MX2011004453A - Composicion acuosa que contiene hormona foliculo estimulante. - Google Patents

Abstract

Una composición acuosa estable que contiene la hormona folículo estimulante, que comprende la hormona folículo estimulante e histidina como un agente de estabilización.

Description

' COMPOSICIÓN ACUOSA QUE CONTIENE HORMONA FOLÍCULO ESTIMULANTE Campo Técnico La presente invención se relaciona con una composición acuosa estable que contiene una hormona folículo estimulante.

Antecedentes de la Invención La hormona folículo estimulante (en adelante también abreviada "FSH") es una hormona sintetizada segregada por las células productoras de hormona gonadotrofica de la pituitaria anterior. La FSH tiene una acción de estimulación del crecimiento de los folículos ováricos inmaduros y de maduración de las células dentro del ovario. Como medicamento, la FSH se ha usado como agente inductor de la ovulación en la tecnología reproductiva asistida (ART) .

Las preparaciones de la gonadotropina menopáusica humana (hMG) extraída de la orina de mujeres postmenopáusicas se han usado convencionalmente como composiciones que contienen la FSH. Las preparaciones de hMG contienen la FSH y la hormona luteinizante (LH) en la cual la relación de actividad de la FSH y la LH es de 1:1. En los países extranjeros, las "preparaciones de FSH recombinantes" producidas mediante la recombinación de genes sin usar la orina humana como una materia prima recientemente se han usado principalmente, y también en Japón. Follistim® se aprobó en 2005. Dado que estas preparaciones recombinantes no usan la orina como materia prima, se caracterizan porque no contienen impurezas y tienen calidad consistente.

Las proteínas bioactivas son generalmente inestables en un estado de una solución acuosa y esta tendencia se aumenta cuando la pureza de una proteína se hace más alta. En las soluciones acuosas, las proteínas se hidrolizan en la misma forma que los compuestos de bajo peso molecular, y también provocan cambios químicos tales como racemización, y también provocan cambios de estructuras de orden más alto (cambios físicos) ya que son compuestos poliméricos. Ejemplos de dichos cambios físicos incluyen desnaturalización, agregado, adsorción, precipitación y similares. En el proceso del cambio físico, se considera que la desnaturalización ocurre como un gatillo y posteriormente se provocan fenómenos tales como el agregado, la adsorción y la precipitación. La desnaturalización implica cambios de las estructuras tridimensionales (estructuras terciarias y cuaternarias) tales como el despliegue de cadenas plegadas, y dado que la desnaturalización deriva en la pérdida de la actividad fisiológica en la mayor parte de los casos, es importante prevenir la desnaturalización para la estabilidad mejorada de las preparaciones de proteína o péptido.

Para suprimir los cambios químicos y físicos de las preparaciones de proteína, generalmente se han agregado proteínas contaminantes tales como albúmina de suero humano como un agente estabilizador. Sin embargo, para evitar el riesgo de la contaminación de virus y similares, el uso de preparaciones recombinantes recientemente se ha convertido en la tendencia principal. Para las preparaciones recombinantes, se han examinado diferentes métodos de estabilización como sustitutos del agregado de proteínas contaminantes .

Por ejemplo, se ha investigado el aumento de la estabilidad de preparaciones de proteína agregando un compuesto que tiene una acción de formación de un enlace de hidrógeno con una molécula de proteína o mejorar la hidratación de una molécula de proteína, tal como sacáridos, surfactantes, y aminoácidos (véanse, por ejemplo, Bull. Chem. Soc . Jpn., 53, páginas 2451-2455, 1980; J. Biol . Chem., 256, páginas 7193-7201, 1981; Pharm. Res., 10, páginas 954-962, 1993; Int. J. Pharm., 96, páginas 41-49, 1993; Pharm. Res., 8, páginas 1258-1263, 1991; Pharm. Res., 10, páginas 649-659, 1993, y similares). En cuanto a los aminoácidos entre dichos compuestos, DE-A-2916711 , por ejemplo, revela que la glicina, la a- o ß-alanina, la prolina, la glutamina, y similares tienen un efecto de estabilización para los factores de coagulación sanguínea y la Patente Estadounidense N° 4.440.679 describe que la arginina, la lisina, y/o la glicina tienen un efecto de estabilización para el factor VIII, fibronectina, y similares. DE-A-1985644 también revela que la arginina, la lisina, la histidina, la fenilalanina, el triptofano, la tirosina, el ácido aspártico y/o el ácido glutámico tienen un efecto de estabilización para la antitrombina III. Sin embargo, los efectos de estabilización de estos aminoácidos son específicos para las proteínas o péptidos blanco y en consecuencia, los aminoácidos o combinaciones de dos o más tipos de aminoácidos que tienen el efecto de estabilización más eficaz para proteínas o péptidos arbitrarios no se pueden predecir a partir de estos hallazgos.

En cuanto a la FSH, por ejemplo, se describe en el documento de Patente 1 que la metionina estabiliza la gonadotropina en una composición acuosa. Además, en cuanto al efecto de estabilización de la histidina para las proteínas, se sabe que, por ejemplo, la histidina tiene un efecto de estabilización en preparaciones líquidas de la proteína relacionada con el factor de coagulación sanguínea (documento de Patente 2) , inmunoglobulina (documento de Patente 3), eritropoyetina (documento de Patente 4) y similares.

Además, el documento de Patente 5 revela una preparación de FSH que contiene glicina, metionina, un surfactante no iónico y un agente de tampón de fosfato como agentes estabilizadores. Sin embargo, no se sabe hasta ahora si la histidina tiene un efecto de estabilización para la FSH en una composición acuosa. Tampoco se sabe si una combinación de histidina y otro aminoácido tiene un efecto de estabilización para la FSH en una composición acuosa .

Referencias del Arte Previo Documentos de Patentes Documento de Patente 1: Publicación Sin Examinar de Patente Japonesa (KOKAI) N° 10-203997 Documento de Patente 2: Publicación Sin Examinar de Patente Japonesa (KOKAI) N° 2002-275090 Documento de Patente 3: Publicación Sin Examinar de Patente Japonesa (KOHYO) N° 2007-511566 Documento de Patente 4: Publicación de Patente Internacional WO02/011753 Documento de Patente 5: Publicación Sin Examinar de Patente Japonesa (KOHYO) N° 2009-509953 Documento de Patente 6: DE-A-2916711 Documento de Patente 7: Patente Estadounidense N° 4.440.679 Documento de Patente 8: DE-A-1985644 Documentos que no son Patentes : Documento que no es Patente 1: Bull. Chem. Soc . Jpn., 53, páginas 2451-2455, 1980 Documento que no es Patente 2: J. Biol . Chem., 256, páginas 7193-7201, 1981 Documento que no es patente 3: Pharm. Res., 10, páginas 954-962, 1993 Documento que no es patente 4: Int. J. Pharm., 96, páginas 41-49, 1993 Documento que no es patente 5: Pharm. Res., 8, páginas 1258-1263, 1991 Documento que no es patente 6: Pharm. Res., 10, páginas 649-659, 1993 Extracto de la Invención Resumen del objeto de la invención Un objeto de la presente invención es proporcionar una composición acuosa que contiene hormona folículo estimulante. Más específicamente, el objeto de la presente invención es proporcionar un medio para estabilizar la hormona folículo estimulante en una composición acuosa usando un aminoácido.

Medios para alcanzar el Objeto Los inventores de la presente invención realizaron diferentes investigaciones acerca de sustancias que estabilizan la hormona folículo estimulante en el estado de una solución acuosa, y descubrieron que la histidina tenía un efecto de estabilización muy superior y alcanzaba un efecto de estabilización aún más alto cuando se combinaba apropiadamente con otro aminoácido, sacárido, tampón o similar. La presente invención se realizó sobre la base de los hallazgos mencionados anteriormente.

La presente invención por lo tanto provee una composición acuosa que comprende la hormona folículo estimulante e histidina como un agente de estabilización.

De acuerdo con realizaciones preferidas de la presente invención, se proporciona la composición acuosa mencionada anteriormente, en donde la concentración de la histidina es de 0,05 a 10,0 mg/mL; la composición acuosa mencionada anteriormente, en donde la concentración de la histidina es de 0,2 a 5,0 mg/mL; y la composición acuosa mencionada anteriormente, en donde la concentración de la histidina es de 0,25 a 2,0 mg/mL. De acuerdo con una realización preferida de la presente invención, también se provee la composición acuosa mencionada anteriormente, que además comprende metionina, y de acuerdo con realizaciones más preferidas, se provee la composición acuosa mencionada anteriormente, en donde la concentración de la metionina es de 0,05 a 10,0 mg/mL; la composición acuosa mencionada, en donde la concentración de la metionina es de 0,2 a 5,0 mg/mL; y la composición acuosa mencionada, en donde la concentración de la metionina es de 0,25 a 2,0 mg/mL. Además, también se provee la composición acuosa mencionada anteriormente, que comprende un hormona folículo estimulante humana recombinante genética como la hormona folículo estimulante.

De acuerdo con realizaciones preferidas de la presente invención, se provee la composición acuosa mencionada anteriormente, que además comprende uno o dos o más tipos de sustancias seleccionadas del grupo formado por sacárido, propilenglicol y creatinina y la composición acuosa mencionada, que además comprende uno o dos o más tipos de sustancias seleccionadas del grupo formado por xilitol, inositol, propilenglicol, sacarosa, gloconato de calcio, gluconato de sodio, manitol, macrogol 600 y creatinina .

De acuerdo con una realización más preferida de la presente invención, se provee la composición acosa mencionada anteriormente, que además comprende un surfactante. De acuerdo con realizaciones más preferidas de la presente invención, se provee la composición acuosa mencionada anteriormente, en dond el surfactante es un surfactante seleccionado del grupo formado por un surfactante aniónico, un surfactante anfótero, y un surfactante no iónico; la composición acuosa mencionada anteriormente, en donde el surfactante es un surfactante no iónico; la composición acuosa mencionada anteriormente en donde el surfactante consiste en Tween 80 y/o Tween 20; y la composición acuosa mencionada anteriormente, en donde el surfactante es Tween 80.

De acuerdo con otra realización preferida de la presente invención, se provee la composición acuosa mencionada anteriormente, que además comprende un agente tampón. De acuerdo con realizaciones más preferidas, se provee la composición acuosa mencionada anteriormente, que comprende un agente tampón seleccionado del grupo formado por un agente tampón de fosfato, un agente tampón de citrato, un agente tampón de acetato, un agente tampón de borato, un agente ampón de tartrato y un agente tampón de tris; la composición acuosa mencionada anteriormente, que comprende un agente ampón de fosfato o un agente tampón de citrato; la composición acuosa mencionada anteriormente, que tiene un pH de 6,5 a 8,0, preferentemente de 7,0 a 7,8; la composición acuosa mencionada anteriormente, que comprende un agente de toxicidad; la composición acuosa mencionada anteriormente, en donde el agente de toxicidad es cloruro de sodio; la composición acuosa mencionada anteriormente, que además comprende un ácido policarboxílico seleccionado del grupo formado por EDTA, ácido cítrico, ácido fítico, ácido málico y ácido glucónico; la composición acuosa mencionada anteriormente, en donde el ácido policarboxílico es EDTA; y la composición acuosa mencionada anteriormente, en donde el medio acuoso es solución salina con tampón de fosfato.

Desde otro aspecto de la presente invención, se provee un agente para estabilizar una solución acuosa que contiene la hormona folículo estimulante como un ingrediente activo, que comprende histidina; y el agente estabilizador precedente, que comprende histidina y metionina.

Desde aún otro aspecto de la presente invención, se proporciona un método para estabilizar una solución acuosa que contiene la hormona folículo estimulante como ingrediente activo, que comprende el paso de agregar histidina y metionina a la solución acuosa; y el método mencionado, que comprende el paso de agregar histidina y metionina.

Efecto de la Invención En las composiciones acuosas de la presente invención, la hormona folículo estimulante se estabiliza con histidina y por lo tanto los cambios químicos y físicos de la hormona folículo estimulante se reducen o se eliminan sustancialmente . En consecuencia, la composición es útil como una composición farmacéutica estable en la cual la reducción de la actividad de la hormona se elimina durante el almacenamiento y la distribución.

Breve Descripción de los Dibujos [Figura 1] La Figura 1 muestra una vista ampliada de diagramas de HPLC obtenidos para composiciones que contienen la hormona folículo estimulante alrededor de los picos de la subunidad a y la subunidad ß. Los diagramas obtenidos para una composición preparada agregando una FSH recombinante genética a 150 IU/mL, sacarosa a 50 mg/mL y Tween 80 al 0,01% a 10 mM PBS, y también agregando histidina a la mezcla, después del almacenamiento de ella a 40 °C durante 8 semanas y una composición preparada agregando una FSH recombinante genética a 150 IU/mL y Tween 80 al 0,01% a 10 mM PBS, después del almacenamiento a 5°C o a 40 °C durante 8 semanas .

[Figura 2] La Figura 2 muestra una vista ampliada de diagramas de HPLC obtenidos para composiciones que contienen la hormona folículo estimulante alrededor de los picos de la subunidad ce y la subunidad ß. Los diagramas se obtuvieron para una composición preparada agregando FSH recombinante genética a 150 IU/mL, sacarosa a 50 mg/mL y Tween 80 al 0,01% a 10 mM PBS, y también agregando metionina a la mezcla, después del almacenamiento de ella a 40 °C durante 8 semanas y una composición preparada agregando una FHS recombinante genética a 150 IU/mL y Tween 80 al 0,01% a 10 mM PBS, después del almacenamiento a 5°C o a 40 °C durante 8 semanas.

[Figura 3] La Figura 3 muestra una vista ampliada de diagramas de HPLC obtenidas para composiciones que contienen la hormona folículo estimulante alrededor de los picos de la subunidad a y la subunidad ß. Los diagramas se obtuvieron para una composición preparada agregando una FSH recombinante genética a 150 IU/mL, sacarosa a 50 mg/mL y Tween 80 al 0,01% a 10 mM PBS, y también agregando metionina e histidina a la mezcla, después del almacenamiento de ella a 40°C durante 8 semanas y una composición preparada agregando una FSH recombinante genética a 150 IU/mL y Tween 80 al 0,01% a 10 mM PBS, después del almacenamiento de ella a 5°C o a 40°C durante 8 semanas.

Formas de Realizar la Invención En la presente invención, se puede usar la hormona folículo estimulante separada de la orina humana. El efecto de la presente invención se puede exhibir en forma notable cuando se usa la hormona folículo estimulante altamente purificada. Por consiguiente, es preferible usar la hormona folículo estimulante altamente purificada, preferentemente la hormona folículo estimulante altamente purificada que comprende sustancialmente la sustancia sola. De acuerdo con la presente invención, es preferible usar, desde el punto de vista precedente, la hormona folículo estimulante humana preparada mediante una técnica de recombinación genética y sustancialmente libre de proteínas contaminantes como la hormona folículo estimulante.

No se limita particularmente una concentración de la hormona folículo estimulante en la composición acuosa de la presente invención. La concentración es, por ejemplo, de 50 a 500 IU/mL, preferentemente de 100 a 300 IU/mL. La unidad internacional (IU) de la hormona folículo estimulante se describe en el documento acerca del estándar internacional de la FSH del NIBSC (Instituto Nacional para los Estándares y el Control Biológico, http://www.nibsc.ac.uk/documents/ifu/98-704.pdf), o similar.

Tampoco se limita particularmente una concentración de la histidina en la composición acuosa de la presente invención. La concentración es, por ejemplo, de 0,05 a 10,0 mg/mL, preferentemente de 0,2 a 5,0 mg/mL, más preferentemente de 0,25 a 2,0 mg/mL. Aunque tampoco se limita particularmente una concentración de la metionina en la composición acuosa de la presente invención, la concentración es, por ejemplo, de 0,05 a 10,0 mg/mL, preferentemente de 0,2 a 5,0 mg/mL, más preferentemente de 0,25 a 2,0 mg/mL.

La composición acuosa de la presente invención pueden contener además un tipo o dos o más tipos de sustancias seleccionadas del grupo formado por un sacárido, propilenglicol y creatinina. Como el sacárido, se pueden usar monosacáridos , disacáridos, alcoholes de azúcar, ácidos aldónicos y sales de ellos, ciclitoles, macrogoles y similares. Ejemplos de monosacáridos incluyen, por ejemplo, glucosa, mañosa, galactosa, fructosa, xilosa, treosa, y similares, ejemplos de los disacáridos incluyen, por ejemplo, sacarosa, maltosa, lactosa, celobiosa, trehalosa, y similares, y ejemplos de los alcoholes de azúcar incluyen, por ejemplo, manitol, xilitol, sorbitol, eritritol, glicerol y similares. Ejemplos de los ácidos aldónicos o sales de ellos incluyen, por ejemplo, ácido glucónico, ácido galactónico, ácido manónico, y similares, y sales de ellos, ejemplos, de los ciclitoles incluyen inositol, y los ejemplos de los macrogoles incluyen macrogol 200, macrogol 300, macrogol 400, macrogol 600, macrogol 1000, macrogol 1500, macrogol 1540, macrogol 4000, macrogol 6000, macrogol 10000, macrogol 20000, y similares.

La composición acuosa de la presente invención pueden contener preferentemente uno o dos o más tipos de sustancias seleccionada del grupo formado por xilitol, inositol, propilenglicol , sacarosa, gluconato de calcio, gloconato de sodio, manitol, macrogol 600 y creatinina.

Cuando la composición acuosa de la presente invención contiene sacarosa, manitol o inositol como el sacárido, el sacárido se puede usar a una concentración, por ejemplo, de 25 a 125 mg/mL, y se puede agregar preferentemente a una concentración de 50 a 100 mg/mL. Cuando el xilitol está contenido como el sacárido, el xilitol se puede usar a una concentración, por ejemplo, de 1 a 100 mg/mL, y se puede agregar preferentemente a una concentración de 5 a 75 mg/mL. Cuando el gluconato de calcio o gluconato de sodio están contenidos como el sacárido, el gluconato puede usarse a una concentración, por ejemplo, de 0,2 a 75 mg/mL, y se puede agregar preferentemente a una concentración de 1 a 50 mg/mL. Cuando el macrogol 600 está contenido como el sacárido, el surfactante se puede usar a una concentración, por ejemplo, de 0,2 a 75 mg/mL y se puede agregar preferentemente a una concentración de 1 a 50 mg/mL. Cuando el propilenglicol está contenido, el glicol se puede usar a una concentración, por ejemplo, de 1 a 100 mg/mL y se puede agregar preferentemente a una concentración de 5 a 75 mg/mL. Cuando está contenida la creatinina, ésta se puede usar a una concentración, por ejemplo, de 0,1 a 50 mg/mL, y se puede agregar preferentemente a una concentración de 0,5 a 30 mg/mL.

La composición acuosa de la presente invención puede contener un tipo o dos o más tipos de surfactantes . Aunque el tipo de surfactante no se limita particularmente, se puede usar un tipo o dos o más tipos de surfactantes seleccionados del grupo formado por un surfactante aniónico, un surfactante anfolítico, y un surfactante no iónico. Aunque la concentración del surfactante no se limita particularmente, el surfactante se puede usar a una concentración del 0,001 al 0,1% y se puede agregar preferentemente a una concentración del 0,005 al 0,05%, basado en el volumen total de la composición acuosa.

Ejemplos del surfactante iónico incluyen, por ejemplo, ácido cólico, ácido desoxicólico, y similares, ejemplos del surfactante anfolítico incluyen, por ejemplo, CHAPS (3- [ (colamidopropil) dimetilamonio] -1-propanosulfonato) , CHAPSO (3- [ (3-colamidopropil) dimetilamonio] -2-hidroxi-l-propanosulfonato) , y similares, y ejemplos del surfactante no iónico incluyen, por ejemplo, aquellos de Tween (marca registrada) , TRITON (marca registrada) , PLURONIC (marca registrada) , Carbowax (marca registrada), y similares. Los nombres mencionados como ejemplos específicos del surfactante no iónico son aquellos que representan la serie de surfactantes. Por ejemplo, los surfactantes Tween incluyen aquellos con los nombres de producto Tween 20, Tween 40, Tween 60, Tween 80, y similares. Entre ellos, los surfactantes no iónicos se usan preferentemente en la presente invención. Entre los surfactantes no iónicos, Tween 20 y Tween 80 son más preferidos y Tween 80 es especialmente preferido .

La composición acuosa de la presente invención puede contener también un agente de tampón, y la composición puede contener, por ejemplo, un agente de tampón seleccionado del grupo formado por un agente de tampón de fosfato, un agente de tampón de citrato, un agente de tampón de acetato, un agente de tampón de borato, un agente de tampón de tartrato y un agente de tampón de tris, y preferentemente puede estar contenido un agente de tampón de citrato o un agente de tampón de fosfato.

Cuando se usa un agente de tampón de citrato, el agente se puede usar a una concentración de, por ejemplo, 10 a 250 mM, y se puede agregar preferentemente a una concentración de 25 a 75 mM. Cuando se usa un agente de tampón de fosfato o una solución salina con tampón de fosfato, el agente se puede usar a una concentración de, por ejemplo, 2 a 50 mM, y se puede agregar preferentemente a una concentración de 5 a 15 mM. Aunque el pH de la composición acuosa de la presente invención no se limita particularmente la composición se puede preparar para tener un valor de pH de, por ejemplo, 6,5 a 8,0, preferentemente de 7,0 a 7,8 y se puede ajustar para tener un valor de pH deseado con un modificador del pH apropiado tal como ácido clorhídrico e hidróxido de sodio. La composición acuosa de la presente invención se prepara preferentemente de manera que sea isotónica con los fluidos corporales, y puede contener un agente de toxicidad con este propósito. Como el agente de toxicidad, por ejemplo, se puede usar cloruro de sodio, glicerol, y similares y preferentemente se puede usar cloruro de sodio.

La composición acuosa de la presente invención puede contener un ácido policarboxílico seleccionado del grupo formado por EDTA, ácido cítrico, ácido fítico, ácido málico, y ácido glucónico y preferentemente puede contener EDTA. Cuando está contenido un agente quelante, el agente se puede usar a una concentración, por ejemplo, de 0,1 a 10,0 mg/mL y se puede agregar preferentemente a una concentración de 0,2 a 5,0 mg/mL.

Como el medio acuoso de la composición acuosa de la presente invención, se pueden usar, por ejemplo, agua, agua destilada para inyección, solución salina fisiológica, tampón de fosfato, solución salina con tampón de fosfato, y similares y preferentemente se puede usar solución salina con tampón de fosfato .

Aunque el método para preparar la composición acuosa de la presente invención no se limita particularmente, la composición se puede preparar, por ejemplo, disolviendo la hormona folículo estimulante e histidina en un medio acuoso apropiado tal como agua, agua destilada para inyección, solución salina fisiológica o solución salina con tampón de fosfato, y opcionalmente agregando uno o dos o más tipos de los aminoácidos, sacáridos, propilenglicol , creatinina, surfactantes, agentes tampones, modificadores del pH, agentes de toxicidad, y similares explicados anteriormente, según sea necesario. La composición se puede someter a un proceso de esterilización tal como esterilización por filtración según sea necesario para preparar una composición acuosa para inyección. La composición acuosa de la presente invención se puede usar como una composición farmacéutica para inyección, por ejemplo, para el tratamiento de la infertilidad y similares.

Ejemplos La presente invención se explicará más específicamente con referencia a ejemplos. Sin embargo, el alcance de la presente invención no está limitado por los siguientes ejemplos.

Ejemplo 1: Examen de la relación remanente para el aminoácido Se prepararon composiciones acuosas agregando una FSH recombinante genética a 150 IU/mL, sacarosa a 50 mg/mL y Tween 80 al 0,01% a 50 mM tampón de citrato, 10 mM solución salina con tampón de fosfato (PBS) , o 10 mM tampón de fosfato (PB) , y agregando además aminoácidos (concentración: 0,5 mg/mL) a la mezcla en dichas combinaciones con los tampones que se muestran en la Tabla 1 mencionada a continuación. Una porción de 0,5 mL de cada composición acuosa se colocó dentro de un envase de 2 mL de volumen, se selló y se almacenó a 50 °C durante dos semanas. Después de dos semanas, la cantidad de FSH se midió mediante un inmunoensayo y se calculó una relación de ella a FSH medida al comienzo del experimento (relación remanente) . Los resultados se muestran en la Tabla 1 mencionada a continuación.

Tabla 1 Ejemplo de Aminoácido Relación Agente de tampón Ensayo N° (0,5 mg/mL) Remanente Citrato (50 mM, Ejemplo 1-1 71% pH 7,4) PBS (10 mM, pH Ejemplo 1-2 Histidina 76% 7,4) PB (10 mM, pH Ejemplo 1-3 60% 7,4) Ej emplo Citrato (50 mM, Comparativo 69% pH 7,4) 1-1 Metionina Ej emplo PBS (10 mM, pH Comparativo 70% 7,4) 1-2 Ej emplo Aspartato de PBS (10 mM, pH Comparativo 56% sodio 7,4) 1-3 Ej emplo Comparativo Alanina 55% 1-4 Ejemplo Clorhidrato // 2% Comparativo de Cisteína 1-5 Ejemplo Comparativo Glicina 70% 1-6 Ej emplo Comparativo Glutamina 60% 1-7 Ejemplo Clorhidrato Comparativo del Ácido 56% 1-8 Glutámico Ej emplo Glutamato de Comparativo 54% sodio 1-9 Ejemplo Glutationa Comparativo 59% oxidada 1-10 Ej emplo Comparativo Cistina 38% 1-11 (Tabla 1 continuación) Ej emplo Diclorhidrato Comparativo // 43% de Cistina 1-12 Ej emplo Ácido Comparativo // 47% Cisteico 1-13 Ej emplo Comparativo Serina // 54% 1-14 Ej emplo Comparativo Tirosina // 40% 1-15 Ej emplo Comparativo Triptofano // 41% 1-16 Ej emplo Comparativo Fenilalanina ;; 44% 1-17 Ej emplo Comparativo Prolina // 52% 1-18 Ej emplo Leucina // 58% E emplo 2 : Examen de la relación remanente para combinación de aminoácidos Se prepararon composiciones acuosas agregando una FSH recombinante genética a 150 IU/mL, sacarosa a 50 mg/mL y Tween 80 al 0,01% a 10 mM PBS, y también agregando histidina y/o metionina a la mezcla como se muestra en la Tabla 2 mencionada a continuación a las respectivas concentraciones. Como control, se preparó una composición acuosa agregando una FSH recombinante genética a 150 IU/mL y Tween 80 al 0,01% a 10 mM PBS. Una porción de 0,5 mL se colocó dentro de un recipiente de 2 mL de volumen, se selló y se almacenó a 40 °C durante 8 semanas. Al comienzo del experimento, y después de 5 semanas y 8 semanas, cada composición acuosa se analizó mediante HPLC de fase invertida (los diagramas de HPLC obtenidos después de 8 semanas se muestran en las Figuras 1 a 3) y los valores obtenidos de las áreas pico de la subunidad a y la subunidad ß se corrigieron sobre la base de los valores de las áreas pico de las subunidades obtenidas con una muestra de estándar de FSH (10 pg/mL de solución de FSH recombinante genética congelada almacenada a -80°C, descongelada antes de usarla) . Luego, se calcularon las relaciones remanentes de las subunidades en las composiciones acuosas después de los períodos como las relaciones de las cantidades medidas después de los períodos a las cantidades medidas al comienzo del experimento.

Las cantidades de FSH se calcularon sumando los valores de las áreas pico de las subunidades. Los resultados se muestran en la Tabla 2 mencionada a continuación.

Tabla 2 Relación remanente (%) Ejemplo de Aminoácido 5 8 Ensayo N° semanas semanas Subunidad 86,3 79,8 a Histidina (0,5 Ejemplo 2-1 Subunidad 87, 8 86,6 mg/mL) ß FSH 87, 1 83,4 Subunidad 112, 1 104 , 9 Ej emplo a Metionina (0,5 Comparativo Subunidad 87, 0 70, 6 mg/mL) 2 ß FSH 99, 2 87,2 Subunidad 112, 2 110,0 Histidina (0,5 Ejemplo 2-2 mg/mL) + Metionina Subunidad 98,2 93,8 (0,5 mg/mL) ß FSH 104, 8 101, 5 Subunidad 60,3 56, 0 a Control - Subunidad 44, 0 39,0 ß FSH 51,7 47,1 A partir de los resultados de las mediciones, se puede entender que la histidina y la metionina presentan un alto efecto de estabilización para la subunidad a y la subunidad ß, respectivamente. Además, la preparación de FSH que contiene tanto histidina como metionina como agentes de estabilización son muy estables .

Ejemplo 3: Examen de la relación remanente para la concentración de histidina Se prepararon composiciones acuosas agregando una FSH recombinante genética a 150 IU/mL, sacarosa a 50 mg/mL y Tween 80 al 0,01% a 50 mM tampón de citrato o 10 mM PBS, y agregando también histidina a la mezcla en las combinaciones que se muestran en la Tabla 3 mencionada a continuación y se examinó la relación remanente en la misma forma que en el Ejemplo 1. Los resultados se muestran en la Tabla 3 mencionada a continuación.

Tabla 3 Ejemplo de Ensayo Concentración Relación Tampón N° de Histidina remanente Ejemplo Comparativo PBS (10 mM, pH 3-1 (Ejemplo 0 mg/mL 60% 7,4) Comparativo) Ejemplo 3-2 Citrato (50 mM, pH 71% 7,4) 0,2 mg/mL Ejemplo 3-3 PBS (10 mM, pH 68% 7,4) Ejemplo 1-1 Citrato (50 mM, pH 71% 7,4) Ejemplo 1-2 0 , 5 mg/mL PBS (10 mM, pH 76% 7,4) Ejemplo 1-3 PB (10 mM, pH 7,4) 60% Ejemplo 3-4 Citrato (50 mM, pH 74% 1,0 mg/mL 7,4) Ejemplo 3-5 PBS (10 mM, pH 73% 7,4) Ejemplo 3-6 Citrato (50 mM, pH 71% 7,4) 2 , 0 mg/mL Ejemplo 3-7 PBS (10 mM, pH 75% 7,4) Ejemplo 3-8 Citrato (50 mM, pH 74% 7,4) 3,2 mg/mL Ejemplo 3-9 PBS (10 mM, pH 70% 7,4) Ejemplo 4: Examen y comparación de la relación remanente para sacárido Se prepararon composiciones acuosas agregando una FSH recombinante genética a 150 IU/mL, histidina a 0,5 mg/mL y Tween 80 al 0,01% a 50 mM tampón de citrato o 10 mM PBS y también agregando un sacárido, propilenglicol o creatinina a la mezcla en combinaciones que se muestran en la Tabla 4 mencionada a continuación y se examinó la relación remanente en la misma forma que en el Ejemplo 1. Los resultados se muestran en la Tabla 4 mencionada a continuación. Los resultados obtenidos sin agregar histidina también se muestran como ejemplos comparativos.

Tabla 4 E emplo Relación Sacárido de Ensayo Tampón Remanente (concentración) N° Ej emplo Citrato (50 mM, 71% Sacarosa (50 mg/mL) 1-1 pH 7,4) Ejemplo PBS (10 mM, pH 76% 1-2 7,4) Ejemplo 70% Sacarosa (10 mg/mL) 4-1 Ej emplo Citrato (50 mM, 79% Inositol (50 mg/mL) 4-2 pH 7,4) Ej emplo PBS (10 mM, pH 78% n 4-3 7,4) ejemplo 70% Inositol (10 mg/mL) 4-4 Ejemplo Citrato (50 mM, 79% Xilitol (50 mg/mL) 4-5 pH 7,4) ej emplo PBS (10 mM, pH 81% 4-6 7,4) Ejemplo 64% Xilitol (10 mg/mL) 4-7 Ejemplo Glicerol (50 mg/mL) II 37% 4-8 Ej emplo 56% Glucosa (50 mg/mL) // 4-9 Ej emplo Gluconato de Calcio Citrato (50 mM, 70% 4-10 (1 mg/mL) pH 7,4) Ej emplo PBS (10 mM, pH 73% // 4-11 7,4) Ej emplo Gluconato de calcio 68% n 4-12 (0,2 mg/mL) Ej emplo 69% Creatinina (25 mg/mL) II 4-13 Ejemplo 71% Creatinina (5 mg/mL) n 4-14 Ej emplo 67% Sorbitol (50 mg/mL) II 4-15 Ejemplo Dextrano 70 (50 59% II 4-16 mg/mL) Ejemplo 21% Fructosa (50 mg/mL) II 4-17 E emplo Propi1englicol (50 78% II 4-18 mg/mL) Ejemplo Macrogol 400 (50 67% II 4-19 mg/mL) Ej emplo Macrogol 600 (50 Citrato (50 mM, 67% 4-20 mg/mL) pH 7,4) Ej emplo PBS (10 mM, pH 72% 4-21 7,4) Ej emplo Macrogol 600 (10 67% 4-22 mg/mL) Ej emplo Macrogol 4000 (50 61% 4-23 mg/mL) Ejemplo 58% Maltosa (50 mg/mL) 4-24 (Tabla 4 continuación) Ejemplo 4- Citrato (50 mM, 80% Manitol (50 mg/mL) 25 pH 7,4) Ejemplo 4- PBS (10 mM, H 73% // 26 7,4) Ejemplo 4- 70% Manitol (10 mg/mL) // 27 Ejemplo 4- 54% Lactosa (50 mg/mL) // 28 Ejemplo comparativo Sacarosa (50 mg/mL) // 60% 4-1 Ej emplo Comparativo Inositol (50 mg/mL) 56% 4-2 Ej emplo Comparativo Xilitol (50 mg/mL) 63% 4-3 Ejemplo Gluconato de calcio Comparativo 76% (1 mg/mL) 4-4 Ej emplo Gluconato de calcio Comparativo 55% (0,2 mg/mL) 4-5 Ej emplo Comparativo Creatinina (25 mg/mL) 54% 4-6 Ej emplo Comparativo Creatinina (5 mg/mL) 61% 4-7 Ejemplo Macrogol 600 (50 Comparativo 32% mg/mL) 4-8 Ejemplo Macrogol 600 (10 71% Comparati o mg/mL) 4-9 Ejemplo Comparativo Manitol (50 mg/mL) 64% 4-10 Ejemplo 5: Examen y comparación de la relación remanente para el surfactante Se prepararon composiciones acuosas agregando una FSH recombinante genética a 160 IU/mL, histidina a 0,5 mg/mL y sacarosa a 50 mg/mL a 50 mM tampón de citrato o 10 mM PBS o 10 mM PB, y agregando también un surfactante a la mezcla en tales combinaciones con los tampones que se muestran en la Tabla 5 mencionada a continuación y se examinaron las relaciones remanentes de la FSH en la misma forma que en el Ejemplo 1. Los resultados se muestran en la Tabla 5 mencionada a continuación. Los resultados obtenidos agregando 0,5 mg/mL de metionina en lugar de 0,5 mg/mL de histidina también se muestran como ejemplos comparativos. La estabilidad se indicó como la relación de la cantidad de FSH medida 2 semanas después del inicio del experimento a la cantidad de FSH medida al inicio del experimento. Cuando no se agregó ningún surfactante, la adsorción o similar tuvo lugar cuando las composiciones se colocaron 4 dentro de frascos, y la cantidad de FSH se redujo al 80% de aquella observada con el agregado de un surfactante al mismo tiempo .

Tabla 5 Relación Ejemplo N° Surfactante Agente Tampón remanente Ejemplo 1-1 Citrato (50 mM, pH 71% 7,4) Ejemplo 1-2 PBS (10 mM, pH 76% 7,4) Tween 80 Ejemplo 1-3 PB (10 mM, pH 7,4) 60% (0,01%) Ejemplo Comparativo Citrato (50 mM, pH 69% 1-1 7,4) Ejemplo Comparativo PBS (10 mM, pH 70% 1-2 7,4) Ejemplo 5-1 Citrato (50 mM, pH 77% 7,4) Ejemplo 5-2 PBS (10 mM, pH Tween 20 73% 7,4) (0,01%) Ejemplo 5-3 PB (10 mM, pH 7,4) 58% Ejemplo Comparativo Citrato (50 mM, pH 72% 5-1 7,4) Ejemplo 5-4 PBS (10 mM, pH 65% Ninguno 7,4) Ejemplo 5-5 PB (10 mM, pH 7,4) 46% Aplicabilidad Industrial La composición acuosa de la presente invención es útil como una composición farmacéutica estable en la cual se elimina la reducción de la actividad durante el almacenamiento y la distribución.

Claims (15)

1. REIVINDICACIONES Una composición acuosa, CARACTERIZADA porque comprende la hormona folículo estimulante e histidina como un agente de estabilización . La composición acuosa de acuerdo con la reivindicación 1, CARACTERIZADA porque la concentración de la histidina es de 0,05 a 10,0 mg/mL. La composición acuosa de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, CARACTERIZADA porque comprende una hormona folículo estimulante humana recombinante genética como la hormona folículo estimulante. La composición acuosa de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, CARACTERIZADA porque además comprende uno o dos o más tipos de sustancias seleccionada del grupo formado por un sacárido, propilenglicol y creatinina. La composición acuosa de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, CARACTERIZADA porque además comprende uno o dos o más tipos de sustancias seleccionadas del grupo formado por xilitol, inositol, propilenglicol, sacarosa, gluconato de calcio, gluconato de sodio, manitol, macrogol 600 y creatinina. La composición acuosa de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, CARACTERUZADA porque también comprende metionina como un agente de estabilización. 7. La composición acuosa de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, CARACTERIZADA porque la concentración de la metionina es de 0,05 a 10 mg/mL. 8. La composición acuosa de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, CARACTERIZADA porque además comprende un surfactante. 9. La composición acuosa de acuerdo con la reivindicación 8, CARACTERIZADA porque el surfactante es un surfactante no iónico . 10. La composición acuosa de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, CARACTERIZADA porque además comprende un agente tampón de fosfato o un agente tampón de citrato. 11. La composición acuosa de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, CARACTERIZADA porque tiene un valor de pH de 6,5 a 8,0. 12. La composición acuosa de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, CARACTERIZADA porque además comprende cloruro de sodio como un agente de toxicidad. 13. La composición acuosa de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, CARACTERIZADA porque además comprende EDTA como un ácido policarboxílico . 14. Un agente para estabilizar una composición farmacéutica acuosa que contiene una hormona folículo estimulante como un ingrediente activo, CARACTERIZADA porque comprende histidina. 15. El agente de estabilización de acuerdo con la reivindicación 14, CARACTERIZADO porque además comprende metionina.