BRPI0917851B1

BRPI0917851B1 - métodos para inibir a adsorção da cistatina c e para medir cistatina c em uma amostra

Info

Publication number: BRPI0917851B1
Application number: BRPI0917851-1A
Authority: BR
Inventors: Yasunori Minakawa
Original assignee: Denka Seiken Co., Ltd.
Priority date: 2008-08-22
Filing date: 2009-08-24
Publication date: 2021-05-11
Also published as: CN102187221A; BRPI0917851A2; WO2010021399A1; CN102187221B; EP2325639A4; JP5653216B2; EP2325639B1; KR20110042182A; US20110143457A1; JPWO2010021399A1; EP2325639A1; KR101665999B1; US9046517B2

Abstract

INIBIDOR DA ADSORÇÃO DA CISTATINA C, REAGENTE E KIT DE MEDIÇÃO A CISTATINA C, E, MÉTODOS PARA INIBIR A ADSORÇÃO DA CISTATINA C E PARA MEDIR CISTATINA C EM UMA AMOSTRA. É apresentando um método para inibir a adsorção da cistatina C a um recipiente de uma maneira simples para melhorar a precisão da medição da cistatina C. São especificamente apresentados: um inibidor da adsorção da cistatina C compreendendo um tensoativo não iônico; um reagente de medição da cistatina C compreendendo o inibidor da adsorção; um kit de medição da cistatina C; e um método para inibir a adsorção da cistatina C, o qual compreende colocar em contato uma amostra contendo cistatina C com um instrumento de medição na presença de um tensoativo não iônico. O tensoativo não iônico é de preferência um tensoativo do tipo de polioxietileno. Alternativamente, o tensoativo não iônico preferivelmente tem uma estrutura de fenóxi, mais preferível uma estrutura de benzilfenóxi.

Description

CAMPO TÉCNICO

[0001] A presente invenção diz respeito a um inibidor da adsorção da cistatina C e a um método para inibir a adsorção da cistatina C.

FUNDAMENTOS DA TÉCNICA

[0002] A cistatina C é produzida como cisteína protease pelas células nucleadas por todo o corpo. A cistatina C pertence à superfamília das cistatinas e é uma proteína básica de baixo peso molecular tendo um peso molecular de 13 kD. Nos testes clínicos, ela tem chamado a atenção como um marcador da função renal para substituir a creatinina (ver o Documento 1 Não Patente). Nos testes clínicos, tendo em vista que um grande número de espécimes é manipulado de uma vez, um dispositivo automatizado preciso para quantificar a cistatina C é necessário.

[0003] Como um método de quantificar a cistatina C, por exemplo, um ensaio turbidimétrico de látex no qual o látex ligado a um anticorpo anti- humano de cistatina C é usado para medir a absorção ou a dispersão da luz visível (ver o Documento de Patente 1) e um método de rotular enzima (ver o Documento de Patente 2) é conhecido.

[0004] É também conhecido um método de examinar uma doença renal, o qual é caracterizado pela medição da concentração da cistatina C excretada na urina e da concentração de uma substância de depuração endógena, a creatinina, para calcular a relação da concentração da cistatina C com a concentração da creatinina, e com o uso dos dados assim obtidos (ver o Documento de Patente 3).

[0005] O Documento de Patente 4 descreve um método de quantificar a cistatina C, no qual um inibidor do fenômeno de prozona para medição das reações imunológicas é empregado, o inibidor sendo caracterizado por compreender um ou mais tensoativos aniônicos à base de éster de sulfato e à base de sulfonato.

[0006] Tem sido indicado que a cistatina C, por causa de suas propriedades físicas, deve provavelmente adsorver-se em recipientes plásticos e de vidro. Tendo em vista que o analisador automático com frequência emprega um recipiente de plástico comercialmente disponível na medição clínica da cistatina C, acredita-se ser importante evitar um decréscimo na precisão da medição causado pela adsorção da cistatina C ao recipiente de plástico. Como um método para inibir a adsorção da cistatina C ao recipiente, pensa-se submeter o próprio recipiente a um tratamento superficial; entretanto, existe um problema no fato de que um recipiente especial tratado superficialmente deva ser necessário, o que resultará em um aumento no custo.

[0007] Portanto, existe a necessidade de um método de se quantificar precisa e automaticamente a cistatina C com uma operação simples, e um meio para inibir a adsorção da cistatina C a um recipiente de uma maneira simples, é necessário.

DOCUMENTOS DA TÉCNICA ANTERIOR Documentos de Patente

[0008] (Documento de Patente 1) Publicação do Pedido de Patente Japonesa não Examinada no 2000-193662

[0009] (Documento de Patente 2) Patente Japonesa no 03342819

[0010] (Documento de Patente 3) Patente Japonesa no 03398372

[0011] (Documento de Patente 4) Publicação do Pedido de Patente Japonesa não Examinada no 2003-149244 Documentos Não Patente

[0012] (Documento não patente 1) Saito, K. “The 13th Annual Meeting of The Society of Analytical Bio-Science; Measurement of Cystatin C and its Significance in Clinical Studies” (on line), 14 de março de 2003, (pesquisado em 8 de fevereiro de 2008), Internet <URL: http://www.higo.ne.jp/anal-bio-sci13/NewFiles/saitou.html>

SUMÁRIO DA INVENÇÃO PROBLEMAS A SEREM SOLUCIONADOS PELA INVENÇÃO

[0013] Um objeto da presente invenção é prover um meio para inibir a adsorção da cistatina C a um recipiente de uma maneira simples, por esse meio melhorando a precisão da medição da cistatina C.

MEIO PARA SOLUCIONAR OS PROBLEMAS

[0014] Os presentes inventores estudaram intensivamente até descobrirem que um tensoativo não iônico tem um efeito de inibir a adsorção da cistatina C a um recipiente de plástico, dessa forma completando a presente invenção.

[0015] Isto é, a presente invenção provê um inibidor da adsorção da cistatina C contendo um tensoativo não iônico. Além disso, a presente invenção provê um reagente de medição da cistatina C compreendendo o inibidor da adsorção da cistatina C acima mencionada de acordo com a presente invenção. Além disso, a presente invenção provê um kit de medição da cistatina C compreendendo o inibidor da adsorção da cistatina C acima mencionada de acordo com a presente invenção. Ainda mais, a presente invenção provê um método para inibir a adsorção da cistatina C, o método compreendendo a colocação de uma amostra que contenha a cistatina C em contato com um instrumento de medição na presença de um tensoativo não iônico. Além disso, a presente invenção provê um método para medir cistatina C em uma amostra, o método compreendendo a etapa de inibir a adsorção da cistatina C ao instrumento de medição supracitado pelo método mencionado acima de inibir a adsorção de acordo com a presente invenção.

EFEITOS DA INVENÇÃO

[0016] De acordo com a presente invenção, por um método simples de possibilitar que um tensoativo não iônico coexista no sistema de medição, a adsorção da cistatina C a um instrumento de medição, tal como um recipiente plástico, pode ser eficazmente inibida. Em um teste clínico em que um grande número de espécimes sejam manipulados ao mesmo tempo, as medições das amostras de teste são usualmente realizadas por um sistema de medição automático que emprega um recipiente plástico de medição. De acordo com a presente invenção, valores de medição precisos podem ser alcançados com uma operação simples também quando da medição da cistatina C por um tal sistema automático de medição; consequentemente, a presente invenção é muito útil em aplicações clínicas.

MODO PARA REALIZAR A INVENÇÃO

[0017] A expressão “inibidor da adsorção da cistatina C” refere-se a um agente que inibe a adsorção da cistatina C em uma solução a um instrumento de medição. Particularmente, o inibidor da adsorção pode ser adequadamente empregado para inibir a adsorção a um instrumento de plástico. Aqui, a expressão “instrumento de medição” usada neste relatório descritivo refere-se a uma variedade de instrumentos usados em uma série de operações realizadas para medir cistatina C, e a expressão também inclui, por exemplo, aqueles membros que entram em contato com a amostra de teste contida em um analisador automático. Exemplos específicos de tais membros incluem, porém sem limitar, placas, recipientes tais como células, pipetas e bicos de pipetas. Além disso, na presente invenção, a expressão “instrumento de plástico” inclui não apenas aqueles instrumentos que sejam inteiramente produzidos de plástico, mas também aqueles instrumentos que apenas a superfície que faça o contato com a amostra que contém a cistatina C seja produzida de plástico. Por exemplo, a expressão “recipiente de plástico” inclui amplamente aqueles recipientes em que pelo menos a parede interna seja feita de plástico. O termo “plástico” não é particularmente restrito e significa aquelas resinas sintéticas que são convencionalmente usadas em instrumentos de laboratório, tais como o polipropileno e o poliestireno.

[0018] Exemplos do tensoativo não iônico usado na presente invenção incluem, porém sem limitar, etoxilatos de álcool secundário; tensoativos não iônicos do tipo de polioxietileno, tais como o cumilfeniléter de polioxietileno, o polímero de fenol-formaldeído de polioxietileno p-iso-octílico, o alquiléter de polioxietileno, o feniléter policíclico de polioxietileno, a diamina de propileno alquílico de polioxietileno, o etoxilato de nonilfenol, oxtilfeniléter, octilfeniléter de polioxietileno, os derivados de polioxietileno, o mono-oleato sorbitano de polioxietileno, o polímero de bloco de polioxietileno- oxipropileno, o lauril alcoxilato de álcool, o lauril éter de polioxietileno, o mono-oleato de polioxietileno, o monolaurato sorbitano de polioxietileno, feniléter diestirenado de polioxietileno, monoestearato sorbitano de polioxietileno, monopalmitado sorbitano de polioxietileno, octadecilamina de polioxietileno, esteariléter de polioxietileno, nonilfeniléter de polioxietileno, oleiléter de polioxietileno, éster de ácido graxo de poliglicerina, benzilfeniléter de polioxietileno e tribenzilfeniléter de polioxietileno; tensoativos não iônicos do tipo de fosfato tais como os ésteres de fosfato alifático; e tensoativos não iônicos do tipo amida tais como a alquilalquilolamida. Além disso, o tensoativo não iônico pode também ser usado isoladamente, ou dois ou mais destes podem ser usados em combinação. Como concretamente apresentado nos Exemplos abaixo, a quantidade da adsorção da cistatina C a um instrumento de plástico pode ser reduzida pela adição de tal(is) tensoativo(s) não iônico(s) a uma amostra que contenha a cistatina C. Um tal efeito não pode ser alcançado com um tensoativo iônico (ver os Exemplos Comparativos).

[0019] Entre os tensoativos não iônicos, os tensoativos do tipo de polioxietileno são mais preferidos, desde que a quantidade da adsorção da cistatina C em uma amostra à parede do recipiente se torne particularmente pequena. Além disso, os tensoativos não iônicos que tenham uma estrutura de fenóxi como o grupo lipofílico, são também preferidos. O mais preferido entre estes como o tensoativo não iônico usado na presente invenção, é um tensoativo não iônico que tenha uma estrutura de benzilfenóxi como o grupo lipofílico, tal como o benzilfeniléter de polioxietileno ou o tribenzilfeniléter de polioxietileno. Aqui, a estrutura de benzilfenóxi é uma estrutura Ph-CH2- Ph-O, em que o pH representa um grupo fenila e uma parte dos átomos de hidrogênio, H, no grupo fenila, ou o grupo CH2 pode opcionalmente ser substituído por um substituinte tal como um halogênio ou um grupo alquila.

[0020] O valor de HLB (valor do Equilíbrio de Hidrófilo-Lipófilo) do tensoativo não iônico é preferivelmente de 11 a 16, e particularmente mais preferível de 12,5 a 15. Quando o valor de HLB se situe nesta faixa, o efeito para inibir a adsorção da cistatina C ao instrumento de medição é elevado.

[0021] Quando um tensoativo que tenha uma estrutura de benzilfenóxi é empregado, embora o mecanismo que possibilita a inibição particularmente eficaz da adsorção da cistatina C não seja certo, acredita-se que o componente da estrutura de benzilfenóxi no grupo lipofílico linear se entrelace com o componente lipofílico da cistatina C ou com o instrumento de medição para inibir a adsorção da cistatina C ao instrumento de medição.

[0022] O inibidor da adsorção da cistatina C de acordo com a presente invenção pode consistir em apenas um tensoativo não iônico, ou pode também ser na forma de uma solução obtida pela dissolução de um tensoativo não iônico em um tampão. O tampão não é particularmente restrito, e qualquer tampão pode ser empregado, contanto que ele não afete adversamente o sistema de medição da cistatina C. Como um tal tampão, por exemplo, os tampões Good, os tampões Tris, os tampões à base de fosfato, os tampões à base de carbonato, os tampões à base de acetato e os tampões de glicina podem ser empregados. Como o tampão Good, o MÊS, Bis-Tris, ADA, BisTris propano, PIPES, ACES, cloreto de colamina, BES, MOPS, TES, HEPES, HEPPS, Tricina, glicinamida, Bicina, TAPS, CHES, CAPS ou coisa parecida, são adequadamente empregados. Além disso, o inibidor da adsorção da cistatina C pode também compreender um aditivo conhecido tal como um agente de estabilização ou um agente de quelação. Exemplos específicos do aditivo incluem, porém sem limitar, os agentes de estabilização tais como a albumina de soro bovino e a caseína e os agentes de quelação tais como o EDTA.

[0023] O inibidor da adsorção da cistatina C de acordo com a presente invenção pode ser usado pela adição a uma solução que contenha a cistatina C. Exemplos da solução que contém a cistatina C incluem aquelas amostras de teste separadas de um corpo vivente e as soluções padrão de cistatina C usadas para preparar uma curva de calibração necessária para quantificar a cistatina C. Exemplos da amostra separada de um corpo vivente incluem o sangue, soro sanguíneo, plasma sanguíneo, urina, fezes, saliva, líquido tecidual, líquido espinhal e mechas absorventes, bem como suas diluições. A quantidade do inibidor da adsorção da cistatina C a ser usada pode ser apropriadamente selecionada de acordo com a quantidade de cistatina C contida na solução. O conteúdo do inibidor da adsorção da cistatina C em tal amostra originada de um corpo vivente situa-se usualmente na faixa de aproximadamente 0,01 a 100 mg/litro, e uma curva de calibração é também usualmente preparada com o uso de uma solução padrão de cistatina C tendo esta faixa de concentração. Portanto, a quantidade do inibidor da adsorção da cistatina C a ser usada é preferivelmente uma quantidade adequada para a concentração da cistatina C de 0,01 a 100 mg/litro e, especificamente, é preferivelmente de 0,001 a 10 % p/v, mais preferível de 0,01 a 5 % p/v, em termos da concentração final do tensoativo não iônico (em termos da concentração total quando uma pluralidade de tensoativos é empregada).

[0024] Uma tal amostra à qual o inibidor da adsorção da cistatina C é adicionado pode ser adequadamente usada em qualquer dos métodos de medição da cistatina C conhecidos. Tendo em vista que a adsorção da cistatina C em uma amostra, a um instrumento tal como um recipiente plástico, pode ser eficazmente inibida pela adição do inibidor da adsorção da cistatina C de acordo com a presente invenção à amostra, torna-se possível medir precisamente a cistatina C na amostra.

[0025] Como o método para medir cistatina C, os imunoensaios nos quais um anticorpo contra a cistatina C é usado são conhecidos (por exemplo, ver os Documentos de Patente 1 a 4 e o Documento 1 não patente). A cistatina C é uma proteína conhecida e o anticorpo contra ela já é também conhecido. Além disso, tendo em vista que os imunoensaios são métodos convencionais por si bem conhecidos, os reagentes e kits usados para eles acham-se também comercialmente disponíveis. O inibidor da adsorção da cistatina C de acordo com a presente invenção pode ser fornecido em combinação com tal reagente e/ou kit de medição comercialmente disponível. Isto é, a presente invenção também provê um reagente e kit de medição compreendendo o inibidor da adsorção da cistatina C. Aqui, além das diluições de amostras, diluições de anticorpos, soluções de lavagem, soluções enzimáticas, soluções de substratos e outras, a expressão “reagente de medição” aqui usada também inclui a solução padrão da cistatina C acima mencionada. Uma vez que uma adição do inibidor da adsorção da cistatina C de acordo com a presente invenção, à solução padrão de cistatina C, permita medições da cistatina C na solução padrão, uma curva de calibração precisa pode ser preparada.

[0026] Como descrito mais acima, pela utilização do inibidor da adsorção da cistatina C contendo um tensoativo não iônico, a adsorção da cistatina C em uma amostra, tal como uma amostra biológica, ao instrumento de medição, pode ser inibida. Isto é, a presente invenção também provê um método para inibir a adsorção da cistatina C, o método compreendendo colocar a amostra contendo a cistatina C em contato com um instrumento de medição na presença de um tensoativo não iônico. A expressão “método para inibir a adsorção” aqui usada refere-se a inibir a adsorção da cistatina C, em uma amostra, a um instrumento de medição tal como um recipiente plástico. As condições do(s) tensoativo(s) não iônico(s), a concentração deles e a amostra contendo a cistatina C, que são usadas no método para inibir a adsorção, são as mesmas descritas no texto acima com respeito ao inibidor da adsorção.

[0027] Além disso, a presente invenção também provê um método para medir cistatina C em uma amostra, o método compreendendo a etapa de inibir a adsorção da cistatina C a um instrumento de medição pelo método acima mencionado de inibir a adsorção da cistatina C. O método de medição é preferivelmente realizado por imunoensaio. Pelo emprego do método acima mencionado de inibir a adsorção, a precisão da medição da cistatina C pode ser melhorada, de modo que a cistatina C na amostra possa ser precisamente medida. É preferível que a etapa de realizar o método para inibir a adsorção seja realizada antes de se colocar a amostra em contato com o recipiente de medição, tal como a placa de medição. Por exemplo, é preferível que a amostra e o(s) tensoativo(s) não iônico(s) sejam misturados na etapa de preparar uma amostra a ser medida. Observa-se aqui que, na presente invenção, o termo “medição” inclui “detecção”, “quantificação” e “semi- quantificação”.

[0028] A medição da cistatina C por si na amostra pode empregar qualquer método conhecido. Por exemplo, os imunoensaios com o uso de um anticorpo contra a cistatina C são conhecidos (por exemplo, ver os Documentos de Patente 1 a 4 e o Documento não patente 1), e um tal método conhecido pode ser empregado. Entretanto, uma vez que os imunoensaios sejam por si bem conhecidos conforme descrito acima, o método para medir cistatina C não fica restrito àqueles métodos conhecidos, e qualquer imunoensaio também pode ser aplicado. Isso é, quando da classificação à base do tipo de reação, os imunoensaios conhecidos incluem os métodos de sanduíche, os métodos de competição, os métodos de aglutinação, os métodos de imunocromatografia e outros, e quando da classificação com base no rótulo empregado, os imunoensaios conhecidos incluem os imunoensaios enzimáticos, os radioimunoensaios, os imunoensaios de fluorescência, os imunoensaios de quimioluminescência e outros. Qualquer destes é incluído no termo “imunoensaio” usado na presente invenção e pode ser empregado como o imunoensaio acima mencionado. Além disso, como descrito acima, a cistatina C é uma proteína conhecida, e o anticorpo da anti-cistatina C é também conhecido. Estes podem ser facilmente obtidos, já que existem também comercialmente disponíveis produtos destes. Além disso, os métodos de preparar uma proteína conhecida por uma técnica de engenharia genética, bem como métodos de preparar anticorpos contra uma proteína conhecida, tais como anticorpos policlonais e anticorpo monoclonais, e fragmentos de ligação a antígenos (fragmentos de anticorpos, tais como fragmentos Fab e fragmentos (ab’)2 que conservam uma propriedade de ligarem-se com os antígenos correspondentes), são também métodos convencionais bem conhecidos na técnica; portanto, uma pessoa de experiência normal na técnica deve ser capaz de preparar facilmente um anticorpo contra a cistatina C ou seu fragmento de ligação a antígeno.

[0029] Como a amostra usada no método para medir cistatina C de acordo com a presente invenção, uma amostra separada de um corpo vivente é preferida, e exemplos destes incluem o sangue, soro sanguíneo, plasma sanguíneo, urina, fezes, saliva, líquido tecidual, líquido espinhal e mechas absorventes, bem como suas diluições. No método de medição de acordo com a presente invenção, particularmente um fluido corporal de origem do sangue, tal como o sangue, o soro sanguíneo ou o plasma sanguíneo, bem como uma diluição destes, é adequadamente usado.

[0030] Nos Exemplos descritos abaixo, um método de imunoaglutinação é empregado. O método de imunoaglutinação será agora explanado; entretanto, a explanação não pretende restringir o escopo da presente invenção ao método de imunoaglutinação.

[0031] Um método de imunoaglutinação é um método de detectar ou quantificar um antígeno ou anticorpo em uma amostra de teste com base em uma troca em uma propriedade óptica, tal como a turbidez ou absorbância da solução de reação, cuja troca é causada pela reação de antígeno-anticorpo. O método de imunoaglutinação inclui o imunoensaio turbidimétrico e a imunonefelometria. Em um método de imunoaglutinação, partículas sensibilizadas, por exemplo, as partículas de outro coloidal ou de látex, são usadas. Em um método de imunoaglutinação, a substância de teste (cistatina C na presente invenção) é medida com base em uma mudança em uma propriedade óptica, tal como a turbidez ou a absorbância da solução, cuja mudança é causada pela reação de antígeno-anticorpo entre um antígeno na amostra e um anticorpo das partículas sensibilizadas ou entre um anticorpo na amostra e um antígeno das partículas sensibilizadas. Os métodos de imunoaglutinação nos quais as partículas de látex são usadas são também referidos como anti-soro no lugar das partículas sensibilizadas.

[0032] Nos casos em que o método de imunoaglutinação é empregado como o método para medir cistatina C de acordo com a presente invenção, a concentração das partículas sensibilizadas na solução de reação é usualmente de cerca de 0,01 a 0,5 %, e a reação é realizada usualmente em uma temperatura de 1 a 55 °C, preferivelmente de 35 a 40 °C, por cerca de 1 a 10 minutos. O meio de reação não é particularmente restrito, e vários tampões tais como os tampões de glicina e os tampões de Good podem ser empregados.

[0033] A concentração da cistatina C na amostra é calculada com base na quantidade de modificação (método do ponto final) ou no índice da mudança (método da relação) na turbidez ou absorbância da solução de reação medidas. O método do ponto final baseia-se na quantidade de modificação na turbidez ou na absorbância medida antes da reação e em um tempo prescrito após a reação, e o método da relação baseia-se na quantidade de modificação na turbidez ou na absorbância medidas antes da reação e após a reação com o tempo. O método de imunoaglutinação pode ser realizado manualmente ou mediante o uso de um analisador automático conhecido. EXEMPLOS

[0034] A presente invenção será agora descrita mais concretamente por meio dos seus exemplos. Entretanto, a presente invenção não fica restrita aos seguintes exemplos.

Preparação das Soluções de Amostra

[0035] Ao seguinte tampão Hepes 50 mM (pH 7,5), cada um dos tensoativos listados abaixo foi adicionado em uma quantidade de 0,1 % p/v para preparar as soluções de base. O antígeno da cistatina C foi adicionado a cada uma das soluções de base assim preparadas a uma concentração de aproximadamente 1 mg/litro para preparar as soluções de amostra.

[0036] As soluções de amostra assim preparadas foram transferidas para dois recipientes de amostras do analisador automático da nova marca registrada Hitachi, e uma delas foi designada de “Amostra sem transferência”. A outra amostra foi transferida para um novo recipiente de amostra e deixada suficientemente em contato com o recipiente por agitação adequada com turbilhão. Esta operação foi repetida uma vez mais para realizar um total de duas transferências. A solução de amostra assim obtida foi designada de “Amostra com duas transferências”. Além disso, como Exemplos Comparativos, as soluções de amostra não contendo nenhum tensoativo na solução de base foram preparadas e submetidas à medição da modificação na absorbância da mesma maneira como nos Exemplos.

Materiais Usados

[0037] Tensoativo não iônico A: Emulgen 707 (fabricado pela Kao Corporation; o principal componente é o alquiléter de polioxietileno); valor de HLB = 12,1

[0038] Tensoativo não iônico B: Emulgen A-90 (fabricado pela Kao Corporation; o componente principal é feniléter diestirenado de polioxietileno); valor de HLB = 14,5

[0039] Tensoativo não iônico C: Emulgen B-66 (fabricado pela Kao Corporation; o componente principal é tribenzilfeniléter de polioxietileno); valor de HLB = 13,2

[0040] Tensoativo não iônico D: Tween 80 (fabricado pela Sigma; o componente principal é o mono-oleato sorbitano de polioxietileno); valor de HLB = 15,0

[0041] Tensoativo aniônico A: PS-1 (fabricado pela Tosch Corporation; o componente principal é sulfonato poliestireno de sódio)

[0042] Tensoativo aniônico B: Pelex NBL (fabricado pela Kao Corporation; o componente principal é sulfonato alquil naftaleno de sódio)

[0043] Antígeno da cistatina C: cistatina C humana recombinante (fabricado pela DAKO)

Reagentes de Medição

[0044] Primeiro reagente: compreende o tampão Tris 10 mM (pH 8,5) e cloreto de sódio 500 mM

[0045] Segundo reagente: suspensão de látex sensibilizada pelo anticorpo anti-humano da cistatina C

[0046] Método de medição: A medição automática foi realizada pelo método do ponto final com o uso do Analisador Clínico Automático Hitachi 7180 (fabricado pela Hitachi Ltd.; ver HTTP://www.hitachi- hitec.com/science/medical/7180.html).

Medição pelo Analisador Automático

[0047] A concentração da cistatina C em cada amostra foi medida pelo uso dos reagentes de medição da cistatina C acima mencionados. Foram adicionados a 3 μl da solução de amostra preparada acima 230 μl do primeiro reagente, e a mistura resultante foi agitada em 37 °C e deixada repousar por 5 minutos. Após isso, 50 μl do segundo reagente foram acrescentados e a mistura resultante foi ainda agitada em 37 ± 0,1 °C. A reação de aglutinação foi medida durante um período de cerca de 5 minutos, em termos da quantidade de modificação na absorbância em 546 nm para comparar as concentrações da cistatina C. As amostras com concentrações conhecidas foram submetidas à medição sob as mesmas condições para se preparar uma curva de calibração com base no relacionamento entre a concentração da cistatina C e a quantidade da modificação na absorbância. Um software acessório do analisador automático foi usado para medir a modificação na absorbância, preparar a curva de calibração e calcular os valores quantitativos.

[0048] A taxa de adsorção foi calculada com o uso da seguinte equação, e a capacidade de inibir a adsorção da cistatina C foi avaliada em cada material de teste de acordo com os seguintes critérios de avaliação.

[0049] Taxa de adsorção (%) = Concentração da Cistatina C na Solução de Amostra com Duas Transferências / Concentração da Cistatina C na Solução de Amostra sem Transferência - 1) x 100

Critérios de Avaliação

[0050] (Excelente): O valor absoluto do índice de adsorção não é maior do que 1 %

[0051] (Bom): O valor absoluto do índice de adsorção não é maior do que 10 %.

[0052] (Não aceitável): O valor absoluto do índice de adsorção é maior do que 10 %. TABELA 1

NOTA 1: Um menor valor absoluto do índice de adsorção significa uma menor quantidade de adsorção.

Discussão

[0053] A adsorção da cistatina C ao recipiente da amostra simplesmente foi inibida pelo uso dos tensoativos não iônicos. Por esse motivo, foi mostrado que a cistatina C pode ser precisamente quantificada por meio de operação simples mediante o uso do analisador automático.

Claims

1. Método para inibir a adsorção da cistatina C, caracterizado pelo fato de que compreende colocar a amostra contendo cistatina C em contato com um instrumento de medição na presença de um tensoativo não iônico, em que o referido tensoativo não iônico é um tensoativo do tipo de polioxietileno, selecionado de pelo menos um do grupo que consiste em polioxietileno alquiléter, polioxietileno feniléter destirenado, polioxietileno tribenzilfeniléter e polioxietileno monooleato de sorbitano.

2. Método para inibir a adsorção, de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de que referido tensoativo não iônico se acha presente em uma quantidade de 0,001 a 10 % em p/v.

3. Método para inibir a adsorção, de acordo com a reivindicação 2, caracterizadopelo fato de que referido tensoativo não iônico se acha presente em uma quantidade de 0,01 a 5 % em p/v.

4. Método para inibir a adsorção, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizadopelo fato de que referido instrumento de medição é um recipiente de plástico.

5. Método para medir cistatina C em uma amostra, caracterizadopelo fato de que compreende a etapa de inibir a adsorção da cistatina C ao referido instrumento de medição pelo método para inibir a adsorção como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4.

6. Método para medir de acordo com a reivindicação 5, caracterizadopelo fato de que é realizado por um imunoensaio.