BRPI0912898A2 - Polinucleotídeos e polipeptídeos isolados úteis para aumentar a eficiência de uso do nitrogênio, tolerância ao estresse abiótico, produção e biomassa em plantas - Google Patents

Abstract

polinucleotídeos e polipetídeos isolados úteis para aumentar a eficiência de uso do nitrogênio, tolerância ao estresse abiótico, produção e biomassa em plantas, são providos métodos para aumentar a eficiência de uso nitrogênio, eficiência de uso de fertilizante, produção, taxa de crescimento, vigor, biomassa, teor de óleo e/ou tolerância ao estresse abiótico de uma planta expressando dentro da planta um polinucleotídeo exógeno compreendendo uma sequência de ácido nucléico pelo menos 80% idêntica à seq id n°: 2506, 2512, 2442, 2496, 2446, 1, 2, 4, 7, 8, 11, 12, 13,16-19, 21-60, 63-128, 130-137, 270-287, 289-293, 295,306, 308-362, 364-666, 671, 673-1333, 2507-2511, 2513-2521 ou 2522; e para aumentar a eficiência de uso do nitrogênio, eficiência de uso de fertilizantes e/ou teor de óleo de uma planta expressando dentro da planta um polinucleotídeo exógeno compreendendo uma sequência de ácido nucléico pelo menos 80% idêntica à seq id n°; 3, 5, 6, 9, 10, 14, 15, 288, 394, 2398-2412 ou 2413; também são providos polipeptídios e polinucleotídeos isolados que podem ser usados para aumentar a eficiência de uso do nitrogênio, eficiência de uso de fertilizantes, produção, taxa de crescimento, vigor, biomassa, teor de óleo e/ou tolerância ao estresse abiótico de uma planta de uma planta.

Description

“POLINUCLEOTÍDEOS E

POLIPEPTÍDEOS ISOLADOS ÚTEIS PARA AUMENTAR A EFICIÊNCIA DE USO DO NITROGÊNIO, TOLERÂNCIA AO ESTRESSE ABIÓTICO, PRODUÇÃO E BIOMASSA EM PLANTAS” 5 CAMPO E ANTECEDENTES DA INVENÇÃO A presente invenção, em algumas de suas configurações, está relacionada a polinucleotídeos e polipeptídeos isolados, combinações de ácido nucléico compreendendo os mesmos, plantas transgênicas expressando os mesmos e métodos para usar os mesmos para aumentar eficiência de uso do nitrogênio, produção, biomassa, vigor, taxa de crescimento, teor de óleo, eficiência de uso de fertilizantes, eficiência de uso de água e tolerância ao estresse abiótico de uma planta.

Uma abordagem comum para promover o crescimento da planta era e continua a ser o uso de nutrientes naturais e sintéticos (fertilizantes). Dessa forma, os fertilizantes são o combustível por trás da "revolução verde", diretamente responsável pelo aumento excepcional nos rendimentos das safras durante os últimos 40 anos, e são considerados a despesa geral número um na agricultura. Dos três macronutrientes providos como fertilizantes principais [Nitrogênio (N), Fosfato (P) e Potássio (K)], o nitrogênio é o único que geralmente precisa ser reposto todo ano, em especial para cereais, que compreendem mais da metade das áreas cultivadas no mundo todo. Por exemplo, fertilizantes nitrogenosos inorgânicos tais como nitrato de amônio, nitrato de potássio, ou ureia,

normalmente são responsáveis por 40% dos custos associados a safras tais como milho e trigo.

O nitrogênio é um macronutriente essencial para a planta, responsável pela 5 biosíntese de aminoácidos e ácidos nucléicos, grupos prostéticos, hormônios vegetais, defesas químicas das plantas, etc. Além disso, o nitrogênio é, muitas vezes, o elemento limitador de taxa no crescimento da planta e todas as safras do campo têm uma dependência fundamental do nitrogênio inorgânico. Dessa forma, o nitrogênio é translocado para os galhos, onde é armazenado nas folhas e no caule durante a rápida etapa de desenvolvimento da planta e até a florescência. No milho, por exemplo, as plantas acumulam o lote de seu nitrogênio orgânico durante o período de germinação do grão e até a florescência. Uma vez ocorrida a fertilização da planta, os grãos começam a se formar e se tornam o dreno principal de nitrogênio da planta. O nitrogênio armazenado pode então ser redistribuído a partir das folhas e do caule que serviram de compartimentos de armazenamento até a formação do grão.

Uma vez que o fertilizante se esgota rapidamente na maioria dos tipos de solo, deve ser fornecido para cultivar safras duas ou três vezes durante a época de cultivo. Além disso, a baixa eficiência de uso do nitrogênio (EUN) das principais safras (ex., na faixa de apenas 30-70 %) afeta negativamente as despesas de insumo para o fazendeiro, devido ao excesso de fertilizante aplicado. Além do mais, a utilização excessiva e ineficiente de fertilizantes são fatores importantes responsáveis por problemas ambientais tais como eutroficação de lençóis freáticos, lagos, rios e mares, a poluição do nitrato na água potável que pode causar metemoglobinemia, poluição do 5 fosfato, poluição atmosférica e similares. No entanto, apesar do impacto negativo dos fertilizantes sobre o ambiente e dos limites sobre a utilização de fertilizantes, que foram legislados em vários países, espera-se que o uso de fertilizantes aumente para dar suporte à produção de alimentos e fibras para atender ao rápido crescimento da população em recursos de terra limitados. Por exemplo, foi estimado que até 2050, mais de 150 milhões de toneladas de fertilizante nitrogenoso serão usadas anualmente no mundo todo.

O aumento da eficiência de uso do nitrogênio pelas plantas deve possibilitar que as safras sejam cultivadas com menor insumo de fertilizantes, ou de maneira alternativa cultivadas em solos de qualidade inferior e teriam, portanto, um impacto econômico significativo em sistemas agrícolas desenvolvidos e em desenvolvimento.

O aperfeiçoamento genético da eficiência de uso de fertilizantes (EUF) em plantas pode ser obtido através do cultivo tradicional ou por engenharia genética.

Tentativas de geração de plantas com maior EUF foram descritas no Pedido de Patente Americana Nº 20020046419 para Choo, et al.; Pedido de

Patente Americana Nº 2005010879 para Edgerton et al; Pedido de Patente Americana Nº 20060179511 para Chomet et al; Good, A, et al. 2007 (Engineering nitrogen use efficiency with alanine aminotransferase. Canadian Journal of Botany 85: 5 252-262); e Good AG et al. 2004 (Trends Plant Sci. 9:597- 605).

Yanagisawa et al. (Proc. Natl.

Acad. Sci. U.S.A. 2004 101:7833-8) descreve plantas transgênicas de Dofl que apresentam crescimento aprimorado em condições de baixo nitrogênio.

A Patente Americana Nº

6.084.153 para Good et al. divulga a utilização de um promotor que reage ao estresse para controlar a expressão de Alanina Aminotransferase (ALT) e plantas de canola transgênicas com tolerância à seca e à deficiência do nitrogênio melhoradas quando comparadas a plantas de controle.

A escassez global do fornecimento de água, desertificação, condições de estresse abiótico (ABS) (ex., seca, salinidade, osmoticum, inundação, temperaturas não ideais tais como frio e calor, poluição química tóxica, radiação, deficiências de nutrientes e similares) juntamente com a presença de fontes limitadas de nitrogênio e fertilizante causam danos substanciais a plantas agrícolas tais como alterações importantes no metabolismo da planta, morte celular e diminuições no crescimento da planta e produtividade da safra.

A seca é um fenômeno gradativo que envolve períodos de clima irregularmente seco que persiste o suficiente para ocasionar desequilíbrios hidrológicos sérios tais como danos à safra, escassez no fornecimento de água e aumento da suscetibilidade a diversas 5 doenças.

A salinidade afeta um em cinco hectares de terra irrigada. Nenhuma das cinco principais culturas alimentares, i.e., trigo, milho, arroz, batata e soja é capaz de tolerar sal em excesso. Os efeitos prejudiciais do sal em plantas resultam tanto do déficit de água, que leva ao estresse osmótico (similar ao estresse por seca), quanto do efeito do excesso de íons de sódio em processos bioquímicos críticos. Como ocorre com o congelamento e a seca, a alta concentração de sal ocasiona o déficit de água; e a alta concentração de sal faz com que as raízes das plantas tenham dificuldade em extrair a água de seu ambiente. Dessa forma, a salinação dos solos que são usados para produção agrícola é um problema significativo e cada vez maior em regiões que dependem decisivamente da agricultura, e é piorado pela utilização excessiva, fertilização excessiva e escassez de água, normalmente causados por alterações climáticas e pelas demandas de uma população cada vez maior.

Temperaturas extremas tais como abaixo do ideal ou temperaturas de calor afetam o crescimento e o desenvolvimento das plantas ao longo de todo o ciclo de vida da planta. Dessa forma, temperaturas baixas reduzem a taxa de germinação e temperaturas altas resultam em necrose das folhas. Além disso, plantas maduras que são expostas ao calor excessivo podem experimentar choque de calor, que pode se originar em diversos órgãos, inclusive as folhas e, em especial, frutos, quando a transpiração é 5 insuficiente para superar o estresse do calor. O calor também danifica estruturas celulares, inclusive organelas e o citoesqueleto e prejudica a função da membrana. O choque de calor pode produzir uma diminuição na síntese geral das proteínas, acompanhada de uma expressão de proteínas de choque de calor, ex., chaperones, que estão envolvidas no redobramento de proteínas desnaturadas pelo calor. O dano por altas temperaturas ao pólen quase sempre ocorre em conjunto com o estresse por seca e raramente ocorre em condições de boa umidificação. O estresse combinado pode alterar o metabolismo da planta de novas maneiras. Condições de resfriamento excessivo, ex., temperaturas baixas, mas acima do congelamento, afetam as safras de origens tropicais, tais como soja, arroz, milho e algodão. Os danos por resfriamento típicos incluem definhamento, necrose, clorose ou vazamento de íons das membranas celulares.

Condições de luz excessiva, que ocorrem em condições atmosféricas limpas subsequentes a noites frias e tardias de verão/outono, podem levar à fotoinibição da fotossíntese (interrupção da fotossíntese). Além disso, o resfriamento pode levar a perdas de produção e qualidade de produto inferior através da maturação atrasada do milho.

As deficiências de nutrientes causam adaptações da arquitetura da raiz, particular e notavelmente, por exemplo, é a proliferação da raiz em pequenos pedaços de terra ricos em nutrientes para aumentar a absorção de nutrientes. As deficiências de nutrientes também causam a ativação de uma série de reações químicas 5 metabólicas da planta que maximizam os processos de absorção, assimilação e distribuição tais como ativando alterações de arquitetura. A engenharia da expressão dos genes acionados pode fazer com que a planta exiba as alterações de arquitetura e um metabolismo aprimorado também sob outras condições.

Além disso, é bastante difundido que plantas normalmente respondem à deficiência de água criando um sistema de raízes mais profundas que permite o acesso à umidade situada em camadas mais profundas do solo. O desencadeamento desse efeito permitirá que as plantas acessem nutrientes e água situados em horizontes de solos mais profundos em especial aqueles imediatamente dissolvidos em nitratos como a água.

A produção é afetada por diversos fatores tais como o número e o tamanho dos órgãos da planta, a arquitetura da planta (por exemplo, o número de ramos), o comprimento definido dos grãos, o número de grãos preenchidos, vigor (ex. muda), taxa de crescimento, desenvolvimento da raiz, utilização de água, nutrientes (ex., nitrogênio) e fertilizantes e tolerância ao estresse.

Safras tais como, milho, arroz, trigo, canola e soja são responsáveis por mais da metade da ingestão calórica humana total, seja por consumo direto das próprias sementes ou através do consumo de produtos alimentícios produzidos em forragem ou sementes processadas. As sementes também são uma fonte de açúcares, proteínas, óleos e metabólitos utilizados em processos 5 industriais. A capacidade de aumentar a produção das plantas, seja pelo aumento da taxa de acúmulo de matéria seca, modificando a composição de lignina ou celulose, aumento da força do caule, ampliação do tamanho do meristema, alteração do padrão de ramificação da planta, ereção das folhas, aumento na eficiência da fertilização, taxa aprimorada de acúmulo de matéria seca da semente, modificação do desenvolvimento da semente, preenchimento aprimorado da semente ou aumento do teor de óleo, amido ou proteína nas sementes poderia ter muitas aplicações em usos agrícolas e não agrícolas tais como na produção biotecnológica de produtos farmacêuticos, anticorpos ou vacinas.

A publicação WO Nº 2009/013750 divulga genes, combinações e métodos para aumentar a tolerância ao estresse abiótico, biomassa e/ou produção em plantas geradas com isso.

A publicação WO Nº 2008/122980 divulga genes, combinações e métodos para aumentar o teor de óleo, a taxa de crescimento e biomassa das plantas.

A publicação WO Nº 2008/075364 divulga polinucleotídeos envolvidos no desenvolvimento da fibra vegetal e métodos de utilizá-los.

A publicação WO Nº 2007/049275 divulga polipeptídeos isolados, polinucleotídeos codificando-os, plantas transgênicas expressando-os e métodos para sua utilização para aumentar a eficiência de uso de fertilizantes, tolerância da planta ao estresse 5 abiótico e biomassa.

A publicação WO Nº 2004/104162 divulga métodos para aumentar a tolerância ao estresse abiótico e/ou biomassa em plantas e plantas geradas por meio disso.

A publicação WO Nº 2005/121364 divulga polinucleotídeos e polipeptídeos envolvidos no desenvolvimento da fibra vegetal e métodos e métodos de utilizá-los para melhorar a qualidade da fibra, produção e/ou biomassa de uma planta produtora de fibras.

A publicação WO Nº 2007/020638 divulga métodos para aumentar a tolerância ao estresse abiótico e/ou biomassa em plantas e plantas geradas através disso.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO De acordo com um aspecto de algumas configurações da presente invenção é provido um método para aumentar a eficiência de uso do nitrogênio, a eficiência de uso de fertilizantes, produção, taxa de crescimento, vigor, biomassa, teor de óleo e/ou tolerância ao estresse abiótico de uma planta, compreendendo expressar dentro da planta um polinucleotídeo exógeno compreendendo uma sequência de ácido nucléico pelo menos 80% idêntica à SEQ ID Nº: 2506, 2512, 2442, 2496, 2446, 1, 2, 4, 7, 8, 11,

12, 13, 16-19, 21-60, 63-128, 130-137, 270-287, 289-293, 295-306, 308-362, 364-666, 671, 673-1333, 2414-2441, 2443- 2445, 2447-2455, 2458-2495, 2497-2505, 2507-2511, 2513-2521 ou 2522, com isso aumentando eficiência de uso do 5 nitrogênio, a eficiência de uso de fertilizantes, produção, taxa de crescimento, vigor, biomassa, teor de óleo e/ou tolerância ao estresse abiótico da planta.

De acordo com um aspecto de algumas configurações da presente invenção é provido um método para aumentar a eficiência de uso do nitrogênio, a eficiência de uso de fertilizantes, produção, taxa de crescimento, vigor, biomassa, teor de óleo e/ou tolerância ao estresse abiótico de uma planta, compreendendo expressar dentro da planta um polinucleotídeo exógeno compreendendo a sequência de ácido nucléico selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID Nº: 2506, 2512, 2442, 2496, 2446, 1, 2, 4, 7, 8, 11, 12, 13, 16-19, 21-60, 63-128, 130-137, 270- 287, 289-293, 295-306, 308-362, 364-666, 671, 673-1333, 2414-2441, 2443-2445, 2447-2455, 2458-2495, 2497-2505, 2507- 2511, 2513-2522, 3, 5, 6, 9, 10, 14, 15, 20, 61, 62, 129, 288, 294, 307, 363, 667, 668, 669, 670, 672, 2398-2413, 2456 e 2457, com isso aumentando a eficiência de uso do nitrogênio, a eficiência de uso de fertilizantes, produção, taxa de crescimento, vigor, biomassa, teor de óleo e/ou tolerância ao estresse abiótico da planta.

De acordo com um aspecto de algumas configurações da presente invenção é provido um método para aumentar a eficiência de uso do nitrogênio, a eficiência de uso de fertilizantes, produção, taxa de crescimento, vigor, biomassa, teor de óleo e/ou tolerância ao estresse abiótico de uma planta, compreendendo expressar dentro da planta um polinucleotídeo exógeno compreendendo a 5 sequência de ácido nucléico codificando um polipeptídeo pelo menos 80% idêntico à SEQ ID Nº: 2557, 2560, 184, 238, 188, 154-156, 158-161, 163-183, 185-187, 189-197, 200-237, 239- 264, 266-269, 1351, 1365-1425, 1429-1457, 1459, 1461-1730, 1735, 1739-2397, 2533-2541, 2544-2556, 2558, 2559, 2561-2562 or 2563, com isso aumentando a eficiência de uso do nitrogênio, a eficiência de uso de fertilizantes, produção, taxa de crescimento, vigor, biomassa, teor de óleo e/ou tolerância ao estresse abiótico da planta.

De acordo com um aspecto de algumas configurações da presente invenção é provido um método para aumentar a eficiência de uso do nitrogênio, a eficiência de uso de fertilizantes, produção, taxa de crescimento, vigor, biomassa, teor de óleo e/ou tolerância ao estresse abiótico de uma planta, compreendendo expressar dentro da planta um polinucleotídeo exógeno compreendendo a sequência de ácido nucléico codificando um polipeptídeo selecionado a partir do grupo que consiste na SEQ ID Nº: 2557, 2560, 184, 238, 188, 154-156, 158-161, 163-183, 185- 187, 189-197, 200-237, 239-264, 266-269, 1351, 1365-1425, 1429-1457, 1459, 1461-1730, 1735, 1739-2397, 2533-2541, 2544-2556, 2558, 2559, 2561-2563, 138-143, 146, 148, 150- 152, 157, 162, 198, 265, 1334-1350, 1352-1364, 1426-1428, 1458, 1460, 1732-1734, 1737-1738, 2523-2532, 2542 e 2543,

com isso aumentando a eficiência de uso do nitrogênio, a eficiência de uso de fertilizantes, produção, taxa de crescimento, vigor, biomassa, teor de óleo e/ou tolerância ao estresse abiótico da planta.

5 De acordo com um aspecto de algumas configurações da presente invenção é provido um método para aumentar a eficiência de uso do nitrogênio, a eficiência de uso de fertilizantes e/ou teor de óleo de uma planta, compreendendo expressar dentro da planta um polinucleotídeo exógeno compreendendo a sequência de ácido nucléico pelo menos 80% idêntica à SEQ ID Nº: 3, 5, 6, 9, 10, 14, 15, 288, 294, 2398-2412 ou 2413, com isso aumentando a eficiência de uso do nitrogênio, a eficiência de uso de fertilizantes, e/ou teor de óleo da planta.

De acordo com um aspecto de algumas configurações da presente invenção é provido um método para aumentar a eficiência de uso do nitrogênio, a eficiência de uso de fertilizantes e/ou teor de óleo de uma planta, compreendendo expressar dentro da planta um polinucleotídeo exógeno compreendendo a sequência de ácido nucléico selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID Nº: 3, 5, 6, 9, 10, 14, 15, 288, 294, 2398-2413, com isso aumentando a eficiência de uso do nitrogênio, a eficiência de uso de fertilizantes e/ou teor de óleo da planta.

De acordo com um aspecto de algumas configurações da presente é provido um método para aumentar a eficiência de uso do nitrogênio, a eficiência de uso de fertilizantes e/ou teor de óleo de uma planta,

compreendendo expressar dentro da planta um polinucleotídeo exógeno compreendendo a sequência de ácido nucléico codificando um polipeptídeo pelo menos 80% idêntico à SEQ ID Nº: 138-153, 1334-1350, 1352-1364, 1458, 1460, 2523-2531 ou 5 2532, com isso aumentando a eficiência de uso do nitrogênio, a eficiência de uso de fertilizantes e/ou teor de óleo da planta.

De acordo com um aspecto de algumas configurações da presente invenção é provido um método para aumentar a eficiência de uso do nitrogênio, a eficiência de uso de fertilizantes e/ou teor de óleo de uma planta, compreendendo expressar dentro da planta um polinucleotídeo exógeno compreendendo a sequência de ácido nucléico codificando um polipeptídeo selecionado a partir do grupo que consiste na SEQ ID Nº: 138-153, 1334-1350, 1352- 1364, 1458, 1460, 2523-2532, com isso aumentando a eficiência de uso do nitrogênio, a eficiência de uso de fertilizantes e/ou teor de óleo da planta.

De acordo com um aspecto de algumas configurações da presente invenção é provido um polinucleotídeo isolado compreendendo a sequência de ácido nucléico pelo menos 80% idêntica à SEQ ID Nº: 2506, 2512, 2442, 2496, 2446, 1, 2, 4, 7, 8, 11, 12, 13, 16-19, 21-60, 63-128, 130-137, 270-287, 289-293, 295-306, 308-362, 364- 666, 671, 673-1333, 2414-2441, 2443-2445, 2447-2455, 2458- 2495, 2497-2505, 2507-2511, 2513-2521 ou 2522, onde a sequência de ácido nucléico é capaz de aumentar a eficiência de uso do nitrogênio, a eficiência de uso de fertilizantes,

produção, taxa de crescimento, vigor, biomassa, teor de óleo e/ou estresse abiótico de uma planta.

De acordo com um aspecto de algumas configurações da presente invenção é provido um 5 polinucleotídeo isolado compreendendo a sequência de ácido nucléico selecionado a partir do grupo que consiste na SEQ ID Nº: 2506, 2512, 2442, 2496, 2446, 1, 2, 4, 7, 8, 11, 12, 13, 16-19, 21-60, 63-128, 130-137, 270-287, 289-293, 295- 306, 308-362, 364-666, 671, 673-1333, 2414-2441, 2443-2445, 2447-2455, 2458-2495, 2497-2505, 2507-2511, 2513-2522, 3, 5, 6, 9, 10, 14, 15, 20, 61, 62, 129, 288, 294, 307, 363, 667, 668, 669, 670, 672, 2398-2413, 2456 e 2457.

De acordo com um aspecto de algumas configurações da presente invenção é provido um polinucleotídeo isolado compreendendo a sequência de ácido nucléico codificando um polipeptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos 80% homóloga à sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID Nº: 2557, 2560, 184, 238, 188, 154-156, 158-161, 163-183, 185-187, 189-197, 200- 237, 239-264, 266-269, 1351, 1365-1425, 1429-1457, 1459, 1461-1730, 1735, 1739-2397, 2533-2541, 2544-2556, 2558, 2559, 2561-2562 ou 2563, onde a sequência de aminoácidos é capaz de aumentar a eficiência de uso do nitrogênio, a eficiência de uso de fertilizantes, produção, taxa de crescimento, vigor, biomassa, teor de óleo e/ou tolerância ao estresse abiótico de uma planta.

De acordo com um aspecto de algumas configurações da presente invenção é provido um polinucleotídeo isolado compreendendo a sequência de ácido nucléico codificando um polipeptídeo que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID Nº: 2557, 2560, 184, 238, 188, 154-156, 5 158-161, 163-183, 185-187, 189-197, 200-237, 239-264, 266- 269, 1351, 1365-1425, 1429-1457, 1459, 1461-1730, 1735, 1739-2397, 2533-2541, 2544-2556, 2558, 2559, 2561-2563, 138- 143, 146, 148, 150-152, 157, 162, 198,265, 1334-1350, 1352- 1364, 1426-1428, 1458, 1460, 1732-1734, 1737-1738, 2523- 2532, 2542 e 2543.

De acordo com um aspecto de algumas configurações da presente invenção é provido uma combinação de ácido nucléico compreendendo o polinucleotídeo isolado da invenção e um promotor para direcionar a transcrição da sequência de ácido nucléico em uma célula hospedeira.

De acordo com um aspecto de algumas configurações da presente invenção é provido um polinucleotídeo isolado compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 80% homóloga à SEQ ID Nº: 2557, 2560, 184, 238, 188, 154-156, 158-161, 163-183, 30 185-187, 189- 197, 200-237, 239-264, 266-269, 1351, 1365-1425, 1429-1457, 1459, 1461-1730, 1735, 1739-2397, 2533-2541, 2544-2556, 2558, 2559, 2561-2562 ou 2563, onde a sequência de aminoácidos é capaz de aumentar eficiência de uso do nitrogênio, a eficiência de uso de fertilizantes, produção, taxa de crescimento, vigor, biomassa, teor de óleo e/ou tolerância ao estresse abiótico de uma planta.

De acordo com um aspecto de algumas configurações da presente invenção é provido um polinucleotídeo isolado compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste na 5 SEQ ID Nº: 2557, 2560, 184, 238, 188, 154-156, 158-161, 163- 183, 185-187, 189-197, 200-237, 239-264, 266-269, 1351, 1365-1425, 1429-1457, 1459, 1461-1730, 1735, 1739-2397, 2533-2541, 2544-2556, 2558, 2559, 2561-2563, 138-143, 146, 148, 150-152, 157, 162, 198, 265, 1334-1350, 1352-1364, 1426-1428, 1458, 1460, 1732-1734, 1737-1738, 2523-2532, 2542 e 2543.

De acordo com um aspecto de algumas configurações da presente invenção é provida uma célula vegetal que expressa de forma exógena o polinucleotídeo da invenção ou a combinação de ácido nucléico da invenção.

De acordo com um aspecto de algumas configurações da presente invenção é provida uma célula vegetal que expressa de forma exógena o polipeptídeo da invenção.

De acordo com algumas configurações da invenção, a sequência de ácido nucléico é conforme estabelecida na SEQ ID Nº: 2506, 2512, 2442, 2496, 2446, 1, 2, 4, 7, 8, 11, 12, 13, 16-19, 21-60, 63-128, 130- 137, 270-287, 289-293, 295-306, 308-362, 364-666, 671, 673- 1333, 2414-2441, 2443-2445, 2447-2455, 2458-2495, 2497-2505, 2507-2511, 2513-2521 ou 2522.

De acordo com algumas configurações da invenção, o polinucleotídeo consiste na sequência de ácido nucléico selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID Nº: 2506, 2512, 2442, 2496, 2446, 1, 2, 4, 7, 8, 11, 12, 13, 16-19, 21-60, 63-128, 130-137, 270- 5 287, 289-293, 295-306, 308-362, 364-666, 671, 673-1333, 2414-2441, 2443-2445, 2447-2455, 2458-2495, 2497-2505, 2507- 2511, 2513-2522.

De acordo com algumas configurações da invenção, a sequência de ácido nucléico codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 80% homóloga à SEQ ID Nº: 2557, 2560, 184, 238, 188, 154-156, 158-161, 163-183, 185-187, 189-197, 200-237, 239-264, 266- 269, 1351, 1365-1425, 1429-1457, 1459, 1461-1730, 1735, 1739-2397, 2533-2541, 2544-2556, 2558, 2559, 2561-2562 ou

2563.

De acordo com algumas configurações da invenção, a sequência de ácido nucléico codifica a sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID Nº: 2557, 2560, 184, 238, 188, 154-156, 158-161, 163-183, 185-187, 189-197, 200-237, 239- 264, 266-269, 1351, 1365-1425, 1429-1457, 1459, 1461-1730, 1735, 1739-2397, 2533-2541, 2544-2556, 2558, 2559, 2561-

2563.

De acordo com algumas configurações da invenção, a sequência de ácido nucléico é conforme estabelecida na SEQ ID Nº: 3, 5, 6, 9, 10, 14, 15, 288, 294, 2398-2412 ou 2413.

De acordo com algumas configurações da invenção, o polinucleotídeo consiste na sequência de ácido nucléico selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID Nº: 3, 5, 6, 9, 10, 14, 15, 288, 294, 2398-2413.

5 De acordo com algumas configurações da invenção, a sequência de ácido nucléico codifica uma sequência de aminoácidos pelo menos 80% homóloga à SEQ ID Nº: 138-153, 1334-1350, 1352-1364, 1458, 1460, 2523-2531 ou 2532.

De acordo com algumas configurações da invenção, a sequência de ácido nucléico codifica a sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID Nº: 138-153, 1334-1350, 1352- 1364, 1458, 1460, 2523-2532.

De acordo com algumas configurações da invenção, a célula vegetal forma parte de uma planta.

De acordo com algumas configurações da invenção, o método ainda compreendendo o cultivo da planta expressando o polinucleotídeo exógeno sob estresse abiótico.

De acordo com algumas configurações da invenção, o estresse abiótico é selecionado dentre um grupo que consiste em salinidade, seca, privação de água, inundação, estiolamento, baixa temperatura, alta temperatura, toxicidade de metais pesados, anaerobiose, deficiência de nutrientes, excesso de nutrientes, poluição atmosférica e Irradiação UV.

De acordo com algumas configurações da invenção, a produção compreende produção de sementes ou produção de óleo.

A menos que de outra forma 5 definido, todos os termos técnicos e/ou científicos utilizados no presente documento têm o mesmo significado normalmente compreendido por alguém de habilidade comum na técnica à qual diz respeito a invenção. Embora métodos e materiais similares ou equivalentes àqueles descritos no presente documento possam ser utilizados na prática ou teste de configurações da invenção, são descritos abaixo exemplos de métodos e/ou materiais. Em caso de conflito, a especificação da patente incluindo definições, aplicar-se-á.

Além disso, os materiais, métodos e exemplos têm caráter somente ilustrativo e não se destinam necessariamente a limitar a invenção.

BREVE DESCRIÇÃO DAS ILUSTRAÇÕES Algumas configurações da invenção são descritas no presente documento somente como forma de exemplo, com referência às ilustrações em anexo.

Agora se referindo especificamente às ilustrações detalhadas, é enfatizado que as especificidades mostradas são uma forma de exemplo e para fins de discussão ilustrativa de configurações da invenção. A esse respeito, a descrição feita com as ilustrações torna aparente àqueles com experiência na técnica como as configurações da invenção podem ser colocadas em prática.

Nas ilustrações:

A figura 1 é uma ilustração esquemática do plasmídeo binário pGI utilizado para expressar as sequências do polinucleotídeo isolado de algumas configurações da invenção.

RB - borda direita do

5 T - DNA; LB - borda esquerda do T - DNA; H -

enzima de restrição Hind III; X – enzima de restrição Xbal; B - enzima de restrição BamHI; S

– enzima de restrição SalI; Sm - enzima de restrição SmaI; R-I - enzima de restrição EcoRI;

Sc - SacI/SstI/Ecll36II; (números) - Extensão em pares-base; NOS pro = promotor da nopalina sintase; NPT-II = 15 gene de neomicina fosfotransferase; NOS ter = terminador da nopalina sintase; sinal Poli-A (sinal de poliadenilação); GUSintron - o gene repórter GUS

(sequência de codificação e íntron). As sequências de polinucleotídeo isolado da invenção foram clonadas no vetor ao substituir o gene repórter GUSintron; a figura 2 é uma ilustração esquemática do plasmídeo binário modificado pGI utilizado para expressar as sequências de polinucleotídeo isolado da invenção.

RB - borda direita do T-DNA; LB -

borda esquerda do T - DNA; MCS – Local de clonagem múltipla; RE – qualquer enzima de restrição; (números) - Extensão em pares-base;

NOS pro = promotor da nopalina sintase; NPT-II = gene de neomicina fosfotransferase; NOS ter = terminador da nopalina sintase; Sinal Poli-A (sinal de poliadenilação); GUSintron - o gene repórter GUS (sequência de codificação e íntron) As sequências de polinucleotídeo isolado da 5 invenção foram clonadas no vetor ao substituir o gene repórter GUSintron; e as figuras 3A-B são imagens que representam a visualização do desenvolvimento da raiz de plantas cultivadas em placas de ágar transparentes. Os diferentes transgenes foram cultivados em placas de ágar transparentes por 10 dias e as placas foram fotografadas a cada 3-4 dias começando no dia 1.

Figura 3A – Uma imagem de uma fotografia de plantas tirada após 10 dias em placas de ágar.

Figura 3B – Uma imagem da análise da raiz na qual a extensão da raiz medida é representada por uma seta vermelha.

DESCRIÇÃO DE CONFIGURAÇÕES ESPECÍFICAS DA INVENÇÃO A presente invenção, em algumas de suas configurações, está relacionada a polinucleotídeos e polipeptídeos isolados, vetores de expressão compreendendo-os e plantas transgênicas expressando-os e, mais especificamente, mas não exclusivamente, a métodos para aumentar a eficiência de uso do nitrogênio, produção, biomassa, vigor, taxa de crescimento, teor de óleo e tolerância ao estresse abiótico de uma planta utilizando-os.

Antes de explicar pelo menos uma configuração da invenção em detalhes, deve ser compreendido que a invenção em sua aplicação não se limita necessariamente aos detalhes estabelecidos na descrição a seguir ou exemplificados pelos exemplos. A invenção é capaz 5 de outras configurações ou de ser praticada ou executada de diversas formas.

Ao reduzir a presente invenção à prática, os presentes inventores identificaram novos polipeptídeos e polinucleotídeos que podem ser usados para aumentar a eficiência de uso do nitrogênio, a eficiência de uso de fertilizantes, a eficiência de uso de água, produção, taxa de crescimento, biomassa, teor de óleo, vigor e/ou tolerância ao estresse abiótico de uma planta.

Dessa forma, conforme mostrado na seção de exemplos a seguir, os presentes inventores utilizaram ferramentas de bioinformática para gerar perfis de expressão digital de agrupamentos de genes cujo nível de expressão é associado a diversas condições e estresses tais como deficiência de nutrientes, frio, salinidade, seca, estresse por calor, estiolamento, alagamento e estresse oxidativo (Tabelas 1-19; Exemplo 1 da Seção de exemplos a seguir), e com base nos perfis de expressão identificaram genes dos quais se espera o aprimoramento da eficiência de uso do nitrogênio, biomassa, taxa de crescimento, produção, vigor, teor de óleo e/ou tolerância ao estresse abiótico de uma planta (Tabela 20; polinucleotídeo SEQ ID Nº: 1-137; polipeptídeos SEQ ID Nº: 138-269; Exemplo 1 da seção de exemplos a seguir). Polipeptídeos e polinucleotídeos homólogos contendo a mesma função também foram identificados (Tabela 21, polinucleotídeo SEQ ID Nº:270-1333; polipeptídeo SEQ ID Nº: 1334-2397; Exemplo 2 da seção de exemplos a seguir). Para testar o efeito dos genes isolados no traço de 5 interesse, os polinucleotídeos foram clonados nos vetores binários (Tabela 23, polinucleotídeo SEQ ID Nº: 2398-2522; Exemplo 3 da seção de exemplos a seguir) e as proteínas previstas foram identificadas (Tabela 23, Exemplo 3). Foi constatado que plantas transgênicas com excesso de expressão dos polinucleotídeos identificados apresentam aumento de eficiência de uso do nitrogênio, produção, biomassa, áreas fotossintéticas e taxa de crescimento (Tabelas 24-521 Exemplos 5, 6 e 7 da seção de exemplos a seguir), bem como aumento de tolerância ao estresse abiótico (ex., sob estresse de salinidade; Tabelas 53-55, Exemplo 8 da seção de exemplos a seguir). No todo, esses resultados sugerem a utilização dos novos polinucleotídeos e polipeptídeos da invenção e suas sequências homólogas para aumentar a eficiência de uso do nitrogênio, a eficiência de uso de fertilizantes, produção (inclusive a produção de óleo, a produção de sementes e o teor de óleo), taxa de crescimento, biomassa, vigor e/ou tolerância ao estresse abiótico de uma planta.

Assim, de acordo com um aspecto de algumas configurações da invenção, é provido um método para aumentar a eficiência de uso de fertilizantes, a eficiência de uso do nitrogênio, produção, taxa de crescimento, vigor, biomassa, teor de óleo e/ou tolerância ao estresse abiótico de uma planta, compreendendo expressar dentro da planta um polinucleotídeo exógeno compreendendo a sequência de ácido nucléico pelo menos 80% idêntica à SEQ ID Nº: 2506, 2512, 2442, 2496, 2446, 1, 2, 4, 7, 8, 11, 12, 13, 5 16-19, 21-60, 63-128, 130-137, 270-287, 289-293, 295-306, 308-362, 364-666, 671, 673-1333, 2414-2441, 2443-2445, 2447- 2455, 2458-2495, 2497-2505, 2507-2511, 2513-2521 ou 2522, com isso aumentando a eficiência de uso do nitrogênio, a eficiência de uso de fertilizantes, produção, taxa de crescimento, vigor, biomassa, teor de óleo, eficiência de uso de água e/ou tolerância ao estresse abiótico da planta.

Conforme utilizada no presente documento, a frase "eficiência de uso de fertilizantes" refere-se ao(s) processo(s) metabólico(s) que levam a um aumento da produção, biomassa, vigor, e taxa de crescimento por unidade de fertilizante aplicada na planta. O processo metabólico pode ser a absorção, dispersão, absorvente (sic), acúmulo, remanejamento (dentro da planta) e utilização de um ou mais dos minerais e partes orgânicas absorvidos pela planta, tais como nitrogênio, fosfatos e/ou potássio.

Conforme utilizada no presente documento, a frase "condições limitadas por fertilizantes" refere-se às condições de crescimento que incluem um nível (ex., concentração) de um fertilizante aplicado que está abaixo do nível necessário para o metabolismo, crescimento, reprodução e/ou viabilidade normais da planta.

Conforme utilizada no presente documento, a frase "eficiência de uso do nitrogênio (EUN)"

refere-se ao(s) processo(s) metabólico(s) que levam a um aumento na produção, biomassa, vigor, e taxa de crescimento por unidade de nitrogênio aplicada na planta. O processo metabólico pode ser a absorção, dispersão, absorvente, 5 acúmulo, remanejamento (dentro da planta) e utilização do nitrogênio absorvido pela planta.

Conforme utilizada no presente documento, a frase "condições limitadas pelo nitrogênio" refere-se às condições de crescimento que incluem um nível (ex., concentração) de nitrogênio (ex., amônio ou nitrato) aplicado que está abaixo do nível necessário para o metabolismo, crescimento, reprodução e/ou viabilidade normais da planta.

EUN e EUF melhoradas são traduzidas no campo como a colheita de quantidades similares de produção, implementando menos fertilizantes, ou produções maiores obtidas com a implementação dos mesmos níveis de fertilizantes. Dessa forma, EUN ou EUF aprimoradas têm um efeito direto na produção da planta no campo. Assim, os polinucleotídeos e polipeptídeos de algumas configurações da invenção afetam positivamente a produção da planta, a produção de sementes e a biomassa da planta. Além disso, o benefício da EUN melhorada irá certamente melhorar a qualidade da safra e os componentes bioquímicos da semente tais como a produção de proteínas e a produção de óleo.

Conforme utilizada no presente documento, a frase "produção da planta" refere-se à quantia (conforme determinada por peso ou tamanho) ou quantidade

(números) de tecido produzido por planta ou por época de cultivo. Por isso o aumento da produção poderia afetar o benefício econômico que se pode obter da planta em uma determinada área de cultivo e/ou tempo de cultivo.

5 Deve ser observado que a produção da planta pode ser afetada por diversos parâmetros incluindo, entre outros, biomassa da planta; vigor da planta; taxa de crescimento; produção de sementes; quantidade de grãos ou sementes; qualidade dos grãos ou sementes; produção de óleo; teor de óleo, amido e/ou proteína em órgãos ceifados (ex., sementes ou partes vegetativas da planta); número de flores (florículos) por panícula (expressa como uma taxa do número de sementes preenchidas sobre o número de panículas primárias); índice de colheita; número de plantas cultivadas por área; número e tamanho de órgãos ceifados por planta e por área; número de plantas por área de cultivo (densidade); número de órgãos ceifados no campo; área de folhagem total; assimilação de carbono e particionamento de carbono (a distribuição/alocação do carbono dentro da planta); resistência à sombra; número de órgãos ceifáveis (ex.

sementes), sementes por vagem, peso por semente; e arquitetura modificada [tal como aumento do diâmetro ou espessura do caule ou aprimoramento de propriedades físicas (ex. elasticidade)].

Conforme utilizada no presente documento, a frase "biomassa da planta" refere-se à quantia (medida em gramas de tecido seco ao ar) de um tecido produzido a partir da planta em uma época de cultivo, o que também poderia determinar ou afetar a produção da planta ou a produção por área de cultivo. Um aumento na biomassa da planta pode ser na planta toda ou em suas partes tais como 5 partes acima do solo (ceifáveis), biomassa vegetativa, raízes e sementes.

Conforme utilizada no presente documento, a frase "taxa de crescimento" refere-se ao aumento de massa ou tamanho dos órgãos da planta por tempo (pode ser medida em cm2 por dia, dia ou como o coeficiente de regressão do curso no decorrer do tempo).

Conforme utilizada no presente documento, a frase "vigor da planta" refere-se à quantia (medida por peso) de tecido produzido pela planta em um determinado tempo. Por isso um aumento de vigor poderia determinar ou afetar a produção da planta ou a produção por tempo de cultivo ou área de cultivo. Além disso, o vigor precoce (semente e/ou muda) resulta em uma sustentação melhorada do campo. Conforme utilizada no presente documento, a frase "produção de sementes" refere-se ao número ou peso de sementes por planta, sementes por vagem, ou por área de cultivo ou ao peso de uma única semente, ou ao óleo extraído por semente. Portanto a produção de sementes pode ser afetada pelas dimensões da semente (ex., comprimento, largura, perímetro, área e/ou volume), número de sementes (preenchidas) e taxa de preenchimento de sementes e por teor de óleo da semente. Portanto, um aumento na produção de sementes por planta poderia afetar o benefício econômico que se pode obter da planta em uma determinada área de cultivo e/ou tempo de cultivo; e um aumento na produção de sementes por área de cultivo poderia 5 ser obtido aumentando a produção de sementes por planta e/ou aumentando o número de plantas cultivadas na mesma determinada área.

O termo "semente" (também denominado "grão") conforme utilizado no presente documento refere-se a uma pequena planta embrionária encerrada em uma cobertura chamada de casca da semente (normalmente com algum alimento armazenado), o produto do óvulo amadurecido de plantas angiospermas e gimnospermas que aocorre após a fertilização e algum crescimento dentro da planta mãe.

A frase "teor de óleo" conforme utilizada no presente documento refere-se à quantia de lipídios em um determinado órgão da planta, sejam as sementes (teor de óleo da semente) ou a parte vegetativa da planta (teor de óleo vegetativo) e é normalmente expressa como a porcentagem de peso seco (10% da umidade das sementes) ou peso líquido (para a parte vegetativa).

Deve ser observado que o teor de óleo é afetado pela produção de óleo intrínseca de um tecido (ex., semente, parte vegetativa), bem como a massa ou tamanho do tecido produtor de óleo por planta ou por período de cultivo.

Em uma configuração, o aumento no teor de óleo da planta pode ser obtido aumentando o tamanho/massa do(s) tecido(s) de uma planta que compreendem óleo por período de cultivo. Dessa forma, o aumento do teor de óleo de uma planta pode ser obtido aumentando a produção, taxa de crescimento, biomassa e vigor da planta.

5 Deve ser observado que a produção da planta pode ser determinada em condições de estresse (ex., estresse abiótico, condições limitadas pelo nitrogênio) ou condições de não estresse (normais).

Conforme utilizada no presente documento, a frase "condições de não estresse" refere-se a condições de crescimento (ex., água, temperatura, ciclos de presença/ausência de luz, umidade, concentração de sal, concentração de fertilizante no solo, fornecimento de nutrientes tais como nitrogênio, fosforoso (sic) e/ou potássio), que possibilitam metabolismo, crescimento, reprodução e/ou viabilidade normais de uma planta em qualquer etapa de seu ciclo de vida (da semente à planta madura e de volta à semente novamente). Deve ser observado que embora as condições de não estresse possam incluir algumas variações moderadas das condições ideais (que variam de um tipo/espécie de uma planta para outra), tais variações não fazem com que a planta deixe de crescer sem a capacidade de retomar o crescimento.

A frase "estresse abiótico", conforme utilizada no presente documento, refere-se a qualquer efeito adverso no metabolismo, crescimento, reprodução e/ou viabilidade de uma planta. Como tal, o estresse abiótico pode ser induzido por condições de crescimento ambientais abaixo do ideal tais como, por exemplo, salinidade, privação de água, inundação, congelamento, baixa ou alta temperatura, toxicidade de metais pesados, anaerobiose, deficiência de nutrientes, 5 poluição atmosférica or irradiação UV. As implicações do estresse abiótico são discutidas na seção Antecedentes da Invenção.

A frase "tolerância ao estresse abiótico", conforme utilizada no presente documento, refere-se à habilidade de uma planta de suportar um estresse abiótico sem sofrer uma alteração substancial no metabolismo, crescimento, produtividade e/ou viabilidade.

Conforme utilizada no presente documento, a frase "eficiência de uso de água (EUA)" refere- se ao nível de matéria orgânica produzida por unidade de água consumida pela planta, i.e., o peso seco de uma planta em relação ao uso de água da planta, ex., a biomassa produzida por transpiração de unidade.

Conforme utilizado no presente documento, o termo "aumento" refere-se a pelo menos aproximadamente 2%, pelo menos aproximadamente 3%, pelo menos aproximadamente 4%, pelo menos aproximadamente 5%, pelo menos aproximadamente 10%, pelo menos aproximadamente 15%, pelo menos aproximadamente 20%, pelo menos aproximadamente 30%, pelo menos aproximadamente 40%, pelo menos aproximadamente 50%, pelo menos aproximadamente 60%, pelo menos aproximadamente 70%, pelo menos aproximadamente 80%, aumento na eficiência de uso do nitrogênio, eficiência de uso de fertilizantes, produção, taxa de crescimento, vigor, biomassa, teor de óleo, eficiência de uso de água e/ou tolerância ao estresse abiótico de uma planta em comparação a uma planta nativa [i.e., uma planta não 5 modificada com as biomoléculas (polinucleotídeos ou polipeptídeos) da invenção, ex., uma planta não transformada da mesma espécie que é cultivada sob as mesmas condições de crescimento].

Conforme utilizada no presente documento, a frase "polinucleotídeo exógeno" refere-se a uma sequência de ácido nucléico heteróloga que pode não ser naturalmente expressa dentro da planta ou cujo excesso de expressão na planta é desejado. O polinucleotídeo exógeno pode ser introduzido na planta de maneira estável ou temporária, a fim de produzir uma molécula de ácido ribonucleico (RNA) e/ou uma molécula de polipeptídeo. Deve ser observado que o polinucleotídeo exógeno pode compreender uma sequência de ácido nucléico que é idêntica ou parcialmente homóloga a uma sequência de ácido nucléico endógena da planta.

De acordo com algumas configurações da invenção o polinucleotídeo exógeno compreende uma sequência de ácido nucléico que é pelo menos aproximadamente 80%, pelo menos aproximadamente 81%, pelo menos aproximadamente 82%, pelo menos aproximadamente 83%, pelo menos aproximadamente 84%, pelo menos aproximadamente 85%, pelo menos aproximadamente 86%, pelo menos aproximadamente 87%, pelo menos aproximadamente 88%, pelo menos aproximadamente 89%, pelo menos aproximadamente 90%, pelo menos aproximadamente 91%, pelo menos aproximadamente 92%, pelo menos aproximadamente 93%, pelo menos aproximadamente 93%, pelo menos aproximadamente 94%, pelo 5 menos aproximadamente 95%, pelo menos aproximadamente 96%, pelo menos aproximadamente 97%, pelo menos aproximadamente 98%, pelo menos aproximadamente 99%, ex., 100% idêntica à sequência de ácido nucléico selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID Nº: 2506, 2512, 2442, 2496, 2446, 1, 2, 4, 7, 8, 11, 12, 13, 16-19, 21-60, 63-128, 130-137, 270- 287, 289-293, 295-306, 308-362, 364-666, 671, 673-1333, 2414-2441, 2443-2445, 2447-2455, 2458-2495, 2497-2505, 2507- 2511,2513-2522.

A identidade (ex., porcentagem de homologia) pode ser determinada utilizando qualquer software de comparação de homologia, incluindo, por exemplo, o software BlastN do National Center of Biotechnology Information (NCBI) tal como utilizando parâmetros padrão.

De acordo com algumas configurações da invenção o polinucleotídeo exógeno é pelo menos aproximadamente 80%, pelo menos aproximadamente 81%, pelo menos aproximadamente 82%, pelo menos aproximadamente 83%, pelo menos aproximadamente 84%, pelo menos aproximadamente 85%, pelo menos aproximadamente 86%, pelo menos aproximadamente 87%, pelo menos aproximadamente 88%, pelo menos aproximadamente 89%, pelo menos aproximadamente 90%, pelo menos aproximadamente 91%, pelo menos aproximadamente 92%, pelo menos aproximadamente 93%, pelo menos aproximadamente 93%, pelo menos aproximadamente 94%, pelo menos aproximadamente 95%, pelo menos aproximadamente 96%, pelo menos aproximadamente 97%, pelo menos aproximadamente 98%, pelo menos aproximadamente 99%, ex., 5 100% idêntico ao polinucleotídeo selecionado a partir do grupo que consiste na SEQ ID Nº: 2506, 2512, 2442, 2496, 2446, 1, 2, 4, 7, 8, 11, 12, 13, 16-19, 21-60, 63-128, 130- 137, 270-287, 289-293, 295-306, 308-362, 364-666, 671, 673- 1333, 2414-2441, 2443-2445, 2447-2455, 2458-2495, 2497-2505, 2507-2511, 2513-2522.

De acordo com algumas configurações da invenção o polinucleotídeo exógeno é estabelecido pela SEQ ID Nº: 2506, 2512, 2442, 2496, 2446, 1, 2, 4, 7, 8, 11, 12, 13, 16-19, 21-60, 63-128, 130-137, 270-287, 289-293, 295-306, 308-362, 364-666, 671, 673-1333, 2414-2441, 2443-2445, 2447-2455, 2458-2495, 2497-2505, 2507- 2511, 2513-2521 ou 2522.

Conforme utilizado no presente documento o termo "polinucleotídeo" refere-se a uma sequência de ácido nucléico de um ou dois filamentos que é isolada e provida na forma de uma sequência de RNA, uma sequência de polinucleotídeo complementar (cDNA), uma sequência de polinucleotídeo genômica e/ou sequências de polinucleotídeo compostas (ex., uma combinação dos itens acima).

O termo "isolado" refere-se a pelo menos parcialmente separado do ambiente natural ex., de uma célula vegetal.

Conforme utilizada no presente documento, a frase "sequência de polinucleotídeo complementar" refere-se a uma sequência que resulta da transcrição reversa do RNA mensageiro utilizando uma 5 transcriptase reversa ou qualquer outra DNA polimerase dependente de RNA. Tal sequência pode ser amplificada subsequentemente in vivo ou in vitro utilizando uma DNA polimerase dependente de DNA.

Conforme utilizada no presente documento, a frase "sequência de polinucleotídeo genômica" refere-se a uma sequência derivada (isolada) de um cromossomo e assim representa uma parte contígua de um cromossomo.

Conforme utilizada no presente documento, a frase "sequência de polinucleotídeo composta" refere-se a uma sequência que é pelo menos parcialmente complementar e pelo menos parcialmente genômica. Uma sequência composta pode incluir algumas sequências exonais necessárias para codificar o polipeptídeo da presente invenção, bem como algumas sequências intrônicas se interpondo entre elas. As sequências intrônicas podem ser de qualquer fonte, inclusive de outros genes e normalmente incluem sequências de sinais de união conservadas. Tais sequências intrônicas podem ainda incluir elementos regulatórios de expressão de ação cis.

De acordo com algumas configurações da invenção, o polinucleotídeo exógeno da invenção codifica um polipeptídeo contendo uma sequência de aminoácidos pelo menos aproximadamente 80%, pelo menos aproximadamente 81%, pelo menos aproximadamente 82%, pelo menos aproximadamente 83%, pelo menos aproximadamente 84%, pelo menos aproximadamente 85%, pelo menos aproximadamente 5 86%, pelo menos aproximadamente 87%, pelo menos aproximadamente 88%, pelo menos aproximadamente 89%, pelo menos aproximadamente 90%, pelo menos aproximadamente 91%, pelo menos aproximadamente 92%, pelo menos aproximadamente 93%, pelo menos aproximadamente 94%, pelo menos aproximadamente 95%, pelo menos aproximadamente 96%, pelo menos aproximadamente 97%, pelo menos aproximadamente 98%, pelo menos aproximadamente 99%, ou mais, digamos 100% homóloga à sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID Nº: 2557, 2560, 184, 238, 188, 154-156, 158-161, 163-183, 185-187, 189-197, 200-237, 239- 264, 266-269, 1351, 1365-1425, 1429-1457, 1459, 1461-1730, 1735, 1739-2397, 2533-2541, 2544-2556, 2558,2559, 2561-2563.

A homologia (ex., porcentagem de homologia) pode ser determinada utilizando qualquer software de comparação de homologia, incluindo, por exemplo, o software BlastP ou TBLASTN do National Center of Biotechnology Information (NCBI) tal como utilizando parâmetros padrão, ao começar a partir de uma sequência de polipeptídeo; ou o algoritmo tBLASTX (disponível através do NCBI) tal como utilizando parâmetros padrão, que compara os produtos de tradução conceitual de seis estruturas de uma sequência de consulta de nucleotídeos (ambos os filamentos) com um banco de dados de sequências de proteínas.

Sequências homólogas incluem tanto sequências ortólogas como sequências parálogas. O termo "parálogo" está relacionado a duplicações de genes dentro do genoma de uma espécie que leva a genes parálogos.

5 O termo "ortólogo" está relacionado a genes homólogos em diferentes organismos devido à relação hereditária.

Uma opção para identificar ortólogas em uma espécie de planta monocotiledônea é realizando uma busca recíproca por blast. Isso pode ser feito por um primeiro blast envolvendo a utilização da sequência de interesse na blast comparada com qualquer banco de dados de sequência, tal como o banco de dados do NCBI disponível ao público em geral que pode ser encontrado em: http://www.ncbi.nlm.nih.gov. Se foram buscadas ortólogas no arroz, a sequência de interesse seria comparada no blast com, por exemplo, os 28.469 clones inteiros de cDNA do Oryza sativa Nipponbare disponível na NCBI. Os resultados da blast podem ser filtrados. As sequências inteiras dos resultados filtrados ou dos resultados não filtrados são então novamente comparadas no blast (segundo blast) com as sequências do organismo do qual a sequência de interesse é derivada. Os resultados da primeira e segunda blasts são então comparados. Uma ortóloga é identificada quando a sequência resultante na maior pontuação (melhor acerto) na primeira blast identifica na segunda blast a sequência da consulta (a sequência de interesse original) como o melhor acerto. Utilizando a mesma lógica, é encontrada uma paráloga (homologa a um gene no mesmo organismo). No caso de famílias de sequências grandes, pode ser usado o programa ClustalW [http://www.ebi.ac.uk/Tools/clustalw2/index.html], seguido de uma neighbor-joining tree (http://en.wikipedia.org/wiki/Neighbor-joining) que ajuda a 5 visualizar o agrupamento (clustering).

De acordo com algumas configurações da invenção, o polinucleotídeo exógeno codifica um polipeptídeo que consiste na sequência de aminoácidos estabelecida pela SEQ ID Nº: 2557, 2560, 184, 238, 188, 154-156, 158-161, 163-183, 185-187, 189-197, 200- 237, 239-264, 266-269, 1351, 1365-1425, 1429-1457, 1459, 1461-1730, 1735, 1739-2397, 2533-2541, 2544-2556, 2558, 2559, 2561-2562 ou 2563.

De acordo com um aspecto de algumas configurações da invenção é provido um método para aumentar a eficiência de uso do nitrogênio, a eficiência de uso de fertilizantes, produção, taxa de crescimento, vigor, biomassa, teor de óleo e/ou tolerância ao estresse abiótico de uma planta. O método é executado expressando dentro da planta um polinucleotídeo exógeno, compreendendo a sequência de ácido nucléico selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID Nº: 2506, 2512, 2442, 2496, 2446, 1, 2, 4, 7, 8, 11, 12, 13, 16-19, 21-60, 63-128, 130-137, 270-287, 289-293, 295-306, 308-362, 364-666, 671, 673-1333, 2414-2441, 2443- 2445, 2447-2455, 2458-2495, 2497-2505, 2507-2511, 2513-2522, 3, 5, 6, 9, 10, 14, 15, 20, 61, 62, 129, 288, 294, 307, 363, 667, 668, 669, 670, 672, 2398-2413, 2456 e 2457, com isso aumentando a eficiência de uso do nitrogênio, a eficiência de uso de fertilizantes, produção, taxa de crescimento, vigor, biomassa, teor de óleo e/ou tolerância ao estresse abiótico da planta.

De acordo com algumas 5 configurações da invenção o polinucleotídeo exógeno é estabelecido pela SEQ ID Nº: 2506, 2512, 2442, 2496, 2446, 1, 2, 4, 7, 8, 11, 12, 13, 16-19, 21-60, 63-128, 130-137, 270-287, 289-293, 295-306, 308-362, 364-666, 671, 673-1333, 2414-2441, 2443-2445, 2447-2455, 2458-2495, 2497-2505, 2507- 2511, 2513-2522, 3, 5, 6, 9, 10, 14, 15, 20, 61, 62, 129, 288, 294, 307, 363, 667, 668, 669, 670, 672, 2398-2413, 2456 ou 2457.

De acordo com algumas configurações da invenção, o polinucleotídeo exógeno da invenção codifica um polipeptídeo contendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID Nº: 2557, 2560, 184, 238, 188, 154-156, 158-161, 163- 183, 185-187, 189-197, 200-237, 239-264, 266-269, 1351, 1365-1425, 1429-1457, 1459, 1461-1730, 1735, 1739-2397, 2533-2541, 2544-2556, 2558, 2559, 2561-2563, 138-143, 146, 148, 150-152, 157, 162, 198, 265, 1334-1350, 1352-1364, 1426-1428, 1458, 1460, 1732-1734, 1737-1738, 2523-2532, 2542 e 2543, com isso aumentando a eficiência de uso do nitrogênio, a eficiência de uso de fertilizantes, produção, taxa de crescimento, vigor, biomassa, teor de óleo e/ou tolerância ao estresse abiótico da planta.

De acordo com um aspecto de algumas configurações da invenção é provido um método para aumentar a eficiência de uso do nitrogênio, a eficiência de uso de fertilizantes e/ou teor de óleo de uma planta. O método é executado expressando dentro da planta um polinucleotídeo exógeno compreendendo uma sequência de ácido 5 nucléico pelo menos 80% idêntica à SEQ ID Nº: 3, 5, 6, 9, 10, 14, 15, 288, 294, 2398-2412 ou 2413, com isso aumentando a eficiência de uso do nitrogênio, a eficiência de uso de fertilizantes, e/ou teor de óleo da planta.

De acordo com algumas configurações da invenção o polinucleotídeo exógeno compreende uma sequência de ácido nucléico que é pelo menos aproximadamente 80%, pelo menos aproximadamente 81%, pelo menos aproximadamente 82%, pelo menos aproximadamente 83%, pelo menos aproximadamente 84%, pelo menos aproximadamente 85%, pelo menos aproximadamente 86%, pelo menos aproximadamente 87%, pelo menos aproximadamente 88%, pelo menos aproximadamente 89%, pelo menos aproximadamente 90%, pelo menos aproximadamente 91%, pelo menos aproximadamente 92%, pelo menos aproximadamente 93%, pelo menos aproximadamente 93%, pelo menos aproximadamente 94%, pelo menos aproximadamente 95%, pelo menos aproximadamente 96%, pelo menos aproximadamente 97%, pelo menos aproximadamente 98%, pelo menos aproximadamente 99%, ex., 100% idêntica à sequência de ácido nucléico selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID Nº: 3, 5, 6, 9, 10, 14, 15, 288, 294, 2398-2413.

De acordo com algumas configurações da invenção o polinucleotídeo exógeno é pelo menos aproximadamente 80%, pelo menos aproximadamente 81%, pelo menos aproximadamente 82%, pelo menos aproximadamente 83%, pelo menos aproximadamente 84%, pelo menos aproximadamente 85%, pelo menos aproximadamente 86%, pelo 5 menos aproximadamente 87%, pelo menos aproximadamente 88%, pelo menos aproximadamente 89%, pelo menos aproximadamente 90%, pelo menos aproximadamente 91%, pelo menos aproximadamente 92%, pelo menos aproximadamente 93%, pelo menos aproximadamente 93%, pelo menos aproximadamente 94%, pelo menos aproximadamente 95%, pelo menos aproximadamente 96%, pelo menos aproximadamente 97%, pelo menos aproximadamente 98%, pelo menos aproximadamente 99%, ex., 100% idêntica ao polinucleotídeo selecionado a partir do grupo que consiste na SEQ ID Nº: 3, 5, 6, 9, 10, 14, 15, 288, 294, 2398-2413.

De acordo com algumas configurações da invenção o polinucleotídeo exógeno é estabelecido pela SEQ ID Nº: 3, 5, 6, 9, 10, 14, 15, 288, 294, 2398-2412 ou 2413. De acordo com algumas configurações da invenção, o polinucleotídeo exógeno da invenção codifica um polipeptídeo contendo uma sequência de aminoácidos pelo menos aproximadamente 80%, pelo menos aproximadamente 81%, pelo menos aproximadamente 82%, pelo menos aproximadamente 83%, pelo menos aproximadamente 84%, pelo menos aproximadamente 85%, pelo menos aproximadamente 86%, pelo menos aproximadamente 87%, pelo menos aproximadamente 88%, pelo menos aproximadamente 89%, pelo menos aproximadamente 90%, pelo menos aproximadamente 91%, pelo menos aproximadamente 92%, pelo menos aproximadamente 93%, pelo menos aproximadamente 94%, pelo menos aproximadamente 95%, pelo menos aproximadamente 96%, pelo 5 menos aproximadamente 97%, pelo menos aproximadamente 98%, pelo menos aproximadamente 99%, ou mais, digamos 100% homóloga à sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID Nº: 138-153, 1334-1350, 1352- 1364, 1458, 1460, 2523-2532.

De acordo com algumas configurações da invenção, o polinucleotídeo exógeno codifica um polipeptídeo que consiste na sequência de aminoácidos estabelecida pela SEQ ID Nº: 138-153, 1334-1350, 1352-1364, 1458, 1460, 2523-2531 ou 2532.

Sequências de ácido nucléico que codificam os polipeptídeos da presente invenção podem ser otimizadas para expressão. Exemplos não limitadores de sequências de ácido nucléico otimizadas são providos na SEQ ID Nº: 2415, 2420, 2428, 2430, 2431, 2436, 2437, 2441, 2444, 2445, 2446, 2451, 2456, 2468, 2471, 2478, 2481, 2484, 2520 e 2522 (Tabela 23). Exemplos de tais modificações de sequências incluem, entre outros, um teor de G/C alterado para abordar mais de perto aquele normalmente encontrado na espécie de planta de interesse e a remoção de códons atipicamente encontrados na espécie de planta comumente denominada otimização de códon.

A frase "otimização de códon" refere-se à seleção de nucleotídeos de DNA apropriados para uso dentro de um gene estrutural ou de um fragmento seu que aborda a utilização do códon dentro da planta de interesse.

Então, um gene ou uma sequência de ácido nucléico otimizada refere-se ao gene no qual a sequência de nucleotídeos de um 5 gene nativo ou de ocorrência natural tenha sido modificada para utilizar códons preferidos ou favorecidos estatisticamente dentro da planta. A sequência de nucleotídeos é normalmente examinada no nível do DNA e a região de codificação é otimizada para expressão na espécie de planta determinada utilizando qualquer procedimento adequado, por exemplo, conforme descrito em Sardana et al.

(1996, Plant Cell Reports 15:677-681). Nesse método, o desvio padrão da utilização do códon, uma medida da tendência de utilização do códon, pode ser calculado encontrando primeiro o desvio proporcional ao quadrado de utilização de cada códon do gene nativo em relação àquele de genes de planta de alta expressão, seguido de um cálculo desvio médio ao quadrado. A fórmula utilizada é: 1 SDCU = n = 1N[(Xn-Yn)/Yn]2/N, onde Xn refere-se à frequência de utilização do códon n em genes de planta de alta expressão, onde Yn refere-se à frequência de utilização do códon n no gene de interesse e N refere-se ao número total de códons no gene de interesse. Foi compilada uma tabela da utilização de códons de genes de alta expressão de plantas dicotiledôneas utilizando os dados de Murray et al. (1989, Nuc Acids Res.

17:477-498).

Um método de otimizar a sequência de ácido nucléico de acordo com a utilização preferida do códon para um tipo específico de célula vegetal é baseado no uso direto, sem a realização de nenhum cálculo estatístico extra, de tabelas otimização de códon tais como aquelas oferecidas online no Banco de Dados de Utilização de 5 Códons através do banco de DNA do NIAS (National Institute of Agrobiological Sciences) no Japão (http://www.kazusa.or.jp/codon/). O Banco de Dados de Utilização de Códons contém tabelas de utilização de códons para uma série de diferentes espécies, com cada tabela de utilização de códons tendo sido estatisticamente determinada com base nos dados presentes no Genbank.

Utilizando as tabelas acima para determinar os códons mais preferidos ou mais favorecidos para cada aminoácido em uma espécie específica (por exemplo, arroz), uma sequência de nucleotídeos de ocorrência natural codificando uma proteína de interesse pode ser otimizada para códon para aquela espécie de planta em especial. Isso é realizado substituindo códons que possam ter uma baixa incidência estatística no genoma da espécie em particular com códons correspondentes, com relação a um aminoácido, que são estatisticamente mais favorecidos. No entanto, um ou mais códons menos favorecidos podem ser selecionados para apagar locais de restrição existentes, para criar novos em junções potencialmente úteis (extremidades de 5' e 3' para adicionar peptídeo sinal ou cassetes de terminação, locais internos que poderiam ser usados para cortar e juntar segmentos para produzir uma sequência inteira correta), ou para eliminar sequências de nucleotídeos que podem afetar negativamente a estabilidade ou expressão do mRNA.

A sequência de nucleotídeos de codificação de ocorrência natural pode já, antes de qualquer 5 modificação, conter uma série de códons que correspondem a um códon estatisticamente favorecido em uma espécie de planta específica. Então, a otimização do códon da sequência de nucleotídeos nativa pode compreender a determinação de quais códons, dentro da sequência de nucleotídeos nativa, não são estatisticamente favorecidos com relação a uma planta em especial, e a modificação desses códons de acordo com a tabela de utilização de códons da planta em particular para produzir um derivado de códon otimizado. Uma sequência de nucleotídeos modificada pode ser total ou parcialmente otimizada para utilização de códon da planta contanto que a proteína codificada pela sequência de nucleotídeos modificada seja produzida em um nível maior do que a proteína codificada pelo gene nativo ou de ocorrência natural correspondente. A construção de genes sintéticos alterando a utilização do códon é descrita, por exemplo, no Pedido de Patente PCT 93/07278.

De acordo com algumas configurações da invenção, o polinucleotídeo exógeno é um RNA não codificador.

Conforme utilizada no presente documento, a frase “RNA não codificador” refere-se a uma molécula de RNA que não codifica uma sequência de aminoácidos (um polipeptídeo). Exemplos de tais moléculas de

RNA não codificador incluem, entre outros, um RNA antissentido, um pré-miRNA (precursor de um microRNA) ou um precursor de um RNA de interação com Piwi (piRNA).

De acordo com uma configuração 5 específica, o polinucleotídeo não codificador compreende a sequência de ácido nucléico da SEQ ID Nº: 64 ou 2459 (NUE512).

Assim, a invenção abrange sequências de ácido nucléico descritas anteriormente no presente documento; seus fragmentos, sequências hibridizáveis com elas, sequências homólogas a elas, sequências que codificam polipeptídeos similares com diferente utilização de códons, sequências alteradas caracterizadas por mutações tais como deleção, inserção ou substituição de um ou mais nucleotídeos, sejam por ocorrência natural ou induzidas pelo homem, sejam aleatoriamente ou de maneira dirigida.

A invenção provê um polinucleotídeo isolado compreendendo uma sequência de ácido nucléico pelo menos aproximadamente 80%, pelo menos aproximadamente 81%, pelo menos aproximadamente 82%, pelo menos aproximadamente 83%, pelo menos aproximadamente 84%, pelo menos aproximadamente 85%, pelo menos aproximadamente 86%, pelo menos aproximadamente 87%, pelo menos aproximadamente 88%, pelo menos aproximadamente 89%, pelo menos aproximadamente 90%, pelo menos aproximadamente 91%, pelo menos aproximadamente 92%, pelo menos aproximadamente 93%, pelo menos aproximadamente 93%, pelo menos aproximadamente 94%, pelo menos aproximadamente 95%, pelo menos aproximadamente 96%, pelo menos aproximadamente 97%, pelo menos aproximadamente 98%, pelo menos aproximadamente 99%, ex., 100% idêntica ao polinucleotídeo selecionado a 5 partir do grupo que consiste na SEQ ID Nº: 2506, 2512, 2442, 2496, 2446, 1, 2, 4, 7, 8, 11, 12, 13, 16-19, 21-60, 63-128, 130-137, 270-287, 289-293 , 295-306, 308-362, 364-666, 671, 673-1333 , 2414-2441, 2443-2445, 2447-2455, 2458-2495, 2497- 2505, 2507-2511, 2513-2522.

De acordo com algumas configurações da invenção, a sequência de ácido nucléico é capaz de aumentar a eficiência de uso do nitrogênio, a eficiência de uso de fertilizantes, produção, taxa de crescimento, vigor, biomassa, teor de óleo, tolerância ao estresse abiótico e/ou eficiência de uso de água de uma planta.

De acordo com algumas configurações da invenção o polinucleotídeo isolado compreendendo a sequência de ácido nucléico selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID Nº: 2506, 2512, 2442, 2496, 2446, 1, 2, 4, 7, 8, 11, 12, 13, 16-19, 21-60, 63-128, 130-137, 270-287, 289-293, 295-306, 308-362, 364-666, 671, 673-1333, 2414-2441, 2443-2445, 2447-2455, 2458-2495, 2497- 2505, 2507-2511, 2513-2522, 3, 5, 6, 9, 10, 14, 15, 20, 61, 62, 129, 288, 294, 307, 363, 667, 668, 669, 670, 672, 2398- 2413, 2456 e 2457.

De acordo com algumas configurações da invenção o polinucleotídeo isolado é estabelecido pela SEQ ID Nº: 2506, 2512, 2442, 2496, 2446, 1, 2, 4, 7, 8, 11, 12, 13, 16-19, 21-60, 63-128, 130-137, 270-287, 289-293, 295-306, 308-362, 364-666, 671, 673-1333, 2414-2441, 2443-2445, 2447-2455, 2458-2495, 2497-2505, 2507- 5 2511, 2513-2522, 3, 10 5, 6, 9, 10, 14, 15, 20, 61, 62, 129, 288, 294, 307, 363, 667, 668, 669, 670, 672, 2398-2413, 2456 ou 2457.

A invenção provê um polinucleotídeo isolado compreendendo uma sequência de ácido nucléico codificando um polipeptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos aproximadamente 80%, pelo menos aproximadamente 81%, pelo menos aproximadamente 82%, pelo menos aproximadamente 83%, pelo menos aproximadamente 84%, pelo menos aproximadamente 85%, pelo menos aproximadamente 86%, pelo menos aproximadamente 87%, pelo menos aproximadamente 88%, pelo menos aproximadamente 89%, pelo menos aproximadamente 90%, pelo menos aproximadamente 91%, pelo menos aproximadamente 92%, pelo menos aproximadamente 93%, pelo menos aproximadamente 93%, pelo menos aproximadamente 94%, pelo menos aproximadamente 95%, pelo menos aproximadamente 96%, pelo menos aproximadamente 97%, pelo menos aproximadamente 98%, pelo menos aproximadamente 99%, ou mais, digamos 100% homóloga à sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID Nº: 2557, 2560, 184, 238, 188, 154-156, 158-161, 163-183, 185-187, 189-197, 200-237, 239-264, 266- 269, 1351, 1365-1425, 1429-1457, 1459, 1461-1730, 1735, 1739-2397, 2533-2541, 2544-2556, 2558, 2559, 2561-2563.

De acordo com algumas configurações da invenção a sequência de aminoácidos é capaz de aumentar a eficiência de uso do nitrogênio, a eficiência de uso de fertilizantes, produção, taxa de crescimento, 5 vigor, biomassa, teor de óleo, tolerância ao estresse abiótico e/ou eficiência de uso de água de uma planta.

A invenção provê um polinucleotídeo isolado compreendendo uma sequência de ácido nucléico codificando um polipeptídeo que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID Nº: 2557, 2560, 184, 238, 188, 154-156, 158-161, 163-183, 185-187, 189-197, 200-237, 239-264, 266- 269, 1351, 1365-1425, 1429-1457, 1459, 1461-1730, 1735, 1739-2397, 2533-2541, 2544-2556, 2558, 2559, 2561-2563, 138- 143, 146, 148, 150-152, 157, 162, 198, 265, 1334-1350, 1352- 1364, 1426-1428, 1458, 1460, 1732-1734, 1737-1738, 2523- 2532, 2542 e 2543.

A invenção provê um polipeptídeo isolado compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos aproximadamente 80%, pelo menos aproximadamente 81%, pelo menos aproximadamente 82%, pelo menos aproximadamente 83%, pelo menos aproximadamente 84%, pelo menos aproximadamente 85%, pelo menos aproximadamente 86%, pelo menos aproximadamente 87%, pelo menos aproximadamente 88%, pelo menos aproximadamente 89%, pelo menos aproximadamente 90%, pelo menos aproximadamente 91%, pelo menos aproximadamente 92%, pelo menos aproximadamente 93%, pelo menos aproximadamente 93%, pelo menos aproximadamente 94%, pelo menos aproximadamente 95%, pelo menos aproximadamente 96%, pelo menos aproximadamente 97%, pelo menos aproximadamente 98%, pelo menos aproximadamente 99%, ou mais, digamos 100% homóloga a uma sequência de 5 aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID Nº: 2557, 2560, 184, 238, 188, 154-156, 158-161, 163- 183, 185-187, 189-197, 200-237, 239-264, 266-269, 1351, 1365-1425, 1429-1457, 1459, 1461-1730, 1735, 1739-2397, 2533-2541, 2544-2556, 2558, 2559, 2561-2563.

De acordo com algumas configurações da invenção, o polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste na SEQ ID Nº: 2557, 2560, 184, 238, 188, 154-156, 158-161, 163-183, 185-187, 189-197, 200-237, 239-264, 266- 269, 1351, 1365-1425, 1429-1457, 1459, 1461-1730, 1735, 1739-2397, 2533-2541, 2544-2556, 2558, 2559, 2561-2563, 138- 143, 146, 148, 150-152, 157, 162, 198, 265, 1334-1350, 1352- 1364, 1426-1428, 1458, 1460, 1732-1734, 1737-1738, 2523- 2532, 2542 e 2543. De acordo com algumas configurações da invenção, o polipeptídeo é estabelecido pela SEQ ID Nº: 2557, 2560, 184, 238, 188, 154-156, 158-161, 163-183, 185-187, 189-197, 200-237, 239-264, 266-269, 1351, 1365-1425, 1429-1457, 1459, 1461-1730, 1735, 1739-2397, 2533-2541, 2544-2556, 2558, 2559, 2561-2563, 138-143, 146, 148, 150-152, 157, 162, 198, 265, 1334-1350, 1352-1364, 1426-1428, 1458, 1460, 1732-1734, 1737-1738, 2523-2532, 2542 ou 2543.

A invenção também abrange fragmentos dos polipeptídeos e polipeptídeos descritos acima contendo mutações, tais como deleções, inserções ou substituições de um ou mais aminoácidos, sejam por 5 ocorrência natural ou induzidas pelo homem, sejam aleatoriamente ou de maneira dirigida.

O termo '"planta" conforme utilizado no presente documento abrange plantas inteiras, ancestrais e progênie das plantas e partes das plantas, incluindo sementes, brotos, tronco, raízes (incluindo bulbos) e células vegetais, tecidos e órgãos. A planta pode ter qualquer forma incluindo culturas de suspensão, embriões, regiões meristemáticas, tecido de calo, folhas, gametófitos, esporófitos, pólen e microesporos. Plantas que são particularmente úteis nos métodos da invenção incluem todas as plantas que pertencem à superfamília Viridiplantae, em especial plantas monocotiledôneas e dicotiledôneas incluindo uma forragem ou legume de forragem, planta ornamental, cultura agrícola, árvore ou arbusto selecionado a partir da lista que compreende Acacia spp., Acer spp., Actinidia spp., Aesculus spp., Agathis australis, Albizia amara, Alsophila tricolor, Andropogon spp., Arachis spp, Areca catechu, Astelia fragrans, Astragalus cicer, Baikiaea plurijuga, Betula spp., Brassica spp., Bruguiera gymnorrhiza, Burkea africana, Butea frondosa, Cadaba farinosa, Calliandra spp, Camellia sinensis, Canna indica, Capsicum spp., Cassia spp., Centroema pubescens, Chacoomeles spp., Cinnamomum cassia, Coffea arabica, Colophospermum mopane, Coronillia varia, Cotoneaster serotina, Crataegus spp., Cucumis spp., Cupressus spp., Cyathea dealbata,

Cydonia oblonga, Cryptomeria japonica, Cymbopogon spp.,

Cynthea dealbata, Cydonia oblonga, Dalbergia monetaria,

5 Davallia divaricata, Desmodium spp., Dicksonia squarosa,

Dibeteropogon amplectens, Dioclea spp, Dolichos spp.,

Dorycnium rectum, Echinochloa pyramidalis, Ehraffia spp.,

Eleusine coracana, Eragrestis spp., Erythrina spp.,

Eucalypfus spp., Euclea schimperi, Eulalia vi/losa,

Pagopyrum spp., Feijoa sellowlana, Fragaria spp., Flemingia spp, Freycinetia banksli, Geranium thunbergii, GinAgo biloba, Glycine javanica, Gliricidia spp, Gossypium hirsutum, Grevillea spp., Guibourtia coleosperma, Hedysarum spp., Hemaffhia altissima, Heteropogon contoffus, Hordeum vulgare, Hyparrhenia rufa, Hypericum erectum, Hypeffhelia dissolute, Indigo incamata, Iris spp., Leptarrhena pyrolifolia, Lespediza spp., Lettuca spp., Leucaena leucocephala, Loudetia simplex, Lotonus bainesli, Lotus spp., Macrotyloma axillare, Malus spp., Manihot esculenta, Medicago saliva, Metasequoia glyptostroboides, Musa sapientum, Nicotianum spp., Onobrychis spp., Ornithopus spp., Oryza spp., Peltophorum africanum, Pennisetum spp.,

Persea gratissima, Petunia spp., Phaseolus spp., Phoenix canariensis, Phormium cookianum, Photinia spp., Picea glauca, Pinus spp., Pisum sativam, Podocarpus totara,

Pogonarthria fleckii, Pogonaffhria squarrosa, Populus spp.,

Prosopis cineraria, Pseudotsuga menziesii, Pterolobium stellatum, Pyrus communis, Quercus spp., Rhaphiolepsis umbellata, Rhopalostylis sapida, Rhus natalensis, Ribes grossularia, Ribes spp., Robinia pseudoacacia, Rosa spp., Rubus spp., Salix spp., Schyzachyrium sanguineum, Sciadopitys vefficillata, Sequoia sempervirens, 5 Sequoiadendron giganteum, Sorgo bicolor, Spinacia spp., Sporobolus fimbriatus, Stiburus alopecuroides, Stylosanthos humilis, Tadehagi spp, Taxodium distichum, Themeda triandra, Trifolium spp., Triticum spp., Tsuga heterophylla, Vaccinium spp., Vicia spp., Vitis vinifera, Watsonia pyramidata, Zantedeschia aethiopica, Zea mays, amaranto, alcachofra, aspargo, brócolis, couve de Bruxelas, repolho, canola, cenoura, couve-flor, aipo, couve-manteiga, linheiro, couve, lentilha, colza, quiabo, cebola, batata, arroz, soja, palha, beterraba, cana-de-açúcar, girassol, tomate, chá de abóbora, milho, trigo, cevada, centeio, aveia, amendoim, ervilha, lentilha e alfafa, algodão, semente de colza, canola, pimenta, girassol, tabaco, berinjela, eucalipto, uma árvore, uma planta ornamental, grama perene e cultura de forragem.

De maneira alternativa, algas e outras não Viridiplantae podem ser usadas para os métodos da presente invenção.

De acordo com algumas configurações da invenção, a planta utilizada pelo método da invenção é uma planta de cultura agrícola tal como arroz, milho, trigo, cevada, amendoim, batata, gergelim, oliveira, óleo de palma, banana, soja, girassol, canola, cana-de- açúcar, alfafa, painço, leguminosas (feijão, ervilha), linheiro, lupino, semente de colza, tabaco, álamo e algodão.

De acordo com algumas configurações da invenção, é provida uma célula vegetal que expressa exogenamente o polinucleotídeo de algumas configurações da invenção, a combinação de ácido nucléico de algumas configurações da invenção e/ou o polipeptídeo de 5 algumas configurações da invenção.

De acordo com algumas configurações da invenção, a expressão do polinucleotídeo exógeno da invenção dentro da planta é executada transformando uma ou mais células da planta com o polinucleotídeo exógeno, seguida pela geração de uma planta madura a partir das células transformadas e o cultivo da planta madura em condições adequadas para expressar o polinucleotídeo exógeno dentro da planta madura.

De acordo com algumas configurações da invenção, a transformação é executada introduzindo na célula vegetal uma combinação de ácido nucléico que inclui o polinucleotídeo exógeno de algumas configurações da invenção e pelo menos um promotor para direcionar a transcrição do polinucleotídeo exógeno em uma célula hospedeira (uma célula vegetal). Maiores detalhes sobre abordagens de transformação apropriadas são fornecidas abaixo no presente documento.

De acordo com algumas configurações da invenção, é provida uma combinação de ácido nucléico compreendendo o polinucleotídeo isolado da invenção, e um promotor para direcionar a transcrição da sequência de ácido nucléico do polinucleotídeo isolado em uma célula hospedeira.

De acordo com algumas configurações da invenção, o polinucleotídeo isolado é operavelmente ligado à sequência do promotor.

Uma sequência de ácido 5 nucléico codificadora é "operavelmente ligada" a uma sequência reguladora (ex., promotor) se a sequência reguladora for capaz de exercer um efeito regulatório sobre a sequência codificadora ligada a ela.

Conforme utilizado no presente documento, o termo "promotor" refere-se a uma região do DNA que está situada a montante do local de iniciação transcricional de um gene ao qual a RNA polimerase obriga a iniciação da transcrição de RNA. O promotor controla onde (ex., qual parte de uma planta) e/ou quando (ex., em que etapa ou condição no tempo de vida de um organismo) o gene é expresso.

Qualquer sequência de promotor adequada pode ser usada pela combinação de ácido nucléico da presente invenção. De preferência, o promotor é um promotor constitutivo, específico de tecido ou um promotor induzível por estresse abiótico.

Promoters constitutivos adequados incluem, por exemplo, o promotor CaMV 35S (SEQ ID Nº:3063; Odell et al, Nature 313:810-812, 1985); promotor Arabidopsis At6669 (SEQ ID Nº:3064; ver Publicação PCT Nº WO04081173A2); maize Ubi 1 (Christensen et al, Plant Sol.

Biol. 18:675-689, 1992); rice actin (McElroy et al, Plant Cell 2:163-171, 1990); pEMU (Last et al, Theor. Appl. Genet.

81:581-588, 1991); CaMV 19S (Nilsson et al, Physiol. Plant 100:456-462, 1997); GOS2 (de Pater et al, Plant J Nov;2(6):837-44, 1992); ubiquitin (Christensen et al, Plant Mol. Biol. 18: 675-689, 1992); Rice cyclophilin (Bucholz et 5 al, Plant Mol Biol. 25(5):837-43, 1994); Maize H3 histone (Lepetit et al, Mol. Gen. Genet. 231: 276-285, 1992); Actin 2 (An et al, Plant J. 10(1); 107-121, 1996) e Synthetic Super MAS (Ni et al, The Plant Journal 7: 661-76, 1995).

Outros promotores constitutivos incluem aqueles na patente americana Nº. 5.659.026, 5.608.149; 5.608.144; 5.604.121;

5.569.597: 5.466.785; 5.399.680; 5.268.463; e 5.608.142.

Promotores adequados específicos de tecido incluem, entre outros, promotores específicos de folhas [tais como os descritos, por exemplo, por Yamamoto et al, Plant J. 12:255-265, 1997; Kwon et al, Plant Physiol. 105:357-67, 1994; Yamamoto et al, Plant Cell Physiol. 35:773-778, 1994; Gotor et al, Plant J. 3:509-18, 1993; Orozco et al, Plant Mol. Biol. 23:1129-1138, 1993; e Matsuoka et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:9586-9590, 1993], promotores preferidos por sementes [ex., de genes específicos de sementes (Simon, et al, Plant Mol. Biol. 5.

191, 1985; Scofield, et al, J. Biol. Chem. 262: 12202, 1987; Baszczynski, et al., Plant Mol. Biol. 14: 633, 1990), Brazil Nut albumin (Pearson' et al., 5 Plant Mol. Biol. 18: 235- 245, 1992), legumin (Ellis, et al. Plant Mol. Biol. 10: 203- 214, 1988), Glutelin (arroz) (Takaiwa, et al, Mol. Gen.

Genet. 208: 15-22, 1986; Takaiwa, et al, FEBS Letts. 221: 43-47, 1987), Zein (Matzke et al Plant Mol Biol, 143).323-32

1990), napA (Stalberg, et al, Planta 199: 515-519, 1996), Wheat SPA (Albanietal, Plant Cell, 9: 171- 184, 1997), oleosina do girassol (Cummins, etal, Plant Mol. Biol. 19: 873-10 876, 1992)], promotores específicos do endosperma 5 [ex., trigo LMW e HMW, glutenin-1 (Mol Gen Genet 216:81-90, 1989; NAR 17:461-2), trigo a, b e g gliadinas (EMB03:1409- 15, 1984), promotor ltrl de cevada, cevada Bl, C, D hordeína (Theor Appl Gen 98:1253-62, 1999; Plant J 4:343-55, 1993; Mol Gen Genet 250:750- 60, 1996), Barley DOF (Mena et al, The Plant Journal, 116(1): 53- 62, 1998), Biz2 (EP99106056.7), promotor sintético (Vicente-Carbajosa et al, Plant J. 13: 629-640, 1998), prolamina do arroz NRP33, arroz -globulina Glb-1 (Wu et al, Plant Cell Physiology 39(8) 885- 889, 1998), arroz alfa-globulina REB/OHP-1 (Nakase et al.

Plant Mol. Biol. 33: 513-S22, 1997), arroz ADP-glicose PP (Trans Res 6:157-68, 1997), família de genes ESR do milho (Plant J 12:235-46, 1997), sorgo gama- kafirina (PMB 32:1029-35, 1996)], promoters específicos de embriões [ex., arroz OSH1 (Sato et al, Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 93: 8117-8122), KNOX (Postma-Haarsma ef al, Plant Mol. Biol.

39:257-71, 1999), oleosina de arroz (Wu et at, J. Biochem., 123:386, 1998)], e promotores específicos de flores [ex., AtPRP4, chalene synthase (chsA) (Van der Meer, et al, Plant Mol. Biol. 15, 95-109, 1990), LAT52 (Twell et al Mol. Gen Genet. 217:240-245; 1989), apetala- 3].

Promotores induzíveis por estresse abiótico incluem, entre outros, promotores induzíveis por sal tais como RD29A (Yamaguchi-Shinozalei et al., Mol. Gen. Genet. 236:331-340, 1993); promotores induzíveis por seca tais como o promotor do gene rabl7 do milho (Pla et. al, Plant Mol. Biol. 21:259-266, 1993), promotor do gene rab28 do milho (Busk et. al., Plant J.

5 11:1285-1295, 1997) e promotor do gene Ivr2 do milho (Pelleschi et. al, Plant Mol. Biol. 39:373-380, 1999); promotores induzíveis por calor tais como o promotor hsp80 de calor do tomate (patente americana Nº 5.187.267).

A combinação de ácido nucléico de algumas configurações da invenção pode incluir ainda um marcador selecionável apropriado e/ou uma origem de replicação. De acordo com algumas configurações da invenção, a combinação de ácido nucléico utilizada é um vetor de transporte, que pode se propagar em E. coli (onde a combinação compreende um marcador selecionável apropriado e a origem da replicação) e ser compatível com a propagação nas células. A combinação de acordo com a presente invenção pode ser, por exemplo, um plasmídeo, um bacmideo, um fagemídeo, um cosmídeo, um fago, um vírus ou um cromossomo artificial.

A combinação de ácido nucléico de algumas configurações da invenção pode ser utilizada para transformar de maneira estável ou temporária células vegetais. Na transformação estável, o polinucleotídeo exógeno é integrado no genoma da planta e, como tal, representa um traço estável e herdado. Na transformação temporária, o polinucleotídeo exógeno é expresso pela célula transformada, mas não é integrado no genoma e, como tal,

representa um traço temporário.

Há diversos métodos de se introduzir genes estranhos em plantas monocotiledôneas e dicotiledôneas (Potrykus, I., Annu. Rev. Plant. Physiol, 5 Plant. Mol. Biol. (1991) 42:205-225; Shimamoto et al, Nature (1989) 338:274-276).

Os principais métodos de se causar uma integração estável do DNA exógeno no DNA genômico da planta incluem duas abordagens principais: (i) Transferência de gene mediada por agrobacteria: Klee et al. (1987) Annu. Rev. Plant Physiol. 38:467-486; Klee and Rogers in Cell Culture and Somatic Cell Genetics of Plants, Vol. 6, Molecular Biology of Plant Nuclear Genes, eds.

Schell, J., and Vasil, L. K., Academic Publishers, San Diego, Calif. (1989) p. 2-25; Gatenby, in Plant Biotechnology, eds. Kung, S. and Arntzen, C. J., Butterworth Publishers, Boston, Mass. (1989) p. 93-112.

(ii) Absorção direta de DNA: Paszkowski et al., in Cell Culture and Somatic Cell Genetics of Plants, Vol. 6, Molecular Biology of Plant Nuclear Genes eds. Schell, J., and Vasil, L. K., Academic Publishers, San Diego, Calif.

(1989) p. 52-68; including methods for direct uptake of DNA into protoplasts, Toriyama, K. et al. (1988) Bio/Technology 6:1072-1074. DNA uptake induced by brief electric shock of plant cells: Zhang et al. Plant Cell Rep. (1988) 7:379-384.

Fromm et al. Nature (1986) 319:791-793. DNA injection into plant cells or tissues by particle bombardment, Klein et al.

Bio/Technology (1988) 6:559-563; McCabe et al.

Bio/Technology (1988) 6:923-926; Sanford, Physiol. Plant.

(1990) 79:206-209; by the use of micropipette systems: Neuhaus et al, Theor. Appl. Genet. (1987) 75:30-36; Neuhaus and Spangenberg, Physiol. Plant. (1990) 79:213-217; 5 transformação de whisker de carboneto de silício ou fibras de fidro de culturas de células, embriões ou tecido de calo, patente americana Nº 5.464.765 ou pela incubação direta do DNA com o pólen em germinação, DeWet et al. in Experimental Manipulation of Ovule Tissue, eds. Chapman, G. P. and Mantell, S. H. and Daniels, W. Longman, London, (1985) p.

197-209; and Ohta, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1986) 83:715-

719.

O sistema Agrobacterium inclui a utilização de vetores plasmídeos que contêm segmentos de DNA definidos que se integram ao DNA genômico da planta.

Métodos de inoculação do tecido da planta variam dependendo da espécie de planta e do sistema de distribuição Agrobacterium. Uma abordagem amplamente usada é o procedimento de disco de folha que pode ser realizado com qualquer explante de tecido que forneça uma boa fonte para a iniciação da diferenciação da planta inteira. Ver, ex., Horsch et al. in Plant Molecular Biology Manual A5, Kluwer Academic Publishers, Dordrecht (1988) p. 1-9. Uma abordagem complementar emprega o sistema de distribuição Agrobacterium juntamente com a infiltração a vácuo. O sistema Agrobacterium é especialmente viável na criação de plantas dicotiledôneas transgênicas.

Há diversos métodos de transferência direta de DNA para células vegetais. Na eletroporação, os protoplastos são brevemente expostos a um forte campo elétrico. Na microinjeção, o DNA é mecanicamente injetado diretamente nas células utilizando pequenas 5 micropipetas. No bombardeio de micropartículas, o DNA é adsorvido em microprojéteis tais como cristais de sulfato de magnésio ou partículas de tungstênio e os microprojéteis são fisicamente acelerados em células ou tecidos de plantas.

Após a transformação estável é realizada a propagação da planta. O método mais comum de propagação da planta é pela semente. A regeneração por propagação da semente, no entanto, tem a deficiência de que devido à heterozigosidade há uma falta de uniformidade na safra, uma vez que as sementes são produzidas por plantas de acordo com as variações genéticas governadas pelas regras de Mendel. Basicamente, cada semente é geneticamente diferente e cada uma irá crescer com seus próprios traços específicos.

Então é preferível que a planta transformada seja produzida de tal forma que a planta regenerada tenha traços e características idênticos aos da planta transgênica reprodutora. Portanto, é preferível que a planta transformada seja regenerada por micropropagação o que proporciona uma reprodução rápida e consistente das plantas transformadas.

A micropropagação é um processo de cultivar plantas de uma nova geração a partir de uma única peça de tecido que foi removida de uma planta reprodutora ou cultivada selecionada. Esse processo permite a reprodução em massa de plantas contendo o tecido preferido expressando a proteína da fusão. As plantas da nova geração que forem produzidas são geneticamente idênticas e têm todas as características da planta original. A micropropagação 5 permite a produção em massa de material vegetal de qualidade em um curto período de tempo e oferece uma rápida multiplicação das plantas cultivadas selecionadas na preservação das características da planta original transgênica ou transformada. As vantagens de clonar plantas são a velocidade de multiplicação da planta e a qualidade e uniformidade das plantas produzidas.

A micropropagação é um procedimento de múltiplas etapas que requer a alteração do meio de cultura ou das condições de crescimento entre etapas. Dessa forma, o processo de micropropagação envolve quatro etapas básicas: etapa um, cultura inicial do tecido; etapa dois, multiplicação da cultura do tecido; etapa três, diferenciação e formação da planta; e etapa quatro, cultura em estufa e enrijecimento. Durante a etapa um, cultura inicial do tecido, a cultuta do tecido é estabelecida e obtém a certificação de isenção de contaminantes. Durante a etapa dois, a cultura inicial do tecido é multiplicada até que um número suficiente de amostras de tecido seja produzido para satisfazer as metas de produção. Durante a etapa três, as amostras de tecido cultivadas na etapa dois são divididas e cultivadas em plântulas individuais. Na etapa quatro, as plântulas transformadas são transferidas para uma estufa para enrijecimento quando a tolerância das plantas à luz é gradativamente aumentada para que possam ser cultivadas no ambiente natural.

De acordo com algumas configurações da invenção, as plantas transgênicas são 5 geradas pela transformação temporária de células de folhas, células meristemáticas ou da planta inteira.

A transformação temporária pode ser executada por qualquer um dos métodos de transferência direta de DNA descritos acima ou por infecção viral utilizando vírus de plantas modificados.

Vírus que se mostraram úteis para a transformação de hospedeiros de plantas incluem CaMV, Vírus do mosaico do tabaco (TMV), vírus do mosaico do bromo (BMV) e vírus do mosaico comum do feijoeiro (BV or BCMV). A transformação de plantas utilizando vírus de plantas é descrita na patente americana Nº 4.855.237 (vírus do mosaico dourado do feijoeiro; BGV), EP-A 67,553 (TMV), Pedido Japonês Publicado Nº 63-14693 (TMV), EPA 194,809 (BV), EPA 278,667 (BV); and Gluzman, Y. et al., Communications in Molecular Biology: Viral Vectors, Cold Spring Harbor Laboratory, New York, pp. 172-189 (1988). Partículas de pseudovírus para uso na expressão de DNA estranho em muitos hospedeiros, incluindo plantas são descritas na WO 87/06261.

De acordo com algumas configurações da invenção, o vírus utilizado para transformações temporárias é avirulento e assim é incapaz de causar sintomas graves tais como taxa de crescimento reduzida, mosaico, manchas anelares, enrolamento das folhas,

amarelamento, riscos, formação de inchação, formação de tumores e furos. Um vírus avirulento adequado pode ser um vírus avirulento de ocorrência natural ou um vírus atenuado artificialmente. A atenuação do vírus pode ser realizada 5 utilizando métodos bem conhecidos na técnica incluindo, entre outros, aquecimento subletal, tratamento químico ou por técnicas de mutagênese direcionada tais como as descritas, por exemplo, por Kurihara e Watanabe (Molecular Plant Pathology 4:259-269, 2003), Galon et al. (1992), Atreya et al. (1992) e Huet et al. (1994).

Variedades de vírus adequados podem ser obtidas a partir de fontes disponíveis tais como, por exemplo, a American Type Culture Collection (ATCC) ou por isolamento de plantas infectadas. O isolamento de vírus de tecidos de plantas infectadas pode ser realizado por técnicas bem conhecidas na técnica tais como as descritas, por exemplo, por Foster e Tatlor, Eds. "Plant Virology Protocols: From Vírus Isolation to Transgenic Resistance (Methods in Molecular Biology (Humana Pr), Vol 81)", Human Press, 1998. Em resumo, tecidos de uma planta infectada dos quais se acredita que contenham uma alta concentração de um vírus adequado, de preferência folhas jovens e pétalas de flores, são colocados em uma solução tampão (ex., solução tampão de fosfato) para produzir uma seiva do vírus infectado que pode ser usaada em inoculações subsequentes.

A construção de vírus de RNA de plantas para a introdução e expressão de sequências de polinucleotídeos exógenos não virais em plantas é demonstrada pelas referências acima e também por Dawson, W.

O. et al, Virology (1989) 172:285-292; Takamatsu et al. EMBO J. (1987) 6:307-311; French et al. Science (1986) 231:1294- 1297; Takamatsu et al. FEBS Letters (1990) 269:73-76; e pela 5 patente americana Nº 5.316.931.

Quando o vírus é um vírus de DNA, podem ser feitas modificações adequadas ao vírus em si.

De maneira alternativa, o vírus pode primeiro ser clonado em um plasmídeo bacteriano para facilitar a construção do vetor viral desejado com o DNA estranho. O vírus pode então ser removido do plasmídeo. Se o vírus for um vírus de DNA, uma origem bacteriana de replicação pode ser anexada ao DNA viral, que é então replicado pela bacteria. A transcrição e a tradução desse DNA produzirão uma proteína de revestimento que irá encapsidar o DNA viral. Se o vírus for um vírus de RNA, o vírus é geralmente clonado como um cDNA e inserido em um plasmídeo. O plasmídeo é então utilizado para fazer todas as construções. O vírus RNA é então produzido transcrevendo a sequência viral do plasmídeo e a tradução dos genes virais para produzir a(s) proteína(s) de revestimento que encapsidam RNA viral.

Em uma configuração, é provido um polinucleotídeo viral de uma planta no qual sequência de codificação de uma proteína de revestimento nativa foi apagada de um polinucleotídeo viral, uma sequência de codificação de uma proteína de revestimento nativa viral de uma planta não nativa e um promotor não nativo, de preferência, foi inserido o promotor subgenômico da sequência de codificação de uma proteína de revestimento não nativa, capaz de expressão no hospedeiro da planta, empacotamento do polinucleotídeo viral recombinante da planta, e de garantir uma infecção sistêmica do hospedeiro 5 pelo polinucleotídeo viral recombinante da planta. De maneira alternativa, o gene da proteína de revestimento pode ser inativado pela inserção da sequência do polinucleotídeo não nativa dentro dele de tal forma que é produzida uma proteína. O polinucleotídeo viral recombinante da planta pode conter um ou mais promotores subgenômicos não nativos.

Cada promotor subgenômico não nativo é capaz de transcrever ou expressar sequências de polinucleotídeo ou genes adjacentes no hospedeiro da planta e incapaz de recombinação um com o outro e com promotores subgenômicos nativos.

Sequências de polinucleotídeo não nativas (estranhas) podem ser inseridas adjacentes ao promotor subgenômico viral da planta nativa ou aos promotores subgenômicos virais de plantas nativas ou não nativas se for incluída mais de uma sequência de polinucleotídeo. As sequências de polinucleotídeo não nativas são transcritas ou expressas na planta hospedeira sob o controle do promotor subgenômico para produzir os produtos desejados.

Em uma segunda configuração, é provido um polinucleotídeo viral recombinante da planta como na primeira configuração com exceção de que a sequência de codificação da proteína de revestimento nativa é disposta adjacente a um dos promotores subgenômicos da proteína de revestimento não nativa ao invés de uma sequência de codificação da proteína de revestimento não nativa.

Em uma terceira configuração, é provido um polinucleotídeo viral recombinante da planta no qual o gene da proteína de revestimento nativa é adjacente a 5 seu promotor subgenômico e um ou mais promotores subgenômicos não nativos foram inseridos no polinucleotídeo viral. Os promotores subgenômicos não nativos inseridos são capazes de trascrever ou expressar genes adjacentes em um hospedeiro da planta e são incapazes de recombinação um com o outro e com promotores subgenômicos nativos. Sequências de polinucleotídeo não nativas podem ser inseridas adjacentes aos promotores subgenômicos virais de plantas não nativos de tal forma que as sequências são transcritas ou expressas na planta hospedeira sob controle dos promotores subgenômicos para produzir o produto desejado.

Em uma quarta configuração, um polinucleotídeo viral recombinante da planta é provido como na terceira configuração com exceção de que a sequência de codificação da proteína de revestimento nativa é substituída por uma sequência de codificação da proteína de revestimento não nativa.

Os vetores virais são encapsidados pelas proteínas de revestimento codificadas pelo polinucleotídeo viral recombinante da planta para produzir um vírus de planta recombinante. O polinucleotídeo viral recombinante da planta ou o vírus de planta recombinante é usado para infectar plantas hospedeiras apropriadas. O polinucleotídeo viral recombinante da planta é capaz de replicação no hospedeiro, dispersão sistêmica no hospedeiro e transcrição ou expressão de gene(s) estranho(s) (polinucleotídeo exógeno) no hospedeiro para produzir a proteína desejada.

5 Técnicas para inoculação de vírus em plantas podem ser encontradas em Foster and Taylor, eds. "Plant Virology Protocols: From Vírus Isolation to Transgenic Resistance (Methods in Molecular Biology (Humana Pr), Vol 81)", Human Press, 1998; Maramorosh and Koprowski, eds. "Methods in Virology" 7 vols, Academic Press, New York 1967-1984; Hill, S.A. "Methods in Plant Virology", Blackwell, Oxford, 1984; Walkey, D.G.A. "Applied Plant Virology", Wiley, New York, 1985; e Kado and Agrawa, eds.

"Principles and Techniques in Plant Virology", Van Nostrand- Reinhold, New York.

Além do que foi mencionado anteriormente, o polinucleotídeo da presente invenção também pode ser introduzido em um genoma de cloroplasto com isso possibilitando a expressão do cloroplasto. Uma técnica para introduzir sequências de polinucleotídeo exógeno no genoma dos cloroplastos é conhecida. Essa técnica envolve os seguintes procedimentos: primeiro, células vegetais são tratadas quimicamente de maneira a reduzir o número de cloroplastos por célula a aproximadamente um. Depois, o polinucleotídeo exógeno é introduzido através de bombardeio de partículas nas células com o objetivo de introduzir pelo menos uma molécula de polinucleotídeo exógeno nos cloroplastos. Os polinucleotídeos exógenos foram selecionados de tal maneira que possam ser integrados no genoma do cloroplasto por meio da recombinação homóloga que é imediatamente realizada por enzimas inerentes ao cloroplasto. Para essa finalidade, o 5 polinucleotídeo exógeno inclui, além de um gene de interesse, pelo menos uma extensão de polinucleotídeo que é derivada do genoma do cloroplasto. Além disso, o polinucleotídeo exógeno inclui um marcador selecionável, que atua por procedimentos de seleção sequencial para verificar se todas ou substancialmente todas as cópias dos genomas de cloroplasto que seguem tal seleção irão incluir o polinucleotídeo exógeno. Maiores detalhes com relação a essa técnica são encontrados na patente americana Nº. 4.945.050; e 5.693.507 que são incorporadas por referência ao presente documento. Um polipeptídeo pode assim ser produzido pelo sistema de expressão de proteínas do cloroplasto e se tornar integrado à membrana interna do cloroplasto.

Uma vez que processos que aumentam o teor de óleo, produção, taxa de crescimento, biomassa, vigor e/ou tolerância ao estresse abiótico de uma planta podem envolver múltiplos gene atuando de maneira cumulativa ou em sinergia (ver, por exemplo, em Quesda et al, Plant Physiol. 130:951-063, 2002), a presente invenção também contempla a expressão de uma pluralidade de polinucleotídeos exógenos em uma única planta hospedeira para com isso obter um efeito superior no teor de óleo, produção, taxa de crescimento, biomassa, vigor e/ou tolerância ao estresse abiótico.

A expressão de uma pluralidade de polinucleotídeos exógenos em uma única planta hospedeira pode ser realizada cointroduzindo múltiplas combinações de ácido nucléico, cada uma incluindo um polinucleotídeo 5 exógeno diferente, em uma única célula vegetal. A célula transformada pode então ser regenerada e se tornar uma planta madura utilizando os métodos descritos anteriormente no presente documento.

De maneira alternativa, a expressão de uma pluralidade de polinucleotídeos exógenos em uma única planta hospedeira pode ser realizada cointroduzindo em uma única célula vegetal uma única combinação de ácido nucléico incluindo uma pluralidade de polinucleotídeos exógenos diferentes. Tal combinação pode ser concebida com uma única sequência de promotor que pode transcrever um RNA mensageiro policistrônico incluindo todas as sequências de polinucleotídeo exógeno diferentes. Para permitir a cotradução dos diferentes polipeptídeos codificados pelo RNA mensageiro policistrônico, as sequências de polinucleotídeo podem ser interligadas através de uma sequência de local de entrada interno do ribossomo (IRES) que facilita a tradução das sequências de polinucleotídeo posicionadas a jusante da sequência de IRES.

Nesse caso, uma molécula de RNA policistrônica transcrita que codifica os diferentes polipeptídeos descritos acima será traduzida da extremidade 5´ do cap e as duas sequências internas IRES da molécula de RNA policistrônica para com isso produzir na célula todos os polipeptídeos diferentes.

De maneira alternativa, a combinação pode incluir várias sequências de promotor cada uma a uma sequência de polinucleotídeo exógeno diferente.

A célula vegetal transformada 5 com a combinação incluindo uma pluralidade de polinucleotídeos exógenos pode ser regenerada tornando-se uma planta madura, utilizando os métodos descritos anteriormente no presente documento.

De maneira alternativa, a expressão de uma pluralidade de polinucleotídeos exógenos em uma única planta hospedeira pode ser realizada introduzindo diferentes combinações de ácido nucléico, including diferentes polinucleotídeos exógenos, em uma pluralidade de plantas. As plantas transformadas regeneradas podem então ser cruzadas e a progênie resultante selecionada para alcançar uma tolerância superior ao estresse abiótico, eficiência de uso de água, eficiência de uso de fertilizantes, crescimento, biomassa, produção e/ou traços de vigor, utilizando técnicas convencionais de cultura de plantas.

De acordo com algumas configurações da invenção, o método ainda compreende o cultivo da planta expressando o polinucleotídeo exógeno sob o estresse abiótico.

Exemplos não limitadores de condições de estresse abiótico incluem salinidade, seca, privação de água, excesso de água (ex. inundação, alagamento), estiolamento, baixa temperatura, alta temperatura, toxicidade de metais pesados, anaerobiose, deficiência de nutrientes, excesso de nutrientes, poluição atmosférica e irradiação UV.

Dessa forma, a invenção 5 abrange plantas que expressam exogenamente o(s) polinucleotídeo(s), as combinações de ácido nucléico e/ou polipeptídeo(s) da invenção. Uma vez expresso dentro da célula da planta ou da planta inteira, o nível do polipeptídeo codificado pelo polinucleotídeo exógeno pode ser determinado por métodos bastante conhecidos na técnica tais como, ensaios de atividade, Western blots utilizando anticorpos capazes de ligar especificamente o polipeptídeo, Ensaio Imunossorvente Ligado à Enzima (ELISA), ensaios radioimunológicos (RIA), imunohistoquímica, imunocitoquímica, imunofluorescência e similares.

Métodos para determinar, na planta, o nível do RNA transcrito a partir do polinucleotídeo exógeno são bastante conhecidos na técnica e incluem, por exemplo, análise de Northern blot, análise de reação em cadeia da polimerase via transcrição reversa (RT- PCR) (incluindo RT-PCR quantitativa, semiquantitativa ou em tempo real) e hibridização de RNA in situ.

Além disso, o homólogo endógeno do polinucleotídeo exógeno ou polipeptídeo da invenção, ou um fragmento do homólogo endógeno (ex. íntrons ou regiões não traduzidas) na planta podem ser usadas como um marcador para uma seleção auxiliada por marcador (MAS), na qual é usado um marcador para seleção indireta de um determinante ou determinantes genéticos de um traço de interesse (ex., biomassa, taxa de crescimento, teor de óleo, produção, tolerância ao estresse abiótico). Esses genes (sequência de DNA ou RNA) podem conter locais polimórficos 5 ou marcadores genéticos no genoma tais como polimorfismo do tamanho do fragmento de restrição (RFLP), microsatélites e polimorfismo de nucleotídeo único (SNP), impressão digital do DNA (DFP), polimorfismo do tamanho de fragmentos amplificados (AFLP), polimorfismo do nível de expressão, polimorfismo do polipeptídeo codificado ou podem ser ligados a estes e a qualquer outro polimorfismo na sequência de DNA ou RNA.

Exemplos de seleções auxiliadas por marcadores incluem, entre outros, a seleção de um traço morfológico (ex., um gene que afeta a forma, coloração, esterilidade masculina ou resistência tais como a presença ou ausência de estrepes, coloração do revestimento das folhas, altura, cor dos grãos, aroma do arroz); a seleção de um traço bioquímico (ex., um gene que codifica uma proteína que pode ser extraída e observada; por exemplo, isozimas e proteínas de armazenamento); a seleção de um traço biológico (ex., raças patogênicas ou biótipos de insetos com base em patógeno hospedeiro ou relação entre parasita e hospedeiro podem ser usados como marcador uma vez que a constituição genética de um organismo pode afetar sua susceptibilidade a patógenos ou parasitas).

Os polinucleotídeos e polipeptídeos descritos anteriormente no presente documento podem ser usados em uma ampla variedade de plantas econômicas, de maneira segura e de boa relação custo- benefício.

Linhas de plantas que 5 expressam exogenamente o polinucleotídeo ou o polipeptídeo da invenção são filtradas para identificar aquelas que apresentam o maior aumento do traço desejado da planta.

Abaixo segue uma descrição não limitadora de ensaios que podem ser usados para determinar o efeito do transgene (o polinucleotídeo exógeno de algumas configurações da invenção) ou que é um polipeptídeo no traço de interesse em uma planta.

Os parâmetros principais de eficiência utilizados para definir o metabolismo de Nitrogênio (N) da planta incluem eficiência de absorção do nitrogênio, eficiência de utilização do nitrogênio e eficiência de uso do nitrogênio.

A eficiência de absorção do nitrogênio [a quantia de N em biomassa acima do solo (gramas de nitrogênio) / N aplicada (gramas/hectare)] é a quantia total de nitrogênio incorporada pela planta e é uma função da "absorção" (a capacidade de transporte da planta), a eficiência metabólica do processo de assimilação e a taxa de desenvolvimento do tamanho da planta, uma vez que a massa do caule e das folhas criada durante o crescimento são os reais órgãos de armazenamento de nitrogênio. A fração do nitrogênio assimilado encontrada em um broto que é por fim transferida ao grão (produção) é controlada enzimaticamente,

e, dessa forma, pode ser afetada por manipulação transgênica. Esse parâmetro é, na prática, igual à eficiência de uso do nitrogênio (EUN). Um melhor particionamento N entre grão e broto muito provavelmente irá 5 melhorar a produção e o teor de proteína do grão.

De forma similar, os mesmos cálculos de eficiências de uso e utilização podem ser feitos para outros macronutrientes tais como Fosforoso (sic) (P) e Potássio (K), que têm uma correlação direta com a produção e a tolerância geral da planta.

Eficiência de uso de fertilizantes – Para verificar se as plantas transgênicas são mais responsivas aos fertilizantes, as plantas são cultivadas em placas de ágar ou potes com uma quantidade limitada de fertilizante, conforme descrito, por exemplo, nos Exemplos 5-7 da seção de Exemplo a seguir e em Yanagisawa et al (Proc Natl Acad Sci USA. 2004; 101:7833-8).

As plantas são analisadas quanto ao seu tamanho total, tempo de florescência, produção, teor de proteína do broto e/ou grão. Os parâmetros verificados são o tamanho total da planta madura, sua umidade e peso seco, o peso das sementes produzidas, o tamanho médio da semente e o número de sementes produzidas por planta. Outros parâmetros que podem ser testados são: o teor de clorofila das folhas (como o status de nitrogênio da planta e o grau de verdor da folha são altamente co-relacionados), aminoácido e o teor total de proteína das sementes ou de outras partes da planta tais como as folhas ou brotos, teor de óleo, etc.. De forma similar, ao invés de fornecer nitrogênio em quantidades limite, o fosfato ou o potássio podem ser adicionados em concentrações cada vez maiores. Novamente, os mesmos parâmetros medidos são os mesmos listados acima. Desta 5 forma, a eficiência de uso de nitrogênio (EUN), a eficiência de uso de fosfato (EUF) e a eficiência de uso de potássio (EUP) são avaliadas, verificando a capacidade das plantas transgênicas de florescer sob as condições de restrição dos nutrientes.

Eficiência de uso do nitrogênio – Para verificar se as plantas transgênicas Arabidopsis são mais responsivas ao nitrogênio, as plantas são cultivadas em 0,75-1,5 mM (condições de deficiência de nitrogênio) ou 6-15 mM (condições ideais de nitrogênio). É permitido que as plantas cresçam por mais 20 a 40 dias ou até da produção de sementes. As plantas são então analisadas por seu tamanho total, tempo de florescência, produção, teor de proteína do broto e/ou grão/ produção de semente. Os parâmetros verificados podem ser o tamanho total da planta, umidade e peso seco, o peso das sementes produzidas, o tamanho médio da semente e o número de sementes produzidas por planta. Outros parâmetros que podem ser testados são: o teor de clorofila das folhas (como o status de nitrogênio da planta e o grau de verdor da folha são altamente co- relacionados), aminoácido e o teor total de proteína das sementes ou de outras partes da planta tais como as folhas ou brotos e o teor de óleo. Plantas transformadas não apresentam efeitos fisiológicos e/ou morfológicos substanciais, ou apresentam níveis maiores de parâmetros medidos do que de plantas silvestres, são identificadas como plantas de eficiência de uso do nitrogênio.

Determinação de nitrogênio – O 5 procedimento para determinação de concentração de N (nitrogênio) nas partes estruturais das plantas envolvem o método de digestão de persulfato de potássio para converter N orgânico para NO3 (Purcell and King 1996 Argon. J. 10 88:111-113, a redução mediada de Cd” modificada de NO3 para NO2 (Vodovotz 1996 Biotechniques 20:390-394) e a medição de nitrito através do ensaio de Griess (Vodovotz 1996, supra).

Os valores e absorção são medidos em 550nm em relação a uma curva padrão de NaNO2. O procedimento é descrito em detalhes em Samonte et.al. 2006 Agron. J. 98:168-176.

Testes de germinação – Os testes de germinação comparam a porcentagem de sementes de plantas transgênicas que poderiam completar o processo de germinação à porcentagem de sementes do controle de plantas que são tratadas da mesma forma. Condições normais são consideradas, por exemplo, incubação a 22 ºC sob ciclos diários de 22 horas com luz e 2 horas no escuro. A avaliação de germinação e vigor da muda é conduzida entre 4 e 14 dias após o plantio. A média basal é meio MS de 50% (Murashige and Skoog, 1962 Plant Physiology 15, 473-497).

A germinação é verificada também em condições não favoráveis tais como frio (incubação em temperaturas menores que 10 ºC ao invés de 22 ºC) ou usando soluções de inibição de sementes que contem altas concentrações de um osmolito tal como sorbitol (em concentrações de 50 mM, 100 mM, 200 mM, 300 mM, 500 mM, e até 1000 mM) ou aplicando concentrações crescentes de sal (de 50 mM, 100 mM, 200 mM, 300 mM, 500 mM de NaCl).

5 O efeito da transgene no vigor, taxa de crescimento, biomassa, produção e/ou teor de óleo pode ser determinada usando métodos conhecidos.

Vigor da planta – O vigor da planta pode ser calculado pelo aumento nos parâmetros de crescimentos tais como a área da folha, comprimento da fibra, diâmetro de roseta, peso fresco da planta e similares por tempo.

Taxa de crescimento - A taxa de crescimento pode ser medida usando a análise digital de cultivo de plantas. Por exemplo, imagens de cultivo de plantas em estufas com base em diagramas podem ser capturadas a cada 3 dias e a área de roseta pode ser calculada por análise digital. O crescimento da área de roseta é calculado usando a diferença da área de roseta entre dias de amostragem dividido pela diferença em dias entre amostras.

A avaliação da taxa de crescimento pode ser feita medindo a biomassa da planta produzida, a área da roseta, o tamanho da folha ou o comprimento da raiz por tempo (pode ser medido em cm2 por dia de área de folha).

A área de crescimento relativo pode ser calculada usando a Fórmula I.

Fórmula I: Taxa de área de crescimento relativo = (Δ Área / Δt) * (1/ Área t0) Δt é o dia da imagem atual analisada subtraído do dia 5 inicial (t-tO). Dessa forma, taxa de área de crescimento relativo é em unidades de 1/dia e a taxa de crescimento de comprimento é em unidades de 1/dia.

De maneira alternativa, a taxa de crescimento relativo da área pode ser calculada como o coeficiente de regressão no decorrer do curso de tempo.

Produção de sementes – A avaliação da produção de sementes por planta pode ser feita medindo a quantia (peso ou tamanho) ou quantidade (i.e., número) de sementes secas produzidas e colhidas de 8 a 16 plantas e divido pelo número de plantas.

Por exemplo, as sementes totais de 8 a 16 plantas podem ser colhidas, pesadas usando ex., um balanço analítico e o peso total pode ser dividido pelo número de plantas. A produção de sementes por área de cultivo pode ser calculada da mesma forma ao levar em conta uma determinada área de cultivo para uma única planta. O aumento da produção de semente por área de cultivo seria obtido pelo aumento da produção de semente por planta, e/ou pelo aumento do número de plantas capazes de produzir em uma determinada área.

Além disso, a produção de sementes pode ser determinada via peso of 1000 sementes. O peso de 1000 sementes pode ser determinado conforme segue:

as sementes são espalhadas em uma bandeja de vidro e é uma foto tirada. Cada amostra é pesada e então usando a análise digital, é calculado o número de sementes.

O peso de 1000 sementes pode 5 ser calculado usando a fórmula II: Fórmula II: Peso de 1000 Sementes = número de sementes em amostra/ peso da amostra X 1000 O Índice de Colheita pode ser calculado usando a Fórmula III Fórmula III: Índice de colheita = Produção média de sementes por planta/ Peso seco médio Concentração de proteína dos grãos – O conteúdo de proteína dos grãos (gramas de proteína dos grãos m-2) é estimado como o produto da massa de grão N (nitrogênio) [gramas de Nitrogênio dos grãos m-2] multiplicado pela taxa de conversão de proteína/N de k-5,13 (Mosse 1990, supra). A concentração de proteína dos grãos é estimada como a taxa de teor de proteína dos grãos por massa de unidade do grão (gramas de proteína dos grãos kg-1 de grão).

Comprimento das fibras – O comprimento das fibras pode ser medido usando um fibrógrafo.

O sistema fibrógrafo foi usado para computar o comprimento em termos de comprimento “Médio da Metade Superior”. A média da metade superior (UHM) é o comprimento médio da metade mais longa da distribuição da fibra. O comprimento das medidas do fibrógrafo em comprimentos de vão de um determinado ponto de porcentagem (http://www.cottonine.com/ClassificationofCotton/?Pg=4#Lengt h).

Teor de óleo - O teor de óleo 5 de uma planta pode ser determinada pela extração do óleo da semente ou da porção vegetativa da planta. Em resumo, os lipídios (óleo) pode ser removido da planta (ex., semente) triturando o tecido da planta na presença de solventes específicos (ex., hexano ou éter de petróleo) e extraindo o óleo em um extrator contínuo. A análise do teor de óleo indireto pode ser realizado usando vários métodos de conhecimento tais como Espectroscópio de Ressonância Magnética Nuclear (NMR), que mede a energia de ressonância absorvida pelos átomos de hidrogênio no estado líquido da amostra [Ver por exemplo, Conway TF. and Earle FR., 1963, Journal of the American Oil Chemists' Society; Springer Berlin / Heidelberg, ISSN: 0003-021X (Print) 1558-9331 (Online)]; o Espectroscópio de Quase Infravermelho (NI), que usa a absorção de energia quase infravermelha (1100-2500 nm) pela amostra; e o método descrito em WO/2001/023884, que é baseado em extrair óleo um solvente, evaporar o solvente em um fluxo de gás que forma partículas de óleo, e direcionam luz no fluxo de gás e nas partículas de óleo que formam uma luz refletida detectável.

O efeito da transgene ou seu polipeptídeo codificado em tolerância ao estresse abiótico pode ser determinado usando métodos conhecidos.

Tolerância ao estresse abiótico – Plantas transformadas (i.e., expressando a transgenese) e não transformadas (tipo silvestre) são expostas a condições de estresse abiótico, tais como privação de água, temperatura abaixo do ideal, (temperatura 5 baixa, alta temperatura), deficiência de nutrientes, excesso de nutrientes, condição se estresse salino, estresse osmótico, toxicidade de metais pesados, anaerobiose, poluição atmosférica e irradiação UV.

Ensaio de tolerância de salinidade – Espera-se que as plantas transgênicas com tolerância a altas concentrações de sal demonstrem melhor germinação, vigor da muda ou crescimento em alta salinidade.

O estresse salino pode ser efetuado de varias formas tais como, por exemplo, irrigando as plantas com uma solução hiperosmótica, cultivando as plantas de forma hidropônica em uma solução de crescimento hiperosmótico (ex., solução de Hoagland), ou cultivando as plantas em um meio de crescimento hiperosmótico [ex., 50 % do meio Murashige-Skoog (meio MS)]. Desde que plantas diferentes variam consideravelmente em sua tolerância à salinidade, a concentração de sal na irrigação de água, solução de crescimento, ou meio de crescimento podem ser ajustadas de acordo com as características específicas ou cultivo de planta específico ou variedade, de modo a infligir um efeito suave ou moderado na fisiologia e/ou morfologia das plantas (para diretrizes referentes a concentração apropriada ver, Bernstein and Kafkafi, Root Crescimento Under Salinidade Stress In: Plant Roots, The Hidden Half 3rd ed. Waisel Y,

Eshel A and Kafkafi U. (editores) Marcel Dekker Inc., New York, 2002, e suas referências).

Por exemplo, o teste de tolerância de salinidade pode ser executado irrigando as 5 plantas em estagios de desenvolvimento com aumento de concentrações de cloreto de sódio (por exemplo, 50 mM, 100 mM, 200 mM, 400 mM de NaCl) aplicado no fundo e por cima para garantir a dispersão uniforme do sal. Seguindo a exposição à condição de estresse as plantas são monitoradas freqüentemente até que os efeitos fisiológicos e/ou morfológicos substanciais apareçam em plantas tipo silvestre. Dessa forma, a aparência fenotipica externa, o grau de secagem e o sucesso total para alcançar a maturidade e a progênie de produção são comparados entre plantas transgênicas e de controle. Os parâmetros quantitativos de tolerância medidos incluem, entre outros, o peso molhado e seco médios, o peso das sementes produzidas, o tamanho médio das sementes e o número de sementes produzidas por planta.

As plantas transformadas não apresentam efeitos fisiológicos e/ou morfológicos substanciais, ou apresentam maior biomassa que as plantas tipo silvestre, são identificadas como plantas tolerantes ao estresse abiótico.

Teste de tolerância osmótica – Os ensaios de estresse osmótico (incluindo ensaios de cloreto de sódio e manitol) são conduzidos para determinar se um fenótipo de estresse osmótico foi específico de cloreto de sódio ou se este foi um fenótipo relacionado ao estresse osmótico geral. Plantas que são tolerantes ao estresse osmótico podem ter mais tolerância ao seco e/ou congelamento. Para experimentos de germinação por estresse de salino e osmótico, o meio suplementado, por exemplo, com 50 mM, 100 mM, 200 mM de NaCl ou 100 mM, 200 mM de NaCl, 400 5 mM de manitol, 500 mM de sorbitol ou 15 g (gramas) de PEG [Polietileno glicol 8000].

Ensaios de tolerância seca/ Ensaio de osmoticum – A tolerância ao seco é apresentada para identificar os genes que concedem melhor sobrevivência da planta após privação de água aguda. Para analisar se as plantas transgênicas são mais tolerantes à seca, um estresse osmótico produzido pelo sorbitol osmólito não iônico no meio pode ser realizado. As plantas transgênicas e de controle são germinadas e cultivadas em placas de ágar de plantas por 4 dias, depois de serem transferidas para placas contendo 500 mM de sorbitol. O tratamento causa retardamento no crescimento, então ambas as plantas trangênicas e de controle são comparadas, pelo peso da planta (molhada e seca), produção e pela taxa de crescimentos medidos como tempo para florescência.

De modo oposto, as classificações de seca por solo são realizadas com plantas que expressam excessivamente os detalhes de polinucleotídeos acima. As sementes de controle das plantas Arabidopsis, ou outras plantas transgênicas que expressam excessivamente o polipeptídeo da invenção são germinadas e transferidas para potes. O estresse por seca é obtido após a irrigação ser cessada, acompanhada por colocar os potes em papel absorvente para aumentar a taxa de secagem do solo. As plantas transgênicas e de controlesão comparadas umas as outras quando a maioria das plantas de controle desenvolvem secagem severa. As plantas são regadas novamente após obter 5 uma fração significante das plantas de controle mostrando uma secagem severa. As plantas são classificadas comparando controles para cada um dos dois critérios: tolerância às condições de seca e recuperação (sobrevivência) após serem regadas novamente.

Tolerância de estresse por frio – Para analisar o estresse por frio, as plantas maduras (25 dias de vida) são trasnferidas para câmaras a 4 ºC por 1 ou 2 semanas, com luz constitutiva. Mais tarde as plantas são movidas de volta para a estufa. Duas semanas mais tarde os danos do período de resfriamento, resultando em retardamento do crescimento e outros fenótipos, são comparados entre ambas as plantas transgênicas e de controle, pelo peso da planta (molhada e seca) e comparando a taxa de crescimentos medidos como tempo para florescência, tamanho da planta, produção e similares.

Tolerância de estresse por calor – A tolerância de estresse por calor alcançada pela exposição das plantas a temperaturas acima de 34 ºC por um determinado período. A tolerância da planta é examinada após a transferência das plantas de volta aos 22 ºC para recuperação e avaliação após 5 dias relativo aos controles internos (plantas não transgênicas) ou plantas não expostas nem ao estresse por frio nem por calor.

Eficiência do uso de água - pode ser determinada como a biomassa produzida por transpiração de unidade. Para analisar EUA, o teor de água relativo da folha pode ser medido nas plantas transgênicas e 5 de controle. O peso fresco (PF) é registrado imediatamente; então as folhas são enxarcadas por 8 horas em água destilada em temperatura ambiente no escuro, e o peso túrgido (PT) é registrado. O peso seco total (PS) é registrado após a secagem das folhas a 60 ºC para um peso constante. O teor de água relativo (TAR) é calculado de acordo com a Fórmula IV a seguir: Fórmula IV TAR = [(PF - PS) / (PT - PS)] x 100 Dessa forma, a invensão é de alto valor agricultural para promover a produção das safras desejadas pelo comércio (ex., biomassa de órgão vegetativo tais como madeira de álamo, ou órgãos reprodutivos tais como número de sementes ou biomassa de sementes) sob condições normais ou de limitação de crescimento (ex., condições de deficiência de nitrogênio, estresse abiótico).

Quaisquer das plantas transgenicas descritas acima ou partes destas podem ser processadas para produzirem preparação de alimento, proteína ou óleo, tais como para animais ruminantes.

As plantas transgenicas descritas acima, que exibem um teor de óleoaumentado podem ser usadas para produzir óleo vegetal (pela extração de óleo da planta).

O óleo vegetal (incluindo o óleo de semente e/ou óleo da parte vegetativa) produzido, de acordo com o método da invenção, pode ser combinado com uma variedade de outros ingredientes. Os ingredientes 5 específicos incluídos em uma produção são determinados de acordo com o uso pretendido. Os produtos exemplares incluem alimentação animal, matéria prima para modificações químicas, plástico biodegradável, produto de comida misturada, óleo comestível, biocombustível, óleo de cozinha, lubrificante, biodiesel, lanches, cosméticos e matéria prima de processo de fermentação. Produtos exemplares a serem incorporados ao óleo vegetal incluem alimentos de animais, produtos de alimentação humana tais como lanches extrusados, pães, como um agente obrigatório do alimento, alimentação de aqüicultura, misturas fermentáveis, suplementos alimentares, bebidas energéticas, barras nutricionais, suplementos multi- vitamínicos, bebidas dietéticas e cereais. De acordo com algumas configurações da invenção, o óleo compreende óleo de semente oil e/ou óleo de parte vegetativa. De acordo com algumas configurações da invenção, a célula da planta forma uma parte de uma planta.

Conforme utilizado no presente documento o termo "aproximadamente" refere-se ± 10 %.

O termos "compreende", "compreendendo", "incluir", "incluindo", "contendo" e suas conjugações significam "incluindo entre outros".

O termo "consistindo de meios"

incluindo e limitado a".

O termo "consistindo essencialmente de” meios que a composição, método ou estrutura podem incluir ingredientes adicionais, etapas e/ou 5 partes, mas somente se os ingredientes adicionais, etapas e/ou partes não alterarem de forma material as características básicas e originais da composição reivindicada, método ou estrutura.

Conforme utilizada no presente documento a forma única "um/uma" e "o/a" incluem referencias de plural a menos que o contexto ditar claramente de outra forma. Por exemplo, o termo "um composto" ou "pelo menos um composto" pode incluir uma pluralidade de compostos, incluindo misturas.

Durante este pedido, varias configurações desta invenção podem apresentar em um formato de faixa. Isso pode ser entendido que a descrição em formato de faixa é meramente por conveniência e brevidade e não pode ser construída como uma limitação inflexível no escopo da invenção. Conseqüentemente, a descrição da faixa não pode ser considerada por ter revelado especificamente todas as subfaixas possíveis assim como valores numéricos individuais dentro desta faixa. Por exemplo, a descrição da faixa tal como de 1 a 6 deve ser considerada por ter revelado especificamente todas as subfaixas tais como de 1 a 3, de 1 a 4, de 1 a 5, de 2 a 4, de 2 a 6, de 3 a 6, etc., assim como números individuais dentro da faixa, por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5 e 6. Isto se aplica no que diz respeito a largura da faixa.

Sempre que uma faixa numérica é indicada no presente documento, cujo propósito é incluir qualquer número citado (fracional ou inteiro) dentro da 5 faixa indicada. As frases “variando/varia entre” um primeiro número indicado e um segundo número indicado e “variando/varia de” um primeiro número indicado “até” um segundo número indicado são usados no presente documento alternadamente e cujo propósito é incluir o primeiro e o segundo números indicados e todos os números fracionais ou inteiros entre eles.

Conforme usado no presente documento o termo “método” refere-se a maneiras, meios, técnicas e procedimentos para cumprir uma determinada tarefa incluindo, entre outros, essas maneiras, meios, técnicas e procedimentos sejam de conhecimento de praticantes das técnicas químicas, farmacológicas, biológicas, bioquímicas e médicas ou imediatamente desenvolvidos a partir de maneiras, meios, técnicas e procedimentos conhecidos. É reconhecido que determinadas características da invensão, as quais são, para fins de esclarecimento, descritas no contexto de configurações separadas, também podem ser providas em conjunto em uma única configuração. Por outro lado, diversas características da invensão, que são, por brevidade, descritas no contexto de uma única configuração, também podem ser providas separadamente ou em qualquer subconbinação adequada ou como adequada em qualquer outra configuração da invenção descrita. Determinadas caraterísticas descritas no contexto de várias configurações não são consideradas características essenciais dessas configurações, a menos que a configuração seja inoperante sem esses elementos.

5 Varias configurações e aspectos da presente invenção conforme descritas acima e conforme reivindicado na seção de reivindicações abaixo encontram suporte experimental nos exemplos a seguir.

EXEMPLOS Agora é feita referência aos exemplos a seguir, que juntos com as descrições acima ilustram algumas configurações da invenção de maneira não limitadora.

Geralmente, a nomenclatura utilizada no presente documento e os procedimentos laboratoriais utilizados na presente invenção incluem técnicas moleculares, bioquímicas, microbiológicas e de DNA recombinante. Tais técnicas são detalhadamente explicadas na documentação. Veja, por exemplo, "Molecular Cloning: A laboratory Manual" Sambrook et al, (1989); "Current Protocols in Molecular Biology" Volumes I-III Ausubel, R.

M., ed. (1994); Ausubel et al, "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley and Sons, 25 Baltimore, Maryland (1989); Perbal, "A Practical Guide to Molecular Cloning", John Wiley & Sons, New York (1988); Watson et al, "Recombinant DNA", Scientific American Books, New York; Birren et al. (eds) "Genome Analysis: A Laboratory Manual Series", Vols. 1-4, Frio Spring Harbor Laboratory Press, New

York (1998); metodologias conforme estabelecidas nas patentes americanas Nº 4.666.828; 4.683.202; 4.801.531;

5.192.659 e 5.272.057; "Cell Biology: A Laboratory Handbook", Volumes I-III Cellis, J. E., ed. (1994); "Current 5 Protocols in Immunology" Volumes I-III Coligan J. E., ed.

(1994); Stites et al. (eds), "Basic and Clinical Immunology" (8th Edition), Appleton & Lange, Norwalk, CT (1994); Mishell and Shiigi (eds), "Selected Methods in Cellular Immunology", W. H. Freeman and Co., New York (1980); imunoensaios disponíveis são amplamente descritos na patente e na documentação científica, veja, por exemplo, as patentes americanas Nº 3.791.932; 3.839.153; 3.850.752; 3.850.578;

3.853.987; 3.867.517; 3.879.262; 3.901.654; 3.935.074;

3.984.533; 3.996.345; 4.034.074; 4.098.876; 4.879.219;

5.011.771 e 5.281.521; "Oligonucleotide Synthesis" Gait, M.

J., ed. (1984); "Nucleic Acid Hybridization" Hames, B. D., and Higgins S. J., eds. (1985); "Transcription and Translation" Hames, B. D., and Higgins S. J., Eds. (1984); "Animal Cell Culture" Freshney, R. I., ed. (1986); "Immobilized Cells and Enzymes" IRL Press, (1986); "A Practical Guide to Molecular Cloning" Perbal, B., (1984) and "Methods in Enzymology" Vol. 1-317, Academic Press; "PCR Protocols: A Guide To Methods And Applications", Academic Press, San Diego, CA (1990); Marshak et al, "Strategies for Protein Purification and Characterization - A Laboratory Course Manual" CSHL Press (1996); todos os quais são incorporados por referência como se plenamente estabelecidos no presente documento. Outras referências gerais são fornecidas ao longo do presente documento. Acredita-se que os procedimentos nelas contidos sejam bastante conhecidos na técnica e sejam fornecidos para maior comodidade do leitor.

Todas as informações nelas contidas são incorporadas por 5 referência ao presente documento.

EXEMPLO 1

IDENTIFICAÇÃO DE GENES QUE AUMENTAM A EFICIÊNCIA DE USO DO NITROGÊNIO, A EFICIÊNCIA DE USO DE FERTILIZANTES, PRODUÇÃO, TEOR DE ÓLEO, BIOMASSA E/OU TOLERÂNCIA AO ESTRESSE ABIÓTICO Genes que podem aumentar a eficiência de uso do nitrogênio (EUN), a eficiência de uso de fertilizantes (EUF), produção, teor de óleo, biomassa e/ou tolerância ao estresse abiótico (ABST) foram identificados utilizando várias ferramentas de bioinformática e mineração de dados.

Todos os conjuntos de dados de sequências de nucleotídeo aqui utilizados foram originados de bancos de dados disponíveis para o público em geral.

Dados de sequências de 76 diferentes espécies de plantas foram introduzidos em um único e amplo banco de dados.

Outras informações acerca de expressão de genes, observações sobre proteínas, enzimas e vias também foram incorporados.

Os principais bancos de dados utilizados incluem: • Genomas o Genoma de Arabidopsis [TAIR genome version 6 (http://www.arabidopsis.org/)] o Genoma do Arroz [IRGSP build 4.0 (http://rgp.dna.affix.go.jp/IRGSP/)].

o Álamo [Populus trichocarpa release 1.1 from JGI (assembly vl.0) (http://www.genome.jgi-psf.org/)] o Brachypodium [JGI 4x assembly, http://www.brachpodium.org)] 5 o Soja [DOE-JGI SCP, version Glyma0 (http://www.phytozome.net/)] o Uva [French-Italian Public Consortium for Grapevine Genome Characterization grapevine genome (http://www.genoscope.ens.fr/)] o Mamona [TIGR/J Craig Venter Institute 4x assembly [(http://msc.jevi.org/rcommunis] o Sorgo [DOE-JGI SCP, version Sbil [http://www.phytozome.net/)], o Genoma do milho parcialmente montado [http://maizesequence.org/] • As sequências expressadas de EST e mRNA foram extraídas dos seguintes bancos de dados: o GenBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Genbank/).

o RefSeq (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/RefSeq/). o TAIR (http://www.arabidopsis.org/).

• Bancos de dados de vias e proteínas o Uniprot (http://www.expasy.uniprot.org/).

o AraCyc (http://www.arabidopsis.org/biocyc/index.jsp).

o ENZYME (http://expasy.org/enzyme/).

• Conjuntos de dados de microarranjo foram baixados de: o GEO (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/) o TAIR (http://www.arabidopsis.org/).

o Dados exclusivos de microarranjos de fibra de algodão

(Publicação PCT Nº WO2008/075364) o Dados exclusivos de microarranjos sobre ecotipos de Arabidopsis (Publicação PCT Nº WO2008/122980).

• Informações de OTL (quantitative trailt Locus) 5 o Gramene (http://www.gramene.org/qtl/).

A montagem do banco de dados foi realizada para permitir a construção de um banco de dados amplo, rico, com observações confiáveis e fácil de analisar composto de sequências genômicas de DNA mRNA e ESTs disponíveis para o público em geral, dados de diversas safras bem como expressão de genes, observações de proteínas e QTLs de dados de vias e outras informações relevantes.

A montagem do banco de dados é composta de uma caixa de ferramentas de refinamento, estruturação e observação de genes e ferramentas de análise que permitem combinar um banco de dados adaptado para cada projeto de descoberta de genes. As ferramentas de refinamento e estruturação de genes permitem detectar de maneira confiável variantes de recomposição e transcrições antissentido, gerando a compreensão de diversos resultados fenotípicos potenciais de um único gene. As capacidades da plataforma "LEADS" da Compugen LTD para analisar o genoma humano foram confirmadas e aceitas pela comunidade científica [ver por ex., "Widespread Antisense Transcription", Yelin, et al. (2003) Nature Biotechnology 21, 379-85; "Splicing of Alu Sequences", Lev-Maor, et al.

(2003) Science 300 (5623), 1288-91; "Computational analysis of alternative splicing using EST tissue information", Xie H et al. Genomics 2002], e foi comprovado que têm maior eficiência na genômica de plantas também.

Agrupamento (Clustering) EST e montagem de genes - Para agrupamento e montagem de genes de 5 Arabidopsis, arroz, uva, sorgo, brachypodium e soja os presentes inventores utilizaram a versão "genomic LEADS".

Essa ferramenta permite o mais preciso agrupamento de sequências de ESTs e mPvNA no genoma e prevê a estrutura do gene e eventos de recomposição alternativos e transcrição antissentido.

Observação de genes – Genes e proteínas previstos foram observados conforme segue: Foi realizada busca de sequências por blast [http://blast.ncbi.nlm. nih.gov/ Blast.cgi] em relação a todas as plantas UniProt [http://www.uniprot.org/]. Quadros de leitura aberta de cada suposta transcrição foram analisados e o mais longo ORF com o maior número de homólogos foi selecionado como a proteína prevista da transcrição. As proteínas previstas foram analisadas pelo InterPro [http://www.ebi.ac.uk/interpro/].

A comparação por Blast de proteínas dos bancos de dados AraCyc e ENZYME foi usada para mapear as transcrições previstas para vias do AraCyc.

Proteínas previstas de diferentes espécies foram comparadas utilizando o algoritmo blast [http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi] para validar a precisão da sequência da proteína prevista e para a detecção eficiente de orthologs.

Definição do perfil de expressão dos genes – Poucas fontes de dados foram exploradas em busca de definição do perfil de expressão dos genes, a saber, dados de microarranjo e perfil de expressão 5 digital (conforme mencionado acima). De acordo com o perfil de expressão do gene, foi realizada uma análise de correlação para identificar genes que são corregulados em etapas de desenvolvimento e condições ambientais diferentes.

Conjuntos de dados de microarranjos disponíveis para o público em geral nos sites NCBI GEO foram baixados, renormalizados e integrados ao banco de dados. O perfil de expressão foi um dos mais importantes dados de recursos para identificar genes importantes para a EUN, ABST, produção, aumento de biomassa e/ou EUF. Além do mais, quando foi descoberto que genes homólogos de diferentes safras estavam associados ao aumento de EUN, ABST, EUF, biomassa, produção or teor de óleo, os genes foram marcados como "altamente previsíveis" para aperfeiçoar o traço. Um resumo do perfil de expressão digital foi compilado para cada cluster de acordo com todas as palavras-chave incluídas nos registros de sequências que compreendem o cluster. A expressão digital, também conhecida como Northern Blot eletrônico, é uma ferramenta que exibe o perfil de expressão virtual baseado nas sequências de EST que formam o cluster do gene. A ferramenta pode fornecer o perfil de expressão de um cluster em termos de anatomia da planta (ex. tecidos/órgãos nos quais o gene é expresso), etapa de desenvolvimento (as etapas de desenvolvimento nas quais um gene pode ser encontrado) e perfil de tratamento (provê as condições fisiológicas nas quais um gene é expresso tais como seca, 5 frio, infecção patogênica, etc). Dada uma distribuição aleatória de ESTs nos diferentes clusters, a expressão digital fornece um valor de probabilidade que descreve a probabilidade de um cluster ter um total de N ESTs para conter X ESTs de uma determinada coleção de bibliotecas.

Para os cálculos de probabilidade foram levados em consideração os parâmetros a seguir: a) o número de ESTs no cluster; b) o número de ESTs das bibliotecas implicadas e relacionadas; e c) o número total de ESTs disponíveis, que representam as espécies. Com isso clusters com valores de baixa probabilidade são altamente enriquecidos com ESTs do grupo de bibliotecas de interesse que indicam uma expressão especializada.

Os resultados dos dados de expressão digital e de microarranjo dos genes são fornecidos nas Tabelas 1-19 abaixo no presente documento.

São resumidos abaixo os critérios fundamentais utilizados para selecionar os genes cuja expressão em uma planta pode ser usada para aumentar a EUN, a EUF, biomassa, produção, teor de óleo e ABST. A prega de excesso de expressão ("Prega") é calculada como a razão entre o número de ESTs encontradas em um gene ou um grupo ortólogo para uma determinada categoria ("Palavra-chave") e o número de ESTs esperado de acordo com a distribuição normal. Um valor probalístico (P-value) foi estimado para as pregas de excesso de expressão calculadas. Genes foram selecionados com base nos resultados apresentados nas Tabelas 1-19 abaixo e outros filtros computacionais 5 combinados com curação manual conforme detalhado abaixo.

NUE242, NUE244, NUE234, NUE239, NUE240, NUE514, NUE523, NUE533, NUE538, NUE548, NUE549, NUE241, NUE235, NUE251, NUE587 e NUE582 foram selecionados já que são altamente expressos em raízes e em condições de deficiência de nutrientes (conforme mostrado nas Tabelas 1 e 2, abaixo no presente documento).

Tabela 1 Expressão digital de NUE242, NUE244, NUE234, NUE239, NUE240, NUE514, NUE523, NUE533, NUE538, NUE548, NUE549, NUE241, NUE235, NUE251, NUE587 e NUE582 em diferentes tecidos.

Anatomia Genes semente germinando raiz mudas tentativa dobra valor p dobra valor p dobra valor p dobra valor p NUE242 10.57 2.68E-12 1.00 5.47E-01 NUE244 1.00 4.48E-02 3.00 1.06E-03 1.40 1.67E-01 2.00 2.03E-01 NUE234 6.89 1.80E-24 NUE239 7.26 1.87E-21 NUE240 12.70 4.65E-40 NUE514 1.97 2.69E-01 2.95 7.95E-60 0.78 1 0.39 9.99E-01 NUE523 2.15 1.17E-05 1.11 4.45E-01 1.33 1.31E-01 NUE533 2.96 5.39E-04 0.76 8.43E-01 NUE538 3.47 1.05E-06 0.96 6.20E-01 NUE548 1.72 1.06E-02 0.65 8.48E-01 0.60 9.41E-01 NUE549 1.51 7.86E-06 2.52 7.38E-13 0.19 1 NUE241 3.32 7.66E-03 1.00 4.05E-01 0.88 6.88E-01 NUE235 1.00 2.95E-02 4.94 1.12E-06 0.48 9.46E-01 NUE251 2.72 3.33E-05 NUE587 2.39 2.20E-02 2.56 1.10E-01 NUE582 2.00 6.00E-08 1.19 2.80E-01 1.89 7.60E-06 Tabela 1. Expressão digital dos genes indicados da semente em germinação, raíz, muda e brotos. São fornecidos o aumento de pregas e os valores p calculados. Os resultados foram considerados estatisticamente significativos se o valor p tiver sido inferior a 0,05. Células em branco indicam que o gene não está expresso ou que não há dados disponíveis.

5 Tabela 2 Expressão digital de NUE242, NUE244, NUE234, NUE239, NUE240, NUE514, NUE523, NUE533, NUE538, NUE548, NUE549, NUE241, NUE235, NUE251, NUE587 e NUE582 em diferentes condições de crescimento Genes Tratamento deficiências de seco etiolação tensão de calor irrigação nutrientes dobra valor p dobr valor p dobra valor p dobra valor p dobra valor p

4.69E- NUE242 1.00 5.00 8.06E-06 02 NUE244 4.00 1.40E-02 7.00 2.93E-06 1.00 1.50E-01 NUE234 3.00 2.51E-03 2.93 1.71E-02 NUE239 8.00 5.17E-11 17.36 2.11E-27 NUE240 4.00 1.44E-05 26.09 6.02E-35 NUE514 0.14 1 0.49 9.96E-01 1.16 5.14E-01 5.75 1.26E-38 3.54 1.95E-04 NUE523 1.53 1.07E-01 4.35 5.73E-04 1.94 2.76E-01 NUE533 1.00 6.19E-01 4.00 3.57E-03 NUE538 1.69 2.10E-01 7.00 2.32E-06 5.00 2.30E-05 NUE548 0.76 7.80E-01 9.60 1.24E-09 NUE549 1.91 8.07E-07 4.08 6.20E-12 9.58 8.54E-30 NUE241 3.00 8.97E-03 NUE235 2.00 1.50E-01 6.00 2.61E-06 NUE251 1.89 9.79E-02 3.00 4.85E-02 8.00 2.04E-08 NUE587 4.50 ÚSEOS 3.00 4.71E-03 NUE582 0.63 9.51E-01 3.20 4.00E-02 0.97 6.10E-01 Tabela 2. Expressão digital dos genes indicados sob seca, estiolamento estresse por calor, deficiências de nutrientes e alagamento. São fornecidos o aumento de pregas e os valores p calculados. Os resultados foram considerados estatisticamente significativos se o valor p tiver sido inferior a 0,05.

5 Células em branco indicam que o gene não está expresso ou que não há dados disponíveis.

NUE229, NUE248, NUE254, NUE542, NUE562, NUE237, NUE221, NUE585 and NUE588 foram selecionados por causa de sua alta expressão nas raízes e em condições de estresse por seca (conforme mostrado nas tabelas 3 e 4 abaixo).

Tabela 3 Expressão digital ofNUE229, NUE248, NUE254, NUE542, NUE562, NUE237, NUE221,NUE585 e NUE588 em diferentes tecidos. Genes Anatomia folha semente raiz mudas tentativa dobra valor p dobra valor p dobra valor p dobra valor p dobra valor p NUE229 4.64 2.79E-04 NUE248 1.19 5.06E-01 3.56 6.36E-03 NUE254 2.26 1.35E-02 7.90 5.32E-22 0.33 9.53E-01 1.55 1.46E-01 NUE542 4.22 9.75E-04 NUE562 2.75 2.40E-02 3.32 3.79E-08 0.71 9.32E-01 0.62 9.66E-01 NUE237 0.50 9.00E-01 5.35 5.22E-11 1.21 2.97E-01 0.50 9.67E-01 NUE221 4.15 2.33E-04 0.63 8.74E-01 1.41 2.48E-01 NUE585 2.00 1.20E-01 6.00 1.34E-04 NUE588 0.99 6.00E-01 2.56 7.16E-05 0.65 9.64E-01 1.30 1.29E-01 Tabela 3. Expressão digital dos genes indicados na folha, semente, raíz, muda e brotos. São fornecidos o aumento de pregas e os valores p calculados. Os resultados foram considerados estatisticamente significativos se o valor p tiver sido inferior a 0,05. Células em branco indicam que o gene não está expresso ou que não há dados disponíveis.

Tabela 4 Expressão digital de NUE252, MAB106, NUE265, NUE553, NUE513,

NUE579, NUE580, NUE256, NUE227 e NUE223 em diferentes condições de crescimento. Genes Tratamento frio seco etiolação salinidade dobra valor p dobra valor p dobra valor p dobra valor p NUE229 4.00 6.53E-03 NUE248 4.00 6.02E-03 NUE254 3.13 1.29E-02 1.00 3.67E-01 NUE542 3.00 3.50E-02 6.00 1.61E-10 NUE562 0.70 0.760127 2.75 3.66E-02 0.98 0.57666 4.35 2.80E-03 NUE237 6.00 3.30E-04 NUE221 4.00 1.38E-03 1.60 0.28739 NUE585 2.00 5.13E-02 NUE588 2.10 0.173185 2.73 3.76E-02 1.39 0.185271 0.72 7.53E-01 Tabela 4. Expressão digital dos genes indicados sob resfriamento, aridez, estiolamento e salinidade. São 5 fornecidos o aumento de pregas e os valores p calculados. Os resultados foram considerados estatisticamente significativos se o valor p tiver sido inferior a 0,05.

Células em branco indicam que o gene não está expresso ou que não há dados disponíveis.

NUE252 e MAB106, NUE265, NUE553, NUE513, NUE579, NUE580, NUE256, NUE227 and NUE223 foram selecionados por causa de sua alta expressão sob condições de crescimento de estiolamento (como mostra a Tabela 5).

Tabela 5 Expressão digital de NUE252, MAB106, NUE265, NUE553, NUE513, NUE579, NUE580, NUE256, NUE227 e NUE223 em diferentes condições de crescimento. Tratamento Genes seco etiolação calor metal pesado dobra valor p dobra valor p dobra valor p dobra valor p NUE252 1.28 4.2E-01 5.67 2.0E-11 MAB 106 0.49 8.7E-01 10.17 5.2E-71 NUE265 1.90 4.9E-02 4.00 2.6E-03 2.26 7.2E-02 NUE553 1.92 4.4E-02 NUE513 1.05 5.7E-01 3.75 1.5E-04

Continuação da Tabela 5 NUE579 0.27 9.8E-01 3.18 1.9E-05 NUE580 1.00 5.6E-01 3.16 3.8E-02 NUE256 1.84 5.9E-02 2.03 9.9E-03 3.43 4.7E-03 NUE227 4.74 3.4E-03 NUE223 1.40 4.19E-01 4.17 5.6E-09 Tabela 5. Expressão digital dos genes indicados sob aridez, estiolamento, calor e metais pesados. São fornecidos o aumento de pregas e os valores p calculados. Os resultados foram considerados estatisticamente significativos se o 5 valor p tiver sido inferior a 0,05. Células em branco indicam que o gene não está expresso ou que não há dados disponíveis.

Tabela 6 Expressão digital de NUE252, MAB106, NUE265, NUE553, NUE513, NUE579, NUE580, NUE256, NUE227 e NUE223 em diferentes condições de crescimento. Tratamento Genes salinidade tensão de oxidação irrigação dobra valor p dobra valor p dobra valor p NUE252 MAB106 NUE265 3.00 6.3E-02 NUE553 NUE513 NUE579 NUE580 NUE256 2.96 8.2E-02 NUE227 NUE223 2.85 8.91E-02 2.00 2.31E-02 Tabela 6. Expressão digital dos genes indicados sob salinidade, estresse oxidativo e inundações. São fornecidos o aumento de pregas e os valores p calculados. Os resultados foram considerados estatisticamente significativos se o valor p tiver sido inferior a 0,05. Células em branco indicam que o gene não está expresso ou que não há dados disponíveis.

NUE224, NUE230, NUE255, NUE245, NUE237, NUE233, NUE231, NUE228, NUE225 e NUE249 foram selecionados devido a sua alta expressão em raízes e expressão quando foram tratados com hormônios 5 intrinsecamente relacionados ao crescimento e desenvolvimento de plantas (como mostra as Tabelas7, 8 e 9).

Tabela 7 Expressão digital de NUE224, NUE230, NUE255, NUE245, NUE237, NUE233, NUE231, NUE228, NUE225 e NUE249 em diferentes tecidos.

Anatomia Genes folha caule raiz mudas tentativa dobra valor p dobra valor p dobra valor p dobra valor p dobra valor p NUE224 1.20 4.0E-01 0.49 9.9E-01 7.26 4.1E-30 1.64 8.4E-03 1.04 5.0E-01 NUE230 0.71 8.3E-01 1.35 1.4E-02 2.76 7.1E-09 0.59 1.0E+00 1.16 2.1E-01 NUE255 4.00 3.3E-03 NUE245 1.48 2.5E-01 0.32 1.0E+00 2.14 4.4E-03 1.03 4.8E-01 1.53 3.2E-02 NUE237 0.47 8.8E-01 1.39 1.0E-01 5.12 1.3E-10 1.14 3.7E-01 0.47 9.8E-01 NUE233 1.73 4.4E-02 4.19 9.9E-05 0.95 6.2E-01 1.28 3.3E-01 NUE231 0.75 7.8E-01 8.66 4.6E-10 0.30 9.7E-01 NUE228 0.17 1.0E+00 2.29 2.4E-12 4.75 3.2E-23 0.13 1.0E+00 NUE225 11.25 0 2.41 1.0E-14 0.10 1.0E+00 NUE249 5.78 4.17E-05 Tabela 7. Expressão digital dos genes indicados na folha, calo, raíz, muda e brotos. São fornecidos o aumento de pregas e os valores p calculados. Os resultados foram considerados estatisticamente significativos se o valor p tiver sido inferior a 0,05. Células em branco indicam que o gene não está expresso ou que não há dados disponíveis.

Tabela 8 Expressão digital de NUE224, NUE230, NUE255, NUE245, NUE237, NUE233, NUE231, NUE228, NUE225 and NUE249 em diferentes condições de crescimento e tratamento.

Tratamento hormônios de desenvolvimento Genes seco etiolação herbal dobra valor p dobra valor p dobra valor p NUE224 4.75 1.7E-06 1.51 1.4E-01 NUE230 2.74 2.1E-04 0.31 9.6E-01 NUE255 4.00 1.4E-04 NUE245 2.67 1.1E-02 1.28 4.6E-01 NUE237 4.26 5.9E-04 6.00 4.2E-04 NUE233 11.74 2.5E-10 NUE231 10.00 3.4E-10 NUE228 4.48 3.0E-09 NUE225 3.45 3.6E-07 NUE249 2.00 3.0E-02 Tabela 8. Expressão digital dos genes indicados hormônios de crescimento de plantas, aridez e estiolamento. São fornecidos o aumento de pregas e os valores p calculados. Os resultados foram considerados estatisticamente 5 significativos se o valor p tiver sido inferior a 0,05.

Células em branco indicam que o gene não está expresso ou que não há dados disponíveis.

Tabela 9 Expressão digital de NUE224, NUE230, NUE255, NUE245, NUE237, NUE233, NUE231, NUE228, NUE225 e NUE249 em diferentes tratamentos de crescimento.

Tratamento Genes irrigação resposta a período de luz salinidade dobra valor p dobra valor p dobra valor p NUE224 NUE230 1.26 4.3E-01 NUE255 NUE245 2.00 2.7E-02 0.87 6.9E-01 NUE237 NUE233 NUE231 NUE228 NUE225 21.00 3.4E-26 28.53 5.6E-82 NUE249 2.00 4.0E-03 Tabela 9. Expressão digital dos genes indicados sob alagamento, resposta ao fotoperíodo e salinidade. São fornecidos o aumento de pregas e os valores p calculados. Os resultados foram considerados estatisticamente significativos se o valor p tiver sido inferior a 0,05.

Células em branco indicam que o gene não está expresso ou 5 que não há dados disponíveis.

NUE268, NUE574 e NUE575 foram selecionados devido a sua alta expressão em calos (um tecido com grande taxa de divisão cellular) e induzidos, quando tratados com hormônios relacionados ao desenvolvimento e ao crescimento de plantas (como mostra a tabela 10, abaixo).

Tabela 10 Expressão digital de NUE268, NUE574 e NUE575 em diversos tecidos e sob diferentes condições e tratamentos. NUE268 NUE574 NUE575 dobra 0.84 1.24 folha valor p 0.8 4.8E-01 dobra 2.37 2.28 2.47 caule valor p 6.0E-19 2.0E-04 2.5E-07 dobra 0.41 0.31 1.20 raiz valor p 1 9.7E-01 3.8E-01 dobra 0.34 1.23 0.45 mudas valor p 1 3.1E-01 9.9E-01 Anatomia dobra 0.59 0.16 0.91 tentativa valor p 9.9E-01 1.0E+00 6.6E-01 plant dobra 4.46 2.80 1.84 development hormones valor p 1.4E-12 5.5E-02 1.7E-01 dobra 2.00 seco valor p 1.7E-01 dobra 0.20 0.35 0.23 etiolação valor p 1.0E+00 9.5E-01 9.9E-01 dobra irrigação valor p resposta a período de dobra 3.32 luz valor p 3.4E-02 Tratamento dobra 1.00 salinidade valor p 4.3E-01 Tabela 10. Expressão digital dos genes indicados em diversos tecidos (folha, calo, raiz,

muda e brotos) e sob diversos tratamentos ou condições (hormônios de desenvolvimento de plantas, aridez, estiolamento, inundações, resposta ao fotoperíodo e salinidade). São fornecidos o aumento de pregas e os valores 5 p calculados. Os resultados foram considerados estatisticamente significativos se o valor p tiver sido inferior a 0,05. Nota-se uma expressão de pregas significante no calo e sob hormônios de desenvolvimento de plantas.

CT75, CT7, CT76, CT71, CT74, CT11, CT20, CT81, CT22, CT82, CT3, CT40, CT1, CT6, CT27, CT2, NUE269, NUE545 e NUE544,foram selecionados devido ao sua alta expressão em fibras de algodão, em que a formação é fortemente relacionada a alongamento de células (Tabelas 11 e 12 abaixo) e, portanto, deverão ter um efeito positivo no desenvolvimento da raiz em condições normais, condições em que há deficiência de nitrogênio, escassez de fertilizantes e/ou deficiências hídricas, bem como para o aumento do teor de óleo. Tabela 11 Expressão digital de CT75, CT7, CT76, CT71, CT74, CT11, CT20, CT81, CT22, CT82, CT3, CT40, CT1, CT6, CT27, CT2, NUE269, NUE545 e NUE544 em diferentes tecidos. Nome do Gene Anatomia Fibra de Algodão Fruta semente raiz dobra Valor p fold Valor p dobra Valor p fold Valor p CT75 1,63 9,3E-13 CT7 1,65 6,3E-16 CT76 1,21 1,9E-01 CT71 1,6 1,3E-28 CT74 1,68 2,4E-89 CT11 1,49 4,4E-04

Continuação da Tabela 11 CT20 1,68 1,1E-14 0,6 8,1E-01 CT81 1,37 9,8E-04 CT22 0,92 7,4E-01 CT82 1,31 3,6E-01 CT3 1,87 1,4E-14 CT40 1,27 1,9E-03 0,59 8,2E-01 CT1 1,53 2,4E-09 CT6 1,46 6,3E-09 CT27 0,65 9,0E-01 CT2 1,43 1,7E-03 NUE269 1,50 2,5E-02 NUE545 1,39 4,6E-03 1 4,5E-01 NUE544 1,73 1,5E-03 Tabela 11. Expressão digital dos genes indicados em fibras de algodão, frutas, sementes e raízes. São fornecidos o aumento de pregas e os valores p calculados. Os resultados foram considerados estatisticamente significativos se o 5 valor p tiver sido inferior a 0,05. Nota-se uma expressão de pregas significante nas fibras de algodão. Células em branco indicam que o gene não está expresso ou que não há dados disponíveis.

Tabela 12 Expressão digital de CT75, CT7, CT76, CT71, CT74, CT11, CT20, CT81, CT22, CT82, CT3, CT40, CT1, CT6, CT27, CT2, NUE269, NUE545 e NUE544 Nome do Gene Anatomia plântula haste folha dobra Valor-p fold Valor-p fold Valor-p CT75 CT7 0,08 1 0,44 9,0E-01 CT76 CT71 0,17 1 CT74 0,17 1 CT11 CT20 0,55 0,97 CT81 1,6 0,08 CT22 CT82 CT3 CT40 0,52 0,86

Continuação da Tabela 12 CT1 0,54 0,97 CT6 0,17 0,99 CT27 CT2 0,21 0,99 NUE269 NUE545 0,63 8,0E-01 NUE544 0,6 8,3E-01 Tabela 12. Expressão digital dos genes indicados em mudas, caule e folha. São fornecidos o aumento de pregas e os valores p calculados. Os resultados foram considerados estatisticamente significativos se o valor p tiver sido 5 inferior a 0,05. Células em branco indicam que o gene não está expresso ou que não há dados disponíveis.

Plantas crescendo sob condições baixas de nitrogênio ou condições de aridez severa sofrem de senescência foliar severa. NUE525, NUE535, NUE565, NUE578, NUE515 e NUE591 foram selecionados como genes fortemente induzidos em folhas e sob deficiências de nutrientes em condições de estresse hídrico (como mostras as Tabelas 13 e 14 abaixo). Além disso, NUE578 demonstra uma forte indução em plantas afetadas pelo estresse calórico. Tabela 13 Expressão digital de NUE525, NUE535, NUE565, NUE578, NUE515 e NUE591 em diferentes tecidos Anatomy Genes Folha Raiz Flor Caule dobra valor-p fold valor-p fold valor-p fold valor-p NUE525 2,54 4,4E-06 0,93 6,6E-01 0,28 1,0E+00 NUE535 8,10 1,4E-11 NUE565 4,78 3,3E-03 NUE578 2,41 9,1E-04 0,20 1,0E+00 NUE515 3,67 2,2E-02 1,36 4,4E-01 1,00 3,7E-01 NUE591 3,41 1,3E-02 1,40 3,6E-01 1,59 2,9E-01 Tabela 13. Expressão digital dos genes indicados em folha, raíz, flor e calo. São fornecidos o aumento de pregas e os valores p calculados. Os resultados foram considerados estatisticamente significativos se o valor p tiver sido inferior a 0,05.

Nota-se expressão de pregas na folha. Células em branco 5 indicam que o gene não está expresso ou que não há dados disponíveis.

Tabela 14 Expressão digital de NUE525, NUE535, NUE565, NUE578, NUE515 e NUE591 em diferentes condições Tratamento Genes Deficiencia de Nutrientes Seca Salinidade Calor dobra valor-p fold valor-p fold valor-p fold valor-p NUE525 3.19 1.2E-02 0.54 9.4E-01 1.29 4.6E-01 NUE535 4.06 6.7E-03 NUE565 3.00 2.3E-02 NUE578 4.25 2.7E-05 1.00 4.0E-01 8.05 3.8E-08 NUE515 3.00 2.6E-02 NUE591 7.00 2.7E-05 Tabela 14. Expressão digital dos genes indicados sob deficiência nutricional, aridez, salinidade e calor. São fornecidos o aumento de pregas e os valores p calculados. Os resultados foram considerados estatisticamente significativos se o valor p tiver sido inferior a 0,05. Nota-se expressão de pregas sob deficiência nutricional e aridez. Células em branco indicam que o gene não está expresso ou que não há dados disponíveis.

NUE520, NUE521, NUE560, NUE563 e NUE573 foram selecionados como genes que podem aprimorar o vigor de mudas sob condições de estresse de nitrogênio.

NUE520, NUE521, NUE560 foram selecionados como genes que são fortemente expressados em plantas inteiras e são fortemente duzidos sob estresse hídrico. NUE563 foi selecionado como um gene que é fortemente induzido em folhas de mudas e é induzido sob estresse salino. NUE573 é induzido 5 em raízes de mudas e sob estresse salino.

Tabela 15 Expressão digital de NUE520, NUE521, NUE560, NUE563 e NUE573 em diferentes tecidos Anatomia Genes Folha raiz Flor Mudas dobra valor-p dobra valor-p dobra valor-p dobra valor-p NUE520 1,80 8,0E-02 0,88 6,9E-01 1,34 1,4E-02 1,87 9,1E-05 NUE521 1,43 2,7E-01 1,06 4,4E-01 1,78 2,1E-02 NUE560 2,68 6,2E-02 0,66 8,2E-01 0,57 9,8E-01 3,67 1,2E-09 NUE563 5,07 6,7E-05 0,28 9,8E-01 0,14 1,0E+00 5,30 4,7E-24 NUE573 0,17 1,0E+00 8,59 3,2E-47 2,00 3,0E-03 Tabela 15. Expressão digital dos genes indicados em folha, raíz, flor e muda. São fornecidos o aumento de pregas e os valores p calculados. Os resultados foram considerados estatisticamente significativos se o valor p tiver sido inferior a 0,05. Nota-se expressão de pregas em folha (NUE563), raíz (NUE573) e muda (NUE520, NUE521, NUE560, NUE563 and NUE573). Células em branco indicam que o gene não está expresso ou que não há dados disponíveis.

Tabela 16 Expressão digital de NUE520, NUE521, NUE560, NUE563 e NUE573 em diferentes condições. Tratamento Genes Deficiencia de Nutrientes Seca Calor Salinidade dobra valor-p dobra valor-p dobra valor-p dobra valor-p NUE520 3,96 1,1E-03 8,00 5,5E-06 2,60 6,9E-02 NUE521 6,00 1,3E-04 1,00 4,5E-01 NUE560 5,00 5,9E-04 NUE563 3,00 2,4E-02 NUE573 1,73 1,3E-01 2,00 5,4E-02 Tabela 16. Expressão digital dos genes indicados sob deficiência nutricional, aridez e salinidade. São fornecidos o aumento de pregas e os valores p calculados. Os resultados foram considerados estatisticamente significativos se o valor p tiver sido inferior a 0,05. Nota-se expressão de 5 pregas em aridez (NUE520, NUE521, NUE560) e salinidade (NUE563 e NUE573). Células em branco indicam que o gene não está expresso ou que não há dados disponíveis.

Mudas e culturas de células são tecidos de crescimento rápido. Além disso, raízes de mudas emergentes alongam-se muito rápido para alcançar a água disponível e o nitrogênio em solos mais profundos.

NUE520, NUE211, NUE564 e NUE567 foram selecionados devido a sua forte expressão em raízes de mudas e/ou mudas inteiras, enquanto NUE519 foi selecionado por sua alta expressão em raízes de mudas e culturas de células (ver Tabela 17).

Tabela 17 Expressão digital de NUE520, NUE211, NUE564, NUE567, e NUE519 em diferentes tecidos.

NUE211 NUE564 NUE567 NUE519 dobra 1,76 3,39 Folha valor-p 2,0E-01 2,5E-03 dobra 0,24 8,00 valor-p 9,9E-01 8,4E-12 Anatomia dobra 1,91 3,50 6,11 3,21 Raiz valor-p 4,6E-02 1,1E-03 6,9E-06 5,1E-05 dobra 2,01 3,687807 Mudas valor-p 1,2E-03 5,9E-03 dobra 1,29 0,21 Shoot valor-p 2,0E-01 1,0E+00 Tabela 17. Expressão digital dos genes indicados em folha, suspensão celular, raiz, muda e broto. São fornecidos o aumento de pregas e os valores p calculados. Os resultados foram considerados estatisticamente significativos se o valor p tiver sido inferior a 0,05. Nota-se expressão de pregas em raiz (NUE211, NUE564, NUE567 e NUE519) e mudas (NUE211 e NUE564).

Células em branco indicam que o gene não está expresso ou 5 que não há dados disponíveis.

NUE528, NUE571, NUE531 e NUE590 são induzidos a estresse por resfriamento. O estresse por resfriamento reduz a fotossíntese da planta e produz efeitos similares aos observados em plantas crescendo sob deficiência de nitrogênio (ver Tabela 18).

Tabela 18 Expressão digital de NUE528, NUE571, NUE531 e NUE590 em diferentes condições. Tratamento Genes Deficiencias de Nutriente Frio Quente Salinidade Seca dobra valor-p dobra valor-p dobra valor-p dobra valor-p dobra valor-p NUE528 2,47 0,08 3,00 5,2E-04 NUE571 7,24 5,8E-09 NUE531 6,00 4,5E-04 NUE590 1,00 3,9E-04 1 2,9E-01 1 2,9E-01 Tabela 18. Expressão digital dos genes indicados sob deficiências nutricionais, resfriamento, aquecimento, salinidade e aridez. São fornecidos o aumento de pregas e os valores p calculados. Os resultados foram considerados estatisticamente significativos se o valor p tiver sido inferior a 0,05. Nota-se expressão de pregas sob deficiências nutricionais (NUE528) e resfriamento (NUE528, 571, 531 e 590). Células em branco indicam que o gene não está expresso ou que não há dados disponíveis.

NUE206 foi selecionado com base em sua análise de expressão digital. Ela demonstrou que

NUE206 é altamente expressada em raízes (2,4 pregas p < 0,05) e há indicações de ser incluída pelo resfriamento (2,2 pregas p < 0,08). NUE208 e NUE210 são genes do tomate que são expressos em frutas e durante o amadurecimento de 5 frutas, respectivamente. Estes estágios são considerados importantes para a manutenção de intenso turgor celular.

NUE209 é uma proteína homeodomíno HB2 putativa fortemente expressada em botões de flores. Foi selecionado como um gene que pertence a um grupo ortólogo de genes que são altamente induzidos pelos hormônios de desenvolvimento das plantas como as auxinas (5 pregas p < 0,002), e em tecidos que mantém intenso turgor celular como a polpa das frutas (3 pregas p < 0,00098) e calo (2 pregas p < 0,0003). NUE246 foi selecionado devido a sua forte expressão no pericarpo dos frutos (3,7 pregas p < 0,01) e por ser fortemente induzido sob aridez (4 pregas, p < 0,0013). NUE516 é uma Pto kinase interactor putativa selecionada para sua indução sob condições de aridez (3,2 pregas, p < 0,03) e primeiramente para o estágio de inundação (2,0 pregas p < 0,02). NUE527 foi escolhido devido a sua expressão em diferentes deficiências nutricionais (3,7 pregas p < 0,002) sendo expressa principalmente sob deficiência de fosfato (4 pregas, p< 0,006). NUE547, a qual é uma nucleasse dependente de Ca(2+)- Putativo, foi selecionada como um gene induzido em flores durante a fase de pré-antese (2,0 pregas p< 0,04).

NUE551 é uma proteína não caracterizada que foi classificada e escolhida como um gene que é induzido em flores (2,6 pregas p < 0,007) e é envolvido no metabolismo do carbono das plantas (G0:0005975 metabolismo de carboidratos). NUE554 foi caracterizada como uma proteína de ligação TBT que é induzida em brotos (1,8 pregas p < 8e-09) durante a bolha e/ou extração na fase de enchimento dos grãos (3,4 pregas p 5 < le-08). NUE583 é uma proteína não caracterizada foretemente expressada em flores (2,5 pregas p <0,006) e induzida de forma significante por citocininas (4,0 pregas p < 2e-05). NUE584 é uma proteína fortemente induzida em brotos e raízes (6,0 pregas p < 8e-07) e super-representada sob condições de deficiência de nutrientes (6,0 pregas p < le-08) e aridez (3,0 pregas p<0,03). NUE592 é uma proteína induzida por deficiência de fosfato (2,0 pregas p< 0,05) e por estresse por hormônios relacionados (6,1 pregas p< 2E- 05).

Outros genes NUE e MAB foram selecionados com base em suas expressões em diferentes experimentos de Microarrays. Os experimentos selecionados do Gene Expression Omnibus (Protocolo de Transferência de Hipertexto://World Wide Web (dot) ncbi (dot) nlm (dot) nih (dot) gov/geo/) foram estresse abiótico (arides, salinidade) GSE6901, deficiência de nitrogenio GSE4409, resfriamento GSE3326, rice atlas GSE6893, e auxin GSE3350. Foram escolhidos de TAIR (Protocolo de Transferência de Hipertexto: //World Wide Web (dot) arabidopsis (dot) org/servlets/Search?type=expr&search_action=new_search) os experimentos em salinidade 1007966888, osmoticum 1007966835, resfriamento 1007966553 e aplicação ABA 1007964750, e de Nascarrays (Protocolo de Transferência de

Hipertexto://affymetrix (dot) arabidopsis (dot) info/narrays/experimentbrowse (dot) pi) foi escolhido um experimento em deficiência de nitrogênio NASCARRAYS-136.

Além destes, dados microarray sobre Propriedades da fibra de 5 algodão foram utilizados para detector a expressão dos genes em fibras de algodão ou raízes especificamente (PCT Publication No: WO 2008/075364).

Baseando-se na analise dos experimentos microarray descritos assima, NUE222 foi selecionada devido a sua forte expressão sob deficiência de nitrogênio, salinidade e por sua forte indução por ABA( ver Tabela 19, logo abaixo). NUE267 e NUE206 foram selecionados como os genes que são fortemente induzidos pela salinidade, resfriamento e ABA. NUE212 é um gene do algodão expressado especificamente em raízes. MAB52 foi selecionado devido a sua indução pela aridez. MAB53 foi selecionado devido a sua indução por deficiência de nitrogênio e seu ortólogo funcional de MAB 106. NUE566 e NUE568 foram selecionados devido a sua alta expressão em folhas, quando comparadas com expressões em raízes. NUE570 foi selecionado devido a sua super-representação na literatura sobre folhas da EST (5 pregas p< 0,001) e sua indução por salinidade em experimentos microarray. NUE540 é expressado em raízes e é relacionado a diferenciação das células das raízes capilares (G0:0048765). NUE539, NUE543, NUE576 e NUE577 foram selecionados por serem fortemente induzidos sob deficiência de nitrogênio. NUE577 também foi selecionado por estar incluído em salinidade e estresse por resfriamento. NUE569 foi selecionado por estar induzido a condições de salinidade e osmoticum. NUE586 foi selecionado por estar induzido quando tratado com o hormônio de crescimento auxina. NUE253 foi selecionada como um gene fortemente expressado sob 5 deficiência de nitrogênio e salinidade e NUE593 foi selecionado como um gene fortemente expressado sob condições de salinidade.

Tabela 19 Análise de expressão por Microarray de NUE222, NUE267, NUE206, NUE212, MAB52, MAB53, NUE539, NUE543, NUE576, NUE566, NUE568, NUE569, NUE570, NUE572, NUE581, NUE540, NUE586, NUE577, NUE253 e NUE593 Dobra Dobra Dobra Dobra Dobra Dobra Dobra Dobra Genes Dobra Seco salinidade Osmoticum Deficiência de Frio ABA Roots Shoot Auxin NUE222 5,0 Ni 2,0 ê i 3,0 NUE267 3,0 4,4 3,5 NUE206 4,0 10,0 6,0 NUE212 12,0 MAB52 1,6 MAB53 1,9 NUE539 4,4 NUE543 2,1 NUE576 3,3 NUE566 2,3 NUE568 22,0 NUE569 1,5 1,6 NUE570 6,2 NUE572 1,2 2,1 NUE581 20,9 7,0 NUE540 2,0 NUE586 3,1 NUE577 2,1 1,9 4,4 NUE253 1,8 1,6 NUE593 2,0 Tabela 19: Análise de expressão por Microarray de genes indicados sob condições de salinidade, aridez, osmoticum, deficiência de nitrogênio, resfriamento, ABA(ácido abscísico) e raízes, brotos e auxina. Células em branco indicam que o gene não está expresso.

NUE49, NUE50 e NUE102 são variants de genes previamente descritos que foram 5 selecionados originalmente para produtividade e melhora no NUE (PCT Publication No. W02007/049275).

No geral, 137 genes foram identificados como tendo um maior impacto na eficiência do uso do nitrogênio, eficiência no uso de fertilizantes, produtividade (ex: produção de sementes, produção de óleo, quantidade e/ou qualidade de grãos), taxa de crescimento, vigor, biomassa, teor do óleo, tolerância ao estresse abiótico e/ou eficiência no uso da água quando sua expressão é, então, aumentada em plantas. Os genes identificados, suas sequências expostas de polinucleotídeo e polipeptídeo, bem como suas sequencias atualizadas de acordo com o banco de dados BenBank estão sumarizadas na Tabela 20, logo abaixo. Tabela 20 Genes que afetam a eficiência do uso do nitrogênio, eficiência do uso de fertilizantes, produtividade, taxa de crescimento, vigor, biomassa, teor de óleo, tolerância ao estresse abiótico e/ou eficiência no uso da água.

Nome do Gene Nome do Grupo Organismo Polyn, SEQIDNO: Polyp, SEQIDNO: CT1 algodão|gbl64|AI725990 algodão 1 138 CT11 algodão|gbl64|AI725968 algodão 2 139 CT2 algodão|gbl64|AI727334 algodão 3 140 CT20 algodão|gbl64|AI726497 algodão 4 141 CT22 algodão|gbl64|BG440027 algodão 5 142 CT27 algodão|gbl64|AF336280 algodão 6 143 CT3 algodão|gbl64|AI725456 algodão 7 144 CT40 algodão|gbl64|BE052317 algodão 8 145 CT6 algodão|gbl64|AI726479 algodão 9 146 CT7 algodão|gbl64|AI727027 algodão 10 147

Continuação da Tabela 20 CT71 algodão|gbl64|AI725508 algodão 11 148 CT74 algodão|gbl64|AI725950 algodão 12 149 CT75 algodão|gbl64|AI726599 algodão 13 150 CT76 algodão|gbl64|AI726155 algodão 14 151 CT81 algodão|gbl64|AI726693 algodão 15 152 CT82 algodão|gbl64|BQ402794 algodão 16 153 MAB106 cevada|gbl57,2|AL450627 cevada 17 154 MAB52 arroz|gbl57,2|AU070543 arroz 18 155 MAB53 arroz|gbl57,2|BI805919 arroz 19 156 NUE102 milho|gbl70|AI974922 milho 20 157 NUE206 arabidopsis|gbl65|AT4G24960 arabidopsis 21 158 NUE208 tomate|gbl64|BG124666 tomate 22 159 NUE209 tomate|gbl64|BG134403 tomate 23 160 NUE210 tomate|gbl57|TOMTRALTAB tomate 24 161 NUE211 arroz|gbl57,2|AU174544 arroz 25 162 NUE212 algodão|gbl64|CO081293 algodão 26 163 NUE221 arroz|gbl57,2|BI305241 arroz 27 164 NUE222 arabidopsis|gbl65|ATlG31820 arabidopsis 28 165 NUE223 arroz|gbl57,2|AW069985 arroz 29 166 NUE224 arroz|gbl57,2|AW155063 arroz 30 167 NUE225 arroz|gbl57,2|BE039221 arroz 31 168 NUE227 arroz|gbl57,2|AU056888 arroz 32 169 NUE228 arroz|gbl57,2|AA753730 arroz 33 170 NUE229 milho|gbl64|AW455682 milho 34 171 NUE230 arroz|gbl57,2|AA749861 arroz 35 172 NUE231 arroz|gbl57,2|AK108994 arroz 36 173 NUE233 arroz|gbl57,2|CB640732 arroz 37 174 NUE234 alamo|gbl57,2|BU868634 alamo 38 175 NUE235 soja|gbl62|CA852963 soja 39 176 NUE237 arroz|gbl57,2|BI811377 arroz 40 177 NUE239 alamo|gbl57,2|BU880014 alamo 41 178 NUE240 alamo|gbl57,2|AJ407707 alamo 42 179 NUE241 tomate|gbl64|BG129806 tomate 43 180 NUE242 tomate|gbl64|BG791300 tomate 44 181 NUE244 soja|gbl62|CF808561 soja 45 182 NUE245 arroz|gbl57,2|AT003383 arroz 46 183 NUE246 uva|gbl60|CF207859 uva 47 184 NUE248 milho|gbl57|BG354535 milho 48 185 NUE249 arroz|gbl57,2|AU029933 arroz 49 186 NUE250 arroz|gbl57,2|AK102239 arroz 50 187 NUE251 sorgo|gb 161 ,xeno| AI947781 sorgo 51 188 NUE252 arabidopsis|gbl65|ATlG58030 arabidopsis 52 189 NUE253 arroz|gbl57,2|AF145730 arroz 53 190 NUE254 milho|gbl64|AI600563 milho 54 191 NUE255 arroz|gbl57,2|CB000630 arroz 55 192 NUE256 trigo|gbl54|TG BE216912 trigo 56 193 NUE265 arroz|gbl57,2|BE039218 arroz 57 194 NUE267 arabidopsis|gbl65|AT5G60680 arabidopsis 58 195 NUE268 arroz|gbl57,2|AA750934 arroz 59 196 NUE269 algodão|gbl64|AI730085 algodão 60 197 NUE49 milho|gbl54|AW037179 milho 61 198 NUE50 milho|gbl64|AW287760 milho 62 199 NUE511 milho|gbl57|AW360667 milho 63 200

Continuação da Tabela 20 NUE512 arabidopsis|gbl57,2|AT5G23460 arabidopsis 64 201 NUE513 arabidopsis|gbl57,2|AT3G26100 arabidopsis 65 202 NUE514 soja|gbl62|SOYHPR soja 66 203 NUE515 arabidopsis|gbl65|ATlG44920 arabidopsis 67 204 NUE515 arabidopsis|gbl57,2|ATlG44920 Pl arabidopsis 67 266 NUE516 arabidopsis|gbl57,2|ATlG48210 arabidopsis 68 205 NUE519 trigo|gbl64|BE445396 trigo 69 206 NUE520 arroz|gbl57,2|BI305493 arroz 70 207 NUE521 arroz|gbl57,2|AU077950 arroz 71 208 NUE523 sorgo|gb 161 ,xeno| AI901439 sorgo 72 209 NUE525 sorgo|gb 161 ,xeno| AW052978 sorgo 73 210 NUE527 sorgo|gb 161 ,xeno| AW055409 sorgo 74 211 NUE528 sorgo|gb 161 ,xeno| AI372194 sorgo 75 212 NUE531 arroz|gbl57,2|BI805136 arroz 76 213 NUE532 milho|gbl64|AW054475 milho 77 214 NUE533 soja|gbl66|AW350050 soja 78 215 NUE535 sorgo|gb 161 ,crp|BE599042 sorgo 79 216 NUE536 milho|gbl64|BQ279657 milho 80 217 NUE537 cevada|gbl57,2|AJ234408 cevada 81 218 NUE538 sorgo|gb 161 ,xeno| AW923 729 sorgo 82 219 NUE539 arroz|gbl57,2|AW155216 arroz 83 220 NUE540 arabidopsis|gbl57,2|ATlG13980 arabidopsis 84 221 NUE542 arabidopsis|gbl57,2|AT3G46280 arabidopsis 85 222 NUE543 arroz|gbl57,2|AK063415 arroz 86 223 NUE544 algodão|gbl64|BQ412384 algodão 87 224 NUE545 algodão|gbl64|AI055737 algodão 88 225 NUE547 sorgo|gbl61,xeno|BI139559 sorgo 89 226 NUE548 sorgo|gb 161 ,xeno|BQ279657 sorgo 90 227 NUE549 sorgo|gbl61,xeno|AF019147 sorgo 91 228 NUE550 canola|gbl61|EE559843 cañóla 92 229 NUE551 cevada|gbl57,3|BE420701 cevada 93 230 NUE553 cevada|gbl57,3|BE421829 cevada 94 231 NUE554 sorgo|gb 161,xeno| AA011880 sorgo 95 232 NUE560 arroz|gbl57,2|BE229552 arroz 96 233 NUE562 arroz|gbl57,2|BE039784 arroz 97 234 NUE563 arroz|gbl57,2|AU057884 arroz 98 235 NUE564 milho|gbl64|AI619269 milho 99 236 NUE565 arabidopsis|gbl57,2|AT5G15080 arabidopsis 100 237 NUE566 arabidopsis|gbl65|AT2G43700 arabidopsis 101 238 NUE567 arabidopsis|gbl65|ATlG60680 arabidopsis 102 239 NUE568 arabidopsis|gbl65|ATlG78450 arabidopsis 103 240 NUE569 arabidopsis|gbl65|AT2G03890 arabidopsis 104 241 NUE570 arabidopsis|gbl65|ATlG43910 arabidopsis 105 242 NUE571 arabidopsis|gbl57,2|ATlG47530 arabidopsis 106 243 NUE572 arabidopsis|gbl57,2|AT2G24240 arabidopsis 107 244 NUE573 arabidopsis|gbl65|AT4G15390 arabidopsis 108 245 NUE574 arroz|gbl57,2|BI807603 arroz 109 246 NUE575 arroz|gbl57,2|AU068829 arroz 110 247 NUE576 arroz|gbl57,2|AA752451 arroz 111 248 NUE577 arabidopsis|gbl65|ATlG67800 arabidopsis 112 249 NUE578 trigo|gbl64|BE401454 trigo 113 250 NUE579 arabidopsis|gbl65|ATlG70850 arabidopsis 114 251

Continuação da Tabela 20 NUE580 arabidopsis|gbl65|AT2G35880 arabidopsis 115 252 NUE581 arabidopsis|gbl65|ATlG12845 arabidopsis 116 253 NUE582 sorgo|gbl61,xeno|T18303 sorgo 117 254 NUE583 arroz|gbl57,2|AU172665 arroz 118 255 NUE584 sorgo|gbl61,crp|AW923545 sorgo 119 256 NUE585 arabidopsis|gbl65|ATlG71900 arabidopsis 120 257 NUE586 arabidopsis|gbl65|ATlG72320 arabidopsis 121 258 NUE587 sorgo|gbl61,xeno|AW672541 sorgo 122 259 NUE588 arroz|gbl57,2|AA750816 arroz 123 260 NUE590 sorgo|gb 161 ,xeno| AI622209 sorgo 124 261 NUE591 sorgo|gbl61,xeno|BE123399 sorgo 125 262 NUE592 sorgo|gbl 61 ,xeno| AI901557 sorgo 126 263 NUE593 arabidopsis|gbl65|AT2G04066 arabidopsis 127 264 CT82 algodão|gbl64|BQ402794 TI algodão 128 153 NUE102 milho|gbl64|AI974922 TI milho 129 265 NUE211 arroz|gbl57,2|AU174544 TI arroz 130 162 NUE212 algodão|gbl64|CO081293 TI algodão 131 163 NUE269 algodão|gbl64|AI730085 TI algodão 132 197 NUE519 trigo|gbl64|BE445396 TI trigo 133 206 NUE535 sorgo|gbl61,xeno|BE599042 TI sorgo 134 267 NUE537 cevada|gbl57,2|AJ234408 TI cevada 135 218 NUE544 algodão|gbl64|BQ412384 TI algodão 136 268 NUE584 sorgo|gbl61,xeno|AW923465 TI sorgo 137 269 Tabela 20. São fornecidos polinucleotídeo (polyn.) e polipeptídeo (polyp.) que afetam a eficiência do uso de nitrogênio, eficiência no uso de fertilizantes, produtividade, taxa de crescimento, vigor, biomassa, teor do 5 óleo, tolerância ao estresse abiótico e/ou eficiência no uso da água de uma planta.

EXEMPLO 2 IDENTIFICAÇÃO DE HOMÓLOGOS QUE AFETAM NUE, FUE, PRODUTIVIDADE, TAXA DE CRESCIMENTO, VIGOR, BIOMASSA, TEOR DE ÓLEO, ABST E WUE.

Os conceitos de ortologia e paralogia foram aplicados a caracterizações e classificações funcionais na escala de comparações de todo o genoma.

Ortólogos e parálogos constituem dois tipos principais de homólogos: O primeiro evoluiu de um ancestral comum por meio de especialização, sendo o último está relacionado a eventos de duplicação. Supõe-se que parálogos decorrentes de antigos eventos de duplicação são susceptíveis de ter divergências 5 na função, enquanto ortólogos verdadeiros são mais propensos a reter a função idêntica ao longo do tempo evolutivo.

Para investigar profundamente o ortólogo purativo do gene e identifica-lo genes que afetam a eficiência do uso do nitrogênio, eficiência no uso de fertilizantes, produtividade (ex: produção de sementes, produção de óleo, quantidade e/ou qualidade de grãos), taxa de crescimento, vigor, biomassa, teor do óleo, tolerância ao estresse abiótico e/ou eficiência no uso da água (presentes acima, na Tabela 20) todas as sequencias foram alinhadas utilizando-se o the BLAST (/Basic Local Alignment Search Tool/). Sequências suficientemente semelhantes foram tentativamente agrupadas. Estes ortólogos putativos foram posteriormente organizados em um Filograma, um diagrama de ramificações (árvore) que representaria as relações evolutivas entre os táxons biológicos. Grupos de ortólogos putativos foram analisados de acordo com o filograma e em casos de desentendimentos, estes ortólogos foram adequadamente fracionados. Dados de expressão foram analisados e a literatura de EST foram classificadas usando um vocabulário fixo de termos personalizados, de acordo com seu estágio de desenvolvimento (ex: genes demostrando perfil de expressão similar através do desenvolvimento com aumento da regulação em fase específica, como na fase de enchimento de grãos) e/ou órgãos da planta (ex: genes demonstrando perfil de expressão similar através de seus órgãos com aumento da regulação em órgãos específicos com a raíz). As 5 anotações feitas de EST foram agrupadas a um gene o qual foi analisado estatisticamente, comparando sua frequência no conjunto versus sua abundância no banco de dados, possibilitando a construção de um perfil de expressão numérico e gráfico do gene, que é chamado de “expressão digital”. A razão de se utilizar estes dois tipos de métodos complementares, com métodos de estudos de associação fenotípica de QTLs, e correlação de expressão fenotípica está baseada na suposição de que ortólogos verdadeiros devem manter a função idêntica durante o tempo evolucionário.

Esses métodos fornecem diferentes conjuntos de indicações sobre as semelhanças de função entre dois genes homólogos, semelhanças no nível de sequência - aminoácidos idênticos nos domínios da proteína e similaridade nos perfis de expressão. A pesquisa e identificação de genes homólogos envolve a análise da sequencia de informações envolvidas, por exemplo, em banco de dados públicos que incluem, mas não são limitados ao Banco de Dados de DNA do Japão (DDBJ), Genbank, e o banco de dados sobre a sequência do ácido nucleico do Laboratório Europeu de Biologia Molecular (EMBL) ou versões do mesmo ou o banco de dados do MIPS. Um número de diferentes algoritmos de pesquisa está sendo desenvolvido, incluindo, mas não limitados ao suíte de programas relacionados aos programas BLAST.

Existem cinco implementações do BLAST, três desenvolvidas para questões de sequência de 5 nucleotídeos (BLASTN, BLASTX, e TBLASTX) e duas desenvolvidas para questões sobre a sequência de proteínas (BLASTP e TBLASTN) (Coulson, Trends in Biotechnology: 76-80, 1994; Birren et al., Genome Analysis, I: 543, 1997).Tais métodos envolvem o alinhamento e a comparação das sequências. O algoritmo BLAST calcula a porcentagem de identidade da sequência e realiza uma análise estatística de semelhança entre as duas sequências. O programa para realização da análise BLAST está disponível para o público através do Centro Nacional de Informação em Biotecnologia.

Outros programas ou algoritmos são GAP, BESTFIT, FASTA e TFASTA. GAP que utilizam os algoritmos de Needleman e Wunsch (J. Mol. Biol. 48: 443-453, 1970) para determiner o alinhamento de duas sequências completes que maximize o número de equivalentes e minimize o número de lacunas. Os genes homólogos podem pertencer à família de um mesmo gene.

A análise de uma família de genes pode ser realizada através de análise de similaridade de sequência. Para executar esta análise pode-se usar os programas padrão para alinhamentos múltiplos, por exemplo Clustal W. Uma árvore de junção de proteínas homólogas semelhantes aos genes de algumas modalidades da invenção pode ser usada para fornecer uma visão geral das relações estruturais e ancestrais. A sequência de identidade pode ser calculada utilizando um programa de alinhamento como descrito acima. Espera-se que outras plantas irão carregar um gene funcional semelhante (ortólogo) ou uma família de genes similares e os genes fornecerão o mesmo fenótipo preferencial como os genes aqui 5 apresentados.

Vantajosamente, estes membros da família podem ser úteis nos métodos de algumas modalidades da invenção. Exemplos de outras plantas incluem, mas não se limitam a, cevada (Hordeum vulgare), Arabidopsis (Arabidopsis thaliana), milho (Zea mays), algodão (Gossypium), óleo de colza (Brassica napus), arroz (Oryza sativa), cana-de-açúcar (Saccharum officinarum), sorgo (Sorgo bicolor), soja (Glycine max), girassol (Helianthus annuus), tomate (Lycopersicon esculentum) e trigo (Triticum aestivum).

As análises acima mencionadas para sequencia de homólogos é realizada preferencialmente em uma sequência inteira, mas também pode ser baseada em uma comparação de determinadas regiões, tais como domínios conservados. A identificação de tais domínios seria boa também dentro do domínio de pessoas hábeis neste tipo de área e que envolveria, por exemplo, um formato legível em computador dos ácidos nucléicos de algumas modalidades da invenção, o uso de programas de alinhamento e a utilização disponíveis a acesso público sobre os domínios da proteína, motivo conservado e caixas. Esta informação está disponível nos bancos de dados PRODOM (Protocolo de Transferência de Hipertexto:// World Wide Web (dot) biochem (dot) ucl (dot)

ac (dot) uk/bsm/dbbrowser/protocol/prodomqry (dot) html), PIR (Protocolo de Transferência de Hipertexto:// pir (dot) Georgetown (dot) edu/) ou Pfam (Protocolo de Transferência de Hipertexto://World Wide Web (dot) Sanger (dot) ac (dot) 5 uk/Software/Pfam/) database. Programas de análise de sequência projetados para pesquisar o motivo podem ser usados para identificação de fragmentos, regiões e domínios conservados como mencionado acima. Programas de computador apresentados incluem, mas não limitado a, MEME, SIGNALSCAN e GENESCAN.

Uma pessoa hábil na área pode utilizar as sequências de homólogos aqui fornecidas para encontrar sequências similares em outras espécies e outros organismos. Homólogos de uma proteína englobam peptídeos, oligopeptídeos, polipeptídeos, proteínas e enzimas com substituições de aminoácidos, exclusões e / ou inserções em relação à proteína inalterada em questão, possuindo atividade biológica e funcional semelhantes à proteína não modificada a partir das quais são derivadas. Para produzir tais homólogos, aminoácidos da proteína podem ser substituídos por outro aminoácido com propriedades semelhantes (mudanças moderadas, como a hidrofobicidade semelhante, hidrofilicidade, antigenicidade propensão para formar ou quebrar estruturas a-helicoidais ou estruturas de 3 sheets). Tabelas de substituição moderada são bem conhecidas na área [ver, por exemplo, Proteínas Creighton (1984). W.H. Freeman and Company], Homólogos de um ácido nucleico abrangem ácidos nucléicos com substituições de nucleotídeos, exclusões e/ou inserções em relação ao ácido nucleico não modificado em questão e com atividade biológicas e funcionais semelhantes, como o ácido nucléico não modificado a partir dos quais são derivados.

5 A Tabela 21, logo abaixo, lista um índice de sequências ortólogas e homólogas das sequências de polinucleotídeos (SEQ ID NOs: 1-137) e as sequências de polipeptídeos (SEQ ID NOs: 138-269) apresentados na Tabela 20, que foram identificados utilizando BLAST (programas TBLASTN e BlastP) obtendo pelo menos 80% de identidade aos polipeptídeos selecionados e que devem possuir o mesmo papel em NUE, ABST, FUE, QUE, incremento da biomassa, incremento na taxa de crescimento, produtividade, vigor e/ou teor de óleo de plantas Tabela 21 Homólogos dos polinucleotídeos e polipeptídeos identificados que afetam a eficiência de uso de nitrogênio, eficiência de uso de fertilizantes, produtividade, taxa de crescimento, vigor, biomassa, teor de óleo, tolerância a estresse abiótico e/ou eficiência do uso da água de uma planta.

Polyn, Polyp, Homologia Algor SEQID Nome do Grupo Organismo SEQ to SEQ ID Nome do Grupo Central % identidade global itmo NO: ID NO: cacau|gbl67|CU4848 270 cacau 1334 138 algodão|gbl64|AI7 25990 88,2 blastp 98 algodão|gbl64|AI7267 271 algodão 1335 138 algodão|gbl64|AI7 25990 86,9 blastp 05 amêndoa|gbl57,2|AY9 272 amêndoa 1336 139 algodão|gbl64|AI7 25968 85,7 blastp 47462 maçã|gbl57,3|C041 273 maçã 1337 139 algodão|gbl64|AI7 25968 83,5 blastp 5932 274 feijão|gbl67|CA9024 63 feijão 1338 139 algodão|gbl64|AI7 25968 87,9 blastp cacau|gbl67|CU5192 275 cacau 1339 139 algodão|gbl64|AI7 25968 95,5 blastp 00

Continuação da Tabela 21 citrico|gbl66|CK9360 276 citrico 1340 139 algodão|gbl64|AI7 25968 92,4 blastp 45 algodão|gbl64|AI7285 277 algodão 1341 139 algodão|gbl64|AI7 25968 90,7 blastp 19

278 uva|gbl60|AF3736 04 uva 1342 139 algodão|gbl64|AI7 25968 86,2 blastp lótus|gbl57,2|AY770 279 lótus 1343 139 algodão|gbl64|AI7 25968 85,7 blastp 405 medicago gbl 57,2 BI 280 medicago 1344 139 algodão|gbl64|AI7 25968 87,4 blastp 311053 mamão|gbl65|GFXE 281 mamão 1345 139 algodão|gbl64|AI7 25968 90,1 blastp U141966X1 álamo|gbl70|BU882 282 álamo 1346 139 algodão|gbl64|AI7 25968 87,6 blastp 889 álamo|gbl70|CV256 283 álamo 1347 139 algodão|gbl64|AI7 25968 83,9 blastp 507 prunus|gbl67|AJ825 284 prunus 1348 139 algodão|gbl64|AI7 25968 85,2 blastp 116

285 soja|gbl68|BE65 9913 soja 1349 139 algodão|gbl64|AI7 25968 87,4 blastp

286 soja|gbl68|BE65 9915 soja 1350 139 algodão|gbl64|AI7 25968 85,2 blastp Euphorbia|gbl61|DV14 287 3 Euphorbia 1351 139 algodão|gbl64|AI7 25968 84,75 tblast n 720 algodão|gbl64|AI7264 288 algodão 1352 140 algodão|gbl64|AI7 27334 98,1 blastp 82 cacau|gbl67|CU4732 289 cacau 1353 141 algodão|gbl64|AI7 26497 87,4 blastp 57 algodão|gbl64|BF2723 290 algodão 1354 141 algodão|gbl64|AI7 26497 83,3 blastp 26 algodão|gbl64|AI7296 291 algodão 1355 144 algodão|gbl64|AI7 25456 83,7 blastp 72 algodão|gbl64|CB350 292 algodão 1356 145 algodão|gbl64|BE 052317 87,8 blastp 460 algodão|gbl64|DV437 293 algodão 1357 145 algodão|gbl64|BE 052317 87,8 blastp 946 algodão|gbl64|AI7264 294 algodão 1358 146 algodão|gbl64|AI7 26479 95,1 blastp 35 cacau|gbl67|CF9728 295 cacau 1359 148 algodão|gbl64|AI7 25508 81,4 blastp 23 algodão|gbl64|AI7255 296 algodão 1360 148 algodão|gbl64|AI7 25508 81,8 blastp 20 algodão|gbl64|BE054 297 algodão 1361 148 algodão|gbl64|AI7 25508 85,4 blastp 381 algodão|gbl64|AI7266 298 algodão 1362 149 algodão|gbl64|AI7 25950 86,8 blastp 10 algodão|gbl64|AI7315 299 algodão 1363 149 algodão|gbl64|AI7 25950 96,4 blastp 67 algodão|gbl64|AI7266 300 algodão 1364 150 algodão|gbl64|AI7 26599 96,4 blastp 27 brachypodium gb 169 brachypodi cevada|gbl57,2|A 301 1365 154 84,7 blastp |BE425417 um L450627 leymus|gbl66|EG388 cevada|gbl57,2|A 302 leymus 1366 154 86,4 blastp 830 L450627

Continuação da Tabela 21 pseudoroegneria gb 1 pseudoroeg cevada|gbl57,2|A 303 1367 154 89,4 blastp 67|FF340314 neria L450627 cevada|gbl57,2|A 304 trigo|gbl64|BE4299 31 trigo 1368 154 89,4 blastp L450627 Panicum virgatum Panicum 305 |gbl67|D 1369 156 arroz|gbl57,2|BI8 05919 82,5 blastp virgatum N142225 brachypodium gb 169 brachypodi 306 1370 157 milho|gbl70|AI9 74922 85,2 blastp |BE425715 um brachypodium gb 169 brachypodi 306 1370 265 milho|gbl64|AI9 74922 81 blastp |BE425715 um

307 milho|gbl70|BG320 615 milho 1371 157 milho|gbl70|AI9 74922 92,1 blastp

307 milho|gbl70|BG320 615 milho 1371 265 milho|gbl64|AI9 74922 86 blastp

308 milho|gbl70|CF0237 21 milho 1372 157 milho|gbl70|AI9 74922 89,1 blastp

308 milho|gbl70|CF0237 21 milho 1372 265 milho|gbl64|AI9 74922 87,5 blastp

309 milho|gbl70|CF0593 93 milho 1373 157 milho|gbl70|AI9 74922 87,6 blastp

309 milho|gbl70|CF0593 93 milho 1373 265 milho|gbl64|AI9 74922 86 blastp milho|gbl70|SRR01 310 milho 1374 265 milho|gbl64|AI9 74922 88,1 blastp 4551S0286097 milho|gbl70|SRR01 310 milho 1374 157 milho|gbl70|AI9 74922 85,1 blastp 4551S0286097 arroz|gbl70|OSHG09 311 arroz 1375 265 milho|gbl64|AI9 74922 83,56 tblast n 020 arroz|gbl70|OSHG09 311 arroz 1375 157 milho|gbl70|AI9 74922 80,1 blastp 020 arroz|gbl70|OS12G08 312 arroz 1376 157 milho|gbl70|AI9 74922 86 blastp 090 arroz|gbl70|OS12G08 312 arroz 1376 265 milho|gbl64|AI9 74922 81,3 blastp 090 arroz|gbl70|OS12G08 313 arroz 1377 157 milho|gbl70|AI9 74922 86,2 blastp 130 arroz|gbl70|OS12G08 313 arroz 1377 265 milho|gbl64|AI9 74922 81,5 blastp 130 sorgo gb 161 ,crp B 314 sorgo 1378 157 milho|gbl70|AI9 74922 95,6 blastp E358811 sorgo gb 161 ,crp B 314 sorgo 1378 265 milho|gbl64|AI9 74922 89,8 blastp E358811 sorgo gb 161 ,crp B 315 sorgo 1379 157 milho|gbl70|AI9 74922 89,1 blastp G052599 sorgo gb 161 ,crp B 315 sorgo 1379 265 milho|gbl64|AI9 74922 87,5 blastp G052599 sorgo gb 161 ,crp B 316 sorgo 1380 157 milho|gbl70|AI9 74922 91 blastp G464355 sorgo gb 161 ,crp B 316 sorgo 1380 265 milho|gbl64|AI9 74922 85,6 blastp G464355 sorgo gb 161 ,crp B 317 sorgo 1381 157 milho|gbl70|AI9 74922 89,1 blastp G488442 sorgo gb 161 ,crp B 317 sorgo 1381 265 milho|gbl64|AI9 74922 87,7 blastp G488442

Continuação da Tabela 21 sorgo gb 161, crp S 318 sorgo 1382 157 milho|gbl70|AI9 74922 87,6 blastp BGWP027891 sorgo gb 161, crp S 318 sorgo 1382 265 milho|gbl64|AI9 74922 86 blastp BGWP027891

319 trigo|gbl64|BI4790 31 trigo 1383 265 milho|gbl64|AI9 74922 81,74 tblast n

319 trigo|gbl64|BI4790 31 trigo 1383 157 milho|gbl70|AI9 74922 80,33 tblast n b rapa|gbl62|BG544 arabidopsisgbló 320 b_rapa 1384 158 87,5 blastp 047 5|AT4G24960 b rapa|gbl62|EX087 arabidopsisgbló 321 b_rapa 1385 158 82,2 blastp 649 5|AT4G24960 canola|gbl61|DY020 arabidopsisgbló 322 cañóla 1386 158 86,8 blastp 042 5|AT4G24960 rabanete|gbl64|EV538 arabidopsisgbló 323 rabanete 1387 158 84,4 blastp 867 5|AT4G24960 rabanete|gbl64|EV544 arabidopsisgbló 324 rabanete 1388 158 85,1 blastp 902 5|AT4G24960 rabanete|gbl64|EX746 arabidopsisgbló 325 rabanete 1389 158 84,4 blastp 928 5|AT4G24960 rabanete|gbl64|EX748 arabidopsisgbló 326 rabanete 1390 158 83,9 blastp 244 5|AT4G24960 thellungiella|gbl67|B thellungiell arabidopsisgbló 327 1391 158 84,3 blastp Y812778 a 5|AT4G24960 maçã|gbl57,3|CN87 328 maçã 1392 159 tomate|gbl64|B G124666 81,7 blastp 6940 maçã|gbl57,3|CN94 329 maçã 1393 159 tomate|gbl64|B G124666 81,7 blastp 4710 apricot|gbl57,2|CB8 330 apricot 1394 159 tomate|gbl64|B G124666 82,3 blastp 19340 b oleracea|gbl61|A 331 b_oleracea 1395 159 tomate|gbl64|B G124666 80,6 blastp M057864 b rapa|gbl62|EE527 332 b_rapa 1396 159 tomate|gbl64|B G124666 80,6 blastp 690 cacau|gbl67|CU4938 333 cacau 1397 159 tomate|gbl64|B G124666 80,3 blastp 76 canola|gbl61|CD830 334 cañóla 1398 159 tomate|gbl64|B G124666 80 blastp 518 canola|gbl61|CX279 335 cañóla 1399 159 tomate|gbl64|B G124666 80,6 blastp 110 mandioca|gbl64|DV45 336 mandioca 1400 159 tomate|gbl64|B G124666 82,3 blastp 4217 catharanthus|gbl66|E catharanthu 337 1401 159 tomate|gbl64|B G124666 81,1 blastp G557732 s citrico|gbl66|CB2902 338 citrico 1402 159 tomate|gbl64|B G124666 83,4 blastp 40 coffea|gbl57,2|DV69 339 coffea 1403 159 tomate|gbl64|B G124666 83,4 blastp 4449 algodão|gbl64|AI7271 340 algodão 1404 159 tomate|gbl64|B G124666 83,7 blastp 00 cynara|gbl67|GE589 341 cynara 1405 159 tomate|gbl64|B G124666 80 blastp 728 ipomoea gbl57,2 EE 342 ipomoea 1406 159 tomate|gbl64|B G124666 81,7 blastp 875432

Continuação da Tabela 21

343 kiwi|gbl66|FG40590 6 kiwi 1407 159 tomate|gbl64|B G124666 81,6 blastp pêssego|gbl57,2|BU04 344 pêssego 1408 159 tomate|gbl64|B G124666 84 blastp 4342 pimenta|gbl57,2|CA5 345 pimenta 1409 159 tomate|gbl64|B G124666 93,1 blastp 14905 mirta|gbl64|EG 346 mirta 1410 159 tomate|gbl64|B G124666 81,1 blastp 557732 petunia|gbl66|CV29 347 petunia 1411 159 tomate|gbl64|B G124666 88,7 tblast n 4973 álamo|gbl70|BU867 348 álamo 1412 159 tomate|gbl64|B G124666 85,2 blastp 493 prunus|gbl67|BU044 349 prunus 1413 159 tomate|gbl64|B G124666 84 blastp 342 safflower|gb 1621EL3 350 safflower 1414 159 tomate|gbl64|B G124666 81,71 tblast n 99778

351 soja|gbl68|AL37 1264 soja 1415 159 tomate|gbl64|B G124666 81,1 blastp

352 soja|gbl68|BE66 1867 soja 1416 159 tomate|gbl64|B G124666 80,6 blastp

Euphorbia|gbl61|DV12 353 Euphorbia 1417 159 tomate|gbl64|B G124666 80,6 blastp 1 886 morango | gbl 64|DY 354 morango 1418 159 tomate|gbl64|B G124666 82,4 blastp 670203 girassol gb 162 EL4 355 girassol 1419 159 tomate|gbl64|B G124666 80 tblast n 60579 thellungiella|gbl67|D 356 thellungiell a 1420 159 tomate|gbl64|B G124666 80,6 blastp N773683 tabaco|gbl62|EB44 357 tobáceo 1421 159 tomate|gbl64|B G124666 90,9 blastp 5785 batata|gbl57,2|BG09 358 batata 1422 160 tomate|gbl64|B G134403 97,1 blastp 8579 batata|gbl57,2|CK24 359 batata 1423 160 tomate|gbl64|B G134403 96,7 blastp 6251 batata|gbl57,2|CK24 360 batata 1424 160 tomate|gbl64|B G134403 96 blastp 6610 brachypodium gb 169 brachypodi 361 1425 162 arroz|gbl57,2|AU 174544 88,6 tblast n |BF260689 um

362 milho|gbl70|AI6768 64 milho 1426 162 arroz|gbl57,2|AU 174544 86,9 blastp arroz|gbl70|OS02G44 363 arroz 1427 162 arroz|gbl57,2|AU 174544 80,6 blastp 980 sorgo gb 161 ,crp B 364 sorgo 1428 162 arroz|gbl57,2|AU 174544 89 blastp F704932 arroz|gbl70|OS12G38 365 arroz 1429 168 arroz|gbl57,2|BE0 39221 91,14 tblast n 010 arroz|gbl70|OS12G38 366 arroz 1430 168 arroz|gbl57,2|BE0 39221 81,2 blastp 270 arroz|gbl70|OS10G38 367 arroz 1431 169 arroz|gbl57,2|AU 056888 98,1 blastp 040

368 milho|gbl70|BQ528 487 milho 1432 170 arroz|gbl57,2|AA 753730 89,1 blastp sorgo gb 161 ,crp C 369 sorgo 1433 170 arroz|gbl57,2|AA 753730 87,1 blastp D221960

Continuação da Tabela 21

Panicum virgatum Panicum 370 1434 170 arroz|gbl57,2|AA 753730 86,7 blastp |gbl67|D N149767 virgatum sorgo gb 161, crp S 371 sorgo 1435 171 milho|gbl64|AW 455682 89,3 blastp BGWP095487 cana de açucar gbl57,3 cana de 372 1436 171 milho|gbl64|AW 455682 89 blastp C Al 72410 açucar Panicum virgatum Panicum 373 1437 171 milho|gbl64|AW 455682 85,2 blastp |gbl67|D N144560 virgatum brachypodium gb 169 brachypodi 374 1438 172 arroz|gbl57,2|AA 749861 88,7 blastp |BE404970 um cenchrus|gbl66|EB6 375 cenchrus 1439 172 arroz|gbl57,2|AA 749861 87 blastp 54111 leymus|gbl66|EG400 376 leymus 1440 172 arroz|gbl57,2|AA 749861 83,6 blastp 906 milho|gbl70|AW018 377 milho 1441 172 arroz|gbl57,2|AA 749861 90 blastp 173 milho|gbl70|LLAI63 378 milho 1442 172 arroz|gbl57,2|AA 749861 88,9 blastp 7139 sorgo gb 161 ,crp 379 sorgo 1443 172 arroz|gbl57,2|AA 749861 90,5 blastp AI783434 cana de açucar gbl57,3 cana de 380 1444 172 arroz|gbl57,2|AA 749861 91,2 blastp B U925706 açucar Panicum virgatum Panicum 381 1445 172 arroz|gbl57,2|AA 749861 91 blastp gbl67|D N142209 virgatum Panicum virgatum Panicum 382 1446 172 arroz|gbl57,2|AA 749861 90,7 blastp gbl67|D N142636 virgatum

383 trigo|gbl64|BE3988 63 trigo 1447 172 arroz|gbl57,2|AA 749861 80,9 blastp

384 trigo|gbl64|BE4049 70 trigo 1448 172 arroz|gbl57,2|AA 749861 81,7 blastp

385 trigo|gbl64|BE4182 90 trigo 1449 172 arroz|gbl57,2|AA 749861 82 blastp milho|gbl70|BM895 386 milho 1450 173 arroz|gbl57,2|AK 108994 84,5 blastp 695 arroz|gbl70|OS04G55 387 arroz 1451 173 arroz|gbl57,2|AK 108994 94,7 blastp 740 sorgo gb 161 ,crp B 388 sorgo 1452 173 arroz|gbl57,2|AK 108994 82,2 blastp M895695 brachypodium gb 169 brachypodi 389 1453 174 arroz|gbl57,2|CB 640732 87,2 blastp ICA684980 um milho|gbl70|AW562 390 milho 1454 174 arroz|gbl57,2|CB 640732 87,1 blastp 805 sorgo gb 161 ,crp C 391 sorgo 1455 174 arroz|gbl57,2|CB 640732 87,7 blastp D219694

392 soja gbl68AL36 6192 soja 1456 174 arroz|gbl57,2|CB 640732 80,38 tblast n

393 álamo|gbl70|AI1665 96 álamo 1457 175 álamo|gbl57,2|B U868634 88,2 blastp mamona|gbl60|AJ 394 mamona 1458 176 soja gb 162 C A852963 81 blastp 605572 castanha|gbl70|SRR0 395 castanha 1459 176 soja gb 162 C A852963 80,08 tblast n 06296S0014660 citrico|gbl66|CK7401 396 citrico 1460 176 soja gb 162 C A852963 80,08 tblast n 63

Continuação da Tabela 21 cowpea|gbl66|FF394 397 cowpea 1461 176 soja gb 162 C A852963 90,7 blastp 551 medicago gbl 57,2 A 398 medicago 1462 176 soja gb 162 C A852963 87,9 blastp A660751 amendoim|gbl67|EH04 399 amendoim 1463 176 soja gb 162 C A852963 88,66 tblast n 2 453

400 soja|gbl68|BU54 7671 soja 1464 176 soja gb 162 C A852963 97,2 blastp cevada|gbl57,3|BE19 401 cevada 1465 177 arroz|gbl57,2|BI8 11377 81,5 blastp 4421 brachypodium gb 169 brachypodi 402 1466 177 arroz|gbl57,2|BI8 11377 82,4 blastp |BE424330 um leymus gb 166 EG3 76 403 leymus 1467 177 arroz|gbl57,2|BI8 11377 81,8 blastp 396 pseudoroegneria gb 1 pseudoroeg 404 1468 177 arroz|gbl57,2|BI8 11377 82,1 blastp 67|FF349876 neria cana de açucar gbl57,3 cana de 405 1469 177 arroz|gbl57,2|BI8 11377 81 blastp C A099115 açucar

406 trigo|gbl64|BE4243 30 trigo 1470 177 arroz|gbl57,2|BI8 11377 81,82 tblast n trigo|gbl64|BE5167 407 trigo 1471 177 arroz|gbl57,2|BI8 11377 82,1 blastp 75 antirrhinum|gbl66|A 408 antirrhinum 1472 180 tomate|gbl64|B G129806 82,9 blastp J560033 antirrhinum|gbl66|A 409 antirrhinum 1473 180 tomate|gbl64|B G129806 83,3 blastp J801252 maçã|gbl57,3|AU30 410 maçã 1474 180 tomate|gbl64|B G129806 86,9 blastp 1287 maçã|gbl57,3|CN48 411 maçã 1475 180 tomate|gbl64|B G129806 84,7 blastp 8989 maçã|gbl57,3|CN86 412 maçã 1476 180 tomate|gbl64|B G129806 84,7 blastp 4173 maçã|gbl57,3|CN86 413 maçã 1477 180 tomate|gbl64|B G129806 87,4 blastp 9339 aquilegia gbl57,3 D 414 aquilegia 1478 180 tomate|gbl64|B G129806 81,5 blastp R939874 arabidopsis gbl65 A 415 arabidopsis 1479 180 tomate|gbl64|B G129806 81,5 blastp T1G04750 arabidopsis gbl65 A 416 arabidopsis 1480 180 tomate|gbl64|B G129806 82 blastp T2G33120 artemisia|gbl64|EY0 417 artemisia 1481 180 tomate|gbl64|B G129806 84,7 blastp 60063 artemisia|gbl64|EY0 418 artemisia 1482 180 tomate|gbl64|B G129806 84,7 blastp 73689 abacate|gbl64|CK76 419 abacate 1483 180 tomate|gbl64|B G129806 82,9 blastp 2777 abacate|gbl64|CV46 420 abacate 1484 180 tomate|gbl64|B G129806 80,6 blastp 1025 b oleracea|gbl61|A 421 b olerácea 1485 180 tomate|gbl64|B G129806 80,6 blastp M386735 b oleracea|gbl61|CB 422 b olerácea 1486 180 tomate|gbl64|B G129806 81,6 blastp 617574 b rapa|gbl62|CA992 423 b rapa 1487 180 tomate|gbl64|B G129806 80,2 blastp 099

Continuação da Tabela 21 b rapa|gbl62|CV544 424 b rapa 1488 180 tomate|gbl64|B G129806 82,4 blastp 695 b rapa|gbl62|DN961 425 b rapa 1489 180 tomate|gbl64|B G129806 82,1 blastp 220 b rapa|gbl62|DY008 426 b rapa 1490 180 tomate|gbl64|B G129806 82,4 blastp 890 b rapa|gbl62|EX034 427 b rapa 1491 180 tomate|gbl64|B G129806 80,6 blastp 829 banana|gbl67|FF558 428 banana 1492 180 tomate|gbl64|B G129806 80,4 blastp 354 banana|gbl67|FL658 429 banana 1493 180 tomate|gbl64|B G129806 82 blastp 702 cevada|gbl57,3|BE41 430 cevada 1494 180 tomate|gbl64|B G129806 80,8 blastp 3339 basilicumgbl57,3 D 431 basilicum 1495 180 tomate|gbl64|B G129806 84,1 blastp Y343103

432 feijão|gbl67|CA8985 78 feijão 1496 180 tomate|gbl64|B G129806 83,8 blastp

433 feijão|gbl67|CA8994 86 feijão 1497 180 tomate|gbl64|B G129806 87,2 blastp

434 feijão|gbl67|CA9078 67 feijão 1498 180 tomate|gbl64|B G129806 87,4 blastp brachypodium gb 169 brachypodi 435 1499 180 tomate|gbl64|B G129806 80,2 blastp |BE417694 um cacau|gbl67|CA7980 436 cacau 1500 180 tomate|gbl64|B G129806 83,3 blastp 42 cacau|gbl67|CU4743 437 cacau 1501 180 tomate|gbl64|B G129806 90,5 blastp 49 cacau|gbl67|CU4780 438 cacau 1502 180 tomate|gbl64|B G129806 85,1 blastp 46 canola|gbl61|CD816 439 cañóla 1503 180 tomate|gbl64|B G129806 82,4 blastp 574 canola|gbl61|CD818 440 cañóla 1504 180 tomate|gbl64|B G129806 80,2 blastp 619 canola|gbl61|CD826 441 cañóla 1505 180 tomate|gbl64|B G129806 82,9 blastp 636 canola|gbl61|CD841 442 cañóla 1506 180 tomate|gbl64|B G129806 82,4 blastp 484 canola|gbl61|CN734 443 cañóla 1507 180 tomate|gbl64|B G129806 81,5 blastp 885 canola|gbl61|DW99 444 cañóla 1508 180 tomate|gbl64|B G129806 82,1 blastp 8530 canola|gbl61|DY028 445 cañóla 1509 180 tomate|gbl64|B G129806 82,5 blastp 580 canola|gbl61|EE483 446 cañóla 1510 180 tomate|gbl64|B G129806 80,2 blastp 345 mandioca|gbl64|BM25 447 mandioca 1511 180 tomate|gbl64|B G129806 84,2 blastp 9789 mandioca|gbl64|CK64 448 mandioca 1512 180 tomate|gbl64|B G129806 84,7 blastp 5968 mandioca|gbl64|DV44 449 mandioca 1513 180 tomate|gbl64|B G129806 82,4 blastp 6794 mamona|gbl60|EE 450 mamona 1514 180 tomate|gbl64|B G129806 82,9 blastp 255473

Continuação da Tabela 21 mamona|gbl60|EE 451 mamona 1515 180 tomate|gbl64|B G129806 85,1 blastp 255572 mamona|gbl60|EE 452 mamona 1516 180 tomate|gbl64|B G129806 86 blastp 259993 centaurea|gbl66|EH7 453 centaurea 1517 180 tomate|gbl64|B G129806 84,3 blastp 28993 centaurea|gbl66|EH7 454 centaurea 1518 180 tomate|gbl64|B G129806 83,33 tblast n 37653 centaurea|gbl66|EH7 455 centaurea 1519 180 tomate|gbl64|B G129806 84,7 blastp 43515 centaurea|gbl66|EH7 456 centaurea 1520 180 tomate|gbl64|B G129806 82 blastp 47496 castanha|gbl70|SRR0 457 castanha 1521 180 tomate|gbl64|B G129806 84,7 blastp 06295S0000799 castanha|gbl70|SRR0 458 castanha 1522 180 tomate|gbl64|B G129806 85,7 blastp 06295S0000895 cichorium|gbl66|DT 459 cichorium 1523 180 tomate|gbl64|B G129806 83,33 tblast n 212405 cichorium|gbl66|DT 460 cichorium 1524 180 tomate|gbl64|B G129806 84,7 blastp 212482 cichorium|gbl66|EH 461 cichorium 1525 180 tomate|gbl64|B G129806 82,88 tblast n 686887 citrico|gbl66|BE2056 462 citrico 1526 180 tomate|gbl64|B G129806 88,3 blastp 77 citrico|gbl66|CB2907 463 citrico 1527 180 tomate|gbl64|B G129806 83,3 blastp 04 citrico|gbl66|CF8306 464 citrico 1528 180 tomate|gbl64|B G129806 83,8 blastp 98 coffea|gbl57,2|CF58 465 coffea 1529 180 tomate|gbl64|B G129806 82,9 blastp 8660 coffea|gbl57,2|DV66 466 coffea 1530 180 tomate|gbl64|B G129806 80,5 blastp 5256 algodão|gbl64|AI0551 467 algodão 1531 180 tomate|gbl64|B G129806 82,4 blastp 43 algodão|gbl64|AI7265 468 algodão 1532 180 tomate|gbl64|B G129806 82,43 tblast n 38 algodão|gbl64|BF2682 469 algodão 1533 180 tomate|gbl64|B G129806 88,3 blastp 81 algodão|gbl64|BF2708 470 algodão 1534 180 tomate|gbl64|B G129806 85,1 blastp 00 algodão|gbl64|BF2743 471 algodão 1535 180 tomate|gbl64|B G129806 88,8 blastp 09 cowpea gbl 66 FF3 82 472 cowpea 1536 180 tomate|gbl64|B G129806 84,2 blastp 703 cowpea gbl66 FF385 473 cowpea 1537 180 tomate|gbl64|B G129806 87,4 blastp 500 cowpea|gbl66|FF388 474 cowpea 1538 180 tomate|gbl64|B G129806 88 blastp 694 cycas|gbl66|CB0900 475 cycas 1539 180 tomate|gbl64|B G129806 80,6 blastp 84 cynara|gbl67|GE583 476 cynara 1540 180 tomate|gbl64|B G129806 81,98 tblast n 641 cynara|gbl67|GE586 477 cynara 1541 180 tomate|gbl64|B G129806 80,18 tblast n 008

Continuação da Tabela 21 dente de leão|gbl61|DY dente de 478 1542 180 tomate|gbl64|B G129806 84,23 tblast n 820375 leão dente de leão|gbl61|DY dente de 479 1543 180 tomate|gbl64|B G129806 85,1 blastp 822153 leão

480 galho|gbl61|DT686 644 galho 1544 180 tomate|gbl64|B G129806 82,9 blastp gengibre|gbl64|DY354 481 gengibre 1545 180 tomate|gbl64|B G129806 82,9 blastp 490 gengibre|gbl64|DY357 482 gengibre 1546 180 tomate|gbl64|B G129806 81,53 tblast n 009

483 uva|gbl60|BQ7972 49 uva 1547 180 tomate|gbl64|B G129806 84,2 blastp

484 uva|gbl60|CA8148 78 uva 1548 180 tomate|gbl64|B G129806 83,4 blastp

485 uva|gbl60|CB0093 59 uva 1549 180 tomate|gbl64|B G129806 83,8 blastp ipomoea gbl 57,2 BJ 486 ipomoea 1550 180 tomate|gbl64|B G129806 90,1 blastp 554498 ipomoea gbl 57,2 BJ 487 ipomoea 1551 180 tomate|gbl64|B G129806 89,6 blastp 555833 ipomoea gbl 57,2 BJ 488 ipomoea 1552 180 tomate|gbl64|B G129806 89,6 blastp 565525 ipomoea gbl 57,2 DQ 489 ipomoea 1553 180 tomate|gbl64|B G129806 82 blastp 016990

490 kiwi|gbl66|FG42882 4 kiwi 1554 180 tomate|gbl64|B G129806 81,5 blastp alface|gbl57,2|DW0 491 alface 1555 180 tomate|gbl64|B G129806 85,1 blastp 46480 alface|gbl57,2|DW0 492 alface 1556 180 tomate|gbl64|B G129806 80,6 blastp 51770 alface|gbl57,2|DW0 493 alface 1557 180 tomate|gbl64|B G129806 84,7 blastp 54433 alface|gbl57,2|DWl 494 alface 1558 180 tomate|gbl64|B G129806 83,8 blastp 04005 alface|gbl57,2|DWl 495 alface 1559 180 tomate|gbl64|B G129806 84,7 blastp 48893 liriodendron gb 166 C 496 liriodendron 1560 180 tomate|gbl64|B G129806 81,1 blastp K761427 lovegrass gb 167 EH1 497 lovegrass 1561 180 tomate|gbl64|B G129806 81,5 blastp 89433

498 milho|gbl70|AI6214 44 milho 1562 180 tomate|gbl64|B G129806 83 blastp milho|gbl70|AI9016 499 milho 1563 180 tomate|gbl64|B G129806 81,5 blastp 72 medicago gbl 57,2 A 500 medicago 1564 180 tomate|gbl64|B G129806 81,3 blastp L371369 medicago gbl57,2 A 501 medicago 1565 180 tomate|gbl64|B G129806 85,3 blastp W127543 medicago gbl57,2 A 502 medicago 1566 180 tomate|gbl64|B G129806 81,5 blastp W329342 melão|gbl65|AM743 503 melón 1567 180 tomate|gbl64|B G129806 82,9 blastp 036 melão|gbl65|DV633 504 melón 1568 180 tomate|gbl64|B G129806 80,6 blastp 620

Continuação da Tabela 21 nuphar|gbl66|ES730 505 nuphar 1569 180 tomate|gbl64|B G129806 81,2 blastp 054 carvalho|gbl70|CU6395 506 carvalho 1570 180 tomate|gbl64|B G129806 85,7 blastp 08 carvalho|gbl70|SRR00 507 carvalho 1571 180 tomate|gbl64|B G129806 84,7 blastp 63 07S0008904 carvalho|gbl66|CN5 508 carvalho 1572 180 tomate|gbl64|B G129806 82 blastp 99846 cebola|gbl62|CF4400 509 cebola 1573 180 tomate|gbl64|B G129806 82,43 tblast n 03 mamão|gbl65|AM90 510 mamão 1574 180 tomate|gbl64|B G129806 84,2 blastp 4122 mamão|gbl65|EX245 511 mamão 1575 180 tomate|gbl64|B G129806 83,8 blastp 134 pêssego|gbl57,2|BU04 512 pêssego 1576 180 tomate|gbl64|B G129806 88,7 blastp 0787 pêssego|gbl57,2|BU04 513 pêssego 1577 180 tomate|gbl64|B G129806 81,53 tblast n 8627 amendoim|gbl67|EH04 514 amendoim 1578 180 tomate|gbl64|B G129806 88,4 blastp 2 957 amendoim|gbl67|EH04 515 amendoim 1579 180 tomate|gbl64|B G129806 83 blastp 4 861 pimenta|gbl57,2|CA5 516 pimenta 1580 180 tomate|gbl64|B G129806 82,4 blastp 20584 petunia|gbl66|CV29 517 petunia 1581 180 tomate|gbl64|B G129806 82,9 blastp 6853 abacaxí gb 157,2 D pinheiromaç 518 1582 180 tomate|gbl64|B G129806 83,3 blastp T337519 ã

519 álamo|gbl70|AI1660 18 álamo 1583 180 tomate|gbl64|B G129806 86,9 blastp álamo|gbl70|BI1203 520 álamo 1584 180 tomate|gbl64|B G129806 82,9 blastp 22

521 álamo|gbl70|BI1281 84 álamo 1585 180 tomate|gbl64|B G129806 81,1 blastp álamo|gbl70|BU818 522 álamo 1586 180 tomate|gbl64|B G129806 87,8 blastp 354 álamo|gbl70|CB240 523 álamo 1587 180 tomate|gbl64|B G129806 81,1 blastp 411 batata|gbl57,2|BG59 524 batata 1588 180 tomate|gbl64|B G129806 80,3 blastp 0329 batata|gbl57,2|BG88 525 batata 1589 180 tomate|gbl64|B G129806 82,9 blastp 6984 batata|gbl57,2|BI40 526 batata 1590 180 tomate|gbl64|B G129806 100 blastp 6651 prunus|gbl67|BU040 527 prunus 1591 180 tomate|gbl64|B G129806 88,7 blastp 787 prunus|gbl67|BU048 528 prunus 1592 180 tomate|gbl64|B G129806 85,6 blastp 627 pseudoroegneria gb 1 pseudoroeg 529 1593 180 tomate|gbl64|B G129806 81,2 blastp 67|FF341379 neria rabanete|gbl64|EV527 530 rabanete 1594 180 tomate|gbl64|B G129806 82,5 blastp 352 rabanete|gbl64|EV528 531 rabanete 1595 180 tomate|gbl64|B G129806 82 blastp 724

Continuação da Tabela 21 rabanete|gbl64|EV532 532 rabanete 1596 180 tomate|gbl64|B G129806 82 blastp 638 rabanete|gbl64|EV535 533 rabanete 1597 180 tomate|gbl64|B G129806 82,5 blastp 212 rabanete|gbl64|EV544 534 rabanete 1598 180 tomate|gbl64|B G129806 82 blastp 241 rabanete|gbl64|EV549 535 rabanete 1599 180 tomate|gbl64|B G129806 81,98 tblast n 527 rabanete|gbl64|EV567 536 rabanete 1600 180 tomate|gbl64|B G129806 82 blastp 707 rabanete|gbl64|EW724 537 rabanete 1601 180 tomate|gbl64|B G129806 82 blastp 564 rabanete|gbl64|EX755 538 rabanete 1602 180 tomate|gbl64|B G129806 80,7 blastp 021 arroz|gbl70|OS03G58 539 arroz 1603 180 tomate|gbl64|B G129806 82,9 blastp 840 arroz|gbl70|OS07G09 540 arroz 1604 180 tomate|gbl64|B G129806 82,9 blastp 600 safflower|gb 1621EL3 541 safflower 1605 180 tomate|gbl64|B G129806 84,7 blastp 73980 safflower|gbl62|EL3 542 safflower 1606 180 tomate|gbl64|B G129806 83,8 blastp 81462 safflower|gb 1621EL3 543 safflower 1607 180 tomate|gbl64|B G129806 81,5 blastp 89501 safflower|gbl62|EL4 544 safflower 1608 180 tomate|gbl64|B G129806 84,7 blastp 04279 senecio|gbl70|DY66 545 senecio 1609 180 tomate|gbl64|B G129806 81,08 tblast n 3178 sorgo gb 161 ,crp 546 sorgo 1610 180 tomate|gbl64|B G129806 81,5 blastp AW282206 sorgo gb 161 ,crp 547 sorgo 1611 180 tomate|gbl64|B G129806 83 blastp AW565015

548 soja|gbl68|AL37 1369 soja 1612 180 tomate|gbl64|B G129806 87,8 blastp

549 soja|gbl68|AL37 1370 soja 1613 180 tomate|gbl64|B G129806 87,6 blastp

550 soja|gbl68|AL37 4552 soja 1614 180 tomate|gbl64|B G129806 87,4 blastp

551 soja|gbl68|AL38 4290 soja 1615 180 tomate|gbl64|B G129806 86,7 blastp

552 soja|gbl68|BE65 8783 soja 1616 180 tomate|gbl64|B G129806 84,7 blastp

553 soja|gbl68|BE66 0085 soja 1617 180 tomate|gbl64|B G129806 85,1 blastp

Euphorbia|gbl61|DV11 554 Euphorbia 1618 180 tomate|gbl64|B G129806 83,8 blastp 3 185 Euphorbia|gbl61|DV11 555 Euphorbia 1619 180 tomate|gbl64|B G129806 86,5 blastp 5 533 Euphorbia|gbl61|DV12 556 Euphorbia 1620 180 tomate|gbl64|B G129806 82,4 blastp 9 528 morango gb 164 CO 557 morango 1621 180 tomate|gbl64|B G129806 87,4 blastp 380944 morango | gbl 64|DY 558 morango 1622 180 tomate|gbl64|B G129806 83,8 blastp 667942

Continuação da Tabela 21 cana de açucar gbl57,3 cana de 559 1623 180 tomate|gbl64|B G129806 81,53 tblast n C A066679 açucar cana de açucar gbl57,3 cana de 560 1624 180 tomate|gbl64|B G129806 83 blastp C A070863 açucar cana de açucar gbl57,3 cana de 561 1625 180 tomate|gbl64|B G129806 82,5 blastp C A073069 açucar cana de açucar gbl57,3 cana de 562 1626 180 tomate|gbl64|B G129806 81,1 blastp C A098212 açucar cana de açucar gbl57,3 cana de 563 1627 180 tomate|gbl64|B G129806 83 blastp C A105955 açucar cana de açucar gbl57,3 cana de 564 1628 180 tomate|gbl64|B G129806 83 blastp C A125341 açucar girassol gb 162 CD 565 girassol 1629 180 tomate|gbl64|B G129806 83,8 blastp 848438 girassol gb 162 CD 566 girassol 1630 180 tomate|gbl64|B G129806 84,7 blastp 855829 girassol gb 162 DY 567 girassol 1631 180 tomate|gbl64|B G129806 84,7 blastp 909391 girassol gb 162 EL4 568 girassol 1632 180 tomate|gbl64|B G129806 83,3 blastp 23569 girassol gb 162 EL4 569 girassol 1633 180 tomate|gbl64|B G129806 85,1 blastp 29220 Panicum virgatum Panicum 570 1634 180 tomate|gbl64|B G129806 82,4 blastp gbl67D N143573 virgatum Panicum virgatum gbl Panicum 571 1635 180 tomate|gbl64|B G129806 82,9 blastp 67D N151435 virgatum Panicum virgatum gb Panicum 572 1636 180 tomate|gbl64|B G129806 83 blastp 167 F E607763 virgatum Panicum virgatum Panicum 573 1637 180 tomate|gbl64|B G129806 84,2 blastp gbl67 F E624609 virgatum thellungiella|gbl67|B 574 thellungiell a 1638 180 tomate|gbl64|B G129806 81,5 blastp Y802757 tabaco|gbl62|DV15 575 tobáceo 1639 180 tomate|gbl64|B G129806 82,4 blastp 7924 tabaco|gbl62|EB42 576 tobáceo 1640 180 tomate|gbl64|B G129806 96,4 tblast n 6444 tabaco|gbl62|EB42 577 tobáceo 1641 180 tomate|gbl64|B G129806 84,7 blastp 6574 tabaco|gbl62|EB67 578 tobáceo 1642 180 tomate|gbl64|B G129806 94,1 blastp 7916 tomate|gbl64|BG135 579 tomate 1643 180 tomate|gbl64|B G129806 84,2 blastp 003 tomate|gbl64|BG629 580 tomate 1644 180 tomate|gbl64|B G129806 82,9 blastp 456 triphysaria|gbl 64|DR 581 triphysaria 1645 180 tomate|gbl64|B G129806 82,3 blastp 172719 triphysaria|gb 164|EY 582 triphysaria 1646 180 tomate|gbl64|B G129806 83,8 blastp 126667 triphysaria|gb 164|EY 583 triphysaria 1647 180 tomate|gbl64|B G129806 83,8 blastp 128979 nozes|gbl66|CV19 584 nozes 1648 180 tomate|gbl64|B G129806 85,7 blastp 8306

585 trigo|gbl64|BE4004 99 trigo 1649 180 tomate|gbl64|B G129806 80,8 blastp

Continuação da Tabela 21

586 trigo|gbl64|BE4176 94 trigo 1650 180 tomate|gbl64|B G129806 81,2 blastp trigo|gbl64|CA595 587 trigo 1651 180 tomate|gbl64|B G129806 81,2 blastp 472 zamia|gbl66|FD7684 588 zamia 1652 180 tomate|gbl64|B G129806 80,2 blastp 87 cevada|gbl57,3|AL45 589 cevada 1653 183 arroz|gbl57,2|AT 003383 85,7 blastp 0674 brachypodium gb 169 brachypodi 590 1654 183 arroz|gbl57,2|AT 003383 83,4 blastp |BE424284 um

591 galho|gbl61|DT675 288 galho 1655 183 arroz|gbl57,2|AT 003383 85,4 blastp leymus|gbl66|CN46 592 leymus 1656 183 arroz|gbl57,2|AT 003383 84,6 blastp 6264

593 milho|gbl70|AI4388 09 milho 1657 183 arroz|gbl57,2|AT 003383 84,4 blastp

594 milho|gbl70|AI9778 70 milho 1658 183 arroz|gbl57,2|AT 003383 82,8 blastp milho|gbl70|LLDQ2 595 milho 1659 183 arroz|gbl57,2|AT 003383 85,7 blastp 45361 pseudoroegneria gb 1 pseudoroeg 596 1660 183 arroz|gbl57,2|AT 003383 85,7 blastp 67|FF341007 neria centeio|gbl64|BE58672 597 centeio 1661 183 arroz|gbl57,2|AT 003383 85,7 blastp 5 sorgo gb 161 ,crp 598 sorgo 1662 183 arroz|gbl57,2|AT 003383 82,9 blastp AW565030 cana de açucar gbl57,3 cana de 599 1663 183 arroz|gbl57,2|AT 003383 83,1 blastp C A084082 açucar Panicum virgatum Panicum 600 1664 183 arroz|gbl57,2|AT 003383 86,4 blastp |gbl67|D N142592 virgatum Panicum virgatum Panicum 601 1665 183 arroz|gbl57,2|AT 003383 85 blastp gbl67|D N145453 virgatum

602 trigo|gbl64|BE4242 84 trigo 1666 183 arroz|gbl57,2|AT 003383 85,7 blastp

603 trigo|gbl64|BE4981 39 trigo 1667 183 arroz|gbl57,2|AT 003383 85,3 blastp

604 trigo|gbl64|BF2008 80 trigo 1668 183 arroz|gbl57,2|AT 003383 85,1 blastp trigo|gbl64|CA620 605 trigo 1669 183 arroz|gbl57,2|AT 003383 81,67 tblast n 728 brachypodium gb 169 brachypodi 606 1670 185 milho|gbl57|BG 354535 91 blastp |AJ476542 um leymus|gbl66|EG388 607 leymus 1671 185 milho|gbl57|BG 354535 88,3 blastp 555 pseudoroegneria gb 1 pseudoroeg 608 1672 185 milho|gbl57|BG 354535 88,9 blastp 67|FF346414 neria arroz|gbl70|OS01G51 609 arroz 1673 185 milho|gbl57|BG 354535 91,57 tblast n 190 sorgo gb 161 ,crp 610 sorgo 1674 185 milho|gbl57|BG 354535 98,8 blastp AW283867

611 trigo|gbl64|AL8209 71 trigo 1675 185 milho|gbl57|BG 354535 88,3 blastp

612 milho|gbl70|BI3888 11 milho 1676 186 arroz|gbl57,2|AU 029933 82,8 blastp

Continuação da Tabela 21 sorgo gb 161 ,crp 613 sorgo 1677 186 arroz|gbl57,2|AU 029933 82 blastp DR807282 arroz|gbl70|OS01G65 614 arroz 1678 187 arroz|gbl57,2|AK 102239 82,5 blastp 169 brachypodium gb 169 brachypodi sorgo gb 161,x 615 1679 188 81,97 tblast n |BE421953 um eno|AI947781 sorgo gb 161,x 616 milho|gbl70|AI9477 81 milho 1680 188 95,8 blastp eno|AI947781 arroz|gbl70|OS01G65 sorgo gb 161,x 617 arroz 1681 188 87 blastp 100 eno|AI947781 Panicum virgatum Panicum sorgo gb 161,x 618 1682 188 90,2 tblast n |gbl67|D N144961 virgatum eno|AI947781 canola|gbl61|EE417 arabidopsisgbló 619 cañóla 1683 189 89 blastp 585 5|AT1G58030 rabanete|gbl64|EV566 arabidopsisgbló 620 rabanete 1684 189 89,47 tblast n 943 5|AT1G58030 cevada|gbl57,3|BE41 621 cevada 1685 191 milho gbl 64 AI6 00563 84,2 blastp 2663 brachypodium gb 169 brachypodi 622 1686 191 milho gbl64 AI6 00563 88,6 blastp |BE407009 um arroz|gbl70|OS04G56 623 arroz 1687 191 milho gbl64 AI6 00563 88,1 blastp 290 sorgo gb 161 ,crp 624 sorgo 1688 191 milho gbl64 AI6 00563 95,3 blastp AI622153 cana de açucar gbl57,3 cana de 625 1689 191 milho gbl64 AI6 00563 95 blastp C A067412 açucar Panicum virgatum Panicum 626 1690 191 milho gbl64 AI6 00563 93,5 blastp |gbl67|D N150103 virgatum

627 trigo|gbl64|BE4070 09 trigo 1691 191 milho gbl64 AI6 00563 87,5 blastp arroz|gbl70|OS01G03 628 arroz 1692 192 arroz|gbl57,2|CB 000630 99,8 blastp 530 cevada|gbl57,3|BF06 629 cevada 1693 193 trigo|gbl54|TG BE216912 88,03 tblast n 6082 cevada|gbl57,3|HVU 630 cevada 1694 193 trigo|gbl54|TG BE216912 81,7 blastp 08135 brachypodium gb 169 brachypodi 631 1695 193 trigo|gbl54|TG BE216912 91,1 blastp |HVU08135 um

632 galho|gbl61|DT682 842 galho 1696 193 trigo|gbl54|TG BE216912 86,5 blastp leymus|gbl66|CD80 633 leymus 1697 193 trigo|gbl54|TG BE216912 97,4 blastp 8858

634 milho|gbl70|AI4914 63 milho 1698 193 trigo|gbl54|TG BE216912 84,3 blastp

635 milho|gbl70|AI6010 31 milho 1699 193 trigo|gbl54|TG BE216912 84,9 blastp pseudoroegneria gb 1 pseudoroeg 636 1700 193 trigo|gbl54|TG BE216912 98,3 blastp 67|FF347239 neria arroz|gbl70|OS03G56 637 arroz 1701 193 trigo|gbl54|TG BE216912 85 blastp 670 centeio|gbl64|BE63680 638 centeio 1702 193 trigo|gbl54|TG BE216912 84 blastp 6 sorgo gb 161 ,crp 639 sorgo 1703 193 trigo|gbl54|TG BE216912 85,4 blastp AI861201

Continuação da Tabela 21

Panicum virgatum Panicum 640 1704 193 trigo|gbl54|TG BE216912 84,4 blastp |gbl67|D N144671 virgatum

641 trigo|gbl64|BE2135 64 trigo 1705 193 trigo|gbl54|TG BE216912 91,5 blastp

642 trigo|gbl64|BE2169 12 trigo 1706 193 trigo|gbl54|TG BE216912 89,8 blastp trigo|gbl64|BE4158 643 trigo 1707 193 trigo|gbl54|TG BE216912 93,5 blastp 75

644 trigo|gbl64|CK217 408 trigo 1708 193 trigo|gbl54|TG BE216912 83,12 tblast n

645 trigo|gbl64|DR737 269 trigo 1709 193 trigo|gbl54|TG BE216912 82,25 tblast n leymus|gbl66|EG400 646 leymus 1710 194 arroz|gbl57,2|BE0 39218 81,9 blastp 892 b oleracea|gbl61|A arabidopsisgbló 647 b_oleracea 1711 195 80,6 blastp M059989 5|AT5G60680 canola|gbl61|DW99 arabidopsisgbló 648 cañóla 1712 195 81,2 blastp 7913 5|AT5G60680

649 feijão|gbl67|CA8984 06 feijão 1713 196 arroz|gbl57,2|AA 750934 80,5 blastp cacau|gbl67|CU4695 650 cacau 1714 196 arroz|gbl57,2|AA 750934 80,6 blastp 91 mandioca|gbl64|CK64 651 mandioca 1715 196 arroz|gbl57,2|AA 750934 80,9 blastp 1441

652 mamona|gbl60|Tl 5009 mamona 1716 196 arroz|gbl57,2|AA 750934 80,2 blastp cowpea gbl 66 FC45 653 cowpea 1717 196 arroz|gbl57,2|AA 750934 80,2 blastp 7559 cowpea gbl 66 FC46 654 cowpea 1718 196 arroz|gbl57,2|AA 750934 80,3 blastp 1906

655 milho|gbl70|W2162 0 milho 1719 196 arroz|gbl57,2|AA 750934 87,6 blastp carvalho|gbl66|CN6 656 carvalho 1720 196 arroz|gbl57,2|AA 750934 81,1 blastp 01354 mamão|gbl65|EX264 657 mamão 1721 196 arroz|gbl57,2|AA 750934 80 blastp 224 pinheiroapplegb 157,2 C pinheiroappl 658 1722 196 arroz|gbl57,2|AA 750934 81,6 blastp 0730751 e sorgo gb 161 ,crp 659 sorgo 1723 196 arroz|gbl57,2|AA 750934 87,4 blastp W21620

660 soja|gbl68|AL37 3484 soja 1724 196 arroz|gbl57,2|AA 750934 80,9 blastp

661 soja|gbl68|AW3 48141 soja 1725 196 arroz|gbl57,2|AA 750934 80,4 blastp

662 soja|gbl68|AW5 87090 soja 1726 196 arroz|gbl57,2|AA 750934 80,4 blastp cana de açucar gbl57,3 cana de 663 1727 196 arroz|gbl57,2|AA 750934 86,8 blastp B Q535675 açucar Panicum virgatum Panicum 664 1728 196 arroz|gbl57,2|AA 750934 86,1 blastp gbl67D N140694 virgatum Panicum virgatum gbl Panicum 665 1729 196 arroz|gbl57,2|AA 750934 85,8 blastp 67D N141888 virgatum Panicum virgatum gb Panicum 666 1730 196 arroz|gbl57,2|AA 750934 85,3 blastp 167 F E603746 virgatum

Continuação da Tabela 21

667 milho|gbl70|BE1295 70 milho 1731 198 milho|gbl54|AW 037179 96,1 blastp

668 milho|gbl70|BI4788 34 milho 1732 198 milho|gbl54|AW 037179 92,9 blastp arroz|gbl70|OS02G54 669 arroz 1733 198 milho|gbl54|AW 037179 81,4 blastp 730 sorgo gb 161 ,crp B 670 sorgo 1734 198 milho|gbl54|AW 037179 91,8 blastp E129570 sorgo gb 161 ,crp C 671 sorgo 1735 199 milho|gbl64|AW 287760 81,98 tblast n D231473 cana de açucar gbl57,3 cana de 672 1736 199 milho|gbl64|AW 287760 88,56 tblast n C A089926 açucar Panicum virgatum Panicum 673 1737 199 milho|gbl64|AW 287760 85,3 blastp gbl67 F L699406 virgatum Panicum virgatum Panicum 674 gbl67 F 1738 199 milho|gbl64|AW 287760 81,9 blastp virgatum L727557 sorgo gb 161 ,crp B 675 sorgo 1739 200 milho|gbl57|AW 360667 96,1 blastp F480947 cana de açucar gbl57,3 cana de 676 1740 200 milho|gbl57|AW 360667 97,2 blastp C A069365 açucar maçã|gbl57,3|CN87 arabidopsisgbl5 677 maçã 1741 202 80,26 tblast n 3722 7,2|AT3G26100 castanha|gbl70|SRR0 arabidopsisgbl5 678 castanha 1742 202 82,2 blastp 06295S0001486 7,2|AT3G26100 algodão|gbl64|AI7289 arabidopsisgbl5 679 algodão 1743 202 80,3 blastp 64 7,2|AT3G26100 arabidopsisgbl5 680 uva|gbl60|CB0045 07 uva 1744 202 80,3 blastp 7,2|AT3G26100 mamão|gbl65|EX243 arabidopsisgbl5 681 mamão 1745 202 82,8 blastp 430 7,2|AT3G26100 arabidopsisgbl5 682 álamo|gbl70|AI1657 88 álamo 1746 202 80,26 tblast n 7,2|AT3G26100 arabidopsisgbl5 683 álamo|gbl70|BI0718 04 álamo 1747 202 80,75 tblast n 7,2|AT3G26100

684 feijão|gbl67|CV5383 36 feijão 1748 203 soja gb 162 S OYHPR 80,83 tblast n feijão|gbl67|PVU727 685 feijão 1749 203 soja gb 162 S OYHPR 85,8 blastp 68

686 trevo|gbl62|BB932 705 trevo 1750 203 soja gb 162 S OYHPR 83,3 blastp cowpea gbl 66 FC45 687 cowpea 1751 203 soja gb 162 S OYHPR 87,92 tblast n 7443 medicago gbl57,2 A 688 medicago 1752 203 soja gb 162 S OYHPR 84,7 blastp L366760 medicago gbl57,2 A 689 medicago 1753 203 soja gb 162 S OYHPR 80,52 tblast n W328889 medicago gbl57,2 A 690 medicago 1754 203 soja gb 162 S OYHPR 83,67 tblast n W329415 medicago gbl57,2 A 691 medicago 1755 203 soja gb 162 S OYHPR 85,11 tblast n W329734

692 soja|gbl68|S442 02 soja 1756 203 soja gb 162 S OYHPR 95,7 blastp b rapa|gbl62|CV544 arabidopsis gbl5 693 b rapa 1757 266 80,38 tblast n 929 7,2|AT1G44920

Continuação da Tabela 21 b rapa|gbl62|CV544 arabidopsis gbl6 693 b rapa 1757 204 80,15 tblast n 929 5|AT1G44920 rabanete|gbl64|EV525 arabidopsis gbl5 694 rabanete 1758 266 81,3 blastp 414 7,2|AT1G44920 rabanete|gbl64|EV525 arabidopsis gbl6 694 rabanete 1758 204 80,7 blastp 414 5|AT1G44920 thellungiella|gbl67|D arabidopsis gbl5 695 thellungiell a 1759 266 81,7 blastp N777579 7,2|AT1G44920 thellungiella|gbl67|D arabidopsis gbl6 695 thellungiell a 1759 204 81,1 blastp N777579 5|AT1G44920 arabidopsis gbl65 A arabidopsis gbl5 696 arabidopsis 1760 205 87,1 blastp T3G17410 7,2|AT1G48210 b oleracea|gbl61|A arabidopsis gbl5 697 b olerácea 1761 205 87,4 blastp M385784 7,2|AT1G48210 b rapa|gbl62|DN962 arabidopsis gbl5 698 b rapa 1762 205 83,52 tblast n 030 7,2|AT1G48210 b rapa|gbl62|EX020 arabidopsis gbl5 699 b rapa 1763 205 85,4 blastp 680 7,2|AT1G48210 b rapa|gbl62|EX025 arabidopsis gbl5 700 b rapa 1764 205 85,99 tblast n 892 7,2|AT1G48210 canola|gbl61|CX278 arabidopsis gbl5 701 cañóla 1765 205 86,3 blastp 279 7,2|AT1G48210 canola|gbl61|EG021 arabidopsis gbl5 702 cañóla 1766 205 83,79 tblast n 170 7,2|AT1G48210 rabanete|gbl64|EV525 arabidopsis gbl5 703 rabanete 1767 205 87,6 blastp 080 7,2|AT1G48210 rabanete|gbl64|EV543 arabidopsis gbl5 704 rabanete 1768 205 85,4 blastp 636 7,2|AT1G48210 rabanete|gbl64|EY895 arabidopsis gbl5 705 rabanete 1769 205 84,7 blastp 533 7,2|AT1G48210 thellungiella|gbl67|D arabidopsis gbl5 706 thellungiell a 1770 205 87,4 blastp N774052 7,2|AT1G48210

707 trigo|gbl64|AL8226 88 trigo 1771 206 trigo|gbl64|BE 445396 92,9 blastp

708 trigo|gbl64|CD869 154 trigo 1772 206 trigo|gbl64|BE 445396 92,9 blastp banana|gbl67|ES432 709 banana 1773 208 arroz|gbl57,2|AU 077950 85,3 blastp 415 cevada|gbl57,3|BI94 710 cevada 1774 208 arroz|gbl57,2|AU 077950 81,5 blastp 8762 cevada|gbl57,3|BJ45 711 cevada 1775 208 arroz|gbl57,2|AU 077950 94,2 blastp 3298 citrico|gbl66|CF4197 712 citrico 1776 208 arroz|gbl57,2|AU 077950 80,8 blastp 25 algodão|gbl64|BF2776 713 algodão 1777 208 arroz|gbl57,2|AU 077950 81,5 blastp 09

714 galho|gbl61|CK801 460 galho 1778 208 arroz|gbl57,2|AU 077950 91,1 blastp

715 milho|gbl70|AI6190 81 milho 1779 208 arroz|gbl57,2|AU 077950 97,7 blastp milho|gbl70|AW216 716 milho 1780 208 arroz|gbl57,2|AU 077950 87,8 blastp 176

717 milho|gbl70|BG841 543 milho 1781 208 arroz|gbl57,2|AU 077950 97,7 blastp

Continuação da Tabela 21

718 milho|gbl70|H89383 milho 1782 208 arroz|gbl57,2|AU 077950 86,9 blastp cebola|gbl62|CF4471 719 cebola 1783 208 arroz|gbl57,2|AU 077950 80 blastp 50 pseudoroegneria gb 1 pseudoroeg 720 1784 208 arroz|gbl57,2|AU 077950 94,2 blastp 67|FF343595 neria arroz|gbl70|OS05G36 721 arroz 1785 208 arroz|gbl57,2|AU 077950 86,2 blastp 110 sorgo gb 161 ,crp 722 sorgo 1786 208 arroz|gbl57,2|AU 077950 96,5 blastp AI783327 sorgo gb 161 ,crp 723 sorgo 1787 208 arroz|gbl57,2|AU 077950 87,9 blastp H89383 cana de açucar gbl57,3 cana de 724 1788 208 arroz|gbl57,2|AU 077950 98,1 blastp B Q479039 açucar Panicum virgatum Panicum 725 1789 208 arroz|gbl57,2|AU 077950 96,9 blastp |gbl67|D N144476 virgatum Panicum virgatum gb Panicum 726 1790 208 arroz|gbl57,2|AU 077950 87,5 blastp 167 F E642599 virgatum

727 trigo|gbl64|BG909 438 trigo 1791 208 arroz|gbl57,2|AU 077950 93,4 blastp

728 trigo|gbl64|CA497 850 trigo 1792 208 arroz|gbl57,2|AU 077950 81,9 blastp trigo|gbl64|CA658 729 trigo 1793 208 arroz|gbl57,2|AU 077950 94,2 blastp 427 cenchrus|gbl66|EB6 sorgo gbl61,x 730 cenchrus 1794 209 82,2 blastp 54920 eno|AI901439 sorgo gbl61,x 731 milho|gbl70|AI8552 09 milho 1795 209 89,4 blastp eno|AI901439 cana de açucar gbl57,3 cana de sorgo gbl61,x 732 1796 209 96,2 blastp B U102825 açucar eno|AI901439 Panicum virgatum gbl Panicum sorgo gbl61,x 733 1797 209 81,2 blastp 67D N146789 virgatum eno|AI901439 sorgo gbl61,x 734 milho|gbl70|AI9443 02 milho 1798 210 93,5 blastp eno|AW052978 cana de açucar gbl57,3 cana de sorgo gbl61,x 735 1799 210 93,5 blastp B Q534346 açucar eno|AW052978 Panicum virgatum gbl Panicum sorgo gbl61,x 736 1800 210 86,1 blastp 67 F L722616 virgatum eno|AW052978 cevada|gbl57,3|BE41 sorgo gbl61,x 737 cevada 1801 211 88,3 blastp 3281 eno|AW055409 leymus|gbl66|EG382 sorgo gbl61,x 738 leymus 1802 211 88,5 blastp 167 eno|AW055409 milho|gbl70|AI8553 sorgo gbl61,x 739 milho 1803 211 93,5 blastp 25 eno|AW055409 arroz|gbl70|OS01G09 sorgo gbl61,x 740 arroz 1804 211 88,8 blastp 010 eno|AW055409 Panicum virgatum gbl Panicum sorgo gbl61,x 741 1805 211 93 blastp 67D N145994 virgatum eno|AW055409 sorgo gbl61,x 742 trigo|gbl64|BE4147 89 trigo 1806 211 88,5 blastp eno|AW055409 cevada|gbl57,3|BE43 sorgo gbl61,x 743 cevada 1807 212 82,43 tblast n 7905 eno|AI372194 brachypodium gb 169 brachypodi sorgo gbl61,x 744 1808 212 80,2 blastp |BE437905 um eno|AI372194

Continuação da Tabela 21 leymus|gbl66|EG394 sorgo gbl61,x 745 leymus 1809 212 80,4 blastp 243 eno|AI372194 sorgo gbl61,x 746 milho|gbl70|BG320 821 milho 1810 212 94,5 blastp eno|AI372194 sorgo gbl61,x 747 milho|gbl70|LLT233 30 milho 1811 212 96,2 blastp eno|AI372194 arroz|gbl70|OS08G45 sorgo gbl61,x 748 arroz 1812 212 82,2 blastp 240 eno|AI372194 cana de açucar gbl57,3 cana de sorgo gbl61,x 749 1813 212 97,9 blastp C A073529 açucar eno|AI372194 Panicum virgatum gbl Panicum sorgo gbl61,x 750 1814 212 94,9 blastp 67D N145055 virgatum eno|AI372194 sorgo gbl61,x 751 trigo|gbl64|BE4040 04 trigo 1815 212 81,59 tblast n eno|AI372194

752 milho|gbl70|AI9397 46 milho 1816 213 arroz|gbl57,2|BI8 05136 80 blastp arroz|gbl70|OS08G44 753 arroz 1817 213 arroz|gbl57,2|BI8 05136 99,8 blastp 840

754 trigo|gbl64|BE4000 51 trigo 1818 213 arroz|gbl57,2|BI8 05136 80,54 tblast n cevada|gbl57,3|AL50 755 cevada 1819 214 milho|gbl64|AW 054475 86,9 blastp 6838 brachypodium gb 169 brachypodi 756 1820 214 milho|gbl64|AW 054475 90,9 blastp |BE406703 um arroz|gbl70|OS01G13 757 arroz 1821 214 milho|gbl64|AW 054475 92,7 blastp 730 sorgo gb 161 ,crp 758 sorgo 1822 214 milho|gbl64|AW 054475 97,8 blastp AI739896 cana de açucar gbl57,3 cana de 759 1823 214 milho|gbl64|AW 054475 97,8 blastp B Q479038 açucar Panicum virgatum Panicum 760 1824 214 milho|gbl64|AW 054475 95,1 blastp gbl67 F E622691 virgatum

761 trigo|gbl64|BE4067 03 trigo 1825 214 milho|gbl64|AW 054475 86,7 blastp maçã|gbl57,3|AU30 762 maçã 1826 215 sojagbl66 A W350050 93,1 blastp 1405 arabidopsis gb 165 A 763 arabidopsis 1827 215 sojagbl66 A W350050 91 blastp T2G27600 b rapa|gbl62|CV546 764 b rapa 1828 215 sojagbl66 A W350050 90,6 blastp 524 b rapa|gbl62|EX019 765 b rapa 1829 215 sojagbl66 A W350050 89,9 blastp 335 cevada|gbl57,3|BE43 766 cevada 1830 215 sojagbl66 A W350050 87,5 blastp 8944 basilicumgbl57,3 D 767 basilicum 1831 215 sojagbl66 A W350050 88 blastp Y330212

768 feijão|gbl67|CA8968 47 feijão 1832 215 sojagbl66 A W350050 98,4 blastp brachypodium gb 169 brachypodi 769 1833 215 sojagbl66 A W350050 87,9 blastp |BE405668 um cacau|gbl67|CA7943 770 cacau 1834 215 sojagbl66 A W350050 93,1 blastp 07 canola|gbl61|CD814 771 cañóla 1835 215 sojagbl66 A W350050 88,7 blastp 779

Continuação da Tabela 21 canola|gbl61|DY024 772 cañóla 1836 215 sojagbl66 A W350050 90,8 blastp 749 mamona|gbl60|EG 773 mamona 1837 215 sojagbl66 A W350050 93,1 blastp 661556 castanha|gbl70|SRR0 774 castanha 1838 215 sojagbl66 A W350050 92,9 blastp 06295S0002595 citrico|gbl66|CF8303 775 citrico 1839 215 sojagbl66 A W350050 93,8 blastp 44 algodão|gbl64|AI7263 776 algodão 1840 215 sojagbl66 A W350050 94 blastp 26 algodão|gbl64|AI7296 777 algodão 1841 215 sojagbl66 A W350050 91,5 blastp 50 algodão|gbl64|AI7314 778 algodão 1842 215 sojagbl66 A W350050 89,5 blastp 87 algodão|gbl64|AI7316 779 algodão 1843 215 sojagbl66 A W350050 92,2 blastp 57 cowpeagbl66 FF395 780 cowpea 1844 215 sojagbl66 A W350050 94,2 blastp 986 iceplant|gbl64|AF16 781 iceplant 1845 215 sojagbl66 A W350050 91,3 blastp 5422 alface|gbl57,2|DW0 782 alface 1846 215 sojagbl66 A W350050 90,8 blastp 49083 alface|gbl57,2|DW0 783 alface 1847 215 sojagbl66 A W350050 83,9 blastp 59917 milho|gbl70|AI6150 784 milho 1848 215 sojagbl66 A W350050 89,9 blastp 72 milho|gbl70|AI7146 785 milho 1849 215 sojagbl66 A W350050 89,7 blastp 27 medicago gbl 57,2 A 786 medicago 1850 215 sojagbl66 A W350050 91,94 tblast n W329426 pinheiro|gbl57,2|AL751 787 pinheiro 1851 215 sojagbl66 A W350050 88,2 blastp 019 pinheiro|gbl57,2|BE643 788 pinheiro 1852 215 sojagbl66 A W350050 86,8 blastp 751

789 álamo|gbl70|AI1666 46 álamo 1853 215 soja gbl66 A W350050 91,7 blastp

790 álamo|gbl70|BI0697 48 álamo 1854 215 soja gbl66 A W350050 90,8 blastp

791 álamo|gbl70|BI0700 62 álamo 1855 215 soja gbl66 A W350050 81,7 blastp álamo|gbl70|CN549 792 álamo 1856 215 soja gbl66 A W350050 81,6 blastp 423 batata|gbl57,2|BG09 793 batata 1857 215 soja gbl66 A W350050 87,4 blastp 6555 batata|gbl57,2|BI17 794 batata 1858 215 soja gbl66 A W350050 90,8 blastp 7056 arroz|gbl70|OS01G04 795 arroz 1859 215 soja gbl66 A W350050 90,8 blastp 814 sorgo gb 161 ,crp B 796 sorgo 1860 215 soja gbl66 A W350050 90,6 blastp E366383

797 soja|gbl68|AW3 29426 soja 1861 215 soja gbl66 A W350050 94 blastp

798 soja|gbl68|AW7 19488 soja 1862 215 soja gbl66 A W350050 94 blastp

Continuação da Tabela 21

799 soja|gbl68|AW7 19867 soja 1863 215 soja gbl66 A W350050 97,5 blastp spikemoss gbl 65 FE 800 spikemoss 1864 215 soja gbl66 A W350050 85,3 blastp 429017

801 abeto|gbl62|C0217 587 abeto 1865 215 soja gbl66 A W350050 88,2 blastp morango gbl 64 CO 802 morango 1866 215 soja gbl66 A W350050 92,4 blastp 816822 cana de açucar gbl57,3 cana de 803 1867 215 soja gbl66 A W350050 90,6 blastp B Q533539 açucar girassol gb 162 CD 804 girassol 1868 215 soja gbl66 A W350050 90,57 tblast n 849902 girassol gbl62 DY 805 girassol 1869 215 soja gbl66 A W350050 82,3 blastp 927633 Panicum virgatum Panicum 806 1870 215 soja gbl66 A W350050 90,3 blastp gbl67D N142133 virgatum tomate|gbl64|AI637 807 tomate 1871 215 soja gbl66 A W350050 90,6 blastp 361 tomate|gbl64|BE459 808 tomate 1872 215 soja gbl66 A W350050 87,2 blastp 090 triphysaria|gbl 64|DR 809 triphysaria 1873 215 soja gbl66 A W350050 90,3 blastp 175699

810 trigo|gbl64|BE4059 03 trigo 1874 215 soja gbl66 A W350050 87,9 blastp sorgo gbl61,x 811 milho|gbl70|BG316 566 milho 1875 267 98,87 tblast n eno|BE599042 sorgo gbl6l,c 811 milho|gbl70|BG316 566 milho 1875 216 96,8 blastp rp|BE599042 arroz|gbl70|OSHG10 sorgo gbl61,x 812 arroz 1876 267 93,57 tblast n 420 eno|BE599042 arroz|gbl70|OSHG10 sorgo gbl6l,c 812 arroz 1876 216 88 blastp 420 rp|BE599042 aquilegia gbl57,3 D 813 aquilegia 1877 217 milho|gbl64|BQ 279657 80,7 blastp R921243 abacate|gbl64|CK76 814 abacate 1878 217 milho|gbl64|BQ 279657 80,5 blastp 6314 brachypodium gb 169 brachypodi 815 1879 217 milho|gbl64|BQ 279657 85,7 blastp |BE492967 um brachypodium gb 169 brachypodi sorgogblól,x 815 1879 227 84,7 blastp |BE492967 um eno|BQ279657 mamona|gbl60|EE 816 mamona 1880 217 milho|gbl64|BQ 279657 81,3 blastp 255906 mamona|gbl60|EE sorgogblól,x 816 mamona 1880 227 81 blastp 255906 eno|BQ279657 centaurea|gbl66|EH7 817 centaurea 1881 217 milho|gbl64|BQ 279657 80,08 tblast n 28846 castanha|gbl70|SRR0 818 castanha 1882 217 milho|gbl64|BQ 279657 81,3 blastp 06295S0011600 castanha|gbl70|SRR0 sorgogblól,x 818 castanha 1882 227 80,6 blastp 06295S0011600 eno|BQ279657 citrico|gbl66|CB3051 sorgogblól,x 819 citrico 1883 227 81,4 blastp 47 eno|BQ279657 citrico|gbl66|CB3051 819 citrico 1883 217 milho|gbl64|BQ 279657 81,3 blastp 47

Continuação da Tabela 21 algodão|gbl64|C0121 820 algodão 1884 217 milho|gbl64|BQ 279657 82,4 tblast n 350 algodão|gbl64|C0121 sorgogblól,x 820 algodão 1884 227 81,41 tblast n 350 eno|BQ279657 kiwi|gbl66|FG40376 821 kiwi 1885 217 milho|gbl64|BQ 279657 80,5 blastp 7 leymus gb 166 EG3 76 822 leymus 1886 217 milho|gbl64|BQ 279657 90,3 blastp 319 leymus gb 166 EG3 76 sorgogblól,x 822 leymus 1886 227 89,6 blastp 319 eno|BQ279657 mamão|gbl65|EX229 823 mamão 1887 217 milho|gbl64|BQ 279657 81,3 blastp 221 mamão|gbl65|EX229 sorgogblól,x 823 mamão 1887 227 81 blastp 221 eno|BQ279657 batata|gbl57,2|BE34 824 batata 1888 217 milho|gbl64|BQ 279657 81,3 blastp 1318 batata|gbl57,2|BE34 sorgogblól,x 824 batata 1888 227 81,3 blastp 1318 eno|BQ279657 pseudoroegneria gb 1 pseudoroeg 825 1889 217 milho|gbl64|BQ 279657 89,9 blastp 67|FF342296 neria pseudoroegneria gb 1 pseudoroeg sorgogblól,x 825 1889 227 89,2 blastp 67|FF342296 neria eno|BQ279657 arroz|gbl70|OS03G21 826 arroz 1890 217 milho|gbl64|BQ 279657 90,6 blastp 914 arroz|gbl70|OS03G21 sorgogblól,x 826 arroz 1890 227 89,9 blastp 914 eno|BQ279657 arroz|gbl70|OS03G50 827 arroz 1891 217 milho|gbl64|BQ 279657 88,2 blastp 620 arroz|gbl70|OS03G50 sorgogblól,x 827 arroz 1891 227 87,2 blastp 620 eno|BQ279657 cana de açucar gbl57,3 cana de sorgogblól,x 828 1892 227 99,3 blastp B Q536934 açucar eno|BQ279657 cana de açucar gbl57,3 cana de 828 1892 217 milho|gbl64|BQ 279657 98,1 blastp B Q536934 açucar cana de açucar gbl57,3 cana de sorgo gbl61,x 829 1893 227 98,9 blastp C A096803 açucar eno|BQ279657 cana de açucar gbl57,3 cana de 829 1893 217 milho|gbl64|BQ 279657 97,8 blastp C A096803 açucar girassol gb 162 BU 830 girassol 1894 217 milho|gbl64|BQ 279657 80,2 blastp 018368 Panicum virgatum gbl Panicum sorgo gbl61,x 831 1895 227 94,8 blastp 67 F L773351 virgatum eno|BQ279657 Panicum virgatum gb Panicum 831 1895 217 milho|gbl64|BQ 279657 94 blastp 167 F L773351 virgatum tabaco|gbl62|DV15 832 tobáceo 1896 217 milho|gbl64|BQ 279657 80,9 blastp 8876 tabaco|gbl62|DV15 sorgo gbl61,x 832 tobáceo 1896 227 80,2 blastp 8876 eno|BQ279657 tomate|gbl64|BG124 833 tomate 1897 217 milho|gbl64|BQ 279657 80,9 blastp 565 tomate|gbl64|BG124 sorgo gbl61,x 833 tomate 1897 227 80,6 blastp 565 eno|BQ279657

834 trigo|gbl64|BE4929 67 trigo 1898 217 milho|gbl64|BQ 279657 89,9 blastp

Continuação da Tabela 21 sorgo gbl61,x 834 trigo|gbl64|BE4929 67 trigo 1898 227 89,2 blastp eno|BQ279657

835 trigo|gbl64|BQ168 983 trigo 1899 217 milho|gbl64|BQ 279657 90,3 blastp sorgo gbl61,x 835 trigo|gbl64|BQ168 983 trigo 1899 227 89,6 blastp eno|BQ279657 cevada|gbl57,2|A 836 galho|gbl61|CK801 026 galho 1900 218 87 blastp J234408 pseudoroegneria gb 1 pseudoroeg cevada|gbl57,2|A 837 1901 218 92,1 blastp 67|FF340368 neria J234408 arroz|gbl70|OS07G05 cevada|gbl57,2|A 838 arroz 1902 218 81,2 blastp 360 J234408 cevada|gbl57,2|A 839 trigo|gbl64|BE2133 79 trigo 1903 218 92,1 blastp J234408 trigo|gbl64|BE4011 cevada|gbl57,2|A 840 trigo 1904 218 90 blastp 32 J234408 cevada|gbl57,2|A 841 trigo|gbl64|BE4012 88 trigo 1905 218 90,7 blastp J234408 cevada|gbl57,2|A 842 trigo|gbl64|CA654 680 trigo 1906 218 84,89 tblast n J234408 cevada|gbl57,2|A 843 trigo|gbl64|CA695 915 trigo 1907 218 88,49 tblast n J234408 milho|gbl70|AW433 sorgo gbl61,x 844 milho 1908 219 87,9 blastp 364 eno|AW923729 sorgo gb 161 ,crp sorgo gbl61,x 845 sorgo 1909 219 81,1 blastp AW922411 eno|AW923729 cana de açucar gbl57,3 cana de sorgo gbl61,x 846 1910 219 91,1 blastp C A068925 açucar eno|AW923729 Panicum virgatum gbl Panicum sorgo gbl61,x 847 1911 219 86,8 blastp 67D N144528 virgatum eno|AW923729 Panicum virgatum gbl Panicum sorgo gbl61,x 848 1912 219 85,8 blastp 67D N144587 virgatum eno|AW923729 Panicum virgatum Panicum sorgo gbl61,x 849 gbl67 F 1913 219 80,1 blastp virgatum eno|AW923729 L758275 mamona|gbl60|M arabidopsisgbl5 850 mamona 1914 221 83,3 blastp DL29813M001539 7,2|AT1G13980 álamo|gbl70|BU886 arabidopsisgbl5 851 álamo 1915 221 82 blastp 496 7,2|AT1G13980 arabidopsisgbl5 852 soja|gbl68|BM3 08552 soja 1916 221 81,2 blastp 7,2|AT1G13980 milho|gbl70|BM072 sorgo gbl61,x 853 milho 1917 226 95,5 blastp 861 eno|BI139559 arroz|gbl70|OS01G07 sorgo gbl61,x 854 arroz 1918 226 83,5 blastp 200 eno|BI139559 cana de açucar gbl57,3 cana de sorgo gbl61,x 855 1919 226 88,25 tblast n C Al 12539 açucar eno|BI139559 cevada|gbl57,3|BE41 sorgo gbl61,x 856 cevada 1920 228 84,1 blastp 2997 eno|AF019147 brachypodium gb 169 brachypodi sorgo gbl61,x 857 1921 228 83 blastp |BE403874 um eno|AF019147 sorgo gbl61,x 858 galho|gbl61|DT680 716 galho 1922 228 81 blastp eno|AF019147 leymus|gbl66|CN46 sorgo gbl61,x 859 leymus 1923 228 83,4 blastp 6335 eno|AF019147

Continuação da Tabela 21 milho|gbl70|AF0191 sorgo gbl61,x 860 milho 1924 228 91,7 blastp 47 eno|AF019147 sorgo gbl61,x 861 milho|gbl70|AI9483 11 milho 1925 228 90 blastp eno|AF019147 arroz|gbl70|OS04G55 sorgo gbl61,x 862 arroz 1926 228 85,2 blastp 650 eno|AF019147 cana de açucar gbl57,3 cana de sorgo gbl61,x 863 1927 228 97,9 blastp B Q536348 açucar eno|AF019147 Panicum virgatum Panicum sorgo gbl61,x 864 1928 228 91,8 blastp gbl67D N140659 virgatum eno|AF019147 Panicum virgatum gbl Panicum sorgo gbl61,x 865 1929 228 90,8 blastp 67D N141292 virgatum eno|AF019147 sorgo gbl61,x 866 trigo|gbl64|BE4038 74 trigo 1930 228 83,9 blastp eno|AF019147 trigo|gbl64|BE4050 sorgo gbl61,x 867 trigo 1931 228 84,5 blastp 77 eno|AF019147 b rapa|gbl62|EX027 868 b_rapa 1932 229 canola|gbl61|EE 559843 94,1 blastp 120 brachypodium gb 169 brachypodi cevada|gbl57,3|B 869 1933 230 90,9 blastp |BF202681 um E420701 milho|gbl70|LLAI62 cevada|gbl57,3|B 870 milho 1934 230 87 blastp 9913 E420701 pseudoroegneria gb 1 pseudoroeg cevada|gbl57,3|B 871 1935 230 96,8 blastp 67|FF340034 neria E420701 arroz|gbl70|OS07G44 cevada|gbl57,3|B 872 arroz 1936 230 88,6 blastp 660 E420701 sorgo gb 161 ,crp cevada|gbl57,3|B 873 sorgo 1937 230 88,3 blastp AW282627 E420701 Panicum virgatum gb Panicum cevada|gbl57,3|B 874 1938 230 88,1 blastp 167 F E609054 virgatum E420701 brachypodium gb 169 brachypodi cevada|gbl57,3|B 875 1939 231 90,2 blastp |BE421829 um E421829 brachypodium gb 169 brachypodi 875 1939 235 arroz|gbl57,2|AU 057884 82,6 blastp |BE421829 um brachypodium gb 169 brachypodi sorgogblól,x 875 1939 261 81,1 blastp |BE421829 um eno|AI622209 cevada|gbl57,3|B 876 galho|gbl61|DT679 850 galho 1940 231 95,3 blastp E421829

876 galho|gbl61|DT679 850 galho 1940 235 arroz|gbl57,2|AU 057884 84,1 blastp sorgogblól,x 876 galho|gbl61|DT679 850 galho 1940 261 81,6 blastp eno|AI622209 leymus|gbl66|EG396 cevada|gbl57,3|B 877 leymus 1941 231 96,3 blastp 605 E421829 leymus|gbl66|EG396 877 leymus 1941 235 arroz|gbl57,2|AU 057884 83,6 blastp 605 leymus|gbl66|EG396 sorgogblól,x 877 leymus 1941 261 83,1 blastp 605 eno|AI622209 sorgogblól,x 878 milho|gbl70|AI6222 09 milho 1942 261 94 blastp eno|AI622209

878 milho|gbl70|AI6222 09 milho 1942 235 arroz|gbl57,2|AU 057884 82,9 blastp cevada|gbl57,3|B 878 milho|gbl70|AI6222 09 milho 1942 231 81,8 blastp E421829

Continuação da Tabela 21 cana de açucar gbl57,3 cana de sorgogblól,x 879 1943 261 93,5 blastp C A123704 açucar eno|AI622209 cana de açucar gbl57,3 cana de cevada|gbl57,3|B 879 1943 231 86,5 blastp C A123704 açucar E421829 cana de açucar gbl57,3 cana de 879 1943 235 arroz|gbl57,2|AU 057884 84,6 blastp C A123704 açucar Panicum virgatum gbl Panicum sorgogblól,x 880 1944 261 91 blastp 67 F E619680 virgatum eno|AI622209 Panicum virgatum gb Panicum 880 1944 235 arroz|gbl57,2|AU 057884 85,4 blastp 167 F E619680 virgatum Panicum virgatum gb Panicum cevada|gbl57,3|B 880 1944 231 82,7 blastp 167 F E619680 virgatum E421829 Panicum virgatum Panicum sorgogblól,x 881 1945 261 89,6 blastp gbl67 F E630609 virgatum eno|AI622209 Panicum virgatum Panicum 881 1945 235 arroz|gbl57,2|AU 057884 84 blastp gbl67 F E630609 virgatum Panicum virgatum Panicum cevada|gbl57,3|B 881 1945 231 81,9 blastp gbl67 F E630609 virgatum E421829 cevada|gbl57,3|B 882 trigo|gbl64|BE4976 07 trigo 1946 231 96,8 blastp E421829

882 trigo|gbl64|BE4976 07 trigo 1946 235 arroz|gbl57,2|AU 057884 84,6 blastp sorgogblól,x 882 trigo|gbl64|BE4976 07 trigo 1946 261 82,6 blastp eno|AI622209 cevada|gbl57,3|B 883 trigo|gbl64|BF4286 60 trigo 1947 231 96,8 blastp E421829

883 trigo|gbl64|BF4286 60 trigo 1947 235 arroz|gbl57,2|AU 057884 85,6 blastp sorgogblól,x 883 trigo|gbl64|BF4286 60 trigo 1947 261 82,6 blastp eno|AI622209 cevada|gbl57,3|BE41 sorgogblól,x 884 cevada 1948 232 81 blastp 1922 eno|AA011880 brachypodium gb 169 brachypodi sorgogblól,x 885 1949 232 82,3 blastp |BE398696 um eno|AA011880 cenchrus|gbl66|EB6 sorgo gbl61,x 886 cenchrus 1950 232 92,3 blastp 52789 eno|AA011880 algodão|gbl64|DT574 sorgo gbl61,x 887 algodão 1951 232 95,9 blastp 337 eno|AA011880 leymus|gbl66|CN46 sorgo gbl61,x 888 leymus 1952 232 81,1 blastp 5754 eno|AA011880 sorgo gbl61,x 889 milho|gbl70|AA011 880 milho 1953 232 95,9 blastp eno|AA011880 milho|gbl70|LLCD9 sorgo gbl61,x 890 milho 1954 232 95,9 blastp 79368 eno|AA011880 pseudoroegneria gb 1 pseudoroeg sorgo gbl61,x 891 1955 232 83,3 blastp 67|FF344484 neria eno|AA011880 arroz|gbl70|OS07G46 sorgo gbl61,x 892 arroz 1956 232 87,9 blastp 750 eno|AA011880 cana de açucar gbl57,3 cana de sorgo gbl61,x 893 1957 232 97,3 blastp B Q535840 açucar eno|AA011880 cana de açucar gbl57,3 cana de sorgo gbl61,x 894 1958 232 94 blastp B Q536355 açucar eno|AA011880 cana de açucar gbl57,3 cana de sorgo gbl61,x 895 1959 232 83,94 tblast n C A065609 açucar eno|AA011880

Continuação da Tabela 21 cana de açucar gbl57,3 cana de sorgo gbl61,x 896 1960 232 93,3 blastp C A075754 açucar eno|AA011880 cana de açucar gbl57,3 cana de sorgo gbl61,x 897 1961 232 98,6 blastp C A078921 açucar eno|AA011880 Panicum virgatum Panicum sorgo gbl61,x 898 1962 232 91,5 blastp gbl67D N141728 virgatum eno|AA011880 Panicum virgatum gbl Panicum sorgo gbl61,x 899 1963 232 92,4 blastp 67D N145078 virgatum eno|AA011880 sorgo gbl61,x 900 trigo|gbl64|BE3983 06 trigo 1964 232 82,8 blastp eno|AA011880 sorgo gbl61,x 901 trigo|gbl64|BE3986 96 trigo 1965 232 81,4 blastp eno|AA011880 sorgo gbl61,x 902 trigo|gbl64|BE4230 10 trigo 1966 232 82,8 blastp eno|AA011880 sorgo gbl61,x 903 trigo|gbl64|CA484 184 trigo 1967 232 97,7 blastp eno|AA011880 cevada|gbl57,3|BE41 904 cevada 1968 233 arroz|gbl57,2|BE2 29552 87,4 blastp 3465 brachypodium gb 169 brachypodi 905 1969 233 arroz|gbl57,2|BE2 29552 86,5 blastp |BE413465 um leymus|gbl66|EG379 906 leymus 1970 233 arroz|gbl57,2|BE2 29552 87,1 blastp 179

907 milho|gbl70|T26952 milho 1971 233 arroz|gbl57,2|BE2 29552 87,7 blastp sorgo gb 161 ,crp B 908 sorgo 1972 233 arroz|gbl57,2|BE2 29552 87,7 blastp G549557 cana de açucar gbl57,3 cana de 909 1973 233 arroz|gbl57,2|BE2 29552 88,3 blastp C A099583 açucar Panicum virgatum gb Panicum 910 1974 233 arroz|gbl57,2|BE2 29552 85,6 blastp 167 F E610789 virgatum Panicum virgatum Panicum 911 1975 233 arroz|gbl57,2|BE2 29552 88 blastp gbl67 F L748149 virgatum

912 trigo|gbl64|BE4303 30 trigo 1976 233 arroz|gbl57,2|BE2 29552 86,83 tblast n

913 trigo|gbl64|BE4901 64 trigo 1977 233 arroz|gbl57,2|BE2 29552 87,1 blastp

914 trigo|gbl64|BF2010 86 trigo 1978 233 arroz|gbl57,2|BE2 29552 87,4 blastp amborella|gbl66|CD 915 amborella 1979 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 96 blastp 484126 amborella|gbl66|CK 916 amborella 1980 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 97,4 blastp 760819 antirrhinum|gbl66|A 917 antirrhinum 1981 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 89,4 blastp J558674 antirrhinum|gbl66|A 918 antirrhinum 1982 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp J559850 antirrhinum|gbl66|A 919 antirrhinum 1983 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp J787300 antirrhinum|gbl66|A 920 antirrhinum 1984 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp J789533 maçã|gbl57,3|CN48 921 maçã 1985 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 90,7 blastp 9349 maçã|gbl57,3|CN49 922 maçã 1986 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp 6576

Continuação da Tabela 21 maçã|gbl57,3|CN99 923 maçã 1987 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 90,7 blastp 5013 apricot|gbl57,2|CB8 924 apricot 1988 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp 19597 apricot|gbl57,2|CV0 925 apricot 1989 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp 44080 aquilegia gbl57,3 D 926 aquilegia 1990 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 94,7 blastp R915026 arabidopsis gbl65 A 927 arabidopsis 1991 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 90,7 blastp T2G36160 arabidopsis gbl65 A 928 arabidopsis 1992 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp T3G11510 arabidopsis gbl65 A 929 arabidopsis 1993 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp T3G52580 artemisia|gbl64|EY0 930 artemisia 1994 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 89,4 blastp 33322 artemisia|gbl64|EY0 931 artemisia 1995 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 88,1 blastp 38655 artemisia|gbl64|EY0 932 artemisia 1996 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 89,4 blastp 50701 abacate|gbl64|CK75 933 abacate 1997 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp 3882 bJuncea|gbl64|EVG 934 bjuncea 1998 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp N00033609170815 bJuncea|gbl64|EVG 935 bjuncea 1999 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp N00191625522759 bJuncea|gbl64|EVG 936 bjuncea 2000 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 84,8 blastp N00422623890637 bJuncea|gbl64|EVG 937 bjuncea 2001 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp N00544912222373 bJuncea|gbl64|EVG 938 bjuncea 2002 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,1 blastp N00716011751939 bJuncea|gbl64|EVG 939 bjuncea 2003 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,1 blastp N00888211982122 bJuncea|gbl64|EVG 940 bjuncea 2004 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp N01248609033239 b oleracea|gbl61|D 941 b_oleracea 2005 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp Y026232 b oleracea|gbl61|D 942 b_oleracea 2006 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp Y026495 b oleracea|gbl61|D 943 b_oleracea 2007 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp Y026867 b oleracea|gbl61|D 944 b_oleracea 2008 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp Y027139 b oleracea|gbl61|D 945 b_oleracea 2009 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp Y028093 b olerácea gbl 6 ÍES 946 b_oleracea 2010 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp 942246 b rapa|gbl62|BG544 947 b_rapa 2011 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp 390 b rapa|gbl62|CA992 948 b_rapa 2012 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp 255 b rapa|gbl62|CV433 949 b_rapa 2013 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp 769

Continuação da Tabela 21 b rapa|gbl62|CV433 950 b_rapa 2014 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp 783 b rapa|gbl62|CX265 951 b_rapa 2015 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp 694 b rapa|gbl62|CX270 952 b_rapa 2016 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp 276 b rapa|gbl62|CX270 953 b_rapa 2017 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp 426 b rapa|gbl62|DY008 954 b_rapa 2018 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp 989 b rapa|gbl62|EE525 955 b_rapa 2019 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp 926

956 b rapa|gbl62|L3366 1 b_rapa 2020 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp banana|gbl67|DN24 957 banana 2021 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 96,7 blastp 0239 banana|gbl67|ES433 958 banana 2022 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 96,7 blastp 381 banana|gbl67|FF558 959 banana 2023 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 96,7 blastp 372 banana|gbl67|FF558 960 banana 2024 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 97,4 blastp 518 banana|gbl67|FL662 961 banana 2025 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp 140 cevada|gbl57,3|AL50 962 cevada 2026 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 96 blastp 1882 cevada|gbl57,3|BE41 963 cevada 2027 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 97,4 blastp 2576 cevada|gbl57,3|BQ76 964 cevada 2028 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 82,8 blastp 8399 cevada|gbl57,3|DN18 965 cevada 2029 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 80,9 blastp 3050 basilicum|gbl57,3|D 966 basilicum 2030 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp Y331402 basilicumgbl57,3 D 967 basilicum 2031 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 90,1 blastp Y344099

968 feijão|gbl67|CA8971 10 feijão 2032 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp

969 feijão|gbl67|CA8971 13 feijão 2033 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp beterraba|gbl62|BQ060 970 48 beterraba 2034 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 94 blastp 7brachypodium gb 169 brachypodi 971 2035 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 94,04 tblast n |BE398957 um brachypodium gb 169 brachypodi 972 2036 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 97,35 tblast n |BE402469 um brachypodium gb 169 brachypodi 973 2037 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 95,4 blastp |BE403589 um brachypodium gb 169 brachypodi 974 2038 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 96,7 blastp |BE406789 um bruguiera gbl 66 BP9 975 bruguiera 2039 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,39 tblast n 49576 cacau|gbl67|CA7965 976 cacau 2040 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp 67

Continuação da Tabela 21

977 cacau|gbl67|CU4733 26 cacau 2041 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,1 blastp

978 canola|gbl61|AY196 093 cañóla 2042 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp

979 canola|gbl61|CD811 632 cañóla 2043 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp

980 canola|gbl61|CD812 906 cañóla 2044 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

981 canola|gbl61|CD820 445 cañóla 2045 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp

982 canola|gbl61|CD822523 cañóla 2046 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

983 canola|gbl61|CD823 758 cañóla 2047 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

984 canola|gbl61|CD827 084 cañóla 2048 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

985 canola|gbl61|CD829 044 cañóla 2049 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

986 canola|gbl61|CD840 491 cañóla 2050 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

987 canola|gbl61|CN730 264 cañóla 2051 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp

988 canola|gbl61|CN731 838 cañóla 2052 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

989 canola|gbl61|CX190 513 cañóla 2053 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

990 canola|gbl61|CX280 454 cañóla 2054 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

991 canola|gbl61|CX280 565 cañóla 2055 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

992 canola|gbl61|H0755 9 cañóla 2056 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

993 mandioca|gbl64|CK64 7007 mandioca 2057 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 95,4 blastp

994 mandioca|gbl64|CK65 0413 mandioca 2058 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 95,4 blastp

995 mandioca|gbl64|CK65 2715 mandioca 2059 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 95,4 blastp mamona|gbl60|M 996 mamona 2060 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp DL29693M002016

997 mamona|gbl60|Tl 4945 mamona 2061 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp catharanthus|gbl66|E 998 catharanthus 2062 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 88,7 blastp G556977 catharanthus|gbl66|E 999 catharanthus 2063 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp G557933

1000 cenchrus | gb 16 61EB 6 56767 cenchrus 2064 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 94,7 blastp

1001 cenchrus | gb 16 61 EB 6 64187 cenchrus 2065 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 97,4 blastp

1002 centaurea|gbl66|EH7 24794 centaurea 2066 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp

1003 centaurea|gbl66|EH7 39148 centaurea 2067 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp

Continuação da Tabela 21

1004 centaurea|gbl66|EH7 48001 centaurea 2068 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 90,7 blastp

1005 centaurea|gbl66|EH7 53801 centaurea 2069 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp

1006 centaurea|gbl66|EH7 80000 centaurea 2070 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp

1007 cereja|gbl57,2|EE48 8074 cereja 2071 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,05 tblast n castanha|gbl70|SRR0 1008 castanha 2072 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 94 blastp 06295S0002784 castanha|gbl70|SRR0 1009 castanha 2073 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp 06295S0004532 castanha|gbl70|SRR0 1010 castanha 2074 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 94 blastp 06295S0010942 chlamydomonas|gbl chlamydom 1011 2075 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 85,6 blastp 62|AW676072 onas

1012 cichorium|gbl66|DT 211087 cichorium 2076 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 89,4 blastp

1013 cichorium|gbl66|DT 214005 cichorium 2077 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp

1014 cichorium|gbl66|EL 356717 cichorium 2078 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp

1015 cichorium|gbl66|EL 365574 cichorium 2079 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp

1016 citrico|gbl66|BQ6232 92 citrico 2080 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 94,7 blastp

1017 citrico|gbl66|BQ6241 14 citrico 2081 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp

1018 coffea|gbl57,2|BQ44 9109 coffea 2082 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp

1019 coffea|gbl57,2|DV67 3676 coffea 2083 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1020 algodão|gbl64|AI7268 45 algodão 2084 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1021 algodão|gbl64|AI7300 68 algodão 2085 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,1 blastp

1022 algodão|gbl64|BE054 711 algodão 2086 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp algodão|gbl64|BF2716 1023 algodão 2087 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,1 blastp 77

1024 algodão|gbl64|CD485 874 algodão 2088 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 81,46 tblast n

1025 algodão|gbl64|DV849 004 algodão 2089 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,1 blastp

1026 algodão|gbl64|ES7929 38 algodão 2090 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,1 blastp

1027 cowpea gbl 66 FC45 9672 cowpea 2091 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp

1028 cowpea|gbl66|FF384 317 cowpea 2092 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 81,6 blastp

1029 cowpea gbl66 FF385 803 cowpea 2093 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp

1030 cowpea gbl66 FF389 079 cowpea 2094 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 83,4 blastp

Continuação da Tabela 21

1031 cowpea gbl66 FF391 295 cowpea 2095 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 90,7 blastp cryptomeria|gbl66|B 1032 cryptomeria 2096 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp P173938 cryptomeria|gbl66|B 1033 cryptomeria 2097 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp W994122

1034 cycas|gbl66|EX9236 16 cycas 2098 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,1 blastp

1035 cycas|gbl66|EX9249 38 cycas 2099 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,39 tblast n

1036 cynara|gbl67|GE586 142 cynara 2100 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp

1037 cynara|gbl67|GE586 173 cynara 2101 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp

1038 cynara|gbl67|GE591 726 cynara 2102 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 90,1 blastp dente de leão|gbl61|DY 1039 dente de leão 2103 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp 804347 dente de leão|gbl61|DY 1040 dente de leão 2104 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp 807877

1041 eucalipto gbl 66 CB 967799 eucalipto 2105 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 94,7 blastp

1042 eucalipto gbl66 CT 980941 eucalipto 2106 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 94,7 blastp

1043 galho|gbl61|DT679 829 galho 2107 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 98 blastp

1044 galho|gbl61|DT682 674 galho 2108 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 96 blastp

1045 galho|gbl61|DT688 310 galho 2109 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 98 blastp

1046 flax|gbl57,3|CV4788 13 flax 2110 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 89,4 tblast n

1047 gengibre|gbl64|DY372 231 gengibre 2111 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 97,4 blastp uva|gbl60|BQ7960 1048 uva 2112 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 94,7 blastp 73

1049 uva|gbl60|BQ7963 30 uva 2113 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp

1050 uva|gbl60|BQ8001 80 uva 2114 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 94 blastp iceplant|gbl64|BE03 1051 iceplant 2115 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp 4755

1052 iceplant|gbl64|CA83 3881 iceplant 2116 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1053 ipomoea gbl 57,2 BJ 554031 ipomoea 2117 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 94,7 blastp

1054 ipomoea gbl 57,2 BJ 555694 ipomoea 2118 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,72 tblast n

1055 ipomoea gbl 57,2 BJ 557693 ipomoea 2119 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 94,7 blastp

1056 ipomoea gbl 57,2 BU 691365 ipomoea 2120 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 94 blastp

1057 kiwi|gbl66|FG40465 8 kiwi 2121 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

Continuação da Tabela 21

1058 kiwi|gbl66|FG40474 6 kiwi 2122 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,1 blastp

1059 kiwi|gbl66|FG40806 3 kiwi 2123 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 94 blastp

1060 alface|gbl57,2|DW0 78606 alface 2124 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp

1061 leymus|gbl66|EG388 410 leymus 2125 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 96 blastp liriodendron gb 166 C 1062 liriodendron 2126 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 94,7 blastp K743464 liriodendron gb 166 C 1063 liriodendron 2127 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp 0998653

1064 lótus|gbl57,2|AI967 817 lótus 2128 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 90,1 blastp

1065 lótus|gbl57,2|CB826 697 lótus 2129 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 89,4 blastp

1066 lovegrass|gbl67|DN4 80258 lovegrass 2130 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 99,3 blastp

1067 lovegrass gb 167 EH1 83996 lovegrass 2131 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 98,7 blastp

1068 milho|gbl70|AI6123 06 milho 2132 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 97,4 blastp milho|gbl70|AI9670 1069 milho 2133 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 98,7 blastp 32

1070 milho|gbl70|AI9796 79 milho 2134 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 85,71 tblast n

1071 milho|gbl70|AW054 617 milho 2135 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 97,4 blastp

1072 milho|gbl70|AW165 569 milho 2136 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 97,4 blastp

1073 milho|gbl70|LLBU0 37867 milho 2137 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 94,7 tblast n

1074 milho|gbl70|LLDQ2 44878 milho 2138 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1075 milho|gbl70|LLDQ2 45962 milho 2139 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,1 blastp

1076 milho|gbl70|T18275 milho 2140 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 97,4 blastp

1077 marchantia|gb 1661B J 841500 marchantía 2141 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 89,4 blastp

1078 marchantia|gbl 66|C9 5799 marchantía 2142 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,1 blastp medicago gbl57,2 A 1079 medicago 2143 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 89,4 blastp A660312 medicago gbl57,2 A 1080 medicago 2144 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 88,7 blastp A660491

1081 melão|gbl65|AM713 905 melón 2145 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 94 blastp melão|gbl65|AM719 1082 melón 2146 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 84,1 blastp 737

1083 melão|gbl65|AM719 902 melón 2147 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,76 tblast n

1084 melão|gbl65|EB714 362 melón 2148 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 94 blastp

Continuação da Tabela 21 mesostigma gbl66 D 1085 mesostigma 2149 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 86,3 blastp N254866

1086 painço|gbl61|CD7247 48 painço 2150 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 96 blastp

1087 painço|gbl61|CD7253 98 painço 2151 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,72 tblast n

1088 nuphar|gbl66|CD475 044 nuphar 2152 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 94 blastp

1089 nuphar|gbl66|CK757 845 nuphar 2153 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 94 blastp

1090 nuphar|gbl66|CK767 949 nuphar 2154 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp carvalho|gbl70|DB99686 1091 carvalho 2155 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp 5

1092 carvalho|gbl70|DB99806 8 carvalho 2156 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 94 blastp

1093 carvalho|gbl70|DN94973 8 carvalho 2157 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 94 blastp

1094 carvalho|gbl66|EL6 81750 carvalho 2158 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 96 blastp

1095 carvalho|gbl66|EL9 30220 carvalho 2159 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 96 blastp

1096 carvalho|gbl66|EL9 30363 carvalho 2160 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 96 blastp cebola|gbl62|BQ5800 1097 cebola 2161 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 96 blastp 74

1098 mamão|gbl65|EX231 620 mamão 2162 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1099 mamão|gbl65|EX252 393 mamão 2163 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1100 pêssego|gbl57,2|BU04 0848 pêssego 2164 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp

1101 amendoim|gbl67|CD037 918 amendoim 2165 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,1 blastp

1102 amendoim|gbl67|CX018 155 amendoim 2166 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,1 blastp

1103 pimenta|gbl57,2|BM0 61978 pimenta 2167 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,1 blastp

1104 pimenta|gbl57,2|BM0 62219 pimenta 2168 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1105 pimenta|gbl57,2|BM0 66627 pimenta 2169 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1106 mirta|gbl64|EG 556977 mirta 2170 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 88,7 blastp

1107 mirta|gbl64|EG 557933 mirta 2171 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp physcomitrella|gb 15 physcomitre 1108 2172 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 89,4 tblast n 7|AW127039 Ha physcomitrella|gb 15 physcomitre 1109 2173 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 88,7 blastp 7|BQ827306 Ha

1110 pinheiro|gbl57,2|AW010 184 pinheiro 2174 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1111 pinheiro|gbl57,2|BX248 872 pinheiro 2175 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp

Continuação da Tabela 21

1112 pinheiro|gbl57,2|BX251 919 pinheiro 2176 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1113 pinheiro|gbl57,2|DR102 094 pinheiro 2177 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 82,1 blastp

1114 pinheiro|gbl57,2|H75266 pinheiro 2178 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1115 álamo|gbl70|AI1624 68 álamo 2179 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 96 blastp

1116 álamo|gbl70|AI1631 54 álamo 2180 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp

1117 álamo|gbl70|AI1646 14 álamo 2181 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 94 blastp

1118 álamo|gbl70|AI1647 59 álamo 2182 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 94,7 blastp

1119 papoula|gbl66|FE9645 30 papoula 2183 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,1 blastp papoula|gbl66|FE9656 1120 papoula 2184 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp 52

1121 batata|gbl57,2|AW9 06248 batata 2185 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1122 batata|gbl57,2|BF45 9889 batata 2186 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,1 blastp

1123 batata|gbl57,2|BG35 0431 batata 2187 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,1 blastp

1124 batata|gbl57,2|BG35 1012 batata 2188 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,1 blastp

1125 batata|gbl57,2|BG35 1586 batata 2189 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,05 tblast n

1126 prunus|gbl67|BQ641 170 prunus 2190 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1127 prunus|gbl67|BU040 848 prunus 2191 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp pseudoroegneria gb 1 pseudoroeg 1128 2192 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 97,4 blastp 67|FF343278 neria pseudoroegneria gb 1 pseudoroeg 1129 2193 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 96 blastp 67|FF349878 neria

1130 rabanete|gbl64|EV527 917 rabanete 2194 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1131 rabanete|gbl64|EV528 399 rabanete 2195 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,1 blastp

1132 rabanete|gbl64|EV535 656 rabanete 2196 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1133 rabanete|gbl64|EV535 984 rabanete 2197 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1134 rabanete|gbl64|EV538 012 rabanete 2198 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1135 rabanete|gbl64|EV543 948 rabanete 2199 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1136 rabanete|gbl64|EV544 942 rabanete 2200 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1137 rabanete|gbl64|EV545 164 rabanete 2201 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1138 rabanete|gbl64|EV565 378 rabanete 2202 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,05 tblast n

Continuação da Tabela 21

1139 rabanete|gbl64|EV565 564 rabanete 2203 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1140 rabanete|gbl64|EV565 962 rabanete 2204 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp rabanete|gbl64|EV569 1141 rabanete 2205 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp 172

1142 rabanete|gbl64|EV571 678 rabanete 2206 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1143 rabanete|gbl64|EW714 068 rabanete 2207 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1144 rabanete|gbl64|EW715 107 rabanete 2208 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1145 rabanete|gbl64|EW715 768 rabanete 2209 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1146 rabanete|gbl64|EX755 320 rabanete 2210 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,1 blastp

1147 rabanete|gbl64|EX762 413 rabanete 2211 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1148 rabanete|gbl64|EX762 524 rabanete 2212 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,1 blastp

1149 rabanete|gbl64|EX762 893 rabanete 2213 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1150 rabanete|gbl64|EY902 515 rabanete 2214 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,1 blastp

1151 rabanete|gbl64|EY916 898 rabanete 2215 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1152 rabanete|gbl64|T25179 rabanete 2216 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1153 arroz|gbl70|OS02G06 700 arroz 2217 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 98 blastp

1154 rosa|gbl57,2|EC5860 94 rosa 2218 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,1 blastp

1155 centeio|gbl64|BE494213 centeio 2219 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 96,69 tblast n

1156 safflower|gbl62|EL4 01182 safflower 2220 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 90,7 blastp

1157 safflower|gbl62|EL4 03588 safflower 2221 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 90,1 blastp

1158 safflower|gbl62|EL4 08982 safflower 2222 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 86,09 tblast n

1159 senecio|gbl70|DY66 3041 senecio 2223 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 88,7 blastp

1160 sorgo gb 161 ,crp AW120027 sorgo 2224 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 98,7 blastp

1161 sorgo gb 161 ,crp B E238630 sorgo 2225 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 98,7 blastp

1162 sorgo gb 161 ,crp B E367365 sorgo 2226 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 98,7 blastp

1163 soja|gbl68|AI96 7817 soja 2227 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,1 blastp

1164 soja|gbl68|AJ38 8676 soja 2228 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,1 blastp

1165 soja|gbl68|AW3 49445 soja 2229 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp

Continuação da Tabela 21

1166 spikemoss |gbl65|DN 837720 spikemoss 2230 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 87,4 blastp

1167 spikemoss gbl65 FE 450939 spikemoss 2231 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 87,4 blastp

1168 abeto|gbl62|C0216 116 abeto 2232 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,1 blastp

1169 abeto|gbl62|C0227 952 abeto 2233 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,1 blastp

1170 abeto|gbl62|DR449 297 abeto 2234 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 84,8 blastp

1171 abeto|gbl62|DR449 808 abeto 2235 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 82,1 blastp

1172 abeto|gbl62|DR474 303 abeto 2236 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 80,8 blastp

1173 abeto|gbl62|DR534 167 abeto 2237 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 82,1 blastp

1174 abeto|gbl62|DR579 185 abeto 2238 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 80,8 blastp

1175 Euphorbia|gbl61|BE095 303 Euphorbia 2239 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,72 tblast n

1176 Euphorbia|gbl61|DV124 297 Euphorbia 2240 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp

1177 morango gbl 64 CO 380977 morango 2241 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,1 blastp

1178 morango gbl64 CO 817246 morango 2242 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp

1179 morango|gb 164|EX 670929 morango 2243 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 85,5 blastp cana de açucar gbl57,3 B cana de 1180 2244 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 97,35 tblast n Q529920 açucar cana de açucar gbl57,3 B cana de 1181 2245 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 98,7 blastp Q533000 açucar cana de açucar gbl57,3 C cana de 1182 2246 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 97,4 blastp A076561 açucar cana de açucar gbl57,3 C cana de 1183 2247 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 96,03 tblast n A102375 açucar cana de açucar gbl57,3 C cana de 1184 2248 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 96 blastp A123229 açucar cana de açucar gbl57,3 C cana de 1185 2249 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 98,7 blastp A137141 açucar cana de açucar gbl57,3 C cana de 1186 2250 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,72 tblast n A230074 açucar

1187 girassol gb 162 AJ3 18263 girassol 2251 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 90,1 blastp

1188 girassol gb 162 CD 848093 girassol 2252 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp

1189 girassol gb 162 CD 848805 girassol 2253 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 90,1 blastp

1190 girassol gb 162 EL4 30967 girassol 2254 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 82,8 blastp

Panicum virgatum gbl67D Panicum 1191 2255 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 96,7 blastp N149917 virgatum Panicum virgatum gbl 67D Panicum 1192 2256 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 98,7 blastp N150990 virgatum

Continuação da Tabela 21

Panicum virgatum gb 167 F Panicum 1193 2257 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 96 blastp E599497 virgatum Panicum virgatum gbl67 F Panicum 1194 2258 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 96,7 blastp E608350 virgatum Panicum virgatum gbl67 F Panicum 1195 2259 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 80,13 tblast n E625398 virgatum Panicum virgatum gbl67 F Panicum 1196 2260 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 98,7 blastp E627660 virgatum Panicum virgatum gbl67 F Panicum 1197 2261 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 98 blastp E634044 virgatum Panicum virgatum gbl67 F Panicum 1198 2262 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 97,4 blastp E637032 virgatum Panicum virgatum gbl67 F Panicum 1199 2263 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 82,12 tblast n L948269 virgatum Panicum virgatum gbl67 G Panicum 1200 2264 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 80,13 tblast n D043911 virgatum

1201 tamarix | gb 16 61EG9 6 6933 tamarix 2265 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp

1202 tamarix | gb 16 61EG9 7 2900 tamarix 2266 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 82,8 blastp thellungiella|gbl67|B 1203 thellungiell a 2267 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 94 blastp Y818453 thellungiella|gbl67|D 1204 thellungiell a 2268 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 94 blastp N775374

1205 tabaco|gbl62|AM81 6373 tobáceo 2269 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 81,5 blastp

1206 tabaco|gbl62|CN49 8843 tobáceo 2270 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 82,2 blastp

1207 tabaco|gbl62|CV01 9114 tobáceo 2271 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp

1208 tabaco|gbl62|CV02 0233 tobáceo 2272 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp

1209 tabaco|gbl62|CV02 1807 tobáceo 2273 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1210 tabaco|gbl62|NTU6 6262 tobáceo 2274 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 90,7 blastp

1211 tomate|gbl64|BG123 159 tomate 2275 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,1 blastp

1212 tomate|gbl64|BG123 562 tomate 2276 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1213 tomate|gbl64|U2107 8 tomate 2277 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1214 triphysaria|gbl 64|B M357412 triphysaria 2278 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,7 blastp

1215 triphysaria|gb 164|EX 988766 triphysaria 2279 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp

1216 triphysaria|gb 164|EX 990185 triphysaria 2280 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp

1217 triphysaria|gb 164|EX 992752 triphysaria 2281 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp

1218 volvox|gbl62|AW67 6072 volvox 2282 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 85 blastp

1219 nozes|gbl66|CV19 7623 nozes 2283 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 92,1 blastp

Continuação da Tabela 21

1220 nozes|gbl66|EL89 1118 nozes 2284 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 94,7 blastp trigo|gbl64|AL8271 1221 trigo 2285 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 97,4 blastp 37 trigo|gbl64|BE3986 1222 trigo 2286 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 96 blastp 47 trigo|gbl64|BE3989 1223 trigo 2287 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 97,4 blastp 57

1224 trigo|gbl64|BE4053 21 trigo 2288 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 96 blastp

1225 trigo|gbl64|BE4067 89 trigo 2289 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 95,4 blastp

1226 trigo|gbl64|BJ2409 69 trigo 2290 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 80,79 tblast n

1227 trigo|gbl64|BM135 152 trigo 2291 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 82,9 blastp

1228 trigo|gbl64|CA616 908 trigo 2292 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 94,7 tblast n

1229 trigo|gbl64|CJ6525 04 trigo 2293 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 93,4 blastp

1230 trigo|gbl64|DN829 631 trigo 2294 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 80,92 tblast n

1231 zamia|gbl66|DY032 098 zamia 2295 234 arroz|gbl57,2|BE0 39784 91,4 blastp

1232 cevada|gbl57,3|BE41 2461 cevada 2296 236 milhogbl64 AI6 19269 87,9 blastp brachypodium gb 169 brachypodi 1233 2297 236 milhogbl64 AI6 19269 86,4 blastp |BE404324 um

1234 cenchrus | gb 16 61EB 6 53779 cenchrus 2298 236 milhogbl64 AI6 19269 94,8 blastp galho|gbl61|DT696 1235 galho 2299 236 milhogbl64 AI6 19269 85,6 blastp 747

1236 leymus|gbl66|EG375 640 leymus 2300 236 milhogbl64 AI6 19269 88,8 blastp

1237 lovegrass gb 167 EH1 89611 lovegrass 2301 236 milho|gbl64|AI6 19269 92 blastp

1238 milho|gbl70|AI9443 07 milho 2302 236 milho|gbl64|AI6 19269 94,4 blastp

1239 oat|gbl64|BE439172 oat 2303 236 milho|gbl64|AI6 19269 85,58 tblast n pseudoroegneria gb 1 pseudoroeg 1240 2304 236 milho|gbl64|AI6 19269 88,4 blastp 67|FF354244 neria

1241 arroz|gbl70|OS02G53 790 arroz 2305 236 milho|gbl64|AI6 19269 89,3 blastp

1242 arroz|gbl70|OS07G43 170 arroz 2306 236 milho|gbl64|AI6 19269 90,1 blastp

1243 sorgo gb 161 ,crp AW011679 sorgo 2307 236 milho|gbl64|AI6 19269 95,8 blastp

1244 sorgo gb 161 ,crp C D231888 sorgo 2308 236 milho|gbl64|AI6 19269 90,6 blastp cana de açucar gbl57,3 C cana de 1245 2309 236 milho|gbl64|AI6 19269 95,3 blastp A072943 açucar cana de açucar gbl57,3 C cana de 1246 2310 236 milho|gbl64|AI6 19269 95,8 blastp A090072 açucar

Continuação da Tabela 21

Panicum virgatum gbl67D Panicum 1247 2311 236 milho|gbl64|AI6 19269 92,5 blastp N145249 virgatum Panicum virgatum gb 167 F Panicum 1248 2312 236 milho|gbl64|AI6 19269 93,4 blastp E626130 virgatum arabidopsis gbl65 A arabidopsis gbl5 1249 arabidopsis 2313 237 83,3 blastp T3G01300 7,2|AT5G15080 arabidopsis gbl5 1250 b rapa|gbl62|CA992 096 b rapa 2314 237 82,5 blastp 7,2|AT5G15080 arabidopsis gbl5 1251 canola|gbl61|EE473 973 cañóla 2315 237 82,3 blastp 7,2|AT5G15080 arabidopsis gbl65 A 1252 arabidopsis 2316 239 arabidopsis gbl6 5|AT1G60680 84,1 blastp T1G60690 arabidopsis gbl65 A 1253 arabidopsis 2317 239 arabidopsis gbl6 5|AT1G60680 83,2 blastp T1G60710 arabidopsis gbl65 A 1254 arabidopsis 2318 239 arabidopsis gbl6 5|AT1G60680 84,44 tblast n T1G60730

1255 b rapa|gbl62|ES935 213 b rapa 2319 239 arabidopsis gbl6 5|AT1G60680 82,1 blastp

1256 canola|gbl61|CD815 566 cañóla 2320 239 arabidopsis gbl6 5|AT1G60680 80,6 blastp

1257 canola|gbl61|CD819 004 cañóla 2321 239 arabidopsis gbl6 5|AT1G60680 81,5 blastp

1258 canola|gbl61|DY003 163 cañóla 2322 239 arabidopsis gbl6 5|AT1G60680 81,8 blastp

1259 rabanete|gbl64|EV524 749 rabanete 2323 239 arabidopsis gbl6 5|AT1G60680 81,6 blastp

1260 rabanete|gbl64|EV544 729 rabanete 2324 239 arabidopsis gbl6 5|AT1G60680 81,8 blastp

1261 b rapa|gbl62|EX018 587 b rapa 2325 242 arabidopsis gbl6 5|AT1G43910 85,3 blastp

1262 canola|gbl61|EE452 442 cañóla 2326 242 arabidopsis gbl6 5|AT1G43910 91,5 blastp arabidopsis gbl5 1263 rabanete|gbl64|EX749 875 rabanete 2327 243 91,94 tblast n 7,2|AT1G47530 arabidopsis gbl65 A 1264 arabidopsis 2328 244 arabidopsis gbl5 7,2|AT2G24240 88,3 blastp T4G30940

1265 mamona|gbl60|EG 675736 mamona 2329 244 arabidopsis gbl57,2|AT2G24240 83,6 blastp

1266 algodão|gbl64|C0495 384 algodão 2330 244 arabidopsis gbl57,2|AT2G24240 83,3 blastp nicotiana benthamia nicotiana b 1267 2331 244 arabidopsis gbl57,2|AT2G24240 80,1 blastp na|gbl62|CK280239 enthamiana

1268 álamo|gbl70|CA822 859 álamo 2332 244 arabidopsis gbl57,2|AT2G24240 81,2 blastp

1269 álamo|gbl70|CV237 453 álamo 2333 244 arabidopsis gbl57,2|AT2G24240 81,8 blastp

1270 batata|gbl57,2|CK24 3505 batata 2334 244 arabidopsis gbl57,2|AT2G24240 83,1 blastp

1271 soja|gbl68|AW5 86330 soja 2335 244 arabidopsis gbl57,2|AT2G24240 80,3 blastp

1272 soja|gbl68|BP07 3481 soja 2336 244 arabidopsis gbl57,2|AT2G24240 80,4 blastp

1273 cevada|gbl57,3|AL50 2083 cevada 2337 246 arroz|gbl57,2|BI8 07603 89,93 tblast n

Continuação da Tabela 21 brachypodium gb 169 brachypodi 1274 2338 246 arroz|gbl57,2|BI8 07603 90,3 blastp |BE471061 um

1275 milho|gbl70|AW066 842 milho 2339 246 arroz|gbl57,2|BI8 07603 88,1 blastp

1276 milho|gbl70|CF0214 66 milho 2340 246 arroz|gbl57,2|BI8 07603 81 blastp

1277 milho|gbl70|LLCD9 75615 milho 2341 246 arroz|gbl57,2|BI8 07603 88,8 blastp

1278 milho|gbl70|T12700 milho 2342 246 arroz|gbl57,2|BI8 07603 91,8 blastp

1279 sorgo gb 161 ,crp AW066842 sorgo 2343 246 arroz|gbl57,2|BI8 07603 92,9 blastp

1280 sorgo gb 161 ,crp AW747438 sorgo 2344 246 arroz|gbl57,2|BI8 07603 82,1 blastp cana de açucar gbl57,3 B cana de 1281 2345 246 arroz|gbl57,2|BI8 07603 88,27 tblast n U925651 açucar Panicum virgatum gb 167 F Panicum 1282 2346 246 arroz|gbl57,2|BI8 07603 91,8 blastp L745129 virgatum

1283 trigo|gbl64|BE4710 61 trigo 2347 246 arroz|gbl57,2|BI8 07603 89,7 blastp

1284 arroz|gbl70|OS01G09 340 arroz 2348 247 arroz|gbl57,2|AU 068829 86,29 tblast n brachypodium gb 169 brachypodi 1285 2349 248 arroz|gbl57,2|AA 752451 86,7 blastp |AV835247 um

1286 milho|gbl70|BG835 950 milho 2350 248 arroz|gbl57,2|AA 752451 80,7 blastp

1287 sorgo gb 161 ,crp B E598733 sorgo 2351 248 arroz|gbl57,2|AA 752451 81,4 blastp cana de açucar gbl57,3 C cana de 1288 2352 248 arroz|gbl57,2|AA 752451 84,5 blastp A101548 açucar Panicum virgatum gb 167 F Panicum 1289 2353 248 arroz|gbl57,2|AA 752451 88,9 blastp E639520 virgatum

1290 cevada|gbl57,3|AL51 1842 cevada 2354 250 trigo|gbl64|BE 401454 98,4 blastp brachypodium gb 169 brachypodi 1291 2355 250 trigo|gbl64|BE 401454 93,4 blastp |BE488258 um

1292 galho|gbl61|DT699 211 galho 2356 250 trigo|gbl64|BE 401454 90,2 blastp leymus|gbl66|CD80 1293 leymus 2357 250 trigo|gbl64|BE 401454 97,6 blastp 8752 pseudoroegneria gb 1 pseudoroeg 1294 2358 250 trigo|gbl64|BE 401454 99,2 blastp 67|FF347865 neria

1295 arroz|gbl70|OS08G45 190 arroz 2359 250 trigo|gbl64|BE 401454 81,9 blastp

1296 sorgo gb 161 ,crp AW287236 sorgo 2360 250 trigo|gbl64|BE 401454 83,7 blastp

1297 trigo|gbl64|BE4881 91 trigo 2361 250 trigo|gbl64|BE 401454 99,2 blastp arabidopsis gbl65 A 1298 arabidopsis 2362 251 arabidopsis gbl6 5|AT1G70850 85,4 blastp T1G70830 arabidopsis gb 165 A 1299 arabidopsis 2363 251 arabidopsis gbl6 5|AT1G70850 88,24 tblast n T1G70830T4

1300 cevada|gbl57,3|BE42 0890 cevada 2364 254 sorgo gbl61,x eno|T18303 81,5 blastp

Continuação da Tabela 21 brachypodium gb 169 brachypodi 1301 2365 254 sorgo gbl61,x eno|T18303 83 blastp |BE401954 um

1302 cenchrus | gb 16 61EB 6 56949 cenchrus 2366 254 sorgo gbl61,x eno|T18303 89,1 blastp

1303 galho|gbl61|DT686 385 galho 2367 254 sorgo gbl61,x eno|T18303 80,1 blastp

1304 leymus|gbl66|CN46 6500 leymus 2368 254 sorgo gbl61,x eno|T18303 82,2 blastp

1305 milho|gbl70|AF0935 38 milho 2369 254 sorgo gbl61,x eno|T18303 91,3 blastp

1306 milho|gbl70|T18303 milho 2370 254 sorgo gbl61,x eno|T18303 94,9 blastp pseudoroegneria gb 1 pseudoroeg 1307 2371 254 sorgo gbl61,x eno|T18303 81,2 blastp 67|FF348742 neria

1308 arroz|gbl70|OS09G19 734T3 arroz 2372 254 sorgo gbl61,x eno|T18303 83,7 blastp cana de açucar gbl57,3 B cana de 1309 2373 254 sorgo gbl61,x eno|T18303 97,5 blastp Q533149 açucar Panicum virgatum |gbl67|D Panicum 1310 2374 254 sorgo gbl61,x eno|T18303 89,1 blastp N141290 virgatum Panicum virgatum |gbl67|D Panicum 1311 2375 254 sorgo gbl61,x eno|T18303 89,5 blastp N141310 virgatum

1312 trigo|gbl64|BE4061 44 trigo 2376 254 sorgo gbl61,x eno|T18303 81,5 blastp

1313 trigo|gbl64|BF2005 48 trigo 2377 254 sorgo gbl61,x eno|T18303 81,9 blastp

1314 trigo|gbl64|X77733 trigo 2378 254 sorgo gbl61,x eno|T18303 81,2 blastp

1315 milho|gbl70|CD936 650 milho 2379 269 sorgo gbl61,x eno|AW923465 89,12 tblast n

1315 milho|gbl70|CD936 650 milho 2379 256 sorgo gbl6l,c rp|AW923545 88,85 tblast n aquilegia gbl57,3 D 1316 aquilegia 2380 257 arabidopsis gbl6 5|AT1G71900 81,1 blastp R915439 arabidopsis gbl65 A 1317 arabidopsis 2381 257 arabidopsis gbl6 5|AT1G71900 80,11 tblast n T1G34470 mamona|gbl60|EE 1318 mamona 2382 257 arabidopsis gbl6 5|AT1G71900 81 blastp 258327 mamona|gbl60|M 1319 mamona 2383 257 arabidopsis gbl6 5|AT1G71900 81,56 tblast n DL29728M000834

1320 uva|gbl60|CB0357 95 uva 2384 257 arabidopsis gbl6 5|AT1G71900 82,4 blastp

1321 rabanete|gbl64|EW714 634 rabanete 2385 257 arabidopsis gbl6 5|AT1G71900 89,74 tblast n

1322 milho|gbl70|CF0218 16 milho 2386 259 sorgo gbl61,x eno|AW672541 88,3 blastp

1323 milho|gbl70|CO527 882 milho 2387 259 sorgo gbl61,x eno|AW672541 85 blastp

Panicum virgatum gbl 67 F Panicum 1324 2388 259 sorgo gbl61,x eno|AW672541 85,4 blastp E626524 virgatum cana de açucar gbl57,3 C cana de 1325 2389 262 sorgo gbl61,x eno|BE123399 89,08 tblast n A069240 açucar cana de açucar gbl57,3 C cana de 1326 2390 262 sorgo gbl61,x eno|BE123399 88,4 blastp A078694 açucar

Continuação da Tabela 21 milho|gbl70|AI9015 1327 milho 2391 263 sorgo gbl61,x eno|AI901557 86,2 blastp 57 1328 sorgo gb 161 ,crp AW286491 sorgo 2392 263 sorgo gbl61,x eno|AI901557 98,5 blastp cana de açucar gbl57,3 C cana de 1329 2393 263 sorgo gbl61,x eno|AI901557 93,9 blastp A068682 açucar Panicum virgatum gbl 67D Panicum 1330 2394 263 sorgo gbl61,x eno|AI901557 83,6 blastp N146139 virgatum Panicum virgatum gbl67 F Panicum 1331 2395 263 sorgo gbl61,x eno|AI901557 82,7 blastp E604486 virgatum 1332 milho|gbl70|CD945 482 milho 2396 265 milho|gbl64|AI9 74922 81,53 tblast n 1333 sorgo gb 161 ,crp B E599314 sorgo 2397 265 milho|gbl64|AI9 74922 80,49 tblast n Tabela 21: São fornecidos os polipeptídeos (polypep.) e polinucleotídeos (polynucl.) dos genes e polipeptídeos identificados na Tabela 20, que são capazes de aumentar a eficiência do uso de nitrogênio, eficiência de uso de 5 fertilizantes, produtividade, taxa de crescimento, vigor, biomassa, teor de óleo, a tolerância a estresse abiótico e / ou eficiência do uso da água de uma planta. A homologia foi calculada como % de identidade sobre as sequências alinhadas. As sequências de consulta foram sequências de polipeptídeo SEQ ID NOs: 138-269 e as sequências sujeitas são sequências de polipeptídicas ou sequências de nucleotídeos, que foram traduzidos de forma dinâmica em todos os seis quadros de leitura identificados no banco de dados baseado em mais de 80% de identidade com as sequências de consulta de polipeptídeos.

EXEMPLO 3

GERAÇÃO E CLONAGEM DE GENES DE VETORES BINÁRIOS PARA

EXPRESSÃO EM PLANTAS Estratégia de clonagem Os genes apresentados nos exemplos 1 e 2 acima foram clonados em vetores binários para a geração de plantas transgênicas. Para a clonagem, a fase de leitura aberta inteira (ORF) foi identificada pela primeira vez. Grupos de ESTs, e em alguns casos, sequências 5 de mRNA foram analisados para identificar a fase de leitura aberta toda de cada gene, comparando os resultados dos diversos algoritmos de tradução para proteínas conhecidas de outras espécies de plantas.

A fim de clonar a totalidade de cDNA’s, uma Transcrição Reversa seguida de PCR (RT-PCR) foi realizada no total de RNA extraído de folhas, fibras ou outros tecidos da planta, crescendo em condições normais, com deficiência de nutrientes ou outras condições de estresse abiótico. A extração total de RNA, produção de cDNA e amplificação de PCR foram realizados utilizando protocolos padrões descritos em outros lugares (Sambrook J., E.F.

Fritsch, e T. Maniatis. 1989. Molecular Cloning. A Laboratory Manual., 2nd Ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York.), que são bem conhecidos por aqueles especialistas na arte. Os produtos PCR foram purificados utilizando um kit de purificação PCR (Qiagen) e o sequenciamento dos produtos PCR amplificados foi realizado, utilizando o sequenciador ABI 377 (Applied Biosystems). Em caso em que nenhuma faixa ou faixas de produtos PCR fracas foram visíveis no Brometo de Etídio – gel de agarose 1% corados, 0,1 – 1 |u,L do produto PCR foi utilizado como uma amostra de DNA e a amplificação de PCR foi efetuada utilizando o mesmo ou novos conjuntos de iniciadores,

projetados internamente para o primeiro conjuntos de iniciadores. Em tais casos, o conjunto de iniciadores do qual se espera produzir os produtos PCR mais longos é designado Conjunto de iniciadores externos (EF e ER para 5 Externo-Avançado e Externo-Reverso, respectivamente) e o conjunto de iniciadores do qual se espera produzir os produtos PCR mais curtos é designado Conjunto de iniciadores agrupados (NF e NR para Agrupado-Avançado e Agruapado- Reverso, respectivamente, conforme ilustrado na Tabela 22 abaixo. A clonagem de genes de algodão CT75, CT7, CT76, CT71, CT74, CT11, CT20, CT81, CT22, CT82, CT3, CT40, CT1, CT6, CT27 e CT2 foi realizada utilizando apenas um conjunto de iniciadores, conforme detalhado na Publicação WO Nº: W02005/121364.

Para facilitar a clonagem de cDNA’s, uma extensão bp 7-12 foi adicionada aos 5’ primeiros finais da maioria dos iniciadores. A extensão do iniciador inclui um local de restrição de endonuclease (Tabela 22). Os locais de restrição foram selecionados utilizando dois parâmetros: (a). O local não existe na sequência de cDNA; e (b). Os locais de restrição nos iniciadores avançados e reversos são projetados de tal modo que o cDNA digerido é inserido na formação de sentido no vetor binário utilizado na transformação. A tabela 22, abaixo, fornece a designação dos iniciadores, os locais de restrição da endonuclease adicionados à clonagem subsequente e as sequências de cada iniciador utilizado na amplificação dos genes das mesmas configurações da invenção.

Tabela 22 Iniciadores PCR utilizados na clonagem e na seleção dos clones positivos

SEQ SEQ Identificação Enz. Iniciadores de Clonagem ID Iniciadores de Seleção ID Pías. dos Genes NO: NO: NUE22 TTAGTCGACAG

GCTATGACCAT NUE227 SalI. 7 EF S AGAAGAGGCAA 2564 101-F 2860 pGXN

GATTACGCC all GAACAACTAG NUE22 TATCTAGACGAT Xbal 7 ER CGGTGTCCACTG 2565 Xbal TACAG NUE22 TTAGTCGACACT 7 NF S AGCTGCATGGC 2566 all AATGG NUE22 TTAGTCGACACT NUE22 TATCTAGATTA 7 NR AGCTGCATGGC 2567 7 NR ACGCGTTGATC 2861 Xbal AATGG Xbal GATCAGC NUE23 TTAGTCGACCTC pKsJ or NUE233 SalI. 3 EF S GAAATCCTTCCC 2568 Topo all AAGAC NUE23 TATCTAGAGTCA Xbal 3 ER CAGAATAGTAC 2569 Xbal ACGTACACAAC NUE23 TTAGTCGACCGC 3 NF S ACGCTTCTCCAT 2570 all TTC NUE23 TATCTAGATCAA 3 NR ACTAAGTACTCC 2571 Xbal AGTAACAAC NUE23 AAAGTCGACCC

GGAGAGGACA NUE237 SalI. 7 EF S TCTCTCTCGTTT 2572 35S_1F 2862 pGXN

GGCTTCTTGAG all CGATTCC NUE23 ATTCTAGATCAA NUE23 ACTCTAGAACT Xbal 7 ER CCACATAGCCT 2573 7 NR CTATTAACAAT 2863 Xbal AGAGCAC Xbal GCACGGAG NUE23 AAAGTCGACAG 7 NF S ATTCGATCCAAC 2574 all CAAACC NUE23 ACTCTAGAACTC 7 NR TATTAACAATGC 2575 Xbal ACGGAG NUE24 AAAGTCGACAA

GGAGAGGACA NUE241 SalI. 1 EF S TTCTTCTTTGTT 2576 35S_1F 2864 pGXN

GGCTTCTTGAG all TGCTTGC ATTCTAGATAA NUE24 ATTCTAGATCA NUE24 1 Xbal ATGCTGATATA 2577 1 NR CAATAGAAAC 2865 ER Xbal GGACAAAGC Xbal ATCCTCCCTC NUE24 AAAGTCGACGA 1 NF S AGAAAACCCAC 2578 all AAAACCAG NUE24 ATTCTAGATCAC 1 NR AATAGAAACAT 2579 Xbal CCTCCCTC

Continuação da Tabela 22 NUE24 TATCTAGAGAG p35S F GGACAGGCTT NUE242 Xbal. 2 EF X AAGAGAGAGAC 2580 2866 pGXN 2 CTTGAGATCCT bal TTTGAAGATG

TGAGCTCTTAT NUE24 TGAGCTCTTAAG NUE24

TAGGAAGCAA Sacl 2ERS AGTAGACACAA 2581 2_NR_S 2867

CTTCAAGAAAT acl CTCCTGCG acl

G NUE24 TTAGTCGACTGA SalI. 2 NF S AGATGGAAGCA 2582 all AACTCTAAC NUE24 TGAGCTCTTATT Sacl 2_NR_S AGGAAGCAACT 2583 acl TCAAGAAATG NUE25 ATGATATCCCTC p35S F GGACAGGCTT NUE255 EcoR V 5 EF E CAACCTCTCTCC 2584 2868 Topo 2 CTTGAGATCCT coRV CAAC NUE25 TAGATATCGATT TAGATATCTCA NUE25 5 5 ER E GCTTCTTGTACT 2585 TCATTTGATCA 2869 NR EcoRV coRV CTGATCATC GCTTTAGCG NUE25 ATGATATCCAA 5 NF E GAATTAAGGTG 2586 coRV TAGCAACC

TAGATATCTCAT NUE25 5 CATTTGATCAGC 2587 NR EcoRV

TTTAGCG NUE26 TATGTCGACAC

GGAGAGGACA NUE269 SalI. 9 NF S AAGGAAATGAT 2588 35S_1F 2870 pGXN

GGCTTCTTGAG all GGCTATTG NUE26 TATCTAGACACC NUE26 TATCTAGACAC Xbal 9 NR ACAACATGATA 2589 9 NR CACAACATGA 2871 Xbal GCTTTTG Xbal TAGCTTTTG NUE52 AAGGTCGACCT p35S F GGACAGGCTT NUE521 Sal. INF GGGAGCTAGCT 2590 2872 pGXN 2 CTTGAGATCCT Sal TTGGAG

ACTCTAGATCAC CGTCTAGATCA NUE52 1ER NUE52 1NR Xba ACCGATTCCAC 2591 GATCGTGTTGA 2873 Xba Xba

ACATAAC GCACTTGAGC NUE52 AAGGTCGACCT INF GGGAGCTAGCT 2592 Sal TTGGAG

CGTCTAGATCA NUE52 1NR GATCGTGTTGA 2593 Xba

GCACTTGAGC NUE55 TCCCGGGCTCCG

GGAGAGGACA NUE554 Smal. 4_EF_S TCTCTAGGGTTT 2594 35S_1F 2874 pGXN

GGCTTCTTGAG mal GAG NUE55 TGAGCTCTCAGT NUE55 TGAGCTCTCAG Sacl 4ERS GATTGGAACTCT 2595 4ERS TGATTGGAACT 2875 acl AGATCTTG acl CTAGATCTTG NUE56 TATCTAGACTTG

GGAGAGGACA NUE562 Xbal. 2 EF X AGCTAGGGTTTT 2596 35S_1F 2876 pGXN

GGCTTCTTGAG bal ATCGC NUE56 TGAGCTCTTAAT NUE56 TGAGCTCTTAT Sacl 2ERS GCAGACGGTAA 2597 2_NR_S GAAGATTACA 2877 acl CATCTAGG acl GCCTCCTACC

Continuação da Tabela 22

TATCTAGAAAC NUE56 AATGTCCGGGA 2598 2 NF Xbal

GGAAGAAGAC NUE56 TGAGCTCTTATG 2_NR_S AAGATTACAGC 2599 acl CTCCTACC NUE56 AGAGTCGACGT

GGAGAGGACA NUE567 Sal. 7 EF S GACATAAAATC 2600 35S_1F 2878 pGXN

GGCTTCTTGAG al CATGGCTG NUE56 TATCTAGATCAG ACCTCTAGATC NUE56 Xba 7 ER CTTACACAAGC 2601 ATTAAGTGGCT 2879 7NR Xba Xba CCTTAGCA TTCCAGGAAG

GAGGTCGACAA NUE56 TCCATGGCTGA 2602 7 NF Sal

AGCTTG

ACCTCTAGATCA NUE56 TTAAGTGGCTTT 2603 7NR Xba

CCAGGAAG

AGAGTCGACCG NUE56 8 EF GGAGAGGACA NUE568 Sal. CAACGGAAAAC 2604 35S_1F 2880 pGXN Sal GGCTTCTTGAG

AAATC TATCTAGATCA

TATCTAGAAGA NUE56 8ER NUE56 8NR TGTTCACTGAG Xba TAGGCTTATCTC 2605 2881 Xba Xba TAACGATACTA

AATGGCT ACAG

TAGGTCGACAC NUE56 AAATCCGCCAA 2606 8NF Sal

TGGAAG

TATCTAGATCAT NUE56 8NR GTTCACTGAGTA 2607 Xba ACGATACTAAC

AG NUE TAGGTCGACGA

GGAGAGGACA NUE573 Sal. 573 EF GAGAAATCCAT 2608 35S_1F 2882 pKsJ

GGCTTCTTGAG Sal GGAGACG NUE57 CGAGCTCAATTT NUE57 CGAGCTCTCAG Sac 3ER CAGTACAGGAT 2609 3NR TACAGGATTTA 2883 Sac TTAAACC Sac AACCAAGACA

ACCCGGGAGAC NUE57 Sma. GATGACGATGA 2610 3_NF Sma

AGGTTG NUE57 CGAGCTCTCAGT Sac 3NR ACAGGATTTAA 2611 Sac ACCAAGACA NUE57 AAGATATCCCA NUE57 AAGATATCCC NUE575 EcoR V 5 NF E AACACCAAACC 2612 5 NF E AAACACCAAA 2884 pKsJ coRV CTCG coRV CCCTCG

TAGATATCTCAT NUE57 5 AAGTTGGGTA CATATTCCTAGC 2613 101R 2885 NR EcoRV ACGCCAGGGT

TTATCAACCTC NUE58 AAAGTCGACCG

GGAGAGGACA NUE585 SalI. 5 EF S ATTTCTGCTTCG 2614 35S_1F 2886 pGXN

GGCTTCTTGAG all ATCTCTAC

Continuação da Tabela 22 NUE58 ATTCTAGACCTT NUE58 ATTCTAGATTA Xbal 5 ER CTTCGATCTTCT 2615 5 NR GTTTGCAGTTA 2887 Xbal TGAACC Xbal TCGCAGTGG NUE58 AAAGTCGACGT 5 NF S CTGGGTCGAAG 2616 all TTAAATAGG NUE58 ATTCTAGATTAG 5 NR TTTGCAGTTATC 2617 Xbal GCAGTGG NUE58 AAAGTCGACGT

GGAGAGGACA NUE587 SalI. 7 EF S TCCATTGGAGG 2618 35S_1F 2888 pGXN

GGCTTCTTGAG all AGAATCG

ATTCTAGATTA NUE58 ATTCTAGATTCA NUE58

TTTCAAACATG Xbal 7 ER AAAGGAAAATG 2619 7 NR 2889

AAATGAGTTG Xbal GAGAGG Xbal

C NUE58 AAAGTCGACAA 7 NF S AGGCTTGGAAA 2620 all GGAAGG NUE58 ATTCTAGATTAT 7 NR TTCAAACATGA 2621 Xbal AATGAGTTGC NUE52 AGAGCTCAACC

GCTATGACCAT NUE528 Sac 8_EF_S CTAACGTTTCGA 2622 101F 2890 pGXN

GATTACGCC ac TCG NUE52 TGAGCTCTTCCA NUE52 TGAGCTCTGGC SalI. 8ERS GAAGTAGCATC 2623 8_NR_S CTTCACCCTCT 2891 ac TTTCG ac ATATCTC NUE52 AATGTCGACGA 8 NF S AGCGTCTGAGC 2624 all CAGTCC NUE52 TGAGCTCTGGCC 8_NR_S TTCACCCTCTAT 2625 ac ATCTC NUE53 ATTGTCGACGA

GCTATGACCAT NUE535 Sal. 5 NF S GTATGCTTTCCG 2626 101F 2892 pGXN

GATTACGCC al ATGGG NUE53 TTTCTAGACTAT NUE53 TTTCTAGACTA Xbal 5 NR GAATGAATCCG 2627 5 NR TGAATGAATCC 2893 Xbal TGACTCTTG Xbal GTGACTCTTG NUE53 ATTGTCGACCAC NUE53 ATTGTCGACCA NUE538 Sal. 8 EF S GACCATTCTTCA 2628 8 EF S CGACCATTCTT 2894 pKSJ al TTTTCC al CATTTTCC NUE53 TCCCGGGTTAG GCGGGACTCT Sma 8ERS AACTGAGTCTG 2629 NOSR AATCATAAAA 2895 ma AAAGGATGG ACC NUE54 AATGTCGACGT

GCTATGACCAT NUE548 Sal 8 NF S CCTAATACTATA 2630 101F 2896 pGXN

GATTACGCC al CTCGCAATCC NUE54 AATCTAGATCA NUE54 AATCTAGATCA Xba 8 NR ACCAACTAGTTT 2631 8 NR ACCAACTAGTT 2897 Xba GCAGCTCCT Xba TGCAGCTCCT NUE53 TAAGTCGACCA

GAAACACCAT NUE537 Sal. 7 NF S AACAACATGTC 2632 101ER 2898 pGXN

CTTCGTTCTTG al TGCCTGTG

Continuação da Tabela 22 NUE53 ATTCTAGATTAA NUE53 TAAGTCGACC Xba 7 NR CACATCGTTTGG 2633 7 NF S AAACAACATG 2899 Xba TGCATAGC al TCTGCCTGTG NUE55 AATGTCGACGTT NUE55 GTCAAGCTGTG NUE551 Sal. 1 NF S GATCAGTCAGC 2634 2900 pGXN l_seqF CTGTCTTCC al CCACTTC NUE55 TATCTAGAGAC

GAAACACCAT Xba 1 ER ATAATCCATCA 2635 101ER 2901

CTTCGTTCTTG Xba ACGGTTG NUE55 AATCTAGACTC NUE55 AATCTAGAGA NUE553 Xba. 3EFX ACGAATCCACC 2636 3 NF CACGGACCGA 2902 pGXN ba GATCAG Xba ACAGCTAG NUE55 TCCCGGGACAC GCGGGACTCT Sma 3ERS ACATCATGGCT 2637 NOS_R AATCATAAAA 2903 ma GTTACAG ACC NUE55 AATCTAGAGAC 3 NF ACGGACCGAAC 2638 Xba AGCTAG NUE55 TCCCGGGCGAC 3NRS TTCATATACAGA 2639 ma CGGATG NUE51 AATCTAGAGAT NUE51 AATCTAGAGA NUE511 Xba. 1EFX TAGGAGCAGGG 2640 1EFX TTAGGAGCAG 2904 pGXN ba ACCAATC ba GGACCAATC NUE51 TGAGCTCTTAGG

GAAACACCAT Sac 1_NR_S TACATGATGAC 2641 101ER 2905

CTTCGTTCTTG ac ATTTCAGCA NUE51 AATCTAGACCT NUE51 AATCTAGACCT NUE512 Xba. 2 NF ATTGCTCATGAT 2642 2 NF ATTGCTCATGA 2906 pGXN Xba GTTTGA Xba TGTTTGA NUE51 TGAGCTCTTACA GCGGGACTCT Sac 2_NR_S AAGGCAGGAAA 2643 NosR AATCATAAAA 2907 ac TACAGAAG ACC NUE54 TATCTAGAAATT NUE54 GTACGTCTCCG NUE542 Xbal. 2 EF X TAGCTCGTTGAT 2644 2908 pGXN 2_seqF TCCGACAAC bal GATGG NUE54 TGAGCTCCTAGT

GAAACACCAT Sacl 2_ER_s GTCCATGTCAAT 2645 101ER 2909

CTTCGTTCTTG acl GATGTC NUE54 TATCTAGATAGC 2 NF TCGTTGATGATG 2646 Xbal GAGG NUE54 TGAGCTCTTATC 2_NR_S CATGTCAATGAT 2647 acl GTCCATC NUE56 AAAGTCGACGC

GGAGAGGACA NUE569 SalI 9 NF S TACTGCTTCTTC 2648 35S_1F 2910 pGXN

GGCTTCTTGAG all TGTTCACC NUE56 TGAGCTCTACTA NUE56 GAGATGGAGC Sacl 9_NR_S CCATAGAACTG 2649 2911 9_seqR CTTGTCATGA acl AAGAAGAAGTC NUE24 TTAGTCGACTAG

GGAGAGGACA NUE244 SalI. 4 NF S ACTGATGGGAA 2650 35S_1F 2912 pGXN

GGCTTCTTGAG all GTGTTCC

Continuação da Tabela 22 NUE24 TATCTAGACTAC NUE24 TATCTAGACTA Xbal 4 NR TACACGGATTG 2651 4 NR CTACACGGATT 2913 Xbal CCCAAAC Xbal GCCCAAAC NUE57 AATCTAGAGTTT

GGAGAGGACA NUE577 7 NF ATCTTGTTTTGG 2652 35S_1F 2914 TopoB

GGCTTCTTGAG Xbal GTTTGG NUE57 TCCCGGGGTGA NUE57 TCCCGGGGTG 7_NR_S AAGATCTCAGA 2653 7_NR_S AAAGATCTCA 2915 mal CCACCTC mal GACCACCTC NUE25 TATCTAGACTTC

GGAGAGGACA NUE253 Xbal. 3 EF X TTCCTCCATATC 2654 35S_1F 2916 pKSJ

GGCTTCTTGAG bal ACACG NUE25 TCCCGGGTCAC Smal 3ERS GTGGCATGCAT 2655 mal GATCTG NUE25 TATCTAGAAAC NUE25 TCCCGGGTCAT 3 NF AATGGATGGGG 2656 3NRS CACTCGCTCTC 2917 Xbal AGGAGGAC mal GAATTCC NUE25 TCCCGGGTCATC 3NRS ACTCGCTCTCGA 2657 mal ATTCC NUE58 TATCTAGACAC

GGAGAGGACA NUE583 Xbal. 3 EF X GAATCAACCCA 2658 35S_1F 2918 pGXN

GGCTTCTTGAG bal CCAGAG NUE58 TGAGCTCTCAAT NUE58 TGAGCTCTCAT Sacl 3ERS GCCGATCATCA 2659 3NRS CAGAACCGGA 2919 acl GTGCTAAG acl AGAAGTTGG NUE58 TATCTAGAAAC 3 NF AATGCCTTGGGT 2660 Xbal TTATCATCC NUE58 TGAGCTCTCATC 3NRS AGAACCGGAAG 2661 acl AAGTTGG NUE23 TATCTAGAATTG

GGAGAGGACA NUE235 Xbal. 5 EF X AGCAGAGGAGC 2662 35S_1F 2920 pGXN

GGCTTCTTGAG bal CATG NUE23 TGAGCTCCTACA NUE23 TGAGCTCTTAA Sacl 5ERS CAGGGTGCCAG 2663 5NRS GTGCAAGTTGT 2921 acl ATCTC acl CAATCCTATTG NUE23 TATCTAGAGGA 5 NF GCCATGGCCAA 2664 Xbal AATC NUE23 TGAGCTCTTAAG 5NRS TGCAAGTTGTCA 2665 acl ATCCTATTG

GGAGAGGACA NUE231 35S_1F 2922

GGCTTCTTGAG NUE23

CCTGAGAGGG GA 1 GA 2923

CGATCATATC

R NUE51 AATCTAGAGAT

GGAGAGGACA NUE513 Xbal. 3 NF GATGGTTTGATG 2666 35S_1F 2924 pKSJ

GGCTTCTTGAG Xbal CAGATG

Continuação da Tabela 22 NUE51 TCCCGGGCTAA NUE51 CTGCTTTGACA Smal 3NRS CGTAGTTTCTTA 2667 2925 3_seqR TGGCTTAGAC mal CCAACCAAAC NUE51 AATGTCGACGA p35S F GGACAGGCTT NUE516 SalI. 6 NF S GAGAAGGGTGT 2668 2926 pGXN 2 CTTGAGATCCT all AATGAGCTG NUE51 TATCTAGATCAT NUE51 TATCTAGATCA Xbal 6 NR CAGTAGGGGTT 2669 6 NR TCAGTAGGGG 2927 Xbal CCTATGTGG Xbal TTCCTATGTGG NUE22 AAAGTCGACCA

GGAGAGGACA NUE223 SalI. 3 NF S AGAGGTAGCAC 2670 35S_1F 2928 pGXN

GGCTTCTTGAG all ATCCTCTCC NUE22 ATTCTAGACCG NUE22 ATTCTAGACCG Xbal 3 NR GATTGAACTAA 2671 3 NR GATTGAACTA 2929 Xbal TTAACGAC Xbal ATTAACGAC NUE54 AAAGTCGACAG

GGAGAGGACA NUE540 SalI. 0 NF S GAAGATTGTGA 2672 35S_1F 2930 pGXN

GGCTTCTTGAG all GCATTGAAG NUE54 ATTCTAGACACC NUE54

CATACCAACAT Xbal 0 NR TAATGATCTCAC 2673 0 ER 2931

GTTCGACCAC Xbal TTGTAAGG Ndel NUE54 TTAGTCGACAG

GGAGAGGACA NUE544 SalI. 4 EF S CCTTGCCTTGTT 2674 35S_1F 2932 pKSJ

GGCTTCTTGAG all TCTTC NUE54 TCCCGGGCAAC NUE54 TCCCGGGCTTT Smal 4ERS TTATACACTCAA 2675 4_NR_S CATCCATGTGT 2933 mal CCAAAGC mal GCAGTG NUE54 TTAGTCGACCAT 4 NF S ACACACACAGT 2676 all GAGAGGTAGG NUE54 TCCCGGGCTTTC 4_NR_S ATCCATGTGTGC 2677 mal AGTG NUE56 AATCTAGAAGA

GGAGAGGACA NUE560 Xbal. 0 EF X AACCCAGAGGA 2678 35S_1F 2934 pGXN

GGCTTCTTGAG bal GCAGC NUE56 CGAGCTCAAGG NUE56 TGAGCTCCTAC Sacl OERS GATTATTATTGC 2679 ONRS TTCTAGGCCTT 2935 acl AGGTTG acl GTTGCTGC

AATCTAGAGAA NUE56 GCAGGAAGGAA 2680 0 NF Xbal

GCAGAG NUE56 TGAGCTCCTACT ONRS TCTAGGCCTTGT 2681 acl TGCTGC NUE56 AATCTAGAGAT ATTCTAGATCA NUE56 NUE563 Xbal. 3 EF X AACATCAGTAG 2682 CAGCAACACA 2936 pGXN 3 NF Xbal bal TTCGCAGC ATCACCAC NUE56 CGAGCTCAACA

AAGTTGGGTA Sacl 3ERS CACTCACACCA 2683 101R 2937

ACGCCAGGGT acl AAAGTCC

ATTCTAGATCAC NUE56 AGCAACACAAT 2684 3 NF Xbal

CACCAC

Continuação da Tabela 22 NUE56 TGAGCTCCACTG 3NRS CTACTGAAGGC 2685 acl AAATTC NUE56 ATTCTAGATTTT

GGAGAGGACA NUE565 Xbal 5 EF X CCTGGATTTTGT 2686 35S_1F 2938 pGXN

GGCTTCTTGAG bal TTTCTC NUE56 TGAGCTCTCAAT NUE56 TGAGCTCCTAC Sacl 5ERS TAAAGAGTTAC 2687 5NRS TTGAGCCTTCT 2939 acl CCTAACG acl AGCTCTGTTC

ATTCTAGAGATT NUE56 TGGGGAAAAGC 2688 5 NF Xbal

TATGG NUE56 TGAGCTCCTACT 5NRS TGAGCCTTCTAG 2689 acl CTCTGTTC NUE56 TACGTCGACTTC

GGAGAGGACA NUE566 SalI 6 EF S ACATGTCTTGAC 2690 35S_1F 2940 Topo

GGCTTCTTGAG all TAGTTCATATG NUE56 TAAGTCGACAC

CGAAGGCATA 6 ER S GATACATTCAAT 2691 NUE56 6_R 2941

GACGTCTGTC all ACAATCACC NUE56 TTAGTCGACCTT 6 NF S CCATCATGCTCC 2692 all CAAAG NUE56 TAAGTCGACTC 6 NR S AACTCAGCATC 2693 all ACGTCTCAGC NUE58 AATGTCGACTC

GGAGAGGACA NUE586 SalI. 6 EF S GTTTCTCCTCTA 2694 35S_1F 2942 pKSJ

GGCTTCTTGAG all ACGTCAAC NUE58 TCCCGGGTCAG

CATCGAAGCA Smal 6ERS CAGCTCTCTGTC 2695 NUE58 6_R 2943

CTTCTCAACTG mal TGTTAC NUE58 ATAGTCGACGTT 6 NF S TAACATAGTTG 2696 all GGGCTAGG NUE58 CCCCGGGATAA 6NRS GCCAGGAGATG 2697 mal AAAGGAG NUE58 AAAGTCGACGA

GGAGAGGACA NUE588 SalI. 8 NF S TCGAAAAGAGA 2698 35S_1F 2944 pGXN

GGCTTCTTGAG all AGAGGAGC NUE58 ATTCTAGACTAA NUE58 ATTCTAGACTA Xbal 8 NR TCTCTCTCCCTC 2699 8 NR ATCTCTCTCCC 2945 Xbal CCTCC Xbal TCCCTCC

GGAGAGGACA NUE591 35S_1F 2946

GGCTTCTTGAG NUE59

CTCTTGCAGCT GA 1 GA 2947

CTTGATCTTC

R NUE20 ATTCTAGAATTT

GGAGAGGACA NUE206 Xbal. 6 EF X ACACAGACTTG 2700 35S_1F 2948 pGN

GGCTTCTTGAG bal TCGCTCTC

Continuação da Tabela 22 NUE20 TATCTAGACTTC NUE20 TATCTAGATCA SalI 6 ER TGATTCAGTGAC 2701 6 NR TCAGTGACTGT 2949 Xbal TGTGAGC Xbal GAGCCTCGT NUE20 ATAGTCGACAA 6 NF S CAATGGACAAA 2702 all TTTTGGAC NUE20 TATCTAGATCAT 6 NR CAGTGACTGTG 2703 Xbal AGCCTCGT NUE20 AATCTAGACTG

GGAGAGGACA NUE208 Xbal. 8 EF X AAAGAGAGAGA 2704 35S_1F 2950 pGN

GGCTTCTTGAG bal GGTATGGC NUE20 TGAGCTCTGAAT NUE20 TGAGCTCTTAT Sacl 8ERS TAGTCATCTATT 2705 8_NR_S TAGTCATCTAT 2951 acl GGGTCC acl TGGGTCCTGAG NUE20 TATCTAGAAAC 8 NF AATGGCAGGTG 2706 Xbal AGGCAACTC NUE20 TGAGCTCTTATT 8_NR_S AGTCATCTATTG 2707 acl GGTCCTGAG NUE20 AATGTCGACTTT

GGAGAGGACA NUE209 SalI. 9 EF S GTGATGACCCTT 2708 35S_1F 2952 pGN

GGCTTCTTGAG all TTAAGG NUE20 ATTCTAGAGGT NUE20 ATTCTAGATTA Xbal 9 ER AGTTAGCCGGT 2709 9 NR TTAGCCGGTCA 2953 Xbal CATGTTG Xbal TGTTGTAGTC NUE20 AATGTCGACAA 9 NF S CAATGGATTGG 2710 all GAAAAACAGC NUE20 ATTCTAGATTAT 9 NR TAGCCGGTCAT 2711 Xbal GTTGTAGTC NUE21 TGAGTCGACGT

GGAGAGGACA NUE210 SalI 0 EF S CTTGAAATGTTT 2712 35S_1F 2954 pGN

GGCTTCTTGAG all GGTGGGT

TGTCTAGACTA NUE21 TATCTAGACTTA NUE21

TGCTATGAGG Xbal 0 ER CTTGCCCTTTGC 2713 0 NR 2955

AAAAGAAACT Xbal TTATGA Xbal

AAGC NUE21 AATGTCGACAA 0 NF S CAATGTTTGGTG 2714 all GGTTCAATGTG

TGTCTAGACTAT NUE21

GCTATGAGGAA 0 NR 2715

AAGAAACTAAG Xbal

C

GGAGAGGACA NUE211 35S_1F 2956

GGCTTCTTGAG

GCGGGACTCT GeneArt NOS_R AATCATAAAA 2957

ACC NUE21 ATTCTAGAATAT

GGAGAGGACA NUE212 Xbal 2 EF X CATAATGAAAG 2716 35S_1F 2958 pGN

GGCTTCTTGAG bal GGATTCG

Continuação da Tabela 22

TGAGCTCTTAT NUE21 TGAGCTCCCATT NUE21 2

TAGAACCGAG Sacl 2ERS AGAACCGAGAC 2717 NEW NR 2959

ACTGAAGATA acl TGAAG Sa el

CTTA NUE21 TATCTAGAAAC 2 NF AATGAAAGGGA 2718 Xbal TTCGCTCC

TGAGCTCTTATT NUE21

AGAACCGAGAC 2_NR_S 2719

TGAAGATACTT acl

A NUE22 AAGATATCAAT

GGAGAGGACA NUE221 EcoR V 1 EF E GACTTTCCCCAT 2720 35S_1F 2960 pKSJ

GGCTTCTTGAG coRV CTATCC NUE22 ACGATATCAAT ATGATATCCAT NUE22 1 1 ER E CGACCAACAAC 2721 TACATGTGTGT 2961 NR EcoRV coRV TAACATTAC ATCCGACG NUE22 AAGATATCCTTC 1 NF E TAATAATCAAC 2722 coRV CGACAGG

ATGATATCCATT NUE22 1 ACATGTGTGTAT 2723 NR EcoRV

CCGACG NUE22 ATAGTCGACGG NUE22

AGTTGCATCGA NUE222 SalI. 2 EF S GAAGTATCATT 2724 2 seq_F 2962 pGN

TCTTGATCTTG all AGTTCATTACC 1 NUE22 TATCTAGACTAG

CTGCAAGGCG Xbal 2 ER TATCCCTAACGT 2725 101ER 2963

ATTAAGTTGG Xbal AACAAAGACTC NUE22 AATGTCGACTTA 2 NF S CCATGGGAGAC 2726 all TATAACATG NUE22 TATCTAGACTAC 2 NR TAACGTAACAA 2727 Xbal AGACTCTTCACA NUE22 TATCTAGACTGT NUE22

GCAAGGTTAG NUE229 Xbal 9 EF X CTGTTTGCCTGT 2728 9 seq_F 2964 pGN

CTTCATGACG bal CGAG 1 NUE22 TCCCGGGATACT

GAAACACCAT Smal 9_ER_S CAAATCAAATG 2729 101ER 2965

CTTCGTTCTTG mal AAAGTCCG NUE22 CATCTAGACAA 9 NF CAATGGCGAGG 2730 Xbal ATGATC NUE22 TCCCGGGTTAG 9_NR_S ATAGAAGTTTAT 2731 mal CCCATCAGGG NUE25 AATGTCGACAG NUE25 AATGTCGACCT NUE254 SalI 4 EF S TCTGCACTGGA 2732 4 NF S GGAAGGACAG 2966 pGN all AGGACAG all CATGTCG NUE25 TATCTAGACTTG

AAGTTGGGTA Xbal 4 ER TTGCCAGCATCT 2733 101R 2967

ACGCCAGGGT Xbal CTTATG

Continuação da Tabela 22 NUE25 AATGTCGACCT 4 NF S GGAAGGACAGC 2734 all ATGTCG NUE25 TATCTAGACTAT 4 NR GACTAGCTGAT 2735 Xbal GGAGTCCTCC

CTTCTTCAATG NUE267 NUE26 7 F CTTCTTCAATGG CGACGG 2736 NUE26 7 F 2968 Topo

GCGACGG TAGTCATGCAA

GAAACACCAT NUE26 7_R ATATTTAATCTT 2737 101ER 2969

CTTCGTTCTTG

GGAACCC NUE51 TTAGTCGACTTA NUE51 TTAGTCGACTT NUE519 SalI. 9 NF S AGATGGCCAAG 2738 9 NF S AAGATGGCCA 2970 pGN all GTTAACG all AGGTTAACG NUE51 TATCTAGACTAA

CTGCAAGGCG Xbal 9 NR TGCCGTTGCTTC 2739 101ER 2971

ATTAAGTTGG Xbal TAGTAATAG NUE54 TATCTAGATCCT NUE54

CAGCTGTGGA NUE549 Xbal. 9 EF X CTCCCTAGCTAG 2740 9 seq_F 2972 pGN

AGGCATCAAC bal CAAG 3 NUE54 TGAGCTCCTAAT

AAGTTGGGTA Sacl 9_ER_S CACCCTGGCTGT 2741 101R 2973

ACGCCAGGGT acl TGAC NUE54 TATCTAGATCCC 9 NF TAGCTAGCAAG 2742 Xbal CTCTAG NUE54 TGAGCTCCCTTA 9_NR_S ATGCCATGCTGC 2743 acl G NUE57 ATTCTAGATACA

GGAGAGGACA NUE572 Xbal. 2 NF TCGTCTTCACCT 2744 35S_1F 2974 pGN

GGCTTCTTGAG Xbal AATTTTC NUE57 CGAGCTCAACA NUE57 CGAGCTCAAC Sacl 2_NR_S AGCAAACTAAA 2745 2_NR_S AAGCAAACTA 2975 acl CGTGAAC acl AACGTGAAC NUE59

ATGATATCAAA GGAGAGGACA NUE592 EcoR V 2 EF E 2746 35S_1F 2976 pKSJ

TCCGGTGGAC GGCTTCTTGAG coRV NUE59 TAGATATCCAA TAGATATCGTT NUE59 2 2 ER E CACTCACTAGG 2747 GAACGCTCCA 2977 NR EcoRV coRV GAGCACAG CATCATG NUE59 TAGATATCAGA 2 NF E ATTCGCAGGGA 2748 coRV TGCC

TAGATATCGTTG NUE59 2 AACGCTCCACA 2749 NR EcoRV

TCATG NUE24 GCTCTAGAAGG NUE24 GCTCTAGAAG NUE248 Xbal. 8 NF CGAGATGTGGG 2750 8 NF GCGAGATGTG 2978 pGN Xbal AGTC Xbal GGAGTC NUE24 TGAGCTCCTACT GCGGGACTCT Sacl 8_NR_S AGGCCTTCTCCT 2751 NOS_R AATCATAAAA 2979 acl TTGTTG ACC

Continuação da Tabela 22 NUE59 AATCTAGACAA

GGAGAGGACA NUE590 Sacl 0 EF X CTGCAACTGCA 2752 35S_1F 2980 TopoB

GGCTTCTTGAG bal ACTAGC NUE59 CGAGCTCACAG OERS CTAAACATCAA 2753 acl TCCTCTTC NUE59 TGAGCTCTGCA NUE59 TGAGCTCCTCA 0_NF_S AGCAATCACCA 2754 ONRS TTTTATTTGCT 2981 acl GTTTG acl GCGTG NUE59 TGAGCTCCTCAT ONRS TTTATTTGCTGC 2755 acl GTG

GGAGAGGACA NUE245 35S_1F 2982

GGCTTCTTGAG NUE24

CTCGGTGTTCT GA 5 GA 2983

TGATGGTCAC Rl

GGAGAGGACA NUE520 35S_1F 2984

GGCTTCTTGAG NUE52

TTCTTGACCTT GA 0 GA 2985

GGTCAGCTTG R2 NUE57

AGATTAGTCCCAAAGATT GGAGAGGACA NUE574 Smal 4_EF_S 2756 35S_1F 2986 Topo

A TTCG GGCTTCTTGAG mal NUE57 NUE57

GACATTGTGGGGAAGCTA GCATGTAATTGTAGCTT 4ERS 2757 4_NR_S 2987

CT TC TTTT mal mal NUE57

GATACAAAGAATTCGCTT 4_NF_S 2758

T GE mal NUE57

GCATGTAATTGTAGCTTT 4_NR_S 2759

CTT TT mal

TATCTAGAGTTT NUE22 4 EF GGAGAGGACA NUE224 Xbal. GCTTGCTTACCA 2760 p35S F 1 2988 pGXN Xbal GGCTTCTTGAG

GGAG NUE22 TCCCGGGTTAGC NUE22 TCCCGGGTTAG Smal 4_ER_ AGCATCGATCG 2761 4ERS CAGCATCGATC 2989 Smal TACACTAG mal GTACACTAG NUE22 AATGTCGACGA

GGAGAGGACA NUE225 SalI. 5 NF GTTTACAAGAG 2762 p35S F 1 2990 pGXN

GGCTTCTTGAG SalI ACCCAGACG NUE22 ACTCTAGAATTC NUE22 ACTCTAGAATT Xbal 5 NR AGTCATAGATC 2763 5 NR CAGTCATAGAT 2991 Xbal GCCTTG Xbal CGCCTTG

GGAGAGGACA NUE230 p35S F 1 2992

GGCTTCTTGAG NUE23

GGATCTTGATG GA 0 GA 2993

TACACGTTTGG Rl

GGAGAGGACA NUE234 p35S F 1 2994

GGCTTCTTGAG

Continuação da Tabela 22 NUE23

CGATGTTGCAC GA 4 GA 2995

CTCTTTGG Rl

GGAGAGGACA NUE239 p35S F 1 2996

GGCTTCTTGAG NUE23

CGAAATCCTCT GA 9 GA 2997

GGGAATGAC Rl

GGAGAGGACA NUE240 p35S F 1 2998

GGCTTCTTGAG NUE24 CCTCAGTAGA GA 0 GA GAGAGACTCG 2999 Rl TCG

GGAGAGGACA NUE246 p35S F 1 3000

GGCTTCTTGAG NUE24

CAACACTTGCA GA 6 GA 3001

TCACCCTAGTC Rl

GGAGAGGACA NUE249 p35S F 1 3002

GGCTTCTTGAG NUE24 CCACCTCAAG GA 9 GA AACAGTAACG 3003 Rl AG

GGAGAGGACA NUE250 p35S F 1 3004

GGCTTCTTGAG NUE25

GAAGGTAGAG GA 0 GA 3005

TGCAGCATGG Rl

TATCTAGATTGG NUE25 2 EF GGAGAGGACA NUE252 Xbal. TCACAGGGGAT 2764 p35S F 1 3006 pGXN Xbal GGCTTCTTGAG

AGGC NUE25 TGAGCTCCTAA Sacl TGAGCTCCTAC NUE25 Sacl 2 ER GATGCTGCTTTC 2765 TATGCCAAAG 3007 2_NR_ Sacl TCAGACTATG AACCTTCATG NUE25 TATCTAGAGAA 2 NF ATTGTGTTTGTT 2766 Xbal TGATGGG NUE25 TGAGCTCCTACT 2 NR ATGCCAAAGAA 2767 Sacl CCTTCATG

TATCTAGAGAG NUE26 GGAGAGGACA NUE265 Xbal. AAATGACAAGT 2768 p35S F 1 3008 pGXN 5 NF Xbal GGCTTCTTGAG

GTCTGGAAG NUE26 TGAGCTCGGAG NUE26 TGAGCTCGGA Sacl 5 NR TGATCACTACTG 2769 5NRS GTGATCACTAC 3009 Sacl CTTCTCC acl TGCTTCTCC

AATGTCGACTG NUE26 GGAGAGGACA NUE268 SalI AAGATGGCTGA 2770 p35S F 1 3010 pGXN 8 NF SalI GGCTTCTTGAG

CGATTTG NUE26 TATCTAGACTAG NUE26 TATCTAGACTA Xbal 8 NR TCTTAGCCACCA 2771 8 NR GTCTTAGCCAC 3011 Xbal CCAGAAC Xbal CACCAGAAC

Continuação da Tabela 22

AATCTAGAGGA NUE51 4 EF GGAGAGGACA NUE514 Xbal. TTGAGACATGC 2772 p35S F 1 3012 pGXN Xbal GGCTTCTTGAG

ACTTAACAG NUE51 TGAGCTCTTTTG NUE51 TGAGCTCCTAC Sacl 4 ER AGCACCTCTTAT 2773 4_NR_S AATACACCTCT 3013 Sacl TTAGC acl TGACATCCTTC NUE51 AATCTAGAACT 4 NF CATCAGCAACT 2774 Xbal ACAACGTG NUE51 TGAGCTCCTACA 4 NR ATACACCTCTTG 2775 Sacl ACATCCTTC

TAAGTCGACGA NUE51

TACAATGAGAA GGAGAGGACA NUE515 SalI. 5 NF 2776 p35S F 1 3014 pGXN

TGTTAGTTCTTC GGCTTCTTGAG SalI

G

TATCTAGATCA NUE51 TATCTAGATCAT NUE51

TCACCATCGTC Xbal 5 NR CACCATCGTCTT 2777 5 NR 3015

TTATCAATGAA Xbal ATCAATGAAG Xbal

G

ACCCGGGTCGT NUE52 GGAGAGGACA NUE523 Smal. CTCATCAATTCA 2778 p35S F 1 3016 Topo 3_EF_ Smal GGCTTCTTGAG

AGATCC NUE52 TGAGCTCCCCTT NUE52 TGAGCTCCCCT Sacl 3 ER CAAACTAATCA 2779 3ERS TCAAACTAATC 3017 Sacl ATCTTG acl AATCTTG GGAGAGGACA pQXY NUE525 p35S F 1 3018

GGCTTCTTGAG N NUE52

GTACTGAAGCT GA 5 GA 3019

CGTCCTGGAC R

AATCTAGAAAG NUE52 7EF GGAGAGGACA NUE527 Xbal AGCACCACCAG 2780 p35S F 1 3020 pKSJ Xbal GGCTTCTTGAG

AGCAG TTGATATCCTTT NUE52 TTGATATCCTT NUE52 7 EcoR V ATGTCACCATTC 2781 7 ER E TATGTCACCAT 3021 ER EcoRV ATCTCAG coRV TCATCTCAG

AATCTAGACTG NUE53 2 EF GGAGAGGACA NUE532 Xbal. GTTTAGGAGAC 2782 p35S F 1 3022 pGXN Xbal GGCTTCTTGAG

GAAAAGG

AGAGCTCCTAC NUE53 AGAGCTCCTATC NUE53

TACTCAACTTC Sacl 2 ER TCAACTCCATCG 2783 2_NR_S 3023

TCTGATGATTC Sacl CCTCAG acl

TC NUE53 AATCTAGAAGT 2 NF GCTCTCCGGTTT 2784 Xbal GAGG NUE53 AGAGCTCCTACT 2 NR ACTCAACTTCTC 2785 Sacl TGATGATTCTC GGAGAGGACA pQXY NUE533 p35S F 1 3024

GGCTTCTTGAG N

Continuação da Tabela 22 NUE53 GGTTAGACAC GA 3 GA GAGCTTCTCAG 3025

R AC

ATTCTAGAGCCT NUE53 6 EF GGAGAGGACA NUE536 Xbal. TCTGATTCCCAC 2786 p35S F 1 3026 pGXN Xbal GGCTTCTTGAG

TCC NUE53 TGAGCTCTGGA NUE53 CGAGCTCAAA Sacl 6 ER GTATCTGGTTTA 2787 6NRS GTCTCACTCCG 3027 Sacl GTTCGTC acl CACTACAC NUE53 AATCTAGACCT 6 NF ACTATACTTGCA 2788 Xbal ACCTCTCC NUE53 CGAGCTCAAAG 6 NR TCTCACTCCGCA 2789 Sacl CTACAC GGAGAGGACA pQXY NUE547 p35S F 1 3028

GGCTTCTTGAG N NUE54

GTGTGCAGCTC GA 7 GA 3029

GAACTTGG R

ACCCGGGGTAA NUE55 p35S F GGACAGGCTT NUE550 Smal CACTATCAAGA 2790 3030 pKSJ 0_EF_ Smal 2 CTTGAGATCCT

GACGATGAAG NUE55 TCCCGGGGTTTA NUE55 TCCCGGGAATC 0_ER_ CATTGTTCTCGT 2791 ONRS TTTATTAACGA 3031 Smal TTCAAATC mal AACAGCAG NUE55 ACCCGGGCTAT 0_NF_ CAAGAGACGAT 2792 Smal GAAGGTTG NUE55 TCCCGGGAATCT 0_NR_ TTATTAACGAA 2793 Smal ACAGCAG

AATCTAGACTTC NUE56 4 EF GGAGAGGACA NUE564 Xbal. AAGCAGGCAGC 2794 p35S F 1 3032 pGXN Xbal GGCTTCTTGAG

ACAC

TGAGCTCCTAC NUE56 CGAGCTCAAAG NUE56

ATGTCCCTTAG Sacl 4 ER GGTCCATCATA 2795 4_NR_S 3033

ATTGCTCTATT Sacl ATCACAG acl

C

TATCTAGAGGA NUE56 AACCTTGAGCC 2796 4 NF Xbal

ATGG NUE56 TGAGCTCCTACA 4 NR TGTCCCTTAGAT 2797 Sacl TGCTCTATTC NUE57 AAAGTCGACAG

GGAGAGGACA NUE576 SalI. 6 EF GAACAGCAACA 2798 p35S F 1 3034 pGXN

GGCTTCTTGAG SalI AAAGTAAGC

TCCCGGGCTAA NUE57 TCCCGGGCTAA NUE57

GTAGCATGAG Smal 6_ER_ ACTGTCCCATTC 2799 6NRS 3035

TCTAGAGCTTG Smal TGCGTG mal

G NUE57 AAAGTCGACCA 6 NF S ACAACCACACA 2800 all CACTCACAG

Continuação da Tabela 22 NUE57 TCCCGGGCTAA 6_NR_ GTAGCATGAGT 2801 Smal CTAGAGCTTGG NUE57 AATGTCGACTCT

GGAGAGGACA NUE579 SalI. 9 NF CAAAACCCTAA 2802 p35S F 1 3036 pGXN

GGCTTCTTGAG SalI CTGTTTCC

ATTCTAGACAG NUE57 ATTCTAGACAG NUE57

GATAATAGAT Xbal 9 NR GATAATAGATA 2803 9 NR 3037

AGTCACACGA Xbal GTCACACGAGG Xbal

GG NUE58 AAAGTCGACCA

GGAGAGGACA NUE581 SalI. 1 EF AAAGAATCTGT 2804 p35S F 1 3038 pGXN

GGCTTCTTGAG SalI CTTCTTCTCTG

ACTCTAGATTA ATTCTAGACTAT NUE58 NUE58 1 GAACCACAAA Xbal CCAAGAAGGAA 2805 1 NR 3039 ER Xbal AGATTACAAC CAATGAGG Xbal

ATC NUE58 AAAGTCGACGG 1 NF TAAAATATCTTT 2806 SalI CTTGTGCAG NUE58 ACTCTAGATTAG 1 NR AACCACAAAAG 2807 Xbal ATTACAACATC

TCAGCCACCCA MAB52 6669F 3040 pGN

AACCATGAC

GAAGTCCTGA MAB52 GA GACCGTTGATA 3041 _R_Seq

G

GTTCCAGTTGAG TACGACTCACT MAB10 6 MAB10 6 EF 2808 T7_l 3042 pGN

CGAGCAG ATAGGGCGA AAGATATCGT

TTGATATCCCAG EcoR MABIO 6 ER MABIO 6 NR GCTAAACTATA TCTGTTTATTGC 2809 3043 v. EcoRV EcoRV CATCAAACGT

ATCATC G MABIO

AACTGCAGGAT 6 PstI CATCCTCACATT 2810 NF Ps

GCGAG ti

AAGATATCGTG MABIO 6 NR CTAAACTATAC 2811 EcoRV

ATCAAACGTG

GGAGAGGACA NUE251 35S_1F 3044

GGCTTCTTGAG NUE25 GAAGTACCAC GA 1 GA CAGTTGAAGA 3045

R AGC NUE54 TATGTCGACAG GCAACAATTGT NUE545 SalI. 5 NF S GTTATGGGGAA 2812 NUE54 5_F GGAGTCAACA 3046 pGXN all GAAGCTAG C NUE54 TATCTAGATCAT

AAGTTGGGTA Xbal 5 NR CAGTAGCCACG 2813 101R 3047

ACGCCAGGGT Xbal AACTTGTCTAG

Continuação da Tabela 22 NUE57 TTCGTCGACTAA NUE57 CTTTGAGACGT NUE570 Sal. 0 NF GCACAAATGGC 2814 3048 pKSJ OSeqF TAGCTGTTGAG Sal GACTC

ACCCGGGTCAA NUE57 AAGTTGGGTA Sma GGAGCTGAAAC 2815 101R 3049 ONR Sma ACGCCAGGGT

ACTAGAGTTACT NUE57 GTAGTCGACTTC NUE57 GTAGTCGACTT NUE571 Sal. 1 NF S ACATGGGAAAG 2816 1 NF S CACATGGGAA 3050 pGXN al GATAAGAC al AGGATAAGAC

AATCTAGATCA NUE57 1NR AAGTTGGGTA Xba CTGATATAGTCC 2817 101R 3051 Xba ACGCCAGGGT

ACGTCCTAAGG NUE57 AATCTAGAATA

GGAGAGGACA NUE578 Xbal. 8 EF X TCCTCCCATTCT 2818 35S_1F 3052 pGXN

GGCTTCTTGAG bal CATTCTG

TCCCGGGCTAA NUE57 TCCCGGGCTAAT NUE57

GAAAAGGTAG Smal 8ERS GCAATCTCCAA 2819 8_NR_S 3053

GAGAAGGAAG mal CTCCAAG mal

G NUE57 AATCTAGAAGC 8 NF GGAGAAGAGGA 2820 Xbal AGGAG NUE57 TCCCGGGCTAA 8_NR_S GAAAAGGTAGG 2821 mal AGAAGGAAGG NUE58 AATCTAGACGG

GGAGAGGACA NUE580 Xbal. 0 NF AATATACATTTG 2822 35S_1F 3054 pGXN

GGCTTCTTGAG Xbal CTTTGTG NUE58 TCCCGGGCTACT NUE58 TCCCGGGCTAC Smal ONRS GCTGAATGCTCT 2823 ONRS TGCTGAATGCT 3055 mal CTTTGC mal CTCTTTGC NUE58 AATCTAGAAAT

GGAGAGGACA NUE582 Xbal 2 NF CATCCTTCCCCA 2824 35S_1F 3056 pGXN

GGCTTCTTGAG Xbal ACCTC NUE58 CCCCGGGACCC NUE58 CCCCGGGACC Smal 2_NR_S AAACAGTCATG 2825 2_NR_S CAAACAGTCA 3057 mal CTAGG mal TGCTAGG NUE58 AAAGTCGACAA

GGAGAGGACA NUE584 SalI. 4 NF S GGTTGGAGATT 2826 35S_1F 3058 pGXN

GGCTTCTTGAG all GTGAAATTG NUE58 CGAGCTCATACT NUE58 CGAGCTCATAC Sacl 4_NR_S CTACGTTCCCGT 2827 4_NR_S TCTACGTTCCC 3059 acl GTGG acl GTGTGG

GGAGAGGACA NUE593 35S_1F 3060

GGCTTCTTGAG NUE59

GTAGCCTGAA GA 3 GA 3061

CAGCAGAACC R

AAGTTGGGTAA CT1 Smal Reverse 2828 pKS

CGCCAGGGT

GGTGGCTCCTAC Sacl Forward 2829

AAATGCCATC

AAGTTGGGTAA CT11 Smal Reverse 2830 pKS

CGCCAGGGT

Continuação da Tabela 22

GGTGGCTCCTAC Sacl Forward 2831

AAATGCCATC

AAGTTGGGTAA CT2 Xbal Reverse 2832 pKS

CGCCAGGGT

ATGGGGCAACA Forward 2833

TCACTTGGG

AAGTTGGGTAA CT20 Smal Reverse 2834 pKS

CGCCAGGGT

GGTGGCTCCTAC Sacl Forward 2835

AAATGCCATC

AAGTTGGGTAA CT22 Smal Reverse 2836 pKS

CGCCAGGGT

GGTGGCTCCTAC Sacl Forward 2837

AAATGCCATC

AAGTTGGGTAA CT27 Smal Reverse 2838 pKS

CGCCAGGGT

GGTGGCTCCTAC EcoR V Forward 2839

AAATGCCATC

AAGTTGGGTAA CT3 Smal Reverse 2840 pKS

CGCCAGGGT

GGTGGCTCCTAC Sacl Forward 2841

AAATGCCATC

AAGTTGGGTAA CT40 Smal Reverse 2842 pKS

CGCCAGGGT

GGTGGCTCCTAC Sacl Forward 2843

AAATGCCATC

AAGTTGGGTAA CT6 Smal Reverse 2844 pKS

CGCCAGGGT

GGTGGCTCCTAC Sacl Forward 2845

AAATGCCATC

AAGTTGGGTAA CT7 Smal Reverse 2846 pKS

CGCCAGGGT

GGTGGCTCCTAC EcoR V Forward 2847

AAATGCCATC

AAGTTGGGTAA CT71 Xbal Reverse 2848 pKS

CGCCAGGGT

GGTGGCTCCTAC Sacl Forward 2849

AAATGCCATC

AAGTTGGGTAA CT74 Smal Reverse 2850 pKS

CGCCAGGGT

GGTGGCTCCTAC Sacl Forward 2851

AAATGCCATC

AAGTTGGGTAA CT75 Smal Reverse 2852 pKS

CGCCAGGGT

GGTGGCTCCTAC EcoR V Forward 2853

AAATGCCATC

AAGTTGGGTAA CT76 Smal Reverse 2854 pKS

CGCCAGGGT

GGTGGCTCCTAC Sacl Forward 2855

AAATGCCATC

AAGTTGGGTAA CT81 Smal Reverse 2856 pKS

CGCCAGGGT

GGTGGCTCCTAC Sacl Forward 2857

AAATGCCATC

Continuação da Tabela 22

AAGTTGGGTAA CT82 Smal Reverse 2858 pKS

CGCCAGGGT

GGTGGCTCCTAC Sacl Forward 2859

AAATGCCATC Tabela 22. São fornecidas as sequências dos iniciadores utilizados na clonagem dos genes indicados e na seleção de plasmídeos binários clonados. Iniciadores são fornecidos de 5’ —> 3’. “EF” = iniciador avançado externo; “ER” = 5 iniciador reverso externo; “NF” = iniciador avançado agrupado; “NR” = iniciador reverso agrupado. A menos que de outra forma indicado, todos os genes foram clonados de moléculas de RNA. “GA” = GeneArt, genes preparados sinteticamente; “Enz.” = Enzima; “Plas.” = Plasmídeo.

Cada produto PCR digerido foi inserido em um vetor de cópia elevada originado do vetor de plasmídeo pBlue-script KS (vetor de plasmídeo pBlue-script KS, Protocolo de Transferência de Hipertexto://www (ponto) stratagene (ponto) com/manuals/212205 (ponto) pdf). No caso do vetor de cópia elevada originado do vetor de plasmídeo pBlue-script KS (pGN), o produto PCR foi inserido no plasmídeo de cópia elevada anterior ao terminador NOS (SEQ ID N0:3064) originado do vetor binário pBI 101,3 (GenBank Acesso Nº. U12640, nucleotídeos 4417 a 4693). Em outros casos, o produto PCR foi inserido no vetor de cópia elevada pCR®-BluntII-TOPO® (ZeroBlunt® TOPO ® PCR Kit de clonagem, Invitrogene). Alguns destes genes foram encomendados sinteticamente sintetizados de um fornecedor comercial (GeneArt, GmbH), estes genes foram postos nos vetores de cópia elevada pQXYN, pGXN, obtidos dos fornecedores.

O sequenciamento dos genes inseridos foi realizado utilizando o sequenciador ABI 377 (Applied Biosystems). Em alguns casos, após a confirmação das sequências dos genes clonados, o cDNA clonado 5 acompanhado com o terminador NOS foi introduzido nos vetores binários pGI, contendo o promotor 35S via digestão com restrição de endonucleases adequadas. Em outros casos, o cDNA clonado acompanhado com o promotor 35S foi introduzido no vetor pGI. Em nenhum caso, a inserção foi seguida por cópia única do terminador NOS (SEQ ID NO: 3064). Os produtos digeridos e o vetor plasmídeo linearizado foram ligados utilizando a enzima ligase T4 DNA (Roche, Suíça).

Para alguns dos polinucleotídeos clonados, ao invés de amplificar a sequência a partir do cDNA, as sequências sintéticas foram encomendadas de um fornecedor comercial GeneArt, GmbH).

Dessa forma, nenhum iniciador foi utilizado para a amplificação dos genes sintéticos. Para otimizar as sequências de codificação dos genes sintéticos, Tabelas de uso de códon, calculadas a partir dos transcritores de plantas, foram utilizadas (exemplos de tais Tabelas podem ser encontrados no Banco de Dados de Uso de Códon, disponível on-line em Protocolo de Transferência de Hipertexto://www (ponto) kazusa (ponto) or (ponto) jp/codon/). A sequência de codificação otimizada é projetada de tal forma que mudanças não são introduzidas na sequência do ácido amino codificado, enquanto se utiliza códons selecionados para expressão em plantas dicotiledôneas,

principlamente tomates e Arabidopsis; e plantas monocotiledôneas, tais como o milho. Estas sequências otilizada promovem uma melhor taxa de tradução e, portanto, níveis de expressão de proteínas mais elevados. Para as 5 sequências otimizadas, divisões adicionais de locais de enzimas de restrição únicas foram adicionadas – para facilitar a clonagem dos genes nos vetores binários.

Os vetores binários de plasmídeos pPI e pGI foram utilizados para introduzir as construções de gene em plantas. O plasmídeo pPI foi construído inserindo uma sequência de sinal poli-(A) sintético, originado a partir do vetor de plamídeo básico pGL3 (Promega, Ac. No. U47295; bp 4658-4811) no local de restrição Hindlll do vetor binário pBI101.3 (Clontech, Acc.

No. U12640). Em alguns casos, o plasmídeo binário da espinha dorsal utilizado foi pGI que é similar ao pPI, mas o gene GUS foi substituído pelo gene GUS-Intron (Vancanneyt. G, et al MGG 220, 245-50, 1990). O plasmídeo pPI ou pGI foi utilizado para clonar as seque^cnias de polinucleotídeos, inicialmente sob o controle do promotor 35S [Odell, JT, et al. Nature 313, 810 - 812 (28 February 1985); SEQ ID NO: 3063] ou o promotor Arabidopsis thaliana At6669 (SEQ ID N0:3064, PCT Publicação No. W02004/104162).

A sequência do promotor At6669 ou CaMV 35S (estabelecido em SEQ ID NO: 3063) é inserido no vetor binário pPI ou pGI anterior aos genes clonados utilizando as enzimas de restrição Hindlll e Sail ou BamRl (Roche, Suíça). Os produtos PCR digeridos e o vetor de plasmídeo linearizado foram ligados utilizando a enzima ligase de DNA T4 (Roche, Suíça), conforme descrito acima.

60 |uL de E. coli, da linhagem de células competentes DH5-a (cerca de 109 células/mL) foram 5 transformadas utilizando 1 jllI de mistura de reação de ligação por eletroporação, utilizando um eletroporador MicroPulser (Biorad), 0,2 cm cadinho (Biorad) e programa de eletroporação EC-2 (Biorad). As células de E. coli foram cultivadas em 0,8 mL de líquido médio a 37ºC por 1 hora e 0,2 mL de suspensão de células foram colocadas em placas de LB-agar suplementadas com 50 mg/L de antibiótico canamicina (Sigma). As placas foram, então, incubadas a 37ºC por 16 horas. Colônias de bactérias foram cultivadas e a expressão foi confirmada por amplificação de PCR utilizando os conjuntos de iniciadores detalhados na Tabela 22, acima, que foram projetados para espalhar a sequência no vetor binário.

Os produtos PCR foram separados em gel agarose 1,5% e os tamanhos dos produtos foram estimados por comparação por escala de DNA (MBI Fermentas).

Tabela 23 Sequências clonadas Tabela 23. São fornecidos os genes produzidos sinteticamente ou clonados e seus polipeptídeos codificados, justamente com os identificadores de sequências, organismos a partir dos quais os genes foram clonados. SEQ ID NO: do Nome do SEQ ID NO: do clonado ou do Gene Cluster Método de Clonagem Gene Polipetídeo Codificado

ID 2398 CT1 2523 algodão|gbl64|AI725990 TI clonado 2399 CT11 2524 algodão|gbl64|AI725968 TI clonado 2400 CT2 2525 algodão|gbl64|AI727334 TI clonado

Continuação da Tabela 23 2401 CT20 2526 algodão|gbl64|AI726497 TI clonado 2402 CT22 2527 algodão|gbl64|BG440027 TI clonado 2403 CT27 2528 algodão|gbl64|AF336280 TI clonado 2404 CT3 144 algodão|gbl64|AI725456 TI clonado 2405 CT40 145 algodão|gbl64|BE052317 TI clonado 2406 CT6 2529 algodão|gbl64|AI726479 TI clonado 2407 CT7 147 algodão|gbl64|AI727027 TI clonado 2408 CT71 148 algodão|gbl64|AI725508 TI clonado 2409 CT74 149 algodão|gbl64|AI725950 TI clonado 2410 CT75 2530 algodão|gbl64|AI726599 TI clonado 2411 CT76 2531 algodão|gbl64|AI726155 TI clonado 2412 CT81 2532 algodão|gbl64|AI726693 TI clonado 2413 CT82 153 algodão|gbl64|BQ402794 TI clonado 2414 MAB10 6 154 cevada|gbl57.2|AL450627 T 1 clonado 2415 MAB52 155 arroz|gbl57.2|AU070543 Tl synthesized opti mized 2416 NUE206 158 arabidopsis|gbl65|AT4G2496 0 TI clonado 2417 NUE208 2533 tomate|gbl64|BG124666 TI clonado 2418 NUE209 160 tomate|gbl64|BG134403 TI clonado 2419 NUE210 2534 tomate|gbl57|TOMTRALTA B TI clonado 2420 NUE211 162 arroz|gbl57.2|AU174544_Tl synthesized_opti mized 2421 NUE212 163 algodão|gbl64|CO081293 TI clonado 2422 NUE221 164 arroz|gbl57.2|BI305241 TI clonado 2423 NUE222 165 arabidopsis|gbl65|ATlG3182 0 TI clonado 2424 NUE223 166 arroz|gbl57.2|AW069985 TI clonado 2425 NUE224 167 arroz|gbl57.2|AW155063 TI clonado 2426 NUE225 168 arroz|gbl57.2|BE039221 TI clonado 2427 NUE227 169 arroz|gbl57.2|AU056888 TI clonado 2428 NUE228 170 arroz|gbl57.2|AA753730_Tl Sintetizado otimizado 2429 NUE229 2535 milho|gbl64|AW455682 TI clonado 2430 NUE230 172 arroz|gbl57.2|AA749861_Tl Sintetizado otimizado 2431 NUE231 173 arroz|gbl57.2|AK108994_Tl Sintetizado otimizado 2432 NUE233 174 arroz|gbl57.2|CB640732 TI Sintetizado otimizado 2433 NUE234 175 álamo|gbl57.2|BU868634 T 1 Sintetizado otimizado

2434 NUE235 176 soja|gbl62|CA852963 T 1 Sintetizado otimizado 2435 NUE237 177 arroz|gbl57.2|BI811377 TI Sintetizado otimizado 2436 NUE239 178 álamo|gbl57.2|BU880014 T 1 Sintetizado otimizado 2437 NUE240 179 álamo|gbl57.2|AJ407707 Tl Sintetizado otimizado 2438 NUE241 180 tomate|gbl64|BG129806 TI clonado 2439 NUE242 2536 tomate|gbl64|BG791300 TI clonado 2440 NUE244 182 soja|gbl62|CF808561 TI clonado 2441 NUE245 2537 arroz|gbl57.2|AT003383_Tl Sintetizado otimizado 2442 NUE246 184 uva|gbl60|CF207859 TI Sintetizado otimizado 2443 NUE248 2538 milho|gbl57|BG354535 TI Sintetizado otimizado 2444 NUE249 186 arroz|gbl57.2|AU029933_Tl Sintetizado otimizado 2445 NUE250 187 arroz|gbl57.2|AK102239 Tl Sintetizado otimizado 2446 NUE251 188 sorghum gb 161 .xeno AI9477 81 TI Sintetizado otimizado 2447 NUE252 189 arabidopsis|gbl65|ATlG5803 0 TI clonado 2448 NUE253 190 arroz|gbl57.2|AF145730 TI clonado 2449 NUE254 2539 milho|gbl64|AI600563 TI clonado 2450 NUE255 2540 arroz|gbl57.2|CB000630 TI clonado 2451 NUE256 193 trigo|gbl64|BE415875 Tl Sintetizado otimizado 2452 NUE265 194 arroz|gbl57.2|BE039218 TI clonado 2453 NUE267 195 arabidopsis|gbl65|AT5G6068 0 TI clonado 2454 NUE268 196 arroz|gbl57.2|AA750934 TI clonado

Continuação da Tabela 23 2455 NUE269 2541 algodão|gbl64|AI730085 TI clonado 2456 NUE49 2542 milho|gbl54|AW037179_Tl Sintetizado otimizado 2457 NUE50 2543 milho|gbl64|AW287760 TI clonado 2458 NUE511 2544 milho|gbl57|AW360667 TI clonado 2459 NUE512 201 arabidopsis|gbl57.2|AT5G23 460 TI clonado 2460 NUE513 2545 arabidopsis|gbl57.2|AT3G26 100 TI clonado 2461 NUE514 2546 soja|gbl62|SOYHPR TI clonado 2462 NUE515 2547 arabidopsis|gbl65|ATlG4492 0 TI clonado 2463 NUE516 205 arabidopsis|gbl57.2|ATlG48 210 TI clonado 2464 NUE519 2548 trigo|gbl64|BE445396 TI clonado 2465 NUE520 207 arroz|gbl57.2|BI305493 TI Sintetizado 2466 NUE521 208 arroz|gbl57.2|AU077950 TI clonado 2467 NUE523 209 sorghum gb 16l.xenoAI9014 39 TI clonado 2468 NUE525 210 sorghum gb 161 .xeno AW052 978 TI Sintetizado otimizado

2469 NUE527 211 sorghum gb 161 .xeno AW055 409 TI clonado

2470 NUE528 212 sorghum gb 161 .xeno AI3 721 94 TI clonado

2471 NUE531 213 arroz|gbl57.2|BI805136_Tl Sintetizado otimizado 2472 NUE532 214 milho|gbl64|AW054475 TI clonado 2473 NUE533 215 soja|gbl66|AW350050 T 1 clonado

2474 NUE535 2549 sorghum|gb 161 .crp|BE59904 2 TI clonado 2475 NUE536 217 milho|gbl64|BQ279657 TI clonado 2476 NUE537 218 cevada|gbl57.2|AJ234408 TI clonado 2477 NUE538 219 sorghum gb 161 .xeno AW923 729 TI clonado

2478 NUE539 220 arroz|gbl57.2|AW155216_Tl Sintetizado otimizado

2479 NUE540 2550 arabidopsis|gbl57.2|ATlG13 980 TI clonado

2480 NUE542 2551 arabidopsis|gbl57.2|AT3G46 280 TI clonado

2481 NUE543 223 arroz|gbl57.2|AK063415_Tl Sintetizado otimizado 2482 NUE544 2552 algodão|gbl64|BQ412384 TI clonado 2483 NUE545 2553 algodão|gbl64|AI055737 TI clonado

2484 NUE547 226 sorghum gb 161.xeno BU 395 59 TI Sintetizado otimizado

2485 NUE548 227 sorghum gb 161.xeno BQ2796 57 TI clonado

2486 NUE549 228 sorghum|gb 161 .xeno| AFO191 47 TI clonado 2487 NUE550 229 canola|gbl61|EE559843 TI clonado 2488 NUE551 2554 cevada|gbl57.3|BE420701 TI clonado 2489 NUE553 231 cevada|gbl57.3|BE421829 TI clonado 2490 NUE554 232 sorghum gb 161.xeno AA0118 80 TI clonado 2491 NUE560 233 arroz|gbl57.2|BE229552 TI clonado 2492 NUE562 2555 arroz|gbl57.2|BE039784 TI clonado 2493 NUE563 235 arroz|gbl57.2|AU057884 TI clonado 2494 NUE564 236 milho|gbl64|AI619269 TI clonado

Continuação da Tabela 23 2495 NUE565 237 arabidopsis gbl 57.2 AT5G15 080 TI clonado 2496 NUE566 238 arabidopsis|gbl65|AT2G4370 0 TI clonado 2497 NUE567 239 arabidopsis|gbl65|ATlG6068 0 TI clonado 2498 NUE568 240 arabidopsis|gbl65|ATlG7845 0 TI clonado 2499 NUE569 241 arabidopsis|gbl65|AT2G0389 0 TI clonado 2500 NUE570 242 arabidopsis|gbl65|ATlG4391 0 TI clonado 2501 NUE571 243 arabidopsis|gbl57.2|ATlG47 530 TI clonado 2502 NUE572 244 arabidopsis|gbl57.2|AT2G24 240 TI clonado 2503 NUE573 245 arabidopsis|gbl65|AT4G1539 0 TI clonado 2504 NUE574 2556 arroz|gbl57.2|BI807603 TI clonado 2505 NUE575 247 arroz|gbl57.2|AU068829 TI clonado 2506 NUE576 2557 arroz|gbl57.2|AA752451 TI clonado 2507 NUE577 249 arabidopsis|gbl65|ATlG6780 0 TI clonado 2508 NUE578 250 trigo|gbl64|BE401454 TI clonado 2509 NUE579 2558 arabidopsis|gbl65|ATlG7085 0 TI clonado 2510 NUE580 2559 arabidopsis|gbl65|AT2G3588 0 TI clonado 2511 NUE581 253 arabidopsis|gbl65|ATlG1284 5 TI clonado 2512 NUE582 2560 sorghum|gbl61.xeno|T18303 TI clonado 2513 NUE583 255 arroz|gbl57.2|AU172665 TI clonado 2514 NUE584 2561 sorghum gb 161 .crp AW9235 45 TI clonado 2515 NUE585 257 arabidopsis|gbl65|ATlG7190 0 TI clonado 2516 NUE586 2562 arabidopsis|gbl65|AW672 541_TI clonado 2517 NUE586 259 sorghum|gbl61.xeno|T18303 TI clonado 2518 NUE586 260 arroz|gbl57.2|AA70816_TI clonado 2519 NUE586 2563 sorghum|gbl61.xeno|AI622209_ TI clonado 2520 NUE586 262 sorghum|gbl61.xeno|BE123399_TI Sintetizado otimizado 2521 NUE586 263 sorghum|gbl61.xeno|AI901557_TI clonado 2522 NUE586 264 arabidopsis|gbl65|AT2G04066_TI Sintetizado otimizado EXEMPLO 4

GERAÇÃO DE PLANTAS TRANSGÊNICAS EXPRESSANDO OS

POLINUCLEOTÍDEOS DE ALGUMAS CONFIGURAÇÕES DA INVENÇÃO A transformação do Arabidopsis foi realizada conforme Clough SJ, Bent AF. (1998) Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated 5 transformation of Arabidopsis thaliana. Plant J. 16(6): 735- 43; e Desfeux C, Clough SJ, Bent AF. (20000 Female reproductive tissues are the primary targets of Agrobacterium-mediated transformation by the Arabidopsis floral-dip method. Plant Physiol. 123(3): 895-904.).

Briefly- As Arabidopsis thaliana var Columbia (T0 plants) foram transformadas utilizando o procedimento Floral Dip descrito por Clough SJ e Bent AF (10) e por Desfeux C et al. (11), com pequenas modificações. A Arabidopsis thaliana Columbia (Col0) T0 Plants foram semeadas em vasos de 250 ml preenchido com uma mistura de crescimento com base em material fóssil umedecido. Os vasos foram cobertos com folha de alumínio e cúpula de plástico, mantidos à temperatura de 4 °C por 3-4 dias, então descobertas e incubadas em uma câmara de crescimento à temperatura de 18-24 °C sob 16/8 ciclos de luz/escuridão. As plantas T0 estavam prontas para transformação seis dias antes da florescência. Colônias individuais de Agrobacterium contendo vetores binários hospedagem de poli nucleotídeos de algumas configurações da invenção foram cultivadas em LB médio suplementado com kanamicina (50 mg/L) e gentamicina (50 mg/L). As culturas foram incubadas à 28 °C por 48 horas sob agitação vigorosa e centrifugadas a 4000 rpm por 5 minutos. Os paletes compreendendo células de Agrobacterium foram resuspendidos em uma transformação média que continha meia potência (2,15 g/L) Murashige-Skoog (MS) médio (Duchefa); 0,044 µM de benzilamino purina (Sigma); 112 µg/L B5 de vitaminas Gambourg (Sigma); 5% de sacarose e 0,2 ml/L Silwet L-77 (OSI 5 Specialists, CT) em água duplamente destilada, a pH of 5,7.

A transformação de plantas T0 foi realizada invertendo-se cada planta em uma suspensão de Agrobacterium de forma que o talo de floração seja submergido por 3-5 segundos. Cada planta T0 foi imediatamente colocada em uma bandeja de plástico, então coberta com domo de plástico transparente para manter a umidade e mantida no escuro em temperatura ambiente por 18 horas para facilitar a infecção e transformação. Plantas transformadas (transgênica) foram então descobertas e transferidas para uma estufa para plantas para recuperação e maturação. As plantas T0 transgênicas se desenvolverem em uma estufa para plantas por 3-5 semanas até a maturação síliqua, e então as sementes foram colhidas e mantidas em temperatura ambiente até a semeadura. Para gerar florações de plantas transgênicas T1 e T2 , os poli nucleotídeos de algumas configurações das invenções, sementes coletadas das plantas transgênicas T0 foram esterilizadas por superfície por encharcamento em 70 % de etanol por 1 minuto, seguido por encharcamento em 5 % de hipoclorito de sódio e 0,05 % de Triton X-100 por 5 minutos. As sementes de superfície esterilizada foram completamente molhadas em água destilada estéril e então colocadas em placas de cultura contendo meia potência de Murashige-Skoog (Duchefa); 2 % de sacarose; 0,8 % de ágar para planta; 50 mM de kanamicina e 200 mM de carbenicilina (Duchefa). As placas de cultura foram incubadas a 4 °C por 48 horas e então transferidas para 5 incubadora a 25 °C por uma semana adicional de incubação.

Plantas Arabidopsis Vital T1 foram transferidas para placas de cultura novas para um outro período de incubação. Após a incubação, as plantas T1 foram removidas para placas de cultura e plantadas em uma mistura para crescimento contido em vasos de 250 ml. As plantas transgênicas foram então deixadas para crescimento em uma estufa para plantas para amadurecerem. Sementes colhidas das plantas T1 foram cultivadas e até o crescimento para amadurecimento, assim como as plantas T2 sob as mesmas condições utilizadas para cultura e crescimento das plantas T 1. Pelo menos 10 transformações independentes foram criadas a partir de cada construção para as quais os lotes de sementes T2 foram coletadas.

Os genes NUE584 (SEQ ID Nº: 2514), NUE253 (SEQ ID Nº: 2448), NUE533 (SEQ ID Nº: 2473), NUE577 (SEQ ID Nº: 2507), NUE590 (SEQ ID Nº: 2519) e NUE562 (SEQ ID Nº: 2492) foram clonados, introduzidos na Arabidopsis e sementes T2 foram produzidas.

NUE540 (SEQ ID Nº: 2479), NUE549 (SEQ ID Nº: 2486), e NUE533 (SEQ ID Nº: 2473) desenvolveram plantas saudáveis de coloração púrpura, sugerindo o vigor aumentado das plantas transgênicas.

NUE591 (SEQ ID Nº: 2520)

produziu plantas de coloração verde clara. Este fenótipo está relacionado ao gene da capacidade fotossintética da planta em diferentes níveis de fertilização de nitrogênio.

EXEMPLO 5 5 ENSAIO1: EFICIÊNCIA MELHORADA DO USO DE NITROGÊNIO IN VITRO (ENSAIO DE CULTURA DE TECIDO) Sementes de superfície esterilizada foram semeadas em média basal [50% de Murashige-Skoog médio (MS) suplementado com 0,8 % de ágar de planta como agente solidificante] na presença de Kanamicina (utilizado como um agente de seleção). Após a semeadura, as placas foram transferidas por 2-3 dias para estratificação a 4°C e então germinadas a 25°C sob ciclos diários de 12 horas na luz e 12 horas no escuro, por 7 a 10 dias. Neste ponto de tempo, mudas escolhidas randomicamente foram cuidadosamente transferidas para placas contendo ½ de MS médio (15 mM N) para o tratamento normal de concentração de nitrogênio e 0,75 mM de nitrogênio para os tratamento de baixa concentração de nitrogênio. Cada placa continha 5 mudas do mesmo evento transgênico e 3-4 placas diferentes (replicatas) para cada evento. Para cada polinucleotídeo da invenção pelo menos quatro eventos independentes de transformações foram analisados para cada construção.

Plantas expressando os poli nucleotídeos da invenção foram comparadas às medições médias das plantas de controle (vetor vazio ou gene de relato GUS sob o mesmo promotor) utilizados no mesmo experimento.

Imagem digital – Um sistema de aquisição de imagem laboratorial, que consiste de uma câmera de reflexo digital (Canon EOS 300D) acoplada com uma lente de comprimento focal de 55 mm (série Canon EF-S), montada sobre um dispositivo de reprodução (Kaiser RS), que inclui 4 5 unidades de luz (lâmpadas de 4 x 150 Watts) e localizadas em um quarto escuro, foi utilizado para capturar imagens das plantinhas semeadas nas placas de ágar.

O processo de captura de imagem foi repetido a cada 3-4 dias, iniciando no dia 1 até o dia 10 (vide, por exemplo, as imagens nas Figuras 3 A-B).

Um sistema de análise de imagem foi utilizado, o qual consiste de um computador desktop pessoal (Intel P4 processador de 3.0 GHz) e um programa de domínio público - ImageJ 1.39 [programa de processamento baseado em Java que foi desenvolvido no U.S. National Institutes of Health e disponibilizado para uso livre na internet no protocolo de transferência de hipertexto://rsbweb (dot) nih (dot) gov/].

As imagens foram capturadas em resolução de 10 Mega Pixels (3888 x 2592 pixels) e armazenadas em formato JPEG (Joint Photographic Experts Group standard) de baixa compressão. A seguir, dados analisados foram salvos em arquivos texto e processados utilizando-se um software de análise estatística JMP (SAS institute).

Análise da muda – Utilizando a análise digital, os dados da muda foram calculados, incluindo a área de folhagem, cobertura da raiz e comprimento da raiz.

A área de crescimento relativo para os diversos parâmetros da muda foi calculada de acordo com a fórmulas V, VI e VII, a seguir.

Fórmula V: Taxa de crescimento relativo 5 da área de folhagem = Coeficiente de regressão da área de folhagem ao longo do tempo de curso.

Fórmula VI: Taxa de crescimento relativo da cobertura da raiz = Coeficiente de regressão da cobertura da raiz ao longo do tempo de curso.

Fórmula VII: Taxa de crescimento relativo do comprimento da raiz = Coeficiente de regressão da cobertura da raiz ao longo do tempo de curso.

Ao final do experimento, plantinhas foram removidas do meio e pesadas para a determinação do peso da planta nova. Plantinhas foram então secadas por 24 horas a 60°C, e pesadas novamente para medir o peso da planta seca para análises estatísticas posteriores. A taxa de crescimento foi determinada comparando-se a cobertura da área de folhagem, cobertura da raiz e comprimento da raiz, entre cada par de fotografias sequenciais, e os resultados foram utilizados para resolver o efeito do gene introduzido no vigor da planta sob condições ideais. Similarmente, o efeito do gene introduzido no acúmulo de biomassa, sob condições ideais, foi determinado comparando-se as plantas novas e peso seco àqueles das plantas de controle (contendo um vetor vazio e um gene de relato GUS sob o mesmo promotor). A partir de cada construção criada, 3-5 eventos independentes de transformação foram examinados em replicatas.

Análises estatísticas – Para 5 identificar genes conferindo vigor de planta significativamente melhorado ou arquitetura de raiz enlarguecida, os resultados obtidos das plantas transgênicas foram comparados com aqueles obtidos das plantas de controle. Para identificar genes e construções de melhor qualidade, resultados dos eventos independentes de transformação testados foram analisados separadamente. Para avalizar o efeito de um evento de gene sobre um controle, o dado foi analisado por teste T de Estudante e o valor p foi calculado. Os resultados foram considerados significativos se p ≤ 0,1. O pacote de software estatístico JMP foi utilizado (Versão 5.2.1, SAS Institute Inc., Cary, NC, EUA).

Resultados experimentais Os genes apresentados nas Tabela 24-25, abaixo, mostraram melhoria na eficiência de uso do nitrogênio (NUE), produzindo biomassa de plantas maiores quando germinadas sob condições limitadoras de germinação de nitrogênio, comparados a plantas de controle.

A Tabelas 24 e 25 representam análises de biomassa das plantas planta fresca e peso seco e área de folhagem) quando germinadas sob condições limitadoras de nitrogênio [condições de baixo nitrogênio ou deficiência de nitrogênio (0,75 mM N)] em plantas sobre- expressando os poli nucleotídeos de algumas configurações da invenção sob a regulação de um promotor constitutivo (35S).

A avaliação de cada gene foi realizada testando-se o desempenho de diversos eventos. Alguns dos genes foram avaliados em mais que um ensaio de cultura de tecido e o 5 segundo experimento confirmou o aumento significativo na biomassa das plantas. Evento com valor p <0,1 foi considerado estatisticamente significativo.

Tabela 24 Plantas transgênicas exógenas expressando os poli nucleotídeos de algumas configurações da invenção, exibindo biomassa de planta melhorada (fresca e peso seco) sob condições deficientes de nitrogênio Peso de Biomassa Fresco da Planta Peso de Biomassa Seco da Planta [mg] [mg] Nome do Nome do Evento# Média valor-p % incr, Evento# Média valor-p % incr, gene gene CT11 4892,1 204,50 6,3E-02 16,5 CT11 4894,3 7,80 7,7E-02 39,29 Controle 175,55 CT11 4892,3 8,85 1,3E-01 58,04 CT22 5023,1 184,08 2,6E-04 43,5 CT11 4892,2 7,85 4,5E-02 40,18 Controle 128,24 CT11 4893,2 5,98 6,8E-01 6,70 CT27 5033,7 195,00 3,2E-02 55,4 CT11 4892,1 9,20 3,7E-02 64,29 CT27 5031,4 150,93 3,2E-01 20,3 Controle 5,60 CT27 5035,2 233,40 2,7E-02 86,0 CT27 5033,7 7,68 1,2E-01 37,05 CT27 5033,6 150,63 4,2E-01 20,0 CT27 5031,4 6,73 2,2E-01 20,09 CT27 5033,4 179,95 1,8E-01 43,4 CT27 5035,2 9,68 4,3E-02 72,77 CT27 5033,8 189,30 2,0E-02 50,9 CT27 5033,6 6,40 3,1E-01 14,29 CT27 5033,5 146,98 3,6E-01 17,1 CT27 5033,4 8,03 1,4E-01 43,30 Controle 125,47 CT27 5033,8 7,60 7,7E-02 35,71 CT6 4943,1 184,30 8,3E-02 46,9 CT27 5033,5 6,40 9,6E-02 14,29 CT6 4941,4 188,38 3,0E-02 50,1 Controle 5,60 Controle 125,47 CT6 4943,1 7,78 1,9E-01 38,84 CT76 5044,6 213,08 1,8E-01 21,4 CT6 4941,4 9,60 1,3E-03 71,43 CT76 5041,5 250,50 1,6E-01 42,7 Controle 5,60 CT76 5043,5 207,00 2,5E-01 17,9 CT76 5044,6 7,83 1,1E-01 22,21 CT76 5041,7 204,53 1,6E-01 16,5 CT76 5041,5 9,10 2,0E-01 42,12 CT76 5041,9 209,00 8,4E-02 19,1 CT76 5043,5 11,05 1,7E-02 72,57 CT76 5041,6 256,10 9,0E-02 45,9 CT76 5041,7 7,35 1,9E-01 14,79 Controle 175,55 CT76 5041,9 7,33 2,0E-01 14,40 CT81 4992,1 223,50 1,8E-02 27,3 CT76 5041,6 9,28 9,6E-02 44,85 Controle 175,55 Controle 6,40 NUE208 8354,8 118,28 9,1E-02 17,3 CT81 4992,1 9,60 7,2E-04 49,93 NUE208 8351,3 138,15 8,5E-02 37,0 CT81 4993,5 6,60 8,0E-01 3,07 NUE208 8355,3 128,53 4,9E-02 27,5 Controle 6,40 NUE208 8351,5 112,93 3,5E-01 12,0 NUE206 6731,2 7,65 8,4E-01 4,97

Continuação da Tabela 24 Controle 100,81 NUE206 6732,9 10,70 7,4E-02 46,83 NUE209 8191,2 135,83 4,0E-01 34,7 NUE206 6732,5 7,98 7,0E-01 9,43 NUE209 8192,1 3 118,85 2,3E-01 17,9 Controle 7,2875

NUE209 8192,1 4 160,40 1,7E-01 59,1 NUE208 8354,8 6,05 1,0E-01 55,63 NUE209 8191,5 119,28 1,9E-01 18,3 NUE208 8351,3 7,95 4,3E-02 104,50 NUE209 8192,1 134,45 4,5E-01 33,4 NIIK20S 8355,3 6,63 9,8E-03 70,42 Controle 100,81 NIIK20S 8351,5 6,33 1,0E-02 62,70 NUE211 8265,1 118,48 6,7E-02 47,0 Controle 3,89 Controle 80,58 NUE209 8191,2 6,20 2,2E-01 59,49 NUE212 8331,1 115,18 4,7E-01 14,2 NUE209 8192,13 5,80 4,4E-02 49,20 NUE212 8335,2 182,98 6,6E-03 81,5 NUE209 8192,14 7,58 6,3E-02 94,86 NUE212 8334,1 121,25 2,6E-01 20,3 NUE209 8191,5 7,85 5,2E-02 101,93 NUE212 8331,4 177,68 1,1E-01 76,2 NUE209 8192,1 5,85 9,5E-02 50,48 Controle 100,81 Controle 3,89 NUE221 9802,8 134,30 1,6E-01 18,0 NIK2I0 8202,1 4,83 4,9E-01 24,12 NUE221 9806,1 138,60 9,0E-02 21,8 NUE210 8202,2 6,35 6,3E-03 63,34 Controle 113,81 NUE210 8201,3 5,50 4,7E-02 41,48 NUE222 8851,4 131,68 5,8E-03 44,1 Controle 3,89 NUE222 8854,1 108,37 6,9E-02 18,6 NUE212 8334,1 5,18 2,2E-01 42,76 NUE222 8853,2 119,23 1,9E-02 30,4 NUE212 8332,1 3,83 7,5E-01 5,52 NUE222 8851,3 161,75 2,1E-02 77,0 NUE212 8331,4 4,75 6,6E-02 31,03 Controle 91,40 Controle 3,63 NUE227 9851,2 102,75 1,2E-01 26,1 NUE221 9806,1 6,025 1,9E-01 18,7 NUE227 9854,2 84,70 8,3E-01 4,0 Controle 5,075 NUE227 9853,4 102,83 2,9E-01 26,2 NUE222 8851,4 4,03 7,9E-01 3,54 NUE227 9853,1 103,23 1,3E-01 26,7 NUE222 8853,2 4,65 2,2E-01 19,61 NUE227 9852,3 101,98 1,4E-01 25,2 NUE222 8851,3 6,45 3,3E-03 65,92 Controle 81,48 Controle 3,89 NUE230 9154,2 181,58 2,3E-02 48,8 NUE224 9002,2 6,93 2,1E-02 39,55 NUE230 9151,2 125,18 8,8E-01 2,6 NUE224 9001,3 6,83 2,8E-01 37,70 Controle 122,05 Controle 4,96 NUE231 10633, 3 138,98 8,5E-02 22,1 NUE227 9851,2 4,90 3,6E-01 24,05 Controle 113,81 NUE227 9854,2 4,60 4,8E-01 16,46

NUE233 10174, 3 156,40 3,7E-02 60,8 NUE227 9853,4 4,55 5,3E-01 15,19

NUE233 10174, 1 176,20 4,0E-03 81,2 NUE227 9853,1 4,83 1,4E-01 22,15

10173, NUE233 103,68 7,4E-01 6,6 NUE227 9852,3 5,18 7,7E-02 31,01 7 Controle 97,24 Controle 3,95 NUE233 10174, 1 117,95 8,1E-03 37,2 NUE228 10092,2 6,75 2,8E-02 35,34

10173, NUE233 95,40 4,6E-01 10,9 Controle 4,99 7 Controle 86,00 NUE230 9154,2 7,83 2,2E-02 57,68 NUE235 9691,1 175,50 3,2E-01 43,8 NUE230 9151,2 5,40 5,4E-01 8,82 NUE235 9693,3 178,60 3,1E-03 46,3 NUE230 9153,3 5,28 6,9E-01 6,30 NUE235 9694,3 156,28 2,1E-01 28,0 NUE230 9153,1 5,48 3,3E-01 10,33 Controle 122,05 Controle 4,96 NUE237 9651,1 159,43 1,6E-01 30,6 NUE231 10633,3 8,425 1,0E-05 66,0 NUE237 9654,4 170,70 4,1E-02 39,9 Controle 5,075 NUE237 9654,1 128,70 7,1E-01 5,4 NUE233 10174,3 6,05 5,1E-02 44,05

Continuação da Tabela 24 NUE237 9653,3 133,33 6,1E-01 9,2 NUE233 10174,1 8,15 2,7E-03 94,05 Controle 122,05 NUE233 10173,7 4,45 7,3E-01 5,95 NUE239 9192,3 168,58 5,1E-02 27,4 Controle 4,20 NUE239 9192,1 142,68 1,7E-01 7,8 NUE235 9694,2 5,25 7,9E-01 5,79 NUE239 9191,2 136,75 5,8E-01 3,3 NUE235 9691,1 7,28 1,6E-01 46,60 Controle 132,34 NUE235 9694,4 5,83 4,1E-01 17,38 NUE240 9172,1 157,53 5,3E-03 19,0 NUE235 9693,3 7,28 6,0E-02 46,60 NUE240 9174,3 143,65 1,7E-01 8,5 NUE235 9694,3 7,88 1,5E-02 58,69 Controle 132,34 Controle 4,96 NUE241 9632,5 133,63 1,4E-01 64,0 NUE237 9651,1 7,03 3,2E-01 41,56 NUE241 9631,3 148,18 3,8E-03 81,9 NUE237 9654,4 8,88 2,0E-02 78,84 NUE241 9632,3 137,60 8,0E-03 68,9 NUE237 9654,1 6,23 6,5E-02 25,44 NUE241 9632,4 131,93 1,9E-02 61,9 NUE237 9653,3 7,08 8,5E-02 42,57 Controle 81,48 Controle 4,96 NUE242 9212,1 124,50 2,7E-02 48,7 NUE239 9191,1 9,00 5,3E-02 60,71 NUE242 9214,1 89,98 7,5E-01 7,4 NUE239 9191,2 6,13 5,2E-01 9,38 NUE242 9211,2 95,30 4,3E-01 13,8 Controle 5,60 NUE242 9213,4 125,50 2,8E-02 49,9 NUE240 9172,4 7,35 3,5E-02 18,55 Controle 83,75 NUE240 9174,3 6,53 6,1E-01 5,24 NUE244 9061,1 119,60 2,8E-03 30,9 Controle 6,20 NUE244 9061,5 148,80 1,4E-01 62,8 NUE241 9633,4 5,68 6,1E-02 43,67 Controle 91,40 NUE241 9632,3 6,55 1,3E-02 65,82 NUE246 9033,6 140,75 1,4E-01 41,2 NUE241 9632,2 6,20 4,4E-02 56,96 NUE246 9033,8 111,20 4,8E-01 11,6 NUE241 9632,4 5,68 7,9E-04 43,67 NUE246 9033,4 148,63 2,7E-03 49,1 Controle 3,95 NUE246 9034,1 138,50 6,0E-03 39,0 NUE246 9033,6 4,40 3,2E-01 19,32 NUE246 9031,1 131,63 3,5E-01 32,1 NUE246 9033,8 5,13 1,8E-01 38,98 Controle 99,68 NUE246 9033,4 4,73 8,2E-02 28,14 NUE248 8981,5 197,35 1,3E-02 30,1 NUE246 9034,1 6,43 1,7E-02 74,46 Controle 151,66 NUE246 9031,1 4,80 2,5E-01 30,17 NUE249 9124,2 82,68 9,2E-01 3,4 Controle 3,69 NUE249 9121,4 125,13 2,0E-03 56,5 NUE248 8981,5 7,98 6,0E-02 23,17 NUE249 9123,3 89,55 2,3E-01 12,0 NUE248 8984,1 6,75 7,1E-01 4,25 Controle 79,94 NUE248 8981,2 7,35 3,3E-01 13,51 NUE250 9132,1 149,53 4,6E-02 22,5 Controle 6,48 NUE250 9133,2 193,20 1,3E-02 58,3 NUE249 9124,2 5,05 7,6E-01 11,60 NUE250 9132,2 152,38 1,8E-01 24,8 NUE249 9121,4 5,50 2,3E-02 21,55 NUE250 9134,1 205,50 5,0E-02 68,4 Controle 4,53 Controle 122,05 NUE250 9132,1 7,38 4,8E-02 48,61 NUE251 10181, 3 175,35 4,7E-03 80,3 NUE250 9133,2 7,95 2,5E-03 60,20

10183, NUE251 127,58 1,7E-01 31,2 NUE250 9132,2 7,23 1,0E-01 45,59 2

NUE251 10183, 1 118,03 3,6E-01 21,4 NUE250 9134,1 8,03 1,1E-02 61,71 Controle 97,24 Controle 4,96 NUE252 9011,3 252,23 1,3E-02 40,9 NUE251 10181,3 7,03 2,9E-02 67,26 NUE252 9012,2 201,53 3,1E-01 12,5 NUE251 10183,2 5,35 2,6E-01 27,38 Controle 179,06 NUE251 10183,1 4,93 4,6E-01 17,26 10063, NUE256 127,55 1,7E-01 31,2 Controle 4,2 4

NUE256 10064, 1 155,88 3,1E-02 60,3 NUE256 10063,4 5,78 1,0E-01 37,50

10061, NUE256 158,93 1,1E-02 63,4 NUE256 10064,1 7,40 1,0E-02 76,19 2

Continuação da Tabela 24

NUE256 10062, 4 147,40 1,4E-01 51,6 NUE256 10061,2 6,35 1,8E-02 51,19

10063, NUE256 134,18 1,9E-01 38,0 NUE256 10062,4 7,43 1,4E-01 76,79 2

NUE256 10061, 1 101,35 8,3E-01 4,2 NUE256 10063,2 5,73 1,4E-01 36,31 Controle 97,24 NUE256 10061,1 4,40 8,0E-01 4,76 10061, NUE256 104,20 5,5E-01 21,2 Controle 4,20 2 10061, NUE256 127,68 1,8E-01 48,5 NUE512 9284,3 4,65 6,8E-01 5,38 4 10063, NUE256 88,28 8,5E-01 2,6 NUE512 9282,3 7,78 1,3E-02 76,20 2 Controle 86,00 NUE512 9284,4 6,70 2,6E-02 51,84 NUE268 8992,1 108,25 4,3E-01 10,4 Controle 4,41 NUE268 8996,3 118,68 5,5E-01 21,0 NUE515 9713,6 6,725 2,4E-02 32,5 NUE268 8996,5 177,25 8,4E-02 80,8 Controle 5,075 NUE268 8996,2 112,10 3,7E-01 14,3 NUE516 9291,1 5,78 2,4E-01 16,37 Controle 98,05 NUE516 9291,4 7,43 2,7E-02 49,62 NUE269 9104,1 93,80 3,0E-01 23,1 NUE516 9293,2 5,78 4,3E-01 16,37 NUE269 9101,3 94,65 6,2E-03 24,2 Controle 4,96 Controle 76,20 NUE519 9371,2 11,75 4,8E-02 89,52 NUE512 9284,2 166,53 6,1E-05 73,7 NUE519 9371,1 8,50 1,5E-02 37,10 NUE512 9284,3 112,35 2,1E-01 17,2 NUE519 9372,2 6,60 6,7E-01 6,45 NUE512 9282,3 181,10 1,3E-02 88,9 Controle 6,20 NUE512 9284,4 171,70 7,6E-02 79,1 NUE525 9531,2 5,25 3,6E-01 -10,45 Controle 95,88 NUE525 9534,1 5,40 4,4E-01 -7,89 NUE515 9712,5 116,43 8,6E-01 2,3 NUE525 9531,3 6,73 4,4E-01 14,71 NUE515 9713,6 148,18 2,0E-02 30,2 NUE525 9533,1 7,43 1,2E-02 26,65 Controle 113,81 NUE525 9531,1 7,20 9,9E-02 22,81 NUE514 9404,1 113,98 8,5E-02 36,1 Controle 5,86 NUE514 9403,2 94,58 1,2E-01 12,9 NUE531 10083,1 6,58 4,2E-02 31,83 NUE514 9402,5 99,38 3,5E-01 18,7 NUE531 10082,2 6,25 1,6E-01 25,31 Controle 83,75 NUE531 10081,4 8,50 2,4E-02 70,43 NUE516 9291,1 128,58 6,7E-01 5,3 NUE531 10081,5 8,03 2,5E-02 60,90 NUE516 9291,4 165,93 1,5E-01 35,9 Controle 4,99 NUE516 9293,2 139,73 5,7E-01 14,5 NUE532 9222,4 6,15 3,5E-05 44,71 Controle 122,05 NUE532 9222,1 6,98 1,3E-02 64,12 NUE519 9371,2 182,10 1,5E-02 37,6 NUE532 9223,3 5,53 1,4E-01 30,00 Controle 132,34 NUE532 9224,4 4,43 4,4E-01 4,12 NUE521 9363,1 107,40 3,1E-01 28,2 Controle 4,25 NUE521 9362,2 119,80 2,6E-02 43,0 NUE536 9233,3 6,03 4,8E-03 63,39 NUE521 9361,2 136,10 3,5E-04 62,5 NUE536 9234,1 4,55 3,3E-01 23,39 NUE521 9361,3 104,15 3,8E-01 24,4 NUE536 9231,3 4,08 5,7E-01 10,51 NUE521 9363,4 132,95 5,8E-03 58,7 NUE536 9232,4 3,98 6,1E-01 7,80 Controle 83,75 Controle 3,69 NUE523 9412,5 190,08 2,4E-01 25,3 NUE537 9391,1 5,08 3,5E-01 15,01 NUE523 9414,2 192,23 1,9E-01 26,7 NUE537 9393,2 4,53 9,2E-01 2,55 NUE523 9412,1 187,50 2,8E-02 23,6 NUE537 9394,4 5,90 2,8E-01 33,71 Controle 151,66 NUE537 9391,2 5,53 2,2E-01 25,21 NUE527 9201,1 111,28 3,2E-03 273,7 NUE537 9393,3 5,63 2,7E-02 27,48 NUE527 9202,6 51,70 2,1E-02 73,6 Controle 4,41 NUE527 9203,2 49,77 4,3E-02 67,1 NUE539 10101,5 6,78 4,4E-03 61,31 NUE527 9204,1 45,83 3,0E-01 53,9 NUE539 10103,5 5,63 1,7E-01 33,93

Continuação da Tabela 24 Controle 29,78 NUE539 10101,2 7,43 4,4E-02 76,79 NUE531 10083, 1 159,05 9,2E-02 38,1 NUE539 10101,7 7,05 2,3E-02 67,86

10082, NUE531 154,43 1,6E-02 34,1 NUE539 10103,4 4,88 3,6E-01 16,07 2

NUE531 10081, 4 173,70 5,9E-02 50,8 Controle 4,20

10081, NUE531 154,38 1,9E-02 34,0 NUE542 9333,2 8,35 2,6E-02 89,24 5 Controle 115,16 NUE542 9334,1 4,80 5,2E-01 8,78 NUE531 10081, 4 128,20 3,4E-02 49,1 NUE542 9331,3 4,83 6,9E-01 9,35

10083, NUE531 91,95 6,4E-01 6,9 NUE542 9334,3 4,65 8,1E-01 5,38 2 10081, NUE531 165,43 5,5E-02 92,4 Controle 4,41 5 Controle 86,00 NUE548 9095,2 8,05 2,6E-01 44,07 NUE532 9222,4 143,08 9,9E-02 70,8 NUE548 9095,4 8,60 4,7E-02 53,91 NUE532 9222,1 106,98 2,3E-01 27,7 NUE548 9091,1 6,43 3,0E-01 14,99 NUE532 9223,3 100,20 1,3E-01 19,6 Controle 5,59 Controle 83,75 NUE549 9343,7 7,67 2,2E-02 54,88 NUE532 9222,4 118,33 7,6E-02 41,3 Controle 4,95 NUE532 9222,1 170,88 1,1E-01 104,0 NUE550 9143,1 5,75 3,9E-04 35,29 NUE532 9223,3 115,80 3,1E-01 38,3 NUE550 9143,4 6,85 7,3E-03 61,18 NUE532 9223,5 104,90 7,7E-01 25,3 NUE550 9142,2 6,45 1,6E-02 51,76 NUE532 9224,4 110,48 6,3E-01 31,9 Controle 4,25 Controle 98,05 NUE553 9181,5 5,55 7,6E-02 30,59 NUE535 9082,2 32,95 4,7E-01 10,7 NUE553 9184,3 4,58 6,3E-01 7,65 NUE535 9086,2 73,97 3,2E-02 148,4 NUE553 9182,2 4,70 2,4E-01 10,59 NUE535 9086,3 51,43 6,0E-02 72,7 Controle 4,25 NUE535 9081,1 61,90 1,9E-01 107,9 NUE554 9114,1 4,33 9,4E-01 1,76 NUE535 9084,4 57,00 9,3E-03 91,4 NUE554 9115,2 6,88 1,3E-02 61,76 Controle 29,78 NUE554 9114,2 5,35 1,8E-02 25,88 NUE537 9391,1 131,75 2,2E-01 37,4 NUE554 9115,3 4,45 5,9E-01 4,71 NUE537 9393,2 110,88 3,9E-01 15,6 Controle 4,25 NUE537 9394,4 214,60 6,4E-02 123,8 NUE564 9242,3 4,55 6,7E-05 114,12 NUE537 9391,2 141,33 3,2E-02 47,4 NUE564 9243,2 4,03 7,8E-02 89,41 NUE537 9393,3 136,40 2,1E-04 42,3 NUE564 9242,4 3,28 3,6E-02 54,12 Controle 95,88 NUE564 9242,2 3,90 7,6E-02 83,53 NUE538 9782,4 108,85 2,7E-01 33,6 NUE564 9243,4 4,35 2,2E-06 104,71 NUE538 9781,4 95,73 4,5E-01 17,5 Controle 2,13 NUE538 9781,1 94,65 2,6E-01 16,2 NUE567 9263,2 3,15 2,1E-01 48,24 NUE538 9782,1 145,73 8,8E-02 78,9 NUE567 9261,3 3,05 1,8E-02 43,53 Controle 81,48 NUE567 9263,3 3,28 8,5E-03 54,12 10101, NUE539 163,80 2,4E-02 68,5 NUE567 9261,4 3,28 5,9E-03 54,12 5 10103, NUE539 124,98 2,8E-01 28,5 Controle 2,13 5 10101, NUE539 177,98 2,7E-02 83,0 NUE569 9384,4 2,63 3,0E-01 23,53 2 10101, NUE539 162,73 2,5E-02 67,3 NUE569 9381,2 5,20 1,8E-02 144,71 7

NUE539 10103, 4 105,13 7,6E-01 8,1 NUE569 9381,5 2,90 5,3E-01 36,47 Controle 97,24 NUE569 9381,3 4,53 1,3E-01 112,94 NUE542 9333,2 165,80 6,0E-02 72,9 NUE569 9384,2 3,58 4,5E-01 68,24

Continuação da Tabela 24 NUE542 9331,3 150,08 9,7E-02 56,5 Controle 2,13 NUE542 9334,3 153,73 2,9E-03 60,3 NUE570 9311,4 4,23 1,6E-01 98,82 NUE542 9332,1 167,08 1,0E-01 74,3 NUE570 9313,3 3,85 5,1E-02 81,18 Controle 95,88 NUE570 9314,4 3,58 8,1E-01 68,24 NUE542 9333,2 169,30 1,0E-01 38,7 NUE570 9314,1 4,25 4,3E-02 100,00 NUE542 9332,1 165,13 3,6E-02 35,3 NUE570 9312,3 4,33 4,8E-01 103,53 Controle 122,05 Controle 2,13 10051, NUE543 99,90 1,4E-01 22,6 NUE571 9304,2 4,28 1,1E-02 101,18 2

NUE543 10051, 6 113,23 1,8E-01 39,0 NUE571 9304,3 4,15 1,7E-02 95,29

NUE543 10053, 1 97,10 3,1E-01 19,2 NUE571 9303,2 5,13 6,8E-05 141,18

10054, NUE543 121,08 9,3E-03 48,6 NUE571 9302,3 3,63 7,7E-02 70,59 2 Controle 81,48 NUE571 9301,4 3,90 1,9E-02 83,53 NUE544 9764,1 143,68 3,0E-02 33,9 Controle 2,13 NUE544 9763,4 115,60 4,9E-01 7,7 NUE572 9321,3 3,35 2,6E-02 57,65 NUE544 9764,2 127,50 1,6E-01 18,8 NUE572 9321,1 4,50 2,2E-02 111,76 NUE544 9763,3 123,08 3,5E-02 14,7 NUE572 9322,1 3,03 1,2E-01 42,35 Controle 107,29 NUE572 9324,3 4,10 1,5E-02 92,94 NUE549 9343,7 142,03 1,9E-02 19,6 NUE572 9322,2 3,63 1,2E-02 70,59 Controle 118,75 Controle 2,13 NUE550 9141,3 109,05 5,0E-01 11,2 NUE573 9491,4 5,65 3,2E-01 14,14 NUE550 9143,1 136,53 1,7E-01 39,2 NUE573 9491,1 6,18 1,2E-01 24,75 NUE550 9143,4 161,73 1,3E-02 64,9 NUE573 9493,2 5,53 3,2E-01 11,78 NUE550 9142,2 131,30 5,7E-02 33,9 Controle 4,95 Controle 98,05 NUE574 10364,2 5,73 2,9E-01 11,98 NUE553 9181,5 52,48 2,2E-04 76,2 NUE574 10366,2 7,08 5,3E-02 38,39 NUE553 9184,1 57,30 3,2E-03 92,4 Controle 5,11 NUE553 9184,3 82,23 1,3E-05 176,2 NUE576 9791,3 6,70 8,6E-04 69,62 NUE553 9185,2 56,35 8,3E-04 89,3 NUE576 9792,4 5,18 6,6E-02 31,01 NUE553 9182,2 68,93 8,8E-03 131,5 NUE576 9794,1 4,78 4,0E-01 20,89 Controle 29,78 NUE576 9793,3 5,65 8,4E-04 43,04 NUE554 9115,2 215,73 3,9E-02 120,0 Controle 3,95 NUE554 9114,2 116,98 1,9E-01 19,3 NUE581 9723,6 5,875 2,7E-01 15,8 Controle 98,05 NUE581 9724,9 5,425 6,3E-01 6,9 NUE564 9242,3 120,53 8,6E-03 25,7 Controle 5,075 NUE564 9243,2 130,18 2,3E-02 35,8 NUE582 9564,2 5,28 5,6E-01 6,30 NUE564 9242,2 221,87 6,4E-02 131,4 NUE582 9562,4 6,45 1,8E-01 29,97 NUE564 9243,4 121,85 1,0E-01 27,1 NUE582 9561,2 6,95 1,4E-03 40,05 Controle 95,88 Controle 4,96 NUE567 9263,2 133,50 8,5E-02 39,2 NUE583 9673,1 5,80 1,1E-01 46,84 NUE567 9261,2 133,75 2,6E-01 39,5 NUE583 9673,2 4,33 2,7E-01 9,49 Controle 95,88 NUE583 9671,2 5,28 2,1E-01 33,54 NUE568 9461,2 164,90 7,0E-02 38,9 NUE583 9671,1 4,88 3,7E-01 23,42 Controle 118,75 Controle 3,95 NUE569 9381,2 97,40 1,5E-01 20,5 NUE585 9662,4 4,65 3,3E-01 26,10 NUE569 9381,3 108,85 7,3E-02 34,7 NUE585 9661,5 4,78 5,4E-02 29,49 NUE569 9384,2 93,95 9,3E-02 16,2 NUE585 9661,3 3,90 6,6E-01 5,76 Controle 80,83 NUE585 9662,1 4,00 6,9E-01 8,47 NUE570 9311,4 127,53 1,3E-01 33,0 NUE585 9661,1 4,43 2,5E-01 20,00 NUE570 9314,1 135,55 3,8E-01 41,4 Controle 3,69 NUE570 9312,3 143,83 3,5E-02 50,0 NUE586 9751,1 5,38 1,9E-01 22,86 Controle 95,88 NUE586 9751,7 6,43 1,4E-01 46,86

Continuação da Tabela 24 NUE573 9491,1 135,18 6,0E-02 13,8 NUE586 9752,1 8,15 3,7E-04 86,29 Controle 118,75 Controle 4,38 10364, NUE574 110,48 2,1E-02 28,5 NUE587 9643,2 7,45 8,6E-03 70,29 2 10362, NUE574 89,95 7,8E-01 4,6 NUE587 9643,1 5,58 9,3E-02 27,43 2 10366, NUE574 153,38 8,1E-02 78,3 NUE587 9642,2 4,50 8,7E-01 2,86 2 Controle 86,00 NUE587 9641,3 6,88 4,2E-02 57,14 NUE576 9791,3 164,75 1,6E-02 102,2 Controle 4,38 NUE576 9792,3 90,20 4,8E-01 10,7 NUE588 9591,3 5,03 5,9E-02 36,27 NUE576 9792,4 106,40 1,0E-01 30,6 NUE588 9591,4 3,75 9,4E-01 1,69 NUE576 9794,1 108,43 1,9E-01 33,1 NUE588 9592,2 4,68 3,7E-01 26,78 NUE576 9793,3 136,93 6,6E-02 68,1 NUE588 9592,4 4,98 1,7E-01 34,92 Controle 81,48 NUE588 9592,1 3,98 7,2E-01 7,80 NUE583 9673,4 171,65 5,2E-03 99,6 Controle 3,69 NUE583 9673,2 117,30 3,2E-03 36,4 NUE592 9744,5 9,000 3,7E-07 77,3 Controle 86,00 NUE592 9747,5 7,900 2,1E-05 55,7 NUE585 9662,4 135,60 1,7E-01 36,0 Controle 5,075 NUE585 9661,5 122,20 6,2E-02 22,6 Controle 99,68 NUE586 9751,1 153,83 2,1E-01 88,8 NUE586 9752,1 194,23 2,2E-02 138,4 Controle 129,73 NUE587 9643,2 156,78 2,0E-01 92,4 NUE587 9641,3 180,28 6,6E-02 121,3 Controle 129,73 NUE592 9744,5 187,48 1,8E-06 64,7 NUE592 9747,5 155,45 5,0E-03 36,6 Controle 113,81 Tabela 24: Análises de biomassa da planta (planta fresco e peso seco) de plantas transgênicas sobre-expressando o poli nucleotídeos exógenos de algumas configurações da invenção (utilizando genes clonados ou sintéticos listados na Tabela 5 23 acima) sob condições de regulação de um promotor constitutivo (35S) quando germinadas sob condições limitadoras de nitrogênio [condições de baixo nitrogênio ou deficiência de nitrogênio (0,75 mM N)], como comparado à plantas de controle. "Aum." = aumento.

Tabela 25 Plantas transgênicas exógenas expressando os poli nucleotídeos de algumas configurações da invenção, exibindo biomassa de planta melhorada (área de folhagem) sob condições deficientes de nitrogênio Area Foliar [cm2] Nome do Gene Evento # Média valor-p % crescimento CT11 4894,3 0,70 4,9E-02 43,10 CT11 4892,3 0,77 4,0E-02 57,27 CT11 4892,2 0,65 7,4E-02 33,68 CT11 4893,2 0,51 6,3E-01 4,12 CT11 4892,1 0,93 1,2E-02 91,25 Controle 0,49 CT27 5033,7 0,40 8,2E-01 3,15 CT27 5031,4 0,59 7,3E-04 50,88 CT27 5035,2 0,52 9,6E-03 33,43 CT27 5033,4 0,45 5,2E-01 14,02 Controle 0,39 CT6 4943,1 0,58 1,1E-01 47,28 CT6 4941,4 0,56 6,0E-02 43,93 Controle 0,39 CT76 5044,6 0,58 2,9E-01 19,76 CT76 5041,5 0,74 1,1E-01 50,86 CT76 5043,5 0,81 2,8E-04 66,21 CT76 5041,9 0,79 5,4E-02 61,76 CT76 5041,6 0,80 7,2E-03 64,90 Controle 0,49 CT81 4992,1 0,70 3,0E-04 44,35 CT81 4993,6 0,50 8,2E-01 3,08 CT81 4993,5 0,59 3,2E-01 20,36 CT81 4992,2 0,69 8,9E-02 41,46 Controle 0,49 NUE206 6731,2 0,34 1,4E-02 30,90 NUE206 6732,7 0,30 1,9E-01 15,55 Controle 0,26 NUE208 8354,8 0,33 4,7E-01 8,19 NUE208 8351,3 0,43 5,8E-02 44,03 NUE208 8355,3 0,37 7,4E-02 22,98 NUE208 8351,5 0,31 7,3E-01 3,72 Controle 0,30 NUE209 8192,13 0,39 1,6E-01 30,67 NUE209 8192,14 0,47 5,9E-02 56,92 NUE209 8191,5 0,32 6,9E-01 4,74 Controle 0,30 NUE209 8192,13 0,45 4,7E-03 34,55 NUE209 8191,5 0,51 2,8E-02 53,15 NUE209 8192,14 0,40 1,5E-01 20,45 Controle 0,33 NUE211 8265,1 0,35 7,9E-02 17,46 Controle 0,30 NUE212 8335,2 0,43 1,7E-03 43,62 NUE212 8334,1 0,33 5,3E-01 10,76 NUE212 8331,4 0,44 3,5E-02 44,45 Controle 0,30 NUE221 9801,1 0,500 1,0E-01 20,5 NUE221 9802,8 0,505 8,2E-02 21,8 NUE221 9806,1 0,666 4,2E-06 60,5

Continuação da Tabela 25 Controle 0,415 NUE224 9001,3 0,62 1,7E-03 38,99 Controle 0,44 NUE225 9732,8 0,445 5,6E-01 7,2 NUE225 9734,5 0,484 1,8E-01 16,6 NUE225 9734,9 0,439 6,4E-01 5,7 Controle 0,415 NUE230 9154,2 0,52 7,3E-02 17,73 NUE230 9151,2 0,50 1,2E-01 12,59 Controle 0,44 NUE231 10633,3 0,573 2,8E-04 38,1 Controle 0,415 NUE233 10174,3 0,47 8,4E-03 54,39 NUE233 10174,1 0,75 2,8E-04 146,46 NUE233 10172,5 0,32 6,6E-01 6,03 NUE233 10173,7 0,39 3,5E-02 26,43 Controle 0,31 NUE237 9651,1 0,52 4,4E-01 17,13 NUE237 9654,4 0,57 1,1E-01 29,19 NUE237 9654,1 0,54 2,2E-02 21,91 Controle 0,44 NUE239 9191,1 0,66 4,6E-02 57,34 Controle 0,42 NUE240 9172,2 0,68 1,4E-03 63,63 NUE240 9174,3 0,55 7,7E-02 32,26 Controle 0,42 NUE240 9174,2 0,54 7,7E-01 4,29 NUE240 9172,1 0,71 7,8E-03 35,86 NUE240 9174,3 0,57 4,2E-01 9,74 Controle 0,52 NUE241 9633,4 0,56 2,1E-05 47,36 NUE241 9632,2 0,44 1,4E-01 15,74 NUE241 9632,4 0,49 2,4E-01 28,11 Controle 0,38 NUE241 9631,3 0,53 3,9E-03 36,03 NUE241 9632,3 0,54 7,5E-02 40,72 NUE241 9632,4 0,49 1,1E-01 26,49 Controle 0,39 NUE242 9212,1 0,56 2,9E-02 50,18 NUE242 9213,4 0,43 1,3E-01 14,72 Controle 0,37 NUE246 9033,6 0,44 8,7E-01 3,16 NUE246 9033,8 0,51 1,8E-01 21,26 NUE246 9033,4 0,50 2,6E-01 18,30 NUE246 9034,1 0,64 2,1E-02 52,45 NUE246 9031,1 0,49 4,7E-01 15,11 Controle 0,42 NUE248 8981,5 0,58 4,6E-02 38,97 NUE248 8981,2 0,51 3,1E-02 22,19 Controle 0,42 NUE251 10181,3 0,54 7,6E-06 75,63 NUE251 10183,2 0,42 2,3E-02 38,78 NUE251 10183,1 0,42 5,4E-03 38,58 Controle 0,31 NUE251 10183,2 0,84 1,0E-02 72,56

Continuação da Tabela 25 NUE251 10182,1 0,57 1,2E-01 18,26 Controle 0,49 NUE256 10063,4 0,43 6,3E-01 5,53 NUE256 10064,1 0,54 1,3E-02 30,76 NUE256 10061,1 0,45 5,2E-01 10,87 Controle 0,41 NUE256 10063,4 0,58 6,6E-02 90,27 NUE256 10064,1 0,59 1,1E-02 94,09 NUE256 10061,2 0,68 9,5E-06 122,00 NUE256 10062,4 0,64 8,2E-03 108,97 NUE256 10063,2 0,52 9,2E-03 68,33 Controle 0,31 NUE256 10061,2 0,75 5,3E-05 53,75 NUE256 10061,4 0,71 1,4E-02 46,02 NUE256 10063,2 0,52 4,1E-01 6,83 Controle 0,49 NUE268 8996,5 0,65 4,3E-02 21,87 Controle 0,53 NUE511 9273,1 0,47 4,7E-01 13,04 NUE511 9271,2 0,54 2,2E-02 28,41 Controle 0,42 NUE512 9282,3 0,72 2,1E-02 68,37 NUE512 9284,4 0,60 7,8E-03 39,86 Controle 0,43 NUE514 9404,1 0,49 1,1E-02 30,78 NUE514 9402,2 0,41 5,1E-01 10,03 NUE514 9403,2 0,42 1,5E-01 12,66 NUE514 9402,5 0,42 5,1E-01 13,45 Controle 0,37 NUE515 9712,5 0,454 4,5E-01 9,4 NUE515 9713,6 0,648 1,7E-05 56,1 Controle 0,415 NUE520 9771,4 0,40 3,1E-03 31,70 Controle 0,31 NUE521 9362,2 0,50 7,5E-02 33,38 NUE521 9361,2 0,43 1,6E-01 14,92 NUE521 9363,4 0,57 1,3E-03 54,08 Controle 0,37 NUE521 9363,4 0,63 8,6E-02 31,31 Controle 0,48 NUE523 9412,5 0,59 1,9E-01 40,65 NUE523 9414,2 0,48 1,6E-01 16,08 NUE523 9412,1 0,65 7,4E-03 55,07 Controle 0,42 NUE525 9531,2 0,44 2,9E-01 15,42 NUE525 9534,1 0,45 3,8E-01 17,35 NUE525 9531,3 0,51 6,2E-02 34,94 NUE525 9533,1 0,54 6,9E-02 42,25 NUE525 9531,1 0,49 2,7E-03 29,15 Controle 0,38 NUE527 9201,1 0,44 6,7E-02 22,51 Controle 0,36 NUE528 9072,1 0,48 4,5E-02 17,39 NUE528 9073,1 0,42 7,8E-01 3,17 Controle 0,41

Continuação da Tabela 25 NUE531 10083,1 0,74 2,0E-02 31,74 NUE531 10082,2 0,69 3,0E-02 22,95 NUE531 10081,4 0,75 8,8E-02 32,91 NUE531 10081,5 0,75 1,3E-01 33,71 Controle 0,56 NUE535 9082,2 0,37 4,1E-01 22,10 NUE535 9084,2 0,37 4,6E-02 22,19 NUE535 9081,1 0,43 1,7E-01 41,23 NUE535 9083,1 0,63 2,8E-03 105,40 NUE535 9084,4 0,46 8,7E-03 50,93 Controle 0,31 NUE537 9391,2 0,65 1,6E-02 51,35 NUE537 9393,3 0,76 3,4E-03 76,76 Controle 0,43 NUE539 10101,5 0,53 1,2E-02 74,32 NUE539 10103,5 0,50 6,6E-05 63,28 NUE539 10101,2 0,60 7,3E-05 96,27 NUE539 10101,7 0,68 3,9E-03 121,77 NUE539 10103,4 0,32 8,9E-01 4,57 Controle 0,31 NUE542 9333,2 0,56 2,0E-02 25,55 Controle 0,44 NUE543 10051,2 0,43 4,6E-01 11,78 NUE543 10051,6 0,52 1,7E-02 33,53 Controle 0,39 NUE544 9764,2 0,49 9,7E-02 19,20 Controle 0,41 NUE548 9095,2 0,59 3,4E-03 41,28 NUE548 9095,3 0,47 3,1E-01 13,55 NUE548 9092,2 0,55 1,8E-01 32,59 Controle 0,42 NUE548 9095,2 0,67 3,3E-01 10,81 NUE548 9095,4 0,82 5,7E-02 36,33 NUE548 9091,1 0,71 2,4E-02 17,16 Controle 0,60 NUE568 9471,3 0,54 3,5E-02 18,92 NUE568 9472,2 0,64 3,6E-04 41,93 Controle 0,45 NUE573 9491,4 0,59 6,8E-02 29,98 NUE573 9491,1 0,51 6,1E-01 13,35 NUE573 9494,3 0,52 2,8E-01 14,77 Controle 0,45 NUE574 10364,2 0,63 8,1E-04 28,96 NUE574 10366,2 0,81 4,0E-03 66,05 Controle 0,49 NUE576 9791,3 0,47 8,9E-02 21,80 NUE576 9792,3 0,39 9,8E-01 0,42 NUE576 9792,4 0,48 1,5E-01 24,25 NUE576 9794,1 0,46 1,3E-01 19,07 NUE576 9793,3 0,49 6,6E-02 25,95 Controle 0,39 NUE581 9723,6 0,449 5,0E-01 8,3 NUE581 9724,9 0,583 1,5E-03 40,6 Controle 0,415 NUE582 9562,4 0,54 7,0E-02 21,31

Continuação da Tabela 25 NUE582 9561,2 0,51 6,2E-02 14,15 Controle 0,44 NUE583 9673,1 0,56 6,5E-02 46,13 Controle 0,39 NUE583 9673,4 0,91 2,1E-02 88,22 NUE583 9673,2 0,65 8,8E-02 34,45 Controle 0,49 NUE586 9751,7 0,52 3,8E-01 11,42 NUE586 9752,1 0,62 1,1E-02 31,98 Controle 0,47 NUE586 9751,7 0,50 2,3E-01 23,80 NUE586 9751,3 0,42 6,9E-01 3,28 NUE586 9752,4 0,53 3,2E-02 30,20 NUE586 9752,1 0,53 2,9E-01 30,75 Controle 0,41 NUE587 9643,2 0,58 1,5E-02 24,86 Controle 0,47 NUE592 9741,7 0,462 3,7E-01 11,3 NUE592 9744,5 0,721 4,3E-08 73,7 NUE592 9747,4 0,472 2,7E-01 13,8 NUE592 9747,5 0,711 1,0E-07 71,4 Controle Tabela 25: Análises de biomassa da planta (área de folhagem) de plantas transgênicas sobre-expressando o poli nucleotídeos exógenos de algumas configurações da invenção (utilizando genes clonados ou sintéticos listados na Tabela 5 23 acima) sob condições de regulação de um promotor constitutivo (35S) quando germinadas sob condições limitadoras de nitrogênio [condições de baixo nitrogênio ou deficiência de nitrogênio (0,75 mM N)], como comparado à plantas de controle. "Aum." = aumento.

Os genes apresentados na Tabela 26, abaixo, melhoraram o NUE da plante, uma vez que eles produziram biomassa de raiz maiores quando germinadas sob condições limitadoras de germinação de nitrogênio, comparado à plantas de controle. Plantas produzindo biomassa de raiz maiores têm mais possibilidades de absorver quantidades maiores de nitrogênio a partir do solo.

A Tabela 26 representa análises de biomassa da raiz (comprimento e cobertura da raiz) quando germinadas sob condições limitadores de nitrogênio [condições de baixo nitrogênio ou deficiência de 5 nitrogênio (0,75 mM N)] em plantas sobre-expressando os poli nucleotídeos de algumas configurações da invenção sob a regulação de um promotor constitutivo (35S). A avaliação de cada gene foi realizada pelo teste de desempenho de diversos eventos. Alguns dos genes foram avalizados em mais de um ensaio de cultura de tecido e o segundo experimento confirmou o aumento significativo no desempenho da raiz.

Evento com valor p <0,1 foi considerado estatisticamente significativo.

Tabela 26 Plantas transgênicas exógenas expressando os poli nucleotídeos de algumas configurações da invenção exibem desempenho melhorado da raiz sob condições de deficiência de nitrogênio Comprimento de Raiz [cm] Cobertura de Raiz [cm2] Nome do % Nome do Evento # Média, valor-p Evento# Média valor-p % aumento Gene aumento Gene CT1 4844, 5 3,445 1,1E-01 19,68 CT11 4894,3 8,833 4,1E-01 16,49 CT1 4841, 2 3,580 2,6E-01 24,3 8 CT11 4892,2 8,345 6,3E-01 10,06 Controle 2,879 CT11 4892,1 9,792 8,1E-02 29,14 CT27 5035,2 4,246 1,7E-03 47,5 0 Controle 7,582 Controle 2,879 CT22 5023,1 4,110 2,1E-01 49,46 CT27 5033, 4 4,384 2,4E-02 29,17 Controle 2,750 Controle 3,394 CT27 50314 5,380 5,8E-01 10,31 CT75 4873, 4 4,829 3,9E-01 9,29 CT27 5033,4 6,993 1,0E-01 43,38 CT75 4873, 3 6,119 2,2E-03 38,5 1 Controle 4,877

Continuação da Tabela 26

Controle 4,418 CT27 5035,2 5,220 3,8E-02 89,83

CT76 5044, 6 3,723 1,9E-01 9,70 Controle 2,750

CT76 5041, 5 4,025 3,1E-02 18,5 9 CT6 4943,1 7,564 2,3E-01 55,08

CT76 5043, 5 3,614 6,2E-01 6,49 CT6 4941,4 126Q 1,8E-01 48,86

CT76 5041, 6 3,651 2,9E-01 7,58 Controle 4,877

CT76 5041, 9 3,970 5,6E-02 16,98 CT75 4873,4 5,384 6,2E-01 10,40

Controle 3,394 CT75 4873,3 6,378 1,6E-01 30,78

NUE206 6731,2 4,717 1,4E-03 36,19 Controle 4,877

NUE206 6732, 9 3,952 1,7E-01 14,1 1 CT76 5044,6 4,762 2,6E-02 39,62

NUE206 6732, 5 3,624 7,7E-01 4,64 CT76 5041,5 4,729 6,0E-02 38,66

Controle 3,463 CT76 5043, 5 5,470 1,3E-01 60,38

NUE208 8355, 3 4,721 7,5E-02 36,3 0 CT76 5041,9 5,282 1,3E-02 54,87 Controle 3,463 Controle 3,410 NUE209 8192, 14 4,584 5,7E-02 32,3 4 NUE206 6731,2 7,467 1,3E-01 95,14

Controle 3,463 NUE206 6732,7 4,706 3,7E-01 22,98

NUE212 8331, 1 5,110 2,1E-01 9,85 Controle 3,826

NUE212 8332,2 5,868 9,1E-02 26,1 4 NUE206 673 1,2 6,249 2,8E-02 92,41

NUE212 8331, 4 4,910 5,8E-01 5,55 NUE206 6732,5 4,433 4,0E-01 36,49 Controle 4,652 Controle 3,248 NUE221 9801, 1 4,34 1,6E-01 13,5 NUE208 8354,8 4,799 5,0E-01 17,29

NUE221 9801,7 3,84 9,0E-01 0,4 NUE208 8351,3 5,763 7,7E-02 40,86

NUE221 9802,8 4,68 2,1E-02 22,5 Controle 4,091

Controle 3,82 NUE209 8192,13 5,110 7,0E-02 24,91

NUE222 8854, 1 4,997 7,0E-02 7,48 NUE209 8192,14 5,450 1,7E-01 33,21 Controle 4,649 Controle 4,091 NUE223 9613, 1 4,236 5,0E-01 10,3 8 NUE209 8192,14 5,624 5,5E-02 73,16

NUE223 9611,5 5,091 6,8E-03 32,67 Controle 3,248

NUE223 9612, 3 4,868 1,6E-01 26,8 6 NUE210 8202,2 5,208 1,0E-01 27,29 Controle 3,837 Controle 4,091

Continuação da Tabela 26

NUE225 9731,7 4,58 4,0E-02 20,0 NUE212 8335,2 6,338 2,8E-02 54,92

NUE225 9731, 8 4,30 2,0E-01 12,5 NUE212 833 4,1 4,541 3,4E-01 10,99

NUE225 9732, 8 4,09 4,7E-01 6,9 NUE212 833 1,4 6,188 1,3E-01 51,26

NUE225 9734, 5 4,07 4,9E-01 6,5 Controle 4,091

NUE225 9734, 9 4,26 2,3E-01 11,5 NUE212 8332,2 8,847 2,5E-01 56,56

Controle 3,82 NUE212 8331,4 6,998 2,5E-01 23,84

NUE228 10092,2 4,242 1,4E-01 13,8 9 Controle 5,651

NUE228 10093,1 4,106 2,5E-01 10,2 3 NUE221 9801,1 5,06 1,4E-01 29,7

Controle 3,725 NUE221 9802,8 5,89 1,2E-03 50,9

NUE231 10631,3 4,27 2,3E-01 11,6 NUE221 9806,1 4,39 5,4E-01 12,3

NUE231 10631,4 4,08 4,8E-01 6,8 Controle

NUE231 10633,3 4,34 1,6E-01 13,5 NUE223 9613,1 5,411 2,9E-01 16,86

Controle 3,82 NUE223 9612,3 5,162 2,9E-01 11,49

NUE233 10174,3 3,942 4,0E-01 7,65 Controle 4,630

NUE233 10174,1 4,973 2,8E-02 35,8 3 NUE223 9611,5 8,701 1,9E-02 67,39

NUE233 10173,5 4,903 2,0E-02 33,8 9 NUE223 9612,3 6,493 2,6E-01 24,90

NUE233 10172,5 4,240 1,3E-01 15,7 8 Controle 5,198

NUE233 10173,7 4,289 1,7E-01 17,1 4 NUE225 9731,7 4,77 2,7E-01 22,1 Controle 3,662 Controle 3,90 NUE233 10174,1 4,253 1,5E-02 16,8 6 NUE228 10092,2 5,763 7,2E-02 34,52

NUE233 1017 3,5 4,101 3,7E-01 12,6 6 NUE228 100 93,3 5,099 1,5E-01 19,02

NUE233 10172,5 3,911 1,0E-01 7,44 NUE228 100 93,1 5,468 1,2E-01 27,63

NUE233 10173,7 4,544 1,3E-01 24,8 4 Controle 4,284

Controle 3,640 NUE231 106 31,3 4,31 5,9E-01 10,5

NUE234 9162,1 4,574 9,8E-02 23,62 NUE231 10631,4 4,87 2,1E-01 24,8

Controle 3,700 NUE231 10633,3 6,21 3,6E-03 59,1

NUE235 9693, 4 4,908 6,4E-02 22,3 2 Controle

NUE235 9691,1 4,310 4,9E-01 7,43 NUE233 10174,3 4,340 2,8E-01 24,27

Continuação da Tabela 26

NUE235 9694,4 4,347 4,0E-01 8,36 NUE233 10174,1 7,195 2,6E-04 106,04

NUE235 9694,3 5,377 3,4E-02 34,0 3 NUE233 10173,5 4,086 3,5E-01 17,00

Controle 4,012 NUE233 10173,7 4,955 5,4E-02 41,90

NUE239 9192,3 5,241 4,4E-04 36,5 9 Controle 3,492

NUE239 9192,1 4,041 5,6E-01 5,31 NUE235 9693,4 6,311 7,2E-03 44,37

NUE239 9191,2 4,081 4,2E-01 6,35 NUE235 9691,1 5,246 3,3E-02 20,00

Controle 3,837 NUE235 9694,4 5,145 1,4E-01 17,69

NUE240 9172,1 4,624 1,3E-02 20,4 9 NUE235 9694,3 6,927 4,8E-02 58,46 Controle 3,837 Controle 4,371 NUE241 9633,4 6,137 3,4E-06 52,97 NUE237 9654,4 7,760 1,1E-01 38,68

NUE241 9632,3 4,772 2,4E-01 18,9 4 NUE237 9654,1 7,127 3,0E-01 27,37

NUE241 9632,2 5,157 3,2E-04 28,5 4 Controle 5,596

NUE241 9632,4 5,016 2,0E-01 25,02 NUE239 9192,3 8,844 6,5E-05 70,14

Controle 4,012 NUE239 9191,2 5,903 2,8E-01 13,55

NUE242 9212,1 4,373 4,9E-01 6,96 Controle 5,198

NUE242 9211,2 4,328 5,2E-01 5,86 NUE240 9172,2 5,902 5,7E-02 27,47

NUE242 9213,4 5,474 1,3E-03 33,8 9 NUE240 9174,3 5,530 1,2E-01 19,43 Controle 4,088 Controle 4,630 NUE242 9212,1 4,552 1,0E-01 29,0 6 NUE240 9172,1 7,568 1,8E-02 45,59 Controle 3,527 Controle 5,198 NUE245 10641,7 4,388 9,4E-02 20,5 6 NUE241 9633,4 9,643 7,2E-07 120,61

NUE245 10641,8 4,657 7,4E-03 27,9 5 NUE241 9632,3 5,344 3,9E-01 22,26

NUE245 10643,4 3,906 2,1E-01 7,31 NUE241 9632,2 6,559 3,6E-02 50,05

Controle 3,640 NUE241 9632,4 6,451 1,3E-01 47,58

NUE246 9033,4 4,695 4,8E-01 7,49 Controle 4,371

NUE246 9031,1 5,062 8,4E-02 15,9 0 NUE241 9632,5 5,170 5,1E-01 15,54

Controle 4,368 NUE241 9632,3 6,198 8,3E-02 38,51

NUE250 9134,1 4,593 1,6E-01 5,15 NUE241 9632,4 5,754 1,6E-01 28,58

NUE250 9132,2 4,590 3,3E-01 5,09 Controle 4,475

Continuação da Tabela 26

Controle 4,088 NUE242 9212,1 5,873 4,1E-01 11,59

NUE251 10181,3 3,907 2,6E-01 734 NUE242 9213,4 8,125 1,6E-02 54,40

NUE251 10183,2 4,763 7,9E-02 30,87 Controle 5,262

Controle 3,640 NUE242 9212,1 5,679 1,2E-01 67,87

NUE256 10063,4 5,259 1,4E-02 43,6 3 NUE242 9213,4 4,572 2,4E-01 35,15

NUE256 1006 4,1 4,734 2,3E-02 29,2 8 Controle 3,383

NUE256 10061,2 4,281 1,3E-01 16,92 NUE245 10641,8 4,795 1,3E-01 22,01

NUE256 10062,4 3,855 7,0E-01 5,28 Controle 3,930

NUE256 10063,2 5,276 5,5E-03 44,1 0 NUE246 9033,8 6,003 2,5E-01 20,21

Controle 3,662 NUE246 9033,4 5,693 4,7E-01 14,00

NUE512 9284,3 4,875 1,0E-01 17,4 8 NUE246 9034,1 6,292 1,7E-01 25,99

NUE512 9282,3 4,442 4,4E-01 7,05 NUE246 9031,1 7,329 6,6E-03 46,77

NUE512 9284,4 6,172 3,9E-04 48,73 Controle 4,994

Controle 4,150 NUE250 9134,1 5,762 4,8E-01 9,49

NUE513 9681,6 5,009 1,7E-03 30,52 NUE250 9132,2 7,281 2,7E-01 38,35

NUE513 9683,2 4,506 8,6E-02 17,42 Controle 5,262

Controle 3,837 NUE251 10181,3 4,289 1,9E-01 22,81

NUE514 9404,1 4,333 5,3E-01 5,99 NUE251 10183,2 4,689 1,4E-01 34,27

NUE514 9404,5 4,906 4,1E-02 20,0 0 NUE251 10183,1 4,709 1,9E-01 34,86

NUE514 9403,2 4,451 6,9E-02 8,87 Controle 3,492

NUE514 9402, 5 4,644 2,1E-01 13,5 9 NUE251 10183,2 6,691 3,8E-02 70,25

Controle 4,088 NUE251 10181,1 4,687 4,8E-01 19,25

NUE514 9403,2 4,874 2,1E-02 38,20 Controle 3,930

NUE514 9402, 5 4,044 2,9E-01 14,65 NUE256 10063,4 7,393 2,9E-02 111,70

Controle 3,527 NUE256 10064,1 7,214 2,6E-02 106,5 9

NUE515 9712, 5 4,43 1,0E-01 15,9 NUE256 10061,2 6,139 2,2E-03 75,81

NUE515 9712, 6 4,05 5,0E-01 5,8 NUE256 10062,4 6,337 7,9E-02 81,46

Continuação da Tabela 26

NUE515 9713 6 5,34 1,0E-04 39,7 NUE256 10063,2 6,594 1,7E-02 88,81

Controle 3,82 Controle 3,492 NUE520 9771,4 4,327 6,9E-02 16,16 NUE256 10061,3 4,798 3,9E-02 22,09

NUE520 9771,7 4,332 1,7E-01 16,28 NUE256 10061,2 5,141 1,9E-02 30,82

NUE520 9771,2 4,303 1,2E-01 15,52 NUE256 10061,4 5,617 9,8E-02 42,92

NUE520 9771, 3 4,345 1,6E-01 16,6 6 NUE256 10063,2 5,303 1,5E-02 34,95 Controle 3,725 Controle 3,930 NUE520 9771, 4 4,377 1,4E-01 19,5 4 NUE268 899 6,5 7,789 1,6E-02 40,04

NUE520 9771,2 4,684 3,1E-02 27,9 3 Controle 5,562

NUE520 9771, 3 3,878 5,2E-01 5,90 NUE512 928 4,3 4,930 1,1E-01 21,84

Controle 3,662 NUE512 9282,3 5,873 1,4E-01 45,13

NUE523 9412,5 4,031 3,9E-01 14,2 8 NUE512 9284,4 7,912 1,6E-03 95,53

NUE523 9414,2 5,032 1,5E-03 42,6 8 Controle 4,047

NUE523 9413,4 3,766 2,8E-01 6,78 NUE513 9681,6 6,591 3,6E-02 26,79 Controle 3,527 Controle 5,198 NUE523 9412,5 5,066 6,2E-01 7,98 NUE514 9404,5 6,570 9,0E-02 24,84

NUE523 9414,2 5,879 2,1E-04 25,30 Controle 5,262

Controle 4,692 NUE514 9403,2 5,579 1,2E-02 64,94

NUE525 9531,2 5,029 1,0E-03 25,34 NUE514 9402,5 4,299 3,2E-01 27,09

NUE525 9534, 1 5,116 4,0E-02 27,51 Controle 3,383

NUE525 9533, 1 4,471 2,8E-01 11,4 3 NUE515 9712,5 4,93 26,3 1,9E-01

NUE525 9531,1 5,184 1,9E-01 29,21 NUE515 9712,6 4,09 4,7 8,1E-01

Controle 4,012 NUE515 9713,6 7,39 89,4 1,9E-05

NUE531 10081,5 5,029 9,2E-02 35,00 Controle 3,90

Controle 3,725 NUE519 9371,2 7,868 4,7E-01 51,36

NUE531 10083,3 4,502 2,7E-03 23,69 NUE519 937 1,1 7,813 1,7E-01 50,30

NUE531 10081,4 3,894 1,4E-01 6,98 Controle 5,198

NUE531 10083,2 4,655 3,2E-02 27,89 NUE520 9771,4 4,820 3,0E-01 12,51

NUE531 10081,5 5,026 2,1E-02 38,08 NUE520 9771,7 5,879 1,4E-02 37,23

Continuação da Tabela 26

Controle 3,640 NUE520 9111,2 6,392 3,3E-02 49,20

NUE536 9233, 3 5,416 1,2E-02 24,0 0 NUE520 9771,3 7,265 1,4E-02 69,57 Controle 4,368 Controle 4,284 NUE539 10101,5 4,107 4,7E-01 12,17 NUE520 9771,4 6,158 1,8E-02 76,34

NUE539 1010 3,5 4,561 5,0E-02 24,5 7 NUE520 9771,2 6,839 1,7E-02 95,84

NUE539 10101,7 4,953 2,0E-02 35,2 7 NUE520 9771,3 5,440 5,3E-03 55,77

Controle 3,662 NUE520 9773,1 4,655 9,8E-02 33,29

NUE539 10101,7 4,344 8,5E-02 19,3 6 Controle 3,492

Controle 3,640 NUE521 9362,2 4,458 3,1E-01 31,79

NUE543 10051,1 4,030 3,5E-01 8,20 NUE521 9363,4 5,071 5,6E-02 49,90

NUE543 10052,3 4,347 8,1E-02 16,7 0 Controle 3,383

NUE543 10053,1 4,034 4,0E-01 8,29 NUE523 9412,5 4,834 3,0E-01 42,92

Controle 3,725 NUE523 9414,2 5,371 1,7E-04 58,79

NUE563 9452, 3 5,668 7,3E-02 41,2 7 Controle 3,383

NUE563 9451,2 4,348 2,6E-01 8,38 NUE523 941 3,3 6,532 5,1E-01 20,78

NUE563 9452, 1 4,415 3,9E-01 10,04 NUE523 9414,2 8,479 4,6E-02 56,78 Controle 4,012 Controle 5,408 NUE566 9513, 1 4,306 4,5E-01 7,32 NUE525 9531,2 6,497 1,7E-04 48,62

NUE566 9512,2 4,118 6,3E-01 2,63 NUE525 9534,1 6,805 6,9E-02 55,67

NUE566 9512, 4 4,411 3,9E-01 9,95 NUE525 9531,3 4,928 6,1E-01 12,73

NUE566 9512, 1 5,392 9,6E-02 34,3 9 NUE525 9533,1 7,002 3,6E-02 60,17

NUE566 9514, 1 5,583 1,8E-05 39,15 NUE525 9531,1 8,063 1,5E-01 84,46 Controle 4,012 Controle 4,371 NUE574 10363,4 4,132 3,5E-01 13,52 NUE531 10083,3 4,905 2,4E-02 24,81

NUE574 10366,2 4,697 7,2E-02 29,04 NUE531 100 81,4 6,308 1,3E-02 60,52

NUE574 10366,1 4,264 6,0E-03 17,1 5 NUE531 10083,2 5,480 8,6E-02 39,45

Controle 3,640 NUE531 10081,5 7,516 4,3E-02 91,25

NUE581 9724, 9 4,35 1,5E-01 13,8 Controle 3,930

Controle 3,82 NUE536 9233,3 7,107 3,3E-02 42,30

Continuação da Tabela 26

NUE583 9673, 4 5,145 8,6E-02 41,3 5 Controle 4,994

NUE583 9673,2 4,621 1,6E-02 26,95 NUE537 9393,3 7,508 5,7E-02 85,53

NUE583 9671,2 4,181 1,0E-01 14,8 8 Controle 4,047

NUE583 9671, 1 3,903 3,2E-01 7,24 NUE539 10101,5 5,026 1,1E-01 43,93

Controle 3,640 NUE539 10103,5 5,622 7,6E-03 60,99

NUE586 9751, 1 4,510 4,7E-01 7,36 NUE539 10101,7 6,622 4,1E-03 89,62

NUE586 9751,7 5,845 3,0E-03 39,1 3 Controle 3,492

NUE586 9751, 3 5,259 7,3E-02 25,2 0 NUE543 10051,1 5,204 9,1E-02 21,47

NUE586 9752,2 4,903 1,1E-01 16,7 1 NUE543 10052,3 4,978 2,0E-01 16,20

NUE586 9752,1 6,626 1,3E-05 57,7 3 NUE543 10051,2 5,086 3,6E-01 18,73 Controle 4,201 Controle 4,284 NUE586 9751,1 5,290 3,0E-01 13,7 1 NUE544 9764,2 8,303 9,5E-02 46,92

NUE586 9751,6 6,090 1,6E-03 30,92 NUE544 9763,3 6,821 1,1E-01 20,71

NUE586 9751,3 5,181 3,1E-01 11,3 8 Controle 5,651

NUE586 9752,4 5,952 2,9E-03 27,9 6 NUE548 9095,2 7,731 2,2E-01 46,90

NUE586 9752,1 6,660 2,1E-04 43,17 NUE548 9095,4 7,888 1,3E-01 49,89

Controle 4,652 NUE548 9091,1 6,011 2,7E-01 14,23

NUE593 10391,2 4,849 8,9E-03 30,1 8 Controle 5,262

NUE593 10394,1 4,390 2,4E-01 17,8 5 NUE554 9115,2 7,603 3,2E-02 36,68

NUE593 10394,2 4,698 3,3E-02 26,1 3 Controle 5,562

Controle 3,725 NUE563 9452,3 9,266 1,7E-01 111,97

NUE592 9741,7 4,08 4,8E-01 6,8 NUE563 9451,2 6,068 1,3E-01 38,82

NUE592 9747,4 4,00 6,2E-01 4,8 NUE563 9452,1 5,145 1,2E-01 17,70

NUE592 9747, 5 4,70 1,8E-02 23,0 Controle 4,371

Controle 3,82 NUE566 9513,1 5,537 2,0E-01 26,67

NUE566 9512,2 5,086 1,3E-01 16,36

NUE566 9512,1 7,608 1,0E-01 74,05

NUE566 9514,1 7,752 2,2E-03 77,33

Continuação da Tabela 26 Controle 4,371 NUE569 9381,2 5,147 2,8E-02 21,78 Controle 4,226 NUE570 9311,4 4,965 5,6E-01 22,69

NUE570 9314,4 5,327 8,0E-02 31,63

NUE570 9314,1 5,093 3,3E-01 25,85 Controle 4,047 NUE574 10364,2 4,318 1,9E-01 9,88

NUE574 10366,2 7,430 5,1E-02 89,06

NUE574 10366,1 5,260 5,6E-02 33,83 Controle 3,930 NUE581 9723,6 4,16 7,4E 6,5

NUE581 9724,9 4,93 1,9E 26,3 Controle 3,90 NUE583 9673,4 8,986 1,7E-02 128,6 4

NUE583 9673,2 6,359 5,0E-02 61,80

NUE583 9671,2 4,956 1,0E-01 26,11 Controle 3,930 NUE586 9751,1 5,324 5,1E-01 14,00

NUE586 9751,7 8,938 2,6E-02 91,38

NUE586 975 1,3 6,250 8,3E-02 33,83

NUE586 9752,2 5,566 3,7E-01 19,18

NUE586 9752,1 10,320 9,6E-04 120,9 9 Controle 4,670 NUE586 9751,1 7,261 2,8E-01 28,49

NUE586 975 1,6 7,902 4,2E-02 39,83

NUE586 9751,7 6,250 6,0E-01 10,60

NUE586 9751,3 7,274 9,2E-02 28,71

NUE586 9752,4 8,572 6,8E-03 51,70

NUE586 9752,1 9,922 5,6E-02 75,58 Controle 5,651 NUE587 9643,2 7,007 7,6E-02 50,03

Continuação da Tabela 26 Controle 4,670 NUE592 9741,7 4,20 7,0E 7,7 NUE592 9747,5 5,31 7,3E 36,0 Controle 3,90 NUE593 10391,2 5,167 2,6E-01 20,60 NUE593 10394,2 6,009 9,4E-02 40,25 Controle 4,284 Tabela 26: Análises do desempenho da raiz (comprimento e cobertura da raiz) de plantas transgênicas sobre-expressando o poli nucleotídeos exógenos de algumas configurações da invenção (utilizando genes clonados ou sintéticos listados 5 na Tabela 23 acima) sob regulação de um promotor constitutivo (35S) quando o germinada sob condições limitadoras de nitrogênio [condições de baixo nitrogênio ou deficiência de nitrogênio (0,75 mM N)] como comparado às plantas de controle. "Méd." = Média; "Aum." = aumento.

Os genes apresentados nas Tabelas 27 e 28, abaixo, melhoraram a taxa de crescimento das plantas quando germinadas sob condições de germinação de nitrogênio, comparadas às plantas de controle. Plantas mostrando taxa de crescimento rápido confirma um melhor estabelecimento da planta no solo sob condições de deficiência de nitrogênio. Crescimento mais rápido foi observado quando a taxa de crescimento da área de folhagem, bem como o comprimento e cobertura da raiz foram medidos.

As Tabelas 27 e 28 representam análises da taxa de crescimento da planta da área de folhagem, cobertura da raiz e comprimento da raiz quando germinadas sob condições limitadoras de nitrogênio

[condições de baixo nitrogênio ou deficiência de nitrogênio (0,75 mM N)] em plantas transgênicas sobre-expressando o poli nucleotídeos exógenos de algumas configurações da invenção sob regulação de um promotor constitutivo (35S). A 5 avaliação de cada gene foi realizada pelo teste de desempenho de diversos eventos. Alguns dos genes foram avalizados em mais de um ensaio de cultura de tecido e o segundo experimento confirmou o aumento significativo na taxa de crescimento. Eventos com valor p <0.1 foram considerados estatisticamente significativos.

Tabela 27 Plantas transgênicas exógenas expressando os poli nucleotídeos de algumas configurações da invenção exibem taxa de crescimento da planta melhorada (taxa de crescimento relativo da área de folhagem e cobertura da raiz) sob condições de deficiência de nitrogênio RGR da Area de folhagem RGR de Cobertura da Raiz Nome do % Nome do % Evento # Média Valor-p Evento # Média Valor-p Gene aumento Gene aumento CT11 4892,3 0,043 3,1E-01 14,75 CT11 4894,3 1,07 2,6E-01 18,78 CT11 4893,2 0,054 7,0E-02 43,87 CT11 4892,2 1,02 4,7E-01 12,68 Controle 0,038 CT11 4892,1 1,17 4,9E-02 29,43 CT11 4894,3 0,071 3,2E-02 37,85 Controle 0,90 6,6E- CT11 4892,3 0,077 6,5E-03 47,95 CT22 5023,1 0,49 51,49 02 CT11 4892,2 0,066 8,1E-02 27,89 Controle 0,32 Controle 0,052 CT27 5033,7 0,51 5,1E-01 59,31 CT27 5031,4 0,059 2,1E-03 56,19 CT27 5031,4 0,66 4,4E-01 106,25 CT27 5035,2 0,050 3,7E-02 31,33 CT27 5035,2 0,48 3,3E-01 50,35 Controle 0,038 CT27 5033,6 0,46 1,9E-01 41,98

Continuação da Tabela 27

CT27 5035,2 0,052 1,4E-02 47,58 CT27 5033,4 0,81 5,0E-02 152,27

Controle 0,035 CT27 5033,8 0,36 4,5E-02 12,91

CT27 5033,4 0,047 1,9E-01 28,65 Controle 0,32

CT27 5033,8 0,062 1,7E-04 66,84 CT6 4943,1 0,93 4,7E-02 60,75

Controle 0,037 CT6 4941,4 0,88 3,3E-02 52,53

1,9E- CT6 4943,1 0,058 54,43 Controle 0,58 02

CT6 4941,4 0,058 1,2E-02 52,74 CT75 4873,3 0,75 1,1E-01 30,24 Controle 0,038 Controle 0,58 CT76 5044,6 0,059 3,8E-01 13,49 CT76 5041,5 1,29 5,2E-02 43,20

2,9E- CT76 5041,5 0,075 44,40 CT76 5043,5 1,24 5,2E-02 37,15 02

CT76 5043,5 0,082 2,8E-04 58,85 CT76 5041,6 1,01 4,7E-01 11,99

CT76 5041,9 0,084 4,2E-03 62,25 Controle 0,90

3,6E- CT76 5041,6 0,086 5,5E-04 65,56 CT76 5044,6 0,59 49,62 02 1,9E- Controle 0,052 CT76 5043,5 0,67 71,45 02

CT76 5044,6 0,044 2,9E-01 18,54 CT76 5041,6 0,46 4,1E-01 17,98

CT76 5041,5 0,050 5,8E-02 36,83 CT76 5041,9 0,64 8,3E-03 64,17

1,6E- CT76 5043,5 0,075 103,60 Controle 0,39 07

CT76 5041,6 0,053 9,2E-03 43,71 NUE206 6731,2 0,88 6,1E-03 107,33

CT76 5041,9 0,055 7,7E-03 48,95 NUE206 6732,7 0,54 2,5E-01 28,14 Controle 0,037 Controle 0,42 CT81 4992,1 0,074 1,9E-03 43,33 NUE206 6731,2 0,73 3,0E-04 103,93

CT81 4993,5 0,061 2,8E-01 17,47 NUE206 6732,9 0,46 1,5E-01 29,09

CT81 4992,2 0,072 2,3E-02 38,79 NUE206 6732,5 0,51 1,5E-01 42,93 Controle 0,052 Controle 0,36 NUE206 6731,2 0,035 2,0E-02 39,25 NUE208 8354,8 0,58 3,9E-01 18,43

NUE206 6732,7 0,032 6,4E-02 28,96 NUE208 8351,3 0,71 3,7E-02 44,72 Controle 0,025 Controle 0,49 NUE208 8351,3 0,046 1,0E-02 54,30 NUE208 8355,3 0,72 9,1E-03 100,13

9,5E- NUE208 8355,3 0,038 28,29 Controle 0,36 02

Continuação da Tabela 27

Controle 0,030 NUE209 8192,13 0,63 1,3E-01 28,43

NUE208 8355,3 0,073 2,0E-02 55,84 NUE209 8192,14 0,65 1,1E-01 32,34 Controle 0,047 Controle 0,49 NUE209 8192,13 0,043 3,2E-02 44,12 NUE209 8192,14 0,65 4,0E-03 79,86

NUE209 8192,14 0,047 6,9E-03 60,54 Controle 0,36

Controle 0,030 NUE212 8332,2 0,64 2,2E-02 70,92

NUE209 8192,13 0,047 2,2E-02 38,99 NUE212 8334,1 0,61 1,5E-01 63,17

NUE209 8191,5 0,055 4,8E-04 64,77 Controle 0,37

NUE209 8192,14 0,041 1,2E-01 22,52 NUE212 8335,2 0,75 1,1E-02 52,25

Controle 0,033 NUE212 8331,4 0,76 2,4E-02 54,17

NUE209 8192,14 0,071 2,5E-03 52,94 Controle 0,49

NUE209 8191,3 0,057 2,2E-01 22,44 NUE212 8332,2 1,08 2,7E-02 58,34

Controle 0,047 NUE212 8331,4 0,87 1,6E-01 27,37

1,9E- NUE212 8335,2 0,041 40,11 Controle 0,68 02

NUE212 8331,4 0,046 8,8E-03 54,77 NUE223 9611,5 1,06 8,9E-04 67,16

Controle 0,030 NUE223 9612,3 0,77 2,3E-01 21,00

NUE212 8332,1 0,062 4,8E-03 50,03 Controle 0,63

Controle 0,041 NUE228 10092,2 0,70 2,0E-02 41,76

NUE224 9001,3 0,064 5,9E-04 41,00 NUE228 10093,3 0,61 1,5E-01 23,30

Controle 0,045 NUE228 10093,1 0,66 5,5E-02 33,53

NUE230 9154,2 0,054 8,1E-02 19,70 Controle 0,49

NUE230 9151,2 0,052 1,5E-01 14,88 NUE233 10174,3 0,52 2,2E-01 27,38

Controle 0,045 NUE233 10174,1 0,86 1,1E-05 111,13

3,5E- NUE230 9153,3 0,046 23,46 NUE233 10173,7 0,59 4,2E-02 45,30 02 Controle 0,038 Controle 0,41 NUE233 10174,3 0,047 2,8E-03 52,81 NUE233 10174,1 0,56 8,1E-02 22,89

NUE233 10174,1 0,075 5,3E-09 141,80 NUE233 10173,7 0,72 2,7E-03 57,48

NUE233 10173,7 0,040 4,3E-02 28,55 Controle 0,46

Continuação da Tabela 27

Controle 0,031 NUE234 9162,1 0,51 5,1E-02 39,40

NUE237 9651,1 0,051 4,5E-01 12,77 Controle 0,37

NUE237 9654,4 0,059 2,5E-02 31,14 NUE235 9693,4 0,68 2,5E-03 44,45

2,6E- NUE237 9654,1 0,056 24,39 NUE235 9691,1 0,56 2,0E-01 18,18 02

Controle 0,045 NUE235 9694,4 0,55 2,3E-01 15,87

NUE239 9191,1 0,063 1,3E-02 58,77 NUE235 9694,3 0,76 1,1E-03 60,48 Controle 0,040 Controle 0,47 5,3E- NUE239 9192,3 0,061 25,48 NUE237 9654,4 0,93 7,8E-02 39,79 02

Controle 0,048 NUE237 9654,1 0,84 2,4E-01 26,90

NUE240 9172,2 0,067 1,5E-03 68,99 Controle 0,66

6,5E- NUE240 9174,3 0,052 1,4E-01 29,40 NUE239 9191,1 0,75 36,48 02 Controle 0,040 Controle 0,55 NUE240 9172,1 0,068 4,1E-03 41,05 NUE239 9192,3 1,08 7,2E-05 71,00

Controle 0,048 NUE239 9191,2 0,73 3,5E-01 14,79

NUE241 9633,4 0,053 4,5E-04 58,65 Controle 0,63

NUE241 9632,2 0,042 7,6E-02 26,55 NUE240 9172,2 0,73 5,1E-02 33,21

6,8E- NUE241 9632,4 0,045 35,24 NUE240 9174,3 0,68 1,4E-01 23,94 02 Controle 0,033 Controle 0,55 NUE241 9632,3 0,056 2,2E-02 43,54 NUE240 9172,1 0,93 8,4E-03 46,95 Controle 0,039 Controle 0,63 NUE242 9212,1 0,053 4,2E-03 49,38 NUE241 9633,4 1,05 5,1E-09 121,17

NUE242 9213,4 0,041 2,2E-01 15,83 NUE241 9632,3 0,56 3,0E-01 17,76

Controle 0,036 NUE241 9632,2 0,70 4,2E-03 47,48

2,6E- NUE245 10641,7 0,064 3,3E-02 39,30 NUE241 9632,4 0,68 42,78 02 Controle 0,046 Controle 0,47 NUE246 9033,8 0,047 5,0E-01 13,54 NUE241 9632,3 0,73 8,7E-02 37,63

NUE246 9033,4 0,053 1,8E-01 27,65 NUE241 9632,4 0,68 1,8E-01 28,48

NUE246 9034,1 0,067 1,3E-02 63,07 Controle 0,53

Controle 0,041 NUE242 9214,1 0,82 5,3E-01 34,65

NUE248 8981,5 0,059 1,8E-02 42,38 NUE242 9213,4 0,98 4,4E-04 61,42

Continuação da Tabela 27 Controle 0,041 Controle 0,61 NUE250 9132,1 0,051 2,9E-01 13,50 NUE242 9212,1 0,69 2,3E-03 76,75

NUE250 9132,2 0,051 4,2E-01 12,43 NUE242 9213,4 0,55 4,3E-02 40,32

5,3E- NUE250 9134,1 0,055 21,91 Controle 0,39 02

Controle 0,045 NUE245 10641,7 0,67 5,7E-03 46,73

NUE251 10181,3 0,052 3,2E-05 67,47 NUE245 10641,8 0,57 4,6E-02 24,96

NUE251 10183,2 0,044 1,1E-02 41,23 NUE245 10643,4 0,50 4,1E-01 10,90

NUE251 10183,1 0,043 1,1E-02 38,27 Controle 0,46

Controle 0,031 NUE246 9033,8 0,72 2,4E-01 22,81

NUE251 10183,2 0,084 2,2E-05 83,75 NUE246 9033,4 0,69 3,8E-01 17,06

NUE251 10182,1 0,057 8,1E-02 23,66 NUE246 9034,1 0,78 1,5E-01 32,69

NUE251 10181,1 0,048 7,3E-01 4,28 NUE246 9031,1 0,90 1,2E-02 52,58 Controle 0,046 Controle 0,59

NUE256 10063,4 0,045 4,9E-01 10,33 NUE248 8981,5 0,70 7,3E-02 30,02

NUE256 10064,1 0,057 1,5E-02 37,35 Controle 0,53

Controle 0,041 NUE250 9134,1 0,68 3,3E-01 12,73

3,6E- NUE256 10063,4 0,061 8,1E-04 96,42 NUE250 9132,2 0,89 46,62 02

NUE256 10064,1 0,063 1,3E-05 104,87 Controle 0,61

NUE256 10061,2 0,065 1,0E-07 110,14 NUE251 10183,2 0,81 8,3E-05 77,68

NUE256 10062,4 0,062 2,3E-05 99,98 NUE251 10181,1 0,56 1,8E-01 24,08

NUE256 10063,2 0,054 1,7E-04 74,87 Controle 0,46

6,0E- Controle 0,031 NUE254 8972,4 0,74 38,45 02

NUE256 10061,2 0,071 6,0E-04 55,03 Controle 0,53

NUE256 10061,4 0,068 4,1E-03 47,93 NUE256 10063,4 0,88 2,3E-04 115,25

NUE256 10063,2 0,051 3,9E-01 11,43 NUE256 10064,1 0,89 1,6E-04 117,15

Controle 0,046 NUE256 10061,2 0,74 5,9E-04 81,36

2,6E- NUE511 9271,2 0,056 50,68 NUE256 10062,4 0,77 4,0E-03 87,01 02

Controle 0,040 NUE256 10063,2 0,78 7,9E-04 90,93

NUE512 9282,3 0,072 3,6E-04 68,22 Controle 0,41

Continuação da Tabela 27

NUE512 9284,4 0,059 8,0E-03 38,67 NUE256 10061,3 0,55 7,7E-02 20,48

Controle 0,043 NUE256 10061,2 0,61 1,1E-02 34,76

NUE514 9404,1 0,047 3,4E-02 30,81 NUE256 10061,4 0,67 6,4E-03 46,55

NUE514 9402,2 0,041 3,3E-01 14,01 NUE256 10063,2 0,63 6,6E-03 39,24

NUE514 9403,2 0,042 1,7E-01 17,39 Controle 0,46

Controle 0,036 NUE268 8996,5 0,95 7,5E-03 46,67

NUE516 9291,1 0,051 3,6E-01 12,83 Controle 0,65

NUE516 9291,4 0,058 5,2E-02 28,67 NUE512 9284,3 0,59 1,2E-01 24,74

Controle 0,045 NUE512 9282,3 0,72 1,5E-02 51,97

NUE519 9371,2 0,065 7,6E-02 34,99 NUE512 9284,4 0,94 7,5E-06 98,41

NUE519 9371,1 0,059 1,7E-01 22,69 Controle 0,47

Controle 0,048 NUE513 9681,6 0,77 1,4E-01 21,72

NUE521 9362,2 0,050 7,7E-03 41,00 Controle 0,63

NUE521 9361,2 0,041 3,1E-01 15,27 NUE514 9404,1 0,72 2,6E-01 17,95

2,9E- NUE521 9363,4 0,056 1,4E-04 56,51 NUE514 9404,5 0,79 30,17 02 Controle 0,036 Controle 0,61 NUE521 9362,2 0,057 3,4E-01 16,01 NUE514 9403,2 0,67 3,9E-05 71,81

6,3E- NUE521 9363,4 0,065 31,54 NUE514 9402,5 0,52 5,8E-02 34,24 02 Controle 0,049 Controle 0,39 5,6E- NUE523 9412,5 0,048 4,9E-02 33,67 NUE519 9371,2 0,97 52,96 02 9,2E- NUE523 9414,2 0,043 20,21 NUE519 9371,1 0,96 2,5E-02 51,45 02 Controle 0,036 Controle 0,63 NUE523 9412,5 0,058 7,6E-02 41,83 NUE520 9771,4 0,59 2,1E-01 20,79

NUE523 9414,2 0,049 2,2E-01 19,88 NUE520 9771,7 0,72 9,4E-03 47,07

NUE523 9412,1 0,062 5,2E-03 49,67 NUE520 9771,2 0,78 4,4E-03 59,79

Controle 0,041 NUE520 9771,3 0,89 5,5E-04 81,39

8,9E- NUE525 9531,2 0,043 27,96 Controle 0,49 02

NUE525 9534,1 0,042 1,4E-01 27,19 NUE520 9771,4 0,76 1,5E-03 85,18

3,9E- NUE525 9531,3 0,046 36,82 NUE520 9771,2 0,83 3,7E-04 102,18 02

Continuação da Tabela 27

1,6E- NUE525 9533,1 0,048 42,76 NUE520 9771,3 0,66 5,4E-03 60,90 02 3,5E- NUE525 9531,1 0,045 36,14 NUE520 9773,1 0,57 1,1E-01 39,32 02 Controle 0,033 Controle 0,41 5,6E- NUE531 10083,1 0,070 24,91 NUE521 9362,2 0,55 5,4E-02 39,89 02

NUE531 10082,2 0,067 1,1E-01 20,04 NUE521 9361,3 0,46 2,1E-01 18,65

NUE531 10081,4 0,070 1,2E-01 24,78 NUE521 9363,4 0,63 1,4E-03 61,36

NUE531 10081,5 0,073 8,2E-02 30,25 Controle 0,39

Controle 0,056 NUE523 9412,5 0,58 5,0E-02 49,67

NUE531 10081,4 0,051 4,0E-01 11,96 NUE523 9414,2 0,63 9,9E-06 61,62

NUE531 10081,5 0,090 1,3E-05 95,63 Controle 0,39

Controle 0,046 NUE523 9413,3 0,80 2,6E-01 24,87

NUE532 9222,4 0,050 1,6E-01 40,00 NUE523 9414,2 1,03 3,8E-03 60,15 Controle 0,036 Controle 0,64 NUE535 9082,2 0,040 1,7E-01 29,19 NUE523 9412,5 1,03 5,0E-02 44,09

NUE535 9084,2 0,037 2,0E-01 17,89 NUE523 9414,2 1,05 7,8E-03 47,15

NUE535 9081,1 0,045 4,7E-02 45,68 Controle 0,71

NUE535 9083,1 0,059 9,9E-06 91,43 NUE525 9531,2 0,71 1,1E-03 50,16

NUE535 9084,4 0,046 6,1E-03 49,99 NUE525 9534,1 0,76 3,0E-03 59,45

Controle 0,031 NUE525 9531,3 0,55 3,9E-01 15,44

NUE537 9391,2 0,067 8,9E-04 57,56 NUE525 9533,1 0,75 1,1E-03 57,42

NUE537 9393,3 0,078 3,4E-06 83,37 NUE525 9531,1 0,88 9,0E-04 85,07 Controle 0,043 Controle 0,47 6,0E- NUE539 10103,5 0,060 7,5E-02 45,45 NUE527 9201,2 0,91 39,82 02 Controle 0,041 Controle 0,65 NUE539 10101,5 0,052 6,3E-04 68,95 NUE528 9073,1 0,91 8,8E-02 33,70

NUE539 10103,5 0,052 2,7E-05 67,92 Controle 0,68

NUE539 10101,2 0,058 4,6E-06 85,91 NUE531 10081,4 0,65 1,2E-01 33,32

NUE539 10101,7 0,067 1,3E-06 115,49 NUE531 10081,5 0,95 6,1E-03 93,18 Controle 0,031 Controle 0,49 NUE542 9333,2 0,058 1,7E-02 27,22 NUE531 10083,3 0,56 5,7E-02 22,09

Continuação da Tabela 27

Controle 0,045 NUE531 10081,4 0,76 2,5E-04 67,03

NUE543 10051,2 0,043 4,9E-01 11,08 NUE531 10083,2 0,65 7,4E-03 42,46

2,6E- NUE543 10051,6 0,052 32,97 NUE531 10081,5 0,88 5,5E-05 94,20 02 Controle 0,039 Controle 0,46 1,9E- NUE548 9095,2 0,058 45,78 NUE535 9084,2 0,87 1,1E-01 34,81 02

NUE548 9092,2 0,054 1,1E-01 34,83 Controle 0,65

Controle 0,040 NUE536 9233,3 0,85 2,7E-02 45,06

NUE548 9095,2 0,067 2,0E-01 16,93 Controle 0,59

9,3E- NUE548 9095,4 0,082 OJEOS 43,33 NUE537 9393,2 0,50 28,21 02

NUE548 9091,1 0,070 7,8E-02 21,75 NUE537 9393,3 0,49 8,0E-02 25,71

Controle 0,057 Controle 0,39 NUE554 9115,2 0,067 8,8E-02 26,21 NUE537 9393,3 0,92 5,4E-04 95,13 Controle 0,053 Controle 0,47 NUE560 9424,3 0,069 4,8E-02 39,85 NUE539 10101,5 0,62 3,4E-02 50,84

Controle 0,049 NUE539 10103,5 0,66 6,2E-03 61,79

NUE564 9242,2 0,066 8,5E-03 54,86 NUE539 10101,7 0,80 2,0E-04 96,01 Controle 0,043 Controle 0,41 NUE566 9512,1 0,052 2,2E-02 56,47 NUE544 9764,2 1,00 2,7E-02 46,55

Controle 0,033 NUE544 9763,3 0,80 2,7E-01 17,81

NUE567 9263,3 0,053 1,8E-01 25,10 Controle 0,68

Controle 0,043 NUE545 9482,4 0,61 7,1E-02 28,80

NUE568 9471,3 0,051 2,9E-01 14,08 Controle 0,47

NUE568 9472,2 0,062 5,2E-03 40,02 NUE548 9095,2 0,72 1,2E-01 30,12 Controle 0,045 Controle 0,55 NUE570 9314,1 0,064 6,7E-02 32,94 NUE548 9095,2 0,96 1,5E-02 57,39

Controle 0,048 NUE548 9095,4 0,97 4,3E-03 59,52

6,1E- NUE573 9491,4 0,058 30,87 NUE548 9091,1 0,74 1,1E-01 22,28 02

NUE573 9494,3 0,055 1,4E-01 23,73 Controle 0,61

Controle 0,045 NUE550 9141,3 0,83 1,4E-01 28,42

NUE574 10364,2 0,062 1,0E-02 34,44 Controle 0,65

Continuação da Tabela 27

NUE574 10362,2 0,048 6,7E-01 5,59 NUE554 9115,2 0,93 1,7E-02 43,12

NUE574 10366,2 0,079 6,5E-05 72,54 Controle 0,65

Controle 0,046 NUE563 9452,3 1,02 3,8E-03 114,90

NUE576 9791,3 0,046 2,5E-01 17,12 NUE563 9451,2 0,65 3,0E-02 36,75

9,0E- NUE576 9792,4 0,050 27,76 Controle 0,47 02 9,8E- NUE576 9794,1 0,048 24,04 NUE564 9242,3 0,58 2,0E-01 21,75 02

NUE576 9793,3 0,048 1,4E-01 22,67 NUE564 9242,2 0,71 3,1E-02 49,74

9,3E- Controle 0,039 NUE564 9243,4 0,65 37,10 02

NUE582 9562,4 0,056 4,1E-02 24,61 Controle 0,47

Controle 0,045 NUE566 9513,1 0,58 1,3E-01 23,35

NUE583 9673,1 0,056 3,2E-02 43,43 NUE566 9512,2 0,56 1,7E-01 17,73

Controle 0,039 NUE566 9512,1 0,79 5,1E-03 67,15

NUE583 9673,4 0,092 3,5E-05 100,45 NUE566 9514,1 0,86 2,8E-05 80,42

NUE583 9673,2 0,063 2,5E-02 38,28 Controle 0,47

Controle 0,046 NUE567 9263,3 0,66 7,7E-02 39,99

NUE586 9751,6 0,047 4,2E-01 12,92 Controle 0,47

NUE586 9751,7 0,049 3,1E-01 19,09 NUE567 9263,3 0,97 5,0E-02 42,53

2,6E- NUE586 9752,4 0,057 36,93 Controle 0,68 02

NUE586 9752,1 0,058 1,0E-01 39,90 NUE569 9381,2 0,60 8,8E-02 20,49

Controle 0,041 NUE569 9381,5 0,59 2,1E-01 19,31 Controle 0,50 NUE570 9311,4 0,60 2,9E-01 27,17

NUE570 9314,4 0,64 4,5E-02 35,92

NUE570 9314,1 0,61 1,6E-01 29,32 Controle 0,47 NUE570 9314,4 0,63 2,6E-01 26,50

NUE570 9314,1 0,81 1,1E-02 64,12 Controle 0,50 NUE571 9304,2 0,84 1,4E-01 30,16

Continuação da Tabela 27 Controle 0,64 NUE574 10364,2 0,51 2,5E-01 12,29

NUE574 10366,2 0,91 7,6E-05 99,71

NUE574 10366,1 0,63 6,2E-03 38,15 Controle 0,46 NUE583 9673,4 1,08 7,4E-07 136,31

NUE583 9673,2 0,76 3,4E-04 67,32

NUE583 9671,2 0,58 3,4E-02 27,94

Controle 0,46

NUE586 9751,7 1,08 4,4E-04 90,56

NUE586 9751,3 0,73 1,3E-01 28,69

NUE586 9752,1 1,23 1,1E-06 117,25 Controle 0,57 NUE586 9751,1 0,86 1,9E-01 26,09

NUE586 9751,6 0,93 5,1E-02 35,91

9,6E- NUE586 9751,3 0,89 30,27 02

NUE586 9752,4 1,02 9,5E-03 49,17

NUE586 9752,1 1,16 6,5E-03 69,78 Controle 0,68 NUE587 9643,2 0,85 2,3E-02 50,29 Controle 0,57 NUE593 10394,2 0,72 1,5E-02 46,89

Controle 0,49

Tabela 27: Análises da taxa de crescimento da planta

(crescimento relativo da área de folhagem e cobertura da raiz) de plantas transgênicas sobre-expressando o poli nucleotídeos exógenos de algumas configurações da invenção

5 (utilizando genes clonados ou sintéticos listados na Tabela

23 acima) sob regulação de um promotor constitutivo (35S)

quando o germinada sob condições limitadoras de nitrogênio

[condições de baixo nitrogênio ou deficiência de nitrogênio

(0,75 mM N)] como comparado às plantas de controle. "Aum." = Aumento; "RGR" = taxa de crescimento relativo.

Tabela 28 Plantas transgênicas exógenas expressando os poli 5 nucleotídeos de algumas configurações da invenção exibem taxa de crescimento da planta melhorada (taxa de crescimento relativo da área de folhagem e comprimento da raiz)sob condições de deficiência de nitrogênio Tabela 28 RGR do Comprimento da Raiz Nome do Gene Evento # Média valor-p % aumento CT1 4841,1 0,325 4,6E-01 14,92 CT1 4844,5 0,386 3,9E-02 36,53 CT1 4841,2 0,399 5,1E-02 41,25 Controle 0,282 CT11 4892,1 0,612 9,8E-02 15,48 Controle 0,530 CT22 5023,1 0,373 9,6E-02 32,01 Controle 0,282 CT27 5033,4 0,394 5,2E-02 29,10 CT27 5033,8 0,350 2,6E-01 14,96 Controle 0,305 CT6 4945,8 0,460 2,1E-01 17,91 CT6 4943,1 0,548 2,0E-02 40,56 Controle 0,390 CT75 4873,4 0,473 1,5E-01 21,17 CT75 4873,3 0,532 1,3E-02 36,39 Controle 0,390 CT76 5044,6 0,408 1,1E-02 33,88 CT76 5043,5 0,389 7,9E-02 27,59 CT76 5041,9 0,381 6,4E-02 25,11 Controle 0,305 NUE206 6731,2 0,496 5,5E-03 49,81 NUE206 6732,7 0,395 1,8E-01 19,18 Controle 0,331 NUE206 6731,2 0,501 1,2E-05 64,61 NUE206 6732,9 0,417 8,6E-03 37,13 Controle 0,304 NUE208 8351,3 0,477 7,4E-02 22,59 Controle 0,389 NUE208 8355,3 0,500 7,9E-04 64,40 Controle 0,304 NUE209 8192,13 0,506 1,6E-02 30,23 NUE209 8192,14 0,475 9,5E-02 22,29 Controle 0,389 NUE209 8191,2 0,421 5,1E-02 36,60 NUE209 8192,13 0,394 7,1E-02 27,85

Continuação da Tabela 28 NUE209 8191,5 0,410 3,0E-02 32,93 Controle 0,308 NUE209 8192,14 0,452 5,1E-03 48,66 Controle 0,304 NUE210 8202,2 0,462 9,4E-02 18,92 Controle 0,389 NUE210 6755,3 0,421 3,2E-02 36,49 Controle 0,308 NUE212 8332,2 0,455 1,7E-02 47,71 NUE212 8334,1 0,426 1,6E-01 38,40 Controle 0,308 NUE212 8331,4 0,504 2,3E-02 29,68 Controle 0,389 NUE212 8331,1 0,584 6,4E-02 24,96 NUE212 8332,2 0,597 8,7E-02 27,76 NUE212 8331,4 0,567 1,3E-01 21,20 Controle 0,468 NUE223 9611,5 0,537 4,1E-03 35,20 NUE223 9612,3 0,466 2,5E-01 17,18 Controle 0,397 NUE228 10092,2 0,426 5,6E-02 29,90 NUE228 10093,3 0,422 8,2E-02 28,77 NUE228 10093,1 0,408 1,1E-01 24,40 Controle 0,328 NUE233 10174,3 0,391 3,9E-01 14,35 NUE233 10174,1 0,471 4,7E-02 37,60 NUE233 10173,5 0,461 5,6E-02 34,78 NUE233 10172,5 0,412 2,3E-01 20,55 NUE233 10173,7 0,407 2,8E-01 19,07 Controle 0,342 NUE233 10174,1 0,404 1,2E-03 29,24 NUE233 10173,5 0,362 2,5E-01 15,71 NUE233 10172,5 0,362 6,0E-02 15,79 NUE233 10173,7 0,436 3,6E-03 39,35 Controle 0,313 NUE234 9162,1 0,426 5,9E-02 25,45 Controle 0,340 NUE235 9693,4 0,451 1,4E-02 25,62 NUE235 9694,3 0,517 4,3E-04 43,98 Controle 0,359 NUE239 9191,1 0,435 3,5E-01 10,73 NUE239 9194,3 0,482 4,7E-02 22,75 Controle 0,393 NUE239 9192,3 0,565 2,7E-04 42,18 NUE239 9192,1 0,447 2,6E-01 12,34 NUE239 9191,2 0,449 2,2E-01 13,06 Controle 0,397 NUE240 9172,2 0,490 1,2E-02 24,73 Controle 0,393 NUE240 9172,1 0,507 1,4E-02 27,47 Controle 0,397 NUE241 9633,4 0,554 8,4E-07 54,27 NUE241 9632,3 0,407 2,8E-01 13,32 NUE241 9632,2 0,466 1,7E-03 29,87 NUE241 9632,4 0,432 1,5E-01 20,52

Continuação da Tabela 28 Controle 0,359 NUE242 9212,1 0,429 2,2E-01 13,68 NUE242 9213,4 0,544 4,7E-05 44,09 Controle 0,377 NUE242 9212,1 0,462 1,1E-03 54,42 NUE242 9211,2 0,403 7,9E-02 34,60 NUE242 9213,4 0,347 2,6E-01 16,09 Controle 0,299 NUE245 10643,1 0,351 2,1E-01 12,20 NUE245 10641,7 0,414 3,8E-03 32,32 NUE245 10641,8 0,434 2,5E-04 38,90 NUE245 10643,4 0,377 2,2E-02 20,56 Controle 0,313 NUE246 9033,4 0,504 1,2E-01 21,54 NUE246 9034,1 0,510 1,4E-01 22,94 NUE246 9031,1 0,524 5,4E-02 26,35 Controle 0,414 NUE250 9134,1 0,433 1,4E-01 14,91 NUE250 9132,2 0,482 2,4E-02 27,68 Controle 0,377 NUE251 10183,1 0,460 6,6E-02 34,46 Controle 0,342 NUE251 10181,3 0,337 3,8E-01 7,88 NUE251 10183,2 0,485 1,4E-04 55,27 NUE251 10182,1 0,391 3,4E-02 25,13 NUE251 10183,1 0,323 6,8E-01 3,24 NUE251 10181,1 0,361 2,5E-01 15,54 Controle 0,313 NUE252 9011,3 0,468 6,8E-03 24,03 NUE252 9012,2 0,438 1,2E-01 16,22 NUE252 9013,2 0,458 8,4E-02 21,40 Controle 0,377 NUE254 8972,4 0,508 2,7E-03 27,22 Controle 0,399 NUE256 10063,4 0,507 1,5E-02 48,06 NUE256 10064,1 0,525 4,0E-03 53,43 NUE256 10061,2 0,431 1,4E-01 26,08 NUE256 10063,2 0,518 6,8E-03 51,45 Controle 0,342 NUE256 10061,3 0,383 6,3E-02 22,55 NUE256 10061,2 0,368 6,1E-02 17,75 NUE256 10061,4 0,432 3,7E-04 38,10 NUE256 10063,2 0,434 3,8E-05 38,83 Controle 0,313 NUE512 9282,3 0,479 5,0E-02 22,43 NUE512 9284,4 0,525 3,4E-03 34,40 Controle 0,391 NUE513 9681,4 0,489 1,7E-01 18,01 NUE513 9683,5 0,518 8,4E-02 24,96 Controle 0,414 NUE513 9681,6 0,475 6,5E-02 19,62 Controle 0,397 NUE513 9683,5 0,515 8,4E-02 16,54 Controle 0,442 NUE514 9404,1 0,471 2,5E-02 24,98

Continuação da Tabela 28 NUE514 9402,2 0,445 9,9E-02 17,92 NUE514 9404,5 0,493 4,6E-03 30,81 NUE514 9403,2 0,443 4,8E-02 17,37 NUE514 9402,5 0,503 3,8E-03 33,24 Controle 0,377 NUE514 9404,1 0,371 3,0E-02 23,82 NUE514 9403,2 0,471 4,9E-05 57,43 NUE514 9402,5 0,442 9,5E-04 47,79 Controle 0,299 NUE519 9371,2 0,513 1,3E-01 29,00 NUE519 9371,1 0,555 1,8E-02 39,76 Controle 0,397 NUE520 9771,4 0,486 2,5E-03 48,07 NUE520 9771,7 0,471 1,1E-02 43,62 NUE520 9771,2 0,463 9,8E-03 41,14 NUE520 9771,3 0,463 2,4E-02 41,09 Controle 0,328 NUE520 9771,4 0,476 3,4E-02 39,14 NUE520 9771,2 0,478 3,0E-02 39,79 Controle 0,342 NUE521 9362,2 0,414 1,2E-02 38,49 NUE521 9361,3 0,383 8,8E-03 27,99 NUE521 9363,4 0,456 1,0E-04 52,49 Controle 0,299 NUE523 9412,5 0,410 2,6E-02 36,99 NUE523 9414,2 0,495 1,1E-06 65,32 NUE523 9412,1 0,364 7,6E-02 21,51 NUE523 9413,4 0,372 3,3E-02 24,28 Controle 0,299 NUE523 9412,5 0,525 1,7E-01 18,63 NUE523 9414,2 0,552 6,9E-03 24,85 Controle 0,442 NUE525 9531,2 0,465 3,5E-03 29,55 NUE525 9534,1 0,506 5,7E-04 40,93 NUE525 9531,1 0,494 4,1E-03 37,67 Controle 0,359 NUE531 10082,2 0,413 1,1E-01 25,96 NUE531 10081,5 0,451 5,6E-02 37,34 Controle 0,328 NUE531 10083,3 0,387 8,0E-03 23,90 NUE531 10082,2 0,359 2,2E-01 14,68 NUE531 10081,4 0,366 5,7E-02 17,00 NUE531 10083,2 0,445 5,0E-04 42,20 NUE531 10081,5 0,478 2,9E-05 52,87 Controle 0,313 NUE536 9233,3 0,511 8,2E-02 23,25 Controle 0,414 NUE537 9393,2 0,409 2,5E-03 36,75 NUE537 9393,3 0,415 1,8E-03 38,64 Controle 0,299 NUE537 9393,3 0,496 1,4E-02 26,83 Controle 0,391 NUE539 10101,5 0,454 9,5E-02 32,65 NUE539 10103,5 0,436 1,2E-01 27,43 NUE539 10101,7 0,527 4,4E-03 53,99

Continuação da Tabela 28 Controle 0,342 NUE539 10101,7 0,420 2,4E-03 34,28 Controle 0,313 NUE544 9764,2 0,581 9,7E-02 24,20 Controle 0,468 NUE548 9095,2 0,495 3,1E-02 31,12 NUE548 9095,4 0,541 1,3E-03 43,44 NUE548 9091,1 0,436 8,2E-02 15,49 Controle 0,377 NUE550 9141,3 0,469 9,2E-02 27,80 Controle 0,367 NUE563 9452,3 0,513 4,5E-03 42,86 Controle 0,359 NUE566 9512,1 0,448 7,9E-02 24,77 NUE566 9514,1 0,530 1,3E-05 47,65 Controle 0,359 NUE570 9314,4 0,477 6,1E-02 22,12 NUE570 9314,1 0,436 3,3E-01 11,56 Controle 0,391 NUE570 9314,1 0,522 5,4E-02 26,80 Controle 0,411 NUE574 10363,4 0,384 9,0E-02 22,79 NUE574 10364,2 0,369 3,4E-02 18,18 NUE574 10362,2 0,372 4,0E-02 19,10 NUE574 10366,2 0,505 1,3E-05 61,62 NUE574 10366,1 0,403 1,8E-03 28,75 Controle 0,313 NUE583 9673,1 0,337 3,3E-01 7,83 NUE583 9673,4 0,511 4,9E-04 63,57 NUE583 9673,2 0,445 1,3E-04 42,20 NUE583 9671,2 0,373 5,7E-02 19,44 NUE583 9671,1 0,356 1,3E-01 13,96 Controle 0,313 NUE586 9751,1 0,466 3,8E-01 12,01 NUE586 9751,7 0,561 1,4E-02 34,87 NUE586 9752,1 0,616 6,6E-04 48,10 Controle 0,416 NUE586 9751,6 0,578 9,9E-02 23,61 NUE586 9751,3 0,544 2,5E-01 16,32 NUE586 9752,4 0,585 6,0E-02 25,16 NUE586 9752,1 0,611 3,8E-02 30,58 Controle 0,468 NUE593 10394,2 0,446 2,9E-02 35,91 Controle 0,328

Tabela 28: Análises da taxa de crescimento da planta

(crescimento relativo da área de folhagem e comprimento da raiz) de plantas transgênicas sobre-expressando o poli nucleotídeos exógenos de algumas configurações da invenção 5 (utilizando genes clonados ou sintéticos listados na Tabela

23 acima) sob regulação de um promotor constitutivo (35S) quando o germinada sob condições limitadoras de nitrogênio [condições de baixo nitrogênio ou deficiência de nitrogênio (0,75 mM N)] como comparado às plantas de controle. "Aum." = 5 Aumento; "RGR" = taxa de crescimento relativo.

Tabela 29 Plantas transgênicas exógenas expressando os poli nucleotídeos de algumas configurações da invenção exibem biomassa da planta melhorada (planta fresca e seca) sob condições padrões de nitrogênio Nome do Nome do Evento # Peso da Planta fresca Evento # Peso da Planta seca Gene Gene % % Média Valor-p Média Valor-p aumento aumento CT1 4841,1 224,68 5,7E-03 44,54 CT11 4894,3 10,93 1,0E-01 57,88 CT1 4844,3 220,28 1,3E-01 41,71 CT11 4892,2 11,00 2,3E-02 58,84 Controle 155,44 CT11 4892,3 9,35 1,6E-01 35,02 CT11 4892,2 327,13 1,2E-02 41,78 CT11 4893,2 7,20 7,0E-01 3,97 CT11 4892,3 321,38 4,4E-02 39,29 CT11 4892,1 12,40 1,0E-01 79,06 Controle 230,73 Controle 6,93 CT11 4893,2 293,83 1,8E-02 70,30 CT11 4894,2 6,70 5,8E-01 8,06 Controle 172,54 CT11 4893,2 12,73 5,8E-03 105,24 CT22 5023,1 249,48 1,3E-02 60,50 Controle 6,20 Controle 155,44 CT27 5033,6 7,40 1,9E-01 79,39 9,2E- CT27 5033,6 234,13 1,1E-01 148,18 CT27 5033,8 7,50 81,82 02 CT27 5033,8 192,50 8,4E-03 104,05 CT27 5033,5 5,55 1,9E-01 34,55 CT27 5033,5 143,73 3,1E-01 52,35 Controle 4,13 Controle 94,34 CT27 5033,7 8,23 1,5E-01 32,66 CT27 5033,7 224,58 1,2E-01 30,16 CT27 5035,2 13,10 2,1E-04 111,29 CT27 5035,2 343,65 2,2E-02 99,17 CT27 5031,4 9,28 8,2E-03 49,60 CT27 5031,4 255,88 3,0E-03 48,30 CT27 5033,6 8,15 2,7E-01 31,45 Controle 172,54 CT27 5033,4 7,95 4,7E-02 28,23

Continuação da Tabela 29

CT76 5041,7 292,55 5,6E-02 26,80 CT27 5033,8 8,90 2,5E-02 43,55

CT76 5043,5 415,05 1,4E-03 79,89 CT27 5033,5 7,63 2,1E-01 22,98 Controle 230,73 Controle 6,20 CT76 5044,6 239,08 2,1E-03 153,43 CT6 4943,1 7,83 3,2E-01 26,21

CT76 5041,5 209,10 1,6E-03 121,65 CT6 4945,9 7,63 1,8E-01 22,98

2,9E- CT76 5043,5 272,60 2,7E-02 188,96 CT6 4941,4 9,28 49,60 02 CT76 5041,6 124,75 3,9E-02 32,24 Controle 6,20 CT76 5041,9 245,20 7,1E-02 159,92 CT75 4874,4 9,35 1,2E-02 50,81

Controle 94,34 Controle 6,20

CT81 4992,1 381,73 3,3E-04 65,45 CT76 5044,6 9,40 1,6E-01 35,74

CT81 4992,2 305,85 2,8E-01 32,56 CT76 5043,5 17,23 7,8E-06 148,74

Controle 230,73 CT76 5041,6 10,03 9,7E-02 44,89 NUE209 8192,14 217,23 3,8E-02 86,30 Controle 6,93 Controle 116,60 CT76 5044,6 7,43 5,8E-02 80,00

NUE210 8202,1 279,53 1,1E-01 139,73 CT76 5041,5 9,70 1,0E-04 135,15

NUE210 8201,3 250,90 4,8E-02 115,18 CT76 5041,7 5,03 4,5E-01 21,82

Controle 116,60 CT76 5043,5 10,88 1,3E-02 163,64

NUE211 8263,5 162,35 5,0E-02 31,43 CT76 5041,9 8,95 1,1E-02 116,97 Controle 123,53 Controle 4,13 NUE212 8332,1 253,75 1,0E-01 105,42 CT81 4992,1 11,20 4,1E-02 61,73

NUE212 8335,2 169,28 4,9E-02 37,03 CT81 4993,5 8,60 3,6E-01 24,19

Controle 123,53 CT81 4992,2 8,63 3,4E-01 24,55

NUE212 8335,2 221,83 2,0E-02 90,24 CT81 4995,5 7,90 3,8E-01 14,08 NUE212 8331,4 163,88 2,7E-01 40,54 Controle 6,93 Controle 116,60 NUE206 6732,9 13,68 7,9E-03 43,38

NUE212 8332,1 116,43 1,8E-01 29,34 NUE206 6731,2 14,13 4,3E-01 48,19

NUE212 8334,1 128,33 8,1E-02 42,56 NUE206 6732,5 12,98 1,8E-02 36,04

NUE212 8331,4 143,63 3,0E-02 59,56 NUE206 6732,2 10,98 3,6E-01 15,07 Controle 90,01 Controle 9,54 NUE221 9802,8 149,35 3,9E-03 58,7 NUE208 8354,8 8,20 2,7E-02 78,75

NUE221 9806,1 209,18 1,7E-08 122,3 NUE208 8355,3 5,78 3,3E-01 25,89

Continuação da Tabela 29 Controle 94,09 Controle 4,59 NUE222 8851,3 240,70 6,1E-02 106,43 NUE208 8354,8 6,15 3,1E-02 14,42 NUE222 8852,4 138,15 3,1E-01 18,48 Controle 5,38 Controle 116,60 NUE208 8354,8 16,45 1,9E-03 72,48

NUE224 9002,4 279,08 6,1E-02 32,66 NUE208 8354,5 15,58 2,4E-03 63,30

9,6E- Controle 210,36 NUE208 8355,3 12,40 30,01 02 NUE224 9002,4 159,13 2,6E-01 14,58 Controle 9,54

NUE224 9002,2 268,95 3,8E-03 93,66 NUE209 8192,1 7,73 1,5E-01 68,39

NUE224 9001,3 181,65 3,2E-02 30,80 NUE209 8191,5 7,13 7,1E-02 55,31 Controle 138,88 Controle 4,59 NUE225 9732,8 117,00 2,2E-01 24,4 NUE209 8191,5 10,83 6,2E-01 162,42

Controle 94,09 NUE209 8191,3 15,40 6,3E-03 NUE227 9853,1 197,68 9,4E-02 55,51 Controle 9,54 Controle 127,11 NUE210 8202,1 10,95 1,0E-02 138,69

NUE229 8862,2 75,00 1,2E-02 26,32 NUE210 8201,3 8,98 5,5E-02 95,64 NUE229 8862,5 74,03 1,3E-01 24,67 Controle 4,59 NUE229 8864,2 84,93 3,9E-02 43,03 NUE210 8202,1 4,28 2,4E-02 41,91

Controle 59,38 NUE210 8751,4 4,33 1,1E-01 43,57

NUE230 9154,2 171,38 4,4E-01 23,40 NUE210 6755,3 3,85 2,4E-01 27,80

NUE230 9151,2 203,78 3,1E-02 46,73 NUE210 8201,2 3,93 2,1E-01 30,29 Controle 138,88 Controle 3,01 NUE231 10633,3 199,70 1,6E-07 112,2 NUE211 8265,1 7,38 8,8E-02 60,76 Controle 94,09 Controle 4,59 NUE233 10174,3 139,08 9,0E-02 44,46 NUE212 8335,2 9,53 7,3E-02 107,63 NUE233 10174,1 190,05 5,5E-04 97,40 Controle 4,59 NUE233 10173,7 143,98 3,5E-03 49,55 NUE212 8334,1 4,20 7,4E-02 39,42

Controle 96,28 NUE212 8331,4 5,08 5,7E-02 68,46 NUE235 9694,2 171,15 1,0E-01 23,24 Controle 3,01 NUE235 9691,1 172,20 7,8E-02 24,00 NUE221 9802,8, 7,50 2,5E-03 56,3

NUE235 9693,3 194,48 5,4E-02 40,04 NUE221 9806,1, 9,08 3,5E-06 89,1 Controle 138,88 Controle 4,80 NUE237 9651,1 293,05 3,8E-02 111,02 NUE222 8851,3 11,60 4,2E-02 152,86 NUE237 9652,3 167,10 1,1E-01 20,32 Controle 4,59 NUE237 9654,4 195,80 1,4E-01 40,99 NUE224 9002,2 10,13 5,4E-02 83,67

Continuação da Tabela 29

Controle 138,88 NUE224 9001,3 7,03 1,1E-01 27,44 NUE237 9651,1 191,70 1,8E-02 26,32 Controle 5,51 Controle 151,76 NUE227 9851,2 5,88 1,4E-01 24,34

NUE239 9192,1 245,53 3,6E-02 56,82 NUE227 9853,1 8,88 4,0E-02 87,83 Controle 156,56 Controle 4,73

NUE240 9172,1 212,68 7,3E-02 35,84 NUE228 10092 7,90 2,0E-01 45,29

NUE240 9174,3 255,50 2,6E-01 NUE228 10093 7,98 8,6E-02 46,67

Controle 156,56 NUE228 10093 6,68 5,3E-03 22,76 NUE241 9631,3 166,03 6,6E-02 30,61 Controle 5,44 NUE241 9632,5 185,58 1,4E-02 45,99 NUE229 8862,2 3,90 4,1E-02 30,54

NUE241 9632,4 219,43 8,4E-03 72,62 NUE229 8862,5 3,80 2,7E-01 27,20

2,9E- Controle 127,11 NUE229 8864,2 4,45 48,95 02 NUE242 9212,1 140,78 3,9E-02 59,41 Controle 2,99 NUE242 9214,1 129,18 1,5E-01 46,27 NUE230 9154,2 7,38 1,0E-01 33,79

NUE242 9213,2 101,43 3,7E-01 14,85 NUE230 9151,2 7,48 5,8E-02 35,60 NUE242 9213,4 146,30 3,0E-02 65,66 Controle 5,51 Controle 88,31 NUE231 10632,2 5,53 4,1E-01 15,1

NUE244 9061,1 164,20 8,9E-04 45,23 NUE231 10633,3 11,43 2,0E-11 138,0 NUE244 9061,5 143,40 4,8E-01 26,83 Controle 4,80 Controle 113,06 NUE233 10174 6,13 1,2E-02 58,58

NUE246 9033,6 273,05 8,9E-03 43,57 NUE233 10174 8,63 2,1E-04 123,30

NUE246 9033,4 241,48 4,8E-01 26,97 NUE233 10174 5,10 8,2E-02 32,04 NUE246 9034,1 224,08 2,5E-01 17,82 Controle 3,86 NUE246 9031,1 232,65 3,3E-01 22,33 NUE234 9163,5 4,28 8,7E-02 43,10

Controle 190,19 NUE234 9162,1 4,60 1,3E-01 53,97 NUE246 9034,1 160,45 1,8E-02 41,91 Controle 2,99 Controle 113,06 NUE235 9694,2 7,35 2,2E-01 33,33

NUE246 9033,4 185,78 4,3E-01 16,45 NUE235 9691,1 7,90 1,4E-01 43,31

6,2E- NUE246 9033,8 205,95 1,8E-01 29,09 NUE235 9693,3 6,98 26,53 02 NUE246 9034,1 228,95 2,4E-03 43,51 Controle 5,51 2,9E- Controle 159,54 NUE237 9651,1 10,20 85,03 02 6,3E- NUE248 8982,4 275,80 2,2E-02 45,01 NUE237 9652,3 6,68 21,09 02

Continuação da Tabela 29

NUE248 8981,5 343,28 1,1E-02 80,49 NUE237 9654,4 8,25 1,1E-02 49,66 NUE248 8984,1 294,45 1,5E-01 54,82 Controle 5,51 NUE248 8981,2 245,25 1,1E-01 28,95 NUE237 9651,1 6,98 4,0E-02 26,53 Controle 190,19 Controle 5,51

NUE248 8982,4 118,75 1,6E-01 37,56 NUE239 9191,2 8,80 7,6E-02 19,32

NUE248 8984,1 124,38 2,5E-02 44,08 Controle 7,38 NUE248 8981,5 140,05 4,8E-02 62,24 NUE241 9631,3 6,43 8,5E-02 35,98

NUE248 8983,1 114,05 3,2E-01 32,12 NUE241 9632,5 8,33 2,8E-04 76,19

1,6E- Controle 86,33 NUE241 9632,3 6,55 38,62 02

NUE249 9122,5 145,73 4,6E-02 68,82 NUE241 9632,4 8,03 1,0E-04 70,02 NUE249 9121,4 112,83 3,6E-01 30,71 Controle 4,73 6,3E- NUE249 9123,3 107,98 2,1E-01 25,08 NUE244 9061,1 5,65 34,52 02

Controle 86,33 NUE244 9061,5 5,88 6,7E-02 39,88 NUE250 9133,2 182,70 4,3E-02 31,56 Controle 4,20 2,9E- NUE250 9134,1 216,85 2,5E-02 56,15 NUE246 9033,6 8,98 28,90 02

Controle 138,88 NUE246 9033,4 8,28 3,1E-01 18,85 NUE251 10181,3 143,00 4,0E-02 48,53 Controle 6,96 NUE251 10183,2 146,38 2,4E-02 52,04 NUE246 9034,1 5,60 7,3E-02 33,33 NUE251 10183,1 128,05 3,6E-01 33,00 Controle 4,20 Controle 96,28 NUE246 9033,4 6,28 1,7E-01 18,40

NUE254 8972,2 173,28 8,8E-02 100,72 NUE246 9033,8 8,63 5,2E-04 62,74

NUE254 8974,1 130,38 4,1E-02 51,03 NUE246 9034,1 8,35 2,5E-04 57,55 Controle 86,33 Controle 5,30 NUE256 10063,4 132,65 1,4E-02 37,78 NUE248 8982,4 9,88 2,2E-02 41,83

NUE256 10064,1 212,63 1,5E-04 120,85 NUE248 8981,5 11,78 1,3E-01 69,12

NUE256 10061,2 151,98 1,2E-01 57,86 NUE248 8984,1 10,25 1,4E-01 47,22

NUE256 10062,4 152,75 1,5E-01 58,66 NUE248 8981,2 7,55 6,5E-01 8,44 NUE256 10063,2 162,50 2,1E-01 68,79 Controle 6,96 Controle 96,28 NUE248 8984,1 7,15 1,2E-01 43,00

1,9E- NUE267 8962,1 185,23 1,6E-02 63,83 NUE248 8981,5 8,65 73,00 02 Controle 113,06 Controle 5,00 NUE268 8994,5 228,80 8,7E-02 64,46 NUE250 9134,3 8,48 1,3E-02 49,67 NUE268 8992,1 204,08 2,2E-01 46,69 Controle 5,66

Continuação da Tabela 29

NUE268 8996,5 146,34 7,6E-02 5,19 NUE250 9132,1 11,18 1,5E-01 102,72

2,6E- Controle 139,13 NUE250 9133,2 7,88 42,86 02

NUE269 9101,1 95,83 1,4E-02 79,28 NUE250 9132,2 8,55 3,2E-02 55,10

NUE269 9102,2 89,05 7,7E-05 66,60 NUE250 9134,1 8,88 4,5E-02 61,00 NUE269 9102,3 117,90 6,5E-02 120,58 Controle 5,51 NUE269 9103,1 83,60 7,0E-02 56,41 NUE250 9134,1 3,53 1,8E-01 17,99

NUE269 9103,3 82,45 1,6E-02 54,26 NUE250 9131,2 4,38 7,2E-02 46,44 Controle 53,45 Controle 2,99 NUE512 9284,2 94,55 9,0E-02 20,60 NUE251 10181 5,98 4,9E-02 54,69

NUE512 9284,3 92,98 4,2E-01 18,59 NUE251 10183 6,63 3,6E-03 71,52 NUE512 9283,1 91,30 8,6E-02 16,45 Controle 3,86 NUE512 9282,3 92,85 5,7E-02 18,43 NUE254 8972,2 6,43 2,1E-02 52,98 NUE512 9281,3 105,50 2,1E-01 34,57 Controle 4,20 Controle 78,40 NUE254 8972,2 9,28 3,3E-02 85,50 NUE514 9404,1 158,73 3,8E-02 79,73 Controle 5,00 Controle 88,31 NUE256 10063 6,10 1,7E-03 57,93

2,9E- NUE515 9712,5 104,98 5,6E-01 11,6 NUE256 10064 9,55 147,25 07

NUE515 9713,6 185,55 4,0E-06 97,2 NUE256 10061 6,30 5,2E-02 63,11

Controle 94,09 NUE256 10062 7,65 1,1E-01 98,06

NUE516 9291,1 230,00 8,3E-02 65,62 NUE256 10063 6,33 4,9E-03 63,75 NUE516 9291,4 227,13 5,7E-02 63,55 Controle 3,86 Controle 138,88 NUE267 8962,1 6,43 5,0E-03 52,98 NUE520 9771,4 137,73 5,8E-02 43,05 Controle 4,20 NUE520 9771,7 160,25 3,5E-03 66,45 NUE268 8994,5 7,18 8,4E-02 59,44

1,9E- NUE520 9771,2 158,98 1,3E-02 65,13 NUE268 8996,3 6,85 52,22 02

NUE520 9771,3 148,40 6,5E-02 54,14 NUE268 8996,5 7,00 2,8E-03 55,56 Controle 96,28 Controle 4,50 1,6E- NUE521 9361,2 167,53 7,3E-05 89,70 NUE512 9284,2 4,20 46,72 02

NUE521 9363,4 180,95 7,6E-03 104,90 NUE512 9284,3 3,58 1,7E-01 24,89

Controle 88,31 NUE512 9283,1 4,35 1,8E-02 51,97

2,6E- NUE523 9412,1 271,35 1,0E-01 42,67 NUE512 9282,3 4,18 45,85 02

Continuação da Tabela 29

1,9E- Controle 190,19 NUE512 9281,3 4,93 72,05 02 NUE523 9413,3 184,25 7,3E-02 28,51 Controle 2,86

NUE523 9413,4 180,55 2,2E-01 25,93 NUE512 9284,2 6,00 2,3E-03 53,35

Controle 143,37 Controle 3,91 6,3E- NUE527 9202,6 152,18 6,1E-01 9,38 NUE514 9404,1 7,90 61,64 02 NUE527 9203,2 249,95 7,5E-02 79,66 Controle 4,89 NUE527 9201,2 273,53 4,2E-04 96,60 NUE515 9713,6 8,38 1,0E-04 74,5

Controle 139,13 Controle 4,80

NUE527 9204,2 101,70 1,3E-02 90,27 NUE519 9371,1 12,15 1,4E-01 64,75

NUE527 9202,6 82,40 3,4E-02 54,16 NUE519 9371,2 14,15 3,5E-01 91,86

NUE527 9201,1 120,30 3,6E-03 125,07 NUE519 9373,1 9,20 2,4E-01 24,75 NUE527 9203,2 84,63 2,6E-03 58,33 Controle 7,38 NUE527 9204,1 68,55 1,2E-01 28,25 NUE520 9771,4 5,73 1,5E-01 48,22

Controle 53,45 NUE520 9771,7 6,60 5,4E-02 70,87

NUE532 9222,4 210,65 3,5E-01 51,41 NUE520 9771,2 8,05 7,6E-03 108,41

2,9E- NUE532 9222,1 168,45 8,4E-02 21,08 NUE520 9771,3 5,73 48,22 02 NUE532 9223,5 210,15 7,6E-02 51,05 Controle 3,86 6,0E- Controle 139,13 NUE523 9412,1 9,03 29,62 02 NUE535 9081,1 117,15 3,0E-01 21,68 Controle 6,96 NUE535 9083,1 235,35 7,7E-02 144,46 NUE527 9201,2 8,78 7,7E-02 95,00 NUE535 9084,4 128,88 5,4E-02 33,86 Controle 4,50 NUE535 9082,1 114,83 3,1E-01 19,27 NUE531 10083 7,05 1,2E-01 29,66

Controle 96,28 NUE531 10082 8,90 7,5E-02 63,68

NUE535 9082,2 85,55 5,9E-03 60,06 NUE531 10081 8,60 2,4E-01 58,16

1,6E- NUE535 9086,2 120,63 1,3E-02 125,68 NUE531 10082 9,43 73,33 02 NUE535 9086,3 86,67 1,2E-01 62,15 Controle 5,44 NUE535 9081,1 90,65 4,3E-03 69,60 NUE531 10081 8,48 4,2E-02 32,13

NUE535 9084,4 69,83 2,2E-02 30,64 NUE531 10082 8,95 1,2E-01 39,53 Controle 53,45 Controle 6,41 NUE537 9393,3 207,43 6,7E-02 30,28 NUE532 9222,4 8,28 1,4E-01 83,89

Controle 159,21 NUE532 9222,1 6,53 8,4E-02 45,00

NUE538 9782,1 203,68 4,0E-02 60,23 NUE532 9223,3 6,08 7,5E-02 35,00

Continuação da Tabela 29

Controle 127,11 NUE532 9223,5 6,70 1,8E-01 48,89

NUE539 10101,5 146,60 3,7E-03 52,27 Controle 4,50 5,6E- NUE539 10103,5 126,33 7,8E-02 31,21 NUE535 9083,1 10,90 182,20 02 NUE539 10101,2 190,80 5,0E-03 98,18 Controle 3,86 9,9E- NUE539 10101,7 173,78 2,0E-04 80,50 NUE537 9391,1 6,48 65,50 02

Controle 96,28 NUE537 9393,3 5,53 2,9E-01 41,21 NUE542 9332,1 196,48 3,3E-02 41,48 Controle 3,91 Controle 138,88 NUE538 9782,1 8,30 2,8E-05 75,66 NUE544 9763,3 169,78 8,8E-02 26,31 Controle 4,73 Controle 134,41 NUE539 10102 6,83 1,4E-03 76,70

NUE549 9343,6 200,95 9,7E-02 32,41 NUE539 10101 9,15 2,0E-02 136,89

1,6E- NUE549 9343,7 205,95 2,8E-01 35,71 NUE539 10102 7,80 101,94 02 Controle 151,76 Controle 3,86 NUE550 9144,4 128,13 5,6E-03 139,71 NUE543 10052 5,90 7,1E-02 24,87 NUE550 9141,3 116,60 5,0E-07 118,15 Controle 4,73 NUE550 9143,1 124,23 1,9E-02 132,41 NUE544 9764,2 8,25 1,1E-01 53,49

NUE550 9143,4 98,70 5,2E-02 84,66 NUE544 9763,3 8,25 2,7E-02 53,49 Controle 53,45 Controle 5,38 NUE550 9143,1 197,68 2,6E-01 42,08 NUE548 9095,2 7,50 7,6E-02 32,45

NUE550 9143,4 174,85 1,4E-01 25,68 NUE548 9095,4 8,18 1,7E-01 44,37

NUE550 9142,2 240,83 7,2E-05 73,10 NUE548 9091,1 7,68 2,1E-01 35,54 Controle 139,13 Controle 5,66 NUE553 9181,5 76,85 1,9E-03 43,78 NUE548 9095,2 10,17 2,7E-02 71,23

8,9E- NUE553 9185,2 74,85 2,4E-01 40,04 NUE548 9092,2 8,15 37,26 02 NUE553 9184,3 61,65 5,6E-01 15,34 Controle 5,94 6,9E- NUE553 9182,2 72,28 1,3E-01 35,22 NUE549 9343,7 7,25 31,52 02 Controle 53,45 Controle 5,51 NUE554 9111,4 135,30 6,7E-02 153,13 NUE550 9141,3 5,80 3,0E-01 28,89

Controle 53,45 NUE550 9143,4 5,73 8,3E-03 27,22

1,6E- NUE563 9453,2 270,58 1,2E-01 53,26 NUE550 9142,2 8,08 79,44 02 NUE563 9452,3 207,35 4,2E-01 17,45 Controle 4,50 NUE563 9451,2 273,50 4,7E-02 54,91 NUE554 9115,2 6,40 4,5E-02 42,22 Controle 176,55 Controle 4,50

Continuação da Tabela 29

NUE564 9242,3 113,35 4,7E-02 44,58 NUE560 9424,3 8,85 1,7E-03 65,64

NUE564 9242,4 90,95 8,5E-02 16,01 NUE560 9422,1 6,88 4,7E-02 28,68 NUE564 9244,1 94,08 1,3E-02 19,99 Controle 5,34 Controle 78,40 NUE562 9252,8 8,43 3,0E-02 57,69 NUE566 9512,4 257,28 1,4E-02 45,72 Controle 5,34 6,3E- Controle 176,55 NUE567 9261,3 4,10 43,23 02 NUE567 9263,2 130,00 7,3E-03 65,82 Controle 2,86 NUE567 9261,3 93,50 8,4E-02 19,26 NUE568 9471,3 7,63 1,8E-02 38,32 NUE567 9261,4 112,75 2,2E-02 43,81 Controle 5,51 NUE567 9263,3 84,55 5,9E-01 7,84 NUE569 9381,2 4,40 1,7E-02 53,71

9,0E- Controle 78,40 NUE569 9381,5 4,90 71,18 02

NUE568 9471,3 230,43 4,1E-02 51,83 NUE569 9381,3 4,73 2,4E-03 65,07 NUE568 9461,2 186,87 2,5E-01 23,13 Controle 2,86 NUE568 9474,4 187,77 2,0E-01 23,72 NUE570 9311,4 3,63 1,4E-01 26,64

NUE568 9472,2 195,70 3,0E-01 28,95 NUE570 9313,3 4,33 4,3E-02 51,09

NUE568 9462,3 172,65 5,1E-01 13,76 NUE570 9314,4 4,78 8,5E-03 66,81

Controle 151,76 NUE570 9314,1 4,33 3,0E-02 51,09

NUE569 9384,4 90,90 2,1E-01 15,94 NUE570 9312,3 5,23 4,2E-04 82,53 NUE569 9381,2 124,28 7,9E-03 58,51 Controle 2,86 5,6E- NUE569 9381,5 130,40 4,3E-02 66,33 NUE571 9304,2 8,98 67,98 02

NUE569 9381,3 99,18 1,7E-01 26,50 NUE571 9303,2 8,63 2,3E-03 61,43

6,3E- NUE569 9384,2 99,08 9,4E-02 26,37 NUE571 9301,4 7,13 33,36 02 Controle 78,40 Controle 5,34 NUE570 9313,3 110,70 1,2E-01 41,20 NUE571 9304,3 6,50 2,4E-04 127,07

NUE570 9314,4 119,08 1,2E-02 51,88 NUE571 9304,2 6,05 2,8E-02 111,35

NUE570 9314,1 109,93 8,7E-03 40,21 NUE571 9303,2 4,98 4,2E-03 73,80

NUE570 9312,3 149,30 8,0E-03 90,43 NUE571 9301,4 4,13 4,1E-02 44,10

Controle 78,40 NUE571 9302,3 4,03 3,4E-02 40,61 NUE571 9304,2 212,53 1,1E-01 48,23 Controle 2,86 9,0E- NUE571 9303,2 240,93 3,8E-02 68,04 NUE572 9321,3 4,95 72,93 02

NUE571 9302,1 177,58 4,0E-01 23,86 NUE572 9324,3 4,55 2,4E-02 58,95

Continuação da Tabela 29

NUE571 9301,4 209,80 1,0E-01 46,33 NUE572 9321,1 4,80 4,7E-03 67,69

NUE571 9302,3 199,13 2,6E-01 38,89 NUE572 9322,2 4,35 1,5E-02 51,97 Controle 143,37 Controle 2,86 NUE571 9304,3 124,43 1,2E-02 58,71 NUE573 9491,4 7,28 1,8E-03 31,97 NUE571 9304,2 123,90 4,5E-02 58,04 Controle 5,51 NUE571 9303,2 106,00 1,7E-02 35,20 NUE576 9793,3 8,03 7,1E-04 69,84 Controle 78,40 Controle 4,73 9,3E- NUE572 9322,1 124,90 3,5E-02 59,31 NUE581 9723,6 6,28 30,7 02

NUE572 9324,3 115,85 2,7E-03 47,77 NUE581 9724,9 8,15 2,0E-04 69,8

NUE572 9321,1 101,00 3,1E-02 28,83 Controle 4,80

NUE572 9322,2 98,05 1,1E-02 25,06 NUE582 9561,1 6,90 2,6E-01 25,17

Controle 78,40 NUE582 9562,4 7,88 3,3E-02 42,86

NUE573 9491,1 226,63 4,7E-02 49,33 NUE582 9561,2 8,95 3,0E-02 62,36 Controle 151,76 Controle 5,51 6,2E- NUE581 9723,6 125,85 9,7E-02 33,8 NUE583 9673,4 11,28 75,78 02

NUE581 9724,5 99,23 7,8E-01 5,5 NUE583 9673,2 7,70 4,3E-01 20,04 NUE581 9724,9 165,35 2,0E-04 75,7 Controle 6,41 Controle 94,09 NUE585 9661,1 6,95 7,5E-02 31,13 NUE582 9564,2 189,45 1,4E-01 36,42 Controle 5,30 NUE582 9561,1 186,30 1,5E-01 34,15 NUE587 9643,2 10,20 3,2E-02 85,03

NUE582 9562,4 209,48 7,3E-02 50,84 NUE587 9641,3 8,23 1,8E-01 49,21 NUE582 9561,2 244,25 9,8E-02 75,88 Controle 5,51 Controle 138,88 NUE592 9744,5 9,80 1,0E-07 104,2

NUE583 9673,4 222,13 4,7E-02 54,28 NUE592 9747,5 8,23 2,0E-04 71,4 Controle 143,97 Controle 4,80 NUE585 9661,5 198,18 6,9E-02 24,22 NUE585 9661,1 194,93 2,6E-01 22,18 Controle 159,54 NUE587 9643,2 242,53 4,2E-02 53,46 NUE587 9643,1 221,50 1,9E-01 40,16 NUE587 9642,5 169,73 7,0E-01 7,40 NUE587 9642,2 192,08 4,1E-01 21,54 NUE587 9641,3 268,95 3,5E-04 70,18 Controle 158,04 NUE592 9741,7 115,18 2,6E-01 22,4 NUE592 9744,5 197,68 2,6E-07 110,1 NUE592 9747,4 118,53 1,9E-01 26,0 NUE592 9747,5 169,38 1,0E-04 80,0 Controle 94,09

Tabela 29: Análises da taxa de biomassa das plantas (planta fresca e seca) de plantas transgênicas sobre-expressando o poli nucleotídeos exógenos de algumas configurações da invenção (utilizando genes clonados ou sintéticos listados 5 na Tabela 23 acima) sob regulação de um promotor constitutivo (35S) quando o germinada sob condições limitadoras de nitrogênio [condições de baixo nitrogênio ou deficiência de nitrogênio (15 mM N)] como comparado às plantas de controle. "Aum." = Aumento; "RGR" = taxa de crescimento relativo.

Tabela 30 Plantas transgênicas exógenas expressando os poli nucleotídeos de algumas configurações da invenção exibem biomassa da planta melhorada (área de folhagem) sob condições padrões de nitrogênio Area da folhagem cm2 Nome do Gene Evento # Média Valor-p % aumento CT11 4892,2 0,873 6,4E-03 72,49 CT11 4892,3 0,809 1,6E-03 59,89 CT11 4892,1 0,848 8,2E-02 67,56 Controle 0,506 CT11 4894,2 0,474 8,2E-02 21,28 CT11 4893,2 0,763 2,7E-02 94,95 Controle 0,391 CT27 5033,8 0,645 3,8E-02 81,02 CT27 5033,5 0,482 8,8E-02 35,52 Controle 0,356 CT27 5033,7 0,495 6,9E-02 26,56 CT27 5035,2 0,751 1,2E-02 92,06 CT27 5031,4 0,582 1,3E-05 48,90 CT27 5033,6 0,602 1,6E-02 53,79 CT27 5033,4 0,575 1,3E-02 47,12 CT27 5033,8 0,528 6,0E-03 34,95 CT27 5033,5 0,446 5,8E-02 14,08 Controle 0,391 CT6 4941,4 0,551 1,5E-04 40,90 Controle 0,391 CT75 4872,5 0,506 1,0E-01 29,29 CT75 4874,4 0,529 3,1E-02 35,35 Controle 0,391 CT76 5044,6 0,702 8,6E-03 38,82

Continuação da Tabela 30 CT76 5041,5 0,674 2,0E-01 33,22 CT76 5041,7 0,596 1,4E-01 17,83 CT76 5043,5 1,093 2,1E-05 116,09 CT76 5041,6 0,779 4,9E-02 53,91 CT76 5041,9 0,749 4,0E-03 48,14 Controle 0,506 CT76 5044,6 0,663 1,6E-02 86,32 CT76 5041,5 0,904 2,4E-03 153,77 CT76 5043,5 0,850 1,8E-03 138,87 CT76 5041,6 0,528 2,3E-02 48,40 CT76 5041,9 0,696 6,3E-03 95,60 Controle 0,356 CT81 4992,1 0,804 7,1E-02 58,98 CT81 4992,2 0,778 3,4E-03 53,73 Controle 0,506 NUE206 6732,5 0,707 3,6E-02 21,77 Controle 0,580 NUE208 8354,8 0,765 1,1E-02 31,82 NUE208 8354,5 0,727 1,3E-01 25,27 NUE208 8355,3 0,763 5,7E-02 31,55 Controle 0,580 NUE209 8192,14 0,458 2,2E-01 43,17 NUE209 8191,5 0,430 7,0E-02 34,44 Controle 0,320 NUE210 8201,3 0,485 1,1E-02 51,70 Controle 0,320 NUE210 8202,1 0,414 1,3E-02 30,69 NUE210 6755,3 0,474 5,8E-02 49,68 Controle 0,316 NUE210 8201,2 0,275 1,5E-02 35,08 Controle 0,204 NUE211 8265,1 0,253 7,2E-02 24,01 NUE211 8263,5 0,370 4,7E-04 81,74 Controle 0,204 NUE212 8335,1 0,332 6,3E-02 62,71 NUE212 8334,1 0,277 5,9E-03 36,04 NUE212 8331,4 0,268 1,1E-01 31,45 Controle 0,204 NUE212 8335,2 0,490 1,2E-02 53,10 Controle 0,320 NUE212 8332,1 0,390 7,7E-03 23,33 NUE212 8334,1 0,420 2,1E-03 32,80 NUE212 8331,4 0,430 2,3E-03 35,83 Controle 0,316 NUE221 9801,10 0,47 5,6E-01 8,7 NUE221 9802,8 0,59 1,0E-02 38,4 NUE221 9806,1 0,72 1,0E-05 68,8 Controle 0,43 NUE224 9002,2 0,525 1,3E-02 19,12 NUE224 9001,3 0,542 9,6E-02 22,97 Controle 0,441 NUE227 9851,2 0,531 1,9E-01 22,50 NUE227 9853,1 0,628 2,1E-02 44,84 NUE227 9852,3 0,550 6,8E-02 26,84 Controle 0,433

Continuação da Tabela 30 NUE228 10092,2 0,691 2,5E-01 22,23 NUE228 10093,3 0,759 3,6E-02 34,30 NUE228 10093,1 0,646 1,7E-01 14,35 Controle 0,565 NUE229 8864,2 0,430 2,4E-02 21,48 Controle 0,354 NUE230 9154,2 0,559 1,3E-01 26,94 NUE230 9151,2 0,519 8,3E-02 17,74 Controle 0,441 NUE231 10631,3 0,46 5,9E-01 8,0 NUE231 10632,2 0,50 2,7E-01 16,3 NUE231 10633,3 0,74 3,9E-06 72,3 Controle 0,43 NUE233 10174,3 0,512 7,7E-04 87,53 NUE233 10174,1 0,735 5,1E-06 169,13 NUE233 10173,7 0,398 2,9E-02 45,70 Controle 0,273 NUE233 10174,1 0,820 1,2E-04 35,44 Controle 0,606 NUE235 9694,2 0,516 1,0E-01 17,08 NUE235 9694,3 0,578 2,6E-02 31,06 Controle 0,441 NUE237 9651,1 0,710 3,7E-03 61,05 NUE237 9654,4 0,566 1,9E-02 28,50 NUE237 9654,1 0,634 1,4E-01 43,87 Controle 0,441 NUE241 9631,3 0,670 6,8E-04 54,67 NUE241 9632,5 0,626 1,2E-01 44,49 NUE241 9632,4 0,601 1,1E-03 38,64 Controle 0,433 NUE242 9214,1 0,726 5,0E-02 18,36 Controle 0,613 NUE242 9212,1 0,542 4,1E-02 42,31 NUE242 9213,4 0,518 1,3E-02 35,92 Controle 0,381 NUE244 9061,5 0,473 4,8E-03 33,52 Controle 0,354 NUE246 9033,8 0,740 3,2E-03 51,11 NUE246 9034,1 0,582 6,5E-02 18,92 NUE246 9031,1 0,572 6,9E-02 16,87 Controle 0,490 NUE248 8981,5 0,803 7,2E-02 55,67 Controle 0,516 NUE250 9132,1 0,744 8,5E-02 68,79 NUE250 9133,2 0,528 2,0E-02 19,79 NUE250 9132,2 0,517 1,8E-01 17,26 NUE250 9134,1 0,525 1,8E-01 19,17 Controle 0,441 NUE250 9134,1 0,444 4,1E-03 25,38 Controle 0,354 NUE251 10181,3 0,599 1,1E-02 119,32 NUE251 10183,2 0,467 2,4E-02 71,22 NUE251 10183,1 0,408 2,7E-02 49,61 NUE251 10181,1 0,397 7,3E-03 45,35 Controle 0,273

Continuação da Tabela 30 NUE251 10181,3 0,600 6,2E-02 22,85 Controle 0,488 NUE251 10183,2 0,713 2,9E-02 17,75 Controle 0,606 NUE256 10063,4 0,479 4,6E-03 75,40 NUE256 10064,1 0,707 1,5E-04 159,05 NUE256 10061,2 0,601 9,0E-06 120,20 NUE256 10062,4 0,588 1,2E-03 115,54 NUE256 10063,2 0,507 3,2E-03 85,58 Controle 0,273 NUE268 8996,5 0,730 6,1E-02 39,46 Controle 0,523 NUE269 9103,3 0,448 8,1E-02 23,13 Controle 0,364 NUE512 9284,2 0,531 4,8E-02 45,85 NUE512 9282,3 0,748 1,2E-04 105,28 NUE512 9284,4 0,442 5,3E-02 21,37 Controle 0,364 NUE514 9404,1 0,796 1,2E-04 108,76 NUE514 9402,2 0,449 2,1E-01 17,88 NUE514 9403,2 0,452 2,3E-01 18,65 Controle 0,381 NUE515 9712,6 0,49 3,5E-01 14,0 NUE515 9713,6 0,66 5,0E-04 53,4 Controle 0,43 NUE516 9291,1 0,516 2,0E-01 16,98 NUE516 9291,4 0,639 6,0E-04 45,10 Controle 0,441 NUE520 9771,4 0,465 1,6E-02 70,36 NUE520 9771,7 0,482 1,4E-02 76,62 NUE520 9771,2 0,415 2,7E-03 51,98 NUE520 9771,3 0,360 1,5E-02 32,02 Controle 0,273 NUE521 9363,4 0,716 4,6E-03 75,12 Controle 0,409 NUE521 9361,2 0,525 4,8E-02 37,71 NUE521 9363,4 0,582 2,5E-02 52,79 Controle 0,381 NUE523 9412,1 0,752 2,0E-02 45,74 Controle 0,516 NUE523 9412,5 0,526 5,2E-02 38,12 NUE523 9414,2 0,487 3,3E-02 27,79 Controle 0,381 NUE531 10083,1 0,809 7,9E-03 43,12 NUE531 10082,2 0,705 3,0E-01 24,67 NUE531 10081,4 0,900 1,5E-02 59,14 NUE531 10081,5 0,866 3,8E-02 53,10 Controle 0,565 NUE531 10081,4 0,789 7,0E-02 30,24 NUE531 10081,5 0,816 2,0E-02 34,70 Controle 0,606 NUE535 9084,2 0,430 1,9E-02 57,65 NUE535 9083,1 0,822 4,7E-03 201,24 NUE535 9084,4 0,436 1,4E-03 59,81 NUE535 9082,1 0,381 1,6E-01 39,64

Continuação da Tabela 30 Controle 0,273 NUE537 9391,1 0,526 8,2E-02 44,39 NUE537 9393,2 0,459 7,1E-02 26,03 NUE537 9394,4 0,471 3,3E-02 29,36 NUE537 9391,2 0,575 1,1E-02 57,79 NUE537 9393,3 0,733 5,0E-03 101,21 Controle 0,364 NUE539 10101,5 0,510 3,6E-02 86,79 NUE539 10103,5 0,432 1,6E-02 58,38 NUE539 10101,2 0,638 3,5E-04 133,70 NUE539 10101,7 0,641 6,5E-03 134,76 Controle 0,273 NUE542 9333,2 0,535 4,4E-04 46,83 NUE542 9331,3 0,455 7,7E-02 24,84 NUE542 9332,1 0,411 2,9E-01 12,88 Controle 0,364 NUE543 10052,3 0,556 2,0E-01 28,45 NUE543 10051,6 0,530 2,6E-02 22,32 Controle 0,433 NUE543 10051,2 0,759 7,7E-02 34,20 NUE543 10051,6 0,682 1,0E-01 20,71 Controle 0,565 NUE544 9763,3 0,596 1,8E-03 36,70 Controle 0,436 NUE548 9091,1 0,783 1,2E-02 27,78 Controle 0,613 NUE550 9144,3 0,436 4,0E-02 19,74 Controle 0,364 NUE550 9143,1 0,558 1,4E-02 35,96 Controle 0,410 NUE550 9141,3 0,622 2,0E-01 18,74 NUE550 9142,2 0,664 5,7E-03 26,77 Controle 0,523 NUE551 9351,1 0,566 7,6E-02 15,59 Controle 0,490 NUE560 9424,3 0,537 8,5E-02 31,22 NUE560 9422,1 0,581 2,0E-04 41,90 Controle 0,409 NUE564 9244,1 0,520 7,9E-02 22,64 Controle 0,424 NUE564 9242,3 0,415 5,6E-02 13,97 NUE564 9243,2 0,469 7,6E-02 28,83 NUE564 9242,2 0,585 4,5E-04 60,72 Controle 0,364 NUE567 9263,2 0,510 2,5E-02 40,15 NUE567 9261,3 0,415 3,4E-01 13,94 NUE567 9261,2 0,400 6,0E-01 9,89 NUE567 9263,3 0,453 3,9E-01 24,33 Controle 0,364 NUE568 9471,3 0,613 4,5E-04 60,34 NUE568 9472,2 0,689 3,5E-03 80,16 Controle 0,382 NUE569 9381,2 0,576 1,6E-02 35,83 NUE569 9381,3 0,507 1,7E-01 19,49 Controle 0,424

Continuação da Tabela 30 NUE571 9304,2 0,752 4,6E-03 83,90 NUE571 9301,1 0,623 1,4E-01 52,23 NUE571 9303,2 0,545 6,6E-04 33,32 NUE571 9302,1 0,574 1,3E-04 40,39 NUE571 9302,3 0,524 9,1E-02 28,11 Controle 0,409 NUE571 9301,4 0,492 6,1E-02 16,00 Controle 0,424 NUE573 9491,1 0,511 1,5E-02 33,50 NUE573 9491,4 0,539 2,3E-01 40,86 Controle 0,382 NUE576 9794,1 0,503 1,2E-01 16,10 NUE576 9793,3 0,641 9,9E-03 48,00 Controle 0,433 NUE578 9524,3 0,551 3,2E-04 43,94 NUE578 9524,1 0,477 2,2E-01 24,73 Controle 0,382 NUE579 9701,3 0,481 8,3E-02 18,67 Controle 0,406 NUE580 9554,4 0,483 2,0E-02 26,39 Controle 0,382 NUE581 9723,6 0,53 1,3E-01 22,7 NUE581 9724,9 0,74 2,9E-06 73,4 Controle 0,43 NUE582 9562,4 0,567 2,6E-02 28,69 NUE582 9561,2 0,649 3,4E-02 47,37 Controle 0,441 NUE583 9673,4 1,065 4,9E-03 75,90 NUE583 9673,2 0,773 8,5E-02 27,63 Controle 0,606 NUE586 9751,6 0,551 3,4E-02 26,32 NUE586 9751,7 0,628 2,7E-02 44,06 NUE586 9752,4 0,479 8,0E-02 9,73 NUE586 9752,1 0,609 2,0E-02 39,56 Controle 0,436 NUE587 9643,2 0,780 4,2E-03 92,27 NUE587 9641,3 0,503 1,9E-01 23,98 Controle 0,406 NUE592 9744,5 0,89 1,0E-10 106,7 NUE592 9747,5 0,59 1,0E-02 38,7 Controle 0,43

Tabela 30: Análises da taxa de biomassa das plantas (área de folhagem) de plantas transgênicas sobre-expressando o poli nucleotídeos exógenos de algumas configurações da invenção

(utilizando genes clonados ou sintéticos listados na Tabela 5 23 acima) sob regulação de um promotor constitutivo (35S) quando o germinada sob condições limitadoras de nitrogênio

[condições de baixo nitrogênio ou deficiência de nitrogênio

(15 mM N)] como comparado às plantas de controle.

"Aum." = Aumento; "RGR" = taxa de crescimento relativo.

Os genes apresentados na 5 Tabela 31, abaixo, tem NUE da planta melhorado uma vez que elas produziram biomassa da raiz maiores quando germinadas sob condições padrões de germinação de nitrogênio, comparadas às plantas de controle. Plantas produzindo biomassa de raiz maiores tem melhores possibilidades de absorver quantidades maiores de nitrogênio do solo.

A Tabela 31 representa análises de desempenho da raiz (comprimento e cobertura da raiz) quando germinadas sob condições padrões de nitrogênio [condições de germinação normal ou regular (15 mM N)] em plantas sobre-expressando os poli nucleotídeos de algumas configurações da invenção sob a regulação de um promotor constitutivo (35S). A avaliação de cada gene foi realizada pelo teste de desempenho de diversos eventos. Alguns do gentes foram avalizados em mais de um ensaio de cultura de tecido e os resultados obtidos foram repetidos. Eventos com valor p <0.1 foram considerados estatisticamente significativos.

Tabela 31 Plantas transgênicas expressando exogenamente polinucleotídeos de algumas modalidades da invenção apresentam melhor desempenho da raiz (comprimento de raízes e cobertura) em condições de nitrogênio padrão

Comprimento da Raiz [cm] Cobertura da Raiz_[cm2] Nome do Gene Evento # Média Valor p %aumento Média Valor p % aumento CT27 5033,6 3,341 1,8E-01 18,64 2,879 1,5E-01 31,17 CT27 5033,4 3,362 1,6E-02 19,36 2,461 5,3E-01 12,11 Controle 2,817 2,195 CT75 4873,4 4,223 8,1E-02 13,74 3,136 8,5E-01 2,38 CT75 4873,3 5,290 9,1E-03 42,48 4,560 7,9E-02 48,88 Controle 3,713 3,063 CT76 5043,5 4,908 7,0E-02 23,17 7,927 1,5E-02 101,19 CT76 5041,6 4,286 4,2E-01 7,57 5,216 3,7E-01 32,41 CT76 5041,9 4,051 7,2E-01 1,67 4,809 3,9E-02 22,05 Controle 3,984 3,940 CT76 5041,5 4,273 5,4E-04 51,72 5,377 2,8E-03 144,94 CT76 5043,5 2,837 9,1E-01 0,73 3,200 5,7E-03 45,76 Controle 2,817 2,195 NUE206 6731,2 3,619 6,8E-02 28,05 3,376 3,5E-02 60,66 NUE206 6732,7 3,311 6,7E-02 17,14 2,577 1,3E-01 22,63 NUE206 6732,5 3,516 3,1E-02 24,42 2,894 1,3E-01 37,69 NUE206 6732,1 3,347 2,0E-02 18,43 2,575 1,2E-01 22,53 Controle 2,826 2,102 NUE206 6731,2 4,088 4,8E-02 36,80 5,469 3,2E-02 109,44 NUE206 6732,5 4,106 1,2E-03 37,41 5,064 5,2E-03 93,92 NUE206 6732,15 3,669 9,1E-02 22,78 4,031 2,4E-02 54,36 Controle 2,988 2,611 NUE208 8351,3 3,930 2,9E-03 39,05 3,339 8,4E-03 58,86 NUE208 8354,4 3,385 1,8E-01 19,76 2,828 1,3E-02 34,57 Controle 2,826 2,102 NUE208 8355,3 3,393 6,0E-01 8,41 3,528 8,5E-02 48,07 Controle 3,130 2,382 NUE208 8355,3 3,600 6,6E-02 20,47 3,969 8,6E-02 51,99 Controle 2,988 2,611 NUE212 8332,2 4,896 6,1E-02 14,16 5,444 2,0E-02 27,45 Controle 4,289 4,272 NUE221 9802,8 3,72 4,9E-01 12,1 Controle 3,32 NUE223 9613,1 4,376 9,8E-02 18,05 5,480 4,0E-02 36,61 NUE223 9612,3 4,426 8,7E-02 19,41 5,228 4,5E-02 30,32 Controle 3,707 4,012 NUE230 9152,4 4,034 9,1E-03 17,77 3,441 1,1E-01 40,34 Controle 3,425 2,452 NUE231 10631,3 4,45 5,3E-02 34,2 NUE231 10632,2 4,31 7,8E-03 14,7 4,64 2,3E-02 40,0 NUE231 10633,3 4,84 7,0E-04 28,9 6,30 1,2E-06 90,1 Controle 3,76 3,32 NUE233 10174,3 3,326 1,2E-01 16,40 2,879 3,3E-02 45,78 NUE233 10174,1 4,581 3,9E-04 60,32 5,392 3,2E-04 173,01 NUE233 10173,5 4,414 4,8E-04 54,47 2,865 1,1E-02 45,06 NUE233 10172,5 3,581 3,5E-02 25,30 2,957 4,8E-03 49,73 NUE233 10173,7 3,100 4,5E-01 8,48 2,613 1,9E-01 32,30 Controle 2,858 1,975 NUE233 10174,1 4,375 1,3E-02 30,08 3,884 1,6E-01 18,86 NUE233 10173,5 4,755 7,1E-04 41,36 4,746 2,3E-02 45,25 Controle 3,363 3,268 NUE233 10174,1 4,357 5,8E-04 21,63 4,698 6,0E-03 39,12 Controle 3,582 3,377 NUE237 9654,4 3,928 8,6E-01 -1,32 4,729 1,0E-02 21,38

Continuação da Tabela 31 NUE237 9654,1 4,951 4,0E-02 24,37 6,035 7,3E-02 54,90 Controle 3,981 3,896 NUE237 9654,1 3,831 1,8E-01 11,85 4,235 2,3E-02 49,30 Controle 3,425 2,837 NUE239 9191,2 4,379 2,1E-02 27,86 5,300 3,4E-02 86,84 Controle 3,707 4,012 NUE241 9631,3 4,010 4,1E-01 5,60 3,785 1,4E-01 23,13 NUE241 9632,5 5,084 4,2E-04 33,88 6,207 2,3E-03 101,95 NUE241 9632,3 4,507 1,7E-01 18,69 4,237 2,3E-01 37,86 Controle 3,797 3,074 NUE242 9213,4 4,696 5,9E-02 20,84 5,038 1,3E-01 28,12 Controle 3,886 3,933 NUE246 9033,8 4,534 1,2E-01 14,09 5,522 6,1E-02 50,92 Controle 3,974 3,659 NUE251 10181,3 3,824 2,7E-02 33,82 3,356 9,5E-03 69,93 NUE251 10183,2 3,635 3,7E-02 27,20 3,158 3,6E-02 59,92 NUE251 10183,1 3,726 6,2E-02 30,37 3,075 7,4E-02 55,70 Controle 2,858 1,975 NUE251 10181,3 4,406 1,5E-03 30,98 4,945 2,9E-02 51,35 Controle 3,363 3,268 NUE256 10063,4 4,545 1,0E-02 59,03 4,513 1,7E-02 128,53 NUE256 10064,1 3,444 8,2E-02 20,53 3,655 3,0E-04 85,07 NUE256 10061,2 3,398 6,3E-02 18,90 3,772 7,5E-05 91,01 NUE256 10063,2 3,464 2,0E-01 21,21 3,617 7,2E-02 83,13 Controle 2,858 1,975 NUE256 10061,3 4,011 8,5E-02 11,96 3,500 7,6E-01 3,66 Controle 3,582 3,377 NUE269 9104,1 4,116 9,0E-02 26,30 3,527 2,2E-01 28,77 Controle 3,259 2,739 NUE512 9284,3 4,178 3,9E-01 14,99 3,222 6,3E-01 12,38 NUE512 9282,3 3,683 8,6E-01 1,36 4,173 1,7E-02 45,56 NUE512 9284,4 5,110 6,5E-04 40,66 3,987 3,4E-02 39,06 Controle 3,633 2,867 NUE513 9681,6 4,639 2,5E-02 25,14 5,087 1,9E-01 26,81 Controle 3,707 4,012 NUE513 9683,5 5,331 3,4E-02 20,24 4,960 9,1E-01 1,26 Controle 4,433 4,898 NUE513 9683,5 5,216 1,6E-04 31,26 4,402 2,2E-01 20,31 Controle 3,974 3,659 NUE514 9403,2 5,889 2,1E-04 54,38 6,448 1,4E-03 101,05 Controle 3,815 3,207 NUE515 9712,6, 3,87 3,4E-01 16,6 NUE515 9713,6, 4,19 1,3E-01 26,3 Controle 3,32 NUE520 9771,4 3,480 6,1E-02 21,77 3,356 7,8E-02 69,94 NUE520 9771,2 3,487 5,7E-02 22,01 4,241 1,3E-02 114,72 NUE520 9772,1 3,382 2,6E-01 18,35 3,936 4,7E-02 99,31 NUE520 9771,3 3,284 2,0E-01 14,93 3,728 4,4E-03 88,78 Controle 2,858 1,975 NUE523 9414,2 5,238 9,7E-02 18,15 4,912 9,9E-01 0,28 Controle 4,433 4,898 NUE523 9412,5 4,589 2,1E-02 24,78 3,820 5,5E-01 11,95 NUE523 9414,2 4,983 3,6E-02 35,48 4,310 1,6E-01 26,28 Controle 3,678 3,413 NUE523 9412,5 3,997 5,3E-01 4,78 4,391 1,4E-02 36,91

Continuação da Tabela 31 NUE523 9414,2 4,386 7,8E-02 14,98 4,588 1,8E-02 43,04 Controle 3,815 3,207 NUE531 10083,3 4,413 5,7E-02 33,45 3,781 2,2E-01 24,13 NUE531 10081,4 3,857 3,6E-02 16,65 4,484 3,8E-02 47,23 NUE531 10081,5 4,377 3,6E-02 32,38 4,698 9,9E-02 54,25 Controle 3,306 3,046 NUE531 10083,2 3,852 7,3E-02 14,51 3,992 6,0E-02 22,18 Controle 3,363 3,268 NUE531 10083,3 4,256 9,0E-02 18,79 4,023 2,8E-01 19,16 NUE531 10081,4 4,066 5,2E-02 13,49 4,864 3,7E-02 44,06 NUE531 10081,5 4,240 1,7E-02 18,37 4,905 8,1E-02 45,26 Controle 3,582 3,377 NUE535 9084,2 3,244 2,5E-01 13,51 3,005 9,7E-02 52,16 NUE535 9083,1 3,300 2,3E-01 15,49 3,263 7,1E-02 65,20 Controle 2,858 1,975 NUE537 9393,3 3,603 8,9E-01 -0,83 4,005 4,8E-02 39,70 Controle 3,633 2,867 NUE538 9782,1 3,805 9,8E-01 0,22 3,850 7,9E-02 25,26 Controle 3,797 3,074 NUE538 9784,4 3,674 7,5E-02 16,79 2,729 4,6E-01 12,64 NUE538 9783,4 4,332 6,1E-03 37,70 3,571 4,5E-02 47,38 Controle 3,146 2,423 NUE539 10103,5 3,228 2,0E-01 12,96 2,727 1,5E-01 38,07 NUE539 10101,7 3,736 1,6E-02 30,72 3,446 8,3E-03 74,48 Controle 2,858 1,975 NUE543 10052,3 4,801 3,8E-03 26,44 4,373 4,7E-02 42,28 Controle 3,797 3,074 NUE543 10051,1 4,064 2,9E-02 22,91 4,493 6,0E-02 47,51 NUE543 10052,3 4,003 1,1E-01 21,06 3,953 2,1E-01 29,78 Controle 3,306 3,046 NUE544 9764,1 3,603 9,6E-02 14,52 3,075 2,3E-02 26,92 NUE544 9763,3 3,953 1,8E-02 25,66 3,096 3,0E-02 27,77 Controle 3,146 2,423 NUE550 9141,3 4,453 4,6E-01 8,58 5,445 5,9E-02 35,65 Controle 4,101 4,014 NUE551 9354,3 4,584 9,0E-02 23,66 5,375 1,3E-01 33,99 Controle 3,707 4,012 NUE566 9512,2 5,004 3,0E-02 18,17 5,741 2,3E-01 27,49 NUE566 9512,1 4,859 1,5E-01 14,75 5,807 3,0E-01 28,96 Controle 4,234 4,503 NUE568 9471,3 3,796 2,4E-01 10,82 3,883 8,9E-02 36,89 NUE568 9472,2 4,025 1,8E-01 17,50 4,944 9,7E-03 74,30 NUE568 9462,3 4,519 4,8E-02 31,93 4,354 5,0E-02 53,47 Controle 3,425 2,837 NUE570 9311,4 4,279 3,0E-01 17,77 4,349 5,4E-02 51,70 NUE570 9314,4 3,692 8,1E-01 1,63 4,044 2,8E-02 41,05 Controle 3,633 2,867 NUE571 9304,2 3,841 7,5E-01 4,43 4,423 3,7E-01 29,60 NUE571 9301,1 4,444 6,6E-02 20,84 5,020 1,1E-01 47,11 Controle 3,678 3,413 NUE573 9491,1 3,948 7,6E-02 15,26 3,887 4,8E-02 37,01 Controle 3,425 2,837 NUE574 10363,4 4,080 5,6E-02 13,90 4,326 2,0E-01 28,12 NUE574 10366,1 4,893 3,3E-02 36,58 5,262 4,3E-02 55,84 Controle 3,582 3,377

Continuação da Tabela 31 NUE576 9792,4 4,284 1,5E-01 12,82 4,322 2,3E-02 40,63 Controle 3,797 3,074 NUE579 9701,3 3,965 9,9E-02 26,03 3,899 4,7E-02 60,90 NUE579 9703,3 3,542 1,0E-01 12,60 2,797 4,7E-01 15,43 Controle 3,146 2,423 NUE580 9553,2 4,418 4,7E-03 28,99 3,784 7,3E-02 33,40 NUE580 9551,4 4,239 5,1E-02 23,75 4,282 1,5E-01 50,96 NUE580 9554,4 4,158 8,9E-02 21,41 3,902 7,1E-02 37,54 Controle 3,425 2,837 NUE582 9562,4 4,115 5,1E-01 3,38 4,951 7,6E-02 27,06 Controle 3,981 3,896 NUE583 9673,4 4,319 2,2E-03 20,56 5,635 4,1E-03 66,89 NUE583 9673,2 3,739 5,9E-01 4,36 4,595 1,5E-01 36,10 Controle 3,582 3,377 NUE586 9752,1 6,394 2,6E-05 49,10 7,681 6,9E-05 79,81 Controle 4,289 4,272 NUE586 9751,1 3,847 9,6E-02 22,28 3,171 2,3E-01 30,87 NUE586 9751,7 4,956 9,5E-03 57,53 4,510 8,1E-02 86,12 NUE586 9752,2 4,538 2,3E-04 44,25 3,478 1,6E-03 43,54 NUE586 9751,3 4,047 2,8E-01 28,62 3,090 3,3E-01 27,54 NUE586 9752,1 4,629 3,9E-02 47,13 4,232 1,4E-01 74,66 Controle 3,146 2,423 NUE587 9643,2 3,473 3,4E-01 10,38 3,653 4,2E-02 50,77 Controle 3,146 2,423 NUE593 10394,2 4,033 4,5E-02 21,96 3,941 3,7E-02 29,39 NUE593 10393,2 3,719 6,3E-02 12,48 3,544 1,8E-01 16,38 Controle 3,306 3,046 Tabela 31: Análises de desempenho da raiz (comprimento e cobertura) de plantas transgênicas superexpressaram os polinucleotídeos de algumas configurações da invenção (utilizando genes clonados ou sintéticos, listados na Tabela 5 23 acima) sob a regulação de um promotor constitutivo (35S), quando desenvolvidas sob condições padrão de nitrogênio [condições regulares ou normais de crescimento (15 mM N)] conforme comparação para controlar plantas. "Incr." = aumento; "RGR" = taxa de Crescimento Relativo.

Os genes apresentados na Tabela 32, neste documento adiante, melhoraram o ca taxa de crescimento da planta quando esta se desenvolve sobre condições padrão de nitrogênio, comparadas com o controle de plantas. Um crescimento mais rápido foi observado quando a taxa de crescimento da área da folha, do comprimento e da cobertura da raiz foram mensurados.

Tabela 32 detalha análises das taxas de crescimento da área de folha, comprimento e 5 cobertura da raiz quando sob condições padrão de nitrogênio [condições regulares ou normais de crescimento (15 mM N)] em plantas superexpressaram os polinucleotídeos de algumas configurações da invenção sob a regulação de um promotor constitutivo (35S). A avaliação de cada gene foi realizada testando o desempenho em uma série de eventos. Algumas A avaliação de cada gene foi realizada por testes de desempenho de vários eventos. Alguns dos genes foram avaliados em mais de um ensaio de cultura de tecidos e os resultados obtidos foram repetidos. Evento com valor de p <0,1 foi considerado estatisticamente significativo.

Tabela 32 Plantas transgênicas expressando exogenamente polinucleotídeos de algumas modalidades da invenção apresentam melhor taxa de crescimento em condições de nitrogênio padrão Nome do Evento# RGR da Area da Folha RGR da Cobertura da Raiz RGR do Comprimento da Raiz Gene % % Média Valor -p Média Valor -p Média Valor -p % aumento aumento aumento CT11 4892,2 0,093 2,4E-04 76,02 0,584 7,8E-02 28,88 0,428 1,0E-01 17,45 CT11 4892, 3 0,082 1,3E-03 55,84 0,524 3,6E-01 15,68 0,397 4,0E-01 8,75 CT11 4892, 1 0,085 6,5E-03 61,71 0,490 6,8E-01 8,24 0,385 6,7E-01 5,43 Controle 0,053 0,453 0,365 CT11 4894,2 0,049 2,0E-02 30,32 CT11 4893,2 0,078 3,6E-05 107,0 1 0,550 3,4E-02 52,79 0,395 2,0E-01 21,56

Continuação da Tabela 32

Controle 0,037 0,360 0,325

1,9E- CT27 5033, 6 0,040 1,6E-01 22,17 0,347 4,1E-02 40,85 0,325 36,08 02 5,9E- CT27 5033, 4 0,047 3,2E-02 40,54 0,287 3,5E-01 16,49 0,296 24,30 02

CT27 5033, 8 0,063 5,9E-05 90,98 0,357 1,0E-01 44,71 0,251 7,5E-01 5,19

CT27 5033, 5 0,049 3,7E-03 48,72 0,248 7,8E-01 3,85

Controle 0,033 0,247 0,238

5033, CT27 0,049 1,8E-02 31,77 7 5035, 111,0 CT27 0,079 8,4E-07 0,402 5,8E-01 11,56 0,343 7,1E-01 5,73 2 2

CT27 5031, 4 0,053 1,5E-03 41,85

CT27 5033, 6 0,058 4,6E-04 53,91 0,513 3,1E-02 42,39 0,357 5,4E-01 10,03

9,9E- CT27 5033, 4 0,060 2,2E-05 59,59 0,547 3,2E-02 51,81 0,416 28,01 02

CT27 5033, 8 0,055 3,8E-04 47,37

CT27 5033, 5 0,047 4,0E-02 25,25

Controle 0,037 0,360 0,325

6,3E- CT6 4943, 1 0,048 27,13 0,378 8,1E-01 4,79 02

Controle 0,037 0,360 0,325

CT75 4872, 5 0,055 2,1E-03 47,90

CT75 4874, 4 0,053 3,2E-03 42,55

4874, CT75 0,054 OJEOS 44,21 0,368 9,2E-01 2,17 7

CT75 4873, 3 0,052 1,3E-02 39,84 0,518 4,3E-02 43,91 0,415 1,1E-01 27,69

Controle 0,037 0,360 0,325

2,6E- CT76 5044, 6 0,072 36,36 02

CT76 5041, 5 0,068 29,56 0,685 2,8E-02 51,34 0,403 4,7E-01 10,41

5041, CT76 0,058 9,50 7 112,1 CT76 5043, 5 0,114 1,4E-07 115,1 9 0,961 9,5E-06 0,506 2,2E-03 38,75 7 9,8E- CT76 5041, 6 0,082 7,3E-03 55,95 0,626 38,15 0,448 5,4E-02 22,83 02 9,6E- CT76 5041, 9 0,079 3,8E-03 49,27 0,571 25,96 0,378 7,0E-01 3,74 02

Continuação da Tabela 32

Controle 0,053 0,453 0,365

CT76 5044, 6 0,064 2,7E-05 92,67 0,283 4,2E-01 14,80 0,292 1,2E-01 22,42

9,7E- CT76 5041, 5 0,094 182,4 8 0,635 9,1E-08 157,5 1 0,384 2,8E-05 61,08 12 5041, CT76 0,042 3,4E-02 25,46 7

CT76 5043, 5 0,091 1,1E-11 174,2 9 0,394 2,7E-03 59,72 0,300 4,2E-02 25,74

CT76 5041, 6 0,052 7,3E-05 55,70 0,287 3,9E-01 16,43 0,271 3,6E-01 13,45

CT76 5041, 9 0,066 4,5E-07 100,3 1 0,408 1,2E-03 65,59 0,317 9,7E-03 33,04

Controle 0,033 0,247 0,238

6731, NUE2 06 0,396 1,6E-03 78,33 0,369 8,5E-03 44,35 2

NUE2 06 6732, 1 0,297 1,5E-01 33,53 0,333 4,9E-02 30,52

Controle 0,036 0,222 0,256

NUE2 06 6731,2 0,063 6,3E-01 7,32 0,650 3,1E-05 125,3 9 0,435 4,9E-05 65,80

NUE2 06 6732, 5 0,074 9,5E-02 26,57 0,579 4,4E-06 100,85 0,389 8,9E-05 48,32

NUE2 06 6732,2 0,059 9,2E-01 1,58 0,464 1,9E-03 60,76 0,365 4,6E-03 39,21

Controle 0,058 0,288 0,262

NUE2 08 8351, 3 0,033 0,389 1,4E-03 74,92 0,397 1,9E-04 55,33

Controle 0,036 0,222 0,256

NUE2 08 8354, 8 0,041 24,69 0,422 3,7E-02 51,73 0,393 8,2E-02 35,05

NUE2 08 8355, 3 0,037 13,69 0,418 3,5E-02 50,07 0,331 4,7E-01 13,65

Controle 0,033 0,278 0,291

NUE2 08 8354, 8 0,076 9,1E-02 30,54

NUE2 08 8354, 5 0,073 1,8E-01 24,95 0,305 7,4E-01 5,73 0,276 6,4E-01 5,23

NUE2 08 8355, 3 0,079 5,8E-02 34,69 0,460 7,5E-03 59,54 0,362 3,1E-03 37,83

NUE2 08 8351, 5 0,059 9,0E-01 1,94 0,312 6,2E-01 8,27 0,315 9,1E-02 19,92

Controle 0,058 0,288 0,262

NUE2 09 8192, 1 0,045 1,4E-01 36,98 0,450 1,9E-02 61,65 0,368 1,4E-01 26,60

NUE2 09 8191,5 0,044 7,8E-02 34,71 0,295 7,7E-01 6,00

Continuação da Tabela 32

Controle 0,033 0,278 0,291

NUE2 09 8191,2 0,041 4,5E-02 31,45 0,330 4,3E-01 12,88 0,335 4,4E-01 12,06

NUE2 09 8192, 1 0,035 3,6E-01 14,35

NUE2 09 8192, 1 0,044 2,3E-02 40,98

8191, 5,9E- NUE2 09 0,040 30,43 5 02

NUE2 09 8192, 1 0,034 5,7E-01 9,26

Controle 0,031 0,292 0,299

NUE2 09 8192, 1 0,345 19,74 0,365 1,4E-03 39,07

NUE2 09 8192, 1 0,487 9,6E-03 68,94 0,377 2,5E-02 43,59

NUE2 09 8191, 3 0,083 4,7E-02 41,92

Controle 0,058 0,288 0,262

3,9E- NUE2 10 8202, 1 0,049 48,76 02

NUE2 10 8201, 3 0,049 9,7E-03 50,64

Controle 0,033 0,278 0,291

3,6E- NUE2 10 8202, 1 0,042 34,98 0,403 4,8E-02 37,90 0,345 3,7E-01 15,40 02 1,9E- NUE2 10 6755, 3 0,048 4,6E-03 55,18 0,423 44,72 0,441 1,1E-02 47,78 02

Controle 0,031 0,292 0,299

8,9E- NUE2 11 8263, 5 0,038 7,6E-05 89,32 0,191 58,43 0,215 5,7E-02 53,44 02

Controle 0,020 0,121 0,140

NUE2 12 8335, 1 0,036 2,7E-03 82,84 0,216 5,8E-02 79,29 0,235 4,4E-02 68,20

NUE2 12 8334, 1 0,029 6,2E-03 46,65 0,131 7,9E-01 8,85 0,159 6,3E-01 13,62

9,1E- NUE2 12 8331, 4 0,026 31,28 0,153 7,1E-01 9,70 02

Controle 0,020 0,121 0,140

8335, NUE2 12 0,049 1,5E-02 48,76 0,314 5,6E-01 12,68 2

Controle 0,033 0,278 0,291

8332, NUE2 12 0,046 8,1E-01 3,53 0,656 4,5E-02 27,59 0,507 1,2E-01 19,17 2

Controle 0,044 0,514 0,426

Continuação da Tabela 32

NUE2 12 8332, 1 0,039 5,5E-02 26,08

NUE2 12 8334, 1 0,044 5,7E-03 41,96 0,316 6,2E-01 8,13 0,361 2,1E-01 20,73

NUE2 12 8331, 4 0,041 3,2E-02 31,53 0,307 8,8E-01 2,62

Controle 0,031 0,292 0,299

NUE2 22 8851, 3 0,046 6,7E-02 41,29 0,365 2,2E-01 31,13 0,291 1,0E+ 00 -0,102

Controle 0,033 0,278 0,291

NUE2 23 9613, 1 0,659 3,7E-02 36,07 0,449 9,4E-02 19,43

Controle 0,068 0,484 0,376

NUE2 24 9002,2 0,052 5,5E-02 23,49

NUE2 24 9001,3 0,055 2,7E-02 30,04

Controle 0,042 0,445 0,370

NUE2 24 9001,3 0,046 3,2E-02 28,75

Controle 0,036 0,279 0,316

NUE2 27 9851,2 0,058 2,8E-02 35,17

NUE2 27 9853, 1 0,064 3,6E-03 49,89

Controle 0,043 0,349 0,360

NUE2 28 10093 0,078 2,9E-02 39,70 0,355 3,25 0,328 16,65

NUE2 28 10093 0,067 2,1E-01 20,98 0,301 7,24

Controle 0,056 0,344 0,281

NUE2 29 8864,2 0,045 3,9E-02 26,44

Controle 0,036 0,279 0,316

NUE2 30 9154,2 0,057 2,1E-02 35,25 0,461 3,61

NUE2 30 9151,2 0,055 1,7E-02 29,70

Controle 0,042 0,445 0,370

NUE2 30 9152, 4 0,047 1,7E-01 29,87 0,378 7,6E-02 35,74 0,328 7,2E-01 3,71

Controle 0,036 0,279 0,316

NUE2 33 1017 4 0,051 4,1E-06 93,04 0,340 1,4E-02 54,67 0,311 1,7E-01 31,25

NUE2 33 1017 4 0,069 5,1E-11 160,3 0 0,624 8,1E-09 183,57 0,399 7,2E-03 68,42

Continuação da Tabela 32

5,6E- NUE2 33 1017 4 0,030 3,6E-01 13,97 0,314 4,1E-02 42,81 0,344 45,20 02

NUE2 33 1017 3 0,032 1,9E-01 19,26 0,342 9,3E-03 55,25 0,324 1,1E-01 36,68

NUE2 33 1017 4 0,039 1,1E-02 45,92 0,299 1,2E-01 35,80 0,262 6,4E-01 10,75

Controle 0,026 0,220 0,237

NUE2 33 1017 4 0,053 7,8E-01 4,51 0,451 3,0E-01 17,53 0,381 5,1E-02 32,89

NUE2 33 1017 4 0,538 2,8E-02 40,15 0,407 1,2E-02 41,78

Controle 0,051 0,384 0,287

NUE2 34 9163,5 0,044 9,7E-02 22,24

NUE2 34 9162, 1 0,048 2,8E-02 32,38 0,381 7,4E-02 36,73 0,330 7,6E-01 4,39

Controle 0,036 0,279 0,316

NUE2 35 9694,2 0,054 3,7E-02 27,26 0,475 6,0E-01 6,64

6,9E- NUE2 35 9691,1 0,055 31,10 0,454 8,9E-01 1,90 0,382 7,4E-01 3,28 02

NUE2 35 9693,3 0,054 5,5E-02 28,28

1,9E- NUE2 35 9694,3 0,062 1,0E-03 46,88 0,583 30,90 0,470 1,2E-02 27,17 02

Controle 0,042 0,445 0,370

NUE2 37 9651, 1 0,073 7,6E-06 74,28 0,508 2,1E-01 14,12

NUE2 37 9654, 4 0,057 5,2E-03 36,61 0,553 2,5E-02 24,26 0,384 7,1E-01 3,83

NUE2 37 9654, 1 0,065 8,0E-03 53,61 0,680 5,8E-03 52,84 0,445 9,4E-02 20,30

Controle 0,042 0,445 0,370

NUE2 37 9651, 1 0,047 4,6E-02 31,99 0,331 9,7E-01 0,99

9,9E- NUE2 37 9654, 1 0,056 OJEOS 58,85 0,493 50,53 0,363 5,2E-01 13,15 02

Controle 0,036 0,327 0,321

NUE2 41 9631, 3 0,066 4,8E-04 52,60 0,452 5,0E-02 29,57 0,395 3,6E-01 9,92

110,0 NUE2 41 9632,5 0,066 9,6E-03 52,36 0,733 8,9E-08 0,490 2,0E-03 36,33 5

NUE2 41 9632,3 0,060 4,8E-02 39,27 0,494 5,1E-02 41,65 0,377 7,3E-01 4,72

NUE2 41 9632,4 0,060 5,7E-03 38,59 0,428 1,8E-01 22,84

Controle 0,043 0,349 0,360

Continuação da Tabela 32

NUE2 42 9214, 1 0,074 7,4E-02 25,97 0,460 8,2E-01 4,07 0,380 3,8E-01 13,95

NUE2 42 9213, 4 0,068 2,6E-01 16,65 0,588 8,2E-02 32,97 0,428 7,7E-02 28,57

Controle 0,059 0,442 0,333

NUE2 42 9212, 1 0,050 4,6E-02 43,13 0,374 8,2E-01 2,93

NUE2 42 9214, 1 0,052 4,5E-02 47,68

1,6E- NUE2 42 9213, 4 0,050 3,3E-02 41,82 0,504 38,74 0,409 1,8E-01 20,10 02

Controle 0,035 0,363 0,341

9061, NUE2 44 0,049 2,2E-03 35,40 0,347 1,9E-01 24,39 0,324 8,4E-01 2,40 5

Controle 0,036 0,279 0,316

1064 2,6E- 2,9E- NUE2 45 0,080 7,9E-02 33,89 0,622 60,99 0,397 26,31 2 02 02

Controle 0,060 0,387 0,315

NUE2 46 9033, 8 0,462 7,1E-02 30,62 0,400 2,0E-01 18,15

Controle 0,049 0,354 0,339

NUE2 46 9033, 6 0,053 5,9E-01 8,27

NUE2 46 9033, 4 0,053 5,4E-01 8,70 0,546 1,5E-01 30,07 0,410 2,1E-01 14,19

NUE2 46 9033, 8 0,075 3,8E-03 52,67 0,658 9,3E-03 56,72 0,436 4,3E-02 21,22

NUE2 46 9034, 1 0,060 1,3E-01 22,21

NUE2 46 9031, 1 0,057 2,3E-01 16,59 0,505 2,9E-01 20,28 0,424 6,6E-02 17,89

Controle 0,049 0,420 0,359

NUE2 48 8981,5 0,085 3,9E-03 63,02 0,638 5,3E-01 11,57

Controle 0,052 0,572 0,423

NUE2 50 9132, 1 0,078 1,3E-03 86,50 0,604 7,4E-02 35,67 0,386 4,46

NUE2 50 9132,2 0,054 4,2E-02 28,86

NUE2 50 9134, 1 0,051 1,3E-01 21,34

Controle 0,042 0,445 0,370

NUE2 50 9134, 1 0,043 6,6E-02 19,98 0,329 3,0E-01 17,87

Controle 0,036 0,279 0,316

Continuação da Tabela 32

NUE2 51 1018 1 0,059 5,5E-06 122,3 4 0,396 9,1E-04 80,08 0,349 5,2E-02 47,21

NUE2 51 1018 3 0,048 2,3E-04 80,31 0,369 5,8E-03 67,70 0,343 5,7E-02 44,89

NUE2 51 1018 3 0,042 2,5E-03 58,23 0,366 9,1E-03 66,32 0,377 1,9E-02 59,19

NUE2 51 1018 1 0,039 5,8E-03 48,78 0,249 5,2E-01 13,16 0,240 9,5E-01 1,48

Controle 0,026 0,220 0,237

NUE2 51 1018 1 0,063 1,5E-01 23,79 0,582 8,9E-03 51,43 0,381 3,8E-02 32,80

Controle 0,051 0,384 0,287

NUE2 51 1018 3 0,072 9,1E-02 19,27 0,324 6,6E-01 3,02

Controle 0,060 0,387 0,315

NUE2 56 1006 3 0,050 7,6E-06 89,88 0,520 1,9E-05 136,3 5 0,410 OJEOS 72,97

NUE2 56 10064 0,076 2,0E-11 188,6 6 0,442 5,9E-05 100,9 9 0,356 3,4E-02 50,21

NUE2 56 1006 1 0,056 5,0E-08 110,7 3 0,450 1,2E-05 104,3 6 0,330 8,2E-02 39,37

NUE2 56 10062 0,054 2,3E-06 103,9 9 0,327 7,9E-02 48,64 0,272 5,3E-01 14,99

NUE2 56 1006 3 0,051 9,1E-06 93,42 0,424 2,3E-03 92,64 0,335 1,0E-01 41,59

Controle 0,026 0,220 0,237

NUE2 68 8996,5 0,072 7,2E-03 43,95 0,388 7,2E-01 3,95

Controle 0,050 0,463 0,374

NUE5 12 9284,2 0,052 3,6E-03 48,09 0,369 3,4E-01 18,49 0,372 9,7E-02 22,41

NUE5 12 9282, 3 0,073 4,5E-09 108,17 0,514 2,9E-03 64,80 0,403 2,2E-02 32,41

NUE5 12 9284, 4 0,041 1,5E-01 18,26 0,450 2,2E-02 44,50 0,390 5,3E-02 28,25

Controle 0,035 0,312 0,304

NUE5 13 9683,5 0,511 5,7E-02 20,91

Controle 0,052 0,572 0,423

NUE5 13 9683,5 0,521 24,10 0,512 1,8E-05 42,60

Controle 0,049 0,420 0,359

NUE5 14 9404, 1 0,082 7,9E-07 133,82 0,426 2,2E-01 17,18 0,377 4,6E-01 10,68

NUE5 14 9402,2 0,044 1,7E-01 26,64 0,389 6,0E-01 7,20 0,356 7,5E-01 4,44

NUE5 14 9403,2 0,046 1,3E-01 31,04 0,776 1,9E-07 113,5 6 0,565 8,5E-05 65,81

Continuação da Tabela 32

Controle 0,035 0,363 0,341

NUE5 16 9291, 1 0,054 4,3E-02 28,22 0,577 4,3E-02 29,59 0,407 3,9E-01 10,04

NUE5 16 9291, 4 0,064 8,4E-05 52,81 0,531 7,4E-02 19,37 0,392 5,9E-01 6,00

Controle 0,042 0,445 0,370

NUE5 20 9771, 4 0,049 5,8E-05 87,02 0,408 2,7E-03 85,53 0,370 1,7E-02 56,27

NUE5 20 9771,7 0,050 6,3E-05 88,34 0,404 5,1E-03 83,74 0,372 2,1E-02 57,16

NUE5 20 9771,2 0,042 8,9E-04 59,66 0,491 4,1E-05 122,92 0,330 1,1E-01 39,23

NUE5 20 9772, 1 0,462 5,2E-04 109,9 0 0,301 2,6E-01 27,23

NUE5 20 9771, 3 0,035 3,8E-02 32,37 0,454 1,3E-04 106,42 0,346 5,1E-02 46,13

NUE5 20 9773, 1 0,023 4,8E-01 14,07 0,369 7,7E-02 67,68 0,329 2,3E-01 38,86

Controle 0,026 0,220 0,237

NUE5 20 9771, 4 0,360 7,9E-01 4,93 0,352 6,6E-02 25,41

NUE5 20 9771,7 0,434 1,9E-01 26,37 0,377 2,5E-02 34,19

Controle 0,056 0,344 0,281

NUE5 21 9362,2 0,051 4,7E-02 29,12 0,430 6,6E-01 9,02 0,375 6,4E-01 6,57

NUE5 21 9363,4 0,073 5,8E-05 84,97 0,407 8,4E-01 3,33 0,349 9,6E-01 -0,67

Controle 0,040 0,394 0,351

NUE5 21 9361,2 0,051 3,9E-02 44,60 0,370 8,9E-01 1,86 0,349 8,6E-01 2,50

NUE5 21 9363,4 0,059 3,0E-03 69,25 0,313 3,7E-01

Controle 0,035 0,363 0,341

NUE5 23 9412, 1 0,070 2,7E-02 35,53

Controle 0,052 0,572 0,423

NUE5 23 9413, 3 0,059 3,1E-02 49,30 0,466 4,2E-01 18,10 0,406 3,4E-01 15,59

NUE5 23 9414,2 0,052 1,4E-01 30,19 0,516 8,7E-02 30,82 0,471 3,2E-02 34,02

Controle 0,040 0,394 0,351

NUE5 23 9412, 5 0,053 1,6E-02 51,59 0,522 3,6E-03 43,78 0,392 2,8E-01 15,04

NUE5 23 9414,2 0,046 8,0E-02 32,35 0,523 4,2E-03 43,92 0,394 2,6E-01 15,82

Continuação da Tabela 32

Controle 0,035 0,363 0,341

NUE5 27 9202, 6 0,046 1,5E-01 22,86 0,375 2,0E-01 25,97 0,374 2,8E-02 46,88

Controle 0,038 0,297 0,254

NUE5 31 1008 3 0,078 2,7E-02 40,47 0,305 5,6E-01 8,47

NUE5 31 1008 1 0,090 3,8E-03 62,13 0,535 7,9E-03 55,85 0,359 5,6E-02 27,85

NUE5 31 10082 0,086 1,2E-02 55,40 0,554 1,3E-02 61,37 0,398 1,2E-02 41,80

Controle 0,056 0,344 0,281

NUE5 31 1008 1 0,080 2,5E-02 32,77 0,578 49,54 0,386 22,62

NUE5 31 10082 0,078 2,4E-02 30,60 0,581 1,5E-02 50,29 0,410 7,9E-04 30,44

Controle 0,060 0,387 0,315

NUE5 35 9084,2 0,043 1,2E-03 62,38 0,345 2,6E-02 56,73 0,277 4,6E-01 17,08

NUE5 35 9083, 1 0,082 3,3E-09 211,1 1 0,388 5,6E-03 76,23 0,325 1,2E-01 37,19

NUE5 35 9084, 4 0,042 4,8E-04 59,66 0,246 5,8E-01 11,82 0,306 2,2E-01 29,02

NUE5 35 9082, 1 0,039 2,9E-02 46,36

Controle 0,026 0,220 0,237

NUE5 37 9391, 1 0,053 4,2E-03 51,98 0,444 6,2E-02 42,62 0,388 5,6E-02 27,48

NUE5 37 9394, 4 0,046 3,2E-02 31,60

NUE5 37 9391,2 0,056 2,6E-04 60,43 0,385 2,0E-01 23,46 0,365 1,4E-01 19,94

NUE5 37 9393, 3 0,073 8,5E-07 109,6 6 0,481 1,3E-02 54,18 0,366 1,3E-01 20,35

Controle 0,035 0,312 0,304

NUE5 38 9782, 1 0,071 1,0E-03 64,80 0,474 2,4E-02 36,00 0,424 1,3E-01 17,89

Controle 0,043 0,349 0,360

NUE5 38 9781, 4 0,048 3,3E-01 15,40 0,405 5,9E-02 41,28 0,398 2,8E-02 31,83

NUE5 38 9783, 4 0,046 5,4E-01 9,73 0,414 9,5E-03 44,32 0,390 2,5E-02 29,10

Controle 0,042 0,287 0,302

NUE5 39 10102 0,049 1,1E-03 83,56 0,307 1,3E-01 39,36 0,311 2,0E-01 31,26

NUE5 39 1010 4 0,045 3,9E-04 69,52 0,317 6,6E-02 43,97 0,299 2,4E-01 26,34

Continuação da Tabela 32

NUE5 39 1010 1 0,061 3,2E-08 129,4 8 0,266 3,2E-01 20,90 0,293 3,0E-01 23,62

NUE5 39 10102 0,061 1,1E-06 132,2 8 0,410 5,3E-04 86,11 0,375 1,5E-02 58,30

Controle 0,026 0,220 0,237

NUE5 39 10102 0,366 8,7E-02 27,65

NUE5 39 10102 0,371 1,0E-01 29,42

Controle 0,051 0,384 0,287

NUE5 42 9333,2 0,053 2,2E-04 50,87 0,445 3,5E-02 42,68 0,400 1,7E-02 31,61

NUE5 42 9331, 3 0,045 6,9E-02 27,12 0,450 6,4E-02 44,47 0,397 8,1E-02 30,56

NUE5 42 9332, 1 0,041 2,4E-01 16,04 0,414 8,3E-02 32,84 0,347 2,8E-01 14,05

Controle 0,035 0,312 0,304

NUE5 43 10052 0,060 2,7E-02 39,61 0,505 8,0E-03 44,88 0,420 1,4E-01 16,75

NUE5 43 10052 0,058 1,6E-02 33,92 0,399 3,4E-01 14,30

Controle 0,043 0,349 0,360

NUE5 43 1005 1 0,056 9,8E-01 0,47 0,509 2,1E-02 48,29 0,356 7,1E-02 26,63

NUE5 43 1005 1 0,077 4,3E-02 39,35 0,452 1,5E-01 31,70 0,385 3,3E-02 36,96

Controle 0,056 0,344 0,281

NUE5 44 9763, 3 0,060 2,7E-02 35,77 0,602 2,4E-01 17,04

Controle 0,044 0,514 0,426

NUE5 44 9764, 1 0,047 3,4E-01 11,45 0,367 7,3E-02 27,87 0,350 1,9E-01 15,92

NUE5 44 9763, 3 0,046 4,0E-01 9,93 0,358 1,0E-01 24,63 0,378 4,9E-02 24,94

Controle 0,042 0,287 0,302

9,0E- NUE5 48 9091,3 0,058 9,7E-01 -0,55 0,489 5,6E-01 10,49 0,423 26,90 02

NUE5 48 9091,1 0,076 3,2E-02 29,54 0,578 1,1E-01 30,72 0,419 1,0E-01 25,87

NUE5 48 9092,2 0,063 6,6E-01 6,64 0,686 2,4E-02 55,14 0,486 2,4E-02 45,86

Controle 0,059 0,442 0,333

NUE5 49 9343,7 0,055 5,8E-03 53,63 0,362 7,2E-01 10,47

NUE5 49 9342, 3 0,045 6,6E-02 26,67 0,330 9,7E-01 0,73 0,370 3,2E-01 15,10

Controle 0,036 0,327 0,321

Continuação da Tabela 32

NUE5 50 9143, 1 0,061 6,0E-02 36,03

Controle 0,045 0,416 0,368

NUE5 50 9141, 3 0,061 1,1E-01 21,68 0,651 1,3E-02 40,71 0,451 8,2E-02 20,82

9142, NUE5 50 0,066 1,5E-02 31,25 2

Controle 0,050 0,463 0,374

1,6E- NUE5 60 9424, 3 0,052 31,56 0,374 6,54 02

NUE5 60 9422, 1 0,058 5,3E-04 46,65

Controle 0,040 0,351

NUE5 62 9252, 8 0,055 4,1E-02 38,43

Controle 0,040

9243, NUE5 64 0,049 8,7E-03 38,96 0,477 2,0E-02 53,10 0,356 2,2E-01 17,03 2 9242, NUE5 64 0,060 7,6E-05 70,29 0,471 3,1E-02 51,25 0,452 8,2E-03 48,52 2

NUE5 64 9243, 4 0,045 8,0E-02 27,01 0,356 4,3E-01 14,34 0,349 2,8E-01 14,73

Controle 0,035 0,312 0,304

9263, NUE5 67 0,047 1,8E-02 34,46 2

Controle 0,035

NUE5 68 9471, 3 0,059 4,2E-05 65,16 0,458 8,3E-02 40,04 0,358 4,4E-01 11,62

NUE5 68 9461, 3 0,062 1,5E-03 73,11 0,424 3,6E-01 29,62 0,347 6,9E-01 8,17

NUE5 68 9474, 4 0,056 4,1E-03 57,42 0,353 7,6E-01 7,67 0,331 8,6E-01 3,00

9472, NUE5 68 0,071 3,5E-07 99,64 0,567 4,6E-03 73,13 0,364 4,0E-01 13,42 2

NUE5 68 9462, 3 0,047 5,2E-02 32,21 0,478 5,4E-02 45,99 0,369 3,9E-01 14,82

Controle 0,036 0,327 0,321

9381, NUE5 69 0,056 5,3E-03 36,52 0,391 9,1E-01 1,25 2

Controle 0,041 0,386 0,353

6,6E- NUE5 69 9381, 1 0,053 8,1E-03 52,48 0,474 52,21 0,342 4,9E-01 12,36 02

Controle 0,035 0,312 0,304

NUE5 70 9314, 1 0,049 1,8E-01 40,41 0,439 2,2E-01 40,98 0,420 7,2E-02 38,13

Continuação da Tabela 32

Controle 0,041 0,386 0,353

NUE5 70 9311, 4 0,047 3,3E-02 32,96 0,530 5,0E-03 70,17 0,456 7,3E-03 49,83

NUE5 70 9311, 3 0,040 2,3E-01 15,28 0,426 7,1E-02 36,71 0,397 3,7E-02 30,73

NUE5 70 9314, 4 0,035 9,4E-01 0,90 0,479 7,4E-03 53,70 0,368 1,1E-01 21,10

NUE5 70 9314, 1 0,418 7,8E-02 34,04 0,374 1,0E-01 22,95

Controle 0,035 0,312 0,304

NUE5 71 9304,2 0,078 3,4E-06 95,35 0,542 1,3E-01 37,40 0,420 2,1E-01 19,40

NUE5 71 9301, 1 0,063 9,9E-03 59,31 0,576 2,9E-02 46,03 0,389 4,4E-01 10,81

NUE5 71 9303,2 0,053 1,1E-03 33,00

NUE5 71 9302, 1 0,062 7,2E-06 56,48

NUE5 71 9302, 3 0,054 2,1E-02 36,15

Controle 0,040 0,394 0,351

NUE5 71 9304, 3 0,055 6,8E-02 33,34

NUE5 71 9304,2 0,054 7,6E-02 32,37

NUE5 71 9303,2 0,050 1,0E-01 22,33

NUE5 71 9301,4 0,049 9,7E-02 19,07

Controle 0,041

NUE5 72 9324, 3 0,049 2,7E-02 24,30 0,410 8,0E-01 3,99 0,381 5,3E-01 8,40

Controle 0,040 0,394 0,351

NUE5 73 9491, 1 0,053 1,5E-03 49,67 0,457 7,9E-02 39,55 0,382 1,9E-01 19,03

NUE5 73 9491,4 0,050 8,7E-02 40,83 0,470 8,2E-02 43,44 0,400 1,9E-01 24,64

Controle 0,036 0,327 0,321

NUE5 74 1036 6 0,063 8,1E-01 4,39 0,610 7,5E-03 57,68 0,473 6,5E-04 50,50

Controle 0,060 0,387 0,315

NUE5 75 9502, 1 0,052 7,9E-03 46,87 0,446 1,1E-01 36,36 0,343 6,5E-01 6,83

Controle 0,036 0,327 0,321

NUE5 76 9792, 4 0,050 2,2E-01 16,55 0,504 3,9E-03 44,47 0,390 4,7E-01 8,39

Continuação da Tabela 32

NUE5 76 9794, 1 0,054 5,4E-02 26,15 0,357 8,7E-01 2,30 0,392 4,4E-01 9,02

NUE5 76 9793, 3 0,065 1,8E-03 51,97 0,386 4,4E-01 10,78

Controle 0,043 0,349 0,360

NUE5 78 9524, 3 0,055 1,8E-04 54,47 0,374 5,1E-01 14,35 0,360 4,1E-01 12,25

NUE5 78 9524, 1 0,050 2,5E-02 41,80

Controle 0,036 0,327 0,321

NUE5 79 9701, 3 0,051 8,7E-02 21,86 0,456 3,9E-03 58,84 0,377 8,8E-02 24,61

Controle 0,042 0,287 0,302

9,3E- NUE5 80 9551, 4 0,040 4,3E-01 13,32 0,479 46,41 0,361 4,2E-01 12,46 02

NUE5 80 9554, 4 0,049 1,2E-02 36,68 0,462 7,3E-02 41,18 0,382 2,3E-01 18,93

Controle 0,036 0,327 0,321

NUE5 82 9562,4 0,059 3,4E-03 40,45 0,591 8,2E-03 32,70 0,414 1,9E-01 12,08

NUE5 82 9561,2 0,061 4,1E-03 45,60

Controle 0,042 0,445 0,370

NUE5 83 9671, 1 0,057 1,3E-01 32,70 0,499 2,2E-02 43,12 0,401 4,5E-01 11,60

Controle 0,043 0,349 0,360

NUE5 83 9673, 4 0,106 1,1E-05 77,51 0,663 2,0E-04 71,43 0,416 4,2E-05 32,10

5,6E- NUE5 83 9673,2 0,077 4,3E-02 28,35 0,533 37,79 0,331 5,4E-01 5,30 02

Controle 0,060 0,387 0,315

NUE5 86 9751,7 0,067 5,9E-03 49,93 0,548 6,5E-01 6,47

NUE5 86 9752, 1 0,066 4,3E-03 47,72 0,855 4,1E-05 66,23 0,563 1,2E-02 32,27

Controle 0,044 0,514 0,426

9,5E- 3,6E- NUE5 86 9751, 1 0,052 8,3E-02 24,79 0,379 32,19 0,393 30,10 02 02

NUE5 86 9751,7 0,067 7,5E-03 60,10 0,529 1,7E-03 84,40 0,452 1,5E-03 49,64

2,6E- NUE5 86 9752,2 0,394 1,4E-02 37,21 0,390 29,02 02 1,9E- NUE5 86 9752, 1 0,055 5,8E-02 32,53 0,472 64,61 0,400 4,5E-02 32,28 02

Controle 0,042 0,287 0,302

Continuação da Tabela 32 9643, NUE5 87 0,083 2,5E-06 97,54 0,439 3,8E-03 52,93 0,314 7,6E-01 4,01 2 Controle 0,042 0,287 0,302 1039 9,0E- 6,3E- NUE5 93 0,074 1,4E-01 33,10 0,465 35,46 0,368 31,07 4 02 02 Controle 0,056 0,344 0,281 Análise da taxa de crescimento da planta (área foliar, a cobertura da raiz e comprimento de raízes) de plantas transgênicas que superexpressam a polinucleotídeos exógenos de algumas modalidades da invenção 5 (usando os genes clonados ou sintéticas listadas na Tabela 23 acima), sob a regulação de um constituinte promotor (35S), quando cultivadas sob condições padrão de nitrogênio [condições normais de crescimento ou regular (15 mM N)] em relação ao controle de plantas. "Incr." = Acréscimo; "RGR" = taxa de crescimento relativo, "Ave". = Média.

EXEMPLO 6 ENSAIO 2: USO EFICIENTE DO NITROGÊNIO: PRODUÇÃO E TAXA DE

CRESCIMENTO DE PLANTAS EM CONCENTRAÇÃO ÓTIMA DE NITROGÊNIO E

EM ESTUFAS Este ensaio segue a produção constitutiva de sementes, formação de biomassa e crescimento da área roseta de plantas cultivadas em estufa, nitrogênio deficiente de nitrogênio condições padrão de fertilização.

As sementes foram semeadas em ágar suplementado com meio Vi MS e um agente de seleção (canamicina). As mudas T2 transgênicas foram transplantadas para bandejas 1,7 cheias de turfa e perlite. As bandejas foram irrigadas com uma solução contendo nitrogênio constante condições limitantes,

que foram atingidos por irrigar as plantas com uma solução contendo 1,5 mM de nitrogênio inorgânico em forma de KNO3, suplementado com 1 mM KH2PO4, 1 mM MgSO4, 3,6 mM K2SO4, 2 mM CaCl2 e microelementos, enquanto os níveis normais de 5 nitrogênio foram obtidos com a aplicação de uma solução de 6 mM de nitrogênio inorgânico também na forma de KNO3 com 1 mM de KH2PO4, 1 mM MgSC> 4,2 mm CaCl2 e microelementos. Todas as plantas foram cultivadas em estufa até as sementes maduras.

As sementes foram colhidas separadamente acima da linha do solo, extraídas e pesadas. A biomassa (a cobertura acima do solo) também foi recolhida e seca durante uma semana a 30°C.

Cada constructo foi validado na sua geração T2. Plantas transgênicas transformadas com uma construção em conformidade com um vetor vazio carregando o promotor 35S e o marcador de seleção foram usadas como controle.

As plantas foram analisadas quanto à sua dimensão global, a taxa de crescimento, rendimento de grãos, 1.000 - peso de grãos, matéria seca e índice de colheita (HI-semente de produção / matéria seca).

O desempenho das plantas transgênicas foi comparado com o controle de plantas cultivadas em paralelo, nas mesmas condições.

O experimento foi planejado em distribuição de lotes aleatórios agrupados. Para cada gene da invenção 3-5 eventos de transformação independentes foram analisados a partir de cada construto.

Imagem digital - Um laboratório de sistema de aquisição de imagem, que consiste de um reflexo da câmera digital (Canon EOS 300D) acoplada a uma lente focal de espessura de 55 mm (Canon série EF-S), montados em um dispositivo de reprodução (Kaiser RS), que 5 inclui 4 unidades de luz (4 x 150 Watts lâmpada) foi usado para capturar imagens de amostras de plantas.

O processo de captação de imagem foi repetido a cada dois dias a partir do dia 1 após o transplantio e até o dia 15. A mesma câmera, colocada em um suporte de ferro feito especialmente para ela, utilizado para capturar imagens em corte de plantas maiores em vasos brancos em uma estufa de ambiente controlado. Durante o processo de captura, as bandejas foram colocadas abaixo do suporte de ferro, evitando a luz direta do sol e o aparecimento de sombras.

Um sistema de análise de imagem foi utilizado, o qual consiste de um computador tipo PC (Intel P4 3.0 GHz) e um programa de domínio público - Imagem J 1.39 [programa Java de processamento de imagem que foi desenvolvido no National Institutes of Health dos EUA e estão disponíveis gratuitamente na Internet em Hypertext Transfer Protocol:// rsbweb (ponto) nih (ponto) gov/]. As imagens foram capturadas em resolução de 10 megapixels (3888 x 2592 pixels) e armazenadas em uma baixa compressão JPEG (padrão Joint Photographic Experts Group) de formato. Em seguida, os dados analisados foram salvos em arquivos de texto e processados utilizando o software de análise estatística JMP (SAS Institute).

Análise de Crescimento Foliar - Por meio da análise digital dos dados das folhas foi calculado, incluindo o número de folhas, área roseta, diâmetro da roseta, área de lâmina foliar, cobertura de 5 parcela, comprimento do pecíolo da folha.

Taxa de crescimento vegetativo: é a taxa de crescimento da planta, tal como definido por fórmulas VIII, IX, X e XI Fórmula VIII: Taxa de crescimento relativo da área de lâmina foliar = coeficiente de regressão da área foliar ao longo do curso do tempo.

Fórmula IX: Taxa de crescimento relativo da área roseta = coeficiente de regressão da área de roseta ao longo do curso do tempo.

Fórmula X Taxa de crescimento relativo do diâmetro da roseta de regressão = coeficiente de diâmetro da roseta ao longo do curso do tempo.

Fórmula XI Taxa de crescimento relativo da cobertura da parcela de regressão: coeficiente de cobertura de parcelas ao longo do curso do tempo.

Sementes de peso médio (peso de sementes ou peso de 1.000 sementes) - No final do experimento, as sementes foram coletadas.As sementes foram espalhadas em uma bandeja de vidro e uma foto foi tirada.

Por meio da análise digital, o número de sementes em cada amostra foi calculada.

Peso seco da planta e produção de sementes - Em cerca de 80 dias da semeadura, as plantas foram colhidas e deixadas para secar a 30 ° C em uma câmara de secagem.O peso da biomassa e de sementes de cada parcela, 5 foram medidos e divididos pelo número de plantas em cada parcela.

Peso seco = peso total da parte vegetativa acima do solo (raízes exclusive), após secagem a 30°C em uma câmara de secagem; Produção de grãos por planta = peso total de sementes por planta (g).

O índice de colheita pode ser calculado pela fórmula III (como descrito acima, índice de colheita = rendimento médio em sementes por planta / peso seco).

Análises estatísticas - Para identificar os genes que conferem eficiência ao uso de nitrogênio e melhorar significativamente o rendimento da produção, os resultados obtidos com as plantas transgênicas foram comparados com aqueles obtidos a partir de plantas de controle. Para identificar genes de alto desempenho e construções, os resultados dos eventos de transformação independentes testados foram analisados separadamente. Os dados foram analisados utilizando t-teste de estudante e os resultados foram considerados significativos se o valor p foi inferior a 0,1. O pacote de software estatístico JMP foi utilizado (Versão 5.2.1, SAS Institute Inc., Cary, NC, EUA).

Os resultados da experiência:

Os genes apresentados nas Tabelas 33, 34 e 35, neste documento adiante, melhoraram o NUE da planta, quando cultivada em condições limites de concentração de nitrogênio. Estes genes proporcionam 5 maior produtividade de sementes, índice de colheita, peso das sementes (expresso em peso de 1000 sementes) e usina de biomassa [(expressos como planta de massa seca (DW)], quando cultivada em condições de limitantes de nitrogênio para crescimento, em relação ao controle.

Tabelas 33, 34 e 35 detalham análises da produção das sementes, índice de colheita, tamanho da semente (expresso em peso de 1000 sementes), quando cultivadas sob condições limitantes de nitrogênio em plantas com superexpressão de polinucleotídeos de algumas modalidades da invenção no âmbito da regulamentação de um constitutiva (35S ). A avaliação de cada gene foi realizada por meio de testes o desempenho de vários eventos. Alguns dos genes foram avaliados em mais de um ensaio de cultura de tecidos e os resultados obtidos foram repetidos. Evento com valor de p<0,1 foi considerado estatisticamente significativo.

Tabela 33 Plantas transgênicas expressando exogenamente polinucleotídeos de algumas modalidades da invenção apresentam a produção de sementes melhoradas e peso (expresso em peso de 1000 sementes) em condições de nitrogênio deficiente de crescimento.

Nome do Produção de Semente Nome do Peso das sementes Evento # Gene Evento # Gene Média valor-p % aumento Ave, p-value % incr, NUE241 9631,6 0,169 1,3E-01 12,60 Médi NUE241 9632,3 0,020 2,5E-01 2,46 NUE241 9631,4 0,150 9,7E-01 0,40 NUE241 9631,4 0,020 6,4E-01 1,96 Controle 0,150 Controle 0,020 NUE248 8982,3 0,144 3,6E-01 7,27 NUE248 8982,4 0,023 4,1E-03 14,08 Controle 0,135 NUE248 8982,3 0,021 4,3E-01 4,59 NUE525 9534,1 0,161 6,7E-01 7,33 NUE248 8981,1 0,021 7,2E-01 7,54 NUE525 9531,3 0,169 5,6E-01 12,83 NUE248 8983,1 0,021 7,3E-01 5,14 NUE525 9533,4 0,162 7,0E-01 8,26 Controle 0,020 NUE525 9531,1 0,166 1,0E-01 10,90 NUE255 9431,4 0,021 1,0E-01 4,57 Controle 0,150 Controle 0,020 NUE536 9234,1 0,157 6,1E-01 16,81 NUE525 9533,1 0,022 2,1E-01 10,94 Controle 0,135 NUE525 9531,3 0,020 7,6E-01 2,55 NUE545 9482,4 0,184 1,7E-04 22,72 Controle 0,020 Controle 0,150 NUE536 9234,1 0,020 6,0E-01 3,02 NUE565 9443,4 0,204 1,8E-01 36,33 NUE536 9231,3 0,021 5,3E-01 4,99 Controle 0,150 Controle 0,020 NUE566 9514,3 0,163 1,6E-01 9,08 NUE545 9482,4 0,020 7,1E-01 1,36 NUE566 9514,1 0,172 7,0E-01 15,02 Controle 0,020 Controle 0,150 NUE549 9343,6 0,023 2,7E-01 14,91 NUE568 9471,3 0,160 1,8E-01 6,55 NUE549 9342,3 0,021 5,1E-01 3,66 Controle 0,150 Controle 0,020 NUE573 9493,4 0,172 3,8E-01 14,54 NUE560 9424,1 0,023 1,3E-04 18,35 NUE573 9491,2 0,181 3,3E-04 20,87 NUE560 9424,3 0,021 8,0E-02 4,76 NUE573 9492,2 0,155 8,9E-01 3,21 NUE560 9422,1 0,020 3,1E-01 3,38 Controle 0,150 Controle 0,020 NUE578 9524,1 0,147 9,3E-01 -1,70 NUE568 9461,2 0,024 1,3E-05 21,77 Controle 0,150 Controle 0,020 NUE580 9552,3 0,180 1,9E-01 19,99 NUE573 9491,2 0,023 1,1E-01 14,40 Controle 0,150 NUE573 9492,2 0,021 3,6E-02 5,14 NUE585 9661,1 0,150 1,8E-01 11,29 Controle 0,020 Controle 0,135 NUE578 9524,1 0,022 8,2E-04 10,87 Controle 0,020 NUE580 9551,3 0,025 7,2E-02 24,52 NUE580 9554,4 0,023 9,7E-02 14,78 Controle 0,020 NUE585 9662,4 0,021 7,5E-02 6,26 NUE585 9661,1 0,022 5,2E-03 9,36 Controle 0,020

Tabela 33: Análise da produção de sementes e peso de plantas transgênicas que superexpressam a polinucleotídeos exógenos de algumas modalidades da invenção (usando os genes clonados ou sintéticas listadas na Tabela 23 acima), sob a regulação

5 de um promotor constitutivo (35S), quando cultivadas sob deficiência de nitrogênio condições (1,5 mM KNO3, 1 mM

KH2PO4, 1 mM MgSO4. 3.6 mM K2SO4, 2 mM CaCl2 e microelementos)

em relação ao controle de plantas."Incr." = Acréscimo,

"Ave". = Média.

Tabela 34 Plantas transgênicas expressando exogenamente polinucleotídeos de algumas modalidades da invenção 5 apresentam melhor índice de colheita em condições de nitrogênio deficiente de crescimento. Indice de Colheita Nome do Gene Evento # Média valor-p % aumento NUE525 9534,1 0,321 1,9E-01 6,99 NUE525 9533,1 0,319 7,0E-01 6,25 NUE525 9533,4 0,322 4,8E-01 7,18 NUE525 9531,1 0,356 3,5E-02 18,72 Controle 0,300 NUE536 9234,1 0,344 6,9E-02 20,95 NUE536 9231,3 0,298 3,7E-01 4,68 Controle 0,285 NUE545 9482,4 0,328 2,0E-01 9,31 Controle 0,300 NUE549 9341,1 0,337 2,9E-02 12,21 NUE549 9342,3 0,322 6,8E-01 7,19 Controle 0,300 NUE560 9424,3 0,316 9,5E-02 10,86 NUE560 9422,1 0,318 8,2E-02 11,60 Controle 0,285 NUE565 9443,4 0,335 3,9E-01 11,59 Controle 0,300 NUE566 9514,1 0,351 5,8E-01 17,05 Controle 0,300 Tabela 34: Análise de índice de colheita de plantas transgênicas que superexpressam a polinucleotídeos exógenos de algumas modalidades da invenção (usando os genes clonados ou sintéticas listadas na Tabela 23 acima), sob a regulação de um promotor constitutivo (35S), quando cultivadas sob condições de deficiência de nitrogênio (1,5 mM, KNO3 1 mM KH2PO4, 1 mM MgSO4. 3,6 mM K2SO4, 2 mM CaCl2 e microelementos) em relação ao controle de plantas.

Tabela 35

Plantas transgênicas expressando exogenamente polinucleotídeos de algumas modalidades da invenção apresentam melhorou o peso seco sob nitrogênio condições de

5 crescimento deficiente Peso seco Nome do gene Evento # Média valor-p % aumento NUE241 9631,6 0,569 5,2E-01 11,66 NUE241 9632,3 0,613 8,0E-02 20,25 Controle 0,509 NUE248 8982,3 0,534 2,9E-01 13,35 Controle 0,471 NUE525 9531,3 0,600 4,3E-01 17,79 Controle 0,509 NUE545 9482,4 0,561 2,9E-01 10,18 Controle 0,509 NUE549 9342,2 0,541 7,3E-01 6,13 Controle 0,509 NUE565 9444,1 0,589 6,5E-01 15,71 NUE565 9443,4 0,609 3,4E-02 19,63 Controle 0,509 NUE566 9514,3 0,637 5,2E-01 24,96 Controle 0,509 NUE568 9471,3 0,515 8,9E-01 1,10 NUE568 9462,3 0,639 1,4E-02 25,52 Controle 0,509 NUE573 9493,4 0,581 2,9E-01 14,15 NUE573 9491,2 0,613 3,4E-02 20,37 NUE573 9492,2 0,683 4,2E-02 33,99 Controle 0,509 NUE580 9552,3 0,561 10,18 NUE580 9551,3 0,634 2,4E-01 24,42 NUE580 9554,4 0,526 7,0E-01 3,31 Controle 0,509 NUE585 9661,1 0,519 4,6E-01 10,30 Controle 0,471

Tabela 35: Análise do peso seco de plantas transgênicas que superexpressam a polinucleotídeos exógenos de algumas modalidades da invenção (usando os genes clonados ou sintéticas listadas na Tabela 23 acima), sob a regulação de um promotor constitutivo (35S), quando cultivadas sob condições de deficiência de nitrogênio (1,5 mM KNO3, 1 mM

KH2PO4, 1 mM MgSO4. 3,6 mM K2SO4, 2 mM CaCl2 e microelementos)

em relação ao controle de plantas.

Os genes apresentadas nos Quadros 36 e 37, neste documento adiante, melhoraram o NUE das plantas, pois proporcionaram maior produção de sementes, 5 índice de colheita, peso de grãos (expresso em peso de 1000 sementes) e biomassa vegetal [(expressos como peso da planta seca (DW)] quando cultivadas em condições de nitrogênio padrão para o crescimento, comparado ao controle de plantas indicando a alta capacidade da planta para melhor metabolização do nitrogênio presente no meio.

As Tabelas 36 e 37 mostram as análises de peso seco, rendimento de grãos, índice de colheita, tamanho da semente (expresso em peso de 1000 sementes), quando cultivadas sob condições padrão de nitrogênio (6 mM de KNO3, 1 mM KH2PO4, 1 mM MgSO4 2 MM CaCl2 e microelementos) nas plantas com superexpressão da polinucleotídeos de algumas modalidades da invenção sob a regulação de um promotor constitutivo (35S). A avaliação de cada gene foi realizada por testes de desempenho de vários eventos. Alguns dos genes foram avaliados em mais de um ensaio de cultura de tecidos e os resultados obtidos foram repetidos. Evento com valor de p <0,1 foi considerado estatisticamente significativo.

Tabela 36 Plantas transgênicas expressando exogenamente polinucleotídeos de algumas modalidades da invenção apresentam biomassa vegetal melhorado (peso seco) e produção de sementes em condições de nitrogênio padrão

Nome do Evento Peso Seco Nome do Produção da Semente Gene # Gene Evento # Média Valor-P % aumento Média Valor-P % aumento NUE255 9431,4 1,394 5,6E-01 14,344 NUE234 9162,5 0,523 1,0E-01 16,207 NUE255 9432,1 1,499 5,9E-02 22,894 Controle 0,450 NUE255 9433,1 1,409 1,0E-01 15,530 NUE241 9631,4 0,364 3,0E-01 12,185 Controle 1,219 Controle 0,414 NUE525 9531,1 1,635 6,1E-03 34,085 NUE255 9431,4 0,436 7,4E-01 5,346 Controle 1,219 NUE255 9432,1 0,483 3,5E-01 16,593 NUE545 9484,2 1,246 7,0E-01 2,204 NUE255 9433,1 0,444 1,0E-01 7,100 NUE545 9481,3 1,631 3,4E-04 33,726 Controle 0,414 Controle 1,219 NUE525 9534,1 0,486 2,6E-03 17,328 NUE549 9341,1 1,381 6,7E-02 13,275 NUE525 9531,1 0,504 4,0E-01 21,719 NUE549 9342,3 1,310 2,7E-01 7,432 Controle 0,414 Controle 1,219 NUE549 9341,1 0,447 6,4E-01 8,031 NUE563 9451,1 1,303 5,6E-01 6,868 Controle 0,414 NUE563 9452,3 1,473 1,6E-02 20,788 NUE563 9451,1 0,419 8,6E-01 1,237 Controle 1,219 NUE563 9452,3 0,454 6,5E-01 9,572 NUE565 9443,2 1,348 9,3E-02 10,507 Controle 0,414 NUE565 9444,3 1,376 4,7E-01 12,814 NUE566 9512,4 0,458 1,8E-01 10,657 Controle 1,219 Controle 0,414 NUE566 9512,4 1,471 5,8E-03 20,605 NUE568 9464,2 0,429 8,6E-01 3,674 Controle 1,219 NUE568 9462,3 0,423 7,7E-01 2,233 NUE568 9461,2 1,571 8,6E-04 28,806 Controle 0,414 NUE568 9464,2 1,366 4,9E-01 11,994 NUE573 9491,4 0,455 5,1E-01 9,769 NUE568 9462,3 1,288 3,8E-01 5,638 NUE573 9492,1 0,486 4,5E-01 17,465 Controle 1,219 NUE573 9493,4 0,449 7,5E-01 8,482 NUE573 9491,4 1,249 8,9E-01 2,460 Controle 0,414 NUE573 9492,1 1,668 1,3E-01 36,802 NUE582 9561,2 0,452 4,7E-01 9,239 NUE573 9493,4 1,478 7,2E-02 21,213 Controle 0,414 NUE573 9491,2 1,407 1,0E-01 15,377 Tabela 36: Análise da biomassa vegetal (peso seco) e ver o rendimento de plantas transgênicas que superexpressam polinucleotídeos exógenos de algumas modalidades da invenção (usando os genes clonados ou sintéticas listadas na Tabela 5 23 acima), sob a regulação de um promotor constitutivo (35S) quando cultivadas sob condições padrão de nitrogênio (6 mM de KNO3, 1 mM KH2PO4, 1 mM MgSO4 2. mM CaCl2 e microelementos) em relação ao controle de plantas. "Incr." = Acréscimo; "RGR" = taxa de crescimento relativo, "Ave". = Média.

Tabela 37

Plantas transgênicas expressando exogenamente polinucleotídeos de algumas modalidades da invenção apresentam melhor índice de colheita e peso de sementes em condições de nitrogênio padrão Nome do Nome do Evento# Indice de colheita Evento# Seed Weight Gene Gene Média Valor-P % aumento Média Valor-P % aumento

NUE234 9162,5 0,368 3,7E-02 15,734 NUE241 9631,4 0,022 3,3E-02 6,274

Controle 0,318 Controle 0,021

NUE525 9534,1 0,477 4,5E-01 38,546 NUE255 9432,1 0,023 2,5E-02 11,793

Controle 0,344 NUE255 9433,1 0,021 6,6E-02 4,087

NUE573 9491,4 0,366 3,7E-01 6,179 Controle 0,021

Controle 0,344 NUE525 9534,1 0,021 1,0E+00 0,008

NUE582 9561,2 0,466 2,2E-01 35,384 NUE525 9531,1 0,025 3,6E-01 22,277

Controle 0,344 Controle 0,021 NUE545 9481,3 0,024 3,0E-01 17,664 Controle 0,021 NUE549 9341,1 0,022 5,8E-01 9,152 NUE549 9342,3 0,023 5,6E-01 11,416 Controle 0,021 NUE563 9451,1 0,023 1,1E-01 10,668 NUE563 9452,3 0,022 3,5E-01 5,095 Controle 0,021 NUE565 9443,2 0,024 2,0E-01 15,540 NUE565 9444,3 0,021 9,1E-01 1,159 Controle 0,021 NUE566 9512,4 0,022 8,6E-02 5,164 Controle 0,021 NUE568 9461,2 0,024 3,0E-01 19,048 NUE568 9464,2 0,022 6,1E-01 8,243 NUE568 9462,3 0,023 6,1E-04 10,961 Controle 0,021 NUE573 9491,4 0,021 7,1E-01 1,229 NUE573 9492,1 0,021 1,8E-01 3,164 NUE573 9493,4 0,022 1,9E-01 8,883 NUE573 9491,2 0,023 4,0E-01 14,335 Controle 0,021 NUE582 9561,2 0,024 1,6E-03 15,172 Controle 0,021

5 Tabela 37: Análise de índice de colheita e peso de sementes de plantas transgênicas que superexpressam a polinucleotídeos exógenos de algumas modalidades da invenção (usando os genes clonados ou sintéticas listadas na Tabela 23 acima), sob a regulação de um promotor constitutivo 5 (35S), quando cultivada sob o padrão condições de nitrogênio (6 mM de KNO3, 1 mM KH2PO4, 1 mM MgSO4, 2 mM CaCl2 e microelementos) em relação ao controle de plantas. "Incr." = Acréscimo; "RGR" = taxa de crescimento relativo, "Ave". = Média.

Melhoria da área de roseta, assim como a taxa de crescimento roseta suporta o fato de que plantas podem produzir maior quantidade de biomassa vegetal por meio de um melhor aproveitamento do nitrogênio disponível no solo. Além disso, uma produção de um maior número de folhas, bem como uma parcela maior cobertura quando cultivada em condições de baixo teor de azoto indicar uma maior capacidade fotossintética da planta, quando cultivada em condições de crescimento de nitrogênio Os genes apresentadas nos Quadros 38 e 39, neste documento adiante, melhoraram o NUE da planta e produziram maior quantidade de biomassa de plantas quando cultivadas sob condições de limitar o crescimento de nitrogênio, em comparação com plantas controle. Além disso, uma produção de um maior número de folhas, bem como uma maior cobertura de plano, quando cultivada em condições de baixo teor de azoto indicar uma maior capacidade fotossintética da planta, quando cultivada em condições de nitrogênio para baixo crescimento

Tabelas 38 e 39 mostram as análises da área de roseta e número de folhas (diâmetro da roseta, área de roseta, número de folhas, área de lâmina foliar e cobertura do terreno), quando cultivadas sob 5 condições limitantes de nitrogênio (1,5 mM KNO3, 1 mM KH2PO4, 1 mM MgSO4, 3,6 mM MgSO4, 2 mM CaCl2 e microelementos) em plantas com superexpressão de polinucleotídeos de algumas modalidades da invenção sob a regulação de um promotor constitutivo (35S). A avaliação de cada gene foi realizada por testes de desempenho de vários eventos.

Alguns dos genes foram avaliados em mais de um ensaio de cul-tura de tecidos e os resultados obtidos foram repetidos. Evento com valor de p<0,1 foi considerado estatisticamente significatitivo.

Tabela 38 Plantas transgênicas que expressem de forma exógena os polinucleotídeos de algumas configurações da invenção exibem performance de crescimento de rosácea aprimorada (diâmetro e área da rosácea e cobertura da planta) sob condições de deficiência de nitrogênio Nome do Evento Diâmetro da Rosa [cm] Área da Rosa [cm2] Cobertura do Lote [%] Gene # média Valor-p %aumento média Valor-p %aumento média Valor-p %aumento NUE234 9163,4 2,26 1,6E-01 8,49 1,634 2,7E-01 7,24 13,07 2,7E-01 7,24 Controle 2,08 1,523 12,19 NUE241 9632,3 1,72 4,1E-01 20,77 1,008 5,3E-01 42,18 8,06 5,3E-01 42,18 NUE241 9631,4 1,57 6,4E-02 10,20 0,886 1,7E-03 24,97 7,09 1,7E-03 24,97 Controle 1,42 0,709 5,67 NUE249 9122,2 2,20 2,3E-01 5,86 1,696 2,6E-01 11,33 13,57 2,6E-01 11,33 Controle 2,08 1,523 12,19 NUE525 9534,1 1,84 9,3E-02 29,75 1,255 6,6E-02 77,06 9,45 1,9E-01 66,71 NUE525 9531,2 1,83 2,1E-02 29,02 1,191 8,3E-02 68,09 8,98 2,2E-01 58,33 NUE525 9533,1 1,74 7,1E-02 22,38 1,060 1,4E-01 49,54 8,48 1,4E-01 49,54 NUE525 9531,3 1,58 4,3E-01 11,39 0,884 5,3E-01 24,70 7,07 5,3E-01 24,70 NUE525 9533,4 1,71 1,5E-03 20,13 1,048 1,5E-04 47,84 8,38 1,5E-04 47,84 NUE525 9531,1 1,62 8,0E-02 13,70 1,025 2,8E-02 44,64 8,20 2,8E-02 44,64 Controle 1,42 0,709 5,67 NUE536 9234,1 2,29 2,1E-02 9,74 1,734 3,2E-01 13,79 13,87 3,2E-01 13,79 Controle 2,08 1,523 12,19 NUE545 9484,2 1,97 1,5E-07 38,83 1,311 4,1E-08 84,91 10,49 4,1E-08 84,91 NUE545 9482,4 1,71 2,1E-01 19,99 0,999 2,1E-01 40,87 7,99 2,1E-01 40,87

Continuação da Tabela 38 NUE545 9481,3 1,79 4,6E-01 26,22 1,025 4,9E-01 44,66 8,20 4,9E-01 44,66 NUE545 9484,4 2,01 1,6E-07 41,45 1,265 2,1E-05 78,42 10,12 2,1E-05 78,42 Controle 1,42 0,709 5,67 NUE549 9341,1 1,61 13,18 0,956 2,2E-01 34,91 7,65 2,2E-01 34,91 Controle 1,42 0,709 5,67 NUE563 9454,1 1,61 1,6E-01 13,12 0,930 1,0E-01 31,25 7,44 1,0E-01 31,25 NUE563 9452,3 1,56 4,6E-01 10,02 0,828 5,7E-01 16,76 6,62 5,7E-01 16,76 NUE563 9453,4 1,72 1,7E-01 21,08 1,077 1,9E-01 51,96 8,62 1,9E-01 51,96 NUE563 9452,1 1,48 7,5E-02 4,31 0,720 8,4E-01 1,64 5,76 8,4E-01 1,64 Controle 1,42 0,709 5,67 NUE565 9444,1 1,72 3,1E-01 20,73 0,889 2,7E-01 25,43 7,11 2,7E-01 25,43 NUE565 9442,4 1,63 8,5E-04 14,54 0,839 9,5E-02 18,42 6,72 9,5E-02 18,42 Controle 1,42 0,709 5,67 NUE566 9514,3 1,75 2,1E-01 22,85 1,113 2,3E-01 56,97 8,27 1,2E-01 45,76 NUE566 9513,1 1,63 3,0E-01 14,74 0,915 2,3E-01 29,04 7,32 2,3E-01 29,04 NUE566 9512,4 1,58 5,0E-01 11,26 0,927 4,3E-01 30,79 7,42 4,3E-01 30,79 NUE566 9514,1 1,72 6,9E-02 21,08 1,061 2,3E-01 49,66 8,02 3,7E-01 41,52 Controle 1,42 0,709 5,67 NUE568 9474,4 1,66 2,3E-01 16,75 0,937 2,9E-02 32,20 7,50 2,9E-02 32,20 NUE568 9461,2 1,79 2,1E-01 26,22 1,216 1,6E-01 71,50 9,72 1,6E-01 71,50 NUE568 9462,4 1,76 3,3E-01 23,46 1,072 2,7E-01 51,17 8,57 2,7E-01 51,17 NUE568 9462,3 1,69 5,8E-02 19,20 1,005 1,8E-01 41,72 8,04 1,8E-01 41,72 NUE568 9463,4 1,78 2,3E-01 25,46 1,018 3,6E-01 43,57 8,14 3,6E-01 43,57 NUE568 9473,3 1,52 3,4E-01 6,95 0,826 1,9E-01 16,55 6,61 1,9E-01 16,55 Controle 1,42 0,709 5,67 NUE573 9491,4 1,72 2,1E-01 21,02 1,007 2,4E-01 42,03 8,05 2,4E-01 42,03 NUE573 9492,1 2,01 1,1E-05 41,63 1,404 4,1E-03 98,05 11,23 4,1E-03 98,05 NUE573 9493,4 1,77 4,9E-06 24,30 1,106 3,3E-04 56,00 8,31 1,5E-01 46,46 NUE573 9494,3 1,82 1,4E-06 27,69 1,177 6,2E-03 66,10 9,42 6,2E-03 66,10 NUE573 9491,2 1,79 1,2E-01 26,17 1,115 1,8E-01 57,32 8,92 1,8E-01 57,32 NUE573 9492,2 1,75 1,2E-01 22,83 1,016 1,5E-01 43,40 8,13 1,5E-01 43,40 Controle 1,42 0,709 5,67 NUE575 9501,4 2,04 1,4E-02 43,55 1,338 8,7E-08 88,73 10,70 8,7E-08 88,73 NUE575 9504,1 1,93 1,8E-01 35,73 1,259 2,5E-01 77,60 10,07 2,5E-01 77,60 NUE575 9503,1 1,84 2,2E-01 29,22 1,282 2,0E-01 80,88 10,26 2,0E-01 80,88 NUE575 9502,1 1,73 2,7E-01 21,38 1,097 2,1E-01 54,82 8,78 2,1E-01 54,82 Controle 1,42 0,709 5,67 NUE578 9524,3 1,92 6,1E-02 34,78 1,274 4,5E-02 79,68 10,19 4,5E-02 79,68 NUE578 9524,1 2,13 1,5E-01 49,88 1,602 1,4E-01 126,00 12,12 2,2E-01 #### NUE578 9523,3 1,97 1,9E-02 38,35 1,400 4,0E-02 97,45 11,20 4,0E-02 97,45 NUE578 9522,3 1,75 4,8E-04 22,83 1,095 6,4E-05 54,54 8,76 6,4E-05 54,54 Controle 1,42 0,709 5,67 NUE580 9552,3 1,52 1,2E-01 6,68 0,783 3,5E-02 10,46 6,26 3,5E-02 10,46 NUE580 9551,3 1,71 1,7E-01 19,93 1,049 2,0E-01 48,02 8,39 2,0E-01 48,02 NUE580 9553,4 1,73 1,1E-05 21,63 1,058 5,1E-06 49,24 8,46 5,1E-06 49,24 NUE580 9551,4 1,85 6,7E-02 30,17 1,284 6,8E-02 81,21 10,28 6,8E-02 81,21 NUE580 9554,4 1,70 2,7E-01 19,55 1,084 2,8E-01 52,96 8,67 2,8E-01 52,96 Controle 1,42 0,709 5,67 NUE582 9561,1 1,73 3,0E-01 21,81 1,026 3,3E-01 44,69 7,60 2,5E-01 34,04 NUE582 9562,1 1,60 3,4E-01 12,36 0,985 2,2E-01 38,99 7,88 2,2E-01 38,99 NUE582 9562,4 1,58 4,7E-01 11,39 0,920 4,7E-01 29,79 7,00 6,1E-01 23,36 NUE582 9563,3 1,76 2,1E-01 23,73 1,071 1,4E-01 51,05 8,57 1,4E-01 51,05 NUE582 9561,2 1,92 6,2E-02 34,91 1,328 9,8E-02 87,34 10,02 2,1E-01 76,63 Controle 1,42 0,709 5,67

Tabela 38: Análises de diâmetro de rosácea e cobertura da planta de plantas transgênicas que superexpressam os polinucleotídeos exógenos de algumas configurações da invenção (usando os genes clonados ou sintéticos listados na 5 Tabela 23 acima) sob a regulação de um promotor constitutivo (35S) quando cultivada sob condições de deficiência de nitrogênio (1,5 mM KN03, 1 mM KH2P04, 1 mM MgS04. 3,6 mM K2S04, 2 mM CaCl2 e microelementos) em comparação com as plantas de controle. "Incr." = incremento; "Ave." = média.

Tabela 39 Plantas transgênicas que expressem de forma exógena os polinucleotídeos de algumas configurações da invenção exibem performance de crescimento de rosácea aprimorada (número de folhas e lâmina da folha) sob condições de deficiência de nitrogênio. Nome do Número de Área de Lâminas foliares [cm2] Evento # Gene Média Valor-p % Média p-value % aumento NUE241 9632,3 8,0 6,4E-01 7,34 0,174 5,3E-01 30,98 NUE241 9631,4 8,3 1,6E-01 10,69 0,156 2,8E-02 17,43 Controle 7,5 0,133 NUE249 9122,2 9,8 l,lE-01 4,20 0,266 4,7E-02 12,23 Controle 9,4 0,237 NUE525 9534,1 8,8 5,9E-02 17,88 0,199 1,6E-01 49,90 NUE525 9531,2 8,9 3,6E-05 19,80 0,181 4,1E-02 36,68 NUE525 9533,1 7,8 1,9E-02 4,82 0,175 3,3E-01 31,80 NUE525 9531,3 7,6 8,6E-01 2,31 0,149 6,4E-01 12,26 NUE525 9533,4 8,3 8,0E-02 11,53 0,176 2,0E-02 32,40 NUE525 9531,1 8,4 3,0E-05 12,37 0,161 3,4E-03 21,39 Controle 7,5 0,133 NUE536 9234,1 9,4 9,7E-01 0,19 0,266 3,0E-01 12,00 Controle 9,4 0,237 NUE545 9484,2 8,7 4,6E-02 16,56 0,216 2,8E-03 62,69 NUE545 9482,4 8,0 4,7E-01 7,34 0,174 1,6E-01 31,20 NUE545 9481,3 7,8 7,2E-01 3,98 0,188 4,7E-01 41,85 NUE545 9484,4 8,3 1,6E-01 10,69 0,207 2,6E-07 56,09 Controle 7,5 0,133 NUE549 9341,1 7,9 6,7E-01 5,66 0,160 8,3E-02 20,34 Controle 7,5 0,133 NUE563 9454,1 8,3 1,6E-01 10,69 0,154 1,7E-01 16,19 NUE563 9452,3 7,4 9,8E-01 -0,21 0,150 6,1E-01 13,28 NUE563 9453,4 8,1 1,9E-01 9,01 0,181 2,2E-01 36,86

Continuação da Tabela 39 NUE563 9452,1 0,141 4,4E-01 6,33 Controle 7,5 0,133 NUE565 9444,1 7,7 8,6E-02 3,14 0,162 2,2E-01 21,85 NUE565 9442,4 7,8 1,9E-02 4,82 0,148 1,4E-01 11,60 Controle 7,5 0,133 NUE566 9514,3 7,8 4,5E-01 4,94 0,188 5,6E-02 41,70 NUE566 9513,1 7,8 1,8E-01 3,98 0,162 3,2E-01 22,40 NUE566 9512,4 8,1 5,4E-01 8,18 0,170 3,9E-01 28,31 NUE566 9514,1 8,0 4,2E-01 7,82 0,180 1,9E-01 35,77 Controle 7,5 0,133 NUE568 9474,4 7,9 3,1E-01 5,66 0,175 4,2E-02 31,80 NUE568 9461,2 8,6 9,9E-03 15,72 0,195 9,6E-02 47,20 NUE568 9462,4 8,1 1,3E-01 8,18 0,193 3,2E-01 45,51 NUE568 9462,3 7,8 5,7E-01 3,98 0,176 5,3E-02 32,52 NUE568 9463,4 7,6 6,1E-01 2,31 0,185 3,7E-01 39,91 NUE568 9473,3 7,9 4,6E-01 6,50 0,148 1,8E-01 11,71 Controle 7,5 0,133 NUE573 9491,4 7,9 6,7E-01 5,66 0,168 2,6E-01 27,07 NUE573 9492,1 9,1 6,1E-02 22,43 0,234 3,8E-02 76,54 NUE573 9493,4 8,0 3,1E-01 7,94 0,193 9,4E-07 45,94 NUE573 9494,3 8,1 3,6E-02 9,01 0,193 1,3E-05 45,95 NUE573 9491,2 8,7 2,0E-01 16,56 0,181 2,2E-01 36,33 NUE573 9492,2 7,6 6,7E-01 1,47 0,183 5,8E-02 38,25 Controle 7,5 0,133 NUE575 9501,4 8,5 1,1E-01 14,05 0,216 1,9E-02 62,82 NUE575 9504,1 8,5 2,0E-01 14,05 0,214 2,2E-01 61,54 NUE575 9503,1 8,4 3,8E-01 13,21 0,207 2,1E-01 55,92 NUE575 9502,1 8,4 2,5E-01 13,21 0,182 2,6E-01 37,35 Controle 7,5 0,133 NUE578 9524,3 8,4 2,3E-01 12,37 0,208 1,5E-07 57,07 NUE578 9524,1 9,1 1,3E-01 22,19 0,242 1,6E-01 82,58 NUE578 9523,3 8,8 3,1E-06 17,40 0,223 7,2E-02 68,19 NUE578 9522,3 8,4 2,3E-01 12,37 0,178 2,4E-04 34,51 Controle 7,5 0,133 NUE580 9552,3 8,1 1,6E-03 8,18 0,135 6,4E-01 1,85 NUE580 9551,3 8,5 1,3E-05 14,05 0,175 2,4E-01 31,72 NUE580 9553,4 7,9 1,8E-01 6,50 0,185 1,4E-01 39,73 NUE580 9551,4 8,5 2,0E-01 14,05 0,202 2,0E-05 52,26 NUE580 9554,4 7,9 9,4E-02 5,66 0,183 3,4E-01 38,26 Controle 7,5 0,133 NUE582 9561,1 8,3 2,8E-01 11,29 0,171 3,9E-01 28,94 NUE582 9562,1 8,1 1,9E-01 9,01 0,168 3,4E-01 26,84 NUE582 9562,4 7,7 5,3E-01 2,67 0,164 5,0E-01 24,06 NUE582 9563,3 8,4 1,0E-04 13,21 0,186 1,5E-01 40,09 NUE582 9561,2 8,7 7,5E-02 16,08 0,217 1,5E-01 63,53 Controle 7,5 0,133

Tabela 39: As análises de número de folhas e lâmina da folha de plantas transgênicas que superexpressam os polinucleotídeos exógenos de algumas configurações da invenção (usando os genes clonados ou sintéticos listados na Tabela 23 acima) sob a regulação de um promotor constitutivo 35S quando cultivada sob condições de deficiência de nitrogênio (1,5 mM KN03, 1 mM KH2P04, 1 mM MgS04. 3.6 mM K2SO4, 2 mM CaCl2 e microelementos) em 5 comparação com as plantas de controle. "Incr." = incremento; “Ave.” = média.

Os genes apresentados nas Tabelas 40 e 41, mostrados abaixo, aprimoraram a taxa de crescimento da planta quando cultivada em níveis limitados de fertilização com nitrogênio. Esses genes aprimoraram a taxa de crescimento da rosácea e cobriram mais rapidamente o solo quando cultivada em condições limitadas de crescimento de nitrogênio.

Tabelas 40 e 41 descrevem as análises de taxa de crescimento de diâmetro da rosácea, área da rosácea, área da lâmina da folha, número de folhas e cobertura da planta quando cultivada sob condições limitadas de nitrogênio (1,5 mM KN03, 1 mM KH2P04, 1 mM MgS04, 3,6 mM K2S04, 2 mM CaCl2 e microelementos) em plantas que superexpressam os polinucleotídeos de algumas configurações da invenção sob a regulação de um promotor constitutivo (35S). A avaliação de cada gene foi feita testando-se a performance de vários eventos. Alguns dos genes foram avaliados em mais de um ensaio de cultura de tecido e os resultados obtidos foram repetidos. Evento com valor p < 0,1 foi considerado estatisticamente significante.

Tabela 40 Plantas transgênicas que superexpressam de forma exógena os polinucleotídeos de algumas configurações da invenção exibem taxa de crescimento aprimorada (taxa de crescimento relativo da área da lâmina da folha e taxa de crescimento da rosácea do número de folhas) sob condições de deficiência de

5 nitrogênio Nome do Gene Evento # RGR Of Leaf Blade Área RGR Of Leaf Number média Valor-p %aumento média Valor-p %aumento NUE241 9633,4 0,016 8,8E-01 1,45 0,567 0,330 13,34 NUE241 9632,3 0,021 4,2E-02 30,38 0,548 0,538 9,72 NUE241 9631,4 0,019 6,1E-02 17,16 0,536 0,579 7,27 Controle 0,016 0,500 NUE525 9534,1 0,023 6,7E-05 43,97 0,612 0,105 22,43 NUE525 9531,2 0,020 6,2E-03 25,68 0,661 0,016 32,14 NUE525 9533,1 0,020 2,0E-02 25,03 0,503 0,954 0,71 NUE525 9531,3 0,017 7,1E-01 3,98 0,508 0,918 1,54 NUE525 9533,4 0,020 1,4E-02 22,12 0,560 0,372 11,94 NUE525 9531,1 0,018 1,3E-01 13,01 0,557 0,392 11,36 Controle 0,016 0,500 NUE545 9484,2 0,026 1,1E-07 60,54 NUE545 9482,4 0,021 6,0E-03 28,52 NUE545 9482,2 0,018 9,81 NUE545 9481,3 0,022 2,1E-02 39,32 NUE545 9484,4 0,025 1,3E-06 54,25 Controle 0,016 NUE549 9341,1 0,018 1,6E-01 12,49 Controle 0,016 NUE563 9454,1 0,018 1,4E-01 13,13 0,544 0,509 8,79 NUE563 9452,3 0,018 3,7E-01 9,76 NUE563 9453,4 0,021 2,7E-03 30,97 0,580 0,223 16,07 Controle 0,016 0,500 NUE565 9444,1 0,020 3,2E-02 21,06 Controle 0,016 NUE566 9514,3 0,022 3,5E-03 34,09 0,558 0,384 11,55 NUE566 9513,1 0,020 3,2E-02 22,23 0,551 0,432 10,19 NUE566 9512,4 0,021 1,2E-02 31,16 0,575 0,285 14,98 NUE566 9514,1 0,021 5,5E-03 29,97 0,515 3,05 Controle 0,016 0,500 NUE568 9474,4 0,022 6,2E-04 34,41 NUE568 9461,2 0,024 1,2E-04 46,02 0,567 0,327 13,35 NUE568 9462,4 0,024 5,3E-04 48,85 0,527 0,687 5,52 NUE568 9462,3 0,022 1,2E-03 35,77 NUE568 9463,4 0,022 2,5E-03 38,12 Controle 0,016 0,500

Continuação da Tabela 40 NUE573 9491,4 0,018 1,4E-01 14,16 NUE573 9492,1 0,029 7,4E-09 77,15 0,606 0,122 21,29 NUE573 9493,4 0,023 9,0E-05 42,33 0,539 0,549 7,79 NUE573 9494,3 0,023 1,3E-04 40,79 0,573 0,271 14,63 NUE573 9491,2 0,020 9,4E-03 26,53 0,565 0,383 13,00 NUE573 9492,2 0,022 4,2E-04 39,19 Controle 0,016 0,500 NUE575 9501,4 0,026 2,8E-07 59,00 0,554 0,441 10,78 NUE575 9504,3 0,016 8,9E-01 -1,86 0,517 0,813 3,41 NUE575 9504,1 0,025 1,3E-04 55,64 0,560 0,398 12,06 NUE575 9503,1 0,024 1,4E-04 51,12 0,615 0,126 23,04 NUE575 9502,1 0,021 1,5E-02 28,36 0,513 0,852 2,58 Controle 0,016 0,500 NUE578 9524,3 0,025 4,9E-06 56,63 0,575 0,268 14,98 NUE578 9524,1 0,029 3,0E-07 77,86 0,630 0,050 25,93 NUE578 9523,3 0,027 6,9E-08 65,64 0,561 0,372 12,29 NUE578 9522,3 0,021 1,6E-03 32,66 0,606 0,119 21,29 Controle 0,016 0,500 NUE580 9551,3 0,021 6,5E-03 28,15 0,538 0,545 7,62 NUE580 9554,2 0,564 0,339 12,76 NUE580 9553,4 0,023 1,5E-04 40,79 0,526 0,686 5,28 NUE580 9551,4 0,024 1,3E-05 47,33 0,524 0,734 4,82 NUE580 9554,4 0,022 4,0E-03 37,25 Controle 0,016 0,500 NUE582 9561,1 0,021 1,3E-02 29,36 0,585 0,225 16,94 NUE582 9562,1 0,020 1,8E-02 26,50 0,560 0,379 11,94 NUE582 9562,4 0,020 3,7E-02 26,29 0,556 0,464 11,24 NUE582 9563,3 0,023 1,7E-04 44,35 0,615 0,113 23,04 NUE582 9561,2 0,026 1,4E-06 61,66 0,605 0,124 21,11 Controle 0,016 0,500

Tabela 40: As análises de taxa de crescimento (taxa de crescimento relativo da área da lâmina da folha e taxa de crescimento da rosácea do número de folhas) de plantas transgênicas que superexpressam os

5 polinucleotídeos exógenos de algumas configurações da invenção (usando os genes clonados ou sintéticos listados na

Tabela 23 acima) sob a regulação de um promotor constitutivo

(35S) quando cultivada sob condições de deficiência de nitrogênio (1,5 mM KNO3, 1 mM KH2P04, 1 mM MgS04. 3,6 mM

K2S04, 2 mM CaCl2 e microelementos) em comparação com as plantas de controle.

Tabela 41 Plantas transgênicas que superexpressam de forma exógena os 5 polinucleotídeos de algumas configurações da invenção exibem taxa de crescimento aprimorada (taxa de crescimento relativo da área e diâmetro da rosácea e da cobertura da planta) sob condições de deficiência de nitrogênio Nome do Evento RGR OfRosette Área RGR OfRosette Diameter RGR OfPlot Coverage Gene # %aumen %aume média Valor-p média Valor-p média Valor-p %aumento to nto 9633, NUE241 0,102 2,9E-01 13,04 0,130 6,4E-01 -3,23 0,82 2,9E-01 13,04 4 9632, NUE241 0,131 2,2E-02 44,18 0,163 5,3E-02 21,41 1,05 2,2E-02 44,18 3 9631, NUE241 0,114 2,6E-02 25,68 0,151 8,4E-02 12,12 0,91 2,6E-02 25,68 4 Controle 0,091 0,135 0,72 NUE525 9534, 1 0,160 3,4E-07 76,36 0,164 3,4E-03 21,78 1,20 2,3E-05 66,06 9531, NUE525 0,150 3,9E-06 65,52 0,161 7,7E-03 19,52 1,13 2,0E-04 55,87 2 NUE525 9533, 1 0,135 3,4E-04 48,53 0,153 5,1E-02 13,37 1,08 3,4E-04 48,53 NUE525 9531, 3 0,111 1,1E-01 22,62 0,135 9,8E-01 0,21 0,89 1,1E-01 22,62 NUE525 9533, 4 0,130 3,6E-04 43,83 0,149 1,1E-01 11,07 1,04 3,6E-04 43,83 NUE525 9531, 1 0,129 6,5E-04 42,14 0,140 5,5E-01 4,10 1,03 6,5E-04 42,14 Controle 0,091 0,135 0,72 9484, NUE545 0,168 4,4E-08 85,85 0,184 4,2E-06 36,37 1,35 4,4E-08 85,85 2 NUE545 9482, 4 0,127 3,1E-03 40,34 0,154 6,9E-02 14,35 1,02 3,1E-03 40,34 9482, NUE545 0,098 8,66 0,135 9,6E-01 0,34 0,79 4,4E-01 8,66 2 NUE545 9481, 3 0,130 2,3E-02 43,77 0,173 3,3E-02 28,42 1,04 2,3E-02 43,77 NUE545 9484, 4 0,163 2,7E-07 79,91 0,194 4,6E-07 43,83 1,30 2,7E-07 79,91 Controle 0,091 0,135 0,72 NUE549 9341, 1 0,118 1,4E-02 30,70 0,140 6,0E-01 3,79 0,95 1,4E-02 30,70 Controle 0,091 0,135 0,72 NUE563 9454, 1 0,119 9,5E-03 31,19 0,148 1,5E-01 9,88 0,95 9,5E-03 31,19

Continuação da Tabela 41

NUE563 9452, 3 0,104 2,4E-01 15,20 0,140 6,0E-01 4,00 0,84 2,4E-01 15,20

NUE563 9453, 4 0,137 2,1E-04 51,54 0,155 3,6E-02 15,50 1,10 2,1E-04 51,54 Controle 0,091 0,135 0,72 NUE565 9444, 1 0,111 6,2E-02 22,99 0,157 6,4E-02 16,45 0,89 6,2E-02 22,99 Controle 0,091 0,135 0,72

NUE566 9514, 3 0,143 3,0E-04 58,15 0,162 4,2E-02 20,44 1,07 6,9E-04 47,03

NUE566 9513, 1 0,118 1,7E-02 30,34 0,155 4,8E-02 14,92 0,94 1,7E-02 30,34

NUE566 9512, 4 0,121 2,4E-02 33,06 0,156 7,6E-02 15,84 0,96 2,4E-02 33,06

NUE566 9514, 1 0,134 1,1E-03 48,17 0,160 1,1E-02 18,57 1,02 1,0E-02 40,14 Controle 0,091 0,135 0,72 NUE568 9474, 4 0,121 7,0E-03 33,08 0,160 1,2E-02 19,19 0,96 7,0E-03 33,08

9461, NUE568 0,157 7,6E-06 73,36 0,170 4,1E-03 26,24 1,26 7,6E-06 73,36 2

NUE568 9462, 4 0,139 5,3E-04 53,79 0,172 5,8E-03 27,76 1,11 5,3E-04 53,79

NUE568 9462, 3 0,131 1,4E-03 44,88 0,167 1,3E-03 23,84 1,05 1,4E-03 44,88

NUE568 9463, 4 0,129 3,7E-03 42,01 0,159 2,5E-02 18,33 1,03 3,7E-03 42,01 Controle 0,091 0,135 0,72 9491, NUE573 0,123 6,0E-03 35,42 0,149 1,7E-01 10,44 0,98 6,0E-03 35,42 4

NUE573 9492, 1 0,182 5,7E-09 100,76 0,190 1,2E-06 41,04 1,46 5,7E-09 100,76

NUE573 9493, 4 0,141 5,6E-05 55,36 0,166 2,1E-03 23,03 1,06 6,8E-04 45,86

NUE573 9494, 3 0,151 5,3E-06 66,87 0,171 6,6E-04 26,79 1,21 5,3E-06 66,87

9491, NUE573 0,139 1,3E-04 53,69 0,164 1,1E-02 21,53 1,11 1,3E-04 53,69 2 9492, NUE573 0,130 1,5E-03 43,69 0,165 4,8E-03 22,63 1,04 1,5E-03 43,69 2 Controle 0,091 0,135 0,72 9501, NUE575 0,172 9,2E-09 89,99 0,198 1,1E-07 47,36 1,38 9,2E-09 89,99 4

NUE575 9504, 3 0,095 7,7E-01 4,69 0,135 1,0E+0 0 -0,04 0,76 7,7E-01 4,69

NUE575 9504, 1 0,160 4,5E-05 76,22 0,178 3,5E-03 32,48 1,28 4,5E-05 76,22

NUE575 9503, 1 0,165 4,1E-06 82,22 0,168 1,2E-02 24,58 1,32 4,1E-06 82,22

NUE575 9502, 1 0,136 9,0E-04 50,03 0,151 1,3E-01 12,57 1,09 9,0E-04 50,03 Controle 0,091 0,135 0,72 NUE578 9524, 3 0,165 6,9E-07 81,99 0,185 2,5E-04 37,68 1,32 6,9E-07 81,99

Continuação da Tabela 41 NUE578 9524, 1 0,206 3,9E-09 127,63 0,202 1,1E-06 49,79 1,56 4,4E-07 115,41 NUE578 9523, 3 0,181 4,2E-09 99,40 0,179 1,9E-05 33,16 1,45 4,2E-09 99,40 NUE578 9522, 3 0,141 6,5E-05 55,95 0,167 1,6E-03 24,01 1,13 6,5E-05 55,95 Controle 0,091 0,135 0,72 NUE580 9551, 3 0,135 3,5E-04 48,50 0,157 2,7E-02 16,48 1,08 3,5E-04 48,50 9554, NUE580 0,093 8,5E-01 0,130 7,1E-01 0,74 8,5E-01 2 NUE580 9553, 4 0,137 1,5E-04 51,17 0,169 8,0E-04 25,59 1,10 1,5E-04 51,17 NUE580 9551, 4 0,165 2,1E-07 82,42 0,170 1,3E-03 26,33 1,32 2,1E-07 82,42 NUE580 9554, 4 0,138 1,0E-03 52,73 0,152 9,4E-02 12,99 1,11 1,0E-03 52,73 Controle 0,091 0,135 0,72 NUE582 9561, 1 0,133 2,5E-03 47,08 0,167 6,9E-03 24,32 0,99 7,7E-03 36,09 NUE582 9562, 1 0,127 3,4E-03 40,44 0,152 7,7E-02 13,15 1,02 3,4E-03 40,44 9562, NUE582 0,120 2,8E-02 32,82 0,153 1,1E-01 13,90 0,91 1,0E-01 26,19 4 9563, NUE582 0,141 2,1E-04 55,33 0,178 4,6E-04 32,62 1,13 2,1E-04 55,33 3 9561, NUE582 0,172 9,3E-08 89,88 0,186 1,1E-05 37,84 1,30 4,6E-06 79,08 2 Controle 0,091 0,135 0,72 Tabela 41: As análises de taxa de crescimento (taxa de crescimento relativo da área e diâmetro da rosácea e taxa de crescimento relativo da cobertura da planta) de plantas transgênicas que superexpressam os polinucleotídeos exógenos 5 de algumas configurações da invenção (usando os genes clonados ou sintéticos listados na Tabela 23 acima) sob a regulação de um promotor constitutivo (35S) quando cultivada sob condições de deficiência de nitrogênio (1,5 mM KN03, 1 mM KH2P04, 1 mM MgS04, 3,6 mM K2S04, 2 mM CaCl2 e microelementos) em comparação com as plantas de controle.

Os genes apresentados nas Tabelas 42 e 43, mostrados abaixo, aprimoram o uso eficiente de nitrogênio da planta e produziram biomassa de planta maior quando cultivada sob condições de fertilização com nitrogênio padrão em comparação com as plantas de controle.

Além disso, uma produção de um número maior de folhas, assim 5 como uma maior cobertura da planta quando cultivada em condições de pouco nitrogênio indica uma capacidade fotossintética maior da planta quando cultivada em condições de crescimento com altos níveis de nitrogênio. As Tabelas 42 e 43 descrevem as análises da área da rosácea e número de folhas (diâmetro de rosácea, área de rosácea, número de folhas, área de lâmina da folha e cobertura da planta) quando cultivada sob condições padrão de fertilização com nitrogênio (6 mM KNO3, 1 mM KH2PO4, 1 mM MgS04. 2 mM CaCh e microelementos) em plantas que superexpressam os polinucleotídeos de algumas configurações da invenção sob a regulação de um promotor constitutivo (35S). A avaliação de cada gene foi feita testando-se a performance de vários eventos. Alguns dos genes foram avaliados em mais de um ensaio de cultura de tecido e os resultados obtidos foram repetidos. O evento com valor p <0,1 foi considerado estatisticamente significativo.

Tabela 42 Plantas transgênicas que expressem de forma exógena os polinucleotídeos de algumas configurações da invenção exibem performance de crescimento de rosácea aprimorada (área e diâmetro da rosácea e cobertura da planta) sob condições padrão de nitrogênio

Diâmetro da Roseta [cm] Área da Roseta [cm2] Cobertura do Diagrama [%] Nome do Gene Evento # média Valor-p %aument média Valor-p %aument média Valor-p %aument NUE230 9154,2 2,16 1,1E-02 6,87 1,57 4,6E-03 17,45 12,56 4,6E-03 17,45 Controle 2,02 1,34 10,69 NUE234 9163,4 2,40 2,7E-02 18,64 1,72 1,7E-02 28,84 13,78 1,7E-02 28,84 NUE234 9162,5 2,14 2,1E-02 5,87 1,52 1,6E-02 13,45 12,13 1,6E-02 13,45 Controle 2,02 1,34 10,69 NUE248 8983,1 2,21 2,2E-03 9,45 1,58 3,5E-03 18,29 12,65 3,5E-03 18,29 Controle 2,02 1,34 10,69 NUE249 9122,2 2,27 8,3E-02 12,44 1,62 1,8E-03 20,83 12,92 1,8E-03 20,83 Controle 2,02 1,34 10,69 NUE268 8996,3 2,17 1,2E-02 7,34 1,64 2,2E-03 23,05 13,16 2,2E-03 23,05 Controle 2,02 1,34 10,69 NUE525 9534,1 1,96 1,0E-01 12,33 1,37 4,5E-02 27,78 10,97 4,5E-02 27,78 NUE525 9531,2 2,17 8,8E-02 24,47 1,65 7,2E-02 53,32 13,17 7,2E-02 53,32 NUE525 9533,1 2,11 3,4E-01 21,09 1,57 3,5E-01 46,56 12,59 3,5E-01 46,56 NUE525 9531,3 2,00 2,9E-02 14,68 1,47 1,9E-02 37,33 11,79 1,9E-02 37,33 NUE525 9533,4 2,08 3,2E-01 19,24 1,47 3,6E-01 36,69 11,74 3,6E-01 36,69 Controle 1,75 1,07 8,59 NUE536 9233,3 2,28 2,2E-01 12,83 1,71 1,7E-01 27,70 13,66 1,7E-01 27,70 NUE536 9234,1 2,43 6,8E-02 20,35 1,92 2,6E-02 43,88 15,39 2,6E-02 43,88 Controle 2,02 1,34 10,69 NUE545 9484,2 2,37 1,2E-03 35,50 1,74 8,5E-03 62,13 13,92 8,5E-03 62,13 NUE545 9482,4 1,93 6,8E-01 10,29 1,37 5,9E-01 27,95 10,99 5,9E-01 27,95 NUE545 9481,3 2,09 8,6E-03 19,87 1,51 7,8E-03 40,62 12,08 7,8E-03 40,62 NUE545 9484,4 2,15 8,4E-02 22,97 1,55 1,7E-01 43,98 12,37 1,7E-01 43,98 Controle 1,75 1,07 8,59 NUE549 9343,6 1,93 4,9E-01 10,73 1,22 6,2E-01 13,86 9,78 6,2E-01 13,86 NUE549 9341,1 1,94 5,1E-01 11,16 1,33 4,3E-01 23,54 10,61 4,3E-01 23,54 NUE549 9342,3 2,01 2,7E-02 15,03 1,38 4,3E-02 28,53 11,04 4,3E-02 28,53 Controle 1,75 1,07 8,59 NUE560 9423,4 2,23 4,7E-01 10,17 1,66 4,2E-01 24,21 13,28 4,2E-01 24,21 Controle 2,02 1,34 10,69 NUE568 9461,2 2,35 2,3E-03 34,72 2,01 1,3E-02 87,26 16,08 1,3E-02 87,26 NUE568 9461,3 2,05 9,9E-02 17,54 1,48 7,0E-02 38,17 11,87 7,0E-02 38,17 NUE568 9462,4 1,92 2,1E-01 9,87 1,25 3,4E-01 16,76 9,46 6,7E-01 10,14 NUE568 9463,4 2,01 7,4E-02 14,90 1,41 7,7E-02 31,41 11,29 7,7E-02 31,41 Controle 1,75 1,07 8,59 NUE573 9491,4 2,10 9,7E-03 20,13 1,48 1,4E-02 37,74 11,83 1,4E-02 37,74 NUE573 9492,1 2,01 1,0E-01 15,05 1,36 7,2E-02 26,45 8,02 8,5E-01 -6,67 NUE573 9493,4 1,99 1,3E-01 14,08 1,38 7,7E-02 28,86 10,42 3,7E-01 21,28 NUE573 9491,2 2,18 1,1E-01 25,09 1,59 1,3E-01 48,09 12,72 1,3E-01 48,09 NUE573 9494,3 1,98 7,0E-02 13,52 1,45 1,0E-01 34,78 11,57 1,0E-01 34,78 NUE573 9492,2 1,94 4,4E-01 11,14 1,46 5,2E-01 35,94 9,79 5,7E-01 14,02 Controle 1,75 1,07 8,59 NUE575 9501,4 1,96 2,8E-01 12,36 1,31 2,7E-01 22,00 10,48 2,7E-01 22,00 NUE575 9504,1 2,13 4,8E-02 21,96 1,58 7,9E-02 47,31 12,65 7,9E-02 47,31 NUE575 9503,1 1,95 9,7E-02 11,94 1,24 3,4E-01 15,70 9,94 3,4E-01 15,70 NUE575 9502,1 1,99 4,1E-01 14,24 1,44 3,8E-01 34,12 10,35 6,9E-01 20,49 Controle 1,75 1,07 8,59 NUE578 9524,1 2,15 3,4E-03 23,14 1,64 1,9E-03 52,74 13,12 1,9E-03 52,74 NUE578 9524,3 2,08 6,0E-01 18,89 1,58 5,2E-01 47,61 12,68 5,2E-01 47,61 NUE578 9523,3 2,37 8,6E-02 35,89 1,79 2,9E-02 66,79 13,36 1,4E-03 55,59 NUE578 9522,3 2,07 1,3E-01 18,61 1,63 1,2E-01 51,78 13,03 1,2E-01 51,78 Controle 1,75 1,07 8,59 NUE580 9552,3 1,92 1,1E-01 10,01 1,24 2,4E-01 15,83 9,95 2,4E-01 15,83

Continuação da Tabela 42 NUE580 9551,3 1,98 4,3E-02 13,26 1,47 1,4E-02 37,05 11,77 1,4E-02 37,05 NUE580 9554,4 2,03 3,7E-01 16,34 1,52 2,0E-01 41,78 12,18 2,0E-01 41,78 Controle 1,75 1,07 8,59 NUE582 9561,1 2,25 9,2E-02 28,98 1,73 1,6E-01 61,52 13,87 1,6E-01 61,52 NUE582 9561,2 2,10 7,1E-03 20,11 1,56 4,6E-03 45,40 12,49 4,6E-03 45,40 Controle 1,75 1,07 8,59 NUE585 9661,1 2,46 4,9E-02 21,69 2,02 1,2E-05 50,77 16,12 1,2E-05 50,77 Controle 2,02 1,34 10,69 NUE588 9591,3 2,14 1,3E-01 5,91 1,50 5,3E-02 12,38 12,02 5,3E-02 12,38 Controle 2,02 1,34 10,69 Tabela 42: As análises de performance de crescimento de rosácea (área e diâmetro da rosácea e cobertura da planta) de plantas transgênicas que superexpressam os polinucleotídeos exógenos de algumas configurações da 5 invenção (usando os genes clonados ou sintéticos listados na Tabela 23 acima) sob a regulação de um promotor constitutivo (35S) quando cultivada sob nitrogênio padrão (6 mM KN03, 1 mM KH2P04, 1 mM MgS04. 2 mM CaCl2 e microelementos) em comparação com as plantas de controle.

Tabela 43 Plantas transgênicas que expressem de forma exógena os polinucleotídeos de algumas configurações da invenção exibem performance de crescimento de rosácea aprimorada (número de folhas e área da lâmina da folha) sob condições padrão de nitrogênio Numero de folhas Area de Lâminas foliares [cm2] Nome do Gene Evento # média Valor-p %aumento média Valor-p %aumento NUE230 9154,2 8,75 1,4E-01 4,03 0,26 7,3E-03 16,16 Controle 8,41 0,23 NUE234 9163,4 8,88 4,2E-01 5,52 0,28 2,9E-02 23,30 NUE234 9162,5 8,06 5,7E-01 -4,14 0,26 9,0E-02 12,41 Controle 8,41 0,23 NUE248 8983,1 8,75 1,4E-01 4,03 0,25 1,0E-02 11,97 Controle 8,41 0,23 NUE249 9122,2 9,25 2,2E-02 9,98 0,27 3,5E-03 17,48 Controle 8,41 0,23 NUE268 8996,3 8,81 1,4E-02 4,78 0,28 6,2E-04 21,22 Controle 8,41 0,23 NUE525 9534,1 8,88 3,4E-02 9,44 0,23 6,6E-02 20,64 NUE525 9531,2 9,06 9,5E-03 11,75 0,26 1,3E-01 39,24

Continuação da Tabela 43 NUE525 9533,1 8,63 5,6E-01 6,36 0,24 3,4E-01 29,39 NUE525 9531,3 8,69 4,8E-01 7,13 0,23 2,3E-02 23,65 NUE525 9533,4 8,88 4,8E-01 9,44 0,23 3,5E-01 24,51 Controle 8,11 0,19 NUE536 9233,3 9,50 1,2E-02 12,95 0,27 2,8E-01 18,94 NUE536 9234,1 9,44 6,1E-02 12,21 0,29 7,6E-02 28,74 Controle 8,41 0,23 NUE545 9484,2 9,31 1,5E-01 14,84 0,28 2,1E-03 47,68 NUE545 9482,4 8,56 6,3E-01 5,59 0,22 6,6E-01 18,07 NUE545 9481,3 8,06 8,7E-01 -0,58 0,27 1,2E-03 41,88 NUE545 9484,4 8,88 1,1E-01 9,44 0,25 8,3E-02 31,54 Controle 8,11 0,19 NUE549 9343,6 8,81 7,7E-02 8,67 0,20 6,6E-01 8,33 NUE549 9341,1 8,44 6,7E-01 4,05 0,21 6,0E-01 14,37 NUE549 9342,3 9,06 1,1E-01 11,75 0,21 1,3E-01 13,98 Controle 8,11 0,19 NUE560 9423,4 8,75 1,3E-02 4,03 0,28 4,4E-01 21,95 Controle 8,41 0,23 NUE568 9461,2 9,63 1,5E-02 18,69 0,30 2,1E-02 59,80 NUE568 9461,3 8,94 2,6E-01 10,21 0,23 3,2E-02 25,07 NUE568 9462,4 8,48 3,5E-01 4,60 0,21 4,6E-01 13,21 NUE568 9463,4 8,69 7,2E-02 7,13 0,24 7,0E-02 28,16 Controle 8,11 0,19 NUE573 9491,4 8,63 2,3E-01 6,36 0,23 6,2E-02 22,82 NUE573 9492,1 8,81 7,7E-02 8,67 0,23 3,9E-02 20,79 NUE573 9493,4 8,86 4,2E-02 9,22 0,22 8,1E-02 17,66 NUE573 9491,2 8,63 1,2E-01 6,36 0,25 1,2E-01 33,61 NUE573 9494,3 9,13 1,5E-01 12,52 0,23 9,9E-02 20,47 NUE573 9492,2 8,46 7,1E-01 4,30 0,23 5,5E-01 25,07 Controle 8,11 0,19 NUE575 9501,4 8,38 3,6E-01 3,28 0,21 3,9E-01 14,56 NUE575 9504,1 9,06 9,5E-03 11,75 0,25 1,1E-01 33,06 NUE575 9503,1 8,06 9,2E-01 -0,58 0,22 3,3E-01 16,13 NUE575 9502,1 8,98 3,9E-01 10,73 0,22 3,0E-01 18,72 Controle 8,11 0,19 NUE578 9524,1 8,50 1,9E-01 4,82 0,26 7,3E-03 40,77 NUE578 9524,3 8,31 8,7E-01 2,50 0,25 5,4E-01 32,70 NUE578 9523,3 9,48 1,5E-02 16,93 0,28 4,2E-03 51,09 NUE578 9522,3 9,06 1,1E-01 11,75 0,24 1,9E-01 27,90 Controle 8,11 0,19 NUE580 9552,3 8,56 1,4E-01 5,59 0,20 4,9E-01 7,20 NUE580 9551,3 8,69 7,2E-02 7,13 0,23 1,6E-02 25,62 NUE580 9554,4 8,63 4,8E-01 6,36 0,23 3,5E-01 24,90 Controle 8,11 0,19 NUE582 9561,1 9,44 2,7E-01 16,38 0,27 1,6E-01 43,32 NUE582 9561,2 8,94 1,8E-02 10,21 0,25 5,5E-03 33,79 Controle 8,11 0,19 NUE585 9661,1 8,94 4,0E-03 6,26 0,33 1,8E-02 43,63 Controle 8,41 0,23 NUE588 9591,3 9,19 5,6E-04 9,24 0,25 2,6E-02 9,62 Controle 8,41 0,23

Tabela 43: As análises de performance de crescimento de rosácea (número de folhas e área da lâmina da folha) de plantas transgênicas que superexpressam os polinucleotídeos exógenos de algumas configurações da invenção (usando os genes clonados ou sintéticos listados na Tabela 23 acima) sob a regulação de um promotor constitutivo (35S) quando 5 cultivada sob nitrogênio padrão (6 mM KN03, 1 mM KH2PO4, 1 mM MgSCU. 2 mM CaC^ e microelementos) em comparação com as plantas de controle.

Os genes apresentados nas Tabelas 44 e 45, mostrados abaixo, aprimoraram a taxa de crescimento da planta quando cultivada em níveis limitados de fertilização com nitrogênio. Esses genes aprimoraram a taxa de crescimento da rosácea e cobriram o solo mais rápido quando cultivada sob níveis padrão de fertilização com nitrogênio. Esses genes produziram crescimento mais rápido nas plantas, mostrando uma melhor utilização do nitrogênio presente.

Tabelas 44 e 45 descrevem as análises de taxa de crescimento de diâmetro da rosácea, área da rosácea, área da lâmina da folha, número de folhas e cobertura da planta quando cultivada sob condições padrão de nitrogênio (6 mM KN03, 1 mM KH2P04, 1 mM MgS04, 2 mM CaCl2 e microelementos) em plantas que superexpressam os polinucleotídeos de algumas configurações da invenção sob a regulação de um promotor constitutivo (35S). A avaliação de cada gene foi feita testando-se a performance de vários eventos. Alguns dos genes foram avaliados em mais de um ensaio de cultura de tecido e os resultados obtidos foram repetidos. O evento com valor p <0,1 foi considerado estatisticamente significativo.

Tabela 44 Plantas transgênicas que superexpressam de forma exógena os polinucleotídeos de algumas configurações da invenção exibem 5 taxa de crescimento aprimorada (taxa de crescimento relativo da área da lâmina da folha, número de folhas e área da rosácea) sob condições padrão de nitrogênio RGR Of Leaf Blade Área RGR de Número de folhas RGR da Area Roseta Nome do Evento Gene # %aumen média Valor-p média Valor-p %aumento média Valor-p %aumento to NUE230 9154,2 0,032 2,5E-01 18,08 0,561 0,862 -1,88 0,20 2,8E-01 18,63 NUE230 9153,3 0,034 1,5E-01 25,07 0,629 0,404 9,96 0,22 9,2E-02 32,65 Controle 0,027 0,572 0,16 NUE525 9534,1 0,027 3,4E-01 17,00 0,577 0,820 3,62 0,18 2,5E-01 25,20 NUE525 9531,2 0,032 4,9E-02 37,26 0,619 0,479 11,17 0,21 2,0E-02 53,67 NUE525 9533,1 0,029 2,1E-01 23,87 0,570 0,889 2,25 0,20 6,0E-02 45,89 NUE525 9531,3 0,028 2,3E-01 21,75 0,618 0,485 10,96 0,19 9,2E-02 37,52 NUE525 9533,4 0,028 2,4E-01 22,32 0,581 0,783 4,35 0,19 1,2E-01 36,12 Controle 0,023 0,557 0,14 NUE536 9233,3 0,032 2,0E-01 21,11 0,696 0,053 21,70 0,21 9,8E-02 30,44 NUE536 9234,1 0,035 6,2E-02 31,13 0,719 0,025 25,69 0,24 1,6E-02 46,81 Controle 0,027 0,572 0,16 NUE545 9484,2 0,034 1,4E-02 47,61 0,666 0,224 19,56 0,23 7,1E-03 63,45 NUE545 9482,4 0,026 5,0E-01 13,65 0,617 0,523 10,85 0,18 2,8E-01 26,57 NUE545 9481,3 0,032 3,8E-02 39,71 0,478 0,19 7,9E-02 38,94 NUE545 9484,4 0,030 1,3E-01 27,62 0,542 0,20 6,8E-02 41,88 Controle 0,023 0,557 0,14 NUE568 9474,3 0,025 7,0E-01 7,00 0,535 0,15 6,4E-01 10,17 NUE568 9471,3 0,024 7,5E-01 5,65 0,627 0,423 12,49 0,17 3,4E-01 20,52 NUE568 9461,2 0,037 3,1E-03 58,77 0,665 0,208 19,45 0,26 3,9E-04 88,65 NUE568 9474,4 0,026 5,5E-01 10,89 0,526 0,726 -5,61 0,15 6,2E-01 10,72 NUE568 9461,3 0,029 1,9E-01 23,81 0,643 0,342 15,47 0,20 8,0E-02 39,53 Controle 0,023 0,557 0,14 NUE573 9491,4 0,026 4,3E-01 14,05 0,543 0,872 -2,57 0,19 1,2E-01 34,11 NUE573 9493,4 0,026 4,9E-01 12,34 0,653 0,270 17,18 0,18 2,0E-01 28,04 NUE573 9491,2 0,030 1,0E-01 30,33 0,519 0,657 -6,87 0,21 4,2E-02 46,75 NUE573 9492,2 0,029 2,3E-01 24,31 0,531 0,791 -4,60 0,19 1,6E-01 35,61 Controle 0,023 0,557 0,14 NUE575 9504,1 0,030 1,1E-01 30,22 0,624 0,428 12,01 0,21 4,0E-02 47,00 NUE575 9503,1 0,027 4,0E-01 15,42 0,516 0,651 -7,29 0,16 4,7E-01 15,58 NUE575 9502,1 0,026 4,7E-01 13,38 0,609 0,566 9,32 0,19 1,7E-01 32,29 Controle 0,023 0,557 0,14 NUE578 9524,1 0,033 3,3E-02 41,00 0,613 0,511 10,12 0,22 1,8E-02 54,74 NUE578 9524,3 0,031 1,5E-01 31,93 0,608 0,642 9,18 0,21 7,3E-02 49,17 NUE578 9523,3 0,034 1,6E-02 46,45 0,665 0,213 19,44 0,23 5,4E-03 65,74 NUE578 9522,3 0,029 2,1E-01 23,38 0,685 0,143 23,02 0,21 2,4E-02 52,52 Controle 0,023 0,557 0,14 NUE580 9551,3 0,029 1,4E-01 26,91 0,602 0,608 8,02 0,19 8,4E-02 38,45

Continuação da Tabela 44 NUE580 9554,4 0,027 3,8E-01 16,77 0,543 0,875 -2,57 0,19 9,4E-02 38,64 Controle 0,023 0,557 0,14 NUE582 9561,1 0,032 4,1E-02 39,34 0,666 0,252 19,56 0,22 1,2E-02 60,37 NUE582 9562,1 0,027 3,5E-01 17,41 0,577 0,833 3,51 0,17 3,0E-01 23,28 NUE582 9562,4 0,027 3,8E-01 15,92 0,568 0,902 1,94 0,16 4,4E-01 16,65 NUE582 9561,2 0,032 7,0E-02 37,29 0,665 0,255 19,42 0,22 3,1E-02 54,06 Controle 0,023 0,557 0,14 NUE585 9661,3 0,030 4,5E-01 11,39 0,684 0,145 19,49 0,18 5,3E-01 10,62 NUE585 9661,1 0,039 1,2E-02 43,80 0,658 0,178 14,96 0,25 7,0E-03 52,30 Controle 0,027 0,572 0,16 NUE588 9591,3 0,031 2,6E-01 17,23 0,713 0,052 24,56 0,19 3,2E-01 17,29 Controle 0,027 0,572 0,16

Tabela 44: As análises de taxa de crescimento (taxa de crescimento relativo da área da lâmina da folha, número de folhas e área da rosácea) de plantas transgênicas que superexpressam os polinucleotídeos exógenos de algumas

5 configurações da invenção (usando os genes clonados ou sintéticos listados na Tabela 23 acima) sob a regulação de um promotor constitutivo (35S) quando cultivada sob nitrogênio padrão (6 mM KNO3, 1 mM KH2PO4, 1 mM MgSCU. 2 mM

CaCl2 e microelementos) em comparação com as plantas de controle.

Tabela 45

Plantas transgênicas que superexpressam de forma exógena os polinucleotídeos de algumas configurações da invenção exibem taxa de crescimento aprimorada (taxa de crescimento relativo do diâmetro da rosácea e cobertura da planta) sob condições padrão de nitrogênio RGR do Diâmetro da Roseta RGR da Cobertura do Diagrama Nome do Gene Evento # média Valor-p %aumento média Valor-p %aumento NUE230 9154,2 0,20 0,612 5,67 1,56 0,283 18,63 NUE230 9153,3 0,21 0,382 10,99 1,75 0,092 32,65 Controle 0,19 1,32 NUE525 9534,1 0,18 0,672 6,16 1,40 0,249 25,20 NUE525 9531,2 0,21 0,188 19,78 1,72 0,020 53,67 NUE525 9533,1 0,21 0,239 18,66 1,63 0,060 45,89 NUE525 9531,3 0,20 0,407 12,27 1,54 0,092 37,52 NUE525 9533,4 0,20 0,308 16,23 1,52 0,125 36,12 Controle 0,17 1,12

Continuação da Tabela 45 NUE536 9233,3 0,22 0,250 13,45 1,72 0,098 30,44 NUE536 9234,1 0,23 0,068 21,81 1,93 0,016 46,81 Controle 0,19 1,32 NUE545 9484,2 0,23 0,024 34,81 1,83 0,007 63,45 NUE545 9482,4 0,18 0,741 5,45 1,42 0,281 26,57 NUE545 9481,3 0,20 0,304 15,24 1,55 0,079 38,94 NUE545 9484,4 0,21 0,215 18,52 1,59 0,068 41,88 Controle 0,17 1,12 NUE568 9474,3 0,18 0,868 2,45 1,23 0,641 10,17 NUE568 9471,3 0,17 0,853 -2,69 1,35 0,345 20,52 NUE568 9461,2 0,23 0,039 31,20 2,11 0,000 88,65 NUE568 9474,4 0,18 0,947 0,98 1,24 0,624 10,72 NUE568 9461,3 0,21 0,218 18,40 1,56 0,080 39,53 Controle 0,17 1,12 NUE573 9491,4 0,19 0,582 8,00 1,50 0,121 34,11 NUE573 9493,4 0,19 0,589 7,89 1,35 0,349 20,66 NUE573 9491,2 0,21 0,222 18,90 1,64 0,042 46,75 NUE573 9492,2 0,18 0,821 3,40 1,27 0,542 13,46 Controle 0,17 1,12 NUE575 9504,1 0,21 0,196 19,39 1,64 0,040 47,00 NUE575 9503,1 0,19 0,644 6,72 1,29 0,472 15,58 NUE575 9502,1 0,19 0,637 7,16 1,33 0,439 19,10 Controle 0,17 1,12 NUE578 9524,1 0,21 0,154 21,31 1,73 0,018 54,74 NUE578 9524,3 0,21 0,302 19,94 1,67 0,073 49,17 NUE578 9523,3 0,23 0,036 33,14 1,73 0,017 54,56 NUE578 9522,3 0,19 0,472 10,54 1,71 0,024 52,52 Controle 0,17 1,12 NUE580 9551,3 0,20 0,319 14,57 1,55 0,084 38,45 NUE580 9554,4 0,18 0,764 4,75 1,55 0,094 38,64 Controle 0,17 1,12 NUE582 9561,1 0,22 0,112 24,58 1,79 0,012 60,37 NUE582 9562,1 0,19 0,548 9,10 1,38 0,300 23,28 NUE582 9562,4 0,19 0,469 10,79 1,31 0,438 16,65 NUE582 9561,2 0,20 0,325 16,03 1,72 0,031 54,06 Controle 0,17 1,12 NUE585 9661,3 0,20 0,518 7,29 1,46 0,528 10,62 NUE585 9661,1 0,22 0,142 17,93 2,00 0,007 52,30 Controle 0,19 1,32 NUE588 9591,3 0,21 0,413 9,34 1,54 0,317 17,29 Controle 0,19 1,32

Tabela 45: As análises de taxa de crescimento (taxa de crescimento relativo do diâmetro da rosácea e cobertura da planta) de plantas transgênicas que superexpressam os polinucleotídeos exógenos de algumas configurações da 5 invenção (usando os genes clonados ou sintéticos listados na

Tabela 23 acima) sob a regulação de um promotor constitutivo

(35S) quando cultivada sob nitrogênio padrão (6 mM KN03, 1 mM KH2PO4, 1 mM MgSCU. 2 mM CaCl2 e microelementos) em comparação com as plantas de controle.

EXEMPLO 7 ENSAIO 3: EFICIÊNCIA DE USO DO NITROGÊNIO MEDIDA ATÉ O 5 ESTÁGIO DE PENEIRAMENTO: BIOMASSA DA PLANTA E TAXA DE

CRESCIMENTO DA PLANTA EM ESTUFA SOB CONCENTRAÇÕES LIMITADAS

E PADRÃO DE NITROGÊNIO Este ensaio segue a produção de sementes, a formação de biomassa e o crescimento da área da rosácea das plantas cultivadas na estufa em condições limitadas e não limitadas de crescimento com nitrogênio.

Sementes transgênicas de Arabidopsis foram cultivadas em meio de ágar suplementado com meio '/2 MS e agente de seleção (canamicina). As mudas T2 transgênicas foram então transplantadas para bandejas 1.7 preenchidas com turfa e perlita a uma razão de 1:1. As bandejas foram irrigadas com uma solução em condições limitadas de nitrogênio, obtida irrigando-se as plantas com uma solução contendo 1,5 mM de nitrogênio inorgânico na forma de KNO3, suplementada com 1 mM KH2PO4, 1 mM MgS04. 3,6 mM KC1, 2 mM CaCh e microelementos, enquanto os níveis normais de nitrogênio foram obtidos aplicando-se uma solução de 6 mM de nitrogênio inorgânico também na forma de KNO3 com 1 mM KH2PO4, 1 mM MgS04, 2 mM CaCl2 e microelementos. Todas as plantas foram cultivadas na estufa até o amadurecimento das sementes. A biomassa da planta (tecido acima do solo) foi pesada imediatamente após colheita da rosácea (peso da planta fresca ou PF). Em seguida, as plantas foram secas em forno a

50°C por 48 horas e pesadas (peso da planta seca ou PS).

Cada conjunto foi validado em sua geração T2. As plantas transgênicas transformadas com conjunto conformado por um vetor vazio portando o promotor 5 35S e o marcador selecionável foi usado como controle.

As plantas foram analisadas em seu tamanho geral, taxa de crescimento, peso fresco e matéria seca. A performance das plantas transgênicas em comparação com as plantas de controle cultivadas em paralelo sob as mesmas condições.

O experimento foi planejado com distribuição aleatória de plantas. Para cada gene da invenção, três a cinco eventos independentes de transformação foram analisados de cada conjunto.

Imagem digital – Um sistema de aquisição de imagens laboratoriais consistindo de uma câmera de reflexo digital (Canon EOS 300D) com uma lente de distância focal de 55 mm (Canon série EF-S), montada sobre dispositivo de reprodução (Kaiser RS) que inclui 4 lâmpadas (4 lâmpadas de 150 Watts cada) foi usada para capturar imagens das amostras das plantas.

O processo de captura de imagem foi repetido a cada dois dias a partir do dia 1 após o transplante até o dia 15. A mesma câmera, colocada em uma estrutura de ferro feita sob medida, foi usada para capturar imagens de plantas maiores cultivadas em tubos brancos em uma estufa com controle ambiental. Durante o processo de captura, os tubos foram colocados abaixo da estrutura de ferro, ao mesmo tempo em que evitam a luz solar direta e projeção de sombras.

Foi usado um sistema de análise de imagens que consiste de um computador de mesa 5 (processador Intel P4 3,0 GHz) e um programa gratuito - Imagem J 1.39 [programa de processamento de imagens em Java desenvolvido no National Institutes of Health dos EUA e disponível gratuitamente na internet em http://rsbweb.nih.gov/]. As imagens foram capturadas em resolução de 10 megapixels (3888 x 2592 pixels) e armazenadas em formato JPEG (Joint Photographic Experts Group). Em seguida, os dados analisados foram salvos em arquivos de texto e processados com uso do pacote de software de análise estatística JMP (SAS institute).

Análise das folhas – Com uso da análise digital, os dados das folhas foram calculados, incluindo o número das folhas, área da rosácea, diâmetro da rosácea, área da lâmina da folha, cobertura da planta e área do pecíolo da folha. Taxa de crescimento vegetativo: é a taxa de crescimento da planta conforme definido pelas fórmulas VIII, IX, X e XI conforme descrito a seguir: Fórmula VIII: Taxa de crescimento relativo da área da lâmina da folha = Coeficiente de regressão da área da folha no decorrer do tempo.

Fórmula IX:

Taxa de crescimento relativo da área da rosácea = Coeficiente de regressão da área da rosácea no decorrer do tempo.

Fórmula X 5 Taxa de crescimento relativo do diâmetro da rosácea = Coeficiente de regressão do diâmetro da rosácea no decorrer do tempo.

Fórmula XI Taxa de crescimento relativo da cobertura da planta = Coeficiente de regressão da cobertura da planta no decorrer do tempo.

Peso da planta fresca e seca – Por volta do dia 40 desde o cultivo, as plantas foram colhidas e pesadas diretamente para determinação do peso da planta fresca (PF) e deixada secando a 50°C em câmera de secagem por cerca de 48 horas antes da pesagem para determinação do peso da planta seca (PS).

Análises estatísticas – Para identificar genes que conferem melhoria significativa do eficiente de nitrogênio, os resultados obtidos das plantas transgênicas foram comparados com os resultados das plantas de controle. Para identificar genes e conjuntos com melhor performance, os resultados dos eventos independentes de transformação testados foram analisados separadamente. Os dados foram analisados com o teste t Student e os resultados foram considerados significativos se o valor p for menor do que 0,1. Foi usado o software de estatística JMP (Versão

5.2.1, SAS Institute Inc., Cary, Carolina do Norte, EUA).

Resultados experimentais: Os genes apresentados nas Tabelas 46 e 47, mostrados abaixo, aprimoraram o eficiente de nitrogênio da planta quando cultivada sob 5 condições limitadas de crescimento de nitrogênio em comparação com as plantas de controle. Esses genes produziram plantas maiores com capacidade fotossintética maior quando cultivadas sob condições limitadas de nitrogênio.

Tabelas 46 e 47 descrevem as análises de biomassa da planta e área fotossintética (peso fresco, peso seco, diâmetro da rosácea, área da rosácea e cobertura da planta) quando cultivada sob condições limitadas de nitrogênio (1,5 mM KN03, 1 mM KH2P04, 1 mM MgS04, 3,6 mM KC1, 2 mM CaCb e microelementos) em plantas que superexpressam os polinucleotídeos de algumas configurações da invenção sob a regulação de um promotor constitutivo (35S). A avaliação de cada gene foi feita testando-se a performance de vários eventos. Alguns dos genes foram avaliados em mais de um ensaio de cultura de tecido e os resultados obtidos foram repetidos. O evento com valor p <0,1 foi considerado estatisticamente significativo.

Tabela 46 Plantas transgênicas que expressem de forma exógena os polinucleotídeos de algumas configurações da invenção exibem biomassa de planta aprimorada (peso fresco e peso seco) sob condições limitadas de nitrogênio

Peso Seco [g] Peso Fresco [g] Nome do Evento # Gene média Valor-p %aumento média Valor-p %aumento NUE227 9851,4 0,076 0,014 44,26 0,725 0,002 79,65 NUE227 9854,2 0,059 0,202 12,33 0,569 0,000 40,93 NUE227 9853,1 0,069 0,025 31,25 0,581 0,092 44,03 NUE227 9851,1 0,063 0,052 19,43 0,581 0,205 44,03 NUE227 9852,3 0,063 0,063 18,24 0,519 0,469 28,54 Controle 0,053 0,404 NUE233 10173,5 0,035 0,055 34,48 0,243 0,838 -1,89 Controle 0,026 0,248 NUE256 10061,4 0,034 0,031 32,08 NUE256 10061,1 0,044 0,126 70,50 0,325 0,250 31,29 Controle 0,026 0,248 NUE512 9284,2 0,044 0,417 -17,23 0,419 0,794 3,76 NUE512 9283,1 0,066 0,033 25,34 0,488 0,088 20,80 NUE512 9284,3 0,052 0,900 -1,86 0,469 0,566 16,15 NUE512 9282,3 0,064 0,066 20,61 0,506 0,005 25,44 NUE512 9283,3 0,063 0,247 18,24 0,538 0,002 33,19 NUE512 9281,3 0,079 0,066 49,32 0,538 0,023 33,41 Controle 0,053 0,404 NUE514 9403,5 0,050 0,581 -5,41 0,388 0,807 -3,98 NUE514 9404,4 0,054 0,964 2,20 0,439 0,759 8,85 NUE514 9402,2 0,056 0,468 6,42 0,594 0,000 47,12 NUE514 9402,5 0,057 0,553 7,60 0,488 0,088 20,80 Controle 0,053 0,404 NUE531 10082,2 0,042 0,001 62,84 0,235 0,976 -5,26 NUE531 10081,5 0,029 0,810 10,46 0,219 0,334 -11,63 Controle 0,026 0,248 NUE532 9222,4 0,069 0,066 31,25 0,606 0,296 50,22 NUE532 9222,3 0,061 0,773 15,88 0,444 0,148 9,96 NUE532 9222,1 0,064 0,570 20,61 0,525 0,117 30,09 NUE532 9223,3 0,062 0,093 17,06 0,475 0,603 17,70 NUE532 9224,4 0,035 0,007 -32,94 0,467 0,037 15,71 NUE532 9223,5 0,057 0,746 7,60 0,556 0,242 37,83 Controle 0,053 0,404 NUE535 9086,2 0,056 0,915 5,24 0,550 0,477 36,28 Controle 0,053 0,404 NUE537 9392,2 0,053 0,988 0,51 0,550 0,021 36,28 NUE537 9393,2 0,055 0,847 3,72 0,589 0,065 46,02 NUE537 9393,1 0,060 0,274 13,51 0,444 0,148 9,96 NUE537 9393,3 0,068 0,033 28,89 0,575 0,014 42,48 Controle 0,053 0,404 NUE576 9794,1 0,039 0,090 48,89 0,294 0,028 18,67 Controle 0,026 0,248 NUE576 9791,3 0,431 0,838 6,86 NUE576 9792,4 0,500 0,007 23,89 NUE576 9792,3 0,550 0,159 36,28 Controle 0,404

Tabela 46: As análises da biomassa da planta (peso seco e peso fresco) de plantas transgênicas que superexpressam os polinucleotídeos exógenos de algumas configurações da invenção (usando os genes clonados ou sintéticos listados na Tabela 23 acima) sob a regulação de um promotor constitutivo (35S) quando cultivada sob nitrogênio limitado (1,5 mM KNO3, 1 mM KH2PO4, 1 mM MgSCU. 3,6 mM KC1, 2 mM CaCl2 e 5 microelementos) em comparação com as plantas de controle.

Tabela 47 Plantas transgênicas que expressem de forma exógena os polinucleotídeos de algumas configurações da invenção exibem biomassa de planta aprimorada (área e diâmetro da rosácea e cobertura da planta) sob condições limitadas de nitrogênio Nome do Evento Rosette Diameter [cm] Rosette Área [cm2] Plot Coverage [%] média Valor-p %aumento média Valor-p %aumento média Valor-p %aumento NUE2 27 9851,4 2,04 0 2,4E-02 48,28 1,477 7,6E-02 115,9 0 11,81 9 7,6E-02 115,9 0 NUE2 27 9854,2 1,77 8 5,9E-02 29,24 1,070 7,0E-03 56,44 8,564 7,0E-03 56,44 NUE2 27 9853,1 1,67 9 9,5E-02 22,03 0,979 l,lE-01 43,09 7,833 1,1E-01 43,09 NUE2 27 9851,1 1,55 5 2,8E-01 13,03 0,915 2,8E-01 33,71 7,320 2,8E-01 33,71 NUE2 27 9852,3 1,88 9 1,7E-01 37,33 1,298 1,8E-01 89,71 10,38 6 1,8E-01 89,71 Contro 1 1,37 6 0,684 5,474 NUE2 33 10173, 5 1,77 8 1,9E-01 7,66 1,080 3,2E-01 16,76 7,559 7,1E-01 5,15 Contro 1 1,65 1 0,925 7,189 10,66 NUE2 56 10061, 1 1,991 2,6E-03 20,56 1,333 2,7E-02 44,13 2,0E-02 48,34 4 Contro 1 1,65 1 0,925 7,189 NUE5 12 9284,2 1,47 5 7,1E-01 7,21 0,794 7,0E-01 15,97 6,349 7,0E-01 15,97 NUE5 12 9283,1 1,58 1 1,8E-01 14,91 0,916 2,6E-02 33,86 7,328 2,6E-02 33,86 NUE5 12 9284,3 1,395 9,0E-01 1,41 0,719 8,2E-01 5,14 5,755 8,2E-01 5,14 NUE5 12 9282,3 1,58 8 2,6E-01 15,43 0,928 6,3E-02 35,67 7,427 6,3E-02 35,67 NUE5 12 9283,3 1,41 0 8,2E-01 2,50 0,789 3,9E-01 15,37 6,315 3,9E-01 15,37 NUE5 12 9281,3 1,52 6 3,8E-01 10,94 0,824 4,1E-01 20,42 6,236 6,5E-01 13,91 Contro 1 1,37 6 0,684 5,474

Continuação da Tabela 47

NUE5 14 9403,5 1,58 1 5,6E-01 14,93 0,901 5,4E-01 31,69 7,209 5,4E-01 31,69

NUE5 14 9404,4 1,60 8 2,3E-01 16,92 0,930 2,0E-01 35,86 6,923 2,2E-02 26,47

NUE5 14 9402,2 1,99 6 1,8E-01 45,07 1,395 1,5E-01 103,8 5 11,15 9 1,5E-01 103,8 5

NUE5 14 9402,5 1,86 0 3,2E-01 35,21 1,160 3,2E-01 69,52 9,280 3,2E-01 69,52

NUE5 14 9404,5 1,68 9 2,2E-01 22,77 1,006 4,7E-02 47,02 8,048 4,7E-02 47,02

Contro 1 1,37 6 0,684 5,474

NUE5 27 9201,1 1,77 3 1,4E-02 28,89 1,109 9,3E-02 62,12 8,875 9,3E-02 62,12

Contro 1 1,37 6 0,684 5,474

NUE5 31 10081,5 1,75 8 4,5E-01 6,49 1,043 5,1E-01 12,74 8,342 4,3E-01 16,04

Contro 1 1,65 1 0,925 7,189

NUE5 32 9222,4 1,752 3,9E-01 27,34 1,056 4,4E-01 54,32 8,448 4,4E-01 54,32

NUE5 32 9222,3 1,66 8 4,6E-04 21,24 1,034 8,3E-05 51,08 8,270 8,3E-05 51,08

NUE5 32 9222,1 1,62 3 3,8E-01 17,95 1,016 2,8E-01 48,52 8,130 2,8E-01 48,52

NUE5 32 9223,3 1,58 5 5,5E-03 15,23 0,902 6,2E-03 31,88 7,219 6,2E-03 31,88

NUE5 32 9224,4 1,732 1,4E-04 25,88 1,060 6,5E-05 54,91 7,941 2,3E-02 45,06

NUE5 32 9223,5 1,89 9 7,1E-02 38,02 1,294 3,2E-02 89,11 10,35 3 3,2E-02 89,11

Contro 1 1,37 6 0,684 5,474

NUE5 35 9086,2 1,69 6 2,2E-01 23,27 0,938 2,2E-01 37,03 7,502 2,2E-01 37,03

NUE5 35 9084,2 1,46 3 6,4E-01 6,35 0,827 4,3E-01 20,92 6,620 4,3E-01 20,92

NUE5 35 9081,1 1,52 1 3,3E-01 10,57 0,823 3,0E-01 20,21 6,581 3,0E-01 20,21

NUE5 35 9082,1 1,432 5,6E-01 4,10 0,742 3,8E-01 8,46 5,938 3,8E-01 8,46

Contro 1 1,37 6 0,684 5,474

NUE5 37 9391,1 1,50 3 5,2E-01 9,24 0,807 3,8E-01 17,86 6,452 3,8E-01 17,86

NUE5 37 9392,2 1,47 5 4,9E-01 7,21 0,851 3,4E-01 24,32 6,806 3,4E-01 24,32

NUE5 37 9393,2 1,532 8,5E-03 11,34 0,955 4,1E-04 39,59 7,157 4,5E-02 30,73

NUE5 37 9393,1 1,85 6 1,7E-03 34,95 1,225 7,0E-05 78,96 9,797 7,0E-05 78,96

NUE5 37 9392,3 1,42 9 8,3E-01 3,89 0,784 7,3E-01 14,54 6,270 7,3E-01 14,54

Continuação da Tabela 47 NUE5 37 9393,3 1,73 9 5,3E-02 26,42 1,092 1,5E-02 59,52 8,733 1,5E-02 59,52 Contro 1 1,37 6 0,684 5,474 NUE5 76 9794,1 1,963 1,5E-01 18,86 1,350 2,3E-01 45,96 10,80 0 2,1E-01 50,23 Contro 1 1,65 1 0,925 7,189 NUE5 76 9791,3 1,41 6 8,6E-01 2,94 0,753 7,4E-01 10,01 6,022 7,4E-01 10,01 NUE5 76 9792,4 1,82 6 2,1E-05 32,75 1,204 2,4E-04 75,90 9,629 2,4E-04 75,90 NUE5 76 9792,3 1,912 5,4E-06 39,03 1,208 1,1E-05 76,46 9,660 1,1E-05 76,46 Contro 1 1,37 6 0,684 5,474 Tabela 47: As análises da biomassa da planta (área e diâmetro da rosácea e cobertura da planta) de plantas transgênicas que superexpressam os polinucleotídeos exógenos de algumas configurações da invenção (usando os genes 5 clonados ou sintéticos listados na Tabela 23 acima) sob a regulação de um promotor constitutivo (35S) quando cultivada sob nitrogênio limitado (1,5 mM KN03, 1 mM 5 KH2P04, 1 mM MgS04. 3,6 mM KC1, 2 mM CaCl2 e microelementos) em comparação com as plantas de controle.

Os genes apresentados na Tabela 48, mostrados abaixo, aprimoraram o eficiente de nitrogênio da planta quando cultivada sob condições limitadas de crescimento de nitrogênio em comparação com as plantas de controle. Esses genes produziram áreas fotossintéticas maiores como pode ser observado pelo número de folhas maior, área da lâmina da folha e área do pecíolo.

Tabela 48 descreve as análises da área fotossintética da planta (número de folhas, área da lâmina da folha e área do pecíolo) quando cultivada sob condições limitadas de nitrogênio (1,5 mM KNO3, 1 mM KH2PO4, 1 mM MgS04. 3,6 mM KC1, 2 mM CaCl2 e microelementos) em plantas que superexpressam os polinucleotídeos de algumas configurações da invenção sob a regulação de um promotor 5 constitutivo (35S). A avaliação de cada gene foi feita testando-se a performance de vários eventos. Alguns dos genes foram avaliados em mais de um ensaio de cultura de tecido e os resultados obtidos foram repetidos. O evento com valor p <0,1 foi considerado estatisticamente significativo.

Tabela 48 Plantas transgênicas que expressem de forma exógena os polinucleotídeos de algumas configurações da invenção exibem área fotossintética aprimorada (número de folhas, área da lâmina da folha e área do pecíolo) sob condições limitadas de nitrogênio Comprimento do Pecíolo da folha Numero de folhas Àrea de Lâminas Foliares [cm2] Nome do [cm] Evento # Gene %aument %aument %aument média Valor-p média Valor-p média Valor-p o o o NUE227 9851,4 8,56 1,9E-02 16,38 0,24 4,6E-02 108,4 4 0,38 6,5E-02 69,59 NUE227 9854,2 7,63 1,5E-01 3,64 0,19 5,8E-03 67,63 0,32 1,2E-04 41,44 3,5E- NUE227 9853,1 7,81 6,19 0,17 2,2E-01 49,04 0,26 3,8E-02 14,04 02 NUE227 9851,1 7,69 2,8E-01 4,49 0,16 2,9E-01 35,75 0,24 4,7E-01 5,61 NUE227 9852,3 8,50 2,4E-01 15,53 0,21 1,1E-01 82,96 0,32 4,4E-01 41,85 Controle 7,36 0,11 0,22 NUE233 10173, 5 7,79 6,0E-01 2,05 0,19 4,0E-01 15,50 0,26 5,8E-01 8,27 Controle 7,63 0,17 0,24 NUE256 10061, 1 8,13 2,5E-01 6,50 0,23 8,4E-02 39,00 0,31 2,0E-01 30,30 Controle 7,63 0,17 0,24 NUE512 9283,1 7,63 2,5E-01 3,64 0,16 7,0E-02 42,74 0,24 1,2E-01 8,56 NUE512 9284,3 6,88 5,0E-01 -6,55 0,13 4,9E-01 15,53 0,21 8,3E-01 -5,04 NUE512 9282,3 7,38 9,8E-01 0,24 0,16 3,9E-02 41,04 0,26 5,5E-01 14,40

Continuação da Tabela 48

NUE512 9283,3 7,56 6,3E-01 2,79 0,13 6,1E-01 12,00 0,25 6,2E-02 11,05

NUE512 9281,3 7,08 7,9E-01 -3,76 0,15 3,8E-02 31,49 0,23 9,9E-01 0,30 Controle 7,36 0,11 0,22 NUE514 9403,5 7,31 8,7E-01 -0,61 0,16 5,0E-01 35,23 0,28 4,7E-01 25,62

NUE514 9404,4 8,04 4,1E-01 9,22 0,14 1,2E-01 25,05 0,26 1,1E-02 17,01

NUE514 9402,2 8,75 2,5E-01 18,93 0,22 1,4E-01 89,22 0,35 3,1E-01 55,03

NUE514 9402,5 8,38 2,7E-01 13,83 0,19 3,3E-01 63,94 0,32 3,1E-01 42,26

NUE514 9404,5 8,56 1,0E-01 16,38 0,16 3,9E-02 37,00 0,30 3,7E-01 31,67 Controle 7,36 0,11 0,22 NUE527 9201,1 8,19 2,0E-03 11,29 0,17 1,3E-01 49,68 0,33 1,7E-03 45,43

NUE527 9201,2 6,94 6,5E-01 -5,70 0,12 5,8E-01 7,58 0,22 9,3E-01 -1,31 Controle 7,36 0,11 0,22 10082, NUE531 8,24 7,1E-02 7,98 0,15 2,3E-01 12,84 0,27 3,9E-01 13,71 2 10081, NUE531 8,31 4,4E-02 8,95 0,17 9,4E-01 1,15 0,27 3,2E-02 15,99 5 Controle 7,63 0,17 0,24 NUE532 9222,4 7,56 8,4E-01 2,79 0,17 4,2E-01 51,79 0,30 4,1E-01 32,08

NUE532 9222,3 8,31 3,5E-02 12,99 0,16 2,5E-05 41,75 0,29 1,5E-03 30,67

NUE532 9222,1 7,94 1,1E-01 7,89 0,16 2,6E-01 40,64 0,27 5,0E-01 21,12

NUE532 9223,3 7,31 9,4E-01 -0,61 0,15 2,6E-01 32,70 0,28 1,5E-03 26,20

NUE532 9224,4 8,27 1,3E-03 12,38 0,16 3,4E-02 41,63 0,32 6,8E-02 43,77

9,8E- NUE532 9223,5 8,25 12,14 0,20 1,5E-02 72,88 0,35 1,5E-02 58,06 02 Controle 7,36 0,11 0,22 NUE535 9086,2 7,75 5,7E-01 5,34 0,16 2,0E-01 37,02 0,34 2,1E-01 52,44

NUE535 9084,2 6,88 4,0E-01 -6,55 0,15 2,4E-01 28,20 0,23 8,7E-01 2,43

NUE535 9081,1 8,31 1,4E-01 12,99 0,13 4,7E-01 12,91 0,28 2,6E-03 25,65

NUE535 9082,1 7,25 6,2E-01 -1,46 0,13 2,5E-02 12,04 0,26 4,5E-01 14,26 Controle 7,36 0,11 0,22 NUE537 9391,1 7,81 4,8E-01 6,19 0,14 2,6E-01 23,28 0,25 5,7E-01 11,88

NUE537 9392,2 7,31 9,4E-01 -0,61 0,14 2,9E-01 25,68 0,26 4,1E-01 14,53

NUE537 9393,2 7,56 7,2E-01 2,79 0,15 2,2E-02 33,42 0,24 5,1E-01 4,72

Continuação da Tabela 48 NUE537 9393,1 8,63 1,7E-03 17,23 0,19 4,6E-02 69,46 0,34 4,7E-04 52,73 NUE537 9392,3 7,19 8,5E-01 -2,31 0,13 7,3E-01 10,02 0,25 7,4E-01 11,68 2,6E- NUE537 9393,3 8,00 4,8E-01 8,74 0,18 56,70 0,30 3,1E-04 33,39 02 Controle 7,36 0,11 0,22 NUE576 9794,1 8,13 5,7E-01 6,50 0,24 1,4E-01 42,20 0,30 5,0E-01 28,80 Controle 7,63 0,17 0,24 NUE576 9791,3 7,00 6,7E-01 -4,85 0,13 6,3E-01 15,21 0,24 8,0E-01 7,24 NUE576 9792,4 8,75 1,1E-03 18,93 0,18 1,4E-04 55,06 0,35 2,8E-02 56,82 9,6E- NUE576 9792,3 8,06 2,1E-01 9,59 0,20 2,9E-05 71,82 0,34 52,50 04 Controle 7,36 0,11 0,22 Tabela 48: As análises da área fotossintética (número de folhas, área da lâmina da folha e área do pecíolo) de plantas transgênicas que superexpressam os polinucleotídeos exógenos de algumas configurações da invenção (usando os 5 genes clonados ou sintéticos listados na Tabela 23 acima) sob a regulação de um promotor constitutivo (35S) quando cultivada sob nitrogênio limitado (1,5 mM KNO3, 1 mM KH2P04, 1 mM MgS04. 3,6 mM KC1, 2 mM CaCl2 e microelementos) em comparação com as plantas de controle. Os genes apresentados na Tabela 49, mostrados abaixo, aprimoraram a taxa de crescimento da planta quando cultivada em níveis limitados de fertilização com nitrogênio. Esses genes aprimoraram a taxa de crescimento da rosácea e cobriram mais rapidamente o solo quando cultivada sob condições limitadas de crescimento de nitrogênio em comparação com as plantas de controle.

Esses genes produziram um crescimento mais rápido mostrando uma utilização melhor do nitrogênio presente.

A Tabela 49 descreve análises da taxa de crescimento do diâmetro da rosácea, área da rosácea, área da lâmina da folha, número de folhas e 5 cobertura da planta quando cultivada sob condições padrão de nitrogênio quando cultivada sob condições limitadas de nitrogênio (1,5 mM KNO3, 1 mM KH2PO4, 1 mM MgS04, 3,6 mM KC1, 2 mM CaCl2 e microelementos) em plantas que superexpressam os polinucleotídeos de algumas configurações da invenção sob a regulação de um promotor constitutivo (35S). A avaliação de cada gene foi feita testando-se a performance de vários eventos. Alguns dos genes foram avaliados em mais de um ensaio de cultura de tecido e os resultados obtidos foram repetidos. O evento com valor p <0,1 foi considerado estatisticamente significativo.

Tabela 49 Plantas transgênicas que expressem de forma exógena os polinucleotídeos de algumas configurações da invenção exibem performance de crescimento de rosácea aprimorada (taxa de crescimento relativo da área e diâmetro da rosácea e cobertura da planta) sob condições limitadas de nitrogênio Nome do Evento RGR da Area da RGR do Diâmetro da RGR da Cobertura do Gene # Roseta Roseta Diagrama Valor- %aumen Valor- %aume Valor média média média %aumento p to p nto -p 2,6E- 2,0E- 2,6E- NUE227 9851,4 0,183 118,89 0,189 44,11 1,462 118,89 05 03 05 7,4E- 2,0E- 7,4E- NUE227 9854,2 0,133 59,50 0,172 31,13 1,066 59,50 03 02 03 4,6E- 1,2E- 4,6E- NUE227 9853,1 0,120 43,12 0,157 19,92 0,956 43,12 02 01 02 1,2E- 2,5E- 1,2E- NUE227 9851,1 0,112 33,76 0,152 15,45 0,894 33,76 01 01 01 5,4E- 2,5E- 5,4E- NUE227 9852,3 0,161 93,37 0,174 32,77 1,292 93,37 04 02 04

Continuação da Tabela 49 Controle 0,084 0,131 0,668 10063, 5,2E- 7,1E- 9,8E- NUE256 0,132 11,42 0,132 -6,29 0,923 0,41 4 01 01 01 10061, 1,2E- 4,0E- 1,2E- NUE256 0,167 40,75 0,160 13,13 1,332 44,97 1 02 01 02 Controle 0,118 0,141 0,919 3,9E- 5,7E- 3,9E- NUE512 9284,2 0,100 19,99 0,142 8,06 0,802 19,99 01 01 01 7,3E- 2,7E- 7,3E- NUE512 9283,1 0,115 37,78 0,150 14,31 0,920 37,78 02 01 02 6,8E- 7,8E- 6,8E- NUE512 9284,3 0,091 8,61 0,136 3,59 0,726 8,61 01 01 01 6,6E- 2,8E- 6,6E- NUE512 9282,3 0,116 38,73 0,151 14,64 0,927 38,73 02 01 02 4,0E- 6,8E- 4,0E- NUE512 9283,3 0,098 17,73 0,125 -5,14 0,787 17,73 01 01 01 2,5E- 6,0E- 4,2E- NUE512 9281,3 0,103 23,92 0,140 6,87 0,783 17,24 01 01 01 Controle 0,084 0,131 0,668 2,4E- 7,8E- 2,4E- NUE514 9403,5 0,108 28,84 0,137 4,40 0,861 28,84 01 01 01 6,4E- 1,6E- 1,4E- NUE514 9404,4 0,117 39,59 0,155 17,67 0,869 30,04 02 01 01 8,9E- 1,5E- 8,9E- NUE514 9402,2 0,177 111,43 0,195 48,26 1,412 111,43 05 03 05 3,4E- 7,1E- 3,4E- NUE514 9403,2 0,105 26,02 0,140 6,57 0,842 26,02 01 01 01 8,3E- 2,7E- 8,3E- NUE514 9402,5 0,144 72,44 0,180 37,10 1,152 72,44 03 02 03 1,8E- 6,6E- 1,8E- NUE514 9404,5 0,126 50,85 0,164 24,82 1,008 50,85 02 02 02 Controle 0,084 0,131 0,668 1,5E- 3,8E- 1,5E- NUE527 9201,1 0,131 56,83 0,146 11,45 1,048 56,83 02 01 02 Controle 0,084 0,131 0,668 3,4E- 4,2E- 3,4E- NUE532 9222,4 0,132 58,62 0,177 34,79 1,060 58,62 02 02 02 2,7E- 3,2E- 2,7E- NUE532 9222,3 0,124 48,99 0,148 12,66 0,995 48,99 02 01 02 3,9E- 2,5E- 3,9E- NUE532 9222,1 0,124 48,48 0,153 16,37 0,992 48,48 02 01 02 2,0E- 8,3E- 2,0E- NUE532 9223,3 0,106 26,75 0,135 2,62 0,847 26,75 01 01 01 9,5E- 1,0E- 2,7E- NUE532 9224,4 0,132 58,37 0,159 21,08 0,991 48,37 03 01 02 1,4E- 3,4E- 1,4E- NUE532 9223,5 0,162 94,31 0,169 28,67 1,298 94,31 04 02 04 Controle 0,084 0,131 0,668 6,7E- 3,7E- 6,7E- NUE535 9086,2 0,118 40,98 0,169 28,72 0,942 40,98 02 02 02 2,6E- 7,0E- 2,6E- NUE535 9084,2 0,103 23,65 0,138 4,93 0,826 23,65 01 01 01 3,1E- 7,2E- 3,1E- NUE535 9081,1 0,101 20,62 0,137 4,66 0,806 20,62 01 01 01 Controle 0,084 0,131 0,668

Continuação da Tabela 49 3,0E- 5,1E- 3,0E- NUE537 9391,1 0,101 20,89 0,143 8,62 0,808 20,89 01 01 01 1,9E- 5,0E- 1,9E- NUE537 9392,2 0,107 27,77 0,142 8,29 0,854 27,77 01 01 01 4,4E- 8,3E- 1,1E- NUE537 9393,2 0,120 43,18 0,135 2,61 0,894 33,89 02 01 01 5,1E- 2,4E- 5,1E- NUE537 9393,1 0,156 86,73 0,198 50,58 1,247 86,73 04 04 04 3,8E- 6,6E- 3,8E- NUE537 9392,3 0,101 20,36 0,140 6,28 0,804 20,36 01 01 01 1,0E- 7,9E- 1,0E- NUE537 9393,3 0,133 59,56 0,162 23,54 1,066 59,56 02 02 02 Controle 0,084 0,131 0,668 1,1E- 5,5E- 3,0E- NUE576 9793,4 0,163 37,49 0,157 11,44 1,139 23,91 01 01 01 2,6E- 2,7E- 4,2E- NUE576 9792,4 0,139 17,71 0,167 18,29 1,047 13,98 01 01 01 1,7E- 4,0E- 1,6E- NUE576 9794,1 0,168 41,95 0,161 14,09 1,343 46,20 02 01 02 Controle 0,118 0,141 0,919 8,5E- 6,5E- 8,5E- NUE576 9792,4 0,150 79,96 0,162 23,36 1,202 79,96 04 02 04 1,2E- 1,3E- 1,2E- NUE576 9792,3 0,149 78,96 0,177 34,59 1,196 78,96 03 02 03 5,1E- 4,7E- 5,1E- NUE576 9794,1 0,095 14,23 0,145 10,57 0,763 14,23 01 01 01 2,4E- 6,4E- 4,4E- NUE576 9793,3 0,104 24,59 0,140 6,33 0,771 15,45 01 01 01 Controle 0,084 0,131 0,668 Tabela 49: As análises de performance de crescimento de rosácea (taxa de crescimento relativo da área e diâmetro da rosácea e cobertura da planta) de plantas transgênicas que superexpressam os polinucleotídeos exógenos de algumas 5 configurações da invenção (usando os genes clonados ou sintéticos listados na Tabela 23 acima) sob a regulação de um promotor constitutivo (35S) quando cultivada sob nitrogênio limitado (1,5 mM KN03, 1 mM KH2P04, 1 mM MgS04.

3,6 mM KC1, 2 mM CaCl2 e microelementos) em comparação com as plantas de controle.

Os genes apresentados nas Tabelas 50 e 51, mostrados abaixo, aprimoraram o eficiente de nitrogênio da planta quando cultivada sob condições padrão de crescimento de nitrogênio em comparação com as plantas de controle. Esses genes produziram plantas grandes com maior área fotossintética quando cultivada sob condições padrão de crescimento de nitrogênio em comparação com as 5 plantas de controle.

As Tabelas 50 e 51 descrevem as análises de biomassa da planta (peso fresco, peso seco, diâmetro da rosácea, área da rosácea e cobertura da planta) quando cultivada sob condições padrão de nitrogênio (6 mM KN03, 1 mM KH2P04, 1 mM MgS04, 2 mM CaCl2 e microelementos) em plantas que superexpressam os polinucleotídeos de algumas configurações da invenção sob a regulação de um promotor constitutivo (35S). A avaliação de cada gene foi feita testando-se a performance de vários eventos. Alguns dos genes foram avaliados em mais de um ensaio de cultura de tecido e os resultados obtidos foram repetidos. O evento com valor p <0,1 foi considerado estatisticamente significativo.

Tabela 50 Plantas transgênicas que expressem de forma exógena os polinucleotídeos de algumas configurações da invenção exibem biomassa de planta aprimorada (peso seco e peso fresco) sob condições padrão de nitrogênio Peso Seco Peso fresco Nome do Gene Evento # média Valor-p %aumento média Valor-p %aumento NUE227 9851,4 0,170 1,8E-01 18,41 1,631 2,1E-01 12,64 NUE227 9854,2 0,163 1,7E-01 13,18 1,744 2,1E-02 20,41 NUE227 9853,1 0,202 2,1E-01 40,61 2,019 1,9E-02 39,40 NUE227 9852,3 0,199 2,6E-01 38,87 1,794 3,7E-01 23,86 Controle 0,144 1,448 NUE233 10174,3 0,128 1,3E-01 21,58 1,206 l,OE-01 19,80 NUE233 10173,7 0,143 1,4E-02 36,31 1,210 3,8E-01 20,15 Controle 0,105 1,007 NUE256 10063,4 0,139 4,0E-01 32,65 1,363 1,6E-01 35,31 NUE256 10061,3 0,118 5,8E-01 12,64 1,025 9,2E-01 1,80

Continuação da Tabela 50 Controle 0,105 1,007 NUE512 9282,3 0,177 2,0E-01 23,20 1,881 2,8E-03 29,90 Controle 0,144 1,448 NUE514 9403,5 0,168 2,3E-02 17,10 1,556 5,9E-01 7,46 NUE514 9402,2 0,161 2,2E-01 11,88 1,769 3,7E-02 22,13 NUE514 9404,5 0,153 5,0E-01 6,65 1,531 3,9E-01 5,73 NUE514 9402,5 0,171 1,7E-01 19,28 1,488 7,3E-01 2,71 Controle 0,144 1,448 NUE531 10081,5 0,115 5,2E-01 10,00 1,086 5,9E-01 7,83 Controle 0,105 1,007 NUE532 9222,4 0,175 4,9E-01 21,89 1,750 3,4E-01 20,84 NUE532 9223,3 0,156 2,3E-01 8,83 1,556 2,8E-01 7,46 NUE532 9223,5 0,164 4,4E-01 14,05 1,669 5,3E-02 15,23 Controle 0,144 1,448 NUE537 9391,1 0,178 1,3E-01 24,07 1,669 4,8E-02 15,23 NUE537 9393,1 0,168 2,4E-01 16,92 1,743 3,2E-02 20,35 Controle 0,144 1,448 Tabela 50: Aa análises de biomassa da planta (peso seco e peso fresco) de plantas transgênicas que superexpressam os polinucleotídeos exógenos de algumas configurações da invenção (usando os genes clonados ou sintéticos listados na 5 Tabela 23 acima) sob a regulação de um promotor constitutivo (35S) quando cultivada sob nitrogênio padrão (6 mM KN03, 1 mM KH2P04, 1 mM MgS04. 2 mM CaCl2 e microelementos) em comparação com as plantas de controle. "Ave." = média.

Tabela 51 Plantas transgênicas que expressem de forma exógena os polinucleotídeos de algumas configurações da invenção exibem biomassa de planta aprimorada (área e diâmetro da rosácea e cobertura da planta) sob condições padrão de nitrogênio Diâmetro da Roseta Area da Roseta Cobertura do Diagrma •e Nome do Evento # %aument %aument Gene média Valor-p média Valor-p média Valor-p %aumento o o NUE227 9851,4 1,82 8,6E-01 -1,70 1,29 3,5E-01 9,98 10,30 3,5E-01 9,98 NUE227 9854,2 2,13 7,6E-02 14,82 1,40 2,1E-01 19,82 11,22 2,1E-01 19,82 NUE227 9853,1 1,96 6,1E-01 5,70 1,45 1,8E-01 23,64 11,58 1,8E-01 23,64 NUE227 9852,3 1,94 5,9E-01 4,72 1,40 5,8E-01 19,24 11,17 5,8E-01 19,24 Controle 1,85 1,17 9,37

Continuação da Tabela 51

NUE233 10174,3 2,69 2,8E-01 12,27 2,54 3,0E-01 24,73 20,36 2,7E-01 27,64

NUE233 10173,7 2,61 4,7E-01 9,02 2,49 4,0E-01 22,00 18,84 5,9E-01 18,14 Controle 2,40 2,04 15,95 NUE256 10063,4 3,37 1,5E-03 40,59 3,25 1,4E-01 59,40 24,17 2,9E-02 51,58

NUE256 10061,3 2,89 3,3E-01 20,50 2,38 5,8E-01 16,48 19,01 5,3E-01 19,20 Controle 2,40 2,04 15,95 NUE512 9282,3 2,08 3,8E-02 12,43 1,38 1,3E-01 18,07 11,06 1,3E-01 18,07 Controle 1,85 1,17 9,37 6,0E- NUE514 9403,5 2,14 1,9E-02 15,56 1,44 23,37 11,56 6,0E-02 23,37 02

NUE514 9402,2 2,03 9,8E-02 9,60 1,46 5,4E-02 24,90 11,70 5,4E-02 24,90

1,6E- NUE514 9404,5 2,13 2,1E-02 14,76 1,56 32,88 12,45 1,6E-02 32,88 02 5,6E- NUE514 9402,5 2,15 3,9E-02 16,09 1,45 23,83 11,60 5,6E-02 23,83 02 Controle 1,85 1,17 9,37

NUE531 10081,5 2,78 1,5E-01 16,08 2,50 2,5E-01 22,65 18,66 3,0E-01 17,01

NUE531 10083,2 2,99 6,6E-02 24,72 3,18 2,0E-01 56,02 24,12 3,4E-01 51,24 Controle 2,40 2,04 15,95 NUE532 9222,4 2,04 2,8E-01 10,29 1,43 2,2E-01 22,08 11,44 2,2E-01 22,08

NUE532 9223,3 2,04 9,0E-02 10,28 1,38 1,3E-01 18,26 11,08 1,3E-01 18,26

NUE532 9223,5 2,23 5,3E-03 20,20 1,64 6,4E-03 40,20 13,13 6,4E-03 40,20 Controle 1,85 1,17 9,37 NUE537 9391,1 1,87 8,6E-01 0,96 1,22 6,7E-01 4,43 9,78 6,7E-01 4,43

NUE537 9393,1 1,90 7,6E-01 2,36 1,34 4,7E-01 14,85 10,17 7,5E-01 8,55 Controle 1,85 1,17 9,37

Tabela 51: As análises de biomassa da planta (área e diâmetro da rosácea e cobertura da planta) de plantas transgênicas que superexpressam os polinucleotídeos exógenos de algumas configurações da invenção (usando os genes

5 clonados ou sintéticos listados na Tabela 23 acima) sob a regulação de um promotor constitutivo (35S) quando cultivadas sob nitrogênio padrão (6 mM KNO3, 1 mM KH2P04, 1 mM MgS04; 2 mM CaCl2 e microelementos) em comparação com as plantas de controle. "Incr." = incremento; “Ave.” = média.

Os genes apresentados na Tabela 52, mostrados abaixo, aprimoraram o eficiente de nitrogênio da planta quando cultivada sob condições padrão 5 de crescimento de nitrogênio em comparação com as plantas de controle. Esses genes produziram plantas grandes com maior área fotossintética como pode ser observado pelo número maior de folhas, área da lâmina da folha e área do pecíolo em comparação com as plantas de controle.

Tabela 52 descreve as análises da área fotossintética da planta (número de folhas e área do pecíolo) quando cultivada sob condições padrão de nitrogênio (6 mM KNO3, 1 mM KH2PO4, 1 mM MgSÛ4. 2 mM CaCh e microelementos) em plantas que superexpressam os polinucleotídeos de algumas configurações da invenção sob a regulação de um promotor constitutivo (35S). A avaliação de cada gene foi feita testando-se a performance de vários eventos. Alguns dos genes foram avaliados em mais de um ensaio de cultura de tecido e os resultados obtidos foram repetidos. O evento com valor p <0,1 foi considerado estatisticamente significativo.

Tabela 52 Plantas transgênicas que expressem de forma exógena os polinucleotídeos de algumas configurações da invenção exibem áreas fotossintéticas aprimoradas (área da lâmina da folha e comprimento do pecíolo) sob condições padrão de crescimento de nitrogênio

Area da folhagem [cm2] Comprimento do Pecíolo da folhagem Nome do Gene Evento # média Valor-p %aumento média Valor-p %aumento NUE227 9851,4 0,219 1,6E-01 15,14 0,305 7,2E-02 -14,52 NUE227 9854,2 0,249 2,6E-02 30,94 0,373 4,6E-01 4,52 NUE227 9853,1 0,248 6,6E-02 30,68 0,364 7,9E-01 2,16 NUE227 9852,3 0,232 4,4E-01 22,31 0,331 4,7E-01 -7,20 Controle 0,190 0,357 NUE233 10174 0,437 1,8E-01 28,66 0,424 3,3E-01 15,67 NUE233 10174 0,440 1,8E-01 29,28 0,440 2,3E-01 20,06 Controle 0,340 0,366 NUE256 10063 0,518 2,3E-01 52,46 0,491 1,9E-01 34,00 NUE256 10061 0,384 4,9E-01 13,04 0,426 4,3E-01 16,39 Controle 0,340 0,366 NUE512 9282,3 0,244 2,3E-02 28,51 0,370 4,7E-01 3,82 Controle 0,190 0,357 NUE514 9403,5 0,245 1,2E-01 28,88 0,380 2,4E-01 6,47 NUE514 9402,2 0,225 1,3E-01 18,56 0,373 4,4E-01 4,60 NUE514 9404,5 0,246 5,1E-02 29,57 0,358 9,5E-01 0,42 NUE514 9402,5 0,235 4,4E-02 23,86 0,414 3,7E-02 16,10 Controle 0,190 0,357 NUE531 10082 0,393 2,5E-01 15,61 0,445 5,6E-02 21,67 NUE531 10083 0,526 4,9E-02 54,72 0,503 4,4E-02 37,48 Controle 0,340 0,366 NUE532 9222,4 0,238 1,8E-01 25,41 0,380 4,4E-01 6,51 NUE532 9223,3 0,217 3,5E-01 13,98 0,418 3,3E-02 17,17 NUE532 9223,5 0,261 1,1E-02 37,44 0,404 9,7E-02 13,18 Controle 0,190 0,357 NUE537 9391,1 0,206 4,1E-01 8,34 0,340 4,9E-01 -4,82 NUE537 9393,1 0,204 6,9E-01 7,22 0,369 5,6E-01 3,52 Controle 0,190 0,357 Tabela 52: As análises da área fotossintéticas (área da lâmina da folha e comprimento do pecíolo) de plantas transgênicas que superexpressam os polinucleotídeos exógenos de algumas configurações da invenção (usando os genes 5 clonados ou sintéticos listados na Tabela 23 acima) sob a regulação de um promotor constitutivo (35S) quando cultivada sob nitrogênio padrão (6 mM KNO3, 1 mM KH2PO4, 1 mM MgSCU. 2 mM CaCl2 e microelementos) em comparação com as plantas de controle. "Ave." = média.

EXEMPLO 8

AVALIAÇÃO DO CRESCIMENTO DE PLANTAS TRANSGÊNICAS SOB

CONDIÇÕES DE ESTRESSE ABIÓTICO Uma das consequências da estiagem é a indução de estresse osmótico na área ao redor das raízes; portanto, em muitos estudos científicos, o PEG (por exemplo, 1,5 % PEG8000) é usado para simular as condições de estresse osmótico semelhantes à alta 5 osmolaridade encontrada durante o estresse da estiagem.

Ensaio 1: Ensaio de tolerância a estresse abiótico sob condições de cultura – O crescimento da planta foi avaliado sob salinidade (150 mM NaCl) ou estresse osmótico [poli (etileno glicol) (PEG)] em condições de cultura de tecido.

As sementes com superfície esterilizada foram cultivadas em meio basal [50% de meio Murashige-Skoog (MS) suplementado com 0,8 % de ágar de planta como agente solidificante] na presença de canamicina (somente para seleção de plantas transgênicas). Após o cultivo, as placas foram transferidas por 2 a 3 dias para estratificação a 4°C e então cultivadas a 25°C sob ciclos de 12 horas de luz e 12 horas de escuridão durante 7 a 10 dias.

Nesse momento, mudas escolhidas aleatoriamente foram cuidadosamente transferidas para pratos contendo 150 mM ou 1,5 % de PEG: 0,5 de meio MS ou condições normais de crescimento (0,5 de meio MS). Cada placa continha 5 mudas do mesmo evento transgênico e 3 a 4 placas diferentes (réplicas) para cada evento. Para cada polinucleotídeo da invenção, no mínimo quatro eventos independentes de transformação foram analisados de cada conjunto. As plantas expressando os polinucleotídeos da invenção foram comparadas com a medição da média das plantas de controle (vetor vazio ou gene de repórter do GUS sob o mesmo promotor) usadas no mesmo experimento.

Imagem digital – Um sistema de aquisição de imagens laboratoriais que consiste de uma 5 câmera de reflexo digital (Canon EOS 300D) com uma lente de distância focal de 55 mm (Canon série EF-S), montada sobre dispositivo de reprodução (Kaiser RS) que inclui 4 lâmpadas (4 lâmpadas de 150 Watts cada) e localizada em um quarto escuro, foi usada para capturar imagens das pequenas plantas cultivadas em pratos com ágar.

Foi usado um sistema de análise de imagens que consiste de um computador de mesa (processador Intel P4 3,0 GHz) e um programa gratuito - Imagem J 1.39 [programa de processamento de imagens em Java desenvolvido no National Institutes of Health dos EUA e disponível gratuitamente na internet em http://rsbweb.nih.gov/]. As imagens foram capturadas em resolução de 10 megapixels (3888 x 2592 pixels) e armazenadas em formato JPEG (Joint Photographic Experts Group). Em seguida, os dados analisados foram salvos em arquivos de texto e processados usando o software de análise estatística JMP (SAS institute).

Análise de mudas – Com uso da análise digital, os dados foram calculados, inclusive a área da folha, a cobertura da raiz e a comprimento da raiz.

A taxa de crescimento relativo dos vários parâmetros de muda foi calculada de acordo com as seguintes fórmulas V, VI e VII conforme descrito a seguir.

Fórmula V: Taxa de crescimento relativo da área da folha = Coeficiente de regressão da área da folha no decorrer do tempo.

Fórmula VI: 5 Taxa de crescimento relativo da cobertura da raiz = Coeficiente de regressão da cobertura da raiz no decorrer do tempo.

Fórmula VII: Taxa de crescimento relativo do comprimento da raiz = Coeficiente de regressão do comprimento da raiz no decorrer do tempo.

Ao final do experimento, as pequenas plantas foram removidas do meio e pesadas para a determinação do peso da planta fresca. As plantinhas foram então secas por 24 horas a 60°C e pesadas novamente para medição do seu peso seco para análise estatística posterior.

A taxa de crescimento foi determinada comparando-se a cobertura da área da folha, a cobertura da raiz e o comprimento da raiz, entre cada par de fotografias sequenciais e os resultados foram usados para resolver o efeito do gene introduzido no vigor da planta, sob estresse osmótico e também sob condições ideais. De forma semelhante, o efeito do gene introduzido no acúmulo de biomassa, sob estresse osmótico e também sob condições ideais, foi determinado comparando-se o peso da planta fresca e da planta seca com o das plantas de controle (que continham o gene do repórter do GUS sob o mesmo promotor). De cada conjunto criado, foram examinados 3 a 5 eventos independentes de transformação nas réplicas.

Análises estatísticas – Para identificar genes que conferem tolerância significativamente aprimorada a estresses abióticos ou arquitetura de raiz 5 maior, os resultados obtidos das plantas transgênicas foram comparados com os obtidos de plantas de controle. Para identificar genes e conjuntos com melhor performance, os resultados dos eventos independentes de transformação foram analisados separadamente. Para avaliar o efeito de um evento de gene sobre o controle, os dados foram analisados pelo teste t Student e o valor p foi calculado. Os resultados foram considerados significativos se p < 0,1. Foi usado o pacote de software de estatística JMP (Versão 5.2.1, SAS Institute Inc., Cary, Carolina do Norte, EUA).

Resultados experimentais: Os genes apresentados nas Tabelas 53, 54 e 55, mostrados abaixo, aprimoraram a ABST (tolerância a estresse abiótico) da planta quando cultivada sob altos níveis de concentração de salinidade em comparação com as plantas de controle. Os resultados mostraram que os genes também aprimoraram a performance da planta sob condições de sem salinidade.

As Tabelas 53, 54 e 55 descrevem as análises de performance da planta (área de folhas e raiz) sob condições normais (0 mM NaCl) ou de alta salinidade (150 mM NaCl) em plantas que superexpressam os polinucleotídeos de algumas configurações da invenção sob a regulação de um promotor constitutivo (35S). A avaliação de cada gene foi feita testando-se a performance de vários eventos. Alguns dos genes foram avaliados em mais de um ensaio de cultura de tecido e os resultados obtidos foram repetidos. O evento com valor p <0,1 foi considerado 5 estatisticamente significativo.

Tabela 53 Plantas transgênicas que expressem de forma exógena os polinucleotídeos de algumas configurações da invenção exibem performance aprimorada (área de folhas e raízes da planta) sob condições normais (padrão) Area Foliar [cm2] Area da Raiz [ cm2] Nome do Tratamento Evento Gene Média Estatisticas % aumento Média Estatisticas % aumento 0 mM NaCl CT81 4995,1 0,60 A 23,04 0,25 A 57,13 0 mM NaCl CT81 4991,1 0,53 AB 7,91 0,16 B 0,18 0 mM NaCl Controle 4543,3 0,49 B 0,16 B Tabela 53: As análises de performance da planta (área de folhas e razies) de plantas transgênicas que superexpressam os polinucleotídeos exógenos de algumas configurações da invenção (usando os genes clonados ou sintéticos listados na Tabela 23 acima) sob a regulação de um promotor constitutivo (35S) quando cultivada sob condições padrão (0 mM NaCl) em comparação com as plantas de controle.

Tabela 54 Plantas transgênicas que expressem de forma exógena os polinucleotídeos de algumas configurações da invenção exibem performance aprimorada (área das folhas) sob estresse de salinidade Área Foliar [cm2] Tratamento Nome do Gene Evento Média Estatisticas % aumento 150 mM NaCl CT81 4991,1 0,25 A 27,57 150 mM NaCl CT81 4995,1 0,21 B 3,74 150 mM NaCl CT81 4993,1 0,20 B 2,09 150 mM NaCl Controle 4543,3 0,20 B

Tabela 54: As análises de performance da planta (área das folhas) de plantas transgênicas que superexpressam os polinucleotídeos exógenos de algumas configurações da invenção (usando os genes clonados ou sintéticos listados na 5 Tabela 23 acima) sob a regulação de um promotor constitutivo (35S) quando cultivada sob condições de salinidade (150 mM NaCl) em comparação com as plantas de controle.

Tabela 55 Plantas transgênicas que expressem de forma exógena os polinucleotídeos de algumas configurações da invenção exibem performance aprimorada (área da raiz) sob condições de salinidade Area da Raiz [ cm2] Tratamento Nome do Gene Evento Média Estatisticas % aumento 150mMNaCl CT81 4995,1 0,24 A 44,30 150mMNaCl CT81 4991,1 0,22 A 30,09 150mMNaCl Controle 4543,3 0,17 B 0,00 Tabela 55: As análises de performance da planta (roots área) de plantas transgênicas que superexpressam os polinucleotídeos exógenos de algumas configurações da invenção (usando os genes clonados ou sintéticos listados na Tabela 23 acima) sob a regulação de um promotor constitutivo (35S) quando cultivada sob condições de salinidade (150 mM NaCl) em comparação com as plantas de controle.

Embora a invenção tenha sido descrita em conjunto com configurações específicas da mesma, é evidente que muitas alternativas, modificações e variações possíveis serão evidentes àqueles que possuem perícia na técnica. Da mesma forma, pretende-se aqui abarcar todas as alternativas, modificações e variações que estejam dentro do princípio e do amplo escopo das reivindicações anexadas.

Todas as publicações, patentes e pedidos de patente mencionados nesta especificação são a este incorporados em sua totalidade por meio de referência à 5 especificação, como se cada publicação, patente ou pedido de patente individual fosse indicado específica e individualmente para ser a este incorporada por referência.

Além disso, a citação ou identificação de qualquer referência neste pedido não deve ser interpretada como uma admissão de que tal referência esteja disponível como técnica anterior à presente invenção. Os cabeçalhos das seções que foram utilizados não devem ser interpretados como delimitação do escopo.

Claims (15)

REIVINDICAÇÕES

1. Método para aumentar a eficiência de uso do nitrogênio, eficiência de uso de fertilizantes, produção, taxa de crescimento, vigor, 5 biomassa, teor de óleo e/ou tolerância ao estresse abiótico de uma planta, caracterizado pelo fato de que compreende superexpressar dentro da planta um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácido pelo menos 80% idêntica às SEQ ID Nº: 2557, 2560, 184, 238, 188, 154-156, 10 158-161, 163-183, 185-187, 189-197, 200-237, 239-264, 266- 269, 1351, 1365-1425, 1429-1457, 1459, 1461-1730, 1735, 1739-2397, 2533-2541, 2544-2556, 2558, 2559, 2561-2562 ou 2563, aumentando, por meio disto, a eficiência de uso do nitrogênio, eficiência de uso de fertilizantes, produção, 15 taxa de crescimento, vigor, biomassa, teor de óleo e/ou tolerância ao estresse abiótico da planta.

2. Método para aumentar a eficiência de uso do nitrogênio, eficiência de uso de fertilizantes, produção, taxa de crescimento, vigor, 20 biomassa, teor de óleo e/ou tolerância ao estresse abiótico de uma planta, caracterizado pelo fato de que compreende superexpressar dentro da planta um polpeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácido selecionada do grupo consistindo das SEQ ID Nº: 2557, 2560, 184, 238, 188, 154-156, 158-161, 25 163-183, 185-187, 189-197, 200-237, 239-264, 266-269, 1351, 1365-1425, 1429-1457, 1459, 1461-1730, 1735, 1739-2397, 2533-2541, 2544-2556, 2558, 2559, 2561-2563, 138-143, 146, 148, 150-152, 157, 162, 198, 265, 1334-1350, 1352-1364,

1426-1428, 1458, 1460, 1732-1734, 1737-1738, 2523-2532, 2542 e 2543, aumentando, por meio disto, a eficiência de uso do nitrogênio, eficiência de uso de fertilizantes, produção, taxa de crescimento, vigor, biomassa, teor de óleo e/ou 5 tolerância ao estresse abiótico da planta.

3. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o dito polipeptídeo é codificado por um polinucleotídeo exógeno, o qual compreende uma sequência de ácido nucleico pelo menos 10 80% idêntica às SEQ ID Nº: 2506, 2512, 2442, 2496, 2446, 1, 2, 4, 7, 8, 11, 12, 13, 16-19, 21-60, 63-128, 130-137, 270- 287, 289-293, 295-306, 308-362, 364-666, 671, 673-1333, 2414-2441, 2443-2445, 2447-2455, 2458-2495, 2497-2505, 2507- 2511, 2513-2521 ou 2522.

15 4. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o dito polipeptídeo é codificado por um polinucleotídeo exógeno, o qual compreende uma sequência de ácido nucleico selecionada do grupo consistindo das SEQ ID Nº: 2506, 2512, 2442, 2496, 20 2446, 1, 2, 4, 7, 8, 11, 12, 13, 16-19, 21-60, 63-128, 130- 137, 270-287, 289-293, 295-306, 308-362, 364-666, 671, 673- 1333, 2414-2441, 2443-2445, 2447-2455, 2458-2495, 2497-2505, 2507-2511, 2513-2522, 3, 5, 6, 9, 10, 14, 15, 20, 61, 62, 129, 288, 294, 307, 363, 667, 668, 669, 670, 672, 2398-2413, 25 2456 e 2457.

5. Polinucleotídeo isolado, caracterizado pelo fato de que compreende uma sequência de ácido nucléico codificando um polipeptídeo que compreende uma sequência de aminoácido pelo menos 80% homóloga à sequência de aminoácido das SEQ ID Nº: 2557, 2560, 184, 238, 188, 154-156, 158-161, 163-183, 185-187, 189-197, 200-237, 239-264, 266-269, 1351, 1365-1425, 1429-1457, 1459, 1461- 5 1730, 1735, 1739-2397, 2533-2541, 2544-2556, 2558, 2559, 2561-2562 ou 2563, onde a mencionada sequência de aminoácido é capaz de aumentar a eficiência de uso de nitrogênio, eficiência de uso de fertilizantes, produção, taxa de crescimento, vigor, biomassa, teor de óleo e/ou tolerância 10 ao estresse abiótico da planta.

6. Polinucleotídeo isolado, caracterizado pelo fato de que compreende uma sequência de ácido nucléico codificando um polipeptídeo que compreende a sequência de aminoácido selecionada do grupo consistindo das 15 SEQ ID Nº: 2557, 2560, 184, 238, 188, 154-156, 158-161, 163- 183, 185-187, 189-197, 200-237, 239-264, 266-269, 1351, 1365-1425, 1429-1457, 1459, 1461-1730, 1735, 1739-2397, 2533-2541, 2544-2556, 2558, 2559, 2561-2563, 138-143, 146, 148, 150-152, 157, 162, 198, 265, 1334-1350, 1352-1364, 20 1426-1428, 1458, 1460, 1732-1734, 1737-1738, 2523-2532, 2542 e 2543.

7. Polinucleotídeo isolado de acordo com a reivindicação 5 ou 6, caracterizado pelo fato de que a dita sequência de ácido nucleico é pelo menos 80% 25 idêntica às SEQ ID Nº: 2506, 2512, 2442, 2496, 2446, 1, 2, 4, 7, 8, 11, 12, 13, 16-19, 21-60, 63-128, 130-137, 270-287, 289-293, 295-306, 308-362, 364-666, 671, 673-1333, 2414- 2441, 2443-2445, 2447-2455, 2458-2495, 2497-2505, 2507-2511,

2513-2521 ou 2522.

8. Polinucleotídeo isolado de acordo com a reivindicação 5 ou 6, caracterizado pelo fato de que a dita sequência de ácido nucleico é selecionada do 5 grupo consistindo das SEQ ID Nº: 2506, 2512, 2442, 2496, 2446, 1, 2, 4, 7, 8, 11, 12, 13, 16-19, 21-60, 63-128, 130- 137, 270-287, 289-293, 295-306, 308-362, 364-666, 671, 673- 1333, 2414-2441, 2443-2445, 2447-2455, 2458-2495, 2497-2505, 2507-2511, 2513-2522, 3, 5, 6, 9, 10, 14, 15, 20, 61, 62, 10 129, 288, 294, 307, 363, 667, 668, 669, 670, 672, 2398-2413, 2456 e 2457.

9. Construção de ácido nucléico, caracterizada pelo fato de que compreende o polinucleotídeo isolado como definido nas reivindicações 5, 15 6, 7 ou 8, e um promotor heterólogo para transcrição direta da mencionada sequência de ácido nucléico na célula hospedeira.

10. Polipeptídeo isolado, caracterizado pelo fato de que compreende uma sequência de 20 aminoácido pelo menos 80 % homóloga às SEQ ID Nº: 2557, 2560, 184, 238, 188, 154-156, 158-161, 163-183, 185-187, 189-197, 200-237, 239-264, 266-269, 1351, 1365-1425, 1429- 1457, 1459, 1461-1730, 1735, 1739-2397, 2533-2541, 2544- 2556, 2558, 2559, 2561-2562 ou 2563, onde a mencionada 25 sequência de amino ácido é capaz de aumentar a eficiência de uso de nitrogênio, eficiência de uso de fertilizantes, produção, taxa de crescimento, vigor, biomassa, teor de óleo e/ou tolerância ao estresse abiótico da planta.

11. Polipeptídeo isolado, caracterizado pelo fato de que compreende uma sequência de aminoácido selecionada do grupo consistindo das SEQ ID Nº: 2557, 2560, 184, 238, 188, 154-156, 158-161, 163-183, 185- 5 187, 189-197, 200-237, 239-264, 266-269, 1351, 1365-1425, 1429-1457, 1459, 1461-1730, 1735, 1739-2397, 2533-2541, 2544-2556, 2558, 2559, 2561-2563, 138-143, 146, 148, 150- 152, 157, 162, 198, 265, 1334-1350, 1352-1364, 1426-1428, 1458, 1460, 1732-1734, 1737-1738, 2523-2532, 2542 e 2543.

10 12. Célula de planta exógena, caracterizada pelo fato de que expressa o polinucleotídeo como definido nas reivindicações 5, 6, 7 ou 8, ou a construção de ácido nucléico como definida na reivindicação 9 ou o polipeptídeo como definido na reivindicação 10 ou 11.

15 13. Célula de planta de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de que a mencionada célula de planta forma parte de uma planta.

14. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3 ou 4, caracterizado 20 pelo fato de que compreende ainda o crescimento da planta expressando o mencionado polinucleotídeo exógeno sob estresse abiótico.

15. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4 ou 14, 25 polinucleotídeo isolado de acordo com a reivindicação 5, construção de ácido nucléico de acordo com a reivindicação 9, polipeptídeo isolado de acordo com a reivindicação 10, ou célula de planta de acordo com a reivindicação 12,

caracterizado pelo fato de que o mencionado estresse abiótico é selecionado do grupo consistindo de salinidade,

estiagem, falta de água, enchente, etiolação, baixa temperatura, alta temperatura, toxicidade de metais pesados,

5 deficiência de nutrientes, poluição atmosférica e irradiação

UV.