CN101386855A - 调节基因表达的核苷酸序列和构建体及其使用方法 - Google Patents

调节基因表达的核苷酸序列和构建体及其使用方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及调节基因表达的核苷酸序列和构建体及其使用方法。本发明提供了新的植物衍生的调控序列和构建体以及使用这种序列指导外源多核苷酸序列在植物中表达的方法。

Description

调节基因表达的核苷酸序列和构建体及其使用方法
本申请是申请日为2004年3月11日的发明创造名称为“调节基因表达的核苷酸序列和构建体及其使用方法”的中国专利申请(国家申请号为No.200480012842.3，国际申请号为PCT/IL2004/000235)的分案申请。
技术领域
本发明涉及能够在生物中调节基因表达的分离多核苷酸，以及更具体地涉及新的核酸序列，其包括组成型的、诱导型的、组织特异的和发育阶段特异的启动子，所述启动子能够指导植物中的基因表达。
背景技术
启动子是长度为大约200-1500个碱基对(bp)的核酸序列，其一般位于编码序列的上游。启动子在指导相邻的编码序列转录中发挥功能，因此在生物中起基因表达开关的作用。因此，所有的细胞过程最终都受到启动子活性的支配，使得这种调控元件成为重要的研究和商业工具。
启动子通常在商业化的表达系统、基因治疗和多种研究应用中用于异源基因的表达。
启动子序列的选择决定了所选择的异源基因在何时、何处以及怎样强地表达。因此，当需要在生物中全面进行组成型表达时，优选使用组成型启动子。另一方面，当需要触发的基因表达时，优选诱导型启动子。同样，当将表达限于特定的组织、或特定的生理学或发育阶段中时，分别优选组织特异的或阶段特异的启动子。
组成型启动子在整个细胞周期都是有活性的，并且已经用于在转基因的植物中表达异源的基因，以使得在整体植物中一直进行由异源基因编码的性状的表达。经常用于植物转化的已知组成型启动子的实例，包括花椰菜热休克蛋白80(hsp80)启动子、35S花椰菜花叶病毒启动子、胭脂氨酸合酶(nos)启动子、章鱼碱(ocs)土壤杆菌(Agrobacterium)启动子和甘露氨酸合酶(mas)土壤杆菌启动子。
可通过诱导试剂打开诱导型启动子，并且所述启动子只要暴露于诱导试剂就一般是活化的。诱导试剂可以是化学试剂，例如代谢物、生长调节剂、除草剂或酚类化合物、或直接施加于植物的生理应激，例如冷、热、盐、毒素、或经过微生物病原体或杀虫性害虫的作用施加的生理应激。因此，可使用诱导型启动子来调节所需要性状的表达，例如控制昆虫害虫或微生物病原体的基因，由此只有当昆虫感染或初次啮咬时立刻产生蛋白并且是短暂地，以使得降低对抗性害虫的选择压力。例如，可转化植物来表达杀虫的或杀真菌的性状，例如苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)(Bt)毒素、病毒外壳蛋白、葡聚糖酶、壳多糖酶或植物抗毒素。在另一个实例中，可转化植物以当暴露于除草剂后，通过超表达中和多种类型的除草剂的乙酰羟酸合成酶而耐受除草剂[Hattori，J.等人，Mol.General.Genet.246：419(1995)]。
已经描述了几个水果特异的启动子，包括苹果分离的Thi启动子(美国专利号6,392,122)；草莓分离的启动子(美国专利号6,080,914)；番茄分离的E4和E8启动子(美国专利号5,859,330)；多聚半乳糖醛酸酶启动子(美国专利号4,943,674)；和2AII番茄基因启动子[VanHaaren等人，Plant Mol.Biol.21：625-640(1993)]。可将这种水果特异的启动子用于，例如通过调节抑制乙烯生物合成的ACC脱氨酶的表达来改变果实成熟。需要在水果组织中表达的其它基因产物包括编码香味或颜色性状的基因，例如奇甜蛋白、环化酶或蔗糖磷酸合酶。
已经在美国专利号6,403,862、5,608,152和5,504,200；和美国专利申请系列号09/998059和10/137964中描述了种子特异的启动子。可将这种种子特异的启动子用于，例如改变饱和或不饱和脂肪酸的水平；增加赖氨酸-或含硫氨基酸的水平或改变种子中包含的淀粉的量。
已经描述了在发芽阶段特异调节基因表达的几个启动子，包括α-葡糖苷酸酶(α-glucoronidase)和半胱氨酸蛋白酶抑制剂-1大麦分离的启动子(美国专利号6,359,196)，和水解酶启动子[Skriver等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，88：7266-7270(1991)]。
在使本发明付诸实践时，本发明人已经揭示了在植物中显示出各种启动子活性的几个调控序列，如在下文所进一步描述的，这种调控序列可用于多种商业和研究应用。
发明内容
根据本发明的一个方面，提供了分离的多核苷酸，该分离的多核苷酸包括选自SEQ ID NOS：1、6、11、16、21、26、31、36、41、46、56、61、66、71、76、81、86、91、96、101、106、111、116、121、126、131、136、141、146、151、156、161、166、171、176、181、186、191、196、201、202、211、210和213的核酸序列，其中分离的多核苷酸能够调节可操作地与其连接的至少1个多核苷酸序列的表达。
根据本发明的另一个方面，提供了包括分离的多核苷酸的核酸构建体，该分离的多核苷酸包括选自SEQ ID NOS：1、6、11、16、21、26、31、36、41、46、56、61、66、71、76、81、86、91、96、101、106、111、116、121、126、131、136、141、146、151、156、161、166、171、176、181、186、191、196、201、202、203、210和213的核酸序列。
根据本发明的另一方面，提供了包括分离的多核苷酸的转基因细胞，该分离的多核苷酸包括选自SEQ ID NOS：1、6、11、16、21、26、31、36、41、46、56、61、66、71、76、81、86、91、96、101、106、111、116、121、126、131、136、141、146、151、156、161、166、171、176、181、186、191、196、201、202、203、210和213的核酸序列。
根据本发明的另一个方面，提供了包括核酸构建体的转基因细胞，该核酸构建体包括分离的多核苷酸，该分离的多核苷酸包括选自SEQID NOS：1、6、11、16、21、26、31、36、41、46、56、61、66、71、76、81、86、91、96、101、106、111、116、121、126、131、136、141、146、151、156、161、166、171、176、181、186、191、196、201、202、203、210和213的核酸序列。
根据本发明另外的方面，提供了包括分离的多核苷酸的转基因生物，该分离的多核苷酸包括选自SEQ ID NOS：1、6、11、16、21、26、31、36、41、46、56、61、66、71、76、81、86、91、96、101、106、111、116、121、126、131、136、141、146、151、156、161、166、171、176、181、186、191、196、201、202、203、210和213的核酸序列。
根据本发明另外的方面，提供了包括核酸构建体的转基因生物，该核酸构建体包括分离的多核苷酸，该分离的多核苷酸包括选自SEQ IDNOS：1、6、11、16、21、26、31、36、41、46、56、61、66、71、76、81、86、91、96、101、106、111、116、121、126、131、136、141、146、151、156、161、166、171、176、181、186、191、196、201、202、203、210和213的核酸序列。
根据本发明另外的方面，提供了包括分离的多核苷酸的转基因植物，该分离的多核苷酸包括选自SEQ ID NOS：1、6、11、16、21、26、31、36、41、46、56、61、66、71、76、81、86、91、96、101、106、111、116、121、126、131、136、141、146、151、156、161、166、171、176、181、186、191、196、201、202、203、210和213的核酸序列。
根据本发明进一步的方面，提供了包括核酸构建体的转基因植物，该核酸构建体包括分离的多核苷酸，该分离的多核苷酸包括选自SEQID NOS：1、6、11、16、21、26、31、36、41、46、56、61、66、71、76、81、86、91、96、101、106、111、116、121、126、131、136、141、146、151、156、161、166、171、176、181、186、191、196、201、202、203、210和213的核酸序列。
根据本发明进一步的方面，提供生产转基因植物的方法，包括用分离的多核苷酸转化植物，该分离的多核苷酸包括选自SEQ ID NOS：1、6、11、16、21、26、31、36、41、46、56、61、66、71、76、81、86、91、96、101、106、111、116、121、126、131、136、141、146、151、156、161、166、171、176、181、186、191、196、201、202、203、210和213的核酸序列。
根据本发明进一步的方面，提供了生产转基因植物的方法，包括用核酸构建体转化植物，该核酸构建体包括分离的多核苷酸，该分离的多核苷酸包括选自SEQ ID NOS：1、6、11、16、21、26、31、36、41、46、56、61、66、71、76、81、86、91、96、101、106、111、116、121、126、131、136、141、146、151、156、161、166、171、176、181、186、191、196、201、202、203、210和213的核酸序列。
根据本发明进一步的方面，提供了在细胞中目标多肽的方法，包括用核酸构建体转化细胞，该核酸构建体包括与调控核酸序列可操作连接的编码目标多肽的多核苷酸序列，该调控核酸序列选自SEQ IDNOS：1、6、11、16、21、26、31、36、41、46、56、61、66、71、76、81、86、91、96、101、106、111、116、121、126、131、136、141、146、151、156、161、166、171、176、181、186、191、196、201、202、203、210和213，由此在细胞中表达目标多肽。
根据本发明进一步的方面，提供了在细胞中共表达2种目标多肽的方法，包括用核酸构建体转化细胞，该核酸构建体包括与调控核酸序列可操作连接的编码2种目标多肽的2种多核苷酸序列，该调控核酸序列选自SEQ ID NOS：1、6、11、16、21、26、31、36、41、46、56、61、66、71、76、81、86、91、96、101、106、111、116、121、126、131、136、141、146、151、156、161、166、171、176、181、186、191、196、201、202、203、210和213，以使得所述的2种多核苷酸序列侧接所述的调控核酸序列，由此在细胞中表达2种目标多肽。
根据如下所述的本发明优选实施方案中进一步的特性，分离的多核苷酸包括至少1个启动子区域。
根据所描述的优选实施方案中进一步的特性，核酸序列选自SEQID NOS：1、6、41、46、51、86、121、136、171、181和202，并且至少一个启动子区域能够指导所述的至少一个多核苷酸序列以组成型的方式转录。
根据所描述的优选实施方案中更进一步的特性，核酸序列选自SEQ ID NOS：1、11、16、21、26、31、36、56、61、66、71、76、81、91、96、101、116、126、141、146、151、156、161、166、176、186、191、196、201、203、210和213，并且至少一个启动子区域能够指导所述的至少一个多核苷酸序列以诱导型的方式转录。
根据所描述的优选实施方案中更进一步的特性，核酸序列选自SEQ ID NOS：1、11、16、21、26、31、36、56、61、66、71、76、91、116、126、141、146、151、156、161、166、176、186、191、196、201、203、210和213，并且至少一个启动子区域能够指导所述的至少一个多核苷酸序列以组织特异的方式转录。
根据所描述的优选实施方案中更进一步的特性，核酸序列选自SEQ ID NOS：81、96、101、106和131，并且至少一个启动子区域能够指导所述的至少一个多核苷酸序列以发育阶段特异的方式转录。
根据所描述的优选实施方案中更进一步的特性，核酸构建体进一步包括与分离的多核苷酸可操作连接的至少一个异源的多核苷酸。
根据所描述的优选实施方案中更进一步的特性，至少一个异源的多核苷酸是报告基因。
根据所描述的优选实施方案中更进一步的特性，核酸构建体进一步包括各自与分离的多核苷酸末端可操作连接的2个异源的多核苷酸，以使得2个异源的多核苷酸侧接分离的多核苷酸。
本发明通过提供显示广泛范围的启动子功能模式的多个分离的多核苷酸序列成功解决了目前已知构型的缺点。这些多核苷酸可用于产生核酸构建体，例如适于转化生物的表达载体。这种核酸构建体可用于促进所需要的性状或表达产物以组成型的、诱导型的、组织特异的或发育阶段特异的方式在转基因的生物，如植物中表达。
附图说明
在此只通过实例的方式描述本发明，其中参考所附有的附图。现在具体参考详细的附图，应强调指出的是，所示出的细节仅仅作为实例及为了例证性的讨论本发明的优选实施方案的目的，且提供的目的是为了提供对本发明的原理和概念方面的描述最有效并且最容易的理解。在这点上，不是试图比为基本理解本发明所必需的更详细地显示本发明的结构细节，伴随附图的描述使得何使本发明的几个形式在实施中具体化对本领域的技术人员来说是显而易见的。
在附图中：
图1a-b是显示用核酸构建体转化的拟南芥(Arabidopsis thaliana)植株的照片，该核酸构建体包括与萤光素酶编码序列可操作连接的、SEQ ID NO：11所示的核酸序列。图1a显示在正常光下的转基因植物。图1b是相同植物在黑暗中的超低光照片，说明萤光素酶在花组织中的特异表达。
图2a-b是显示用核酸构建体转化的拟南芥植株的照片，该核酸构建体包括与萤光素酶编码序列可操作连接的、SEQ ID NO：21所示的核酸序列。图2a显示在正常光下的转基因植物。图2b是相同植物在黑暗中的超低光照片，说明萤光素酶在根组织中的特异表达。
图3a-b是显示用核酸构建体转化的拟南芥植株的照片，该核酸构建体包括与萤光素酶编码序列可操作连接的、SEQ ID NO：36所示的核酸序列。图3a显示在正常光下的转基因植物。图3b是相同植物在黑暗中的超低光照片，说明萤光素酶在根和花组织中的特异表达。
图4a-b是显示用核酸构建体转化的拟南芥植株的照片，该核酸构建体包括与萤光素酶编码序列可操作连接的、SEQ ID NO：61所示的核酸序列。图4a显示在正常光下的转基因植物。图4b是相同植物在黑暗中的超低光照片，说明萤光素酶在幼小组织中的特异表达。
图5a-b是显示用核酸构建体转化的拟南芥幼苗的照片，该核酸构建体包括与萤光素酶编码序列可操作连接的、SEQ ID NO：66所示的核酸序列。图5a显示在正常光下的转基因植物。图5b是相同植物在黑暗中的超低光照片，说明萤光素酶在叶组织中的表达。
图6a-b是显示用核酸构建体转化的拟南芥成熟植株的照片，该核酸构建体包括与萤光素酶编码序列可操作连接的、SEQ ID NO：66所示的核酸序列。图6a显示在正常光下的转基因植物。图6b是相同植物在黑暗中的超低光照片，说明萤光素酶在茎组织中的表达。
图7a-b是显示用核酸构建体转化的拟南芥植株幼苗的照片，该核酸构建体包括与萤光素酶编码序列可操作连接的、SEQ ID NO：81所示的核酸序列。图7a显示在正常光下的转基因植物。图7b是相同植物在黑暗中的超低光照片，说明萤光素酶在地上组织中的表达。
图8a-b是显示用核酸构建体转化的拟南芥成熟植株的照片，该核酸构建体包括与萤光素酶编码序列可操作连接的、SEQ ID NO：81所示的核酸序列。图8a显示在正常光下的转基因植物。图8b是相同植物在黑暗中的超低光照片，说明萤光素酶在花组织中的表达。
图9a-b是显示用核酸构建体转化的拟南芥植株的照片，该核酸构建体包括与萤光素酶编码序列可操作连接的、SEQ ID NO：91所示的核酸序列。图9a显示在正常光下的转基因植物。图9b是相同植物在黑暗中的超低光照片，说明萤光素酶在根和花组织中的特异表达。
图10a-b是显示用核酸构建体转化的拟南芥幼苗的照片，该核酸构建体包括与萤光素酶编码序列可操作连接的、SEQ ID NO：96所示的核酸序列。图10a显示在正常光下的转基因植物。图10b是相同植物在黑暗中的超低光照片，说明萤光素酶在地上组织中的特异表达。
图11a-b是显示用核酸构建体转化的拟南芥成熟植株的照片，该核酸构建体包括与萤光素酶编码序列可操作连接的、SEQ ID NO：96所示的核酸序列。图11a显示在正常光下的转基因植物。图11b是相同植物在黑暗中的超低光照片，说明萤光素酶在地上组织中的特异表达。
图12a-b是显示用核酸构建体转化的拟南芥植株的种子的照片，该核酸构建体包括与萤光素酶编码序列可操作连接的、SEQ ID NO：111所示的核酸序列。图12a显示在正常光下的种子。图12b是相同种子在黑暗中的超低光照片，说明荧光素酶在种子中的特异表达。
图13a-b是显示用核酸构建体转化的拟南芥植株的照片，该核酸构建体包括与萤光素酶编码序列可操作连接的、SEQ ID NO：111所示的核酸序列。图13a显示在正常光下的转基因植物。图13b是相同植物在黑暗中的超低光照片，说明萤光素酶在根中的特异表达。
图14a-b是显示用核酸构建体转化的拟南芥植株的照片，该核酸构建体包括与萤光素酶编码序列可操作连接的、SEQ ID NO：121所示的核酸序列。图14a显示在正常光下的转基因植物。图14b是相同植物在黑暗中的超低光照片，说明萤光素酶在分生组织中的特异表达。
图15a-b是显示用核酸构建体转化的拟南芥幼苗的照片，该核酸构建体包括与萤光素酶编码序列可操作连接的、SEQ ID NO：126所示的核酸序列。图15a显示在正常光下的转基因植物。图15b是相同植物在黑暗中的超低光照片，说明萤光素酶在根分生组织中的特异表达。
图16a-b是显示用核酸构建体转化的拟南芥植株的照片，该核酸构建体包括与萤光素酶编码序列可操作连接的、SEQ ID NO：126所示的核酸序列。图16a显示在正常光下的转基因植物。图16b是相同植物在黑暗中的超低光照片，说明萤光素酶在花分生组织中的特异表达。
图17a-b是显示用核酸构建体转化的拟南芥植株的照片，该核酸构建体包括与萤光素酶编码序列可操作连接的、SEQ ID NO：131所示的核酸序列。图17a显示在正常光下的转基因植物。图17b是相同植物在黑暗中的超低光照片，说明萤光素酶在叶片组织中的特异表达。
图18a-b是显示用核酸构建体转化的拟南芥植株的照片，该核酸构建体包括与萤光素酶编码序列可操作连接的、SEQ ID NO：136所示的核酸序列。图18a显示在正常光下的转基因植物。图18b是相同植物在黑暗中的超低光照片，说明萤光素酶的非特异的组成型表达。
图19a-b是显示用核酸构建体转化的拟南芥幼苗的照片，该核酸构建体包括与萤光素酶编码序列可操作连接的、SEQ ID NO：156所示的核酸序列。图19a显示在正常光下的转基因植物。图19b是相同植物在黑暗中的超低光照片，说明萤光素酶在地上组织中的特异表达。
图20a-b是显示用核酸构建体转化的拟南芥成熟植株的照片，该核酸构建体包括与萤光素酶编码序列可操作连接的、SEQ ID NO：156所示的核酸序列。图20a显示在正常光下的转基因植物。图20b是相同植物在黑暗中的超低光照片，说明萤光素酶在地上组织中的特异表达。
图21a-b是显示用核酸构建体转化的拟南芥植株的种子的照片，该核酸构建体包括与萤光素酶编码序列可操作连接的、SEQ ID NO：161所示的核酸序列。图21a显示在正常光下的种子。图21b是相同植物在黑暗中的超低光照片，说明萤光素酶在种子组织中的特异表达。
图22a-b是显示用核酸构建体转化的拟南芥植株的照片，该核酸构建体包括与萤光素酶编码序列可操作连接的、SEQ ID NO：186所示的核酸序列。图22a显示在正常光下的转基因植物。图22b是相同植物在黑暗中的超低光照片，说明萤光素酶在柄和茎组织中的表达。
图23a-b是显示用核酸构建体转化的拟南芥植株的照片，该核酸构建体包括与萤光素酶编码序列可操作连接的、SEQ ID NO：191所示的核酸序列。图23a显示在正常光下的转基因植物。图23b是相同植物在黑暗中的超低光照片，说明萤光素酶在营养组织中的弱表达。
图24a-b是显示用核酸构建体转化的拟南芥植株的照片，该核酸构建体包括与萤光素酶编码序列可操作连接的、SEQ ID NO：201所示的核酸序列。图24a显示在正常光下的转基因植物。图24b是相同植物在黑暗中的超低光照片，说明萤光素酶在地上组织中的特异表达。
图25a-b是显示用核酸构建体转化的拟南芥植株的照片，该核酸构建体包括与萤光素酶编码序列可操作连接的、SEQ ID NO：176所示的核酸序列。图25a显示在正常光下的转基因植物。图25b是相同植物在黑暗中的超低光照片，说明萤光素酶在花组织中的特异表达。
图26a-b是显示用核酸构建体转化的转化拟南芥植株的照片，该核酸构建体包括各自与GUS编码序列可操作连接的部分DREs。图26a显示用核酸构建体转化的植物，该核酸构建体包括与GUS编码序列可操作连接的、SEQ ID NO：210所示的核酸序列。图26b显示用核酸构建体转化的植物的根尖，该核酸构建体包括与GUS编码序列可操作连接的、SEQ ID NO：213所示的核酸序列。
图27是DRE6669(SEQ ID NO：61，查询)和现有技术的序列(SEQ ID NO：214，目标物)之间的核酸序列比对，显示如下文实施例小节中所举例说明的，不同的5′序列对于组成型表达是很重要的。
优选实施方案的描述
本发明提供了能够调节可操作连接的异源多核苷酸表达的分离的多核苷酸，以及更具体地，能够促进基因以组成型的、诱导型的、组织特异的和/或发育阶段特异的方式表达的新核酸序列。本发明也提供了核酸构建体，以及携带本发明多核苷酸的转基因生物及其生产方法。
参考所附的说明可更好地理解本发明的原理和操作。
在详细解释本发明的至少一个实施方案前，应理解本发明不只限于将其应用于下列描述中所列出的或实施例部分中所说明的成分的构建和排列的细节。本发明能够实施其他的实施方案或以多种方式实践或进行。也应理解在此使用的措辞和术语是为了说明的目的而不应被认为是加以限制。
术语“多核苷酸”或短语“核酸序列”在此可互换地使用，并且是指脱氧核糖核苷酸(DNA)或核糖核苷酸(RNA)的聚合物。
短语“异源的多核苷酸”是指来源于异源生物的多核苷酸序列，或是指与相同生物的调控序列连接的多核苷酸序列，该调控序列通常不调节多核苷酸序列在生物中的表达。
PCT公开WO 02/07989描述了由本发明人为了揭示在例如植物的生物中的新调控序列而开发的独特方法。这个方法结合了分子和生物信息学技术，以用于位于基因组的非转录(非编码)区内的DNA调节元件(DREs)的高通量分离，并且所述DNA调节元件包括例如，启动子、增强子、抑制基因、沉默子、基因座控制区等。
利用这个方法，本发明人已经揭示了如在随后的实施例小节中说明的几个新的多核苷酸序列，其在植物中显示出调控活性。
因此，根据本发明的一个方面，提供了能够调节与其可操作连接的至少一个多核苷酸表达的分离的多核苷酸。如在随后的实施例小节中进一步描述的，这些分离的多核苷酸如SEQ ID NOS：1、6、11、16、21、26、31、36、41、46、56、61、66、71、76、81、86、91、96、101、106、111、116、121、126、131、136、141、146、151、156、161、166、171、176、181、186、191、196、201、202和203，或其片段(例如SEQ ID NOS：210和213)、变体或衍生物所示。
如果其能够发挥对与其连接的编码序列的调控作用，则编码核酸序列是与调控序列“可操作连接”的。优选地，调控序列位于编码核酸序列的ATG密码子上游的1-500bp，尽管认识到当相对于编码核酸序列位于其它地方时(例如内含子内)，调控序列也可发挥其作用。
如在随后的实施例小节所清楚说明的，本发明的分离多核苷酸能够调节与其可操作连接的编码核酸序列(例如萤光素酶)的表达(参见图1-25)。
本发明的分离多核苷酸长度范围为174至3,348核苷酸，并且包括能够识别和结合RNA聚合酶II和参与转录的其他蛋白(反式作用转录因子)的一个或多个序列区。
尽管在此所描述的大多数分离的多核苷酸包括一个启动子区域，但一些包括2个不同的启动子区，其各自位于相同基因组序列的不同链上。这种双向的DREs在随后的实施例小节中有进一步的描述(参见实施例，表3-17)。
如由随后的实施例小节进一步说明的，本发明的分离的多核苷酸显示出活性和组织特异性的范围。
例如，SEQ ID NOS：1、6、41、46、51、86、121、136、171、181和202或其片段、变体或衍生物所示的核酸序列，能够指导与其可操作连接的编码核酸序列以组成型方式进行转录，并且因此包括组成型启动子区域。
在另一个实例中，SEQ ID NOS：1、11、16、21、26、31、36、56、61、66、71、76、81、91、96、101、116、126、141、146、151、156、161、166、176、186、191、196、201和203或其片段(例如SEQ IDNOS：210和213)、变体或衍生物所示的核酸序列，能够指导与其可操作连接的编码核酸序列以诱导型方式转录，并且因此包括诱导型启动子区域。
在另一个实施例中，SEQ ID NOS：1、11、16、21、26、31、36、56、61、66、71、76、91、116、126、141、146、151、156、161、166、176、186、191、196、201和203或其片段(例如SEQ ID NOS：210和213)、变体或衍生物所示的核酸序列，能够指导与其可操作连接的编码核酸序列以组织特异的方式转录，并且因此包括组织特异的启动子区域。
在进一步的另一实施例中，SEQ ID NOS：81、96、101、106和131或其片段、变体或衍生物所示的核酸序列，能够指导与其可操作连接的编码核酸序列以发育阶段特异的方式进行转录，并且因此包括发育阶段特异的启动子区域。
优选地，使用本领域已知的方法修饰本发明的多核苷酸以在分子序列中产生变异，从而使得增强其促进活性，所述方法例如基于PCR的DNA修饰，或标准的DNA诱变技术，或通过化学合成修饰的多核苷酸。
因此，SEQ ID NOS：1、6、11、16、21、26、31、36、41、46、56、61、66、71、76、81、86、91、96、101、106、111、116、121、126、131、136、141、146、151、156、161、166、171、176、181、186、191、196、201、202和203所示的序列可以是截短或缺失的，而仍然保持指导可操作连接的DNA序列转录的能力(例如，SEQ ID NOS：210和213)。可通过本领域已知的标准技术，包括但不限于除去限制性内切酶片段或用核酶消化，系统地从分离的多核苷酸的5′和3′-末端除去序列来确定启动子区域的最小长度。因此，本发明公开的多肽序列的任何序列片段、部分或区域都可用作调控序列。可认识到修饰的序列(突变、截短等)可获得不同的转录特性，例如与非修饰的元件相比指导不同模式的基因表达(例如与SEQ ID NO：213相比的SEQ IDNO:61，参见随后的实施例小节)。
任选地，可修饰SEQ ID NOS：1、6、11、16、21、26、31、36、41、46、56、61、66、71、76、81、86、91、96、101、106、111、116、121、126、131、136、141、146、151、156、161、166、171、176、181、186、191、196、201、202和203所示的序列，例如用于在多种植物系统中进行表达。在另一个方法中，可通过许多方法设计或工程改造新的杂合启动子。许多启动子包含活化、增强或限定启动子强度和/或特异性的上游序列，例如由Atchison[Ann.Rev.Cell Biol.4:127(1988)]所描述的。例如，T-DNA基因包含限定转录起始的位点的“TATA”框和位于转录起始位点上游的其他上游元件，所述元件调节转录的水平[Gelvin In:Transgenic Plants(Kung，S.-D.和Us，R.，eds，San Diego:Academic Press，pp.49-87，(1988))。另一个嵌合的启动子组合了章鱼碱合酶(ocs)激活子与甘露氨酸合酶(mas)激活子加启动子的三聚体，并且报告了报告基因的表达增加[Min Ni等人，The Plant Journal 7:661(1995)]。本发明的多核苷酸序列的上游调控序列可用于构建这种嵌合或杂合的启动子。用于构建变体启动子的方法包括但不限于，组合不同启动子的控制元件或重复启动子的部分或区域(参见例如，美国专利号5,110,732和5,097,025)。本领域的技术人员熟悉用于构建、操作和分离大分子(例如，DNA分子，质粒等)，产生重组生物和筛选并分离基因的特定条件和方法，[参见例如Sambrook等人，Molecular Cloning:A Laboratory Manual，ColdSpring Harbor Press，(1989)；Mailga等人，Methods in PlantMolecular Biology，Cold Spring Harbor Press，(1995)；Birren等人，Genome Analysis:卷1，Analyzing DNA，(1997)；卷2，Detecting Genes，(1998)；卷3，Cloning Systems，(1999)；和卷4，Mapping Genomes，(1999)，Cold Spring Ha rbor，N.Y]。
可将本发明的多核苷酸、或其片段、变体或衍生物，整合到核酸构建体中，优选表达构建体(即，表达载体)中，可将其导入宿主细胞并在宿主细胞中复制。
因此，根据本发明的另一个方面，提供了包括至少一个本发明的多核苷酸、或其片段、变体或衍生物的核酸构建体。
优选地，本发明的核酸构建体包括至少一个可操作连接的异源多核苷酸。更优选地，至少一个可操作地连接的报告基因。
在此使用的短语“报告基因”是指编码可选择、可筛选或可检测的表型的基因。
可用于本发明的报告基因包括但不限于，编码萤光素酶的LUX或LUC、编码β-葡糖苷酸酶的GUS、编码绿色荧光蛋白的GFP、或抗生素或除草剂耐受性基因。在Wilmink和Dons，Plant Mol.Biol.Reprt.11:165-185(1993)中可找到合适标记的综述。
进一步优选地，本发明的核酸构建体包括编码所需要性状或表达产物的至少一个异源的多核苷酸。
可用于本发明的所需要性状可包括但不限于，与生物的形态学、生理学、生长和发育、产量、生产品质、营养增强、疾病或害虫抗性、或应激耐受性相关的任何表型。
备选地，异源的多核苷酸可编码任何天然存在或人造的重组蛋白，例如药物蛋白[例如，生长因子和抗体，Schillberg Naturwissenschaften.(2003)Apr；90(4):145-55]和食物添加剂。可认识到分子作业是生产多种重组蛋白的充分证明的方式，如在Ma Nat Rev Genet.2003 Oct；4(10):794-805；Twyman Trends Biotechnol.2003Dec；21(12):570-8中所详细描述的。
可用于本发明的表达产物可包括但不限于，药物多肽、工业化的酶、油类、染料、调料、生物燃料、或工业化的生物聚合物。
在双向DREs的情形中，本发明的核酸构建体可包括各自与本发明的分离的多核苷酸末端可操作连接的2个异源的多核苷酸，以使得2个异源的多核苷酸侧接本发明的分离的多核苷酸。
核酸构建体可以是例如质粒、杆粒、噬菌粒、粘粒、噬菌体、病毒或人工染色体。优选地，本发明的核酸构建体是质粒载体，更优选二元载体。
短语“二元载体”是指携带来自Ti质粒的修饰的T-区域的表达载体，使得其能够在大肠杆菌(E.coli)和土壤杆菌细胞中繁殖，并且通常包括在2个边界区域之间用于植物转化的报告基因。适于本发明的二元载体包括pBI2113、pBI121、pGA482、pGAH、pBIG、pBI101(Clonetech)、或其修饰，例如pVER1，其是修饰的pBI101质粒，其中由来自pGL3-Basic(Promega)的Luc II基因替代GUS基因。
可使用本发明的核酸构建体转化宿主细胞。因此，根据本发明的另一个方面，提供了用本发明的分离的多核苷酸转化的转基因的细胞、转基因的生物或转基因的植物。优选地用本发明的核酸构建体转化转基因的细胞、转基因的生物或转基因的植物。
如在此所使用的，术语“转基因的”或“转化的”可互换使用，是指其中已经转移入克隆的遗传物质的细胞或生物。
将核酸构建体导入细胞、生物或植物的方法是本领域已知的。因此，将核酸序列导入植物的合适方法包括但不限于，细菌感染、DNA的直接递送(例如，通过PEG-介导的转化、干燥/抑制-介导的DNA摄取、电穿孔、利用碳化硅纤维的搅拌、以及DNA涂覆的颗粒的加速，例如由Potrykus Ann.Rev.Plant Physiol.Plant Mol.Biol.42:205-225(1991)所描述的。
特异转化双子叶植物的方法主要使用根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)。例如，报告的转基因植物包括但不限于棉花(美国专利号5,004,863、5,159,135、5,518,908；和WO 97/43430)、大豆[美国专利号5,569,834、5,416,011；McCabe等人，Bio/Technology，6:923(1988)；和Christou等人，Plant Physiol.，87:671，(1988)]；芸苔属(Brassica)(美国专利号5,463,174)和花生[Cheng等人，PlantCell Rep.，15:653，(1996)]。
已经在单子叶植物的转化中报道了相似的方法。已经对于许多作物描述了利用这些方法的转化和植物再生，所述作物包括但不限于芦笋[石刁柏(Asparagus officinalis)；Bytebier等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，84：5345，(1987)；大麦(Hordeum vulgarae；Wan和Lemaux，Plant Physiol.，104：37，(1994))；玉米[Zea mays；Rhodes，C.A.，等人，Science，240：204，(1988)；Gordon-Kamm，等人，Plant Cell，2：603，(1990)；Fromm，等人，Bio/Technology，8：833，(1990)；Koziel，等人，Bio/Technology，11：194，(1993)]；燕麦[Avena sativa；Somers，等人，Bio/Technology，10：1589，(1992)]；鸭茅[Dactylis glomerata；Horn，等人，Plant Cell Rep.，7：469，(1988)；水稻[Oryza sativa，包括籼稻和粳稻，Toriyama，等人，Bio/Technology，6:10，(1988)；Zhang，等人，Plant Cell Rep.，7：379，(1988)；Luo和Wu，Plant Mol.Biol.Rep.，6：165，(1988)；Zhang和Wu，Theor.Appl.Genet.，76：835，(1988)；Christou，等人，Bio/Technology，9：957，(1991)；高粱[Sorghum bicolor；Casas，A.M.，等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，90：11212，(1993)]；甘蔗[甘蔗属(Saccharum)物种；Bower和Birch，Plant J.，2：409，(1992)]；苇状羊茅[Festuca arundinacea；Wang，Z..Y.等人，Bio/Technology，10：691，(1992)]；草坪草[匍匐翦股颖(Agrostispalustris)；Zhong等人，Plant Cell Rep.，13：1，(1993)]；小麦[普通小麦(Triticum aestivum)；Vasil等人，Bio/Technology，10：667，(1992)；Weeks T.，等人，Plant Physiol.，102：1077，(1993)；Becker，等人，Plant，J.5：299，(1994)]和苜蓿[Masoud，S.A.等人，Transgen.Res.，5:313，(1996)]。对于本领域技术人员显而易见的是可使用许多转化方法并且可对其进行修饰以用于生产来自大量目标靶作物的稳定的转基因植物。
可使用本领域已知的用于分析转化的植物的方法来分析转化植物的由本发明多核苷酸赋予的表达特性。使用多种方法来评估基因表达并测定导入的基因是否如所期望的进行整合、适当地发挥作用并且遗传下去。优选地，可通过测定可操作连接该启动子的基因的表达水平和表达特性来评估启动子。可利用报告基因通过瞬时的测定法确定启动子功能的初级评估，但可从稳定植物的分析测定更明确的启动子评估。用于植物分析的方法包括但不限于DNA印迹或RNA印迹、基于PCR的方法、生物化学分析、表型筛选法、田间评估和免疫诊断测定。
优选地，利用如下列实施例小节所描述的方法，根据报告基因的表型表达来评估本发明的分离的多核苷酸促进植物中基因表达的能力。简而言之，通过定量分拣某些表达特性，例如表达的强度、特异性、发育阶段和定位来测定和一致地划分萤光素酶在转基因拟南芥(Arabidopsis)中的表达。因此，以组成型方式表达的萤光素酶基因可表明分离的多核苷酸的推定的组成型启动子活性。同样，以诱导型、组织特异性或发育阶段特异性方式表达的萤光素酶基因，分别表明了推定的诱导型、组织特异性或阶段特异性的启动子活性。
因此，本发明提供了显示广泛范围的启动子功能模式的多个分离的多核苷酸序列。这些多核苷酸可用于产生核酸构建体，例如适于转化生物的表达载体。这种核酸构建体可用于促进所需要性状或表达产物在例如植物的转基因生物中，以组成型的、诱导型的、组织特异的或发育阶段特异的方式表达。
经下列不是旨在进行限制的实施例的检验后，本发明附加的目的、优点和新特性对于本领域的普通技术人员来说是显而易见的。另外，如在上文所描绘的和如下列权利要求书部分所请求保护的本发明多种实施方案和方面的每一个都在下列实施例中得到了实验支持。
具体实施方式
实施例
现在参考下列实施例，其与上述说明书一起，以非限制的方式说明本发明。
一般，在此使用的命名法和在本发明中使用的实验方法包括分子、生物化学、微生物学和重组DNA技术。这种技术在文献中有充分的解释。参见例如，“Molecular Cloning:A laboratory Manual”Sambrook等人，(1989)；“Current Protocols in Molecular Biology”卷I-III Ausubel，R.M.ed.(1994)；Ausubel等人，“Current Protocolsin Molecular Biology”，John Wiley andSons，Baltimore，Maryland(1989)；Perbal，“A Practical Guide to Molecular Cloning”，JohnWiley & Sons，New York(1988)；Watson等人，“Recombinant DNA”，Scientific American Books，New York；Birren等人(eds)“GenomeAnalysis:A Laboratory Manual Series”，Vols.1-4，Cold SpringHarbor Laboratory Press，New York(1998)；如美国专利号4,666,828；4,683,202；4,801,531；5,192,659和5,272,057中所阐明的方法学；“Cell Biology:A Laboratory Handbook”，卷I-III Cellis，J.E.，ed.(1994)；“Current Protocols in Immunology”卷I-III Coligan J.E.，ed.(1994)；Stites等人(eds)，“Basic and Clinical Immunology”(第8版)，Appleton & Lange，Norwalk，CT(1994)；Mishell和Shiigi(eds)，“Selected Methods in Cellular Immunology”，W.H.Freemanand Co.，New York(1980)；可利用的免疫测定在下列专利和科学文献中有充分描述，参见例如，美国专利号3,791,932；3,839,153；3,850,752；3,850,578；3,853,987；3,867,517；3,879,262；3,901,654；3,935,074；3,984,533；3,996,345；4,034,074；4,098,876；4,879,219；5,011,771和5,281,521；“Oligonucleotide Synthesis”Gait，M.J.，ed.(1984)；“Nucleic Acid Hybridization”Hames，B.D.，和Higgins S.J.，eds.(1985)；“Transcription and Translation”Hames，B.D.，和HigginsS.J.，eds.(1984)；“Animal Cell Culture”Freshney，R.I.，ed.(1986)；“Immobilized Cells and Enzymes”IRL Press，(1986)；“APractical Guide to Molecular Cloning”Perbal，B.，(1984)和“Methods in Enzymology”Vol.1-317，Academic Press；“PCRProtocols:A Guide To Methods And Applications”，Academic Press，San Diego，CA(1990)；Marshak等人，“Strategies for ProteinPurification and Characterization-A Laboratory Course Manual”CSHL Press(1996)；所有这些引入作为参考，如同在此处完全阐明一样。在本文件中自始至终提供其它一般的参考文献。认为其中的方法是本领域公知的并且为方便读者进行提供。其中包含的全部信息在此引入作为参考。
DNA调节元件(DRES)的鉴定、分离和表征
通过由生物信息学鉴定的来自拟南芥基因组DNA的DNA片段驱动的萤光素酶表达来测定来鉴定新的DREs。阳性DREs在用来转化拟南芥植物的载体中融合在报告基因上游。表征了由这些DREs驱动的报告基因表达。
试验材料和方法
DREs的分离：为了能够大规模生产DRE转化的植物，使用在此称为“一个试管(one-tube)”的方法，即，使用单个反应管克隆DNA调节元件(DREs)的高通量方法。因此，利用DNAeasy Plant Mini试剂盒(Qiagen，德国)从拟南芥Col1的叶片提取基因组DNA(gDNA)。使用
Figure A200810165721D0021105714QIETU
软件设计用于PCR扩增DREs的引物，将其修饰为包含DRE序列所缺少的限制酶切位点，以用于将PCR产物插入pVER1二元质粒，其是pBI101(clontech)修饰的质粒，其中GUS报告基因由来自pGL3-Basic(promega)的LucII基因替代。简而言之，利用平末端的限制性内切酶Ecl136II和SmaI从pBI101中切下GUS基因。用SacI和XbaI切割pGL-Basic质粒[通过消化除去HindIII和BamHI位点后，利用克列诺(klenow)片段(Roche)补平，并利用T4 DNA连接酶(Roche)自我连接质粒]，并将LucII基因插入片段插入用相同酶消化的pBluescript。将新的质粒用SmaI消化，从而切掉平末端的LucII基因。将LucII基因插入pBI质粒代替GUS基因。为了除去pBI101上调节卡那霉素抗性基因的Nos-启动子所有可能的通读，在Nos终止子和LucII基因之间加入多腺苷酸化信号。利用有校正功能的Taq聚合酶PFU(Promega)以及利用引物5′-aggtacttggagcggccgca-3′和5′-tagagaaatgttctggcacctg-3′从pGL3-Basic扩增-多腺苷酸化信号。在利用克列诺片段(Roche)补平突出的5′末端后，将产物插入pVerI上的HindIII位点。
利用Taq Expand Long Template PCR试剂盒(Roche)，根据制造商的说明书进行聚合酶链反应分析，使用的热循环为：92℃/2分钟→10×[94℃/10分钟→55℃/30秒→68℃/5分钟]→18×[94℃/10分钟→55℃/30秒→68℃/5分钟(每个循环+20秒)]→68℃/7分钟。根据表1中描述的方法用限制性内切核酸酶二重消化PCR产物。
表1：DRE二重消化方案
 
酶组合 第一次消化 缓冲液(Roche) 消化时间(分钟) 热灭活条件   第二次消化   缓冲液 消化时间(分钟) 热灭活条件  
HindIII，SalI HindIII M 90 20分钟，70℃     SalI M+NaCl+Tris 60 20分钟，70℃    
HindIII，BamHI     HindIII B 30 No BamHI B 60 20分钟，70℃    
SalI，BamHI BamHI M 60 20分钟，80℃     SalI M+NaCl+Tris  60 20分钟，70℃    
HindIII，EcoRV     HindIII B 30 No EcoRV B 60 20分钟，70℃    
SalI，ScaI SalI，ScaI H 60 20分钟，80℃    
BamHI，SmaI SmaI A 60(30℃) 20分钟，70℃     BamHI A 60 20分钟，80℃    
SalI，PvuII PvuII M 60 20分钟，80℃     SalI M+NaCl+Tris 60 20分钟，
HindIII，PvuII     HindIII M 30 无 PvuII M 60 20分钟，80℃    
HindIII，StuI HindIII，StuI      B 90 20分钟，80℃    
BamHI，StuI StuI B 30 无 BamHI B 60 20分钟，80℃    
萤光素酶报告基因表达中DREs的克隆；将PCR扩增的DREs克隆到来源于二元载体pBI101(Clontech)的萤光素酶报告基因表达载体pVER1中，使用与从载体切除克隆的DREs所使用的限制性内切核酸酶相同的酶进行二重消化，根据制造商的说明书使用PCR纯化试剂盒(Qiagen，德国)进行纯化，用碱性磷酸酶(Roche)进行处理，以及使用PCR纯化试剂盒(Qiagen，德国)进行再纯化。通过向DRE消化物中加入如下成分来进行DRE向载体pVER1的插入：500ng二重消化的pVer1质粒，1μl T4DNA连接酶(40U/μl；Roche)和6μl的T4缓冲液(Roche)。在4℃过夜温育连接混合物后，利用1-2μl的连接反应混合物通过用MicroPulser电穿孔仪(Biorad)，0.2cm杯(Biorad)和EC-2电穿孔程序(Biorad)通过电穿孔转化根癌土壤杆菌GV303的感受态细胞。在LB上于28℃使土壤杆菌细胞生长3小时，并且铺平板在补充有抗生素庆大霉素50mg/L(Sigma)和卡那霉素50mg/L(Sigma)的LB-琼脂平板上。然后在28℃温育平板48小时。使用载体特异的、分别侧接插入片段的上游和下游引物5′-AGGTACTTGGAGCGGCCGCA-3′和5′-CGAACACCACGGTAGGCTG-3′，通过菌落DNA的PCR分析鉴定克隆的DREs，且热循环为：92℃/3分钟→31×[94℃/30秒→54℃/30秒→72℃/X分钟(X＝最长PCR预期产物的长度(kb))]→72℃/10分钟。随后将阳性土壤杆菌菌落用于拟南芥植物的转化。
植物转化和培养：利用由Clough SJ和Bent AF[The Plant J.16：735-743(1998)]和由Desfeux等人[Plant Physiology 123:895-904(2000)]描述的具有较少修饰的Floral Dip方法转化哥伦比亚拟南芥(T0植物)。简而言之，将T0植物播种在装满基于湿泥煤的生长混合物的250ml罐中。用铝箔和塑料圆盖覆盖罐子，在4℃保持3-4天，然后打开并于18-24℃在16/8小时的光/黑暗周期下培养在生长室中。在开花前6天准备T0植物用于转化。
在补充有卡那霉素(50mg/L)和庆大霉素(50mg/L)的LB培养基中培养携带植物DREs的土壤杆菌的单个菌落。在剧烈摇动下在28℃培养该培养物48小时，并在4000rpm离心5分钟。将包括土壤杆菌细胞的沉淀重悬在包含溶于重蒸馏水中的半强度的(2.15g/L)Murashig-Skoog(Duchefa)；0.044μM苄氨基嘌呤(Sigma)；112μg/L B5Gambourg维生素(Sigma)；5％蔗糖；和0.2ml/L Silwet L-77(OSI Specialists，CT)，pH为5.7的转化培养基中。
通过将各个植物颠倒放入土壤杆菌悬浮液中，以使得地上的植物组织浸没3-5秒，从而实现T0植物的转化。将各个接种的T0植物立即置于塑料盘中，然后用透明塑胶圆盖覆盖以保持湿度并且在室温下在黑暗中保持18小时以以便于感染和转化。然后揭开转化的(转基因的)植物并且转入温室用于恢复和成熟。使转基因的T0植物在温室中生长3-5周直到长角果为褐色且干燥的，然后从植物收获种子并于室温保存直到播种。
产生具有DREs的T1和T2转基因植物：通过浸泡在70％乙醇中1分钟，然后浸入5％次氯酸钠和0.05％triton中5分钟使收集自转基因T0植物的种子表面灭菌。在无菌蒸馏水中彻底洗涤表面灭菌的种子，然后将其置于含有半强度的Murashig-Skoog(Duchefa)，2％蔗糖，0.8％植物琼脂，50mM卡那霉素，和200mM羧苄青霉素(carbenicylin)(Duchefa)的培养平板上。在4℃培养该培养平板48小时然后转入生长室于25℃另外培养一周。将有活力的T1拟南芥植株转入新鲜的培养平板另外培养一周。培养后，从培养平板移出T1植株并种植在包含于250ml罐中的生长混合物中。容许转基因植物生长在温室中至成熟。培养从T1植株收获的种子并在用于培养和生长T1植株的相同条件下生长成熟为T2植株。
评估在转基因植物中DRE基因促进的活性：根据荧光素酶报告基因的表达确定DREs促进植物中基因表达的能力。因此，利用Messinner R.[Plant.J.22:265(2000)]描述的方法对在2-3片真叶发育阶段的转基因拟南芥小植株进行发光测定。利用超低光探测照相机(Princeton Instruments Inc.，美国)在暗室中进行萤光素酶的成像。使用Messinner R.[Plant.J.22:265(2000)]描述的方法。
对转基因植物中的启动子活性进行评分：利用能够一致评估大量转基因植物的数量值，基于转基因植物中萤光素酶的表达如下所述来表征促进基因表达的DREs：
对表达的分布和强度进行评分：转基因植物中报告基因表达的分布以3变量函数表示如下：(i)植物ID(X轴)，(ii)植物器官(Y轴)，和(iii)发育阶段(Z轴)。通过下文称为fx，y，z(启动子)的分布函数值(DF)测量与任何这3个变量相关的表达强度。DF接受0至5范围的值，分别表示没有表达和最高表达强度。
对表达的特异性进行评分：通过加和2个独立的加数：(a)如下列表2中所描述的和进一步称为二元函数B()的零值/非零值比率；以及(b)仅仅非零值的方差来计算报告基因在转基因植物中表达的特异性。
表2
Figure A200810165721D00241
根据下列等式计算器官特异性表达值(SpOr)：
SpOr(启动子)＝Vary(Avx，z(fx，y，z(启动子))|y>0)+B(Avx，z(fx，y，z(启动子)))
其中Var是方差，Av是平均值，而B是二元函数。
根据下列等式计算发育阶段特异性表达值(SpDs)：
SpDs(启动子)＝Varz(Avx，y(fx，y，z(启动子))|z>0)+B(Avx，y(fx，y，z(启动子)))
其中Var是方差，Av是平均值，而B是二元函数。
对位置效应进行评分：类似于如上所述的二元因素分析方法，位置值也分类为零或非零值。因此，通过局部的位置效应值(LoPoEf)测量报告基因在给定发育阶段的给定器官中的表达。位置效应值(PoEf)是如下以3个步骤计算的所有局部位置效应的平均值：
1)
Figure A200810165721D00251
2)
Figure A200810165721D00252
Figure A200810165721D00253
3)PoEf(启动子)＝Av(LoPoEf(启动子，Y，Z)).
对表达水平进行评分：根据下列等式，计算各个DRE启动子×植物器官×植物发育阶段组合的平均表达水平值(ExLe)和ExLe方差(VrExLe)：
ExLe(启动子，器官，发育阶段)＝Avx(fx，y，z(启动子))
VrExLe(启动子，器官，发育阶段)＝varx(fx，y，z(启动子))。
对评估可信度进行评分：综合的可信度值(Grel)是用来评估特异的DRE启动子活性的单独植物的数目。因此，G Rel(启动子)＝计数x(fx，y，z(启动子))。发育阶段的可信度值(Rel(DS))是用来评估在任何给定的植物发育阶段中特异的DRE启动子活性的单独植物的数目。Rel(启动子，发育阶段)＝计数x\z＝发育阶段(fx，y，z(启动子))。
从vDREs 4209和6669产生部分的片段：提取来源于拟南芥varCol0的基因组DNA，并利用与vDRE 4209(SEQ ID NO:36)中的序列互补的寡核苷酸引物[有义引物5′-GTTGGTTCGTCGACTAGAGAAGGT-3′(SEQ ID NO:208)，反义引物5′-TTGGATCCGGGAGGCAATGATGCTTTAG-3′(SEQ IDNO:209)]和vDRE 6669(SEQ ID NO:61)内的序列互补的寡核苷酸引物[有义引物5′TTGTAAGCTTGCAGGGATACGGATGGGTAG-3′(SEQ ID NO:211)，反义引物5′-AAATATTGGATCCTTTGGGGTTCTC-3′(SEQ ID NO:212)]进行PCR扩增。
上述PCR扩增分别产生包含原始vDRE 4209(SEQ ID NO:210)的76-548位bp的470bp片段和包含原始vDRE 6669(SEQ ID NO：213)的748-2316位bp的1569bp片段。
用HindIII和BamHI消化PCR产物并且连接到二元载体pBI121(Clontech，保藏号：AF485783)的GUS基因上游中，分别产生质粒p4209short-GUS，和p6669short-GUS。用产生的二元构建体(p4209short-GUS和p6669short-GUS)转化拟南芥植株(var col0)，利用标准的GUS染色方法[Jefferson RA，Kavanagh TA，Bevan MW.1987.GUS fusions:beta-glucuronidase as a sensitive and versatilegene fusion marker in higher plants.EMBO J.6(13):3901-7]分析10个单独的T1转化植物的GUS活性。根据如上所述的方法进行拟南芥植物的基因组DNA提取、PCR扩增、DNA限制酶切、连接和转化。
实验结果
DREs的表征：
在随后的表3-17中描述了本发明的分离的DREs的多种特性。从表格提供的数据可明显看出，本发明的DREs显示大范围的基因促进活性，包括组成型的、诱导型的、组织特异的和阶段特异的活性。
表3
 
DRE编号1 1345 1495 2176
聚簇编号2 Z18125 Z17428 ATBIBBI
聚簇位置2 上游 上游 上游
DRE调节方向3 双向 单向 单向
DRE长度(bp) 1611 901 2192
DRE序列 SEQ ID NO：1 SEQ ID NO：6 SEQ ID NO：11
内部正向引物4 SEQ ID NO：2 SEQ ID NO：7 SEQ ID NO：12
外部正向引物4 SEQ ID NO：3 SEQ ID NO：8 SEQ ID NO：13
内部反向引物4 SEQ ID NO：4 SEQ ID NO：9 SEQ ID NO：14
外部反向引物4 SEQ ID NO：5 SEQ ID NO：10 SEQ ID NO：15
位置效应值5 0.37 0.21 8.33
发育阶段特异性值5 1.09 0.32 0.62
器官特异性值5 1.56 0.38 2.60
转基因植物数 11 10 7
幼根分数(No.，Ave.，Var)6 10，12，3.36 6，2.333，1.555 4，0，0
成熟根分数(No.，Ave.，Var)6 7，1.571，3.387 7，3，2.285 5，0，0
幼小地上组织(No.，Ave.，Var)6 10，3.3，2.21 6，4.16，0.13 4，0，0
成熟地上组织(No.，Ave.，Var)6 7，3，2 7，3.28，1.06 5，0，0
长角果/种子(No.，Ave.，Var)6 3，4.33，0.88 3，2，2 3，1.67，5.56
花(No.，Ave.，Var)6 7，1.42，3.10 7，3.14，4.40 5，4.2，2.56
说明 组成型的。在种子中强。 组成型的。 对花组织特异。在花芽中强。在开放的花中较低表达
1由本发明者指定的DRE的ID编号。
2由本发明者指定的对于DRE上游或下游的拟南芥基因(重叠群)聚簇的内部参考。
3单向意味着只有DRE的有义链能够调节基因表达；
双向意味着DRE的有义链和反义链都能调节基因表达。
4用于从拟南芥基因组DNA分离DRE的PCR引物。
5如上文材料和方法部分所描述的，计算位置效应值(PoEf)、发育阶段特异性值(SpDs)和器官特异性值(SpOr)。
6No.＝数目；Ave.＝平均值；Var.＝方差。
表4
 
DRE编号1 2524 3560 3583
聚簇编号2 Z17778 Z17937 av558751
聚簇位置2 上游 上游 上游
DRE调节方向3 双向 双向 双向
DRE长度(bp) 1975 3126 2501
DRE序列 SEQ ID NO:16 SEQ ID NO:21 SEQ ID NO:26
内部正向引物4 SEQ ID NO:17 SEQ ID NO:22 SEQ ID NO:27
外部正向引物4 SEQ ID NO:18 SEQ ID NO:23 SEQ ID NO:28
内部反向引物4 SEQ ID NO:19 SEQ ID NO:24 SEQ ID NO:29
外部反向引物4 SEQ ID NO:20 SEQ ID NO:25 SEQ ID NO:30
位置效应值5 0.15 0.3 5.555
发育阶段特异性值5 0.69 0.77 1.5
器官特异性值5 1.16 1.14 2
转基因植物数 8 11 6
幼根分数(No.，Ave.，Var)6 5，0，0 6，3.5，1.92 5，0，0
成熟根分数(No.，Ave.，Var)6 5.0.0 7，3.71，1.63 4，0，0
幼小地上组织(No.，Ave.，Var)6 5，0.4，0.24 6，1.83，2.14 5，0，0
成熟地上组织(No.，Ave.，Var)6 5，2，0.8 7，1.43，1.10 4，0.25，0.19
长角果/种子(No.，Ave.，Var)6 3，0，0 3，0.67，0.89 3，0，0
花(No.，Ave.，Var)6 5，0.4，0.64 7，1.86，1.55 4，0，0
说明 对地上组织特异。 对根组织特异。强表达，主要在根分生组织中。在地上组织中弱表达。 在地上组织中弱。
1由本发明者指定的DRE的ID编号。
2由本发明者指定的对于DRE上游或下游的拟南芥基因(重叠群)聚簇的内部参考。
3单向意味着只有DRE的有义链能够调节基因表达；
双向意味着DRE的有义链和反义链都能调节基因表达。
4用于从拟南芥基因组DNA分离DRE的PCR引物。
5如上文材料和方法部分所描述的，计算位置效应值(PoEf)、发育阶段特异性值(SpDs)和器官特异性值(SpOr)。
6No.＝数目；Ave.＝平均值；Var.＝方差。
表5
 
DRE编号1 3714 4209 5095
聚簇编号2 Z25961 Z29176 A1996150
聚簇位置2 上游 下游 下游
DRE调节方向3 单向 双向 双向
DRE长度(bp) 513 1022 1056
DRE序列 SEQ ID NO:31 SEQ ID NO:36 SEQ ID NO:41
内部正向引物4 SEQ ID NO:32 SEQ ID NO:37 SEQ ID NO:42
外部正向引物4 SEQ ID NO:33 SEQ ID NO:38 SEQ ID NO:43
内部反向引物4 SEQ ID NO:34 SEQ ID NO:39 SEQ ID NO:44
外部反向引物4 SEQ ID NO:35 SEQ ID NO:40 SEQ ID NO:45
位置效应值5 0.3625 0.40 0.6
发育阶段特异性值5 0.11241 0.57 0
器官特异性值5 0.377 0.40 0.85
转基因植物数 11 18 3
幼根分数(No.，Ave.，Var)6 9，0.611，0.987 14，3.46，2.87 2，0.5，0.25
成熟根分数(No.，Ave.，Var)6 3，0，0 9，2.11，3.65 2，1，1
幼小地上组织(No.，Ave.，Var)6 9，2.38，1.20 14，2.89，2.36 2，1.5，1.25
成熟地上组织(No.，Ave.，Var)6 3，1，2 9，2.44，1.80 2，2，0
长角果/种子(No.，Ave.，Var)6 3，1.66，0.22 3，1.33，1.56 无
花(No.，Ave.，Var)6 3，1.33，3.55 9，2，3.78 2，0，0
说明 在地上组织中弱。 在根，主要在根尖中及花牙中强。在叶脉中较低表达。在种子中非常低表达。 组成型的，弱。
1由本发明者指定的DRE的ID编号。
2由本发明者指定的对于DRE上游或下游的拟南芥基因(重叠群)聚簇的内部参考。
3单向意味着只有DRE的有义链能够调节基因表达；
双向意味着DRE的有义链和反义链都能调节基因表达。
4用于从拟南芥基因组DNA分离DRE的PCR引物。
5如上文材料和方法部分所描述的，计算位置效应值(PoEf)、发育阶段特异性值(SpDs)和器官特异性值(SpOr)。
6No.＝数目；Ave.＝平均值；Var.＝方差。
表6
 
DRE编号1 5311 5532 5587
聚簇编号2 ATHCOL2A ATASCO Z26363
聚簇位置2 上游 上游 上游
DRE调节方向3 双向 单向 单向
DRE长度(bp) 435 3348 1331
DRE序列 SEQ ID NO:46 SEQ ID NO:51 SEQ ID NO:56
内部正向引物4 SEQ ID NO:47 SEQ ID NO:52 SEQ ID NO:57
外部正向引物4 SEQ ID NO：(无) SEQ ID NO:53 SEQ ID NO:58
内部反向引物4 SEQ ID NO:49 SEQ ID NO:54 SEQ ID NO:59
外部反向引物4 SEQ ID NO：(无) SEQ ID NO:55 SEQ ID NO:60
位置效应值5 0.36 0.25 8.33
发育阶段特异性值5 1.15 1.30932 1.5
器官特异性值5 0.332 1.246 2
转基因植物数 8 6 4
幼根分数(No.，Ave.，Var)6 7，0.36，0.48 5，2.2，1.36 4，0，0
成熟根分数(No.，Ave.，Var)6 4，0.5，0.75 4，4.25，0.187 3，0，0
幼小地上组织(No.，Ave.，Var)6 7，1.57，1.74 5，3.6，1.84 4，0，0
成熟地上组织(No.，Ave.，Var)6 4，1.5，2.25 4，3.5，0.25 3，0，0
长角果/种子(No.，Ave.，Var)6 无 3，0.67，0.22 3，1.33，3.55
花(No.，Ave.，Var)6 4，025，0.18 4，2、4.5 3，0，0
说明 组成型的，弱。 组成型的，主要在营养组织中 长角果特异性的。高位置效应。
1由本发明者指定的DRE的ID编号。
2由本发明者指定的对于DRE上游或下游的拟南芥基因(重叠群)聚簇的内部参考。
3单向意味着只有DRE的有义链能够调节基因表达；
双向意味着DRE的有义链和反义链都能调节基因表达。
4用于从拟南芥基因组DNA分离DRE的PCR引物。
5如上文材料和方法部分所描述的，计算位置效应值(PoEf)、发育阶段特异性值(SpDs)和器官特异性值(SpOr)。
6No.＝数目；Ave.＝平均值；Var.＝方差。
表7
 
DRE编号1 6669 6762 7357
聚簇编号2 Z26440 Z17588 F13952
聚簇位置2 上游 上游 上游
DRE调节方向3 单向 双向 单向
DRB长度(bp) 2316 379 979
DRE序列 SEQ ID NO:61 SEQ I DNO:66 SEQ ID NO:71
内部正向引物4 SEQ ID NO:62 SEQ ID NO:67 SEQ ID NO:72
外部正向引物4 SEQ ID NO:63 SEQ ID NO:68 SEQ ID NO:73
内部反向引物4 SEQ ID NO:64 SEQ ID NO:69 SEQ ID NO:74
外部反向引物4 SEQ ID NO:65 SEQ I DNO:70 SEQ ID NO:75
位置效应值5 0.28 9.72 0.32
发育阶段特异性值5 1.18 0.16 0.6
器官特异性值5 1.32 1.42 0.64
转基因植物数 4 11 7
幼根分数(No.，Ave.，Var)6 3，2.67，0.22 8，1.25，4.69 6，0.5，0.58
成熟根分数(No.，Ave.，Var)6 4，4.75，0.19 9，0.33，0.89 5，0，0
幼小地上组织(No.，Ave.，Var)6 3，3.67，3.56 8，4.19，0.87 6，0.43，0.47
成熟地上组织(No.，Ave.，Var)6 4，1，3 9，3.61，1.10 5，0.8，0.16
长角果/种子(No.，Ave.，Var)6 4，0.75，0.69 3，3.33，1.56 3，0，0
花(No.，Ave.，Var)6 4，3，4.5 9，3.11，2.57 5，1.2，1.36
说明 对幼小和分生组织特异。 在地上组织中强。 在地上组织中弱。
1由本发明者指定的DRE的ID编号。
2由本发明者指定的对于DRE上游或下游的拟南芥基因(重叠群)聚簇的内部参考。
3单向意味着只有DRE的有义链能够调节基因表达；
双向意味着DRE的有义链和反义链都能调节基因表达。
4用于从拟南芥基因组DNA分离DRE的PCR引物。
5如上文材料和方法部分所描述的，计算位置效应值(PoEf)、发育阶段特异性值(SpDs)和器官特异性值(SpOr)。
6No.＝数目；Ave.＝平均值；Var.＝方差。
表8
 
DRE编号1 7617 8463 9136
聚簇编号2 Z17636 Z26728 F15462
聚簇位置2 上游 下游 下游
DRE调节方向3 双向 单向 单向
DRE长度(bp) 665 2834 486
DRE序列 SEQ ID NO:76 SEQ ID NO:81 SEQ ID NO:86
内部正向引物4 SEQ ID NO:77 SEQ ID NO:82 SEQ ID NO:87
外部正向引物4 SEQ ID NO:78 SEQ ID NO:83 SEQ ID NO:88
内部反向引物4 SEQ ID NO:79 SEQ ID NO:84 SEQ ID NO:89
外部反向引物4 SEQ ID NO:80 SEQ ID NO:85 SEQ ID NO:90
位置效应值5 0.42 0.16 0.48
发育阶段特异性值5 0.16 0.68 0.60
器官特异性值5 0.41 2.02 0.53
转基因植物数 3 12 13
幼根分数(No.，Ave.，Var)6 3，0，0 6，0，0 9，0.778，2.617
成熟根分数(No.，Ave.，Var)6 3，0，0 7，1.14，3.55 11，0.73，1.107
幼小地上组织(No.，Ave.，Var)6 3，0.17，5.56 6，3.33，3.32 9，0.778，0.84
成熟地上组织(No.，Ave.，Var)6 3，0.33，0.22 7，2，2.57 11，1.18，2.51
长角果/种子(No.，Ave.，Var)6 2，1，1 4，0，0 3，0，0
花(No.，Ave.，Var)6 3，0.33，0.22 7，3.57，3.96 11，0.55，0.98
说明 在地上组织中非常弱。 在幼苗的地上组织中强。在成熟植物的花组织中强。 组成型的，弱。
1由本发明者指定的DRE的ID编号。
2由本发明者指定的对于DRE上游或下游的拟南芥基因(重叠群)聚簇的内部参考。
3单向意味着只有DRE的有义链能够调节基因表达；
双向意味着DRE的有义链和反义链都能调节基因表达。
4用于从拟南芥基因组DNA分离DRE的PCR引物。
5如上文材料和方法部分所描述的，计算位置效应值(PoEf)、发育阶段特异性值(SpDs)和器官特异性值(SpOr)。
6No.＝数目；Ave.＝平均值；Va r.＝方差。
表9
 
DRE编号1 10826 12582 13257
聚簇编号2 Z30896 Z33953 Z17541
聚簇位置2 上游 下游 上游
DRE调节方向3 双向 单向 双向
DRE长度(bp) 1840 1665 807
DRE序列 SEQ ID NO:91 SEQ ID NO:96 SEQ ID NO:101
内部正向引物4 SEQ ID NO:92 SEQ ID NO:97 SEQ ID NO:102
外部正向引物4 SEQ ID NO:93 SEQ ID NO:98 SEQ ID NO:103
内部反向引物4 SEQ ID NO:94 SEQ ID NO:99 SEQ ID NO:104
外部反向引物4 SEQ ID NO:95 SEQ ID NO:100 SEQ ID NO:105
位置效应值5 0.27 0.19 0
发育阶段特异性值5 0.50 0.32 1.5
器官特异性值5 8.19 1.38 1.14
转基因植物数 5 20 2
幼根分数(No.，Ave.，Var)6 3，1.67，2.89 18，0.56，1.36 2，0，0
成熟根分数(No.，Ave.，Var)6 4，3.38，4.17 10，0.5，1.05 2，0，0
幼小地上组织(No.，Ave.，Var)6 3，2，2.67 18，2.39，3.90 2，0，0
成熟地上组织(No.，Ave.，Var)6 4，3.12，1.55 10，3.2，0.36 2，2.5，0.25
长角果/种子(No.，Ave.，Var)6 无 3，1，0 2，0，0
花(No.，Ave.Var)6 4，3.25，3.06 10，4.4，1.84 2，2，1
说明 在根和花组织中强。 在幼苗的地上组织中强。在成熟植物中较低表达。 对成熟植物的地上组织特异。
1由本发明者指定的DRE的ID编号。
2由本发明者指定的对于DRE上游或下游的拟南芥基因(重叠群)聚簇的内部参考。
3单向意味着只有DRE的有义链能够调节基因表达；
双向意味着DRE的有义链和反义链都能调节基因表达。
4用于从拟南芥基因组DNA分离DRE的PCR引物。
5如上文材料和方法部分所描述的，计算位置效应值(PoEf)、发育阶段特异性值(SpDs)和器官特异性值(SpOr)。
6No.＝数目；Ave.＝平均值；Var.＝方差。
表10
 
DRE编号1 13277 15980 16665
聚簇编号2 Z18392 BE522497 T04806
聚簇位置2 上游 下游 下游
DRE调节方向3 双向 单向 双向
DRE长度(bp) 3297 2183 1358
DRE序列 SEQ ID NO:106 SEQ ID NO:111 SEQ ID NO:116
内部正向引物4 SEQ ID NO:107 SEQ ID NO:112 SEQ ID NO:117
外部正向引物4 SEQ ID NO:108 SEQ ID NO:113 SEQ ID NO:118
内部反向引物4 SEQ ID NO:109 SEQ ID NO:114 SEQ ID NO:119
外部反向引物4 SEQ ID NO:110 SEQ ID NO:115 SEQ ID NO:120
位置效应值5 0.22 0.38 0.33
发育阶段特异性值5 1.5 1.18 4.44
器官特异性值5 1 1.45 1.5
转基因植物数 5 16 5
幼根分数(No.，Ave.，Var)6 5，0.6，0.24 10，2.1，1.49 5，0，0
成熟根分数(No.，Ave.，Var)6 3，0，0 13，2.46，0.86 2，0，0
幼小地上组织(No.，Ave.，Var)6 5，0.4，0.24 10，12，1.76 5，0.6，0.34
成熟地上组织(No.，Ave.，Var)6 3，0，0 13，0.46，0.86 2，0.5，0.25
长角果/种子(No.，Ave.，Var)6 3，0，0 4，3.75，1.69 无
花(No.，Ave.，Var)6 3，0，0 13，0.92，1.76 2，0，0
说明 在幼苗中弱。 根组织，主要为根尖；以及种子。 成熟植物的地上营养组织。
1由本发明者指定的DRE的ID编号。
2由本发明者指定的对于DRE上游或下游的拟南芥基因(重叠群)聚簇的内部参考。
3单向意味着只有DRE的有义链能够调节基因表达；
双向意味着DRE的有义链和反义链都能调节基因表达。
4用于从拟南芥基因组DNA分离DRE的PCR引物。
5如上文材料和方法部分所描述的，计算位置效应值(PoEf)、发育阶段特异性值(SpDs)和器官特异性值(SpOr)。
6No.＝数目；Ave.＝平均值；Var.＝方差。
表11
 
DRE编号1 16900 17109 17809
聚簇编号2 Z25996 Z17897 Z18103
聚簇位置2 上游 上游 上游
DRE调节方向3 双向 双向 双向
DRE长度(bp) 824 2927 3165
DRE序列 SEQ ID NO:121 SEQ ID NO:126 SEQ ID NO:131
内部正向引物4 SEQ ID NO:122 SEQ ID NO:127 SEQ ID NO:132
外部正向引物4 SEQ ID NO:123 SEQ ID NO:128 SEQ ID NO:133
内部反向引物4 SEQ ID NO:124 SEQ ID NO:129 SEQ ID NO:134
外部反向引物4 SEQ ID NO:125 SEQ ID NO:130 SEQ ID NO:135
位置效应值5 4.17 0.26 0.21
发育阶段特异性值5 0.21 0.63 0.60
器官特异性值5 0.22 1.85 1.38
转基因植物数 5 10 10
幼根分数(No.，Ave.，Var)6 4，3.5，0.75 6，4，1.25 5，0.8，0.56
成熟根分数(No.，Ave.，Var)6 5，3.2，0.56 7，3.07，2.60 7，1.5，1.5
幼小地上组织(No.，Ave.，Var)6 4，4，0 6，0.42，0.37 5，4，0.8
成熟地上组织(No.，Ave.，Var)6 5，3.8，0.56 7，1.05，1.07 7，3.07，1.03
长角果/种子(No.，Ave.，Var)6 3，4.67，0.22 3，0，0 3，0，0
花(No.，Ave.，Var)6 5，4，4 7，1.07，2.89 7，2.71，2.99
说明 组成型模式。在分生组织和种子中强。 在根、花和分生组织中强。 在幼苗的叶片组织中强。在成熟植物中有变化。
1由本发明者指定的DRE的ID编号。
2由本发明者指定的对于DRE上游或下游的拟南芥基因(重叠群)聚簇的内部参考。
3单向意味着只有DRE的有义链能够调节基因表达；
双向意味着DRE的有义链和反义链都能调节基因表达。
4用于从拟南芥基因组DNA分离DRE的PCR引物。
5如上文材料和方法部分所描述的，计算位置效应值(PoEf)、发育阶段特异性值(SpDs)和器官特异性值(SpOr)。
6No.＝数目；Ave.＝平均值；Var.＝方差。
表12
 
DRE编号1 19672 19678 19827
聚簇编号2 Z25683 BE523552 Z17577
聚簇位置2 上游 上游 上游
DRE调节方向3 单向 双向 双向
DRE长度(bp) 1155 2877 578
DRE序列 SEQ ID NO:136 SEQ ID NO:141 SEQ ID NO:146
内部正向引物4 SEQ ID NO:137 SEQ ID NO:142 SEQ ID NO:147
外部正向引物4 SEQ ID NO:138 SEQ ID NO:143 SEQ ID NO:148
内部反向引物4 SEQ ID NO:139 SEQ ID NO:144 SEQ ID NO:149
外部反向引物4 SEQ ID NO:140 SEQ ID NO:145 SEQ ID NO:150
位置效应值5 0.03 5.55 0.37
发育阶段特异性值5 9.78 1.5 0.60
器官特异性值5 3.99 2 0.64
转基因植物数 17 5 12
幼根分数(No.，Ave.，Var)6 15，4.33，0.76 5，0，0 10，0，0
成熟根分数(No.，Ave.，Var)6 17，4，1.76 4，0，0 5，0.1，0.04
幼小地上组织(No.，Ave.，Var)6 15，4.53，0.38 5，0，0 10，2.9，2.29
成熟地上组织(No.，Ave.，Var)6 17，3.12，2.22 4，0.25，0.18 5，0.8，1.36
长角果/种子(No.，Ave.，Var)6 3，4.33，0.22 3，0，0 3，0，0
花(No.，Ave.，Var)6 17，4.06，2.17 4，0，0 5，0.8，1.36
说明 强，组成型的。在成熟叶片组织中较低表达。 非常弱。高位置变化。 地上组织。弱。
1由本发明者指定的DRE的ID编号。
2由本发明者指定的对于DRE上游或下游的拟南芥基因(重叠群)聚簇的内部参考。
3单向意味着只有DRE的有义链能够调节基因表达；
双向意味着DRE的有义链和反义链都能调节基因表达。
4用于从拟南芥基因组DNA分离DRE的PCR引物。
5如上文材料和方法部分所描述的，计算位置效应值(PoEf)、发育阶段特异性值(SpDs)和器官特异性值(SpOr)。
6No.＝数目；Ave.＝平均值；Var.＝方差。
表13
 
DRE编号1 20607 22397 22604
聚簇编号2 AI998130 ATHD12A ATHFEDAA
聚簇位置2 上游 上游 下游
DRE调节方向3 双向 单向 双向
DRE长度(bp) 2819 1313 2080
DRE序列 SEQ ID NO:151 SEQ ID NO:156 SEQ ID NO:161
内部正向引物4 SEQ ID NO:152 SEQ ID NO:157 SEQ ID NO:162
外部正向引物4 SEQ ID NO:153 SEQ ID NO:158 SEQ ID NO:163
内部反向引物4 SEQ ID NO:154 SEQ ID NO:159 SEQ ID NO:164
外部反向引物4 SEQ ID NO:155 SEQ ID NO:160 SEQ ID NO:165
位置效应值5 0.25 0.38 9.72
发育阶段特异性值5 2.50 0.89 0.71
器官特异性值5 0.916 1.33 1.10
转基因植物数 5 12 17
幼根分数(No.，Ave.，Var)6 5，0，0 12，1.13，2.09 15，0，0
成熟根分数(No.，Ave.，Var)6 3，0，0 12，1.67，4.22 13，0，0
幼小地上组织(No.，Ave.，Var)6 5，2.2，2.16 12，3.33，0.89 15，0.2，0.16
成熟地上组织(No.，Ave.，Var)6 3，2，2 12，2.63，2.69 13，0，0
长角果/种子(No.，Ave.，Var)6 无 3，4，0.67 4，0.75，1.69
花(No.，Ave.，Var)6 3，1，2 12，1.21，3.06 13，0，0
说明 地上组织。 地上组织和种子。 地上组织和种子。高位置效应。非常弱。
1由本发明者指定的DRE的ID编号。
2由本发明者指定的对于DRE上游或下游的拟南芥基因(重叠群)聚簇的内部参考。
3单向意味着只有DRE的有义链能够调节基因表达；
双向意味着DRE的有义链和反义链都能调节基因表达。
4用于从拟南芥基因组DNA分离DRE的PCR引物。
5如上文材料和方法部分所描述的，计算位置效应值(PoEf)、发育阶段特异性值(SpDs)和器官特异性值(SpOr)。
6No.＝数目；Ave.＝平均值；Var.＝方差。
表14
 
DRE编号1 24136 24291 24728
聚簇编号2 Z34788 Z17960 AV530349
聚簇位置2 下游 上游 上游
DRE调节方向3 单向 双向 单向
DRE长度(bp) 174 2096 1617
DRE序列 SEQ ID NO:166 SEQ ID NO:171 SEQ ID NO:176
内部正向引物4 SEQ ID NO:167 SEQ ID NO:172 SEQ ID NO:177
外部正向引物4 SEQ ID NO：无 SEQ ID NO:173 SEQ ID NO:178
内部反向引物4 SEQ ID NO:169 SEQ ID NO:174 SEQ ID NO:179
外部反向引物4 SEQ ID NO：无 SEQ ID NO:175 SEQ ID NO:180
位置效应值5 0.17 0.56 5.71
发育阶段特异性值5 1.5 7.76 0.17
器官特异性值5 2 6.93 1.75
转基因植物数 5 12 9
幼根分数(No.，Ave.，Var)6 1，0，0 9，1.56，3.14 8，0，0
成熟根分数(No.，Ave.，Var)6 2，0，0 8，2.37，1.48 8，0.5，1.75
幼小地上组织(No.，Ave.，Var)6 1，0，0 9，2.33，3.11 8，2.63，0.48
成熟地上组织(No.，Ave.，Var)6 2，0.25，0.06 8，1.62，2.33 8，2.5，1.5
长角果/种子(No.，Ave.，Var)6 3，0，0 4，2，1.5 无
花(No.，Ave.，Var)6 2，0，0 8，1.37，1.98 8，3.38，2.73
说明 地上组织。非常弱。 组成型的。 在花组织中强。在叶脉中低表达。
1由本发明者指定的DRE的ID编号。
2由本发明者指定的对于DRE上游或下游的拟南芥基因(重叠群)聚簇的内部参考。
3单向意味着只有DRE的有义链能够调节基因表达；
双向意味着DRE的有义链和反义链都能调节基因表达。
4用于从拟南芥基因组DNA分离DRE的PCR引物。
5如上文材料和方法部分所描述的，计算位置效应值(PoEf)、发育阶段特异性值(SpDs)和器官特异性值(SpOr)。
6No.＝数目；Ave.＝平均值；Var.＝方差。
表15
 
DRE编号1 24811 4209 5095
聚簇编号2 H36200 H36237 Z29720
聚簇位置2 上游 上游 上游
DRE调节方向3 双向 双向 双向
DRE长度(bp) 428 1022 1056
DRE序列 SEQ ID NO:181 SEQ ID NO:186 SEQ ID NO:191
内部正向引物4 SEQ ID NO:182 SEQ ID NO:187 SEQ ID NO:192
外部正向引物4 SEQ ID NO：无 SEQ ID NO:188 SEQ ID NO:193
内部反向引物4 SEQ ID NO:184 SEQ ID NO:189 SEQ ID NO:194
外部反向引物4 SEQ ID NO：无 SEQ ID NO:190 SEQ ID NO:195
位置效应值5 0.53 0.60 0.33
发育阶段特异性值5 8.11 028 0.61
器官特异性值5 0.23 0.49 1.35
转基因植物数 4 5 3
幼根分数(No.，Ave.，Var)6 4，0.75，1.69 5，0.4，0.34 3，0.33，0.22
成熟根分数(No.，Ave.，Var)6 3，1，2 4，1.2，2.16 2，1，1
幼小地上组织(No.，Ave.，Var)6 4，1，3 5，2.4，1.84 3，1.33，1.56
成熟地上组织(No.，Ave.，Var)6 3，1.33，3.56 5，2，2.8 2，2，0
长角果/种子(No.，Ave.，Var)6 无 5，0.4，0.24 2，0，0
花(No.，Ave.，Var)6 3，2，4 5，1.6，3.44 2，0，0
说明 组成型的。弱。 叶柄和茎组织。 营养组织，弱。
1由本发明者指定的DRE的ID编号。
2由本发明者指定的对于DRE上游或下游的拟南芥基因(重叠群)聚簇的内部参考。
3单向意味着只有DRE的有义链能够调节基因表达；
双向意味着DRE的有义链和反义链都能调节基因表达。
4用于从拟南芥基因组DNA分离DRE的PCR引物。
5如上文材料和方法部分所描述的，计算位置效应值(PoEf)、发育阶段特异性值(SpDs)和器官特异性值(SpOr)。
6No.＝数目；Ave.＝平均值；Var.＝方差。
表16
 
DRE编号1 17109 20607 24811
聚簇编号2 R29912 R90407 T22055
聚簇位置2 下游 下游 下游
DRE调节方向3 双向 双向 双向
DRE长度(bp) 2027 2834 428
DRE序列 SEQ ID NO:196 SEQ ID NO:201 SEQ ID NO:202
内部正向引物4 SEQ ID NO:197 SEQ ID NO:168 SEQ ID NO:48
外部正向引物4 SEQ ID NO:198 SEQ ID NO:170 SEQ ID NO：无
内部反向引物4 SEQ ID NO:199 SEQ ID NO:183 SEQ ID NO:50
外部反向引物4 SEQ ID NO:200 SEQ ID NO:185 SEQ ID NO：无
位置效应值5 0.46 0.26 0.24
发育阶段特异性值5 0 0.60 0.61
器官特异性值5 0.49 1.16 0.51
转基因植物数 5 5 5
幼根分数(No.，Ave.，Var)6 5，0.6，0.64 5，0，0 4，0.75，1.69
成熟根分数(No.，Ave.，Var)6 无 5，0，0 5，0.6，1.44
幼小地上组织(No.，Ave.，Var)6 5，2，2 5，2.2，2.16 4，1，3
成熟地上组织(No.，Ave.，Var)6 无 5，1.8，2.16 5，08，2.56
长角果/种子(No.，Ave.，Var)6 无 4，0，0 3，0，0
花(No.，Ave.，Var)6 无 5，1.2，1.36 5，0，8，2.56
说明 地上组织，弱。 地上组织，主要在叶片中。 组成型的，弱。
1由本发明者指定的DRE的ID编号。
2由本发明者指定的对于DRE上游或下游的拟南芥基因(重叠群)聚簇的内部参考。
3单向意味着只有DRE的有义链能够调节基因表达；
双向意味着DRE的有义链和反义链都能调节基因表达。
4用于从拟南芥基因组DNA分离DRE的PCR引物。
5如上文材料和方法部分所描述的，计算位置效应值(PoEf)、发育阶段特异性值(SpDs)和器官特异性值(SpOr)。
6No.＝数目；Ave.＝平均值；Var.＝方差。
表17
 
DRE编号1 16665
聚簇编号2 Z26101
聚簇位置2 上游
DRE调节方向3 双向
DRE长度(bp) 1358
DRE序列 SEQ ID NO:203
内部正向引物4 SEQ ID NO:204
外部正向引物4 SEQ ID NO:206
内部反向引物4 SEQ ID NO:206
外部反向引物4 SEQ ID NO:207
位置效应值5 0.51
发育阶段特异性值5 8.82
器官特异性值5 0.403
转基因植物数 12
幼根分数(No.，Ave.，Var)6 10，0，0
成熟根分数(No.，Ave.，Var)6 5，0.6，0.64
幼小地上组织(No.，Ave.，Var)6 10，1.5，3.05
成熟地上组织(No.，Ave.，Var)6 5，2，2.08
长角果/种子(No.，Ave.，Var)6 3，1，0.66
花(No.，Ave.，Var)6 5，1.8，3.76
说明 地上组织
1由本发明者指定的DRE的ID编号。
2由本发明者指定的对于DRE上游或下游的拟南芥基因(重叠群)聚簇的内部参考。
3单向意味着只有DRE的有义链能够调节基因表达；
双向意味着DRE的有义链和反义链都能调节基因表达。
4用于从拟南芥基因组DNA分离DRE的PCR引物。
5如上文材料和方法部分所描述的，计算位置效应值(PoEf)、发育阶段特异性值(SpDs)和器官特异性值(SpOr)。
6No.＝数目；Ave.＝平均值；Var.＝方差。
DREs 4209和6669的缺失分析：
通过比较由未修饰的DREs(SEQ ID NO:36和61)和其缺失突变体(分别为SEQ ID NO:210和213)驱动的报告基因表达来测试部分DRE序列在体内修饰基因表达模式的能力。
p4209short-GUS(包括SEQ NO:210所示的DRE 4209部分序列)转化的植物中GUS的表达模式与由全长启动子序列，DRE 4209(SEQ ID NO:36)驱动的相似。如图26a所示，在根中，主要是根尖，以及花芽中表达是强烈的。有趣的是，p4209short-GUS转化的植物显示叶脉中报告基因表达较低而叶片显示较高的表达。需注意，没有检验种子中的表达。
p6669short-GUS(包括SEQ ID NO:213所示的DRE 6669部分序列)转化的植物中GUS表达模式局限于根尖(图26b)，而通过全长DRE 6669启动子(SEQ ID NO:61)获得的在其它幼小或分生组织中的表达已经丢失。
这些结果表明SEQ ID NO:61的5′核酸序列(例如，核苷酸坐标1-747)对于组成型基因表达是重要的。实际上，不包括SEQ ID NO：61的5′端最初400个核苷酸的DNA序列(SEQ ID NO:214，参见图27 WO 02/16655)涉及应激调节的基因表达。
这些结果表示可通过部分缺失来修饰本发明的启动子，以产生如DRE 6669(SEQ ID NO:61)所证明的诱导型的或组织特异的表达模式。
如表3-17和图1-26所清楚说明的，根据本发明的教导分离的DREs显示大范围的活性以及大范围的组织和发育阶段特异性。根据上文描述的利用拟南芥测定确定的作用划分本发明的DREs。
当功能性连接SEQ ID NOS:1、6、41、46、51、86、121、136、171、181和202(图18中说明)时，以组成型方式在拟南芥中表达萤光素酶基因，因此这些DREs的启动子在此推定分类为组成型启动子。
当功能性连接SEQ ID NOS:1、11、16、21、26、31、36、56、61、66、71、76、、81、91、96、101、116、126、141、146、151、156、161、166、176和203时，以诱导型方式在拟南芥中表达萤光素酶基因，因此这些DREs的启动子在此推定分类为诱导型启动子。
当功能性连接SEQ ID NOS:61、121、126、213(图4、14、15、16和26b中说明)时，以幼小或分生组织的、组织-特异性方式在拟南芥中表达萤光素酶基因，因此这些DREs的启动子在此推定分类为幼小或分生组织的、组织特异的启动子。
当功能性连接SEQ ID NOS:21、36、91、111和126(图2、3、9和13中说明)时，以根组织特异的方式在拟南芥中表达萤光素酶基因，因此这些DREs的启动子在此推定分类为根组织特异的启动子。
当功能性连接SEQ ID NOS：16、26、31、66、71、76、81、96、106、101、116、131、146、151、156、161、166、196、201和203(图10、11、17、19和20中说明)时，以地上组织特异的方式在拟南芥中表达萤光素酶基因，因此这些DREs的启动子在此推定分类为地上组织-特异的启动子。
当功能性连接SEQ ID NO:186(图22中说明)时，以茎组织特异的方式在拟南芥中表达萤光素酶基因，因此该DRE的启动子在此推定分类为茎组织特异的启动子。
当功能性连接SEQ ID NOS:11、36、81、91、126、176和210(图1、3、9和26a中说明)时，以花组织特异的方式在拟南芥中表达萤光素酶基因，因此这些DREs的启动子在此推定分类为花组织特异的启动子。
当功能性连接SEQ ID NO:56时，以果实(长角果)组织特异的方式在拟南芥中表达萤光素酶基因，因此该DRE的启动子在此推定分类为果实(长角果)组织特异的启动子。
当功能性连接SEQ ID NOS:1、156和161(图12和21中说明)时，以种子组织特异的方式在拟南芥中表达萤光素酶基因，因此这些DREs的启动子在此推定分类为种子组织特异的启动子。
当功能性连接SEQ ID NOS:81、96、101、106和131(图5-6、7-8、10-11和15-16中比较说明)时，以发育阶段特异的方式在拟南芥中表达萤光素酶基因，因此这些DREs的启动子在此推定分类为发育阶段特异的启动子。
当功能性连接SEQ ID NOS：210和213(图26b中说明)时，以诱导型方式在拟南芥中表达GUS基因，因此这些部分DREs序列的启动子在此推定分类为诱导型启动子。
当功能性连接SEQ ID NO:210(图26a中说明)时，以根，以及花芽组织特异的方式在拟南芥中表达GUS基因，因此该部分DRE序列的启动子在此推定分类为根以及花组织特异的启动子。
当功能性连接SEQ ID NO：213(图26b中说明)时，以根尖组织特异的方式在拟南芥中表达GUS基因，因此这个启动子在此推定分类为根组织特异的启动子。
尽管已经结合其特定实施方案描述了本发明，但很明显许多备选方案、修饰和改变对本领域的技术人员来说是显而易见的。因此，旨在包含属于所附的权利要求的精神和广泛范围内的所有这种备选方案、修饰和改变。在本说明书中所提及的所有出版物、专利、专利申请和由其保藏号确定的序列在此整体引入本说明书作为参考，以达到如各个单独的出版物、专利、专利申请或由其保藏号确定的序列具体且单独指明在此引入作为参考的相同程度。此外，不应认为本申请中任何参考文献的引用或确定是承认这种参考文献是对于本发明所可获得的现有技术。
序列表
<110>Evogene Ltd.
<120>调节基因表达的核苷酸序列和构建体及其使用方法
<130>CPCH0563247P
<160>214
<170>PatentIn version3.2
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<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
<400>81
Figure A200810165721D00782
Figure A200810165721D00791
Figure A200810165721D00801
<210>82
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>82
<210>83
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>83
Figure A200810165721D00803
<210>84
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>84
Figure A200810165721D00804
<210>85
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>85
Figure A200810165721D00805
<210>86
<211>484
<212>DNA
<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
<400>86
Figure A200810165721D00811
<210>87
<211>25
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>87
<210>88
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>88
Figure A200810165721D00813
<210>89
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
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<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>90
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<210>91
<211>1840
<212>DNA
<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
<400>91
Figure A200810165721D00823
<210>92
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>92
Figure A200810165721D00832
<210>93
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>93
Figure A200810165721D00841
<210>94
<211>25
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>94
Figure A200810165721D00842
<210>95
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>95
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<210>96
<211>1665
<212>DNA
<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
<400>96
Figure A200810165721D00844
Figure A200810165721D00851
<210>97
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>97
Figure A200810165721D00861
<210>98
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
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<400>98
Figure A200810165721D00862
<210>99
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>99
Figure A200810165721D00863
<210>100
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>100
Figure A200810165721D00864
<210>101
<211>807
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<400>101
Figure A200810165721D00871
<210>102
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>102
Figure A200810165721D00872
<210>103
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>103
Figure A200810165721D00873
<210>104
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
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<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
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<400>106
Figure A200810165721D00883
Figure A200810165721D00891
<210>107
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
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<400>107
Figure A200810165721D00902
<210>108
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>108
Figure A200810165721D00911
<210>109
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
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<400>109
Figure A200810165721D00912
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<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
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<400>110
Figure A200810165721D00913
<210>111
<211>2183
<212>DNA
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<400>111
Figure A200810165721D00914
Figure A200810165721D00931
<210>112
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
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Figure A200810165721D00932
<210>113
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
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Figure A200810165721D00933
<210>114
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
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<400>114
Figure A200810165721D00934
<210>115
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
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<400>115
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<210>116
<211>1358
<212>DNA
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<400>116
Figure A200810165721D00942
Figure A200810165721D00951
<210>117
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
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Figure A200810165721D00953
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<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
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<400>119
Figure A200810165721D00954
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<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
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<400>120
Figure A200810165721D00955
<210>121
<211>824
<212>DNA
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<400>121
Figure A200810165721D00961
<210>122
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
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<400>122
Figure A200810165721D00962
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<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
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<400>123
Figure A200810165721D00971
<210>124
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
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Figure A200810165721D00972
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<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
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<400>125
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<210>126
<211>2027
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<400>126
Figure A200810165721D00974
Figure A200810165721D00981
Figure A200810165721D00991
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<211>25
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
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<400>128
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<210>129
<211>25
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<213>人工序列
<220>
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<400>129
Figure A200810165721D00994
<210>130
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
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<400>130
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<210>131
<211>3154
<212>DNA
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<400>131
Figure A200810165721D01001
Figure A200810165721D01021
<210>132
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>132
Figure A200810165721D01022
<210>133
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>133
Figure A200810165721D01023
<210>134
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>134
Figure A200810165721D01024
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<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>135
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<400>136
Figure A200810165721D01032
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<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>137
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<210>138
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>138
Figure A200810165721D01042
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<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>139
Figure A200810165721D01043
<210>140
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>140
Figure A200810165721D01044
<210>141
<211>2877
<212>DNA
<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
<400>141
Figure A200810165721D01051
Figure A200810165721D01061
<210>142
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
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Figure A200810165721D01071
<210>143
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>143
Figure A200810165721D01072
<210>144
<211>25
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
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<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
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<210>146
<211>578
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<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
<400>146
Figure A200810165721D01075
<210>147
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>147
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<210>148
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
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<400>148
Figure A200810165721D01083
<210>149
<211>24
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<213>人工序列
<220>
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<211>21
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<213>人工序列
<220>
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Figure A200810165721D01091
<210>151
<211>2819
<212>DNA
<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
<400>151
Figure A200810165721D01092
Figure A200810165721D01111
<210>152
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>152
Figure A200810165721D01112
<210>153
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
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<213>人工序列
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<211>21
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<213>人工序列
<220>
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<210>156
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<400>156
Figure A200810165721D01122
Figure A200810165721D01131
<210>157
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
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<400>157
Figure A200810165721D01132
<210>158
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>158
Figure A200810165721D01133
<210>159
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
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<211>21
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<213>人工序列
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<212>DNA
<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
<400>161
Figure A200810165721D01141
<210>162
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
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<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
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Figure A200810165721D01153
<210>164
<211>25
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
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Figure A200810165721D01161
<210>165
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>165
Figure A200810165721D01162
<210>166
<211>174
<212>DNA
<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
<400>166
Figure A200810165721D01163
<210>167
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>167
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<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>168
Figure A200810165721D01171
<210>169
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>169
Figure A200810165721D01172
<210>170
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>170
Figure A200810165721D01173
<210>171
<211>2096
<212>DNA
<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
<400>171
Figure A200810165721D01174
Figure A200810165721D01181
Figure A200810165721D01191
<210>172
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>172
Figure A200810165721D01192
<210>173
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>173
<210>174
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>174
<210>175
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>175
Figure A200810165721D01195
<210>176
<211>1617
<212>DNA
<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
<400>176
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<223>单链DNA寡核苷酸
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<212>DNA
<213>人工序列
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<223>单链DNA寡核苷酸
<400>178
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<211>25
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<213>人工序列
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<223>单链DNA寡核苷酸
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<211>21
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<213>人工序列
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<223>单链DNA寡核苷酸
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<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
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<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
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<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
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<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
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<211>21
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<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
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<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
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<213>人工序列
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<223>单链DNA寡核苷酸
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<223>单链DNA寡核苷酸
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<213>人工序列
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<223>单链DNA寡核苷酸
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<213>人工序列
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<223>单链DNA寡核苷酸
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<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
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<223>单链DNA寡核苷酸
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<223>单链DNA寡核苷酸
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<213>人工序列
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<223>单链DNA寡核苷酸
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<223>单链DNA寡核苷酸
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<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
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<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
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<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
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<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
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<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
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<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
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<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
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Figure A200810165721D01325
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<223>单链DNA寡核苷酸
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Figure A200810165721D01331
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<212>DNA
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<223>单链DNA寡核苷酸
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<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
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<212>DNA
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<223>单链DNA寡核苷酸
<400>211
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<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>单链DNA寡核苷酸
<400>212
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<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
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<212>DNA
<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
<400>214
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Claims (15)

1.一种分离的多核苷酸，其包括SEQ ID NOS:136的核酸序列，其中分离的多核苷酸能够调节与其可操作连接的至少一个多核苷酸序列的表达。
2.权利要求1的分离的多核苷酸，其中所述分离的多核苷酸包括至少一个启动子区域。
3.权利要求2的分离的多核苷酸，其中至少一个启动子区域能够指导所述的至少一个多核苷酸序列以组成型方式转录。
4.一种核酸构建体，包括权利要求1的分离的多核苷酸。
5.权利要求4的核酸构建体，进一步包括至少一个与分离的多核苷酸可操作连接的异源多核苷酸。
6.权利要求5的核酸构建体，其中所述的至少一个异源多核苷酸是报告基因。
7.权利要求5的核酸构建体，进一步包括2个各自与分离的多核苷酸末端可操作连接的异源多核苷酸，以使得所述的2个异源多核苷酸侧接分离的多核苷酸。
8.权利要求4的核酸构建体，其中所述的分离的多核苷酸包括至少一个启动子区域。
9.权利要求8的核酸构建体，其中所述的至少一个启动子区域能够指导所述的至少一个多核苷酸序列以组成型方式转录。
10.一种转基因的植物的细胞，其包括权利要求1的分离的多核苷酸。
11.一种转基因的植物的细胞，其包括权利要求7的核酸构建体。
12.一种生产转基因植物的方法，其包括用权利要求1的多核苷酸转化植物。
13.一种生产转基因植物的方法，其包括用权利要求4的核酸构建体转化植物。
14.一种在细胞中表达目标多肽的方法，包括用核酸构建体转化细胞，其中该核酸构建体包括与SEQ ID NOS:136的调控核酸序列可操作连接的编码目标多肽的多核苷酸序列，由此在细胞中表达所述目标多肽。
15.权利要求1的分离的多核苷酸，其中所述分离的多核苷酸具有不多于3348个核苷酸。
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WO (1) WO2004081173A2 (zh)

Families Citing this family (43)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10329575B2 (en) 1999-05-14 2019-06-25 Ceres, Inc. Regulatory sequence for plants
EP1606304A4 (en) 2003-03-12 2006-09-27 Evogene Ltd Gene expression regulating regulatory nucleotide sequences and constructs and methods thereof
AU2005234725B2 (en) 2003-05-22 2012-02-23 Evogene Ltd. Methods of Increasing Abiotic Stress Tolerance and/or Biomass in Plants and Plants Generated Thereby
US7554007B2 (en) 2003-05-22 2009-06-30 Evogene Ltd. Methods of increasing abiotic stress tolerance and/or biomass in plants
EP1766058A4 (en) 2004-06-14 2008-05-21 Evogene Ltd POLYNUCLEOTIDES AND POLYPEPTIDES INVOLVED IN THE DEVELOPMENT OF PLANT FIBERS AND METHOD OF USE THEREOF
DE102005021365A1 (de) * 2005-05-04 2006-11-09 Sungene Gmbh & Co. Kgaa Transgene Expressionskassetten zur Expression von Nukleinsäuren in Blütengeweben von Pflanzen
CA2626592C (en) 2005-10-24 2018-07-17 Evogene Ltd. Methods of increasing abiotic stress tolerance and fertilizer use efficiency of a plant
CA2672756C (en) 2006-12-20 2018-11-20 Evogene Ltd. Polynucleotides and polypeptides involved in plant fiber development and methods of using same
MX341624B (es) 2007-04-09 2016-08-26 Evogene Ltd Polinucleotidos, polipeptidos y metodos para aumentar el contenido de aceite, la velocidad de crecimiento y biomasa de las plantas.
ES2547305T3 (es) 2007-07-24 2015-10-05 Evogene Ltd. Polinucleótidos, polipéptidos codificados por los mismos, y métodos de uso de los mismos para aumentar la tolerancia al estrés abiótico y/o la biomasa y/o el rendimiento en plantas que los expresan
PE20091236A1 (es) * 2007-11-22 2009-09-16 Astrazeneca Ab Derivados de pirimidina como immunomoduladores de tlr7
MX357387B (es) 2007-12-27 2018-07-06 Evogene Ltd Polipeptidos, polinucleotidos aislados utiles para modificar la eficacia en el uso de agua, eficacia en el uso del fertilizante, la tolerancia al estres biotico/abiotico, el rendimiento y biomasa en plantas.
MX2010012697A (es) 2008-05-22 2011-03-15 Evogene Ltd Polinucleotidos y polipeptidos aislados y metodos para usarlos para incrementar el rendimiento de plantas, biomasa, velocidad de crecimiento, vigor, contenido de aceite, tolerancia al estres abiotico de las plantas y eficiencia de uso de nitrogeno.
MX2011001741A (es) 2008-08-18 2011-03-29 Evogene Ltd Polipeptidos y polinucleotidos aislados utiles para mejorar la eficacia en el uso de nitrogeno tolerancia al estres abiotico, rendimiento y biomasa en plantas.
BRPI0914522B1 (pt) 2008-10-30 2019-04-02 Evogene Ltd Método para aumentar o rendimento, a biomassa, a taxa de crescimento, o vigor, oteor de óleo, e/ou a eficiência da utilização do nitrogênio de uma planta
CA2744827C (en) 2008-12-29 2019-10-15 Evogene Ltd. Polynucleotides, polypeptides encoded thereby, and methods of using same for increasing abiotic stress tolerance, biomass and/or yield in plants expressing same
AR075773A1 (es) 2009-03-02 2011-04-27 Evogene Ltd Polipetidos y polinucleotidos aislados y metodos para su uso en el aumento del rendimiento de plantas y las caracteristicas agricolas
MX363447B (es) 2009-06-10 2019-03-22 Evogene Ltd Polinucleotidos y polipeptidos aislados, y metodos para utilizarlos para mejorar la eficacia en el uso de nitrogeno, rendimiento, tasa de crecimiento, vigor, biomasa, contenido de aceite y/o tolerancia al estres abiotico.
BR112012002543B1 (pt) 2009-08-04 2021-03-09 Evogene Ltd. método para aumentar a tolerância ao estresse abiótico, o rendimento, a biomassa, taxa de crescimento, e/ou vigor de uma planta, e, construto de ácido nucléico isolado
WO2011067745A2 (en) 2009-12-06 2011-06-09 Rosetta Green Ltd. Compositions and methods for enhancing plants resistance to abiotic stress
US9493785B2 (en) 2009-12-28 2016-11-15 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides and methods of using same for increasing plant yield, biomass, growth rate, vigor, oil content, abiotic stress tolerance of plants and nitrogen use efficiency
BR122021002340B1 (pt) 2010-04-28 2022-04-05 Evogene Ltd Método de aumento de biomassa, taxa de crescimento e/ou eficiência de uso de nitrogênio de uma planta
MX365161B (es) 2010-08-30 2019-05-24 Evogene Ltd Polinucleótidos y polipéptidos aislados, y métodos para utilizarlos para aumentar la eficacia en el uso de nitrógeno, rendimiento, tasa de crecimiento, vigor, biomasa, contenido de aceite y/o tolerancia al estrés abiótico.
US9551006B2 (en) 2010-12-22 2017-01-24 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides, and methods of using same for improving plant properties
CA3137663A1 (en) 2011-05-03 2012-11-08 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides and methods of using same for increasing plant yield, biomass, growth rate, vigor, oil content, abiotic stress tolerance of plants and nitrogen use efficiency
AU2012284205B2 (en) 2011-07-15 2016-11-17 Syngenta Participations Ag Methods of increasing yield and stress tolerance in a plant
WO2013012643A1 (en) 2011-07-15 2013-01-24 Syngenta Participations Ag Polynucleotides encoding trehalose-6-phosphate phosphatase and methods of use thereof
BR112014004130A8 (pt) 2011-08-23 2022-05-17 Evogene Ltd Polinucleotídeos e polipeptídeos isolados e métodos de uso dos mesmos para o aumento da prooução da planta e/ou características agrícolas
MX2014005375A (es) 2011-11-03 2014-10-17 Syngenta Participations Ag Polinucleotidos, polipeptidos y metodos para mejorar la fotoasimilacion en plantas.
CN104254242A (zh) 2011-11-21 2014-12-31 先正达参股股份有限公司 用于增强植物中的线虫抗性的组合物和方法
BR122019023055B1 (pt) 2011-11-28 2021-03-30 Evogene Ltd Método para aumento da eficiência no uso de nitrogênio, produção, biomassa, taxa de crescimento, vigor, e/ou tolerância ao estresse abiótico de uma planta, e, construto de ácido nucleico isolado
BR112014016080A2 (pt) 2011-12-28 2020-06-30 Evogene Ltd., polínucleotídeos e polipeptídeos isolados e métodos de uso dos mesmos para aumentar à produção das plantas
WO2013118120A2 (en) 2012-02-06 2013-08-15 Rosetta Green Ltd. Isolated polynucleotides expressing or modulating micrornas or targets of same, transgenic plants comprising same and uses thereof in improving nitrogen use efficiency, abiotic stress tolerance, biomass, vigor or yield of a plant
AR091312A1 (es) 2012-02-29 2015-01-28 Evogene Ltd Polinucleotidos y polipeptidos aislados y metodos para utilizarlos para mejorar el rendimiento de la planta, biomasa, tasa de crecimiento, vigor, contenido de aceite, tolerancia al estres abiotico de las plantas y eficacia en el uso de nitrogeno
BR122021002085B1 (pt) 2012-05-28 2022-08-09 Evogene Ltd Método para aumentar a produção, taxa de crescimento, biomassa, vigor, produção de sementes, e/ou eficiência no uso de nitrogênio de uma planta
BR122019028110B1 (pt) 2012-08-27 2022-07-12 Evogene Ltd Método para aumentar o rendimento, taxa de crescimento, biomassa, vigor, rendimento da semente, capacidade fotossintética, eficiência do uso de nitrogênio, e/ou tolerância ao estresse abiótico de uma planta, método para produzir uma colheita, construto de ácido nucléico, e, método de cultivar uma cultura
MX355797B (es) 2012-12-25 2018-04-30 Evogene Ltd Polinucleotidos y polipeptidos aislados y metodos para utulizarlos para mejorar la eficacia en el uso de nitrogeno de las plantas.
BR122020005652B1 (pt) 2012-12-26 2022-05-17 Evogene Ltd Método para aumentar a eficiência do uso de nitrogênio, rendimento, taxa de crescimento, biomassa, vigor, rendimento de sementes, capacidade fotossintética e/ou tolerância ao estresse abiótico de uma planta, e, construção de ácido nucleico
CA2910097A1 (en) 2013-05-22 2014-11-27 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides, and methods of using same for increasing plant yield and/or agricultural characteristics
CA2916060A1 (en) 2013-08-27 2015-03-05 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides, and methods of using same for increasing plant yield and/or agricultural characteristics
WO2015181823A1 (en) 2014-05-28 2015-12-03 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides, polypeptides and methods of using same for increasing abiotic stress tolerance, biomass and yield of plants
CA3176207A1 (en) 2014-08-27 2016-03-03 Evogene Ltd. Constructs and methods for increasing plant yield or agricultural characteristics or both
BR112018012843A2 (pt) 2015-12-28 2018-12-04 Evogene Ltd métodos para aumentar pelo menos uma característica, para produzir e para cultivar uma cultura e para selecionar uma planta, polinucleotídeo e polipeptídeo isolados, construção de ácido nucleico, célula vegetal, e, planta transgênica.

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4761367A (en) 1984-11-07 1988-08-02 The University Of North Carolina At Chapel Hill Vectors suitable for detection of eukaryotic DNA regulatory sequences
US5359196A (en) * 1993-05-24 1994-10-25 Hewlett-Packard Company Mass spectrometry with gas counterflow for particle beam
AU4804293A (en) 1993-08-06 1995-02-28 Biotechnology Research And Development Corporation Mycoplasma expression system
US6189013B1 (en) 1996-12-12 2001-02-13 Incyte Genomics, Inc. Project-based full length biomolecular sequence database
AR014072A1 (es) 1998-02-26 2001-01-31 Pioneer Hi Bred Int Molecula de acido nucleico aislada que tiene una secuencia nucleotidica para un promotor que es capaz de iniciar una transcripcion constitutiva en unacelula de planta, construccion adn, vector, celula huesped, metodo para expresar en forma constitutiva una secuencia nucleotidica heteroloca en una
JP2002537760A (ja) 1998-11-16 2002-11-12 アドバンタ・テクノロジー・リミテッド 根特異的プロモーター
ATE295880T1 (de) 1999-09-01 2005-06-15 Monsanto Technology Llc Pflanzen -promotersequenzen aus mais, die selektiv die genexpression kontrollieren
DE19941606A1 (de) 1999-09-01 2001-03-08 Merck Patent Gmbh Verfahren zum Ermitteln von Nuklein- und/oder Aminosäuresequenzen
US6359196B1 (en) * 1999-09-23 2002-03-19 Finn Lok Germination-specific plant promoters
US6403862B1 (en) * 1999-09-24 2002-06-11 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Seed-preferred promoter from maize
US20020029394A1 (en) 1999-12-22 2002-03-07 Allen Stephen M. Homologs of starch synthase DU1
AU2001231171B2 (en) 2000-01-28 2007-01-04 The Scripps Research Institute Synthetic internal ribosome entry sites and methods of identifying same
EP1313867A2 (en) 2000-08-24 2003-05-28 The Scripps Research Institute Stress-regulated genes of plants, transgenic plants containing same, and methods of use
CN1361282A (zh) * 2000-12-28 2002-07-31 中国科学院发育生物学研究所 一种能够提高结构基因表达的内含子及其应用
EP1373885A4 (en) 2001-03-29 2004-06-23 Evogene Ltd METHODS, PLATFORMS AND KITS SUITABLE FOR IDENTIFYING, ISOLATING AND USING GENE EXPRESSION IN AN ORGANISM REGULATING NUCLEOTIDE SEQUENCES
US20040121360A1 (en) 2002-03-31 2004-06-24 Hagai Karchi Methods, platforms and kits useful for identifying, isolating and utilizing nucleotide sequences which regulate gene exoression in an organism
EP1606304A4 (en) 2003-03-12 2006-09-27 Evogene Ltd Gene expression regulating regulatory nucleotide sequences and constructs and methods thereof

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