BRPI0708385A2

BRPI0708385A2 - redução no crescimento de cabelo ou pêlos

Info

Publication number: BRPI0708385A2
Application number: BRPI0708385-8A
Authority: BR
Inventors: Douglas Shander; Natalia Botchkarev
Original assignee: Gillette Co
Priority date: 2006-02-28
Filing date: 2007-02-28
Publication date: 2011-05-24
Also published as: WO2007099503A2; EP1988870A2; WO2007099503A9; US20080195183A1; US7727516B2; KR101060531B1; JP2009529494A; CN101951873A; AU2007220143A1; KR20080088632A; MX2008010980A; CA2642605A1; WO2007099503A3

Abstract

REDUçAO NO CRESCIMENTO DE CABELOS ou PêLOS Um método de redução do crescimento de cabelos ou pêlos inclui uso tópico de um agonista do TRPM8 e/ou do TRPAl, sozinho ou em conjunto com calor.

Description

"REDUÇÃO NO CRESCIMENTO DE CABELOS OU PÊLOS"

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

A invenção refere-se à redução do crescimento decabelos ou pêlos em mamíferos, particularmente para finscosméticos.

Uma função principal dos cabelos ou pêlos demamíferos é conferir proteção contra o ambiente. Entretanto,essa função basicamente se perdeu nos seres humanos, nosquais o pêlo é mantido ou removido de várias partes docorpo, essencialmente por razões cosméticas. Por exemplo, égeralmente preferencial ter cabelos no couro cabeludo, masnão ter pêlos no rosto.

Diversos procedimentos têm sido empregados pararemover cabelos ou pêlos indesejados, inclusive barbeamentoou depilação, eletrólise, cremes ou loções depilatórios,remoção por cera, arrancamento e antiandrogênicosterapêuticos. Esses procedimentos convencionais geralmentetêm desvantagens associadas aos mesmos. 0 barbeamento oudepilação, por exemplo, pode causar esfolamentos e cortes, epode deixar uma sensação de aumento na velocidade derecrescimento dos cabelos ou pêlos. 0 barbeamento oudepilaçãopode, também, deixar indesejáveis pêlos curtos eespetados. A eletrólise, por outro lado, pode manter uma áreatratada isenta de cabelos ou pêlos durante períodos de tempoprolongados, mas pode ser dispendiosa, dolorosa e, às vezes,deixar cicatrizes. Cremes depilatórios, embora sejam muitoeficazes, são de aplicação complicada e, tipicamente, não sãorecomendados para uso freqüente, devido a seu alto potencialpara causar irritações. A remoção por cera e por pinça podecausar dor, desconforto e remoção insatisfatória de cabelosou pêlos curtos. Finalmente, os antiandrogênicos - os quaistêm sido utilizados para o tratamento de hirsutismo emmulheres - podem ter efeitos colaterais indesejáveis.

Foi anteriormente revelado que a velocidade e ascaracterísticas do crescimento de cabelos ou pêlos podem seralteradas mediante a aplicação à pele de inibidores dedeterminadas enzimas. Estes inibidores incluem inibidores da5-alfa-redutase, ornitina descarboxilase, S-adenosilmetionina descarboxilase, gamaglutamil transpeptidase, etransglutaminase. Consulte, por exemplo, as patentes U.S. N04.885.289 de Breuer et al., U.S. N0 4.720.489 de Shander,U.S. N0 5.095.007 de Ahluwalia, U.S. N0 5.096.911 deAhluwalia et al. e U.S. N0 5.132.293 de Shander et al.

A família de receptores de potencial transiente(TRP) de canais iônicos compreende mais de 30 canaiscatiônicos, e pode ser dividida em sete subfamíliasprincipais: TRPC, TRPV, TRPM, TRPP, TRPML, TRPA e o TRPN.Dois membros de duas subfamílias distintas de canais TRPforam identificados como sendo responsáveis pela sensação defrio: TRPM8 e TRPAl.

O receptor de potencial transiente Melastatina-8(TRPM8) pertence à subfamília melastatina de canais iônicosTRP (Tominaga M. et al. (2004) J. Neurobiol. 61(1):3-12). OTRPM8 é um canal catiônico não seletivo permeável ao Ca(2+)que media um influxo direto de íons Ca(2+) em resposta aestímulos específicos. Ele é ativado pelo frio (temperaturasabaixo de 24°C) e por compostos de resfriamento, como mentole icilina (Tsavaler et al. (2001) Câncer Res. 61(9):3760-9;McKemy et al. (2002) Nature 416:52-8; Peier et al. (2002)Cell 108 (5): 705-15). O canal TRPM8 é expresso em umsubconjunto de neurônios da raiz dorsal pequena e neurôniosdo gânglio trigêmeo, de detecção de temperatura (McKemy etal. (2002) supracitado; Peier et al. (2002) supracitado;Babes et al. (2004) Eur J Neurosci. 20 (9):2276-82; Nealen etal. (2003) J Neurophysiol. 90 (1): 515-20). Os neurônios dogânglio trigêmeo suprem os nervos sensoriais das áreas depele da face acima da boca, área da mandíbula inferior, comotambém acima da testa e ao redor dos olhos. Portanto, TRPM8foi envolvido na detecção de temperaturas frias nasterminações nervosas de termoreceptores de mamíferos. Emadição a sua presença nos neurônios sensoriais, o receptorTRPM8 foi também identificado em vários tipos celulares nãoneurais. A expressão do mRNA do TRPM8 foi relatada em teoresmoderados no tecido da próstata normal e parece ser elevadano câncer de próstata, onde este envolve inúmeros processosdependentes de Ca(2+), incluindo proliferação e apoptose(Thebault et al, 2005) J Biol Chem 280 (47):39423-35). Étambém expresso em inúmeros tumores primários de mama,cólon, pulmão e de origem da pele (Tsavaler et al. (2001)supracitado).

Outro canal iônico, o canal do receptor depotencial transiente da ankirina-repetição 1 (TRPAl) tambémchamado de receptor proteínal similar a anquirina (ANKTMl) éativado por temperaturas frias (abaixo de 18°C),cinamaldeído, alicina, eugenol, gingerol, e salicilato demetil e similar ao TRPM8, pela icilina. TRPAl é expresso emum subconjunto de neurônios sensoriais que expressammarcadores nociceptivos, como TRPVl, peptideo relacionado aogene da calcitonina (CGRP) e substância P (Story et al.(2003) Cell 112:819-829). Foi também relatado ser expressoem fibroblastos cultivados, onde é reprimido apóstransformação oncogênica de fibroblastos (Jaquemar et al.(1999) J. Biol. Chem. 274:7325-7333).

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Em um aspecto, a invenção apresenta um método(tipicamente um método cosmético) para redução docrescimento de cabelos ou pêlos indesejados em mamíferos (depreferência seres humanos). O método inclui a aplicação deuma composição que inclui um ou mais agonistas do receptorpara frio, por exemplo, um agonista do receptor de potencialtransiente Melastatina-8 (TRPM8) e/ou um agonista do canaldo receptor de potencial transiente anquirina-repetição 1(TRPAl) em uma área da pele. 0 crescimento de cabelos oupêlos desnecessários pode ser indesejável, por exemplo, deum ponto de vista cosmético.

Agonistas do TRPM8 e/ou do TRPAl incluemcompostos que acionam ao menos uma atividade de um ou maisfolículos pilosos TRPM8(s) e/ou TRPAl(s) (por exemplo, umou mais TRPM8(s) e/ou TRPAl(s)) pela forte interação comTRPM8(s) e/ou TRPAl(s); compostos que aumentam os níveise/ou expressão de um ou mais TRPM8(s) e/ou TRPAl (s) nosfolículos pilosos; e/ou compostos que aumentam a expressãode um ou mais mRNAsdo TRPM8 e/ou do TRPAl nos folículospilosos. "Interage fortemente" significa um composto que seliga, ou de preferência se liga ao TRPM8(s) e/ou TRPAl (s).

O composto pode ser selecionado, por exemplo, de um dostipos de compostos discutidos abaixo. Agonistas exemplaresdo TRPM8 incluem terpenos, por exemplo, terpenos cíclicos(por exemplo, mentol ou lactato de mentila) , WS-3, agentede resfriamento 10, Frescolat MGA e Frescolat ML. Oagonista do TRPM8 pode ser também um agonista do TRPA1, porexemplo, icilina e eugenol. Outros TRPAl exemplares incluemgingerol, salicilato de metil, alicina e cinamaldeído.

Exemplos adicionais de agonistas do TPRM8 e/ou do TRPAl sãodescritos na presente invenção.

Em uma modalidade, a composição consisteessencialmente em um agonista do TRPM8 ou do TRPA1, porexemplo, uma composição que tem um agonista do TRPM8 ou doTRPAl como o único inibidor ativo do crescimento de cabelosou pêlos. Em outras modalidades, a composição não inclui umou mais dentre alfa-difluorometil ornitina (DFMO), uminibidor da proteína de choque térmico, um composto quepromova apoptose, ou uma combinação dos mesmos. Em aindaoutra modalidade, a composição não inclui um terpeno, porexemplo, mentol. Em outras modalidades, a composição inclui25% ou mais do agonista do TRPM8 e/ou do TRPAl, em peso.

Em outras modalidades, o método inclui umacomposição que inclui um ou mais agonista (s) do TRPM8 e/oudo TRPAl. Em uma modalidade, o agonista ativa um TRPM8 e umTRPAl; por exemplo, o agonista é icilina, que se liga eativa ambos os canais. Em outras modalidades, é usada umacombinação de um ou mais agonistas seletivos para TRPM8 ouTRPAl.

Tipicamente, na prática dos métodos aquidescritos, uma composição também incluirá um veiculodermatológica ou cosmeticamente aceitável.

Em outra modalidade, o método inclui, ainda,tratar a área de pele com calor, com um depilatório químico(incluindo, por exemplo, um ou mais agente redutores docrescimento de cabelos ou pêlos conforme descrito napresente invenção), ou outros métodos de remoção de pêlos(incluindo, um ou mais de, por exemplo, barbeamento oudepilação, remoção por cera, epilação mecânica oueletrólise) Em uma modalidade, o tratamento depilatório comcalor inclui aquecer a área de pele com, por exemplo, laserou lâmpada de flash. Tipicamente, o aquecimento é aplicadono em um prazo de dez, sete e cinco dias, e maistipicamente em um prazo de três, dois dias ou um dia, ousimultaneamente à aplicação da composição. 0 momentoadequado depende do agonista específico, e poderia ser tãocurto quanto um dia. 0 tratamento pode ser até mesmosimultâneo. Tipicamente, a composição é aplicada muitasvezes e o aquecimento é realizado em um prazo de sete dias,e com mais preferência em um prazo de três, dois dias ou umdia, ou simultaneamente, com uma das aplicações. Em outrasmodalidades, os agonistas do TRPM8 e/ou do TRPAl aumentam aeficácia da inibição do pêlo mediada pelo calor e/oureduzem a fluência dos dispositivos fototérmicos. Porexemplo, a energia de saída da luz e/ou do dispositivofototérmico pode ser reduzida para cerca de 10 a 30 J/cm2,mais tipicamente, para cerca de 1 a 3 J/cm2.

Em outras modalidades, a composição que inclui o(s)agonista(s) do TRPM8 e/ou do TRPAl é aplicada na peleanteriormente, durante, ou após a aplicação de um depilatórioquímico na pele ou outros métodos de remoção de pêlos, porexemplo, remoção por cera. Por exemplo, a composição pode seraplicada uma vez ou várias vezes e a remoção por cera érealizada em um prazo de sete dias, e com mais preferência emum prazo de três, dois dias ou um dia, ou simultaneamente,com uma das aplicações. A composição pode ser também aplicadaapós a remoção de pêlos, por exemplo, remoção por cera, dessaforma fornecendo uma vantagem adicional na melhoria da dorassociada à remoção de pêlos. Em algumas modalidades, o(s)agonista(s) do TRPM8 e/ou do TRPAl diminuem um ou maisefeitos indesejáveis induzidos pelo calor, químicos, ououtros métodos de depilação, incluindo transmissão da dor,irritação e/ou inflamação.

A presente invenção também refere-se a composiçõestópicas (por exemplo, cosméticas) que compreendem um veículodermatológica ou cosmeticamente aceitável e umagonista doreceptor para frio, por exemplo, um agonista do TRPM8 e/ou doTRPAl conforme descrito na presente invenção, ou umacomposição do mesmo. Além disso, a presente invenção refere-se ao uso de um agonista do receptor para frio, por exemplo,um agonista do TRPM8 e/ou TRPAl conforme descrito na presenteinvenção, para a fabricação de uma composição de uso tópico(por exemplo, uma composição conforme descrito na presenteinvenção). Modalidades destes aspectos da invenção podemincluir uma ou mais das características discutidas acima.

Os compostos específicos mencionados nestedocumento incluem tanto o composto em si como seus saisfarmaceuticamente aceitáveis.

Outras características e vantagens da invençãoficarão evidentes a partir da descrição detalhada e dasreivindicações.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Um exemplo de uma composição inclui um agonista doreceptor para frio, por exemplo, um agonista doTRPM8 e/ou doTRPAl, em um veículo cosmética e/ou dermatologicamenteaceitável. A composição pode estar sob a forma de um sólido,semi-sólido ou líquido. A composição pode ser, por exemplo,um produto cosmético e dermatológico sob a forma de, porexemplo, pomada, loção, espuma, creme, gel ou solução. Acomposição pode, também, estar sob a forma de uma preparaçãopara barbeamento ou depilação, ou de um produto para usoapós o barbeamento ou depilação. 0 veículo, em si, pode serinerte ou pode oferecer seus próprios benefícios cosméticos,fisiológicos e/ou farmacêuticos.

Exemplos de agonistas do TRPM8 incluem terpenos,por exemplo, terpenos cíclicos, como mentol e lactato dementila (Frescolat ML). Terpenos são uma classe de compostosorgânicos encontrados em óleos essenciais e têm sidoempregados como fragrâncias, flavorizantes e medicamentos.Um terpeno refere-se a um composto que tem por base umaunidade de isopreno (CsH8) e pode ser classificado com baseno número de unidades de isoprenóides que eles contêm. Porexemplo, um monoterpeno consiste de duas unidades deisopreno (CIO), sesquiterpenos têm três (C15) e diterpenostêm quatro (C20). Um terpeno comumente usado é o mentol, quetem sido incorporado em inalações e preparações emolientes.Outros exemplos de terpenos incluem eucaliptol (1,8-cineole),geraniol, nerolidol, mentona, cineol, terpinol, d-limoneno,linalol, pulegol (por exemplo, isopulegol) e carvacrol.Outros exemplos de agonistas terpeno e não-terpeno do TRPM8incluem Trans-p-mentano-3,8-diol, cis-p-mentano-3,8-diol, 1-carvona (óleo de menta), N,2,3-trimetila-2-isopropilbutanamida (WS-23), N-etil paramentano-3-carboxaminda (WS-3),mentona glicerina acetal (Frescolat MGA), mentoxipropanediol(agente de resfriamento 10), Coolact P, PMD-38, succinato demonomentila (Physcool), glutarato de monomentila e hidróxicitronelal. (Consulte, por exemplo, WO 2005/089206;Behrendt, H-J. et al. (2004) British Journal of Pharmacology141:737-745; Calixto, J.B. et al. (2005) Pharmacology &Therapeutics 106:179-208 Erman, Μ. B. et al. (2005)Cosmetics & Toiletries 120(5):105-118, os conteúdos dosquais estão aqui incorporados a titulo de referência).

Exemplos de agonistas que se ligam e ativam TRPM8e TRPAl incluem eugenol, icilina e análogos dos mesmos, porexemplo, compostos similares a icilina. Icilina, l-(2-hidróxi fenila)-4-(3-nitrofenila)-1,2,3,6-tetrahidropirimidina-2-um (CAS N0 36945-98-9) tem umaestrutura química conforme mostrada abaixo:

<formula>formula see original document page 11</formula>

Compostos similares a icilina tipicamente têm umaestrutura química geral 1-[R1-fenila] 4-[R2-fenila]-1,2,3,6-tetrahidropirimidina-2-um conforme mostrada abaixo, sendo queR1 é tipicamente escolhido a partir de um ou mais hidróxi,cloro, fluoro, alquila (com cerca de 2 a cerca de 4 átomos decarbono), acetóxi ou trifluorometil; e R2 é tipicamenteescolhido a partir de um ou mais nitro, cloro, fluoro,alquila (com cerca de 2 a 4 carbonos), ou trifluorometil.

<formula>formula see original document page 11</formula>

Métodos adequados para preparar icilina ecompostos similares a icilina são descritos na patente U.S.n° 3.821.221 e patente U.S. n° 6.919.348, o teor dos quaisestá aqui incorporado a título de referência.Exemplos de agonistas do TRPA-I incluem gingerol;salicilato de metil (óleo de gaultéria) ; compostosisotiocianato (por exemplo, alicina ou isotiocianato dealila (óleo de mostarda), bem como benzila, fenil etila,isopropila e metil (isotiocianato); cinamaldeido (óleo decanela); e A9-tetrahidrocanabinol. Métodos para sintetizare testar agonistas do TRPAl apresentados na presenteinvenção, bem como análogos dos mesmos, são conhecidas natécnica e são descritos, por exemplo, no WO 2005/089206 eCalixto, J.B. et al. (2005) supracitado, o teor destes estáaqui incorporado, por referência.

A composição pode incluir mais de um agonista doTRPM8 e/ou do TRPAl. A composição pode, também, incluir umou mais outros tipos de agentes redutores do crescimento decabelos ou pêlos, como aqueles descritos nas patentes U.S.N0 4 . 720.4Í 39, u. s. N0 CO 35.289 / U. S . N ° 5.095 . 007, U . S. N5. 096 . 911, U. s. N0 5 . 132 .293, U . S . N0 5. 143. 925, U. S. N5. 328 . 686, U. s. N0 5 . 364 .885, U . S . N0 5.411. 991, U. S. N5. 440 .090, U. S . N0 5 .468 .476, U . S . N0 5. 475. 763, U. S. N5. 554 . 608, U. S . N0 5 . 648 .394, U . S . N0 5.652. 273, U. S. N5. 674 .477, U. S . N0 5 . 728 .736, U . S . N0 5.776. 442, U. S. N5. 824 . 665, U. S . N0 5 .840 .752, U . S . N0 5.908 . 867, U. S. N5. 939 .458, U. S . N0 5 . 958 . 946, U . s. N0 5.962. 466, U. S. N6. 020 . 006, u. S . N0 6 . 037 . 326, U . S . N0 6.060. 471, U. S. N6. 093 .748, u. s. N0 6 . 121 .269, U . S . N0 6.218 . 435, U. S. N6. 235 .737, u. s. N0 6 . 239 . 170, U . S . N0 6.248. 751, U. S. N6. 299 .865, u. s. N0 6. 414 . 017, u. S . N0 6.743.419 e U. , S. N6.743.822, estando todos esses documentos aquiincorporados, a titulo de referência.

A concentração do agonista do TRPM8 e/ou do TRPAlna composição pode variar sobre uma ampla gama até umasolução saturada, de preferência de 0,1% a 30%, em peso, ouaté mais; a redução no crescimento de cabelos ou pêlosaumenta conforme o aumento da quantidade aplicada porunidade de área de pele. A quantidade máxima aplicada demaneira eficaz é limitada somente pela taxa de penetraçãona pele. As quantidades eficazes podem situar-se na faixade, por exemplo, 10 a 3.000 microgramas, ou mais, porcentímetro quadrado de pele.

O veículo pode ser inerte ou pode oferecer seuspróprios benefícios cosméticos, fisiológicos e/oufarmacêuticos. Os veículos podem ser formulados comemolientes líquidos ou sólidos, solventes, espessantes,umectantes e/ou pós. Os emolientes incluem álcoolestearílico, óleo de marta, álcool cetílico, álcoololeílico, laurato de isopropila, polietileno glicol, gel depetróleo, ácido palmítico, ácido oléico e miristato demiristila. Os solventes incluem álcool etílico, isopropanol,acetona, dietileno glicol, etileno glicol, sulfóxido dedimetila e dimetil formamida.

A composição opcionalmente pode incluircomponentes que melhoram a penetração dos agonistas doTRPM8 e/ou do TRPAl na pele e/ou no local de ação. Exemplosde intensificadores de penetração incluem uréia., éteres depolióxi etileno (por exemplo, IRB-30 e lauret-4), 3-hidróxi-3,7,11-trimetila-l,6,10-dodecatrieno, ácidos cis-graxos (por exemplo, ácido oléico, ácido palmitoléico),acetona, laurocapramo, sulfóxido de dimetila, 2-pirrolidona, álcool oleilico, glicerila-3-estearato,propan-2-ol, éster isopropilico de ácido miristico,colesterol e propileno glicol. Um intensificador depenetração pode ser adicionado, por exemplo, aconcentrações de 0,1% a 20%, ou de 0,5% a 5%, em peso.

A composição podem, também, ser formulada parafornecer um reservatório no interior ou sobre a superfícieda pele para fornecer uma liberação lenta e contínua doagonista do TRPM8 e/ou do TRPAl. A composição pode, também,ser formulada para evaporar lentamente da pele, conferindoao agonista um tempo maior para penetrar na pele.

Uma composição de uso tópico à base de cremecontendo um agonista do TRPM8 e/ou do TRPAl é preparada pelamistura de água e de todos os componentes solúveis em águano tanque de mistura- A. O pH é ajustado a uma faixadesejada de cerca de 3,5 a 8,0. De modo a obter a completadissolução dos ingredientes, a temperatura do tanque podeser elevada até 45°C. A seleção do pH e temperaturadependerá da estabilidade do agonista do TRPM8 e/ou doTRPAl. Os componentes solúveis em óleo, exceto peloscomponentes de conservante e fragrância, são misturados umao outro em outro recipiente (B), e aquecidos até 70°C parafundir e misturar os componentes. 0 conteúdo aquecido dorecipiente B é vertido sobre a fase aquosa (recipiente A)com agitação rápida. A misturação prossegue durante cerca de20 minutos. Os componentes conservantes são adicionados àtemperatura de cerca de 40°C. A agitação prossegue até que atemperatura atinja cerca de 25°C, para produzir um crememacio com uma viscosidade de 8 Pa. s (8.000 cps) a 12 Pa. s(12.000 cps), ou outra viscosidade desejada. Os componentesde fragrância são adicionados a uma temperatura de cerca de25°C a 30°C, enquanto o conteúdo ainda está sendo misturadoe a viscosidade ainda não chegou à faixa desejada. Caso sedeseje aumentar a viscosidade da emulsão resultante, pode-seaplicar cisalhamento mediante o uso de um homogeneizadorconvencional, por exemplo um homogeneizador Silverson L4Rcom uma tela de orifícios quadrados e alto cisalhamento. Acomposição de uso tópico pode ser fabricada mediante ainclusão do agente ativo na fase aquosa durante a preparaçãoda formulação anteriormente descrita, ou o agente pode seradicionado depois de estar completa a preparação daformulação (veículo). 0 agente ativo pode, também, seradicionado durante qualquer etapa da preparação do veículo.Os componentes das formulações em creme são descritos nosexemplos abaixo.

Exemplo 1 (Creme)

<table>table see original document page 15</column></row><table><table>table see original document page 16</column></row><table>

a O ingrediente ativo é um agonista do TRPM8 e/ou do TRPAl.

b Poliquatêrnio-51 (Collaborative Labs, NY, EUA).

c Glicerina, água, sódio PCA, uréia, trealose, poliquatêrnio-51 ehialuronato de sódio (Collaborative Labs, NY, EUA).

Exemplo 2 (Creme)

<table>table see original document page 16</column></row><table>

a O ingrediente ativo é um agonista do TRPM8 e/ou do TRPAl.

Exemplo 3 (Creme)

<table>table see original document page 16</column></row><table>

a O ingrediente ativo é um agonista do TRPM8 e/ou do TRPAl.

Exemplo 4 (Creme)

<table>table see original document page 16</column></row><table><table>table see original document page 17</column></row><table>

A O agonista do TRPM8 e/ou do TRPAl é adicionadona formulação do Exemplo 4 e misturado até ser solubilizado.

Exemplo 5 (Creme)

<table>table see original document page 17</column></row><table>

A 0 agonista do TRPM8 e/ou do TRPAl é adicionadona formulação do Exemplo 5 e misturado até ser solubilizado.

Exemplo 6 (Creme)

<table>table see original document page 17</column></row><table><table>table see original document page 18</column></row><table>

A O agonista do TRPM8 e/ou do TRPA1 é adicionadona formulação do Exemplo 6 e misturado até ser solubilizado.

Exemplo 7 (Creme)

<table>table see original document page 18</column></row><table>

A O agonista do TRPM8 e/ou do TRPA1 é adicionadona formulação do exemplo 7 e misturado até ser solubilizado.

Exemplo 8 (Creme)

<table>table see original document page 18</column></row><table><table>table see original document page 19</column></row><table>

A O agonista do TRPM8 e/ou do TRPAl é adicionadona formulação do exemplo 8 e misturado até ser solubilizado.

Uma formulação hidroalcoólica contendo um agonistado TRPM8 e/ou do TRPAl é preparada pela mistura doscomponentes da formulação em um tanque de mistura. 0 pH daformulação é ajustado para um valor desejado na faixa de 3,5a 8,0. O ajuste de pH também pode ser feito de modo a causara completa dissolução dos ingredientes da formulação. Alémdisso, pode ser aplicado calor até 45°C, ou mesmo até 70°C,dependendo da estabilidade do ativo, de modo a se obter adissolução dos ingredientes da formulação. Algumasformulações hidroalcoólicas são listadas abaixo.

Exemplo 9 (hidroalcoólico)

<table>table see original document page 19</column></row><table>

aO ingrediente ativo é um agonista do TRPM8 e/ou do TRPAl.13 Triglicerideo caprilico/cáprico (Abitec Corp., 0H, EUA).<table>table see original document page 20</column></row><table>

a O ingrediente ativo é um agonista do TRPM8 e/ou do TRPAl.

Exemplo 11 (hidroalcoólico)

<table>table see original document page 20</column></row><table>

Um agonista do TRPM8 e/ou do TRPAl é adicionado àformulação e misturado até ser solubilizado.

O aquecimento pode ser realizado, por exemplo,mediante o uso de um laser, uma lâmpada de flash ou umdispositivo de Luz Intensa Pulsada (LIP). Por exemplo, odispositivo pode ser um laser de diodo com um comprimento deonda na faixa de 700 a 1.300 nm (por exemplo, 810 nm) , umlaser de rubi a 654 nm, um laser de alexandrita a 755 nm, umlaser de NdrYAG a 1.064 nm, um laser de NdrYAG na faixa de600 a 850 nm, uma luz pulsada, uma luz intensa pulsada ou umalâmpada de flash com um comprimento de onda na faixa de 400 a1.200 nm, uma luz fluorescente pulsada na faixa com 550, 580ou na faixa de 615 a 1.200 nm, um diodo emissor de luz (LED,ou Light Emitting Diode) com um comprimento de onda na faixade 400 a 700 nm, e uma energia óptica (580 a 980 nm) ou dediodo (800 + 25 nm) combinada com energia elétrica deradiofreqüência. A energia de saída (J/cm2) da luz edispositivos fototérmicos podem ser, por exemplo, de 0,5 a50 J/cm2, 2 a 20 J/cm2, or 1 a 10 J/cm2. Outros parâmetros defonte de laser e de luz que afetam o aquecimento incluemduração de pulso, tamanho do ponto e taxa de repetição. Asfaixas para esses parâmetros dependem do dispositivo deaquecimento utilizado. A duração de pulso pode situar-se, porexemplo, na faixa de 0,1 ms até 500 ms ou pode ser uma ondacontínua (CW) conforme descrito na patente U.S. N0 6.273.884.

Durante o aquecimento, a temperatura da pelegeralmente se eleva até ao menos 40°C, por exemplo, entre40°C e 55°C. No entanto, a pele pode ser aquecida atemperaturas tão altas quanto, por exemplo, 70°C mediante ouso de pulsos curtos com duração de milissegundos,evitando-se a ocorrência de queimaduras na pele. Para astemperaturas mais baixas na faixa de 40 a 60°C, deve-semanter o tempo de exposição entre 0,5 min até váriosminutos. Para temperaturas acima de 60°C, pode-se manter otempo de exposição de 1 a 500 ms. A temperatura da peleobtida pelo aquecimento por um mecanismo específicogeralmente pode ser determinada como a seguir. Um indivíduocom temperatura corporal normal é colocado em uma sala comuma temperatura de 25 °C. Um termopar de 0,23 mm(0,009 polegada) de diâmetro é colocado em uma área dapele. A saída do termopar é conectada a um condicionador desinais para termopar National Instruments SCXI-1112. Umaplaca para captura de dados National Instruments 6052E,tendo uma taxa de captura máxima de 333 mil amostras porsegundo, controlou a captura de dados e o ganho de sinal. Acombinação de SCXI-1112 e NI 6052E DAQ podia detectar,simultaneamente, até oito saídas de termopar a uma taxa de42 mil amostras por segundo. A taxa de amostragem pode serconduzida, por exemplo, a 1.000 amostras/segundo.

Um método similar é usado para determinar a faixade temperaturas na região da hipoderme. Nesse caso, umtermopar é inserido a uma profundidade de cerca de 5 mm empele humana ex-vivo, e o tratamento é aplicado à superfícieda pele.

A composição deve ser aplicada topicamente em umaárea de pele selecionada na qual deseja-se reduzir ocrescimento de pêlos. O período de tempo para a aplicação dacomposição de uso tópico, antes ou depois do tratamento poraquecimento, pode variar desde tão curto quanto 1 dia ou atémesmo uma aplicação simultânea, dependendo da natureza docomposto químico ativo na composição de uso tópico. Depreferência, a composição é aplicada (múltiplas vezes, porexemplo, duas, três ou quatro vezes) em um prazo de setedias a partir do aquecimento e, com mais preferência, aomenos uma vez no prazo dois dias a partir do aquecimento. Ascomposições podem ser aplicadas uma vez por dia, durante aomenos dois ou três dias antes do aquecimento.A composição, por exemplo, pode ser aplicada aorosto, particularmente à área de barba do rosto, isto é, àsbochechas, ao pescoço, ao lábio superior, e ao queixo. Acomposição também pode ser aplicada nas pernas, braços,torso, axilas, sobrancelhas e/ou virilha. A composição éparticularmente adequada para a redução do crescimento depêlos indesejados em mulheres com hirsutismo ou outrosproblemas de saúde. Δ combinação de aquecimento/composiçãopode ser usada como um composto auxiliar para outros métodosde remoção de cabelos ou pêlos, inclusive raspagem, remoçãopor cera, epilação mecânica, depilação química e eletrólise.Por exemplo, agonista(s) do TRPM8 e/ou do TRPA1, pode(m) serusado(s) em combinação com qualquer um dos outros métodos deremoção de pêlos supracitados, por exemplo, remoção porcera. Tal combinação de tratamento pode incluir, ainda, umtratamento depilatório com calor (por exemplo, laser).Qualquer combinação e/ou seqüência dos tratamentossupracitados com o(s) agonista(s) do TRPM8 e/ou do TRPAlestá dentro do escopo da invenção.

A redução no crescimento de cabelos ou pêlos podeser demonstrada quantitativamente mediante a redução docomprimento, do diâmetro, da pigmentação e/ou da densidadedos mesmos na área tratada. A redução no crescimento decabelos ou pêlos pode ser demonstrada cosmeticamente pelapresença, na área tratada, de cabelos ou pêlos menosvisíveis, mais curtos, mais finos/esparsos e mais macios,e/ou de um barbeado mais duradouro.Os protocolos usados nos Exemplos anexos sãoapresentados abaixo.

ENSAIO DE CRESCIMENTO DE FOLÍCULO PILOSO HUMANO

Os folículos pilosos humanos em fase de crescimento(anágena) foram isolados do tecido de ritidoplastia (obtido apartir de cirurgiões plásticos). A pele foi cortada em tirasestreitas, expondo de 2 a 3 fileiras de foliculos que podiamser prontamente dissecados. Os foliculos foram colocados emmeio E de William (Life Technologies, Gaithersburg, MD, EUA.)suplementado com 2 mM de L-glutamina, 10 pg/mL de insulina,10 ng/mL de hidrocortisona e uma mistura deantibiótico/antimicótico conforme descrito em Philpott et al.(1990) J. Cell Sei. 97 (Pt3):463-71. Os foliculos foramincubados em bandejas de 24 cavidades (1 folículo/cavidade) a37 °C em uma atmosfera de 5% de CO2 e 100% de umidade paradiferentes períodos de tempo (Philpott et al. (1990)supracitado).O comprimento dos folículos pilosos foiavaliado mediante o uso de um sistema de software paraanálise de imagens. Para determinar o efeito de moléculas quemodulam a atividade do TRPM8 /TRPAl no crescimento de pêlos,os folículos pilosos foram incubados com icilina (TocrisBioscience) e L-mentol, L-Iactato de mentila (Sigma). Foramtomadas imagens do folículo piloso nas placas com 24cavidades, na lupa de dissecção sob uma ampliação de 20 χ. 0comprimento do folículo piloso foi medido no dia 0 (osfolículos do dia foram colocados em cultura) e novamente nodia 6. 0 crescimento da fibra capilar foi calculado mediantea subtração do comprimento do foliculo no dia 0 daqueledeterminado no dia 6.

IMUNOHISTOQUÍMICA

Para determinar a expressão do TRPM8 no foliculopiloso, o protocolo de imunofluorescência indireta foiempregado. Seções de criostato (8 μιτι) de foliculos pilososforam recém-preparadas e fixadas em acetona, e pré-incubadas com 10% de soro normal de cabra, seguido de umaincubação com o anticorpo primário contra o TRPM8 (1:50;Novus-Biologicals) de um dia para o outro à temperaturaambiente. As seções foram então incubadas com IgG de cabraanti-coelho identificada com TRITC (Jackson ImmunoResearch;45 min, 37°C).

Para detecção da proliferação de células doprotocolo de imunofluorescência indireta usando-se anticorpomonoclonal de coelho contra Ki-67. Seções de foliculo pilosocom 8 pm foram fixadas em formalina e pós-fixadas emetanol/ácido acético. Em seguida, as seções foram incubadascom anticorpo contra Ki-67 (1: 50; Dako; M 7187) de um diapara o outro à temperatura ambiente, seguido de incubaçãocom IgG de cabra anti-coelho identificada com TRITC (JacksonImmunoResearch; 45 min, 37°C).

A contracoloração foi realizada usando-se coranteHOECHST 33342 (10 mg/mL em PBS; 10 minutos) . Cada fase foientremeada por uma etapa de lavagem (três vezes) em PBS.Finalmente, as seções foram montadas, mediante o uso deVectaShield (Vector Laboratories).Para a imunodetecção de proteínas melanogênicas, asseções foram incubadas tanto com anticorpo monoclonal decamundongo contra tirosinase humana como anticorpo monoclonalde frango contra p-mel 17 humano (Neomarker e Zymed,respectivamente; 1:100, de um dia para o outro), seguido deincubação com IgG de cabra anti-coelho identificada com TRITC(Jackson ImmunoResearch; 45 min, 37 °C) e IgG de cabra anti-frango identificada com FITC, respectivamente. Em seguida, asseções foram contracoradas com Hoechst 33342 (1: 300, 15 min)para identificação de núcleos celulares, e montadas usando-seVectaShield (Vector Laboratories).

Todas as seções foram examinadas sob ummicroscópio fluorescente Olympus BX 60, e fotodocumentadascom o auxílio de um sistema para análise de imagens digitais(câmera CCD CoolSnap™, Alpha Innotech).

ANÁLISE WESTERN BLOT

As proteínas celulares totais de melanócitoshumanos foram collhidas em um tampão de Iise (Kit deextração de proteína total; CHEMIC0N International, Inc). 20μg de proteína foram carregados por faixa, separados poreletroforese em gel de poliacrilamida com 10% de dodecilsulfato sódio e transferido para membranas de nitro celulosea 100 V por 1 h. Após bloqueio de um dia para o outro com 5%de leite desnatado desidratado/albumina sérica bovina (BSA)em solução salina tamponada com fosfato-Tris (PBS) (0,5%Tween-20 em PBS) a 4 °C, a membrana foi incubada de um diapara o outro com um anticorpo monoclonal, tanto contratirosinase como proteína-1 relacionada à tirosinase eactina, em uma diluição de 1:1000. Após incubação, amembrana foi rapidamente lavada em PBS, depois três vezescom Tris-PBS, e incubada com o anticorpo secundáriocorrespondente em diluição 1:1000 (Pierce, Rockford, IL)- em1% de leite/0,2% de BSA por 1 hora. Após lavagem extensiva,a membrana foi incubada durante 1 minuto com reagente paradetecção Western Blotting em quimioluminescência ligado àenzima (Amersham, Buckinghamshire, REINO UNIDO), e as bandasforam detectadas em filme Kodak X-Omat e revelado apósvários segundos de exposição.RT-PCR

A transcrição do gene TRPAl na pele humana espessae nas células da papila dérmica isoladas do foliculo capilarfoi caracterizada por análise RT-PCR. 0 RNA total foi isoladodas amostras de pele do couro cabeludo espesso e células dapapila dérmica do foliculo capilar usando-se reagente TRIzol(Invitrogen, San Diego, Califórnia). 0 cDNA foi sintetizadopor transcrição reversa de 2,5 pg do RNA total, usando-se umSistema de Síntese de Fita SuperScript™ por RT-PCR (nvitrogenSan Diego, Califórnia). Os seguintes cojuntos de iniciadoresde oligonucleotídeo foram usados para amplificar o c-DNAespecífico: TRPAl humano: iniciador#l: 5'-

TCATGGTCCAACAGAACACATGGC-3' e 51-GCATGACAGGCATGGTACAGTGTT-3'(tamanho do produto iniciador: 228 bp) , iniciador#2: 5'- TCCTCTCCATCTGGCAGCAAAGAA -3' e 5'- ATTGTGGCTCAGAAGAAGCGCAAC -3' (tamanho do produto iniciador: 262 bp). A amplificação foirealizada usando-se PCR SuperiMix (Invitrogen) em 38 ciclos,usando-se um ciclador térmico automatizado. Cada cicloconsistiu das seguintes etapas: desnaturação a 94°C (1 min),anelamento a 58°C (45 s) , e extensão a 72°C (45 s). Osprodutos de PCR foram analisados por eletroforese em gel(agarose 2%) e digestão enzimática usando-se métodos-padrão.

Exemplo 1: Localização Imunohistoquimica do TRPM8 emFoliculos Capilares Anágenos

Para localizar TRPM8 no foliculo capilar anágenohumano, foi aplicada imunohistoquimica usando-se anticorpopoliclonal de coelho contra TRPM8 humano. A expressão doTRPM8 foi encontrada na papila dérmica do foliculo capilar,bem como nas células da matriz pilosa circundante da papiladérmica. A dupla imunocoloração para detecção simultânea doTRPM8 e marcador de melanócito pMel-17 (gp 100) revelou co-localização destas duas proteínas no foliculo capilar. Istosugere que as células que expressam TRPM8 vistas na matrizcapilar são melanócitos. Desse modo: A expressão do TRPM8foi detectada na papila dérmica do foliculo capilar, e nosmelanócitos foliculares e epidérmicos.

Exemplo 2: Expressão de mRNA do TRPAl na pele humana e nofoliculo

A transcrição do gene do TRPAl na pele humanaespessa e nas células de papila dérmica isolada do foliculocapilar foi caracterizada pela análise RT-PCR. 0 RNA totalda pele do couro cabeludo de seres humanos e das células depapila dérmica do foliculo capilar foram extraídas etranscritas de forma reversa. Como resultado, os níveis deregime permanente detectáveis de mRNA do TRPAl foramencontrados na pele bem como nas células de papila dérmica.Exemplo 3: Efeito dos agonistas do TRPM8 e do TRPAl noCrescimento de Cabelos ou

Para identificar se a modulação da atividade doTRPM8 e do TRPAl poderia afetar o crescimento de cabelos oupêlos, seus agonistas foram testados no modelo de cultura defoliculo capilar. 0 tratamento do foliculo capilar com 10 μΜde mentol, icilina e lactato de mentila, causou inibição decrescimento de cabelos estatisticamente significativa em40%, 45% e 60% respectivamente, comparado ao controle. Otratamento do foliculo capilar com icilina (um agonista doTRPM8 e do TRPA1) resultou na inibição da proliferaçãocelular em um modo dependente da concentração, gue foidetectado por uma diminuição proeminente na imunoreatividadeKi-67 na matriz capilar e na bainha externa da raiz. Dessaforma, a ativação tanto do TRPM8 como do TRPAl por um agentede resfriamento leva a uma redução significativa na taxa decrescimento de cabelos ou pêlos in vitro.

Exemplo 4: Efeito dos Agonistas do TRPM8 e do TRPAl nosMelanócitos

Para determinar se um agonista do TRPM8 e doTRPAl pode afetar a atividade de produção de pigmento dosmelanócitos, a expressão de tirosinase foi analisada nosfoliculo capilares tratados com 10 uM de icilina porimunohistoquimica. A expressão da tirosinase diminuiu nosfoliculos capilares tratados, comparada ao controle. Alémdisso, os efeitos da icilina na expressão da proteínamelanogênica foram testados na cultura de melanócitosepidérmicos humanos. Uma diminuição na tirosinase e nosníveis de expressão da proteína relacionada à tirosinase(TRP)-I foram observados 48 horas após tratamento com 10 uMde icilina, comparado ao controle, conforme determinadopela análise Western blot. Portanto, a icilina exerce umefeito inibidor do crescimento de cabelos in vitro,acompanhado por uma diminuição na atividade de produção depigmento dos melanócitos. Estes resultados sugerem que osagonistas dos receptores TRPM8 e TRPAl podem proteger osmelanócitos da superpigmentação.

Outras modalidades estão nas reivindicações. Porexemplo, as classes de compostos e os compostos específicosdescritos na lista de patentes acima, e incorporados porreferência, podem ser usados nos métodos apresentados naseção de Sumário.

Todos os documentos citados na Descrição Detalhadaestão, em sua parte relevante, aqui incorporados, a títulode referência. A citação de qualquer documento não deve serinterpretada como admissão de que este represente técnicaanterior com respeito à presente invenção. Se qualquersignificado ou definição de um termo presente nestedocumento entrar em conflito com algum significado oudefinição do mesmo termo em um documento incorporado atítulo de referência, terá precedência o significado ou adefinição desse termo neste documento.

Embora modalidades específicas da presenteinvenção tenham sido ilustradas e descritas, deve ficaróbvio aos versados na técnica que várias outras alterações emodificações podem ser feitas sem que se desvie do caráter eâmbito da invenção. Portanto, pretende-se cobrir nasreivindicações anexas todas essas alterações e modificaçõesque se enquadram no escopo da presente· invenção.

Claims

1. Método de redução do crescimento de cabelos oupêlos em mamíferos, caracterizado pelo fato de compreenderas etapas de:(a) selecionar, no mamífero, uma área de pele naqual se deseje um crescimento reduzido decabelos ou pêlos; e(b) aplicar, a essa área de pele, uma composiçãodermatologicamente aceitável que compreende umagonista do receptor para frio escolhido apartir de um agonista do Receptor de PotencialTransiente Melastatina-8 (TRPM8), um agonistado canal do receptor de potencial transienteanquirina-repetição 1 (TRPAl), ou umacombinação dos mesmos.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que a composição não inclui alfa-difluorometil ornitina.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2,caracterizado pelo fato de que o agonista do TRPM8 é umagonista do TRPM8 não-terpeno.

4. Método, de acordo com a reivindicação 3,caracterizado pelo fato de que a composição compreende,ainda, um terpeno.

5. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2,caracterizado pelo fato de que o agonista do TRPM8 é umterpeno.

6. Método, de acordo com a reivindicação 5,caracterizado pelo fato de que o terpeno é mentol oulactato de mentila.

7. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2,caracterizado pelo fato de. que o agonista do TRPM8 ou doTRPAl é icilina.

8. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que acomposição não inclui um inibidor da proteína de choquetérmico ou um composto que promova apoptose.

9. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações anteriores, compreendendo, ainda, a etapa (c)de contatar a área de pele com um depilatório com calor.

10. Método, de acordo com a reivindicação 9,caracterizado pelo fato de que um laser é usado para aetapa (c).

11. Método, de acordo com a reivindicação 10,caracterizado pelo fato de que a área de pele é tratada comlaser em um prazo de 48 horas subseqüente à aplicação dacomposição.

12. Método, de acordo com a reivindicação 9,caracterizado pelo fato de que uma lâmpada de flash é usadapara a etapa (c).

13. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que acomposição inclui entre 0,1% e 30% do agonista, em peso.

14. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que aárea de pele de um ser humano é selecionada do grupoconsistindo em face, axilas, pernas, sobrancelhas e virilha.