BRPI0616633A2 - inibidores de pde e combinações dos mesmos para o tratamento de transtornos urológicos - Google Patents

Abstract

INIBIDORES DE PDE E COMBINAçõES DOS MESMOS PARA O TRATAMENTO DE TRANSTORNOS UROLóGICOS. A presente invenção provê composições farmacológicas compreendendo inibidores de PDE-5 e de PDE-4, sozinhos ou em combinação, para o tratamento de transtornos urológicos compreendendo Hiperpíasia Prostática Benigna (BPH), Sintomas do Trato Urinário Inferior (LUTS) e especificamente sintomas de irritação causados por obstrução da saída da bexiga induzida por BPH. A invenção também provê métodos de classificação para tais inibidores de PDE-5 e PDE-4 para emprego, em combinação ou sozinhos, na preparação de medicamentos para o tratamento dos transtornos urológicos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "INIBIDORESDE PDE E COMBINAÇÕES DOS MESMOS PARA O TRATAMENTO DETRANSTORNOS UROLÓGICOS".

CAMPO TÉCNICO DA INVENÇÃO

A presente invenção refere-se às fosfodiesterases (PDEs) e àfarmacologia dos inibidores de PDE. Mais especificamente, a invenção serefere aos inibidores de PDE-5 e PDE-4 e seu uso na preparação de medi-camentos para o tratamento de transtornos urológicos.

ANTECEDENTS DA INVENÇÃO

Hiperplasia Prostática Benigna (BPH) resultando na obstruçãoda Saída da Bexiga (BOO) é um neoplasma muito comum nos homens. Es-tima-se que aproximadamente 80% dos homens com idade acima de 50 a-nos possuem sintomas moderados a graves, incluindo freqüência urináriaaumentada, noctúria e de urgência, acompanhadas por um fluxo urináriolento e retenção urinária. Portanto, a BPH é reconhecida crescentementecomo um problema de saúde maior nos países do ocidente (Guess 1995).Além da cirurgia prostática (20% de todos pacientes com BPH), o tratamentocomum da doença compreende inibidores de 5-alfa reductase (finasterida) ealfa bloqueadores (tamsulosina, doxazosina, terazosina, alfuzosina) (Truss2001). Os inibidores de 5-alfa reductase influenciam o componente mecâni-co de BPH e inibem a proliferação do tecido prostático. Os alfa bloqueadoresinfluenciam o componente dinâmico e diminuem os sintomas de irritação deBPH através do relaxamento da musculatura lisa prostática o que diminui aresistência da uretra. Além disso, os alfa bloqueadores são capazes de rela-xar diretamente as células da musculatura lisa da bexiga e reduzir as contra-ções de não eliminação da urina na bexiga. Contudo, todas essas opções detratamento possuem uma eficácia limitada e/ou um perfil de efeito colateraldesfavorável (Carbone 2003). Assim, diversas tentativas focaram as novasopções terapêuticas para inibir a proliferação do estroma prostático ou a di-minuição do tonus da musculatura lisa da próstata e da bexiga. Isso inclui,inibidores de aromatase (Sciarra 2000), antagonistas do fator de crescimento(Desgrandchamps 1997), abridores do canal de potássio (Gopalakrishnan2004) e antagonistas de endotelina (Andersson 2002).

Também foi bem-estabelecido que o nucleotídeos cíclicos AMPce GMPc podem reduzir o tonus da musculatura lisa (Drescher 1994). AMPce GMPc são sintetizados de seus trifosfatos de nucleosídeo correspondentespelo adenilato e guanilato ciclase respectivamente. Eles são degradadospelas fosfodiesterases de nucleotídeo cíclicas (PDEs) que regulam muitoeficazmente o nível de AMPc e GMPc. Até agora 11 diferentes membros dafamília PDE foram identificados, os quais diferem em estrutura, regulação eespecificidade dos seus substratos (Soderling 2000). O papel das PDEs notratamento de transtornos urológicos é apenas pouco entendido, a caracteri-zação das isoformas de PDE está defasada em relação a outros sistemas ea maior parte da literatura foi publicada antes da identificação das novasPDEs, o que foi realizado recentemente. Embora as PDEs sejam expressasno trato urinário inferior, isto é, na bexiga, na uretra e nos tecidos prostáti-cos, ainda faltam ou são inconsistentes os dados da expressão de RNAm ecomparações diretas de todos isogenes de PDE. Existem algumas evidên-cias de que a inibição não específica de PDE seja capaz de relaxar o tecidoprostático humano (Drescher 1994). Os dados com relação ao efeito da ini-bição de PDE-5 são muito limitados. Foi mostrado que, o Zaprinast, um ini-bidor de PDE-5 que também inibe PDE-6, -9 e -1.1 é capaz de relaxar o teci-do prostático humano pré-contraído in vitro (Ückert 2001), considerando-seque o papel das outras famílias PDE dentro desse tecido precisa ser deter-minado. Dentro da bexiga, o bloqueio não específico de diferentes PDEs porIBMX (inibição de PDE-1, -2, -3, -4, -5, -6, -10 e -11) poderia relaxar a bexigade uma fêmea de porquinho da índia, considerando-se que Zaprinast foi ine-ficaz (Gillespie 2004). A despeito dessas verificações inconsistentes, o papelde PDE-5 no relaxamento do corpo cavernoso e tratamento da disfunçãoerétil é bem conhecido e já existem inibidores muito potentes e seletivos dePDE-5 no mercado. Os inibidores de PDE-4 potentes e seletivos são usadosprincipalmente para o tratamento da asma e COPD (Spina 2003).

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

Um aspecto da invenção é provido por um perfil de expressãode RNAm de PDE demonstrando a abundância de PDE-5 dependente deGMPc e PDE-4 dependente de AMPC, não apenas no tecido prostático, po-rém também no tecido da bexiga (figuras 1,2). Portanto, os inibidores seleti-vos de PDE-5 ou PDE-4 e especificamente combinações de ambos, não re-duziriam apenas a contractilidade da próstata, porém também, como um be-nefício adicional da combinação de ambos, melhorariam os sintomas de irri-tação causados pela obstrução da Saída da Bexiga, como ocorre freqüen-temente nos transtornos urológicos. Inibidores seletivos de PDE-5 são, porexemplo, Vardenafil, Sildenafil e Tadalafil e um inibidor seletivo de PDE-4sendo o Roflumilast.

Os transtornos urológicos englobados pelos agentes terapêuti-cos da invenção compreendem, Hiperplasia Prostática Benigna (BPH), Sin-tomas do Trato Urinário Inferior (LUTS) e especificamente, os sintomas deirritação causados pela Obstrução da Saída da Bexiga (BOOP) induzida porBPH. Uma vez que não apenas as irritações sintomáticas da bexiga, porémtambém as obstruções da Saída da Bexiga induzidas por BPH são engloba-das pelo tratamento com inibidores específicos de PDE-5 e/ou PDE-4 (e es-pecificamente combinações dos mesmos), esse tratamento provê vantagemsubstancial em relação aos métodos de tratamento já conhecidos na técnica.

Outros transtornos urológicos que, especificamente e com van-tagem substancial podem ser tratados pelos inibidores mencionados acimaou combinação dos inibidores são os transtornos genitourinários compreen-dendo síndrome neurogênica da bexiga [também referida como bexiga supe-rativa (OAB) ou cistite intersticial (IC)], incontinência urinária, (UI) tal como,incontinência mista, de urgência, de estresse, ou de fluxo constante (MUI,UUI, SUI, OUI), dor pélvica, transtornos benignos e malignos dos órgãosconstituindo o sistema genitourinário em mulheres e homens, doenças re-nais tais como, falência renal aguda ou crônica, doenças renais imunologi-camente mediadas, tais como, rejeição do transplante renal, nefrite do lúpus,doenças renais do complexo imune, glomerulopatias, nefrite, nefropatia tóxi-ca, uropatias obstrutivas e disfunção erétil.

Outro aspecto da invenção é a demonstração de que o inibidorde PDE-5 Vardenafil possui um efeito de relaxamento nos anéis uretrais dorato com um valor de EC50 de 0,96 μιτιοΙ/L, e tiras prostáticas e de bexiga dorato com o valor EC50 de 1,1 e 5,0 μιτιοΙ/L respectivamente (figura 3, Tabela 1).

Outro aspecto da invenção é a demonstração de que o inibidorde PDE-4 Roflumilast e o inibidor de PDE-5 Vardenafil ambos mostram efei-tos de relaxamento nas tiras de bexiga de rato com um IC5o de 260 nmol/L e1,7 pmol/L respectivamente (figura 4, Tabela 2).

Outro aspecto da invenção é provido pela demonstração de queo inibidor de PDE-5 Vardenafil aumentou significativamente o número decontrações de não eliminação da urina como uma medida dos sintomas deirritação de BPH no modelo de obstrução da Saída da Bexiga (BOO) de rato(figura 5).

A invenção provê inibidores de PDE-5 que são, sozinhos, ou emcombinação com os inibidores de PDE-4, úteis para o tratamento de trans-tornos urológicos. Especificamente, os compostos da invenção são Tadalafil((6R,12aR) -2,3,6,7,12,12a - Hexaidro - 2 - metil - 6-(3,4-metileno-dioxifenil) pirazino(1',2':1,6) pirido(3,4-b)indol-1,4-diona), Vardenafil (2-(2-Etóxi-5-(4-etilpiperazin-1-il-1-sulfonil)fenil)-5-metil-7-propil-3H-imidazo (5,1-f)(1,2,4)triazin-4-ona), Sildenafil (3-[2-etóxi-5-(4-metilpiperazin-1-il)sulfonil-fenil]- 7- metil- 9- propil-2,4,7,8-tetrazabiciclo [4.3.0]nona -3,8,10-trien-5-ona),Udenafil 5-[2-propilóxi-5-(1-metil-2-pirrolidiniletilamidossulfonil)fenil]-metil-3-propil-1,6-diidro-7H-pirazol(4,3-d)pirimidina-7-ona, Dasantafil 7-(3-Bromo-4-metoxibenzil)-1-etil-8-[[(1,2)-2-hidroxiciclopentil]amino]-3-(2-hidroxietil)-3,7-diidro-1-purina-2,6-diona, Avanafil 4-{[(3-cloro-4-metoxifenil)metil]amino}-2-[(2S)-2-(hidroximetil)pirrolidin-1-il]-N-(pirimidin-2-ilmetil)pirimidina-5-carboxamida, SLx 2101 da Surface Logix, LAS 34179 Triazol[1,2-]xantina,6-metil-4-propil-2-[2-propóxi-5-(4-metilpiperazino)sulfonil]fenil-, Roflumilast (3-(ciclopropilmétoxi)-N-(3,5-dicloropiridin-4-il)-4-(difluormetóxi)benzamida), Ci-Iomilast (ácido 4-ciano-4-(3-ciclopentóxi-4-metóxi-fenil)-cicloexano-1-carboxílico), e Piclamilast (3-ciclopentóxi-N-(3,5-dicloropiridin-4-il)-4-metóxi-benzamida).Ainda outro aspecto da invenção é um método de classificaçãopara inibidores de PDE1 especificamente para inibidores de PDE-4- e PDE-5para emprego, sozinhos ou em combinação, para a preparação de medica-mentos para o tratamento de transtornos urológicos mencionados acima.

A invenção provê métodos (também referidos como "ensaios declassificação") para identificação de inibidores de PDE que podem ser usa-dos para o tratamento de transtornos urológicos. Os métodos incluem a i-dentificação de compostos candidatos ou de teste ou agentes (por exemplo,peptídeos, peptidomiméticos, moléculas pequenas e outras moléculas) quese ligam às fosfodiesterases e/ou possuem um efeito estimulador ou inibidorda atividade biológica de PDE1A ou sua expressão e então determinandoquais desses compostos possui um efeito nos sintomas ou doenças relacio-nados aos transtornos urológicos em um ensaio in vivo.

Os compostos candidatos ou de teste ou agentes que se ligam aPDE-4 ou PDE-5 e/ou possuem um efeito estimulador ou inibidor da ativida-de ou da expressão de PDE-4 ou PDE-5 sendo identificados tanto nos en-saios que empregam células que expressam PDE-4 e/ou PDE-5 (ensaioscom base na célula) ou nos ensaios com PDE-4 e/ou PDE5 isolada (ensaiosisentos de célula). Os vários ensaios que empregam uma variedade de vari-antes de PDEs (por exemplo, PDEs de comprimento pleno, um fragmentobiologicamente ativo de PDEs, ou uma proteína de fusão que inclui todas ouparte das PDEs). Além disso, PDE-4 e/ou PDE-5 podem ser derivadas dequaisquer espécies de mamíferos apropriados. O ensaio pode ser um ensaiode ligação cobrindo a medição direta ou indireta da ligação de um compostode teste ou um Iigante de PDE-4 ou PDE-5 para PDE-4 ou PDE-5. O ensaiopode também ser um ensaio de atividade cobrindo medição direta ou indiretada atividade de PDE-4 ou PDE-5. O ensaio pode também ser um ensaio deexpressão cobrindo medição direta ou indireta da expressão de RNAm dePDE-4 e/ou PDE-5 ou proteína de PDE-4 e/ou PDE5. Os vários ensaios declassificação são combinados com um ensaio in vivo cobrindo a medição doefeito do composto de teste nos sintomas dos distúrbios urológicos.

A presente invenção inclui ensaios bioquímicos, ensaios isentosde células que permitem a identificação dos inibidores e agonistas dos PDEsapropriados com estruturas de condução para o desenvolvimento de medi-camento farmacológico. Tais ensaios envolvem contato de PDE-4 e/ou PDE-5 com o composto de teste e determinação da capacidade do composto deteste de atuar como um antagonista (preferivelmente) ou um agonista daatividade enzimática de PDE-4 e/ou PDE-5. Em uma concretização, o ensaioinclui monitoramento da atividade de PDE de PDE-4 e/ou PDE-5 por medi-ção da conversão tanto de AMPc quanto GMPc em seu monofosfato de nu-cleosídeo após contato de PDE-4 e/ou PDE-5 com o composto de teste.

Por exemplo, os níveis de AMPc e GMPc podem ser medidospelo emprego dos compostos contendo 3HAMPc e 3HGMPc conforme des-crito em [Hansen1R. S., e Beavo1 J.A., PITAS USA1982.79: 2788-92], Paraclassificar um grupo de compostos compreendidos de um grande número decompostos, pode ser aplicado o ensaio de proximidade de cintilação à baseda placa microtituladora (SPA) conforme descrito em [Bardelle, C. e outros,(1999) Anal. Biochem. 275: 148-155].

Alternativamente, a atividade de fosfodiesterase da proteína re-combinante pode ser classificada usando um kit de SPA comercialmentedisponível (Amersham Pharmacia). A enzima de PDE hidrolisa os nucleotí-deos cíclicos, por exemplo, AMPc e GMP em suas contrapartes lineares. Oensaio de SPA utiliza os nucleotídeos cíclicos tritiados [3H]AMPc ou[3H]GMPc, e se baseia na interação seletiva do produto cíclico não tritiadocom as esferas de SPA, considerando-se que os substratos cíclicos não seligam eficazmente.

O produto radiorrotulado ligado às microesferas de cintilaçãogera luz que pode ser analisada em um contador de cintilação.

Uma composição farmacêutica da invenção é formulada paraser compatível com sua via destinada de administração. Exemplos de viasde administração incluem parenteral (por exemplo, administração intraveno-sa, intra-arterial, intradérmica, subcutânea, intramuscular, inalação, trans-dérmica, transmucosal, nasal e retal), oral (por exemplo, administração bu-cal, sublingual, oral, mucosal e peroral) e local (por exemplo, instilação localde soluções ou suspensões e implantes locais).

Composições farmacêuticas apropriadas para injeções e infu-sões incluem soluções aquosas estéreis (se o ingrediente ativo for suficien-temente solúvel em água), suspensões, emulsões e pós estéreis para a pre-paração extemporânea de soluções injetáveis estéreis ou dispersões. O veí-culo pode ser um solvente ou meio de dispersão contendo, por exemplo á-gua, etanol, um poliol farmaceuticamente aceitável, tal como glicerol, propi-lenoglicol, polietileno glicol líquido e misturas apropriadas dos mesmos. Osingredientes farmaceuticamente aceitáveis podem ser adicionados, tais co-mo, tampões, conservantes, antioxidantes, agentes isotônicos ou agentestensoativos. As injeções de depósito se baseiam em princípios de formula-ção conhecido, tais como, soluções oleosas ou suspensões ou partículas depolímeros biodegradáveis.

Para administração por inalação, os compostos são reveladosna forma de uma aspersão em aerossol de um recipiente pressurizado oudispensador que contém um propelente apropriado de um nebulizador ou uminalador de pó seco.

A administração sistêmica pode também ser realizada por meiostransmucosais ou transdérmicos. Para administração transmucosal ou trans-dérmica, os penetrantes apropriados para a barreira a serem permeados sãousados na formulação. Tais penetrantes são geralmente conhecidos na téc-nica, e incluem, por exemplo, administração transmucosal, detergentes, saisbiliares e derivados do ácido fusídico. A administração transmucosal podeser realizada através do uso de aspersões nasais, preparações sublinguaisou bucais ou supositórios. Para administração transdérmica, os compostosativos são formulados em ungüentos, emplastros, géis ou cremes conformegeralmente conhecido na técnica.

Os compostos podem também ser preparados na forma de su-positórios (por exemplo, com bases de supositório convencionais, tais como,manteiga de cacau e outros glicerídeos) ou enemas de retenção para distri-buição retal.

Composições gerais geralmente incluem um diluente inerte ouagente de volume e excipientes funcionais. Eles podem ser encerrados emcápsulas ou prensados em comprimidos. Outras formas de dosagem apro-priada são comprimidos efervescentes, comprimidos mastigáveis, comprimi-dos orodispersáveis, cápsulas de gelatina macia, cápsulas de gelatina duraenchidas com líquido, pós em saches e líquidos orais.

Excipientes funcionais apropriados para a preparação de formasde dosagem oral são bem conhecidos na técnica e incluem, por exemplo,ligantes, tais como, polivinilpirrolidona ou hidroxipropilmetilcelulose, disinte-grantes, tais como, crospovidona ou croscarmelose sódio, deslizantes, taiscomo, dióxido de silício coloidal, lubrificantes, tais como, estearato de mag-nésio, macrogóis ou ácido esteárico, agentes adoçantes, tais como, aspar-tame, sacarose ou sacarina sódio e agentes aromatizantes, tais como, aro-matizante hortelã-pimenta ou laranja.

Em uma modalidade, os compostos ativos são preparados comveículos que protegem o composto ativo contra eliminação rápida do corpo,tais como, comprimidos de liberação controlada oü péletes revestidos enchi-dos nas cápsulas ou formulações de liberação controladas parenterais, inclu-indo implantes e sistemas de distribuição microencapsulados. Polímeros bi-odegradáveis ou biocompatíveis podem ser usados, tais como, acetato deetileno vinila, polianidridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres, áci-do poliláctico ou copolímeros poliglicólicos-polilácticos.

Em outra modalidade, a invenção provê combinações de inibido-res de PDE-4 e PDE-5 e seu uso para a preparação de composições farma-cêuticas para o tratamento de transtornos urológicos, pelo que, essas com-binações compreendem tanto i) composições farmacêuticas compreendendoum composto possuindo ação inibidora de ambas atividades de PDE-4 ePDE-5, ou ii) composições farmacêuticas compreendendo pelo menos uminibidor de PDE-4 e pelo menos um inibidor de PDE-5 como uma combina-ção fixa em uma unidade de aplicação ou iii) um kit de partes contendo, pelomenos, dois conjuntos de composições farmacêuticas, cada conjunto consis-tindo em pelo menos uma preparação farmacêutica compreendendo um ini-bidor de PDE-5 nas unidades de pelo menos uma dose e pelo menos umapreparação farmacêutica compreendendo um inibidor de PDE-4 nas unida-des de pelo menos uma dose, pelo que, cada unidade de aplicação dascomposições farmacêuticas é administrada em combinação, seqüencialmen-te, como uma dose simples ou em doses múltiplas.

A presente invenção provê, adicionalmente:um método de classificação para inibidores de PDE-5 úteis co-mo agentes terapêuticos, no tratamento de uma doença compreendida emum grupo de doenças consistindo em Hiperplasia Prostática Benigna (BPH),Obstrução da Saída da Bexiga (BOO) e Sintomas do Trato Urinário Inferior(LUTS) compreendendo as etapas de i) contato com um composto de teste(que pode ou não ter atividade inibidora de PDE-4) com um polipeptídeo dePDE-5, ii) determinação da atividade do polipeptídeo de PDE-5 em uma de-terminada concentração do composto de teste ou na ausência do compostode teste, iii) determinação da atividade do polipeptídeo de PDE-5 em umaconcentração diferente do composto de teste, iv) seleção de pelo menos umcomposto com efeito inibidor no polipeptídeo de PDE-5.

Um método de classificação para os inibidores de PDE-4 úteiscomo agentes terapêuticos no tratamento de uma doença compreendida emum grupo de doenças consistindo em Hiperplasia Prostática Benigna (BPH),Obstrução da Saída da Bexiga (BOO) e Sintomas do Trato Urinário Inferior(LUTS) compreendendo as etapas de i) contato com um composto de teste(que pode ou não ter atividade inibidora de PDE-5) com um polipeptídeo dePDE-4, ii) determinação da atividade do polipeptídeo de PDE-4 em uma de-terminada concentração do composto de teste ou na ausência do compostode teste, iii) determinação da atividade do polipeptídeo de PDE-4 em umaconcentração diferente do composto de teste, iv) seleção de pelo menos umcomposto com efeito inibidor no polipeptídeo de PDE-4.

Um método de classificação para combinações de inibidores dePDE-5 e inibidores de PDE-4 úteis como agentes terapêuticos no tratamentode uma doença compreendida em um grupo de doenças consistindo em Hi-perplasia Prostática Benigna (BPH), Obstrução da Saída da Bexiga (BOO) eSintomas do Trato Urinário Inferior (LUTS) compreendendo as etapas de i)contato de um primeiro composto de teste com um polipeptídeo de PDE-5, ii)determinação da atividade do polipeptídeo de PDE-5 em uma determinadaconcentração do primeiro composto de teste ou na ausência do primeirocomposto de teste, iii) determinação da atividade do polipeptídeo de PDE-5em uma concentração diferente do primeiro composto de teste, iv) seleçãode pelo menos um primeiro composto com efeito inibidor no polipeptídeo dePDE-5, v) contato de um segundo composto de teste com um polipeptídeode PDE-4, vi) determinação da atividade do polipeptídeo de PDE-4 em umadeterminada concentração do segundo composto de teste ou na ausência dosegundo composto de teste, vii) determinação da atividade do polipeptídeode PDE-4 em uma concentração diferente do segundo composto de teste,vii) seleção de pelo menos um segundo composto com efeito inibidor no po-lipeptídeo de PDE-4, vii) combinação de pelo menos um primeiro compostocom atividade inibidora de PDE-5 com pelo menos um segundo compostopossuindo atividade inibidora de PDE-4.

Métodos de classificação que envolvem contato do composto deteste em ou na superfície de uma célula, onde a célula está in vitro.

Métodos de classificação que envolvem contato do composto deteste com o polipeptídeo de PDE-4 ou PDE-5 em um sistema isento de célu-Ia.

Métodos de classificação podem envolver um composto de testeque é acoplado a um marcador detectável.

Especificamente, a presente invenção provê:

Uma composição farmacêutica para o tratamento de uma doen-ça compreendida em um grupo de doenças consistindo em Hiperplasia Pros-tática Benigna (BPH), Obstrução da Saída da Bexiga (BOO), Sintomas doTrato urinário inferior (LUTS), transtornos genitourinários compreendendosíndrome neurogênica da bexiga (OAB) e (IC), incontinência urinária (Ul), talcomo, incontinência mista, de urgência, de estresse, ou de fluxo constante(MUI, UUI, SUI, OUI), dor pélvica, transtornos benignos e malignos dos ór-gãos constituindo o sistema genitounirário de mulheres e homens, doençasrenais tais como, falência renal aguda ou crônica, imunologicamente media-das doenças renais tais como, rejeição do transplante renal, nefrite do lúpus,doenças renais do complexo imune, glomerulopatias, nefrite, nefropatia tóxi-ca e uropatias obstrutivas em um mamífero, compreendendo um agente te-rapêutico que regula a atividade de um polipeptídeo de PDE-5.

Uma composição farmacêutica para o tratamento de uma doen-ça compreendida em um grupo de doenças consistindo em Hiperplasia Pros-tática Benigna (BPH), Obstrução da Saída da Bexiga (BOO) e Sintomas doTrato Urinário Inferior (LUTS) em um mamífero compreendendo um agenteterapêutico que regula a atividade de um polipeptídeo de PDE-4.

Uma composição farmacêutica para o tratamento de uma doen-ça compreendida em um grupo de doenças consistindo em Hiperplasia Pros-tática Benigna (BPH), Obstrução da Saída da Bexiga (BOO) e Sintomas doTrato Urinário Inferior (LUTS) em um mamífero compreendendo um agenteterapêutico que é uma combinação dos agentes terapêuticos seletivos men-cionados acima.

Uma composição farmacêutica para o tratamento de uma doen-ça compreendida em um grupo de doenças consistindo em Hiperplasia Pros-tática Benigna (BPH), Obstrução da Saída da Bexiga (BOO) e Sintomas doTrato Urinário Inferior (LUTS) em um mamífero compreendendo um agenteterapêutico, que regula a atividade de um polipeptídeo de PDE-5 e um poli-peptídeo de PDE-4.

Uma composição farmacêutica para o tratamento de uma doen-ça compreendida em um grupo de doenças consistindo em Hiperplasia Pros-tática Benigna (BPH), Obstrução da Saída da Bexiga (BOO) e Sintomas doTrato Urinário Inferior (LUTS) em um mamífero compreendendo um inibidorde PDE-4 selecionado do grupo dos inibidores de PDE-4 consistindo em Ro-flumilast (3-(ciclopropilmetóxi) -N-(3,5-dicloropiridin-4-il)-4-(diflúor-metóxi)benzamida), Cilomilast (ácido 4-ciano-4-(3-ciclopentóxi-4-metóxi-fenil)-cicloexano-1-carboxílico) e Piclamilast (3-ciclopentóxi-N-(3,5-dicloropiridin-4-il)-4-metóxi-benzamida).

Uma composição farmacêutica para o tratamento de uma doen-ça compreendida em um grupo de doenças consistindo em Hiperplasia Pros-tática Benigna (BPH), Obstrução da Saída da Bexiga (BOO) e Sintomas doTrato Urinário Inferior (LUTS)1 transtornos genitourinários compreendendosíndrome neurogênica da bexiga (OAB) e (IC), incontinência urinária (Ul), talcomo, incontinência mista, de urgência, de estresse, ou de fluxo constante(MUI, UUI, SUI, OUI), dor pélvica, transtornos benignos e malignos dos ór-gãos constituindo o sistema genitounirário de mulheres e homens, doençasrenais tais como, falência renal aguda ou crônica, doenças renais imunologi-camente mediadas, tais como, rejeição do transplante renal, nefrite do lúpus,doenças renais do complexo imune, glomerulopatias, nefrite, nefropatia tóxi-ca e uropatias obstrutivas em um mamífero compreendendo um inibidor dePDE-5 selecionado do grupo dos inibidores de PDE-5 consistindo em Tada-Iafil ((6R,12aR) -2,3,6,7,12,12a - Hexaidro - 2 - metil - 6-(3,4-metileno -dioxifenil) pirazino(1\2':1,6) pirido(3,4-b)indol-1,4-diona), Vardenafil (2-(2-Etóxi-5-(4-etilpiperazin-1 -il-1 -sulfonil)fenil)-5-metil-7-propil-3H-imidazo (5,1 -f)(1,2,4)triazin-4-ona), Sildenafil (3-[2-etóxi-5-(4-metilpiperazin-1-il)sulfonil-fenil]-7-metil-1-9-propil-2,4,7,8-tetrazabiciclo [4.3.0]nona-3,8,10-trien-5-ona),Udenafil 5-[2-propilóxi-5-(1-metil-2-pirrolidinil-etil-amidossulfonil)fenil]-metil-3-propil-1,6-diidro-7H-pirazol(4,3-d)pirimidina-7-ona, Dasantafil 7-(3-Bromo-4-metoxibenzil)-1 -etil-8-[[(1,2)-2-hidroxiciclopentil]amino]-3-(2-hidroxietil)-3,7-diidro-1-purina-2,6-diona, Avanafil 4-{[(3-cloro-4-metóxifenil)metil]amino}-2-[(2S)-2-(hidroximetil)pirrolidin-1-il]-N-(pirimidin-2-il metil)pirimidina-5-carboxamida, SLx 2101 da Surface Logix, LAS 34179 Triazol[1,2-]xantina,6-metil-4-propil-2-[2-propóxi-5-(4-metilpiperazino)-sulfonil]fenila ou sais, hidra-tos ou hidratos de sais dos mesmos.

Uma composição farmacêutica para o tratamento de uma doen-ça compreendida em um grupo de doenças consistindo em Hiperplasia Pros-tática Benigna (BPH), Obstrução da Saída da Bexiga (BOO) e Sintomas doTrato Urinário Inferior (LUTS) em um mamífero compreendendo uma combi-nação de pelo menos um inibidor de PDE-4 selecionado do grupo de inibido-res de PDE-4 consistindo em Roflumilast (3-(ciclopropilmetóxi)-N-(3,5-dicloropiridin-4-il)-4-(difluormetóxi)benzamida), Cilomilast (ácido 4-ciano-4-(3-ciclopentóxi-4-metóxi-fenil)-cicloexano-1-carboxílico) e Piclamilast (3-ciclopentóxi-N-(3,5-dicloropiridin-4-il)-4-metóxi-benzamida) e pelo menos uminibidor de PDE-5 selecionado do grupo dos inibidores de PDE-5 consistindoem Vardenafil (2-(2-Etóxi-5-(4-etilpiperazin-1 -il-1 -sulfonil)fenil)-5-metil-7-propil-3H-imidazo (5,1 -f) (1,2,4)triazin-4-ona), Sildenafil (3-[2-etóxi-5-(4-metilpiperazin-1 -il)sulfonil-fenil]- 7- metil- 9- propil-2,4,7,8- tetrazabiciclo[4.3.0]nona -3,8,10-trien-5-ona), e Tadalafil ((6R,12aR) -2,3,6,7, 12, 12a- He-xaidro - 2 - metil - 6-(3,4-metileno-dioxifenil).

Uso de um inibidor de PDE-5 na preparação de uma composi-ção farmacêutica para o tratamento de uma doença compreendida em umgrupo de doenças consistindo em Hiperplasia Prostática Benigna (BPH),Obstrução da Saída da Bexiga (BOO) e Sintomas do Trato Urinário Inferior(LUTS), transtornos genitourinários compreendendo síndrome neurogênicada bexiga (OAB) e (IC), incontinência urinária (UI) tal como, incontinênciamista, de urgência, de estresse, ou de fluxo constante (MUI, UUI, SUI, OUI),dor pélvica, transtornos benignos e malignos dos órgãos constituindo o sis-tema genitounirário de mulheres e homens, doenças renais tais como, falên-cia renal aguda ou crônica, doenças renais imunologicamente mediadas, taiscomo, rejeição do transplante renal, nefrite do lúpus, doenças renais docomplexo imune, glomerulopatias, nefrite, nefropatia tóxica e uropatias obs-trutivas em um mamífero.

Uso de um inibidor de PDE-4 na preparação de uma composi-ção farmacêutica para o tratamento de uma doença compreendida em umgrupo de doenças consistindo em Hiperplasia Prostática Benigna (BPH),Obstrução da Saída da Bexiga (BOO) e Sintomas do Trato Urinário Inferior(LUTS) em um mamífero.

Uso de uma combinação de pelo menos um inibidor de PDE-4 epelo menos um inibidor de PDE-5 na preparação de uma composição farma-cêutica para o tratamento de uma doença compreendida em um grupo dedoenças consistindo em Hiperplasia Prostática Benigna (BPH), Obstrução daSaída da Bexiga (BOO) e Sintomas do Trato Urinário Inferior (LUTS), trans-tornos genitourinários compreendendo síndrome neurogênica da bexiga (O-AB) e (IC), incontinência urinária (UI)1 tal como, incontinência mista, de ur-gência, de estresse, ou de fluxo constante (MUI, UUI1 SUI), dor pélvica,transtornos benignos e malignos dos órgãos constituindo o sistema genitou-nirário de mulheres e homens, doenças renais, tais como, falência renal a-guda ou crônica, doenças renais imunologicamente mediadas, tais como,rejeição do transplante renal, nefrite do lúpus, doenças renais do complexoimune, glomerulopatias, nefrite, nefropatia tóxica, uropatias obstrutivas e dis-função erétil em um mamífero.

Uso de um agente que é um inibidor de um polipeptídeo dePDE-4 e um polipeptídeo de PDE-5 na preparação de uma composição far-macêutica para o tratamento de uma doença compreendida em um grupo dedoenças consistindo em Hiperplasia Prostática Benigna (BPH), Obstrução daSaída da Bexiga (BOO) e Sintomas do Trato Urinário Inferior (LUTS) em ummamífero.

Uso do inibidor de PDE-5 selecionado do grupo dos inibidoresde PDE-5 consistindo em Tadalafil ((6R,12aR) -2,3,6,7,12,12a-Hexaidro-2-metil-6-(3,4-metileno-dioxifenil) pirazino(1',2':1,6) pirido(3,4-b)indol-1,4-diona), Vardenafil (2-(2-Etóxi-5-(4-etilpiperazin-1 -il-1 -sulfonil)fenil)-5-metil-7-propil-3H-imidazo (5,1-f) (1,2,4)triazin-4-ona), Sildenafil (3-[2-etóxi-5-(4-metilpiperazin-1-il)sulfonil-fenil]-7-metil-1-9-propil-2,4,7,8-tetrazabicicló[4.3.0]nona-3,8,10-trien-5-ona), Udenafil 5-[2-propilóxi-5-(1 -metil-2-pirrolidinil-etil-amidossulfonil)fenil]-metil-3-propil-1,6-diidro-7H-pirazol(4,3-d)pirimidina-7-ona, Dasantafil 7-(3-Bromo-4-metoxibenzil)-1-etil-8-[[(1,2)-2-hidroxiciclopentil]amino]-3-(2-hidroxietil)-3,7-diidro-1 -purina-2,6-diona, Ava-nafil 4-{[(3-cloro-4-metóxi fenil)metil]amino}-2-[(2S)-2-(hidroximetil)pirrolidin-1-il]-N-(pirimidin-2-il metil)pirimidina-5-carboxamida, SLx 2101 da SurfaceLogix, LAS 34179 Triazol[1,2-]xantina,6-metil-4-propil-2-[2-propóxi-5-(4-metilpiperazino)-sulfonil]fenila ou sais, hidratos ou hidratos de sais dosmesmos, na preparação de uma composição farmacêutica para o tratamentode uma doença compreendida em um grupo de doenças consistindo em Hi-perplasia Prostática Benigna (BPH), Obstrução da Saída da Bexiga (BOO) eSintomas do Trato Urinário Inferior (LUTS), transtornos genitourinários com-preendendo síndrome neurogênica da bexiga (OAB) e (IC), incontinênciaurinária (Ul), tal como, incontinência mista, de urgência, de estresse, ou defluxo constante (MUI, UUI, SUI, OUI), dor pélvica, transtornos benignos emalignos dos órgãos constituindo o sistema genitounirário de mulheres ehomens, doenças renais tais como, falência renal aguda ou crônica, doençasrenais imunologicamente mediadas, tais como, rejeição do transplante renal,nefrite do lúpus, doenças renais do complexo imune, glomerulopatias, nefri-te, nefropatia tóxica e urópatias obstrutivas em um mamífero.

Uso do inibidor de PDE-4 selecionado do grupo dos inibidoresde PDE-4 consistindo em Roflumilast (3-(ciclopropilmetóxi)-N-(3,5-dicloropiridin-4-il)-4-(difluormetóxi) benzamida), Cilomilast (ácido 4-ciano-4-(3-ciclopentóxi-4-metóxi-fenil)-cicloexano-1-carboxílico) e Piclamilast (3-ciclopentóxi-N-(3,5-dicloropiridin-4-il)-4-metóxi-benzamida) na preparação deuma composição farmacêutica para o tratamento de uma doença compreen-dida em um grupo de doenças consistindo em Hiperplasia Prostática Benig-na (BPH), Obstrução da Saída da Bexiga (BOO) e Sintomas do Trato Uriná-rio Inferior (LUTS) em um mamífero.

Uso de uma combinação de pelo menos um inibidor de PDE-4selecionado do grupo dos inibidores de PDE-4 consistindo em Roflumilast(3-(ciclopropilmetóxi)-N-(3,5-dicloropiridin-4-il)-4-(difluormetóxi) benzamida),Cilomilast (ácido 4-ciano-4-(3-ciclopentóxi-4-metóxi-fenil)-cicloexano-1-carboxílico) e Piclamilast (3-ciclopentóxi-N-(3,5-dicloropiridin-4-il)-4-metóxi-benzamida) e pelo menos um inibidor de PDE-5 selecionado do grupo dosinibidores de PDE-5 consistindo em Vardenafil (2-(2-Etóxi-5-(4-etilpiperazin-1-il-1-sulfonil)fenil)-5-metil-7-propil-3H-imidazo (5,1 -f) (1,2,4) triazin-4-ona),Sildenafil (3-[2-etóxi-5-(4-metilpiperazin-1-il)sulfonil-fenil]-7- metil-9-propil-2,4,7,8- tetrazabiciclo [4.3.0]nona-3,8,10-trien-5-ona) e Tadalafil ((6R,12aR) -2,3,6,7,12,12a-Hexaidro-2-metil-6- (3,4-metileno-dioxifenil) na preparação deuma composição farmacêutica para o tratamento de uma doença compreen-dida em um grupo de doenças consistindo em Hiperplasia Prostática Benig-na (BPH), Obstrução da Saída da Bexiga (BOO) e Sintomas do Trato Uriná-rio Inferior (LUTS), transtornos genitourinários compreendendo síndromeneurogênica da bexiga (OAB) e (IC), incontinência urinária (Ul), tal como,incontinência mista, de urgência, de estresse, ou de fluxo constante (MUI,UUI, SUI, OUI), dor pélvica, transtornos benignos e malignos dos órgãosconstituindo o sistema genitounirário de mulheres e homens, doenças renaistais como, falência renal aguda ou crônica, doenças renais imunologicamen-te mediadas, tais como, rejeição do transplante renal, nefrite do lúpus, doen-ças renais do complexo imune, glomerulopatias, nefrite, nefropatia tóxica,uropatias obstrutivas e disfunção erétil em um mamífero.

Método para a preparação de uma composição farmacêutica útilno tratamento de uma doença compreendida em um grupo de doenças con-sistindo em Hiperplasia Prostática Benigna (BPH), Obstrução da Saída daBexiga (BOO) e Sintomas do Trato Urinário Inferior (LUTS), transtornos geni-tourinários compreendendo síndrome neurogênica da bexiga (OAB) e (IC),incontinência urinária (Ul), tal como, incontinência mista, de urgência, deestresse, ou de fluxo constante (MUI, UUI, SUI, OUI), dor pélvica, transtor-nos benignos e malignos dos órgãos constituindo o sistema genitounirário demulheres e homens, doenças renais tais como, falência renal aguda ou crô-nica, doenças renais imunologicamente mediadas, tais como, rejeição dotransplante renal, nefrite do lúpus, doenças renais do complexo imune, glo-merulopatias, nefrite, nefropatia tóxica, uropatias obstrutivas e disfunção eré-til em um mamífero compreendendo as etapas de i) identificação de um ini-bidor de PDE-5 de acordo com o método de classificação descrito acima, ii)identificação de um inibidor de PDE-4 de acordo com o método de classifi-cação descrito acima) determinando se os inibidores melhoram os sintomasde uma doença compreendida em um grupo de doenças consistindo em Hi-perplasia Prostática Benigna (BPH), Obstrução da Saída da Bexiga (BOO) eSintomas do Trato Urinário Inferior (LUTS) em um mamífero; e iii) combina-ção de pelo menos um dos inibidores com um veículo farmaceuticamenteaceitável.

Método para a preparação de uma composição farmacêuticaonde o inibidor de PDE-5 é um inibidor de PDE-5 selecionado do grupo dosinibidores de PDE-5 consistindo em Vardenafil (2-(2-Etóxi-5-(4-etilpiperazin-1 -il-1 -sulfonil)fenil)-5-metil-7-propil-3H-imidazo (5,1 -f) (1,2,4)triazin-4-ona),Sildenafil (3-[2-etóxi-5-(4-metilpiperazin-1 -il)sulfonil-fenil]-7-metil-9-propil-2,4,7,8- tetrazabiciclo [4.3.0]nona -3,8,10-trien-5-ona), Tadalafil ((6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-Hexaidro-2-metil-6-(3,4-metilenoidioxifenil), Udenafil 5-[2-propilóxi-5-(1 -metil-2-pirrolidinil-etil-amidossulfonil)fenil]-metil-3-propil-1,6-diidro-7H-pirazol(4,3-d)pirimidina-7-ona, Dasantafil 7-(3-Bromo-4-metoxibenzil)-1-etil-8-[[(1,2)-2-hidroxiciclopentil]amino]-3-(2-hidroxietil)diidro-1-purina-2,6-diona, Avanafil 4-{[(3-cloro-4-metóxi fenil)metil]amino}-2-[(2S)-2-(hidroximetil)pirrolidin-1 -il]-N-(pirimidin-2-il metil)pirimidina-5-carboxamida, SLx 2101 da Surface Logix e LAS 34179 Triazol[1,2-]xantina,6-metil-4-propil-2-[2-propóxi-5-(4-metilpiperazino)-sulfonil]fenila.

Método para a preparação de uma composição farmacêuticaonde o inibidor de PDE-4 é um inibidor de PDE-4 selecionado do grupo dosinibidores de PDE-4 consistindo em Roflumilast (3-(ciclopropilmetóxi)-N-(3,5-dicloropiridin-4-il)-4-(difluormetóxi) benzamida), Cilomilast (ácido 4-ciano-4-(3-ciclopentóxi-4-metóxi-fenil)-cicloexano-1-carboxílico) e Piclamilast (3-ciclopentóxi-N-(3,5-dicloropiridin-4-il)-4-metóxi-benzamida).

Uso de uma composição farmacêutica como mencionada acima,para a regulação da atividade de PDE em um mamífero possuindo uma do-ença compreendida em um grupo de doenças consistindo em HiperplasiaProstática Benigna (BPH), Obstrução da Saída da Bexiga (BOO) e Sintomasdo Trato Urinário Inferior (LUTS), transtornos genitourinários compreenden-do síndrome neurogênica da bexiga (OAB) e (IC), incontinência urinária (Ul),tal como, incontinência mista, de urgência, de estresse, ou de fluxo constan-te (MUI,'UUI1 SUI, OUI), dor pélvica, transtornos benignos e malignos dosórgãos constituindo o sistema genitounirário de mulheres e homens, doen-ças renais tais como, falência renal aguda ou crônica, doenças renais imuno-logicamente mediadas, tais como, rejeição do transplante renal, nefrite dolúpus, doenças renais do complexo imune, glomerulopatias, nefrite, nefropa-tia tóxica, uropatias obstrutivas e disfunção erétil.

Kit de peças para o tratamento de uma doença compreendidaem um grupo de doenças consistindo em Hiperplasia Prostática Benigna(BPH), Obstrução da Saída da Bexiga (BOO) e Sintomas do Trato UrinárioInferior (LUTS) em um mamífero incluindo seres humanos contendo umacombinação de pelo menos uma composição farmacêutica selecionada dogrupo de composições farmacêuticas consistindo em Vardenafil, Sildenafil eTadalafil1 e pelo menos uma composição farmacêutica selecionada do grupode composições farmacêuticas consistindo em Roflumilast, Cilomilast e Pi-clamilast.

Método para a preparação de um kit de partes útil no tratamentode uma doença compreendida em um grupo de doenças consistindo em Hi-perplasia Prostática Benigna (BPH), Obstrução da Saída da Bexiga (BOO) eSintomas do Trato Urinário Inferior (LUTS) em um mamífero compreendendoas etapas de: i) seleção de pelo menos uma composição farmacêutica dogrupo de composições farmacêuticas consistindo em Vardenafil, Sildenafil eTadalafil1 ii) seleção de pelo menos uma composição farmacêutica do grupode composições farmacêuticas consistindo em Roflumilast, Cilomilast e Pi-clamilast, iii) combinação de pelo menos duas das composições farmacêuti-cas, dessa forma criando o kit de partes.

kit de partes para o tratamento de uma doença compreendidaem um grupo de doenças consistindo em Hiperplasia Prostática Benigna(BPH), Obstrução da Saída da Bexiga (BOO) e Sintomas do Trato UrinárioInferior (LUTS) em um mamífero contendo uma combinação de pelo menosum agente terapêutico regulando a atividade de um polipeptídeo de PDE-5 eTadalafil e pelo menos um agente terapêutico regulando a atividade de umpolipeptídeo de PDE-4.

Método para a preparação de um kit de partes útil no tratamentode uma doença compreendida em um grupo de doenças consistindo em Hi-perplasia Prostática Benigna (BPH), Obstrução da Saída da Bexiga (BOO) eSintomas do Trato Urinário Inferior (LUTS) em um mamífero compreendendoas etapas de: i) seleção de pelo menos uma composição farmacêutica com-preendendo um agente terapêutico regulando a atividade de um polipeptídeode PDE-5, ii) seleção de pelo menos uma composição farmacêutica compre-endendo um agente terapêutico regulando a atividade de um polipeptídeo dePDE-4, iii) combinação de pelo menos duas das composições farmacêuticas,desse modo criando um kit de partes.

Uma concretização preferida da invenção é uma composiçãofarmacêutica contendo Vardenafil, ou um sal, um hidrato ou um hidrato deum sal do mesmo, para o tratamento de uma doença compreendida em umgrupo de doenças consistindo em Hiperplasia Prostática Benigna (BPH),Obstrução da Saída da Bexiga (BOO), Sintomas do Trato Urinário Inferior(LUTS)1 transtornos genitourinários compreendendo síndrome neurogênicada bexiga (OAB) e (IC)1 incontinência urinária (UI)1 tal como, incontinênciamista, de urgência, de estresse, ou de fluxo constante (MUI, UUI, SUI, OUI),dor pélvica, transtornos benignos e malignos dos órgãos constituindo o sis-tema genitounirário de mulheres e homens, doenças renais, tais como, fa-lência renal aguda ou crônica, doenças renais imunologicamente mediadas,tais como, rejeição do transplante renal, nefrite do lúpus, doenças renais docomplexo imune, glomerulopatias, nefrite, nefropatia tóxica e uropatias obs-trutivas em um mamífero.

Foi verificado surpreendentemente que especialmente o Varde-nafil, ou um sal, um hidrato, ou um hidrato de um sal do mesmo, exibe ativi-dades superiores e mostra melhores resultados no tratamento da bexiganeurogênica (também referida como bexiga superativa ou cistite intersticial)em comparação aos outros inibidores de PDE-5.

DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

FIGURA 1:

Expressão de RNAm relativa de PDE-5 nos Rins (K), Bexiga (B),Próstata (P)1 Uretra (U) e Corpo cavernoso (C) de ratos Sprague Dawley. Osdados são a média + SEM, n=10.

FIGURA 2:

Expressão de RNAm relativa de PDE-4a, -4b, -4c, -4d e PDE-5na bexiga e próstata de ratos Sprague Dawley. Os dados são a média +SEM, n=10.

FIGURA 3:

Efeitos do Vardenafil na contração dos anéis uretrais isoladosde rato (triângulos pretos) e bexiga (losangos pretos) e tiras prostáticas(quadrados cinzas). As tiras de bexiga foram pré-contraídas usando soluçãode K+ Krebs-Henseleit (50 mmoles/L). Os tecidos prostáticos e uretrais forampré-contraídos usando 10 μιηοΙ/L de Fenilefrina. O relaxamento foi expressocomo porcentagem da pré-contração. Cada ponto representa um valor mé-dio ± SEM. η = 9.

FIGURA 4:

Efeitos do Roflumilast (losangos pretos) e Vardenafil (quadradoscinzas) na contração de tiras isoladas de bexiga de rato. As tiras de bexigaforam pré-contraídas usando solução de K+ Krebs-Henseleit (50 mmoles/L).O relaxamento foi expresso como porcentagem da pré-contração. Cada pon-to representa um valor médio ± SEM. η = 9.

FIGURA 5:

úmero de contrações de não eliminação da urina em porcenta-gem após tratamento i.v. do bolus com veículo (V) e Vardenafil HCI (1, 3 e10 mg/kg). Os dados são a média + SEM1 * = significativos com ρ < 0,05(teste t de Student emparelhado).FIGURA 6:

ntervalo de micção em porcentagem após tratamento i.v. do bo-lus com veículo (V) e Vardenafil HCI (1,3 mg/kg) em comparação ao interva-lo de micção basal (C). Os dados são a média + SEM, * = significativo com ρ< 0,05 (teste t de Student emparelhado).

EXEMPLO 1

mostragem de tecido e preparação de RNA: Ratos machos S-prague Dawley com peso corpóreo entre 200-250 g foram usados par coletado tecido. Os ratos foram brevemente anestesiados com uma mistura deIsoflurano a 5% (Baxter S.A.) em um veículo com 70% N2O e 30% O2, e en-tão eutanaziados por decapitação. O abdômen foi aberto por uma incisão delinha mediana e os rins e tecido do trato urinário inferior como medula renal,uretra, bexiga, próstata e uretra foram expostos e rapidamente removidos.

Os tecidos foram congelados em N2 líquido e armazenados até preparaçãodo RNA. O RNA total foi isolado usando mini colunas RNeasy (Qiagen Inc.)e adicionalmente purificados por digestão com DNase.uantificação de PDE RNAm: A expressão de RNAm de isogenosde PDE diferentes em tecidos urinários inferiores de rato foi medida por PCRquantitativa de tempo real (TaqMan-PCR, Heid 1996). Portanto, 1 pg doRNA total transcrito para o DNAc com o kit de síntese Superscript Il RTDNAc (Gibco, Inc) de acordo com o manual do fornecedor. O RNAm paraPDEs foi medido por RT-PCR quantitativa em tempo real em um instrumentode detecção de seqüência ABI Prism 7700 (Applied Biosystems, Inc.). Se-qüências específicas para iniciadores a frente e reversos como para a sondafluorogênica de cada isogene de PDE RNAm foram indicadas pelo SoftwarePrimer Express 1.5 (Applied Biosystems, Inc.). Durante a ampliação da PCR,a atividade nucleotídica 5' da polimerase Taq cliva a sonda separando o co-rante fluorescente repórter 5' do corante saturador 3'. O ciclo limite, Ct, quecorrelaciona inversamente com o nível de RNAm alvo, foi medido como onúcleo de ciclo no qual a emissão fluorescente repórter aumenta 10 desviospadrão acima do nível de base. Um gene de manutenção, de ação beta, foiquantificado conforme descrito acima, usando como iniciador a frente5'-accttcaacaccccagcca-3', iniciador reverso 5'-cagtggtacgaccagaggca-3' esonda fluorescente 5'-6AFM-acgtagccatccaggctgtgttgtcc-TAMARA-3'. Osníveis RNAm de PDE RNAm foram corrigidos para os níveis de RNAm dabeta-actina e calculados como expressão relativa usando o método-Ct com-parativo.

xpressão de RNAm de PDE-5 e PDE-4A, -4B, -4C, -4D no tratourinário inferior: Uma vez que existem apenas dados incompletos no perfil deexpressão de PDE-5 no tecido do trato urinário inferior, RNAm de PDE foiquantificada nos ratos Sprague Dawley através de TaqMan RT-PCR. A ex-pressão mais proeminente de PDE-5 foi encontrada na bexiga (figura 1). Ní-veis de expressão mais baixos foram encontrados na uretra, corpo caverno-so e próstata (figura 1). Esse resultado mostrou que existe uma expressãode RNAm de PDE-5 nos tecidos do trato urinário inferior, especialmente nabexiga.

lém disso, a expressão de RNAm de PDE-4 de todos os quatroisogenes de PDE-4 (PDE-4A, -4B, -4C e -4D) foi determinada por TaqManRT-PCR na bexiga e na próstata (figura 2). Foi verificada expressão muitobaixa de PDE-4c, que estava no limite da detectabilidade, contudo, RNAmsde PDE-4A, -4B e -4D foram substancialmente expressos dentro de ambosos tecidos. Na bexiga, PDE-4D era o RNAm de isogene de PDE-4 mais a-bundante, considerando-se que, na próstata, PDE-4a e -4D são quase i-gualmente distribuídos e 2,5 vezes mais expressos em relação ao RNAm dePDE-5 (figura 2).

perfil da expressão demonstra que RNAms de PDE-5 e PDE-4D são abundantes na bexiga, porém também no tecido prostático. Portanto,os inibidores de PDE-5 ou PDE-4, porém especificamente combinações deambos, inibidores de PDE-5 e PDE-4, tais como, Vandernafil em combina-ção com Roflumoilast não apenas reduziriam a contratibilidade da bexiga,porém também a próstata, assim fornecendo vantagem em relação aos mé-todos de tratamento dos transtornos urológicos existentes na técnica, ostranstornos compreendendo, por exemplo, Hiperplasia Prostática Benigna(BPH) e especificamente sintomas de irritação causados por Obstrução daSaída da Bexiga (BOO) induzida por BPH incluindo, porém não limitado aosSintomas do Trato Urinário Inferior (LUTS).EXEMPLO 2

Preparação do tecido: ratos machos Wistar (200-300 g) forameutanaziados empregando dióxido de carbono. Os tecidos foram removidose colocados em tampão Krebs-Henseleit resfriado em gelo da composiçãoque se segue (em mmoles/L): NaCI 112, KCI 5,9, CaCI2 2,0, MgCI2 1,2,NaH2PO4 1,2, NaHCO3 25, glicose 11,5. Quatro tiras longitudinais igualmen-te espaçadas de aproximadamente 2 mm χ 10 mm foram cortadas do corpoda bexiga. As tiras prostáticas foram obtidas por corte transversal atravésdos lóbulos da glândula prostática em paralelo à uretra. Um anel por animalfoi dissecado da parte proximal da uretra.

Coelhos brancos da Nova Zelândia foram anestesiados usandotiopental. A bexiga urinária foi removida e colocada em tampão Krebs-Henseleit resfriado em gelo da composição que se segue (em mmol/L): NaCI112, KCI 5,9, CaCI2 2,0, MgCI2 1,2, NaH2PO4 1,2, NaHCO3 25, e glicose11,5. Tiras longitudinais igualmente espaçadas de cerca de 2 mm χ 10 mmforam cortadas do corpo da bexiga.

Registro da atividade mecânica: As preparações foram transfe-ridas para banhos de órgão de 20 mL contendo solução de Krebs-Henseleitequilibrada com 95% de O2, 5% de CO2 a 37°C. As tiras foram montadasentre dois ganchos por meio de dois grampos. De modo a registrar a tensãoisométrica, um dos ganchos foi conectado a um transdutor de força que foipor sua vez ligado a um amplificador e registrador de gráfico. O outro gan-cho foi anexado a uma unidade móvel, permitindo o ajuste preciso da tensãode pré-carga. Todos os tecidos passaram por um período de equilíbrio de 60minutos, durante o que eles foram lavados e a tensão em repouso foi ajusta-da para 1 g a cada 20 minutos.

Após o período de equilíbrio, cada experimento foi iniciado porexposição da preparação à solução K+ Krebs-Henseleit (50 mmol/L). O pro-cedimento foi repetido 3 vezes e os tecidos foram lavados pelo menos trêsvezes entre cada contração.

As tiras de bexiga foram então pré-contraídas usando soluçãoK+ Krebs-Henseleit (50 mmol/L). Quando a contração foi estabilizada, foiconstruída uma curva de resposta de dose cumulativa do composto testado.

A concentração estabilizada induzida pela solução K+ Krebs-Henseleit (50mmol/L) foi definida como sendo de tensão 100%. O relaxamento foi expres-so como porcentagem de tensão.

As tiras prostáticas e os anéis uretrais foram pré-contraídos u-sando 10"6 moles/L de fenilefrina. Os efeitos dos compostos no tecido pros-tático foram testados de modo não cumulativo com etapas de lavagem entrecada concentração.

Ensaio de banho de órgão: efeitos do Vardenafil nos órgãos u-rogenitais isolados de rato. Os efeitos do inibidor de PDE-5, Vardenafil, norelaxamento da musculatura lisa foram testados no sistema de banho doórgão. O composto foi aplicado na faixa de concentração de10'8 moles/L a 10"5 moles^L (figura 3, Tabela 1). O Vardenafilrelaxou os anéis uretrais com um valor de EC5O de 0,96 pmol/L, e as tirasprostáticas e de bexiga com o valor de EC5O valor de 1,1 e 5,0 pmoles/L,respectivamente.

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Tabela 1: Efeitos do Vardenafil na contração de tecidos urogeni-tais isolados de rato. O relaxamento é expresso como a porcentagem da5 pré-contração. Cada ponto representa um valor médio ± SEM. η = 9.

EXEMPLO 3

Preparação do tecido: ratos machos Wistar (200-300 g) forameutanaziados empregando dióxido de carbono. Os tecidos foram removidose colocados em tampão Krebs-Henseleit resfriado em gelo da composiçãoque se segue (em mmol/L): NaCI 112, KCI 5,9, CaCI2 2,0, MgCI2 1,2,NaH2PO4 1,2, NaHCO3 25, glicose 11,5. Quatro tiras longitudinais igualmen-te espaçadas de aproximadamente 2 mm χ 10 mm foram cortadas do corpoda bexiga. As tiras prostáticas foram obtidas por corte transversal atravésdos lóbulos da glândula prostática em paralelo à uretra. Um anel por animalfoi dissecado da parte proximal da uretra.

Coelhos brancos da Nova Zelândia foram anestesiados usandotiopental. A bexiga urinária foi removida e colocada em tampão Krebs-Henseleit resfriado em gelo da composição que se segue (em mmol/L): NaCI112, KCI 5,9, CaCI2 2,0, MgCI2 1,2, NaH2PO4 1,2, NaHCO3 25, e glicose11,5. Tiras longitudinais igualmente espaçadas de cerca de 2 mm χ 10 mmforam cortadas do corpo da bexiga.

Registro da atividade mecânica: As preparações foram transfe-ridas para banhos de órgão de 20 mL contendo solução de Krebs-Henseleitequilibrada com 95% de O2, 5% de CO2 a 37°C. As tiras foram montadasentre dois ganchos por meio de dois grampos. De modo a registrar a tensãoisométrica, um dos ganchos foi conectado a um transdutor de força que foipor sua vez ligado a um amplificador e registrador de gráfico. O outro gan-cho foi anexado a uma unidade móvel, permitindo o ajuste preciso da tensãode pré-carga. Todos os tecidos passaram por um período de equilíbrio de 60minutos, durante o que eles foram lavados e a tensão em repouso foi ajusta-da para 1 g a cada 20 minutos.

Após o período de equilíbrio, cada experimento foi iniciado porexposição da preparação à solução K+ Krebs-Henseleit (50 mmoles/L). Oprocedimento foi repetido 3 vezes e os tecidos foram lavados pelo menostrês vezes entre cada contração.

As tiras de bexiga foram então pré-contraídas usando soluçãoK+ Krebs-Henseleit (50 mmoles/L). Quando a contração foi estabilizada, foiconstruída uma curva de resposta de dose cumulativa do composto testado.A concentração estabilizada induzida pela solução K+ Krebs-Henseleit (50mmoles/L) foi definida como sendo de tensão 100%. O relaxamento foi ex-presso como porcentagem de tensão.

As tiras prostáticas e os anéis uretrais foram pré-contraídos u-sando 10"6 mol/L de fenilefrina. Os efeitos dos compostos no tecido prostáti-co foram testados de modo não cumulativo com etapas de lavagem entrecada concentração.

Efeitos dos inibidores de PDE-5 e PDE-4 nas tiras de bexigaisoladas de coelhos: Os efeitos do Ensaio do inibidor de PDE-5, Vardenafil, edo inibidor de PDE-4, Roflumilast, no relaxamento da musculatura lisa dabexiga foi testado no banho de órgão usando tiras de bexiga de coelho. Am-bos os compostos foram testados na concentração de 10"9 moles/L a 10"5moles/L (figura 4, Tabela 2). Roflumilast e Vardenafil ambos relaxaram astiras de bexiga com um IC50 de 260 nmoles/L e 1,7 pmol/L, respectivamente.

tabela 2

<table>table see original document page 26</column></row><table><table>table see original document page 27</column></row><table>

Tabela 2: Efeitos do Roflumilast e Vardenafil na contração dastiras de bexiga isoladas de coelho. O relaxamento é expresso como a por-centagem da pré-contração. Cada ponto representa um valor médio ± SEM.η = 9.

EXEMPLO 4

Todos experimentos com animais foram realizados de acordocom "German Law for the Protection of Laboratory animais" e foram condu-zidos de acordo com as diretrizes aprovadas pela permissão "Tierversuchs-vorhaben No 401/A01 M010/M011 vom 09.07.2004". Os experimentos foramrealizados com Ratos Srague Dawley fêmeas com um peso corpóreo entre200-250 g.

Obstrução da Saída da Bexiga: Para a obstrução da Saída daBexiga, os ratos foram anestesiados com uma mistura de isoflurano 1,5-2%em um veículo de N2O a 66% e O2 a 33%. O abdômen foi raspado, abertopor uma incisão mediana inferior, a bexiga e a uretra foram identificadas e ajunção uretravesicular foi exposta. Uma barra de metal de 1,0 mm foi colo-cada ao longo da uretra proximal e uma ligadura de náilon 6-0 foi apertadaao redor da uretra e da barra. A barra foi consecutivamente removida e oabdômen foi fechado por uma ligadura de seda e limpo com etanol a 70%.Houve um tratamento contra dor pós-operatório realizado com 10 mg/kg deRimadyl(R) (Pfizer). Os ratos foram mantidos por duas semanas e alimenta-dos com água de torneira e ração padrão para ratos. Vinte e quatro horasantes da cistometria, os ratos foram anestesiados com isoflurano conformedescrito acima. A Iaparotomia foi realizada conforme descrito acima, a bexi-ga foi exposta e um cateter de polietileno (PE50) foi implantado no domo dabexiga. O cateter foi inserido subcutaneamente usando uma cânula paraalcançar a parte posterior do pescoço do animal. Adicionalmente, um cateterpara administração intravenosa (PE10) foi colocado na veia jugular e inseri-do subcutaneamente em direção a parte posterior do pescoço do animal.Ambos os cateteres foram fixados por uma sutura e uma fita.

Cistometria consciente: Para a cistometria, os animais foramanestesiados por um curto período de tempo com isoflurano, conforme des-crito acima, colocados em uma gaiola de Ballman e fixados. Os animais fo-ram recuperados pelo menos 1 hora antes do experimento começar. O cate-ter da bexiga foi então conduzido para o tubo conformado em T para conec-tar um transdutor de pressão para medição da pressão intrabexiga(MLT0698, ADInstruments) e uma bomba de infusão (Perfusor Compact®,Braun Melsungen) para infusão contínua de solução salina em uma razão defluxo de 10 ml_/h. Os animais com BOO mostraram um aumento na capaci-dade da bexiga (em razão do aumento da bexiga) e contrações de não eli-minação da urina (mimetizando os sintomas de irritação de BPH), quandocomparado a um animal de controle. A eficácia do tratamento foi quantifica-da através do cálculo das contrações de não eliminação da urina por interva-lo de micção, antes e após o tratamento. Para controle positivo, o antagonis-ta de alfa receptor tamusolina (10 μg/kg) foi empregado. Os valores foramfornecidos em % de redução das contrações de não eliminação da urina.

Análise estatística dos resultados: Os dados são expressoscomo média ± erro padrão das médias (SEM), e η indica o número de expe-rimentos. O significado das diferenças entre as médias foi determinado porteste t de Student emparelhado e não emparelhado. Os níveis de probabili-dade inferiores a 0,05 foram considerados significativos.

O efeito do Vardenafil nas contrações de não eliminação daurina em ratos com BOO: Para o modelo BOO, uma ligadura parcial da ure-tra foi realizada no rato sob anestesia. A obstrução da Saída da Bexiga(BOO) resultante desse procedimento causou um aumento significativo dopeso da bexiga (dados não mostrados) indicando uma hipertrofia pronuncia-da da bexiga. Isso também causou as contrações de não eliminação da uri-na (NVC) da bexiga que foram detectadas através da cistometria em animaisconscientes. Essas NCVs foram uma medição dos sintomas de irritação emBPH e foram significativamente reduzidas com um MED de 3 mg/kg de Var-denafil, intravenosamente.

EXEMPLO 5

Todos experimentos com animais foram realizados de acordocom "German Law for the Protection of Laboratory animais" e foram condu-zidos de acordo com as diretrizes aprovadas pela permissão "Tierversuchs-vorhaben No 401/A01 M010/M011 vom 09.07.2004". Os experimentos foramrealizados com Ratos Srague Dawley fêmeas com um peso corpóreo entre200-250 g.

Cistometria anestesiada: Para a cistometria, os ratos SD fêmeaforam anestesiados com uretano (1,2 g/kg ip). Após a laparotomia, a bexigafoi exposta e ambas uretras foram ligadas e cortadas. Uma cânula de polieti-leno (PE50) foi implantada no domo da bexiga, e o abdômen foi fechado. Ocateter da bexiga foi conectado a um tubo conformado em T para conectaruma bomba de infusão (Perfusor® compact; Braun Melsungen) para infusãocontínua de solução salina e conectar um transdutor de pressão (Combi-trans; Braun Melsungen) para medição da pressão intrabexiga. Os sinais dapressão intrabexiga foram registrados com o Powerlab System (MLT0698,ADInstrument). A cistometria foi realizada após um período de equilíbrio de 1hora do procedimento cirúrgico. Para o tratamento com medicamento por viaintravenosa, a veia femoral esquerda foi canulada com um cateter de polieti-leno. O efeito dos tratamentos foi calculado no intervalo de micção (corres-pondendo à capacidade da bexiga).

A indução de uma bexiga superativa foi realizada com infusãoda solução de ácido acético a 0,2% (diluída com solução salina) dentro dabexiga ao invés de solução salina ou com injeção intraperitoneal de 150mg/kg de ciclofosfamida, 18 horas antes da cistometria.

Análise estatística dos resultados: Os dados foram expressoscomo médias ± erro padrão das médias (SEM) e η indicando o número deexperimentos. O significado das diferenças entre as médias foi determinadopor teste t de Student emparelhado ou não emparelhado. Os níveis de pro-babilidade inferiores a 0,05 foram considerados como significativos.Efeito do Vardenafil no intervalo de micção em ratos tratadoscom CYP: o intervalo de micção foi significativamente aumentado com MEDde 3 mg/kg de Vardenafil intravenosamente.REFERÊNCIAS

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Claims (18)

1. Método de classificação para inibidores de PDE-5 úteis comoagentes terapêuticos no tratamento de uma doença compreendida em umgrupo de doenças consistindo em Hiperplasia Prostática Benigna (BPH)1Obstrução da Saída da Bexiga (BOO) e Sintomas do Trato Urinário Inferior(LUTS) compreendendo as etapas de: i) contato de um composto de testecom um polipeptídeo de PDE-5, ii) determinação da atividade do polipeptí-deo de PDE-5 em uma determinada concentração do composto de teste ouna ausência do composto de teste, iii) determinação da atividade do polipep-tídeo de PDE-5 em uma concentração diferente do composto de teste, iv)seleção de pelo menos um composto com efeito inibidor no polipeptídeo dePDE-5.

2. Método de classificação para os inibidores de PDE-4 úteiscomo agentes terapêuticos no tratamento de uma doença compreendida emum grupo de doenças consistindo em Hiperplasia Prostática Benigna (BPH),Obstrução da Saída da Bexiga (BOO) e Sintomas do Trato Urinário Inferior(LUTS) compreendendo as etapas de: i) contato de um composto de testecom um polipeptídeo de PDE-4, ii) determinação da atividade do polipeptí-deo de PDE-4 em uma determinada concentração do composto de teste ouna ausência do composto de teste, iii) determinação da atividade do polipep-tídeo de PDE-4 em uma concentração diferente do composto de teste, iv)seleção de pelo menos um composto com efeito inibidor no polipeptídeo de PDE-4.

3. Método de classificação para combinações de inibidores dePDE-5 e inibidores de PDE-4 úteis como agentes terapêuticos no tratamentode uma doença compreendida em um grupo de doenças consistindo em Hi-perplasia Prostática Benigna (BPH), Obstrução da Saída da Bexiga (BOO) eSintomas do Trato Urinário Inferior (LUTS) compreendendo as etapas de: i)contato de um primeiro composto de teste com um polipeptídeo de PDE-5, ii)determinação da atividade do polipeptídeo de PDE-5 em uma determinadaconcentração do primeiro composto de teste ou na ausência do primeirocomposto de teste, iii) determinação da atividade do polipeptídeo de PDE-5em uma concentração diferente do primeiro composto de teste, iv) seleçãode pelo menos um primeiro composto com efeito inibidor no polipeptídeo dePDE-5, v) contato de um segundo composto de teste com um polipeptídeode PDE-4, vi) determinação da atividade do polipeptídeo de PDE-4 em umadeterminada concentração do segundo composto de teste ou na ausência dosegundo composto de teste, vii) determinação da atividade do polipeptídeode PDE-4 em uma concentração diferente do segundo composto de teste,vii) seleção de pelo menos um segundo composto com efeito inibidor no po-lipeptídeo de PDE-4, vii) combinação de pelo menos um composto com ati-vidade inibidora de PDE-5 com pelo menos um composto possuindo ativida-de inibidora de PDE-4.

4. Composição farmacêutica para o tratamento de uma doençacompreendida em um grupo de doenças consistindo em Hiperplasia Prostá-tica Benigna (BPH), Obstrução da Saída da Bexiga (BOO) e Sintomas doTrato Urinário Inferior (LUTS), transtornos genitourinários compreendendosíndrome neurogênica da bexiga (OAB) e (IC), incontinência urinária (UI) talcomo incontinência mista, de urgência, de estresse, ou de fluxo constante(MUI, UUI, SUI, OUI), dor pélvica, transtornos benignos e malignos dos ór-gãos constituindo o sistema genitounirário de mulheres e homens, doençasrenais tais como, falência renal aguda ou crônica, doenças renais imunologi-camente mediadas, tais como, rejeição de transplante renal, nefrite do lúpus,doenças renais do complexo imune, glomerulopatias, nefrite, nefropatia tóxi-ca, uropatias obstrutivas e disfunção erétil em um mamífero compreendendoum agente terapêutico que regula a atividade de um polipeptídeo de PDE-5.

5. Composição farmacêutica para o tratamento de uma doençacompreendida em um grupo de doenças consistindo em Hiperplasia Prostá-tica Benigna (BPH), Obstrução da Saída da Bexiga (BOO) e Sintomas doTrato Urinário Inferior (LUTS) em um mamífero compreendendo um agenteterapêutico que regula a atividade de um polipeptídeo de PDE-4.

6. Composição farmacêutica para o tratamento de uma doençacompreendida em um grupo de doenças consistindo em Hiperplasia Prostá-tica Benigna (BPH), Obstrução da Saída da Bexiga (BOO) e Sintomas doTrato Urinário Inferior (LUTS) em um mamífero compreendendo um agenteterapêutico que é uma combinação dos agentes terapêuticos das reivindica-ções 4 e 5.

7. Composição farmacêutica para o tratamento de uma doençacompreendida em um grupo de doenças consistindo em Hiperplasia Prostá-tica Benigna (BPH)1 Obstrução da Saída da Bexiga (BOO) e Sintomas doTrato Urinário Inferior (LUTS), transtornos genitourinários compreendendosíndrome neurogênica da bexiga (OAB) e (IC), incontinência urinária (UI) talcomo incontinência mista, de urgência, de estresse, ou de fluxo constante(MUI, UUI, SUI1 OUI), dor pélvica, transtornos benignos e malignos dos ór-gãos constituindo o sistema genitounirário de mulheres e homens, doençasrenais tais como, falência renal aguda ou crônica, doenças renais imunologi-camente mediadas, tais como, rejeição de transplante renal, nefrite do lúpus,doenças renais do complexo imune, glomerulopatias, nefrite, nefropatia tóxi-ca, uropatias obstrutivas e disfunção erétil em um mamífero compreendendoum inibidor de PDE-5 selecionado do grupo dos inibidores de PDE-5 consis-tindo em Vardenafil, Sildenafil, Tadalafil, Udenafil1 Dasantafil, Avanafil, S-Lx2101 e LAS34179.

8. Uso de um inibidor de PDE-5 para a preparação de umacomposição farmacêutica para o tratamento de uma doença compreendidaem um grupo de doenças consistindo em Hiperplasia Prostática Benigna(BPH), Obstrução da Saída da Bexiga (BOO) e Sintomas do Trato UrinárioInferior (LUTS), transtornos genitourinários compreendendo síndrome neu-rogênica da bexiga (OAB) e (IC), incontinência urinária (UI) tal como inconti-nência mista, de urgência, de estresse, ou de fluxo constante (MUI, UUI,SUI, OUI), dor pélvica, transtornos benignos e malignos dos órgãos constitu-indo o sistema genitounirário de mulheres e homens, doenças renais taiscomo, falência renal aguda ou crônica, doenças renais imunologicamentemediadas, tais como, rejeição de transplante renal, nefrite do lúpus, doençasrenais do complexo imune, glomerulopatias, nefrite, nefropatia tóxica, uropa-tias obstrutivas e disfunção erétil em um mamífero.

9. Uso de um inibidor de PDE-4 para a preparação de umacomposição farmacêutica para o tratamento de uma doença compreendidaem um grupo de doenças consistindo em Hiperplasia Prostática Benigna(BPH), Obstrução da Saída da Bexiga (BOO) e Sintomas do Trato UrinárioInferior (LUTS) em um mamífero.

10. Uso de uma combinação de pelo menos um inibidorde PDE-4 e pelo menos um inibidor de PDE-5 para a preparação de umacomposição farmacêutica para o tratamento de uma doença compreendidaem um grupo de doenças consistindo em Hiperplasia Prostática Benigna(BPH)1 Obstrução da Saída da Bexiga (BOO) e Sintomas do Trato UrinárioInferior (LUTS) em um mamífero.

11. Uso de um agente que é um inibidor de um polipeptídeo dePDE-4 e um polipeptídeo de PDE-5 para a preparação de uma composiçãofarmacêutica para o tratamento de uma doença compreendida em um grupode doenças consistindo em Hiperplasia Prostática Benigna (BPH), Obstruçãoda Saída da Bexiga (BOO) e Sintomas do Trato Urinário Inferior (LUTS) emum mamífero.

12. Uso de inibidor de PDE-5 selecionado do grupo de inibidoresde PDE-5 consistindo em Vardenafil, Sildenafil, Tadalafil, Udenafil1 Dasanta-fil, Avanafil, SLx2101 e LAS34179 na preparação de uma composição far-macêutica para o tratamento de uma doença compreendida em um grupo dedoenças consistindo em Hiperplasia Prostática Benigna (BPH), Obstrução daSaída da Bexiga (BOO) e Sintomas do Trato Urinário Inferior (LUTS), trans-tornos genitourinários compreendendo síndrome neurogênica da bexiga (O-AB) e (IC)1 incontinência urinária (UI) tal como incontinência mista, de urgên-cia, de estresse, ou de fluxo constante (MUI, UUI, SUI), dor pélvica, transtor-nos benignos e malignos dos órgãos constituindo o sistema genitounirário demulheres e homens, doenças renais tais como, falência renal aguda ou crô-nica, doenças renais imunologicamente mediadas, tais como, rejeição detransplante renal, nefrite do lúpus, doenças renais do complexo imune, glo-merulopatias, nefrite, nefropatia tóxica, uropatias obstrutivas e disfunção eré-til em um mamífero.

13. Uso de uma combinação de pelo menos um inibidor dePDE-4 selecionado do grupo dos inibidores de PDE-4 consistindo em Roflu-milast, Cilomilast e Piclamilast e, pelo menos um inibidor de PDE-5 selecio-nado do grupo dos inibidores de PDE-5 consistindo em Vardenafil, Sildenafile Tadalafil na preparação de uma composição farmacêutica para o tratamen-to de uma doença compreendida em um grupo de doenças consistindo emHiperplasia Prostática Benigna (BPH), Obstrução da Saída da Bexiga (BOO)e Sintomas do Trato Urinário Inferior (LUTS) em um mamífero.

14. Composição farmacêutica contendo pelo menos um com-posto selecionado do grupo de Vardenafil, Sildenafil, Tadalafil, Udenafil, Da-santafil, Avanafil, SLx2101 e LAS34179 ou um sal, um hidrato, ou um hidratode um sal do mesmo, para o tratamento de uma doença compreendida emum grupo de doenças consistindo em Hiperplasia Prostática Benigna (BPH),Obstrução da Saída da Bexiga (BOO), Sintomas do Trato Urinário Inferior(LUTS), transtornos genitourinários compreendendo síndrome neurogênicada bexiga (OAB) e (IC), incontinência urinária (Ul), tal como incontinênciamista, de urgência, de estresse, ou de fluxo constante (MUI, UUI, SUI), dorpélvica, transtornos benignos e malignos dos órgãos constituindo o sistemagenitounirário de mulheres e homens, doenças renais tais como, falênciarenal aguda ou crônica, doenças renais imunologicamente mediadas, taiscomo, rejeição de transplante renal, nefrite do lúpus, doenças renais docomplexo imune, glomerulopatias, nefrite, nefropatia tóxica e uropatias obs-trutivas em um mamífero.

15. Composição farmacêutica contendo pelo menos um com-posto selecionado do grupo de Vardenafil, Sildenafil, Tadalafil, Udenafil, Da-santafil, Avanafil, SLx2101 e LAS34179 ou um sal, um hidrato, ou um hidratode um sal do mesmo, para o tratamento de bexiga neurogênica, bexiga su-perativa e cistite intersticial.

16. Composição farmacêutica contendo Vardenafil ou um sal,um hidrato, ou um hidrato de um sal do mesmo, para o tratamento de bexiganeurogênica, bexiga superativa e cistite intersticial.

17. Uso de pelo menos um composto selecionado do grupo deVardenafil, Sildenafil, Tadalafil, Udenafil, Dasantafil, Avanafil, SLx2101 eLAS34179 ou um sal, um hidrato, ou um hidrato de um sal do mesmo, napreparação de uma composição farmacêutica para o tratamento de bexiganeurogênica, bexiga superativa e cistite intersticial.

18. Uso de Vardenafil ou um sal, um hidrato, ou um hidrato deum sal do mesmo, na preparação de uma composição farmacêutica para otratamento de bexiga neurogênica, bexiga superativa e cistite intersticial.