BRPI0313480B1 - Purina derivatives, its preparation processes, pharmaceutical compositions understanding the same and uses of the above derived from the preparation of medicines - Google Patents

Abstract

"derivados de purina". a presente invenção refere-se a compostos de fórmula (i) ou a sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, em que um de r^ 1^ e r^ 2^ é metila, etila ou isopropila e o outro é h; r^ 3^ e r^ 4^ são cada um independentemente h, c~ 1~-c~ 6~ alquila ramificada ou não-ramificada ou arila e em que pelo menos um de r^ 3^ e r^ 4^ não é h; r^ 5^ é um grupo c~ 1~-c~ 5~ alquila ramificado ou não-ramificado ou um grupo c~ 1~-c~ 6~, cicloalquila, cada um dos quais pode ser opcionalmente substituído com um ou mais grupos oh; r^ 6^, r^ 7^, r^ 8^ e r^ 9^ são cada um independentemente h, halogênio, no~ 2~, oh, ome, cn, nh~ 2~, cooh, conh~ 2~ ou so~ 2~nh~ 2~. um outro aspecto da invenção refere-se a composições farmacêuticas que compreendem compostos de fórmula (i) e ao uso dos ditos compostos no tratamento de distúrbios proliferativos, distúrbios virais, distúrbios do snc, diabete, derrame, alopecia ou distúrbios neurodegenerativos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "DERIVADOS DE PURINA, SEUS PROCESSOS DE PREPARAÇÃO, COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS COMPREENDENDO OS MESMOS E USOS DOS REFERIDOS DERIVADOS NA PREPARAÇÃO DE MEDICAMENTOS".

CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a novos derivados de purina 2, 6, 9-substituídos e às suas aplicações biológicas. Em particular, a invenção refere-se a derivados de purina que têm propriedades antiproliferativas que são úteis no tratamento de distúrbios proliferativos tais como câncer, leucemia, psoríase e similares.

ANTECEDENTES A iniciação, a progressão e a execução do ciclo das células dos mamíferos são regulados por vários complexos de quinase dependentes de ciclina (CDK), que são críticos para o crescimento das células. Estes complexos compreendem pelo menos uma subunidade catalítica (a própria CDK) e uma reguladora (ciclina). Alguns dos complexos mais importantes para a regulagem do ciclo da célula incluem a ciclina A (CDK1 - também conhecido como cdc2 e CDK2), a ciclina B1-B3 (CDK1), a ciclina D1-D3 (CDK2, CDK4, CDK5, CDK6), a ciclina E (CDK2). Cada um destes complexos está envolvido em uma fase em particular do ciclo da célula. Nem todos os membros da família CDK estão envolvidos no controle do ciclo da célula, entretanto. Desse modo, CDKs 7, 8 e 9 estão implicados na regulagem de transcrição e CDK5 representa um papel na função neuronal e de secreção da célula. A atividade de CDKs é regulada pós-translacionalmente, por associações transitórias com outras proteínas e por alterações de sua localização intracelular. O desenvolvimento de tumor está intimamente associado com alteração genética e com a desregulagem de CDKs e de seus reguladores, sugerindo que os inibidores de CDKs podem ser agentes terapêuticos anticancerígenos úteis. Evidentemente, resultados anteriores sugerem que as células transformadas e normais diferem em suas necessidades, por e-xemplo, para ciclina A/CDK2 e que pode ser possível desenvolver novos agentes antineoplásicos desprovidos da toxicidade geral do hospedeiro observada com drogas citotóxicas e citostáticas convencionais. Embora a inibição de CDKs relacionadas ao ciclo seja claramente relevantes, por exemplo, em aplicação em oncologia, este pode não ser o caso para a inibição de CDKs reguladores de RNA polimerase. Por outro lado, a inibição da função de CDK9/ciclina esteve recentemente ligada à prevenção da replicação do HIV e a descoberta da nova biologia CDK assim continua a abrir novas indicações terapêuticas para os inibidores de CDK (Sausville, E.A. Trends Mo-lec. Med. 2002, 8.S32-S37). A função de CDKs é fosforilar e assim ativar ou desativar certas proteínas, inclusive, por exemplo, proteínas do retinoblastoma, laminas, his-tona H1 e componentes do eixo mitótico. A etapa catalítica mediada por CDKs envolve uma reação de fosfo-transferência de ATP ao substrato ma-cromolecular da enzima. Foi descoberto que diversos grupos de compostos (revistos, por exemplo, em Fischer, P.M. Curr. Opin. Drug Discovery Dev. 2001, 4, 623-634) possuem propriedades antiproliferativas em virtude do antagonismo ATP CDK-específico. A WO 98/05335 (CV Therapeutics Inc) divulga derivados de pu-rina 2,6,9-trissubstituídos que são inibidores seletivos de quinases do ciclo da célula. Tais compostos são úteis no tratamento de distúrbios autoimunes, por exemplo, artrite reumatóide, lúpus, diabetes do tipo I, esclerose múltipla; tratamento de câncer, doença cardiovascular, tal como, restenose, doença de hospedeiro versus enxerto, gota, doença de rim policístico e outras doenças proliferativas cuja patogênese envolve proliferação anormal da célula. A WO 99/07705 (The Regents of the University of Califórnia) divulga análogos de purina que inibem entre outras as proteína quinases, as proteínas G e as polimerases. Mais especificamente, a invenção refere-se a métodos de utilização de tais análogos de purina para tratar doenças proliferativas celulares e doenças neurodegenerativas. A WO 97/20842 (CNRS) também divulga derivados de purina que apresentam propriedades antiproliferativas que são úteis no tratamento de câncer, da psoríase e de distúrbios neurodegenerativos. A presente invenção procura fornecer novos derivados de purina 2,6,9-substituídos, particularmente aqueles que têm propriedades antiproliferativas.

DECLARAÇÃO DA INVENÇÃO

Um primeiro aspecto da invenção refere-se a um composto de fórmula 1 ou a um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que um de R1 e R2 é metila, etila ou isopropila e o outro é H; R3 e R4 são cada um independentemente H, Ci-Ce alquila ramificado ou não-ramificado ou arila e em que pelo menos um de R3 e R4 não é H; R5 é um grupo C1-C5 alquila ramificado ou não-ramificado ou um grupo C1-C6 cicloalquila, cada um dos quais pode ser opcionalmente substituído com um ou mais grupos OH; R6, R7, R8 e R9 são cada um independentemente H, halogênio, N02, OH, OMe, CN, NH2, COOH, CONH2, ou S02NH2 .

Um segundo aspecto da invenção refere-se a uma composição farmacêutica que compreende um composto de fórmula 1 e um veículo, dilu-ente ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

Um terceiro aspecto da invenção refere-se ao uso de um composto de fórmula 1 na preparação de um medicamento para o tratamento de um ou mais dos seguintes distúrbios: um distúrbio proliferativo; um distúrbio viral; um derrame; alopecia; um distúrbio do SNC; um distúrbio neurodegenerativo e diabetes.

Um quarto aspecto da invenção refere-se ao uso de um composto de fórmula 1 como um agente antimitótico.

Um quinto aspecto da invenção refere-se ao uso de um composto de fórmula 1 para inibir uma proteína quinase.

Um sexto aspecto da invenção refere-se a um processo de tratamento de uma doença proliferativa, do dito processo compreendendo a administração a um mamífero de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula 1.

Um sétimo aspecto da invenção refere-se ao uso de um composto da invenção em um ensaio para identificar outros compostos candidatos que influenciam a atividade de uma ou mais enzimas CDK.

DESCRIÇÃO DETALHADA

Como mencionado antes, um primeiro aspecto da invenção refere-se a um composto de fórmula 1 como definido aqui antes. É sabido na técnica que o principal percurso de desativação me-tabólica in vivo do agente inibidor de CDK experimental antiproliferativo ros-covitina (PCT Intl. Patent Appl. Publ. WO 97/20842; Wang, S., McCIue, S. J., Ferguson, J. R., Hull, J. D., Stokes, S., Parsons, S., Westwood, R. e Fischer, P. M. Tetrahedron: Asymmetry 2001, 12, 2891-2894) compreende a oxida-ção do grupo carbinol a um grupo carboxila e excreção subseqüente deste metabólito [Nutley, B. P., Raynaud, F. I., Wilson, S. C., Fischer, P., McCIue, S., Goddard, P. M., Jarman, M., Lane, D. e Workman, P. Clin. Câncer Res. 2000, 6 Suppl. (Proc. 11th AACR-NCI-EORTC Intl. Conf. #318)]. O material sintético autêntico idêntico a este metabólito, apresenta atividade biológica reduzida in vitro. Desse modo, a roscovitina e o derivado de carboxila inibem a atividade de CDK2/ciclina E com valores de IC50 de 0,08 e 0,24 μΜ, respectivamente. Similarmente, os valores de IC50 médios antiproliferativos em um painel representativo de linhagens de célula de tumor transformado humano para roscovitina e o derivado de carboxila eram cerca de 10 e > 50 μΜ, respectivamente.

Roscovitina Metabólito de carboxila Desse modo, em uma modalidade preferida, a invenção procura fornecer novos derivados de purina que exibam resistência melhorada à desativação metabólica.

Em uma modalidade preferida da invenção, um de R1 e R2 é etila ou isopropila e o outro é H.

Em uma outra modalidade preferida da invenção, R5 é isopropila ou ciclopentila.

Em uma modalidade preferida, R6, R7, R8 e R9 são todos H.

Em uma modalidade preferida, R1 ou R2 é etila e o outro é H.

Em uma modalidade preferida, R3 e R4 são cada um independentemente H, metila, etila, propila, butila ou fenila.

Desse modo, em uma modalidade preferida, R3 e R4 são cada um independentemente H, metila, etila, isopropila, n-propila, n-butila, s-butila ou fenila.

Em uma modalidade preferida, R3 e R4 são cada um independentemente H, metila, etila, propila ou butila.

Desse modo, em uma modalidade preferida, R3 e R4 são cada um independentemente H, metila, etila, isopropila, n-propila, n-butila, s-butila ou t-butila.

Em uma modalidade até mesmo mais preferida, R3 e R4 são cada um independentemente H, metila, etila, isopropila ou t-butila.

Em uma modalidade especialmente preferida, o dito composto de fórmula 1 é selecionado entre os seguintes (2S3R)-3-{9-lsopropil-6-[(piridin-2-ilmetil)-amino]-9H-purin-2- ilamino}-pentan-2-ol; (2R3S)-3-{9-lsopropil-6-[(piridin-2-ilmetil)-amino]-9H-purin-2- ilamino}-pentan-2-ol; (3RS,4R)-4-{9-lsopropil-6-[(piridin-2-ilmetil)-amino]-9H-purin-2- ilamino}-hexan-3-ol; (3RS,4S)-4-{9-lsopropil-6-[(piridin-2-ilmetil)-amino]-9H-purin-2- ilamino}-hexan-3-ol; (3RS,4R)-4-{9-lsopropil-6-[(piridin-2-ilmetil)-amino]-9H-purin-2- ilamino}-2-metil-hexan-3-oI; (3RS,4S)-4-{9-lsopropil-6-[(piridin-2-ilmetil)-arnino]-9H-purin-2- ilamino}-2-metil-hexan-3-ol; (3RS,4R)-4-{9-lsopropil-6-[(piridin-2-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilami no}-2,2-d i metil-hexa η-3-ol; (SRS^SM-^-lsopropil-õ-Kpiridin^-ilmetiO-amino^H-purin^- ilamino}-2,2-dimetil-hexan-3-ol; (3R)-3-{9-lsopropil-6-[(piridin-2-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2-metil-pentan-2-ol e (3S)-3-{9-lsopropil-6-[(piridin-2-ilmetil)-amino]-9H-purin-2- ilamino}-2-metil-pentan-2-ol.

Em uma modalidade particularmente preferida, o dito composto de fórmula 1 é (2R3S)-3-{9-lsopropil-6-[(piridin-2-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-pentan-2-ol.

COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS

Um segundo aspecto da invenção refere-se a uma composição farmacêutica que compreende um composto de fórmula 1 misturado com um diluente excipiente ou veículo farmaceuticamente aceitáveis ou uma mistura dos mesmos.

Embora os compostos da presente invenção (inclusive seus sais, ésteres e solvatos farmaceuticamente aceitáveis) possam ser administrados sozinhos, eles geralmente serão administrado em mistura com um veículo, excipiente ou diluente farmacêutico, particularmente para terapia humana. As composições farmacêuticas podem ser para uso humano ou animal em medicina humana e veterinária.

Exemplos de tais excipientes adequados para as várias formas diferentes de composições farmacêuticas aqui descritas podem ser encontradas no "Handbook of Pharmaceutical Excipients", 2nd Edition, (1994), Editado por A Wade e PJ Weller.

Veículos ou diluentes para uso terapêutico são bem conhecidos na técnica farmacêutica e são descritos, por exemplo, em Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A. R. Gennaro edit. 1985).

Exemplos de veículos adequados incluem lactose, amido, glicose, metil celulose, estearato de magnésio, manitol, sorbitol e similares. E-xemplos de diluentes adequados incluem etanol, glicerol e água. A escolha de veículo, excipiente ou diluente farmacêutico pode ser selecionada em relação à via pretendida de administração e prática farmacêutica padronizada. As composições farmacêuticas podem compreender como, ou além do, veículo, excipiente ou diluente qualquer (quaisquer) aglu-tinante (s), lubrificante (s), agente (s) de suspensão, agente (s) de revestimento, agente (s) solubilizador (es) adequado (s).

Exemplos de aglutinantes adequados incluem amido, gelatina, açúcares naturais tais como glicose, lactose anidra, lactose de escoamento livre, beta-lactose, adoçantes de milho, gomas naturais e sintéticas, tais como acácia, tragacanto ou alginato de sódio, carboximetilcelulose e polietileno glicol.

Exemplos de lubrificantes adequados incluem o oleato de sódio, o estearato de sódio, o estearato de magnésio, o benzoato de sódio, o acetato de sódio, o cloreto de sódio e similares.

Conservantes, estabilizadores, corantes e até mesmo agentes flavorizantes podem ser fornecidos na composição farmacêutica. Exemplos de conservantes incluem benzoato de sódio, ácido sórbico e ésteres do ácido p-hidroxibenzóico. Também podem ser usados antioxidantes e agentes de suspensão.

SAIS/ÉSTERES

Os compostos da presente invenção podem estar presentes co- mo sais ou ésteres, em particular como sais ou ésteres farmaceuticamente aceitáveis.

Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da invenção incluem sais de adição de ácido ou de base adequados dos mesmos. Uma revisão de sais farmacêuticos adequados podem ser encontrados em Berge e outros, J Pharm Sei, 66, 1-19 (1977). Os sais são formados, por e-xemplo, com ácidos inorgânicos fortes tais como ácidos minerais, por exemplo, ácido sulfúrico, ácido fosfórico ou ácidos hidroálicos; com ácidos carbo-xílicos orgânicos fortes, tais como ácidos alcanocarboxílicos de 1 a 4 átomos de carbono que não são substituídos ou são substituídos (por exemplo, por halogênio), tal como, ácido acético; com ácidos dicarboxílicos saturados ou não-saturados, por exemplo, ácido oxálico, malônico, succínico, maléico, fumárico, ftálico ou tetraftálico; com ácidos hidroxicarboxílicos, por exemplo, ácidos ascórbico, glicólico, láctico, málico, tartárico ou cítrico; com aminoáci-dos, por exemplo, ácido aspártico ou glutâmico; com ácido benzóico; ou com ácidos sulfônicos orgânicos, tais como ácidos (Ci-C4)-alquil- ou aril-sulfônicos que não são substituídos ou são substituídos (por exemplo, por um halogênio), tal como, ácido metano- ou p-tolueno sulfônico.

Os ésteres são formados usando-se ácidos orgânicos ou álco-ois/hidróxidos, dependendo do grupo funcional que está sendo esterificado. Os ácidos orgânicos incluem ácidos carboxílicos, tais como ácidos alcanocarboxílicos de 1 até 12 átomos de carbono que não são substituídos ou são substituídos (por exemplo, por halogênio), tal como, ácido acético; com ácido dicarboxílico saturado ou não-saturado, por exemplo, oxálico, malônico, succínico, maléico, fumárico, ftálico ou tetraftálico; com ácidos hidroxicarboxílicos, por exemplo, ácido ascórbico, glicólico, láctico, málico, tartárico ou cítrico; com aminoácidos, por exemplo, ácido aspártico ou glutâmico; com ácido benzóico ou com ácidos sulfônicos orgânicos, tais como ácidos (CrC4)-alquil- ou aril-sulfônicos que não são substituídos ou são substituídos (por exemplo, por um halogênio), tal como, ácido metano- ou p-tolueno sulfônico. Os hidróxidos adequados incluem hidróxidos inorgânicos, tais como, hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, hidróxido de cálcio, hidróxido de alumí- nio. Os álcoois incluem alcanoálcoois de 1-12 átomos de carbono que podem não ser substituídos ou substituídos, por exemplo, por um halogênio). ENANCIÔMEROS/TAUTÔMEROS

Em todos os aspectos da presente invenção discutido anteriormente, a invenção inclui, quando apropriado, todos os enanciômeros e tau-tômeros dos compostos de fórmula 1. O versado na técnica irá reconhecer compostos que possuem propriedades ópticas (um ou mais átomos de carbono) ou características tautoméricas. Os enanciômeros e/ou tautômeros correspondentes podem ser isolados/preparados por métodos conhecidos na técnica.

ISÔMEROS ESTÉREO E GEOMÉTRICOS

Alguns dos compostos da invenção podem existir como estere-oisômeros e/ou isômeros geométricos - por exemplo, eles podem possuir um ou mais centros assimétricos e/ou geométricos e assim podem existir em duas ou mais formas estereoisoméricas e/ou geométricas. A presente invenção considera o uso de todos os estereoisômeros e isômeros geométricos daqueles agentes e misturas dos mesmos. Os termos usados nas reivindicações abrangem estas formas, contanto que as ditas formas mantenham a atividade funcional apropriada (embora não necessariamente até o mesmo grau). A presente invenção também inclui todas as variações isotópicas adequadas do agente ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Uma variação isotópica de um agente da presente invenção ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é definida como um em que pelo menos um átomo é substituído por um átomo que tem o mesmo número a-tômico porém uma massa atômica diferente da massa atômica habitualmente encontrada na natureza. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados ao agente e dos sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos incluem os isótopos de hidrogênio, de carbono, de nitrogênio, de oxigênio, de fósforo, de enxofre, de flúor e de cloro, tais como, 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 170, 180, 31P, 32P, 35S, 18F e 36CI, respectivamente. Certas variações isotópicas do agente e dos sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, por exemplo, aqueles em que é incorporado um isótopo radiativo, tal como, 3H ou 14C, são úteis nos estudos de distribuição de droga e/ou de tecido substrato. Isótopos tritiados, isto é, 3H e carbono-14, isto é, isótopos de 14C, são particularmente preferidos por sua facilidade de preparação e detectabilidade. Além disso, a substituição com isótopos, tal como, deutério, isto é, 2H, pode fornecer certas vantagens terapêuticas que resultam da maior estabilidade metabólica, por exemplo, meia vida maior in vivo ou requisitos de dosagem reduzida e portanto podem ser preferidos em algumas circunstâncias. As variações iso-tópicas do agente da presente invenção e dos sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo desta invenção podem geralmente ser preparados por procedimentos convencionais usando-se variações isotópicas apropriadas de reagentes adequados.

SOLVATOS A presente invenção também inclui formas de solvato dos compostos da presente invenção. Os termos usados nas reivindicações abrangem estas formas.

POLIMORFAS A invenção também se refere a compostos da presente invenção em suas várias formas cristalinas, formas polimórficas e formas (não) hidratadas. É bem estabelecido dentro da indústria farmacêutica que os compostos químicos podem ser isolados em qualquer uma de tais formas por uma leve variação no método de purificação e ou forma de isolamento dos solventes usados na preparação sintética de tais compostos.

PRÓ-DROGAS A invenção ainda inclui os compostos da presente invenção em forma de pró-droga. Tais pró-drogas são geralmente compostos de fórmula 1 em que um ou mais grupos apropriados foram modificados de tal modo que a modificação pode ser revertida após a administração a um ser humano ou mamífero. Tal reversão é habitualmente realizada por uma enzima naturalmente presente em tal indivíduo, embora seja possível que um segundo a-gente seja administrado juntamente com uma tal pró-droga para se realizar a reversão in vivo. Exemplos de tais modificações incluem éster (por exemplo, qualquer um daqueles descritos acima), em que a reversão pode ser realizada por uma esterase etc. Outros tais sistemas serão bem conhecidos dos versados na técnica.

ADMINISTRAÇÃO

As composições farmacêuticas da presente invenção podem ser adaptadas para as vias de administração oral, retal, vaginal, parenteral, in-tramuscular, intraperitoneal, intraarterial, intratecal, intrabrônquica, subcutâ-nea, intradermal, intravenosa, nasal, bucal ou sublingual.

Para administração oral, é feito uso em particular de comprimidos prensados, pílulas, comprimidos, gélulas, gotas e cápsulas. Preferenci-almente, estas composições contêm desde 1 até 250 mg e mais preferivelmente desde 10-100 mg, de ingrediente ativo por dose.

Outras formas de administração compreendem soluções ou e-mulsões que podem ser injetadas intravenosamente, intraarterialmente, in-tratecalmente, subcutaneamente, intradermalmente, intraperitonealmente ou intramuscularmente e que são preparadas com soluções estéreis ou esterili-záveis. As composições farmacêuticas da presente invenção também podem estar na forma de supositórios, pessários, suspensões, emulsões, loções, ungüentos, cremes, géis, sprays, soluções ou pós para pulverização.

Um meio alternativo de administração transdermal é pelo uso de um adesivo aplicado na pele. Por exemplo, o ingrediente ativo pode ser incorporado a um creme que consiste em uma emulsão aquosa de polietileno glicóis ou de parafina líquida. O ingrediente ativo também pode ser incorporado, a uma concentração de entre 1 e 10 % em peso, a um ungüento que consiste de uma cera branca ou de uma base parafínica branca mole juntamente com tais estabilizadores e conservantes como pode ser necessário.

Formas injetáveis podem conter entre 10 - 1000 mg, de preferência entre 10 - 250 mg, de ingrediente ativo por dose.

As composições podem ser formuladas em forma de dosagem unitária, isto é, na forma de porções distintas que contenham uma dose unitária ou de uma unidade múltipla ou subunidade de uma dose unitária.

DOSAGEM

Uma pessoa versada na técnica pode facilmente determinar uma dose apropriada de uma das presentes composições para administrar a um indivíduo sem experimentação indevida. Tipicamente, um médico irá determinar a dosagem real que será a mais adequada para um paciente individual e esta vai depender de uma variedade de fatores que incluem a atividade do composto específico empregado, da estabilidade metabólica e da duração da ação daquele composto, da idade, do peso do corpo, da saúde em geral, do sexo, da dieta, do modo e do tempo de administração, da taxa de excreção, da combinação da droga, da gravidade do estado em particular e da terapia em andamento do indivíduo. As dosagens aqui divulgadas são e-xemplos da média dos casos. Evidentemente podem haver casos individuais em que as faixas de dosagem maiores e menores são meritórias e tais fatos estão dentro do âmbito desta invenção.

Dependendo da necessidade, o agente pode ser administrado a uma dose de desde 0,01 até 30 mg/kg de peso do corpo, tal como, desde 0,1 até 10 mg/kg, mais preferivelmente desde 0,1 até 1 mg/kg de peso do corpo.

Em um exemplo de modalidade, serão administradas ao paciente uma ou mais doses de 10 até 150 mg/dia para o tratamento de malignida-de.

USO TERAPÊUTICO

Foi descoberto que os compostos da presente invenção possuem atividade antiproliferativa e acredita-se portanto que eles têm utilidade no tratamento de distúrbios proliferativos, tais como, cânceres, leucemias ou outros distúrbios associados à proliferação celular descontrolada, tais como, psoríase e restenose.

Como definido neste caso, um efeito antiproliferativo dentro do âmbito da presente invenção pode ser demonstrado pela capacidade de inibir a proliferação das células em uma dosagem de célula total in vitro, por exemplo, utilizando qualquer uma das linhagens de célula A549, HeLa, HT-29, MCF7, Saos-2, CCRF-CEM, HL-60 e K-562 ou apresentando inibição da quinase em um ensaio apropriado. Estes ensaios, inclusive métodos para o seu desempenho, são descritos com mais detalhe nos Exemplos anexos. Usando-se estes ensaios pode ser determinado se um composto é antiproli-ferativo no contexto da presente invenção.

Uma modalidade preferida da presente invenção portanto refere-se ao uso de um ou mais compostos da invenção na preparação de um medicamento para o tratamento de uma doença proliferativa.

Como usado neste caso, a expressão "preparação de um medicamento" inclui o uso de um composto da invenção diretamente como o medicamento além de seu uso em um programa de seleção de outros agentes terapêuticos ou em qualquer estágio de fabricação de um tal medicamento. O termo "distúrbio proliferativo" é usado neste caso em um sentido amplo para incluir qualquer distúrbio que requeira o controle do ciclo da célula, por exemplo, distúrbios cardiovasculares, tais como, restenose e car-diomiopatia, distúrbios autoimunes, tais como, glomerulonefrite e artrite reu-matóide, distúrbios dermatológicos tais como psoríase, distúrbios antiinfla-matórios, antifúngicos, antiparasíticos tais como as malária, enfizema e alo-pecia. Nestes distúrbios, os compostos da presente invenção podem induzir apoptose ou manter estase dentro das células desejadas quando necessário. Preferencialmente, o distúrbio proliferativo é um câncer ou leucemia.

Em uma outra modalidade preferida, o distúrbio proliferativo é a psoríase.

Os compostos da invenção podem inibir qualquer uma das etapas ou dos estágios no ciclo da célula, por exemplo, formação do invólucro nuclear, saída da fase quiescente do ciclo da célula (GO), progressão de G1, descondensação do cromossomo, ruptura do invólucro nuclear, START, iniciação de replicação de DNA, progressão de replicação de DNA, terminação de replicação de DNA, duplicação de centrossomo, progressão de G2, ativação de funções mitóticas ou meióticas, condensação de cromossomo, separação de centrossomo, nucleação de microtúbulo, formação de eixo e função, interações com proteínas motoras de microtúbulo, proteínas motoras, separação de cromatídeo e segregação, inativação de funções mitóticas, formação de anel contrátil e funções de citocinese. Em particular, os compostos da invenção podem influenciar certas funções do gene, tais como, ligação da cromatina, formação de complexos de replicação, licenciamento de replicação, fosforilação ou outra atividade de modificação secundária, degradação proteolítica, ligação de microtúbulo, ligação de actina, ligação de septina, atividade de nucleação central de organização de microtúbulo e ligação a componentes dos percursos de sinalização do ciclo da célula.

Um outro aspecto da invenção refere-se a um método de tratamento de uma doença proliferativa, o dito método compreendendo a administração a um mamífero de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula 1.

Em uma modalidade preferida deste aspecto, o distúrbio prolife-rativo é câncer ou leucemia.

Em uma modalidade até mesmo mais preferida deste aspecto, o composto é administrado em uma quantidade suficiente para inibir pelo menos uma enzima CDK.

Preferencialmente, o composto da invenção é administrado em uma quantidade suficiente para inibir pelo menos um de CDK1, CDK2, CDK3, CDK4, CDK6, CDK7, CDK8 e/ou CDK9.

Mais preferivelmente, o composto da invenção é administrado em uma quantidade suficiente para inibir pelo menos um de CDK2 e/ou CDK4.

Até mesmo mais preferivelmente, a enzima CDK é CDK2.

Em uma modalidade preferida deste aspecto, o composto é administrado oralmente.

Um outro aspecto da invenção refere-se ao uso de um composto de fórmula 1 como um agente antimitótico.

Ainda um outro aspecto da invenção refere-se ao uso de um composto de fórmula 1 para o tratamento de um distúrbio neurodegenerati-vo.

Preferencialmente, o distúrbio neurodegenerativo é apoptose neuronal.

Um outro aspecto da invenção refere-se ao uso de um composto de fórmula 1 como um agente antiviral.

Desse modo, um outro aspecto da invenção refere-se ao uso de um composto da invenção na preparação de um medicamento para o tratamento de um distúrbio viral, tal como citomegalovírus humano (HCMV), vírus do herpes simplex do tipo 1 (HSV-1), vírus da imunodeficiência humana do tipo 1 (HIV-1) e vírus varicella zoster (VZV).

Em uma modalidade mais preferida da invenção, o composto da invenção é administrado em uma quantidade suficiente para inibir um ou mais dos CDKs da célula hospedeira envolvidos em replicação viral, isto é, CDK2, CDK7, CDK8 e CDK9 [Wang D, De Ia Fuente C, Deng L, Wang L, Zilberman I, Eadie C, Healey M, Stein D, Denny T, Harrison LE, Meijer L, Kashanchi F. A inibição do transcrição do vírus da imunodeficiência humana do tipo 1 por inibidores de quinase dependentes de ciclina química. J. Virol. 2001; 75: 7266-7279].

Como aqui definido, um efeito antiviral dentro do âmbito da presente invenção pode ser demonstrado pela capacidade de inibir CDK2, CDK7, CDK8 ou CDK9.

Em uma modalidade particularmente preferida, a invenção refe-re-se ao uso de um ou mais compostos da invenção no tratamento de um distúrbio viral que depende de ou é sensível a CDK. Os distúrbios dependentes de CDK estão associados com um nível de atividade normal acima de uma ou mais enzimas CDK. Tais distúrbios de preferência são associados com um nível anormal de atividade de CDK2, CDK7, CDK8 e/ou CDK9. Um distúrbio sensível a CDK é um distúrbio em que uma aberração no nível de CDK não é a causa principal, porém está a jusante da aberração metabólica principal. Em tais esquemas, pode-se dizer que CDK2, CDK7, CDK8 e/ou CDK9 sejam parte do percurso metabólico sensível e os inibidores de CDK podem portanto ser ativos no tratamento de tais distúrbios.

Um outro aspecto da invenção refere-se ao uso de compostos da invenção, ou a sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, na preparação de um medicamento para o tratamento da diabetes.

Em uma modalidade particularmente preferida o diabetes é dia- betes do tipo II. A GSK3 é uma das diversas proteína quinases que fosforilam a glicogênio sintase (GS). A estimulação da síntese de glicogênio pela insulina em músculo esqueletal resulta da desfosforilação e da ativação de GS. A ação de GSK3 sobre a GS assim resulta na desativação desta última e assim na supressão da conversão de glicose em glicogênio em músculos. A diabetes do Tipo II (diabetes mellitus não dependente de insulina) é uma doença multifactorial. A hiperglicemia é conseqüência da resistência da insulinas no fígado, nos músculos e em outros tecidos, acoplada com o impedimento da secreção de insulina. O músculo esqueletal é o principal sítio para a captação de glicose estimulada pela insulina, ali esta é então removida da circulação ou convertida em glicogênio. A deposição de glicogênio no músculo é o determinante principal na homeostasia da glicose e os diabéticos do tipo II têm armazenagem defeituosa de glicogênio no músculo. Há provas de que um aumento da atividade de GSK3 seja importante na diabetes do tipo II [Chen, Y.H.; Hansen, L.; Chen, M.X.; Bjorbaek, C.; Vestergaard, H.; Hansen, T.; Cohen, P.T.; Pedersen, O. Diabetes, 1994, 43, 1234]. Além disso, foi demonstrado que GSK3 é superexpressa em células do músculo dos diabéticos do tipo II e que existe uma correlação inversa entre a atividade de GSK3 no músculo esqueletal e a ação da insulina [Ni-koulina, S.E.; Ciaraldi, T.P.; Mudaliar, S.; Mohideen, P.; Carter, L.; Henry, R.R. Diabetes, 2000, 49, 263]. A inibição de GSK3 é portanto de significado terapêutico no tratamento da diabetes, particularmente do tipo II e na neuropatia diabética. É notável que se sabe que a GSK3 fosforila muitos substratos sem ser a GS e é assim envolvido na regulação de múltiplos percursos bioquímicos. Por exemplo, o GSK é altamente expresso nos sistemas nervoso central e nervoso periférico.

Um outro aspecto da invenção portanto refere-se ao uso de compostos da invenção ou de sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, na preparação de um medicamento para o tratamento de distúrbios do SNC, por exemplo, distúrbios neurodegenerativos.

Preferivelmente, o distúrbio do SNC é a doença de Alzheimer.

Tau é um substrato GSK-3 que foi implicado na etiologia da doença de Alzheimer. Em células nervosas saudáveis, o Tau se associa à tu-bulina em microtúbulos. No entanto, na doença de Alzheimer, o tau forma grandes emaranhados de filamentos, que rompem as estruturas do microtú-bulo na célula nervosa, impedindo assim o transporte de nutrientes assim como a transmissão de mensagens neuronais.

Sem que se deseje ficar preso à teoria, acredita-se que os inibidores de GSK3 sejam capazes de evitar e/ou de reverter a hiperfosforilação anormal da proteína associada ao microtúbulo que é uma característica inva-riante da doença de Alzheimer e de algumas outras doenças neurodegene-rativas, tais como, paralisia supranuclear progressiva, degeneração cortico-basal e doença de Pick. As mutações no gene tau causam formas herdadas de demência fronto-temporal, com avaliação inferior da relevância de disfun-ção da proteína tau para o processo neurodegenerativo [Goedert, M. Curr. Opin. Gen. Dev., 2001, 11,343].

Um outro aspecto da invenção refere-se ao uso de compostos da invenção ou de sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, na preparação de um medicamento para o tratamento de distúrbio bipolar.

Ainda um outro aspecto da invenção refere-se ao uso de compostos da invenção ou de sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, na preparação de um medicamento para o tratamento de um derrame. A redução da apoptose neuronal é uma finalidade terapêutica importante no contexto de trauma cerebral, derrame, epilepsia e doença neurológica motora [Mattson, M.P. Nat. Rev. Mol. Cell. Bioi, 2000, 1, 120]. Portanto, GSK3 como um fator pró-apoptótico em células neuronais toma esta proteína quinase um alvo terapêutico atraente para o projeto de drogas inibidoras para tratamento destas doenças.

Ainda um outro aspecto da invenção refere-se ao uso de compostos da invenção ou de sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, na preparação de um medicamento para o tratamento de alopecia. O crescimento dos cabelos é controlado pelo trajeto de sinaliza- ção Wnt, em particular Wnt-3. Em sistemas de modelo de cultura de tecido da pele, a expressão de mutantes não degradáveis de β-catenina conduz a um aumento drástico na população de células-tronco putativas, que têm maior potencial proliferativo [Zhu, A.J.; Watt, F.M. Development, 1999, 126, 2285]. Esta população de células-tronco expressa um mais alto nível de β-catenina não associada a caderina [DasGupta, R.; Fuchs, E. Development, 1999, 126, 4557], que pode contribuir para o seu alto potencial proliferativo. Além disso, os camundongos transgênicos que superexpressam uma β-catenina truncada na pele sofrem de novo morfogênese do folículo capilar, que normalmente é apenas estabelecido durante a embriogênese. A aplicação ectópica de inibidores de GSK3 pode portanto ser terapeuticamente Citeis no tratamento da calvície e na restauração de crescimento dos cabelos após alopecia induzida por quimioterapia.

Um outro aspecto da invenção refere-se a um processo de tratamento de um distúrbio dependente de GSK3, o dito processo compreendendo a administração a um indivíduo que necessite do mesmo, de um composto de acordo com a invenção ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, como definido acima em uma quantidade suficiente para inibir a GSK3.

Preferencialmente, o composto da invenção ou o sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é administrado em uma quantidade suficiente para inibir a β8Κ3β.

Em uma modalidade da invenção, o composto da invenção é administrado em uma quantidade suficiente para inibir pelo menos uma enzima PLK.

As quinases semelhantes a polo (PLKs) constituem uma família de proteína quinases de serina/treonina. Os mutantes melanogáster de Dro-sophila Mitótica no local polo apresentam anormalidades do eixo [Sunkel e outros, J. Cell Sei., 1988, 89, 25] e foi descoberto que o polo codifica uma quinase mitótica [Llamazares e outros, Genes Dev., 1991, 5, 2153]. Em seres humanos, existem três PLKs intimamente relacionadas [Glover e outros, Genes Dev., 1998, 12, 3777]. Eles contêm um domínio de quinase catalítico amino-terminal altamente homólogo e seus terminais carboxila contêm duas ou três regiões conservadas, as caixas de polo. A função das caixas polo permanecem incompletamente entendidas porém elas estão implicadas no direcionamento de PLKs a compartimentos subcelulares [Lee e outros, Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1998, 95, 9301; Leung e outros, Nat. Struct. Biol., 2002, 9, 719], mediação de interações com outras proteínas [Kauselmann e outros, EMBO J., 1999, 18, 5528] ou podem constituir parte de um domínio autorregulador [Nigg, Curr. Opin. Cell Biol., 1998, 10, 776]. Além disso, a atividade de PLK1 que depende da caixa de polo é necessária para transição apropriada de metáfase/anáfase e citocinese [Yuan e outros, Câncer Res., 2002, 62, 4186; Seong e outros, J. Biol. Chem., 2002, 277, 32282].

Estudos demonstraram que os PLKs humanos regulam alguns aspectos fundamentais da mitose [Lane e outros, J. Cell. Biol., 1996, 135, 1701; Cogswell e outros, Cell Growth Differ., 2000, 11, 615]. Em particular, acredita-se que a atividade de PLK1 seja necessária para a maturação funcional de centrossomos no final de G2/ início da pró-fase e subseqüente estabelecimento de um eixo bipolar. O esgotamento de PLK1 celular através da técnica do pequeno RNA (siRNA) de interferência também confirmou que esta proteína é necessária para múltiplos processos mitóticos e execução da citocinese [Liu e outros, Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 2002, 99, 8672], Em uma modalidade mais preferida da invenção, o composto da invenção é administrado em uma quantidade suficiente para inibir PLK1.

Das três PLKs humanas a PLK1 é a mais bem caracterizada; ela regula um número de efeitos do ciclo de divisão da célula, inclusive o início da mitose [Toyoshima-Morimoto e outros, Nature, 2001, 410, 215; Roshak e outros, Cell. Signalling, 2000, 12, 405], ativação do ponto de controle de danos ao DNA [Smits e outros, Nat. Cell Biol., 2000, 2, 672; van Vugt e outros, J. Biol. Chem., 2001,276, 41656], regulagem do complexo promotor da aná-fase [Sumara e outros, Mol. Cell, 2002, 9, 515; Golan e outros, J. Biol. Chem., 2002, 277, 15552; Kotani e outros, Mol. Cell, 1998, 1, 371], fosforila-ção do proteassomo [Feng e outros, Cell Growth Differ., 2001, 12, 29] e duplicação e maturação de centrossomo [Dai e outros, Oncogene, 2002, 21, 6195].

Especifica mente, a iniciação da mitose requer a ativação de fator promotor da M-fase (MPF), o complexo entre a quinase dependente da cicli-na CDK1 e as ciclinas do tipo B [Nurse, Nature, 1990, 344, 503]. Estas últimas se acumulam durante as fases S e G2 do ciclo da célula e promovem a fosforilação inibidora do complexo de MPF por WEE1, MIK1 e MYT1 quina-ses. No final da fase G2, a desfosforilação correspondente pela fosfatase de especificidade dupla CDC25C aciona a ativação de MPF [Nigg, Nat. Rev. Mol. Cell Biol., 2001, 2, 21]. Na interfase, a ciclina B localiza o citoplasma [Hagting e outros, EMBO J., 1998, 17, 4127], ela então se toma fosforilada durante a prófase e este evento causa translocação nuclear [Hagting e outros, Curr. Biol., 1999, 9, 680; Yang e outros, J. Biol. Chem., 2001, 276, 3604]. Acredita-se que o acúmulo nuclear de MPF ativo durante a prófase seja importante para iniciar os eventos da fase M [Takizawa e outros, Curr. Opin. Cell Biol., 2000, 12, 658]. No entanto, o MPF nuclear é mantido inativo por WEE1 a não ser se for contrariado por CDC25C. A própria fosfatase CDC25C, localizada no citoplasma durante a interfase, se acumula no núcleo na prófase [Seki e outros, Mol. Biol. Cell, 1992, 3, 1373; Heald e outros, Cell, 1993, 74, 463; Dalal e outros, Mol. Cell. Biol., 1999, 19, 4465]. As entradas nucleares tanto da ciclina B [Toyoshima-Morimoto e outros, Nature, 2001, 410, 215] como da CDC25C [Toyoshima-Morimoto e outros, EMBO Rep., 2002, 3, 341] são promovidas através de fosforilação por PLK1 [Ro-shak e outros, Cell. Signalling, 2000,12, 405]. Esta quinase é um importante regulador da iniciação da fase M.

Em uma modalidade particularmente preferida, os compostos da invenção são inibidores ATP-antagonísticos de PLK1.

No presente contexto o antagonismo a ATP refere-se à capacidade de um composto inibidor diminuir ou evitar a atividade catalítica de PLK, isto é, fosfotransferência de ATP a um substrato de PLK macromolecu-lar, em virtude de ligação reversivelmente ou irreversivelmente ou no sítio ativo da enzima de uma maneira tal a atrapalhar ou abolir a ligação de ATP.

Em uma outra modalidade preferida, o composto da invenção é administrado em uma quantidade suficiente para inibir PLK2 e/ou PLK3. A PLK2 de mamífero (também conhecida como SNK) e PLK3 (também conhecida como PRK e FNK) foram originalmente demonstradas como sendo produtos de gene precoces imediatos. A atividade de PLK3 qui-nase parece apresentar um pico durante o final de S e na fase G2. Esta é também ativada durante a ativação do ponto de controle de danos ao DNA e grave esforço oxidativa. A PLK3 também representa um importante papel na regulagem de dinâmica de microtúbulo e função de centrossomo na célula e a expressão desregulada de PLK3 resulta na interrupção do ciclo da célula e apoptose [Wang e outros, Mol. Cell. Biol., 2002, 22, 3450]. A PLK2 é o homólogo menos bem entendido das três PLKs. Tanto Both PLK2 como PLK3 podem ter funções pós-mitóticas importantes adicionais [Kauselmann e outros, EMBOJ., 1999, 18, 5528].

Um outro aspecto da invenção refere-se ao uso de um composto de fórmula 1 para a inibição de uma proteína quinase.

Em uma modalidade preferida este aspecto, a proteína quinase é uma quinase dependente de ciclina. Preferencialmente, a proteína quinase é CDK1, CDK2, CDK3, CDK4, CDK6, CDK7, CDK8 ou CDK9, até mesmo mais preferivelmente CDK2.

Um outro aspecto da invenção refere-se a um processo de inibição de uma proteína quinase, o dito processo compreendendo o contato da dita proteína quinase com um composto de fórmula 1.

Em uma modalidade preferida deste aspecto, a proteína quinase é uma quinase dependente de ciclina, até mesmo mais preferivelmente CDK2.

ENSAIOS

Um outro aspecto da invenção refere-se ao uso de um composto como definido aqui antes em um ensaio para a identificação de outros compostos candidatos que influenciem a atividade de uma ou mais enzimas CDK.

Preferencialmente, o ensaio é capaz de identificar compostos candidatos que sejam capazes de inibir um ou mais enzimas CDK.

Mais preferivelmente, o ensaio é um ensaio de ligação competitivo.

Preferencialmente, o composto candidato é gerado por modificação SAR convencional de um composto da invenção.

Como usado neste caso, o termo "modificação SAR convencional" refere-se a métodos padronizados conhecidos na técnica para a variação de um dado composto por meio de derivatização química.

Desse modo, em um aspecto, o composto identificado pode agir como um modelo (por exemplo, uma matriz) para o desenvolvimento de outros compostos. Os compostos empregados em um tal teste pode estar livres em solução, afixados a um suporte sólido, contidos na superfície de uma célula ou localizados intracelularmente. A abolição da atividade ou a formação de complexos de ligação entre o composto e o agente a ser testado podem ser medidas. O ensaio da presente invenção pode ser uma seleção em que são testados alguns agentes. Em um aspecto, o método de ensaio da presente invenção é uma peneira para alta circulação de material.

Esta invenção também considera o uso de ensaios competitivos de seleção de droga em que os anticorpos neutralizadores capazes de se ligarem a um composto especificamente competem com um composto teste para ligação a um composto.

Uma outra técnica para seleção fornece peneiração com alta circulação de material (HTS) de agentes que tenham afinidade de ligação adequada com as substâncias e seja baseada no método descrito em detalha na WO 84/03564. É de se esperar que os métodos de dosagem da presente invenção sejam adequados tanto para seleção de compostos teste em pequena e ampla escala como em ensaios quantitativos.

Preferencialmente, os ensaios de ligação competitivos compreendem o contato de um composto de fórmula 1 com uma enzima CDK na presença de um substrato conhecido da dita enzima CDK e a detecção de qualquer mudança na interação entre a dita enzima CDK e o dito substrato conhecido.

Um sexto aspecto da invenção fornece um método de detecção da ligação de um ligando a uma enzima CDK, o dito método compreendendo as etapas de: (i) contato de um ligando com uma enzima CDK na presença de um substrato conhecido da dita enzima CDK; (ii) detecção de qualquer mudança na interação entre a dita enzima CDK e o dito substrato conhecido; e em que o dito ligando é um composto de fórmula 1.

Um aspecto da invenção refere-se a um processo que compreende as etapas de: (a) realização de um método de ensaio descrito aqui antes; (b) identificação de um ou mais ligandos capazes de se ligarem a um domínio de ligação de ligando e (c) preparação de uma quantidade do dito um ou mais ligandos.

Um outro aspecto da invenção fornece um processo que compreende as etapas de: (a) realização de um método de ensaio descrito aqui antes; (b) identificação de um ou mais ligandos capazes de se ligarem a um domínio de ligação de ligando e (c) preparação de uma composição farmacêutica que compreende os ditos um ou mais ligandos.

Um outro aspecto da invenção fornece um processo que compreende as etapas de: (a) realização de um método de ensaio descrito aqui antes; (b) identificação de um ou mais ligandos capazes de se ligarem a um domínio de ligação de ligando e (c) modificação do dito um ou mais ligandos capazes de se ligarem a um domínio de ligação de ligando; (d) realização do método de ensaio descrito aqui antes; (e) opcionalmente preparação de uma composição farmacêutica que compreende os ditos um ou mais ligandos. A invenção também se refere a um ligando identificado pelo método descrito aqui antes.

Um outro aspecto ainda da invenção refere-se a uma composição farmacêutica que compreende um ligando identificado pelo método descrito aqui antes.

Um outro aspecto da invenção refere-se ao uso de um ligando identificado pelo método descrito aqui antes na preparação de uma composição farmacêutica para uso no tratamento de distúrbios proliferativos.

Os métodos acima podem ser usados para seleção de um ligando útil como um inibidor de uma ou mais enzimas CDK.

PROCESSO

Um outro aspecto da invenção refere-se a um processo para a preparação de um composto de fórmula I como definido aqui antes, o dito processo compreendendo a reação de um composto de fórmula V com um composto de fórmula VI em que R1'9 são como definidos acima e X é Cl ou F.

Preferencialmente, o dito composto de fórmula V é preparado pelas etapas a seguir: (i) reação de um composto de fórmula II com um composto de fórmula III para formar um composto de fórmula IV; (ii) alquilação do dito composto de fórmula IV com um halogene-to de alquila, R5-X', para formar um composto de fórmula V.

Preferencialmente, o halogeneto de alquila, R5-X' é um brometo de alquila.

Preferivelmente, o dito composto de fórmula VI é preparado pelas etapas a seguir: (i) oxidação de um composto de fórmula VIII, em que PG é um grupo protetor, para formar um composto de fórmula IX; (ii) alquilação do dito composto de fórmula IX para formar um composto de fórmula X; (iii) remoção do grupo protetor PG do dito composto de fórmula X para formar um composto de fórmula IX, que é equivalente à fórmula VI em que um de R3 ou R4 é H.

Alternativamente, o dito composto de fórmula VI é preparado pelas etapas a seguir: (i) oxidação de um composto de fórmula VIII, em que PG é um grupo protetor, para formar um composto de fórmula IX; (ii) alquilação do dito composto de fórmula IX para formar um composto de fórmula X; (iii) oxidação do dito composto de fórmula X para formar um composto de fórmula XI; (iv) alquilação do dito composto de fórmula XI para formar a composto de fórmula XII; (v) remoção do grupo protetor PG do dito composto de fórmula XIII para formar um composto de fórmula VI.

Mais preferivelmente, a oxidação nas etapas (i) e (iii) dos processos acima são conseguidas por meio de uma oxidação de Swem.

Preferencialmente, as reações de alquilação das etapas (ii) e (iv) dos processos acima são conseguidas pelo tratamento do composto com um reagente de alquil lítio na presença de um catalisador complexo de brometo de cobre/sulfeto de dimetila.

Os grupos protetores adequados PG serão familiares aos versados na técnica. Para fins de exemplo, de preferência o grupo protetor PG é um grupo tritila.

Outros detalhes da preparação de compostos da presente invenção estão delineados nos Exemplos anexos sob o título "Síntese". A presente invenção também é descrita por meio dos exemplos a seguir.

EXEMPLOS

Em contraste com a roscovitina, os compostos da presente invenção contêm substituintes modificados de purina C-2. Em particular, os compostos da invenção contêm substituintes C-2 que têm um grupo álcool secundário ou terciário em vez de um grupo álcool primário. Sem que se deseje ficar preso à teoria, acredita-se que a presença de tais substituintes C-2 modificados levem a uma redução na conversão metabólica de álcool-carboxila.

Para se destacar a redução na solubilidade aquosa esperada como um resultado da incorporação de substituintes alquila adicionais ao substituinte C-2, o grupo C-6 benzilamino da roscovitina foi substituído por um grupo (piridin-2-il)-metilamino. Os exemplos anexos demonstram que esta modificação é tolerada em termos de atividade biológica (inibição de CDK2/ciclina E ou A, CDK1/ciclina B e efeito antiproliferativo sobre as linha- gens de célula tumorais humanas).

Desse modo, a presente invenção demonstra que a modificação dos substituintes da purina C-2 e C-6 de roscovitina fornece novos compostos com utilidade terapêutica melhorada. Evidentemente, foi demonstrado que a colocação de um ou dois substituintes alquila inferiores no carbinol C do substituinte C-2 da purina presente na roscovitina não é apenas tolerado em termos de retenção da atividade biológica desejada (potência e seletividade de inibição de proteína quinase, citotoxicidade), porém em alguns casos fornece compostos mais potentes. Além disso, a inclusão de um grupo (piridin-2-il)-metilamino em lugar do grupo benzilamino garante perfis de hi-drofilicidade e de solubilidade aquosa melhoradas para os compostos desta invenção comparados com a roscovitina (coeficientes de distribuição de n-octanol/água calculados: 2,5 < ClogP < 3,8 comparados a ClogP = 3,7 para roscovitina). Além disso, foi demonstrado que os compostos selecionados aqui exemplificados melhoravam a resistência à degradação metabólica u-sando-se um sistema de modelo apropriado in vitro. Síntese Os compostos de estrutura geral 1 podem ser preparados por métodos conhecidos na técnica (revistos em Fischer, P. M., e Lane, D. P. Curr. Med. Chem. 2001, 7, 1213-1245). É apresentada uma via sintética conveniente no Esquema 1 abaixo e inicia com a 2,6-dicloropurina (2, X = Cl) ou com a 2-amino-6-cloropurina (2, X = NH2) comercialmente disponíveis. Neste último caso, o grupo amino é transformado para fornecer o material de partida 6-cloro-2-flúor-purina particularmente adequado (2, X = F; Gray, N. S., Kwon, S., e Schultz, P. G. Tetrahedron Lett. 1997, 38, 1161-1164.). A aminação seletiva na posição mais reativa C-6 com a piridilmetila-mina 3 apropriada então fornece o intermediário 4. Este é alquilado na posição N-9, por exemplo, por substituição nucleofílica que usa o halogeneto de alquila apropriado R5-X. O produto 5 é finalmente aminado com uma hidroxi-etilamina 6 à temperatura elevada.

Esquema 1 Os amino álcoois substituídos 6 (R1 ou R2 <> H) podem ser sintetizados partindo de α-amino álcoois 7 (R1 ou R2 <> H) como apresentado no Esquema 2 a seguir. Muitos destes últimos são comercialmente disponíveis; altemativamente, eles podem ser preparados facilmente por redução dos a-aminoácidos correspondentes. A reação inicial na metodologia sintética adotada era proteção tritila da função amino para fornecer o intermediário 8 (R1 ou R2 <> H; Evans, P. A., Holmes, A. B., e Russell, K. J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 1994, 3397-3409). Este foi submetido à oxidação de Swem ao aldeído correspondente 9 (R1 ou R2 <> H; Takayama, H., Ichikawa, T., Kuwajima, T, Kitajima, M., Seki, H., Aimi, N., e Nonato, M. G. J. Am. Chem. Soc. 2000, 122, 8635-8639). A introdução do substituinte R3 (se R2 <> H) ou R4 (se R1 <> H) foi realizada por meio de alquilação controlada por quelação (Reetz, Μ. T., Roelfing, K., e Griebenow, N. Tetrahedron Lett. 1994, 35, 1969-1972) que usa o reagente alquil lítio apropriado e um catalisador complexo de brometo de cobre/sulfeto de dimetila em dietil éter. Dependendo do substituinte a ser introduzido, este procedimento forneceu os intermediários 10 em excesso diaestereomérico (de) de 50 - 80 %. Altemativamente, podem ser usados métodos aquirais, opcionalmente seguido por separa- ção/resolução dos isômeros ópticos. Para a produção de amino álcoois em que tanto R3 como R4 não são Η, o intermediário 10 foi sujeito a uma outra reação de oxidação de Swem à cetona respectiva 12, seguida por introdução do segundo substituinte por alquilação. A etapa final na síntese para todos os aminoácidos foi a remoção do grupo tritila usando-se ácido trifluo-roacético para fornecer 6 ou 11.

Esquema 2 Naqueles casos em que os amino álcoois contêm dois substitu-intes idênticos no carbinol C (6, R1 ou R2 <> H; R3 = R4, não H), estes podem ser obtidos diretamente partindo de um éster de α-aminoácido correspondente adequado, por exemplo, por alquilação dupla de Grignard (Guenther, B. R., e Kirmse, W. LiebigsAnn. Chem. 1980, 518-532).

Ensaios de quinase Os compostos dos exemplos abaixo foram investigados para sua atividade inibidora de CDK2/ciclina E, CDK1/ciclina B, CDK4/ciclina D1 e CDK7/ciclina H, ERK-2 e atividade inibidora de PKA. As quinases ciclina-dependentes humanas recombinante com marcação de HiS6 CDK1/ciclina B1, CDK2/ciclina E, CDK4 e CDK7/ciclina H foram expressas em células sf9 usando-se um sistema de expressão de bacilovírus. A ciclina D1 recombi-nante foi expressa em E. coli. As proteínas foram purificadas por cromato-grafia por afinidade com quelato de metal até mais de 90 % de homogenei- dade. Os ensaios de quinase foram realizados em placas com 96 cavidades usando-se CDK/ciclinas recombinantes, ERK-2 ativo recombinante (Upstate Biotechnology) ou sub unidade catalítica de quinase cíclica AMP-dependente (PKA) (Calbiochem Cat. 539487). Os ensaios foram realizados em solução tampão para ensaio (β-glicerofosfato 25 mM, MOPS20 mM, EGTA5 mM, DTT1 mM, Na3V03l mM, pH 7,4), em que foram adicionados 2 - 4 μg de enzima ativa com substratos apropriados (histona purificada H1 para CDK2, resíduos de proteína de GST-retinoblastoma recombinante (resíduos 773-928) para CDK4, peptídeo biotinil-Ahx-(Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser)4 para CDK7, proteína de mielina básica para ERK-2 ou peptídeo Kemptide (Fluka Biochemika Cat. 60645) para PKA). A reação foi iniciada pela adição de Mg/mistura de ATP (MgCh 15 mM + ATP 100 μΜ com 30-50 kBq por cavidade de [γ-32Ρ]-ΑΤΡ) e misturas incubadas durante 10 minutos (CDK2/ciclina E, ERK-2, PKA) ou 45 min (CDK4/ciclina D1, CDK7/ciclina H) quando necessário a 30 °C. As reações foram interrompidas sobre gelo, seguidas por filtração través de placas de filtro p81 ou GF/placas de filtro C (para CDK4) (Whatman Polyfiltronics, Kent, UK), exceto para CDK7 em que, após a interrupção da reação sobre gelo, foram adicionados 10 pL de 10 mg/mL de avi-dina a cada cavidade e ainda incubados durante 10 minutos seguidos por filtração como para o ensaio CDK2. Após a lavagem 3 vezes com ácido orto-fosfórico aq. 75 mM, as placas foram secas, é adicionado cintilante e a radia-tividade incorporada medida em um contador de cintilação (TopCount, Pac-kard Instruments, Pangbourne, Berks, UK). Os compostos para o ensaio com quinase foram obtidos como estoques de 10 mM em DMSO e diluídos em DMSO a 10 % em solução tampão para o ensaio. Os dados forma analisados usando-se software de adaptação de curva (GraphPad Prism versão 3.00 para Windows, GraphPad Software, San Diego Califórnia USA) para determinar os valores de IC50 (concentração de composto teste que inibe a atividade da quinase uns 50 %.). Estes valores para os compostos da presente invenção são apresentados na Tabela 1.

Ensaio de citotoxicidade MTT

Os compostos dos exemplos a seguir foram sujeitos a um ensaio de proliferação celular padronizado usando-se as seguintes linhagens de célula de tumor humano: A549, HeLa, HT-29, MCF7, Saos-2, CCRF-CEM, HL-60 e K-562. As linhagens de célula foram obtidas pela ATCC (American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manessas, VA 20110-2209, USA). Padrão 72-h MTT (azul de tiazolila; foram realizados ensaios com brometo de 3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazólio) (Haselsberger, K.; Peterson, D. C.; Thomas, D. G.; Darling, J. L. Anti Câncer Drugs 1996, 7, 331-8; Loveland, B. E.; Johns, T. G.; Mackay, I. R.; Vaillant, F.; Wang, Z. X.; Hertzog, P. J. Biochemistry International 1992, 27, 501-10). Em resumo: as células foram semeadas em placas de 96 cavidades de acordo com um tempo duplicado e incubadas durante toda a noite a 37 °C. Os compostos teste foram obtidos em DMSO e uma série de diluição 1/3 preparada em meios de célula de 100 pl_, foram adicionados a células (em triplicatas) e incubados durante 72 horas a 37 °C. O MTT foi obtido como um estoque de 5 mg/mL em meios de células e esterilizados em filtro. Os meios foram removidos das células seguido por uma lavagem com 200 pL de PBS. Foi então adicionada solução de MTT a 20 pl_ por cavidade e incubada no escuro a 37 °C durante 4 horas. A solução de MTT foi removida e as células de ovo lavadas com 200 μΙ_ de PBS. O corante MTT foi solubilizado com 200 μΙ_ por cavidade de DMSO com agitação. A absorbância foi lida a 540 nm e os dados analisados usando-se software de adaptação da curva (GraphPad Prism versão 3,00 para Windows, GraphPad Software, San Diego Califórnia USA) para determinar os valores de IC50 (concentração de composto teste que inibe o crescimento da célula uns 50%). Estes valores para os compostos da presente invenção são apresentados na Tabela 2.

Ensaio comparativo de metabolismo \n vitro Incubações Microssomais e preparação de amostras para análise Foram obtidos microssomos pela Totem Biologicals, Northamp-ton, Inglaterra. Proteína microssomal (0,2 mg) e roscovitina ou um composto teste desta invenção (concentração final 10 μΜ) foram misturados em soro fisiológico tampão com fosfato (100 μΙ_) contendo NADPH (20 mM), MgCI2 (10 mM), e EDTA (1,5 mM). As amostras foram incubadas durante 30 minu- tos e a reação interrompida pela adição de metanol gelado (300 pL) que contém olomoucina (Vesely, J., Havlicek, L., Strnad, M., Blow, J.J., Donella-Deana, A., Pinna, L., Letham, D.S., Kato, J„ Detivaud, L., Leclerc, S., Meijer, L. Eur. J. Biochem. 1994, 224, 771-786) como padrão interno. Foram preparadas curvas de calibração a 0, 1, e 10 μΜ em microssomos pré-incubados durante 30 min e estes foram também tratados com metanol que contém olomoucina. Todas as amostras foram então centrifugadas e os sobrenadan-tes analisados por cromatografia líquida - espectrometria de massa. Cromatoarafia Líquida - Espectrometria de Massa A coluna de cromatografia era uma Supelco LC-ABZ, 50 x 4,6 mm, coluna zwitteriônica 5 μιτι (Supelco Inc., Supelco Park, Bellefonte, PA, USA). O gradiente de eluentes consistiu em metanol (A) e ácido fórmico a 0,1 % em água (B). O gradiente começou com 10 : 90 (A : B v/v) que foi mantido isocraticamente durante 0,5 minuto, seguido por um aumento linear até 90 : 10 (A : B v/v) durante 6 minutos o que foi mantido nestas condições durante mais 4 minutos. A vazão era de 1 mL/min. Para LC-UV-MS foram introduzidas amostras usando-se um auto-amostrador Gilson 215 (Anachem Ltd., Bedfordshire, UK) ligado a uma bomba quaternária Thermoseparations P4000, coluna (como descrito acima) e detector Thermoseparations ajustado a 254 nm (Thermoquest Ltd., Hemel Hempstead, Hertfordshire, UK). O elu-ente proveniente do detector passou, sem se dividir, a um espectrômetro de massa de coletor de íons Thermoquest LCQ adaptado com uma fonte de electrospray operada em modo positivo. As condições de espectrômetro de massa foram blindagem gás 80, gás auxiliar 20 (ambas unidades arbitrárias), voltagem capilar 4 até 4,5 kV e temperatura do capilar aquecido 250 até 280°C. A faixa de massa era 50-750. O tempo de varredura foi controlado pelo coletor de íons que foi ajustado em um tempo máximo de injeção de íons de 200 ms ou o período de tempo necessário para injetar 2 x 108 íons; para cada varredura o sistema usou automaticamente qualquer período de tempo que foi alcançado primeiro.

Análises de Dados Para analisar os resultados foram extraídos traços de íon selecionados dos íons de MH+ íons do composto teste e padrão interno e a área dos picos relevantes obtidos. A razão da área do pico (composto teste/padrão interno) da incubação do teste foi então comparada com as razões da área de pico obtidas para a curva de calibração do composto teste. Partindo destes valores foi determinada a concentração do composto teste restante após 30 minutos de incubação da proteína microssomal. Os resultados para os compostos representativos da presente invenção estão resumidos na Tabela 3, em que a estabilidade metabólica do composto também é comparada com a de ros-covitina em termos de metabolismo (coluna A), inibição in vitro de CDK2 (coluna B) e citotoxicidade in vitro sobre linhagens de célula de tumor (coluna C). São também apresentadas a eficiência comparativa in vitro (colunas A x C) e exposição celular (coluna A x C). Estes resultados sugerem que os compostos da presente invenção terão eficiência in vivo melhorada comparados a roscovitina. Os coeficientes de distribuição de n-octanol/água calculados (ClogP) também estão incluídos na Tabela 3. Pode-se observar que aqueles compostos com atividade celular e estabilidade metabólica melhoradas também possuem ClogP menor do que a roscovitina, sugerindo solubi-lidade aquosa melhorada e assim facilidade de formulação para administração da droga in vivo. Ácido (2R)-2-(6-Benzilamino-9-isopropil-9H-purin-2-ilamino)-butírico A benzil-(2-flúor-9-isopropil-9H-purin-6-il)-amina (151 mg, 0,5 mmol) foi dissolvida em NMP (5 mL) e DBU (1,5 mL, 10 mmoles). Foi então adicionado o ácido (R)-(-)-2-aminobutírico (99 % ee/GLC; 1,03 g, 10 mmoles) e a mistura foi agitada sob N2 a 160 °C durante 1 hora. Após resfriamento, a mistura foi diluída com ácido cítrico (solução aquosa a 10 %) e CH2CI2 (25 mL cada). As fases foram separadas e a fração orgânica foi extraída com salmoura (2x10 mL), seca sobre MgS04, filtrada e evaporada. O resíduo foi redissolvido em MeCN e foi fracionado por RP-HPLC preparativo (Vydac 218TP1022, 9 mL/minuto, MeCN 22,5 - 32,5 % em H20 contendo CF3COOH a 0,1 % durante 40 minutos). As frações apropriadas foram reunidas e liofilizadas para fornecer o composto do título puro (137 mg, 74,4 %) como um sólido amorfo esbranquiçado. Anal. RP-HPLC (Vydac 218TP54, 1 mL/mín): tR = 16,04 min (0 - 60 % MeCN), 15,95 min (22,5 - 32,5 % MeCN in H20 contendo CF3COOH a 0,1 % durante 20 minutos), pureza: > 98 % (λ = 214 nm). 1H RMN (d6-DMSO, 300 MHz) δ: 0,95 (t, J = 7,3 Hz, 3H, CH2CH3); 1,51 (d, J = 6,7 Hz, 6H, CH(CH3)2); 1,78 (m, J = 7,3 Hz, 2H, CH2CH3); 4,27 (m, 1H, CHCH2); 4,64 (hept., J = 6,7 Hz, 1H, CH(CH3)2); 4,69 (m, 2H, CüPh); 7,25 - 7,41 (m, 6H, ArH). DE-MALDI-TOF MS (matriz de ácido a-ciano-4-hidroxicinâmico): [M + H]+ = 369,41. FAB-MS: [M + H]+ = 369,2033 (C19H25N602 requer 369,2039). (R)-2-(T ritil-amino)-butan-1 -ol A uma solução agitada de (R)-(-)-2-aminobutan-1-ol (10 g, 1 eq, 112,18 mmoles) em DCM (500 mL) sob uma atmosfera de argônio à temperatura ambiente, foi adicionado DIEA (30 mL, 1,54 eq, 172,22 mmoles) seguido por cloreto de tritila (35,4 mL, 1,13 eq, 126,98 mmoles). A mistura da reação foi agitada à temperatura ambiente durante 48 horas, quando TLC (hexano : éter: MeOH; 55 : 40 : 5) indicou que a reação tinha sido completada. O solvente foi evaporado a vácuo e o resíduo precipitado com acetona (50 mL) com hexano (900 mL) com agitação, o precipitado foi removido por filtração e o filtrado foi evaporado a vácuo. O resíduo foi dissolvido em hexano (1 L), filtrado e o filtrado foi evaporado a vácuo para fornecer o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento: 32 g (86 %). 1H RMN (de-DMSO, 250 MHz): δ 0,56 (t, 3H, J = 7,41 Hz, -NHCH(CH2ÇH3)CH2OH), 1,10 (m, 2H, -NHCHÍÇfcbCHaJCHzOH), 2,22 (m, 1Η, -NHCH(CH2CH3)CH2QH), 2,38 (m, 1H, -NHÇH(CH2CH3)CH2OH), 2,72 + 3,00 (2 x m, 2H, -NHCHÍCHXH^CHgOH). 4,28 (t, 1H, J = 5,26 Hz, -NHCH(CH2CH3) CH2OH), 7,14-7,49 (m, 15H, 3 x Ph). (S)-2-(Tritil-amino)-butan-1 -ol A uma solução agitada de (S)-(+)-2-aminobutan-1-ol(10 g, 1 eq, 112,18 mmoles) em DCM (500 mL) sob uma atmosfera de argônio à temperatura ambiente, foi adicionado DIEA (30 mL, 1,54 eq, 172,22 mmoles) seguido por cloreto de tritila (35,4 mL, 1,13 eq, 126,98 mmoles). A mistura da reação foi agitada a esta temperatura durante 48 horas, quando TLC (hexa-no : éter: MeOH; 55:40: 5) indicou que a reação tinha sido completada. O solvente foi evaporado a vácuo e o resíduo precipitado com acetona (50 mL) com hexano (900 mL) com agitação, o precipitado foi removido por filtração e o filtrado foi evaporado a vácuo. O resíduo foi dissolvido em hexano (1 L), filtrado e o filtrado por evaporado a vácuo para fornecer o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento: 33 g (89 %). 1H RMN (d6-DMSO, 250 MHz): 50,58 (t, 3H, J = 7,26 Hz, -NHCH(CH?CHj)CH9OH). 1,10 (m, 2H,-NHCH(ÇH2CH3)CH2OH), 2,24 (m, 1H, -NHCH(CH2CH3)CH20H), 2,39 (m, 1H, -NHÇH(CH2CH3)CH2OH), 2,76 & 3,03 (2 x m, 2H, - NHCH(CH2CH3)ÇH20H), 4,32 (t, 1H, J = 4,97 Hz, -NHCH (CH2CH3) CH2OH), 7,15-7,52 (m, 15H, 3 x Ph). (R)-2-(Tritil-amino)-butiraldeído A uma solução agitada de DMSO (3,0 mL, 2,8 eq, 42,28 mmoles) em DCM (30 mL) sob uma atmosfera de argônio a -45°C, foi adicionado cloreto de oxalila (2 M em DCM, 10,56 mL, 1,40 eq, 21,12 mmoles), gota a gota. A mistura da reação foi agitada a -45°C durante 1 hora, após cujo período de tempo foi adicionada uma solução de (R)-2-(tritil-amino)-butan-1-ol (5 g, 1 eq, 15,08 mmoles) em DCM (30 mL) gota a gota com agitação. A mistura da reação foi agitada a esta temperatura durante 3 horas, quando TLC (hexano : éter; 80 : 20) indicou que a reação tinha sido completada. À mistura da reação foi adicionada uma solução de TEA (10,5 mL, 5 eq, 75,33 mmoles) em DCM (30 mL) e a solução deixada aquecer até a temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura da reação foi diluída com mais DCM (200 mL) e lavada com água (250 mL). A fase aquosa foi extraída com DCM (3 x 50 mL) e a fase orgânica combinada lavada com salmoura (50 mL), seca (MgS04) e evaporada a vácuo. O resíduo foi dissolvido em éter (30 mL), o precipitado sólido removido por filtração e o filtrado foi evaporado a vácuo. O resíduo foi dissolvido em hexano (50 mL), o precipitado sólido removido por filtração e o filtrado foi evaporado a vácuo para fornecer o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento: 2,59 g (52 %). 1H RMN (dg-DMSO, 250 MHz): 5 0,77 (t, 3H, J = 7,42 Hz, -NHCHfCH^CH^CHOL 1,34- 1.61 (m, 2H, -NHCH(Çjd2CH3)CHO), 2,92 (m, 1H, -NHÇH(CH2CH3)CHO), 3.62 (d, 1H, J = 8,21 Hz, -NHCH(CH2CH3)CHO), 7,16-7,46 (m, 15H, 3 x Ph), 8,77 (d, 1H, J = 3,00 Hz, -NHCH(CH2CH3)ÇHO). (S1-2-(Tritil-aminoVbutiraldeído A uma solução agitada de DMSO (2,4 mL, 2,8 eq, 33,82 mmoles) em DCM (30 mL) sob uma atmosfera de argônio a -45°C, foi adicionado cloreto de oxalila (2 M em DCM, 8,45 mL, 1,40 eq, 16,9 mmoles), gota a gota. A mistura da reação foi agitada a -45°C durante 1 hora, após cujo período de tempo foi adicionada uma solução de (S)-2-(tritil-amino)-butan-1-ol (4 g, 1 eq, 12,07 mmoles) em DCM (30 mL) gota a gota com agitação. A mistura da reação foi agitada a esta temperatura durante 3 horas, quando TLC (hexano : éter; 80 : 20) indicou que a reação tinha sido completada. À mistura da reação foi adicionada uma solução de TEA (8,4 ml_, 5 eq, 60,27 mmoles) em DCM (30 mL) e a solução deixada aquecer até a temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura da reação foi diluída com mais DCM (100 mL) e lavada com água (250 mL). A fase aquosa foi extraída com DCM (3 χ 50 mL) e a fase orgânica combinada lavada com salmoura (50 mL), seca (MgS04) e evaporada a vácuo. O resíduo foi dissolvido em éter (30 mL), o precipitado sólido removido por filtração e o filtrado foi evaporado a vácuo. O resíduo foi dissolvido em hexano (50 mL), o precipitado sólido removido por filtração e o filtrado foi evaporado a vácuo para fornecer o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento: 3,64 g (91 %). 1H-RMN (d6-DMSO, 250 MHz): 5 0,77 (t, 3H, J = 7,42 Hz, -NHCH (CHzÇtyCHO), 1,37-1,59 (m, 2H, -NHCH(ÇH2CH3)CHO), 2,93 (m, 1H, -NHÇH_(CH2CH3)CHO), 3,62 (d, 1H, J = 5,84 Hz, -NHCH(CH2CH3)CHO), 7,16-7,46 (m, 15H, 3 χ Ph), 8,77 (d, 1H, J = 3,00 Hz, -NHCH(CH2CH3)ÇHO). (2S.3RV3-(Tritil-amino)-pentan-2-ol A uma suspensão agitada de CuBr.SMe2 (2,74 g, 2,2 eq, 13,33 mmoles) em Et20 (100 mL) sob uma atmosfera de argônio a -70°C, foi adicionado metil lítio (1,6 M em Et20, 16,6 mL, 4,4 eq, 26,56 mmoles) gota a gota e a solução deixada aquecer até a temperatura ambiente. A mistura foi resfriada até -70°C à qual foi adicionada uma solução de (R)-2-(tritil-amino)-butiraldeído (2 g, 1 eq, 6,05 mmoles) em Et20 (25 mL) gota a gota com agitação. A mistura da reação foi agitada a esta temperatura durante 2 horas, quando TLC (hexano : éter; 80:20) indicou que a reação tinha sido completada. À mistura da reação foi adicionada uma solução aquosa de NH4CI (100 mL) e deixada aquecer até a temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura da reação foi extraída com éter (2 χ 200 mL) e a fase orgânica lavada com salmoura (50 mL), seca (MgS04) e evaporada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel, eluído com hexano : éter (80 : 20) para fornecer o composto como um óleo amarelo claro. Rendimento: 1,91 g (91 %). (80 % de 2S,3R: 20 % de 2R,3R). 1H-RMN (d6-DMSO, 250 MHz): 50,47 & 0,55 (2 x t, J = 7,43 & 7,27 Hz, -NHCHfCHsCHs) CH(CH3)OH), 0,99-1,12 (m, 5H, -NHCHfCHpCH^CHfCH^OH). 2,03 (m, 1H, -NHÇH(CH2CH3)CH(CH3)OH), 3,32-3,51 (m, 1H, -NHCH(CH2CH3) ÇH(CH3)OH), 4,40 (d, 1H, J = 3,79 Hz, -NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH), 7,14- 7,51 (m, 15H, 3 x Ph). (2R.3S1-3-(Tritil-amino1-pentan-2-ol A uma suspensão agitada de CuBr.SMe2 (2,74 g, 2,2 eq, 13,33 mmoles) em éter (100 mL) sob uma atmosfera de argônio a -70°C, foi adicionado metil lítio (1,6 M em éter, 15,13 mL, 4,0 eq, 24,21 mmoles) gota a gota e a solução deixada aquecer até a temperatura ambiente. A mistura foi resfriada até -70°C, à qual foi adicionada uma solução de (S)-2-(tritil-amino)-butiraldeído (2 g, 1 eq, 6,05 mmoles) em Et20 (25 mL) gota a gota com agitação. A mistura da reação foi agitada a esta temperatura durante 2 horas e então a -55°C durante 4 horas, quando TLC (hexano : Et20; 80 : 20) indicou que a reação tinha sido completada. À mistura da reação foi adicionada uma solução aquosa saturada de NH4CI (100 mL) e deixada aquecer até a temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura da reação foi aquecida até a temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura da reação foi extraída com Et20 (2 x 200 mL) e a fase orgânica combinada lavada com salmoura (50 mL), seca (MgS04) e evaporada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel, eluída com hexano : Et20 (80 : 20) para fornecer o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento: 1,37 g (66 %). (80 % de 2R,3S: 20 % de 2S,3S). 1H-RMN (d6-DMSO, 250 MHz): δ 0, 0,47 & 0,55 (2 χ t, J = 7,50 & 7,26 Hz -NHCH(CH2ÇH3)CH(CH3)OH), 0,99-1,12 (m, 5H, -NHCH(ÇH2CH3)CH(ÇH3)OH), 2,01 (m, 1H, -NHÇH(CH2CH3)CH(CH3)OH), 3,22-3,43 (m, 1H, -NHCH(CH^>I3) OKCHsJOH), 4,41 (d, 1H, J = 3,31 Hz, -NHCH(CH2CH3)CH(CH3)OH), 7,14- 7,56 (m, 15H, 3 x Ph). (3RS .4R)-4-(T ritil-amino Vhexan-3-ol A uma solução agitada de (R)-2-(tritil-amino)-butiraldeído (1,5 g, 1 eq, 4,53 mmoles) em Et20 (150 mL) sob uma atmosfera de argônio a -78°C, foi adicionado brometo de etilmagnésio (3 M em Et20, 1,51 mL, 1 eq, 4.53 mmoles) gota a gota. A solução foi agitada a -78°C durante 2 horas, então deixada aquecer até a temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura foi resfriada até 0°C, é adicionada H20 (150 mL) e a fase orgânica separada. A fase aquosa foi extraída com mais Et20 (2 χ 50 mL) e a fase orgânica combinada lavada com salmoura (50 mL), seca (MgS04) e evaporada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel, eluída com hexano : éter (90 : 10) para fornecer o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento: 1,13 g (69 %). (57 % de 3S,4R: 43 % de 3R,4R). 1H-RMN (d6-DMSO, 250 MHz): δ 0,45 & 0,69 (t & m, 6H, J = 7,43 Hz, -NHCH(CH2CH3)CH(CH2ÇH3)OH), 1,12-1,29 (m, 4H, -NHCH (ÇhhCHsJCH (ÇHbCHaJOH), 2,16 (m, 1H, -NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH), 2.54 (m, 1H, -NHÇH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH), 3,21-3,40 (m, 1H, -NHCH(CH2CH3) ÇH_(CH2CH3)OH), 4,29+4,39 (2 χ d, 1H, J = 4,42 & 5,37 Hz, -NHCH(CH2CH3) CH(CH2CH3)OH), 7,15-7,52 (m, 15H, 3 χ Ph). (3RS.4S)-4-(Tritil-amino)-hexan-3-ol A uma solução agitada de (R)-2-(tritil-amino)-butiraldeído (1,5 g, 1 eq, 4,53 mmoles) em Et20 (150 ml_) sob uma atmosfera de argônio a -78°C, foi adicionado brometo de etil magnésio (3 M em Et20, 1,51 ml_, 1 eq, 4,53 mmoles) gota a gota. A solução foi agitada a -78°C durante 2 horas, então deixada aquecer até a temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura foi resfriada até 0°C, é adicionada H20 (150 ml_) e a fase orgânica separada. A fase aquosa foi extraída com mais Et20 (2 χ 50 ml_) e a fase orgânica combinada lavada com salmoura (50 ml_), seca (MgSO/O e evaporada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel, eluída com hexano : éter (90 : 10) para fornecer o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento:1,19 g (73 %), (65 % de 3R,4S: 35 % de 3S,4S). 1H-RMN (d6-DMSO, 250 MHz): 50,46+0,69 (t & m, 6H, J = 7,34 Hz, -NHCH(CH2ÇH3)CH(CH2ÇH3)OH), 1,13-1,29 (m, 4H, -NHCHÍÇh^CHa) CHÍÇhbCHaJOH), 2,17 (m, 1H, -NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH), 2,55 (m, 1H, -NHÇH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH), 3,20-3,39 (m, 1H, NHCH(CH2CH3)ÇHCH2 CH3) OH), 4,29 & 4,39 (2 χ d, 1H, J = 4,74 & 5,53 Hz, -NHCH(CH2CH3)CH (CH2CH3)OH), 7,15-7,52 (m, 15H, 3 χ Ph). f3RS.4R)-2-Metil-4-(tritil-amino)-hexan-3-ol A uma suspensão agitada de CuBr.SMe2 (1.37 g, 2,2 eq, 6,66 mmoles) em Et20 (100 mL) sob uma atmosfera de argônio a -78°C, foi adicionado isopropil lítio (0,7 M em pentano, 17,29 mL, 4 eq, 12,1 mmoles) gota a gota e a solução de deixada aquecer até a temperatura ambiente. A mistura foi resfriada até -70°C, à qual foi adicionada uma solução de (R)-2-(tritil-amino)-butiraldeído (1 g, 1 eq, 3,03 mmoles) em Et20 (25 mL) gota a gota com agitação. A mistura da reação foi agitada a esta temperatura durante 1 hora, então deixada aquecer até -55°C e agitada a esta temperatura durante 3 horas. À mistura da reação foi adicionada uma solução aquosa saturada de NH4CI (100 mL) e deixada aquecer até a temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura da reação foi extraída com Et20 (2 χ 200 mL) e a fase orgânica combinada lavada com salmoura (50 ml_), seca (MgS04) e evaporada a vácuo. O resíduo foi purificado por gradiente em cromatografia em coluna sobre sílica-gel, eluída com hexano : éter (100 : 0 90 : 10) para fornecer o composto do título como um óleo incolor. Rendimento: 0,53 g (47 %). (50 % de 3S,4R: 50 % de 3R,4R) 1H-RMN (d6-DMSO, 250 MHz): «5 0,44 (t, 3H, J = 7,03 Hz, -NHCH(CH2ÇH3)CH(CH(CH3)2)OH), 0,52 & 0,77 (2 x d, 6H, J = 6,48 Hz, -NHCH (CH2CH3)CH(CH(ÇH3}2)OH), 0,79-1,13 (m, 2H, -NHCH(CHZCH^CH (CH(CH3)2)OH), 1,72 (m, 1H, -NHCH(CH2CH3)CH (CH(CH3)2)OH), 2,11 (m, 1H, -NHÇH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH), 2,77 (m, 1H, -NHCH(CH2CH3)CH (ÇH(CH3)2)OH), 2,99 (m, 1H, NHCH(CH2CH3)ÇH(CH (CH3)2)OH), 4,55 (d, 1H, J = 5,21 Hz, -NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH), 7,15-7,46 (m, 15H, 3 x Ph). (3RS,4S)-2-Metil-4-(tritil-amino)-hexan-3-ol A uma suspensão agitada de CuBr.SMe2 (1,37 g, 2,2 eq, 6,66 mmoles) em Et20 (100 ml_) sob uma atmosfera de argônio a -78°C, foi adicionado isopropil lítio (0,7 M em pentano, 17,29 ml_, 4 eq, 12,1 mmoles) gota a gota e a solução deixada aquecer até a temperatura ambiente. A mistura foi resfriada até -70°C, à qual foi adicionada uma solução de (S)-2-(tritil-amino)-butiraldeído (1 g, 1 eq, 3,03 mmoles) em Et20 (25 ml_) gota a gota com agitação. A mistura da reação foi agitada a esta temperatura durante 1 hora, então deixada aquecer até -55°C e agitada a esta temperatura durante 3 horas. Λ mistura da reação foi adicionada uma solução aquosa saturada de NH4CI (100 mL) e deixada aquecer até a temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura da reação foi extraída com Et20 (2 χ 200 mL) e a fase orgânica combinada lavada com salmoura (50 mL), seca (MgS04) e evaporada a vácuo. O resíduo foi purificado em cromatografia em coluna sobre sílica-gel, eluída com hexano : éter (100 : 0 -> 90 :10) para fornecer o composto do título como um óleo incolor. Rendimento: 0,36 g (32 %). (50 % de 3R,4S: 50 % de 3S.4S). 1H-RMN (d6-DMSO, 250 MHz): δ 0,44 (t, 3H, J = 6,79 Hz, -NHCH(CH2ÇH3)CH(CH(CH3)2)OH), 0,52 & 0,76 (2 x d, 6H, J = 6,63 Hz, -NHCH (CH2CH3)CH(CH(ÇH3)2)OH), 0,80-1,15 (m, 2H, - NHCH(ÇH2CH3)CH (CH(CH3)2)OH), 1,70 (m, 1H, -NHCH(CH2CH3)CH (CH(CH3)2)QH), 2,10 (m, 1H, -NHÇH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH), 2,76 (m, 1H, -NHCH(CH2CH3)CH (£H(CH3)2)OH), 2,99 (m, 1H, NHCH(CH2CH3)ÇH(CH (CH3)2)OH), 4,55 (d, 1H, J = 5,84 Hz, -NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH), 7,17-7,46 (m, 15H, 3 x Ph). (3RS.4R)-2.2-Dimetil-4-(tritil-amino)-hexan-3-ol A uma suspensão agitada de CuBr.SMe2 (1.37 g, 2.2 eq, 6.66 mmoles) em Et20 (100 mL) sob uma atmosfera de argônio a -78°C, foi adicionado terc-butil lítio (1,5 M em pentano, 8,0 mL, 4 eq, 12,0 mmoles) gota a gota e a solução deixada aquecer até a temperatura ambiente. A mistura foi resfriada até -55°C, à qual foi adicionada uma solução de (R)-2-(tritil-amino)-butiraldeído (1 g, 1 eq, 3,03 mmoles) em Et20 (25 mL) gota a gota com agitação e agitada a esta temperatura durante 3 horas. À mistura da reação foi adicionada uma solução aquosa saturada de NH4CI (100 mL) e deixada a-quecer até a temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura da reação foi extraída com Et20 (2 χ 200 mL) e a fase orgânica combinada lavada com salmoura (50 mL), seca (MgS04) e evaporada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel, eluída com gradiente de hexano : éter (100 : 0 90 : 10) para fornecer o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento : 0,57 g (49 %). (55 % de 3S,4R : 45 % de 3R,4R). 1H-RMN (d6-DMSO, 250 MHz): δ 0,36 & 0,86 (2 χ t, 3H, J = 7,42 Hz, -NH CH(CH2ÇH3)CH(C(CH3)3)OH), 0,57 & 0,71 (2 χ s, 9H, -NHCHCHpOkPHíCXa-b^pH). 1,38-1,52 (m, 2H, -NHCH(CH?CH.macm)OH)· 1,99 (m, 1H, -NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH), 2,27 (m, 1H. - NHÇH(CH2CH3)CH (C(CH3)3)OH), 2,95 (m, 1H, -NHCH(CH2CH3) ÇH(C(CH3)3)OH), 4,22 & 4,77 (2 x d, 1H, J = 4,42 5,21 Hz, -NHCH(CH2CH3) CH(C(CH3)3)OH), 7,14-7,52 (m, 15H, 3 x Ph). (3RS,4S)-2.2-Dimetil-4-(tritil-amino)-hexan-3-ol A uma suspensão agitada de CuBr.SMe2 (1,37 g, 2,2 eq, 6,66 mmoles) em Et20 (100 mL) sob uma atmosfera de argônio a -78°C, foi adicionado terc-butil lítio (1,5 M in pentano, 8,0 mL, 4 eq, 12,0 mmoles) gota a gota e a solução deixada aquecer até a temperatura ambiente. A mistura foi resfriada até -55°C, à qual foi adicionada uma solução de (S)-2-(tritil-amino)-butiraldeído (1 g, 1 eq, 3,03 mmoles) em Et20 (25 mL) gota a gota com agitação e agitada a esta temperatura durante 3 horas. À mistura da reação foi adicionada uma solução aquosa saturada de NH4CI (100 mL) e deixada a-quecer até a temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura da reação foi extraída com Et20 (2 χ 200 mL) e a fase orgânica combinada lavada com salmoura (50 mL), seca (MgS04) e evaporada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel, eluída com gradiente de hexano : Et20 (100 : 0 90 :10) to para fornecer o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento : 0,47 g (40 %). (53 % de 3R,4S : 47 % de 3S,4S). 1H-RMN (de-DMSO, 250 MHz): δ 0,37 & 0,87 (2 χ t, 3H, J = 7,46 Hz, -NHCH (CH2ÇH3)CH(C(CH3)3)OH), 0,58 & 0,71 (2 x s, 9H, -NHCH(CH2CH3)CH (C(CH3)_3)OH), 1,38-1,52 (m, 2H, -NHCH(ÇHhCH3) CH(C(CH3)3)OH), 2,00 (m, 1H, -NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH), 2,28 (m, 1H, -NHÇH(CH2CH3)CH (C(CH3)3)OH), 2,95 (m, 1H, - NHCH(CH2CH3)ÇH(C(CH3)3)OH), 4,24 & 4,79 (2 x d, 1H, J = 5,21 & 6,16 Hz, -NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH), 7,15-7,53 (m, 15H, 3 χ Ph). (3RV3-(Tritil-aminoVDentan-2-ona A uma solução agitada de DMSO (2,19 ml_, 2,8 eq, 30,86 mmo-les) em DCM (30 mL) sob uma atmosfera de argônio a -45°C, foi adicionado cloreto de oxalila (2 M em DCM, 7,69 mL, 1,4 eq, 15,38 mmoles) gota a gota. A mistura da reação foi agitada a -45°C durante 1 hora, após cujo tempo foi adicionada uma solução de (2S,3R)-3-(tritil-amino)-pentan-2-ol (3,81 g, 1 eq, 11,04 mmoles) em DCM (20 mL) gota a gota com agitação. A mistura da reação foi agitada a esta temperatura durante 4 horas, quando TLC (hexano : éter; 80 : 20) indicou que a reação tinha sido completada. À mistura da reação foi adicionada /V-etilpiperidina (7,54 mL, 5 eq, 54,88 mmoles) e a solução deixada aquecer até a temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura da reação foi diluída com mais DCM (50 mL) e lavada com água (200 mL). A fase aquosa foi extraída com DCM (2 χ 50 mL) e a fase orgânica combinada lavada com salmoura (50 mL), seca (MgS04) e evaporada a vácuo. O resíduo foi dissolvido em Εί20 (100 mL), o precipitado sólido removido por filtração e o filtrado foi evaporado a vácuo. O resíduo foi dissolvido em hexano (50 mL), o precipitado solido removido por filtração e o filtrado foi evaporado a vácuo para fornecer o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento : 3,78 g (100 %). 1H-RMN (de-DMSO, 250 MHz): 50,73 (t, 3H, J = 7,35 Hz, -NHCH(CH2CH3)C(CH3)0), 1,47-1,60 (m, 5H, -NHCH(ÇjH2CH3)C(ÇH3)0), 3,12 (d, 1H, J = 8,38 Hz, - NjHCH(CH2CH3)C(CH3)0), 3,32 (m, 1H, -NHÇH(CH2CH3) C(CH3)0), 7,16-7,49 (m, 15H, 3xPh). (3S)-3-(Tritil-amino)-pentan-2-ona A uma solução agitada de DMSO (1,95 mL, 2,8 eq, 27,48 mmo-les) em DCM (30 mL) sob uma atmosfera de argônio a -45°C, foi adicionado cloreto de oxalila (2 M em DCM, 6,85 mL, 1,4 eq, 13,70 mmoles) gota a gota. A mistura da reação foi agitada a -45°C durante 1 hora, após cujo período de tempo foi adicionado gota a gota uma solução de (2R,3S)-3-(tritil-amino)-pentan-2-ol (3,39 g, 1 eq, 9,83 mmoles) em DCM (20 mL) com agitação. A mistura da reação foi agitada a esta temperatura durante 4 horas, quando TLC (hexano : éter; 80 : 20) indicou que a reação tinha se completado. À mistura da reação foi adicionada A/-etilpiperidina (6,71 mL, 5 eq, 48,84 mmoles) e a solução deixada aquecer até a temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura da reação foi diluída com mais DCM (50 mL) e lavada com água (200 mL). A fase aquosa foi extraída com DCM (2 χ 50 mL) e fase orgânica combinada lavada com salmoura (50 mL), seca (MgSÜ4) e evaporada a vácuo. O resíduo foi dissolvido em Et20 (100 mL), o precipitado sólido removido por filtração e o filtrado foi evaporado a vácuo. O resíduo foi dissolvido em hexano (50 mL), o precipitado sólido removido por filtração e o filtrado foi evaporado a vácuo para fornecer o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento : 3,15 g (93 %). 1H-RMN (d6-DMSO, 250 MHz) : 5 0,73 (t, 3H, J = 7,50 Hz, -NHCH(CH2ÇH3)C(CH3)0), 1,45-1,62 (m, 5H, -NHCH(ÇH2CH3)C(ÇH3)0), 3,12 (d, 1H, J = 8,53 Hz, - NHCH(CH2CH3)C(CH3)0), 3,31 (m, 1H, -NHÇH(CH2CH3)C(CH3)0), 7,13-7,45 (m, 15H, 3 χ Ph). (3R)-2-Metil-3-rtritil-amino)-pentan-2-ol A uma solução agitada de (3R)-3-(tritil-amino)-pentan-2-ona (0,87 g, 1 eq, 2,54 mmoles) em Et20 (100 mL) sob uma atmosfera de argônio à temperatura ambiente, foi adicionado iodeto de metil magnésio (3 M em éter, 2,54 mL, 3 eq, 7,62 mmoles) gota a gota. A solução foi colocada em um banho de óleo preaquecido a 45°C e deixada em refluxo a esta tempera- tura durante 16 horas. A mistura foi resfriada até 0°C, H2O (100 mL) adicionada, a solução filtrada através de Celite e a Celite lavada com mais Et20 (50 mL). A fase orgânica combinada foi separada, a fase aquosa foi extraída com Et20 (2 x 50 mL) e a fase orgânica combinada lavada com salmoura (50 mL), seca (MgS04) e evaporada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel, eluída com hexano : éter (100 : 0 —> 90 : 10) para fornecer o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento : 0,21 g (23 %). 1H-RMN (de-DMSO, 250 MHz) : δ 0,26 (t, J = 7,42 Hz, -NHCH (CH2ÇH3)CH(CH3)OH), 1,00 & 1,25 (2 χ s, 6H, -NHCH(CH2CH3)C{aH3^0H), 0,72-1,43 (m, 2H, NHCH(ÇH2CH3)C(CH3)2OH), 1,84 (m, 1H, -NHCH (CH2CH3)C(CH3)2 OH), 2,90 (m, 1H, -NHÇH(CH2CH3)C(CH3)2OH), 4,32 (s, 1H, -NHCH(CH2CH3) C(CH3)2OH), 7,17-7,46 (m, 15H, 3 χ Ph). (3S)-2-Metil-3-(tritil-amino)-pentan-2-ol A uma solução agitada de (3S)-3-(tritil-amino)-pentan-2-ona (0,59 g, 1 eq, 1,72 mmol) em Et20 (100 mL) sob uma atmosfera de argônio à temperatura ambiente, foi adicionado iodeto de metil magnésio (3 M em Et20, 1,72 mL, 3 eq, 5,16 mmoles) gota a gota. A solução foi colocada em um banho de óleo preaquecido a 45°C e deixada em refluxo a esta temperatura durante 16 horas. A mistura foi resfriada até 0°C, H2O (100 mL) é adicionada, a solução filtrada através de Celite e a Celite lavada com mais Et20 (50 mL). A fase orgânica combinada foi separada, a fase aquosa foi extraída com Et20 (2 χ 50 mL) e a fase orgânica combinada lavada com salmoura (50 mL), seca (MgS04) e evaporada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel, eluída com hexano : Et20 (100 : O -» 90 : 10) para fornecer o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento : 0,10 g (16 %). 1H-RMN (d6-DMSO, 250 MHz) : δ 0,27 (t, J = 7,10 Hz, -NHCH(CH2ÇH3)CH(CH3)OH), 0,99 & 1.25 (2 χ s, 6H, - NHCH(CH2CH3) C(CH^2 OH), 0,75-1,42 (m, 2H, NHCH(ÇH2CH3)C(CH3)2OH), 1,88 (m, 1H, -NHCH(CH2 CHaKXCHakOH). 2,92 (m, 1H, -NHÇH(CH2CH3)C(CH3)2OH), 4,32 (s, 1H, -NHCH (CH2CH3)C(CH3)2OH), 7,18-7,46 (m, 15H, 3 x Ph). (2S.3R)-3-Amino-pentan-2-ol A uma solução agitada de (2S,3R)-3-(tritil-amino)-pentan-2-ol (1,32 g, 1 eq, 3,83 mmoles) em DCM (50 mL) sob uma atmosfera de argônio à temperatura ambiente, foi adicionado CF3COOH (10 mL) gota a gota e a solução foi agitada a vácuo e o resíduo foi precipitado com Et20 (15 mL) com hexano (300 mL) com agitação para fornecer um óleo amarelo. O solvente foi decantado do óleo e o óleo foi lavado com hexano (30 mL) e seco a vácuo para fornecer o composto do título como um óleo amarelo. Rendimento : 0,30 g (99 %). (80 % de 2S,3R : 20 % de 2R,3R). 1H-RMN (d6-DMSO, 250 MHz) : δ 0,915 & 0,924 (2 χ t, 3H, J = 7,50 & 7,58 Hz, NH2CH(CH2ÇH3)CH(CH3)OH), 1,06 & 1,13 (2 χ d, J = 6,48 & 6,32 Hz), NH2CH (CH2CH3)CH(ÇH3)OH), 1,41-1,59 (m, 2H, NH?CH(CH?CH^ CH(CH3)OH), 2,77 & 2,93 (2 χ m, 1H, NH2QH(CH2CH3)CH(CH3)OH), 3,62-3,72 & 3,80-3,90 (2 χ m, 1H, NH2CH(CH2CH3)ÇH(CH3)OH), 7,75 (bs, 2H, Nhb). (2R.3S)-3-Amino-pentan-2-ol A uma solução agitada de (2R,3S)-3-(tritil-amino)-pentan-2-ol (1,64 g, 1 eq, 4,75 mmoles) em DCM (50 mL) sob uma atmosfera de argônio à temperatura ambiente, foi adicionado CF3COOH (10 mL) gota a gota e a solução foi agitada a esta temperatura durante 1 hora. O solvente foi evaporado a vácuo e o resíduo foi precipitado com Et20 (15 mL) com hexano (300 mL) com agitação para fornecer um óleo amarelo. O solvente foi decantado do óleo e o óleo foi lavado com hexano (30 mL) e seco a vácuo para fornecer o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento : 0,30 g (98 %). (80 % de 2R,3S : 20 % de 2S,3S). 1H-RMN (d6-DMSO, 250 MHz): <5 0,913 & 0,923 (2 x t, 3H, J = 7,50 & 7,50 Hz, NH2CH(CH2ÇH3)CH(CH3)OH), 1,11 & 1,18 (2 x d, J = 6,48 & 6,48 Hz), NH?CH(CH?CH,)CH(CH3)OH). 1,41-1,65 (m, 2H, NH2CH(ÇH2CH3) CH(CH3)OH), 2,76 + 2,93 (2 x m, 1H, NH2ÇH(CH2CH3)CH(CH3)OH), 3,61-3,69 & 3,80-3,90 (2 x m, 1H, NH2CH(CH2CH3)ÇH(CH3)OH), 7,73 (bs, 2H, NH?). (3RS.4R)-4-Amino-hexan-3-ol A uma solução agitada de (3RS,4R)-4-(tritil-amino)-hexan-3-ol (1,13 g, 1 eq, 3,14 mmoles) em DCM (15 ml_) sob uma atmosfera de argônio à temperatura ambiente, foi adicionado CF3COOH (7 mL) gota a gota e a solução foi agitada a esta temperatura durante 4 horas. O solvente foi evaporado a vácuo, adicionado EtOH (20 mL) e removido a vácuo e este processo repetido duas vezes. O resíduo foi precipitado com Et20 (5 mL) com hexano (40 mL) com agitação para fornecer um óleo amarelo. O solvente foi decantado do óleo e o óleo foi lavado com hexano (30 mL) e seco a vácuo para fornecer o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento: 0,37 g (100 %). (57 % de 3S,4R : 43 % de 3R,4R). 1H-RMN (d6-DMSO, 250 MHz): δ 0,79 & 0,92 (t & m, 6H, J = 7,42 Hz, NH2CH(CH2ÇhU)CH(CH2QHa)OH), 1,30-1,67 (m, 4H, NH2CH(£fcÍ2CH3)CH (CHgCHarom. 2,70 (m, 1H, NH2CH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH), 2,84 & 2,96 (2 x m, 1H, NH2ÇH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH), 3,41 & 3,56 (2 x m, 1H, NH2CH (CH2CH3) ÇH(CH2CH3)OH), 7,71 (bs, 2H, NH9CH(CH9CHOCH(CH»CHa)Om. (3RS.4S)-4-Amino-hexan-3-ol A uma solução agitada de (3RS,4S)-4-(tritil-amino)-hexan-3-ol (1,19 g, 1 eq, 3,31 mmoles) em DCM (15 mL) sob uma atmosfera de argônio à temperatura ambiente, foi adicionado CF3COOH (7 mL) gota a gota e a solução foi agitada a esta temperatura durante 4 horas. O solvente foi evaporado a vácuo, adicionado EtOH (20 ml_) e removido a vácuo e este processo repetido duas vezes. O resíduo foi precipitado com Et20 (5 ml_) com hexano (40 ml_) com agitação para fornecer um óleo amarelo. O solvente orgânico foi decantado do óleo e o óleo foi lavado com hexano (30 mL) e seco a vácuo para fornecer o composto do título. Rendimento : 0,39 g (99 %). (65 % de 3R,4S : 35 % de 3S,4S). 1H-RMN (d6-DMSO, 250 MHz): 50,79 & 0,92 (t & m, 6H, J = 7,50 Hz, NH?CH(CH9CHj)CH(CH?CHj)0H)· 1,22-1,68 (m, 4H, NH2CH(aH2CH3)CH(ÇH2CH3)OH), 2,71 (m, 1H, NH2CH(CH2CH3)CH(CH2CH3)QH), 2,83 & 2,95 (2 χ m, 1H, NH2ÇH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH), 3,39 & 3,54 (2 χ m, 1H, NH2CH (CH2CH3) ÇH(CH2CH3)OH), 7,77 (bs, 2H, NH2CH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH). (3RS,4R)-4-Amino-2-metil-hexan-3-ol A uma solução agitada de (3RS,4R)-2-metil-4-(tritil-amino)-hexan-3-ol (0,53 g, 1 eq, 1,41 mmol) em DCM (20 mL) sob uma atmosfera de argônio à temperatura ambiente, foi adicionado CF3COOH (5 mL) gota a gota e a solução foi agitada a esta temperatura durante 1 hora. O solvente foi evaporado a vácuo, o resíduo foi precipitado com Et20 (10 mL) com hexano (90 mL) com agitação para fornecer um óleo amarelo. O solvente foi decantado do óleo e o óleo foi lavado com hexano (20 mL) e seco a vácuo para fornecer o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento : 0,18 g (100 %). (50 % de 3S,4R : 50 % de 3R,4R). 1H-RMN (d6-DMSO, 250 MHz) : 5 0,85-0,99 (m, 9H, NH2CH (CHpCH^CHfCHfCH-^OH). 1,42-1,79 (m, 2H, NH2CH(ÇH2CH3)CH (CH(CH3)2) OH), 2,95 (m, 1H, NH2ÇH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH), 3,18 (m, 1H, NH2CH

(CH2CH3)CH(ÇH(CH3)2)OH), 3,37 (m, 1H, NH2CH(CH2CH3)ÇH (CH(CH3)2)OH), 7,58 (bs, 2H, NH2CH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH). (3RS.4S)-4-Amino-2-metil-hexan-3-ol A uma solução agitada de (3RS,4S)-2-metil-4-(tritil-amino)-hexan-3-ol (0,36 g, 1 eq, 0,97 mmol) em DCM (20 mL) sob uma atmosfera de argônio à temperatura ambiente, foi adicionado CF3COOH (5 mL) gota a gota e a solução foi agitada a esta temperatura durante 1 hora. O solvente foi evaporado a vácuo, o resíduo foi precipitado com Et20 (10 mL) com he-xano (90 mL) com agitação para fornecer um óleo amarelo. O solvente foi decantado do óleo e 0 óleo foi lavado com hexano (20 mL) e seco a vácuo para fornecer o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento : 0,13 g (100 %). (50 % de 3R,4S : 50 % de 3S,4S) 1H-RMN (d6-DMSO, 250 MHz) : δ 0,85-1,01 (m, 9H, NH2CH (CH?CH3)CH(CH(CH3)?)OH). 1,44-1,76 (m, 2H, NH2CH(ÇH2CH3)CH (CH(CH3)2) OH), 2,94 (m, 1H, NH2ÇH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH), 3,17 (m, 1H, NH2CH(CH2CH3)CH(ÇH(CH3)2)OH), 3,40 (m, 1H, NH2CH(CH2CH3)ÇH (CH(CH3)2) OH), 7,54 (bs, 2H, NhbCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH). (3RS,4R)-4-Amino-2.2-dimetil-hexan-3-ol A uma solução agitada de (3RS,4R)-2,2-dimetil-4-(tritil-amino)-hexan-3-ol (0,57 g, 1 eq, 1,47 mmol) in DCM (10 mL) sob uma atmosfera de argônio à temperatura ambiente, foi adicionado CF3COOH (5 mL) gota a gota e a solução foi agitada a esta temperatura durante 1 hora. O solvente foi evaporado a vácuo, 0 resíduo foi precipitado com Et20 (3 mL) com hexano (20 mL) com agitação para fornecer um óleo amarelo. O solvente foi decantado do óleo e o óleo foi lavado com hexano (20 mL) e seco a vácuo para fornecer o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento : 0,21 g (100 %). (55 % de 3S,4R : 45 % de 3R,4R). 1H-RMN (d6-DMSO, 250 MHz) : δ 0,84-0,99 (m, 3H, NH2CH(CH2ÇH3)CH(C(CH3)3)OH), 1,25-1,29 (m, 9H, NH2CH(CH2CH3) CH(C (ÇH3)3)OH), 1,20-1,72 (m, 2H, NH2CH(ÇH2CH3)CH(C(CH3)3)OH), 3,14 (m, 1H, NH9CH(CH?CH3)CH(C(CH3)3)OH), 3,39 (m, 1H, NH2CH(CH2CH3) CH(C(CH3)3) OH), 3,65 (m, 1H, NH2CH(CH2CH3)ÇH(C(CH3)3)OH), 7,43, 7,77 & 8,54 (3 x bs, 2H, ]^CH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH). (3RS.4SV4-Amino-2.2-dimetil-hexan-3-ol A uma solução agitada de (3RS,4S)-2,2-dimetil-4-(tritil-amino)-hexan-3-ol (0,47 g, 1 eq, 1,21 mmol) em DCM (10 ml_) sob uma atmosfera de argônio à temperatura ambiente, foi adicionado CF3COOH (5 ml_) gota a gota e a solução foi agitada a esta temperatura durante 1 hora. O solvente foi evaporado a vácuo, o resíduo foi precipitado com Et20 (3 mL) com hexa-no (20 mL) com agitação para fornecer um óleo amarelo. O solvente foi decantado do óleo e 0 óleo foi lavado com hexano (20 mL) e seco a vácuo para fornecer o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento : 0,18 g (99 %). (53 % de 3R,4S : 47 % de 3S,4S). 1H-RMN (d6-DMSO, 250 MHz) : δ 0,86-0,99 (m, 3H, NH2CH(CH2ÇH2)CH(C(CH3)3)OH), 1,25-1,30 (m, 9H, NH2CH(CH2CH3) CH(C(ÇH3}3)OH), 1,20-1,67 (m, 2H, NHzCHÍÇhbCHsJCHÍCíCH^JOH), 3,14 (m, 1H, NHoCHÍCHoCl-U) CH(C(CH3)3)OH), 3,38 (m, 1H, NH2CH(CH2CH3) CH(C(CH3)3)OH), 3,64 (m, 1H, NH2CH(CH2CH3)ÇH(C(CH3)3)OH), 7,41, 7,73 & 8,44 (3 x bs, 2H, NHgCHfCHoCH^ CH(CH(CH3)2)OH). (3R)-3-Amino-2-metil-pentan-2-ol A uma solução agitada de (3R)-2-metil-3-(tritil-amino)-pentan-2-ol (0,21 g, 1 eq, 0,60 mmol) em DCM (5 mL) sob uma atmosfera de argônio à temperatura ambiente, foi adicionado CF3COOH (2,5 mL) gota a gota e a solução foi agitada a esta temperatura durante 1 hora. O solvente foi evaporado a vácuo e o resíduo foi precipitado com Et20 (15 mL) com hexano (300 mL) com agitação para fornecer um óleo amarelo. O solvente foi decantado do óleo e o óleo foi lavado com hexano (30 mL) e seco a vácuo para fornecer o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento : 0,07 g (100 %). 1H-RMN (de-DMSO, 250 MHz) : <5 0,97 (t, 3H, J = 7,42 Hz, NH2CH(CH2ÇH3)C(CH3)20H), 1,06 & 1,19 (2 x s, 6H, NH2CH(CH2CH3)C{ÇH3)20H), 1,28-1,71 (m, 2H, NH2CH (ÇH2CH3) C(CH3)2OH), 2,72 (m, 1H, NH2ÇH(CH2CH3)C(CH3)20H), 5,21 (s, 1H, NH2CH (CH2CH3)C(CH3)2QH), 7,63 (bs, 2H, NiH2CH(CH2CH3)C(CH3)20H). (3S )-3-Amino-2-metil-pentan-2-ol A uma solução agitada de (3S)-2-metil-3-(tritil-amino)-pentan-2-ol (0,38 g, 1 eq, 1,06 mmol) em DCM (5 mL) sob uma atmosfera de argônio à temperatura ambiente, foi adicionado CF3COOH (2,5 mL) gota a gota e a solução foi agitada a esta temperatura durante 1 hora. O solvente foi evaporado a vácuo e o resíduo foi precipitado com Et20 (15 mL) com hexano (300 mL) com agitação para fornecer um óleo amarelo. O solvente foi decantado do óleo e 0 óleo foi lavado com hexano (30 mL) e seco a vácuo para fornecer o composto do título como um óleo amarelo claro. Rendimento : 0,12 g (99 %). 1H-RMN (de-DMSO, 250 MHz) : δ 0,97 (t, 3H, J = 7,42 Hz, NH2CH(CH2ÇH3)C(CH3)2OH), 1,07 & 1,19 (2 χ s, 6H, NH2CH(CH2CH3)C(ÇH3)20H), 1,28-1,61 (m, 2H, NH2CH (ÇH2CH3)C(CH3)20H), 2,72 (m, 1H, NH2ÇH(CH2CH3)C(CH3)2OH), 5,21 (s, 1H, NH2CH(CH2CH3) C(CH3)2QH), 7,63 (bs, 2H, NH2CH(CH2CH3)C(CH3)20H). 6-Cloro-2-flúor-9H-purina Este composto foi preparado por uma modificação de um procedimento da literatura (Gray, N.S.; Kwon, S.; Schultz, P.G. Tetrahedron Lett. 1997, 38(7), 1161-1164.) O cloro-9/-/-purin-2-ilamina (75,0 g, 0,44 mol) foi suspenso em HBF4 aq (1,5 L de solução a 48 % peso/peso em H20). Esta mistura foi resfriada até -15 °C e foi agitada vigorosamente. Foi então adicionado NaN02 (2,5 L de uma solução aquosa 0,3 M) lentamente durante 75 minutos com agitação e controle da temperatura cuidadoso (< 10 °C). Após adição completa, a solução amarelo-clara foi ainda agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos. Esta foi então resfriada até -15 °C e foi neutralizada cuidadosamente até pH = 6,2 com NaOH (solução aquosa a 50 % peso/volume). Esta solução foi evaporada com rotação até semi-secura. A torta resultante foi dividida com uma espátula e seca sob alto vácuo durante toda a noite. O pó amarelo resultante foi carregado a seco sobre uma cromatografia flash em coluna (leito de Sí02 com 24 x 15 cm), que foi eluída com CH2CI2/MeOH, 9 : 1. As frações apropriadas foram coletadas, reunidas e evaporadas. Após secagem a vácuo, o composto do título foi obtido como um pó incolor. TLC : Rf = 0,25 (CH2CI2/MeOH, 9:1), material de partida Rf = 0,16. m/z 173 (MH+, 100), 175 (MH+2, 33). (2-Flúor-9H-Durin-6-ilVpiridin-2-ilmetil-amina A uma solução agitada de 6-cloro-2-fluoropurina (0,4 g, 1 eq, 2,31 mmoles) em n-BuOH (25 mL) sob uma atmosfera de argônio, resfriada até 0 °C, foi adicionada DIEA (1,13 mL, 2,80 eq, 6,49 mmoles) seguida por C-piridin-2-il-metilamina (0,48 mL, 2,0 eq, 4,66 mmoles). A mistura da reação foi agitada a 0°C durante 3 horas e então deixada retornar até a temperatura ambiente durante 30 minutos e agitada a esta temperatura durante 1 hora, quando TLC (CHCI3: MeOH; 90 : 10) indicou que a reação tinha sido completada. O solvente foi evaporado a vácuo e o resíduo distribuído entre solução de ácido cítrico (200 mL, 10 % aq.) e EtOAc (200 mL), a fase aquosa foi separada e extraída com mais EtOAc (2 χ 100 mL) e a fase orgânica volu- mosa que contém traços de 6-cloro-2-fluoropurina foi descartada. O pH da fase aquosa foi ajustado até 7,0 com solução de NaOH (50 % peso/volume, aq.), extraída com EtOAc (4 χ 100 mL) e fase orgânica volumosa foi lavada com salmoura (50 mL), seca (MgS04) e evaporada a vácuo. O resíduo foi purificado por gradiente de cromatografia em coluna sobre sílica-gel, eluída com CHCI3 : MeOH (95 : 5 -» 85 : 15) para fornecer 0 composto do título como um sólido amarelo-claro. Rendimento : 0,40 g (71 %). PF 217-220°C. 1H-RMN (de-DMSO, 250 MHz) : δ 4,58 (d, 2H, J = 5,68 Hz, -HNCHrPvr). 7,29, 7,71, 8,49 (3 χ m, 4H, Pyr), 8,10 (s, 1H, -N=ÇH-NH-), 8,69 (bs, 1H, -HNCH^-Pvr). 13,07 (bs, 1H, -N=CH-NH-). FABMS m/z (intensidade relativa): 245 ([M+H]+, 55), 176 (30), 154 (100), 136 (85). Massa Precisa (M+H): Real : 245,0951, Medida : 245,0942. Microanálise (Esperada : Medida) CnHgNeF .0,4H2O : C; 52,55 : 52,91, H; 3,93 : 3,49, N; 33,42 : 33,26. 2-Flúor-9-isoDropil-9H-purin-6-il)-piridin-2-ilmetil-amina A uma solução agitada de (2-flúor-9/-/-purin-6-il)-piridin-2-ilmetil-amina (0,4 g, 1 eq, 1,64 mmol) em DMA (5 mL) sob uma atmosfera de argô-nio à temperatura ambiente, foi adicionado K2CO3 (em pó, anidro, 1,1 g, 4,85 eq, 7,96 mmoles) seguido por 2-bromopropano (1,5 mL, 9,75 eq, 15,98 mmoles). A mistura da reação foi agitada a 40°C durante 48 horas, quando TLC (CHCI3: MeOH; 90 :10) indicou que a reação tinha sido completada. O solvente foi evaporado a vácuo e o resíduo distribuído entre água (200 mL) e EtOAc (100mL), a fase aquosa foi separada e extraída com mais EtOAc (2 χ 50 mL). A fase orgânica volumosa foi lavada com salmoura (50 mL), seca (MgS04) e evaporada a vácuo e 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel, eluída com gradiente de CHCI3 : MeOH (100 : 0 —> 95 : 5) para fornecer 0 composto do título como um sólido branco. Rendi- mento : 0,27 g (58 %). PF 150-152°C. 1H-RMN (d6-DMSO, 250 MHz): δ 1,49 (2 x s, 6H, CHÍCFU)?), 4,63 (m, 1H, -ÇH(CH3)2), 4,71 (d, 2H, J = 5,76 Hz, -HNÇhb-Pyr), 7,26, 7,71, 8,49 (3 x m, 4H, Pyr), 8,26 (s, 1H, -N=ÇH-N-), 8,78 (bs, 1H, -HNCH2-Pyr). FABMS m/z (intensidade relativa): 287 ([M+H]+, 100), 245 (10), 154 (22), 136 (17). Massa Precisa (M+H): Real: 287,1420, Medida : 287,1412. Microanálise (Esperada : Medida) Ci4H-|5N6F : C; 58,73 : 58,38, H; 5,28 : 5,13, N; 29,35 : 29,36. (2S3R1-3-(9-lsopropil-6-[(piridin-2-ilmetil)-amino1-9H-purin-2-ilamino)-pentan- 2-ol A uma solução agitada de (2-flúor-9-isopropil-9H-purin-6-il)-piridin-2-ilmetil-amina (30 mg, 1 eq, 0,10 mmol) em n-BuOH/DMSO (2,5 mL, 4 : 1) à temperatura ambiente sob uma atmosfera de argônio foi adicionada DIEA (0,2 mL, 10,96 eq, 1,14 mmol) seguida por (2S,3R)-3-amino-pentan-2-ol (60 mg, 5,5 eq, 0,58 mmol). A mistura da reação foi colocada em um banho de óleo preaquecido a 160°C e agitada a esta temperatura durante 72 horas. A mistura da reação foi deixada esfriar à temperatura ambiente e o solvente foi evaporado a vácuo. O resíduo foi distribuído entre EtOAc (50 mL) e água (50 mL), a fase aquosa foi extraída com mais EtOAc (2 χ 25 mL) e a fase orgânica combinada foi lavada com salmoura (50 mL), seca (Mg-SO4) e evaporada a vácuo. O resíduo foi purificado por gradiente de croma-tografia em coluna sobre sílica-gel eluída com gradiente de CHCI3 : MeOH (100 : 0 -> 98 : 2) para fornecer 0 composto do título como um sólido branco. Rendimento : 36,1 mg (93 %). (80 % de 3R,2S : 20 % de 3R,2R).1H-RMN (d-CDCI3, 250 MHz) : δ 0,91 & 1,06 (2 χ t, 3H, J = 7,11 & 7,42 Hz, -NHCH(CH2£H3)CH(CH3)OH), 1,16 & 1,29 (2 χ d, 3H, J = 6,48 & 3,48 Hz, -NHCH (CH2CH3)CH(ÇH3)OH) 1,57 (d, 6H, J = 6,79 Hz, -CH(CH?M· 1,71- 2,01 (m, 2H, -NHCH(ÇH2CH3)CH(CH3)OH), 3,98 (m, 2H, - NHÇH(CH2CH3)ÇH(CH3)OH), 4,58-4,69 (m, 1H, -ÇH(CH3)2), 4,83-5,00 (m, 2H, -HNCHg-Pvr). 6,75-6,91 (m, 1H, -HNCH2-Pyr), 7,19-7,25 (m, 1H, Pyr-H), 7,37 (d, 1H, J = 8,05 Hz, Pyr-H), 7,57 (s, 1H, -N=ÇH-N), 7,64-7,71 (m, 1H, Pyr-H), 8,61 (d, 1H, J = 4,58 Hz, Pyr-H). FABMS m/z (intensidade relativa) : 370 ([M+H]+, 100), 324 (40). Massa Precisa (M+H): Real: 370,2355, Medida : 370,2347. (2R3SV3-t9-lsoproDil-6-rfpiridin-2-ilmeti0-amino1-9H-Durin-2-ilanninoVDentan- 2-ol A uma solução agitada de (2-flúor-9-isopropil-9/-/-purin-6-il)-piridin-2-ilmetil-amina (30 mg, 1 eq, 0,10 mmol) em n-BuOH/DMSO (2,5 ml_, 4 : 1) à temperatura ambiente sob uma atmosfera de argônio, foi adicionada DIEA (0,2 mL, 10,96 eq, 1,14 mmol) seguida por (2R,3S)-3-amino-pentan-2-ol (60 mg, 5,5 eq, 0,58 mmol). A mistura da reação foi colocada em um banho de óleo preaquecido a 160°C e agitada a esta temperatura durante 72 h. \ A mistura da reação foi deixada esfriar à temperatura ambiente e o solvente foi evaporado a vácuo. O resíduo foi distribuído entre EtOAc (50 mL) e água (50 mL), a fase aquosa foi extraída com mais EtOAc (2 χ 25 mL) e a fase orgânica combinada lavada com salmoura (50 mL), seca (MgS04) e evaporada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel, eluída com gradiente de CHCI3 : MeOH (100 : 0-> 98 : 2) para fornecer o composto do título como um sólido branco. Rendimento : 22 mg (57 %). (80 % de 3S,2R : 20 % de 3S,2S). 1H-RMN (d-CDCI3, 250 MHz): δ 0,90 & 1,05 (2 x t, 3H, J = 7,11 & 7,42 Hz, -NHCHíCHzÇhh) CH(CH3)OH), 1,17 & 1,25 (2 x d, 3H, J = 6,31 & 6,16 Hz, -NHCH (CH2CH3)CH(ÇH3)OH) 1,57 (d, 6H, J = 6,79 Hz, -CHfCHaU 1,75-2,03 (m, 2H, - NHCH(ÇH2CH3)CH(CH3)OH), 3,93-4,05 (m, 2H, -NHCH(CH2CH3) £H(CH3)OH), 4,58-4,70 (m, 1H, -ÇH(CH3)2), 4,83-5,01 (m, 2H, -HNCHrPyr), 6,74-6,91 (m, 1H, -HNCH2-Pyr), 7,19-7,25 (m, 1H, Pyr-H), 7,37 (d, 1H, J = 7,90 Hz, Pyr-H), 7,57 (s, 1H, -N=ÇH-N-), 7,64-7,71 (m, 1H, Pyr-H), 8,61 (d, 1H, J = 4,90 Hz, Pyr-H). FABMS m/z (intensidade relativa) : 370 ([M+H]+, 100), 324 (43). Massa Precisa (M+H): Real: 370,2355, Medida : 370,2347. (3RS.4R)-4-(9-lsopropil-6-f(piridin-2-ilmeti0-amino1-9H-purin-2-ilamino)-hexan-3-ol A uma solução agitada de (2-flúor-9-isopropil-9H-purin-6-il)-piridin-2-ilmetil-amina (20 mg, 1 eq, 0,07 mmol) em n-BuOH/DMSO (3,75 ml_, 4 : 1) à temperatura ambiente sob uma atmosfera de argônio foi adicionada DIEA (0,18 mL, 15 eq, 1,03 mmol) seguida por (3f?S,4f?)-4-amino-hexan-3-ol (110 mg, 13 eq, 0,94 mmol). A mistura da reação foi colocada em um banho de óleo preaquecido a 140°C e agitada a esta temperatura durante 72 horas. A mistura da reação foi deixada esfriar à temperatura ambiente e o solvente foi evaporado a vácuo. O resíduo foi distribuído entre EtOAc (50 mL) e salmoura/água (1 : 1, 100 mL), a fase aquosa foi extraída com mais EtOAc (2 x 25 mL) e a fase orgânica foi lavada com salmoura (50 mL), seca (MgSO/j) e evaporada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel eluída com CHCI3 : MeOH (100 : 0 -> 98 : 2) para fornecer o composto do título como um sólido branco. Rendimento : 11 mg (41 %). (57 % de 4R,3S : 43 % de 4R.3R). 1H-RMN (d-CDCI3, 250 MHz): <50,85- 1,06 (m, 6H, -NHCH(CH?CHg) CH(CH2QH3)OH), 1,57 (d, 6H, J = 6,79 Hz, & -CH(QH3)2), 1,42-1,65 (m, 4H, -NHCHÍCHgCHrOCHtCHgCH^OH), 3,45 (d, 1H, J = 6,31 Hz, OH), 3,57-3,70 (m, 1H, -NHCH(CH2CH3)ÇH(CH2CH3)OH), 3,91-4,03 (m, 1H, -NHCH(CH2CH3) ÇH(CH2CH3) OH), 4,57-4,76 (m, 1H, - ÇH(CH3)2), 4,86-4,98 (m, 2H, -HNCHZ-Pvr), 5,18-5,29 (m, 1H, - NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH), 6,73-6,89 (m, 1H, -HNCH2-Pyr), 7,15-7,25 (m, 1H, Pyr-H), 7,38 (d, 1H, J = 7,90 Hz, Pyr-H), 7,56 (s, 1H, -N=ÇH-N-), 7,63-7,70 (m, 1H, Pyr-H), 8,60 (d, 1H, J = 4,42 Hz, Pyr-H). FABMS m/z (intensidade relativa) : 384 ([M+H]\ 100), 324 (35), 307 (37), 297 (25), 289 (20). Massa Precisa (M+H): Real: 384,2512, Medida : 384,2523. (3RS.4SV4-t9-lsopropil-6-r(piridin-2-ilmetih-aminol-9H-purin-2-ilamino)-hexan-3-ol A uma solução agitada de (2-flúor-9-isopropil-9H-purin-6-il)-piridin-2-ilmetil-amina (20 mg, 1 eq, 0,07 mmol) em n-BuOH/DMSO (3,75 mL, 4 : 1) à temperatura ambiente sob uma atmosfera de argônio, foi adicionada DIEA (0,18 mL, 15 eq, 1,03 mmol) seguida por (3RS,4S)-4-amino-hexan-3-ol (110 mg, 13 eq, 0,94 mmol). A mistura da reação foi colocada em um banho de óleo preaquecido a 140°C e agitada a esta temperatura durante 72 horas. A mistura da reação foi deixada esfriar à temperatura ambiente e o solvente foi evaporado a vácuo. O resíduo foi distribuído entre EtOAc (50 mL) e salmoura/água (1 : 1, 100 mL), a fase aquosa foi extraída com mais EtOAc (2 x 25 mL) e a fase orgânica combinada foi lavada com salmoura (50 mL), seca (MgSÜ4) e evaporada a vácuo. O resíduo foi purificado por croma-tografia em coluna sobre sílica-gel eluída com CHCI3 : MeOH (100 : 0 98 : 2), para fornecer o composto do título como um sólido branco. Rendimento : 10 mg (37 %).(57 % de 4S,3R : 43 % de 4S.3S). 1H-RMN (d-CDCI3, 250 MHz): 50,85-1,06 (m, 6H, -NHCH(CH?CHZ1 CH(CH?CH^OH). 1,57 (d, 6H, J = 6,79 Hz, & -CH(CH^). 1,43-1,64 (m, 4H, NHCH(ÇH2CH3)CH(ÇH2CH3)OH), 3,45 (d, 1H, J= 6,16 Hz, OH), 3,56-3,70 (m, 1H, -NHCH(CH2CH3)ÇH(CH2CH3)OH), 3,91-4,02 (m, 1H, - NHCH(CH2CH3) ÇH(CH2CH3) OH), 4,58-4,71 (m, 1H, -ÇH(CH3)2), 4,86-4,98 (m, 2H, -HNCH?-Pvr1. 5,21-5,32 (m, 1H, -NHCH(CH2CH3)CH(CH2CH3)OH), 6,76-6,94 (m, 1H, -HNCHz-Pyr), 7,16-7,26 (m, 1H, Pyr-H), 7,38 (d, 1H, J = 7,74 Hz, Pyr-H), 7,58 (s, 1H, -N=CH-N-), 7,64-7,70 (m, 1H, Pyr-H), 8,60 (d, 1H, J = 4,45 Hz, Pyr-H). FABMS m/z (intensidade relativa) : 384 ([M+H]+, 100), 324 (35), 307 (37), 297 (25), 289 (20). Massa Precisa (M+H) : Real : 384,2512, Medida: 384,2523. (3RS.4R)-4-{9-lsoproDil-6-[(piridin-2-ilmetil)-aminol-9H-purin-2-ilamino}-2- metil-hexan-3-ol A uma solução agitada de (2-flúor-9-isopropil-9H-purin-6-il)-piridin-2-ilmetil-amina (30 mg, 1 eq, 0,10 mmol) em n-BuOH/DMSO (2,5 mL, 4 : 1) à temperatura ambiente sob uma atmosfera de argônio foi adicionada DIEA (0,10 mL, 5,5 eq, 0,57 mmol) seguida por 3RS,4R)-4-amino-2-metil-hexan-3-ol (42 mg, 3,0 eq, 0,32 mmol). A mistura da reação foi colocada em um banho de óleo preaquecido a 140°C e agitada a esta temperatura durante 72 horas. A mistura da reação foi deixada esfriar à temperatura ambiente e o solvente foi evaporado a vácuo. O resíduo foi distribuído entre EtOAc (50 mL) e salmoura/água (1 : 1, 100 mL), a fase aquosa foi extraída com mais EtOAc (2 x 25 mL) e a fase orgânica combinada foi lavada com salmoura (50 mL), seca (MgS04) e evaporada a vácuo. O resíduo foi purificado por croma-tografia em coluna sobre sílica-gel eluída com CHCI3 : MeOH (100 : 0 —> 98 : 2), para fornecer o composto do título como um sólido branco. Rendimento : 7,8 mg (19 %). 50 % de 4R,3S : 50 % de 4R,3R). 1H-RMN (d-CDCI3, 250 MHz) : δ 0,91-1,04 (m, 9H, -ΝΗΟΗ^ΗςΟΗ^ CHÍCHÍCH^OH). 1,57 (d, 6H, J = 6,79 Hz, -CHÍCHgM. 1,66-1,94 (m, 4H, NHCH(ÇH2CH3)CH(ÇH(CH3)2)OhD, 3,22-3,34 (m, 1H, -NHÇH(CH2CH3) CH(CH (CH3)2)OH), 3,79-3,93 (m, 1H, -NHCH(CH2CH3)ÇH_(CH(CH3)2)OH), 4.57- 4,71 (m, 1H, -ÇH(CH3)2), 4,85-4,97 (m, 2H, -HNCH?-Pvr). 5,13-5,24 (m, 1H, - NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH), 6,65-6,79 (m, 1H, -HNCH2-Pyr), 7,13-7,24 (m, 1H, Pyr-H), 7,32-7,42 (m, 1H, Pyr-H), 7,56 (s, 1H, -N=ÇH-N-), 7.58- 7,73 (m, 1H, Pyr-H), 8,60 (d, 1H, J = 4,42 Hz, Pyr-H). FABMS m/z (intensidade relativa): 398 ([M+H]+, 100), 324 (50). Massa Precisa (M+H): Real : 398,2668, Medida : 398,2654. (3RS.4S)-4-{9-lsopropil-6-r(piridin-2-ilmetil)-amino1-9H-purin-2-ilamino)-2- metil-hexan-3-ol A uma solução agitada de (2-flúor-9-isopropil-9/7-purin-6-il)-piridin-2-ilmetil-amina (30 mg, 1 eq, 0,10 mmol) em n-BuOH/DMSO (2,5 ml_, 4 : 1) à temperatura ambiente sob uma atmosfera de argônio foi adicionada Dl EA (0,20 mL, 11 eq, 1,14 mmol) seguida por 3RS,4S)-4-amino-2-metil-hexan-3-ol (28 mg, 2,0 eq, 0,21 mmol). A mistura da reação foi colocada em um banho de óleo preaquecido a 160°C e agitada a esta temperatura durante 72 horas. A mistura da reação foi deixada esfriar à temperatura ambiente e o solvente foi evaporado a vácuo. O resíduo foi distribuído entre EtOAc (50 mL) e salmoura/água (1 : 1, 100 mL), a fase aquosa foi extraída com mais EtOAc (2 x 25 mL) e a fase orgânica combinada foi lavada com salmoura (50 mL), seca (MgS04) e evaporada a vácuo. O resíduo foi purificado por croma-tografia em coluna sobre sílica-gel eluída com CHCI3: MeOH (100 : 0 98 : 2), para fornecer o composto do título como um sólido branco. Rendimento : 5,7 mg (14 %). (50 % de 4S,3R : 50 % de 4S,3S). 1H-RMN (d-CDCI3, 250 MHz): δ 0,90-1,06 (m, 9H, -NHCH(CH?CHj) CH(CH(CH?MOm. 1,57 (d, 6H, J = 6,79 Hz, -CHfCH^A 1,64-1,93 (m, 4H, NHCH(ÇH2CH3)CH(ÇH(CH3)2)QH), 3,24-3,37 (m, 1H, -NHÇH(CH2CH3) CH(CH (CH3)2)OH), 3,80-3,95 (m, 1H, -NHCH(CH2CH3)QfcL(CH(CH3)2)OH), 4,57-4,71 (m, 1H, -ÇH(CH3)2), 4,84-4,96 (m, 2H, -HNCH2-Pvr). 5,13-5,24 (m, 1H, - NHCH(CH2CH3)CH(CH(CH3)2)OH), 6,65-6,80 (m, 1H, -HNCH2-Pyr), 7,12-7,23 (m, 1H, Pyr-H), 7,30-7,40 (m, 1H, Pyr-H), 7,56 (s, 1H, -N=ÇH-N-), 7,59-7,74 (m, 1H, Pyr-H), 8,61 (d, 1H, J = 4,42 Hz, Pyr-H), FABMS m/z (intensidade relativa): 398 ([M+H]+, 100), 324 (55). Massa Precisa (M+H): Real : 398,2668, Medida : 398,2654. (3RS.4RM-í9-lsopropil-6-r(piridin-2-ilmeti0-amino1-9H-purin-2-ilamino}-2.2- dimetil-hexan-3-ol A uma solução agitada de (2-flúor-9-isopropil-9/-/-purin-6-il)-piridin-2-ilmetil-amina (30 mg, 1 eq, 0,10 mmol) em n-BuOH/DMSO (5 ml_, 4 : 1) à temperatura ambiente sob uma atmosfera de argônio foi adicionada DIEA (0,10 mL, 5,5 eq, 0,57 mmol) seguida por (3RS,4R)-4-amino-2,2-dimetil-hexan-3-ol (52 mg, 3,41 eq, 0,36 mmol). A mistura da reação foi colocada em um banho de óleo preaquecido a 140°C e agitada a esta temperatura durante 72 horas. A mistura da reação foi deixada esfriar à temperatura ambiente e o solvente foi evaporado a vácuo. O resíduo foi distribuído entre EtOAc (50 mL) e salmoura/água (1 : 1, 100 mL), a fase aquosa foi extraída com mais EtOAc (2 χ 25 mL) e a fase orgânica combinada foi lavada com salmoura (50 mL), seca (MgSÜ4) e evaporada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel eluída com CHCI3 : MeOH (100 : 0 98 : 2), para fornecer o composto do título como um sólido bran- co. Rendimento : 6,3 mg (15 %). (55 % de 4R,3S : 45 % de 4R.3R). 1H-RMN (d-CDCI3, 250 MHz) : δ 1,00-1,03 (m, 12H, -NHCH(CH?CHj) CH(C(ÇH3)3)OH), 1,56 & 0,58 (2 x d, 6H, J = 6,63 & 6,63 Hz, -CHÍCHOA 1,69-1,89 (m, 2H, -NHCH(ÇH2CH3)CH(C(CH3)3)OH), 3,56 (d, 1H, J = 1,89 Hz, -NHCH(CH2CH3)ÇH(C(CH3)3)OH), 3,72-3,84 (m, 1H, -NHÇH(CH2CH3) CH(C(CH3)3) OH), 4,58-4,70 (m, 1H, -ÇH(CH3)2), 4,88-4,98 (m, 2H, -HNÇhh-Pyr), 5,22-5,39 (m, 1H, -NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH), 6,70-6,80 (m, 1H, -HNCHrPyr), 7,18-7,24 (m, 1H, Pyr-H), 7,38 (d, 1H, J = 7,90, Pyr-H), 7,57 (s, 1H, -N=ÇH-N-), 7,63-7,70 (m, 1H, Pyr-H), 8,61 (d, 1H, J = 4,90 Hz, Pyr-H). FABMS m/z (intensidade relativa): 412 ([M+H]+, 100), 324 (70). Massa Precisa (M+H): Real: 412,2825, Medida : 412,2835. (3RS.4S)-4-J9-lsopropil-6-r(piridin-2-ilmetil)-aminol-9H-purin-2-ilamino)-2.2- dimetil-hexan-3-ol A uma solução agitada de (2-flúor-9-isopropil-9H-purin-6-il)-piridin-2-ilmetil-amina (30 mg, 1 eq, 0,10 mmol) em n-BuOH/DMSO (5 ml_, 4 : 1) à temperatura ambiente sob uma atmosfera de argônio foi adicionada DIEA (0,10 mL, 5,5 eq, 0,57 mmol) seguida de (3RS,4S)-4-amino-2,2-dimetil-hexan-3-ol (43 mg, 2,81 eq, 0,29 mmol). A mistura da reação foi colocada em um banho de óleo preaquecido a 140°C e agitada a esta temperatura durante 72 horas. A mistura da reação foi deixada esfriar à temperatura ambiente e o solvente foi evaporado a vácuo. O resíduo foi distribuído entre EtOAc (50 mL) e salmoura/água (1 : 1, 100 mL), a fase aquosa foi extraída com mais EtOAc (2 χ 25 mL) e a fase orgânica combinada foi lavada com salmoura (50 mL), seca (MgSÜ4) e evaporada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel com CHCI3 : MeOH (100 : 0 -» 98 : 2), para fornecer o composto do título como um sólido branco. Rendimento : 5,9 mg (14 %).(53 % de 4S,3R : 47 % de 4S,3S). 1H-RMN (d-CDCI3, 250 MHz) : <5 1,00-1,04 (m, 12H, -NHCH(CH2ÇH3) CH(C(OH3)3)OH), 1,56 & 1,58 (2 χ d, 6H, J = 6,63 & 6,63 Hz, -CHfCH^). 1,67-1,90 (m, 2H, -NHCH(ÇH2CH3)CH(C(CH3)3)OH), 3,56 (d, 1H, J = 1,89 Hz, - NHCH(CH2CH3)ÇH(C(CH3)3)OH), 3,70-3,83 (m, 1H, -NHÇH(CH2CH3)CH (C(CH3)3) OH), 4,58-4,69 (m, 1H, -ÇH(CH3)2), 4,88-4,98 (m, 2H, -HNCHr Pyr), 5,23-5,39 (m, 1H, -NHCH(CH2CH3)CH(C(CH3)3)OH), 6,71-6,80 (m, 1H, -HNCH2-Pyr), 7,17-7,24 (m, 1H, Pyr-H), 7,38 (d, 1H, J = 7,90, Pyr-H), 7,57 (s, 1H, -N=CH-N-), 7,63-7,70 (m, 1H, Pyr-H), 8,61 (d, 1H, J = 4,90 Hz, Pyr-H). FABMS m/z (intensidade relativa): 412 ([M+H]+, 100), 324 (75). Massa Precisa (M+H): Real: 412,2825, Medida : 412,2835. (3R)-3-f9-lsopropil-6-r(piridin-2-ilmetiiyamino1-9H-purin-2-ilamino}-2-metil- pentan-2-ol A uma solução agitada de (2-flúor-9-isopropil-9H-purin-6-il)-piridin-2-ilmetil-amina (20 mg, 1 eq, 0,07 mmol) em n-BuOH/DMSO (1,25 mL, 4 : 1) à temperatura ambiente sob uma atmosfera de argônio, foi adicionada DIEA (0,25 mL, 20,5 eq, 1,44 mmol) seguida de (3R)-3-amino-2-metil-pentan-2-ol (22 mg, 2,7 eq, 0,19 mmol). A mistura da reação foi colocada em um banho de óleo preaquecido a 140°C e agitada a esta temperatura durante 72 horas. A mistura da reação foi deixada esfriar à temperatura ambiente e o solvente foi evaporado a vácuo. O resíduo foi distribuído entre EtOAc (50 mL) e salmoura/água (1 : 1, 100 mL), a fase aquosa foi extraída com mais EtOAc (2 χ 25 mL) e a fase orgânica combinada foi lavada com salmoura (50 mL), seca (MgS04) e evaporada a vácuo. O resíduo foi purificado por croma-tografia em coluna sobre sílica-gel com CHCI3 : MeOH (100 : 0 -> 98 : 2), para fornecer o composto do título como um sólido branco. Rendimento : 3,7 mg (14 %). 1H-RMN (d-CDCI3, 250 MHz) : δ 1,01 (t, 3H, J = 7,35 Hz, -NHCH(CH2ÇH3)C(CH3)2OH), 1,22 & 1,30 (2 χ s, 6H, - NHCH(CH2CH3)C(^3)2OH), 1,57 (d, 6H, J = 6,79 Hz, -CHfCHak). 1,69-1,88 (m, 2H, -NHCH(ÇH2CH3)C(CH3)20H}, 3,68-3,82 (m, 1H, - NHÇH(CH2CH3)C(CH3)2OH), 4,59-4,72 (m, 1H, -ÇH(CH3)2), 4,86-5,03 (m, 2H, -HNÇhb-Pyr), 6,88-7,09 (m, 1H, -HNCH2-Pyr), 7,20-7,25 (m, 1H, Pyr-H), 7,40 (d, 1H, J = 7,74, Pyr-H), 7,59 (s, 1H, -N=ÇH-N-), 7,65-7,72 (m, 1H, Pyr-H), 8,61 (d, 1H, J = 4,42 Hz, Pyr-H). FABMS mfz (intensidade relativa): 384 ([M+H]+, 100), 324 (80), 307 (30), 193 (50), 176 (90), 165 (35). Massa Precisa (M+H): Real: 384,2512, Medida : 384,2494. (3S)-3-(9-lsopropil-6-f(piridin-2-ilmetil)-aminoi-9H-purin-2-ilamino}-2-metil-pentan-2-ol A uma solução agitada de (2-flúor-9-isopropil-9W-purin-6-il)-piridin-2-ilmetil-amina (30 mg, 1 eq, 0,10 mmol) em n-BuOH/DMSO (1,25 mL, 4 :1) à temperatura ambiente sob uma atmosfera de argônio, foi adicionada DIEA (0,25 mL, 14,4 eq, 1,44 mmol) seguida de (3S)-3-amino-2-metil-pentan-2-ol (40 mg, 3,2 eq, 34 mmoles). A mistura da reação foi colocada em um banho de óleo preaquecido a 140°C e agitada a esta temperatura durante 72 horas. A mistura da reação foi deixada esfriar à temperatura ambiente e o solvente foi evaporado a vácuo. O resíduo foi distribuído entre EtOAc (50 mL) e salmoura/água (1:1, 100 mL), a fase aquosa foi extraída com mais EtOAc (2 χ 25 mL) e a fase orgânica combinada foi lavada com salmoura (50 mL), seca (MgS04) e evaporada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel com gradiente de CHCI3 : MeOH (100 : 0 -> 98 : 2), para fornecer o composto do título como um sólido branco. Rendimento : 4,8 mg (12 %). 1H-RMN (d-CDCI3, 250 MHz): 51,01 (t, 3H, J = 7,42 Hz, -NHCH(CH2ÇH3)C(CH3)2OH), 1,22 & 1,30 (2 x s, 6H, -NHCH(CH2CH3)C(ÇH3^OH), 1,57 (d, 6H, J = 6,79 Hz, -CHfCHOA 1,70-1,88 (m, 2H, -NHCH(ÇH2CH3)C(CH3)20H), 3,69-3,84 (m, 1H, -NHÇH(CH2CH3) C(CH3)2OH), 4,59-4,73 (m, 1H, -CH(CH3)2), 4,87-5,08 (m, 2H, -HNCHg-Pvr). 6,87-7,16 (m, 1H, -HNCH2-Pyr), 7,20-7,26 (m, 1H, Pyr-H), 7,40 (d, 1H, J = 8,05, Pyr-H), 7,59 (s, 1H, -N=ÇH-N-), 7,65-7,73 (m, 1H, Pyr-H), 8,61 (d, 1H, J = 4,53 Hz, Pyr-H). FABMS m/z (intensidade relativa) : 384 ([M+H]\ 100), 370 (30), 324 (80). Massa Precisa (M+H) : Real : 384,2512, Medida : 384,2494. (3SV3-(9-lsoDropil-6-[(Diridin-2-ilmetil)-aminol-9H-Durin-3-ilamino)-2-metil- pentan-2-ol A uma solução agitada de (2-flúor-9-isopropil-9H-purin-6-il)-piridin-3-ilmetil-amina (30 mg, 1 eq, 0,10 mmol) em n-BuOH/DMSO (1,25 mL, 4 : 1) à temperatura ambiente sob uma atmosfera de argônio, foi adicionada DIEA (0,25 mL, 14,4 eq, 1,44 mmol) seguida de (3S)-3-amino-2-metil-pentan-2-ol (40 mg, 3,2 eq, 34 mmoles). A mistura da reação foi colocada em um banho de óleo preaquecido a 140°C e agitada a esta temperatura durante 72 horas. A mistura da reação foi deixada esfriar à temperatura ambiente e o solvente foi evaporado a vácuo. O resíduo foi distribuído entre EtOAc (50 mL) e salmoura/água (1 : 1, 100 mL), a fase aquosa foi extraída com mais EtOAc (2 χ 25 mL) e a fase orgânica combinada foi lavada com salmoura (50 mL), seca (MgS04) e evaporada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel com CHCI3 : MeOH (100 : 0 -» 98 : 2), para fornecer o composto do título como um sólido branco. Rendimento : 6,5 mg (16 %), 1H-RMN (d-CDCI3, 250 MHz) : δ 1,00 (t, 3H, J = 7,42 Hz, -NHCH(CH2ÇH3)C(CH3)2OH), 1,22 & 1,31 (2 x s, 6H, -NHCHÍCHzCHaJCÍÇH^OH), 1,57 (d, 6H, J = 6,79 Hz, -CH(CH^). 1,70-1,90 (m, 2H, -NHCH(ÇhbCH3)C(CH3)2OH), 3,66-3,81 (m, 1H, -NHÇH(CH2CH3) C(CH3)2OH), 4,56-4,73 (m, 1H, -ÇH(CH3)2), 4,78-5,01 (m, 2H, -HNCHrPvrV 7,20-7,45 (m, 3H, 2 x Pyr-H & -N=ÇH-N-), 7,48-7,69 (m, 1H, Pyr-H), 7,77 (d, 1H, J = 7,74 Hz, Pyr-H). FABMS m/z (intensidade relativa) : 384 ([M+H]+, 100), 366 (30), 324 (85), 286 (40), 242 (65), 192 (63), 176 (70). Massa Precisa (M+H): Real: 384,2512, Medida : 384,2494. Várias modificações e variações da invenção serão evidentes aos versados na técnica sem sair do âmbito e do espírito da invenção. Embora a invenção tenha sido descrita em associação com as modalidades preferidas específicas, devia ser entendido que a invenção como reivindicada não devia ser limitada indevidamente a tais modalidades específicas. Evidentemente, pretende-se que as várias modificações dos modos descritos para a realização da invenção que são óbvias nos campos pretendidos sejam abrangidas pela presente invenção.

REIVINDICAÇÕES

Claims (32)

1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que um de R1 e R2 é metila, etila ou isopropila e o outro é H; R3 e R4 são cada um independentemente H, CrC6 alquila ramificado ou não-ramificado ou arila e em que pelo menos um de R3 e R4 não éH; R5 é um grupo C1-C5 alquila ramificado ou não-ramificado ou um grupo C|-C6 cicloalquila, cada um dos quais pode ser opcionalmente substituído com um ou mais grupos OH; R6, R7, R8 e R9 são cada um H.

2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que um de R1 e R2 é etila ou isopropila e o outro é H.

3. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que R5 é isopropila ou ciclopentila.

4. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que um de R1 e R2 é etila e o outro é H.

5. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que R3 e R4 são cada um independentemente H, metila, etila, isopropila, n-butila, s-butila, t-butila ou fenila.

6. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que R3 e R4 são cada um independentemente H, metila, etila, isopropila, n-propila, n-butila, s-butila ou t-butila.

7. Composto de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que R3 e R4 são cada um independentemente H, metila, etila, isopropila ou t-butila.

8. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que é selecionado entre os seguintes: (2S3R)-3-{9-lsopropil-6-[(piridin-2-ilmetil)-amino]-9H-purin-2- ilamino}-pentan-2-ol; (2R3S)-3-{9-lsopropil-6-[(piridin-2-ilmetil)-amino]-9H-purin-2- ilamino}-pentan-2-ol; (3RS,4R)-4-{9-lsopropil-6-[(piridin-2-ilmetil)-amino]-9H-purin-2- ilamino}-hexan-3-ol; (3RS,4S)-4-{9-lsopropil-6-[(piridin-2-ilmetil)-amino]-9H-purin-2- ilamino}-hexan-3-ol; (3RS,4R)-4-{9-lsopropil-6-[(piridin-2-ilmetil)-amino]-9H-purin-2- ilamino}-2-metil-hexan-3-ol; (3RS,4S)-4-{9-lsopropil-6-[(piridin-2-ilmetil)-amino]-9H-purin-2- ilamino}-2-metil-hexan-3-ol; (3RS,4R)-4-{9-lsopropil-6-[(piridin-2-ilmetil)-amino]-9H-purin-2- ilamino}-2,2-dimetil-hexan-3-ol; (3RS,4S)-4-{9-lsopropil-6-[(piridin-2-ilmetil)-amino]-9H-purin-2- ilamino}-2,2-dimetil-hexan-3-ol; (3R)-3-{9-lsopropil-6-[(piridin-2-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-2-metil-pentan-2-ol; e (3S)-3-{9-lsopropil-6-[(piridin-2-ilmetil)-amino]-9H-purin-2- ilamino}-2-metil-pentan-2-ol.

9. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que é o (2R3S)-3-{9-lsopropil-6-[(piridin-2-ilmetil)-amino]-9H-purin-2-ilamino}-pentan-2-ol.

10. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende o composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9 misturado com um diluente, excipiente ou veículo ou uma mistura dos mesmos farmaceuticamente aceitáveis.

11. Uso do composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que é na preparação de um medicamento para o tratamento de um distúrbio proliferativo.

12. Uso de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que o dito distúrbio proliferativo é câncer ou leucemia.

13. Uso de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que distúrbio proliferativo é glomerulonefrite, artrite reumatóide, pso-ríase ou distúrbio pulmonar obstrutivo crônico.

14. Uso do composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que é na preparação de um medicamento para o tratamento de um distúrbio viral.

15. Uso de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o distúrbio viral é selecionado entre citomegalovírus humano (HCMV), vírus do herpes simplex do tipo 1 (HSV-1), vírus da imunodeficiência humana do tipo 1 (HIV-1) e vírus varicella zoster (VZV).

16. Uso do composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que é na preparação de um medicamento para o tratamento de um distúrbio do SNC.

17. Uso de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o distúrbio do SNC é a doença de Alzheimer ou um distúrbio bi-polar.

18. Uso do composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que é na preparação de um medicamento para o tratamento de alopecia.

19. Uso do composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que é na preparação de um medicamento para o tratamento de derrame.

20. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 11a 19, caracterizado pelo fato de que o composto é administrado em uma quantidade suficiente para inibir pelo menos uma enzima PLK.

21. Uso de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que a enzima PLK é a PLK1.

22. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 11a 19, caracterizado pelo fato de que o composto é administrado em uma quantidade suficiente para inibir pelo menos uma enzima CDK.

23. Uso de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de que a enzima CDK é CDK1, CDK2, CDK3, CDK4, CDK6, CDK7, CDK8 e/ou CDK9.

24. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 11a 19, caracterizado pelo fato de que o composto é administrado em uma quantidade suficiente para inibir a aurora quinase.

25. Uso do composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que é na preparação de um medicamento para o tratamento da diabete.

26. Uso de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que a diabete é diabete do Tipo II.

27. Uso de acordo com a reivindicação 25 ou 26, caracterizado pelo fato de que o composto é administrado em uma quantidade suficiente para inibir GSK.

28. Uso de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo fato de que o composto é administrado em uma quantidade suficiente para inibir GSK3p.

29. Uso do composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que é em um ensaio para a identificação de outros compostos candidatos capazes de inibir uma ou mais de uma quinase dependente de ciclina, GSK e uma enzima PLK.

30. Uso de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que o dito ensaio é um ensaio de ligação competitivo.

31. Processo para a preparação do composto de fórmula I como definido na reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende reagir um composto de fórmula V com um composto de fórmula VI em que R1'9 são como definidos na reivindicação 1 e X é Cl ou F.

32. Processo de acordo com a reivindicação 31, caracterizado pelo fato de que o dito composto de fórmula V é preparado pelas etapas a seguir: (i) reação de um composto de fórmula II com um composto de fórmula III para formar um composto de fórmula IV;(ii) alquilação do dito composto de fórmula IV com um halogene-to de alquila, R5-X', para formar um composto de fórmula V.