BR122016014302B1

BR122016014302B1 - Processo para preparar um sal

Info

Publication number: BR122016014302B1
Application number: BR122016014302-3A
Authority: BR
Inventors: Martin Hans Bohlin; Craig Robert Stewart
Original assignee: Astrazeneca Ab
Priority date: 2012-06-21
Filing date: 2013-06-20
Publication date: 2022-08-23
Also published as: MX354214B; IL236131A0; PL2864316T3; US20140031379A1; AU2013279109B2; CR20160202A; TN2014000491A1; AU2013279109A1; CA2875589A1; ZA201500408B; PT2864316T; HUE033376T2; MA37666B1; PH12014502803A1; US10548882B2; RS55815B1; EP2864316B1; JP2015520221A; CY1119505T1; RU2014148305A

Abstract

PROCESSO PARA PREPARAR UM SAL Sal de cansilato de (1r,1'R,4R)- 4-metoxi-5'' -metil-6'- [5-(prop-1-in-1-il) piridin-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-inden-1'2' -imidazol]-4'' -amina, composições farmacêuticas contendo o sal e usos terapêuticos do sal para tratamento de patologias ABeta relacionadas com mal de Alzheimer como, síndrome de Down, angiopatia amiloide Beta-demência e condições, como incluindo demência vascular de origem mista e degenerativa, demência pré-senil, demência senil e demência associada com o mal de Parkinson, paralisia supranuclear progressiva ou degeneração cortical basal.

Description

“Dividido do BR112014031531-0, depositado em 20/06/2013” CAMPO TÉCNICO DA INVENÇÃO

[001] A presente invenção refere-se a um sal de ácido canforsulfônico (cansilato) de (1r,1’R,4R)-4-metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop-1- in-1-il)piridin-3-il]-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’- amina, e a composições farmacêuticas contendo o sal. Além disso, a presente invenção refere-se a métodos terapêuticos usando o sal para o tratamento e/ou prevenção de patologias relacionadas com Aβ, como a síndrome de Down, angiopatia β-amiloide, como, mas não limitados a, angiopatia amiloide cerebral ou hemorragia cerebral hereditária, distúrbios associados com deficiência cognitiva, como, mas não limitados a MCI ("deficiência cognitiva leve"), mal de Alzheimer, perda de memória, sintomas de déficit de atenção associados com o mal de Alzheimer, neurodegeneração associada com doenças como o mal de Alzheimer ou demência incluindo demência de origem mista vascular e degenerativa, demência pré-senil, demência senil e demência associada com o mal de Parkinson, paralisia supranuclear progressiva ou degeneração cortical basal.

FUNDAMENTOS

[002] O evento neuropatológico principal distinguindo o mal de Alzheimer (AD) é a deposição de peptídeo β-amiloide de 40-42 resíduos (Aβ) em parênquima cerebral e os vasos cerebrais. Um grande campo de dados genéticos, bioquímicos e IN VIVO suportam um papel essencial para Aβ na cascata patológica que, eventualmente, leva a AD. Os pacientes geralmente apresentam sintomas precoces (comumente perda de memória) em sua sexta ou sétima décadas de vida. A doença evolui com o aumento da demência e elevada deposição de Aβ. Em paralelo, uma forma hiperfosforilada de proteína tau associada a microtúbulos se acumula dentro dos neurônios, levando a uma pletora de efeitos deletérios sobre a função neuronal. A hipótese de trabalho prevalecente com relação à relação temporal entre Aβ e patologias tau indica que a deposição de Aβ precede a agregação de tau em humanos e em modelos animais da doença. Dentro deste contexto, é importante notar que a natureza molecular exata de Aβ, mediando essa função patológico é atualmente um aspecto sendo estudado intensamente. De modo mais provável, nota-se um CONTINUUM de espécies tóxicas na faixa de oligômeros Aβ de ordem inferior para conjuntos supramoleculares como fibrilas de Aβ.

[003] O peptídeo Aβ é um fragmento integrante da proteína APP Tipo I (proteína precursora de Aβ amiloide), uma proteína expressa ubiquamente em tecidos humanos. Uma vez que Aβ solúvel pode ser encontrado tanto no plasma como no fluido cerebrospinal (CSF), e no meio a partir de células cultivadas, APP precisa sofrer proteólise. Existem três clivagens principais de APP que são relevantes para a patobiologia da AD, as assim chamadas clivagens α, β, e y. A clivagem α, que ocorre grosseiramente no meio do domínio de Aβ em APP é executada pelas metaloproteases AADM10 ou AADM17 (a última também conhecida como TACE). A clivagem β, ocorrendo no término N de Aβ, é gerada pela enzima de clivagem 1 APP sítio beta de transmembrana aspartil protease BACE1). A clivagem y, gerando os términos C de Aβ e subsequente liberação do peptídeo, é efetuada por uma aspartil protease de multi-subunidades chamada y-secretase. A clivagem ADAM10/17 seguido por clivagem de y-secretase resulta na liberação do peptídeo p3 solúvel, um fragmento de Aβ N-terminalmente truncado, que falha ao formar depósitos de amiloides em humanos. Esta via proteolítica é comumente referida como a via não amiloidogênica. Clivagens consecutivas por BACE1 e y-secretase geram o peptídeo Aβ intacto, assim este esquema de processamento tem sido chamado de via amiloidogênica. Com esse conhecimento disponível, é possível vislumbrar duas possíveis vias para reduzir a produção de Aβ: estimular o processamento não amiloidogênico, ou inibir ou modular o processamento amiloidogênico. Esta aplicação focaliza a última estratégia, inibição ou modulação do processamento amiloidogênico.

[004] As placas amiloidogênicas e a angiopatia amiloide vascular também caracterizam os cérebros de pacientes com Trissomia 21 (síndrome de Down), hemorragia cerebral hereditária com amiloidose de tipo holandês (HCHWA-D), e outros distúrbios neurodegenerativos. Emaranhados neurofibrilares também ocorrem em outros distúrbios neurodegenerativos, incluindo distúrbios induzindo demência (Varghese, J., et al, Journal of Medicinal Chemistry, 2003, 46, 4625-4630). Depósitos de β -amiloide são predominantemente um agregado de Aβ peptídeo, que, por sua vez, é um produto da proteólise da proteína precursora de amiloide (APP). Mais especificamente, Aβ peptídeo resulta a partir da clivagem de APP no término C por uma ou mais Y-secretases, e no N-término por enzima β-secretase (BACE), também conhecida como aspartil protease ou Asp2 ou enzima de clivagem APP sítio Beta (BACE), como parte da via e—amiloidogênica.

[005] A atividade de BACE está correlacionada diretamente para a geração de Aβ peptídeo a partir de APP (Sinha, ET AL, Nature, 1999, 402, 537540), e cada vez mais os estudos indicam que a inibição da BACE inibe a produção de Aβ peptídeo (Roberds, SL, ET AL, Human Molecular Genetics, 2001, 10, 1317-1324). BACE é uma proteína de tipo 1 ligada à membrana que é sintetizada como uma proenzima parcialmente ativa, e é expressa abundantemente em tecido cerebral. Pensa-se que ela representa a principal atividade de β -secretase, e é considerada como sendo a etapa limitante de taxa na produção de amiloide- β-peptfdeo (Aβ).

[006] Os fármacos que reduzem ou bloqueiam a atividade de BACE devem, portanto, reduzir os níveis de Aβ e níveis de fragmentos de Aβ no cérebro, ou em outro lugar onde Aβ ou seus fragmentos se depositam, e, assim, retardar a formação de placas amiloides e a progressão de AD ou outras doenças envolvendo a deposição de Aβ ou seus fragmentos. BACE é, assim, um candidato importante para o desenvolvimento de fármacos como um tratamento e/ou profilaxia de patologias relacionadas com Aβ, como a síndrome de Down, angiopatia β-amiloide, como, mas não limitada a angiopatia amiloide cerebral ou hemorragia cerebral hereditária, distúrbios associados com insuficiência cognitiva como, mas não limitada a MCI ("deficiência cognitiva leve"), mal de Alzheimer, perda de memória, sintomas de déficit de atenção associados com o mal de Alzheimer, neurodegeneração associada com doenças como o mal de Alzheimer ou demência incluindo demência de origem mista vascular e degenerativa, demência pré-senil, demência senil e demência associada com o mal de Parkinson, paralisia supranuclear progressiva ou degeneração cortical basal.

[007] Seria, portanto, útil inibir a deposição de Aβ e suas porções através da inibição de BACE através de inibidores como os compostos aqui apresentados.

[008] O potencial terapêutico para inibir a deposição de Aβ tem motivado muitos grupos a isolar e caracterizar as enzimas secretase e identificar os seus inibidores potenciais.

BREVE DESCRIÇÃO DA FIGURA

[009] Figura 1 é um difratograma de raios-X de pó de um sal de cansilato de (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop-1-in-1-il)piridin-3- il]-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’-amina.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0010] A presente invenção refere-se a sal de cansilato do composto (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop-1-in-1-il)piridin-3-il]-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’-amina. O sal de cansilato de (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop-1-in-1-il)piridin-3-il]-3’H- dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’-amina pode ser alternativamente descrito como um sal de ácido canforsulfônico de (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop-1-in-1-il)piridin-3-il]-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’-amina.

[0011] Uma modalidade da presente invenção é um sal de cansilato do composto (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop-1-in-1-il)piridin-3- il]-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’-amina, caracterizado ao fornecer um padrão de difração de raios-X de pó (XRPD), exibindo substancialmente os seguintes picos com valores de d-espaçamento, como mostrado em Tabela 1:Tabela 1: Picos identificados em difração de raios-X de pó

[0012] Outra modalidade da presente invenção é um sal de cansilato do composto (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop-1-in-1-il)piridin-3- il]-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’-amina, caracterizado para fornecer um padrão de difração de raios-X de pó, exibindo substancialmente os seguintes picos muito fortes, fortes e médio com valores de d-espaçamento, como mostrado em Tabela 2:Tabela 2:Picos identificados em difração de raios-X de pó

[0013] Como usado aqui, o termo sal de cansilato do composto(1r,1’R,4R)-4-metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop-1-in-1-il)piridin-3-il]-3’H-dispiro [ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’-amina também engloba todos os solvatos e co-cristais dos mesmos.

[0014] Sais alternativos do composto (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5’’-metil- 6’-[5-(prop-1-in-1-il)piridin-3-il]-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’- imidazol]-4’’-amina incluem o sal succinato, clorídrico, fosfato, sulfato, fumarato e o 1,5 naftalenodissulfonato.

[0015] Em um aspecto particular da invenção, provê-se uma composição farmacêutica compreendendo como ingrediente ativo uma quantidade terapeuticamente eficaz de sal de cansilato do composto (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop-1-in-1-il)piridin-3-il]-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’-amina, em associação com excipientes, veículos ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis.

[0016] Em outro aspecto da invenção, provê-se um sal de cansilato do composto (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop-1-in-1-il)piridin-3-il]- 3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’-amina para uso como um medicamento.

[0017] Em outro aspecto da invenção, provê-se o uso de sal de cansilato do composto (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop-1-in-1- il)piridin-3-il]-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’-amina, como um medicamento para tratamento ou prevenção uma patologia relacionada com Aβ.

[0018] Em outro aspecto da invenção, provê-se o uso de sal de cansilato do composto (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop-1-in-1- il)piridin-3-il]-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’-amina, como um medicamento para tratamento ou prevenção de uma patologia relacionada com Aβ, em que referida patologia relacionada com Aβ é síndrome de Down, uma angiopatia β-amiloide, angiopatia amiloide cerebral, hemorragia cerebral hereditária, uma doença associada com a deficiência cognitiva, MCI ("deficiência cognitiva leve"), mal de Alzheimer, perda de memória, sintomas de déficit de atenção associados com mal de Alzheimer, neurodegeneração associada com o mal de Alzheimer, demência de origem vascular mista, demência de origem degenerativa, demência pré-senil, demência senil, demência associada com o mal de Parkinson, paralisia supranuclear progressiva ou degeneração cortical basal.

[0019] Em outro aspecto da invenção, provê-se o uso de sal de cansilato do composto (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop-1-in-1- il)piridin-3-il]-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’-amina, como um medicamento para tratamento ou prevenção do mal de Alzheimer.

[0020] Em outro aspecto da invenção, provê-se o uso de sal de cansilato do composto (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop-1-in-1- il)piridin-3-il]-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’-amina, na fabricação de um medicamento para tratamento ou prevenção de uma patologia relacionada com Aβ.

[0021] Em outro aspecto da invenção, provê-se o uso de sal de cansilato do composto (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop-1-in-1- il)piridin-3-il]-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’-amina, na fabricação de um medicamento para tratamento ou prevenção de uma patologia relacionada com Aβ, em que a referida patologia relacionada com Aβ é a síndrome de Down, uma angiopatia β-amiloide, angiopatia amiloide cerebral, hemorragia cerebral hereditária, um distúrbio associado com a deficiência cognitiva, MCI ("deficiência cognitiva leve"), mal de Alzheimer, perda de memória, sintomas de déficit de atenção associados com o mal de Alzheimer, neurodegeneração associada com o mal de Alzheimer, demência de origem vascular mista, demência de origem degenerativa, demência pré- senil, demência senil, demência associada com o mal de Parkinson, paralisia supranuclear progressiva ou degeneração cortical basal.

[0022] Em outro aspecto da invenção, provê-se o uso de sal de cansilato do composto (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop-1-in-1- il)piridin-3-il]-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’-amina, na fabricação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de mal de Alzheimer.

[0023] Em outro aspecto da invenção, provê-se um método de inibição da atividade de BACE compreendendo contatar referido BACE com um sal de cansilato do composto (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop- 1-in-1-il)piridin-3-il]-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’- amina.

[0024] Em outro aspecto da invenção, provê-se um método de tratamento ou prevenção de uma patologia relacionada com Aβ em um paciente em necessidade do mesmo, compreendendo a administração ao referido paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de sal de cansilato do composto (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop-1-in-1- il)piridin-3-il]-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’-amina.

[0025] Em outro aspecto da invenção, provê-se um método de tratamento ou prevenção de uma patologia relacionada com Aβ em um paciente em necessidade do mesmo, compreendendo a administração ao referido paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de sal de cansilato do composto (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop-1-in-1- il)piridin-3-il]-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’-amina, em que referida patologia relacionada com Aβ é a síndrome de Down, uma angiopatia β-amiloide, angiopatia amiloide cerebral, hemorragia cerebral hereditária, um distúrbio associado com a deficiência cognitiva, MCI ("deficiência cognitiva leve"), mal de Alzheimer, perda de memória, sintomas de déficit de atenção associados com o mal de Alzheimer, neurodegeneração associada com o mal de Alzheimer, demência de origem vascular mista, demência de origem degenerativa, demência pré-senil, demência senil, demência associada com o mal de Parkinson, paralisia supranuclear progressiva ou degeneração cortical basal.

[0026] Em outro aspecto da invenção, provê-se um método de tratamento ou prevenção do mal de Alzheimer em um paciente em necessidade do mesmo, compreendendo a administração ao referido paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de sal de cansilato do composto (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop-1-in-1-il)piridin-3-il]-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’-amina.

[0027] Em algumas modalidades, a presente invenção provê um método de inibição da atividade de BACE compreendendo contatar BACE com o sal de cansilato do composto (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5’’-metil-6’-[5- (prop-1-in-1-il)piridin-3-il]-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’- imidazol]-4’’-amina. BACE representa, como se pensa, a atividade de β- secretase principal, e é considerada como sendo a etapa limitadora da taxa na produção de proteína β-amiloide (Aβ). Assim, a inibição de BACE através de inibidores como os compostos aqui fornecidos deve ser utilizável para inibir a deposição de Aβ e suas porções. Porque a deposição de Aβ e suas porções está ligada a doenças como o mal de Alzheimer, BACE é um candidato importante para o desenvolvimento de fármacos como um tratamento e/ou profilaxia de patologias relacionadas com Aβ como síndrome de Down e angiopatia β-amiloide, como, mas não limitada a, angiopatia amiloide cerebral, hemorragia cerebral hereditária, distúrbios associados com deficiência cognitiva, como, mas não limitado a, MCI ("deficiência cognitiva leve"), mal de Alzheimer, perda de memória, sintomas de déficit de atenção associados com o mal de Alzheimer, neurodegeneração associada com doenças, como o mal de Alzheimer ou demência incluindo demência de origem mista vascular e degenerativa, demência pré-senil, demência senil e demência associada com o mal de Parkinson, paralisia supranuclear progressiva ou degeneração cortical basal.

[0028] Em algumas modalidades, a presente invenção provê um método para a profilaxia de patologias relacionadas com Aβ, como síndrome de Down e angiopatia β-amiloide, como, mas não limitadas a, angiopatia amiloide cerebral, hemorragia cerebral hereditária, distúrbios associados com deficiência cognitiva, como, mas não limitados a, MCI ("deficiência cognitiva leve"), mal de Alzheimer, perda de memória, sintomas de déficit de atenção associados com o mal de Alzheimer, neurodegeneração associada com doenças como o mal de Alzheimer ou demência, incluindo demência de origem mista vascular e degenerativa, demência pré-senil, demência senil e demência associada com o mal de Parkinson, paralisia supranuclear progressiva ou degeneração cortical basal, compreendendo a administração a um mamífero (incluindo humano) de uma quantidade terapeuticamente eficaz de sal de cansilato do composto (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop- 1-in-1-il)piridin-3-il]-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’- amina.

[0029] Em algumas modalidades, a presente invenção provê um método de tratamento ou prevenção de patologias relacionadas com Aβ como síndrome de Down e angiopatia β-amiloide, como, mas não limitadas a, angiopatia amiloide cerebral, hemorragia cerebral hereditária, distúrbios associadas com deficiência cognitiva, como, mas não limitados a, MCI ("deficiência cognitiva leve"), mal de Alzheimer, perda de memória, sintomas de déficit de atenção associados com o mal de Alzheimer, neurodegeneração associada com doenças como o mal de Alzheimer ou demência incluindo demência de origem mista vascular e degenerativa, demência pré-senil, demência senil e demência associada com o mal de Parkinson, paralisia supranuclear progressiva ou degeneração cortical basal, por administração a um mamífero (incluindo humano) de um sal de cansilato do composto (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop-1-in-1-il)piridin-3-il]-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’-amina e um agente acentuador da cognição e/ou da memória.

[0030] Em algumas modalidades, a presente invenção provê um método de tratamento ou prevenção de patologias relacionadas com Aβ, como síndrome de Down e angiopatia β- amiloide, como, mas não limitadas a, angiopatia amiloide cerebral, hemorragia cerebral hereditária, distúrbios associados com deficiência cognitiva, como, mas não limitados a, MCI ("deficiência cognitiva leve"), mal de Alzheimer, perda de memória, sintomas de déficit de atenção associados com o mal de Alzheimer, neurodegeneração associada com doenças como o mal de Alzheimer ou demência, incluindo demência de origem mista vascular e degenerativa, demência pré-senil, demência senil e demência associada com o mal de Parkinson, paralisia supranuclear progressiva ou degeneração cortical basal, por administração a um mamífero (incluindo humano) de sal de cansilato do composto (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop-1-in-1-il)piridin-3-il]-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’-amina e um inibidor de colina esterase ou agente anti-inflamatório.

[0031] Em algumas modalidades, a presente invenção provê um método de tratamento ou prevenção de patologias relacionadas com Aβ como síndrome de Down e angiopatia β- amiloide, como, mas não limitadas a, angiopatia amiloide cerebral, hemorragia cerebral hereditária, distúrbios associados com deficiência cognitiva, como, mas não limitados a, MCI ("deficiência cognitiva leve"), mal de Alzheimer, perda de memória, sintomas de déficit de atenção associados com o mal de Alzheimer, neurodegeneração associada com doenças como o mal de Alzheimer ou demência, incluindo demência de origem mista vascular e degenerativa, demência pré-senil, demência senil e demência associada com o mal de Parkinson, paralisia supranuclear progressiva ou degeneração cortical basal, ou qualquer outra doença, distúrbio ou condição descritos aqui, por administração a um mamífero (incluindo humano) de um composto da presente invenção e um agente antipsicótico atípico. Agentes antipsicóticos atípicos incluem, mas não são limitados a, Olanzapina (comercializado como Zyprexa), Aripiprazol (comercializado como Abilify), Risperidona (comercializado como Risperdal), Quetiapina (comercializado como Seroquel), Clozapina (comercializado como Clozaril), Ziprasidona (comercializado como Geodon) e Olanzapina/Fluoxetina (comercializado como Symbyax).

[0032] Em algumas modalidades, o mamífero ou humano sendo tratado com o sal de cansilato do composto (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5’’-metil- 6’-[5-(prop-1-in-1-il)piridin-3-il]-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’- imidazol]-4’’-amina foi diagnosticado com uma doença ou distúrbio em particular, como os aqui descritos. Nestes casos, o mamífero ou humano sendo tratado apresenta uma necessidade de tal tratamento. O diagnóstico, no entanto, não precisa ser previamente realizado.

[0033] As definições estabelecidas no presente pedido são destinadas a esclarecer os termos usados neste pedido. O termo "aqui" significa o pedido completo.

[0034] Como usado, "farmaceuticamente aceitável" é aqui empregado como fazendo referência aos compostos, materiais, composições, e/ou formas de dosagem que são, dentro do âmbito do julgamento médico seguro, apropriados para uso em contato com os tecidos de seres humanos e animais sem toxicidade excessiva, irritação, resposta alérgica, ou outro problema ou complicação, comensurável com uma relação razoável de risco/benefício.

[0035] O tratamento anti-demência definido aqui pode ser aplicado como uma terapia única ou pode envolver, além do composto da invenção, quimioterapia convencional. Tal quimioterapia pode incluir uma ou mais das seguintes categorias de agentes: inibidores da acetil colinesterase, agentes anti-inflamatórios, agentes acentuadores da cognição e/ou memória ou agentes antipsicóticos atípicos.

[0036] Tal tratamento conjunto pode ser conseguido por meio de uma dosagem complementar, concorrente, simultânea, sequencial ou separada componentes individuais do tratamento. Estes produtos de combinação empregam os compostos desta invenção.

[0037] Quimioterapia convencional adicional pode incluir uma ou mais das seguintes categorias de agentes: (i) antidepressivos, (ii) antipsicóticos atípicos, (iii) antipsicóticos, (iv) ansiolíticos, (v) anticonvulsivos, (vi) terapias de Alzheimer correntemente usadas, (vii) terapias de Parkinson, (viii) terapias de enxaqueca, (ix) terapias de derrame cerebral, (x) terapias de incontinência urinária, (xi) terapias de dor neuropática, (xii) terapias dor nociceptiva, (xiii) terapias de insônia e (xiv) estabilizadores de humor. Os tratamentos conhecidos para as terapias anteriores podem ser empregados em combinação com a invenção aqui descrita.

[0038] Estes produtos de combinação empregam um sal de cansilato do composto (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop-1-in-1-il)piridin-3- il]-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’-amina dentro da faixa de dosagem aqui descrita e o outro composto farmaceuticamente ativo ou compostos dentro de faixas de dosagem aprovadas e/ou como determinado por um versado na arte.

[0039] Os compostos da presente invenção podem ser administrados oralmente, de modo parenteral, bucal, vaginal, retal, por inalação, insuflação, sublingualmente, intramuscularmente, subcutaneamente, topicamente, intranasalmente, intraperitonealmente, intratoracicamente, intravenosamente, epiduralmente, intratecalmente, intracerebroventricularmente e por injeção nas juntas.

[0040] A dosagem irá depender da via de administração, da severidade da doença, idade e peso do paciente e outros fatores normalmente considerados pelo médico atendente, ao determinar o regime individual e nível de dosagem como o mais apropriado para um paciente em particular.

[0041] Uma quantidade eficaz de um composto da presente invenção para uso em terapia de demência é uma quantidade suficiente para aliviar sintomaticamente em um animal de sangue quente, particularmente um humano, os sintomas de demência, para retardar a progressão de demência, ou para reduzir em pacientes com sintomas de demência o risco de se tornar pior.

[0042] Além dos compostos da presente invenção, a composição farmacêutica da presente invenção também pode conter, ou ser coadministrada (simultaneamente ou sequencialmente) com, um ou mais agentes farmacológicos de valor no tratamento de uma ou mais condições de doença aqui referidas.

[0043] A quantidade de sal de cansilato do composto (1r,1’R,4R)- 4- metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop-1-in-1-il)piridin-3-il]-3’H-dispiro[ciclohexano- 1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’-amina a ser administrada irá variar para o paciente sendo tratado e irá variar de cerca de 10 ng/kg de peso corporal a 100 mg/kg de peso corporal por dia e preferivelmente de 10 ng/kg a 10 mg/kg por dia. Por exemplo, as dosagens podem ser facilmente determinadas por versados na arte partir desta descrição e do conhecimento na arte. Assim, o versado na arte pode facilmente determinar a quantidade de compostos e aditivos opcionais, veículos, e/ou carreadores em composições e a serem administrados em métodos da invenção.

MÉTODOS DE PREPARAÇÃO Sal de cansilato de (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop-1-in-1- il)piridin-3-il]-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’- amina

[0044] Sal de cansilato do composto (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5’’-metil- 6’-[5-(prop-1-in-1-il)piridin-3-il]-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’- imidazol]-4’’-amina pode ser obtido partindo de uma solução de (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop-1-in-1-il)piridin-3-il]-3’H-dispiro [ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’-amina em um solvente apropriado, por exemplo, 2-propanol, acetonitrila, ou acetona ou de suas misturas com água, seguido por mistura da solução obtida com ácido (1S)- (+)-10- canforsulfônico diretamente ou dissolvido em um solvente apropriado, por exemplo 2-propanol ou água, a uma temperatura entre a temperatura ambiente e 80°C. A cristalização pode ser obtida por evaporação do solvente e/ou por resfriamento da solução, ou diretamente como uma cristalização de reação de sal. Cristais de sementes podem ser usados para iniciar a cristalização. As sementes podem ser preparadas a partir do próprio lote por amostragem de um pequeno volume da solução e então resfriamento rápido para induzir a cristalização. Os cristais são então adicionados ao lote de sementes.

Análise de XRPD:

[0045] Análise de difração de raios-X de pó (XRPD) foi realizada em amostras preparadas de acordo com métodos padrões, por exemplo, os descritos em Giacovazzo, C. et al (1995), Fundamentals of Crystallography, Oxford University Press; Jenkins, R. e Snyder, R. L. (1996), Introduction to X-Ray Powder Diffractometry, John Wiley & Sons, New York; Bunn, C. W. (1948), Chemical Crystallography, Clarendon Press, London; ou Klug, H. P. & Alexander, L. E. (1974), X-ray Diffraction Procedures, John Wiley and Sons, New York. As análises de difração de raios-X foram realizadas usando um difratômetro PANanlytical X’Pert PRO MPD durante 96 minuto de 1 a 60° 2θ. Os valores de distância de XRPD podem variar na faixa de ±2 na última casa decimal.

[0046] As intensidades relativas são derivadas a partir de difratogramas medidos com fendas variáveis.

[0047] As intensidades relativas medidos versus o pico mais forte são dadas como muito forte (vs) acima de 50%, como forte (s) entre 25 e 50%, como média (m) entre 10 e 25%, como fraca (w) entre 5 e 10%, e como muito fraca (vw) sob altura do pico relativo de 5%. Será apreciado por um versado na arte que as intensidades de XRPD podem variar entre diferentes amostras e diferentes preparações de amostra por várias razões, incluindo a orientação preferida. Também será apreciado por um versado arte que deslocamentos menores no ângulo medido e, assim, no d-espaçamento, podem ocorrer por várias razões, incluindo variação do nível de superfície da amostra no difratômetro. EXEMPLOS Exemplo 1 6'-Bromospiro[ciclohexano-1,2'-indeno]-1',4(3'H)-diona

[0048] Terc-butóxido de potássio (223 g, 1,99 mol) foi carregado para um reator de 100 L contendo uma mistura agitada de 6-bromo-1-indanona (8,38 kg, 39,7 mol) em THF (16,75 L) a 20 a 30°C. Acrilato de metila (2,33 L, 25,8 mol) foi então carregado para a mistura durante 15 minutos, mantendo a temperatura entre 20 a 30°C. Uma solução de terc-butóxido de potássio (89,1 g, 0,79 mol) dissolvido em THF (400 mL) foi adicionada depois de acrilato de metila (2,33 L, 25,8 mol) ser adicionado durante 20 minutos a 20 a 30°C. Uma terceira porção de terc-butóxido de potássio (90 g, 0,80 mol) dissolvido em THF (400 mL) foi então adicionada, seguido por uma terceira adição de acrilato de metila (2,33 L, 25,8 mol) durante 20 minutos a 20 a 30°C . Terc-butóxido de potássio (4,86 kg, 43,3 mol) dissolvido em THF (21,9 L) foi carregado para o reator durante 1 hora a 20 a 30°C. A reação foi aquecida a aproximadamente 65°C e 23 L de solvente foram destilados. A temperatura de reação foi abaixada a 60°C e 50% de hidróxido de potássio aquoso (2,42 L, 31,7 mol) dissolvidos em água (51,1 L) foram adicionados à mistura durante 30 minutos a 55 a 60°C e depois a mistura foi agitada durante 6 horas a 60°C, resfriada a 20°C durante 2 horas. Depois de agitar durante 12 horas a 20°C, o material sólido foi filtrado, lavado duas vezes com uma mistura de água (8,4 L) e THF (4,2 L) e, então, secado a 50°C sob vácuo para dar 6'- bromospiro[ciclohexano-1,2'-indeno]-1',4(3'H)-diona (7,78 kg; 26,6 mol), 1H RMN (500 MHz, DMSO-D6) δ ppm 1,78 a 1,84 (m, 2 H), 1,95 (td, 2 H), 2,32 a 2,38 (m, 2 H), 2,51 a 2,59 (m, 2 H), 3,27 (s, 2 H), 7,60 (d, 1 H), 7,81 (m, 1 H), 7,89 (m, 1 H). Exemplo 2 (1r,4r)-6'-Bromo-4-metoxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3'H)-ona

[0049] Complexo de borano terc-butilamina (845 g, 9,7 mol) dissolvido em DCM (3,8 L) foi carregado em uma pasta fluida de 6'- bromoespiro [ciclohexano-1,2’-indeno] -1 ', 4 (3' H)-diona (7,7 kg, 26,3 mol) em DCM (42,4 L) a aproximadamente 0 a 5°C durante aproximadamente 25 minutos. A reação foi deixada com agitação a 0 a 5°C durante 1 hora, e depois a análise confirmou que a conversão foi > 98%. Uma solução preparada a partir de cloreto de sódio (2,77 kg), água (13,3 L) e ácido clorídrico a 37% (2,61 L, 32 mol) foi carregada. A mistura foi aquecida a aproximadamente 1 a 5°C e as fases separaram após assentar em camadas. A fase orgânica foi retornada ao reator, junto com metanossulfonato de metila (2,68 L, 31,6 mol) e cloreto de tetrabutilamônio (131 g, 0,47 mol) e a mistura foi vigorosamente agitada a 20°C. 50% de hidróxido de sódio (12,5 L, 236 mol) foram então carregados para a mistura de reação agitada vigorosamente durante aproximadamente 1 hora e a reação foi deixada com agitação vigorosa durante a noite a 20°C. Água (19 L) foi adicionada e a fase aquosa foi descartada após separação. A camada orgânica foi aquecida a aproximadamente 40°C e 33 L de solvente foram destilados. Etanol (21 L) foi carregado e a destilação reiniciada com aumento da temperatura (22 L destilaram em até 79°C). Etanol (13,9 L) foi carregado a aproximadamente 75°C. Água (14,6 L) foi carregada durante 30 minutos, mantendo a temperatura entre 72 a 75°C. Aproximadamente 400 mL da solução são retirados de um frasco de 500 ml de polietileno e a amostra cristalizou espontaneamente. O lote foi resfriado a 50°C e a amostra de pasta fluida cristalizada foi adicionada de volta à solução. A mistura foi resfriada a 40°C. A mistura foi resfriada a 20°C durante 4 horas e depois foi agitada durante a noite. O sólido foi filtrado, lavado com uma mistura de etanol (6,6 L) e água (5 L) e secado a 50°C sob vácuo para dar (1r,4r)-6'-bromo-4- metoxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3'H)-ona (5,83 kg, 18,9 mol) 1H RMN (500 MHz, DMSO-D6) δ ppm 1,22 a 1,32 (m, 2 H), 1,41 a 1,48 (m, 2 H), 1,56 (td, 2 H), 1,99 a 2,07 (m, 2 H), 3,01 (s, 2 H), 3,16 a 3,23 (m, 1 H), 3,27 (s, 3 H), 7,56 (d, 1 H), 7,77 (d, 1 H), 7,86 (dd, 1 H). Exemplo 3 Cloridrato de (1r,4r)-6'-bromo-4-metoxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]- 1'(3'H)-imina

[0050] (1r,4r)-6'-Bromo-4-metoxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]- 1'(3'H)-ona (5,82 kg; 17,7 mol) foi carregado em um reator de 100 L em temperatura ambiente seguido por etóxido de titânio (IV) (7,4 L; 35,4 mol) e uma solução de terc-butilsulfinamida (2,94 kg; 23,0 mol) em 2-metiltetra- hidrofurano (13,7 L). A mistura foi agitada e aquecida a 82°C. Depois de 30 minutos a 82°C, a temperatura foi aumentada ainda mais (até 97°C) e 8 L de solvente foram destilados. A reação foi resfriada a 87°C e 2- metiltetra- hidrofurano (8,2 L) foi adicionado dando uma temperatura de reação de 82 C. A reação foi deixada com agitação a 82°C durante a noite. A temperatura da reação foi elevada (97°C) e 8,5 L de solvente foram destilados. A reação foi resfriada a 87°C e 2- metiltetra-hidrofurano (8,2 L) foi adicionado dando uma temperatura de reação de 82°C. Após 3,5 horas, a temperatura de reação foi aumentada ainda (a 97°C) e 8 L de solvente foram destilados. A reação foi resfriada a 87°C e 2-metiltetra-hidrofurano (8,2 L) foi adicionado dando uma temperatura de reação de 82°C. Após 2 horas, a temperatura de reação foi ainda aumentada (a 97°C) e 8,2 L de solvente foram destilados. A reação foi resfriada a 87°C e 2-metiltetra-hidrofurano (8,2 L) foi adicionado dando uma temperatura de reação de 82°C. A reação foi agitada durante a noite a 82°C. A temperatura de reação foi ainda aumentada (a 97°C) e 8 L de solvente foram destilados. A reação foi resfriada a 25°C. Diclorometano (16,4 L) foi carregado. Para um reator separado, água (30 L) foi adicionada e agitada vigorosamente e sulfato de sódio (7,54 kg) foi adicionado e a solução resultante foi resfriada a 10°C. Ácido sulfúrico (2,3 L, 42,4 mol) foi adicionado à solução de água e a temperatura foi ajustada a 20°C. 6 L de solução de água ácida foram retirados e guardados para uso posterior. A mistura de reação orgânica foi carregada para a solução de água ácida durante 5 minutos, com boa agitação. O vaso de reação orgânica foi lavado com diclorometano (16,4 L), e a solução de lavagem de diclorometano foi também adicionada à água ácida. A mistura foi agitada durante 15 minutos e então deixada assentar durante 20 minutos. A fase aquosa inferior foi retirada, os 6 L guardados de lavagem ácida foram adicionados, seguido por água (5,5 L). A mistura foi agitada durante 15 minutos e depois deixada assentar durante 20 minutos. A camada orgânica inferior foi levada para garrafões e a camada de água superior foi descartada. A camada orgânica foi carregada de volta para o vaso, seguido por sulfato de sódio (2,74 kg), e a mistura foi agitada durante 30 minutos. O sulfato de sódio foi filtrado e lavado com diclorometano (5,5 L) e as fases orgânicas combinadas foram carregadas em um vaso limpo. O lote foi aquecido por destilação (coletados 31 L em temperatura máxima de 57°C). O lote foi resfriado a 40°C e diclorometano (16,4 L) foi adicionado. O lote foi aquecido durante a destilação (coletados 17 L em temperatura máxima de 54°C). O lote foi resfriado a 20°C e diclorometano (5,5 L) e etanol (2,7 L). Cloreto de hidrogênio 2 M em éter dietílico (10,6 L; 21,2 mol) foi carregado na reação, durante 45 minutos, mantendo a temperatura entre 16-23°C. A pasta fluida resultante foi agitada a 20°C durante 1 hora após o que o sólido foi filtrado e lavado três vezes com uma mistura 1:1 de diclorometano e éter dietílico (3 x 5,5 L). O sólido foi secado a 50°C sob vácuo para dar cloridrato de (1r,4r)-6'-bromo-4-metoxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3'H)-imina (6, 0 kg; 14,3 mol; teste 82% p/p por 1H RMN) 1H RMN (500 MHz, DMSO-D6) δ ppm 130 (m, 2 H), 1, 70 (d, 2 H), 1, 98 (m, 2 H), 2, 10 (m, 2 H), 3, 17 (s, 2 H), 3, 23 (m, 1 H), 3, 29 (s, 3 H), 7, 61 (d, 1 H), 8, 04 (dd, 1 H), 8, 75 (d, 1 H), 12, 90(br s,2H). Exemplo 4 (1r,4r)-6’-Bromo-4-metoxi-5’’-metil-3’H-dispiro [ciclohexano-1,2’-inden- 1’2’-imidazol]-4’’(3’’H)-tiona

[0051] Trimetilortoformato (4,95 L; 45,2 mol) e diisopropiletilamina (3,5 L; 20,0 mol) foram carregados para um reator contendo cloridrato de (1r, 4r) -6’-bromo-4-metoxiespiro [ciclohexano-1,2’-inden] -1'(3'H) -imina (6,25 kg; 14,9 mol) em isopropanol (50,5 L). A mistura de reação foi agitada e aquecida a 75°C durante uma hora de modo que uma solução límpida foi obtida. A temperatura foi fixada a 70°C e uma solução 2 M de 2- oxopropanotioamida em isopropanol (19,5 kg; 40,6 mol) foi carregada durante 1 hora, depois a reação foi agitada durante a noite a 69°C. O lote foi semeado com(1r,4r)-6’-bromo-4-metoxi-5’’-metil-3’H-dispiro[ciclohexano- 1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’(3’’H)-tiona (3 g; 7,6 mmol) e a temperatura foi diminuída a 60°C e agitada durante 1 hora. A mistura foi concentrada por destilação (temperatura de destilação de aproximadamente 60°C; 31 L destilaram). Água (31 L) foi adicionada durante 1 hora e 60°C antes da temperatura ser diminuída a 25°C durante 90 minutos, depois a mistura foi agitada durante 3 horas. O sólido foi filtrado, lavado duas vezes com isopropanol (2 x 5,2 L) e secado sob vácuo a 40°C para dar (1r,4r)-6’-bromo- 4-metoxi-5’’-metil-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]- 4’’(3’’H)-tiona (4,87 kg; 10,8 mol; teste de 87% p/p por 1H RMN). Exemplo 5 Sal de ácido (1r,1’R,4R)-6’-Bromo-4-metoxi-5’’-metil-3’H- dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’-amina D(+)-10-canforsulfônico

[0052] Amônia 7 M em metanol (32 L; 224 mol) foi carregada a um reator contendo(1r,4r)-6’-bromo-4-metoxi-5’’-metil-3’H-dispiro[ciclohexano- 1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’(3’’H)-tiona (5,10 kg; 11,4 mol) e acetato de zinco di-hidratado (3,02 kg; 13,8 mol). O reator foi vedado e a mistura foi aquecida a 80°C e agitada durante 24 horas, depois foi resfriada a 30°C. 1- Butanol (51L) foi carregado e a mistura de reação foi concentrada por destilação a vácuo de aproximadamente 50 L. 1-Butanol (25 L) foi adicionado e a mistura foi concentrada por destilação a vácuo de 27 L. A mistura foi resfriada a 30°C e hidróxido de sódio 1 M (30 L; 30 mol) foi carregado. A mistura bifásica foi agitada durante 15 minutos. A fase aquosa inferior foi separada. Água (20 L) foi carregada e a mistura foi agitada durante 30 minutos. A fase aquosa inferior foi separada. A fase orgânica foi aquecida a 70°C, depois ácido (1S)-(+)-10-canforsulfônico (2,4 kg; 10,3 mol) foi carregado. A mistura foi agitada durante 1 hora a 70°C e depois desceu em rampa até 20°C durante 3 horas. O sólido foi filtrado, lavado com etanol (20 L) e secado em vácuo a 50°C para dar sal de ácido (1r,4r)-6’-bromo-4- metoxi-5’’-metil-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’- amina (+)-10-canforsulfônico (3,12 kg; 5,13 mol; teste 102%p/p por 1H RMN). Exemplo 6 (1r,1’R,4R)-4-metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop-1-in-1-il)piridin-3-il]-3’H- dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’-amina

[0053] Na2PdCl4 (1,4 g; 4,76 mmol) e 3- (di-terc-butilfosfônio) propano-sulfonato (2,6 g; 9,69 mmol) dissolvido em água (0,1 L) foi carregado para um vaso contendo sal de ácido (1r,4r)-6’-bromo-4-metoxi-5’’- metil-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’-amina (+)-10- canforsulfônico (1 kg; 1,58 mol), carbonato de potássio (0,763 kg; 5,52 mol) em uma mistura de 1-butanol (7,7 L) e água (2,6 L). A mistura é cuidadosamente tornada inerte com nitrogênio após o que ácido 5- (prop-1- inil) piridina-3-il borônico (0,29 kg; 1,62 mol) é carregado e a mistura é novamente cuidadosamente tornado inerte com nitrogênio. A mistura de reação é aquecida a 75°C e agitada durante 2 horas, depois análise mostrou uma conversão completa. A temperatura foi ajustada a 45°C. A agitação foi parada e a fase aquosa inferior foi separada. A camada orgânica foi lavada três vezes com água (3 x 4 L). A temperatura da reação foi ajustada a 22°C e o removedor Phosphonics SPM32 (0,195 kg) foi carregado e a mistura foi agitada durante a noite. O removedor foi filtrado e lavado com 1-butanol (1 L). A reação é concentrada por destilação sob pressão reduzida a 3 L. Acetato de butila (7,7 L) é carregado e a mistura é novamente concentrada até 3 L por destilação sob pressão reduzida. O acetato de butila (4,8 L) foi carregado e a mistura aquecida a 60°C. A mistura foi agitada durante 1 hora, depois foi concentrada a cerca de 4 L por destilação sob pressão reduzida. A temperatura foi fixada em 60°C e heptanos (3,8 L) adicionados durante 20 minutos. A mistura foi resfriada a 20°C durante 3 horas e depois deixada com agitação durante a noite. O sólido foi filtrado e lavado duas vezes com uma mistura 1: 1 de acetato de butila: heptano (2 x 2 L). O produto foi secado sob vácuo a 50°C para dar (1r,1’R,4R)-4-metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop-1-in-1-il)piridin-3- il]-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’-amina (0,562 kg; 1.36 mol; teste 100% p/p por 1H RMN). 1H RMN (500 MHz, DMSO-D6) δ ppm 0,97 (d, 1 H), 1,12-1,30 (m, 2 H), 1,37-1,51 (m, 3 H), 1,83 (d, 2 H), 2,09 (s, 3 H), 2,17 (s, 2 H), 2,89-3,12 (m, 3 H), 3,20 (s, 3 H), 6,54 (s, 2 H), 6,83 (s, 1 H), 7,40 (d, 1 H), 7,54 (d, 1 H), 7,90(s,1H), 8,51(d,1H), 8,67(d,1H) Exemplo 7 Preparação de sal de cansilato de (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5’’-metil-6’-[5- (prop-1-in-1-il)piridin-3-il]-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’- imidazol]-4’’-amina

[0054] 1,105 kg (1r, 1 'R, 4R) -4-metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop-1-in-1-il)piridin-3-il]-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’-amina foi dissolvido em 8,10 L de 2-propanol e 475 mL de água a 60°C. Então, 1,0 mol equivalente (622 g) de ácido (1S)-(+)-10 canforsulfônico foi carregado a 60°C. A suspensão foi agitada até que todo o ácido (1S)-(+)-10 canforsulfônico fosse dissolvido. Uma segunda porção de 2-propanol foi adicionada (6,0 L) a 60°C e, então, os conteúdos foram destilados até 4,3 L de destilado serem coletados. Então 9,1 L de heptano foram carregados a 65°C. Após uma espera de uma hora, o lote tornou-se opaco. Então, uma destilação adicional foi realizada a cerca de 75°C e 8,2 L de destilado foram coletados. O lote foi então resfriado a 20°C durante 2 horas e mantido nesta temperatura durante a noite. Então, o lote foi filtrado e lavado com uma mistura de 1,8 L de 2-propanol e 2,7 L de heptano. Finalmente, a substância foi secada em pressão reduzida e 50°C. O rendimento foi de 1,44 kg (83,6 % p/p), 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12,12 (1H, s), 9,70 (2H, d, J 40,2), 8,81 (1H, d, J 2,1), 8,55 (1H, d, J 1,7), 8,05 (1H, dd, J 2,1, 1,7), 7,77 (1H, dd, J 7,8, 1,2), 7,50 (2H, m), 3,22 (3H, s), 3,19 (1H, d, J 16,1), 3,10 (1H, d, J 16,1), 3,02 (1H, m), 2,90 (1H, d, J 14,7), 2,60 (1H, m), 2,41 (1H, d, J 14,7), 2,40 (3H, s), 2,22 (1H, m), 2,10 (3H, s), 1,91 (3H, m), 1,81 (1H, m), 1,77 (1H, d, J 18,1), 1,50 (2H, m), 1,25 (6H, m), 0,98 (3H, s), 0,69 (3H, s).

TESTES BIOLÓGICOS

[0055] O nível de atividade do sal de cansilato de (1r,1’R,4R)- 4- metoxi-5’’-metil-6’-[5-(prop-1-in-1-il)piridin-3-il]-3’H-dispiro[ciclohexano- 1,2’-inden-1’2’-imidazol]-4’’-amina pode ser testado usando os seguintes métodos.

Teste TR-FRET

[0056] A enzima β-secretase usada em TR-FRET é preparada como a seguir.

[0057] O cDNA para a parte solúvel da β-Secretase humana (AA 1 - AA 460) foi clonado usando o vetor de expressão de mamífero ASP2-Fc10-1- IRES-GFP-neoK. O gene foi fusionado ao domínio Fc de IgGl (etiqueta de afinidade) e estavelmente clonado em células HEK 293. O sBACE-Fc purificado foi armazenado em -80°C em 50 mM glicina pH 2,5, ajustado a pH 7,4 com 1 M Tris e alcançou uma pureza de 40%.

[0058] A enzima (forma truncada) foi diluída a 6 μg/mL (carga de 1,3 mg/mL) e substrato BACE1 TruPoint a 200 nM (carga 120 μM) em tampão de reação (NaAcetato, chaps, triton x-100, EDTA pH4,5). Enzima e composto em dimetilsulfóxido (concentração final de DMSO de 5%) foram misturados e pré-incubados durante 10 minutos em temperatura ambiente. Substrato foi então adicionado e a reação incubada durante 15 minutos em temperatura ambiente. A reação foi parada com a adição de 0,35 volume de solução de parada (acetato de Na, pH 9). A fluorescência do produto foi medida em uma leitora de placas Victor II com comprimentos de onda de excitação de 340 a 485 nm e comprimentos de onda de emissão de 590 a 615 nm. A concentração final da enzima foi de 2,7 μg/ml; a concentração final do substrato foi de 100 nM (Km de ~ 250 nM). O controle de dimetilsulfóxido, em vez do composto de teste, definiu o nível de atividade de 100% e 0% de atividade foi definido por cavidades faltando enzima (substituída com tampão de reação), ou por uma dose saturante de um inibidor conhecido, 2-amino-6- [3-(3-metoxifenil)fenil]-3,6-dimetil-5H-pirimidin-4-ona. Um inibidor de controle foi também usado nos testes de resposta a dose e tinha um IC50 de ~150 nM.

[0059] O sal de cansilato de (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5’’-metil-6’-[5- (prop-1-in-1-il)piridin-3-il]-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-inden-1’2’- imidazol]-4’’-amina tinha um IC50 médio de 0,2 nM neste teste.

Teste de liberação de sAPPβ

[0060] As células SH-SY5Y foram cultivadas em DMEM/F-12 com Glutamax, 10% FCS e 1% de aminoácidos não essenciais e criopreservadas e armazenadas a -140°C a uma concentração de células por frasco de 7,5- 9,5x106. As células são descongeladas e semeadas a uma concentração em torno de 10.000 células/cavidade em DMEM/F-12 com Glutamax, 10% de FCS e 1% de aminoácidos não essenciais para uma placa tratada com cultura de tecidos de 384 cavidades, 100 μL de suspensão de células /cavidade. As placas de células são então incubadas durante 7 a 24 horas a 37°C, 5% de CO2. O meio celular é removido, seguido da adição de 30 uL composto diluído em DMEM/F-12 com Glutamax, 10% de FCS, 1% de aminoácidos não essenciais e 1% PeSt a uma concentração final de 1% DMSO. Os compostos são incubados com as células durante 17 h (durante a noite) a 37°C, 5% de CO2. Placas de tipo Meso Scale Discovery (MSD) são usadas para a detecção de liberação de sAPPβ. Placas MSD sAPPβ são bloqueadas em 1% BSA em tampão de lavagem Tris (40 μL/cavidade) durante 1 h em agitação em temperatura ambiente e lavadas uma vez em tampão de lavagem Tris (40 μl/cavidade). 20 μL de meio são transferidos para as microplacas MSD sAPPβ pré-bloqueadas e lavadas, e as placas de células são ainda usadas em um teste ATP para medir a citotoxicidade. As placas MSD são incubadas com agitação em temperatura ambiente durante 2 h e o meio descartado. 10 μl de anticorpo de detecção são adicionados (1 nM) por cavidade seguido de incubação com agitação em temperatura ambiente durante 2 h e, então, descartados. 40 μL de tampão Read são adicionados por cavidade e as placas são lidas em um dispositivo SECTOR Imager.

TESTE DE ATP

[0061] Como indicado no teste de liberação sAPPβ, após a transferência de 20 μL de meio a partir das placas das células para a detecção de sAPPβ, as placas são usadas para analisar a citotoxicidade usando um kit de proliferação/citotoxicidade de células ViaLightTM Plus de Cambrex BioScience que mede ATP celular total. O teste é realizado de acordo com o protocolo do fabricante. Brevemente, 10 μL de reagente de lise celular são adicionados por cavidade. As placas são incubadas em temperatura ambiente durante 10 min. Dois minutos após a adição de 25 uL de reagente ATP ViaLightTM Plus reconstituído, a luminescência é medida. O limiar Tox é um sinal abaixo de 75% do controle.

Claims

1. Processo para preparar um sal de cansilato de (1r,1’R,4R)- 4-metoxi-5”-metil-6’-(5-prop-1-in-1-ilpiridin-3-il)-3’H-dispiro[ciclohexano- 1,2’-indeno-1’2”-imidazol]-4”-amina:

caracterizado pelo fato de que compreende a reação de (1r,1’R,4R)-4-metoxi- 5”-metil-6’-(5-prop-1-in-1-ilpiridin-3-il)-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’- indeno-1’2”-imidazol]-4”-amina:

com (1S)-(+)-10 ácido canforsulfônico.

2. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto (1r,1’R,4R)-4-metoxi-5”-metil-6’-(5-prop-1-in-1- ilpiridin-3-il)-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-indeno-1’2”-imidazol]-4”-amina foi preparado de acordo com um processo compreendendo a reação de sal de ácido (1r,4r)-6’-bromo-4-metoxi-5”-metil-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’- indeno-1’2”-imidazol]-4”-amina (+)-10-canforsulfônico:

com ácido 5-(prop-1-inil)piridina-3-il borônico:

na presença de um catalisador de metal de transição e uma base.

3. Processo de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o catalisador de metal de transição é tetracloropaladato de sódio (II) (Na2PdCl4).

4. Processo de acordo com a reivindicação 1 ou 3, caracterizado pelo fato de que a base é K2CO3.

5. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o referido sal de ácido (1r,4r)-6’-bromo-4- metoxi-5”-metil-3’H-dispiro[ciclohexano-1,2’-indeno-1’2”-imidazol]-4”-amina (+)-10-canforsulfônico foi preparado de acordo com um processo compreendendo a reação de (1r,4r)-6’-bromo-4-metoxi-5”-metil-3’H-dispiro [ciclohexano-1,2’-indeno-1’2’-imidazol]-4”(3”H)-tiona:

com amônia na presença de acetato de zinco di-hidratado, seguida da adição de ácido (1S)-(+)-10-canforsulfônico.

6. Processo de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o referido composto (1r,4r)-6’-bromo-4-metoxi-5”-metil-3’H- dispiro[ciclohexano-1,2’-indeno-1’2’-imidazol]-4”(3”H)-tiona é preparado de acordo com o processo compreendendo a reação de cloridrato de (1r,4r)-6’- bromo-4-metoxiespiro[ciclohexano-1,2’-inden]-1'(3'H)-imina:

com 2-oxopropanotioamida.

7. Processo de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que o composto cloridrato de (1r,4r)-6’-bromo-4- metoxiespiro[ciclohexano-1,2’-inden]-1'(3'H)-imina é reagido com 2- oxopropanotioamida na presença de trimetilortoformato.

8. Processo de acordo com a reivindicação 6 ou 7, caracterizado pelo fato de que o referido composto cloridrato de (1r,4r)-6‘- bromo-4-metoxiespiro[ciclohexano-1,2’-inden]-1’(3’H)-imina é preparado de acordo com um processo compreendendo a reação de (1r,4r)-6’-bromo-4- metoxispiro[ciclohexano-1,2’-inden]-1’(3’H)-ona:

, com terc-butilsulfinamida na presença de etóxido de titânio (IV), seguida da adição de um ácido.

9. Processo de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o referido composto (1r,4r)-6’-bromo-4- metoxispiro[ciclohexano-1,2’-inden]-1’(3’H)-ona é preparado de acordo com um processo compreendendo a reação de 6’-bromospiro[ciclohexano-1,2’- indeno]-1’,4(3’H)-diona:

com complexo de borano terc-butilamina, seguida da adição de metanossulfonato de metila na presença de cloreto de tetrabutilamônio e hidróxido de sódio.

10. Processo de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que o referido composto 6’-bromospiro[ciclohexano-1,2’- indeno]-1’,4(3’H)-diona é preparado de acordo com um processo compreendendo a reação de 6-bromo-1-indanona:

com acrilato de metila na presença de terc-butóxido de potássio.