PT2864316T

PT2864316T - Sal de camsilato de (1r,1¿r,4r)-4-metoxi-5¿¿-metil-6¿- [5¿(prop-1-in-1-il)piridina-3-il]-3¿h-dispiro[ciclohexano- 1,2¿-indeno-1¿2¿-imidazola]-4¿¿-amina e suas formas cristalinas para o tratamento de patologias relacionadas com a a[beta] como por exemplo a doença de alzheimer

Info

Publication number: PT2864316T
Application number: PT137334157T
Authority: PT
Inventors: Robert Stewart Craig
Original assignee: Astrazeneca Ab
Priority date: 2012-06-21
Filing date: 2013-06-20
Publication date: 2017-02-24
Also published as: MX354214B; IL236131A0; PL2864316T3; US20140031379A1; AU2013279109B2; CR20160202A; TN2014000491A1; BR122016014302B1; AU2013279109A1; CA2875589A1; ZA201500408B; HUE033376T2; MA37666B1; PH12014502803A1; US10548882B2; RS55815B1; EP2864316B1; JP2015520221A; CY1119505T1; RU2014148305A

Description

DESCRIÇÃO "SAL DE CAMSILATO DE (IR,l'R,4R)-4-METOXI-5''-METIL-6'-[5'(PROP-l-IN-l-IL)PIRIDINA-3-IL]-3Ή-DISPIRO[CICLOHEXANO-1,2'-INDENO-1'2'-IMIDAZOLA]-4''-AMINA E SUAS FORMAS CRISTALINAS PARA O TRATAMENTO DE PATOLOGIAS RELACIONADAS COM A A[BETA] COMO POR EXEMPLO A DOENÇA DE ALZHEIMER" Área da invenção A presente invenção está relacionada com um ácido canforsulfónico (camsilato) de (lr,1'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5'(prop-l-in-l-il)piridina-3-il]-3'H dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4''-amina, e com composições farmacêuticas que contêm o sal. Também são divulgados métodos terapêuticos que usam o sal para o tratamento e/ou prevenção de patologias relacionadas com a Αβ, tais como sindrome de Down, angiopatia β-amiloide, tal como, mas não se limitando à angiopatia amiloide cerebral ou hemorragia cerebral hereditária, distúrbios associados ao défice cognitivo, tal como mas não se limitando ao MCI ("défice cognitivo ligeiro"), doença de Alzheimer, perda de memória, sintomas de défice de atenção associados à doença de Alzheimer, neurodegeneração associada a doenças como a doença de Alzheimer ou demência incluindo demência de origem vascular e degenerativa mista, demência pré-senil, demência senil e demência associada à doença de Parkinson, paralisia supranuclear progressiva ou degeneração corticobasal.

Antecedentes 0 evento neuropatológico principal que distingue a doença de Alzheimer (AD) é a deposição do péptido β-amiloide (Αβ) de 40-42 resíduos, no parênquima cerebral e vasos cerebrais. Uma grande quantidade de dados genéticos, bioquímicos e in vivo suporta um papel fundamental de Αβ na cascata patológica que, eventualmente, leva à AD. Os doentes geralmente apresentam sintomas iniciais (frequentemente perda de memória) na sua sexta ou sétima década de vida. A doença progride com o aumento da demência e elevada deposição de Αβ. Em paralelo, uma forma hiperfosforilada da proteína tau, associada ao microtúbulo que se acumula dentro dos neurónios, levando a uma pletora de efeitos deletérios sobre a função neuronal. A hipótese de trabalho predominante sobre a relação temporal entre patologias da Αβ e tau afirma que a deposição de Αβ precede a agregação de tau em modelos humanos e animais da doença. Neste contexto, vale a pena notar que a natureza molecular exata de Αβ, mediando esta função patológica é atualmente um assunto sob estudo intenso. Provavelmente, existe um continuum de espécies tóxicas que variam desde oligómeros de Αβ de ordem inferior até montagens supramoleculares tais como fibrilas de Αβ. O péptido Αβ é um fragmento integral da proteína APP tipo I (proteína precursora de amiloide Αβ), uma proteína que se expressa ubiquamente nos tecidos humanos. Uma vez que a Αβ solúvel pode ser encontrada tanto no plasma como no líquido cefalorraquidiano (CSF), e no meio de células cultivadas, APP tem de sofrer proteólise. Existem três clivagens principais de APP que são relevantes para a patobiologia da AD, as chamadas clivagens α,β e γ. A clivagem a, que ocorre aproximadamente no meio do domínio da Αβ na APP, é executada pelas metaloproteases ADAM10 ou ADAM17 (a última também conhecida como TACE). A clivagem β, que ocorre no N-terminal de Αβ, é gerada pela protease aspártica transmembranar BACE-1 (enzima responsável pela clivagem da APP no local β). A clivagem γ, que gera o C-terminal de Αβ e subsequente libertação do péptido, é efetuada por uma protease aspártica multi-subunidade denominada γ-secretase. A clivagem ADAM10/17 seguida pela clivagem γ-secretase resulta na libertação do péptido p3 solúvel, um fragmento de Αβ truncado no N-terminal que não forma depósitos amiloides em humanos. Esta via proteólica é geralmente designada por via não amiloidogénica. Clivagens consecutivas por BACE-1 e γ-secretase geram o péptido Αβ intacto, por isso este esquema de processamento foi designado por via amiloidogénica. Com este conhecimento, é possível imaginar duas possíveis vias para diminuir a produção de Αβ: estimulando o processamento não amiloidogénico, ou inibindo ou modulando o processamento amiloidogénico. Este pedido centra-se na última estratégia, inibição ou modulação do processamento amiloidogénico.

As placas amiloidogénicas e a angiopatia amiloide vascular também caracterizam os cérebros de doentes com Trissomia 21 (Síndrome de Down), Hemorragia Cerebral Hereditária com Amiloidose do tipo Holandesa (HCHWA-D), e outras doenças neurodegenerativas. Entrelaçados neurofibrilares também ocorrem em outras doenças neurodegenerativas incluindo distúrbios indutores de demência (Varghese, J., et al, Journal of Medicinal Chemistry, 2003, 46, 4625-4630). Os depósitos de β-amiloide são predominantemente um agregado de péptido Αβ que, por sua vez, é um produto da proteólise da proteína percursora de amiloide (APP). Mais especificamente, o péptido Αβ resulta da clivagem da APP no C-terminal por uma ou mais γ-secretases, e no N-terminal pela enzima β-secretase (BACE), também conhecida por protease aspártica ou Asp2 ou enzima responsável pela clivagem da APP no local β (BACE) , como parte da via β-amiloidogénica. A atividade de BACE correlaciona-se diretamente com a geração do péptido Αβ a partir da APP (Sinha, et ai, Nature, 1999, 402, 537-540), e estudos indicam, cada vez mais, que a inibição de BACE inibe a produção do péptido Αβ (Roberds, S. L., et ai, Human Molecular Genetics, 2001, 10, 1317-1324). A BACE é uma proteina tipo I ligada à membrana que é sintetizada como uma pró-enzima parcialmente ativa, e expressa-se abundantemente no tecido cerebral. Pensa-se que representa a principal atividade β-secretase, e é considerada como passo limitante na produção do péptido β-amiloide (Αβ) Fármacos que reduzem ou bloqueiam a atividade de BACE devem, portanto, reduzir os niveis de Αβ e os niveis de fragmentos de Αβ no cérebro, ou noutro local no qual a Αβ ou os seus fragmentos se depositam e, assim, retardam a formação de placas amiloides e a progressão de AD ou outras doenças que envolvem a deposição de Αβ ou dos seus fragmentos. A BACE é, deste modo, uma importante candidata para o desenvolvimento de fármacos como um tratamento e/ou profilaxia de patologias relacionados com a Αβ, tais como sindrome de Down, angiopatia β-amiloide, tal como mas não se limitando à angiopatia amiloide cerebral ou hemorragia cerebral hereditária, distúrbios associados ao défice cognitivo, tal como mas não se limitando ao MCI ("défice cognitivo ligeiro"), doença de Alzheimer, perda de memória, sintomas de défice de atenção associados à doença de Alzheimer, neurodegeneração associada a doenças como a doença de Alzheimer ou demência incluindo demência de origem vascular e degenerativa mista, demência pré-senil, demência senil e demência associada à doença de Parkinson, paralisia supranuclear progressiva ou degeneração corticobasal.

Seria útil, assim, inibir a deposição de Αβ e das suas porções por inibição de BACE através de inibidores tais como os compostos aqui fornecidos. 0 potencial terapêutico da inibição da deposição de Αβ tem motivado muitos grupos a isolar e caracterizar as enzimas secretases e identificar os seus potenciais inibidores, como discutido em WO 2011/002408 AI e WO 2012/087237 AI.

Breve descrição da figura A figura 1 é um difratograma de raios-X em pó de um sal de camsilato de (lr,l'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5' (prop-1-in-l-il)piridina-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2' -indeno-1'2'-imidazola]-4''-amina.

Descrição detalhada da invenção A presente invenção refere-se a um sal de camsilato do composto (lr,1'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5'(prop-l-in-1-il)piridina-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2' -indeno-1'2' -imidazola]-4''-amina. O sal de camsilato de (lr,1'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5' (prop-l-in-l-il)piridina-3-il]-3Ή-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4' ' -amina pode, alternativamente, ser descrito como um sal de ácido canforsulfónico de (lr,l'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5-(prop-l-in-l-il)piridina-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4''-amina.

Uma forma de realização da presente invenção é um sal de camsilato do composto (lr,l'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5-(prop-l-in-l-il)piridina-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4''-amina, caracterizado por fornecer um padrão de difração de raios-X em pó (XRPD), exibindo substancialmente os seguintes picos com valores de espaçamento d como representados na Tabela 1:

Tabela 1: Picos identificados na difração de raios-X em pó

Outra forma de realização da presente invenção é um sal de camsilato do composto (lr,l'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5-(prop-l-in-l-il)piridina-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4''-amina, caracterizado por fornecer um padrão de difração de raios-X em pó, exibindo substancialmente os seguintes picos muito fortes, fortes e médios com valores de espaçamento d como representados na Tabela 2:

Tabela 2:

Picos identificados na difração de raios-X em pó

Como utilizado aqui, o termo sal de camsilato do composto (lr,1'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5-(prop-l-in-1-il)piridina-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2' -indeno-1'2' -imidazola]-4''-amina também engloba todos os solvatos e co-cristais destes.

Sais alternativos do composto (lr,1'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5-(prop-l-in-l-il)piridina-3-il]-3 Ή-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4''-amina incluem os sais succinato, hidroclórico, fosfato, sulfato, fumarato e 1,5-naptalenedisulfonato.

Num aspeto particular da invenção, é fornecida uma composição farmacêutica compreendendo como ingrediente ativo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um sal de camsilato do composto (lr,l'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5-(prop-l-in-l-il)piridina-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1' 2'-imidazola]-4''-amina, em associação com excipientes, veiculos ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis.

Noutro aspeto da invenção, é fornecido um sal de camsilato do composto (lr,l'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5-(prop-l-in-l-il)piridina-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4''-amina para a sua utilização como medicamento.

Descreve-se a utilização de um sal de camsilato do composto (lr,1'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5-(prop-l-in-1-il)piridina-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4''-amina, como um medicamento para tratar ou prevenir uma patologia relacionada com a Αβ.

Descreve-se a utilização de um sal de camsilato do composto (lr,1'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5-(prop-l-in-1-il)piridina-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2' - indeno-1'2' -imidazola]-4''-amina, como um medicamento para tratar ou prevenir uma patologia relacionada com a Αβ, em que a referida patologia relacionada com a Αβ é sindrome de Down, uma angiopatia β-amiloide, angiopatia amiloide cerebral, hemorragia cerebral hereditária, um distúrbio associado ao défice cognitivo, MCI ("défice cognitivo ligeiro"), doença de Alzheimer, perda de memória, sintomas de défice de atenção associados à doença de Alzheimer, neurodegeneração associada à doença de Alzheimer, demência de origem vascular mista, demência de origem degenerativa, demência pré-senil, demência senil, demência associada à doença de

Parkinson, paralisia supranuclear progressiva ou degeneração corticobasal.

Descreve-se o uso de um sal de camsilato do composto (lr,1'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5-(prop-l-in-1-il)piridina-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2' -indeno-1'2' -imidazola]-4''-amina, como um medicamento para tratar ou prevenir a doença de Alzheimer.

Noutro aspeto da invenção, é fornecido o uso de um sal de camsilato do composto (lr,l'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5-(prop-l-in-l-il)piridina-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4''-amina, na produção de um medicamento para tratar ou prevenir uma patologia relacionada com a Αβ.

Noutro aspeto da invenção, é fornecido o uso de um sal de camsilato do composto (lr,l'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5-(prop-l-in-l-il)piridina-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4''-amina, na produção de um medicamento para tratar ou prevenir uma patologia relacionada com a Αβ, em que a referida patologia relacionada com a Αβ é sindrome de Down, uma angiopatia β-amiloide, angiopatia amiloide cerebral, hemorragia cerebral hereditária, um distúrbio associado ao défice cognitivo, MCI ("défice cognitivo ligeiro"), doença de Alzheimer, perda de memória, sintomas de défice de atenção associados à doença de Alzheimer, neurodegeneração associada à doença de Alzheimer, demência de origem vascular mista, demência de origem degenerativa, demência pré-senil, demência senil, demência associada à doença de Parkinson, paralisia supranuclear progressiva ou degeneração corticobasal.

Noutro aspeto da invenção, é proporcionado o uso de um sal de camsilato do composto (lr,1'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'- [5 - (prop-l-in-l-il)piridina-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4''-amina, na produção de um medicamento para tratar ou prevenir a doença de Alzheimer.

Descreve-se um método para inibir a atividade de BACE compreendendo o contacto da referida BACE com um sal de camsilato do composto (lr,l'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5-(prop-l-in-l-il)piridina-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4' '-amina.

Descreve-se um método para tratar ou prevenir uma patologia relacionada com a Αβ num doente que dele necessite compreendendo administrar ao referido doente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um sal de camsilato do composto (lr,1'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5-(prop-l-in-1-il)piridina-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4''-amina.

Descreve-se um método para tratar ou prevenir uma patologia relacionada com a Αβ num doente que dele necessite compreendendo administrar ao referido doente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um sal de camsilato de composto (lr,1'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5-(prop-l-in-1-il)piridina-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4''-amina, em que a referida patologia relacionada com a Αβ é sindrome de Down, uma angiopatia β-amiloide, angiopatia amiloide cerebral, hemorragia cerebral hereditária, um distúrbio associado ao défice cognitivo, MCI ("défice cognitivo ligeiro"), doença de Alzheimer, perda de memória, sintomas de défice de atenção associados à doença de Alzheimer, neurodegeneração associada à doença de Alzheimer, demência de origem vascular mista, demência de origem degenerativa, demência pré-senil, demência senil, demência associada à doença de Parkinson, paralisia supranuclear progressiva ou degeneração corticobasal.

Descreve-se um método para tratar ou prevenir a doença de Alzheimer num doente que dele necessite compreendendo administrar ao referido doente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um sal de camsilato do composto (lr,1'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5-(prop-l-in-1-il)piridina-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4''-amina.

Descreve-se um método para inibir a atividade de BACE compreendendo o contacto da BACE com um sal de camsilato do composto (lr,1'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5-(prop-l-in-1-il)piridina-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2' -imidazola]-4''-amina. Pensa-se que BACE representa a principal atividade β-secretase, e é considerada como passo limitante na produção da proteina β-amiloide (Αβ). Assim, a inibição de BACE através de inibidores tais como os compostos aqui apresentados seria útil para inibir a deposição de Αβ e das suas porções. Uma vez que a deposição de Αβ e das suas porções está relacionada com doenças tais como a doença de Alzheimer, BACE é uma candidata importante para o desenvolvimento de fármacos como um tratamento e/ou profilaxia de patologias relacionadas com a Αβ tais como sindrome de Down e a angiopatia β-amiloide, tal como mas não se limitando à angiopatia amiloide cerebral, hemorragia cerebral hereditária, distúrbios associados ao défice cognitivo, tal como mas não se limitando ao MCI ("défice cognitivo ligeiro"), doença de Alzheimer, perda de memória, sintomas de défice de atenção associados à doença de Alzheimer, neurodegeneração associada a doenças como a doença de Alzheimer ou demência incluindo demência de origem vascular e degenerativa mista, demência pré-senil, demência senil e demência associada à doença de Parkinson, paralisia supranuclear progressiva ou degeneração corticobasal.

Descreve-se um método para a profilaxia de patologias relacionadas com a Αβ tais como sindrome de Down e angiopatia β-amiloide, tal como mas não se limitando à angiopatia amiloide cerebral, hemorragia cerebral hereditária, distúrbios associados ao défice cognitivo, tal como mas não se limitando ao MCI ("défice cognitivo ligeiro"), doença de Alzheimer, perda de memória, sintomas de défice de atenção associados à doença de Alzheimer, neurodegeneração associada a doenças como a doença de Alzheimer ou demência incluindo demência de origem vascular e degenerativa mista, demência pré-senil, demência senil e demência associada à doença de Parkinson, paralisia supranuclear progressiva ou degeneração corticobasal compreendendo administar a um mamifero (incluindo humanos) uma quantidade terapeuticamente eficaz de um sal de camsilato do composto (lr,l'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5-(prop-l-in-l-il)piridina-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4''-amina.

Descreve-se um método para tratar ou prevenir patologias relacionadas com a Αβ tais como sindrome de Down e angiopatia β-amiloide, tal como mas não se limitando à angiopatia amiloide cerebral, hemorragia cerebral hereditária, distúrbios associados ao défice cognitivo, tal como mas não se limitando ao MCI ("défice cognitivo ligeiro"), doença de Alzheimer, perda de memória, sintomas de défice de atenção associados à doença de Alzheimer, neurodegeneração associada a doenças como a doença de Alzheimer ou demência incluindo demência de origem vascular e degenerativa mista, demência pré-senil, demência senil e demência associada à doença de Parkinson, paralisia supranuclear progressiva ou degeneração corticobasal, administrando a um mamifero (incluindo humanos) um sal de camsilato do composto (lr,l'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5-(prop-l-in-l-il)piridina-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano- 1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4''-amina e um agente potenciador da cognição e/ou da memória.

Descreve-se um método para tratar ou prevenir patologias relacionadas com a Αβ tais como sindrome de Down e angiopatia β-amiloide, tal como mas não se limitando à angiopatia amiloide cerebral, hemorragia cerebral hereditária, distúrbios associados ao défice cognitivo, tal como mas não se limitando ao MCI ("défice cognitivo ligeiro"), doença de Alzheimer, perda de memória, sintomas de défice de atenção associados à doença de Alzheimer, neurodegeneração associada a doenças como a doença de Alzheimer ou demência incluindo demência de origem vascular e degenerativa mista, demência pré-senil, demência senil e demência associada à doença de Parkinson, paralisia supranuclear progressiva ou degeneração corticobasal, administrando a um mamifero (incluindo humanos) um sal de camsilato do composto (lr,l'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5-(prop-l-in-l-il)piridina-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4''-amina e um inibidor da colinesterase ou um agente anti-inflamatório.

Descreve-se um método para tratar ou prevenir patologias relacionadas com a Αβ tais como sindrome de Down e angiopatia β-amiloide, tal como mas não se limitando à angiopatia amiloide cerebral, hemorragia cerebral hereditária, distúrbios associados ao défice cognitivo, tal como mas não se limitando ao MCI ("défice cognitivo ligeiro"), doença de Alzheimer, perda de memória, sintomas de défice de atenção associados à doença de Alzheimer, neurodegeneração associada a doenças como a doença de Alzheimer ou demência incluindo demência de origem vascular e degenerativa mista, demência pré-senil, demência senil e demência associada à doença de Parkinson, paralisia supranuclear progressiva ou degeneração corticobasal, ou qualquer outra doença, distúrbio, ou condição aqui descrita, administrando a um mamífero (incluindo humanos) um composto da presente invenção e um agente antipsicótico atípico. Os agentes antipsicóticos atípicos incluem, mas não se limitam a, Olanzapina (comercializado como Zyprexa), Aripiprazol (comercializado como Abilify), Risperidona (comercializado como Risperdal), Quetiapina (comercialicado como Seroquel), Clozapina (comercializado como Clozaril), Ziprasidona (comercializado como Geodon) e

Olanzapina/Fluoxetina (comercializado como Symbyax).

Em algumas formas de realização, o mamífero ou ser humano tratado com um sal de camsilato do composto (lr,1'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5-(prop-l-in-l-il)piridina-3-il]-3Ή-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4''-amina foi diagnosticado com uma doença ou distúrbio em particular, tal como os aqui descritos. Nesses casos, o mamífero ou ser humano tratado tem necessidade de taltratamento. Contudo, é necessário realizar um diagnóstico prévio.

As definições estabelecidas neste pedido pretendem esclarecer termos usados ao longo deste pedido. 0 termo "aqui" refere-se a todo este pedido.

Como usado aqui, "farmaceuticamente aceitável" é empregue aqui para referir-se aos compostos, materiais, composições, e/ou formas de dosagem que, no âmbito de uma boa avaliação médica, são adequados para utilização em contacto com os tecidos de seres humanos e animais sem toxicidade excessiva, irritação, resposta alérgica, ou outro problema ou complicação, compatível com uma relação benefício/risco razoável. 0 tratamento anti-demência definido aqui pode ser aplicado como uma terapia única ou pode envolver, para além dos compostos da invenção, quimioterapia convencional. Esta quimioterapia pode incluir uma ou mais das seguintes categorias de agentes: inibidores da acetilcolinesterase, agentes anti-inflamatórios, agentes potenciadores da cognição e/ou da memória ou agentes anti-psicóticos atipicos.

Este tratamento conjunto pode ser alcançado mediante dosagem adjunta, concomitante, simultânea, sequencial ou separada dos componentes individuais do tratamento. Esta combinação de produtos utiliza os compostos desta invenção. A quimioterapia convencional adicional pode incluir uma ou mais das seguintes categorias de agentes: (i) anti-depressivos, (ii) anti-psicóticos atipicos, (iii) anti-psicóticos, (iv) ansioliticos, (v) anticonvulsivos, (vi) terapias de Alzheimer usadas atualmente, (vii) terapias de Parkinson, (viii) terapias de enxaqueca, (ix) terapias de derrame, (x) terapias de incontinência urinária, (xi) terapias de dor neuropática, (xii) terapias de dor nociceptiva, (xiii) terapias de insónia e (xiv) estabilizadores de humor. Tratamentos conhecidos para as terapias acima mencionadas podem ser utilizados em combinação com a invenção aqui descrita.

Esta combinação de produtos usa um sal de camsilato do composto (lr,1'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5-(prop-l-in-1-il)piridina-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4''-amina dentro da gama de dosagem descrita aqui e outro composto ou compostos farmaceuticamente ativos dentro de gamas de dosagem aprovadas e/ou determinadas por uma pessoa especializada na técnica.

Os compostos da presente invenção podem ser administrados por via oral, parentérica, bucal, vaginal, retal, por inalação, insuflação, sublingual, intramuscular, subcutânea, tópica, intranasal, intraperitoneal, intratoral, intravenosa, epidural, intratecal, intracerebroventricular e por injeção nas articulações. A dosagem depende da via de administração, da gravidade da doença, da idade e peso do doente e de outros fatores geralmente considerados pelo médico de serviço, aquando da determinação do regime individual e do nivel de dosagem mais adequado para um doente em particular.

Uma quantidade eficaz de um composto da presente invenção para utilização em terapia de demência é uma quantidade suficiente para aliviar sintomaticamente um animal de sangue quente, particularmente um humano, dos sintomas de demência, para retardar a progressão da demência, ou para reduzir em doentes com sintomas de demência o risco de piorar.

Para além dos compostos da presente invenção, a composição farmacêutica desta invenção pode também conter, ou ser coadministrada (simultaneamente ou sequencialmente) com um ou mais agentes farmacológicos de valor no tratamento de uma ou mais doenças aqui referidas. A quantidade de um sal de camsilato do composto (lr,1'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5-(prop-l-in-1-il)piridina-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4''-amina a ser administrada varia de acordo com o doente a ser tratado e varia de aproximadamente 10 ng/Kg do peso corporal até 100 mg/Kg do peso corporal por dia e preferencialmente de 10 ng/Kg a 10 mg/Kg por dia. Por exemplo, as dosagens podem ser facilmente comprovadas pelos especialistas na técnica a partir desta descrição e do conhecimento na técnica. Assim, o especialista na técnica pode facilmente determinar a quantidade de composto e aditivos opcionais, veiculos, e/ou transportadores em composições a serem administradas nos métodos da invenção. Métodos de preparação

Sal de camsilato de (lr,1'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5-(prop-l-in-l-il)piridina-3-il]-3 Ή-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4" -amina

Um sal de camsilato do composto (lr,1'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6' - [5 - (prop-l-in-l-il)piridina-3-il] -3Ή-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4' ' -amina pode ser obtido a partir de uma solução de (lr,1'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5-(prop-l-in-l-il)piridina-3-il]-3Ή-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4''-amina num solvente adequado, como por exemplo 2-propanol, acetonitrilo, ou acetona ou misturas destes com água, seguido da mistura da solução obtida com (IS) -( + ) 10-ácido canforsulfónico diretamente ou dissolvido num solvente adequado, como por exemplo 2-propanol ou água, a uma temperatura entre a temperatura ambiente e 80°C. A cristalização pode ser obtida por evaporação do solvente e/ou por arrefecimento da solução ou diretamente como uma cristalização da reação do sal. Podem ser usados cristais-.semente para iniciar a cristalização. As sementes podem ser preparadas a partir do próprio lote por amostragem de um pequeno volume da solução e depois por arrefecimento rápido para induzir a cristalização. Os cristais são então adicionados ao lote como sementes.

Análise XRPD: A análise de difração de raios-X em pó (XRPD) foi realizada em amostras preparadas de acordo com métodos estandardizados, como por exemplo os descritos em Giacovazzo, C. et al (1995), Fundamentals of Crystallography, Oxford University Press; Jenkins, R. and Snyder, R. L. (1996), Introduction to X-Ray Powder Diffractometry, John Wiley & Sons, New York; Bunn, C. W. (1948), Chemical Crystallography, Clarendon Press, London; ou Klug, Η. P. & Alexander, L. E. (1974), X-ray Diffraction Procedures, John Wiley and Sons, New York. As análises de difração de raios-X foram realizadas usando um difractómetro PANanalytical X'Pert PRO MPD durante 96 minutos de 1 a 60° 2Θ. Os valores de distância XRPD podem variar no intervalo ±2 na última casa decimal.

As intensidades relativas são derivadas de difratogramas medidos com fendas variáveis.

As intensidades relativas medidas versus o pico mais forte são apresentadas como muito fortes (vs) acima de 50%, como fortes (s) entre 25 e 50%, como médias (m) entre 10 e 25%, como fracas (w) entre 5 e 10% e como muito fracas (vw) abaixo de 5% de altura relativa do pico. Será determinado por um especialista na técnica que as intensidades de XRPD podem variar entre diferentes amostras e diferentes preparações de amostras por diversas razões incluindo a orientação preferencial. Também será determinado por um especialista na técnica que pequenas deslocações no ângulo medido e, por conseguinte, no espaçamento d podem ocorrer por uma variedade de razões incluindo uma variação do nível de superfície da amostra no difractómetro.

Exemplos Exemplo 1 6'-bromospiro[ciclohexano-1,2'-indeno]-l',4(3'H)-diona

Foi carregado tert-butoxida de potássio (223 g; 1,99 mol) a um reator de 100 L contendo uma mistura agitada de 6-bromo-1-indanona (8,38 Kg; 39,7 mol) em THF (16,75 L) a 20-30 °C. Foi de seguida carregado acrilato de metilo (2,33 L; 25,8 mol) à mistura durante 15 minutos mantendo a temperatura entre 20-30 °C. Uma solução de tert-butoxida de potássio (89,1 g; 0,79 mol) dissolvida em THF (400 mL) foi adicionada após a qual foi adicionado acrilato de metilo (2,33 L; 25,8 mol) durante 20 minutos a 20-30 °C. Uma terceira porção de tert-butoxida de potássio (90 g; 0,80 mol) dissolvida em THF (400 mL) foi adicionada, seguida de uma terceira adição de acrilato de metilo (2,33 L; 25,8 mol) durante 20 minutos a 20-30 °C. Foi carregado tert- butoxida de potássio (4,86 Kg; 43,3 mol) dissolvido em THF (21,9 L) ao reator durante 1 hora a 20-30 °C. A reação foi aquecida a aproximadamente 65 °C e foram removidos 23 L de solvente por destilação. A temperatura da reação foi reduzida a 60 °C e foi adicionado 50% de hidróxido de potássio aquoso (2,42 L; 31,7 mol) dissolvido em água (51,1 L) à mistura durante 30 minutos a 55-60 °C, após os quais a mistura foi agitada durante 6 horas a 60 °C e arrefecida a 20 °C durante 2 horas. Após agitação durante 12 horas a 20 °C, o material sólido foi filtrado, lavado duas vezes com uma mistura de água (8,4 L) e THF (4,2 L) e depois seco a 50 °C sob vácuo para dar origem a 6'- bromospiro[ciclohexano-1,2'-indeno]-l',4(3'H)-diona (7,78

Kg; 26,6 mol). NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,78 - 1,84 (m, 2H) , 1,95 (td, 2H) , 2,32 - 2,38 (m, 2H) , 2,51 - 2,59 (m, 2H) , 3,27 (s, 2H) , 7,60 (d, 1H) , 7,81 (m, 1H) , 7,89 (m, 1H) .

Exemplo 2 (lr,4r)-6'-bromo-4-metoxispiro[ciclohexano-1,2'-indeno]-1 ' (3 Ή)-ona

O complexo tert-butilamina de borano (845 g; 9,7 mol) dissolvido em DCM (3,8 L) foi carregado a uma suspensão de 6'-bromospiro[ciclohexano-1,2'-indeno]-l',4(3'H)-diona (7,7 Kg; 26,3 mol) em DCM (42,4 L) a aproximadamente 0-5 °C por mais de 25 minutos aproximadamente. A reação foi deixada em agitação a 0-5 °C durante 1 hora após a qual uma análise confirmou que a conversão foi >98%. Foi carregada uma

solução preparada a partir de cloreto de sódio (2,77 Kg), água (13,3 L) e ácido clorídrico a 37% (2,61 L; 32 mol). A mistura foi aquecida até aproximadamente 15 °C e as fases foram separadas após a sua colocação em camadas. A fase orgânica foi recolocada no reator, juntamente com metanosulfonato de metilo (2,68 L; 31,6 mol) e cloridrato de tetrabutilamónio (131 g; 0,47 mol) e a mistura foi vigorosamente agitada a 20 °C. De seguida, foi carregado hidróxido de sódio a 50% (12,5 L; 236 mol) à mistura de reação agitada vigorosamente durante mais de 1 hora aproximadamente e a reação é deixada em agitação vigorosa durante a noite a 20 °C. Foi adicionada água (19 L) e a fase aquosa foi descartada após separação. A camada orgânica foi aquecida até aproximadamente 40 °C e foram destilados 33 L de solvente. Foi carregado etanol (21 L) e a destilação foi retomada com um aumento de temperatura (22 L destilados até 79 °C) . Foi carregado etanol (13,9 L) a aproximadamente 75 °C. Foi carregada água (14,6 L) por mais de 30 minutos mantendo a temperatura entre 72-75 °C.

Aproximadamente 400 mL da solução são retirados para um frasco de polietileno de 500 mL e a amostra é cristalizada espontaneamente. O lote foi arrefecido a 50 °C quando a amostra de suspensão cristalizada foi novamente adicionada à solução. A mistura foi arrefecida a 40 °C. A mistura foi arrefecida a 20 °C durante 4 horas, após as quais foi agitada durante a noite. O sólido foi filtrado, lavado com uma mistura de etanol (6,6 L) e água (5 L) e seco a 50 °C sob vácuo para dar origem a (lr,4r)-6'-bromo-4-metoxispiro[ciclohexano-1,2'-indeno]-1'(3'H)-ona (5,83 Kg; 18,9 mol) XH NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,22-1,32 (m, 2H) , 1,41 - 1,48 (m, 2H) , 1,56 (td, 2H) , 1, 99 - 2, 07 (m, 2H) , 3,01 (s, 2H) , 3,16 - 3,23 (m, 1H) , 3,27 (s, 3H) , 7,56 (d, 1H), 7,77 (d, 1H), 7,86 (dd, 1H).

Exemplo 3

Hidrocloridrato (lr,4r)-6'-Bromo-4-metoxispiro[ciclohexano-1,2'-indeno]-1'(3'H)-imina

Foi carregado (lr,4r)-6'-bromo-4-metoxispiro[ciclohexano-1,2'-indeno]-1' (3'H)-ona a um reator de 100 L a temperatura ambiente seguido de etóxido de titânio (IV) (7,4 L; 35,4 mol) e uma solução de tert-butilsulfinamida (2,94 Kg; 23,0 mol) em 2-metiltetraidrofurano (13,7 L). A mistura foi agitada e aquecida a 82 °C. Após 30 minutos a 82 °C, a temperatura foi aumentada (até aos 97 °C) e foram destilados 8 L de solvente. A reação foi arrefecida a 87 °C e foi adicionado 2-metiltetraidrofurano (8,2 L) dando uma temperatura de reação de 82 °C. A reação foi deixada em agitação durante a noite a 82 °C. A temperatura da reação foi aumentada (até aos 97 °C) e foram destilados 8,5 L de solvente. A reação foi arrefecida a 87 °C e foi adicionado 2-metiltetraidrofurano (8,2 L) dando uma temperatura final de 82 °C. Após 3,5 horas, a temperatura de reação foi aumentada (até aos 97 °C) e foram destilados 8 L de solvente. A reação foi arrefecida a 87 °C e foi adicionado 2-metiltetraidrofurano (8,2 L) dando uma temperatura de reação de 82 °C. Após 2 horas, a temperatura de reação foi aumentada (até aos 97 °C) e foram destilados 8,2 L de solvente. A reação foi arrefecida a 87 °C e foi adicionado 2-metiltetraidrofurano (8,2 L) dando uma temperatura de reação de 82 °C. A reação foi agitada durante a noite a 82 °C. A temperatura de reação foi aumentada (até aos 97 °C) e foram destilados 8 L de solvente. A reação foi arrefecida até aos 25 °C. Foi carregado diclorometano (16,4 L) . Para um reator separado foi adicionada e agitada vigorosamente água (30 L) e foi adicionado sulfato de sódio (7,54 Kg) e a solução resultante foi arrefecida a 10 °C. Foi adicionado ácido sulfúrico (2,3 L; 42,4 mol) à solução de água e a temperatura foi ajustada para os 20 °C. Foram retirados e armazenados 6 L da solução ácida de água para serem usados posteriormente. A mistura de reação orgânica foi carregada à solução ácida de água por mais de 5 minutos com boa agitação. O recipiente de reação orgânica foi lavado com diclorometano (16,4 L), e a solução de lavagem de diclorometano foi também adicionada à água ácida. A mistura foi agitada durante 15 minutos e, de seguida, deixou-se em repouso durante 20 minutos. A fase aquosa inferior foi escoada, e foram adicionados os 6 L de água ácida previamente armazenados seguidos de água (5,5 L) . A mistura foi agitada durante 15 minutos e deixou-se em repouso durante 20 minutos. A camada orgânica inferior foi escoada para garrafões e a camada de água superior foi descartada. A camada orgânica foi novamente carregada para o recipiente seguida de sulfato de sódio (2,74 Kg), e a mistura foi agitada durante 30 minutos. O sulfato de sódio foi filtrado e lavado com diclorometano (5,5 L) e as fases orgânicas combinadas foram carregadas para um recipiente limpo. O lote foi aquecido para destilação (recolhidos 31 L temperatura máxima 57 °C). O lote foi arrefecido a 40 °C e foi adicionado diclorometano (16,4 L). O lote foi aquecido para destilação (recolhidos 17 L temperatura máxima 54 °C). O lote foi arrefecido a 20 °C e foi adicionado diclorometano (5,5 L) e etanol (2,7 L) . Foi carregado à reação cloridrato de hidrogénio a 2 M em éter etilico (10,6 L; 21,2 mol) por mais de 45 minutos mantendo a temperatura entre 16-23 °C. A suspensão resultante foi agitada a 20 °C durante 1 hora após a qual o sólido foi filtrado e lavado 3 vezes com uma mistura de diclorometano e éter etilico (3 x 5,5 L) 1:1. O sólido foi seco a 50 °C sob vácuo para dar origem a hidrocloridrato (lr,4r)-6'-bromo-4-metoxispiro[ciclohexano-1,2'-indeno]-1'(3'H)-imina (6,0 Kg; 14,3 mol; ensaio 82% w/w por NMR) NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 130 (m, 2H) , 1,70 (d, 2H) , 1,98 (m, 2H) , 2,10 (m, 2H) , 3,17 (s, 2H) , 3,23 (m, 1H) , 3,29 (s, 3H) , 7,61 (d, 1H) , 8,04 (dd, 1H) , 8,75 (d, 1H) , 12,90(br s,2H).

Exemplo 4 (lr,4r)-6'-Bromo-4-metoxi-5''-metil-3'H- dispiro[ciclohexano-1,21-indeno-1'2'-imidazola]-4'' (3''H)-tiona

Foi carregado trimetilortoformato (4,95 L; 45,2 mol) e di-isopropiletilamina (3,5 L; 20,0 mol) a um reator contendo hidrocloridrato (lr,4r)-6'-bromo-4-metoxispiro[ciclohexano-1,2'-indeno]-1' (3'H)-imina (6,25 Kg; 14,9 mol) em isopropanol (50,5 L) . A mistura de reação foi agitada e aquecida a 75 °C durante 1 hora de modo que se obteve uma solução limpida. A temperatura foi definida para 70 °C e uma solução de 2-oxopropanetioamida em isopropanol (19,5 Kg; 40, 6 mol) foi carregada por mars de 1 hora, após a qual a reação foi agitada durante a noite a 69 °C. O lote foi semeado com (lr,4r)-6'-bromo-4-metoxi-5''-metil-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4''(3' ' H) -tiona (3g; 7,6 mmol) e a temperatura foi reduzida para 60 °C e agitado durante 1 hora. A mistura foi concentrada por destilação (temperatura de destilação aproximadamente 60 °C; 31 L destilados). Foi adicionada água (31 L) durante 1 hora a 60 °C antes da temperatura ser reduzida para 25 °C durante 90 minutos após os quais a mistura foi agitada durante 3 horas. O sólido foi filtrado, lavado com isopropanol duas vezes (2 x 5,2 L) e seco sob vácuo a 40 °C para dar origem a (lr,4r)-6'-bromo-4-metoxi-5''-metil-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4''(3''H)-tiona (4,87 Kg; 10,8 mol, ensaio de 87% w/w por NMR) .

Exemplo 5

Sal_de_(lr, 1' R, 4R) - 6' -Bromo-4-metoxi-5' ' -metil-3' H- dispiro[ciclohexano-1,21-indeno-1'2'-imidazola]-4''-amina (+)-10-ácido canforsulfónico

Amónia em metanol 7M (32 L; 224 mol) foi carregada a um reator contendo (lr, 4r)-6' -bromo-4-metoxi-5' ' -metil-3' H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4''(3' ' H) -tiona (5,10 Kg; 11,4 mol) e acetato de zinco di-hidratado (3,02 Kg; 13,8 mol) . O reator foi selado e a mistura foi aquecida a 80 °C e agitada durante 24 horas, após as quais foi arrefecida a 30 °C. Foi carregado 1-butanol (51 L) e a mistura de reação foi concentrada por vácuo destilando aproximadamente 50 L. Foi adicionado 1-butanol (25 L) e a mistura foi concentrada por vácuo destilando 27 L. A mistura foi arrefecida a 30 °C e foi carregado hidróxido de sódio 1M (30 L; 30 mol) . A mistura bifásica foi agitada durante 15 minutos. A fase aquosa inferior foi separada. Foi carregada água (20 L) e a mistura foi agitada durante 30 minutos. A fase aquosa inferior foi separada. A fase orgânica foi aquecida a 70 °C após o qual foi carregado (IS)-(+)-10-ácido canforsulfónico (2,4 Kg; 10,3 mol). A mistura foi agitada durante 1 hora a 70 °C e depois arrefecida a 20 °C durante 3 horas. O sólido foi filtrado, lavado com etanol (20 L) e seco sob vácuo a 50 °C para dar origem a (lr,4r)-6'-bromo-4-metoxi-5''-metil-3'H- dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4''-amina sal de (+)-10-ácido canforsulfónico (3,12 Kg; 5,13 mol; ensaio 102% w/w por NMR).

Exemplo 6 (lr,1'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5-(prop-l-in-1-il)piridina-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano-1,21-indeno-1'2' -imidazola]-4' ' -amina

Foi carregado Na2PdCl4 (1,4 g; 4,76 mmol) e sulfonato de propano 3-(di-tert-butilfosfónio) (2,6 Kg; 9,69 mmol) dissolvido em água (0,1 L) a um recipiente contendo (lr, 4r) -6' -bromo-4-metoxi-5' ' -metil-3' H- dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4''-amina sal de (+)-10-ácido canforsulfónico (1 Kg; 1,58 mol), carbonato de potássio (0,763 Kg; 5,52 mol) numa mistura de 1-butanol (7,7 L) e água (2,6 L) . A mistura é cuidadosamente inerte com nitrogénio após o qual é carregado ácido borónico de 5-(prop-l-inil)piridina-3-il (0,29 Kg; 1,62 mol) e a mistura é novamente cuidadosamente inerte com nitrogénio. A mistura de reação é aquecida a 75 °C e agitada durante 2 horas, após as quais uma análise demonstrou conversão total. A temperatura foi ajustada a 45 °C. A agitação foi interrompida e a fase aquosa inferior foi separada. A camada orgânica foi lavada 3 vezes com água (3 x 4 L). A temperatura de reação foi ajustada a 22 °C e o Phosphonics SPM32 scavenger (0,195 Kg) foi carregado e a mistura foi agitada durante a noite. O scavenger foi filtrado e lavado com 1-butanol (1L) . A reação é concentrada por destilação sob pressão reduzida para 3 L. É carregado acetato de butilo (7,7 L) e a mistura é novamente concentrada abaixo de 3 L por destilação sob pressão reduzida. Foi carregado acetato de butilo (4,8 L) e a mistura foi aquecida a 60 °C. A mistura foi agitada durante 1 hora, após a qual foi concentrada abaixo de aproximadamente 4 L por destilação sob pressão reduzida. A temperatura foi definida a 60 °C e foram adicionadas heptanos (3,8 L) por mais de 20 minutos. A mistura foi

arrefecida a 20 °C por mais de 3 horas e depois foi deixada em agitação durante toda a noite. O sólido foi filtrado e lavado duas vezes com uma mistura 1:1 de acetato de butilo: heptano (2 x 2 L) . O produto foi seco sob vácuo a 50 °C para dar origem a (lr,l'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5-(prop-l-in-l-il)piridina-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1' 2'-imidazola]-4''-amina (0,562 Kg; 1,36 mol; ensaio 100% w/w por ΧΗ NMR) . ΧΗ NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0,97 (d, 1H), 1,12-1,30 (m, 2H), 1,37-1,51 (m, 3H), 1,83 (d, 2H) , 2,09 (s, 3H) , 2,17 (s, 2H) , 2,89-3,12 (m, 3H) , 3,20 (s, 3H) , 6,54 (s, 2H) , 6,83 (s, 1H) , 7,40 (d, 1H), 7,54 (d, 1H), 7,90 (s, 1H) 8,51 (d, 1H), 8,67 (d, 1H) .

Exemplo 7

Preparação do sal de camsilato de (lr,1'R,4R)-4-metoxi-5''- metil-6'-[5-(prop-l-in-l-il)piridina-3-il]-3' H- dispiro[ciclohexano-1,21-indeno-1'2'-imidazola]-4''-amina 1,105 Kg de (lr,l'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5-(prop-l-in-l-il)piridina-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4''-amina foram dissolvidos em 8,10 L de 2-propanol e 475 mL de água a 60 °C. Depois, foi carregado (IS)-(+)-10-ácido canforsulfónico equivalente a 1 mole (622 gramas) a 60° C. A suspensão foi agitada até que todo o (IS)-( + )-10-ácido canforsulfónico foi dissolvido. Uma segunda porção de 2-propanol foi adicionada (6,0 L) a 60 °C e de seguida os conteúdos foram destilados até que 4,3 L de destilado fossem recolhidos. Depois, foram carregados 9,1 L de heptano a 65 °C. Após um atraso de uma hora, o lote tornou-se opaco. De seguida, foi realizada uma destilação adicional a cerca de 75 °C e foram recolhidos 8,2 L de destilado. 0 lote foi então arrefecido a 20 °C por mais de 2 horas e mantido a essa temperatura durante a noite. De seguida, o lote foi filtrado e lavado com uma mistura de 1,8 L de 2-propanol e 2,7 L de heptano. Finalmente, a substância foi seca a pressão reduzida e a 50 °C. O produto foi de 1,44 Kg (83,6% w/w). NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12,12 (1H, s), 9,70 (2H, d, J40,2), 8,81 (1H, d, J 2,1), 8,55 (1H, d, J 1,7), 8,05 (1H, dd, J2,l, 1,7), 7,77 (1H,

dd, J7,8, 1,2), 7,50 (2H, m), 3,22 (3H, s), 3,19 (1H, d, J

16,1), 3,10 (1H, d, J 16,1), 3,02 (1H, m) , 2,90 (1H, d, J 14,7), 2,60 (1H, m) , 2,41 (1H, d, J 14,7), 2,40 (3H, s), 2,22 (1H, m) , 2,10 (3H, s), 1,91 (3H, m) , 1,81 (1H, m) , 1,77 (1H, d, J 18,1), 1,50 (2H, m) , 1,25 (6H, m) , 0,98 (3H, s) , 0,69 (3H, s) .

Ensaios biológicos O nivel de atividade do sal de camsilato de (lr, 1'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5-(prop-l-in-l-il)piridina-3-il]-3' H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4''-amina pode ser testado usando os seguintes métodos:

Ensaio TR-FRET A enzima β-secretase usada no TR-FRET é preparada do seguinte modo: O cADN para a parte solúvel da β-secretase humana (AA 1 -AA 460) foi clonado usando o vetor de expressão mamifero ASP2-Fcl0-l-IRES-GFP-neoK. O gene foi unido ao dominio Fc da IgGl (marcador de afinidade) e clonado de forma estável em células HEK 293. O sBACE-Fc purificado foi armazenado a -80 °C em Glicina a 50 mM e pH 2,5, ajustado a pH 7,4 com Tris a 1 M, e com pureza de 40%. A enzima (forma truncada) foi diluida a 6 yg/mL (stock a 1,3 mg/mL) e o substrato BACE1 TruPoint a 200 nM (stock a 120 μΜ) em tampão de reação (NaAcetato, CHAPS, triton-X 100, EDTA, pH 4,5). A enzima e composto em dimetilsulfóxido (concentração final de DMSO 5%) foi misturada e pré-incubada durante 10 minutos a temperatura ambiente. Ο substrato foi depois adicionado e a reação foi incubada durante 15 minutos a temperatura ambiente. A reação foi interrompida com a adição de 0,35 vol de solução Stop (NaAcetato, pH 9). A fluorescência do produto foi medida num leitor de placas Victor II com comprimentos de onda de excitação de 340-485 nm e comprimentos de onda de emissão de 590-615 nm. A concentração final da enzima foi de 2,7 yg/mL; a concentração final do substrato foi de 100 nM (Km~250 nM) . O controlo de dimetilsulf óxido, em vez do composto de teste, definiu o nivel de atividade de 100% e a atividade de 0% foi definida por poços sem enzima (substituída por tampão de reação) ou por uma dose saturante de um inibidor conhecido, 2-amino-6-[3-(3-metoxifenil)fenil]-3,6-dimetil-5H-pirimidina-4-ona . Também foi usado um inibidor controlo em ensaios de dose-resposta e teve um IC50 de aproximadamente 150 nM. O sal de camsilato de (lr,l'R,4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5-(prop-l-in-l-il)piridina-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4''-amina teve um IC50 médio de 0,2 nM neste ensaio.

Ensaio de libertação de ΞΑΡΡβ

As células SH-SY5Y foram cultivadas em DMEM/F-12 com Glutamax, 10% de FCS e 1% de aminoácidos não essenciais e criopreservadas e armazenadas a -140 °C a uma concentração de 7,5-9,5xl06 células por tubo. As células foram descongeladas e semeadas a uma concentração de aproximadamente 10000 células/poço em DMEM/F-12 com Glutamax, 10 % FCS e 1% de aminoácidos não essenciais, numa placa de cultura de tecidos de 384 poços tratada, num volume de 100 pL de suspensão celular/poço. As placas de células foram depois incubadas durante 7-24 horas a 37 °C, 5% de C02. O meio celular foi removido, seguido pela adição de 30 pL do composto diluido em DMEM/F-12 com Glutamax, 10% FCS, 1% de aminoácidos não essenciais e 1% de PeSt a uma concentração final de 1% de DMSO. Os compostos são incubados com as células durante 17 h (durante a noite) a 37 °C, 5% C02. Placas Meso Scale Discovery (MSD) são usadas para a deteção da libertação de sAPPp. As placas MSD sAPPp são bloqueadas em 1% de BSA em tampão de lavagem Tris (40 pL/poço) durante 1 hora em agitação a temperatura ambiente e lavadas 1 vez em tampão de lavagem Tris (40 pL/poço). 20 pL de médio são transferidos para as microplacas MSD sAPPp pré-bloqueadas e lavadas, e as placas de células são posteriormente usadas num ensaio de ATP para medir a citotoxicidade. As placas MSD são incubadas com agitação a temperatura ambiente duante 2 horas e o meio descartado. 10 pL de anticorpo de deteção é adicionado (1 nM) a cada poço seguido de incubação com agitação a temperatura ambiente durante 2 horas e logo descartado. 40 pL de tampão de leitura são adicionados a cada poço e as placas são lidas num SECTOR Imager.

Ensaio de ATP

Como indicado no ensaio de libertação de εΑΡΡβ, após transferir 20 pL de meio a partir das placas de células para a deteção de εΑΡΡβ, as placas são usadas para analisar a citotoxicidade usando um kit de proliferação celular/citotoxicidade ViaLightTM Plus de Cambrex BioScience que mede o ATP celular total. 0 ensaio é realizado de acordo com o protocolo do fabricante. Brevemente, 10 yL de reagente de lise celular são adicionados a cada poço. As placas são incubadas a temperatura ambiente durante 10 minutos. Dois minutos após a adição de 25 pL de reagente ViaLightTM Plus reconstituído, é medida a luminescência. O limiar Tox é um sinal abaixo de 75 % do controlo.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Um sal de camsilato de (lr, 1' R, 4R)-4-metoxi-5''-metil-6'-[5 - (prop-l-in-l-il)piridina-3-il]-3' H- dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1'2'-imidazola]-4''-amina:
2. Um sal de camsilato de acordo com a reivindicação 1 tendo um padrão de difração de raios-X em pó (XRPD) exibindo substancialmente os seguintes picos muito fortes, fortes e médios com valores de d:
3. Um sal de camsilato de acordo com a reivindicação 1, tendo um padrão de difração de raios-X em pó essencialmente como mostrado na Figura 1.
4. Uma composição farmacêutica compreendendo como ingrediente ativo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um sal de acordo com a reivindicação 1, 2 ou 3, em associação com pelo menos um excipiente, veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável.
5. Um sal de acordo com a reivindicação 1, 2 ou 3 para usar como um medicamento.
6. Um sal de acordo com a reivindicação 5, para usar como um medicamento para tratar ou prevenir uma patologia relacionada com a Αβ.
7. Um sal de acordo com a reivindicação 6, para usar como um medicamento para tratar ou prevenir uma patologia relacionada com a Αβ, em que a referida patologia relacionada com a Αβ inclui o síndrome de Down, uma angiopatia β-amiloide, angiopatia amiloide cerebral, hemorragia cerebral hereditária, um distúrbio associado ao défice cognitivo, MCI ("défice cognitivo ligeiro"), doença de Alzheimer, perda de memória, sintomas de défice de atenção associados à doença de Alzheimer, neurodegeneração associada à doença de Alzheimer, demência de origem vascular mista, demência de origem degenerativa, demência pré-senil, demência senil, demência associada à doença de Parkinson, paralisia supranuclear progressiva ou degeneração corticobasal.
8. Um sal de acordo com a reivindicação 7, para usar como medicamento para tratar ou prevenir a doença de Alzheimer.
9. Um sal de acordo com a reivindicação 1, 2 ou 3, para usar como medicamento para tratar ou prevenir uma patologia relacionada com a Αβ em combinação com pelo menos um agente potenciador da cognição, agente potenciador da memória, ou inibidor da colinesterase.
10. Uma composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 4, para usar como medicamento.
11. Uma composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 4, para usar no tratamento ou prevenção de uma patologia relacionada com a Αβ.
12. Uma composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 4, para usar no tratamento ou prevenção de uma patologia relacionada com a Αβ, em que a referida patologia relacionada com a Αβ é sindrome de Down, uma angiopatia β-amiloide, angiopatia amiloide cerebral, hemorragia cerebral hereditária, um distúrbio associado ao défice cognitivo, MCI ("défice cognitivo ligeiro"), doença de Alzheimer, perda de memória, sintomas de défice de atenção associados à doença de Alzheimer, neurodegeneração associada à doença de Alzheimer, demência de origem vascular mista, demência de origem degenerativa, demência pré-senil, demência senil, demência associada à doença de Parkinson, paralisia supranuclear progressiva ou degeneração corticobasal.
13. Uma composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 4, para usar no tratamento ou prevenção da doença de Alzheimer.