BR112020018609A2

BR112020018609A2 - Método para tratar e prevenir uma doença associada ao papilomavírus humano (hpv), modular uma resposta imune em um indivíduo com uma doença associada ao hpv e composição compreendendo células imunes modificadas

Info

Publication number: BR112020018609A2
Application number: BR112020018609-0A
Authority: BR
Inventors: Scott LOUGHHEAD; Lee Ann Talarico; Alfonso Vicente-Suarez; Matt Booty; Howard Bernstein; Katarina BLAGOVIC; Armon R. Sharei; Kelan HLAVATY; Melissa Myint
Original assignee: Sqz Biotechnologies Company
Priority date: 2018-03-12
Filing date: 2019-03-11
Publication date: 2020-12-29
Also published as: EP3765073A2; US20210038709A1; IL277190A; CR20200461A; CN112105383A; MX2020009441A; PE20201201A1; KR20200130371A; WO2019178005A2; JP2021517895A; RU2020132524A; CA3093826A1; TW202003025A; PH12020551437A1; MA52003A; WO2019178005A3; SG11202008863XA; AU2019234549A1; CO2020012583A2

Abstract

método para tratar e prevenir uma doença associada ao papilomavírus humano (hpv), modular uma resposta imune em um indivíduo com uma doença associada ao hpv e composição compreendendo células imunes modificadas. o presente pedido fornece células imunes que compreendem um antígeno do hpv e um adjuvante, métodos para fabricar essas células imunes modificadas e métodos de uso dessas células imunes modificadas para tratar uma doença associada ao hpv, prevenir uma doença associada ao hpv e/ou para modular uma resposta imune em um indivíduo com uma doença associada ao hpv.

Description

MÉTODO PARA TRATAR E PREVENIR UMA DOENÇA ASSOCIADA AO PAPILOMAVÍRUS HUMANO (HPV), MODULAR UMA RESPOSTA IMUNE EM UM INDIVÍDUO COM UMA DOENÇA ASSOCIADA AO HPV E COMPOSIÇÃO COMPREENDENDO CÉLULAS IMUNES MODIFICADAS REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS

[0001] Este pedido reivindica prioridade ao Pedido Provisório dos EUA No. 62/641.988, depositado em 12 de março de 2018, Pedido Provisório dos EUA No. 62/794.517, depositado em 18 de janeiro de 2019, e Pedido Provisório dos EUA No. 62/812.225, depositado em 28 de fevereiro de 2019. O pedido também reivindica benefício do Pedido de Patente Europeia No. EP 19161964.2, depositado em 11 de março de 2019; que são incorporados neste documento por referência na sua totalidade.

APRESENTAÇÃO DA LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS NO ARQUIVO DE TEXTO ASCII

[0002] O conteúdo da seguinte submissão em arquivo de texto ASCII é incorporado neste documento por referência em sua totalidade: uma forma legível por computador (CRF) da Listagem de Sequência (nome do arquivo: 750322001640SEQLIST.TXT, data de depósito: 11 de março de 2019, tamanho: 14 KB).

CAMPO DA INVENÇÃO

[0003] A presente divulgação se refere de maneira geral à células imunes compreendendo um antígeno e um adjuvante, métodos de fabricação de tais células imunes modificadas e métodos de uso de tais células imunes modificadas para tratar uma doença associada ao HPV, prevenir uma doença associada ao HPV e/ou para modular uma resposta imune em um indivíduo com uma doença associada ao HPV.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

[0004] Os papilomavírus são pequenos vírus de DNA sem envelope com um tamanho de vírion de ~55 nm de diâmetro. Mais de 100 genótipos do HPV estão completamente caracterizados e presume-se que exista um número maior. O HPV é uma causa conhecida de câncer cervical, bem como de alguns cânceres vulvar, vaginal, peniano, orofaríngeo, anal e retal. Embora a maioria das infecções por HPV sejam assintomáticas e desaparecem espontaneamente, infecções persistentes com um dos tipos do HPV oncogênicos podem progredir para pré-câncer ou câncer. Outras doenças associadas ao HPV podem incluir verrugas comuns, verrugas plantares, verrugas planas, verrugas anogenitais, lesões anais, epidermodisplasia, hiperplasia epitelial focal, papilomas bucais, cistos verrucosos, papilomatose laríngea, lesões intraepiteliais escamosas (SILs), neoplasia intraepitelial cervical (CIN), neoplasia intraepitelial vulvar (VIN) e neoplasia intraepitelial vaginal (VAIN).

[0005] Muitos dos tipos conhecidos de papilomavírus humano (HPV) causam lesões benignas com um subconjunto sendo oncogênico. Com base nas relações epidemiológicas e filogenéticas, os tipos do HPV são classificados em quinze "tipos de alto risco" (HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 73 e 82) e três "prováveis tipos de alto risco" (HPV 26, 53 e 66), que juntos são conhecidos por se manifestar como alterações cervicais de baixo e alto grau e cânceres, bem como outros cânceres anogenitais, como vulvar, vaginal, peniano, anal e câncer perianal, bem como câncer de cabeça e pescoço. Recentemente, também foi descrita a associação dos tipos de alto risco do HPV 16 e 18 com câncer de mama. Onze tipos do HPV classificados como "tipos de baixo risco" (HPV 6, 11, 40, 42, 43, 44, 54, 61, 70, 72 e 81) são conhecidos por se manifestarem como alterações cervicais benignas de baixo grau, verrugas genitais e papilomatose respiratória recorrente. Os tipos cutâneos do HPV 5, 8 e 92 estão associados ao câncer de pele. Em alguns cânceres associados ao HPV, o sistema imunológico está deprimido e,

correspondentemente, a resposta antitumoral é significativamente prejudicada. Vide Suresh e Burtness Am JHematol Oncol 13(6):20-27 (2017).

[0006] A imunoterapia pode ser dividida em dois tipos principais de intervenções, passivas ou ativas. Os protocolos passivos incluem a administração de células pré-ativadas e/ou projetadas (por exemplo, células CAR T), anticorpos terapêuticos específicos para doenças e/ou citocinas. As estratégias ativas de imunoterapia são direcionadas para estimular funções de efeito do sistema imunológico in vivo. Vários protocolos ativos atuais incluem estratégias de vacinação com peptídeos associados à doença, lisados ou células inteiras alogênicas, infusão de DCs autólogos como veículos para a entrega de antígenos tumorais e infusão de moduladores de ponto de verificação imune. Vide Papaioannou, Nikos E., et al. Annals of translational medicine 4.14 (2016). A imunoterapia adotiva pode ser empregada para modular a resposta imune, melhorar a atividade do antitumor e alcançar o objetivo de tratar ou prevenir cânceres associados ao HPV.

[0007] Linfócitos T citotóxicos CD8+ (CTL) e células T auxiliares (Th) CD4+ estimulados por antígenos associados à doença têm o potencial de atingir e destruir células doentes. Os métodos descritos neste documento são usados para gerar células imunes modificadas de novo em alto rendimento e de maneira eficiente, induzindo, desta forma, uma resposta robusta de células T a antígenos do HPV.

[0008] Todas as referências citadas neste documento, incluindo pedidos de patentes e publicações, são incorporadas por referência em sua totalidade. As publicações de patentes W02017041050, WO 2016070136 são expressamente incorporadas por referência em sua totalidade.

BREVE RESUMO DA INVENÇÃO

[0009] Em alguns aspectos, a invenção provê um método para tratar uma doença associada ao papilomavírus humano (HPV) em um indivíduo, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV e um adjuvante, em que o adjuvante é apresentado de maneira intracelular. Em alguns aspectos, a invenção provê um método para tratar uma doença associada ao papilomavírus humano (HPV) em um indivíduo, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV e um adjuvante, em que o adjuvante é apresentado de maneira intracelular. Em alguns aspectos, a invenção provê um método para modular uma resposta imune em um indivíduo com doença associada ao HPV, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV e um adjuvante, em que o adjuvante é apresentado de maneira intracelular.

[0010] Em algumas modalidades, a invenção provê um método para tratar uma doença associada ao HPV em um indivíduo, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV e um adjuvante, em que o adjuvante é apresentado de maneira intracelular; em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para que o antígeno e o adjuvante passem para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do

HPV e o adjuvante por tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV e o adjuvante entrem na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas.

Em algumas modalidades, a invenção provê um método para prevenir uma doença associada ao HPV em um indivíduo, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV e um adjuvante, em que o adjuvante é apresentado de maneira intracelular; em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para que o antígeno e o adjuvante passem para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o adjuvante por tempo suficiente para permitir que o adjuvante entre na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas.

Em algumas modalidades, a invenção provê um método para modular uma resposta imune em um indivíduo com uma doença associada ao HPV, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV e um adjuvante, em que o adjuvante é apresentado de maneira intracelular; em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada compreendendo um antígeno do HPV através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para que o antígeno do HPV e o adjuvante passem para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno e o adjuvante por tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV e o adjuvante entrem na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é menor que o diâmetro da célula. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é de cerca de 20% a menos de 99% do diâmetro da célula. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é de cerca de 20% a menos de 60% do diâmetro da célula. Em algumas modalidades, a constrição está em um canal. Em algumas modalidades, uma força de deformação é aplicada à célula de entrada à medida que passa através da constrição.

[0011] Em algumas modalidades, o antígeno do HPV e/ou o adjuvante estão presentes nos citosol e/ou endossomos. Em algumas modalidades, o antígeno e/ou adjuvante estão presentes em múltiplos compartimentos da célula. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende adicionalmente um antígeno do HPV e/ou um adjuvante no exterior da célula. Em algumas modalidades, a concentração de adjuvante incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM. Em algumas modalidades, a concentração de antígeno incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM. Em algumas modalidades, a proporção de antígeno do HPV para adjuvante incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 10000:1 e cerca de 1:10000.

[0012] Em algumas modalidades, a resposta imune é aprimorada. Em algumas modalidades, a resposta imune ao antígeno do HPV é aprimorada.

[0013] Em algumas modalidades, o adjuvante é CpG ODN, IFN- α, agonistas STING, agonistas RIG-I ou poli I:C. Em algumas modalidades, o adjuvante é CpG ODN. Em algumas modalidades, o CpG ODN é CpG ODN 1018, CpG ODN 1826 ou CpG ODN 2006. Em algumas modalidades,

a célula imune modificada compreende mais de um adjuvante.

[0014] Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é um pool de múltiplos polipeptídeos que provocam uma resposta contra os mesmos e ou diferentes antígenos do HPV.

[0015] Em algumas modalidades, um antígeno no pool de múltiplos antígenos não diminui a resposta imune direcionada para outros antígenos no pool de múltiplos antígenos. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é um polipeptídeo compreendendo um epítopo do HPV antigênico e uma ou mais sequências de peptídeos heterólogos. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV se complexa consigo mesmo, com outros antígenos ou com o adjuvante. Em algumas modificações, o antígeno do HPV é um HPV-16 ou um antígeno do HPV-18. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é composto por um epítopo específico de HLA-A2. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é um antígeno do HPV E6 ou um antígeno do HPV E7. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende um antígeno do HPV E6 e um antígeno do HPV E7. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é um polipeptídeo compreendendo um epítopo do HPV antigênico e uma ou mais sequências de peptídeos heterólogos Em algumas modalidades, o peptídeo restrito HLA-A2 compreende a sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID Nº: 1 a 4. Em algumas modalidades, o polipeptídeo flanqueado no N-terminal compreende a sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID Nº: 5 a 10 e/ou o polipeptídeo flanqueado no C-terminal compreende a sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID Nº: 11 a 17. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 26. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com a SEQ ID Nº: 23. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é capaz de ser transformado em um peptídeo MHC restrito de classe I. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é capaz de ser transformado em um peptídeo MHC restrito de classe II.

[0016] Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende o adjuvante a uma concentração entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende o antígeno do HPV a uma concentração entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM. Em algumas modalidades, a proporção de antígeno do HPV para o adjuvante está entre cerca de 10000:1 a cerca de 1:10000.

[0017] Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende adicionalmente um agente que aprimora a viabilidade e/ou função da célula imune modificada em comparação com uma célula imune modificada correspondente que não compreende o agente. Em algumas modalidades, o agente é um composto que aumenta a endocitose, um agente estabilizador ou um cofator. Em algumas modalidades, o agente é albumina. Em algumas modalidades, a albumina é albumina de camundongo, bovina ou humana. Em algumas modalidades, o agente é um cátion de metal divalente, glicose, ATP, potássio, glicerol, trealose, D- sacarose, PEG1500, L-arginina, L-glutamina ou EDTA. Em algumas modalidades, o agente compreende albumina do soro de camundongo (MSA). Em algumas modalidades, as células imunes modificadas são adicionalmente modificadas para aumentar expressão de uma ou mais moléculas coestimulantes. Em algumas modalidades, a molécula coestimulante é B7-H2, B7-1, B7-2, CD70, LIGHT, HVEM, CD40, 4-1BBL, OX40L, TL1A, GITRL, CD30L, TIM4, SLAM, CD48, CD58, CD155 ou CD112. Em algumas modalidades, a célula compreende um ácido nucleico que resulta em expressão aumentada de uma ou mais moléculas coestimulantes.

[0018] Em algumas modalidades, a célula imune é uma célula T, uma célula dendrítica, um monócito, um macrófago, uma célula mieloide,

um granulócito, um neutrófilo, uma célula mastro, uma célula exterminadora natural, uma célula linfoide inata, um basófilo ou uma célula precursora hematopoética. Em algumas modalidades, a célula imune não é uma célula B.

[0019] Em algumas modalidades, a célula imune é uma célula T. Em algumas modalidades, a célula T compreende uma modificação adicional para modular expressão MHC de classe I. Em algumas modalidades, a célula T compreende uma modificação adicional para modular expressão MHC de classe II. Em algumas modalidades, a célula T compreende uma modificação adicional para reduzir expressão MHC de classe I e/ou expressão MHC de classe II. Em algumas modalidades, a modificação adicional compreende redução da expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II usando siRNA, shRNA, CRISPR/Cas9, ZFN, TALEN, recombinase Cre ou uma meganuclease. Em algumas modalidades, a célula T compreende uma modificação adicional para aumentar expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II. Em algumas modalidades, a modificação adicional compreende aumentar expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II usando RNA ou DNA plasmídico. Em algumas modalidades, uma resposta imune inata montada em um indivíduo em resposta à administração, em um contexto alogênico, das células T modificadas adicionalmente é reduzida em comparação com uma resposta imune inata montada em um indivíduo em resposta à administração, em um contexto alogênico, de células T modificadas correspondentes que não compreendem a modificação adicional. Em algumas modalidades, a meia- vida circulante das células T modificadas adicionalmente em um indivíduo ao qual foram administradas é modulada em comparação com a meia-vida circulante de células T modificadas correspondentes que não compreendem a modificação adicional em um indivíduo ao qual foram administradas. Em algumas modalidades, a célula T inclui uma ou mais dentre células T auxiliares, células T citotóxicas, células T de memória,

células CIK e células T exterminadoras naturais Em algumas modalidades, a célula T inclui uma ou mais dentre células T CD3+, células T CD4+, células T CD8+, células T CD45RA+, células T CD45RO+ e células T γδ. Em algumas modalidades, a célula modificada é alogênica ao indivíduo. Em algumas modalidades, a célula modificada é autóloga ao indivíduo. Em algumas modalidades, o indivíduo está pré-condicionado a ter inflamação modulada e/ou uma resposta imune modulada.

[0020] Em algumas modalidades, os métodos incluem adicionalmente administrar ao indivíduo um adjuvante. Em algumas modalidades, o adjuvante é IFNα ou CpG ODN. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células T modificadas e o adjuvante são administradas simultaneamente. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células T modificadas e o adjuvante são administradas sequencialmente. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células T modificadas é administrada antes da administração do adjuvante. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células T modificadas é administrada após a administração do adjuvante.

[0021] Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células T modificadas é administrada em combinação com a administração de uma um inibidor de ponto de verificação imune. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas e o inibidor de ponto de verificação imune são administradas simultaneamente. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células T modificadas e o inibidor de ponto de verificação imune são administradas sequencialmente. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada antes da administração do inibidor de ponto de verificação imune. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada após a administração do inibidor de ponto de verificação imune. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação imune é direcionado a um ou mais dentre PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG3 ou TIM-3. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação imune é direcionado a um ou mais de PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG3, TIM- 3, TIGIT, VISTA, TIM1, B7-H4 (VTCN1) ou BTLA.

[0022] Em algumas modalidades, a administração da composição compreendendo as células imunes modificadas ao indivíduo resulta na ativação e/ou expansão de linfócitos T citotóxicos (CTLs) específicos para o antígeno do HPV. Em algumas modalidades, administração da composição compreendendo as células imunes modificadas ao indivíduo resulta na ativação e/ou expansão de células T auxiliares (Th) específicas para o antígeno.

[0023] Em algumas modalidades, a quantidade eficaz da composição compreende entre cerca de 1 × 106 e cerca de 1 × 1012células imunes modificadas. Em algumas modalidades, o método compreende múltiplas administrações da composição compreendendo as células imunes modificadas. Em algumas modalidades, o método compreende uma primeira administração da composição compreendendo as células imunes modificadas, seguida por uma segunda administração da composição compreendendo as células imunes modificadas. Em algumas modalidades, a segunda administração é cerca de um mês após a primeira administração.

[0024] Em algumas modalidades, a doença associada ao HPV é um câncer associado ao HPV. Em algumas modalidades, o câncer associado ao HPV é câncer cervical, câncer anal, câncer orofaríngeo, câncer vaginal, câncer vulvar, câncer peniano, câncer de pele ou câncer de cabeça e pescoço. Em algumas modalidades, a doença associada ao HPV é uma doença infecciosa associada ao HPV.

[0025] Em alguns aspectos, a invenção provê um método para o tratamento de uma doença relacionada ao vírus do papiloma humano

(HPV) em um indivíduo, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV compreendendo um aminoácido com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25. Em alguns aspectos, a invenção provê um método para prevenir uma doença associada ao HPV em um indivíduo, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV compreendendo um aminoácido sequência de ácido com pelo menos 90% de semelhança com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25. Em alguns aspectos, a invenção provê um método para modular uma resposta imune em um indivíduo com uma doença associada ao HPV, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25. Em algumas modalidades, as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV compreendendo uma sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25. Em algumas modalidades, as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 23.

[0026] Em alguns aspectos, a invenção provê um método para o tratamento de uma doença associada ao HPV em um indivíduo, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV compreendendo um aminoácido sequência de ácido com pelo menos 90%

de semelhança com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25; em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grande o suficiente para o antígeno passar e formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV por um tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV entre na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas.

Em alguns aspectos, a invenção provê um método para prevenir uma doença associada ao HPV em um indivíduo, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25; em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grande o suficiente para o antígeno do HPV passar para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV por um tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV entre na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas.

Em algum aspecto, a invenção provê um método para modular uma resposta imune em um indivíduo com uma doença associada ao HPV, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25; em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações do célula de entrada grande o suficiente para o antígeno do HPV passar para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV por um tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV entre na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas. Em algumas modalidades, as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV compreendendo uma sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25. Em algumas modalidades, as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 23. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é menor que o diâmetro da célula. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é de cerca de 20% a menos de 99% do diâmetro da célula. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é de cerca de 20% a menos de 60% do diâmetro da célula. Em algumas modalidades, a constrição está em um canal. Em algumas modalidades, uma força de deformação é aplicada à célula de entrada à medida que passa através da constrição.

[0027] Em algumas modalidades, o método compreende adicionalmente administrar ao indivíduo um adjuvante. Em algumas modalidades, o adjuvante é IFNα ou CpG ODN. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células T modificadas e o adjuvante são administradas simultaneamente. Em algumas modalidades, a composição compreendendo células imunes modificadas e o adjuvante são administradas sequencialmente. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada antes da administração do adjuvante. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada após a administração do adjuvante. Em algumas modalidades, as células imunes modificadas compreendem adicionalmente um adjuvante. Em algumas modalidades, a célula imune perturbada da etapa b é incubada com o antígeno do HPV e um adjuvante. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV e/ou o adjuvante estão presentes nos citosol e/ou endossomos. Em algumas modalidades, o antígeno e/ou adjuvante estão presentes em múltiplos compartimentos da célula. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende adicionalmente um antígeno do HPV e/ou um adjuvante no exterior da célula.

[0028] Em algumas modalidades, a concentração de adjuvante incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM. Em algumas modalidades, a concentração de antígeno do HPV incubado com a célula de entrada perturbada está entre cerca de 0,01 µM e cerca de 1 µM. Em algumas modalidades, a proporção de antígeno do HPV para adjuvante incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 10000:1 a cerca de 1:10000.

[0029] Em algumas modalidades, a resposta imune é aprimorada. Em algumas modalidades, a resposta imune ao antígeno do HPV é aprimorada.

[0030] Em algumas modalidades, o adjuvante é CpG ODN, IFN- α, agonistas STING, agonistas RIG-I ou poli I:C. Em algumas modalidades, o adjuvante é CpG ODN. Em algumas modalidades, o CpG ODN é CpG ODN 1018, CpG ODN 1826 ou CpG ODN 2006. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende mais de um adjuvante.

[0031] Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é um pool de múltiplos polipeptídeos que provocam uma resposta contra os mesmos e ou diferentes antígenos do HPV. Em algumas modalidades, um antígeno no pool de múltiplos antígenos não diminui a resposta imune direcionada para outros antígenos no pool de múltiplos antígenos. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é um polipeptídeo compreendendo um epítopo do HPV antigênico e uma ou mais sequências de peptídeos heterólogos. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV se complexa consigo mesmo, com outros antígenos ou com o adjuvante. Em algumas modificações, o antígeno do HPV é um HPV-16 ou um antígeno do HPV-18. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é composto por um epítopo específico de HLA-A2. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é um antígeno do HPV E6 ou um antígeno do HPV E7. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende um antígeno do HPV E6 e um antígeno do HPV E7. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é um polipeptídeo compreendendo um epítopo do HPV antigênico e uma ou mais sequências de peptídeos heterólogos Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é capaz de ser transformado em um peptídeo MHC restrito de classe I. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é capaz de ser transformado em um peptídeo MHC restrito de classe II.

[0032] Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende o adjuvante a uma concentração entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende o antígeno do HPV a uma concentração entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM. Em algumas modalidades, a proporção de antígeno do HPV para o adjuvante está entre cerca de 10000:1 a cerca de 1:10000.

[0033] Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende adicionalmente um agente que aprimora a viabilidade e/ou função da célula imune modificada em comparação com uma célula imune modificada correspondente que não compreende o agente. Em algumas modalidades, o agente é um composto que aumenta a endocitose, um agente estabilizador ou um cofator. Em algumas modalidades, o agente é albumina. Em algumas modalidades, a albumina é albumina de camundongo, bovina ou humana. Em algumas modalidades, o agente é um cátion de metal divalente, glicose, ATP, potássio, glicerol, trealose, D- sacarose, PEG1500, L-arginina, L-glutamina ou EDTA. Em algumas modalidades, o agente compreende albumina do soro de camundongo (MSA). Em algumas modalidades, as células imunes modificadas são adicionalmente modificadas para aumentar expressão de uma ou mais moléculas coestimulantes. Em algumas modalidades, a molécula coestimulante é B7-H2, B7-1, B7-2, CD70, LIGHT, HVEM, CD40, 4-1BBL, OX40L, TL1A, GITRL, CD30L, TIM4, SLAM, CD48, CD58, CD155 ou CD112. Em algumas modalidades, a célula compreende um ácido nucleico que resulta em expressão aumentada de uma ou mais moléculas coestimulantes.

[0034] Em algumas modalidades, a célula imune é uma célula T, uma célula dendrítica, um monócito, um macrófago, uma célula mieloide, um granulócito, um neutrófilo, uma célula mastro, uma célula exterminadora natural, uma célula linfoide inata, um basófilo ou uma célula precursora hematopoética. Em algumas modalidades, a célula imune não é uma célula T.

[0035] Em algumas modalidades, a célula imune é uma célula T. Em algumas modalidades, a célula T compreende uma modificação adicional para modular expressão MHC de classe I. Em algumas modalidades, a célula T compreende uma modificação adicional para modular expressão MHC de classe II. Em algumas modalidades, a célula T compreende uma modificação adicional para reduzir expressão MHC de classe I e/ou expressão MHC de classe II. Em algumas modalidades, a modificação adicional compreende redução da expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II usando siRNA, shRNA, CRISPR/Cas9, ZFN, TALEN, recombinase Cre ou uma meganuclease. Em algumas modalidades, a célula T compreende uma modificação adicional para aumentar expressão

MHC de classe I e/ou MHC de classe II. Em algumas modalidades, a modificação adicional compreende aumentar expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II usando RNA ou DNA plasmídico. Em algumas modalidades, uma resposta imune inata montada em um indivíduo em resposta à administração, em um contexto alogênico, das células T modificadas adicionalmente é reduzida em comparação com uma resposta imune inata montada em um indivíduo em resposta à administração, em um contexto alogênico, de células T modificadas correspondentes que não compreendem a modificação adicional. Em algumas modalidades, a meia- vida circulante das células T modificadas adicionalmente em um indivíduo ao qual foram administradas é modulada em comparação com a meia-vida circulante de células T modificadas correspondentes que não compreendem a modificação adicional em um indivíduo ao qual foram administradas. Em algumas modalidades, a célula T inclui uma ou mais dentre células T auxiliares, células T citotóxicas, células T de memória, células CIK e células T exterminadoras naturais Em algumas modalidades, a célula T inclui uma ou mais dentre células T CD3+, células T CD4+, células T CD8+, células T CD45RA+, células T CD45RO+ e células T γδ. Em algumas modalidades, a célula modificada é alogênica ao indivíduo. Em algumas modalidades, a célula modificada é autóloga ao indivíduo. Em algumas modalidades, o indivíduo está pré-condicionado a ter inflamação modulada e/ou uma resposta imune modulada.

[0036] Em algumas modalidades, os métodos incluem adicionalmente administrar ao indivíduo um adjuvante. Em algumas modalidades, o adjuvante é IFNα ou CpG ODN. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas e o adjuvante são administradas simultaneamente. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas e o adjuvante são administradas sequencialmente. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada antes da administração do adjuvante. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada após a administração do adjuvante.

[0037] Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada em combinação com administração de um inibidor de ponto de verificação imune. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas e o inibidor de ponto de verificação imune são administrados simultaneamente. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas e o inibidor de ponto de verificação imune são administradas sequencialmente. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada antes da administração do inibidor de ponto de verificação imune. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada após a administração do inibidor de ponto de verificação imune. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação imune é direcionado a um ou mais dentre PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG3 ou TIM-3. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação imune é direcionado a um ou mais dentre PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG3, TIM-3, TIGIT, VISTA, TIM1, B7-H4 (VTCN1) ou BTLA.

[0038] Em algumas modalidades, a administração da composição compreendendo as células imunes modificadas ao indivíduo resulta na ativação e/ou expansão de linfócitos T citotóxicos (CTLs) específicos para o antígeno do HPV. Em algumas modalidades, a administração da composição compreendendo as células imunes modificadas ao indivíduo resulta na ativação e/ou expansão de células T (Th) auxiliares específicas para o antígeno.

[0039] Em algumas modalidades, a quantidade eficaz da composição compreende entre cerca de 1 × 106 e cerca de 1 × 1012 células imunes modificadas. Em algumas modalidades, o método compreende múltiplas administrações da composição compreendendo as células imunes modificadas. Em algumas modalidades, o método compreende uma primeira administração da composição compreendendo as células imunes modificadas, seguida por uma segunda administração da composição compreendendo as células imunes modificadas. Em algumas modalidades, a segunda administração é cerca de um mês após a primeira administração.

[0040] Em algumas modalidades, a doença associada ao HPV é um câncer associado ao HPV. Em algumas modalidades, o câncer associado ao HPV é câncer cervical, câncer anal, câncer orofaríngeo, câncer vaginal, câncer vulvar, câncer peniano, câncer de pele ou câncer de cabeça e pescoço. Em algumas modalidades, a doença associada ao HPV é uma doença infecciosa associada ao HPV.

[0041] Em alguns aspectos, a invenção provê uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem de maneira intracelular um CpG ODN e um antígeno do HPV com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV compreende a sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com a SEQ ID Nº: 23. Em algumas modalidades, as células imunes modificadas compreendem de maneira intracelular um CpG ODN e um antígeno do HPV, em que o antígeno do HPV compreende a sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 23.

[0042] Em algumas modalidades, as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grande o suficiente para o antígeno do HPV e p CpG PDN para passar para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV e o CpG ODN por um tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV e o CpG ODN entrem na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é menor que o diâmetro da célula. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é de cerca de 20% a cerca de 90% do diâmetro da célula. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é de cerca de 20% a menos de 60% do diâmetro da célula. Em algumas modalidades, a constrição está em um canal. Em algumas modalidades, uma força de deformação é aplicada à célula de entrada à medida que passa através da constrição.

[0043] Em algumas modalidades, a composição compreende adicionalmente um adjuvante. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV e/ou o CpG ODN estão presentes no citosol e/ou endossomos. Em algumas modalidades, o antígeno e/ou o CpG ODN estão presentes em múltiplos compartimentos da célula. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende adicionalmente um antígeno do HPV e/ou um CpG ODN na superfície da célula. Em algumas modalidades, a concentração de CpG ODN incubado com a célula de entrada perturbada está entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM. Em algumas modalidades, a concentração de antígeno do HPV incubado com a célula de entrada perturbada está entre cerca de 0,01 µM e cerca de 1 µM. Em algumas modalidades, a proporção de antígeno do HPV para CpG ODN incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 10000:1 e cerca de 1:10000. Em algumas modalidades, o CpG ODN é CpG ODN 1018, CpG ODN 1826 ou CpG ODN 2006. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende mais de um adjuvante. Em algumas modalidades, o adjuvante compreende CpG ODN, IFN-α, agonistas STING, agonistas

RIG-I ou poli I:C.

[0044] Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é um pool de múltiplos polipeptídeos que provocam uma resposta contra os mesmos e ou diferentes antígenos do HPV. Em algumas modalidades, um antígeno no pool de múltiplos antígenos não diminui a resposta imune direcionada a outros antígenos no pool de múltiplos antígenos. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é um polipeptídeo compreendendo um epítopo do HPV antigênico e uma ou mais sequências de peptídeos heterólogos. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV se complexa consigo mesmo, com outros antígenos, com um adjuvante ou com o CpG ODN. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é composto por um epítopo específico de HLA-A2. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é um polipeptídeo compreendendo um epítopo do HPV antigênico e uma ou mais sequências de peptídeos heterólogos.

[0045] Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende o CpG ODN a uma concentração entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende o antígeno do HPV a uma concentração entre cerca de 0,01 µM e cerca de 1 µM. Em algumas modalidades, a proporção de antígeno do HPV para o CpG ODN está entre cerca de 10000:1 a cerca de 1:10000.

[0046] Em alguns aspectos, a invenção compreende uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV, em que o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com a SEQ ID Nº: 23. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV compreende a sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 23.

[0047] Em algumas modalidades, as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grande o suficiente para o antígeno do HPV passar para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV por um tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV entre na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é menor que o diâmetro da célula. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é de cerca de 20% a cerca de 90% do diâmetro da célula T de entrada. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é de cerca de 20% a menos de 60% do diâmetro da célula. Em algumas modalidades, a constrição está em um canal. Em algumas modalidades, uma força de deformação é aplicada à célula de entrada à medida que passa através da constrição.

[0048] Em algumas modalidades, a composição compreende adicionalmente um adjuvante. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV e/ou o adjuvante estão presentes nos citosol e/ou endossomos. Em algumas modalidades, o antígeno e/ou adjuvante estão presentes em múltiplos compartimentos da célula. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende adicionalmente um antígeno do HPV e/ou um adjuvante na superfície da célula. Em algumas modalidades, a concentração de adjuvante incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM. Em algumas modalidades, a concentração de antígeno do HPV incubado com a célula de entrada perturbada está entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM. Em algumas modalidades, a proporção de antígeno do HPV para adjuvante incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 10000:1 e cerca de 1:10000. Em algumas modalidades, o adjuvante é CpG ODN, IFN-α, agonistas STING, agonistas RIG-I ou poli I:C. Em algumas modalidades, o adjuvante é CpG ODN. Em algumas modalidades, o CpG ODN é CpG ODN 1018, CpG ODN 1826 ou CpG ODN 2006. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende mais de um adjuvante.

[0049] Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é um pool de múltiplos polipeptídeos que provocam uma resposta contra os mesmos e ou diferentes antígenos do HPV. Em algumas modalidades, um antígeno no pool de múltiplos antígenos não diminui a resposta imune direcionada a outros antígenos no pool de múltiplos antígenos. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é um polipeptídeo compreendendo um epítopo do HPV antigênico e uma ou mais sequências de peptídeos heterólogos. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV se complexa consigo mesmo, com outros antígenos ou com o adjuvante. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é compreendido por um epítopo específico de HLA-A2. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende o adjuvante a uma concentração entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende o antígeno do HPV a uma concentração entre cerca de 0,01 µM e cerca de 1 µM. Em algumas modalidades, a proporção de antígeno do HPV para o adjuvante está entre cerca de 10000:1 a cerca de 1:10000. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é capaz de ser transformado em um peptídeo MHC restrito de classe I. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é capaz de ser transformado em um peptídeo MHC restrito de classe II.

[0050] Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende adicionalmente um agente que aprimora a viabilidade e/ou função da célula imune modificada em comparação com uma célula imune modificada correspondente que não compreende o agente. Em algumas modalidades, o agente é um composto que aumenta a endocitose, um agente estabilizador ou um cofator. Em algumas modalidades, o agente é albumina. Em algumas modalidades, a albumina é albumina de camundongo, bovina ou humana. Em algumas modalidades, o agente é um cátion de metal divalente, glicose, ATP, potássio, glicerol, trealose, D- sacarose, PEG1500, L-arginina, L-glutamina ou EDTA. Em algumas modalidades, o agente compreende MSA. Em algumas modalidades, as células são adicionalmente modificadas para aumentar expressão de uma ou mais moléculas coestimuladoras. Em algumas modalidades, a molécula coestimuladora é B7-H2 (ICOSL), B7-1 (CD80), B7-2 (CD86), CD70, LIGHT, HVEM, CD40, 4-1BBL, OX40L, TL1A, GITRL, CD30L, TIM4, SLAM, CD48, CD58, CD155 ou CD112. Em algumas modalidades, a célula compreende um ácido nucleico que resulta em expressão aumentada de uma ou mais moléculas coestimulantes.

[0051] Em algumas modalidades, a célula imune é uma célula T, uma célula dendrítica, um monócito, um macrófago, uma célula mieloide, um granulócito, um neutrófilo, uma célula mastro, uma célula exterminadora natural, uma célula linfoide inata, um basófilo ou uma célula precursora hematopoética. Em algumas modalidades, a célula imune não é uma célula T. Em algumas modalidades, a célula imune é uma célula T. Em algumas modalidades, a célula T compreende uma modificação adicional para modular expressão MHC de classe I. Em algumas modalidades, a célula T compreende uma modificação adicional para modular expressão MHC de classe II. Em algumas modalidades, a célula T compreende uma modificação adicional para reduzir expressão MHC de classe I e/ou expressão MHC de classe II. Em algumas modalidades, a modificação adicional compreende redução da expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II usando siRNA, shRNA, CRISPR/Cas9, ZFN, TALEN, recombinase Cre ou uma meganuclease. Em algumas modalidades, a célula T compreende uma modificação adicional para aumentar expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II. Em algumas modalidades, a modificação adicional compreende aumentar expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II usando RNA ou DNA plasmídico. Em algumas modalidades, uma resposta imune inata montada em um indivíduo em resposta à administração, em um contexto alogênico, das células T modificadas adicionalmente é reduzida em comparação com uma resposta imune inata montada em um indivíduo em resposta à administração, em um contexto alogênico, de células T modificadas correspondentes que não compreendem a modificação adicional. Em algumas modalidades, a meia- vida circulante das células T modificadas adicionalmente em um indivíduo ao qual foram administradas é modulada em comparação com a meia-vida circulante de células T modificadas correspondentes que não compreendem a modificação adicional em um indivíduo ao qual foram administradas.

[0052] Em algumas modalidades, a célula T inclui uma ou mais dentre células T auxiliares, células T citotóxicas, células T de memória, células CIK e células T exterminadoras naturais. Em algumas modalidades, a célula T inclui uma ou mais dentre células T CD3+, células T CD4+, células T CD8+, células T CD45RA+, células T CD45RO+ e células T γδ. Em algumas modalidades, a célula modificada é alogênica a um indivíduo. Em algumas modalidades, a célula modificada é autóloga a um indivíduo. Em algumas modalidades, um indivíduo está precondicionado a ter inflamação modulada e/ou uma resposta imune modulada.

[0053] Em algumas modalidades, a composição compreende adicionalmente um inibidor de ponto de verificação imune. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação imune é direcionado a um ou mais dentre PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG3, TIM-3, LAG3, TIGIT, VISTA, TIM1, B7-H4 (VTCN1) ou BTLA. Em algumas modalidades, a administração da composição compreendendo as células imunes modificadas a um indivíduo resulta na ativação e/ou expansão de linfócitos T citotóxicos (CTLs) específicos para o antígeno do HPV. Em algumas modalidades, a administração da composição compreendendo as células imunes modificadas a um indivíduo resulta na ativação e/ou expansão de células T auxiliares (Th) específicas para o antígeno.

[0054] Em algumas modalidades, a quantidade eficaz da composição compreende entre cerca de 1 × 106 e cerca de 1 × 1012 células imunes modificadas. Em algumas modalidades, o antígeno compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com a SEQ ID Nº: 23. Em algumas modalidades, o antígeno compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 23.

[0055] Em algumas modalidades, a célula imune é uma célula T, uma célula dendrítica, um monócito, um macrófago, uma célula mieloide, um granulócito, um neutrófilo, uma célula mastro, uma célula exterminadora natural, uma célula linfoide inata, um basófilo ou uma célula precursora hematopoética. Em algumas modalidades, a célula imune não é uma célula T. Em algumas modalidades, a célula imune é uma célula T. Em algumas modalidades, a célula T compreende uma modificação adicional para modular expressão MHC de classe I. Em algumas modalidades, a célula T compreende uma modificação adicional para modular expressão MHC de classe II. Em algumas modalidades, a célula T compreende uma modificação adicional para reduzir expressão MHC de classe I e/ou expressão MHC de classe II. Em algumas modalidades, a modificação adicional compreende redução da expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II usando siRNA, shRNA, CRISPR/Cas9, ZFN, TALEN, recombinase Cre ou uma meganuclease. Em algumas modalidades, a célula T compreende uma modificação adicional para aumentar expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II. Em algumas modalidades, a modificação adicional compreende aumentar expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II usando RNA ou DNA plasmídico. Em algumas modalidades, uma resposta imune inata montada em um indivíduo em resposta à administração, em um contexto alogênico, das células T modificadas adicionalmente é reduzida em comparação com uma resposta imune inata montada em um indivíduo em resposta à administração, em um contexto alogênico, de células T modificadas correspondentes que não compreendem a modificação adicional. Em algumas modalidades, a meia- vida circulante das células T modificadas adicionalmente em um indivíduo ao qual foram administradas é modulada em comparação com a meia-vida circulante de células T modificadas correspondentes que não compreendem a modificação adicional em um indivíduo ao qual foram administradas.

[0056] Em algumas modalidades, a célula T inclui uma ou mais dentre células T auxiliares, células T citotóxicas, células T de memória, células CIK e células T exterminadoras naturais Em algumas modalidades, a célula T inclui uma ou mais dentre células T CD3+, células T CD4+, células T CD8+, células T CD45RA+, células T CD45RO+ e células T γδ. Em algumas modalidades, a célula modificada é alogênica a um indivíduo. Em algumas modalidades, a célula modificada é autóloga a um indivíduo. Em algumas modalidades, o indivíduo está precondicionado a ter inflamação modulada e/ou uma resposta imune modulada.

[0057] Em algumas modalidades, a composição compreende adicionalmente um inibidor de ponto de verificação imune. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação imune é direcionado a um ou mais dentre PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG3, ou TIM-3. Em algumas modalidades, administração da composição compreendendo as células imunes modificadas ao indivíduo resulta na ativação e/ou expansão de linfócitos T citotóxicos (CTLs) específicos para o antígeno do HPV. Em algumas modalidades, administração da composição compreendendo as células imunes modificadas a um indivíduo resulta na ativação e/ou expansão de células T (Th) auxiliares específicas para o antígeno.

[0058] Em algumas modalidades, a quantidade eficaz da composição compreende entre cerca de 1 × 106 e cerca de 1 × 1012 células imunes modificadas. Em algumas modalidades, o antígeno compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com a SEQ ID Nº: 23. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 23.

[0059] Em alguns aspectos, a invenção provê um método para tratar ou prevenir uma doença associada ao HPV em um indivíduo, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV e um adjuvante, em que o adjuvante é apresentado de maneira intracelular; em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada compreendendo um antígeno do HPV através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para que o antígeno e o adjuvante passem para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o adjuvante por tempo suficiente para permitir que o adjuvante entre na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas. Em algumas modalidades, a invenção provê um método para tratar ou prevenir uma doença associada ao HPV em um indivíduo, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV e um adjuvante, em que o adjuvante é apresentado de maneira intracelular; em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para que o antígeno e o adjuvante passem para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o adjuvante por tempo suficiente para permitir que o adjuvante entre na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas.

[0060] Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é menor que o diâmetro da célula. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é de cerca de 20% a cerca de 90% do diâmetro da célula T de entrada. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é de cerca de 20% a menos de 60% do diâmetro da célula. Em algumas modalidades, a constrição está em um canal. Em algumas modalidades, uma força de deformação é aplicada à célula de entrada à medida que passa através da constrição.

[0061] Em algumas modalidades, o antígeno do HPV e/ou o adjuvante estão presentes nos citosol e/ou endossomos. Em algumas modalidades, o antígeno e/ou adjuvante estão presentes em múltiplos compartimentos da célula. Em algumas modalidades, a concentração de adjuvante incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM. Em algumas modalidades, a concentração de antígeno incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM.

[0062] Em algumas modalidades, o adjuvante é CpG ODN, IFN- α, agonistas STING, agonistas RIG-I ou poli I:C. Em algumas modalidades, o adjuvante é CpG ODN. Em algumas modalidades, o CpG ODN é CpG ODN 1018, CpG ODN 1826 ou CpG ODN 2006.

[0063] Em algumas modificações, o antígeno do HPV é um HPV-16 ou um antígeno do HPV-18. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é um antígeno do HPV E6 ou um antígeno do HPV E7. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das

SEQ ID Nº: 18 a 25. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com a SEQ ID Nº: 23. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 23.

[0064] Em alguns aspectos, a invenção provê um método para tratar ou prevenir uma doença associada ao HPV em um indivíduo compreendendo administrar ao indivíduo uma célula imune modificada associada a um antígeno do HPV, em que a célula imune modificada é preparada por um processo compreendendo as etapas de: a) incubar uma célula de entrada com o antígeno do HPV e/ou um adjuvante por um tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV se associe à célula de entrada; gerando, desta forma, a célula imune modificada associada ao antígeno. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº:

23. Em algumas modalidades, o adjuvante é CpG ODN. Em algumas modalidades, o CpG ODN é CpG ODN 1018, CpG ODN 1826 ou CpG ODN

2006.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0065] A Fig. 1A mostra um esquema representativo dos grupos de tratamento e cronograma. A Fig. 1B mostra o crescimento do tumor, conforme medido pela fórmula ((comprimento x largura2)/2) em comparação entre os camundongos dentre o grupo não tratado (sem transferência adotiva de células T) e os grupos de tratamento B-E delineados na Figura 1A.

[0066] A Fig. 2A mostra um esquema representativo para avaliar os antígenos E7. A Fig. 2B mostra o impacto da sequência SLP nas células

T CD8+ produtoras de IFN-y geradas em resposta à vacinação TAPC.

[0067] A Fig. 3 é um gráfico que mostra a capacidade das SLPs de E6 de induzir uma resposta imune específica para antígenos em células T respondedoras de E6 em um modelo humano in vitro.

[0068] A Fig. 4 mostra a capacidade das SLPs de E7 de induzir uma resposta imune específica do antígeno em células T respondedoras E711-20, bem como o impacto da sequência SLP na ativação de APC de células T SQZ (Tapc) em um modelo humano in vitro.

[0069] A Fig. 5 mostra os resultados de um estudo para avaliar a dose de antígeno para APCs de células T SQZ em um modelo humano in vitro.

[0070] A Fig. 6 mostra os resultados de um estudo para determinar a variabilidade do doador para APCs de células T SQZ em um modelo humano in vitro.

[0071] A Fig. 7A é um esquema de um experimento para comparar a robustez das respostas imunes usando diferentes adjuvantes. A Fig. 7B mostra os resultados da experiência para comparar a robustez das respostas imunes usando poli I:C e um CpG ODN.

[0072] A Fig. 8A é um esquema de uma experiência avaliando o efeito da concentração de CpG ODN nas respostas imunes. A Fig. 8A mostra os resultados da experiência avaliando o efeito da concentração de CpG ODN nas respostas imunes.

[0073] A Fig. 9A é um esquema de uma experiência avaliando o cronograma de dosagem de CpG ODN nas respostas imunes. A Fig. 9B mostra os resultados da experiência avaliando o cronograma de dosagem de CpG ODN nas respostas imunes.

[0074] A Fig. 10A é um esquema de um experimento para avaliar a combinação de administração adjuvante de maneira intracelular e sistêmica para a função antitumoral TAPC. A Fig. 10B mostra as respostas das células T para cada grupo experimental e a Fig. 10C mostra o crescimento de tumores para cada grupo experimental. A Fig. 10D mostra o crescimento do tumor após reintrodução em animais tratados com SQZ (E7+CpG) em relação a animais não tratados.

[0075] A Fig. 11A é um esquema de um experimento para avaliar o efeito da combinação de múltiplos antígenos do HPV para a função antitumoral TAPC. A Fig. 11B mostra respostas das células T para cada grupo experimental e a Fig. 11C mostra o crescimento de tumores para cada grupo experimental.

[0076] A Fig. 12A mostra os resultados de uma experiência avaliando a importância da via de administração do adjuvante CpG para o efeito antitumoral TAPC específico para E7. O cronograma de dosagem é provido. A Fig. 12B mostra o volume do tumor ao longo do tempo para camundongos individuais em cada grupo de tratamento.

[0077] A Fig. 13 mostra um esquema de um experimento para avaliar a capacidade de adjuvantes coadministrados em levar à infiltração de tumor de células T específicas para E7. As respostas das células T são mostradas no painel inferior.

[0078] A Fig. 14A é um esquema de um experimento para determinar um cronograma de vacinação tanto para iniciação quanto para reforço de TAPCs carregados com um peptídeo sintético longo E7 (SLP) + CpG. A Fig. 14B mostra o crescimento de tumores para cada grupo experimental.

[0079] A Fig. 15 mostra os resultados de um experimento para mostrar que as T SQZ’d podem apresentar o antígeno diretamente.

[0080] A Fig. 16 mostra que a entrega SQZ de um adjuvante não altera significativamente os níveis de citocinas de células T in vitro.

[0081] A Fig. 17 mostra que a entrega SQZ de antígeno +/- adjuvante não altera significativamente os níveis de citocinas no soro in vivo.

[0082] A Fig. 18 mostra que a entrega SQZ do HPV-E7 contendo lisados celulares em células dendríticas (como APCs), seguida por coculturar as células dendríticas SQZ com respondentes de células T CD8+ leva a uma resposta celular T mais robusta em comparação com a entrega de mesmos lisados em células dendríticas por endocitose.

[0083] A Fig. 19A mostra um esquema representativo de um experimento para avaliar a capacidade da célula B como APCs de induzir uma resposta endógena. A Fig. 19B mostra os níveis de células T CD8+ positivas para IFN-y induzidas por desafio B9-23, geradas em resposta à vacinação com BAPC carregada com OVA. A Fig. 19C mostra os níveis de células T CD8+ positivas para IFN-y induzidas por desafio E7, geradas em resposta à vacinação com BAPC carregada com E7.

[0084] A Fig. 20A mostra o volume do tumor ao longo do tempo em um experimento para determinar a capacidade das células B carregadas com SQZ para atuar como APCs para tratamento profilático para tumores associados ao HPV. A Fig. 20B mostra os dados de sobrevivência correspondentes ao longo do tempo do tratamento profilático de células B APC para tumores associados ao HPV.

[0085] A Fig. 21A mostra o volume do tumor ao longo do tempo em um experimento para determinar a capacidade das células B carregadas com SQZ para atuar como APCs para o tratamento terapêutico de tumores associados ao HPV. A Fig. 21B mostra os dados de sobrevivência correspondentes ao longo do tempo do tratamento terapêutico de APC de células B para tumores associados ao HPV.

[0086] A Fig. 22A mostra o volume do tumor ao longo do tempo em um experimento para determinar a capacidade das células B carregadas com SQZ para atuar como APCs para o tratamento terapêutico de tumores associados ao HPV. A Fig. 22B mostra os perfis e porcentagens de vários fenótipos de células infiltradas por tumores que foram recrutados para os tumores.

[0087] A Fig. 23 mostra a secreção de IFN-y por respondedores

E7, como uma resposta específica ao antígeno in vitro para BAPC SQZ carregado com HPV16 E7 SLP.

[0088] A Fig. 24 mostra as quantidades relativas de recrutamento de linfócitos infiltrantes de tumor (TIL) para tumores administrados com TAPC SQZ carregada com HPV16 E7 SLP, com ou sem coadministração de adjuvante.

[0089] A Fig. 25 mostra o volume do tumor ao longo do tempo em um experimento para determinar a capacidade das células T carregadas com SQZ para atuar como APCs para o tratamento profilático de tumores associados ao HPV, tanto para um prazo mais curto (tumor de flanco direito, injetado no Dia 0) como bem como proteção de longo prazo (tumor do flanco esquerdo, injetado no Dia 60).

[0090] A Fig. 26 mostra o volume do tumor ao longo do tempo em um experimento para determinar o efeito da dose de células T, coadministração de adjuvante, bem como o número de administrações (iniciação vs. iniciação/reforço) na capacidade das células T carregadas com SQZ para atuam como APCs para o tratamento terapêutico de tumores associados ao HPV. "P" indica iniciação, e "B" indica reforço na Fig. 26.

[0091] A Fig. 27A mostra o volume do tumor ao longo do tempo em um experimento para determinar a capacidade das células B carregadas de SQZ de agir como APCs para tratamento terapêutico para tumores associados ao HPV, em comparação com células B eletroporadas, e uma vacina de peptídeo de alta dosagem em alta dose (SC SLP). A Fig. 27B mostra os dados de sobrevivência correspondentes ao longo do tempo do tratamento terapêutico APC de células B para tumores associados ao HPV, em comparação com células B lectroporadas, e uma vacina de peptídeo de alta dosagem.

[0092] A Fig. 28A mostra um esquema representativo de um experimento para avaliar a capacidade de esplenócitos como APCs de induzir uma resposta endógena. A Fig. 28C mostra os níveis de células T

CD8+ positivas para IFN-y induzidas por desafio E7, geradas em resposta à vacinação de APC de esplenócito carregado com OVA. A Fig. 28C mostra os níveis de células T CD8+ positivas para IFN-y induzidas por desafio E7, geradas em resposta à vacinação de APC de esplenócito carregado com E7.

[0093] A Fig. 29A mostra o volume do tumor ao longo do tempo em um experimento para determinar a capacidade de esplenócitos carregados de SQZ para atuar como APCs para tratamento terapêutico para tumores associados ao HPV. A Fig. 29B mostra os dados de sobrevivência correspondentes ao longo do tempo do tratamento terapêutico esplenócito APC para tumores associados ao HPV.

[0094] A Fig. 30 mostra a secreção IFN-y por E7 respondentes, como uma resposta in vitro antígeno específico para PBMCAPC SQZ carregado com HPV16 E7 SLP.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0095] Em alguns aspectos, a presente invenção provê métodos para tratar e prevenir uma doença associada ao HPV e/ou modular a resposta imune em um indivíduo com uma doença associada ao HPV compreendendo administrar ao indivíduo uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes compreendem de maneira intracelular um antígeno do HPV e de maneira intracelular um adjuvante. Em alguns aspectos, a presente invenção provê métodos para tratar e prevenir uma doença associada ao HPV e/ou modular a resposta imune em um indivíduo com uma doença associada ao HPV, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem de maneira intracelular um antígeno do HPV e de maneira intracelular um adjuvante; em que as células imunes modificadas são preparadas ao passar primeiro uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na pele suspensa, causando, desta forma, perturbações do célula de entrada grande o suficiente para o antígeno e o adjuvante passarem para formar uma célula de entrada perturbada; e depois incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV e o adjuvante por um tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV e o adjuvante entrem na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas. Certos aspectos da presente divulgação se referem a métodos para gerar uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que uma célula imune é transmitida através de uma constrição, em que a constrição deforma a célula, causando, desta forma, uma perturbação da célula de modo que um antígeno do HPV e/ou um adjuvante entram na célula imune a ser modificada.

[0096] Em alguns aspectos, a presente invenção provê métodos para tratar e prevenir uma doença associada ao HPV e/ou modular a resposta imune em um indivíduo com uma doença associada ao HPV compreendendo administrar ao indivíduo uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes compreendem de maneira intracelular um antígeno do HPV. Em alguns aspectos, a presente invenção provê métodos para tratar e prevenir uma doença associada ao HPV e/ou modular a resposta imune em um indivíduo com uma doença associada ao HPV, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem de maneira intracelular um antígeno do HPV, em que as células imunes modificadas são preparadas ao passar primeiro uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma,

perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para o antígeno passar para formar uma célula de entrada perturbada; e, em seguida, incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV por um tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV entre na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas. Certos aspectos da presente divulgação se referem a métodos para gerar uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que uma célula imune é transmitida através de uma constrição, em que a constrição deforma a célula, causando, desta forma, uma perturbação da célula de modo que um antígeno do HPV entra na célula imune a ser modificada. Em algumas outras modalidades, o método para tratar e prevenir uma doença associada ao HPV e/ou modulação da resposta imune em um indivíduo com uma doença associada ao HPV compreende adicionalmente a administração de um adjuvante ao indivíduo. Em algumas modalidades, a composição de células imunes modificadas compreende adicionalmente mais um adjuvante (por exemplo, um oligonucleotídeo CpG (CpG ODN) ou IFNα. Em algumas modalidades, as células imunes modificadas compreendem ainda mais um adjuvante de maneira intracelular, como um CpG ODN. Técnicas Gerais

[0097] As técnicas e procedimentos descritos ou referenciados neste documento são geralmente bem compreendidos e comumente empregados utilizando metodologia convencional por aqueles versados na técnica, de tal modo como, por exemplo, as metodologias amplamente utilizadas descritas em Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Sambrook et al., 4th ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 2012); Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel, etal. eds., 2003); the series Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); PCR 2: A Practical Approach (M.J. MacPherson, B.D. Hames and G.R. Taylor eds., 1995); Antibodies, A Laboratory Manual (Harlow and Lane, eds.,

1988); Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique and Specialized Applications (R.I. Freshney, 6th ed., J. Wiley and Sons, 2010); Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., Academic Press, 1998); Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather and P.E. Roberts, Plenum Press, 1998); Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., J. Wiley and Sons, 1993-8); Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds., 1996); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis etal., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan et al, eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Ausubel et al, eds., J. Wiley and Sons, 2002); Immunobiology (C.A. Janeway et al, 2004); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: A Practical Approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow and D. Lane, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti and J. D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995); e Cancer: Principles and Practice of Oncology (V.T. DeVita et al., eds., J.B. Lippincott Company, 2011). Definições

[0098] Para efeitos de interpretação desse relatório descritivo, serão aplicadas as seguintes definições e, sempre que apropriado, os termos usados no singular também incluirão o plural e vice-versa. Caso qualquer definição estabelecida abaixo entre em conflito com qualquer documento incorporado por referência neste documento, a definição estabelecida será controlada.

[0099] Como usado neste documento, a forma singular "um", "uma" e "o/a" inclui referências plurais, a menos que indicado o contrário.

[00100] Entende-se que aspectos e modalidades da invenção descritas neste documento incluem "compreendendo", "consistindo" e "consistindo essencialmente em" aspectos e modalidades.

[00101] O termo "cerca de" como usado neste documento se refere ao intervalo de erro habitual para o valor respectivo facilmente conhecido ao versado na técnica neste campo técnico. A referência de "cerca de" um valor ou parâmetro inclui (e descreve) neste documento modalidades que são dirigidas a esse valor ou parâmetro em si.

[00102] Como usado neste documento, "tratamento" é uma abordagem para obter resultados clínicos benéficos ou desejados. O "tratamento" como usado neste documento, abrange qualquer administração ou aplicação de uma terapêutica para doenças em um mamífero, incluindo um humano. Para os fins desta invenção, os resultados clínicos benéficos ou desejados incluem, mas não estão limitados a, qualquer um ou mais de alívio de um ou mais sintomas, diminuição da extensão da doença, prevenção ou retardamento da propagação (por exemplo, metástase, por exemplo, metástase para pulmão ou para o nódulo linfático) da doença, prevenindo ou retardando a recorrência da doença, retardando ou desacelerando a progressão da doença, melhorando o estado da doença, inibindo a doença ou progressão da doença, inibindo ou retardando a doença ou sua progressão, interrompendo seu desenvolvimento e remissão (seja parcial ou total). Também englobado pelo "tratamento" é uma redução da consequência patológica de uma doença proliferativa. Os métodos da invenção contemplam qualquer um ou mais desses aspectos do tratamento.

[00103] No contexto de câncer, o termo "tratamento" inclui qualquer ou todo o crescimento inibidor das células cancerosas, inibindo a replicação de células cancerosas, diminuindo a carga tumoral global e amenizando um ou mais sintomas associados à doença.

[00104] O termo "poros" como usado neste documento se refere a uma abertura, incluindo, sem limitação, um buraco, desgaste, cavidade, orifício, ruptura, lacuna ou perfuração dentro de um material. Em alguns exemplos, (onde for indicado) o termo se refere a um poro dentro de uma superfície da presente divulgação. Em outros exemplos, (onde for indicado) um poro pode se referir a um poro em uma membrana celular.

[00105] O termo "membrana" como usado neste documento se refere a uma barreira seletiva ou placa contendo poros. O termo inclui uma estrutura de placas flexíveis que agem como um limite ou forro. Em alguns exemplos, o termo se refere a uma superfície ou filtro contendo poros. Este termo é distinto do termo "membrana celular".

[00106] O termo "filtro" como usado neste documento se refere a um artigo poroso que permite a passagem seletiva através dos poros. Em alguns exemplos, o termo se refere a uma superfície ou membrana contendo poros.

[00107] O termo "heterogêneo" como usado neste documento se refere a algo que é misturado ou não uniforme em estrutura ou composição. Em alguns exemplos, o termo se refere a poros com tamanhos, formas ou distribuições variados dentro de uma determinada superfície.

[00108] O termo "homogêneo" como usado neste documento se refere a algo que é consistente ou uniforme em estrutura ou toda a composição. Em alguns exemplos, o termo se refere a poros com tamanhos, formas ou distribuições consistentes dentro de uma determinada superfície.

[00109] O termo "homólogo", tal como usado neste documento, se refere a uma molécula que é derivada do mesmo organismo. Em alguns exemplos, o termo se refere a um ácido nucleico ou proteína que é normalmente encontrado ou expresso dentro de um determinado organismo.

[00110] O termo "heterólogo" no que se refere a sequências de ácido nucleico, de tal modo como sequências de codificação e sequências de controle, denota sequências que normalmente não são unidas e/ou normalmente não estão associadas a uma célula em particular. Deste modo, uma região "heteróloga" de uma construção de ácido nucleico ou um vetor é um segmento de ácido nucleico dentro ou anexado a outra molécula de ácido nucleico que não é encontrada em associação com a outra molécula na natureza. Por exemplo, uma região heteróloga de um construção de ácido nucleico poderia incluir uma sequência de codificação flanqueada por sequências não encontradas em associação com a sequência de codificação na natureza. Outro exemplo de sequência de codificação heteróloga é uma construção onde a própria sequência de codificação não é encontrada na natureza (por exemplo, sequências sintéticas tendo códons diferentes do gene nativo). Semelhantemente, uma célula transformada com uma construção que não está normalmente presente na célula seria considerada heteróloga para os fins desta invenção. Variação alélica ou eventos mutacionais de ocorrência natural não dão origem a DNA heterólogo, como usado neste documento.

[00111] O termo "heterólogo" no que se refere às sequências de aminoácido, de tal modo como sequências de peptídeo e sequências de polipeptídeo, denota sequências que normalmente não são unidas e/ou normalmente não estão associadas a uma célula em particular. Deste modo, uma região "heteróloga" de uma sequência de peptídeo é um segmento de aminoácidos dentro ou anexado a outra molécula de aminoácido que não é encontrada em associação com a outra molécula na natureza. Por exemplo, uma região heteróloga de um construção de peptídeo poderia incluir a sequência de aminoácido do peptídeo flanqueado por sequências não encontradas em associação com a sequência de aminoácido do peptídeo na natureza. Outro exemplo de sequência de peptídeos heterólogos é uma construção onde a própria sequência de peptídeo não é encontrada na natureza (por exemplo, sequências sintéticas tendo aminoácidos diferentes como codificados a partir do gene nativo).

Semelhantemente, uma célula transformada com um vetor que expressa um construção de aminoácido que não está normalmente presente na célula seria considerada heteróloga para os fins desta invenção. Variação alélica ou eventos mutacionais de ocorrência natural não dão origem aos peptídeos heterólogos, como usado neste documento.

[00112] Conforme usado neste documento, o termo "inibir" pode se referir ao ato de bloquear, reduzir, eliminar ou, de outra forma, antagonizar a presença ou uma atividade de um alvo em partircular. A inibição pode se referir a inibição parcial ou inibição completa. Por exemplo, a inibição de uma resposta imune pode se referir a qualquer ato que leve a um bloqueio, redução, eliminação ou qualquer outro antagonismo de uma resposta imune. Em outros exemplos, a inibição da expressão de um ácido nucleico pode incluir, mas não se limitando à redução na transcrição de um ácido nucleico, redução da abundância de mRNA (por exemplo, omitindo a transcrição de mRNA), degradação de mRNA, inibição da tradução de mRNA e assim por diante.

[00113] Conforme usado neste documento, o termo "suprimir" pode se referir ao ato de decrescer, reduzir, proibir, limitar, minimizar ou de outra forma diminuir a presença ou uma atividade de um alvo em particuar. A supressão pode se referir à supressão parcial ou supressão completa. Por exemplo, suprimir uma resposta imune pode se referir a qualquer ato que leve a decrescer, reduzir, proibir, limitar, minimizar ou de outra forma diminuir uma resposta imune. Em outros exemplos, a supressão da expressão de um ácido nucleico pode incluir, mas não se limitando à redução na transcrição de um ácido nucleico, redução da abundância de mRNA (por exemplo, omitindo a transcrição de mRNA), degradação de mRNA, inibição da tradução de mRNA e assim por diante.

[00114] Conforme usado neste documento, o termo "melhorar" pode se referir ao ato de aprimorar, reforçar, elevar ou de outra forma aumentar a presença ou a atividade de um alvo em particular. Por exemplo,

o melhoramento de uma resposta imune pode se referir a qualquer ato que leve a aprimorar, reforçar, elevar ou de outra forma aumentar uma resposta imune. Em um exemplo exemplar, o melhoramento de uma resposta imune pode se referir ao emprego de um antígeno e/ou adjuvante para aprimorar, reforçar, elevar ou de outro modo aumentar uma resposta imune. Em outros exemplos, o melhoramento da expressão de um ácido nucleico pode incluir, mas não se limitando ao aumento na transcrição de um ácido nucleico, aumento da abundância de mRNA (por exemplo, aumentando a transcrição de mRNA), diminuição da degradação de mRNA, aumento da tradução de mRNA e assim por diante.

[00115] Conforme usado neste documento, o termo "modular" pode se referir ao ato de mudar, alterar, variar ou de outra forma modificar a presença ou uma atividade de um alvo em particular. Por exemplo, a modulação de uma resposta imune pode se referir a qualquer ato que leve a mudar, alterar, variar ou de outra forma modificar uma resposta imune. Em alguns exemplos, "modulação" se refere ao aumento da presença ou atividade de um alvo específico. Em alguns exemplos, "modulação" se refere ao aumento da presença ou atividade de um alvo específico. Em outros exemplos, a modulação da expressão de um ácido nucleico pode incluir, mas não se limitando a uma mudança na transcrição de um ácido nucleico, uma mudança da abundância de mRNA (por exemplo, aumentando a transcrição de mRNA), uma mudança correspondente da degradação de mRNA, uma mudança da tradução de mRNA e assim por diante.

[00116] Conforme usado neste documento, o termo "induzir" pode se referir ao ato de iniciar, induzir, estimular, estabelecer ou de outra forma produzir um resultado. Por exemplo, a indução de uma resposta imune pode se referir a qualquer ato que leve a iniciar, induzir, estimular, estabelecer ou de outra forma produzir uma resposta imune desejada. Em outros exemplos, a indução da expressão de um ácido nucleico pode incluir, mas não se limitando, a iniciação da transcrição de um ácido nucleico, a iniciação da tradução de mRNA e assim por diante.

[00117] Conforme usado neste documento, uma "células mononucleares de sangue periférico" ou "PBMCs" se refere a uma população heterogênea de células sanguíneas com um núcleo redondo. Exemplos de células que podem ser encontradas em uma população de PBMCs incluem linfócitos, como células T, células B, células NK (incluindo células NKT e células CIK) e monócitos, como macrófagos e células dendríticas. Uma "pluralidade de PBMCs", conforme usado neste documento, se refere a uma preparação de PBMCs compreendendo células de pelo menos dois tipos de células sanguíneas. Em algumas modalidades, uma pluralidade de PBMCs compreende duas ou mais células T, células B, células NK, macrófagos ou células dendríticas. Em algumas modalidades, uma pluralidade de PBMCs compreende três ou mais células T, células B, células NK, macrófagos ou células dendríticas. Em algumas modalidades, uma pluralidade de PBMCs compreende quatro ou mais células T, células B, células NK, macrófagos ou células dendríticas. Em algumas modalidades, uma pluralidade de PBMCs compreende células T, células B, células NK, macrófagos e células dendríticas.

[00118] PBMCs podem ser isolados por meios conhecidos na técnica. Por exemplo, PBMCs podem ser derivados do sangue periférico de um indivíduo com base na densidade de PBMCs em comparação com outras células sanguíneas. Em algumas modalidades, os PBMCs são derivados do sangue periférico de um indivíduo usando Ficoll (por exemplo, um gradiente de Ficoll). Em algumas modalidades, os PBMCs são derivados do sangue periférico de um indivíduo usando o sistema de separação de células ELUTRA®.

[00119] Em algumas modalidades, uma população de PBMCs é isolada de um indivíduo. Em algumas modalidades, uma pluralidade de PBMCs é uma população autóloga de PBMCs em que a população é derivada de um indivíduo específico, manipulada por qualquer um dos métodos descritos neste documento e retornada ao indivíduo específico. Em algumas modalidades, uma pluralidade de PBMCs é uma população alogênica de PBMCs em que a população é derivada de um indivíduo, manipulada por qualquer um dos métodos descritos neste documento e administrada a um segundo indivíduo.

[00120] Em algumas modalidades, uma pluralidade de PBMCs é uma preparação reconstituída de PBMCs. Em algumas modalidades, a pluralidade de PBMCs pode ser gerada pela mistura de células normalmente encontradas em uma população de PBMCs; por exemplo, misturando populações de duas ou mais células T, células B, células NK ou monócitos.

[00121] O termo "polinucleotídeo" ou "ácido nucleico", como usado neste documento, se refere a uma forma polimérica de nucleotídeos de qualquer comprimento, seja ribonucleotídeos ou desoxirribonucleotídeos. Deste modo, este termo inclui, mas não está limitado a, DNA ou RNA de filamento único, duplo ou múltiplo, DNA genômico, cDNA, híbridos de DNA-RNA ou um polímero compreendendo bases de purina e pirimidina, ou outra bases de nucleotídeos natural, modificadas quimicamente ou bioquimicamente, não naturais ou derivadas. A estrutura do polinucleotídeo pode compreender açúcares e grupos fosfato (como pode ser tipicamente encontrado no RNA ou DNA), ou açúcar modificado ou substituído ou grupos fosfato. Alternativamente, a estrutura do polinucleotídeo pode compreender um polímero de subunidades sintéticas, como fosforamidatos e fosforotioatos, e, portanto, pode ser um fosforamidato de oligodesoxinucleosídeo (P-NH2), um oligômero de fosforotioato-fosfodiéster misto ou um oligômero de fosforamidato- fosfodiéster misto. Além disso, um polinucleotídeo de fita dupla pode ser obtido a partir do produto polinucleotídeo de fita simples da síntese química, quer sintetizando a fita complementar e emparelhando as fitas sob condições apropriadas, ou sintetizando a fita complementar de novo usando uma DNA polimerase com um iniciador apropriado.

[00122] Os termos "polipeptídeo" e "proteína" são usados de maneira alternada para se referir a um polímero de resíduos de aminoácidos e não estão limitados a um comprimento mínimo. Tais polímeros de resíduos de aminoácidos podem conter resíduos de aminoácidos naturais ou não naturais e incluem, mas não estão limitados a, peptídeos, oligopeptídeos, dímeros, trímeros e multímeros de resíduos de aminoácidos. Tanto as proteínas de comprimento total como os seus fragmentos são abrangidos pela definição. Os termos também incluem modificações pós-expressão do polipeptídeo, por exemplo, glicosilação, sialilação, acetilação, fosforilação e semelhantes. Adicionalmente, para os fins da presente invenção, um "polipeptídeo" se refere a uma proteína que inclui modificações, tais como deleções, adições e substituições (geralmente de natureza conservadora), na sequência nativa, desde que a proteína mantenha a atividade desejada. Essas modificações podem ser deliberadas, como por meio de mutagênese dirigida ao local, ou podem ser acidentais, de tal modo como por meio de mutações de hospedeiros que produzem as proteínas ou erros devido à amplificação por PCR.

[00123] Conforme usado neste documento, o termo "adjuvante" se refere a uma substância que modula direta ou indiretamente e/ou engendra uma resposta imune. Geralmente, o adjuvante é administrado em conjunto com um antígeno para efetuar o aumento de uma resposta imune ao antígeno em comparação com o antígeno sozinho. Vários adjuvantes são descritos neste documento.

[00124] Os termos "oligodesoxinucleotídeo CpG" e "CpG ODN" se referem neste documento a moléculas de DNA de 10 a 30 nucleotídeos de comprimento contendo um dinucleotídeo de citosina e guanina separados por um fosfato (também referido neste documento como um dinucleotídeo "CpG" ou "CpG") Os CpG ODNs da presente divulgação contêm pelo menos um dinucleotídeo CpG não metilado. Ou seja, a citosina no dinucleotídeo CpG não é metilada (ou seja, não é 5-metilcitosina). Os ODNs CpG podem ter uma estrutura de fosforotioato (PS) parcial ou completa.

[00125] Conforme usado neste documento, por "farmaceuticamente aceitável" ou "farmacologicamente compatível" significa um material que não é biologicamente ou de outra forma indesejável, por exemplo, o material pode ser incorporado em uma composição farmacêutica administrada a um paciente sem causar quaisquer efeitos biológicos indesejáveis significativos ou interagir de forma prejudicial com qualquer um dos outros componentes da composição em que está contido. Os carreadores ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis têm, preferencialmente, atendido os padrões exigidos de testes toxicológicos e de fabricação e/ou estão incluídos no Guia de Ingredientes Inativos preparado pela Administração de Drogas e Alimentos (FDA) dos Estados Unidos.

[00126] Para qualquer uma das características estruturais e funcionais descritas neste documento, os métodos de determinação dessas características são conhecidos na técnica. Sistemas microfluídicos e componentes dos mesmos Canais microfluídicos para provêr constrições de deformação celular

[00127] Em alguns aspectos, a presente invenção provê métodos para tratar e prevenir uma doença associada ao HPV e/ou modular a resposta imune em um indivíduo com uma doença associada ao HPV, o método compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem, de maneira intracelular, um antígeno do HPV e, de maneira intracelular, um adjuvante; em que as células imunes modificadas são preparadas ao passar primeiro uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição deformadora de células, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grande o suficiente para o antígeno e o adjuvante passarem para formar uma célula de entrada perturbada; e depois incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV e o adjuvante por um tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV e o adjuvante entrem na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas. Em algumas modalidades, a constrição está contida dentro de um canal microfluídico. Em algumas modalidades, múltiplas constrições podem ser colocadas em paralelo e/ou em série dentro do canal microfluídico. Em algumas modalidades, uma força de deformação é aplicada à célula de entrada à medida que passa através da constrição. Canais microfluídicos exemplares contendo constrições de deformação celular para uso nos métodos divulgados neste documento são descritos em WO2013059343. Superfícies exemplares com poros para uso nos métodos divulgados neste documento são descritas em W02017041050.

[00128] Em algumas modalidades, o canal microfluídico inclui um lúmen e é configurado de tal modo que uma célula imune suspensa em um tampão possa passar, em que o canal microfluídico inclui uma constrição. O canal microfluídico pode ser feito de qualquer um dentre uma série de materiais, incluindo silício, metal (por exemplo, aço inoxidável), plástico (por exemplo, poliestireno), cerâmica, vidro, substratos cristalinos, substratos amorfos ou polímeros (por exemplo, Polimetilmetacrilato (PMMA), PDMS, Copolímero de Olefina Cíclica (COC), etc.). A fabricação do canal microfluídico pode ser realizada por qualquer método conhecido na técnica, incluindo gravação a seco, gravação úmida, fotolitografia, moldagem por injeção, ablação a laser ou máscaras SU-8.

[00129] Em algumas modalidades, a constrição dentro do canal microfluídico inclui uma porção de entrada, um ponto central e uma porção de saída.

Em algumas modalidades, o comprimento, a profundidade e a largura da constrição dentro do canal microfluídico podem variar.

Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição dentro do canal microfluídico é uma função do diâmetro da célula imune.

Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição dentro do canal microfluídico é de cerca de 20% a cerca de 99% do diâmetro da célula imune.

Em algumas modalidades, o tamanho da constrição é de cerca de 20%, cerca de 30%, cerca de 40%, cerca de 50%, cerca de 60%, cerca de 70%, cerca de 80%, cerca de 90%, ou cerca de 99% do diâmetro da célula imune.

Em algumas modalidades, o tamanho da constrição é de cerca de 20%, cerca de 30%, cerca de 40%, cerca de 50%, cerca de 60%, cerca de 70%, cerca de 80%, cerca de 90%, ou cerca de 99% da distância transversal mínima da célula imune.

Em algumas modalidades, o canal compreende uma largura de constrição entre cerca de 2 μm e cerca de 10 μm ou qualquer largura ou intervalo de larguras entre as mesmas.

Por exemplo, a largura de constrição pode ser qualquer uma de cerca de 2 μm, cerca de 3 μm, cerca de 4 μm, cerca de 5 μm, cerca de 6 μm ou cerca de 7 μm.

Em algumas modalidades, o canal compreende um comprimento de constrição de cerca de 10 μm e uma largura de constrição de cerca de 4 μm.

A seção transversal do canal, a porção de entrada, o ponto central e a porção de saída também podem variar.

Por exemplo, as seções transversais podem ser circulares, elípticas, uma fenda alongada, em formato quadrado, hexagonal ou triangular.

A porção de entrada define um ângulo de constrição, em que o ângulo de constrição é otimizado para reduzir o entupimento do canal e otimizado para entrega intensificada de um composto na célula imune.

O ângulo da porção de saída também pode variar.

Por exemplo, o ângulo da porção de saída é configurado para reduzir a probabilidade de turbulência que pode resultar em fluxo não laminar.

Em algumas modalidades, as paredes da porção de entrada e/ou da porção de saída são lineares.

Em algumas modalidades, as paredes da porção de entrada e/ou da porção de saída são curvas. A taxa de fluxo através do canal também pode ser ajustada. Em algumas modalidades, a taxa de fluxo através do canal está entre cerca de 0,001 mL/cm2/seg a cerca de 100 L/cm2/seg ou qualquer taxa ou intervalo de taxas entre elas.

[00130] Em algumas modalidades, de acordo com qualquer um dos métodos ou composições descritos neste documento, em que a célula imune é uma pluralidade de PBMCs, o diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro dos PBMCs, tal como o diâmetro médio de uma pluralidade de PBMCs, ou um diâmetro médio de uma subpopulação dentro da pluralidade de PBMCs. Em algumas modalidades, o diâmetro de uma célula é medido pela distância transversal mínima da célula (por exemplo, uma célula dentro da pluralidade de PBMCs).

[00131] Em algumas modalidades, de acordo com qualquer um dos métodos ou composições descritos neste documento, em que a célula imune é uma pluralidade de PBMCs, o diâmetro da constrição é de cerca de 10% a cerca de 99% do diâmetro médio da pluralidade de PBMCs de entrada. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é qualquer um dentre cerca de 10% a 90%, cerca de 10% a cerca de 80%, cerca de 10% a cerca de 70%, cerca de 20% a cerca de 60%, cerca de 40% a cerca de 60%, cerca de 30% a cerca de 45% do diâmetro médio da pluralidade de PBMCs de entrada. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é qualquer um dentre cerca de 10% a 20%, cerca de 20% a cerca de 30%, cerca de 30% a cerca de 40%, cerca de 40% a cerca de 50%, cerca de 50% a cerca de 60%, cerca de 60% a cerca de 70%, cerca de 70% a cerca de 80%, cerca de 80% a cerca de 90% ou cerca de 90% a cerca de 99% do diâmetro médio da pluralidade de PBMCs de entrada. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é qualquer um dentre cerca de 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 99% do diâmetro médio da pluralidade de PBMCs de entrada.

[00132] Em algumas modalidades, de acordo com qualquer um dos métodos ou composições descritos neste documento, em que a célula imune é uma pluralidade de PBMCs, o diâmetro da constrição é de cerca de 10% a cerca de 99% de um diâmetro médio de uma subpopulação de células tendo o menor diâmetro dentro da pluralidade de PBMCs de entrada.

Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é qualquer um dentre cerca de 10% a cerca de 90%, cerca de 10% a cerca de 80%, cerca de 10% a cerca de 70%, cerca de 20% a cerca de 60%, cerca de 40% a cerca 60%, cerca de 30% a cerca de 45%, cerca de 50% a cerca de 99%, cerca de 50% a cerca de 90%, cerca de 50% a cerca de 80%, cerca de 50% a cerca de 70%, cerca de 60% a cerca de 90%, cerca de 60% a cerca de 80%, ou cerca de 60% a cerca de 70% do diâmetro médio de uma subpopulação de células tendo o menor diâmetro dentro da pluralidade de PBMCs de entrada.

Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é qualquer um dentre cerca de 10% a cerca de 20%, cerca de 20% a cerca de 30%, cerca de 30% a cerca de 40%, cerca de 40% a cerca de 50%, cerca de 50% a cerca 60%, cerca de 60% a cerca de 70%, cerca de 70% a cerca de 80%, cerca de 80% a cerca de 90%, ou cerca de 90% a cerca de 99% do diâmetro médio de uma subpopulação de células com o menor diâmetro dentro do pluralidade de PBMCs de entrada.

Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é qualquer um dentre cerca de 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 99% do diâmetro médio de uma subpopulação de células com o menor diâmetro dentro da pluralidade de PBMCs de entrada.

Em algumas modalidades, a subpopulação de células com o menor diâmetro médio dentro da pluralidade de PBMCs de entrada é uma população de linfócitos, em que o diâmetro da população de linfócitos é de cerca de 6 µm a cerca de 10 µm.

Em algumas modalidades, o diâmetro médio da população de linfócitos é de cerca de 7 µm.

Em algumas modalidades, a população de linfócitos é uma população de células T.

Em algumas modalidades, os linfócitos são células T. Em algumas modalidades, a subpopulação de células tendo o menor diâmetro médio dentro da pluralidade de PBMCs de entrada são células T.

[00133] Em algumas modalidades, de acordo com qualquer um dos métodos ou composições descritos neste documento, em que a célula imune é uma pluralidade de PBMCs, o diâmetro da constrição é de cerca de 10% a cerca de 99% de um diâmetro médio de uma subpopulação de células tendo o maior diâmetro dentro da pluralidade de PBMCs de entrada. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é qualquer um dentre cerca de 10% a cerca de 90%, cerca de 10% a cerca de 80%, cerca de 10% a cerca de 70%, cerca de 20% a cerca de 60%, cerca de 40% a cerca 60%, cerca de 30% a cerca de 45%, cerca de 15% a cerca de 30%, cerca de 15% a cerca de 20%, cerca de 20% a cerca de 25%, cerca de 25% a cerca de 30%, cerca de 20% a cerca de 30%, cerca de 30% a cerca de 70%, ou cerca de 30% a cerca de 60% do diâmetro médio de uma subpopulação de células tendo o maior diâmetro dentro da pluralidade de PBMCs de entrada. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é qualquer um dentre cerca de 5% a cerca de 10%, cerca de 10% a cerca de 20%, cerca de 20% a cerca de 30%, cerca de 30% a cerca de 40%, cerca de 40% a cerca de 50%, cerca de 50% a cerca 60%, cerca de 60% a cerca de 70%, cerca de 70% a cerca de 80%, cerca de 80% a cerca de 90%, ou cerca de 90% a cerca de 99% do diâmetro médio de uma subpopulação de células com o maior diâmetro dentro do pluralidade de PBMCs de entrada. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é qualquer um dentre cerca de 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 99% do diâmetro médio de uma subpopulação de células com o maior diâmetro dentro da pluralidade de PBMCs de entrada. Em algumas modalidades, a subpopulação de células com o maior diâmetro médio dentro da pluralidade de PBMCs de entrada é uma população de monócitos, em que o diâmetro da população de monócitos é de cerca de 15 µm a cerca de 25 µm. Em algumas modalidades, o diâmetro médio da população de monócitos é de cerca de 20 µm. Em algumas modalidades, a subpopulação de células tendo o maior diâmetro médio dentro da pluralidade de PBMCs de entrada são monócitos .

[00134] Em algumas modalidades, de acordo com qualquer um dos métodos ou composições descritos neste documento, o diâmetro da constrição é de cerca de 3 μm a cerca de 15 μm. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é de cerca de 3 μm a cerca de 10 μm. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é de cerca de 4 μm a cerca de 10 μm. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é de cerca de 4,2 μm a cerca de 6 μm. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é de cerca de 4,2 μm a cerca de 4,8 μm. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é qualquer um dentre cerca de 2 µm a cerca de 14 µm, cerca de 4 µm a cerca de 12 µm, cerca de 6 µm a cerca de 9 µm, cerca de 4 µm a cerca de 6 µm, cerca de 4 µm a cerca de 5 µm, cerca de 3,5 µm a cerca de 7 µm, cerca de 3,5 µm a cerca de 6,3 µm, cerca de 3,5 µm a cerca de 5,6 µm, cerca de 3,5 µm a cerca de 4,9 µm, cerca de 4,2 µm a cerca de 6,3 µm, cerca de 4,2 µm a cerca de 5,6 µm, ou cerca de 4,2 µm a cerca de 4,9 µm. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é qualquer um dentre cerca de 2 µm, 2,5 µm, 3 µm, 3,5 µm, 4 µm, 4,5 µm, 5 µm, 5,5 µm, 6 µm, 6,5 µm, 7 µm, 7,5 µm, 8 µm, 8,5 µm, 9 µm, 9,5 µm, 10 µm, 10,5 µm, 11 µm, 11,5 µm, 12 µm, 12,5 µm, 13 µm, 13,5 µm, 14 µm, 14,5 µm ou 15 µm. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é qualquer um dentre cerca de 4,0 µm, 4,1 µm, 4,2 µm, 4,3 µm, 4,4 µm, 4,5 µm, 4,6 µm, 4,7 µm, 4,8 µm, 4,9 µm ou 5,0 µm. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é de cerca de 4,5 µm.

[00135] Em algumas modalidades, de acordo com qualquer um dos métodos ou composições descritos neste documento, a célula imune de entrada é passada através da constrição a uma taxa de fluxo entre cerca de 0,001 mL/min a cerca de 200 mL/min ou qualquer taxa ou intervalo de taxas entre elas. Em algumas modalidades, a taxa de fluxo está entre cerca de 0,001 mL/min a cerca de 175 mL/min, cerca de 0,001 mL/min a cerca de 150 mL/min, cerca de 0,001 mL/min a cerca de 125 mL/min, cerca de 0,001 mL/min a cerca de 100 mL/min, cerca de 0,001 mL/min a cerca de 50 mL/min, cerca de 0,001 mL/min a cerca de 25 mL/min, cerca de 0,001 mL/min a cerca de 10 mL/min, cerca de 0,001 mL/min a cerca de 7,5 mL/min, cerca de 0,001 mL/min a cerca de 5,0 mL/min, cerca de 0,001 mL/min para cerca de 2,5 mL/min, cerca de 0,001 mL/min a cerca de 1 mL/min, cerca de 0,001 mL/min a cerca de 0,1 mL/min ou cerca de 0,001 mL/min a cerca de 0,01 mL/min. Em algumas modalidades, a taxa de fluxo está entre cerca de 0,001 mL/min a cerca de 200 mL/min, cerca de 0,01 mL/min a cerca de 200 mL/min, cerca de 0,1 mL/min a cerca de 200 mL/min, cerca de 1 mL/min a cerca de 200 mL/min, cerca de 10 mL/min a cerca de 200 mL/min cerca de 50 mL/min a cerca de 200 mL/min, cerca de 75 mL/min a cerca de 200 mL/min, cerca de 100 mL/min a cerca de 200 mL/min, cerca de 150 mL/min a cerca de 200 mL/min, cerca de 0,5 mL/min para cerca de 200 mL/min, cerca de 1 mL/min a cerca de 200 mL/min, cerca de 2,5 mL/min a cerca de 200 mL/min, cerca de 5 mL/min a cerca de 200 mL/min, cerca de 7,5 mL/min a cerca de 200 mL/min, cerca de 10 mL/min a cerca de 200 mL/min, cerca de 25 mL/min a cerca de 200 mL/min, ou cerca de 175 mL/min a cerca de 200 mL/min. Em algumas modalidades, a célula imune de entrada é passada através da constrição em uma taxa de fluxo entre cerca de 10 mL/min a cerca de 200 mL/min. Em algumas modalidades, a célula imune de entrada é passada através da constrição em uma taxa de fluxo de cerca de 100 mL/min.

[00136] Em algumas modalidades, de acordo com qualquer um dos métodos ou composições descritos neste documento, a constrição pode ter qualquer formato conhecido na técnica; por exemplo, um formato tridimensional ou um formato bidimensional. O formato bidimensional, tal como o formato transversal, da constrição pode ser, sem limitação, circular, elíptica, redonda, quadrada, em formato de estrela, triangular, poligonal, pentágono, hexagonal, heptagonal ou octogonal.

O formato tridimensional da constrição pode ser, sem limitação, cilíndrica, cônica ou cuboidal.

Em algumas modalidades, o formato transversal da constrição é um retângulo.

Em algumas modalidades, o formato transversal da constrição é uma fenda.

Em algumas modalidades, o formato transversal da constrição é uma fenda compreendendo uma largura de cerca de 4 μm a cerca de 10 μm e/ou uma profundidade de cerca de 1 μm a cerca de 200 μm.

Em algumas modalidades, o formato transversal da constrição é uma fenda compreendendo uma largura de cerca de 3 μm a cerca de 6 μm e/ou uma profundidade de cerca de 20 μm a cerca de 120 μm.

Em algumas modalidades, o formato transversal da constrição é uma fenda compreendendo uma largura de cerca de 4.2 μm a cerca de 6 μm e/ou uma profundidade de cerca de 20 μm a cerca de 120 μm.

Em algumas modalidades, o formato transversal da constrição é uma fenda compreendendo uma largura de cerca de 4.2 μm a cerca de 6 μm e/ou uma profundidade de cerca de 40 μm a cerca de 120 μm.

Em algumas modalidades, o formato transversal da constrição é uma fenda compreendendo uma largura de cerca de 4.2 μm a cerca de 6 μm e/ou uma profundidade de cerca de 20 μm a cerca de 80 μm.

Em algumas modalidades, o formato transversal da constrição é uma fenda compreendendo uma largura de cerca de 4,5 μm e/ou uma profundidade de cerca de 80 μm.

Em algumas modalidades, a fenda compreende um comprimento de cerca de 5 μm a cerca de 50 μm.

Em algumas modalidades, a fenda compreende um comprimento de cerca de 10 μm a cerca de 30 μm.

Em algumas modalidades, a fenda compreende um comprimento de cerca de 2 μm a cerca de 50 μm.

Em algumas modalidades, a fenda compreende um comprimento de qualquer um de cerca de 2 µm a cerca de 5 µm, cerca de 5 µm a cerca de 10 µm, cerca de

10 µm a cerca de 15 µm, cerca de 15 µm a cerca de 20 µm, cerca de 20 µm a cerca de 25 µm, cerca de 25 µm a cerca de 30 µm, cerca de 30 µm a cerca de 35 µm, cerca de 35 µm a cerca de 40 µm, cerca de 40 µm a cerca de 45 µm ou cerca de 45 µm a cerca de 50 µm. Em algumas modalidades, a fenda compreende um comprimento de cerca de 10 μm. Superfície com poros para provêr constrições de deformação celular

[00137] Em alguns aspectos, a presente invenção provê métodos para tratar e prevenir uma doença associada ao HPV e/ou aumentar a resposta imune em um indivíduo com uma doença associada ao HPV, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem de maneira intracelularum antígeno do HPV e um adjuvante; em que as células imunes modificadas são preparadas passando primeiro uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grande o suficiente para o antígeno e o adjuvante passarem para formar uma célula de entrada perturbada; e depois incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV e o adjuvante por um tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV e o adjuvante entrem na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas. Em algumas modalidades, uma força de deformação é aplicada à célula de entrada à medida que passa através da constrição. Em algumas modalidades, a constrição é um poro ou está contida dentro de um poro. Em algumas modalidades, o poro está contido em uma superfície. Superfícies exemplares com poros para uso nos métodos divulgados neste documento são descritas em W02017041050.

[00138] As superfícies divulgadas neste documento podem ser feitas de qualquer um de vários materiais e tomar qualquer uma de várias formas. Em algumas modalidades, a superfície é um filtro. Em algumas modalidades, a superfície é uma membrana. Em algumas modalidades, o filtro é um filtro de fluxo tangencial. Em algumas modalidades, a superfície é uma matriz tipo esponja ou esponja. Em algumas modalidades, a superfície é uma matriz.

[00139] Em algumas modalidades, a superfície é uma superfície de via tortuosa. Em algumas modalidades, a superfície de via tortuosa compreende acetato de celulose. Em algumas modalidades, a superfície compreende um material selecionado a partir de, sem limitação, polímeros sintéticos ou naturais, policarbonato, silício, vidro, metal, liga, nitrato de celulose, prata, acetato de celulose, nylon, poliéster, poliétersulfona, poliacrilonitrilo (PAN), polipropileno, PVDF, politetrafluortileno, ester de celulose mista, porcelana e cerâmica.

[00140] A superfície divulgada neste documento pode ter qualquer formato conhecido na técnica; por exemplo, um formato tridimensional. O formato bidimensional da superfície por ser, sem limitação, circular, elíptica, redonda, quadrada, em formato de estrela, triangular, poligonal, pentagonal, hexagonal, heptagonal ou octogonal. Em algumas modalidades, a superfície é redonda em forma. Em algumas modalidades, a superfície de formato tridimensional é cilíndrica, cônica ou cuboidal.

[00141] A superfície pode ter várias larguras transversais e espessuras. Em algumas modalidades, a largura da seção transversal da superfície está entre cerca de 1 mm e cerca de 1 m ou qualquer largura da seção transversal ou faixa de larguras da seção transversal entre as mesmas. Em algumas modalidades, a superfície tem uma espessura definida. Em algumas modalidades, a espessura da superfície é uniforme. Em algumas modalidades, a espessura da superfície é variável. Por exemplo, em algumas modalidades, porções da superfície são mais grossas ou mais finas do que outras porções da superfície. Em algumas modalidades, a espessura da superfície varia cerca de 1% a cerca de 90% ou qualquer porcentagem ou faixa de percentuais entre elas. Em algumas modalidades, a superfície tem entre cerca de 0,01 µm a cerca de 5 mm de espessura ou qualquer espessura ou intervalo de espessuras entre as mesmas.

[00142] Em algumas modalidades, a constrição é um poro ou está contida dentro de um poro. A largura da seção transversal dos poros está relacionada ao tipo de célula imune a ser tratada. Em algumas modalidades, o tamanho do poro é uma função do diâmetro da célula imune ou grupo de células imunes a ser tratado. Em algumas modalidades, o tamanho do poro é uma função do diâmetro da célula imune ou grupo de células imunes a ser tratado. Em algumas modalidades, o tamanho do poro é menor que o diâmetro da célula imune. Em algumas modalidades, o tamanho do poro é de cerca de 10% a cerca de 99% do diâmetro da célula imune. Em algumas modalidades, o tamanho do poro é de cerca de 10%, cerca de 15%, cerca de 20%, cerca de 30%, cerca de 40%, cerca de 50%, cerca de 60%, cerca de 70%, cerca de 80%, cerca de 90% ou cerca de 99% do diâmetro da célula imune. O tamanho ideal do poro ou largura da seção transversal do poro pode variar com base na aplicação e/ou tipo de célula imune. Em algumas modalidades, o tamanho do poro é de cerca de 2 µm a cerca de 14µm. Em algumas modalidades, o tamanho do poro é de cerca de 2 µm, cerca de 3 µm, cerca de 1 µm, cerca de 5 µm, cerca de 8 µm, cerca de 10 µm, cerca de 12 µm ou cerca de 14 µm. Em algumas modalidades, a largura transversal é de cerca de 2 μm a cerca de 14 μm. Em algumas modalidades, a seção transversal do poro é de cerca de 2 µm, cerca de 3 µm, cerca de 4 µm, cerca de 5 µm, cerca de 8 µm, cerca de 10 µm, cerca de 12 µm ou cerca de 14 µm.

[00143] As entradas e saídas da passagem de poro podem ter uma variedade de ângulos. O ângulo de poro pode ser selecionado para minimizar o entupimento dos poros enquanto as células imunes estão passando. Por exemplo, o ângulo da porção de entrada ou saída pode ser entre 0 e cerca de 90 graus. Em algumas modalidades, a porção de entrada ou saída pode ser superior a 90 graus. Em algumas modalidades, os poros têm ângulos de entrada e saída idênticos. Em algumas modalidades, os poros têm ângulos de entrada e saída diferentes. Em algumas modalidades, a borda do poro é lisa, por exemplo, arredondada ou curvada. Uma borda de poro lisa tem uma superfície contínua, plana e uniforme sem solavancos, cumes ou partes irregulares. Em algumas modalidades, a borda dos poros é afiada. Uma borda de poro afiada tem uma borda fina que é apontada ou em um ângulo agudo. Em algumas modalidades, a passagem do poro é reta. Uma passagem do poro reta não contém curvas, dobras, ângulos ou outras irregularidades. Em algumas modalidades, a passagem do poro é curva. Uma passagem de poro curva é dobrada ou desvia-se de uma linha reta. Em algumas modalidades, a passagem de poro tem múltiplas curvas, por exemplo, cerca de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou mais curvas. A taxa de fluxo através do poro também pode ser ajustada. Em algumas modalidades, a taxa de fluxo através do poro está entre cerca de 0,001 mL/cm2/seg a cerca de 100 L/cm2/seg ou qualquer taxa ou intervalo de taxas entre elas.

[00144] Os poros podem ter qualquer formato conhecido na técnica, incluindo um formato bidimensional ou tridimensional. O formato do poro (por exemplo, o formato transversal) pode ser, sem limitação, circular, elíptico, redondo, quadrado, em formato de estrela, triangular, poligonal, pentagonal, hexagonal, heptagonal e octogonal. Em algumas modalidades, a seção transversal do poro é redonda em forma. Em algumas modalidades, o formato tridimensional do poro é cilíndrico ou cônico. Em algumas modalidades, o poro tem um formato de entrada e saída acanelado. Em algumas modalidades, o formato do poro é homogêneo (isto é, consistente ou regular) entre os poros dentro de uma determinada superfície. Em algumas modalidades, o formato do poro é heterogêneo (isto é, misto ou variado) entre os poros dentro de uma determinada superfície.

[00145] As superfícies descritas neste documento podem ter uma faixa de número total de poros. Em algumas modalidades, os poros abrangem cerca de 10% a cerca de 80% da área total da superfície. Em algumas modalidades, a superfície contém cerca de 1,0 x 105 a cerca de 1,0 x 1030 dos poros totais ou qualquer número ou intervalo de números entre eles. Em algumas modalidades, a superfície compreende entre cerca de 10 e cerca de 1,0 x 105 da área de superfície dos poros/mm2.

[00146] Os poros podem ser distribuídos de várias maneiras dentro de uma determinada superfície. Em algumas modalidades, os poros são distribuídos em paralelo dentro de uma determinada superfície. Em um dentre tais exemplos, os poros são distribuídos lado a lado na mesma direção e são separados na mesma distância dentro de uma determinada superfície. Em algumas modalidades, a distribuição dos poros é ordenada ou homogênea. Em um dentre tais exemplos, os poros são distribuídos em um padrão sistemático, regular ou são separados na mesma distância dentro de uma determinada superfície. Em algumas modalidades, a distribuição dos poros é aleatória ou heterogênea. Em um dentre tais exemplos, os poros são distribuídos em um padrão desordenado, irregular ou são separados em distâncias diferentes dentro de uma determinada superfície. Em algumas modalidades, várias superfícies são distribuídas em séries. As múltiplas superfícies podem ser homogêneas ou heterogêneas em tamanho, formato e/ou rugosidade da superfície. As múltiplas superfícies podem conter adicionalmente mais poros com tamanho, formato e/ou número de poros homogêneos ou heterogêneos, permitindo, desse modo, a entrega simultânea de uma gama de compostos em diferentes tipos de células T imunes.

[00147] Em algumas modalidades, um poro individual tem uma dimensão de largura uniforme (isto é, largura constante ao longo do comprimento da passagem de poro). Em algumas modalidades, um poro individual tem uma largura variável (isto é, aumentando ou diminuindo a largura ao longo do comprimento da passagem de poro). Em algumas modalidades, os poros dentro de uma determinada superfície têm as mesmas profundidades individuais de poros. Em algumas modalidades, os poros dentro de uma determinada superfície têm diferentes profundidades individuais de poros. Em algumas modalidades, os poros são imediatamente adjacentes uns aos outros. Em algumas modalidades, os poros são separados uns dos outros por uma distância. Em algumas modalidades, os poros são separados uns dos outros por uma distância de cerca de 0,001 μm a cerca de 30 mm ou qualquer distância ou intervalo de distâncias entre eles.

[00148] Em algumas modalidades, a superfície é revestida com um material. O material pode ser selecionado de qualquer material conhecido na técnica, incluindo, sem limitação, Teflon, um revestimento adesivo, surfactantes, proteínas, moléculas de adesão, anticorpos, anticoagulantes, fatores que modulam a função celular, ácidos nucleicos, lipídeos, carboidratos ou proteínas transmembrana. Em algumas modalidades, a superfície é revestida com polivinilpirrolidona (PVP). Em algumas modalidades, o material é covalentemente anexado à superfície. Em algumas modalidades, o material é não covalentemente anexado ou adsorvido à superfície. Em algumas modalidades, as moléculas de superfície são liberadas à medida que as células imunes passam pelos poros.

[00149] Em algumas modalidades, a superfície modificou propriedades químicas. Em algumas modalidades, a superfície é polar. Em algumas modalidades, a superfície é hidrofílica. Em algumas modalidades, a superfície é não polar. Em algumas modalidades, a superfície é hidrofóbica. Em algumas modalidades, a superfície é carregada. Em algumas modalidades, a superfície é carregada positivamente e/ou negativamente. Em algumas modalidades, a superfície pode ser carregada positivamente em algumas regiões e negativamente carregada em outras regiões. Em algumas modalidades, a superfície tem uma carga geral positiva ou geral negativa. Em algumas modalidades, a superfície pode ser qualquer uma dentre lisa, eletropolida, áspera ou tratada com plasma. Em algumas modalidades, a superfície compreende um composto zwitterion ou dipolar. Em algumas modalidades, a superfície é tratada com plasma.

[00150] Em algumas modalidades, a superfície está contida dentro de um módulo maior. Em algumas modalidades, a superfície está contida dentro de uma seringa, tal como uma seringa de plástico ou vidro. Em algumas modalidades, a superfície está contida dentro de um suporte de filtro de plástico. Em algumas modalidades, a superfície está contida dentro de uma ponteira de pipeta. Perturbações celulares

[00151] Em algumas modalidades, a invenção provê métodos para modular uma resposta imune passando uma suspensão celular compreendendo uma célula imune através de uma constrição, causando, desta forma, uma perturbação da célula imune de modo que um antígeno e/ou adjuvante entre na célula imune, em que a perturbação na célula imune há uma brecha na célula imune que permite que material de fora da célula imune se mova para dentro da célula imune (por exemplo, um buraco, rasgo, cavidade, abertura, poro, quebra, lacuna, perfuração). Em algumas modalidades, uma força de deformação é aplicada à célula de entrada à medida que passa através da constrição. A deformação pode ser causada por, por exemplo, tensão mecânica e/ou forças de cisalhamento. Em algumas modalidades, a perturbação é uma perturbação dentro da membrana da célula imune. Em algumas modalidades, a perturbação é transitória. Em algumas modalidades, a perturbação das células imunes dura de cerca de 1,0 x 10-9 segundos a cerca de 2 horas, ou qualquer momento ou intervalo de tempo entre eles. Em algumas modalidades, a perturbação das células imunes dura por cerca de 1,0 x 10-9 segundo a cerca de 1 segundo, cerca de 1 segundo a cerca de 1 minuto, ou cerca de 1 minuto a cerca de 1 hora. Em algumas modalidades, a perturbação das células imunes dura entre cerca de 1,0 x 10-9 a cerca de 1,0 x 10-1, cerca de 1,0 x 10-9 a cerca de 1,0 x 10-2, cerca de 1,0 x 10-9 a cerca de 1,0 x 10-3, cerca de 1,0 x 10-9 a cerca de 1,0 x 10-4, cerca de 1,0 x 10-9 a cerca de 1,0 x 10-5, cerca de 1,0 x 10-9 a cerca de 1,0 x 10-6, cerca de 1,0 x 10-9 a cerca de 1,0 x 10-7, ou cerca de 1,0 x 10-9 a cerca de 1,0 x 10-8 segundos. Em algumas modalidades, a perturbação das células imunes dura entre cerca de 1,0 x 10-8 a cerca de 1,0 x 10-1, cerca de 1,0 x 10-7a cerca de 1,0 x 10-1, cerca de 1,0 x 10-6 a cerca de 1,0 x 10-1, cerca de 1,0 x 10-5 a cerca de 1,0 x 10-1, cerca de 1,0 x 10-4 a cerca de 1,0 x 10-1, cerca de 1,0 x 10-3 a cerca de 1,0 x 10-1, ou cerca de 1,0 x 10-2 a cerca de 1,0 x 10-1 segundos. As perturbações das células imunes (por exemplo, poros ou buracos) criadas pelos métodos descritos neste documento não são formadas como resultado da montagem de subunidades de proteína para formar uma estrutura de poro multimérica, tal como aquela criada por complemento ou hemolisinas bacterianas.

[00152] À medida que a célula imune passa pela constrição, a constrição temporariamente incute dano à membrana da célula imune que permite a difusão passiva do material através da perturbação. Em algumas modalidades, a célula imune é deformada apenas por um breve período de tempo, na ordem de 100 μs para minimizar a chance de ativar as vias apoptóticas por meio de mecanismos de sinalização celular, embora outras durações sejam possíveis (por exemplo, variando de nanosegundos a horas). Em algumas modalidades, a célula imune é deformada por cerca de 1,0 x 10-9 segundos a cerca de 2 horas, ou qualquer momento ou intervalo de tempo entre eles. Em algumas modalidades, a célula imune é deformada por cerca de 1,0 x 10-9segundo a cerca de 1 segundo, cerca de 1 segundo a cerca de 1 minuto, ou cerca de 1 minuto a cerca de 1 hora. Em algumas modalidades, a célula imune é deformada por entre cerca de 1,0 x 10-9 a cerca de 1,0 x 10-1, cerca de 1,0 x 10-9 a cerca de 1,0 x 10-2, cerca de 1,0 x 10-9 a cerca de 1,0 x 10-3, cerca de 1,0 x 10-9 a cerca de 1,0 x 10-4, cerca de 1,0 x 10-9 a cerca de 1,0 x 10-5, cerca de 1,0 x 10-9 a cerca de 1,0 x 10-6, cerca de 1,0 x 10-9 a cerca de 1,0 x 10-7, ou cerca de 1,0 x 10-9 a cerca de 1,0 x 10-8 segundos. Em algumas modalidades, a célula T é deformada por qualquer um dentre cerca de 1.0 x 10-8 a cerca de 1.0 x 10-1, cerca de 1.0 x 10-7a cerca de 1.0 x 10-1, cerca de 1.0 x 10-6 a cerca de 1.0 x 10-1, cerca de

1.0 x 10-5 a cerca de 1.0 x 10-1, cerca de 1.0 x 10-4 a cerca de 1.0 x 10-1, cerca de 1.0 x 10-3 a cerca de 1.0 x 10-1, ou cerca de 1.0 x 10-2 a cerca de1.0 x 10-1 segundos. Em algumas modalidades, deformar a célula imune inclui deformar a célula imune por um tempo que varia de, sem limitação, cerca de 1 μs a pelo menos cerca de 750 μs, por exemplo, pelo menos cerca de 1 μs, 10 μs, 50 μs, 100 μs, 500 μs ou 750 μs.

[00153] Em algumas modalidades, a passagem do antígeno e/ou adjuvante para a célula imune ocorre simultaneamente com a célula imune passando pela constrição e/ou perturbação da célula imune. Em algumas modalidades, a passagem do composto para a célula imune ocorre após a célula imune passar através da constrição. Em algumas modalidades, a passagem do composto para a célula imune ocorre na ordem de minutos após a célula imune passar através da constrição. Em algumas modalidades, a passagem do composto para a célula imune ocorre de cerca de 1,0 x 10-2 segundos a pelo menos cerca de 30 minutos após a célula imune passar através da constrição. Por exemplo, a passagem do composto para a célula imune ocorre de cerca de 1,0 x 10 -2 segundos a cerca de 1 segundo, cerca de 1 segundo a cerca de 1 minuto, ou cerca de 1 minuto a cerca de 30 minutos após a célula imune passar através do constrição. Em algumas modalidades, a passagem do composto para a célula imune ocorre cerca de 1,0 x 10-2 segundos a cerca de 10 minutos, cerca de 1,0 x 10-2 segundos a cerca de 5 minutos, cerca de 1,0 x 10-2 segundos a cerca de 1 minuto, cerca de 1,0 x 10-2 segundos a cerca de 50 segundos, cerca de 1,0 x 10-2 segundos a cerca de 30 segundos, cerca de 1,0 x 10-2 segundos a cerca de 10 segundos, ou cerca de 1,0 x 10-2 segundos a cerca de 1 segundo, ou cerca de 1,0 x 10-2 segundos a cerca de 0,1 segundo após a célula imune passar através da constrição. Em algumas modalidades, a passagem do composto para a célula imune ocorre cerca de 1,0 x 10-1 segundos a cerca de 10 minutos, cerca de 1 segundo a cerca de 10 minutos, cerca de 10 segundos a cerca de 10 minutos, cerca de 50 segundos a cerca de 10 minutos, cerca de 1 minuto a cerca de 10 minutos, ou cerca de 5 minutos a cerca de 10 minutos após a célula imune passar através da constrição. Em algumas modalidades, uma perturbação na célula imune após passar através da constrição é corrigida dentro da ordem de cerca de cinco minutos após a célula através passar através da constrição.

[00154] Em algumas modalidades, a viabilidade celular após passar por uma constrição é de cerca de 5% a cerca de 100%. Em algumas modalidades, a viabilidade celular após passar através da constrição é de pelo menos cerca de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, ou 99%. Em algumas modalidades, a viabilidade celular é medida de cerca de 1,0 x 10-2 segundos para pelo menos cerca de 10 dias após a célula imune passar através da constrição. Por exemplo, a viabilidade celular é medida de cerca de 1,0 x 10-2 segundos a cerca de 1 segundo, cerca de 1 segundo a cerca de 1 minuto, ou cerca de 1 minuto a cerca de 30 minutos, ou cerca de 30 minutos a cerca de 2 horas após a célula imune passar através da constrição. Em algumas modalidades, a viabilidade celular é medida cerca de 1,0 x 10-2 segundos a cerca de 2 horas, cerca de 1,0 x 10-2 segundos a cerca de 1 hora, cerca de 1,0 x 10-2 segundos a cerca de 30 minutos, cerca de 1,0 x 10-2 segundos a cerca de 1 minuto, cerca de 1,0 x 10-2 segundos a cerca de 30 segundos, cerca de 1,0 x 10-2 segundos a cerca de 1 segundo, ou cerca de 1,0 x 10 - 2 segundos a cerca de 0,1 segundo após a célula imune passar através da constrição.

Em algumas modalidades, a viabilidade celular é medida cerca de 1,5 horas a cerca de 2 horas, cerca de 1 hora a cerca de 2 horas, cerca de 30 minutos a cerca de 2 horas, cerca de 15 minutos a cerca de 2 horas, cerca de 1 minuto a cerca de 2 horas, cerca de 30 segundos a cerca de 2 horas, ou cerca de 1 segundo a cerca de 2 horas após a célula imune passar através constrição. Em algumas modalidades, a viabilidade celular é medida cerca de 2 horas a cerca de 5 horas, cerca de 5 horas a cerca de 12 horas, cerca de 12 horas a cerca de 24 horas, ou cerca de 24 horas a cerca de 10 dias após a célula imune passar através da constrição. Parâmetros de entrega

[00155] Uma série de parâmetros podem influenciar a entrega de um composto a uma célula imune para modular uma resposta imune pelos métodos descritos neste documento. Em algumas modalidades, a suspensão celular é contatada com o composto antes, concomitantemente ou após passar através da constrição. A célula imune pode passar através da constrição suspensa em uma solução que inclui o composto a ser administrado, embora o composto possa ser adicionado à suspensão celular após as células imunes passarem através da constrição. Em algumas modalidades, o composto a ser entregue é revestido na constrição.

[00156] Exemplos de parâmetros que podem influenciar a entrega do composto na célula imune incluem, mas não se limitam a, as dimensões da constrição, o ângulo de entrada da constrição, as propriedades superficiais das constrições (por exemplo, rugosidade, modificação química, hidrofílica, hidrofóbica, etc.), as velocidades de fluxo operacional (por exemplo, tempo de trânsito celular através da constrição), a concentração da célula imune, a concentração do composto na suspensão celular e a quantidade de tempo que a célula imune recupera ou incuba após passar através das constrições pode afetar a passagem do composto entregue na célula imune. Os parâmetros adicionais que influenciam a entrega do composto na célula imune podem incluir a velocidade da célula imune na constrição, a taxa de cisalhamento na constrição, a viscosidade da suspensão celular, o componente de velocidade que é perpendicular à velocidade de fluxo e o tempo na constrição. Tais parâmetros podem ser projetados para controle de entrega do composto. Em algumas modalidades, a concentração de célula imune varia de cerca de 10 a pelo menos cerca de 10 12 células/mL ou qualquer concentração ou intervalo de concentração entre elas. Em algumas modalidades, a concentração de composto de entrega pode variar de cerca de 10 ng/mL a cerca de 1 g/mL ou qualquer concentração ou intervalo de concentração entre elas. Em algumas modalidades, a concentração de composto de entrega pode variar de cerca de 1 µm a pelo menos cerca de 2 M ou qualquer concentração ou intervalo de concentrações entre elas.

[00157] A temperatura utilizada nos métodos da presente divulgação pode ser ajustada para afetar a entrega de compostos e a viabilidade celular. Em algumas modalidades, o método é realizado entre cerca de -5 °C e cerca de 45 °C. Por exemplo, os métodos podem ser realizados à temperatura ambiente (por exemplo, cerca de 20 °C), temperatura fisiológica (por exemplo, cerca de 37 °C), superior à temperatura fisiológica (por exemplo, superior a cerca de 37 °C a 45 °C ou mais), ou temperatura reduzida (por exemplo, cerca de -5 °C a cerca de 4 °C), ou temperaturas entre essas temperaturas exemplares.

[00158] Vários métodos podem ser usados para direcionar as células imunes através das constrições. Por exemplo, a pressão pode ser aplicada por uma bomba na lateral da entrada (por exemplo, compressor), um vácuo pode ser aplicado por uma bomba de vácuo na lateral da saída, a ação capilar pode ser aplicada através de um tubo e/ou o sistema pode ser alimentado pela gravidade. Sistemas de fluxo baseados em deslocamento também podem ser usados (por exemplo, bomba de seringa, bomba peristáltica, seringa manual ou pipeta, pistões, etc.). Em algumas modalidades, as células imunes são passadas através das constrições por pressão positiva ou pressão negativa. Em algumas modalidades, as células imunes são passadas através das constrições por pressão constante ou pressão variável. Em algumas modalidades, a pressão é aplicada usando uma seringa. Em algumas modalidades, a pressão é aplicada por meio de um cilindro de gás. Em algumas modalidades, a pressão é aplicada usando o método de pressão positiva do cilindro de gás. Em algumas modalidades, a pressão é aplicada usando uma bomba. Em algumas modalidades, a bomba é uma bomba peristáltica ou uma bomba de diafragma. Em algumas modalidades, a pressão é aplicada usando um vácuo. Em algumas modalidades, as células imunes são passadas através da constrições pela força g. Em algumas modalidades, as células imunes são passadas através das constrições por força centrífuga. Em algumas modalidades, as células imunes são passadas através das constrições por pressão capilar.

[00159] Em algumas modalidades, o fluxo de fluido direciona as células imunes através das constrições. Em algumas modalidades, o fluxo de fluidos é um fluxo turbulento antes das células imunes passarem pela constrição. O fluxo turbulento é um fluxo de fluido em que a velocidade em um determinado ponto varia de forma errática em magnitude e direção. Em algumas modalidades, o fluxo de fluido através da constrição é fluxo laminar. O fluxo de laminar envolve fluxo ininterrupto em um fluido perto de um limite sólido em que a direção do fluxo em cada ponto permanece constante. Em algumas modalidades, o fluxo de fluidos é um fluxo turbulento após as células imunes passarem através da constrição. A velocidade com que as células imunes passam através das constrições pode ser variada. Em algumas modalidades, as células imunes passam através das constrições a uma velocidade uniforme da célula. Em algumas modalidades, as células imunes passam através das constrições a uma velocidade de flutuação da célula.

[00160] Em outras modalidades, um tratamento de combinação é usado para modular uma resposta imune pela passagem de uma suspensão celular compreendendo uma célula imune através de uma constrição, em que a constrição deforma a célula imune, causando, desta forma, uma perturbação da célula imune de modo que um antígeno e/ou adjuvante entra na célula imune, por exemplo, os métodos descritos neste documento, seguido pela exposição a um campo elétrico a jusante da constrição. Em algumas modalidades, a célula imune é passada através de um campo elétrico gerado por pelo menos um eletrodo após passar através da constrição. Em algumas modalidades, o campo elétrico auxilia na entrega de compostos a um segundo local dentro da célula imune, como o núcleo da célula imune. Por exemplo, a combinação de uma constrição de deformação celular e um campo elétrico entrega um plasmídeo que codifica um anticorpo na célula imune (por exemplo, o núcleo da célula), resultando na produção de novo de anticorpo. Em algumas modalidades, um ou mais eletrodos estão próximos à constrição de deformação celular para gerar um campo elétrico. Em algumas modalidades, o campo elétrico está entre cerca de 0,1 kV/m a cerca de 100 MV/m, ou qualquer número ou intervalo de números entre os mesmos. Em algumas modalidades, um circuito integrado é usado para provêr um sinal elétrico para acionar os eletrodos. Em algumas modalidades, as células imunes são expostas ao campo elétrico por uma largura de pulso de cerca de 1 ns a cerca de 1 s e um período de cerca de 100 ns a cerca de 10 s ou qualquer tempo ou intervalo de tempo entre os mesmos. Suspensões celulares para entrega a células imunes

[00161] A suspensão celular pode ser uma população mista ou purificada de células imunes. Em algumas modalidades, a suspensão celular é uma população de células mistas, como sangue total ou PBMCs. Em outras modalidades, a população de células mistas é uma mistura de populações definidas ou purificadas. Em algumas modalidades, a suspensão celular é uma população de células purificadas, como uma população purificada de células imunes.

[00162] A composição da suspensão celular (por exemplo, osmolaridade, concentração de sal, conteúdo de soro, concentração de células, pH, etc.) pode impactar a entrega do composto para modular uma resposta imune. Em algumas modalidades, a suspensão compreende sangue total. Alternativamente, a suspensão celular é uma mistura de células em uma solução salina fisiológica ou meio fisiológico diferente do sangue. Em algumas modalidades, a suspensão celular compreende uma solução aquosa. Em algumas modalidades, a solução aquosa compreende meio de cultura de células, (solução salina tamponada com fosfato) PBS, sais, íons metálicos, açúcares, fatores de crescimento, produtos derivados de animais, materiais de volume, surfactantes, lubrificantes, lipídios, vitaminas, aminoácidos, proteínas, células inibidores do ciclo e/ou um agente que impacta a polimerização da actina. Em algumas modalidades, o meio de cultura celular é X-VIVOTM 10, X-VIVOTM 15, DMEM, Opti-MEM®, IMDM ou RPMI. Além disso, o tampão de solução pode incluir um ou mais lubrificantes (plurônicos ou outros surfactantes) que podem ser projetados, por exemplo, para reduzir ou eliminar o entupimento da constrição e melhorar a viabilidade celular. Os surfactantes exemplares incluem, sem limitação, poloxâmero, polissorbatos, açúcares ou álcoois de açúcar, tais como manitol, sorbitol, soro derivado de animal e proteína albumina.

[00163] Em algumas configurações com certos tipos de células imunes, as células imunes podem ser incubadas em uma ou mais soluções que auxiliam na entrega do composto para o interior da célula imune. Em algumas modalidades, a solução aquosa compreende um agente que impacta a polimerização de actina. Em algumas modalidades, o agente que impacta a polimerização da actina é Latrunculin A, Citocalasina e/ou Colchicina. Por exemplo, as células imunes podem ser incubadas em uma solução de despolimerização, como Lantrunculina A (0,1 μg / mL) por 1 hora antes da entrega para despolimerizar o citoesqueleto de actina. Como um exemplo adicional, as células imunes podem ser incubadas em 10μM Colchicina (Sigma) por 2 horas antes da entrega para despolimerizar a rede de microtúbulos.

[00164] Em algumas modalidades, a população de células é enriquecida antes do uso nos métodos divulgados. Por exemplo, as células são obtidas a partir de um fluido corporal, por exemplo, sangue periférico e, opcionalmente, enriquecidas ou purificadas para concentrar células imunes. As células podem ser enriquecidas por quaisquer métodos conhecidos na técnica, incluindo, sem limitação, separação magnética de células, classificação de células ativadas por fluorescência (FACS) ou centrifugação de gradiente de densidade.

[00165] A viscosidade da suspensão celular também pode impactar os métodos divulgados neste documento. Em algumas modalidades, a viscosidade da suspensão celular varia de cerca de 8,9x10- 4 Pa·s a cerca de 4,0 x 10-3 Pa·s ou qualquer valor ou intervalo de valores entre os mesmos. Em algumas modalidades, a viscosidade varia entre qualquer um de cerca de 8,9x10-4 Pa·s a cerca de 4,0 x 10-3 Pa·s ou qualquer valor ou intervalo de valores entre eles. Em algumas modalidades, a viscosidade varia entre cerca de 8,9x10-4 Pa·s a cerca de 4,0 x10-3 Pa·s, cerca de 8,9x10-4 Pa·s a cerca de 3,0 x10-3 Pa·s, cerca de 8,9x10-4 Pa·s a cerca de 2,0 x10-3 Pa·s, ou cerca de 8,9x10-3 Pa·s a cerca de 1,0 x10-3 Pa·s. Em algumas modalidades, a viscosidade varia entre cerca de 0,89 cP a cerca de 4,0 cP, cerca de 0,89 cP a cerca de 3,0 cP, cerca de 0,89 cP a cerca de 2,0 cP ou cerca de 0,89 cP a cerca de 1,0 cP. Em algumas modalidades, um efeito de pseudoplasticidade é observado, em que a viscosidade da suspensão celular diminui sob condições de tensão de deformação. A viscosidade pode ser medida por qualquer método conhecido na técnica, incluindo, sem limitação, viscosímetros, como um viscosímetro capilar de vidro ou reômetros. Um viscosímetro mede a viscosidade sob uma condição de fluxo, enquanto um reômetro é usado para medir viscosidades que variam com as condições de fluxo. Em algumas modalidades, a viscosidade é medida para uma solução de pseudoplasticidade, como sangue. Em algumas modalidades, a viscosidade é medida entre cerca de -5 °C e cerca de 45 °C. Por exemplo, a viscosidade é medida à temperatura ambiente (por exemplo, cerca de 20 °C), temperatura fisiológica (por exemplo, cerca de 37 °C), superior à temperatura fisiológica (por exemplo, superior a cerca de 37 °C a 45 °C ou mais), temperatura reduzida (por exemplo, cerca de -5 °C a cerca de 4 °C), ou temperaturas entre estas temperaturas exemplares. Antígenos e adjuvantes para aumentar uma resposta imune

[00166] Certos aspectos da presente divulgação se referem a um método de tratamento de um paciente através da introdução de células imunes modificadas de acordo com os métodos descritos neste documento para um paciente. Em algumas modalidades, as células imunes são para uso em imunoterapia. Em alguns aspectos, a divulgação se refere a um método para tratar uma doença associada ao vírus do papiloma humano (HPV) em um indivíduo, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem de maneira intracelular um antígeno do HPV e de maneira intracelular um adjuvante. Em alguns aspectos, a divulgação se refere a um método para tratar uma doença associada ao HPV em um indivíduo, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem de maneira intracelular um antígeno do HPV e de maneira intracelular um adjuvante; em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da entrada célula grande o suficiente para o antígeno e o adjuvante passarem para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV e o adjuvante por um tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV e o adjuvante entrem na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas. Em algumas modalidades, uma força de deformação é aplicada à célula de entrada à medida que passa através da constrição.

[00167] Em alguns aspectos, a divulgação se refere a um método para prevenir uma doença associada ao HPV em um indivíduo, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem de maneira intracelular um antígeno do HPV e de maneira intracelular um adjuvante. Em alguns aspectos, a divulgação divulga um método para prevenir uma doença associada ao HPV em um indivíduo, o método compreendendo administrar ao indivíduo de uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem de maneira intracelular um antígeno do HPV e de maneira intracelular um adjuvante; em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar de uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações do célula de entrada grande o suficiente para o antígeno do HPV e o adjuvante passarem para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV e o adjuvante por um tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV e o adjuvante entrem na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas. Em algumas modalidades, uma força de deformação é aplicada à célula de entrada à medida que passa através da constrição.

[00168] Em alguns aspectos, a divulgação divulga um método para modular uma resposta imune em um indivíduo com uma doença associada ao HPV, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem de maneira intracelular um antígeno do HPV e de maneira intracelular um adjuvante. Em alguns aspectos, a divulgação divulga um método para modular uma resposta imune em um indivíduo com uma doença associada ao HPV, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem de maneira intracelular um antígeno do HPV e de maneira intracelular um adjuvante; em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada que compreende um antígeno do HPV através de um canal microfluídico que inclui uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para o antígeno do HPV e o adjuvante passarem para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno e o adjuvante por um tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV e o adjuvante entrem na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas. Em algumas modalidades, uma força de deformação é aplicada à célula de entrada à medida que passa através da constrição. Em algumas modalidades, a resposta imune é aprimorada. Em algumas modalidades, a resposta imune ao antígeno do HPV é aprimorada.

[00169] Alguns aspectos da invenção provêm a entrega de antígenos a um indivíduo com uma doença associada ao HPV para aumentar uma resposta imune ao antígeno, por meio da administração de uma célula imune compreendendo um antígeno de maneira intracelular em que o antígeno é entregue à célula por qualquer um dos métodos descritos neste documento. Em algumas modalidades, o antígeno é um antígeno único. Em algumas modalidades, o antígeno é uma mistura de antígenos. Um antígeno é uma substância que estimula uma resposta imune específica, como uma resposta imune mediada por células ou anticorpos. Os antígenos se ligam a receptores expressos por células do sistema imunológico, como os receptores de células T (TCRs), que são específicos para um antígeno particular. A ligação antígeno-receptor posteriormente desencadeia vias de sinalização intracelular que levam a vias efetoras imunológicas a jusante, como ativação celular, produção de citocinas, migração celular, secreção de fator citotóxico e produção de anticorpos.

[00170] Em algumas modalidades, as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar de uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada compreendendo um antígeno do HPV através de uma constrição, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, desse modo causar perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para o antígeno do HPV e o adjuvante passarem para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno e o adjuvante por um tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV e o adjuvante entrem na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é menor que o diâmetro da célula. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é menor do que o diâmetro das células imunes. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é de cerca de 20% a cerca de 90% do diâmetro da célula T de entrada. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é de cerca de 20% a menos de 60% do diâmetro da célula. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é de cerca de 20%, cerca de 30%, cerca de 40%, cerca de 50%, cerca de 60%, cerca de 70%, cerca de 80%, cerca de 90%, cerca de 95% ou cerca de 99% do diâmetro da célula. Em algumas modalidades, o diâmetro da constrição é qualquer um entre cerca de 20% e cerca de 30%, entre cerca de 30% e cerca de 40%, entre cerca de 40% e cerca de 50%, entre cerca de 50% e cerca de 60%, entre cerca de 60% e cerca de 70%, entre cerca de 70% e cerca de 80%, entre cerca de 80% e cerca de 90%, entre cerca de 90% e cerca de 95%, ou entre cerca de 95% e cerca de 99% do diâmetro da célula. Em algumas modalidades, uma força de deformação é aplicada à célula de entrada à medida que passa através da constrição. Em algumas modalidades, a constrição está em um canal. Em algumas modalidades, a constrição está contida em um canal microfluídico. Em algumas modalidades, a constrição está contida dentro de um filtro. Em outras modalidades, a constrição é um poro em um filtro.

[00171] Em algumas modalidades, as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV intracelular e um adjuvante. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV e/ou o adjuvante estão presentes nos citosol e/ou endossomos. Em algumas modalidades, o antígeno e/ou adjuvante estão presentes em múltiplos compartimentos da célula. Em outras modalidades, o antígeno e/ou adjuvante estão presentes em compartimentos da célula, incluindo um ou mais dentre o retículo endoplasmático (ER), aparelho de Golgi, lisossoma ou exossomos. Em algumas modalidades, o antígeno e o adjuvante estão no mesmo compartimento. Em algumas modalidades, o antígeno e o adjuvante estão em compartimentos diferentes um do outro. Por exemplo, em algumas modalidades, o antígeno está presente no citosol, enquanto o adjuvante está presente no endossomo. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende adicionalmente um antígeno do HPV e/ou um adjuvante no exterior da célula.

[00172] Em algumas modalidades, a concentração de adjuvante incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 0.01 µM e cerca de 10 µM. Por exemplo, em algumas modalidades, a concentração de adjuvante incubado com a célula de entrada perturbada é inferior a cerca de 0,01 µM, cerca de 0,1 µM, cerca de 1 µM, cerca de 10 µM, cerca de 100 µM, cerca de 1 µM ou cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a concentração de adjuvante incubado com a célula de entrada perturbada é maior do que cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a concentração de adjuvante incubado com a célula de entrada perturbada é qualquer um entre cerca de 0,01 µM e cerca de 0,1 µM, entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM, entre cerca de 1 µM e cerca de 10 µM, entre cerca de 10 µM e cerca de 100 µM, entre cerca de 100 µM e cerca de 1 µM, ou entre 1 µM e cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a concentração de adjuvante incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 0.1 µM e cerca de 1 µM.

[00173] Em algumas modalidades, a concentração de antígeno do HPV incubado com a célula de entrada perturbada está entre cerca de 0,01 µM e cerca de 10 µM. Por exemplo, em algumas modalidades, a concentração de antígeno do HPV incubado com a célula de entrada perturbada é inferior a cerca de 0,01 µM, cerca de 0,1 µM, cerca de 1 µM, cerca de 10 µM, cerca de 100 µM, cerca de 1 µM ou cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a concentração de antígeno do HPV incubado com a célula de entrada perturbada é maior do que cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a concentração de antígeno do HPV incubado com a célula de entrada perturbada é qualquer uma entre cerca de 0,01 µM e cerca de 0,1 µM, entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM, entre cerca de 1 µM e cerca de 10 µM, entre cerca de 10 µM e cerca de 100 µM, entre cerca de 100 µM e cerca de 1 µM, ou entre 1 µM e cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a concentração de antígeno do HPV incubado com a célula de entrada perturbada está entre cerca de 0,01 µM e cerca de 1 µM.

[00174] Em algumas modalidades, a proporção molar de antígeno do HPV para adjuvante incubado com a célula de entrada perturbada é qualquer uma entre cerca de 10000:1 a cerca de 1:10000. Por exemplo, em algumas modalidades, a proporção molar de antígeno do HPV para adjuvante incubado com a célula de entrada perturbada é de cerca de 10000:1, cerca de 1000:1, cerca de 100:1, cerca de 10:1, cerca de 1:1, cerca de 1:10, cerca de 1:100, cerca de 1:1000 ou cerca de 1:10000. Em algumas modalidades, a proporção molar de antígeno do HPV para adjuvante incubado com a célula de entrada perturbada é qualquer uma entre cerca de 10000:1 e cerca de 1000:1, entre cerca de 1000:1 e cerca de 100:1, entre cerca de 100:1 e cerca de 10:1, entre cerca de 10:1 e cerca de 1:1, entre cerca de 1:1 e cerca de 1:10, entre cerca de 1:10 e cerca de 1:100, entre cerca de 1:100 e cerca de 1:1000, entre cerca de 1:1000 e cerca de 1:10000.

[00175] Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende o adjuvante a uma concentração entre cerca de 0.01 µM e cerca de 10 µM. Por exemplo, em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende o adjuvante a uma concentração de qualquer um de menos do que cerca de 0,01 µM, cerca de 0,1 µM, cerca de 1 µM, cerca de 10 µM, cerca de 100 µM, cerca de 1 µM ou cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a célula imune compreende o adjuvante a uma concentração superior a cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a célula imune compreende o adjuvante a uma concentração de qualquer entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM, entre cerca de 1 µM e cerca de 10 µM, entre cerca de 10 µM e cerca de 100 µM, entre cerca de 100 µM e cerca de 1 µM, ou entre 1 µM e cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende o adjuvante a uma concentração entre cerca de 0.1 µM e cerca de 1 µM.

[00176] Em algumas modalidades, a concentração de antígeno do HPV na célula imune modificada está entre cerca de 0,1 µM e cerca de 10 µM. Por exemplo, em algumas modalidades, a concentração de antígeno do HPV na célula imune modificada é inferior a cerca de 0,01 µM, cerca de 0,1 µM, cerca de 1 µM, cerca de 10 µM, cerca de 100 µM, cerca de 1 µM ou cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a concentração de antígeno do HPV na célula imune modificada é maior do que cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a concentração de antígeno do HPV na célula imune modificada é qualquer uma entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM, entre cerca de 1 µM e cerca de 10 µM, entre cerca de 10 µM e cerca de 100 µM, entre cerca de 100 µM e cerca de 1 µM, ou entre 1 µM e cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a concentração de antígeno do HPV na célula imune modificada está entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM.

[00177] Em algumas modalidades, a proporção molar de antígeno do HPV para adjuvante na célula imune modificada é qualquer uma entre cerca de 10000: 1 a cerca de 1: 10000. Por exemplo, em algumas modalidades, a proporção molar de antígeno do HPV para adjuvante na célula imune modificada é de cerca de 10000: 1, cerca de 1000: 1, cerca de 100: 1, cerca de 10: 1, cerca de 1: 1, cerca de 1 : 10, cerca de 1: 100, cerca de 1: 1000 ou cerca de 1: 10000. Em algumas modalidades, a proporção molar de antígeno do HPV para adjuvante na célula imune modificada é qualquer uma entre cerca de 10000: 1 e cerca de 1000: 1, entre cerca de 1000: 1 e cerca de 100: 1, entre cerca de 100: 1 e cerca de 10: 1, entre cerca de 10: 1 e cerca de 1: 1, entre cerca de 1: 1 e cerca de 1:10, entre cerca de 1:10 e cerca de 1: 100, entre cerca de 1: 100 e cerca de 1: 1000, entre cerca de 1: 1000 e cerca de 1: 10000.

[00178] Em algumas modalidades, o antígeno é um antígeno polipeptídico. Em algumas modalidades, o antígeno é modificado com um lipídeo. Em algumas modalidades, o antígeno modificado é modificado com um polissacarídeo ou uma fração de carboidrato. Em algumas modalidades,

o antígeno está associado a um vírus.

Em algumas modalidades, o antígeno é um antígeno viral.

Antígenos virais exemplares incluem antígenos do HPV.

Em outras modalidades, o antígeno é um antígeno do HPV.

Em algumas modalidades, o antígeno do HPV consiste em uma seleção do grupo dentre: HPV- 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, e 82. HPV- 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 73 e 82 são tipos de alto risco em causar câncer, enquanto HPV- 26, 53 e 66 são “provavelmente tipos de alto risco” em causar câncer.

Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é um polipeptídeo compreendendo um epítopo do HPV antigênico e uma ou mais sequências de peptídeos heterólogos.

Em algumas modalidades, o antígeno é um antígeno do HPV- 16 ou um antígeno do HPV-18. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é composto por um epítopo específico de HLA-A2.Os genes HPV E6 e E7 são os oncogenes do vírus e a expressão desses genes é necessária para a transformação maligna.As proteínas E6 e E7 têm como alvo vários reguladores negativos do ciclo celular, principalmente p105Rb e p53, respectivamente, e, portanto, interferem na regulação do ciclo celular.

Em modalidades adicionais, o antígeno do HPV é um antígeno do HPV E6 ou um antígeno do HPV E7. Em algumas modalidades, as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV E6 e um antígeno do HPV E7. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é um polipeptídeo compreendendo um epítopo imunogênico que é flanqueado no N-terminal e/ou no C-terminal por uma ou mais sequências de peptídeos heterólogas.

Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é um epítopo do HPV E7 flanqueado por sequências do polipeptídeo deoHPV E6 (E7.6). Em algumas modalidades, o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 26. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 23. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV compreende a sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 26. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº:

23.

[00179] Em algumas modalidades, o antígeno é derivado a partir de um lisado celular, como um lisado de células doentes. Em algumas modalidades, o antígeno está em um lisado celular. Em algumas modalidades, o antígeno é derivado de um lisado de tumor. Em algumas modalidades, o antígeno é derivado a partir de um lisado de células cancerosas associadas ao HPV. Em algumas modalidades, o câncer associado ao HPV é qualquer um de câncer de cabeça e pescoço, câncer cervical, câncer vulvar, câncer vaginal, câncer peniano, câncer anal, câncer perianal, câncer anogenital, câncer oral ou câncer salivar.

[00180] Em alguns aspectos, a divulgação se refere a um método para tratar um câncer relacionado ao vírus do papiloma humano (HPV) em um indivíduo, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 26. Em alguns aspectos, a divulgação divulga um método para tratar uma doença associada ao HPV em um indivíduo, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV compreendendo um sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 26; em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações do célula de entrada grande o suficiente para o antígeno passar e formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV por um tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV entre na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas. Em algumas modalidades, uma força de deformação é aplicada à célula de entrada à medida que passa através da constrição.

[00181] Em alguns aspectos, a divulgação divulga um método para prevenir uma doença associada ao HPV em um indivíduo, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV compreendendo um sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 26. Em alguns aspectos, a divulgação divulga um método para prevenir uma doença associada ao HPV em um indivíduo, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 26; em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grande o suficiente para o antígeno do HPV passar para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV por um tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV entre na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas. Em algumas modalidades, uma força de deformação é aplicada à célula de entrada à medida que passa através da constrição.

[00182] Em alguns aspectos, a divulgação divulga um método para modular uma resposta imune em um indivíduo com uma doença associada ao HPV, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 26. Em algum aspecto, a divulgação divulga um método para modular uma resposta imune em um indivíduo com uma doença associada ao HPV, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 26; em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações do célula de entrada grande o suficiente para o antígeno do HPV passar para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV por um tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV entre na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas. Em algumas modalidades, uma força de deformação é aplicada à célula de entrada à medida que passa através da constrição. Em algumas modalidades, a resposta imune é aprimorada. Em algumas modalidades, a resposta imune ao antígeno do HPV é aprimorada.

[00183] Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é um pool de múltiplos polipeptídeos que provocam uma resposta contra os mesmos e ou diferentes antígenos do HPV. Em algumas modalidades, os antígenos compreendidos em um pool de vários antígenos não diminuem a resposta imune direcionada para os outros antígenos. Por exemplo, ao usar um pool de antígenos E6 e E7 do HPV, as respectivas respostas imunes direcionadas aos antígenos E6 e E7 do HPV seriam comparáveis ao uso do HPV E6 sozinho ou ao uso do HPV E7 sozinho como antígeno, respectivamente.

[00184] Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é um polipeptídeo compreendendo um epítopo imunogênico do HPV e uma ou mais sequências de peptídeos heterólogas. Em algumas modalidades, o um ou mais antígenos do HPV complexam consigo mesmo, com outros antígenos ou com o adjuvante.

[00185] Conforme usado neste documento, o termo "adjuvante" se refere a uma substância que modula direta ou indiretamente e/ou engendra uma resposta imune. Geralmente, o adjuvante é administrado em conjunto com um antígeno para efetuar o aumento de uma resposta imune ao antígeno em comparação com o antígeno sozinho. Portanto, os adjuvantes podem ser usados para aumentar a elicitação de uma resposta de células imunes (por exemplo, resposta de células T) a um antígeno. Em algumas modalidades, a invenção provê células imunes modificadas para compreender de maneira intracelular um antígeno do HPV e de maneira intracelular um adjuvante. Em algumas modalidades, as células imunes perturbadas conforme descrito neste documento são incubadas com o antígeno do HPV e um adjuvante. Adjuvantes intracelulares exemplares incluem, sem limitação, CpG ODN, interferon-α (IFN-α), agonistas estimuladores de genes de interferon (STING) e agonistas do gene I indutível com ácido retinóico (RIG-I) e polinossínico: ácido policitidílico (poli I:C). Em algumas modalidades, o adjuvante é CpG ODN, IFN-α, agonistas

STING, agonistas RIG-I ou poli I:C. Em modalidades particulares, o adjuvante é um polinucleotídeo CpG ODN. Em algumas modalidades, o adjuvante CpG ODN compreende uma seleção do grupo dentre CpG ODN 1018, CpG ODN 1585, CpG ODN 2216, CpG ODN 2336, CpG ODN 1668, CpG ODN 1826, CPG ODN 2006, CpG ODN 2007, CpG ODN BW006, CpG ODN D-SL01, CpG ODN 2395, CpG ODN M362, CpG ODN D-SL03. Em algumas modalidades, o adjuvante CpG ODN é CpG ODN 1826 (SEQ: TCCATGACGTTCCTGACGTT) ou oligonucleotídeo CpG ODN 2006 (também conhecido como CpG ODN 7909) (SEQ: TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT). Em algumas modalidades, o agonista de RIG-I compreende poliinossínico: ácido policitidílico (poli I:C). Múltiplos adjuvantes também podem ser usados em conjunto com antígenos para aumentar a elicitação da resposta imune. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende mais de um adjuvante. Múltiplos adjuvantes também podem ser usados em conjunto com antígenos para aumentar a elicitação da resposta imune. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende mais de um adjuvante. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende qualquer combinação dos adjuvantes CpG ODN, IFN-α, agonistas STING, agonistas RIG-I ou poli I:C.

[00186] Os adjuvantes exemplares incluem, sem limitação, CpG ODN, interferon-α (IFN-α), poliinossínico: ácido policitidílico (poli I:C), imiquimod (R837), resiquimod (R848) ou lipopolissacarídeo (LPS). Em algumas modalidades, o adjuvante é CpG ODN, LPS, IFN-α, agonistas STING, agonistas RIG-I, poli I:C, R837, R848, um agonista TLR3, um agonista TLR4 ou um agonista TLR 9. Em modalidades particulares, o adjuvante é um CpG ODN. Em algumas modalidades, o adjuvante é um CpG ODN. Em algumas modalidades, o CpG ODN é um CpG ODN de Classe A, um CpG ODN de Classe B ou um CpG ODN de Classe C. Em algumas modalidades, o adjuvante CpG ODN compreende uma seleção do grupo dentre CpG ODN 1018, CpG ODN 1585, CpG ODN 2216, CpG ODN 2336, CpG ODN 1668, CpG ODN 1826, CPG ODN 2006, CpG ODN 2007, CpG ODN BW006, CpG ODN D-SL01, CpG ODN 2395, CpG ODN M362, CpG ODN D-SL03. Em algumas modalidades, o adjuvante CpG ODN é CpG ODN 1826 (SEQ: TCCATGACGTTCCTGACGTT) ou oligonucleotídeo CpG ODN 2006 (também conhecido como CpG ODN 7909) (SEQ: TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT). Em algumas modalidades, o adjuvante é CpG ODN 7909. Em algumas modalidades, o agonista de RIG-I compreende poliinossínico: ácido policitidílico (poliI: C). Múltiplos adjuvantes também podem ser usados em conjunto com antígenos para aumentar a elicitação da resposta imune. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende mais de um adjuvante. Múltiplos adjuvantes também podem ser usados em conjunto com antígenos para aumentar a elicitação da resposta imune. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende mais de um adjuvante. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende qualquer combinação dos adjuvantes CpG ODN, LPS, IFN-α, agonistas STING, agonistas RIG-I, poli I:C, R837, R848, um agonista TLR3, um agonista TLR4 ou um TLR 9 agonista.

[00187] Em qualquer uma das modalidades descritas neste documento, a menos que indicado de outra forma, o adjuvante pode se referir a (a) um adjuvante que é incubado com e passa através de uma célula imune de entrada perturbada, (b) um adjuvante incubado com PBMCs para os PBMCs condicionarem, (c) um adjuvante coadministrado com células imunes modificadas a um indivíduo.

[00188] Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende adicionalmente um agente que aprimora a viabilidade e/ou função da célula imune modificada em comparação com uma célula imune modificada correspondente que não compreende o agente. Em algumas modalidades, o agente é um composto que aumenta a endocitose, um agente estabilizador ou um cofator. Em algumas modalidades, o agente estabilizador é complexado com o antígeno do HPV e/ou o adjuvante. Em algumas modalidades, o agente estabilizador aumenta a solubilidade e/ou meia-vida da solução do antígeno do HPV e/ou o adjuvante. Em algumas modalidades, a pluralidade de células imunes modificadas tem maior viabilidade do que as células imunes modificadas correspondentes que não compreendem o agente estabilizador. Em algumas modalidades, o agente é albumina. Em modalidades adicionais, a albumina é albumina de camundongo, bovina ou humana. Em algumas modalidades, o agente é um cátion de metal divalente, glicose, ATP, potássio, glicerol, trealose, D- sacarose, PEG1500, L-arginina, L-glutamina ou EDTA. Em algumas modalidades, o cátion de metal divalente é mais um dentre Mg2+, Zn2+ ou Ca2+.Em algumas modalidades, o agente compreende MSA.

[00189] Em algumas modalidades, de acordo com qualquer um dos métodos ou composições descritas neste documento, a célula imune modificada compreende ainda um agente que aumenta a viabilidade e/ou função da célula imune modificada em comparação com uma pluralidade correspondente da célula imune modificada que não compõem o agente. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende ainda um agente que aumenta a viabilidade e/ou função da célula imune modificada após o ciclo de congelamento-descongelamento em comparação com uma célula imune modificada correspondente que não compreende o agente. Em algumas modalidades, o agente é um agente de ciropreservação e/ou um agente de preservação hipotérmico. Em algumas modalidades, nem o agente de ciropreservação nem do agente de preservação hipotérmico causam mais de 10% ou 20% da morte celular na célula imune modificada que compreende o agente em comparação com uma célula imune modificada correspondente que não compreende o agente antes de qualquer um dos ciclos de congelamento/descongelamento. Em algumas modalidades, pelo menos cerca de 70%, cerca de 80% ou cerca de 90% das células imunes modificadas são viáveis após até 1, 2, 3, 4, 5 ciclos de congelamento/descongelamento. Em algumas modalidades, o agente é um composto que aumenta a endocitose, um agente estabilizador ou um cofator. Em algumas modalidades, o agente é albumina. Em algumas modalidades, a albumina é albumina de camundongo, bovina ou humana. Em algumas modalidades, o agente é albumina humana. Em algumas modalidades, o agente é um ou mais dentre: um cátion de metal divalente, glicose, ATP, potássio, glicerol, trealose, D-sacarose, PEG1500, L-arginina, L-glutamina ou EDTA. Em algumas modalidades, o cátion de metal divalente é mais um dentre Mg2+, Zn2+ ou Ca2+.Em algumas modalidades, o agente é um ou mais dentre: piruvato de sódio, adenina, trealose, dextrose, manose, sacarose, albumina de soro humana (HSA), DMSO, HEPES, glicerol, glutationa, inosina, fosfato de sódio dibásico, fosfato de sódio monobásico, íons de metal de sódio, íons de metal de potássio, íons de metal de magnésio, cloreto, acetato, gluoconato, sacarose, hidróxido de potássio ou hidróxido de sódio. Em algumas modalidades, o agente é um ou mais dentre: Piruvato de sódio, adenina, Rejuvesol®, trealose, dextrose, manose, sacarose, albumina de soro humano (HSA), PlasmaLyte®, DMSO, Cryostor® CS2, Cryostor® CS5, Cryostor® CS10, Cryostor® CS15, HEPES, glicerol, HypoThermosol®.

[00190] Em algumas modalidades, as células imunes modificadas são adicionalmente modificadas para aumentar expressão de uma ou mais moléculas coestimulantes. Em algumas modalidades, a molécula coestimulante é B7-H2 (ICOSL), B7-1 (CD80), B7-2 (CD86), CD70, LIGHT, HVEM, CD40, 4-1BBL, OX40L, TL1A, GITRL, CD30L, TIM4, SLAM, CD48, CD58, CD155, ou CD112. Em algumas modalidades, a célula compreende um ácido nucleico que resulta em expressão aumentada de uma ou mais moléculas coestimulantes.

[00191] Em algumas modalidades, a célula imune é uma célula T, uma célula dendrítica, um monócito, um macrófago, uma célula mieloide, um granulócito, um neutrófilo, uma célula mastro, uma célula exterminadora natural, uma célula linfoide inata, um basófilo ou uma célula precursora hematopoética.

Em algumas modalidades, a célula imune não é uma célula T.

Em algumas modalidades, a célula imune é uma célula T.

Em algumas modalidades, a célula imune diferente de uma célula B.

Em algumas modalidades, a célula T modificada inclui uma ou mais dentre células T auxiliares, células T citotóxicas, células T de memória, células CIK e células T exterminadoras naturais.

Em algumas modalidades, a célula T inclui uma ou mais dentre células T CD3+, células T CD4+, células T CD8+, células T CD45RA+, células T CD45RO+ e células T γδ.

A expressão de MHC em células T alogênicas pode resultar em uma resposta imune inata montada em um indivíduo em resposta às suas administrações e resultará em uma meia-vida encurtada de tais células T.

Em algumas modalidades, a célula T compreende uma modificação adicional para modular expressão MHC de classe I.

Em algumas modalidades, a célula T compreende uma modificação adicional para modular expressão MHC de classe II.

Em algumas modalidades, a célula T compreende uma modificação adicional para reduzir expressão MHC de classe I e/ou expressão MHC de classe II.

Em modalidades particulares, a modificação adicional compreende redução da expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II usando siRNA, shRNA, CRISPR/Cas9, ZFN, TALEN, recombinase Cre ou uma meganuclease.

Em algumas modalidades, a célula T compreende uma modificação adicional para aumentar expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II.

Em modalidades particulares, a modificação adicional compreende aumentar expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II usando mRNA, DNA plasmídico, ou cDNA.

Em algumas modalidades, uma resposta imune inata montada em um indivíduo em resposta à administração, em um contexto alogênico, das células T modificadas adicionalmente é reduzida em comparação com uma resposta imune inata montada em um indivíduo em resposta à administração, em um contexto alogênico, de células T modificadas correspondentes que não compreendem a modificação adicional. Em algumas modalidades, a meia- vida circulante das células T modificadas adicionalmente em um indivíduo ao qual foram administradas é aumentada em comparação com a meia-vida circulante de células T modificadas correspondentes que não compreendem a modificação adicional em um indivíduo ao qual foram administradas. Em algumas modalidades, a célula T modificada inclui uma ou mais dentre células T auxiliares, células T citotóxicas, células T de memória, células CIK e células T exterminadoras naturais. Em algumas modalidades, a célula T inclui uma ou mais dentre células T CD3+, células T CD4+, células T CD8+, células T CD45RA+, células T CD45RO+ ou células T γδ.

[00192] As células imunes e outras células podem ser usadas como uma fonte de células autólogas ou alogênicas. Em algumas modalidades, a célula imune modificada é alogênica ao indivíduo. Em outras modalidades, a célula imune modificada é autóloga ao indivíduo. Em algumas modalidades, o indivíduo a ser tratado é precondicionado para modular a inflamação.

[00193] Os adjuvantes podem ser empregados para aumentar ainda mais a resposta imune aos antígenos do HPV. Em algumas modalidades, o método de tratamento compreende adicionalmente administrar ao indivíduo um adjuvante. O adjuvante exemplar inclui, sem limitação, IFN-α, CpG ODN, agonistas STING, agonistas RIG-I e poli I:C. Em algumas modalidades, o adjuvante é IFN-α ou CpG ODN. Em algumas modalidades, o adjuvante é IFN-α, CpG ODN, agonistas STING, agonistas RIG-I ou poli I:C. Em algumas modalidades, o adjuvante compreende qualquer combinação de IFN-α, CpG ODN, agonistas STING, agonistas RIG-I ou poli I:C.

[00194] Em algumas modalidades, o método compreende múltiplas administrações da célula imune modificada. Em algumas modalidades, o método compreende cerca de 3 a cerca de 9 administrações das células imunes modificadas. Em algumas modalidades, o método compreende cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ou 15 administrações das células imunes modificadas. Em algumas modalidades, o método compreende administrações contínuas das células imunes modificadas conforme necessário. Em algumas modalidades, o intervalo de tempo entre duas administrações sucessivas de células imunes modificadas é entre cerca de 1 dia e cerca de 30 dias. Em algumas modalidades, o intervalo de tempo entre duas administrações sucessivas das células imunes modificadas é de cerca de 21 dias. Em algumas modalidades, o tempo de intervalo entre duas administrações sucessivas das células imunes modificadas é de cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 12, 14, 16, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 ou 150 dias. Em algumas modalidades, as células imunes modificadas são uma pluralidade de PBMCs modificados. Em algumas modalidades, as células imunes modificadas são uma pluralidade condicionada de PBMCs modificados.

[00195] Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas e o adjuvante são administrados simultaneamente. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas e o adjuvante são administrados sequencialmente.

[00196] Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada antes da administração do adjuvante. Por exemplo, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada de cerca de 1 hora a cerca de 1 semana antes da administração do adjuvante. Por exemplo, em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada cerca de 1 hora, cerca de 2 horas, cerca de 3 horas, cerca de 4 horas, cerca de 6 horas, cerca de 8 horas, cerca de 10 horas, cerca de 12 horas, cerca de 14 horas, cerca de 16 horas, cerca de 18 horas, cerca de 20 horas, cerca de 24 horas, cerca de 30 horas, cerca de 36 horas, cerca de 42 horas, cerca de 48 horas, cerca de 60 horas, cerca de 3 dias, cerca de 4 dias, cerca de 5 dias, cerca de 6 dias ou cerca de 7 dias antes da administração do adjuvante. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada entre cerca de 1 hora e cerca de 2 horas, entre cerca de 2 horas e cerca de 3 horas, entre cerca de 3 horas e cerca de 4 horas, entre cerca de 4 horas e cerca de 6 horas, entre cerca de 6 horas e cerca de 8 horas, entre cerca de 8 horas e cerca de 10 horas, entre cerca de 10 horas e cerca de 12 horas, entre cerca de 12 horas e cerca de 14 horas, entre cerca de 14 horas e cerca de 16 horas, entre cerca de 16 horas e cerca de 18 horas, entre cerca de 18 horas e cerca de 20 horas, entre cerca de 20 horas e cerca de 24 horas, entre cerca de 24 horas e cerca de 30 horas, entre cerca de 30 horas e cerca de 36 horas, entre cerca de 36 horas e cerca de 42 horas, entre cerca de 42 horas e cerca de 48 horas, entre cerca de 48 horas e cerca de 60 horas, entre cerca de 60 horas e cerca de 3 dias, entre cerca de 3 dias e cerca de 4 dias, desde entre cerca de 4 dias e cerca de 5 dias, entre cerca de 5 dias e cerca de 6 dias, entre cerca de 6 dias e cerca de 7 dias antes da administração do adjuvante.

[00197] Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada após a administração do adjuvante. Por exemplo, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada de cerca de 1 hora a cerca de 1 semana após a administração do adjuvante. Por exemplo, em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada cerca de 1 hora, cerca de 2 horas, cerca de 3 horas, cerca de 4 horas, cerca de 6 horas, cerca de 8 horas, cerca de 10 horas, cerca de

12 horas, cerca de 14 horas, cerca de 16 horas, cerca de 18 horas, cerca de 20 horas, cerca de 24 horas, cerca de 30 horas, cerca de 36 horas, cerca de 42 horas, cerca de 48 horas, cerca de 60 horas, cerca de 3 dias, cerca de 4 dias, cerca de 5 dias, cerca de 6 dias, ou cerca de 7 dias após a administração do adjuvante. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada entre cerca de 1 hora e cerca de 2 horas, entre cerca de 2 horas e cerca de 3 horas, entre cerca de 3 horas e cerca de 4 horas, entre cerca de 4 horas e cerca de 6 horas, entre cerca de 6 horas e cerca de 8 horas, entre cerca de 8 horas e cerca de 10 horas, entre cerca de 10 horas e cerca de 12 horas, entre cerca de 12 horas e cerca de 14 horas, entre cerca de 14 horas e cerca de 16 horas, entre cerca de 16 horas e cerca de 18 horas, entre cerca de 18 horas e cerca de 20 horas, entre cerca de 20 horas e cerca de 24 horas, entre cerca de 24 horas e cerca de 30 horas, entre cerca de 30 horas e cerca de 36 horas, entre cerca de 36 horas e cerca de 42 horas, entre cerca de 42 horas e cerca de 48 horas, entre cerca de 48 horas e cerca de 60 horas, entre cerca de 60 horas e cerca de 3 dias, entre cerca de 3 dias e cerca de 4 dias, entre cerca de 4 dias e cerca de 5 dias, entre cerca de 5 dias e cerca de 6 dias, entre cerca de 6 dias e cerca de 7 dias após a administração do adjuvante.

[00198] Os pontos de verificação imunes são reguladores do sistema imunológico e mantêm as respostas imunológicas sob controle. Os inibidores de ponto de verificação imune podem ser empregados para facilitar o aumento da resposta imunológica. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada em combinação com a administração de um inibidor de ponto de verificação imune. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas e o inibidor de ponto de verificação imune são administrados simultaneamente. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas e o inibidor de ponto de verificação imune são administrados sequencialmente.

[00199] Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada antes da administração do inibidor de ponto de verificação imune. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada após a administração do inibidor de ponto de verificação imune. Por exemplo, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada de cerca de 1 hora a cerca de 1 semana antes da administração do inibidor de ponto de verificação imune. Por exemplo, em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada cerca de 1 hora, cerca de 2 horas, cerca de 3 horas, cerca de 4 horas, cerca de 6 horas, cerca de 8 horas, cerca de 10 horas, cerca de 12 horas, cerca de 14 horas, cerca de 16 horas, cerca de 18 horas, cerca de 20 horas, cerca de 24 horas, cerca de 30 horas, cerca de 36 horas, cerca de 42 horas, cerca de 48 horas, cerca de 60 horas, cerca de 3 dias, cerca de 4 dias, cerca de 5 dias, cerca de 6 dias ou cerca de 7 dias antes da administração do inibidor de ponto de verificação imune. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada entre cerca de 1 hora e cerca de 2 horas, entre cerca de 2 horas e cerca de 3 horas, entre cerca de 3 horas e cerca de 4 horas, entre cerca de 4 horas e cerca de 6 horas, entre cerca de 6 horas e cerca de 8 horas, entre cerca de 8 horas e cerca de 10 horas, entre cerca de 10 horas e cerca de 12 horas, entre cerca de 12 horas e cerca de 14 horas, entre cerca de 14 horas e cerca de 16 horas, entre cerca de 16 horas e cerca de 18 horas, entre cerca de 18 horas e cerca de 20 horas, entre cerca de 20 horas e cerca de 24 horas, entre cerca de 24 horas e cerca de 30 horas, entre cerca de 30 horas e cerca de 36 horas, entre cerca de 36 horas e cerca de 42 horas, entre cerca de 42 horas e cerca de 48 horas, entre cerca de 48 horas e cerca de 60 horas, entre cerca de 60 horas e cerca de 3 dias, entre cerca de 3 dias e cerca de 4 dias, desde entre cerca de 4 dias e cerca de 5 dias, entre cerca de 5 dias e cerca de 6 dias, entre cerca de 6 dias e cerca de 7 dias antes da administração do inibidor de ponto de verificação imune.

[00200] Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada após a administração do inibidor de ponto de verificação imune. Por exemplo, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada de cerca de 1 hora a cerca de 1 semana após a administração do inibidor de ponto de verificação imune. Por exemplo, em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada cerca de 1 hora, cerca de 2 horas, cerca de 3 horas, cerca de 4 horas, cerca de 6 horas, cerca de 8 horas, cerca de 10 horas, cerca de 12 horas, cerca de 14 horas, cerca de 16 horas, cerca de 18 horas, cerca de 20 horas, cerca de 24 horas, cerca de 30 horas, cerca de 36 horas, cerca de 42 horas, cerca de 48 horas, cerca de 60 horas, cerca de 3 dias, cerca de 4 dias, cerca de 5 dias, cerca de 6 dias, ou cerca de 7 dias após a administração do inibidor de ponto de verificação imune. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada entre cerca de 1 hora e cerca de 2 horas, entre cerca de 2 horas e cerca de 3 horas, entre cerca de 3 horas e cerca de 4 horas, entre cerca de 4 horas e cerca de 6 horas, entre cerca de 6 horas e cerca de 8 horas, entre cerca de 8 horas e cerca de 10 horas, entre cerca de 10 horas e cerca de 12 horas, entre cerca de 12 horas e cerca de 14 horas, entre cerca de 14 horas e cerca de 16 horas, entre cerca de 16 horas e cerca de 18 horas, entre cerca de 18 horas e cerca de 20 horas, entre cerca de 20 horas e cerca de 24 horas, entre cerca de 24 horas e cerca de 30 horas, entre cerca de 30 horas e cerca de 36 horas, entre cerca de 36 horas e cerca de 42 horas, entre cerca de 42 horas e cerca de 48 horas, entre cerca de 48 horas e cerca de 60 horas, entre cerca de 60 horas e cerca de 3 dias,

entre cerca de 3 dias e cerca de 4 dias, entre cerca de 4 dias e cerca de 5 dias, entre cerca de 5 dias e cerca de 6 dias, entre cerca de 6 dias e cerca de 7 dias após a administração do inibidor de ponto de verificação imune.

[00201] Em algumas modalidades, o método compreende administrar múltipla composição compreendendo as células imunes modificadas e/ou administração múltipla do inibidor de ponto de verificação. Por exemplo, em algumas modalidades, o método compreende duas administrações, três administrações, quatro administrações, cinco administrações, seis administrações, sete administrações, oito administrações, nove administrações, dez administrações, onze administrações, doze administrações, treze administrações, quatorze administrações, ou quinze administrações da composição compreendendo as células imunes modificadas e/ou o inibidor de ponto de verificação. Por exemplo, em algumas modalidades, o método compreende menos de cinco administrações, menos de dez administrações, menos de quinze administrações, menos de vinte administrações, menos de vinte e cinco administrações, menos de trinta administrações, menos de cinquenta administrações, menos de setenta - cinco administrações, menos de cem ou menos de duzentas administrações da composição que compreende as células imunes modificadas e/ou o inibidor de ponto de verificação.

[00202] O inibidor de ponto de verificação imune exemplar é direcionado a, sem limitação, PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG3 ou TIM-3. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação imune é direcionado a um ou mais dentre PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG3 ou TIM-3. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação imune é um ou mais dentre: um anticorpo que se liga a PD-1, um anticorpo que se liga a PD-L1, um anticorpo que se liga a CTLA-4, um anticorpo que se liga a LAG3 ou um anticorpo que se liga TIM-3. Em modalidades adicionais, o anticorpo pode ser um anticorpo de comprimento total ou quaisquer variantes, por exemplo, mas não limitado a, um fragmento de anticorpo, um fragmento variável de cadeia única (ScFv) ou um fragmento de ligação ao antígeno (Fab). Em modalidades adicionais, o anticorpo pode ser biespecífico, triespecífico ou multiespecífico. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação imune é um ou mais compostos químicos que se ligam a e/ou inibem um ou mais dentre PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG3 ou TIM-3. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação imune é um ou mais peptídeos que se ligam a e/ou inibem um ou mais dentre PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG3 ou TIM-3.

[00203] Outro inibidor de ponto de verificação imune exemplar é direcionado a, sem limitação, TIGIT, VISTA, TIM1, B7-H4 (VTCN1) ou BTLA. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação imune é direcionado a um ou mais dentre TIGIT, VISTA, TIM1, B7-H4 (VTCN1) ou BTLA. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação imune é um ou mais dos seguintes: um anticorpo que se liga a TIGIT, um anticorpo que se liga a VISTA, um anticorpo que se liga a TIM1, um anticorpo que se liga a B7-H4 (VTCN1) ou um anticorpo que se liga a BTLA. Em modalidades adicionais, o anticorpo pode ser um anticorpo de comprimento total ou quaisquer variantes, por exemplo, mas não limitado a, um fragmento de anticorpo, um fragmento variável de cadeia única (ScFv) ou um fragmento de ligação ao antígeno (Fab). Em modalidades adicionais, o anticorpo pode ser biespecífico, triespecífico ou multiespecífico. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação imune é um ou mais compostos químicos que se ligam a e/ou inibem um ou mais dentre PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG3, TIM-3, TIGIT, VISTA, TIM1, B7-H4 (VTCN1) ou BTLA. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação imune é um ou mais peptídeos que se ligam a e/ou inibem um ou mais dentre PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG3, TIM-3, TIGIT, VISTA, TIM1, B7-H4 (VTCN1) ou BTLA.

[00204] A quimioterapia ou radioterapia pode ser usada em combinação com qualquer uma das células imunes modificadas descritas neste documento para obter efeitos aditivos ou sinérgicos contra cânceres, por exemplo, cânceres associados ao HPV. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada em combinação com a administração de uma quimioterapia. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas e a quimioterapia são administradas simultaneamente. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas e a quimioterapia são administradas sequencialmente.

[00205] Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada antes da administração da quimioterapia. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada após administração da quimioterapia. Por exemplo, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada de cerca de 1 hora a cerca de 1 semana antes da administração da quimioterapia. Por exemplo, em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada cerca de 1 hora, cerca de 2 horas, cerca de 3 horas, cerca de 4 horas, cerca de 6 horas, cerca de 8 horas, cerca de 10 horas, cerca de 12 horas, cerca de 14 horas, cerca de 16 horas, cerca de 18 horas, cerca de 20 horas, cerca de 24 horas, cerca de 30 horas, cerca de 36 horas, cerca de 42 horas, cerca de 48 horas, cerca de 60 horas, cerca de 3 dias, cerca de 4 dias, cerca de 5 dias, cerca de 6 dias ou cerca de 7 dias antes da administração da quimioterapia. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada entre cerca de 1 hora e cerca de 2 horas, entre cerca de 2 horas e cerca de 3 horas, entre cerca de 3 horas e cerca de 4 horas, entre cerca de 4 horas e cerca de 6 horas, entre cerca de 6 horas e cerca de 8 horas, entre cerca de 8 horas e cerca de 10 horas, entre cerca de 10 horas e cerca de 12 horas, entre cerca de 12 horas e cerca de 14 horas, entre cerca de 14 horas e cerca de 16 horas, entre cerca de 16 horas e cerca de 18 horas, entre cerca de 18 horas e cerca de 20 horas, entre cerca de 20 horas e cerca de 24 horas, entre cerca de 24 horas e cerca de 30 horas, entre cerca de 30 horas e cerca de 36 horas, entre cerca de 36 horas e cerca de 42 horas, entre cerca de 42 horas e cerca de 48 horas, entre cerca de 48 horas e cerca de 60 horas, entre cerca de 60 horas e cerca de 3 dias, entre cerca de 3 dias e cerca de 4 dias, entre cerca de 4 dias e cerca de 5 dias, entre cerca de 5 dias e cerca de 6 dias, entre cerca de 6 dias e cerca de 7 dias antes da administração da quimioterapia.

[00206] Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada após administração da quimioterapia. Por exemplo, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada de cerca de 1 hora a cerca de 1 semana após a administração da quimioterapia. Por exemplo, em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada cerca de 1 hora, cerca de 2 horas, cerca de 3 horas, cerca de 4 horas, cerca de 6 horas, cerca de 8 horas, cerca de 10 horas, cerca de 12 horas, cerca de 14 horas, cerca de 16 horas, cerca de 18 horas, cerca de 20 horas, cerca de 24 horas, cerca de 30 horas, cerca de 36 horas, cerca de 42 horas, cerca de 48 horas, cerca de 60 horas, cerca de 3 dias, cerca de 4 dias, cerca de 5 dias, cerca de 6 dias, ou cerca de 7 dias após a administração da quimioterapia. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada entre cerca de 1 hora e cerca de 2 horas, entre cerca de 2 horas e cerca de 3 horas, entre cerca de 3 horas e cerca de 4 horas, entre cerca de 4 horas e cerca de 6 horas, entre cerca de 6 horas e cerca de 8 horas, entre cerca de 8 horas e cerca de 10 horas, entre cerca de 10 horas e cerca de 12 horas, entre cerca de 12 horas e cerca de 14 horas, entre cerca de 14 horas e cerca de 16 horas, entre cerca de 16 horas e cerca de 18 horas, entre cerca de 18 horas e cerca de 20 horas, entre cerca de 20 horas e cerca de 24 horas, entre cerca de 24 horas e cerca de 30 horas, entre cerca de 30 horas e cerca de 36 horas, entre cerca de 36 horas e cerca de 42 horas, entre cerca de 42 horas e cerca de 48 horas, entre cerca de 48 horas e cerca de 60 horas, entre cerca de 60 horas e cerca de 3 dias, entre cerca de 3 dias e cerca de 4 dias, entre cerca de 4 dias e cerca de 5 dias, entre cerca de 5 dias e cerca de 6 dias, entre cerca de 6 dias e cerca de 7 dias após a administração da quimioterapia.

[00207] Em algumas modalidades, o método compreendo múltiplas administrações da composição compreendendo as células imunes modificadas e/ou as múltiplas administrações da quimioterapia. Por exemplo, em algumas modalidades, o método compreende duas administrações, três administrações, quatro administrações, cinco administrações, seis administrações, sete administrações, oito administrações, nove administrações, dez administrações, onze administrações, doze administrações, treze administrações, quatorze administrações, ou quinze administrações da composição compreendendo as células imunes modificadas e/ou a quimioterapia. Por exemplo, em algumas modalidades, o método compreende menos de cinco administrações, menos de dez administrações, menos de quinze administrações, menos de vinte administrações, menos de vinte e cinco administrações, menos de trinta administrações, menos de cinquenta administrações, menos de setenta e cinco administrações, menos de cem, ou menos de duzentos administrações da composição compreendendo as células imunes modificadas e/ou a quimioterapia.

[00208] A quimioterapia exemplar pode ser dependente do ciclo celular ou independente do ciclo celular. Em algumas modalidades, a quimioterapia compreende um ou mais agentes quimioterápicos. Em algumas modalidades, um agente quimioterapêutico pode ter como alvo um ou mais dentre a divisão celular, DNA ou metabolismo no câncer. Em algumas modalidades, o agente quimioterapêutico é um agente à base de platina, de tal modo como, mas não se limitando a, cisplatina, oxaliplatina ou carboplatina. Em algumas modalidades, o agente quimioterapêutico é um taxano (tal como docetaxel ou paclitaxel). Em algumas modalidades, o agente quimioterapêutico é 5-fluorouracil, doxorrubicina ou irinotecano. Em algumas modalidades, o agente quimioterapêutico é um ou mais dentre: um agente alquilante, um antimetabólito, um antibiótico antitumoral, um inibidor de topoisomerase ou um inibidor mitótico. Em algumas modalidades, a quimioterapia é composta por cisplatina. Em algumas modalidades, uma ou mais quimioterapias ou inibidores de ponto de verificação imune podem ser combinados com qualquer uma das células imunes modificadas descritas neste documento para tratar ou prevenir uma doença associada ao HPV.

[00209] A radioterapia pode ser usada em combinação com qualquer uma das células T modificadas descritas neste documento para obter efeitos aditivos ou sinérgicos contra cânceres, por exemplo, cânceres associados ao HPV. Em algumas modalidades, a composição compreendendo pelas células T modificadas é administrada em combinação com a administração de uma radioterapia. Em algumas modalidades, a composição que compreende as células T modificadas e a radioterapia são administradas simultaneamente. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células T modificadas e a radioterapia são administradas simultaneamente. Em algumas modalidades, a composição compreendendo células T modificadas é administrada em combinação com a administração de uma radioterapia, em combinação com uma quimioterapia, e/ou em combinação com um inibidor de ponto de verificação imune.

[00210] Em algumas modalidades, a composição que compreende as células T modificadas é administrada antes da administração da radioterapia. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células T modificadas é administrada antes da administração da radioterapia. Por exemplo, a composição compreendendo as células T modificadas é administrada de cerca de 1 hora a cerca de 1 semana antes da administração da radioterapia. Por exemplo, em algumas modalidades, a composição compreendendo células T modificadas é administrada cerca de 1 hora, cerca de 2 horas, cerca de 3 horas, cerca de 4 horas, cerca de 6 horas, cerca de 8 horas, cerca de 10 horas, cerca de 12 horas, cerca de 14 horas, cerca de 16 horas, cerca de 18 horas, cerca de 20 horas, cerca de 24 horas, cerca de 30 horas, cerca de 36 horas, cerca de 42 horas, cerca de 48 horas, cerca de 60 horas, cerca de 3 dias, cerca de 4 dias, cerca de 5 dias, cerca de 6 dias ou cerca de 7 dias antes da administração da radioterapia. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células T modificadas é administrada entre cerca de 1 hora e cerca de 2 horas, entre cerca de 2 horas e cerca de 3 horas, entre cerca de 3 horas e cerca de 4 horas, entre cerca de 4 horas e cerca de 6 horas, entre entre cerca de 6 horas e cerca de 8 horas, entre cerca de 8 horas e cerca de 10 horas, entre cerca de 10 horas e cerca de 12 horas, entre cerca de 12 horas e cerca de 14 horas, entre cerca de 14 horas e cerca de 16 horas, entre entre cerca de 16 horas e cerca de 18 horas, entre cerca de 18 horas e cerca de 20 horas, entre cerca de 20 horas e cerca de 24 horas, entre cerca de 24 horas e cerca de 30 horas, entre cerca de 30 horas e cerca de 36 horas, entre entre cerca de 36 horas e cerca de 42 horas, entre cerca de 42 horas e cerca de 48 horas, entre cerca de 48 horas e cerca de 60 horas, entre cerca de 60 horas e cerca de 3 dias, entre cerca de 3 dias e cerca de 4 dias, desde entre cerca de 4 dias e cerca de 5 dias, entre cerca de 5 dias e cerca de 6 dias, entre cerca de 6 dias e cerca de 7 dias antes da administração da radioterapia.

[00211] Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células T modificadas é administrada antes da administração da radioterapia. Por exemplo, a composição compreendendo as células T modificadas é administrada de cerca de 1 hora a cerca de 1 semana após a administração da radioterapia. Por exemplo, em algumas modalidades, a composição compreendendo as células T modificadas é administrada cerca de 1 hora, cerca de 2 horas, cerca de 3 horas, cerca de 4 horas, cerca de 6 horas, cerca de 8 horas, cerca de 10 horas, cerca de 12 horas, cerca de 14 horas, cerca de 16 horas, cerca de 18 horas, cerca de 20 horas, cerca de 24 horas, cerca de 30 horas, cerca de 36 horas, cerca de 42 horas, cerca de 48 horas, cerca de 60 horas, cerca de 3 dias, cerca de 4 dias, cerca de 5 dias, cerca de 6 dias, ou cerca de 7 dias após a administração da radioterapia. Em algumas modalidades, a composição compreendendo as células T modificadas é administrada entre cerca de 1 hora e cerca de 2 horas, entre cerca de 2 horas e cerca de 3 horas, entre cerca de 3 horas e cerca de 4 horas, entre cerca de 4 horas e cerca de 6 horas, entre cerca de 6 horas e cerca de 8 horas, entre cerca de 8 horas e cerca de 10 horas, entre cerca de 10 horas e cerca de 12 horas, entre cerca de 12 horas e cerca de 14 horas, entre cerca de 14 horas e cerca de 16 horas, entre cerca de 16 horas e cerca de 18 horas, entre cerca de 18 horas e cerca de 20 horas, entre cerca de 20 horas e cerca de 24 horas, entre cerca de 24 horas e cerca de 30 horas, entre cerca de 30 horas e cerca de 36 horas, entre cerca de 36 horas e cerca de 42 horas, entre cerca de 42 horas e cerca de 48 horas, entre cerca de 48 horas e cerca de 60 horas, entre cerca de 60 horas e cerca de 3 dias, entre cerca de 3 dias e cerca de 4 dias, entre cerca de 4 dias e cerca de 5 dias, entre cerca de 5 dias e cerca de 6 dias, entre cerca de 6 dias e cerca de 7 dias após a administração da radioterapia.

[00212] Em algumas modalidades, o método compreendo múltiplas administrações da composição compreendendo as células T modificadas e/ou as múltiplas administrações da radioterapia. Por exemplo, em algumas modalidades, o método compreende duas administrações, três administrações, quatro administrações, cinco administrações, seis administrações, sete administrações, oito administrações, nove administrações, dez administrações, onze administrações, doze administrações, treze administrações, quatorze administrações, ou quinze administrações da composição compreendendo células T modificadas e/ou radioterapia. Por exemplo, em algumas modalidades, o método compreende menos de cinco administrações, menos de dez administrações, menos de quinze administrações, menos de vinte administrações, menos de vinte e cinco administrações, menos de trinta administrações, menos de cinquenta administrações, menos de setenta e cinco administrações, menos de cem, ou menos de duzentos administrações da composição que compreende as células T modificadas e/ou a radioterapia.

[00213] Quando os antígenos do HPV são processados e apresentados no MHC para células imunes, uma resposta imune contra o epítope do HPV apresentado pode ser acionada ou aprimorada. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é capaz de ser transformado em um peptídeo MHC restrito de classe I. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é capaz de ser transformado em um peptídeo MHC restrito de classe II. Em algumas modalidades, a resposta imune é aprimorada. Em algumas modalidades, a resposta imune ao antígeno do HPV é aprimorada. Em algumas modalidades, a administração da composição compreendendo as células imunes modificadas ao indivíduo resulta na ativação e/ou expansão de linfócitos T citotóxicos (CTLs) específicos para o antígeno do HPV. Em algumas modalidades, a administração da composição compreendendo as células imunes modificadas ao indivíduo resulta na ativação e/ou expansão de células T (Th) auxiliares específicas para o antígeno.

[00214] Em algumas modalidades, a quantidade eficaz da composição compreende entre cerca de 1 × 106 e cerca de 1 × 1012 células imunes modificadas. Em algumas modalidades, a quantidade eficaz da composição compreende qualquer uma das cerca de 1 × 106, cerca de 1 × 107, cerca de 1 × 108, cerca de 1 × 109, cerca de 1 × 1010, cerca de 1 × 1011, ou cerca de 1 × 1012 células imunes modificadas. Em algumas modalidades, a quantidade eficaz da composição compreende qualquer uma das cerca de 1 × 106 a cerca de 1 × 107, entre cerca de 1 × 107 a cerca de 1 × 108, entre cerca de 1 × 108 para cerca de 1 × 109, entre cerca de 1 × 109 a cerca de 1 × 1010, entre cerca de 1 × 1010 a cerca de 1 × 1011, ou entre cerca de 1 × 1011 a cerca de 1 × 1012 células imunes modificadas.

[00215] Em algumas modalidades, o método compreende múltiplas administrações da composição compreendendo as células imunes modificadas. Por exemplo, em algumas modalidades, o método compreende duas administrações, três administrações, quatro administrações, cinco administrações, seis administrações, sete administrações, oito administrações, nove administrações, dez administrações, onze administrações, doze administrações, treze administrações, quatorze administrações, ou quinze administrações da composição compreendendo células imunes modificadas. Por exemplo, em algumas modalidades, o método compreende menos de cinco administrações, menos de dez administrações, menos de quinze administrações, menos de vinte administrações, menos de vinte e cinco administrações, menos de trinta administrações, menos de cinquenta administrações, menos de setenta e cinco administrações, menos de cem, ou menos de duzentos administrações da composição compreendendo as células imunes modificadas. Por exemplo, em algumas modalidades, o método compreende uma primeira administração da composição compreendendo células imunes modificadas seguida por uma segunda administração da composição compreendendo as células imunes modificadas. O tempo da administração também pode ser modificado para alcançar os resultados desejados. Em algumas modalidades, a primeira administração da composição ao indivíduo ocorre antes da segunda administração da composição. Em algumas modalidades, a primeira administração é introduzida ao indivíduo mais do que qualquer uma de cerca de 1 semana, cerca de 2 semanas, cerca de 3 semanas, cerca de 4 semanas, cerca de 1 mês, cerca de 2 meses, cerca de 3 meses, cerca de 4 meses, cerca de 5 meses, cerca de 6 meses, cerca de 7 meses, cerca de 8 meses, cerca de 9 meses, cerca de 10 meses, cerca de 11 meses, cerca de 12 meses, cerca de 18 meses, ou cerca de 24 meses antes da introdução da segunda administração.

[00216] Em algumas modalidades, o método compreende múltiplas administrações da célula T modificada. Em algumas modalidades, o método compreende qualquer uma das cerca de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou mais de 10 administrações. Em algumas modalidades, o intervalo de tempo entre duas administrações sucessivas da célula T modificada é entre cerca de 1 dia e cerca de 1 mês. Em algumas modalidades, a administração é diária, a cada 2 dias, a cada 3 dias, a cada 4 dias, a cada 5 dias, a cada 6 dias, semanal, quinzenal ou mensal. Em algumas modalidades, sucessivas administrações são dadas por até um ano ou mais.

[00217] Em certos aspectos, a composição compreendendo células modificadas pode ser usada para tratar, prevenir uma doença associada ao HPV e/ou modular uma resposta imune em um indivíduo com uma doença associada ao HPV. Em algumas modalidades, a doença associada ao HPV é um câncer associado ao HPV. Em algumas modaliades, o câncer associado ao HPV é doença cervical, doença anal, doença orofaringe, doença vaginal, doença vulvar, doença peniana, doença da pele ou doença da cabeça e pescoço. Em algumas modalidades, a doença associada ao HPV é uma doença infecciosa associada ao HPV. Outras doenças associadas ao HPV podem incluir verrugas comuns, verrugas plantares, verrugas planas, verrugas anogenitais, lesões anais, epidermodisplasia, hiperplasia epitelial focal, papilomas bucais, cisto verrucoso e papilomatose laríngea.

[00218] Em alguns aspectos, a divulgação divulga uso de células imunes modificadas para tratar uma doença associada ao HPV, em que as células imunes modificadas compreendem de maneira intracelular um antígeno do HPV e de maneira intracelular um adjuvante. Em alguns aspectos, a divulgação divulga o uso de células imunes modificadas para tratar uma doença associada ao HPV, o método compreendendo a administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem de maneira intracelular um antígeno do HPV e de maneira intracelular um adjuvante; em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, de modo que uma força de deformação é aplicada à célula de entrada conforme ela passa pela constrição, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para o antígeno do HPV e o adjuvante passarem para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV e o adjuvante por um tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV e o adjuvante entrem na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas.

[00219] Em alguns aspectos, a divulgação divulga uma composição compreendendo células imunes modificadas para fabricar um medicamento usado para tratar uma doença associada ao HPV, em que as células imunes modificadas compreendem de maneira intracelular um antígeno do HPV e de maneira intracelular um adjuvante. Em alguns aspectos, a divulgação divulga uma composição compreendendo células imunes modificadas para fabricar um medicamento usado para tratar uma doença associada ao HPV, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem de maneira intracelular um antígeno do HPV e de maneira intracelular um adjuvante; em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, de modo que uma força de deformação é aplicada à célula de entrada conforme ela passa pela constrição, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para o antígeno do HPV e o adjuvante passarem para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV e o adjuvante por um tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV e o adjuvante entrem na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas.

[00220] Em alguns aspectos, a divulgação divulga uma composição compreendendo células imunes modificadas para uso em um método de tratamento médico, em que as células imunes modificadas compreendem de maneira intracelular um antígeno do HPV e de maneira intracelular um adjuvante. Em alguns aspectos, a divulgação divulga uma composição compreendendo células imunes modificadas para uso em um método de tratamento médico, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem de maneira intracelular um HPV antígeno e de maneira intracelular um adjuvante; em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, de modo que uma força de deformação é aplicado à célula de entrada conforme ela passa pela constrição, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para o antígeno do HPV e o adjuvante passarem para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV e o adjuvante por um tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV e o adjuvante entrem na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas.

[00221] Em alguns aspectos, a divulgação divulga uma composição compreendendo células imunes modificadas para uso em um método de tratamento de câncer, uma doença infecciosa ou uma doença associada a vírus, em que as células imunes modificadas compreendem de maneira intracelular um antígeno do HPV e de maneira intracelular um adjuvante. Em alguns aspectos, a divulgação divulga uma composição compreendendo células imunes modificadas para uso no tratamento de uma doença associada ao HPV, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem de maneira intracelular um antígeno do HPV e um adjuvante de maneira intracelular; em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, de modo que uma força de deformação é aplicado à célula de entrada conforme ela passa pela constrição, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para o antígeno do HPV e o adjuvante passarem para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV e o adjuvante por um tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV e o adjuvante entrem na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas.

[00222] Em alguns aspectos, essa divulgação divulga um método para tratar ou prevenir uma doença associada ao HPV em um indivíduo compreendendo administrar ao indivíduo uma célula imune modificada associada a um antígeno do HPV, em que a célula imune modificada é preparada por um processo compreendendo as etapas de: a) incubar uma célula de entrada com o antígeno do HPV e/ou um adjuvante por tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV se associe à superfície celular da célula. gerando, desta forma, a célula imune modificada associada ao antígeno.

[00223] Em algumas modalidades, as células imunes modificadas da invenção não induzem tolerância em um indivíduo. Em algumas modalidades, as células imunes modificadas não suprimem uma resposta imune em um indivíduo. Em algumas modalidades, as células imunes modificadas não compreendem um fator tolerogênico. Em algumas modalidades, as células imunes modificadas não são administradas em combinação com um fator tolerogênico. Em algumas modalidades, as células imunes modificadas não são administradas antes, simultaneamente com ou após a administração de um fator tolerogênico. Composições

[00224] Em certos aspectos, a invenção provê uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem antígeno do HPV intracelular e um CpG ODN intracelular. Em outros aspectos, a divulgação divulga uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem de maneira intracelular um antígeno do HPV, em que o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 26. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com a SEQ ID Nº: 23. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 23. Em algumas modalidades, as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grande o suficiente para o antígeno do HPV passar para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV por um tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV entre na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas. Em algumas modalidades, uma força de deformação é aplicada à célula de entrada à medida que passa através da constrição. Em algumas modalidades, a composição compreende adicionalmente um adjuvante de maneira intracelular.

[00225] Em algumas modalidades, o antígeno do HPV e/ou o adjuvante estão presentes nos citosol e/ou endossomos. Em algumas modalidades, o antígeno e/ou adjuvante estão presentes em múltiplos compartimentos da célula. Em outras modalidades, o antígeno e/ou adjuvante estão presentes em compartimentos da célula que compreendem o retículo endoplasmático (ER), aparelho de Golgi, lisossoma, exossomos, superfície celular ou membrana celular. Em algumas modalidades, o antígeno e o adjuvante estão no mesmo compartimento. Em algumas modalidades, o antígeno e o adjuvante estão em compartimentos diferentes um do outro. Por exemplo, em algumas modalidades, o antígeno está presente no citosol, enquanto o adjuvante está presente no endossomo. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende adicionalmente um antígeno do HPV e/ou um adjuvante no exterior da célula.

[00226] Em algumas modalidades, o antígeno é um antígeno polipeptídico. Em algumas modalidades, o antígeno é um antígeno modificado. Por exemplo, antígenos podem ser fundidos com agentes terapêuticos ou peptídeos de alvo. Em algumas modalidades, o antígeno modificado é fundido com um polipeptídeo. Em algumas modalidades, o antígeno é modificado com um lipídeo. Em algumas modalidades, o antígeno é modificado com um polissacarídeo ou uma fração de carboidrato. Em algumas modalidades, o antígeno está associado a um vírus. Em algumas modalidades, o antígeno é um antígeno viral. Antígenos virais exemplares incluem antígenos do HPV. Em outras modalidades, o antígeno é um antígeno do HPV. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV consiste em uma seleção do grupo dentre: HPV- 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, e 82. HPV- 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 73 e 82 são tipos de alto risco em causar câncer, enquanto HPV- 26, 53 e 66 são “provavelmente tipos de alto risco” em causar câncer. Em algumas modalidades, o antígeno é um antígeno do HPV-16 ou um antígeno do HPV-18. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é composto por um epítopo específico de HLA-A2.Os genes HPV E6 e E7 são os oncogenes do vírus e a expressão desses genes é necessária para a transformação maligna. As proteínas E6 e E7 têm como alvo vários reguladores negativos do ciclo celular, principalmente p105Rb e p53, respectivamente, e, portanto, interferem na regulação do ciclo celular. Em modalidades adicionais, o antígeno do HPV é um antígeno do HPV E6 ou um antígeno do HPV E7. Em algumas modalidades, as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV E6 e um antígeno do HPV E7. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é um polipeptídeo compreendendo um epítopo imunogênico que é flanqueado no N-terminal e/ou no C-terminal por uma ou mais sequências de peptídeos heterólogas. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV é um epítopo do HPV E7 flanqueado por sequências do polipeptídeo do HPV E6 (E7.6). Em algumas modalidades, o antígeno do HPV compreende um aminoácido com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma dentre as SEQ ID Nº: 18 a

26. Em algumas modalidades, o antígeno do HPV compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 23.

[00227] Um adjuvante, quando adicionado a um agente imunogênico, aumenta ou potencializa de forma não específica uma resposta imune ao agente no hospedeiro receptor após exposição à mistura. Portanto, os adjuvantes podem ser usados para aumentar a elicitação de uma resposta de células imunes (por exemplo, resposta de células T) a um antígeno. Em algumas modalidades, as células perturbadas são incubadas com o antígeno do HPV e um adjuvante. Os adjuvantes intracelulares exemplares incluem, sem limitação, CpG ODN, Interferon-α (IFN-α), agonistas estimuladores de genes de interferon (STING), agonistas do gene I induzido por ácido retinóico (RIG-I) e polinossínico: ácido policitidílico (poliI: C.). Em algumas modalidades, o adjuvante é CpG ODN, IFN-α, agonistas STING, agonistas RIG-I ou poli I:C. Em modalidades particulares, o adjuvante é um polinucleotídeo CpG ODN. Em algumas modalidades, o adjuvante CpG ODN compreende uma seleção do grupo dentre CpG ODN 1585, CpG ODN2216, CpG ODN 2336, CpG ODN 1668, CpG ODN 1826, CPG ODN 2006, CpG ODN 2007, CpG ODN BW006, CpG ODN D -SL01, CpG ODN 2395, CpG ODN M362, CpG ODN D-SL03 (InvivoGen). Em algumas modalidades, o adjuvante CpG ODN é CpG ODN 1826 (SEQ: TCCATGACGTTCCTGACGTT) ou oligonucleotídeo CpG ODN 2006 (também conhecido como CpG ODN 7909) (SEQ: TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT). Múltiplos adjuvantes também podem ser usados em conjunto com antígenos para aumentar a elicitação da resposta imune. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende mais de um adjuvante. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende qualquer combinação dos adjuvantes CpG ODN, IFN-α, agonistas STING, agonistas RIG-I e poli I:C.

[00228] Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende o adjuvante a uma concentração entre cerca de 0.01 µM e cerca de 10 µM. Por exemplo, em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende o adjuvante a uma concentração de qualquer um de menos do que cerca de 0,01 µM, cerca de 0,1 µM, cerca de 1 µM, cerca de 10 µM, cerca de 100 µM, cerca de 1 µM ou cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende o adjuvante a uma concentração superior entre cerca de 10 µM. Por exemplo, em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende o adjuvante a uma concentração inferior a cerca de 0,01 µM, cerca de 0,1 µM, cerca de 1 µM, cerca de 10 µM, cerca de 100 µM, cerca de 1 µM ou cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende o adjuvante a uma concentração de mais do que qualquer um de cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende o adjuvante a uma concentração qualquer entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM, entre cerca de 1 µM e cerca de 10 µM, entre cerca de 10 µM e cerca de 100 µM, entre cerca de 100 µM e cerca de 1 µM, ou entre 1 µM e cerca de 10 µM.

[00229] Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende o antígeno do HPV a uma concentração entre cerca de 0,01 µM e cerca de 10 µM. Por exemplo, em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende o adjuvante a uma concentração de qualquer um de menos do que cerca de 0,01 µM, cerca de 0,1 µM, cerca de 1 µM, cerca de 10 µM, cerca de 100 µM, cerca de 1 µM ou cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende o adjuvante a uma concentração superior entre cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende o antígeno do HPV a uma concentração inferior a cerca de 0,01 µM, cerca de 0,1 µM, cerca de 1 µM, cerca de 10 µM, cerca de 100 µM, cerca de 1 µM ou cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende o adjuvante a uma concentração de mais do que qualquer um de cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende o antígeno do HPV a uma concentração entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM, entre cerca de 1 µM e cerca de 10 µM, entre cerca de 10 µM e cerca de 100 µM, entre cerca de 100 µM e cerca de 1 µM, ou entre 1 µM e cerca de 10 µM.

[00230] Em algumas modalidades, a proporção de antígeno do HPV para o adjuvante está entre cerca de 10000:1 a cerca de 1:10000. Por exemplo, em algumas modalidades, a proporção de antígeno do HPV para o adjuvante é qualquer uma de cerca de 10000:1, cerca de 1000:1, cerca de 200:1, cerca de 100:1, cerca de 10:1, cerca de 1:1, cerca de 1:10, cerca de 1:100, cerca de 1:1000 ou cerca de 1:10000. Em algumas modalidades, a proporção de antígeno do HPV para o adjuvante entre cerca de 10000:1 e cerca de 1000:1, entre cerca de 1000:1 e cerca de 100:1, entre cerca de 100:1 e cerca de 10:1, entre cerca de 10:1 e cerca de 1:1, entre cerca de 1:1 e cerca de 1:10, entre cerca de 1:10 e cerca de 1:100, entre cerca de 1:100 e cerca de 1:1000, entre cerca de 1:1000 e cerca de 1:10000.

[00231] Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende adicionalmente um agente que aprimora a viabilidade e/ou função da célula imune modificada em comparação com uma célula imune modificada correspondente que não compreende o agente. Em algumas modalidades, o agente é um composto que aumenta a endocitose, um agente estabilizador ou um cofator. Em algumas modalidades, o agente estabilizador é complexado com o antígeno do HPV e/ou o adjuvante. Em algumas modalidades, o agente estabilizador aumenta a solubilidade e/ou meia-vida da solução do antígeno do HPV e/ou o adjuvante. Em algumas modalidades, a pluralidade de células imunes modificadas tem maior viabilidade do que as células imunes modificadas correspondentes que não compreendem o agente estabilizador. Em algumas modalidades, o agente é albumina. Em modalidades adicionais, a albumina é albumina de camundongo, bovina ou humana. Em algumas modalidades, o agente é um cátion de metal divalente, glicose, ATP, potássio, glicerol, trealose, D- sacarose, PEG1500, L-arginina, L-glutamina ou EDTA. Em algumas modalidades, o cátion de metal divalente é mais um dentre Mg2+, Zn2+ ou Ca2+.Em algumas modalidades, o agente compreende MSA.

[00232] Em algumas modalidades, de acordo com qualquer um dos métodos ou composições descritos neste documento, a célula imune modificada compreende ainda um agente que aumenta a viabilidade e/ou função da célula imune modificada em comparação com uma pluralidade correspondente da célula imune modificada que não compõem o agente. Em algumas modalidades, a célula imune modificada compreende ainda um agente que aumenta a viabilidade e/ou função da célula imune modificada após o ciclo de congelamento-descongelamento em comparação com uma célula imune modificada correspondente que não compreende o agente. Em algumas modalidades, o agente é um agente de ciropreservação e/ou um agente de preservação hipotérmico. Em algumas modalidades, o agente de ciropreservação nem o agente de preservação hipotérmico causam não mais que 10% ou 20% da morte celular em uma célula imune modificada que compreende o agente em comparação com uma célula imune modificada correspondente que não compreende o agente antes de qualquer ciclo de congelamento/descongelamento. Em algumas modalidades, pelo menos cerca de 70%, cerca de 80% ou cerca de 90% das células imunes modificadas são viáveis após até 1, 2, 3, 4, 5 ciclos de congelamento/descongelamento. Em algumas modalidades, o agente é um composto que aumenta a endocitose, um agente estabilizador ou um cofator. Em algumas modalidades, o agente é albumina. Em algumas modalidades, a albumina é albumina de camundongo, bovina ou humana. Em algumas modalidades, o agente é albumina humana. Em algumas modalidades, o agente é um ou mais dentre: um cátion de metal divalente, glicose, ATP, potássio, glicerol, trealose, D-sacarose, PEG1500, L-arginina, L-glutamina ou EDTA. Em algumas modalidades, o cátion de metal divalente é mais um dentre Mg2+, Zn2+ ou Ca2+.Em algumas modalidades, o agente é um ou mais dentre: piruvato de sódio, adenina,

trealose, dextrose, manose, sacarose, albumina de soro humana (HSA), DMSO, HEPES, glicerol, glutationa, inosina, fosfato de sódio dibásico, fosfato de sódio monobásico, íons de metal de sódio, íons de metal de potássio, íons de metal de magnésio, cloreto, acetato, gluoconato, sacarose, hidróxido de potássio ou hidróxido de sódio. Em algumas modalidades, o agente é um ou mais dentre: Piruvato de sódio, adenina, Rejuvesol®, trealose, dextrose, manose, sacarose, albumina de soro humano (HSA), PlasmaLyte®, DMSO, Cryostor® CS2, Cryostor® CS5, Cryostor® CS10, Cryostor® CS15, HEPES, glicerol, HypoThermosol®.

[00233] Em algumas modalidades, as células imunes modificadas são adicionalmente modificadas para aumentar expressão de uma ou mais moléculas coestimulantes. Em algumas modalidades, a molécula coestimulante é B7-H2 (ICOSL), B7-1 (CD80), B7-2 (CD86), CD70, LIGHT, HVEM, CD40, 4-1BBL, OX40L, TL1A, GITRL, CD30L, TIM4, SLAM, CD48, CD58, CD155, ou CD112. Em algumas modalidades, a célula compreende um ácido nucleico que resulta em expressão aumentada de uma ou mais moléculas coestimulantes.

[00234] Em algumas modalidades, a célula imune é uma célula T, uma célula dendrítica, um monócito, um macrófago, uma célula mieloide, um granulócito, um neutrófilo, uma célula mastro, uma célula exterminadora natural, uma célula linfoide inata, um basófilo ou uma célula precursora hematopoética. Em algumas modalidades, a célula imune não é uma célula T. Em algumas modalidades, a célula imune é uma célula T. Em algumas modalidades, a célula imune diferente de uma célula B. Em algumas modalidades, a célula T modificada inclui uma ou mais dentre células T auxiliares, células T citotóxicas, células T de memória, células CIK e células T exterminadoras naturais. Em algumas modalidades, a célula T inclui uma ou mais dentre células T CD3+, células T CD4+, células T CD8+, células T CD45RA+, células T CD45RO+ e células T γδ. A expressão de MHC em células T alogênicas pode resultar em uma resposta imune inata montada em um indivíduo em resposta às suas administrações e resultará em uma meia-vida encurtada de tais células T.

Em algumas modalidades, uma resposta imune inata montada em um indivíduo em resposta à administração, em um contexto alogênico, das células T modificadas adicionalmente é reduzida em comparação com uma resposta imune inata montada em um indivíduo em resposta à administração, em um contexto alogênico, de células T modificadas correspondentes que não compreendem a modificação adicional.

Em algumas modalidades, a meia- vida circulante das células T modificadas adicionalmente em um indivíduo ao qual foram administradas é aumentada em comparação com a meia-vida circulante de células T modificadas correspondentes que não compreendem a modificação adicional em um indivíduo ao qual foram administradas.

Em algumas modalidades, a célula T inclui uma ou mais dentre células T CD3+, células

T CD4+, células T CD8+, células T CD45RA+, células T CD45RO+ ou células T γδ.

[00235] Células imunes e outras células podem ser usadas como uma fonte de células autólogas ou alogênicas. Em algumas modalidades, a célula imune modificada é alogênica ao indivíduo. Em outras modalidades, a célula imune modificada é autóloga ao indivíduo. Em algumas modalidades, o indivíduo a ser tratado é precondicionado para ter inflamação diminuída ou uma resposta imune modulada. Composição PBMC

[00236] Conforme usado neste documento, PBMCs podem ser isolados por leucaferese de sangue total obtido a partir de um indivíduo. Também são providas composições de PBMC são reconstituídas pela mistura de diferentes conjuntos de PBMCs do mesmo indivíduo ou de indivíduos diferentes. Em outros exemplos, PBMCs também podem ser reconstituídos pela mistura de diferentes populações de células em uma composição celular mista com um perfil gerado. Em algumas modalidades, as populações de células usadas para reconstituir PBMCs são populações mistas de células (como uma mistura de uma ou mais células T, células B, células NK ou monócitos). Em algumas modalidades, as populações de células usadas para reconstituir PBMCs são populações purificadas de células (como uma mistura de uma ou mais células T, células B, células NK ou monócitos). Em exemplos adicionais, as diferentes populações de células usadas na reconstituição de uma composição de PBMC podem ser isoladas do mesmo indivíduo (por exemplo, autólogo) ou isoladas de diferentes indivíduos (por exemplo, alogênico e/ou heterólogo).

[00237] Portanto, em algumas modalidades de acordo com qualquer um dos métodos ou composições descritos neste documento, em que a célula imune é uma pluralidade de PBMCs, a pluralidade de PBMCs de entrada compreende uma ou mais das células T, células B, células NK, monócitos, células dendríticas ou Células NK-T. Em algumas modalidades,

a pluralidade de PBMCs de entrada compreende células T, células B, células NK, monócitos, células dendríticas ou células NK-T.

Em algumas modalidades, a pluralidade de PBMCs de entrada compreende uma ou mais células T CD3+, células B CD20+, monócitos CD14+, células NK CD56+. Em algumas modalidades, a pluralidade de PBMCs de entrada compreende células T, células B, células NK e monócitos, e a proporção de células T, células B, células NK e monócitos para o número total de PBMCs na pluralidade de PBMCs de entrada é essencialmente o mesmo que a proporção de células T, células B, células NK e monócitos para o número total de PBMCs no sangue total.

Em algumas modalidades, a pluralidade de PBMCs de entrada compreende células T, células B, células NK e monócitos, e a proporção de células T, células B, células NK e monócitos para o número total de PBMCs na pluralidade de PBMCs de entrada é essencialmente o mesmo que a proporção de células T, células B, células NK e monócitos para o número total de PBMCs em um produto de leucaferese de sangue total.

Em algumas modalidades, a pluralidade de PBMCs de entrada compreende células T, células B, células NK e monócitos, e a proporção de células T, células B, células NK e monócitos para o número total de PBMCs na pluralidade de PBMCs de entrada difere por não mais do que qualquer um de 1%, 2%, 5%, 10% 15%, 20%, 25%, 30%, 40% ou 50% da proporção de células T, células B, células NK e monócitos para o número total de PBMCs no sangue total.

Em algumas modalidades, a pluralidade de PBMCs de entrada compreende células T, células B, células NK e monócitos, e a proporção de células T, células B, células NK e monócitos para o número total de PBMCs na pluralidade de PBMCs de entrada difere por não mais do que qualquer um de 10% da proporção de células T, células B, células NK e monócitos para o número total de PBMCs no sangue total.

Em algumas modalidades, a pluralidade de PBMCs de entrada compreende células T, células B, células NK e monócitos, e a proporção de células T, células B, células NK e monócitos em relação ao número total de PBMCs na pluralidade de PBMCs de entrada difere em não mais do que qualquer um de 1%, 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40% ou 50% da proporção de células T, células B, células NK e monócitos para o número total de PBMCs em um produto de leucaferese de sangue total. Em algumas modalidades, a pluralidade de PBMCs de entrada compreende células T, células B, células NK e monócitos, e a proporção de células T, células B, células NK e monócitos para o número total de PBMCs na pluralidade de PBMCs de entrada difere por não mais do que qualquer um de 10% da proporção de células T, células B, células NK e monócitos para o número total de PBMCs em um produto de leucaferese de sangue total.

[00238] Em algumas modalidades, de acordo com qualquer um dos métodos ou composições descritos neste documento, em que a célula imune é uma pluralidade de PBMCs, cerca de 25% a cerca de 70% dos PBMCs modificados são células T. Em algumas modalidades, cerca de 2,5% a cerca de 14% dos PBMCs modificados são células NK. Em algumas modalidades, cerca de 3,5% a cerca de 35% dos PBMCs modificados são células NK. Em algumas modalidades, cerca de 4% a cerca de 25% dos PBMCs modificados são células NK. Em algumas modalidades, de acordo com qualquer um dos métodos ou composições descritos neste documento, em que a célula imune é uma pluralidade de PBMCs, pelo menos cerca de 90% a cerca de 99% dos PBMCs de entrada consistem em células T, células B, células NK e monócitos. Em algumas modalidades, pelo menos qualquer um de cerca de 80% a cerca de 85%, cerca de 85% a cerca de 90%, cerca de 90% a cerca de 95% ou cerca de 95% a cerca de 99% dos PBMCs de entrada consistem em células T, células B, células NK e monócitos. Em algumas modalidades, pelo menos cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% dos PBMCs de entrada consistem em células T, células B, células NK e monócitos. Em algumas modalidades,

pelo menos cerca de 90% dos PBMCs de entrada consistem em células T, células B, células NK e monócitos. Em algumas modalidades, os PBMCs de entrada consistem em células T, células B, células NK e monócitos.

[00239] Em algumas modalidades, de acordo com qualquer um dos métodos ou composições descritos neste documento, em que a célula imune é uma pluralidade de PBMCs, pelo menos cerca de 90% a cerca de 99% dos PBMCs modificados consistem em células T, células B, células NK e monócitos. Em algumas modalidades, pelo menos qualquer um de cerca de 80% a cerca de 85%, cerca de 85% a cerca de 90%, cerca de 90% a cerca de 95% ou cerca de 95% a cerca de 99% dos PBMCs modificados consistem em células T, células B, células NK e monócitos. Em algumas modalidades, pelo menos cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93 %, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% dos PBMCs modificados consistem em células T, células B, células NK e monócitos. Em algumas modalidades, pelo menos cerca de 90% dos PBMCs modificados consistem em células T, células B, células NK e monócitos. Em algumas modalidades, os PBMCs modificados consistem em células T, células B, células NK e monócitos.

[00240] Em algumas modalidades, de acordo com qualquer um dos métodos ou composições descritos neste documento, em que a célula imune é uma pluralidade de PBMCs, pelo menos cerca de 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45 %, 50%, 55%, 60%, 65%, 70% ou 75% das PBMCs de entrada são células T. Em algumas modalidades, pelo menos cerca de 24% dos PBMCs de entrada são células T. Em algumas modalidades, pelo menos cerca de qualquer um de 0,5%, 1%, 1,5%, 2%, 2,5%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 7,5%, 8%, 9%, 10 %, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 25% ou 30% dos PBMCs de entrada são células B. Em algumas modalidades, pelo menos cerca de 2,5% dos PBMCs de entrada são células B. Em algumas modalidades, pelo menos cerca de qualquer um de 0,5%, 1%, 1,5%, 2%, 2,5%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 7,5%, 8%, 9%, 10 %,

11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 25% ou 30% dos PBMCs de entrada são células NK. Em algumas modalidades, pelo menos cerca de 3,5% dos PBMCs de entrada são células NK. Em algumas modalidades, pelo menos cerca de 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 12%, 14%, 16%, 18 %, 20%, 25%, 30%, 35% ou 40% dos PBMCs de entrada são monócitos. Em algumas modalidades, pelo menos cerca de 4% dos PBMCs de entrada são monócitos. Em algumas modalidades, pelo menos cerca de 25% dos PBMCs de entrada são células T; pelo menos cerca de 2,5% dos PBMCs de entrada são células B; pelo menos cerca de 3,5% dos PBMCs de entrada são células NK; e pelo menos cerca de 4% dos PBMCs de entrada são monócitos.

[00241] Em algumas modalidades, de acordo com qualquer um dos métodos ou composições descritos neste documento, em que a célula imune é uma pluralidade de PBMCs, pelo menos cerca de 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40 %, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% ou 70% dos PBMCs modificados são células T. Em algumas modalidades, pelo menos cerca de 20% dos PBMCs modificados são células T. Em algumas modalidades, pelo menos cerca de 0,25%, 0,5%, 1%, 1,5%, 2%, 2,5%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 7,5%, 8%, 9 %, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 25% ou 30% dos PBMCs modificados são células B. Em algumas modalidades, pelo menos cerca de 2% dos PBMCs modificados são células B. Em algumas modalidades, pelo menos cerca de qualquer um de 0,5%, 1%, 1,5%, 2%, 2,5%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 7,5%, 8%, 9%, 10 %, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 25% ou 30% dos PBMCs modificados são células NK. Em algumas modalidades, pelo menos cerca de 3% dos PBMCs modificados são células NK. Em algumas modalidades, pelo menos cerca de 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 12%, 14%, 16%, 18 %, 20%, 25%, 30%, 35% ou 40% dos PBMCs modificados são monócitos. Em algumas modalidades, pelo menos cerca de 3% dos PBMCs modificados são monócitos. Em algumas modalidades,

pelo menos cerca de 20% dos PBMCs modificados são células T; pelo menos cerca de 2% dos PBMCs modificados são células B; pelo menos cerca de 3% dos PBMCs modificados são células NK; e pelo menos cerca de 3% dos PBMCs modificados são monócitos.

[00242] Em algumas modalidades, de acordo com qualquer um dos métodos ou composições descritos neste documento, em que a célula imune é uma pluralidade de PBMCs, não mais do que cerca de 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% ou 90% dos PBMCs de entrada são células T. Em algumas modalidades, não mais do que cerca de 70% dos PBMCs de entrada são células T. Em algumas modalidades, não mais do que cerca de 5%, 10%, 12%, 14%, 16%, 18%, 20%, 22%, 25%, 30%, 35%, 40% ou 50% dos PBMCs de entrada são células B. Em algumas modalidades, não mais do que cerca de 14% dos PBMCs de entrada são células B. Em algumas modalidades, não mais do que cerca de 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50% ou 60% dos PBMCs de entrada são células NK. Em algumas modalidades, não mais do que cerca de 35% dos PBMCs de entrada são células NK. Em algumas modalidades, não mais do que cerca de 5%, 10%, 12%, 14%, 16%, 18%, 20%, 22%, 25%, 30%, 35%, 40% ou 50% dos PBMCs de entrada são monócitos. Em algumas modalidades, não mais do que cerca de 4% dos PBMCs de entrada são monócitos. Em algumas modalidades, não mais do que cerca de 25% dos PBMCs de entrada são células T; não mais do que cerca de 2,5% dos PBMCs de entrada são células B; não mais do que cerca de 3,5% dos PBMCs de entrada são células NK; e não mais do que cerca de 4% dos PBMCs de entrada são monócitos.

[00243] Em algumas modalidades, de acordo com qualquer um dos métodos ou composições descritos neste documento, em que a célula imune é uma pluralidade de PBMCs, não mais do que cerca de 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% ou 70% dos PBMCs modificados são células T. Em algumas modalidades, não mais do que cerca de 20% dos PBMCs modificados são células T. Em algumas modalidades, não mais do que cerca de 0,25%, 0,5%, 1%, 1,5%, 2%, 2,5%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 7,5%, 8%, 9%, 10 %, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 25% ou 30% dos PBMCs modificados são células B. Em algumas modalidades, não mais do que cerca de 2% dos PBMCs modificados são células B. Em algumas modalidades, não mais do que cerca de 0,5%, 1%, 1,5%, 2%, 2,5%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 7,5%, 8%, 9%, 10%, 11 %, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 25% ou 30% dos PBMCs modificados são células NK. Em algumas modalidades, não mais do que cerca de 3% dos PBMCs modificados são células NK. Em algumas modalidades, não mais do que cerca de 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 12%, 14%, 16%, 18%, 20 %, 25%, 30%, 35% ou 40% dos PBMCs modificados são monócitos. Em algumas modalidades, não mais do que cerca de 3% dos PBMCs modificados são monócitos. Em algumas modalidades, não mais do que cerca de 20% dos PBMCs modificados são células T; não mais do que cerca de 2% dos PBMCs modificados são células B; não mais do que cerca de 3% dos PBMCs modificados são células NK; e não mais do que cerca de 3% dos PBMCs modificados são monócitos.

[00244] Em algumas modalidades, de acordo com qualquer um dos métodos ou composições descritos neste documento, em que a célula imune é uma pluralidade de PBMCs, cerca de 20% a 25%, 25% a 30%, 30% a 35%, 35% a 40%, 40% a 45%, 45% a 50%, 50% a 55%, 55% a 60%, 60% a 65%, 65% a 70% ou 70% a 75% dos PBMCs modificados são células T. Em algumas modalidades, cerca de 25% a cerca de 70% dos PBMCs modificados são células T. Em algumas modalidades, cerca de 1% a 2,5%, 2,5% a 4%, 4% a 6%, 6% a 8%, 8% a 10%, 10% a 12%, 12% a 14%, 14% a 16%, 16% a 20% ou 20% a 25% dos PBMCs modificados são células B. Em algumas modalidades, cerca de 2,5% a cerca de 14% dos PBMCs modificados são células NK. Em algumas modalidades, cerca de

1% a 2%, 2% a 3,5%, 3,5% a 5%, 5% a 8%, 8% a 10%, 10% a 12%, 12% a 14%, 14% a 16%, 16% a 20% ou 20% a 25% dos PBMCs modificados são células B. Em algumas modalidades, cerca de 3,5% a cerca de 35% dos PBMCs modificados são células NK. Em algumas modalidades, cerca de 2% a 4%, 4% a 6%, 6% a 8%, 8% a 10%, 10% a 12%, 12% a 14%, 14% a 16%, 16% a 20%, 20% a 25%, 25% a 30%, 30% a 35% ou 35% a 40% dos PBMCs modificados são monócitos. Em algumas modalidades, cerca de 4% a cerca de 25% dos PBMCs modificados são monócitos.

[00245] Tal como usado neste documento, PBMCs também podem ser gerados após a manipulação da composição de uma população de células mistas de células sanguíneas mononucleares (como linfócitos e monócitos). Em alguns casos, os PBMCs de entrada são gerados após a redução (tal como esgotamento) de certas subpopulações (como células B) dentro de uma população de células mistas de células sanguíneas mononucleares. A composição em uma população de células mistas de células sanguíneas mononucleares em um indivíduo pode ser manipulada para tornar a população de células mais semelhante a um produto de leucaferese de sangue total no mesmo indivíduo. Em outros exemplos, a composição em uma população de células mistas de células sanguíneas mononucleares (por exemplo, esplenócitos de camundongo) também pode ser manipulada para tornar a população de células mais parecida com PBMCs humanos isolados de um produto de leucaferese de sangue total humano.

[00246] Em algumas modalidades, a entrega mediada por construção não modula diferencialmente a viabilidade de diferentes subpopulações (como células B, células T, células NK ou monócitos) dentro de PBMCs de uma maneira significativa. Em algumas modalidades, o processo de condicionamento não modula diferencialmente a viabilidade de diferentes subpopulações dentro de PBMCs de uma maneira significativa. Em algumas modalidades, a adição adicional de agentes (incluindo, mas não se limitando a qualquer um de: agentes de biopreservação ou agentes que aumentam a função e/ou viabilidade de PBMCs) não modula diferencialmente a viabilidade de várias subpopulações dentro de PBMCs de uma maneira significativa.

Portanto, em algumas modalidades de acordo com qualquer um dos métodos ou composições descritos neste documento, em que a célula imune é uma pluralidade de PBMCs, a porcentagem de células T dentro da pluralidade de PBMCs modificados e a porcentagem de células T dentro da pluralidade de PBMCs de entrada diferem em não mais do que cerca de 10% em número.

Em algumas modalidades, a porcentagem de células T dentro da pluralidade de PBMCs modificados e a porcentagem de células T dentro da pluralidade de PBMCs de entrada diferem em não mais do que cerca de 5%, 8%, 10%, 12%, 14%, 16%, 18% ou 20% em número.

Em algumas modalidades, a porcentagem de células B dentro da pluralidade de PBMCs modificados e a porcentagem de células B dentro da pluralidade de PBMCs de entrada diferem em não mais do que cerca de 10% em número.

Em algumas modalidades, a porcentagem de células B dentro da pluralidade de PBMCs modificados e a porcentagem de células B dentro da pluralidade de PBMCs de entrada diferem em não mais do que cerca de 5%, 8%, 10%, 12%, 14%, 16%, 18% ou 20% em número.

Em algumas modalidades, a porcentagem de células NK dentro da pluralidade de PBMCs modificados e a porcentagem de células NK dentro da pluralidade de PBMCs de entrada diferem em não mais do que cerca de 10% em número.

Em algumas modalidades, a porcentagem de células NK dentro da pluralidade de PBMCs modificados e a porcentagem de células NK dentro da pluralidade de PBMCs de entrada diferem em não mais do que cerca de 5%, 8%, 10%, 12%, 14%, 16%, 18% ou 20% em número.

Em algumas modalidades, a porcentagem de monócitos dentro da pluralidade de PBMCs modificados e a porcentagem de monócitos dentro da pluralidade de PBMCs de entrada diferem em não mais do que cerca de 10% em número.

Em algumas modalidades, a porcentagem de monócitos dentro da pluralidade de PBMCs modificados e a porcentagem de monócitos dentro da pluralidade de PBMCs de entrada diferem em não mais do que cerca de 5%, 8%, 10%, 12%, 14%, 16 %, 18% ou 20% em número. Condicionamento de PBMCs

[00247] Em algumas modalidades, de acordo com qualquer um dos métodos ou composições descritos neste documento, em que a célula imune é uma pluralidade de PBMCs, a pluralidade de PBMCs modificados é condicionada. Em outras modalidades, a pluralidade de PBMCs modificados é amadurecida. Em algumas modalidades, a pluralidade de PBMCs é condicionada subsequentemente à entrega mediada por constrição. Portanto, em algumas modalidades, o processo de preparação da pluralidade de PBMCs modificados compreende adicionalmente incubar a pluralidade de PBMCs modificados compreendendo o antígeno e/ou adjuvante com um segundo adjuvante por um tempo suficiente para que os PBMCs modificados compreendendo o antígeno condicionem, gerando, desta forma, a pluralidade condicionada de PBMCs modificados compreendendo o antígeno e/ou o adjuvante. Em algumas modalidades, o processo compreende adicionalmente isolar a pluralidade de PBMCs modificados compreendendo o antígeno e/ou o adjuvante a partir da suspensão celular antes da incubação com o adjuvante para condicionar os PBMCs modificados.

[00248] Em algumas modalidades, a concentração de antígeno incubado com os PBMCs modificados está entre 0,01 µM e cerca de 10 µM. Por exemplo, em algumas modalidades, a concentração de antígeno incubado com os PBMCs modificados é qualquer uma inferior a cerca de 0,01 µM, cerca de 0,1 µM, cerca de 1 µM, cerca de 10 µM, cerca de 100 µM, cerca de 1 µM ou cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a concentração de antígeno incubado com os PBMCs modificados são maiores do que cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a concentração de antígeno incubado com os PBMCs modificados é qualquer um entre cerca de 0,01 µM e cerca de 0,1 µM, entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM, entre cerca de 1 µM e cerca de 10 µM, entre cerca de 10 µM e cerca de 100 µM, entre cerca de 100 µM e cerca de 1 µM, ou entre 1 µM e cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a concentração de antígeno incubado com os PBMCs modificados está entre 0,01 µM e cerca de 1 µM. Em algumas modalidades, a concentração de antígeno incubado com os PBMCs modificados está entre 0,01 µM e cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a concentração de antígeno incubado com os PBMCs modificados é de 1 µM.

[00249] Em algumas modalidades, de acordo com qualquer um dos métodos ou composições descritos neste documento, em que a célula imune é uma pluralidade de PBMCs, a pluralidade de PBMCs modificados é incubada com o adjuvante por cerca de 1 a cerca de 24 horas para que os PBMCs modificados condicionem. Em algumas modalidades, a pluralidade de PBMCs modificados é incubada com o adjuvante por cerca de 2 a cerca de 10 horas para que os PBMCs modificados sejam condicionados. Em algumas modalidades, a pluralidade de PBMCs modificados é incubada com o adjuvante por cerca de 3 a cerca de 6 horas para que os PBMCs modificados sejam condicionados. Em algumas modalidades, a pluralidade de PBMCs modificados é incubada com o adjuvante por qualquer um de cerca de 1 hora, 2 horas, 3 horas, 3,5 horas, 4 horas, 4,5 horas, 5 horas, 5,5 horas, 6 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas ou 24 horas para os PBMCs modificados condicionarem. Em algumas modalidades, a pluralidade de PBMCs modificados é incubada com o adjuvante por cerca de 4 horas para que os PBMCs modificados sejam condicionados.

[00250] Em algumas modalidades, de acordo com qualquer um dos métodos ou composições descritos neste documento, em que a célula imune é uma pluralidade de PBMCs, a pluralidade de PBMCs é condicionada antes da entrega mediada por constrição. Portanto, em algumas modalidades, o processo de preparação da pluralidade de PBMC modificados compreende ainda a incubação de uma pluralidade de PBMCs de entrada com um adjuvante por um tempo suficiente para que os PBMCs de entrada condicionem, gerando, desta forma, uma pluralidade condicionada de PBMCs de entrada. Em algumas modalidades, é provida uma pluralidade condicionada de PBMCs modificados compreendendo um antígeno, preparado por um processo compreendendo as etapas de: a) incubar uma pluralidade de PBMCs de entrada com um adjuvante por um tempo suficiente para que os PBMCs de entrada condicionem, gerando, desta forma, uma pluralidade condicionada de PBMCs de entrada; b) passar uma suspensão celular compreendendo a pluralidade condicionada de PBMCs de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro dos PBMCs de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações dos PBMCs de entrada grandes o suficiente para o antígeno deve passar para formar uma pluralidade condicionada de PBMCs de entrada perturbados; e c) incubar a pluralidade condicionada de PBMCs de entrada perturbados com o antígeno por um tempo suficiente para permitir que o antígeno entre nos PBMCs de entrada perturbados, gerando, desta forma a pluralidade condicionada de PBMCs modificados compreendendo o antígeno. Em algumas modalidades, o processo compreende adicionalmente isolar a pluralidade condicionada de PBMCs de entrada do adjuvante de condicionamento antes de passar a pluralidade condicionada de PBMCs de entrada através de uma constrição de deformação celular.

[00251] Em algumas modalidades, a concentração de antígeno incubado com os PBMCs de entrada está entre 0,01 µM e cerca de 10 µM. Por exemplo, em algumas modalidades, a concentração de antígeno incubado com os PBMCs de entrada é qualquer uma inferior a cerca de 0,01 µM, cerca de 0,1 µM, cerca de 1 µM, cerca de 10 µM, cerca de 100 µM, cerca de 1 µM ou cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a concentração de antígeno incubado com os PBMCs de entrada são maiores do que cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a concentração de antígeno incubado com os PBMCs de entrada é qualquer um entre cerca de 0,01 µM e cerca de 0,1 µM, entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM, entre cerca de 1 µM e cerca de 10 µM, entre cerca de 10 µM e cerca de 100 µM, entre cerca de 100 µM e cerca de 1 µM, ou entre 1 µM e cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a concentração de antígeno incubado com os PBMCs de entrada está entre 0,01 µM e cerca de 1 µM. Em algumas modalidades, a concentração de antígeno incubado com os PBMCs de entrada está entre 0,01 µM e cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a concentração de antígeno incubado com os PBMCs de entrada é 1 µM.

[00252] Em algumas modalidades, de acordo com qualquer um dos métodos ou composições descritos neste documento, em que a célula imune é uma pluralidade de PBMCs de entrada, a pluralidade de PBMCs de entrada é incubada com o adjuvante por cerca de 1 a cerca de 24 horas para que os PBMCs de entrada condicionem. Em algumas modalidades, a pluralidade de PBMCs de entrada é incubada com o adjuvante por cerca de 2 a cerca de 10 horas para que os PBMCs de entrada condicionem. Em algumas modalidades, a pluralidade de PBMCs de entrada é incubada com o adjuvante por cerca de 3 a cerca de 6 horas para que os PBMCs de entrada condicionem. Em algumas modalidades, a pluralidade de PBMCs de entrada é incubada com o adjuvante por qualquer um de cerca de 1 hora, 2 horas, 3 horas, 3,5 horas, 4 horas, 4,5 horas, 5 horas, 5,5 horas, 6 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas ou 24 horas para os PBMCs de entrada condicionarem. Em algumas modalidades, a pluralidade de PBMCs de entrada é incubada com o adjuvante por cerca de 4 horas para que os PBMCs de entrada condicionem.

[00253] Em algumas modalidades, é provida uma pluralidade condicionada de PBMCs compreendendo um antígeno, preparada incubando a pluralidade de PBMCs compreendendo o antígeno com um adjuvante por um tempo suficiente para que os PBMCs condicionem, gerando, desta forma, a pluralidade condicionada de PBMCs compreendendo o antígeno. Em algumas modalidades, é provida uma pluralidade condicionada de PBMCs compreendendo um antígeno, preparada incubando a pluralidade de PBMCs compreendendo o antígeno com um adjuvante por um tempo suficiente para que os PBMCs condicionem, gerando, desta forma, a pluralidade condicionada de PBMCs compreendendo o antígeno.

[00254] Em algumas modalidades, de acordo com qualquer um dos métodos ou composições descritos neste documento, em que a célula imune é uma pluralidade de PBMCs, a concentração de antígeno incubado com os PBMCs está entre cerca de 0,01 µM e cerca de 10 µM. Por exemplo, em algumas modalidades, a concentração de antígeno incubado com os PBMCs é qualquer uma inferior a cerca de 0,01 µM, cerca de 0,1 µM, cerca de 1 µM, cerca de 10 µM, cerca de 100 µM, cerca de 1 µM ou cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a concentração de antígeno incubado com os PBMCs são maiores do que cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a concentração de antígeno incubado com os PBMCs é qualquer um entre cerca de 0,01 µM e cerca de 0,1 µM, entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM, entre cerca de 1 µM e cerca de 10 µM, entre cerca de 10 µM e cerca de 100 µM, entre cerca de 100 µM e cerca de 1 µM, ou entre 1 µM e cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a concentração de antígeno incubado com os PBMCs está entre 0,01 µM e cerca de 1 µM. Em algumas modalidades, a concentração de antígeno incubado com os PBMCs está entre 0,01 µM e cerca de 10 µM. Em algumas modalidades, a concentração de antígeno incubado com os PBMCs é de 1 µM.

[00255] Em algumas modalidades, de acordo com qualquer um dos métodos ou composições descritos neste documento, em que a célula imune é uma pluralidade de PBMCs, a pluralidade de PBMCs é incubada com o adjuvante por cerca de 1 a cerca de 24 horas para que os PBMCs condicionem. Em algumas modalidades, a pluralidade de PBMCs é incubada com o adjuvante por cerca de 2 a cerca de 10 horas para que os PBMCs condicionem. Em algumas modalidades, a pluralidade de PBMCs é incubada com o adjuvante por cerca de 3 a cerca de 6 horas para que os PBMCs condicionem. Em algumas modalidades, a pluralidade de PBMCs é incubada com o adjuvante por qualquer um de cerca de 1 hora, 2 horas, 3 horas, 3,5 horas, 4 horas, 4,5 horas, 5 horas, 5,5 horas, 6 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas ou 24 horas para que os PBMCs condicionarem. Em algumas modalidades, a pluralidade de PBMCs é incubada com o adjuvante por cerca de 4 horas para que os PBMCs condicionem.

[00256] Em algumas modalidades, uma ou mais moléculas coestimulantes são reguladas positivamente na pluralidade condicionada de PBMCs modificados em comparação com uma pluralidade não condicionada de PBMCs modificados. Em algumas modalidades, uma ou mais moléculas coestimulantes são reguladas positivamente em uma subpopulação de células na pluralidade condicionada de PBMCs modificados em comparação com a subpopulação de células em uma pluralidade não condicionada de PBMCs modificados. Em algumas modalidades, uma ou mais moléculas coestimulantes são reguladas positivamente nas células B da pluralidade condicionada de PBMCs modificados em comparação com as células B em uma pluralidade não condicionada de PBMCs modificados. Em algumas modalidades, a molécula coestimulante é CD80 e/ou CD86. Em algumas modalidades, a molécula coestimulante é CD86. Em algumas modalidades, o CD80 e/ou CD86 é regulado positivamente nas células B da pluralidade condicionada de PBMCs modificados em cerca de 1,2 vezes, 1,5 vezes, 1,8 vezes, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 dobradas, 8 vezes ou mais de 10 vezes em comparação com as células B em uma pluralidade não condicionada de

PBMCs modificados.

Em algumas modalidades, o CD80 e/ou CD86 é regulado positivamente nas células B da pluralidade condicionada de PBMCs modificados por qualquer um de cerca de 1,2 vezes a cerca de 1,5 vezes, cerca de 1,5 vezes a cerca de 1,8 vezes, cerca de 1,8 vezes a cerca de 2 vezes, cerca de 2 vezes a cerca de 3 vezes, cerca de 3 vezes a cerca de 4 vezes, cerca de 4 vezes a cerca de 5 vezes, cerca de 5 vezes a cerca de 8 vezes, cerca de 8 vezes a cerca de 10 vezes, cerca de 10 vezes a cerca de 20 vezes, cerca de 20 vezes a cerca de 50 vezes, cerca de 50 vezes a cerca de 100 vezes, cerca de 100 vezes a cerca de 200 vezes, cerca de 200 vezes a cerca de 500 vezes, ou mais do que cerca de 500 vezes em comparação com as células B em uma pluralidade não condicionada de PBMCs modificados.

Em algumas modalidades, a expressão de um ou mais dentre IFN-γ, IL-6, MCP-1, MIP-1β, IP-10 ou TNF-α é aumentada na pluralidade condicionada de PBMCs modificados em comparação com uma pluralidade não condicionada de PBMCs modificados.

Em algumas modalidades, a expressão de um ou mais de IFN-γ, IL-6, MCP-1, MIP-1β, IP-10 ou TNF-α é aumentada uma subpopulação de células na pluralidade condicionada em comparação com a subpopulação de células em uma pluralidade não condicionada de PBMCs modificados.

Em algumas modalidades, a expressão de um ou mais dentre IFN-γ, IL-6, MCP-1, MIP-1β, IP-10 ou TNF-α é aumentada em cerca de 1,2 vezes, 1,5 vezes, 1,8 vezes, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 8 vezes ou mais de 10 vezes na pluralidade condicionada de PBMCs modificados em comparação com uma pluralidade não condicionada de PBMCs modificados.

Em algumas modalidades, a expressão de um ou mais dentre IFN-γ, IL-6, MCP-1, MIP-1β, IP-10 ou TNF-α é aumentada em cerca de 1,2 vezes a cerca de 1,5 vezes, cerca de 1,5 vezes a cerca de 1,8 vezes, cerca de 1,8 vezes a cerca de 2 vezes, cerca de 2 vezes a cerca de 3 vezes, cerca de 3 vezes a cerca de 4 vezes, cerca de 4 vezes a cerca de 5 vezes, cerca de 5 vezes a cerca de 8 vezes,

cerca de 8 vezes a cerca de 10 vezes, cerca de 10 vezes a cerca de 20 vezes, cerca de 20 vezes a cerca de 50 vezes, cerca de 50 vezes a cerca de 100 vezes, cerca de 100 vezes a cerca de 200 vezes, cerca de 200 vezes a cerca de 500 vezes, ou mais do que cerca de 500 vezes na pluralidade condicionada de PBMCs modificados em comparação com uma pluralidade não condicionada de PBMCs modificados. Aplicações

[00257] Em alguns aspectos, a presente invenção provê métodos para tratar e prevenir uma doença associada ao HPV e/ou modular a resposta imune em um indivíduo com uma doença associada ao HPV compreendendo administrar ao indivíduo uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes compreendem de maneira intracelular um antígeno do HPV e de maneira intracelular um adjuvante. Em algumas modalidades, a célula imune é isolada de um paciente, modificada de acordo com os métodos divulgados e introduzida novamente no paciente. Por exemplo, uma população de células imunes é isolada de um paciente, passada pela constrição para alcançar a entrega do antígeno do HPV e adjuvante e, em seguida, reinfundida no paciente para aumentar uma resposta imune terapêutica ao antígeno do HPV. Em algumas modalidades, a célula é isolada de um indivíduo com doença associada ao HPV, modificada de acordo com os métodos divulgados e introduzida novamente no indivíduo. Por exemplo, uma população de células imunes é isolada a partir de um indivíduo com doença associada ao HPV, passada pela constrição para conseguir a entrega do antígeno do HPV e adjuvante e, em seguida, reinfundida no paciente para induzir ou aumentar a resposta imune ao antígeno do HPV no indivíduo.

[00258] Em algumas modalidades, o antígeno do HPV e/ou adjuvante para entrega são purificados. Em algumas modalidades, o composto é pelo menos cerca de 60% em peso (peso seco) do composto de interesse. Em algumas modalidades, o composto purificado é pelo menos cerca de 75%, 90% ou 99% do composto de interesse. Em algumas modalidades, o composto purificado é pelo menos cerca de 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 98%, 99% ou 100% (p/p) do composto de interesse. A pureza é determinada por quaisquer métodos conhecidos, incluindo, sem limitação, cromatografia em coluna, cromatografia em camada fina, análisado de HPLC, NMR, espectrometria de massa ou SDS-PAGE. O DNA ou RNA purificado é definido como DNA ou RNA que é livre de ácidos nucléicos exógenos, carboidratos e lipídios.

[00259] Em algumas modalidades, a invenção provê métodos para tratar um indivíduo com uma doença associada ao HPV através da introdução da célula, modificada ao passar através de uma constrição de modo que um antígeno do HPV e um adjuvante entrem na célula, para o indivíduo. Em algumas modalidades, a célula é uma célula autóloga. Por exemplo, a célula imune é isolada de um indivíduo (por exemplo, um paciente), modificada de acordo com os métodos divulgados e introduzida novamente no indivíduo. Em algumas modalidades, a célula imune é isolada de um indivíduo, modificada de acordo com os métodos divulgados e introduzida novamente no mesmo indivíduo. Em algumas modalidades, a célula é uma célula alogênica. Por exemplo, a célula é isolada de um indivíduo diferente, modificada de acordo com os métodos divulgados e introduzida no primeiro indivíduo (por exemplo, o paciente). Em algumas modalidades, a célula é isolada de um indivíduo, modificada de acordo com os métodos divulgados e introduzida em um indivíduo diferente.

[00260] Qualquer um dos métodos descritos acima são realizados in vitro, ex vivo ou in vivo. Para aplicações in vivo, o dispositivo pode ser implantado em um lúmen vascular, por exemplo, um stent em linha em uma artéria ou veia. Em algumas modalidades, os métodos são usados como parte de um sistema de beira de leito para tratamento de células do paciente ex vivo e reintrodução imediata das células no paciente. Em algumas modalidades, o método pode ser implementado em um laboratório de hospital típico com um técnico minimamente treinado. Em algumas modalidades, um sistema de tratamento operado pelo paciente pode ser usado. Sistemas e Kits

[00261] Em alguns aspectos, a invenção provê um sistema compreendendo um ou mais dentre constrição, uma suspensão celular imune, antígenos do HPV ou adjuvantes para uso nos métodos divulgados neste documento. O sistema pode incluir qualquer modalidade descrita para os métodos divulgados acima, incluindo canais microfluídicos ou uma superfície com poros para provêr constrições de deformação celular, suspensões celulares, perturbações celulares, parâmetros de entrega, compostos e/ou aplicações, etc. Em algumas modalidades, as constrições de deformação celular são dimensionadas para distribuição às células imunes. Em algumas modalidades, os parâmetros de entrega, tais como velocidades de fluxo operacional, concentração de células e compostos, velocidade da célula na constrição e a composição da suspensão celular (por exemplo, osmolaridade, concentração de sal, conteúdo de soro, concentração de célula, pH, etc.) são otimizados para a resposta máxima de um composto para suprimir uma resposta imune ou induzir tolerância.

[00262] Também são providos kits ou artigos de manufatura para uso ao tratar de indivíduos com uma doença associada ao HPV. Em algumas modalidades, o kit compreende uma célula imune modificada compreendendo de maneira intracelular um antígeno do HPV e de maneira intracelular um adjuvante. Em algumas modalidades, o kit compreende um ou mais dentre constrição, uma suspensão celular imunes, antígenos do HPV ou adjuvantes para uso na geração de células imunes modificadas para uso ao tratar um indivíduo com uma doença associada ao HPV. Em algumas modalidades, os kits compreendem as composições descritas neste documento (por exemplo, um canal microfluídico ou superfície contendo poros, suspensões celulares e/ou compostos) em embalagens adequadas. Os materiais de embalagem adequados são conhecidos no estado da técnica e incluem, por exemplo, frascos (tais como frascos selados), recipientes, ampolas, garrafas, vasos, embalagens flexíveis (por exemplo, Mylar selado ou sacolas de plástico) e semelhantes. Estes artigos de fabricação podem ainda ser esterilizados e/ou selados.

[00263] A invenção também provê kits que compreendem componentes dos métodos descritos neste documento e podem compreender ainda instruções para realizar os ditos métodos para tratar um indivíduo com uma doença associada ao HPV e/ou instruções para a introdução de um antígeno do HPV e um adjuvante em uma célula imune. Os kits descritos neste documento podem incluir adicionalmente outros materiais, incluindo outros tampões, diluentes, filtros, agulhas, seringas e bulas com instruções para realizar quaisquer métodos descritos neste documento; por exemplo, instruções para tratar um indivíduo com uma doença associada ao HPV ou instruções para modificar uma célula imune para conter de maneira intracelular um antígeno do HPV e de maneira intracelular um adjuvante.

MODALIDADES EXEMPLARES

[00264] Modalidade 1. Método para tratar uma doença associada ao papilomavírus humano (HPV) em um indivíduo, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV e um adjuvante, em que o adjuvante é apresentado de maneira intracellular.

[00265] Modalidade 2. Método para prevenir uma doença associada ao HPV em um indivíduo, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV e um adjuvante, em que o adjuvante é apresentado de maneira intracelular.

[00266] Modalidade 3. Método para modular uma resposta imune em um indivíduo com uma doença associada ao HPV, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV e um adjuvante, em que o adjuvante é apresentado de maneira intracelular.

[00267] Modalidade 4. Método para tratar uma doença associada ao HPV em um indivíduo, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV e um adjuvante, em que o adjuvante é apresentado de maneira intracelular; em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para que o antígeno e o adjuvante passem para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV e o adjuvante por tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV e o adjuvante entrem na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas.

[00268] Modalidade 5. Método para prevenir uma doença associada ao HPV em um indivíduo, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV e um adjuvante, em que o adjuvante é apresentado de maneira intracelular.

[00269] Modalidade 6. Método para modular uma resposta imune em um indivíduo com doença associada ao HPV, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV e um adjuvante, em que o adjuvante é apresentado de maneira intracelular. em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada compreendendo um antígeno do HPV através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para que o antígeno do HPV e o adjuvante passem para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno e o adjuvante por tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV e o adjuvante entrem na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas.

[00270] Modalidade 7. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 4 a 6, caracterizado pelo fato de que o diâmetro da constrição é menor que o diâmetro da célula.

[00271] Modalidade 8. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 4 a 7, caracterizado pelo fato de que o diâmetro da constrição é cerca de 20% a 99% do diâmetro da célula.

[00272] Modalidade 9. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 4 a 8, caracterizado pelo fato de que o diâmetro da constrição é cerca de 20% até menos de cerca de 60% do diâmetro da célula.

[00273] Modalidade 10. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 4 a 9, caracterizado pelo fato de que a constrição está em um canal.

[00274] Modalidade 11. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 4 a 10, caracterizado pelo fato de que uma força de deformação é aplicada à célula de entrada à medida que passa pela constrição.

[00275] Modalidade 12. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 11, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV e/ou o adjuvante estão presentes no citosol e/ou em endossomos.

[00276] Modalidade 13. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 12, caracterizado pelo fato de que o antígeno e/ou adjuvante estão presentes em compartimentos múltiplos da célula.

[00277] Modalidade 14. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 13, caracterizado pelo fato de que a célula imune modificada compreende adicionalmente um antígeno do HPV e/ou um adjuvante no exterior da célula.

[00278] Modalidade 15. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 14, caracterizado pelo fato de que a concentração de adjuvante incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM.

[00279] Modalidade 16. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 15, caracterizado pelo fato de que a concentração de antígeno do HPV incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM.

[00280] Modalidade 17. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 4 a 16, caracterizado pelo fato de que a proporção de antígeno do HPV para adjuvante incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 10000:1 e cerca de 1:10000.

[00281] Modalidade 18. Método, de acordo com a modalidade 3 ou 6, caracterizado pelo fato de que a resposta imune é aprimorada.

[00282] Modalidade 19. Método, de acordo com a modalidade 18, caracterizado pelo fato de que a resposta imune ao antígeno do HPV é aprimorada.

[00283] Modalidade 20. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 19, caracterizado pelo fato de que o adjuvante é CpG ODN, IFN-α, agonistas STING, agonistas RIG-I ou poli I:C.

[00284] Modalidade 21. Método, de acordo com a modalidade 20, caracterizado pelo fato de que em que o adjuvante é CpG ODN.

[00285] Modalidade 22. Método, de acordo com a modalidade 21, caracterizado pelo fato de que o CpG ODN é CpG ODN 1018, CpG ODN 1826 ou CpG ODN 2006.

[00286] Modalidade 23. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 22, caracterizado pelo fato de que a célula imune modificada compreende mais de um adjuvante.

[00287] Modalidade 24. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 23, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é um pool de polipeptídeos múltiplos que provocam uma resposta contra os mesmos e ou diferentes antígenos do HPV.

[00288] Modalidade 25. Método, de acordo com a modalidade 24, caracterizado pelo fato de que um antígeno no pool de antígenos múltiplos não diminui a resposta imune direcionada para outros antígenos no pool de antígenos múltiplos.

[00289] Modalidade 26. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 25, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é um polipeptídeo compreendendo um epítopo do HPV antigênico e uma ou mais sequências de peptídeos heterólogos.

[00290] Modalidade 27. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 26, caracterizado pelo fato de que o antígeno do

HPV se complexa consigo mesmo, com outros antígenos ou com o adjuvante.

[00291] Modalidade 28. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 27, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é derivado a partir de um lisado celular.

[00292] Modalidade 29. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 28, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é um HPV-16 ou um antígeno do HPV-18.

[00293] Modalidade 30. Método, de acordo com a modalidade 29, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é composto por um epítopo específico de HLA-A2.

[00294] Modalidade 31. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 30, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é um antígeno do HPV E6 ou um antígeno do HPV E7.

[00295] Modalidade 32. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 31, caracterizado pelo fato de que a célula imune modificada compreende um antígeno do HPV E6 e um antígeno do HPV E7.

[00296] Modalidade 33. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 32, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é um polipeptídeo compreendendo um epítopo antigênico que é flanqueado no N-terminal e/ou no C-terminal por uma ou mais sequências de peptídeos heterólogos.

[00297] Modalidade 34. Método, de acordo com a modalidade 33, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 26.

[00298] Modalidade 35. Método, de acordo com a modalidade 34, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com a

SEQ ID Nº: 23.

[00299] Modalidade 36. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 35, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é capaz de ser transformado em um peptídeo restrito MHC de classe I.

[00300] Modalidade 37. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 36, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é capaz de ser transformado em um peptídeo restrito MHC de classe II.

[00301] Modalidade 38. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 37, caracterizado pelo fato de que a célula imune modificada compreende o adjuvante a uma concentração entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM.

[00302] Modalidade 39. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 38, caracterizado pelo fato de que a célula imune modificada compreende o antígeno do HPV a uma concentração entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM.

[00303] Modalidade 40. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 39, caracterizado pelo fato de que a proporção de antígeno do HPV para o adjuvante está entre cerca de 10000:1 a cerca de 1:10000.

[00304] Modalidade 41. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 40, caracterizado pelo fato de que a célula imune modificada compreende adicionalmente um agente que aprimora a viabilidade e/ou função da célula imune modificada em comparação com uma célula imune modificada correspondente que não compreende o agente.

[00305] Modalidade 42. Método, de acordo com a modalidade 41, caracterizado pelo fato de que o agente é um composto que aumenta a endocitose, um agente estabilizador ou um cofator.

[00306] Modalidade 43. Método, de acordo com a modalidade

41, caracterizado pelo fato de que o agente é albumina.

[00307] Modalidade 44. Método, de acordo com a modalidade 43, caracterizado pelo fato de que a albumina é albumina de camundongo, bovina ou humana.

[00308] Modalidade 45. Método, de acordo com a modalidade 41, caracterizado pelo fato de que o agente é um cátion de metal divalente, glicose, ATP, potássio, glicerol, trealose, D-sacarose, PEG1500, L-arginina, L-glutamina ou EDTA.

[00309] Modalidade 46. Método, de acordo com a modalidade 41, caracterizado pelo fato de que o agente compreende albumina do soro de camundongo (MSA).

[00310] Modalidade 47. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 46, caracterizado pelo fato de que as células imunes modificadas são adicionalmente modificadas para aumentar expressão de uma ou mais moléculas coestimulantes.

[00311] Modalidade 48. Método, de acordo com a modalidade 41, caracterizado pelo fato de que a molécula coestimulante é B7-H2, B7-1, B7-2, CD70, LIGHT, HVEM, CD40, 4-1BBL, OX40L, TL1A, GITRL, CD30L, TIM4, SLAM, CD48, CD58, CD155 ou CD112.

[00312] Modalidade 49. Método, de acordo com a modalidade 47 ou 48, caracterizado pelo fato de que a célula compreende um ácido nucleico que resulta em expressão aumentada de uma ou mais moléculas coestimulantes.

[00313] Modalidade 50. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 49, caracterizado pelo fato de que a célula imune é uma célula T, uma célula dendrítica, um monócito, um macrófago, uma célula mieloide, um granulócito, um neutrófilo, uma célula mastro, uma célula exterminadora natural, uma célula linfoide inata, um basófilo ou uma célula precursora hematopoética.

[00314] Modalidade 51. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 50, caracterizado pelo fato de que a célula imune não é uma célula B.

[00315] Modalidade 52. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 50, caracterizado pelo fato de que a célula imune é uma célula B.

[00316] Modalidade 53. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 51, caracterizado pelo fato de que a célula imune é uma célula T.

[00317] Modalidade 54. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 49, caracterizado pelo fato de que as células imunes são uma população de células mistas.

[00318] Modalidade 55. Método, de acordo com a modalidade 54, caracterizado pelo fato de que as células imunes são uma pluralidade de PBMCs.

[00319] Modalidade 56. Método, de acordo com a modalidade 53, caracterizado pelo fato de que a célula T compreende uma modificação adicional para modular expressão MHC de classe I.

[00320] Modalidade 57. Método, de acordo com a modalidade 53, caracterizado pelo fato de que a célula T compreende uma modificação adicional para modular expressão MHC de classe II.

[00321] Modalidade 58. Método, de acordo com a modalidade 56 ou 57, caracterizado pelo fato de que a célula T compreende uma modificação adicional para reduzir expressão MHC de classe I e/ou expressão MHC de classe II.

[00322] Modalidade 59. Método, de acordo com a modalidade 56 ou 57, caracterizado pelo fato de que a modificação adicional compreende redução da expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II usando siRNA, shRNA, CRISPR/Cas9, ZFN, TALEN, recombinase Cre ou uma meganuclease.

[00323] Modalidade 60. Método, de acordo com a modalidade

56 ou 57, caracterizado pelo fato de que a célula T compreende uma modificação adicional para aumentar expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II.

[00324] Modalidade 61. Método, de acordo com a modalidade 56 ou 57, caracterizado pelo fato de que a modificação adicional compreende aumentar expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II usando RNA ou DNA plasmídico.

[00325] Modalidade 62. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades 53 e de 56 a 59, caracterizado pelo fato de que uma resposta imune inata montada em um indivíduo em resposta à administração, em um contexto alogênico, das células T modificadas adicionalmente é reduzida em comparação com uma resposta imune inata montada em um indivíduo em resposta à administração, em um contexto alogênico, de células T modificadas correspondentes que não compreendem a modificação adicional.

[00326] Modalidade 63. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades 53 e de 56 a 59, caracterizado pelo fato de que a meia- vida circulante das células T modificadas adicionalmente em um indivíduo ao qual foram administradas é modulada em comparação com a meia-vida circulante de células T modificadas correspondentes que não compreendem a modificação adicional em um indivíduo ao qual foram administradas.

[00327] Modalidade 64. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades 53 e de 56 a 63, caracterizado pelo fato de que a célula T inclui uma ou mais dentre células T auxiliares, células T citotóxicas, células T de memória, células CIK e células T exterminadoras naturais.

[00328] Modalidade 65. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades 53 e de 56 a 63, caracterizado pelo fato de que a célula T inclui uma ou mais dentre células T CD3+, células T CD4+, células T CD8+, células T CD45RA+, células T CD45RO+ e células T γδ.

[00329] Modalidade 66. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 65, caracterizado pelo fato de que a célula modificada é alogênica ao indivíduo.

[00330] Modalidade 67. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 65, caracterizado pelo fato de que a célula modificada é autóloga ao indivíduo.

[00331] Modalidade 68. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 67, caracterizado pelo fato de que o indivíduo está pré-condicionado a ter inflamação modulada e/ou uma resposta imune modulada.

[00332] Modalidade 69. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 68, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente administrar ao indivíduo um adjuvante.

[00333] Modalidade 70. Método, de acordo com a modalidade 69, caracterizado pelo fato de que o adjuvante é IFNα ou CpG ODN.

[00334] Modalidade 71. Método, de acordo com a modalidade 69 ou 70, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas e o adjuvante são administrados simultaneamente.

[00335] Modalidade 72. Método, de acordo com a modalidade 69 ou 70, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas e o adjuvante são administrados sequencialmente.

[00336] Modalidade 73. Método, de acordo com a modalidade 72, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada antes de administrar o adjuvante.

[00337] Modalidade 74. Método, de acordo com a modalidade 72, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada seguindo administração do adjuvante.

[00338] Modalidade 75. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 74, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada em combinação com administração de um inibidor de ponto de verificação imune.

[00339] Modalidade 76. Método, de acordo com a modalidade 75, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas e o inibidor de ponto de verificação imune são administrados simultaneamente.

[00340] Modalidade 77. Método, de acordo com a modalidade 75, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas e o inibidor de ponto de verificação imune são administrados sequencialmente.

[00341] Modalidade 78. Método, de acordo com a modalidade 77, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada antes da administração do inibidor de ponto de verificação imune.

[00342] Modalidade 79. Método, de acordo com a modalidade 77, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada seguindo a administração do inibidor de ponto de verificação imune.

[00343] Modalidade 80. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades 75 a 79, caracterizado pelo fato de que o inibidor de ponto de verificação imune é direcionado a um ou mais dentre PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG3, TIM-3, TIGIT, VISTA, TIM1, B7-H4 (VTCN1) ou BTLA.

[00344] Modalidade 81. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 80, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada em combinação com a administração de uma quimioterapia.

[00345] Modalidade 82. Método, de acordo com a modalidade 81, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas e a quimioterapia são administradas simultaneamente.

[00346] Modalidade 83. Método, de acordo com a modalidade 81, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas e a quimioterapia é administrada sequencialmente.

[00347] Modalidade 84. Método, de acordo com a modalidade 83, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada antes de administrar a quimioterapia.

[00348] Modalidade 85. Método, de acordo com a modalidade 83, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada após administração da quimioterapia.

[00349] Modalidade 86. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 81 a 85, caracterizado pelo fato de que a quimioterapia compreende um agente baseado em platina.

[00350] Modalidade 87. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 81 a 86, caracterizado pelo fato de que a quimioterapia compreende cisplatina.

[00351] Modalidade 88. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 87, caracterizado pelo fato de que administração da composição compreendendo as células imunes modificadas ao indivíduo resulta na ativação e/ou expansão de linfócitos T citotóxicos (CTLs) específicos para o antígeno do HPV.

[00352] Modalidade 89. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 87, caracterizado pelo fato de que administração da composição compreendendo as células imunes modificadas ao indivíduo resulta em ativação e/ou expansão de células T auxiliares (T h) específicas para o antígeno.

[00353] Modalidade 90. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 89, caracterizado pelo fato de que a quantidade eficaz da composição compreende entre cerca de 1 × 10 6 e cerca de 1 × 1012 células imunes modificadas.

[00354] Modalidade 91. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 90, caracterizado pelo fato de que o método compreende administrações múltiplas da composição compreendendo as células imunes modificadas.

[00355] Modalidade 92. Método, de acordo com a modalidade 91, caracterizado pelo fato de que o método compreende uma primeira administração da composição compreendendo as células imunes modificadas seguido de uma segunda administração da composição compreendendo as células imunes modificadas.

[00356] Modalidade 93. Método, de acordo com a modalidade 92, caracterizado pelo fato de que a segunda administração é cerca de um mês após a primeira administração.

[00357] Modalidade 94. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 93, caracterizado pelo fato de que a doença associada ao HPV é um câncer associado ao HPV.

[00358] Modalidade 95. Método, de acordo com a modalidade 94, caracterizado pelo fato de que o câncer associado ao HPV é câncer cervical, câncer anal, câncer orofaríngeo, câncer vaginal, câncer vulvar, câncer peniano, câncer de pele ou câncer de cabeça e pescoço.

[00359] Modalidade 96. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 1 a 95, caracterizado pelo fato de que a doença associada ao HPV é uma doença infecciosa associada ao HPV.

[00360] Modalidade 97. Método para tratar uma doença relacionada ao vírus do papiloma humano (HPV) em um indivíduo, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV compreendendo um aminoácido com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25.

[00361] Modalidade 98. Método para prevenir uma doença associada ao HPV em um indivíduo, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo de uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25.

[00362] Modalidade 99. Método para modular uma resposta imune em um indivíduo com uma doença associada ao HPV, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25.

[00363] Modalidade 100. Método para tratar uma doença associada ao HPV em um indivíduo, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25; em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para que o antígeno passe para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV por tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV entre na célula de entrada perturbada;

gerando, desta forma, as células imunes modificadas.

[00364] Modalidade 101. Método para prevenir uma doença associada ao HPV em um indivíduo, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25; em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para que o antígeno do HPV passe para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV por tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV e o adjuvante entre na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas.

[00365] Modalidade 102. Método para modular uma resposta imune em um indivíduo com uma doença associada ao HPV, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25; em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para que o antígeno do HPV passe para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV por tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV entre na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas.

[00366] Modalidade 103. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 100 a 102, caracterizado pelo fato de que o diâmetro da constrição é menor que o diâmetro da célula.

[00367] Modalidade 104. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 100 a 103, caracterizado pelo fato de que o diâmetro da constrição é cerca de 20% a 99% do diâmetro da célula.

[00368] Modalidade 105. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 100 a 104, caracterizado pelo fato de que o diâmetro da constrição é cerca de 20% até menos de cerca de 60% do diâmetro da célula.

[00369] Modalidade 106. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 100 a 105, caracterizado pelo fato de que a constrição está em um canal.

[00370] Modalidade 107. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 100 a 106, caracterizado pelo fato de que uma força de deformação é aplicada à célula de entrada à medida que passa pela constrição.

[00371] Modalidade 108. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 86 a 107, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente administrar ao indivíduo um adjuvante.

[00372] Modalidade 109. Método, de acordo com a modalidade 108, caracterizado pelo fato de que o adjuvante é IFNα ou CpG ODN.

[00373] Modalidade 110. Método, de acordo com a modalidade 108 ou 109, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas e o adjuvante são administrados simultaneamente.

[00374] Modalidade 111. Método, de acordo com a modalidade 108 ou 109, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas e o adjuvante são administrados sequencialmente.

[00375] Modalidade 112. Método, de acordo com a modalidade 111, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada antes de administrar o adjuvante.

[00376] Modalidade 113. Método, de acordo com a modalidade 111, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada seguindo administração do adjuvante.

[00377] Modalidade 114. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 97 a 113, caracterizado pelo fato de que a célula imune modificada compreende adicionalmente um adjuvante.

[00378] Modalidade 115. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 100 a 113, caracterizado pelo fato de que a célula imune perturbada da etapa b é incubada com o antígeno do HPV e um adjuvante.

[00379] Modalidade 116. Método, de acordo com a modalidade 114 ou 115, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV e/ou o adjuvante estão presentes no citosol e/ou endossomos.

[00380] Modalidade 117. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 114 a 116, caracterizado pelo fato de que o antígeno e/ou adjuvante estão presentes em múltiplos compartimentos da célula.

[00381] Modalidade 118. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 114 a 117, caracterizado pelo fato de que a célula imune modificada compreende adicionalmente um antígeno do HPV e/ou um adjuvante no exterior da célula.

[00382] Modalidade 119. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 115 a 118, caracterizado pelo fato de que a concentração de adjuvante incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM.

[00383] Modalidade 120. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 115 a 119, caracterizado pelo fato de que a concentração de antígeno do HPV incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM.

[00384] Modalidade 121. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 115 a 120, caracterizado pelo fato de que a proporção de antígeno do HPV para adjuvante incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 10000:1 e cerca de 1:10000.

[00385] Modalidade 122. Método, de acordo com a modalidade 99 ou 102, caracterizado pelo fato de que a resposta imune é aprimorada.

[00386] Modalidade 123. Método, de acordo com a modalidade 122, caracterizado pelo fato de que a resposta imune ao antígeno do HPV é aprimorada.

[00387] Modalidade 124. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 114 a 123, caracterizado pelo fato de que o adjuvante é CpG ODN, IFN-α, agonistas STING, agonistas RIG-I ou poli I:C.

[00388] Modalidade 125. Método, de acordo com a modalidade 124, caracterizado pelo fato de que o adjuvante é CpG ODN.

[00389] Modalidade 126. Método, de acordo com a modalidade 125, caracterizado pelo fato de que o CpG ODN é CpG ODN 1018, CpG ODN 1826 ou CpG ODN 2006.

[00390] Modalidade 127. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 114 a 126, caracterizado pelo fato de que a célula imune modificada compreende mais de um adjuvante.

[00391] Modalidade 128. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 97 a 127, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é um pool de múltiplos polipeptídeos que provocam uma resposta contra os mesmos e/ou diferentes antígenos do HPV.

[00392] Modalidade 129. Método, de acordo com a modalidade 128, caracterizado pelo fato de que um antígeno no pool de múltiplos antígenos não diminui a resposta imune direcionada para outros antígenos no pool de múltiplos antígenos.

[00393] Modalidade 130. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 97 a 129, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é um polipeptídeo compreendendo um epítopo do HPV antigênico e uma ou mais sequências de peptídeos heterólogos.

[00394] Modalidade 131. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 97 a 130, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV se complexa consigo mesmo, com outros antígenos ou com o adjuvante.

[00395] Modalidade 132. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 97 a 131, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é compreendido por um epítopo específico HLA-A2.

[00396] Modalidade 133. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 97 a 132, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é capaz de ser transformado em um peptídeo MHC restrito de classe I.

[00397] Modalidade 134. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 97 a 133, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é capaz de ser transformado em um peptídeo MHC restrito de classe II.

[00398] Modalidade 135. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 114 a 134, caracterizado pelo fato de que a célula imune modificada compreende o adjuvante a uma concentração entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM.

[00399] Modalidade 136. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 97 a 135, caracterizado pelo fato de que a célula imune modificada compreende o antígeno do HPV a uma concentração entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM.

[00400] Modalidade 137. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 114 a 136, caracterizado pelo fato de que a proporção de antígeno do HPV para o adjuvante está entre cerca de 10000:1 a cerca de 1:10000.

[00401] Modalidade 138. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 97 a 137, caracterizado pelo fato de que a célula imune modificada compreende adicionalmente um agente que aprimora a viabilidade e/ou função da célula imune modificada em comparação com uma célula imune modificada correspondente que não compreende o agente.

[00402] Modalidade 139. Método, de acordo com a modalidade 138, caracterizado pelo fato de que o agente é um composto que aprimora endocitose, um agente estabilizador ou um cofator.

[00403] Modalidade 140. Método, de acordo com a modalidade 138, caracterizado pelo fato de que o agente é albumina.

[00404] Modalidade 141. Método, de acordo com a modalidade 140, caracterizado pelo fato de que a albumina é albumina de camundongo, bovina ou humana.

[00405] Modalidade 142. Método, de acordo com a modalidade 138, caracterizado pelo fato de que o agente é um cátion de metal divalente, glicose, ATP, potássio, glicerol, trealose, D-sacarose, PEG1500, L-arginina, L-glutamina ou EDTA.

[00406] Modalidade 143. Método, de acordo com a modalidade 138, caracterizado pelo fato de que o agente compreende MSA.

[00407] Modalidade 144. Célula T modificada, de acordo com qualquer uma das modalidades de 97 a 143, caracterizada pelo fato de que as células são modificadas adicionalmente para aumentar a expressão de uma ou mais moléculas coestimulantes.

[00408] Modalidade 145. Célula T modificada, de acordo com a modalidade 144, caracterizado pelo fato de que a molécula coestimulante é B7-H2, B7-1, B7-2, CD70, LIGHT, HVEM, CD40, 4-1BBL, OX40L, TL1A, GITRL, CD30L, TIM4, SLAM, CD48, CD58, CD155 ou CD112.

[00409] Modalidade 146. Célula T modificada, de acordo com a modalidade 144 ou 145, caracterizada pelo fato de que a célula compreende um ácido nucleico que resulta em expressão aumentada de uma ou mais moléculas coestimulantes.

[00410] Modalidade 147. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 97 a 146, caracterizado pelo fato de que a célula imune é uma célula T, uma célula dendrítica, um monócito, um macrófago, uma célula mieloide, um granulócito, um neutrófilo, uma célula mastro, uma célula exterminadora natural, uma célula linfoide inata, um basófilo ou uma célula precursora hematopoética.

[00411] Modalidade 148. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 97 a 147, caracterizado pelo fato de que a célula imune não é uma célula B.

[00412] Modalidade 149. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 97 a 148, caracterizado pelo fato de que a célula imune é uma célula B.

[00413] Modalidade 150. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 97 a 148, caracterizado pelo fato de que a célula imune é uma célula T.

[00414] Modalidade 151. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 97 a 148, caracterizado pelo fato de que a célula imune é uma população de células mistas.

[00415] Modalidade 152. Método, de acordo com a modalidade

151, caracterizado pelo fato de que as células imunes são uma pluralidade de PBMCs.

[00416] Modalidade 153. Método, de acordo com a modalidade 150, caracterizado pelo fato de que a célula T compreende uma modificação adicional para modular expressão MHC de classe I.

[00417] Modalidade 154. Método, de acordo com a modalidade 150, caracterizado pelo fato de que a célula T compreende uma modificação adicional para modular expressão MHC de classe II.

[00418] Modalidade 155. Método, de acordo com a modalidade 153 ou 154, caracterizado pelo fato de que a célula T compreende uma modificação adicional para reduzir expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II.

[00419] Modalidade 156. Método, de acordo com a modalidade 153 ou 154, caracterizado pelo fato de que a modificação adicional compreende redução da expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II usando siRNA, shRNA, CRISPR/Cas9, ZFN, TALEN, recombinase Cre ou uma meganuclease.

[00420] Modalidade 157. Método, de acordo com a modalidade 153 ou 154, caracterizado pelo fato de que a célula T compreende uma modificação adicional para aumentar expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II.

[00421] Modalidade 158. Método, de acordo com a modalidade 153 ou 154, caracterizado pelo fato de que a modificação adicional compreende aumentar expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II usando RNA ou DNA plasmídico.

[00422] Modalidade 159. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades 150 e de 153 a 156, caracterizado pelo fato de que uma resposta imune inata montada em um indivíduo em resposta à administração, em um contexto alogênico, das células T modificadas adicionalmente é reduzida em comparação com uma resposta imune inata montada em um indivíduo em resposta à administração, em um contexto alogênico, de células T modificadas correspondentes que não compreendem a modificação adicional.

[00423] Modalidade 160. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades 150 e de 153 a 156, caracterizado pelo fato de que a meia-vida circulante das células T modificadas adicionalmente em um indivíduo ao qual foram administradas é modulada em comparação com a meia-vida circulante de células T modificadas correspondentes que não compreendem a modificação adicional em um indivíduo ao qual foram administradas.

[00424] Modalidade 161. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades 150 e de 153 a 160, caracterizado pelo fato de que a célula T inclui uma ou mais células T auxiliares, células T citotóxicas, células T de memória, células CIK e células T exterminadoras naturais.

[00425] Modalidade 162. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades 150 e de 153 a 160, caracterizado pelo fato de que a célula T inclui uma ou mais dentre células T CD3+, células T CD4+, células T CD8+, células T CD45RA+, células T CD45RO+ e células T γδ.

[00426] Modalidade 163. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades 97 a 162, caracterizado pelo fato de que a célula modificada é alogênica ao indivíduo.

[00427] Modalidade 164. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades 97 a 162, caracterizado pelo fato de que a célula modificada é autóloga ao indivíduo.

[00428] Modalidade 165. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades 97 a 164, caracterizado pelo fato de que o indivíduo está pré-condicionado a ter inflamação modulada e/ou uma resposta imune modulada.

[00429] Modalidade 166. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades 97 a 165, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada em combinação com administração de um inibidor de ponto de verificação imune.

[00430] Modalidade 167. Método, de acordo com a modalidade 166, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas e o inibidor de ponto de verificação imune são administrados simultaneamente.

[00431] Modalidade 168. Método, de acordo com a modalidade 166, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas e o inibidor de ponto de verificação imune são administrados sequencialmente.

[00432] Modalidade 169. Método, de acordo com a modalidade 168, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada antes de administrar o inibidor de ponto de verificação imune.

[00433] Modalidade 170. Método, de acordo com a modalidade 168, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada seguindo administração do inibidor de ponto de verificação imune.

[00434] Modalidade 171. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades 152 a 156, caracterizado pelo fato de que o inibidor de ponto de verificação imune é direcionado a um ou mais dentre PD-1, PD- L1, CTLA-4, LAG3, TIM-3, TIGIT, VISTA, TIM1, B7-H4 (VTCN1) ou BTLA.

[00435] Modalidade 172. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades 97 a 171, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada em combinação com a administração de uma quimioterapia.

[00436] Modalidade 173. Método, de acordo com a modalidade 172, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas e a quimioterapia são administradas simultaneamente.

[00437] Modalidade 174. Método, de acordo com a modalidade 172, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas e a quimioterapia são administradas sequencialmente.

[00438] Modalidade 175. Método, de acordo com a modalidade 174, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada antes de administrar a quimioterapia.

[00439] Modalidade 176. Método, de acordo com a modalidade 174, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada após administração da quimioterapia.

[00440] Modalidade 177. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades 172 a 176, caracterizado pelo fato de que a quimioterapia compreende cisplatina.

[00441] Modalidade 178. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades 97 a 177, caracterizado pelo fato de que administração da composição compreendendo as células imunes modificadas ao indivíduo resulta na ativação e/ou expansão de linfócitos T citotóxicos (CTLs) específicos para o antígeno do HPV.

[00442] Modalidade 179. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 97 a 177, caracterizado pelo fato de que administração da composição compreendendo as células imunes modificadas ao indivíduo resulta em ativação e/ou expansão de células T auxiliares (T h) específicas para o antígeno do HPV.

[00443] Modalidade 180. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 97 a 179, caracterizado pelo fato de que a quantidade eficaz da composição compreende entre cerca de 1 × 106 e cerca de 1 × 1012 células imunes modificadas.

[00444] Modalidade 181. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades 97 a 180, caracterizado pelo fato de que o método compreende múltiplas administrações da composição compreendendo as células imunes modificadas.

[00445] Modalidade 182. Método, de acordo com a modalidade 181, caracterizado pelo fato de que o método compreende uma primeira administração da composição compreendendo as células imunes modificadas seguido por uma segunda administração da composição compreendendo as células imunes modificadas.

[00446] Modalidade 183. Método, de acordo com a modalidade 182, caracterizado pelo fato de que a segunda administração é cerca de um mês após a primeira administração.

[00447] Modalidade 184. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 97 a 183, caracterizado pelo fato de que a doença associada ao HPV é um câncer associado ao HPV.

[00448] Modalidade 185. Método, de acordo com a modalidade 184, caracterizado pelo fato de que o câncer associado ao HPV é câncer cervical, câncer anal, câncer orofaríngeo, câncer vaginal, câncer vulvar, câncer peniano, câncer de pele ou câncer de cabeça e pescoço.

[00449] Modalidade 186. Composição compreendendo células imunes modificadas caracterizada pelo fato que as células imunes modificadas compreendem de maneira intracelular um CpG ODN e um antígeno do HPV com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25.

[00450] Modalidade 187. Composição, de acordo com a modalidade 166, caracterizada pelo fato de que o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com a SEQ ID Nº: 23.

[00451] Modalidade 188. Composição, de acordo com a modalidade 186 ou 187, caracterizada pelo fato de que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para que o antígeno do HPV e o CpG ODN passem para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV e o CpG ODN por tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV e o CpG ODN entrem na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas.

[00452] Modalidade 189. Composição, de acordo com a modalidade 188, caracterizada pelo fato de que o diâmetro da constrição é menor que o diâmetro da célula.

[00453] Modalidade 190. Composição, de acordo com a modalidade 188 ou 189, caracterizada pelo fato de que o diâmetro da constrição é cerca de 20% a cerca de 99% do diâmetro da célula.

[00454] Modalidade 191. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 188 a 190, caracterizada pelo fato de que o diâmetro da constrição é cerca de 20% a menor que cerca de 60% do diâmetro da célula.

[00455] Modalidade 192. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 188 a 191, caracterizada pelo fato de que a constrição está em um canal.

[00456] Modalidade 193. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 188 a 192, caracterizada pelo fato de que uma força de deformação é aplicada à célula de entrada à medida que passa pela constrição.

[00457] Modalidade 194. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 186 a 193, caracterizada pelo fato de que a composição compreende adicionalmente um adjuvante.

[00458] Modalidade 195. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 186 a 194, caracterizada pelo fato de que o antígeno do HPV e/ou o CpG ODN estão presentes no citosol e/ou endossomos.

[00459] Modalidade 196. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 186 a 195, caracterizada pelo fato de que o antígeno e/ou o CpG ODN estão presentes em múltiplos compartimentos da célula.

[00460] Modalidade 197. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 186 a 196, caracterizada pelo fato de que a célula imune modificada compreende adicionalmente um antígeno do HPV e/ou um CpG ODN na superfície da célula.

[00461] Modalidade 198. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 188 a 197, caracterizada pelo fato de que a concentração de CpG ODN incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM.

[00462] Modalidade 199. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 188 a 198, caracterizada pelo fato de que a concentração de antígeno do HPV incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM.

[00463] Modalidade 200. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 188 a 199, caracterizada pelo fato de que a proporção de antígeno do HPV para CpG ODN incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 10000:1 e cerca de 1:10000.

[00464] Modalidade 201. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 186 a 200, caracterizada pelo fato de que o CpG ODN é CpG ODN 1018, CpG ODN 1826 ou CpG ODN 2006.

[00465] Modalidade 202. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 186 a 201, caracterizada pelo fato de que a célula imune modificada compreende mais de um adjuvante.

[00466] Modalidade 203. Composição, de acordo com a modalidade 202, caracterizada pelo fato de que o adjuvante compreende CpG ODN, IFN-α, agonistas STING, agonistas RIG-I ou poli I:C.

[00467] Modalidade 204. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 186 a 203, caracterizada pelo fato de que o antígeno do HPV é um pool de múltiplos polipeptídeos que provocam uma resposta contra os mesmos e ou diferentes antígenos do HPV.

[00468] Modalidade 205. Composição, de acordo com a modalidade 204, caracterizada pelo fato de que um antígeno no pool de múltiplos antígenos não diminui a resposta imune direcionada para outros antígenos no pool de múltiplos antígenos.

[00469] Modalidade 206. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 186 a 205, caracterizada pelo fato de que o antígeno do HPV é um polipeptídeo compreendendo um epítopo do HPV antigênico e uma ou mais sequências de peptídeos heterólogos.

[00470] Modalidade 207. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 186 a 206, caracterizada pelo fato de que o antígeno do HPV se complexa consigo mesmo, com outros antígenos, com um adjuvante ou com o CpG ODN.

[00471] Modalidade 208. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 186 a 207, caracterizada pelo fato de que o antígeno do HPV é compreendido por um epítopo específico HLA-A2.

[00472] Modalidade 209. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 186 a 208, caracterizada pelo fato de que o antígeno do HPV é um polipeptídeo compreendendo um epítopo antigênico que é flanqueado no N-terminal e/ou no C-terminal por uma ou mais sequências de peptídeos heterólogos.

[00473] Modalidade 210. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 186 a 209, caracterizada pelo fato de que a célula imune modificada compreende o CpG ODN a uma concentração entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM.

[00474] Modalidade 211. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 186 a 210, caracterizada pelo fato de que a célula imune modificada compreende o antígeno do HPV a uma concentração entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM.

[00475] Modalidade 212. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 186 a 211, caracterizada pelo fato de que a proporção de antígeno do HPV para o CpG ODN está entre cerca de 10000:1 a cerca de 1:10000.

[00476] Modalidade 213. Composição compreendendo células imunes modificadas caracterizada pelo fato de que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV, em que o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25.

[00477] Modalidade 214. Composição, de acordo com a modalidade 213, caracterizada pelo fato de que o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com a SEQ ID Nº: 23.

[00478] Modalidade 215. Composição, de acordo com a modalidade 213 ou 214, caracterizada pelo fato de que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para que o antígeno do HPV passe para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV por tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV entre na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas.

[00479] Modalidade 216. Composição, de acordo com a modalidade 215, caracterizada pelo fato de que o diâmetro da constrição é menor que o diâmetro da célula.

[00480] Modalidade 217. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 215 a 216, caracterizada pelo fato de que o diâmetro da constrição é cerca de 20% a cerca de 99% do diâmetro da célula.

[00481] Modalidade 218. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 215 a 217, caracterizada pelo fato de que o diâmetro da constrição é cerca de 20% a menor que cerca de 60% do diâmetro da célula.

[00482] Modalidade 219. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 215 a 218, caracterizada pelo fato de que a constrição está em um canal.

[00483] Modalidade 220. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 215 a 219, caracterizada pelo fato de que uma força de deformação é aplicada à célula de entrada à medida que passa através da constrição.

[00484] Modalidade 221. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 213 a 220, caracterizada pelo fato de que a composição compreende adicionalmente um adjuvante.

[00485] Modalidade 222. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 213 a 221, caracterizada pelo fato de que o antígeno do HPV e/ou o adjuvante estão presentes no citosol e/ou endossomos.

[00486] Modalidade 223. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 213 a 222, caracterizada pelo fato de que o antígeno e/ou adjuvante estão presentes em múltiplos compartimentos da célula.

[00487] Modalidade 224. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 213 a 223, caracterizada pelo fato de que a célula imune modificada compreende adicionalmente um antígeno do HPV e/ou um adjuvante na superfície da célula.

[00488] Modalidade 225. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 215 a 224, caracterizada pelo fato de que a concentração de adjuvante incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM.

[00489] Modalidade 226. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 215 a 225, caracterizada pelo fato de que a concentração de antígeno do HPV incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM.

[00490] Modalidade 227. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 215 a 226, caracterizada pelo fato de que a proporção de antígeno do HPV incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 10000:1 a cerca de 1:10000.

[00491] Modalidade 228. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 213 a 227, caracterizada pelo fato de que o adjuvante é CpG ODN, IFN-α, agonistas STING, agonistas RIG-I ou poli I:C.

[00492] Modalidade 229. Composição, de acordo com a modalidade 228, caracterizada pelo fato de que o adjuvante é CpG ODN.

[00493] Modalidade 230. Composição, de acordo com a modalidade 229, caracterizada pelo fato de que o CpG ODN é CpG ODN 1018, CpG ODN 1826 ou CpG ODN 2006.

[00494] Modalidade 231. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 213 a 230, caracterizada pelo fato de que a célula imune modificada compreende mais de um adjuvante.

[00495] Modalidade 232. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 213 a 231, caracterizada pelo fato de que o antígeno do HPV é um pool de múltiplos polipeptídeos que provocam uma resposta contra os mesmos e/ou diferentes antígenos do HPV.

[00496] Modalidade 233. Composição, de acordo com a modalidade 232, caracterizada pelo fato de que um antígeno no pool de múltiplos antígenos não diminui a resposta imune direcionada para outros antígenos no pool de múltiplos antígenos.

[00497] Modalidade 234. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 213 a 233, caracterizada pelo fato de que o antígeno do HPV é um polipeptídeo compreendendo um epítopo do HPV antigênico e uma ou mais sequências de peptídeos heterólogos.

[00498] Modalidade 235. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 213 a 234, caracterizada pelo fato de que o antígeno do HPV se complexa consigo mesmo, com outros antígenos ou com o adjuvante.

[00499] Modalidade 236. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 213 a 234, caracterizada pelo fato de que o antígeno do HPV é compreendido por um epítopo específico HLA-A2.

[00500] Modalidade 237. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 213 a 236, caracterizada pelo fato de que a célula imune modificada compreende o adjuvante a uma concentração entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM.

[00501] Modalidade 238. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 213 a 237, caracterizada pelo fato de que a célula imune modificada compreende o antígeno do HPV a uma concentração entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM.

[00502] Modalidade 239. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 213 a 238, caracterizada pelo fato de que a proporção de antígeno do HPV para o adjuvante está entre cerca de 10000:1 a cerca de 1:10000.

[00503] Modalidade 240. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 186 a 239, caracterizada pelo fato de que o antígeno do HPV é capaz de ser transformado em um peptídeo restrito MHC de classe I.

[00504] Modalidade 241. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 186 a 240, caracterizada pelo fato de que o antígeno do HPV é capaz de ser transformado em um peptídeo restrito MHC de classe II.

[00505] Modalidade 242. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 186 a 241, caracterizada pelo fato de que a célula imune modificada compreende adicionalmente um agente que aumenta a viabilidade e/ou função da célula imune modificada em comparação com uma célula imune modificada correspondente que não compreende o agente.

[00506] Modalidade 243. Composição, de acordo com a modalidade 242, caracterizada pelo fato de que o agente é um composto que aumenta a endocitose, um agente estabilizador ou um cofator.

[00507] Modalidade 244. Composição, de acordo com a modalidade 41, caracterizada pelo fato de que o agente é albumina.

[00508] Modalidade 245. Composição, de acordo com a modalidade 43, caracterizada pelo fato de que a albumina é humana de camundongo, bovina ou albumina.

[00509] Modalidade 246. Composição, de acordo com a modalidade 242, caracterizada pelo fato de que o agente é um cátion de metal divalente, glicose, ATP, potássio, glicerol, trealose, D-sacarose, PEG1500, L-arginina, L-glutamina ou EDTA.

[00510] Modalidade 247. Composição, de acordo com a modalidade 242, caracterizada pelo fato de que o agente compreende

MSA.

[00511] Modalidade 248. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 186 a 247, caracterizada pelo fato de que as células são modificadas adicionalmente para aumentar a expressão de uma ou mais moléculas coestimulantes.

[00512] Modalidade 249. Composição, de acordo com a modalidade 248, caracterizada pelo fato de que a molécula co-estimulante é B7-H2 (ICOSL), B7-1, B7-2 (CD86), CD70, LIGHT, HVEM, CD40, 4-1BBL, OX40L, TL1A, GITRL, CD30L, TIM4, SLAM, CD48, CD58, CD155 ou CD112.

[00513] Modalidade 250. Composição, de acordo com a modalidade 248 ou 249, caracterizada pelo fato de que a célula compreende um ácido nucleico que resulta em expressão aumentada de uma ou mais moléculas coestimulantes.

[00514] Modalidade 251. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 186 a 250, caracterizada pelo fato de que a célula imune é uma célula T, uma célula dendrítica, um monócito, um macrófago, uma célula mieloide, um granulócito, um neutrófilo, uma célula mastro, uma célula exterminadora natural, uma célula linfoide inata, um basófilo ou uma célula precursora hematopoética.

[00515] Modalidade 252. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 186 a 251, caracterizada pelo fato de que a célula imune não é uma célula B.

[00516] Modalidade 253. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 186 a 252, caracterizada pelo fato de que a célula imune é uma célula T.

[00517] Modalidade 254. Composição, de acordo com a modalidade 253, caracterizada pelo fato de que a célula T compreende uma modificação adicional para modular expressão MHC de classe I.

[00518] Modalidade 255. Composição, de acordo com a modalidade 253, caracterizada pelo fato de que a célula T compreende uma modificação adicional para modular expressão MHC de classe II.

[00519] Modalidade 256. Composição, de acordo com a modalidade 254 ou 255, caracterizada pelo fato de que a célula T compreende uma modificação adicional para reduzir expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II.

[00520] Modalidade 257. Composição, de acordo com a modalidade 254 ou 255, caracterizada pelo fato de que a modificação adicional compreende redução de expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II usando siRNA, shRNA, CRISPR/Cas9, ZFN, TALEN, recombinase Cre ou uma meganuclease.

[00521] Modalidade 258. Composição, de acordo com a modalidade 56 ou 57, caracterizada pelo fato de que a célula T compreende uma modificação adicional para aumentar expressão MHC de classe I e/ou expressão MHC de classe II.

[00522] Modalidade 259. Composição, de acordo com a modalidade 254 ou 255, caracterizada pelo fato de que a modificação adicional compreende aumentar expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II usando RNA ou DNA plasmídico.

[00523] Modalidade 260. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 253 a 257, caracterizada pelo fato de que uma resposta imune inata montada em um indivíduo em resposta à administração, em um contexto alogênico, das células T modificadas adicionalmente é reduzida em comparação com uma resposta imune inata montada em um indivíduo em resposta à administração, em um contexto alogênico, de células T modificadas correspondentes que não compreendem a modificação adicional.

[00524] Modalidade 261. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 253 a 257, caracterizada pelo fato de que a meia- vida circulante das células T modificadas adicionalmente em um indivíduo ao qual foram administradas é modulada em comparação com a meia-vida circulante de células T modificadas correspondentes que não compreendem a modificação adicional em um indivíduo ao qual foram administradas.

[00525] Modalidade 262. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 253 a 261, caracterizada pelo fato de que a célula T inclui uma ou mais dentre células T auxiliares, células T citotóxicas, células T de memória, células CIK e células T exterminadoras naturais.

[00526] Modalidade 263. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 253 a 261, caracterizada pelo fato de que a célula T inclui uma ou mais dentre células T CD3+, células T CD4+, células T CD8+, células T CD45RA+, células T CD45RO+ e células T γδ.

[00527] Modalidade 264. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 186 a 263, caracterizada pelo fato de que a célula modificada é alogênica ao indivíduo.

[00528] Modalidade 265. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 186 a 263, caracterizada pelo fato de que a célula modificada é autóloga ao indivíduo.

[00529] Modalidade 266. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 186 a 263, caracterizada pelo fato de que o indivíduo está precondicionado a ter inflamação modulada e/ou uma resposta imune modulada.

[00530] Modalidade 267. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 186 a 266, caracterizada pelo fato de que a composição compreende adicionalmente um inibidor de ponto de verificação imune.

[00531] Modalidade 268. Composição, de acordo com a modalidade 267, caracterizada pelo fato de que o inibidor de ponto de verificação imune é direcionado a um ou mais dentre PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG3, TIM-3, TIGIT, VISTA, TIM1, B7-H4 (VTCN1) ou BTLA.

[00532] Modalidade 269. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 186 a 268, caracterizada pelo fato de que administração da composição compreendendo as células imunes modificadas ao indivíduo resulta na ativação e/ou expansão de linfócitos T citotóxicos (CTLs) específicos para o antígeno do HPV.

[00533] Modalidade 270. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 186 a 268, caracterizada pelo fato de que administração da composição compreendendo as células imunes modificadas ao indivíduo resulta em ativação e/ou expansão de células T auxiliares (Th) específicas para o antígeno.

[00534] Modalidade 271. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 186 a 270, caracterizada pelo fato de que a quantidade eficaz da composição compreende entre cerca de 1 × 106 e cerca de 1 × 1012 células imunes modificadas.

[00535] Modalidade 272. Composição compreendendo um antígeno caracterizada pelo fato de que o antígeno compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com SEQ ID Nº: 23.

[00536] Modalidade 273. Composição, de acordo com a modalidade 272, caracterizada pelo fato de que o antígeno compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 23.

[00537] Modalidade 274. Método para tratar ou prevenir uma doença associada ao HPV em um indivíduo, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV e um adjuvante, em que o adjuvante é apresentado de maneira intracelular; em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada compreendendo um antígeno do HPV através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para que o antígeno e o adjuvante passem para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o adjuvante por tempo suficiente para permitir que o adjuvante entre na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas.

[00538] Modalidade 275. Método para tratar ou prevenir uma doença associada ao HPV em um indivíduo, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV e um adjuvante, em que o adjuvante é apresentado de maneira intracelular; em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada compreendendo o adjuvante através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta, forma perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para que o antígeno do HPV passe para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV por tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV entre na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas.

[00539] Modalidade 276. Método, de acordo com a modalidade 274 ou 275, caracterizado pelo fato de que o diâmetro da constrição é menor que o diâmetro da célula.

[00540] Modalidade 277. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 274 a 276, caracterizado pelo fato de que o diâmetro da constrição é cerca de 20% a 99% do diâmetro da célula.

[00541] Modalidade 278. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 274 a 277, caracterizado pelo fato de que o diâmetro da constrição é cerca de 20% a menor que cerca de 60% do diâmetro da célula.

[00542] Modalidade 279. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 274 a 278, caracterizado pelo fato de que a constrição está em um canal.

[00543] Modalidade 280. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 274 a 279, caracterizado pelo fato de que uma força de deformação é aplicada à célula de entrada à medida que passa pela constrição.

[00544] Modalidade 281. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 274 a 280, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV e/ou o adjuvante estão presentes no citosol e/ou endossomos.

[00545] Modalidade 282. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 274 a 281, caracterizado pelo fato de que o antígeno e/ou adjuvante estão presentes em compartimentos múltiplos da célula.

[00546] Modalidade 283. Método, de acordo com a modalidade 274, caracterizado pelo fato de que a concentração de adjuvante incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM.

[00547] Modalidade 284. Método, de acordo com a modalidade 275, caracterizado pelo fato de que a concentração de antígeno do HPV incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 µM.

[00548] Modalidade 285. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 274 a 285, caracterizado pelo fato de que o adjuvante é CpG ODN, IFN-α, agonistas STING, agonistas RIG-I ou poli I:C.

[00549] Modalidade 286. Método, de acordo com a modalidade

285, caracterizado pelo fato de que o adjuvante é CpG ODN.

[00550] Modalidade 287. Método, de acordo com a modalidade 286, caracterizado pelo fato de que o CpG ODN é CpG ODN 1018, CpG ODN 1826 ou CpG ODN 2006.

[00551] Modalidade 288. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 274 a 287, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é derivado a partir de um lisado celular.

[00552] Modalidade 289. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 274 a 288, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é um HPV-16 ou um antígeno do HPV-18.

[00553] Modalidade 290. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 274 a 289, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é um antígeno do HPV E6 ou um antígeno do HPV E7.

[00554] Modalidade 291. Método, de acordo com a modalidade 290, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25.

[00555] Modalidade 292. Método, de acordo com a modalidade 289, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25.

[00556] Modalidade 293. Método, de acordo com a modalidade 290, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com a SEQ ID Nº: 23.

[00557] Modalidade 294. Método, de acordo com a modalidade 290, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 23.

[00558] Modalidade 295. Método para tratar ou prevenir uma doença associada ao HPV em um indivíduo caracterizado pelo fato de que compreende administração ao indivíduo de uma célula imune modificada associada a um antígeno do HPV, em que a célula imune modificada é preparada por um processo compreendendo as etapas de: a) incubar uma célula de entrada com o antígeno do HPV e/ou um adjuvante por tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV se associe à célula de entrada; gerando, desta forma, a célula imune modificada associada ao antígeno.

[00559] Modalidade 296. Método, de acordo com a modalidade 295, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25.

[00560] Modalidade 297. Método, de acordo com a modalidade 296, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 23.

[00561] Modalidade 298. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades de 295 a 297, caracterizado pelo fato de que o adjuvante é CpG ODN.

[00562] Modalidade 299. Método, de acordo com a modalidade 298, caracterizado pelo fato de que o CpG ODN é CpG ODN 1018, CpG ODN 1826 ou CpG ODN 2006.

[00563] Modalidade 300. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende as células imunes modificadas conforme qualquer uma das modalidades de 186 a 273 para uso como uma medicação.

[00564] Modalidade 301. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende pelas células imunes modificadas conforme qualquer uma das modalidades de 186 a 273 para uso em um método para tratar o corpo humano ou animal por cirurgia, terapia ou diagnóstico.

[00565] Modalidade 302. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende as células imunes modificadas conforme qualquer uma das modalidades de 186 de 273 para uso no tratamento de um câncer, uma doença infecciosa ou uma doença viral.

[00566] Modalidade 303. Composição compreendendo as células imunes modificadas, conforme qualquer uma das modalidades de 186 a 273, caracterizada pelo fato de que o câncer é câncer de cabeça e pescoço, câncer de colo do útero, câncer vulvar, câncer vaginal, câncer peniano, câncer anal, câncer perianal, câncer anogenital, câncer bucal ou câncer salivar.

[00567] Modalidade 304. Composição compreendendo as células imunes modificadas, conforme qualquer uma das modalidades de 300 a 303, caracterizada pelo fato de que os PBMCs modificados são administrados antes, simultaneamente ou após a administração de um inibidor de ponto de verificação imune.

[00568] Modalidade 305. Composição, de acordo com a modalidade 304, caracterizada pelo fato de que o inibidor de ponto de verificação imune é direcionado a qualquer um dos PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG3, VISTA e TIM-3.

[00569] Modalidade 306. Composição, de acordo com a modalidade 305, caracterizada pelo fato de que o inibidor de ponto de verificação imune é direcionado a PD-1.

[00570] Modalidade 307. Composição, de acordo com a modalidade 305, caracterizada pelo fato de que o inibidor de ponto de verificação imune é direcionado a PD-L1.

[00571] Modalidade 308. Composição, de acordo com qualquer uma das modalidades de 300 a 307, caracterizado pelo fato de que os PBMCs modificados são administrados antes, concomitantemente com ou seguindo administração de um agente terapêutico.

[00572] Modalidade 309. Composição, de acordo com a modalidade 308, caracterizada pelo fato de que o agente terapêutico é um agente quimioterápico.

[00573] Modalidade 310. Composição, de acordo com a modalidade 309, caracterizada pelo fato de que a doença infecciosa está associada ao HIV, HPV, EBV, MCV, HBV ou HCV.

EXEMPLOS

[00574] Os versados na técnica reconhecerão que várias modalidades são possíveis dentro do escopo e do espírito desta invenção. A invenção será agora descrita com mais detalhes, em referência aos seguintes exemplos não limitantes. Os exemplos seguintes ilustram adicionalmente a invenção, mas, é claro, não devem ser interpretados de forma alguma limitando seu escopo. Exemplo 1

[00575] A fim de determinar a dose celular mínima eficaz de TAPCs necessária para levar à inibição do crescimento do tumor em um ambiente terapêutico, quatro doses diferentes de iniciação/reforço de T APCs foram testadas em um modelo de tumor TC1, com a área dos tumores plotada contra o tempo.

[00576] Os camundongos fêmeas C57BL/6J foram injetados no flanco traseiro direito com células tumorais TC1 (50k células/camundongos) no Dia 0. Nos dias 4 (iniciação) e 7 (reforço), as células T de camundongos doadores fêmeas C57BL/6J foram isoladas e carregadas usando SQZ com 200 μg/mL CpG ODN 1826 e 40 μm E7 SLP pré-complexado (GQAEPDRAHYNIVTFSSKSDSTLRLSVQSTHVDIR)+ 40 µm de albumina do soro de camundongo (MSA). Animais (10 camundongos/grupo) foram injetados por via intravenosa com a dose relevante de células T carregadas com E7+MSA+ CpG (células 50 M/mL) e o crescimento do tumor TC-1 foi medido começando 1 semana após a implantação do tumor, duas vezes por semana e comparado ao crescimento do tumor em camundongos não tratados. Um esquema representativo dos grupos de tratamento e cronograma estão delineados na Fig. 1A.

[00577] O crescimento do tumor, conforme medido pela fórmula ((comprimento x largura2)/ 2) foi comparado entre os camundongos dentre o grupo não tratado (sem transferência adotiva de células T) e os grupos de tratamento B-E delineados na Figura 1A são mostrados na Fig. 1B. Todas as condições de tratamento levaram à redução completa do tumor, indicativo de que a menor dose de células testadas (células 2,5 M primárias, reforço de células 1M) ainda eram capazes de alcançar a mesma redução do tumor que doses de células mais altas, cada uma atingindo significância estatística em relação ao não tratado no Dia 18 (#P <0,0001). Exemplo 2

[00578] Para determinar o projeto de E7 SLP, duas E7 SLPs diferentes, a E7 SLP nativa e uma em que a sequência nativa tem todas as cisteínas substituídas por serina, foram SQZadas em TAPCs juntamente com a coadministração de CpG, e cada condição foi avaliada para Produção de IFN-y pela ICS.

[00579] As células T de camundongos doadores fêmeas C57BL/6J foram isoladas e carregadas usando SQZ com doses variáveis (Esquerda - 200 μg/mL, Direita - 25 μg/mL) CpG ODN 1826 e pré- complexado 40 μm E7 nativo ou SLP clássico+40 μm albumina sérica de camundongo (MSA) ou células T foram incubadas com as mesmas condições na ausência de SQZ como um controle negativo (Endo - Grupos B e D). Os animais (5 camundongos/grupo) foram injetados por via intravenosa com células T carregadas ou incubadas 5M em um volume de 100 µL (células 50M/mL). No Dia 8, os baços foram colhidos e a porcentagem (%) de células T CD8+ produtoras de IFN-y foi quantificada por ICS. Um esquema representativo dos grupos de tratamento e cronograma estão delineados na Fig. 2A.

[00580] A % de células T CD8+ produtoras de IFN-y foi mais alta no grupo de controle Endo usando cE7, o qual não era significativamente diferente de SQZ com cE7 ou Endo com nE7. Inesperadamente, não houve benefício para SQZ vs. Endo, mas houve uma diminuição notável em % de células T CD8+ produtoras de IFN-y na condição nE7 SQZ em relação a todas as outras. Estes dados -mostram que a sequência SLP tem um impacto sobre a % de células T CD8+ produtoras de IFN-y geradas em resposta à vacinação com TAPC, particularmente quando o antígeno é carregado na célula T usando SQZ. Exemplo 3

[00581] Para determinar a capacidade das E6 SLPs de induzir uma resposta imune específica de antígenos em células T respondentes E6 em um modelo humano in vitro, células T humanas primárias foram carregadas com uma E6 SLP e a secreção de IFN-y da célula respondente foi medida por ELISA.

[00582] As células T humanas foram isoladas dos PBMCs de doadores HLA-A02+ (células 10M/mL) e 50 μm E6 SLP contendo o epítopo E629-38 mínimo restrito a HLA-A02 (LPQLSTELQTTIHDIILECVYSKQQLLRREVYDFAF) foi entregue de maneira intracelular por SQZ e o nível de IFN-y, medido por ELISA, foi comparado entre as condições SQZ e um controle em que o E6 SLP é incubado com TAPCs na ausência de SQZação (Endo). TAPCs foram então co-cultivados com células CD8+ respondentes específicas de E6 em uma proporção de 1:1 estimulador:efetor e cultivados na presença de IL-2 (100 U/mL). Após 18h, o sobrenadante é colhido de cada condição e o nível de produção de IFN-y foi avaliado por IFN-y ELISA (Biolegend).

[00583] O E6 SLP testado, quando administrado de modo intracelular usando SQZ, levou a um aumento>10 vezes na produção de IFN-y quando co-cultivado com células T CD8+ respondentes E6 (#P <0,0001) como mostrado na Figura 3. Esses achados mostram a capacidade dos TAPCs de induzir uma resposta imune específica do antígeno a múltiplos antígenos do HPV (E6 e E7). Exemplo 4

[00584] Para determinar a capacidade das E7 SLPs de induzir uma resposta imune específica do antígeno em células T respondedoras

E711-20, bem como o impacto da sequência SLP na ativação de células T SQZ APC (Tapc) em um humano modelo in vitro, células T humanas primárias de vários doadores foram carregadas com diferentes E7 SLPs e a secreção de IFN-y da célula respondente foi medida por ELISA.

[00585] As células T humanas foram isoladas dos PBMCs de doadores HLA-A02+ (células 10M/mL) e 50 μm OL-E71- 35(MHGDTPTLHEYMLDLQPETTDLYCYEQLNDSSEEE) ou E7.6 (QLCTELQTYMLDLQPETTYCKQQLL) foram entregues de modo intracelular por SQZ e o nível de IFN-y, conforme medido por ELISA, foram comparados entre as condições SQZ e um controle em que o E7 SLP foi incubado com o TAPCs na ausência de SQZação (Endo). Os TAPCs foram então co-cultivados com células CD8+ respondentes específicas de E611-20 em uma proporção de 4:1 estimulador:efetor e cultivados na presença de IL-2 (100 U/mL). Após 24h, o sobrenadante é colhido de cada condição e o nível de produção de IFN-y foi avaliado por IFN-y ELISA (Biolegend).

[00586] O SLP OL-E71-35 nativo eliciou uma resposta IFN-y mínima quando entregue usando SQZ em comparação com Endo (Figura 4). Contudo, o E7.6, que compreende o epítopo mínimo E7 (YMLDLQPETT) inserido entre as regiões de flanqueamento de outro SLP reativo (E621-45 - QLCTELQTXXXXXXXXXXXYCKQQLL), induziu uma maior resposta IFN-y em relação ao controle Endo correspondente em todos os três doadores testados quando comparados aos controles Endo (*P<0.05, **P<0.01; #P<0.0001). Esta descoberta destaca a importância da sequência da região de flanqueamento na imunogenicidade do SLP e provê suporte para que as regiões de flanqueamento de outras SLPs, que são conhecidas por serem reativas, possam ser usadas em conjunto com epítopos mínimos ortogonais para atingir respostas imunes aumentadas. Exemplo 5

[00587] Para avaliar a dose de antígeno para APCs de células T SQZ em um modelo humano in vitro, células T humanas primárias foram carregadas com um SLP E7 em doses variadas e avaliadas para IFN-y por ELISA.

[00588] As células T humanas foram isoladas dos PBMCs de doadores HLA-A02+ (células 10M/mL) e doses variadas (50 e 100 μm) E7 SLP (QLCTELQTYMLDLQPETTYCKQQLL) foram entregues de modo intracelular por SQZ e o nível de IFN-y, conforme medido por ELISA, foram comparados entre as condições SQZ e um controle em que o E7 SLP é incubado com o TAPCs na ausência de SQZação (Endo). Os TAPCs foram então co-cultivados com células CD8+ respondentes específicas de E611-20 em uma proporção de 4:1 estimulador:efetor e cultivados na presença de IL-2 (100 U/mL). Após 24h, o sobrenadante é colhido de cada condição e o nível de produção de IFN-y foi avaliado por IFN-y ELISA (Biolegend). Adicionalmente, um controle positivo de pulso de peptídeo foi empregado em que as células B-LCL foram incubadas na presença do epítopo E7 mínimo (YMLDLQPETT) por 1h antes do ELISA.

[00589] Entre os três doadores testados, aumentos consistentes em IFN-y ocorrem com todas as condições SQZ em relação ao controle comparável (Endo), onde o SLP é incubado com a célula T na ausência de SQZ (Figura 5). Os doadores 1 e 3 exibiram aumentos estatisticamente significativos com 50 μm E7 SLP (8668 - *P<0.05; 8299 - #P<0.0001) e uma tendência de significância no maior 100 μm E7 SLP. Embora não tenha havido diferença estatisticamente significativa entre 50 e 100 μm para qualquer doador, houve resposta de IFN-y consistentemente igual ou superior com 50 μm E7 SLP. Exemplo 6

[00590] Para determinar a variabilidade do doador para APCs de células T SQZ em um modelo humano in vitro, juntamente com a identificação de combinações e doses ideais de E6 e E7 SLPs que induzem uma resposta imune significativa contra E7 em células T humanas primárias de múltiplos doadores HLA-A02+ foram carregados com um E6 e E7 SLPs e avaliados para IFN-y por ELISA.

[00591] As células T humanas foram isoladas dos PBMCs de doadores HLA-A02+ (células 10M/mL) e 25 ou 50 μm E6 SLP (QLCTELQTTIHDIILECVYCKQQLL) e E7.6 SLP (QLCTELQTYMLDLQPETTYCKQQLL) foram entregues de modo intracelular por SQZ e o nível de IFN-y, conforme medido por ELISA, foram comparados entre as condições SQZ e um controle em que os SLPS são incubados com o TAPC na ausência de SQZação (Endo). Um controle positivo de pulso de peptídeo foi empregado em que as células B-LCL foram incubadas na presença do epítopo E7 mínimo (YMLDLQPETT) ao mesmo tempo conforme a geração de TAPC. Os TAPCs e o controle positivo foram então co-cultivados com células CD8+ respondentes específicas de E711-20 em uma proporção de 4:1 estimulador:efetor e cultivados na presença de IL-2 (100 U/mL). Após 24h, o sobrenadante é colhido de cada condição e o nível de produção de IFN-y foi avaliado por IFN-y ELISA (Biolegend).

[00592] Cinco de sete doadores mostrados exibiram aumentos consistentes em IFN-y quando tratados com SLPs E6+E7 SQZ em relação ao controle comparável (Endo), onde o SLP é incubado com a célula T na ausência de SQZ (Doadores 1-3, 5-6: *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.005) como mostrado na Fig. 6. Dos dois doadores que não tiveram aumentos estatisticamente significativos quando tratados com TAPCs SQZados em relação aos controles Endo, ambos os doadores (Doadores 4 e 7) tinham condições onde havia aumentos detectáveis com uma dose de TAPCs SQZados testados (Doador 4-50 μm, Doador 7-25 μm), tendendo à significância. Tomados em conjunto, esses dados mostram que, embora diferentes TAPCs do doador tenham atividade imunoestimuladora diferencial, podemos ver um aumento consistente na produção de IFN-y em múltiplos doadores e que a resposta imune específica de E7 ainda é significativa quando combinada com múltiplos antígenos/SLPs, neste caso, o antígeno E6 específico do HPV. Exemplo 7

[00593] Para ajudar a determinar o adjuvante que leva à resposta imune mais robusta, testamos o efeito de dois adjuvantes que atuam em diferentes vias sobre a capacidade dos TAPCs de induzir uma resposta específica do antígeno in vivo. Este efeito foi quantificado por tetrâmero e coloração ICS por citometria de fluxo.

[00594] As células T de camundongos doadores fêmeas C57BL/6J foram isoladas e carregadas usando SQZ com 400 μg/mL Ova + várias concentrações de poli I: C de alto e baixo peso molecular (10, 30, 100, 300, 1000 μg/mL) e em comparação com células T incubadas com as mesmas condições na ausência de SQZ como um controle negativo (Endo - Grupos C e E). As células T SQZadas com Ova+200 μg/mL CpG foram usadas como um controle positivo (Grupo F). No dia 0, camundongos (5/grupo, 3 não tratatos) foram injetados por via intravenosa com células T carregadas ou incubadas 5M em um volume de 100 pL (50M células/mL). No Dia 7, os baços foram colhidos e as células T específicas de Ova foram quantificadas por coloração de tetrâmero usando citometria de fluxo, enquanto alguns esplenócitos foram permeabilizados e fixados durante a noite. No dia seguinte (Dia 8), os níveis de IFN-y foram determinados por ICS, com PMA/ionomicina atuando como um controle positivo. Um esquema representativo dos grupos de tratamento e cronograma estão delineados na Fig. 7A.

[00595] A % de células T CD8+ produtoras de tetrâmero ou IFN-y foi maior no grupo com adjuvante CpG, enquanto todas as condições de adjuvantes com LMW ou HMW poli I: C não aumentaram a porcentagem de cálulas T CD8+ específicos para Ova ou produtores de IFN y em relação a não tratadas (Figura 7B). Como poli I: C é um agonista de TLR3 e CpG é um agonista de TLR9, esses dados suportam a superioridade de CpG em relação a poli I: C como um adjuvante com vacinação de TAPC, embora sugerindo que a ativação de TLR3 pode não ser benéfica neste cenário. Exemplo 8

[00596] Para ajudar a determinar a concentração de adjuvante CpG que leva à resposta imune mais robusta, testamos o efeito de múltiplas doses de CpG sobre a capacidade dos TAPCs de induzir uma resposta específica do antígeno in vivo. Este efeito foi quantificado por tetrâmero e coloração ICS por citometria de fluxo.

[00597] As células T de camundongos doadores fêmeas C57BL/6J foram isoladas e carregadas usando SQZ com 400 μg/mL Ova + várias concentrações de CpG 1826 (50, 100, 200 μg/mL) e em comparação com células T incubadas com as mesmas condições na ausência de SQZ como um controle negativo (Endo - Grupos B, D & F). No dia 0, camundongos (5/grupo, 3 não tratatos) foram injetados por via intravenosa com células T carregadas ou incubadas 5M em um volume de 100 pL (50M células/mL). No Dia 7, os baços foram colhidos e as células T específicas de Ova foram quantificadas por coloração de tetrâmero usando citometria de fluxo, enquanto alguns esplenócitos foram permeabilizados e fixados durante a noite. No dia seguinte (Dia 8), os níveis de IFN-y foram determinados por ICS, com PMA/ionomicina atuando como um controle positivo. Um esquema representativo dos grupos de tratamento e cronograma estão delineados na Fig. 8A.

[00598] A % de células T CD8+ produtoras de tetrâmero ou IFN-y foi maior no grupo com 200 μg/mL de CpG e foi significativamente diferente do controle Endo relacionado (*P<0.05 para tetrâmero, #P<0.0001 para IFN-y) para o peptídeo de Classe I/MHC-I, enquanto todas as outras condições não provocaram uma resposta significativa em relação ao não tratado ou seus respectivos controles Endo (Figura 8B). A ativação de células T específicas de Ova foi observada apenas com o peptídeo de

Classe I, suportando a apresentação direta de antígenos de Ova para efetuar uma resposta de células T CD8+. Exemplo 9

[00599] Para ajudar a avaliar o cronograma para administração de adjuvante CpG que leva a uma resposta imune mais robusta, testamos o efeito de múltiplos cronogramas de dosagens de CpG sobre a capacidade dos TAPCs de induzir uma resposta específica do antígeno in vivo. Este efeito foi quantificado por tetrâmero e coloração ICS por citometria de fluxo.

[00600] As células T de camundongos doadores fêmeas C57BL/6J foram isoladas e carregadas usando SQZ com 400 μg/mL Ova e camundongos (5/ grupo, 3 não tratados) foram injetados com 5M carregados ou células T incubadas em volume de 100 pL (50M células/mL). A co-administração sistêmica CpG 1826 (25 μg/mL) de camundongos doadores ocorreu ao mesmo tempo que o iniciação de TAPC (Dia 0), ou 1 ou 2 dias após a iniciação (Dia 1 ou 2, respectivamente) e em comparação com T células incubadas com as mesmas condições na ausência de SQZ como um controle negativo (Grupos B, D e F). As células T SQZadas com (Ova+200 μg/mL CpG) foram usadas como um controle positivo (Grupo H). No Dia 7, os baços foram colhidos e as células T específicas de Ova foram quantificadas por coloração de tetrâmero usando citometria de fluxo, enquanto alguns esplenócitos foram permeabilizados e fixados durante a noite. No dia seguinte (Dia 8), os níveis de IFN-y foram determinados por ICS, com PMA/ionomicina atuando como um controle positivo. Um esquema representativo dos grupos de tratamento e cronograma estão delineados na Fig. 9A.

[00601] A % de células T CD8+ produtoras de tetrâmero ou IFN-y foi maior no grupo em que Ova e CpG foram co-entregues a TAPCs, enquanto a coadministração no mesmo dia que a iniciação (Grupo B) foi o único CpG coadministrado grupo para mostrar algum nível de ativação específica de Ova, tendendo à significância (Figura 9B). Contudo, esses dados suportam a observação de que a co-entrega de antígeno+CpG pode levar à maior ativação de células T CD8+ específicas de Ova, enquanto o atraso da administração sistêmica de CpG leva a respostas mais baixas em comparação com a iniciação e co-administração simultânea de adjuvante. Exemplo 10.

[00602] A fim de determinar uma combinação de administração de adjuvante intracelular e de sistema para a função antitumoral de TAPC, múltiplas vias de administração de CpG vs. IFN-α foram comparadas em conjunto com nosso TAPC específico para E7 em um modelo de tumor murino TC-1 profilático. As respostas das células T específicas do antígeno foram medidas por coloração com tetrâmero e citometria de fluxo, enquanto o efeito antitumoral foi medido pela prevenção do crescimento do tumor.

[00603] Nos dias -14 (iniciação) e -7 (reforço), células T de camundongos doadores fêmeas C57BL/6J foram isoladas e carregadas usando SQZ com 40 µM E7 SLP precomplexado (GQAEPDRAHYNIVTFSSKSDSTLRLSVQSTHVDIR) + albumina de soro de camundongo 40 µM (MSA) (Grupos B e C) ou E7 SLP + MSA + 200 µg/mL CpG ODN 1826 (Grupos D, E e F). Camundongos receptores fêmeas C57BL/6J (10 camundongos/grupo) foram injetados por via intravenosa com 100 µL de células T carregadas (células 5M/animal), enquanto os animais dos grupos B e E também receberam CpG intravenoso (25 μg) e os grupos C e F receberam IV IFN-α (10k IU). Nos dias -8 e -3, 100 µL de sangue murino foram coletados e a % de células T CD8+ específicas para E7 foi quantificada por coloração com tetrâmero e citometria de fluxo. No Dia 0, os camundongos receptores foram injetados no flanco traseiro direito com células tumorais TC1 (100k células/camundongo) e o crescimento do tumor TC-1 foi medido duas vezes por semana começando no Dia 11 e comparado com o crescimento tumoral em camundongos não tratados. Um esquema representativo dos grupos de tratamento e cronograma é delineado na Fig. 10A.

[00604] A porcentagem de células T específicas de E7 foi medida em camundongos por coloração com tetrâmero E7 após a iniciação (Dia -8) e reforço (Dia -3) com células T E7+MSA ou E7+MSA+CpG SQZado +/- coadministração de CpG ou IFN-α (Figura 10B). A maior proporção relativa de células T específicas para E7 foi observada nos grupos de coadministração SQZ E7 + CpG e SQZ (E7 + CpG) + IFN-α.

O número relativo de células T CD8+ pós-primárias específicas de E7 foi surpreendentemente menor na coadministração SQZ (E7 + CpG) + de CpG em relação à coadministração SQZ E7 + de CpG (*P<0.05), considerando que a coadministração de IFN-α com células T SQZ (E7 + CpG) levou a um número significativamente maior de células T específicas de E7 do que a coadministração de CpG com células T SQZ (E7 + CpG) (*P<0.05). Após o reforço (Dia -3), uma tendência semelhante foi observada onde a coadministração de SQZ E7+CpG e os grupos de coadministração de SQZ (E7+CpG) + IFN-α levaram à maior % de células T específicas de E7. Contudo, a maior resposta veio do grupo de coadministração de SQZ (E7+CpG) + IFN-α, que foi significativamente maior do que a coadministração de SQZ E7 + IFN-α e SQZ (E7+CpG) + coadministração de CpG, mostrando que a coadministração de IFN-α leva a uma maior porcentagem de células T específicas do antígeno quando usadas em combinação com células T SQZ (E7+CpG). O crescimento do tumor, conforme medido pela fórmula ((comprimento x largura2)/2), foi comparado entre camundongos do grupo não tratado (sem transferência adotiva de células T) e os grupos de tratamento B-F delineados na Fig. 10C.

A alta redução do crescimento tumoral e vantagem de sobrevivência do grupo de coadministração SQZ (E7+CpG) + IFN-α corresponde bem com a coloração de tetrâmero, mostrando que a maior indução de células T específicas de E7 levou à melhor atividade antitumoral.

Notavelmente, apesar da baixa % de células T específicas de E7 no grupo SQZ (E7+CpG), este tratamento também proporcionou um nível muito alto de atividade antitumoral, sendo este o único outro grupo (além de SQZ (E7+CpG)) + coadministração de IFN-α) que estendeu a sobrevivência de todos os camundongos após 60 dias. Embora ligeiramente inferior aos Grupos D e F mencionados anteriormente, houve uma extensão de sobrevivência discernível e inibição do crescimento do tumor nos Grupos C e E. No Dia 78, os 7 camundongos livres de tumor do Grupo D foram contestados novamente com células de 50k no flanco oposto (esquerdo) e em comparação com animais não tratados de mesma idade (10 camundongos) (Figura 10D). Os camundongos do Grupo D tiveram uma redução significativa no crescimento do tumor após nova contestação, em comparação com os camundongos não tratados que receberam sua primeira contestação (***P<0,005), provendo suporte de que este efeito antitumoral é durável nos últimos 2 meses. Exemplo 11.

[00605] A fim de determinar o efeito da combinação de múltiplos antígenos do HPV para a função antitumoral de TAPC, os peptídeos sintéticos longos E6 e E7 (SLPs) isolados e em combinação com nossos TAPCs específicos para E7 em um modelo de tumor murino TC-1 profilático. As respostas das células T específicas para E7 foram medidas por coloração com tetrâmero e citometria de fluxo, enquanto o efeito antitumoral foi medido pela prevenção do crescimento do tumor.

[00606] Nos dias -14 (iniciação) e -8 (reforço), células T de camundongos doadores fêmeas C57BL/6J foram isoladas e carregadas usando SQZ com albumina de soro de camundongo 20 µM pré-complexada (MSA) + E6 20 µM (VYSKQQLLRREVYDFAFRDLSIVYRDGNPYAVSDK) e/ou E7 SLP (GQAEPDRAHYNIVTFSSKSDSTLRLSVQSTHVDIR) ou a combinação de ambos +/- 200 µg/mL CpG ODN 1826 de acordo com a Tabela XX. As células T incubadas com as mesmas condições do Grupo B na ausência de SQZ foram usadas como controle negativo (Grupo C). Os camundongos receptores fêmeas C57BL/6J (5-10 camundongos/grupo)

foram injetados por via intravenosa com 100 µL de células T carregadas (células 5M/animal). No dia -3, 100 µL de sangue murino foi coletado e a % de células T CD8+ específicas para E7 foi quantificada por coloração com tetrâmero e citometria de fluxo. No Dia 0, os camundongos receptores foram injetados no flanco traseiro direito com células tumorais TC1 (100k células/camundongo) e o crescimento do tumor TC-1 foi medido duas vezes por semana começando no Dia 11 e comparado com o crescimento tumoral em camundongos não tratados. Um esquema representativo dos grupos de tratamento e cronograma é delineado na Fig. 11A.

[00607] A porcentagem de células T específicas para E7 foi medida em camundongos por coloração com tetrâmero E7 após o reforço (Dia -3) com o maior efeito observado com os TAPCs CpG+E7 SQZ (Grupo B) como mostrado na Figura 11B. Notavelmente, as respostas do Grupo B foram significativamente maiores do que as não tratadas e a combinação de E7 e E6 (Grupo F - #P<0,0001), provendo evidências de que a adição do E6 SLP embota a resposta específica de E7. O Grupo B foi significativamente diferente dos outros grupos de tratamento, com a notável exceção do controle Endo (Grupo C), em que o Grupo B foi notavelmente mais alto e tendendo à significância estatística. Como mostrado na Fig. 11C, o crescimento do tumor, conforme medido pela fórmula ((comprimento x largura2)/2), foi comparado entre os camundongos do grupo não tratado (sem transferência adotiva de células T) e os grupos de tratamento BG delineados na Fig. 11A. A alta prevenção do crescimento tumoral ocorreu em grupos com células T SQZ'd com E7 + CpG, bem como células T que foram incubadas na presença de E7 + CpG na ausência de SQZ. Os grupos D-F mostraram algum nível de inibição do crescimento tumoral em relação às células T não tratadas (Grupo A) e E6 CpG SQZadas (Grupo G), mas foram todos menos eficazes do que os Grupos B e C. Exemplo 12.

[00608] A fim de determinar a importância da via de administração do adjuvante CpG para o efeito antitumoral TAPC específico para E7, um E7 SLP foi entregue às células T em combinação com CpG, seja entregue à célula T ou sistemicamente coadministrado ao animal receptor e o efeito antitumoral foi medido pela inibição do crescimento do tumor.

[00609] No Dia 0, os camundongos receptores foram injetados no flanco traseiro direito com células tumorais TC1 (50k células/camundongo). Nos dias 10 (iniciação) e 20 (reforço), células T de camundongos doadores fêmeas C57BL/6J foram isoladas e carregadas usando SQZ com albumina de soro de camundongo 20 µM precomplexada (MSA) + E7 20 µM (GQAEPDRAHYNIVTFSSKSDSTLRLSVQSTHVDIR) e ODN 1826 foi ou coentregue (Grupo D) por SQZ a 200 µg/mL ou coadministrado aos animais sistemicamente a 25 µg/camundongo (Grupo C) e em comparação com a administração não tratada (Grupo A) e sistêmica de CpG sozinho (Grupo B). Os camundongos receptores (8-10 camundongos/grupo) foram tratados com 100 µL de células T carregadas (células 5M/animal). O crescimento do tumor TC-1 foi medido duas vezes por semana, começando no Dia 10. Um esquema representativo dos grupos de tratamento e cronograma é descrito na Figura 12A.

[00610] Em um modelo terapêutico de câncer associado ao HPV (TC-1), TAPCs que foram SQZ'd com E7 SLP levaram a uma redução significativa na carga do tumor em relação à injeção não tratada e de CpG isolado (Dia 17: Grupo C - P<0.05; Dia 20: Grupos C & D – P<0.0001) (Fig. 12B). Estes dados mostram que em um cenário terapêutico tanto a co- administração sistêmica quanto a administração intracelular de adjuvante CpG levam a uma redução significativa na carga tumoral em relação ao não tratado ou adjuvante isolado. Exemplo 13.

[00611] A fim de avaliar a capacidade de adjuvantes coadministrados em levar à infiltração de tumor de células T específicas para E7, CpG vs. IFN-α foram comparados em combinação com nosso APC T específico para E7 em um modelo de tumor murino TC-1 terapêutico. As respostas de células T específicas do antígeno foram medidas em linfócitos de infiltração tumoral por coloração com tetrâmero e citometria de fluxo.

[00612] No Dia 0, os camundongos receptores foram injetados no flanco traseiro direito com células tumorais TC1 (50k células/camundongo). No Dia 10, as células T de camundongos doadores fêmeas C57BL/6J foram isoladas e carregadas usando SQZ com 20 µM E7 SLP precomplexado (GQAEPDRAHYNIVTFSSKSDSTLRLSVQSTHVDIR) + 20 µM de albumina de soro de camundongo (MSA). As células T carregadas com SQZ (células 5M/animal) foram administradas sozinhas (Grupo C), com CpG ODN 1826 (25 µg/camundongo - Grupo D), ou IFN-α (10k IU/camundongo - Grupo E) e foram injetadas por via intravenosa em volume total de 100 µL. Os camundongos também foram injetados com CpG sistêmico (25 μg - Grupo A) ou IFN-α isolado (10k UI - Grupo B). No Dia 17, os tumores foram colhidos e células T infiltrantes de tumor CD8+ foram isoladas e a reatividade específica de E7 foi avaliada por coloração com tetrâmero. Um esquema representativo dos grupos de tratamento e cronograma é descrito na Fig. 13.

[00613] A porcentagem de células T CD8+ específicas para E7 foi medida em camundongos por coloração com tetrâmero E7 7 dias após a iniciação (Dia 17) e um exemplo representativo da porcentagem de células T específicas para E7 fora das células CD8+ é mostrado no painel inferior de Fig. 13. Embora a injeção de adjuvantes por si só não gerasse uma quantidade apreciável de células T específicas para E7, a distribuição SQZ de uma SLP E7 proporcionou um aumento de 40% nas células T específicas para E7 e as células T distribuídas E7 em combinação com

CpG e IFN-α levou a percentagens ainda mais altas de células T específicas do antígeno (70 e 80%, respectivamente). Estes dados mostram que uma resposta de célula T específica de E7 mais robusta é gerada quando células T carregadas com E7 SLP são administradas em combinação com adjuvantes sistêmicos, tal como CpG ou IFN-α. Exemplo 14.

[00614] A fim de determinar um cronograma de vacinação tanto para iniciação quanto para reforço de TAPCs carregados com um peptídeo sintético longo E7 (SLP) + CpG, usamos um modelo de tumor murino TC-1 terapêutico tratado com nossa vacina TAPC em diferentes pontos de tempo e com número diferencial de reforços. O efeito antitumoral foi medido pela inibição do crescimento tumoral.

[00615] No Dia 0, os camundongos receptores foram injetados no flanco traseiro direito com células tumorais TC1 (células 50k/camundongo) e o crescimento do tumor TC-1 foi medido duas vezes por semana começando no Dia 11 e comparado ao crescimento tumoral em camundongos não tratados. Nos dias 3 ou 6, as células T de camundongos doadores fêmeas C57BL/6J foram isoladas e carregadas usando SQZ com albumina de soro de camundongo 20 µM precomplexada (MSA) + 20 µM E7 SLP (GQAEPDRAHYNIVTFSSKSDSTLRLSVQSTHVDIR) + 200 µg/mL CpG ODN 1826 de acordo com à Tabela XX, seguida por injeção intravenosa de camundongos receptores com 100 µL de células T carregadas (células 5M/animal). Um esquema representativo dos grupos de tratamento e cronograma é descrito na Fig. 14A.

[00616] A inibição do crescimento do tumor ocorreu em todos os grupos com células T SQZ’d com E7 + CpG, com significância estatística em relação ao não tratado ocorrendo no Dia 20 (Dia 20 - Todos os grupos P<0,05; Dia 24 - Todos os grupos P<0,0001). Estes dados mostram que o cronograma de dosagem com a vacina TAPC pode funcionar igualmente bem ao iniciar no Dia 6 vs. Dia 3 e não houve nenhum benefício discernível para adicionar um segundo reforço no Dia 21. Exemplo 15.

[00617] A fim de compreender melhor o mecanismo de apresentação do antígeno por células T que tiveram a entrega de antígeno intracelular por SQZ, Ova foi entregue a ou incubado na ausência de SQZ com células T de tipo selvagem injetadas em um camundongo de tipo selvagem ou em camundongos knockout de MHC-I. Os baços foram colhidos e a quantidade de proliferação de células T específicas de Ova (OT-I) foi quantificada por coloração CFSE.

[00618] No Dia 0, as células T de camundongos doadores OT-I fêmeas foram isoladas e marcadas com CFSE 2 µM e células 2,5 M foram injetadas retro-orbitalmente (RO) em 100 µL de PBS em camundongos de tipo selvagem ou nocaute MHC-I. Também no Dia 0, 400 μg/mL Ova foi carregado ou incubado com células T isoladas de camundongos doadores CD45.1 (4 camundongos/grupo) e células T 5M foram injetadas com RO. No Dia 3, os baços foram colhidos e o nível de proliferação de células T específicas de Ova (OT-I) foi avaliada por coloração CFSE.

[00619] A quantidade de proliferação de células T específicas de Ova foi avaliada por marcação CFSE de células T CD8+ OT-I responsivas a Ova. Para determinar o mecanismo de apresentação de TAPCs carregados com antígeno, camundongos deficientes em MHC-I foram usados como camundongos receptores. Isso impediria a apresentação de antígenos de Ova por APCs endógenos murinos devido à absorção indireta de antígeno por células T SQZadas morrendo e apresentação cruzada em MHC-I para células OT-I transferidas de forma adotiva. Foi descoberto que quando os camundongos receptores carecem de MHC-I, a proliferação de células OT-I específicas de Ova ainda ocorria, provendo evidências de que TAPCs SQZadas estão apresentando antígeno diretamente (Figura 15). Estes dados suportam a apresentação direta do antígeno entregue de modo intracelular mediado por SQZ. Exemplo 16.

[00620] A fim de avaliar a propensão de SQZ para alterar a produção de citocinas, as células T foram SQZ entregues com CpG e avaliadas quanto à capacidade de alterar os níveis de citocinas de células T em um modelo murino in vitro. Os níveis de citocinas no sobrenadante foram traçados usando um kit multiplex de citocinas.

[00621] Camundongos receptores fêmeas C57BL/6J foram iniciados com células T de camundongos doadores fêmeas C57BL/6J foram isolados e SQZ’d com 200 µg/mL de CpG e os sobrenadantes foram coletados após 24h (N = 2). O sobrenadante foi avaliado quanto aos níveis de citocina pelo kit de citocinas multiplex Millipore Milliplex e expresso como uma diferença de modulação em relação às células T não tratadas.

[00622] Não houve mudanças significativas entre os níveis de citocinas no sobrenadante de células T carregadas com CpG via SQZ em relação às células não tratadas (Figura 16). A Figura 16 mostra que a entrega SQZ de um adjuvante não altera significativamente os níveis de citocinas de células T in vitro. Exemplo 17.

[00623] A fim de avaliar a propensão de SQZ para alterar a produção de citocinas, as células T foram SQZ entregues com tanto Ova quando Ova+CpG foram avaliadas quanto à capacidade de alterar os níveis de citocinas séricos em um modelo murino in vivo. As citocinas séricas foram traçadas usando um kit multiplex de citocinas.

[00624] Os camundongos receptores fêmeas C57BL/6J foram iniciados com células T de camundongos doadores fêmeas C57BL/6J foram isolados e SQZadas com 400 μg/mL de Ova ou Ova + 200 μg/mL de CpG e sangue foi retirado da veia da cauda às 6h e por punção cardíaca às 24h pós-iniciação. O soro foi avaliado quanto aos níveis de citocina pelo kit de citocinas multiplex Millipore Milliplex e expresso como uma diferença de modulação vs. células T não tratadas.

[00625] Não houve mudanças significativas entre os níveis de citocinas no soro de camundongos iniciados com células T carregadas com Ova ou Ova+CpG via SQZ (Figura 17). Adicionalmente, não foram observadas diferenças significativas entre 6h e 24h pós-iniciação. Estes dados mostram que a entrega SQZ de antígeno +/- adjuvante não altera significativamente os níveis de citocinas séricas in vivo. Exemplo 18.

[00626] A fim de determinar a capacidade das células dendríticas derivadas de monócitos humanos primários (MoDCs) de induzir uma resposta imune específica do HPV E7 em células T respondedoras de E7 usando lisado de células tumorais (TCL) como uma fonte de antígeno em um modelo humano in vitro, MoDCs humanos foram carregados com lisado de células tumorais CaSki e a expressão percentual4-1BB foi medida por citometria de fluxo.

[00627] Monócitos humanos foram isolados das PBMCs de doadores HLA-A02 + e MoDCs imaturos foram gerados pela adição de rhIL- 4 (1000 U/mL) e rhGM-CSF (800 U/mL) ao longo de 4-6 dias, reabastecendo a citocina contendo mídia após 3 dias. A linha de células de câncer cervical CaSki foi usada como uma fonte de antígeno e TCL de células CaSki (23 mg/mL) foi entregue de maneira intracelular a MoDCs (1 × 106 células/mL) por SQZ ou CaSki TCL é incubado com os MoDCs em a ausência de SQZing (Endo). Adicionalmente, um controle pulsado de peptídeo, em que MoDCs foram incubados na presença de epítopo E7 reativo conhecido (YMLDLQPETT - 0,1 µM - Ctrl Positivo) foi empregado. Todas as condições foram cultivadas por 1h com LPS (60 EU/mL) e rhIFN-γ (20000 IU/mL) para ativar os MoDCs, seguido por 16-24h de incubação em 60 EU/mL contendo meio LPS (sem IFN-γ). MoDCs foram então cocultivados por 16-24h com células T reativas a E7 (Astarte) em uma proporção de estimulador:respondedor de 3:1. Após a cocultura, a% de expressão de 4-1BB em células T CD8+ reativas a E7 foi medida por citometria de fluxo.

[00628] O lisado de CaSki, derivado de uma linha celular de câncer cervical HPV-positiva conhecida por expressar altamente o antígeno HPV E7, quando entregue de maneira intracelular usando SQZ, levou a um aumento de 20% na porcentagem de células T CD8+ reativas a E7 que expressam 4-1BB, a marcador de ativação específica do antígeno, quando comparado ao controle Endo não tratado e correspondente (#P<0,0001). Estas descobertas mostram a capacidade do TCL intracelular por SQZ de induzir uma resposta imune específica do antígeno ao antígeno E7 do HPV em MoDCs humanos primários, provendo suporte para o uso de TCL como uma fonte de antígeno complexa para indicação adicional em que os antígenos oncogênicos podem ser desconhecidos. Exemplo 19.

[00629] A fim de determinar a resposta endógena às células apresentadoras de antígeno (APCs) que foram carregadas com antígeno por SQZ, as células B foram carregadas por SQZ e os níveis de citocinas inflamatórias foram medidos por coloração intracelular de citocinas (ICS).

[00630] Células B murinas (BAPC) de camundongos C56BL/6J foram isoladas e carregadas com SQZ com 400 µg/mL de proteína Ova ou com 20 µM de peptídeo HPV 16 E7, então injetadas em camundongos doadores junto com 1 µM de CpG1826 (5 camundongos/grupo). No Dia 7, os esplenócitos foram colhidos de camundongos não tratados, bem como de camundongos tratados com BAPCs carregados com SQZ, desafiados novamente com o peptídeo Ins B9-23 e, subsequentemente, a coloração de citocina intracelular (ICS) foi conduzida para IFN-γ e medida por citometria de fluxo (Fig. 19A).

[00631] Para ambos os modelos de antígeno Ova (Fig. 19B) e HPV E7 relevante para a doença (Fig. 19C), os resultados mostraram que os esplenócitos de camundongos tratados com BAPC carregado com SQZ exibiram aumentos estatisticamente significativos na produção de IFN-γ quando -estimulado com Ova ou HPV E7 respectivamente (P<0,005, ambos), em comparação com os esplenócitos colhidos de camundongos não tratados. Tomados em conjunto, esses dados mostram que as células B podem ser projetadas para induzir respostas específicas do antígeno a vários antígenos in vivo. Exemplo 20.

[00632] A fim de determinar a capacidade das células B carregadas com SQZ para atuar como células apresentadoras de antígeno (BAPCs) para o tratamento profilático de tumores, os camundongos foram tratados com BAPC carregadas com SQZ com antígenos, seguido por injeção com células tumorais TC-1. A inibição do crescimento do tumor foi medida para avaliar a eficácia da vacina profilática in vivo.

[00633] Para testar a capacidade de uma vacina profilática de células B à base de antígeno do HPV, isto é, BAPC SQZ carregada com antígenos do HPV, para controlar o crescimento do tumor TC-1, uma SLP E7 foi entregue SQZ em células B e injetada em camundongos antes da implantação do tumor. Especificamente, no Dia -7, células B murinas (BAPC) de C56BL/6J camundongos foram isolados e SQZ-carregados com o peptídeo do HPV 16 E7, então injetados em camundongos doadores juntamente com 1 µM CpG1826 (10 camundongos/grupo). No Dia 0, as células tumorais TC-1 foram implantadas (células 1E6/mL em 100 µL) por via subcutânea no flanco traseiro de cada camundongo. TC-1 é uma linha celular tumoral conhecida por expressar os antígenos do HPV E6 e E7. Os volumes de tumores foram medidos ao longo do tempo e os camundongos foram sacrificados no Dia 48 ou quando seus tumores atingiram >1500 mm3, o que ocorrer primeiro.

[00634] O crescimento do tumor foi drasticamente inibido nos camundongos que receberam BAPC carregado com E7, com 8 de 10 camundongos no grupo de tratamento permanecendo sem tumor (TF) ao longo da duração do estudo, em comparação com 0 de 10 camundongos no grupo de controle (Fig. 20A). A vacina BAPC também levou a melhorias estatisticamente significativas (P <0,0001) na sobrevivência de camundongos imunizados com BAPCem relação ao controle, com a sobrevida média para o grupo de tratamento sendo >60 dias, em comparação com 32 dias para o grupo de controle (Fig. 20B) Tomados em conjunto, estes dados mostram que as células B carregadas com antígeno via SQZ podem atuar como uma vacina baseada em APC potente para um tratamento profilático específico de antígeno de tumores. Exemplo 21.

[00635] A fim de determinar a capacidade das células B carregadas com SQZ de atuarem como células apresentadoras de antígeno (BAPCs) para o tratamento terapêutico de tumores, camundongos foram implantados com células tumorais TC-1, seguido por imunização terapêutica com BAPCs carregado com antígenos. A inibição do crescimento do tumor foi medida para avaliar a eficácia da vacina terapêutica in vivo.

[00636] Para testar a capacidade de uma vacina de células B à base de antígeno do HPV terapêutica, ou seja, BAPC SQZ carregada com antígenos do HPV, para controlar o crescimento do tumor TC-1, uma SLP E7 foi entregue SQZ em células B e injetada em camundongos após a implantação do tumor. Especificamente, no Dia 0, as células tumorais TC-1 (50k células/camundongo) foram injetadas por via subcutânea no flanco direito de camundongos C56BL/6J (10 camundongos/grupo). TC-1 é uma linha celular tumoral conhecida por expressar os antígenos do HPV E6 e E7. No Dia 9, os camundongos foram deixados sem tratamento ou iniciados com células 1M/camundongo de células B murinas (BAPCs) carregadas com SQZ com E7 SLP. Os volumes de tumores foram medidos ao longo do tempo e os camundongos foram sacrificados no Dia 48 ou quando seus tumores atingiram >1500 mm3, o que ocorrer primeiro.

[00637] O crescimento de tumor foi drasticamente inibido nos camundongos que receberam BAPC carregado com E7, com o volume médio do tumor remanescente <500 mm3 durante o estudo (Figura 21A). A sobrevivência de camundongos tratados com BAPC carregado com E7 também aumentou significativamente (P <0,0001), com a sobrevida média para o grupo de tratamento sendo> 60 dias, em comparação com 38 dias para o grupo de controle. Tomados em conjunto, estes dados mostram que as células B carregadas com antígeno via SQZ podem atuar como uma vacina baseada em APC potente para um tratamento terapêutico de tumores específico do antígeno. Exemplo 22.

[00638] A fim de determinar a capacidade das células B carregadas com SQZ para promover o recrutamento de linfócitos infiltrantes de tumor (TIL) para tumores, camundongos portadores de tumor foram tratados com APCs de células B carregadas (iniciação e reforço), e a inibição do crescimento tumoral foi medida além de análisado de tumores para números e porcentagens relativas de células T específicas do antígeno por citometria de fluxo.

[00639] No Dia 0, as células tumorais TC-1 (50k células/camundongo) foram injetadas por via subcutânea no flanco direito de camundongos C56BL/6J (20 camundongos/grupo). No Dia 14, os camundongos foram iniciados com (i) 150 µg/camundongo de E7 SLP + 50 µg de CpG1826 injetados por via subcutânea (SC SLP), (ii) células B murinas pulsadas com 1 µg/mL de epítopo mínimo E7 + 1 µM CpG (Min. Epi.) Injetado retro-orbitalmente, ou (iii) células B carregadas (SQZ) com E7 SLP (20 µM) + 1 µM de CpG (células 5M/camundongo) injetados retro- orbitalmente. Os volumes de tumor foram medidos ao longo do tempo até atingir >1500 mm3 ou no Dia 34, o que ocorrer primeiro. No Dia 27, um subconjunto de animais (5 camundongos/grupo) foi sacrificado, onde os tumores foram ressecados e as células T isoladas e analisadas por citometria de fluxo.

[00640] No cenário de tratamento terapêutico, conforme descrito, apenas os tratamentos SC SLP e SQZ levaram a uma inibição apreciável do crescimento do tumor, com apenas o tratamento SQZ levando à regressão do tumor em relação ao volume máximo observado no Dia 19 (Fig. 22A). A análisado do recrutamento de TIL para o tumor, bem como o fenótipo relativo dessas células T, mostrou que a vacina de células B carregada com SQZ (SQZ) resultou em aumento significativo na porcentagem de células T infiltrantes no tumor, bem como uma maior número de células normalizadas para 100 mg de peso do tumor. Além do número total de células T infiltrantes, foi observado que tanto as células T CD8+ quanto as células T CD8+ específicas para E7 no tratamento SQZ aumentaram mais significativamente como uma porcentagem de células CD45+, em comparação com S.C. SLP e Min. EP., e esta tendência também foi observada quando normalizada para o peso do tumor (Fig. 22B). Todas as comparações entre SQZ e todos os outros grupos de tratamento foram estatisticamente significativas (P <0,001). Tomados em conjunto, estes dados suportam a descoberta de que a vacina BAPC carregada com SQZ leva à regressão do tumor devido à promoção da infiltração de células T no tumor, especificamente células T citotóxicas CD8+ específicas do antígeno. Exemplo 23.

[00641] A fim de determinar a resposta específica do antígeno in vitro para células apresentadoras de antígeno humano (APCs) que foram carregadas com antígeno por SQZ, as células B foram carregadas com SQZ e os níveis de secreção de citocinas inflamatórias induzidas foram medidos por ELISA.

[00642] Especificamente, as células B humanas foram isoladas de dadores HLA-A2 + e um HPV 16 E7 SLP (50 µM) foi incubado com células B (Endo), ou entregue a células B por SQZ (SQZ). As células Endo ou SQZ B (60k células/poço) foram então incubadas com células T respondedoras E7 (30k células/poço) em uma proporção de 2:1 e cocultivadas na presença de IL-2 (100 U/mL) e CpG 2006 (1 µM) durante 24 horas. Os sobrenadantes foram então colhidos e analisados quanto à secreção de IFN-γ por ELISA.

[00643] Os resultados mostram que as células B carregadas com SQZ podem atuar como células apresentadoras de antígeno (BAPC) para estimular uma resposta específica ao antígeno E7 do HPV in vitro. As células B APCs carregadas com antígeno estimularam as células respondedoras específicas de E7 a secretar IFN- γ em níveis significativamente mais elevados do que aquelas células que foram incubadas com antígeno (P <0,005). Exemplo 24.

[00644] A fim de avaliar a importância do adjuvante na capacidade de uma vacina carregada com SQZ de induzir linfócitos infiltrantes tumorais específicos do antígeno (TILs), as células foram carregadas com um antígeno modelo, maturadas com adjuvante e injetadas em camundongos portanto o tumor. A porcentagem relativa de células T específicas do antígeno recrutadas para o tumor foi medida por citometria de fluxo.

[00645] Os camundongos fêmeas C57BL/6J foram injetados no flanco traseiro direito com células tumorais TC1 (50k células/camundongos) no Dia 0. No Dia 15 (iniciação), as células T murinas foram obtidas de baços de camundongos doadores fêmeas C57BL/6J e foram carregadas com 5 μM E7 SLP pré-complexado (GQAEPDRAHYNIVTFSSKSDSTLRLSVQSTHVDIR) + 5 μM de albumina sérica de camundongo (MSA) via SQZ (40 psi, constrição de 3,5 μm, temperatura ambiente) e incubado por 1h a 37 °C. Camundongos receptores fêmeas C57BL/6J (10/grupo) foram injetados retro-orbitalmente no Dia 15 com 100 μL de veículo (PBS - Não tratado) ou células T carregadas com E7 (células 1M/camundongo) +/- CpG 1826 (25 μg/camundongo). No Dia 25, os tumores foram colhidos e a quantidade de TILs específicos para E7 foi medida por citometria de fluxo.

[00646] Os TAPCs carregados com SQZ isoladamente levaram a um pequeno (~15%), mas estatisticamente insignificante aumento no número de TILs específicos para E7, mas quando co-injetados com CpG, houve um aumento maior e significativo no número de TILs (~55 %, **P<0,01 em comparação com TAPC isolado; ***p<0,0005 em comparação com não tratado). Esses dados mostram que a co-injeção de CpG junto com o TAPC carregado com E7 leva a um recrutamento muito maior de TILs em comparação com o TAPC isolado. Exemplo 25.

[00647] A fim de avaliar a durabilidade da vacina adjuvante TAPC em um ambiente profilático, camundongos tratados com TAPC foram comparados a camundongos não tratados para o crescimento do tumor de um modelo de tumor TC1 expressando E7 do HPV, tanto para a resposta inicial, como também um nova contstação 60 dias depois, com a área dos tumores traçada contra o tempo.

[00648] No Dia -14, os esplenócitos foram colhidos de camundongos doadores fêmeas C57BL/6J e as células T foram isoladas por separação imunomagnética. Em seguida, as células T murinas foram carregadas com 20 µM E7 SLP precomplexado (GQAEPDRAHYNIVTFSSKSDSTLRLSVQSTHVDIR) + 20 µM de albumina de soro de camundongo (MSA) via SQZ (45 psi; 3,5 µm de constrição) e incubadas por 1 hora a 37 °C. Camundongos receptores fêmeas C57BL/6J (10 camundongos/grupo, exceto coorte 1 não tratado, que foi de 20 camundongos/grupo) foram injetados retro-orbitalmente com 100 μL de veículo (PBS - Não tratado) ou células T carregadas com E7 (células 1M/camundongo) + CpG 1826 (25 μg/camundongo) [Iniciação]. No Dia -7,

os baços foram colhidos de camundongos doadores fêmeas C57BL/6J e as células T foram isoladas e SQZ'd e injetadas em camundongos receptores exatamente como no Dia -14 [Reforço]. No Dia 0, camundongos C57BL/6J fêmeas foram injetados no flanco traseiro direito (exceto os 10 coortes 2 não tratados que não foram implantados com células tumorais até o Dia 64 com células tumorais TC1 (50k células/camundongo). O crescimento do tumor TC-1 foi medido começando 1 semana após a implantação do tumor duas vezes por semana e comparado com o crescimento do tumor em camundongos não tratados por até 120 dias.

[00649] O crescimento do tumor, conforme medido pela fórmula ((comprimento x largura2)/2), foi comparado entre os camundongos do grupo não tratado e o grupo tratado com TAPC contestados com células tumorais no Dia 0, e enquanto todos os camundongos atingiram o ponto final humano no grupo não tratado no Dia 47, houve atraso significativo no crescimento do tumor para o grupo TAPC em todos, exceto 2 dos camundongos TAPC, com o restante dos camundongos (8) permanecendo livres de tumor até serem novamente contestados com tumores. Notavelmente, quando os camundongos não tratados que foram implantados com tumores no Dia 64 e comparados com os camundongos tratados com TAPC que tiveram os tumores reimplantados em seu flanco oposto, ainda houve um atraso no crescimento do tumor, com 3 dos camundongos nunca crescendo tumores mensuráveis, mesmo após a inoculação tumoral secundária. Esses dados sugerem que o tratamento com TAPCs + adjuvante carregado com E7 pode não só levar à inibição do crescimento tumoral específico do antígeno, mas também à prevenção do tumor que pode até ser durável por > 100 dias, apesar de uma inoculação tumoral secundária. Exemplo 26.

[00650] A fim de avaliar o impacto de diferentes concentrações de TAPC, bem como cronogramas de iniciação-reforço em um ambiente de vacina terapêutica, camundongos tratados com TAPC (múltiplas concentrações e cronogramas de iniciação-reforço) foram comparados a camundongos não tratados para o crescimento do tumor de um modelo de tumor TC1 expressando E7 do HPV, com a área dos tumores traçada contra o tempo.

[00651] No Dia 0, os camundongos fêmeas C57BL/6J foram injetados no flanco traseiro direito com células tumorais TC1 (50k células/camundongos). No Dia 10 (iniciação), as células T murinas foram obtidas de baços de camundongos doadores fêmeas C57BL/6J por separação imunomagnética e foram carregadas com 20 μm de E7 SLP pré- complexado (GQAEPDRAHYNIVTFSSKSDSTLRLSVQSTHVDIR) + 20 μm de albumina do soro de camundongo (MSA) via SQZ (45 psi, constrição de 3,5 μm) e incubado por 1 hora a 37 ° C. Então, os camundongos receptores fêmeas C57BL/6J (10/grupo) foram injetados retro-orbitalmente com 100 pL de ou veículo (PBS) ou TAPCs (0,25 ou células 1M/camundongo) + CpG 1826 (25 μg/camundongo). No Dia 17, o grupo Iniciação/Reforço recebeu uma segunda injeção com TAPCs de maneira idêntica ao Dia 10. O crescimento do tumor TC-1 foi medido começando 1 semana após a implantação do tumor duas vezes por semana e comparado com o crescimento do tumor em camundongos não tratados por até 66 dias.

[00652] O crescimento do tumor, conforme medido pela fórmula ((comprimento x largura2)/2) e o grupo TAPC de baixa dose (células 0,25 M/camundongo) + CpG (apenas iniciação) só levou a um ligeiro atraso na taxa de crescimento do tumor em comparação com o não tratado. A inclusão de um reforço no Dia 17 com a dose baixa de TAPC + CpG (0,25M iniciação/reforço) viu um aumento da inibição do crescimento tumoral em relação à mesma concentração condição inicial apenas e inibição muito maior em relação ao não tratado. O aumento da dose de TAPCs carregados com antígeno para 1M/camundongo (apenas iniciação) levou a uma ligeira inibição do crescimento do tumor em relação à dose mais baixa de TAPC+

CpG (apenas iniciação). Notavelmente, o uso da dose elevada de TAPC+ CpG (apenas iniciação) levou à melhor proteção contra o crescimento do tumor, com a regressão do tumor ocorrendo entre os dias 20-40 e o nível mais alto de inibição do crescimento de qualquer um dos grupos observados. Tomados em conjunto, esses dados destacam que o aumento da dose celular, a inclusão de adjuvante ou os cronogramas de dosagem iniciação+reforço podem aumentar a eficácia de uma vacina TAPC. Exemplo 27.

[00653] A fim de comparar a eficácia de uma vacina de peptídeo de alta dose contra células B incubadas ou carregadas com SQZ com peptídeo, os camundongos foram tratados com o peptídeo E7, células B incubadas com E7 (células B pulsadas) ou APCs B carregadas com E7 após o desafio com o modelo de tumor de TC1 expressando HPV E7 em um ambiente terapêutico, com a área dos tumores e a sobrevida plotada ao longo do tempo

[00654] No Dia 0, os camundongos fêmeas C57BL/6J foram injetados no flanco traseiro direito com células tumorais TC1 (50k células/camundongos). No Dia 13 (iniciação), as células B foram obtidas a partir de baços de camundongos doadores fêmeas C57BL/6J por separação imunomagnética e incubadas (10 μg/mL) ou carregadas com 20 µM E7 SLP precomplexado (GQAEPDRAHYNIVTFSSKSDSTLRLSVQSTHVDIR) + 20 µM de albumina de soro de camundongo (MSA) via SQZ (60 psi; 4 μm de constrição, temperatura ambiente) e incubado com CpG 1826 (1 μM) por 16 horas. No Dia 14, camundongos receptores fêmeas C57BL/6J (10/grupo) foram injetados retro-orbitalmente com 100 μL de qualquer veículo (PBS), B APCs incubados com E7 (5M células/camundongo), B APCs carregados com E7 (5M células/camundongo) ou injetados por via subcutânea no flanco traseiro esquerdo com E7 SLP (450 μg/camundongo) + CpG (50 μg/camondongo). No Dia 28, os camundongos apenas com peptídeo receberam um reforço com peptídeo subcutâneo de maneira idêntica ao Dia 14 (reforço). O crescimento e a sobrevivência do tumor TC-1 foram medidos começando 1 semana após a implantação do tumor duas vezes por semana e comparado com o crescimento do tumor em camundongos não tratados por até 80 dias.

[00655] O crescimento do tumor, conforme medido pela fórmula ((comprimento x largura2)/2), não foi afetado pelo tratamento com B APCs pulsadas com peptídeo em comparação com camundongos não tratados (Fig. 27A). Curiosamente, os camundongos tratados com B APC carregados com SQZ exibiram forte inibição do crescimento do tumor em comparação com células B não tratadas e pulsadas com peptídeo. Este efeito foi semelhante ao efeito da vacina de peptídeo (SC SLP), apesar do fato de que a quantidade de peptídeo entregue aos camundongos é muito maior do que as APCs B carregadas, e que o grupo de vacina de peptídeo recebeu e inicial e um reforço de a vacina de peptídeo, enquanto o grupo SQZ B APC recebeu apenas uma única dose inicial. As tendências observadas com o crescimento do tumor estão correlacionadas com a sobrevida geral, com os grupos de células B não tratadas e pulsadas com peptídeo tendo sobrevida média equivalente (~ 36 dias - direita). Tanto a vacina de peptídeo de alta dose quanto as APCs B carregadas com E7 tiveram quase o dobro da sobrevida média em relação aos dois outros grupos (60 [peptídeo] vs. 65,5 dias [APCs SQZ B]) (Fig. 27B). Esses dados mostram que B APCs carregados por SQZ podem induzir a regressão do tumor em um modelo terapêutico de câncer associado ao HPV e que é tão ou mais eficaz do que uma dose muito mais alta de uma vacina de peptídeo clássica. Exemplo 28.

[00656] A fim de determinar a resposta endógena para células apresentadoras de antígeno (APCs) que foram carregadas com antígeno por SQZ, esplendócitos engendrados foram carregadas com SQZ e os níveis de citocinas inflamatórias foram medidos por coloração de citocina intracelular (ICS).

[00657] Esplenócitos murinos (Spleno APC) de camundongos C56BL/6J foram isolados e SQZ'd com 400 µg/mL de proteína de Ova (Fig. 28B) ou peptídeo de E7 do HPV 16 (20 µM - Fig. 28C), então injetados em camundongos doadores juntamente com CpG1826 1 µM (5 camundongos/grupo). No Dia 7, os esplenócitos foram colhidos, re- desafiados com Ins B9-23 e a coloração de citocina intracelular (ICS) foi conduzida para IFN-γ e IL-2 por citometria de fluxo e comparada com camundongos não tratados.

[00658] Tanto para o antígeno modelo Ova (Fig. 28B) quanto para o HPV E7 relevante para a doença (Fig. 28C), verificou-se que os camundongos tratados com Spleno APC exibiram aumentos estatisticamente significativos em IFN-γ e IL-2 quando reestimulados com ou Ova ou E7 (P <0,005 para todas as condições APC em comparação com suas respectivas condições não tratadas). Tomados em conjunto, esses dados mostram que esplenócitos mistos podem ser projetados para induzir respostas específicas do antígeno a múltiplos antígenos in vivo. Exemplo 29.

[00659] A fim de determinar a capacidade de células B carregadas com SQZ ou esplenócitos mistos para atuar como células apresentadoras de antígeno (APCs) para o tratamento terapêutico de tumores, os camundongos foram tratados com APCs de esplenócitos carregados, seguido por injeção com células tumorais TC-1. A inibição do crescimento do tumor foi medida para avaliar a eficácia da vacina in vivo.

[00660] No Dia 0, as células tumorais TC-1 (50k células/camundongo) foram injetadas por via subcutânea no flanco direito de camundongos C56BL/6J (10 camundongos/grupo). No Dia 9, os camundongos foram iniciados com 1M células/camundongo de esplenócitos (FIG. 28, SplenoAPC), os volumes de tumor foram medidos ao longo do tempo e os camundongos foram sacrificados no Dia 48 ou quando seus tumores atingiram> 1500 mm3, o que vier primeiro.

[00661] A capacidade de uma vacina terapêutica de esplenócito baseada em antígeno do HPV para controlar o crescimento de tumor TC-1, uma linha conhecida por expressar os antígenos do HPV E6 e E7, foi testada carregando um SLP E7 em células B ou esplenócitos 9 dias após a implantação do tumor. O crescimento do tumor foi drasticamente inibido em ambos os camundongos tratados com SplenoAPC, com o volume médio do tumor remanescente <500 mm3 durante o estudo (Fig. 29A). A sobrevivência dos camundongos tratados com qualquer APC também foi significativamente aumentada (P <0,0001), com nenhum dos camundongos tratados com SplenoAPCatingindo o ponto final humano antes do final do estudo (Fig. 29B). Tomados em conjunto, estes dados mostram que os esplenócitos carregados com o antígeno via SQZ podem atuar como uma vacina baseada em APC potente para o tratamento específico do antígeno de tumores. Exemplo 30.

[00662] A fim de determinar a resposta específica do antígeno in vitro para células apresentadoras de antígeno humano (APCs) que foram carregadas com antígeno por SQZ, células B ou PBMCs foram carregadas com SQZ e os níveis de citocinas inflamatórias foram medidos por coloração de citocina intracelular (ICS).

[00663] Os PBMCs humanos foram isolados a partir de doadores HLA-A2+ e um HPV 16 E7 SLP (50 µM) foi incubado com PBMCs (Endo) ou liberado por SQZ (SQZ). As PBMCs carregadas (60k células/poço) foram então co-cultivadas com células T respondedoras Astarte E7 (30k células/poço) em uma proporção de 2: 1 e cultivadas na presença de IL-2 (100 U/mL) e CpG 2006 (1 µM) por 24h. Os sobrenadantes foram então colhidos e analisados para IFN-γ por ELISA.

[00664] Os PBMCs foram testados como APCs para estimular uma resposta específica do antígeno E7 do HPV in vitro. Os PBMC APCs que foram carregados com antígeno estimularam as células respondedoras específicas de E7 para secretar IFN-γ em níveis muito mais elevados do que aquelas células que foram incubadas com antígeno (P <0,005).

[00665] Tomados em conjunto, esses dados mostram que PBMCs humanos podem atuar como APCs eficientes para estimular respostas específicas de antígenos relevantes para doenças in vitro.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Método para tratar uma doença associada ao papilomavírus humano (HPV) em um indivíduo, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV e um adjuvante, em que o adjuvante é apresentado de maneira intracelular.

2. Método para prevenir uma doença associada ao HPV em um indivíduo, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV e um adjuvante, em que o adjuvante é apresentado de maneira intracelular.

3. Método para modular uma resposta imune em um indivíduo com uma doença associada ao HPV, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV e um adjuvante, em que o adjuvante é apresentado de maneira intracelular.

4. Método para tratar uma doença associada ao HPV em um indivíduo, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV e um adjuvante, em que o adjuvante é apresentado de maneira intracelular; em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para que o antígeno e o adjuvante passem para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV e o adjuvante por tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV e o adjuvante entrem na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas.

5. Método para prevenir uma doença associada ao HPV em um indivíduo, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV e um adjuvante, em que o adjuvante é apresentado de maneira intracelular. em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para que o antígeno e o adjuvante passem para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV e o adjuvante por tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV e o adjuvante entrem na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas.

6. Método para modular uma resposta imune em um indivíduo com doença associada ao HPV, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV e um adjuvante, em que o adjuvante é apresentado de maneira intracelular. em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada compreendendo um antígeno do HPV através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para que o antígeno do HPV e o adjuvante passem para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno e o adjuvante por tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV e o adjuvante entrem na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas.

7. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 4 a 6, caracterizado pelo fato de que o diâmetro da constrição é menor que o diâmetro da célula.

8. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 4 a 7, caracterizado pelo fato de que o diâmetro da constrição é cerca de 20% a 99% do diâmetro da célula.

9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 4 a 8, caracterizado pelo fato de que o diâmetro da constrição é cerca de 20% até menos de cerca de 60% do diâmetro da célula.

10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 4 a 9, caracterizado pelo fato de que a constrição está em um canal.

11. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 4 a 10, caracterizado pelo fato de que uma força de deformação é aplicada à célula de entrada à medida que passa pela constrição.

12. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 11, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV e/ou o adjuvante estão presentes no citosol e/ou em endossomos.

13. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 12, caracterizado pelo fato de que o antígeno e/ou adjuvante estão presentes em compartimentos múltiplos da célula.

14. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 13, caracterizado pelo fato de que a célula imune modificada compreende adicionalmente um antígeno do HPV e/ou um adjuvante no exterior da célula.

15. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 14, caracterizado pelo fato de que a concentração de adjuvante incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 mM.

16. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 15, caracterizado pelo fato de que a concentração de antígeno do HPV incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 mM.

17. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 4 a 16, caracterizado pelo fato de que a proporção de antígeno do HPV para adjuvante incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 10000:1 e cerca de 1:10000.

18. Método, de acordo com a reivindicação 3 ou 6, caracterizado pelo fato de que a resposta imune é aprimorada.

19. Método, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que a resposta imune ao antígeno do HPV é aprimorada.

20. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 19, caracterizado pelo fato de que o adjuvante é CpG ODN, IFN-α, Agonistas STING, Agonistas RIG-I ou poli I:C.

21. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que em que o adjuvante é CpG ODN.

22. Método, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de que o CpG ODN é CpG ODN 1018, CpG ODN 1826 ou CpG ODN

2006.

23. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 22, caracterizado pelo fato de que a célula imune modificada compreende mais de um adjuvante.

24. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 23, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é um pool de polipeptídeos múltiplos que provocam uma resposta contra os mesmos e ou diferentes antígenos do HPV.

25. Método, de acordo com a reivindicação 24, caracterizado pelo fato de que um antígeno no pool de antígenos múltiplos não diminui a resposta imune direcionada para outros antígenos no pool de antígenos múltiplos.

26. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 25, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é um polipeptídeo compreendendo um epítopo do HPV antigênico e uma ou mais sequências de peptídeos heterólogos.

27. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 26, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV se complexa consigo mesmo, com outros antígenos ou com o adjuvante.

28. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 27, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é derivado a partir de um lisado celular.

29. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 28, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é um HPV-16 ou um antígeno do HPV-18.

30. Método, de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é composto por um epítopo específico de HLA-A2.

31. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 30, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é um antígeno do HPV E6 ou um antígeno do HPV E7.

32. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 31, caracterizado pelo fato de que a célula imune modificada compreende um antígeno do HPV E6 e um antígeno do HPV E7.

33. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 32, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é um polipeptídeo compreendendo um epítopo antigênico que é flanqueado no N-terminal e/ou no C-terminal por uma ou mais sequências de peptídeos heterólogos.

34. Método, de acordo com a reivindicação 33, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 26.

35. Método, de acordo com a reivindicação 34, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com a SEQ ID Nº: 23.

36. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 35, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é capaz de ser transformado em um peptídeo MHC de classe I-restrito.

37. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 36, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é capaz de ser transformado em um peptídeo MHC de classe II-restrito.

38. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 37, caracterizado pelo fato de que a célula imune modificada compreende o adjuvante a uma concentração entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 mM.

39. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 38, caracterizado pelo fato de que a célula imune modificada compreende o antígeno do HPV a uma concentração entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 mM.

40. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 39, caracterizado pelo fato de que a proporção de antígeno do HPV para o adjuvante está entre cerca de 10000:1 a cerca de 1:10000.

41. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 40, caracterizado pelo fato de que a célula imune modificada compreende adicionalmente um agente que aprimora a viabilidade e/ou função da célula imune modificada em comparação com uma célula imune modificada correspondente que não compreende o agente.

42. Método, de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo fato de que o agente é um composto que aumenta a endocitose, um agente estabilizador ou um cofator.

43. Método, de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo fato de que o agente é albumina.

44. Método, de acordo com a reivindicação 43, caracterizado pelo fato de que a albumina é albumina de camundongo, bovina ou humana.

45. Método, de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo fato de que o agente é um cátion de metal divalente, glicose, ATP, potássio, glicerol, trealose, D-sacarose, PEG1500, L-arginina, L-glutamina ou EDTA.

46. Método, de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo fato de que o agente compreende albumina do soro de camundongo (MSA).

47. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 46, caracterizado pelo fato de que as células imunes modificadas são adicionalmente modificadas para aumentar expressão de uma ou mais moléculas coestimulantes.

48. Método, de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo fato de que a molécula coestimulante é B7-H2, B7-1, B7-2, CD70, LIGHT, HVEM, CD40, 4-1BBL, OX40L, TL1A, GITRL, CD30L, TIM4, SLAM, CD48, CD58, CD155 ou CD112.

49. Método, de acordo com a reivindicação 47 ou 48, caracterizado pelo fato de que a célula compreende um ácido nucleico que resulta em expressão aumentada de uma ou mais moléculas coestimulantes.

50. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 49, caracterizado pelo fato de que a célula imune é uma célula T, uma célula dendrítica, um monócito, um macrófago, uma célula mieloide, um granulócito, um neutrófilo, uma célula mastro, uma célula exterminadora natural, uma célula linfoide inata, um basófilo ou uma célula precursora hematopoética.

51. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 50, caracterizado pelo fato de que a célula imune não é uma célula B.

52. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 50, caracterizado pelo fato de que a célula imune é uma célula B.

53. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 51, caracterizado pelo fato de que a célula imune é uma célula T.

54. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 49, caracterizado pelo fato de que as células imunes são uma população de células mistas.

55. Método, de acordo com a reivindicação 54, caracterizado pelo fato de que as células imunes são uma pluralidade de PBMCs.

56. Método, de acordo com a reivindicação 53, caracterizado pelo fato de que a célula T compreende uma modificação adicional para modular expressão MHC de classe I.

57. Método, de acordo com a reivindicação 53, caracterizado pelo fato de que a célula T compreende uma modificação adicional para modular expressão MHC de classe II.

58. Método, de acordo com a reivindicação 56 ou 57, caracterizado pelo fato de que a célula T compreende uma modificação adicional para reduzir expressão MHC de classe I e/ou expressão MHC de classe II.

59. Método, de acordo com a reivindicação 56 ou 57, caracterizado pelo fato de que a modificação adicional compreende redução da expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II usando siRNA, shRNA, CRISPR/Cas9, ZFN, TALEN, recombinase Cre ou uma meganuclease.

60. Método, de acordo com a reivindicação 56 ou 57, caracterizado pelo fato de que a célula T compreende uma modificação adicional para aumentar expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II.

61. Método, de acordo com a reivindicação 56 ou 57, caracterizado pelo fato de que a modificação adicional compreende aumentar expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II usando RNA ou DNA plasmídico.

62. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 e de 56 a 59, caracterizado pelo fato de que uma resposta imune inata montada em um indivíduo em resposta à administração, em um contexto alogênico, das células T modificadas adicionalmente é reduzida em comparação com uma resposta imune inata montada em um indivíduo em resposta à administração, em um contexto alogênico, de células T modificadas correspondentes que não compreendem a modificação adicional.

63. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 e de 56 a 59, caracterizado pelo fato de que a meia-vida circulante das células T modificadas adicionalmente em um indivíduo ao qual foram administradas é modulada em comparação com a meia-vida circulante de células T modificadas correspondentes que não compreendem a modificação adicional em um indivíduo ao qual foram administradas.

64. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 e de 56 a 63, caracterizado pelo fato de que a célula T inclui uma ou mais dentre células T auxiliares, células T citotóxicas, células T de memória, células CIK e células T exterminadoras naturais.

65. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 e de 56 a 63, caracterizado pelo fato de que a célula T inclui uma ou mais dentre células T CD3+, células T CD4+, células T CD8+, células T CD45RA+, células T CD45RO+ e células T γδ.

66. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 65, caracterizado pelo fato de que a célula modificada é alogênica ao indivíduo.

67. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 65, caracterizado pelo fato de que a célula modificada é autóloga ao indivíduo.

68. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 67, caracterizado pelo fato de que o indivíduo está pré-condicionado a ter inflamação modulada e/ou uma resposta imune modulada.

69. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 68, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente administrar ao indivíduo um adjuvante.

70. Método, de acordo com a reivindicação 69, caracterizado pelo fato de que o adjuvante é IFNα ou CpG ODN.

71. Método, de acordo com a reivindicação 69 ou 70, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas e o adjuvante são administrados simultaneamente.

72. Método, de acordo com a reivindicação 69 ou 70, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas e o adjuvante são administrados sequencialmente.

73. Método, de acordo com a reivindicação 72, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada antes de administrar o adjuvante.

74. Método, de acordo com a reivindicação 72, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada seguindo administração do adjuvante.

75. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 74, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada em combinação com administração de um inibidor de ponto de verificação imune.

76. Método, de acordo com a reivindicação 75, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas e o inibidor de ponto de verificação imune são administrados simultaneamente.

77. Método, de acordo com a reivindicação 75, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas e o inibidor de ponto de verificação imune são administrados sequencialmente.

78. Método, de acordo com a reivindicação 77, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada antes da administração do inibidor de ponto de verificação imune.

79. Método, de acordo com a reivindicação 77, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada seguindo a administração do inibidor de ponto de verificação imune.

80. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 79, caracterizado pelo fato de que o inibidor de ponto de verificação imune é direcionado a um ou mais dentre PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG3, TIM-3, TIGIT, VISTA, TIM1, B7-H4 (VTCN1) ou BTLA.

81. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 80, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada em combinação com a administração de uma quimioterapia.

82. Método, de acordo com a reivindicação 81, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas e a quimioterapia são administradas simultaneamente.

83. Método, de acordo com a reivindicação 81, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas e a quimioterapia é administrada sequencialmente.

84. Método, de acordo com a reivindicação 83, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada antes de administrar a quimioterapia.

85. Método, de acordo com a reivindicação 83, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada após administração da quimioterapia.

86. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 81 a 85, caracterizado pelo fato de que a quimioterapia compreende um agente baseado em platina.

87. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 81 a 86, caracterizado pelo fato de que a quimioterapia compreende cisplatina.

88. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 87, caracterizado pelo fato de que administração da composição compreendendo as células imunes modificadas ao indivíduo resulta na ativação e/ou expansão de linfócitos T citotóxicos (CTLs) específicos para o antígeno do HPV.

89. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 87, caracterizado pelo fato de que administração da composição compreendendo as células imunes modificadas ao indivíduo resulta em ativação e/ou expansão de células T auxiliares (Th) específicas para o antígeno.

90. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 89, caracterizado pelo fato de que a quantidade eficaz da composição compreende entre cerca de 1 × 106 e cerca de 1 × 1012 células imunes modificadas.

91. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 90, caracterizado pelo fato de que o método compreende administrações múltiplas da composição compreendendo as células imunes modificadas.

92. Método, de acordo com a reivindicação 91, caracterizado pelo fato de que o método compreende uma primeira administração da composição compreendendo as células imunes modificadas seguido de uma segunda administração da composição compreendendo as células imunes modificadas.

93. Método, de acordo com a reivindicação 92, caracterizado pelo fato de que a segunda administração é cerca de um mês após a primeira administração.

94. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 93, caracterizado pelo fato de que a doença associada ao HPV é um câncer associado ao HPV.

95. Método, de acordo com a reivindicação 94, caracterizado pelo fato de que o câncer associado ao HPV é câncer cervical, câncer anal, câncer orofaríngeo, câncer vaginal, câncer vulvar, câncer peniano, câncer de pele ou câncer de cabeça e pescoço.

96. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 95, caracterizado pelo fato de que a doença associada ao HPV é uma doença infecciosa associada ao HPV.

97. Método para tratar uma doença relacionada ao vírus do papiloma humano (HPV) em um indivíduo, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV compreendendo um aminoácido com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25.

98. Método para prevenir uma doença associada ao HPV em um indivíduo, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo de uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25.

99. Método para modular uma resposta imune em um indivíduo com uma doença associada ao HPV, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25.

100. Método para tratar uma doença associada ao HPV em um indivíduo, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25; em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para que o antígeno passe para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV por tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV entre na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas.

101. Método para prevenir uma doença associada ao HPV em um indivíduo, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25; em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para que o antígeno do HPV passe para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV por tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV e o adjuvante entre na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas.

102. Método para modular uma resposta imune em um indivíduo com uma doença associada ao HPV, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25;

em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para que o antígeno do HPV passe para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV por tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV entre na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas.

103. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 100 a 102, caracterizado pelo fato de que o diâmetro da constrição é menor que o diâmetro da célula.

104. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 100 a 103, caracterizado pelo fato de que o diâmetro da constrição é cerca de 20% a 99% do diâmetro da célula.

105. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 100 a 104, caracterizado pelo fato de que o diâmetro da constrição é cerca de 20% até menos de cerca de 60% do diâmetro da célula.

106. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 100 a 105, caracterizado pelo fato de que a constrição está em um canal.

107. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 100 a 106, caracterizado pelo fato de que uma força de deformação é aplicada à célula de entrada à medida que passa pela constrição.

108. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 86 a 107, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente administrar ao indivíduo um adjuvante.

109. Método, de acordo com a reivindicação 108, caracterizado pelo fato de que o adjuvante é IFNα ou CpG ODN.

110. Método, de acordo com a reivindicação 108 ou 109, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas e o adjuvante são administrados simultaneamente.

111. Método, de acordo com a reivindicação 108 ou 109, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas e o adjuvante são administrados sequencialmente.

112. Método, de acordo com a reivindicação 111, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada antes de administrar o adjuvante.

113. Método, de acordo com a reivindicação 111, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada seguindo administração do adjuvante.

114. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 97 a 113, caracterizado pelo fato de que a célula imune modificada compreende adicionalmente um adjuvante.

115. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 100 a 113, caracterizado pelo fato de que a célula imune perturbada da etapa b é incubada com o antígeno do HPV e um adjuvante.

116. Método, de acordo com a reivindicação 114 ou 115, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV e/ou o adjuvante estão presentes no citosol e/ou endossomos.

117. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 114 a 116, caracterizado pelo fato de que o antígeno e/ou adjuvante estão presentes em múltiplos compartimentos da célula.

118. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 114 a 117, caracterizado pelo fato de que a célula imune modificada compreende adicionalmente um antígeno do HPV e/ou um adjuvante no exterior da célula.

119. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 115 a 118, caracterizado pelo fato de que a concentração de adjuvante incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 mM.

120. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 115 a 119, caracterizado pelo fato de que a concentração de antígeno do HPV incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 mM.

121. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 115 a 120, caracterizado pelo fato de que a proporção de antígeno do HPV para adjuvante incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 10000:1 e cerca de 1:10000.

122. Método, de acordo com a reivindicação 99 ou 102, caracterizado pelo fato de que a resposta imune é aprimorada.

123. Método, de acordo com a reivindicação 122, caracterizado pelo fato de que a resposta imune ao antígeno do HPV é aprimorada.

124. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 114 a 123, caracterizado pelo fato de que o adjuvante é CpG ODN, IFN-α, agonistas STING, agonistas RIG-I ou poli I:C.

125. Método, de acordo com a reivindicação 124, caracterizado pelo fato de que o adjuvante é CpG ODN.

126. Método, de acordo com a reivindicação 125, caracterizado pelo fato de que o CpG ODN é CpG ODN 1018, CpG ODN 1826 ou CpG ODN 2006.

127. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 114 a 126, caracterizado pelo fato de que a célula imune modificada compreende mais de um adjuvante.

128. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 97 a 127, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é um pool de múltiplos polipeptídeos que provocam uma resposta contra os mesmos e/ou diferentes antígenos do HPV.

129. Método, de acordo com a reivindicação 128, caracterizado pelo fato de que um antígeno no pool de múltiplos antígenos não diminui a resposta imune direcionada para outros antígenos no pool de múltiplos antígenos.

130. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 97 a 129, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é um polipeptídeo compreendendo um epítopo do HPV antigênico e uma ou mais sequências de peptídeos heterólogos.

131. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 97 a 130, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV se complexa consigo mesmo, com outros antígenos ou com o adjuvante.

132. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 97 a 131, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é compreendido por um epítopo específico HLA-A2.

133. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 97 a 132, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é capaz de ser transformado em um peptídeo MHC restrito de classe I.

134. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 97 a 133, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é capaz de ser transformado em um peptídeo MHC restrito de classe II.

135. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 114 a 134, caracterizado pelo fato de que a célula imune modificada compreende o adjuvante a uma concentração entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 mM.

136. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 97 a 135, caracterizado pelo fato de que a célula imune modificada compreende o antígeno do HPV a uma concentração entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 mM.

137. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 114 a 136, caracterizado pelo fato de que a proporção de antígeno do HPV para o adjuvante está entre cerca de 10000:1 a cerca de 1:10000.

138. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 97 a 137, caracterizado pelo fato de que a célula imune modificada compreende adicionalmente um agente que aprimora a viabilidade e/ou função da célula imune modificada em comparação com uma célula imune modificada correspondente que não compreende o agente.

139. Método, de acordo com a reivindicação 138, caracterizado pelo fato de que o agente é um composto que aprimora endocitose, um agente estabilizador ou um cofator.

140. Método, de acordo com a reivindicação 138, caracterizado pelo fato de que o agente é albumina.

141. Método, de acordo com a reivindicação 140, caracterizado pelo fato de que a albumina é albumina de camundongo, bovina ou humana.

142. Método, de acordo com a reivindicação 138, caracterizado pelo fato de que o agente é um cátion de metal divalente, glicose, ATP, potássio, glicerol, trealose, D-sacarose, PEG1500, L-arginina, L-glutamina ou EDTA.

143. Método, de acordo com a reivindicação 138, caracterizado pelo fato de que o agente compreende MSA.

144. Célula T modificada, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 97 a 143, caracterizada pelo fato de que as células são modificadas adicionalmente para aumentar a expressão de uma ou mais moléculas coestimulantes.

145. Célula T modificada, de acordo com a reivindicação 144, caracterizado pelo fato de que a molécula coestimulante é B7-H2, B7-1, B7-2, CD70, LIGHT, HVEM, CD40, 4-1BBL, OX40L, TL1A, GITRL, CD30L, TIM4, SLAM, CD48, CD58, CD155 ou CD112.

146. Célula T modificada, de acordo com a reivindicação 144 ou 145, caracterizada pelo fato de que a célula compreende um ácido nucleico que resulta em expressão aumentada de uma ou mais moléculas coestimulantes.

147. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 97 a 146, caracterizado pelo fato de que a célula imune é uma célula T, uma célula dendrítica, um monócito, um macrófago, uma célula mieloide, um granulócito, um neutrófilo, uma célula mastro, uma célula exterminadora natural, uma célula linfoide inata, um basófilo ou uma célula precursora hematopoética.

148. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 97 a 147, caracterizado pelo fato de que a célula imune não é uma célula B.

149. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 97 a 148, caracterizado pelo fato de que a célula imune é uma célula B.

150. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 97 a 148, caracterizado pelo fato de que a célula imune é uma célula T.

151. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 97 a 148, caracterizado pelo fato de que a célula imune é uma população de células mistas.

152. Método, de acordo com a reivindicação 151, caracterizado pelo fato de que as células imunes são uma pluralidade de PBMCs.

153. Método, de acordo com a reivindicação 150, caracterizado pelo fato de que a célula T compreende uma modificação adicional para modular expressão MHC de classe I.

154. Método, de acordo com a reivindicação 150, caracterizado pelo fato de que a célula T compreende uma modificação adicional para modular expressão MHC de classe II.

155. Método, de acordo com a reivindicação 153 ou 154, caracterizado pelo fato de que a célula T compreende uma modificação adicional para reduzir expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II.

156. Método, de acordo com a reivindicação 153 ou 154, caracterizado pelo fato de que a modificação adicional compreende redução da expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II usando siRNA, shRNA, CRISPR/Cas9, ZFN, TALEN, recombinase Cre ou uma meganuclease.

157. Método, de acordo com a reivindicação 153 ou 154, caracterizado pelo fato de que a célula T compreende uma modificação adicional para aumentar expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II.

158. Método, de acordo com a reivindicação 153 ou 154, caracterizado pelo fato de que a modificação adicional compreende aumentar expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II usando RNA ou DNA plasmídico.

159. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 150 e de 153 a 156, caracterizado pelo fato de que uma resposta imune inata montada em um indivíduo em resposta à administração, em um contexto alogênico, das células T modificadas adicionalmente é reduzida em comparação com uma resposta imune inata montada em um indivíduo em resposta à administração, em um contexto alogênico, de células T modificadas correspondentes que não compreendem a modificação adicional.

160. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 150 e de 153 a 156, caracterizado pelo fato de que a meia-vida circulante das células T modificadas adicionalmente em um indivíduo ao qual foram administradas é modulada em comparação com a meia-vida circulante de células T modificadas correspondentes que não compreendem a modificação adicional em um indivíduo ao qual foram administradas.

161. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 150 e de 153 a 160, caracterizado pelo fato de que a célula T inclui uma ou mais células T auxiliares, células T citotóxicas, células T de memória, células CIK e células T exterminadoras naturais.

162. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 150 e de 153 a 160, caracterizado pelo fato de que a célula T inclui uma ou mais dentre células T CD3+, células T CD4+, células T CD8+, células T CD45RA+, células T CD45RO+ e células T γδ.

163. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 97 a 162, caracterizado pelo fato de que a célula modificada é alogênica ao indivíduo.

164. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 97 a 162, caracterizado pelo fato de que a célula modificada é autóloga ao indivíduo.

165. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 97 a 164, caracterizado pelo fato de que o indivíduo está pré-condicionado a ter inflamação modulada e/ou uma resposta imune modulada.

166. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 97 a 165, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada em combinação com administração de um inibidor de ponto de verificação imune.

167. Método, de acordo com a reivindicação 166, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas e o inibidor de ponto de verificação imune são administrados simultaneamente.

168. Método, de acordo com a reivindicação 166, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas e o inibidor de ponto de verificação imune são administrados sequencialmente.

169. Método, de acordo com a reivindicação 168, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada antes de administrar o inibidor de ponto de verificação imune.

170. Método, de acordo com a reivindicação 168, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada seguindo administração do inibidor de ponto de verificação imune.

171. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 152 a 156, caracterizado pelo fato de que o inibidor de ponto de verificação imune é direcionado a um ou mais dentre PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG3, TIM-3, TIGIT, VISTA, TIM1, B7-H4 (VTCN1) ou BTLA.

172. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 97 a 171, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada em combinação com a administração de uma quimioterapia.

173. Método, de acordo com a reivindicação 172, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas e a quimioterapia são administradas simultaneamente.

174. Método, de acordo com a reivindicação 172, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas e a quimioterapia são administradas sequencialmente.

175. Método, de acordo com a reivindicação 174, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada antes de administrar a quimioterapia.

176. Método, de acordo com a reivindicação 174, caracterizado pelo fato de que a composição compreendendo as células imunes modificadas é administrada após administração da quimioterapia.

177. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 172 a 176, caracterizado pelo fato de que a quimioterapia compreende cisplatina.

178. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 97 a 177, caracterizado pelo fato de que administração da composição compreendendo as células imunes modificadas ao indivíduo resulta na ativação e/ou expansão de linfócitos T citotóxicos (CTLs) específicos para o antígeno do HPV.

179. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 97 a 177, caracterizado pelo fato de que administração da composição compreendendo as células imunes modificadas ao indivíduo resulta em ativação e/ou expansão de células T auxiliares (Th) específicas para o antígeno do HPV.

180. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 97 a 179, caracterizado pelo fato de que a quantidade eficaz da composição compreende entre cerca de 1 × 106 e cerca de 1 × 1012 células imunes modificadas.

181. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 97 a 180, caracterizado pelo fato de que o método compreende múltiplas administrações da composição compreendendo as células imunes modificadas.

182. Método, de acordo com a reivindicação 181, caracterizado pelo fato de que o método compreende uma primeira administração da composição compreendendo as células imunes modificadas seguido por uma segunda administração da composição compreendendo as células imunes modificadas.

183. Método, de acordo com a reivindicação 182, caracterizado pelo fato de que a segunda administração é cerca de um mês após a primeira administração.

184. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 97 a 183, caracterizado pelo fato de que a doença associada ao HPV é um câncer associado ao HPV.

185. Método, de acordo com a reivindicação 184, caracterizado pelo fato de que o câncer associado ao HPV é câncer cervical, câncer anal, câncer orofaríngeo, câncer vaginal, câncer vulvar, câncer peniano, câncer de pele ou câncer de cabeça e pescoço.

186. Composição compreendendo células imunes modificadas caracterizada pelo fato que as células imunes modificadas compreendem de maneira intracelular um CpG ODN e um antígeno do HPV com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25.

187. Composição, de acordo com a reivindicação 166, caracterizada pelo fato de que o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com a SEQ ID Nº: 23.

188. Composição, de acordo com a reivindicação 186 ou 187, caracterizada pelo fato de que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para que o antígeno do HPV e o CpG ODN passem para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV e o CpG ODN por tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV e o CpG ODN entrem na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas.

189. Composição, de acordo com a reivindicação 188, caracterizada pelo fato de que o diâmetro da constrição é menor que o diâmetro da célula.

190. Composição, de acordo com a reivindicação 188 ou 189, caracterizada pelo fato de que o diâmetro da constrição é cerca de 20% a cerca de 99% do diâmetro da célula.

191. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 188 a 190, caracterizada pelo fato de que o diâmetro da constrição é cerca de 20% a menor que cerca de 60% do diâmetro da célula.

192. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 188 a 191, caracterizada pelo fato de que a constrição está em um canal.

193. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 188 a 192, caracterizada pelo fato de que uma força de deformação é aplicada à célula de entrada à medida que passa pela constrição.

194. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 186 a 193, caracterizada pelo fato de que a composição compreende adicionalmente um adjuvante.

195. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 186 a 194, caracterizada pelo fato de que o antígeno do HPV e/ou o CpG ODN estão presentes no citosol e/ou endossomos.

196. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 186 a 195, caracterizada pelo fato de que o antígeno e/ou o CpG ODN estão presentes em múltiplos compartimentos da célula.

197. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 186 a 196, caracterizada pelo fato de que a célula imune modificada compreende adicionalmente um antígeno do HPV e/ou um CpG ODN na superfície da célula.

198. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 188 a 197, caracterizada pelo fato de que a concentração de CpG ODN incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 mM.

199. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 188 a 198, caracterizada pelo fato de que a concentração de antígeno do HPV incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 mM.

200. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 188 a 199, caracterizada pelo fato de que a proporção de antígeno do

HPV para CpG ODN incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 10000:1 e cerca de 1:10000.

201. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 186 a 200, caracterizada pelo fato de que o CpG ODN é CpG ODN 1018, CpG ODN 1826 ou CpG ODN 2006.

202. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 186 a 201, caracterizada pelo fato de que a célula imune modificada compreende mais de um adjuvante.

203. Composição, de acordo com a reivindicação 202, caracterizada pelo fato de que o adjuvante compreende CpG ODN, IFN-α, agonistas STING, agonistas RIG-I ou poli I:C.

204. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 186 a 203, caracterizada pelo fato de que o antígeno do HPV é um pool de múltiplos polipeptídeos que provocam uma resposta contra os mesmos e ou diferentes antígenos do HPV.

205. Composição, de acordo com a reivindicação 204, caracterizada pelo fato de que um antígeno no pool de múltiplos antígenos não diminui a resposta imune direcionada para outros antígenos no pool de múltiplos antígenos.

206. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 186 a 205, caracterizada pelo fato de que o antígeno do HPV é um polipeptídeo compreendendo um epítopo do HPV antigênico e uma ou mais sequências de peptídeos heterólogos.

207. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 186 a 206, caracterizada pelo fato de que o antígeno do HPV se complexa consigo mesmo, com outros antígenos, com um adjuvante ou com o CpG ODN.

208. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 186 a 207, caracterizada pelo fato de que o antígeno do HPV é compreendido por um epítopo específico HLA-A2.

209. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 186 a 208, caracterizada pelo fato de que o antígeno do HPV é um polipeptídeo compreendendo um epítopo antigênico que é flanqueado no N-terminal e/ou no C-terminal por uma ou mais sequências de peptídeos heterólogos.

210. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 186 a 209, caracterizada pelo fato de que a célula imune modificada compreende o CpG ODN a uma concentração entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 mM.

211. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 186 a 210, caracterizada pelo fato de que a célula imune modificada compreende o antígeno do HPV a uma concentração entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 mM.

212. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 186 a 211, caracterizada pelo fato de que a proporção de antígeno do HPV para o CpG ODN está entre cerca de 10000:1 a cerca de 1:10000.

213. Composição compreendendo células imunes modificadas caracterizada pelo fato de que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV, em que o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25.

214. Composição, de acordo com a reivindicação 213, caracterizada pelo fato de que o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com a SEQ ID Nº: 23.

215. Composição, de acordo com a reivindicação 213 ou 214, caracterizada pelo fato de que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para que o antígeno do HPV passe para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV por tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV entre na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas.

216. Composição, de acordo com a reivindicação 215, caracterizada pelo fato de que o diâmetro da constrição é menor que o diâmetro da célula.

217. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 215 a 216, caracterizada pelo fato de que o diâmetro da constrição é cerca de 20% a cerca de 99% do diâmetro da célula.

218. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 215 a 217, caracterizada pelo fato de que o diâmetro da constrição é cerca de 20% a menor que cerca de 60% do diâmetro da célula.

219. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 215 a 218, caracterizada pelo fato de que a constrição está em um canal.

220. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 215 a 219, caracterizada pelo fato de que uma força de deformação é aplicada à célula de entrada à medida que passa através da constrição.

221. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 213 a 220, caracterizada pelo fato de que a composição compreende adicionalmente um adjuvante.

222. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 213 a 221, caracterizada pelo fato de que o antígeno do HPV e/ou o adjuvante estão presentes no citosol e/ou endossomos.

223. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 213 a 222, caracterizada pelo fato de que o antígeno e/ou adjuvante estão presentes em múltiplos compartimentos da célula.

224. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 213 a 223, caracterizada pelo fato de que a célula imune modificada compreende adicionalmente um antígeno do HPV e/ou um adjuvante na superfície da célula.

225. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 215 a 224, caracterizada pelo fato de que a concentração de adjuvante incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 mM.

226. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 215 a 225, caracterizada pelo fato de que a concentração de antígeno do HPV incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 mM.

227. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 215 a 226, caracterizada pelo fato de que a proporção de antígeno do HPV incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 10000:1 a cerca de 1:10000.

228. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 213 a 227, caracterizada pelo fato de que o adjuvante é CpG ODN, IFN-α, agonistas STING, agonistas RIG-I ou poli I:C.

229. Composição, de acordo com a reivindicação 228, caracterizada pelo fato de que o adjuvante é CpG ODN.

230. Composição, de acordo com a reivindicação 229, caracterizada pelo fato de que o CpG ODN é CpG ODN 1018, CpG ODN 1826 ou CpG ODN 2006.

231. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 213 a 230, caracterizada pelo fato de que a célula imune modificada compreende mais de um adjuvante.

232. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 213 a 231, caracterizada pelo fato de que o antígeno do HPV é um pool de múltiplos polipeptídeos que provocam uma resposta contra os mesmos e/ou diferentes antígenos do HPV.

233. Composição, de acordo com a reivindicação 232, caracterizada pelo fato de que um antígeno no pool de múltiplos antígenos não diminui a resposta imune direcionada para outros antígenos no pool de múltiplos antígenos.

234. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 213 a 233, caracterizada pelo fato de que o antígeno do HPV é um polipeptídeo compreendendo um epítopo do HPV antigênico e uma ou mais sequências de peptídeos heterólogos.

235. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 213 a 234, caracterizada pelo fato de que o antígeno do HPV se complexa consigo mesmo, com outros antígenos ou com o adjuvante.

236. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 213 a 234, caracterizada pelo fato de que o antígeno do HPV é compreendido por um epítopo específico HLA-A2.

237. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 213 a 236, caracterizada pelo fato de que a célula imune modificada compreende o adjuvante a uma concentração entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 mM.

238. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 213 a 237, caracterizada pelo fato de que a célula imune modificada compreende o antígeno do HPV a uma concentração entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 mM.

239. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 213 a 238, caracterizada pelo fato de que a proporção de antígeno do HPV para o adjuvante está entre cerca de 10000:1 a cerca de 1:10000.

240. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 186 a 239, caracterizada pelo fato de que o antígeno do HPV é capaz de ser transformado em um peptídeo restrito MHC de classe I.

241. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 186 a 240, caracterizada pelo fato de que o antígeno do HPV é capaz de ser transformado em um peptídeo restrito MHC de classe II.

242. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 186 a 241, caracterizada pelo fato de que a célula imune modificada compreende adicionalmente um agente que aumenta a viabilidade e/ou função da célula imune modificada em comparação com uma célula imune modificada correspondente que não compreende o agente.

243. Composição, de acordo com a reivindicação 242, caracterizada pelo fato de que o agente é um composto que aumenta a endocitose, um agente estabilizador ou um cofator.

244. Composição, de acordo com a reivindicação 41, caracterizada pelo fato de que o agente é albumina.

245. Composição, de acordo com a reivindicação 43, caracterizada pelo fato de que a albumina é humana de camundongo, bovina ou albumina.

246. Composição, de acordo com a reivindicação 242, caracterizada pelo fato de que o agente é um cátion de metal divalente, glicose, ATP, potássio, glicerol, trealose, D-sacarose, PEG1500, L-arginina, L-glutamina ou EDTA.

247. Composição, de acordo com a reivindicação 242, caracterizada pelo fato de que o agente compreende MSA.

248. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 186 a 247, caracterizada pelo fato de que as células são modificadas adicionalmente para aumentar a expressão de uma ou mais moléculas coestimulantes.

249. Composição, de acordo com a reivindicação 248, caracterizada pelo fato de que a molécula co-estimulante é B7-H2 (ICOSL), B7-1, B7-2 (CD86), CD70, LIGHT, HVEM, CD40, 4-1BBL, OX40L, TL1A, GITRL, CD30L, TIM4, SLAM, CD48, CD58, CD155 ou CD112.

250. Composição, de acordo com a reivindicação 248 ou 249, caracterizada pelo fato de que a célula compreende um ácido nucleico que resulta em expressão aumentada de uma ou mais moléculas coestimulantes.

251. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 186 a 250, caracterizada pelo fato de que a célula imune é uma célula T, uma célula dendrítica, um monócito, um macrófago, uma célula mieloide, um granulócito, um neutrófilo, uma célula mastro, uma célula exterminadora natural, uma célula linfoide inata, um basófilo ou uma célula precursora hematopoética.

252. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 186 a 251, caracterizada pelo fato de que a célula imune não é uma célula B.

253. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 186 a 252, caracterizada pelo fato de que a célula imune é uma célula T.

254. Composição, de acordo com a reivindicação 253, caracterizada pelo fato de que a célula T compreende uma modificação adicional para modular expressão MHC de classe I.

255. Composição, de acordo com a reivindicação 253, caracterizada pelo fato de que a célula T compreende uma modificação adicional para modular expressão MHC de classe II.

256. Composição, de acordo com a reivindicação 254 ou 255, caracterizada pelo fato de que a célula T compreende uma modificação adicional para reduzir expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II.

257. Composição, de acordo com a reivindicação 254 ou 255, caracterizada pelo fato de que a modificação adicional compreende redução de expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II usando siRNA, shRNA, CRISPR/Cas9, ZFN, TALEN, recombinase Cre ou uma meganuclease.

258. Composição, de acordo com a reivindicação 56 ou 57, caracterizada pelo fato de que a célula T compreende uma modificação adicional para aumentar expressão MHC de classe I e/ou expressão MHC de classe II.

259. Composição, de acordo com a reivindicação 254 ou 255, caracterizada pelo fato de que a modificação adicional compreende aumentar expressão MHC de classe I e/ou MHC de classe II usando RNA ou DNA plasmídico.

260. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 253 a 257, caracterizada pelo fato de que uma resposta imune inata montada em um indivíduo em resposta à administração, em um contexto alogênico, das células T modificadas adicionalmente é reduzida em comparação com uma resposta imune inata montada em um indivíduo em resposta à administração, em um contexto alogênico, de células T modificadas correspondentes que não compreendem a modificação adicional.

261. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 253 a 257, caracterizada pelo fato de que a meia-vida circulante das células T modificadas adicionalmente em um indivíduo ao qual foram administradas é modulada em comparação com a meia-vida circulante de células T modificadas correspondentes que não compreendem a modificação adicional em um indivíduo ao qual foram administradas.

262. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 253 a 261, caracterizada pelo fato de que a célula T inclui uma ou mais dentre células T auxiliares, células T citotóxicas, células T de memória, células CIK e células T exterminadoras naturais.

263. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 253 a 261, caracterizada pelo fato de que a célula T inclui uma ou mais dentre células T CD3+, células T CD4+, células T CD8+, células T CD45RA+, células T CD45RO+ e células T γδ.

264. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 186 a 263, caracterizada pelo fato de que a célula modificada é alogênica ao indivíduo.

265. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 186 a 263, caracterizada pelo fato de que a célula modificada é autóloga ao indivíduo.

266. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 186 a 263, caracterizada pelo fato de que o indivíduo está precondicionado a ter inflamação modulada e/ou uma resposta imune modulada.

267. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 186 a 266, caracterizada pelo fato de que a composição compreende adicionalmente um inibidor de ponto de verificação imune.

268. Composição, de acordo com a reivindicação 267, caracterizada pelo fato de que o inibidor de ponto de verificação imune é direcionado a um ou mais dentre PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG3, TIM-3, TIGIT, VISTA, TIM1, B7-H4 (VTCN1) ou BTLA.

269. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 186 a 268, caracterizada pelo fato de que administração da composição compreendendo as células imunes modificadas ao indivíduo resulta na ativação e/ou expansão de linfócitos T citotóxicos (CTLs) específicos para o antígeno do HPV.

270. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 186 a 268, caracterizada pelo fato de que administração da composição compreendendo as células imunes modificadas ao indivíduo resulta em ativação e/ou expansão de células T auxiliares (Th) específicas para o antígeno.

271. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 186 a 270, caracterizada pelo fato de que a quantidade eficaz da composição compreende entre cerca de 1 × 106 e cerca de 1 × 1012 células imunes modificadas.

272. Composição compreendendo um antígeno caracterizada pelo fato de que o antígeno compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com SEQ ID NO: 23.

273. Composição, de acordo com a reivindicação 272, caracterizada pelo fato de que o antígeno compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 23.

274. Método para tratar ou prevenir uma doença associada ao HPV em um indivíduo, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV e um adjuvante, em que o adjuvante é apresentado de maneira intracelular; em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada compreendendo um antígeno do HPV através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta forma, perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para que o antígeno e o adjuvante passem para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o adjuvante por tempo suficiente para permitir que o adjuvante entre na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas.

275. Método para tratar ou prevenir uma doença associada ao HPV em um indivíduo, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo células imunes modificadas, em que as células imunes modificadas compreendem um antígeno do HPV e um adjuvante, em que o adjuvante é apresentado de maneira intracelular; em que as células imunes modificadas são preparadas ao a) passar uma suspensão celular compreendendo uma célula de entrada compreendendo o adjuvante através de uma constrição de deformação celular, em que um diâmetro da constrição é uma função de um diâmetro da célula de entrada na suspensão, causando, desta, forma perturbações da célula de entrada grandes o suficiente para que o antígeno do HPV passe para formar uma célula de entrada perturbada; e b) incubar a célula de entrada perturbada com o antígeno do HPV por tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV entre na célula de entrada perturbada; gerando, desta forma, as células imunes modificadas.

276. Método, de acordo com a reivindicação 274 ou 275, caracterizado pelo fato de que o diâmetro da constrição é menor que o diâmetro da célula.

277. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 274 a 276, caracterizado pelo fato de que o diâmetro da constrição é cerca de 20% a 99% do diâmetro da célula.

278. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 274 a 277, caracterizado pelo fato de que o diâmetro da constrição é cerca de 20% a menor que cerca de 60% do diâmetro da célula.

279. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 274 a 278, caracterizado pelo fato de que a constrição está em um canal.

280. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 274 a 279, caracterizado pelo fato de que uma força de deformação é aplicada à célula de entrada à medida que passa pela constrição.

281. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 274 a 280, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV e/ou o adjuvante estão presentes no citosol e/ou endossomos.

282. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 274 a 281, caracterizado pelo fato de que o antígeno e/ou adjuvante estão presentes em compartimentos múltiplos da célula.

283. Método, de acordo com a reivindicação 274, caracterizado pelo fato de que a concentração de adjuvante incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 mM.

284. Método, de acordo com a reivindicação 275, caracterizado pelo fato de que a concentração de antígeno do HPV incubado com a célula de entrada perturbada é entre cerca de 0,1 µM e cerca de 1 mM.

285. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 274 a 285, caracterizado pelo fato de que o adjuvante é CpG ODN, IFN-α, agonistas STING, agonistas RIG-I ou poli I:C.

286. Método, de acordo com a reivindicação 285, caracterizado pelo fato de que o adjuvante é CpG ODN.

287. Método, de acordo com a reivindicação 286, caracterizado pelo fato de que o CpG ODN é CpG ODN 1018, CpG ODN 1826 ou CpG ODN 2006.

288. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 274 a 287, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é derivado a partir de um lisado celular.

289. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 274 a 288, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é um HPV- 16 ou um antígeno do HPV-18.

290. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 274 a 289, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV é um antígeno do HPV E6 ou um antígeno do HPV E7.

291. Método, de acordo com a reivindicação 290, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25.

292. Método, de acordo com a reivindicação 289, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25.

293. Método, de acordo com a reivindicação 290, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com a SEQ ID Nº: 23.

294. Método, de acordo com a reivindicação 290, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 23.

295. Método para tratar ou prevenir uma doença associada ao HPV em um indivíduo caracterizado pelo fato de que compreende administração ao indivíduo de uma célula imune modificada associada a um antígeno do HPV, em que a célula imune modificada é preparada por um processo compreendendo as etapas de: a) incubar uma célula de entrada com o antígeno do HPV e/ou um adjuvante por tempo suficiente para permitir que o antígeno do HPV se associe à célula de entrada; gerando, desta forma, a célula imune modificada associada ao antígeno.

296. Método, de acordo com a reivindicação 295, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de similaridade com qualquer uma das SEQ ID Nº: 18 a 25.

297. Método, de acordo com a reivindicação 296, caracterizado pelo fato de que o antígeno do HPV compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 23.

298. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 295 a 297, caracterizado pelo fato de que o adjuvante é CpG ODN.

299. Método, de acordo com a reivindicação 298, caracterizado pelo fato de que o CpG ODN é CpG ODN 1018, CpG ODN 1826 ou CpG ODN 2006.

300. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende as células imunes modificadas conforme qualquer uma das reivindicações de 186 a 273 para uso como uma medicação.

301. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende pelas células imunes modificadas conforme qualquer uma das reivindicações de 186 a 273 para uso em um método para tratar o corpo humano ou animal por cirurgia, terapia ou diagnóstico.

302. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende as células imunes modificadas conforme qualquer uma das reivindicações de 186 de 273 para uso no tratamento de um câncer, uma doença infecciosa ou uma doença viral.

303. Composição compreendendo as células imunes modificadas, conforme qualquer uma das reivindicações de 186 a 273, caracterizada pelo fato de que o câncer é câncer de cabeça e pescoço, câncer de colo do útero, câncer vulvar, câncer vaginal, câncer peniano, câncer anal, câncer perianal, câncer anogenital, câncer bucal ou câncer salivar.

304. Composição compreendendo as células imunes modificadas, conforme qualquer uma das reivindicações de 300 a 303, caracterizada pelo fato de que os PBMCs modificados são administrados antes, simultaneamente ou após a administração de um inibidor de ponto de verificação imune.

305. Composição, de acordo com a reivindicação 304, caracterizada pelo fato de que o inibidor de ponto de verificação imune é direcionado a qualquer um dos PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG3, VISTA e TIM-

3.

306. Composição, de acordo com a reivindicação 305, caracterizada pelo fato de que o inibidor de ponto de verificação imune é direcionado a PD-1.

307. Composição, de acordo com a reivindicação 305, caracterizada pelo fato de que o inibidor de ponto de verificação imune é direcionado a PD-L1.

308. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 300 a 307, caracterizado pelo fato de que os PBMCs modificados são administrados antes, concomitantemente com ou seguindo administração de um agente terapêutico.

309. Composição, de acordo com a reivindicação 308, caracterizada pelo fato de que o agente terapêutico é um agente quimioterápico.

310. Composição, de acordo com a reivindicação 309, caracterizada pelo fato de que a doença infecciosa está associada ao HIV, HPV, EBV, MCV, HBV ou HCV.