TW202003025A - 用於治療ｈｐｖ相關疾病之方法 - Google Patents

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李安 塔拉瑞
阿爾方索 維森特蘇雅斯
馬特 布蒂
霍華德 柏恩斯坦
卡塔琳娜 布拉格威
阿蒙 沙里
柯蘭 拉維堤
梅莉莎 敏特
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Abstract

本申請案提供包含HPV抗原和佐劑之免疫細胞、製造此等經修飾之免疫細胞的方法、和使用此等經修飾之免疫細胞以用於治療HPV相關疾病、預防HPV相關疾病和/或用於調節患有HPV相關疾病之個體的免疫反應之方法。

Description

用於治療ＨＰＶ相關疾病之方法
本發明大致上關於包含抗原和佐劑之免疫細胞、製造此等經修飾之免疫細胞的方法、和使用此等經修飾之免疫細胞以用於治療HPV相關疾病、預防HPV相關疾病和用於調節患有HPV相關疾病之個體的免疫反應之方法。
乳頭瘤病毒為小的無外套DNA病毒，中病毒粒子直徑為約55 nm。已有超過100種HPV基因型被完全表徵且假定有更多數量存在。HPV為子宮頸癌及某些外陰、陰道、陰莖、口咽、肛門和直腸癌的已知原因。雖然大多數HPV感染為無症狀且自發地清除，但受到致癌性HPV類型中一者持續感染時可進展為癌前病變或癌症。其他HPV相關疾病可包括常見之疣、蹠疣、扁平疣、肛門生殖器疣、肛門病變、表皮發育不良、局灶性上皮增生、口腔乳頭瘤、疣狀囊腫、喉乳頭瘤病、鱗狀上皮內病變(SILs)、子宮頸上皮內瘤變(CIN)、外陰上皮內瘤變(VIN)和陰道上皮內瘤變(VAIN)。
許多已知之人乳頭瘤病毒(HPV)類型引起良性病變，並有一亞群為致癌性的。基於流行病學和系統發育關係，HPV類型被分類成15種“高風險類型”(HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73和82)及3種“可能之高風險類型”(HPV 26、53和66)，已知它們均顯示低級別和高級別之子宮頸變化和癌症，以及其他肛門與生殖器癌症，諸如外陰、陰道、陰莖、肛門和肛周癌，以及頭頸癌。最近，亦有高風險類型HPV16和18與乳癌之關聯的描述。已知11種被分類為“低風險類型”之HPV類型(HPV 6、11、40、42、43、44、54、61、70、72和81)顯示良性低度子宮頸變化、生殖器疣和復發之呼吸道乳頭瘤病。皮膚HPV類型5、8和92與皮膚癌有關。於某些HPV相關癌症中，該免疫系統被抑制且相應地，該抗腫瘤反應顯著削弱。參見Suresh and BurtnessAm J Hematol Oncol 13(6)：20-27 (2017)。
免疫療法可分成二種主要干預類型，被動式或主動式。被動式方案包括投予預活化和/或經工程治療之細胞(例如CAR T細胞)、疾病特異性治療性抗體和/或細胞因子。主動式免疫療法策略係針對刺激體內免疫系統效應子功能。幾種目前的主動式方案包括使用疾病相關肽類、溶胞產物(lysate)或異體移植之全細胞的疫苗接種策略、輸注自體DC作為用於投遞腫瘤抗原之載劑及輸注免疫檢查點調節劑。參見Papaioannou, Nikos E., et al.Annals of translational medicine 4.14 (2016)。過繼性免疫療法可用於調節該免疫反應、增強抗腫瘤活性及實現治療或預防HPV相關癌症之目標。
藉由疾病相關抗原刺激之CD8+ 細胞毒性T淋巴細胞(CTL)和CD4+ 輔助T(Th)細胞具有靶向和破壞患病細胞之潛力。本文所描述之方法係用於以高通量且有效地重新產生經修飾之免疫細胞，從而誘導對抗HPV抗原之強T細胞反應。
本文所引用之所有參考文獻(包括專利申請案和出版物)的全部內容均以引用方式併入本文。專利申請案WO 2017041050、WO 2016070136的全部內容以引用方式明確地併入本文中。
於一些態樣中，本發明提供用於治療個體中人類乳頭瘤病毒(HPV)相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原和佐劑，其中該佐劑係存在於細胞內。於一些態樣中，本發明提供用於預防個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原和佐劑，其中該佐劑係存在於細胞內。於一些態樣中，本發明提供用於調節患有HPV相關疾病之個體的免疫反應之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原和佐劑，其中該佐劑係存在於細胞內。
於一些實施態樣中，本發明提供用於治療個體內HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原和佐劑，其中該佐劑係存在於細胞內；其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備：a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(cell-deforming constriction)(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該抗原和該佐劑通過以形成經擾動之輸入細胞；和b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原和該佐劑一起培育足夠之時間以令該HPV抗原和該佐劑進入該經擾動之輸入細胞；從而產生該等經修飾之免疫細胞。於一些實施態樣中，本發明提供用於預防個體內HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原和佐劑，其中該佐劑係存在於細胞內；其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備：a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該HPV抗原和該佐劑通過以形成經擾動之輸入細胞；和b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原和該佐劑一起培育足夠之時間以令該HPV抗原和該佐劑進入該經擾動之輸入細胞；從而產生該等經修飾之免疫細胞。於一些實施態樣中，本發明提供用於調節患有HPV相關疾病之個體的免疫反應之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原和佐劑，其中該佐劑係存在於細胞內；其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備：a)令包含含有HPV抗原之輸入細胞的細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該HPV抗原和該佐劑通過以形成經擾動之輸入細胞；和b)將該經擾動之輸入細胞與該佐劑一起培育足夠之時間以令該HPV抗原和該佐劑進入該經擾動之輸入細胞；從而產生該等經修飾之免疫細胞。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑小於該細胞之直徑。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至99%。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至小於約60%。於一些實施態樣中，該壓縮器係在通道中。於一些實施態樣中，變形力係當該輸入細胞通過該壓縮器時施加至該輸入細胞。
於一些實施態樣中，該HPV抗原和/或該佐劑係存在於胞質液(cytosol)和/或胞內體中。於一些實施態樣中，該抗原和/或佐劑係存在於該細胞之多個隔室中。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞進一步在該細胞外部包含HPV抗原和/或佐劑。於一些實施態樣中，與該經擾動之輸入細胞一起培育之佐劑的濃度係介於約0.1μM與約1 mM之間。於一些實施態樣中，與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原的濃度係介於約0.1μM與約1 mM之間。於一些實施態樣中，與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原對佐劑之比例係介於約10000：1與約1：10000之間。
於一些實施態樣中，該免疫反應經增強。於一些實施態樣中，對該HPV抗原之免疫反應經增強。
於一些實施態樣中，該佐劑為CpG ODN、IFN-α、STING激動劑、RIG-I激動劑或聚I：C。於一些實施態樣中，該佐劑為CpG ODN。於一些實施態樣中，該CpG ODN為CpG ODN 1018、CpG ODN 1826或CpG ODN 2006。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含多於一種之佐劑。
於一些實施態樣中，該HPV抗原為引發針對相同和/或不同HPV抗原之反應的多種多肽之匯集庫(pool)。
於一些實施態樣中，在該多種抗原之匯集庫中之抗原不會降低該針對該多種抗原之匯集庫中的其他抗原之免疫反應。於一些實施態樣中，該HPV抗原為包含抗原性HPV抗原決定部位和一或多個異源肽序列之多肽。於一些實施態樣中，該HPV抗原與其自身、與其他抗原、或與該佐劑複合。於一些實施態樣中，該HPV抗原為HPV-16或HPV-18抗原。於一些實施態樣中，該HPV抗原包含HLA-A2特異性抗原決定部位。於一些實施態樣中，該HPV抗原為HPV E6抗原或HPV E7抗原。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含HPV E6抗原和HPV E7抗原。於一些實施態樣中，該HPV抗原為包含抗原性抗原決定部位之多肽，該抗原性抗原決定部位之N端和/或C端二側鄰接一或多個異源肽序列。於一些實施態樣中，該HLA-A2限制性肽包含SEQ ID NO：1至4中任一者之胺基酸序列。於一些實施態樣中，該N端側翼多肽包含SEQ ID NO：5至10中任一者之胺基酸序列和/或該C端側翼多肽包含SEQ ID NO：11至17中任一者之胺基酸序列。於一些實施態樣中，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至26中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列。於一些實施態樣中，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：23具有至少90%相似性之胺基酸序列。於一些實施態樣中，該HPV抗原能被加工成第I類MHC限制性肽。於一些實施態樣中，該HPV抗原能被加工成第II類MHC限制性肽。
於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含濃度介於約0.1μM與約1μM之間之佐劑。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含濃度介於約0.1μM與約1 mM之間之該HPV抗原。於一些實施態樣中，該HPV抗原對該佐劑之比例係介於約10000：1與約1：10000之間。
於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞進一步包含與不包含該劑之對應的經修飾之免疫細胞相比較，增強該經修飾之免疫細胞的存活力和/或功能之劑。於一些實施態樣中，該劑為增強胞吞作用之化合物、穩定劑或輔因子。於一些實施態樣中，該劑為白蛋白。於一些實施態樣中，該白蛋白為小鼠、牛或人白蛋白。於一些實施態樣中，該劑為二價金屬陽離子、葡萄糖、ATP、鉀、甘油、海藻糖、D-蔗糖、PEG1500、L-精胺酸、L-麩胺醯胺、或EDTA。於一些實施態樣中，該劑包含小鼠血清白蛋白(MSA)。於一些實施態樣中，該等經修飾之免疫細胞被進一步修飾以增加一或多種共刺激分子之表現。於一些實施態樣中，該共刺激分子為B7-H2、B7-1、B7-2、CD70、LIGHT、HVEM、CD40、4-1BBL、OX40L、TL1A、GITRL、CD30L、TIM4、SLAM、CD48、CD58、CD155、或CD112。於一些實施態樣中，該細胞包含導致該一或多種共刺激分子表現增加之核酸。
於一些實施態樣中，該免疫細胞為T細胞、樹突細胞、單核細胞、巨噬細胞、髓樣細胞、粒細胞、嗜中性粒細胞、肥大細胞、天然殺手細胞、先天性淋巴細胞、嗜鹼性粒細胞、或造血前體細胞。於一些實施態樣中，該免疫細胞不是B細胞。
於一些實施態樣中，該免疫細胞為T細胞。於一些實施態樣中，該T細胞包含進一步修飾以調節第I類MHC表現。於一些實施態樣中，該T細胞包含進一步修飾以調節第II類MHC表現。於一些實施態樣中，該T細胞包含進一步修飾以減少第I類MHC和/或第II類MHC表現。於一些實施態樣中，該進一步修飾包含使用siRNA、shRNA、CRISPR/Cas9、ZFN、TALEN、Cre重組酶或大核酸酶減少第I類MHC和/或第II類MHC表現。於一些實施態樣中，該T細胞包含進一步修飾以增加第I類MHC和/或第II類MHC表現。於一些實施態樣中，該進一步修飾包含使用RNA或質體DNA增加第I類MHC和/或第II類MHC表現。於一些實施態樣中，與在同種異體背景下於個體中之固有之先天性免疫反應對投予不包含該進一步修飾之對應的經修飾之T細胞的反應相比較，在同種異體背景下於個體中之固有之先天性免疫反應對投予該經進一步修飾之T細胞的反應減低。於一些實施態樣中，與該不包含該進一步修飾之對應的經修飾之T細胞在經投予該T細胞之個體中的循環半衰期相比較，該經進一步修飾之T細胞在經投予該T細胞之個體中的循環半衰期被調節。於一些實施態樣中，該T細胞包括下列之一或多者：輔助T細胞、細胞毒性T細胞、記憶T細胞、CIK細胞和天然殺手T細胞。於一些實施態樣中，該T細胞包括下列之一或多者：CD3+T細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞、CD45RA+T細胞、CD45RO+T細胞和γδ-T細胞。於一些實施態樣中，該經修飾之細胞對該個體而言為同種異體的。於一些實施態樣中，該經修飾之細胞對該個體而言為自體的。於一些實施態樣中，該個體經預調理(pre-conditioned)以具有經調節之發炎和/或經調節之免疫反應。
於一些實施態樣中，該方法進一步包含對該個體投予佐劑。於一些實施態樣中，該佐劑為IFNα或CpG ODN。於一些實施態樣中，該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和該佐劑係同時投予。於一些實施態樣中，該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和該佐劑係依序投予。於一些實施態樣中，該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該佐劑之前投予。於一些實施態樣中，該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該佐劑之後投予。
於一些實施態樣中，該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係與免疫檢查點抑制劑之投予組合投予。於一些實施態樣中，該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和該免疫檢查點抑制劑係同時投予。於一些實施態樣中，該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和該免疫檢查點抑制劑係依序投予。於一些實施態樣中，該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該免疫檢查點抑制劑之前投予。於一些實施態樣中，該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該免疫檢查點抑制劑之後投予。於一些實施態樣中，該免疫檢查點抑制劑係靶向下列之一或多者：PD-1、PD-L1、CTLA-4、LAG3或TIM-3。於一些實施態樣中，該免疫檢查點抑制劑係靶向下列之一或多者：PD-1、PD-L1、CTLA-4、LAG3、TIM-3、TIGIT、VISTA、TIM1、B7-H4(VTCN1)或BTLA。
於一些實施態樣中，對該個體投予包含該等經修飾之免疫細胞之組成物導致特異於該HPV抗原之細胞毒性T淋巴細胞(CTL)活化和/或擴增。於一些實施態樣中，對該個體投予包含該等經修飾之免疫細胞之組成物導致特異於該抗原之輔助T(Th )細胞活化和/或擴增。
於一些實施態樣中，該組成物之有效量包含介於約1×106 與約1×1012 個之間的經修飾之免疫細胞。於一些實施態樣中，該方法包含多次投予該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物。於一些實施態樣中，該方法包含第一次投予該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物，接著第二次投予該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物。於一些實施態樣中，該第二次投予係在該第一次投予後約一個月。
於一些實施態樣中，該HPV相關疾病為HPV相關癌症。於一些實施態樣中，該HPV相關癌症為子宮頸癌、肛門癌、口咽癌、陰道癌、外陰癌、陰莖癌、皮膚癌或頭頸癌。於一些實施態樣中，該HPV相關疾病為HPV相關傳染病。
於一些態樣中，本發明提供用於治療個體中人類乳頭瘤病毒(HPV)相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至25中任一者具有至少90%相似性之胺基酸。於一些態樣中，本發明提供用於預防個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至25中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列。於一些態樣中，本發明提供用於調節患有HPV相關疾病之個體中的免疫反應之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至25中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列。於一些實施態樣中，該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，該HPV抗原包含SEQ ID NO：18至25中任一者之胺基酸序列。於一些實施態樣中，該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，該HPV抗原包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列。
於一些態樣中，本發明提供一種用於治療個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至25中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列；其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備：a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該抗原通過以形成經擾動之輸入細胞；和b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原一起培育足夠之時間以令該HPV抗原進入該經擾動之輸入細胞；從而產生該等經修飾之免疫細胞。於一些態樣中，本發明提供用於預防個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至25中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列；其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備：a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該HPV抗原通過以形成經擾動之輸入細胞；和b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原一起培育足夠之時間以令該HPV抗原進入該經擾動之輸入細胞；從而產生該等經修飾之免疫細胞。於一些態樣中，本發明提供用於調節患有HPV相關疾病之個體中的免疫反應之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至25中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列；其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備：a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該HPV抗原通過以形成經擾動之輸入細胞；和b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原一起培育足夠之時間以令該HPV抗原進入該經擾動之輸入細胞；從而產生該等經修飾之免疫細胞。於一些實施態樣中，該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，該HPV抗原包含SEQ ID NO：18至25中任一者之胺基酸序列。於一些實施態樣中，該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，該HPV抗原包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑小於該細胞之直徑。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為該細胞直徑之約20%至99%。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為該細胞直徑之約20%至小於約60%。於一些實施態樣中，該壓縮器係在通道中。於一些實施態樣中，變形力係當該輸入細胞通過該壓縮器時施加至該輸入細胞。
於一些實施態樣中，該方法進一步包含對該個體投予佐劑。於一些實施態樣中，該佐劑為IFNα或CpG ODN。於一些實施態樣中，該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和該佐劑係同時投予。於一些實施態樣中，該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和該佐劑係依序投予。於一些實施態樣中，該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該佐劑之前投予。於一些實施態樣中，該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該佐劑之後投予。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞進一步包含佐劑。於一些實施態樣中，該步驟b之經擾動的免疫細胞係與該HPV抗原和佐劑一起培育。於一些實施態樣中，該HPV抗原和/或該佐劑係存在於胞質液和/或胞內體中。於一些實施態樣中，該抗原和/或佐劑係存在於該細胞之多個隔室中。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞進一步在該細胞外部包含HPV抗原和/或佐劑。
於一些實施態樣中，與該經擾動之輸入細胞一起培育之佐劑的濃度係介於約0.1μM與約1 mM之間。於一些實施態樣中，與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原的濃度係介於約0.1μM與約1 mM之間。於一些實施態樣中，與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原對佐劑的比例係介於約10000：1與約1：10000之間。
於一些實施態樣中，該免疫反應經增強。於一些實施態樣中，針對該HPV抗原之免疫反應被增強。
於一些實施態樣中，該佐劑為CpG ODN、IFN-α、STING激動劑、RIG-I激動劑或聚I：C。於一些實施態樣中，該佐劑為CpG ODN。於一些實施態樣中，該CpG ODN為CpG ODN 1018、CpG ODN 1826或CpG ODN 2006。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含多於一種之佐劑。
於一些實施態樣中，該HPV抗原為引發針對相同和/或不同HPV抗原之反應的多種多肽之匯集庫。於一些實施態樣中，在該多種抗原之匯集庫中之抗原不會降低該針對該多種抗原之匯集庫中的其他抗原之免疫反應。於一些實施態樣中，該HPV抗原為包含抗原性HPV抗原決定部位和一或多個異源肽序列之多肽。於一些實施態樣中，該HPV抗原與其自身、與其他抗原、或與該佐劑複合。於一些實施態樣中，該HPV抗原為HPV-16或HPV-18抗原。於一些實施態樣中，該HPV抗原包含HLA-A2特異性抗原決定部位。於一些實施態樣中，該HPV抗原為HPV E6抗原或HPV E7抗原。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含HPV E6抗原和HPV E7抗原。於一些實施態樣中，該HPV抗原為包含抗原性抗原決定部位之多肽，該抗原性抗原決定部位之N端和/或C端側翼鄰接一或多個異源肽序列。於一些實施態樣中，該HPV抗原能夠被加工成第I類MHC限制性肽。於一些實施態樣中，該HPV抗原能夠被加工成第II類MHC限制性肽。
於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含濃度介於約0.1μM與約1mM之間之佐劑。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含濃度介於約0.1μM與約1 mM之間之該HPV抗原。於一些實施態樣中，該HPV抗原對該佐劑之比例係介於約10000：1與約1：10000之間。
於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞進一步包含與不包含該劑之對應的經修飾之免疫細胞相比較，增強該經修飾之免疫細胞的存活力和/或功能之劑。於一些實施態樣中，該劑為增強胞吞作用之化合物、穩定劑或輔因子。於一些實施態樣中，該劑為白蛋白。於一些實施態樣中，該白蛋白為小鼠、牛或人白蛋白。於一些實施態樣中，該劑為二價金屬陽離子、葡萄糖、ATP、鉀、甘油、海藻糖、D-蔗糖、PEG1500、L-精胺酸、L-麩胺醯胺、或EDTA。於一些實施態樣中，該劑包含小鼠血清白蛋白(MSA)。於一些實施態樣中，該等經修飾之免疫細胞被進一步修飾以增加一或多種共刺激分子之表現。於一些實施態樣中，該共刺激分子為B7-H2、B7-1、B7-2、CD70、LIGHT、HVEM、CD40、4-1BBL、OX40L、TL1A、GITRL、CD30L、TIM4、SLAM、CD48、CD58、CD155、或CD112。於一些實施態樣中，該細胞包含導致該一或多種共刺激分子表現增加之核酸。
於一些實施態樣中，該免疫細胞為T細胞、樹突細胞、單核細胞、巨噬細胞、髓樣細胞、粒細胞、嗜中性粒細胞、肥大細胞、天然殺手細胞、先天性淋巴細胞、嗜鹼性粒細胞、或造血前體細胞。於一些實施態樣中，該免疫細胞不是B細胞。
於一些實施態樣中，該免疫細胞為T細胞。於一些實施態樣中，該T細胞包含進一步修飾以調節第I類MHC表現。於一些實施態樣中，該T細胞包含進一步修飾以調節第II類MHC表現。於一些實施態樣中，該T細胞包含進一步修飾以減少第I類MHC和/或第II類MHC表現。於一些實施態樣中，該進一步修飾包含使用siRNA、shRNA、CRISPR/Cas9、ZFN、TALEN、Cre重組酶或大核酸酶來減少第I類MHC和/或第II類MHC表現。於一些實施態樣中，該T細胞包含進一步修飾以增加第I類MHC和/或第II類MHC表現。於一些實施態樣中，該進一步修飾包含使用RNA或質體DNA增加第I類MHC和/或第II類MHC表現。於一些實施態樣中，與在同種異體背景下於個體中之固有之先天性免疫反應對投予不包含該進一步修飾之對應的經修飾之T細胞的反應相比較，在同種異體背景下於個體中之固有之先天性免疫反應對投予該經進一步修飾之T細胞的反應減低。於一些實施態樣中，與該不包含該進一步修飾之對應的經修飾之T細胞在經投予該T細胞之個體中的循環半衰期相比較，該經進一步修飾之T細胞在經投予該經進一步修飾之T細胞之個體中的循環半衰期被調節。於一些實施態樣中，該T細胞包括下列之一或多者：輔助T細胞、細胞毒性T細胞、記憶T細胞、CIK細胞和天然殺手T細胞。於一些實施態樣中，該T細胞包括下列之一或多者：CD3+T細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞、CD45RA+T細胞、CD45RO+T細胞和γδ-T細胞。於一些實施態樣中，該經修飾之細胞對該個體而言為同種異體的。於一些實施態樣中，該經修飾之細胞對該個體而言為自體的。於一些實施態樣中，該個體係經預調理以具有經調節之炎症和/或經調節之免疫反應。
於一些實施態樣中，該方法進一步包含對該個體投予佐劑。於一些實施態樣中，該佐劑為IFNα或CpG ODN。於一些實施態樣中，該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和該佐劑係同時投予。於一些實施態樣中，該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和該佐劑係依序投予。於一些實施態樣中，該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該佐劑之前投予。於一些實施態樣中，該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該佐劑之後投予。
於一些實施態樣中，該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物之投予係與免疫檢查點抑制劑之投予組合。於一些實施態樣中，該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和該免疫檢查點抑制劑係同時投予。於一些實施態樣中，該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和該免疫檢查點抑制劑係依序投予。於一些實施態樣中，該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該免疫檢查點抑制劑之前投予。於一些實施態樣中，該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該免疫檢查點抑制劑之後投予。於一些實施態樣中，該免疫檢查點抑制劑係靶向下列之一或多者：PD-1、PD-L1、CTAL-4、LAG3或TIM-3。於一些實施態樣中，該免疫檢查點抑制劑係靶向下列之一或多者：PD-1、PD-L1、CTLA-4、LAG3、TIM-3、TIGIT、VISTA、TIM1、B7-H4(VTCN1)或BTLA。
於一些實施態樣中，對該個體投予該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物導致特異於該HPV抗原之細胞毒性T淋巴細胞(CTL)活化和/或擴增。於一些實施態樣中，對該個體投予該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物導致特異於該抗原之輔助T(Th )細胞活化和/或擴增。
於一些實施態樣中，該組成物之有效量包含介於約1×106 與約1×1012 個之間的經修飾之免疫細胞。於一些實施態樣中，該方法包含多次投予該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物。於一些實施態樣中，該方法包含第一次投予該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物，接著第二次投予該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物。於一些實施態樣中，該第二次投予係在該第一次投予後約一個月。
於一些實施態樣中，該HPV相關疾病為HPV相關癌症。於一些實施態樣中，該HPV相關癌症為子宮頸癌、肛門癌、口咽癌、陰道癌、外陰癌、陰莖癌、皮膚癌或頭頸癌。於一些實施態樣中，該HPV相關疾病為HPV相關傳染病。
於一些態樣中，本發明提供包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞在細胞內包含CpG ODN和與SEQ ID NO：18至25中任一者具有至少90%相似性之HPV抗原。於一些實施態樣中，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：23具有至少90%相似性之胺基酸序列。於一些實施態樣中，該等經修飾之免疫細胞在細胞內包含CpG ODN和HPV抗原，其中該HPV抗原包含SEQ ID NO：18至25中任一者之胺基酸序列。於一些實施態樣中，該HPV抗原包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列。
於一些實施態樣中，該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備：a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該HPV抗原和該CpG ODN通過以形成經擾動之輸入細胞；和b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原和該CpG ODN一起培育足夠之時間以令該HPV抗原和該CpG ODN進入該經擾動之輸入細胞；從而產生該等經修飾之免疫細胞。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑小於該細胞之直徑。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至約99%。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至小於約60%。於一些實施態樣中，該壓縮器係在通道中。於一些實施態樣中，該變形力係當該輸入細胞通過該壓縮器時施加至該輸入細胞。
於一些實施態樣中，該組成物進一步包含佐劑。於一些實施態樣中，該HPV抗原和/或該CpG ODN係存在於胞質液和/或胞內體中。於一些實施態樣中，該抗原和/或該CpG ODN係存在於該細胞之多個隔室中。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞進一步包含在該細胞表面上之HPV抗原和/或CpG ODN。於一些實施態樣中，與該經擾動之輸入細胞一起培育之CpG ODN的濃度係介於約0.1μM與約1 mM之間。於一些實施態樣中，與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原的濃度係介於約0.1μM與約1 mM之間。於一些實施態樣中，與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原對CpG ODN之比例係介於約10000：1與約1：10000之間。於一些實施態樣中，該CpG ODN為CpG ODN 1018、CpG ODN 1826或CpG ODN 2006。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含多於一種之佐劑。於一些實施態樣中，該佐劑包含CpG ODN、IFN-α、STING激動劑、RIG-I激動劑或聚I：C。
於一些實施態樣中，該HPV抗原為引發針對相同和/或不同HPV抗原之反應的多種多肽之匯集庫。於一些實施態樣中，在該多種抗原之匯集庫中之抗原不會降低該針對該多種抗原之匯集庫中的其他抗原之免疫反應。於一些實施態樣中，該HPV抗原為包含抗原性HPV抗原決定部位和一或多個異源肽序列之多肽。於一些實施態樣中，該HPV抗原與其自身、與其他抗原、與佐劑或與CpG ODN複合。於一些實施態樣中，該HPV抗原包含HLA-A2特異性抗原決定部位。於一些實施態樣中，該HPV抗原為包含抗原性抗原決定部位之多肽，該抗原性抗原決定部位之N端和/或C端側翼鄰接一或多個異源肽序列。
於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含濃度介於約0.1μM與約1 mM之間之該CpG ODN。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含濃度介於約0.1μM與約1 mM之間之該HPV抗原。於一些實施態樣中，該HPV抗原對該CpG ODN之比例係介於約10000：1與約1：10000之間。
於一些態樣中，本發明包含含有經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，其中該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至25中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列。於一些實施態樣中，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：23具有至少90%相似性之胺基酸序列。於一些實施態樣中，該HPV抗原包含SEQ ID NO：18至25中任一者之胺基酸序列。於一些實施態樣中，該HPV抗原包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列。
於一些實施態樣中，該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備：a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該HPV抗原通過以形成經擾動之輸入細胞；和b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原一起培育足夠之時間以令該HPV抗原進入該經擾動之輸入細胞；從而產生該等經修飾之免疫細胞。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑小於該細胞之直徑。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至約99%。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至小於約60%。於一些實施態樣中，該壓縮器係在通道中。於一些實施態樣中，該變形力係當該輸入細胞通過該壓縮器時施加至該輸入細胞。
於一些實施態樣中，該組成物進一步包含佐劑。於一些實施態樣中，該HPV抗原和/或該佐劑係存在於胞質液和/或胞內體中。於一些實施態樣中，該抗原和/或佐劑係存在於該細胞之多個隔室中。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞進一步包含在該細胞表面上之HPV抗原和/或佐劑。於一些實施態樣中，與該經擾動之輸入細胞一起培育之佐劑的濃度係介於約0.1μM與約1mM之間。於一些實施態樣中，與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原的濃度係介於約0.1μM與約1mM之間。於一些實施態樣中，與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原對佐劑之比例係介於約10000：1與約1：10000之間。於一些實施態樣中，該佐劑為CpG ODN、IFN-α、STING激動劑、RIG-I激動劑或聚I：C。於一些實施態樣中，該佐劑為CpG ODN。於一些實施態樣中，該CpG ODN為CpG ODN 1018、CpG ODN 1826或CpG ODN 2006。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含多於一種之佐劑。
於一些實施態樣中，該HPV抗原為引發針對相同和/或不同HPV抗原之反應的多種多肽之匯集庫。於一些實施態樣中，該多種抗原之匯集庫中的抗原不會降低該針對該多種抗原之匯集庫中的其他抗原之免疫反應。於一些實施態樣中，該HPV抗原為包含抗原性HPV抗原決定部位和一或多個異源肽序列之多肽。於一些實施態樣中，該HPV抗原與其自身、與其他抗原、或與該佐劑複合。於一些實施態樣中，該HPV抗原包含HLA-A2特異性抗原決定部位。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含濃度介於約0.1μM與約1mM之間之該佐劑。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含濃度介於約0.1μM與約1mM之間之該HPV抗原。於一些實施態樣中，該HPV抗原對該佐劑之比例係介於約10000：1與約1：10000之間。於一些實施態樣中，該HPV抗原能夠被加工成第I類MHC限制性肽。於一些實施態樣中，該HPV抗原能夠被加工成第II類MHC限制性肽。
於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞進一步包含與不包含該劑之對應的經修飾之免疫細胞相比較，增強該經修飾之免疫細胞的存活力和/或功能之劑。於一些實施態樣中，該劑為增強胞吞作用之化合物、穩定劑或輔因子。於一些實施態樣中，該劑為白蛋白。於一些實施態樣中，該白蛋白為小鼠、牛或人白蛋白。於一些實施態樣中，該劑為二價金屬陽離子、葡萄糖、ATP、鉀、甘油、海藻糖、D-蔗糖、PEG1500、L-精胺酸、L-麩胺醯胺、或EDTA。於一些實施態樣中，該劑包含MSA。於一些實施態樣中，該等細胞被進一步修飾以增加一或多種共刺激分子之表現。於一些實施態樣中，該共刺激分子為B7-H2(ICOSL)、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、CD70、LIGHT、HVEM、CD40、4-1BBL、OX40L、TL1A、GITRL、CD30L、TIM4、SLAM、CD48、CD58、CD155、或CD112。於一些實施態樣中，該細胞包含導致該一或多種共刺激分子表現增加的核酸。
於一些實施態樣中，該免疫細胞為T細胞、樹突細胞、單核細胞、巨噬細胞、髓樣細胞、粒細胞、嗜中性粒細胞、肥大細胞、天然殺手細胞、先天性淋巴細胞、嗜鹼性粒細胞、或造血前體細胞。於一些實施態樣中，該免疫細胞不是B細胞。於一些實施態樣中，該免疫細胞為T細胞。於一些實施態樣中，該T細胞包含進一步修飾以調節第I類MHC表現。於一些實施態樣中，該T細胞包含進一步修飾以調節第II類MHC表現。於一些實施態樣中，該T細胞包含進一步修飾以減少第I類MHC和/或第II類MHC表現。於一些實施態樣中，該進一步修飾包含使用siRNA、shRNA、CRISPR/Cas9、ZFN、TALEN、Cre重組酶或大核酸酶減少第I類MHC和/或第II類MHC表現。於一些實施態樣中，該T細胞包含進一步修飾以增加第I類MHC和/或第II類MHC表現。於一些實施態樣中，該進一步經修飾包含使用RNA或質體DNA增加第I類MHC和/或第II類MHC表現。於一些實施態樣中，與在同種異體背景下於個體中之固有之先天性免疫反應對投予不包含該進一步修飾之對應的經修飾之T細胞的反應相比較，在同種異體背景下於個體中之固有之先天性免疫反應對投予該經進一步修飾之T細胞的反應減低。於一些實施態樣中，與該不包含該進一步修飾之對應的經修飾之T細胞在經投予該T細胞之個體中的循環半衰期相比較，該經進一步修飾之T細胞在經投予該經進一步修飾之T細胞之個體中的循環半衰期被調節。
於一些實施態樣中，該T細胞包括下列之一或多者：輔助T細胞、細胞毒性T細胞、記憶T細胞、CIK細胞和天然殺手T細胞。於一些實施態樣中，該T細胞包括下列之一或多者：CD3+T細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞、CD45RA+T細胞、CD45RO+T細胞和γδ-T細胞。於一些實施態樣中，該經修飾之細胞對個體而言為同種異體的。於一些實施態樣中，該經修飾之細胞對個體而言為自體的。於一些實施態樣中，該個體經預調理以具有經調節之炎症和/或經調節之免疫反應。
於一些實施態樣中，該組成物進一步包含免疫檢查點抑制劑。於一些實施態樣中，該免疫檢查點抑制劑係靶向下列之一或多者：PD-1、PD-L1、CTLA-4、LAG3、TIM-3、LAG3、TIGIT、VISTA、TIM1、B7-H4(VTCN1)或BTLA。於一些實施態樣中，對個體投予包含該等經修飾之免疫細胞之組成物導致特異於該HPV抗原之細胞毒性T淋巴細胞(CTL)活化和/或擴增。於一些實施態樣中，對個體投予包含該等經修飾之免疫細胞之組成物導致特異於該抗原之輔助T(Th )細胞活化和/或擴增。
於一些實施態樣中，該組成物之有效量包含介於約1×106 與約1×1012 個之間的經修飾之免疫細胞。於一些實施態樣中，該抗原包含與SEQ ID NO：23具有至少90%相似性之胺基酸序列。於一些實施態樣中，該抗原包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列。
於一些實施態樣中，該免疫細胞為T細胞、樹突細胞、單核細胞、巨噬細胞、髓樣細胞、粒細胞、嗜中性粒細胞、肥大細胞、天然殺手細胞、先天性淋巴細胞、嗜鹼性粒細胞、或造血前體細胞。於一些實施態樣中，該免疫細胞不是B細胞。於一些實施態樣中，該免疫細胞為T細胞。於一些實施態樣中，該T細胞包含進一步修飾以調節第I類MHC表現。於一些實施態樣中，該T細胞包含進一步修飾以調節第II類MHC表現。於一些實施態樣中，該T細胞包含進一步修飾以減少第I類MHC和/或第II類MHC表現。於一些實施態樣中，該進一步修飾包含使用siRNA、shRNA、CRISPR/Cas9、ZFN、TALEN、Cre重組酶或大核酸酶減少第I類MHC和/或第II類MHC表現。於一些實施態樣中，該T細胞包含進一步修飾以增加第I類MHC和/或第II類MHC表現。於一些實施態樣中，該進一步修飾包含使用RNA或質體DNA增加第I類MHC和/或第II類MHC表現。於一些實施態樣中，與在同種異體背景下於個體中之固有之先天性免疫反應對投予不包含該進一步修飾之對應的經修飾之T細胞的反應相比較，在同種異體背景下於個體中之固有之先天性免疫反應對投予該經進一步修飾之T細胞的反應減低。於一些實施態樣中，與該不包含該進一步修飾之對應的經修飾之T細胞在經投予該T細胞之個體中的循環半衰期相比較，該經進一步修飾之T細胞在經投予該經進一步修飾之T細胞之個體中的循環半衰期被調節。
於一些實施態樣中，該T細胞包括下列之一或多者：輔助T細胞、細胞毒性T細胞、記憶T細胞、CIK細胞和天然殺手T細胞。於一些實施態樣中，該T細胞包括下列之一或多者：CD3+T細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞、CD45RA+T細胞、CD45RO+T細胞和γδ-T細胞。於一些實施態樣中，該經修飾之細胞對該個體而言為同種異體的。於一些實施態樣中，該經修飾之細胞對該個體而言為自體的。於一些實施態樣中，該個體經預調理以具有經調節之炎症和/或經調節之免疫反應。
於一些實施態樣中，該組成物進一步包含免疫檢查點抑制劑。於一些實施態樣中，該免疫檢查點抑制劑係靶向下列之一或多者：PD-1、PD-L1、CTLA-4、LAG3或TIM-3。於一些實施態樣中，對個體投予包含該等經修飾之免疫細胞之組成物導致特異於該HPV抗原之細胞毒性T淋巴細胞(CTL)活化和/或擴增。於一些實施態樣中，對個體投予包含該等經修飾之免疫細胞之組成物導致特異於該抗原之輔助T(Th )細胞活化和/或擴增。
於一些實施態樣中，該組成物之有效量包含介於約1×106 與約1×1012 個之間的經修飾之免疫細胞。於一些實施態樣中，該抗原包含與SEQ ID NO：23具有至少90%相似性之胺基酸序列。於一些實施態樣中，該抗原包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列。
於一些態樣中，本發明提供用於治療或預防個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原和佐劑，其中該佐劑係存在於細胞內；其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備：a)令包含含有HPV抗原之輸入細胞的細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該抗原和該佐劑通過以形成經擾動之輸入細胞；和b)將該經擾動之輸入細胞與該佐劑一起培育足夠之時間以令該佐劑進入該經擾動之輸入細胞；從而產生該等經修飾之免疫細胞。於一些態樣中，本發明提供用於治療或預防個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原和佐劑，其中該佐劑係存在於細胞內；其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備：a)令包含含有該佐劑之輸入細胞的細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該HPV抗原通過以形成經擾動之輸入細胞；和b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原一起培育足夠之時間以令該HPV抗原進入該經擾動之輸入細胞；從而產生該等經修飾之免疫細胞。
於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑小於該細胞之直徑。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至99%。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至小於約60%。於一些實施態樣中，該壓縮器係在通道中。於一些實施態樣中，該變形力係當該輸入細胞通過該壓縮器時施加至該輸入細胞。
於一些實施態樣中，該HPV抗原和/或該佐劑係存在於胞質液和/或胞內體中。於一些實施態樣中，該抗原和/或佐劑係存在於該細胞之多個隔室中。於一些實施態樣中，與該經擾動之輸入細胞一起培育之佐劑的濃度係介於約0.1μM與約1mM之間。於一些實施態樣中，與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原的濃度係介於約0.1μM與約1mM之間。
於一些實施態樣中，該佐劑為CpG ODN、IFN-α、STING激動劑、RIG-I激動劑或聚I：C。於一些實施態樣中，該佐劑為CpG ODN。於一些實施態樣中，該CpG ODN為CpG ODN 1018、CpG ODN 1826或CpG ODN 2006。
於一些實施態樣中，該HPV抗原為HPV-16或HPV-18抗原。於一些實施態樣中，該HPV抗原為HPV E6抗原或HPV E7抗原。於一些實施態樣中，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至25中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列。於一些實施態樣中，該HPV抗原包含SEQ ID NO：18至25中任一者之胺基酸序列。於一些實施態樣中，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：23具有至少90%相似性之胺基酸序列。於一些實施態樣中，該HPV抗原包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列。
於一些態樣中，本發明提供用於治療或預防個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予與HPV抗原聯結(associate)之經修飾的免疫細胞，其中該經修飾之免疫細胞係藉由包含以下步驟之方法製備：a)將輸入細胞與該HPV抗原和/或該佐劑一起培育足夠之時間以令該HPV抗原與該輸入細胞聯結；從而產生與該抗原聯結之經修飾之免疫細胞。於一些實施態樣中，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至25中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列。於一些實施態樣中，該HPV抗原包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列。於一些實施態樣中，該佐劑為CpG ODN。於一些實施態樣中，該CpG ODN為CpG ODN 1018、CpG ODN 1826或CpG ODN 2006。
發明之詳細描述
於一些態樣中，本發明提供用於治療和預防HPV相關疾病和/或調節患有HPV相關疾病之個體中之免疫反應的方法，該方法包含對該個體投予包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞在細胞內包含HPV抗原且在細胞內包含佐劑。於一些態樣中，本發明提供用於治療和預防HPV相關疾病和/或調節患有HPV相關疾病之個體中之免疫反應的方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾的免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞在細胞內包含HPV抗原且在細胞內包含佐劑；其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備：首先令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該抗原和該佐劑通過以形成經擾動之輸入細胞；然後將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原和該佐劑一起培育足夠之時間以令該HPV抗原和該佐劑進入該經擾動之輸入細胞；從而產生該等經修飾之免疫細胞。本發明之某些態樣關於用於產生包含經修飾之免疫細胞之組成物之方法，其中係將免疫細胞通過壓縮器，其中該壓縮器使該細胞變形從而造成該細胞擾動，使得HPV抗原和/或佐劑進入該待修飾之免疫細胞。
於一些態樣中，本發明提供用於治療和預防HPV相關疾病和/或調節患有HPV相關疾病之個體中之免疫反應的方法，該方法包含對該個體投予包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞在細胞內包含HPV抗原。於一些態樣中，本發明提供用於治療和預防HPV相關疾病和/或調節患有HPV相關疾病之個體中之免疫反應的方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾的免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞在細胞內包含HPV抗原，其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備：首先令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該抗原通過以形成經擾動之輸入細胞；然後將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原一起培育足夠之時間以令該HPV抗原進入該經擾動之輸入細胞；從而產生該等經修飾之免疫細胞。本發明之某些態樣關於用於產生包含經修飾之免疫細胞之組成物之方法，其中係將免疫細胞通過壓縮器，其中該壓縮器使該細胞變形從而造成該細胞擾動，使得HPV抗原進入該待修飾之免疫細胞。於一些進一步之實施態樣中，該用於治療和預防HPV相關疾病和/或調節患有HPV相關疾病之個體中之免疫反應的方法進一步包含對該個體投予佐劑。於一些實施態樣中，該等經修飾之免疫細胞之組成物進一步包含佐劑(例如CpG寡核苷酸(CpG ODN))或IFNα)。於一些實施態樣中，該等經修飾之免疫細胞進一步在細胞內包含佐劑，諸如CpG ODN。 一般技術
本文所描述或參考之技術和程序為本技藝之技術熟習人士大致上充分理解且通常使用常規方法採用，諸如，例如下列文獻中所描述之被廣泛利用之方法：Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Sambrooket al ., 4th ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 2012)；Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel,et al . eds., 2003)；Methods in Enzymology 系列(Academic Press, Inc.)；PCR 2: A Practical Approach (M.J. MacPherson, B.D. Hames and G.R. Taylor eds., 1995)；Antibodies, A Laboratory Manual ( Harlow and Lane, eds., 1988)；Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique and Specialized Applications (R.I. Freshney, 6th ed., J. Wiley and Sons, 2010)；Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984)；Methods in Molecular Biology , Humana Press;Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., Academic Press, 1998)；Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather and P.E. Roberts, Plenum Press, 1998)；Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., J. Wiley and Sons, 1993-8)；Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds., 1996)；Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987)；PCR: The Polymerase Chain Reaction (Mulliset al ., eds., 1994)；Current Protocols in Immunology (J.E. Coliganet al ., eds., 1991)；Short Protocols in Molecular Biology (Ausubelet al ., eds., J. Wiley and Sons, 2002)；Immunobiology (C.A. Janewayet al ., 2004)；Antibodies (P. Finch, 1997)；Antibodies: A Practical Approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989)；Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000)；Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow and D. Lane, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999)；The Antibodies (M. Zanetti and J. D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995)；和Cancer: Principles and Practice of Oncology (V.T. DeVitaet al ., eds., J.B. Lippincott Company, 2011)。 定義
為了解釋本專利說明書，下列定義將適用於(及當合適時)所使用之單數術語亦包括複數，反之亦然。當下文中列出之任何定義與藉由引用方式併入本文之任何文件相衝突時，以下列定義為準。
除非另有說明，如本文所使用之單數形式“一(a、an)”和“該(the)”包括複數指稱。
應理解的是，本文所描述之本發明的態樣和實施態樣包括“包含” 、“由......組成”和“基本上由......組成”之態樣和實施態樣。
本文所使用之術語“約”係指本技術領域中之技術熟習人士早已知之用於該對應值之常用的誤差範圍。本文所提及之“約”值或參數包括(並描述)針對該值或參數本身的實施態樣。
如本文所使用者，“治療”為用於獲得有利或期望之臨床結果的方法。如本文所使用之“治療”涵蓋用於哺乳動物(包括人)之疾病的治療劑之任何投予或施用。在本發明之目的方面，有利或期望之臨床結果包括，但不限於下列之任何一或多者：減輕一或多種症狀、減輕疾病程度、預防或延遲疾病擴散(例如轉移，例如轉移至肺部或淋巴結)、預防或延遲疾病復發、延遲或減緩疾病進展、改善疾病狀態、抑制疾病或疾病之進展、抑制或減緩疾病或其進展、遏制其發展和緩解(無論是部分還是全部)。“治療”亦包含減少增殖性疾病之病理後果。本發明之方法考慮這些治療態樣之任何一或多者。
在癌症之背景下，術語“治療”包括下列任一者或全部：抑制癌細胞生長、抑制癌細胞複製、減輕整體腫瘤負荷和改善與該疾病相關之一或多種症狀。
如本文所使用之術語“孔”係指開口，包括，但不限於洞、撕裂、凹洞、小孔、斷裂、間隙或物質內之穿孔。於一些實例中，(當指明時)該術語係指在本發明之表面內的孔。於其他實例中，(當指明時)孔可指細胞膜中之孔。
如本文所使用之術語“膜”係指含有孔之選擇性屏障或薄片。該術語包括作為邊界或襯裡之柔韌的薄片狀結構。於一些實例中，該術語係指含有孔之表面或過濾器。該術語與術語“細胞膜”不同。
如本文所使用之術語“過濾器”係指允許選擇性通過該孔的多孔物品。於一些實例中，該術語係指含有孔之表面或膜。
如本文所使用之術語“異質性”係指某物之結構或組成為混合的或不均一。於一些實例中，該術語係指在指定之表面內具有各種尺寸、形狀或分佈的孔。
如本文所使用之術語“均勻的”係指某物在結構或組成上為整體一致或均勻的。於一些實例中，該術語係指在指定之表面內具有一致之尺寸、形狀或分佈的孔。
如本文所使用之術語“同源的”係指源自該相同生物體之分子。於一些實例中，該術語係指通常在該指定之生物體內被發現或表現在該指定之生物體內的核酸或蛋白質。
當與核酸序列(諸如編碼序列和控制序列)有關時，術語“異源的”表示通常不連接在一起之序列和/或通常不與特定細胞聯結之序列。因此，核酸構建體或載體之“異源”區為核酸節段，該核酸節段係位在另一在自然界中未曾被發現與其他分子聯結的核酸分子內或與其連接。例如，核酸構建體之異源區可包括編碼序列，該編碼序列側翼鄰接在自然界中未被發現與該編碼序列聯結之序列。異源編碼序列之另一實例為其中該編碼序列本身未曾在自然界中被發現的構建體(例如具有與天然基因不同之密碼子的合成序列)。類似地，在本發明之目的方面，使用通常不存在於細胞中之構建體轉化的細胞將被視為異源。如本文所使用之等位基因變異或天然發生之突變事件不會產生異源DNA。
當與胺基酸序列(諸如肽序列和多肽序列)有關時，術語“異源的”表示通常不連接在一起和/或通常不與特定細胞聯結之序列。因此，肽序列之“異源”區為胺基酸節段，該胺基酸節段係位於在自然界中未曾被發現與其他分子聯結之另一胺基酸分子內或與其連接。例如肽構建體之異源區可包括該肽之胺基酸序列，該肽之側翼鄰接在自然界中並未被發現與該肽之胺基酸序列聯結的序列。異源肽序列之另一實例為其中該肽序列本身未曾在自然界中被發現的構建體(例如具有與天然基因所編碼者不同之胺基酸的合成序列)。類似地，在本發明之目的方面，使用表現通常不存在於細胞中之胺基酸構建體的載體轉化的細胞將被視為異源。如本文所使用之等位基因變異或天然發生之突變事件不會產生異源肽。
如本文所使用之術語“抑制”可指阻斷、減少、消除或以其他方式拮抗特定靶的之存在或特定靶的之活性的行為。抑制可指部分抑制或完全抑制。例如抑制免疫反應可指導致阻斷、減少、消除或任何其他拮抗免疫反應的行為。於其他實例中，抑制核酸表現可包括，但不限於減少核酸轉錄、減少mRNA豐度(例如使mRNA轉錄不表現)、降解mRNA、抑制mRNA轉譯，等。
如本文所使用者，術語“壓制”可指減少、降低、阻止、限制、減輕或以其他方式消除特定靶的之存在或特定靶的之活性的行為。壓制可指部分壓制或完全壓制。例如壓制免疫反應可指導致減少、降低、阻止、限制、減輕或以其他方式消除免疫反應的任何行為。於其他實例中，壓制核酸表現可包括，但不限於減少核酸轉錄、減少mRNA豐度(例如使mRNA轉錄不表現)、降解mRNA、抑制mRNA轉譯，等。
如本文所使用者，術語“增強”可指改善、加強、提高或以其他方式增加特定靶的之存在或特定靶的之活性。例如增強免疫反應可指導致改善、加強、提高或以其他方式增加免疫反應的任何行為。於一示例性實例中，增強免疫反應可指使用抗原和/或佐劑來改善、加強、提高或以其他方式增加免疫反應。於其他實例中，增強核酸之表現可包括，但不限於增加核酸轉錄、增加mRNA豐度(例如增加mRNA轉錄)、減少mRNA降解、增加mRNA轉譯，等。
如本文所使用者，術語“ 調節”可指改變、更改、變化或以其他方式修飾特定靶的之存在或特定靶的之活性。例如調節免疫反應可指導致改變、更改、變化或以其他方式修飾免疫反應的任何行為。於一些實例中，“調節”係指增強特定靶的之存在或活性。於一些實例中，“調節”係指壓制特定靶的之存在或活性。於其他實例中，調節核酸之表現可包括，但不限於核酸轉錄之變化、mRNA豐度之變化(例如增加mRNA轉錄)、mRNA降解之對應變化、mRNA轉譯之變化，等。
如本文所使用者，術語“誘導”可指起始、促使、刺激、建立或以其他方式產生結果之行為。例如，誘導免疫反應可指導致起始、促使、刺激、建立或以其他方式產生所需之免疫反應的任何行為。於其他實例中，誘導核酸表現可包括，但不限於起始核酸之轉錄、起始mRNA之轉譯，等。
如本文所使用者，“外周血單核細胞”或“PBMC”係指具有圓形細胞核之異質血液細胞族群(cell population)。可在PBMC族群中找到之細胞的實例包括淋巴細胞，諸如T細胞、B細胞、NK細胞(包括NKT細胞和CIK細胞)和單核細胞，諸如巨噬細胞和樹突細胞。如本文所使用之“多個PBMC”係指包含具有至少二種血液細胞類型之細胞的PBMC製劑。於一些實施態樣中，該多個PBMC包含二或更多個T細胞、B細胞、NK細胞、巨噬細胞或樹突細胞。於一些實施態樣中，該多個PBMC包含三或更多個T細胞、B細胞、NK細胞、巨噬細胞或樹突細胞。於一些實施態樣中，該多個PBMC包含四或更多個T細胞、B細胞、NK細胞、巨噬細胞或樹突細胞。於一些實施態樣中，該多個PBMC包含T細胞、B細胞、NK細胞、巨噬細胞或樹突細胞。
PBMC可藉由本技藝中已知之方法分離。例如PBMC可基於與其他血液細胞相比較之PBMC密度，從個體之外周血衍生。於一些實施態樣中，PBMC係使用Ficoll(例如ficoll梯度)自個體的外周血衍生。於一些實施態樣中，PBMC係使用ELUTRA®細胞分離系統從個體之外周血衍生。
於一些實施態樣中，該PBMC族群係從個體分離出。於一些實施態樣中，該多個PBMC為自體PBMC族群，其中該族群係源自特定個體，藉由本文所描述之任何方法操作，再返回該特定個體。於一些實施態樣中，該多個PBMC為同種異體之PBMC族群，其中該族群係源自一個體，藉由本文所描述之任何方法操作，再投予第二個體。
於一些實施態樣中，該多個PBMC為PBMC之重構製劑。於一些實施態樣中，該多個PBMC可藉由混合通常在PBMC族群中發現之細胞來產生；例如，藉由混合二或更多種之T細胞、B細胞、NK細胞或單核細胞族群。
如本文所使用之術語“多核苷酸”或“核酸”係指任何長度之核苷酸(無論是核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸)的聚合形式。因此，該術語包括，但不限於單股、雙股、或多股DNA、或RNA、基因組DNA、cDNA、DNA-RNA雜合體或包含嘌呤和嘧啶鹼基之聚合物，或其他天然、經化學或經生物化學修飾的、非天然或衍生之核苷酸鹼基。該多核苷酸之骨架可包含糖和磷酸基團(如通常可在RNA或DNA中找到者)，或經修飾或取代之糖或磷酸基團。或者，該多核苷酸之骨架可包含合成之亞單位(諸如胺基磷酸酯和硫代磷酸酯)的聚合物，因此可為寡脫氧核苷胺基磷酸酯(P-NH2)、混合之硫代磷酸酯-磷酸二酯寡聚物或混合之胺基磷酸酯-磷酸二酯寡聚物。此外，雙股多核苷酸可藉由合成該互補股及在適當之條件下黏合該股，或使用DNA聚合酶與合適之引物從頭合成該互補而從化學合成之單股多核苷酸產物取得。
術語“多肽”和“蛋白質”可互換使用以指胺基酸殘基之聚合物且不限於最小長度。該等胺基酸殘基聚合物可含有天然或非天然胺基酸殘基且包括，但不限於肽、寡肽、胺基酸殘基之二聚體、三聚體和聚體。該定義涵蓋全長蛋白質及其片段。該術語亦包括該多肽之表現後修飾，例如糖基化、唾液酸化、乙醯化、磷酸化，等。此外，為了本發明之目的，“多肽”係指包括對天然序列之修飾，諸如缺失、添加和取代(通常為保守性的)的蛋白質，只要該蛋白質維持所需的活性。這些修飾可為透過定點誘變故意引起的修飾，或可為，諸如透過產生該蛋白質之宿主突變或由於PCR擴增之錯誤偶然引起的修飾。
如本文所使用者，術語“佐劑”係指調節和/或導致免疫反應之物質。通常，與單獨之抗原相比較，該佐劑係與抗原一起投予以增強對抗原之免疫反應。本文中描述各種佐劑。
本文中，術語“CpG寡脫氧核苷酸”和“CpG ODN”係指長度為10至30個核苷酸，含有藉由磷酸鹽分開之胞嘧啶和鳥嘌呤的二核苷酸之DNA分子(本文中亦稱為“CpG”二核苷酸，或“CpG”)。本發明之CpG ODN含有至少一個未甲基化之CpG二核苷酸。亦即，CpG二核苷酸中之胞嘧啶未被甲基化(即，不是5-甲基胞嘧啶)。CpG ODN可具有部分或完整之硫代磷酸酯(PS)骨架。
如本文所使用者，“醫藥上可接受的”或“藥理學上相容的”係指非生物學上或其他方面不良之物質，例如該物質可被併入投予患者之醫藥組成物中，而不會引起任何顯著不良之生物效果或以有害方式與該組成物所包含之任何其他組分交互作用。較佳地，醫藥上可接受之載體或賦形劑符合毒理學和製造測試之必要標準和/或包含在由美國食品和藥物管理局製作之非活性成分指南中。
在本文所描述之任何結構和功能特徵方面，測定這些特性之方法為本技藝所已知。微流體系統及其組分 提供細胞變形壓縮器之微流體通道 於一些態樣中，本發明提供用於治療和預防HPV相關疾病，和/或調節患有HPV相關疾病之個體中的免疫反應之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾的免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞在細胞內包含HPV抗原且在細胞內包含佐劑；其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備：首先令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該抗原和該佐劑通過以形成經擾動之輸入細胞；然後將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原和該佐劑一起培育足夠之時間以令該HPV抗原和該佐劑進入該經擾動之輸入細胞；從而產生該等經修飾之免疫細胞。於一些實施態樣中，該壓縮器係包含在微流體通道內。於一些實施態樣中，多個壓縮器可平行和/或串聯放在該微流體通道內。於一些實施態樣中，變形力係當該輸入細胞通過該壓縮器時施加至該輸入細胞。用於本發明方法中之含有細胞變形壓縮器的示例性微流體通道描述於WO2013059343中。用於本發明方法之具有孔的示例性表面描述於WO2017041050中。
於一些實施態樣中，該微流體通道包括內腔且經過配置，從而使懸浮在緩衝液中之免疫細胞可通過，其中該微流體通道包括壓縮器。微流體通道可使用下述多種物質中任一者製成，包括：矽、金屬(例如不銹鋼)、塑料(例如聚苯乙烯)、陶瓷、玻璃、結晶型基質、無定形基質或聚合物(例如聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、PDMS、環烯烴共聚物(COC)，等)。微流體通道可藉由本技藝已知之任何方法製造，包括乾蝕刻、濕蝕刻、光刻(photolithography)、注射成型、雷射燒蝕或SU-8掩模。
於一些實施態樣中，該微流體通道內之壓縮器包括入口部分、中心點和出口部分。於一些實施態樣中，該微流體通道內之壓縮器的長度、深度和寬度可變化。於一些實施態樣中，該微流體通道內之壓縮器的直徑為該免疫細胞之直徑的函數。於一些實施態樣中，該微流體通道內之壓縮器的直徑為該免疫細胞之直徑的約20%至約99%。於一些實施態樣中，該壓縮器之大小為該免疫細胞之直徑的約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%、或約99%。於一些實施態樣中，該壓縮器之大小為該免疫細胞之最小橫截面距離的約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%、或約99%。於一些實施態樣中，該通道包含寬度介於約2μM與約10μm之間，或為其間之任何寬度或寬度範圍的壓縮器。例如，壓縮器寬度可為約2μm、約3μm、約4μm、約5μm、約6μm、或約7μm中之任一者。於一些實施態樣中，該通道包含之壓縮器長度為約10μm且壓縮器寬度為約4μm。該通道之橫截面、入口部分、中心點和出口部分亦可變化。例如，該橫截面之形狀可為圓形、橢圓形、細長狹縫、方形、六邊形或三角形。該入口部分界定壓縮器角度，其中該壓縮器角度係經優化以減少該通道堵塞並經優化以增進化合物投遞入該免疫細胞。該出口部分之角度亦可變化。例如出口部分之角度經過配置以減小可能導致非層流之擾亂的可能性。於一些實施態樣中，該入口部分和/或出口部分之壁為直線形。於其他實施態樣中，該入口部分和/或出口部分之壁為曲線形。通過該通道之流速亦可經過調整。於一些實施態樣中，通過該通道之流速係介於約0.001mL/cm2 /sec與約100L/cm2 /sec之間，或為其間之任何速率或速率範圍。
於根據本文所描述之任一方法或組成物的一些實施態樣中，其中該免疫細胞為多個PBMC，該壓縮器之直徑為該PBMC之直徑的函數，諸如多個PBMC之平均直徑，或多個PBMC內之亞群的平均直徑。於一些實施態樣中，該細胞之直徑係藉由該細胞(例如該多個PBMC內之細胞)的最小橫截面距離來測量。
於根據本文所描述之任一方法或組成物的一些實施態樣中，其中該免疫細胞為多個PBMC，該壓縮器之直徑為該多個輸入PBMC之平均直徑的約10%至約99%。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為該多個輸入PBMC之平均直徑的約10%至約90%、約10%至約80%、約10%至約70%、約20%至約60%、約40%至約60%、或約30%至約45%中之任一者。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為該多個輸入PBMC之平均直徑的約10%至約20%、約20%至約30%、約30%至約40%、約40%至約50%、約50%至約60%、約60%至約70%、約70%至約80%、約80%至約90%、或約90%至約99%中之任一者。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為該多個輸入PBMC之平均直徑的約10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、或99%中之任一者。
於根據本文所描述之任一方法或組成物的一些實施態樣中，其中該免疫細胞為多個PBMC，該壓縮器之直徑為該多個輸入PBMC內具有最小直徑之細胞亞群的平均直徑之約10%至約99%。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為該多個輸入PBMC內具有最小直徑之細胞亞群的平均直徑的約10%至約90%、約10%至約80%、約10%至約70%、約20%至約60%、約40%至約60%、約30%至約45%、約50%至約99%、約50%至約90%、約50%至約80%、約50%至約70%、約60%至約90%、約60%至約80%、或約60%至約70%中之任一者。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為該多個輸入PBMC內具有最小直徑之細胞亞群的平均直徑之約10%至約20%、約20%至約30%、約30%至約40%、約40%至約50%、約50%至約60%、約60%至約70%、約70%至約80%、約80%至約90%、或約90%至約99%中之任一者。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為該多個輸入PBMC內具有最小直徑之細胞亞群的平均直徑之約10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、或99%中之任一者。於一些實施態樣中，該多個輸入PBMC內具有最小直徑之細胞亞群為淋巴細胞族群，其中該淋巴細胞族群之直徑為約6μm至約10μm。於一些實施態樣中，該淋巴細胞族群之平均直徑為約7μm。於一些實施態樣中，該淋巴細胞族群為T細胞族群。於一些實施態樣中，該淋巴細胞為T細胞。於一些實施態樣中，該多個輸入PBMC內具有最小平均直徑之細胞亞群為T細胞。
於根據本文所描述之任一方法或組成物的一些實施態樣中，其中該免疫細胞為多個PBMC，該壓縮器之直徑為該多個輸入PBMC內具有最大直徑之細胞亞群的平均直徑之約10%至約99%。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為該多個輸入PBMC內具有最大直徑之細胞亞群的平均直徑之約10%至約90%、約10%至約80%、約10%至約70%、約20%至約60%、約40%至約60%、約30%至約45%、約15%至約30%、約15%至約20%、約20%至約25%、約25%至約30%、約20%至約30%、約30%至約70%、或約30%至約60%中之任一者。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為該多個輸入PBMC內具有最大直徑之細胞亞群的平均直徑之約5%至約10%、約10%至約20%、約20%至約30%、約30%至約40%、約40%至約50%、約50%至約60%、約60%至約70%、約70%至約80%、約80%至約90%、或約90%至約99%中之任一者。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為該多個輸入PBMC內具有最大直徑之細胞亞群的平均直徑之約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、或99%中之任一者。於一些實施態樣中，該多個輸入PBMC內具有最大平均直徑之細胞亞群為單核細胞族群，其中該單核細胞族群之直徑為約15μm至約25μm。於一些實施態樣中，該單核細胞族群之平均直徑為約20μm。於一些實施態樣中，在該多個輸入PBMC內具有最大平均直徑之細胞亞群為單核細胞。
於根據本文所描述之任一方法或組成物的一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為約3μm至約15μm。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為約3μm至約10μm。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為約4μm至約10μm。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為約4.2μm至約6μm。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為約4.2μm至約4.8μm。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為約2μm至約14μm、約4μm至約12μm、約6μm至約9μm、約4μm至約6μm、約4μm至約5μm、約3.5μm至約7μm、約3.5μm至約6.3μm、約3.5μm至約5.6μm、約3.5μm至約4.9μm、約4.2μm至約6.3μm 、約4.2μm至約5.6μm、或約4.2μm至約4.9μm中之任一者。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為約2μm、2.5μm、3μm、3.5μm、4μm、4.5μm、5μm、5.5μm、6μm、6.5μm、7μm、7.5μm、8μm、8.5μm、9μm、9.5μm、10μm、10.5μm、11μm、11.5μm、12μm、12.5μm、13μm、13.5μm、14μm、14.5μm、或15μm中之任一者。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為約4.0μm、4.1μm、4.2μm、4.3μm、4.4μm、4.5μm、4.6μm、4.7μm、4.8μm、4.9μm、或5.0μm中之任一者。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為約4.5μm。
於根據本文所描述之任一方法或組成物的一些實施態樣中，該輸入免疫細胞係以介於約0.001mL/min與約200mL/min之間之流速，或其間之任何速率或速率範圍通過該壓縮器。於一些實施態樣中，該流速係介於約0.001mL/min與約175mL/min之間、約0.001mL/min與約150mL/min之間、約0.001mL/min與約125mL/min之間、約0.001mL/min與約100mL/min之間、約0.001mL/min與約50mL/min之間、約0.001mL/min與約25mL/min之間、約0.001mL/min與約10mL/min之間、約0.001mL/min與約7.5mL/min之間、約0.001mL/min與約5.0mL/min之間、約0.001mL/min與約2.5mL/min之間、約0.001mL/min與約1mL/min之間、約0.001mL/ml min與約0.1mL/min之間、或約0.001mL/min與約0.01mL/min之間。於一些實施態樣中，該流速係介於約0.001mL/min與約200mL/min之間、約0.01mL/min與約200mL/min之間、約0.1mL/min與約200mL/min之間、約1mL/min與約200mL/min之間、約10mL/min與約200mL/min之間、約50mL/min與約200mL/min之間、約75mL/min與約200mL/min之間、約100mL/min與約200mL/min之間、約150mL/min與約200mL/min之間、約0.5mL/min與約200mL/min之間、約1mL/min與約200mL/min之間、約2.5mL/min與約200mL/min之間、約5mL/mL與約200mL/min之間、約7.5mL/min與約200mL/min之間、約10mL/min與約200mL/min之間、約25mL/min與約200mL/min之間、或約175mL/min與約200mL/min之間。於一些實施態樣中，該輸入免疫細胞係以介於約10mL/min與約200mL/min之間之流速通過該壓縮器。於一些實施態樣中，該輸入免疫細胞係以約100mL/min之流速通過該壓縮器。
於根據本文所描述之任一方法或組成物的一些實施態樣中，該壓縮器可具有本技藝已知之任何形狀；例如三維形狀或二維形狀。該壓縮器之二維形狀(諸如橫截面形狀)可為，但不限於環形、橢圓形、圓形、正方形、星形、三角形、多邊形、五邊形、六邊形、七邊形或八邊形。該壓縮器之三維形狀可為，但不限於圓柱形、圓錐形或立方形。於一些實施態樣中，該壓縮器之橫截面形狀為矩形。於一些實施態樣中，該壓縮器之橫截面形狀為狹縫。於一些實施態樣中，該壓縮器之橫截面形狀為包含約4μm至約10μm之寬度和/或約1μm至約200μm之深度的狹縫。於一些實施態樣中，該壓縮器之橫截面形狀為包含約3μm至約6μm之寬度和/或約20μm至約120μm之深度的狹縫。於一些實施態樣中，該壓縮器之橫截面形狀為包含約4.2μm至約6μm之寬度和/或約20μm至約120μm之深度的狹縫。於一些實施態樣中，該壓縮器之橫截面形狀為包含約4.2μm至約6μm之寬度和/或約40μm至約120μm之深度的狹縫。於一些實施態樣中，該壓縮器之橫截面形狀為包含約4.2μm至約6μm之寬度和/或約20μm至約80μm之深度的狹縫。於一些實施態樣中，該壓縮器之橫截面形狀為包含約4.5μm之寬度和/或約80μm之深度的狹縫。於一些實施態樣中，該狹縫包含約5μm至約50μm之長度。於一些實施態樣中，該狹縫包含約10μm至約30μm之長度。於一些實施態樣中，該狹縫包含約2μm至約50μm之長度。於一些實施態樣中，該狹縫包含約2μm至約5μm、約5μm至約10μm、約10μm至約15μm、約15μm至約20μm、約20μm至約25μm、約25μm至約30μm、約30μm至約35μm、約35μm至約40μm、約40μm至約45μm、或約45μm至約50μm中之任一長度。於一些實施態樣中，該狹縫包含約10μm之長度。
具有用於提供細胞變形壓縮器之孔的表面 於一些態樣中，本發明提供用於治療和預防HPV相關疾病，和/或增強患有HPV相關疾病之個體中的免疫反應之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞在細胞內包含HPV抗和佐劑；其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備：首先令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該抗原和該佐劑通過以形成經擾動之輸入細胞；然後將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原和該佐劑一起培育足夠之時間以令該HPV抗原和該佐劑進入該經擾動之輸入細胞；從而產生該等經修飾之免疫細胞。於一些實施態樣中，該變形力係當該輸入細胞通過該壓縮器時施加至該輸入細胞。於一些實施態樣中，該壓縮器為孔或包含在孔內。於一些實施態樣中，該孔係包含在表面中。具有用於本文所揭示之方法的孔之示例性表面描述於WO2017041050中。
如本文所揭示之表面可由多種物質中之任一者製成且可採取許多形式其中之任一形式。於一些實施態樣中，該表面為過濾器。於一些實施態樣中，該表面為膜。於一些實施態樣中，該過濾器為切向流過濾器。於一些實施態樣中，該表面為海綿狀或海綿狀基質。於一些實施態樣中，該表面為基質。
於一些實施態樣中，該表面為曲徑表面。於一些實施態樣中，該曲徑表面包含醋酸纖維素。於一些實施態樣中，該表面包含選自，但不限於下列群組之物質：合成或天然之聚合物、聚碳酸酯、矽、玻璃、金屬、合金、硝酸纖維素、銀、醋酸纖維素、尼龍、聚酯、聚醚碸、聚丙烯腈(PAN)、聚丙烯、PVDF、聚四氟乙烯、混合之纖維素酯、瓷器和陶瓷。
本文所揭示之表面可具有本技藝中已知之任何形狀；例如三維形狀。該表面之二維形狀可為，但不限於環形、橢圓形、圓形、正方形、星形、三角形、多邊形、五邊形、六邊形、七邊形或八邊形。於一些實施態樣中，該表面為圓形。於一些實施態樣中，該表面之3維形狀為圓柱形、圓錐形或立方形。
該表面可具有各種橫截面寬度和厚度。於一些實施態樣中，該表面橫截面寬度係介於約1mm至約1m之間，或為其間之任何橫截面寬度或橫截面寬度範圍。於一些實施態樣中，該表面具有限定之厚度。於一些實施態樣中，該表面厚度為均勻的。於一些實施態樣中，該表面厚度為可變的。例如，於一些實施態樣中，該表面之一些部分較該表面之其他部分更厚或更薄。於一些實施態樣中，該表面厚度之變化為約1%至約90%，或其間之任何百分比或百分比範圍。於一些實施態樣中，該表面厚度係介於約0.01μm與約5mm之間，或為其間之任何厚度或厚度範圍。
於一些實施態樣中，該壓縮器為孔或包含在孔內。該孔之橫截面寬度與待治療之免疫細胞的類型有關。於一些實施態樣中，該孔徑為待治療之免疫細胞或免疫細胞簇之直徑的函數。於一些實施態樣中，該孔徑使得免疫細胞在通過該孔時被擾動。於一些實施態樣中，該孔徑小於該免疫細胞之直徑。於一些實施態樣中，該孔徑為該免疫細胞之直徑的約10%至約99%。於一些實施態樣中，該孔徑為該免疫細胞直徑之約10%、約15%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%、或約99%。最佳孔徑或孔橫截面寬度可根據應用和/或免疫細胞類型而變化。於一些實施態樣中，該孔徑為約2μm至約14μm。於一些實施態樣中，該孔徑為約2μm、約3μm、約4μm、約5μm、約8μm、約10μm、約12μm、或約14μm。於一些實施態樣中，該橫截面寬度為約2μm至約14μm。於一些實施態樣中，該孔橫截面為約2μm、約3μm、約4μm、約5μm、約8μm、約10μm、約12μm、或約14μm。
該孔通道之入口和出口可具有各種角度。該孔之角度可經過選擇以使免疫細胞通過時將孔的堵塞最小化。例如，入口或出口部分之角度可介於約0度與約90度之間。於一些實施態樣中，該入口或出口部分可大於90度。於一些實施態樣中，該孔具有完全相同之入口和出口角度。於一些實施態樣中，該孔具有不同之入口和出口角度。於一些實施態樣中，該孔邊緣為平滑的，例如圓形或彎曲的。平滑之孔邊緣具有連續、平坦且均勻之表面，沒有凸起、脊或不均勻之部分。於一些實施態樣中，該孔之邊緣為尖銳的。尖銳之孔邊緣具有尖銳之薄邊緣或銳角。於一些實施態樣中，該孔通道為直的。該直的孔通道不包含曲線、彎曲、角度或其他不規則性。於一些實施態樣中，該孔通道為彎曲的。彎曲的孔通道為彎曲的或偏離直線。於一些實施態樣中，該孔通道具有多條曲線，例如約2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多條曲線。通過該孔之流速亦可經過調節。於一些實施態樣中，通過該孔之流速係介於約0.001mL/cm2 /sec與約100 L/cm2 /sec之間，或為其間之任何速率或速率範圍。
該孔可具有本技藝已知之任何形狀，包括二維形狀或三維形狀。該孔之形狀(諸如橫截面形狀)可為，但不限於環形、橢圓形、圓形、正方形、星形、三角形、多邊形、五邊形、六邊形、七邊形和八邊形。於一些實施態樣中，該孔之橫截面形狀為圓形。於一些實施態樣中，該孔之三維形狀為圓柱形或圓錐形。於一些實施態樣中，該孔具有帶凹槽之入口和出口形狀。於一些實施態樣中，在指定之表面內的孔之間，孔的形狀為均勻的(即一致的或規則的)。於一些實施態樣中，在指定之表面內的孔之間，孔的形狀為混雜的(即混合的或有變化的)。
本文所描述之表面可具有一系列小孔總數。於一些實施態樣中，該小孔佔總表面積之約10%至約80%。於一些實施態樣中，該表面含有之小孔總數為約1.0×105 至約1.0×1030 個，或其間之任何數量或數量範圍。於一些實施態樣中，該表面包含約10至約1.0×1015 個孔/mm2 表面積。
該小孔可以多種方式分佈在指定之表面內。於一些實施態樣中，該小孔係平行分佈在指定之表面內。於一此類實例中，該小孔係在指定之表面內以相同方向並排分佈且分隔相同的距離。於一些實施態樣中，該小孔分佈是有序的或均勻的。於一此類實例中，該小孔係以規則的，系統性圖案或間隔相同的距離分佈在指定之表面內。於一些實施態樣中，該小孔分佈為隨機或混雜的。於一此類實例中，該小孔係以不規則的，無序圖案或間隔不同的距離分佈在指定之表面內。於一些實施態樣中，多個表面係串聯分佈。該多個表面之表面尺寸、形狀和/或粗糙度可為均勻的或混雜的。該多個表面可進一步含有尺寸、形狀和/或數量均勻或混雜的小孔，從而能夠同時將一系列化合物投遞入不同的免疫細胞類型。
於一些實施態樣中，該個別小孔具有均勻之寬度大小(即，沿著該小孔通道長的寬度為固定的)。於一些實施態樣中，該個別小孔具有可變之寬度(即，沿著該小孔通道長的寬度增加或減小)。於一些實施態樣中，在指定表面內之小孔具有相同的個別小孔深度。於一些實施態樣中，在指定表面內之小孔具有不同的個別小孔深度。於一些實施態樣中，該小孔彼此緊鄰。於一些實施態樣中，該小孔彼此分開一段距離。於一些實施態樣中，該小孔彼此分開相距約0.001μm至約30mm，或其間之任何距離或距離範圍。
於一些實施態樣中，該表面係以物質塗層。該物質可選自本技藝已知之任何物質，包括，但不限於鐵氟龍、黏合塗層、表面活性劑、蛋白質、黏附分子、抗體、抗凝血劑、調節細胞功能之因子、核酸、脂質、碳水化合物或跨膜蛋白質。於一些實施態樣中，該表面係經塗覆聚乙烯吡咯啶酮(PVP)。於一些實施態樣中，該物質共價連接型該表面。於一些實施態樣中，該物質非共價連接至該表面或吸附至該表面。於一些實施態樣中，該表面分子係在該免疫細胞通過小孔時被釋出。
於一些實施態樣中，該表面具有經修飾之化學性質。於一些實施態樣中，該表面為極性。於一些實施態樣中，該表面為親水性。於一些實施態樣中，該表面為非極性。於一些實施態樣中，該表面為疏水性。於一些實施態樣中，該表面帶電荷。於一些實施態樣中，該表面帶正電和/或帶負電。於一些實施態樣中，該表面在一些區域可帶正電並在其他區域帶負電。於一些實施態樣中，該表面具有總體正電荷或總體負電荷。於一些實施態樣中，該表面可為平滑的、經電解拋光的、粗糙的或經等離子體處理中之任一者。於一些實施態樣中，該表面包含兩性離子或偶極化合物。於一些實施態樣中，該表面為經等離子體處理。
於一些實施態樣中，該表面係包含在較大之模塊內。於一些實施態樣中，該表面係包含在注射器內，諸如塑料或玻璃注射器。於一些實施態樣中，該表面係包含在塑料過濾器支架內。於一些實施態樣中，該表面係包含在移液管尖端內。 細胞擾動 於一些實施態樣中，本發明提供調節免疫反應之方法，該方法係藉由令包含免疫細胞之細胞懸浮液通過壓縮器，從而造成該免疫細胞擾動，使得抗原和/或佐劑進入該免疫細胞進行，其中該免疫細胞中之擾動為該免疫細胞之缺口允許物質從該免疫細胞外部移動進入該免疫細胞內(例如孔、撕裂口、腔、隙縫、小孔、裂縫、間隙、穿孔)。於一些實施態樣中，該變形力係當該輸入細胞通過該壓縮器時施加至該輸入細胞。該變形可由，例如機械應變和/或剪切力引起。於一些實施態樣中，該擾動為在該免疫細胞膜內之擾動。於一些實施態樣中，該擾動為瞬時的。於一些實施態樣中，該免疫細胞擾動持續約1.0×10-9 秒至約2小時，或其間之任何時間或時間範圍。於一些實施態樣中，該免疫細胞擾動持續約1.0×10-9 秒至約1秒、約1秒至約1分鐘或約1分鐘至約1小時。於一些實施態樣中，該免疫細胞擾動持續之時間介於下列任一範圍之間：約1.0×10-9 至約1.0×10-1 秒、約1.0×10-9 至約1.0×10-2 秒、約1.0×10-9 至約1.0×10-3 秒、約1.0×10-9 至約1.0×10-4 秒、約1.0×10-9 至約1.0×10-5 秒、約1.0×10-9 至約1.0×10-6 秒、約1.0×10-9 至約1.0×10-7 秒、或約1.0×10-9 至約1.0×10-8 秒。於一些實施態樣中，該免疫細胞擾動持續之時間為下列任一者：約1.0×10-8 至約1.0×10-1 秒、約1.0×10-7 至約1.0×10-1 秒、約1.0×10-6 至約1.0×10-1 秒、約1.0×10-5 至約1.0×10-1 秒、約1.0×10-4 至約1.0×10-1 秒、約1.0×10-3 至約1.0×10-1 秒、或約1.0×10-2 至約1.0×10-1 秒。藉由本文所描述之方法創造之免疫細胞擾動(例如孔或洞)的形成並非由於蛋白質亞單位組裝形成聚體小孔結構(諸如由補體或細菌溶血素創造之聚體孔結構)所導致。
當該免疫細胞通過該壓縮器時，該壓縮器暫時對該免疫細胞膜帶來損傷，該損傷允許物質透過擾動被動地擴散。於一些實施態樣中，該免疫細胞僅短期間變形(大約100μs)以將透過細胞信號傳導機制活化凋亡途徑的機會最小化，儘管其他持續時間是可能的(例如從奈秒到數小時)。於一些實施態樣中，該免疫細胞變形約1.0×10-9 秒至約2小時，或其間之任何時間或時間範圍。於一些實施態樣中，該免疫細胞變形約1.0×10-9 秒至約1秒、約1秒至約1分鐘或約1分鐘至約1小時。於一些實施態樣中，該免疫細胞之變形時間介於下列任一範圍之間：約1.0×10-9 至約1.0×10-1 秒、約1.0×10-9 至約1.0×10-2 秒、約1.0×10-9 至約1.0×10-3 秒、約1.0×10-9 至約1.0×10-4 秒、約1.0×10-9 至約1.0×10-5 秒、約1.0×10-9 至約1.0×10-6 秒、約1.0×10-9 至約1.0×10-7 秒、或約1.0x10-9 至約1.0x10-8 秒。於一些實施態樣中，該免疫細胞之變形時間為約1.0×10-8 至約1.0×10-1 秒、約1.0×10-7 至約1.0×10-1 秒、約1.0×10-6 至約1.0×10-1 秒、約1.0×10-5 至約1.0×10-1 秒、約1.0×10-4 至約1.0×10-1 秒、約1.0×10-3 至約1.0×10-1 秒、或約1.0×10-2 至約1.0×10-1 秒。於一些實施態樣中，令該免疫細胞變形係包括令該免疫細胞變形約1μs到至少約750μs，但不限於此，例如至少約1μs、10μs、50μs、100μs、500μs、或750μs。
於一些實施態樣中，該抗原和/或佐劑進入該免疫細胞係與免疫細胞通過該壓縮器和/或該免疫細胞之擾動同時發生。於一些實施態樣中，該化合物進入該免疫細胞係在免疫細胞通過該壓縮器後發生。於一些實施態樣中，該化合物進入該免疫細胞係在免疫細胞通過該壓縮器後數分鐘內發生。於一些實施態樣中，該化合物進入該免疫細胞係在免疫細胞通過該壓縮器後約1.0×10-2 秒到至少約30分鐘發生。例如，該化合物進入該免疫細胞係在免疫細胞通過該壓縮器後約1.0×10-2 秒至約1秒、約1秒至約1分鐘、或約1分鐘至約30分鐘發生。於一些實施態樣中，該化合物進入該免疫細胞係在免疫細胞通過該壓縮器後約1.0×10-2 秒至約10分鐘、約1.0×10-2 秒至約5分鐘、約1.0×10-2 秒至約1分鐘、1.0×10-2 秒至約50秒、1.0×10-2 秒至約30秒、1.0×10-2 秒至約10秒、1.0×10-2 秒至約1秒、或1.0×10-2 秒至約0.1秒發生。於一些實施態樣中，該化合物進入該免疫細胞係在免疫細胞通過該壓縮器後約1.0×10-1 秒至約10分鐘、約1秒至約10分鐘、約10秒至約10分鐘、約50秒至約10分鐘、約1分鐘至約10分鐘、或約5分鐘至約10分鐘發生。於一些實施態樣中，該免疫細胞中之擾動係在免疫細胞通過該壓縮器後約5分鐘校正。
於一些實施態樣中，通過壓縮器後該細胞存活力為約5%至約100%。於一些實施態樣中，通過壓縮器後該細胞存活力為至少約5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、或99%。於一些實施態樣中，該細胞存活力係在該免疫細胞通過該壓縮器後約1.0×10-2 秒到至少約10天測量。例如，該細胞存活力係在該免疫細胞通過該壓縮器後約1.0×10-2 秒至約1秒、約1秒至約1分鐘、約1分鐘至約30分鐘、或約30分鐘至約2小時測量。於一些實施態樣中，該細胞存活力係在該免疫細胞通過該壓縮器後約1.0×10-2 秒至約2小時、約1.0×10-2 秒至約1小時、約1.0×10-2 秒至約30分鐘、約1.0×10-2 秒至約1分鐘、約1.0×10-2 秒至約30秒、約1.0×10-2 秒至約1秒、或約1.0×10-2 秒至約0.1秒測量。於一些實施態樣中，該細胞存活力係在該免疫細胞通過該壓縮器後約1.5小時至約2小時、約1小時至約2小時、約30分鐘至約2小時、約15分鐘至約2小時、約1分鐘至約2小時、約30秒至約2小時、或約1秒至約2小時測量。於一些實施態樣中，該細胞存活力係在該免疫細胞通過該壓縮器後約2小時至約5小時、約5小時至約12小時、約12小時至約24小時、或約24小時至約10天測量。 投遞參數
許多參數可能影響化合物投遞至免疫細胞以用於藉由本文所描述之方法調節免疫反應。於一些實施態樣中，該細胞懸浮液係在通過該壓縮器之前、同時或之後與該化合物接觸。該免疫細胞可懸浮在包括該待投遞之化合物的溶液中通過該壓縮器，儘管該化合物可在該免疫細胞通過壓縮器後加入該細胞懸浮液中。於一些實施態樣中，該待投遞之化合物係塗覆在該壓縮器上。
可能影響該化合物投遞入該免疫細胞之參數的實例包括，但不限於該壓縮器之尺寸、該壓縮器之入口角度、該壓縮器之表面性質(例如粗糙度、化學修飾、親水性、疏水性，等)、操作流速(例如通過該壓縮器之細胞運輸時間)、該免疫細胞濃度、該細胞懸浮液中之化合物的濃度且該免疫細胞在通過該壓縮器後恢復或培育之時間量可影響該投遞之化合物進入該免疫細胞。影響該化合物投遞入該免疫細胞的其他參數可包括該免疫細胞在該壓縮器中之速度、該壓縮器中之剪切率、該細胞懸浮液之黏度、與流速正交之速度組分和在該壓縮器中之時間。該等參數可經過設計以控制該化合物之投遞。於一些實施態樣中，該免疫細胞之濃度係在約10到至少約1012 個細胞/mL之範圍內，或其間之任何濃度或濃度範圍。於一些實施態樣中，投遞化合物濃度可為約10 ng/mL至約1 g/mL，或其間之任何濃度或濃度範圍。於一些實施態樣中，投遞化合物濃度可為約1pM到至少約2M，或其間之任何濃度或濃度範圍。
本發明方法中所使用之溫度可經調整以影響化合物投遞和細胞存活力。於一些實施態樣中，該方法係在介於約-5℃與約45℃之間執行。例如，該方法可在室溫(例如約20℃)、生理溫度(例如約37℃)、高於生理溫度(例如高於約37℃至45℃或更高)、或降低之溫度(例如約-5℃至約4℃)、或這些示例性溫度之間之溫度下進行。
可利用各種方法來驅動免疫細胞通過該壓縮器。例如，可藉由泵將壓力施加在入口側(例如壓縮機)、可藉由真空泵將真空施加在出口側、可透過管施加毛細作用和/或該系統可為重力供給系統。亦可使用基於位移之流動系統(例如注射泵、蠕動泵、手動注射器、或移液管、活塞，等)。於一些實施態樣中，該免疫細胞係藉由正壓或負壓通過該壓縮器。於一些實施態樣中，該免疫細胞係藉由恆定壓力或可變壓力通過該壓縮器。於一些實施態樣中，該壓力係使用注射器施加。於一些實施態樣中，該壓力係使用氣瓶施加。於一些實施態樣中，該壓力係使用氣瓶正壓法施加。於一些實施態樣中，該壓力係使用泵施加。於一些實施態樣中，該泵為蠕動泵或隔膜泵。於一些實施態樣中，該壓力係使用真空施加。於一些實施態樣中，該免疫細胞係藉由g力通過該壓縮器。於一些實施態樣中，該免疫細胞係藉由離心力通過該壓縮器。於一些實施態樣中，該免疫細胞係藉由毛細壓力通過該壓縮器。
於一些實施態樣中，該流體流引導該免疫細胞通過該壓縮器。於一些實施態樣中，在免疫細胞通過該壓縮器之前，該流體流為紊流。紊流為其中在指定點處之速度在幅度和方向方面不規則地變化的流體流。於一些實施態樣中，該通過該壓縮器之流體流為層流。層流涉及在靠近固體邊界之流體不間斷地流動，其中每個點之流動方向保持恆定。於一些實施態樣中，在該免疫細胞通過該壓縮器後，該流體流為紊流。該免疫細胞通過該壓縮器之速度可以改變。於一些實施態樣中，該免疫細胞以均勻之細胞速度通過該壓縮器。於一些實施態樣中，該免疫細胞以起伏不定之細胞速度通過該壓縮器。
於其他實施態樣中，藉由令包含免疫細胞之細胞懸浮液通過壓縮器來使用組合治療調節免疫反應，其中該壓縮器令該免疫細胞變形，從而造成該免疫細胞之擾動，使得抗原和/或佐劑進入免疫細胞(例如本文所描述之方法)，然後暴露於該壓縮器電場下游。於一些實施態樣中，在通過該壓縮器之後，該免疫細胞通過藉由至少一個電極產生之電場。於一些實施態樣中，該電場協助將化合物投遞至該免疫細胞內之第二位置，諸如免疫細胞核。例如，細胞變形壓縮器和電場之組合可將編碼抗體之質粒投遞入免疫細胞(例如細胞核)中，導致重新產生抗體。於一些實施態樣中，一或多個電極係靠近細胞變形壓縮器以產生電場。於一些實施態樣中，該電場係介於約0.1 kV/m與約100MV/m之間，或為其間之任何數字或數字範圍。於一些實施態樣中，使用集成電路來提供電信號以驅動該電極。於一些實施態樣中，該免疫細胞暴露於電場，脈衝寬度係介於約1ns與約1s之間，期間係介於約100 ns與約10 s之間，或為其間之任何時間或時間範圍。 用於投遞至免疫細胞的細胞懸浮液
該細胞懸浮液可為混合或純化之免疫細胞族群。於一些實施態樣中，該細胞懸浮液為混合之細胞族群，諸如全血或PBMC。於進一步之實施態樣中，該混合之細胞族群為限定或純化之群體的混合物。於一些實施態樣中，該細胞懸浮液為純化之細胞族群，諸如純化之免疫細胞族群。
該細胞懸浮液之組成(例如莫耳滲透壓濃度、鹽濃度、血清含量、細胞濃度、pH值，等)可影響用於調節免疫反應之化合物的投遞。於一些實施態樣中，該懸浮液包含全血。或者，該細胞懸浮液為在生理鹽水溶液或除了血液之外的生理介質中之細胞混合物。於一些實施態樣中，該細胞懸浮液包含水溶液。於一些實施態樣中，該水溶液包含細胞培養基、(磷酸鹽緩衝之鹽水)PBS、鹽、金屬離子、糖、生長因子、源自動物之產品、增量物質、表面活性劑、潤滑劑、脂質、維生素、胺基酸、蛋白質、細胞週期抑制劑和/或影響肌動蛋白聚合之劑。於一些實施態樣中，該細胞培養基為X-VIVOTM 10、X- VIVOTM 15、DMEM、Opti-MEM®、IMDM或RPMI。另外，溶液緩衝液可包括一或多種潤滑劑(普朗尼克(pluronic)或其他表面活性劑)，該潤滑劑可經過設計以，例如減少或消除該壓縮器堵塞並改善細胞存活力。示例性表面活性劑包括，但不限於泊洛沙姆(poloxamer)、聚山梨醇酯、糖、或糖醇，諸如甘露醇、山梨糖醇、源自動物之血清和白蛋白。
於一些具有某些類型之免疫細胞的構形中，該免疫細胞可被培育在一或多種協助將該化合物投遞至該免疫細胞內部之溶液中。於一些實施態樣中，該水溶液包含影響肌動蛋白聚合之劑。於一些實施態樣中，該影響肌動蛋白聚合之劑為紅海海綿蛋白(Latrunculin A)、細胞鬆弛素(Cytochalasin)和/或秋水仙素(Colchicine)。例如，可在投遞之前將該免疫細胞在解聚溶液，諸如紅海海綿蛋白(0.1μg/mL)中培育1小時以將該肌動蛋白細胞骨架解聚。另外之實例為可在投遞之前將該免疫細胞在10μM秋水仙素(Sigma)中培育2小時以將微管網絡解聚。
於一些實施態樣中，在使用本揭示之方法前先富集該細胞族群。例如，從體液(例如外周血)取得細胞並可選擇地富集或純化以濃縮免疫細胞。細胞可藉由本技藝已知之任何方法富集，包括，但不限於磁性細胞分離、螢光活化之細胞分選(FACS)或密度梯度離心。
細胞懸浮液之黏度亦可影響本文所揭示之方法。於一些實施態樣中，該細胞懸浮液之黏度範圍係在約8.9×10-4 Pa·s至約4.0×10-3 Pa·s，或其間之任何數值或數值範圍。於一些實施態樣中，該黏度範圍係在約8.9×10-4 Pa·s至約4.0×10-3 Pa·s，或其間之任何數值或數值範圍。於一些實施態樣中，該黏度係在下列任一範圍之間：約8.9×10-4 Pa·s與約4.0×10-3 Pa·s之間、約8.9×10-4 Pa·s與約3.0×10-3 Pa·s之間、約8.9×10-4 Pa·s與約2.0×10-3 Pa·s之間、或約8.9×10-3 Pa·s與約1.0×10-3 Pa·s之間。於一些實施態樣中，該黏度係在下列任一範圍之間：約0.89 cP與約4.0 cP之間、約0.89 cP與約3.0 cP之間、約0.89 cP與約2.0 cP之間、或約0.89 cP與約1.0 cP之間。於一些實施態樣中，觀察到剪切稀化效果，其中該細胞懸浮液之黏度在剪切應變之條件下降低。黏度可藉由本技藝已知之任何方法測量，包括，但不限於黏度計(諸如玻璃毛細管黏度計)或流變儀。黏度計測量在一種流動條件下的黏度，而流變儀係用於測量隨著流動條件而變化之黏度。於一些實施態樣中，該測量之黏度為剪切稀化溶液，諸如血液之黏度。於一些實施態樣中，該黏度係在介於約-5℃與約45℃之間測量。例如，該黏度係在室溫(例如約20℃)、生理溫度(例如約37℃)、高於生理溫度(例如高於約37℃至45℃、或更高)、降低之溫度(例如約-5℃至約4℃)、或這些示例性溫度之間之溫度下測量。用於增強免疫反應之抗原和佐劑
本發明之某些態樣係關於藉由將根據本文所描述之方法修飾的免疫細胞引入患者體內來治療患者之方法。於一些實施態樣中，該免疫細胞係用於免疫療法中。於一些態樣中，本發明關於用於治療個體中與人乳頭瘤病毒(HPV)相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾的免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞在細胞內包含HPV抗原且在細胞內包含佐劑。於一些態樣中，本發明關於用於治療個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾的免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞在細胞內包含HPV抗原且在細胞內包含佐劑；其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備：a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該抗原和該佐劑通過以形成經擾動之輸入細胞；和b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原和該佐劑一起培育足夠之時間以令該HPV抗原和該佐劑進入該經擾動之輸入細胞；從而產生該等經修飾之免疫細胞。於一些實施態樣中，該變形力係當該輸入細胞通過該壓縮器時施加至該輸入細胞。
於一些態樣中，本發明關於用於預防個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾的免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞在細胞內包含HPV抗原且在細胞內包含佐劑。於一些態樣中，本發明關於用於預防個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾的免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞在細胞內包含HPV抗原且在細胞內包含佐劑；其中該經修飾的免疫細胞係藉由下述步驟製備：a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該HPV抗原和該佐劑通過以形成經擾動之輸入細胞；和b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原和該佐劑一起培育足夠之時間以令該HPV抗原和該佐劑進入該經擾動之輸入細胞；從而產生該等經修飾之免疫細胞。於一些實施態樣中，該變形力係當該輸入細胞通過該壓縮器時施加至該輸入細胞。
於一些態樣中，本發明關於用於調節患有HPV相關之疾病的個體中之免疫反應的方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾的免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞在細胞內包含HPV抗原且在細胞內包含佐劑。於一些態樣中，本發明關於用於調節患有HPV相關疾病的個體中之免疫反應的方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾的免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞在細胞內包含HPV抗原且在細胞內包含佐劑；其中該經修飾的免疫細胞係藉由下述步驟製備：a)令包含輸入細胞(其包含HPV抗原)之細胞懸浮液通過了包含細胞變形壓縮器之微流體通道(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該HPV抗原和該佐劑通過以形成經擾動之輸入細胞；和b)將該經擾動之輸入細胞與該抗原和該佐劑一起培育足夠之時間以令該HPV抗原和該佐劑進入該經擾動之輸入細胞；從而產生該等經修飾之免疫細胞。於一些實施態樣中，該變形力係當該輸入細胞通過該壓縮器時施加至該輸入細胞。於一些實施態樣中，該免疫反應被增強。於一些實施態樣中，對該HPV抗原之免疫反應被增強。
本發明之一些態樣提供對患有HPV相關疾病之個體投遞抗原來增強對該抗原之免疫反應，此係藉由投予包含細胞內抗原之免疫細胞進行，其中該抗原係藉由本文所描述之任何方法投遞至該細胞。於一些實施態樣中，該抗原為單一抗原。於一些實施態樣中，該抗原為抗原之混合物。抗原為刺激特定之免疫反應(諸如由細胞或抗體介導之免疫反應)的物質。抗原與由免疫細胞表現之受體(諸如T細胞受體(TCR))結合，該受體係特異於特定抗原。抗原-受體結合隨後觸發細胞內信號傳導途徑，此導致下游免疫效應途徑，諸如細胞活化、產生細胞因子、細胞移行、分泌細胞毒性因子和產生抗體。
於一些實施態樣中，該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備：a) 令包含含有HPV抗原之輸入細胞的細胞懸浮液通過壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該HPV抗原和該佐劑通過以形成經擾動之輸入細胞；和b) 將該經擾動之輸入細胞與該抗原和該佐劑一起培育足夠之時間以令該HPV抗原和該佐劑進入該經擾動之輸入細胞；從而產生經修飾的免疫細胞。於進一步之實施態樣中，該壓縮器之直徑小於該細胞之直徑。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑小於該免疫細胞之直徑。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至99%。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至小於約60%。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%、約95%、或約99%中之任一者。於一些實施態樣中，該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至約30%、約30%至約40%、約40%至約50%、約50%至約60%、約60%至約70%、約70%至約80%、約80%至約90%、約90%至約95%、或約95%至約99%中之任一者。於一些實施態樣中，該變形力係當該輸入細胞通過該壓縮器時施加至該輸入細胞。於一些實施態樣中，該壓縮器係在通道中。於一些實施態樣中，該壓縮器係包含在微流體通道中。於一些實施態樣中，該壓縮器係包含在過濾器內。於其他實施態樣中，該壓縮器為過濾器上的孔。
於一些實施態樣中，該等經修飾之免疫細胞包含細胞內HPV抗原和佐劑。於一些實施態樣中，該HPV抗原和/或該佐劑係存在於該細胞質液和/或胞內體中。於一些實施態樣中，該抗原和/或佐劑係存在於該細胞之多個隔室中。於進一步之實施態樣中，該抗原和/或佐劑係存在於細胞之隔室中，包括下列之一或多者：內質網(ER)、高基氏體、溶酶體、或外泌體。於一些實施態樣中，該抗原和佐劑係在相同之隔室中。於一些實施態樣中，該抗原和佐劑彼此係在不同之隔室中。例如，於一些實施態樣中，該抗原存在於細胞質液中，而該佐劑係存在於胞內體中。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞進一步在細胞外部包含HPV抗原和/或佐劑。
於一些實施態樣中，與該經擾動之輸入細胞一起培育之佐劑的濃度係介於約0.1μM與約10mM之間。例如，於一些實施態樣中，與該經擾動之輸入細胞一起培育之佐劑的濃度為下列任一者：低於約0.01μM、約0.1μM、約1μM、約10μM、約100μM、約1mM、或約10mM。於一些實施態樣中，與該經擾動之輸入細胞一起培育之佐劑的濃度大於約10mM。於一些實施態樣中，與該經擾動之輸入細胞一起培育之佐劑的濃度係介於下列任一範圍之間：介於約0.01μM與約0.1μM之間、介於約0.1μM與約1μM之間、介於約1μM與約10μM之間、介於約10μM與約100μM之間、介於約100μM與約1mM之間、或介於1mM與約10mM之間。於一些實施態樣中，與該經擾動之輸入細胞一起培育之佐劑的濃度介於約0.1μM與約1mM之間。
於一些實施態樣中，與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原的濃度係介於約0.01μM與約10mM之間。例如，於一些實施態樣中，與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原的濃度為下列任一者：低於約0.01μM、約0.1μM、約1μM、約10μM、約100μM、約1mM、或約10mM。於一些實施態樣中，與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原的濃度大於約10mM。於一些實施態樣中，與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原的濃度係介於下列任一範圍之間：介於約0.01μM與約0.1μM之間、介於約0.1μM與約1μM之間、介於約1μM與約10μM之間、介於約10μM與約100μM之間、介於約100μM與約1mM之間、或介於1mM與約10mM之間。於一些實施態樣中，與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原的濃度係介於約0.1μM與約1mM之間。
於一些實施態樣中，與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原對佐劑的莫耳比為介於約10000：1與約1：10000之間之任何比例。例如，於一些實施態樣中，與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原對佐劑的莫耳比為下列任一比例：10000：1、約1000：1、約100：1、約10：1、約1：1、約1:10、約1：100、約1：1000、或約1：10000。於一些實施態樣中，與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原對佐劑的莫耳比係介於下列任一範圍之間：介於約10000：1與約1000：1之間、介於約1000：1與約100：1之間、介於約100：1與約10：1之間、介於約10：1與約1：1之間、介於約1：1與約1：10之間、介於約1：10與約1：100之間、介於約1：100與約1：1000之間、介於約1：1000與約1：10000之間。
於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含之佐劑的濃度介於約0.01μM與約10mM之間。例如，於一些實施態樣中，該免疫細胞包含之佐劑的濃度為下列任一者：低於約0.01μM、約0.1μM、約1μM、約10μM、約100μM、約1mM、或約10mM。於一些實施態樣中，該免疫細胞包含之佐劑的濃度高於約10mM。於一些實施態樣中，該免疫細胞包含之佐劑的濃度係介於下列任一範圍之間：介於約0.1μM與約1μM之間、介於約1μM與約10μM之間、介於約10μM與約100μM之間、介於約100μM與約1mM之間、或介於約1mM與約10mM之間。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含之佐劑的濃度係介於約0.1μM與約1mM之間。
於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞中之HPV抗原的濃度為介於約0.01μM與約10mM之間。例如，於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞中之HPV抗原的濃度為下列任一者：低於約0.01μM、約0.1μM、約1μM、約10μM、約100μM、約1mM、或約10mM。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞中之HPV抗原的濃度高於約10mM。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞中之HPV抗原的濃度係介於下列任一範圍之間：介於約0.1μM與約1μM之間、介於約1μM與約10μM之間、介於約10μM與約100μM之間、介於約100μM與約1mM之間、或介於1mM與約10mM之間。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞中之HPV抗原的濃度係介於約0.1μM與約1mM之間。
於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞中之HPV抗原對佐劑的莫耳比為介於約10000：1與約1：10000之間之任一比例。例如，於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞中之HPV抗原對佐劑的莫耳比為下列任一者：約10000：1、約1000：1、約100：1、約10：1、約1：1、約1：10、約1：100、約1：1000、或約1：10000。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞中之HPV抗原對佐劑的莫耳比係介於下列任一範圍之間：介於約10000：1與約1000：1之間、介於約1000：1與約100：1之間、介於約100：1與約10：1之間、介於約10：1與約1：1之間、介於約1：1與約1：10之間、介於約1：10與約1：100之間、介於約1：100與約1：1000之間、介於約1：1000與約1：10000之間。
於一些實施態樣中，該抗原為多肽抗原。於一些實施態樣中，該抗原係使用脂質修飾。於一些實施態樣中，該經修飾之抗原係使用多醣或碳水化合物部分修飾。於一些實施態樣中，該抗原與病毒相關。於一些實施態樣中，該抗原為病毒抗原。示例性病毒抗原包括HPV抗原。於進一步之實施態樣中，該抗原為HPV抗原。於一些實施態樣中，該HPV抗原係由選自下列群組之HPV抗原所組成：HPV-16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73和82。HPV-16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73和82為導致癌症之高風險類型，而HPV-26、53和66為導致癌症之“可能的高風險類型”。於一些實施態樣中，該HPV抗原為包含抗原性HPV抗原決定部位和一或多種異源肽序列之多肽。於一些實施態樣中，該抗原為HPV-16抗原或HPV-18抗原。於一些實施態樣中，該HPV抗原包含HLA-A2特異性抗原決定部位。HPV E6和E7基因為該病毒之致癌基因且這些基因之表現對惡性轉化是必要的。E6和E7蛋白靶向該細胞週期的許多負調節因子，主要分別為p105Rb和p53，因此可干擾細胞週期調節。於進一步之實施態樣中，該HPV抗原為HPV E6抗原或HPV E7抗原。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含HPV E6抗原和HPV E7抗原。於一些實施態樣中，該HPV抗原為包含免疫原性抗原決定部位之多肽，該免疫原性抗原決定部位之N端和/或C端側翼鄰接一或多個異源肽序列。於一些實施態樣中，該HPV抗原為HPV E7抗原決定部位，該HPV E7抗原決定部位側翼鄰接來自HPV E6多肽(E7.6)之序列。於一些實施態樣中，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至26中任一序列具有至少90%相似性之胺基酸序列。於一些實施態樣中，該HPV抗原包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列。於一些實施態樣中，該HPV抗原包含SEQ ID NO：18至26中任一胺基酸序列。於一些實施態樣中，該HPV抗原包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列。
於一些實施態樣中，該抗原係源自細胞溶胞產物，諸如疾病細胞之溶胞產物。於一些實施態樣中，該抗原係在細胞溶胞產物中。於一些實施態樣中，該抗原係源自腫瘤溶胞產物。於一些實施態樣中，該抗原係源自HPV相關癌細胞之溶胞產物。於一些實施態樣中，該HPV相關癌症為頭頸癌、子宮頸癌、外陰癌、陰道癌、陰莖癌、肛門癌、肛周癌、肛門生殖器癌、口腔癌或唾液腺癌中之任一者。
於一些態樣中，本發明關於用於治療個體中人類乳頭瘤病毒(HPV)相關癌症之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至26中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列。於一些態樣中，本發明關於用於治療個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至26中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列；其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備：a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該抗原通過以形成經擾動之輸入細胞；和b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原一起培育足夠之時間以令該HPV抗原進入該經擾動之輸入細胞；從而產生該等經修飾之免疫細胞。於一些實施態樣中，該變形力係當該輸入細胞通過該壓縮器時施加至該輸入細胞。
於一些態樣中，本發明關於用於預防個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至26中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列。於一些態樣中，本發明關於用於預防個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含含有HPV抗原之經修飾的免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至26中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列；其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備：a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該HPV抗原通過以形成經擾動之輸入細胞；和b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原一起培育足夠之時間以令該HPV抗原進入該經擾動之輸入細胞；從而產生該等經修飾之免疫細胞。於一些實施態樣中，該變形力係當該輸入細胞通過該壓縮器時施加至該輸入細胞。
於一些態樣中，本發明關於用於調節患有HPV相關疾病之個體的免疫反應之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至26中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列。於一些態樣中，本發明關於用於調節患有HPV相關疾病之個體的免疫反應之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至26中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列；其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備：a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該HPV抗原通過以形成經擾動之輸入細胞；和b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原一起培育足夠之時間以令該HPV抗原進入該經擾動之輸入細胞；從而產生該等經修飾之免疫細胞。於一些實施態樣中，該變形力係當該輸入細胞通過該壓縮器時施加至該輸入細胞。於一些實施態樣中，該免疫反應被增強。於一些實施態樣中，對該HPV抗原之免疫反應被增強。
於一些實施態樣中，該HPV抗原為引發針對相同和/或不同HPV抗原之反應的多個多肽之匯集庫。於一些實施態樣中，該包含在多個抗原之匯集庫中的抗原不會降低針對其他抗原之免疫反應。例如，當使用HPV E6和E7抗原之匯集庫時，該針對HPV E6和E7抗原之對應的免疫反應將分別與單獨使用HPV E6或單獨使用HPV E7作為抗原時的免疫反應相當。
於一些實施態樣中，該HPV抗原為包含免疫原性HPV抗原決定部位及一或多個異源肽序列之多肽。於一些實施態樣中，該一或多個HPV抗原與其自身、與其他抗原、或與佐劑複合。
如本文所使用之術語“佐劑”係指直接或間接調節和/或產生免疫反應之物質。一般而言，與單獨之抗原相比較，該佐劑係與抗原一起投予以有效增強針對該抗原之免疫反應。因此，佐劑可用於加強引發針對抗原之免疫細胞反應(例如T細胞反應)。於一些實施態樣中，本發明提供經修飾以在細胞內包含HPV抗原和在細胞內包含佐劑之免疫細胞。於一些實施態樣中，該依本文之描述被擾動之免疫細胞係與HPV抗原和佐劑一起培育。示例性細胞內佐劑包括，但不限於CpG ODN、干擾素α(IFN-α)、干擾素基因刺激劑(STING)激動劑和視黃酸誘導型基因I(RIG-I)激動劑和聚肌胞苷酸：聚胞苷酸(聚I：C)。於一些實施態樣中，該佐劑為CpG ODN、IFN-α、STING激動劑、RIG-I激動劑或聚I：C。於特定之實施態樣中，該佐劑為CpG ODN多核苷酸。於一些實施態樣中，該CpG ODN佐劑包含選自下列群組之CpG ODN佐劑：CpG ODN 1018、CpG ODN 1585、CpG ODN 2216、CpG ODN 2336、CpG ODN 1668、CpG ODN 1826、CPG ODN 2006、CpG ODN 2007、CpG ODN BW006、CpG ODN D-SL01、CpG ODN 2395、CpG ODN M362、CpG ODN D-SL03。於一些實施態樣中，該CpG ODN佐劑為CpG ODN 1826(SEQ：TCCATGACGTTCCTGACGTT)或CpG ODN 2006(亦稱為CpG ODN 7909)(SEQ：TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT)寡核苷酸。於一些實施態樣中，該RIG-I激動劑包含聚肌胞苷酸：聚胞苷酸(聚I：C)。多種佐劑亦可與抗原一起使用以增進誘導免疫反應。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含多於一種之佐劑。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含佐劑CpG ODN、IFN-α、STING激動劑、RIG-I激動劑或聚I：C之任何組合。
示例性佐劑包括，但不限於CpG ODN、干擾素-α(IFN-α)、聚肌苷酸：聚胞苷酸(聚I：C)、咪喹莫特(imiquimod)(R837)、雷西莫特(resiquimod)(R848)或脂多醣(LPS)。於一些實施態樣中，該佐劑為CpG ODN、LPS、IFN-α、STING激動劑、RIG-I激動劑、聚I：C、R837、R848、TLR3激動劑、TLR4激動劑或TLR9激動劑。於特定之實施態樣中，該佐劑為CpG ODN。於一些實施態樣中，該佐劑為CpG ODN。於一些實施態樣中，該CpG ODN為A類CpG ODN、B類CpG ODN或C類CpG ODN。於一些實施態樣中，該CpG ODN佐劑包含選自由下列所組成之群組的CpG ODN佐劑：CpG ODN 1018、CpG ODN 1585、CpG ODN 2216、CpG ODN 2336、CpG ODN 1668、CpG ODN 1826、CPG ODN 2006、CpG ODN 2007、CpG ODN BW006、CpG ODN D-SL01、CpG ODN 2395、CpG ODN M362、CpG ODN D-SL03。於一些實施態樣中，該CpG ODN佐劑為CpG ODN 1826(SEQ：TCCATGACGTTCCTGACGTT) 或CpG ODN 2006(亦稱為CpG ODN 7909)(SEQ：TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT)寡核苷酸。於一些實施態樣中，該佐劑為CpG ODN 7909。於一些實施態樣中，該RIG-I激動劑包含聚肌胞苷：聚胞苷酸(polyI：C)。多種佐劑亦可與抗原一起使用以增進誘導免疫反應。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含多於一種之佐劑。多種佐劑亦可與抗原一起使用以增進誘導免疫反應。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含多於一種之佐劑。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含下列佐劑之任何組合：CpG ODN、LPS、IFN-α、STING激動劑、RIG-I激動劑、聚I：C、R837、R848、TLR3激動劑、TLR4激動劑或TLR 9激動劑。
除非另有說明，於本文所描述之任一實施態樣中，該佐劑可指(a)與經擾動之輸入免疫細胞一起培育及通過該經擾動之輸入免疫細胞的佐劑，(b)與PBMC一起培育以用於調理PBMC之佐劑，(c)與該等經修飾之免疫細胞共同投予個體之佐劑。
於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞進一步包含與不包含該劑之對應的經修飾之免疫細胞相比較，增強該經修飾之免疫細胞的存活力和/或功能之劑。於一些實施態樣中，該劑為增進胞吞作用之化合物、穩定劑或輔因子。於一些實施態樣中，該穩定劑係與該HPV抗原和/或該佐劑複合。於一些實施態樣中，該穩定劑增加該HPV抗原和/或該佐劑之溶解度和/或溶液半衰期。於一些實施態樣中，該多個之間的經修飾之免疫細胞的存活力高於該不包含穩定劑之對應的經修飾之免疫細胞。於一些實施態樣中，該劑為白蛋白。於進一步之實施態樣中，該白蛋白為小鼠、牛或人白蛋白。於進一步之實施態樣中，該劑為二價金屬陽離子、葡萄糖、ATP、鉀、甘油、海藻糖、D-蔗糖、PEG1500、L-精胺酸、L-麩胺醯胺、或EDTA。於一些實施態樣中，該二價金屬陽離子為下列之一或多者：Mg2+ 、Zn2+ 或Ca2+ 。於一些實施態樣中，該劑包含MSA。
於根據本文所描述之任一方法或組成物的一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞進一步包含與不包含該劑之對應的經修飾之免疫細胞相比較，增強該經修飾之免疫細胞的存活力和/或功能之劑。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞進一步包含與不包含該劑之對應的經修飾之免疫細胞相比較，增強該經修飾之免疫細胞在凍融循環中之存活力和/或功能之劑。於一些實施態樣中，該劑為冷凍保存劑和/或低溫保存劑。於一些實施態樣中，與在任何凍融循環前不包含該劑之對應的經修飾之免疫細胞相比較，該冷凍保存劑和低溫保存劑均不會導致包含該劑之該經修飾的免疫細胞中細胞死亡超過10%或20%。於一些實施態樣中，在至多1、2、3、4、5個凍融循環後，至少約70%、約80%或約90%之該經修飾的免疫細胞保持存活。於一些實施態樣中，該劑為增強胞吞作用之化合物、穩定劑或輔因子。於一些實施態樣中，該劑為白蛋白。於一些實施態樣中，該白蛋白為小鼠、牛或人白蛋白。於一些實施態樣中，該劑為人白蛋白。於一些實施態樣中，該劑為下列之一或多者：二價金屬陽離子、葡萄糖、ATP、鉀、甘油、海藻糖、D-蔗糖、PEG1500、L-精胺酸、L-麩胺醯胺、或EDTA。於一些實施態樣中，該二價金屬陽離子為下列之一或多者：Mg2+ 、Zn2+ 或Ca2+ 。於一些實施態樣中，該劑為下列之一或多者：丙酮酸鈉、腺嘌呤、海藻糖、右旋糖、甘露糖、蔗糖、人血清白蛋白(HSA)、DMSO、HEPES、甘油、麩胱甘肽、肌苷、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、金屬鈉離子、金屬鉀離子、金屬鎂離子、氯化物、醋酸鹽、葡萄糖酸鹽、蔗糖、氫氧化鉀或氫氧化鈉。於一些實施態樣中，該劑為下列之一或多者：丙酮酸鈉、腺嘌呤、Rejuvesol®、海藻糖、右旋糖、甘露糖、蔗糖、人血清白蛋白(HSA)、PlasmaLyte®、DMSO、Cryostor®CS2、Cryostor®CS5、Cryostor®CS10、Cryostor®CS15、HEPES、甘油、麩胱甘肽、HypoThermosol®。
於一些實施態樣中，該等經修飾之免疫細胞係經進一步修飾以增加一或多種共刺激分子之表現。於進一步之實施態樣中，該共刺激分子為B7-H2(ICOSL)、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、CD70、LIGHT、HVEM、CD40、4-1BBL、OX40L、TL1A、GITRL、CD30L、TIM4、SLAM、CD48、CD58、CD155、或CD112。於一些實施態樣中，該細胞包含導致該一或多種共刺激分子增加表現之核酸。
於一些實施態樣中，該免疫細胞為T細胞、樹突細胞、單核細胞、巨噬細胞、骨髓細胞、粒細胞、嗜中性粒細胞、肥大細胞、天然殺手細胞、先天淋巴細胞、嗜鹼性粒細胞、或造血前體細胞。於一些實施態樣中，該免疫細胞不是B細胞。於一些實施態樣中，該免疫細胞為T細胞。於一些實施態樣中，該免疫細胞為除B細胞以外者。於一些實施態樣中，該經修飾之T細胞包括下列一或多者：輔助T細胞、細胞毒性T細胞、記憶性T細胞、CIK細胞或天然殺手T細胞。於一些實施態樣中，該T細胞包括下列一或多者：CD3+T細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞、CD45RA+T細胞、CD45RO+T細胞和γδ-T細胞。同種異體T細胞中之MHC表現可導致個體中之固有之先天性免疫反應對所投予之同種異體T細胞產生反應且將導致該等T細胞之半衰期縮短。於一些實施態樣中，該T細胞包含進一步修飾以調節第I類MHC表現。於一些實施態樣中，該T細胞包含進一步修飾以調節第II類MHC表現。於一些實施態樣中，該T細胞包含進一步修飾以減少第I類MHC和/或第II類MHC表現。於特定之實施態樣中，該進一步修飾包含使用siRNA、shRNA、CRISPR/Cas9、ZFN、TALEN、Cre重組酶或大核酸酶減少第I類MHC和/或第II類MHC表現。於一些實施態樣中，該T細胞包含進一步修飾以增加第I類MHC和/或第II類MHC表現。於特定之實施態樣中，該進一步修飾包含使用mRNA、質體DNA或cDNA增加第I類MHC和/或第II類MHC表現。於一些實施態樣中，與在同種異體背景下於個體中之固有之先天性免疫反應對投予不包含該進一步修飾之對應的經修飾之T細胞的反應相比較，在同種異體背景下於個體中之固有之先天性免疫反應對投予該經進一步修飾之T細胞的反應減低。於一些實施態樣中，與不包含該經進一步修飾之對應的經修飾之T細胞在經投予該等T細胞之個體中的循環半衰期相比較，該經進一步修飾之T細胞在經投予該等T細胞之個體中的循環半衰期增加。於一些實施態樣中，該經修飾之T細胞包括下列一或多者：輔助T細胞、細胞毒性T細胞、記憶T細胞、CIK細胞或天然殺手T細胞。於一些實施態樣中，該T細胞包括下列一或多者：CD3+T細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞、CD45RA+T細胞、CD45RO+T細胞或γδ-T細胞。
免疫細胞和其他細胞可作為自體或同種異體細胞之來源。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞對個體而言為同種異體的。於其他實施態樣中，該經修飾之免疫細胞對個體而言為自體的。於一些實施態樣中，該待治療之個體係經預調理以調節炎症。
佐劑可用於進一步增強對HPV抗原之免疫反應。於一些實施態樣中，該用於治療之方法進一步包含對該個體投予佐劑。示例性佐劑包括，但不限於IFN-α、CpG ODN、STING激動劑、RIG-I激動劑和聚I：C。於一些實施態樣中，該佐劑為IFN-α或CpG ODN。於一些實施態樣中，該佐劑為IFN-α、CpG ODN、STING激動劑、RIG-I激動劑或聚I：C。於一些實施態樣中，該佐劑包含下列群組之任何組合：IFN-α、CpG ODN、STING激動劑、RIG-I激動劑或聚I：C。
於一些實施態樣中，該方法包含多次投予該等經修飾之免疫細胞。於一些實施態樣中，該方法包含投予約3至約9次經修飾之免疫細胞。於一些實施態樣中，該方法包含投予約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、或15次之經修飾的免疫細胞。於一些實施態樣中，該方法包含依需要持續投予該等經修飾之免疫細胞。於一些實施態樣中，該等經修飾之免疫細胞的二次連續投予之間之時間間隔為約1天至約30天。於一些實施態樣中，該等經修飾之免疫細胞的二次連續投予之間之時間間隔為約21天。於一些實施態樣中， 該等經修飾之免疫細胞的二次連續投予之間之時間間隔為約下列任一者：1、2、3、4、5、6、7、8、10、12、14、16、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、或150天。於一些實施態樣中，該等經修飾之免疫細胞為多個經修飾之PBMC。於一些實施態樣中，該等經修飾之免疫細胞為經調理之多個經修飾的PBMC。
於一些實施態樣中，該包含經修飾之免疫細胞之組成物和佐劑係同時投予。於一些實施態樣中，該包含經修飾之免疫細胞之組成物和佐劑係依次投予。
於一些實施態樣中，該包含經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該佐劑之前投予。例如，該包含經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該佐劑之前約1小時至約1週投予。例如，於一些實施態樣中，該包含經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該佐劑之前約1小時、約2小時、約3小時、約4小時、約6小時、約8小時、約10小時、約12小時、約14小時、約16小時、約18小時、約20小時、約24小時、約30小時、約36小時、約42小時、約48小時、約60小時、約3天、約4天、約5天、約6天、或約7天投予。於一些實施態樣中，該包含經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該佐劑之前約1小時至約2小時、約2小時至約3小時、約3小時至約4小時、約4小時至約6小時、約6小時至約8小時、約8小時至約10小時、約10小時至約12小時、約12小時至約14小時、約14小時至約16小時、約16小時至約18小時、約18小時至約20小時、約20小時至約24小時、約24小時至約30小時、約30小時至約36小時、約36小時至約42小時、約42小時至約48小時、約48小時至約60小時、約60小時至約3天、約3天至約4天、約4天至約5天、約5天至約6天、約6天至約7天投予。
於一些實施態樣中，該包含經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該佐劑之後投予。例如，該包含經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該佐劑之後約1小時至約1週投予。例如，於一些實施態樣中，該包含經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該佐劑之後約1小時、約2小時、約3小時、約4小時、約6小時、約8小時、約10小時、約12小時、約14小時、約16小時、約18小時、約20小時、約24小時、約30小時、約36小時、約42小時、約48小時、約60小時、約3天、約4天、約5天、約6天、或約7天投予。於一些實施態樣中，該包含經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該佐劑之後介於約1小時與約2小時之間、介於約2小時與約3小時之間、介於約3小時與約4小時之間、介於約4小時與約6小時之間、介於約6小時與約8小時之間、介於約8小時與約10小時之間、介於約10小時與約12小時之間、介於約12小時與約14小時之間、介於約14小時與約16小時之間、介於約16小時與約18小時之間、介於約18小時與約20小時之間、介於約20小時與約24小時之間、介於約24小時與約30小時之間、介於約30小時與約36小時之間、介於約36小時與約42小時之間、介於約42小時與約48小時之間、介於約48小時與約60小時之間、介於約60小時與約3天之間、介於約3天與約4天之間、介於約4天與約5天之間、介於約5天與約6天之間、介於約6天與約7天之間投予。
免疫檢查點為該免疫系統之調節子並保持控制免疫反應。免疫檢查點抑制劑可用於促進增強免疫反應。於一些實施態樣中，該包含經修飾之免疫細胞之組成物係與免疫檢查點抑制劑組合投予。於一些實施態樣中，該包含經修飾之免疫細胞之組成物和該免疫檢查點抑制劑係同時投予。於一些實施態樣中，該包含經修飾之免疫細胞之組成物和該免疫檢查點抑制劑係依次投予。
於一些實施態樣中，該包含經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該免疫檢查點抑制劑之前投予。於一些實施態樣中，該包含經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該免疫檢查點抑制劑之後投予。例如，該包含經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該免疫檢查點抑制劑之前約1小時至約1週投予。例如，於一些實施態樣中，該包含經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該免疫檢查點抑制劑之前約1小時、約2小時、約3小時、約4小時、約6小時、約8小時、約10小時、約12小時、約14小時、約16小時、約18小時、約20小時、約24小時、約30小時、約36小時、約42小時、約48小時、約60小時、約3天、約4天、約5天、約6天、或約7天投予。於一些實施態樣中，該包含經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該免疫檢查點抑制劑之前介於約1小時與約2小時之間、介於約2小時與約3小時之間、介於約3小時與約4小時之間、介於約4小時與約6小時之間、介於約6小時與約8小時之間、介於約8小時與約10小時之間、介於約10小時與約12小時之間、介於約12小時與約14小時之間、介於約14小時與約16小時之間、介於約16小時與約18小時之間、介於約18小時與約20小時之間、介於約20小時與約24小時之間、介於約24小時與約30小時之間、介於約30小時與約36小時之間、介於約36小時與約42小時之間、介於約42小時與約48小時之間、介於約48小時與約60小時之間、介於約60小時與約3天之間、介於約3天與約4天之間、介於約4天與約5天之間、介於約5天與約6天之間、介於約6天與約7天之間投予。
於一些實施態樣中，該包含經修飾之免疫細胞之組成物係在免疫檢查點抑制劑之後投予。例如，該包含經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該免疫檢查點抑制劑之後約1小時至約1週投予。例如，於一些實施態樣中，該包含經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該免疫檢查點抑制劑之後約1小時、約2小時、約3小時、約4小時、約6小時、約8小時、約10小時、約12小時、約14小時、約16小時、約18小時、約20小時、約24小時、約30小時、約36小時、約42小時、約48小時、約60小時、約3天、約4天、約5天、約6天、或約7天投予。於一些實施態樣中，該包含經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該免疫檢查點抑制劑之後介於約1小時與約2小時之間、介於約2小時與約3小時之間、介於約3小時與約4小時之間、介於約4小時與約6小時之間、介於約6小時與約8小時之間、介於約8小時與約10小時之間、介於約10小時與約12小時之間、介於約12小時與約14小時之間、介於約14小時與約16小時之間、介於約16小時與約18小時之間、介於約18小時與約20小時之間、介於約20小時與約24小時之間、介於約24小時與約30小時之間、介於約30小時與約36小時之間、介於約36小時與約42小時之間、介於約42小時與約48小時之間、介於約48小時與約60小時之間、介於約60小時與約3天之間、介於約3天與約4天之間、介於約4天與約5天之間、介於約5天與約6天之間、介於約6天與約7天之間投予。
於一些實施態樣中，該方法包含多次投予包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和/或多次投予該檢查點抑制劑。例如，於一些實施態樣中，該方法包含投予2次、投予3次、投予4次、投予5次、投予6次、投予7次、投予8次、投予9次、投予10次、投予11次、投予12次、投予13次、投予14次、或投予15次包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和/或該檢查點抑制劑。例如，於一些實施態樣中，該方法包含投予該包含經修飾之免疫細胞之組成物和/或該檢查點抑制劑之次數少於5次、少於10次、少於15次、少於20次、少於25次、少於30次、少於50次、少於75次、少於100次、或少於200次。
示例性免疫檢查點抑制劑係靶向，但不限於PD-1、PD-L1、CTLA-4、LAG3或TIM-3。於一些實施態樣中，該免疫檢查點抑制劑係靶向下列之一或多者：PD-1、PD-L1、CTLA-4、LAG3或TIM-3。於一些實施態樣中，該免疫檢查點抑制劑為下列之一或多者：與PD-1結合之抗體、與PD-L1結合之抗體、與CTLA-4結合之抗體、與LAG3結合之抗體、或與TIM-3結合之抗體。於進一步之實施態樣中，該抗體可為全長抗體或任何變體，例如，但不限於抗體片段、單鏈可變片段(ScFv)、或抗原結合片段(Fab)。於進一步之實施態樣中，該抗體可為雙特異性、三特異性或多特異性。於一些實施態樣中，該免疫檢查點抑制劑為一或多種與下列之一或多者結合和/或抑制下列之一或多者的化學化合物：PD-1、PD-L1、CTLA-4、LAG3或TIM-3。於一些實施態樣中，該免疫檢查點抑制劑為一或多種與下列之一或多者結合和/或抑制下列之一或多者的肽：PD-1、PD-L1、CTLA-4、LAG3或TIM-3。
其他示例性免疫檢查點抑制劑係靶向，但不限於TIGIT、VISTA、TIM1、B7-H4(VTCN1)或BTLA。於一些實施態樣中，該免疫檢查點抑制劑係靶向下列之一或多者：TIGIT、VISTA、TIM1、B7-H4(VTCN1)或BTLA。於一些實施態樣中，該免疫檢查點抑制劑為下列之一或多者：與TIGIT結合之抗體、與VISTA結合之抗體、與TIM1結合之抗體、與B7-H4(VTCN1)結合之抗體、或與BTLA結合之抗體。於進一步之實施態樣中，該抗體可為全長抗體或任何變體，例如，但不限於抗體片段、單鏈可變片段(ScFv)或抗原結合片段(Fab)。於進一步之實施態樣中，該抗體可為雙特異性、三特異性或多特異性。於一些實施態樣中，該免疫檢查點抑制劑為一或多種與下列之一或多者結合和/或抑制下列之一或多者的化學化合物：PD-1、PD-L1、CTLA-4、LAG3、TIM-3、TIGIT、VISTA、TIM1、B7-H4(VTCN1)或BTLA。於一些實施態樣中，該免疫檢查點抑制劑為一或多種與下列之一或多者結合和/或抑制下列之一或多者的肽：PD-1、PD-L1、CTLA-4、LAG3、TIM-3、TIGIT、VISTA、TIM1、B7-H4(VTCN1)或BTLA。
化學療法或放射療法可與本文所描述之任一經修飾的免疫細胞組合使用以達到針對癌症(例如HPV相關癌症)之加成或協同效果。於一些實施態樣中，該包含經修飾之免疫細胞之組成物之投予係與化學療法之投予組合。於一些實施態樣中，該包含經修飾之免疫細胞之組成物係與化學療法同時投予。於一些實施態樣中，該包含經修飾之免疫細胞之組成物係與化學療法依次投予。
於一些實施態樣中，該包含經修飾之免疫細胞之組成物係在化學療法之前投予。於一些實施態樣中，該包含經修飾之免疫細胞之組成物係在化學療法之後投予。例如，該包含經修飾之免疫細胞之組成物係在化學療法之前約1小時至約1週投予。例如，於一些實施態樣中，該包含經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該化學療法之前約1小時、約2小時、約3小時、約4小時、約6小時、約8小時、約10小時、約12小時、約14小時、約16小時、約18小時、約20小時、約24小時、約30小時、約36小時、約42小時、約48小時、約60小時、約3天、約4天、約5天、約6天、或約7天投予。於一些實施態樣中，該包含經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該化學療法之前介於約1小時與約2小時之間、介於約2小時與約3小時之間、介於約3小時與約4小時之間、介於約4小時與約6小時之間、介於約6小時與約8小時之間、介於約8小時與約10小時之間、介於約10小時與約12小時之間、介於約12小時與約14小時之間、介於約14小時與約16小時之間、介於約16小時與約18小時之間、介於約18小時與約20小時之間、介於約20小時與約24小時之間、介於約24小時與約30小時之間、介於約30小時與約36小時之間、介於約36小時與約42小時之間、介於約42小時與約48小時之間、介於約48小時與約60小時之間、介於約60小時與約3天之間、介於約3天與約4天之間、介於約4天與約5天之間、介於約5天與約6天之間、介於約6天與約7天之間投予。
於一些實施態樣中，該包含經修飾之免疫細胞之組成物係在化學療法之後投予。例如，該包含經修飾之免疫細胞之組成物係在化學療法之後約1小時至約1週投予。例如，於一些實施態樣中，該包含經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該化學療法之後約1小時、約2小時、約3小時、約4小時、約6小時、約8小時、約10小時、約12小時、約14小時、約16小時、約18小時、約20小時、約24小時、約30小時、約36小時、約42小時、約48小時、約60小時、約3天、約4天、約5天、約6天、或約7天投予。於一些實施態樣中，該包含經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該化學療法之後介於約1小時與約2小時之間、介於約2小時與約3小時之間、介於約3小時與約4小時之間、介於約4小時與約6小時之間、介於約6小時與約8小時之間、介於約8小時與約10小時之間、介於約10小時與約12小時之間、介於約12小時與約14小時之間、介於約14小時與約16小時之間、介於約16小時與約18小時之間、介於約18小時與約20小時之間、介於約20小時與約24小時之間、介於約24小時與約30小時之間、介於約30小時與約36小時之間、介於約36小時與約42小時之間、介於約42小時與約48小時之間、介於約48小時與約60小時之間、介於約60小時與約3天之間、介於約3天與約4天之間、介於約4天與約5天之間、介於約5天與約6天之間、介於約6天與約7天之間投予。
於一些實施態樣中，該方法包含多次投予包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和/或多次投予化學療法。例如，於一些實施態樣中，該方法包含投予2次、投予3次、投予4次、投予5次、投予6次、投予7次、投予8次、投予9次、投予10次、投予11次、投予12次、投予13次、投予14次、或投予15次包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和/或化學療法。例如，於一些實施態樣中，該方法包含投予包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和/或化學療法之次數少於5次、少於10次、少於15次、少於20次、少於25次、少於30次、少於50次、少於75次、少於100次、或少於200次。
示例性化學療法可為細胞週期依賴性或與細胞週期無關的。於一些實施態樣中，該化學療法包含一或多種化學治療劑。於一些實施態樣中，化學治療劑可靶向癌症中之細胞分裂、DNA或代謝中之一或多者。於一些實施態樣中，該化學治療劑為基於鉑之劑，諸如，但不限於順鉑(cisplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)或卡鉑(carboplatin)。於一些實施態樣中，該化學治療劑為紫杉烷(諸如多西紫杉醇或太平洋紫杉醇(paclitaxel))。於一些實施態樣中，該化學治療劑為5-氟尿嘧啶、多柔比星(doxorubicin)或伊立替康(irinotecan)。於一些實施態樣中，該化學治療劑為下列之一或多者：烷化劑、抗代謝劑、抗腫瘤抗生素、拓撲異構酶抑制劑或有絲分裂抑制劑。於一些實施態樣中，該化學療法包含順鉑。於一些實施態樣中，該一或多種化學療法或免疫檢查點抑制劑可與本文所描述之任一經修飾的免疫細胞組合以用於治療或預防HPV相關疾病。
放射療法可與本文所描述之任一經修飾的T細胞組合使用以達到針對癌症(例如HPV相關癌症)之加成或協同效果。於一些實施態樣中，該包含經修飾之T細胞的組成物之投予係與放射療法之投予組合。於一些實施態樣中，該包含經修飾之T細胞的組成物係與放射療法同時投予。於一些實施態樣中，該包含經修飾之T細胞的組成物係與放射療法依次投予。於一些實施態樣中，該包含經修飾之T細胞的組成物之投予係與放射療法組合投予、組合化學療法和/或組合免疫檢查點抑制劑組。
於一些實施態樣中，該包含經修飾之T細胞的組成物係在放射療法之前投予。於一些實施態樣中，該包含經修飾之T細胞的組成物係在放射療法之後投予。例如，該包含經修飾之T細胞的組成物係在投予該放射療法之前約1小時至約1週投予。例如，於一些實施態樣中，該包含經修飾之T細胞的組成物係在投予該放射療法之前約1小時、約2小時、約3小時、約4小時、約6小時、約8小時、約10小時、約12小時、約14小時、約16小時、約18小時、約20小時、約24小時、約30小時、約36小時、約42小時、約48小時、約60小時、約3天、約4天、約5天、約6天、或約7天投予。於一些實施態樣中，該包含經修飾之T細胞的組成物係在投予該放射療法之前介於約1小時與約2小時之間、介於約2小時與約3小時之間、介於約3小時與約4小時之間、介於約4小時與約6小時之間、介於約6小時與約8小時之間、介於約8小時與約10小時之間、介於約10小時與約12小時之間、介於約12小時與約14小時之間、介於約14小時與約16小時之間、介於約16小時與約18小時之間、介於約18小時與約20小時之間、介於約20小時與約24小時之間、介於約24小時與約30小時之間、介於約30小時與約36小時之間、介於約36小時與約42小時之間、介於約42小時與約48小時之間、介於約48小時與約60小時之間、介於約60小時與約3天之間、介於約3天與約4天之間、介於約4天與約5天之間、介於約5天與約6天之間、介於約6天與約7天之間投予。
於一些實施態樣中，該包含經修飾之T細胞的組成物係在放射療法之後投予。例如，該包含經修飾之T細胞的組成物係在放射療法之後約1小時至約1週投予。例如，於一些實施態樣中，該包含經修飾之T細胞的組成物係在投予該放射療法之後約1小時、約2小時、約3小時、約4小時、約6小時、約8小時、約10小時、約12小時、約14小時、約16小時、約18小時、約20小時、約24小時、約30小時、約36小時、約42小時、約48小時、約60小時、約3天、約4天、約5天、約6天、或約7天投予。於一些實施態樣中，該包含經修飾之T細胞的組成物係在投予該放射療法之後介於約1小時與約2小時之間、介於約2小時與約3小時之間、介於約3小時與約4小時之間、介於約4小時與約6小時之間、介於約6小時與約8小時之間、介於約8小時與約10小時之間、介於約10小時與約12小時之間、介於約12小時與約14小時之間、介於約14小時與約16小時之間、介於約16小時與約18小時之間、介於約18小時與約20小時之間、介於約20小時與約24小時之間、介於約24小時與約30小時之間、介於約30小時與約36小時之間、介於約36小時與約42小時之間、介於約42小時與約48小時之間、介於約48小時與約60小時之間、介於約60小時與約3天之間、介於約3天與約4天之間、介於約4天與約5天之間、介於約5天與約6天之間、介於約6天與約7天之間投予。
於一些實施態樣中，該方法包含多次投予包含該經修飾之T細胞之組成物和/或多次投予放射療法。例如，於一些實施態樣中，該方法包含投予2次、投予3次、投予4次、投予5次、投予6次、投予7次、投予8次、投予9次、投予10次、投予11次、投予12次、投予13次、投予14次、或投予15次包含該經修飾之T細胞之組成物和/或放射療法。例如，於一些實施態樣中，該方法包含投予該包含經修飾之T細胞之組成物和/或放射療法之次數少於5次、少於10次、少於15次、少於20次、少於25次、少於30次、少於50次、少於75次、少於100次、或少於200次。
當該HPV抗原經過加工並在MHC上呈遞給免疫細胞時可觸發或增強針對該呈遞之HPV抗原決定部位的免疫反應。於一些實施態樣中，該HPV抗原能夠經加工成第I類MHC限制性肽。於一些實施態樣中，該HPV抗原能夠經加工成第II類MHC限制性肽。於一些實施態樣中，該免疫反應被增強。於進一步之實施態樣中，對該HPV抗原之免疫反應被增強。於一些實施態樣中，對該個體投予該包含經修飾之免疫細胞之組成物可導致特異於該HPV抗原之細胞毒性T淋巴細胞(CTL)活化和/或擴增。於一些實施態樣中，對該個體投予該包含經修飾之免疫細胞之組成物可導致特異於該抗原之輔助T(Th )細胞活化和/或擴增。
於一些實施態樣中，該組成物之有效量包含介於約1×106 與約1×1012 個之間的經修飾之免疫細胞。於一些實施態樣中，該組成物之有效量包含下列任一數量之經修飾的免疫細胞：約1×106 、約1×107 、約1×108 、約1×109 、約1×1010 、約1×1011 、或約1×1012 個免疫細胞。於一些實施態樣中，該組成物之有效量包含下列任一數量之經修飾的免疫細胞：介於約1×106 與約1×107 之間、介於約1×107 與約1×108 之間、介於約1×108 與約1×109 之間、介於約1×109 與約1×1010 之間、介於約1×1010 與約1×1011 之間、或介於約1×1011 與約1×1012 個之間的經修飾之免疫細胞。
於一些實施態樣中，於一些實施態樣中，該方法包含多次投予該包含經修飾之免疫細胞之組成物。例如，於一些實施態樣中，該方法包含投予2次、投予3次、投予4次、投予5次、投予6次、投予7次、投予8次、投予9次、投予10次、投予11次、投予12次、投予13次、投予14次、或投予15次該包含經修飾之免疫細胞之組成物。例如，於一些實施態樣中，該方法包含投予該包含經修飾之免疫細胞之組成物的次數少於5次、少於10次、少於15次、少於20次、少於25次、少於30次、少於50次、少於75次、少於100次、或少於200次。例如，於一些實施態樣中，該方法包含第一次投予該包含經修飾之免疫細胞之組成物，接著第二次投予該包含經修飾之免疫細胞之組成物。投予時點亦可經修改以獲得所需結果。於一些實施態樣中，第一次對個體投予該組成物係在第二次投予該組成物之前發生。於一些實施態樣中，該第一次投予係在引入第二次投予之前約1週、約2週、約3週、約4週、約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月、約7個月、約8個月、約9個月、約10個月、約11個月、約12個月、約18個月、或約24個月引入該個體。
於一些實施態樣中，該方法包含多次投予該經修飾之T細胞。於一些實施態樣中，該方法包含投予下列任一次數：約2、3、4、5、6、7、8、9、10次、或約10次以上。於一些實施態樣中，該經修飾之T細胞的連續二次投予之間係間隔約1天至約1個月。於一些實施態樣中，該投予為每天、每2天、每3天、每4天、每5天、每6天、每週、每二週、或每月。於一些實施態樣中，連續投予係給予長達一年或更久。
於某些態樣中，該包含經修飾之細胞的組成物可用於治療、預防HPV相關疾病和/或調節患有HPV相關疾病之個體中的免疫反應。於一些實施態樣中，該HPV相關疾病為HPV相關癌症。於一些實施態樣中，該HPV相關癌症為子宮頸疾病、肛門疾病、口咽疾病、陰道疾病、外陰疾病、陰莖疾病、皮膚病、或頭頸疾病。於一些實施態樣中，該HPV相關疾病為HPV相關傳染病。其他HPV相關疾病可包括常見之疣、蹠疣、扁平疣、肛門生殖器疣、肛門病變、表皮發育不良、局灶性上皮增生、口腔乳頭瘤、疣狀囊腫和喉乳頭瘤病。
於一些態樣中，本發明關於經修飾之免疫細胞於治療HPV相關疾病之用途，其中該等經修飾之免疫細胞在細胞內包含HPV抗原且在細胞內包含佐劑。於一些態樣中，本發明關於經修飾之免疫細胞於治療HPV相關疾病之用途，該方法包含對個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞在細胞內包含HPV抗原且在細胞內包含佐劑；其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備：a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，使得該變形力係當該輸入細胞通過該壓縮器時施加於該輸入細胞上，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該抗原和該佐劑通過以形成經擾動之輸入細胞；和b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原和該佐劑一起培育足夠之時間以令該HPV抗原和該佐劑進入該經擾動之輸入細胞；從而產生該等經修飾之免疫細胞。
於一些態樣中，本發明關於包含經修飾之免疫細胞之組成物於製造用於治療HPV相關疾病之藥物的用途，其中該等經修飾之免疫細胞在細胞內包含HPV抗原且在細胞內包含佐劑。於一些態樣中，本發明關於包含經修飾之免疫細胞之組成物於製造用於治療HPV相關疾病之藥物的用途，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾的免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞在細胞內包含HPV抗原且在細胞內包含佐劑；其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備：a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，使得該變形力係當該輸入細胞通過該壓縮器時施加於該輸入細胞上，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該HPV抗原和該佐劑通過以形成經擾動之輸入細胞；和b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原和該佐劑一起培育足夠之時間以令該HPV抗原和該佐劑進入該經擾動之輸入細胞；從而產生該等經修飾之免疫細胞。
於一些態樣中，本發明關於用於醫學治療方法之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞在細胞內包含HPV抗原且在細胞內包含佐劑。於一些態樣中，本發明關於用於醫學治療方法之包含經修飾之免疫細胞之組成物，該方法包含對個體投予有效量之包含經修飾的免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞在細胞內包含HPV抗原且在細胞內包含佐劑；其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備：a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，使得該變形力係當該輸入細胞通過該壓縮器時施加於該輸入細胞上，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該HPV抗原和該佐劑通過以形成經擾動之輸入細胞；和b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原和該佐劑一起培育足夠之時間以令該HPV抗原和該佐劑進入該經擾動之輸入細胞；從而產生該等經修飾之免疫細胞。
於一些態樣中，本發明關於用於治療癌症、感染性疾病或病毒相關疾病之方法中的包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞在細胞內包含HPV抗原且在細胞內包含佐劑。於一些態樣中，本發明關於用於治療HPV相關疾病之包含經修飾的免疫細胞之組成物，該方法包含對個體投予有效量之包含經修飾的免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞在細胞內包含HPV抗原且在細胞內包含佐劑；其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備：a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，使得該變形力係當該輸入細胞通過該壓縮器時施加於該輸入細胞上，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該HPV抗原和該佐劑通過以形成經擾動之輸入細胞；和b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原和該佐劑一起培育足夠之時間以令該HPV抗原和該佐劑進入該經擾動之輸入細胞；從而產生該等經修飾之免疫細胞。
於一些態樣中，本發明關於用於治療或預防個體中HPV相關疾病在之方法，該方法包含對該個體投予與HPV抗原聯結之免疫細胞，其中該經修飾之免疫細胞係藉由包含下述步驟之方法製備：a) 將輸入細胞與該HPV抗原和/或該佐劑一起培育足夠之時間以令該HPV抗原與該輸入細胞之表面結合；從而產生與該抗原聯結之該經修飾的免疫細胞。
於一些實施態樣中，本發明之經修飾的免疫細胞不會在個體中誘導耐受性。於一些實施態樣中，該等經修飾之免疫細胞不會抑制個體之免疫反應。於一些實施態樣中，該等經修飾之免疫細胞不包含致耐受因子。於一些實施態樣中，該等經修飾之免疫細胞不與致耐受因子組合投予。於一些實施態樣中，該等經修飾之免疫細胞並非在投予致耐受因子之前、同時或之後投予。 組成物
於某些態樣中，本發明提供包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞在細胞內包含HPV抗原且在細胞內包含CpG ODN。於其他態樣中，本發明關於包含該等經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞在細胞內包含HPV抗原，其中該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至26中之任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列。於一些實施態樣中，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：23具有至少90%相似性之胺基酸序列。於一些實施態樣中，該HPV抗原包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列。於一些實施態樣中，該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備：a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該HPV抗原通過以形成經擾動之輸入細胞；和b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原一起培育足夠之時間以令該HPV抗原進入該經擾動之輸入細胞；從而產生該等經修飾之免疫細胞。於進一步之實施態樣中，變形力係當該輸入細胞通過該壓縮器時施加至該輸入細胞。於一些實施態樣中，該組成物進一步在細胞內包含佐劑。
於一些實施態樣中，該HPV抗原和/或該佐劑係存在於該胞質液和/或胞內體中。於一些實施態樣中，該抗原和/或佐劑係存在於該細胞之多個隔室中。於進一步之實施態樣中，該抗原和/或佐劑係存在於包含下列之一或多者的細胞隔室中：內質網(ER)、高基氏體、溶酶體、外泌體、細胞表面、或細胞膜。於一些實施態樣中，該抗原和佐劑係在相同之隔室中。於一些實施態樣中，該抗原和佐劑彼此係在不同之隔室中。例如，於一些實施態樣中，該抗原存在於細胞質液中，而該佐劑係存在於胞內體中。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞進一步在細胞外部包含HPV抗原和/或佐劑。
於一些實施態樣中，該抗原為多肽抗原。於一些實施態樣中，該抗原為經修飾之抗原。例如，抗原可與治療劑或靶向肽融合。於一些實施態樣中，該經修飾之抗原係與多肽融合。於一些實施態樣中，該抗原係使用脂質修飾。於一些實施態樣中，該抗原係使用多醣或碳水化合物部分修飾。於一些實施態樣中，該抗原係與病毒有關。於一些實施態樣中，該抗原為病毒抗原。示例性病毒抗原包括HPV抗原。於進一步之實施態樣中，該抗原為HPV抗原。於一些實施態樣中，該HPV抗原係選自由下列所組成之群組：HPV-16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73和82。HPV-16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73和82為導致癌症之高風險類型，而HPV-26、53和66為導致癌症之“可能的高風險類型”。於一些實施態樣中，該抗原為HPV-16抗原或HPV-18抗原。於一些實施態樣中，該HPV抗原包含HLA-A2特異性抗原決定部位。HPV E6和E7基因為該病毒之致癌基因且這些基因之表現對惡性轉化是必要的。該E6和E7蛋白靶向該細胞週期的許多負調節因子，主要分別為p105Rb和p53，因此可干擾細胞週期調節。於進一步之實施態樣中，該HPV抗原為HPV E6抗原或HPV E7抗原。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含HPV E6抗原和HPV E7抗原。於一些實施態樣中，該HPV抗原為包含免疫原性抗原決定部位之多肽，該免疫原性抗原決定部位之N端和/或C端側翼鄰接一或多個異源肽序列。於一些實施態樣中，該HPV抗原為HPV E7抗原決定部位，該HPV E7抗原決定部位之側翼鄰接來自HPV E6多肽之序列。於一些實施態樣中，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至26中任一序列具有至少90%相似性之胺基酸序列。於一些實施態樣中，該HPV抗原包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列。
當將佐劑加入免疫原性劑中時，當該接受者宿主在暴露於該混合物時，佐劑可非特異性地增強或加強該接受者宿主對該劑之免疫反應。因此，佐劑可用於加強誘導針對抗原之免疫細胞反應(例如T細胞反應)。於一些實施態樣中，該經擾動之細胞係與HPV抗原和佐劑二者一起培育。示例性細胞內佐劑包括，但不限於CpG ODN、干擾素-α(IFN-α)、干擾素基因刺激劑(STING)激動劑、視黃酸誘導型基因I(RIG-I)激動劑和聚肌胞苷酸：聚胞苷酸(聚I：C)。於一些實施態樣中，該佐劑為CpG ODN、IFN-α、STING激動劑、RIG-I激動劑或聚I：C。於特定之實施態樣中，該佐劑為CpG ODN多核苷酸。於一些實施態樣中，該CpG ODN佐劑包含選自由下列所組成之群組的CpG ODN佐劑：CpG ODN 1585、CpG ODN 2216、CpG ODN 2336、CpG ODN 1668、CpG ODN 1826、CPG ODN 2006、CpG ODN 2007、CpG ODN BW006、CpG ODN D-SL01、CpG ODN 2395、CpG ODN M362、CpG ODN D-SL03 (InvivoGen)。於一些實施態樣中，該CpG ODN佐劑為CpG ODN 1826(SEQ：TCCATGACGTTCCTGACGTT)或 CpG ODN 2006(亦稱為CpG ODN 7909)(SEQ： TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT)寡核苷酸。亦可將多種佐劑與抗原一起使用以增進誘導免疫反應。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含多於一種之佐劑。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含下列佐劑之任何組合：CpG ODN、IFN-α、STING激動劑、RIG-I激動劑和聚I：C。
於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含之佐劑濃度介於約0.01μM與約10mM之間。例如，於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含之佐劑濃度為下列任一者：小於約0.01μM、約0.1μM、約1μM、約10μM、約100μM、約1mM、或約10mM。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含之佐劑濃度大於約10mM。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含之佐劑濃度小於下列任一者：約0.01μM、約0.1μM、約1μM、約10μM、約100μM、約1mM、或約10mM。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含之佐劑濃度超過約10mM。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含之佐劑濃度係介於下列任一範圍之間：介於約0.1μM與約1μM之間、介於約1μM與約10μM之間、介於約10μM與約100μM之間、介於約100μM與約1mM之間、或介於1mM與約10mM之間。
於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含之HPV抗原濃度介於約0.01μM與約10mM之間。例如，於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含之佐劑濃度為下列任一者：小於約0.01μM、約0.1μM、約1μM、約10μM、約100μM、約1mM、或約10mM。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含之佐劑濃度大於約10mM。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含之HPV抗原濃度小於下列任一濃度：約0.01μM、約0.1μM、約1μM、約10μM、約100μM、約1mM、或約10mM。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含之佐劑濃度大於約10mM。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞包含之HPV抗原濃度係介於下列任一範圍之間：介於約0.1μM與約1μM之間、介於約1μM與約10μM之間、介於約10μM與約100μM之間、介於約100μM與約1mM之間、或介於1mM與約10mM之間。
於一些實施態樣中，該HPV抗原對該佐劑之比例係介於約10000：1與約1：10000之間。例如，於一些實施態樣中，該HPV抗原對該佐劑之比例為約10000：1、約1000：1、約200：1、約100：1、約10：1、約1：1、約1：10、約1：100、約1：1000、或約1：10000中之任一者。於一些實施態樣中，該HPV抗原對該佐劑之比例係介於約10000：1至約1000：1、介於約1000：1至約100：1、介於約100：1至約10：1、介於約10：1至約1：1、介於約1：1至約1：10、介於約1：10至約1：100、介於約1：100至約1：1000、介於約1：1000至約1：10000。
於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞進一步包含與不包含該劑之對應的經修飾之免疫細胞相比較，增強該經修飾之免疫細胞的存活力和/或功能之劑。於一些實施態樣中，該劑為增進胞吞作用之化合物、穩定劑或輔因子。於一些實施態樣中，該穩定劑係與該HPV抗原和/或該佐劑複合。於一些實施態樣中，該穩定劑增加該HPV抗原和/或該佐劑之溶解度和/或溶液半衰期。於一些實施態樣中，該多個之間的經修飾之免疫細胞的存活力高於該不包含穩定劑之對應的經修飾之免疫細胞。於一些實施態樣中，該劑為白蛋白。於進一步之實施態樣中，該白蛋白為小鼠、牛或人白蛋白。於進一步之實施態樣中，該劑為二價金屬陽離子、葡萄糖、ATP、鉀、甘油、海藻糖、D-蔗糖、PEG1500、L-精胺酸、L-麩胺醯胺、或EDTA。於一些實施態樣中，該二價金屬陽離子為下列之一或多者：Mg2+ 、Zn2+ 、或Ca2+ 。於一些實施態樣中，該劑包含MSA。
於根據本文所描述之任一方法或組成物的一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞進一步包含與不包含該劑之對應的多個經修飾之免疫細胞相比較，增強該經修飾之免疫細胞的存活力和/或功能之劑。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞進一步包含與不包含該劑之對應的經修飾之免疫細胞相比較，增強該經修飾之免疫細胞在凍融循環中的存活力和/或功能之劑。於一些實施態樣中，該劑為冷凍保存劑和/或低溫保存劑。於一些實施態樣中，與在任何凍融循環前不包含該劑之對應的經修飾之免疫細胞相比較，該冷凍保存劑和低溫保存劑均不會導致包含該劑之該經修飾的免疫細胞中細胞死亡超過10%或20%。於一些實施態樣中，在至多1、2、3、4、5個凍融循環後，至少約70%、約80%或約90%之該經修飾的免疫細胞保持存活。於一些實施態樣中，該劑為增強胞吞作用之化合物、穩定劑或輔因子。於一些實施態樣中，該劑為白蛋白。於一些實施態樣中，該白蛋白為小鼠、牛或人白蛋白。於一些實施態樣中，該劑為人白蛋白。於一些實施態樣中，該劑為下列之一或多者：二價金屬陽離子、葡萄糖、ATP、鉀、甘油、海藻糖、D-蔗糖、PEG1500、L-精胺酸、L-麩胺醯胺、或EDTA。於一些實施態樣中，該二價金屬陽離子為下列之一或多者：Mg2+ 、Zn2+ 或Ca2+ 。於一些實施態樣中，該劑為下列之一或多者：丙酮酸鈉、腺嘌呤、海藻糖、右旋糖、甘露糖、蔗糖、人血清白蛋白(HSA)、DMSO、HEPES、甘油、麩胱甘肽、肌苷、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、金屬鈉離子、金屬鉀離子、金屬鎂離子、氯化物、醋酸鹽、葡萄糖酸鹽、蔗糖、氫氧化鉀、或氫氧化鈉。於一些實施態樣中，該劑為下列之一或多者：丙酮酸鈉、腺嘌呤、Rejuvesol®、海藻糖、右旋糖、甘露糖、蔗糖、人血清白蛋白(HSA)、PlasmaLyte®、DMSO、Cryostor®CS2、Cryostor®CS5、Cryostor®CS10、Cryostor®CS15、HEPES、甘油、麩胱甘肽、HypoThermosol®。
於一些實施態樣中，該等經修飾之免疫細胞係經進一步修飾以增加一或多種共刺激分子之表現。於進一步之實施態樣中，該共刺激分子為B7-H2(ICOSL)、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、CD70、LIGHT、HVEM、CD40、4-1BBL、OX40L、TL1A、GITRL、CD30L、TIM4、SLAM、CD48、CD58、CD155、或CD112。於一些實施態樣中，該細胞包含導致該一或多種共刺激分子增加表現之核酸。
於一些實施態樣中，該免疫細胞為T細胞、樹突細胞、單核細胞、巨噬細胞、骨髓細胞、粒細胞、嗜中性粒細胞、肥大細胞、天然殺手細胞、先天淋巴細胞、嗜鹼性粒細胞、或造血前體細胞。於一些實施態樣中，該免疫細胞不是B細胞。於一些實施態樣中，該免疫細胞為T細胞。於一些實施態樣中，該免疫細胞為除B細胞以外者。於一些實施態樣中，該經修飾之T細胞包括下列一或多者：輔助T細胞、細胞毒性T細胞、記憶性T細胞、CIK細胞或天然殺手T細胞。於一些實施態樣中，該T細胞包括下列一或多者：CD3+T細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞、CD45RA+T細胞、CD45RO+T細胞和γδ-T細胞。同種異體T細胞中之MHC表現可導致個體中之固有之先天性免疫反應對所投予之同種異體T細胞產生反應且將導致該等T細胞之半衰期縮短。於一些實施態樣中，該T細胞包含進一步修飾以調節第I類MHC表現。於一些實施態樣中，該T細胞包含進一步修飾以調節第II類MHC表現。於一些實施態樣中，該T細胞包含進一步修飾以減少第I類MHC和/或第II類MHC表現。於特定之實施態樣中，該進一步修飾包含使用siRNA、shRNA、CRISPR/Cas9、ZFN、TALEN、Cre重組酶或大核酸酶減少第I類MHC和/或第II類MHC表現。於一些實施態樣中，該T細胞包含進一步修飾以增加第I類MHC和/或第II類MHC表現。於特定之實施態樣中，該進一步修飾包含使用mRNA、質體DNA或cDNA增加第I類MHC和/或第II類MHC表現。於一些實施態樣中，與在同種異體背景下於個體中之固有之先天性免疫反應對投予不包含該進一步修飾之對應的經修飾之T細胞的反應相比較，在同種異體背景下於個體中之固有之先天性免疫反應對投予該經進一步修飾之T細胞的反應減低。於一些實施態樣中，與不包含該進一步修飾之對應的經修飾之T細胞在經投予該等T細胞之個體中的循環半衰期相比較，該經進一步修飾之T細胞在經投予該等T細胞之個體中的循環半衰期增加。於一些實施態樣中，該經修飾之T細胞包括下列一或多者：輔助T細胞、細胞毒性T細胞、記憶T細胞、CIK細胞或天然殺手T細胞。於一些實施態樣中，該T細胞包括下列一或多者：CD3+T細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞、CD45RA+T細胞、CD45RO+T細胞或γδ-T細胞。
免疫細胞和其他細胞可作為自體或同種異體細胞之來源。於一些實施態樣中，該經修飾之免疫細胞對個體而言為同種異體的。於其他實施態樣中，該經修飾之免疫細胞對個體而言為自體的。於一些實施態樣中，該待治療之個體係經預調理以減低炎症或免疫反應。PBMC 組成物
如本文所使用者，PBMC可藉由白血球分離法從獲自個體之全血中分離。本發明亦提供PBMC組成物，該PBMC組成物係藉由混合來自相同個體或不同個體之不同PBMC匯集庫重構成。於其他實例中，亦可藉由將不同細胞族群混合入具有巳存在之變化形廓的混合細胞組成物中來重構PBMC。於一些實施態樣中，用於重構PBMC之細胞族群為混合之細胞族群(諸如下列一或多者之混合物：T細胞、B細胞、NK細胞或單核細胞)。於一些實施態樣中，用於重構PBMC之細胞族群為純化之細胞族群(諸如純化之T細胞、B細胞、NK細胞或單核細胞)。於另外之實例中，用於重構PBMC組成物之不同細胞族群可從相同個體分離出(例如自體的)或從不同個體分離出(例如同種異體和/或異源的)。
因此，於根據本文所描述之方法或組成物的一些實施態樣中，其中該免疫細胞為多個PBMC，該多個輸入PBMC包含下列之一或多者：T細胞、B細胞、NK細胞、單核細胞、樹突細胞或NK-T細胞。於一些實施態樣中，該多個輸入PBMC包含T細胞、B細胞、NK細胞、單核細胞、樹突細胞或NK-T細胞。於一些實施態樣中，該多個輸入PBMC包含下列之一或多者：CD3+T細胞、CD20+B細胞、CD14+單核細胞、CD56+NK細胞。於一些實施態樣中，該多個輸入PBMC包含T細胞、B細胞、NK細胞和單核細胞且該多個輸入PBMC中之T細胞、B細胞、NK細胞和單核細胞對PBMC總數之比例基本上與全血中T細胞、B細胞、NK細胞和單核細胞對PBMC之總數的比例相同。於一些實施態樣中，該多個輸入PBMC包含T細胞、B細胞、NK細胞和單核細胞且該多個輸入PBMC中T細胞、B細胞、NK細胞和單核細胞對PBMC總數的比例基本上與來自全血之白血球分離術產物中之T細胞、B細胞、NK細胞和單核細胞對PBMC總數的比例相同。於一些實施態樣中，該多個輸入PBMC包含T細胞、B細胞、NK細胞和單核細胞且該多個輸入PBMC中之T細胞、B細胞、NK細胞和單核細胞對PBMC總數的比例與全血中T細胞、B細胞、NK細胞和單核細胞對PBMC總數的比例相差不超過下列任一百分比：1%、2%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、40%、或50%。於一些實施態樣中，該多個輸入PBMC包含T細胞、B細胞、NK細胞和單核細胞且該多個輸入PBMC中T細胞、B細胞、NK細胞和單核細胞對PBMC總數之比例與全血中T細胞、B細胞、NK細胞和單核細胞對PBMC總數之比例相差不超過10%。於一些實施態樣中，該多個輸入PBMC包含T細胞、B細胞、NK細胞和單核細胞且該多個輸入PBMC中T細胞、B細胞、NK細胞和單核細胞對PBMC總數之比例基本上與來自全血之白血球分離術產物中之T細胞、B細胞、NK細胞和單核細胞對PBMC總數之比例相差不超過下列任一百分比：1%、2%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、40%、或50%。於一些實施態樣中，該多個輸入PBMC包含T細胞、B細胞、NK細胞和單核細胞且該多個輸入PBMC中T細胞、B細胞、NK細胞和單核細胞對PBMC總數之比例基本上與來自全血之白血球分離術產物中之T細胞、B細胞、NK細胞和單核細胞對PBMC總數之比例相差不超過10%。
於根據本文所描述之任一方法或組成物的一些實施態樣中，其中該免疫細胞為多個PBMC，至少約25%至約70%之該經修飾之PBMC為T細胞。於一些實施態樣中，至少約2.5%至約14%之該經修飾之PBMC為B細胞。於一些實施態樣中，至少約3.5%至約35%之該經修飾之PBMC為NK細胞。於一些實施態樣中，該經修飾之PBMC中約4%至約25%為NK細胞。於根據本文所描述之任一方法或組成物的一些實施態樣中，其中該免疫細胞為多個PBMC，至少約90%至約99%之該輸入PBMC係由T細胞、B細胞、NK細胞和單核細胞組成。於一些實施態樣中，該輸入PBMC中至少下列任一百分比範圍內之PBMC係由T細胞、B細胞、NK細胞和單核細胞組成：約80%至約85%、約85%至約90%、約90%至約95%、或約95%至約99%。於一些實施態樣中，該輸入PBMC中至少下列任一百分比之PBMC係由T細胞、B細胞、NK細胞和單核細胞組成：約80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%。於一些實施態樣中，至少約90%之該輸入PBMC係由T細胞、B細胞、NK細胞和單核細胞組成。於一些實施態樣中，該輸入PBMC係由T細胞、B細胞、NK細胞和單核細胞組成。
於根據本文所描述之任一方法或組成物的一些實施態樣中，其中該免疫細胞為多個PBMC，至少約90%至約99%之該經修飾之PBMC係由T細胞、B細胞、NK細胞和單核細胞組成。於一些實施態樣中，該經修飾之PBMC中至少下列任一百分比範圍內之PBMC係由T細胞、B細胞、NK細胞和單核細胞組成：約80%至約85%、約85%至約90%、約90%至約95%或約95%至約99%。於一些實施態樣中，該經修飾之PBMC中至少下列任一百分比之PBMC係由T細胞、B細胞、NK細胞和單核細胞組成：約80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%。於一些實施態樣中，至少約90%之經修飾的PBMC係由T細胞、B細胞、NK細胞和單核細胞組成。於一些實施態樣中，該經修飾的PBMC係由T細胞、B細胞、NK細胞和單核細胞組成。
於根據本文所描述之任一方法或組成物的一些實施態樣中，其中該免疫細胞為多個PBMC，該輸入PBMC中至少下列任一百分比之PBMC為T細胞：15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、或75%。於一些實施態樣中，至少約25%之該輸入PBMC為T細胞。於一些實施態樣中，該輸入PBMC中至少下列任一百分比之PBMC為B細胞：0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%、3%、4%、5%、6%、7%、7.5%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、25%、或30%。於一些實施態樣中，至少約2.5%之輸入PBMC為B細胞。於一些實施態樣中，該輸入PBMC中至少下列任一百分比之PBMC為NK細胞：0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%、3%、4%、5%、6%、7%、7.5%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、25%、或30%。於一些實施態樣中，至少約3.5%之輸入PBMC為NK細胞。於一些實施態樣中，該輸入PBMC中至少下列任一百分比之PBMC為單核細胞：1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、12%、14%、16%、18%、20%、25%、30%、35%、或40%。於一些實施態樣中，至少約4%之該輸入PBMC為單核細胞。於一些實施態樣中，至少約25%之該輸入PBMC為T細胞；至少約2.5%之該輸入PBMC為B細胞；至少約3.5%之該輸入PBMC為NK細胞；且至少約4%之輸入PBMC為單核細胞。
於根據本文所描述之任一方法或組成物的一些實施態樣中，其中該免疫細胞為多個PBMC，至少約下列任一百分比之該經修飾的PBMC為T細胞：10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、或70%。於一些實施態樣中，至少約20%之該經修飾的PBMC為T細胞。於一些實施態樣中，至少約下列任一百分比之該經修飾的PBMC為B細胞：0.25%、0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%、3%、4%、5%、6%、7%、7.5%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、25%、或30%。於一些實施態樣中，至少約2%之該經修飾的PBMC為B細胞。於一些實施態樣中，至少約下列任一百分比之該經修飾的PBMC為NK細胞：0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%、3%、4%、5%、6%、7%、7.5%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、25%、或30%。於一些實施態樣中，至少約3%之該經修飾的PBMC為NK細胞。於一些實施態樣中，至少約下列任一百分比之該經修飾的PBMC為單核細胞：1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、12%、14%、16%、18%、20%、25%、30%、35%、或40%。於一些實施態樣中，至少約3%之該經修飾的PBMC為單核細胞。於一些實施態樣中，至少約20%之該經修飾的PBMC為T細胞；至少約2%之該經修飾的PBMC為B細胞；至少約3%之該經修飾的PBMC為NK細胞；至少約3%之該經修飾的PBMC為單核細胞。
於根據本文所描述之任一方法或組成物的一些實施態樣中，其中該免疫細胞為多個PBMC，不超過約下列任一百分比之該輸入PBMC為T細胞：40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、或90%。於一些實施態樣中，不超過約70%之該輸入PBMC為T細胞。於一些實施態樣中，不超過約下列任一百分比之該輸入PBMC為B細胞：5%、10%、12%、14%、16%、18%、20%、22%、25%、30%、35%、40%、或50%。於一些實施態樣中，不超過約14%之該輸入PBMC為B細胞。於一些實施態樣中，不超過約下列任一百分比之該輸入PBMC為NK細胞：10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、或60%。於一些實施態樣中，不超過約35%之該輸入PBMC為NK細胞。於一些實施態樣中，不超過約下列任一百分比之該輸入PBMC為單核細胞：5%、10%、12%、14%、16%、18%、20%、22%、25%、30%、35%、40%、或50%。於一些實施態樣中，不超過約4%之該輸入PBMC為單核細胞。於一些實施態樣中，不超過約25%之該輸入PBMC為T細胞；不超過約2.5%之該輸入PBMC為B細胞；不超過約3.5%之該輸入PBMC為NK細胞；且不超過約4%之該輸入PBMC為單核細胞。
於根據本文所描述之任一方法或組成物的一些實施態樣中，其中該免疫細胞為多個PBMC，不超過約下列任一百分比之該經修飾的PBMC為T細胞：10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、或70%。於一些實施態樣中，不超過約20%之該經修飾的PBMC為T細胞。於一些實施態樣中，不超過約下列任一百分比之該經修飾的PBMC為B細胞：0.25%、0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%、3%、4%、5%、6%、7%、7.5%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、25%、或30%。於一些實施態樣中，不超過約2%之該經修飾的PBMC為B細胞。於一些實施態樣中，不超過約下列任一百分比之該經修飾的PBMC為NK細胞：0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%、3%、4%、5%、6%、7%、7.5%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、25%、或30%。於一些實施態樣中，不超過約3%之該經修飾的PBMC為NK細胞。於一些實施態樣中，不超過約下列任一百分比之該經修飾的PBMC為單核細胞：1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、12%、14%、16%、18%、20%、25%、30%、35%、或40%。於一些實施態樣中，不超過約3%之該經修飾的PBMC為單核細胞。於一些實施態樣中，不超過約20%之該經修飾的PBMC為T細胞；不超過約2%之該經修飾的PBMC為B細胞；不超過約3%之該經修飾的PBMC為NK細胞；且不超過約3%之該經修飾的PBMC為單核細胞。
於根據本文所描述之任一方法或組成物的一些實施態樣中，其中該免疫細胞為多個PBMC，該經修飾之PBMC中約下列任一百分比範圍內之PBMC為T細胞：約20%至25%、25%至30%、30%至35%、35%至40%、40%至45%、45%至50%、50%至55%、55%至60%、60%至65%、65%至70%、或70%至75%。於一些實施態樣中，約25%至約70%之該經修飾的PBMC為T細胞。於一些實施態樣中，該經修飾之PBMC中約下列任一百分比範圍內之PBMC為B細胞：1%至2.5%、2.5%至4%、4%至6%、6%至8%、8%至10%、10%至12%、12%至14%、14%至16%、16%至20%、或20%至25%。於一些實施態樣中，約2.5%至約14%之該經修飾的PBMC為B細胞。於一些實施態樣中，該經修飾之PBMC中約下列任一百分比範圍內之PBMC為NK細胞：1%至2%、2%至3.5%、3.5%至5%、5%至8%、8%至10%、10%至12%、12%至14%、14%至16%、16%至20%、或20%至25%。於一些實施態樣中，約3.5%至約35%之該經修飾的PBMC為NK細胞。於一些實施態樣中，該經修飾之PBMC中約下列任一百分比範圍內之PBMC為單核細胞：2%至4%、4%至6%、6%至8%、8%至10%、10%至12%、12%至14%、14%至16%、16%至20%、20%至25%、25%至30%、30%至35%、或35%至40%。於一些實施態樣中，約4%至約25%之該經修飾的PBMC為單核細胞。
如本文所使用者，PBMC亦可在操縱單核血球(諸如淋巴細胞和單核細胞)之混合細胞族群的組成後產生。於一些情況下，該輸入PBMC係在減少(例如消耗)單核血球之混合細胞族群內的某些亞群(例如B細胞)之後產生。個體中之單核血球的混合細胞族群中之組成可經過操縱以使該細胞族群更接近來自相同個體之全血的白血球分離術產物。於其他實例中，單核血球(例如小鼠脾細胞)之混合細胞族群中的組成亦經過操縱以使細胞族群更接近從獲自人全血之白血球分離術產物中分離出的人PBMC。
於一些實施態樣中，該由壓縮器介導之投遞不會以明顯方式差別調節PBMC內之不同亞群(諸如B細胞、T細胞、NK細胞或單核細胞) 的存活力。於一些實施態樣中，該調理過程不會以明顯方式差別調節PBMC內之不同亞群的存活力。於一些實施態樣中，進一步添加劑(包括，但不限於下列任一者：生物保存劑或增強PBMC之功能和/或存活力的劑)不會以明顯方式差別調節PBMC內各種亞群之存活力。因此，於根據本文所描述之任一方法或組成物的一些實施態樣中，其中該免疫細胞為多個PBMC，該多個經修飾之PBMC內的T細胞百分比與該多個輸入PBMC內之T細胞百分比相差不超過約10%(按數量計)。於一些實施態樣中，該多個經修飾之PBMC內的T細胞百分比與該多個輸入PBMC內之T細胞百分比相差不超過約下列任一百分比：5%、8%、10%、12%、14%、16%、18%、或20%(按數量計)。於一些實施態樣中，該多個經修飾之PBMC內的B細胞百分比與該多個輸入PBMC內之B細胞百分比相差不超過約10%(按數量計)。於一些實施態樣中，該多個經修飾之PBMC內的B細胞百分比與該多個輸入PBMC內之B細胞百分比相差不超過約下列任一百分比：5%、8%、10%、12%、14%、16%、18%、或20%(按數量計)。於一些實施態樣中，該多個經修飾之PBMC內的NK細胞百分比與該多個輸入PBMC內之NK細胞百分比相差不超過約10%(按數量計)。於一些實施態樣中，該多個經修飾之PBMC內的NK細胞百分比與該多個輸入PBMC內之NK細胞百分比相差不超過約下列任一百分比：5%、8%、10%、12%、14%、16%、18%、或20%(按數量計)。於一些實施態樣中，該多個經修飾之PBMC內的單核細胞百分比與該多個輸入PBMC內之單核細胞百分比相差不超過約10%(按數量計)。於一些實施態樣中，該多個經修飾之PBMC內的單核細胞百分比與該多個輸入PBMC內之單核細胞百分比相差不超過約下列任一百分比：5%、8%、10%、12%、14%、16%、18%、或20%(按數量計)。PBMC 之調理
於根據本文所描述之任一方法或組成物的一些實施態樣中，其中該免疫細胞為多個PBMC，該多個經修飾之PBMC係經過調理。於進一步之實施態樣中，該多個經修飾之PBMC被熟化。於一些實施態樣中，該多個PBMC係在由壓縮器介導之投遞後被調理。因此，於一些實施態樣中，製備該多個經修飾之PBMC的過程進一步包含將該多個包含該抗原和/或佐劑之經修飾的PBMC與該第二佐劑一起培育足夠的時間以調理該包含抗原之經修飾的PBMC，從而產生該多個包含抗原和/或佐劑之經調理的經修飾之PBMC。於一些實施態樣中，該過程進一步包含在與佐劑一起培育以調理該經修飾之PBMC之前，從該細胞懸浮液中分離出該多個包含抗原和/或佐劑之經修飾的PBMC。
於一些實施態樣中，與該經修飾之PBMC一起培育之抗原濃度係介於約0.01μM與約10mM之間。例如，於一些實施態樣中，與該經修飾之PBMC一起培育之抗原濃度為下列任一濃度：小於約0.01μM、約0.1μM、約1μM、約10μM、約100μM、約1mM、或約10mM。於一些實施態樣中，與該經修飾之PBMC一起培育之抗原濃度大於約10mM。於一些實施態樣中，與該經修飾之PBMC一起培育之抗原的濃度係介於下列任一範圍之間：介於約0.01μM與約0.1μM之間、介於約0.1μM與約1μM之間、介於約1μM與約10μM之間、介於約10μM與約100μM之間、介於約100μM與約1mM之間、或介於1mM與約10mM之間。於一些實施態樣中，與該經修飾之PBMC一起培育之抗原濃度介於約0.1μM與約1mM之間。於一些實施態樣中，與該經修飾之PBMC一起培育之抗原濃度係介於約0.1μM與約10μM之間。於一些實施態樣中，與該經修飾之PBMC一起培育之抗原濃度為1μM。
於根據本文所描述之任一方法或組成物的一些實施態樣中，其中該免疫細胞為多個PBMC，該多個經修飾之PBMC係與該佐劑一起培育約1至約24小時以調理該經修飾之PBMC。於一些實施態樣中，該多個經修飾之PBMC係與該佐劑一起培育約2至約10小時以調理該經修飾之PBMC。於一些實施態樣中，該多個經修飾之PBMC係與該佐劑一起培育約3至約6小時以調理該經修飾之PBMC。於一些實施態樣中，該多個經修飾之PBMC係與該佐劑一起培育下列任一時間以調理該經修飾之PBMC：約1小時、2小時、3小時、3.5小時、4小時、4.5小時、5小時、5.5小時、6小時、8小時、12小時、16小時、20小時、或24小時。於一些實施態樣中，該多個經修飾之PBMC係與該佐劑一起培育約4小時以調理該經修飾之PBMC。
於根據本文所描述之任一方法或組成物的一些實施態樣中，其中該免疫細胞為多個PBMC，該多個PBMC係在由壓縮器介導的投遞之前進行調理。因此，於一些實施態樣中，製備該多個經修飾之PBMC的過程進一步包含將該多個輸入PBMC與該佐劑一起培育足夠的時間以調理該經修飾之PBMC，從而產生經調理之多個輸入PBMC。於一些實施態樣中，提供經調理之多個包含抗原的經修飾之PBMC，其係藉由包含下列步驟之過程製備：a)將多個輸入PBMC與佐劑一起培育足夠之時間以調理該輸入PBMC，從而產生經調理之多個輸入PBMC；b) 令包含該經調理之多個輸入PBMC的細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入PBMC之直徑的函數)，從而造成該輸入PBMC之擾動大到足以令該抗原通過以形成經調理之多個經擾動的輸入PBMC；和c)將該經調理之多個經擾動的輸入PBMC與該抗原一起培育足夠之時間以令該抗原進入該經擾動之輸入PBMC；從而產生該經調理之多個經修飾的包含該抗原之PBMC。於一些實施態樣中，該過程進一步在令該經調理之多個輸入PBMC通過細胞變形壓縮器之前從該調理佐劑分離出該經調理之多個輸入PBMC。
於一些實施態樣中，與該輸入PBMC一起培育之抗原濃度係介於約0.01μM與約10mM之間。例如，於一些實施態樣中，與該輸入PBMC一起培育之抗原濃度為下列任一濃度：小於約0.01μM、約0.1μM、約1μM、約10μM、約100μM、約1mM、或約10mM。於一些實施態樣中，與該輸入PBMC一起培育之抗原濃度大於約10mM。於一些實施態樣中，與該輸入PBMC一起培育之抗原的濃度係介於下列任一範圍之間：介於約0.01μM與約0.1μM之間、介於約0.1μM與約1μM之間、介於約1μM與約10μM之間、介於約10μM與約100μM之間、介於約100μM與約1mM之間、或介於1mM與約10mM之間。於一些實施態樣中，與該輸入PBMC一起培育之抗原濃度係介於約0.1μM與約1mM之間。於一些實施態樣中，與該輸入PBMC一起培育之抗原濃度係介於約0.1μM與約10μM之間。於一些實施態樣中，與該輸入PBMC一起培育之抗原濃度為1μM。
於根據本文所描述之任一方法或組成物的一些實施態樣中，其中該免疫細胞為多個PBMC，該多個輸入PBMC係與該佐劑一起培育約1至約24小時以調理該輸入PBMC。於一些實施態樣中，該多個輸入PBMC係與該佐劑一起培育約2至約10小時以調理該輸入PBMC。於一些實施態樣中，該多個輸入PBMC係與該佐劑一起培育約3至約6小時以調理該輸入PBMC。於一些實施態樣中，該多個輸入PBMC係與該佐劑一起培育下列任一時間以調理該輸入PBMC：約1小時、2小時、3小時、3.5小時、4小時、4.5小時、5小時、5.5小時、6小時、8小時、12小時、16小時、20小時、或24小時。於一些實施態樣中，該多個輸入PBMC係與該佐劑一起培育約4小時以調理該輸入PBMC。
於一些實施態樣中，提供經調理之多個包含抗原的PBMC，其係藉由將多個包含該抗原之PBMC與佐劑一起培育足夠的時間以調理該PBMC，從而產生經調理之多個包含該抗原的PBMC。於一些實施態樣中，提供經調理之多個包含抗原的PBMC，其係藉由將該多個PBMC與佐劑一起培育足夠之時間以在將該抗原引入該PBMC之前調理該PBMC，從而產生經調理之多個包含該抗原的PBMC。
於根據本文所描述之任一方法或組成物的一些實施態樣中，其中該免疫細胞為多個PBMC，與該PBMC一起培育之抗原濃度係介於約0.01μM與約10mM之間。例如，於一些實施態樣中，與該PBMC一起培育之抗原濃度為下列任一濃度：小於約0.01μM、約0.1μM、約1μM、約10μM、約100μM、約1mM、或約10mM。於一些實施態樣中，與該PBMC一起培育之抗原濃度大於約10mM。於一些實施態樣中，與該PBMC一起培育之抗原的濃度係介於下列任一範圍之間：介於約0.01μM與約0.1μM之間、介於約0.1μM與約1μM之間、介於約1μM與約10μM之間、介於約10μM與約100μM之間、介於約100μM與約1mM之間、或介於1mM與約10mM之間。於一些實施態樣中，與該PBMC一起培育之抗原濃度係介於約0.1μM與約1mM之間。於一些實施態樣中，與該PBMC一起培育之抗原濃度係介於約0.1μM與約10μM之間。於一些實施態樣中，與該PBMC一起培育之抗原濃度為1μM。
於根據本文所描述之任一方法或組成物的一些實施態樣中，其中該免疫細胞為多個PBMC，該多個PBMC係與該佐劑一起培育約1至約24小時以調理該PBMC。於一些實施態樣中，該多個PBMC係與該佐劑一起培育約2至約10小時以調理該PBMC。於一些實施態樣中，該多個PBMC係與該佐劑一起培育約3至約6小時以調理該PBMC。於一些實施態樣中，該多個PBMC係與該佐劑一起培育下列任一時間以調理該PBMC：約1小時、2小時、3小時、3.5小時、4小時、4.5小時、5小時、5.5小時、6小時、8小時、12小時、16小時、20小時、或24小時。於一些實施態樣中，該多個PBMC係與該佐劑一起培育約4小時以調理該PBMC。
於一些實施態樣中，與未經調理之多個經修飾的PBMC相比較，在該經調理之多個經修飾之PBMC中有一或多個共刺激分子被上調。於一些實施態樣中，與未經調理之多個經修飾的PBMC中之細胞亞群相比較，該經調理之多個經修飾之PBMC中的細胞亞群中有一或多個共刺激分子被上調。於一些實施態樣中，與未經調理之多個經修飾的PBMC中之B細胞相比較，該經調理之多個經修飾之PBMC中的B細胞中有一或多個共刺激分子被上調。於一些實施態樣中，該共刺激分子為CD80和/或CD86。於一些實施態樣中，該共刺激分子為CD86。於一些實施態樣中，與未經調理之多個經修飾的PBMC中之B細胞相比較，該經調理之多個經修飾之PBMC中的B細胞中，該CD80和/或CD86被上調約1.2倍、1.5倍、1.8倍、2倍、3倍、4倍、5倍、8倍、或10倍以上。與未經調理之多個經修飾的PBMC中之B細胞相比較，該經調理之多個經修飾之PBMC中的B細胞中，該CD80和/或CD86被上調約1.2倍至約1.5倍、約1.5倍至約1.8倍、約1.8倍至約2倍、約2倍至約3倍、約3倍至約4倍、約4倍至約5倍、約5倍至約8倍、約8倍至約10倍、約10倍至約20倍、約20倍至約50倍、約50倍至約100倍、約100倍至約200倍、約200倍至約500倍、或約500倍以上。於一些實施態樣中，與未經調理之多個經修飾之PBMC相比較，該經調理之多個經修飾之PBMC中的IFN-γ、IL-6、MCP-1、MIP-1β、IP-10、或TNF-α中之一或多者的表現增加。於一些實施態樣中，與未經調理之多個經修飾的PBMC中的細胞亞群相比較，該經調理之多個經修飾之PBMC中的細胞亞群中之IFN-γ、IL-6、MCP-1、MIP-1β、IP-10、或TNF-α中之一或多者的表現增加。於一些實施態樣中，與未經調理之多個經修飾之PBMC相比較，該經調理之多個經修飾之PBMC中的IFN-γ、IL-6、MCP-1、MIP-1β、IP-10或TNF-α中之一或多者之表現增加約1.2倍、1.5倍、1.8倍、2倍、3倍、4倍、5倍、8倍、或10倍以上。於一些實施態樣中，與未經調理之多個經修飾的PBMC相比較，該經調理之多個經修飾之PBMC中的IFN-γ、IL-6、MCP-1、MIP-1β、IP-10、或TNF-α中之一或多者的表現增加約1.2倍至約1.5倍、約1.5倍至約1.8倍、約1.8倍至約2倍、約2倍至約3倍、約3倍至約4倍、約4倍至約5倍、約5倍至約8倍、約8倍至約10倍、約10倍至約20倍、約20倍至約50倍、約50倍至約100倍、約100倍約200倍、約200倍至約500倍、或約500倍以上。應用
於一些態樣中，本發明提供用於治療和預防HPV相關疾病之方法，和/或調節患有HPV相關疾病之個體的免疫反應之方法，該方法包含對該個體投予包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞在細胞內包含HPV抗原且在細胞內包含佐劑。於一些實施態樣中，該細胞係從患者分離出，根據所揭示之方法修飾再引回患者體內。例如，從患者中分離出免疫細胞族群，將該免疫細胞族群通過該壓縮器以投遞HPV抗原和佐劑，然後重新注入該患者體內以增強對該HPV抗原之治療性免疫反應。於一些實施態樣中，從患有HPV相關疾病之個體中分離出細胞，根據本文揭示之方法修飾再將其引回該個體中。例如從患有HPV相關疾病之個體中分離出免疫細胞族群，將該免疫細胞族群通過該壓縮器以投遞HPV抗原和佐劑，然後重新注入該患者體內以誘導或增強對該個體中之HPV抗原的免疫反應。
於一些實施態樣中，該待投遞之HPV抗原和/或佐劑為經純化的。於一些實施態樣中，該化合物至少為該所欲化合物之約60重量%(乾重)。於一些實施態樣中，該經純化之化合物至少為該所欲化合物之約75%、90%或99%。於一些實施態樣中，該經純化之化合物至少為該所欲化合物之約90%、91%、92%、93%、94%、95%、98%、99%、或100%(w/w)。純度係藉由任何已知方法測定，包括，但不限於管柱色層分析法、薄層色層分析法、HPLC分析、NMR、質譜分析或SDS-PAGE。純化之DNA或RNA之定義為不含外源核酸、碳水化合物和脂質之DNA或RNA。
於一些實施態樣中，本發明提供治療患有HPV相關疾病之個體的方法，該方法係藉由將該經修飾之細胞引入個體來進行，該細胞係藉由通過該壓縮器從而使HPV抗原和佐劑進入細胞中來修飾。於一些實施態樣中，該細胞為自體細胞。例如，該免疫細胞係從個體(例如患者)中分離出，根據所揭示之方法進行修飾並將其引回個體。於一些實施態樣中，該免疫細胞係從個體中分離出，根據所揭示之方法進行修飾並將該細胞引回同一個體中。於一些實施態樣中，該細胞為同種異體細胞。例如，該細胞係從不同個體分離出，根據所揭示之方法修飾並將其引入第一個體(例如患者)中。於一些實施態樣中，從個體中分離出細胞，根據所揭示之方法進行修飾並引入不同的個體中。
上述之任一方法係在玻管內、體外或體內進行。在體內應用方面，可將該裝置植入血管腔中，例如動脈或靜脈中之內聯式支架。於一些實施態樣中，該方法係作為床邊系統之一部分以用於在體外處理患者細胞並立即將該細胞重新引入該患者體內。於一些實施態樣中，該方法可在具有經最低限度訓練之技術員的典型醫院實驗室中實施。於一些實施態樣中，可使用由患者操作之治療系統。系統和套組
於一些態樣中，本發明提供用於本文所揭示之方法中的系統，該系統包含一或多個壓縮器、免疫細胞懸浮液、HPV抗原或佐劑。該系統可包括所描述之用於上文揭示之方法的任何實施態樣，包括用於提供細胞變形壓縮器之微流體通道或具有孔之表面、細胞懸浮液、細胞擾動、投遞參數、化合物和/或應用，等。於一些實施態樣中，該細胞變形壓縮器之大小為適合用於投遞至免疫細胞。於一些實施態樣中，該投遞參數，諸如操作流速、細胞和化合物濃度、細胞在該壓縮器中之速度和細胞懸浮液之組成(例如滲透壓濃度、鹽濃度、血清含量、細胞濃度、pH，等)係經優化以使化合物抑制免疫反應或誘導耐受性的反應最大化。
本發明亦提供用於治療患有HPV相關疾病之個體的套組或製品。於一些實施態樣中，該套組包含經修飾之免疫細胞，該等經修飾之免疫細胞在細胞內包含HPV抗原且在細胞內包含佐劑。於一些實施態樣中，該套組包含壓縮器、免疫細胞懸浮液、HPV抗原或佐劑中之一或多者以用於產生用於治療患有HPV相關疾病之個體的經修飾之免疫細胞。於一些實施態樣中，該套組包含在合適之包裝中的本文所描述之組成物(例如微流體通道或含有孔之表面、細胞懸浮液和/或化合物)。合適之包裝物質為本技藝所已知且包括，例如小瓶(諸如經密封之小瓶)、容器、安瓿、瓶子、罐子、軟包裝(例如密封之麥拉(Mylar)或塑料袋)，等。這些製品可經進一步滅菌和/或密封。
本發明亦提供包含本文所描述之方法的組分之套組且可進一步包含用於執行該方法治療患有HPV相關疾病之個體的說明書和/或用於將HPV抗原和佐劑引入免疫細胞之說明書。本文所描述之套組可進一步包括其他物質，包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針頭、注射器和具有用於執行本文所描述之任何方法之說明的仿單；例如用於治療患有HPV相關疾病之個體的說明書或用於修飾免疫細胞以在細胞內含有HPV抗原和在細胞內含有佐劑的說明書。 [示例性實施態樣 ]
實施態樣1. 一種用於治療個體中人類乳頭瘤病毒(HPV)相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原和佐劑，其中該佐劑係存在於細胞內。
實施態樣2. 一種用於預防個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原和佐劑，其中該佐劑係存在於細胞內。
實施態樣3. 一種用於調節患有HPV相關疾病之個體的免疫反應之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原和佐劑，其中該佐劑係存在於細胞內。
實施態樣4. 一種用於治療個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原和佐劑，其中該佐劑係存在於細胞內； 其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備： a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該抗原和該佐劑通過以形成經擾動之輸入細胞；和 b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原和該佐劑一起培育足夠之時間以令該HPV抗原和該佐劑進入該經擾動之輸入細胞； 從而產生該等經修飾之免疫細胞。
實施態樣5. 一種用於預防個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原和佐劑，其中該佐劑係存在於細胞內； 其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備： a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該抗原和該佐劑通過以形成經擾動之輸入細胞；和 b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原和該佐劑一起培育足夠之時間以令該HPV抗原和該佐劑進入該經擾動之輸入細胞； 從而產生該等經修飾之免疫細胞。
實施態樣6. 一種用於調節患有HPV相關疾病之個體的免疫反應之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原和佐劑，其中該佐劑係存在於細胞內； 其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備： a)令包含含有HPV抗原之輸入細胞的細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該HPV抗原和該佐劑通過以形成經擾動之輸入細胞；和 b)將該經擾動之輸入細胞與該抗原和該佐劑一起培育足夠之時間以令該HPV抗原和該佐劑進入該經擾動之輸入細胞； 從而產生該等經修飾之免疫細胞。
實施態樣7. 如實施態樣4至6中任一實施態樣之方法，其中該壓縮器之直徑小於該細胞之直徑。
實施態樣8. 如實施態樣4至7中任一實施態樣之方法，其中該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至99%。
實施態樣9. 如實施態樣4至8中任一實施態樣之方法，其中該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至小於約60%。
實施態樣10. 如實施態樣4至9中任一實施態樣之方法，其中該壓縮器係在通道中。
實施態樣11. 如實施態樣4至10中任一實施態樣之方法，其中該變形力係當該輸入細胞通過該壓縮器時施加至該輸入細胞。
實施態樣12. 如實施態樣1至11中任一實施態樣之方法，其中該HPV抗原和/或該佐劑係存在於胞質液和/或胞內體中。
實施態樣13. 如實施態樣1至12中任一實施態樣之方法，其中該抗原和/或佐劑係存在於該細胞之多個隔室中。
實施態樣14. 如實施態樣1至13中任一實施態樣之方法，其中該經修飾之免疫細胞進一步在該細胞外部包含HPV抗原和/或佐劑。
實施態樣15. 如實施態樣1至14中任一實施態樣之方法，其中與該經擾動之輸入細胞一起培育之佐劑的濃度為介於約0.1μM與約1mM之間。
實施態樣16. 如實施態樣1至15中任一實施態樣之方法，其中與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原的濃度為介於約0.1μM與約1mM之間。
實施態樣17. 如實施態樣4至16中任一實施態樣之方法，其中與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原對佐劑之比例係介於約10000：1與約1：10000之間。
實施態樣18. 如實施態樣3或6之方法，其中該免疫反應經增強。
實施態樣19. 如實施態樣18之方法，其中對該HPV抗原之免疫反應經增強。
實施態樣20. 如實施態樣1至19中任一實施態樣之方法，其中該佐劑為CpG ODN、IFN-α、STING激動劑、RIG-I激動劑或聚I：C。
實施態樣21. 如實施態樣20之方法，其中該佐劑為CpG ODN。
實施態樣22. 如實施態樣21之方法，其中該CpG ODN為CpG ODN 1018、CpG ODN 1826或CpG ODN 2006。
實施態樣23. 如實施態樣1至22中任一實施態樣之方法，其中該經修飾之免疫細胞包含多於一種之佐劑。
實施態樣24. 如實施態樣1至23中任一實施態樣之方法，其中該HPV抗原為引發針對相同和/或不同HPV抗原之反應的多種多肽之匯集庫。
實施態樣25. 如實施態樣24之方法，其中在該多種抗原之匯集庫中的抗原不會減低該針對該多種抗原之匯集庫中的其他抗原之免疫反應。
實施態樣26. 如實施態樣1至25中任一實施態樣之方法，其中該HPV抗原為包含抗原性HPV抗原決定部位和一或多個異源肽序列之多肽。
實施態樣27. 如實施態樣1至26中任一實施態樣之方法，其中該HPV抗原與其自身、與其他抗原、或與該佐劑複合。
實施態樣28. 如實施態樣1至27中任一實施態樣之方法，其中該HPV為源自細胞溶胞產物之抗原。
實施態樣29. 如實施態樣1至28中任一實施態樣之方法，其中該HPV抗原為HPV-16或HPV-18抗原。
實施態樣30. 如實施態樣29之方法，其中該HPV抗原包含HLA-A2特異性抗原決定部位。
實施態樣31. 如實施態樣1至30中任一實施態樣之方法，其中該HPV抗原為HPV E6抗原或HPV E7抗原。
實施態樣32. 如實施態樣1至31中任一實施態樣之方法，其中該經修飾之免疫細胞包含HPV E6抗原和HPV E7抗原。
實施態樣33. 如實施態樣1至32中任一實施態樣之方法，其中該HPV抗原為包含抗原性抗原決定部位之多肽，該抗原性抗原決定部位之N端和/或C端側翼鄰接一或多個異源肽序列。
實施態樣34. 如實施態樣33之方法，其中該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至26中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列。
實施態樣35. 如實施態樣34之方法，其中該HPV抗原包含與SEQ ID NO：23具有至少90%相似性之胺基酸序列。
實施態樣36. 如實施態樣1至35中任一實施態樣之方法，其中該HPV抗原能夠被加工成第I類MHC限制性肽。
實施態樣37. 如實施態樣1至36中任一實施態樣之方法，其中該HPV抗原能夠被加工成第II類MHC限制性肽。
實施態樣38. 如實施態樣1至37中任一實施態樣之方法，其中該經修飾之免疫細胞包含濃度為介於約0.1μM與約1mM之間之佐劑。
實施態樣39. 如實施態樣1至38中任一實施態樣之方法，其中該經修飾之免疫細胞包含濃度為介於約0.1μM與約1mM之間之HPV抗原。
實施態樣40. 如實施態樣1至39中任一實施態樣之方法，其中該HPV抗原對該佐劑之比例係介於約10000：1與約1：10000之間。
實施態樣41. 如實施態樣1至40中任一實施態樣之方法，其中該經修飾之免疫細胞進一步包含與不包含該劑之對應的經修飾之免疫細胞相比較，增強該經修飾之免疫細胞的存活力和/或功能之劑。
實施態樣42. 如實施態樣41之方法，其中該劑為增強胞吞作用之化合物、穩定劑或輔因子。
實施態樣43. 如實施態樣41之方法，其中該劑為白蛋白。
實施態樣44. 如實施態樣43之方法，其中該白蛋白為小鼠、牛或人白蛋白。
實施態樣45. 如實施態樣41之方法，其中該劑為二價金屬陽離子、葡萄糖、ATP、鉀、甘油、海藻糖、D-蔗糖、PEG1500、L-精胺酸、L-麩胺醯胺、或EDTA。
實施態樣46. 如實施態樣41之方法，其中該劑包含小鼠血清白蛋白(MSA)。
實施態樣47. 如實施態樣1至46中任一實施態樣之方法，其中該等經修飾之免疫細胞被進一步修飾以增加一或多種共刺激分子之表現。
實施態樣48. 如實施態樣47之方法，其中該共刺激分子為B7-H2、B7-1、B7-2、CD70、LIGHT、HVEM、CD40、4-1BBL、OX40L、TL1A、GITRL、CD30L、TIM4、SLAM、CD48、CD58、CD155、或CD112。
實施態樣49. 如實施態樣47或48之方法，其中該細胞包含導致該一或多種共刺激分子增加表現之核酸。
實施態樣50. 如實施態樣1至49中任一實施態樣之方法，其中該免疫細胞為T細胞、樹突細胞、單核細胞、巨噬細胞、髓樣細胞、粒細胞、嗜中性粒細胞、肥大細胞、天然殺手細胞、先天性淋巴細胞、嗜鹼性粒細胞、或造血前體細胞。
實施態樣51. 如實施態樣1至50中任一實施態樣之方法，其中該免疫細胞不是B細胞。
實施態樣52. 如實施態樣1至50中任一實施態樣之方法，其中該免疫細胞為B細胞。
實施態樣53. 如實施態樣1至51中任一實施態樣之方法，其中該免疫細胞為T細胞。
實施態樣54. 如實施態樣1至49中任一實施態樣之方法，其中該免疫細胞為混合之細胞族群。
實施態樣55. 如實施態樣54之方法，其中該免疫細胞為多個PBMC。
實施態樣56. 如實施態樣53之方法，其中該T細胞包含進一步修飾以調節第I類MHC表現。
實施態樣57. 如實施態樣53之方法，其中該T細胞包含進一步修飾以調節第II類MHC表現。
實施態樣58. 如實施態樣56或57之方法，其中該T細胞包含進一步修飾以減少第I類MHC和/或第II類MHC表現。
實施態樣59. 如實施態樣56或57之方法，其中該進一步修飾包含使用siRNA、shRNA、CRISPR/Cas9、ZFN、TALEN、Cre重組酶或大核酸酶減少第I類MHC和/或第II類MHC表現。
實施態樣60. 如實施態樣56或57之方法，其中該T細胞包含進一步修飾以增加第I類MHC和/或第II類MHC表現。
實施態樣61. 如實施態樣56或57之方法，其中該進一步修飾包含使用RNA或質體DNA增加第I類MHC和/或第II類MHC表現。
實施態樣62. 如實施態樣53和56至59中任一實施態樣之方法，其中與在同種異體背景下於個體中之固有之先天性免疫反應對投予不包含該進一步修飾之對應的經修飾之T細胞的反應相比較，在同種異體背景下於個體中之固有之先天性免疫反應對投予該經進一步修飾之T細胞的反應減低。
實施態樣63. 如實施態樣53和56至59中任一實施態樣之方法，其中與該不包含該進一步修飾之對應的經修飾之T細胞在經投予該T細胞之個體中的循環半衰期相比較，該經進一步修飾之T細胞在經投予該T細胞之個體中的循環半衰期被調節。
實施態樣64. 如實施態樣53和56至63中任一實施態樣之方法，其中該T細胞包括下列之一或多者：輔助T細胞、細胞毒性T細胞、記憶T細胞、CIK細胞和天然殺手T細胞。
實施態樣65. 如實施態樣53和56至63中任一實施態樣之方法，其中該T細胞包括下列之一或多者：CD3+T細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞、CD45RA+T細胞、CD45RO+T細胞和γδ-T細胞。
實施態樣66. 如實施態樣1至65中任一實施態樣之方法，其中該經修飾之細胞對該個體而言為同種異體的。
實施態樣67. 如實施態樣1至65中任一實施態樣之方法，其中該經修飾之細胞對該個體而言為自體的。
實施態樣68. 如實施態樣1至67中任一實施態樣之方法，其中該個體經預調理以具有經調節之發炎和/或經調節之免疫反應。
實施態樣69. 如實施態樣1至68中任一實施態樣之方法，其進一步包含對該個體投予佐劑。
實施態樣70. 如實施態樣69之方法，其中該佐劑為IFNα或CpG ODN。
實施態樣71. 如實施態樣69或70之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和該佐劑係同時投予。
實施態樣72. 如實施態樣69或70之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和該佐劑係依序投予。
實施態樣73. 如實施態樣72之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該佐劑之前投予。
實施態樣74. 如實施態樣72之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該佐劑之後投予。
實施態樣75. 如實施態樣1至74中任一實施態樣之方法，其中投予該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係與免疫檢查點抑制劑之投予組合。
實施態樣76. 如實施態樣75之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和該免疫檢查點抑制劑係同時投予。
實施態樣77. 如實施態樣75之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和該免疫檢查點抑制劑係依序投予。
實施態樣78. 如實施態樣77之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該免疫檢查點抑制劑之前投予。
實施態樣79. 如實施態樣77之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該免疫檢查點抑制劑之後投予。
實施態樣80. 如實施態樣75至79中任一實施態樣之方法，其中該免疫檢查點抑制劑係靶向下列之一或多者：PD-1、PD-L1、CTLA-4、LAG3、TIM-3、TIGIT、VISTA、TIM1、B7-H4(VTCN1)或BTLA。
實施態樣81. 如實施態樣1至80中任一實施態樣之方法，其中投予該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係與該化學療法之投予組合。
實施態樣82. 如實施態樣81之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係與該化學療法同時投予。
實施態樣83. 如實施態樣81之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係與該化學療法依序投予。
實施態樣84. 如實施態樣83之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該化學療法之前投予。
實施態樣85. 如實施態樣83之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該化學療法之後投予。
實施態樣86. 如實施態樣81至85中任一實施態樣之方法，其中該化學療法包含基於鉑之劑。
實施態樣87. 如實施態樣81至86中任一實施態樣之方法，其中該化學療法包含順鉑。
實施態樣88. 如實施態樣1至87中任一實施態樣之方法，其中對該個體投予包含該等經修飾之免疫細胞之組成物導致特異於該HPV抗原之細胞毒性T淋巴細胞(CTL)活化和/或擴增。
實施態樣89. 如實施態樣1至87中任一實施態樣之方法，其中對該個體投予包含該等經修飾之免疫細胞之組成物導致特異於該抗原之輔助T(Th )細胞活化和/或擴增。
實施態樣90. 如實施態樣1至89中任一實施態樣之方法，其中該組成物之有效量包含介於約1×106 與約1×1012 個之間的經修飾之免疫細胞。
實施態樣91. 如實施態樣1至90中任一實施態樣之方法，其中該方法包含多次投予該包含該等經修飾之免疫細胞的組成物。
實施態樣92. 如實施態樣91之方法，其中該方法包含先投予該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物，接著第二次投予該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物。
實施態樣93. 如實施態樣92之方法，其中該第二次投予係在該第一次投予後約一個月。
實施態樣94. 如實施態樣1至93中任一實施態樣之方法，其中該HPV相關疾病為HPV相關癌症。
實施態樣95. 如實施態樣94之方法，其中該HPV相關癌症為子宮頸癌、肛門癌、口咽癌、陰道癌、外陰癌、陰莖癌、皮膚癌或頭頸癌。
實施態樣96. 如實施態樣1至95中任一實施態樣之方法，其中該HPV相關疾病為HPV相關傳染病。
實施態樣97. 一種用於治療個體中人類乳頭瘤病毒(HPV)相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至25中任一者具有至少90%相似性之胺基酸。
實施態樣98. 一種用於預防個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至25中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列。
實施態樣99. 一種用於調節患有HPV相關疾病之個體中的免疫反應之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至25中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列。
實施態樣100. 一種用於治療個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至25中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列；其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備： a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該抗原通過以形成經擾動之輸入細胞；和 b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原一起培育足夠之時間以令該HPV抗原進入該經擾動之輸入細胞； 從而產生該等經修飾之免疫細胞。
實施態樣101. 一種用於預防個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至25中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列； 其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備： a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該HPV抗原通過以形成經擾動之輸入細胞；和 b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原一起培育足夠之時間以令該HPV抗原進入該經擾動之輸入細胞； 從而產生該等經修飾之免疫細胞。
實施態樣102. 一種用於調節患有HPV相關疾病之個體中的免疫反應之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至25中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列； 其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備： a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該HPV抗原通過以形成經擾動之輸入細胞；和 b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原一起培育足夠之時間以令該HPV抗原進入該經擾動之輸入細胞； 從而產生該等經修飾之免疫細胞。
實施態樣103. 如實施態樣100至102中任一實施態樣之方法，其中該壓縮器之直徑小於該細胞之直徑。
實施態樣104. 如實施態樣100至103中任一實施態樣之方法，其中該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至99%。
實施態樣105. 如實施態樣100至104中任一實施態樣之方法，其中該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至小於約60%。
實施態樣106. 如實施態樣100至105中任一實施態樣之方法，其中該壓縮器係在通道中。
實施態樣107. 如實施態樣100至106中任一實施態樣之方法，其中變形力係當該輸入細胞通過該壓縮器時施加至該輸入細胞。
實施態樣108. 如實施態樣86至107中任一實施態樣之方法，其進一步包含對該個體投予佐劑。
實施態樣109. 如實施態樣108之方法，其中該佐劑為IFNα或CpG ODN。
實施態樣110. 如實施態樣108或109之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和佐劑係同時投予。
實施態樣111. 如實施態樣108或109之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和該佐劑係依序投予。
實施態樣112. 如實施態樣111之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該佐劑之前投予。
實施態樣113. 如實施態樣111之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該佐劑之後投予。
實施態樣114. 如實施態樣97至113中任一實施態樣之方法，其中該經修飾之免疫細胞進一步包含佐劑。
實施態樣115. 如實施態樣100至113中任一實施態樣之方法，其中該步驟b之經擾動的免疫細胞係與該HPV抗原和佐劑一起培育。
實施態樣116. 如實施態樣114或115之方法，其中該HPV抗原和/或該佐劑係存在於胞質液和/或胞內體中。
實施態樣117. 如實施態樣114至116中任一實施態樣之方法，其中該抗原和/或佐劑係存在於該細胞之多個隔室中。
實施態樣118. 如實施態樣114至117中任一實施態樣之方法，其中該經修飾之免疫細胞進一步在該細胞外部包含HPV抗原和/或佐劑。
實施態樣119. 如實施態樣115至118中任一實施態樣之方法，其中與該經擾動之輸入細胞一起培育之該佐劑的濃度為介於約0.1μM與約1mM之間。
實施態樣120. 如實施態樣115至119中任一實施態樣之方法，其中與該經擾動之輸入細胞一起培育之該HPV抗原的濃度為介於約0.1μM與約1mM之間。
實施態樣121. 如實施態樣115至120中任一實施態樣之方法，其中與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原對佐劑之比例係介於約10000：1與約1：10000之間。
實施態樣122. 如實施態樣99或102之方法，其中該免疫反應經增強。
實施態樣123. 如實施態樣122之方法，其中對該HPV抗原之免疫反應經增強。
實施態樣124. 如實施態樣114至123中任一實施態樣之方法，其中該佐劑為CpG ODN、IFN-α、STING激動劑、RIG-I激動劑或聚I：C。
實施態樣125. 如實施態樣124之方法，其中該佐劑為CpG ODN。
實施態樣126. 如實施態樣125之方法，其中該CpG ODN為CpG ODN 1018、CpG ODN 1826或CpG ODN 2006。
實施態樣127. 如實施態樣114至126中任一實施態樣之方法，其中該經修飾之免疫細胞包含多於一種之佐劑。
實施態樣128. 如實施態樣97至127中任一實施態樣之方法，其中該HPV抗原為引發針對相同和/或不同HPV抗原之反應的多種多肽之匯集庫。
實施態樣129. 如實施態樣128之方法，其中在該多種抗原之匯集庫中之抗原不會減低該針對該多種抗原之匯集庫中的其他抗原之免疫反應。
實施態樣130. 如實施態樣97至129中任一實施態樣之方法，其中該HPV抗原為包含抗原性HPV抗原決定部位和一或多個異源肽序列之多肽。
實施態樣131. 如實施態樣97至130中任一實施態樣之方法，其中該HPV抗原與其自身、與其他抗原、或與該佐劑複合。
實施態樣132. 如實施態樣97至131中任一實施態樣之方法，其中該HPV抗原包含HLA-A2特異性抗原決定部位。
實施態樣133. 如實施態樣97至132中任一實施態樣之方法，其中該HPV抗原能夠被加工成第I類MHC限制性肽。
實施態樣134. 如實施態樣97至133中任一實施態樣之方法，其中該HPV抗原能夠被加工成第II類MHC限制性肽。
實施態樣135. 如實施態樣114至134中任一實施態樣之方法，其中該經修飾之免疫細胞包含濃度介於約0.1μM與約1mM之間之該佐劑。
實施態樣136. 如實施態樣97至135中任一實施態樣之方法，其中該經修飾之免疫細胞包含濃度介於約0.1μM與約1mM之間之該HPV抗原。
實施態樣137. 如實施態樣114至136中任一實施態樣之方法，其中該HPV抗原對該佐劑之比例為介於約10000：1與約1：10000之間。
實施態樣138.實施態樣97至137中任一實施態樣之方法，其中該經修飾之免疫細胞進一步包含與不包含該劑之對應的經修飾之免疫細胞相比較，增強該經修飾之免疫細胞的存活力和/或功能之劑。
實施態樣139.實施態樣138之方法，其中該劑為增強胞吞作用之化合物、穩定劑或輔因子。
實施態樣140.實施態樣138之方法，其中該劑為白蛋白。
實施態樣141。實施態樣140之方法，其中該白蛋白為小鼠、牛或人白蛋白。
實施態樣142.實施態樣138之方法，其中該劑為二價金屬陽離子、葡萄糖、ATP、鉀、甘油、海藻糖、D-蔗糖、PEG1500、L-精胺酸、L-麩胺醯胺、或EDTA。
實施態樣143. 如實施態樣138之方法，其中該劑包含MSA。
實施態樣144. 如實施態樣97至143中任一實施態樣之經修飾之T細胞，其中該等細胞被進一步修飾以增加一或多種共刺激分子之表現。
實施態樣145. 如實施態樣144之經修飾之T細胞，其中該共刺激分子為B7-H2(ICOSL)、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、CD70、LIGHT、HVEM、CD40、4-1BBL、OX40L、TL1A、GITRL、CD30L、TIM4、SLAM、CD48、CD58、CD155、或CD112。
實施態樣146. 如實施態樣144或145之經修飾之T細胞，其中該細胞包含導致該一或多種共刺激分子增加表現的核酸。
實施態樣147. 如實施態樣97至146中任一實施態樣之方法，其中該免疫細胞為T細胞、樹突細胞、單核細胞、巨噬細胞、髓樣細胞、粒細胞、嗜中性粒細胞、肥大細胞、天然殺手細胞、先天性淋巴細胞、嗜鹼性粒細胞、或造血前體細胞。
實施態樣148. 如實施態樣97至147中任一實施態樣之方法，其中該免疫細胞不是B細胞。
實施態樣149. 如實施態樣97至148中任一實施態樣之方法，其中該免疫細胞為B細胞。
實施態樣150. 如實施態樣97至148中任一實施態樣之方法，其中該免疫細胞為T細胞。
實施態樣151. 如實施態樣97-148中的任一項，其中該免疫細胞為混合之細胞族群。
實施態樣152. 如實施態樣151之方法，其中該免疫細胞為多個PBMC。
實施態樣153. 如實施態樣150之方法，其中該T細胞包含進一步修飾以調節第I類MHC表現。
實施態樣154. 如實施態樣150之方法，其中該T細胞包含進一步修飾以調節第II類MHC表現。
實施態樣155. 如實施態樣153或154之方法，其中該T細胞包含進一步修飾以減少第I類MHC和/或第II類MHC表現。
實施態樣156. 如實施態樣153或154之方法，其中該進一步修飾包含使用siRNA、shRNA、CRISPR/Cas9、ZFN、TALEN、Cre重組酶或大核酸酶減少第I類MHC和/或第II類MHC表現。
實施態樣157. 如實施態樣153或154之方法，其中該T細胞包含進一步修飾以增加第I類MHC和/或第II類MHC表現。
實施態樣158. 如實施態樣153或154之方法，其中該進一步修飾包含使用RNA或質體DNA增加第I類MHC和/或第II類MHC表現。
實施態樣159. 如實施態樣150和153至156中任一實施態樣之方法，其中與在同種異體背景下於個體中之固有之先天性免疫反應對投予不包含該進一步修飾之對應的經修飾之T細胞的反應相比較，在同種異體背景下於個體中之固有之先天性免疫反應對投予該經進一步修飾之T細胞的反應減低。
實施態樣160. 如實施態樣150和153至156中任一實施態樣之方法，其中與該不包含該進一步修飾之對應的經修飾之T細胞在經投予該T細胞之個體中的循環半衰期相比較，該經進一步修飾之T細胞在經投予該T細胞之個體中的循環半衰期被調節。
實施態樣161. 如實施態樣150和153至160中任一實施態樣之方法，其中該T細胞包括下列之一或多者：輔助T細胞、細胞毒性T細胞、記憶T細胞、CIK細胞和天然殺手T細胞。
實施態樣162. 如實施態樣150和153至160中任一實施態樣之方法，其中該T細胞包括下列之一或多者：CD3+T細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞、CD45RA+T細胞、CD45RO+T細胞和γδ-T細胞。
實施態樣163. 如實施態樣97至162中任一實施態樣之方法，其中該經修飾之細胞對該個體而言為同種異體的。
實施態樣164. 如實施態樣97至162中任一實施態樣之方法，其中該經修飾之細胞對該個體而言為自體的。
實施態樣165. 如實施態樣97至164中任一實施態樣之方法，其中該個體係經預調理以具有經調節之發炎和/或經調節之免疫反應。
實施態樣166. 如實施態樣97至165中任一實施態樣之方法，其中投予該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係與免疫檢查點抑制劑之投予組合。
實施態樣167. 如實施態樣166之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和該免疫檢查點抑制劑係同時投予。
實施態樣168. 如實施態樣166之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和該免疫檢查點抑制劑係依序投予。
實施態樣169. 如實施態樣168之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該免疫檢查點抑制劑之前投予。
實施態樣170. 如實施態樣168之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該免疫檢查點抑制劑之後投予。
實施態樣171. 如實施態樣152至156中任一實施態樣之方法，其中該免疫檢查點抑制劑係靶向下列之一或多者：PD-1、PD-L1、CTLA-4、LAG3、TIM-3、TIGIT、VISTA、TIM1、B7-H4(VTCN1)或BTLA。
實施態樣172. 如實施態樣97至171中任一實施態樣之方法，其中投予該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係與該化學療法之投予組合。
實施態樣173. 如實施態樣172之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係與該化學療法同時投予。
實施態樣174. 如實施態樣172之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係與該化學療法依序投予。
實施態樣175. 如實施態樣174之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該化學療法之前投予。
實施態樣176. 如實施態樣174之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該化學療法之後投予。
實施態樣177. 如實施態樣172至176中任一實施態樣之方法，其中該化學療法包含順鉑。
實施態樣178. 如實施態樣97至177中任一實施態樣之方法，其中對該個體投予包含該等經修飾之免疫細胞之組成物導致特異於該HPV抗原之細胞毒性T淋巴細胞(CTL)活化和/或擴增。
實施態樣179. 如實施態樣97至177中任一實施態樣之方法，其中對該個體投予包含該等經修飾之免疫細胞之組成物導致特異於該HPV抗原之輔助T(Th )細胞活化和/或擴增。
實施態樣180. 如實施態樣97至179中任一實施態樣之方法，其中該組成物之有效量包含介於約1×106 與約1×1012 個之間的經修飾之免疫細胞。
實施態樣181. 如實施態樣97至180中任一實施態樣之方法，其中該方法包含多次投予該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物。
實施態樣182. 如實施態樣181之方法，其中該方法包含第一次投予該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物，接著第二次投予該包含該等經修飾之免疫細胞的組成物。
實施態樣183. 如實施態樣182之方法，其中該第二次投予係在該第一次投予後約一個月。
實施態樣184. 如實施態樣97至183中任一實施態樣之方法，其中該HPV相關疾病為HPV相關癌症。
實施態樣185. 如實施態樣184之方法，其中該HPV相關癌症為子宮頸癌、肛門癌、口咽癌、陰道癌、外陰癌、陰莖癌、皮膚癌或頭頸癌。
實施態樣186. 一種包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞在細胞內包含CpG ODN和與SEQ ID NO：18至25中任一者具有至少90%相似性之HPV抗原。
實施態樣187. 如實施態樣186之組成物，其中該HPV抗原包含與SEQ ID NO：23具有至少90%相似性之胺基酸序列。
實施態樣188. 如實施態樣186或187之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備： a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該HPV抗原和該CpG ODN通過以形成經擾動之輸入細胞；和 b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原和該CpG ODN一起培育足夠之時間以令該HPV抗原和該CpG ODN進入該經擾動之輸入細胞； 從而產生該等經修飾之免疫細胞。
實施態樣189. 如實施態樣188之組成物，其中該壓縮器之直徑小於該細胞之直徑。
實施態樣190. 如實施態樣188或189之組成物，其中該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至約99%。
實施態樣191. 如實施態樣188至190中任一實施態樣之組成物，其中該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至小於約60%。
實施態樣192. 如實施態樣188至191中任一實施態樣之組成物，其中該壓縮器係在通道中。
實施態樣193. 如實施態樣188至192中任一實施態樣之組成物，其中該變形力係當該輸入細胞通過該壓縮器時施加至該輸入細胞。
實施態樣194. 如實施態樣186至193中任一實施態樣之組成物，其中該組成物進一步包含佐劑。
實施態樣195. 如實施態樣186至194中任一實施態樣之組成物，其中該HPV抗原和/或該CpG ODN係存在於胞質液和/或胞內體中。
實施態樣196. 如實施態樣186至195中任一實施態樣之組成物，其中該抗原和/或該CpG ODN係存在於該細胞之多個隔室中。
實施態樣197. 如實施態樣186至196中任一實施態樣之組成物，其中該經修飾之免疫細胞進一步在該細胞表面上包含HPV抗原和/或CpG ODN。
實施態樣198. 如實施態樣188至197中任一實施態樣之組成物，其中與該經擾動之輸入細胞一起培育之CpG ODN的濃度為介於約0.1μM與約1mM之間。
實施態樣199. 如實施態樣188至198中任一實施態樣之組成物，其中與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原的濃度為介於約0.1μM與約1mM之間。
實施態樣200. 如實施態樣188至199中任一實施態樣之組成物，其中與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原對CpG ODN之比例為介於約10000：1與約1：10000之間。
實施態樣201. 如實施態186至200中任一實施態樣之組成物，其中該CpG ODN為CpG ODN 1018、CpG ODN 1826或CpG ODN 2006。
實施態樣202. 如實施態樣186至200中任一實施態樣之組成物，其中該經修飾之免疫細胞包含多於一種之佐劑。
實施態樣203. 如實施態樣202之組成物，其中該佐劑包含CpG ODN、IFN-α、STING激動劑、RIG-I激動劑或聚I：C。
實施態樣204. 如實施態樣186至203中任一實施態樣之組成物，其中該HPV抗原為引發針對相同和/或不同HPV抗原之反應的多種多肽之匯集庫。
實施態樣205. 如實施態樣204之組成物，其中在該多種抗原之匯集庫中之抗原不會減低該針對該多種抗原之匯集庫中的其他抗原之免疫反應。
實施態樣206. 如實施態樣186至205中任一實施態樣之組成物，其中該HPV抗原為包含抗原性HPV抗原決定部位和一或多個異源肽序列之多肽。
實施態樣207. 如實施態樣186至206中任一實施態樣之組成物，其中該HPV抗原與其自身、與其他抗原或與CpG ODN複合。
實施態樣208. 如實施態樣186至207中任一實施態樣之組成物，其中該HPV抗原包含HLA-A2特異性抗原決定部位。
實施態樣209. 如實施態樣186至208中任一實施態樣之組成物，其中該HPV抗原為包含抗原性抗原決定部位之多肽，該抗原性抗原決定部位之N端和/或C端側翼鄰接一或多個異源肽序列。
實施態樣210. 如實施態樣186至209中任一實施態樣之組成物，其中該經修飾之免疫細胞包含濃度介於約0.1μM與約1mM之間之該CpG ODN。
實施態樣212. 如實施態樣186至211中任一實施態樣之組成物，其中該HPV抗原對該CpG ODN之比例為介於約10000：1與約1：10000之間。
實施態樣213. 一種包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，其中該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至25中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列。
實施態樣214. 如實施態樣213之組成物，其中該HPV抗原包含與SEQ ID NO：23具有至少90%相似性之胺基酸序列。
實施態樣215. 如實施態樣213或214之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備： a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該HPV抗原通過以形成經擾動之輸入細胞；和 b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原一起培育足夠之時間以令該HPV抗原進入該經擾動之輸入細胞； 從而產生該等經修飾之免疫細胞。
實施態樣216. 如實施態樣215之組成物，其中該壓縮器之直徑小於該細胞之直徑。
實施態樣217. 如實施態樣215至216中任一實施態樣之組成物，其中該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至99%。
實施態樣218. 如實施態樣215至217中任一實施態樣之組成物，其中該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至小於約60%。
實施態樣219. 如實施態樣215至218中任一實施態樣之組成物，其中該壓縮器係在通道中。
實施態樣220. 如實施態樣215至219中任一實施態樣之組成物，其中該變形力係當該輸入細胞通過該壓縮器時施加至該輸入細胞。
實施態樣221. 如實施態樣213至220中任一實施態樣之組成物，其中該組成物進一步包含佐劑。
實施態樣222. 如實施態樣213至221中任一實施態樣之組成物，其中該HPV抗原和/或該佐劑係存在於胞質液和/或胞內體中。
實施態樣223. 如實施態樣213至222中任一實施態樣之組成物，其中該抗原和/或佐劑係存在於該細胞之多個隔室中。
實施態樣224. 如實施態樣213至223中任一實施態樣之組成物，其中該經修飾之免疫細胞進一步在該細胞之表面上包含HPV抗原和/或佐劑。
實施態樣225. 如實施態樣215至224中任一實施態樣之組成物，其中與該經擾動之輸入細胞一起培育之佐劑的濃度為介於約0.1μM與約1mM之間。
實施態樣226. 如實施態樣215至225中任一實施態樣之組成物，其中與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原的濃度為介於約0.1μM與約1mM之間。
實施態樣227. 如實施態樣215至226中任一實施態樣之組成物，其中與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原對佐劑之比例為介於約10000：1與約1：10000之間。
實施態樣228. 如實施態樣213至227中任一實施態樣之組成物，其中該佐劑為CpG ODN、IFN-α、STING激動劑、RIG-I激動劑或聚I：C。
實施態樣229. 如實施態樣228之組成物，其中該佐劑為CpG ODN。
實施態樣230. 如實施態樣229之組成物，其中該CpG ODN為CpG ODN 1018、CpG ODN 1826或CpG ODN 2006。
實施態樣231. 如實施態樣213至230中任一實施態樣之組成物，其中該經修飾之免疫細胞包含多於一種之佐劑。
實施態樣232. 如實施態樣213至231中任一實施態樣之組成物，其中該HPV抗原為引發針對相同和/或不同HPV抗原之反應的多種多肽之匯集庫。
實施態樣233. 如實施態樣232之組成物，其中在該多種抗原之匯集庫中的抗原不會減低該針對該多種抗原之匯集庫中的其他抗原之免疫反應。
實施態樣234. 如實施態樣213至233中任一實施態樣之組成物，其中該HPV抗原為包含抗原性HPV抗原決定部位和一或多個異源肽序列之多肽。
實施態樣235. 如實施態樣213至234中任一實施態樣之組成物，其中該HPV抗原與其自身、與其他抗原、或與該佐劑複合。
實施態樣236. 如實施態樣213至235中任一實施態樣之組成物，其中該HPV抗原包含HLA-A2特異性抗原決定部位。
實施態樣237. 如實施態樣213至236中任一實施態樣之組成物，其中該經修飾之免疫細胞包含濃度介於約0.1μM與約1mM之間之該佐劑。
實施態樣238. 如實施態樣213至237中任一實施態樣之組成物，其中該經修飾之免疫細胞包含濃度介於約0.1μM與約1mM之間之該HPV抗原。
實施態樣239. 如實施態樣213至238中任一實施態樣之組成物，其中該HPV抗原對該佐劑之比例係介於約10000：1與約1：10000之間。
實施態樣240. 如實施態樣186至239中任一實施態樣之組成物，其中該HPV抗原能夠被加工成第I類MHC限制性肽。
實施態樣241. 如實施態樣186至240中任一實施態樣之組成物，其中該HPV抗原能夠被加工成第II類MHC限制性肽。
實施態樣242.如實施態樣186至241中任一實施態樣之組成物，其中該經修飾之免疫細胞進一步包含與不包含該劑之對應的經修飾之免疫細胞相比較，增強該經修飾之免疫細胞的存活力和/或功能之劑。
實施態樣243.如實施態樣242之組成物，其中該劑為增強胞吞作用之化合物、穩定劑或輔因子。
實施態樣244.如實施態樣242之組成物，其中該劑為白蛋白。
實施態樣245. 如實施態樣244之組成物，其中該白蛋白為小鼠、牛或人白蛋白。
實施態樣246. 如實施態樣242之組成物，其中該劑為二價金屬陽離子、葡萄糖、ATP、鉀、甘油、海藻糖、D-蔗糖、PEG1500、L-精胺酸、L-麩胺醯胺、或EDTA。
實施態樣247. 如實施態樣242之組成物，其中該劑包含MSA。
實施態樣248. 如實施態樣186至247中任一實施態樣之組成物，其中該等細胞被進一步修飾以增加一或多種共刺激分子之表現。
實施態樣249. 如實施態樣248之組成物，其中該共刺激分子為B7-H2(ICOSL)、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、CD70、LIGHT、HVEM、CD40、4-1BBL、OX40L、TL1A、GITRL、CD30L、TIM4、SLAM、CD48、CD58、CD155、或CD112。
實施態樣250. 如實施態樣248或249之組成物，其中該細胞包含導致該一或多種共刺激分子增加表現之核酸。
實施態樣251. 如實施態樣186至250中任一實施態樣之組成物，其中該免疫細胞為T細胞、樹突細胞、單核細胞、巨噬細胞、髓樣細胞、粒細胞、嗜中性粒細胞、肥大細胞、天然殺手細胞、先天性淋巴細胞、嗜鹼性粒細胞、或造血前體細胞。
實施態樣252. 如實施態樣186至251中任一實施態樣之組成物，其中該免疫細胞不是B細胞。
實施態樣253. 如實施態樣186至252中任一實施態樣之組成物，其中該免疫細胞為T細胞。
實施態樣254. 如實施態樣253之組成物，其中該T細胞包含進一步修飾以調節第I類MHC表現。
實施態樣255. 如實施態樣253之組成物，其中該T細胞包含進一步修飾以調節第II類MHC表現。
實施態樣256. 如實施態樣254或255項之組成物，其中該T細胞包含進一步修飾以減少第I類MHC和/或第II類MHC表現。
實施態樣257. 如實施態樣254或255項之組成物，其中該進一步修飾包含使用siRNA、shRNA、CRISPR/Cas9、ZFN、TALEN、Cre重組酶或大核酸酶減少第I類MHC和/或第II類MHC表現。
實施態樣258. 如實施態樣254或255項之組成物，其中該T細胞包含進一步修飾以增加第I類MHC和/或第II類MHC表現。
實施態樣259. 如實施態樣254或255之組成物，其中該進一步修飾包含使用RNA或質體DNA增加第I類MHC和/或第II類MHC表現。
實施態樣260. 如實施態樣253至257中任一實施態樣之組成物，其中與在同種異體背景下於個體中之固有之先天性免疫反應對投予不包含該進一步修飾之對應的經修飾之T細胞的反應相比較，在同種異體背景下於個體中之固有之先天性免疫反應對投予該經進一步修飾之T細胞的反應減低。
實施態樣261. 如實施態樣253至257中任一實施態樣之組成物，其中與該不包含該進一步修飾之對應的經修飾之T細胞在經投予該T細胞之個體中的循環半衰期相比較，該經進一步修飾之T細胞在經投予該T細胞之個體中的循環半衰期被調節。
實施態樣262. 如實施態樣253至261中任一實施態樣之組成物，其中該T細胞包括下列之一或多者：輔助T細胞、細胞毒性T細胞、記憶T細胞、CIK細胞和天然殺手T細胞。
實施態樣263. 如實施態樣253至261中任一實施態樣之組成物，其中該T細胞包括下列之一或多者：CD3+T細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞、CD45RA+T細胞、CD45RO+T細胞和γδ-T細胞。
實施態樣264. 如實施態樣186至263中任一實施態樣之組成物，其中該經修飾之細胞對該個體而言為同種異體的。
實施態樣265. 如實施態樣186至263中任一實施態樣之組成物，其中該經修飾之細胞對該個體而言為自體的。
實施態樣266. 如實施態樣186至265中任一實施態樣之組成物，其中該個體經預調理以具有經調節之發炎和/或經調節之免疫反應。
實施態樣267. 如實施態樣186至266中任一實施態樣之組成物，其中該組成物進一步包含免疫檢查點抑制劑。
實施態樣268. 如實施態樣267之組成物，其中該免疫檢查點抑制劑係靶向下列之一或多者：PD-1、PD-L1、CTLA-4、LAG3、TIM-3、TIGIT、VISTA、TIM1、B7-H4(VTCN1)或BTLA。
實施態樣269. 如實施態樣186至268中任一實施態樣之組成物，其中對個體投予包含該等經修飾之免疫細胞之組成物導致特異於該HPV抗原之細胞毒性T淋巴細胞(CTL)活化和/或擴增。
實施態樣270. 如實施態樣186至268中任一實施態樣之組成物，其中對個體投予包含該等經修飾之免疫細胞之組成物導致特異於該抗原之輔助T(Th )細胞活化和/或擴增。
實施態樣271. 如實施態樣186至270中任一實施態樣之組成物，其中該組成物之有效量包含介於約1×106 與約1×1012 個之間的經修飾之免疫細胞。
實施態樣272. 一種包含抗原之組成物，其中該抗原包含與SEQ ID NO：23具有至少90%相似性之胺基酸序列。
實施態樣273. 如實施態樣272之組成物，其中該抗原包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列。
實施態樣274. 一種用於治療或預防個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原和佐劑，其中該佐劑係存在於細胞內； 其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備： a)令包含含有該HPV抗原之輸入細胞的細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該抗原和該佐劑通過以形成經擾動之輸入細胞；和 b)將該經擾動之輸入細胞與該佐劑一起培育足夠之時間以令該佐劑進入該經擾動之輸入細胞； 從而產生該等經修飾之免疫細胞。
實施態樣275. 一種用於治療或預防個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原和佐劑，其中該佐劑係存在於細胞內； 其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備： a)令包含含有該佐劑之輸入細胞的細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該HPV抗原通過以形成經擾動之輸入細胞；和 b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原一起培育足夠之時間以令該HPV抗原進入該經擾動之輸入細胞； 從而產生該等經修飾之免疫細胞。
實施態樣276. 如實施態樣274或275之方法，其中該壓縮器之直徑小於該細胞之直徑。
實施態樣277. 如實施態樣274至276中任一實施態樣之方法，其中該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至99%。
實施態樣278. 如實施態樣274至277中任一實施態樣之方法，其中該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至小於約60%。
實施態樣279. 如實施態樣274至278中任一實施態樣之方法，其中該壓縮器係在通道中。
實施態樣280. 如實施態樣274至279中任一實施態樣之方法，其中該變形力係當該輸入細胞通過該壓縮器時施加至該輸入細胞。
實施態樣281. 如實施態樣274至280中任一實施態樣之方法，其中該HPV抗原和/或該佐劑係存在於胞質液和/或胞內體中。
實施態樣282. 如實施態樣274至281中任一實施態樣之方法，其中該抗原和/或佐劑係存在於該細胞之多個隔室中。
實施態樣283. 如實施態樣274之方法，其中與該經擾動之輸入細胞一起培育之佐劑的濃度為介於約0.1μM與約1mM之間。
實施態樣284. 如實施態樣275之方法，其中與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原的濃度為介於約0.1μM與約1mM之間。
實施態樣285. 如實施態樣274至285中任一實施態樣之方法，其中該佐劑為CpG ODN、IFN-α、STING激動劑、RIG-I激動劑或聚I：C。
實施態樣286. 如實施態樣285之方法，其中該佐劑為CpG ODN。
實施態樣287. 如實施態樣286之方法，其中該CpG ODN為CpG ODN 1018、CpG ODN 1826或CpG ODN 2006。
實施態樣288. 如實施態樣274至287中任一實施態樣之方法，其中該HPV抗原係源自細胞溶胞產物。
實施態樣289. 如實施態樣274至288中任一實施態樣之方法，其中該HPV抗原為HPV-16或HPV-18抗原。
實施態樣290. 如實施態樣274至289中任一實施態樣之方法，其中該HPV抗原為HPV E6抗原或HPV E7抗原。
實施態樣291. 如實施態樣290之方法，其中該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至25中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列。
實施態樣292. 如實施態樣289之方法，其中該HPV抗原包含SEQ ID NO：18至25中任一者之胺基酸序列。
實施態樣293. 如實施態樣290之方法，其中該HPV抗原包含與SEQ ID NO：23具有至少90%相似性之胺基酸序列。
實施態樣294. 如實施態樣290之方法，其中該HPV抗原包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列。
實施態樣295. 一種用於治療或預防個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予與HPV抗原聯結之經修飾的免疫細胞，其中該經修飾之免疫細胞係藉由包含以下步驟之方法製備： a)將輸入細胞與該HPV抗原和/或該佐劑一起培育足夠之時間以令該HPV抗原與該輸入細胞聯結； 從而產生該與該抗原聯結之經修飾之免疫細胞。
實施態樣296. 如實施態樣295之方法，其中該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至25中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列。
實施態樣297. 如實施態樣296之方法，其中該HPV抗原包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列。
實施態樣298. 如實施態樣295至297中任一實施態樣之方法，其中該佐劑為CpG ODN。
實施態樣299. 如實施態樣298之方法，其中該CpG ODN為CpG ODN 1018、CpG ODN 1826或CpG ODN 2006。
實施態樣300. 一種包含如實施態樣186至273中任一實施態樣之經修飾之免疫細胞之組成物，其係作為藥物。
實施態樣301. 一種包含如實施態樣186至273中任一實施態樣之經修飾之免疫細胞之組成物，其係用於藉由手術、療法或診斷治療人體或動物體之方法。
實施態樣302. 一種包含如實施態樣186至273中任一實施態樣之經修飾之免疫細胞之組成物，其係用於癌症、傳染病或病毒相關疾病之治療中。
實施態樣303. 一種包含如實施態樣186至273中任一實施態樣之經修飾之免疫細胞之組成物，其中該癌症為頭頸癌、子宮頸癌、外陰癌、陰道癌、陰莖癌、肛門癌、肛周癌、肛門生殖器癌、口腔癌或唾液腺癌。
實施態樣304. 一種包含如實施態樣300至303中任一實施態樣之經修飾之免疫細胞之組成物，其中該經修飾之PBMC係在投予免疫檢查點抑制劑之前、同時或之後投予。
實施態樣305. 如實施態樣304之組成物，其中該免疫檢查點抑制劑係靶向PD-1、PD-L1、CTLA-4、LAG3、VISTA和TIM-3中之任一者。
實施態樣306. 如實施態樣305之組成物，其中該免疫檢查點抑制劑係靶向PD-1。
實施態樣307. 如實施態樣305之組成物，其中該免疫檢查點抑制劑係靶向PD-1。
實施態樣308. 如實施態樣300至307中任一實施態樣之組成物，其中該經修飾之PBMC係在投予治療劑之前、同時或之後投予。
實施態樣309. 如實施態樣308之組成物，其中該治療劑為化學治療劑。
實施態樣310. 如實施態樣309之組成物，其中該傳染病與HIV、HPV、EBV、MCV、HBV或HCV有關。 實施例
本技術領域之技術熟習人士將認知數種可能在本發明之範圍和精神內的實施態樣。現在本發明將參考下列非限制性實施例更詳細地說明。下列實施例進一步說明本發明，但當然不應解釋為以任何方式限制本發明之範圍。 實施例1
為了測定在治療設定中導致腫瘤生長受抑制所需之最低TAPC 有效細胞劑量，在TC1腫瘤模型中測試四種不同之引發/加強TAPC 劑量，相對於時間繪製腫瘤面積之圖形。
第0天，在C57BL/6J雌性小鼠的右後側腹注射TC1腫瘤細胞(50K細胞/小鼠)。第4天(引發)和第7天(加強)，從C57BL/6J雌性供體小鼠分離出T細胞並使用SQZ加載200μg/mL CpG ODN 1826和預複合之40μM E7 SLP (GQAEPDRAHYNIVTF SSKSDSTLRLSVQSTHVDIR)+40μM小鼠血清白蛋白(MSA)。經由靜脈內途徑為動物(10隻小鼠/組)注射相關劑量之經加載E7+MSA+CpG的T細胞(50M細胞/mL)且在植入腫瘤後1週開始每週二次測量TC-1腫瘤生長，並與未經治療之小鼠中的腫瘤生長情況相比較。治療組和計劃表之代表性示意圖概述於第1A圖中。
第1B圖顯示藉由式((長度×寬度2 )/2)測量之腫瘤生長，並比較來自第1A圖中所概述之未經治療組(無T細胞過繼性轉移)和治療組B-E組之小鼠的腫瘤生長。所有治療條件均導致腫瘤十足縮小，此表明所測試之最低細胞劑量(引發劑量2.5M細胞，加強劑量1M細胞)仍然能夠獲得與更高之細胞劑量所獲得者相同之腫瘤縮小程度，第18天時相對於未經治療組，每一組均達到統計學顯著性。(#P ＜0.0001 )。 實施例2
為了測定該E7 SLP設計，將二種不同的E7 SLP(天然E7 SLP和其中該天然序列之所有半胱胺酸已被絲胺酸取代之E7 SLP)藉由SQZ加載入T APC中，隨著CpG共同投予並藉由ICS評估每種條件所產生之IFN-γ。
從C57BL/6J雌性供體小鼠分離出T細胞並使用SQZ加載不同劑量(左-200μg/mL，右-25μg/mL)之CpG ODN 1826和預複合之40μM E7天然或經典SLP+40μM小鼠血清白蛋白(MSA)，或者將T細胞在無SQZ之情況下以相同條件培育以作為陰性對照組(Endo-B和D組)。經由靜脈內途徑為動物(5隻小鼠/組)注射在100μL體積中之5M經加載或培育之T細胞(50M細胞/mL)。第8天，收穫脾臟並藉由ICS定量產生IFN-γ之CD8+T細胞的%。治療組和計劃表之代表性示意圖概述於第2A圖中。
使用cE7之Endo對照組中之產生IFN-γ的CD8+T細胞之%最高，其與使用SQZ之cE7或具有nE7之Endo的差異並不顯著。出乎意料地，SQZ相對於Endo並無優勢，但相對於所有其他條件，在SQZ nE7條件中之產生IFN-γ之CD8+T細胞的%顯著降低。該數據顯示SLP序列對回應T APC疫苗接種而產生之產製IFN-γ的CD8+T細胞之%有影響，特別是當使用SQZ將該抗原加載入T細胞中時。 實施例3
為了在玻管內人體模型中測定E6 SLP誘導E6反應T細胞之抗原特異性免疫反應之能力，在原代人T細胞中加載E6 SLP並藉由ELISA測量反應細胞分泌之IFN-γ。
從HLA-A02+供體之PBMC分離出人T細胞(10M細胞/mL)並藉由SQZ經由細胞內投遞50μM含有HLA-A02限制性最小E629-38 抗原決定部位 (LPQLSTELQTTIHDIILECV YSKQQLLRREVYDFAF)之E6 SLP，藉由ELISA進行測量以比較在SQZ條件下所產生之IFN-γ之量和對照組(其中該E6 SLP係在無SQZ之條件下與TAPC 一起培育(Endo))中產生之IFN-γ量。然後將TAPC 與E6-特異性CD8+反應細胞以1：1 刺激劑：效應子之比例共同培養，並在IL-2(100 U/mL)之存在下進行培養。18小時後，收穫來自每種條件之上清液並藉由IFN-γELISA (Biolegend公司)評估所產生之IFN-γ的量。
如第3圖中所示，當使用SQZ經由細胞內投遞時，該測試之E6 SLP當與E6反應CD8+T細胞共同培養時可導致IFN-γ之產量增加＞10倍(＃P ＜0.0001)。這些發現顯示T APC引發對該多種HPV抗原(E6和E7)之抗原特異性免疫反應的能力。 實施例4
為了在玻管內人體模型中測定E7 SLP誘導E711-20 反應T細胞之抗原特異性免疫反應之能力及SLP序列對SQZ T細胞APC(Tapc )活化的影響，在來自多個供體之原代人T細胞上加載不同的E7 SLP，並藉由ELISA測量反應細胞分泌之IFN-γ。
從HLA-A02+供體之PBMC分離出人T細胞(10M細胞/mL)並藉由SQZ在細胞內投遞50μM之OL-E71-35 (MHGDTPTLHEYMLDLQPETT DLYCYEQLNDSSEEE)或E7.6 (QLCTELQTYMLDLQPETT YCKQQLL)SLP，藉由ELISA測量來比較在SQZ條件下產生之IFN-γ的量和對照組(其中該E7 SLP係在無SQZ加載之條件下與Tapc 一起培育(Endo))中產生之IFN-γ量。然後將Tapc 與E711-20 -特異性CD8 +反應細胞以4：1 刺激劑：效應子之比例共同培養，並在IL-2(100U/mL)之存在下培養。24小時後，收穫來自每種條件之上清液並藉由IFN-γELISA (Biolegend公司)評估所產生之IFN-γ的量。
與Endo相比較，當使用SQZ投遞時，天然OL-E71-35 SLP引發最小IFN-γ反應(第4圖)。然而，當與Endo對照組相比較時，該E7.6 (其包含插在另一個反應性SLP(E621-45 -QLCTELQTXXXXXXXXXYCKQQLL)之側翼區之間之E7最小抗原決定部位(YMLDLQPETT))在所測試之全部三個供體中誘導相對於該匹配之Endo對照組所誘導之IFN-γ反應更強的IFN-γ反應(*P ＜0.05，**P ＜0.01；#P ＜0.0001)。該發現強調該側翼區序列在SLP免疫原性中之重要性並支持其他SLP之側翼區(已知其具有反應性)可與正交最小抗原決定部位結合使用以增強免疫反應。 實施例5
為了在玻管內人體模型中評估用於SQZ T細胞APC之抗原劑量，在原代人T細胞上加載不同劑量之E7 SLP並藉由ELISA評估IFN-γ。
從HLA-A02+供體之PBMC分離出人T細胞(10M細胞/mL)並藉由SQZ細胞內投遞不同劑量(50和100μM)之E7 SLP (QLCTELQTYMLDLQPETT YCKQQLL) ，藉由ELISA測量來比較在SQZ條件下產生之IFN-γ量和對照組(其中該E7 SLP係在無SQZ加載之條件下與TAPC 一起培育(Endo))中產生之IFN-γ量。然後將T APC與E711-20 -特異性CD8+反應細胞以4：1 刺激劑：效應子之比例共同培養，並在IL-2(100U/mL)之存在下培養。24小時後，收穫來自每種條件之上清液並藉由IFN-γELISA (Biolegend公司)評估所產生之IFN-γ的量。另外，採用肽脈衝陽性對照組，其中在進行ELISA之前，將B-LCL細胞在最小E7抗原決定部位(YMLDLQPETT)之存在下培育1小時。
相對於可比較的對照組(Endo) (其中SLP係在無SQZ加載之情況下與T細胞一起培育)，所測試之全部三個供體在所有SQZ條件下IFN-γ均持續增加(第5圖)。供體1和3顯示出使用50μM E7 SLP時為統計學上顯著增加(8668 - *P ＜0.05；8299 - ＃P ＜0.0001)，且在較高之100μM E7 SLP下趨向顯著。雖然任何供體在50和100μM之間均無統計學上顯著差異，但使用50μM E7 SLP時持續具有相等或更高之IFN-γ反應。 實施例6
為了在玻管內人體模型中測定用於SQZ T細胞APC之供體可變性，連同鑑定誘導針對E7之顯著免疫反應的最佳E6和E7 SLP組合和劑量，在來自多個HLA-A02+供體的原代人T細胞上加載E6和E7 SLP並藉由ELISA評估IFN-γ。
從HLA-A02+供體之PBMC分離出人T細胞(10M細胞/mL)並藉由SQZ細胞內投遞25或50μM之E6 SLP(QLCTELQTTIHDIILECV YCKQQLL)和E7.6 SLP(QLCTELQTYMLDLQPETT YCKQQLL)，藉由ELISA測量來比較在SQZ條件下產生之IFN-γ的量和對照組(其中該SLP係在無SQZ加載(Endo)之條件下與TAPC 一起培育)中分泌之IFN-γ的量。採用肽脈衝之陽性對照組，其中B-LCL細胞係在TAPC 產生之同時在最小E7抗原決定部位(YMLDLQPETT)之存在下培育。然後，將TAPC 和陽性對照組與E711-20 -特異性CD8+反應細胞以4：1 刺激劑：效應子之比例共同培養，並在IL-2(100U/mL)之存在下培養。24小時後，收穫來自每種條件之上清液並藉由IFN-γELISA (Biolegend公司)評估所產生之IFN-γ的量。
如第6圖所示，當使用SQZ E6+E7 SLP治療時，相對於可比較之對照組(Endo)(其中該SLP係在無SQZ之情況下與T細胞一起培育)，七個供體中有五個顯示出IFN-γ持續增加(供體1-3、5-6：*P ＜0.05，**P ＜0.01，***P ＜0.005)。該二個當使用經SQZ加載之T APC治療時相對於Endo對照組而言不具有統計學上顯著增加之IFN-γ的供體在使用一個劑量之經SQZ加載之測試的T APC時，該二個供體(供體4和7)均具有可檢測之增加(供體4-50μM，供體7-25μM)且趨向顯著的情況。總之，這些數據顯示雖然不同供體T APC具有差別免疫刺激活性，但我們可見到多個供體之間IFN-γ之產製持續增加且當與多種抗原/SLP組合時(本案例為HPV特異性E6抗原)，E7特異性免疫反應仍然顯著。 實施例7
為了協助測定導致最強免疫反應之佐劑，我們測試二種作用在不同途徑之佐劑對T APC誘導體內抗原特異性反應之能力的效果。藉由四聚體和ICS染色，使用流式細胞術來定量該效果。
從C57BL/6J雌性供體小鼠分離出T細胞，使用SQZ加載400μg/mL Ova+各種濃度之高分子量和低分子量聚I：C (10、30、100、300、1000μg)/mL)並與作為陰性對照組(Endo-C＆E組)之在無SQZ加載的相同條件下培育之T細胞相比較。使用經SQZ加載Ova +200μg/mL CpG之T細胞作為陽性對照組(F組)。第0天，為小鼠(5隻小鼠/組，3隻未治療)注射在100μL體積中之5M經加載或培育之T細胞(50M細胞/mL)。第7天，收穫脾臟並藉由四聚體染色，使用流式細胞術定量Ova特異性T細胞，同時令一些脾細胞可滲透化並固定一整夜。第二天(第8天)，藉由ICS測定IFN-γ之量，使用PMA/離子黴素作為陽性對照組。治療組和計劃表之代表性示意圖概述於第7A圖中。
在具有CpG佐劑之組中，四聚體或產生IFN-γ之CD8+T細胞的%最高，而相較於未治療組，所有具有LMW或HMW聚I：C佐劑之條件並未增加Ova-特異性或產生IFN-γ之CD8+T細胞的百分比(第7B圖)。由於聚I：C為TLR3激動劑且CpG為TLR9激動劑，該數據支持CpG優於聚I：C作為T APC疫苗接種之佐劑，同時表明TLR3活化在此設置中可能沒有利益。 實施例8
為了協助測定導致最強免疫反應之CpG佐劑的濃度，我們測試多個劑量之CpG對T APC誘導體內抗原特異性反應之能力的效果。藉由四聚體和ICS染色，使用流式細胞術來定量該效果。
從C57BL/6J雌性供體小鼠分離出T細胞，使用SQZ加載400μg/mL Ova+各種濃度之CpG 1826(50、100、200μg/mL)並與作為陰性對照組之在無SQZ加載之相同條件下培育的T細胞(Endo-B、D＆F組)相比較。第0天，為小鼠(5隻小鼠/組，3隻未治療)注射在100μL體積中之5M經加載或培育之T細胞(50μM細胞/mL)。第7天，收穫脾臟並藉由四聚體染色，使用流式細胞術定量Ova特異性T細胞，同時令一些脾細胞可滲透化並固定一整夜。第二天(第8天)，藉由ICS測定IFN-γ之量，使用PMA/離子黴素作為陽性對照組。治療組和計劃表之代表性示意圖概述於第8A圖中。
在具有200μg/mL CpG之組中，四聚體或產生IFN-γ之CD8+T細胞的%最高，且與相關之用於第I類肽/MHC-I的Endo對照組顯著不同(在四聚體方面，*P ＜0.05，在IFN-γ方面，＃ P ＜ 0.0001)，而所有其他條件均未引發超越未經治療或其對應之Endo對照組的顯著反應(第8B圖)。Ova特異性T細胞之活化僅在使用第I類肽時觀察到，此支持Ova抗原係直接呈遞來使CD8+T細胞反應生效。 實施例9
為了協助評估投予導致最強免疫反應之CpG佐劑的計劃表，我們測試CpG多次給藥計劃表對T APC誘導體內抗原特異性反應之能力的效果。藉由四聚體和ICS染色，使用流式細胞術來定量該效果。
從C57BL/6J雌性供體小鼠分離出T細胞，使用SQZ加載400μg/mL Ova並為小鼠(5隻小鼠/組，3隻未治療)注射在100μL體積中之5M經加載或培育之T細胞(50M細胞/mL)。在T APC引發(第0天)之同時或在引發後1或2天(分別為第1天或第2天)經由全身途徑共同投予供體小鼠CpG 1826(25μg/mL)並與作為陰性對照組(B、D和F組)之在無SQZ加載的相同條件下培育之T細胞相比較。使用經SQZ加載(Ova +200μg/mL CpG)之T細胞作為陽性對照組(H組)。第7天，收穫脾臟並藉由四聚體染色，使用流式細胞術定量Ova特異性T細胞，同時令一些脾細胞可滲透化並固定一整夜。第二天(第8天)，藉由ICS測定IFN-γ之量，使用PMA/離子黴素作為陽性對照組。治療組和計劃表之代表性示意圖概述於第9A圖中。
Ova和CpG被共同投遞至T APC的組別中之四聚體或產生IFN-γ之CD8+T細胞的%最高，而在引發之同一天共同投予的組別(B組)為唯一顯示出某種程度之Ova特異性活化(趨向顯著)之經共同投予CpG的組別(第9B圖)。然而，該數據支持對於共同投遞抗原+CpG可導致Ova特異性CD8+T細胞最大活化的觀察，而相較於同時引發和共同投予佐劑，延遲之全身性投予CpG可導致較弱之反應。 實施例10
為了決定細胞內和全身性投予用於TAPC抗腫瘤功能之佐劑的組合，在預防性TC-1小鼠腫瘤模型中，聯同我們的E7特異性T APC將經由多種途徑投予之CpG相對於IFN-α進行比較。藉由四聚體染色和流式細胞術測量抗原特異性T細胞反應，而抗腫瘤效果係藉由防止腫瘤生長來測量。
第-14天(引發)和-7天(加強)，從C57BL/6J雌性供體小鼠分離出T細胞，使用SQZ加載預複合之40μM E7 SLP(GQAEPDRAHYNIVTF SSKSDSTLRLSVQSTHVDIR)+ 40μM小鼠血清白蛋白(MSA)(B和C組)或E7 SLP+MSA+ 200μg/mL CpG ODN 1826(D、E和F組)。經由靜脈內途徑為C57BL/6J雌性接受者小鼠(10隻小鼠/組)注射100μL之經加載的T細胞(5M細胞/mL)，而B和E組動物亦接受靜脈內注射CpG(25μg)，C和F組接受IV IFN-α(10k IU)。第-8天和第-3天，收集100μL小鼠血液並藉由四聚體染色和流式細胞術定量E7特異性CD8+T細胞的%。第0天，在接受者小鼠之右後腹側注射TC1腫瘤細胞(100k細胞/小鼠)，從第11天開始每週二次測量TC-1腫瘤生長並與未經治療之小鼠中的腫瘤生長相比較。治療組和計劃表之代表性示意圖概述於第10A圖中。
在使用經SQZ加載E7+MSA或E7+MSA+CpG之T細胞+/-共同投予CpG或IFN-α引發(第-8天)和加強(第-3天)後，藉由E7四聚體染色測量小鼠中之E7特異性T細胞的百分比(第10B圖)。在SQZ E7+CpG共同投予組和SQZ(E7+CpG)+IFN-α共同投予組中觀察到E7特異性T細胞之相對比例最高。SQZ(E7+CpG)+共同投予CpG之組別相對於SQZ E7 +共同投予CpG之組別，引發後E7特異性CD8+T細胞之相對數量大幅減少(* P ＜0.05)，然而相較於共同投予CpG和SQZ(E7+CpG)T細胞，共同投予IFN-α與SQZ(E7+CpG)T細胞可導致E7特異性T細胞數量明顯較多(* P ＜0.05)。在加強(第-3天)後，可觀察到類似之趨勢，其中共同投予SQZ E7+CpG和共同投予SQZ(E7+CpG)+IFN-α組導致E7特異性T細胞之%最高。然而，最高反應係來自共同投予SQZ(E7+CpG)+IFN-α組，其顯著高於SQZ E7+IFN-α共同投予組和SQZ(E7+CpG)+共同投予之CpG組，表明當與SQZ(E7+CpG)T細胞組合使用時，共同投予IFN-α可導致較高百分比之抗原特異性T細胞。藉由式((長度×寬度2 )/2)測量第10C圖中概述之未經治療組(無T細胞過繼性轉移)和B至F治療組之腫瘤生長並將彼等相比較。SQZ(E7+CpG) +IFN-α共同投予組高度減少腫瘤生長及具存活優勢之結果與四聚體染色對應良好，表明誘導最多E7特異性T細胞可導致最佳之抗腫瘤活性。有趣的是，儘管SQZ(E7+CpG)組中E7特異性T細胞之百分比低，該治療亦產生非常高水準之抗腫瘤活性，而此組為唯一之使所有小鼠存活延長超過60天的另一組(除SQZ(E7+CpG)+IFN-α共同投予組之外)。雖然略低於先前提及之D組和F組，C組和E組具有可辨別之存活延長和腫瘤生長抑制。第78天，在相對側腹(左側)以50k細胞再次挑戰來自D組之7隻無腫瘤小鼠並與年齡匹配之未經治療的動物(10隻小鼠)相比較(第10D圖)。與已接受其第一次挑戰之未經治療的小鼠相比較，來自D組之小鼠在再次挑戰後腫瘤生長顯著減少(***P ＜0.005)，此點支持該抗腫瘤效果可持續2個月。 實施例11
為了測定組合多種HPV抗原以用於T APC抗腫瘤功能的效果，在預防性TC-1鼠腫瘤模型中使用單獨之E6和E7合成長肽(SLP)及與我們的E7特異性T APC之組合。藉由四聚體染色和流式細胞術測量E7特異性T細胞反應，而抗腫瘤效果係藉由防止腫瘤生長來測量。
第-14天(引發)和-8天(加強)，從C57BL/6J雌性供體小鼠分離出T細胞並使用SQZ加載預複合之20μM小鼠血清白蛋白(MSA)+20μM E6 (VYSKQQLLRREVYDFAFRDLSIVYRDGNPYAVSDK)和/或E7 SLP(GQAEPDRAHYNIVTFSSKSDSTLRLSVQSTHVDIR)或根據表XX之+/-200μg/mL CpG ODN 1826的二種組合。使用在與B組相同之條件下培育，但無SQZ加載之T細胞作陰性對照組(C組)。經由靜脈內途徑為C57BL/6J雌性接受者小鼠(5至10隻小鼠/組)注射100μL之經加載之T細胞(5M細胞/mL)。第-3天，收集100μL小鼠血液並藉由四聚體染色和流式細胞術定量E7特異性CD8+T細胞的%。第0天，在接受者小鼠之右後腹側注射TC1腫瘤細胞(100k細胞/小鼠)，從第11天開始每週二次測量TC-1腫瘤生長並與未經治療之小鼠中的腫瘤生長相比較。治療組和計劃表之代表性示意圖概述於第11A圖中。
如第11B圖所示，在加強(第-3天)後藉由E7四聚體染色測量小鼠中之E7特異性T細胞的百分比，該CpG+E7 SQZ T APC(B組)中可觀察到最大效果。有趣的是，B組反應顯著高於未經治療組和E7和E6組合組(F組 -#P ＜0.0001)，表明添加E6 SLP會減弱E7特異性反應。B組與其他治療組顯著不同，但Endo對照組(C組)明顯例外，其中B組明顯較高且趨向於統計上顯著。如第11C圖所示，藉由式((長度×寬度2 )/2)測量腫瘤生長，並將來自第11A圖中概述之未經治療組(無T細胞過繼性轉移)和B至G治療組之小鼠進行比較。在具有藉由SQZ加載E7+CpG之T細胞組及具有在E7+CpG之存在下培育，但無SQZ加載的T細胞之組別中腫瘤生長被高度阻礙。相對於未經治療組(A組)和經SQZ加載E6+CpG之T細胞(G組)，D至F組顯示出腫瘤生長受到某種程度之抑制，但均不如B組和C組有效。 實施例12
為了測定CpG佐劑之投予途徑對E7特異性T APC抗腫瘤效果的重要性，將E7 SLP與CpG組合投遞入T細胞，或是投遞入該T細胞或是經由全身途徑共同投予該接受者動物並藉由腫瘤生長受抑制的情況來測量抗腫瘤效果。
第0天，在接受者小鼠之右後腹側注射TC1腫瘤細胞(50k細胞/小鼠)。第10天(引發)和第20天(加強)，從C57BL/6J雌性供體小鼠分離出T細胞並使用SQZ加載預複合之20μM小鼠血清白蛋白(MSA)+20μM E7 (GQAEPDRAHYNIVTF SSKSDSTLRLSVQSTHVDIR)，或是藉由SQZ共同投遞200μg/mL ODN 1826(D組)或是將ODN 1826經由全身途徑共同投予該動物25μg/小鼠(C組)，並與未經治療組(A組)和經由全身途徑單獨投予CpG(B組)進行比較。使用100μL經加載之T細胞(5M細胞/動物)治療接受者小鼠(8至10隻小鼠/組)。從第10天開始，每週二次測量TC-1腫瘤生長。治療組和計劃表之代表性示意圖概述於第12A圖中。
在HPV相關癌症(TC-1)之治療模型中，相對於未經治療組和注射單獨的CpG，經SQZ加載E7 SLP之T APC導致腫瘤負荷顯著減少(第17天：C組 -P ＜0.05；第20天：C和D組-P ＜0.0001)(第12B圖)。這些數據表明在治療設置中，全身性共同投予和細胞內投遞CpG佐劑均導致腫瘤負荷相對於未經治療組或單獨之佐劑組顯著減少。 實施例13
為了評估共同投予之佐劑導致E7特異性T細胞腫瘤浸潤的能力，在治療性TC-1鼠腫瘤模型中將與我們的E7特異性T APC組合之CpG相對於IFN-α比較。藉由四聚體染色和流式細胞術測量腫瘤浸潤淋巴細胞中之抗原特異性T細胞反應。
第0天，在接受者小鼠之右後腹側注射TC1腫瘤細胞(50k細胞/小鼠)。第10天，從C57BL/6J雌性供體小鼠分離出T細胞並使用SQZ加載預複合之20μM E7 SLP (GQAEPDRAHYNIVTF SSKSDSTLRLSVQSTHVDIR)+20μM小鼠血清白蛋白(MSA)。單獨投予經SQZ加載之T細胞(5M細胞/動物)(C組)並經由靜脈內途徑注射總體積為100μL之CpG ODN 1826(25μg/小鼠-D組)或IFN-α(10k IU/小鼠-E組)。亦經由全身途徑為小鼠注射單獨之CpG(25μg-A組)或IFN-α(10k IU-B組)。第17天，收穫腫瘤並分離出CD8+腫瘤浸潤T細胞，藉由四聚體染色評估E7特異性反應性。治療組和計劃表之代表性示意圖概述於第13圖中。
在引發後7天(第17天)藉由E7四聚體染色測量小鼠中之E7特異性CD8+T細胞之百分比，CD8+細胞中E7特異性T細胞之百分比的代表性實例顯示於第13圖下方。雖然單獨注射佐劑未產生可察覺量之E7特異性T細胞，藉由SQZ投遞E7 SLP可使E7特異性T細胞增加40%，而與CpG和IFN-α組合之經投遞E7的T細胞可導致甚至更高之抗原特異性T細胞百分比(分別為70%和80%)。該數據表明當將經加載E7 SLP之T細胞與佐劑，諸如CpG或IFN-α經由全身途徑組合投予時可產生更強之E7特異性T細胞反應。 實施例14
為了測定加載E7合成長肽(SLP)+CpG C之T APC的引發和加強免疫接種計劃表，我們使用在不同時間點以我們的T APC疫苗治療之治療性TC-1鼠腫瘤模型並使用差別數量之加強劑。藉由腫瘤生長抑制來測量抗腫瘤效果。
在第0天，在接受者小鼠之右後腹側注射TC1腫瘤細胞(50k細胞/小鼠)，從第11天開始每週二次測量TC-1腫瘤生長並與未經治療之小鼠中的腫瘤生長相比較。在第3或6天，從C57BL/6J雌性供體小鼠分離出T細胞並根據表XX使用SQZ加載預複合之20μM小鼠血清白蛋白(MSA)+20μM E7 SLP (GQAEPDRAHYNIVTF SSKSDSTLRLSVQSTHVDIR)+200 μg/mL CpG ODN 1826，再經由靜脈內途徑為接受者小鼠注射100μL之經加載的T細胞(5M細胞/動物)。治療組和計劃表之代表性示意圖概述於第14A圖中。
第20天，在具有經SQZ加載E7+CpG之T細胞的所有組中之腫瘤生長抑制情況相較於未經治療組均為統計學上顯著的(第20天-所有組P ＜0.05；第24天-所有組P ＜0.0001)。該數據顯示，使用T APC疫苗之給藥方案在第6天引發與在第3天引發的效果相同，且在第21天添加第二個加強劑並無明顯的益處。 實施例15
為了更充分理解具有藉由SQZ經細胞內投遞抗原之T細胞呈遞抗原的機制，在無SQZ加載之情況下將Ova投遞至野生型T細胞將Ova或與野生型T細胞一起培育並將該T細胞注射入野生型小鼠中或剔除MHC-I之小鼠中。收穫脾臟並藉由CFSE染色定量Ova特異性T細胞(OT-I)增殖的量。
第0天，從OT-I雌性供體小鼠分離出T細胞並使用2μM CFSE標記，將2.5μM細胞在100μLPBS中經由眼眶後(RO)注射入野生型或剔除MHC-I之小鼠中。同樣在第0天，將400μg/mL Ova加載入從CD45.1供體小鼠(4隻小鼠/組)分離出之T細胞或與該T細胞一起培育，並將5M T細胞經由眼眶後注射入小鼠中。第3天，收穫脾臟並藉由CFSE染色評估Ova特異性T細胞增殖之量。
藉由CFSE標記Ova-反應性OT-I CD8+T細胞來評估Ova特異性T細胞增殖之量。為了測定經加載抗原之TAPC 的呈遞機制，使用缺乏MHC-I之小鼠作為接受者小鼠。由於垂死之經SQZ加載的T細胞間接攝取抗原及交叉呈遞在MHC-I上以過繼性轉移OT-I細胞，這將排除由內源性鼠APC呈遞之Ova抗原。結果發現當接受者小鼠缺乏MHC-I時，Ova特異性OT-I細胞仍會增殖，表明經SQZ之T APC直接呈遞抗原(第15圖)。這些數據支持由SQZ介導之細胞內投遞的抗原係直接呈遞。 實施例16
為了評估SQZ改變細胞因子產製之傾向，使用SQZ投遞CpG入T細胞玻管內小鼠模型中評估其改變T細胞之細胞因子量的能力。使用多重細胞因子套組來剖析上清液中之細胞因子量。
使用從C57BL/6J雌性小鼠供體分離之T細胞來引發C57BL/6J雌性接受者小鼠並使用SQZ加載200μg/mL CpG，24小時後收集上清液(N = 2)。藉由Millipore Milliplex多重細胞因子套組評估上清液中之細胞因子量並相對於未經治療組之T細胞以倍數變化差異表示。
相對於未經處理之細胞，經由SQZ加載之CpG的T細胞之上清液中的細胞因子量之間未無顯著變化(第16圖)。該數據表明SQZ投遞佐劑不會顯著改變玻管內之T細胞細胞因子量。 實施例17
為了評估SQZ改變細胞因子產製之傾向，在體內小鼠模型中評估經SQZ投遞Ova或Ova+CpG之T細胞改變血清細胞因子量的能力。使用多重細胞因子套組剖析血清細胞因子。
使用從C57BL/6J雌性供體小鼠分離出之T細胞來引發C57BL/6J雌性接受者小鼠並使用SQZ加載400μg/mL Ova或Ova+200μg/mL CpG，6小時後從尾靜脈抽血且在引發後24小時經由心臟穿刺收集血液。藉由Millipore Milliplex多重細胞因子套組評估血清之細胞因子量並相對於未經治療之T細胞以倍數變化表示。
使用經由SQZ加載Ova或Ova+CpG之T細胞來引發之小鼠血清中的細胞因子量並無顯著變化(第17圖)。另外，引發後6小時和24小時之間並未觀察到顯著差異。該數據表明SQZ投遞抗原+/-佐劑不會顯著改變體內之血清細胞因子量。 實施例18
為了測定源自原代人單核細胞之樹突狀細胞(MoDC)引發E7反應T細胞中之HPV E7特異性免疫反應的能力，在玻管內人體模型中使用腫瘤細胞溶胞產物(TCL)作為抗原來源，為原代人MoDC加載來自CaSki腫瘤細胞之溶胞產物並藉由流式細胞術測量4-1BB表現百分比。
從HLA-A02 +供體之PBMC分離出人單核細胞並藉由在4至6天內添加rhIL-4(1000 U/mL)和rhGM-CSF(800 U/mL)來產生不成熟的MoDC，3天後補充含有細胞因子之培養基。使用CaSki子宮頸癌細胞株作為抗原來源並藉由SQZ將來自CaSki細胞(23mg/mL)之TCL經細胞內投遞至MoDC(1×106 細胞/mL)，或在無SQZ加載的情況下將CaSki TCL與MoDC一起培育(Endo)。另外，採用肽脈衝之對照組，其中MoDC係在已知之反應性E7抗原決定部位(YMLDLQPETT-0.1μM-陽性對照組)的存在下培育。將所有條件下與LPS(60EU/mL)和rhIFN-γ(20000 IU/mL)培養1小時以活化MoDC，接著在含有60 EU/mL LPS之培養基(無IFN-γ)中培育16至24小時。然後將MoDC與E7反應性T細胞(Astarte)以3：1刺激劑：反應劑之比例共同培養16至24小時。共培養後，藉由流式細胞術測量E7-反應性CD8+T細胞上之4-1BB表現%。
當使用SQZ經由細胞內投遞CaSki溶胞產物(源自已知高度表現該HPV抗原E7之HPV陽性子宮頸癌細胞株)時，與未經治療組和對應之Endo對照組相比較，其導致表現4-1BB(抗原特異性活化之標記)之E7-反應性CD8+T細胞的百分比增加20%(#P ＜0.0001)。這些發現表明藉由SQZ之細胞內TCL在原代人MoDC中誘導針對HPV抗原E7之抗原特異性免疫反應的能力，此支持使用TCL作為另外適應症之複合抗原來源，其中該致癌抗原可能為未知的。 實施例19
為了測定對已藉由SQZ加載抗原之抗原呈遞細胞(APC)的內源性反應，藉由SQZ為B細胞進行加載並藉由細胞內細胞因子染色(ICS)測量炎性細胞因子的量。
從C56BL/6J小鼠分離出小鼠B細胞(BAPC )並藉由SQZ加載400μg/mL Ova蛋白或加載20μM HPV 16 E7肽，然後連同1μM CpG1826注射入供體小鼠(5隻小鼠/組)。第7天，從未經治療之小鼠及以SQZ加載之BAPC 治療的小鼠收穫脾細胞，再次以Ins B9-23肽進行挑戰且隨後進行用於IFN-γ之細胞內細胞因子染色(ICS)並藉由流式細胞術測量(第19A圖)。
在抗原Ova(第19B圖)和疾病相關之HPV E7(第19C圖)的二種模型方面，該結果表明當分別使用Ova或HPV E7再刺激時，相較於從未經治療之小鼠收穫的脾細胞，來自以SQZ加載之BAPC 治療的小鼠之脾細胞顯示出IFN-γ之產量為統計學上顯著增加(二者均為P ＜0.005)。總之，這些數據表明B細胞可經工程處理以在體內引發針對多種抗原之抗原特異性反應。 實施例20
為了測定經SQZ加載之B細胞作為抗原呈遞細胞(BAPC )以用於預防性治療腫瘤的能力，以經SQZ加載抗原之BAPC 細胞治療小鼠，接著注射TC-1腫瘤細胞。測量腫瘤生長受抑制之情況以評估體內預防性疫苗之效力。
為了測試基於預防性HPV抗原之B細胞疫苗(即，藉由SQZ加載HPV抗原之BAPC )控制TC-1腫瘤生長之能力，將E7 SLP藉由SQZ投遞入B細胞中並在腫瘤植入前注射入小鼠。具體而言，第-7天，從C56BL/6J小鼠分離出小鼠B細胞(BAPC )並藉由SQZ加載HPV 16 E7肽，然後隨同1μM CpG1826注射入供體小鼠(10隻小鼠/組)。第0天，在每隻小鼠的後脇腹經由皮下植入TC-1腫瘤細胞(1E6細胞/mL，在100μL中)。TC-1為已知之表現HPV抗原E6和E7的腫瘤細胞株。隨時間測量腫瘤體積，並在第48天或當小鼠腫瘤達到＞ 1500mm3 時處死小鼠(以較先者為準)。
在接受經加載E7之BAPC 的小鼠中腫瘤生長受到大幅抑制，在治療組之10隻小鼠中有8隻在整個研究期間保持無腫瘤(TF)，而對照組之10隻小鼠中0隻保持無腫瘤(第20A圖)。相對於對照組，BAPC 疫苗亦導致經免疫接種BAPC 之小鼠的存活力統計學上顯著改善(P＜0.0001)，相較於對照組之32天，治療組之生存中位數＞60天(第20B圖)。總之，該數據顯示經由SQZ加載抗原之B細胞可作為用於腫瘤之抗原特異性預防性治療之基於APC的有效疫苗。 實施例21
為了測定經SQZ加載之B細胞作為抗原呈遞細胞(BAPC )以用於治療性治療腫瘤的能力，為小鼠植入TC-1腫瘤細胞，隨後使用經加載抗原之BAPC 細胞進行治療性免疫化。測量腫瘤生長受抑制之情況以評估體內治療性疫苗之效力。
為了測試基於HPV抗原之治療性B細胞疫苗(即，藉由SQZ加載HPV抗原之BAPC )控制TC-1腫瘤生長之能力，藉由SQZ將E7 SLP投遞入B細胞並在腫瘤植入前注射入小鼠中。具體而言，第0天，經由皮下在C56BL/6J小鼠(10隻小鼠/組)的右側腹注射TC-1腫瘤細胞(50k細胞/小鼠)。TC-1為已知之表現HPV抗原E6和E7的腫瘤細胞株。第9天，或是令小鼠保持未接受治療或是使用1M細胞/小鼠之經SQZ加載E7 SLP的小鼠B細胞(BAPC )引發。隨時間測量腫瘤體積並在第48天或當小鼠腫瘤達到＞1500mm3 時處死小鼠(以較先者為準)。
接受經加載E7之BAPC 的小鼠中腫瘤生長受到大幅抑制，在研究期間，平均腫瘤體積保持＜500mm3 (第21A圖)。使用經加載E7之BAPC 治療的小鼠之存活期亦顯著增加(P＜0.0001)，相較於對照組之38天，治療組之生存中位數＞60天。總之，該數據顯示經由SQZ加載抗原之B細胞可作為用於腫瘤之抗原特異性治療性治療之基於APC的有效疫苗。 實施例22
為了測定經SQZ加載之B細胞促進腫瘤浸潤淋巴細胞(TIL)被募集至腫瘤的能力，以經加載之B細胞APC治療(引發和加強)荷瘤小鼠，除了分析腫瘤之​​數量和藉由流式細胞術分析抗原特異性T細胞的相對百分比外並測量腫瘤生長受抑制之情形。
第0天，將TC-1腫瘤細胞(50k細胞/小鼠)經由皮下注射入C56BL/6J小鼠的右脇腹(20隻小鼠/組)。第14天，使用(i)經由皮下注射之150μg/小鼠 E7 SLP +50μg CpG1826(SC SLP)，(ii) 以注射在眼眶後之1μg/mL E7最小抗原決定部位+1μM CpG(最小抗原決定部位)脈衝的小鼠B細胞，或(ⅲ)注射在眼眶後之經加載(SQZ)E7 SLP(20μM)+ 1μM CpG(5M細胞/小鼠)的B細胞來引發小鼠。隨時間測量腫瘤體積直到達到＞ 1500mm3 或在第34天時處死小鼠(以較先者為準)。第27天，處死動物的一個子群(5隻小鼠/組)，其中將該腫瘤切除並分離出T細胞，再藉由流式細胞術分析。
如所描述之治療性治療設置中，僅S.C. SLP和SQZ治療導致可感知之腫瘤生長抑制，僅SQZ治療導致相對於第19天所觀察到之最大腫瘤體積的腫瘤消退(第22A圖)。對募集至腫瘤之TIL的分析及這些T細胞之相對表型的分析顯示經SQZ加載之B細胞疫苗(SQZ)導致腫瘤中之浸潤性T細胞百分比顯著增加以及對100mg腫瘤重量進行標準化之較高的細胞數量。除了浸潤性T細胞的總數外，可觀察到與SC SLP和最小EP相比較，在SQZ治療中CD8+T細胞及E7特異性CD8+T細胞二者以CD45+ 細胞之百分比形式而言增加更明顯且當對腫瘤重量正常化時亦觀察到此種趨勢(第22B圖)。SQZ與其他每一治療組之間之所有比較均為統計學上有意義(P＜0.001)。總之，這些數據支持經SQZ加載之BAPC 疫苗由於促進T細胞浸潤入腫瘤中而導致腫瘤消退(具體地說，抗原特異性CD8+細胞毒性T細胞)。 實施例23
為了在玻管內測定對已藉由SQZ加載抗原之人類抗原呈遞細胞(APC)的抗原特異性反應，藉由SQZ加載B細胞並藉由ELISA測量經誘導之炎性細胞因子分泌量。
具體而言，從HLA-A2+供體分離出人B細胞並將HPV 16 E7 SLP(50μM)與B細胞一起培育(Endo)或藉由SQZ投遞至B細胞(SQZ)。然後以2：1之比例將Endo或SQZ B細胞(60k細胞/孔)與E7反應T細胞(30k細胞/孔)一起培育，並在IL-2(100 U/mL)和CpG 2006(1μM)之存在下共同培養24小時。然後收穫上清液並藉由ELISA分析IFN-γ分泌。
結果表明經SQZ加載之B細胞可在玻管內作為抗原呈遞細胞(BAPC )以刺激HPV E7抗原特異性反應。相較於那些與抗原一起培育之細胞所分泌者，經加載抗原之B細胞APC刺激該E7特異性反應細胞所分泌之IFN-γ量明顯較高(P＜0.005)。 實施例24
為了評估佐劑對經SQZ加載之疫苗誘導抗原特異性腫瘤浸潤淋巴細胞(TIL的)之能力的重要性，為細胞加載典型抗原，使用佐劑熟化並注射入荷瘤小鼠。藉由流式細胞術測量被募集至該腫瘤之抗原特異性T細胞的相對百分比。
第0天，在C57BL/6J雌性小鼠的右後腹側注射TC1腫瘤細胞(50K細胞/小鼠)。第15天(引發)，從雌性C57BL/6J供體小鼠之脾臟取得小鼠T細胞，經由SQZ(40psi，3.5μm壓縮器，室溫)加載預複合之5μM E7 SLP(GQAEPDRAHYNIVTF SSKSDSTLRLSVQSTHVDIR)+5μM小鼠血清白蛋白(MSA)並在37℃培育1小時。第15天，在雌性C57BL/6J接受者小鼠(10隻/組)眼眶後注射100μL載劑(PBS-未經治療的)或加載E7之T細胞(1M細胞/小鼠)+/-CpG 1826(25μg)。第25天，收穫腫瘤並藉由流式細胞術測量E7特異性TIL之量。
經SQZ加載之單獨的T APC導致E7特異性TIL之數量少許(~15%)但統計學上不顯著地增加，但當將其與CpG共同注射時，TIL之數量較多且顯著增加(~55%，與單獨之T APC相比較，**P＜0.01；與未經治療組相比較， ***P＜0.0005)。該數據顯示與單獨之T APC相比較，將CpG連同經加載E7之T APC共同注射導致募集較多之TIL。 實施例25
為了評估T APC +佐劑疫苗在預防性設置中的持久性，在表現HPV E7之TC1腫瘤模型中藉由腫瘤面積相對於時間之繪圖來比較經T APC治療之小鼠與未經治療之小鼠之初始反應中的腫瘤生長及60天後之再挑戰中的腫瘤生長。
第-14天，從C57BL/6J雌性供體小鼠收穫脾細胞並藉由免疫磁化分離法分離出T細胞。接下來，經由SQZ(45psi；3.5μm壓縮器)為小鼠T細胞加載預複合之20μM E7 SLP (GQAEPDRAHYNIVTF SSKSDSTLRLSVQSTHVDIR) +20μM小鼠血清白蛋白(MSA)並在37℃培育1小時。在雌性C57BL/6J接受者小鼠(除了未經治療的小組I為20隻小鼠/組外，其他為10隻/組)眼眶後注射100μL之載劑(PBS-未經治療的)或加載E7之T細胞(1M細胞/小鼠)+CpG 1826(25μg/小鼠)[引發]。第-7天，從C57BL/6J雌性供體小鼠收穫脾臟，分離出T細胞並藉由SQZ加載，且完全依照第-14天[加強]般注射入接受者小鼠中。第0天，在C57BL/6J雌性小鼠右後腹側注射TC1腫瘤細胞(50k細胞/小鼠)(除了直到第64天未植入腫瘤細胞的小組2之10隻未經治療的小鼠外)。
藉由式((長度×寬度2 )/2)測量未經治療組和在第0天以腫瘤細胞挑戰之經T APC治療組的腫瘤生長並將二者進行比較，雖然未經治療組中的所有小鼠在第47天均達到人道終點，除了2隻外，所有T APC組之小鼠的腫瘤生長均顯著延遲，其餘小鼠(8)保持無腫瘤直至再次以腫瘤進行挑戰。有趣的是，當將在第64天植入腫瘤之未經治療的小鼠與已在彼等之對向腹側重新植入腫瘤之經T APC治療的小鼠相比較時，腫瘤生長延遲仍然存在，其中有3隻小鼠從未長出可測量之腫瘤，即使在第二次腫瘤挑戰後。這些數據表明使用加載E7之T APC +佐劑治療不僅可導致抗原特異性腫瘤生長受抑制，亦可預防腫瘤，儘管有第二次腫瘤挑戰，此預防效果仍可持續超過100天。 實施例26
為了評估不同T APC濃度及引發-加強計劃表在治療性疫苗設置中的影響，在表現HPV E7之TC1腫瘤模型中藉由腫瘤面積相對於時間繪圖來比較經T APC治療之小鼠(多種濃度和引發-加強時間)與未經治療之小鼠的腫瘤生長。
第0天，在C57BL/6J雌性小鼠之右後腹側注射TC1腫瘤細胞(50k細胞/小鼠)。第10天(引發)，藉由免疫磁性分離法從雌性C57BL/6J供體小鼠之脾臟獲得小鼠T細胞，經由SQZ(45psi；3.5μm壓縮器)加載預複合之20μM E7 SLP(GQAEPDRAHYNIVTF SSKSDSTLRLSVQSTHVDIR)+ 20μM小鼠血清白蛋白(MSA)並在37℃培育1小時。然後，在雌性C57BL/6J接受者小鼠(10隻/組)眼眶後注射100μL之載劑(PBS)或T APC(0.25或1M細胞/小鼠)+CpG 1826(25μg/小鼠)。第17天，使用與第10天完全相同之方式，令該引發/加強組接受第二次T APC注射。在腫瘤植入後1週開始每週二次測量TC-1腫瘤生長並與未經治療之小鼠中的腫瘤生長比較長達66天。
與未經治療相比較，藉由式((長度×寬度2)/2)測量之腫瘤生長中僅低劑量T APC組(0.25M細胞/小鼠)+CpG(僅引發)導致腫瘤生長速率略微延遲。第17天加入加強劑，可見到相對於僅使用相同濃度之引發條件，使用低劑量T APC+CpG(0.25M引發/加強)腫瘤生長受抑制之程度增強，且相對於未經治療組，受抑制之程度增加更多。加載抗原之T APC的劑量增加至1M/小鼠(僅引發)時可導致相對於較低劑量之T APC+CpG(僅引物)而言，腫瘤生長僅輕微受抑制。有趣的是，使用高劑量之T APC+CpG(僅引發)可導致對腫瘤生長的最佳防護(腫瘤消退係發生在第20至40天之間)及在觀察之任何組中之最高生長抑制水準。總之，這些數據強調包含佐劑之增加的細胞劑量或引發+加強劑給藥計劃表可增進T APC疫苗之功效。
實施例27 為了比較高劑量肽疫苗相對於與肽一起培育或藉由SQZ加載肽之B細胞的功效，在治療設置中使用表現HPV E7之TC1腫瘤模型進行挑戰後，以E7肽、與E7一起培育之B細胞(脈衝之B細胞)或經加載E7之B APC治療小鼠並繪製腫瘤面積相對於存活率之隨時間推移的圖形。
第0天，在C57BL/6J雌性小鼠之右後腹側注射TC1腫瘤細胞(50k細胞/小鼠)。第13天(引發)，藉由免疫磁性分離法從雌性C57BL/6J供體小鼠之脾臟獲得B細胞，與預複合之20μM E7 SLP (GQAEPDRAHYNIVTF SSKSDSTLRLSVQSTHVDIR)+20μM小鼠血清白蛋白(MSA)一起培育(10μg/mL)或經由SQZ加載之(60psi；4μm壓縮器，室溫)並與CpG 1826(1μM)一起培育16小時。第14天，在雌性C57BL/6J接受者小鼠(10隻/組)眼眶後注射100μL之載劑(PBS)、與E7一起培育之B APC(5M細胞/小鼠)、加載E7之B APC(5M細胞/小鼠)或經由皮下在左後腹側注射E7 SLP(450μg/小鼠)+CpG(50μg/小鼠)。第28天，依與第14天完全相同之方式經由皮下投予僅接受肽之小鼠該作為加強劑之肽(加強)。在植入腫瘤後1週開始每週二次測量TC-1腫瘤生長和存活，並與未經治療之小鼠中的腫瘤生長進行比較長達80天。
藉由式((長度×寬度2 )/2)測量腫瘤生長，與未經治療之小鼠相比較，使用經肽脈衝之B APC治療不會影響腫瘤生長(第27A圖)。有趣的是，與未經治療組和使用肽脈衝之B細胞組相比較，使用經由SQZ加載之B APC治療小鼠表現出腫瘤生長明顯受抑制。該效果類似於肽疫苗(SC SLP)之效果，儘管事實上投遞給小鼠之肽的量遠高於經加載之B APC，且該肽疫苗組接受該肽疫苗之引發和加強劑，而SQZ B APC組僅接受單一引發劑量。觀察到腫瘤生長的趨勢與總體存活率有關，該未經治療組和肽脈衝之B細胞組具有相等之生存期中位數(約36天-右)。相對於其他二組，該高劑量肽疫苗和加載E7之B APC之生存期中位數幾乎是二倍(60天[肽]相對於65.5天[SQZ B APC])(第27B圖)。這些數據顯示藉由SQZ加載之B APC可在HPV相關癌症之治療模型中誘導腫瘤消退，且其與更高劑量之經典肽疫苗一樣有效或更有效。
實施例28
為了測定對已藉由SQZ加載抗原之抗原呈遞細胞(APC)的內源反應，經處理之脾細胞係藉由SQZ加載，而該炎性細胞因子之量係藉由細胞內細胞因子染色(ICS)測量。
從C56BL/6J小鼠分離出小鼠脾細胞(脾APC)並藉由SQZ加載400μg/mL Ova蛋白(第28B圖)或HPV 16 E7肽(20μM -第28C圖)，然後連同1μM CpG1826一起注射入供體小鼠(5隻小鼠/組)。第7天，收穫脾細胞，以Ins B9-23再次挑戰並進行用於IFN-γ和IL-2之細胞內細胞因子染色(ICS)以藉由流式細胞術測量並與未經治療之小鼠相比較。
在抗原Ova(第28B圖)和疾病相關之HPV E7(第28C圖) 的二種模型方面，發現當以Ova或E7再刺激時，經脾APC治療之小鼠的IFN-γ和IL-2均表現出統計學上顯著增加(相較於其各自之未經治療的條件，所有APC條件均為P＜0.005)。總之，這些數據表明混合之脾細胞可經工程處理以在體內引發針對多種抗原之抗原特異性反應。
實施例29
為了測定經SQZ加載之B細胞或混合之脾細胞作為抗原呈遞細胞(APC)以用於治療性腫瘤治療的能力，使用經加載之脾細胞APC治療小鼠，然後注射TC-1腫瘤細胞。測量腫瘤生長受抑制之情形以評估體內疫苗功效。
第0天，經由皮下途徑在C56BL/6J小鼠(10隻小鼠/組)的右側腹注射TC-1腫瘤細胞(50k細胞/小鼠)。第9天，使用1M細胞/小鼠之脾細胞在小鼠中進行引發(第28圖，脾細胞APC )，隨時間測量腫瘤體積並在第48天或當小鼠的腫瘤達到＞1500mm3 時處死小鼠(以較先者為準)。
在腫瘤移植後9天，藉由將E7 SLP加載入B細胞或脾細胞中來測試治療性HPV抗原為基底之脾細胞疫苗控制TC-1腫瘤(已知為表現HPV抗原E6和E7的細胞株)生長之能力。在經脾細胞APC 治療之小鼠中腫瘤生長均被大幅抑制，研究期間之平均腫瘤體積保持＜500mm3 (第29A圖)。使用任一APC治療之小鼠的存活率亦顯著增加(P＜0.0001)，在該研究結束之前經脾細胞APC 治療之小鼠無一達到人道終點(第29B圖)。總之，該數據顯示經由SQZ加載抗原之脾細胞可作為用於抗原特異性治療腫瘤之基於APC的有效疫苗。
實施例30
為了測定針對已藉由SQZ加載抗原之人抗原呈遞細胞(APC)的玻管內抗原特異性反應，藉由SQZ加載B細胞或PBMC並藉由細胞內細胞因子染色(ICS)測量炎性細胞因子的量。
從HLA-A2 +供體分離出人PBMC並將HPV 16 E7 SLP(50μM)與PBMC一起培育(Endo)或藉由SQZ投遞(SQZ)。然後，將經加載之PBMC(60K細胞/孔)與Astrate E7反應T細胞(30K細胞/孔)以2：1之比例共同培養，並在IL-2(100 U/mL)和CpG 2006(1μM)之存在下培養24小時。然後收穫上清液並藉由ELISA分析IFN-γ。
測試PBMC作為APC以刺激玻管內HPV E7抗原特異性反應。經加載抗原之PBMC APC刺激E7特異性反應細胞分泌之IFN-γ的量較那些與抗原一起培育之細胞所分泌之IFN-γ的量高得多 (P＜0.005)。
總之，這些數據表明人PBMC可作為有效之APC以在玻管內刺激疾病相關抗原特異性反應。 序列表
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第 1A 圖 顯示治療組和計劃表之代表性示意圖。第 1B 圖 顯示第1A圖中概述之未治療組(無過繼性T細胞轉移)和治療組B至E的小鼠之間藉由公式((長度×寬度2 )/2)測量之腫瘤生長的比較。
第 2A 圖 顯示用於評估E7抗原之代表性示意圖。第 2B 圖 顯示SLP序列對回應TAPC 疫苗接種時所產生之製造IFN-γ的CD8+T細胞之影響。
第 3 圖 之圖形顯示E6 SLP在玻管內人體模型中引起E6反應T細胞之抗原特異性免疫反應的能力。
第 4 圖 顯示E7 SLP在玻管內人體模型中引起E711-20 反應T細胞之抗原特異性免疫反應的能力以及SLP序列對SQZ T細胞APC(TAPC )活化之影響。
第 5 圖 顯示在玻管內人體模型中評估用於SQZ T細胞APC之抗原劑量的研究結果。
第 6 圖 顯示在玻管內人體模型中測定用於SQZ T細胞APC之供體變異性的研究結果。
第 7A 圖 為比較使用不同佐劑之免疫反應的強度之實驗的示意圖。第 7B 圖 顯示用於比較使用聚I：C和CpG ODN之免疫反應之強度的實驗結果。
第 8A 圖 為評估CpG ODN之濃度對免疫反應之效果的實驗示意圖。第 8B 圖 顯示評估CpG ODN之濃度對免疫反應之效果的實驗結果。
第 9A 圖 為評估CpG ODN之給藥計劃表對免疫反應之效果的實驗示意圖。第 9B 圖 顯示評估CpG ODN之給藥計劃表對免疫反應之效果的實驗結果。
第 10A 圖 之示意圖為評估細胞內和全身性投予佐劑之組合在TAPC 抗腫瘤功能方面之實驗。第 10B 圖 顯示各實驗組之T細胞反應，而第 10C 圖 顯示各實驗組之腫瘤生長。第 10D 圖 顯示使用SQZ(E7+CpG)治療之動物在重新挑戰後相對於未經治療之動物的腫瘤生長。
第 11A 圖 之示意圖為評估組合多個HPV抗原對TAPC 抗腫瘤功能之效果的實驗。第 11B 圖 顯示每個實驗組之T細胞反應，而第 11C 圖 顯示每個實驗組之腫瘤生長。
第 12A 圖 為評估CpG佐劑之投予途徑對E7特異性TAPC 抗腫瘤效果之重要性的實驗結果。圖中提供給藥計劃表。第 12B 圖 顯示在各治療組內之個別小鼠隨時間變化的腫瘤體積。
第 13 圖 為用於評估共同投予之佐劑導致E7特異性T細胞腫瘤浸潤之能力的實驗示意圖。T細胞反應顯示在下方。
第 14A 圖 為用於決定加載E7合成長肽(SLP)+CpG之TAPC 的引發和加強劑的疫苗接種計劃表之實驗示意圖。第 14B 圖 顯示各實驗組之腫瘤生長。
第 15 圖 顯示表明經SQZ處理之TAPC 可直接呈遞抗原之實驗的結果。
第 16 圖 顯示SQZ投遞佐劑不會顯著改變玻管內T細胞細胞因子的量。
第 17 圖 顯示SQZ投遞抗原+/-佐劑不會顯著改變體內血清細胞因子的量。
第 18 圖 顯示藉由SQZ投遞含有HPV-E7之細胞溶胞產物入樹突細胞(作為APC)中，接著將經SQZ處理之樹突細胞與CD8 T細胞反應細胞共同培養可導致較藉由胞吞作用將相同的溶胞產物投遞入樹突細胞中更強固之T細胞反應。
第 19A 圖 顯示用於評估B細胞作為APC以誘導內源性反應的能力之實驗的代表性示意圖。第 19B 圖 顯示藉由B9-23挑戰誘導之IFN-γ陽性CD8+T細胞的量，該IFN-γ陽性CD8+T細胞係在回應加載OVA之BAPC 疫苗接種時產生。第 19C 圖 顯示由E7挑戰誘導之IFN-γ陽性CD8+T細胞的量，該IFN-γ陽性CD8+T細胞係在回應加載E7之BAPC 疫苗接種時產生。
第 20A 圖 顯示實驗中隨時間變化之腫瘤體積以測定經SQZ加載之B細胞於作為用於預防性治療HPV相關腫瘤的APC之能力。第 20B 圖 顯示隨時間變化之對應的存活數據，該數據係來自用於HPV相關腫瘤之B細胞APC預防性治療。
第 21A 圖 顯示實驗中隨時間變化之腫瘤體積以測定經SQZ加載之B細胞於作為用於治療性治療HPV相關腫瘤的APC之能力。第 21B 圖 顯示隨時間變化之對應的存活數據，該數據係來自用於HPV相關腫瘤之B細胞APC治療性治療。
第 22A 圖 顯示實驗中隨時間變化之腫瘤體積以測定經SQZ加載之B細胞於作為用於治療性治療HPV相關腫瘤的APC之能力。第 22B 圖 顯示被召募到腫瘤之各種腫瘤浸潤細胞表型的變化形廓和百分比。
第 23 圖 顯示由E7反應細胞分泌之IFN-γ，其為玻管內對經SQZ加載HPV16 E7 SLP之BAPC 的抗原特異性反應。
第 24 圖 顯示被召募至腫瘤之腫瘤浸潤淋巴細胞(TIL)的相對量，該腫瘤係在有或無共同投予佐劑下經投予經SQZ加載HPV16 E7 SLP之TAPC 。
第 25 圖 顯示實驗中隨時間變化之腫瘤體積以測定經SQZ加載之B細胞在用於HPV相關腫瘤之短期(右脇腹腫瘤，在第0天注射)和長期(左脇腹腫瘤，在第60天注射)保護的預防性治療中作為APC之能力。
第 26 圖 顯示實驗中隨時間變化之腫瘤體積以測定與佐劑共同投予之T細胞劑量及投予次數(引發相對於引發/加強)對經SQZ加載之T細胞於作為用於HPV相關腫瘤之治療性治療的APC之能力的影響。第 26 圖中 “P”表示引發，“B”表示增強。
第 27A 圖 顯示實驗中隨時間變化之腫瘤體積以測定與經電穿孔之B細胞及高劑量之高劑量肽疫苗(SC SLP)相比較，經SQZ加載之B細胞於作為用於HPV相關腫瘤之治療性治療的APC之能力。第 27B 圖 顯示與經電穿孔之B細胞及高劑量肽疫苗相比較，來自用於HPV相關腫瘤之B細胞APC治療性治療的隨時間變化之對應的存活數據。
第 28A 圖 顯示評估脾細胞作為APC以誘導內源性反應之能力的實驗之代表性示意圖。第 28B 圖 顯示由B9-23挑戰誘導之IFN-γ陽性CD8+T細胞的量，其係在回應加載OVA之脾細胞APC 疫苗接種時產生。第 28C 圖 顯示由E7挑戰誘導之IFN-γ陽性CD8+T細胞的量，其係在回應加載E7之脾細胞APC 疫苗接種時產生。
第 29A 圖 顯示實驗中隨時間變化之腫瘤體積以測定經SQZ加載之脾細胞於作為用於治療性治療HPV相關腫瘤的APC之能力。第 29B 圖 顯示來自用於HPV相關腫瘤之脾細胞APC治療性治療的隨時間變化之對應的存活數據。
第 30 圖 顯示由E7反應細胞分泌之IFN-γ，其為玻管中對經SQZ加載HPV16 E7 SLP之PBMCAPC 的抗原特異性反應。
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Claims (310)

  1. 一種用於治療個體中人類乳頭瘤病毒(HPV)相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原和佐劑，其中該佐劑係存在於細胞內。
  2. 一種用於預防個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原和佐劑，其中該佐劑係存在於細胞內。
  3. 一種用於調節患有HPV相關疾病之個體的免疫反應之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原和佐劑，其中該佐劑係存在於細胞內。
  4. 一種用於治療個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原和佐劑，其中該佐劑係存在於細胞內； 其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備： a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(cell-deforming constriction)(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該抗原和該佐劑通過以形成經擾動之輸入細胞；和 b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原和該佐劑一起培育足夠之時間以令該HPV抗原和該佐劑進入該經擾動之輸入細胞； 從而產生該等經修飾之免疫細胞。
  5. 一種用於預防個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原和佐劑，其中該佐劑係存在於細胞內； 其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備： a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該抗原和該佐劑通過以形成經擾動之輸入細胞；和 b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原和該佐劑一起培育足夠之時間以令該HPV抗原和該佐劑進入該經擾動之輸入細胞； 從而產生該等經修飾之免疫細胞。
  6. 一種用於調節患有HPV相關疾病之個體的免疫反應之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原和佐劑，其中該佐劑係存在於細胞內； 其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備： a)令包含含有HPV抗原之輸入細胞的細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該HPV抗原和該佐劑通過以形成經擾動之輸入細胞；和 b)將該經擾動之輸入細胞與該抗原和該佐劑一起培育足夠之時間以令該HPV抗原和該佐劑進入該經擾動之輸入細胞； 從而產生該等經修飾之免疫細胞。
  7. 如申請專利範圍第4至6項中任一項之方法，其中該壓縮器之直徑小於該細胞之直徑。
  8. 如申請專利範圍第4至7項中任一項之方法，其中該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至99%。
  9. 如申請專利範圍第4至8項中任一項之方法，其中該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至小於約60%。
  10. 如申請專利範圍第4至9項中任一項之方法，其中該壓縮器係在通道中。
  11. 如申請專利範圍第4至10項中任一項之方法，其中該變形力係當該輸入細胞通過該壓縮器時施加至該輸入細胞。
  12. 如申請專利範圍第1至11項中任一項之方法，其中該HPV抗原和/或該佐劑係存在於胞質液(cytosol)和/或胞內體中。
  13. 如申請專利範圍第1至12項中任一項之方法，其中該HPV抗原和/或該佐劑係存在於該細胞之多個隔室中。
  14. 如申請專利範圍第1至13項中任一項之方法，其中該經修飾之免疫細胞進一步在該細胞外部包含HPV抗原和/或佐劑。
  15. 如申請專利範圍第1至14項中任一項之方法，其中與該經擾動之輸入細胞一起培育之該佐劑的濃度為介於約0.1μM與約1mM之間。
  16. 如申請專利範圍第1至15項中任一項之方法，其中與該經擾動之輸入細胞一起培育之該HPV抗原的濃度為介於約0.1μM與約1mM之間。
  17. 如申請專利範圍第4至16項中任一項之方法，其中與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原對佐劑之比例係介於約10000：1與約1：10000之間。
  18. 如申請專利範圍第3或6項之方法，其中該免疫反應經增強。
  19. 如申請專利範圍第18項之方法，其中對該HPV抗原之免疫反應增強。
  20. 如申請專利範圍第1至19項中任一項之方法，其中該佐劑為CpG ODN、IFN-α、STING激動劑、RIG-I激動劑或聚I：C。
  21. 如申請專利範圍第20項之方法，其中該佐劑為CpG ODN。
  22. 如申請專利範圍第21項之方法，其中該CpG ODN為CpG ODN 1018、CpG ODN 1826或CpG ODN 2006。
  23. 如申請專利範圍第1至22項中任一項之方法，其中該經修飾之免疫細胞包含多於一種之佐劑。
  24. 如申請專利範圍第1至23項中任一項之方法，其中該HPV抗原為引發針對相同和/或不同HPV抗原之反應的多種多肽之匯集庫(pool)。
  25. 如申請專利範圍第24項之方法，其中在該多種抗原之匯集庫中的抗原不會減低該針對該多種抗原之匯集庫中的其他抗原之免疫反應。
  26. 如申請專利範圍第1至25項中任一項之方法，其中該HPV抗原為包含抗原性HPV抗原決定部位和一或多個異源肽序列之多肽。
  27. 如申請專利範圍第1至26項中任一項之方法，其中該HPV抗原與其自身、與其他抗原、或與該佐劑複合。
  28. 如申請專利範圍第1至27項中任一項之方法，其中該HPV為源自細胞溶胞產物(lysate)之抗原。
  29. 如申請專利範圍第1至28項中任一項之方法，其中該HPV抗原為HPV-16或HPV-18抗原。
  30. 如申請專利範圍第29項之方法，其中該HPV抗原包含HLA-A2特異性抗原決定部位。
  31. 如申請專利範圍第1至30項中任一項之方法，其中該HPV抗原為HPV E6抗原或HPV E7抗原。
  32. 如申請專利範圍第1至31項中任一項之方法，其中該經修飾之免疫細胞包含HPV E6抗原和HPV E7抗原。
  33. 如申請專利範圍第1至32項中任一項之方法，其中該HPV抗原為包含抗原性抗原決定部位之多肽，該抗原性抗原決定部位之N端和/或C端側翼鄰接一或多個異源肽序列。
  34. 如申請專利範圍第33項之方法，其中該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至26中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列。
  35. 如申請專利範圍第34項之方法，其中該HPV抗原包含與SEQ ID NO：23具有至少90%相似性之胺基酸序列。
  36. 如申請專利範圍第1至35項中任一項之方法，其中該HPV抗原能夠被加工成第I類MHC限制性肽(MHC class I-restricted peptide)。
  37. 如申請專利範圍第1至36項中任一項之方法，其中該HPV抗原能夠被加工成第II類MHC限制性肽。
  38. 如申請專利範圍第1至37項中任一項之方法，其中該經修飾之免疫細胞包含濃度為介於約0.1μM與約1mM之間之佐劑。
  39. 如申請專利範圍第1至38項中任一項之方法，其中該經修飾之免疫細胞包含濃度為介於約0.1μM與約1mM之間之該HPV抗原。
  40. 如申請專利範圍第1至39項中任一項之方法，其中該HPV抗原對該佐劑之比例係介於約10000：1與約1：10000之間。
  41. 如申請專利範圍第1至40項中任一項之方法，其中該經修飾之免疫細胞進一步包含與不包含該劑之對應的經修飾之免疫細胞相比較，增強該經修飾之免疫細胞的存活力和/或功能之劑。
  42. 如申請專利範圍第41項之方法，其中該劑為增強胞吞作用之化合物、穩定劑或輔因子。
  43. 如申請專利範圍第41項之方法，其中該劑為白蛋白。
  44. 如申請專利範圍第43項之方法，其中該白蛋白為小鼠、牛或人白蛋白。
  45. 如申請專利範圍第41項之方法，其中該劑為二價金屬陽離子、葡萄糖、ATP、鉀、甘油、海藻糖、D-蔗糖、PEG1500、L-精胺酸、L-麩胺醯胺、或EDTA。
  46. 如申請專利範圍第41項之方法，其中該劑包含小鼠血清白蛋白(MSA)。
  47. 如申請專利範圍第1至46項中任一項之方法，其中該等經修飾之免疫細胞被進一步修飾以增加一或多種共刺激分子之表現。
  48. 如申請專利範圍第47項之方法，其中該共刺激分子為B7-H2、B7-1、B7-2、CD70、LIGHT、HVEM、CD40、4-1BBL、OX40L、TL1A、GITRL、CD30L、TIM4、SLAM、CD48、CD58、CD155、或CD112。
  49. 如申請專利範圍第47或48項之方法，其中該細胞包含導致該一或多種共刺激分子增加表現的核酸。
  50. 如申請專利範圍第1至49項中任一項之方法，其中該免疫細胞為T細胞、樹突細胞、單核細胞、巨噬細胞、髓樣細胞、粒細胞、嗜中性粒細胞、肥大細胞、天然殺手細胞、先天性淋巴細胞、嗜鹼性粒細胞、或造血前體細胞。
  51. 如申請專利範圍第1至50項中任一項之方法，其中該免疫細胞不是B細胞。
  52. 如申請專利範圍第1至50項中任一項之方法，其中該免疫細胞為B細胞。
  53. 如申請專利範圍第1至51項中任一項之方法，其中該免疫細胞為T細胞。
  54. 如申請專利範圍第1至49項中任一項之方法，其中該免疫細胞為混合之細胞族群(cell population)。
  55. 如申請專利範圍第54項之方法，其中該免疫細胞為多個PBMC。
  56. 如申請專利範圍第53項之方法，其中該T細胞包含進一步修飾以調節第I類MHC表現。
  57. 如申請專利範圍第53項之方法，其中該T細胞包含進一步修飾以調節第II類MHC表現。
  58. 如申請專利範圍第56或57項之方法，其中該T細胞包含進一步修飾以減少第I類MHC和/或第II類MHC表現。
  59. 如申請專利範圍第56或57項之方法，其中該進一步修飾包含使用siRNA、shRNA、CRISPR/Cas9、ZFN、TALEN、Cre重組酶或大核酸酶減少第I類MHC和/或第II類MHC表現。
  60. 如申請專利範圍第56或57項之方法，其中該T細胞包含進一步修飾以增加第I類MHC和/或第II類MHC表現。
  61. 如申請專利範圍第56或57項之方法，其中該進一步修飾包含使用RNA或質體DNA增加第I類MHC和/或第II類MHC表現。
  62. 如申請專利範圍第53和56至59項中任一項之方法，其中與在同種異體背景下於個體中之固有之先天性免疫反應對投予不包含該進一步修飾之對應的經修飾之T細胞的反應相比較，在同種異體背景下於個體中之固有之先天性免疫反應對投予該經進一步修飾之T細胞的反應減低。
  63. 如申請專利範圍第53和56至59項中任一項之方法，其中與該不包含該進一步修飾之對應的經修飾之T細胞在經投予該T細胞之個體中的循環半衰期相比較，該經進一步修飾之T細胞在經投予該T細胞之個體中的循環半衰期被調節。
  64. 如申請專利範圍第53和56至63項中任一項之方法，其中該T細胞包括下列之一或多者：輔助T細胞、細胞毒性T細胞、記憶T細胞、CIK細胞和天然殺手T細胞。
  65. 如申請專利範圍第53和56至63項中任一項之方法，其中該T細胞包括下列之一或多者：CD3+T細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞、CD45RA+T細胞、CD45RO+T細胞和γδ-T細胞。
  66. 如申請專利範圍第1至65項中任一項之方法，其中該經修飾之細胞對該個體而言為同種異體的。
  67. 如申請專利範圍第1至65項中任一項之方法，其中該經修飾之細胞對該個體而言為自體的。
  68. 如申請專利範圍第1至67項中任一項之方法，其中該個體經預調理(pre-conditioned)以具有經調節之發炎和/或經調節之免疫反應。
  69. 如申請專利範圍第1至68項中任一項之方法，其進一步包含對該個體投予佐劑。
  70. 如申請專利範圍第69項之方法，其中該佐劑為IFNα或CpG ODN。
  71. 如申請專利範圍第69或70項之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和該佐劑係同時投予。
  72. 如申請專利範圍第69或70項之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和該佐劑係依序投予。
  73. 如申請專利範圍第72項之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該佐劑之前投予。
  74. 如申請專利範圍第72項之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該佐劑之後投予。
  75. 如申請專利範圍第1至74項中任一項之方法，其中投予該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係與免疫檢查點抑制劑之投予組合。
  76. 如申請專利範圍第75項之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和該免疫檢查點抑制劑係同時投予。
  77. 如申請專利範圍第75項之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和該免疫檢查點抑制劑係依序投予。
  78. 如申請專利範圍第77項之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該免疫檢查點抑制劑之前投予。
  79. 如申請專利範圍第77項之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該免疫檢查點抑制劑之後投予。
  80. 如申請專利範圍第75至79項中任一項之方法，其中該免疫檢查點抑制劑係靶向下列之一或多者：PD-1、PD-L1、CTLA-4、LAG3、TIM-3、TIGIT、VISTA、TIM1、B7-H4(VTCN1)或BTLA。
  81. 如申請專利範圍第1至80項中任一項之方法，其中投予該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係與該化學療法之投予組合。
  82. 如申請專利範圍第81項之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係與該化學療法同時投予。
  83. 如申請專利範圍第81項之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係與該化學療法依序投予。
  84. 如申請專利範圍第83項之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該化學療法之前投予。
  85. 如申請專利範圍第83項之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該化學療法之後投予。
  86. 如申請專利範圍第81至85項中任一項之方法，其中該化學療法包含基於鉑之劑。
  87. 如申請專利範圍第81至86項中任一項之方法，其中該化學療法包含順鉑。
  88. 如申請專利範圍第1至87項中任一項之方法，其中對該個體投予包含該等經修飾之免疫細胞之組成物導致特異於該HPV抗原之細胞毒性T淋巴細胞(CTL)活化和/或擴增。
  89. 如申請專利範圍第1至87項中任一項之方法，其中對該個體投予包含該等經修飾之免疫細胞之組成物導致特異於該抗原之輔助T(Th )細胞活化和/或擴增。
  90. 如申請專利範圍第1至89項中任一項之方法，其中該組成物之有效量包含介於約1×106 與約1×1012 個之間的經修飾之免疫細胞。
  91. 如申請專利範圍第1至90項中任一項之方法，其中該方法包含多次投予該包含該等經修飾之免疫細胞的組成物。
  92. 如申請專利範圍第91項之方法，其中該方法包含第一次投予該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物，接著第二次投予該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物。
  93. 如申請專利範圍第92項之方法，其中該第二次投予係在該第一次投予後約一個月。
  94. 如申請專利範圍第1至93項中任一項之方法，其中該HPV相關疾病為HPV相關癌症。
  95. 如申請專利範圍第94項之方法，其中該HPV相關癌症為子宮頸癌、肛門癌、口咽癌、陰道癌、外陰癌、陰莖癌、皮膚癌或頭頸癌。
  96. 如申請專利範圍第1至95項中任一項之方法，其中該HPV相關疾病為HPV相關傳染病。
  97. 一種用於治療個體中人類乳頭瘤病毒(HPV)相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至25中任一者具有至少90%相似性之胺基酸。
  98. 一種用於預防個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至25中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列。
  99. 一種用於調節患有HPV相關疾病之個體中的免疫反應之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至25中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列。
  100. 一種用於治療個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至25中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列； 其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備： a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該抗原通過以形成經擾動之輸入細胞；和 b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原一起培育足夠之時間以令該HPV抗原進入該經擾動之輸入細胞； 從而產生該等經修飾之免疫細胞。
  101. 一種用於預防個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至25中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列； 其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備： a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該HPV抗原通過以形成經擾動之輸入細胞；和 b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原一起培育足夠之時間以令該HPV抗原進入該經擾動之輸入細胞； 從而產生該等經修飾之免疫細胞。
  102. 一種用於調節患有HPV相關疾病之個體中的免疫反應之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至25中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列； 其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備： a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該HPV抗原通過以形成經擾動之輸入細胞；和 b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原一起培育足夠之時間以令該HPV抗原進入該經擾動之輸入細胞； 從而產生該等經修飾之免疫細胞。
  103. 如申請專利範圍第100至102項中任一項之方法，其中該壓縮器之直徑小於該細胞之直徑。
  104. 如申請專利範圍第100至103項中任一項之方法，其中該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至99%。
  105. 如申請專利範圍第100至104項中任一項之方法，其中該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至小於約60%。
  106. 如申請專利範圍第100至105項中任一項之方法，其中該壓縮器係在通道中。
  107. 如申請專利範圍第100至106項中任一項之方法，其中變形力係當該輸入細胞通過該壓縮器時施加至該輸入細胞。
  108. 如申請專利範圍第86至107項中任一項之方法，其進一步包含對該個體投予佐劑。
  109. 如申請專利範圍第108項之方法，其中該佐劑為IFNα或CpG ODN。
  110. 如申請專利範圍第108或109項之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和佐劑係同時投予。
  111. 如申請專利範圍第108或109項之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和該佐劑係依序投予。
  112. 如申請專利範圍第111項之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該佐劑之前投予。
  113. 如申請專利範圍第111項之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該佐劑之後投予。
  114. 如申請專利範圍第97至113項中任一項之方法，其中該經修飾之免疫細胞進一步包含佐劑。
  115. 如申請專利範圍第100至113項中任一項之方法，其中該步驟b之經擾動的免疫細胞係與該HPV抗原和佐劑一起培育。
  116. 如申請專利範圍第114或115項之方法，其中該HPV抗原和/或該佐劑係存在於胞質液和/或胞內體中。
  117. 如申請專利範圍第114至116項中任一項之方法，其中該抗原和/或佐劑係存在於該細胞之多個隔室中。
  118. 如申請專利範圍第114至117項中任一項之方法，其中該經修飾之免疫細胞進一步在該細胞外部包含HPV抗原和/或佐劑。
  119. 如申請專利範圍第115至118項中任一項之方法，其中與該經擾動之輸入細胞一起培育之該佐劑的濃度為介於約0.1μM與約1mM之間。
  120. 如申請專利範圍第115至119項中任一項之方法，其中與該經擾動之輸入細胞一起培育之該HPV抗原的濃度為介於約0.1μM與約1mM之間。
  121. 如申請專利範圍第115至120項中任一項之方法，其中與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原對佐劑之比例為介於約10000：1與約1：10000之間。
  122. 如申請專利範圍第99或102項之方法，其中該免疫反應經增強。
  123. 如申請專利範圍第122項之方法，其中對該HPV抗原之免疫反應經增強。
  124. 如申請專利範圍第114至123項中任一項之方法，其中該佐劑為CpG ODN、IFN-α、STING激動劑、RIG-I激動劑或聚I：C。
  125. 如申請專利範圍第124項之方法，其中該佐劑為CpG ODN。
  126. 如申請專利範圍第125項之方法，其中該CpG ODN為CpG ODN 1018、CpG ODN 1826或CpG ODN 2006。
  127. 如申請專利範圍第114至126項中任一項之方法，其中該經修飾之免疫細胞包含多於一種之佐劑。
  128. 如申請專利範圍第97至127項中任一項之方法，其中該HPV抗原為引發針對相同和/或不同HPV抗原之反應的多種多肽之匯集庫。
  129. 如申請專利範圍第128項之方法，其中在該多種抗原之匯集庫中之抗原不會減低該針對該多種抗原之匯集庫中的其他抗原之免疫反應。
  130. 如申請專利範圍第97至129項中任一項之方法，其中該HPV抗原為包含抗原性HPV抗原決定部位和一或多個異源肽序列之多肽。
  131. 如申請專利範圍第97至130項中任一項之方法，其中該HPV抗原與其自身、與其他抗原、或與該佐劑複合。
  132. 如申請專利範圍第97至131項中任一項之方法，其中該HPV抗原包含HLA-A2特異性抗原決定部位。
  133. 如申請專利範圍第97至132項中任一項之方法，其中該HPV抗原能夠被加工成第I類MHC限制性肽。
  134. 如申請專利範圍第97至133項中任一項之方法，其中該HPV抗原能夠被加工成第II類MHC限制性肽。
  135. 如申請專利範圍第114至134項中任一項之方法，其中該經修飾之免疫細胞包含濃度介於約0.1μM與約1mM之間之該佐劑。
  136. 如申請專利範圍第97至135項中任一項之方法，其中該經修飾之免疫細胞包含濃度介於約0.1μM與約1mM之間之該HPV抗原。
  137. 如申請專利範圍第114至136項中任一項之方法，其中該HPV抗原對該佐劑之比例為介於約10000：1與約1：10000之間。
  138. 如申請專利範圍第97至137項中任一項之方法，其中該經修飾之免疫細胞進一步包含與不包含該劑之對應的經修飾之免疫細胞相比較，增強該經修飾之免疫細胞的存活力和/或功能之劑。
  139. 如申請專利範圍第138項之方法，其中該劑為增強胞吞作用之化合物、穩定劑或輔因子。
  140. 如申請專利範圍第138項之方法，其中該劑為白蛋白。
  141. 如申請專利範圍第140項之方法，其中該白蛋白為小鼠、牛或人白蛋白。
  142. 如申請專利範圍第138項之方法，其中該劑為二價金屬陽離子、葡萄糖、ATP、鉀、甘油、海藻糖、D-蔗糖、PEG1500、L-精胺酸、L-麩胺醯胺、或EDTA。
  143. 如申請專利範圍第138項之方法，其中該劑包含MSA。
  144. 如申請專利範圍第97至143項中任一項之經修飾之T細胞，其中該等細胞被進一步修飾以增加一或多種共刺激分子之表現。
  145. 如申請專利範圍第144項之經修飾之T細胞，其中該共刺激分子為B7-H2(ICOSL)、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、CD70、LIGHT、HVEM、CD40、4-1BBL、OX40L、TL1A、GITRL、CD30L、TIM4、SLAM、CD48、CD58、CD155、或CD112。
  146. 如申請專利範圍第144或145項之經修飾之T細胞，其中該細胞包含導致該一或多種共刺激分子增加表現的核酸。
  147. 如申請專利範圍第97至146項中任一項之方法，其中該免疫細胞為T細胞、樹突細胞、單核細胞、巨噬細胞、髓樣細胞、粒細胞、嗜中性粒細胞、肥大細胞、天然殺手細胞、先天性淋巴細胞、嗜鹼性粒細胞、或造血前體細胞。
  148. 如申請專利範圍第97至147項中任一項之方法，其中該免疫細胞不是B細胞。
  149. 如申請專利範圍第97至148項中任一項之方法，其中該免疫細胞為B細胞。
  150. 如申請專利範圍第97至148項中任一項之方法，其中該免疫細胞為T細胞。
  151. 如申請專利範圍第97至148項中任一項之方法，其中該免疫細胞為混合之細胞族群。
  152. 如申請專利範圍第151項之方法，其中該免疫細胞為多個PBMC。
  153. 如申請專利範圍第150項之方法，其中該T細胞包含進一步修飾以調節第I類MHC表現。
  154. 如申請專利範圍第150項之方法，其中該T細胞包含進一步修飾以調節第II類MHC表現。
  155. 如申請專利範圍第153或154項之方法，其中該T細胞包含進一步修飾以減少第I類MHC和/或第II類MHC表現。
  156. 如申請專利範圍第153或154項之方法，其中該進一步修飾包含使用siRNA、shRNA、CRISPR/Cas9、ZFN、TALEN、Cre重組酶或大核酸酶減少第I類MHC和/或第II類MHC表現。
  157. 如申請專利範圍第153或154項之方法，其中該T細胞包含進一步修飾以增加第I類MHC和/或第II類MHC表現。
  158. 如申請專利範圍第153或154項之方法，其中該進一步修飾包含使用RNA或質體DNA增加第I類MHC和/或第II類MHC表現。
  159. 如申請專利範圍第150和153至156項中任一項之方法，其中與在同種異體背景下於個體中之固有之先天性免疫反應對投予不包含該進一步修飾之對應的經修飾之T細胞的反應相比較，在同種異體背景下於個體中之固有之先天性免疫反應對投予該經進一步修飾之T細胞的反應減低。
  160. 如申請專利範圍第150和153至156項中任一項之方法，其中與該不包含該進一步修飾之對應的經修飾之T細胞在經投予該T細胞之個體中的循環半衰期相比較，該經進一步修飾之T細胞在經投予該T細胞之個體中的循環半衰期被調節。
  161. 如申請專利範圍第150和153至160項中任一項之方法，其中該T細胞包括下列之一或多者：輔助T細胞、細胞毒性T細胞、記憶T細胞、CIK細胞和天然殺手T細胞。
  162. 如申請專利範圍第150和153至160項中任一項之方法，其中該T細胞包括下列之一或多者：CD3+T細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞、CD45RA+T細胞、CD45RO+T細胞和γδ-T細胞。
  163. 如申請專利範圍第97至162項中任一項之方法，其中該經修飾之細胞對該個體而言為同種異體的。
  164. 如申請專利範圍第97至162項中任一項之方法，其中該經修飾之細胞對該個體而言為自體的。
  165. 如申請專利範圍第97至164項中任一項之方法，其中該個體係經預調理以具有經調節之發炎和/或經調節之免疫反應。
  166. 如申請專利範圍第97至165項中任一項之方法，其中投予該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係與免疫檢查點抑制劑之投予組合。
  167. 如申請專利範圍第166項之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和該免疫檢查點抑制劑係同時投予。
  168. 如申請專利範圍第166項之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物和該免疫檢查點抑制劑係依序投予。
  169. 如申請專利範圍第168項之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該免疫檢查點抑制劑之前投予。
  170. 如申請專利範圍第168項之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該免疫檢查點抑制劑之後投予。
  171. 如申請專利範圍第152至156項中任一項之方法，其中該免疫檢查點抑制劑係靶向下列之一或多者：PD-1、PD-L1、CTLA-4、LAG3、TIM-3、TIGIT、VISTA、TIM1、B7-H4(VTCN1)或BTLA。
  172. 如申請專利範圍第97至171項中任一項之方法，其中投予該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係與該化學療法之投予組合。
  173. 如申請專利範圍第172項之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係與該化學療法同時投予。
  174. 如申請專利範圍第172項之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係與該化學療法依序投予。
  175. 如申請專利範圍第174項之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該化學療法之前投予。
  176. 如申請專利範圍第174項之方法，其中該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物係在投予該化學療法之後投予。
  177. 如申請專利範圍第172至176項中任一項之方法，其中該化學療法包含順鉑。
  178. 如申請專利範圍第97至177項中任一項之方法，其中對該個體投予包含該等經修飾之免疫細胞之組成物導致特異於該HPV抗原之細胞毒性T淋巴細胞(CTL)活化和/或擴增。
  179. 如申請專利範圍第97至177項中任一項之方法，其中對該個體投予包含該等經修飾之免疫細胞之組成物導致特異於該HPV抗原之輔助T(Th )細胞活化和/或擴增。
  180. 如申請專利範圍第97至179項中任一項之方法，其中該組成物之有效量包含介於約1×106 與約1×1012 個之間的經修飾之免疫細胞。
  181. 如申請專利範圍第97至180項中任一項之方法，其中該方法包含多次投予該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物。
  182. 如申請專利範圍第181項之方法，其中該方法包含第一次投予該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物，接著第二次投予該包含該等經修飾之免疫細胞之組成物。
  183. 如申請專利範圍第182項之方法，其中該第二次投予係在該第一次投予後約一個月。
  184. 如申請專利範圍第97至183項中任一項之方法，其中該HPV相關疾病為HPV相關癌症。
  185. 如申請專利範圍第184項之方法，其中該HPV相關癌症為子宮頸癌、肛門癌、口咽癌、陰道癌、外陰癌、陰莖癌、皮膚癌或頭頸癌。
  186. 一種包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞在細胞內包含CpG ODN和與SEQ ID NO：18至25中任一者具有至少90%相似性之HPV抗原。
  187. 如申請專利範圍第186項之組成物，其中該HPV抗原包含與SEQ ID NO：23具有至少90%相似性之胺基酸序列。
  188. 如申請專利範圍第186或187項之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備： a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該HPV抗原和該CpG ODN通過以形成經擾動之輸入細胞；和 b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原和該CpG ODN一起培育足夠之時間以令該HPV抗原和該CpG ODN進入該經擾動之輸入細胞； 從而產生該等經修飾之免疫細胞。
  189. 如申請專利範圍第188項之組成物，其中該壓縮器之直徑小於該細胞之直徑。
  190. 如申請專利範圍第188或189項之組成物，其中該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至約99%。
  191. 如申請專利範圍第188至190項中任一項之組成物，其中該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至小於約60%。
  192. 如申請專利範圍第188至191項中任一項之組成物，其中該壓縮器係在通道中。
  193. 如申請專利範圍第188至192項中任一項之組成物，其中該變形力係當該輸入細胞通過該壓縮器時施加至該輸入細胞。
  194. 如申請專利範圍第186至193項中任一項之組成物，其中該組成物進一步包含佐劑。
  195. 如申請專利範圍第186至194項中任一項之組成物，其中該HPV抗原和/或該CpG ODN係存在於胞質液和/或胞內體中。
  196. 如申請專利範圍第186至195項中任一項之組成物，其中該抗原和/或該CpG ODN係存在於該細胞之多個隔室中。
  197. 如申請專利範圍第186至196項中任一項之組成物，其中該經修飾之免疫細胞進一步在該細胞表面上包含HPV抗原和/或CpG ODN。
  198. 如申請專利範圍第188至197項中任一項之組成物，其中與該經擾動之輸入細胞一起培育之CpG ODN的濃度為介於約0.1μM與約1mM之間。
  199. 如申請專利範圍第188至198項中任一項之組成物，其中與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原的濃度為介於約0.1μM與約1mM之間。
  200. 如申請專利範圍第188至199項中任一項之組成物，其中與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原對CpG ODN之比例係介於約10000：1與約1：10000之間。
  201. 如申請專利範圍第186至200項中任一項之組成物，其中該CpG ODN為CpG ODN 1018、CpG ODN 1826或CpG ODN 2006。
  202. 如申請專利範圍第186至201中任一項之組成物，其中該經修飾之免疫細胞包含多於一種之佐劑。
  203. 如申請專利範圍第202項之組成物，其中該佐劑包含CpG ODN、IFN-α、STING激動劑、RIG-I激動劑或聚I：C。
  204. 如申請專利範圍第186至203項中任一項之組成物，其中該HPV抗原為引發針對相同和/或不同HPV抗原之反應的多種多肽之匯集庫。
  205. 如申請專利範圍第204項之組成物，其中在該多種抗原之匯集庫中之抗原不會減低該針對該多種抗原之匯集庫中的其他抗原之免疫反應。
  206. 如申請專利範圍第186至205項中任一項之組成物，其中該HPV抗原為包含抗原性HPV抗原決定部位和一或多個異源肽序列之多肽。
  207. 如申請專利範圍第186至206項中任一項之組成物，其中該HPV抗原與其自身、與其他抗原、與佐劑或與CpG ODN複合。
  208. 如申請專利範圍第186至207項中任一項之組成物，其中該HPV抗原包含HLA-A2特異性抗原決定部位。
  209. 如申請專利範圍第186至208項中任一項之組成物，其中該HPV抗原為包含抗原性抗原決定部位之多肽，該抗原性抗原決定部位之N端和/或C端側翼鄰接一或多個異源肽序列。
  210. 如申請專利範圍第186至209項中任一項之組成物，其中該經修飾之免疫細胞包含濃度介於約0.1μM與約1mM之間之該CpG ODN。
  211. 如申請專利範圍第186至210項中任一項之組成物，其中該經修飾之免疫細胞包含濃度介於約0.1μM與約1mM之間之該HPV抗原。
  212. 如申請專利範圍第186至211項中任一項之組成物，其中該HPV抗原對該CpG ODN之比例係介於約10000：1與約1：10000之間。
  213. 一種包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原，其中該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至25中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列。
  214. 如申請專利範圍第213項之組成物，其中該HPV抗原包含與SEQ ID NO：23具有至少90%相似性之胺基酸序列。
  215. 如申請專利範圍第213或214項之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備： a)令包含輸入細胞之細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該HPV抗原通過以形成經擾動之輸入細胞；和 b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原一起培育足夠之時間以令該HPV抗原進入該經擾動之輸入細胞； 從而產生該等經修飾之免疫細胞。
  216. 如申請專利範圍第215項之組成物，其中該壓縮器之直徑小於該細胞之直徑。
  217. 如申請專利範圍第215至216項中任一項之組成物，其中該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至99%。
  218. 如申請專利範圍第215至217項中任一項之組成物，其中該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至小於約60%。
  219. 如申請專利範圍第215至218項中任一項之組成物，其中該壓縮器係在通道中。
  220. 如申請專利範圍第215至219項中任一項之組成物，其中該變形力係當該輸入細胞通過該壓縮器時施加至該輸入細胞。
  221. 如申請專利範圍第213至220項中任一項之組成物，其中該組成物進一步包含佐劑。
  222. 如申請專利範圍第213至221項中任一項之組成物，其中該HPV抗原和/或該佐劑係存在於胞質液和/或胞內體中。
  223. 如申請專利範圍第213至222項中任一項之組成物，其中該抗原和/或佐劑係存在於該細胞之多個隔室中。
  224. 如申請專利範圍第213至223項中任一項之組成物，其中該經修飾之免疫細胞進一步在該細胞之表面上包含HPV抗原和/或佐劑。
  225. 如申請專利範圍第215至224項中任一項之組成物，其中與該經擾動之輸入細胞一起培育之佐劑的濃度為介於約0.1μM與約1mM之間。
  226. 如申請專利範圍第215至225項中任一項之組成物，其中與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原的濃度為介於約0.1μM與約1mM之間。
  227. 如申請專利範圍第215至226項中任一項之組成物，其中與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原對佐劑之比例係介於約10000：1與約1：10000之間。
  228. 如申請專利範圍第213至227項中任一項之組成物，其中該佐劑為CpG ODN、IFN-α、STING激動劑、RIG-I激動劑或聚I：C。
  229. 如申請專利範圍第228項之組成物，其中該佐劑為CpG ODN。
  230. 如申請專利範圍第229項之組成物，其中該CpG ODN為CpG ODN 1018、CpG ODN 1826或CpG ODN 2006。
  231. 如申請專利範圍第213至230中任一項之組成物，其中該經修飾之免疫細胞包含多於一種之佐劑。
  232. 如申請專利範圍第213至231項中任一項之組成物，其中該HPV抗原為引發針對相同和/或不同HPV抗原之反應的多種多肽之匯集庫。
  233. 如申請專利範圍第232項之組成物，其中在該多種抗原之匯集庫中的抗原不會減低該針對該多種抗原之匯集庫中的其他抗原之免疫反應。
  234. 如申請專利範圍第213至233項中任一項之組成物，其中該HPV抗原為包含抗原性HPV抗原決定部位和一或多個異源肽序列之多肽。
  235. 如申請專利範圍第213至234項中任一項之組成物，其中該HPV抗原與其自身、與其他抗原、或與該佐劑複合。
  236. 如申請專利範圍第213至235項中任一項之組成物，其中該HPV抗原包含HLA-A2特異性抗原決定部位。
  237. 如申請專利範圍第213至236項中任一項之組成物，其中該經修飾之免疫細胞包含濃度介於約0.1μM與約1mM之間之佐劑。
  238. 如申請專利範圍第213至237項中任一項之組成物，其中該經修飾之免疫細胞包含濃度介於約0.1μM與約1mM之間之HPV抗原。
  239. 如申請專利範圍第213至238項中任一項之組成物，其中該HPV抗原對該佐劑之比例係介於約10000：1與約1：10000之間。
  240. 如申請專利範圍第186至239項中任一項之組成物，其中該HPV抗原能夠被加工成第I類MHC限制性肽。
  241. 如申請專利範圍第186至240項中任一項之組成物，其中該HPV抗原能夠被加工成第II類MHC限制性肽。
  242. 如申請專利範圍第186至241項中任一項之組成物，其中該經修飾之免疫細胞進一步包含與不包含該劑之對應的經修飾之免疫細胞相比較，增強該經修飾之免疫細胞的存活力和/或功能之劑。
  243. 如申請專利範圍第242項之組成物，其中該劑為增強胞吞作用之化合物、穩定劑或輔因子。
  244. 如申請專利範圍第242項之組成物，其中該劑為白蛋白。
  245. 如申請專利範圍第244項之組成物，其中該白蛋白為小鼠、牛或人白蛋白。
  246. 如申請專利範圍第242項之組成物，其中該劑為二價金屬陽離子、葡萄糖、ATP、鉀、甘油、海藻糖、D-蔗糖、PEG1500、L-精胺酸、L-麩胺醯胺、或EDTA。
  247. 如申請專利範圍第242項之組成物，其中該劑包含MSA。
  248. 如申請專利範圍第186至247項中任一項之組成物，其中該等細胞被進一步修飾以增加一或多種共刺激分子之表現。
  249. 如申請專利範圍第248項之組成物，其中該共刺激分子為B7-H2(ICOSL)、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、CD70、LIGHT、HVEM、CD40、4-1BBL、OX40L、TL1A、GITRL、CD30L、TIM4、SLAM、CD48、CD58、CD155、或CD112。
  250. 如申請專利範圍第248或249項之組成物，其中該細胞包含導致該一或多種共刺激分子增加表現的核酸。
  251. 如申請專利範圍第186至250項中任一項之組成物，其中該免疫細胞為T細胞、樹突細胞、單核細胞、巨噬細胞、髓樣細胞、粒細胞、嗜中性粒細胞、肥大細胞、天然殺手細胞、先天性淋巴細胞、嗜鹼性粒細胞、或造血前體細胞。
  252. 如申請專利範圍第186至251項中任一項之組成物，其中該免疫細胞不是B細胞。
  253. 如申請專利範圍第186至252項中任一項之組成物，其中該免疫細胞為T細胞。
  254. 如申請專利範圍第253項之組成物，其中該T細胞包含進一步修飾以調節第I類MHC表現。
  255. 如申請專利範圍第253項之組成物，其中該T細胞包含進一步修飾以調節第II類MHC表現。
  256. 如申請專利範圍第254或255項之組成物，其中該T細胞包含進一步修飾以減少第I類MHC和/或第II類MHC表現。
  257. 如申請專利範圍第254或255項之組成物，其中該進一步修飾包含使用siRNA、shRNA、CRISPR/Cas9、ZFN、TALEN、Cre重組酶或大核酸酶減少第I類MHC和/或第II類MHC表現。
  258. 如申請專利範圍第254或255項之組成物，其中該T細胞包含進一步修飾以增加第I類MHC和/或第II類MHC表現。
  259. 如申請專利範圍第254或255項之組成物，其中該進一步修飾包含使用RNA或質體DNA增加第I類MHC和/或第II類MHC表現。
  260. 如申請專利範圍第253至257項中任一項之組成物，其中與在同種異體背景下於個體中之固有之先天性免疫反應對投予不包含該進一步修飾之對應的經修飾之T細胞的反應相比較，在同種異體背景下於個體中之固有之先天性免疫反應對投予該經進一步修飾之T細胞的反應減低。
  261. 如申請專利範圍第253至257項中任一項之組成物，其中與該不包含該進一步修飾之對應的經修飾之T細胞在經投予該T細胞之個體中的循環半衰期相比較，該經進一步修飾之T細胞在經投予該T細胞之個體中的循環半衰期被調節。
  262. 如申請專利範圍第253至261項中任一項之組成物，其中該T細胞包括下列之一或多者：輔助T細胞、細胞毒性T細胞、記憶T細胞、CIK細胞和天然殺手T細胞。
  263. 如申請專利範圍第253至261項中任一項之組成物，其中該T細胞包括下列之一或多者：CD3+T細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞、CD45RA+T細胞、CD45RO+T細胞和γδ-T細胞。
  264. 如申請專利範圍第186至263項中任一項之組成物，其中該經修飾之細胞對該個體而言為同種異體的。
  265. 如申請專利範圍第186至263項中任一項之組成物，其中該經修飾之細胞對該個體而言為自體的。
  266. 如申請專利範圍第186至265項中任一項之組成物，其中該個體經預調理以具有經調節之發炎和/或經調節之免疫反應。
  267. 如申請專利範圍第186至266項中任一項之組成物，其中該組成物進一步包含免疫檢查點抑制劑。
  268. 如申請專利範圍第267項之組成物，其中該免疫檢查點抑制劑係靶向下列之一或多者：PD-1、PD-L1、CTLA-4、LAG3、TIM-3、TIGIT、VISTA、TIM1、B7-H4(VTCN1)或BTLA。
  269. 如申請專利範圍第186至268項中任一項之組成物，其中對個體投予包含該等經修飾之免疫細胞之組成物導致特異於該HPV抗原之細胞毒性T淋巴細胞(CTL)活化和/或擴增。
  270. 如申請專利範圍第186至268項中任一項之組成物，其中對個體投予包含該等經修飾之免疫細胞之組成物導致特異於該抗原之輔助T(Th )細胞活化和/或擴增。
  271. 如申請專利範圍第186至270項中任一項之組成物，其中該組成物之有效量包含介於約1×106 與約1×1012 個之間的經修飾之免疫細胞。
  272. 一種包含抗原之組成物，其中該抗原包含與SEQ ID NO：23具有至少90%相似性之胺基酸序列。
  273. 如申請專利範圍第272項之組成物，其中該抗原包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列。
  274. 一種用於治療或預防個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原和佐劑，其中該佐劑係存在於細胞內； 其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備： a)令包含含有該HPV抗原之輸入細胞的細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該抗原和該佐劑通過以形成經擾動之輸入細胞；和 b)將該經擾動之輸入細胞與該佐劑一起培育足夠之時間以令該佐劑進入該經擾動之輸入細胞； 從而產生該等經修飾之免疫細胞。
  275. 一種用於治療或預防個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予有效量之包含經修飾之免疫細胞之組成物，其中該等經修飾之免疫細胞包含HPV抗原和佐劑，其中該佐劑係存在於細胞內； 其中該等經修飾之免疫細胞係藉由下述步驟製備： a)令包含含有該佐劑之輸入細胞的細胞懸浮液通過細胞變形壓縮器(其中該壓縮器之直徑為該懸浮液中該輸入細胞之直徑的函數)，從而造成該輸入細胞之擾動大到足以令該HPV抗原通過以形成經擾動之輸入細胞；和 b)將該經擾動之輸入細胞與該HPV抗原一起培育足夠之時間以令該HPV抗原進入該經擾動之輸入細胞； 從而產生該等經修飾之免疫細胞。
  276. 如申請專利範圍第274或275項之方法，其中該壓縮器之直徑小於該細胞之直徑。
  277. 如申請專利範圍第274至276項中任一項之方法，其中該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至99%。
  278. 如申請專利範圍第274至277項中任一項之方法，其中該壓縮器之直徑為該細胞之直徑的約20%至小於約60%。
  279. 如申請專利範圍第274至278項中任一項之方法，其中該壓縮器係在通道中。
  280. 如申請專利範圍第274至279項中任一項之方法，其中該變形力係當該輸入細胞通過該壓縮器時施加至該輸入細胞。
  281. 如申請專利範圍第274至280項中任一項之方法，其中該HPV抗原和/或該佐劑係存在於胞質液和/或胞內體中。
  282. 如申請專利範圍第274至281項中任一項之方法，其中該抗原和/或佐劑係存在於該細胞之多個隔室中。
  283. 如申請專利範圍第274項之方法，其中與該經擾動之輸入細胞一起培育之佐劑的濃度為介於約0.1μM與約1mM之間。
  284. 如申請專利範圍第275項之方法，其中與該經擾動之輸入細胞一起培育之HPV抗原的濃度為介於約0.1μM與約1mM之間。
  285. 如申請專利範圍第274至285項中任一項之方法，其中該佐劑為CpG ODN、IFN-α、STING激動劑、RIG-I激動劑或聚I：C。
  286. 如申請專利範圍第285項之方法，其中該佐劑為CpG ODN。
  287. 如申請專利範圍第286項之方法，其中該CpG ODN為CpG ODN 1018、CpG ODN 1826或CpG ODN 2006。
  288. 如申請專利範圍第274至287項中任一項之方法，其中該HPV抗原係源自細胞溶胞產物。
  289. 如申請專利範圍第274至288項中任一項之方法，其中該HPV抗原為HPV-16或HPV-18抗原。
  290. 如申請專利範圍第274至289項中任一項之方法，其中該HPV抗原為HPV E6抗原或HPV E7抗原。
  291. 如申請專利範圍第290項之方法，其中該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至25中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列。
  292. 如申請專利範圍第289項之方法，其中該HPV抗原包含SEQ ID NO：18至25中任一者之胺基酸序列。
  293. 如申請專利範圍第290項之方法，其中該HPV抗原包含與SEQ ID NO：23具有至少90%相似性之胺基酸序列。
  294. 如申請專利範圍第290項之方法，其中該HPV抗原包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列。
  295. 一種用於治療或預防個體中HPV相關疾病之方法，該方法包含對該個體投予與HPV抗原聯結之經修飾的免疫細胞，其中該等經修飾之免疫細胞係藉由包含以下步驟之方法製備： a)將輸入細胞與該HPV抗原和/或該佐劑一起培育足夠之時間以令該HPV抗原與該輸入細胞聯結(associate)； 從而產生與該抗原聯結之經修飾之免疫細胞。
  296. 如申請專利範圍第295項之方法，其中該HPV抗原包含與SEQ ID NO：18至25中任一者具有至少90%相似性之胺基酸序列。
  297. 如申請專利範圍第296項之方法，其中該HPV抗原包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列。
  298. 如申請專利範圍第295至297項中任一項之方法，其中該佐劑為CpG ODN。
  299. 如申請專利範圍第298項之方法，其中該CpG ODN為CpG ODN 1018、CpG ODN 1826或CpG ODN 2006。
  300. 一種包含如申請專利範圍第186至273項中任一項之經修飾之免疫細胞之組成物，其係作為藥物。
  301. 一種包含如申請專利範圍第186至273項中任一項之經修飾之免疫細胞之組成物，其係用於藉由手術、療法或診斷治療人體或動物體之方法。
  302. 一種包含如申請專利範圍第186至273項中任一項之經修飾之免疫細胞之組成物，其係用於癌症、傳染病或病毒相關疾病之治療中。
  303. 一種包含如申請專利範圍第186至273項中任一項之經修飾之免疫細胞之組成物，其中該癌症為頭頸癌、子宮頸癌、外陰癌、陰道癌、陰莖癌、肛門癌、肛周癌、肛門生殖器癌、口腔癌或唾液腺癌。
  304. 一種包含如申請專利範圍第300至303項中任一項之經修飾之免疫細胞之組成物，其中該經修飾之PBMC係在投予免疫檢查點抑制劑之前、同時或之後投予。
  305. 如申請專利範圍第304項之組成物，其中該免疫檢查點抑制劑係靶向PD-1、PD-L1、CTLA-4、LAG3、VISTA和TIM-3中之任一者。
  306. 如申請專利範圍第305項之組成物，其中該免疫檢查點抑制劑係靶向PD-1。
  307. 如申請專利範圍第305項之組成物，其中該免疫檢查點抑制劑係靶向PD-L1。
  308. 如申請專利範圍第300至307項中任一項之組成物，其中該經修飾之PBMC係在投予該治療劑之前、同時或之後投予。
  309. 如申請專利範圍第308項之組成物，其中該治療劑為化學治療劑。
  310. 如申請專利範圍第309項之組成物，其中該傳染病與HIV、HPV、EBV、MCV、HBV或HCV有關。
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