BR112020016008A2 - Composto, método para inibir uma resposta inflamatória em um paciente, método para inibir inflamação em um paciente, método para inibir expressão de interferon ativada por dsdna em um mamífero, método para tratar metástase de câncer em um paciente e formulação farmacêutica - Google Patents

Abstract

são descritos 1-(3,4-di-hidro-1h-pirido[4, 3-b]indol-2(5h)-il)-2-hidróxietanonas. os compostos são inibidores de cgas humana em tipos de células produtoras de interferon. eles são, portanto, úteis como agentes terapêuticos para o tratamento de doenças autoimunes relacionadas a cgas em humanos.

Description

COMPOSTO, MÉTODO PARA INIBIR UMA RESPOSTA INFLAMATÓRIA EM UM PACIENTE, MÉTODO PARA INIBIR INFLAMAÇÃO EM UM PACIENTE, MÉTODO PARA INIBIR EXPRESSÃO DE INTERFERON ATIVADA POR DSDNA EM UM MAMÍFERO, MÉTODO PARA TRATAR METÁSTASE DE CÂNCER EM UM PACIENTE

E FORMULAÇÃO FARMACÊUTICA Campo da invenção

[0001] A invenção refere-se a derivados de 2,3,4,5-tetrahidro- 1H-pirido[4,3-b]indol e, especialmente, 1-(3,4-dihidro-1H- pirido[4,3-b]indol-2(5H)-il)-2-hidroxietanonas, que são inibidores de cGAS humana em tipos importantes de células produtoras de interferon. Eles são, portanto, úteis como agentes terapêuticos para o tratamento de doenças autoimunes relacionadas a cGAS em humanos.

Fundamentos da invenção

[0002] A imunidade inata é considerada uma resposta de primeira linha ao estresse celular que defende a célula hospedeira contra patógenos invasores e que inicia a sinalização para o sistema imune adaptativo. Esses processos são desencadeados por padrões moleculares associados a patógenos (PAMPs) conservados através da detecção por diversos receptores de reconhecimento de padrão (PRRs) e ativação subsequente da expressão gênica de citocinas e de interferon tipo I. As principais células apresentadoras de antígenos, tais como monócitos, macrófagos e células dendríticas produzem interferons e são fundamentais para suscitar respostas de células T e B do sistema imune adaptativo. Os principais PRRs detectam ácidos nucleicos anormais, ou seja, mal localizados, imaturos ou não modificados na superfície celular, no interior de membranas lisossômicos ou no citosol.

[0003] A GMP-AMP sintase cíclica (cGAS/MB21D1) é o sensor predominante de dsDNA citosólico originário de patógenos ou erro de localização (mislocalization) de dsDNA próprio nuclear ou mitocondrial. A ligação de dsDNA a cGAS ativa a síntese de c[G(2’,5’)pA(3’,5’)p], um dinucleotídeo cíclico difusível designado como cGAMP, que se desloca até e ativa a proteína adaptadora ancorada na membrana do retículo endoplasmático, Estimulador de genes para interferon (STING/TMEM173). A proteína STING ativada recruta e ativa a quinase 1 de ligação a TANK (TBK1), a qual, por sua vez, fosforila a família de fatores de transcrição de fatores reguladores de interferons (IRFs) induzindo a expressão do mRNA de citocinas e de interferon tipo I. Interferons tipo I são expressos a partir de mais de dez genes IFNA e um gene IFNB1.

[0004] O papel crítico de cGAS na detecção de dsDNA foi estabelecido em diferentes bactérias patogênicas, vírus e retrovírus. Além disso, cGAS é essencial em vários outros processos biológicos como senescência celular e reconhecimento de micronúcleos rompidos na vigilância de células cancerígenas potenciais.

[0005] Embora a via de cGAS seja importante para a defesa do hospedeiro contra patógenos invasores, o estresse celular e fatores genéticos podem também causar acúmulo de dsDNA próprio no citosol, p. ex., por extravasamento nuclear ou mitocondrial. Isso pode deflagrar respostas autoinflamatórias. A síndrome de

Aicardi-Goutières (AGS), um transtorno autoinflamatório grave mediado pelo sistema imune, semelhante ao lúpus, decorre de uma mutação de perda de função em TREX1, uma DNA exonuclease primária, responsável pela degradação de DNA anormal no citosol. O knockout (silenciamento gênico) de cGAS em camundongos deficientes em TREX1 impediu respostas imunes do contrário letais, apoiando cGAS como alvo farmacológico e promotor de interferonopatias. Do mesmo modo, a letalidade embrionária causada pela deficiência de DNase II, uma endonuclease responsável pela degradação de DNA excessivo em lisossomos durante a endocitose, é completamente resgatada pelo knockout adicional de STING ou cGAS. A inibição de cGAS, portanto, constitui uma estratégia terapêutica importante para prevenção de doenças autoinflamatórias cuja etiologia envolve anticorpos anti-dsDNA. O lúpus eritematoso sistêmico (LES) pode ser uma de tais doenças [Pisetsky, Nat Rev Rheumatol 12, 102–110 (2016)].

[0006] Consequentemente, cGAS e STING atraíram o interesse de biólogos estruturais e químicos medicinais para identificação de inibidores e/ou ativadores. Um esforço de rastreamento in silico usando a estrutura cristalina de cGAS-DNA murino levou à identificação de um fármaco antimalárico de molécula pequena, bem caracterizado, quinacrina, como um inibidor potencial de cGAS [An et al., J. Immunol. 194, 4089–4093 (2015)]. No entanto, quinacrina, um conhecido intercalador de DNA, demonstrou afetar indiretamente a atividade de cGAS ao perturbar a conformação de dsDNA e não conseguir ativar a enzima em vez de ligar-se diretamente e inibir a enzima. Além disso, um efeito considerável fora do alvo foi observado através de sua interferência com a via RIG-I.

[0007] Inibidores de moléculas pequenas que sejam específicas para cGAS seriam de grande valor no tratamento de doenças que decorram da atividade inadequada de cGAS e da atividade indesejada resultante de interferon tipo I. Exemplos de tais doenças autoimunes incluem síndrome de Aicardi-Goutières (AGS) e lúpus eritematoso sistêmico (LES), uma doença autoimune sistêmica crônica complexa que acomete mais de 1,5 milhão de americanos. Os tratamentos atuais para LES envolvem esquemas imunossupressores associados com efeitos colaterais debilitantes. Outras possíveis utilidades relacionadas à supressão da atividade indesejada de interferon tipo I incluiriam o tratamento da doença inflamatória intestinal (DII). Além disso, a supressão da via não canônica de cGAS dependente da sinalização de NF-kB pode interferir com o processo de metástase do câncer [Bakhoum et al., Nature 553, 467-472 (2018)].

Sumário da invenção

[0008] Verificou-se agora que derivados de 1-(3,4-dihidro-1H- pirido[4,3-b]indol-2(5H)-il)-2-hidroxietanona são inibidores potentes e específicos de cGAS humana, e que são ativos em tipos de células produtoras de interferon incluindo macrófagos primários humanos.

[0009] Em um aspecto, a invenção refere-se um compostos de Fórmula I:

I em que: R1 é hidrogênio, (C1-C3)alquila, CH2CH2-OR3 ou fluoro(C1- C3)alquila; R2 é hidrogênio, (C1-C3)alquila ou CH2CH2-OR3, ou, considerados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados, R2 e R30 podem formar um anel alifático de 4 a 6 membros; R3 é hidrogênio ou (C1-C3)alquila; R4 é escolhido dentre hidrogênio, halogênio, (C1- C3)alcóxi, heterociclila monocíclico opcionalmente substituído, ciano, fenila opcionalmente substituído, heterociclila bicíclico opcionalmente substituído, amino(C1-C3)alquila, (C1- C3)alquilamino(C1-C3)alquila, (C1-C3)dialquilamino(C1-C3)alquila, (C1-C3)alcóxi(C1-C3)alquila, (C1-C6)hidrocarbila, heterociclil(C1-C3)alquila, benzila, benzila substituído com heterociclila, (C1-C3)alquilaminocarbonila, (C1-C3)acilamino; em que: o referido heterociclila monocíclico opcionalmente substituído pode ser substituído com um ou mais substituintes escolhidos dentre: (C1-C3)alquila, amino, ciano, (C1-

C3)alquilamino, (C1-C3)alcóxi, oxo, fluoro(C1-C3)alquila, halogênio, hidróxi e hidroxi(C1-C3)alquila; o referido fenila opcionalmente substituído pode ser substituído com um ou mais substituintes escolhidos dentre: amino, (C1-C3)alquilamino, meta-(C1-C3)dialquilamino, (C1- C3)alcóxi, hidroxi, halogênio, orto-ciano, meta-ciano, aminocarbonila, metilenodioxi, etilenodioxi, (C1-C3)acilamino, fluoro(C1-C3)acilamino e hidroxi(C1-C3)alquilaminossulfonila; e o referido heterociclila bicíclico opcionalmente substituído pode ser substituído com um ou mais substituintes escolhidos dentre: (C1-C3)alquila, hidróxi e oxo; R5 é escolhido dentre hidrogênio, halogênio, (C1- C3)alquila, (C1-C3)alcóxi, fluoro(C1-C3)alquila, fluoro(C1-

C3)alcóxi, ciano e ; R6 é escolhido dentre hidrogênio, halogênio, ciano, - C≡CH, -CH=CH2, metila e trifluorometila; R7 é escolhido dentre hidrogênio, halogênio, (C1- C3)alcóxi, fluoro(C1-C3)alcóxi, ciano, (C1-C3)alquila e fluoro(C1- C3)alquila; R20 é hidrogênio ou (C1-C3)alquila, ou, considerados junto com o carbono ao qual estão ligados, R20 e R21 podem formar um anel carbocíclico alifático de 3 a 5 membros; R21 é hidrogênio ou (C1-C3)alquila, ou, considerados junto com o carbono ao qual estão ligados, R21 e R20 podem formar um anel carbocíclico alifático de 3 a 5 membros; R30 é hidrogênio, ou, considerados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados, R30 e R2 podem formar um anel alifático de 4 a 6 membros; e n é 1 ou 2; com as condições de que: (1) quando R2 for (C1-C3)alquila, nem todos dentre R4, R5, R6 e R7 podem ser hidrogênio; (2) quando R1 for hidrogênio, R2 for metila e R5 for halogênio, R7 não pode ser H ou cloro; e (3) quando R2 for (C1-C3)alquila e R5 for metóxi ou carbóxi, R7 não pode ser H.

[0010] Em um aspecto, a invenção refere-se a um método para inibir uma resposta inflamatória em um paciente, o qual compreende administrar um composto de fórmula (II):

II em que: R1 é hidrogênio, (C1-C3)alquila, CH2CH2-OR3 ou fluoro(C1- C3)alquila; R2 é hidrogênio ou (C1-C3)alquila, CH2CH2-OR3, ou, considerados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados, R2 e R30 podem formar um anel alifático de 4 a 6 membros; R3 é hidrogênio ou (C1-C3)alquila; R4 é escolhido dentre hidrogênio, halogênio, (C1- C3)alcóxi, heterociclila monocíclico opcionalmente substituído,

ciano, fenila opcionalmente substituído, heterociclila bicíclico opcionalmente substituído, amino(C1-C3)alquila, (C1- C3)alquilamino(C1-C3)alquila, (C1-C3)dialquilamino(C1-C3)alquila, (C1-C3)alcoxi(C1-C3)alquila, (C1-C6)hidrocarbila, heterociclil(C1-C3)alquila, benzila, benzila substituído com heterociclila, (C1-C3)alquilaminocarbonila, (C1-C3)acilamino; em que: o referido heterociclila monocíclico opcionalmente substituído pode ser substituído com um ou mais substituintes escolhidos dentre: (C1-C3)alquila, amino, ciano, (C1- C3)alquilamino, (C1-C3)alcóxi, oxo, fluoro(C1-C3)alquila, halogênio, hidróxi e hidroxi(C1-C3)alquila; o referido fenila opcionalmente substituído pode ser substituído com um ou mais substituintes escolhidos dentre: amino, (C1-C3)alquilamino, meta-(C1-C3)dialquilamino, (C1- C3)alcóxi, hidróxi, halogênio, orto-ciano, meta-ciano, aminocarbonila, metilenodioxi, etilenodioxi, (C1-C3)acilamino, fluoro(C1-C3)acilamino e hidroxi(C1-C3)alquilaminossulfonila; e o referido heterociclila bicíclico opcionalmente substituído pode ser substituído com um ou mais substituintes escolhidos dentre: (C1-C3)alquila, hidróxi e oxo; R5 é escolhido dentre hidrogênio, halogênio, (C1- C3)alquila, (C1-C3)alcóxi, fluoro(C1-C3)alquila, fluoro(C1-

C3)alcóxi, ciano e ; R6 é escolhido dentre hidrogênio, halogênio, ciano, - C≡CH, -CH=CH2, metila e trifluorometila;

R7 é escolhido dentre hidrogênio, halogênio, (C1- C3)alcóxi, fluoro(C1-C3)alcóxi, ciano, (C1-C3)alquila e fluoro(C1- C3)alquila; R20 é hidrogênio ou (C1-C3)alquila, ou, considerados junto com o carbono ao qual estão ligados, R20 e R21 podem formar um anel carbocíclico alifático de 3 a 5 membros; R21 é hidrogênio ou (C1-C3)alquila, ou, considerados junto com o carbono ao qual estão ligados, R21 e R20 podem formar um anel carbocíclico alifático de 3 a 5 membros; R30 é hidrogênio, ou, considerados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados, R30 e R2 podem formar um anel alifático de 4 a 6 membros; e n é 1 ou 2.

[0011] Em outro aspecto, a invenção refere-se a um método para inibir a expressão de interferon desencadeada por dsDNA em um paciente com um composto conforme aqui descrito.

[0012] Em outro aspecto, a invenção refere-se a um método para tratar metástase de câncer em um paciente com um composto conforme aqui descrito.

[0013] Em outro aspecto, a invenção refere-se a composições farmacêuticas que compreendem um veículo farmaceuticamente aceitável e um composto conforme aqui descrito.

Descrição detalhada da invenção

[0014] Em um aspecto da composição, a invenção refere-se um compostos de Fórmula I:

I como descrito acima.

[0015] Em algumas modalidades, R1 é hidrogênio. Em outras modalidades, R1 é um grupo (C1-C3)alquila, especialmente, metila. Em ainda outras modalidades, R1 é CH2CH2-OR3, em que R3 é escolhido dentre hidrogênio e (C1-C3)alquila. Em outras modalidades ainda, R1 é um grupo fluoro(C1-C3)alquila.

[0016] Em algumas modalidades, R2 é hidrogênio. Em outras modalidades, R2 é um grupo (C1-C3)alquila, especialmente, metila. Em ainda outras modalidades, R2 é CH2CH2-OR3, em que R3 é novamente escolhido dentre hidrogênio e (C1-C3)alquila. Em outras modalidades ainda, R2 e R30 formam um anel alifático de 4 a 6 membros.

[0017] Em algumas modalidades, R4 é hidrogênio. Em outras modalidades, R4 é um halogênio. Em ainda outras modalidades, R4 é (C1-C3)alcóxi. Em outras modalidades ainda, R4 é ciano.

[0018] Em algumas modalidades, R4 é um anel heterociclila monocíclico opcionalmente substituído. Em outras modalidades, R4 é um anel fenila opcionalmente substituído. Em ainda outras modalidades, R4 é um anel heterociclila bicíclico opcionalmente substituído. Em outras modalidades ainda, R4 é um grupo amino(C1- C3)alquila.

[0019] Para algumas modalidades em que R4 é um anel heterociclila monocíclico opcionalmente substituído, os referidos substituintes opcionais são escolhidos entre um ou mais dentre: um (C1-C3)alquila, grupo amino, um substituinte ciano, um grupo (C1-C3)alquilamino, um grupo (C1-C3)alcóxi, um substituinte oxo, um grupo fluoro(C1-C3)alquila, um substituinte halogênio, um substituinte hidróxi e um grupo hidroxi(C1- C3)alquila.

[0020] Para algumas modalidades em que R4 é um anel heterociclila monocíclico opcionalmente substituído, o referido anel heterociclila monocíclico é um anel heteroarila monocíclico opcionalmente substituído. Para algumas dessas modalidades, os referidos substituintes opcionais são escolhidos entre um ou mais dentre: um substituinte amino, um substituinte halogênio, um grupo metila, um grupo difluorometila, um grupo metóxi e um substituinte ciano.

[0021] Para algumas modalidades em que R4 é um anel heteroarila monocíclico opcionalmente substituído, o anel heteroarila monocíclico é escolhido dentre furano, tiofeno, pirrol, pirazol, oxazol, oxadiazol, tiazol, isoxazol, isotiazol, imidazol, triazol, piridina, pirimidina, pirazina e piridazina.

[0022] Em algumas modalidades em que R4 é um anel heteroarila monocíclico opcionalmente substituído, o anel heteroarila monocíclico substituído é , em que R50 é (C1- C3)alquila ou fluoro(C1-C3)alquila. Para algumas dessas modalidades, R4 é .

[0023] Para as modalidades em que R4 é um anel fenila opcionalmente substituído, os referidos substituintes opcionais são escolhidos entre um ou mais dentre: um substituinte amino (especialmente, para-amino), um grupo (C1-C3)alquilamino, um grupo meta-(C1-C3)dialquilamino, um grupo (C1-C3)alcóxi (especialmente, metóxi), um substituinte hidróxi (especialmente, orto- ou meta-hidróxi), um substituinte halogênio (especialmente, flúor), um substituinte orto-ciano, um substituinte meta-ciano, um grupo aminocarbonila (especialmente, meta-aminocarbonila), um anel 1,2-metilenodioxi, um anel 1,2- etilenodioxi, um grupo (C1-C3)acilamino, um grupo fluoro(C1- C3)acilamino e um grupo hidroxi(C1-C3)alquilaminossulfonila.

[0024] Para as modalidades em que R4 é um anel heterociclila bicíclico opcionalmente substituído, os referidos substituintes opcionais são escolhidos entre um ou mais dentre: um grupo (C1- C3)alquila, um substituinte hidróxi e um substituinte oxo.

[0025] Para algumas modalidades em que R4 é um anel heterociclila bicíclico opcionalmente substituído, o anel heterociclila bicíclico é escolhido dentre: indol, isoindol, benzimidazol, benzofurano, benzotiofeno, benzo-oxadiazol, benzotiazol, pirazol-piridina, quinolina, isoquinolina, quinazolina, quinoxalina, benzodioxol, dihidrobenzo-oxazina e purina.

[0026] Em algumas modalidades, R4 é um grupo (C1- C3)alquilamino(C1-C3)alquila. Em outras modalidades, R4 é um grupo (C1-C3)dialquilamino(C1-C3)alquila. Em ainda outras modalidades, R4 é um grupo (C1-C3)alcóxi(C1-)alquila. Em outras modalidades ainda, R4 é um grupo (C1-C6)hidrocarbila.

[0027] Em algumas modalidades, R4 é um grupo heterociclil(C1- C3)alquila. Em outras modalidades, R4 é um grupo benzila. Em ainda outras modalidades, R4 é um grupo benzila substituído com heterociclila. Em outras modalidades ainda, R4 é um grupo (C1- C3)alquilaminocarbonila ou (C1-C3)acilamino.

[0028] Em algumas modalidades, R5 é hidrogênio. Em outras modalidades, R5 é um substituinte halogênio. Em ainda outras modalidades, R5 é um grupo (C1-C3)alquila. Em outras modalidades ainda, R5 é um grupo (C1-C3)alcóxi.

[0029] Em algumas modalidades, R5 é um grupo fluoro(C1- C3)alquila, especialmente, trifluorometila. Em outras modalidades, R5 é um grupo fluoro(C1-C3)alcóxi, Em ainda outras modalidades, R5 é um substituinte ciano. Em outras modalidades ainda, R5 é .

[0030] Em algumas modalidades, R6 é hidrogênio. Em outras modalidades, R6 é um substituinte halogênio, especialmente,

bromo, cloro ou flúor. Em ainda outras modalidades, R6 é um substituinte ciano, de preferência quando R7 não é um substituinte ciano também. Em outras modalidades ainda, R6 é escolhido dentre um grupo -C≡CH, -CH=CH2, metila e trifluorometila.

[0031] Em algumas modalidades, R7 é hidrogênio. Em outras modalidades, R7 é um substituinte halogênio, especialmente cloro ou flúor. Em ainda outras modalidades, R7 é um substituinte ciano, de preferência quando R6 não é um substituinte ciano também. Em outras modalidades ainda, R7 é um grupo (C1-C3)alcóxi, especialmente metóxi.

[0032] Em algumas modalidades, R7 é um grupo fluoro(C1- C3)alcóxi. Em outras modalidades, R7 é um grupo (C1-C3)alquila. Em ainda outras modalidades, R7 é um grupo fluoro(C1-C3)alquila, especialmente trifluorometila.

[0033] Em algumas modalidades, R20 é hidrogênio. Em outras modalidades, R20 é um grupo (C1-C3)alquila, especialmente metila. Em algumas modalidades, R21 é hidrogênio. Em outras modalidades, R21 é um grupo (C1-C3)alquila, especialmente metila. Em algumas modalidades, R20 e R21, junto com o carbono ao qual estão ligados formam um anel carbocíclicos alifático de 3 a 5 membros.

[0034] Em algumas modalidades, R30 é hidrogênio. Em outras modalidades, R30 e R2 formam um anel alifático de 4 a 6 membros.

[0035] Em algumas modalidades, n é 1. Em outras modalidades, n é 2.

[0036] Em suma, a invenção refere-se a:

[0037] [1] Um composto de Fórmula I ou II.

[0038] [2] Um composto de acordo com [1] acima em que R1 é hidrogênio.

[0039] [3] Um composto de acordo com [1] acima em que R1 é (C1- C3)alquila.

[0040] [4] Um composto de acordo com [1] acima em que R1 é CH2CH2-OR3 e R3 é escolhido dentre hidrogênio e (C1-C3)alquila.

[0041] [5] Um composto de acordo com [1] acima em que R1 é um grupo fluoro(C1-C3)alquila.

[0042] [6] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [5] acima em que R2 é hidrogênio.

[0043] [7] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [5] acima em que R2 é (C1-C3)alquila.

[0044] [8] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [5] acima em que R2 é CH2CH2-OR3 e R3 é escolhido dentre hidrogênio e (C1-C3)alquila.

[0045] [9] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [8] acima em que R4 é hidrogênio.

[0046] [10] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [8] acima em que R4 é halogênio.

[0047] [11] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [8] acima em que R4 é (C1-C3)alcóxi.

[0048] [12] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [8] acima em que R4 é ciano.

[0049] [13] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [8] acima em que R4 é um anel heterociclila monocíclico opcionalmente substituído, os referidos substituintes opcionais são escolhidos entre um ou mais dentre: um (C1-C3)alquila, grupo amino, um substituinte ciano, um grupo (C1-C3)alquilamino, um grupo (C1- C3)alcóxi, um substituinte oxo, um grupo fluoro(C1-C3)alquila, um substituinte halogênio, um substituinte hidróxi e um grupo hidroxi(C1-C3)alquila.

[0050] [14] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [8] acima em que R4 é um anel fenila opcionalmente substituído, os referidos substituintes opcionais são escolhidos entre um ou mais dentre: um substituinte amino (especialmente para-amino), um grupo (C1-C3)alquilamino, um grupo meta-(C1-C3)dialquilamino, um grupo (C1-C3)alcóxi (especialmente metóxi), um substituinte hidróxi (especialmente orto- ou meta-hidroxi), um substituinte halogênio (especialmente flúor), um substituinte orto-ciano, um substituinte meta-ciano, um grupo aminocarbonila (especialmente meta-aminocarbonila), um anel 1,2-metilenodioxi, um anel 1,2- etilenodioxi, um grupo (C1-C3)acilamino, um grupo fluoro(C1- C3)acilamino e um grupo hidroxi(C1-C3)alquilaminossulfonila.

[0051] [15] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [8] acima em que R4 é um anel heterociclila bicíclico opcionalmente substituído, os referidos substituintes opcionais são escolhidos entre um ou mais dentre: um grupo (C1-C3)alquila, um substituinte hidróxi e um substituinte oxo.

[0052] [16] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [8] acima em que R4 é um grupo amino(C1-C3)alquila.

[0053] [17] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [8] acima em que R4 é um anel heteroarila monocíclico opcionalmente substituído, os referidos substituintes opcionais são escolhidos entre um ou mais dentre: um substituinte amino, um substituinte halogênio, um grupo metila, um grupo difluorometila, um grupo metóxi e um substituinte ciano.

[0054] [18] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [8],

[13] e [17] acima em que R4 é um anel heteroarila monocíclico opcionalmente substituído escolhido dentre furano, tiofeno, pirrol, pirazol, oxazol, oxadiazol, tiazol, isoxazol, isotiazol, imidazol, triazol, piridina, pirimidina, pirazina e piridazina.

[0055] [19] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [8],

[13] e [17]-[18] acima em que R4 é , em que R50 é (C1- C3)alquila ou fluoro(C1-C3)alquila.

[0056] [20] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [8],

[13] e [17]-[18] acima em que R4 é .

[0057] [21] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [8] acima em que R4 é um grupo (C1-C3)alquilamino(C1-C3)alquila.

[0058] [22] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [8] acima em que R4 é um grupo (C1-C3)dialquilamino(C1-C3)alquila.

[0059] [23] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [8] acima em que R4 é um grupo (C1-C3)alcóxi(C1-C3)alquila.

[0060] [24] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [23] acima em que R5 é hidrogênio.

[0061] [25] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [23] acima em que R5 é um substituinte halogênio.

[0062] [26] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [23] acima em que R5 é um grupo (C1-C3)alquila.

[0063] [27] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [23] acima em que R5 é um grupo (C1-C3)alcóxi.

[0064] [28] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [23] acima em que R5 é um grupo fluoro(C1-C3)alquila.

[0065] [29] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [23] acima em que R5 é um grupo fluoro(C1-C3)alcóxi.

[0066] [30] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [23] acima em que R5 é um substituinte ciano.

[0067] [31] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [30] acima em que R6 é hidrogênio.

[0068] [32] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [30] acima em que R6 é bromo, flúor ou cloro.

[0069] [33] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [30] acima em que R6 é um substituinte ciano.

[0070] [34] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [33] acima em que R7 é hidrogênio.

[0071] [35] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [33] acima em que R7 é flúor ou cloro.

[0072] [36] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [33] acima em que R7 é um substituinte ciano.

[0073] [37] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [36] acima em que R20 é hidrogênio.

[0074] [38] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [36] acima em que R20 é um grupo metila.

[0075] [39] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [36] acima em que R21 é hidrogênio.

[0076] [40] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [36] acima em que R21 é um grupo metila.

[0077] [41] Um composto de acordo com qualquer um de [1] a [36] acima em que R20 e R21, junto com o carbono ao qual estão ligados, formam um anel carbocíclico alifático de 3 a 5 membros.

[0078] Por todo este relatório descritivo, os termos e substituintes retêm suas definições. A descrição aqui fornecida usa certos termos conhecidos nas técnicas químicas. A menos que especificado de outra forma por toda a presente descrição, os termos retêm seus significados como entendidos por qualquer técnico no assunto.

[0079] Neste relatório descritivo, os termos “compreender” e “incluir” ou suas variantes gramaticais devem ser tomados de modo a especificar as características, números inteiros, etapas ou componentes declarados, mas não impedem a adição de um ou mais características, números inteiros, etapas, componentes ou grupos adicionais dos mesmos. Esse termo abrange os termos “consistir em” e “consistir essencialmente em”. A expressão “consistir essencialmente em” ou suas variantes gramaticais, neste relatório descritivo, devem ser tomados de modo a especificar as características, números inteiros, etapas ou componentes declarados, mas não impedem a adição de um ou mais características, números inteiros, etapas, componentes ou grupos adicionais dos mesmos, mas somente se as características, números inteiros, etapas, componentes ou grupos adicionais dos mesmos não alterarem materialmente as características básicas e inovadoras da composição ou método reivindicado.

[0080] Neste relatório descritivo, os termos “compreender” (e qualquer forma de compreender, como “compreende” e “compreendendo”), “ter” (e qualquer forma de ter, como “tem” e “tendo”), “incluir” (e qualquer forma de incluir, como “inclui” e “incluindo”) e “conter” (e qualquer forma de conter, como “contém” e “contendo”) são verbos de ligação abertos. Como resultado, um método que “compreende”, “tem”, “inclui” ou “contém” um ou mais etapas ou elementos possui aquelas uma ou mais etapas ou elementos, mas não está limitado a possuir somente aquelas umas um ou mais etapas ou elementos.

[0081] “Hidrocarboneto” (ou “hidrocarbila” quando é um resíduo) inclui alquila, cicloalquila, policicloalquila, alquenila, alquinila, arila e combinações dos mesmos. Os exemplos incluem benzila, fenetila, ciclohexilmetila, adamantila, canforila e naftiletila. Hidrocarbila refere-se a qualquer substituinte composto por hidrogênio e carbono como os únicos constituintes elementares. Um prefixo como “Cx-Cy” ou “(Cx-Cy)” indica que o grupo após o prefixo contém x a y átomos de carbono. Por exemplo, a “C1 a C20 hidrocarboneto” indica um hidrocarboneto com 1 a 20 átomos de carbono. Hidrocarbonetos alifáticos são hidrocarbonetos que não são aromáticas; eles podem ser saturados ou insaturados, cíclicos, lineares ou ramificados. Os exemplos de hidrocarbonetos alifáticos incluem isopropila, 2-butenila, 2- butinila, ciclopentila, norbornila etc. Hidrocarbonetos aromáticos incluem benzeno (fenila), naftaleno (naftila), antraceno etc.

[0082] A menos que especificado de outra forma, alquila (ou alquileno quando bivalente) destina-se a incluir estruturas de hidrocarbonetos saturados lineares ou ramificados e combinações dos mesmos. A menos que definido de outra forma, “alquila” refere-se a grupos alquila de 1 a 20 átomos de carbono, de preferência 1 a 10 átomos de carbono, mais preferivelmente 1 a 6 átomos de carbono. Os exemplos de grupos alquila incluem metila, etila, propila, isopropila, n-butila, s-butila, t-butila e similares.

[0083] Cicloalquila é um subconjunto de hidrocarbonetos e incluir grupos hidrocarbonetos cíclicos de 3 a 8 átomos de carbono. Os exemplos de grupos cicloalquila incluem ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, norbornila e similares.

[0084] A menos que especificado de outra forma, o termo “carbociclo” destina-se a incluir sistemas de anel nos quais os átomos no anel são todos de carbono, mas em qualquer estado de oxidação. Assim, (C3-C10) carbociclo refere-se a sistemas não aromáticos e aromáticos, incluindo sistemas tais como ciclopropano, benzeno e ciclohexeno; (C8-C12) carbopoliciclo refere-se a sistemas tais como norbornano, decalina, indano e naftaleno. Carbociclo, se não limitado de outra forma, refere- se a monociclos, biciclos e policiclos.

[0085] Heterociclo significa um resíduo de carbociclo alifático ou aromático no qual de um a quatro carbonos foram substituídos por um heteroátomo selecionado a partir do grupo que consiste em N, O e S. A menos que especificado de outra forma, um heterociclo pode ser não aromático (heteroalifático) ou aromático (heteroarila). Os exemplos de heterociclos incluem pirrolidina, pirazol, pirrol, indol, quinolina, isoquinolina, tetrahidroisoquinolina, benzofurano, benzodioxano, benzodioxol (comumente referido como metilenodioxifenila, quando ocorrido em um substituinte), tetrazol, morfolina, tiazol, piridina, piridazina, pirimidina, tiofeno, furano, oxazol, oxazolina, isoxazol, dioxano, tetrahidrofurano e similares. Os exemplos de resíduos de heterociclila incluem piperazinila, piperidinila, pirazolidinila, imidazolila, imidazolinila, imidazolidinila, pirazinila, oxazolidinila, isoxazolidinila, tiazolidinila, isotiazolila, quinuclidinila, isotiazolidinila, benzimidazolila, tiadiazolila, benzopiranila, benzotiazolila, benzoxazolila, tetrahidrofurila, tetrahidropiranila, tienila (também chamado historicamente de tiofenila), benzotienila, tiamorfolinila, oxadiazolila, triazolila e tetrahidroquinolinila.

[0086] Heterociclila monocíclico ou heterociclo monocíclico significa um heterociclo aromático ou não aromático composto por um único anel. Os exemplos de heterociclos monocíclicos incluem furano, tiofeno, pirrol, pirazol, oxazol, oxadiazol, tiazol, isoxazol, isotiazol, imidazol, triazol, piridina, pirimidina, pirazina e piridazina. Heterociclila bicíclico significa um heterociclo aromático ou não aromático composto por dois anéis fundidos, em que um ou os dois anéis contém um heteroátomo. Assim heterociclila bicíclico inclui estruturas bicíclicas fundidas que não possuem heteroátomo em um anel, mas que contêm um ou mais heteroátomos no outro anel. Nenhum anel precisa ser aromático, mas um ou os dois anéis podem ser aromáticos. No entanto, se pelo menos um anel for aromático, então, o heterociclila bicíclico é considerado aromático. Os exemplos de heterociclos bicíclicos incluem indol, isoindol, benzimidazol, benzofurano, benzotiofeno, benzo-oxadiazol, benzotiazol, pirazol-piridina, quinolina, isoquinolina, quinazolina, quinoxalina, benzodioxol, dihidrobenzooxazina e purina.

[0087] Hidrocarbiloxi refere-se a grupos de 1 a 20 átomos de carbono, de preferência 1 a 10 átomos de carbono, mais preferivelmente 1 a 6 átomos de carbono, anexados à estrutura parental através de um oxigênio. Alcóxi é um subconjunto de hidrocarbiloxi e inclui grupos de configuração linear ou ramificada. Os exemplos incluem metóxi, etóxi, propóxi, isopropoxi e similares. Alcóxi inferior refere-se a grupos contendo um a quatro carbonos. O termo “halogênio” significa átomos de flúor, cloro, bromo ou iodo.

[0088] A menos que especificado de outra forma, acila refere- se a formila e a grupos de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 e 8 átomos de carbono de configuração linear, ramificada, cíclica, saturados, insaturados, aromáticos e combinações destes, anexados à estrutura parental através de uma funcionalidade carbonila. Os exemplos incluem acetila, benzoíla, propionila, isobutirila e similares. Acila inferior refere-se a grupos contendo um a quatro carbonos.

[0089] Neste relatório descritivo, o termo “opcionalmente substituído” pode ser usado alternadamente com “não substituído ou substituído”. O termo “substituído” refere-se à substituição de um ou mais átomos de hidrogênio em um grupo especificado com um radical especificado. Por exemplo, alquila, arila, cicloalquila, heterociclila substituído etc. referem ao alquila, arila, cicloalquila ou heterociclila no qual um ou mais átomos H em cada resíduo são substituídos por halogênio, haloalquila, alquila, acila, alcoxialquila, hidroxi-alquila inferior, carbonila, fenila, heteroarila, benzenossulfonila, hidróxi, alcóxi inferior, haloalcoxi, oxa-alquila, carbóxi, alcoxicarbonila [-C(=O)O-alquila], alcoxicarbonilamino [HNC(=O)O-alquila], aminocarbonila (também conhecido como carboxamido) [-C(=O)NH2], oxo [=O], alquilaminocarbonila [- C(=O)NH-alquila], ciano, acetóxi, nitro, amino, alquilamino, dialquilamino, (alquil)(aril)aminoalquila, alquilaminoalquila (incluindo cicloalquilaminoalquila), dialquilaminoalquila, dialquilaminoalcoxi, heterociclilalcoxi, mercapto, alquiltio, sulfóxido, sulfona, sulfonilamino, alquilsulfinila, alquilsulfonila, acilaminoalquila, acilaminoalcoxi, acilamino, amidino, arila, benzila, heterociclila, heterociclilalquila, fenóxi, benziloxi, heteroariloxi, hidróxi-imino, alcóxi-imino, oxa-alquila, aminosulfonila, tritila, amidino, guanidino, ureído, benziloxifenila e benziloxi. Em uma modalidade, 1, 2 ou 3 átomos de hidrogênio são substituídos por um radical especificado. No caso de alquila e cicloalquila, mais de três átomos de hidrogênio podem ser substituídos por flúor; de fato, todos os átomos disponíveis de hidrogênio poderiam ser substituídos por flúor.

[0090] Rn substituintes são em geral definidos quando introduzidos e retêm essa definição por todo o relatório descritivo e em todas as reivindicações independentes.

[0091] A preparação de compostos pode envolver a proteção e desproteção de vários grupos químicos. A necessidade de proteção e desproteção, e a seleção de grupos protetores adequados, pode ser rapidamente determinada pelo técnico no assunto. Grupos adequados para essa finalidade são discutidos em livros-texto padrão no campo da química, tais como Protective Groups in Organic Synthesis por T.W.Greene e P.G.M.Wuts [John Wiley & Sons, Nova York, 1999], em Protecting Group Chemistry, 1a Ed., Oxford University Press, 2000; e em March’s Advanced Organic chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 5a Ed., Wiley-Interscience Publication, 2001.

[0092] Um ou mais compostos aqui descritos contêm até dois centros assimétricos e podem, portanto, dar origem a enantiômeros, diastereoisômeros e outras formas estereoisoméricas que podem ser definidas em termos de estereoquímica absoluta como (R)- ou (S)-. A presente invenção destina-se a incluir todos tais isômeros possíveis como racematos, formas opticamente puras e misturas de intermediários. Isômeros opticamente puros podem ser preparados utilizando síntons homoquirais ou reagentes homoquirais, ou resolvidos opticamente por técnicas convencionais tais como cromatografia quiral. Todas as formas tautoméricas destinam-se a ser incluídas. As representações gráficas de compostos racêmicos, ambiescalêmicos e escalêmicos ou enantiomericamente puros aqui usados são extraídos de Maehr J. Chem. Ed. 62, 114- 120 (1985): linhas simples, únicas em negrito transmitem conectividade somente e nenhuma implicação estereoquímica; cunhas sólidas e quebradas são usadas para indicar a configuração absoluta de um elemento quiral; linhas onduladas indicam a negação explícita de qualquer implicação estereoquímica que a ligação por ela representada possa gerar; linhas sólidas e quebradas em negrito são descritores geométricos indicando a configuração relativa mostrada, mas não implicam configurações absolutas; e os contornos de cunhas ou linhas tracejadas ou quebradas denotam compostos enantiomericamente puros de configuração absoluta indeterminada. Enantiomericamente puro significa superior a 80 e.e. e, de preferência superior a 90 e.e.

[0093] Por exemplo, uma estrutura genérica representando compostos exemplares da invenção é apresentada abaixo, em que R21 é hidrogênio:

Essa estrutura contém um único centro assimétrico (marcado com um asterisco). Em uma modalidade, essa estrutura pode ser representada como: . Essa representação indica somente a conectividade referente aos átomos ligados ao centro quiral. O composto representado nesse caso pode ser qualquer mistura dos enantiômeros R e S, de 100% R a 100% S, e qualquer proporção intermediária.

[0094] Os enantiômeros individuais são desenhados como segue: . Quando R20 é (C1-C3)alquila, a estrutura à esquerda indica que o composto está enantiomericamente enriquecido com o enantiômero S (S:R superior a 90:10 ou S > 80% e.e.) e a estrutura à direita indica que o composto está enantiomericamente enriquecido com o enantiômero R (R:S superior a 90:10 ou R > 80%

e.e.). Para estruturas representadas usando essa convenção, a configuração absoluta é reconhecida como aquela mostrada.

[0095] Quando a estereoquímica absoluta não é conhecida, mas os compostos são reconhecidos como enantiomericamente enriquecidos (> 80% e.e.), as estruturas são desenhadas como segue: . Para essas estruturas usando essa convenção, os compostos estão enantiomericamente enriquecidos (> 80% e.e.), mas a estereoquímica absoluta é desconhecida. Tudo que se sabe é que os principais isômeros são imagens especulares um do outro no e.e. especificado. Essa situação é tipicamente o resultado da exposição a um ambiente quiral que leva ao enriquecimento enantiomérico.

[0096] Neste relatório descritivo, os termos “tratamento” ou “tratar,” ou “atenuar” ou “melhorar” referem-se a uma abordagem para obter resultados benéficos ou desejados, incluindo, entre outros, benefício terapêutico e/ou benefício profilático. Por benefício terapêutico, entende-se erradicação ou melhora do transtorno subjacente em tratamento. Além disso, um benefício terapêutico é alcançado com a erradicação ou melhora de um ou mais dos sistemas fisiológicos associados com o transtorno subjacente, de tal modo que uma melhoria é observada no paciente,

não obstante o fato de que o paciente possa ainda estar acometido pelo transtorno subjacente. Especialmente, no caso de tratamento de LES, são consideradas as pré-disposições familiares. Assim, se, em uma família com três filhos, dois destes apresentarem LES e anticorpos anti-dsDNA e o terceiro filho exibir anticorpos contra dsDNA, mas não manifestar ainda sintomas da doença, os médicos tratariam a criança assintomática por causa do histórico genético.

[0097] Neste relatório descritivo, e como seria entendido pelo técnico no assunto, a menção a “um composto” – a menos que expressamente limitado mais – pretende incluir sais daquele composto. Em uma modalidade específica, o termo “composto de fórmula” refere-se ao composto ou a um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0098] O termo “sal farmaceuticamente aceitável” refere-se aos sais preparados a partir de ácidos ou bases não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis, incluindo ácidos e bases inorgânicos e ácidos e bases orgânicos. Quando os compostos da presente invenção são básicos – como o são na maioria dos casos – os sais podem ser preparados a partir de ácidos não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis, incluindo ácidos inorgânicos e orgânicos. Os sais farmaceuticamente aceitáveis adequados da adição de ácidos para os compostos da presente invenção incluem ácido acético, adípico, algínico, ascórbico, aspártico, benzenossulfônico (besilato), benzoico, bórico, butírico, canfórico, canfossulfônico, carbônico, cítrico, etanodissulfônico, etanossulfônico, etilenodiaminotetracético, fórmico, fumárico, glicoheptônico, glucônico, glutâmico,

bromídrico, clorídrico, iodídrico, hidroxinaftoico, isetiônico, láctico, lactobiônico, laurilsulfônico, maleico, málico, mandélico, metanossulfônico, múcico, naftilenossulfônico, nítrico, oleico, pamoico, pantotênico, fosfórico, piválico, poligalacturônico, salicílico, esteárico, succínico, sulfúrico, tânico, tartárico, teoclático, p-toluenossulfônico e similares. Quando os compostos contiverem uma funcionalidade ácida (p. ex., -SO3H), os sais farmaceuticamente aceitáveis adequados da adição de bases para os compostos da presente invenção incluem, entre outros, sais metálicos preparados a partir de alumínio, cálcio, lítio, magnésio, potássio, sódio e zinco, ou sais orgânicos preparados a partir de lisina, arginina, N,N'- dibenziletilenodiamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, etilenodiamina, meglumina (N-metilglucamina) e procaína. Outros sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, quando adequado, cátions de amônio não tóxicos e ânions carboxilato, sulfato e fosfonato anexados a alquila com 1 a 20 átomos de carbono.

[0099] Além disso, provê-se aqui uma composição farmacêutica que compreende um composto descrito acima, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, junto com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis desta e, opcionalmente, outros ingredientes terapêuticos. O(s) veículo(s) precisa(m) ser “aceitável(is)” no sentido de ser compatível com os outros ingredientes da formulação e não nocivo ao receptor da mesma.

[0100] As formulações incluem aquelas adequadas para administração oral, parenteral (incluindo subcutânea, intradérmica, intramuscular, intravenosa e intra-articular), retal e tópica (incluindo dérmica, bucal, sublingual e intraocular). A via mais adequada pode depender da condição e do transtorno do receptor. As formulações podem ser convenientemente apesentadas em forma de dose unitária e podem ser preparadas por qualquer um dos métodos bem conhecidos na técnica da farmácia. Todos os métodos incluem a etapa de levar um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo (“ingrediente ativo”) a se associar com um veículo que constitua um ou mais ingredientes acessórios. Em geral, as formulações são preparadas levando o ingrediente ativo a se associar de modo uniforme e íntimo com veículos líquidos ou veículos sólidos finamente divididos, ou ambos, e, a seguir, se necessário, moldando o produto na formulação desejada.

[0101] Formulações da presente invenção adequadas para administração oral podem ser apresentadas em unidades distintas tais como cápsulas, pílulas ou comprimidos, cada um contendo uma quantidade predeterminada do ingrediente ativo; em pó ou grânulos; em suspensão em líquido aquoso ou líquido não aquoso; ou em emulsão líquida óleo em água ou emulsão líquida água em óleo. O ingrediente ativo pode também ser apresentado em bólus, eletuário ou pasta.

[0102] Um comprimido pode ser preparado por prensagem ou moldagem, opcionalmente com um ou mais ingredientes acessórios. Comprimidos prensados podem ser preparados por prensagem em uma máquina adequada do ingrediente ativo em forma de fluxo livre, como pó ou grânulos, opcionalmente com um aglutinante, lubrificante, diluente inerte, agente lubrificante, de superfície ativa ou dispersante. Comprimidos moldados podem ser preparados por moldagem em uma máquina adequada uma mistura do composto em pó umedecido com um diluente líquido inerte. Os comprimidos podem opcionalmente ser revestidos ou marcados e podem ser formulados para que forneçam liberação sustentada, retardada ou controlada do ingrediente ativo no mesmo.

[0103] As formulações para administração parenteral incluem soluções injetáveis estéreis aquosas e não aquosas que podem conter antioxidantes, tampões, bacteriostáticos e solutos que tornam a formulação isotônica com o sangue do receptor pretendido. As formulações para administração parenteral também incluem suspensões estéreis aquosas e não aquosas, que podem incluir agentes de suspensão e agentes espessantes. As formulações podem ser apresentadas em dose unitária de recipientes com doses múltiplas, por exemplo, ampolas e frascos- ampolas lacrados, e podem ser armazenados em condição seca por atomização (liofilizada) requerendo somente a adição de um veículo líquido estéril, por exemplo, solução salina, solução salina com tampão fosfato (PBS) ou similares, imediatamente antes do uso. Soluções e suspensões injetáveis extemporâneas podem ser preparadas a partir de pós, grânulos e comprimidos estéreis do tipo anteriormente descrito.

Seção experimental

[0104] Alguns compostos x da invenção, em que R4 é arila ou heteroarila, podem ser preparados como descrito abaixo nas Rotas Sintéticas A1 ou A2. A Rota Sintética A2 é preferida para síntese multigrama.

ROTA SINTÉTICA A1 HCl conc.

Pd(OAc)2 Dioxano xantophos Cs2CO3 tolueno H2SO4 dioxano TEA / piridina Pd(dppf)Cl2 K2CO3 dioxano / H2O

[0105] O acoplamento catalisado por paládio de i com a benzofenona hidrazona fornece ii, que é hidrolisado até hidrazina iii. A hidrazina é ciclizada com piperidinona fornecendo tetrahidropirido[4,3-b]indol iv. O tetrahidropirido[4,3-b]indol iv é desmetilado para 4-hidróxi v, N-protegido com Boc (vi), e ativado com anidrido tríflico para fornecer vii. O triflato vii é acoplado com um reagente boronato de pinacol via o acoplamento de Suzuki-Miyaura para incorporar R4 em viii. O grupo Boc é clivado e substituído pela cadeia lateral hidroxiacetila protegida por intermédio de seu cloreto ácido para fornecer o produto com acetila protegido ix. O acetila é clivado do produto com acetila protegido ix pelo tratamento com hidróxido de lítio aquoso para fornecer a 1-(3,4-dihidro- 1H-pirido[4,3-b]indol-2(5H)-il)-2-hidroxietanona x.

[0106] Uma síntese de exemplo é fornecida para ilustração: 1-(6,7-Dicloro-9-(1H-pirazol-4-il)-1,3,4,5-tetrahidro- 2H-pirido[4,3-b]indol-2-il)-2-hidroxietan-1-ona A uma solução de 1-bromo-3-cloro-5-metoxibenzeno (20 g, 90,3 mmol) em dimetilformamida (100 mL), adicionou-se ácido tricloroisocianúrico (7,56 g, 32,5 mmol) a 25 ºC. A mistura foi agitada por 12 horas a 50 ºC. A mistura foi despejada em água (200 mL). A fase aquosa foi extraída com acetato de etila (2 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (3 x 100 mL), secas com sulfato de sódio anidro e filtradas. O filtrado foi concentrado sob vácuo. O resíduo foi triturado com éter de petróleo (20 mL) a 0 ºC. O sólido foi coletado por filtração para obter 1-bromo-2, 3-dicloro-5- metoxibenzeno. RMN 1H: (CDCl3, 400 MHz) δ 7,12 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 3,79 (s, 3H). A uma mistura de 1-bromo-2, 3-dicloro-5-metoxibenzeno (20 g, 78,1 mmol), benzofenona hidrazona (18,4 g, 93,8 mmol), Xantphos (7,45 g, 12,9 mmol) e carbonato de césio (63,7 g, 196 mmol) em tolueno (200 mL), adicionou-se acetato de paládio (1,75 g, 7,79 mmol) a 25 ºC sob nitrogênio. A mistura foi agitada por

10 horas a 100 ºC sob nitrogênio.

A mistura foi resfriada até 30 ºC e filtrada.

O filtrado foi concentrado.

O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo = 1) para obter 1-(2,3-dicloro-5-metoxifenil)-2- (difenilmetileno)hidrazina.

RMN 1H: (CDCl3, 400 MHz) δ 8,12 (brs, 1H), 7,65-7,55 (m, 5H), 7,39-7,34 (m, 5H), 7,25 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 6,53 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 3,86 (s, 3H). LCMS: m/z 371,0; 373,0 [M+H]+ Uma solução de 1-(2,3-dicloro-5-metoxifenil)-2- (difenilmetileno)hidrazina (7,0 g, 18,9 mmol) em dioxano (60 mL) e ácido clorídrico concentrado (12 M, 15 mL) foi agitada por 1 hora a 100 ºC.

A mistura foi resfriada até 0 ºC, e o pH foi ajustado para 8 pela adição de uma solução saturada de bicarbonato de sódio.

A fase aquosa foi extraída com acetato de etila (3 x 150 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (200 mL), secas com sulfato de sódio anidro e filtradas.

O filtrado foi concentrado sob vácuo.

O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel (éter de petróleo:acetato de etila = 20:1~5:1) para fornecer 1-(2,3- dicloro-5-metoxifenil)hidrazina.

RMN 1H: (DMSO-d6, 400 MHz) δ 6,83 (brs, 1H), 6,72 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 6,41 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 4,21 (brs, 2H), 3,73 (s, 3H). LCMS: m/z 207,0, 208,9 [M+H]+ A uma solução de 1-(2, 3-dicloro-5-metoxifenil)hidrazina (6,5 g, 31,4 mmol) e 4-piperidona (5,11 g, 37,7 mmol, sal de HCl) em dioxano (70 mL), adicionou-se ácido sulfúrico concentrado (9,02 g, 92,0 mmol, 4,9 mL) a 0 ºC.

A mistura foi agitada por 12 horas a 80 ºC.

A mistura foi concentrada sob vácuo.

O resíduo foi diluído com água (20 mL), e o pH foi ajustado para 9 pela adição de uma solução aquosa de hidróxido de sódio

(2 M) a 0 ºC.

O precipitado formado foi coletado por filtração.

O precipitado foi triturado com acetato de etila (15 mL) fornecendo 6,7-dicloro-2,3,4,5-tetrahidro-9-metoxi-1H- pirido[4,3-b]indol.

RMN 1H: (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,64 (br.s, 1H), 6,73 (s, 1H), 4,30 (s, 2H), 3,86 (s, 3H), 3,56 (s, 2H), 2,96 (s, 2H). LCMS: m/z 271,0; 273,0 [M+H]+ A uma solução de 6,7-dicloro-2,3,4,5-tetrahidro-9- metoxi-1H-pirido[4,3-b]indol (2,0 g, 7,38 mmol) em diclorometano (50 mL), adicionou-se tribrometo de boro (5,30 g, 21,2 mmol) a 0 ºC.

A mistura foi agitada a 25 ºC por 12 horas.

A mistura foi concentrada sob pressão reduzida.

O resíduo foi despejado em uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (30 mL). A mistura foi extraída com acetato de etila (3 x 30 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (10 mL), secas com sulfato de sódio anidro e filtradas.

O filtrado foi concentrado sob vácuo para obter 6,7-dicloro-2,3,4,5-tetrahidro- 1H-pirido[4,3-b]indol-9-ol.

RMN 1H: (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,48 (brs, 1H), 6,61 (s, 1H), 4,33 (s, 2H), 3,39-3,35 (m, 2H), 3,00- 3,97 (m, 2H). A uma solução de 6,7-dicloro-2,3,4,5-tetrahidro-1H- pirido[4,3-b]indol-9-ol (1 g, 3,89 mmol) e trietilamina (1,18 g, 11,7 mmol, 1,62 mL) em tetrahidrofurano (20 mL), adicionou-se Boc2O (679 mg, 3,11 mmol, 715 µL) a 25 ºC.

A mistura foi agitada por 1 hora a 25 ºC.

A mistura foi despejada em água gelada (40 mL). A mistura foi extraída com acetato de etila (3 x 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (2 x 20 mL), secas com sulfato de sódio anidro e filtradas.

O filtrado foi concentrado sob vácuo.

O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo: acetato de etila

= 10:1 para 3:1) fornecendo 6,7-dicloro-3,4-dihidro-9-hidroxi- 1H-pirido[4,3-b]indol-2(5H)-carboxilato de terc-butila.

RMN 1H:

(CDCl3, 400 MHz) δ 8,16 (brs, 1H), 7,90 (brs, 1H), 6,48 (s, 1H), 4,83 (s, 2H), 3,81 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,85-2,81 (m, 2H), 1,59 (s, 9H). LCMS: m/z 379,0 [M+Na]+ A uma solução de 6,7-dicloro-3,4-dihidro-9-hidroxi-1H- pirido[4,3-b]indol-2(5H)-carboxilato de terc-butila (700 mg, 1,96 mmol) em piridina (5 mL) e diclorometano (10 mL), adicionou- se Tf2O (1,11 g, 3,93 mmol, 647 µL) a 0 ºC.

A mistura foi agitada por 1 hora a 25 ºC.

A mistura foi despejada em água gelada (30 mL). A mistura foi extraída com acetato de etila (2 x 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com ácido clorídrico aquoso (1 M, 20 mL) e salmoura (2 x 10 mL). A camada orgânica foi seca com sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada sob vácuo para obter 6,7-dicloro-9-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)- 1,3,4,5-tetrahidro-2H-pirido[4,3-b]indol-2-carboxilato de terc- butila.

RMN 1H: (CDCl3, 400 MHz) δ 8,43 (brs, 1H), 7,16 (s, 1H), 4,76 (s, 2H), 3,83 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 2,89-2,87 (m, 2H), 1,51 (s, 9H). LCMS: m/z 432,9; 434,9 [MS-55]+ A uma mistura de 6,7-dicloro-9- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)-1,3,4,5-tetrahidro-2H- pirido[4,3-b]indol-2-carboxilato de terc-butila (200 mg, 409 µmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H- pirazol (119 mg, 613 µmol) e carbonato de potássio (169 mg, 1,22 mmol) em dioxano (10 mL) e água (3 mL), adicionou-se Pd(dppf)Cl2CH2Cl2 (33 mg, 40 µmol) a 25 ºC sob nitrogênio.

A mistura foi agitada por 10 horas a 80 ºC.

A mistura foi filtrada, e o filtrado foi despejado em água (20 mL). A mistura foi extraída com acetato de etila (3 x 15 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (10 mL), secas com sulfato de sódio anidro e filtradas.

O filtrado foi concentrado sob vácuo.

O resíduo foi purificado por cromatografia preparativa em camada fina (SiO2, éter de petróleo: acetato de etila = 2:1) para obter 6,7-dicloro-3,4-dihidro-9-(1H-pirazol-4-il)-1H- pirido[4,3-b]indol-2(5H)-carboxilato de terc-butila.

RMN 1H:

(CD3OD, 400 MHz) δ 7,75 (s, 1H), 7,60 (s, 1H), 7,00 (s, 1H), 4,24 (s, 2H), 3,75 (s, 2H), 2,85 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 1,20 (s, 9H). LCMS: m/z 429,0; 431,0 [M+Na]+ Uma mistura de 6,7-dicloro-3,4-dihidro-9-(1H-pirazol-4- il)-1H-pirido[4,3-b]indol-2(5H)-carboxilato de terc-butila (150 mg, 368 µmol) em ácido trifluoroacético (3 mL) e diclorometano (10 mL) foi agitada por 10 horas a 25 ºC.

A solução foi concentrada sob vácuo para obter 6,7-dicloro-2,3,4,5-tetrahidro- 9-(1H-pirazol-4-il)-1H-pirido[4,3-b]indol-TFA.

O material foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional.

RMN 1H: (CD3OD, 400 MHz) δ 11,48 (brs, 1H), 8,01 (brs, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,81 (s, 2H), 7,10 (s, 1H), 4,06 (s, 2H), 3,58 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,18 (t, J = 6,0 Hz, 2H). A uma solução de 6,7-dicloro-2,3,4,5-tetrahidro-9-(1H- pirazol-4-il)-1H-pirido[4,3-b]indol-TFA (120 mg, 297 µmol) e trietilamina (119 mg, 1,18 mmol, 163 µL) em diclorometano (2 mL), adicionou-se acetato de (clorocarbonil)metila (80 mg, 586 µmol, 63 µL) a 0 ºC.

A mistura foi agitada por 0,5 hora a 25 ºC.

O resíduo foi despejado em uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (20 mL) e a mistura agitada por 15 minutos.

A fase aquosa foi extraída com acetato de etila (3 x 15 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (10 mL), secas com sulfato de sódio anidro e filtradas.

O filtrado foi concentrado sob vácuo fornecendo acetato de 2-(6,7-dicloro-3,4- dihidro-9-(1H-pirazol-4-il)-1H-pirido[4,3-b]indol-2(5H)-il)-2- oxoetila que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional.

A uma solução de acetato de 2-(6,7-dicloro-3,4-dihidro- 9-(1H-pirazol-4-il)-1H-pirido[4,3-b]indol-2(5H)-il)-2-oxoetila (150 mg, 368 µmol) em tetrahidrofurano (3 mL) e água (1 mL), adicionou-se hidróxido de lítio monohidratado (46 mg, 1,10 mmol) a 25 ºC.

A mistura foi agitada por 1 hora a 25 ºC.

A mistura foi despejada em água gelada (20 mL), e o pH foi ajustado para 7 pela adição de ácido clorídrico aquoso (1 M). A mistura foi extraída com acetato de etila (3 x 15 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (2 x 10 mL), secas com sulfato de sódio anidro e filtradas.

O filtrado foi concentrado sob vácuo.

O resíduo foi purificado por cromatografia preparativa em camada fina (acetato de etila:metanol, 20:1) para obter 1-(6,7-dicloro-9-(1H-pirazol-4-il)-1,3,4,5-tetrahidro-2H- pirido[4,3-b]indol-2-il)-2-hidroxietan-1-ona.

RMN 1H: (CD3OD, 400 MHz) δ 7,84 (brs, 1H), 7,73 (brs, 1H), 7,02 (s, 1H), 4,46 (s, 1H), 4,31 (s, 1H), 4,19 (s, 1H), 4,06 (s, 1H), 3,94 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 3,74 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 2,89 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 2,95 (t, J = 5,6 Hz, 1H). LCMS: m/z 365,0 [M+H]+

ROTA SINTÉTICA A2 H2SO4 conc. HCl conc. H2O H2SO4 Dioxano Dioxano

[0107] A bromação de derivados de nitrobenzeno opcionalmente substituídos xi fornece produtos de substituição de meta-bromo xii. A redução com ferro fornece anilinas xiii, as quais são, então, convertidas em hidrazinas xiv com nitrito de sódio e cloreto de estanho. As hidrazinas xiv passam por síntese de indol de Fischer com piperidinona fornecendo tetrahidropirido[4,3- b]indóis xv, os quais são subsequentemente limitados fornecendo amidas xvi. O acoplamento de Suzuki-Miyaura seguido por hidrólise do grupo protetor do acetato fornece compostos x.

[0108] Uma síntese de exemplo é fornecida para ilustração: 1-(7-Cloro-6-fluoro-9-(1-metil-1H-pirazol-3-il)- 1,3,4,5-tetrahidro-2H-pirido[4,3-b]indol-2-il)-2-hidroxietan- 1-ona

A uma solução de 1-cloro-2-fluoro-3-nitrobenzeno (120 g, 684 mmol) em H2SO4 (650 mL), adicionou-se NBS (146 g, 820 mmol) a 25 ºC.

Em seguida, a mistura de reação foi agitada a 65 ºC por 4 horas.

A mistura foi resfriada até 25 ºC.

A mistura foi despejada em água gelada (2,00 L) e extraída com acetato de etila (3 x 500 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (500 mL), secas com sulfato de sódio anidro e filtradas.

O filtrado foi concentrado fornecendo 5-bromo-1-cloro-2-fluoro- 3-nitrobenzeno.

RMN 1H: (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,39-8,37 (m, 1H), 8,34-3,33 (m, 1H). A uma solução de 5-bromo-1-cloro-2-fluoro-3-nitrobenzeno (89,0 g, 350 mmol) em AcOH (500 mL), adicionou-se Fe (58,6 g, 1,05 mol) em porções a 0 ºC.

A mistura foi agitada a 25 ºC por 16 horas.

A mistura foi despejada em água (1,50 L) e filtrada.

O bolo filtrado foi lavado com acetato de etila (5 x 200 mL). O filtrado foi extraído com acetato de etila (4 x 500 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (500 mL), secas com sulfato de sódio anidro e filtradas.

O filtrado foi concentrado fornecendo um resíduo.

O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo: acetato de etila = 50:1 para 1:1) fornecendo 5-bromo-3-cloro-2- fluoroanilina.

RMN 1H: (CDCl3, 400 MHz) δ 6,89-6,87 (m, 1H), 6,82- 6,80 (m, 1H), 3,61-3,59 (m, 2H). LC-MS: m/z 225,9 [M+H]+

A uma solução de 5-bromo-3-cloro-2-fluoroanilina (50,0 g, 223 mmol) em HCl (12,0 M, 825 mL), adicionou-se NaNO2 (18,9 g, 274 mmol) em água (100 mL) gota a gota a -5 ºC sob nitrogênio.

Após agitação da mistura de reação a -5 ~0 ºC por 1 hora, uma solução de SnCl2·2H2O (126 g, 558 mmol) em HCl (12,0 M, 825 mL) foi adicionada gota a gota a 0 ºC.

A mistura foi agitada a 0 ºC por 3 horas.

A mistura de reação foi filtrada, e o bolo filtrado foi lavado com água (200 mL). O sólido coletado foi seco para fornecer (5-bromo-3-cloro-2-fluorofenil)hidrazina-HCl.

LC-MS: m/z 240,9 [M+H]+ A uma solução de (5-bromo-3-cloro-2- fluorofenil)hidrazina (85,0 g, 308 mmol, sal de HCl) e piperidin- 4-ona (62,7 g, 462 mmol, sal de HCl) em dioxano (1,97 L), adicionou-se H2SO4 (18 M, 347 mmol). A mistura foi agitada a 90 ºC por 12 horas.

A mistura de reação foi concentrada fornecendo um resíduo.

O resíduo foi basificado (pH = 8) com NaOH aquoso juntamente com o resfriamento adequado.

A mistura foi filtrada, e o bolo filtrado foi lavado com água (100 mL). O sólido coletado foi seco para fornecer 9-bromo-7-cloro-6-fluoro-2,3,4,5- tetrahidro-1H-pirido[4,3-b]indol.

RMN 1H: (DMSO-d6, 400 MHz) δ11,91 (s, 1H), 7,26 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 4,21 (m, 2H), 3,08 (m, 2H), 2,74 (m, 2H). LC-MS: m/z 304,9 [M+H]+ A uma solução de 9-bromo-7-cloro-6-fluoro-2,3,4,5- tetrahidro-1H-pirido[4,3-b]indol (40,0 g, 132 mmol) e TEA (40,0 g, 395 mmol, 17,0 mL) em THF (400 mL), adicionou-se acetato de (2-cloro-2-oxo-etila) (21,6 g, 158 mmol, 17,0 mL) a 0 ºC.

A mistura foi agitada a 25 ºC por 5 horas.

A mistura de reação foi despejada em água (200 mL). A mistura foi extraída com acetato de etila (3 x 300 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (200 mL), secas com sulfato de sódio anidro e filtradas.

O filtrado foi concentrado fornecendo um resíduo bruto.

O resíduo foi triturado com acetato de etila (30,0 mL) a 25 ºC por 12 horas.

A mistura foi filtrada, e o bolo filtrado foi seco fornecendo um resíduo.

O resíduo foi purificado por cromatografia (SiO2, éter de petróleo: acetato de etila = 20:1 para 4:1) fornecendo acetato de 2-(9-bromo-7-cloro-6-fluoro- 1,3,4,5-tetrahidro-2H-pirido[4,3-b]indol-2-il)-2-oxoetila.

RMN 1H: (DMSO-d6, 400 MHz) δ 12,09-12,06 (m, 1H), 7,30 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 4,92-4,86 (m, 4H), 3,84-3,70 (m, 2H), 2,90-2,77 (m, 2H), 2,09 (s, 3H). LC-MS: m/z 404,9 [M+H]+ A uma solução de acetato de 2-(9-bromo-7-cloro-6-fluoro- 1,3,4,5-tetrahidro-2H-pirido[4,3-b]indol-2-il)-2-oxoetila (11,0 g, 27,3 mmol), 1-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (5,67 g, 27,2 mmol) e K2CO3 (7,53 g, 54,5 mmol) em dioxano (330 mL), adicionou-se Pd(dppf)Cl2 (1,99 g, 2,72 mmol) a 25 ºC.

A mistura foi agitada a 100 ºC por 12 horas sob atmosfera de nitrogênio.

A mistura de reação foi filtrada, e o filtrado foi concentrado fornecendo um resíduo.

O resíduo foi purificado por HPLC de fase reversa (condição FA). O eluente foi concentrado para remover acetonitrila.

O pH da solução resultante foi ajustado para pH = 7 com adição de uma solução aquosa de NaHCO3. A camada aquosa foi extraída com CH2Cl2 (3 x 100 mL), seca com sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada.

O resíduo foi triturado com acetato de etila (20,0 mL) a 25 ºC por 3 horas (duas vezes) para fornecer acetato de 2- (7-cloro-6-fluoro-9-(1-metil-1H-pirazol-3-il)-1,3,4,5- tetrahidro-2H-pirido[4,3-b]indol-2-il)-2-oxoetila.

LC-MS: m/z 405,0 [M+H]+

A uma solução de acetato de 2-(7-cloro-6-fluoro-9-(1- metil-1H-pirazol-3-il)-1,3,4,5-tetrahidro-2H-pirido[4,3- b]indol-2-il)-2-oxoetila (4,50 g, 11,1 mmol) em MeOH (50,0 mL) e água (5,00 mL), adicionou-se LiOH·H2O (1,32 g, 31,5 mmol) a 25 ºC. A mistura foi agitada a 25 ºC por 0,17 h. A mistura de reação bruta foi concentrada para remover MeOH. O resíduo foi despejado em água (75 mL) e o pH foi ajustado para 6 com a adição de solução aquosa de HCl (1M). A mistura foi filtrada, e o bolo filtrado foi seco fornecendo 1-(7-cloro-6-fluoro-9-(1-metil-1H- pirazol-3-il)-1,3,4,5-tetrahidro-2H-pirido[4,3-b]indol-2-il)- 2-hidroxietan-1-ona. Para remover o Pd residual da etapa anterior de acoplamento, o material foi purificado mais por MPLC reversa (condição neutra). O material foi dissolvido em EtOH (350 mL) e adicionou-se resina de tioureia (6,20 g). A mistura foi aquecida a 80 ºC e agitada a 80 ºC por 16 horas. A mistura foi resfriada até 25 ºC e filtrada. O bolo filtrado foi lavado com EtOH (2 x 20 mL). Ao filtrado, adicionou-se a resina de tioureia (3,10 g), e a mistura foi aquecida até 80 ºC e agitada a 80 ºC por 2 horas. A mistura foi resfriada até 25 ºC e filtrada. O bolo filtrado foi lavado com EtOH (2 x 20 mL). O filtrado foi concentrado fornecendo 1-(7-cloro-6-fluoro-9-(1-metil-1H- pirazol-3-il)-1,3,4,5-tetrahidro-2H-pirido[4,3-b]indol-2-il)- 2-hidroxietan-1-ona. RMN 1H: (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,82-11,77 (m, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,15-7,09 (m, 1H), 6,57 -6,52 (m, 1H), 4,58- 4,55 (m, 3H), 4,18-4,17 (m, 1H), 4,11-4,10 (m, 1H), 3,95-3,92 (m, 3H), 3,83-3,82 (m, 1H), 3,67-3,64 (m, 1H), 2,88-2,82 (m, 2H). LC-MS: m/z 363,0 [M+H]+

[0109] Para alguns compostos da invenção, R4 é introduzido por uma reação do tipo de Ullman. Um exemplo é mostrado abaixo:

Acetato de [2-[9-Bromo-7-cloro-6-fluoro-5-(2- trimetilsililetoximetil)-3,4-dihidro-1H-pirido[4,3-b]indol-2- il]-2-oxo-etila] (0,2 g, 375 µmol), 1H-pirazol (51 mg, 749 µmol), CuI (71 mg, 375 µmol), K2CO3 (104 mg, 749 µmol) e (1S,2S)-N1,N2- dimetilciclohexano-1,2-diamina (53 mg, 375 µmol) foram coletados em um tubo de micro-ondas com DMSO (3 mL). O tubo fechado foi aquecido a 170 ºC por 120 minutos sob a irradiação de micro- ondas. A mistura de reação foi repartida entre água (20 mL) e EtOAc (20 mL). A fase orgânica foi separada, lavada com EtOAc (3 x 30mL), seca com sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida fornecendo um resíduo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa para fornecer 1-(7-cloro-6- fluoro-9-pirazol-1-il-1,3,4,5-tetrahidropirido[4,3-b]indol-2- il)-2-hidroxi-etanona. RMN 1H: (CD3OD, 400 MHz) δ 8,02-7,95 (m, 1H), 7,83 (brd, J = 15,7 Hz, 1H), 7,15 (dd, J = 5,7; 13,3 Hz, 1H), 6,64-6,58 (m, 1H), 4,59 (s, 2H), 4,31 (brd, J = 6,8 Hz, 2H), 4,07 (d, J = 13,6 Hz, 2H), 3,95 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 3,74 (t, J = 5,3 Hz, 1H), 3,50 (brs, 2H), 3,06-2,88 (m, 2H).

[0110] Alguns compostos da invenção, em que um acoplamento de Suzuki-Miyaura ou do tipo de Ullman não é necessário para introduzir R4, podem ser preparados como descrito abaixo na Rota Sintética B.

ROTA SINTÉTICA B H2SO4 HCl conc. Dioxano

[0111] Uma síntese de exemplo é fornecida para ilustração: 1-(7-Bromo-6-fluoro-1,3,4,5-tetrahidro-2H-pirido[4,3- b]indol-2-il)-2-hidroxietan-1-ona A uma solução de 3-bromo-2-fluoroanilina (20,0 g, 105 mmol) em HCl (12,0 M, 100 mL, 11,4 eq), adicionou-se uma solução de NaNO2 (10,9 g, 158 mmol, 1,50 eq) em água (20,0 mL) gota a gota a 0 ºC. A mistura foi agitada a 0 ºC por 1 hora. SnCl2,2H2O (71,3 g, 316 mmol, 3,00 eq) em H2O (40,0 mL) foi adicionado à mistura a 0 ºC. A mistura foi agitada por 12 horas a 20 ºC. A mistura de reação foi filtrada. O bolo filtrado foi lavado com EtOAc (20,0 mL) e triturado com EtOAc (30,0 mL). O bolo filtrado foi seco fornecendo cloridrato de (3-bromo-2- fluorofenil)hidrazina. LC-MS: m/z 205,1 [M+H]+

A uma solução de cloridrato de (3-bromo-2- fluorofenil)hidrazina (25,0 g, 104 mmol, sal de HCl) e piperidin- 4-ona (16,8 g, 124 mmol, sal de HCl) em dioxano (125 mL), adicionou-se H2SO4 (27,3 g, 278 mmol, 14,8 mL) a 0 ºC.

A mistura foi aquecida até 80 ºC por 14 horas.

A mistura foi despejada em água (100 mL), e o pH foi ajustado para 10 com a adição de solução aquosa de NaOH (4M). A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (2 x 100 mL), secas com sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas.

O resíduo foi triturado com EtOAc (40,0 mL) e filtrado fornecendo 7-bromo-6-fluoro- 2,3,4,5-tetrahidro-1H-pirido[4,3-b]indol.

LC-MS: m/z 269,1 [M+H]+ A uma solução de 7-bromo-6-fluoro-2,3,4,5-tetrahidro-1H- pirido[4,3-b]indol (14,2 g, 52,8 mmol) e Et3N (16,0 g, 158 mmol, 22,0 mL) em THF (70,0 mL), adicionou-se acetato de (2-cloro-2- oxo-etila) (8,65 g, 63,3 mmol, 6,81 mL) a 0 ºC.

A mistura foi agitada a 25 ºC por 3 horas.

A mistura foi despejada em água (300 mL). A mistura foi extraída com EtOAc (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (100 mL), secas com sulfato de sódio anidro e concentradas.

O resíduo foi triturado com EtOAc (60,0 mL) a 25 ºC por 1 hora.

A mistura foi filtrada.

O bolo filtrado foi seco fornecendo acetato de 2- (7-bromo-6-fluoro-1,3,4,5-tetrahidro-2H-pirido[4,3-b]indol-2- il)-2-oxoetila.

RMN 1H: (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,69 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 7,25-7,15 (m, 2H), 4,91 (d, J = 12,4 Hz, 2H), 4,62 (s, 2H), 3,85-3,71 (m, 2H), 2,89-2,77 (m, 2H), 2,09 (s, 3H). A uma solução de acetato de 2-(7-bromo-6-fluoro-1,3,4,5- tetrahidro-2H-pirido[4,3-b]indol-2-il)-2-oxoetila (12,0 g, 32,5 mmol) em MeOH (150 mL) e água (15,0 mL), adicionou-se LiOH·H2O (3,86 g, 92,0 mmol). A mistura foi agitada a 25 ºC por 2 horas. A mistura de reação foi concentrada. O sólido foi dissolvido com água (100 mL) e o pH ajustado para 6 com a adição de solução aquosa de HCl 1 M. A mistura foi filtrada, e o bolo filtrado foi seco fornecendo um resíduo. O resíduo foi triturado com EtOAc/acetonitrila (3/1, 40 mL) a 25 ºC por 1 hora. A mistura foi filtrada, o bolo filtrado foi seco para fornecer 1-(7-bromo- 6-fluoro-1,3,4,5-tetrahidro-2H-pirido[4,3-b]indol-2-il)-2- hidroxietan-1-ona. RMN 1H: (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,66 e 11,64 (s, 1H), 7,26 – 7,14 (m, 2H), 4,65 – 4,55 (m, 3H), 4,23 – 4,19 (m, 2H), 3,87 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 3,69 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 2,86 – 2,77 (m, 2H). LC-MS: m/z 327,0 [M+H]+

[0112] Compostos nos quais R1 ≠ H podem ser preparados por alquilação de um intermediário adequadamente protegido (Rota Sintética C):

ROTA SINTÉTICA C alquilação p. ex., viii, xvi, ix ou xx

[0113] Para alguns compostos em que R1 ≠ H, o agente alquilante é R1-X, em que X é um grupo de partida adequado. Dois exemplos são mostrados abaixo:

A uma solução de acetato de 2-(7-cloro-6-fluoro-1,3,4,5- tetrahidro-2H-pirido[4,3-b]indol-2-il)-2-oxoetila (18,8 g, 57,9 mmol) em DMF (90,0 mL), adicionou-se NaH (2,35 g, 58,8 mmol, 60% em óleo mineral) a 0 ºC. A mistura foi agitada a 0 ºC por 1 hora. Iodeto de metila (14,5 g, 102 mmol, 6,37 mL) foi adicionado a 0 ºC. A mistura foi agitada a 25 ºC por 2 horas e, a seguir, mais iodeto de metila (8,22 g, 57,89 mmol, 3,60 mL) foi adicionado. A mistura foi agitada a 25 ºC por 1 hora. A mistura foi interrompida com NH4Cl aquoso saturado (1,00 L), e a solução resultante foi extraída com EtOAc (3 x 400 mL). As camadas orgânicas combinadas foram concentradas. O resíduo foi triturado com EtOAc (60,0 mL) a 25 ºC por 1 hora. A mistura foi filtrada, e o bolo filtrado foi seco fornecendo acetato de 2-(7-cloro-6- fluoro-5-metil-1,3,4,5-tetrahidro-2H-pirido[4,3-b]indol-2-il)- 2-oxoetila. RMN 1H: (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,31-7,27 (m, 1H), 7,10- 7,05 (m, 1H), 4,92-4,89 (m, 2H), 4,61 (s, 2H), 3,86-3,74 (m, 5H), 2,90-2,79 (m, 2H), 2,09 (s, 3H).

Uma mistura de acetato de [2-(7-bromo-6-fluoro-1,3,4,5- tetrahidropirido[4,3-b]indol-2-il)-2-oxo-etila] (400 mg, 1,08 mmol), trifluorometanossulfonato de 2,2,2-trifluoroetila (377 mg, 1,63 mmol, 80 µL), K2CO3 (299 mg, 2,17 mmol) e 1,4,7,10,13,16-

hexaoxaciclooctadecano (573 mg, 2,17 mmol) em DMF anidro (5 mL) foi agitada sob aquecimento a 65 ºC por 3 horas. A reação foi resfriada até 20 ºC, e os outros reagentes foram adicionados à mistura [trifluorometanossulfonato de 2,2,2-trifluoroetila (377 mg, 1,63 mmol, 80 µL), K2CO3 (299 mg, 2,17 mmol) e 1,4,7,10,13,16- hexaoxaciclooctadecano (286 mg, 1,08 mmol)]. A reação foi agitada a 65 ºC por 3 horas. A mistura de reação foi concentrada. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (condição TFA) para fornecer acetato de [2-[7-bromo-6-fluoro-5-(2,2,2- trifluoroetil)-3,4-dihidro-1H-pirido[4,3-b]indol-2-il]-2-oxo- etila]. RMN 1H: (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,35-7,26 (m, 2H), 5,18-5,11 (m, 2H), 4,92 (brd, J = 12,6 Hz, 2H), 4,63 (s, 2H), 3,90-3,72 (m, 2H), 2,96-2,76 (m, 2H), 2,09 (s, 3H).

[0114] Para compostos em que R1 = CHF2, o agente alquilante é BrF2CCOOEt em vez de R1I e a mistura é aquecida a 60 ºC por ~2,5 horas. Um exemplo é mostrado abaixo: Hidreto de sódio (139 mg, 3,48 mmol, 60% em óleo mineral) foi adicionado em porções a uma solução agitada de 9-bromo-7- cloro-6-fluoro-1,3,4,5-tetrahidropirido[4,3-b]indol-2- carboxilato de terc-butila (0,7 g, 1,73 mmol) em DMF (15 mL) a 15 ºC. Após agitação a 15 ºC por 0,5 h, 2-bromo-2,2- difluoroacetato de etila (422 mg, 2,08 mmol, 267 µL) foi adicionado à mistura gota a gota. A mistura de reação foi agitada a 60 ºC por 2,5 horas. A mistura de reação foi interrompida pela adição de uma solução aquosa saturada de NH4Cl (50 mL). A mistura foi extraída com EtOAc (3 x 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (30 mL), secas com sulfato de sódio anidro e filtradas. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 15/1 para 10/1) para fornecer 9-bromo-7-cloro-5-(difluorometil)-6-fluoro-3,4- dihidro-1H-pirido[4,3-b]indol-2-carboxilato de terc-butila. RMN 1H: (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,80-7,45 (m, 1H), 7,37-7,33 (m, 1H), 4,95 (brs, 2H), 3,74 (brs, 2H), 2,99 (brs, 2H), 1,52 (s, 9H).

[0115] Para o exemplo acima, o grupo Boc é removido sob condições padrão (HCl/EtOAc) e a α-hidróxi amida é formada como descrito acima.

[0116] Em geral, compostos da invenção nos quais R2 ≠ H foram formados usando um éter de cloreto ácido necessário, ou seja, ClC(=O)CHR30OR2, no lugar do cloreto ácido de acetato mencionado acima (ou seja, ClC(=O)CH2OC(=O)CH3).

[0117] Alguns compostos xxxiii, xxxiv e xxxv da invenção, em que R20 é (C1-C3)alquila e R21 é hidrogênio, podem ser preparados como descrito abaixo na Rota Sintética D. A etapa em parênteses é opcional quando R4 é arila ou heteroarila e uma reação de Suzuki-Miyaura introduz o grupo R4. Compostos xxxiv e xxxv são antípodas substancialmente puros um do outro (>80% e.e.), mas a sua configuração absoluta é indeterminada.

ROTA SINTÉTICA D

[0118] A reação de derivados de nitrobenzeno opcionalmente substituídos xxiii fornece produtos indol xxiv, os quais reagem com uma imina terciária formada in situ para fornecer os intermediários xxv. A ciclocondensação dos acetais xxv fornece álcoois xxvi, os quais são oxidados a cetonas xxvii. O grupo R20 (C1-C3)alquila é introduzido por intermédio de um reagente de

Grignard para fornecer álcoois xxviii, os quais sofrem desidratação/aromatização e formam íons piridínio xxix. A redução dos íons piridínio xxix com borohidreto de sódio fornece os intermediários xxx. Grupos R4 arila e heteroarila podem ser introduzidos nos intermediários xxx quando os referidos intermediários são intermediários brometo de arila. A troca subsequente do grupo protetor resulta em derivados intermediário com Boc xxxii, os quais são convertidos através dos métodos descritos acima em compostos substituídos racêmicos xxxiii. A resolução pode ser então realizada por cromatografia quiral em fluido supercrítico para fornecer enantiômeros substancialmente puros xxxiv e xxxv.

[0119] Um esquema sintético de exemplo é fornecido para ilustração:

HCl conc.

Dioxano Dioxano Dioxano/H2O

[0120] Os detalhes sintéticos e a resolução são descritos abaixo: A uma mistura de 5-bromo-1-cloro-2-fluoro-3-nitro- benzeno (25,0 g, 98,3 mmol) em THF (250 mL), adicionou-se brometo de vinil-magnésio (1 M, 500 mL), gota a gota, a -60 ºC sob nitrogênio. A mistura foi deixada aquecer até 10 ºC e foi agitada por 2 horas. A mistura de reação foi despejada em solução aquosa saturada de NH4Cl (1,0 L), e o pH foi ajustado para 7 com a adição de uma solução aquosa de HCl (6 M). A solução foi extraída com EtOAc (3 x 500 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (1,0 L), secas com sulfato de sódio anidro e filtradas. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, Éter de petróleo: Acetato de etila = 1:0 para 50:1). O material foi purificado mais cromatografia em coluna (SiO2, Éter de petróleo: Acetato de etila=0:1 para 49:1) fornecendo 4-bromo-6-cloro-7- fluoro-1H-indol. RMN 1H: (CDCl3, 400 MHz) δ8,52 (brs, 1H), 7,29- 7,28 (m, 2H), 6,61-6,59 (m, 1H).

A uma mistura de 4-bromo-6-cloro-7-fluoro-1H-indol (14,0 g, 56,3 mmol) em AcOH (140 mL), adicionou-se HCHO (5,03 g, 62,0 mmol, 4,61 mL, 37% solução em água) e N-benzil-2,2-dimetoxi- etanamina (13,2 g, 67,6 mmol). A mistura foi agitada a 25 ºC por 12 horas. A mistura de reação foi diluída com água (300 mL), e o pH da mistura foi ajustado para 8 com uma solução de NaOH (1 M, aquosa). A solução foi extraída com EtOAc (3 x 150 mL). A camada orgânica foi lavada com salmoura (200 mL), seca com sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, Éter de petróleo: Acetato de etila = 97:3 para 9:1) fornecendo N-benzil-N-[(4-bromo-6-cloro-7-fluoro-1H-indol-

3-il)metil]-2,2-dimetoxi-etanamina. RMN 1H: (CDCl3, 400 MHz) δ7,33-7,31 (m, 2H), 7,26-7,17 (m, 5H), 4,49-4,41 (m, 1H), 4,08- 4,07 (m, 2H), 3,75-3,72 (m, 2H), 3,22-3,20 (m, 6H), 2,72-2,69 (m, 2H).

HCl conc.

Dioxano Uma mistura de N-benzil-N-[(4-bromo-6-cloro-7-fluoro- 1H-indol-3-il)metil]-2,2-dimetoxi-etanamina (8,0 g, 17,6 mmol) em dioxano (80 mL) e HCl aquoso (6 M, 80 mL) foi agitada a 100 ºC por 0,5 h. A mistura de reação foi diluída com água (300 mL), e o pH foi ajustado para 8 com solução aquosa saturada de NaHCO3. A mistura foi extraída com 2-metiltetrahidrofurano (3 x 150 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (200 mL), secas com sulfato de sódio anidro e filtradas. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, Éter de petróleo: Acetato de etila = 10:1 para 3:1). O material foi purificado mais cromatografia em coluna (SiO2, Éter de petróleo: Acetato de etila = 9:1 para 3:1) fornecendo 2-benzil-9-bromo-7-cloro-6-fluoro- 1,3,4,5-tetrahidropirido[4,3-b]indol-4-ol. RMN 1H: (DMSO-d6, 400 MHz) δ 12,14 (s, 1H), 7,41-7,26 (m, 6H), 5,36 (d, J = 7,46 Hz, 1H), 4,74-4,70 (m, 1H), 3,93-3,82 (m, 2H), 3,77 (s, 2H), 2,94- 2,90 (m, 1H), 2,58-2,53 (m, 1H).

A uma mistura de 2-benzil-9-bromo-7-cloro-6-fluoro- 1,3,4,5-tetrahidropirido[4,3-b]indol-4-ol (480 mg, 1,17 mmol) em THF (15 mL) e DCM (5 mL), adicionou-se periodinano de Dess- Martin (994 mg, 2,34 mmol, 725 µL) a 0 ºC. A mistura foi agitada a 25 ºC por 2 horas. A mistura de reação foi diluída com solução aquosa saturada de NaHCO3 (300 mL), e a mistura foi extraída com 2-metiltetrahidrofurano (3 x 150 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (200 mL), secas com sulfato de sódio anidro e filtradas. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, Éter de petróleo: 2-metiltetrahidrofurano = 10:1 para 5:1) fornecendo 2-benzil-9-bromo-7-cloro-6-fluoro-3,5- dihidro-1H-pirido[4,3-b]indol-4-ona. RMN 1H: (DMSO-d6, 400 MHz) δ 13,00 (brs, 1H), 7,48 (d, J = 5,75 Hz, 1H), 7,39-7,34 (m, 4H), 7,33-7,27 (m, 1H), 4,24 (s, 2H), 3,84 (s, 2H), 3,38 (s, 2H).

A uma mistura de 2-benzil-9-bromo-7-cloro-6-fluoro-3,5- dihidro-1H-pirido[4,3-b]indol-4-ona (1,0 g, 2,45 mmol) em THF (10 mL), adicionou-se bromo(metil)magnésio (3 M em éter dietílico, 4,91 mL) a 0 ºC. A mistura foi deixada agitando a 25 ºC por 3 horas. A mistura de reação foi diluída com solução aquosa saturada de NH4Cl (50 mL). A solução foi extraída com EtOAc (3 x 30 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (40 mL), secas com sulfato de sódio anidro e filtradas. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, Éter de petróleo: Acetato de etila = 19:1 para 4:1) fornecendo 2- benzil-9-bromo-7-cloro-6-fluoro-4-metil-3,5-dihidro-1H- pirido[4,3-b]indol-4-ol. RMN 1H: (DMSO-d6, 400 MHz) δ 12,06 (s, 1H), 7,42-7,40 (m, 2H), 7,36-7,34 (m, 2H), 7,28-7,24 (m, 2H), 3,93-3,89 (m, 1H), 3,83-3,72 (m, 3H), 2,62-2,60 (m, 2H), 1,47 (s, 3H).

Dioxano A uma mistura de 2-benzil-9-bromo-7-cloro-6-fluoro-4- metil-3,5-dihidro-1H-pirido[4,3-b]indol-4-ol (700 mg, 1,65 mmol) em dioxano (21 mL), adicionou-se HCl concentrado (12 M, 21 mL). A mistura foi agitada a 80 ºC por 2 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para fornecer 2- benzil-9-bromo-7-cloro-6-fluoro-4-metil-5H-pirido[4,3-b]indol- 2-io, que foi usado diretamente na etapa seguinte.

A uma mistura de 2-benzil-9-bromo-7-cloro-6-fluoro-4- metil-5H-pirido[4,3-b]indol-2-io (1,2 g, 2,73 mmol) em EtOH (15 mL) e água (15 mL), adicionou-se NaBH4 (1,03 g, 27 mmol) a 0 ºC. A mistura foi agitada a 100 ºC por 6 horas. A mistura de reação foi despejada em água (100 mL). A mistura foi extraída com EtOAc (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (100 mL), secas com sulfato de sódio anidro e filtradas. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo: acetato de etila=1:0 para 17:3) fornecendo 2-benzil-9-bromo-7- cloro-6-fluoro-4-metil-1,3,4,5-tetrahidropirido[4,3-b]indol.

LC-MS: m/z 409,1 [M+H]+

Dioxano/H2O

A uma mistura de 2-benzil-9-bromo-7-cloro-6-fluoro-4- metil-1,3,4,5-tetrahidropirido[4,3-b]indol (430 mg, 1,05 mmol) em dioxano (10 mL) e água (2 mL), adicionou-se 1-metil-3-(4, 4, 5, 5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)pirazol (549 mg, 2,64 mmol), Pd(dppf)Cl2 (386 mg, 528 µmol) e K2CO3 (292 mg, 2,11 mmol). A mistura foi desgaseificada e purgada três vezes com nitrogênio.

A mistura foi agitada a 100 ºC por 12 horas sob nitrogênio.

A mistura de reação foi diluída com água (50 mL) e filtrada.

O filtrado foi extraído com EtOAc (3 x 30 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secas com sulfato de sódio anidro e filtradas.

O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida.

O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, Éter de petróleo: Acetato de etila = 9:1 para 3:1) fornecendo 2-benzil-7-cloro-6-fluoro-4-metil-9-(1-metilpirazol- 3-il)-1,3,4,5-tetrahidropirido[4,3-b]indol.

RMN 1H: (CD3OD, 400 MHz) δ 7,55 (d, J = 2,08 Hz, 1H), 7,35-7,28 (m, 5H), 6,98 (d, J = 6,48 Hz, 1H), 6,29 (d, J = 2,20 Hz, 1H), 4,13-4,11 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,75 (d, J = 12,59 Hz, 1H), 3,59 (d, J = 12,59 Hz, 1H), 3,22-3,21 (m, 2H), 3,11-3,07 (m, 1H), 2,39-2,34 (m, 1H), 1,34 (d, J = 6,85 Hz, 3H).

A uma mistura de 2-benzil-7-cloro-6-fluoro-4-metil-9-(1- metilpirazol-3-il)-1,3,4,5-tetrahidropirido[4,3-b]indol (300 mg, 734 µmol) e Boc2O (178 mg, 816 µmol, 187,09 µL) em MeOH (3 mL) e THF (0,9 mL), adicionou-se Pd/C (20 mg, 10% em peso). A mistura foi desgaseificada e purgada três vezes com H2. A mistura foi agitada sob H2 (15 psi) a 25 ºC por 1 hora. A mistura de reação foi filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo: acetato de etila = 19:1 para 4:1) fornecendo 7-cloro-6-fluoro-4-metil-9-(1-metilpirazol-3-il)- 1,3,4,5-tetrahidropirido[4,3-b]indol-2-carboxilato de terc- butila. RMN 1H: (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,71 (s, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,06 (d, J = 6,48 Hz, 1H), 6,49 (s, 1H), 4,46-4,39 (m, 2H), 3,91 (d, J = 3,2 Hz, 3H), 3,69-3,65 (m, 1H), 3,47-3,35 (m, 1H), 3,04- 3,01 (m, 1H), 1,38 (s, 9H), 1,27-1,25 (m, 3H).

A uma mistura de 7-cloro-6-fluoro-4-metil-9-(1- metilpirazol-3-il)-1,3,4,5-tetrahidropirido[4,3-b]indol-2- carboxilato de terc-butila (200 mg, 477 µmol) em EtOAc (2 mL), adicionou-se HCl/EtOAc (4 M, 10 mL). A mistura foi agitada a 25 ºC por 0,5 h. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para fornecer 7-cloro-6-fluoro-4-metil-9-(1-

metilpirazol-3-il)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-pirido[4,3-b]indol- HCl. O sal de HCl (190 mg) foi dissolvido em água (30 ml). O pH da mistura foi ajustado para 8 pela adição de uma solução aquosa saturada de NaHCO3. A mistura foi extraída com EtOAc (3 x 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (30 mL), secas com sulfato de sódio anidro e filtradas. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer a base livre.

A uma mistura de 7-cloro-6-fluoro-4-metil-9-(1- metilpirazol-3-il)-2,3,4,5-tetrahidro-1H-pirido[4,3-b]indol (110 mg, 345 mmol) em DMF (2 mL), adicionou-se HOBt (50 mg, 370 mmol), EDCI (71 mg, 370 mmol), DIPEA (120 mg, 928 mmol, 160 mL) e ácido 2-hidroxiacético (28 mg, 368 mmol, 23 mL). A mistura foi agitada a 25 ºC por 2 horas. A mistura de reação foi diluída com água (30 mL). A solução foi extraída com EtOAc (3 x 20 mL). A camada orgânica foi lavada com salmoura (30 mL), seca com sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia preparativa em camada fina (Éter de petróleo:Acetato de etila:álcool etílico = 4:3:1). Os enantiômeros puros foram obtidos por resolução cromatográfica via SFC (coluna: DAICEL CHIRALPAK AD-H (250 mm x 30 mm, 5 µm); fase móvel: [NH4OH 0,1% em MeOH];B%: 50%, 3,8 minutos) superior a 97% ee. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 7,67-7,65 (m, 1H), 7,07-7,03 (m, 1H), 6,45-6,42 (m, 1H), 4,58-4,34 (m, 2H), 4,30 (s, 1H), 4,21-4,19 (m, 1H), 4,00-3,99 (d, 3H), 3,94-3,91 (m, 0,5H), 3,78-3,75 (m, 0,5H),

3,68-3,66 (m, 0,5H), 3,36-3,33 (m, 0,5H), 3,22-3,09 (m, 1H), 1,34 (q, 3H). LC-MS: m/z 377,0 [M+H]+

[0121] Alguns compostos representativos da invenção, nos quais nem R20 nem R21 são hidrogênios (p. ex., os dois, R20 e R21, são metila), podem ser sintetizados como mostrado na Rota Sintética E:

ROTA SINTÉTICA E

[0122] A reação de cetonas opcionalmente substituídas xxvii com tetracloreto de dimetilzinco e titânio de acordo com um procedimento conhecido (Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 25 (2015) 3368–3372) pode fornecer o derivado dimetila xxxvi. O derivado dimetila xxxvi pode ser convertido através de métodos descritos acima em compostos xxxvii em que R20 e R21 são metila. Deve-se destacar que Et2Zn, Pr2Zn e iPr2Zn são também conhecidos. Assim, compostos tais xxxvii em que R20 e R21 são (C1-C3)alquila podem ser obtidos.

[0123] Alguns compostos representativos da invenção, nos quais R20 e R21, junto com o carbono ao qual estão ligados, formam um anel ciclopropila, podem ser sintetizados como mostrado na Rota Sintética F:

ROTA SINTÉTICA F

[0124] A reação de Wittig de cetonas opcionalmente substituídas xxvii pode fornecer o alceno xxxviii. O alceno xxxviii pode ser reagido com diiodometano e dietilzinco para fornecer o intermediário espirociclopropila xxxix, o qual pode ser convertido por métodos descritos acima em compostos xl nos quais R20 e R21 formam um anel ciclopropila.

[0125] Dados espectroscópicos de compostos representativos da invenção são mostrados na Tabela 1: Tabela 1. Dados espectroscópicos de compostos representativos Estrutura ID no Dados espectroscópicos RMN 1H (500 MHz, DMSO- d6) δ 11,52 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 7,53 (dd, J = 21,2; 1,8 Hz, 1H), 7,31- 6,88 (m, 1H), 4,60 (d, J TDI-004576 = 19.7 Hz, 2H), 4,20 (d, J = 17,4 Hz, 2H), 3,90- 3,67 (m, 2H), 3,3 (s, 3H), 2,92-2,76 m, 2H). LC-MS: m/z 313,2 [M+H]+

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

RMN 1H (500 MHz, DMSO- d6) δ 7,68-7,35 (m, 1H), 7,27-7,05 (m, 1H), 4,59 (d, J = 18,7 Hz, 2H), TDI-004581 4,19 (d, J = 23,8 Hz, 2H), 3,92 (s, 3H), 3,88- 3,68 (m, 2H), 3,29 (s, 3H), 2,95-2,72 (m, 2H). LC-MS: m/z 327,2 [M+H]+

RMN 1H (500 MHz, DMSO- d6) δ 7,65 (dd, J = 25,6; 2,0 Hz, 1H), 7,40–7,21 (m, 1H), 5,38 (q, J = 8,8 Hz, 2H), 4,61 (d, J = 14,5 Hz, 2H), 4,21 (d, J TDI-005021 = 15,1 Hz, 2H), 3,86 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 3,76 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 3,32 (s, 3H), 2,91 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 2,82 (d, J = 5,8 Hz, 1H). LC-MS: m/z 395,2 [M+H]+ RMN 1H (400 MHz, DMSO- d6) δ 11,03 (brs, 1H), 7,39 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,11 (d, J = 7,5 Hz, 1H), TDI-005323 7,03-6,94 (m, 1H), 4,65 (s, 2H), 4,20 (s, 2H), 3,81 (brs, 2H),3,34 (s, 3H),2,88 (brs, 2H). LC- MS: m/z 279,1 [M+H]+

RMN 1H (400 MHz, DMSO- d6) δ 11,14-10,80 (m, 1H), 7,44-6,95 (m, 3H), 4,91 (s, 1H), 4,63 (s, TDI-005324 1H), 4,19 (s, 2H), 3,80 (brs, 2H), 3,34 (s, 3H), 2,84 (brs, 2H). LC-MS: m/z 278,9 [M+H]+

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

RMN 1H (400 MHz, DMSO- d6) δ 11,42 (brs, 1H), 7,13-7,05 (m, 1H), 7,03- 6,96 (m, 1H), 4,91 (s, TDI-005325 2H), 4,20 (s, 2H), 3,80 (brs, 2H), 3,34 (s, 3H), 2,88 (brs, 2H). LC-MS: m/z 312,9 [M+H]+

RMN 1H (400 MHz, DMSO- d6) δ 11,42 (brs, 1H), 7,13-7,05 (m, 1H), 7,03- 6,96 (m, 1H), 4,91 (s, TDI-005397 2H), 4,20 (s, 2H), 3,80 (brs, 2H), 3,34 (s, 3H), 2,88 (brs, 2H). LC-MS: m/z 313,0 [M+H]+

RMN 1H (400 MHz, DMSO- d6) δ 11,51 (d, J = 12,3 Hz, 1H), 7,46 (dd, J = 25,9; 8,4 Hz, 1H), 7,19 (t, J = 8,6 Hz, 1H), TDI-005685 4,74–4,55 (m, 3H), 4,23 (dd, J = 19,5; 5,5 Hz, 2H), 3,80 (dt, J = 89,5; 5,7 Hz, 2H), 2,86 (dt, J = 40,1; 5,8 Hz, 2H). LC- MS: m/z 299,0 [M+H]+ LC-MS: m/z 327,1 [M+H]+

TDI-005716

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

LC-MS: m/z 357,1 [M+H]+

TDI-005719

LC-MS: m/z 339,1 [M+H]+

TDI-005745 δ 7,36 (dd, J = 8,38; 3,31 Hz, 1H), 7,12 (d, J = 8,38 Hz, 1H), 4,75- 4,63 (m, 2H), 4,28 (d, J = 4,19 Hz, 2H), 3,98 TDI-005776 (t, J = 5,84 Hz, 1H), 3,84 (t, J = 5,73 Hz, 1H), 3,42 (d, J = 5,51 Hz, 3H), 2,99-2,85 (m, 2H). LC-MS: m/z 358,9 [M+H]+ δ 7,19-7,07 (m, 1H), 7,03-6,91 (m, 1H), 4,75- 4,59 (m, 2H), 4,28 (d, J = 4,63 Hz, 2H), 3,98 (brt, J = 5,84 Hz, 1H), TDI-005777 3,95 (s, 3H), 3,89-3,73 (m, 1H), 3,43 (d, J = 4,85 Hz, 3H), 2,97-2,83 (m, 2H). LC-MS: m/z 309,0 [M+H] +

Estrutura ID no Dados espectroscópicos δ 7,33-7,21 (m, 2H), 4,77-4,64 (m, 2H), 4,28 (d, J = 4,16 Hz, 2H), 3,99 (t, J = 5,81 Hz, TDI-005854 1H), 3,85 (t, J = 5,69 Hz, 1H), 3,42 (d, J = 5,62 Hz, 3H), 2,98-2,84 (m, 2H). LC-MS: m/z 359,0 [M+H]+ RMN 1H (400 MHz, DMSO- d6) δ 11,11 (brd, J = 4,9 Hz, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,42-7,34 (m, 1H), 7,13- 7,05 (m, 1H), 4,66-4,54 TDI-005855 (m, 2H), 4,24-4,13 (m, 2H), 3,86-3,67 (m, 2H), 3,31 (s, 3H), 2,88-2,71 (m, 2H). LC-MS: m/z 325,0 [M+H]+ δ 7,53 (d, J = 8,38 Hz, 1H), 7,35 (d, J = 8,16 Hz, 1H), 4,81-4,71 (m, 2H), 4,30 (d, J = 5,07 TDI-006171 Hz, 2H), 4,01 (t, J = 5,73 Hz, 1H), 3,87 (t, J = 5,73 Hz, 1H), 3,43 (d, J = 6,62 Hz, 3H), 3,06- 2,91 (m, 2H).

δ 7,71 (d, J = 8,60 Hz, 1H), 7,21 (d, J = 8,38 Hz, 1H), 4,79-4,69 (m, 2H), 4,30 (d, J = 5,29 Hz, 2H), 4,00 (t, J = TDI-006182 5,84 Hz, 1H), 3,86 (t, J = 5,73 Hz, 1H), 3,43 (d, J = 6,17 Hz, 3H), 3,01- 2,95 (m, 1H), 2,90 (brs, 1H).

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

RMN 1H (500 MHz, DMSO- d6) δ 11,32 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 7,42 (dd, J = 8,4; 4,3 HZ, 1H), 7,16 (dd, J = 8,4; 1,7 Hz, 1H), 4,57 (dt, J = 5,5; 2,8 Hz, 1H), 4,23 (dd, J = 5,6; 2,9 Hz, 2H), 3,74 TDI-006183 (dt, J = 16,9; 5,3 Hz, 2H), 3,65 (dt, J = 11,8; 5,4 Hz, 2H), 3,09 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 3,02 (t, J = 5,4 Hz, 1H), 2,93 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 2,86 (t, J = 5,3 Hz, 1H). LC-MS: m/z 313,1 [M+H]+ RMN 1H (500 MHz, DMSO- d6) δ 11,35 (d, J = 11,8 Hz, 1H), 7,48 (dd, J = 26,1; 8,3 Hz, 1H), 7,19 (t, J = 8,7 Hz, 1H), TDI-006261 4,73–4,54 (m, 3H), 4,23 (dd, J = 19,8; 5,6 Hz, 2H), 3,79 (dt, J = 88,7; 5,8 Hz, 2H), 2,93–2,78 (m, 2H). RMN 1H (500 MHz, DMSO- d6) δ 10,66 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 7,12 (dd, J = 10,0; 7,9 Hz, 1H), 6,80 (dd, J = 8,0; 2,4 Hz, 1H), 4,68–4,49 (m, 3H), TDI-006339 4,22 (dd, J = 19,8; 5,5 Hz, 2H), 3,79 (dt, J = 97,1; 5,8 Hz, 2H), 2,83 (dt, J = 37,2; 5,9 Hz, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,31 (s, 3H). LC-MS: m/z 259,2 [M+H]+

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

RMN 1H (500 MHz, DMSO- d6) δ 11,68 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 7,30 (dd, J = 24,4; 8,5 Hz, 1H), 7,08 (td, J = 8,5; 6,4 Hz, 1H), 4,73–4,53 (m, 3H), TDI-006340 4,23 (dd, J = 18,6; 5,6 Hz, 2H), 3,80 (dt, J = 89,1; 5,7 Hz, 2H), 2,85 (dt, J = 40,9; 6,0 Hz, 2H). LC-MS: m/z 283,1 [M+H]+ LC-MS: m/z 343,1 [M+H]+

TDI-006354

RMN 1H (500 MHz, DMSO- d6) δ 11,09 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 7,31 (dd, J = 17,7; 7,9 Hz, 1H), 6,96 (dd, J = 8,0; 4,2 Hz, 1H), 4,66 (d, J = 5,7 Hz, 2H), 4,57 (d, J = 19,5 TDI-006358 Hz, 1H), 4,23 (dd, J = 18,2; 5,5 Hz, 2H), 3,79 (dt, J = 93,1; 5,8 Hz, 2H), 2,84 (dt, J = 38,3; 5,9 Hz, 2H), 2,42 (s, 3H). LC-MS: m/z 279,2 [M+H]+ RMN 1H (500 MHz, DMSO- d6) δ 11,47 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 7,43 (ddd, J = 27,6; 8,6; 4,7 Hz, 1H), 7,04 (dt, J = 10,1; 8,2 TDI-006359 Hz, 1H), 4,68 (d, J = 5,1 Hz, 2H), 4,58 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 4,23 (dd, J = 18,7; 5,5 Hz, 3H), 3,79 (dt, J = 91,2; 5,7

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

Hz, 2H), 2,85 (dt, J = 39,2; 5,7 Hz, 2H). LC- MS: m/z 283,1 [M+H]+

RMN 1H (500 MHz, DMSO- d6) δ 11,09 (d, J = 11,1 Hz, 1H), 7,28 (dd, J = 17,9; 8,4 Hz, 1H), 7,01 (dd, J = 8,4; 6,2 Hz, 1H), 4,72–4,62 (m, 2H), TDI-006360 4,57 (d, J = 14,3 Hz, 1H), 4,23 (dd, J = 20,7; 5,5 Hz, 2H), 3,80 (dt, J = 93,2; 5,8 Hz, 2H), 2,85 (dt, J = 38,8; 5,7 Hz, 2H), 2,48 (s, 3H). LC-MS: m/z 279,2 [M+H]+ RMN 1H (500 MHz, DMSO- d6) δ 7,47 (dd, J = 24,3; 8,4 Hz, 1H), 7,23 (dd, J = 9,8; 8,2 Hz, 1H), 4,61 (d, J = 45,7 Hz, 3H), TDI-006366 4,31-4,18 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,93-3,68 (m, 2H), 2,86 (dt, J = 38,8; 6,0 Hz, 2H). LC-MS: m/z 313,1 [M+H]+ RMN 1H (400 MHz, DMSO- d6) δ 7,18 (s, 1H), 4,63 (brs, 2H), 4,22 (s, 2H), 3,89 (s, 3H), 3,78 (brs, TDI-006528 2H), 2,86 (brs, 2H). LC- MS: m/z 329,0 [M+H]+

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

RMN 1H (400 MHz, DMSO- d6) δ11,66 e 11,64 (s, 1H), 7,26–7,14 (m, 2H), 4,65–4,55 (m, 3H), 4,23– TDI-006529 4,19 (m, 2H), 3,87 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 3,69 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 2,86– 2,77 (m, 2H). LC-MS: m/z 327,0 [M+H]+

RMN 1H (400 MHz, DMSO- d6) δ 7,32-7,26 (m, 1H), 7,10-7,05 (m, 1H), 4,73- 4,55 (m, 2H), 4,23-4,18 TDI-006570 (m, 2H), 3,88-3,73 (m, 5H), 2,88-2,80 (m, 2H). LC-MS: m/z 297,1 [M+H]+

RMN 1H (400 MHz, DMSO- d6) δ 11,17 (brs, 1H), 6,66 (s, 1H), 4,70 (brs, 2H), 4,37 (brs, 1H), TDI-006622 4,18 (d, J = 5,1 Hz, 2H), 3,87 (s, 3H), 3,72 (brs, 1H), 2,82 (brs, 2H). LC- MS: m/z 329,0 [M+H]+

RMN 1H (400 MHz, MeOD) δ 7,21-7,14 (m, 2H), 6,98 (dd, J1 = 11,6 Hz, J2 = 18,0 Hz, 1H), 5,77 (dd, J1 = 1,2 Hz, J2 = 17,6 Hz, 1H), 5,24 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 4,75 (s, 1H), 4,59 TDI-006923 (s, 1H), 4,35 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 4,00 (t, J = 5,6 Hz,1 H), 3,78 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 2,93 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 2,87 (t, J = 5,6 Hz, 1H). LC-MS: m/z 275,1 [M+H] +

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ 12,08 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 8,13–7,72 (m, 1H), 7,28 (dd, J = 11,0; 8,3 Hz, 1H), 4,78–4,55 (m, TDI-006931 2H), 4,23 (dd, J = 20,4; 5,6 Hz, 2H), 3,80 (dt, J = 87,6; 5,7 Hz, 2H), 2,97–2,80 (m, 2H). LC- MS: m/z 290,2 [M+H]+ RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ 12,55 (s, 1H), 8,19– 7,86 (m, 1H), 7,63 (t, J = 8,3 Hz, 1H), 4,74 (s, TDI-006932 2H), 4,24 (dd, J = 22,3; 5,4 Hz, 2H), 3,83 (dt, J = 83,9; 5,8 Hz, 2H), 3,06–2,86 (m, 2H). LC-MS: m/z 281,2 [M+H]+ RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ 11,88 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 7,78 (d, J = 31,3 Hz, 1H), 4,73–4,53 (m, 3H), 4,22 (dd, J = 24,8; TDI-007362 5,6 Hz, 2H), 3,79 (dt, J = 88,1; 5,8 Hz, 2H), 2,85 (dt, J = 41,3; 5,4 Hz, 2H). LC-MS: m/z 363,1 [M+H] +

RMN 1H (400 MHz, MeOD) δ 8,48-8,45 (m, 1H), 7,34 (s, 1H), 4,80 (s, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,29 (s, TDI-007433 2H), 4,00 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 3,86 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 3,42 (d, J = 3,5 Hz, 3H), 2,95-2,86 (m, 2H). LC-MS: m/z 273,0 [M+H]+

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

RMN 1H: (CD3OD, 400 MHz) δ 7,84 (brs, 1H), 7,73 (brs, 1H), 7,02 (s, 1H), 4,46 (s, 1H), 4,31 (s, 1H), 4,19 (s, 1H), 4,06 TDI-007445 (s, 1H), 3,94 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 3,74 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 2,89 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 2,95 (t, J = 5,6 Hz, 1H). LCMS: m/z 365,0 [M+H]+ RMN 1H: (CD3OD, 400 MHz) δ 7,77 (s, 1H), 7,20 – 7,18 (m, 1H), 6,53 – 6,51 (m, 1H), 4,50 (s, 1H), 4,39-4,30 (m, 2H), TDI-007457 4,15 (s, 1H), 3,94 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 3,74 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 2,97- 2,90 (m, 2H). LC-MS: m/z 364,9 [M+H]+ RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, T=80 ºC) δ 12,10 (br.s, 1H), 7,99 (s, 1H), 4,67 (s, 2H), 4,39 (br.s, TDI-007542 1H), 4,22-4,21 (m, 2H), 3,82 (s, 2H), 2,90-2,89 (m, 2H). LC-MS: m/z 308,0 [M+H] +

RMN 1H (400 MHz, CD3OD): δ 7,15 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,61- 4,57 (m, 1H), 4,36 (d, J TDI-007544 = 11,2 Hz, 2H), 4,00 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 3,78 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 2,95- 2,87 (m, 2H). LC-MS: m/z 301,0 [M+H]+

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 7,34 (dd, J = 4,5; 8,4 Hz, 1H), 7,12 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,82-4,68 (m, 1H), 4,59 (q, J = 15,2 Hz, 1H), 4,43-4,31 (m, 2H), 3,87 (brd, J = 4,8 TDI-007553 Hz, 1H), 3,80 (dd, J = 4,5; 13,9 Hz, 0,5H), 3,46 (dd, J = 5,8; 13,6 Hz, 0,5H), 3,24-3,08 (m, 1H), 1,36 (dd, J = 7,0; 14,8 Hz, 3H). LC-MS: m/z 313,1 [M+H]+ RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, T=80 ºC) δ 10,93 (br.s, 1H), 6,49 (s, 1H), 4,58 (s, 2H), 4,32 (s, 1H), 4,21 (t, J = 5,6 Hz, 2H), TDI-007560 3,94 (t, J = 6,8 Hz, 4H), 3,80 (s, 2H), 2,82 (t, J = 3,2 Hz, 2H), 2,27-2,20 (m, 2H). LC-MS: m/z 338,0 [MS+H]+ RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 7,34 (dd, J=3,9; 8,3 Hz, 1H), 7,12 (d, J=8,4 Hz, 1H), 4,71-4,68 (m, 1H), 4,67-4,51 (m, 1H), 4,37 (s, 2H), 3,86 (brd, TDI-007575 J=5,0 Hz, 1H), 3,80 (dd, J=4,6; 13,9 Hz, 1H), 3,46 (dd, J=5,6; 13,5 Hz, 1H), 3,23-3,11 (m, 1H), 1,36 (dd, J=6,8; 14,5 Hz, 3H). LC-MS: m/z 313,1 [MS+H]+

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 7,33 (dd, J = 4,1; 8,4 Hz, 1H), 7,11 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,68-4,63 (m, 1H), 4,58 (brd, J = 14,9 Hz, 1H), 4,38-4,34 (m, 2H), 3,86 (dd, J = 2,9; TDI-007576 4,8 Hz, 1H), 3,79 (dd, J = 4,6; 13,9 Hz, 0,5H), 3,45 (dd, J = 5,9; 13,8 Hz, 0,5H), 3,17 (td, J = 6,3, 13,0 Hz, 1H), 1,35 (dd, J = 6,9; 14,5 Hz, 3H). LC-MS: m/z 313,1 [MS+H]+ RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,70 (s, 1H), 4,87 (s, 2H), 4,40 (br. s, 1H), 4,23 (s, 2H), 3,81 (t, J TDI-007586 = 5,4 Hz, 2H), 2,96–2,94 (m, 2H). LC-MS: m/z 324,0 [MS+H] +

RMN 1H (DMSO-d6,, 400 MHz, T=80) δ 11,23 (br. s, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 4,34 (s, 2H), 4,10 TDI-007635 (s, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,76 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 2,89 (t, J = 5,2 Hz, 2H). LC-MS: m/z 379,0, 381,0 [MS+H]+ RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz, T=80) δ 7,73 (s, 2H), 7,03 (s, 1H), 4,19-4,05 (m, 4H), 3,98 (s, 3H), TDI-007945 3,76 (s, 2H), 2,86 (s, 2H). LC-MS: m/z 379,0, 381,0 [MS+H]+

Estrutura ID no Dados espectroscópicos RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz, T=80) δ 7,74 (s, 2H), 7,03 (s, 1H), 4,22 (s, 2 H), 4,08-4,00 (m, 2H)， TDI-008026 3,99 (s, 3H), 3,78 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,25 (s, 3H), 2,86 (s, 2H).

RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 7,13 (t, J = 2,9 Hz, 2H), 4,72 (s, 1H), 4,64 (s, 1H), 4,28 (d, J = 11,4 TDI-008034 Hz, 2H), 4,01 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 3,86 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 3,83 (s, 3H), 3,42 (d, J = 8,8 Hz, 3H), 2,94-2,82 (m, 2H).

RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,30-7,14 (m, 2H), 4,75-4,54 (m, 3H), 4,27- 4,14 (m, 2H), 3,92-3,69 TDI-008061 (m, 5H), 2,93-2,75 (m, 2H). LC-MS: m/z 341,0 [M+H]+ RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,36-7,09 (m, 2H), 4,80-4,49 (m, 3H), 4,33- 4,12 (m, 4H), 3,97-3,66 TDI-008062 (m, 2H), 2,94-2,75 (m, 2H), 1,27 (t, J = 7,1 Hz, 3H). LC-MS: m/z 355,0 [M+H]+

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

LC-MS: m/z 365,1 [M+H]+

TDI-008069

LC-MS: m/z 365,1 [M+H]+

TDI-008070

LC-MS: m/z 375,1 [M+H]+

TDI-008071

LC-MS: m/z 376,1 [M+H]+

TDI-008072

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

LC-MS: m/z 376,1 [M+H]+

TDI-008073

LC-MS: m/z 377,1 [M+H]+

TDI-008074

LC-MS: m/z 378,1 [M+H]+

TDI-008075

LC-MS: m/z 379,1 [M+H]+

TDI-008076

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,33 (brs, 1H), 7,73 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,22 (s, 1H), 6,52 (brs, 1H), TDI-008077 4,57 (s, 2H), 4,32-4,26 (m, 1H), 4,13 (brs, 2H), 3,94 (s, 3H), 3,76 (brs, 2H), 2,88 (brs, 2H). LC-MS: m/z 379,0 [M+H]+

LC-MS: m/z 381,1 [M+H]+

TDI-008078

LC-MS: m/z 381,1 [M+H]+

TDI-008079

LC-MS: m/z 381,0 [M+H]+

TDI-008080

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

LC-MS: m/z 381,1 [M+H]+

TDI-008081

LC-MS: m/z 390,1 [M+H]+

TDI-008082

LC-MS: m/z 390,1 [M+H]+

TDI-008083

LC-MS: m/z 391,1 [M+H]+

TDI-008084

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

LC-MS: m/z 391,1 [M+H]+

TDI-008085

LC-MS: m/z 391,1 [M+H]+

TDI-008086

LC-MS: m/z 391,1 [M+H]+

TDI-008087

LC-MS: m/z 391,1 [M+H]+

TDI-008088

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

LC-MS: m/z 393,0 [M+H]+

TDI-008089

LC-MS: m/z 393,1 [M+H]+

TDI-008090

LC-MS: m/z 393,0 [M+H]+

TDI-008091

LC-MS: m/z 393,1 [M+H]+

TDI-008092

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

LC-MS: m/z 393,1 [M+H]+

TDI-008093

LC-MS: m/z 393,1 [M+H]+

TDI-008094

LC-MS: m/z 393,1 [M+H]+

TDI-008095

LC-MS: m/z 394,1 [M+H]+

TDI-008096

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

LC-MS: m/z 400,0 [M+H]+

TDI-008097

LC-MS: m/z 400,0 [M+H]+

TDI-008098

LC-MS: m/z 402,0 [M+H]+

TDI-008100

LC-MS: m/z 405,1 [M+H]+

TDI-008101

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

LC-MS: m/z 406,1 [M+H]+

TDI-008102

LC-MS: m/z 406,1 [M+H]+

TDI-008103

LC-MS: m/z 406,0 [M+H]+

TDI-008104

LC-MS: m/z 406,1 [M+H]+

TDI-008105

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

LC-MS: m/z 406,0 [M+H]+

TDI-008106

LC-MS: m/z 406,1 [M+H]+

TDI-008107

LC-MS: m/z 406,1 [M+H]+

TDI-008108

LC-MS: m/z 406,0 [M+H]+

TDI-008109

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

LC-MS: m/z 406,0 [M+H]+

TDI-008110

LC-MS: m/z 406,1 [M+H]+

TDI-008111

LC-MS: m/z 407,1 [M+H]+

TDI-008112

LC-MS: m/z 409,9 [M+H]+

TDI-008113

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

LC-MS: m/z 412,0 [M+H]+

TDI-008114

LC-MS: m/z 415,0 [M+H]+

TDI-008115

LC-MS: m/z 415,0 [M+H]+

TDI-008116

LC-MS: m/z 417,0 [M+H]+

TDI-008117

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

LC-MS: m/z 418,1 [M+H]+

TDI-008118

LC-MS: m/z 418,1 [M+H]+

TDI-008120

RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,39-7,26 (m, 2H), 5,14 (q, J = 9,2 Hz, 2H), 4,81-4,56 (m, 3H), 4,26- TDI-008130 4,17 (m, 2H), 3,92-3,70 (m, 2H), 2,93-2,78 (m, 2H). LC-MS: m/z 411,0 [M+H]+

RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 13,11 (brs, 1H), 8,11- 7,62 (m, 3H), 7,19 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 4,72-4,59 (m, 1H), 4,26 (brs, 1H), TDI-008136 4,16 (brd, J = 5,3 Hz, 1H), 4,11-3,86 (m, 1H), 3,84-3,65 (m, 2H), 3,09- 2,88 (m, 2H). LC-MS: m/z 399,1 [M+H]+

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,84-7,46 (m, 1H), 7,39-7,29 (m, 1H), 7,09 (brdd, J = 8,1; 16,4 Hz, 1H), 4,82 (brs, 1H), 4,43 (brs, 1H), 4,30 TDI-008179 (brd, J = 11,8 Hz, 2H), 4,08 (brt, J = 5,5 Hz, 1H), 3,69-3,59 (m, 2H), 3,09 (brd, J = 5,7 Hz, 2H). LC-MS: m/z 377,0 [M+H]+ RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 13,02 (brs, 1H), 11,81-11,72 (m, 1H), 8,01-7,89 (m, 1H), 7,64 (brs, 1H), 6,89 (d, J = 6,1 Hz, 1H), 4,60-4,51 TDI-008185 (m, 1H), 4,36 (s, 1H), 4,16 (brd, J = 5,3 Hz, 2H), 3,98-3,76 (m, 1H), 3,66 (brs, 1H), 2,90- 2,75 (m, 2H). LC-MS: m/z 349,0 [M+H]+ RMN 1H: (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,82-11,77 (m, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,15- 7,09 (m, 1H), 6,57 -6,52 (m, 1H), 4,58-4,55 (m, TDI-008246 3H), 4,18-4,17 (m, 1H), 4,11-4,10 (m, 1H), 3,95- 3,92 (m, 3H), 3,83-3,82 (m, 1H), 3,67-3,64 (m, 1H), 2,88-2,82 (m, 2H). LC-MS: m/z 363,0 [M+H]+ RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,79 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,11 (dd, J = 6,4; 14,0 Hz, 1H), 6,51 (dd, J = 1,9; 15,0 Hz, 1H), TDI-008292 4,46 (brs, 2H), 4,36 (brs, 2H), 4,16 (s, 1H), 4,05 (s, 1H), 3,96-3,90 (m, 3H), 3,83 (brt, J = 5,5 Hz, 1H), 3,70-3,58

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

(m, 4H), 3,23-3,16 (m, 3H), 2,94-2,81 (m, 2H). LC-MS: m/z 421,1 [M+H]+

RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 7,74 (dd, J = 2,1; 9,5 Hz, 1H), 7,21 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,50 (dd, J = 2,1; 12,7 Hz, 1H), 4,60 (s, 1H), 4,47 (s, 1H), TDI-008371 4,37-4,26 (m, 3H), 4,18 (s, 1H), 3,97 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 3,76 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 2,95 (td, J = 5,6; 19,8 Hz, 2H), 1,57 (t, J = 7,3 Hz, 3H). LC- MS: m/z 393,0 [M+H]+ LC-MS: m/z 356,0 [M+H]+

TDI-008437

LC-MS: m/z 357,1 [M+H]+

TDI-008438

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

LC-MS: m/z 381,1 [M+H]+

TDI-008439

LC-MS: m/z 382,1 [M+H]+

TDI-008440

LC-MS: m/z 396,1 [M+H]+

TDI-008441

LC-MS: m/z 398,1 [M+H]+

TDI-008442

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

LC-MS: m/z 455,1 [M+H]+

TDI-008443

LC-MS: m/z 379,1 [M+H]+

TDI-008444

LC-MS: m/z 390,1 [M+H]+

TDI-008445

LC-MS: m/z 390,0 [M+H]+

TDI-008446

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

LC-MS: m/z 390,1 [M+H]+

TDI-008447

LC-MS: m/z 394,0 [M+H]+

TDI-008448

LC-MS: m/z 394,1 [M+H]+

TDI-008449

LC-MS: m/z 406,1 [M+H]+

TDI-008450

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

LC-MS: m/z 445,1 [M+H]+

TDI-008451

LC-MS: m/z 447,1 [M+H]+

TDI-008452

LC-MS: m/z 444,0 [M+H]+

TDI-008455

LC-MS: m/z 419,1 [M+H]+

TDI-008457

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

LC-MS: m/z 487,1 [M+H]+

TDI-008458

LC-MS: m/z 443,1 [M+H]+

TDI-008460

LC-MS: m/z 445,1 [M+H]+

TDI-008461

LC-MS: m/z 446,1 [M+H]+

TDI-008462

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

LC-MS: m/z 512,1 [M+H]+

TDI-008464

RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,71 (d, J = 18,4 Hz, 1H), 8,35 (t, J = 3,5 Hz, 1H), 8,09-7,98 (m, 1H), 7,93-7,83 (m, 1H), 7,77- 7,69 (m, 1H), 8,08-7,68 (m, 1H), 7,43-7,31 (m, 1H), 6,99-6,89 (m, 1H), TDI-008474 4,53 (s, 1H), 4,48 (t, J = 5,3 Hz, 1H), 4,55 (brs, 1H), 4,16 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 4,03 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 3,83 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 3,69- 3,62 (m, 1H), 2,93-2,80 (m, 2H). LC-MS: m/z 415,0 [M+H]+ RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 12,00-11,88 (m, 1H), 8,39 (brd, J = 4,5 Hz, 1H), 7,29-7,22 (m, 1H), TDI-008520 4,67-4,49 (m, 2H), 4,24- 4,09 (m, 2H), 3,89-3,61 (m, 2H), 2,93-2,76 (m, 5H). LC-MS: m/z 340,0 [M+H]+

RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 6,90-6,84 (m, 1H), 4,80- 4,77 (m, 1H), 4,66 (brs, 1H), 4,33 (brd, J = 18,8 TDI-008522 Hz, 2H), 4,01-3,91 (m, 1H), 3,75 (brs, 1H), 2,98-2,83 (m, 2H), 2,21 (s, 3H). LC-MS: m/z 340,0 [M+H]+

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 6,98 (d, J = 6,1 Hz, 1H), 4,36 (s, 1H), 4,29 (s, 1H), 4,19 (brs, 1H), 4,13 (s, 1H), 3,91 (t, J TDI-008605 = 5,8 Hz, 1H), 3,71 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 2,96- 2,84 (m, 2H), 2,39 (d, J = 13,6 Hz, 3H), 2,15 (d, J = 5,4 Hz, 3H). LC-MS: m/z 393,0 [M+H]+ RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 12,11 (s, 1H), 7,79- 7,85 (m, 1H), 4,79-4,89 (m, 2H), 4,53-4,67 (m, TDI-008768 1H), 4,13-4,24 (m, 2H), 3,87 (s, 1H), 3,64-3,75 (m, 1H), 2,85-3,00 (m, 2H), 2,45- 2,48 (m, 3H). LC-MS: m/z 381,0 [M+H]+

RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 12,00 (brs, 1H), 7,66- 7,74 (m, 1H), 4,74-4,90 (m, 2H), 4,62 (d, J = TDI-008777 4,63 Hz, 1H), 4,11-4,25 (m, 2H), 3,86 (s, 1H), 3,69 (s, 1H), 2,85-3,00 (m, 2H), 2,62 (s, 3H). LC-MS: m/z 381,1 [M+H]+

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,77 (brd, J = 19,0 Hz, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,19 (dd, J = 6,0; 17,2 Hz, 1H), 6,52 (dd, J = 2,0; 19,0 Hz, 1H), 4,59- 4,49 (m, 3H), 4,19-4,04 TDI-008783 (m, 2H), 3,92 (d, J = 13,5 Hz, 3H), 3,81 (brt, J = 5,5 Hz, 1H), 3,64 (brt, J = 5,5 Hz, 1H), 2,90-2,74 (m, 2H). LC- MS: m/z 407,0; 409,0 [M+H]+ RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,10 (brs, 1H), 7,72 (d, J=2,08 Hz, 1H), 7,07 (s, 1H), 6,60-6,25 (m, 2H), 4,56 (s, 2H), 4,39 TDI-008796 (td, J = 14,34; 3,85 Hz, 2H), 4,30-4,23 (m, 1H), 4,14 (brs, 2H), 3,94 (s, 3H), 3,77 (brs, 2 H), 2,89 (brs, 2H). LC-MS: m/z 425,1 [M+H]+ RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,71 (s, 1H), 7,04 (s, 1H), 6,46 (brs, 1H), 4,56 (s, 2H), 4,28-4,09 (m, 4H), 3,94 (s, 3H), TDI-008797 3,76 (brs, 2H), 3,12 (brs, 24H), 2,99-2,79 (m, 2H), 2,50 (brd, J = 1,32 Hz, 8H), 1,41 (t, J = 6,95 Hz, 3H). LC-MS: m/z 389,0 [M+H]+ LC-MS: m/z 352,1 [M+H]+

TDI-008860

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

LC-MS: m/z 364,1 [M+H]+

TDI-008861

LC-MS: m/z 366,1 [M+H]+

TDI-008862

LC-MS: m/z 366,1 [M+H]+

TDI-008863

LC-MS: m/z 368,1 [M+H]+

TDI-008864

LC-MS: m/z 377,1 [M+H]+

TDI-008865

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

LC-MS: m/z 388,1 [M+H]+

TDI-008866

LC-MS: m/z 403,0 [M+H]+

TDI-008867

RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,68 (s, 1H), 4,87- 4,67 (m, 2H), 4,60 (brs, 1H), 4,29-4,11 (m, 3H), TDI-008937 3,86 (brs, 1H), 3,69 (brs, 1H), 3,00-2,85 (m, 2H), 2,71 (s, 3H). LC- MS: m/z 381,0 [M+H]+

RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 9,26-8,96 (m, 1H), 7,66- 7,52 (m, 1H), 4,77 (brs, 3H), 4,42-7,25 (m, 2H), TDI-008989 4,15 (d, J = 5,99 Hz, 2H), 4,04-3,70 (m, 2H), 3,05-2,89 (m, 2H). LC- MS: m/z 380,0 [M+H]+

Estrutura ID no Dados espectroscópicos

RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 7,67-7,65 (m, 1H), 7,07- 7,03 (m, 1H), 6,45-6,42 (m, 1H), 4,58-4,34 (m, 2H), 4,30 (s, 1H), 4,21- 4,19 (m, 1H), 4,00-3,99 TDI-009000 (d, 3H), 3,94-3,91 (m, 0,5H), 3,78-3,75 (m, 0,5H), 3,68-3,66 (m, 0,5H), 3,36-3,33 (m, 0,5H), 3,22-3,09 (m, 1H), 1,34 (q, 3H.

LC-MS: m/z 377,0 [M+H]+ RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 7,70-7,68 (m, 1H), 7,10- 7,06 (m, 1H), 6,48-6,45 (m, 1H), 4,56-4,34 (m, 2H), 4,33 (s, 1H), 4,23- 4,22 (m, 1H), 4,03-4,01 TDI-009001 (d, 3H), 3,95-3,94 (m, 0,5H), 3,85-3,80 (m, 0,5H), 3,70-3,65 (m, 0,5H), 3,41-3,36 (m, 0,5H), 3,24-3,13 (m, 1H), 1,39-1,35 (q, 3H). LC-MS: m/z 377,0 [M+H]+ RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,54 (brs, 1H), 8,11 (s, 1H), 7,40 (s, 1H), 4,61 (s, 2H), 4,31 (s, TDI-009007 3H), 4,21 (brs, 2H), 3,83 (brs, 2H), 2,96 (brs, 2H). LC-MS: m/z 380,0 [M+H]+

RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 8,02-7,95 (m, 1H), 7,83 (brd, J = 15,7 Hz, 1H), 7,15 (dd, J = 5,7; 13,3 Hz, 1H), 6,64-6,58 (m, TDI-009013 1H), 4,59 (s, 2H), 4,31 (brd, J = 6,8 Hz, 2H), 4,07 (d, J = 13,6 Hz, 2H), 3,95 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 3,74 (t, J = 5,3 Hz,

Estrutura ID no Dados espectroscópicos 1H), 3,50 (brs, 2H), 3,06-2,88 (m, 2H). LC- MS: m/z 349,0 [M+H]+ RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 7,00 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,65-4,58 (m, 2H), 4,38 (s, 1H), 4,32 (s, 1H), TDI-009072 3,89 (s, 3H), 3,78 (s, 1H), 2,96 (s, 2H), 2,67 (t, J = 8,1 Hz, 2H), 2,34 (brd, J = 7,9 Hz, 2H). LC-MS: m/z 366,0 [M+H]+ RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,70 (brs, 1H), 8,01 (s, 1H), 7,22 (brd, J = 6,5 Hz, 1H), 4,54 (s, TDI-009186 2H), 4,25 (s, 3H), 4,15 (brs, 2H), 3,77 (brs, 2H), 2,89 (brs, 2H). LC- MS: m/z 364,1 [M+H]+ RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,81 (brd, J = 4,6 Hz, 1H), 7,18 (brs, 1H), 6,66 (brd, J = 11,9 Hz, 1H), 4,64 (s, 2H), 4,20- TDI-009208 4,14 (m, 1H), 4,10 (s, 1H), 3,99-3,92 (m, 3H), 3,86-3,77 (m, 1H), 3,65 (brt, J = 5,4 Hz, 1H), 2,93-2,77 (m, 2H). LC- MS: m/z 370,1 [M+H]+ Ensaios biológicos

[0126] Ensaio bioquímico:

Os compostos foram suspensos na concentração de 10 mM para estoque, usando DMSO, e testados para determinar os seus valores de IC50 contra h-cGAS, em placas de polipropileno com 384 poços, usando um sistema RapidFire 365 de espectrometria de massa(RF-MS). A concentração final de h-cGAS completa, dsDNA, ATP e GTP eram 100 nM, 25 nM, 100 µM e 100 µM, respectivamente.

O tampão de reação era composto por Tris-HCl 20 mM, pH 7,4, NaCl 150 mM, MgCl2 5 mM, ZnCl2 1 µM ZnCl2 e Tween-20 0,01%. Soluções de reação de 20 µl foram incubadas por 7 horas à temperatura ambiente (RT) e interrompidas pela adição de 60 µl de ácido fórmico 0,5% (v/v) por poço, seguido pela análise de RF-MS.

Um solvente aquoso de acetato de amônio 5 mM, pH 10, foi utilizado para o processo de carregamento/lavagem.

Usou-se um solvente orgânico, compreendendo acetato de amônio 5 mM, pH 10, em água 50%, acetona 25% e acetonitrila 25% para eluição dos analitos.

Aproximadamente 35 µl de cada amostra foi aspirado de uma placa com 384 poços e separados usando um cartucho de carbono Graphitic Tipo D.

A amostra carregada no cartucho foi então lavada por 5 segundos, a 1,5 mL min-1, usando o solvente aquoso.

ATP, GTP e cGAMP foram eluídos por 5 segundos usando o solvente orgânico a uma vazão de 1,5 mL min-1, seguido pela re-equilibração com o solvente aquoso por 5 segundos a uma vazão de 1,5 mL min-1. As amostras foram analisadas, usando modo de ionização negativo no espectrômetro de massa, com uma temperatura do gás de 350 ºC, pressão do nebulizador de 35 psi e vazão do gás de 15 L min-1. A faixa de aquisição foi entre 300 e 800 m/z para todos os cromatogramas e as massas moleculares dos picos detectados foram: ATP: 505,9835, GTP: 521,9854 e cGAMP: 673,0906. A área sob a curva (AUC) das contagens dos íons extraídos, de cada analito, foi calculada usando o software Agilent RapidFire Integrator. A formação percentual de produto, para cGAMP, foi calculada como: formação de produto (%) = [(AUCcGAMP x 100)/(AUCcGAMP + ½ AUCATP + ½ AUCGTP)]. A formação percentual de produto de cada amostra a uma dada concentração do inibidor foi usada para determinar a inibição percentual por normalização contra o controle positivo (ausência de dsDNA) e controle negativo (sem inibidor). O % de inibição foi calculado como segue: % de inibição = 100 x [(amostra - controle negativo médio)/(controle positivo médio – controle negativo médio)].

[0127] Compostos representativos da invenção foram testados no ensaio bioquímico anterior com os resultados mostrados na Tabela

2.

Tabela 2. IC50s pelo ensaio bioquímico de cGAS IC50 h- IC50 h- IC50 h- cGAS cGAS cGAS ID no ID no ID no RF-MS RF-MS RF-MS (µM) (µM) (µM) TDI- TDI- TDI- 3,08 1,03 0,0768 004576 008062 008118 TDI- TDI- TDI- 2,41 0,0848 0,438 004581 008069 008120 TDI- TDI- TDI- 13,9 0,0228 1,12 005021 008070 008130 TDI- TDI- TDI- 5,86 0,0393 0,416 005323 008071 008136 TDI- TDI- TDI- 4,02 0,0975 0,506 005324 008072 008179 TDI- TDI- TDI- 3,23 0,0204 0,0322 005325 008073 008185 TDI- TDI- TDI- 0,352 0,0194 0,023 005397 008074 008246

IC50 h- IC50 h- IC50 h- cGAS cGAS cGAS ID no ID no ID no RF-MS RF-MS RF-MS (µM) (µM) (µM) TDI- TDI- TDI- 0,106 0,469 0,402 005685 008075 008292 TDI- TDI- TDI- 1,51 11,4 0,0232 005716 008076 008371 TDI- TDI- TDI- 3,29 0,0146 0,35 005719 008077 008437 TDI- TDI- TDI- 3,08 0,0318 0,112 005745 008078 008438 TDI- TDI- TDI- 0,203 0,890 0,663 005776 008079 008439 TDI- TDI- TDI- 24,7 0,0668 2,23 005777 008080 008440 TDI- TDI- TDI- 0,198 0,0479 5,22 005854 008081 008441 TDI- TDI- TDI- 1,74 0,322 0,706 005855 008082 008442 TDI- TDI- TDI- 7,69 0,0203 0,586 006171 008083 008443 TDI- TDI- TDI- 0,57 0,258 3,24 006182 008084 008444 TDI- TDI- TDI- 0,469 0,0309 0,035 006183 008085 008445 TDI- TDI- TDI- 0,14 2,05 0,901 006261 008086 008446 TDI- TDI- TDI- 7,63 0,0102 0,0249 006339 008087 008447 TDI- TDI- TDI- 0,129 0,0569 0,0259 006340 008088 008448 TDI- TDI- TDI- 0,043 0,0644 0,42 006354 008089 008449 TDI- TDI- TDI- 0,597 0,0267 0,0545 006358 008090 008450 TDI- TDI- TDI- 0,44 0,031 9,78 006359 008091 008451

IC50 h- IC50 h- IC50 h- cGAS cGAS cGAS ID no ID no ID no RF-MS RF-MS RF-MS (µM) (µM) (µM) TDI- TDI- TDI- 0,327 1,84 2,91 006360 008092 008452 TDI- TDI- TDI- 0,201 0,330 0,154 006366 008093 008455 TDI- TDI- TDI- 0,031 0,371 0,0446 006528 008094 008457 TDI- TDI- TDI- 0,039 0,929 0,629 006529 008095 008458 TDI- TDI- TDI- 0,138 5,95 0,83 006570 008096 008460 TDI- TDI- TDI- 0,049 0,0422 0,344 006622 008097 008461 TDI- TDI- TDI- 19,3 0,0853 1,2 006923 008098 008462 TDI- TDI- TDI- 0,402 5,27 3,91 006931 008100 008464 TDI- TDI- TDI- >25 0,105 0,018 006932 008101 008474 TDI- TDI- TDI- 0,591 0,0402 1,04 007362 008102 008520 TDI- TDI- TDI- 1,45 0,0441 0,365 007433 008103 008522 TDI- TDI- TDI- 0,0275 0,0952 0,568 007445 008104 008605 TDI- TDI- TDI- 0,0541 0,107 0,0226 007457 008105 008768 TDI- TDI- TDI- 1,23 0,0493 0,0305 007542 008106 008777 TDI- TDI- TDI- 0,166 2,97 0,0327 007544 008110 009001 TDI- TDI- TDI- 0,3 0,268 0,0233 007553 008111 009007 TDI- TDI- TDI- 6,74 0,201 0,583 007560 008112 009013

IC50 h- IC50 h- IC50 h- cGAS cGAS cGAS ID no ID no ID no RF-MS RF-MS RF-MS (µM) (µM) (µM) TDI- TDI- TDI- 0,174 0,962 0,0176 007575 008113 009186 TDI- TDI- TDI- 0,323 0,0622 0,0392 007576 008114 009208 TDI- TDI- TDI- 0,352 0,0451 0,350 007586 008115 008860 TDI- TDI- TDI- 0,0428 0,0252 0,480 007635 008116 008861 TDI- TDI- TDI- 0,125 0,0182 0,478 007945 008117 008862 TDI- TDI- TDI- 0,203 0,0172 0,147 008026 008783 008863 TDI- TDI- TDI- 0,401 0,984 0,455 008034 008796 008864 TDI- TDI- TDI- 0,131 0,351 1,58 008061 008797 008865 TDI- TDI- TDI- 0,0524 0,0776 0,452 008107 008937 008866 TDI- TDI- TDI- 0,552 0,0459 6,93 008108 008989 008867 TDI- TDI- TDI- 2,33 0,0245 18,6 008109 009000 009072

[0128] Ensaios celulares: Ensaio celular de Lucia luciferase em células THP1-Dual A potência de inibidores selecionados é determinada com células THP1-Dual humana que carregam uma luciferase secretada que reporta a expressão gênica induzida por interferon. Células THP1-Dual foram pré-incubadas em placas com 24 poços (2,5x105 células/poço, 500 µl por poço) ao longo de uma faixa de concentração indicada de inibidores por 1 hora. DMSO foi adicionado como controle negativo. As células foram transfectadas com 0,5 µg ml-1 de ligantes de dsDNA 100-bp em complexo com Lipofectamine 2000 (Invitrogen) por 24 horas. O complexo de transfecção foi preparado combinando 0,25 µg de dsDNA em 25 µL de Opti-MEM (Gibco) com 0,25 µL de Lipofectamine 2000 em 25 µL de Opti-MEM e adicionando o volume combinado de 50 µL por cada poço que continha as células. A luminescência da luciferase foi medida em cada amostra, usando o reagente QUANTI- Luc luciferase (InvivoGen) e seguindo o protocolo do fabricante. Resumidamente, 20 µL de sobrenadante da cultura celular por poço foram transferidos para uma placa branca opaca com 96 poços, e a luminescência foi registrada por um leitor de placas Biotek Synergy Neo (BioTek, Winooski, VT) com os seguintes parâmetros: 50 µL de injeção com o reagente luciferase, medição no ponto final com tempo inicial de 4 segundos e tempo de leitura de 0,1 segundo. A atividade relativa de luciferase para cada amostra tratada com composto foi calculada usando a amostra tratada com Lipofectamine 2000, como controle negativo, e a amostra tratada com complexo Lipofectamine 2000:dsDNA sem composto como controle positivo, ou seja, atividade relativa de luciferase = (RLUamostra – RLUcontrole negativo)/(RLUcontrole positivo – RLUcontrole negativo), onde RLU indica unidade de luciferase bruta.

[0129] Compostos representativos da invenção foram testados no ensaio celular referido acima com os resultados mostrados na Tabela 3.

Tabela 3. IC50s do ensaio celular de Lucia luciferase THP1-Dual, THP1-Dual, THP1-Dual, Lucia Lucia Lucia ID no ID no ID no luciferase luciferase luciferase IC50 (µM) IC50 (µM) IC50 (µM) TDI- TDI- TDI- >40 34 >10,0 6570 8179 8865 TDI- TDI- TDI- 5,26 9,9 >10,0 7445 8185 8866 TDI- TDI- TDI- 8,14 1,7 >10,0 7635 8246 8867 TDI- TDI- TDI- 4,95 >40,0 16,1 8070 8292 8937 TDI- TDI- TDI- 9 6,52 6,71 8071 8371 8989 TDI- TDI- TDI- 6,23 5,8 2,89 8073 8768 9000 TDI- TDI- TDI- 6,85 12,9 3,18 8074 8777 9001 TDI- TDI- TDI- 3,32 3,41 1,15 8077 8783 9007 TDI- TDI- TDI- 1,97 >40,0 >40,0 8087 8796 9013 TDI- TDI- TDI- 6,43 >10,0 >40,0 8116 8860 9072 TDI- TDI- TDI- 6,19 >10,0 0,72 8117 8861 9186 TDI- TDI- TDI- 25,78 >10,0 4,4 8130 8863 9208 TDI- TDI- 15,86 >10,0 8136 8864

Expressão do mRNA de IFNB1 em células A ativação celular da enzima cGAS leva à expressão do mRNA de IFNB1 em células THP1, macrófagos humanos primários e PBMCs humanas.

A expressão do mRNA de IFNB1 foi quantificada por qRT-PCR.

RNA total foi isolado de 5x105 células THP1 por poço de uma placa de 12 poços, as quais foram pré-incubadas com inibidores por 1 hora. Usou-se macrófagos primários humanos a 3x105 células por poço de uma placa de 12 poços. Usou-se PBMCs humanas a 1x106 células por poço de uma placa de 12 poços. As células foram transfectadas por meio de 100 µL de solução de transfecção Opti-MEM compreendendo 2 µg de dsDNA 100-bp em complexo com 2 µL de Lipofectamine 2000. As células foram coletadas quatro horas após a transfecção, e o RNA foi extraído com 500 µL de Trizol (Ambion). 800 ng de RNA total transcrito para síntese de cDNA em 20 µL de volume final de reação usando o primer oligo(dT)20 a 2,5 µM e Superscript III 10 U/µL (Thermo- Fisher) por 50 minutos a 50 ºC. PCR quantitativa foi realizada em um sistema Mx3000P qPCR (Agilent Technologies) com 1/20o do volume do material de transcrição reversa como insumo para cada reação de qPCR. Os níveis de expressão dos mRNAs de IFNB1 e TUBA1B foram medidos em triplicata técnica para cada amostra. os valores de ciclo limiar (Threshold Cycle, CT) obtidos para os mRNAs de IFNB1 foram normalizados para os valores do CT de TUBA1B e usados para calcular CT. Os níveis de expressão relativa de mRNA de IFNB1 foram calculados usando o método CT (2CT). O grau de inibição de cGAS foi determinado normalizando o nível de expressão de mRNA de IFNB1 mRNA de cada amostra em relação ao controle com DMSO apenas.

[0130] Compostos representativos da invenção foram testados nos ensaios celulares referidos acima com os resultados mostrados na Tabela 4.

Tabela 4 PBMCs PBMCs humanas Macrófago THP1, qRT- humanas congeladas- humano, ID no PCR frescas, descongeladas, qRT-PCR IC50 (µM) qRT-PCR qRT-PCR IC50 (µM) IC50 (µM) IC50 (µM) TDI- 1,44 1,2 n.d. n.d. 7445 TDI- 2,14 n.d. n.d. n.d. 7635 TDI- 0,93 0,86 1,15 n.d. 8077 TDI- 0,95 0,62 n.d. n.d. 8087 TDI- 1,09 0,6 1,12 1,16 8246 n.d. – não determinado

[0131] Experimentos iniciais in vivo sugerem que os compostos aqui descritos penetram a barreira hematoencefálica. Eles devem, portanto, ser úteis no tratamento de transtornos autoimunes dentro do SNC.

Claims (37)

REIVINDICAÇÕES

1. Composto de fórmula (I)

I caracterizado pelo fato de que: R1 é hidrogênio, (C1-C3)alquila, CH2CH2-OR3, ou fluoro(C1-C3)alquila; R2 é hidrogênio, (C1-C3)alquila, ou CH2CH2-OR3, ou, tomados junto com os átomos aos quais eles estão ligados, R2 e R30 podem formar um anel alifático de 4 a 6 membros; R3 é hidrogênio ou (C1-C3)alquila; R4 é escolhido de hidrogênio, halogênio, (C1-C3)alcóxi, anel de heterociclila monocíclico opcionalmente substituído, ciano, anel de fenila opcionalmente substituído, anel de heterociclila bicíclico opcionalmente substituído, amino(C1-C3)alquila, (C1-C3)alquilamino(C1-C3)alquila, (C1-C3)dialquilamino(C1-C3)alquila, (C1-C3)alcóxi(C1-C3)alquila, (C1-C6)hidrocarbila, heterociclila(C1-C3)alquila, benzila, benzila substituído com heterociclila, (C1-C3)alquilaminocarbonila, (C1-C3)acilamino; em que:

o referido heterociclila monocíclico opcionalmente substituído pode ser substituído com um ou mais substituintes escolhidos de: (C1-C3)alquila, amino, ciano, (C1-C3)alquilamino, (C1-C3)alcóxi, oxo, fluoro(C1-C3)alquila, halogênio, hidróxi e hidróxi(C1-C3)alquila; o referido fenila opcionalmente substituído pode ser substituído com um ou mais substituintes escolhidos de: amino, (C1-C3)alquilamino, meta-(C1-C3)dialquilamino, (C1-C3)alcóxi, hidróxi, halogênio, orto-ciano, meta-ciano, aminocarbonila, metilenodióxi, etilenodióxi, (C1-C3)acilamino, fluoro(C1-C3)acilamino, e hidróxi(C1-C3)alquilaminosulfonila; e o referido heterociclila bicíclico opcionalmente substituído pode ser substituído com um ou mais substituintes escolhidos de: (C1-C3)alquila, hidróxi e oxo; R5 é escolhido de hidrogênio, halogênio, (C1-C3)alquila, (C1-C3)alcóxi, fluoro(C1-C3)alquila, (C1-C3)alquila,

fluoro(C1-C3)alcóxi, ciano, e ; R6 é escolhido de hidrogênio, halogênio, ciano,-C≡CH,-CH=CH2, metila, e trifluormetila; R7 é escolhido de hidrogênio, halogênio, (C1-C3)alcóxi, fluoro(C1-C3)alcóxi, ciano, (C1-C3)alquila, e fluoro(C1-C3)alquila; R20 é hidrogênio ou (C1-C3)alquila, ou, tomados junto com o carbono ao qual eles estão ligados, R20 e R21 podem formar um anel carbocíclico alifático de 3 a 5 membros;

R21 é hidrogênio ou (C1-C3)alquila, ou, tomados junto com o carbono ao qual eles estão ligados, R21 e R20 podem formar um anel carbocíclico alifático de 3 a 5 membros; R30 é hidrogênio, ou, tomados junto com os átomos aos quais eles estão ligados, R30 e R2 podem formar um anel alifático de 4 a 6 membros; e n é 1 ou 2; com as condições que: (1) quando R2 é (C1-C3)alquila, nem todos dentre R4, R5, R6 e R7 podem ser hidrogênio; (2) quando R1 é hidrogênio, R2 é metila e R5 é halogênio, R7 não pode ser H ou cloro; e (3) quando R2 é (C1-C3)alquila, e R5 é metóxi ou carbóxi, R7 não pode ser H.

2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que: i) R20 é hidrogênio ou (C1-C3)alquila; ii) R21 é hidrogênio; iii) R30 é hidrogênio; e iv) n é 1.

3. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que R1 é hidrogênio ou metila.

4. Composto de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que R1 é hidrogênio.

5. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que R2 é hidrogênio ou metila.

6. Composto de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que R2 é hidrogênio.

7. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que R7 é escolhido de hidrogênio, halogênio, metóxi, ciano e trifluormetila.

8. Composto de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que R7 é halogênio.

9. Composto de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que R7 é cloro ou fluoro.

10. Composto de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que R7 é fluoro.

11. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que R6 é halogênio.

12. Composto de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que R6 é cloro.

13. Composto de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que R6 é bromo.

14. Composto de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que R6 é fluoro.

15. Composto de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que R7 é fluoro.

16. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que R5 é escolhido de hidrogênio, halogênio, ciano e trifluorometila.

17. Composto de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que R5 é hidrogênio.

18. Composto de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que R5 é hidrogênio.

19. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que R20 é hidrogênio ou metila.

20. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que R4 é escolhido de fenila opcionalmente substituído, heterociclila bicíclica opcionalmente substituído, e heteroarila monocíclica opcionalmente substituído.

21. Composto de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que R4 é fenila, opcionalmente substituído com um substituinte escolhido de amino, halogênio, orto-ciano, meta- ciano, metóxi, hidróxi e aminocarbonila.

22. Composto de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de que os substituintes opcionais são escolhidos de para-amino, fluoro, orto-ciano, meta-ciano, orto-hidróxi, meta- hidróxi e meta-aminocarbonila.

23. Composto de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que R4 é um heteroarila monocíclica, opcionalmente substituído com um substituinte escolhido de amino, halogênio, metila, difluorometila, metóxi e ciano.

24. Composto de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pelo fato de que o referido heteroarila monocíclica opcionalmente substituído é escolhido de furano, tiofeno, pirrol, pirazol, oxazol, oxadiazol, tiazol, isoxazol, isotiazol, imidazol, triazol, piridina, pirimidina, pirazina e piridazina.

25. Composto de acordo com a reivindicação 24, caracterizado pelo fato de que o referido heteroarila monocíclica opcionalmente substituído é escolhido de pirazol, oxazol, isoxazol, triazol, oxadiazol e imidazol.

26. Composto de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que o referido heteroarila monocíclica opcionalmente substituído é pirazol ou triazol.

27. Composto de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que o substituinte opcional é metila.

28. Composto de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que R4 é: , R20 é hidrogênio ou metila, e R2 é hidrogênio.

29. Composto de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que o referido heterociclila bicíclica opcionalmente substituído é escolhido de indol, isoindol, benzimidazol, benzofurano, benzotiofeno, benzooxadiazol, benzotiazol, pirazolpiridina, quinolina, isoquinolina, quinazolina, quinoxalina, benzodioxol, di-hidrobenzooxazina e purina.

30. Composto de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que o referido heterociclila bicíclica opcionalmente substituído é escolhido de benzooxadiazol, pirazolpiridina, benzodioxol, di-hidrobenzooxazina e purina.

31. Método para inibir uma resposta inflamatória em um paciente caracterizado por compreender administrar um composto de fórmula (II):

II em que: R1 é hidrogênio, (C1-C3)alquila, CH2CH2-OR3, ou fluoro(C1-C3)alquila; R2 é hidrogênio ou (C1-C3)alquila, CH2CH2-OR3, ou, tomados junto com os átomos aos quais eles estão ligados, R2 e R30 podem formar um anel alifático de 4 a 6 membros; R3 é hidrogênio ou (C1-C3)alquila; R4 é escolhido de hidrogênio, halogênio, (C1-C3)alcóxi, heterociclila monocíclico opcionalmente substituído, ciano, fenila opcionalmente substituído, heterociclila bicíclico opcionalmente substituído, amino(C1-C3)alquila, (C1-C3)alquilamino(C1-C3)alquila, (C1-C3)dialquilamino(C1-C3)alquila, (C1-C3)alcóxi(C1-C3)alquila, (C1-C6)hidrocarbila, heterociclila(C1-C3)alquila, benzila, benzila substituído com heterociclila, (C1-C3)alquilaminocarbonila, (C1-C3)acilamino; em que: o referido heterociclila monocíclico opcionalmente substituído pode ser substituído com um ou mais substituintes escolhidos de: (C1-C3)alquila, amino, ciano, (C1-C3)alquilamino, (C1-C3)alcóxi, oxo,

fluoro(C1-C3)alquila, halogênio, hidróxi e hidróxi(C1-C3)alquila; o referido fenila opcionalmente substituído pode ser substituído com um ou mais substituintes escolhidos de: amino, (C1-C3)alquilamino, meta-(C1-C3)dialquilamino, (C1-C3)alcóxi, hidróxi, halogênio, orto-ciano, meta-ciano, aminocarbonila, metilenodióxi, etilenodióxi, (C1-C3)acilamino, fluoro(C1-C3)acilamino, e hidróxi(C1-C3)alquilaminosulfonila; e o referido heterociclila bicíclico opcionalmente substituído pode ser substituído com um ou mais substituintes escolhidos de: (C1-C3)alquila, hidróxi e oxo; R5 é escolhido de hidrogênio, halogênio, (C1-C3)alquila, (C1-C3)alcóxi, fluoro(C1-C3)alquila, (C1-C3)alquila,

fluoro(C1-C3)alcóxi, ciano, e ; R6 é escolhido de hidrogênio, halogênio, ciano,-C≡CH,-CH=CH2, metila, e trifluormetila; R7 é escolhido de hidrogênio, halogênio, (C1-C3)alcóxi, fluoro(C1-C3)alcóxi, ciano, (C1-C3)alquila, e fluoro(C1-C3)alquila; R20 é hidrogênio ou (C1-C3)alquila, ou, tomados junto com o carbono ao qual eles estão ligados, R20 e R21 podem formar um anel carbocíclico alifático de 3 a 5 membros; R21 é hidrogênio ou (C1-C3)alquila, ou, tomados junto com o carbono ao qual eles estão ligados, R21 e R20 podem formar um anel carbocíclico alifático de 3 a 5 membros;

R30 é hidrogênio, ou, tomados junto com os átomos aos quais eles estão ligados, R30 e R2 podem formar um anel alifático de 4 a 6 membros; e n é 1 ou 2.

32. Método para inibir inflamação em um paciente caracterizado por compreender administrar um composto conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 30.

33. Método de acordo com a reivindicação 31, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente inibir expressão de interferon ativada por dsDNA no referido paciente.

34. Método para inibir expressão de interferon ativada por dsDNA em um mamífero caracterizado por compreender administrar ao referido mamífero um composto conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 30.

35. Método para tratar metástase de câncer em um paciente caracterizado por compreender administrar um composto de fórmula (II).

36. Método para tratar metástase de câncer em um paciente caracterizado por compreender administrar um composto conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 30.

37. Formulação farmacêutica caracterizada por compreender um veículo farmaceuticamente aceitável e um composto conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 30.