BR112020009910A2 - composições de ácido ascórbico estáveis e métodos de usar as mesmas - Google Patents

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Abstract

A presente invenção refere-se a uma composição compreendendo ácido orgânico (por exemplo, ácido ascórbico), glutationa, um derivado de glutationa, um conjugado de glutationa, um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, ou qualquer combinação dos mesmos, e métodos de utilizá-los. Em determinados aspectos o pedido refere-se a glutationa, um derivado de glutationa, um conjugado de glutationa, um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos; e um ácido orgânico; em que a razão molar é cerca de 0,5-1:1. A composição pode ainda compreender um sal de bicarbonato, em que a razão molar é cerca de 0,1-0,5: 0,5-1: 1.

Description

“COMPOSIÇÕES DE ÁCIDO ASCÓRBICO ESTÁVEIS E MÉTODOS DE USAR AS MESMAS”. REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS
[001] Este pedido reivindica o benefício do Pedido Provisório dos EUA Nº de Série. 62/588.300, depositado em 17 de novembro de 2017; e 62/684.700, depositado em 13 de junho de 2018, cada um dos quais é aqui incorporado por referência em sua totalidade.
CAMPO DA INVENÇÃO
[002] A presente divulgação refere-se a composições compreendendo ácido orgânico, glutationa, um derivado de glutationa, um conjugado de glutationa, um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, ou qualquer combinação dos mesmos e seu uso.
FUNDAMENTO
[003] Glutationa ou “GSH” refere-se a um composto tendo a fórmula: , ou uma forma zwitteriônica dos mesmos, por exemplo, um composto tendo a fórmula: .
[004] Em indivíduos saudáveis, existem altas concentrações de GSH nas vias aéreas. No entanto, em indivíduos com doenças inflamatórias crônicas das vias aéreas, tais como pacientes de transplante pulmonar, as reservas de glutationa são depletadas. Tanto a inflamação quanto a infecção são associadas à rejeição/disfunção e falha do enxerto pulmonar. A terapia atual para transplante de pulmão, que inclui altas doses de agentes imunossupressores e antimicrobianos, tem efeitos colaterais sistêmicos e toxicidades que podem levar a inflamação e infecções adicionais. Além disso, o uso repetido de antibióticos em altas doses demonstrou levar a infecções resistentes a múltiplas drogas.
[005] Infecções respiratórias inferiores de doenças inflamatórias crônicas das vias aéreas estão presentes em vários distúrbios e doenças das vias aéreas, incluindo, por exemplo, pacientes de transplante pulmonar e pacientes com fibrose cística (CF) e bronquiectasia (por exemplo, bronquiectasia de fibrose não cística ou bronquiectasia de fibrose cística).
BREVE SUMÁRIO
[006] A presente divulgação provê composições compreendendo: (a) glutationa, um derivado de glutationa, um conjugado de glutationa, um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, ou qualquer combinação dos mesmos; e (b) um ácido orgânico, em que a razão molar de (a) a (b) é cerca de 0,5-1:1 e o pH da formulação é pelo menos 5,5. Em algumas modalidades, o ácido orgânico é ácido ascórbico. Em algumas modalidades, a composição ainda compreende (c) um sal de bicarbonato (por exemplo, bicarbonato de sódio). Em algumas modalidades, a composição não inclui um sal de bicarbonato.
[007] Em algumas modalidades, a razão molar de (a):(b):(c) é cerca de 0,1- 0,5: 0,5-1: 1. Em algumas modalidades, a razão molar de (a):(b):(c) é cerca de 0,4- 0,5: 0,5-1: 1. Em algumas modalidades, a razão molar de (a):(b):(c) é cerca de 0,4- 0,5: 0,5: 1 ou 0,4-0,5: 1: 1.
[008] Em algumas modalidades, a glutationa reduzida na composição é mais do que cerca de 80%, mais do que cerca de 82%, mais do que cerca de 84%, mais do que cerca de 85%, mais do que cerca de 88%, mais do que cerca de 90%, mais do que cerca de 91%, mais do que cerca de 92%, mais do que cerca de 93%, mais do que cerca de 94%, mais do que cerca de 95%, mais do que cerca de 96%, ou mais do que cerca de 97% em peso da glutationa total na composição após armazenamento da composição por 4 semanas a cerca de 5ºC.
[009] Em algumas modalidades, a glutationa oxidada na composição é menos do que cerca de 20%, menos do que cerca de 18%, menos do que cerca de 16%, menos do que cerca de 15%, menos do que cerca de 12%, menos do que cerca de 10%, menos do que cerca de 9%, menos do que cerca de 8%, menos do que cerca de 7%, menos do que cerca de 6%, menos do que cerca de 5%, menos do que cerca de 4%, ou menos do que cerca de 3% em peso da glutationa total na composição após armazenamento da composição por 4 semanas (por exemplo, a 5ºC em uma atmosfera de N2 e/ou atmosfera ambiente).
[010] Em algumas modalidades, o ácido ascórbico reduzido é mais do que cerca de 80%, mais do que cerca de 85%, mais do que cerca de 86%, mais do que cerca de 87%, mais do que cerca de 88%, mais do que cerca de 89%, ou mais do que cerca de 90% em peso do ácido ascórbico total na composição após armazenamento da composição após armazenamento da composição por 4 semanas a cerca de 5ºC.
[011] Em algumas modalidades, o ácido ascórbico oxidado na composição é menos do que cerca de 20%, menos do que cerca de 18%, menos do que cerca de 16%, menos do que cerca de 15%, menos do que cerca de 12%, menos do que cerca de 10% ou menos do que cerca de 9% em peso do ácido ascórbico total na composição após armazenamento da composição por 4 semanas a cerca de 5ºC.
[012] Em algumas modalidades, a composição é armazenada sob condições ambiente, por exemplo, sem aspersão de nitrogênio. Em algumas modalidades, a composição é armazenada com aspersão de nitrogênio.
[013] Em algumas modalidades, o pH da composição é cerca de 5,5 a cerca de 10, cerca de 5,5 a cerca de 8, cerca de 6 a cerca de 10, ou cerca de 6 a cerca de
8. Em algumas modalidades, o pH é cerca de 5,5, cerca de 6,5, cerca de 7,0, ou cerca de 7,5. Em algumas modalidades, o pH da composição é 7 ± 1,5. Em algumas modalidades, o pH da composição é cerca de 6.
[014] Em algumas modalidades, a composição é uma solução aquosa, um pó seco ou liofilizada.
[015] Determinados aspectos da divulgação referem-se a um método de inibir ou reduzir o crescimento de uma bactéria isolada clínica compreendendo contactar o isolado clínico com uma composição da divulgação.
[016] Determinados aspectos da divulgação referem-se a um método de inibir ou reduzir a formação de um biofilme de bactéria isolada clínica compreendendo contactar o isolado clínico com uma composição compreendendo uma composição da divulgação.
[017] Determinados aspectos da divulgação referem-se a um método de tratar ou reduzir sintomas em um indivíduo que sofre ou em risco de uma infecção por bactéria isolada clínica compreendendo contactar o isolado clínico com uma composição da divulgação.
[018] Em algumas modalidades, o indivíduo tem uma doença ou distúrbio pulmonar ou das vias aéreas. Em algumas modalidades, o distúrbio ou doença pulmonar ou das vias aéreas é fibrose cística ou bronquiectasia de fibrose não cística.
[019] Determinados aspectos da divulgação referem-se a um método de sobrerregular depuração mucociliar em um indivíduo que sofre ou em risco de depuração mucociliar prejudicada compreendendo administrar ao indivíduo uma composição da divulgação. Em algumas modalidades, administrar a composição reduz a viscosidade do muco do paciente. Em algumas modalidades, administrar a composição aumenta a frequência de batimento ciliar das células epiteliais das vias aéreas do paciente. Em algumas modalidades, administrar a composição aumenta a taxa de transporte mucociliar das células epiteliais das vias aéreas do paciente. Em algumas modalidades, administrar a referida composição aumenta a altura do líquido de superfície das vias aéreas do paciente.
[020] Em algumas modalidades, o epitélio das vias aéreas do paciente não é colonizado por bactérias. Em algumas modalidades, o epitélio das vias aéreas do paciente é colonizado por bactérias. Em algumas modalidades, o paciente sofre de uma infecção bacteriana ativa. Em algumas modalidades, o paciente não sofre de uma infecção bacteriana ativa.
[021] Determinados aspectos da divulgação referem-se a um método de reduzir inflamação das vias aéreas em um indivíduo que sofre ou em risco de inflamação das vias aéreas compreendendo administrar ao indivíduo uma composição da divulgação.
[022] Em algumas modalidades, administrar a referida composição inibe atividade de mieloperoxidase dos neutrófilos do paciente. Em algumas modalidades, administrar a referida composição reduz a formação de armadilhas extracelulares de neutrófilos. Em algumas modalidades, administrar a referida composição sub-regula a produção de óxido nítrico dos neutrófilos do paciente. Em algumas modalidades, administrar a referida composição reduz o óxido nítrico exalado fracionado (FeNO) do paciente em pelo menos 20%. Em algumas modalidades, a composição é administrada duas vezes ao dia. Em algumas modalidades, a composição é administrada por nebulizador. Em algumas modalidades, a administração da composição reduz o óxido nítrico exalado fracionado (FeNO) do paciente em pelo menos 20% após 1 mês de administração (por exemplo, duas vezes ao dia) da composição.
[023] Em algumas modalidades, administrar a referida composição sub-regula a produção de pelo menos uma citocina pró-inflamatória (por exemplo, TNF-α, IL-6 e/ou IL-8) e/ou pelo menos uma citocina associada a neutrófilos e macrófagos (por exemplo, MIP1α e/ou MIP1β).
[024] Determinados aspectos da divulgação referem-se a um método de reduzir viscosidade do muco em um indivíduo que sofre ou em risco de sofrer de viscosidade reduzida do muco compreendendo administrar ao indivíduo uma composição da divulgação.
[025] Determinados aspectos da divulgação referem-se a um método de ativar a função do receptor transmembranar de fibrose cística (CFTR) em um indivíduo que sofre de função de CFTR reduzida compreendendo administrar ao indivíduo uma composição da divulgação.
[026] Determinados aspectos da divulgação referem-se a um método de aumentar a expressão de receptor transmembranar de fibrose cística (CFTR) em um indivíduo que sofre de expressão reduzida de CFTR compreendendo administrar ao indivíduo uma composição da divulgação.
[027] Determinados aspectos da divulgação referem-se a um método compreendendo administrar uma composição da divulgação em combinação com uma terapia de CFTR selecionada do grupo que consiste em um amplificador de CFTR (por exemplo, PTI-428), um corretor de CFTR (por exemplo, VX-809 (lumacaftor), VX- 661 (tezacaftor), VX-445, VX-659, VX-152, FDL169, GLPG2222, PT-801 ou combinações dos mesmos), um modulador/potenciador de CFTR (por exemplo, VX- 770 (ivacaftor), QBW 251, VX-561, PT1-808, ou combinações dos mesmos), um modificador de RNA de CFTR (por exemplo, QR-100, MRT5005, ou a combinação dos mesmos), ou qualquer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, a administração da terapia de CFTR é simultânea ou consecutiva à administração da composição da divulgação ao indivíduo e em qualquer ordem (por exemplo, a composição pode ser administrada antes ou após a terapia de CFTR). Em algumas modalidades, a terapia de CFTR é administrada oralmente e a composição da divulgação é administrada por inalação. Em algumas modalidades, ambas a terapia de fibrose cística e a composição da divulgação são administradas por inalação.
[028] Em algumas modalidades, os métodos compreendem administrar uma composição da divulgação em combinação com VX-770 (ivacaftor), VX-809 (lumacaftor), ou a combinação dos mesmos ao indivíduo.
[029] Em algumas modalidades, administrar uma composição da divulgação em combinação com a administração de VX-770 (ivacaftor), VX-809 (lumacaftor) ou a combinação de VX-770/VX-809 a um indivíduo reduz a viscosidade do muco nas vias aéreas do indivíduo mais do que administrar a composição da divulgação ou VX-770 (ivacaftor), VX-809 (lumacaftor), ou a combinação de VX-770/VX-809 isoladamente.
[030] Em algumas modalidades, administrar uma composição da divulgação em combinação com a administração de VX-770 (ivacaftor), VX-809 (lumacaftor), ou a combinação de VX-770/VX-809 a um indivíduo aumenta a frequência de batimento ciliar das células epiteliais das vias aéreas do indivíduo mais do que administrar a composição isoladamente.
[031] Em algumas modalidades, administrar uma composição da divulgação em combinação com a administração de VX-770 (ivacaftor), VX-809 (lumacaftor) ou a combinação de VX-770/VX-809 a um indivíduo aumenta a taxa de transporte mucociliar das células epiteliais das vias aéreas do indivíduo mais do que administrar a composição isoladamente.
[032] Em algumas modalidades, administrar uma composição do pedido em combinação com a administração de VX-770, VX-809 ou a combinação de VX- 770/VX-809 ao indivíduo aumenta a altura do líquido de superfície das vias aéreas do indivíduo mais do que administrar a composição isoladamente.
[033] Em algumas modalidades, a composição da divulgação é administrada em combinação com VX-770, VX-809 ou a combinação de VX-770/VX-809, em que a administração é simultânea ou consecutiva ao indivíduo e em qualquer ordem (por exemplo, a composição pode ser administrada antes ou após a combinação de VX- 770/VX-809).
[034] Em algumas modalidades, a composição é estável a 2-8ºC por pelo menos 72 horas. Em algumas modalidades, a composição após armazenamento a 2- 8ºC por pelo menos 72 horas compreende qualquer um ou mais dos seguintes: (a) essencialmente livre de precipitação, (b) compreende menos do que 4% de impurezas, (c) tem um pH de 6,0-7,0, e (d) perda mínima de solubilidade.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS/FIGURAS
[035] A Figura 1 mostra a taxa de transporte mucociliar de células epiteliais brônquicas humanas primárias (df508-/-) isoladas das vias aéreas de pacientes com fibrose cística após a administração da Composição 1.
[036] A Figura 2 mostra a taxa de transporte mucociliar de células epiteliais brônquicas humanas primárias (df508-/-) isoladas das vias aéreas de pacientes com fibrose cística após a administração da Composição 1, bicarbonato, glutationa, bicarbonato + glutationa, ou bicarbonato + ascorbato.
[037] A Figura 3 mostra coloração por NETosis de neutrófilos humanos isolados de voluntários saudáveis após a administração de acetato miristato de forbol (PMA) e Composição 2.
[038] A Figura 4 mostra coloração por diacetato DAF-FM para óxido nítrico em neutrófilos humanos após a administração de lipopolissacarídeo (LPS) e Composição 1.
[039] As Figuras 5A-5C mostram a concentração de citocinas pró- inflamatórias TNF-α (Figura 5A), IL-6 (Figura 5B) e IL-8 (Figura 5C) secretadas por neutrófilos humanos após a administração de lipopolissacarídeo (LPS) e Composição
1.
[040] A Figura 6 mostra um ensaio funcional do receptor de condutância transmembranar de fibrose cística (CFTR) realizado com células epiteliais brônquicas de fibrose cística de tipo selvagem (WT CFBE).
[041] A Figura 7 mostra uma imagem de um vídeo mostrando o efeito da Composição 1 (painéis direitos) em comparação com PBS (painéis esquerdos) na taxa de transporte mucociliar (MCT) in vitro de células epiteliais brônquicas humanas primárias isoladas de pacientes com fibrose cística (células dF508-/-) em 0 hora (superior) e 6 horas (inferior) após a administração.
[042] A Figura 8A-8B mostra análise de inclinação de MCT em relação a líquido de superfície das vias aéreas (ASL) (Figura 8A) e frequência de batimento ciliar (CBF) (Figura 8B) em 6 horas após a administração da Composição 1 em comparação com PBS em células epiteliais brônquicas humanas primárias isoladas de pacientes com fibrose cística (células dF508-/-). Essa análise de correlação indica que a viscosidade do muco é reduzida pela Composição 1.
[043] A Figura 9 mostra liberação de metaloprotease-9 (MMP-9) de neutrófilos estimulados por LPS após uma hora de tratamento com Composição 1 (Ar) a diluições de 1:100 e 1:10 em comparação com meio (Med) e controles com LPS apenas. MMP- 9 é a banda de 75-100 kDa no gel.
[044] As Figuras 10A-10B mostram níveis de liberação de citocinas associadas a macrófagos e neutrófilos: proteína inflamatória de macrófago 1α (MIP1α) (Figura 10A) e proteína inflamatória de macrófago 1β (MIP1β) (Figura 10B) de neutrófilos ativados por LPS após administração da Composição 1 (Ar) a diluições de 1:100 e 1:10 em comparação com meio (M) e controles com LPS apenas. #ANOVA <0,11 por 1 hora. *p<0,15 LPS v. AR 1:10 + LPS 100 através de pós-teste de Tukey.
[045] A Figura 11 mostra o efeito da combinação da Composição 1 e VX- 770/809 (COMP 1 + VX-770/809, painel direito) em comparação com PBS (painel esquerdo) e VX-770/809 isoladamente (painel central) na taxa de transporte mucociliar (MCT) in vitro de células epiteliais brônquicas humanas primárias isoladas de pacientes com fibrose cística (células dF508-/-).
[046] A Figura 12A mostra uma quantificação de amostra das mudanças de líquido de superfície das vias aéreas (ASL), frequência de batimento ciliar (CBF), e taxa de transporte mucociliar (MCT) ao longo do tempo em células CF HBE dF508 após administração da combinação de Composição 1 e VX-770/809 (COMP 1 + VX- 770/809), Composição 1 isoladamente (COMP 1), VX-770/809 isoladamente ou controle de PBS. Os resultados mostram dados combinados (N=20 monocamadas de HBE em 3 doadores de CF homozigotos para F508del). **P<0,11, P<0,101, ****P<0,1001.
[047] A Figura 12B mostra a quantificação da mudança da taxa de transporte mucociliar da linha de base vs. PBS (controle) com a Composição 1, VX-770/809, e uma combinação da Composição 1 com VX-770/809. Os resultados mostram dados combinados (N=20 monocamadas de HBE em 3 doadores de CF homozigotos para F508del). Média + SEM ****P<0,1001.
[048] A Figura 13 mostra a alteração percentual média em medições espirométricas em pacientes pós-transplante de pulmão administrados com a Composição 1 através de nebulização por um mês duas vezes ao dia. As medições espirométricas incluem volume expiratório forçado exalado em 1 segundo (FEV1), capacidade vital forçada (volume) (FVC), e uma medição da função pequena-média das vias aéreas (FEF25-75%). Esses resultados são após um mês de tratamento.
[049] A Figura 14 mostra a alteração percentual em óxido nítrico exalado fracionado (FENO) em 4 pacientes pós-transplante de pulmão administrados com a Composição 1 através de nebulização por um mês duas vezes ao dia. CF, ILD, e A1AT referem-se às doenças de origem dos pacientes (etiologia do motivo pelo qual foram transplantadas). Esses resultados são após um mês de tratamento.
[050] A Figura 15 mostra dados de estabilidade após armazenamento por cerca de 72 horas a 2-8ºC para as Formulações 1-9 tendo baixas, médias ou altas concentrações de ácido ascórbico e/ou tampão. Glutationa (GSH) foi mesma concentração para cada formulação. A Composição 1 é mostrada como Formulação
9.
DESCRIÇÃO DETALHADA Definições
[051] Para facilitar o entendimento da presente invenção, vários termos e frases são definidos abaixo.
[052] Conforme usado na presente divulgação e reivindicações, as formas singulares “um/a” e “o/a” incluem formas plurais, a menos que o contexto indique claramente o contrário.
[053] O termo “e/ou”, como usado em uma frase como “A e/ou B” neste documento, pretende incluir tanto “A e B”, “A ou B”, “A ou B”, “A” e “B”. Da mesma forma, o termo “e/ou”, como usado em um frase como “A, B e/ou C”, destina-se a abranger cada uma das seguintes modalidades: A, B e C; A, B ou C; A ou C; A ou B; B ou C; A e C; A e B; B e C; A (sozinho); B (sozinho); e C (sozinho).
[054] O termo “cerca de”, conforme usado neste documento, significa aproximadamente ± 10%. Quando o termo “cerca de” é usado em conjunto com um valor ou intervalo numérico, ele modifica esse valor ou intervalo estendendo os limites acima e abaixo dos valores numéricos estabelecidos. Em geral, o termo “cerca de” é usado aqui para modificar um valor numérico acima e abaixo do valor declarado por uma variação de 10%, para cima ou para baixo (maior ou menor), ou seja, ± 10%, a menos que uma variação diferente seja indicada (por exemplo, ± 30%, ± 20%, ± 5%, ± 1% etc.).
[055] “Bactéria isolada clínica”, conforme usado neste documento, significa uma cepa bacteriana que foi isolada de um indivíduo humano ou de uma amostra de tecido retirada de um indivíduo humano.
[056] “Concentração inibidora mínima” ou “MIC”, conforme usado neste documento, significa a menor concentração de um agente (por exemplo, um antibiótico e/ou composição do pedido) que inibirá o crescimento visível de uma espécie de bactéria.
[057] “Concentração bactericida mínima” ou “MBC”, conforme usado neste documento, significa a menor concentração na qual um agente (por exemplo, um antibiótico e/ou composição do pedido) irá exterminar uma espécie de bactéria.
[058] “Concentração mínima de erradicação de biofilme” ou “MBEC”, conforme usado neste documento, significa a menor concentração de um agente (por exemplo, um antibiótico e/ou composição do pedido) que inibirá o crescimento visível de um biofilme.
[059] “Farmaceuticamente aceitável”, conforme usado neste documento, significa seguro e eficaz para uso em seres humanos. Por exemplo, um “sal farmaceuticamente aceitável”, como aqui utilizado, significa os sais dos compostos aqui divulgados que são seguros e eficazes para uso em um indivíduo e que possuem a atividade biológica desejada do composto.
[060] “Biofilme”, conforme usado neste documento, significa um grupo de microrganismos, por exemplo, bactéria isolada clínica, em que as células do microrganismo aderem umas às outras e geralmente essas células aderem a uma superfície. Em algumas modalidades, essas células aderentes são incorporadas a uma matriz autoproduzida de substância polimérica extracelular (EPS). Em algumas modalidades, o biofilme compreende uma única espécie bacteriana. Em outras modalidades, o biofilme é uma mistura de duas ou mais espécies de bactérias.
[061] “Bactéria mucoide”, conforme aqui utilizado, significa bactérias produtoras de alginato.
[062] “Bactéria não mucoide”, conforme usado neste documento, significa bactérias que não produzem alginato.
[063] “Aeróbico”, como aqui utilizado, significa um organismo, por exemplo, bactérias que podem sobreviver e crescer em um ambiente oxigenado.
[064] “Anaeróbico” ou “anaeróbio”, conforme usado neste documento, significa um organismo, por exemplo, bactérias que não necessitam de oxigênio para o crescimento. Em algumas modalidades, o organismo é um “anaeróbio obrigatório”, que significa que é prejudicado pela presença de oxigênio; um “organismo aerotolerante”, que significa que ele não pode usar oxigênio para o crescimento, mas tolera sua presença; ou um “anaeróbio facultativo”, que significa que ele pode crescer sem oxigênio, mas usará oxigênio se estiver presente.
[065] “Extracelular”, como aqui utilizado, significa fora de uma célula.
[066] “Resistência a antibióticos” refere-se a uma bactéria que possui um mecanismo que torna um antibiótico ineficaz em matar as bactérias. Mecanismos exemplificativos incluem, por exemplo, destruição do antibiótico, modificação do alvo do antibiótico, e penetração restrita e/ou efluxo do antibiótico. Em algumas modalidades, as bactérias se tornam resistentes a antibióticos devido a uma mutação.
[067] “Resistência multidroga” (também referida como “resistência a múltiplas drogas”, “MDR”, “multirresistência”), conforme usado neste documento, significa resistência antimicrobiana apresentada por uma espécie de microrganismo, por exemplo, uma espécie de bactéria, a várias drogas antimicrobianas, por exemplo, antibióticos.
[068] “Tolerância a antibiótico” refere-se a células sobreviventes (ou persistentes) especializadas em uma população de células bacterianas que são variantes fenotípicas (não mutantes) que não estão desenvolvendo células dormentes. As persistentes são mortas apenas lentamente, se forem, por antibióticos e retomam o crescimento quando as concentrações de antibiótico são reduzidas ou interrompidas.
[069] “Sensibilizado”, conforme usado neste documento, significa a suscetibilidade de um microrganismo, por exemplo, uma bactéria, a uma droga antimicrobiana, por exemplo, um antibiótico.
[070] “Efeito sinérgico”, conforme usado neste documento, significa um efeito que surge entre dois ou mais agentes terapêuticos, por exemplo, uma composição divulgada aqui e um antibiótico que produz um efeito maior do que a soma dos dois efeitos individuais do agente terapêutico.
[071] “Inibir”, conforme usado neste documento, significa bloquear ou interromper, por exemplo, interromper o crescimento bacteriano.
[072] “Reduzir”, conforme usado neste documento, significa reduzir ou diminuir a quantidade, por exemplo, diminuir a quantidade de crescimento bacteriano (por exemplo, em comparação com um ponto de partida ou em comparação entre dois ou mais grupos).
[073] “Tratar” ou “tratamento”, conforme usado neste documento, refere-se a um alívio parcial ou total, melhoria, aprimoramento, alívio, atraso do início, inibição da progressão, redução da gravidade e/ou redução de um ou mais sinais, sintomas ou características de uma doença.
[074] “Indivíduo” ou “paciente” significa qualquer indivíduo, particularmente um mamífero, para quem o diagnóstico, prognóstico ou terapia é desejado. Em certas modalidades, o mamífero é um indivíduo humano. Em outras modalidades, um indivíduo é um paciente humano. Em uma modalidade particular, um indivíduo é um paciente humano que necessita de tratamento.
[075] A administração “em combinação com” um ou mais agentes terapêuticos ainda inclui administração simultânea (concomitante) ou consecutiva em qualquer ordem.
[076] A terapia de combinação pode fornecer “sinergia” e se provar “sinérgica”, isto é, o efeito alcançado quando os ingredientes ativos usados em conjunto são maiores do que a soma dos efeitos resultantes do uso dos compostos separadamente. Um efeito sinérgico pode ser alcançado quando os ingredientes ativos são: (1) coformulados e administrados ou entregues simultaneamente em uma formulação combinada de dosagem unitária; (2) entregues em série, por alternância, ou em paralelo como formulações separadas; ou (3) por algum outro regime. Quando administrado em terapia alternada, um efeito sinérgico pode ser alcançado quando os compostos são administrados ou entregues sequencialmente, por exemplo, por diferentes injeções em seringas separadas ou por inalação de uma terapia e administração oral de uma segunda terapia ou vice-versa.
[077] O termo “formulação farmacêutica” refere-se a uma preparação que tem tal forma para permitir que a atividade biológica do ingrediente ativo ou dos ingredientes ativos seja eficaz, e que não contém componentes adicionais que sejam inaceitavelmente tóxicos para um indivíduo ao qual a formulação seria administrada.
A formulação pode ser estéril.
[078] Uma “quantidade eficaz” de uma composição ou agente ativo, conforme divulgado neste documento, é uma quantidade suficiente para realizar um propósito especificamente declarado. Uma “quantidade eficaz” pode ser determinada empiricamente e de maneira rotineira, em relação ao objetivo declarado.
[079] O termo “quantidade terapeuticamente eficaz” refere-se a uma quantidade da composição ou agente ativo, conforme divulgado aqui, eficaz para “tratar” uma doença ou distúrbio em um indivíduo.
Glutationa e Composições Conjugadas de Glutationa
[080] Em determinados aspectos, as composições do pedido compreendem glutationa, um derivado de glutationa, um conjugado de glutationa, um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, ou qualquer combinação dos mesmos.
[081] Em algumas modalidades, a composição compreende glutationa ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
[082] Glutationa ou “GSH” refere-se a um composto tendo a fórmula A:
ou uma forma zwitteriônica dos mesmos, por exemplo, um composto tendo a fórmula B:
[083] Glutationa é não proteína tiol mais abundante em células de mamíferos.
Desempenha um papel na desintoxicação de compostos xenobióticos e na antioxidação de espécies reativas de oxigênio e radicais livres. Ver, por exemplo, Bray and Taylor, Canadian Journal of Physiology and Pharmacology 71:746-751 (1993).
[084] Em indivíduos saudáveis, há altas concentrações de GSH nas vias aéreas. No entanto, em indivíduos com doenças inflamatórias crônicas das vias aéreas, tais como pacientes de transplante pulmonar, as reservas de glutationa são depletadas.
[085] Em algumas modalidades, a composição compreende um conjugado contendo glutationa ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos. Em determinadas modalidades, o conjugado contendo glutationa é metabolizado para liberar glutationa, ou um derivado do mesmo, mediante administração a um indivíduo.
Em algumas modalidades, o conjugado contendo glutationa é referido neste documento como um “Composto Conjugado da Divulgação” ou “conjugado de glutationa.”
[086] Em uma modalidade, um Composto Conjugado da Divulgação é um composto tendo Fórmula I: I, e os sais e solvatos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, em que, A1 é -OR1; A2 é Z1; A3 é hidrogênio; e A4 é R3a; ou
A1 é Z1; A2 é -OR2; e A3 é hidrogênio; e A4 é R3a; ou
A1 é -OR1; A2 é -OR2; e A3 é Z3; e A4 é R3a; ou
A1 é Z2; A2 é -OR2; e A3 é hidrogênio; e A4 é R3a; ou
A1 é -OR1; A2 é Z2; e A3 é hidrogênio; e A4 é R3a; ou
A1 é -OR1; A2 é -OR2; A3 é hidrogênio; e A4 é Z3; ou
A1 e A2 são, cada um, Z1, e A3 é hidrogênio;
Z1 é selecionado do grupo que consiste em:
e ;
Z2 é selecionado do grupo que consiste em:
, e ;
Z3 é selecionado do grupo que consiste em:
e ;
R1 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio e alquil opcionalmente substituído;
R2 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio e alquil opcionalmente substituído;
R3a, R3b, e R3c são, cada um, independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio e grupo de proteção;
X é selecionado do grupo que consiste em:
-O-;
-O(CH2)mO-;
-OCH2CH(R4)O-;
-OCH(R4)CH2O-; e
-O(CH2CH2O)n-; R4 is: ; m é 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, ou 8; n é 2, 3, 4, 5, 6, 7, ou 8; e R5 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio e alquil opcionalmente substituído.
[087] Em outra modalidade, um Composto Conjugado da Divulgação é um composto tendo a Fórmula I, e os sais e solvatos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, em que m é 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8.
[088] Em outra modalidade, um Composto Conjugado da Divulgação é um composto tendo a Fórmula II: II, ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R1, R3a, R3b, R3c e X são como definidos em conexão com a Fórmula I.
[089] Em outra modalidade, um Composto Conjugado da Divulgação é um composto enantiomericamente enriquecido tendo qualquer uma ou mais das fórmulas da Tabela 1, e os sais e solvatos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, em que R1, R3a, R3b, R3c e X são como definidos em conexão com a Fórmula I.
Composições da Divulgação
[090] Glutationa, um derivado de glutationa, um conjugado de glutationa, um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, ácido orgânico ou qualquer combinação dos mesmos podem ser misturados com um veículo farmacêutico, por exemplo, água, e, opcionalmente, outros componentes para dar uma “Composição da
Divulgação”. Em algumas modalidades, a quantidade de glutationa, um derivado de glutationa, um conjugado de glutationa, sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos ou qualquer combinação dos mesmos, por exemplo, glutationa reduzida, na Composição da Divulgação é cerca de 30-90% em peso, cerca de 30-85% em peso, cerca de 30-80% em peso, cerca de 30-75% em peso, cerca de 30-70% em peso, cerca de 30-65% em peso, cerca de 30-60% em peso, cerca de 30-55% em peso, cerca de 30-50% em peso. Em algumas modalidades, a quantidade de glutationa, um derivado de glutationa, um conjugado de glutationa, sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos ou qualquer combinação dos mesmos, por exemplo, glutationa reduzida, na Composição da Divulgação é 30-50% em peso.
[091] Em algumas modalidades, a Composição da Divulgação ainda compreende um ácido orgânico. Em algumas modalidades, o ácido orgânico é selecionado do grupo de ácidos que consiste em ascórbico, acético, adípico, aspártico, benzenossulfônico, benzoico, butírico, canforsulfônico, camsílico, carbônico, clorobenzoico, cólico, cítrico, edético, edissílico, estólico, etanossulfônico, fórmico, fumárico, glucéptico, glucônico, glucurônico, glutâmico, glicólico, glicolilarsanílico, hipúrico, 1-hidróxi-2-naftoico, isetiônico, isobutírico, isonicotínico, láctico, lactobiônico, maleico, málico, malônico, mandélico, metanossulfônico, múcico, mucônico, naftalenossulfônico, nicotínico, oxálico, oleico, orótico, p- nitrometanossulfônico, pamoico, pantotênico, ftálico, poligalactourônico, propiônico, sacárico, salicílico, esteárico, subérico, succínico, sulfanílico, tânico, tartárico, p- toluenossulfônico e qualquer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, a quantidade de ácido orgânico, por exemplo, ácido ascórbico reduzido, na Composição da Divulgação é cerca de 10-90% em peso, cerca de 10-85% em peso, cerca de 10- 80% em peso, cerca de 10-75% em peso, cerca de 10-70% em peso, cerca de 10- 65% em peso, cerca de 10-60% em peso, cerca de 10-55% em peso, cerca de 10- 50% em peso, cerca de 10-45% em peso, cerca de 10-40% em peso, cerca de 10-
35% em peso, cerca de 10-30% em peso, cerca de 1-30% em peso, cerca de 1-20% em peso, ou cerca de 1-10% em peso. Em algumas modalidades, a quantidade de ácido orgânico, por exemplo, ácido ascórbico reduzido, na Composição da Divulgação é 25-40% em peso.
[092] Em algumas modalidades, a Composição da Divulgação ainda compreende um sal de bicarbonato. Em algumas modalidades, o sal de bicarbonato é bicarbonato de sódio. Em algumas modalidades, a quantidade de sal de bicarbonato, por exemplo, bicarbonato de sódio, na Composição da Divulgação é cerca de 10-90% em peso, cerca de 10-85% em peso, cerca de 10-80% em peso, cerca de 10-75% em peso, cerca de 10-70% em peso, cerca de 10-65% em peso, cerca de 10-60% em peso, cerca de 10-55% em peso, cerca de 10-50% em peso, cerca de 10-45% em peso, cerca de 10-40% em peso, cerca de 10-35% em peso, cerca de 10-30% em peso, cerca de 1-30% em peso, cerca de 1-20% em peso, ou cerca de 1-10% em peso. Em algumas modalidades, a quantidade de sal de bicarbonato, por exemplo, bicarbonato de sódio, na Composição da Divulgação é cerca de 20-30% em peso. Em algumas modalidades, a Composição da Divulgação não compreende um sal de bicarbonato.
[093] Em algumas modalidades, o pH da Composição da Divulgação é cerca de 6,0 a cerca de 8. Em algumas modalidades, o pH da Composição da Divulgação é maior do que 5,5 ou pelo menos 6,0. (por exemplo, 5,6 a 14, 5,7 a 14, 5,8 a 14, 5,9 a 14, 6 a 14, 5,6 a 12, 5,7 a 12, 5,8 a 12, 5,9 a 12, 6 a 12, 5,6 a 10, 5,7 a 10, 5,8 a 10, 5,9 a 10, 6 a 10, 5,6 a 9, 5,7 a 9, 5,8 a 9, 5,9 a 9, 6 a 9, 5,6 a 8, 5,7 a 8, 5,8 a 8, 5,9 a 8, 6 a 8, 5,6 a 7,5, 5,7 a 7,5, 5,8 a 7,5, 5,9 a 7,5, 6 a 7,5, 5,6 a 7, 5,7 a 7, 5,8 a 7, 5,9 a 7, ou 6 a 7).
[094] Em algumas modalidades, a Composição da Divulgação é formulada para maximizar a estabilidade da formulação e minimizar a oxidação de glutationa.
Glutationa oxidada é associada à geração de proteína-carbonils através de glutationilação. A glutationilação ocorre quando glutationa oxidada se dissocia e se liga a proteínas. Manter a glutationa no estado reduzido na solução antes da administração pode reduzir o risco de produtos de glutationilação que podem resultar em complicações clínicas, tais como bronquiectasia. Em algumas modalidades, a glutationa oxidada (por exemplo, % de GSSG) na Composição da Divulgação é menos do que cerca de 20%, menos do que cerca de 18%, menos do que cerca de 16%, menos do que cerca de 15%, menos do que cerca de 12%, menos do que cerca de 10%, menos do que cerca de 9%, menos do que cerca de 8%, menos do que cerca de 7%, menos do que cerca de 6%, menos do que cerca de 5%, menos do que cerca de 4%, ou menos do que cerca de 3% em peso da glutationa total na Composição da Divulgação após armazenamento da Composição da Divulgação por 4 semanas (por exemplo, a 5ºC em uma atmosfera de N2 e/ou atmosfera ambiente). Em algumas modalidades, a porcentagem de glutationa oxidada (por exemplo, % de GSSG) na Composição da Divulgação não é mais do que cerca de 2% a cerca de 20%, cerca de 2% a cerca de 18%, cerca de 2% a cerca de 16%, cerca de 2% a cerca de 16%, cerca de 2% a cerca de 10%, ou cerca de 2% a 8% em peso da glutationa total na Composição da Divulgação após 4 semanas de armazenamento (por exemplo, a 5ºC em uma atmosfera de N2 e/ou atmosfera ambiente). Em algumas modalidades, a porcentagem de glutationa oxidada (por exemplo, % de GSSG) na Composição da Divulgação é menos do que cerca de 20%, menos do que cerca de 18%, menos do que cerca de 16%, ou menos do que cerca de 10% em peso da glutationa total na Composição da Divulgação após 4 semanas de armazenamento (por exemplo, a 5ºC em uma atmosfera de N2 e/ou atmosfera ambiente).
[095] Em algumas modalidades, a glutationa reduzida na Composição da Divulgação é mais do que cerca de 80%, mais do que cerca de 82%, mais do que cerca de 84%, mais do que cerca de 85%, mais do que cerca de 88%, mais do que cerca de 90%, mais do que cerca de 91%, mais do que cerca de 92%, mais do que cerca de 93%, mais do que cerca de 94%, mais do que cerca de 95%, mais do que cerca de 96%, ou mais do que cerca de 97% em peso da glutationa total na Composição da Divulgação após armazenamento da Composição da Divulgação por 4 semanas a cerca de 5ºC (por exemplo, em uma atmosfera de N2 ou ambiente). Em algumas modalidades, a porcentagem de glutationa reduzida na Composição da Divulgação é entre cerca de 80% a cerca de 100%, entre cerca de 80% a cerca de 98%, entre cerca de 82% a cerca de 98%, entre cerca de 84% a cerca de 98%, entre cerca de 86% a cerca de 98%, entre cerca de 88% a cerca de 98%, entre cerca de 90% a cerca de 98%, ou entre cerca de 92% a cerca de 98% em peso da glutationa total na Composição da Divulgação após 4 semanas de armazenamento a 5ºC (por exemplo, em uma atmosfera de N2 ou ambiente). Em algumas modalidades, a porcentagem de glutationa reduzida na Composição da Divulgação é pelo menos 80%, pelo menos 82%, pelo menos 84%, pelo menos 86%, pelo menos 88%, ou pelo menos 90% em peso da glutationa total na Composição da Divulgação após 4 semanas de armazenamento a 5ºC em uma atmosfera de N2 ou ambiente.
[096] Em algumas modalidades, a Composição da Divulgação é ainda formulada para maximizar a estabilidade da formulação e minimizar a oxidação de ácido orgânico, por exemplo, ácido ascórbico. Adicionalmente, quando ácido ascórbico é oxidado em dehidroascorbato (DHA), DHA pode desagregar e resultar na formação de adutos de proteína no processo chamado ascorbilação. Manter o ácido orgânico, por exemplo, ácido ascórbico, no estado reduzido na solução antes da administração pode reduzir o risco de ascorbilação dos produtos de desagregação de dehidroascorbato. Em algumas modalidades, o ácido ascórbico reduzido (por exemplo, % de ASC) é mais do que cerca de 80%, mais do que cerca de 85%, mais do que cerca de 86%, mais do que cerca de 87%, mais do que cerca de 88%, mais do que cerca de 89%, ou mais do que cerca de 90% em peso do ácido ascórbico na Composição da Divulgação após armazenamento da Composição da Divulgação por
4 semanas (por exemplo, a 5ºC em uma atmosfera de N2 e/ou atmosfera ambiente).
Em algumas modalidades, a porcentagem de ácido ascórbico reduzido (por exemplo, % de ASC) na Composição da Divulgação é entre cerca de 82% a cerca de 100% ou entre cerca de 85% a cerca de 95% em peso do ácido ascórbico total na Composição da Divulgação após 4 semanas de armazenamento (por exemplo, a 5ºC em uma atmosfera de N2 e/ou atmosfera ambiente). Em algumas modalidades, a porcentagem de ácido ascórbico reduzido (por exemplo, % de ASC) na Composição da Divulgação é pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, ou pelo menos 90% em peso do ácido ascórbico total na Composição da Divulgação após 4 semanas de armazenamento (por exemplo, a 5ºC em uma atmosfera de N2 e/ou atmosfera ambiente).
[097] Em algumas modalidades, o ácido ascórbico oxidado na Composição da Divulgação é menos do que cerca de 20%, menos do que cerca de 18%, menos do que cerca de 16%, menos do que cerca de 15%, menos do que cerca de 12%, menos do que cerca de 10%, ou menos do que cerca de 9% em peso do ácido ascórbico total na Composição da Divulgação após armazenamento da Composição da Divulgação por 4 semanas (por exemplo, a 5ºC em uma atmosfera de N2 e/ou atmosfera ambiente). Em algumas modalidades, a porcentagem de ácido ascórbico oxidado na Composição da Divulgação não é mais do que cerca de 5% a cerca de 20%, cerca de 5% a cerca de 18%, cerca de 5% a cerca de 10%, ou cerca de 5% a 9% em peso do ácido ascórbico total na Composição da Divulgação após 4 semanas de armazenamento (por exemplo, a 5ºC em uma atmosfera de N2 e/ou atmosfera ambiente). Em algumas modalidades, a porcentagem de ácido ascórbico oxidado na Composição da Divulgação é menos do que cerca de 20%, menos do que cerca de 18%, menos do que cerca de 16%, ou menos do que cerca de 10% em peso do ácido ascórbico total na Composição da Divulgação após 4 semanas de armazenamento (por exemplo, a 5ºC em uma atmosfera de N2 e/ou atmosfera ambiente).
[098] Em determinados aspectos, as razões dos componentes da Composição da Divulgação são formuladas para maximizar a estabilidade da formulação e minimizar a oxidação de glutationa e ácido orgânico, por exemplo, ácido ascórbico. Em algumas modalidades, glutationa e ácido orgânico (por exemplo, ácido ascórbico) são formulados para compreender equivalente molares na solução, por exemplo, cerca de 0,5-1:1, cerca de 0,6-1:1, 0,7-1:1, 0,8-1:1, 0,9-1:1 ou cerca de 1:1 razão molar de glutationa para ácido ascórbico. Em algumas modalidades, a glutationa e o ácido orgânico (por exemplo, ácido ascórbico) são formulados para compreender excesso molar de ácido orgânico (por exemplo, ácido ascórbico) em relação a glutationa na solução, por exemplo, cerca de 1:1,1, cerca de 1:1,2, cerca de 1:3, cerca de 1:4, cerca de 1:5 razão molar de glutationa para ácido ascórbico.
[099] Em algumas modalidades, a Composição da Divulgação ainda compreende um sal de bicarbonato (por exemplo, bicarbonato de sódio). Em algumas modalidades, glutationa, ácido orgânico (por exemplo, ácido ascórbico) e sal de bicarbonato (por exemplo, bicarbonato de sódio) são formulados para compreender uma razão molar de cerca de 0,1-0,5: 0,5-1: 1, cerca de 0,2-0,5: 0,5-1: 1, cerca de 0,3- 0,5: 0,5-1: 1, cerca de 0,4-0,5: 0,5-1: 1, cerca de 0,49: 0,5-1: 1, cerca de 0,5: 0,5-1: 1, cerca de 0,1-0,5: 0,6-1: 1, cerca de 0,2-0,5: 0,6-1: 1, cerca de 0,3-0,5: 0,6-1: 1, cerca de 0,4-0,5: 0,6-1: 1, cerca de 0,49: 0,6-1: 1, cerca de 0,5: 0,6-1: 1, cerca de 0,1-0,5: 0,7-1: 1, cerca de 0,2-0,5: 0,7-1: 1, cerca de 0,3-0,5: 0,7-1: 1, cerca de 0,4-0,5: 0,7-1: 1, cerca de 0,49: 0,7-1: 1, cerca de 0,5: 0,7-1: 1, cerca de 0,1-0,5: 0,8-1: 1, cerca de 0,2-0,5: 0,8-1: 1, cerca de 0,3-0,5: 0,8-1: 1, cerca de 0,4-0,5: 0,8-1: 1, cerca de 0,49: 0,8-1: 1, cerca de 0,5: 0,8-1: 1, cerca de 0,1-0,5: 0,9-1: 1, cerca de 0,2-0,5: 0,9-1: 1, cerca de 0,3-0,5: 0,9-1: 1, cerca de 0,4-0,5: 0,9-1: 1, cerca de 0,49: 0,9-1: 1, cerca de 0,5: 0,9-1: 1, cerca de 0,1-0,5: 1: 1, cerca de 0,2-0,5: 1: 1, cerca de 0,3-0,5: 1: 1, cerca de 0,4-0,5: 1: 1, cerca de 0,49: 1: 1, cerca de 0,5: 1: 1, razão molar de glutationa para ácido orgânico (por exemplo, ácido ascórbico) para sal de bicarbonato (por exemplo,
bicarbonato de sódio). Em algumas modalidades, a razão molar de glutationa, ácido orgânico (por exemplo, ácido ascórbico), e sal de bicarbonato (por exemplo, bicarbonato de sódio) é 0,1-0,5: 0,5-1: 1, 0,4-0,5: 0,5-1: 1, 0,1-0,5: 0,5: 1, 0,1-0,5: 1: 1, ou 0,4-0,5: 1: 1. Em algumas modalidades, a razão molar de glutationa, ácido orgânico (por exemplo, ácido ascórbico), e sal de bicarbonato (por exemplo, bicarbonato de sódio) é 0,49: 0,5: 1, 0,5: 0,5: 1, 0,49: 1: 1 ou 0,5: 1: 1.
[0100] Em algumas modalidades, o sal de bicarbonato (por exemplo, bicarbonato de sódio) é menos do que a razão molar combinada de (a) glutationa, um derivado de glutationa, um conjugado de glutationa, um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, ou qualquer combinação dos mesmos e (b) ácido orgânico (por exemplo, ácido ascórbico). Em algumas modalidades, a razão molar de glutationa, ácido orgânico (por exemplo, ácido ascórbico) e sal de bicarbonato (por exemplo, bicarbonato de sódio) é 0,1-0,49: 0,5: 1, 0,2-0,49: 0,5: 1, 0,3-0,49: 0,5: 1, ou 0,4-0,49: 0,5: 1.
[0101] Em algumas modalidades, a Composição da Divulgação compreende ou consiste essencialmente em (a) uma glutationa, um derivado de glutationa, um conjugado de glutationa, sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos ou qualquer combinação dos mesmos, e (b) um ácido orgânico, em que a razão molar de (a) a (b) é cerca de 0,5-1:1, cerca de 0,6-1:1, 0,7-1:1, 0,8-1:1, 0,9-1:1 ou cerca de 1:1 e o pH da composição é cerca de 5,5 a 14, cerca de 6 a cerca de 8, 7 ± 1,5, 6 ± 0,5, ou cerca de 6.
[0102] Em algumas modalidades, a Composição da Divulgação compreende ou consiste essencialmente em (a) uma glutationa, um derivado de glutationa, um conjugado de glutationa, sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos ou qualquer combinação dos mesmos, (b) um ácido orgânico, (c) um sal de bicarbonato, em que a razão molar de (a) a (b) a (c) é cerca de 0,1-0,5: 0,5-1: 1, 0,4-0,5: 0,5-1: 1, 0,1-0,5: 0,5: 1, 0,1-0,5: 1: 1, 0,4-0,5: 1: 1, 0,1-0,49: 0,5: 1, 0,2-0,49: 0,5: 1, 0,3-0,49: 0,5: 1, ou
0,4-0,49: 0,5: 1 e o pH da composição é cerca de 5,5 a 14, cerca de 6 a cerca de 8, 7 ± 1,5, 6 ± 0,5, ou cerca de 6.
[0103] Composições farmacêuticas para uso na presente divulgação podem ser formuladas usando um ou mais veículos e/ou excipientes fisiologicamente aceitáveis que facilitam a administração de ácido orgânico, glutationa, um derivado de glutationa, um conjugado de glutationa, um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos ou qualquer combinação dos mesmos a um indivíduo por uma rota pretendida, por exemplo, entrega por inalação. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica composição é uma solução aquosa. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica composição é um pó seco.
[0104] As Composições da divulgação podem ser fabricadas por processos convencionais de mistura, dissolução, granulação, produção de drágeas, emulsificação, encapsulamento, armadilha, secagem por pulverização ou liofilização que são conhecidos na técnica. A formulação particular depende da rota de administração escolhida. Em uma modalidade, glutationa, um derivado de glutationa, um conjugado de glutationa, um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, ou qualquer combinação dos mesmos é dissolvido em um solvente, por exemplo, água, for administração às vias aéreas de um indivíduo (por exemplo, administração intranasal).
[0105] O termo “veículo farmaceuticamente aceitável” refere-se a um material, composição ou veículo farmaceuticamente aceitável, tal como um líquido (por exemplo, água), ou um enchimento sólido, diluente, excipiente, solvente ou material de encapsulamento. Um veículo é “farmaceuticamente aceitável” no sentido de ser compatível com os outros ingredientes de uma formulação farmacêutica e adequada para uso em seres humanos sem toxicidade, irritação, resposta alérgica, imunogenicidade, ou outras complicações proporcionais a uma razão benefício/risco razoável. Ver, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21ª Edição;
Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia, Pa., 2005; Handbook of Pharmaceutical Excipients, 5ª Edição; Rowe et al., Eds., The Pharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association: 2005; e Handbook of Pharmaceutical Additives, 3ª Edição; Ash and Ash Eds., Gower Publishing Company: 2007; Pharmaceutical Preformulation and Formulation, Gibson Ed., CRC Press LLC: Boca Raton, Fla., 2004).
[0106] Em algumas modalidades, as Composições da divulgação compreendem um excipiente. Em algumas modalidades, o excipiente é selecionado do grupo que consiste em um agente de ajuste de pH, um conservante, um agente quelante, e qualquer combinação dos mesmos.
[0107] Em determinadas modalidades, as composições da divulgação podem compreender um agente de ajuste de pH. Agentes de ajuste de pH são conhecidos na técnica. Ver, por exemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18ª Edição, A.
R Gennaro, Ed., Mack Publishing Company (1990) e Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3ª Edição, A. Kibbe, Ed., Pharmaceutical Press (2000). Exemplos adequados de agentes de ajuste de pH farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas sem limitação, ácido ascórbico, ácido cítrico, citrato de sódio, bicarbonato de sódio, bicarbonato de potássio, fosfato de sódio dibásico, óxido de magnésio, carbonato de cálcio, hidróxido de magnésio, tampões (por exemplo, tampões de acetato, tampões de citrato, tampões de fosfato, tampões de ácido láctico e tampões de borato e qualquer combinação dos mesmos), ésteres de ácido graxo solúveis em solúveis de ácido ascórbico (vitamina C) (por exemplo, isoladamente ou em combinação com ácidos a-hidróxi), ésteres de ácido graxo saturado resistente à oxidação de ácido ascórbico (por exemplo, ascorbil laurato, ascorbil miristato, ascorbil palmitato, ascorbil estearato e ascorbil behenato, e qualquer combinação dos mesmos), e qualquer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, os ésteres podem ser preparados usando gorduras ou óleos hidrogenados, ou frações dos mesmos, e contêm pequenas quantidades de outro éster. Ascorbil estearato preparado usando canola, por exemplo, geralmente pode conter cerca de 4% de ascorbil palmitato.
[0108] Em uma modalidade, o agente de ajuste de pH, por exemplo, ácido ascórbico, está presente em uma Composição da Divulgação em uma quantidade de cerca de 0,01-50% em peso, cerca de 10-90% em peso, cerca de 10-85% em peso, cerca de 10-80% em peso, cerca de 10-75% em peso, cerca de 10-70% em peso, cerca de 10-65% em peso, cerca de 10-60% em peso, cerca de 10-55% em peso, cerca de 10-50% em peso, cerca de 10-45% em peso, cerca de 10-40% em peso, cerca de 10-35% em peso, cerca de 10-30% em peso, cerca de 1-30% em peso, cerca de 1-20% em peso, ou cerca de 1-10% em peso. Em algumas modalidades, o agente de ajuste de pH está presente em uma Composição da Divulgação em uma quantidade de cerca de 1% em peso, cerca de 5% em peso, cerca de 10% em peso, cerca de 15% em peso, cerca de 20% em peso, cerca de 25% em peso, cerca de 30% em peso, cerca de 35% em peso, cerca de 40% em peso, cerca de 45% em peso, ou cerca de 50% em peso da composição.
[0109] Em determinadas modalidades, as composições da divulgação podem compreender conservantes. Conservantes farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas sem limitação, vários agentes antibacterianos e antifúngicos, solventes (por exemplo, etanol, propileno glicol, álcool benzílico e clorobutanol, e qualquer combinação dos mesmos), sais de amônio quaternário (por exemplo, cloreto de cetilipiridínio, cloreto de benzalcônio e parabenos incluindo, mas sem limitação, metil parabeno, etil parabeno e propil parabeno), clorexidina, ácido benzoico e os sais dos mesmos, ácidos parahidroxibenzoico e os sais dos mesmos, alquil ésteres de ácido parahidroxibenzoico e os sais dos mesmos, sais fenilmercúricos, tais como nitrato, cloreto, acetato e borato, antioxidantes, EDTA, sorbitol, fenol, ácido bórico e os sais dos mesmos, ácido sórbico e os sais dos mesmos, timerosal e nitromersol, e qualquer combinações dos mesmos.
[0110] Em uma modalidade, o conservante está presente em uma Composição da Divulgação em cerca de 0,01-50% em peso, por exemplo, cerca de 1-30% em peso, cerca de 1-20% em peso, ou cerca de 1-10% em peso, por exemplo, cerca de 1% em peso, cerca de 5% em peso, cerca de 10% em peso, cerca de 15% em peso, cerca de 20% em peso, cerca de 25% em peso, cerca de 30% em peso, cerca de 35% em peso, cerca de 40% em peso, cerca de 45% em peso, ou cerca de 50% em peso da composição.
[0111] Em determinadas modalidades, as Composições da divulgação podem compreender um agente quelante. Exemplos não limitantes de agentes quelantes ácidos ácido láctico, ácido acético, ácido oxálico, ácido malônico, ácido succínico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido aconítico, ácido pimélico, ácido sebácico, ácido alimalônico, ácido etilmalônico, ácido cítrico, ácido málico, ácido glicérico, ácido tartárico, ácido mevaloico, ácido oxiglutárico, ácido oxaloacético, ácido a- cetoglutárico, ácido a-cetomalônico, ácido glucurônico, ácido galaceturônico, ácido manurônico, ácido aspártico, ácido glutâmico, glicina, alanina, lisina, histidina, alginina, cisteína, ácido s-aminocaproico, fenilalanina, fenilglicina, p-hidroxifenilglicina, p-aminofenilalanina, ácido y-carboxiglutâmico, ácido iminodiacético, ácido hidroxietiliminodiacético, ácido etilenodiaminediacético, ácido etilenodiaminotetraacético, ácido trans-ciclohexano-diaminetetraacético, ácido dietilenodiaminapentaacético, ácido alaninadiacético, ácido diaminopimélico, ácido ftálico, ácido tereftálico, ácido homoftálico, ácido fenilsuccínico, ácido fenilmalônico, ácido oxanílico-ácido o-carboxílico, ácido antralininoacético, ácido 2,4- dihidroxibenzoico, ácido p-aminossalicíclico, ácido ftaliglutâmico, quinurenina, ácido 1,2-hidroxibenzeno-3,5-dissulfônico, ácido 4-amino-fenol-2-sulfônico, ácido cisteico, ácido 2-fosfoglicérico, ácido glicero-3-fosfórico, ácido glicose-1,6-difosfórico, ácido frutose-1,6-difosfórico e fosfatos (por exemplo, fosfato de sódio, fosfato de alumínio e sódio, fosfato ácido de sódio, fosfato dipotássico, fosfato dissódico, hexametafosfato de sódio e monobásico) e qualquer combinação dos mesmos. Os agentes quelantes podem ser incluídos nas composições farmacêuticas desta divulgação como molécula de origem ou na forma de sal, quando apropriado. Por exemplo, compostos contendo uma função ácida podem ser usados na forma protonada ou como um sal inorgânico ou orgânico farmaceuticamente aceitável que mantém a atividade quelante do composto de origem.
[0112] Em uma modalidade, o agente quelante está presente em uma Composição da Divulgação em cerca de 0,01-50% em peso, por exemplo, cerca de 1-30% em peso, cerca de 1-20% em peso, ou cerca de 1-10% em peso, por exemplo, cerca de 1% em peso, cerca de 5% em peso, cerca de 10% em peso, cerca de 15% em peso, cerca de 20% em peso, cerca de 25% em peso, cerca de 30% em peso, cerca de 35% em peso, cerca de 40% em peso, cerca de 45% em peso, ou cerca de 50% em peso da composição.
[0113] Em determinadas modalidades, a Composição da Divulgação compreende glutationa, um derivado de glutationa, um conjugado de glutationa, um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, ou qualquer combinação dos mesmos; um bicarbonato (por exemplo, bicarbonato de sódio ou bicarbonato de potássio) e/ou um modificador de pH (por exemplo, ácido ascórbico). Em algumas modalidades, a Composição da Divulgação compreende glutationa, um derivado de glutationa, um conjugado de glutationa, um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, ou qualquer combinação dos mesmos e/ou um modificador de pH, tal como um ácido orgânico (por exemplo, ácido ascórbico). Em algumas modalidades, a composição reivindicada em que a quantidade de cada componente está presente tal que a quantidade de ácido ascórbico é aproximadamente equivalente molar ou em excesso molar de glutationa, um derivado de glutationa, um conjugado de glutationa, um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, ou qualquer combinação dos mesmos.
[0114] Em algumas modalidades, uma Composição da Divulgação compreende (a) glutationa, um derivado de glutationa, um conjugado de glutationa, um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos; (b) um ácido orgânico; e (c) um sal de bicarbonato. Em outras modalidades, a razão molar de (a):(b):(c) em uma Composição da Divulgação é 0,1-0,5: 0,5-1: 1 (por exemplo, 0,4-0,5: 0,5-1: 1, 0,1-0,5: 0,5: 1, 0,1-0,5: 1: 1, 0,4-0,5: 1: 1, 0,1-0,49: 0,5: 1, 0,2-0,49: 0,5: 1, 0,3-0,49: 0,5: 1, ou 0,4-0,49: 0,5: 1).
[0115] Em algumas modalidades, o ácido orgânico em uma Composição da Divulgação é ácido ascórbico. Em algumas modalidades, o sal de bicarbonato em uma Composição da Divulgação é bicarbonato de sódio. Em algumas modalidades, a composição compreende: (a) glutationa; (b) ácido ascórbico; e (c) bicarbonato de sódio. Em determinadas modalidades, a razão molar de (a):(b):(c) é cerca de 0,1-0,5: 0,5-1: 1 (por exemplo, cerca de 0,49 : cerca de 0,50 : cerca de 1). Em outras modalidades, a razão molar de (a):(b):(c) é cerca de 0,1-0,5: 1: 1 (por exemplo, cerca de 0,49 : cerca de 1 : cerca de 1).
[0116] Em algumas modalidades, o pH de uma Composição da Divulgação é de cerca de 5,5 a cerca de 14 (por exemplo 5,5 a 7,5). Em algumas modalidades, o pH de uma Composição da Divulgação é de cerca de 6 a cerca de 14 (por exemplo, 6 a 7,5). Em algumas modalidades, o pH da composição é 7 ± 1,5, 7 ± 1,4, 7 ± 1,3, 7 ± 1,2, 7 ± 1,1, 6 ± 0,5, 6 ± 0,4, 6 ± 0,3, 6 ± 0,2, 6 ± 0,5, 6 ± 0,1, ou cerca de 6.
[0117] Em algumas modalidades, a Composição da Divulgação é armazenamento estável a 2-8ºC por pelo menos 72 horas. Em algumas modalidades, a Composição da Divulgação pode (a) permanecer essencialmente livre de precipitação após armazenamento a 2-8ºC por pelo menos 72 horas, (b) compreender menos do que 7%, menos do que 6%, menos do que 5%, ou menos do que 4% de impurezas após armazenamento a 2-8ºC por pelo menos 72 horas, (c) ter ou manter um pH de cerca de 6 a 7,5 (por exemplo, 6,0-7,0) após armazenamento a 2-8ºC por pelo menos 72 horas, e/ou (d) ter perda mínima de solubilidade após armazenamento a 2-8ºC por pelo menos 72 horas.
Métodos de Uso
[0118] Em algumas modalidades, as Composições da Divulgação são úteis para tratar, reduzir os sintomas de, ou impedir uma doença, condição ou distúrbio do pulmão. Em particular, as Composições da Divulgação podem ser usadas para inibir ou reduzir o crescimento de bactéria isolada clínica e/ou inibir ou reduzir a formação de um biofilme de bactéria isolada clínica. As Composições da divulgação podem ser usadas para tratar ou reduzir os sintomas em um indivíduo que sofre ou em risco de uma infecção por bactéria isolada clínica. Em outras modalidades, as Composições da divulgação são úteis para sobrerregular a depuração mucociliar em um indivíduo que sofre ou em risco de depuração mucociliar prejudicada, por exemplo, em um indivíduo com ou sem uma infecção bacteriana ativa no pulmão. Em outras modalidades, as Composições da divulgação são úteis para reduzir a inflamação das vias aéreas em um indivíduo que sofre ou em risco de inflamação das vias aéreas, por exemplo, com ou sem uma infecção bacteriana ativa no pulmão.
[0119] Em algumas modalidades, o indivíduo tem uma doença ou distúrbio pulmonar ou das vias aéreas. Em algumas modalidades, o distúrbio pulmonar ou das vias aéreas é selecionado do grupo que consiste em doença pulmonar inflamatória crônica, fibrose pulmonar, vasculite pulmonar, sarcoidose pulmonar, inflamação e/ou infecção associada a transplante de pulmão, disfunção e/ou rejeição pulmonar crônica ou aguda, hipertensão arterial pulmonar, bronquite, sinusite, asma, fibrose cística, bronquiectasia (por exemplo, bronquiectasia de fibrose não cística ou bronquiectasia de fibrose cística), infecção bacteriana, infecção fúngica, infecção parasitária, infecção viral, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), síndrome de bronquiolite obliterante (BOS), discinesia ciliar primária (PCD), proteinose alveolar, fibrose pulmonar idiopática, pneumonia eosinofílica, bronquite eosinofílica, síndrome do desconforto respiratório agudo (ARDS), inflamação e/ou infecção associada a ventilação mecânica, pneumonia associada ao ventilador, distúrbio ou doença das vias aéreas relacionado a amianto, distúrbio ou doença das vias aéreas relacionado a poeira, silicose, e distúrbio ou doença das vias aéreas relacionado a agente químico ou radiação, e qualquer combinação dos mesmos.
[0120] Em algumas modalidades, o distúrbio ou doença pulmonar ou das vias aéreas é selecionado do grupo que consiste em doença pulmonar inflamatória crônica, uma inflamação e/ou infecção associada a transplante de pulmão, rejeição ou disfunção pulmonar aguda ou crônica, asma, fibrose cística, bronquiectasia (por exemplo, bronquiectasia de fibrose não cística ou bronquiectasia de fibrose cística), ou doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), ou qualquer combinação dos mesmos. Em outra modalidade, o distúrbio ou doença pulmonar ou das vias aéreas é fibrose cística. Em outra modalidade, o indivíduo é um paciente de transplante pulmonar. Em outra modalidade, o indivíduo é um paciente com bronquiectasia de fibrose não cística. Em outra modalidade, o indivíduo é infectado com uma bactéria produtora de biofilme.
[0121] Em algumas modalidades, o distúrbio ou doença pulmonar ou das vias aéreas é bronquiectasia (BrE). A bronquiectasia pode ser diagnosticada em pacientes que sofrem de fibrose cística (bronquiectasia CF) ou pacientes sem fibrose cística (bronquiectasia não CF). Até o momento, as terapias que foram usadas em fibrose cística (CF) não funcionaram e demonstraram ser potencialmente prejudiciais em bronquiectasia não CF.
[0122] Bronquiectasia não CF e doença de CF, incluindo bronquiectasia associada a CF, são clinicamente distintas, embora apresentem algumas das mesmas características. BrE CF afeta principalmente os lobos superiores das vias aéreas, enquanto que BrE não CF está associado a um envolvimento do lobo mais inferior.
Como os pacientes com BrE não CF não possuem mecanismos de transporte mucociliar adequados, as terapias que apenas quebram os componentes do muco (por exemplo, DNase) fazem com que o escarro se acumule nas vias aéreas inferiores e no parênquima pulmonar, em vez de ser expectorado. O escarro em CF contém mais DNA em comparação com os pacientes com BrE, indicando fisiologias subjacentes distintas. Os pacientes com BrE são geralmente mais velhos com maior prevalência em mulheres, e os pacientes com CF são diagnosticados em idade precoce e têm igual prevalência masculino/feminino. (O'Donnell et al., Chest 1998 Volume 113, Edição 5, Páginas 1329–1334).
[0123] Em algumas modalidades, as Composições da Divulgação são úteis para tratar, reduzir os sintomas de ou impedir (por exemplo, bronquiectasia de fibrose não cística ou bronquiectasia de fibrose cística).
[0124] Em outra modalidade, a presente divulgação provê métodos de tratar ou prevenir uma infecção por bactéria isolada clínica nas vias aéreas de um indivíduo em necessidade dos mesmos, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma Composição da Divulgação. Em outra modalidade, uma Composição da Divulgação é administrada ao indivíduo em combinação com um ou mais antibióticos. Os antibióticos podem ser administrados localmente aos pulmões e/ou sistemicamente.
[0125] Em outra modalidade, a presente divulgação provê métodos de tratar ou prevenir a inflamação nas vias aéreas de um indivíduo em necessidade dos mesmos, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente de uma Composição da Divulgação.
[0126] Em outra modalidade, a presente divulgação provê métodos de tratar ou prevenir uma doença ou distúrbio no tecido mucoso em um indivíduo em necessidade dos mesmos, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma Composição da Divulgação. Exemplos não limitantes de tecido mucoso incluem boca, nariz, olho, ouvido, trato respiratório superior, trato respiratório inferior, trato gastrointestinal, vagina, reto e uretra.
[0127] Em outra modalidade, a presente divulgação provê métodos de tratar ou prevenir uma doença ou distúrbio associada a membranas de mucosa, em um indivíduo em necessidade dos mesmos, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente de uma Composição da Divulgação às membranas de mucosa apropriadas. Em uma modalidade, as membranas de mucosa são os pulmões, tais como o pulmão profundo (região alveolar), e em outras modalidades, as membranas de mucosa são um ou mais dos olhos, boca, nariz, reto e vagina.
[0128] Em outra modalidade, uma Composição da Divulgação pode ser usada para tratar ou prevenir bronquiolite obliterante e dano pulmonar relacionado a militares, isto é, dano pulmonar de militares que danificaram as vias aéreas secundárias a exposições desconhecidas.
[0129] Em outra modalidade, a presente divulgação provê o uso de uma Composição da Divulgação para a fabricação de um medicamento para o tratamento de um distúrbio pulmonar ou das vias aéreas. Em outra modalidade, o uso ainda compreende administrar um ou mais agentes terapêuticos adicionais ao indivíduo.
[0130] Os métodos terapêuticos desta divulgação compreendem administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma Composição da Divulgação a um indivíduo em necessidade dos mesmos, por exemplo, um paciente humano. A indicação de tal tratamento depende do caso individual e está sujeita a avaliação médica (diagnóstico) que leva em consideração sinais, sintomas e/ou malfunções que estão presentes, os riscos de desenvolver sinais, sintomas e/ou malfunções particulares, e outros fatores.
[0131] Em uma modalidade, a presente divulgação provê um método para tratar um distúrbio ou doença pulmonar ou das vias aéreas em um indivíduo infectado com uma bactéria isolada clínica ou em risco de infecção com uma bactéria isolada clínica, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma Composição da Divulgação.
[0132] Em outra modalidade, o distúrbio ou doença pulmonar ou das vias aéreas é selecionado do grupo que consiste em doença pulmonar inflamatória crônica, uma inflamação e/ou infecção associada a transplante de pulmão, rejeição aguda de pumão, asma, fibrose cística, bronquiectasia (por exemplo, bronquiectasia de fibrose não cística ou bronquiectasia de fibrose cística), e doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), e qualquer combinação dos mesmos.
[0133] Em outra modalidade, o distúrbio ou doença pulmonar ou das vias aéreas é tratado inibindo o crescimento de bactéria isolada clínica nas vias aéreas do indivíduo.
[0134] Em outra modalidade, o distúrbio ou doença pulmonar ou das vias aéreas é tratado restaurando homeostase e/ou mantendo a homeostase em uma membrana de mucosa de um indivíduo em necessidade da mesma, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma Composição da Divulgação.
[0135] Em outra modalidade, a presente divulgação provê um método de restaurar a homeostase e/ou manter a homeostase em uma membrana de mucosa de um indivíduo em necessidade da mesma, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma Composição da Divulgação.
[0136] Em outra modalidade, a presente divulgação provê um método de restaurar ou manter a homeostase em uma membrana de mucosa compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma Composição da Divulgação.
[0137] Em algumas modalidades, os métodos da divulgação compreendem administrar às vias aéreas do indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo: um conjugado de glutationa e/ou glutationa, ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos. Em outra modalidade, a composição ainda compreende: um ácido orgânico, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
Em outra modalidade, o ácido orgânico é ácido ascórbico. Em outra modalidade, a composição ainda compreende: um sal de bicarbonato. Em outra modalidade, o sal de bicarbonato é bicarbonato de sódio ou bicarbonato de potássio. Em algumas modalidades, o ácido orgânico na Composição da Divulgação é ácido ascórbico. Em algumas modalidades, o sal de bicarbonato em uma Composição da Divulgação é bicarbonato de sódio. Em algumas modalidades, a composição compreende: (a) glutationa; (b) ácido ascórbico; e (c) bicarbonato de sódio. Em determinadas modalidades, a razão molar de (a):(b):(c) é cerca de 0,1-0,5: 0,5-1: 1 (por exemplo, cerca de 0,49 : cerca de 0,50 : cerca de 1). Em outras modalidades, a razão molar de (a):(b):(c) é cerca de 0,1-0,5: 1: 1 (por exemplo, cerca de 0,49 : cerca de 1 : cerca de 1).
[0138] Em outra modalidade, a quantidade de cada um dos componentes, o conjugado de glutationa e/ou a glutationa, ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, o ácido orgânico, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e o sal de bicarbonato da composição está presente tal que a quantidade de sal de bicarbonato resulta em um pH em um intervalo de cerca de 5,5 a cerca de 14. Em algumas modalidades, o pH de uma Composição da Divulgação é de cerca de 5,5 a cerca de 14 (por exemplo 5,5 a 7,5). Em algumas modalidades, o pH de uma Composição da Divulgação é de cerca de 6 a cerca de 14 (por exemplo, 6 a 7,5). Em algumas modalidades, o pH da composição é 7 ± 1,5, 7 ± 1,4, 7 ± 1,3, 7 ± 1,2, 7 ± 1,1, 6 ± 0,5, 6 ± 0,4, 6 ± 0,3, 6 ± 0,2, 6 ± 0,5, 6 ± 0,1, ou cerca de 6.
[0139] Em outra modalidade, a composição ainda compreende de cerca de 0,01% a cerca de 5% em peso de um sal de tiocianato farmaceuticamente aceitável.
[0140] Em outra modalidade, a composição é na forma de uma partícula. Em outra modalidade, a partícula é misturada com um propulsor a gás ou líquido para uso em terapia de inalação.
[0141] Em outra modalidade, a glutationa é glutationa reduzida.
[0142] Em outra modalidade, a administração da composição ao indivíduo dá uma concentração de cerca de 0,1 mM a cerca de 1,0 mM de glutationa no líquido de superfície das vias aéreas do indivíduo. Em outra modalidade, a administração da composição ao indivíduo dá uma concentração de cerca de 0,5 mM a cerca de 3,0 mM de tiocianato no líquido de superfície das vias aéreas do indivíduo.
[0143] Em algumas modalidades, a glutationa oxidada (por exemplo, % de GSSG) na Composição da Divulgação é menos do que cerca de 20%, menos do que cerca de 18%, menos do que cerca de 16%, menos do que cerca de 15%, menos do que cerca de 12%, menos do que cerca de 10%, menos do que cerca de 9%, menos do que cerca de 8%, menos do que cerca de 7%, menos do que cerca de 6%, menos do que cerca de 5%, menos do que cerca de 4%, ou menos do que cerca de 3% em peso da glutationa total na Composição da Divulgação após armazenamento da Composição da Divulgação por 4 semanas (por exemplo, a 5ºC em uma atmosfera de N2 e/ou atmosfera ambiente).
[0144] Em algumas modalidades, a glutationa reduzida na Composição da Divulgação é mais do que cerca de 80%, mais do que cerca de 82%, mais do que cerca de 84%, mais do que cerca de 85%, mais do que cerca de 88%, mais do que cerca de 90%, mais do que cerca de 91%, mais do que cerca de 92%, mais do que cerca de 93%, mais do que cerca de 94%, mais do que cerca de 95%, mais do que cerca de 96%, ou mais do que cerca de 97% em peso da glutationa total na Composição da Divulgação após armazenamento da Composição da Divulgação por 4 semanas a cerca de 5ºC (por exemplo, em uma atmosfera de N2 ou ambiente).
[0145] Em algumas modalidades, o ácido ascórbico reduzido (por exemplo, % de ASC) é mais do que cerca de 80%, mais do que cerca de 85%, mais do que cerca de 86%, mais do que cerca de 87%, mais do que cerca de 88%, mais do que cerca de 89%, ou mais do que cerca de 90% em peso do ácido ascórbico na Composição da Divulgação após armazenamento da Composição da Divulgação por 4 semanas (por exemplo, a 5ºC em uma atmosfera de N2 e/ou atmosfera ambiente).
[0146] Em algumas modalidades, o ácido ascórbico oxidado na Composição da Divulgação é menos do que cerca de 20%, menos do que cerca de 18%, menos do que cerca de 16%, menos do que cerca de 15%, menos do que cerca de 12%, menos do que cerca de 10%, ou menos do que cerca de 9% em peso do ácido ascórbico total na Composição da Divulgação após armazenamento da Composição da Divulgação por 4 semanas (por exemplo, a 5ºC em uma atmosfera de N2 e/ou atmosfera ambiente).
[0147] Em algumas modalidades, a composição é uma solução aquosa ou um pó seco. Em outra modalidade, a composição é administrada por inalação ao indivíduo.
a. Métodos de Uso de Antibacterianos
[0148] Embora a maioria dos agentes antibacterianos (por exemplo, antibióticos) têm atividade exclusivamente contra Gram negativo bactérias ou exclusivamente contra bactérias Gram positivas, a Composição da Divulgação demonstram atividade de amplo espectro contra bactérias Gram negativas e Gram positivas. Tais propriedades são inesperadas em vista de estudos que mostram que ácido ascórbico isoladamente atua de maneira dependente de cepa e altamente dependente de concentração (ver, por exemplo, Med J Aust. 1974 Feb 9;1(6):169-74; Hancock and Wong. Antimicrob agents and chemotherapy, July 1984: 48-52). As condições clínicas complicam o uso de antibióticos de amplo espectro em doenças inflamatórias crônicas das vias aéreas, tais como fibrose cística, bronquiectasia (por exemplo, bronquiectasia de fibrose não cística ou bronquiectasia de fibrose cística), e transplante de pulmão. Além disso, os médicos geralmente usam antibióticos empiricamente e com base na resposta do paciente. Em contraste com as composições da divulgação, as terapias com antibiótico atuais não demonstram eficácias consistentes contra bactérias comumente encontradas em doenças inflamatórias crônicas das vias aéreas.
[0149] As Composições da Divulgação podem ativamente inibir múltiplas espécies bacterianas sem conferir mecanismos de proteção de bactérias.
[0150] Por conseguinte, em algumas modalidades, as Composições da Divulgação são úteis para inibir ou reduzir o crescimento de uma bactéria isolada clínica. Em algumas modalidades, as composições da divulgação são úteis para inibir ou reduzir a formação de um biofilme de bactéria isolada clínica. Em algumas modalidades, as composições da divulgação são úteis para tratar ou reduzir sintomas em um indivíduo que sofre ou em risco de uma infecção por bactéria isolada clínica.
[0151] Em determinados aspectos, o isolado clínico do pedido pode compreender uma única cepa bacteriana ou uma combinação (isto é, duas ou mais) de cepas bacterianas. Em determinadas modalidades, o isolado clínico é selecionado do grupo que consiste em Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA), Actinobacter baumannii, Burkholderia pseudomallei, Burkholderia cepacia, ou qualquer combinação dos mesmos.
[0152] Em algumas modalidades, o isolado clínico é gram negativo. Em determinadas modalidades, o isolado clínico gram negativo é selecionado do grupo que consiste em Burkholderia cepacia, Pseudomonas aeruginosa, Actinobacter baumannii, Burkholderia pseudomallei, ou qualquer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, a Pseudomonas aeruginosa é mucoide ou não mucoide, ou combinação dos mesmos.
[0153] Em algumas modalidades, o isolado clínico é gram positivo. Em determinadas modalidades, o isolado clínico gram positivo é selecionado do grupo que consiste em Enterococcus, Streptococcus, Pneumococcus, Staphylococcus (por exemplo, Staphylococcus aureus ou Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA), e qualquer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, o isolado clínico gram positivo é Staphylococcus aureus ou Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA) ou uma combinação dos mesmos.
[0154] Em algumas modalidades, o isolado clínico é mucoide. Em determinadas modalidades, o isolado clínico mucoide é Pseudomonas aeruginosa, Burkholderia cepacia, e qualquer combinação dos mesmos.
[0155] Em algumas modalidades, o isolado clínico é não mucoide. Em determinadas modalidades, o isolado clínico é Pseudomonas aeruginosa não mucoide clínica.
[0156] Em algumas modalidades, o isolado clínico é aeróbico. Em determinadas modalidades, o isolado clínico aeróbico é Pseudomonas aeruginosa, Burkholderia cepacia, Staphylococcus aureus, e Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA), e qualquer combinação dos mesmos. Em determinadas modalidades, a condição aeróbica é com nitrato. Em determinadas modalidades, a condição aeróbica é sem nitrato.
[0157] Em algumas modalidades, o isolado clínico é anaeróbico ou aerotolerante. Em determinadas modalidades, o isolado clínico anaeróbico ou aerotolerante é selecionado do grupo que consiste em Staphylococcus aureus, Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA), Burkholderia cepacia, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, e qualquer combinação dos mesmos. Em determinadas modalidades, a condição anaeróbica ou aerotolerante é com nitrato. Em determinadas modalidades, a condição anaeróbica ou aerotolerante é sem nitrato.
[0158] Em algumas modalidades, o isolado clínico pode viver de maneira extracelular. Em determinadas modalidades, o isolado clínico que pode viver de maneira extracelular é Burkholderia cepacia, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, e Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA), e qualquer combinação dos mesmos.
[0159] Em algumas modalidades, o isolado clínico é resistente a multidroga.
Em determinadas modalidades, o isolado clínico resistente a multidroga é selecionado do grupo que consiste em Staphylococcus aureus, Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA), Pseudomonas aeruginosa, Burkholderia cepacia, e qualquer combinação dos mesmos.]
[0160] Em algumas modalidades, o isolado clínico é resistante a tratamento com proteína catiônica. Em determinadas modalidades, o isolado clínico resistente a tratamento com proteína catiônica é selecionado do grupo que consiste em Pseudomonas aeruginosa, Burkholderia cepacia, e qualquer combinação dos mesmos.
Pseudomonas aeruginosa
[0161] Em uma modalidade, as bactérias isoladas clínicas são Pseudomonas aeruginosa.
[0162] Pseudomonas aeruginosa é uma bactéria gram negativa que pode causar infecção, especialmente em pacientes com mecanismos de defesa do hospedeiro comprometidos. É o patógeno mais comum isolado de pacientes que foram hospitalizados por mais de uma semana e é uma causa frequente de infecções nosocomiais. Infecções por pseudomonas podem ser fatais.
[0163] Pseudomonas aeruginosa é uma bactéria metabolicamente versátil que pode causar uma ampla gama de infecções oportunistas graves em pacientes com defesas naturais comprometidas. Condições predisponentes podem incluir, por exemplo, uma barreira epitelial rompida (como encontrada em pacientes com queimaduras), uma depleção de neutrófilos (por exemplo, em um paciente com câncer recebendo quimioterapia), a presença de corpo estranho (um paciente com um cateter venoso central) e depuração mucociliar alterada (por exemplo, em indivíduos com fibrose cística). Pseudomonas aeruginosa é intrinsecamente resistente a um grande número de antibióticos e pode adquirir resistência a outros, dificultando o tratamento.
A propensão de Pseudomonas aeruginosa para formar biofilmes ainda a protege de antibióticos e de um sistema imune do hospedeiro. Em algumas modalidades, o isolado clínico é a Pseudomonas aeruginosa mucoide. Em algumas modalidades, o isolado clínico é a Pseudomonas aeruginosa não mucoide.
[0164] Pseudomonas aeruginosa é comumente associada ao trato respiratório de indivíduos com fibrose cística e é associada a um declínio acelerado da função pulmonar nesses pacientes. Infecção e colonização pulmonar crônica também ocorrem na bronquiectasia (por exemplo, bronquiectasia de fibrose não-quimica ou bronquiectasia de fibrose cística), uma doença caracterizada por dilatação irreversível da árvore brônquica, e na doença pulmonar obstrutiva crônica, uma doença caracterizada pelo estreitamento da vias aéreas e anormalidades no fluxo de ar. Além disso, Pseudomonas aeruginosa é uma das causas mais comuns de pneumonia adquirida no hospital, especialmente em pacientes sob ventilação mecânica; está associada a uma taxa de mortalidade particularmente alta.
[0165] A exposição a vários ambientes in vivo resulta na ativação de uma variedade de padrões metabólicos em Pseudomonas aeruginosa para se defender contra espécies nitrogenadas reativas. Isso pode resultar na produção mucoide do hospedeiro.
Burkholderia cepacia
[0166] Em outra modalidade, as bactérias isoladas clínicas são Burkholderia cepacia.
[0167] Burkholderia cepacia é um bacilo aeróbico gram-negativo encontrado em vários ambientes aquáticos. Burkholderia cepacia é um organismo de baixa virulência e é um colonizador frequente de fluidos usados no hospital (por exemplo, soluções de irrigação, fluidos intravenosos). Burkholderia cepacia raramente causa infecção em hospedeiros saudáveis. Com base em análises fenotípicas e genotípicas, a Burkholderia cepacia é uma das dividias em 9 genovares que constituem o complexo de Burkholderia cepacia (BCC).
[0168] BCC é um importante grupo de patógenos que afetam os pacientes com fibrose cística e doença granulomatosa crônica, bem como pacientes imunocomprometidos e hospitalizados. Avgeri et al. Int J Antimicrob Agents. Maio de 2009; 33(5):394-404. BCC sofre mutação frequentemente e adquire altos níveis de resistência a muitos agentes antimicrobianos. Essas bactérias são associadas ao declínio clínico e à mortalidade em doenças inflamatórias crônicas das vias aéreas e podem até desenvolver resistência multidroga. Embora elas geralmente sejam consideradas aeróbicas, algumas apresentam respiração de fermentação e nitrato.
Sass et al. ISME J. 2013 Aug;7(8):1568-81.
Staphylococcus aureus e Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA)
[0169] Em outra modalidade, as bactérias isoladas clínicas são Staphylococcus aureus ou Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA), ambas das quais são cocos Gram positivos.
[0170] Staphylococcus aureus é uma importante causa de pneumonia. Essas bactérias são especificamente implicadas no desenvolvimento de infecções pleuropulmonares, e geralmente se colocalizam com Pseudomonas aeruginosa ou Burkholderia cepacia em doenças inflamatórias crônicas das vias aéreas. Tong et al.
Clin Microbiol Rev. 2015 Jul;28(3):603-61. Em uma modalidade, Staphylococcus aureus é identificada em pacientes de transplante pulmonar com rejeição aguda e crônica.
[0171] A infecção por MRSA é causada por Staphylococcus aureus que se torna resistente a muitos dos antibióticos usados no tratamento de infecções comuns por estafilococos. As infecções por HA-MRSA geralmente são associadas a procedimentos ou dispositivos invasivos, tais como cirurgias, tubos intravenosos ou articulações artificiais. MRSA associada à comunidade (CA-MRSA) é outro tipo de infecção por MRSA que ocorreu na comunidade em geral, frequentemente entre pessoas saudáveis. Esta forma geralmente começa como uma ferida dolorosa na pele. É espalhada pelo contato pele a pele. Populações em risco incluem grupos como lutadores de wrestling, funcionários de creches e pessoas que vivem em condições de lotação.
b. Métodos de aumentar a depuração mucociliar
[0172] A depuração mucociliar é crítica na prevenção de infeccões e inflamação no pulmão. No entanto, a depuração mucociliar é geralmente ausente ou prejudicada em doenças inflamatórias crônicas das vias aéreas, tais como fibrose cística, bronquiectasia (por exemplo, bronquiectasia de fibrose não cística ou bronquiectasia de fibrose cística), transplante de pulmão e doença pulmonar obstrutiva crônica. Além disso, células epiteliais das vias aéreas de pacientes com fibrose cística são conhecidas por completamente não possuir capacidade de depuração mucociliar sem outros insultos inflamatórios ou infecção ou colonização bacteriana. Embora alguns estudos tenham focado na modificação do microambiente das vias aéreas para restaurar a função para tecido previamente funcional, as Composições da Divulgação são capazes de ativar as funções de depuração mucociliar em células epiteliais de outra forma desprovidas de tais funções.
[0173] Ácido ascórbico pode diretamente modular a atividade de CFTR (Proc Natl Acad Sci U S A. 2004 Mar 9; 101(10): 3691–3696.). No entanto, ácido ascórbico também demonstrou ter efeito limitado na depuração mucociliar (BMC Complement Altern Med. 2013; 13: 110.) e eficácia clínica limitada (Sakasura Ann Otol 82; 1973).
No entanto, as composições da divulgação podem restaurar a função mucociliar na ausência de uma infecção bacteriana.
[0174] Quando administrados individualmente, glutationa, ácido ascórbico e bicarbonato não têm nenhum impacto clínico na depuração mucociliar ou resultados clínicos (Sakasura Ann Otol 82; 1973; Am J Respir Crit Care Med. 2013 Jul 1;188(1):83-9. doi: 10.1164/rccm.201303-0427OC.). Além disso, os efeitos do bicarbonato foram inconclusivos apesar dos dados clínicos que diretamente afetam o pH das vias aéreas.
[0175] As Composições da Divulgação geram um efeito sinérgico entre glutationa, ácido ascórbico, e bicarbonato, e podem ativar a depuração mucociliar para níveis vistos em células normais (Am J Respir Crit Care Med. 2014 Aug 15; 190(4): 421–432.). Por conseguinte, em algumas modalidades, as Composições da Divulgação são úteis para sobrerregular a depuração mucociliar em um indivíduo que sofre ou em risco de depuração mucociliar prejudicada.
[0176] Em algumas modalidades, a divulgação compreende um método de sobrerregular a depuração mucociliar em um indivíduo que sofre ou em risco de depuração mucociliar prejudicada compreendendo administrar ao indivíduo uma composição compreendendo: (a) glutationa, um derivado de glutationa, um conjugado de glutationa, um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos e (b) um ácido orgânico.
[0177] Em outra modalidade, o ácido orgânico é ácido ascórbico. Em outra modalidade, a composição ainda compreende: (c) um sal de bicarbonato. Em outra modalidade, o sal de bicarbonato é bicarbonato de sódio ou bicarbonato de potássio.
Em algumas modalidades, o ácido orgânico em a é ácido ascórbico. Em algumas modalidades, a composição compreende: (a) glutationa; (b) ácido ascórbico; e (c)
bicarbonato de sódio. Em determinadas modalidades, a razão molar de (a):(b):(c) é cerca de 0,1-0,5: 0,5-1: 1 (por exemplo, cerca de 0,49 : cerca de 0,50 : cerca de 1).
Em outras modalidades, a razão molar de (a):(b):(c) é cerca de 0,1-0,5: 1: 1 (por exemplo, cerca de 0,49 : cerca de 1 : cerca de 1).
[0178] Em outra modalidade, a quantidade de cada de componente, o conjugado de glutationa e/ou a glutationa, ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, o ácido orgânico, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e o sal de bicarbonato da composição está presente tal que a quantidade de sal de bicarbonato resulta em um pH em um intervalo de cerca de 5,5 a cerca de 14. Em algumas modalidades, o pH de uma Composição da Divulgação é de cerca de 5,5 a cerca de 14 (por exemplo, 5,5 a 7,5). Em algumas modalidades, o pH de uma Composição da Divulgação é de cerca de 6 a cerca de 14 (por exemplo, 6 a 7,5). Em algumas modalidades, o pH da composição é 7 ± 1,5, 7 ± 1,4, 7 ± 1,3, 7 ± 1,2, 7 ± 1,1, 6 ± 0,5, 6 ± 0,4, 6 ± 0,3, 6 ± 0,2, 6 ± 0,5, 6 ± 0,1, ou cerca de 6.
[0179] Em outra modalidade, a composição ainda compreende de cerca de 0,01% a cerca de 5% em peso de um sal de tiocianato farmaceuticamente aceitável.
[0180] Em outra modalidade, a composição é na forma de uma partícula. Em outra modalidade, a partícula é misturada com um propulsor a gás ou líquido para uso em terapia de inalação.
[0181] Em outra modalidade, a glutationa é glutationa reduzida.
[0182] Em outra modalidade, a administração da composição ao indivíduo dá uma concentração de cerca de 0,1 mM a cerca de 1,0 mM de glutationa no líquido de superfície das vias aéreas do indivíduo. Em outra modalidade, a administração da composição ao indivíduo dá a concentração de cerca de 0,5 mM a cerca de 3,0 mM de tiocianato no líquido de superfície das vias aéreas do indivíduo.
[0183] Em algumas modalidades, a glutationa oxidada (por exemplo, % de GSSG) na Composição da Divulgação é menos do que cerca de 20%, menos do que cerca de 18%, menos do que cerca de 16%, menos do que cerca de 15%, menos do que cerca de 12%, menos do que cerca de 10%, menos do que cerca de 9%, menos do que cerca de 8%, menos do que cerca de 7%, menos do que cerca de 6%, menos do que cerca de 5%, menos do que cerca de 4%, ou menos do que cerca de 3% em peso da glutationa total na Composição da Divulgação após armazenamento da Composição da Divulgação por 4 semanas (por exemplo, a 5ºC em uma atmosfera de N2 e/ou atmosfera ambiente).
[0184] Em algumas modalidades, a glutationa reduzida na Composição da Divulgação é mais do que cerca de 80%, mais do que cerca de 82%, mais do que cerca de 84%, mais do que cerca de 85%, mais do que cerca de 88%, mais do que cerca de 90%, mais do que cerca de 91%, mais do que cerca de 92%, mais do que cerca de 93%, mais do que cerca de 94%, mais do que cerca de 95%, mais do que cerca de 96%, ou mais do que cerca de 97% em peso da glutationa total na Composição da Divulgação após armazenamento da Composição da Divulgação por 4 semanas a cerca de 5ºC (por exemplo, em uma atmosfera de N2 ou ambiente).
[0185] Em algumas modalidades, o ácido ascórbico reduzido (por exemplo, % de ASC) é mais do que cerca de 80%, mais do que cerca de 85%, mais do que cerca de 86%, mais do que cerca de 87%, mais do que cerca de 88%, mais do que cerca de 89%, ou mais do que cerca de 90% em peso do ácido ascórbico na Composição da Divulgação após armazenamento da Composição da Divulgação por 4 semanas (por exemplo, a 5ºC em uma atmosfera de N2 e/ou atmosfera ambiente).
[0186] Em algumas modalidades, o ácido ascórbico oxidado na Composição da Divulgação é menos do que cerca de 20%, menos do que cerca de 18%, menos do que cerca de 16%, menos do que cerca de 15%, menos do que cerca de 12%, menos do que cerca de 10%, ou menos do que cerca de 9% em peso do ácido ascórbico total na Composição da Divulgação após armazenamento da Composição da Divulgação por 4 semanas (por exemplo, a 5ºC em uma atmosfera de N2 e/ou atmosfera ambiente).
[0187] Em algumas modalidades, a composição é uma solução aquosa ou um pó seco. Em outra modalidade, a composição é administrada por inalação ao indivíduo.
[0188] Em algumas modalidades, administrar a composição reduz a viscosidade do muco do paciente. Em algumas modalidades, administrar a composição aumenta a frequência de batimento ciliar das células epiteliais das vias aéreas do paciente. Em algumas modalidades, administrar a composição aumenta a taxa de transporte mucociliar das células epiteliais das vias aéreas do paciente. Em algumas modalidades, administrar a referida composição aumenta a altura do líquido de superfície das vias aéreas do paciente.
[0189] Em algumas modalidades, o paciente sofre ou está em risco de sofrer de uma doença inflamatória crônica das vias aéreas. Em algumas modalidades, a doença inflamatória das vias aéreas é fibrose cística, bronquiectasia (por exemplo, bronquiectasia de fibrose não cística ou bronquiectasia de fibrose cística), asma, doença pulmonar obstrutiva crônica ou fibrose pulmonar. Em algumas modalidades, a doença inflamatória das vias aéreas é fibrose cística. Em algumas modalidades, as células epiteliais das vias aéreas do paciente não possuem capacidade de depuração mucociliar antes da administração da referida composição. Em algumas modalidades, as células epiteliais das vias aéreas do referido paciente não possuem capacidade de depuração mucociliar devido a uma deficiência genética.
[0190] Em algumas modalidades, o paciente recebeu um transplante de pulmão.
[0191] Em algumas modalidades, o epitélio das vias aéreas do paciente não é colonizado por bactérias. Em outras modalidades, o epitélio das vias aéreas do paciente é colonizado por bactérias. Em algumas modalidades, o paciente sofre de uma infecção bacteriana ativa. Em outras modalidades, o paciente não sofre de uma infecção bacteriana ativa.
[0192] Em algumas modalidades, o paciente é um paciente pediátrico. Em outras modalidades, o paciente é um paciente adulto.
c. Métodos anti-inflamatórios de uso
[0193] Identificadores de inflamação na doença das vias aéreas incluem a produção de armadilhas extracelulares de neutrófilos (NETs), atividade de mieloperoxidase de neutrófilos elevada, produção de óxido nítrico elevada e produção elevada de citocinas pró-inflamatórias. Estudos sugerem que o ácido ascórbico especificamente melhora a atividade de mieloperoxidase (MPO) e promove o recrutamento de leucócitos, e que a presença de MPO é diretamente associada a complicações clínicas e deterioração (Free Radic Biol Med. 2017 2 de outubro de 2017; 113: 236-243). Além disso, a formação de armadilha extracelular de neutrófilos causada por acetato miristato de forbol (PMA) é evitada sob condições ácidas e provocada sob condições mais básicas resultantes de altas concentrações de bicarbonato de sódio.
[0194] As Composições da Divulgação inibem diretamente o processo inflamatório. Em particular, as Composições da Divulgação inibem a atividade de MPO, além de sub-regular as citocinas associadas à formação de NET, ativação de macrófagos e recrutamento de células T e neutrófilos em um mecanismo independente das funções de redução. As Composições da Divulgação podem sub- regular o nível de produção de óxido nítrico patológico e, portanto, não prejudicar as propriedades antibacterianas endógenas. Em algumas modalidades, administrar a referida composição reduz o óxido nítrico exalado fracionado (FeNO) do paciente em pelo menos 20%. Por conseguinte, em algumas modalidades, as Composições da Divulgação são úteis para reduzir a inflamação das vias aéreas em um indivíduo que sofre ou em risco de inflamação das vias aéreas.
[0195] Em algumas modalidades, a divulgação compreende um método de reduzir a inflamação das vias aéreas em um indivíduo que sofre ou em risco de inflamação das vias aéreas compreendendo administrar ao indivíduo uma composição compreendendo: (a) glutationa, um derivado de glutationa, um conjugado de glutationa, um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos e (b) um ácido orgânico.
[0196] Em outra modalidade, o ácido orgânico é ácido ascórbico. Em outra modalidade, a composição ainda compreende: (c) um sal de bicarbonato. Em outra modalidade, o sal de bicarbonato é bicarbonato de sódio ou bicarbonato de potássio.
Em algumas modalidades, o ácido orgânico em a é ácido ascórbico. Em algumas modalidades, a composição compreende: (a) glutationa; (b) ácido ascórbico; e (c) bicarbonato de sódio. Em determinadas modalidades, a razão molar de (a):(b):(c) é cerca de 0,1-0,5: 0,5-1: 1 (por exemplo, cerca de 0,49 : cerca de 0,50 : cerca de 1).
Em outras modalidades, a razão molar de (a):(b):(c) é cerca de 0,1-0,5: 1: 1 (por exemplo, cerca de 0,49 : cerca de 1 : cerca de 1).
[0197] Em outra modalidade, a quantidade de cada componente, o conjugado de glutationa e/ou a glutationa, ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, o ácido orgânico, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e o sal de bicarbonato da composição está presente, tal que a quantidade de sal de bicarbonato resulta em um pH em um intervalo de cerca de 5,5 a cerca de 14. Em algumas modalidades, o pH de uma Composição da Divulgação é de cerca de 5,5 a cerca de 14 (por exemplo 5,5 a 7,5). Em algumas modalidades, o pH de uma Composição da Divulgação é de cerca de 6 a cerca de 14 (por exemplo, 6 a 7,5). Em algumas modalidades, o pH da composição é 7 ± 1,5, 7 ± 1,4, 7 ± 1,3, 7 ± 1,2, 7 ± 1,1, 6 ± 0,5, 6 ± 0,4, 6 ± 0,3, 6 ± 0,2, 6 ± 0,5, 6 ± 0,1, ou cerca de 6.
[0198] Em outra modalidade, a composição ainda compreende de cerca de 0,01% a cerca de 5% em peso de um sal de tiocianato farmaceuticamente aceitável.
[0199] Em outra modalidade, a composição é na forma de uma partícula. Em outra modalidade, a partícula é misturada com um propulsor a gás ou líquido para uso em terapia de inalação.
[0200] Em outra modalidade, a glutationa é glutationa reduzida.
[0201] Em outra modalidade, a administração da composição ao indivíduo dá a concentração de cerca de 0,1 mM a cerca de 1,0 mM de glutationa no líquido de superfície das vias aéreas do indivíduo. Em outra modalidade, administração da composição ao indivíduo dá a concentração de cerca de 0,5 mM a cerca de 3,0 mM de tiocianato no líquido de superfície das vias aéreas do indivíduo.
[0202] Em algumas modalidades, a glutationa oxidada (por exemplo, % de GSSG) na Composição da Divulgação é menos do que cerca de 20%, menos do que cerca de 18%, menos do que cerca de 16%, menos do que cerca de 15%, menos do que cerca de 12%, menos do que cerca de 10%, menos do que cerca de 9%, menos do que cerca de 8%, menos do que cerca de 7%, menos do que cerca de 6%, menos do que cerca de 5%, menos do que cerca de 4%, ou menos do que cerca de 3% em peso da glutationa total na Composição da Divulgação após armazenamento da Composição da Divulgação por 4 semanas (por exemplo, a 5ºC em uma atmosfera de N2 e/ou atmosfera ambiente).
[0203] Em algumas modalidades, a glutationa reduzida na Composição da Divulgação é mais do que cerca de 80%, mais do que cerca de 82%, mais do que cerca de 84%, mais do que cerca de 85%, mais do que cerca de 88%, mais do que cerca de 90%, mais do que cerca de 91%, mais do que cerca de 92%, mais do que cerca de 93%, mais do que cerca de 94%, mais do que cerca de 95%, mais do que cerca de 96%, ou mais do que cerca de 97% em peso da glutationa total na Composição da Divulgação após armazenamento da Composição da Divulgação por 4 semanas a cerca de 5ºC (por exemplo, em uma atmosfera de N2 ou ambiente).
[0204] Em algumas modalidades, o ácido ascórbico reduzido (por exemplo, % de ASC) é mais do que cerca de 80%, mais do que cerca de 85%, mais do que cerca de 86%, mais do que cerca de 87%, mais do que cerca de 88%, mais do que cerca de 89%, ou mais do que cerca de 90% em peso do ácido ascórbico na Composição da Divulgação após armazenamento da Composição da Divulgação por 4 semanas (por exemplo, a 5ºC em uma atmosfera de N2 e/ou atmosfera ambiente).
[0205] Em algumas modalidades, o ácido ascórbico oxidado na Composição da Divulgação é menos do que cerca de 20%, menos do que cerca de 18%, menos do que cerca de 16%, menos do que cerca de 15%, menos do que cerca de 12%, menos do que cerca de 10%, ou menos do que cerca de 9% em peso do ácido ascórbico total na Composição da Divulgação após armazenamento da Composição da Divulgação por 4 semanas (por exemplo, a 5ºC em uma atmosfera de N2 e/ou atmosfera ambiente).
[0206] Em algumas modalidades, a composição é uma solução aquosa ou um pó seco. Em outra modalidade, a composição é administrada por inalação ao indivíduo.
[0207] Em algumas modalidades, administrar a composição inibe a atividade de mieloperoxidase dos neutrófilos do paciente. Em algumas modalidades, administrar a composição reduz a formação de armadilhas extracelulares de neutrófilos. Em algumas modalidades, administrar a composição sub-regula a produção de óxido nítrico dos neutrófilos do paciente. Em algumas modalidades, administrar a composição reduz o óxido nítrico exalado fracionado do paciente em pelo menos 20%, pelo menos 21%, pelo menos 22%, pelo menos 23%, pelo menos 24%, ou pelo menos 25%. Em algumas modalidades, administrar a composição reduz o óxido nítrico exalado fracionado de linha de base do paciente em pelo menos 20%.
[0208] Em algumas modalidades, administrar a composição sub-regula a produção de pelo menos uma citocina inflamatória. Em algumas modalidades, a pelo menos uma citocina inflamatória compreende uma citocina associada a ativação de macrófagos e/ou recrutamento de células T e neutrófilos. Em algumas modalidades, a pelo menos uma citocina inflamatória compreende TNF-α. Em algumas modalidades, a pelo menos uma citocina inflamatória compreende IL-6. Em algumas modalidades, a pelo menos uma citocina inflamatória compreende IL-8.
[0209] Em algumas modalidades, o paciente sofre ou está em risco de sofrer de uma doença inflamatória crônica das vias aéreas. Em algumas modalidades, a doença inflamatória das vias aéreas é fibrose cística, bronquiectasia (por exemplo, bronquiectasia de fibrose não cística ou bronquiectasia de fibrose cística), asma, doença pulmonar obstrutiva crônica ou fibrose pulmonar. Em algumas modalidades, a doença inflamatória das vias aéreas é fibrose cística.
[0210] Em algumas modalidades, o paciente recebeu um transplante de pulmão.
[0211] Em algumas modalidades, o epitélio das vias aéreas do paciente não é colonizado por bactérias. Em algumas modalidades, o epitélio das vias aéreas do paciente é colonizado por bactérias. Em determinadas modalidades, o paciente sofre de uma infecção bacteriana ativa. Em outras modalidades, o paciente não sofre de uma infecção bacteriana ativa.
[0212] Em algumas modalidades, o paciente é um paciente pediátrico. Em outras modalidades, o paciente é um paciente adulto.
[0213] Em algumas modalidades, administrar a composição não altera significativamente o pH do endotélio das vias aéreas do paciente.
Administração
[0214] Os métodos terapêuticos desta divulgação podem ser realizados administrando uma Composição da Divulgação a um indivíduo. A administração de uma Composição da Divulgação pode ser realizada antes, durante ou após o início da doença, condição ou distúrbio de interesse. Tipicamente, as composições farmacêuticas são estéreis, e não contêm composto tóxicos, carcinogênicos ou mutagênicos que causariam uma reação adversa quando administradas ao indivíduo.
[0215] Composições da Divulgação são administradas de maneira compatível com a formulação de dosagem em uma quantidade que seja eficaz para o resultado desejado. Em modalidades particulares, as Composições da Divulgação são administradas ao indivíduo em uma quantidade terapeuticamente eficaz. Uma quantidade terapeuticamente eficaz das Composições da Divulgação necessária para uso em terapia varia de acordo com a natureza da condição a ser tratada, o tempo em que a atividade é desejada e a idade e a condição do paciente e, em última análise, é determinada pelo médico. As quantidades e intervalos de dosagem podem ser ajustados individualmente para fornecer níveis plasmáticos de glutationa que sejam suficientes para manter os efeitos terapêuticos desejados. A dose desejada pode ser administrada em dose única, ou em doses múltiplas administradas em intervalos apropriados, por exemplo, como uma, duas, três, quatro ou mais subdoses por dia.
Doses múltiplas geralmente são desejadas ou necessárias. Por exemplo, glutationa, um derivado de glutationa, um conjugado de glutationa, um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, ou qualquer combinação dos mesmos pode ser administrado com uma frequência de: quatro doses entregues como uma dose por dia em intervalos de quatro dias (q4d x 4); quatro doses entregues como uma dose por dia em intervalos de três dias (q3d x 4); uma dose entregue por dia em intervalos de cinco dias (qd x 5); uma dose por semana por três semanas (qwk3); cinco doses por dia, com dois dias de descanso e outras cinco doses diárias (5/2/5); ou qualquer regime de dose determinado como apropriado para a circunstância.
[0216] As Composições da Divulgação podem ser administradas por um período prolongado, tal como por pelo menos cerca de um mês, pelo menos cerca de 2 meses, pelo menos cerca de 3 meses, pelo menos cerca de 6 meses, ou pelo menos cerca de 12 meses ou mais (por exemplo, como um tratamento crônico ao longo da vida).
[0217] Qualquer cronograma de dosagem adequado pode ser seguido. Por exemplo, a frequência de dosagem pode ser uma dose semanal. A frequência de dosagem pode ser uma dose uma vez ao dia ou várias vezes ao dia. A frequência de dosagem pode ser mais do que uma dose semanal. A frequência de dosagem pode ser mais do que uma dose diária, tal como qualquer uma de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou mais do que 10 doses diárias. A frequência de dosagem pode ser intermitente (por exemplo, dosagem diária múltipla por 7 dias, seguida por nenhuma dose por 7 dias, repetida por qualquer período de 14 dias, tal como 2 meses, 4 meses, 6 meses ou mais). A frequência de dosagem pode ser contínua (por exemplo, uma dosagem semanal por semanas contínuas).
[0218] Glutationa, um derivado de glutationa, um conjugado de glutationa, um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos ou qualquer combinação dos mesmos usada em um método terapêutico da presente divulgação pode ser administrado em uma quantidade de cerca de 0,005 a cerca de 1.000 miligramas por dose, cerca de 0,05 a cerca de 250 miligramas por dose ou cerca de 0,5 a cerca de 100 miligramas por dose. Por exemplo, glutationa, um derivado de glutationa, um conjugado de glutationa, um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos ou qualquer combinação dos mesmos pode ser administrado, por dose, em uma quantidade de cerca de 0,005, 0,05, 0,5, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450 ou 500 miligramas, incluindo todas as doses entre 0,005 e 1.000 miligramas.
[0219] A dosagem de glutationa, um derivado de glutationa, um conjugado de glutationa, um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, ou qualquer combinação dos mesmos , ou uma composição contendo os mesmos, podem ser de cerca de 1 ng/kg a cerca de 200 mg/kg, cerca de 1 μg/kg a cerca de 100 mg/kg, ou cerca de 1 mg/kg a cerca de 50 mg/kg. A dosagem de uma composição pode ser em qualquer dosagem incluindo, mas sem limitação, cerca de 1 μg/kg. A dosagem de uma composição pode ser em qualquer dosagem incluindo, mas sem limitação, cerca de 1 μg/kg, cerca de 10 μg/kg, cerca de 25 μg/kg, cerca de 50 μg/kg, cerca de 75 μg/kg, cerca de 100 μg/kg, cerca de 125 μg/kg, cerca de 150 μg/kg, cerca de 175 μg/kg, cerca de 200 μg/kg, cerca de 225 μg/kg, cerca de 250 μg/kg, cerca de 275 μg/kg, cerca de 300 μg/kg, cerca de 325 μg/kg, cerca de 350 μg/kg, cerca de 375 μg/kg, cerca de 400 μg/kg, cerca de 425 μg/kg, cerca de 450 μg/kg, cerca de 475 μg/kg, cerca de 500 μg/kg, cerca de 525 μg/kg, cerca de 550 μg/kg, cerca de 575 μg/kg, cerca de 600 μg/kg, cerca de 625 μg/kg, cerca de 650 μg/kg, cerca de 675 μg/kg, cerca de 700 μg/kg, cerca de 725 μg/kg, cerca de 750 μg/kg, cerca de 775 μg/kg, cerca de 800 μg/kg, cerca de 825 μg/kg, cerca de 850 μg/kg, cerca de 875 μg/kg, cerca de 900 μg/kg, cerca de 925 μg/kg, cerca de 950 μg/kg, cerca de 975 μg/kg, cerca de 1 mg/kg, cerca de 5 mg/kg, cerca de 10 mg/kg, cerca de 15 mg/kg, cerca de 20 mg/kg, cerca de 25 mg/kg, cerca de 30 mg/kg, cerca de 35 mg/kg, cerca de 40 mg/kg, cerca de 45 mg/kg, cerca de 50 mg/kg, cerca de 60 mg/kg, cerca de 70 mg/kg, cerca de 80 mg/kg, cerca de 90 mg/kg, cerca de 100 mg/kg, cerca de 125 mg/kg, cerca de 150 mg/kg, cerca de 175 mg/kg, cerca de 200 mg/kg, ou mais. As dosagens acima são exemplificativas do caso médio, mas pode haver instâncias individuais em que dosagens mais altas ou mais baixas são merecidas, e essas estão dentro do escopo desta divulgação. Na prática, o médico determina o regime de dosagem real que é mais adequado para um paciente individual, que pode variar com a idade, peso e resposta do paciente em particular.
[0220] Em uma modalidade, glutationa, um derivado de glutationa, um conjugado de glutationa, um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, ou qualquer combinação dos mesmos é entregue no terço superior da cavidade nasal, no meato superior, na região olfativa e/ou na região sinusal do nariz. A região olfativa é uma pequena área que tem tipicamente cerca de 2-10 cm2 no homem localizada no terço superior da cavidade nasal para deposição e absorção pelo epitélio olfativo e subsequente transporte pelos neurônios do receptor olfativo. Localizada no teto da cavidade nasal, no meato superior, a região olfativa é útil para a entrega em algumas modalidades, porque é a parte conhecida do corpo em que uma extensão do CNS entra em contato com o ambiente (Bois et al. Fundamentals of Otolaryngology, p. 184, W. B. Saunders Co., Philadelphia, 1989).
[0221] Em algumas modalidades, uma Composição da Divulgação pode ser administrada em uma única dose de “choque”, por exemplo, durante uma broncoscopia. Em outras modalidades, os métodos da divulgação podem ser realizados conforme necessário por automedicação.
[0222] Qualquer uma das frequências de dosagem pode ser usada com quantidade de dosagem. Além disso, qualquer uma das frequências de dosagem e/ou quantidades de dosagem pode ser usada com qualquer uma das composições da divulgação.
[0223] Uma Composição da Divulgação pode ser entregue em qualquer volume de administração adequado. Em modalidades representativas da divulgação, um volume de administração para entrega intranasal varia entre 25 microlitros a 200 microlitros ou de cerca de 50 a 150 microlitros ou de cerca de 50, 100, 250 ou 500 microlitros a cerca de 1, 2, 3, 3,5 ou 4 mililitros em um ser humano. Normalmente, o volume de administração é selecionado para ser grande o suficiente para permitir a entrega de quantidades terapêuticas, enquanto contabiliza a diluição em ASL em condições de manutenção em vias aéreas relativamente “normais” (10-30 ml de ASL) e em vias aéreas de fibrose cística (CF) (40-50 ml de ASL ou mais com secreções de muco espessas, tenazes e fortemente infectadas).
[0224] As Composições da Divulgação podem ser utilizadas em aplicações médicas e/ou veterinárias. Objetos adequados da presente divulgação incluem, mas sem limitação, mamíferos. O termo “mamífero”, conforme usado neste documento,
inclui, mas sem limitação, primatas (por exemplo, símios e seres humanos), primatas não humanos (por exemplo, macacos, babuínos, chimpanzés, gorilas), bovinos, ovinos, caprinos, ungulados, suínos, equinos, felinos, caninos, lagomorfos, pinípedes, roedores (por exemplo, ratos, hamsters e camundongos) etc. Em algumas modalidades da presente divulgação, o indivíduo é um ser humano. Indivíduos humanos incluem indivíduos do sexo masculino e feminino, e indivíduos de todas as idades, incluindo indivíduos neonatais, infantis, juvenis, adolescentes, adultos e geriátricos.
[0225] Em algumas modalidades, uma Composição da Divulgação é administrada uma ou mais vezes ao dia (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou mais vezes ao dia). Em modalidades particulares, o indivíduo é um ser humano.
[0226] Em algumas modalidades dos métodos desta divulgação, uma Composição da Divulgação pode ser administrada através de inalação, intranasalmente, através do olho, através do ouvido, através de irrigação sinusal, ou através de broncoscópio, ou qualquer combinação dos mesmos.
[0227] A administração intranasal de uma Composição da Divulgação pode ser alcançada por qualquer método conhecido. Em modalidades particulares, a administração intranasal é por inalação (por exemplo, usando um inalador, atomizador ou dispositivo nebulizador), alternativamente, por pulverizador, tubo, cateter, seringa, conta-gotas, packtail, pipeta, compressa etc.
[0228] Como ilustração adicional, uma Composição da Divulgação pode ser administrada por via intranasal como (1) gotas nasais, (2) aerossóis ou pulverizadores em pó ou líquidos, (3) líquidos ou semissólidos por seringa, (4) líquidos ou semissólidos por zaragatoa, compressa ou outros meios de aplicação semelhantes, (5) um gel, creme ou unguento, (6) uma infusão, ou (7) por injeção, ou por qualquer meio agora conhecido ou desenvolvido posteriormente na técnica. Em modalidades particulares, o método de entrega é por gotas nasais, pulverizador ou aerossol.
Conforme usado aqui, os aerossóis podem ser usados para entregar pós, líquidos ou dispersões (sólidos em líquido).
[0229] Em algumas modalidades, a formulação farmacêutica é direcionada para cima durante a administração, de modo a melhorar a entrega ao terço superior (por exemplo, o epitélio olfativo na região olfativa) e as paredes laterais (por exemplo, epitélio nasal) da cavidade nasal . Além disso, orientar a cabeça do indivíduo em uma posição inclinada para trás ou orientar o corpo do indivíduo na posição de Mygind ou na posição de rezar em direção à Meca podem ser usados para facilitar a entrega à região olfativa.
[0230] As formulações podem ser fornecidas em forma única ou multidose.
Nesse último caso, pode ser fornecido um meio de medição da dose. No caso de conta-gotas ou pipeta, isso pode ser alcançado pelo paciente ou profissional de saúde que administra um volume apropriado e predeterminado da composição. No caso de um pulverizador, isso pode ser alcançado, por exemplo, por meio de uma bomba de pulverização atomizada dosadora.
[0231] Em um aspecto adicional, a presente divulgação fornece um dispositivo de pulverização intranasal compreendendo uma Composição da Divulgação.
[0232] Muitos dispositivos são conhecidos na técnica para entrega nasal.
Dispositivos exemplificativos incluem dispositivos de dispersão de partículas, dispositivos bidirecionais e dispositivos que usam tecnologias de jato de tinta com base em chip.
[0233] Quando uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma Composição da Divulgação é administrada por injeção intravenosa, cutânea ou subcutânea, uma composição é forma de uma solução aquosa livre de pirogênio e parentericamente aceitável. A preparação de tais soluções parentericamente aceitáveis, tendo em conta o pH, isotonicidade, estabilidade e semelhantes, está dentro dos conhecimentos da técnica. Uma composição para injeção intravenosa, cutânea ou subcutânea normalmente contém um veículo isotônico.
[0234] As Composições da Divulgação podem ser formuladas para administração parenteral por injeção, por exemplo, por injeção em bolus ou infusão contínua. As formulações para injeção podem ser apresentadas em forma de dosagem unitária, por exemplo, em ampolas ou em recipientes multidose, com um conservante adicionado. As composições podem assumir formas como suspensões, soluções ou emulsões em veículos oleosos ou aquosos, podem conter agentes formuladores, tais como agentes de suspensão, estabilização e/ou dispersão.
[0235] Composições farmacêuticas para administração parenteral incluem soluções aquosas do agente ativo na forma solúvel em água. Adicionalmente, suspensões de glutationa, um derivado de glutationa, um conjugado de glutationa, um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, ou qualquer combinação dos mesmos podem ser preparados como suspensões oleosas apropriadas para injeção. Solventes ou veículos lipofílicos adequados podem usar óleos graxos ou ésteres de ácidos graxos sintéticos. As suspensões aquosas de injeção podem conter substâncias que aumentam a viscosidade da suspensão. Opcionalmente, a suspensão também pode conter estabilizadores ou agentes adequados que aumentam a solubilidade dos compostos e permitem a preparação de soluções altamente concentradas.
Alternativamente, uma composição presente pode ser em forma de pó para constituição com um veículo adequado, por exemplo, água estéril livre de pirogênio, antes do uso.
[0236] Glutationa, um derivado de glutationa, um conjugado de glutationa, um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos ou qualquer combinação dos mesmos também pode ser formulado em composições retais, tais como supositórios ou enemas de retenção, por exemplo, contendo bases convencionais de supositório.
Além das formulações descritas anteriormente, glutationa, um derivado de glutationa,
um conjugado de glutationa, um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos ou qualquer combinação dos mesmos também pode ser formulado como uma preparação de depósito. Essas formulações de ação prolongada podem ser administradas por implante (por exemplo, por via subcutânea ou intramuscular) ou por injeção intramuscular. Assim, por exemplo, glutationa, um derivado de glutationa, um conjugado de glutationa, um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos ou qualquer combinação dos mesmos pode ser formulado com materiais poliméricos ou hidrofóbicos adequados (por exemplo, como uma emulsão em um óleo aceitável) resinas de troca iônica.
[0237] As Composições da Divulgação podem ser administradas por via oral, bucal ou sublingual na forma de comprimidos contendo excipientes, tais como amido ou lactose, ou em cápsulas ou óvulos, isoladamente ou em mistura com excipientes, ou na forma de elixires ou suspensões contendo aromatizantes ou agentes corantes.
Tais preparações líquidas podem ser preparadas com aditivos farmaceuticamente aceitáveis, tais como agentes de suspensão. As Composições da Divulgação também podem ser injetadas parentericamente, por exemplo, por via intravenosa, intramuscular, subcutânea ou intracoronária. Para administração parenteral, as Composições da Divulgação são normalmente usadas na forma de uma solução aquosa estéril que pode conter outras substâncias, por exemplo, sais ou monossacarídeos, tais como manitol ou glicose, para tornar a solução isotônica com sangue.
[0238] As Composições da divulgação podem estar presentes, por exemplo, como uma formulação sólida, tal como uma formulação de partícula, ou como uma solução. Quando em uma formulação de partícula, as partículas podem ser misturadas com gases ou propulsores líquidos para uso em terapia de inalação.
Outras formulações sólidas incluem formulações para administração oral, administração bucal ou administração colônica e supositórios para administração retal ou vaginal. Fórmulas exemplificativas incluem, mas sem limitação: colírios, nebulizadores, géis e unguentos tópicos, pós secos, partículas, pulverizadores, líquidos, máquinas ou vaporizadores anestésicos, autoinjetores, dispositivos intrauterinos, respimats, linimentos, lipossomas, loções, formulações para injeção intramuscular, intratecal ou subcutânea, duchas, infusões e máscaras faciais.
[0239] Na forma de solução, as formulações podem ser na forma de pulverizadores para administração intranasal, formulações para uso em nebulizadores e formulações para administração retal, tais como enemas e colônias. Soluções que incluem solventes orgânicos miscíveis com água, tais como propilenoglicol e/ou glicerol, e outros componentes normalmente encontrados em lubrificantes vaginais e retais, também podem ser usadas. Independentemente dos solventes utilizados, o solvente normalmente está presente em uma proporção em peso de cerca de 15 a cerca de 85% em peso, em relação ao peso dos sólidos e, mais tipicamente, em cerca de 50 a cerca de 85% em peso.
[0240] As composições e/ou formulações desta invenção podem ser usadas para tratar distúrbios associados a uma membrana de mucosa, entregando as composições e/ou formulações às membranas de mucosa a serem tratadas. Em algumas modalidades, a membrana de mucosa pode estar dentro ou perto dos pulmões, tais como o pulmão profundo (região alveolar), e em outras modalidades, as membranas de mucosa podem estar dentro ou perto de um ou mais dos olhos, boca, nariz, reto e/ou vagina.
Agentes Terapêuticos Adicionais
[0241] Em outra modalidade, a presente divulgação provê um método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um agente terapêutico adicional.
[0242] Composições compreendendo glutationa, um derivado de glutationa, um conjugado de glutationa, um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, ácido orgânico ou qualquer combinação dos mesmos podem também ser combinadas com antibióticos para aumentar a eficácia do tratamento.
[0243] Em outra modalidade, um objeto da invenção é identificar isolados clínicos em uma amostra de paciente e testar a eficácia de tratamento in vitro por tratamento com uma composição compreendendo glutationa, um derivado de glutationa, um conjugado de glutationa, um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, ácido orgânico ou qualquer combinação dos mesmos.
[0244] As drogas administradas aos pulmões são geralmente associadas a certos efeitos colaterais, em alguns casos, por causa da dosagem e, em outros casos, porque danificam o tecido pulmonar. Em algumas modalidades, os agentes terapêuticos combinados com as composições aqui divulgadas são eficazes em doses mais baixas e, nessas doses mais baixas, a incidência de efeitos colaterais pode ser reduzida. Em outras modalidades, em que o agente terapêutico interage desfavoravelmente com o tecido pulmonar, as composições descritas neste documento podem ajudar a restaurar a homeostase do tecido pulmonar e, assim, ajudar a reduzir ou eliminar os danos causados pelos agentes terapêuticos.
[0245] Em outra modalidade, a presente divulgação provê um agente terapêutico selecionado do grupo que consiste em Fluticasona, Budesonida, Mometasona, Ciclesonida, Flunisolida, Beclometasona, Albuterol, Levalbuterol, Ipratrópio, Tiotrópio, Formoterol, Arformoterol, Indacaterol, Aclidínio e Pirbuterol, penicilinas, tais como Amoxicilina, Ampicilina, Azlocilina, Carbenicilina, Cloxacilina, Cayston, Dicloxacilina, Flucloxacilina, Mezlocilina, Meticilina, Nafcilina, Oxacilina, Penicilina G, Penicilina V, Piperacilina, Penicilina G, Temocilina, e Ticarcilina, e combinações de penicilinas com outros agentes terapêuticos, tais como Amoxicilina/clavulanato, Ampicilina/sulbactam, Piperacilina/tazobactam, Ticarcilina/clavulanato, e qualquer combinação dos mesmos.
[0246] Em uma modalidade, o agente terapêutico é selecionado do grupo que consiste em Fluticasona, Budesonida, Mometasona, Ciclesonida, Flunisolida, Beclometasona, Albuterol, Levalbuterol, Ipratrópio, Tiotrópio, Formoterol, Arformoterol, Indacaterol, Aclidínio, Cayston, Pirbuterol, e qualquer combinação dos mesmos.
[0247] Agentes terapêuticos adicionais que podem ser combinados com as composições e formulações desta invenção incluem, mas sem limitação, Fluticasona (por exemplo, comercializada como Flovent Diskus 50 ou como Flonase, GlaxoSmithKline), Budesonida (por exemplo, comercializada como Pulmicort Respules ou Rhinocort por Astra Zeneca (“AZ”), Mometasona (comercializada como Nasonex como um pulverizador ou como Asmanex Twisthaler por Merck/S-P), Ciclesonida (comercializada como Alvesco ou Onmaris por Takeda Pharmaceuticals), Flunisolida (comercializada como Aerobid por Roche Palo ou Aerospan HFA por GSK), Beclometasona (comercializada como Qvar ou Onasl por Teva Pharmaceuticals), Albuterol (comercializado como ProAir HFA por Teva e como Ventolin HFA por GSK), Levalbuterol (comercializado como Xopenex por Sunovion), Ipratrópio (comercializado como Atrovent por BI), Tiotrópio (comercializado como Spiriva por BI), Salmeterol (comercializado como Serevent por GSK), Formoterol (comercializado como Foradil por Novartis e como Perforomist por Dey Pharma), Arformoterol (comercializado como Brovana por Sunovion), Indacaterol (comercializado como Arcapta por Novartis), Aclidínio (comercializado como Tudorza por Forest Labs), Pirbuterol (comercializado como Maxair por Medicis), e qualquer combinação dos mesmos.
[0248] Os presentes métodos englobam administrar um ou mais agentes terapêuticos adicionais ao indivíduo em combinação com uma Composição da Divulgação. Em uma modalidade, uma Composição da Divulgação ainda compreende, ou a composição é administrada em combinação ou em alternância com,
um agente terapêutico adicional. Ou seja, em algumas modalidades, a composição e outros agentes terapêuticos referem-se ao mesmo locus na mesma formulação, e em outras modalidades, a composição pode ser administrada através de uma via, e os outros agentes terapêuticos podem ser administrados através de uma via diferente.
[0249] Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional compreende uma terapia com receptor transmembranar de fibrose cística (CFTR). Em algumas modalidades, a terapia de CFTR compreende um amplificador de CFTR (por exemplo, PTI-428), um corretor de CFTR (por exemplo, VX-809 (lumacaftor), VX-661 (tezacaftor), VX-445, VX-659, VX-152, FDL169, GLPG2222, PT-801, ou combinações dos mesmos), um modulador/potenciador de CFTR (por exemplo, VX-770 (ivacaftor, que é aprovado como Kalydeco), QBW 251, VX-561, PT1-808, ou combinações dos mesmos), um modificador de RNA de CFTR (por exemplo, QR-100, MRT5005, ou a combinação dos mesmos), ou qualquer combinação dos mesmos.
[0250] Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional compreende um amplificador de CFTR. Os amplificadores de CFTR aumentam a quantidade de proteína de CFTR em uma célula. Na fibrose cística, existem seis classes de mutação que conferem diferentes graus de disfunção de CFTR. As mutações de fibrose cística mais graves têm um defeito genético, tal como um códon de parada prematuro, que impede que o CFTR seja transformado em uma proteína. As terapias propostas para tratar essa mutação incluem amplificadores que aumentam a quantidade de RNA de CFTR em uma célula. São também conhecidas como “terapias de leitura”. Em algumas modalidades, o amplificador de CFTR é PTI-428.
[0251] Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional compreende um corretor de CFTR. Os corretores de CFTR transportam a proteína de CFTR para uma superfície celular. A classe de mutação de fibrose cística mais comum é a Classe II, em que CFTR é dobrado incorretamente e não é transportado adequadamente para a superfície celular. As terapias usadas para tratar mutações de Classe II, tais como dF508, incluem uma combinação de corretores que ajudam a dobrar a proteína e/ou transportar a proteína para a superfície celular e potenciadores que aumentam o bloqueio de CFTR ou transporte de íons através da proteína. Em algumas modalidades, o corretor de CFTR é selecionado do grupo que consiste em VX-809 (lumacaftor), VX-661 (tezacaftor), VX-445, VX-659, VX-152, FDL169, GLPG2222, PT- 801 e uma combinação dos mesmos.
[0252] Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional compreende um Potenciador/Modulador de CFTR. Potenciadores/Moduladores de CFTRs aumentam o transporte de íons através de CFTR na superfície celular. As mutações nas classes III e IV incluem G551D e são mutações em que CFTR tem o bloqueio prejudicado ou o transporte de íons. Potenciadores/moduladores podem ser usados para pacientes com essas mutações para aumentar a abertura do canal e permitir transporte iônico adequado. Em algumas modalidades, o potenciador/modulador de CFTR é selecionado do grupo que consiste em VX-770 (ivacaftor), QBW 251, VX-561, PT1-808 e uma combinação dos mesmos.
[0253] Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional compreende um modificador de RNA. Os modificadores de RNA podem ser usados para permitir a entrega de CFTR geneticamente corrigido à superfície celular. As mutações das classes V-VI resultam em diminuição da proteína de CFTR na superfície celular seja através do número reduzido de transcritos de CFTR ou das taxas de rotação aceleradas. Amplificadores e modificadores de RNA podem ser usados para tratar essas mutações. Em algumas modalidades, o modificador de RNA é selecionado do grupo que consiste em QR-100, MRT5005, ou a combinação dos mesmos.
[0254] Em algumas modalidades, a terapia de CFTR compreende um corretor de CFTR (por exemplo, VX-809 (lumacaftor), VX-661 (tezacaftor), VX-445, VX-659, VX-152, FDL169, GLPG2222, PT-801, ou combinações dos mesmos) e um modulador/potenciador de CFTR (por exemplo, VX-770 (ivacaftor), QBW 251, VX-561,
PT1-808, ou combinações dos mesmos). Em algumas modalidades, a terapia de CFTR compreende: uma combinação de VX-770 (ivacaftor) e VX-809 (lumacaftor), que é aprovada como Orkambi; uma combinação de VX-770 (ivacaftor) e VX-661 (tezacaftor), que é aprovada como Symdeko; uma combinação de VX-770 (ivacaftor), VX-661 (tezacaftor), e VX-445; uma combinação de VX-770 (ivacaftor), VX-661 (tezacaftor), e VX-659; uma combinação de VX-770 (ivacaftor), VX-661 (tezacaftor), e VX-152; ou uma combinação de VX-770 (ivacaftor) e GLPG2222.
[0255] Em algumas modalidades, a terapia de CFTR compreende um corretor de CFTR (por exemplo, VX-809 (lumacaftor), VX-661 (tezacaftor), VX-445, VX-659, VX-152, FDL169, GLPG2222, PT-801, ou combinações dos mesmos) e um amplificador de CFTR (por exemplo, PTI-428). Em algumas modalidades, a terapia de CFTR compreende: uma combinação de VX-770 (ivacaftor) e VX-809 (lumacaftor), que é aprovada como Orkambi, e PTI-428.
[0256] Em algumas modalidades, a terapia de CFTR compreende um corretor de CFTR (por exemplo, VX-809 (lumacaftor), VX-661 (tezacaftor), VX-445, VX-659, VX-152, FDL169, GLPG2222, PT-801, ou combinações dos mesmos). Um modulador/potenciador de CFTR (por exemplo, VX-770 (ivacaftor), QBW 251, VX-561, PT1-808, ou combinações dos mesmos), e um amplificador de CFTR (por exemplo, PTI-428).
[0257] Em algumas modalidades, a terapia de CFTR compreende um modulador/potenciador de CFTR e um corretor de CFTR para melhorar o bloqueio de CFTR/transporte de íons.
[0258] Em algumas modalidades, a administração da terapia de CFTR é simultânea ou consecutiva à administração da composição da divulgação ao indivíduo e em qualquer ordem (por exemplo, a composição pode ser administrada antes ou após a terapia de CFTR). Em algumas modalidades, a terapia de CFTR é administrada oralmente e a composição da divulgação é administrada por inalação. Em algumas modalidades, ambas a terapia de fibrose cística e a composição da divulgação são administradas por inalação.
[0259] Em algumas modalidades, a composição da divulgação é administrada em combinação com VX-770, VX-809, ou a combinação de VX-770/VX-809, em que a administração é simultânea ou consecutiva ao indivíduo e em qualquer ordem (por exemplo, a composição pode ser administrada antes ou após a combinação de VX- 770/VX-809).
[0260] O agente terapêutico adicional é normalmente selecionado de drogas conhecidas como úteis no tratamento da doença, condição ou distúrbio que afeta o indivíduo em necessidade do mesmo. A escolha de agentes terapêuticos adicionais dependerá da doença, condição ou distúrbio a ser tratado ou prevenido em um indivíduo. Essa determinação está dentro da capacidade daqueles versados na técnica, especialmente à luz da presente divulgação.
[0261] Em uma modalidade, um agente terapêutico adicional é administrado ao indivíduo. Em outra modalidade, dois agentes terapêuticos adicionais são administrados ao indivíduo. Em outra modalidade, três agentes terapêuticos adicionais são administrados ao indivíduo. Em outra modalidade, quatro agentes terapêuticos adicionais são administrados ao indivíduo. Em outra modalidade, cinco agentes terapêuticos adicionais são administrados ao indivíduo. Em outra modalidade, cinco ou mais agentes terapêuticos adicionais são administrados ao indivíduo.
Agentes terapêuticos exemplificativos não limitantes são agentes antifúngicos, agentes antivirais, agentes antibacterianos, anti-inflamatórios, agentes imunossupressores, broncodilatadores, moduladores das vias aéreas, ácido alfa lipoico, alfa tocoferol, ácido docosahexânico, prolina, glicina, curcumina, arginina, tiocianato, glutationa, glutationa oxidada, glutationa reduzida, cisteína, hipotiocianato, lactoferrina, lactoperoxidase e qualquer combinação dos mesmos. Em outra modalidade, os um ou mais agentes terapêuticos são glutationa, glutationa oxidada ou glutationa reduzida.
[0262] Uma Composição da Divulgação e um agente terapêutico adicional podem ser administrados em conjunto como uma dose unitária única ou separadamente como doses unitárias múltiplas, em que a Composição da Divulgação é administrada antes do agente terapêutico adicional, após o agente terapêutico adicional, ou simultaneamente ao agente terapêutico adicional. Uma ou mais doses da Composição da Divulgação e/ou uma ou mais doses do agente terapêutico adicional podem ser administradas ao indivíduo.
[0263] Em outra modalidade, o agente terapêutico adicional trata o distúrbio desejado para o qual é administrado, mas pode causar certos efeitos colaterais, por exemplo, secagem das membranas de mucosa que resulta em desconforto e/ou lesão que podem ser tratados administrando uma Composição da Divulgação.
[0264] Em outra modalidade, uma Composição da Divulgação trata o distúrbio desejado para o qual é administrado, mas pode causar certos efeitos colaterais, por exemplo, secagem das membranas de mucosa que resulta em desconforto e/ou lesão que podem ser tratados administrando um agente terapêutico adicional.
[0265] Em algumas modalidades, os um ou mais agentes terapêuticos adicionais e a Composição da Divulgação tratam o distúrbio subjacente, através de diferentes meios, tal que um efeito aditivo ou sinérgico possa ser obtido. Como resultado, em alguns aspectos dessa modalidade, doses mais baixas do agente terapêutico adicional podem ser eficazes, cujas doses mais baixas podem resultar em menos efeitos colaterais, ou prover outros benefícios ao indivíduo.
[0266] Quando uma Composição da Divulgação e um ou mais agentes terapêuticos adicionais não são administrados simultaneamente, entende-se que eles podem ser administrados em qualquer ordem a um indivíduo em necessidade dos mesmos. Por exemplo, uma Composição da Divulgação pode ser administrada antes de, por exemplo, 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 8 semanas ou 12 semanas antes, simultaneamente ou subsequentemente a, por exemplo, 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 8 semanas, ou 12 semanas após a administração de um ou mais agentes terapêuticos adicionais a um indivíduo em necessidade dos mesmos.
Em algumas modalidades, uma Composição da Divulgação e os um ou mais agentes terapêuticos adicionais são administrados com 1 minuto de intervalo, 10 minutos apart, 30 minutos de intervalo, menos do que 1 hora de intervalo, 1 hora de intervalo, 1 hora a 2 horas de intervalo, 2 horas a 3 horas de intervalo, 3 horas a 4 horas de intervalo, 4 horas a 5 horas de intervalo, 5 horas a 6 horas de intervalo, 6 horas a 7 horas de intervalo, 7 horas a 8 horas de intervalo, 8 horas a 9 horas de intervalo, 9 horas a 10 horas de intervalo, 10 horas a 11 horas de intervalo, 11 horas a 12 horas de intervalo, no mais do que 24 horas de intervalo, ou no mais do que 48 horas de intervalo. Em uma modalidade, os componentes das terapias de combinação são administrados em cerca de 1 minuto a cerca de 24 horas de intervalo.
[0267] Em outra modalidade, o agente terapêutico adicional é um corticosteroide (ICS) ou broncodilatador inalado.
Profilaxia
[0268] Além de prover métodos de tratamento, as composições da divulgação podem também ser usadas para reduzir os sintomas de ou prover a prevenção de várias doenças e distúrbios associados a uma infeção por isolado clínico de bactéria, depuração mucociliar prejudicada, e/ou inflamação das vias aéreas.
[0269] Modalidades da presente divulgação podem ser ainda definidas por referência aos seguintes exemplos não limitantes, que descrevem em detalhes a preparação de determinadas composições da presente divulgação e métodos para usar as composições da presente divulgação. Será evidente para os versados na técnica que muitas modificações, tanto a materiais e métodos, podem ser praticadas sem se afastar do escopo da presente divulgação.
Análise in vitro de bactéria isolada clínica
[0270] Amostras de isolado clínico de um indivíduo podem incluir, mas sem limitação, escarro, amostras das vias aéreas, amostras de tecido cirúrgico, amostras de autópsia e sangue. As amostras podem ser fixadas e/ou armazenadas a -20ºC ou -80ºC.
[0271] O isolamento de espécies CI de bactérias isoladas clínicas pode ser realizado por qualquer técnica conhecida na técnica. As espécies de CIs podem ser isoladas de culturas puras (isto é, tendo apenas uma espécie de CI) ou de uma amostra com várias bactérias. Métodos comuns para isolar espécies de CIs incluem, mas sem limitação, diluição em série de amostra clínica inicial, centrifugação, distribuição de placas com ou sem uma etapa inicial de cultura em meio líquido, e a cultura de colônias individuais de bactérias em meio sólido ou líquido . Os CIs são cultivados usando qualquer meio conhecido na técnica, incluindo, mas sem limitação, meio planctônico e sólido.
[0272] A bactéria isolada clínica pode ser identificada usando qualquer técnica conhecida na técnica, incluindo, mas sem limitação, técnicas morfológicas (por exemplo, coloração de Gram, manchas rápidas de ácido); testes bioquímicos, sorológicos ou de expressão de proteínas (por exemplo, interação com anticorpos, aglutinação de lâminas, ELISA, Western blotting, imuno-histoquímica, imunofluorescência, citometria de fluxo); tipagem de fagos; e métodos baseados em DNA e/ou RNA (por exemplo, sequenciamento de DNA, comparações G+C, gPCR, RT-PCR, qPCR, sequenciamento de rRNA, impressão digital de DNA por polimorfismos de comprimento de fragmento de restrição (RFLPs), hibridização de ácido nucleico (por exemplo, Northern blotting, Southern blotting), microarranjos, hibridização in situ, incluindo FISH).
[0273] A cultura de isolados clínicos na presença de uma droga (por exemplo, um antibiótico) com ou sem a composição da divulgação, na ausência de uma droga com ou sem a composição da divulgação, ou um placebo com ou sem a composição da divulgação pode ser testada usando qualquer técnica conhecida na técnica incluindo, mas sem limitação, diluição e cultura de CIs de tempo decorrido; identificação de concentrações inibidoras mínimas (MICs); determinação de concentração mínima de eliminação de biofilme (MBC); e outros métodos conhecidos na técnica (por exemplo, método de difusão de disco, teste E (AB Biodisk, Solna, Suécia)), qualquer sistema de teste de sensibilidade automatizado disponível no mercado (por exemplo, o Vitek System (bioMerieux, França), o Walk-Away System (Dade International, Sacramento, CA), enzima (por exemplo, beta lactamase)). A cultura de CIs é testada em culturas planctônicas ou de biofilme.
[0274] Em alguns aspectos, a presente divulgação inclui a medição das concentrações inibidoras mínimas (MICs). As MICs podem ser determinadas em placas de ágar Müller-Hinton (MH) ou em culturas planctônicas por microdiluição em caldo em MH. As MICs podem ser determinadas para cepas isoladas clínicas e/ou cepa de referência tipo laboratório PAO1. Em algumas combinações, a faixa de MIC clinicamente eficaz da composição é de cerca de 1% a 50%, cerca de 1% a 40%, cerca de 5% a 50%, cerca de 5% a 50%, cerca de 5% a 40%, cerca de 5% a 35%, cerca de 10% a 50%, cerca de 10% a 40%, cerca de 10% a 35% ou cerca de 12% a 32%.
[0275] Em alguns aspectos, a presente divulgação inclui a medição de formação de in vitro para bactéria isolada clínica. Em algumas modalidades, uma cultura noturna de bactérias é cultivada em LB com e sem a composição da divulgação com agitação. A cultura é, então, diluída 1:100, e 100-L em alíquotas adicionadas a uma placa de 96 cavidades, que é incubada por 72 h a 37ºC para permitir o crescimento adequado dos isolados clínicos. Após duas a três lavagens com água, violeta cristal é adicionado por 15 min, seguido de três enxágues com água e, então, a adição de 95% de etanol. Os materiais são, então, transferidos para uma nova placa de 96 cavidades, com absorbância a 540 nm determinada.
[0276] Em alguns aspectos, a presente divulgação inclui a medição da concentração mínima de eliminação de biofilme (MBC) de CIs. Para as concentrações mínimas de biofilme (MBC), um protocolo semelhante ao protocolo MIC pode ser usado, exceto que as bactérias são semeadas em uma placa usada para aderência bacteriana. Em algumas modalidades, as densidades ópticas são medidas para determinar a MBC para o isolado bacteriano. Em algumas modalidades, o ensaio envolve uma formação de 96 biofilmes idênticos em estacas de plástico na tampa de um dispositivo de MBC. Os biofilmes são então expostos a antibióticos de teste por um período de tempo definido, depois colocados em meio bacteriológico fresco em uma segunda placa de 96 cavidades e incubados durante a noite. O valor de MBC é a menor diluição que impede o crescimento de bactérias a partir do biofilme tratado.
[0277] A presente divulgação permite qualquer uma das técnicas acima na presença ou ausência de nitrato.
[0278] A presente divulgação permite qualquer uma das técnicas acima na presença ou ausência de oxigênio.
[0279] A presente divulgação permite qualquer uma das técnicas acima na presença ou ausência de um ou mais antibióticos.
EXEMPLOS
[0280] Entende-se que os exemplos e modalidades aqui descritos são apenas para fins ilustrativos e que várias modificações ou alterações à luz dos mesmos serão sugeridas a pessoas versadas na técnica e serão incluídas no espírito e alcance deste pedido.
Exemplo 1: Estabilidade: Medir níveis de ácido ascórbico e glutationa reduzida
[0281] A Composição 1 foi preparada com 150 mg/ml de glutationa, 88 mg/ml de ácido ascórbico e 84 mg/ml de bicarbonato de sódio com base em 322 mg/ml em peso total, que corresponde a % em peso total de cerca de 46,6%, 27,3% e 26,1%, respectivamente. A razão molar dos componentes na Composição 1 foi de 0,49 M de glutationa, 0,50 M de ácido ascórbico, e 1 M de HCO3.
[0282] A Composição 2 foi preparada com 150 mg/ml de glutationa, 126 mg/ml de ácido ascórbico e 84 mg/ml de bicarbonato de sódio com base em 360 mg/ml em peso total, que corresponde a % em peso total de cerca de 33%, 38,9% e 28,9%, respectivamente. A razão molar dos componentes na Composição 1 foi de 0,49 M de glutationa, 1 M de ácido ascórbico, e 1 M de HCO 3.
[0283] A quantidade de oxidação de ácido ascórbico e glutationa foi determinada para a Composição 1 em pH 5,5, 6,0 e 6,5. Glutationa oxidada é associada à geração de proteína-carbonils através de glutationilação, que ocorre quando glutationa oxidada se dissocia e se liga a proteínas. O % de glutationa oxidada (% de GSSG) foi determinado após 4 semanas de armazenamento da Composição 1 em pH 5,5, 6,0 e 6,5 sob condições ambiente e de aspersão de N2. Adicionalmente, quando ácido ascórbico é oxidado em dehidroascorbato (DHA), DHA pode desagregar e resultar na formação de adutos de proteína no processo chamado ascorbilação (Simpson et al., Biochim biophys Acta 2000;1501:12-24). O % de ácido ascórbico reduzido mantido na Composição 1 (% de ASC) foi determinado após 4 semanas de armazenamento da Composição 1 em pH 5,5, 6,0, e 6,5 sob condições ambiente e de aspersão de N2 (anaeróbicas). Especificamente, amostras aspergidas com nitrogênio foram misturadas sob condições anaeróbicas aspergidas com nitrogênio, e as amostras foram embaladas usando borbulhamento de nitrogênio. As amostras ambiente foram misturadas sob condições de ar ambiente e não foram borbulhadas com nitrogênio. As formulações foram armazenadas a 5ºC por 4 semanas, e o percentual de glutationa oxidada (GSSG) e ácido ascórbico (ASC) foi medido para cada amostra de acordo com técnicas padrão.
[0284] Como mostrado na Tabela 2, a oxidação de glutationa e ácido ascórbico é dependente de pH e oxigênio, e a presença de glutationa aumenta a concentração de ácido ascórbico reduzido após 4 semanas de armazenamento a 5 oC.
Além disso, quando oxigênio está presente na solução, glutationa reduzida (GSH) ajuda a manter a concentração de ácido ascórbico, mas a GSH é por si própria oxidada para GSSG em maiores concentrações. Esses resultados demonstram que o pH da Composição 1 é importante para manter glutationa e ácido ascórbico em seu estado reduzido, e que as razões molares de glutationa e ácido ascórbico na Composição 1 ainda estabiliza as taxas de oxidação de ambos glutationa e ácido ascórbico.
TABELA 1 Formulação pH Atmosfera % de % de
GSSG ASC Formulação 5,5 Aspergido 2,86 89,47 1 com N2 Formulação 6,0 Aspergido 6,54 91,20 Formulação 6,5 Aspergido 9,11 91,27 3 com N2 Formulação 5,5 Ambiente 6,44 90,66 4 Formulação 6,0 Ambiente 15,97 90,25 5 Formulação 6,5 Ambiente 19,94 91,25 6 Ácido Ambiente 77,88 ascórbico apenas
Exemplo 2: Concentração inibidora mínima (MIC) in vitro de composições de glutationa contra isolados clínicos bacterianos
[0285] A Composição 1 foi preparada com 150 mg/ml de glutationa, 88 mg/ml de ácido ascórbico e 84 mg/ml de bicarbonato de sódio com base em 322 mg/ml em peso total, que corresponde a % em peso total de cerca de 46,6%, 27,3% e 26,1%, respectivamente. A razão molar dos componentes na Composição 1 foi de 0,49 M de glutationa, 0,50 M de ácido ascórbico e 1 M de HCO3.
[0286] As MICs da Composição 1 (glutationa, ácido ascórbico e HCO3); glutationa e ácido ascórbico; e HCO3 foram testados contra isolados clínicos, incluindo Burkholderia cepacia, Pseudomonas aeruginosa (Schroeter) Migula (ATCC 27853), Pseudomonas aeruginosa (Schroeter) Migula (ATCC 9027), Pseudomonas aeruginosa (Schroeter) Migula (ATCC BAA-2114), Klebsiella pneumonia, Staphylococcus aureus resistente a meticilina; cepas laboratoriais de Moraxella catarrhalis, Stenotrophomonas maltophilia, Acinetobacter baumannii; e oito amostras de isolados clínicos de Pseudomonas aeruginosa mucoide e não mucoide do pulmão humano. A MIC para o isolado clínico laboratorial Pseudomonas aeruginosa (Schroeter) Migula (ATCC BAA-47 (PAO1)) também foi testado. As MICs foram determinadas sob condições anaeróbicas em meio suplementado com nitrato, sob condições aeróbicas suplementadas com nitrato, ou sob condições ambiente.
[0287] Os isolados clínicos foram inoculados em duplicata em placas de ágar durante a noite sob condições anaeróbicas a 36ºC ± 1,0ºC em uma placa de 96 cavidades. Os isolados laboratoriais de Burkholderia cepacia também foram cultivados em duplicata durante a noite sob condições aeróbicas a 36ºC ± 1,0ºC em uma placa de 96 cavidades. As colônias de cada isolado clínico cultivado nas placas de ágar foram, então, escolhidos para inocular placas de 96 cavidades em duplicata e foram testados sob três condições de solução de teste: Composição 1 (glutationa,
ácido ascórbico e HCO3); glutationa e ácido ascórbico; e HCO3 foram diluídos e adicionados ao meio.
Dez diluições para cada solução de teste foram examinadas:
50%, 25%, 12,5%, 6,25%, 3,13%, 1,57%, 0,78%, 0,39%, 0,2% e 0,1%. Os isolados da colônia foram incubados por 12 horas ou 24 horas a 36ºC ± 1,0ºC sob condições anaeróbicas em meio compreendendo Ágar/Caldo Luria e nitrato com uma das três soluções de teste.
Em um teste adicional, Burkholderia cepacia e Klebsiella pneumoniae foram cultivadas em meio aeróbico compreendendo apenas Ágar/Caldo
Luria com Composição 1. A MIC da Composição 1 foi também determinada para certos isolados clínicos e laboratoriais de Pseudomonas aeruginosa, Moraxella catarrhalis, Stenotrophomonas maltophilia, Acinetobacter baumannii e Burkholderia cepacia cultivados sob condições aeróbicas compreendendo 1% de nitrato.
As MICs foram determinadas através de inspeção visual e OD620. As MICs a 12, 24 e/ou 48 horas nos isolados clínicos testados são listadas na Tabela 2:
Aeró Aeró bico Anaeróbico (+nitrato) bico Or (+ (Ambiente) ganismo nitrato)
Comp GS H Com Comp osição 1 H+ASC CO3 posição 1 osição 1
25% 6,25 3,13% Bc (24 h); 6,25% % (12 h) (12 h); 25% 25416 (48 h) (24 h)
25% 50% Kp (12 h); 25% (24 (12 h); 50% 4352 h) (12 h)
12,5% Pa (12 h); 12,5% 27853 (24 h)
6,25% Pa 6,2 (12 h); 25% (24 9027 5% (12 h) h)
Pa 3,13% 0,3
BAA-2114 (12 h) 9% (12 h)
Pa 1 6,25 6,25% 0,3 BAA-47 2,5% % (12 h) (12 h) 9% (12 h) (PAO1) (12 h)
1 1,56 Pa 12,5% 0,7 2,5% % (12 h) UAB-NM-1 (12 h) 8% (12 h) (12 h)
1 3,13 Pa 6,25% 0,3 2,5% % (12 h) UAB-M-2 (12 h) 9% (12 h) (12 h)
1 Pa 6,25% 0,7 2,5% UAB-NM-3 (12 h) 8% (12 h) (12 h)
Pa 6,25%
UAB-4 (12 h)
1 Pa 6,25% 0,7 2,5% UAB-NM-5 (12 h) 8% (12 h) (12 h)
M 2 12,5% 0,3 RSA UAB- 5% (12 (12 h) 9% (12 h) 1 h)
M 25% 0,3 RSA UAB- (12 h) 9% (12 h) 2 M 2 6,25% 0,3 RSA UAB- 5% (12 (12 h) 9% (12 h) 3 h)
M 25% 0,3 RSA UAB- (12 h) 9% (12 h) 4 Mc 1,56 ATCC % (12 h) 25238 S 6,25 m ATCC % (12 h) 13636 Ab 6,25 ATCC % (12 h) 19606 Bc: Burkholderia cepacia Kp: Klebsiella pneumonia Pa: Pseudomonas aeruginosa Pa UAB: isolados clínicos de P. aeruginosa do pulmão MRSA: Staphylococcus aureus resistente a meticilina
Mc: Moraxella catarrhalis Sm: Stenotrophomonas maltophilia Ab: Acinetobacter baumannii NM: Não mucoide M: Mucoide
[0288] Um ensaio in vitro para MIC, isto é, a concentração mais baixa de uma droga ou substância de teste que inibe o crescimento bacteriano, pode ser medido by densidade óptica ou visualização de não crescimento. MIC é geralmente usada para indicar a eficácia de uma droga antibacteriana. Uma MIC mais baixa geralmente corresponde a uma droga mais potente.
[0289] Os resultados mostram que a Composição 1 inibe bactérias ainda que o bicarbonato na solução tenha reduzido a eficácia de glutationa in vitro. A MIC para bicarbonato isoladamente foi medida para isolados bacterianos representativos para determinar a contribuição de bicarbonato para a inibição in vitro.
[0290] Os resultados mostram que a Composição 1 foi clinicamente eficaz contra isolados clínicos e laboratoriais de Pseudomonas aeruginosa, Burkholderia cepacia, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus resistente a meticilina, Moraxella catarrhalis, Stenotrophomonas maltophilia, e Acinetobacter baumannii.
Notavelmente, fenótipos de Pseudomonas aeruginosa de isolado clínico e laboratorial podem variar consideravelmente com base nas condições sob as quais eles são mantidos, seu número de passagem e o ambiente dos quais foram isolados. Portanto, PAO1 não é preditivo de como outros isolados clínicos ou laboratorais serão inibidos.
[0291] Os efeitos anaeróbicos e aeróbicos sobre B. cepacia e K. pneumoniae também foram avaliados in vitro. Ambas essas bactérias são especialmente tenazes e são difíceis de inibir, mesmo em altas concentrações de agentes antibacterianos.
Elas são ambas associadas a declínio clínico em doenças inflamatórias crônicas das vias aéreas. Para B. cepacia, o efeito inibidor durou um período de 48 horas.
[0292] A Composição 1 também foi capaz de efetivamente inibir MRSA in vitro.
Isso foi inesperado devido à alta concentração de sal da Composição 1 porque MRSA geralmente se desenvolve sob altas concentrações de sal.
[0293] A Composição 1 também foi capaz de efetivamente inibir um isolado clínico mucoide de Pseudomonas aeruginosa (Pa UAB-M-4). Um fenótipo mucoide é associado a resistência multidroga e declínio clínico em pacientes com doenças inflamatórias crônicas das vias aéreas.
[0294] A Composição 1 também foi capaz de efetivamente inibir Burkholderia cepacia, Moraxella catarrhalis, Stenotrophomonas maltophilia, e Acinetobacter baumannii sob condições aeróbicas com 1% nitrato. Cada dessas bactérias foi reconhecida como um patógeno emergente.
Exemplo 3: Análise in vitro de taxa de transporte mucociliar em células epiteliais brônquicas humanas primárias dF508-/-
[0295] A capacidade da Composição 1 (conforme preparada no Exemplo 1) de afetar a taxa de transporte mucociliar (MCT) de células epiteliais brônquicas humanas primárias isoladas de pacientes com fibrose cística foi avaliada in vitro. A taxa de transporte mucociliar provê uma medição de depuração mucociliar, que é o mecanismo pelo qual as células epiteliais clareiam o muco das vias aéreas.
[0296] Em resumo, as células epiteliais brônquicas humanas primárias foram isoladas das vias aéreas de pacientes com fibrose cística e foram terminalmente diferenciadas. Todas as células isoladas de pacientes com fibrose cística foram representadas pelo genótipo dF508 -/-. As células foram incubadas com solução salina tamponada com fosfato (PBS), uma alta concentração (25%) da Composição 1, ou uma baixa (12,5%) concentração da Composição 1. Tomografia de coerência micro-óptica (uOCT) foi usada para avaliar a taxa de transporte mucociliar de acordo com os métodos descritos em Liu, L., et al., PLoS One. 2013; 8(1): e54473. A razão de glutationa para ácido ascórbico para sal de bicarbonato na Composição 1 foi de
150 mg/ml de glutationa : 88 mg/ml de ácido ascórbico : 84 mg/ml sal de bicarbonato, que é representada por uma razão molar de 0,5 mol de glutationa : 0,5 mol de ácido ascórbico : 1 mol de bicarbonato.
[0297] Como mostrado na Figura 1, incubação com a Composição 1 aumentou o transporte mucociliar de células epiteliais brônquicas humanas primárias dF508-/- em comparação com a incubação com um controle de PBS. Adicionalmente, em todos os pontos de tempo testados, a incubação com uma alta concentração da Composição 1 resultou em taxa de transporte mucociliar elevada em comparação com a incubação com uma baixa concentração da Composição 1. Esses dados demonstram que Composição melhora o transporte mucociliar de células epiteliais brônquicas humanas primárias de maneira dependente de dose.
Exemplo 4: Análise in vitro de taxa de transporte mucociliar em células epiteliais brônquicas humanas primárias dF508-/-
[0298] A taxa de transporte mucociliar de células epiteliais brônquicas humanas primárias dF508-/- após a administração de componente isolados da Composição 1 (conforme preparada no Exemplo 1) foi avaliada in vitro. Conforme descrito acima no Exemplo 2, as células epiteliais brônquicas humanas primárias foram isoladas das vias aéreas de pacientes com fibrose cística, e uOCT foi usada para avaliar a taxa de transporte mucociliar de acordo com os métodos descritos em Liu, L., et al., PLoS One. 2013; 8(1): e54473. As células foram incubadas com a Composição 1, bicarbonato, glutationa, bicarbonato + glutationa, ou bicarbonato + ascorbato antes da análise através de uOCT.
[0299] Como mostrado na Figura 2, a incubação de células epiteliais brônquicas humanas primárias dF508-/- com a Composição 1 aumentou sua taxa de transporte mucociliar em comparação com a incubação com um controle de PBS, uma solução contendo apenas bicarbonato, uma solução contendo apenas glutationa, ou uma solução contendo glutationa e bicarbonato. A incubação de células com soluções contendo apenas glutationa, apenas bicarbonato ou uma combinação de glutationa e bicarbonato não alterou a taxa de transporte mucociliar em comparação com a incubação com um controle de PBS. Esses dados demonstram que soluções contendo apenas glutationa e bicarbonato (sozinhos ou em combinação) não têm um efeito significativo na taxa de transporte mucociliar, enquanto a Composição 1 melhorou o transporte mucociliar de células epiteliais brônquicas humanas primárias isolados de pacientes com fibrose cística.
Exemplo 5: Análise in vitro de formação de armadilha extracelular de neutrófilos (NET) em neutrófilos humanos
[0300] A Composição 2 foi preparada com 150 mg/ml de glutationa, 126 mg/ml de ácido ascórbico e 84 mg/ml de bicarbonato de sódio com base em 360 mg/ml em peso total, que corresponde a % em peso total de cerca de 33%, 38,9% e 28,9%, respectivamente. A razão molar dos componentes na Composição 1 foi de 0,49 M de glutationa, 1 M de ácido ascórbico, e 1 M de HCO 3.
[0301] A capacidade da Composição 2 para controlar a formação de armadilhas extracelulares de neutrófilos (NETs) de neutrófilos humanos foi avaliada in vitro. NETs são definidas como a liberação de myiloperoxidase (MPO), filamentos de DNA, e outros componentes pró-inflamatórios (por exemplo, elastase de neutrófilo) de neutrófilos, e NETs contribuem para a inflamação e infecção em doenças inflamatórias crônicas das vias aéreas (ver, por exemplo, Martinez-Aleman, Front Cell Infect Microbiol. 2017; 7:104).
[0302] Em resumo, os neutrófilos foram isolados de voluntários saudáveis e incubados com acetato miristato de forbol (PMA) (50 mM) ou uma solução de controle por três horas. As células foram, então, incubadas com diluições da Composição 1, ou Composição 2 e coloridas com DAPI (4',6-diamidino-2-fenilindol) para detectar liberação de DNA extracelular e MPO foi detectada. Imagens de formação de NET foram obtidas por microscopia de fluorescência.
[0303] Como mostrado na Figura 3, os neutrófilos incubados com PMA isoladamente mostraram formação de NET extensiva, enquanto os neutrófilos incubados com a Composição 2 apresentaram uma redução acentuada na formação de NET. Em particular, os neutrófilos incubados com uma solução contendo 50% de diluição da Composição 2 apresentaram a menor quantidade de formação de NET após estimulação com PMA, enquanto os neutrófilos incubados com soluções cada vez mais diluídas da Composição 2 (25%, 12,5%, 6,25%, e 3,125%) apresentaram menos redução nas quantidades de formação de NET. Esses dados demonstram que a Composição 2 reduziu a formação de NET a partir de neutrófilos humanos de maneira dependente de dose.
Exemplo 6: Análise in vitro de liberação de óxido nítrico (NO) de neutrófilos humanos
[0304] A liberação de óxido nítrico (NO) de neutrófilos humanos após a administração da Composição 1 (conforme preparada no Exemplo 1) foi avaliada in vitro. NO é liberado de neutrófilos em doenças inflamatórias crônicas das vias aéreas e é associado a aumento de inflamação e infecções pulmonares devido à conversão de NO em nitratos e nitratos (ver, por exemplo, Francoeur, C. e Denis, M. Inflammation (1995) 19: 587).
[0305] Em resumo, os neutrófilos foram isolados de voluntários saudáveis, incubados com 10 µg/ml de lipopolissacarídeo (LPS) ou uma solução de controle, e incubados com várias diluições da Composição 1. As células foram coloridas com diacetato DAF-FM para detectar NO, e imagens de liberação de NO foram obtidas por microscopia de fluorescência.
[0306] Como mostrado na Figura 4, os neutrófilos incubados com LPS isoladamente apresentaram extensiva liberação de NO, enquanto os neutrófilos incubados com a Composição 1 apresentaram uma redução acentuada na liberação de NO. Em particular, os neutrófilos incubados com uma solução contendo 50% de diluição da Composição 1 apresentaram a menor quantidade de liberação de NO após estimulação com LPS, enquanto os neutrófilos incubados com soluções cada vez mais diluídas da Composição 1 (25%, 12,5%, 6,25% e 3,125%) apresentaram menos redução nas quantidades de liberação de NO. Esses dados demonstram que a Composição 1 reduz a liberação de NO a partir de neutrófilos humanos de maneira dependente de dose.
Exemplo 7: Estudo clínico de óxido nítrico (NO) exalado de um paciente de transplante pulmonar bilateral
[0307] O efeito da Composição 1 (conforme preparada no Exemplo 1) em NO exalado patológico foi avaliado em um paciente humano in vivo. Em resumo, medições de óxido nítrico exalado fracionado (FeNO) foram obtidas de um paciente de transplante pulmonar bilateral antes da administração da Composição 1 e, de novo, imediatamente após a administração da Composição 1 usando técnicas padrão (ver, por exemplo, Fisher, Thorax 1998; 53:454-458; Gabbay, Am J Respir Crit Care Med 2000; 162: 2182-2187; Kharitonov, The Lancet 1994; 343 (8890): 133-135; e Hubert, European Respiratory Journal 2009 34: 117-124). Enquanto o paciente apresentou uma medição de FeNO de 119 ppb antes da administração da Composição 1, o a medição de FeNO do paciente diminuiu para 24 ppb imediatamente após a administração da Composição 1. Em alguns pacientes, considera-se que níveis normais de NO sejam 20-50 ppb, e níveis de NO acima de 50 ppb são associados a infecção e inflamação. Por conseguinte, o paciente apresentou uma redução de um nível patológico de NO para um nível normal de NO após um único tratamento com a Composição 1. Esses resultados foram reproduzíveis (dados não mostrados). Esses dados demonstram o impacto positivo agudo da Composição 1 na redução do nível de NO exalado em pacientes de transplante pulmonar.
Exemplo 8: Análise de citocina inflamatória in vitro de neutrófilos humanos
[0308] Ensaios de citocina inflamatória foram realizados in vitro com neutrófilos humanos após a administração de diluições da Composição 1. Em resumo, leucócitos polimorfonucleares (PMNs) foram ajustados para uma densidade de 4x106/ml em DMEM (Gibco 11995-065) sem soro bovino fetal (FBS), e 0,25 ml da solução resultante foi adicionado a cavidades duplicadas de uma placa de 24 cavidades (1x106 PMN/2-cm2 cavidade). As células foram, então, pré-tratadas com 0,25 ml de 3,125%, 6,25%, 12,5%, 25% e 50% diluições de uma dose 2X da Composição 1 (88 mg/ml de vitamina C) por 1 hora a 37°C. Metade das cavidades foi, então, enriquecida com 100X E. coli O111:B4 LPS (Sigma L4391) a 5 µl/cavidade e incubada por 4 horas a 37°C. Os meios condicionados foram coletados das cavidades e congelados para análise de citocina por batelada. A quantificação de IL- 6 humano, IL-8/CXCL8 humano e TNF-α humano nos meios condicionados foi realizada sob condições padrão usando kits ELISA R&D Systems Quantikine.
[0309] Como mostrado na Tabela 3 e nas Figuras 5A-5C, neutrófilos humanos estimulados com LPS e incubados com diluições da Composição 1 secretaram quantidades significativamente menores de citocinas pró-inflamatórias em comparação com aqueles incubados com um controle (meio apenas). Em particular, os neutrófilos estimulados com LPS e incubados apenas com meio apresentaram uma concentração de TNF-α de 23,8 pg/ml, enquanto os neutrófilos incubados com 12,5% de Composição 1, 25% de Composição 1 ou 50% de Composição 1 não produziram nenhum TNF-α detectável (Tabela 3 e Figura 5A). Os neutrófilos incubados com 6,25% de Composição 1 apresentaram uma concentração de TNF-α de 11,7 pg/ml, cerca de metade dos neutrófilos incubados apenas com meio (Tabela 3 e Figura 5A).
Da mesma forma, os neutrófilos estimulados com LPS e incubados com 50% de Composição 1, 25% de Composição 1 ou 12,5% de Composição 1 não produziram nenhum nível detectável de IL-6, enquanto os neutrófilos incubados com 6,25% de Composição 1 apresentaram redução de cerca de 6 vezes no nível de IL-6 em comparação com os neutrófilos incubados apenas com meio (Tabela 3 e Figura 5B).
Além disso, os neutrófilos estimulados com LPS e incubados com 50% de Composição 1 , 25% de Composição 1 ou 12,5% de Composição 1 não produziram nenhum nível detectável de IL-8, enquanto os neutrófilos incubados com 6,25% de Composição 1 apresentaram redução de cerca de 3 vezes no nível de IL-8 em comparação com os neutrófilos incubados apenas com meio (Tabela 3 e Figura 5C).
Esses dados demonstram que a administração da Composição 1 resulta em uma sub- regulação dependente de dose de citocinas pró-inflamatórias implicadas em doenças inflamatórias crônicas, tais como fibrose cística, transplante de pulmão e doença pulmonar obstrutiva crônica.
TABELA 3: Tratament Tratament IL- IL-8 TNF o com LPS o com 6 (pg/ml) (pg/ml) -α (pg/ml) Composição 1 Controle Meio 0,0 289,0 0,0 Controle 50% de 0,0 1,0 0,0 Composição 1 Controle 25% de 0,0 0,0 0,0 Composição 1 Controle 12,5% de 0,1 0,0 0,0 Composição 1 Controle 6,25% de 0,0 130,0 0,0 Composição 1 Controle 3,125% 0,4 315,0 0,0 de Composição 1 LPS Meio 12, 1993, 23,8 1 0
LPS 50% de 0,0 0,0 0,0 Composição 1 LPS 25% de 0,0 0,0 0,0 Composição 1 LPS 12,5% de 0,0 0,0 0,0 Composição 1 LPS 6,25% de 2,2 643,0 11,7 Composição 1 LPS 3,125% 13, 1808, 37,5 de Composição 1 3 0 Exemplo 9: Ensaio funcional do receptor de condutância transmembranar de fibrose cística (CFTR)
[0310] Como mostrado na Figura 6, Composição 1 (conforme preparada no Exemplo 1) melhora Isc (µA/cm2) em células epiteliais brônquicas de fibrose cística de tipo selvagem em um ensaio de receptor de condutância transmembranar de fibrose cística (CFTR).
Exemplo 10: Análise in vitro de taxa MCT, ASL e CBF em células epiteliais brônquicas humanas primárias dF508-/-
[0311] A taxa MCT foi avaliada em um ensaio de depuração mucociliar de acordo com os métodos no Exemplo 3 acima. Imagens de um vídeo mostrando o efeito da Composição 1 na microanatomia funcional das células epiteliais brônquicas humanas primárias isoladas de pacientes com fibrose cística (células dF508-/-) a 0 e 6 horas após administração são mostradas na Figura 7. Esses resultados mostraram que a Composição 1 melhorou a taxa MCT em comparação com controle de PBS 6 horas após a administração.
[0312] A viscosidade do muco é o mecanismo dominante no aumento de MCT (Liu et al., Am J Prespir Cell Mol Biol. 2014, 51(4):485-93), em vez de no aumento do líquido de superfície das vias aéreas (ASL) e frequência de batimento ciliar (CBF). A análise de inclinação de MCT em relação a líquido de superfície das vias aéreas (ASL) e a frequência de batimento ciliar (CBF) 6 horas após administração da Composição 1 em comparação com PBS em células epiteliais brônquicas humanas primárias isoladas de pacientes com fibrose cística (células dF508-/-) são mostradas na Figura 8A e Figura 8B, respectivamente. A Composição 1 melhorou a MCT e funcionalmente e proporcionalmente aumentou ASL e CBF. Esses resultados mostram que a Composição 1 pode restaurar células epiteliais brônquicas humanas CF dF508 para níveis normais de MCT sem aumentar ASL e CBF para níveis supranormais, que poderiam atrapalhar a função MCT supersaturando a camada de muco ou resultando em um padrão de batimento ciliar rápido, mas muito irregular que interrompe o movimento do muco. Esses resultados suportam que a Composição 1 tem um efeito sobre MCT reduzindo a viscosidade do muco.
Exemplo 11: Composição 1 reduz atividade de MMP-9 liberada de neutrófilos ativados
[0313] A liberação de metaloprotease-9 (MMP-9) de neutrófilos estimulados por LPS após administração da Composição 1 em diluições de 1:100 e 1:10 foi avaliada. Os neutrófilos periféricos foram isolados de sangue coletado de um doador saudável. Os neutrófilos foram tratados com uma de duas diluições da Composição 1 (1:10 ou 1:100) ou meio (Med) apenas por 1 hora. Eles foram, então, estimulados com 10 ou 100 µg de LPS por 1 hora. Os sobrenadantes das culturas foram coletados e avaliados através de zimograma de MMP-9.
[0314] A Figura 9 mostra a liberação de metaloprotease-9 (MMP-9) de neutrófilos estimulados por LPS após tratamento de 1 hora com a Composição 1 (Ar) a diluições de 1:100 e 1:10 em comparação com meio (Med) e controles com LPS apenas. MMP-9 é a banda de 75-100 kDa no gel.
[0315] Durante a formação de armadilhas extracelulares neutrofílicas, ou desgranulação, metaloproteinases de matriz (MMPs) são liberadas e são associadas a exacerbação de doenças inflamatórias crônicas das vias aéreas quebrando o epitélio das vias aéreas. MMP-9 é liberada de neutrófilos estimulados por LPS e é associada a declínio clínico em pacientes com fibrose cística (Gaggar et al., Eur Respir J., 2011 38(3):721-727).
[0316] A Composição 1 significativamente reduz a liberação de metaloprotease-9 de neutrófilos estimulados por LPS. A diluição 1:100 reduz a expressão de MMP-9 induzida por LPS 100 em cerca de 50%. A diluição 1:10 reduz a mesma estimulação em cerca de 75%.
[0317] Esses resultados mostram que Composição 1 reduziu a a liberação de neutrófilos de MMP-9 in vitro e atua como um agente anti-inflamatório.
Exemplo 12: Composição 1 reduz citocinas associadas com macrófagos e neutrófilos MIP1α e MIP1β
[0318] Os neutrófilos periféricos foram isolados de sangue coletado de um doador saudável. Os neutrófilos foram tratados com uma de duas diluições da Composição 1 (1:10 ou 1:100) ou apenas meio por 1 hora. Eles foram, então, estimulados com 10 ou 100 µg de LPS por 1 hora. Os sobrenadantes das culturas foram coletados e avaliados através de análise multiplex a 15 minutos e 1 hora após a estimulação.
[0319] Citocinas associadas com macrófagos e neutrófilos: os níveis de liberação de proteína inflamatória de macrófago 1α (MIP1α) (Figura 10A) e proteína inflamatória de macrófago 1β (MIP1β) (Figura 10B) de neutrófilos ativados por LPS após administração da Composição 1 em diluições de 1:100 e 1:10 foram reduzidos 1 hora após a estimulação em comparação com meio (M) e controles com LPS apenas.
Exemplo 13: Combinação da Composição 1 e VX-770/809
[0320] O efeito da combinação da Composição 1 e VX-770/809 na taxa MCT, ASL e CBF foi testado. VX-770/809 é um modulador/potenciador/corretor específico de CFTR que permite a expressão de receptor transmembranar de fibrose cística (CFTR) e bloqueio na superfície de HBEs dF508. VX-770, também conhecido como ivacaftor, é um potenciador de CFTR. VX-809, também conhecido como lumacaftor, é um corretor de CFTR. No entanto, o uso de VX-770/809 isoladamente não alivia todos os sintomas respiratórios.
[0321] A taxa MCT foi avaliada em um ensaio de depuração mucociliar de acordo com os métodos no Exemplo 3 acima. Imagens de um vídeo mostrando o efeito da Composição 1 em combinação com VX-770/809 em comparação com VX-770/809 isoladamente e controle de PBS na microanatomia funcional das células epiteliais brônquicas humanas primárias isoladas de pacientes com fibrose cística (células dF508-/-) são mostradas na Figura 11. Os resultados para as células tratadas com VX-770-809 mostraram que, apesar de ter MCT ligeiramente elevada, uma bicamada de muco se formou, impedindo o movimento adequado de MCT (Figura 11, painel central). Combinar a Composição 1 com VX-770/809 resultou não apenas em um aumento significativo de MCT, mas também quebra da bicamada de muco, permitindo melhor movimento de MCT em comparação com VX-770/809 isoladamente.
[0322] Esses resultados mostraram que a combinação da Composição 1 e VX-770/809 melhorou a taxa de MCT em comparação com controle de PBS e reduziu a bicamada de muco associada ao uso de VX-770/809 em um ensaio de depuração mucociliar.
[0323] A quantificação de ASL, CBF e MCT muda com a Composição 1 isoladamente, VX-770/809 e a combinação dos dois nas células dF508 CF HBE é mostrada na Figura 12A. A combinação da Composição 1 e VX-770/809 resultou no maior aumento em MCT, CBF e ASL. Esses dados demonstram o efeito melhorado da Composição 1 quando usada em combinação com o CFTR VX-770/809.
[0324] Como mostrado na Figura 12B, a incubação com a Composição 1 ou Composição 1 mais VX-770 e VX-809 aumentou o transporte mucociliar de células epiteliais brônquicas humanas primárias dF508-/- em comparação com a incubação com um controle de PBS ou em comparação com VX-770 mais VX-809 isoladamente.
Esses dados demonstram que a Composição 1 melhora o transporte mucociliar de células epiteliais brônquicas humanas primárias de maneira dependente de dose. Os resultados representam dados combinados obtidos de 20 amostras de monocamadas de HBE em 3 doadores de CF homozigotos para F508del.
Exemplo 14: Estudo clínico para administração da Composição 1 a pacientes de transplante pulmonar bilateral
[0325] Os efeitos da Composição 1 (conforme preparado no Exemplo 1) em pacientes pós-transplante pulmonar bilateral na função pulmonar (avaliada pela alteração em VEF1), alterações no óxido nítrico exalado fracionado (FeNO) e alterações na qualidade de vida foram avaliados. Em resumo, a Composição 1 (4 ml) foi nebulizada duas vezes ao dia a quatro (4) pacientes pós-transplante de pulmão usando um nebulizador PARI eFlow.
[0326] A alteração na função pulmonar de cada paciente foi avaliada usando a inclinação linear da alteração de VEF1 no momento da inscrição (linha de base) e 1 mês. Pacientes com transplante pulmonar tiveram aumento das medições espirométricas domésticas e clínicas após o uso da Composição 1 por um mês. Essa mudança se correlacionou com uma mudança positiva na qualidade de vida, conforme medido pelo Questionário Respiratório de St. George. Esses resultados da função pulmonar após 1 mês são mostrados na Figura 13.
[0327] As alterações de cada paciente em FENO foram avaliadas utilizando- se a alteração das medições de FENO de linha de base médias para as medições médias pós-uso da Composição 1 após 1 mês. Os pacientes reduziram as medições de FENO após o uso da Composição 1 por um mês. A redução de FENO da linha de base indica a resolução de inflamação/infecção em pacientes após transplante de pulmão (ver, por exemplo, Fisher, A., Thorax 1998; 53:454-458). Essa alteração se correlacionou com uma mudança positiva na qualidade de vida, conforme medido pelo Questionário Respiratório de St. George. Esses resultados de FENO após 1 mês são mostrados na Figura 14.
Exemplo 15: Estabilidade de Armazenamento da Composição 1
[0328] Os efeitos do armazenamento nas composições de ácido ascórbico incluindo quantidades variáveis de tampão com uma concentração consistente de glutationa foram testados. Para a preparação das Formulações 1-9 (Formulação 9 corresponde à Composição 1 (como mostrado no Exemplo 1)), as soluções foram misturadas usando água estéril para injeção e armazenadas em recipientes herméticos, que foram protegidos da luz. No teste, as Formulações 1-9 foram avaliadas para determinar as concentrações de ácido ascórbico e glutationa reduzida e oxidada. Um método RP-HPLC padrão para esses analitos foi usado. O método foi validado incluindo especificidade, precisão, repetibilidade, LOQ, minilinearidade, estabilidade de amostra de NPLC em frasco e verificação indicando estabilidade com amostras informais de degradação forçada. O pH de cada formulação foi determinado usando um local de sonda de pH em uma amostra de cada solução. Os resultados são mostrados na Figura 15. Ascórbico (ACS) isoladamente era instável sob as condições testadas (-20ºC, 5ºC, ambiente) (dados não mostrados).
[0329] A estabilidade da formulação é crítica para a aplicação clínica, a fim de garantir consistência e eficácia do produto ao longo do tempo. Condições ácidas estão presentes em doenças inflamatórias crônicas das vias aéreas e contribuem para a doença (Morice, Breathe 2013 9: 256-266; Tang et al., J Clin Invest. 2016; 126(3): 879- 891; Tate et al., Thorax 2002; 57: 926-929). Além disso, funções imunes inatas, tais como depuração de muco adequada, viscosidade de muco ideal e atividade bactericida inata são ótimas a um pH ligeiramente ácido entre 6-7 (Fisher et al., J.
Membr. Biol. 2006; 211 (3): 139 -150). Assim, condições ácidas podem prejudicar funções imunes e resultar em morte e disfunção do epitélio das vias aéreas.
[0330] Após armazenamento por cerca de 72 horas a cerca de 2-8ºC, apenas a Composição 1 (Formulação 9) obteve boa solubilidade, nenhuma formação de precipitado detectável, e manteve um pH de cerca de 6-7. Além disso, as impurezas após armazenamento por cerca de 72 horas a cerca de 2-8ºC foram inferiores a 4%, isto é, 3,8%, para a Composição 1.
[0331] A presente invenção foi descrita acima com o auxílio de blocos de construção funcionais que ilustram a implementação de funções especificadas e suas relações. Os limites desses blocos de construção funcionais foram aqui definidos arbitrariamente por conveniência de descrição. Limites alternativos podem ser definidos desde que as funções especificadas e suas relações sejam realizadas adequadamente.
[0332] A descrição acima das modalidades específicas revelará tão completamente a natureza geral da invenção que outros podem, aplicando o conhecimento dentro da técnica, prontamente modificar e/ou adaptar para várias aplicações tais modalidades específicas, sem experimentação indevida, sem se afastar do conceito geral da presente invenção. Portanto, tais adaptações e modificações devem estar dentro do significado e faixa de equivalentes das modalidades divulgadas, com base no ensinamento e orientações aqui apresentados.
Deve-se compreender que a fraseologia ou terminologia aqui descrita é para fins de descrição e não de limitação, de tal modo que a terminologia ou fraseologia da presente especificação deve ser interpretada pelo versado na técnica à luz dos ensinamentos e orientações.
[0333] A amplitude e escopo da presente invenção não devem ser limitados por nenhuma das modalidades exemplificativas descritas acima, mas devem ser definidos apenas de acordo com as reivindicações a seguir e seus equivalentes.

Claims (95)

REIVINDICAÇÕES
1. Composição, compreendendo: (a) glutationa, um derivado de glutationa, um conjugado de glutationa, um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos; e (b) um ácido orgânico; CARACTERIZADA pelo fato de que a razão molar de (a) a (b) é cerca de 0,5- 1:1.
2. Composição, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADA pelo fato de que o ácido orgânico é ácido ascórbico.
3. Composição, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADA pelo fato de que a composição ainda compreende (c) um sal de bicarbonato.
4. Composição, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADA pelo fato de que o sal de bicarbonato é bicarbonato de sódio.
5. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, CARACTERIZADA pelo fato de que a composição compreende: (a) glutationa; (b) ácido ascórbico; e (c) bicarbonato de sódio.
6. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, CARACTERIZADA pelo fato de que a razão molar de (a):(b):(c) é cerca de 0,1-0,5: 0,5-1: 1.
7. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, CARACTERIZADA pelo fato de que a razão molar de (a):(b):(c) é cerca de 0,4-0,5: 0,5-1: 1.
8. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, CARACTERIZADA pelo fato de que a razão molar de (a):(b):(c) é cerca de 0,4-0,5: 0,5: 1 ou 0,4-0,5: 1: 1.
9. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, CARACTERIZADA pelo fato de que o pH da composição é pelo menos cerca de 5,5.
10. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, CARACTERIZADA pelo fato de que o pH da composição é cerca de 5,5 a cerca de 10, cerca de 5,5 a cerca de 8, cerca de 6 a cerca de 10, ou cerca de 6 a cerca de 8.
11. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, CARACTERIZADA pelo fato de que o pH é cerca de 5,5, cerca de 6,5, cerca de 7,0, ou cerca de 7,5.
12. Composição, de acordo com a reivindicação 11, CARACTERIZADA pelo fato de que o pH da composição é 7 ± 1,5.
13. Composição, de acordo com a reivindicação 12, CARACTERIZADA pelo fato de que o pH da composição é cerca de 6.
14. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, CARACTERIZADA pelo fato de que a glutationa reduzida na composição é mais do que cerca de 80%, mais do que cerca de 82%, mais do que cerca de 84%, mais do que cerca de 85%, mais do que cerca de 88%, mais do que cerca de 90%, mais do que cerca de 91%, mais do que cerca de 92%, mais do que cerca de 93%, mais do que cerca de 94%, mais do que cerca de 95%, mais do que cerca de 96%, ou mais do que cerca de 97% em peso da glutationa total na composição após armazenamento da composição por 4 semanas a cerca de 5ºC.
15. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, CARACTERIZADA pelo fato de que a glutationa oxidada na composição é menos do que cerca de 20%, menos do que cerca de 18%, menos do que cerca de 16%, menos do que cerca de 15%, menos do que cerca de 12%, menos do que cerca de 10%, menos do que cerca de 9%, menos do que cerca de 8%, menos do que cerca de 7%, menos do que cerca de 6%, menos do que cerca de 5%, menos do que cerca de 4%, ou menos do que cerca de 3% em peso da glutationa total na composição após armazenamento da composição por 4 semanas (por exemplo, a 5ºC em uma atmosfera de N2 e/ou atmosfera ambiente).
16. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, CARACTERIZADA pelo fato de que o ácido ascórbico reduzido é mais do que cerca de 80%, mais do que cerca de 85%, mais do que cerca de 86%, mais do que cerca de 87%, mais do que cerca de 88%, mais do que cerca de 89% ou mais do que cerca de 90% em peso do ácido ascórbico total na composição após armazenamento da composição após armazenamento da composição por 4 semanas a cerca de 5ºC.
17. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, CARACTERIZADA pelo fato de que o ácido ascórbico oxidado na composição é menos do que cerca de 20%, menos do que cerca de 18%, menos do que cerca de 16%, menos do que cerca de 15%, menos do que cerca de 12%, menos do que cerca de 10%, ou menos do que cerca de 9% em peso do ácido ascórbico total na composição após armazenamento da composição por 4 semanas a cerca de 5ºC.
18. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, CARACTERIZADA pelo fato de que que é adequada para uso farmacêutico.
19. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18, CARACTERIZADA pelo fato de que a composição é uma solução aquosa.
20. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18, CARACTERIZADA pelo fato de que a composição é um pó seco.
21. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18, CARACTERIZADA pelo fato de que a composição é adequada para administração por inalação.
22. Método de inibir ou reduzir o crescimento de uma bactéria isolada clínica, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende contactar o isolado clínico com a composição, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 21.
23. Método de inibir ou reduzir a formação de um biofilme de bactéria isolada clínica, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende contactar o isolado clínico com uma composição compreendendo a composição, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 21.
24. Método de tratar ou reduzir sintomas em um indivíduo que sofre ou em risco de uma infecção por bactéria isolada clínica, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende contactar o isolado clínico com a composição, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 21.
25. Método, de acordo a reivindicação 24, CARACTERIZADO pelo fato de que o indivíduo tem uma doença ou distúrbio pulmonar ou das vias aéreas.
26. Método, de acordo a reivindicação 25, CARACTERIZADO pelo fato de que o distúrbio pulmonar ou das vias aéreas é selecionado do grupo que consiste em doença pulmonar inflamatória crônica, fibrose pulmonar, vasculite pulmonar, sarcoidose pulmonar, inflamação e/ou infecção associada a transplante de pulmão, rejeição e/ou disfunção pulmonar [crônica] ou aguda, hipertensão arterial pulmonar, bronquite, sinusite, asma, fibrose cística, bronquiectasia, infecção bacteriana, infecção fúngica, infecção parasitária, infecção viral, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), síndrome de bronquiolite obliterante (BOS), discinesia ciliar primária (PCD), proteinose alveolar, fibrose pulmonar idiopática, pneumonia eosinofílica, bronquite eosinofílica, síndrome do desconforto respiratório agudo (ARDS), inflamação e/ou infecção associada a ventilação mecânica, pneumonia associada ao ventilador, distúrbio ou doença das vias aéreas relacionado a amianto, distúrbio ou doença das vias aéreas relacionado a poeira, silicose, e distúrbio ou doença das vias aéreas relacionado a agente químico ou radiação, e qualquer combinação dos mesmos.
27. Método, de acordo a reivindicação 25, CARACTERIZADO pelo fato de que o distúrbio ou doença pulmonar ou das vias aéreas é selecionado do grupo que consiste em doença pulmonar inflamatória crônica, uma inflamação e/ou infecção associada a transplante de pulmão, rejeição ou disfunção pulmonar aguda ou crônica,
asma, fibrose cística, bronquiectasia, ou doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), ou qualquer combinação dos mesmos.
28. Método, de acordo a reivindicação 27, CARACTERIZADO pelo fato de que o distúrbio ou doença pulmonar ou das vias aéreas é fibrose cística, bronquiectasia de fibrose não cística ou bronquiectasia de fibrose cística.
29. Método, de acordo a reivindicação 27, CARACTERIZADO pelo fato de que o indivíduo é um paciente de transplante pulmonar.
30. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 29, CARACTERIZADO pelo fato de que o indivíduo tem uma infecção por biofilme.
31. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 30, CARACTERIZADO pelo fato de que ainda compreende administrar um agente terapêutico adicional ao indivíduo.
32. Método, de acordo a reivindicação 31, CARACTERIZADO pelo fato de que o agente terapêutico adicional é um antibiótico.
33. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 22 a 32, CARACTERIZADO pelo fato de que o isolado clínico compreende dois ou mais isolados clínicos.
34. Método, de acordo as reivindicações 22 a 33, CARACTERIZADO pelo fato de que o isolado clínico é Gram negativo ou Gram positivo.
35. Método, de acordo a reivindicação 34, CARACTERIZADO pelo fato de que os dois ou mais isolados clínicos compreendem uma combinação de isolados clínicos Gram negativos e Gram positivos.
36. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 22 a 35, CARACTERIZADO pelo fato de que o isolado clínico é mucoide ou não mucoide.
37. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 22 a 36, CARACTERIZADO pelo fato de que o isolado clínico é aeróbico, anaeróbico ou aerotolerante.
38. Método, de acordo a reivindicação 37, CARACTERIZADO pelo fato de que a condição aeróbica, anaeróbica ou aerotolerante é com nitrato.
39. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 23 a 38, CARACTERIZADO pelo fato de que o isolado clínico é resistente a multidroga.
40. Método de sobrerregular depuração mucociliar em um indivíduo que sofre ou em risco de depuração mucociliar prejudicada, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma composição, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 21.
41. Método, de acordo a reivindicação 40, CARACTERIZADO pelo fato de que administrar a referida composição reduz a viscosidade do muco do indivíduo.
42. Método, de acordo a reivindicação 40, CARACTERIZADO pelo fato de que administrar a referida composição aumenta frequência de batimento ciliar das células epiteliais das vias aéreas do indivíduo.
43. Método, de acordo a reivindicação 40, CARACTERIZADO pelo fato de que administrar a referida composição aumenta a taxa de transporte mucociliar das células epiteliais das vias aéreas do indivíduo.
44. Método, de acordo a reivindicação 40, CARACTERIZADO pelo fato de que administrar a referida composição aumenta a altura do líquido de superfície das vias aéreas do indivíduo.
45. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 40 a 44, CARACTERIZADO pelo fato de que o indivíduo sofre ou está em risco de sofrer de uma doença ou distúrbio pulmonar ou das vias aéreas.
46. Método, de acordo a reivindicação 45, CARACTERIZADO pelo fato de que o distúrbio pulmonar ou das vias aéreas é selecionado do grupo que consiste em doença pulmonar inflamatória crônica, fibrose pulmonar, vasculite pulmonar, sarcoidose pulmonar, inflamação e/ou infecção associada a transplante de pulmão, rejeição e/ou disfunção pulmonar [crônica] ou aguda, hipertensão arterial pulmonar,
bronquite, sinusite, asma, fibrose cística, bronquiectasia, infecção bacteriana, infecção fúngica, infecção parasitária, infecção viral, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), síndrome de bronquiolite obliterante (BOS), discinesia ciliar primária (PCD), proteinose alveolar, fibrose pulmonar idiopática, pneumonia eosinofílica, bronquite eosinofílica, síndrome do desconforto respiratório agudo (ARDS), inflamação e/ou infecção associada a ventilação mecânica, pneumonia associada ao ventilador, distúrbio ou doença das vias aéreas relacionado a amianto, distúrbio ou doença das vias aéreas relacionado a poeira, silicose, e distúrbio ou doença das vias aéreas relacionado a agente químico ou radiação, e qualquer combinação dos mesmos.
47. Método, de acordo a reivindicação 46, CARACTERIZADO pelo fato de que o distúrbio ou doença pulmonar ou das vias aéreas é fibrose cística, bronquiectasia de fibrose não cística ou bronquiectasia de fibrose cística.
48. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 45 a 47, CARACTERIZADO pelo fato de que as células epiteliais das vias aéreas do referido indivíduo não possuem capacidade de depuração mucociliar antes da administração da referida composição.
49. Método, de acordo a reivindicação 48, CARACTERIZADO pelo fato de que as células epiteliais das vias aéreas do referido indivíduo não possuem capacidade de depuração mucociliar devido a uma deficiência genética.
50. Método, de acordo a reivindicação 45, CARACTERIZADO pelo fato de que o indivíduo recebeu um transplante de pulmão.
51. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 45 a 50, CARACTERIZADO pelo fato de que o epitélio das vias aéreas do indivíduo não é colonizado por bactéria.
52. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 45 a 50, CARACTERIZADO pelo fato de que o epitélio das vias aéreas do indivíduo é colonizado por bactéria.
53. Método, de acordo a reivindicação 52, CARACTERIZADO pelo fato de que o indivíduo sofre de uma infecção bacteriana ativa.
54. Método, de acordo a reivindicação 52, CARACTERIZADO pelo fato de que o indivíduo não sofre de uma infecção bacteriana ativa.
55. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 51 a 54, CARACTERIZADO pelo fato de que o indivíduo é um paciente pediátrico.
56. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 51 a 54, CARACTERIZADO pelo fato de que o indivíduo é um paciente adulto.
57. Método de reduzir inflamação das vias aéreas em um indivíduo que sofre ou em risco de inflamação das vias aéreas, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma composição, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 21.
58. Método, de acordo a reivindicação 57, CARACTERIZADO pelo fato de que administrar a referida composição inibe atividade de mieloperoxidase dos neutrófilos do indivíduo.
59. Método, de acordo com as reivindicações 57 ou 58, CARACTERIZADO pelo fato de que administrar a referida composição reduz a formação de armadilhas extracelulares de neutrófilos.
60. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 57 a 59, CARACTERIZADO pelo fato de que administrar a referida composição sub-regula a produção de óxido nítrico dos neutrófilos do indivíduo.
61. Método, de acordo a reivindicação 60, CARACTERIZADO pelo fato de que administrar a referida composição reduz o óxido nítrico exalado fracionado do indivíduo em pelo menos 20%.
62. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 57 a 61, CARACTERIZADO pelo fato de que administrar a referida composição sub-regula a produção de pelo menos uma citocina inflamatória.
63. Método, de acordo a reivindicação 62, CARACTERIZADO pelo fato de que a referida pelo menos uma citocina inflamatória compreende uma citocina associada a ativação de macrófagos e/ou recrutamento de células T e neutrófilos.
64. Método, de acordo a reivindicação 63, CARACTERIZADO pelo fato de que a referida pelo menos uma citocina inflamatória compreende TNF-α.
65. Método, de acordo a reivindicação 63, CARACTERIZADO pelo fato de que a referida pelo menos uma citocina inflamatória compreende IL-6.
66. Método, de acordo a reivindicação 63, CARACTERIZADO pelo fato de que a referida pelo menos uma citocina inflamatória compreende IL-8.
67. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 57 a 66, CARACTERIZADO pelo fato de que o indivíduo sofre ou está em risco de sofrer de uma doença ou distúrbio pulmonar ou das vias aéreas.
68. Método, de acordo a reivindicação 67, CARACTERIZADO pelo fato de que o distúrbio pulmonar ou das vias aéreas é selecionado do grupo que consiste em doença pulmonar inflamatória crônica, fibrose pulmonar, vasculite pulmonar, sarcoidose pulmonar, inflamação e/ou infecção associada a transplante de pulmão, rejeição e/ou disfunção pulmonar [crônica] ou aguda, hipertensão arterial pulmonar, bronquite, sinusite, asma, fibrose cística, bronquiectasia, infecção bacteriana, infecção fúngica, infecção parasitária, infecção viral, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), síndrome de bronquiolite obliterante (BOS), discinesia ciliar primária (PCD), proteinose alveolar, fibrose pulmonar idiopática, pneumonia eosinofílica, bronquite eosinofílica, síndrome do desconforto respiratório agudo (ARDS), inflamação e/ou infecção associada a ventilação mecânica, pneumonia associada ao ventilador, distúrbio ou doença das vias aéreas relacionado a amianto, distúrbio ou doença das vias aéreas relacionado a poeira, silicose, e distúrbio ou doença das vias aéreas relacionado a agente químico ou radiação, e qualquer combinação dos mesmos.
69. Método, de acordo a reivindicação 68, CARACTERIZADO pelo fato de que o distúrbio ou doença pulmonar ou das vias aéreas é fibrose cística, bronquiectasia de fibrose não cística ou bronquiectasia de fibrose cística.
70. Método, de acordo a reivindicação 67, CARACTERIZADO pelo fato de que o indivíduo recebeu um transplante de pulmão.
71. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 70, CARACTERIZADO pelo fato de que o epitélio das vias aéreas do indivíduo não é colonizado por bactéria.
72. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 71, CARACTERIZADO pelo fato de que o epitélio das vias aéreas do paciente é colonizado por bactéria.
73. Método, de acordo a reivindicação 72, CARACTERIZADO pelo fato de que o indivíduo sofre de uma infecção bacteriana ativa.
74. Método, de acordo a reivindicação 72, CARACTERIZADO pelo fato de que o indivíduo não sofre de uma infecção bacteriana ativa.
75. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 74, CARACTERIZADO pelo fato de que o indivíduo é um paciente pediátrico.
76. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 74, CARACTERIZADO pelo fato de que o indivíduo é um paciente adulto.
77. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 40 a 76, CARACTERIZADO pelo fato de que não altera significativamente o pH do endotélio das vias aéreas do indivíduo.
78. Método de reduzir a viscosidade do muco em um indivíduo que sofre ou em risco de sofrer de viscosidade reduzida do muco, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma composição, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 21.
79. Método de ativar a função do receptor transmembranar de fibrose cística (CFTR) em um indivíduo que sofre de função de CFTR reduzida, CARACTERIZADO pelo fato de que compreendendo administrar ao indivíduo uma composição, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 21.
80. Método de aumentar a expressão de receptor transmembranar de fibrose cística (CFTR) em um indivíduo que sofre de expressão reduzida de CFTR, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma composição, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 21.
81. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 80 CARACTERIZADO pelo fato de que ainda compreende administrar uma terapia de CFTR selecionada do grupo que consiste em um amplificador de CFTR, um corretor de CFTR, um modulador/potenciador de CFTR, um modificador de RNA de CFTR, ou qualquer combinação dos mesmos.
82.Método, de acordo a reivindicação 81, CARACTERIZADO pelo fato de que o corretor de CFTR é selecionado do grupo que consiste em VX-809 (lumacaftor), VX- 661 (tezacaftor), VX-445, VX-659, VX-152, FDL169, GLPG2222, PT-801, e uma combinação dos mesmos.
83. Método, de acordo com as reivindicações 81 ou 82, CARACTERIZADO pelo fato de que o potenciador/modulador de CFTR é selecionado do grupo que consiste em VX-770 (ivacaftor), QBW 251, VX-561, PT1-808, e uma combinação dos mesmos.
84. Método, de acordo com quaisquer das reivindicações 81 a 83, CARACTERIZADO pelo fato de que o amplificador de CFTR é PTI-428.
85. Método, de acordo com quaisquer das reivindicações 81 a 84, CARACTERIZADO pelo fato de que o modificador de RNA de CFTR é QR-100, MRT5005, ou a combinação dos mesmos.
86. Método, de acordo a reivindicação 81, CARACTERIZADO pelo fato de que a terapia de CFTR compreende o corretor de CFTR e o potenciador/modulador de CFTR.
87. Método, de acordo a reivindicação 86, CARACTERIZADO pelo fato de que a terapia de CFTR compreende VX-770 (ivacaftor), VX-809 (lumacaftor), ou a combinação dos mesmos.
88. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 81 a 87, CARACTERIZADO pelo fato de que a viscosidade do muco nas vias aéreas do indivíduo reduz mais do que administrar a composição isoladamente.
89. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 81 a 88, CARACTERIZADO pelo fato de que a frequência de batimento ciliar das células epiteliais das vias aéreas do indivíduo aumenta mais do que administrar a composição isoladamente.
90. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 81 a 89, CARACTERIZADO pelo fato de que a taxa de transporte mucociliar das células epiteliais das vias aéreas do indivíduo aumenta mais do que administrar a composição isoladamente.
91. Método, de acordo com quaisquer das reivindicações 81 a 90, CARACTERIZADO pelo fato de que a composição e o CFTR são administrados simultaneamente ou consecutivamente ao indivíduo em qualquer ordem.
92. Método, de acordo com quaisquer das reivindicações 24 a 91, CARACTERIZADO pelo fato de que óxido nítrico exalado fracionado do indivíduo (FeNO) é reduzido em pelo menos 20% após 1 mês de administração da composição.
93. Método, de acordo a reivindicação 92, CARACTERIZADO pelo fato de que o indivíduo é um paciente de transplante pulmonar.
94. Método, de acordo com quaisquer das reivindicações 24 a 93, CARACTERIZADO pelo fato de que a composição é administrada por nebulização duas vezes ao dia.
95. Composição, de acordo com quaisquer das reivindicações 1 a 24, ou método, de acordo com quaisquer das reivindicações 24 a 94, CARACTERIZADO pelo fato de que a composição, após armazenamento a 2-8ºC por pelo menos 72 horas compreende qualquer um ou mais dos seguintes: (a) essencialmente livre de precipitação, (b) compreende menos do que 4% de impurezas, (c) mantém um pH de 6,0-7,0, e (d) perda mínima de solubilidade.
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