BR112019012597A2

BR112019012597A2 - inibidores de glutaminil ciclase e uso dos mesmos em tratamento de várias doenças

Info

Publication number: BR112019012597A2
Application number: BR112019012597-3A
Authority: BR
Inventors: Vladimirovna RYDLOVSKAYA Anastasia; Alexandrovna Kromova Tatyana; Evgenievich Nebolsin Vladimir
Original assignee: Obschestvo S Ogranichennoi Otvetstvennostiyu Pharmenterprises
Priority date: 2017-05-26
Filing date: 2018-05-24
Publication date: 2019-11-19
Also published as: JP2023071720A; AU2018273483B2; WO2018217139A1; UA124636C2; KR20240035919A; CA3046196A1; EP3632433A4; CN110087650B; AU2018273483A1; IL267077A; US20240116898A1; ZA201903828B; EP4335509A2; CN110087650A; MX2019006880A; JP2021533078A; CN118141807A; KR20240035920A; KR20200010164A; CN118141806A

Abstract

a presente invenção refere-se à química de substâncias orgânicas, farmacologia e medicina, e refere-se ao tratamento de doenças associadas e com atividade aberrante de células do sistema imune, mais particularmente para tratamento de doenças do pulmão, das vias respiratórias e abdominais, doença de radiação, síndrome de dor e outras doenças usando compostos de fórmula (a), (a) em que r1 é grupo -c(o)-r2-c(o)- ou -r2-c(o)-, onde r2 é grupo -(ch2)n- opcionalmente substituído com uma ou duas c1-c6 alquilas, ou fenila, n é um número inteiro de a partir de 0 a 4; em que os compostos são selecionados do grupo consistindo no grupo dos compostos como mostrado na descrição. esses compostos, bem como sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são altamente eficazes na inibição de glutaminil ciclase, que está envolvida, em particular, em processos de modificação pós-traducional de quimiocinas e quimiotaxia de monócitos, macrófagos e outras células do sistema imune. a presente invenção refere-se também a composições farmacêuticas compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz dos compostos de fórmula (a) como acima definido.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para INIBIDORES DE GLUTAMINIL CICLASE E USO DOS MESMOS EM TRATAMENTO DE VÁRIAS DOENÇAS.

CAMPO DA TÉCNICA [001] A presente invenção refere-se à química de compostos orgânicos, farmacologia e medicina e refere-se ao tratamento de doenças associadas com atividade aberrante de células do sistema imune, em particular para tratamento de doença do pulmão, das vias respiratórias e abdominal. A presente invenção refere-se também a tratamento de doença de radiação e síndrome de dor, e também a outras doenças ao usar compostos que são eficazes na inibição de uma enzima glutaminil ciclase, envolvida em particular em modificação póstraducional de quimiocinas e quimiotaxia de células do sistema imune. ANTECEDENTES DA INVENÇÃO [002] Quimiotaxia ou movimento direcionado de células do sistema imune seguindo o gradiente de concentração de algumas substâncias endógenas e exógenas (quimioatratores) é um dos principais constituintes de células funcionais do sistema imune. O influxo excessivo de células do sistema imune geralmente causa a atividade excessiva de células do sistema imune e lesão de órgãos e tecidos circundantes. A compreensão de participantes e processos associados com o processo de quimiotaxia, no nível molecular, poderia resultar em novas abordagens efetivas no tratamento e prevenção de várias doenças associadas com atividade aberrante de células do sistema imune.

[003] Quimiocinas da família CCL (CCL2, CCL7, CCL8, CCL13), que são ligantes do receptor CCR2, são os fatores mais potentes de quimiotaxia de monócitos e macrófagos em mamíferos (Biochem, J., 2012 Mar 1 ;442(2):403-12). Quimiocinas da família CCL são a classe importante de citocinas requerida para a ativação de neutrófilos e monócitos, e atrai o envolvimento dessas células para o sítio de inflama

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 26/97

2/65 ção. No entanto, concentrações altas de quimiocinas como uma regra causam o influxo excessivo de células do sistema imune. Atividade aberrante de células do sistema imune pode resultar em sérias lesões de órgãos e tecido circundantes. Por exemplo, em alguns casos, produtos de oxidação de lipídeo podem ativar células endoteliais vasculares (intima), que resulta no isolamento de CCL2, o envolvimento de macrófagos que por sua vez secretam marcadores inflamatórios, provocando a lesão da parede arterial e o desenvolvimento de aterosclerose (Mol Cell. 1998 Ago;2(2):275-81; Nature. 1998 Ago 27;394(6696): 894-7). Quadro patogênico análogo pode ser observado em caso de lesão induzida por radiação de tecidos das vias respiratórias: a lesão e ativação de células epiteliais de pulmões e vias respiratórias resulta no isolamento de CCL2, que por sua vez causa o extravasamento de células imunes e células tumorais em circulação para os pulmões e vias respiratórias (Antioxid Redox Signal. 2018 Abr 2, doi: 10.1089/ars. 2017.7458).

[004] O papel de quimiocinas da família CCL em patofisiologia de várias condições autoimunes e alérgicas mediadas por atividade aberrante de monócitos CCR2+, CD14+ e CD16lo (artrite reumatoide, esclerose múltipla) é conhecido. Ainda, as quimiocinas da família CCL (em particular CCL2) estão envolvidas na patogênese da obesidade, síndrome metabólica, dor crônica, fibrose, doença hepática gordurosa não alcoólica e algumas formas de câncer.

[005] A supressão de atividade aberrante de células do sistema imune através da inibição da quimiotaxia mediada por CCL poderia ser em grande demanda para 0 tratamento de uma gama de doenças tais como lesão pulmonar aguda, asma brônquica, bronquite, doença pulmonar obstrutiva crônica, doença de Crohn, nefropatia diabética e similar. Por exemplo, em caso de nefropatia diabética, a influência de glicose em concentrações alta resulta no aumento em secreção de

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 27/97

3/65

CCL por células renais tubulares, o que por sua vez causa a migração de monócitos (Kidney Int., 2006 Jan; 69(1):73-80). O aumento na concentração de monócitos em tecidos renais e sua maturação para macrófagos causa o desenvolvimento de resposta aberrante associada com o isolamento da quantidade maior de quimiocinas e formas de oxigênio ativas que estão lesionando as células renais circundantes (Mediators Inflamm. 2012;2012:146154). A lesão de tecidos renais resulta no desenvolvimento e manutenção de atividade aberrante de células do sistema imune e a destruição adicional de tecidos renais, e o bloqueio da interação de CCL2/CCR2 por antagonistas de baixo peso molecular reduz a intensidade de patologia (Nephrol Dial Transplant. 2013 Jul;28(7): 1700-10). Processos análogos são característicos para a patogênese de doença hepática gordurosa não alcoólica: o acúmulo de ácidos graxos em células hepáticas resulta na ativação de uma via de sinal de NF-κΒ e o desenvolvimento de reação inflamatória induzindo a liberação de citocinas anti-inflamatórias tais como IL-6 e CCL2. A liberação de citocinas anti-inflamatórias na migração de monócitos para o sítio de inflamação e o desenvolvimento de resposta aberrante associada com o isolamento de uma quantidade maior de quimiocinas e formas de oxigênio ativas lesionando células circundantes (Int. J. Exp. Pathol. 2013 Jun; 94(3): 217-225).

[006] Membros da família CCL (CCL2, CCL7, CCL8, CCL13), fractalcina, bem como de uma gama de outros hormônios e proteínas secretadas contêm um resíduo de ácido piroglutâmico (pE), cujo papel é proteger contra a degradação por aminopeptidases (Chem. Immunol. 1999;72:42-56; Biochemistry. 1999 Out 5;38(40): 13013-25). A piroglutamação do resíduo N-terminal é calalisada por enzimas - glutaminil ciclase (QPCT ou QC) (J. Biol. Chem. 2003 Dez 12;278(50):49773-9; J. Mol. Biol. 2008 Jun 20;379(5):966-80). Glutaminil ciclase tem uma especificidade de substrato ampla e participa na modificação pós

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 28/97

4/65 traducional de uma gama de moléculas de peptídeo. Foi mostrado nos estudos da especificidade do substrato de glutaminil ciclase que a enzima pode catalisar a piroglutamação de substratos diferentes sem importar o comprimento da cadeia de polipeptideo (FEBS Lett. 2004 Abr 9;563(1-3): 191-6, J. Biol. Chem. 2011 Abr 8;286(14): 12439-49).

[007] Foi mostrado em estudos experimentais que a inibição de glutaminil ciclase resulta em uma redução drástica em atividade de quimioatrator de formas não piroglutamadas de quimiocinas CCL2, CCL7, CCL8 e CCL13 (Biochem. J. (2012) 442, 403-412) e fractalcina (Biosci. Rep. 2017 Ago 23;37(4)). Desta maneira, é óbvio que inibidores de glutaminil ciclase podem ser usados para a terapia de uma gama ampla de doenças e, em particular, doenças dos pulmões e vias respiratórias, tais como asma brônquica, bronquite aguda e crônica, faringite, enfisema pulmonar, rinite, rinossinusite e doença pulmonar obstrutiva crônica. A patogênese da doença é associada com produção de citocina excessiva e em particular proteínas quimioatratoras de monócito CCL2 e CCL7 (Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 2014 Jan;50(1): 144-57) e fractalcina (Expert Opin Ther. Targets. 2010 Fev; 14(2):20719), que são substratos de glutaminil ciclase (Biosci Rep. 2017 Agos 23;37(4). pii: BSR20170712; EMBO Mol. Med. 2011 Set;3(9):545-58). Foi mostrado que a neutralização de CCL2 e CCL7 com o uso de anticorpos reduz consideravelmente o influxo de leucócitos, monócitos e neutrófilos para vias respiratórias de animais experimentais (Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 2014 Jan;50(1 ):144-57). O impacto de lipopolissacarídeos bacterianos, ácido lipoteicoico e outros irritantes da mucosa do sistema de órgãos respiratórios resulta no aumento em secreção de CCL2 por células do músculo liso brônquicas (Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 2012 Abr 15;302(8):L785-92) e o crescimento de concentração de CCL2 em lavagem broncoalveolar (Mol. Immunol. 2011 Jul;48(12-13): 1468-76). O aumento na concentração de CCL2

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 29/97

5/Q5 por sua vez causa a migração de eosinófilos, monócitos e basófilos e o desenvolvimento de resposta aberrante associada com o isolamento de uma quantidade maior de quimiocinas (TNFa, IL-1, IL-6, IL-4) e formas de oxigênio ativas que lesam as células circundantes de brônquios e órgãos respiratórios (Immunobiology. 2016 Fev;221(2):182-7; Int. J. Biol. Sci. 2012;8(9): 1281-90; Mol. Immunol. 2013 Nov;56(1-2): 57-63). A lesão de brônquios resulta no desenvolvimento e manutenção da atividade aberrante de células do sistema imune e a destruição adicional de tecidos do órgão respiratório. De acordo com modelos in vivo de asma alérgica, o bloqueio de interação de CCL2/CCR por antagonistas de baixo peso molecular mostrou a eficácia significante (Int. Arch. Allergy Immunol. 2015; 166(1 ):52-62).

[008] É importante notar que o desenvolvimento mediado por CCL2 de inflamação por neutrófilo e o desenvolvimento da resposta aberrante relacionada com a liberação de citocinas pirogênicas, (IL-1, TNFa, IL-6), resulta no aumento em temperatura e desenvolvimento de febre (J. Infect. Dis. 1999 Mar; 179 Supl 2:S294-304; Front Biosci. 2004 Maio 1 ;9:1433-49).

[009] Em adição à febre e temperatura elevada, síndrome de dor é também o sintoma extremamente comum de várias doenças. É óbvio que a redução da intensidade da resposta aberrante relacionada à liberação do número aumentado de formas ativas de oxigênio que danificam tecidos circundantes deve em si resultar na diminuição na intensidade da síndrome de dor. No entanto, em trabalho recente, o papelchave de fractalcina na patogênese de dor crônica foi mostrado (J. Neurochem. 2017 Maio; 141 (4):520-531).

[0010] Inibidores de glutaminil ciclase podem ser usados para a terapia de várias doenças autoimunes, em particular artrite reumatoide e psoríase. Fractalcina é um dos mediadores proinflamatórios-chave envolvidos no desenvolvimento de doenças autoimunes. A interação

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 30/97

6/65 entre fractalcina e seu receptor único (CX3CR1) induz a adesão celular, quimiotaxia e sobrevivência celular (Mol Interv. 2010 Out; 10(5): 263-70). O nível de fractalcina é aumentado em pacientes com artrite reumatoide (PA) (Mod. Rheumatol. 2017 Maio;27(3):392-397) e psoríase (Ann. Clin. Lab. Sci. 2015 Fall;45(5):556-61) e se relaciona com a atividade de doença. A fractalcina é expressa em sinoviócitos do tipo fibroblasto e células endoteliais em tecido sinovial de pacientes com artrite reumatoide. No caso de psoríase, níveis altos de produção de fractalcina são observados em papilas dermais e células apresentando antígeno (Br. J. Dermatol. 2001 Jun;144(6):1105-13). A expressão de fractalcina é aumentada pelo fator a de necrose de tumor e interferonY, e em caso de artrite reumatoide promove a migração de monócitos, células T e precursores de osteoclasto para o tecido sinovial (Mod. Rheumatol. 2017 Maio;27(3):392-397). A expressão aumentada de fractalcina em papilas dermais explica da mesma maneira a migração e acúmulo de células T nesses sítios no caso de psoríase (Br. J. Dermatol. 2001 Jun;144(6):1105-13). A fractalcina também induz a formação de mediadores inflamatórios por macrófagos, células T e sinoviócitos do tipo fibroblasto. Além disso, a fractalcina promove angiogênese e osteoclastogênese. No modelo de artrite induzida por colágeno, o uso de anticorpos antifractalcina permitiu aliviar consideravelmente o processo de patologia (Mod. Rheumatol. 2017 Maio;27(3):392-397).

[0011] Com base nos resultados de estudos de pesquisa recentes, é possível afirmar que a inibição da quimiotaxia mediada por CCL é a nova abordagem terapêutica perspectiva para o tratamento de doença por radiação (Antioxid Redox Signal. 2018 Abr 2. doi: 10.1089/ars. 2017.7458, Int. J. Radiat. Biol. 2015 Jun;91 (6):510-8). Foi mostrado em modelos animais que a intensidade de disfunção induzida por radiação de vasos pode ser eficientemente reduzida devido à inibição das vias de sinal mediadas por CCL. O uso de animais que têm contagem

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 31/97

7/65 baixa para o gene de receptor de CCL2 bem como em caso de uso de antagonistas do dito receptor bloqueia a alteração induzida por radiação em morfologia e a destruição de células endoteliais e previne o desenvolvimento de inflamação das vias respiratórias diretamente após a radiação (Antioxid Redox Signal. 2018 Abr 2. doi: 10.1089/ars. 2017.7458). Além disso, a supressão de vias de sinal mediadas por CCL permite reduzir significantemente a intensidade de fibrose pulmonar induzida por radiação que é um dos principais efeitos colaterais diferidos da radiação.

[0012] Desta maneira, com base nos dados de literatura, é possível concluir que a estratégia direcionada para a inibição de glutaminil ciclase é a abordagem possível para o tratamento de doenças autoimunes, obesidade, doença do pulmão, vias respiratórias e cavidade abdominal, doença de radiação e síndrome de dor.

[0013] Há inibidores de glutaminil ciclase atualmente conhecidos compreendendo sulfolipídeos (WO 2017/046256), derivados de flavonoides (Bioorg. Med. Chem. 2016 Maio 15;24(10):2280-6), derivados de piridina (US 2015/0291632) e algumas moléculas pequenas descritas em trabalhos recentes (J. Med. Chem. 2017 Mar 23;60(6): 2573-2590; WO 2014/193974, US 2015/0291557). Os análogos mais próximos do composto que é o objeto da presente invenção são mostrados em publicações de Probiodrug Aktiengesellschaft (J. Biol. Chem. 2003 Dez 12;278(50):49773-9). Este trabalho descreve inibidores de glutaminil ciclase baseados em derivados de imidazol. No entanto, em estruturas de compostos publicadas pela companhia Probiodrug Aktiengesellschaft imidazol compreende um substituinte alifático por um de átomos de nitrogênio do ciclo imidazol. A introdução do substituinte alifático reduz a estabilidade metabólica dos compostos. Ainda, a introdução do substituinte alifático aumenta a hidrofobicidade dos compostos e facilita a penetração do composto através da barreira

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 32/97

8/65 sangue-cérebro, que é claramente desnecessário para suprimir a atividade aberrante de células do sistema imune e pode causar potencialmente efeitos colaterais.

[0014] Até o momento não existe nenhum fármaco agindo como o inibidor de glutaminil ciclase, que fosse usado na terapia de doenças relacionadas à atividade aberrante de células do sistema imune, desta maneira permanece uma necessidade do desenvolvimento e aplicação prática de novos fármacos eficazes baseados em inibidores de glutaminil ciclase.

[0015] A presente invenção refere-se ao uso de compostos químicos que são eficazes na supressão de glutaminil ciclase em tratamento de doenças das vias respiratórias e cavidade abdominal, doença de radiação e vários tipos de síndrome de dor, e também outras doenças associadas com a atividade aberrante de células do sistema imune. BREVE DESCRIÇÃO DO DESENHO [0016] Fig. 1 - O influxo de células inflamatórias no espaço broncoalveolar em estudo de atividade farmacológica específica do Composto 1 em modelo de asma aguda em porquinhos-da-índia (M±m, n=10).

SUMÁRIO DA INVENÇÃO [0017] É um objetivo da presente invenção prover novos medicamentos que sejam inibidores de glutaminil ciclase e sejam eficazes para tratamento de doenças associadas com atividade aberrante de células do sistema imune, especialmente doenças do pulmão, vias respiratórias e abdominais, doença de radiação e síndrome de dor, e também outras doenças associadas com atividade aberrante de células do sistema imune.

[0018] O resultado técnico da invenção é o desenvolvimento e obtenção de inibidores de glutaminil ciclase eficazes caracterizados por atividade inibidora alta que permitam o uso desses inibidores para tra

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 33/97

9/65 tamento de doenças relacionadas com a atividade aberrante de células do sistema imune, em particular doenças do pulmão e vias respiratórias, tais como asma brônquica, bronquite aguda e crônica, faringite, rinite (particularmente rinite alérgica), rinossinusite, doença pulmonar obstrutiva crônica e suas manifestações (particularmente enfisema pulmonar, obstrução brônquica); doenças de órgãos abdominais tais como doença de Crohn, colite ulcerativa, peritonites e nefropatia (particularmente nefropatia diabética); doença de radiação e síndrome de dor, e também outras doenças associadas com atividade aberrante de células do sistema imunes, em particular com a quimiotaxia aberrante de células do imune.

[0019] O resultado técnico auxiliar indicado é atingido aplicando compostos de fórmula (A) hⁿ^ ^NH

N XX N N N

Η Η (A) em que

Ri é um grupo -C(O)-R2-C(O)- ou -R2-C(O)-, onde R₂ é um grupo -(CH₂)_n- opcionalmente substituído com uma ou mais C1-C6 alquilas, ou fenila, n é um número inteiro de a partir de 0 a 4.

[0020] Em que os compostos indicados de fórmula (A) são selecionados do grupo consistindo em qualquer um dos compostos l-X, e combinações dos mesmos

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 34/97

10/65

Η ou sais farmaceuticamente aceitáveis, hidratos e solvatos dos mesmos, como inibidores de glutaminil ciclase.

[0021] O resultado técnico indicado é também atingido pelo uso dos compostos de fórmula (A) selecionados de qualquer um dos compostos l-X ou sais farmaceuticamente aceitáveis, hidratos e solvatos dos mesmos para produção de uma composição farmacêutica para prevenção e/ou tratamento de um distúrbio associado com a atividade de glutaminil ciclase.

[0022] O resultado técnico indicado é também atingido pelo uso de qualquer um dos compostos l-X ou sais, hidratos e solvatos dos mesmos para produção de uma composição farmacêutica para a prevenção e/ou tratamento de um distúrbio associado com atividade aberrante de células do sistema imune, em particular com a quimiotaxia aberrante de células do sistema imune.

[0023] Ainda, a invenção provê composições farmacêuticas e para a prevenção e/ou tratamento de um distúrbio associado com a atividade de glutaminil ciclase e/ou atividade aberrante de células do sistema imune, em particular com a quimiotaxia aberrante de células do sistema imune, e distinguida pelo fato de compreender uma quantidade eficaz do composto de acordo com a invenção e pelo menos um adjuvante farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades da in

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 35/97

11/65 venção, o adjuvante é um veículo e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

[0024] A invenção inclui também um método para a prevenção e/ou tratamento de um distúrbio associado com a atividade de glutaminil ciclase no corpo compreendendo administração ao dito corpo de uma composição farmacêutica de acordo com a invenção. Tal distúrbio associado com a atividade de glutaminil ciclase é a doença associada com atividade aberrante de células do sistema imune, em particular com a quimiotaxia aberrante de células do sistema imune, particularmente doença do pulmão e vias respiratórias. Em certas modalidades não limitantes da invenção, a doença do pulmão e vias respiratórias é asma brônquica, bronquite aguda e crônica, faringite, enfisema pulmonar, rinite, rinossinusite ou doença pulmonar obstrutiva crônica. Em casos particulares de modalidade da invenção, o corpo é um humano ou animal.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO [0025] Preparação de Compostos l-X, bem como vários de outros compostos químicos, é descrita no pedido da invenção RU 2013/116822. O pedido de patente indicado revela derivados bisamida do ácido dicarboxílico que têm a habilidade de complexação ou quelação de íons de metal, e também ao uso dos mesmos como um agente para prevenção e/ou tratamento de hepatite viral, infecção por HIV, câncer; doenças neurodegenerativas, cardiovasculares, inflamatórias; diabetes, doença gerontológica, doenças causadas por toxinas de micro-organ ismos e também alcoolismo, cirrose alcoólica, anemia, porfiria tarda, envenenamentos por sais de metal de transição.

[0026] No curso dos estudos da atividade farmacológica específica de Composto de fórmula (A), os autores da presente invenção constataram surpreendentemente que então é mostrado que Compostos de fórmula (A) afetam a quimiotaxia de células do sistema imune. A dimi

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 36/97

12/65 nuição no influxo de células do sistema imune pode ser usada no tratamento de várias doenças associadas com a atividade aberrante de células de células do sistema imune, em particular doenças do pulmão e vias respiratórias tais como asma brônquica, bronquite aguda e crônica, faringite, rinite (em particular rinite alérgica), rinossinusite, doença pulmonar obstrutiva crônica, doença pulmonar e suas manifestações (em particular enfisema pulmonar, obstrução brônquica); e também doenças do órgão abdominal tais como doença de Crohn, colite ulcerativa, peritonites e nefropatia (particularmente nefropatia diabética); e doença de radiação.

[0027] Uma vez que a influência sobre a quimiotaxia não pode ser prevista ou explicada pela habilidade do composto para a complexação ou quelação de íons de metal, foi feita uma tentativa de pesquisar por alvos terapêuticos potenciais. Na fonte de estudos, os autores da presente invenção constataram que o efeito terapêutico observado de compostos de fórmula (A) está associado com a habilidade desses compostos em inibir a atividade de glutaminil ciclase. Na fonte dos estudos que seguem, a habilidade em inibir a atividade de glutaminil ciclase foi também mostrada para compostos III, IV, V, VI, VII, VIII, IX e X.

[0028] Desta maneira, os Compostos l-X são inibidores de glutaminil ciclase novos que têm a influência sobre quimiotaxia de células do sistema imune e podem ser usados para a terapia de doenças associadas com atividade aberrante de células de células do sistema imune, em particular doenças do pulmão e vias respiratórias tais como asma brônquica, bronquite aguda e crônica, faringite, rinite (em particular rinite alérgica), rinossinusite, doença pulmonar obstrutiva crônica e suas manifestações (em particular, enfisema pulmonar, obstrução crônica); e também doenças do órgão abdominal tais como doença de Crohn, colite ulcerativa, peritonites e nefropatia (particularmente nefro

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 37/97

13/65 patia diabética); e também doença de radiação e síndrome de dor.

Termos e Definições [0029] O termo «Composto I» refere-se a /V,/V-bis[2-(1H-imidazol4-il)etil]oxalamida correspondendo à fórmula estrutural que segue:

[0030] O termo «Composto II» refere-se à N,N-bis[2-(1 H-imidazol-4-il)etil] isoftalamida correspondendo à fórmula estrutural que segue.

[0031] O termo «Composto III» refere-se a N,N-bis[2-(1 H-imidazol-4-il)etil] carbamida que é também representada pela fórmula es-

[0032] O termo «Composto IV» refere-se a N,N-bis[2-(1 H-imidazol-4-il)etil] malonamida que é também representada pela fórmula estrutural:

[0033] O termo «Composto V» refere-se a N,N-bis[2-(1 H-imidazol-4-il)etil]succinamida que é também representada pela fórmula estrutural:

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 38/97

14/65

[0034] O termo «Composto VI» refere-se à N,N-bis[2-(1 H-imidazol-4-il)etil] glutaramida correspondendo à fórmula estrutural que segue:

[0035] O termo «Composto VII» refere-se à N,N-bis[2-(1 H-imidazol-4-il)etil] adipamida correspondendo à fórmula estrutural que segue:

[0036] O termo «Composto VIII» refere-se a N,N-bis[2-(1 H-imidazol-4-il)etil]-3-metilpentanodiamida correspondendo à fórmula estrutural que segue:

[0037] O termo «Composto IX» refere-se a N,N-bis[2-(1 H-imidazol-4-il)etil]-3,3-dimetilpentanodiamida correspondendo à fórmula estrutural:

[0038] O termo «Composto X» refere-se a N,N-bis[2-(1 H-imidazol-4-il)etil] tereftalamida correspondendo à fórmula estrutural que segue:

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 39/97

15/65

[0039] O termo C quando ele é usado com referência a uma temperatura significa o grau de temperatura centígrado ou a escala de temperatura Celsius.

[0040] O termo ICso significa a concentração de composto de teste na qual a inibição metade da máxima da enzima é atingida.

[0041] O termo sais farmaceuticamente aceitáveis ou sais inclui sais de compostos ativos que são preparados com ácidos relativamente não tóxicos. Exemplos de sais não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis incluem sais formados por ácidos inorgânicos tais como ácidos clorídrico, bromídrico, fosfórico, sulfúrico e perclórico ou por ácidos orgânicos tais como ácidos acético, oxálico, maleico, tartárico, succínico, cítrico ou malônico ou obtidos através de outros métodos usados na técnica, por exemplo, através da troca de íon. Outros sais farmaceuticamente aceitáveis incluem adipato, alginato, ascorbato, aspartato, benzenossulfonato, benzoato, bissulfato, borato, butirato, canforato, canfossulfonato, citrato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodeciIsulfato, etanossulfonato, formiato, fumarato, glucoeptonato, glicerofosfato, gluconato, hemissulfato, heptanoato, hexanato, hidroiodeto, 2hidróxi-etanossulfonato, lactobionato, lactato, laurato, lauril sulfato, malato, maleato, malonato, metanossulfonato (mesilato), 2-naftalenossulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, pectinate, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, picrate, pivalate, propionato, hemifumarato, estearato, succinate, sulfate, tartrate, tiocianato, p-toluenossulfonato (tosilato), undecanoato, valeriato e similar.

[0042] O termo solvato é usado para descrever um complexo

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 40/97

16/65 molecular compreendendo o composto de acordo com a invenção e uma ou mais moléculas de um solvente farmaceuticamente aceitável, por exemplo, etanol. O termo hidrato é usado quando o dito solvente é água.

[0043] O termo atividade aberrante de células do sistema imune aqui significa a atividade que difere significantemente do nível de atividade básico de células do sistema imune no corpo na ausência de patologia. A atividade aberrante pode ser causada pelo influxo em excesso de células do sistema imune para o órgão ou tecido, a anormalidade de processos resultando na ativação de células do sistema imune, a desregulagem de processos associados com a morte de células do sistema imune, bem como por outros fatores.

[0044] O termo adjuvante significa qualquer substância farmaceuticamente aceitável de uma origem inorgânica ou orgânica que é a parte de um medicamento ou é usada no processo da produção, da fabricação do medicamento para prover as propriedades físicas e químicas necessárias ao mesmo.

[0045] O termo meio RPMI (meio do Engl. Roswell Park Memorial Institute) significa um meio para culturas de célula e tecido. RPMI é tradicionalmente usado para o cultivo de células linfoides humanas. O meio contém uma quantidade substancial de fosfato e tem a formulação para o cultivo na atmosfera contendo dióxido de carbono 5%.

[0046] O termo glutaminil ciclase significa a enzima - aminoaciltransferase participando na conversão de glutamina N-terminal em piroglutamina em substratos de peptídeo diferentes. A formação do piroglutamato N-terminal protege peptídeos biologicamente ativos, hormônios e quimiocinas (por exemplo, hormônio de liberação de tireotrofina, ligante-2 de β-quimiocina) da degradação por exopeptidases e em alguns casos pode aumentar a afinidade de ligantes aos seus receptores.

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 41/97

17/65 [0047] O termo quimiotaxia significa o movimento direcionado de células em resposta a um estímulo químico. No coração da quimiotaxia está a habilidade de uma célula em responder ao gradiente de concentração de um mediador quimiotático. A quimiotaxia é o processo devido ao qual células do sistema imune deixam a corrente sanguínea e migram para o tecido danificado. Substâncias quimiotáticas (quimioatratores) desempenham o papel principal na quimiotaxia. Um dos quimioatratores mais potentes para monócitos e macrófagos é uma quimiocina CCL2.

[0048] Os termos tratamento e terapia compreendem o tratamento de condições patológicas em mamíferos, preferivelmente um humano, e incluem: a) diminuição, b) bloqueio (retardo) de uma doença, c) alívio da severidade da doença, isto é, a indução da regressão da doença, d) reversão da doença ou condição à qual o termo se aplica ou um ou mais sintomas da doença ou condição.

[0049] O termo profilaxia ou prevenção compreende a eliminação de fatores de risco, bem como o tratamento profilático de estágios subclínicos de uma doença em mamíferos, preferivelmente em um humano, direcionado à redução da probabilidade do início de estágios clínicos da doença. Os pacientes são selecionados para a terapia preventiva com base em fatores que, com base em dados conhecidos, implicam no risco aumentado do início de estágios clínicos da doença comparado com a população geral. A terapia profilática pode ser a) a prevenção primária e b) a prevenção secundária. A profilaxia primária é definida como o tratamento profilático para pacientes, nos quais o estágio clínico da doença não ocorreu ainda. A profilaxia secundária é a prevenção da recorrência do mesmo estágio clínico ou similar da doença.

[0050] Os Compostos l-X são perspectivas para tratamento de doenças associadas com atividade aberrante de células do sistema imu

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 42/97

18/65 ne, especialmente doenças relacionadas com quimiotaxia aberrante de células do sistema imune, em particular para o tratamento de doenças do pulmão ou vias respiratórias tais como asma brônquica, bronquite aguda e crônica, faringite, rinite (em particular rinite alérgica), rinossinusite, doença pulmonar obstrutiva crônica, e suas manifestações (em particular enfisema pulmonar, obstrução brônquica); doenças de órgão abdominal tais como doença de Crohn, colite ulcerativa, peritonites e nefropatia (particularmente nefropatia diabética); doença de radiação e síndrome de dor tendo ambos o caráter sistêmico e o local, incluindo provida por mudanças patológicas primárias ou associadas com doenças diferentes ou ingestão longa de alguns medicamentos. Em algumas modalidades particulares, compostos de acordo com a invenção podem ser usados para o tratamento de outras doenças associadas com atividade aberrante de células do sistema imune.

Método para uso terapêutico dos compostos [0051] A matéria-objeto da invenção também inclui administração a um indivíduo com necessidade de tratamento apropriado de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais compostos de acordo com a invenção. A quantidade terapeuticamente eficaz significa tal quantidade de um ou mais compostos que é administrada a um paciente, em que o paciente é mais provável manifestar a resposta desejada a tratamento (profilaxia). A quantidade exata requerida pode variar de indivíduo para indivíduo, dependendo da idade, peso corporal e condição geral do paciente, severidade da doença, métodos de administração, o tratamento de combinação com outros fármacos, etc.

[0052] Os compostos de acordo com a invenção ou uma composição farmacêutica compreendendo um ou mais compostos podem ser administrados ao paciente em qualquer quantidade (preferivelmente, uma dose diária do ingrediente ativo é até 0,5 g para um paciente por dia, sobretudo preferivelmente, uma dose diária é 0-50 mg/dia) e atra

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 43/97

19/65 vés de qualquer modo de administração (preferivelmente, o modo de administração oral) eficaz para tratar ou prevenir a doença.

[0053] Após mistura de um medicamento com um veículo farmaceuticamente adequado particular em uma dosagem desejada, composições representando a essência da invenção podem ser administradas a um humano ou outros animais oralmente, parenteralmente, topicamente, etc.

[0054] A administração pode ser realizada ambos uma vez e várias vezes por dia, uma semana (ou qualquer outro intervalo de tempo) ou de tempos em tempos. Ainda, um ou mais compostos podem ser administrados ao paciente diariamente durante um período de dias particular (por exemplo, 2-10 dias), seguido por um período sem recebimento da substância (por exemplo, 1-30 dias).

[0055] No caso onde o composto de acordo com a invenção é usado como a parte de um regime da terapia de combinação, a dose de cada componente da terapia de combinação é administrada por um período de tratamento requerido. Compostos constituindo a terapia de combinação podem ser administrados a um paciente ambos de uma vez na forma de dosagem, contendo todos os componentes e na forma de dosagens individuais dos componentes.

Composições farmacêuticas [0056] A invenção refere-se também a composições farmacêuticas compreendendo um composto de fórmula (A), em particular compostos l-X (ou uma forma de profármaco ou outro derivado farmaceuticamente aceitável) e um ou mais veículos, adjuvantes, diluentes e/ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis, de modo que sejam administradas ao paciente junto com o composto representando a essência da invenção e que não afetem a atividade farmacológica do composto, e sejam não tóxicas quando administradas em doses suficientes para administração de uma quantidade terapêutica do composto.

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 44/97

20/65 [0057] As composições farmacêuticas reivindicadas de acordo com a presente invenção compreendem um ou mais compostos de fórmula (A) junto com veículos farmaceuticamente aceitáveis que podem incluir quaisquer solventes, diluentes, dispersões ou suspensões, tensoativos, agentes isotônicos, espessantes e emulsificantes, conservantes, ligantes, lubrificantes, etc., adequados para a forma de dosagem particular. Materiais que podem servir como veículos farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não estão limitados a, mono- e oligossacarídeos e seus derivados; gelatina; talco; excipientes tais como manteiga de cacau e ceras de supositório; óleos tais como óleo de amendoim, semente de algodão, açafrão, sésamo, oliva, milho e soja; glicóis tais como propileno glicol; ésteres tais como oleato de etila e laurato de etila; agentes de tamponamento tais como hidróxido de magnésio e hidróxido de alumínio; ácido algínico; água livre de pirógeno; solução isotônica, solução de Ringer; álcool de etila e soluções tampão de fosfato. A composição pode também compreender outros lubrificantes compatíveis não tóxicos tais como lauril sulfato de sódio e estearato de magnésio, e também corantes, formadores de película, adoçantes, agentes de saborização e perfume, conservantes e antioxidantes.

[0058] O objeto da invenção são também formas de dosagem uma classe de composições farmacêuticas, cuja formulação é otimizada para um modo particular da administração ao corpo em uma dose terapeuticamente eficaz, por exemplo, para administração oral, tópica, ou a administração por inalação, por exemplo, na forma de spray inalante, ou através de método intravascular, intranasalmente, subcutaneamente, intramuscularmente, bem como através de método de infusão, nas dosagens recomendadas.

[0059] As formas de dosagem da invenção podem compreender formulações obtidas através de métodos do uso de lipossomas, técniPetição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 45/97

21/65 cas de microencapsulação, métodos para a preparação de nanoformas do medicamento e outros métodos conhecidos nos fármacos.

[0060] Quando da preparação da composição, por exemplo na forma de um comprimido, um princípio ativo é misturado com um ou mais excipientes farmacêuticos tais como gelatina, amido, lactose, estearato de magnésio, talco, silica, goma arábica, manitol, celulose microcristalina, hipromelose ou similar.

[0061] Os comprimidos podem ser revestidos com sacarose, um derivado de celulose ou com outras substâncias adequadas para aplicação de um revestimento. Os comprimidos podem ser preparados através de vários métodos tais como compressão direta, granulação a seco ou a úmido ou fusão a quente no estado quente.

[0062] Uma composição farmacêutica na forma de uma cápsula de gelatina pode ser preparada misturando o princípio ativo com outras substâncias e enchendo cápsulas macias ou sólidas com a mistura obtida.

[0063] Para a administração parenteral, suspensões aquosas, soluções salinas isotônicas ou soluções estéreis para injeção, que contêm agentes farmacologicamente compatíveis, por exemplo, propileno glicol ou butileno glicol, são usadas.

Exemplos de composições farmacêuticas [0064] Os compostos de fórmula (A) descritos na invenção podem ser usados para a prevenção e/ou tratamento de doenças humanas ou doenças animais na forma das composições que seguem (Composto de fórmula (A) significa a Substância):

Comprimido I mg/comprimido

Substância0,5

Celulose microcristalina66,5

Carboximetil amido de sódio2,3

Estearato de magnésio0,7

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 46/97

22/65

Comprimido II mg/comprimido

Substância5,0

Celulose microcristalina62,0

Carboximetil amido de sódio2,3

Estearato de magnésio0,7

Comprimido III mg/comprimido

Substância50

Celulose microcristalina620

Carboximetil amido de sódio23

Estearato de magnésio7

Comprimido IV mg/comprimido

Substância50

Lactose Ph. Eur..............................223,75

Croscarmelose de sódio6,0

Amido de milho15

Polivinil pirrolidona (5% v. pasta)....2,25

Estearato de magnésio3,0

Comprimido V mg/comprimido

Substância200

Lactose Ph. Eur..............................182,75

Croscarmelose de sódio12,0

Amido de milho (5% v. pasta)2,25

Estearato de magnésio3,0

Cápsula mg/cápsula

Substância10

Lactose Ph. Eur488,5

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 47/97

23/65

Magnésia........................................1.5

Formulação para injeções I (50 mg/ml)

Substância......................................5,0% p/v

Solução 1M de hidróxido de sódio .15,0% p/v

Solução 1M de ácido sulfúrico .......até pH 7,6

Polietileno glicol 400.......................4,5% p/v

Água para injeções ........................até 100%

Unguento ml

Substância......................................40 mg

Etanol..............................................300 μΙ

Água................................................300 μΙ

1-dodecilazacicloeptanona.............50 μΙ

Propileno glicol...............................até 1 ml [0065] Essas composições podem ser preparadas de acordo com técnicas farmacêuticas padrão. Os comprimidos (I) - (II) podem ser revestidos pelo revestimento entérico usando, por exemplo, ftalato de acetato de celulose.

Uso de Compostos l-X em terapia de combinação [0066] Apesar do fato dos Compostos l-X poderem ser administrados como um agente farmacêutico ativo individual, eles podem ser também usados em combinação com um ou mais outros agentes, em particular o outro agente pode ser um antibiótico, NSAIDs ou outro agente anti-inflamatório, agente anti-hipertensivo, glucocorticosteroide, um anticorpo monoclonal, etc. Em caso da ingestão da combinação, os agentes terapêuticos podem representar formas de dosagem diferentes que são administradas simultaneamente ou sequencialmente em momentos diferentes, ou os agentes terapêuticos podem ser combinados em uma forma de dosagem.

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 48/97

24/65 [0067] A expressão terapia de combinação com relação aos compostos da invenção em combinação com outros agentes farmacêuticos é ingestão sequencial ou simultânea de todos os agentes que de alguma maneira proveem o efeito benéfico da combinação de fármacos. A administração combinada significa, em particular, a administração combinada, por exemplo, em um comprimido, cápsula, injeção ou na outra forma tendo uma razão fixa de substâncias ativas, bem como a administração simultânea em várias formas de dosagem separadas para cada composto, respectivamente.

[0068] Desta maneira, a administração de compostos l-X da invenção pode ser realizada junto com terapias adicionais conhecidas do versado no campo da prevenção e tratamento de doenças correspondentes, incluindo o uso de fármacos antibacterianos, citostáticos e citotóxicos, medicamentos para inibição de sintomas ou efeitos colaterais de um medicamento.

[0069] Se o medicamento for uma dose fixa, tal combinação usa os compostos da invenção em uma faixa de dosagem adequada. Os Compostos l-X de acordo com a invenção podem também ser administrados ao paciente sequencialmente com outros agentes, no caso em que a combinação desses medicamentos não é possível. A invenção não é limitada à sequência de administração; os compostos da invenção podem ser administrados ao paciente junto, antes ou após a administração de um outro medicamento.

Exemplos

Obtenção de compostos de acordo com a invenção [0070] Métodos de produção de Compostos l-X são revelados no pedido de invenção RU 2013/116822. A habilidade de compostos similares de complexação ou quelação de íons de metal é descrita no mesmo pedido.

Características da atividade biológica de compostos de acordo

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 49/97

25/65 com a invenção [0071] A atividade biológica dos Compostos l-X foi estudada em experimentos in vitro e in vivo diferentes. Em particular, o estudo da atividade dos Compostos I e II em vários modelos in vitro e in vivo mostrou um efeito inibidor dos Compostos I e II sobre a quimiotaxia de monócitos, macrófagos e outras células do sistema imune. O efeito biológico dos Compostos I e II não pode ser previsto ou explicado com base no conhecimento anterior sobre a habilidade dos Compostos I e II da quelação de íons de metal.

[0072] Estudos da atividade biológica dos Compostos IIl-X in vitro revelaram que os Compostos IIl-X são também inibidores da enzima glutaminil ciclase e então o efeito dos Compostos IIl-X sobre a quimiotaxia de células do sistema imune pode ser mediado pela inibição da atividade de glutaminil ciclase.

Estudo do efeito de Compostos l-X sobre a atividade enzimática de glutaminil ciclase humana in vitro [0073] Durante estudos do efeito dos Compostos l-X, que são o objeto da presente invenção, sobre a atividade enzimática de glutaminil ciclase in vitro, o efeito inibidor direto dos Compostos l-X sobre glutaminil ciclase humana intracelular primeiro foi verificado.

[0074] A atividade de glutaminil ciclase em várias concentrações dos Compostos l-X foi estudada a 25° C com o uso de um substrato fluorescente L-glutaminil 2-naftil amida (Gln-bNA) (Anal Biochem. 2002 Abr 1 ;303(1 ):49-56). A mistura de reação tendo um volume de 100 μΙ contém 50 μΜ de substrato fluorgênico; ~0,2 unidade de piroglutaminil aminopeptidase (1 unidade é definida como uma quantidade hidrolisando 1 micromol de pGlu-bNA por minuto), e uma alíquota da glutaminil ciclase humana intracelular recombinante (gQC) em trisaminometano-HCI 50 mM e glicerol 5%, um pH é 8,0. A reação foi iniciada adicionando à mistura de reação uma alíquota de glutaminil ciclase incu

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 50/97

26/65 bada com Compostos l-X por 5 minutos.

Tabela 1

O efeito dos compostos l-X sobre a atividade enzimática de glutaminil ciclase humana in vitro.

Ne	Composto	IC50, μΜ	Ki, μΜ
1	//^l ⁰ ^υ --N	1,4	0,8
II	8 í Ϊ-Ά iQj	2,9	1,61
III	Η Η Η H	3,5	2
IV	çuoa* Η Η Η H	6,3	3,50
V	,N--1 0 ^{H H} T T) ⁰	20	11
VI	fí--NH 0 0 HN--\ n \ II II / Y \_N/\_N/ \z Η H	5,4	3
VII	N^, 0 (Ί 1 Η H ^{H H} T Y> ⁰	4,4	2
VIII	<K 11 1 B Η H	7,3	4
IX	/7—‘NH 0 _v , 0 Η H	5,7	3,17
X	^L“ HM M; J NH	0,8	0,44

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 51/97

27/65 [0075] O curso adicional da reação foi monitorado espectrofotometricamente (os comprimentos de onda da excitação e emissão foram 320 e 410 nM). A atividade de enzima foi determinada por uma quantidade da 2-naftil amida liberada (bNA), calculada a partir da curva de calibragem. Os valores de ICso foram calculados usando regressão não linear de curva de concentração inibidora - atividade enzimática. Como uma substância de referência, o inibidor conhecido de glutaminil ciclase - composto PBD150 - foi usado (J. Med. Chem. 2006 Jan 26;49(2):664-77).

[0076] Como o resultado do estudo, foi estabelecido que os Compostos l-X inibem a atividade de glutaminil ciclase variando de 0,8 a 20 μΜ (vide Tabela 1).

Estudo do efeito de Compostos I e II sobre a migração de monócitos in vitro [0077] O efeito dos Compostos I e II sobre a migração de monócitos in vitro foi estudado com o uso de células de linhagem U937 reproduzidas para a concentração de (2-3)x10⁶ células/ml no meio RPMI 1640 com a adição de soro bovino fetal termoinativado 10% (Biochem J. 2012 Mar 1 ;442(2):403-12). Cerca de 1x10⁷ células U937 foram incubadas com concentrações diferentes de Compostos I e II (concentrações para cada um dos compostos em absoluto) a 37° C por 2 horas e então foram tratadas com lipopolissacarídeo E. coli (O111:B4). Um sobrenadante (o meio condicionado) foi usado para estudo da migração de monócitos.

[0078] Uma batelada fresca de células U937 foi colorida pelo corante fluorescente Calcein AM por 1 hora a 7° C. Depois disso, a alíquota das células coloridas foi posta na seção superior de orifícios de BD FalconTM HTS FluoroBlock de mesa plana, cujas células são separadas através de membranas semipermeáveis opticamente opacas. O meio condicionado obtido após a incubação de células com o inicia

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 52/97

28/65 dor e lipopolissacarídeo foi posto na seção inferior de orifícios da mesa plana. As mesas planas foram incubadas por 2 horas a 37° C, uma quantidade (% em relação ao estudo sem o inibidor) de células que migrou para a seção inferior de orifícios foi fluorimetricamente determinada. Como uma substância de referência, o inibidor conhecido de glutaminil ciclase - composto PBD150 - foi usado (J. Med. Chem. 2006 Jan 26;49(2):664-77).

[0079] Foi estabelecido como o resultado do experimento que o Composto I e o Composto II na faixa micromolar de concentrações tem o efeito inibidor sobre a migração de monócitos in vitro. O Composto I inibe a migração de monócitos em uma ampla faixa de concentrações de a partir de 1 μΜ a 300 μΜ com a eficácia próximo de 60%. Na mesma faixa de concentrações, o Composto II inibe a migração de monócitos com a eficácia de 50-70%.

Estudo do efeito de Composto I sobre a quimiotaxia de leucócitos in vivo no modelo de asma brônquica em porquinhos-da-índia [0080] A indução de asma brônquica em porquinhos-da-índia foi realizada de acordo com o procedimento padrão (Current Drug Targets. 2008 Jun; 9(6):452-65). Os animais foram imunizados através de uma injeção intraperitoneal única de 0,5 ml de solução contendo 100 pg/ml de ovalbumina (Sigma) e 100 mg/ml de hidroxialumínio. Os animais intactos foram injetados intraperitonealmente com uma solução salina em um volume de 0,5 ml.

[0081] Nos dias 29, 30 e 31 do experimento, a provocação de hiper-reatividade de tratos respiratórios foi realizada através da administração por inalação de ovalbumina em concentrações crescentes - 0,1, 0,3 e 0,5 mg/mL (nos dias 29, 30 e 31, respectivamente). A inalação foi realizada por 5 minutos ou até o aparecimento de sinais aparentes de asfixia (incidência de efeitos colaterais). No 32° dia de estudo, os animais foram administrados com uma dose provocadora de ovalbu

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 53/97

29/65 mina - 1 mg/ml por 5 minutos com estimação de reação broncoespástica.

[0082] O composto de teste foi administrado intragastricamente a animais diariamente uma vez por dia por 10 dias, terminando antes de 24 horas antes da administração da dose de provocação de um antígeno.

[0083] 24 horas após a administração da dose de provocação de ovalbumina, lavagem broncoalveolar (BAL) foi coletada dos animais. A obtenção de BAL foi realizada sob anestesia através da lavagem dos pulmões com 5 ml de solução salina preaquecida 37° C através da traqueia usando um aplicador de seringa.

[0084] No fluido de lavagem broncoalveolar, a contagem absoluta de elementos celulares em 1 pl da lavagem foi calculada usando a câmera de Goryaev. Então, a lavagem broncoalveolar foi centrifugada a 200 g por 10 minutos. Esfregaços foram preparados a partir do sedimento de célula, esfregaços que foram fixados mais em metanol e tingidos por Romanowsky-Giemsa para contagem de citograma endopulmonar.

[0085] A análise citológica da lavagem broncoalveolar (BAL) revelou o aumento múltiplo em elementos celulares no BAL de porquinhosda-índia sensibilizados (Figura 1). Desta maneira, o modelo é caracterizado pela resposta inflamatória das vias respiratórias de animais experimentais. A análise de tipos de célula individuais mostrou que o influxo mais pronunciado de células é para eosinófilos. Os resultados obtidos confirmam dados da literatura e permitem concluir que a inflamação simulada é alérgica.

[0086] A administração intragástrica diária do Composto I por 10 dias reduziu o influxo de células inflamatórias no espaço broncoalveolar. O Composto I tem um efeito terapêutico através da faixa de dose sob estudo (0,14-14 mg/kg), reduziu ambos o número total de leucóci

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 54/97

30/65 tos e a quantidade de tipos de célula individuais: eosinófilos, neutrófilos, macrófagos (Figura 1).

[0087] Desta maneira, na Figura 1, um símbolo * designa distinções que são estatisticamente significantes comparado com o grupo intacto (p <0,05); e um símbolo & - distinções que são estatisticamente significantes comparado com o grupo controle (p <0,05).

[0088] Os resultados obtidos indicam que o Composto I tem o efeito terapêutico expresso sobre asma brônquica.

Estudo do efeito do Composto I sobre a quimiotaxia de macrófagos, neutrófilos e eosinófilos in vivo em um modelo de rato de inflamação pulmonar não infecciosa [0089] O modelo de rato de bronquite pulmonar induzida por sephadex foi realizado através do procedimento padrão (Int. Arch. Allergy Immunol. 2011; 154(4):286-94). Ratos Wistar machos foram administrados isoladamente através de inalação com Sephadex G-200 (Pharmacia, Suécia) em uma dose de 5 mg/kg. Os compostos de teste foram intragastricamente administrados aos animais quatro vezes: 24 horas e 1 hora antes da e 24 e 45 horas após a administração de sephadex. O medicamento de referência budenosida foi administrado da mesma maneira através de inalação em uma dose de 0,5 mg/kg. Após 48 horas da inalação com sephadex, a obtenção da lavagem broncoalveolar foi realizada. Na lavagem o número total de leucócitos foi avaliado e fórmula leucocítica foi determinada.

[0090] A análise da lavagem broncoalveolar mostrou que a administração inalada única de Sephadex G-200 a ratos causa o influxo acentuado de leucócitos no pulmão. A quantidade de todos os tipos de célula foi aumentada no grupo controle comparado com os grupos intactos (Tabela 2).

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 55/97

31/65

Tabela 2

Quantidade de elementos celulares na lavagem broncoalveolar no modelo de bronquite induzida por sephadex em ratos (M±m, n=10)

Grupo	Quantidade de elementos celulares em 1 pl da BAL
Leucócitos	Neutrófilos	Eosinófilos	Macrófagos	Linfócitos
Intacto	22091348	270154	010	19751346	010
Controle	46171582*	9891135*	248165*	32091397*	010
Composto 1 (0,18 mg/kg)	38331525*	283175 &	010 &	31271351*	010
Composto I (1,8 mg/kg)	41331454*	8461101*	010 &	32871381*	010

Notas:

* - a distinção do grupo intacto de acordo com o teste t de Student em p <0,05;

& - a distinção do grupo controle de acordo com o teste t de Student em p <0,05.

[0091] A administração intragástrica do Composto I a ratos reduziu o teor de neutrófilos e eosinófilos na BAL para o nível de animais intactos. Os resultados obtidos indicam que o Composto I tem um efeito terapêutico em caso da inflamação das vias respiratórias inferiores, em particular bronquite.

Estudo da atividade do Composto I no modelo de pneumonia não infecciosa induzida por extrato de fumaça de cigarro [0092] A indução de pneumonia não infecciosa em camundongos foi realizada de acordo com o procedimento padrão [Exp. Lung Res. 2013 Fen;39(1): 18-31], Camundongos machos Balb/c foram administrados intraperitonealmente com extrato de fumaça de cigarro (CSE, 0,45 ml/20 mg) nos dias 0, 11°, 15°, 17°, 19°e 22°. O CSE foi preparado como segue: 5 cigarros foram queimados, usando uma bomba de vácuo, a fumaça foi filtrada para remover partículas e coletada em um recipiente contendo um tampão de solução salina de fosfato. O Composto I foi administrado intragastricamente, diariamente, uma vez por dia a partir do 7° dia até o 27° dia. Eutanásia foi realizada no 28° dia. O

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 56/97

32/65 lobo do pulmão direito foi fixado em 10% de solução de formalina neutra, passado pelos álcoois de concentrações crescentes para xileno e incrustrado em parafina através de procedimentos padrão. Cortes de 5 microns desparafinados foram tingidos com hematoxilina-eosina e a análise histológica foi realizada.

[0093] Cada lesão foi avaliada de acordo com uma escala de 5 pontos: 1 ponto - o infiltrado inflamatório ocupa 0-20% da área da preparação histológica sob estudo, 2 pontos - o infiltrado inflamatório ocupa 21-40% da área da preparação histológica sob estudo, 3 pontos - o infiltrado inflamatório ocupa 41-60% da área da preparação histológica sob estudo, 4 pontos - o infiltrado inflamatório ocupa 61-80% da área da preparação histológica sob estudo, 5 pontos - o infiltrado inflamatório ocupa 81-100% da área da preparação histológica sob estudo. índice de destruição alveolar (Dl) como a porcentagem dos alvéolos danificados com relação ao número total de alvéolos foi também calculado.

[0094] Os resultados do estudo mostraram que administração intraperitoneal múltipla do extrato de fumaça de cigarro a camundongos induz formação de perivasculite, peribronquite, alveolite e pneumonia intersticial (Tabela 3).

[0095] A administração intragástrica do Composto I reduziu significantemente o desenvolvimento de perivasculite, peribronquite, alveolite e pneumonia intersticial (Tabela 3). Os resultados obtidos tornam possível concluir que o Composto I terá o efeito terapêutico em caso de perivasculite e alveolite.

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 57/97

33/67

Tabela 3

Resultados do estudo histológico no modelo de pneumonia não infecciosa induzida por extr (M±m, n=12)

Grupo	Uma dose de composto, mg/kg	Perivasculite, pontos	Peribronquite, pontos	Alveolite (Dl, %)
Intacto	-	0,71±0,20	0,51±0,19	11,50±1,20
Controle	-	1,50±0,24*	1,29±0,18	30,90±2,30*
Composto 1	0,3	0,38±0,13&	1,09±0,24	17,70±2,00*&

Notas:

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 58/97

34/65

Estudo da atividade de Composto I in vivo em um modelo de camundonqo de enfisema pulmonar [0096] A inflamação e o enfisema pulmonar causados por uma injeção endotraqueal única de elastase pancreática de porco. A elastase foi endotraquealmente administrada uma vez em uma dose de 0,6 U/camundongo em 30 μΙ de NaCI 0,9%. Pentobarbital foi usado intraperitonealmente para a anestesia durante a operação em uma dose de 30 mg/kg. O sítio operativo foi tratado com 70% de solução de etanol e teve cobertura de pelo retirada.

[0097] Através de linha média do pescoço, a pele, o subcutâneo e a própria fáscia do pescoço foram dissecados. Os músculos foram afastados através de um método de tecido de dissecação cega no lado ventral da traqueia.

[0098] A injeção de elastase pancreática de porco foi realizada usando uma seringa Hamilton ao longo do fluxo de vento durante a inalação. Após o fechamento da ferida o sítio operatório foi tratado com antisséptico. A administração de elastase foi considerada como dia 0 do experimento.

[0099] O Composto I foi intragastricamente administrado em uma dose de 0,3 mg/kg uma vez por dia nos dias 8°-21° do experimento. No dia 21° os animais foram eutanizados em uma câmara de CO2 e os pulmões foram separados. Para avaliar a dinâmica e a severidade de enfisema no tecido de pulmão do pulmão esquerdo, espécimes histológicos foram feitos. Para fazer isso, 0 pulmão foi fixado em solução 10% de formalina neutra e então incrustrado em parafina de acordo com 0 procedimento padrão. Espécimes do ápice pulmonar, campo pulmonar médio e campo pulmonar inferior tendo uma espessura de 5 microns foram obtidos a partir de cortes desparafinizados e tingidos com hematoxilina e eosina através do procedimento padrão. Em seguida as fotos do ápice pulmonar, dos campos pulmonares médio e

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 59/97

35/65 inferior foram feitas. Usando ferramentas de processamento gráfico de computador, a localização e a área do tecido pulmonar enfisematoso estendida (% de tecido normal) foram estudadas, os vasos e brônquios foram excluídos do cálculo (Int. J. Biomed. Imaging. 2012;2012: 734734; Front Physiol. 2015 Maio 12;6:14).

[00100] No exame histológico no 21° dia após a administração de elastase em todas as áreas do pulmão de camundongos, a hiperemia moderadamente acentuada de vasos de canal microcircular e capilares de septos interalveolares foi revelada. Ainda, elastase resultou em espessamento de paredes alveolares devido à infiltração de linfomacrófago e também a infiltração inflamatória do tecido intersticial. O lúmen de alvéolos individuais é também cheio com macrófagos e linfócitos. Como um resultado do efeito do agente de dano sobre fibras elásticas de bronquíolos, dutos alveolares e alvéolos no parênquima pulmonar, a distensão alveolar e rompimentos de septos alveolares foram observados, o enfisema difuso foi desenvolvido. A análise dos espécimes mostrou que no 21° dia de experimento, uma porção significante do tecido pulmonar esquerdo estava tomada com alvéolos enfisematosos estendidos com a destruição de septos interalveolares. O enfisema estava localizado em todos os campos pulmonares. As lesões mais acentuadas foram observadas no campo pulmonar inferior (Tabela 4).

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Uso de compostos caracterizado pelo fato de apresentar a fórmula geral (A):

Η Η (A) em que

Ri é grupo -C(O)-R2-C(O)- ou -R2-C(O)-, onde R2 é grupo (Chkjn- opcionalmente substituído com uma ou duas C1-C6 alquilas, ou fenila, n é um número inteiro de a partir de 0 a 4;

em que os compostos são selecionados do grupo consistindo em compostos de fórmula

ou sais farmaceuticamente aceitáveis, hidratos ou solvatos dos mesmos como um inibidor de glutaminil ciclase.
2. Uso de compostos como descrito na reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser para a prevenção e/ou tratamento de um distúrbio associado com a atividade de glutaminil ciclase.

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 20/97

2/4
3. Uso de compostos como descrito na reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser para a prevenção e/ou tratamento de um distúrbio associado com atividade aberrante de células do sistema imune.
4. Uso do composto, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de ser para a prevenção e/ou tratamento de um distúrbio associado com quimiotaxia aberrante de células do sistema imune.
5. Composição farmacêutica para a prevenção e/ou tratamento de um distúrbio associado com a atividade de glutaminil ciclase e/ou atividade aberrante de células do sistema imune caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto como descrito na reivindicação 1 e pelo menos um veículo e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
6. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que o distúrbio associado com a atividade de glutaminil ciclase e/ou atividade aberrante de células do sistema imune é uma doença selecionada de doenças do pulmão, das vias respiratórias e abdominais, doença de radiação e/ou síndrome de dor.
7. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que o distúrbio associado com a atividade de glutaminil ciclase e/ou atividade aberrante de células do sistema imune é asma brônquica, bronquite aguda ou crônica, faringite, enfisema pulmonar, rinite, rinossinusite, doença pulmonar obstrutiva crônica ou lesão pulmonar aguda.
8. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que o distúrbio associado com a atividade de glutaminil ciclase e/ou atividade aberrante de células do sistema imune é febre.

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 21/97

3/4
9. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que o distúrbio associado com a atividade de glutaminil ciclase e/ou atividade aberrante de células do sistema imune é dermatite atópica.
10. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que o distúrbio associado com a atividade de glutaminil ciclase e/ou atividade aberrante de células do sistema imune são doenças autoimunes, em particular psoríase, doença de Crohn e colite ulcerativa.
11. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que o distúrbio associado com a atividade de glutaminil ciclase e/ou atividade aberrante de células do sistema imune são distúrbios metabólicos, em particular obesidade, síndrome metabólica e doença hepática gordurosa não alcoólica, nefropatia (em particular nefropatia diabética).
12. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que o distúrbio associado com a atividade de glutaminil ciclase e/ou atividade aberrante de células do sistema imune é peritonite.
13. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 11, caracterizada pelo fato de que compreende ainda o outro agente ativo.
14. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de que o outro agente ativo é selecionado do grupo compreendendo agentes antibacterianos, citostáticos e citotóxicos, agentes inibindo os sintomas de efeitos colaterais de agentes ativos e uma combinação dos mesmos.
15. Método de tratamento de uma doença mediada pela atividade de glutaminil ciclase caracterizado pelo fato de que compreende administrar a um indivíduo com necessidade de tratamento uma

Petição 870190056398, de 18/06/2019, pág. 22/97

4/4 quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (A)

em que

Ri é grupo -C(O)-R2-C(O)- ou -R2-C(O)-, onde R₂ é grupo (CH₂)_n- opcionalmente substituído com uma ou duas Ci-Ce alquilas, ou fenila, n é um número inteiro de a partir de 0 a 4;

em que os compostos são selecionados do grupo consis tindo em compostos de fórmula

ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou solvato do mesmo.