CN110087650B - 新的谷氨酰胺酰基环化酶抑制剂及其在治疗多种疾病中的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及有机物质化学、药理学和医学，并且涉及通过使用式(A)化合物治疗与免疫系统细胞的异常活性相关的疾病，更具体地用于治疗肺、呼吸道和腹部疾病、辐射病、疼痛综合征以及其他疾病，其中，R1是‑C(O)‑R2‑C(O)‑或‑R2‑C(O)‑基团，其中R2是任选地被一个或两个C1‑C6烷基或苯基取代的‑(CH2)n‑基团，并且n是0至4的整数；其中化合物选自如说明书中列出的化合物。这些化合物及其可药用盐在抑制谷氨酰胺酰基环化酶方面非常有效，谷氨酰胺酰基环化酶特别参与趋化因子的翻译后修饰以及单核细胞、巨噬细胞和免疫系统的其他细胞的趋化性。本发明还涉及包含治疗有效量的如上定义的式(A)化合物的药物组合物。

Description

新的谷氨酰胺酰基环化酶抑制剂及其在治疗多种疾病中的 用途
技术领域
本发明涉及有机化合物的化学、药理学和医学，并且涉及治疗与免疫系统细胞的异常活性相关的疾病，特别是治疗肺、呼吸道和腹部疾病。本发明还涉及通过使用有效抑制酶谷氨酰胺酰基环化酶的化合物来治疗辐射病和疼痛综合征以及其他疾病，谷氨酰胺酰基环化酶特别涉及趋化因子的翻译后修饰和免疫系统细胞的趋化性。
背景技术
免疫系统细胞通过一些内源和外源物质(化学引诱物)的浓度梯度的趋化性或定向运动是免疫系统的功能细胞的主要成分之一。免疫系统细胞的过度流入通常导致免疫系统细胞的过度活性和周围器官和组织的损伤。在分子水平上理解与趋化性过程相关的参与者和过程可以产生治疗和预防与免疫系统细胞的异常活性相关的许多疾病的新的有效方法。
CCL家族的趋化因子(CCL2、CCL7、CCL8、CCL13)是CCR2受体的配体，是哺乳动物中单核细胞和巨噬细胞的趋化性的最有效因子(Biochem J.2012年3月1日；442(2)：403-12)。CCL家族的趋化因子是激活嗜中性粒细胞和单核细胞所需的重要细胞因子类别，并且吸引这些细胞参与到炎性部位中。然而，高浓度的趋化因子通常导致免疫系统细胞的过度流入。免疫系统细胞的异常活性可能导致周围器官和组织的严重损伤。例如，在某些情况下，脂质氧化产物可能活化血管内皮细胞(内膜)，其导致CCL2的分离，巨噬细胞的参与，其继而分泌炎性标志物，引起动脉壁的损伤和动脉粥样硬化的发生(Mol Cell.1998年8月；2(2)：275-81；Nature.1998年8月27日；394(6696)：894-7)。在辐射诱导的呼吸道组织损伤的情况下可以观察到类似的致病图：肺和呼吸道的上皮细胞的损伤和活化导致CCL2的分离，其继而导致免疫细胞和循环肿瘤细胞外渗到肺和呼吸道中(Antioxid Redox Signal.2018年4月2日.doi：10.1089/ars.2017.7458)。
CCL家族的趋化因子在由CCR2+、CD14+和CD161o单核细胞的异常活性介导的多种自身免疫和变应性病症(类风湿性关节炎、多发性硬化)的病理生理学中的作用是已知的。此外，CCL家族的趋化因子(特别是CCL2)参与肥胖、代谢综合征、慢性疼痛、纤维化、非酒精性脂肪性肝病和一些形式的癌症的发病机制。
通过抑制CCL介导的趋化性来抑制免疫系统细胞的异常活性对治疗一系列疾病例如急性肺损伤、支气管哮喘、支气管炎、慢性阻塞性肺病、克罗恩病、糖尿病肾病等可能有很大需求。
例如，在糖尿病肾病的情况下，高浓度葡萄糖的影响导致由肾小管细胞分泌的CCL2的提高，其继而导致单核细胞的迁移(Kidney Int.2006年1月；69(1)：73-80)。肾组织中单核细胞浓度的提高及其成熟为巨噬细胞导致与大量趋化因子和损伤周围肾细胞的活性氧形式的分离相关的异常应答的发生(Mediators Inflamm.2012；2012：146154)。肾组织的损伤导致免疫系统细胞的异常活性的发生和维持以及肾组织的进一步破坏，而通过低分子拮抗剂阻断CCL2/CCR2的相互作用降低了病理强度(Nephrol Dial Transplant.2013年7月；28(7)：1700-10)。类似过程是非酒精性脂肪性肝病的发病机制的特征：肝细胞中脂肪酸的积累导致NF-κB信号通路的激活和诱导抗炎性细胞因子(例如IL-6和CCL2)释放的炎性反应的发生。抗炎性细胞因子的释放导致单核细胞迁移至炎症部位，以及与大量趋化因子和损伤周围细胞的活性氧形式的分离相关的异常应答的发生(Int J Exp Pathol.2013年6月；94(3)：217-225)。
CCL家族的成员(CCL2、CCL7、CCL8、CCL13)、分形趋化因子以及一系列其他激素和分泌蛋白含有焦谷氨酸残基(pE)，其作用是保护免于被氨肽酶降解(Chem Immunol.1999；72：42-56；Biochemistry.1999年10月5日；38(40)：13013-25)。N-末端残基的焦谷氨酸化由酶谷氨酰胺酰基环化酶(QPCT或QC)催化(J Biol Chem.2003年12月12日；278(50)：49773-9；J Mol Biol.2008年6月20日；379(5)：966-80)。谷氨酰胺酰基环化酶具有广泛的底物特异性，并参与一系列肽分子的翻译后修饰。已经在谷氨酰胺酰基环化酶的底物特异性的研究中显示，无论多肽链长度如何，酶都可以催化不同底物的焦谷氨酸化(FEBS Lett.2004年4月9日；563(1-3)：191-6，J Biol Chem.2011年4月8日；286(14)：12439-49)。
在实验研究中已经显示，谷氨酰胺酰基环化酶的抑制导致非焦谷氨酸形式的CCL2、CCL7、CCL8和CCL13趋化因子(Biochem.J.(2012)442，403-412)和分形趋化因子(Biosci Rep.2017年8月23日；37(4))的化学引诱物活性的急剧降低。因此，显然谷氨酰胺酰基环化酶抑制剂可用于多种疾病的治疗，特别是肺和呼吸道疾病，例如支气管哮喘、急性和慢性支气管炎、咽炎、肺气肿、鼻炎、鼻窦炎和慢性阻塞性肺病。这些疾病的发病机制与过度的细胞因子产生相关，特别是单核细胞趋化引诱物蛋白CCL2和CCL7(Am J Respir CellMol Biol.2014年1月；50(1)：144-57)和分形趋化因子(Expert Opin Ther Targets.2010年2月；14(2)：207-19)，其为谷氨酰胺酰基环化酶底物(Biosci Rep.2017年8月23日；37(4).pii：BSR20170712；EMBO Mol Med.2011年9月；3(9)：545-58)。已经显示，使用抗体中和CCL2和CCL7显著地降低白细胞、单核细胞和嗜中性粒细胞向实验动物的呼吸道的流入(AmJ Respir Cell Mol Biol.2014年1月；50(1)：144-57)。
细菌脂多糖、脂磷壁酸或其他刺激物对呼吸器官系统的黏膜的影响导致由支气管平滑肌细胞分泌CCL2的提高(Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol.2012年4月15日；302(8)：L785-92)和支气管肺泡灌洗液中CCL2浓度的增长(Mol Immunol.2011年7月；48(12-13)：1468-76)。CCL2浓度的提高继而导致嗜酸性粒细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞的迁移以及与更多量趋化因子(TNFα、IL-1、IL-6、IL-4)和损伤支气管和呼吸器官周围细胞的活性氧形式的分离相关的异常应答的发生(Immunobiology.2016年2月；221(2)：182-7；Int JBiol Sci.2012；8(9)：1281-90；Mol Immunol.2013年11月；56(1-2)：57-63)。支气管的损伤导致免疫系统细胞的异常活性的发生和维持以及呼吸器官组织的进一步破坏。根据变应性哮喘的体内模型，通过低分子量拮抗剂阻断CCL2/CCR2的相互作用已显示出显著的效力(Int Arch Allergy Immunol.2015；166(1)：52-62)。
值得注意的是，CCL2介导的嗜中性粒细胞炎症的发生和与致热细胞因子(IL-1、TNFα、IL-6)的释放相关的异常应答的发生导致体温的提高和发热的发生(J InfectDis.1999年3月；179Suppl 2：S294-304；Front Biosci.2004年5月1日；9：1433-49.)。
除了发热和体温升高之外，疼痛综合征也是多种疾病的极为常见的症状。显然，与提高数目的损害周围组织的活性氧形式的释放相关的异常应答的强度的降低本身应当导致疼痛综合征的强度降低。然而，在最近的研究中，已显示出分形趋化因子在慢性疼痛的发病机制中的关键作用(JNeurochem.2017年5月；141(4)：520-531)。
谷氨酰胺酰基环化酶抑制剂可用于治疗多种自身免疫病，特别是类风湿性关节炎和银屑病。分形趋化因子是参与自身免疫病发生的关键促炎介质之一。分形趋化因子与其独特受体(CX3CR1)之间的相互作用诱导细胞黏附、趋化性和细胞存活(Mol Interv.2010年10月；10(5)：263-70)。在患有类风湿性关节炎(PA)(Mod Rheumatol.2017年5月；27(3)：392-397)和银屑病(Ann Clin Lab Sci.2015秋季；45(5)：556-61)的患者中分形趋化因子水平提高，并且与疾病的活性相关。分形趋化因子在患有类风湿性关节炎的患者滑膜组织中的成纤维细胞样滑膜细胞和内皮细胞上表达。在银屑病的情况下，在真皮乳头和抗原呈递细胞中观察到高水平的分形趋化因子产生(Br J Dermatol.2001年6月；144(6)：1105-13)。分形趋化因子的表达通过肿瘤-α坏死因子和干扰素-γ来增强，并且在类风湿性关节炎的情况下促进单核细胞、T细胞和破骨细胞前体向滑膜组织的迁移(ModRheumatol.2017年5月；27(3)：392-397)。真皮乳头中分形趋化因子的表达提高可能解释了在银屑病的情况下T细胞在这些部位的迁移和累积(Br J Dermatol.2001年6月；144(6)：1105-13)。分形趋化因子还诱导由巨噬细胞、T细胞和成纤维细胞样滑膜细胞形成炎性介质。此外，分形趋化因子促进血管生成和破骨细胞生成。在胶原蛋白诱导的关节炎模型中，抗分形趋化因子抗体的使用允许显著地减轻病理过程(Mod Rheumatol.2017年5月；27(3)：392-397)。
基于最近的研究结果，可以断定CCL介导的趋化性的抑制是治疗辐射病的新的有前景的治疗方法(Antioxid Redox Signal.2018年4月2日.doi：10.1089/ars.2017.7458，Int J Radiat Biol.2015年6月；91(6)：510-8)。已在动物模型中显示，由于CCL介导的信号通路的抑制，可以有效地降低血管的辐射诱导的功能障碍的强度。使用敲除了CCL2受体基因的动物以及在使用所述受体的拮抗剂的情况下，阻止了辐射诱导的形态学改变和内皮细胞的破坏，并防止了紧接辐射之后的呼吸道炎症的发生(Antioxid Redox Signal.2018年4月2日.doi：10.1089/ars.2017.7458)。此外，CCL介导的信号通路的抑制允许显著地降低辐射诱导的肺纤维化的强度，辐射诱导的肺纤维化是辐射的主要“延迟”副作用之一。
因此，基于文献数据，可以得出结论，针对抑制谷氨酰胺酰基环化酶的策略是治疗自身免疫病、肥胖、肺、呼吸道和腹腔疾病、辐射病以及疼痛综合征的可能方法。
目前已知的谷氨酰胺酰基环化酶抑制剂包括硫脂(WO 2017/046256)、黄酮类衍生物(Bioorg Med Chem.2016年5月15日；24(10)：2280-6)、吡啶衍生物(US 2015/0291632)和描述于最近研究中的一些小分子(J Med Chem.2017年3月23日；60(6)：2573-2590；WO2014/193974、US 2015/0291557)。作为本发明目标的化合物的最接近的类似物示出在Probiodrug Aktiengesellschaft的出版物中(J Biol Chem.2003年12月12日；278(50)：49773-9)。该研究描述了基于咪唑衍生物的谷氨酰胺酰基环化酶抑制剂。然而，在由Probiodrug Aktiengesellschaft公司公开的化合物的结构中，咪唑包含通过咪唑环的一个氮原子的脂族取代基。脂族取代基的引入降低了化合物的代谢稳定性。此外，脂族取代基的引入提高了化合物的疏水性并促进了化合物通过血脑屏障的渗透，这对于抑制免疫系统细胞的异常活性显然是不需要的并且可能潜在地引起副作用。
迄今为止，没有可用于治疗与免疫系统细胞的异常活性相关的疾病之作为谷氨酰胺酰基环化酶抑制剂的药物，因此仍然需要基于谷氨酰胺酰基环化酶抑制剂的新的有效药物的开发和实际应用。
本发明涉及有效抑制谷氨酰胺酰基环化酶的化合物在治疗呼吸道和腹腔疾病、辐射病和多种疼痛综合征，以及与免疫系统细胞的异常活性相关的其他疾病中的用途。
附图说明
图1-在豚鼠(M±m，n＝10)中的急性哮喘模型上研究化合物1的具体药理活性中支气管肺泡空间内炎性细胞的流入。
发明内容
本发明的一个目的是提供新的药物，其是谷氨酰胺酰基环化酶抑制剂，并且有效治疗与免疫系统细胞的异常活性相关的疾病，特别是肺、呼吸道和腹部疾病、辐射病和疼痛综合征，以及与免疫系统细胞的异常活性相关的其他疾病。
本发明的技术结果是开发和获得了特征在于高抑制活性的有效谷氨酰胺酰基环化酶抑制剂，其允许使用这些抑制剂来治疗与免疫系统细胞的异常活性相关的疾病，特别是肺和呼吸道疾病，例如支气管哮喘、急性和慢性支气管炎、咽炎、鼻炎(特别是变应性鼻炎)、鼻窦炎、慢性阻塞性肺病及其表现(特别是肺气肿、支气管阻塞)；腹部器官疾病，例如克罗恩病、溃疡性结肠炎、腹膜炎和肾病(特别是糖尿病肾病)；辐射病和疼痛综合征，以及与免疫系统细胞的异常活性，特别是与免疫细胞的异常趋化性相关的其他疾病。
通过施加式(A)化合物或其可药用盐、水合物、溶剂合物作为谷氨酰胺酰基环化酶抑制剂实现了指定的辅助技术结果
其中
R1是-C(O)-R2-C(O)-或-R2-C(O)-基团，其中R2是任选地被一个或更多个C1-C6烷基或苯基取代的-(CH2)n-基团，
n是0至4的整数；
其中式(A)指定的化合物选自化合物I至X的任一种及其组合
还通过使用选自化合物I至X任一种的式(A)化合物或其可药用盐、水合物、溶剂合物生产用于预防和/或治疗与谷氨酰胺酰基环化酶活性相关的病症的药物组合物实现了指定的技术结果。
还通过使用化合物I至X中的任一种或其盐、水合物、溶剂合物生产用于预防和/或治疗与免疫系统细胞的异常活性，特别是与免疫系统细胞的异常趋化性相关的疾病的药物组合物实现了指定的技术结果。
此外，本发明提供了用于预防和/或治疗与谷氨酰胺酰基环化酶的活性和/或免疫系统细胞的异常活性，特别是与免疫系统细胞的异常趋化性相关的病症的药物组合物，其特征在于其包含有效量的根据本发明的化合物和至少一种可药用辅料。在本发明的一些实施方案中，辅料是可药用载体和/或赋形剂。
本发明也包括用于预防和/或治疗与身体内谷氨酰胺酰基环化酶的活性相关的病症的方法，其包括向所述身体施用根据本发明的药物组合物。这种与谷氨酰胺酰基环化酶的活性相关的病症是与免疫系统细胞的异常活性，特别是与免疫系统细胞的异常趋化性相关的疾病，特别是肺和呼吸道疾病。在本发明的某些非限制性实施方案中，肺和呼吸道疾病是支气管哮喘、急性和慢性支气管炎、咽炎、肺气肿、鼻炎、鼻窦炎或慢性阻塞性肺病。在本发明实施方案的特定情况下，身体是人或动物。
发明详述
化合物I至X以及多种其他化学化合物的获得描述于发明申请RU 2013/116822中。所述专利申请公开了具有与金属离子络合或螯合的能力的二羧酸双酰胺衍生物，以及其作为用于预防和/或治疗病毒性肝炎、HIV感染、癌症；神经退行性疾病、心血管疾病、炎性疾病；糖尿病、老年疾病、由微生物毒素引起的疾病、以及酒精中毒、酒精性肝硬化、贫血、迟发性卟啉病、由过渡金属盐引起的中毒之药剂的用途。
在研究式(A)化合物的具体药理活性的过程中，本发明的作者惊奇地发现式(A)化合物影响免疫系统细胞的趋化性。免疫系统细胞的流入的减少可用于治疗与免疫系统细胞的细胞异常活性相关的许多疾病，特别是肺和呼吸道疾病，例如支气管哮喘、急性和慢性支气管炎、咽炎、鼻炎(特别是变应性鼻炎)、鼻窦炎、慢性阻塞性肺病及其表现(特别是肺气肿、支气管阻塞)；以及腹部器官疾病，例如克罗恩病、溃疡性结肠炎、腹膜炎和肾病(特别是糖尿病肾病)；和辐射病。
由于对趋化性的影响不能通过化合物对金属离子的络合或螯合的能力来预测或解释，因此试图寻找潜在的治疗靶点。在研究的来源中，本发明的作者已发现，观察到的式(A)化合物的治疗作用与这些化合物抑制谷氨酰胺酰基环化酶的活性的能力相关。在以下研究的来源中，还显示了化合物III、IV、V、VI、VII、VIII、IX和X抑制谷氨酰胺酰基环化酶的活性的能力。
因此，化合物I至X是新的谷氨酰胺酰基环化酶抑制剂，其对免疫系统细胞的趋化性具有影响，并且可用于治疗与免疫系统细胞的细胞异常活性相关的疾病，特别是肺和呼吸道疾病，例如支气管哮喘、急性和慢性支气管炎、咽炎、鼻炎(特别是变应性鼻炎)、鼻窦炎、慢性阻塞性肺病及其表现(特别是肺气肿、支气管阻塞)；以及腹部器官疾病，例如克罗恩病、溃疡性结肠炎、腹膜炎和肾病(特别是糖尿病肾病)；以及辐射病和疼痛综合征。
术语和定义
术语“化合物I”涉及N，N′-双[2-(1H-咪唑-4-基)乙基]草酰胺，其对应于以下结构式：
术语“化合物II”涉及N，N′-双[2-(1H-咪唑-4-基)乙基]间苯二甲酰胺，其对应于以下结构式：
术语“化合物III”涉及N，N′-双[2-(1H-咪唑-4-基)乙基]碳酰胺，其也由以下结构式表示：
术语“化合物IV”涉及N，N′-双[2-(1H-咪唑-4-基)乙基]丙二酰胺，其也由以下结构式表示：
术语“化合物V”涉及N，N′-双[2-(1H-咪唑-4-基)乙基]琥珀酰胺，其也由以下结构式表示：
术语“化合物VI”涉及N，N′-双[2-(1H-咪唑-4-基)乙基]戊二酰亚胺，其对应于以下结构式：
术语“化合物VII”涉及N，N′-双[2-(1H-咪唑-4-基)乙基]己二酰胺，其其对应于以下结构式：
术语“化合物VIII”涉及N，N′-双[2-(1H-咪唑-4-基)乙基]-3-甲基戊二酰胺，其对应于以下结构式：
术语“化合物IX”涉及N，N′-双[2-(1H-咪唑-4-基)乙基]-3，3-二甲基戊二酰胺，其对应于以下结构式：
术语“化合物X”涉及N，N′-双[2-(1H-咪唑-4-基)乙基]-对苯二甲酰胺，其对应于以下结构式：
术语“C”当参考温度使用时，意指摄氏温度等级或摄氏温标。
术语“IC50”意指实现酶的半数最大抑制的测试化合物的浓度。
术语“可药用盐”或“盐”包括用相对无毒的酸制备的活性化合物的盐。可药用无毒盐的实例包括通过无机酸例如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸或通过有机酸例如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、琥珀酸、柠檬酸或丙二酸形成的，或通过本领域中使用的其他方法，例如通过离子交换获得的盐。其他可药用盐包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙烷磺酸盐、乳糖醛酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲基磺酸盐(甲磺酸盐)、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、半富马酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐(甲苯磺酸盐)、十一烷酸盐、戊酸盐等。
术语“溶剂合物”用于描述包含根据本发明的化合物和一个或更多个分子的可药用溶剂(例如乙醇)的分子复合物。当所述溶剂是水时，使用术语“水合物”。
本文中免疫系统细胞的术语“异常活性”意指显著不同于没有病理时体内免疫系统细胞的基本活性水平的活性。异常活性可由免疫系统细胞向器官或组织的过度流入、导致免疫系统细胞活化的过程的异常、与免疫系统细胞的死亡相关的过程的失调、以及由其他因素引起。
术语“辅料”意指无机或有机来源的任何可药用物质，其是药物的部分或用于药物的生产、制造过程以赋予其必要的物理和化学性质。
术语“RPMI培养基”(Engl.Roswell Park Memorial Institute培养基)意指用于细胞和组织培养的培养基。RPMI传统上用于人淋巴样细胞的培养。该培养基包含大量的磷酸盐，并具有用于在包含5％二氧化碳的气氛中培养的制剂。
术语“谷氨酰胺酰基环化酶”意指参与在不同肽底物中将N-末端谷氨酰胺转化为焦谷氨酰胺的酶氨酰基转移酶。N-末端焦谷氨酸的形成保护生物活性肽、激素和趋化因子(例如，促甲状腺激素释放激素、β-趋化因子配体-2)免于被外肽酶的降解，并且在一些情况下可提高配体对其受体的亲和力。
术语“趋化性”意指细胞响应于化学刺激的定向运动。在趋化性的核心，细胞有能力响应于趋化介质的浓度梯度。趋化性是由于其免疫系统细胞离开血流并迁移至损伤组织的过程。趋化性物质(化学引诱物)在趋化性中起主导作用。单核细胞和巨噬细胞最有效的化学引诱物之一是趋化因子CCL2。
术语“治疗”包括哺乳动物(优选人)中病理病症的治疗，包括：a)降低，b)阻止(延缓)疾病，c)减轻疾病的严重性，即诱导疾病的消退，d)逆转使用该术语的疾病或病症，或疾病或病症的一种或更多种症状。
术语“预防”包括危险因素的消除，以及哺乳动物(优选人)中疾病的亚临床阶段的预防性治疗，涉及降低疾病的临床阶段开始的可能性。基于以下因素选择患者进行预防性治疗：基于已知数据，与一般人群相比，所述因素导致疾病临床阶段开始的风险提高。预防性治疗可以是a)一级预防和b)二级预防。一级预防定义为对患者的预防性治疗，其中尚未发生疾病的临床阶段。二级预防是预防疾病的相同或相似临床阶段的再次发生。
化合物I至X有望用于治疗与免疫系统细胞的异常活性相关的疾病，特别是与免疫系统细胞的异常趋化性相关的疾病，特别是用于治疗肺和呼吸道疾病，例如支气管哮喘、急性和慢性支气管炎、咽炎、鼻炎(特别是变应性鼻炎)、鼻窦炎、慢性阻塞性肺病及其表现(特别是肺气肿、支气管阻塞)；腹部器官疾病，例如克罗恩病、溃疡性结肠炎、腹膜炎和肾病(特别是糖尿病肾病)；具有全身性和局部特征二者的辐射病和疼痛综合征，包括由主要病理变化或与不同疾病相关或一些药物的长期摄入所提供。在一些具体的实施方案中，根据本发明的化合物可用于与免疫系统细胞的异常活性相关的其他疾病的治疗。
化合物的治疗性用途的方法
本发明的主题还包括向需要适当治疗的对象施用治疗有效量的一种或更多种根据本发明的化合物。治疗有效量意指施用或递送至患者的一种或更多种化合物的这样的量，其中患者最可能表现出对治疗(预防)所期望的响应。所需量的确切量可能因对象不同而变化，取决于患者的年龄、体重和一般状况、疾病的严重性、施用方法、与其他药物的组合治疗等。
根据本发明的化合物或包含一种或更多种化合物的药物组合物可以以有效治疗或预防疾病的任何量(优选地，活性成分的每日剂量对于患者每日高至0.5g，最优选地，每日剂量为5至50mg/天)并且通过任何施用方式(优选经口的施用方式)施用于患者。
在将药物与特定的合适的可药用载体以所需剂量混合之后，代表本发明的实质的组合物可以经口、胃肠外、局部等施用至人或其他动物。
施用可以每天、每周(或任何其他时间间隔)一次和数次，或不时进行。此外，可以在特定的数天时期(例如2至10天)每天向患者施用一种或更多种化合物，接着是不接受该物质的时期(例如1至30天)。
在根据本发明的化合物用作组合治疗方案的一部分的情况下，施用组合治疗的每种组分的剂量期望的治疗时期。构成组合治疗的化合物可以以包含所有组分的剂型或者以组分的单独剂量形式一次施用至患者。
药物组合物
本发明还涉及药物组合物，其包含式(A)化合物，特别是化合物I至X(或前药形式或其他可药用衍生物)和一种或更多种可药用载体、辅料、稀释剂和/或赋形剂，例如可以与代表本发明的实质的化合物一起施用至患者并且不影响化合物的药理活性，并且当以足以递送治疗量的化合物的剂量施用时是无毒的。
根据本发明要求保护的药物组合物包含一种或更多种式(A)化合物以及可药用载体，所述可药用载体可包括适合于特定的剂型的任何溶剂、稀释剂、分散剂或混悬剂、表面活性剂、等张剂、增稠剂和乳化剂、防腐剂、黏合剂、润滑剂等。可用作可药用载体的材料包括但不限于单糖和寡糖及其衍生物；明胶；滑石；赋形剂，例如可可脂和栓剂蜡；油，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，例如丙二醇；酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无热原水；等张溶液、林格液；乙醇和磷酸盐缓冲溶液。所述组合物还可包含其他无毒相容的润滑剂，例如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁，以及染料、成膜剂、甜味剂、调味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂。
本发明的目的还在于剂型-一类药物组合物，其制剂被优化以用于将治疗有效剂量以特定方式施用于身体，例如用于经口、局部施用或通过吸入施用(例如以吸入喷雾的形式)或通过血管内方法、鼻内、皮下、肌肉内以及通过灌注方法以推荐的剂量施用。
本发明的剂型可包括通过使用脂质体的方法、微囊化技术、制备纳米形式药物的方法或制药学中已知的其他方法获得的制剂。
在制备例如片剂形式的组合物时，将活性成分与一种或更多种药用赋形剂例如明胶、淀粉、乳糖、硬脂酸镁、滑石、二氧化硅、阿拉伯胶、甘露醇、微晶纤维素、羟丙甲纤维素等混合。
片剂可以用蔗糖、纤维素衍生物或用适合于施加包衣的其他物质来进行包衣。片剂可以通过多种方法制备，例如直接压片、干法或湿法制粒或在热状态下热熔合。
明胶胶囊剂形式的药物组合物可以通过将活性成分与其他物质混合，并用所获得的混合物填充软或固体胶囊来制备。
对于胃肠外施用，使用包含药理相容的试剂(例如丙二醇或丁二醇)的水性混悬剂、等张盐水溶液剂或注射用无菌溶液剂。
药物组合物的实例
本发明中描述的式(A)化合物可以以下组合物的形式用于预防和/或治疗人疾病或动物疾病(式(A)化合物意在在“物质”项下)：
片剂I mg/片剂
物质.........................0.5
微晶纤维素...................66.5
羧甲基淀粉钠.................2.3
硬脂酸镁.....................0.7
片剂II mg/片剂
物质.........................5.0
微晶纤维素...................62.0
羧甲基淀粉钠.................2.3
硬脂酸镁.....................0.7
片剂III mg/片剂
物质.........................50
微晶纤维素...................620
羧甲基淀粉钠.................23
硬脂酸镁.....................7
片剂IV mg/片剂
物质.........................50
乳糖Ph.Eur...................223.75
交联羧甲基纤维素钠...........6.0
玉米淀粉.....................15
聚乙烯吡咯烷酮(5％v.糊剂)....2.25
硬脂酸镁.....................3.0
片剂V mg/片剂
物质.........................200
乳糖Ph.Eur...................182.75
交联羧甲基纤维素钠...........12.0
玉米淀粉(5％v.糊剂)..........2.25
硬脂酸镁.....................3.0
胶囊剂 mg/胶囊剂
物质.........................10
乳糖Ph.Eur...................488.5
氧化镁.......................1.5
注射用制剂I (50mg/ml)
物质.........................5.0％w/v
1M的氢氧化钠溶液.............15.0％w/v
1M的硫酸溶液.................至pH7.6
聚乙二醇400..................4.5％w/v
注射用水.....................至100％
软膏剂 ml
物质.........................40mg
乙醇.........................300μl
水..................... .....300μl
1-十二烷基氮杂环庚酮.........50μl
丙二醇.......................至1ml
这些组合物可根据标准制药技术制备。片剂(I)至(II)可以使用例如乙酸纤维素邻苯二甲酸酯通过肠溶性壳来包衣。
化合物I至X在组合治疗中的用途
尽管化合物I至X可以作为单独的活性药剂施用的事实，但其也可以与一种或更多种其他药剂组合使用，特别是，其他药剂可以是抗生素、NSAID或其他抗炎剂、抗高血压剂、糖皮质激素、单克隆抗体等。在组合摄入的情况下，治疗剂可以代表同时或在不同时间依次施用的不同剂型，或治疗剂可以在一种剂型中组合。
对于本发明的化合物与其他药剂的组合的短语“组合治疗”是依次或同时摄入所有药剂，其以某种方式提供药物组合的有益作用。组合施用特别意指，例如以具有固定比例的活性物质的一个片剂、胶囊剂、注射剂或其他形式组合递送，以及同时递送分别对于每种化合物的多个分开的剂型。
因此，本发明的化合物I至X的施用可以与相应疾病的预防和治疗领域的技术人员已知的另外的治疗，包括使用抗菌药、细胞抑制药物和细胞毒性药物、用于抑制症状或一种药物的副作用的药物一起进行。
如果药物是固定剂量，则这种组合使用合适剂量范围的本发明的化合物。在不可能组合这些药物的情况下，根据本发明的化合物I至X也可以与其他药剂依次施用于患者。本发明不限于施用的顺序；本发明的化合物可以与另一种药物一起、在其施用之前或之后施用于患者。
实施例
根据本发明的化合物的获得
生产化合物I至X的方法公开在发明申请RU2013/116822中。在同一申请中描述了类似的化合物络合或螯合金属离子的能力。
根据本发明的化合物的生物活性的特征
已在不同的体外和体内实验中研究了化合物I至X的生物活性。特别地，化合物I和化合物II在多种体外和体内模型中的活性研究已显示化合物I和化合物II对单核细胞、巨噬细胞和其他免疫系统细胞的趋化性的抑制作用。化合物I和化合物II的生物效应不能基于关于化合物I和化合物II与金属离子螯合的能力的已有的知识来预测或解释。
对体外化合物III至X的生物活性的研究揭示了化合物III至X也是酶谷氨酰胺酰基环化酶的抑制剂，并且因此化合物III至X对免疫系统细胞的趋化性的作用可能通过抑制谷氨酰胺酰基环化酶的活性介导。
化合物I至X对体外人谷氨酰胺酰基环化酶酶促活性的作用的研究。
在研究作为本发明目的的化合物I至X对体外谷氨酰胺酰基环化酶酶促活性的作用期间，首先发现了化合物I至X对重组细胞内人谷氨酰胺酰基环化酶的直接抑制作用。
已在25℃下使用荧光底物L-谷氨酰胺酰基2-萘基酰胺(Gln-bNA)(AnalBiochem.2002年4月1日；303(1)：49-56)研究了在多种浓度的化合物I至X下的谷氨酰胺酰基环化酶活性。体积为100μl的反应混合物含有50μM的荧光底物；～0.2单位的人焦谷氨酰氨基氨肽酶(1单位定义为每分钟水解1微摩尔pGlu-bNA的量)，以及50mM三氨基甲烷-HCl和5％甘油(pH为8.0)中的重组细胞内人谷氨酰胺酰基环化酶(gQC)的等分试样。通过向反应混合物添加与化合物I至X一起孵育5分钟的谷氨酰胺酰基环化酶的等分试样来引发反应。
表1
化合物I至X对体外人谷氨酰胺酰基环化酶酶促活性的作用。
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用分光光度法(激发和发射的波长为320和410nm)监测反应的进一步进程。通过从校准曲线计算的释放的2-萘基酰胺(bNA)的量确定酶活性。使用“抑制剂浓度”-“酶促活性”曲线的非线性回归计算IC50值。作为参照物质，已使用谷氨酰胺酰基环化酶的已知抑制剂化合物PBD150(J Med Chem.2006年1月26日；49(2)：664-77)。
作为该研究的结果，已确定0.8至20μM的化合物I至X抑制谷氨酰胺酰基环化酶的活性(参见表1)。
化合物I和化合物II对体外单核细胞迁移的作用的研究
使用在添加10％热灭活的胎牛血清的培养基RPMI1640上培养至浓度为(2-3)×106细胞/ml的细胞系U937，研究了化合物I和化合物II对体外单核细胞迁移的作用(Biochem J.2012年3月1日；442(2)：403-12)。将约1×107个U937细胞与不同浓度的化合物I和化合物II(每种化合物均7个浓度)在37℃下孵育2小时，并且然后用脂多糖大肠杆菌(O111：B4)处理。上清液(条件培养基)已用于研究单核细胞的迁移。
将新鲜批次的U937细胞通过荧光染料钙黄绿素AM在7℃下着色1小时。在此之后，将经着色细胞的等分试样放置于平板BD FalconTM HTS FluoroBlok的孔的上部部分，其细胞由光学不透明的半透膜隔开。将细胞与抑制剂和脂多糖一起孵育之后获得的条件培养基放置于平板的孔的底部部分。将平板在37℃下孵育2小时，通过荧光确定迁移至孔的底部部分的细胞的量(相对于没有抑制剂的研究的％)。作为参照物质，使用谷氨酰胺酰基环化酶的已知抑制剂-化合物PBD150(J Med Chem.2006年1月26日；49(2)：664-77)。
作为实验的结果已经确定微摩尔浓度范围的化合物I和化合物II对体外单核细胞的迁移具有抑制作用。化合物I在1μM至300μM的宽范围浓度下抑制单核细胞的迁移，效力接近60％。在相同浓度范围内，化合物II抑制单核细胞的迁移，效力为50％至70％。
化合物I在豚鼠中支气管哮喘模型中对体内白细胞的趋化性的作用的研究。
根据标准程序进行豚鼠中支气管哮喘的诱导(Current Drug Targets.2008年6月；9(6)：452-65)。通过含有100μg/ml卵清蛋白(Sigma)和100mg/ml羟基铝的0.5ml溶液的单次腹膜内注射对动物进行免疫接种。用体积为0.5ml的盐水溶液腹膜内注射完整动物。
在实验的第29、30和31天，通过以逐渐提高的浓度0.1、0.3和0.5mg/mL(分别在第29、30和31天)吸入施用卵清蛋白来进行呼吸道的高反应性的激发。将吸入进行5分钟或直至出现明显的窒息迹象(倒向一边)。在第32天，向动物施用攻击剂量的卵清蛋白1mg/ml持续5分钟，估计支气管痉挛反应。
每天一次每天将测试化合物胃内施用于动物，持续10天，在施用攻击剂量的抗原之前24小时之前完成。
施用攻击剂量的卵清蛋白之后24小时，从动物收集支气管肺泡灌洗液(BAL)。在麻醉下通过使用注射器分配器将预热至37℃的5ml盐水溶液经由气管洗肺进行BAL的取得。
在支气管肺泡灌洗液中，使用Goryaev摄像机计算1μl灌洗液中细胞要素的绝对计数。然后，将支气管肺泡灌洗液以200g离心10分钟。从细胞沉淀物制备涂片，将该涂片进一步固定在甲醇中并通过Romanowsky-Giemsa染色以计数肺内细胞图。
支气管肺泡灌洗液(BAL)的细胞学分析揭示了在致敏豚鼠的BAL中细胞要素的多次提高(图1)。因此，该模型的特征在于实验动物的呼吸道的炎性应答。对单个细胞类型的分析表明，最显著的细胞流入是向嗜酸性粒细胞。所获得的结果确认了文献数据并且允许得出模拟的炎症是变应性的结论。
每天胃内施用化合物I持续10天降低了支气管肺泡空间中的炎性细胞的流入。化合物I在整个研究剂量范围(0.14至14mg/kg)内具有治疗作用，降低了白细胞的总数目和个体细胞类型(嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞、巨噬细胞)的量(图1)。
因此，在图1中，符号*表示与完整组相比具有统计学显著性的差异(p＜0.05)；并且符号&表示与对照组相比具有统计学显著性的差异(p＜0.05)。
所获得的结果表明化合物I对支气管哮喘具有明显的治疗作用。
化合物I在非感染性肺炎大鼠模型中对体内巨噬细胞、嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞趋化性的作用的研究
通过标准程序实现了交联葡聚糖(sephadex)诱导的肺支气管炎大鼠模型(IntArch Allergy Immunol.2011；154(4)：286-94)。将交联葡聚糖G-200(Pharmacia，Sweden)以5mg/kg的剂量通过吸入单次施用于Wistar雄性大鼠。在施用交联葡聚糖之前24小时和1小时以及之后24和45小时，将测试化合物四次胃内施用于动物。将参照药物布地奈德以0.5mg/kg的剂量以相同的方式通过吸入施用。在吸入交联葡聚糖后48小时之后，进行支气管肺泡灌洗液的取得。在灌洗液中，评估白细胞的总数目并确定白细胞组成。
对支气管肺泡灌洗液的分析显示，将交联葡聚糖G-200单次吸入性施用于大鼠引起显著的白细胞流入肺中。与完整组相比，对照组中所有细胞类型的量均提高(表2)。
表2
在交联葡聚糖诱导的支气管炎大鼠模型中的支气管肺泡灌洗液中的细胞要素的量(M±m，n＝10)
将化合物I胃内施用于大鼠使BAL中的嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞的含量降低至完整动物的水平。所获得的结果表明化合物I在下呼吸道炎症，特别是支气管炎的情况下具有治疗作用。
化合物I在由香烟烟雾提取物诱导的非感染性肺炎模型中的活性研究
根据标准程序进行小鼠中非感染性肺炎的诱导[Exp Lung Res.2013年2月；39(1)：18-31]。在第0、第11、第15、第17、第19和第22天，向雄性Balb/c小鼠腹膜内施用香烟烟雾提取物(CSE，0.45ml/20mg)。如下制备CSE：使用真空泵燃烧5支香烟，过滤烟雾以除去颗粒并收集在含有磷酸盐盐水缓冲液的容器中。从第7天到第27天每天一次每天胃内施用化合物I。在第28天进行安乐死。将右肺叶固定在10％中性福尔马林溶液中，通过递增浓度的醇进入二甲苯，并通过标准程序包埋在石蜡中。用苏木精-伊红对经脱蜡的5微米切片进行染色，并进行组织学分析。
根据5分标尺评价每个病变：1分-炎性浸润占所研究组织学制备物的面积的0至20％，2分-炎性浸润占所研究组织学制备物的面积的21至40％，3分-炎性浸润占所研究组织学制备物的面积的41至60％，4分-炎性浸润占所研究组织学制备物的面积的61至80％，5分-炎性浸润占所研究组织学制备物的面积的81至100％。还计算了作为损伤肺泡相对于肺泡的总数目的百分比的肺泡破坏指数(DI)。
该研究的结果显示，将向小鼠多次腹膜内施用香烟烟雾提取物诱导了血管周炎、支气管周炎、肺泡炎和间质性肺炎的形成(表3)。
化合物I的胃内施用显著降低了血管周炎、支气管周炎、肺泡炎和间质性肺炎的发生(表3)。所获得的结果可以得出结论，化合物I在血管周炎和肺泡炎的情况下将具有治疗作用。
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化合物I在肺气肿小鼠模型中的体内活性研究
通过单次气管内注射猪胰弹性蛋白酶引起炎症和肺气肿。将弹性蛋白酶在30μlNaCl0.9％中以0.6U/小鼠的剂量气管内施用一次。在手术期间将戊巴比妥以30mg/kg的剂量腹膜内使用用于麻醉。手术部位用70％乙醇溶液处理，并剃除毛发覆盖物。通过颈部的中线，剥离颈部的皮肤、皮下组织和拥有的筋膜。在气管的腹侧通过钝性剥离组织方法将肌肉分开。在吸入期间沿着风流使用Hamilton注射器进行猪胰弹性蛋白酶的注射。伤口闭合之后，用防腐剂处理手术部位。弹性蛋白酶的施用被视为实验的第0天。
在实验的第8至第21天，每天一次每天以3mg/kg的剂量胃内施用化合物I。在第21天，将动物在CO2室中进行安乐死并分离肺。为了评价左肺肺组织中肺气肿的动态和严重性，制作了组织学试样。为此，根据标准程序将肺固定在10％中性福尔马林溶液中，并且然后包埋在石蜡中。从经脱蜡的切片获得厚度为5微米的肺尖、中肺野和下肺野的试样，并通过标准程序用苏木精和伊红进行染色。然后制作肺尖、中肺野和下肺野的照片。使用计算机图形处理工具，研究了扩展的肺气肿肺组织的定位和面积(正常组织％)，从计算中排除血管和支气管(Int J Biomed Imaging.2012；2012：734734；Front Physiol.2015年5月12日；6：14)。
在施用弹性蛋白酶之后第21天在小鼠肺的所有区域中进行组织学检查，揭示了微循环通道的血管和肺泡间间隔的毛细血管的中度明显充血。此外，由于淋巴-巨噬细胞浸润以及间质组织的炎性浸润，弹性蛋白酶导致肺泡壁增厚。单个肺泡的腔也充满巨噬细胞和淋巴细胞。由于损伤剂对肺实质中的细支气管、肺泡管和肺泡的弹性纤维的作用，观察到肺泡扩张和肺泡间隔的破坏，发展为弥漫性肺气肿。对试样的分析显示，在实验的第21天，左肺组织的大部分被扩展的肺气肿肺泡占据，伴有肺泡间间隔的破坏。肺气肿位于所有肺野中。在下肺野中观察到最明显的病变(表4)。
表4
在实验的第21天在气管内施用弹性蛋白酶的条件下，小鼠中扩展的肺气肿肺组织的面积(正常的％)(M±m，n＝5)
组 顶部肺野 中肺野 下肺野
完整对照 0 0 0
病理对照 24.06±6.12* 63.76±5.02* 82.90±2.88*
化合物I(3mg/kg) 11.76±1.48* 37.09±5.86*· 35.28±5.81*·
注释：
1-*-与完整对照相比差异是可靠的(p＜0.05)；
2-·-与病理对照相比差异是可靠的(p＜0.05)。
化合物I的施用降低了肺实质的炎性浸润的强度，以及微循环通道的血管和肺泡间间隔的毛细血管的明显充血，与病理对照组相比，减少了扩展的肺气肿肺泡的相对面积(表4)。所获得的数据对得出化合物I在肺气肿的情况下具有治疗作用的结论提供了依据。
化合物1在豚鼠COPD模型中的治疗活性的研究
该研究在雄性豚鼠上进行。通过气管内施用大肠杆菌细胞壁脂多糖(LPS)和烟草烟雾提取物(TSE)引起慢性阻塞性肺病(Biol Pharm Bull.2009年9月；32(9)：1559-64)。TSE由Hi-Lite香烟(Japan)制备(1支香烟的配方：焦油17毫克/根，烟碱1.4毫克/根)。在制备提取物之前，已除去香烟过滤嘴，带过滤嘴的香烟长度为80mm，然而除去过滤嘴55mm。通过使用真空泵以恒定的速度将点燃的香烟的烟雾拖拉通过PBS进行提取(40ml/40支香烟)。燃烧一支香烟的时间是180秒。为了除去颗粒，将产生的提取物通过孔径为45nm的细菌过滤器过滤。每天一次每天在1至4、6至9、11至14、16至19小时使豚鼠吸入TSE(0.3ml/min，40min)。在第5天、第10天和第15天，每天一次使豚鼠吸入LPS(25μg/ml，0.3ml/min，1小时)。在最后一次吸入TSE之前、在最后一次吸入TSE之后立即和最后一次吸入TSE之后1.5小时，评估呼吸功能(持续15分钟)。在评估呼吸功能之后，立即收集支气管肺泡灌洗液(BAL)。在麻醉下通过使用注射器分配器用加热至37℃的5ml盐水溶液通过气管洗肺来进行BAL捕获。
在支气管肺泡灌洗液中，使用Goryaev摄像机计算1μl灌洗液(吞排作用)中的细胞要素的绝对计数。然后，将BAL以200g离心10分钟。从细胞沉淀物制备涂片，将该涂片进一步固定在甲醇中并通过Romanovsky-Giemsa染色以计数肺内细胞图。
在研究的第10至19天(最后一次施用-最后一次吸入TSE之前1小时)，每天一次每天将化合物I胃内施用于动物。假病理组通过盐水溶液代替TSE和LPS来吸入。对照动物接受等体积的溶剂代替测试物质。
进行的研究显示，在COPD模型中，化合物1降低了炎性细胞向豚鼠支气管肺泡空间中的流入。化合物I最显著降低嗜中性粒细胞、巨噬细胞和嗜酸性粒细胞的流入(表5)。
表5
豚鼠COPD模型中支气管肺泡灌洗液中的细胞要素的量(M±m，n＝10)
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汇总所获得的结果，可以得出结论，化合物II在COPD的情况下具有显著的治疗作用。
化合物I在变应性鼻炎豚鼠模型中的体内活性研究
通过标准方法来实现变应性鼻炎模型(Int Immunopharmacol.2013年9月；17(1)：18-25)。通过腹膜内注射稀释并混悬于盐水溶液中的卵清蛋白(100μg/猪)和氢氧化铝(5mg/猪)的混合物4次(在第0天、第7天、第14天和第21天)对豚鼠(250至300克)进行免疫接种。在研究的第28天，将卵清蛋白溶液(60mg/ml)以20μl鼻内施用于动物的每个鼻孔。在第35天，在初步剃毛清洁背部的皮肤区域之后，将卵清蛋白溶液(200μg/ml，25μl)经皮内注射于动物。存在致敏作用的确认是在注射部位形成水肿和发红。在研究的第42天，进行卵清蛋白溶液(60mg/ml，20μl/鼻孔)的鼻内施用。为了特别控制变应性炎症的形成，形成一组假免疫接种动物：在第0、第7、第14和第21天，豚鼠接受氢氧化铝溶液(5mg/豚鼠)；在第28天和第35天-盐水溶液，第42天-卵清蛋白(60mg/ml，20μl/鼻孔)。
在最后一次鼻内施用卵清蛋白之前3小时，将化合物I、化合物III、化合物IV(0.14，1.4mg/kg)胃内施用于动物一次。
在最后一次施用卵清蛋白之后2小时，评价鼻炎的临床表现：计数打喷嚏和挠鼻的量。
研究结果示于表6至8中。
在最后一次将卵清蛋白鼻内施用于动物之后2小时的变应性鼻炎的临床表现的计数显示，实验动物中的打喷嚏和挠鼻的量显著提高，这表明所实施的变应性鼻炎模型的正确性。
/>
将化合物I、化合物III、化合物IV胃内施用于豚鼠显著降低了鼻炎的临床表现的量。所获得的结果对得出化合物I、化合物III、化合物IV在变应性鼻炎的情况下具有显著的治疗作用的结论提供了依据。
化合物I在福尔马林诱导的急性鼻窦炎大鼠模型中的体内活性研究
通过将20μl7.5％的福尔马林鼻内施用于每个鼻通道中，在雄性Wistar大鼠中进行急性鼻窦炎的诱导。以每天一次每天1.8mg/kg和18mg/kg的剂量施用化合物I，从施用福尔马林之后24小时开始，最后一次施用发生在第7天。将地塞米松(0.6mg/kg)以相同的方式施用。在第8天，收集鼻灌洗液。在鼻灌洗液中，评估白细胞的总量并确定白细胞组成。
对鼻灌洗液的分析显示，急性鼻窦炎伴随着明显的白细胞流入鼻腔中。注意到与巨噬细胞的量有关的最大提高(表9)。
将测试化合物胃内施用于大鼠使鼻灌洗液中的巨噬细胞和嗜中性粒细胞的含量降低至完整动物的水平。就作用强度而言，化合物I等于地塞米松(表9)。
表9
在急性鼻窦炎模型(M±m，n＝10)中大鼠鼻灌洗液中细胞要素的量
注释：
*-根据Student t检验与完整组的差异p＜0.05；
&-根据Student t检验与对照组的差异p＜0.05。
因此，所获得结果显示，化合物I在鼻窦炎的情况下具有显著的治疗作用。
化合物I在非感染性咽炎大鼠模型中的体内活性研究
在雄性Wistar大鼠上实施非感染性咽炎模型。用硫喷妥钠(50mg/kg，腹膜内)麻醉大鼠，并使用肝素化盐水溶液(40U/ml)将具有硅橡胶管(SIL 037，BraintreeScientific，Inc.，Braintree，MA)的套管插入颈外静脉中。通过导管将伊文思蓝染料(Evans Blue，EB)(30mg/kg)静脉内施用于所有动物；施用EB染料之后10分钟，将30％福尔马林溶液如下施加于咽黏膜的表面：将舌轻轻拉出，用钝性镊子在口腔深处打开咽区域，并且轻轻地使用无菌棉垫施加福尔马林溶液(50μl)3次，每次施加5秒。在完整组中使用了生理溶液。
施加30％福尔马林溶液之后60分钟，通过放血使动物安乐死。用肝素化盐水溶液(40U/ml)灌注每只大鼠的头部以除去血管内EB染料。
通过伊文思蓝(EB)染料的渗出试验来评估炎症程度。在55℃下24小时将来自肌肉组织的EB染料提取至甲酰胺中，并且在620nm下分光光度法确定吸光度。使用伊文思蓝染料的标准曲线来计算织物中染料的量，并以每克湿织物重量中染料的微克数表示(μg/g)。
在施加甲醛之前24小时和1小时以6mg/kg和18mg/kg的剂量胃内施用化合物I。向对照组施用浓度为30％的甲醛溶液。将地塞米松和双氯芬酸用作参照药剂。在施加甲醛之前24小时和1小时胃内施用地塞米松(0.6mg/kg)和双氯芬酸(8mg/kg)。研究结果示于表10中。
从表10明显看出，甲醛(对照)的施用导致组织中染料浓度的显著提高，这表明大鼠中的咽部炎症-咽炎。测试化合物显示出对甲醛引起的咽炎的显著保护。化合物I在所有测试剂量(6mg/kg和18mg/kg)中都具有作用-与对照相比，组织中染料的浓度分别降低了2.8和6.4倍。地塞米松(0.6mg/kg)的施用也导致炎症的减少：染料浓度降低2.1倍。双氯芬酸没有作用。
因此，所获得结果显示，化合物I在咽炎的情况下具有显著的抗炎作用。
表10
大鼠咽组织中伊文思蓝染料的浓度
组 组织中染料的浓度，μg/mg
完整 0.029±0.004
对照(甲醛-30％) 0.141±0.015*
化合物I(6mg/kg) 0.051±0.016*&
化合物I(18mg/kg) 0.022±0.003&
地塞米松0.6mg/kg 0.066±0.009*&
双氯芬酸8mg/kg 0.112±0.031*
注释
1-*-与完整组相比，差异是统计学上显著的(p＜0.05)；
2-&-与完整组相比，差异是统计学上显著的(p＜0.05)。
化合物II在博莱霉素诱导的肺损伤模型中的活性研究
博莱霉素诱导的肺损伤模型通过标准方法实施(Am J Respir Cell MolBiol.2009V.41(1).第50-58页)。将博来霉素溶液气管内施用于雄性Balb/c小鼠一次(4单位/kg，体积为50μl)。将化合物II胃内施用于C57BL/6小鼠两次：施用博来霉素之前1小时和施用博来霉素之后12小时。在施用博来霉素之后24小时收集支气管肺泡灌洗液。在灌洗液中，评估白细胞的总量并确定白细胞组成。
该研究的结果显示，胃内施用化合物II降低了炎性细胞向支气管肺泡空间中的流入(表11)。这对得出化合物II对肺损伤具有抗炎作用的结论提供了依据。
化合物IV在脂多糖诱导的急性肺损伤大鼠模型中的活性研究
使用标准方法实施脂多糖诱导的急性肺损伤模型[Lin Tong，Jing Bi，XiaodanZhu，Guifang Wang，Jie Liu，Linyi Rong，Qin Wang，Nuo Xu，Ming Zhong，Duming Zhu，Yuanlin Song，Chunxue Bai.Keratinocyte growth factor-2is protectiveinlipopolysaccharide-induced acute lung injury in rats//RespiratoryPhysiology&Neurobiology.2014.V.201.第7-14页]。将用盐水溶液制备的脂多糖(LPS)溶液气管内施用于雌性Wistar大鼠。假病理组的动物用相同体积的盐水溶液注射。在施用LPS之后48小时从动物收集支气管肺泡灌洗液(BAL)。在麻醉下通过使用注射器分配器用加热至37℃的5ml盐水溶液通过气管洗肺来进行BAL的捕获。
在支气管肺泡灌洗液中，使用Goryaev摄像机计算1μl灌洗液中细胞要素的绝对计数。然后，将支气管肺泡灌洗液以200g离心10分钟。从细胞沉淀物制备涂片，将该涂片进一步固定在甲醇中并用Romanovsky-Giemsa染色以计数肺内细胞图。
在施用LPS之前1小时和施用LPS之后24小时，将化合物IV胃内施用于大鼠两次。
该研究的结果显示，胃内施用化合物IV降低了炎性细胞向支气管肺泡空间中的流入(表12)。这对得出化合物IV在肺损伤的情况下具有抗炎作用的结论提供了依据。
化合物II、化合物IV、化合物VI、化合物I在发热反应大鼠模型中的活性研究
使用标准方法实施发热反应模型[J Neurosci Methods.2005.V.147.第29-35页]。将面包酵母的20％混悬液(12ml/kg)皮下注射于Wistar大鼠。在施用酵母之后14小时，将化合物I、化合物II、化合物IV、化合物VI、化合物VIII胃内施用一次。在施用热原之前和在热反应发展的最高点-其后19小时，通过电子体温计测量直肠温度。在2至7个实验中研究了化合物的抗热原作用。
该研究的结果显示，胃内施用所研究的化合物降低了大鼠体内直肠温度的增加(表13至17)。所获得的数据允许得出结论，化合物I、化合物II、化合物IV、化合物VI、化合物VIII具有抗热原作用。
表13
将酵母皮下施用于大鼠之后19小时体内直肠温度的增加，℃(M±m，n＝30至90)
表14
将酵母皮下施用于大鼠之后19小时体内直肠温度的增加，℃(M±m，n＝30至90)
表15
将酵母皮下施用于大鼠之后19小时体内直肠温度的增加，℃(M±m，n＝40至70)
表16
将酵母皮下施用于大鼠之后19小时体内直肠温度的增加，℃(M±m，n＝40至70)
/>
表17
将酵母皮下施用于大鼠之后19小时体内直肠温度的增加，℃(M±m，n＝40至70)
化合物I和化合物IV在通过化学刺激腹膜方法(“腹部收缩”测试)的特定疼痛反应模型中的活性研究
根据标准程序进行通过化学刺激腹膜的方法(“腹部收缩”测试)的特定疼痛反应模型。为了进行“腹部收缩”测试，以每kg动物体重10ml的体积向Balb/c小鼠腹膜内施用的1％乙酸。在施用乙酸之前1小时，胃内施用化合物I、化合物IV、化合物VII、化合物IX、化合物X一次。在施用乙酸之后15分钟评价收缩的量(腹肌的抽搐颤搐伴随拉伸的后肢和成弓形弯曲)。
该研究的结果显示，胃内施用化合物I、化合物IV、化合物VII、化合物IX、化合物X显著降低了由腹膜内施用乙酸引起的小鼠中收缩的量(表18至19)。所获得结果允许得出结论，化合物I、化合物IV、化合物VII、化合物IX、化合物X在疼痛综合征的情况下具有显著的治疗作用。
表18
在通过化学刺激腹膜的方法(“腹部收缩”测试)的特定疼痛反应模型上的乙酸收缩的量(M±m，n＝10至31)
表19
在通过化学刺激腹膜的方法(“腹部收缩”测试)的特定疼痛反应模型上的乙酸收缩的量(M±m，n＝10至31)
化合物I在热疼痛刺激“热板”模型中的活性研究
根据标准程序进行热疼痛刺激“热板”模型[Barrot M.Tests and models ofnociception and pain in rodents.Neuroscience.2012年6月1日；211：39-50.]。将化合物I和化合物II胃内施用于Balb/c小鼠一次。在施用制剂之后1小时之后，进行“热板”测试。为了进行“热板”测试，将小鼠放置于热板上，其温度(+55±1℃)是恒定的。记录小鼠疼痛响应(舔爪，跳跃)的第一次表现时间，并计算每组中疼痛敏感性阈值(TPS，秒)的平均潜伏时间。
该研究的结果显示，研究中胃内施用化合物以1.5倍提高了“热板”测试中小鼠的疼痛敏感性阈值。化合物1的药理效应持续至少24小时(表20)。所获得的数据允许得出结论，化合物I和化合物II在疼痛综合征的情况下具有显著的镇痛作用。
表20
在热疼痛刺激“热板”模型中的疼痛敏感性阈值(TPS)，相对于施用制剂之前的值的％(M±m，n＝20)
化合物II在db/db小鼠自发性肥胖模型中的活性研究
为了对自发性肥胖进行建模，使用携带瘦蛋白受体-Leprdb-(db)隐性基因(第8连锁群，第4染色体)的db/db小鼠[Cardiovasc.Diabetol.2012.V.11.第139-147页；Biochem.Biophys.Res.Commun.2016.V.472.第603-609页]。
从动物寿命的第7周开始，胃内施用化合物II。在寿命的6至12周，每周测量动物们的体重。
该研究的结果显示，在肥胖模型中，以7.5mg/kg的剂量将化合物II胃内施用于小鼠降低了db/db小鼠的体重增加(表21)。
所获得的结果显示化合物II在肥胖的情况下的治疗作用。治疗作用早在使用化合物II的4周就开始。
化合物II在代谢综合征模型中的活性研究
根据标准方法，通过使雄性Wistar大鼠保持高脂肪饮食(“自助饮食”)16周来实施代谢综合征模型[Rothwell N.J.，Stock M.J.，Warwick B.P.Energy balance and brownfat activity in rats fed cafeteria diets or high-fat.semisynthetic diets atseveral levels of intake//Metabolism.1985.卷34(5).第474-480页]。
从饮食的第10周至第16周，将化合物II每天一次胃内施用于实验组的动物。使用每周体重测量进行测试化合物的活性的评价。
该研究的结果显示，胃内施用化合物II降低了动物的体重增加。药理效应从治疗的第5周开始出现(表22)。
因此，在代谢综合征模型中，化合物II降低了动物的肥胖。
/>
化合物I和化合物II在银屑病小鼠模型中的活性研究
根据标准方法进行小鼠中银屑病的诱导[European Journal ofPharmacology.2015.V.756.第43-51页]。将Aldar乳膏(5％咪喹莫特)施加于雌性Balb/c小鼠右耳的内侧，每天1次，持续7天(第0至第6天)，其量为30mg/小鼠。将凡士林施加于完整动物。将化合物I、化合物II和参照药物(环孢菌素)每天1次，每天胃内施用于动物，持续6天(0至第5天)。在最后一次施加Aldara乳膏之后24小时(第6天)进行安乐死。在下一次施加Aldar乳膏之前和安乐死之前，在0、第2、第3、第4、第5天每天早上，测量右耳的厚度。
通过测量受影响的耳的厚度随时间的增加来进行银屑病严重性的评估。
该研究结果示于表23中。
表23
在银屑病小鼠模型中受影响的耳的厚度在研究的特定日期相对于第0天的增加，％(M±m，n＝10)
该研究的结果显示，在银屑病小鼠模型中胃内施用化合物I和化合物II降低了动物受影响的耳的厚度的增加。这证明了化合物I和化合物II在银屑病的情况下的治疗作用。
因此，在银屑病的小鼠模型中，化合物I和化合物II具有显著的治疗作用。
化合物I和化合物II在特应性皮炎小鼠模型中的活性研究
通过标准方法来实施特应性皮炎的模型[J Ginseng Res.2011.第4卷.-第479-86页]。特应性皮炎在雄性balb/c小鼠中建模。使用1-氯-2，4-二硝基苯(DNHB)作为接触性皮炎的诱导剂。在实验的第0天和第12天，将100μl的2％DNHB溶液施加于预先剃毛的动物背部区域以使身体致敏。在第17天，将20μl的2％DNHB醇溶液以1小时的间隔施加于右“实验”耳两次。代替DNHB溶液，将乙醇施加于完整动物。用乙醇使假免疫接种组中的动物致敏。从第8天到第17天，每天一次胃内施用化合物I和化合物II。在第18天，将动物屠宰。为了评估安乐死之后的水肿程度，确定“实验”和“对照”耳的质量。计算以“实验”和“对照”耳的质量之间差异的百分比表示的反应指数(RI)。
该研究结果示于表24中。
该研究的结果显示，在特应性皮炎的小鼠模型中，胃内施用化合物I和化合物II降低了病理过程的反应指数。这证明了化合物I和化合物II对特应性皮炎的治疗作用。
因此，在特应性皮炎模型的小鼠模型中，化合物I和化合物II具有显著的治疗作用。
化合物II对角叉聚糖气囊中巨噬细胞趋化性的体内作用研究
为了评估药物在临床前研究阶段对免疫系统细胞的活性的有效性，通常使用多种急性炎症过程模型。现今，最常用的模型是病理过程在封闭腔内发展的那些。这些模型使非常接近地模拟免疫系统细胞的异常活性位于特定腔内的疾病(腹膜炎、胆管炎、关节炎)成为可能(J Pharmacol Toxicol Methods.1994年11月；32(3)：139-47)。角叉聚糖气囊模型通常用在临床前研究阶段，以研究与免疫系统细胞的异常活性相关的、位于隔离腔内的病理过程。在该模型中，通过将空气皮下注射至小鼠或大鼠的背部的囊内区域中来形成隔离的囊。将空气皮下注射至背部区域导致囊的细胞内衬的形态变化持续数天。该囊主要由巨噬细胞和成纤维细胞组成，并且血管形成良好。在第六天从形成气囊的那一刻起，将λ-角叉聚糖溶液施用于气囊的腔中。角叉聚糖与囊的囊内区域巨噬细胞内衬表面上的TLR4受体相互作用，这导致它们的活化，并且随后合成趋化因子和其他介质(IL-1、IL-6、TNFα、IL-8、前列腺素和白三烯、NO)以及囊内免疫系统细胞的迁移。
根据标准方法在雄性Balb/c小鼠中进行化合物II的活性研究(Curr ProtocPharmacol.2012年3月；第5章：单元5.6)。在施用角叉聚糖之前立即以3mg/kg的剂量将化合物II胃内施用于实验组，然后每10至12小时施用。在屠宰之前12小时进行最后一次施用。
在注射λ-角叉聚糖之后48小时时，对于各组动物，通过吸入CO2来进行安乐死。在安乐死之后，立即用无菌注射器25G将1ml含有5.4mM室温EDTA的盐水溶液引入囊中。在轻轻按摩气囊区域之后，在囊上形成矢状切口，并通过分配器将渗出物收集至体积为15ml的无菌小瓶中。在渗出物中，使用Goryaev室确定每1μl灌洗液(吞排作用)的细胞要素的绝对计数。然后将渗出物以200g离心10分钟。从细胞沉淀制备涂片，随后将涂片固定在甲醇中(5分钟)并根据Romanovsky-Giemsa染色(在20至22℃下40分钟)。在常规使用显微镜Olympusbx51(放大率100)的涂片上，计数巨噬细胞的数目。细胞计算可至100pcs。
进行的研究显示，化合物II的使用降低了白细胞和巨噬细胞的流入10倍(相对于完整对照的水平)(表25)。因此，化合物II可具有治疗广泛范围疾病，例如克罗恩病、溃疡性结肠炎、腹膜炎和关节炎的潜力。
表25
在研究化合物II在巨噬细胞趋化性(角叉聚糖气囊)模型中的活性时，来自角叉聚糖气囊的渗出物中免疫系统的细胞数目，×109/1(M±m，n＝10)
化合物II在巯基乙酸腹膜炎模型中对巨噬细胞趋化性体内作用的研究
使用标准方法在雄性balb/c小鼠中进行研究(J Leukoc Biol.2009年8月；86(2)：361-70)。将储存为1个月的2ml3％巯基乙酸培养基腹膜内施用于对照组小鼠。将2ml的盐水溶液腹膜内输注于完整动物。在以1mg/kg的剂量施用巯基乙酸之前1小时、施用巯基乙酸之后24小时和48小时，将化合物II胃内施用于实验组的动物。72小时之后，使动物在CO2室中安乐死，用70％醇润湿腹膜区域，在腹腔上小心地切下皮肤，并用注射器将含有0.1％EDTA的5ml冷磷酸盐盐水缓冲液进行腹膜内注射。在轻轻按摩腹腔之后，用注射器将渗出物收集至试管中，确定收集的渗出物的体积。在渗出物中，使用Goryaev室确定每1μl灌洗液(吞排作用)的细胞要素的绝对计数。然后将渗出物以200g离心10分钟。从细胞沉淀制备涂片，随后将涂片固定在甲醇中(5分钟)并根据Romanovsky-Giemsa染色(在20至22℃下40分钟)。在涂片上，常规使用显微镜Olympus bx51(放大率100)，计数单核细胞/巨噬细胞的量。细胞计算可至100pcs。
进行的研究显示，化合物II的使用降低了由3％巯基乙酸介质诱导的巨噬细胞向大鼠腹膜腔中的流入，并降低了由施用巯基乙酸介质诱导的病理严重性(表26)。因此，化合物II可具有治疗腹膜炎、克罗恩病和溃疡性结肠炎的潜力。
表26
在研究化合物II在巨噬细胞趋化性(巯基乙酸腹膜炎)模型中的活性时，来自腹腔渗出物中免疫系统的细胞数目，×109/1(M±m，n＝10)
化合物II和化合物I在通过施用弗氏完全佐剂诱导的佐剂性关节炎模型中的活性研究
根据标准方法对远交系雄性大鼠中实施佐剂性关节炎模型[Chem Pharm Bull(Tokyo).2018.V.66(4).第410-415页]。在第0天和第5天，以每只动物100μl的体积将弗氏完全佐剂(Freund’s Adjuvant，Complete(Pierce))经足底施用于动物的右后肢。使用器官充满度测量器(Ugo Basel)在第0、第14、第16、第18、第21、第25、第28和第30天测量右后爪(受影响)和左后爪(对侧)的体积。通过改变受影响爪的体积来估计原初(炎性)反应，并通过改变对侧爪的体积来估计继发(免疫)反应。从研究的第14次至第30天，每天一次，每天胃内施用化合物II。
该研究结果示于表27至28中。
进行的研究显示，施用化合物II的使用降低了受影响爪和对侧爪两者的体积增加。这允许得出结论，化合物II具有抗炎作用和免疫作用。因此，化合物II具有治疗类风湿性关节炎和其他类型的关节炎以及关节病的高治疗潜力。
/>
化合物II在角叉聚糖水肿模型中的活性研究
为了评估化合物II对免疫系统功能状态的影响，使用角叉聚糖诱导的大鼠爪水肿模型。在重250至270g的雄性白色非线性大鼠中进行实验。大鼠中急性爪炎症是通过以0.1ml的体积将1.5％角叉聚糖溶液经足底内施用(皮下)至右爪中来引起的。在施用角叉聚糖之前1小时胃内施用所研究的化合物。化合物II和对照物质(双氯芬酸)的作用通过与完整左爪相比爪水肿的降低程度来评估。在施用化合物II之前和施用角叉聚糖之后2小时评估爪体积。
该研究结果示于表29中。
从所呈现的结果清楚地看出，化合物II对爪水肿的生长具有直接抑制作用，并且可用于治疗与免疫系统细胞的活性相关的广泛范围的疾病。
化合物II在糖尿病肾病大鼠模型中的活性研究
通过长期使动物摄入高脂肪饮食并且以30mg/kg的剂量单次或两次腹膜内施用链脲佐菌素诱导糖尿病肾病的大鼠模型(Int J C1in Exp Med.2015年4月15日；8(4)：6388-96)。
使动物保持高脂肪饮食16周；在第9周，以30mg/kg的剂量腹膜内施用链脲佐菌素两次(连续2天)。在施用链脲佐菌素之后7天，开始施用化合物II。以50mg/kg的剂量每天一次每天胃内施用该物质。
从研究的第10周开始，胃内施用化合物II使实验动物的尿液中的每日蛋白含量降低至完整对照的水平(表30)。结果允许得出结论，化合物II在糖尿病肾病的情况下具有治疗作用。
尽管参考所公开的实施方案描述了本发明，但是对于本领域技术人员应该是明显的是，给出的详细描述的具体实验仅用于说明本发明，而不应被视为以任何方式限制本发明的范围。应该清楚的是，可以在不偏离本发明的实质的情况下实施多种修改。

Claims (5)

1.下式化合物或其可药用盐在制造用于治疗选自以下的病症的药物中的用途：咽炎、肺气肿、疼痛综合征、鼻炎、鼻窦炎、急性肺损伤、发热
IV
2.用于预防和/或治疗选自以下的病症的药物组合物：咽炎、疼痛综合征、鼻炎、鼻窦炎、急性肺损伤、发热，所述药物组合物包含治疗有效量的如权利要求1中所述的化合物和至少一种可药用载体和/或赋形剂。
3.根据权利要求2所述的药物组合物，其还包含其他活性剂。
4.根据权利要求3所述的药物组合物，其中所述其他活性剂选自抗菌剂、细胞抑制剂和细胞毒剂、抑制症状或活性剂的副作用的药剂、及其组合。
5.下式化合物或其可药用盐在制造用于治疗由谷氨酰胺酰基环化酶活性介导的选自以下的疾病的药物中的用途：咽炎、肺气肿、疼痛综合征、鼻炎、鼻窦炎、急性肺损伤和发热
IV
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Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2647438C2 (ru) * 2015-05-27 2018-03-15 Общество С Ограниченной Ответственностью "Фарминтерпрайсез" Бисамидное производное дикарбоновой кислоты в качестве средства, стимулирующего регенерацию тканей и восстановление сниженных функций тканей
RU2685277C1 (ru) * 2018-05-24 2019-04-17 Общество с ограниченной ответственностью "Фарминтерпрайсез Аллерджи" Применение бисамидного производного малоновой кислоты для лечения аллергических и других заболеваний человека и животных
CN114874186B (zh) * 2022-05-16 2023-07-11 深圳大学 一种谷氨酰胺酰基环化酶同工酶抑制剂及其制备方法与应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105358548A (zh) * 2013-04-12 2016-02-24 制药有限责任公司 二羧酸双酰胺衍生物、其用途、基于其的药物组合物和用于生产二羧酸双酰胺衍生物的方法
WO2016190785A1 (ru) * 2015-05-27 2016-12-01 Общество С Ограниченной Ответственностью "Фарминтерпрайсез" Бисамидное производное дикарбоновой кислоты в качестве средства, стимулирующего регенерацию тканей и восстановление сниженных функций тканей

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8338120B2 (en) * 2003-05-05 2012-12-25 Probiodrug Ag Method of treating inflammation with glutaminyl cyclase inhibitors
GB2447017A (en) * 2007-03-01 2008-09-03 Probiodrug Ag New use for inhibitors of glutaminyl peptide cyclotransferinase
EA201400366A1 (ru) * 2007-03-01 2014-08-29 Пробиодруг Аг Новое применение ингибиторов глутаминилциклазы
UA115431C2 (uk) * 2011-10-11 2017-11-10 Общєство С Огранічєнной Отвєтствєнностью "Валєнта-Інтєллєкт" Застосування глутарилгістаміну для лікування захворювань дихальних шляхів
CA2913914C (en) 2013-05-28 2018-03-20 Viamet Pharmaceuticals, Inc. Fungicidal compositions
CN106535635A (zh) 2014-04-15 2017-03-22 美国陶氏益农公司 作为杀真菌剂的金属酶抑制剂化合物
EP3131399A4 (en) 2014-04-15 2018-02-14 Dow AgroSciences LLC Metalloenzyme inhibitor compounds as fungicides
DE102015011780A1 (de) 2015-09-16 2017-03-16 Hochschule Anhalt Neue Glutaminylcyclase-lnhibitoren
RU2628690C2 (ru) * 2015-11-06 2017-08-21 Общество С Ограниченной Ответственностью 'Фарминтерпрайсез' Аттенуированные гриппозные векторы для профилактики и/или лечения инфекционных заболеваний, а также для лечения онкологических заболеваний

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105358548A (zh) * 2013-04-12 2016-02-24 制药有限责任公司 二羧酸双酰胺衍生物、其用途、基于其的药物组合物和用于生产二羧酸双酰胺衍生物的方法
WO2016190785A1 (ru) * 2015-05-27 2016-12-01 Общество С Ограниченной Ответственностью "Фарминтерпрайсез" Бисамидное производное дикарбоновой кислоты в качестве средства, стимулирующего регенерацию тканей и восстановление сниженных функций тканей

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Mikhail A.Podyminogin et al.Synthetic RNA-cleaving molecules mimicking ribonuclease A active center. Design and cleavage of tRNA transcripts.Nucleic Acids Research.1993,第21卷(第25期),全文. *
李桂英.临床护理学理论与操作.吉林科学技术出版社,2016,第124页. *
范建高.中国脂肪肝防治指南.上海科学技术出版社,2015,第37页. *
邓伟吾.慢支和肺气肿的防治.上海科技教育出版社,2000,第37页. *

Also Published As

Publication number Publication date
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