BR112015023468B1 - Produtos miceliados e métodos para produção de produtos miceliados a partir de cacau e outros substratos agrícolas - Google Patents

Produtos miceliados e métodos para produção de produtos miceliados a partir de cacau e outros substratos agrícolas Download PDF

Info

Publication number
BR112015023468B1
BR112015023468B1 BR112015023468-2A BR112015023468A BR112015023468B1 BR 112015023468 B1 BR112015023468 B1 BR 112015023468B1 BR 112015023468 A BR112015023468 A BR 112015023468A BR 112015023468 B1 BR112015023468 B1 BR 112015023468B1
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
cocoa
cocoa beans
beans
prepared
agricultural substrate
Prior art date
Application number
BR112015023468-2A
Other languages
English (en)
Other versions
BR112015023468A2 (pt
Inventor
Brooks John Kelly
James Patrick Langan
Original Assignee
Mycotechnology, Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US13/844,685 external-priority patent/US9068171B2/en
Priority claimed from US13/859,719 external-priority patent/US9427008B2/en
Priority claimed from US14/020,512 external-priority patent/US20140170264A1/en
Application filed by Mycotechnology, Inc filed Critical Mycotechnology, Inc
Publication of BR112015023468A2 publication Critical patent/BR112015023468A2/pt
Publication of BR112015023468B1 publication Critical patent/BR112015023468B1/pt

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23F—COFFEE; TEA; THEIR SUBSTITUTES; MANUFACTURE, PREPARATION, OR INFUSION THEREOF
    • A23F5/00—Coffee; Coffee substitutes; Preparations thereof
    • A23F5/16—Removing unwanted substances
    • A23F5/163—Removing unwanted substances using enzymes or microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23B—PRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
    • A23B7/00—Preservation or chemical ripening of fruit or vegetables
    • A23B7/14—Preserving or ripening with chemicals not covered by groups A23B7/08 or A23B7/10
    • A23B7/153—Preserving or ripening with chemicals not covered by groups A23B7/08 or A23B7/10 in the form of liquids or solids
    • A23B7/154—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A23B7/155—Microorganisms; Enzymes; Antibiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23F—COFFEE; TEA; THEIR SUBSTITUTES; MANUFACTURE, PREPARATION, OR INFUSION THEREOF
    • A23F5/00—Coffee; Coffee substitutes; Preparations thereof
    • A23F5/02—Treating green coffee; Preparations produced thereby
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
    • A23G1/00—Cocoa; Cocoa products, e.g. chocolate; Substitutes therefor
    • A23G1/0003—Processes of manufacture not relating to composition or compounding ingredients
    • A23G1/0006—Processes specially adapted for manufacture or treatment of cocoa or cocoa products
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
    • A23G1/00—Cocoa; Cocoa products, e.g. chocolate; Substitutes therefor
    • A23G1/0003—Processes of manufacture not relating to composition or compounding ingredients
    • A23G1/002—Processes for preparing or treating cocoa beans or nibs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
    • A23G1/00—Cocoa; Cocoa products, e.g. chocolate; Substitutes therefor
    • A23G1/02—Preliminary treatment, e.g. fermentation of cocoa
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L19/00—Products from fruits or vegetables; Preparation or treatment thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L19/00—Products from fruits or vegetables; Preparation or treatment thereof
    • A23L19/03—Products from fruits or vegetables; Preparation or treatment thereof consisting of whole pieces or fragments without mashing the original pieces
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L19/00—Products from fruits or vegetables; Preparation or treatment thereof
    • A23L19/09—Mashed or comminuted products, e.g. pulp, purée, sauce, or products made therefrom, e.g. snacks
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Tea And Coffee (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Confectionery (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Preparation And Processing Of Foods (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Seasonings (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Beans For Foods Or Fodder (AREA)

Abstract

produtos miceliados e métodos para produção de produtos miceliados a partir de cacau e outros substratos agrícolas. a presente invenção refere-se a um método para a preparação de uma fava de cacau miceliada ou outro produto agrícola. esse método fornece favas de cacau ou outro substrato agrícola e esteriliza as favas de cacau ou outro substrato agrícola para fornecer favas de cacau preparadas ou outro substrato agrícola, e uma etapa de inocular as favas de cacau preparadas ou outro substrato agrícola com um componente fúngico preparado e cultivar o inóculo para preparar o produto miceliado. os métodos da presente invenção resultam em favas de cacau preparadas ou outro substrato agrícola que têm níveis reduzidos de componentes de gosto indesejável, tal como teobromina ou 2-metoxi-3-isopropilpirazina, e níveis aumentados de produtos de miceliação, tais como beta glucanos, pirazinas e polissacarídeos, em relação às favas de cacau ou outro substrato agrícola iniciais.

Description

REFERÊNCIAS CRUZADAS A PEDIDOS RELACIONADOS
[0001] O Pedido Provisório no U.S. 61/802.256, depositado no dia 15 de março de 2013 e intitulado "Myceliated Agricultural Substrates for Production of Nutraceutical Formulations and Functional Foods"; Pedido de Patente no U.S. 13/844.685, depositado no dia 15 de março de 2013 e intitulado "A Method for Myceliating Coffee (emendado)"; Pedido de Patente no U.S. 13/859.719, depositado no dia 9 de abril de 2013 e intitulado "Method of Myceliation of Agricultural Substrates for Producing Functional Foods and Nutraceuticals"; Pedido de Patente no U.S. 13/874.832, depositado no dia 1 de maio de 2013 e intitulado "Extract of a Myceliated Agricultural Substrate and it's Use as a Nutraceutical Composition"; Pedido Provisório no U.S. 61/844.498, depositado no dia 10 de julho de 2013 e intitulado "Method for Manufacturing Coffee by Fermentation"; Pedido Provisório no U.S. 61/396.863, depositado no dia 23 de julho de 2013 e intitulado "Coffee Decafeination Process Including Fungal Components"; Pedido Provisório no U.S. 61/866.371, depositado no dia 15 de agosto de 2013 e intitulado "Cocao Beans Including Metaboloites of 2-Methoxy-3-Isopropylpyrazine and Method for Metabolizing 2-Methoxy-3-Isopropylpyrazine in Cocao Beans"; Pedido Provisório no U.S. 61/867.501, depositado no dia 19 de agosto de 2013 e intitulado "Cocao Beans including Methyl Pyrazines Produced by Fermenation, and a Method of Increasing Methyl Pyrazines in Cocao"; Pedido de Patente no U.S. 14/020.512, depositado no dia 6 de setembro de 2013 e intitulado "Improved Method for Mycelia- ting Raw Coffee Beans Including Removal of Chlorogenic Acids"; Pedido de Patente no U.S. 14/020.781, depositado no dia 6 de setembro de 2013 e intitulado "Method for Myceliating Raw Coffee Beans Including Removal of Chlorogenic Acids"; Pedido Provisório no U.S. 61/878.037, depositado no dia 15 de setembro de 2013 e intitulado "Myceliating Green Coffee Beans to Lessen the Tooth-Staining Impact of Coffee Melanoidins" e Pedido Provisório no U.S. 61/896.097, depositado no dia 27 de outubro de 2013 e intitulado "Cocao Myceliation in an Aqueous Solution"; todos os quais são incorporados em sua totalidade no presente documento a título de referência.
CAMPO DA TÉCNICA
[0002] Os métodos e produtos referem-se ao uso de cepas fúngicas para melhorar o sabor em substratos agrícolas, em particular, cacau e outros substratos agrícolas.
ANTECEDENTES
[0003] A maior parte do cacau mundial é produzida em uma banda que vai de 20 graus de latitude norte e sul do equador, como a árvore de cacau precisa de umidade, o ambiente tropical quente no qual cultivam frutas saudáveis de vagem de cacau que contém a fava de cacau. Colhida quando madura, a vagem de cacau média produz de 20 a 50 favas de cacau emulsionadas em polpa mucilaginosa. Em geral, a vagem de cacau é preparada para o mercado pela fermentação da vagem de quatro a sete dias (para remover a polpa) e as favas são secadas por outros cinco a quatorze dias. Essas são cerca de 20 variedades diferentes de cacau e centenas de hibridas. A partir desses, quatro tipos mais importantes de cacau são comuns no mercado de chocolate comercial. Contas de cacau Forastero para aproximadamente 95% do mercado de cacau mundial. Contas de cacau Criollo para cerca de 7% do mercado global e é caracterizado como um cacau gourmet e fino que é mais difícil de cultivar que o Forastero. O cacau Trinitario é um hibrido de Forastero/Criollo que é bem cultivado em Trinidade. O cacau Nacional é tido por uma baixa amargura e um aro ma floral doce, mas é difícil de cultivar comercialmente. Uma maioria do cacau mundial é produzida na Costa do Marfim. Esse volume representa mais de 1 milhão de toneladas por ano. Gana, Indonésia, Camarões, Brasil e Nigéria produzem grandes quantidades de cacau também. O cacau é consumido por todo o mundo, geralmente na forma de chocolate, que é uma mistura de cacau com adoçantes e outros componentes.
[0004] É comum que favas de cacau sejam tratadas com vapor de superaquecimento para mitigar o teor bacteriano. Acredita-se que tratar favas de cacau com vapor saturado também remove alguns dos componentes de sabor desejáveis. Açucares e outros adoçantes são misturados com pó de cacau para formar chocolate com bom sabor. Frequentemente outros sabores são adicionados. Atualmente muitos advogados da saúde, enquanto conhecem os benefícios para a saúde do cacau, alertam contra o risco de uso excessivo de adoçantes que incluem açúcar e adoçantes artificiai.
[0005] É desejado um modo de fabricação de cacau que alcance um produto com um sabor muito bom sem a necessidade de adoçar excessivamente. É também desejado um modo de processar o cacau que retenha os componentes de sabor desejados enquanto minimiza os componentes de sabor menos desejados. Adicionalmente, é desejável confiar nos processos naturais para alcançar um produto de sabor muito bom.
[0006] Uma necessidade permanece na técnica por produtos mice- liados melhorados que tenham níveis reduzidos de componentes de gosto indesejável e/ou níveis aumentados de sabor e/ou componentes que promovem a saúde relacionados às favas de cacau ou outro substrato agrícola e por métodos de obtenção de tais produtos.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0007] A Figura 1 é um fluxograma de um método de criação de um produto agrícola miceliado de acordo com a presente invenção.
[0008] A Figura 2 é um fluxograma de um método de criação de um extrato de produto agrícola miceliado para consumo humano para efetuar neurorregeneração e neuroproteção em seres humanos de acordo com a presente invenção.
[0009] A Figura 3 é um fluxograma de um método de remoção de cafeína de favas de cacau ou outro substrato agrícola de acordo com a invenção atual.
[0010] A Figura 4 é um fluxograma de um método de criação de um produto de café miceliado.
[0011] A Figura 5 é um fluxograma de um método de criação de um produto de café miceliado.
[0012] A Figura 6 é um transportador usado de acordo com a presente invenção.
[0013] A Figura 7 é um transportador usado de acordo com a presente invenção para entregar recipientes para uma autoclave.
[0014] As Figuras 8(A), 8(B), 8(C) mostram bolsas autoclaváveis que têm uma superfície enrolada, uma pilha de bolsas autoclaváveis e um material autoclavável enrolado.
[0015] A Figura 9 é um fluxograma de um método de criação de um produto de cacau miceliado.
[0016] Figura 10 é um fluxograma de um método de criação de um produto de cacau miceliado.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[0017] Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método para a preparação de um cacau miceliado ou outro produto de substrato agrícola. Esse método inclui a etapa de fornecer favas de cacau preparadas ou outro substrato agrícola preparado, que inclui fornecer favas de cacau ou outro substrato agrícola e esterilizar as favas de cacau ou outro substrato agrícola para fornecer favas de cacau preparadas ou outro substrato agrícola preparado. O método também inclui a etapa de fornecer um componente fúngico preparado. O método também compreende inocular as favas de cacau preparadas ou outro substrato agrícola preparado com o componente fúngico preparado e criar o inóculo para preparar o cacau miceliado ou outro produto de substrato agrícola.
[0018] Em uma modalidade, o método inclui reduzir a quantidade de componentes de sabor indesejável. Reduzir a quantidade de componentes de sabor indesejável inclui opcionalmente pelo menos uma ou duas extrações aquosas das favas de cacau ou outro substrato agrícola. Um componente de sabor indesejável inclui metilxantinas, tal como teobromina e/ou 2-metóxi-3-isopropilpirazina.
[0019] Em uma modalidade, o método inclui uma etapa de hidratar as favas de cacau ou outro substrato agrícola, opcionalmente a cera de 60%. Os métodos da presente invenção também incluem onde o componente fúngico preparado é G. lucidum, opcionalmente, cepa de G. lucidum 806, C. sinensis e/ou T. melanosporum. Os métodos da invenção incluem triar diversas cepas de fungos e selecionar uma cepa que tem uma habilidade aprimorada para crescer em, metabolizar ou utilizar favas de cacau ou outro substrato agrícola e/ou selecionar uma cepa que tem capacidade de remoção aprimorada de um ou mais componentes de sabor indesejável das favas de cacau ou outro subs-trato agrícola e/ou remoção aprimorada de cafeína das favas de cacau ou outro substrato agrícola.
[0020] Em outra modalidade, o componente fúngico preparado é mantido em um meio indefinido que compreende um extrato de favas de cacau aquosas ou outro substrato agrícola e uma fonte de energia ou, de modo alternativo, o meio compreende 2-metóxi-3- isopropilpirazina e/ou metilxantinas, como teobromina. A manutenção da cepa de fungos ocasiona uma adaptação dos fungos resultando em aprimoramento da habilidade do fungo para crescer em, metabolizar ou utilizar favas de cacau ou outro substrato agrícola e/ou 2-metóxi-3- isopropilpirazina e/ou metilxantinas, como teobromina.
[0021] Os métodos inventivos também incluem onde a etapa de cultura é uma etapa de fermentação realizada mediante condições semianaeróbicas, opcionalmente, durante cerca de 7 dias.
[0022] Os métodos da presente invenção resultam em produtos de café miceliados que tem níveis reduzidos de componentes de sabor indesejável, como 2-metóxi-3-isopropilpirazina e/ou metilxantinas, como teobromina e níveis aumentados de produtos de miceliação, como beta-glucanos, pirazinas e polissacarídeos, relativos às favas de cacau ou outro substrato agrícola.
[0023] A presente invenção inclui um produto miceliado e favas de cacau ou outro substrato agrícola preparados pelos métodos da invenção, e um cacau miceliado ou outro produto agrícola que tem níveis reduzidos de componentes de sabor indesejável e níveis aumentados de produtos de miceliação relativos a favas de cacau não tratadas ou primárias ou outro substrato agrícola.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[0024] Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método para a preparação de um produto de cacau miceliado (ou outro substrato agrícola). Esse método inclui a etapa de fornecer cacau ou outro substrato agrícola preparados, que inclui fornecer o cacau ou outro substrato agrícola e esterilizar o cacau ou outro substrato agrícola para fornecer cacau ou outro substrato agrícola preparados. O método também inclui a etapa de fornecer um componente fúngico preparado. O método também compreende inocular o cacau ou outro substrato agrícola preparados com o componente fúngico preparado e cultivar o cacau ou outro substrato agrícola preparados e componente fúngico preparado para permitir miceliação para produzir o cacau mi- celiado ou outro produto substrato agrícola. Essas etapas podem ser realizadas em qualquer ordem.
[0025] Em uma modalidade, cacau ou outro substrato agrícola preparado são fornecidos, incluindo a etapa de fornecer cacau ou outro substrato agrícola.
[0026] Um substrato agrícola inclui favas de cacau ou outro substrato agrícola. Café se refere ao gênero Coffea que é um gênero de plantas de floração cujas sementes, diversamente chamadas de favos de café ou favos de café verde, são usados para produzir café. É um membro da família Rubiaceae. Os favos de Café podem ser selecionados a partir de um dentre diversas variedades de café que são cultivares diversos derivados de criação seletiva ou seleção natural de plantas de café. Os favos de Café da mesma variedade que são cultivados em localizações diferentes podem ter características distintas como sabor (critério de sabor inclui termos como "acidez", "similar a cítrico" ou "terroso"), conteúdo, corpo ou paladar de cafeína e acidez. Os favos de cacau ou outro substrato agrícola útil para a presente invenção pode ser quaisquer espécies de café, incluindo Coffea arabica e Coffea robusta (também conhecido como Coffea conephora); espé-cies adicionais de café úteis para a presente invenção incluem Coffea benghalensis ou café Bengal; Coffea congensis ou café Congo; Coffea liberica ou café Liberiano; Coffea stenophylla ou café Serra Leoa; Cof- fea excelsia, outro café Liberiano; Coffea bonnieri; Coffea gallienii e Coffea mogeneti. A invenção inclui quaisquer varietais ou cepas das espécies listados acima. Por exemplo, muitos varietais do tipo Arábica são nomeados pelo país ou região nos quais os mesmos são predominantemente encontrados ou nos quais são originados. Alguns dos varietais exemplificativos de café Arábica incluem Typica, Bourbon, Caturra, Catuai, Mundo Nova e Blue Mountain. Também incluídos na invenção são e espécies derivadas de café incluindo quaisquer cepas ou cultivares geneticamente modificados (GMO) e também qualquer variedade de (non-GMO) cepas ou cultivares de café heirloom.
[0027] Um substrato agrícola é favas de cacau. Theobroma cacau, doravante "cacau" ou "cacau", pertence ao gênero Theobroma classificado mediante a subfamília Sterculioidea da família malva Malvaceae. Há cerca de 20 variedades diferentes de variedades cacau e centenas de híbridos e todos são adequados para uso na presente invenção, por exemplo, favas de cacau adequadas são cacau Forastero, cacau Criollo, cacau Trinitario e cacau Nacional. Os favos de cacau (ou cacau) adequados para a presente invenção foram ceifados quando a vagem de cacau está madura. A vagem de cacau média produz de 20 a 50 favas de cacau em emulsão em polpa mucilaginosa. Em geral, a vagem de cacau é preparada para o mercado fermentando-se a vagem de quatro a sete dias (para remover a polpa) e os favos são secos por outros cinco a quatorze dias. Os favos secos são adequados para a presente invenção.
[0028] As favas de cacau cruas têm uma abundância de ocorrência natural de bactéria e outros micróbios. É comum que as favas de cacau sejam tratadas com vapor de água superaquecido para atenuar o conteúdo bacteriano. Acredita-se que tratar as favas de cacau com vapor de água saturado também remove alguns dos componentes de sabor desejáveis. As favas de cacau tratadas com vapor de água superaquecido também são adequadas para a presente invenção.
[0029] Os substratos agrícolas que podem ser micelados de acordo com essa invenção incluem: todos os cereais, grãos, todas as espécies de trigo, centeio, arroz marrom, arroz branco, arroz vermelho, arroz dourado, arroz silvestre, arroz, cevada, triticale, arroz, sorgo, aveia, painço, quinoa, trigo sarraceno, fonio, amaranto, teff e trigo duro; maçãs e peras, damascos, cerejas, amêndoas, pêssegos, morangos, passas, mandioca, cacau, banana, Rubiaceae sp. (café), limões, laranjas e toranja; tomates, batatas, pimentas, berinjela, pimenta-da- jamaica, pó de manga, Angelica, Anis (Pimpinella anisum), Mirto de Anis (Syzygium anisatum), Anato (Bixa orellana), Maçã-menta (Mentha suaveolens), Artemisia vulgaris, Artemísia, Asafoetida (Ferula assafoe- tida), Berberis, Banana, Manjericão (Ocimum basilicum), Folhas de Louro, Bistorta (Persicaria bistorta), Cardamomo preto, cominho preto, Groselha, Limas pretas, Algas laminárias (Fucus vesiculosus), Blue Cohosh, Mallee de folha azul (Eucalyptus polybractea), Chá do Labrador do Brejo (Rhododendron groenlandicum), Boldo (Peumus boldus), Coentro Boliviano (Porophyllum ruderale), Borragen (Borago officinalis), Cálamo, Calêndula, Calumba (Jateorhiza calumba), Camomila, Canabis, Alcaparra (Capparis spinosa), Alcaravia, Cardamomo, Vagem de Alfarroba, Cassia, Casuarina, Nepenta, Unha de Gato, Catsear, Pimenta caiena, Celastrus paniculatus, Confrei, Sal de aipo, Semente de aipo, Centauros, Cerfólio (Anthriscus cerefolium), Morrião- dos-Passarinhos, Chicória, pimenta do Chile, Chili em pó, Cinchona, Cebolinha (Allium schoenoprasum), Mirra (Myrrhis odorata), Cilantro (consulte Coriander) (Coriandrum sativum), Canela (e Cassia), Mirto de Canela (Backhousia myrtifolia), Salva Moscatável, Amor-de- hortelão, Trevos, Cravos, Café, Tussilagem, Confrei, Ruibarbo Comum, Condurango, Coptis, Coentro, Hortelã-pimenta (Tanacetum bal- samita), Elitrigia, Cicutária (Anthriscus sylvestris), Prímula, Cramp Bark (Viburnum opulus), Agrião, Orégano Cubano (Plectranthus amboini- cus), Erva-do-carpinteiro, Cominho, Folha de caril (Murraya koenigii), Damiana (Turnera aphrodisiaca), Dente-de-leão (Taraxacum officinale), Erva de Palmeira, Unha do Diabo (Harpagophytum procumbens), Semente de aneto, Aneto (Anethum graveolens), Pimenta Dorigo (Tasmannia stipitata), Echinacea, Echinopanax Elatum, Edelweiss, Sabugueiro, Flor de sabugueiro, Helénio, Eleutherococcus senticosus, Epazote (Chenopodium ambrosioides), Efedrina, Eryngium foetidum, Eucalipto, Erva-doce (Foeniculum vulgare), Feno-grego, Mitricária, Es- crofulária, Cinco especiarias em pó (Chinese), Fo-ti-tieng, Fumária, Galanga, Garam masala, Agrião de jardim, Cebolinhas de alho, Alho, Gengibre (Zingiber officinale), Ginkgo biloba, Ginseng, Ginseng, Sibe- riano (Eleutherococcus senticosus), Ruibarbo de Cabra (Galega officinalis), Goada masala, Solidago, Selo de Ouro, Gotu Kola, Grãos de paradiso (Aframomum melegueta), Grãos de Selim (Xylopia aethiopi- ca), Extrato de semente de uva, Chá-verde, Hera, Guaco, Gypsywort, Espinheiro-alvar (Crataegus sanguinea), Árvore Hawthorne, Cânhamo, Ervas de Provença, Hibisco, Azevinho, Cardo-santo, Lúpulo, Lúpulo das montanhas, Rábano, Cavalinha (Equisetum telmateia), Hissopo (Hyssopus officinalis), Jalapa, Jasmim, pérola de Jasmim, Jiaogulan (Gynostemma pentaphyllum), Erva-daninha Joe Pye (Gravelroot), John, o Conquistador, Cedro-do-mato, Folhas de Limão Kaffir (Citrus hystrix, C. papedia), Kaala masala, Polignácia, Madeira, Chá do Labrador, Erva-coalheira, Alquemila, Agrião terra, Lavanda (Lavandula spp.), Ledum, Erva-cidreira (Melissa officinalis), Limão manjericão, Capim-limão (Cymbopogon citratus, C. flexuosus e outras espécies), Limão de casca-de-ferro (Eucalyptus staigeriana), Menta-limão, Mirto de limão (Backhousia citriodora), Tomilho Limão, Verbena de limão (Lippia citriodora), Alcaçuz - adaptogênio, Flor de Lima, Limnofila aromática, Linhaça, Alcaçuz, Pimenta-longa, Levístico (Levisticum officinale), Siraitia, Macaé, Mahlab, Malabathrum, Árvore-espinheiro de Manchúria (Aralia manchurica), Mandrake, Manjerona (Origanum majorana), Marrubium vulgare, Chá do Labrador do Brejo, Marshmallow, Mástique, Ulmeira, Mei Yen, Pimenta malagueta (Aframomum mele- gueta), Menta, Cardo de leite (Silybum), Bergamota (Monarda didyma), Agripalma, Montanha Skullcap, Verbasco (Verbascum thapsus), Mostarda, semente de Mostarda, Nashia inaguensis, Nim, Nepeta, Urtiga, Nigella sativa, Kolanji, Cominho preto, Noni, Noz-moscada, Erva-de- macaé, Maconha, Oenothera (Oenothera biennis), Olida (Eucalyptus olida), Orégano (Origanum vulgare, O. heracleoticum), Raiz de Lírio, Osmorhiza, Folha de Oliva (usada em chá e como suplemento herbáceo), Panax quinquefolius, folha Pandan, Páprica, Salsa (Petroselinum crispum), Flor da Paixão, Patchuli, Poejo, Pimenta (preta, branca e verde), Hortelã-pimenta, Goma de Hortelã-pimenta (Eucalyptus dives), Perilla, Banana-da-terra, Romãzeira, Ponch phoran, Semente de Papoula, Prímula (Prímula), flores cristalizadas, misturas de chá seco, Psyllium, Beldroega comum, Quássia, Quatro especiarias, Ramsons, Framboesa, Framboesa (folhas), Cogumelo-rei, Joina-dos-matos, Rhodiola rosada, Riberry (Syzygium luehmannii), Erva Rocket/Rúcula, Camomila romana, Rooibos, Roseira brava, Alecrim (Rosmarinus officinalis), Bagas da Tramazeira, Ruibarbo, Óleo de Cártamo, Açafrão, Sálvia (Salvia officinalis), Canela de Saigon, Era de São João, Salada Burnet (Sanguisorba minor ou Poterium sanguisorba), Sálvia, Pimenta de Sichuan (Sansho), Sassafrás, Segurelha (Satureja hortensis, S. montana), Esquisandra (Schisandra chinensis), Scutellaria costarica- na, Senna (erva), Senna obtusifolia, Semente de gergelim, Sheep Sorrel, Shepherd's Purse, Sialagogue, ginseng siberiano (Eleutherococcus senticosus), Siraitia grosvenorii (luohanguo), Skullcap, Abrunho, Amoras, Mancha Vara, Sonchus, Azeda (Rumex spp.), Abrótano, Hortelã, Veronica, Cila, Anis estrelado, Estevidosídeo, Folhas de Morango, Suma (Pfaffia paniculata), Sumagre, Segurelha-anual, Sutherlandia frutescens, Erva-limeira, Mirra doce (Myrrhis odorata), Aspérula doce, pimenta Szechuan (Xanthoxylum piperitum), Tacamahac, Tamarindo, Tandoori masala, Tanásia, Estragão (Artemisia dracunculus), Chá, Teucrium polium, Manjericão tailandês, Cardo, Tomilho, Toor DaIl, Tormentil, Tribulus terrestris, Tulsi (Ocimum tenuiflorum), Açafrão-da- terra (Curcuma longa), Uva Ursi também conhecido como Uva-de- urso, Baunilha (Vanilla planifolia), Vasaka, Verbena, Vetiver, Coentro Vietnamita (Persicaria odorata), Wasabi (Wasabia japonica), Agrião, Wattleseed, Gengibre selvagem, Alface selvagem, Tomilho selvagem, Segurelha, Hamamélis, Lício da Barbária, Madeira Avens, Madeira Be- tony, Aspérula, Absinto, Milefólio, Yerba Buena, Erva-mate, Ioimbé, Za'atar, Raiz Zedoária ou derivações dos mesmos em solução(ões) aquosas ou semiaquosas.
ETAPA DE HIDRATAÇÃO E LAVAGEM
[0030] Em uma modalidade, as favas de cacau ou outro substrato agrícola são preparados para uso nos presentes métodos da invenção, o que resulta em um preparado de fava de cacau ou outro substrato agrícola.
[0031] Em algumas modalidades, a fava de cacau ou outro substrato agrícola não é seco antes de ser usado nos processos da presente invenção. Nessa modalidade, após a fava de cacau ou outro substrato agrícola ser colhido, a fava de cacau ou outro substrato agrícola tem, opcionalmente, a polpa removida por quaisquer processos conhecidos na técnica (desmucilado), como fermentação e, então, a fava de cacau ou outro substrato agrícola podem ser usados na presente invenção sem o tratamento adicional de fava de cacau ou outro substrato agrícola, como secagem. A polpa também pode ser retida. Geralmente, após a etapa de fermentação (desmucilagem), as favas de cacau têm um teor de umidade de cerca de 55% a 60%. Nessa modalidade, a etapa de hidratação e/ou lavagem conforme descrito abaixo não é necessária ou se torna óbvia pelo uso da fava de cacau ou outro substrato agrícola não seco. Em algumas modalidades, a fava de cacau ou outro substrato agrícola podem ser parcialmente secos e subsequentemente hidratados conforme descrito no presente documento.
[0032] Em algumas modalidades, as favas de cacau ou outro substrato agrícola são preparados por uma etapa de hidratação das favas de cacau ou outro substrato agrícola. A hidratação é particularmente útil onde as favas de cacau ou outro substrato agrícola foram secos. A hidratação garante que os substratos tenham um teor ideal de umidade para o processo de cultura (miceliação). A hidratação pode ser realizada por um número de métodos conhecidos na técnica.
[0033] A hidratação pode ser realizada por um meio aquoso. O meio aquoso inclui água e, opcionalmente, excipientes adicionais. A água pode ser, sem limitação, deionizada, de torneira, destilada ou mineralizada. Outros excipientes podem ser adicionados à água, como tampões para manter um certo pH, cloreto de sódio, ácido cítrico e/ou ácido ascórbico. O pH pode ser neutro ou ajustado. A temperatura do meio aquoso pode ser temperatura ambiente ou elevada em temperatura para acelerar o processo de hidratação.
[0034] A hidratação pode ser realizada permitindo-se que as favas de cacau ou outro substrato agrícola sejam embebidos no meio aquoso por qualquer duração de tempo apropriada, que varia de alguns segundos ou menos a uma noite inteira. As favas de cacau, por exemplo, são razoavelmente higroscópicas e precisarão de menos tempo para hidratar. A etapa de imersão para a hidratação e/ou a etapa de extração aquosa podem durar menos de um segundo, pelo menos cinco segundos, pelo menos dez segundos, pelo menos trinta segundos, pelo menos um minuto, pelo menos cinco minutos, pelo menos dez minutos, pelo menos vinte minutos, pelo menos trinta minutos, pelo menos quarenta minutos, pelo menos cinquenta minutos, pelo menos uma hora, pelo menos uma hora e meia, pelo menos duas horas, pelo menos duas horas e meia, pelo menos três horas, pelo menos quatro horas, pelo menos cinco horas, pelo menos seis horas, pelo menos sete horas, pelo menos oito horas, pelo menos dez horas, pelo menos doze horas ou pelo menos quinze horas, pelo menos dezoito horas, pelo menos vinte e quatro horas, pelo menos trinta e seis horas ou pelo menos quarenta e oito horas. Entretanto, o tempo para a etapa de hi- dratação deve ser selecionado em vista do fato de que as favas de cacau ou outro substrato agrícola não são estéreis e nem estão imersas por muito tempo, o que pode encorajar o crescimento de organismos indesejados. O tempo de hidratação deve ser selecionado para otimizar o teor de umidade do substrato e constituintes moleculares da fava de cacau ou outros substratos agrícolas.
[0035] As favas de cacau ou outro substrato agrícola podem ser hidratados a qualquer temperatura que preveja hidratação eficaz. Em uma modalidade, a temperatura do componente aquoso é a temperatura ambiente. A temperatura de hidratação deve ser selecionada em vista do fato de que em altas temperaturas, os componentes de sabor desejáveis podem ser alterados.
[0036] A hidratação pode ser realizada sob pressão atmosférica normal ou pode ser realizada sob pressões aumentadas para acelerar o processo de hidratação e/ou processo de extração aquosa, como entre 0,1 megapascal (1 atmosfera) e 0,2 megapascal (2 atmosferas), por exemplo, em 0,15 megapascal (1,5 atmosferas).
[0037] O teor de umidade das favas de cacau ou outro substrato agrícola hidratados está, opcionalmente, entre cerca de 20% e cerca de 80% de teor de umidade, entre 40% e 70% de um teor de umidade. Em uma modalidade, o teor de umidade é pelo menos cerca de 30%, pelo menos cerca de 50% ou pelo menos cerca de 60%. Em uma modalidade, para a fava de cacau, o teor de umidade é pelo menos cerca de 36%.
[0038] A etapa de hidratação pode ocorrer em um contentor por qualquer método conhecido na técnica. Em uma modalidade, o contentor é um tambor, como um tambor de 0,24 m2 (55 galões) ou um balde de 0,02 m2 (5 galões). Nessa modalidade, é permitido que uma razão volumétrica de 1:1 (volumes iguais) de favas de cacau ou outro componente aquoso de substrato agrícola permaneça por 5 minutos a 24 horas. Por exemplo, o tambor de 0,24 m2 (55 galões) ou balde de 0,02 m2 (5 galões) é preenchido até da metade até o topo com favas de cacau ou outro substrato agrícola e o meio aquoso é adicionado para submergir as favas de cacau ou outro substrato agrícola. Nessa modalidade, as favas de cacau ou outro substrato agrícola podem absorver todo o componente aquoso. Em outra modalidade, as favas de cacau ou outro substrato agrícola, mantidos em um contentor, podem ser enchidas com água para submergir completamente as favas, em uma modalidade, sem excesso significativo.
[0039] Em uma modalidade, a etapa de fornecimento de preparados de favas de cacau ou outro substrato agrícola inclui opcionalmente uma etapa de remoção de componentes de gosto indesejável por lavagem ou enxague das favas de cacau ou outro substrato agrícola. A lavagem ou enxague pode ser o meio aquoso conforme descrito acima. Em uma modalidade, as favas de cacau ou outro substrato agrícola são lavados ou enxaguados opcionalmente antes, durante ou após a etapa de hidratação opcional. A lavagem, drenagem e/ou enxague das favas de cacau ou outro substrato agrícola podem ser realizados por qualquer método conhecido na técnica. As favas de cacau ou outro substrato agrícola podem ser lavadas uma vez, pelo menos duas vezes, pelo menos três vezes, pelo menos quatro vezes, pelo menos cinco vezes, pelo menos dez vezes, pelo menos quinze vezes, pelo menos vinte vezes, pelo menos cinquenta vezes ou mais. Em uma modalidade, a etapa de lavagem é realizada duas vezes. A etapa de lavagem ou enxague pode incluir momentos de imersão opcionais conforme descrito no presente documento.
[0040] Em uma modalidade, as favas de cacau ou outro substrato agrícola são lavados por um método de preenchimento de um contentor que mantém as favas de cacau ou outro substrato agrícola com água para submergir o cacau ou outros substratos agrícolas, o que permite que a água realize imersão por 10 segundos a 4 horas, drene a água e repita as etapas quantas vezes desejadas ou eleve as favas ao nível de umidificação desejado. A etapa de lavagem ou enxague também pode ser conduzida até que as favas de cacau ou outro substrato agrícola tenham tido uma quantidade determinada de componente de gosto indesejado removido.
[0041] As favas de cacau ou outro substrato agrícola podem ser lavadas em qualquer temperatura que permita a extração eficaz de componentes de gosto indesejável; em uma modalidade, a temperatura do meio aquoso é a temperatura ambiente. A temperatura de lavagem deve ser selecionada levando-se em consideração o fato de que em temperaturas altas, componentes de sabor desejáveis podem ser alterados, destruídos e/ou extraídos.
[0042] Em outra modalidade, o meio aquoso ou componente em excesso é removido e/ou separado e/ou drenado das favas de cacau hidratadas ou do outro substrato agrícola após a etapa de hidratação. Essa etapa também pode ser referida como uma etapa de extração aquosa. Essa etapa pode ser feita para remover componentes de gosto indesejável.
[0043] A maior parte dos componentes de café inclui cafeína, minerais, ácido tânico, celulose, água, gordura, proteína e fibras. O café contém metilxantinas tais como cafeína, teofilina, e teobromina, e outras classes de compostos tais como flavonoides, fenóis, ácidos fenóli- cos, alcaloides voláteis, alcaloides não voláteis, e ácidos clorogênicos, entre outros. O café torrefeito contém alguns componentes de gosto indesejável também. Esses componentes vão contribuir para uma percepção de um gosto acre e/ou amargo para o café. As favas de café também são amargas, o que resulta de compostos tais como 2-metóxi- 3-isopropilpirazina e metilxantinas tal como teobromina, por exemplo. Esses componentes de gosto indesejável são comumente mitigados pelo açúcar ou creme para mascarar os componentes de gosto indesejável que adicionam açúcar indesejável e gorduras à dieta do usuário. A redução de amargor e/ou acidez é notada em variedades de café mais vantajosas e dispendiosas, tal como o café Arábico.
[0044] A etapa de hidratação, a etapa de extração aquosa, a etapa de lavar e/ou enxaguar, individualmente ou em conjunto, podem opcionalmente reduzir e/ou remover componentes de gosto indesejável das favas de cacau ou outro substrato agrícola e podem se executadas conforme descrito no presente documento até que a quantidade desejada de componente de gosto indesejável tenha sido removida das favas de cacau ou outro substrato agrícola.
[0045] Em algumas modalidades, componentes de gosto indesejável são removidos e incluem modalidades em que 5% de componentes de gosto indesejável são removidos; em outras modalidades, até 10%, até 15%, até 20%, até 25%, até 30%, até 35%, até 40%, até 45%, até 50%, até 55%, até 60%, até 65%, até 70%, até 75%, até 80%, até 85%, até 90%, ou até 95% de componentes de gosto indesejável são removidos nos processos da presente invenção, que incluem a etapa de enxague. Em algumas modalidades, de cerca de 25% a cerca de 80% dos componentes de gosto indesejável são removidos. Em uma modalidade, cerca de 45 a 50% dos componentes de gosto indesejável são removidos.
[0046] Em algumas modalidades, a determinação da extensão da remoção de pelo menos um componente de gosto indesejável é determinada pela aparência, gosto e/ou composição química (pelos métodos conhecidos na técnica) do produto miceliado. Alternativamente, a aparência das favas de cacau ou de outro substrato agrícola ou composição química pode ser determinada pelos métodos conhecidos. Essa determinação pode ser quantitativa, por exemplo, a composição química do produto miceliado pode ser medida por métodos de ensaio, ou determinada qualitativamente pelo gosto testando-se por pessoas versadas.
[0047] Em uma modalidade, até 5% de um ou mais dos componentes de gosto indesejável são removidos; em outras modalidades, até 10%, até 15%, até 20%, até 25%, até 30%, até 35%, até 40%, até 45%, até 50%, até 55%, até 60%, até 65%, até 70%, até 75%, até 80%, até 85%, até 90%, ou até 95% de um ou mais dos componentes de sabor indesejável são removidos nos processos da presente invenção. Em uma modalidade, um ou mais dos componentes de sabor indesejável são removidos quantitativamente.
[0048] Em uma modalidade, a redução dos componentes de sabor desejáveis tais como óleos voláteis é minimizada pelos processos da presente invenção. Em favas de cacau em processamento ou outro substrato agrícola, a técnica ensina a tratar o vapor d’água, extrair o vapor d’água, ou tirar vapor d’água das favas de cacau ou de outro substrato agrícola antes da torrefação, que pode remover muitos óleos voláteis desejáveis. Os processos da presente invenção evitam a etapa de torrefação de vapor d’água para, desse modo, ajudar a preservar os óleos voláteis desejáveis que contribuem para o sabor do cacau.
TRATAMENTO TÉRMICO
[0049] Os métodos da presente invenção compreendem opcionalmente adicionalmente um método de tratamento térmico tais como pasteurização e/ou esterilização das favas de cacau ou outro substrato agrícola. Em uma modalidade, as favas de cacau ou outro substrato agrícola são esterilizados para fornecer favas de cacau preparadas ou outro substrato agrícola preparado. Essa etapa pode ser alcançada qualquer método conhecido na técnica. Por exemplo, essa etapa pode ser realizada mediante a pressão atmosférica ou mediante a pressão aumentada. Essa etapa pode também ser referida como "pré- processamento". Essa etapa é realizada para reduzir ou remover con- taminantes de organismos microbianos ou fúngicos indesejáveis nas favas de cacau ou em outro substrato agrícola, particularmente esporos de fungos.
[0050] Os métodos para pasteurização e/ou esterilização podem ser executados conforme conhecidos na técnica. Conforme um exemplo de pasteurização, as favas de cacau ou outro substrato agrícola podem ser submetidos ao tratamento térmico de secagem na pressão atmosférica em 62,78 °C (145 °F) até 87,78 °C (190 °F) por 30 a 90 minutos, alternativamente em 60 °C (140 °F) até 98,89 °C (210 °F) por 20 a 100 minutos.
[0051] A esterilização das favas de cacau ou de outro substrato agrícola pode ser realizada conforme conhecido na técnica. Por exemplo, as favas de cacau ou outro substrato agrícola podem ser esterilizadas aquecendo-se mediante pressão de 0,1 MPa (15 lb/in2) em 121 a 122 °C por 20 a 100 minutos, tal como 90 minutos, e com adição de o,34 kg (% lb) para cada 304,8 metros (1.000 pés) acima do nível do mar. Em outra modalidade, o vapor d’água é superaquecido a 121,67 a 123,89 °C (251 a 255 °F). Em uma modalidade, as favas de cacau são esterilizadas por 80 minutos em 0,15 MPa (22 psi) com vapor d’água saturado levemente seco a 123,89 °C (255 °F). As favas de café ou outro substrato agrícola podem ser esterilizadas em um recipiente. O recipiente pode, opcionalmente, ser o mesmo recipiente que o recipiente usado para a extração aquosa e/ou etapa de hidratação. O recipiente pode ser vedado opcionalmente e as favas de cacau ou outro substrato agrícola podem ser esterilizadas pela aplicação de calor ao exterior do recipiente. Em uma modalidade, o calor é fornecido aplicando-se vapor d’água ao exterior do recipiente por um período de tempo suficiente para permitir a esterilização dos conteúdos.
[0052] O recipiente vedado de algumas modalidades pode fornecer algumas vantagens. Por exemplo, vedar o recipiente minimiza esca- pamento de componentes de sabor e de componentes aromáticos das favas de cacau ou de outro substrato agrícola, que pode ser notado pela falta de aroma das favas de cacau ou de outro substrato agrícola a partir do vapor d’água do exaustor de pressão ou autoclave durante o processo de esterilização. A vedação também impede o sabor solúvel em água e os componentes aromáticos de escapar das favas de cacau ou de outras favas de substrato agrícola diretamente no vapor d’água, ar quente, ou água aquecida.
[0053] Recipientes adequados incluem recipientes conhecidos na técnica para cultivo de cogumelos. Opcionalmente os recipientes tem uma seção para troca de ar ou gases, mas não permite a passagem de outro componente. Tais seções são conhecidas na técnica e incluem tiras de filtro. Em uma modalidade, o recipiente é um barril, por exemplo, um barril de 208,2 litros (55 galões). Em algumas modalidades, os recipientes da presente invenção podem ser barris de vidro, carvão ou de aço inoxidável, garrafões ou bolsas de polipropileno ou barris. Fermentadores e biorreatores também podem ser usados como recipientes da presente invenção. Em algumas modalidades, os recipientes têm meios para troca de gases que impedem a passagem de contaminantes, tais com zonas de filtro ou válvulas. Em uma modalidade o recipiente é uma bolsa, por exemplo, uma bolsa autoclavável de polipropileno com tiras de filtro, e uma bolsa de polietileno irradiada por gama com zonas de filtro.
[0054] Uma vantagem adicional das bolsas descritas acima é que quando vedada, as mesmas se conformam ao formato das favas de cacau ou outras favas de substrato agrícola quando pressurizadas durante a etapa de esterilização. A conformidade das bolsas ao formato das favas de cacau ou outro substrato agrícola inibe o movimento das favas de cacau ou outro substrato agrícola em relação um ao outro, o que impede ou minimiza a degradação da superfície das favas ou substratos. Essa conformidade da bolsa ao formato das favas de cacau ou outro substrato agrícola também aprimora a transferência de calor, conforme a falta de ar impede isolamento de ar das favas de cacau ou outro substrato agrícola do calor. As bolsas podem ser de qualquer dimensão. Em uma modalidade, as bolsas são alongadas ou achatadas para apressar o processo de aquecimento, por exemplo, o comprimento pode ser três vezes o diâmetro da bolsa. Essa dimensão também pode facilitar o empilhamento vantajoso de bolsas ou posicionamento de bolsas para esterilização.
[0055] O tamanho das bolsas a serem usadas pode ser escolhido de acordo com o volume ou quantidade de favas de cacau ou outro substrato agrícola para tratamento pelos métodos da presente invenção. Quantidades exemplificativas de favas de cacau ou outro substrato agrícola para usar por bolsa incluem 0,45 Kg a 68,04 kg (1 lb a 150 lbs) de favas de cacau ou outro substrato agrícola, embora quantidades maiores e menores de favas de cacau ou outro substrato agrícola sejam contempladas.
[0056] Em outra modalidade, as bolsas são achatadas, e têm uma espessura de 1/10 ou menos do que a soma das bordas periféricas de cada bolsa. As bolsas podem ser redondas em formato, e ter uma circunferência que define as bordas periféricas de cada bolsa. Alternativamente, as bolsas podem ser retangulares de modo que a soma dos lados define as bordas periféricas de cada bolsa. As bolsas podem ser unidas de modo que uma série de bolsas retangulares possam ser facilmente manuseadas em um ambiente de produção. Todas as bolsas têm remendos respiráveis (tiras de filtro) que fornecem para a aproximação de um ambiente anaeróbico. Ainda em outra modalidade, as bolsas são achatadas para manter uma camada de favas que é menos do que três favas de espessura. Consequentemente, o calor penetra rapidamente nas bolsas achatadas para as favas para efetuar a esterilização ou pasteurização. Nessa modalidade, devido à pressurização, a bolsa irá se conformar ao formato das favas de cacau ou outro substrato agrícola, e isso irá render uma superfície áspera na superfície externa de cada bolsa quando a pressão for aplicada. A superfície de bolsa áspera forma espaços intersticiais que permitem que o calor penetre entre bolsas que estão empilhadas para acelerar o processo de esterilização e pasteurização. A superfície áspera das bolsas também induz fluxo de fluido turbulento ao longo da superfície de bolsa para aprimorar a transferência de calor para as favas de cacau ou outro substrato agrícola.
[0057] Em outra modalidade, as favas de cacau ou outro substrato agrícola estão embalados a vácuo nas bolsas para eliminar o ar que poderia drenar o sabor volátil ou componentes aromáticos das bolsas.
[0058] Em outra modalidade, as bolsas são substituídas por folhas de material de autoclave, tal como plástico livre de BPA. Uma folha de base é dispensada continuamente ao longo do topo de um transportador, favas de cacau ou outros substratos agrícolas são, então, estendidos na folha de base dispensada. Uma segunda folha de topo é estendida sobre as favas de cacau ou outro substrato agrícola e vedada à folha de base. Um vácuo é aplicado entre a folha de topo e de fundo para evacuar o ar, então, as folhas são vedadas em distâncias predeterminadas para formar seções. Cada seção mantém um volume predeterminado de favas de cacau ou outro substrato agrícola. As seções são transportadas através de uma autoclave, ou forno, para efetuar o processo de pasteurização ou esterilização. Calor pode ser aplicado em um ambiente pressurizado ou não pressurizado na forma de vapor d’água, água quente sob pressão, ar quente em fluxo turbulento ou laminar sobre as folhas ou outro fluido aquecido. Em uma variação dessa modalidade, as seções que contêm as favas de cacau ou outro substrato agrícola são enrolados e colocados em uma autoclave para pressurização ou esterilização. Um rolo pode conter muitas seções.
[0059] Visto que as favas de cacau ou outro substrato agrícola cause a superfície áspera no exterior das folhas, o espaço intersticial existe no lado externo da superfície das folhas para apressar o processo de pasteurização ou esterilização por permitir que o fluido aquecido penetre facilmente entre as folhas. A superfície de folha áspera inclui também um fluxo de fluido que aprimora adicionalmente a transferência de calor para as favas de cacau ou outro substrato agrícola. A superfície áspera inibe o movimento relativo entre as favas para garantir que as favas de cacau ou outro substrato agrícola não rachem, fis- surem ou atritem.
COMPONENTE FÚNGICO
[0060] O componente fúngico para usar com a presente invenção pode ser fungos do filo Basidiomycotina de Eumycota, que inclui quaisquer Fungos que pertençam a Polyporaceae e Hericiaceae, em que Fungos selecionados de Basidiomycotina e Eumycota incluem Eumycota, que inclui pelo menos um selecionado de Basidiomycotina e Ascomycotina, que inclui as cepas: Hericium erinaceus, Pleurotus ostreatus, Pleurotus eryngii, Pleurotus citrinopileatus, Pleurotus dja- mor, Trametes versicolor, Lentinula edodes, Armillariella mellea, Tri- choloma matsutake, Flammulina velutipes, Vovariella volvacea, Agari- cus campestris, Agaricus blazei, Grifola frondosa, Pholiota nameko, Agrocybe cylindracea, Boletus ornatipes, Ganoderma lucidum, Gano- derma applanatum, Ganoderma tsugae, Hypsizygus marmoreus, Lari- cifomes officinalis, Morchella hortensis, Morchella angusticeps, Phelli- nus linteus, Auricularia auricula, Tremella fuciformis, Inonotus obliquus, Fomes fomentarius, Laetiporus sulphureus, Bridgeoporus nobillismus, Cordyceps sinensis, Cordyceps militaris, Xylaria nigripes, Tuber mela- nosporum, Tuber magnatum, Polyporus umbellatus.
[0061] Geralmente, a invenção não contempla o uso dos seguintes fungos: Rhizopus chinensis, R. oligosporus, Aspergillus flavusoryzae, A tamari, A. niger, A. nidulans, A. sojae, Fusarium venenatum, F. gra- minearum, Saccharomyces cerevisiae, S. exiguus, S. pombe, Saccha- romycopisis (Candida) lipolytica, Candida utilis, C. krusei or C. tropica- lis, Pichia saitoi, Kluyveromyces fragilis, Endomycopsis fibuliger, the Ascomycete Chaetomium, Zygosaccharomyces rouxii, Mucor racemo- sus, Geotrichum candidum, Penicillium camemberti, P. notatum, P. gri- seofulvuum, P. grisea, P. chrysogenum, P. roqueforti, P. nalgiovense, Neurospora intermedia, Amylomyces rouxii, Endomycopsis burtonii, Psycilocibin, Monascus purpureus, Debaryomyces hansenii, Ashbya gossypii, Blakeslea trispora, Tolypocladium niveum, T. inflatum, Strep- tomyces, Neocosmospora, Stachybotrys, Beauveria, Cephalosporium acremonium, C. acremonium, Gibberella fujikuroi, Fusidium cocci- neum, Monascus ruber, Claviceps fusiformis, C. paspali, C. purpurea, Aminita muscaria, or A. phalloides.
[0062] Os componentes fúngicos úteis na presente invenção podem ser preparados por métodos conforme descrito no presente documento. Por exemplo, em uma modalidade, uma cepa pura de fungos é usada. Em algumas modalidades, a cepa pura de fungos tem a capacidade de efetivamente crescer em e/ou miceliar as favas de cacau ou outro substrato agrícola preparados para preparar os produtos mi- celiados. Qualquer cepa de fungos identificada no presente documento que tem a capacidade de efetivamente crescer em e/ou miceliar favas de cacau ou outro substrato agrícola preparados pode ser usada para os métodos da presente invenção.
[0063] Os componentes fúngicos úteis na presente invenção podem ser preparados por métodos conforme descrito no presente documento. Por exemplo, em uma modalidade, uma cepa pura de fungos é usada. Foi surpreendentemente encontrado pelos inventores da pre sente invenção que algumas cepas fúngicas de uma espécie particular têm intensificado e/ou aumentado a habilidade de crescer em, metabo- lizar ou de outro modo utilizar e/ou modificar favas de cacau ou outro substrato agrícola e/ou remover um ou mais componentes de gosto indesejável das favas de cacau ou outro substrato agrícola e/ou tolerar melhor a presença de favas de cacau ou outro substrato agrícola (ou extrair) no meio. Em uma modalidade, o componente de gosto indesejável é metilxantinas, tal como teobromina e/ou 2-metóxi-3- isopropilpirazina. Em outra modalidade, o componente fúngico reduz ou remove a cafeína das favas de cacau ou outro substrato agrícola.
[0064] Portanto, os métodos da invenção têm opcionalmente como uma etapa adicional um método para selecionar um componente fúngico que tem uma habilidade intensificada e/ou aumentada para crescer em, metabolizar ou utilizar de outro modo e/ou modificar favas de cacau ou outro substrato agrícola e/ou remover um ou mais componentes de gosto indesejável das favas de cacau ou outro substrato agrícola, e/ou remover cafeína e/ou tolerar melhor a presença de favas de cacau ou outro substrato agrícola (ou extrato) no meio. Esse método compreende triagem de um número de cepas de uma espécie fúngica desejada para selecionar para um componente fúngico adequado (cepa) que exibe a habilidade intensificada e/ou aumentada para crescer em, metabolizar ou utilizar de outro modo e/ou modificar favas de cacau ou outro substrato agrícola e/ou remover um ou mais componentes de gosto indesejável e/ou cafeína das favas de cacau ou outro substrato agrícola, e usar essas cepas selecionadas nos métodos da invenção.
[0065] Em uma modalidade, uma cepa adequada irá gerar um anel distintivamente escuro de matéria de café em torno do perímetro da colônia em uma placa de Petri, o que mostra que a cepa rejeita e exclui ativamente certos aspectos de café como uma fonte de alimento. A cor escura do anel, sem se ater à teoria, mostra que ácido clorogê- nico é rejeitado como uma fonte de alimento e é removido/volatilizado da cepa, e/ou está sob digestão antes de crescimento fúngico exagerado.
[0066] Em uma modalidade, uma cepa pura de qualquer Gano- derma lucidum disponível comercialmente é usada como o componente fúngico. Embora todas as cepas de Ganoderma lucidum sejam eficazes para a presente invenção, foi constatado surpreendentemente que algumas cepas selecionadas têm as habilidades intensificadas úteis para a presente invenção conforme descrita no presente documento. Uma tal cepa útil para o componente fúngico da presente invenção é a cepa Ganoderma lucidum 806, (Alice Chen; Buffalo, NY; 4/94) disponível comercialmente a partir de Pennsylvania State University (The Pennsylvania State University Mushroom Culture Collection, disponível a partir de College of Agriculture Sciences, Department of Plant Pathology and Environmental Microbiology, 117 Buckhout Laboratory, The Pennsylvania State University, University Park, Pennsylvania, EUA 16802). Essas cepas selecionadas foram depositadas com ATCC conforme descrito abaixo.
[0067] Essa cepa foi determinada surpreendentemente pelos presentes inventores para crescer de modo mais eficaz, metabolizar ou utilizar de outro modo e/ou modificar favas de cacau ou outro substrato agrícola e/ou remover um ou mais componentes de gosto indesejável das favas de cacau ou outro substrato agrícola, o que inclui ácido clo- rogênico e/ou tolerar melhor a presença de favas de cacau ou outro substrato agrícola (ou extrato) no meio. Em outra modalidade, essa cepa pode remover e/ou reduzir a quantidade de cafeína em favas de cacau ou outro substrato agrícola. Portanto, em uma modalidade, o componente fúngico é a cepa Ganoderma lucidum 806 Alice Chen; Buffalo, NY; 4/94. Essas cepas selecionadas foram depositadas com ATCC conforme descrito abaixo.
[0068] Em uma modalidade, uma cepa pura de qualquer Cor- dyceps sinensis disponível comercialmente é usada como um componente fúngico. Embora todas as cepas de Cordyceps sinensis sejam eficazes para a presente invenção, foi constatado surpreendentemente que algumas cepas selecionadas têm as habilidades intensificadas úteis para a presente invenção conforme descrita no presente documento. Uma tal cepa útil para o componente fúngico da presente invenção é a cepa Cordyceps sinensis 1009, (Cepa 1009 de Fungo de Lagarta; Buffalo, NY; 1/2014) disponível comercialmente a partir de Pennsylvania State University (The Pennsylvania State University Mushroom Culture Collection, disponível a partir de College of Agriculture Sciences, Department of Plant Pathology and Environmental Mi-crobiology, 117 Buckhout Laboratory, The Pennsylvania State University, University Park, Pennsylvania, EUA 16802).
[0069] Essa cepa foi determinada surpreendentemente pelos presentes inventores para crescer de modo mais eficaz, metabolizar ou utilizar de outro modo e/ou modificar favas de cacau ou outro substrato agrícola e/ou remover um ou mais componentes de gosto indesejável das favas de cacau ou outro substrato agrícola, o que inclui metilxanti- nas, como teobromina e/ou 2-metóxi-3-isopropilpirazina e/ou tolerar melhor a presença de favas de cacau ou outro substrato agrícola (ou extrato) no meio. Em outra modalidade, essa cepa pode remover e/ou reduzir a quantidade de cafeína em favas de cacau ou outro substrato agrícola. Portanto, em uma modalidade, o componente fúngico é Cor- dyceps sinensis (Cepa 1009 de Fungo de Lagarta; Colorado Corp, 1/2014). Essas cepas selecionadas foram depositadas com ATCC conforme descrito abaixo.
[0070] As cepas selecionadas de modo semelhante para H. erina- ceus, T. versicolor, L. edodes, T. matsutake, F. velutipes, A. blazei, G. frondosa, P. nameko, L. officinalis, M. hortensis, M. angusticeps, A. auricula, T. fuciformis, I. obliquus, F. fomentarius, L. sulfureus, por exemplo, (ou para qualquer espécie de fungos mencionada no presente documento) foram obtidas por triagem de um número de cepas de cada espécie para selecionar para um componente fúngico adequado (cepa) que exibe a habilidade intensificada e/ou aumentada para crescer em, metabolizar ou utilizar de outro modo e/ou modificar favas de cacau ou outro substrato agrícola e/ou remover um ou mais componentes de gosto indesejável e/ou cafeína das favas de cacau ou outro substrato agrícola, e/ou pode tolerar melhor a presença de favas de cacau ou outro substrato agrícola, e usar essa(s) cepa(s) seleciona- da(s) nos métodos da invenção. Portanto, em algumas modalidades, a(s) cepa(s) selecionada(s) de H. erinaceus, T. versicolor, L. edodes, T. matsutake, F. velutipes, A. blazei, G. frondosa, P. nameko, L. officinalis, M. hortensis, M. angusticeps, A. auricula, T. fuciformis, I. obli- quus, F. fomentarius, L. sulfureus são usadas nos processos da presente invenção. Essas cepas selecionadas foram depositadas com ATCC conforme descrito abaixo.
[0071] Em uma modalidade, a cepa pura de Tuber melanosporum é obtida comercialmente. Em outra modalidade, pelo menos uma cepa é gerada a partir de cogumelo(s) trufado(s) silvestre(s) e usados na presente invenção como o componente fúngico. Embora antibióticos possam ser usados na cultura, cepas de crescimento mais vigoroso foram encontradas onde o meio de cultura não apresentou antibióticos. Por exemplo, uma cepa pura que compreende uma cepa materna para o cogumelo trufado original pode ser gerada pelo cultivo em um ágar indefinido que compreende folhas e gravetos de carvalho. Uma cepa pura que compreende uma cepa paterna para o cogumelo trufado original pode ser gerada pelo cultivo em um ágar indefinido que compreende folhas e gravetos de carvalho. Uma cepa pura, que compreende uma cepa, que compreende um cultivar, derivada a partir de recombi- nação genética não sexual ou anastomose de ambos os tipos coincidentes materno e paterno, pode ser gerada pelo cultivo no ágar indefinido, que compreende folhas e gravetos de carvalho. Em algumas modalidades, isolados apropriados (cepas) para uso incluem isolados que resultam em um aroma/gosto de sabor prazeroso no café micelia- do, que lembram flores (em algumas modalidades, alcançado pelas cepas maternas para um cogumelo trufado, conforme descrito no presente documento), ou isolados (cepas) que resultam em um aro- ma/gosto de sabor prazeroso, que lembram trufas (em algumas modalidades, alcançado por um cultivar derivado de recombinação genética não sexual ou anastomose de ambos os tipos coincidentes materno e paterno, conforme descrito no presente documento). Essas cepas selecionadas foram depositadas com ATCC, conforme descrito no presente documento.
[0072] Em uma modalidade, os métodos da invenção incluem a triagem de um número de cepas de T. melanosporum, criadas conforme descrito acima, para selecionar para um componente fúngico adequado (cepa) que exibe a habilidade intensificada e/ou aumentada para crescer em, metabolizar ou utilizar de outro modo e/ou modificar favas de cacau ou outro substrato agrícola e/ou remover um ou mais componentes de gosto indesejável e/ou cafeína das favas de cacau ou outro substrato agrícola, e/ou pode tolerar melhor a presença de favas de cacau ou outro substrato agrícola, e usar essas cepas selecionadas nos métodos da invenção. Essas cepas selecionadas foram depositadas com ATCC, conforme descrito no presente documento.
[0073] As cepas mencionadas no presente documento estão acessíveis ao público a partir da Pennsylvania State University Mushroom Culture Collection, acessíveis a partir da College of Agriculture Sciences, Department of Plant Pathology and Environmental Microbiology, 117 Buckhout Laboratory, A Pennsylvania State University, University Park, Pennsylvania, EUA 16.802, e a partir de Fungi Perfecti, caixa postal 7,634, Olympia, WA 98507, EUA.
[0074] Todas as cepas mencionadas no presente documento são depositadas com o ATCC em 10.801 University Boulevard, Manassas, Virginia 20.110 a 2.209 EUA nos termos das disposições de Budapest Treaty. O depósito estará irrevogavelmente e sem restrição ou condição acessível ao público mediante a emissão de uma patente e será mantido sob os termos do Tratado de Budapeste sobre o Reconhecimento Internacional do Depósito de Microrganismos para Efeitos do Procedimento em Matéria de Patentes. Estes depósitos foram feitos meramente como uma conveniência para os elementos versados na técnica e não são uma admissão de que um depósito é exigido sob 35 U.S.C. §112. Entretanto, deve-se verificar que a disponibilidade de um depósito não constitui uma licença para praticar o objetivo da invenção na derrogação de direitos de patente assegurados pela ação do governo. Este será mantido sem restrição no Depositório ATCC, que é um depositório público, por um período de 30 anos, ou 5 anos após a mais recente solicitação, ou para a vida executória da patente, a qual seja mais longa, e será substituído se o mesmo se tornar inviável durante aquele período.
MANUTENÇÃO E ADAPTAÇÃO DE COMPONENTES FÚNGICOS
[0075] Os componentes fúngicos úteis na presente invenção podem ser preparados por métodos conforme descrito no presente documento. Por exemplo, em uma modalidade, o componente fúngico é opcionalmente cultivado, mantido e/ou propagado em um meio não definido que compreende favas de cacau ou outro estrato de substrato agrícola antes do uso para inoculação das favas de cacau ou outro substrato agrícola. Em uma modalidade, o componente fúngico é mantido indefinidamente no meio não definido que compreende favas de cacau ou outro estrato de substrato agrícola no estado sólido, de flutuação, e morfologias submersas de vários volumes.
[0076] Quando os substratos agrícolas são favas de cacau, o extrato de favas de cacau pode ser substituído ou misturado por componentes de sabor da fava de cacau que são desejados para serem minimizados, metabolizados, reduzidos ou removidos. Por exemplo, componentes de sabor de cacau podem ser usados, tal como 2- metoxilo-3-isopropilpirazina e metilxantinas, tal como teobromina, obtida comercialmente como compostos químicos, adicionados ao meio como uma solução tampão de 0,1 M através de uma seringa filtrada em linha. As proporções relativas dos componentes de sabor podem ser ajustadas ou equilibradas no meio para alcançar objetivo de perfil de sabor específico. Esse treinamento também pode ser usado para treinar, adaptar o componente fúngico para produzir componentes desejáveis, tais como pirazina, por exemplo, metil pirazina.
[0077] Sem estarem limitados pela teoria, os inventores acreditam que a manutenção do componente fúngico no meio não definido que compreende favas de cacau ou outro substrato agrícola desempenha uma importante função na viabilidade a longo prazo e saúde do componente fúngico. Acredita-se que as mudanças perpétuas e sutis feitas de lote a lote de ágar e meio líquido durante o uso de meio não definido que compreende favas de cacau ou outro substrato agrícola evita, efetivamente, o fenômeno de derivação genética indesejada que ocorrerá ao longo do tempo aos componentes fúngicos quando são mantidos em meio idêntico (definido).
[0078] O meio não definido que compreende favas de cacau ou outro estrato de substrato agrícola pode ser feito por diversos métodos. Em uma modalidade, o meio não definido compreende favas de cacau aquosas puras ou outro estrato de substrato agrícola. De modo opcional, fontes de energia adicional podem ser acrescentadas. Os materiais são opcionalmente orgânicos e a água pelo menos filtrada por RO. Tem sido surpreendentemente verificado pelos inventores que o meio pode compreender cacau aquoso ou outro estrato de substrato agrícola sem nenhuma adição de excipientes adicionais, tais como fonte de energia adicional para o cultivo de fungo da presente invenção.
[0079] O meio sólido que compreende o meio não definido, compreende favas de cacau ou outro estrato de substrato agrícola. Em uma modalidade, o meio não definido que compreende favas de cacau ou outro meio de ágar de substrato agrícola para cultivar fungo para a eventual finalidade de miceliação favas de cacau esterilizados ou outro substrato agrícola pode compreender filtrados de favas de cacau ou outro substrato agrícola. Em uma modalidade, 0,03 a 24,4 cm (0,1 a 100 lbs) de favas de cacau ou outro substrato agrícola são de 0,1 a 100 l de água, respectivamente, de 1 minuto a 12 horas. O filtrado foi coletado através de 1 a 3 filtrações de mistura, e foram acrescentados de 14 a 17 g/l de ágar. A solução de extrato de base pode ser usada sozinha, ou comisturada com extratos de vegetais e/ou fontes adicionais de açúcar, tal como um suco de fruta.
[0080] Essa solução de base pode ser opcionalmente misturada com o filtrado de extrato aquoso (de qualquer tipo, mas de preferência, orgânico) de vegetais não definidos, tal como extrato de malte, extrato de levedura, batata, etc. Em uma modalidade, o vegetal é batata. A mistura de bata aquosa pode ser preparada através do amaciamento de 1 a 300 g de massa de batata em água fervente ou pressurizada, amassada, e o filtrado foi coletado através de 1 a 3 filtrações. De modo opcional, suco de fruta sem adição de açúcar pode acrescentado às favas de cacau de base ou outro meio de ágar de substrato agrícola. Em uma modalidade, o meio compreende de 0,1 a 10% em de extrato de malte, 0,1 a 10% em peso de extrato vegetal não definido com es- sência de fava de cacau, 0,1 a 10% em peso de extrato de levedura, 0,1 a 10% em peso de peptona, 0,1 a 10% em peso de glicose, 20 a 80% em peso de água, e 1 a 90% em peso de todas as favas de cacau ou outro substrato agrícola ou extrato de fava de café verde.
[0081] Conforme um exemplo não limitativo do meio, por exemplo, 0,51 cm (2 lbs) de favas de cacau ou outro substrato agrícola, pulverizado ou inteiro pode ser misturado em 0,946352946 litros de água à temperatura ambiente. A mistura pode ser mesclada. A mistura é, então, deixada para extrair por 20 minutos com agitação, depois filtrada três vezes através de malha fina. Essa solução pode ser usada isoladamente, ou misturada com o seguinte: cerca de 5 batatas orgânicas são colocadas em 10 L de água e autoclavadas 20 minutos para amaciar as batatas. As batatas são, então, pulverizadas com um amassa- dor de batatas e, então, filtradas através de malha fina três vezes. Pode ser acrescentado 1 l de suco de fruta comercial sem açúcar. O extrato de batata é acrescentado ao extrato de cacau e autoclavado.
[0082] Em outra modalidade, o meio pode compreender um licor de chocolate, que pode ser feito por métodos conhecidos na técnica, tais como obter uma trituração fina que é um líquido. O licor pode ser usado puro ou pode ser diluído como desejado. Um meio de licor de chocolate deve ser agitado.
[0083] Uma vez preparado, p meio pode ser esterilizado por qualquer método conhecido na técnica. Uma vez que o meio é resfriado, pode ser derramado nos pratos de Petri e culturas fúngicas foram propagadas de prato para prato em operação estéril, conforme conhecido na técnica. As inclinações para preparar tubos e frascos podem ser preparadas através desse método. Os pratos de Petri podem ser inoculados com flutuação e cultura de tecido líquido submerso, e com substrato miceliado.
[0084] Meio indefinido de meios líquidos que compreende fava de cacau ou outro extrato de substrato agrícola. A fava de cacau, ou outro extrato de substrato agrícola, e o extrato vegetal indefinido foram preparados conforme descrito para meios sólidos, com a exceção de que nenhum ágar é adicionado. Em caso de preparação para produzir uma cultura flutuante, 1 a 10 colheres de sopa de farinha foi adicionada à mistura, em uma modalidade, aproximadamente 1 colher de sopa por 10 a 15 l de cultura. Os meios podem ser esterilizados por métodos conhecidos na técnica. Uma vez resfriado, o vasilhame pode ser inoculado em operação estéril com uma placa de petri de seção colonizada, a partir de outras culturas líquidas de tecido, ou de amostras de substrato miceliado.
[0085] Em uma modalidade, o componente fúngico para inoculação em fava de cacau ou em outro substrato agrícola pode ser preparado por cultura submersa de tecido líquida, com uso do meio indefinido que compreende a fava de cacau ou outros meios líquidos de extrato de substrato agrícola, conforme definido no presente documento, e agitado em uma mesa agitadora. Em uma modalidade, a taxa de agitação é de 50 a 240 rpm, ou 85 a 95 rpm, e o componente é incubado por 4 a 90 dias. Em uma modalidade, a temperatura de incubação é 30,6 a 31,7 °C (87 a 89 °F).
[0086] Em uma modalidade, o componente fúngico é condicionado e/ou adaptado e/ou mantido em sua capacidade de crescer ou de me- tabolizar eficientemente, ou, de outro modo, utilizar e/ou modificar a fava de cacau ou outro substrato agrícola. Em uma modalidade, o componente fúngico é selecionado e/ou condicionado e/ou adaptado e/ou mantido em sua capacidade para remover ou reduzir um ou mais componentes de gosto indesejável da fava de cacau ou outro substrato agrícola ou para remover ou reduzir a quantidade de cafeína. Os métodos para determinar se um componente de gosto indesejável e/ou cafeína foi reduzido ou removido foi revelado no presente documento e também foi verificado na técnica.
[0087] Em uma modalidade, o componente fúngico condicionado e/ou adaptado e/ou mantido é preparado a partir dos fungos saudáveis e selvagens desinfectados. Tais fungos com propriedades adaptadas, melhoradas e alteradas, conforme descrito no presente documento, em relação às cepas primárias, selecionadas ou não selecionadas, foram desenvolvidos por esses métodos. Essas cepas adaptadas foram depositadas com o ATCC, conforme descrito em outro lugar, no presente documento. Em uma modalidade, o componente fúngico condicionado e/ou adaptado e/ou mantido é preparado a partir de Ga- noderma lucidum. Em uma modalidade, o componente fúngico condicionado e/ou adaptado e/ou mantido é preparado a partir da cepa Ga- noderma lucidum 806, Alice Chen; Búfalo, NY; 4/94. Em outra modalidade, o componente fúngico condicionado e/ou adaptado e/ou mantido é preparado a partir de Cordyceps sinensis (Strain 1009 Caterpillar Fungus; Colorado Corp, 1/2014). Em uma modalidade, o componente fúngico condicionado e/ou adaptado e/ou mantido é preparado a partir de H. Erinaceus, T. versicolor, l. Edodes, T. matsutake, F. velutipes, A. blazei, G. frondosa, P. nameko, l. officinalis, M. hortensis, M. angusti- ceps, A. auricula, T. fuciformis, I. obliquus, F. fomentarius, l. sulfureus. Em uma modalidade, o componente fúngico condicionado e/ou adaptado e/ou mantido é preparado a partir de uma cepa pura de Tuber melanosporum, obtida cultivando-se um cogumelo trufado pelos métodos descritos no presente documento. Esses fungos que têm propriedades adaptadas, melhoradas e alteradas, conforme descrito no pre-sente documento, em relação às cepas primárias, foram depositados com ATCC, conforme descrito no presente documento.
[0088] A etapa de manutenção e/ou adaptação e/ou condicionamento, conforme descrito no presente documento, pode ser conduzida opcionalmente em meio indefinido que compreende fava de cacau ou outros meios líquidos de extrato de substrato agrícola ou meios sólidos, conforme definido no presente documento. Em uma modalidade, os fungos podem ser cultivados por 4 a 90 dias, em qualquer temperatura conhecida na técnica para cultivar fungos, por exemplo, 30,6 a 31,7 °C (87 a 89 °F). A reinoculação do componente fúngico cultivado em meios frescos, conforme descrito no presente documento, pode ser realizada em um tempo apropriado, conforme determinado por uma pessoa versada na técnica, dependendo da taxa de crescimento, ciclo de crescimento e aparência do componente fúngico. O ciclo de crescimento e reinoculação do componente fúngico em meios frescos, em algumas modalidades, é realizado mais de uma vez, mais de duas vezes, mais de três vezes, mais de quatro vezes, mais de cinco vezes, mais de dez vezes, mais de quinze vezes, mais de vinte vezes, mais de vinte e cinco vezes, mais de trinta vezes, mais de quarenta vezes, mais de cinquenta vezes, mais de setenta e cinco vezes ou cem vezes ou mais. O componente fúngico, por esses métodos, pode, por exemplo, reconhecer melhor a fava de cacau ou outro substrato agrícola ou qualquer componente particular de fava de cacau ou outro substrato agrícola como uma fonte de energia, tolerar melhor a presença de fava de cacau ou outro extrato de substrato agrícola em meios (conforme medido por uma taxa de crescimento enriquecida, por exemplo), remover melhor os componentes de gosto indesejável, ou remover melhor a cafeína. Em uma modalidade, o componente de gosto indesejável a ser removido e/ou reduzido é metilxantinas, tais como teobromina ou 2-metoxi-3-isopropilpirazina.
[0089] Então, os métodos da invenção têm, como uma etapa adicional opcional, um método de preparação de um componente fúngico condicionado e/ou adaptado e/ou mantido que compreende um componente fúngico que tem uma capacidade aumentada e/ou enriquecida para crescer em, metabolizar ou, de outro modo, utilizar e/ou modificar a fava de cacau ou outro substrato agrícola e/ou remover um ou mais componentes de gosto indesejável da fava de cacau ou de outro substrato agrícola, e/ou remover a cafeína. Então, o uso do componente fúngico condicionado e/ou adaptado e/ou mantido é observado para a presente invenção. Os métodos da invenção compreendem adicionalmente o uso de qualquer um dentre o(s) componente(s) fúngico(s) condicionado(s), adaptado(s), e/ou mantido(s), conforme descrito no presente documento, nos métodos da presente invenção.
PREPARAÇÃO DE COMPONENTE FÚNGICO PARA INOCULAÇÃO DE FAVA DE CACAU OU OUTRO SUBSTRATO AGRÍCOLA
[0090] Em uma modalidade, os métodos para preparar o componente fúngico para inocular a fava de cacau ou outro substrato agrícola preparado incluem escalonar um componente fúngico, conforme definido no presente documento, em cultura líquida. Tal componente fúngico que é preparado para inoculação da fava de cacau ou outro substrato agrícola preparado é chamado de um "componente fúngico preparado".
[0091] Em uma modalidade, o componente fúngico preparado é em cultura sólida. Em outra modalidade, o componente fúngico preparado é em cultura líquida. Em outra modalidade o componente fúngico preparado é uma mistura de cultura líquida e sólida. A cultura líquida pode ser executada por qualquer meio conhecido na técnica e inclui o uso de um biorreator. Por exemplo, ao usar um biorreator para preparar o componente fúngico, o biorreator pode ser preparado diluindo-se o meio indefinido que compreende fava de cacau ou outros meios líquidos de extrato de substrato agrícola até 1.000x com água RO/filtrada. A camisa do biorreator pode ser vaporizada em uma modalidade para esterilizar os meios, ou alternativamente, os meios podem ser esterilizados por meio de injeção de vapor no vasilhame.
[0092] Os meios para uso na preparação de um componente fún- gico, para uso para inocular a fava de cacau ou outro substrato agrícola preparado, podem ser quaisquer meios adequados conhecidos na técnica, ou podem ser produzidos pelos métodos revelados no presente documento. Os meios podem compreender adicionalmente elementos de traço e substâncias orgânicas, tais como água, ácidos nucleicos e minerais. Os meios podem ser diluídos até 1.000x com água RO/filtrada. A diluição pode ser de 1x, aproximadamente 2x, aproxi-madamente 3x, aproximadamente 4x, aproximadamente 5x, aproximadamente 6x, aproximadamente 7x, aproximadamente 8x, aproximadamente 9x, aproximadamente 10x, aproximadamente 15x, aproximadamente 20x, aproximadamente 25x, aproximadamente 30x, aproximadamente 35x, aproximadamente 40x, aproximadamente 45x, aproximadamente 50x, aproximadamente 55x, aproximadamente 60x, aproximadamente 65x, aproximadamente 70x, aproximadamente 80x, aproximadamente 90x, aproximadamente 100x, aproximadamente 150x, aproximadamente 200x, aproximadamente 250x, aproximadamente 300x, aproximadamente 350x, aproximadamente 400x, aproxi-madamente 450x, aproximadamente 500x, aproximadamente 550x, aproximadamente 600x, aproximadamente 650x, aproximadamente 700x, aproximadamente 750x, aproximadamente 800x, aproximadamente 850x, aproximadamente 900x, aproximadamente 950x ou aproximadamente 1.000x. Em algumas modalidades, a diluição é de aproximadamente 5x a aproximadamente 100x. Para um biorreator de 100 l, os meios podem ser diluídos aproximadamente 10x, por exemplo.
[0093] Em uma modalidade, para inocular o reator, os meios podem ser bombeados de outro reator através de uma linha esterilizada com uma bomba em linha ou criação de pressão positiva pela injeção de ar no reator com um compressor de ar que leva o ar através da linha de entrada com filtros de cápsula de 0,2/0,5 mícron, então, através de uma válvula de verificação com uma pressão de rachadura es- pecífica, por exemplo, 13,78 a 20,68 kPa (2 a 3 psi).
[0094] Os métodos para inocular o biorreator para preparar o componente fúngico incluem inocular o biorreator com uma seção colonizada removida de uma placa de Petri e/ou uma amostra de cultura líquida com o uso de um procedimento esterilizado ou pelo derramamento de uma cultura de tecido líquida flutuante ou submergida no biorreator através do bocal.
[0095] Opcionalmente, o componente fúngico pode ser agitado durante um cultivo por métodos conhecidos na técnica. Por exemplo, em um biorreator, a agitação pode ser obtida por uma combinação de ar injetado e uma pá motorizada que permite tanto um ambiente turbulento quanto uma força mecânica de cisalhamento. Os inventores, sem limitação, descobriram que a combinação é superior a executar o método individualmente, conforme ar injetado cria a maior turbulência na metade de topo da cultura, enquanto afeta menos o fundo, o qual pode se manter agitado por uma pá motorizada, enquanto a pá não precisa ser executada em uma RPM tão alta quanto à usada normalmente na técnica. A combinação cria os tamanhos de esfera hifais pequenos adequados sem danificar o micélio.
[0096] As técnicas de agitação e redemoinho de fermentação em estado líquido são conhecidas na técnica e incluem cisalhamento mecânico com o uso de barras de agitação magnéticas, propulsores de aço inoxidável, injeção de ar ambiente de alta pressão esterilizado, injeção em alta pressão de meios esterilizados e ou o uso de braços agitadores. Maiores taxas de agitação e redemoinho, em conjunto com ar e injeções de meios, produzem esferas miceliais pequenas.
[0097] O componente fúngico pode ser crescido até estar pronto para inoculação das favas de cacau preparadas ou outro substrato agrícola conforme determinado por um versado na técnica. Em algumas modalidades, o componente fúngico pode ser crescido por 48 ho- ras antes do uso na inoculação das favas de cacau ou outro substrato agrícola. A determinação a respeito de as culturas fúngicas que compreendem o componente fúngico serem adequadas para inoculação das favas de cacau preparadas ou outro substrato agrícola pode ser determinada pelo versado na técnica. Por exemplo, em uma modalidade, a cultura fúngica, quando está nos meios líquidos, é adequada para inoculação enquanto está em uma fase de crescimento exponencial, ou antecipadamente ou posteriormente. As culturas senescentes e culturas em fases de crescimento anteriores com menores quantidades de micélio/ml podem ser usadas, mas não são preferenciais. O componente fúngico preparado opcionalmente parece bem crescido pelo meio, com um micélio visível que cresce por cada ml visível por microscópio e pela visão sem auxílio.
[0098] Para efetuar a miceliação mais eficaz das favas de cacau ou de outro substrato agrícola, o componente fúngico tem tamanhos de esfera de hifa definidos que possibilitam crescimento de hifas em três dimensões ao redor do conglomerado esférico da cultura da cepa fúngica. Em uma modalidade, o tamanho de esfera hifal é menor que 10 mm em diâmetro, menor que 2 mm em diâmetro, menor que 1 mm em diâmetro, menor que 100 mícrons em diâmetro, menor que 10 mí- crons em diâmetro, menor que 5 mícrons em diâmetro, menor que 2 mícrons em diâmetro ou menor que 1 mícron em diâmetro. Em outra modalidade, o conglomerado esférico hifal tem uma faixa de tamanho de 5 mícrons a 1 milímetro em diâmetro ou uma faixa de tamanho de 10 a 50 mícrons em diâmetro.
[0099] Esses métodos resultam em um componente fúngico preparado para inoculação de favas de cacau preparadas ou outro substrato agrícola.
INOCULAÇÃO E MICELIAÇÃO DAS FAVAS DE CACAU PREPARADAS OU DE OUTRO SUBSTRATO AGRÍCOLA
[00100] As favas de cacau preparadas ou outro substrato agrícola são inoculados com o componente fúngico preparado. O componente fúngico preparado a ser usado pode ser qualquer componente fúngico conforme definido na invenção atual. A inoculação do componente fúngico preparado nas favas de cacau preparadas ou em outro substrato agrícola pode ser executada por quaisquer métodos conhecidos na técnica. Essa etapa pode ser referida de forma variada como a etapa de cultivo, a etapa de fermentação e/ou a etapa de miceliação.
[00101] A miceliação pode ocorrer em um recipiente conforme descrito no presente documento. Em uma modalidade, a miceliação ocorre em um tambor de 208 cm3 (55 galões) conforme descrito no presente documento. Nessa modalidade, os tambores de 208 cm3 (55 galões) têm uma tampa que contém duas portas e uma porta pode ser usada como uma porta de inoculação, enquanto que a outra pode ser usada para injetar ar filtrado ao fundo da cultura e simultaneamente serve como uma ventilação. Em algumas modalidades, a porta de inoculação é um soquete de desconexão rápida que é fixado a um plugue de desconexão rápida no fim da linha de colheita durante a inoculação. Opcionalmente, as favas de cacau preparadas ou outro substrato agrícola em uma pluralidade de tambores podem ser miceliados em um ciclo através de um coletor esterilizado conectado a uma linha de colheita de biorreator com a infraestrutura incluída para alvejar qualquer tambor individualmente ou todos ao mesmo tempo. Em uma modalidade, um sistema para distribuir de forma volumetricamente consistente de inoculante por cultura é usado.
[00102] Em uma modalidade, a cultura pode ser injetada pneumaticamente em um recipiente que compreende as favas de cacau preparadas ou outro substrato agrícola. A umidificação pode ser opcionalmente injetada em bolsas para otimizar crescimento micelial. Em outra modalidade, as favas de cacau ou outro substrato agrícola são inocu- ladas pelo derramamento da cultura no recipiente que contém as favas de cacau esterilizadas ou outro substrato agrícola ou manualmente ou através de uma válvula incorporada no fermentador ou no biorreator de qualquer variedade de cultura de tecido líquida.
[00103] Em uma modalidade, as favas de cacau preparadas ou outro substrato agrícola são resfriados até uma temperatura entre 26,66 a 37,77 °C (80 a 100 °F) antes da inoculação com o componente fúngico preparado. O resfriamento pode ser obtido por refrigeração ou na temperatura ambiente. A etapa de miceliação das favas de cacau preparadas ou outro substrato agrícola pode ocorrer por entre 4 e 90 dias por entre cerca de sete e vinte e um dias e, em uma modalidade, por cerca de sete dias e em qualquer temperatura, por exemplo, em 30,55 a 31,66 °C (87 a 89 °F). A multiplicação do micélio fúngico por fermentação é executada por controle eficaz de luz ambiental, tal como por um modelo de controle de 40% de iluminação e 60% de escuridão e também pelo controle de fluxo de ar esterilizado e uma temperatura em 30 a 31,11 °C (86 a 88 °F) ou 30,55 a 31,66 °C (87 a 89 °F) ou entre 12 e 35 °C ou entre 24 °C a 32 °C.
[00104] A umidade relativa desse cultivo, miceliação e/ou fermentação é entre 20% e 80%, em algumas modalidades, pelo menos cerca de 60%. Em algumas modalidades, a umidade relativa é pelo menos cerca de 36 a 40%.
[00105] Em uma modalidade alternativa, antes da adição do componente fúngico, as favas de cacau são preparadas para cultura de miceliação (fermentação) líquida. As favas de cacau são trituradas em partículas finas, preferencialmente menores que 1 mm em diâmetro como o tamanho de partícula aproximado. Em uma modalidade, as partículas têm 20 a 50 mícrons de tamanho. As favas de cacau são, então, colocadas em uma solução aquosa que tem uma viscosidade regulada ou ajustada para suspender as partículas de cacau. Prefe- rencialmente, a solução aquosa tem uma viscosidade adaptada para o tamanho de partícula de cacau para possibilitar que as partículas de cacau sejam suspensas na solução aquosa quando agitadas. Os meios aquosos que contêm o componente fúngico e as partículas de cacau podem ser depositados em um biorreator de qualquer tamanho. Preferencialmente, o biorreator é dimensionado para conter pelo menos 10 litros de meios aquosos. Mais preferencialmente, o biorreator é dimensionado para conter vários milhares de litros ou mais.
[00106] Em uma modalidade, a cultura de miceliação líquida é agitada. O meio de agitação é regulado para otimizar a solução aquosa para manter a massa de micélio fúngico em partículas pequenas. De preferência, o micélio fúngico terá esferas de hifas, ou conglomerados, que têm tamanhos que estão entre 1 a 100 mícrons de diâmetro. Em outra modalidade, os conglomerados de hifas são menores do que o tamanho de partícula do cacau.
[00107] Na cultura de miceliação líquida, o biorreator é mantido em uma temperatura e pressão adequadas para habilitar o micélio para digerir os componentes do cacau em um ambiente anaeróbico facultativo. Após o micélio ter digerido os componentes do cacau para remover os componentes de sabor amargo, o cacau é separado da solução aquosa. Isso pode ser feito cessando-se e permitindo-se que o cacau precipite. Isso também pode ser realizado filtrando-se o cacau da solução aquosa. Após o cacau ser removido da solução aquosa, o mesmo pode ser preparado para processar (incluindo secagem do cacau em um pó). Uma etapa secundária é opcionalmente realizada para extrair a solução aquosa após a remoção do cacau. Esse extrato pode ser usado para recuperar componentes de sabor solúveis em água do cacau. Esses componentes flavorizantes solúveis em água podem ser processados e podem ser adicionados de volta ao cacau como um pó ou uma aspersão aquosa ou banho. O pó de cacau é o resultado. O sabor suplementar é adicionado, conforme necessário, para aprimorar adicionalmente o sabor do cacau. Por exemplo, os adoçantes ou extratos de sabor de cacau podem ser adicionados nessa conjuntura no processo.
[00108] Consequentemente, o cacau está pronto para ser formado em qualquer produto de cacau, isto é, chocolate.
[00109] A etapa de miceliação das favas de cacau preparadas ou outro substrato agrícola é, de preferência, realizado em um ambiente anaeróbico ou semianaeróbico. Os métodos conhecidos na técnica podem ser usados para induzir e/ou manter a atividade metabólica anaeróbica facultativa do componente fúngico preparado conforme descrito pelo efeito Pasteur. Em uma modalidade alternativa, as favas de cacau ou outro substrato agrícola são removidos das folhas e depositados em grandes cubas de aço inoxidável em um ambiente estéril. As cubas regulam os níveis de oxigênio e temperatura, e habilitam a atividade anaeróbica facultativa e crescimento de micélio nas favas de cacau preparadas ou outro substrato agrícola. A atividade anaeró- bica facultativa metaboliza mais celulose por unidade de tempo, significando que as favas de cacau ou outro substrato agrícola são consumidos em uma taxa mais rápida do que em um ambiente aeróbico. Em alguns casos o crescimento de micélio é nove vezes mais rápido do que em um ambiente aeróbico (isto é, nove vezes mais moléculas de celulose são metabolizadas para ATP). Outro benefício é que o ambiente anaeróbico inibe o crescimento de corpo de frutificação. Um ambiente anaeróbico também assegura uma redução em crescimento bacteriano indesejado, e outro crescimento microbiano indesejado.
[00110] A expansão do fungo micélio é monitorada por microscopia, e cronogramas de crescimento documentos por fotografia.
[00111] Quanto maior é o período de incubação, maior é a produção do peso seco de micélio e maior é acentuação de sabor das favas de cacau ou outro substrato agrícola. Algumas cepas formarão tecido primordial e corpos de fruta por 30 dias (Hericium erinaceus é particularmente inclinado frutificar enquanto em cultura, assim como Gano- derma lucidum e Flamulina velutipes). Em algumas modalidades, a colheita de favas de cacau miceliadas ou outras favas de substrato agrícola é realizada antes da cultura de tecido de corpo de fruta. Entretanto, um período prolongado de incubação de um fungo específico não garante uma produção alta de metabólito ou o acúmulo de micélio e/ou produtos de miceliação.
[00112] A determinação de quando colher o produto miceliado pode ser determinada por vários métodos. A colheita é geralmente realizada com uma temporização para otimizar o perfil de sabor do produto mi- celiado de acordo com o perfil de sabor desejado. Por exemplo, o perfil de odor da cultura de miceliação pode ser usado por pela pessoa experiente para determinar quando a cultura está pronta. A determinação da aparência da cultura também pode ser feita pela pessoa experiente. Em algumas modalidades, a colheita pode ser feita quando a quantidade de micélio na cultura está na quantidade aproximada de 2 a 3 placas petri completamente cultivadas (tamanho padrão) (para G. luci- dum), ou quando a quantidade do micélio está nas quantidades aproximadas de 10 a 12 placas petri completamente cultivadas (para C. sinensis), por 3,26 kg (8 lbs) de favas de cacau ou outro substrato agrícola. Os métodos analíticos da análise que inclui cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) podem ser empregados para executar a medição de biomoléculas totais a fim de determinar a composição ótima e condições de cultivo e o(s) adequado(s) para colher os fungos.
[00113] Em um exemplo não limitador da presente invenção, cerca de 3,26 kg (8 lbs) de favas de cacau preparadas ou outro substrato agrícola de acordo com os processos da invenção, em um recipiente vedado conforme descrito no presente documento, foram inoculados com cerca de 25 ml do componente fúngico preparado conforme descrito no presente documento. Um ambiente com pouco oxigênio foi obtido. A miceliação ou cultivo foi deixado prosseguir por sete dias a 31 a 32 °C (87 a 89 °F), embora tão pouco quanto quatro dias ou tão longo quanto seis ou mais dias também é adequado. A colheita foi realizada quando os observadores determinaram que um perfil de paladar adequado para o produto miceliado foi obtido.
REDUÇÃO DE COMPONENTES DE PALADAR INDESEJÁVEL DURANTE A MICELIAÇÃO
[00114] As favas de cacau e outros substratos agrícolas podem conter componentes de paladar indesejável. Esses componentes de sabor indesejável podem ser definidos ou não definidos. Tal componente de sabor não favorável inclui 2-metóxi-3-isopropilpirazina. Esse componente é metabolizado pelo componente fúngico em polissacarí- deos, como beta 1,3-glucanos e beta 1,6-glucanos. Outros componentes de sabor indesejável incluem componentes de sabor amargo. Tal componente amargo é metilxantinas, como teobromina. A miceliação de cacau bruto rende uma fava de cacau que é menos amarga que o cacau bruto que não é miceliado.
[00115] A miceliação do cacau também faz com que a casca da fava seja joeirado com mais facilidade para vantagens no processamento das favas de cacau.
[00116] A etapa de cultivo ou miceliação também pode causar a redução e/ou remoção de componentes de sabor indesejável conforme descritos no presente documento e/ou cafeína. Em algumas modalidades, a determinação da extensão da remoção de pelo menos um componente de sabor indesejável é determinada pela aparência, sabor e/ou composição química do produto miceliado conforme é conhecido na técnica. Essa determinação pode ser quantitativa, por exemplo, a composição química do produto miceliado pode ser medida por méto- dos de ensaio para um ou mais dos componentes de sabor indesejável conforme conhecido na técnica, ou determinada qualitativamente por teste de sabor por pessoas versadas.
[00117] Em uma modalidade, até 5% de um ou mais dos componentes de sabor indesejável são removidos; em outras modalidades, até 10%, até 15%, até 20%, até 25%, até 30%, até 35%, até 40%, até 45%, até 50%, até 55%, até 60%, até 65%, até 70%, até 75%, até 80%, até 85%, até 90%, ou até 95% de um ou mais dos componentes de sabor indesejável são removidos nos processos da presente invenção. Em uma modalidade, um ou mais dos componentes de sabor indesejável são quantitativamente removidos. A invenção também se refere a produtos miceliados que têm níveis reduzidos de componentes de sabor indesejável conforme descrito no presente documento.
[00118] Em uma modalidade, o componente de sabor indesejável é ácido clorogênico e até 5% de ácidos clorogênicos são removidos; em outras modalidades, até 10%, até 15%, até 20%, até 25%, até 30%, até 35%, até 40%, até 45%, até 50%, até 55%, até 60%, até 65%, até 70%, até 75%, até 80%, até 85%, até 90%, ou até 95% de ácidos clo- rogênicos são removidos nos processos da presente invenção. A invenção também se refere a produtos de café miceliados que têm níveis reduzidos de ácido clorogênico conforme descrito no presente documento.
[00119] Em uma modalidade, a cafeína é removida das favas de cacau ou outro substrato agrícola durante a etapa de cultura ou miceli- ação. Em uma modalidade, até 5% de cafeína são removidos; em outras modalidades, até 10%, até 15%, até 20%, até 25%, até 30%, até 35%, até 40%, até 45%, até 50%, até 55%, até 60%, até 65%, até 70%, até 75%, até 80%, até 85%, até 90% ou até 95% de cafeína são removidos nos processos da presente invenção. A invenção também se refere a produtos miceliados que têm níveis reduzidos de cafeína, conforme descrito no presente documento.
[00120] A remoção de componentes de gosto indesejável pode permitir o aumento do valor de cacau de qualidade menos satisfatória ou outros produtos agrícolas e/ou tornar os mesmos mais comestíveis. Os produtos miceliados produzidos por esse método podem ser usados para mesclar com favas de cacau menos dispendiosas ou outros substratos agrícolas, conduzindo a um produto de custo inferior com propriedades de gosto aprimoradas. A quantidade de açúcar, leite e substitutos dos mesmos a serem adicionados aos produtos miceliados pode ser reduzida. Os presentes métodos conduzem a perfil de sabor intensificado dos produtos miceliados devido a uma percepção que os produtos miceliados fornecem um alimento mais rico, mais macio e/ou mais doce com gostos menos amargos, acres e/ou ácidos.
COMPONENTES DE ADIÇÃO DE SABOR E/OU PROMOTORES DE SAÚDE
[00121] Os processos de cultura ou miceliação da presente invenção, em algumas modalidades, fornecem um produto de favas de cacau miceliado ou outro substrato agrícola com componentes promotores de saúde e/ou sabor adicionados. Por exemplo, As favas de cacau miceliadas ou outros produtos de substrato agrícola podem conter componentes promotores de saúde imunomodulatórios e antitumor adicionados de maneira exógena.
[00122] Os fungos são metabolicamente similares a animais, mas estruturalmente similares a plantas, pelo fato de que possuem uma parede celular rígida formada predominantemente de cadeias longas de molécula de açúcar unidas com um pouco de dificuldade a ligações beta (b-) de digestão e, a uma menor extensão, ligações alfa (a-) di- gestíveis em conjunto com proteínas ligadas à membrana. Em contrapartida, as paredes celulares de planta (tais como favas de cacau ou outro substrato agrícola) são feitas de polissacarídeos de celulose, cu- jas ligações de glicose glicosídicas 1->4 são de modo semelhante difíceis para os seres humanos digerirem, mas são digeríveis por fungos. As paredes celulares de fungos são principalmente compostas de ligações glicosídicas 1->3, com cadeias laterais ligadas 1->6 e, portanto, podem se decompor pelo processamento mínimo com o uso de água, calor e tratamento mecânico em moléculas de polissacarídeo menores, mais facilmente digeríveis e imunologicamente ativas de tamanho de micropartícula variável chamadas beta glucanos, e compostos de glicoproteína relacionados. A resposta imunológica a beta glucano depende da estrutura a- ou b-glucano, a qual tem estruturas primárias, secundárias e terciárias quirais, explicando as diferenças em resposta imunológica a cada perfil de a- e/ou b- glucano exclusivo dos fungos. Dessa forma, as favas de cacau miceliadas ou outros produtos de substrato agrícola têm adicionado componentes promotores de saúde que incluem as moléculas descritas acima. Outros promotores de saú-de presentes nas favas de cacau miceliadas ou outros produtos de substrato agrícola podem ser componentes que têm diversas propriedades, tais como propriedades de imunomodulação, antienvelheci- mento, afrodisíacas, antitumor, antivirais, antibacterianas e/ou antifún- gicas e incluem compostos, tais como a- e b-glucanos, glicoproteínas, proteínas, ergosteróis, esteróis, triterpenos, e ácidos graxos, glucoma- nan, riboglucano, ácido esterpúrico, manitol, ribitol, guanosina e ade- nosina.
[00123] As metil pirazinas, as quais se desenvolvem naturalmente no cacau, estão entre os compostos de sabor desejáveis mais importantes encontrados no cacau. Na presença de calor, tal como torrefa- ção, as mesmas são produzidas através de reação de Maillard, isto é, entre açúcares e aminoácidos ou peptídeos. Sem se ater à teoria, acredita-se que as metil pirazinas também sejam produzidas através de fermentação e/ou miceliação, o qual conduz a metil pirazinas au- mentadas e/ou alteradas em favas de cacau miceliadas e outros produtos agrícolas. Com o uso desse método de fabricação de cacau, uma cepa única de fungos decompõe o teor de celulose, alcaloide, gordura e proteína contido nas favas de cacau esterilizadas cruas que gera gosto amargo e altera a estrutura da substância e concentração das favas de cacau. Por outro lado, uma qualidade uniforme e consistente do cacau é obtida por meio desse método de fermentação da invenção para processar favas de cacau cruas. Mediante a utilização de métodos revelados no presente documento, induzidos por esse processo de fermentação limpo, o sabor de favas de cacau cruas é intensificado, tornando o cacau resultante muito mais rico, macio, doce e exclusivo (em comparação com o simples cacau produzido a partir de favas não miceliadas).
[00124] O grupo carbonila reativo do açúcar reage com o grupo amino nucleofílico do aminoácido e forma uma mistura complexa de moléculas caracterizadas de maneira insatisfatória responsáveis por uma faixa de odores e sabores. Esse processo é acelerado em um ambiente alcalino (por exemplo, soda aplicada para escurecer pretzels), à medida que os grupos amino são desprotonados e, por conseguinte, têm uma nucleofilicidade aumentada. O tipo do aminoácido determina o sabor resultante. Essa reação é a base da indústria de flavo- rizantes. Em temperaturas altas, acrilamida pode ser formada.
[00125] Agaricus blazei pode ser usado para adição de a- e b glu- canos ligados chamados glucomanan e riboglucano, os quais são anti- virais, nas favas de cacau miceliadas ou outro produto de substrato agrícola. Outros extratos de polissacarídeo de A. blazei podem ter efeitos anticâncer e podem ser coterapêuticos com outro extrato micelial de fungos relacionados no presente documento. Os métodos para otimizar a biomassa e produção de polissacarídeo extracelular têm sido relatados. Portanto, a miceliação com A. blazei e favas de cacau mice- liadas ou outros produtos de substrato agrícola contendo sabor e/ou componentes promotores de saúde derivados a partir de A. blazei, conforme descrito no presente documento, também estão incluídos na presente invenção.
[00126] Cordyceps sinensis (C. sinensis) produz ácido cordicépico, adenosina, D-manitol, e cordicepinadenosina, os quais são imunomo- dulatórios e antivirais. Foi constatado que os extratos de C. Sinensis são antienvelhecimento e afrodisíacos. Foi constatado que os esteróis miceliais isolados a partir de C. sinensis inibem o crescimento de inúmeras linhagens celulares de câncer. Foi constatado que os extratos de polissacarídeo micelial de C. sinensis induzem a hipoglicemia. Portanto, a miceliação com C. sinensis e favas de cacau miceliadas ou outros produtos de substrato agrícola contendo sabor e/ou componentes promotores de saúde derivados a partir de C. sinensis, conforme descrito no presente documento, também estão incluídos na presente invenção.
[00127] Foi constatado que o micélio de Flammulina velutipes tem um perfil de polissacarídeo que é imunomodulatório. O micélio de F. velutipes compõe um perfil de aminoácido e ergosterol exclusivo, ácido esterpúrico, manitol, ribitol, e os nucleosídeos guanosina e adenosina, enoquipodinas A-D extraídos do micélio de F. velutipes são terpenos antimicrobianos de amplo espectro. As proteínas flamulina e velutina exibem atividade anti-HIV e anti-HPV. Portanto, a miceliação com F. velutipes e favas de cacau miceliadas ou outros produtos de substrato agrícola contendo sabor e/ou componentes promotores de saúde derivados a partir de F. velutipes, conforme descrito no presente documento, também estão incluídos na presente invenção.
[00128] Foi constatado que o perfil de polissacarídeo de Ganoder- ma lucidum é imunomodulatório em linhagens celulares humanas e também em estudos clínicos. Os extratos miceliais de G. lucidum têm propriedades antiperoxidantes, anti-inflamatórias e antimutagênicas. Foi constatado que os extratos de G. lucidum são antienvelhecimento e afrodisíacos. O perfil triterpenoide de G. lucidum tem sido determinado e mostrado como anti-hepatotóxico e hepatoprotetor, antitumor, antiangiogênico, anti-hipertensivo, hipocolesterolêmico, an-ti-histamínico e anti-HIV. G. lucidum, além de produzir polissacarídeos e glicoproteínas, de modo semelhante, produzem triterpenos, tais como ácidos ganodéricos e lucidênicos, compostos fenólicos e esteróis, os quais têm também alta atividade biológica e propriedades terapêuticas e são, por si mesmos, antioxidantes, antitumor, antibacterianos, anticâncer, anti-inflamatórios, anti-histamina, hipotensivos, sedativos, e mediativos após consumo oral. Portanto, a miceliação com G. lucidum e favas de cacau miceliadas ou outros produtos de substrato agrícola contendo sabor e/ou componentes promotores de saúde derivados a partir de G. lucidum, conforme descrito no presente documento, também estão incluídos na presente invenção.
[00129] Constatou-se que o perfil de polissacarídeo de Grifola frondosa é imunomodulador e antioxidativo, a G. frondosa produz ergoste- róis e um perfil antioxidativo de ácidos graxos. Os efeitos antitumor de extratos de G. frondosa em linhagens celulares de câncer in vitro foram investigados e mostram uma promessa aos pacientes de diabetes como hipoglicêmicos. Portanto, a miceliação com G. frondosa e favas de cacau miceliadas ou outros produtos de substrato agrícola que contêm sabor e/ou componentes de promoção de saúde derivados de G. frondosa conforme descrito neste documento também estão incluídos na presente invenção.
[00130] Constatou-se que os extratos de corpo micelial e de frutificação de Hericium erinaceus são antimutagênicos e imunomodulado- res através de várias linhagens de célula. H. erinaceus produzem, exclusivamente, hericenonas em corpos de fruta e erinacinas em micélio, compostos estruturalmente determinados que podem passar a barreira do cérebro de sangue e promover secreção de Fator de Crescimento de Nervo (NGF) em determinadas regiões do cérebro. Constatou-se que os erinacenos são melhores potenciadores de expressão de NGF do que as hericenonas. Portanto, a miceliação com H. erinaceus e favas de cacau miceliadas ou outros produtos de substrato agrícola que contêm sabor e/ou componentes de promoção de saúde derivados de H. erinaceus conforme descrito neste documento também estão incluídos na presente invenção.
[00131] Os aspectos do perfil de polissacarídeo de Lentinula edodes foram determinados e se mostram imunomoduladores e antivirais. O Lentinano e outros metabólitos foram estudados quanto a seus diversos benefícios de cuidados com a saúde. Em alguns países, o lentina- no é classificado como um "polissacarídeo antineoplástico" e está disponível para uso clínico. A adição de lentinano às terapias-padrão de câncer mostrou resultado na necrose de tumor aumentada e com carcinoma hepatocelular e aprimorou a qualidade de vida nos pacientes com carcinoma esofageal. Portanto, a miceliação com L. edodes e favas de cacau miceliadas ou outros produtos de substrato agrícola que contêm sabor e/ou componentes de promoção de saúde derivados de L. edodes conforme descrito neste documento também estão incluídos na presente invenção.
[00132] Constatou-se que os extratos de Phellenis linteus exibem atividade antitumor. Os extratos de polissacarídeo de Polyporus um- bellatus foram estudados e se mostram anticanceríngenos, imunomo- duladores, antimalária e hepatoprotetores. O extrato de polissacarídeo micelial de Inonotus obliquus demonstrou propriedades antitumor, hi- poglicêmicas e antioxidativas. As composições corporais de fruta e mi- célio de Pleurotus ostreatusse se mostraram muito similares, diferindo apenas no teor de aminoácido. O perfil de polissacarídeo micelial con- siste principalmente em laminarina, cujo extrato se mostrou imunomo- dulador. A Lovastatina, isolada do caldo micelial de P. ostreatus, exibe atividade anticarcinoma, inibe o crescimento de bactérias e Fungos e diminui o colesterol. Trametes versicolor produz heteroglucanos com a-(1-4)- e b-(1-3) ligações glicosídicas com fucose em PSK (Krestin) e ramnose e arabinose em PSP, se mostraram antitumor e imunomodu- ladas. PSK, um fármaco aprovado, é um extrato micelial que exibe propriedades de imunomodulação, antivirais e de regulação de colesterol. Os extratos de polissacarídeo micelial de Tremella fuciformis se mostraram terapêuticos para vários distúrbios circulatórios, se mostraram neurologicamente saudáveis, anticarcinoma, antitumor e antienve- lhecimento.
[00133] Portanto, a miceliação com Phellenis linteus, Polyporus um- bellatus, Inonotus obliquus, Pleurotus ostreatus, Trametes versicolo e/ou Tremella fuciformis (e quaisquer outras espécies fúngicas descritas neste documento) e favas de cacau miceliadas ou outros produtos de substrato agrícola que contêm sabor e/ou componentes de promoção de saúde derivados de Phellenis linteus, Polyporus umbellatus, Inonotus obliquus, Pleurotus ostreatus, Trametes versicolo e/ou Tre- mella fuciformis (ou qualquer outra espécie fúngica descrita neste documento) também está incluída na presente invenção.
[00134] As quantidades de componentes de sabor ou componentes de promoção de saúde adicionadas através do componente fúngico conforme descrito neste documento podem ser estimadas por um elemento versado na técnica e inclui até 1 ng do componente por unidade de favas de cacau miceliadas ou outro produto de substrato agrícola, ou até 5 ng, até 10 ng, até 50 ng, até 100 ng, até 500 ng, até 1 g, até 5 g, até 10 g, até 50 g, até 100 g, até 500 ug, até 1 mg, até 2 mg, até 5 mg, até 10 mg, até 20 mg, até 50 mg, até 100 mg ou até 500 mg por unidade de favas de cacau miceliadas ou outro produto de substra to agrícola. Uma unidade de favas de cacau miceliadas ou outro produto de substrato agrícola pode ser variavelmente definida como 1 g, 1 lb (0,37 kg), 1 kg e similares.
PROCESSAMENTO ADICIONAL DE PRODUTO MICELIADO
[00135] Em algumas modalidades, uma vez que são completamente miceliadas, as favas de cacau miceliadas ou outro produto de substrato agrícola é opcionalmente enxaguado após a miceliação. O enxague pode ser realizado para remover algumas ou todas as partes dos mi- célios e/ou outras favas diferentes de cacau ou outra matéria de substrato não agrícola.
[00136] Em algumas modalidades, uma vez completamente miceli- ado, o produto miceliado é opcionalmente submetido à secagem. A secagem pode ser alcançada por meios conhecidos na técnica para secar favas de cacau ou outro substrato agrícola. Por exemplo, o produto miceliado pode ser espalhado sobre uma superfície seca para secar. Em uma modalidade, o produto miceliado é submetido à secagem até cerca de 11 a 13% de teor de umidade.
[00137] Opcionalmente, o produto miceliado seco ou não seco pode ser torrefeito e/ou torrado através de métodos convencionais conhecidos a técnica. A etapa opcional de torrefação fornece uma desativação do fungo, que pode ser desejável para reduzir o risco de micose.
[00138] O cacau miceliado pode ser submetido a etapas de processamento conhecidas de cacau não miceliado. Consequentemente, a presente invenção pode ser usada para produzir massa de cacau mi- celiado, manteiga de cacau miceliado, licor de chocolate miceliado e todas as formas de chocolate derivadas do mesmo, conforme é feito através de têmpera e outros métodos conhecidos na técnica. Os benefícios adicionados de tal processamento alimentício envolvem o perfil nutricional exclusivo (principalmente o perfil de polissacarídeo e meta- bólito) imbuído em tais alimentos através da miceliação.
[00139] Em uma modalidade da invenção, o extrato de fava de cacau miceliada é usado para nutracêuticos sob uma forma de extrato ou sob uma forma em pó alcançada a partir da desidratação do extrato. Em outra modalidade, o extrato de fava de cacau miceliada é usado como um aditivo em alimentos funcionais para reforçar o sabor e o teor de nutriente. Esse extrato pode estar sob a forma aquosa, infundido em uma base de álcool ou em glicerina vegetal, por exemplo. Uma forma em pó pode ser alcançada a partir da desidratação do extrato. A forma em pó pode ser adicionada a qualquer alimento embalado. Um exemplo de um alimento funcional inclui uma bebida engarrafada, uma barra de petisco ou uma mistura de pó de alta proteína usada para fazer vitaminas de proteína. A forma em pó também pode ser usada no sorvete.
[00140] O produto miceliado pode ser, opcionalmente, extraído para preparar um extrato para usar em produtos de alimento e/ou de bebida. Por exemplo, 1.000 g de fava de cacau ou substrato agrícola torre- feito e miceliado podem ser completamente extraídos, com agitação; com o uso de 10 a 1.000 ml de água pressurizada de 121 a 122 °C como um tampão, que contêm de 0,01% a 10% de ácido cítrico e 0,01 a 10% de ácido ascórbico. O extrato aquoso resultante pode ser adicionalmente purificado e concentrado com o uso de métodos convencionais. Os extratos de fava de cacau ou produto de substrato agrícola miceliados podem ser dotados de uma vida útil estendida através de métodos conhecidos na técnica, tais como a formulação em 18% a 24% de álcool, 45% a 60% de glicerol ou adição de 2,5 X volumes de mel ou um açúcar similar como xarope de ácer ou cana de açúcar evaporada.
[00141] A remoção de componentes de gosto indesejável e/ou cafeína e/ou adição de produtos de miceliação que aumenta o sabor e/ou promovem a saúde, irá resultar em fava de cacau ou produtos de substrato agrícola miceliados e pode aumentar o valor de uma fava de cacau ou substrato agrícola de qualidade mais insatisfatória e/ou tornar os mesmos mais comestíveis. A fava de cacau ou produtos de substrato agrícola miceliados produzidos através de tal método podem ser usados para se mesclar com favas de cacau ou substratos agrícolas menos dispendiosos, o que leva a um produto de custo inferior que tem propriedades aprimoradas de gosto, tais como um alimento enriquecido, mais suave e/ou mais doce com um gosto menos amargo, acre e/ou ácido.
[00142] O cacau miceliado tem um gosto mais doce do que o cacau natural devido ao fato de que o micélio remove compostos amargos da fava. Consequentemente, um benefício do uso do cacau miceliado em alimentos funcionais é que uma versão com baixo açúcar (ou baixo adoçante) de qualquer alimento funcional, inclusive o cacau, pode ser produzida de modo a ter um gosto tão bom quanto em comparação com o cacau natural que tem mais adoçantes (isso é, açúcar, estevio- sídeo ou adoçantes sintetizados).
MODALIDADES
[00143] A Figura 1 mostra um fluxograma de uma modalidade de um método para criar um extrato de produto agrícola miceliado (tal como, um produto de café miceliado) para consumo humano. A etapa 10 fornece um substrato agrícola, a etapa 12 inocula o substrato por meios líquidos que compreendem uma alíquota de cultura derivada de uma fermentação em estado líquido, a etapa 14 possibilita o crescimento de micélio e a etapa 16 cresce micélio no substrato, a etapa 18 inclui ferver o substrato em água e separar a mistura de água-substrato em componentes aquosos e não aquosos após o crescimento de micélio no substrato atingir um estágio desejado, a etapa 20 adiciona uma mistura de pequenos componentes moleculares aos componentes aquosos através dos quais os componentes aquosos se misturam em uma combinação biodisponível com os pequenos componentes moleculares para facilitar solubilidade de água do extrato.
[00144] Em uma modalidade, a etapa 24 utiliza uma cultura de fungos Basidiomycota para possibilitar a etapa 12. Em uma modalidade alternativa, a etapa 26 utiliza fungos Ascomycota para possibilitar a etapa 12.
[00145] A Figura 2 mostra um método para criar um extrato de produto agrícola miceliado para consumo humano para efetuar neurorre- generação e a neuroproteção em humanos, em conformidade com a presente invenção.
[00146] O método inclui a etapa 30 para fornecer um substrato agrícola, sendo que a etapa 32 para inocular o substrato por meios líquidos compreende uma alíquota de cultura derivada de fermentação em estado líquido, a etapa 34 para possibilitar o crescimento de micélio e crescer micélio no substrato, a etapa 36 para ferver o substrato em água e separar a mistura de água-substrato em componentes aquosos e não aquosos. A etapa 36 ocorre após o crescimento de micélio no substrato atingir um estágio desejado. A etapa 38 adiciona uma mistura de pequenos componentes moleculares aos componentes aquosos a fim de aumentar a solubilidade de água do extrato para intensificar a absorção passiva e retenção em humanos.
[00147] A etapa 32 de inocular inclui a etapa 40 de inocular com um componente fúngico da presente invenção.
[00148] A etapa 34 de possibilitar e crescer micélio no substrato inclui regular temperatura e umidade em um ambiente estéril. O micélio, em seguida, cresce automaticamente. O micélio é cultivado em um recipiente que permite que apenas uma pequena quantidade de ar estéril entre no recipiente. Os volumes de ar estéril são regulados tampando-se o recipiente. Isso modula o oxigênio ambiente no recipiente.
[00149] A etapa 34 cresce o micélio a um estágio desejado, por exemplo, em que corpos frutíferos começam a aparecer na superfície do substrato.
[00150] A etapa 36 ferve o substrato em água para separar os po- lissacarídeos no micélio e outros componentes benéficos para suspender na água, separar componente aquoso dos sólidos de substrato residual. O componente não aquoso inclui os sólidos de substrato. A separação do componente aquoso do componente não aquoso pode ser realizada mediante filtragem ou puxamento por sifão. Deve-se observar que outros métodos conhecidos na técnica podem ser utilizados.
[00151] A etapa 38 adiciona uma de pequenos componentes moleculares ao componente aquoso. Isso possibilita que os componentes aquosos sejam mais biodisponíveis in vivo.
[00152] A Figura 3 mostra um método da presente invenção 10. O método 10 inclui a etapa 12 de fornecer um componente fúngico em um meio de cultura de tecido líquido, a etapa 14 de adicionar uma mistura que inclui cafeína, tal como, o meio indefinido que contém extrato fava de café verde, ao meio de cultura de tecido líquido para condicionar o componente fúngico a consumir cafeína, a etapa 16 de pasteurizar ou esterilizar as favas de cacau ou outro substrato agrícola, a etapa 18 de hidratar as favas de cacau ou outro substrato agrícola a 10 a 80% de teor de umidificação, a etapa 20 de inocular as favas de cacau ou outro substrato agrícola com o componente fúngico, a etapa 22 de fornecer temperatura ideal, teor e umidade de oxigênio para possibilitar crescimento fúngico, e a etapa 24 de secar e torrefazer as favas de cacau ou outro substrato agrícola.
[00153] A Figura 4 mostra a método 48 de fabricar café em conformidade com a presente invenção. O método 48 inclui a etapa 50 fornecer favas de café em recipiente. De preferência, o recipiente é bolsa autoclavável.
[00154] A etapa 22 inclui reduzir níveis de oxigênio para facilitar crescimento de micélio anaeróbico facultativo nas favas de cacau ou em outro substrato agrícola para maximizar as taxas de consumo de cafeína pelo micélio do componente fúngico. Na etapa 50, o recipiente é vedado, o que permite apenas um vazamento mínimo.
[00155] A etapa 52 hidrata as favas de café a um teor de umidifica- ção ideal. Em uma modalidade, a etapa 52 de hidratar as favas de café inclui embeber as favas de café em água por duas horas, e drenar as favas de café por duas horas antes da esterilização de pasteurização. Isso é uma etapa importante devido ao fato de que a hidratação das favas de café acelera o crescimento micelial. A etapa de hidratar as favas de café também remove resíduo não desejado, e pode remover alguns componentes solúveis em água indesejáveis das favas de café. Em uma modalidade alternativa, outro fluido além de água é usado. Por exemplo, a água infundida com uma enzima pode eliminar componentes indesejáveis do café antes da etapa 54 de esterilização. O pH da água pode ser regulado para otimizar etapa de hidratação 52. A água destilada, ou água mineralizada, pode ser usada para a etapa 52 de hidratação 52.
[00156] A etapa 54 esteriliza as favas de cacau ou outro substrato agrícola com vapor d’água e a etapa 56 pressuriza o recipiente. A etapa 56 de pressurização do recipiente é incluída tipicamente com a etapa de esterilização 54. Consequentemente, a etapa de esterilização 54 é cumprida com uma pressão situada em faixa a partir de 0,03 a 0,17 MPa (5 a 25 libras por polegadas quadrada). De preferência, a pressão é 0,07 a 0,14 MPa (10 a 20 libras por polegada quadrada). Em uma modalidade, a pressão é 0,1 MPa (15 libras por polegada quadrada).
[00157] A esterilização sob a etapa 54 pode ser realizada sob as condições de 121 a 122 °C a 1,52 MPa (15 lb/pol 2); 115 a 116 °C a 1,01 MPa (10/pol2); e 108 a 109 °C a 0,05 (5 lb/pol 2) por um período de tempo de 20 a 100 minutos, ou pasteurização sob as condições de tratamento por calor seco a 140 °C a 210 °C por um per íodo de 20 a 100 minutos. Esses parâmetros podem ser variados.
[00158] A etapa 58 inocula as bolsas com um componente fúngico. Em uma modalidade, a etapa 58 é cumprida com uma cultura de tecido líquido que tem tamanhos esféricos de hifas fúngicas de 5 a 100 mícrons em diâmetro para garantir inoculação consistente. Em outra modalidade, uma cultura de tecido em estado líquido é adicionada ao café e misturada com o café de maneira consistente. Ainda em outra modalidade, tanto a cultura de tecido líquido quanto as culturas de tecido em estado sólido são adicionadas às favas de café no recipiente para reduzir o tempo exigido para propagar micélio fúngico nas favas de café esterilizadas, conforme descrito na etapa 60.
[00159] Em uma modalidade, a etapa 58 é realizada resfriando-se o recipiente a 26,67 a 37,78 °C (80 a 100 °F) após as etapas 54 e 56 e injetando-se cultura de tecido líquido fúngico diretamente no recipiente. A etapa 60 propaga o micélio fúngico dentro do mesmo recipiente. O recipiente pode ser agitado ou girado para garantir a distribuição consistente da cultura de tecido líquido fúngico. Em uma modalidade alternativa, as favas de café são transferidas dos containers a uma cuba para a etapa 58 de inoculação.
[00160] Em outra modalidade, a etapa 58 é executada com uma cultura de tecido líquida derivada de fermentação em estado líquido. A cultura de tecido líquida rende uma cultura pura de uma estirpe fúngica que compreende conglomeração esférica com tamanho inferior a 2 milímetros de diâmetro, o que permite o crescimento de hifas em três dimensões ao redor da conglomeração esférica da cultura da estirpe fúngica. Em uma variação dessa modalidade, a fermentação em estado líquido rende uma cultura pura de uma estirpe fúngica que compre- ende conglomeração esférica com tamanho situado na faixa de 5 mí- crons a 1 milímetro de diâmetro devido ao cisalhamento de estruturas de hifas durante um processo de agitação ou movimentação de meios líquidos. Os processos de agitação e/ou giro podem incluir, porém não se limitam, por exemplo, a cisalhamento mecânico com uso de barras de agitação magnéticas, impulsores de aço inoxidável, injeção de ar ambiente de alta pressão estéril, injeção de meio de alta pressão estéril e/ou uso de comprimidos agitadores. Taxas mais altas de agitação e giro, em conjunção com injeções de ar e meios, produzem pequenas esferas de micélio, cujas alíquotas são usadas para inocular substra- to(s) agrícola em estado sólido para fermentação semi-anaeróbica subsequente. De modo ideal, as conglomerações esféricas de micélio são inferiores a 100 mícrons de diâmetro e, com mais preferência, si-tua-se na faixa de 10 a 50 mícrons de diâmetro.
[00161] A etapa 58 de inocular as bolsas inclui usar uma cultura flutuante ou de estado líquido submergida, substrato miceliado como grão ou café ou cultura de placa de petri inocula um meio de cultivo de estado sólido composto de favas de cacau esterilizadas ou pasteurizadas ou outro substrato agrícola. Atenção especial é dada a subestirpes que exibem capacidade acentuada para fermentar café. Essas estirpes podem ser selecionadas e propagadas, sendo cultivadas em placa de petri e meios líquidos compostos por uma determinada concentração de extrato de fava de café verde (como em quatro a cinco favas de cacau ou outro substrato agrícola são adicionados a meios de cultura de tecido líquida), em um estado líquido submergido ou flutuante e, em seguida, são usados para inocular favas de cacau esterilizadas ou outro substrato agrícola em uma taxa mais veloz do que estirpes e su- bestirpes que não estão condicionadas a fermentar café.
[00162] A etapa 60 para propagar micélio fúngico nas favas de café esterilizadas é executada preferencialmente em um ambiente anaeró- bico. Consequentemente, uma vez esterilizado ou pasteurizado o substrato (favas de café), a subsequente atividade metabólica anaeró- bica facultativa nos fungos, conforme descrito pelo Efeito de Pasteur pode ser induzida após a etapa 58 de inoculação.
[00163] A Figura 5 mostra um método 10 da presente invenção. O método 10 inclui a etapa 12 de fornecer favas de cacau ou outro substrato agrícola em um recipiente, a etapa 14 de preparar as favas de cacau ou outro substrato agrícola para miceliação fúngica removendo ácidos clorogênicos. Em uma modalidade, a etapa 14 inclui lavar as favas em uma solução aquosa.
[00164] O método 10 inclui adicionalmente a etapa 16 de pasteurizar ou esterilizar as favas de cacau ou outro substrato agrícola, a etapa 18 hidrata as favas de cacau ou outro substrato agrícola em 10% a 80% de teor de umidade, a etapa 20 inocula as favas de cacau ou outro substrato agrícola com um componente fúngico, a etapa 22 regula a temperatura, o oxigênio e a umidade no recipiente para miceliar as favas de cacau ou outro substrato agrícola. Essa etapa 22 otimiza a taxa de miceliação.
[00165] A etapa 24 lava as favas de café miceliadas para eliminar o fortalecimento de superfície de metabólitos de micélio e outro material indesejado produzido pela etapa de miceliação 22.
[00166] A Figura 6 mostra uma esteira 10, uma primeira folha 12 de material autoclavável, uma segunda folha 14 de material autoclavável e um distribuidor 16 que dispensa favas de café entre as folhas 12 e 14. A primeira folha 12 se estende a partir de um rolo 24 de material autoclavável e é deitada na esteira 10. O distribuidor 16 libera favas de café na primeira folha 12. A segunda folha 14 é inicialmente rolada em um rolo 26 e, em seguida, deita as favas de café e a primeira folha 12. A primeira folha 12 tem bordas 22a e 22b. A segunda folha 14 tem bordas 20a e 20b que vedam contra as bordas 22a e 22b da primeira folha 12 a fim de formar uma bolsa autoclavável grande que pode ser rolada, conforme mostrado na Figura 8c e é projetada para reter mais de 68,38 kg (150 lbs) de favas de café.
[00167] Um vácuo pode ser aplicado opcionalmente ao ar de extrato entre as folhas 24a e 24b, o que otimiza a transferência de calor para os favas de café 18 quando as favas de café 18 são entregues a uma câmara de esterilização. O vácuo também inibe movimento relativo entre as favas de café 18. A esteira 10 entrega as favas de café 18 a uma câmara de esterilização.
[00168] A Figura 7 mostra a esteira 10. O distribuidor 16 entrega favas de café para uma bolsa autoclavável 30. A bolsa autoclavável 30 é vedada e deitada na esteira 10. A esteira 10 transporta várias bolsas autoclaváveis 30, 32, 34, 36, 38 e 40, para uma autoclave 42. A autoclave 42, em uma modalidade, aplica fluido aquecido, como vapor, e pressão às bolsas autoclaváveis 30, 32, 34, 36, 38 e 40 para efetuar a esterilização ou pasteurização das favas de café 18.
[00169] A Figura 8a mostra uma bolsa autoclavável 30 preenchida com favas de café. A bolsa autoclavável 30 está sob pressão produzindo uma superfície irregular 44. Alternativamente, a bolsa autoclavá- vel 30 é vedada a vácuo para produzir a superfície irregular 44.
[00170] A Figura 8b mostra bolsas autoclaváveis 30, 32, 34, 36 e 38 empilhadas para esterilização ou pasteurização em uma autoclave. A superfície irregular 44 aprimora a transferência de calor para as favas de café verde envoltas pela bolsa 30. A bolsa autoclavável 30 inclui pelo menos um emplastro respirador 45 aderido à superfície irregular da bolsa 30. Preferencialmente, o emplastro respirador 45 inclui ventosas que têm 0,2 mícron de diâmetro para permitir que uma quantidade mínima de ar flua através da bolsa 30 e para garantir que o micélio propagado dentro da bolsa 30 de propague semianaerobicamente. Pode-se observar que os emplastros respiradores podem ter poros entre 2 a 100 mícrons de diâmetro. Preferencialmente, as ventosas de emplastro respirador 45 têm 5 mícrons ou menos de diâmetro. Mais de um emplastro respirador 45 pode ser aderido à superfície irregular da bolsa 30 e pode ser usado em recipientes diferentes das bolsas, de acordo com a presente invenção.
[00171] A Figura 8c mostra uma bolsa contínua 46 de material auto- clavável que envolve favas de café. A bolsa contínua 46 é vedada para permitir que a bolsa 46 seja esterilizada ou pasteurizada em uma autoclave. Em uma modalidade alternativa, a bolsa 46 é vedada em seções, de modo que a bolsa contínua 46 tenha múltiplas seções que são isoladas entre si para inibir o movimento de ar e café entre as seções. O fluxo turbulento de ar durante a esterilização é mostrado com setas que passam através da bolsa 46 e ao redor de suas superfícies.
[00172] A Figura 9 mostra um método da presente invenção geralmente designado com o número de referência 10. O método 10 inclui a etapa 12 de fornecer um componente fúngico em um meio de cultura de tecido líquida, a etapa 14 de adicionar uma mistura que inclui um extrato de cacau ao meio de cultura de tecido líquida para fazer com que o componente fúngico consuma componentes com sabor de cacau indesejável, a etapa 16 de pasteurizar ou esterilizar as favas de cacau cruas, a etapa 18 de hidratas as favas de cacau cruas em 10 a 80% de teor de umidade, a etapa 20 de inocular as favas de cacau cruas com o componente fúngico, a etapa 22 e fornecer temperatura, teor de oxigênio e umidade ideal para permitir o crescimento fúngico e a etapa 24 de secar e calcinar as favas de cacau cruas.
[00173] A etapa 22 incluir reduzir os níveis de oxigênio para facilitar o crescimento de micélio anaeróbico nas favas de cacau cruas para maximizar as taxas de consumo de 2-metóxi-3-isopropilpirazina e teo- bromina pelo micélio do componente fúngico.
[00174] A Figura 10 mostra um método de micelação aquosa de ca- cau em uma solução aquosa. O método 26 inclui a etapa 28 de fornecer cacau cru ou torrado, a etapa 30 de triturar cacau em partículas pequenas de menos do que 1 mm de diâmetro, a etapa 32 de fornecer uma solução aquosa em um biorreator, em que a solução tem uma viscosidade apropriada para suspender as partículas pequenas de cacau quando agitada, a etapa 34 de adicionar cultura de tecido líquida de um componente fúngico, tal como micélio de uma cepa fúngica pura, a etapa 36 de possibilitar a micelação fúngica do cacau na solução aquosa por regulação da temperatura, atividade de agitação e níveis de oxigênio para garantir o crescimento anaeróbico facultativo do mi- célio, a etapa 38 de separar o cacau da solução aquosa e secar o cacau separado e a etapa 40 de selecionar e extrair componentes de sabor de cacau solúveis em água selecionados da solução aquosa e adicionar pelo menos uma porção dos componentes de sabor de cacau solúveis em água selecionados de volta ao cacau separado para render um pó ou líquido de cacau saboroso.
[00175] Os exemplos a seguir são fornecidos para propósitos ilustrativos apenas e não pretendem limitar o escopo da invenção.
EXEMPLOSEXEMPLO 1
[00176] Cepas específicas e puras de fungos obtidos a partir de coleções referidas foram manipulados em ambientes estéreis em bolsas plásticas de 3,79 l a 37,9 l (1 gal a 10 gal), jarra de vidro de 1,14 l a 3,79 l (1 qt a 1 gal) ou em placas de Petri de 10 cm a 15 cm, com o uso de meios à base de vegetais e frutas orgânicas não definido, incluindo extrato de favas de café verde e favas de café ou outro extrato de substrato agrícola com 1,5% de ágar (p/v), a fim de monitorar e garantir o vigor e a saúde geral das cepas.
[00177] As amostras de micélio foram crescidas em um fluxo de ar estéril em ambiente e suave por 2 a 4 semanas, então, extirpadas das placas de Petri e subsequentemente usadas para inoculação em fermentação de estado líquido que emprega um meio à base de vegetal e fruta indefinido similar (mas sem ágar), com o uso de ar ambiente, em jarras de vidro de 1,14 l a 3,79 l (1 qt a 1 gal). Algumas amostras foram crescidas em culturas agitadas e algumas foram crescidas em culturas não agitadas em ar ambiente em tanques de aço inoxidável projetados para infusão e/ou fermentação de cerveja comercial.
[00178] A fermentação de estado líquido não agitada formou uma massa flutuante de hifas que exibiram crescimento contínuo na interface de líquido e ar. O micélio de culturas agitadas e/ou em redemoinho cresceram muito rapidamente como esferas de hifas, que, sendo hidratadas, permaneceram submersas e tiveram a aparência de micro- esferas gelatinosas em diâmetro pequeno. As esferas de hifas hidratadas sofreram colapso mediante dissecação, em que foram usadas para inocular placas de Petri para controle de propagação e qualidade.
[00179] O diâmetro de esfera em fermentação de estado líquido mostrou ser inversamente proporcional à intensidade e o volume de agitação. O cisalhamento das hifas tornou-se mais eficaz em agitação e intensidade de redemoinho mais altas e, uma vez cisalhadas, as hi- fas formaram novas esferas de diâmetro menor possível, crescendo em tamanho até serem cisalhadas novamente. Quando empregadas em fermentação de estado líquido contínua, existiu uma razão constante de diâmetros de esfera e, portanto, um suprimento constante de esferas na ordem de micra foi produzido.
[00180] Portanto, esse exemplo demonstrou que o diâmetro de esfera de micélio foi manipulado para inoculação mais eficaz com a eficácia de inoculação sendo inversamente proporcionar ao diâmetro de esfera.
EXEMPLO 2
[00181] As culturas de micélio de fermentação de estado líquido não agitada (período de crescimento de 2 a 4 semanas) formaram uma massa flutuante de hifas, que foram suavemente mescladas com um dispositivo de corte estéril afiado antes de serem usadas para inoculação. A mescla suave foi atingida por mistura ou homogeneização baixar em um misturador comercial em rajadas curtas a velocidades baixas. As alíquotas de cultura de estado líquido mesclada foram usadas para inocular frutas e/ou vegetais não processados esterilizados, grãos de cereais e/ou sementes culinárias ou condimento culinário pasteurizado, ervas medicinais, flavorizantes naturais, misturas de chá, favas de baunilha verde, favas de cacau verde e favas de cacau ou outro substrato agrícola.
EXEMPLO 3
[00182] Os substratos para micelação (contendo tanto substrato como cultura de micélios inoculados) em jarras ou bolsas foram misturados suavemente a cada poucos dias até terem controlado o substrato e tornando-se resistentes à mistura ou agitação, usualmente 2 a 4 semanas dependendo da cepa. Os produtos estavam, então, em uma forma de carne de soja. As favas de baunilha verde miceladas foram cozidas ou assadas; as favas de cacau verde miceladas foram assados ou torrefeitos; e as favas de cacau miceladas ou outro substrato agrícola foram torrefeitos ou torrados. O grão micelado apresentado em forma de carne de soja ou como um ingrediente em alimento(s), incluindo sopas, frituras, pães e substitutos de carne, foi tornado seguro para comer e biodisponível por cozimento em calos baixo a médio, 62,78 °C a 73,86 °C (145 °F a 165 °F),por 10 min a 60 min, em algum ponto antes do consumo. Outras culturas em jarras ou bolsas, tais como ervas e especiarias, foram secas a 37,78 °C a 62,78 °C (100 °F a 145 °F) por 1 h a 24 h, embaladas e usadas de modo convencional.
[00183] As formulações de mel miceladas foram agitadas por 10 min a 90 min a 37,78 °C a 51,67 °C (100 °F a 125 °F), então, vertidas em garravas de vidro pequenas. Além disso, os produtos agrícolas com valor agregado, ais como macarrão de ovos, substitutos de carne, flavorizantes especializados, molhos de cozimento, ingredientes de sopa e similares.
EXEMPLO 4
[00184] Para um lote grande de operação de estado líquido ou de estado sólido, culturas puras foram crescidas de modo aeróbico e inoculadas em processadores comerciais de estado sólido grandes e de estado líquido industrial grandes operados de modo contínuo e semia- naeróbico para fermentação em larga escala de produtos alimentícios. Após as culturas de meio tornarem-se completamente brancas ou um cor representativa do mesmo para uma espécie particular, em terem crescido em excesso e controlado o meio e serem resistentes à mistura suave, os conteúdos foram colhidos, removidos para bolsas plásticas e refrigerados para uso rápido a ou 4,44 °C (40 °F), ou congelados para armazenamento a longo prazo, e utilização subsequente, a - 28,89 °C (-20 °F). Os meios fermentados foram preparados em alimentos humanos gastronômicos: substitutos de carne "estilo carne de soja", macarrão de ovos, flavorizantes especializados, pães, extratos e molhos de cozimento, ou usados diretamente como um ingrediente fresco em receitas de sopa e/ou frituras, ou embalados.
EXEMPLO 5
[00185] Os substratos agrícolas foram completamente micelados por inoculação com culturas puras de cepas fúngicas selecionadas dentre A. blazei, C. sinensis, G. lucidum, H. erinaceus, G. frondosa, P. eryngii, P. ostreatus, P. citrinopileatus, P. djamor, T. versicolor, L. edo- des, F. velutipes, V. volvacea, H. marmoreus, P. nameko, T. melanos- porum, M. hortensis, P. umbellatus e T. fuciformis foram submetidos a tratamento térmico 1 hora a 24 horas antes da coleta por 1 min a 2 horas a 62,78 °C a 90,56 °C (145 °F a 195 °F) seguida por recuperação à temperatura ambiente por 45 min a 48 horas. Esse processo mostrou diminuição considerável em níveis de RNA e foi formulado em diferentes composições nutracêuticas.
EXEMPLO 6
[00186] 32,2 kg (71 lbs) de favas de cacau foram embebidas em umvolume equivalente de água por 5 minutos, após o qual a água foi removida por filtração e o cacau foi igualmente distribuído em 10 bolsas de polipropileno com emplastros de respiradouro de 0,2 mícron. Os topos das bolsas foram dobrados sobre a bolsa e tiveram tiras de borracha envolvidas em torno de cada lado da bolsa. As bolsas foram esterilizadas por 80 minutos a 151,68 kPa (22 psi) com vapor d'água saturado ligeiramente seco a 123,89 °C (255 °F). As bolsas foram, então, resfriadas em um ambiente estéril por 8 horas e foram subsequentemente inoculadas com culturas de tecido líquidas submersas de Ga- noderma lucidum, Cordyceps sinensis, Tuber melanosporum, or Mor- chella angusticep, com ferramentas estéreis e operação estéril dentro de uma tampa de fluxo laminar estéril. Os inoculantes foram crescidos em frascos de 4 l, em 1,5 l de meios preparados a partir da mistura com 10 l de extrato de batata orgânico, 2 l de extrato de fava de cacau crua e 1 l de suco de manga orgânico, e 50 ml de inoculante foram usados para cada bolsa de cacau após o inoculante ter crescido por 7 dias sob RPM de agitação de raio de 2,54 cm (1 polegada). As culturas foram miceladas por duas semanas, em seguida foram secas e provadas. Percebeu-se que o cacau de Tuber melanosporum conferiu o sabor menos amargo (sabor mais aprimorado).
EXEMPLO 7
[00187] As amostras de Cevada, Arroz Integral, Trigo Mourisco, Tri- guilho (trigo partido), linhaça, Grano, Milhete, Aveia, Pão de Aveia, Cereal da Aveia, Farinha de Aveia, Pipoca, Flocos de Cereal de Trigo Integral, Granola, Aveia Rolada, Quinoa, Centeio, Sorgo, Espelta, Triti- cale , Cevada de Grãos Integrais, Bagas de Trigo, Farinha de Milho de Grãos Integrais, Centeio Integral, Pão de Trigo Integral, Cuscuz de Trigo Integral e Arroz Selvagem foram individualmente misturadas com metade de seu volume de água em jarras esféricas de 1,14 l ou bolsas autoclaváveis com emplastros respiradores e esterilizadas a 0,103 MPa (15 psi) por 90 minutos ou 0,152 MPa (22 psi) por 80 minutos. Uma vez resfriadas, as jarras de grãos foram inoculadas com metade das a todas as colônias de culturas fúngicas flutuantes ou submergidas selecionadas a partir de uma das seguintes: Ganoderma lucidum, Cordyceps sinensis, Tuber melanosporum, Hericium erinaceus, Agari- cus blazei, Grifola frondosa, Pleurotus ostreatus, Trametes versicolor, Laetiporus sulphureus, Flammulina velutipes, Lentinula edodes, Mor- chella angusticeps, Morchella crassipes, Morchella hesculenta, Tre- mella fuciformis e Inonotus obliquus, em que as culturas flutuantes foram crescidas em um meio indefinido orgânico em jarras esféricas de 1,14 l ou 2,27 l e em que as culturas submergidas foram crescidas em frascos de 4 l em 1,5 l de meio indefinido. Após a miceliação por duas semanas, as jarras foram crescidas completamente e foram pasteurizadas a 100 °C (212 °F) em uma panela para banho-ma ria por 7 minutos antes de serem cozidas e consumidas como carne de soja ou adicionalmente formuladas em um nutracêutico (isto é, formuladas em 2 galões de mel em associação com ácido ascórbico de moléculas pequenas (1 g) e ácido cítrico (10 g) com 8 ml de óleos essenciais de laranja e tangerina). Essa etapa de formulação começou pela mescla- gem da cultura pasteurizada com 2 litros de água ou não e, então, o ácido ascórbico e cítrico foi adicionado à mescla, então, os óleos es-senciais, então, o mel, a formulação foi, então, aquecida em uma panela para banho-maria, engarrafada e pasteurizada uma vez que engarrafada para garantir uma vedação segura.
EXEMPLO 8 CAFÉ DE TRABALHO DE LOTE PEQUENO
[00188] 21,77 kg (48 lb) de café foram divididos em 48 porçõesiguais em jarras esféricas de 1,14 l limpas com tampas construídas para permitir a difusão gasosa além do colar. Essas massas de café de 21,82 kg (48,1 lb) enxaguadas com 0,85 l de água de duas horas. A água nas misturas foi filtrada. As jarras de café foram, então, submetidas a 90 minutos de temperaturas de esterilização a 0,103 MPa (15 psi) e colocadas em um fluxo de ar laminar estéril para resfriar por 8 horas. Uma vez resfriados, os grãos de café foram inoculados com metade dos a todos os fungos selecionados a partir de um dos seguintes: Ganoderma lucidum, Cordyceps sinensis, Tuber melanosporum, Hericium erinaceus, Agaricus blazei, Grifola frondosa, Pleurotus ostre- atus, Trametes versicolor, Laetiporus sulphureus, Flammulina veluti- pes, Lentinula edodes, Morchella angusticeps, Morchella crassipes, Morchella hesculenta, Tremella fuciformis e Inonotus obliquus, fazendo três de cada, proliferando em um meio de ágar de suco de fruta e vegetal indefinido que contém extrato de café verde conforme descrito no Exemplo 8, com ferramentas estéreis e em operação estéril dentro da cobertura de fluxo laminar. As culturas miceliadas por 7 a 21 dias, com amostras de cada uma sendo retiradas para secagem e torrefação nos 7°, 14° e 21° dias. O odor da cultura e o sabor do café no 7° dia indicaram que as culturas foram concluídas, embora períodos de miceliação tenham rendido uma massa celular maior.CAFÉ DE TRABALHO DE LOTE GRANDE
[00189] 239,5 kg (528 lb) de favas de cacau ou outro substrato agrícola foram enxaguados em dois procedimentos diferentes. No primeiro procedimento, as favas foram enxaguadas três vezes, por 20 minutos cada enxágue, no segundo procedimento, as favas foram enxaguadas por 20 minutos através de uma corrente constante de água filtrada. As favas foram, então, embaladas em sacos de polipropileno com em- plastros respiradores de 0,2 mícron, com os topos dos sacos dobrados com bandas de borracha enroladas ao redor dos lados dos sacos, de modo que a difusão de gás e vapor possa ocorrer através do emplastro respirador e através dos lados dobrados dos sacos. Os sacos foram esterilizados sob um ciclo líquido a 0,152 MPa (22 psi) por 80 minutes e, então, permitiu-se que fossem resfriados por 8 horas. Os sacos foram inoculados com fungos a partir das espécies a seguir: Ga- noderma lucidum, Cordyceps sinensis, Tuber melanosporum e Mor- chella angusticpes. A cultura de Ganoderma lucidum foi crescida em um biorreator com 10 l de extrato de batata orgânico, 2 l de extrato de café verde e 1 l de suco de manga orgânico diluídos em 100 litros com água RO. O biorreator foi borrifado com ar comprimido filtrado através de dois filtros de cápsula hidrofóbica de 0,2 mícron em linha e o reator foi mantido sob 0,01 a 0,02 MPa (2 a 3 psi) através do uso de válvulas de verificação no suprimento de ar e linhas de ventilação com classificações de pressão de ruptura de 0,01 a 0,02 MPa (2 a 3 psi). O inocu- lante foi prontamente crescido em 48 horas e foi coletado através de uma válvula de diafragma localizada no fundo do reator, o que levou a uma linha de coleta que tinha acesso em T e com válvula a uma linha de vapor e coleta de vapor, com uma válvula de verificação em linha, através de 1,83 metro (seis pés) de alojamento de aço inoxidável flexível, a uma válvula solenoide conectada a um temporizador e comutador de pedal, seguido por uma válvula de medição de fluxo a um en-caixe sanitário em cotovelo. Enquanto é vaporizado, o encaixe sanitário em cotovelo foi conectado a uma válvula de esfera que é conectada ao coletor de escape de vapor. A válvula de esfera foi fechada após vaporizar a linha e a válvula de esfera foi separada da linha de coleta uma vez que inserida em uma cobertura de fluxo laminar, de modo a manter a linha inteira estéril. As culturas de Cordyceps sinensis, Tuber melanosporum e Morchella angusticeps foram crescidas em frascos de 4 l, em 1,5 l do mesmo meio usado na pré-diluição de biorreator. Essas culturas foram crescidas por seis dias e foram usadas para inocular os sacos de favas de cacau esterilizados ou outro substrato agrícola. As favas foram miceliadas por 7 dias, em que seu odor conferiu o perfil de sabor desejado da bebida feita a partir de favas miceliadas torrefeitas, e, portanto, os mesmos foram secos no 8° dia a um teor de umidade de 13%.
EXEMPLO 9
[00190] Um fungo adequado para o uso nos métodos da presente invenção foi preparado pelos métodos a seguir. As cepas de G. luci- dum a seguir foram adquiridas comercialmente a partir da coleção de cultura da Universidade do Estado da Pensilvânia: 496 Ling ZHI; linhagem comercial de Singapura; 7/85; 502 IFO n° 8436; IFO-Japan; 7/30/85; 510 Red oak, State College, PA; D.J. Royse; 9/85; 549 Y.H. Park, ASI-Korea; 12/5/85; 550 Y.H. Park, ASI-Korea; 12/5/85; 551 Y.H.Park, ASI-Korea; 12/5/85; 580 Y.H. Park, ASI-Korea; 2/10/85; 607 Y.H.Park, ASI-Korea; 2/19/85; 617 Y.H. Park, ASI-Korea; 2/25/85; 618 Y.H.Park, ASI-Korea; 2/25/85; 619 Y.H. Park, ASI-Korea; 2/25/85; 620 Y.H.Park, ASI-Korea; 2/25/85; 621 Y.H. Park, ASI-Korea; 2/25/85; 622 Y.H.Park, ASI-Korea; 2/25/85; 623 Y.H. Park, ASI-Korea; 2/25/85; 624 Y.H.Park, ASI-Korea; 2/25/85; 625 Y.H. Park, ASI-Korea; 2/25/85; 626 Y.H.Park, ASI-Korea; 2/25/85; 627 Y.H. Park, ASI-Korea; 2/25/85; 665 Quimio; Filipinas; 3/6/86; 669 Y.H. Park, ASI-Korea; 3/25/86; 686 B. W. Yoo; 4/28/86; 724 T. Mitchel, Lawn PSU Forestry Bldg. 9/16/90; 806 Alice Chen; Buffalo, NY; 4/94; 807 Alice Chen; Carolina do Norte; 4/94; 841 White Oak; PSU Campus; J. Peplinski; 8/99. As cepas acima foram cultivadas com o uso do meio descrito no presente documento que compreende favas de cacau ou outro extrato de substratos agrícolas (consulte o Exemplo (10)). Muitas cepas não tiveram a capacidade de crescer e/ou morreram no meio. Surpreendentemente, os invento- res revelaram que a cepa de G. lucidum 806 Alice Chen; Buffalo, NY teve a capacidade de crescer no meio que compreende extrato de fava de café verde e foi selecionada para o uso adicional em conformidade com a presente invenção.
EXEMPLO 10
[00191] O fungo (incluindo Cepa de G. lucidum 806, C. sinensis e T. melanosporum conforme descrito no presente documento, também H. erinaceus, T. versicolor, L. edodes, T. matsutake, F. velutipes, A. bla- zei, G. frondosa, P. nameko, L. officinalis, M. hortensis, M. angusti- ceps, A. auricula, T. fuciformis, I. obliquus, F. fomentarius, L. sulfureus) foram mantidos em uma cultura que compreende meios não identificados que incluem extrato de favas de cacau. Os experimentos mostraram que o uso dos meios que incluem os extratos de favas de cacau para cultura manteve a habilidade do fungo de tolerar, crescer, meta- bolizar, remover ou reduzir a cafeína ou os componentes de sabor in- desejado. Constatou-se também que as propagações sucessivas de fungo conforme definida acima causaram a intensificação e/ou aprimoramento da habilidade do fungo de tolerar, crescer, metabolizar, remover ou reduzir a cafeína ou diminuir os componentes de sabor indese- jado, que resulta no treinamento ou adaptação do fungo para meios não identificados que incluem extrato de favas de cacau. Tal fungo com propriedades alteradas, aprimoradas e adaptadas conforme descrito no presente documento, em relação às cepas de início, selecionadas ou não selecionadas, foram desenvolvidas. Essas cepas adaptadas foram depositadas com ATCC conforme descrito em outro local no presente documento.
[00192] Os meios não identificados que incluem o extrato de favas de cacau foram feitos conforme o seguinte: 0,91 kg (2 lbs) favas de cacau ou outro substrato agrícola, pulverizado foi misturado com 0,95 l (Vi de galão de água) em temperatura ambiente. A mistura foi permita à extração por 20 minutes com agitação, então, filtrado três vezes através de malha fina. Separadamente, 5 batatas orgânicas foram colocadas em 10 l de água e autoclavada por 20 minutos para amaciar as batatas. As batatas foram, então, pulverizadas com um amassador de batata e, então, filtradas através de malha fina três vezes. 1 l de suco de fruta não adocicado comercial foi adicionado. Essas soluções foram combinadas e autoclavadas. Essa receita também foi aumentada ou diminuída em escala conforme exigido.
[00193] As favas de cacau lavadas foram lavadas em água e o teor de umidade foi elevado a cerca de 30%. Em outros momentos, o teor de umidade foi elevado a cerca de 60%.
[00194] Cultura de líquido: A cultura que compreende fungo para uso na inoculação de favas de cacau preparadas ou outro substrato agrícola foi agitada com ar espargido e um pá motorizada para criar meio ambiente turbulento e para cisalhar hifa com pura força mecânica. O método de agitação duplo foi superior à ambos os métodos individualmente, visto que o ar espargido criou a maior turbulência na metade superior da cultura, enquanto afeta menos a parte inferior, que foi agitada através de uma pá motorizada. Por sua vez, a pá pode ser realizada em um RPM baixo e ainda obter o tamanho de esfera de hifa obtido através de um RPM mais rápido na ausência de espargimento. O tamanho de hifa foi de cerca de 2 a 5 microns em diâmetro). O micé- lio não danificado e a morfologia adequada no fungo preparado foram preparados através desse método e usados para a cultura e/ou miceli- ação.
EXEMPLO 11
[00195] As Trufas Negras do Perigord de Inverno Italianas [Trufas 1 (T1) e Trufa 2 (T2)], foram manipuladas assepticamente no ambiente de laboratório de micologia para obter uma diversidade de novos cultivares de trufas trabalho comercial, que inclui isolados de tipo conjuga- do oposto, seguindo-se 4 métodos.
[00196] Método 1: pedaços inteiros, intactos, frescos (menos que uma semana) de T1 (nacos de trama de trufa de aproximadamente 10 mm por 20 mm em tamanho) foram colocados em carvalho ágar (uma general mídia ágar não identificada com base nas folhas de carvalho e nos galhos de carvalho), em 50 placas de petri, que foram vedadas com parafilme para permitir que as culturas incubem em uma temperatura ambiente (23°C) por 5 semanas. Após 5 semanas, observou-se que os pedaços de T1 se regeneraram no micélio descrito pelos seguintes cultivares: (a) micélio branco vigoroso que tem tonalidades roxas, em 6 placas de petri, (b) micélio dourado vigoroso com tonalidades roxas, em 3 placas, (c) micélio branco e micélio dourado, em 6 placas, (d) micélio roxo fino não vigoroso e micélio dourado em 2 placas, e (e) micélio branco fino não vigoroso e micélio dourado em 2 placas. O restante das placas de petri (37 placas) foram descartadas após se tornarem cobertas pela contaminação (bacteriano e fúngico). Os isolados (a), (b) e (c) foram determinados como tendo potencial comercial. O (a) isolado branco vigoroso é o micélio tipo acasalamento materno para o cogumelo de trufa original, em que o isolado (b) é um micélio do tipo de acasalamento paterno para o cogumelo de trufa original, e (c) é um cultivar derivado de recombinação genética não sexual ou anastomoses tanto dos tipos de acasalamento de (a) quanto de (b). Após 5 a 6 semanas crescendo em um carvalho ágar, as culturas de (c) micélio branco e dourado vigoroso começa a produzir penas (0,1 mm a 2,0 mm) frutas de trufa. Após as estruturas serem cultivadas para placas de petri frescas e em meios agrícolas similares, essas culturas produzidas de cogumelos de trufa negra crescente.
[00197] Método 2: esporos intactos frescos (menos que uma semana) de T1 (0,01 g a 0,1 g tufos de esporos de uma massa aproximada de 0,1mm por 0,1mm em tamanho) foram colocados em ágar roble de temporada média em placas de petri (40 placas), que foram vedadas com parafilme por 5 semanas para permitir que os esporos para germinar em temperatura ambiente (23 graus C). Após 5 semanas, observou-se que os esporos foram germinados no micélio em 10 placas; no entanto, todos os micélios foram germinados a partir dos esporos, embora viável, foram extremamente finos e cresceram lentamente.
[00198] Método 3: pedaços inteiros, intactos, frescos (menos que uma semana) de T1 (40 g de nacos de trama de aproximadamente 10 mm por 20 mm em tamanho) foram colocadas em 2 garrafas em que cada uma contém 400 ml de água esterilizada e 50 ug/ml de cada um dos seguintes antibióticos: Ampicilina, Penicilina, Cloranfenical, Ero- tromicina, Neomicina, Estrreptomicina, com fechamentos, porém não apertados, em que os mesmos foram permitidos serem incubados sem distúrbio por 5 semanas em temperatura ambiente (23°C) com uma agitação suave ocasional. Após 5 semanas, removeu-se os pedaços intactos do tampão de antibiótico e jogados em meios de ágar não identificados (que contém os mesmos níveis de antibióticos), com base em folhas e galhos de carvalho, em 50 placas de petri que foram, então, vedados com parafilme para permitir que as culturas sejam incubadas por 2 semanas em temperatura ambiente (23°C). Após 2 semanas de regeneração em ágar, os pedaços de T1 se regeneraram nos seguintes cultivares de micélios: (a) micélio branco em 12 placas de petri, (b) micélio dourado em 4 placas, (c) micélio branco e dourado em 2 placas. O restante das placas de petri (32 placas) foram descartados após mostrar nenhum crescimento ou após se tornar cobertos por contaminação fúngica. Os isolados obtidos através do Método 3, embora muito similares aos isolados do Método 1, foram muito menos vigorosos.
[00199] Os isolados (a), (b) e (c) do Método 1 foram preparados conforme descrito no presente documento e usados para miceliação de substratos. O substrato foi favas de cacau preparadas. A micelia- ção das favas de cacau preparadas permitiu prosseguir até o sabor de café desejado para as favas de cacau torrefeitas e o chocolate resultante foi alcançado, cerca de 7 dias. As favas de cacau miceliadas resultantes foram torrefeitas e transformadas em chocolate, e provadas por provadores treinados. Constatou-se que quando o isolado descrito para o Método 1, o isolado (a) foi usado, um aroma/gosto saboroso agradável no chocolate micelinado, reminiscente de flores, foi alcançado. Quando o isolado descrito para o Método 1, o isolado (c) foi usado, um aroma/gosto saboroso agradável, reminiscente de trufas, foi alcançado.
EXEMPLO 12
[00200] As favas de café e produtos moídos produzidas pelos métodos da presente invenção contiveram polissacarídeos e beta gluca- nos adicionados. Uma análise mostrou que os produtos moídos de café Robusta produzidos pelos métodos da invenção tiveram 30,54 mg de dextrano por grama de produtos moídos de café. Esse resultado forneceu a quantidade de polissacarídeo total no substrato através um método espectrofotométrico baseado em uma abordagem de ácido sulfúrico-fenol modificada. A análise também mostrou que os produtos moídos de café Robusta produzidos pelos métodos da invenção tiveram beta glucanos a 0,432%, conforme medido pelo método de MYBG que utiliza condições de hidrólise fortes para hidrolisar beta glucano com quantificação por espectrofotométrico. Isso representa uma van-tagem em relação ao consumo de beta-glucanos de cogumelos Reishi, posto que esses cogumelos são um cogumelo não culinário por razões de amargura, qualidade de madeira e dureza, ou em forma de pílula.
EXEMPLO 13COMPARAÇÃO DE GOSTO 1, FAVAS SUMATRAN, PERUVIAN E HONDURAN ARABICA
[00201] Um profissional do café e proprietário de um negócio de tor- refação de café (degustador) e um funcionário treinado testaram o gosto, em um ensaio duplo-cego, uma comparação de favas de café premium padrão com o uso de favas da Sumatra, Peru e Honduras (favas de controle) com favas de café produzidas pelos métodos da presente invenção (favas miceliadas). Tanto as favas miceliadas quanto as favas de controle foram torradas um dia antes do ensaio. As mesmas foram dispostas em copos lado a lado com o controle, com o uso de técnicas-padrão de degustação de café.
[00202] Os efeitos de acentuação de sabor de miceliação foram confirmados. Os degustadores provaram preparações miceliadas e normais de cada variedade nesse teste-cego de gosto. Notas foram tomadas. Na conclusão da degustação, as favas de café usadas para cada copo foram identificadas.
[00203] O primeiro comentário sobre a Sumatra miceliada foi que a mesma é mais encorpada, com sabor mais complexo e menos amargo que a Sumatra de controle. Os degustadores determinaram que esse foi o único processo no qual perceberam que de fato foi removido um defeito de gosto e de fato foi acentuado o sabor.
[00204] O Peruvian miceliado mostrou também uma acentuação de sabor notável, sendo menos amargo, mais doce e um copo notavelmente "mais claro" quando miceliado. Apesar de ser uma fava de alta qualidade, o Peruvian de controle teve gosto "insípido" em comparação.
[00205] Dentre os dois degustadores, um degustador foi capaz sentir uma diferença em gosto na preparação Honduran. Os métodos da invenção resultaram na remoção dos compostos amargos encontrados no café resultando em um copo com melhor gosto de café.
COMPARAÇÃO DE GOSTO 2 FAVAS ARABICA
[00206] Um gosto de café miceliado foi executado em uma cafete ria. O barista/torrador (degustador) entregou o copo convencional de seu café Sulawesi Arabica (de origem indonésia). As favas foram selecionadas a partir do inventário e tanta as favas miceliadas quanto às favas de controle (Arabica) foram torradas no dia do teste em copos. Os resultados mostraram que o café miceliado (produzido pelos métodos da invenção) teve um perfil de sabor aprimorado.
[00207] O degustador descreveu o café miceliado como menos ácido, mais doce, mais encorpado, mais complexo e como um todo um melhor gosto que a fava original. Diversos outros participantes teste de gosto também observaram a acentuação de sabor encontrada no café miceliado.
COMPARAÇÃO DE GOSTO 3 FAVAS ROBUSTA
[00208] Um profissional do café e proprietário de um negócio de tor- refação de café (degustador) e um funcionário treinado testaram o gosto, em um ensaio duplo-cego, uma comparação de favas de café Robusta de controle com favas de café Robusta produzidas pelos métodos da presente invenção. O café produzido a partir de 100% de favas Robusta é geralmente considerado não bebível devido à acidez e à amargura altas do Robusta. Dessa forma, as favas de café Robusta não são tipicamente usadas sozinhas, em vez disso, as favas Robusta são tipicamente pré-processadas (por exemplo, cozidas a vapor), então, misturadas com favas mais dispendiosas para torná-la palatável.
[00209] Essa fava de qualidade inferior é considerada não bebível por alguns devido à sua amargura, mas o Robusta é usado comercialmente em misturas de café para abaixar o preço. O Robusta está em uso crescente e o segmento de Robusta do mercado de café tem crescido a partir de 39% do mercado em 2008 para 41% do mercado em 2013.
[00210] Os degustadores concordaram que o Robusta miceliado é sem dúvida um melhor copo de café em comparação com o não mice- liado. Um degustador comentou que "foi comprovado acima de qualquer dúvida que sua tecnologia funciona"; o outro degustador comentou que ele é autoproclamado especialista em café snob e que beberia esse Robusta miceliado diariamente", confirmando concomitantemente que o café não miceliado estava impalatável. Mais especificamente, ele observou uma carência evidente de amargura e acidez no copo, com um encorpamento maior no gosto. Os degustadores destacaram que um degustador de café não profissional seria capaz de degusta e apreciar a diferença, e que o Robusta miceliado possui grande valor no mercado. Outros funcionários da empresa de torrefação também notaram a diferença.
[00211] Os resultados de teste de gosto demonstraram claramente que os presentes processos acentuaram o gosto do café. Os resultados mostraram que os processos da invenção removeram defeitos de gosto como amargura tanto de favas de café Arabica quanto Robusta e acentuaram seu sabor e valor. Os processos resultam em um café com gosto mais doce, mais encorpado e mais complexo com favas Robusta ou Arabica.
COMPARAÇÃO DE GOSTO 4 FAVAS DE CACAU
[00212] As favas de cacau preparadas pelo método do Exemplo 6 foram processadas em chocolate e tiveram gosto para ser comparado com o chocolate feito por favas que ainda não foram submetidas ao processo no Exemplo 6. O degustador determinou que o chocolate do chocolate miceliado teve um sabor e um gosto que foram mas ricos, mais suaves e mais doces com sabores menos amargos, pungentes e/ou ácidos e aromas comparados com o chocolate feito a partir das favas de cacau não tratadas. O degustador determinou que menos açúcar e/ou outro adoçante tais como laticínios foi necessário para criar um chocolate que foi levemente palatável em comparação com o chocolate feito a partir das favas de cacau não tratadas.

Claims (9)

1. Método para preparação de um produto de cacau miceliadocompreendendo:a) fornecer favas de cacau preparadas que compreendem as etapas de:i. fornecer favas de cacau;ii. esterilizar as favas de cacau preparadas;b) fornecer um componente fúngico preparado como uma cultura líquida;c) inocular as favas de cacau preparadas com o componente fúngico preparado; eo referido método sendo caracterizado pelo fato de que compreende d) cultivar as favas de cacau preparadas e o componente fúngico preparado para permitir a miceliação, em que o componente fúngico preparado é selecionado do grupo consistindo em G. lucidum, H. erinaceus, T. versicolor, L. edodes, T. matsutake, F. velutipes, A. blazei, G. frondosa, P. nameko, L. officinalis, M. hortensis, M. angusticeps, A. auricula, T. fuciformis, I. obliquus, F. fomentarius, L. sulfureus, C. sinensis, T. melanosporum, e combinações dos mesmos.
2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a etapa de fornecer favas de cacau preparadas compreende adicionalmente hidratar as favas de cacau.
3. Método, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que as favas de cacau são hidratadas para um nível de umidade de 60% ou um nível de umidade de cerca de 30%.
4. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o componente fúngico preparado é G. lucidum.
5. Método, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o componente fúngico preparado é cepa 806 de G. lucidum.
6. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o componente fúngico preparado é C. sinensis.
7. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o componente fúngico preparado é preparado por um método que compreende manter uma cepa de fungos em um meio não definido que compreende um extrato de fava de cacau aquoso e uma fonte de energia.
8. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a etapa de cultivar é executada por 7 dias.
9. Produto miceliado de cacau, caracterizado pelo fato de que é preparado pelo método, como definido na reivindicação 1.
BR112015023468-2A 2013-03-15 2014-03-15 Produtos miceliados e métodos para produção de produtos miceliados a partir de cacau e outros substratos agrícolas BR112015023468B1 (pt)

Applications Claiming Priority (18)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361802256P 2013-03-15 2013-03-15
US13/844,685 US9068171B2 (en) 2012-09-06 2013-03-15 Method for myceliating coffee
US13/859,719 US9427008B2 (en) 2012-09-06 2013-04-09 Method of myceliation of agricultural substates for producing functional foods and nutraceuticals
US13/859,719 2013-04-09
US13/874,832 US20140065131A1 (en) 2012-09-06 2013-05-01 Extract of a myceliated agricultural substrate and its use as a nutraceutical composition
US13/874,832 2013-05-01
US201361844498P 2013-07-10 2013-07-10
US61/844,498 2013-07-10
US201361857671P 2013-07-23 2013-07-23
US201361866371P 2013-08-15 2013-08-15
US201361867501P 2013-08-19 2013-08-19
US201314020781A 2013-09-06 2013-09-06
US14/020,512 2013-09-06
US14/020,512 US20140170264A1 (en) 2012-09-06 2013-09-06 Improved method for myceliating raw coffee beans including removal of chlorogenic acids
US14/020,781 2013-09-06
US201361878037P 2013-09-15 2013-09-15
US201361896097P 2013-10-27 2013-10-27
PCT/US2014/029998 WO2014145265A2 (en) 2013-03-15 2014-03-15 Myceliated products and methods for making myceliated products from cacao and other agricultural substrates

Publications (2)

Publication Number Publication Date
BR112015023468A2 BR112015023468A2 (pt) 2017-07-18
BR112015023468B1 true BR112015023468B1 (pt) 2021-11-23

Family

ID=54249679

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BR112015023468-2A BR112015023468B1 (pt) 2013-03-15 2014-03-15 Produtos miceliados e métodos para produção de produtos miceliados a partir de cacau e outros substratos agrícolas
BR112015023652-9A BR112015023652B1 (pt) 2013-03-15 2014-03-15 método para a preparação de um produto de café miceliado e produto de café miceliado preparado pelo dito método

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BR112015023652-9A BR112015023652B1 (pt) 2013-03-15 2014-03-15 método para a preparação de um produto de café miceliado e produto de café miceliado preparado pelo dito método

Country Status (9)

Country Link
EP (3) EP3560343A1 (pt)
JP (3) JP2016517280A (pt)
KR (3) KR101786644B1 (pt)
CN (2) CN105682480B (pt)
AU (2) AU2014233209B2 (pt)
BR (2) BR112015023468B1 (pt)
ES (1) ES2733912T3 (pt)
SG (2) SG11201507655RA (pt)
WO (2) WO2014145256A1 (pt)

Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9485917B2 (en) 2006-12-15 2016-11-08 Ecovative Design, LLC Method for producing grown materials and products made thereby
US9427008B2 (en) 2012-09-06 2016-08-30 Mycotechnology, Inc. Method of myceliation of agricultural substates for producing functional foods and nutraceuticals
US10231469B2 (en) 2014-03-15 2019-03-19 Mycotechnology, Inc. Myceliated products and methods for making myceliated products from cacao and other agricultural substrates
US9572364B2 (en) 2014-08-26 2017-02-21 Mycotechnology, Inc. Methods for the production and use of mycelial liquid tissue culture
AU2015308905B2 (en) 2014-08-26 2018-08-09 Mycotechnology, Inc. Methods for the production and use of mycelial liquid tissue culture
US10709157B2 (en) 2014-08-26 2020-07-14 Mycotechnology, Inc. Methods for the production and use of mycelial liquid tissue culture
CN105441506A (zh) * 2014-09-30 2016-03-30 天津生机集团股份有限公司 中间补料发酵生产灰树花多糖的方法
US10980257B2 (en) * 2015-02-26 2021-04-20 Myco Technology, Inc. Methods for lowering gluten content using fungal cultures
DK3423561T4 (da) 2016-03-01 2024-05-06 The Fynder Group Inc Filamentøse svampebiomåtter, fremgangsmåder til fremstilling og anvendelse deraf
US11166477B2 (en) 2016-04-14 2021-11-09 Mycotechnology, Inc. Myceliated vegetable protein and food compositions comprising same
JP6931359B2 (ja) * 2016-04-14 2021-09-01 マイコテクノロジー，インコーポレーテッド 菌糸体処理された高タンパク質食品組成物の生産のための方法及び使用
US10806101B2 (en) 2016-04-14 2020-10-20 Mycotechnology, Inc. Methods for the production and use of myceliated high protein food compositions
CN106578266A (zh) * 2016-12-12 2017-04-26 吉林农业大学 一种榆黄菇菌丝球咖啡饮品及其制作方法
CN107080029A (zh) * 2017-03-21 2017-08-22 河南洛阳红牡丹产业研发有限公司 一种猴头菇咖啡的制备方法
CN107372790B (zh) * 2017-08-23 2020-06-02 陕西微阅信息技术有限公司 一种暗褐网柄牛肝菌的保鲜方法
SG10201911092WA (en) 2017-08-30 2020-01-30 Sustainable Bioproducts Inc Edible composition with filamentous fungi and bioreactor system for the cultivation thereof
JP7354094B2 (ja) * 2017-12-22 2023-10-02 フイルメニツヒ ソシエテ アノニム シクロヘキサンカルボン酸を含む酸味増強剤
CO2018001097A1 (es) 2018-02-01 2019-08-09 Reishi Colombia S A S Alimento funcional y proceso para su obtencion
US11920126B2 (en) 2018-03-28 2024-03-05 Ecovative Design Llc Bio-manufacturing process
US20210251271A1 (en) * 2018-05-24 2021-08-19 Mycotechnology, Inc. Method for the production and use of myceliated mixed nutrient product for enhanced nutrient supplements
JP7202080B2 (ja) * 2018-05-30 2023-01-11 テルモ株式会社 細胞処理方法、デバイスおよびシステム
EP3866579A4 (en) * 2018-10-18 2022-02-09 Mycoworks, Inc. MYCELIUM GROW BED
EP3955946A4 (en) * 2019-04-16 2022-12-28 Mycotechnology, Inc. MUSHROOM EXTRACTS AND FLAVOR COMBINATIONS THEREOF
US20220232854A1 (en) * 2019-05-16 2022-07-28 Mycotechnology, Inc. Myceliated protein compositions having improved texture and methods for making
CN114901902A (zh) 2019-06-18 2022-08-12 芬德集团公司 真菌织物材料和皮革类似物
CN111606745A (zh) * 2020-06-04 2020-09-01 贵州省化工研究院 一种辣椒移栽用基肥及其制备方法
CN113208977A (zh) * 2020-09-07 2021-08-06 北京工商大学 活肤抗衰灵芝菌复合发酵物及其制备方法和应用
CN112410228B (zh) * 2020-11-18 2023-04-07 山西运奕道生物科技有限公司 桦褐孔菌生物转化菌丝体的培养及降血糖应用
CN112939227B (zh) * 2021-02-08 2022-05-10 杭州楠大环保科技有限公司 基于mbr工艺的污水处理方法
CN113558126A (zh) * 2021-08-03 2021-10-29 内蒙古中谷君创生物科技发展有限责任公司 一种用灵芝菌菌丝体生产富营养咖啡的方法
KR102456412B1 (ko) * 2021-11-23 2022-10-20 웰커피 주식회사 곡립 고체 버섯균사체 종균으로 배양된 발효 카카오의 제조방법
CN114891644A (zh) * 2022-04-28 2022-08-12 广西民族大学 咖啡碱降解菌及其应用
KR102634667B1 (ko) * 2022-11-11 2024-02-13 케이젠 주식회사 쑥과 새싹보리가 함유된 단백질 쉐이크용 분말 조성물

Family Cites Families (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL7322C (nl) 1919-08-18 1922-07-15 The Floyd W Robison Co Werkwijze voor de behandeling van koffieboonen.
US1822227A (en) * 1927-12-21 1931-09-08 Louise B P Lendrich Process of improving coffee-beans
JPS5037742B1 (pt) * 1971-09-30 1975-12-04
JPS5037742Y2 (pt) * 1972-02-04 1975-11-01
US3749584A (en) * 1972-03-28 1973-07-31 Us Agriculture Decaffeination of beverages
JPS5320025B2 (pt) * 1973-08-10 1978-06-24
GB2059243B (en) * 1979-09-24 1983-06-08 Anvar Process for the fermentation of cocoa beans
DE3239219A1 (de) * 1982-10-22 1984-04-26 Coffex AG, 8201 Schaffhausen Verfahren zur verminderung des chlorogensaeuregehalts von rohkaffee
JPS61219340A (ja) * 1985-03-27 1986-09-29 Lotte Co Ltd カカオニブの醗酵処理方法
JPH04126037A (ja) * 1990-09-14 1992-04-27 Lotte Co Ltd 酵素処理によるカカオニブおよびその加工品の香味改良方法
DE4341316A1 (de) * 1993-12-03 1995-06-08 Lehmann Maschf F B Verfahren zum Entkeimen und Trocknen von rohen Kakaobohnen oder Kakaokernbruch
US5934012A (en) * 1994-11-23 1999-08-10 Hps Biotechnologies, Inc. Process for production of mushroom inoculum
US6312753B1 (en) 1996-09-06 2001-11-06 Mars, Incorporated Cocoa components, edible products having enriched polyphenol content, methods of making same and medical uses
JPH11346657A (ja) * 1998-06-04 1999-12-21 Natl Food Res Inst カカオビンズの殺菌方法
US6277396B1 (en) * 2000-05-11 2001-08-21 Maximum Human Performance, Inc. Dietary supplement containing a thermogenic substance and an adrenal support substance
US8765138B2 (en) * 2004-01-06 2014-07-01 Paul Edward Stamets Antiviral and antibacterial activity from medicinal mushrooms
US6569475B2 (en) * 2000-10-06 2003-05-27 Jae-Mahn Song Process for mycelial culture using grain
DE10053051C2 (de) * 2000-10-13 2002-10-31 Coty Bv Kosmetische Zubereitung mit Pflanzenextrakten
CA2490452C (en) * 2002-06-25 2013-05-28 Asahi Denka Co., Ltd. .beta.-glucan-containing fat and oil composition and novel microorganism capable of producing .beta.-glucan
US9867385B2 (en) * 2003-09-25 2018-01-16 Suntory Beverage & Food Limited Method of processing green coffee beans
US7407795B2 (en) * 2004-07-15 2008-08-05 John Holliday Method for growing Cordyceps sinensis on a substrate and novel method for hybridizing different strains of Cordyceps sinensis
US7514085B2 (en) * 2004-07-16 2009-04-07 Medimush A/S Immune modulating compounds from fungi
EP1931763A1 (en) * 2005-09-12 2008-06-18 Vrije Universiteit Brussel Starter cultures and fermentation method
FR2937866B1 (fr) * 2008-10-30 2010-11-26 Natura Cosmeticos Sa Complexe antioxydant, compositions cosmetiques et pharmaceutiques contenant ledit complexe et utilisation dudit complexe
AP2011005764A0 (en) 2008-11-28 2011-06-30 Archer Daniels Midland Co Method of washing cocoa beans to improve the quality of the cocoa products obtained from such beans.
US20100239711A1 (en) * 2009-03-23 2010-09-23 Pei-Jung Li Method for manufacturing coffee by solid state fermentation
AU2010277607A1 (en) * 2009-07-29 2012-02-09 Barry Callebaut Ag Microbial composition for the fermentation of cocoa material
US20120231114A1 (en) * 2009-09-17 2012-09-13 Blazei Brazil Ltda. Flours produced from fungus myceliated grain
WO2011032244A1 (pt) * 2009-09-17 2011-03-24 Blazei Brazil Ltda Farinhas produzidas com grãos miceliados com fungos
CN101695257B (zh) * 2009-10-30 2011-03-30 上海芝草生物技术有限公司 冬虫夏草菌的固体发酵法
KR20120003596A (ko) * 2010-07-05 2012-01-11 찬 진 박 카카오와 버섯 균사체를 이용한 술병의 제조방법
CN102172272B (zh) * 2011-03-09 2013-02-20 王永显 利用大米固态发酵生产灰树花发酵米的方法
CN102172274A (zh) * 2011-03-09 2011-09-07 王永显 利用大米固态发酵生产灵芝发酵米的方法
CN102172275B (zh) * 2011-03-29 2012-12-12 胡海波 一种姬松茸大米的生产方法
KR101258893B1 (ko) * 2011-08-09 2013-04-29 주식회사 코시스 버섯 및 홍국균 종균을 이용한 커피생두 발효방법, 조성물, 및 발효커피
NL2008812C2 (en) * 2012-05-14 2013-11-18 Ssipfeed B V ANIMAL FEED MATERIAL AND USE OF THE FEED MATERIAL.
JP6695816B2 (ja) * 2017-02-23 2020-05-20 株式会社豊田自動織機 流路切替弁

Also Published As

Publication number Publication date
WO2014145256A1 (en) 2014-09-18
JP6518308B2 (ja) 2019-05-22
AU2014233209A1 (en) 2015-10-01
SG11201507655RA (en) 2015-10-29
WO2014145265A2 (en) 2014-09-18
BR112015023652A2 (pt) 2017-07-18
JP2016512699A (ja) 2016-05-09
AU2014233209B2 (en) 2016-08-04
EP2986159A4 (en) 2016-10-12
ES2733912T3 (es) 2019-12-03
KR102087839B1 (ko) 2020-03-12
BR112015023652B1 (pt) 2020-12-01
BR112015023468A2 (pt) 2017-07-18
JP2018050626A (ja) 2018-04-05
AU2014233200A1 (en) 2015-10-01
KR20180081171A (ko) 2018-07-13
KR20150140687A (ko) 2015-12-16
KR20150131293A (ko) 2015-11-24
AU2014233200B2 (en) 2016-08-04
JP6186070B2 (ja) 2017-08-23
CN105228462A (zh) 2016-01-06
EP2986134A4 (en) 2016-12-21
JP2016517280A (ja) 2016-06-16
EP2986159B1 (en) 2019-05-15
KR101786644B1 (ko) 2017-10-18
EP2986159A2 (en) 2016-02-24
EP2986134A1 (en) 2016-02-24
EP2986134B1 (en) 2019-08-07
EP3560343A1 (en) 2019-10-30
CN105682480B (zh) 2019-09-27
CN105682480A (zh) 2016-06-15
WO2014145265A3 (en) 2014-11-06
SG11201507484YA (en) 2015-10-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11992025B2 (en) Myceliated products and methods for making myceliated products from cacao and other agricultural substrates
JP6518308B2 (ja) 菌糸体処理産物及びカカオ及び他の農産物基質から菌糸体処理産物を製造するための方法
US20200268011A1 (en) Method of myceliating coffee
CN106604650B (zh) 菌丝液体组织培养物的生产方法和应用
US9427008B2 (en) Method of myceliation of agricultural substates for producing functional foods and nutraceuticals
US20160120201A9 (en) Myceliated Coffee Products and Methods for Making Myceliated Coffee Products

Legal Events

Date Code Title Description
B06F Objections, documents and/or translations needed after an examination request according [chapter 6.6 patent gazette]
B06U Preliminary requirement: requests with searches performed by other patent offices: procedure suspended [chapter 6.21 patent gazette]
B15K Others concerning applications: alteration of classification

Free format text: AS CLASSIFICACOES ANTERIORES ERAM: A23L 1/30 , A23L 1/36

Ipc: A23G 1/02 (2006.01)

B06A Patent application procedure suspended [chapter 6.1 patent gazette]
B09A Decision: intention to grant [chapter 9.1 patent gazette]
B16A Patent or certificate of addition of invention granted [chapter 16.1 patent gazette]

Free format text: PRAZO DE VALIDADE: 20 (VINTE) ANOS CONTADOS A PARTIR DE 15/03/2014, OBSERVADAS AS CONDICOES LEGAIS.