BR112014032142B1 - Composto e, composição farmacêutica - Google Patents

Abstract

COMPOSTO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, E, MÉTODOS DE TRATAMENTO DE UM DISTÚRBIO PROLIFERATIVO E DE LEUCEMIA MIELÓIDE AGUDA. A presente invenção refere-se a compostos da fórmula I: em que R1 e R2 são como aqui definidos, ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável dos mesmos. Os compostos da fórmula I são inibidores de aurora quinase e/ou de FLT3. A presente invenção também se refere a processos para a preparação destes compostos, a composições farmacêuticas que os compreendam, e a seu uso no tratamento de distúrbios proliferativos, tais que o câncer, assim como outras doenças ou condições, nas quais a atividade de aurora quinase e/ou de FLT3 está implicada.

Description

INTRODUÇÃO

[001] A presente invenção refere-se a compostos farmaceuticamente ativos. De um modo ainda mais específico, a presente invenção refere-se a compostos, que são inibidores da atividade da enzima Aurora quinase. Os compostos da invenção são também inibidores da atividade de tirosina quinase 3 similar a FMS (FLT3). A presente invenção também se refere a processos para a preparação destes compostos, a composições farmacêuticas que os compreendem, e a seu uso no tratamento de distúrbios proliferativos, tais que o câncer, assim como a outras doenças ou condições, nas quais a atividade de Aurora quinase e/ou de FLT3 está implicada.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

[002] As doenças proliferativas, tais que o câncer, são caracterizadas por uma proliferação celular desregulada e descontrolada. De um modo preciso, o que causa com que uma célula seja proliferada em um modo descontrolado e desregulado tem sido o foco de intensa pesquisa em relação a décadas recentes.

[003] As Aurora quinases, uma família de três serina-treonina quinases, designadas como A, B e C, desempenham funções distintas em diferentes estágios de mitose 1-3 . Nos estágios precoces da mitose, a Aurora- A forma um complexo com a proteína objetivada para Xklp2 (TPX2), que regula a maturação do centrossoma e do conjunto de feixe mitótico4-5. A aurora-B forma complexos com a proteína do centrômero (INCENP), survivina e borealina, deste modo regulando a condensação cromossômica, o alinhamento do cromossoma, o ponto de verificação mitótico e a citoquinese.6-9 A superexpressão de Aurora A e de Aurora B foi ainda relatada em uma ampla faixa de malignidades humanas, que incluem a mama, colorretal, ovariana, glioma, carcinoma da tireoide, e seminoma. 10-16 A função de Aurora C durante a mitose é bem menos bem entendida. No entanto, uma alta expressão de Aurora C tem sido relatada nos testículos.17-18

[004] Em anos recentes, a objetivação de molécula pequena de Aurora quinases tem se tornado uma estratégia comum para a descoberta de novas quimioterapias de câncer, e um número de inibidores estruturalemnte diversos da atividade de Aurora tem sido relatados,18-20, os quais incluem 1 (VX-680 (MK-0457)),21 2 (AZD1152)22, 3 (PHA-739358),23, 24 e 4 (AMG 900)25 (vide abaixo).

[005] No entanto, permanece ainda uma necessidade quanto à identificação de outros agentes terapêuticos, capazes de inibir a atividade de Aurora quinase.

[006] As Publicações de Patente Internacionais Nos. WO2007/072017 e WO2009/001021 expõem ambas uma série de derivados de imidazo[4,5-b]piridina, que funcionam como inibidores da atividade de Aurora quinase, e que são, deste modo, agentes terapêuticos potencialmente úteis para o tratamento de câncer. Um outro composto particular, exposto na WO2009/001021 é apresentado abaixo.

[007] Este composto particular (conhecido como CCT137690) é um inibidor potente e oralmente biodisponível de Aurora quinases, que inibe o crescimento de um xenoenxerto de carcinoma de cólon humano SW620 in vivo, com modulação de biomarcador concomitante, consistente com o engajamento objetivado.26 No entanto, o desenvolvimento pré-clínico deste composto tem sido limitado, devido à sua estreira margem de segurança contra hERG43 (IC50 = 3,0 oM)26 e à sua baixa estabilidade microssômica no fígado humano (86% metabolizado após um período de incubação de 30 minutos, dados não-publicados).

[008] Constitui, deste modo, um objeto da presente invenção, que sejam providos inibidores oralmente biodisponíveis da atividade da enzima Aurora quinase, que sejam adequados para uma avaliação pré-clínica e clínica.

[009] Constitui ainda, deste modo, um objeto da presente invenção, que sejam providos inibidores biodisponíveis da atividade da enzima Aurora quinase, que possuam estabilidade microssômica humana aceitável, uma inibição reduzida da atividade do citocroma P450 e, no caso de certos compostos, um índice terapêutico mais abrangente contra hERG.

[0010] FLT3 é uma quinase de transmembrana, que pertence à classe da família do receptor de tirosina quinase (RTK) de classe III. A ligação do ligante FLT3 (FL) ao receptor, conduz à dimerização, autofosforilação e à subsequente ativação das vias de sinalização a jusante37. Altos níveis de expressão de FLT3 foram encontrados em surtos de leucemia mielóide aguda (AML), e duas classes principais de mutações, isto é duplicações internas em série (ITDs) e mutações de ponto de domínio de tirosina quinase (TKD), foram identificadas em pacientes com AML 37,38. As duplicações internas em série são detectadas em de 20-25% dos pacientes com AML, e as mutações de ponto de domínio de tirosina quinase em 5-10% dos pacientes com AML37,38 . Um número de inibidores de molécula pequena de FLT3 foram avaliados em ensaios clínicos 38,39.

[0011] Existe, portanto, uma necessidade adicional quanto a compostos, que possuam uma função dupla de inibir tanto as Aurora quinases, como FLT3. Tais compostos seriam ainda úteis para o tratamento de doenças e/ou condições, nas quais Aurora e/ou FLT3 estejam implicados, tais que, por exemplo, a AML.

[0012] Constitui, deste modo, um objeto adicional da presente invenção, que sejam providos compostos, que possuam esta atividade dupla. SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0013] Em ainda um aspecto, a presente invenção provê um composto, ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, tal como aqui definido.

[0014] Em ainda um outro aspecto, a presente invenção provê ainda uma composição farmacêutica, que compreende um composto da invenção, tal como aqui definido, ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

[0015] Em ainda um outro aspecto, a presente invenção refere-se a um composto da invenção, tal como aqui definido, ou a um sal ou solvato do mesmo farmaceuticamente aceitável, ou a uma composição farmacêutica, tal como aqui definida, para o uso em terapia.

[0016] Em ainda um aspecto adicional, a presente invenção refere-se a um composto da invenção, tal como aqui definido, ou a um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou a uma composição farmacêutica, tal como aqui definida, para o uso no tratamento de doenças ou condições, nas quais a atividade de Aurora quinase e/ou de FLT3 está implicada.

[0017] Em ainda um outro aspecto, a presente invenção refere-se ao uso de um composto da invenção, tal como aqui definido, ou a um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, na manufatura de um medicamento para o uso no tratamento de doenças ou condições, nas quais a natividade de Aurora quinase e/ou de FLT3 está implicada.

[0018] Em ainda um outro aspecto, a presente invenção refere-se a um método para o tratamento de uma doença ou condição, na qual a atividade de Aurora quinase e/ou de FLT3 está implicada, o referido método compreendendo administrar, a um paciente que esteja em necessidade de um tal tratamento, uma quantidade terapeuticamente efetiva de um composto da invenção, tal como aqui definido, ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma composição farmacêutica, tal como aqui definido.

[0019] Em ainda um outro aspecto, a presente invenção provê um composto, ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma composição farmacêutica, tal como aqui definida, para o uso no tratamento de um distúrbio proliferativo, tal que o câncer. Em ainda uma outra modalidade particular, o câncer é um câncer humano.

[0020] Em ainda um outro aspecto, a presente invenção provê o uso de um composto, ou de um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, na manufatura de um medicamento para o uso no tratamento de um distúrbio proliferativo, tal que o câncer. Em ainda uma modalidade particular, o câncer é um câncer humano.

[0021] Em ainda um outro aspecto, a presente invenção provê um método de tratamento de um distúrbio proliferativo, tal que o câncer, referido método compreendendo administrar a um paciente, que esteja em necessidade de um tal tratamento, uma quantidade terapeuticamente efetiva de um composto, ou de um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou de uma composição farmacêutica, tal como aqui definida. Em ainda uma modalidade particular, o câncer é um câncer humano.

[0022] Em ainda um outro aspecto, a presente invenção provê ainda um composto, ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou ainda uma composição farmacêutica, tal como aqui definida, para o uso na produção de um efeito inibidor de uma Aurora quinase e/ou de FLT3.

[0023] Em ainda um outro aspecto, a presente invenção provê ainda o uso de um composto, ou de um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, na manufatura de um medicamento para o uso na produção de um efeito inibitório de Aurora quinase e/ou de FLT3.

[0024] Em ainda um outro aspecto, a presente invenção provê um método para a produção de um efeito inibitório de Aurora quinase e/ou de FLT3 in vivo, o referido método compreendendo a administração de uma quantidade efetiva de um composto, ou de um sal ou um solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0025] Em ainda um outro aspecto, a presente invenção provê um método de produção de um efeito inibidor de Aurora quinase e/ou de FLT3 in vivo, o referido método compreendendo a administração de uma quantidade efetiva de um composto, ou de um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0026] Em ainda um outro aspecto, a presente invenção provê um método de inibição da proliferação celular in vitro ou in vivo, o referido método compreendendo contatar uma célula com uma quantidade efetiva de um composto, tal como aqui definido, ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0027] A presente invenção provê ainda um método de sintetização de um composto, ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, tal como aqui definido.

[0028] Em ainda um outro aspecto, a presente invenção provê um composto, ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, obtenível através de, ou obtido por, ou diretamente obtido por meio de um método de síntese, tal como aqui definido.

[0029] Em ainda um outro aspecto, a presente invenção provê ainda novos intermediários, tal como aqui definido, que sejam adequados para o uso em qualquer um dos métodos sintéticos aqui expostos.

[0030] Características preferidas, adequadas e opcionais de qualquer aspecto particular da presente invenção são também preferidas, adequadas, e características opcionais de qualquer um outro aspecto.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO Definições

[0031] A não ser que mencionado de um outro modo, os termos que se segue, usados no relatório e nas reivindicações, possuem os significados que se segue, expostos abaixo.

[0032] Deve ser ainda apreciado que as referências a “VtcVct” qw c “VtcVcogpVq” kpenwgo c rtqhHczkc, cuuko eqoq q clívio dos sintomas estabelecidos de uma condição. “VtcVct” qw q “VtcVcogpVq” fg wo gutcfq, distúrbio ou condição, incluem deste modo: (1) a prevenção ou o retardo do aparecimento de sintomas clínicos de um estado, distúrbio ou condição, mas contudo não experimenta ou exibe os sintomas clínicos ou subclínicos do estado, distúrbio ou condição, (2) inibir o estado, distúrbio ou condição, isto é a detenção, redução ou retardo do desenvolvimento da doença ou um alívio da mesma (no caso de tratamento de manutenção) ou de pelo menos um sintoma clínico ou subclínico da mesma, ou (3) o alívio ou a atenuação da doença, isto é , causando a regressão do estado, distúrbio ou condição de pelo menos um de seus sintomas clínicos ou subclínicos.

[0033] Woc “swcpVkfcfg VgtcrgwVkecogpVg ghgVkxc” ukipkhkec c quantidade de um composto que, quando administrada a um mamífero para o tratamento de uma doença, é suficiente para efetuar um tal tratamento para a fqgp>Co C “swcnVkfcfg VgtcrgwVkecogpVg efeVkxc” ktá xctkct. fgrgpfgpfq fq composto, da doença e da severidade e da idade, peso, etc., do mamífero a ser tratado.

[0034] C htcue “eqorquVq fc knxen>«q” eqorteenfe csweneu compostos, que são aqui expostos, tanto de um modo genérico como específico. Compostos da Invenção

[0035] Tal como previamente mencionado, a Publicação de Patente Internacional No. WO2007/072017 expõe uma série de derivados imidazo[4,5-b]piridina, que funcionam como inibidores da atividade de Aurora quinase. Dois compostos particulares, expostos na WOO2007/072017, são 6-bromo-2-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-7-(4-(piridina-3-ilmetil)piperazin-1- il)-3H-imidazo[4,5-b]piridina (Exemplo 56) e 6-bromo-7-(4-(piridina-3- ilmetil)piperazin-1-il)-2-(1,3,5-trimetil-1H-pirazol-4-il)-3H-imidazo[4,5- b]piridina (Exemplo 57). As estruturas destes compostos são apresentadas abaixo.

Exemplo 56, WO2007/072017 Exemplo 57, WO2007/072017

[0036] Em ainda um primeiro aspecto, a presente invenção provê ainda um composto da fórmula I, apresentado abaixo:

em que: R1 é Br ou Cl; R2 é selecionado a partir da fórmula II ou da fórmula II, apresentada abaixo:

em que Ra é hidrogênio ou metila; ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0037] Na definição do grupo R2 acima, o símbolo «A/W denota o ponto de ligação do grupo R2 à porção -CH2- presente nos compostos da fórmula I.

[0038] Os compostos da presente invenção demonstram ainda uma inibição reduzida da atividade do citocromo P450 em relação aos compostos dos Exemplos 56 e 57 na WO2007/072017. Certos compostos da presente invenção possuem também um índice terapêutico mais amplo contra hERG, com relação aos compostos dos Exemplos 56 e 57 na WO2007/072017.

[0039] Os compostos particulares da invenção incluem ainda, por exemplo, os compostos da fórmula I, ou os sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, a não ser que indicado de um outro modo, e cada um R1 e R2 possui qualquer um dos significados aqui antes descritos, ou em qualquer dos parágrafos (1) a (5) a seguir: (1) R1 é Br; (2) R1 é Cl; (3) R2 pertence à formula II; (4) R2 pertence à fórmula III, tal como aqui definido; (5) R2 pertence à fórmula III, tal como aqui definido, e Ra é hidrogênio; (6) R2 pertence à fórmula III, tal como aqui definido, e Ra é metila;

[0040] De um modo adequado, R1 é cloro.

[0041] De um modo adequado, R2 pertence à fórmula II (isto é, para- clorofenila). Em ainda um grupo particular de compostos da invenção, deste modo, os compostos possuem a fórmula estrutural Ia, tal como mostrada abaixo:

em que R1 é tal como aqui antes definido, ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0042] Em ainda um outro grupo de compostos da invenção, R2 pertence à fórmula III, isto é, os compostos possuem a fórmula estrutural Ib, tal como mostrada abaixo:

em que R1 e Ra são ambos como aqui antes definidos, ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

[0043] Os compostos particulares da presente invenção incluem ainda qualquer um dos que se seguem: 6-Cloro-7-(4-(4-clorobenzil)piperazin-1-il)-2-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)- 3H-imidazo[4,5-b]piridina; 3-((4-(6-Cloro-2-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-7- il)piperazin-1-il)metil)-1,2,4-oxadiazol; 3-((4-(6-Cloro-2-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-7- il)piperazin-1-il)metil)-5-metil-1,2,4-oxadiazol; ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0044] Um sal farmaceuticamente aceitável de um composto da invenção é, por exemplo, um sal de adição de ácido de um composto da invenção, que seja suficientemente básico, por exemplo, um sal de adição de ácido com, por exemplo, um ácido orgânico ou inorgânico, por exemplo um ácido clorídrico, bromídrico, sulfúrico, fosfórico, trifluoroacético, fórmico, cítrico ou maleico.

[0045] A presente invenção abrange ainda os compostos da invenção, tal como aqui definidos, que compreendem uma ou mais substituições isotópicas. Por exemplo, H pode estar em qualquer forma isotópica, que inclua 1H, 2H(D), e 3H (T); C podem estar em qualquer forma isotópica, incluindo 12C, 13C, e 14C; e os similares.

[0046] É também entendido que certos compostos da invenção podem existir em formas solvatadas, assim como em formas não-solvatadas, tais que, por exemplo, as formas hidratadas. Deve ser ainda entendido que a invenção abrange todas tais formas solvatadas, que possuem uma atividade inibidora de Aurora quinase e/ou de FLT3.

[0047] Deve ser ainda entendido, que certos compostos da invenção podem ainda exibir polimorfismo, e que a invenção abrange todas tais formas, que apresentam uma atividade inibidora de Aurora quinase e/ou de FLT3.

[0048] Os compostos da invenção podem ainda existir em um número de diferentes formas tautoméricas e as referências a compostos da invenção incluem todas tais formas. Para que seja ainda evitada qualquer dúvida, quando um composto pode existir em uma ou em várias formas tautoméricas, e apenas uma é aqui especificamente descrita ou mostrada, todas as outras são, contudo, abrangidas pelos compostos da invenção. Exemplos de formas tautoméricas dos compostos da presente invenção incluem ainda os compostos na forma mostrada na fórmula I acima, assim como os tautômeros das fórmulas (IV) e (V) apresentadas abaixo.

em que R1 e R2 são como aqui antes definidos.

[0049] Os compostos da invenção, que contêm uma função amina, podem ainda formar N-óxidos. Uma referência aqui a um composto da fórmula I, que contém uma função amina, pode ainda incluir o N-óxido. Quando um composto contém várias funções amina, um ou mais do que um átomo de nitrogênio podem ser então oxidados para que seja formado um N- óxido. Exemplos particulares de N-óxidos são os N-óxidos de um átomo de nitrogênio ou de um heterociclo contendo nitrogênio. Os N-óxidos podem ser então formados através do tratamento da amina correspondente com um agente de oxidação, tal que um peróxido de hidrogênio ou um perácido (por exemplo, um ácido peroxicarboxílico), vide por exemplo Advanced Organic Chemistry, by Jerry March, 4th Edition, Wiley Interscience, páginas. De um modo ainda mais particular, os N-óxidos podem ser produzidos através do procedimento de L. W. Deady (Syn. Comm. 1977, 7, 509-514), no qual o composto amina é reagido com o ácido m-cloroperoxibenzóico (MCPBA), por exemplo, em um solvente inerte, tal que diclorometano.

[0050] Os compostos da presente invenção podem ser ainda administrados sob a forma de uma prodroga, que é rompida no corpo humano ou animal, de um modo a que seja então liberado um composto da invenção. Uma prodroga pode ser então usada de um modo a alterar as propriedades físicas e/ou farmacêuticas d e um composto da invenção. Uma prodroga pode ser ainda formada quando o composto da invenção contém um grupo adequado ou um substituinte, ao qual um grupo de modificação de propriedade pode ser então ligado. Os exemplos de prodrogas incluem os derivados de amida cliváveis in vivo, que podem ser formados em um grupo amino, em um composto da invenção.

[0051] Deste modo, a presente intenção inclui ainda aqueles compostos da fórmula I, tal como aqui antes definidos, quando tornados disponíveis através da síntese orgânica, e quando tornados disponíveis dentro do corpo humano ou animal por meio de clivagem de uma prodroga do mesmo. Deste modo, a presente invenção inclui ainda aqueles compostos da fórmula I, que são produzidos através de um meio sintético orgânico, e também tais compostos, que são produzidos no corpo humano ou animal por meio do metabolismo de um composto precursor, que seja um composto da fórmula I, podendo ser um composto sinteticamente produzido ou um composto metabolicamente produzido.

[0052] Uma prodroga farmaceuticamente adequada de um composto da Fórmula I é uma, que seja baseada em um julgamento médico razoável, como sendo adequada para a administração ao corpo humano ou animal, sem atividades farmacológicas indesejáveis e em uma toxicidade indevida.

[0053] Várias formas de prodroga foram descritas, por exemplo nos documentos que se seguem: a) Methods in Enzymology, Vol. 42, p. 309-396, editado por K. Widder, et al. (Academic Press, 1985); b) Design of Pro-drugs, editado por H. Bundgaard, (Elsevier, 1985); c) A Textbook of Drug Design and Development, edited by Krogsgaard- Larsen cpf J. Dwnficctf. EjcrVgt 7 “Dgukin cpf CrrnkecVkqn qh Rtq- ftwiu”. rqt J. Dwnficctf r. 335-191 (1991); d) H. Bundgaard, Advanced Drug Delivery Reviews, 8, 1-38 (1992); e) H. Bundgaard, et al., Journal of Pharmaceutical Sciences, 77, 285 (1988); f) N. Kakeya, et al., Chem. Pharm. Bull., 32, 692 (1984); g) V. Jkiwejk cnf X. UVgnnc. “Rtq-Dtwiu cu Pqxgn Dgnkxgty UyuVgou”, A.C.S. Symposium Series, Volume 14; e h) G. Tqejg *gfkVqt+. “Dkqtgxgtukdng Ecttkgtu kn Dtwi Dgukin”, Rgticoqn Press, 1987.

[0054] Os efeitos in vivo de um composto da fórmula I podem ser ainda exercidos, de um modo parcial, por um ou mais metabólitos, que são formados no interior do corpo humano ou animal, após a administração I de um composto da fórmula I. Tal como aqui antes mencionado, os efeitos in vivo de um composto da fórmula I podem ser também exercidos através do metbolismo de um composto precursor (uma prodroga).

[0055] Deve ser ainda apreciado que os compostos da fórmula I podem ser também covalentemente ligados (em qualquer posição adequada) a outros grupos, tais que, por exemplo, porções solubilizantes (por exemplo, polímeros de PEG), porções que permitem com que eles sejam ligados a um suporte sólido (tal que, por exemplo, as porções contendo biotina), e os ligantes de objetivação (tais que os anticorpos ou fragmentos de anticorpo). Síntese

[0056] Na descrição dos métodos sintéticos abaixo descritos e nos métodos sintéticos referenciados, que são usados para preparar os materiais de partida, deve ser ainda entendido que todas as condições de reação propostas, que incluem a escolha do solvente, a atmosfera de reação, a temperatura de reação, a duração do experimento e dos procedimentos de elaboração, podem ser selecionados por uma pessoa versada na arte.

[0057] Deve ser ainda entendido que aqueles versados na arte da síntese orgânica, que a funcionalidade presente em várias porções da molécula precisa ser compatível com os reagentes e com as condições de reação utilizadas.

[0058] Os materiais de partida necessários podem ser ainda obtidos através de procedimentos convencionais de química orgânica. A preparação de tais materiais de partida é ainda descrita em conjunção com as variantes de processo representativas que se seguem e dentro dos Exemplos anexos. De um modo alternativo, os materiais de partida necessários são ainda obteníveis por meio de procedimentos análogos àqueles ilustrados, que estão dentro da habilidade ordinária de um químico orgânico.

[0059] Deverá ser ainda apreciado que, durante a síntese dos compostos da invenção nos processos abaixo definidos, ou durante a síntese de certos materiais de partida, pode ser ainda desejável proteger certos grupos substituintes, de um modo a que seja evitada a sua reação indesejada. O químico versado na arte irá apreciar quando uma tal proteção é requerida, e como tais grupos de proteção podem ser colocados no lugar, e posteriormente removidos.

[0060] Quanto a exemplos de grupos de proteção, vide um dos muitos textos gerais acerca fq"vgoc."rqt"gzgornq."ÒRtqvgevkxg"Itqwru"kp"Qticpke" U{pvjgukuÓ"d{"Vjgqfqtc"Itggp"*Gfkvqtc<Lqjp"Ykng{"("Uons). Os grupos de proteção podem ser ainda removidos através de qualquer método conveniente, descrito na literatura ou conhecido para o químico versado na arte como apropriado para a remoção do grupo de proteção em questão, tais métodos sendo selecionados, de um modo a que seja efetuada a remoção do grupo de proteção com um distúrbio mínimo dos grupos em um outro local da molécula.

[0061] Deste modo, se os reagentes incluírem, por exemplo, grupos tais que amino, carbóxi ou hidróxi, pode ser ainda desejável proteger o grupo em algumas das reações aqui mencionadas.

[0062] A título de exemplo, um grupo de proteção para um grupo amino ou alquilamino é, por exemplo, um grupo acila, por exemplo um grupo alcanoíla, tal que acetila, um grupo alcoxicarbonila, por exemplo um grupo metoxicarbonila, etoxicarbonila ou t-butoxicarbonila, um grupo arilmetoxicarbonila, por exemplo, benziloxicarbonila, ou um grupo aroíla, por exemplo benzoíla. As condições de desproteção para os grupos de proteção variam necessariamente com a escolha do grupo de proteção. Deste modo, por exemplo, um grupo acila, tal que um grupo alcanoíla ou um grupo alcoxicarbonila ou um grupo aroíla podem ser removidos através de, por exemplo, hidrólise com uma base adequada, tal que um hidróxido de metal alcalino, por exemplo hidróxido de lítio ou de sódio. De um modo alternativo, um grupo acila, tal que um grupo terc-butoxicarbonila pode ser ainda removido, por exemplo, através de tratamento com um ácido adequado, tal que o ácido clorídrico, sulfúrico ou fosfórico ou com o ácido trifluoroacético e um grupo arilmetoxicarbonila, tal que um grupo benziloxicarbonila pode ser removido, por exemplo, através de hidrogenação por meio de um catalisador, tal que paládio-sobre-carbono, ou através de tratamento com um ácido de Lewis, por exemplo BF3.OEt2. Um grupo de proteção alternativo para um grupo amino primário é, por exemplo, um grupo ftaloíla, que pode ser removido através de tratamento com uma alquilamina, por exemplo, dimetilaminopropilamina, ou com hidrazina.

[0063] Os compostos da presente invenção podem ser preparados através do uso de técnicas sintéticas gerais descritas na WO2007/072017 e na WO2009/001021, cujos conteúdos totais são incorporados a este, a título referencial.

[0064] Em ainda um aspecto particular, a presente invenção provê um método de sintetização de um composto da fórmula I ou de um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, o método compreendendo: a) reagir um composto da fórmula A:

em que R1 e R2 possuem, cada qual, um dos significados aqui antes expostos; com 1,3-dimetil-1H-pirazol-4-carbaldeído, na presença de um agente de redução adequado; e b) opcionalmente, depois disso, e se necessário: i) remover quaisquer grupos de proteção presentes; ii) converter o composto da fórmula I em um outro composto da fórmula I; e/ ou iii) formar um sal ou um solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0065] De um modo adequado, a reação entre o composto da fórmula A e 1,3-dimetil-1H-pirazol-4-carbaldeído ocorre na presença de um solvente adequado. Qualquer solvente ou mistura de solventes pode ser usado para esta reação. Exemplos de solventes adequados incluem DMSO, água, DMF , e álcoois, por exemplo EtOH.

[0066] De um modo adequado, a reação prossegue na presença de um agente de redução adequado, tal que Na2S2O426 aquoso.

[0067] Uma pessoa versada na arte será também capaz de selecionar as condições de reação apropriadas para o uso, de um modo a que esta reação seja facilitada.

[0068] A reação pode ainda ser executada em uma temperatura elevada, por exemplo uma temperatura dentro da faixa de 50 a 90°C pode ser usada (dependendo da natureza do solvente).

[0069] O composto resultante da fórmula I pode ser também isolado e purificado por meio do uso de técnicas bem conhecidas na arte.

[0070] O processo aqui definido pode ainda compreender o estágio de que o composto da fórmula I seja submetido a uma troca de sal, de um modo particular em situações, em que o composto da fórmula I sobre um suporte sólido ou resina adequados e eluição dos compostos com um ácido apropriado, de um modo a que seja fornecido um único sal do composto da fórmula I.

[0071] Os compostos da fórmula A podem ser preparados através de processos conhecidos na arte.

[0072] Um exemplo de um procedimento adequado para a preparação do composto da Fórmula I através de um intermediário da fórmula A é conhecido no Esquema 1 abaixo.

Reagentes e condições: os estágios (a) e (b) acima referem-se apenas ao derivado 1,2,4-oxadiazol porque (1-(4- clorobenzil) piperazina e 1- ((5-metil-1,2,4- oxadiazol-3-il)metil) piperazina estão comercialmente disponíveis : (a) para o derivado 1,2,4- oxadiazol: CH2Cl2, 3-(clorometil)-1,2,4- oxadiazol, EtβN, 50°C; (b) para o derivado 1,2,4- oxadiazol: TFA, CH2CI2, temperatura ambiente; (c) para os derivados 4-clorobenzila e 1,2,4-oxadiazol: 2-amino-4,5- dicloro-3-nitropiridina, Pr2NEt, PrOH, aquecimento; (d) para os derivados 4-clorobenzila e 1,2,4-oxadiazol: 1,3- dimetil- 1H- pirazol-4-carbaldeído, EtOH, N2S2O4 aquoso 1 M, 80°C. Esquema 1

[0073] 2-Amino-4,5-dicloro-3-nitropiridina (4,5-dicloro-3- nitropiridin-2-amina) e 2-amino-5-bromo-4-cloro-3-nitropiridina (5-bromo-4- cloro-3-nitropiridin-2-amina), precursores para a síntese de derivados 2- amino-3-nitropiridina A, foram preparados como previamente descrito 26 ou através da halogenação de 2-amino-4-cloro-3-nitropiridina (4-cloro-3- nitropiridin-2-amina) 40. Composições Farmacêuticas

[0074] De acordo com ainda um outro aspecto da invenção, é provida uma composição farmacêutica, que compreende um composto da invenção tal como aqui antes definido, ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, em associação com um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.

[0075] As composições da invenção podem ainda estar em uma forma adequada para o uso oral (por exemplo, como comprimidos, pastilhas, cápsulas moles ou duras, suspensões aquosas ou oleosas, emulsões, pós dispersáveis ou grânulos, xaropes, ou elixires), para o uso tópico (por exemplo, como cremes, unguentos, géis ou soluções aquosas ou oleosas), para a administração através de inalação (por exemplo, como um pó finamente dividido ou como um aerossol líquido), para a administração através de insuflação (por exemplo, como um pó finamente dividido) ou para a administração parenteral (por exemplo, como uma solução aquosa ou oleosa estéril para a dosagem intravenosa, subcutânea, intramuscular, intraperitoneal ou intramuscular ou como um supositório para a dosagem retal).

[0076] As composições da invenção podem ser ainda obtidas através de procedimentos convencionais, por meio do uso de excipientes farmacêuticos convencionais, bem conhecidos na arte. Deste modo, as composições destinadas ao uso oral podem ainda conter, por exemplo, um ou mais agentes de coloração, adoçantes, aromatizantes e/ou agentes conservantes.

[0077] Uma quantidade efetiva de um composto da presente invenção para o uso em terapia de doença proliferativa consiste em uma quantidade suficiente para sintomaticamente aliviar, em um animal de sangue quente, de um modo particular em um ser humano, os sintomas de infeção. Para retardar o progresso da infeção, ou ainda para reduzir, nos pacientes com sintomas de infeção, o risco de que piorem.

[0078] A quantidade de ingrediente ativo, que é combinada com um ou mais excipientes, de um modo a que seja produzida uma forma de dosagem unitária, irá necessariamente variar, dependendo do hospedeiro tratado e da via de administração particular. Por exemplo, uma formulação destinada à administração oral em seres humanos deverá conter, de um modo geral, por exemplo, de 0,5 mg a 0,5 g de agente ativo (de um modo mais adequado de 0,5 a 100 mg, por exemplo de 1 a 30 mg), composto com uma quantidade apropriada e conveniente de excipientes, que podem ainda variar de cerca de 5 a cera de 98 por cento, em peso, da composição total.

[0079] O tamanho e a dose para propósitos terapêuticos ou profiláticos de um composto da fórmula I irão naturalmente variar de acordo com a natureza e a severidade das condições, com a idade e o sexo do animal ou paciente e com a via de administração, de acordo com princípios da medicina bem conhecidos.

[0080] Quando do uso de um composto da invenção para propósitos terapêuticos ou profiláticos, ele deverá ser administrado, de um modo geral, de uma forma tal que uma dose diária possa estar, por exemplo, em uma faixa de 0,1 mg/ kg a 30 mg/ kg do peso corpóreo, dada, se requerido, em doses divididas. De um modo geral, doses mais baixas deverão ser administradas quando uma via parenteral for empregada. Deste modo, por exemplo, para uma administração intravenosa ou intraperitoneal, uma dose em uma faixa, por exemplo, de 0,1 mg/ kg a 30 mg/ kg de peso corpóreo deverá, de um modo geral ser usada. De um modo similar, para a administração através de inalação, uma dose em uma faixa, por exemplo, de 0,05 mg a 25 mg/ kg de peso corpóreo deverá ser usada. A administração oral pode ser também adequada, de um modo particular, em forma de um comprimido. De um modo típico, as formas de dosagem unitária deverão conter de cerca de 0,5 mg a 0,5 g de um composto desta invenção. Usos Terapêuticos e Aplicações

[0081] Os compostos da invenção são inibidores da atividade de Aurora quinase e de FLT3.

[0082] Deste modo, em ainda um outro aspecto, a invenção provê um método de inibição da atividade de Aurora quinase e/ou de FLT3 em uma célula, o método compreendendo administrar à referida célula, um composto da fórmula I, tal como aqui definido, ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0083] Em ainda um outro aspecto, a presente invenção provê um método de inibição da atividade de Aurora quinase e/ou de FLT3 in vitro ou in vivo, o referido método compreendendo contatar uma célula com uma quantidade efetiva de um composto, ou de um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, tal como aqui definido.

[0084] Em anda um outro aspecto, a presente invenção provê um método para inibir a atividade de Aurora quinase e/ou de FLT3, em um paciente humano ou animal, que esteja em necessidade de uma tal inibição, o método compreendendo administrar ao referido paciente uma quantidade efetiva de um composto da fórmula I, tal como aqui definido, ou de um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0085] A Aurora quinase pode ser Aurora quinase A, B ou C.

[0086] Em ainda um aspecto, a presente invenção provê um composto da Fórmula I, ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou ainda uma composição farmacêutica, tal como aqui definida, para o uso em terapia.

[0087] Em ainda um outro aspecto, a presente invenção provê um composto da Fórmula I, tal como aqui definido, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo, para o uso no tratamento de uma doença ou condição, associada com a atividade de Aurora quinase (e/ou com a atividade de FLT3).

[0088] Em ainda um outro aspecto, a presente invenção provê ainda o uso de um composto da fórmula I, tal como aqui definido, ou de um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, na manufatura de um medicamento para o uso no tratamento de uma doença ou condição, associada com a atividade de Aurora quinase (e/ou com a atividade de FLT3).

[0089] Em ainda um outro aspecto, a presente invenção provê um método de tratamento de um distúrbio proliferativo em um paciente humano ou animal, o método compreendendo administrar ao referido paciente uma quantidade terapeuticamente efetiva de um composto da fórmula I, tal como aqui definido, ou de um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0090] Em ainda um outro aspecto, a presente invenção provê um composto da Fórmula I, tal como aqui definido, ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, para o uso no tratamento de um distúrbio proliferativo.

[0091] Em ainda um outro aspecto, a invenção provê o uso de um composto da fórmula I, tal como aqui definido, ou de um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, na manufatura de um medicamento para o uso no tratamento de um distúrbio proliferativo.

[0092] Em ainda um outro aspecto, a presente invenção provê ainda um composto, ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma composição farmacêutica, tal como aqui definida, para o uso no tratamento de câncer.

[0093] Em ainda um outro aspecto, a presente invenção provê ainda o uso de um composto, ou de um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, tal como aqui definido, na manufatura de um medicamento para o uso no tratamento de câncer.

[0094] Em ainda um outro aspecto, a presente invenção provê um método de tratamento de câncer em um paciente, que esteja em necessidade de um tal tratamento, o referido método compreendendo administrar ao referido paciente, uma quantidade terapeuticamente efetiva de um composto, ou um sal ou um solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma composição farmacêutica, tal como aqui definida.

[0095] Os compostos da invenÁ„o podem ser ainda ˙teis, por exemplo, para o tratamento de c‚ncer colorretal, de mama, pulmonar, de prÛstata, pancre·tico ou de bexiga e renal, ou leucemias ou linfomas.

[0096] De um modo particular, os compostos da presente invenÁ„o s„o ˙teis para o tratamento de leucemias. Uma alta express„o de Aurora quinases foi demonstrada em leucemia (linhagens celulares e coortes de pacientes).30-33 De um modo adicional, a duplicaÁ„o em sÈrie interna do gene FLT3 (FLT3-ITD) resulta em uma ativaÁ„o da quinase FLT3 constitutiva.34 De um modo significativo, FLT3-ITD ocorre em de 20-35% de adultos e em 15% de crianÁas com AML, conferindo um fraco prognÛstico em ambos os grupos de idade.35

[0097] Deste modo, em ainda uma modalidade particular, os compostos são úteis para o tratamento de leucemias, tais que a leucemia mielóide aguda (AML), síndrome mielodisplástica (MDS), leucemia linfocítica crônica (CLL) e mieloma múltiplo. Os compostos da presente invenção são também tidos como úteis para o tratamento de neuroblastoma.

[0098] É esperado que os compostos da presente invenção sejam de um benefício particular em pacientes que não foram bem sucedidos no tratamento com as terapias convencionais. É previsto que os compostos da presente invenção possam também ser de valor para o tratamento de pacientes mais idosos (por exemplo, acima de 60 anos de idade) com leucemia, por exemplo AML, devido ao fato de que é esperado que tais pacientes obtenham um benefício quanto à inibição de Aurora quinase.

[0099] É ainda esperado que os compostos da presente invenção sejam de valor no tratamento de crianças com leucemia (por exemplo, AML mutada com FLT3 recém diagnosticada e AML infantil), assim como neuroblastomas. Vias de Administração

[00100] Os compostos da invenção ou uma composição farmacêutica, que compreende o composto ativo, podem ser administrados a um paciente, através de qualquer via conveniente de administração, seja de um modo sistêmico, periférico ou tópico (isto é, no sítio de ação desejado).

[00101] As vias de administração incluem, mas não estão limitadas a, oral (por exemplo, por ingestão); bucal; sublingual; transdérmica (incluindo, por exemplo, um curativo, adesivo, etc.); por uma via através da mucosa (incluindo, por exemplo, um curativo, adesivo, etc.); intranasal (por exemplo, ulverização nasal); ocular (por exemplo, através de colírios); pulmonar (por exemplo, através de terapia de inalação ou de insuflação usando, por exemplo, através de um aerossol, por exemplo, por meio da boca ou do nariz); retal (por exemplo, através de supositório ou enema); vaginal (por exemplo, através de pessário); parenteral, por exemplo, através de injeção, incluindo por via subcutânea, intradérmica, intramuscular, intraarterial, intracardíaca, intratecal, intraespinal, intracapsular, subcapsular, intraorbital, intraperitoneal, intratraqueal, subcuticular, intraarticular, subaracnóide, e intraesternal; através de implante de um depósito ou reservatório, por exemplo, por via subcutânea ou intramuscular. Terapias Combinadas

[00102] Os compostos da invenção podem ser ainda administrados de um modo isolado como uma monoterapia, ou podem ser administrados em combinação com um ou mais agentes terapêuticos adicionais. A seleção de um ou mais agentes terapêuticos adicionais irá naturalmente variar, dependendo da doença ou da condição a ser tratada e de sua severidade.

[00103] É um lugar comum o uso de terapias combinadas para o tratamento de distúrbios proliferativos, tais que o câncer. Deste modo, o tratamento antiproliferativo aqui antes definido pode ser ainda aplicado como uma terapia única ou pode também envolver, em adição ao composto da invenção, cirurgia convencional ou radioterapia ou quimioterapia. Uma tal quimioterapia pode ainda incluir uma ou mais das categorias que se seguem de agentes antitumor: (i) outras drogas antiproliferativas/ antineoplásticas e as combinações das mesmas, tais como usadas em oncologia média, tais que os agentes de alquilação (por exemplo, cisplatina, oxaliplatina, carboplatina, ciclofosfamida, nitrogênio mostarda, melfalano, clorambucila, bussulfano, temozolamida e nitrosouréias); antimetabólitos (por exemplo, gemcitabina e antifolatos, tais que fluoropirimidinas, tais como 5-fluorouracila e tegafur, raltitrexed, metotrexato, citosina arabinosídeo, e hidroxiuréia; antibióticos antitumor (por exemplo, antraciclinas, tais que adriamicina, bleomicina, doxorubicina, daunomicina, epirubicina, idarubicina, mitomicina-C, dactinomicina e mitramicina); agentes antimitóticos (por exemplo vinca alcalóides, tais que vincristina, vinblastina, vindesina e vinorelbina e os taxóides, tais que taxol e taxotere e inibidores de poloquinase); e inibidores de toposiomerase (por exemplo epipodofillotoxinas, tais que etoposídeo e teniposídeo amsacrina, topotecano e camptotecina); (ii) agentes citostáticos, tais que antioestrógenos (por exemplo tamoxifeno, fulvestrante, toremifeno, raloxifeno, droloxifeno e iodoxifeno), antiandrógenos (por exemplo bicalutamida, flutamida, nilutamida e acetato de ciproterona), antagonistas de LHRH ou agonistas de LHRH (por exemplo goserelinas, leuprorelina e buserelina), progestógenos (por exemplo acetato de megestrol), inibidores de aromatase (por exemplo, tais como anastrozol, letrozol, vorazol e exemestano) e inibidores de 5c- redutase, tais que finasterida; (iii) agentes antiinvasão [por exemplo os inibidores da família c-Src quinase, tais que 4-(6-cloro-2,3-metilenodioxianilino)-7-[2-(4- metilpiperazin-1-ila)etóxi]-5-tetraidropirano-4-iloxiquinazolina (AZD0530; Pedido de Patente Internacional WO 01/94341), N-(2-cloro-6-metilfenil)-2- {6-[4-(2-hidroxietil)piperazin-1-ila]-2-metilpirimidin-4-ilamino}tiazol-5- carboxamida (dasatinib, BMS-354825; J. Med. Chem., 2004, 47, 6658-6661) e bosutinib (SKI-606), e os inibidores de metaloproteinase, tais que marimastat, inibidores da função do receptor do ativador de plasminogênio ou anticorpos para Heparanase]; (iv) inibidores da função do fator de crescimento: por exemplo, tais inibidores incluem os anticorpos do fator de crescimento e os anticorpos do receptor do fator de crescimento (por exemplo o anticorpo anti-gtdD4 VtcuVwzwocd ]JgtegrVkp™_. q cpVkeqtrq cnVk-EGFR panitumumab [Vectibix®], o anticorpo anti-erbB1 cetuximab [Erbitux®, C225] e qualquer fator de crescimento ou anticorpos do receptor do fator de crescimento expostos por Stern et al. Critical reviews in oncology/haematology, 2005, Vol. 54, pp11-29); tais inibidores também incluem os inibidores de tirosina quinase, por exemplo os inibidores da família do fator de crescimento epidérmico (por exemplo, os inibidores de tirosina quinase da família EGFR, tais que N-(3-cloro-4-fluorofenil)-7-metóxi-6-(3-morfolinopropóxi) quinazolin-4-amina (gefitinib, ZD1839), N-(3-etinilfenil)-6,7-bis(2- metóxietóxi)quinazolin-4-amina (erlotinib, OSI-774) e 6-acrilamido-N-(3- cloro-4-fluorofenil)-7-(3-morfolinopropóxi)-quinazolin-4-amina (CI 1033), inibidores de tirosina quinase erbB2, tais que lapatinib); inibidores da família do fator de crescimento de hepatócito; inibidores da família do fator de crescimento de insulina; inibidores da família do fator de crescimento derivado de plaqueta, tais que imatinib e/ou nilotinib (AMN107); inibidores de serina/treonina quinases (por exemplo, inibidores de sinalização Ras/Raf, tais que os inibidores de farnesil transferase , por exemplo sorafenib (BAY 43-9006), tipifarnib (R115777) e lonafarnib (SCH66336)), inibidores da sinalização celular através de MEK e/ou AKT quinases, inibidores de c-kit, inibidores de abl quinase, inibidores de PI3 quinase, inibidores de Plt3 quinase, inibidores de CSF-1R quinase, inibidores do receptor de IGF quinase(fator de crescimento tipo insulina); inibidores de Aurora quinase (por exemplo AZD1152, PH739358, VX-680, MLN8054, R763, MP235, MP529, VX-528 e AX39459) e inibidores de quinase dependente de ciclina, tais que os inibidores de CDK2 e/ou CDK4; (v) agentes antiangiogênicos, tais que aqueles, que inibem os efeitos do fator de crescimento endotelial calcular, por exemplo o anticorpo do fator de crguekogpVq egnwnct gpfqVgnkcl dgxcekzwocd *CxcuVkp™+ e, por exemplo, um inibidor do receptor de tirosina quinase VEGF, tal que vandetanib (ZD6474), vatalanib (PTK787), sunitinib (SU11248), axitinib (AG-013736), pazopanib (GW 786034) e 4-(4-fluoro-2-metilindol-5-ilóxi)-6- metóxi-7-(3-pirrolidin-1-ilpropóxi)quinazolina (AZD2171; Exemplo 240 dentro da WO 00/47212), compostos , tais que aqueles expostos nos Pedidos de Patente Internacionais WO97/22596, WO 97/30035, WO 97/32856 e WO 98/13354 e os compostos, que trabalham através de outros mecanismos (por exemplo linomida, inibidores da função de integrina vd3 e angiostatina)]; (vi) agentes de dano vascular, tais que Combretastatina A4 e os compostos expostos nos Pedidos de Patente Internacionais WO99/02166, WO00/40529, WO00/41669, WO01/92224, WO02/04434 e WO02/08213; (vii) um antagonista do receptor de endotelina, por exemplo zibotentano (ZD4054) ou atrasentano; (viii) terapias antissentido, por exemplo aquelas que são dirigidas aos alvos acima relacionados, tais que ISIS 2503, um antissentido anti-ras ; (ix) abordagens de terapia genética, por exemplo, usando os compostos da invenção em combinação com abordagens de adenovírus oncolíticas, de um modo a substituir os genes aberrantes, tais que o aberrante p53 ou o aberrante BRCA1 ou BRCA2, GDEPT (terapia de prodroga de enzima dirigida ao gene) abordagens, tais que aquelas que utilizam citosina deaminase, timidina quinase ou uma enzima de nitrorredutase bacteriana e as abordagens para aumentar a tolerância do paciente à quimioterapia ou à radioterapia, tais que a terapia genética de resistência a várias drogas; (x) abordagens de imunoterapia, que incluem, por exemplo, as abordagens ex-vivo e in-vivo para aumentar a imunogenicidade das células de tumor do paciente, tais que a transfecção com citoquinas, tais que interleucina 2, interleucina 4, ou um fator de estimulação da colônia de granulócito-macrófago, abordagens para diminuir a energia da célula T, abordagens, que utilizam células imunes transfectadas, tais que as células dendríticas transfectadas com citoquina, abordagens que utilizam as linhagens celulares de tumor transfectadas com citoquina e as abordagens, que incluem os anticorpos anti-idiotípicos.

[00104] Um tal tratamento conjunto/ combinado pode ser ainda alcançado por meio da dosagem simultânea, sequencial ou separada dos componentes individuais do tratamento. Tais produtos combinados empregam os compostos desta invenção dentro de uma faixa de dosagem tal como aqui antes descrita, e outros agentes farmaceuticamente ativos dentro de sua faixa de dosagem aprovada.

[00105] De acordo com um aspecto particular da invenção, é ainda provida uma combinação adequada para o uso no tratamento de uma doença ou condição, na qual a atividade de proteína quinase está implicada, tal como aqui definido (por exemplo, o câncer), compreendendo um composto da invenção, tal como aqui antes definido, ou um sal ou solvato farmaceuticamnete aceitável do mesmo, e ainda um outro agente terapêutico (por exemplo, um agente anti-tumor).

[00106] De acordo com este aspecto da invenção, é ainda provida uma combinação, adequada para o uso no tratamento de um câncer (por exemplo, um câncer envolvendo um tumor sólido), que compreende um composto da invenção tal como aqui antes definido, ou um sal ou solvato do mesmo farmaceuticamente aceitável, e qualquer um dos agentes anti-tumor, relacionados sob (i) - (ix ) acima.

[00107] Em ainda um outro aspecto da invenção, é ainda provido um composto da invenção ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com um agente anti-tumor, selecionado a partir daqueles relacionados sob (i) - (ix) acima.

[00108] PguVg ecuq. q Vgtoq “eqodkpc>«q “ fi cswk wucfq para que seja entendido que este se refere a uma administração simultânea, separada ou sequencial. Em ainda um outro aspecto da kpxgp>«q. “eqodkpc>«q” tgfetg-se à administração simultânea. Em ainda um outro aspecto da invenção, “eqodkpc>«q” tgfgtg-se a uma administração separada. Em ainda um aspecto cfkekqpcn fc kpxgp>«q. “eqobinação refere-se à administração sequencial. Quando a administração é sequencial ou separada, o retardo na administração do segundo componente não deve ser tal a que seja perdido o efeito benéfico da combinação.

[00109] De acordo ainda com um outro aspecto da invenção, é ainda provida uma composição farmacêutica, que compreende um composto da invenção, ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com um ou mais agentes terapêuticos adicionais (por exemplo, um agente antitumor selecionado a partir de um relacionado sob (I) - (ix) aqui acima), em associação com um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.

[00110] É ainda esperado que os compostos da presente invenção sejam particularmente úteis como uma parte de uma terapia combinada com o padrão de cuidado existente para o tratamento de pacientes mais idosos (isto é, pacientes acima de 60 anos de idade), pois tais pacientes podem se beneficiar bastante quanto à inibição de Aurora quinase (independentemente de seu estado de FLT3).

[00111] É também esperado que os compostos da presente invenção sejam ainda particularmente úteis como parte de uma terapia combinada com o padrão de cuidado existente para o tratamento de crianças, que sofrem de leucemia (por exemplo, AML) ou neuroblastoma. EXEMPLOS

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[00112] A figura 1 mostra a eficácia do composto do Exemplo 1 contra xenoenxertos de tumor humano MV4-11 em camundongos atímicos: (A) volumes de tumor relativos ± SEM. (B) Pesos corpóreos de camundongo.

[00113] A figura 2 mostra: (A) concentrações de plasma total e de droga no tumor e concentrações de droga no plasma livre, seguindo-se a uma dosagem de 50 e de 100 mg/ kg, as amostras tendo sido tomadas 2 horas após a dose final. (B) O composto do Exemplo 1 inibe a fosforilação de H-3 histona em S10, e a fosforilação de STAT5 em Y694 em xenoenxertos de tumor humano MV4-11 (4 dias de estudo). Foram obtidas mostras de tumor 2 horas após a dose final. H3 histona total, Stat5 total e GAPDH foram usados como controle de carga. SÍNTESE DOS COMPOSTOS Exemplos 1 a 3 Materiais e Métodos Gerais

[00114] Os materiais de partida, reagentes e solventes secos comercialemtne disponíveis foram usados, tais como fornecidos. A cromatografia de coluna por cintilação foi executada usando sílica gel Merck 60 (0,025 - 0,04 mm). A cromatografia de coluna foi também executada em uma unidade pessoal FlashMaster usando colunas de sílica Flash Isolute ou um sistema de purificação Biotage SP1 usando cartuchos de sílica Biotage Flash. A TLC preparativa foi então executado em placas Analtech ou Merck. A cromatografia de troca iônica foi executada usando cartuchos SCX-II Flash Isolute ácidos. Os espectros de RMN 1H foram registrados em um Bruker Avance-500. Foram preparadas amostras como soluções em um solvente deuterado e referenciadas ao pico de solvente não deuterado interno de tetrametil silano. Qu fguxkqu swíoiequ fotcm tgikuVtcfqu go rro *h+ c jwucpVg de tetrametil silano. A análise de LC-MS foi executada em um LCT Waters com um módulo de separação Waters Alliance 2795 e um detector de absorbância de comprimento de onda duplo, acoplado a um tempo de espectrômetro de massa de voo Waters/ Micromassa LCT com fonte ESI. A separação analítica foi executada a 30°C ou em uma coluna Merck Chromolith SpeedROD (RP- 18e, 50 x 4,6 mm) usando uma taxa de fluxo de 2 ml/ minuto em uma eluição de gradiente de 3,5 minutos, com detecção de 254 nm em uma coluna Merck Purospher STAR (RP-18e, 30 x 4 mm) usando uma taxa de fluxo de 1,5 ml/ minuto em uma eluição de gradiente de 3,5 minutos, com detecção a 254 nm. A fase móvel era uma mistura de metanol (solvente A) e de água (solvente B), ambos contendo ácido fórmico a 0,1 %. A eluição de gradiente foi tal como se segue: 1: 9 (A/B) por 2,25 minutos, 9:1 (A/B) durante 0,75 minutos, e então reversão de volta para 1:9 (A/B) por 0,3 minutos, e finalmente de 1:9 (A/B) por 0,2 minutos).

[00115] A análise de LC-HRMS foi executada em um HPLC Agilent série 1200 e em um detector de conjunto de diodo acoplado a um Quadripolo- Tempo de espectrômetro de massa de vôo com uma fonte de APC/ESI multimodo dupla . A separação analítica foi executada a 30°C em uma coluna Merck Purospher STAR (RP-18e, 30 x 4 mm) usando uma taxa de fluxo de 1,5 ml/ min em uma eluição de gradiente de 4 minutos com detecção a 254 nm. A fase móvel era uma mistura de metanol (solvente A) e de água (solvente B), ambas contendo o ácido fórmico a 0,1%. A eluição de gradiente foi tal como se segue: 1:9 (A/B) para 9:1 (A/B) durante 2,5 minutos, 9:1 (A/B) durante 1 minuto, e então reversão de volta a 1: 9 (A/B) durante 0,3 minutos, finalmente 1:9 (A/B) durante 0,2 minutos. As massas de referências foram usadas para a análise de HRMS: cafeína [M + H]+ 195,087652; (hexaquis(1H,1H,3H-tetrafluoropentóxi)fosfazeno [M+H]+ 922,009798) e hexaquis(2,2-difluoroetóxi)fosfazeno [M+H]+ 622,02896 ou reserpina [M+H]+ 609,280657. Exemplo 1 - Preparação de 6-Cloro-7-(4-(4-clorobenzil)piperazin-1-il)-2- (1,3-dimetil-1 H-pirazol-4-il)-3 H-imidazo[4,5-b Ipiridina 4-Cloro-3-nitropiridin-2-amina40

[00116] A um frasco de fundo redondo de 100 ml, contendo 2-amino- 4-cloropiridina (0,480 g, 3,75 mmol) resfriada em um banho de gelo, foi ent„o adicionado •cido sulf˙rico concentrado (5,4 g). A mistura da reaÁ„o foi ent„o agitada durante 5 minutos e ent„o •cido nÌtrico (70%; 0,36 g) foi adicionado, em gotas. A mistura da reaÁ„o foi ent„o agitada a 0ºC durante 10 minutos, e ent„o aquecida a 55ºC e agitada nesta temperatura durante 1 hora. Ela foi ent„o resfriada ‡ temperatura ambiente e diluÌda com •gua gelada. O pH foi cuidadosamente ajustado para ~7,5 com NaOH aquoso a 10%, depois do que foi ent„o formado um precipitado amarelo. Este foi filtrado, lavado com •gua, e ent„o secado, in vacuo, com P2O5. O produto foi ent„o purificado atravÈs de cromatografia de coluna (eluiÁ„o com diclorometano), de um modo a que fossem providos, em ordem de eluiÁ„o: 4-Cloro-3-nitropiridin-2-amina como um sÛlido amarelo (0,210 g, 32%), RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 6,87 (d, J = 5,2 Hz, 1H, piridina C-H), 7,21 (s, 2H, NH2), 8,11 (d, J = 5,2 Hz, 1H, piridina C-H). 4-Cloro-5-nitropiridin-2-amina (0,080 g, 12%): RMN 1H (500 MHz, DMSOd6) 6,58 (s, 1H, piridina C-H) 7,58 (s, 2H, NH2), 8,79 (s, 1H, piridina C-H). 4,5-Dicloro-3-nitropiridin-2-amina

[00117] 4-Cloro-3-nitropiridin-2-amina (0,10 g, 0,58 mmol) was dissolvido em acetonitrila seca (20 ml). ¿ soluÁ„o agitada, foi ent„o adicionada N-clorossuccinimida (0,094 g, 0,70 mmol), e a mistura da reaÁ„o foi ent„o aquecida a 80 oC durante 1 hora. As subst‚ncias vol•teis foram ent„o removidas in vacuo e o resÌduo foi ent„o purificado atravÈs de cromatografia de coluna em sÌlica gel (eluiÁ„o com diclorometano), de um modo a que seja provido o composto do tÌtulo como um pÛ castanho claro (0,125 g, 85%). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 7,35 (s, 2H, NH2), 8,36 (s, 1H, 6-H). 5-Cloro-4-(4-(4-clorobenzil)piperazin-1-il)-3-nitropiridin-2-amina

[00118] A uma mistura de 2-amino-4,5- dicloro-3- nitropiridina (0,152 g, 0,73 mmol) e isopropanol (22 ml) foi adicionada 1-(4- clorobenzil)piperazina (0,165 g, 0,78 mmol) seguida por diisopropiletilamina (0,17 ml, 0,97 mmol). A mistura da reação foi então aquecida a 45 oC durante um período de 18 horas, e então deixada resfriar à temperatura ambiente, e então diluída com isopropanol (5ml). O precipitado foi então coletado através de filtração, lavado com isopropanol e éter dietílico. O composto do título foi assim obtido como um sólido amarelo (0,215 g, 77%); RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 2,48 (br s, obscurecido pelo pico de DMSO, 4H, piperazina C-H), 3,06 (br t, J = 4,3 Hz, 4H, piperazina C-H), 3,52 (s, 2H, NCH2C6H4Cl), 6,95 (s, 2H, NH2), 7,35 (d, J = 8,5 Hz, 2H) e 7,38 (d, J = 8,5 Hz, 2H) (3,5-ArH e 2,6-ArH), 8,06 (s, 1H, 6-H); LC - MS (ESI, m/z): Temp. amb. = 1,70 min - 382, 384, 386 [(M+H)+, Cl2 padrão isotópico]. 6-Cloro-7-(4-(4-clorobenzil)piperazin-1-yi)-2-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)- 3H-imidazo[4,5-b]piridina

[00119] A uma mistura de 5-cloro-4-(4-(4-clorobenzil)piperazin-1-il)- 3-nitropiridin-2-amina (0,076 g, 0,20 mmol) e EtOH (4,0 mL) foi então adicionado 1,3-dimetil-1H-pirazol-4-carbaldeído (0,027 g, 0,22 mmol) seguido por uma solução aquosa recém preparada de Na2S2O4 (1M; 0,85 mL, 0,85 mmol). A mistura da reação foi então agitada a 80 oC durante um período de 24 horas, e ela foi então deixada resfriar à temperatura ambiente, concentrada in vacuo, e o resíduo foi então absorvido em sílica gel e colocado em uma coluna de sílica Isolute de 10 g. A eluição com acetato de etila/ diclorometano (v/v; :1), e então com 4 % de metanol em acetato de etila/ diclorometano (v/v; 1:1) forneceu o composto do título como um sólido branco, após a trituração com éter dietílico (0,023 g, 25%). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) 2,51 (s, obscurecido pelo pico de solvente, pirazol 3-CH3), 2,57 (br s, 4H, piperazina C-H), 3,54 (s, 2H, N-CH2C6H4Cl), 3,68 (br s, 4H, piperazina C-H), 3,84 (s, 3H, pirazol N-Me), 7,37 (d, J = 8,5 Hz, 2H) e 7,40 (d, J = 8,5 Hz, 2H) (C6H4Cl), 8,02 (s, 1H), e 8,18 (s, 1H) (pirazol 5-H, e imidazo[4,5-b]piridina 5-H), 12,95 (br s, 1H, imidazo[4,5- b ]piridina N-H); LC - MS (ESI, m/z): Rt = 1,97 min - 456, 458, 460 [(M+H)+, Cl2 padrão isotópico]. HRMS: Encontrado: 456,1457, calculado para C22H24Cl2N7 (M+H)+: 456,1465.

[00120] Este composto foi também produzido em quantidades em massa em uma faixa de a partir de 0,80 g a 1,80 g e fornece em uma faixa de 54% a 70%. O mesmo método foi então usado, tal como acima descrito, mas durante a elaboração, a mistura da reação foi dividida entre água e clorofórmio. A camada aquosa foi então extraída com clorofórmio e acetato de etila e as substâncias orgânicas combinadas foram secadas e concentradas in vacuo. O DMSO foi também usado como um solvente, em lugar de EtOH, e nesta ocasião a mistura da reação foi então agitada a 120 oC durante 3 horas. Exemplo 2 - Preparação de 3-((4-(6-Cloro-2-(1,3-dimetil-1 H-pirazol-4-il)- 3H-imidazo [4,5-b ]piridin-7-il)piperazin-1 -il)metil)-1,2,4-oxadiazol 4-((1,2,4-oxadiazol-3-il)metil)piperazina-1-carboxilato de terc-butila

[00121] A uma solução de Boc-piperazina (571 mg, 3,07 mmol) e 3- (clorometil)-1,2,4-oxadiazol (400 mg, 3,37 mmol) in CH2Cl2 (30 mL) foi adicionada trietilamina (1,70 mL, 12,3 mmol). A reação foi então agitada, durante um período de 22 horas, a 50 °C, antes que concentrada in vacuo de um modo a fornecer um sólido branco oleoso bruto. A purificação foi então executada através de cromatografia de cintilação em sílica gel (4 x 12) eluindo com MeOH/CH2Cl2 (5%) de um modo a fornecer o composto do título (555 mg, 67%) como um sólido branco. RMN 1H (500 MHz, CDCl3) 1,43 (s, 9H, C(CH3)3), 2,52 (app t, J = 4,9 Hz, 4H, CH2), 3,45 (app t, J = 4,9 Hz, 4H, CH2), 3,78 (s, 2H, CH2C-), 8,71 (s, 1H, CHar); LC - MS (ESI, m/z): Rt = 1,67 min - 435 *O & tBu)+, 169 (M - Boc)+. 4-(4-((1,2,4-Oxadiazol-3-il)metil)piperazin-1-il)-5-cloro-3-nitropiridin-2- amina

[00122] A uma solução de 4-((1,2,4-oxadiazol-3-il)metil)piperazina-1- carboxilato de terc-butila (213 mg, 0,790 mmol) in CH2Cl2 (18 mL) foi adicionado TFA (1,8 mL, 23,8 mmol) e a solução foi então agitada, em temperatura ambiente, durante 1/ hora. A reação foi então concentrada in vacuo, foi efetuada a azeotropia com tolueno (x2) e então secada em um dessecador a vácuo (contendo KOH) durante a noite, de um modo a que fosse então fornecido um óleo amarelo. O óleo bruto foi então dissolvido em iPrOH (4,4 mL) e ambos 2-amino-3-nitro-4,5-dicloropiridina (190 mg, 0,752 mmol) e DIPEA (520 ol, 3,00 mmol) foram adicionados. A solução foi então agitada a 50 °C durante um período de 4 horas. Quando do resfriamento, um precipitado amarelo foi então produzido, o qual foi filtrado, lavado com Et2O, secado in vacuo, de um modo a fornecer o composto do título como um sólido amarelo (165 mg, 0,486, 65%). O filtrado foi então concentrado in vacuo de um modo a fornecer 715 mg de um sólido amarelo oleoso. A purificação foi então efetuada através de cromatografia de cintilação em sílica gel (4 x 11) eluindo com EtOAc/hexano (40-50%), de um modo a fornecer o composto do título (42 mg, 16%) como um sólido amarelo. RMN 1H (500 MHz, CDCl3) 2,74 (app t, J = 4,1 Hz, 4H, -CH2-), 3,25 (t, J = 4,8 Hz, 4H, -CH2-), 3,85 (s, 2H, -CH2C-), 5,77 (s, 2H, NH2), 7,99 (s, 1H, CHar), 8,72 (s, 1H, -C(Cl)CH-). LC - MS (ESI, m/z): Temp. Amb. = 1,56 min - 340, 342 [(M + H)+, Cl padrão isotópico]. 3-((4-(6-Cloro-2-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-7- il)piperazin-1-il)metil)-1,2,4-oxadiazol

[00123] A uma solução de 4-(4-((1,2,4-oxadiazol-3-il)metil)piperazin- 1-il)-5-cloro-3-nitropiridin-2-amina (50,0 mg, 0,147 mmol) and 1,3-dimetil- 1H-pyrazol-4-carbaldeído (19,2 mg, 0,155 mmol) em EtOH (3,4 mL) foi adicionado Na2S2O4 1 M (0,588 mL, 0,588 mmol, recém preparado) e a solução foi então aquecida a 80 °C e então agitada, durante um período de 15 horas, ao mesmo tempo em que era exposta a ar. Uma vez resfriada, a reação foi então evaporada in vacuo e o resíduo foi então carregado sobre sílica. A purificação foi efetuada através de cromatografia de cintilação em sílica gel (2 x 14) eluindo com MeOH/CH2Cl2 (5-7,5%), de um modo a que fosse então fornecido o composto do título (26 mg, 43%) como um sólido amarelo pálido.

[00124] RMN 1H (500 MHz, CDCl3) 2,58 (s, 3H, CH3), 2,81 (app t, J = 4,4 Hz, 4H, CH2), 3,82 (app s, 4H, CH2), 3,85 (s, 3H, NCH3), 3,88 (s, 2H, - CH2-), 7,62 (br s, 1H, CHar), 7,87 (br s, 1H, CHar), 8,74 (s, 1H, CHar), 13,04 (s, 1H, NH);

[00125] LC - MS (ESI, m/z): Temp. Amb. = 1,91 min - 414, 416 [(M + H)+, Cl padrão isotópico];

[00126] HRMS: Encontrado: 436,1374, calculado para C18H20N9OClNa (M+Na)+: 436,1372. Exemplo 3 - Preparação de 3-((4-(6-Cloro-2-(1,3-dimetil-1 H-pirazol-4-il)- 3H-imidazo [4,5-b ]piridin-7-il)piperazin-1 -il)metil)-5-metil-1,2,4- oxadiazol 2-Amino-5-cloro-4-(4-(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3-il)metilpiperazin-1-il)-3- nitropiridina

[00127] Hidrocloreto de 1-[(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3-il)metil] piperazina (217 mg, 0,99 mmol) and 2-amino-4,5-dicloro-3-nitropiridina (208 mg, 1,0 mmol) foram agitados em 2-propanol (5 mL) e diisopropil etilamina *745 μN, 5:9 oi, 5,2 ooqn+ foi adicionado. A mistura foi agitada e aquecida a 45oC, durante um período de 23 horas. A reação foi resfriada e o produto foi filtrado e lavado com 2-propanol. A secagem in vacuo forneceu o produto (246 mg, 69%). RMN 1H (500 MHz, CDCl3,) 2,63 (s, 3H, CH3), 2,77 (br m, 4H, piperazina C-H), 3,29 (m, 4H, piperazina C-H), 3,76 (s, 2H, CH2), 5,27 (s, 2H, NH2), 8,02 (s, 1H, piridina 6-H). LC - MS (ESI, m/z): Temp. Amb. = 1,66 min - 354 (M + H)+, isótopo 35Cl. 3-((4-(6-Cloro-2-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-3H-imidazo[4,5-b]piridin-7- il)piperazin-1-il)metil)-5-metil-1,2,4-oxadiazol

[00128] A uma solução de 5-cloro-4-(4-((5-metil-1,2,4-oxadiazol-3- il)metil)piperazin-1-il)-3-nitropiridin-2-amina (60,0 mg, 0,170 mmol) e 1,3- dimetil-1H-pirazol-4-carbaldeído (22,2 mg, 0,179 mmol) em EtOH (3,8 mL) foi adicionado Na2S2O4 1 M (0,678 mL, 0,678 mmol, recém preparado) e a solução foi então aquecida a 80 °C e agitada , durante um período de 16 horas, enquanto era exposta ao ar. Uma vez resfriada, a reação foi então evaporada in vacuo e o resíduo foi então carregado sobre sílica. A purificação foi efetuada através de cromatografia de cintilação em sílica gel (3 x 14) eluindo com MeOH/CH2Cl2 (5-7,5%), de um modo a fornecer o composto do título como um sólido amarelo pálido. A recristalização em EtOAc/Et2O forneceu o composto do título (20 mg, 27%) como um sólido bege. O filtrado foi então concentrado in vacuo, uma quantidade adicional do composto do título (12 mg, 16%) como um sólido amarelo pálido.RMN 1H (500 MHz, CDCl3) 2,60 (s, 3H, CH3), 2,62 (s, 3H, CH3), 2,81 (app t, J = 4,5 Hz, 4H, CH2), 3,76 (s, 2H, -CH2-), 3,87 (app s, 4H, CH2), 3,90 (s, 3H, NCH3), 7,77 (br s, 1H, CHar), 7,96 (br s, 1H, CHar), 12,18 (s, 1H, NH); LC - MS (ESI, m/z): Temp. Amb. = 1,95 min - 428, 430 [(M + H)+, Cl padrão isotópico]; HRMS: Encontrado: 450,1527, calculado para C19H22N9OClNa (M+Na)+: 450,1528. AVALIAÇÃO DOS COMPOSTOS DOS EXEMPLOS 1 a 3 Materiais e Métodos Gerais

[00129] Ensaios de Aurora quinase: Os valores de IC50 de Aurora quinase foram determinados como previamente descrito.26, 36

[00130] Ensaio de viabilidade celular: Os valores de GI50 (50% de concentração inibitória de crescimento celular) foram determinados como previamente descrito.26, 36 Determinação dos valores de IC50 celulares do Exemplo 1 para a inibição de Aurora A e Aurora B:

[00131] Aurora A rotulada com Myc foi transferida a células Hela usando Lipofectamina LTX em placas de 24 reservatórios, e 24 horas após a transfecção, as células foram então tratadas com diferentes concentrações do Exemplo 1 durante um período de 2 horas. As células foram então lisadas em um tampão de amostra de LDS 2X. Proteínas de diferentes amostras foram resolvidas por géis de 4-12% de Bis-Tris NuPage (Invitrogen) e analisadas através de borrão de Western usando anticorpos de P-histone H3 (S10) e de P- Aurora A (T288). As faixas para P-histona H3 e P-Aurora A foram quantificadas por meio do uso do software Image J e os valores de IC50 foram calculados por meio do uso de Graphpad Prism. Estabilidade microssômica do fígado de camundongo:

[00132] Os compostos (10 oM) foram incubados com proteína (1 mg.mL-1) de microssomas de fígado de camundongo CD1, na presença de NADPH (1 mM), UDPGA (2.5 mM) e MgCl2 (3 mM) em solução salina tamponada com fosfato (10 mM) a 37 flC. As incubações foram então conduzidas durante 0 e 30 minutos. As incubações de controle foram geradas por meio da omissão de NADPH e UDPGA a partir da reação da incubação. O percentual do composto remanescente foi determinado após a analise por LCMS. Estabilidade microssômica do fígado humano:

[00133] Os compostos (10 oM) foram incubados com proteína (1 mg.mL-1) de microssomas de fígado humano colocado em reservatório por gênero, na presença de NADPH (1 mM), UDPGA (2.5 mM) e MgCl2 (3 mM) em solução salina tamponada com fosfato (10 mM) a 37 flC. As incubações foram conduzidas durante 0 e 30 minutos. As incubações de controle foram geradas por meio da omissão de NADPH e de UDPGA a partir da reação de incubação. O percentual de composto remanescente foi então determinado após a análise por LCMS.

[00134] Inibição de hERG: Todas as inibições percentuais de hERG em uma concentração do composto de 10 oM foram determinadas através de Millipore, em um ensaio de eletrofisiologia de base celular de alta vazão para a inibição da corrente de cauda de hERG 41, e os valores foram então relatados como uma média de múltiplas determinações. Um controle negativo de veículo aquoso de 0,3% de DMSO forneceu de 7-16% de inibição. Um controle positivo de Cisaprida (1 oM) forneceu de 96-104% de inibição. Todos os valores de IC50 de hERG foram determinados por Millipore,41 e a IC50 de hERG para o Exemplo 1 foi também determinada através de correntes de cauda de hERG medindo Cyprotex plc através de fixação de voltagem da célula total. 42

[00135] Propriedades fisicoquímicas: As medições de LogD e de pKa foram executadas através de Pharmorphix® Solid State Services, Membro de Sigma-Aldrich Group, Cambridge, UK.

[00136] Formação de perfil de seletividade de quinase: A formação de perfil de quinase usando a tecnologia KINOMEScanTM technology e as determinações de Kd foram executadas por KINOMEscan, uma Divisão de DiscoveRx Corporation, San Diego, California, USA; www.kinomescan.com.

[00137] PK completo In vivo (composto do Exemplo 1): Camundongos (fêmeas Balb/C) receberam dosagem via p.o. ou i.v. Com o composto do Exemplo 1 (5 mg kg-1) em 10% de DMSO, 5% de Tween 20 em solução salina. Após a administração, os camundongos foram então sacrificados em 5, 15, e 30 minutos e em 1, 2, 4, 6 e 24 horas. O sangue foi então removido através de perfuração cardíaca e centrifugado, de um modo a que fossem obtidas as amostras de plasma. As amostras de plasma (100 μL) foram então adicionadas ao padrão interno analítico (Olomucina; IS), seguido por precipitação de proteína com 300 μL de metanol. Seguindo-se à centrifugação X (1,200 g, 30 min, 4 °C), os sobrenadantes resultantes foram então analisados quanto aos níveis de composto do Exemplo 1, através de LCMS, por meio do uso de uma coluna analítica de fase reversa Acquity UPLC C18 (Waters, 50 x 2.1 mm) e modo de íon positivo ESI MRM em um sistema de cromatografia líquida Agilent 1200 acoplado a um espectrômetro de massa quadripolar triplo 6410 (Agilent Ltd.).

[00138] Estudo quanto à eficácia de xenoenxerto de tumor humano: Procedimentos envolvendo animais foram executados dentro das normas guvcdgngekfcu" rgnq" Vjg" Kpuvkvwvg" qh" Ecpegt" TgugctejÓu" Cpkocn" Gvjkeu" Committee e de acordo com as normas nacionais: Workman P, Aboagye EO, Balkwill F, Balmain A, Bruder G, Chaplin DJ, Double JA, Everitt J, Farningham D, Glennie MJ, Kelland LR, Robinson V, Stratford IJ, Tozer GM, Watson S, Wedge SR, Eccles SA. Guidelines for the welfare and use of animals in cancer research. Brit J Cancer 102: 1555-1577, 2010.

[00139] Camundongos atímicos fêmeas CrTacNCr-Fox1(nu) foram implantados subcutaneamente com 107 células de leucemia FLT3-ITD MV411. Quando os xenoenxertos foram bem estabelecidos (10 dias após a implantação, volumes de tumor médios de pelo menos 100 mm3), os animais foram então tratados ou com o veículo (10% de DMSO, 20% de PEG 400, 5% de Tween 80 e 65% de água) ou com o composto do Exemplo 1 administrado oralmente em duas doses, 50 mg/kg e 100 mg/kg (n=5 por grupo). A dosagem foi de duas vezes por dia, diariamente durante 7 dias, e apenas uma vez ao dia durante mais 4 dias.

[00140] Estudo de PK/PD: Um estudo de PK/PD de 4 dias foi efetuado por administração oral do veículo, tal como acima, ou de 50 mg/kg e 100 mg/kg do composto do Exemplo 1, duas vezes ao dia, em camundongos atímicos, contendo xenoenxertos MV4-11 bem estabelecidos (17 dias após a implantação). Plasma e amostras de tumor foram então coletadas, 2 horas e 6 horas após as doses finais. Resultados Atividade de Aurora quinase, atividade celular, estabilidade microssômica, inibição de hERG e propriedades físico-químicas

[00141] A atividade dos compostos exemplificados contra Aurora A (ensaio bioquímico), GI50 de base celular em células SW620 e hERG é mostrada na Tabela 1 abaixo, em conjunto com os dados referentes a estabilidade microssômica destes compostos e com os seus respectivos valores de clogP. Tabela 1

Quanto às determinações da IC50 de Aurora A e de SW620 GI50, os resultados são valores médios de duas determinações independentes ou a média (±SD) para n>2 a não ser que especificado ded um outro modo. a Os resultados são os valores médios para as amostras processadas em triplicata. b MLM/HLM: Percentual de composto de origem metabolizado após um período de incubação de 30 minutos. ClogD7,4 = 3,84 (valor determinado experimentalmente ). n.d. = não determinado.

[00142] O composto do Exemplo 1 apresentou uma atividade inibitória mais baixa contra hERG, quando comparado com os compostos dos Exemplos 56 e 57 da WO2007/072017.

[00143] Com base nestes resultados, o composto do Exemplo 1 foi selecionado para a caracterização adicional in vitro e in vivo. Seletividade de quinase

[00144] A seletividade de quinase foi determinada através da formação de perfil do Exemplo 1 em um painel de 442 quinases (386 quinases não- mutantes) em uma concentração de 1 oM usando a tecnologia KINOMEScanTM.28 A graduação de seletividade S(10), que é calculada por meio da divisão do número de quinases não-mutantes, para as quais >90% de competição foi observada no ensaio (isto é medido como <10% do controle) pelo número total de quinases não-mutantes total, foi determinado como sendo de 0,057, isto é, 22 eliminações a partir das 386 quinases não-mutantes testadas. A Aurora A, B, e C foram potencialmente inibidas com % dos valores de controle determinados como 3,4%, 1%, e 16%, respectivamente. Esta varredura primária também revelou mais do que 94% de competição para FLT3 quinase e para os mutantes FLT3 incluindo FLT3-ITD, FLT3(D835Y), e FLT3(D835H).

[00145] As atividades inibitórias de FLT3 e de Aurora do composto do Exemplo 1 foram subsequentemente confirmadas por determinação do valor Kd (tecnologia KINOMEScanTM ), tal como mostrado na Tabela 2. Tabela 2: Valores de Kd para o composto do Exemplo 1

[00146] Os exemplos 2 e 3 revelaram ser tambÈm inibidores potentes de Exemplos 2 e 3 de FLT3 e de FLT3-ITD. Os valores de Kd do Exemplo 2 contra FLT3 e FLT3-ITD foram determinados como sendo de 4,4 nM e de 14 nM, respectivamente. Do mesmo modo, os valores de Kd do Exemplo 3 contra FLT3 e FLT3-ITD foram determinados como sendo de 5,6 nM e de 26 nM, respectivamente.

[00147] Tomados conjuntamente, estes dados indicam que o composto do Exemplo 1 È um inibidor duplo potente de FLT3 e de Aurora quinases, com poucas atividades de quinase objetivadas atravÈs do quinoma. AvaliaÁ„o do ensaio celular

[00148] De um modo consistente com uma atividade inibitÛria de FLT3 / Aurora dupla, o composto do Exemplo 1 exibiu uma atividade antiproliferativa em uma faixa de linhagens celulares de tumor humano, incluindo o carcinoma de cÛlon humano HCT116 (GI50 = 0,300 M), e nas linhagens da cÈlula de AML positiva para FLT3-ITD humano, MOLM-13 (GI50 = 0,104 M) e MV4-11 (GI50 = 0,291 M). Em cÈlulas Hela, o composto do Exemplo 1 inibiu tanto Aurora A, como Aurora B, com valores de IC50 de 0,030 M e de 0,148 M respectivamente. Nestes ensaios de base celular, a reduÁ„o de fosforilaÁ„o de H3 em S10 foi usada como um biomarcador para a inibiÁ„o de Aurora B, e a autofosforilaÁ„o de Aurora A em T288 como um biomarcador para a inibiÁ„o de Aurora A.29 PK In Vivo

[00149] Os resultados de PK in vivo para o composto do Exemplo 1 em camundongos são apresentados na Tabela 3. Este é um composto altamente biodisponível oralmente (F = 100%) com uma eliminação determinada como 0,058 L/h (~48 mL/min/kg) e Vd como 0,066 L (~3,3 L/kg). Tabela 3: Composto do Exemplo 1: Ligação de proteína de plasma de camundongo, e parâmetros de PK (dosagem iv: 5 mg/kg, dosagem oral: 5 mg/kg)

Modelo de xenoenxerto de AML

[00150] Atividade do composto do Exemplo 1 em um modelo de xenoenxerto de AML é mostrada na Figura 1.

[00151] Com referência à Figura 1, pode ser observado que o composto do Exemplo 1 inibiu fortemente o crescimento de xenoenxertos do tumor humano MV4-11, em um modo dependente de dose, não tendo sido observada toxicidade, tal como definido através de perda de peso corpórea. Quando a terapia foi descontinuada após 11 dias, os tumores eram não- detectáveis em camundongos tratados com um programa de dosagem de 100 mg/kg do composto do Exemplo 1 e haviam diminuído para 42% do volume inicial em camundongos tratados com uma programação de dosagem de 50 mg/kg. Os camundongos de controle foram selecionados no dia 18, a partir do início da terapia, quando o volume de tumor médio havia aumentado em mais do que 500%. Em contraste, camundongos isolados foram selecionados quando os tumores progrediram para este estágio, tal como se segue: dias 28 e 31 a 50 mg/kg e dias 46 e 56 em 100 mg/kg. Três dos 5 camundongos em cada grupo de tratamento (60%) falharam em desenvolver tumores com crescimento progressivo no momento em que o estudo foi terminado, no dia 60.

[00152] Como um resultado deste efeito inibitório potente, os tumores em tratamento eram pequenos demais para prover material para uma análise farmacocinética/ farmacodinâmica. Subsequentemente, um estudo de PK/PD de 4 dias repetidos foi efetuado através da administração oral de 50 mg/kg e de 100 mg/kg do Exemplo 1, duas vezes ao dia. A análise farmacodinâmica demonstrou uma clara inibição de fosforilação de histona H-3, e a inibição da fosforilação de STAT5, que é um alvo a jusante de FLT3 (Figura 2). Em adição, a concentração de droga isenta de plasma nas amostras obtidas 2 horas após a dose final, foram determinadas como sendo de 222 nM e de 488 nM para as programações de dosagem de 50 mg/kg e de 100 mg/kg, respectivamente (Figura 2). A concentrações de droga isenta de plasma estão claramente acima dos valores de Kd do composto do Exemplo 1 contra as quinases relevantes, isto é, Aurora A (Kd = 7,5 nM), Aurora B (Kd = 48 nM), FLT3 (Kd = 6,2 nM), FLT3-ITD (Kd = 38 nM). Estas descobertas demonstram que o composto do Exemplo 1 inibe, de um modo significativo, o crescimento de um modelo de xenoenxerto humano de AML positivo para FLT3-ITD in vivo, com modulação de biomarcador e exposição de droga livre consistente com o engajamento alvo de FLT3 e de Aurora quinase duplo. Inibição de isoformas de citocroma P450 Materiais e métodos

[00153] Dois compostos comparadores foram usados neste estudo, ou seja 6-bromo-2-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-7-(4-(piridina-3-ilmetil)piperazin-1- il)-3H-imidazo[4,5-b]piridina (Comparador 1, Exemplo 56, WO2007/072017) e 6-bromo-7-(4-(piridina-3-ilmetil)piperazin-1-il)-2-(1,3,5-trimetil-1H- pirazol-4-il)-3H-imidazo[4,5-b]piridina (Comparador 2, Exemplo 57, WO2007/072017).

[00154] Os compostos comparadores e os compostos dos Exemplos 1 a 3 acima foram incubados com microsomas de fígado humano (0,5mg.ml-1) a 3μO. 32μOg72μOo

[00155] A inibição de isozimas CYP usando uma mistura de substratos de sonda (Tabela 4). As amostras foram incubadas durante 10 minutos, seguido pela precipitação de proteína com metanol. Os metabólitos do substrato em cada amostra foram então medidos por LC/MS/MS usando cromatografia líquida de fase reversa e modo de íon positivo ESI com monitoração de reação múltipla (MRM). Tabela 4: Concentrações do substrato de sonda de isozimas CYP e metabólitos detectados

[00156] Resultados Tabela 5:Valores de IC50 estimados para a inibição de isozimas CYP humanas pelos compostos de teste

[00157] Os Exemplos 1-3 não apresentaram nenhuma inibição significativa das isozimas CYP (Tabela 5), os valores de IC50 estimados foram mais altos do que 10 oM.

[00158] Nenhum composto apresentou uma inibição significativa de CYP1A2, CYP2A6, CYP2C9 ou CYP2C19. Ambos os compostos comparadores apresentaram uma inibição significativa de CYP3A4, com as ICSOS estando aproximadamente abaixo de 1μM, com o Comparador 1 também inibindo CYP2D6. Os compostos da presente invenção apresentaram, deste modo, uma inibição de CYP3A4 significativamente reduzida, com relação a ambos os compostos comparadores. Referências 1. Carmena, M et al.;Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2003, 4, 842-854. 2. Ducat D. et al.; Exp. Cell Res. 2004, 301, 60-67. 3. Marumoto, T. et al.; Nat. Rev. Cancer 2005, 5, 42-50. 4. Barr, A. R. et al. J. Cell Sci. 2007, 120, 2987-2996. 5. Bayliss, R et al.; Mol. Cell. 2003, 12, 851-862. 6. Giet, R. et al.; J. Cell Biol. 2001, 152, 669- 681. 7. Gassmann, R. et al.; J. Cell Biol. 2004, 166, 179 - 191. 8. Sessa, F. et al.; Mol. Cell, 2005, 18, 379-391. 9. Bishop, J. D. et al.; J. Biol. Chem. 2002, 277, 27577-27580. 10. Tanaka, T. et al.; Cancer Res. 1999, 59, 2041-2044. 11. Bischoff, J. R. et al.; EMBO J. 1998, 17, 3052-3065. 12. Gritsko, T. M. et al.; Clin. Cancer. Res. 2003, 9, 1420-1426. 13. Reichardt, W. et al.; Oncol. Rep. 2003, 10, 1275-1279. 14. Chieffi, P. et al.; J. Endocrinol. 2004, 181, 263-270. 15. Araki, K. et al.; J Neurooncol. 2004, 67, 53-64. 16. Sorrentino, R. et al.; J Clin Endocrinol Metab. 2005, 90, 928-935. 17. Kimura, M. et al.; J. Biol. Chem. 1999, 274, 7334-7340. 18. Pollard, J. R. et al.; J. Med. Chem. 2009, 52, 2629-2651. 19. Green, M. R. et al.; Expert Opin. Drug Discov. 2011, 6, 291-307. 20. Cheung, C. H. A. et al.; Expert Opin. Ther. Patents 2011, 21, 857884. 21. Harrington, E. A. et al.; Nat. Med. 2004, 10, 262-267. 22. Mortlock, A. A. et al.; J. Med. Chem. 2007, 50, 2213-2224. 23. Fancelli, D. et al.; J. Med. Chem. 2006, 49, 7247-7251. 24. Caprinelli. P. et al.; Mol. Cancer Ther. 2007, 6, 3158-3168. 25. Payton, M. et al.; Cancer Res 2010, 70, 9846-9854. 26. Bavetsias, V. et al.; J. Med Chem. 2010, 53, 5213-5228. 27. CLogP was calculated using ChemBioDraw Ultra 12 by CambridgeSoft (www.cambridgesoft.com). 28. Kinase profiling using the KINOMEScanTM technology: www.kinomescan.com. 29. Manfredi, M. G. et al.; Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2007, 104, 41064111. 30. Ikezoe, T. et al.; Mol Cancer Ther 2007, 6, 1851-1857. 31. Ochi, T. et al.; Blood 2009, 113, 66-74. 32. Huang, X.-F. et al.; Blood 2008, 111, 2854-2865. 33. Walsby, E. et al.; Haematologica 2008, 93, 662-669. 34. Meshinchi, S. et al; Clin Cancer Res 2009, 15, 4263-4269. 35. Meshinchi, S. et al.; Blood 2006, 108, 3654-3661. 36. Chan, F. et al.; Mol Cancer Ther, 2007, 6, 3147-3157. 37. Stirewalt, D. L. et al.; Nat Rev Cancer 2003, 3, 650-665. 38. Kindler, T. et al.; Blood 2010, 116, 5089 - 5102. 39. Levis, M. J.; Best Practice & Research Clinical Haematology 2010, 23, 489-494. 40. Bavetsias, V. et al, Bioorg. Med. Chem. Lett. 2007, 17, 6567-6571. 41. Ion Channel Cardiac Profiler; Millipore: Billerica, MA: http://www.millipore.com/life_sciences/flx4/ld_ion 42. hERG Safety Assay; Cyprotex plc, Cheshire, UK; www.cyprotex.com 43. Roden, D. M. N. Engl. J. Med. 2004, 350, 1013-1022.

Claims (10)

1. Composto, caracterizado pelo fato de que é da fórmula I, apresentada abaixo:

em que: R1 é Br ou Cl; R2 é selecionado a partir da fórmula II ou da fórmula III, apresentadas abaixo:

em que Ra é hidrogênio ou metila; ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

2. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que R1 é Cl.

3. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que R1 é Br.

4. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que R2 pertence à fórmula II.

5. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que R2 pertence à fórmula III.

6. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que é selecionado a partir de qualquer um de: 6-Cloro-7-(4-(4-clorobenzil)piperazin-1-il)-2-(1,3-dimetil-1H- pirazol-4-il)-3H-imidazo[4,5-B]piridina; 3-((4-(6-Cloro-2-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-3H- imidazo[4,5-B]piridin-7-il)piperazin-1-yl)metil)-1,2,4-oxadiazol; 3-((4-(6-Cloro-2-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-3H- imidazo[4,5-B]piridin-7-il)piperazin-1-il)metil)-5-metil-1,2,4-oxadiazol; ou um sal I ou solvato farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

7. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de compreender um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável da mesma, e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

8. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de ser para o uso em terapia.

9. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de ser para o uso no tratamento de um distúrbio proliferativo, tal que o câncer.

10. Composto de acordo com a reivindicação 9, ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de ser para o uso no tratamento de leucemia mielóide aguda.

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