JP6159397B2 - 薬学的活性化合物 - Google Patents

Description

本発明は、薬学的活性化合物に関する。より具体的には、本発明は、オーロラキナーゼ酵素活性の阻害剤である化合物に関する。本発明の化合物は、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）活性の阻害剤でもある。本発明は、これらの化合物の調製のためのプロセス、これらを含む医薬組成物、ならびにがん等の増殖性障害、ならびにオーロラキナーゼおよび／またはＦＬＴ３活性が関係している他の疾患または状態の治療におけるこれらの使用にも関する。

がん等の増殖性疾患は、無制御かつ無調節な細胞増殖によって特徴付けられる。正確には、細胞を無制御かつ無調節な方法で増殖させるものは、ここ数十年にわたって、集中的な研究の焦点とされてきた。

オーロラキナーゼは、Ａ、Ｂ、およびＣと称する３種のセリン−トレオニンキナーゼのファミリーであり、有糸分裂の異なる段階において重要かつ個別の役割を演じる^１〜３。有糸分裂の初期段階では、オーロラＡは、中心体の成熟および有糸分裂紡錘体の形成を調節するＸｋｌｐ２（ＴＰＸ２）を標的化（ｔａｒｇｅｔｉｎｇ）するタンパク質を備えた複合体を形成する^４，５。オーロラＢは、内部動原体タンパク質（ＩＮＣＥＮＰ）、サバイビンおよびボレアリンを備えた複合体を形成し、これにより、染色体凝縮、染色体アラインメント、有糸分裂チェックポイントおよび細胞質分裂を調節する^６〜９。オーロラＡおよびオーロラＢの過剰発現は、乳がん、結腸直腸がん、卵巣がん、神経膠腫、甲状腺癌、および精上皮腫を含む多種多様なヒト悪性腫瘍において報告されている^{１０〜１６}。有糸分裂中におけるオーロラＣの機能は、理解が進んでいない。しかし、精巣におけるオーロラＣの高度な発現は報告されている^{１７，１８}。

近年、オーロラキナーゼの小分子標的化は、新規のがん化学療法剤の発見のための一般的な戦略となっており、１（ＶＸ−６８０（ＭＫ−０４５７））^２１、２（ＡＺＤ１１５２）^２２、３（ＰＨＡ−７３９３５８）^{２３、２４}、および４（ＡＭＧ９００）^２５を含む、数多くの構造的に多様なオーロラ活性の阻害剤が報告されている^{１８〜２０}（以下を参照）。

しかし、オーロラキナーゼ活性を阻害することができるさらなる治療剤を同定する必要性がいまだに存在する。

国際特許公開の国際公開第２００７／０７２０１７号および国際公開第２００９／００１０２１号は共に、オーロラキナーゼ活性の阻害剤として機能する、一連のイミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン誘導体を開示しており、したがって、これらはがんの治療にとって潜在的に有用な治療剤である。国際公開第２００９／００１０２１号に開示されている１つの特定の化合物を以下に示す。

この特定の化合物（ＣＣＴ１３７６９０として公知である）は、標的会合（ｔａｒｇｅｔ ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ）と一致するバイオマーカーのモジュレーションを同時に伴いつつインビボでＳＷ６２０ヒト結腸癌異種移植片の増殖を阻害する、有効かつ経口投与可能なオーロラキナーゼの阻害剤である^２６。しかし、この化合物の前臨床開発は、そのｈＥＲＧに対する安全マージンが狭いこと^４３（ＩＣ_５０＝３．０μＭ）^２６およびそのヒト肝ミクロソーム安定性が低いこと（３０分のインキュベーション後に８６％が代謝される、未公開データ）により、制限されていた。

したがって、本発明の目的は、前臨床および臨床評価に適切な、経口投与可能なオーロラキナーゼ酵素活性の阻害剤を提供することである。

したがって、本発明の目的は、許容されるヒトミクロソーム安定性、シトクロームＰ_４５０活性の低減された阻害、ある化合物の場合にｈＥＲＧに対するより広範な治療指数を保有する、経口投与可能なオーロラキナーゼ酵素活性の阻害剤を提供することである。

ＦＬＴ３は、クラスＩＩＩ受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）ファミリーに属する膜貫通（ｔｒａｎｓ−ｍｅｍｂｒａｎｅ）キナーゼである。ＦＬＴ３リガンド（ＦＬ）のその受容体への結合は、二量体化、自己リン酸化、そしてその後の下流シグナル伝達経路の活性化へとつながる^３７。高レベルのＦＬＴ３発現は急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）芽球において見出されており、突然変異の２つの大きなクラス、すなわち、遺伝子内縦列重複（ＩＴＤ）およびチロシンキナーゼドメイン（ＴＫＤ）点突然変異がＡＭＬ患者において同定されている^{３７，３８}。遺伝子内縦列重複は、ＡＭＬ患者のうちの２０〜２５％において検出され、チロシンキナーゼドメイン点突然変異は、ＡＭＬ患者のうちの５〜１０％において検出されている^{３７，３８}。いくつかのＦＬＴ３の小分子阻害剤は、臨床試験において評価されている^{３８，３９}。

したがって、オーロラキナーゼとＦＬＴ３の両方を阻害する二重の機能を有する化合物に対するさらなる必要性が存在する。このような化合物は、オーロラおよび／またはＦＬＴ３が関係している疾患および／または状態、例えばＡＭＬ等の治療にとって有用となるであろう。

したがって、本発明のさらなる目的は、この二重の活性を保有する化合物を提供することである。

一態様では、本発明は、本明細書で定義されている通りの化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物を提供する。

別の態様では、本発明は、本明細書で定義されている通りの本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物と、１つまたは複数の薬学的に許容される添加剤とを含む医薬組成物を提供する。

別の態様では、本発明は、療法において使用するための、本明細書で定義されている通りの本発明の化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物、または本明細書で定義されている通りの医薬組成物に関する。

別の態様では、本発明は、オーロラキナーゼおよび／またはＦＬＴ３活性が関係している疾患または状態の治療において使用するための、本明細書で定義されている通りの本発明の化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物、または本明細書で定義されている通りの医薬組成物に関する。

別の態様では、本発明は、オーロラキナーゼおよび／またはＦＬＴ３活性が関係している疾患または状態の治療において使用するための薬剤の製造における、本明細書で定義されている通りの本発明の化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物の使用に関する。

別の態様では、本発明は、オーロラキナーゼおよび／またはＦＬＴ３活性が関係している疾患または状態を治療する方法であって、そのような治療を必要とする対象に、治療有効量の本明細書で定義されている通りの化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物、または本明細書で定義されている通りの医薬組成物を投与するステップを含む方法に関する。

別の態様では、本発明は、がん等の増殖性障害の治療において使用するための、化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物、または本明細書で定義されている通りの医薬組成物を提供する。特定の実施形態では、がんはヒトがんである。

別の態様では、本発明は、がん等の増殖性障害の治療において使用するための薬剤の製造における、化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物の使用を提供する。特定の実施形態では、がんはヒトがんである。

別の態様では、本発明は、がん等の増殖性障害を治療する方法であって、そのような治療を必要とする対象に、治療有効量の化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物、または本明細書で定義されている通りの医薬組成物を投与するステップを含む方法を提供する。特定の実施形態では、がんはヒトがんである。

別の態様では、本発明は、オーロラキナーゼおよび／またはＦＬＴ３阻害効果の生成において使用するための、化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物、または本明細書で定義されている通りの医薬組成物を提供する。

別の態様では、本発明は、オーロラキナーゼおよび／またはＦＬＴ３阻害効果の生成において使用するための薬剤の製造における、化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物の使用を提供する。

別の態様では、本発明は、インビトロでのオーロラキナーゼおよび／またはＦＬＴ３の阻害効果を生成する方法であって、有効量の化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物を投与するステップを含む方法を提供する。

別の態様では、本発明は、インビボでのオーロラキナーゼおよび／またはＦＬＴ３の阻害効果を生成する方法であって、有効量の化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物を投与するステップを含む方法を提供する。

別の態様では、本発明は、インビトロまたはインビボでの細胞増殖を阻害する方法であって、細胞を、有効量の本明細書で定義されている通りの化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物と接触させるステップを含む方法を提供する。

本発明は、本明細書で定義されている通りの化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物を合成する方法をさらに提供する。

別の態様では、本発明は、本明細書で定義されている通りの合成の方法によって取得可能な、またはそれによって取得される、またはそれによって直接的に取得された、化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物を提供する。

別の態様では、本発明は、本明細書で提示されている合成法のいずれか１つにおいて使用するのに適切な、本明細書で定義されている通りの新規の中間体を提供する。

本発明の任意の１つの特定の態様の好ましい、適切な、および任意選択の特色は、任意の他の態様の好ましい、適切な、および任意選択の特色でもある。

[定義]
別段の記載がない限り、本明細書および特許請求の範囲で使用される下記の用語は、以下で提示する下記の意味を有する。

ここでいう「治療すること」または「治療」は、状態の確立された症状の予防および軽減を含むことを理解されたい。したがって、状況、障害または状態の「治療すること」または「治療」は、（１）状況、障害または状態に罹患しているかもしれないまたはかかりやすいが、状況、障害または状態の臨床または亜臨床症状を未だ経験しても見せてもいないヒトにおいて発症している状況、障害または状態の臨床症状の出現を予防するまたは遅延させること、（２）状況、障害または状態を阻害すること、すなわち、疾患またはその再発の（維持治療の事例において）、または少なくとも１つのその臨床もしくは亜臨床症状の発症を阻止する、低減させるまたは遅延させること、あるいは（３）疾患を緩和するまたは和らげること、すなわち、状況、障害もしくは状態または少なくとも１つのその臨床もしくは亜臨床症状の退行を引き起こすことを含む。

「治療有効量」は、ある疾患を治療するために哺乳動物に投与される場合、該疾患のそのような治療を達成するのに十分な化合物の量を意味する。「治療有効量」は、化合物、疾患およびその重症度、ならびに治療される哺乳動物の年齢、体重等に応じて変動することになる。

語句「本発明の化合物」は、本明細書で一般的かつ具体的の両方で開示されている化合物を意味する。

[本発明の化合物]
先に述べた通り、国際特許公開の国際公開第２００７／０７２０１７号は、オーロラキナーゼ活性の阻害剤として機能する、一連のイミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン誘導体を開示している。国際公開第２００７／０７２０１７号に開示されている２つの具体的な化合物は、６−ブロモ−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−７−（４−（ピリジン−３−イルメチル）ピペラジン−１−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン（実施例５６）および６−ブロモ−７−（４−（ピリジン−３−イルメチル）ピペラジン−１−イル）−２−（１，３，５−トリメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン（実施例５７）である。これらの化合物の構造を以下に示す。

第１の態様では、本発明は、以下に示される式Ｉの化合物：
［式中、
Ｒ_１は、ＢｒまたはＣｌであり、
Ｒ_２は、以下に示される式ＩＩまたは式ＩＩＩ：
（式中、Ｒ_ａは、水素またはメチルである）から選択される］
または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物を提供する。

上記Ｒ_２基の定義において、記号
は、Ｒ_２基の、式Ｉの化合物中に存在する−ＣＨ_２−部分への結合点（ｐｏｉｎｔ ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ）を表す。

本発明の化合物は、国際公開第２００７／０７２０１７号の実施例５６および実施例５７の化合物と比較して、シトクロームＰ_４５０活性の阻害の低減を実証する。本発明のある特定の化合物は、国際公開第２００７／０７２０１７号の実施例５６および実施例５７の化合物と比較して、ｈＥＲＧに対するより広範な治療指数も保有する。

本発明の特定の化合物は、例えば、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩を含み、ここで、別段の記載がない限り、Ｒ_１およびＲ_２のそれぞれは、上記に定義された、または以後の項（１）から（５）のいずれかで定義されている意味のいずれかを有する。
（１）Ｒ_１は、Ｂｒである。
（２）Ｒ_１は、Ｃｌである。
（３）Ｒ_２は、式ＩＩのものである。
（４）Ｒ_２は、本明細書で定義されている通りの式ＩＩＩのものである。
（５）Ｒ_２は、本明細書で定義されている通りの式ＩＩＩのものであり、Ｒ_ａは、水素である。
（６）Ｒ_２は、本明細書で定義されている通りの式ＩＩＩのものであり、Ｒ_ａは、メチルである。

適切には、Ｒ_１は、クロロである。

適切には、Ｒ_２は、式ＩＩ（すなわち、パラ−クロロフェニル）のものである。したがって、本発明の特定の群の化合物において、化合物は、以下に示す構造式Ｉａ：
［式中、Ｒ_１は、上記で定義された通りである］、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物を有する。

本発明のさらなる群の化合物において、Ｒ_２は、式ＩＩＩのものである。すなわち、化合物は、以下に示す構造式Ｉｂ：
［式中、Ｒ_１およびＲ_ａは、いずれも上記で定義された通りである］、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物を有する。

本発明の特定の化合物は、下記：
６−クロロ−７−（４−（４−クロロベンジル）ピペラジン−１−イル）−２−（１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン；
３−（（４−（６−クロロ−２−（１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−７−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）−１，２，４−オキサジアゾール；
３−（（４−（６−クロロ−２−（１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−７−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）−５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール
のいずれか１つ、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物を含む。

本発明の化合物の適切な薬学的に許容される塩は、例えば、十分に塩基性である本発明の化合物の酸付加塩、例えば、無機酸または有機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、トリフルオロ酢酸、ギ酸、クエン酸またはマレイン酸との例えば酸付加塩である。

本発明は、１つまたは複数の同位体置換を含む本明細書で定義されている通りの本発明の化合物も包含する。例えば、Ｈは、^１Ｈ、^２Ｈ（Ｄ）および^３Ｈ（Ｔ）を含む任意の同位体形態であってよく、Ｃは、^１２Ｃ、^１３Ｃおよび^１４Ｃを含む任意の同位体形態であってよく、他も同様である。

本発明のある特定の化合物は、溶媒和および非溶媒和形態、例えば水和形態等で存在し得ることも理解されたい。本発明は、オーロラキナーゼおよび／またはＦＬＴ３阻害活性を保有するすべてのそのような溶媒和形態を包含することを理解されたい。

本発明のある特定の化合物は多型性（ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）を示し得ること、ならびに本発明はオーロラキナーゼおよび／またはＦＬＴ３阻害活性を保有するすべてのそのような形態を包含することも理解されたい。

本発明の化合物は、若干数の異なる互変異性形態で存在し得、ここでいう本発明の化合物は、すべてのそのような形態を含む。誤解を避けるために、化合物が数種の互変異性形態の１つで存在し得、１つのみが具体的に記述されているまたは示されている場合であっても、その他すべてが本発明の化合物に内包される。本発明の化合物の互変異性形態の例は、上記式Ｉに示される形態の化合物ならびに以下に示す式（ＩＶ）および（Ｖ）
［式中、Ｒ_１およびＲ_２は、上記で定義された通りである］の互変異性体を含む。

アミン官能基を含有する本発明の化合物は、Ｎ−オキシドも形成し得る。本明細書で用いられるアミン官能基を含有する式Ｉの化合物は、Ｎ−オキシドも含む。化合物が数種のアミン官能基を含有する場合、１個または１個を超える窒素原子を酸化させてＮ−オキシドを形成することができる。Ｎ−オキシドの特定の例は、窒素含有複素環の窒素原子のＮ−オキシドである。Ｎ−オキシドは、過酸化水素または過酸（例えば、ペルオキシカルボン酸）等の酸化剤による対応するアミンの処理によって形成することができ、例えば、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｊｅｒｒｙ Ｍａｒｃｈ著、第４版、Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、頁を参照されたい。より詳細には、Ｎ−オキシドは、アミン化合物をｍ−クロロ過安息香酸（ＭＣＰＢＡ）と、例えばジクロロメタン等の不活性溶媒中で反応させる、Ｌ．Ｗ．Ｄｅａｄｙ（Ｓｙｎ．Ｃｏｍｍ．１９７７、７、５０９〜５１４）の手順によって作製され得る。

本発明の化合物は、ヒトまたは動物の体内で分解されて本発明の化合物を放出するプロドラッグの形態で投与され得る。プロドラッグは、本発明の化合物の物理的特性および／または薬物動態特性を変更するために使用され得る。プロドラッグは、本発明の化合物が、特性修飾（ｐｒｏｐｅｒｔｙ−ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ）基を結合させることができる適切な基または置換基を含有する場合に形成され得る。プロドラッグの例は、本発明の化合物中のアミノ基において形成され得るインビボでの開裂可能なアミド誘導体を含む。

したがって、本発明は、有機合成によって利用可能になる場合およびそのプロドラッグの開裂によってヒトまたは動物の体内で利用可能になる場合、上記で定義された通りの式Ｉの化合物を含む。したがって、本発明は、有機合成手段によって生成される式Ｉの化合物、また、ヒトまたは動物の体内で前駆体化合物の代謝によって生成されるような化合物も含み、すなわち、式Ｉの化合物は、合成的に生成された化合物または代謝的に生成された化合物であってよい。

式Ｉの化合物の適切な薬学的に許容されるプロドラッグは、望ましくない薬理学的活性がなく、かつ必要以上の毒性がなく、ヒトまたは動物の体への投与に適切であるとする合理的な医学的判断に基づくものである。

例えば下記の文書において、種々の形態のプロドラッグが記述されている。
ａ）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、第４２巻、３０９〜３９６頁、Ｋ．Ｗｉｄｄｅｒら編（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９８５）、
ｂ）Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ、Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、１９８５）、
ｃ）Ａ Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、Ｋｒｏｇｓｇａａｒｄ−ＬａｒｓｅｎおよびＨ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編、第５章「Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ」、Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ著、１１３〜１９１頁（１９９１）、
ｄ）Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ、８、１〜３８（１９９２）、
ｅ）Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、７７、２８５（１９８８）、
ｆ）Ｎ．Ｋａｋｅｙａら、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．、３２、６９２（１９８４）、
ｇ）Ｔ．ＨｉｇｕｃｈｉおよびＶ．Ｓｔｅｌｌａ、「Ｐｒｏ−Ｄｒｕｇｓ ａｓ Ｎｏｖｅｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ」、Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ、第１４巻、ならびに
ｈ）Ｅ．Ｒｏｃｈｅ（編）、「Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ」、Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ、１９８７。

式Ｉの化合物のインビボでの効果は、一部には、式Ｉの化合物の投与後、ヒトまたは動物の体内で形成される１つまたは複数の代謝産物によって発揮され得る。上記した通り、式Ｉの化合物のインビボでの効果は、前駆体化合物（プロドラッグ）の代謝によっても発揮され得る。

式Ｉの化合物は、例えば、可溶性部分（例えば、ＰＥＧポリマー）、それらが固体支持体と結合することを可能にする部分（例えば、ビオチン含有部分等）、および標的化リガンド（抗体または抗体断片等）等の他の基と（任意の適切な位置で）共有結合していてもよいことも理解されるものとする。

[合成]
以下で記述する合成法の説明において、および出発材料を調製するために使用される参照合成法において、溶媒の選択、反応雰囲気、反応温度、実験の持続時間およびワークアップ手順を含むすべての提案される反応条件は、当業者によって選択され得ることを理解されたい。

分子の種々の部分上に存在する官能基は、利用される試薬および反応条件に適合しなくてはならないことが、有機合成の当業者には理解される。

必要な出発材料は、有機化学の標準的な手順によって取得することができる。そのような出発材料の調製を、下記の代表的なプロセスの変形と併せておよび添付の実施例内に記述する。代替として、必要な出発材料は、有機化学者の通常の技量内である、例証されているものと類似する手順によって取得可能である。

以下で定義するプロセスにおける本発明の化合物の合成の間、またはある特定の出発材料の合成の間、それらの望まれない反応を防止するために、ある特定の置換基を保護することが望ましい場合があることが理解されよう。熟練した化学者であれば、そのような保護が必要とされること、およびそのような保護基をどのようにして導入し、後に除去することができるかを理解するであろう。

保護基の例については、該主題についての多くの一般的なテキストの１つ、例えば、Ｔｈｅｏｄｏｒａ Ｇｒｅｅｎ著（発行元：Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ）の「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」を参照されたい。保護基は、文献に記述されている、または問題の保護基の除去に適しているとして熟練した化学者に公知である任意の好都合な方法によって除去することができ、そのような方法は、分子中の他の場所における基の異常（ｄｉｓｔｕｒｂａｎｃｅ）を最小限にして、保護基の除去を達成するように選択される。

故に、反応物質が例えばアミノ、カルボキシまたはヒドロキシ等の基を含むのであれば、本明細書で述べられている反応のいくつかにおいて該基を保護することが望ましい場合がある。

例として、アミノまたはアルキルアミノ基に対して適切な保護基は、例えば、アシル基、例えばアセチル等のアルカノイル基、アルコキシカルボニル基、例えばメトキシカルボニル、エトキシカルボニルもしくはｔ−ブトキシカルボニル基、アリールメトキシカルボニル基、例えばベンジルオキシカルボニル、またはアロイル基、例えばベンゾイルである。上記の保護基のための脱保護条件は、保護基の選択により必然的に変動する。故に、例えば、アルカノイルもしくはアルコキシカルボニル基等のアシル基またはアロイル基は、例えば、アルカリ金属水酸化物、例えばリチウムまたは水酸化ナトリウム等の適切な塩基による加水分解によって除去され得る。代替として、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基等のアシル基は、例えば、塩酸、硫酸もしくはリン酸またはトリフルオロ酢酸のような適切な酸による処理によって除去され得、ベンジルオキシカルボニル基等のアリールメトキシカルボニル基は、例えば、パラジウム炭素（ｐａｌｌａｄｉｕｍ−ｏｎ−ｃａｒｂｏｎ）等の触媒上での水素化によって、またはルイス酸、例えばＢＦ_３．ＯＥｔ_２による処理によって除去され得る。第一級アミノ基に適切な代替的保護基は、例えば、アルキルアミン、例えばジメチルアミノプロピルアミンによる、またはヒドラジンによる処理によって除去され得るフタロイル基である。

本発明の化合物は、その全内容が参照により本明細書の一部となす、国際公開第２００７／０７２０１７号および国際公開第２００９／００１０２１号に記載されている一般的な合成技術を使用することによって調製されてもよい。

特定の態様では、本発明は、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物を合成する方法であって、
ａ）式Ａの化合物：
［式中、Ｒ_１およびＲ_２は、それぞれ上記で提示されている意味のいずれか１つを有する］を、適切な還元剤の存在下で１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルバルデヒドと反応させるステップと、
ｂ）その後、場合により、かつ必要ならば、
ｉ）存在する任意の保護基を除去するステップ、
ｉｉ）式Ｉの化合物を式Ｉの別の化合物に変換するステップ、および／または
ｉｉｉ）薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物を形成するステップ
を含む方法を提供する。

適切には、式Ａの化合物と１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルバルデヒドとの間の反応は、適切な溶媒の存在下で起こる。任意の適切な溶媒または溶媒混合物をこの反応に使用してもよい。適切な溶媒の例は、ＤＭＳＯ、水、ＤＭＦ、およびアルコール、例えばＥｔＯＨを含む。

適切には、反応は、水性Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_４ ^２６等の適切な還元剤の存在下で進行する。

当業者であれば、この反応を容易にするために使用する適正な反応条件を選択することもできるであろう。

反応を、昇温で行ってもよく、例えば、（溶媒の性質に依存して）５０〜１９０℃の範囲内の温度を使用してもよい。

当技術分野において周知の技術を使用して、得られた式Ｉの化合物を単離および精製することができる。

本明細書で定義されているプロセスは、特に式Ｉの化合物が２つ以上の異なる塩形態の混合物として形成される状況での、式Ｉの化合物を塩交換に供するステップをさらに含み得る。塩交換は、適切には、式Ｉの化合物を適切な固体支持体または樹脂上に固定すること、および化合物を適正な酸で溶離して、式Ｉの化合物の単塩を生み出すことを含む。

式Ａの化合物は、当技術分野において公知のプロセスによって調製することができる。

式Ａの中間体を介した式Ｉの化合物の調製のための適切な手順の例を、以下のスキーム１に示す。

２−アミノ−４，５−ジクロロ−３−ニトロピリジン（４，５−ジクロロ−３−ニトロピリジン−２−アミン）および２−アミノ−５−ブロモ−４−クロロ−３−ニトロピリジン（５−ブロモ−４−クロロ−３−ニトロピリジン−２−アミン）、２−アミノ−３−ニトロピリジン誘導体Ａの合成のための前駆体を、以前に記載した通りに^２６または２−アミノ−４−クロロ−３−ニトロピリジン（４−クロロ−３−ニトロピリジン−２−アミン）のハロゲン化^４０によって調製した。

［医薬組成物］
本発明のさらなる態様によれば、上記で定義された通りの本発明の化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物を、薬学的に許容される賦形剤または担体と会合して含む、医薬組成物が提供される。

本発明の組成物は、経口使用に（例えば錠剤、ロゼンジ剤、硬もしくは軟カプセル剤、水性もしくは油性懸濁剤、乳剤、分散性の散剤もしくは顆粒剤、シロップ剤またはエリキシル剤として）、局所使用に（例えばクリーム剤、軟膏剤、ゲル剤、または水性もしくは油性液剤もしくは懸濁剤として）、吸入による投与に（例えば微粉化散剤または液体エアゾール剤として）、注入による投与に（例えば微粉化散剤として）、または非経口投与に（例えば静脈内、皮下、筋肉内、腹腔内もしくは筋肉内投薬用の滅菌水性もしくは油性液剤として、または経直腸投薬用の坐剤として）適切な形態であってよい。

本発明の組成物は、当技術分野において周知の、従来の医薬添加剤を使用する従来の手順によって取得することができる。故に、経口使用が意図されている組成物は、例えば、１つまたは複数の着色剤、甘味剤、香味剤および／または保存剤を含有し得る。

増殖性疾患の療法において使用するための本発明の化合物の有効量は、温血動物、特にヒトにおいて感染症の症状を症候的に緩和するため、感染症の進行を減速させるため、または感染症の症状を持つ患者において悪化するリスクを低減させるために十分な量である。

単一剤形を生成するために１つまたは複数の添加剤と組み合わせられる活性成分の量は、治療されるホストおよび特定の投与ルートに応じて必然的に変動することになる。例えば、ヒトへの経口投与が意図されている製剤は、全組成の約５〜約９８重量パーセントまでで変動し得る適正かつ好都合な量の添加剤を配合した、例えば、０．５ｍｇから０．５ｇまでの活性剤（より適切には、０．５から１００ｍｇまで、例えば１から３０ｍｇまで）を概して含有することになる。

式Ｉの化合物の治療的または予防的目的のための用量のサイズは、医学の周知の原理に従い、状態の性質および重症度、動物または患者の年齢および性別、ならびに投与ルートに従って自然に変動することになる。

治療的または予防的目的のために本発明の化合物を使用する際、化合物は、概して、分割用量で必要とされると仮定すると、例えば、体重１ｋｇにつき０．１ｍｇから３０ｍｇの範囲内の日用量が受けられるように投与されることになる。概して、非経口ルートが用いられる場合には、より低用量が投与されることになる。故に、例えば、静脈内または腹腔内投与では、例えば、体重１ｋｇにつき０．１ｍｇから３０ｍｇの範囲内の用量が概して使用されることになる。同様に、吸入による投与では、例えば、体重１ｋｇにつき０．０５ｍｇから２５ｍｇの範囲内の用量が使用されることになる。特に錠剤形態での経口投与も適切となり得る。典型的には、単位剤形は、約０．５ｍｇから０．５ｇの本発明の化合物を含有することになる。

［治療的使用および用途］
本発明の化合物は、オーロラキナーゼおよびＦＬＴ３活性の阻害剤である。

故に、別の態様では、本発明は、細胞においてオーロラキナーゼ活性および／またはＦＬＴ３を阻害する方法であって、前記細胞に、本明細書で定義されている通りの式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物を投与するステップを含む方法を提供する。

さらなる態様では、本発明は、オーロラキナーゼ活性および／またはＦＬＴ３をインビトロまたはインビボで阻害する方法であって、細胞を、有効量の本明細書で定義されている通りの化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物と接触させるステップを含む方法を提供する。

別の態様では、本発明は、そのような阻害を必要とするヒトまたは動物対象においてオーロラキナーゼ活性および／またはＦＬＴ３を阻害する方法であって、前記対象に、有効量の本明細書で定義されている通りの式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物を投与するステップを含む方法を提供する。

オーロラキナーゼは、オーロラキナーゼＡ、ＢまたはＣであってもよい。

一態様では、本発明は、療法において使用するための、式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物、または本明細書で定義されている通りの医薬組成物を提供する。

別の態様では、本発明は、オーロラキナーゼ活性（および／またはＦＬＴ３活性）に関連する疾患または状態の治療において使用するための、本明細書で定義されている通りの式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物を提供する。

別の態様では、本発明は、オーロラキナーゼ活性（および／またはＦＬＴ３活性）に関連する疾患または状態の治療において使用するための薬剤の製造における、本明細書で定義されている通りの式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物の使用を提供する。

また、別の態様では、本発明は、ヒトまたは動物対象において増殖性障害を治療する方法であって、前記対象に、治療上許容される量の本明細書で定義されている通りの式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物を投与するステップを含む方法を提供する。

また、別の態様では、本発明は、増殖性障害の治療において使用するための、本明細書で定義されている通りの式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物を提供する。

また、別の態様では、本発明は、増殖性障害の治療において使用するための薬剤の製造における、本明細書で定義されている通りの式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物の使用を提供する。

別の態様では、本発明は、がんの治療において使用するための、本明細書で定義されている通りの化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物、または医薬組成物を提供する。

また、別の態様では、本発明は、がんの治療において使用するための薬剤の製造における、本明細書で定義されている通りの化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物の使用を提供する。

また、別の態様では、本発明は、そのような治療を必要とする患者においてがんを治療する方法であって、前記患者に、治療有効量の本明細書で定義されている通りの化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物、または医薬組成物を投与するステップを含む方法を提供する。

本発明の化合物は、例えば、結腸直腸がん、乳がん、肺がん、前立腺がん、膵臓がんもしくは膀胱および腎臓がんまたは白血病もしくはリンパ腫の治療に有用であり得る。

特に、本発明の化合物は、白血病の治療に有用である。白血病（細胞株および患者コホート）において、オーロラキナーゼの高い発現が実証されている^{３０〜３３}。加えて、ＦＬＴ３遺伝子の遺伝子内縦列重複（ＦＬＴ３−ＩＴＤ）は、恒常的なＦＬＴ３キナーゼ活性を結果として生じる^３４。ＡＭＬを有する成人の２０〜３５％および子供の１５％においてＦＬＴ３−ＩＴＤが有意に生じ、両年齢群において予後不良をもたらしている^３５。

したがって、特定の実施形態では、化合物は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）および多発性骨髄腫等の白血病の治療に有用である。本発明の化合物は、神経芽細胞腫の治療に有用であることも想定されている。

本発明の化合物は、標準的な療法による治療に失敗した患者において特に有益であることが推測される。白血病（例えば、ＡＭＬ）を有する高齢患者（例えば、６０歳を超える）はオーロラキナーゼ阻害について利益を得ると推測されるので、本発明の化合物はこのような患者の治療にも価値があるものと予測される。

本発明の化合物はまた、白血病（例えば、ＦＬＴ３変異型ＡＭＬおよび小児ＡＭＬと新たに診断された）、および神経芽細胞腫を有する子供の治療に価値があると推測される。

［投与ルート］
本発明の化合物、または活性化合物を含む医薬組成物は、全身／末梢または局所的のいずれであるかにかかわらず（すなわち、所望の作用の部位に）、任意の好都合な投与ルートによって対象に投与され得る。

投与ルートは、経口（例えば、摂取による）；口腔；舌下；経皮（例えば、パッチ剤、硬膏剤等によるものを含む）；経粘膜（例えば、パッチ剤、硬膏剤等によるものを含む）；鼻腔内（例えば、鼻腔用スプレーによるもの）；眼内（例えば、点眼剤によるもの）；経肺（例えば、エアゾール剤を介して、例えば、口または鼻を経由して使用する、例えば吸入または注入療法によるもの）；経直腸（例えば、坐剤または浣腸剤によるもの）；経膣（例えば、ペッサリーによるもの）；非経口、例えば、皮下、皮内、筋肉内、静脈内、動脈内、心臓内、くも膜下腔内、髄腔内、嚢内、被膜下、眼窩内、腹腔内、気管内、表皮下、関節内、くも膜下および胸骨内を含む注射によるもの；デポー剤または容器（ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ）の、例えば皮下または筋肉内への移植によるものを含むがこれらに限定されない。

［併用療法］
本発明の化合物は、単剤療法として単独で投与されてもよく、１つまたは複数のさらなる治療剤と組み合わせて投与されてもよい。当然ながら、１つまたは複数のさらなる治療剤の選択は、治療される疾患または状態およびその重症度に応じて変動することになる。

がんなどの増殖障害を治療するために療法を組み合わせて使用することは、一般的である。したがって、上記で定義された抗増殖治療は、単独療法として適用されてもよく、または本発明の化合物に加えて、従来の手術または放射線療法または化学療法も伴い得る。そのような化学療法は、下記のカテゴリーの抗腫瘍剤の１つまたは複数を含み得る。
（ｉ）アルキル化剤（例えばシスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、シクロホスファミド、ナイトロジェンマスタード、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、テモゾラミド（ｔｅｍｏｚｏｌａｍｉｄｅ）およびニトロソウレア）；代謝拮抗物質（例えばゲムシタビン、ならびに５−フルオロウラシルおよびテガフールのようなフロロピリミジン系、ラルチトレキセド、メトトレキサート等の抗葉酸剤、シトシンアラビノシド、およびヒドロキシウレア）；抗腫瘍抗生物質（例えばアドリアマイシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダウノマイシン、エピルビシン、イダルビシン、マイトマイシン−Ｃ、ダクチノマイシンおよびミトラマイシンのようなアントラサイクリン系）；抗有糸分裂剤（例えばビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシンおよびビノレルビンのようなビンカアルカロイド系、ならびにタキソールおよびタキソテールのようなタキソイド系、ならびにポロキナーゼ阻害剤）；ならびにトポイソメラーゼ阻害剤（例えばエトポシドおよびテニポシドのようなエピポドフィロトキシン系、アムサクリン、トポテカンならびにカンプトセシン）等の、内科的腫瘍学において使用される通りの他の抗増殖／抗新生物薬およびそれらの組合せ；
（ｉｉ）抗エストロゲン剤（ａｎｔｉｏｅｓｔｒｏｇｅｎ）（例えばタモキシフェン、フルベストラント、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェンおよびイドキシフェン）、抗アンドロゲン剤（例えばビカルタミド、フルタミド、ニルタミドおよび酢酸シプロテロン）、ＬＨＲＨアンタゴニストまたはＬＨＲＨアゴニスト（例えばゴセレリン、リュープロレリンおよびブセレリン）、プロゲストゲン（例えば酢酸メゲストロール）、アロマターゼ阻害剤（例えばアナストロゾール、レトロゾール、ボラゾールおよびエキセメスタン）ならびにフィナステライド等の５α−レダクターゼの阻害剤等の、細胞増殖抑制剤；
（ｉｉｉ）抗浸潤剤［例えば、４−（６−クロロ−２，３−メチレンジオキシアニリノ）−７−［２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エトキシ］−５−テトラヒドロピラン−４−イルオキシキナゾリン（ＡＺＤ０５３０；国際特許出願の国際公開第０１／９４３４１号）、Ｎ−（２−クロロ−６−メチルフェニル）−２−｛６−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル］−２−メチルピリミジン−４−イルアミノ｝チアゾール−５−カルボキサミドのようなｃ−Ｓｒｃキナーゼファミリーの阻害剤（ダサチニブ、ＢＭＳ−３５４８２５；Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、２００４、４７、６６５８〜６６６１）およびボスチニブ（ＳＫＩ−６０６）、ならびにマリマスタットのようなメタロプロテイナーゼ阻害剤、ヘパラナーゼに対するウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子受容体機能または抗体の阻害剤］；
（ｉｖ）成長因子機能の阻害剤：例えば、そのような阻害剤は、成長因子抗体および成長因子受容体抗体（例えば抗ｅｒｂＢ２抗体トラスツズマブ［Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標）］、抗ＥＧＦＲ抗体パニツムマブ［Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標）］、抗ｅｒｂＢ１抗体セツキシマブ［エルビタックス（登録商標）、Ｃ２２５］およびＳｔｅｒｎら、Ｃｒｉｔｉｃａｌ ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ ｏｎｃｏｌｏｇｙ／ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ、２００５、第５４巻、１１〜２９頁によって開示されている任意の成長因子または成長因子受容体抗体）を含み；そのような阻害剤は、チロシンキナーゼ阻害剤、例えば上皮成長因子ファミリーの阻害剤（例えば、Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−６−（３−モルホリノプロポキシ）キナゾリン−４−アミン（ゲフィチニブ、ＺＤ１８３９）、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）キナゾリン−４−アミン（エルロチニブ、ＯＳＩ−７７４）および６−アクリルアミド−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−（３−モルホリノプロポキシ）−キナゾリン−４−アミン（ＣＩ １０３３）等のＥＧＦＲファミリーのチロシンキナーゼ阻害剤、ラパチニブ等のｅｒｂＢ２チロシンキナーゼ阻害剤）；肝細胞成長因子ファミリーの阻害剤；インスリン成長因子ファミリーの阻害剤；イマチニブおよび／またはニロチニブ（ＡＭＮ１０７）等の血小板由来の成長因子ファミリーの阻害剤；セリン／トレオニンキナーゼの阻害剤（例えば、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、例えばソラフェニブ（ＢＡＹ４３−９００６）、チピファルニブ（Ｒ１１５７７７）およびロナファルニブ（ＳＣＨ６６３３６）等のＲａｓ／Ｒａｆシグナリング阻害剤）、ＭＥＫおよび／またはＡＫＴキナーゼを経由する細胞シグナリングの阻害剤、ｃ−ｋｉｔ阻害剤、ａｂｌキナーゼ阻害剤、ＰＩ３キナーゼ阻害剤、Ｐｌｔ３キナーゼ阻害剤、ＣＳＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤、ＩＧＦ受容体（インスリン様成長因子）キナーゼ阻害剤；オーロラキナーゼ阻害剤（例えばＡＺＤ１１５２、ＰＨ７３９３５８、ＶＸ−６８０、ＭＬＮ８０５４、Ｒ７６３、ＭＰ２３５、ＭＰ５２９、ＶＸ−５２８およびＡＸ３９４５９）ならびにＣＤＫ２および／またはＣＤＫ４阻害剤等のサイクリン依存性キナーゼ阻害剤も含む；
（ｖ）血管内皮成長因子の効果を阻害するもの等の抗血管新生剤［例えば、抗血管内皮細胞成長因子抗体ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（商標））、ならびに例えばバンデタニブ（ＺＤ６４７４）、バタラニブ（ＰＴＫ７８７）、スニチニブ（ＳＵ１１２４８）、アクシチニブ（ＡＧ−０１３７３６）、パゾパニブ（ＧＷ７８６０３４）および４−（４−フルオロ−２−メチルインドール−５−イルオキシ）−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キナゾリン（ＡＺＤ２１７１；国際公開第００／４７２１２号内の実施例２４０）等のＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ阻害剤、国際特許出願の国際公開第９７／２２５９６号、同第９７／３００３５号、同第９７／３２８５６号および同第９８／１３３５４号で開示されているもの等の化合物、ならびに他の機構によって働く化合物（例えばリノミド、インテグリンαｖβ３機能の阻害剤、およびアンギオスタチン）］；
（ｖｉ）コンブレタスタチンＡ４、ならびに国際特許出願の国際公開第９９／０２１６６号、同第００／４０５２９号、同第００／４１６６９号、同第０１／９２２２４号、同第０２／０４４３４号および同第０２／０８２１３号で開示されている化合物等の血管損傷剤；
（ｖｉｉ）エンドセリン受容体アンタゴニスト、例えばジボテンタン（ＺＤ４０５４）またはアトラセンタン；
（ｖｉｉｉ）アンチセンス療法、例えばＩＳＩＳ２５０３、抗ｒａｓアンチセンス等の、上記に掲載されている標的を検出するもの；
（ｉｘ）例えば、異常（ａｂｅｒｒａｎｔ）なｐ５３または異常なＢＲＣＡ１もしくはＢＲＣＡ２等の異常な遺伝子を置き換えるための腫瘍退縮アデノウイルスアプローチ、シトシンデアミナーゼ、チミジンキナーゼまたは細菌のニトロレダクターゼ酵素を使用するもの等のＧＤＥＰＴ（遺伝子指向性酵素プロドラッグ療法）アプローチ、および多剤耐性遺伝子療法等の化学療法または放射線療法に対する患者の耐容性を増大させるためのアプローチを組み合わせて、本発明の化合物を使用することを含む遺伝子療法アプローチ；ならびに
（ｘ）例えば、インターロイキン２、インターロイキン４または顆粒球マクロファージコロニー刺激因子等のサイトカインのトランスフェクション等、患者の腫瘍細胞の免疫原性を増大させるためのｅｘ−ｖｉｖｏおよびインビボアプローチ、Ｔ細胞アネルギーを減少させるためのアプローチ、サイトカインをトランスフェクト（ｔｒａｎｓｆｅｃｔ）した樹枝状細胞等のトランスフェクトした免疫細胞を使用するアプローチ、サイトカインをトランスフェクトした腫瘍細胞株を使用するアプローチ、ならびに抗イディオタイプ抗体を使用するアプローチを含む、免疫療法アプローチ。

そのような共同／併用治療は、治療の個々の成分の同時、順次または別個の投薬によって実現され得る。そのような併用生成物は、本発明の化合物を上記した投薬量範囲内で、および他の薬学的活性剤をその承認された投薬量範囲内で用いる。

本発明の特定の態様によれば、上記で定義された通りの本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物と、別の治療剤（例えば、抗腫瘍剤）とを含む、本明細書で定義されている通りのタンパク質キナーゼ活性が関係している疾患または状態（例えば、がん）の治療における使用に適切な組合せが提供される。

本発明のこの態様によれば、上記で定義された通りの本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物と、上記（ｉ）〜（ｉｘ）に掲載されている抗腫瘍剤のいずれか１つとを含む、がん（例えば固形腫瘍を伴うがん）の治療において使用するのに適切な組合せが提供される。

本発明のさらなる態様では、本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物を、本明細書で上記（ｉ）〜（ｉｘ）に掲載されているものから選択される抗腫瘍剤と組み合わせて提供される。

本明細書で、用語「組合せ」が使用される場合、これは、同時、別個または順次の投与を指すことを理解されたい。本発明の一態様では、「組合せ」は同時投与を指す。本発明の別の態様では、「組合せ」は別個投与を指す。本発明のさらなる態様では、「組合せ」は順次投与を指す。投与が順次または別個である場合、第二の成分の投与における遅延は、併用の有益な効果を喪失するようなものであってはならない。

本発明のさらなる態様によれば、本発明の化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはそれらの溶媒和物を、１つまたは複数のさらなる治療剤（例えば、本明細書で上記（ｉ）〜（ｉｘ）に掲載されているものから選択される抗腫瘍剤）と組み合わせ、薬学的に許容される賦形剤または担体と会合して含む、医薬組成物が提供される。

本発明の化合物は、高齢患者（すなわち、６０歳を超える患者）はオーロラキナーゼ阻害（患者のＦＬＴ３状態によらず）について大いに利益を得る可能性があるので、このような患者の治療に対し、既存の標準治療との併用療法の一部として、特に有用であると推測される。

本発明の化合物はまた、白血病（例えば、ＡＭＬ）または神経芽細胞腫を患う子供の治療に対し、既存の標準治療との併用療法の一部として、特に有用であると推測される。

無胸腺マウスにおけるＭＶ４−１１ヒト腫瘍異種移植片に対する、実施例１の化合物の有効性を示す。（Ａ）は相対腫瘍体積±ＳＥＭを示し、（Ｂ）はマウス体重を示す。 （Ａ）は、５０および１００ｍｇ／ｋｇの投薬後における総血漿および腫瘍薬物濃度ならびに遊離血漿薬物濃度を示し、試料は最終投薬の２時間後に採取したものである。（Ｂ）実施例１の化合物は、ＭＶ４−１１ヒト腫瘍異種移植片において、Ｓ１０におけるヒストンＨ−３リン酸化、およびＹ６９４におけるＳＴＡＴ５のリン酸化を阻害する（４日間の研究）。腫瘍試料は、最終投薬の２時間後に得た。総ヒストンＨ３、総Ｓｔａｔ５およびＧＡＰＤＨをローディングコントロールとして使用した。

［化合物の合成］
＜実施例１〜３＞
[一般的な材料および方法]
市販の出発材料、試薬および乾燥溶媒は、供給された状態のままで使用した。フラッシュカラムクロマトグラフィーは、Ｍｅｒｃｋシリカゲル６０（０．０２５〜０．０４ｍｍ）を使用して実施した。カラムクロマトグラフィーは、アイソルート（ｉｓｏｌｕｔｅ）フラッシュシリカカラムを使用するフラッシュマスターパーソナルユニット、またはＢｉｏｔａｇｅフラッシュシリカカートリッジを使用するＢｉｏｔａｇｅ ＳＰ１精製システムでも実施した。分取ＴＬＣは、ＡｎａｌｔｅｃｈまたはＭｅｒｃｋプレートで実施した。イオン交換クロマトグラフィーは、酸性アイソルートフラッシュＳＣＸ−ＩＩカートリッジを使用して実施した。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒアバンス５００で記録した。試料は、重水素化溶媒中の溶液として調製し、適正な内部非重水素化溶媒ピークまたはテトラメチルシランを基準とした。化学シフトは、テトラメチルシランから低磁場のｐｐｍ（δ）を記録した。ＬＣ／ＭＳ分析は、Ｗａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ ２７９５分離モジュールを備えたＷａｔｅｒｓ ＬＣＴおよびＥＳＩ源を備えたＷａｔｅｒｓ／Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＬＣＴ飛行時間型質量分析計と連結されたＷａｔｅｒｓ ２４８７二波長吸光度検出器で実施した。分析分離は、３０℃で、ＭｅｒｃｋクロモリススピードＲＯＤカラム（ＲＰ−１８ｅ、５０×４．６ｍｍ）で、２ｍＬ／分の流速を使用し、３．５分間の勾配溶離にて、２５４ｎｍにおける検出、または、ＭｅｒｃｋピュロスファーＳＴＡＲカラム（ＲＰ−１８ｅ、３０×４ｍｍ）で、１．５ｍＬ／分の流速を使用し、３．５分間の勾配溶離にて、２５４ｎｍにおける検出のいずれかで行った。移動相は、いずれも０．１％のギ酸を含有するメタノール（溶媒Ａ）および水（溶媒Ｂ）の混合物であった。勾配溶離は、次の通りであった。すなわち、２．２５分間にわたって１：９（Ａ／Ｂ）から９：１（Ａ／Ｂ）、０．７５分間９：１（Ａ／Ｂ）、次いで０．３分間にわたって１：９（Ａ／Ｂ）への復帰、最後に０．２分間１：９（Ａ／Ｂ）であった。

ＬＣ−ＨＲＭＳ分析は、Ａｇｉｌｅｎｔ １２００シリーズＨＰＬＣ、およびデュアルマルチモードＡＰＣＩ／ＥＳＩ源を備えた６５２０四重極の飛行時間型質量分析計と連結されたダイオードアレイ検出器でも実施した。分析分離は、３０℃で、ＭｅｒｃｋピュロスファーＳＴＡＲカラム（ＲＰ−１８ｅ、３０×４ｍｍ）で、１．５ｍＬ／分の流速を使用し、４分間の勾配溶離にて、２５４ｎｍにおける検出で行った。移動相は、いずれも０．１％のギ酸を含有するメタノール（溶媒Ａ）および水（溶媒Ｂ）の混合物であった。勾配溶離は、次の通りであった。すなわち、２．５分間にわたって１：９（Ａ／Ｂ）から９：１（Ａ／Ｂ）、１分間９：１（Ａ／Ｂ）、次いで０．３分間にわたって１：９（Ａ／Ｂ）への復帰、最後に０．２分間１：９（Ａ／Ｂ）であった。下記の参照質量をＨＲＭＳ分析に使用した：カフェイン［Ｍ＋Ｈ］^＋１９５．０８７６５２；（ヘキサキス（１Ｈ，１Ｈ，３Ｈ−テトラフルオロペントキシ）ホスファゼン［Ｍ＋Ｈ］^＋９２２．００９７９８）およびヘキサキス（２，２−ジフルオロエトキシ）ホスファゼン［Ｍ＋Ｈ］^＋６２２．０２８９６またはレセルピン［Ｍ＋Ｈ］^＋６０９．２８０６５７。

＜実施例１ ６−クロロ−７−（４−（４−クロロベンジル）ピペラジン−１−イル）−２−（１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジンの調製＞
[４−クロロ−３−ニトロピリジン−２−アミン^４０］

氷浴中で冷却された２−アミノ−４−クロロピリジン（０．４８０ｇ、３．７５ｍｍｏｌ）の入った１００ｍＬの丸底フラスコに、濃硫酸（５．４ｇ）を添加した。反応混合物を５分間攪拌し、次いで硝酸（７０％、０．３６ｇ）を滴下して添加した。反応混合物を０℃で１０分間攪拌し、次いで５５℃に加熱し、この温度で１時間攪拌した。これを室温に冷却し、氷水で希釈した。１０％ＮａＯＨ水溶液を用いて、ｐＨを慎重に約７．５に調整すると、黄色の沈殿物を形成した。これを濾過除去し、水で洗浄し、Ｐ_２Ｏ_５上で真空乾燥させた。生成物をシリカカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタンで溶離）で精製して、溶離順に、４−クロロ−３−ニトロピリジン−２−アミンを黄色固体（０．２１０ｇ、３２％）として得た。¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) 6.87 (d, J = 5.2 Hz, 1H, ピリジンC-H), 7.21 (s, 2H, NH₂), 8.11 (d, J = 5.2 Hz, 1H, ピリジンC-H)であった。

４−クロロ−５−ニトロピリジン−２−アミン（０．０８０ｇ、１２％）は、¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) 6.58 (s, 1H, ピリジンC-H) 7.58 (s, 2H, NH₂), 8.79 (s, 1H, ピリジンC-H)である。
［４，５−ジクロロ−３−ニトロピリジン−２−アミン］

４−クロロ−３−ニトロピリジン−２−アミン（０．１０ｇ、０．５８ｍｍｏｌ）を乾燥アセトニトリル（２０ｍＬ）に溶解した。次いで、攪拌した溶液にＮ−クロロスクシンイミド（０．０９４ｇ、０．７０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を８０℃で１時間加熱した。揮発性物質を真空除去し、残留物をシリカカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタンで溶離）で精製して、標題化合物を淡褐色粉末（０．１２５ｇ、８５％）として提供した。¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) 7.35 (s, 2H, NH₂), 8.36 (s, 1H, 6-H)であった。
［５−クロロ−４−（４−（４−クロロベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−ニトロピリジン−２−アミン］

２−アミノ−４，５−ジクロロ−３−ニトロピリジン（０．１５２ｇ、０．７３ｍｍｏｌ）およびイソプロパノール（２２ｍＬ）の混合物に、１−（４−クロロベンジル）ピペラジン（０．１６５ｇ、０．７８ｍｍｏｌ）を添加し、続いてジイソプロピルエチルアミン（０．１７ｍＬ、０．９７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４５℃で１８時間加熱し、次いで室温に冷却し、イソプロパノール（５ｍＬ）で希釈した。沈殿物を濾過により収集し、イソプロパノールおよびジエチルエーテルで洗浄した。こうして、標題化合物を黄色固体（０．２１５ｇ、７７％）として得た。¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) 2.48 (br s, DMSOピークより不明確, 4H, ピペラジンC-H), 3.06 (br t, J = 4.3 Hz, 4H, ピペラジンC-H), 3.52 (s, 2H, NCH₂C₆H₄Cl), 6.95 (s, 2H, NH₂), 7.35 (d, J = 8.5 Hz, 2H)および7.38 (d, J = 8.5 Hz, 2H) (3,5-ArHおよび2,6-ArH), 8.06 (s, 1H, 6-H); LC - MS (ESI, m/z): Rt = 1.70分 - 382, 384, 386 [(M+H)⁺, Cl₂同位体パターン]であった。
［６−クロロ−７−（４−（４−クロロベンジル）ピペラジン−１−イル）−２−（１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン］

５−クロロ−４−（４−（４−クロロベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−ニトロピリジン−２−アミン（０．０７６ｇ、０．２０ｍｍｏｌ）およびＥｔＯＨ（４．０ｍＬ）の混合物に、１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルバルデヒド（０．０２７ｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を添加し、続いて新たに調製したＮａ_２Ｓ_２Ｏ_４（１Ｍ；０．８５ｍＬ、０．８５ｍｍｏｌ）の水溶液を添加した。反応混合物を８０℃で２４時間攪拌し、次いでこれを室温に冷却し、真空で濃縮し、残留物をシリカゲルに吸収させ、１０ｇのアイソルートシリカカラム上に置いた。酢酸エチル／ジクロロメタン（ｖ／ｖで１：１）で溶離し、次いで酢酸エチル／ジクロロメタン（ｖ／ｖで１：１）中の４％メタノールにより、ジエチルエーテルによる粉砕後、標題化合物を白色固体（０．０２３ｇ、２５％）として生じさせた。

¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) 2.51 (s, 溶媒ピークにより不明確, ピラゾール3-CH₃), 2.57 (br s, 4H, ピペラジンC-H), 3.54 (s, 2H, N-CH₂C₆H₄Cl), 3.68 (br s, 4H, ピペラジンC-H), 3.84 (s, 3H, ピラゾールN-Me), 7.37 (d, J = 8.5 Hz, 2H)および7.40 (d, J = 8.5 Hz, 2H) (C₆H₄Cl), 8.02 (s, 1H),および8.18 (s, 1H) (ピラゾール5-H,およびイミダゾ[4,5-b]ピリジン5-H), 12.95 (br s, 1H, イミダゾ[4,5-b]ピリジンN-H); LC - MS (ESI, m/z): Rt = 1.97分 - 456, 458, 460 [(M+H)⁺, Cl₂同位体パターン]であった。

ＨＲＭＳは、実測値：４５６．１４５７、計算値Ｃ_２２Ｈ_２４Ｃｌ_２Ｎ_７（Ｍ＋Ｈ）^＋：４５６．１４６５であった。

この化合物はまた、０．８０ｇから１．８０ｇまでの範囲のバルク量および５４％から７０％までの範囲の収率で生成した。同じ方法を上記した通りに使用したが、ワークアップ中、反応混合物を水とクロロホルムとに分配した。水層をクロロホルムおよび酢酸エチルで抽出し、合わせた有機物を乾燥させ、真空で濃縮した。ＥｔＯＨの代わりにＤＭＳＯも溶媒として使用し、この場合、反応混合物を１２０℃で３時間攪拌した。

＜実施例２ ３−（（４−（６−クロロ−２−（１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−７−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）−１，２，４−オキサジアゾールの調製＞
[ｔｅｒｔ−ブチル４−（（１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート]

ＣＨ_２Ｃｌ_２（３０ｍＬ）中のＢｏｃ−ピペラジン（５７１ｍｇ、３．０７ｍｍｏｌ）および３−（クロロメチル）−１，２，４−オキサジアゾール（４００ｍｇ、３．３７ｍｍｏｌ）の溶液にトリエチルアミン（１．７０ｍＬ、１２．３ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を５０℃で２２時間攪拌した後、真空で濃縮して、粗油状白色固体を得た。ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２（５％）で溶離するシリカゲル（４×１２）上でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製を遂行し、標題化合物を白色固体（５５５ｍｇ、６７％）として得た。¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃) 1.43 (s, 9H, C(CH₃)₃), 2.52 (見かけ(ａｐｐ) t, J = 4.9 Hz, 4H, CH₂), 3.45 (見かけ t, J = 4.9 Hz, 4H, CH₂), 3.78 (s, 2H, CH₂C-), 8.71 (s, 1H, CH_ar); LC - MS (ESI, m/z): Rt = 1.67分 - 213 (M - ^tBu)⁺, 169 (M - Boc)⁺であった。
［４−（４−（（１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）メチル）ピペラジン−１−イル）−５−クロロ−３−ニトロピリジン−２−アミン］

ＣＨ_２Ｃｌ_２（１８ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（（１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）メチル）ピペラジン−１−カルボキシレート（２１３ｍｇ、０．７９０ｍｍｏｌ）の溶液にＴＦＡ（１．８ｍＬ、２３．８ｍｍｏｌ）を添加し、溶液を室温で１．５時間攪拌した。反応物を真空で濃縮し、トルエン（×２）と共沸させ、真空デシケーター（ＫＯＨを収容している）内で終夜乾燥させて、黄色油を得た。粗製油を^ｉＰｒＯＨ（４．４ｍＬ）に溶解し、２−アミノ−３−ニトロ−４，５−ジクロロピリジン（１９０ｍｇ、０．７５２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（５２０μｌ、３．００ｍｍｏｌ）の両方を添加した。溶液を５０℃で４時間攪拌した。冷却すると黄色の沈殿物が生じ、これを濾過し、Ｅｔ_２Ｏで洗浄し、真空で乾燥して、標題化合物を黄色固体（１６５ｍｇ、０．４８６、６５％）として得た。濾液を真空で濃縮して、油状黄色固体７１５ｍｇを得た。ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（４０〜５０％）で溶離するシリカゲル（４×１１）上でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製を遂行し、標題化合物を黄色固体（４２ｍｇ、１６％）として得た。

¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃) 2.74 (見かけ t, J = 4.1 Hz, 4H, -CH₂-), 3.25 (t, J = 4.8 Hz, 4H, -CH₂-), 3.85 (s, 2H, -CH₂C-), 5.77 (s, 2H, NH₂), 7.99 (s, 1H, CH_ar), 8.72 (s, 1H, -C(Cl)CH-)であった。

LC - MS (ESI, m/z): Rt = 1.56分 - 340, 342 [(M + H)⁺, Cl同位体パターン]であった。
［３−（（４−（６−クロロ−２−（１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−７−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）−１，２，４−オキサジアゾール］

ＥｔＯＨ（３．４ｍＬ）中の４−（４−（（１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）メチル）ピペラジン−１−イル）−５−クロロ−３−ニトロピリジン−２−アミン（５０．０ｍｇ、０．１４７ｍｍｏｌ）および１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルバルデヒド（１９．２ｍｇ、０．１５５ｍｍｏｌ）の溶液に１Ｍ Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_４（０．５８８ｍＬ、０．５８８ｍｍｏｌ、新たに調製）を添加し、溶液を８０℃に加熱し、空気に触れさせながら１５時間攪拌した。冷却したら、反応物を真空で蒸発させ、乾燥した残留物をシリカに充填した。ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２（５〜７．５％）で溶離するシリカゲル（２×１４）上でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製を遂行し、標題化合物を淡黄色固体（２６ｍｇ、４３％）として得た。

¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃) 2.58 (s, 3H, CH₃), 2.81 (見かけ t, J = 4.4 Hz, 4H, CH₂), 3.82 (見かけ s, 4H, CH₂), 3.85 (s, 3H, NCH₃), 3.88 (s, 2H, -CH₂-), 7.62 (br s, 1H, CH_ar), 7.87 (br s, 1H, CH_ar), 8.74 (s, 1H, CH_ar), 13.04 (s, 1H, NH)であった。

LC - MS (ESI, m/z): Rt = 1.91分 - 414, 416 [(M + H)⁺, Cl同位体パターン]であった。

HRMSは、実測値: 436.1374、C₁₈H₂₀N₉OClNa (M+Na)⁺の計算値: 436.1372であった。

＜実施例３ ３−（（４−（６−クロロ−２−（１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−７−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）−５−メチル−１，２，４−オキサジアゾールの調製＞
[２−アミノ−５−クロロ−４−（４−（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）メチルピペラジン−１−イル）−３−ニトロピリジン]

１−［（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）メチル］ピペラジン塩酸塩（２１７ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）および２−アミノ−４，５−ジクロロ−３−ニトロピリジン（２０８ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を２−プロパノール（５ｍＬ）中で攪拌し、ジイソプロピルエチルアミン（５２３μＬ、３８７ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を攪拌し、４５℃で２３時間加熱した。反応物を冷却し、生成物を濾過除去し、２−プロパノールで洗浄した。真空での乾燥により、生成物（２４６ｍｇ、６９％）を得た。¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃,) 2.63 (s, 3H, CH₃), 2.77 (br m, 4H, ピペラジンC-H), 3.29 (m, 4H, ピペラジンC-H), 3.76 (s, 2H, CH₂), 5.27 (s, 2H, NH₂), 8.02 (s, 1H, ピリジン6-H)であった。

LC - MS (ESI, m/z): Rt = 1.66分 - 354 (M + H)⁺, ³⁵Cl同位体であった。
［３−（（４−（６−クロロ−２−（１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−７−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）−５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール］

ＥｔＯＨ（３．８ｍＬ）中の５−クロロ−４−（４−（（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）メチル）ピペラジン−１−イル）−３−ニトロピリジン−２−アミン（６０．０ｍｇ、０．１７０ｍｍｏｌ）および１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルバルデヒド（２２．２ｍｇ、０．１７９ｍｍｏｌ）の溶液に１Ｍ Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_４（０．６７８ｍＬ、０．６７８ｍｍｏｌ、新たに調製）を添加し、溶液を８０℃に加熱し、空気に触れさせながら１６時間攪拌した。冷却したら、反応物を真空で蒸発させ、乾燥した残留物をシリカに充填した。ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２（５〜７．５％）で溶離するシリカゲル（３×１４）上でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製を遂行し、標題化合物を淡黄色固体として得た。ＥｔＯＡｃ／Ｅｔ_２Ｏ中での再結晶により、標題化合物をオフホワイト色固体（２０ｍｇ、２７％）として得た。濾液を真空で濃縮し、さらなる量の標題化合物を淡黄色固体（１２ｍｇ、１６％）として得た。¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃) 2.60 (s, 3H, CH₃), 2.62 (s, 3H, CH₃), 2.81 (見かけ t, J = 4.5 Hz, 4H, CH₂), 3.76 (s, 2H, -CH₂-), 3.87 (見かけ s, 4H, CH₂), 3.90 (s, 3H, NCH₃), 7.77 (br s, 1H, CH_ar), 7.96 (br s, 1H, CH_ar), 12.18 (s, 1H, NH)であった。

LC - MS (ESI, m/z): Rt = 1.95分 - 428, 430 [(M + H)⁺, Cl同位体パターン]であった。

HRMSは、実測値: 450.1527、C₁₉H₂₂N₉OClNa (M+Na)⁺の計算値: 450.1528であった。

［実施例１〜３の化合物の評価］
［一般的な材料および方法］
オーロラキナーゼアッセイ：オーロラキナーゼＩＣ_５０値を以前に記載した通り^{２６，３６}に決定した。

細胞生存度アッセイ：ＧＩ_５０値（５０％細胞増殖阻害濃度）を以前に記載した通り^{２６，３６}に決定した。

［実施例１のオーロラＡおよびオーロラＢ阻害についての細胞ＩＣ_５０値の決定：］
２４ウェルプレート中でリポフェクタミンＬＴＸを使用して、Ｍｙｃ−タグ付きオーロラＡをＨｅｌａ細胞にトランスフェクトし、トランスフェクトの２４時間後、細胞を異なる濃度の実施例１によって２時間処理した。次いで、細胞を２× ＬＤＳ試料緩衝液中で溶解した。異なる試料からのタンパク質を４〜１２％Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ ＮｕＰａｇｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）ゲルによって分解して、Ｐ−ヒストンＨ３（Ｓ１０）抗体およびＰ−オーロラＡ（Ｔ２８８）抗体を使用するウェスタンブロットによって分析した。Ｐ−ヒストンＨ３およびＰ−オーロラＡについてのバンドをＩｍａｇｅ Ｊソフトウェアを使用して定量化し、ＩＣ_５０値をＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して計算した。

［マウス肝ミクロソーム安定性：］
化合物（１０μＭ）を、リン酸緩衝生理食塩水（１０ｍＭ）中、ＮＡＤＰＨ（１ｍＭ）、ＵＤＰＧＡ（２．５ｍＭ）およびＭｇＣｌ_２（３ｍＭ）の存在下で、３７℃でオスＣＤ１マウス肝ミクロソーム（１ｍｇ．ｍＬ^−１）タンパク質と共にインキュベートした。インキュベーションを０および３０分間実施した。ＮＡＤＰＨおよびＵＤＰＧＡをインキュベーション反応物から除外することにより、対照インキュベーションを作製した。化合物残存率を、ＬＣＭＳによる分析後に決定した。

［ヒト肝ミクロソーム安定性：］
化合物（１０μＭ）を、リン酸緩衝生理食塩水（１０ｍＭ）中、ＮＡＤＰＨ（１ｍＭ）、ＵＤＰＧＡ（２．５ｍＭ）およびＭｇＣｌ_２（３ｍＭ）の存在下で、３７℃で男女混合の貯蔵のヒト肝ミクロソーム（１ｍｇ．ｍＬ^−１）タンパク質と共にインキュベートした。インキュベーションを０および３０分間実施した。ＮＡＤＰＨおよびＵＤＰＧＡをインキュベーション反応物から除外することにより、対照インキュベーションを作製した。化合物残存率を、ＬＣＭＳによる分析後に決定した。

ｈＥＲＧ阻害：１０μＭの化合物濃度におけるすべてのｈＥＲＧ阻害率を、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅによって、ｈＥＲＧテール電流の阻害に関するハイスループット細胞ベース電気生理学アッセイ^４１において決定した。値は、複数の決定値の平均として報告されている。０．３％ＤＭＳＯ水性ビヒクル陰性対照は、７〜１６％の阻害を示した。シサプリド（１μＭ）陽性対照は、９６〜１０４％の阻害を示した。すべてのｈＥＲＧ ＩＣ_５０値は、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅによって決定され^４１、実施例１についてのｈＥＲＧ ＩＣ_５０もまた、Ｃｙｐｒｏｔｅｘ ｐｌｃによって、全細胞電圧クランピング^４２によりｈＥＲＧテール電流を測定して決定された。

物理化学特性：ＬｏｇＤおよびｐＫａの測定は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈグループ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫのメンバーであるＰｈａｒｍｏｒｐｈｉｘ（登録商標）Ｓｏｌｉｄ Ｓｔａｔｅ Ｓｅｒｖｉｃｅｓによって実施された。

キナーゼ選択性プロファイリング：ＫＩＮＯＭＥＳｃａｎ（商標）技術を使用したキナーゼプロファイリングおよびＫｄの決定は、ＤｉｓｃｏｖｅＲｘ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡ；ｗｗｗ．ｋｉｎｏｍｅｓｃａｎ．ｃｏｍの一部門であるＫＩＮＯＭＥｓｃａｎによって実施された。

インビボ完全ＰＫ（実施例１の化合物）：マウス（メスＢａｌｂ／Ｃ）に、生理食塩水中の１０％ＤＭＳＯ、５％Ｔｗｅｅｎ２０中の実施例１の化合物（５ｍｇ ｋｇ^−１）を、経口（p.o.）または静脈内(i.v.)で投薬した。投与後、マウスを５、１５および３０分ならびに１、２、４、６および２４時間の時点で屠殺した。血液を心穿刺によって除去し、遠心分離して血漿試料を得た。血漿試料（１００μＬ）を分析用内部標準（オロモウシン、ＩＳ）に添加し、続いて３００μＬのメタノールでタンパク質沈殿を行った。遠心分離（１，２００×ｇ、３０分、４℃）の後、得られた上清を、逆相Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ Ｃ１８（Ｗａｔｅｒｓ、５０×２．１ｍｍ）分析カラムおよび６４１０三連四重極型質量分析計（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｌｔｄ．）と連結されたＡｇｉｌｅｎｔ１２００液体クロマトグラフィーシステム上で陽イオンモードＥＳＩ ＭＲＭを使用するＬＣＭＳによって、実施例１の化合物のレベルについて分析した。

ヒト腫瘍異種移植片の有効性の研究：動物を伴う手順を、Ｔｈｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ’ｓ Ａｎｉｍａｌ Ｅｔｈｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって提示されたガイドライン内において、国のガイドライン：Ｗｏｒｋｍａｎ Ｐ、Ａｂｏａｇｙｅ ＥＯ、Ｂａｌｋｗｉｌｌ Ｆ、Ｂａｌｍａｉｎ Ａ、Ｂｒｕｄｅｒ Ｇ、Ｃｈａｐｌｉｎ ＤＪ、Ｄｏｕｂｌｅ ＪＡ、Ｅｖｅｒｉｔｔ Ｊ、Ｆａｒｎｉｎｇｈａｍ Ｄ、Ｇｌｅｎｎｉｅ ＭＪ、Ｋｅｌｌａｎｄ ＬＲ、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ Ｖ、Ｓｔｒａｔｆｏｒｄ ＩＪ、Ｔｏｚｅｒ ＧＭ、Ｗａｔｓｏｎ Ｓ、Ｗｅｄｇｅ ＳＲ、Ｅｃｃｌｅｓ ＳＡ． Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｗｅｌｆａｒｅ ａｎｄ ｕｓｅ ｏｆ ａｎｉｍａｌｓ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ． Ｂｒｉｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ １０２： １５５５〜１５７７、２０１０を順守して実施した。

メスＣｒＴａｃＮＣｒ−Ｆｏｘ１（ｎｕ）無胸腺マウスに、１０^７個のＦＬＴ３−ＩＴＤ ＭＶ４−１１白血病細胞を皮下移植した。異種移植片が十分に確立したとき（移植の１０日後、少なくとも１００ｍｍ^３の平均腫瘍体積）、動物を、２通りの投与量、５０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇ（１群あたりｎ＝５）で、ビヒクル（全体の１０％をＤＭＳＯ、２０％をＰＥＧ４００、５％をＴｗｅｅｎ８０および６５％を水とした）または実施例１の化合物のいずれかを経口投与することにより処置した。投薬は、１日２回で７日間、さらに１日１回で４日間行った。

ＰＫ／ＰＤ研究：４日間のＰＫ／ＰＤ研究を、十分に確立したＭＶ４−１１異種移植片（移植後１７日）をもたらす無胸腺マウスに、１日２回、上記の通りのビヒクルまたは５０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇの実施例１の化合物を経口投与することによって実施した。血漿および腫瘍試料を、最終投薬の２時間および６時間後に採集した。

［結果］
［オーロラキナーゼ活性、細胞活性、ミクロソーム安定性、ｈＥＲＧ阻害および物理化学特性］
例示した化合物のオーロラＡに対する活性（生化学アッセイ）、ＳＷ６２０細胞における細胞ベースＧＩ５０およびｈＥＲＧを、これらの化合物のミクロソーム安定性およびこれらそれぞれのｃｌｏｇＰ値に関するデータと共に以下の表１に示す。

実施例１の化合物は、国際公開第２００７／０７２０１７号の実施例５６および実施例５７の化合物と比較して、ｈＥＲＧに対するより低い阻害活性を示した。

これらの結果に基づいて、実施例１の化合物をさらなるインビトロおよびインビボでの特徴付けのために選択した。

［キナーゼの選択性］
ＫＩＮＯＭＥＳｃａｎ（商標）技術^２８を使用して、１μＭの濃度の４４２キナーゼパネル（３８６種の非変異キナーゼ）において実施例１をプロファイリングすることにより、キナーゼの選択性を査定した。アッセイにおいて＞９０％の競合（ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ）が観察された（これは対照の＜１０％として測定される）非変異キナーゼの数を、試験された非変異キナーゼの総数で除することによって計算される選択性スコアＳ（１０）は、０．０５７であると決定され、すなわち、試験された３８６種の非変異キナーゼのうち２２種ヒットした。オーロラＡ、オーロラＢおよびオーロラＣは、それぞれ３．４％、１％および１６％と決定された％対照値で強力に阻害された。また、この一次スクリーニングにより、ＦＬＴ３キナーゼならびにＦＬＴ３−ＩＴＤ、ＦＬＴ３（Ｄ８３５Ｙ）、およびＦＬＴ３（Ｄ８３５Ｈ）を含むＦＬＴ３変異体について、９４％超の競合が明らかとなった。

その後、表２に示すように、実施例１の化合物のＦＬＴ３およびオーロラ阻害活性を、Ｋｄ値の決定（ＫＩＮＯＭＥＳｃａｎ（商標）技術）によって確認した。

実施例２および３も、ＦＬＴ３およびＦＬＴ３−ＩＴＤの強力な阻害剤であった。ＦＬＴ３およびＦＬＴ３−ＩＴＤに対する実施例２のＫｄ値は、それぞれ４．４ｎＭおよび１４ｎＭであると決定された。同様に、ＦＬＴ３およびＦＬＴ３−ＩＴＤに対する実施例３のＫｄ値は、それぞれ５．６ｎＭおよび２６ｎＭであると決定された。

まとめると、このデータは、実施例１の化合物が、キノーム全体にわたる非特異的（ｔａｒｇｅｔ）キナーゼ活性をほとんど有さない、ＦＬＴ３およびオーロラキナーゼの強力な二重性のある阻害剤（ｄｕａｌ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）であることを示している。

［細胞アッセイ評価］
二重性のあるＦＬＴ３／オーロラ阻害活性と一致して、実施例１の化合物は、ＨＣＴ１１６ヒト結腸癌（ＧＩ_５０＝０．３００μＭ）、およびヒトＦＬＴ３−ＩＴＤ陽性ＡＭＬ細胞株ＭＯＬＭ−１３（ＧＩ_５０＝０．１０４μＭ）およびＭＶ４−１１（ＧＩ_５０＝０．２９１μＭ）を含む、様々なヒト腫瘍細胞株において抗増殖活性を示した。Ｈｅｌａ細胞では、実施例１の化合物は、それぞれ０．０３０μＭおよび０．１４８μＭのＩＣ_５０値で細胞オーロラＡとオーロラＢの両方を阻害した。これらの細胞ベースのアッセイにおいて、Ｓ１０におけるＨ３リン酸化の低減をオーロラＢ阻害についてのバイオマーカーとして使用し、Ｔ２８８におけるオーロラＡの自己リン酸化をオーロラＡ阻害についてのバイオマーカーとして使用した^２９。

［インビボＰＫ］
マウスにおける実施例１の化合物についてのインビボＰＫの結果を表３に示す。これは、決定されたクリアランスが０．０５８Ｌ／ｈ（約４８ｍＬ／分／ｋｇ）でＶｄが０．０６６Ｌ（約３．３Ｌ／ｋｇ）を有する、高度に経口投与可能な化合物（Ｆ＝１００％）である。

［ＡＭＬ異種移植片モデル］
ヒトＡＭＬ異種移植片モデルにおける実施例１の化合物の活性を、図１に示す。

図１を参照すると、実施例１の化合物が、体重の減少によって定義される毒性が観察されることなく、投与量依存的様式でＭＶ４−１１ヒト腫瘍異種移植片の増殖を強く阻害したことがわかる。療法が１１日後に中断されたとき、実施例１の化合物の１００ｍｇ／ｋｇの投薬スケジュールで処置されたマウスでは腫瘍が検出されず、５０ｍｇ／ｋｇの投薬スケジュールで処置されたマウスでは初期体積の４２％に減少していた。対照マウスは、平均腫瘍体積が５００％を超えて増加した、療法の開始から１８日目に、殺処分された。対照的に、個々のマウスは、以下の通り、腫瘍がこの段階まで進行したときに殺処分された：５０ｍｇ／ｋｇでは２８日目および３１日目、１００ｍｇ／ｋｇでは４６日目および５６日目。各処置群において、５匹中３匹（６０％）が、６０日目の研究終了時に進行的に増殖する腫瘍を発生しなかった。

この強力なインビボでの阻害効果の結果として、処置を受けた腫瘍はあまりにも小さく、薬物動態／薬力学分析のための材料にならなかった。その後、１日２回の５０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇの実施例１の経口投与による、反復４日間のＰＫ／ＰＤ研究を実施した。薬力学分析により、ヒストンＨ−３リン酸化の明瞭な阻害、およびＦＬＴ３の下流標的であるＳＴＡＴ５リン酸化の阻害が示された（図２）。加えて、最終投薬の２時間後に得られた試料中の血漿遊離薬物濃度は、５０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇの投薬スケジュールについて、それぞれ２２２ｎＭおよび４８８ｎＭであると決定された（図２）。血漿遊離薬物濃度は、関連するキナーゼ、すなわち、オーロラＡ（Ｋｄ＝７．５ｎＭ）、オーロラＢ（Ｋｄ＝４８ｎＭ）、ＦＬＴ３（Ｋｄ＝６．２ｎＭ）、ＦＬＴ３−ＩＴＤ（Ｋｄ＝３８ｎＭ）に対する実施例１の化合物のＫｄ値を明らかに超えている。これらの結果は、実施例１の化合物が、二重性のあるＦＬＴ３およびオーロラキナーゼの標的会合と一致するバイオマーカーのモジュレーションおよび遊離薬物曝露を伴いつつ、インビボでのＦＬＴ３−ＩＴＤ陽性ＡＭＬヒト異種移植片モデルの増殖を著しく阻害することを実証している。

［シトクロームＰ４５０アイソフォームの阻害］
［材料および方法］
２つの比較物質化合物、すなわち、６−ブロモ−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−７−（４−（ピリジン−３−イルメチル）ピペラジン−１−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン（比較物質１、実施例５６、ＷＯ２００７／０７２０１７）、および、６−ブロモ−７−（４−（ピリジン−３−イルメチル）ピペラジン−１−イル）−２−（１，３，５−トリメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン（比較物質２、実施例５７、ＷＯ２００７／０７２０１７）をこの研究において使用した。

比較化合物および上記実施例１〜３の化合物を、１μＭ、１０μＭおよび５０μＭで、ヒト肝ミクロソーム（０．５ｍｇ．ｍｌ^−１）と共にインキュベートした。

プローブ基質の混合物を使用して、ＣＹＰアイソザイムの阻害を決定した（表４）。試料を１０分間インキュベートし、続いてメタノールでタンパク質の沈殿を行った。各試料中の基質代謝産物を、多重反応モニタリング（ＭＲＭ）で逆相液体クロマトグラフィーおよび陽イオンモードＥＳＩを使用するＬＣ／ＭＳ／ＭＳによって測定した。

［結果］

実施例１〜３は、ＣＹＰアイソザイムのいかなる顕著な阻害も示さず（表５）、推定ＩＣ_５０値は１０μＭより高かった。

いずれの化合物も、ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ａ６、ＣＹＰ２Ｃ９またはＣＹＰ２Ｃ１９の顕著な阻害を示さなかった。どちらの比較物質化合物も近似ＩＣ_５０が１μＭ未満でＣＹＰ３Ａ４の顕著な阻害を示し、比較物質１はＣＹＰ２Ｄ６も阻害した。したがって、本発明の化合物は、両比較物質化合物と比較して著しく低減したＣＰ３Ａ４阻害を保有した。

Claims (12)

1. 以下に示される式Ｉの化合物：
   ［式中、
   Ｒ_１は、ＢｒまたはＣｌであり、
   Ｒ_２は、以下に示される式ＩＩまたは式ＩＩＩ：
   （式中、
   Ｒ_ａは、水素またはメチルである）
   から選択される］
   または薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物。
2. Ｒ_１がＣｌである、請求項１に記載の化合物。
3. Ｒ_１がＢｒである、請求項１に記載の化合物。
4. Ｒ_２が式ＩＩのものである、請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物。
5. Ｒ_２が式ＩＩＩのものである、請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物。
6. ６−クロロ−７−（４−（４−クロロベンジル）ピペラジン−１−イル）−２−（１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン；
   ３−（（４−（６−クロロ−２−（１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−７−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）−１，２，４−オキサジアゾール；
   ３−（（４−（６−クロロ−２−（１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−７−イル）ピペラジン−１−イル）メチル）−５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール
   のいずれか１つから選択される、請求項１から５のいずれか１項に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物。
7. 請求項１から６のいずれか１項に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物、および１つまたは複数の薬学的に許容される添加剤を含む、医薬組成物。
8. 療法において使用するための、請求項１から６のいずれか１項に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物。
9. がん等の増殖性障害の治療において使用するための、請求項１から６のいずれか１項に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物。
10. 急性骨髄性白血病の治療において使用するための、請求項９に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物。
11. 増殖性障害を治療するための医薬組成物であって、治療有効量の請求項１から６のいずれか１項に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物を含む、医薬組成物。
12. 急性骨髄性白血病を治療するための医薬組成物であって、治療有効量の請求項１から６のいずれか１項に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物を含む、医薬組成物。