BR112014007683B1

BR112014007683B1 - sistema e método para o processamento de uma amostra de um tecido sólido, módulo de extrapolação de tecido sólido e ferramenta de extrapolação

Info

Publication number: BR112014007683B1
Application number: BR112014007683-9A
Authority: BR
Inventors: Azorides R. Morales
Original assignee: The University Of Miami
Priority date: 2011-09-29
Filing date: 2012-09-28
Publication date: 2021-02-09
Also published as: WO2013049564A2; AU2012315744B2; EP2761268A4; WO2013049564A3; AU2012315744A1; BR112014007683A2; CA2849908A1; CA2849908C; US20140234895A1; EP2761268A2; CN103975229A; JP6189306B2; US9217696B2; CN103975229B; JP2014528575A

Abstract

PREPARAÇÃO ULTRAR RÁPIDA DO TECIDO DE DIAGNÓSTICO COMO UMA ALTERNATIVA PARA SEÇÃO CONGELADA. A presente invenção refere-se aos métodos e sistemas aperfeiçoados para processamento de tecidos sólidos. O método pode ser realizado manualmente ou automaticamente. O sistema pode ter módulos, tais como (i) um módulo de extrapolação, onde um tecido fresco é cortado para preparar amostra de tecido, (ii) um módulo de endurecimento que endurece a amostra de tecido, (iii) um módulo de impregnação que impregna a amostra de tecido que estava endurecida, e (iv) um módulo de incorporação que incorpora uma amostra de tecido que foi endurecida e impregnada. O tecido fresco , que foi retirado para o diagnóstico da doença, ou para avaliar o tratamento cirúrgico, é extrapolado para cerca de 0,6 mm. De preferência, o endurecimento do tecido fresco é iniciado, mas não completado, durante a extrapolação por meio do contato com uma mistura química. De preferência, gelo seco, dispositivo termoelétrico, ou condensador de gás resfria um molde de metal que contém a amostra incorporada. Ele é seccionado e, em seguida, examinado microscopicamente como uma alternativa para o exame histológico de uma seção congelada para evitar os problemas conhecidos de diagnóstico discordante e diferido.

Description

REFERÊNCIA CRUZADA AOS PEDIDOS DE PATENTE RELACIONADOS

[001] Este pedido de Patente reivindica benefício ao pedido de Patente U.S. N ° 61/540, 947, depositado em 29 de setembro de 2011.

CAMPO DA INVENÇÃO

[002] A presente invenção refere-se aos processos químicos e aparelhos mecânicos para a preparação do tecido de diagnóstico. Uma amostra fresca (isto é, não fixa ou congelada) de tecido sólido, o qual foi retirado do corpo de um paciente no decurso de uma cirurgia, pode ser preparada (ou seja, agregada então processada), como uma alternativa para o exame histológico de uma seção congelada e faz não sofrer de artefatos deste último. Estes métodos e estes sistemas permitem o diagnóstico intraoperatório por meio do exame histológico de uma seção de parafina que evita artefatos encontrados quando uma seção congelada é examinada.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[003] Os métodos e os sistemas para processamento de tecidos têm sido descritos (vide o documento WO 99/09390, WO 01/44783, WO 01/44784, e WO 2005/40763). Eles necessitaram de uma mistura de, pelo menos, cetona e álcool para processamento químico. Na presente invenção, mostra-se que o álcool não é necessário. Uma amostra de tecido pode ser obtida a partir de um paciente durante a cirurgia. A mesma amostra pode ser processada para um bloco de tecido, o bloco é segmentado, e de uma seção de tecido é examinado por um patologista anatômico. O exame histológico da seção de tecido e diagnóstico são concluídos antes do paciente sair da cirurgia. Uma vantagem da presente invenção sobre as seções congeladas é que a morfologia das seções de tecido vista sob o microscópio é preservada em blocos de tecido. A qualidade das seções a partir de um bloco de tecido parece ser a mesma se o bloco foi preparado por meio do processamento convencional, ou por meio da presente invenção. O diagnóstico discordante ou diferido, que é principalmente devido a artefatos observados durante o exame histológico de seções congeladas, seriam evitadas pelo uso da presente invenção.

[004] Consulta de patologia intraoperatória envolve exame macroscópico e microscópico de uma amostra obtida de um paciente durante a cirurgia. Na maioria das vezes, o exame histológico de uma seção de tecido sob o microscópio é realizado por meio da coloração com corante para examinar a histomorfologia. Isto é convencionalmente realizado sobre uma seção " conggelada" de um tecido sólido, tal que o diagnóstico por um patologista anatômico é possível antes de o doente deixar de cirurgia (isto é, intraoperatório). Vide, Keeney & Leslie, JAMA 300: 1074 a 1075 (2008). A história do desenvolvimento de Wilson da técnica de congelação foi contada no centenário da sua publicação por Gal & Cagle, JAMA 294: 3135 a 3137 (2005) e Lechago, Arch. Pathol. Lab. Med. 129: 1529 a 1530 (2005).

[005] A acreditação de laboratórios pelo Colégio Americano de Patologistas (CAP), exige que o diagnóstico intraoperatório usando uma seção congelada seja confirmado pelo estudo posterior de uma seção chamada " permanente" obtida a partir do mesmo tecido, que antes era usado para obter a seção congelada, embutidos em um bloco de parafina. A partir dos relatos de participantes do programa Q -track PAC, houve uma discordância entre a seção Permanente ou a seção congelada (ou seja, um estudo de seção congelação adequada com diagnóstico intraoperatório que tem discordância diagnóstica com a seção de parafina) de pelo menos cerca de 1% a 2%. Vide,Raab et al., Arch. Pathol. Lab. Med. 130: 337 a 342 (2006). Por esta razão, bem como o atraso devido ao diagnóstico diferido, seria desejável proporcionar o diagnóstico intra - operatório de uma seção a partir de um bloco de tecido preparado por meio da presente invenção. Mas o encurtamento do tempo necessário para preparar uma amostra de tecido para exame histológico a partir de uma amostra de tal modo que diagnóstico intraoperatório é possível ter tomado modificações substanciais de métodos e sistemas existentes.

[006] Estas melhorias nos métodos e sistemas para a preparação do tecido são agora descritas. Elas são caracterizadas por meio de (i) extrapolação do tecido sólido para uma espessura uniforme de cerca de 0,6 mm e/ou (ii) uma mistura de produtos químicos, pelo menos, uma cetona e um óleo para endurecer uma amostra de tecido e/ou (iii) um refrigerador para solidificar um bloco que contém uma amostra de tecido. Preferencialmente, uma amostra de tecido é primeiramente contatada com a mistura química durante a extrapolação para iniciar o endurecimento do tecido e, dessa maneira, facilitar o seu corte em uma ou mais amostras de tecido. A ausência de artefatos histológicos é uma melhoria sobre o exame histológico convencional de uma seção congelada que é conhecida na técnica e que pode ser esperada para produzir diagnósticos discordantes e diferidos. O requisito para realizar um estudo posterior de uma seção permanente se torna irrelevante porque a morfologia coerente é obtida por meio da presente invenção.

[007] Outras vantagens da presente invenção são discutidas a seguir, ou serão evidentes para uma pessoa que é versada na técnica a partir da discussão.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[008] É um objetivo da invenção proporcionar uma preparação rápida de tecido de diagnóstico. Uma amostra de tecido sólido, que foi retirado do corpo de um paciente durante a cirurgia, é processado como uma amostra de tecido sem congelamento prévio. As seções de tecido a partir de um bloco de amostra processada têm características morfológicas de qualidade semelhante ou idêntica em relação a um bloco de parafina preparado usando o processamento convencional. Esta é uma melhoria sobre o exame histológico de uma seção congeladada, não sofre os artefatos morfológicos do último, evita a necessidade de reprocessar o tecido e evita atraso.

[009] Os métodos e os sistemas são compatíveis com o processamento de amostras de tecido para produzir um bloco que é segmentado para a histologia, a ligação do anticorpo in situ, hibridização de ácidos nucleicos, ou outras análises proteômicas ou genéticas (por exemplo, impressões digitais de fragmentos ou determinando a sua sequência), de preservação arquivo de morfologia e ácidos nucleicos, e as combinações dos mesmos.

[0010] Em uma primeira modalidade, é proporcionado um método que compreende: (a) o endurecimento uma amostra de tecido em uma galeria de sussurros (whispering gallery), em que a amostra é posta em contato com uma mistura de produtos químicos e de energia de microondas, (b) a impregnação de uma amostra de tecido sob vácuo, em que a amostra está em contato com um metal da matriz fundida e de energia térmica, e (c) incorporação de um amostra de tecido de um bloco e solidificando o bloco, em que o bloco sólido pode ser seccionado para análise histológica intraoperatória. Prefere-se que uma amostra de tecido obtida por cirurgia seja extrapolada para uma espessura substancialmente uniforme (por exemplo, cerca de 0,6 mm para a menor dimensão) em contato com uma mistura química para iniciar (mas não completar) o endurecimento. A amostra de tecido pode ser de cerca de 0,1 mm ou mais, cerca de 0,2 mm ou mais, cerca de 0,3 mm ou mais, cerca de 0,4 mm ou mais, ou cerca de 0,5 mm ou mais de espessura. A amostra de tecido pode ser de cerca de 1 mm ou menos, cerca de 0,8 mm ou menos, ou cerca de 0,7 mm ou menos em espessura.

[0011] Em uma segunda modalidade, um sistema é fornecido compreendendo: (a) um módulo de endurecimento para endurecer uma amostra de tecido, (b) um módulo de impregnação para impregnar uma amostra de tecido que foi endurecida, e (c) um módulo de incorporação para incorporar um amostra de tecido que foi endurecida e impregnada em um bloco sólido. Um módulo de endurecimento é formado por (i) uma primeira câmara tendo um interior em forma de uma galeria sussurada, (ii) uma primeira tampa que isola a primeira câmara, quando fechada, é opaca à radiação de micro-ondas, e acessa a primeira câmara, quando aberta, (iii) uma primeira junta de retenção de vapores químicos e evaporação no interior da primeira câmara, e (iv) uma fonte de radiação de transmissão de energia de micro-ondas para o interior da primeira câmara. Uma amostra de tecido é posta em contato com uma mistura química na primeira câmara. Um módulo de impregnação é composto por (i) uma segunda câmara tendo uma capacidade interior de proporcionar uma pressão reduzida em relação ao exterior, (ii) uma segunda tampa, que isola a segunda câmara quando fechada e acessa a segunda câmara, quando aberta, (iii) uma junta de manter um diferencial de pressão entre o interior e o exterior da segunda câmara, (iv) uma bomba, pelo menos, oferecendo diminuição de pressão no interior da segunda câmara abaixo de 100 KPa (1 bar), e (v) um aquecedor de condução de energia térmica para o interior da segunda câmara. A amostra de tecido endurecido é contatada com uma matriz fundida na segunda câmara. Um módulo de incorporação é constituído por meio de um refrigerador de condução de energia térmica a partir de um bloco no qual uma amostra de tecido processado é incorporada na matriz de tal forma que a matriz é solidificada.

[0012] Opcionalmente, um suporte (por exemplo, cassete montado a partir de duas metades interligadas, nos lados dos quais são perfurados para permitir a troca de solução) pode transportar uma ou mais amostras de tecido do mesmo tipo no interior do primeiro e do segundo módulos, bem como entre os mesmos. O portador pode ser desmontado, a amostra de tecido transformada pode ser removida do suporte, em seguida, colocada no interior de um molde opcional, e a amostra de tecido pode ser incorporada dentro do molde cheio com o metal da matriz fundida e coberta por, pelo menos, uma parte do titular (por exemplo, um meio tendo um rótulo de identificação da amostra de tecido). Prefere-se que o molde seja colocado em contato com uma superfície termicamente condutora do resfriamento e o lado em contato do molde fica em frente à cobertura da parte de suporte. Após a incorporação, a amostra de tecido pode ser desmoldada e o bloco que contém a amostra de tecido pode ser mantido ligado à parte de suporte, que pode ser usado por um micrótomo para mover o bloco passado em uma faca, que corta seções. Os três módulos podem ser separados uns dos outros, de preferência, pelo menos, os primeiro e segundo módulos são peças separadas de um mesmo sistema (isto é, o terceiro módulo não está integrado com os outros dois módulos), mas todos os três módulos podem ser partes separadas do mesmo sistema.

[0013] Opcionalmente, a mistura química é composta por meio de uma solução não aquosa compreendendo (i) pelo menos uma cetona, o que pode ser acetona, e (ii) pelo menos um óleo, que pode ser óleo de pinho ou mineral, que pode ser ainda constituído de pelo menos um tensoativo, que pode ser sulfóxido de dimetila. De preferência, a mistura química não é constituída de um aldeído (por exemplo, como a formalina), um álcool, um xileno, ou qualquer combinação dos mesmos. A mistura química de extrapolação e de processamento é de preferência a mesma em composição, mas que pode ser composta de produtos químicos diferentes ou em diferentes proporções. Opcionalmente, a matriz é constituída por, pelo menos, uma cera de parafina. De preferência, a matriz não é constituída por um óleo, um xileno, ou ambos.

[0014] Em uma terceira modalidade, um sistema de extrapolação e uma ferramenta de extrapolação são fornecidos.

[0015] Outros aspectos e vantagens da presente invenção serão evidentes para uma pessoa que é versada na técnica a partir da seguinte descrição pormenorizada e reivindicações, e as generalizações dos mesmos.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0016] A Figura 1 mostra os fluxogramas comparando a histologia (por exemplo, o exame microscópico do tecido de um sólido que é seccionado e corado) de uma seção congelada para uma seção permanente preparada através de métodos diferentes. Um tecido sólido é arrecadado. O processamento Conventional corrige em formol, desidrata em uma série graduada de álcool, limpa em xilenos, e incorpora em cera. O processamento rápido endurece em cetona e álcool usando energia de micro-ondas, então impregna sob vácuo e incorpora em parafina usando energia térmica para fazer as seções permanentes. A histologia de uma seção congelada não requer fixação, impregnação, ou incorporação. Em vez disso, uma nova amostra é endurecida por meio do congelamento, então seccionada sem incorporar em um bloco de cera. A preparação ultrarrápida de acordo com o Exemplo 1 não limitativo é mostrada para uma amostra de tecido que se agregou (por exemplo, uma amostra fresca é posta em contato com uma mistura química para iniciar o endurecimento e facilitar o corte da amostra para a amostra de tecido desse modo), a amostra de tecido é processada em seguida, incorporada em um bloco, e o bloco é resfriado até solidificar. O bloco é submetido a microtomia para proporcionar as seções de tecido de amostra de tecido. As seções de tecido são desparafinadas, em seguida, coradas (por exemplo, anticorpo ou corante) e a sua histomorfologia é examinada.

[0017] A Figura 2 é um diagrama esquemático de um sistema de processamento tendo dois reservatórios, os quais contêm um aditivo químico que endurece de uma amostra de tecido e uma matriz fundida que impregna a amostra de tecido endurecido, respectivamente.

[0018] A Figura 3 é um diagrama esquemático de um outro sistema de processamento sem reservatórios.

[0019] A Figura 4 é uma vista em perspectiva de um sistema para a extrapolação do tecido.

[0020] A Figura 5 é uma vista em perspectiva do sistema de extrapolação da figura 4, antes do seção de tecido.

[0021] A Figura 6 é uma vista em perspectiva do sistema de extrapolação da figura 4 durante o corte do tecido, que não é visto nesta vista.

[0022] A Figura 7 é uma vista de cima do sistema de extrapolação da figura 4 durante o corte do tecido, que não é visto nesta vista.

[0023] A Figura 8 é uma vista em corte transversal do sistema de extrapolação através da linha 8-8 da figura 7 tecido mostrando que está sendo realizado e fatiado.

[0024] A Figura 9 é uma vista em perspectiva de uma ferramenta de extrapolação.

DESCRIÇÃO DAS MODALIDADES ESPECÍFICAS DA INVENÇÃO

[0025] No que diz respeito ao processamento e a análise histológica de tecido sólido, uma seção de tecido deve ser de cerca de 2 mM a 10 mM a ser examinado com a magnificação sob um microscópio, enquanto a fatia mais fina do tecido fresco, que pode ser obtido usando uma ferramenta de extrapolação é mais do que dez vezes mais espessa. A fim de produzir uma seção de tecido adequada para o exame microscópico, é assim necessário endurecer o tecido de modo que uma fatia mais fina pode ser obtida (por exemplo, o corte com um micrótomo). Uma amostra de cerca de 0,6 mm de espessura é suficiente para proporcionar cerca de 75 seções de tecido.

[0026] A microtomia de um bloco de tecido tem de produzir fitas aceitáveis (isto é, uma série) de seções de tecido que podem ser lançadas em um banho de água sem "explodir" e posicionadas sobre uma lâmina de vidro para coloração histológica sem "ruptura" de uma forma consistente e uniforme ao longo de uma variedade de tipos de tecidos. Esta manipulação de seções de tecidos após o corte com um micrótomo é essencial no que diz respeito ao fornecimento de diagnósticos histológicos eficientes e confiáveis com base na morfologia observada em seções de tecidos manchados. As porções da seção de tecido que estão em falta ou mal manchadas iriam adiar o diagnóstico com base na morfologia do tecido em que a seção, reduziria, dessa maneira, a confiança nas conclusões de diagnóstico. Portanto, os procedimentos e equipamentos que são usados em um laboratório de patologia necessitam de validação de acordo com protocolos estabelecidos, de modo que eles podem ser consistente e eficientemente realizados, uma variedade de tipos de tecidos pode ser processada , incorporada em um bloco, e seccionada; critérios de diagnóstico diferentes para uma variedade de doenças podem ser aplicados a eles e o diagnóstico histológico (ou seja, a morfologia do tecido visualizada por meio da coloração com o anticorpo ou corante) de amostras preciosas é realizada rapidamente e com precisão. A presente invenção tem a vantagem de preparer as seções "permanentes" tendo reconhecido a morfologia para o diagnóstico intraoperatório em vez de seções congeladas que têm uma incidência significativa de resultados discordantes ou diferidos.

[0027] Durante a microtomia, as amostras de tecido mal processadas não formam uma fita de seções de tecido em série, a seção explode quando flutuava em banho-maria, e há rachaduras (ou seja, partes faltando) na seção de tecido. Os resultados aceitáveis do processamento não sofrem de tais defeitos porque a microtomia produz seções de tecidos com morfologia preservada (por exemplo, a estrutura celular e organização do tecido) durante a análise histológica subsequente. Os resultados variáveis (por exemplo, morfologia inconsistente para as seções da mesma amostra de tecido, ou consistentes para alguns tipos de tecido, mas não satisfatórios com outros tipos de tecido), não são aceitáveis para o diagnóstico histológico.

[0028] Em uma primeira modalidade, o endurecimento de uma amostra de tecido pode ser realizado por meio do contato com uma mistura de produtos químicos e de energia de micro-ondas em uma galeria de sussurro. Uma amostra de tecido que foi endurecido pode, então, ser impregnada sob vácuo por meio do contato com um metal da matriz fundida e de energia térmica. O endurecimento das amostras de tecido pode ter lugar com aquecimento radiativo usando a energia de micro-ondas à pressão ambiente (por exemplo, 100 KPa (1 bar)). A mistura química pode ser composta de, pelo menos, uma cetona e de pelo menos um óleo (isto é, alcano que é líquido sob condições ambientais e é derivado de animais, de plantas, ou petróleo). A mistura química pode ser ainda constituída por, pelo menos, um tensoativo. O endurecimento da solução da amostra de tecido, de preferência, não é constituído por um álcool, um aldeído, um xileno, ou qualquer combinação dos mesmos. A mistura de produtos químicos e/ou energia de micro-ondas pode fixar, desidratar, e, opcionalmente, limpar a amostra de tecido. Essa combinação pode reduzir o tempo de processamento e/ou aumentar a qualidade do tecido examinado para a histomorfologia. A impregnação da amostra de tecido pode ser realizada por meio do contato com um metal da matriz fundida e o aquecimento usando energia térmica condutora (por exemplo, o aquecimento por efeito Joule) sob pressão inferior à pressão atmosférica (100 KPa (1 bar)) para extrair a mistura de produtos químicos a partir de uma amostra de tecido e a impregnar a matriz naamostra de tecido. O vácuo promove a impregnação através da promoção de difusão e reduzindo a temperatura de evaporação de quaisquer solventes que possam estar presentes na amostra de tecido. A matriz pode compreender pelo menos uma cera de parafina e/ou outras ceras (ou seja, alcano que é sólida sob condições ambientais e é derivada de origem animal, vegetal, ou de petróleo), que opcionalmente foi desgaseificado e desidratado. A solução de impregnação das amostras de tecidos, de preferência não endurecida, é composta de óleo mineral, xileno, ou ambos. A incorporação da amostra de tecido pode ocorrer por meio do vazamento e uma matriz fundida em um molde para produzir um bloco. Em seguida, o bloco pode ser solidificado por meio do resfriamento (por exemplo, do compressor de refrigerante, ou efeito de Peltier). O tecido incorporado é então seccionado com um micrótomo. As seções de tecido estão flutuando sobre a água para a colocação em uma lâmina de vidro. Após a (s) seção de tecido ser (em) colocada (s) sobre a lâmina, a matriz é removido da lâmina e a seção restante do tecido é colada ao vidro. A lâmina é então corada e laminulada.

[0029] Em uma segunda modalidade, uma amostra de tecido pode ser endurecido por meio do contato com uma mistura de produtos químicos e de energia de micro-ondas em uma galeria de sussurro, impregnado por meio do contato com um metal da matriz fundida e de energia térmica em uma câmara sob vácuo, e incorporado em um bloco. A energia de micro-ondas (por exemplo, com magnetron, clístron, tubo de onda) ou de energia térmica (por exemplo, aquecedor resistivo ou bomba de calor) aquece a mistura química e da matriz fundida, bem como outros conteúdos, tais coma amostras de tecido. A agitação (por exemplo, o arejamento, os ciclos de vácuo e um aumento da pressão, agitação, etc) podem ser usados para promover a troca entre uma solução (por exemplo, mistura química ou matriz fundida) e a amostra de tecido. Em seguida, a amostra de tecido é incorporada em um bloco de mais de uma unidade mais fria (por exemplo, refrigerador termoelétrico ou condensador de gás). O bloco de tecido pode ser solidificado em contato com a unidade de refrigeração de modo que o bloco pode ser facilmente seccionado para análise histológica (por exemplo, o exame sob um microscópio de anticorpo ou corante ligado especificamente à seção de tecido).

[0030] A conclusão bem sucedida de preparação do tecido é indicada por meio da facilidade de seção de tecido incorporadao em um bloco durante a microtomia e preservação da morfologia durante o exame histológico de seções de tecido. Embora o funcionamento semiautomático do método e do sistema seja o preferida, com transferência manual na unidade de micro-ondas e de transferência automática entre a unidade de micro-ondas e uma unidade de vácuo (opcional está automatizado de transferência da unidade de vácuo e uma estação de descarga), a mistura química (ou matriz fundida) pode ser transferida entre uma galeria de sussurro e um primeiro reservatório opcional (ou uma câmara, e um segundo reservatório opcional) que estão em comunicação fluida um com o outro (por exemplo, tubos ou tubagens, válvulas e bombas com um circuito de controle para determinar o tempo, velocidade e a direção do fluxo de uma solução).

[0031] A amostra de tecido pode ser endurecida com uma mistura de substâncias químicas, o que pode ser uma solução não aquosa compreendendo pelo menos uma cetona (por exemplo, acetona, metil etil cetona) e pelo menos um óleo (por exemplo, óleo mineral, óleo de pinho). Para a solução não aquosa de cetona (s) e de óleo (s), a relação de volume dos dois agentes pode situar-se entre cerca de 12: 1 a cerca de 6: 1 (apesar de tais extremos poder mudar o tempo de processamento ou os resultados podem ser menos fiáveis); menos do que cerca de 12: 1, menos do que cerca de 11: 1, ou menos do que cerca de 10: 1, mais do que cerca de 6: 1, superior a cerca de 7: 1, ou mais do que cerca de 8: 1, cerca de 9: 1, ou qualquer destas proporções intermediárias (por exemplo, entre cerca de 10: 1 a cerca de 8: 1). A mistura química pode ser ainda constituída por meio de um tensoativo, que pode acelerar o endurecimento: por exemplo, dimetil sulfóxido (DMSO), ésteres de sorbitano de polioxietileno (por exemplo, TWEEN 80), dimetil- sulfossuccinato de sódio, detergentes de uso doméstico, suaves, ou similares. A mistura química pode também ser tamponada com o uso apropriado de ácido e base, mas o ácido acético não precisa de ser incluído na solução não aquosa.

[0032] A amostra de tecido pode ser incubada na mistura química, durante um período de tempo entre cerca de 3 minutos e cerca de 6 minutos; maior do que cerca de 3 minutos e superior a cerca de 4 minutos, ou maiores do que cerca de 5 minutos, menos do que cerca de 4 minutos, menos do que cerca de 5 minutos, ou menos do que cerca de 6 minutos, ou qualquer porporção intermediária dos mesmos (por exemplo, a partir de cerca de 4 minutos a cerca de 5 minutos). A temperatura pode estar entre cerca de 40°C e cerca de 60°C, maior que cerca de 45°C, superior a cerca de 50°C, superior a cerca de 55°C, ou superior a cerca de 60°C, menos do que cerca de 60°C, menos do que cerca de 65°C, menos do que cerca de 70°C, ou menos do que cerca de 75°C, ou qualquer porporção intermediária dos mesmos (por exemplo, entre cerca de 45°C e 55°C).

[0033] A amostra de tecido pode ser impregnada com uma matriz fundida, que pode ser uma solução de cera que compreende pelo menos uma cera de parafina. As matrizes preferidas são as fórmulas comerciais de cera, misturas de ceras de diferentes pontos de fusão (ceras são sólidos à temperatura ambiente e possuem pontos de fusão que são dependentes dos seus comprimentos de cadeia, enquanto o óleo mineral é líquido à temperatura ambiente), e similares. Elas podem ser ainda constituídas por meio de um ou mais aditivos para mudar as propriedades de cristalização da matriz. A amostra de tecido pode ser incubada na matriz fundida, durante um período de tempo entre cerca de 3 minutos e cerca de 6 minutos, maior do que cerca de 3 minutos e superior a cerca de 4 minutos, ou maiores do que cerca de 5 minutos, menos do que cerca de 4 minutos, menos do que cerca de 5 minutos, ou menos do que cerca de 6 minutos, ou qualquer porporção intermediária dos mesmos (por exemplo, a partir de cerca de 4 minutos a cerca de 5 minutos). A solução de cera pode ser um sólido à temperatura ambiente (por exemplo, inferior a cerca de 25°C ou inferior a cerca de 30°C) e fusão superior a cerca de 55°C ou superior a cerca de 60°C. A temperatura pode estar entre cerca de 50°C e cerca de 70°C, maior do que cerca de 50°C, superior a cerca de 55°C, superior a cerca de 60°C, ou superior a cerca de 65°C, menos do que cerca de 65°C, menos do que cerca de 70°C, menos do que cerca de 75°C, ou menos do que cerca de 80°C, ou qualquer porporção intermediária dos mesmos (por exemplo, entre cerca de 55°C e 65°C). Prefere-se que a incubação ser realizada sob pressão reduzida (por exemplo, superior a cerca de 50 KPa (0,5 bar), superior a cerca de 60 KPa (0,6 bar), ou superior a cerca de 70 KPa (0,7 bar); inferior a cerca de 70 KPa (0,7 bar), inferior a cerca de 80 KPa (0,8 bar), inferior a cerca de 90 KPa (0,9 bar), ou menos do que cerca de 100 KPa (1 bar), ou qualquer porporção intermediária dos mesmos).

[0034] Antes do corte, a amostra de tecido impregnada pode ser incorporada na mesma matriz para formar um bloco de tecidos. Por exemplo, a amostra de tecido impregnada pode ser colocada em um molde de metal, a matriz mais derretida pode ser adicionada para encher o molde e de modo a formar o bloco de tecido, e o bloco de tecido pode ser realizado em uma plataforma (por exemplo, cassetes usados anteriormente ou de outros titulares tendo informações de identificação) que atribui a um micrótomo para o corte. A incorporação pode ser acelerada por meio do resfriamento do molde em gelo seco, em um banho que contém um solvente orgânico e de gelo seco ou de um banho contendo uma mistura de solvente orgânico e de nitrogênio líquido, ou sobre uma superfície de uma unidade de refrigeração com um refrigerante comprimido ou resfriamento de fonte Peltier. Após o corte, a matriz (agora sólida) pode ser removida por meio da fusão a uma temperatura superior a cerca de 100°C.

[0035] A galeria de sussurros ou câmara de reação pode ser composta de qualquer combinação das seguintes opções: uma tampa adaptada para isolá-la do seu entorno e para fornecer acesso aos seus conteúdos (por exemplo, feitas de um material opaco à radiação de micro-ondas e/ou luz visível); uma junta de vedação (por exemplo, feita de borracha ou silicone) entre a tampa e a galeria de sussurro ou câmara de reação, para manter os fumos químicos da anterior (bem como reservatório aquecido opcional) e/ou para manter uma pressão reduzida, neste último; o isolamento térmico para reter o calor na galeria de sussurro ou câmara de reação; pelo menos uma temperatura e/ou sonda de pressão para monitorar as condições na mesma; um selo para isolar os componentes eletrônicos de produtos químicos e de condensação na galeria de sussurro ou câmara de reação, e um circuito de controle que recebe entrada de pelo menos uma sonda e/ou temporizada. Da mesma forma, um depósito aquecido pode ser constituído por meio de qualquer combinação de isolamento térmico, pelo menos, uma temperatura e/ou a sonda de pressão, uma vedação, e um circuito de controle que recebe a entrada a partir de pelo menos uma sonda e/ou temporizada.

[0036] Em uma modalidade preferida, a mistura química é pré- misturada e armazenada em um frasco antes do uso. A garrafa é aberta e, pelo menos, alguns dos seus conteúdos arrastados para um (primeiro) reservatório para ser pré-aquecido, transferido para a galeria de sussurro do primeiro módulo de entrada, antes da amostra de tecido, e transferido de volta para o (primeiro) reservatório aquecido para drenar a galeria de sussurro antes da amostra de tecido ser movida (manualmente ou automaticamente) para o segundo módulo. A matriz sólida pode ser fundida diretamente na câmara do segundo módulo. Como alternativa, pode ser fundida em um (Segundo) reservatório aquecido, e, em seguida, arrastada para tal câmara. A mistura química pode ser transferida entre o (primeiro) reservatório aquecido e galeria de sussurro do primeiro módulo durante o processamento do tecido. Em contraste, o metal da matriz fundida pode ser mantido na câmara de reação do segundo módulo durante o processamento do tecido. No final do dia, a mistura química pode ser retirada para dentro da garrafa, o metal da matriz fundida pode ser puxado para trás para dentro do segundo reservatório, em seguida, eles podem ser eliminados ou armazenados de forma segura, para reutilização.

[0037] De uma maneira alternativa, uma câmara de reação única pode ser usada dentro de um módulo que combina as duas funções de micro-ondas e de vácuo, a uma única unidade. Em sucessão, a mistura química e da matriz fundida pode ser transferida a partir dos primeiro e segundo reservatórios separadas, respectivamente, para a câmara de reação comum e vice-versa.

[0038] Tal sistema pode ser operado ou automatizado (isto é, a transferência da amostra de tecido entre os módulos com um transporte mecânico) manualmente. O sistema pode ser ainda constituído por meio de uma carga e/ou a estação de descarga. As amostras de tecidos podem ser carregadas no sistema e tratadas quer em lotes ou em amostras separadas. As amostras de tecido podem entrar no sistema na estação de carregamento e podem sair do sistema a partir da estação de descarga, onde são recolhidas, opcionalmente. Os circuitos de controle (por exemplo, computador e seu programa) podem ser usados para mover a (s) amostra (s) de tecido, através do sistema, para impedir o acesso aos módulos de reação durante a operação, para modificar um ou mais parâmetros de reação (por exemplo, tempo, temperatura, pressão, ou quantidades de solução no método), ou qualquer combinação dos mesmos.

[0039] Uma amostra de tecido é um bloco sólido que pode ser montado em um micrótomo para produzir as seções de tecido de entre cerca de 1 micron e cerca de 50 microns, ou entre cerca de 2 micra e cerca de 10 microns. As seções de tecido podem ser processadas para a coloração histoquímica, a ligação do anticorpo, a hibridização in situ de ácido nucleico ou de amplificação, ou uma combinação dos mesmos. Por exemplo, uma pluralidade de seções de tecido aderidas ao vidro pode ser aquecida a uma temperatura superior a cerca de 100°C para derreter a matriz solidificada, a matriz fundida é removida, as seções de tecidos em vidro restantes são coradas com um anticorpo ou um corante, e visualizadas com ampliação sob um microscópio. Mas podem ser usadas outras técnicas para a detecção de propriedades celulares a analisar a amostra de tecido (por exemplo, fragmentos de impressão digital, fraccionamento e manchamento, sequenciamento). Os blocos de tecido podem ser armazenados para fins de arquivamento ou estudos retrospectivos.

[0040] Os fenótipos celulares (por exemplo, reatividade com anticorpo específico de células, de coloração química) podem ser analisados através da remoção da matriz sólida (por exemplo, remoção de cera) e dissecar os tecidos (por exemplo, digestão proteolítica e desagregação mecânica). As células individuais podem ser dispersas em um spray e analisadas em um citómetro de fluxo. Em alternativa, as seções de tecidos desparafinadas podem ser montadas sobre um estágio de microscópio, dissecadas com um laser e/ou micromanipuladas em populações de células substancialmente homogêneas, e os diferentes tipos de células analisados por meio de técnicas de características físicas, químicas ou genéticas.

[0041] A presente invenção é compatível com a preparação de ácidos nucleicos, o DNA ou RNA, a partir de tecidos transformados. Dessa maneira, o estudo genético é possível para as amostras de tecido coletadas rotineiramente no laboratório de patologia clínica. O poder combinad com essas tecnologias será grande. As observações histológicas podem ser correlacionadas com a genética por meio da análise de uma seção de tecido através de coloração (por exemplo, anticorpo ou corante específico), e a preparação de ácidos nucleicos a partir de uma seção de tecido adjacente, para a análise genética. Por exemplo, as regiões doentes e normais da mesma seção de tecido podem ser comparadas para detectar as diferenças genéticas (por exemplo, mutações, os níveis de transcrição), a progressão da doença pode ser caracterizada por comparar as diferenças genéticas em amostras colhidas em vários pontos de tempo, e a evolução do tumor pode ser avaliada seguindo o acúmulo de diferenças genéticas de câncer primário a metástase. As células substancialmente homogêneas, ou meramente enriquecidas podem ser obtidas por meio da triagem de células a partir de uma seção de tecido com um citômetro de fluxo ou microdissecação.

[0042] As mutações podem ser da linha germinativa e usadas para rastrear a predisposição genética da doença, ou as mutações podem ser somáticas e usadas para determinar as alterações genéticas na patogênese da doença. A doença pode ser um distúrbio metabólico ou neurológico, câncer, defeitos de desenvolvimento, ou causada por meio de um agente infeccioso. A presente invenção preserva o material para análise genética por meio de um procedimento e temperatura ambiente de armazenamento simples. Pode ser analisada por meio da hibridização in situ ou os ácidos nucleicos podem ser extraídos a partir de tecidos.

[0043] A coloração com hematoxilina - eosina é comumente usada para estudos histológicos e pode ser considerada como um padrão para comparação com outros patologistas anatômicas. Além disso, outras manchas podem ser compatíveis, incluindo tricrômico, reticulina, mucicarmina e manchas elásticas, conforme descrito nas referências gerais, como Thompson (Métodos histoquímicos e histopatológicos Selecionados, CC Thomas, Springfield, Illinois, 1966), Sheehan e Hrapchak (Teoria e Prática de Histotecnologia, CV Mosby, St. Louis, Missouri, 1973), e Bancroft e Stevens (Teoria e Práticas de Técnicas histológicas, Churchill Livingstone, Nova Iorque, Nova Iorque, 1982). Tais procedimentos de coloração levariam entre 30 minutos e várias horas para serem concluídos, embora os procedimentos de coloração rápidos estejam disponíveis a partir de Fisher Scientific, que exigem apenas cinco minutos.

[0044] O tecido sólido pode ser obtido a partir de biópsia cirúrgica ou resseção. Durante a cirurgia do câncer, a capacidade de fornecer um diagnóstico patológico de uma seção de tecido manchado irá fornecer ao cirurgião informações que podem ser usadas antes da saída do paciente da sala de operação (por exemplo, diagnóstico intraoperatório). Por exemplo, uma indicação do patologista anatômico de que o câncer está confinado ao tecido ressecado pode permitir que o cirurgião venha a ser conservador no tratamento e preserve o tecido saudável vizinho. De uma maneira alternativa, uma descoberta pelo patologista anatômico que o câncer não se limita a um órgão ressecado permitiria o tratamento cirúrgico mais agressivo enquanto o paciente ainda estavisse na sala de cirurgia. Em contraste com o exame histológico convencional de uma seção congelada, a preparação de diagnóstico de ultrarrápido de uma amostra fresca pode proporcionar seções de tecido com melhor histomorfologia e reduzir a necessidade de uma confirmação posterior através de uma seção de parafina a partir do mesmo tecido que a seção congelada foi obtida.

[0045] Exemplos de tecidos que podem ser tratados incluem: apêndice, bexiga, osso, intestino, cérebro, mama, carcinoma do colo uterino (epitélio escamoso), bexiga, coração, rim, fígado, pulmão, ovário, glândula parótida, placenta, próstata, pele, baço, testículos, tireóide, amígdalas, e do útero (miométrio e endométrio). Os tecidos linforeticulares e gordurosos também podem ser processados . O tecido mineralizado exigiria descalcificação antes do processamento através do presente método. A análise posterior inclui a detecção de mutações de DNA e a expressão do RNA, análise genômica, histoquímica, imunoquímica e análise proteômica.

[0046] As seções de tecido podem ser processadas para a recuperação e/ou para a preservação de antígeno. Os locais de ligação não específicos são bloqueados, o antigênio é ligado por meio de um anticorpo específico (isto é, o anticorpo primário), e o anticorpo específico não ligado é removido. O antigênio pode ser a proteína, hidrato de carbono, ou gangliosídeo, o seu determinante antigênico pode ser aminoácidos lineares ou aminoácidos não lineares, açúcares, outras modificações, ou uma combinação dos mesmos. Se o anticorpo é marcado com uma sonda ou uma porção de geração de sinais, um anticorpo primário pode ser detectado de maneira direta, mas é preferido para fixar a sonda para um amplificador (por exemplo, um anticorpo secundário) que se liga especificamente ao anticorpo primário. O anticorpo secundário pode ser criado contra a região constante da cadeia pesada ou leve do anticorpo primário. Isto amplifica o sinal gerado por meio de um conjugado de antigênio - anticorpo, porque cada anticorpo primário, que vão se ligar a uma pluralidade de anticorpos secundários. A amplificação pode ocorrer por meio de outras interações específicas, tais como biotina - estreptavidina. A ligação do anticorpo pode ser realizada em um pequeno volume para reduzir o uso de reagentes dispendiosos e de manter uma elevada taxa de ligação; a evaporação deste pequeno volume pode ser reduzida, por meio da incubação em uma câmara de umidade. A unidade geradora de sinal é de preferência uma enzima que não é de outro modo presentes no tecido. Por exemplo, a fosfatase alcalina e a peroxidase de rábano silvestre podem ser ligadas ao anticorpo secundário ou conjugados com estreptavidina. Os substratos estão disponíveis para estas enzimas que geram o produto cromogênico, fluorescente, ou luminescente que pode ser detectado visualmente.

[0047] O padrão de coloração para o antigênio pode ser usado para localizar a expressão do antigênio no contexto de estruturas celulares reveladas por meio da coloração de contraste. A expressão do antigênio pode identificar o tipo de célula ou tecido, o grau de desenvolvimento, marcadores de prognóstico do tumor, processos metabólicos degenerativos, ou uma infecção por meio de um agente patogênico.

[0048] A ligação antígeno-anticorpo pode também ser visualizada com sondas metálicas fluorescentes, radioativas, ou coloidais por meio da epifluorescência, autoradiografia, ou microscopia eletrônica. As sondas similares podem ser usadas para detectar o ácido nucleico na seção do tecido por meio de hibridação in situ para identificar as mutações genéticas ou transcritos, em alternativa, o ácido nucleico (DNA ou RNA) pode ser extraído a partir de seções de tecido e analisado de maneira direta por manchamento, ou amplificado antes além da análise genética.

[0049] A preparação do tecido pode ser integrada com outros módulos: (i) extrapolação do módulo que produz uma amostra de tecido a partir de tecido fresco, (ii) a incorporação e seccionamento dos módulos que produzem um bloco de amostras de tecido embebido em matriz e seções de tecido dos mesmos, (iii) microtomia, coloração e lamínulas de módulos que fornecem as lâminas contend as seções de tecido, (iv) o desenvolvimento de módulo que visualiza os sinais histoquímicos e/ou imunoquímicos em seções de tecido, (v) módulo de microdisseção que separa as células de seção de tecido em populações substancialmente homogêneas; (vi) imagem de módulo que digitaliza as seções de tecido sobre uma lâmina, digitaliza os sinais visualizados através de um microscópio, e, em seguida, manipula, aloja, e transmite as imagens, e qualquer combinação dos mesmos. O tecido, especialmente após separação e/ou separando-se em populações substancialmente homogêneas, pode ser analisado por meio de seu DNA ou por meio das sequências de RNA, mutações genéticas, as alterações no nível ou padrão de expressão de genes, as alterações no nível ou padrão de expressão de proteínas, e as combinações dos mesmos. A integração de sistemas e gerenciamento de dados são facilitados por meio da identificação de cada amostra de tecido ou seu titular por meio dos caracteres alfanuméricos, códigos de barras, perto de campo ou identificação por radiofrequência, ou outra marcação. As etiquetas idênticas ou diferentes podem ser usadas para identificar uma amostra de tecido particular, como seus rendimentos através de uma série de sistemas mecânicos. Os rótulos e outras informações sobre a amostra de tecido (por exemplo, nome do paciente, data, local de instalação, doença ou outra condição patológica, tipo de tecido, o diagnóstico, fenótipo, genótipo, caracterização genômica ou proteômica) podem ser inseridos em um sistema de gerenciamento de banco de dados para armazenar, manipular e recuperar os dados. A exploração de tais informações no banco de dados pode provar ou refutar as correlações de acordo com critérios estatísticos, e sugerir novas investigações.

[0050] Uma primeira etapa no método, a qual pode ser realizada no centro cirúrgico, laboratório de patologia ou outro local, é para fornecer uma amostra de tecido adequada para a preparação de diagnóstico ultrarrápido. As etapas subsequentes tem lugar fora do corpo do paciente (ex vivo), e de preferência não mesmo na presença do paciente. Normalmente, o que é coletado fornece uma fatia do tecido de interesse. De uma maneira alternativa, uma fina fatia ou agulha pode ser obtida durante a biópsia. Para o tecido sólido, uma amostra preparada por meio da extrapolação fornece uma amostra de tecido a partir de cerca de 0,4 mm a cerca de 0,8 mm, mais preferivelmente de cerca de 0,5 mm a cerca de 0,7 mm, e mais de preferência cerca de 0,6 mm, medidos na menor dimensão (isto é, da espessura). De preferência, o endurecimento pode ser iniciado, mas não concluído, por meio da extrapolação do tecido sólido em contato com uma mistura química. A etapa de extrapolação pode ser realizada em um período de tempo entre cerca de 5 segundos e cerca de 5 minutos; maior do que cerca de 1 minuto, superior a cerca de 2 minutos, ou maior do que cerca de 3 minutos, menos do que cerca de 3 minutos, menos do que cerca de quatro minutos, ou menos do que cerca de 5 minutos, ou qualquer porporção intermediária dos mesmos (por exemplo, a partir de cerca de 10 segundos a cerca de 3 minutos). Por exemplo, um pedaço ressecado de um órgão do paciente pode ser colocado em uma depressão recebendo o tecido de uma placa de extrapolação, que contém uma mistura de produtos químicos, com o tecido suportado por meio da superfície inferior da depressão. A amostra de tecido a ser processado pode ser cortada com uma espessura substancialmente uniforme por meio de uma lâmina guiada ao longo de carris de metal sobre a superfície de topo da mesa, que pode ser substancialmente nivelada com a superfície superior da depressão, enquanto que, opcionalmente, em contato com o aditivo químico inicia o endurecimento e, dessa maneira, facilita a tomar uma fatia fina. Depois de agregação, a amostra de tecido é colocada em um cassete ou outro portador no qual ele está contido, durante o processamento subsequente, até a amostra de tecido estar embebida em blocos prontos para seccionamento. O bloco é solidificado por meio do resfriamento e, dessa maneira, facilita o corte com um micrótomo. Em alternativa, uma amostra de tecido com uma espessura adequada pode ser fornecida por meio da retirada do dielétrico ou cortando o tecido com um trocarte (por exemplo, por biópsia) em vez de agregação, em seguida, colocado em um cassete ou outro suporte. Embora o tratamento manual seja preferido, os cassetes podem ser colocados em um transportador ou cesto para facilidade de manuseamento. O cassete ou o suporte é depois colocado em uma mistura química, de preferência manualmente.

[0051] Para reduzir o tempo de processamento, recomenda-se reduzir a espessura de uma amostra de tecido em uma placa de extrapolação tal como descrito em WO 01/96830 ou WO 2010/027430 para fornecer uma amostra de tecido, em que uma mistura de produtos químicos, como as usadas para a transformação de tecidos preenche uma depressão na placa de extrapolação quando a amostra de tecido é colocada para o corte para uma espessura substancialmente uniforme (vide o Exemplo 3). Por questões de simplicidade, é preferível que o mesmo aditivo químico venha a ser usado para extrapolação e endurecimento.

[0052] Um amostra de tecido, cassete, ou suporte é exposta à mistura química que endurece a amostra de tecido, ao mesmo tempo que está sendo aquecida por meio da energia de micro-ondas e opcionalmente agitada. Apenas uma única unidade de micro-ondas é necessária porque uma mistura química pode ser usada. A solução de endurecimento pode permanecer em uma galeria de sussurro através de vários ciclos de processamento, ou podem ser transferidos entre a galeria de sussurro e um reservatório em intervalos (por exemplo, removido para o reservatório após cada ciclo de endurecimento, quando todas as amostras de tecido foram processadas, ou no fim das operações durante o dia). Um portador de amostras ou cassetes contendo uma amostra de tecido pode ser de preferência transferido entre as câmaras de reação manualmente ou por meio de uma armadura ou faixa de transporte.

[0053] Para proporcionar a agitação que acelera o processamento, um produto químico ou mistura de matriz fundida pode ser arejado. Para proporcionar a agitação mais uniforme por meio do ar, uma placa de difusão na parte inferior de uma galeria de sussurro ou câmara de reação e através de uma parte substancial dos mesmos pode ser usada para arejamento uniforme de todo o volume da solução. A agitação pode também ser fornecida por meio de uma pressão e de vácuo (P/V) de ciclos (por exemplo, os períodos de poucos segundos cada um passado sob pressão, reduzida para um vácuo parcial, e sob a pressão de novo) ou solução de bombagem para dentro e para fora da galeria de sussurro ou câmara de reação (por exemplo, a circulação da solução durante todo) ou usando os ciclos P/V.

[0054] Em uma modalidade preferida, o sistema para a preparação de uma amostra de tecido pode ser limitado a três ou quatro módulos discretos: uma unidade opcional de extrapolação, uma unidade de micro-ondas, uma unidade de vácuo, e uma unidade de refrigeração opcional. A extrapolação de uma nova amostra de tecido sólido proporciona uma ou mais amostras de tecidos por meio do contato com uma mistura química que inicia o endurecimento e de corte para uma espessura substancialmente uniforme. Uma amostra de tecido é posta em contato com a mesma ou uma mistura de produtos químicos e de energia de micro-ondas diferentes para completar o endurecimento de uma unidade de micro-ondas. A amostra de tecido endurecido é então colocada em contato com um metal da matriz fundida e calor térmico para iniciar a impregnação de uma unidade de vácuo. O processamento ocorre em uma câmara de reação (também conhecido como uma réplica ou recipiente), que tem um interior em forma de galeria de sussurro (por exemplo, unidade de micro-ondas) ou cilindro (por exemplo, unidade de vácuo). Apenas uma unidade de micro-ondas e uma unidade de vácuo são necessárias, e podem ser integradas na mesma unidade. A agitação pode ser fornecida com um dispositivo mecânico que provoca arejamento, agitação ou vibração, ou a transferência de energia de ultrassom para a solução. De uma maneira alternativa, uma bomba pode ser usada para a agitação usando os ciclos P/V ou circula a solução. A incorporação da amostra de tecido endurecido e impregnado em blocos pode ser lançada (com matriz fundida adicional) em um molde. Um bloco de tecido pode ser solidificado através de uma unidade de refrigeração opcional em contato com uma superfície que conduz a energia térmica a partir do bloco de tecido.

[0055] Uma unidade de micro-ondas pode ser constituída por (i) uma fonte de energia de micro-ondas (por exemplo, circuito composto de ressonador de cavidade e um guia de ondas opcional que transmite a energia de micro-ondas a partir da fonte para uma galeria de sussurro, as suas dimensões e forma adaptada para esta finalidade) e (ii) uma galeria de sussurro que recebe a energia de micro-ondas transmitida e é adaptado para processar uma amostra de tecido por meio do endurecimento. A galeria de sussurro pode conter uma pluralidade de diferentes amostras. De preferência, a geometria do interior da galleria de sussurro é configurada para obter uma distribuição uniforme da energia de micro-ondas e aquecimento dos seus conteúdos. A uniformidade é obtida principalmente por conta de dois fatores.

[0056] Em primeiro lugar, a circunferência da galeria de sussurro é feita para ser um número inteiro de metade de comprimentos de onda da radiação a partir dos mesmos. Com boa disposição da entrada de guia de onda para a galeria de sussurros, um modo será animado o qual irá propagar em torno da parede exterior. Este tipo de modo caracteriza- se por meio do campo de micro-ondas sendo predominantemente perto da parede exterior. Um fenômeno semelhante ocorre em acústica onde as ondas sonoras viajam muito eficiente ao lado das paredes sólidas. Estes tipos de modos são chamados modos de galleria de sussurro.

[0057] Uma segunda consideração é a distância radial entre o limite da solução na galleria de sussurro e a sua parede. O espaçamento ideal é determinado empiricamente, alterando o espaçamento. Se o espaçamento for demasiado estreito, a energia de micro-ondas é absorvida principalmente perto da entrada da câmara de reação. Se o espaçamento é muito grande, a galeria de sussurro torna-se uma cavidade ressonante e é sensível à quantidade de mistura química e de sólidos (por exemplo, amostra, cassetes, ou transportador) nele. Com o espaçamento apropriado, o aquecimento eficiente da solução e dos sólidos é conseguido através de uma grande proporção de alturas dos conteúdos como medido por um sensor de nível de fora da galeria de sussurro (isto é, os volumes das mesmas). Tão pouco quanto 10% de toda a altura (ou seja, o volume total) ainda proporciona o aquecimento eficiente do seu conteúdo.

[0058] Do mesmo modo, a fonte e o guia de ondas está configurado para atingir a perda mínima de energia durante a transmissão da energia de micro-ondas. O aparelho de micro-ondas é configurado com um guia de ondas para ter não mais do que cerca de 2% de perda de energia a partir da fonte para a galeria de sussurro. A perda de energia mais elevada exigiria a utilização de blindagem dispendiosa e outros dispositivos de proteção para a fonte de energia de micro-ondas.

[0059] O aquecimento pode ser controlado por meio dos ciclos de energia liga-desliga de cerca de 10 a 25 segundos, porque o tempo mínimo é necessário por meio do aquecimento das características do cátodo da fonte de micro-ondas. Mas isso pode queimar o tecido, de modo que o aquecimento pode ser controlado por meio de uma fonte de corrente variável para permitir a variação continua da energia fornecida por meio da fonte de micro-ondas para a câmara de reação. Essa queima ou excesso de cozimento é caracterizada por meio da coloração homogênea de estruturas de tecido sem distinguir as características celulares. Este último é o preferido para reduzir a potência de pico. A unidade de micro-ondas pode ainda ser constituída por meio de qualquer combinação de um recipiente adaptado para se encaixar na câmara de reação e para receber pelo menos uma amostra de tecido (por exemplo, um cesto), pelo menos, uma temperatura e/ou a sonda de pressão para controlar as condições da câmara de reação, uma ou mais sondas de energia para controlar a energia de micro-ondas que está sendo enviada pela fonte, transmitido através do guia de ondas, e/ou recebidas pela câmara de reação; um fecho adaptado para encaixar a câmara de reação e para isolar a câmara de reação a partir de um ambiente do operador; isolamento térmico para manter o calor na câmara de reação; blindagem para isolar os componentes electrônicos a partir de produtos químicos na câmara de reação, e os circuitos de controle para receber a entrada a partir de pelo menos uma sonda ou temporizador e, dessa maneira, regular, pelo menos, uma parte da energia de micro-ondas a partir da fonte, transmitida através do guia de ondas, e/ou recebido na câmara de reação. O recipiente é, preferivelmente, transparente à radiação de micro-ondas e, por conseguinte, a energia não é consumida no seu aquecimento.

[0060] O material usado para a vedação de vácuo pode ser escolhido por meio da sua capacidade para isolar hermeticamente uma câmara de reação ou um reservatório a partir do ambiente, maleabilidade para assegurar um ajuste apertado, que está em conformidade com a tampa, e a resistência química de soluções do método. A modificação de uma câmara de reação ou reservatório com (i) uma tampa e uma junta/vedação para reduzir a evaporação e (ii) isolamento térmico pode reduzir a energia necessária para operar a unidade de micro-ondas ou a unidade de vácuo por duas ou três vezes.

[0061] Os módulos podem ocupar o mesmo espaço e/ou a amostra de tecido pode permanecer estacionária. Micro-ondas ou energia térmica pode ser regulamentada e transmitida no mesmo espaço, ou para a amostra de tecido estacionária em momentos diferentes no método. Soluções químicas e/ou vapores podem ser movidos para dentro ou fora do mesmo espaço, ou que entrem ou saiam de contato com a amostra de tecido estacionária. É preferido minimizar os requisitos de espaço para o sistema usando as duas câmaras de reação, e transportar as diferentes composições químicas em uma câmara de reação por meio da tubulação ou encanamentos de armazenamento e/ou câmaras de lixo separado. Um controlador pode receber uma entrada a partir da câmara de reação e/ou de sincronismo que parte do ciclo de processamento, e, dessa maneira, regular o transporte de diferentes composições químicas.

[0062] Tanto a transferência de soluções diferentes para dentro e para fora de uma câmara de reação quanto a transferência do cesto entre as câmaras de reação contend as soluções diferentes podem efetuar alterações nas etapas de processamento. Segurando o cesto acima, o interior de uma câmara de reação durante alguns segundos permite que o excesso de solução escorra para trás através de uma ou mais aberturas na parte inferior e/ou dos lados antes que o cesto seja transferido. Dessa maneira, a sequência em que o cesto é transferido entre as câmaras de reação, cada um contendo uma determinada composição dos produtos químicos de tratamento do tecido, e o momento em que o cesto é incubado em cada câmara de reação vai ditar a série de reações químicas necessárias para realizar o método de acordo com a presente invenção.

[0063] A tampa pode ser removida, a junta pode ser ligada à tampa e movida com ele. Este processo de remoção da tampa e vedação é realizado tanto para a unidade de corrente que contém a (s) amostra (s) de tecido quanto a unidade em que a (s) amostra (s) de tecido será (ão) posteriormente transferida (s). O cesto é então removido, a mistura química remanescente pode escoar a partir do cesto e cassetes, que podem estar contidos de volta para dentro da câmara de reação durante alguns segundos, e o cesto pode ser transferido para a câmara de reação próxima contendo a matriz fundida. A lavagem do tubo/encanamento e a limpeza da câmara de reação não são necessárias, porque a quantidade de solução deixada para trás é mínima. Finalmente, as tampas e juntas são substituídas. O tempo total para essa transferência é de cerca de um minuto.

[0064] De acordo com a presente invenção, as variações nas modalidades anteriores são previstas. Várias configurações do sistema de processamento de tecido são possíveis, e os módulos opcionais podem ser ligados para formar uma porção do sistema. A configuração específica escolhida pode ser ditada por meio da quantidade média de amostras de tecido que vai ser processado, em uma base diária pelo laboratório clínico, e/ou a velocidade com que os relatórios de histologia ou patologia devem ser preparados.

[0065] O sistema pode ser operado manualmente ou automatizado. A operação manual é particularmente apropriada para as instalações de processamento rápido de uma única amostra de tecido ou um pequeno número de amostras de tecido. Para um sistema automatizado, uma amostra de tecido pode ser transportada por um meio de transporte mecânico (por exemplo, braço robótico, trilha formada por correia e rolo) e/ou as composições químicas podem ser transferidas por meio do encanamento resistente à corrosão. Dessa maneira, o processamento pode ser automatizado através da transferência de amostras de tecido entre os módulos estacionários em uma sequência particular, o enchimento e esvaziamento dos módulos de diferentes produtos químicos de modo que as amostras de tecidos fixos são incubadas em uma sequência particular, ou em qualquer combinação dos mesmos. Os programas que controlam os parâmetros de processamento de tecidos (por exemplo, inicialização e desligamento do sistema, carga e descarga de uma série de amostras de tecido, condições, tais como o tempo de reação, o progresso das amostras de tecido através do sistema) pode ser monitorado em uma tela; parâmetros de processamento de tecidos (por exemplo, uma ou mais amostras de tecido na câmara de reação de cerca de 2, 3, 4, 5, 6 ou 7 minutos, a partir de cerca de duas a cerca de sete minutos, ou qualquer proporção intermediá - diato entre eles) pode ser pré-programada ou seleccionada pelo operador por meio de um teclado.

[0066] O transporte de armadura pode, por exemplo, agarrar um transportador contendo uma ou mais amostras de tecido com um mecanismo tipo tenaz ou travar o transportador com um dispositivo em forma de gancho. O braço pode ser articulado para executar o movimento de tipo humano, ou pode ser montado em um suporte fixo de coordenadas com movimento linear ou bi dimensional, e, opcionalmente, uma outra dimensão de movimento fornecida através da variação da altura do braço sobre o sistema. O transporte da faixa pode ser feito a partir de um material resiliente ou pegajoso para fixar um transportador contendo uma ou mais amostras de tecido sobre a pista por atrito, ou pode haver uma série regular de protuberâncias ou paredes para prender o transportador entre as mesmas. A pista pode ser formada como uma correia contínua, ou pode ser uma série de correias que transportam o transportador, com a correia colocada em movimento com um mecanismo de rolo ou roda dentada. O transportador pode ser uma cesta, contendo uma pluralidade de cassetes cada um com uma amostra de tecido única, que é adaptado para o transporte por ter uma haste (com ou sem um botão) para ser agarrado ou uma alça para ser pega pelo braço, ou para encaixar dentro de um entalhe ou recesso da pista. De uma maneira alternativa, o transportador pode conter uma única ou poucas amostras de tecido (por exemplo, um cassete), o transportador sendo adaptado para o transporte por meio da armadura ou a faixa de transporte.

[0067] Os motores elétricos e controladores podem ser usados para transportar uma amostra de tecido por meio do comando em tempo real do operador ou a seleção de um programa armazenado na memória do computador. Um mecanismo simples de controlar o tempo gasto pela amostra de tecido em cada módulo deve ser para movimentar a amostra de tecido ou veículo do mesmo a uma velocidade constante, e para ajustar o comprimento do percurso de cada módulo para acomodar o tempo de incubação desejado.

[0068] O tubo flexível ou a tubulação rígida, bem como outros componentes de canalização, deve ser feito de materiais resistentes a produtos químicos para evitar a corrosão (por exemplo, vidro, aço inoxidável, polietileno, politetrafluoroetileno, cloreto de polivinila). Os controladores e bombas/válvulas podem ser usados para o transporte de composições químicas (por exemplo, de mistura química e/ou da matriz fundida) a partir da câmara de armazenamento para a câmara de reação, a partir da câmara de reação para a câmara de armazenamento se a composição poder ser reusada, e a partir da câmara de reação para o restante da câmara se a composição estiver para ser lavada a partir do sistema, para encher a câmara de armazenamento, e para lavar a câmara de resíduos por meio do comando em tempo real do operador ou a selecção de um programa armazenado na memória do computador. Os selos e/ou resfriamento de vapor podem ser necessaries para isolar os vapores corrosivos da mistura química dos componentes mecânicos e elétricos do sistema. Um reservatório aquecido e os componentes de canalizações aquecidas podem ser necessários para manter a composição a temperatura de reação ou para assegurar que o metal da matriz fundida seja mantido em um estado de fluido transportável.

[0069] Todas as patentes, pedidos de patentes e outras publicações citadas na presente invenção são incorporadas por meio da referência na sua totalidade.

[0070] Os exemplos que se seguem pretendem ser ilustrativos da presente invenção, mas a prática da presente invenção não é limitada ou restringida de qualquer forma por eles.

EXEMPLOS Exemplo 1

[0071] O tecido fresco (ou seja, nem congelado nem prefixado) foi extrapolado para uma espessura substancialmente uniforme de cerca de 0,6 mm (por exemplo, a partir de cerca de 0,4 mm a cerca de 0,8 mm) para proporcionar uma ou mais amostras de tecido para o processamento. Prefere-se que o endurecimento seja iniciado enquanto o tecido sólido está a ser cortado por meio do contato do tecido fresco com uma mistura de produtos químicos, que podem ser os mesmos ou diferentes a partir da mistura de produtos químicos usados para o processamento (videer abaixo), durante a extrapolação. As amostras frescas de uma variedade de diferentes tecidos residuais e doenças da pele, pulmão, baço, fígado, útero, placenta, intestino, ovário, carcinoma (por exemplo, mama, rim, e dos testículos), sarcomas e leiomiomas foram preparados como seções permanentes de acordo para um novo processo.

[0072] As amostras de tecido foram processadas em uma mistura química composta de cerca de 90% (v/v) de acetona, cerca de 10% (v/v) de óleo mineral, e cerca de 0,1% (v/v) de dimetilsulfóxido (DMSO). Os dois principais componentes foram misturados em um volume de 3,8 L, e 5 ml de DMSO foi adicionado a isso. As amostras de tecido foram incubadas durante cerca de 4 a 5 minutos nesta mistura química a cerca de 50°C; a troca da solução foi promovida através da agitação da mistura química (por exemplo, o arejamento). Tanto a amostra de tecido quanto a mistura química foram aquecidos por meio da energia de micro-ondas.

[0073] Seguindo o endurecimento da amostra de tecido, que foi impregnado durante cerca de 4 a 5 minutos em parafina fundida a uma temperatura de cerca de 62°C sob pressão reduzida (cerca de 640 mm de Hg). A impregnação foi promovida através da agitação da parafina fundida com ciclos P/V. Depois de um tempo de processamento total de cerca de 8 a 10 minutos, a amostra de tecido foi incorporada na parafina fundida. A amostra de tecido endurecido e inicialmente impregnada e parafina fundida foram moldadas em um molde de metal, em seguida, elas foram contatadas com gelo seco (cerca de -78°C) durante cerca de 1 a 3 minutos. O bloco solidificado contendo a amostra de tecido foi seccionado em micrótomo, as seções de tecido foram flutuadas no líquido, se reuniram como seções seriadas sobre uma lâmina de vidro, e cera de parafina foi removida por meio da fusão em um forno (cerca de 104 °C). A amostra desparafinada estava pronta para análise histológica subsequente (por exemplo, coradas e lamínulas), análise química (por exemplo, proteína de isolamento, o DNA ou RNA a partir de seções de tecido ou uma porção do mesmo por meio da extração e purificação de, pelo menos parcial), ou estavelmente armazenadas à temperatura ambiente.

Exemplo 2

[0074] O processamento do tecido pode ser realizadao usando uma modalidade da presente invenção (mostrada na figura 2) da seguinte forma. Na unidade de micro-ondas, mistura química e micro-ondas de energia contata uma amostra de tecido em uma câmara com um interior em forma de galeria de sussurros para endurecer a amostra de tecido. A fonte de radiação M fornece energia de micro-ondas em um módulo de endurecimento. A agitação na unidade de micro-ondas pode ser proporcionada por meio do arejamento (bomba BP). A mistura química pode ser transferida entre seu reservatório e sua câmara usando uma linha regulada por válvulas, sensores de nível, e um bomba LP. Na unidade de vácuo, a amostra de tecido endurecido é então colocada em contato com um metal da matriz fundida e de energia térmica sob vácuo (bomba AP) em uma câmara de impregnação. A fonte de aquecimento Joule H fornece energia térmica em um módulo de impregnação. A agitação na unidade de vácuo pode ser proporcionada por meio do ciclo P/V usando a mesma bomba AP, que também pode transferir matriz fundida entre o seu compartimento e o seu reservatório por meio de uma linha regulada por válvulas e sensor de nível. Qualquer transferência de uma amostra de tecido para dentro e/ou fora de uma unidade pode ser manual ou automática, a transferência entre a unidade de micro-ondas e o aparelho de vácuo é de preferência automatizada. Na unidade de radiador, as amostras endurecidas e impregnadas são incorporadas em um molde, ais quais são solidificadas em contato com uma superfície termicamente condutora até um bloco de matriz sólida ser formado. O calor é extraído do molde através de uma fonte de resfriamento Peltier C em um módulo de incorporação.

[0075] Uma mistura química é manualmente ou automaticamente transferida para um módulo de endurecimento e péletes de parafina são adicionaos a um módulo de impregnação. A mistura química é pré- aquecida e a parafina é fundida, antes do processamento de uma amostra de tecido. O vácuo é desenhado e a pressão é aumentada para transferir as soluções, se necessário. A solução dentro da galeria de sussurros 2 ou 3 da câmara de reação é agitada por meio do borbulhamento (bomba BP) ou do ciclo P/V (bomba AP), respectivamente. A pressão do ar pode, opcionalmente, ser usada para transferir as soluções a partir de um reservatório para uma galeria de sussurro ou câmara de reação de um aparelho de micro-ondas. Uma ligação de fluido (por exemplo, tubos flexíveis) e uma porta em que a ligação se une a diferentes componentes do sistema podem ser usados para transferir a solução de entre um primeiro reservatório e galeria de sussurro usando uma bomba LP e as válvulas de solenóide. Apenas a impregnação em uma unidade de vácuo pode requerer a redução da pressão com uma bomba de ar porque o processamento na unidade de micro-ondas (por exemplo, endurecimento e impregnação inicial) pode ser realizado à pressão atmosférica.

[0076] As soluções e as câmaras de reação são aquecidas a temperaturas de operação apropriadas. Por exemplo, a mistura química pode ser pré-aquecida por meio de um aquecedor elétrico, no primeiro reservatório 1 da unidade de micro-ondas, antes da transferência para a sua galeria de sussurro 2, e a matriz sólida é fundida com a energia térmica (por exemplo, fonte de aquecimento por efeito Joule) no segundo reservatório 4 da unidade de vácuo antes da transferência da matriz fundida para a sua câmara de reação 3. Essas transferências são normalmente feitas no início da operação (diariamente) dos reservatórios e, em seguida, voltou para os reservatórios no final da operação (diariamente). A temperatura da mistura de produtos químicos é mantida a cerca de 50°C na unidade de micro-ondas por meio de uma fonte de aquecimento por micro-ondas M, a temperatura da matriz fundida é mantida a cerca de 62°C na unidade de vácuo por meio de uma fonte de aquecimento da radiação R. Os tubos válvulas entre o (i) primeiro reservatório 1 e galeria de sussurro 2 ou (ii) segundo reservatório 4 e câmara de 3 fornecem comunicação fluida em dois sentidos. O reservatório 1 e 4 para o reservatório de mistura química e da matriz fundida, respectivamente, são separadas. A presença ou ausência de uma solução e/ou cesto em um dispositivo de micro-ondas ou vácuo podem ser determinados usando um ou mais nívelde sensores (s) para detectar o volume ou o deslocamento da solução.

[0077] Uma cesta perfurada contenda as amostras de tecido em cassetes está carregada. Uma estação de carga é opcional, o cesto pode ser colocado em uma câmara de reação vazia da estação de carga (se estiver presente) e depois transfere automaticamente por um meio de transporte para a galeria de sussurro 2. Mas a transferência manual da cesta para a galeria de sussurro 2 é a preferida (ou seja, nenhuma estação de carregamento). A galeria de sussurro 2 contendo uma mistura química é aquecida por meio da energia de micro-ondas. O meio de transporte é de preferência um braço robô, com um gancho que reversivelmente atribui ao cesto; uma panela com um forro absorvente substituível está preso ao braço robô e gira sob o cesto para pegar o gotejamento da mistura química ou da matriz fundida (não mostrada). A tampa é fixada à galeria de sussurro ou a câmara de reação através de uma dobradiça; cada tampa forma uma vedação com a galeria de sussurro ou câmara de reação, usando uma junta de vedação de borracha, e é aberta/fechada por uma corrente conduzida com um motor elétrico (não mostrado). A transferência automática da cesta entre a galeria sussurrante 2 e 3 da câmara de reação é a preferida. Finalmente, quando o processamento do tecido está completo, o cesto carregado é transferido da câmara de reação 3. Uma estação de descarga é opcional, o cesto pode ser colocado em uma câmara de reação vazia da estação de descarga (se presente). O tempo necessário para a transferência de uma cesta entre as estações é menos do que cerca de 10 segundos. Os cassetes de tecido podem ser removidos do cesto após processamento para microtomia e coloração subsequente (vide a figura 1).

[0078] O método descrito no Exemplo 1 pode ser usado neste sistema. Uma mistura química pré - aquecida é transferida do primeiro reservatório 1 a partir da Galeria de sussurro 2, antes da adição de um cesto contendo as amostras de tecido para dentro da unidade de microondas. Do mesmo modo, a matriz fundida é transferida do segundo reservatório 4 para a câmara 3 antes da adição de um cesto contendo as amostras de tecido para dentro da unidade de vácuo. O cesto é transferido para a galeria de sussurro 2 de tal modo que uma ou mais amostras de tecido em contato com a mistura química, a tampa da galeria de sussurro está fechado, e uma ou mais das amostras de tecido continuam com o endurecimento sob a influência da radiação de microondas. Quando a incubação estiver completa (ou seja, as amostras de tecidos são apropriadamente endurecidas), a tampa é aberta e o cesto é transferido para a câmara de reação 3, que contém de matriz fundida, e uma ou mais das amostras de tecido são incubadas aí até que o processamento esteja completo.

[0079] A câmara de reação 3, que contém a matriz fundida é aquecida por meio da condução com uma fonte de aquecimento por efeito Joule. Em alternativa, um aquecedor elétrico mantém a temperatura da água que circula na tubagem em contato com a matriz, para mantê-lo em fusão. Por exemplo, a tubulação pode ser enrolada dentro da câmara de reação 3; esta bobina de aquecimento, então, transfere calor para o conteúdo. De preferência, a bobina de aquecimento é eliminada por meio do envolvimento na parede exterior da câmara de reação com o fio elétrico que conduz o calor através das paredes dentro dos conteúdos da câmara de reação. A agitação na unidade de vácuo pode ser realizada por meio dos ciclos P/V de pressão nominal de 0,35 Kg/cm2 a 500 mm de Hg de vácuo.

[0080] Cada amostra de tecido endurecido e, inicialmente, impregnado é lançada em um molde 5 contendo a matriz fundida. O molde cheio é depois resfriado por meio do contato com uma unidade de refrigeração que possui uma superfície condutora aquecida 6 com uma fonte de resfriamento de Peltier. A unidade de refrigeração pode ou não ser integrada no mesmo sistema, com as unidades de microondas e de vácuo. Da mesma forma, uma unidade de extrapolação (não mostrada) pode ou não ser integrada no mesmo sistema, como as unidades de micro-ondas e de vácuo.

[0081] Outras condições (por exemplo, tempos e temperaturas de incubação) são descritas na presente invenção. O sistema pode ser colocado em um armário para conter os gases que podem estar presentes e para desabafá-los (exaustão). Um sistema de mesa pode usar um transporte automático de transferir as amostras de tecidos ou podem ser transferidas manualmente. Em alternativa, uma porta com uma janela de vidro na altura do tronco permite ao operador acesso ao sistema quando não existe movimento do cesto, para carregar um cesto ou para descarregar um cesto do sistema, e para observar o movimento do cesto. Por razões de segurança, é preferível que a portatrave , quando o braço ou a tampa de uma galeria de sussurro ou câmara de reação está em movimento. Outra porta na altura do joelho permite que o operador (i) venha a acoplar um frasco do aditivo químico para uma porta que conduz ao primeiro reservatório 1, o qual está ligado à unidade de micro-ondas e (ii) para fundir a parafina no segundo reservatório 4 o qual está ligado para a unidade de vácuo.

[0082] A Figura 3 ilustra uma modalidade alternativa, uma versão do sistema semelhante ao descrito acima com a exceção de que não existem reservatórios.

[0083] Em ambas as figuras 2 e 3, todas as unidades podem ser implementadas em um único aparelho, que pode ser implementado em aparelhos separados, ou micro-ondas e unidades de vácuo podem ser implementadas de um aparelho e a unidade de resfriamento no outro.

Exemplo 3: Extrapolação do tecido sólido

[0084] A extrapolação de tecido pode ser realizada usando outra modalidade da presente invenção (mostrada nas figuras 4 a 9) da seguinte maneira. Um sistema de extrapolação é constituído por meio de uma base 20, que pode ser esterilizado, um suporte de tecido 30, e um suporte de tecido 40. O suporte de tecido 30 e o suporte de tecido 40 podem ser feitos a partir de um material plástico elástico (por exemplo, acrílico). Cada um tem uma superfície abrasiva praticamente plana (por exemplo, pluralidade de farpas, pinos ou serrilhas com a área aproximada do tecido fresco); ambas as superfícies abrasivas em contato com o tecido durante a extrapolação. O titular tem um aperto de dedo na parte superior e uma superfície abrasiva na parte inferior. De uma maneira alternativa, o suporte pode ser substituído por um dedo para exercer uma ligeira pressão sobre o tecido sólido e empurrá-lo contra o suporte (não mostrado).

[0085] O suporte de tecido 30 pode ser confortavelmente equipado empurrando com um dedo na cavidade de recebimento 24, de modo a que as superfícies superiores do suporte 30 e a base 20 são substancialmente niveladas com a outra e permitem que uma lâmina venha a cortar o tecido, quando movido entre a parte inferior de uma lâmina guia 22 e a parte superior da base 20, em que, pelo menos, duas guardas da lâmina de guia 22 se estendem por cima da superfície superior da base 20. O suporte 30 é constituído por um aro formado em torno de uma depressão que recebe tecido que tem uma profundidade de cerca de 0,6 mm (por exemplo, a partir de cerca de 0,4 mm a cerca de 0,8 mm, mais preferivelmente de cerca de 0,5 mm a cerca de 0,7). Antes de colocar o tecido sólido na depressão recebendo o tecido, o mesmo pode ser preenchido com uma mistura de produtos químicos usados para o endurecimento. Como uma alternativa para o suporte 30 sendo separado a partir da base 20, o primeiro pode ser formado integralmente com este último de tal modo que não existe qualquer cavidade de recepção (não mostrado).

[0086] O tecido sólido 60 pode ser cortado com uma ferramenta 50 de extrapolação. Quando o tecido 60 é colocado na depressão recebendo o tecido de suporte 30, a mistura química pode contatar o tecido 60, ser deslocado desde a depressão recebendo o tecido, e derramada para dentro da cavidade adjacente 26. O suporte 30 pode ser realizado em sua cavidade receptora 24 por meio da fricção, e pode ser removido manualmente, acessando através de uma cavidade adjacente 26 e manejada com um dedo. Dentro da base 20, a parte inferior da cavidade 26 pode ser definida como maior/menor do que, ou mesmo com a parte inferior da cavidade 24. A ferramenta de Extrapolação 50 fatia o tecido 60 com uma espessura de cerca de 0,6 mm (por exemplo, a partir de cerca de 0,4 mm a cerca de 0,8 mm, mais preferivelmente de cerca de 0,5 mm a cerca de 0,7), movendo a lâmina em pelo menos duas fendas estreitas, que são formadas entre a parte inferior da guia de lâmina 22 e o topo da base 20. A extrapolação de tecido sólido proporciona uma amostra de tecido com uma espessura substancialmente uniforme, porque a superfície inferior do suporte e a superfície superior da base são substancialmente paralelas umas as outras. Preferencialmente, pelo menos duas guardas da lâmina de guia 22 estão, pelo menos, separadas por meio da largura da depressão que recebe o tecido e/ou estender-se acima da superfície superior da base de, pelo menos, o comprimento da depressão recebendo o tecido.

[0087] Um bisturi ou uma ferramenta de extrapolação (Figura 9) pode ser usado para cortar o tecido sólido em uma ou mais amostras de tecidos. A ferramenta de extrapolação compreende uma pega 52, um suporte 54, e uma lâmina removível 58. O portador tem duas extremidades opostas: uma extremidade é permanentemente fixada ao punho e a extremidade oposta tem uma abertura nela formada. A lâmina é realizada no intervalo de um parafuso 56, que se desloca em uma direcção perpendicular ao (s) plano (s) da lâmina e o punho. Colocar a massa do suporte entre o aperto do punho e da lâmina facilita um movimento de corte horizontal por ponderação adequada da ferramenta

Exemplo 4: A detecção de antígeno em Seções do tecido

[0088] As amostras de tecido são transformadas durante 4 a 5 minutos em cada uma das unidades de micro-ondas e a unidade de vácuo. As amostras de tecido são, cada uma, incorporadas em moldes individuais, que contêm um excesso de parafina. O bloco de tecido pode ser solidificado por meio do resfriamento assistido. As seções de cera são cortadas em um micrótomo para uma espessura de 3 microns, colocadas em um banho de água, e flutuadas sobre uma lâmina de vidro. A cera nas seções de tecido é fundida na lâmina, que é, em seguida, desparafinada em um banho de xileno. O tecido seccionado na lâmina é re-hidratado em uma série de soluções de concentrações decrescentes de etanol durante um minuto cada (dois banhos de álcool absoluto, dois banhos de 95% de álcool, e um banho de 90% de álcool) e enxaguada por meio da submersão em água durante 2 minutos.

[0089] A peroxidase endógena é bloqueada com uma solução de 35 ml de 6% de peróxido de hidrogênio (H2O2) e 140 ml de metanol, foram incubadas durante 15 minutos. As lâminas são lavadas por meio da imersão em água durante 2 minutos, em seguida, fosfato salina (PBS) tamponada, durante 2 minutos, e finalmente seca.

[0090] As lâminas são transferidas para uma câmara de umidade e em contato com o soro normal de cavalo (NHS) durante 10 minutos para bloquear os locais de ligação não específicos. O excesso de soro normal de cavalo é decantado a partir de lâminas, e o anticorpo específico primário é incubado durante 30 minutos na seção de tecido, em uma câmara úmida, à temperatura ambiente. As lâminas são lavadas com um movimento de vai-e-vem com um frasco contendo PBS e imersão em um banho de PBS durante 2 minutos. O excesso de PBS é seco fora de cada fatia. A solução (também conhecidoa como anticorpo secundário ou biotinilado anti - coelho ou anti - camundongo) de ligação é adicionado a cada seção de tecido e incubado durante 25 minutos em uma câmara úmida, à temperatura ambiente. Os anticorpos secundários de coelho, rato e de ratinho (por exemplo, anti - IgM, anti - IgG) pode ser obtido a partir de Dako (Carpinteria, CA) e usado em uma diluição de cerca de 1: 600 . As lâminas são lavadas usando um frasco de pressão contendo PBS e imersão em um banho de PBS durante 2 minutos. O excesso de PBS é seco fora de cada slide.

[0091] O sinal é desenvolvido de acordo com as instruções do fabricante (Vector Laboratories). A solução do complexo de avidina - biotina (ABC) é adicionada para a seção de tecido e incubada durante 25 minutos em câmara úmida. As fatias são liberadas usando um frasco contendo PBS e submergindo em uma prateleira em um banho de PBS por 2 minutos. A prateleira foi submersa em um banho de diaminobenzidina (DAB) de cromogéneo por 6 minutos, então submersa em água corrente para lavar suavemente durante 4 minutos. As seções de tecido são contrastadas com hematoxilina (tempo de coloração vai depender da idade do hematoxilina) a partir de cerca de 15 segundos a 90 segundos à temperatura ambiente. As lâminas são lavadas em água corrente por 3 minutos para remover o excesso de contracorante, desidratadas em banhos de álcool (cerca de 10 segundos em cada) a partir de 85% de álcool em álcool absoluto, limpos em xileno e lamínulas.

[0092] Além de manchas histoquímica comuns (por exemplo, H & E e tricrômico), de coloração imuno-histoquímica das citoqueratinas, ER, PR, HER2, E- caderina, p63, PSA, EMA, HCA, RCA, AFP, HCG, CD10, CD30, CD31, CD45, CD68, e D2 - 40 antígenos foram realizadas.

Exemplo 5: Extração de DNA a partir de seções de tecidos processados

[0093] Duas seções de cera (cerca de 5 a 10 uM cada) a partir de um bloco sólido de tecido processado são cortadas com lâminas descartáveis . Elas são colocadas em um tubo de microfuge de 1,5, 800 μL de xileno e misturadas em vórtex, e 400 μ l de etanol absoluto é adicionado e misturando com vórtice. O tubo é centrifugado durante 5 minutos em uma microcentrífuga e o sobrenadante é decantado. Para o sedimento, 800 ul de etanol absoluto é adicionado e misturando com vórtice.

[0094] O sobrenadante é decantado após centrifugação, em seguida, 100 ul de uma solução de detergente e proteinase K (1% de NP40 ou Triton X - 100, 2,4 μ l de 2,5 mg/ml de proteinase K) é adicionado ao sedimento e incubado a 55 oC por uma hora. A proteinase K é inativada por meio da incubação a 95°C durante 10 minutos. O DNA de super-sobrenadante contendo é recolhido após centrifugação em uma microcentrífuga durante 5 minutos. Este material está pronto para a PCR. Deve ser precipitados e/ou ainda se extraída por meio de Southern blotting é planejado. Mais seções de tecido podem ser necessárias para obter DNA suficiente para análise que não envolve a amplificação. Menos seções podem ser necessárias para a amplificação.

Exemplo 6: Extração de RNA a partir de seções de tecidos processados

[0095] Dez seções de cera (cerca de 5 a 10 uM cada) a partir de um bloco sólido de tecido processado são cortadas com lâminas descartáveis . Elas são colocadas em 50 mL de tubos Falcon e desparafinadas com 20 ml de xileno. O tecido restante é lavado duas vezes com etanol absoluto durante 30 minutos. O tecido é suspenso em 0,5 gm/ml de uma solução contendo tiocianato de guanidina a 4 e, citrato de Na a 25 mM, pH 7,0, 0,5% de N- laurilsarcosina, e 2 - mercaptoetanol a 0,1 M. A solução é misturada por meio da agitação em vórtex e o DNA é cortado por meio de passagem através de uma agulha de seringa de 18 a 22 gauge.

[0096] A solução contendo o RNA é cuidadosamente posta em camadas em 2,8 mL de CsCl a 5,7 M em 5 ml de tubos de centrífuga (Sorvall) e o RNA é sedimentado por centrifugação em um rotor SW55Ti a 35.000 rpm e 18°C durante 14 horas em uma ultra- centrífuga Beckman L8 -53. A fração de topo é cuidadosamente removida para deixar um sedimento de RNA, na parte inferior do tubo. O sedimento é ressuspenso com água isenta de ribonuclease de um tubo de Eppendorf o qual é centrifugado a 14.000 rpm durante 10 minutos. O sobrenadante, contendo o RNA é guardado e a luz ultravioleta (UV) de absorvância é medida: um coeficiente de extinção de 1 OD280/cm é estimado para ser o equivalente de cerca de 40 ug/ml de RNA e a proporção OD260/OD280 deve situar-se entre cerca de 1,8 e cerca 2,0. As bandas 18S e 28S rRNA são separadas por gel desnaturante de eletroforese. O indicativo de purificação de RNA de boa qualidade são 18S e 28S rRNA de bandas presentes na proporção esperada e ausência de degradação.

[0097] Ao referir-se a um intervalo numérico, deve ser entendido que todos os valores dentro da proporção também são descritos (por exemplo, 9: 59, também inclui todos os valores inteiros entre um e dez, bem como todas as proporçãos de intermediários, tais como 2-10, 1-5, e 3-8). O termo "cerca de " pode referir-se a incerteza estatística associada a uma medição ou a variabilidade em uma quantidade numérica que uma pessoa que é versada na técnica iria entender por não afetar o funcionamento da presente invenção ou a sua patenteabilidade.

[0098] Todas as modificações e substituições que vêm no sentido das reivindicações e da proporção de seus equivalentes legais estão a ser abrangidas no seu âmbito. Um pedido usando a transição "compreendendo " permite a inclusão de outros elementos como estando dentro do escopo da reivindicação, a presente invenção também é descrita por meio de tais reivindicações usando a frase transicional " consistindo essencialmente em " (isto é, permitindo a inclusão de outros elementos para situar-se dentro do âmbito da reivindicação, se eles não afectar materialmente a operação da presente invenção) e a transição " que consiste " (isto é, permitindo que apenas os elementos listados na reivindicação de outras impurezas ou de actividades inconsequentes que normalmente estão associadas com a presente invenção), em vez o termo " compreendendo ". Quaisquer destas três transições podem ser usadas para reivindicar a presente invenção.

[0099] Deve ser entendido que um elemento descrito no presente relatório descritivo não deve ser interpretado como uma limitação da presente invenção reivindicada a menos que seja expressamente recitado nas reivindicações. Dessa maneira, as reivindicações concedidas são a base para determinar o âmbito da proteção jurídica, em vez de uma limitação do presente relatório descritivo que é lida nas reivindicações. Em contraste, a técnica anterior é explicitamente excluída da presente invenção para a extensão das modalidades específicas que se antecipa a presente invenção reivindicada ou destroem a novidade.

[00100] Além disso, nenhuma relação especial entre duas ou mais limitações de uma reivindicação se destina a não ser que tal relação seja explicitamente recitada na reivindicação (por exemplo, a disposição dos componentes em uma reivindicação do produto ou ordem de etapas em uma reivindicação de método não é uma limitação do direito a não ser explicitamente indicado para ser assim). Todas as possíveis combinações e permutações dos elementos individuais descritos neste documento serão consideradas aspectos da presente invenção. Da mesma forma, as generalizações de descrição da presente invenção são consideradas como fazendo parte da presente invenção.

[00101] A partir do exposto, será evidente para uma pessoa com conhecimentos na técnica que a presente invenção pode ser concretizada em outras formas específicas sem se afastar do seu espírito ou características essenciais. As modalidades descritas devem ser consideradas apenas como ilustrativas e não restritivas, porque o alcance da proteção legal prevista a presente invenção será indicado por meio das reivindicações em anexo do que por meio deste relatório descritivo.

Claims

1. Sistema para o processamento de uma amostra de um tecido sólido, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) um módulo de endurecimento para endurecer a amostra, composta por (i) uma primeira câmara tendo um interior em forma de uma galeria de sussurro, (ii) uma primeira tampa que isola a primeira câmara, quando fechada, é opaca à radiação de micro-ondas, e acessa a primeira câmara, quando aberta, (iii) uma primeira gaxeta retém vapores químicos e evaporação no interior da primeira câmara, e (iv) uma fonte de radiação transmitindo energia de micro-ondas para o interior da primeira câmara, em que a amostra é posta em contato com uma mistura química na galeria de sussurro; (b) um módulo de impreganação para impregnar a amostra que foi endurecida, o módulo de impreganação composto por (i) uma segunda câmara tendo um interior capaz de proporcionar uma pressão reduzida em relação ao exterior, (ii) uma segunda tampa, que isola a segunda câmara quando fechada e acessa a segunda câmara quando aberta, (iii) uma gaxeta para manter um diferencial de pressão entre o interior e o exterior da segunda câmara, (iv) uma bomba, pelo menos, diminuindo a pressão no interior da segunda câmara abaixo de 100 KPa (1 bar), e (v) um aquecedor conduzindo energia térmica para o interior da segunda câmara, em que a amostra endurecida está em contato com uma matriz fundida na câmara; e (c) um módulo de embutir compreendendo um resfriador operável para solidificar um bloco que contém a amostra que foi endurecida e impregnada, em que o resfriador é operável para conduzir energia térmica a partir do bloco, que é solidificado por meio do resfriamento a uma temperatura inferior a cerca de -50°C, inferior a cerca de -25°C, inferior a cerca de 0°C, menos do que cerca de 5°C, ou a uma temperatura em qualquer intervalo entre as mesmas e de modo que o bloco pode ser seccionado com uma microtomia depois de ser solidificado por menos de cerca de 3 minutos.

2. Sistema de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o módulo de endurecimento é ainda constituído por um primeiro agitador, o que pode ser um gaseificador, no interior da galeria de sussurro para promover a troca da solução entre a mistura química e a amostra.

3. Sistema de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o módulo de impregnação é ainda constituído por um segundo agitador, que pode ser uma válvula de oscilação da pressão, no interior da câmara para promover a troca da solução entre a matriz fundida e a amostra.

4. Sistema de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a amostra é endurecida através da mistura química, da energia de micro-ondas ou de ambos.

5. Sistema de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a amostra é impregnada em seguida incorporada em um bloco usando a mesma matriz.

6. Sistema de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a fonte de radiação mantém a mistura química na primeira câmara a uma temperatura superior a cerca de 45°C, superior a cerca de 50°C, superior a cerca de 55°C, superior a cerca de 60°C, inferior a cerca de 60°C, inferior a cerca de 65°C, inferior a cerca de 70°C, inferior a cerca de 75°C, ou a uma temperatura em qualquer intervalo entre as mesmas.

7. Sistema de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a pressão na câmara é superior a cerca de 0,1 KPa (0,001 bar) , superior a cerca de 1 KPa (0,01 bar) , superior a cerca de 10 KPa (0,1 bar) , inferior a cerca de 20 KPa (0,2 bar), inferior a cerca de 30 KPa (0,3 bar), inferior a cerca de 40 KPa (0,4 bar), inferior a cerca de 50 KPa (0,5 bar), abaixo de 100 KPa (1 bar), ou a uma pressão em qualquer intervalo entre as mesmas.

8. Sistema de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o aquecedor mantém a matriz fundida na segunda câmara a uma temperatura superior a cerca de 55°C, superior a cerca de 60°C, superior a cerca de 65°C, inferior a cerca de 65°C, inferior a cerca de 70°C, inferior a cerca de 75°C, inferior a cerca de 80°C, inferior a cerca de 85°C, ou a uma temperatura em qualquer intervalo entre as mesmas.

9. Sistema de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende ainda um meio de transporte que liga, pelo menos, os módulos de endurecimento e de impregnação, módulos de impregnação e de incorporação, ou módulos de endurecimento, de impregnação e de incorporação.

10. Sistema de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que o transporte é composto por uma faixa ou uma armadura de ligação de módulos sucessivos.

11. Sistema de acordo com a reivindicação 9 ou 10, caracterizado pelo fato de que compreende ainda uma pluralidade de transportadores que têm perfurações que permitem a troca da solução de amostra e entre qualquer mistura ou de matriz, em que cada amostra é colocada dentro de um de uma pluralidade de transportadores e cada transportador é reversivelmente ligado ao transporte de modo lotes de transportadores que podem ser processados de forma contínua.

12. Sistema de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 a 11, caracterizado pelo fato de que compreende ainda um módulo iniciador a partir de uma amostra de tecido que entra no sistema, em seguida, é então transportada para o módulo de endurecimento.

13. Sistema de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 a 12, caracterizado pelo fato de que compreende ainda um módulo final para o qual uma amostra incorporada é transportada a partir da incorporação do módulo, em seguida espera ser recebida.

14. Método para o processamento de uma amostra de um tecido sólido, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) extrapolação de um tecido para formar uma amostra; (b) o endurecimento da amostra em uma galeria de sussurro, em que a amostra é posta em contato com uma mistura de produtos químicos e energia de micro-ondas, em que a mistura de produtos químicos é uma solução não aquosa de pelo menos uma cetona e pelo menos um óleo, em que uma relação de volume de a pelo menos uma cetona e pelo menos um óleo situa-se entre cerca de 12: 1 a cerca de 6:1, e um tensoativo, e a mistura de produtos químicos não inclui álcool; (c) impregnar a amostra sob vácuo, em que a amostra é posta em contato com uma matriz fundida e energia térmica, e (d) a incorporação da amostra em um bloco e solidificando o bloco por meio da condução de energia térmica do bloco com um refrigerador, em que o bloco sólido pode ser seccionado para exame histológico intraoperatório.

15. Método de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a extrapolação de tecido fresco no exterior do corpo de um sujeito para fornecer a amostra, em que a amostra é inicialmente endurecida em uma mistura química, que pode ser a mesma ou diferente a partir da mistura de produtos químicos usada para o processamento, durante a extrapolação.

16. Método de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a amostra tem uma espessura menos do que cerca de 1 mm, menos do que cerca de 0,8 mm ou menos do que cerca de 0,6 mm.

17. Método de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a mistura química é uma solução não aquosa compreendendo (i) pelo menos uma cetona, que pode ser acetona, e (ii) pelo menos um óleo, que pode ser óleo de pinho ou mineral.

18. Método de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a mistura química é ainda constituída por pelo menos um tensoativo, que pode ser dimetil sulfóxido.

19. Método de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a matriz é constituída por, pelo menos, uma cera de parafina.

20. Método de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a amostra é endurecida através da mistura química, da energia de micro-ondas ou de ambos.

21. Método de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a amostra é impregnada em seguida, incorporada em um bloco usando a mesma matriz.

22. Método de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a mistura química é a uma temperatura superior a cerca de 45 °C, superior a cerca de 50 °C, superior a cerca de 55°C, superior a cerca de 60°C, inferior a cerca de 60°C, menos do que cerca de 65°C, menos do que cerca de 70°C, inferior a cerca de 75°C ou a uma temperatura em qualquer intervalo entre as mesmas.

23. Método de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o vácuo é superior a cerca de 0,1 KPa (0,001 bar) , superior a cerca de 1 KPa (0,01 bar) , superior a cerca de 10 KPa (0,1 bar) , superior a cerca de 50 KPa (0,5 bar), superior a cerca de 60 KPa (0,6 bar), superior a cerca de 70 KPa (0,7 bar), inferior a cerca de 20 KPa (0,2 bar), inferior a cerca de 30 KPa (0,3 bar), inferior a cerca de 40 KPa (0,4 bar), inferior a cerca de 50 KPa (0,5 bar), inferior a cerca de 60 KPa (0,6 bar), inferior a cerca de 70 KPa (0,7 bar), inferior a cerca de 80 KPa (0,8 bar), inferior a cerca de 90 KPa (0,9 bar) ou inferior a cerca de 100 KPa (1 bar) ou a uma pressão entre os mesmos em qualquer intervalo.

24. Método de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a matriz é fundida a uma temperatura superior a cerca de 55°C, superior a cerca de 60°C, superior a cerca de 65°C, inferior a cerca de 65°C, inferior a cerca de 70°C, menos do que cerca de 75°C, menos do que cerca de 80°C, inferior a cerca de 85°C ou a uma temperatura em qualquer intervalo entre as mesmas.

25. Método de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o bloco é solidificado por meio do resfriamento a uma temperatura inferior a cerca de -50°C, inferior a cerca de -25°C, inferior a cerca de 0°C, menos do que cerca de 5°C, superior a cerca de -200°C, superior a cerca de -100°C, superior a cerca de -50°C, superior a cerca de -25°C ou a uma temperatura em qualquer intervalo entre as mesmas.

26. Método de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a amostra é processada manualmente.

27. Método de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a amostra é processada automaticamente.

28. Método de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a amostra é endurecida depois de ser posta em contato com a mistura química e a energia de micro-ondas por menos de cerca de 10 minutos, menos do que cerca de 8 minutos, menos do que cerca de 6 minutos, mais do que cerca de 2 minutos, mais do que cerca de 4 minutos, mais do que cerca de 6 minutos ou durante um tempo em qualquer intervalo entre as mesmas.

29. Método de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a amostra é impregnada depois de ter sido contatada com a matriz fundida e a energia térmica por menos do que cerca de 10 minutos, menos do que cerca de 8 minutos, menos do que cerca de 6 minutos, mais do que cerca de 2 minutos, mais do que cerca de 4 minutos, mais do que cerca de 6 minutos ou durante um tempo em qualquer intervalo entre as mesmas.

30. Método de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o bloco pode ser seccionado depois de ser solidificado por menos do que cerca de 5 minutos, menos do que cerca de 4 minutos, menos do que cerca de 3 minutos, mais do que cerca de 1 minuto, mais do que cerca de 2 minutos, mais do que cerca a 3 minutos ou por um tempo entre os mesmos em qualquer faixa.

31. Módulo de extrapolação de tecido sólido em conformidade com o sistema para o processamento de uma amostra de um tecido sólido como definido na reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreendendo: (a) uma base composta por uma cavidade de recebimento que tem um comprimento e uma largura, uma superfície plana superior, uma guia de lâmina composta por, pelo menos, duas guardas que se prolongam acima da superfície de topo e formando pelo menos duas fendas entre os mesmos, e uma cavidade adjacente ao lado da cavidade de recebimento, e (b) um suporte que tem um comprimento e uma largura os mesmos que o comprimento e a largura da cavidade de recebimento de modo que o suporte se encaixa confortavelmente dentro da cavidade de recebimento, o qual é composto de um aro que não se estende acima da superfície superior da base, uma depressão que recebe o tecido que tem uma profundidade de cerca de 0,6 mm que é formada pelo aro, e uma superfície inferior plana que é abrasiva, em que a superfície inferior do suporte e a superfície superior da base são paralelas uma à outra, e as fendas são pelo menos tão longas quanto o comprimento do suporte e, pelo menos, separadas pela largura do suporte.

32. Módulo de acordo com a reivindicação 31, caracterizado pelo fato de que compreende ainda um suporte de tecido composto por um suporte para os dedos de topo e uma superfície abrasiva inferior.

33. Sistema de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende ainda o módulo como definido na reivindicação 31.

34. Ferramenta de extrapolação em conformidade com o sistema para o processamento de uma amostra de um tecido sólido como definido na reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende uma pega, um suporte e uma lâmina removível, em que o suporte tem duas extremidades opostas, uma extremidade do suporte está permanentemente fixada à pega, a extremidade oposta do suporte tem uma abertura nele formada, a lâmina é mantida no intervalo de um parafuso, e o parafuso desloca em uma direção perpendicular a um plano paralelo ao à lâmina e à pega.