BR112013008768B1 - Uso de uma composição que compreende um peptídeo antimicrobiano como um conservante de alimentos e método para prevenir ou inibir a deterioração de um produto alimentar por meio de um micro-organismo - Google Patents

Uso de uma composição que compreende um peptídeo antimicrobiano como um conservante de alimentos e método para prevenir ou inibir a deterioração de um produto alimentar por meio de um micro-organismo Download PDF

Info

Publication number
BR112013008768B1
BR112013008768B1 BR112013008768-4A BR112013008768A BR112013008768B1 BR 112013008768 B1 BR112013008768 B1 BR 112013008768B1 BR 112013008768 A BR112013008768 A BR 112013008768A BR 112013008768 B1 BR112013008768 B1 BR 112013008768B1
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
blad
food
food product
antimicrobial
composition
Prior art date
Application number
BR112013008768-4A
Other languages
English (en)
Other versions
BR112013008768A2 (pt
Inventor
Alexandra Manuela Lourenço Carreira
Sara Alexandra Valadas Da Silva Monteiro
Ricardo Manuel De Seixas Boavida Ferreira
Original Assignee
Consumo Em Verde - Biotecnologia Das Plantas, S.A.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Consumo Em Verde - Biotecnologia Das Plantas, S.A. filed Critical Consumo Em Verde - Biotecnologia Das Plantas, S.A.
Publication of BR112013008768A2 publication Critical patent/BR112013008768A2/pt
Publication of BR112013008768B1 publication Critical patent/BR112013008768B1/pt

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A21—BAKING; EDIBLE DOUGHS
    • A21D—TREATMENT, e.g. PRESERVATION, OF FLOUR OR DOUGH, e.g. BY ADDITION OF MATERIALS; BAKING; BAKERY PRODUCTS; PRESERVATION THEREOF
    • A21D2/00—Treatment of flour or dough by adding materials thereto before or during baking
    • A21D2/08—Treatment of flour or dough by adding materials thereto before or during baking by adding organic substances
    • A21D2/24—Organic nitrogen compounds
    • A21D2/26—Proteins
    • A21D2/267—Microbial proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23B—PRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
    • A23B7/00—Preservation or chemical ripening of fruit or vegetables
    • A23B7/14—Preserving or ripening with chemicals not covered by groups A23B7/08 or A23B7/10
    • A23B7/153—Preserving or ripening with chemicals not covered by groups A23B7/08 or A23B7/10 in the form of liquids or solids
    • A23B7/154—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A23B7/155—Microorganisms; Enzymes; Antibiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23B—PRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
    • A23B4/00—General methods for preserving meat, sausages, fish or fish products
    • A23B4/14—Preserving with chemicals not covered by groups A23B4/02 or A23B4/12
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N47/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid
    • A01N47/40—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid the carbon atom having a double or triple bond to nitrogen, e.g. cyanates, cyanamides
    • A01N47/42—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid the carbon atom having a double or triple bond to nitrogen, e.g. cyanates, cyanamides containing —N=CX2 groups, e.g. isothiourea
    • A01N47/44—Guanidine; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N65/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing material from algae, lichens, bryophyta, multi-cellular fungi or plants, or extracts thereof
    • A01N65/08—Magnoliopsida [dicotyledons]
    • A01N65/20—Fabaceae or Leguminosae [Pea or Legume family], e.g. pea, lentil, soybean, clover, acacia, honey locust, derris or millettia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A21—BAKING; EDIBLE DOUGHS
    • A21D—TREATMENT, e.g. PRESERVATION, OF FLOUR OR DOUGH, e.g. BY ADDITION OF MATERIALS; BAKING; BAKERY PRODUCTS; PRESERVATION THEREOF
    • A21D15/00—Preserving finished, partly finished or par-baked bakery products; Improving
    • A21D15/08—Preserving finished, partly finished or par-baked bakery products; Improving by coating, e.g. with microbiocidal agents, with protective films
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23B—PRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
    • A23B4/00—General methods for preserving meat, sausages, fish or fish products
    • A23B4/14—Preserving with chemicals not covered by groups A23B4/02 or A23B4/12
    • A23B4/18—Preserving with chemicals not covered by groups A23B4/02 or A23B4/12 in the form of liquids or solids
    • A23B4/20—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23B—PRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
    • A23B7/00—Preservation or chemical ripening of fruit or vegetables
    • A23B7/14—Preserving or ripening with chemicals not covered by groups A23B7/08 or A23B7/10
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23B—PRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
    • A23B7/00—Preservation or chemical ripening of fruit or vegetables
    • A23B7/14—Preserving or ripening with chemicals not covered by groups A23B7/08 or A23B7/10
    • A23B7/153—Preserving or ripening with chemicals not covered by groups A23B7/08 or A23B7/10 in the form of liquids or solids
    • A23B7/154—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23B—PRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
    • A23B9/00—Preservation of edible seeds, e.g. cereals
    • A23B9/16—Preserving with chemicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23B—PRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
    • A23B9/00—Preservation of edible seeds, e.g. cereals
    • A23B9/16—Preserving with chemicals
    • A23B9/24—Preserving with chemicals in the form of liquids or solids
    • A23B9/26—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C3/00—Preservation of milk or milk preparations
    • A23C3/08—Preservation of milk or milk preparations by addition of preservatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L3/00—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs
    • A23L3/34—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L3/00—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs
    • A23L3/34—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals
    • A23L3/3454—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals in the form of liquids or solids
    • A23L3/3463—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L3/00—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs
    • A23L3/34—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals
    • A23L3/3454—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals in the form of liquids or solids
    • A23L3/3463—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A23L3/34635—Antibiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L3/00—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs
    • A23L3/34—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals
    • A23L3/3454—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals in the form of liquids or solids
    • A23L3/3463—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A23L3/3472—Compounds of undetermined constitution obtained from animals or plants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L3/00—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs
    • A23L3/34—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals
    • A23L3/3454—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals in the form of liquids or solids
    • A23L3/3463—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A23L3/3526—Organic compounds containing nitrogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Food Preservation Except Freezing, Refrigeration, And Drying (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

uso de uma composição que compreende um peptídeo antimicrobiano como um alimento conservante. a presente invenção refere-se ao uso de uma composição que compreende um polipeptídeo antimicrobiano que compreende blad ou uma variante ativa do mesmo com a finalidade de impedir ou de inibir a deterioração de um produto alimentar por meio de um micro-organismo. também é fornecido um método para previnir ou inibir a deterioração de um produto alimentar por meio de um micro-organismo, que compreende a administração a um gênero alimentício em necessidade do mesmo de uma quantidade eficaz de uma composição que compreende um polipeptídeo antimicrobiano que compreende blad ou uma variante ativa do mesmo.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para USO DE UMA COMPOSIÇÃO QUE COMPREENDE UM PEPTÍDEO ANTIMICROBIANO COMO UM CONSERVANTE DE ALIMENTOS E MÉTODO PARA PREVENIR OU INIBIR A DETERIORAÇÃO DE UM PRODUTO ALIMENTAR POR MEIO DE UM MICRO-ORGANISMO.
Campo da Invenção [0001] A presente invenção refere-se ao campo de agentes antimicrobianos que alvejam os micro-organismos que deterioram alimentos.
Introdução [0002] A conservação de alimentos é o processo de tratamento de alimentos para prevenir ou para inibir a deterioração de alimentos causada por meio da degradação químico / enzimática endógena e / ou causada ou acelerada por meio de um micro-organismo. Um número de técnicas existe para conservar os alimentos, alguns dos quais inibem os processos endógenos (por exemplo, antioxidantes), alguns dos quais inibem os processos microbianos (por exemplo, antimicrobianos), e alguns dos quais inibem os dois tipos de processo (por exemplo, congelamento). Um composto ao qual é usado com a finalidade de inibir a deterioração dos alimentos é comumente referido como um conservante, o qual pode ser, por exemplo, um antioxidante ou um agente antimicrobiano.
[0003] As técnicas de preservação de alimentos específicos incluem a secagem, aquecimento, refrigeração ou congelamento, inibição osmótico (por exemplo, utilização de xaropes ou de sal), embalagem a vácuo, conservas e engarrafamento, geleificação, envasamento, jugging, irradiação ionizante, processamento pulsante do campo elétrico, conservação de alimentos de alta pressão e conservação de alimentos de ultra-alta pressão de água, uso de antioxidantes, e / ou a utilização de conservantes antimicrobianos (por
Petição 870190120570, de 21/11/2019, pág. 4/37
2/28 exemplo, dióxido de enxofre, carbono dióxido de carbono, etanol, ácido acético, ácido cítrico, ácido láctico, ácido sórbico, benzoatos, nitratos e nitritos, sulfitos, propionato de cálcio e de metilcloroisotiazolinona).
[0004] Apesar do número relativamente grande de técnicas de preservação dos alimentos que são atualmente empregados existe uma necessidade de desenvolver novos agentes de conservação antimicrobianos. Isto é devido a inadequação de muitas técnicas preexistentes com a finalidade de visar de maneira eficaz os microorganismos e os problemas aos quais dizem respeito à eficácia e / ou segurança de muitos conservantes antimicrobianos preexistentes em particular.
[0005] As muitas técnicas de preservação de alimentos que tentam criar condições favoráveis de não crescimento para microorganismos são ineficazes contra organismos que sobrevivem em condições extremas (por exemplo, espécies de Pseudomonas podem crescer em temperaturas muito baixas ; Bacillus coagulans é resistente ao calor e ácido tolerante; muitas espécies de Aspergillus demonstram oligotrofia, espécie Zygosaccharomyces tem alta xerotolerância).
[0006] Muitos conservantes antimicrobianos preexistentes tem uma atividade moderada, especialmente contra micro-organismos, com resistência inata ou adquirida, e / ou espectro estreito. Por exemplo, as Espécies Zygosaccharomyces tem elevada tolerância ao etanol, ácido acético, ácido sórbico, ácido benzoico e dióxido de enxofre. Além disso, um certo número de conservantes antimicrobianos preexistente têm sido associado a diversos efeitos colaterais, tais como problemas respiratórios ou ADD. Em exemplos particulares, o dióxido de enxofre é irritante para os brônquios de asmáticos, os nitritos são potencialmente cancerígenos, os benzoatos têm sido associados a várias alergias, asma, pruridos da pele e danos
Petição 870190120570, de 21/11/2019, pág. 5/37
3/28 cerebrais.
[0007] Além disso, as técnicas eficazes para inibir o crescimento microbiano em alimentos, tais como um pH baixo ou baixa atividade de água, muitas vezes são inaceitáveis para o consumidor (por exemplo, dar um sabor ácido) ou tendo as implicações negativas para a saúde (por exemplo, sal ou açúcar elevado).
[0008] Está entre os objetivos da presente invenção obter uma solução para estes problemas, e, de uma maneira específica, por exemplo com a finalidade de proporcionar um novo agente antimicrobiano, com uma atividade potente e de largo espectro contra micro-organismos tendo ao mesmo tempo uma baixa toxicidade.
Sumário da Presente Invenção [0009] Os inventores verificaram surpreendentemente que o polipeptídeo Blad a partir de Lupinus mostra a atividade antimicrobiana potente contra um grande número de diversas bactérias e organismos de fungos os quais provocam a deterioração dos alimentos. Os inventores também descobriram que o Polipeptídeo Blad é não tóxico, portanto, tornando BLAD um excelente composto no que diz respeito à utilização como um conservante de alimentos antimicrobianos.
[00010] Por conseguinte, os inventores proporcionam a utilização de uma composição que compreende um agente antimicrobiano Blad que compreende o polipeptídeo ou um variante ativo do mesmo destinado a prevenir ou a inibir a deterioração de um produto alimentar por meio de um micro-organismo. De um maneira preferida, o referido micro-organismo é uma bactéria (de preferência espécies que deterioram os alimentos da Pseudomonas ou gêneros Bacillus) ou um fungo (de preferência, espécies que deterioram os alimentos a partir de um dos seguintes gêneros; Alternaria, Aspergillus, Fusarium, Botrytis, Colletotrichum, Saccharomyces, Kluyveromyces e
Zygosaccharomyces).
Petição 870190120570, de 21/11/2019, pág. 6/37
4/28 [00011] Nas modalidades preferidas, o produto alimentar é derivado a partir de, fornece, ou seja, um fruto, uma noz, um vegetal, uma semente, um açúcar, um produto lácteo, um alimento líquido ou pastoso, carne, peixe ou pão.
[00012] Nas modalidades preferidas, o produto alimentar é um morango, de preferência em que o micro-organismo é Botrytis cinerea ou Colletotrichum acutatum, de preferência, Botrytis cinerea.
[00013] Nas modalidades preferidas, a referida composição compreende ainda um agente quelante.
[00014] Os inventores também proporcionam um método com a finalidade de prevenir ou de inibir a deterioração de um produto alimentar por meio de um micro-organismo que compreende a administração a um gênero alimentício em necessidade do mesmo de uma quantidade eficaz de uma composição que compreende um polipeptídeo antimicrobiano que compreende Blad ou um variante ativo dos mesmos.
Descrição dos Desenhos [00015] A presente invenção será descrita com referência aos desenhos anexos, nos quais: A Figura 1 mostra a sequência de codificação precursora B-conglutina Lupinus albus (SEQ ID NO: 1) ; e [00016] A Figura 2 mostra o fragmento interno da sequência de codificação precursora B-conglutina que corresponde ao Blad (SEQ ID NO: 3).
Descrição Detalhada da presente Invenção
Blad [00017] Blad (Banda de Lupinus albus doce - banda a partir de L. albus doce) foi o nome dado a um produto da decomposição estável e intermediário de B-conglutina, a principal proteína de armazenamento presente em sementes do gênero Lupinus. Foi caracterizado como um polipeptídeo de 20 kD, o composto de 173 resíduos de aminoácidos, e
Petição 870190120570, de 21/11/2019, pág. 7/37
5/28 codificado por meio de um fragmento interno (519 nucleotídeos, depositados no GenBank sob o número de acesso ABB13526) do gene que codifica o precursor de B-conglutina a partir de Lupinus (1791 nucleotídeos, publicado em GenBank, sob o número de acesso AAS97865). Quando os iniciadores que codificam as sequências terminais Blad são utilizados com a finalidade de amplificar uma sequência a partir de DNA genômico de Lupinus, um produto ~620 bp é obtido, indicando a presença de um íntron no gene que codifica o fragmento Blad. O Blad que ocorre de uma forma natural é o componente principal de um glico-oligômero 210 kD que acumula exclusivamente (após a proteólise limitada intensiva de B-conglutina) nos cotilédones das espécies Lupinus, entre os dias 4 e 12 após o início da germinação. Enquanto o dito oligômero é glicosilado, o Blad que ocorre de uma forma natural é não glicosilado. O Blad contendo glico-oligômero é composto de vários polipeptídeos, os que exibem grandes massas moleculares de 14, 17, 20, 32, 36, 48 e 50 kD. Um polipetídeo 20k D, Blad, é, de longe, o mais abundante polipeptídeo dentro do oligômero e parece ser o único com a atividade de lectina. Blad que ocorre de uma forma natural constitui aproximadamente 80% da proteína total cotiledonar em plântulas de 8 dias de idade.
[00018] A sequência de codificação precursora L. albus Bconglutina (SEQ ID NO: 1) é dada na Figura 1. A sequência codificadora da subunidade princiB-conglutina pal está localizado nos resíduos 70 a 1668. A subunidade principal de B-conglutina dos 533 resíduos de aminoácido codificacados (SEQ ID NO: 2) é a seguinte:
Petição 870190120570, de 21/11/2019, pág. 8/37
6/28
MGKMRVRFFTLVLVLGIVFLMAVSIGIAYGEKDVLKSHERPEEREQEEWQPRRQR PQSRREEREQEQEQGSPSYPRRQSGYERRQYIIERSEQREEREQEQQQGSPSYSRR QRNPYHFSSQRFQTLYKNRNGKIRVLERFDQRTNRLENLQNYRIVEFQSKPNTLI L PKH S DADYVLVVLNG RAT I '1' IVN PDRRQAYNLE YG DALRIPAG S1' S YI LN PDDN QKLRWKLAIPINNPGYFYDFYPSSTKDQQSYFSGFSRNTLEATFNTRYEEIQRI ILGNEDEQEYEEQRRGQEQSDQDEGVIVIVSKKQIQKLTKHAQSSSGKDKPSDSG PFNLRSNEPIYSNKYGNFYEITPDRNPQVQDLNISLTYIKINEGALLLPHYNSKA IYWWDEGEGNYELVGT RDQQRQQDEQEEKEEEVIRYSARLSEGDIFVIPAGYP ISINASSNLRLLGFGINADENQRNFLAGSKDNVIRQLDRAVNELTFPGSAEDIER liknqqqsyfangqpqqqqqqqsekegrrgrrgsslpf [00019] O fragmento interno da sequência de codificação precursora de B-conglutina que corresponde ao Blad (SEQ ID NO: 3) é apresentado na Figura 2. O Polipeptídeo Blad (SEQ ID NO: 4) é:
RRQRNPYHFSSQRFQTLYKNRNGKIRVLERFDQRTNRLENLQNYRTVEFQ3KPNT LILPKH S DADYVLWLNGRATITIVN PDRRQAYNLEYG DALRIPAG STSYILNPD
DNQKLRWKLAIPINNPGYFYDFYPSSTKDQQSYFSGFSRNTLEATFNTRYEEIQ
RIILGNED [00020] A presente invenção refere-se a uma composição que compreende um polipeptídeo antimicrobiano que compreende Blad ou uma variante ativa dos mesmos. É, por conseguinte, referido a uma composição de que compreende um polipeptídeo antimicrobiano que compreende a sequência polipeptídica de SEQ ID NO: 4 ou uma variante ativa do mesmo. Nas modalidades alternativas, a composição consiste essencialmente em um polipeptídeo antimicrobiano que compreende Blad ou um variante ativo dos mesose e / ou consiste essencialmente em polipeptídeo antimicrobiano que compreende Blad ou uma variante ativa dos mesmos. Em outras modalidades, o polipeptídeo antimicrobiano compreende (ou consiste essencialmente em) Blad ou uma variante ativa do mesmo que pode ser utilizado de uma forma isolada.
[00021] Uma variante ativa de Blad é uma variante de Blad que retém a capacidade para atuar como um agente antimicrobiano (isto é, possui uma atividade antimicrobiana - vide abaixo a descrição do nível de tal atividade e como medi-la). Uma variante de Blad ativo inclui dentro do seu âmbito um fragmento da SEQ ID NO: 4. Nas
Petição 870190120570, de 21/11/2019, pág. 9/37
7/28 modalidades preferidas, um fragmento de SEQ ID NO: 4 é selecionado que é pelo menos 10 % do comprimento da SEQ NO: 4, de preferência pelo menos 20 %, de preferência pelo menos 30 %, de preferência pelo menos 40 %, de preferência pelo menos 50 %, de preferência pelo menos 60 %, de preferência pelo menos 70 %, de preferência pelo menos 80 %, de preferência pelo menos 90 % e ainda mais de preferência pelo menos 95 % do comprimento da SEQ NO: 4. Blad ou uma variante do memso tem geralmente um comprimento de pelo menos 10 resíduos de aminoácidos, tal como pelo menos 20, 25, 30, 40, 50, 60, 80, 100, 120, 140, 160 ou 173 resíduos de aminoácidos.
[00022] Uma variante de Blad ativo também inclui no seu âmbito uma sequência de polipeptídeo que possui a homologia com SEQ ID NO: 4, tal como pelo menos 40 % de identidade, de preferência pelo menos 60 %, de preferência pelo menos 70 %, de preferência pelo menos 80 %, de preferência pelo menos 85 %, de preferência menos pelo menos 90 % de identidade, de preferência pelo menos 95 %, de preferência pelo menos 97 %, e mais de preferência pelo menos 99 %, por exemplo, ao longo da sequência completa ou através de uma região de pelo menos 20, de preferência pelo menos 30, de preferência pelo menos 40, de preferência pelo menos 50,de preferência pelo menos 60, de preferência pelo menos 80,de preferência pelo menos 100, de preferência pelo menos 120,de preferência pelo menos 140, e mais de preferência pelo menos 160 ou mais resíduos de aminoácidos contíguos. Os métodos de homologia de proteínas medidos, são bem conhecidos na técnica e serão compreendido por aqueles que são versados na técnica, que no presente contexto, a homologia é calculada com base na identidade de aminoácidos (por vezes referida como homologia dura).
[00023] A variante Blad homólogo ativa tipicamente difere da sequência polipeptídica de SEQ ID NO: 4 por meio da inserção,
Petição 870190120570, de 21/11/2019, pág. 10/37
8/28 substituição ou deleção, por exemplo a partir de 1, 2, 3, 4, 5 a 8 ou mais substituições, deleções ou inserções. As substituições são de preferência conservadoras, que quer dizer que um aminoácido pode ser substituído com um aminoácido semelhante, por meio das partes semelhantes de aminoácidos de um dos seguintes grupos: resíduos aromáticos (F / H / W / Y), sem resíduos alifáticos polares (G / A / P / I / L / V), alifáticos não carregados polares (C / S / T / M / N / Q) e alifáticos carregados polares (D / E / K / R). Os subgrupos preferidos compreendem: G / A / P, E / LN ; C / S / T / M, N / Q, D / E, e K / R.
[00024] Um polipeptídeo antimicrobiano que compreende Blad ou um variante ativo do mesmo (tal como descrito acima), pode consistir em Blad ou em uma variante ativa do mesmo com qualquer número de resíduos de aminoácidos adicionados ao N-terminal e / ou C-terminal, uma vez que o polipeptídeo retenha a atividade antimicrobiana (mais uma vez, vide abaixo a descrição do nível de tal atividade e como medi-la). De preferência, não mais do que 300 resíduos de aminoácidos são adicionados a uma ou ambas as extremidades da Blad ou uma variante ativa do mesmo, mais de preferência não mais de 200 resíduos de aminoácidos, de preferência não mais de 150 resíduos de aminoácidos, de preferência não mais do que 100 de aminoácido resíduos, de preferência não mais do que 80, 60 ou 40 resíduos de aminoácidos, mais de preferência não mais de 20 resíduos de aminoácidos.
[00025] Um polipeptídeo que compreende antimicrobiano (ou que consiste essencialmente em) um Blad ou variante ativa (como descrito acima) pode ser utilizado na presente invenção sob a forma de uma proteína purificada (por exemplo, retirada de uma fonte animal, vegetal ou microbiana) e / ou recombinante. A produção de uma forma recombinante permite a produção de variantes ativas de Blad.
[00026] Os métodos de purificação de Blad que ocorre de uma
Petição 870190120570, de 21/11/2019, pág. 11/37
9/28 forma natural estão já descritos na técnica (por exemplo, Ramos et at (1997) Planta 203 (1): 26 a 34 e Monteiro et al (2010) PLoS ONE 5 (1): e8542). Uma fonte adequada de Blad que ocorre de uma forma natural é uma planta do gênero Lupinus, tais como Lupinus albus, de preferência um cotilédone da referida planta, de preferência, colhido entre cerca de 4 a cerca de 14 dias após o início da germinação, mais de preferência colhido 6 a 12 dias após o início da germinação (tal como de 8 dias após o início da germinação). Os métodos são descritos na técnica com a finalidade de extração de um total de proteínas levando a um extrato em bruto que compreende Blad, e para a purificação de proteína de um tal extrato que conduz a um extrato parcialmente purificado, por exemplo, que compreende o glicooligômero que contém Blad que compreende Blad.
[00027] Para isolar BLAD por si mesmo, o mesmo pode então utilizar SDS-PAGE e / ou, de preferência, HPLC em fase reversa (RP) em uma coluna C-18.
[00028] Uma forma alternativa de obter um extrato parcialmente purificado que compreende um glico-oligômero que compreende Blad é utilizar a atividade de ligação de quitina Blad. O glico-oligômero se liga de uma maneira muito forte a uma coluna de quitina como parte de purificação por cromatografia de uma afinidade quitina, eluindo-se com 0,05 N HC1. Detalhes de um exemplo deste método de purificação são o seguinte:
[00029] Os cotilédones a partir das plantas de tremoço de oito dias, foram colhidos e homogeneizados em Milli-Q mais água (pH ajustado para 8,0), contendo CaC12 a 10 mM e MgC12 a 10 mM. O homogeneizado foi filtrado através de gaze e centrifugado a 30.000 g durante 1 hora a 4 °C. O sedimento foi subsequentemente suspenso em tampão de Tris-HCL a 10 mM, pH 7,5, contendo 10 % (p / v) de NACL, EDTA a 10 mM e EGTA a 10 mM, agitada durante 1 h a 4 °C, e
Petição 870190120570, de 21/11/2019, pág. 12/37
10/28 centrifugado a 30.000 g durante 1 hora a 4 °C. A fração de globulina total, contida no sobrenadante, foi precipitada com sulfato de amônio (561 g / 1), deixada de se agitar a frio durante 1 hora e centrifugada a 30000 g durante 30 min a 4 °C. O pélete obtido foi dissolvido em tampão de Tris-HCL a 50 mM, pH 7,5, dessalinizado em colunas equilibradas PD-10 com o mesmo tampão e passado através de uma cromatografia em coluna de afinidade de quitina pré-equilibrada com o mesmo tampão. A coluna foi lavada com tampão de Tris-HCL a 50 mM, pH 7,5, e as proteínas ligadas eluídas com HCL a 0,05 N. As frações eluidas foram imediatamente neutralizadas com tampão Tris a 2 M e as frações de pico reunidas, liofilizadas e analisadas por SDSPAGE.
[00030] Para a preparação da coluna de quitina quitina em bruto foi obtida a partir de Sigma e processada como se segue: a amostra de quitina foi lavada de uma maneira extensiva com Milli-Q mais água, seguido de HCL a 0,05 N. Foi então lavada com 1 % (p / v) de carbonato de sódio e depois com etanol, até que a absorvância da lavagem doi menor do que 0,05. A quitina foi em seguida, embalada em uma ponta de pipeta e equilibrada com tampão de Tris-HCL a 50 mM, pH 7,5.
[00031] Os métodos de produção de proteínas recombinantes são bem conhecidos na técnica. Tais métodos como aplicados na presente invenção vão envolver a inserção de um polinucleotídeo codificando Polipeptídeo que compreende Blad ou uma variante ativa do mesmo em um vetor de expressão adequado - que permite ao justaposição do referido polinucleotídeo com uma ou mais promotores (por exemplo, um promotor indutível, tal como T7lac) e com outros polinucleotídeos ou genes de interesse - introdução do vetor de expressão em uma célula ou organismo adequado (por exemplo, Escherichia coli), que expressa o polipeptídeo da célula transformada ou organismo e
Petição 870190120570, de 21/11/2019, pág. 13/37
11/28 remoção do polipeptídeo recombinante expresso a partir dessa célula ou organismo. Para auxiliar a purificação, tal vetor de expressão pode ser construído de tal modo que o polinucleotídeo codifica adicionalmente, por exemplo, um etiqueta de terminal que pode auxiliar a purificação: por exemplo, um etiqueta de resíduos de histidina para a purificação por afinidade. Uma vez que o polipeptídeo recombinante é purificado, a etiqueta de purificação pode ser removidaa do polipeptídeo, por exemplo, por meio da clivagem proteolítica.
[00032] Em uma composição que compreende um polipeptídeo antimicrobiano que compreende (ou que consiste essencialmente em) Blad ou um variante ativo do mesmo, o referido polipeptídeo é, de preferência, em parte forma purificada, com maior preferência na forma purificada. O referido polipeptídeo é parcialmente purificado, quando está presente em um ambiente sem um ou mais outros polipeptídeos com os quais estão naturalmente associados e / ou são representados por meio de pelo menos cerca de 10 % da proteína total presente. O referido polipeptídeo é purificado quando ele está presente em um ambiente sem a totalidade ou mais, de outros polipeptídeos com os quais estão naturalmente associados. Por exemplo, Blad purificado significa que Blad representa pelo menos cerca de 50 %, pelo menos cerca de 60 %, pelo menos cerca de 70 %, pelo menos cerca de 75 %, pelo menos cerca de 80 %, pelo menos cerca de 85 %, pelo menos cerca de 90 %, pelo menos cerca de 95 %, pelo menos cerca de 97 %, pelo menos cerca de 98 %, ou, pelo menos, cerca de 99 % da proteína total na composição.
[00033] Em uma composição que compreende um polipeptídeo antimicrobiano que compreende (ou que consiste essencialmente em) Blad ou uma variante do mesmo ativo, o teor de proteínas pode consisitir essencialmente em Lupinus do glico-oligômero Blad
Petição 870190120570, de 21/11/2019, pág. 14/37
12/28 contendo um polipeptídeo que compreende (ou consiste essencialmente de) Blad ou uma variante ativa do mesmo.
[00034] Uma composição que compreende um polipeptídeo antimicrobiano que compreende (ou que consiste essencialmente em) Blad também pode ser uma formulação que compreende um outro (s) composto (s) adicionado (s) à composição por aquele que é versado na técnica.
Deterioração dos alimentos e produtos alimentares [00035] A deterioração de um produto alimentar por meio de um micro-organismo significa qualquer alteração de um gênero alimentício por meio de um micro-organismo, que resulta em uma mudança em, por exemplo, sabor, odor ou aspecto (por exemplo a forma, cor, textura, firmeza) que diminui o seu valor nutricional e / ou comerciais. Por produto alimentar pretende significar qualquer substância líquida ou sólida para consumo por um ser humano ou animal, por motivos nutricionais ou de prazer. O produto alimentar pode ser consumido de maneira direta ou de uma maneira indireta (por exemplo, depois da cozedura ou processamento, como refinamento de cereais).
[00036] Se for caso disso, o produto alimentar é de preferência previsto em uma forma isolada do seu ambiente natural, tais como produtos alimentares vegetais colhidos (por exemplo, fruta, legumes, sementes) e os produtos isolados a partir de animais (por exemplo, carne, peixe, leite).
[00037] O produto alimentar pode ser derivado de, pode fornecer, ou pode ser, um fruto, uma noz, um vegetal, uma semente, um açúcar, um produto lácteo, um alimento líquido ou pastoso, carne, peixe ou pão. Os gêneros alimentares provenientes de frutas incluem vinho e suco de frutas. As plantas fornecendo sementes incluem cereais (por exemplo, milho, trigo, cevada, sorgo, milheto, arroz, aveia e centeio) e leguminosas (feijão, por exemplo, ervilhas e lentilhas). Açúcares, de
Petição 870190120570, de 21/11/2019, pág. 15/37
13/28 preferência sacarose, podem ser derivados a partir de beterraba ou de cana-de-açúcar.
[00038] Os produtos lácteos incluem leite, creme, queijo e iogurte. Os alimentos líquidos ou pastosos incluem sopa, molhos, picles, maionese, creme de salada e outros molhos para salada, conservas, xarope e comida de bebê. Os gêneros alimentícios à base de carne e /ou peixe contemplados podem ser tratados ou não, e podem ser cozidos ou de outro modo. Outros produtos alimentares específicos que são contemplados podem ser encontrados na seção seguinte, que se refere aos alimentos exemplares que podem ser deteriorados por meio do micro-organismos que pode ser visado nas utilizações e nos métodos da presente invenção.
[00039] Os gêneros alimentícios também incluem os alimentos compostos pré-preparados, como sanduíches, tortas, quiches e etc., especialmente aqueles atualmente projetados no que diz respeito ao armazenamento refrigerado.
Alvos microbianos [00040] Os inventores proporcionam a utilização de uma composição que compreende um polipeptídeo antimicrobiano que compreende Blad ou um variante ativo dos mesmos destinados a prevenir ou a inibir a deterioração de um produto alimentar por meio de um micro-organismo. Os micro-organismos que podem causar a deterioração de um produto alimentar - micro-organismos que deterioram os alimentos - incluem, em particular, as bactérias e os fungos. Em tal utilização, o polipeptídeo antimicrobiano pode ser considerado como um conservante de alimentos antimicrobianos.
[00041] O polipeptídeo antimicrobiano pode ser utilizado para prevenir ou para inibir a deterioração de alimentos por meio de qualquer uma das Bactérias Gram-positivas ou Gram-negativas. Os alvos bacterianos particularmente preferidos (com exemplos de
Petição 870190120570, de 21/11/2019, pág. 16/37
14/28 produtos alimentares que podem deteriorar entre parênteses) incluem: a espécie de alimentos que deterioram Pseudomonas, como Pseudomonas aeruginosa (talo de agrião e alface), Pseudomonas syringae (vários produtos alimentares derivados de plantas tais como o trigo, a beterraba e cevada), Pseudomonas tolaasii (cogumelo), Pseudomonas ágarici (cogumelo), Pseudomonas fragi (produtos lácteos) e Pseudomonas lundensis (leite, queijo, carne e peixe), mais de preferência P. aeruginosa, e espécies de alimentos que deterioram Bacillus, tais como Bacillus subtilis (tomate, batata, pão) e Bacillus coagulans (leite, sumo de tomate).
[00042] O polipeptídeo antimicrobiano pode ser utilizado para prevenir ou inibir a deterioração de alimentos, quer por meio dos fungos unicelulares (leveduras) ou multicelular (molde, filamentosa). Alvos particularmente preferidos de levedura (com exemplos de produtos alimentares que podem deteriorar dado entre parênteses) são: espécie de alimentos que deterioram Saccharomyces, como Saccharomyces cerevisiae (xaropes de açúcar, açúcar, vinho e refrigerantes, tais como sucos de frutas), as espécie de alimentos que deterioram Kluyveromyces, como K. marxianus (queijo), e espécie de alimentos que deterioram Zygosaccharomyces, como
Zygosaccharomyces bailii (vinho, suco de frutas, molhos para salada e molho de tomate) e Zygosaccharomyces rouxii (xaropes de açúcar, sucos de frutas, geleias e molhos de salada). Alvos molde particularmente preferidos (com exemplos de produtos alimentares que podem deteriorar dados em parênteses) incluem: a espécie de alimentos que deterioram Alternaria, tal como Alternaria alternata (batata), arborescens Alternaria (tomate), Alternaria arbusti (asiática pêra), Alternaria brassicae (vegetais), Alternaria brassicicola (culturas Cole), Alternaria carotincultae (cenoura), Alternaria conjuncta (parsnip), Alternaria dauci (cenoura), Alternaria euphorbiicola (culturas
Petição 870190120570, de 21/11/2019, pág. 17/37
15/28
Cole), Alternaria gaisen (pêra), Alternaria infectoria (trigo), Alternaria japonica (culturas Cole), Alternaria petroselini (salsa), Alternaria Selini (salsa), Alternaria solani (batata, tomate) e Alternaria smyrnii (alexanders, salsa), as espécies de alimentos que deterioram Aspergillus, tais como Aspergillus fumigatus (nozes, batata, arroz e pão), Aspergillus niger (frutas e legumes, por exemplo, uvas e cebolas), e Aspergillus flavus (amendoim, milho), as espécie de alimentos que deterioram Fusarium, como Fusarium oxysporum (fruta) e Fusarium graminearum (trigo, cevada e milho); as espécies de alimento que deterioram Botrytis, tais como Botrytis cinerea (morango, uva e tomate), e espécie de alimentos que deterioram Colletotrichum, como Colletotrichum atiuatum (morango, aipo, maçã, abacate, berinjela, café e goiaba), Colletotrichum coccodes (tomate, batata), Colletotrichum capsici (manjericão, grão de bico, pimenta), Colletotrichum crassipes (maracujá), Colletotrichum gloeosporioides (legumes e frutas por exemplo, marmelo e maçã), Colletotrichum graminicola (cereais), Colletotrichum kahawae (café), Colletotrichum lindemuthianum (feijão), Colletotrichum musae (banana),
Colletotrichum nigrum (tomate), Colletotrichum orbiculare (pepino, melão), Colletotrichum pisi (ervilha) e Colletotrichum sublineolum (arroz).
[00043] Nas modalidades preferidas, o polipeptídeo antimicrobiano é utilizado para prevenir ou para inibir a deterioração da fruta por meio de um micro-organismo, de preferência um morango, e de preferência em que o micro-organismo é Botrytis cinerea ou Colletotrichum acutatum, de preferência, Botrytis cinerea.
[00044] Aquele que é versado na técnica será capaz de identificar, através de métodos de rotina, uma concentração adequada (isto é, uma concentração eficaz) com os quais a utilização do polipeptídeo antimicrobiano vem a impedir ou a inibir a deterioração em qualquer
Petição 870190120570, de 21/11/2019, pág. 18/37
16/28 configuração particular. De preferência, por exemplo, Blad é utilizado a uma concentração de pelo menos 1 μg / ml, pelo menos, 5 μg / ml, pelo menos, 10 μg / ml, pelo menos, 50 μg / ml, pelo menos 100 μg / ml ou pelo menos 150 μg / ml, e de até 350 μg / ml, até 500 μg / ml, até 600 μg / ml, até 1 mg / ml, até 2,5 mg / ml, até 5 mg / ml, ou acima de 10 mg / ml. De preferência, a concentração de Blad selecionada está entre 10 μg / mL e 5 mg / ml, mais de preferência entre 50 μg / mL e 2,5 mg / ml, mais de preferência entre 100 μg / ml e 1 mg / ml, e ainda mais de preferência entre 150 μg / mL e 600 μg / mL (como cerca de 250 μg / ml). Os inventores proporcionaram evidência (vide os Exemplos 4 e 5) que Blad é não tóxico para os animais, pelo menos, 400 μg / ml.
[00045] Os inventores verificaram surpreendentemente que uma combinação de Blad com um agente quelante (por exemplo, EDTA), produz um efeito sinérgico antimicrobiano. Portanto, de preferência, um agente quelante é utilizado coma finalidade de melhorar a atividade antimicrobiana do polipeptídeo antimicrobiano, e o uso de um tal agente quelante pode diminuir a concentração do polipeptídeo antimicrobiano necessária para alcançar um determinado nível de prevenção ou inibição da deterioração.
[00046] Um agente quelante (também conhecido como um agente quelante, um agente quelante ou um agente sequestrante) é qualquer composto que se liga a um íon metálico com a finalidade de formar um complexo não-covalente e reduz a atividade do íon. Os agentes quelantes adequados incluem carboxilatos de poliaminoácidos, tais como o EDTA (Ácido etilenodiaminotetracético) e EGTA (etileno-glicolbis (B-aminoetil éter) - N, N, N, N'-tetra-acético). De preferência, o EDTA é utilizado como o agente quelante, de preferência a uma concentração de pelo menos 10 μg / ml, pelo menos, 50 μg / ml, ou pelo menos 100 μg / ml, e de até 500 até 1 mg / ml até 5 mg / ml, até
Petição 870190120570, de 21/11/2019, pág. 19/37
17/28 mg / ml, ou até 20 mg / ml. De preferência, o EDTA é utilizado em uma concentração compreendida entre 0,1 mg / ml e 1 mg / ml.
Resultados [00047] O polipeptídeo antimicrobiano pode ser usado com a finalidade de inibir o crescimento de um micro-organismo que deteriora os alimentos (o que significa que ele tem atividade microbiostática) e / ou para matar o dito micro-organismo (que significa que tem uma atividade microbicida) sobre um produto alimentar tal que a deterioração do referido produto alimentar por meio dos referidos micro-organismo é impedido ou inibido. Aquele que é versado na técnica será capaz de identificar uma dose adequada e / ou para se obter uma concentração particularmente desejada a inibição do crescimento ou morte do micro-organismo.
[00048] De preferência, quando usado como um agente microbicida, o polipeptídeo antimicrobiano reduz a taxa de crescimento de 10 %, mais de preferência em 50 %, mais de preferência em 75 %, mais de preferência, em 90 %, mais de preferência em 95 %, mais de preferência em 98 %, mais de preferência de 99 %, e ainda mais de preferência por 99,9 %, em comparação com condições equivalentes, onde o polipeptídeo antimicrobiano não está presente. Mais de preferência, o polipeptídeo antimicrobiano impede qualquer crescimento do micro-organismo.
[00049] De preferência, quando usado como um agente microbicida, o polipeptídeo antimicrobiano mata 10 % da população dos micro-organismos, de preferência mais de 50 % da referida população, com maior preferência de 75 % da referida população, com maior preferência de 90 % da referida população, com maior preferência de 95 % da referida população, com maior preferência de 98 % da referida população, com maior preferência de 99 % da referida população, e ainda mais de preferência, por 99,9 % da
Petição 870190120570, de 21/11/2019, pág. 20/37
18/28 referida população em comparação com condições equivalentes, onde o polipeptídeo antimicrobiano não está presente.
[00050] Mais de preferência, o polipeptídeo antimicrobiano mata toda a população do micro-organismo.
[00051] Quando usado para prevenir ou inibir a deterioração de um produto alimentar por meio de um micro-organismo, o polipeptídeo antimicrobiano é de preferência utilizado em uma quantidade eficaz, isto é, uma quantidade que proporcione um nível de inibição de crescimento e / ou a morte de um micro-organismo de tal modo que um nível detectável de prevenção ou inibição de deterioração (por exemplo, um decréscimo na taxa de deterioração) seja alcançado, de preferência, em comparação com as condições equivalentes, onde o polipeptídeo antimicrobiano não está presente. De preferência, a quantidade eficaz do polipeptídeo antimicrobiano não é tóxica para um ser humano ou animal.
Usos e métodos [00052] Os inventores proporcionam a utilização de uma composição que compreende um polipeptídeo antimicrobiano que compreende Blad ou uma variante ativa do mesmo para impedir ou inibir a deterioração de um produto alimentar por meio de um microorganismo. Para este fim, também fornecem um método para prevenir ou inibir a deterioração de um produto alimentar por meio de um microorganismo, que compreende a administração a um gênero alimentício que esteja em necessidade do mesmo, de uma quantidade eficaz de uma composição que compreende um polipeptídeo antimicrobiano que compreende Blad ou uma variante ativa do mesmo. De preferência, a quantidade eficaz do polipeptídeo antimicrobiano não é tóxica para os seres humanos ou animais. A prevenção ou a inibição de deterioração pode ocorrer durante o armazenamento, transporte, manuseamento, transformação ou exibição do gênero alimentício.
Petição 870190120570, de 21/11/2019, pág. 21/37
19/28 [00053] Uma composição que compreende o polipeptídeo antimicrobiano pode, por exemplo ser misturada com o alimento ou pode por exemplo ser aplicada à superfície do produto alimentar (por exemplo, como uma película de líquido ou um spray). O produto alimentar pode também ser imerso na (e opcionalmente mantido na) referida composição. Para qualquer produto alimentar particular, a utilização da referida composição como conservante pode ser combinada com qualquer outra técnica de preservação de alimentos conhecida, antimicrobiana ou de outra forma, incluindo a secagem, aquecimento, refrigeração ou congelamento, inibição osmótica (por exemplo, utilização de xaropes ou de sal), embalagem a vácuo, conservas e engarrafamento, geleificação, envasamento, jugging, ionizante, irradiação pulsada de processamento de campo elétrico, conservação de alimentos de alta pressão e conservação de alimentos de ultra alta pressão de água, uso de antioxidantes, e / ou a utilização de outros agentes de conservação antimicrobianos (por exemplo, dióxido de enxofre, carbono dióxido de carbono, etanol, ácido acético, ácido cítrico, ácido láctico, ácido sórbico, benzoatos, nitratos e nitritos, sulfitos de cálcio e propionato de metilcloroisotiazolinona).
Exemplos [00054] Nos Exemplos seguintes BLAD denota glico-oligômero contendo Blad de ocorrência natural que compreende o polipeptídeo de 20 kD Blad, purificado como por Ramos et al (1997) Planta 203 (1): 26 a 34: vide Planta material and growth conditions e Purification of proteins partes dos Materiais e Métodos do documento.
Definições:
[00055] MIC - Concentração Inibidora Mínima: a concentração mais baixa de um agente antimicrobiano que inibe o crescimento visível de um micro-organismo.
[00056] MFC / MBC - concentração fungicida / bactericida mínima
Petição 870190120570, de 21/11/2019, pág. 22/37
20/28 (ou concentração letal mínima): a menor concentração de agente antimicrobiano necessária para matar 99,9 % do inóculo inicial após 24 horas sob um conjunto normalizado de condições.
Exemplo 1 - atividade bactericida de BLAD.
MIC e MBC de BLAD para várias espécies de bactérias (usando Mueller-Hinton médio):
Espécies Bactericidas MIC (pg/ml) MBC (pg/ml)
Pseudomonas aeruginosa 32 a 256 128 a 256
Listeria monocytogenes 8 >512
Bacillus subtilis 4 >512
Staphylococcus aureus 8 >512
Salmonella thyphimurium 64 128
[00057] Em particular, P. aeruginosa e B. subtilis podem causar a
deterioração dos alimentos. BLAD foi encontrada para ser
bacteriostático a 100 pg/m1 e bactericida a 250 pg/m1 contra P.
aeruginosa. Contra P. aeruginosa BLAD menos 50 pg/m1 ou EDTA a 1 mg / ml inibe o crescimento (isto é, ambos são bacteriostáticos), mas uma combinação das duas é bactericida.
Exemplo 2 - atividade fungicida de BLAD.
MIC e MFC de BLAD para vários fungos filamentosos (utilizando meio
RPMI)
Espécies fúngicas MIC (pg/ml) MFC (pg/ml)
Alternaria sp. 64 >512
Aspergillus fumigatus 32 >512
Aspergillus niger 32-64 >512
Botrytis cinerea 128 512
Colletotrichum acutatum 64 >512
Colletotrichum gloesporioides 64 >512
Fusarium oxysporum 64 >512
MIC de BLAD para vários filamentos fúngicos (usando vários
Petição 870190120570, de 21/11/2019, pág. 23/37
21/28 meios):
MIC (pg/m1)
Cepa PDB PDB pH 7,5 AM3 RPMI
Botrytis cinerea BM 128(1) 4-8(3) 8-32(3) 128(2)
B. cinerea BT 32-128(3) 8(3) 16-32(3) 64-128(3)
Colletotrichum kahawae (a partir de 32 4 1-4 64
Kenya)
C. kahawae (a partir de Zimbabwe) 16 4-8 4-16 64
Inibição de dados halo (diâmetro) para BLAD contra Botrytis cinera BM em Dextrose de batata ágar (PDA) em 0,6 % ou 0,9 % p / v (incubação de 3 dias a 25 oC)
Blad por disco (pg) Média de diâmetro de halo em ágar Média de diâmetro de halo
de 0,6 % (mm) em ágar de 0,9 % (mm)
20 pg 0 0
50 pg 13 0
100 pg 25,5 11
200 pg 36 22
[00058] Em ágar de 0,6 %, o crescimento de B. cinera foi cada vez mais inibido com quantidades crescentes de BLAD a partir de 20 a 200 pg UGL. A inibição menos acentuada foi observada com 5 mg / ml e 10 mg / ml em 0,9 % de ágar.
O halo de inibição (diâmetro) de dados para BLAD a 200 pg / disco contra várias leveduras em PDA com 0,9 % (p / v) de ágar (incubação de 3 dias a 5 dias a 25 °C):
Levedura média de inibição do diâmetro halo (mm)
Saccharomyces cerevisiae30
Kluyveromyces marxianus28
Zygosaccharomyces bailii>40
Zygosaccharomyces rouxii40 [00059] Blad a 200 pg / disco mostrou inibição significativa do
Petição 870190120570, de 21/11/2019, pág. 24/37
22/28 crescimento de todas estas leveduras, todos as quais podem causar a deterioração dos alimentos.
Exemplo 3 - Ensaios de preservação / descontaminação de Morango [00060] A suscetibilidade de morangos para contaminação de B. cinerea após o tratamento com BLAD foi investigada. Até 38 % de morangos não tratados fornecidos por um fornecedor comercial foram encontrados como contaminados (tamanho da amostra: 10 caixas de 500 g), sublinhando o problema de contaminação de morango.
[00061] Protocolo de Ensaio -
1. Preparar as amostras homogêneas e representativas.
2. Lavar com água e descontaminar usando 70 % v / v de etanol.
3. Lavar duas vezes com água.
4. Tratar com BLAD a várias concentrações (omitido para controle): mergulhar na solução de tratamento durante 1 minuto antes de deixar a secar em pratos petri de incubação (contendo uma esponja úmida de água da carcaça estéril, papel de filtro e tela de plástico).
6. Inocular cada morango com 10 uL de solução de esporos B. cinerea de 1-5 x 106 esporos / ml.
7. Incubar durante 5 dias, sob as seguintes condições:
[00062] Temperatura: 25 °C (+ / - 3 °C) [00063] Umidade relativa: 80 a 90 % [00064] Iluminação: protegido a partir da luz direta do sol
8. Nos intervalos, recolher a amostra de 1 g e homogeneizar utilizando um vortex.
9. Executar a diluição decimal serial.
10. Dispersar em meios sólidos e realizar a contagem de colônias.
[00065] Todas as técnicas de manipulação foram realizadas sob
Petição 870190120570, de 21/11/2019, pág. 25/37
23/28 condições estéreis, utilizando o material autoclavado.
[00066] Os dados seguintes representam a porcentagem de morangos infectados com B. cinerea, após inoculação com a solução de esporos B. cinerea:
Dias após a inoculação Concentração BLAD (mg/ml):
0 (controle) 50 150 250 350
0 0 0 0 0 0
1 44 33 4 0 0
2 63 63 15 6 5
3 93 77 46 50 40
4 100 100 56 70 60
5 100 100 73 70 64
[00067] Blad em concentrações de 150 pg / ml a 350 pg / ml
atrasaram significativamente o aparecimento de contaminação com B. cinerea e reduziram a porcentagem total dos morangos contaminados em comparação com o controle.
Exemplo 4 - estudo de toxicidade cutânea de BLAD em cobaias.
[00068] Estudo confidencial realizado na Faculdade de Medicina Veterinária da Universidade Técnica de Lisboa, em nome do Instituto Superior de Agronomia (18 de julho de 2006 - 1 de agosto de 2006) usando Orientação da OCDE para testes de produtos químicos, n° 402, toxicidade cutânea aguda. O estudo foi conduzido de acordo com boas práticas de laboratório e bem-estar animal.
[00069] A toxicidade aguda por via cutânea de BLAD foi avaliada após a exposição a uma dose única em cobaias, que são amplamente aceitos como animais adequados para estudos de toxicidade dérmica. BLAD foi aplicado à pele glabra em dois grupos de 10 animais cada, com a dosagem de 200 μ / ml e 400 pg / ml, respectivamente. Após a exposição, os animais foram mantidos sob observação durante um
Petição 870190120570, de 21/11/2019, pág. 26/37
24/28 período de 15 dias, durante os quais a massa corporal, a morbidade e a mortalidade foram registrados.
[00070] Materiais e Métodos -
1. Materiais [00071] Item de teste: BLAD foi fornecido a 5 mg / ml (líquido opaco amarelado, 0 a 4 °C) e armazenados a -80 °C.
[00072] Animais: cobaias albinas ; estirpe: Dunkin Hartley (HsdPoc:
DH) por Harlan Ibérica, Barcelona.
[00073] Número de animais utilizados: 30.
[00074] Peso corporal: 400 a 449 g.
[00075] Idade: 6 semanas.
[00076] Hospedagem: os animais foram colocados de uma maneira individual em caixas de polietileno com aparas de madeira esterilizadas (Lignocel).
[00077] Condições ambientais:
a) fotoperíodo: ciclos de luz / escuridão de 12 h em 12 h.
b) meio ambiente controlado: uma temperatura média de 19 / 22 °C e umidade média de 60 %.
[00078] Adaptação: os animais foram mantidos sob condições ambientais do teste durante sete dias antes do início do ensaio.
[00079] Alimentação: a dieta global de 2014, a dieta de Manutenção do roedor fornecida por Harlan Ibérica, Barcelona ; água ad libitum.
2. Métodos [00080] Administração: os animais foram barbeados 48 h antes do teste e apenas os animais que estavam livres de lesões da pele foram tomados para a frente no estudo. Uma alíquota de 1 ml (quer 200 pg / ml quanto 400 pg / ml) foi aplicada na pele rapada de cada animal.
[00081] Desenho do estudo: os 30 animais do estudo foram divididos em quatro grupos, dois grupos de 10 animais cada e dois grupos com cinco animais cada. Um grupo de dez animais foi exposto
Petição 870190120570, de 21/11/2019, pág. 27/37
25/28 para BLAD a 200 pg / mL (grupo teste 1) e outro grupo de dez animais foi exposto a BLAD a 400 pg / mL (grupo teste 2). Os dois grupos de cinco animais serviram como controles: um grupo foi exposto a água (1 alíquota ml), enquanto que um outro grupo que não foi submetido a qualquer administração mas tratado de acordo com todos os outros grupos.
[00082] Resultados: após a exposição, os animais foram observados diariamente durante 15 dias para gravar sinais de morbidade ou até mesmo a morte. Em termos de morbidade, atenção especial foi dada à possível sinais de aparecimento de lesões na pele no local da exposição e possível de toxicidade geral tais como mudanças nos padrões de comportamento normais. O peso corporal foi avaliado de maneira individual antes da exposição e no final do período de teste.
Resultados [00083] Em nenhuma concentração de BLAD havia sinais de alterações físicas na área dérmica de administração ou de alterações no consumo / alimentação ou comportamento geral. Nenhuma reação adversa ou morte ocorreu na administração BLAD. O aumento da massa corporal foi semelhante em todos os grupos (e era consistente com o esperado aumento de desenvolver animais em tal idade jovem).
Conclusões [00084] Blad em concentrações de até 400 pg / ml (e, possivelmente, mais elevadas) não mostra a toxicidade dérmica.
[00085] Exemplo 5 - estudo de toxicidade oral de BLAD em ratos albinos.
[00086] Estudo confidencial realizado na Faculdade de Medicina Veterinária da Universidade Técnica de Lisboa, em nome do Instituto Superior de Agronomia, usando Orientação da OCDE para testes de produtos químicos, n ° 401, toxicidade oral aguda. O estudo foi
Petição 870190120570, de 21/11/2019, pág. 28/37
26/28 conduzido de acordo com boas práticas de laboratório e bem-estar animal.
[00087] A toxicidade oral aguda de BLAD foi avaliada após exposição a uma dose única em ratos, que são amplamente aceites como animais adequados para estudos de toxicidade aguda oral. BLAD foi administrada por meio de sonda esofágica, em dois grupos de 10 animais cada, com a dosagem de 200 pg / ml e 400 pg / ml, respectivamente. Após a exposição, os animais foram mantidos sob observação durante um período de 15 dias, durante os quais a massa corporal, a morbidade e a mortalidade foram registrados. Após o período de observação, os animais foram sacrificados e submetidos a necropsia.
Materiais e Métodos
1. Materiais [00088] Item de teste; BLAD foi fornecido, a 5 mg / ml (líquido opaco amarelado, 0 a 4 °C) e armazenados a -80 °C.
[00089] Animais; Rattus norvegicus, linhagem; Wistar Hannover, adquirida pelo biotério da Faculdade de Medicina Veterinária de Lisboa, de Harlan Ibérica, Barcelona.
[00090] Número de animais utilizados; 30.
[00091] Peso corporal; 250 a 300 g.
[00092] Idade; 10 semanas.
[00093] Hospedagem; os animais foram colocados de maneira individual em caixas de polietileno com aparas de madeira esterilizadas (Lignocel).
[00094] Condições ambientais:
a) fotoperíodo; ciclos de luz / escuridão de 12 h em 12 h.
b) meio ambiente controlado; uma temperatura média de 19 / 22 °C e umidade média de 60 %.
[00095] Adaptação; os animais foram mantidos sob condições
Petição 870190120570, de 21/11/2019, pág. 29/37
27/28 ambientais do teste durante sete dias antes do início do ensaio.
[00096] Alimentação: a dieta global de 2014, a dieta de Manutenção do roedor fornecido por Harlan Ibérica, Barcelona ; água ad libitum.
2. Métodos [00097] Administração: uma alíquota de 1 ml (em cada 200 pg / ml ou 400 pg / ml) foi aplicada a cada animal por via oral (oro-esofágica) intubação, vulgarmente conhecida como sonda. A administração foi realizada com uma sonda de metal apropriada para a espécie animal utilizado. Os animais foram submetidos a jejum durante 18 h antes da administração e três horas após a administração.
[00098] Projeto de estudo: 30 animais do estudo foram divididos em quatro grupos, dois grupos de 10 animais cada e dois grupos com cinco animais cada. Um grupo de dez animais foi exposto a 200 BLAD pg / mL (grupo teste 1) e outro grupo de dez animais foi exposto a Blad a 400 pg / mL (grupo teste 2). Os dois grupos de cinco animais serviram como controles: um grupo foi exposto a água (1 alíquota ml), enquanto que um outro grupo que não foi submetido a qualquer administração mas tratado de acordo com todos os outros grupos.
[00099] Resultados: após a administração, os animais foram observados diariamente durante 15 dias para gravar quaisquer sinais de morbidade ou mesmo morte. O peso corporal foi avaliado de maneira individual antes da exposição e no fim do período de teste. Após o período de observação, os animais foram sacrificados (por asfixia em uma atmosfera saturada com dióxido de carbono) para exame post-mortem subsequente.
Resultados [000100] Em nenhuma concentração de BLAD houve qualquer mudança física ou mudanças de bebida / alimentação ou comportamento geral. Nenhuma reação adversa ou morte ocorreu na administração BLAD. O aumento da massa corporal foi semelhante em
Petição 870190120570, de 21/11/2019, pág. 30/37
28/28 todos os grupos (e era consistente com o esperado aumento de desenvolvimento de animais em tal idade jovem).
[000101] Observação de necropsia / macroscópica dos órgãos da cavidade torácica e abdominal não revelaram quaisquer alterações as mesmas.
Conclusões [000102] Blad em concentrações de até 400 ng / ml (e, possivelmente, mais elevada) não mostra a toxicidade oral.

Claims (6)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Uso de uma composição que compreende um polipeptídeo antimicrobiano que consiste na sequência Blad mostrada na SEQ ID N°: 4, o uso caracterizado pelo fato de que é para impedir ou inibir a deterioração de um produto alimentar por meio de um microorganismo, em que o referido micro-organismo é uma bactéria, em que, no caso em que o produto alimentar é um produto alimentar vegetal, este é um produto alimentar colhido.
  2. 2. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a bactéria é uma espécie que deteriora alimentos a partir dos gêneros Pseudomonas ou Bacillus.
  3. 3. Uso de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o produto alimentar fornece, ou é, um fruto, uma noz, um vegetal, uma semente, um açúcar, um produto lácteo, um alimento líquido ou pastoso, carne, peixe ou pão.
  4. 4. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a
    3, caracterizado pelo fato de que o produto alimentar é um morango.
  5. 5. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a
    4, caracterizado pelo fato de que a referida composição compreende ainda um agente quelante.
  6. 6. Método para prevenir ou inibir a deterioração de um produto alimentar por meio de um micro-organismo, caracterizado pelo fato de que compreende a administração a um produto alimentar em necessidade do mesmo de uma composição como definida na reivindicação 1 ou 5.
BR112013008768-4A 2010-10-12 2011-10-12 Uso de uma composição que compreende um peptídeo antimicrobiano como um conservante de alimentos e método para prevenir ou inibir a deterioração de um produto alimentar por meio de um micro-organismo BR112013008768B1 (pt)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PT105331 2010-10-12
PT105331A PT105331A (pt) 2010-10-12 2010-10-12 Conservante alimentar
GB1017283.1A GB2484508A (en) 2010-10-12 2010-10-13 Use of antimicrobial polypeptide from Lupinus alba to preserve food
GB1017283.1 2010-10-13
PCT/EP2011/067821 WO2012049213A1 (en) 2010-10-12 2011-10-12 Use of a composition comprising an antimicrobial peptide as a food preservative

Publications (2)

Publication Number Publication Date
BR112013008768A2 BR112013008768A2 (pt) 2016-06-28
BR112013008768B1 true BR112013008768B1 (pt) 2020-05-12

Family

ID=44785878

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BR112013008768-4A BR112013008768B1 (pt) 2010-10-12 2011-10-12 Uso de uma composição que compreende um peptídeo antimicrobiano como um conservante de alimentos e método para prevenir ou inibir a deterioração de um produto alimentar por meio de um micro-organismo

Country Status (25)

Country Link
US (2) US9095166B2 (pt)
EP (1) EP2627202B1 (pt)
JP (1) JP6239383B2 (pt)
CN (1) CN103228161B (pt)
AU (1) AU2011315523B2 (pt)
BR (1) BR112013008768B1 (pt)
CA (1) CA2814383C (pt)
CL (1) CL2013000992A1 (pt)
CO (1) CO6791561A2 (pt)
CY (1) CY1123156T1 (pt)
DK (1) DK2627202T3 (pt)
EA (1) EA026573B1 (pt)
FR (1) FR23C1033I1 (pt)
GB (1) GB2484508A (pt)
HU (2) HUE049709T2 (pt)
IL (1) IL225496A (pt)
MX (1) MX347600B (pt)
MY (1) MY160965A (pt)
NZ (1) NZ610389A (pt)
PE (1) PE20140591A1 (pt)
PL (1) PL2627202T3 (pt)
PT (2) PT105331A (pt)
SG (1) SG189380A1 (pt)
WO (1) WO2012049213A1 (pt)
ZA (1) ZA201302932B (pt)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ587490A (en) * 2010-08-20 2013-03-28 Greentide Ltd Anti-Microbial Compounds containing compounds with a sugar substituent
PT105332A (pt) * 2010-10-12 2012-04-12 Cev Biotecnologia Das Plantas S A Agentes para utilização com antimicrobianos
WO2012049215A1 (en) * 2010-10-12 2012-04-19 Consumo Em Verde - Biotecnologia Das Plantas, S.A. Antimicrobial protein
US10357470B2 (en) * 2013-03-07 2019-07-23 Kane Biotech Inc. Antimicrobial-antibiofilm compositions and methods of use thereof
MX2015011613A (es) * 2013-03-07 2016-08-08 Kane Biotech Inc Composiciones antimicrobianas-antibiopelicula y metodos para utlizarlas.
CN104381419A (zh) * 2014-11-20 2015-03-04 洞头县水产科学技术研究所 一种生物保鲜剂及其保鲜方法
JP2018502111A (ja) * 2014-12-29 2018-01-25 エフ エム シー コーポレーションＦｍｃ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ バチルス・アミロリケファシエンス（ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ｒｔｉ３０１組成物および植物成長に利益を与えかつ植物病害を処置するための使用方法
WO2016110271A1 (en) 2015-01-09 2016-07-14 Nano And Advanced Materials Institute Limited Built-in antimicrobial plastic resins and methods for making the same
JP2018002647A (ja) * 2016-06-30 2018-01-11 アヲハタ株式会社 耐熱性微生物の不活性化用組成物、耐熱性カビの不活性化前処理用組成物、及び耐熱性微生物の不活性化方法
US20180228189A1 (en) 2017-02-14 2018-08-16 Kraft Foods Group Brands Llc Process for maintaining freshness of vegetable pieces
CN108378069A (zh) * 2018-05-09 2018-08-10 惠州市梦芭迪工业产品设计中心(普通合伙) 一种杀菌组合物
BR102021002393A2 (pt) * 2021-02-08 2022-08-23 Sterman Heimann Andrea Aditivo de preservação de células e/ou alimentos, uso
CN117562931B (zh) * 2024-01-15 2024-04-30 上海昌进生物科技有限公司 含有马克斯克鲁维酵母菌体的组合物、制备方法及应用

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3459314B2 (ja) * 1994-08-31 2003-10-20 社団法人農林水産技術情報協会 新規ペプチド、抗菌剤、新規ペプチド遺伝子、新規な組み換え体ｄｎａ及び新規ペプチドの製造法
AUPN780296A0 (en) * 1996-01-31 1996-02-22 Cooperative Research Centre For Tropical Plant Pathology Anti-microbial protein
DE19930959A1 (de) * 1999-07-05 2001-01-25 Aventis Res & Tech Gmbh & Co Neue Antimycotika und Fungizide, Verfahren zu deren Herstellung und Verwendung
WO2001005254A2 (en) * 1999-07-14 2001-01-25 Rhodia Inc. An antibacterial composition for control of gram positive bacteria in food
JP2002095475A (ja) * 2000-09-19 2002-04-02 Iwate Prefecture わさびの新規な抗菌性タンパク質遺伝子
WO2003101197A1 (en) * 2002-05-31 2003-12-11 Cjb Industries, Inc. Adjuvant for pesticides
PT1907550E (pt) * 2005-07-21 2013-01-23 Virgilio Borges Loureiro Proteína extraída de plantas do género lupinus ou produzida de forma recombinante, sequência de nucleótidos que a codifica e sua utilização em nutrição animal, como promotora do crescimento de plantas e na luta contra fungos patogénicos
EP1933626B1 (en) * 2005-09-06 2015-08-26 AgrarForum AG Seed suspensions from "lupinus albus", isolated compounds thereof and use as biological plant strengthening agent
DE102008002972A1 (de) * 2008-07-25 2010-01-28 Profos Ag Neues Endolysin PlyP40

Also Published As

Publication number Publication date
CA2814383A1 (en) 2012-04-19
AU2011315523A1 (en) 2013-05-30
CY1123156T1 (el) 2021-10-29
NZ610389A (en) 2014-11-28
US20130288953A1 (en) 2013-10-31
US9095166B2 (en) 2015-08-04
US20150289529A1 (en) 2015-10-15
JP2013540442A (ja) 2013-11-07
HUE049709T2 (hu) 2020-10-28
HUS2100044I1 (hu) 2021-10-28
IL225496A0 (en) 2013-06-27
WO2012049213A1 (en) 2012-04-19
US9402404B2 (en) 2016-08-02
ZA201302932B (en) 2013-11-27
GB2484508A (en) 2012-04-18
JP6239383B2 (ja) 2017-11-29
CN103228161B (zh) 2015-09-09
MX2013004104A (es) 2013-07-17
MY160965A (en) 2017-03-31
CL2013000992A1 (es) 2014-02-14
MX347600B (es) 2017-05-03
SG189380A1 (en) 2013-05-31
CO6791561A2 (es) 2013-11-14
PE20140591A1 (es) 2014-05-31
PL2627202T3 (pl) 2020-11-02
CN103228161A (zh) 2013-07-31
DK2627202T3 (da) 2020-07-27
CA2814383C (en) 2018-04-10
GB201017283D0 (en) 2010-11-24
EP2627202A1 (en) 2013-08-21
PT105331A (pt) 2012-04-12
EP2627202B1 (en) 2020-04-29
BR112013008768A2 (pt) 2016-06-28
EA026573B1 (ru) 2017-04-28
EA201390486A1 (ru) 2013-08-30
IL225496A (en) 2016-07-31
FR23C1033I1 (fr) 2023-11-03
AU2011315523B2 (en) 2015-09-10
PT2627202T (pt) 2020-07-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
BR112013008768B1 (pt) Uso de uma composição que compreende um peptídeo antimicrobiano como um conservante de alimentos e método para prevenir ou inibir a deterioração de um produto alimentar por meio de um micro-organismo
Al-Rousan et al. Use of acetic and citric acids to inhibit Escherichia coli O157: H7, Salmonella Typhimurium and Staphylococcus aureus in tabbouleh salad
Davidson et al. Chemical preservatives and natural antimicrobial compounds
Karabıyıklı et al. Inhibitory effect of sour orange (Citrus aurantium) juice on Salmonella Typhimurium and Listeria monocytogenes
Saladino et al. Antimicrobial activity of the glucosinolates
Søltoft-Jensen et al. New chemical and biochemical hurdles
BR112013008869B1 (pt) usos de agente quelante, uso deste com agente antimicrobiano, método de inibir o crescimento e/ou matar um microrganismo patogênico de plantas e método de aumentar a atividade de um agente antimicrobiano
Shwaiki et al. Plant compounds for the potential reduction of food waste–a focus on antimicrobial peptides
KR101865461B1 (ko) 항균 활성을 가지는 펩타이드 및 이를 유효성분으로 함유하는 항균 조성물
Kamal et al. Prospects of antimicrobial peptides as an alternative to chemical preservatives for food safety
JPS6041473A (ja) 抗微生物剤
McDaniel et al. Pecan and walnut food safety concerns: A mini review
Jay et al. Food protection with chemicals, and by biocontrol
Shee et al. Studies on the antibacterial activity potential of commonly used food preservatives
ES2807327T3 (es) Uso de una composición que comprende un péptido antimicrobiano como un conservador de alimentos
Fatima et al. Control of E. coli and spoilage microorganisms in tomato sauce and paste using a synergistic antimicrobial formula
US20190069569A1 (en) Compositions and methods for treating produce
JP2011206053A (ja) 浅漬および浅漬の保存安定性の向上方法
KR102649547B1 (ko) 항균 활성을 가지는 펩타이드 및 이를 유효성분으로 함유하는 항균 조성물
Kebede The Preservative Efficacy of Antimicrobial Proteins and Metabolites from Microorganisms, Animals and Plants as Potential Alternative to Chemical Food Preservation: A Review
Nabulsi et al. Use of Acetic and Citric acids to Inhibit Escherichia coli O157: H7, 2 Salmonella Typhimurium and Staphylococcus aureus in Tabbouleh 3 Salad
Chauhan et al. 4 Antimicrobials
Patel et al. Lactic Acid Bacteria (Lab) Bacteriocins: An Ecologicaland Sustainable Biopreservativeapproach to Improve The Safety and Shelf Life of Foods
Shwaiki A study on the application of synthetic antimicrobial peptides derived from plants for the reduction of yeast spoilage in food
Baindara et al. Plant-Derived Antimicrobial Peptides: Novel Preservatives for the Food Industry. Foods 2022, 11, 2415

Legal Events

Date Code Title Description
B06F Objections, documents and/or translations needed after an examination request according [chapter 6.6 patent gazette]
B07A Application suspended after technical examination (opinion) [chapter 7.1 patent gazette]
B06A Patent application procedure suspended [chapter 6.1 patent gazette]
B09A Decision: intention to grant [chapter 9.1 patent gazette]
B16A Patent or certificate of addition of invention granted [chapter 16.1 patent gazette]

Free format text: PRAZO DE VALIDADE: 20 (VINTE) ANOS CONTADOS A PARTIR DE 12/10/2011, OBSERVADAS AS CONDICOES LEGAIS.