EA026573B1 - Применение композиции, содержащей антимикробный пептид, в качестве пищевого консерванта - Google Patents

Применение композиции, содержащей антимикробный пептид, в качестве пищевого консерванта Download PDF

Info

Publication number
EA026573B1
EA026573B1 EA201390486A EA201390486A EA026573B1 EA 026573 B1 EA026573 B1 EA 026573B1 EA 201390486 A EA201390486 A EA 201390486A EA 201390486 A EA201390486 A EA 201390486A EA 026573 B1 EA026573 B1 EA 026573B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
food
polypeptide
b1ab
antimicrobial
use according
Prior art date
Application number
EA201390486A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201390486A1 (ru
Inventor
Алезандра Мануэла Лоуренку Каррейра
Сара Алезандра Валадаш Да Силва Монтейру
Рикардо Мануэль Ди Сейшаш Боавида Феррейра
Original Assignee
Консуму Эм Верди - Биотекноложия Даш Планташ, С.А.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Консуму Эм Верди - Биотекноложия Даш Планташ, С.А. filed Critical Консуму Эм Верди - Биотекноложия Даш Планташ, С.А.
Publication of EA201390486A1 publication Critical patent/EA201390486A1/ru
Publication of EA026573B1 publication Critical patent/EA026573B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23B—PRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
    • A23B7/00—Preservation or chemical ripening of fruit or vegetables
    • A23B7/14—Preserving or ripening with chemicals not covered by groups A23B7/08 or A23B7/10
    • A23B7/153—Preserving or ripening with chemicals not covered by groups A23B7/08 or A23B7/10 in the form of liquids or solids
    • A23B7/154—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A23B7/155—Microorganisms; Enzymes; Antibiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N47/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid
    • A01N47/40—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid the carbon atom having a double or triple bond to nitrogen, e.g. cyanates, cyanamides
    • A01N47/42—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid the carbon atom having a double or triple bond to nitrogen, e.g. cyanates, cyanamides containing —N=CX2 groups, e.g. isothiourea
    • A01N47/44—Guanidine; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N65/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing material from algae, lichens, bryophyta, multi-cellular fungi or plants, or extracts thereof
    • A01N65/08—Magnoliopsida [dicotyledons]
    • A01N65/20—Fabaceae or Leguminosae [Pea or Legume family], e.g. pea, lentil, soybean, clover, acacia, honey locust, derris or millettia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A21—BAKING; EDIBLE DOUGHS
    • A21D—TREATMENT, e.g. PRESERVATION, OF FLOUR OR DOUGH, e.g. BY ADDITION OF MATERIALS; BAKING; BAKERY PRODUCTS; PRESERVATION THEREOF
    • A21D15/00—Preserving finished, partly finished or par-baked bakery products; Improving
    • A21D15/08—Preserving finished, partly finished or par-baked bakery products; Improving by coating, e.g. with microbiocidal agents, with protective films
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A21—BAKING; EDIBLE DOUGHS
    • A21D—TREATMENT, e.g. PRESERVATION, OF FLOUR OR DOUGH, e.g. BY ADDITION OF MATERIALS; BAKING; BAKERY PRODUCTS; PRESERVATION THEREOF
    • A21D2/00—Treatment of flour or dough by adding materials thereto before or during baking
    • A21D2/08—Treatment of flour or dough by adding materials thereto before or during baking by adding organic substances
    • A21D2/24—Organic nitrogen compounds
    • A21D2/26—Proteins
    • A21D2/267—Microbial proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23B—PRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
    • A23B4/00—General methods for preserving meat, sausages, fish or fish products
    • A23B4/14—Preserving with chemicals not covered by groups A23B4/02 or A23B4/12
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23B—PRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
    • A23B4/00—General methods for preserving meat, sausages, fish or fish products
    • A23B4/14—Preserving with chemicals not covered by groups A23B4/02 or A23B4/12
    • A23B4/18—Preserving with chemicals not covered by groups A23B4/02 or A23B4/12 in the form of liquids or solids
    • A23B4/20—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23B—PRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
    • A23B7/00—Preservation or chemical ripening of fruit or vegetables
    • A23B7/14—Preserving or ripening with chemicals not covered by groups A23B7/08 or A23B7/10
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23B—PRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
    • A23B7/00—Preservation or chemical ripening of fruit or vegetables
    • A23B7/14—Preserving or ripening with chemicals not covered by groups A23B7/08 or A23B7/10
    • A23B7/153—Preserving or ripening with chemicals not covered by groups A23B7/08 or A23B7/10 in the form of liquids or solids
    • A23B7/154—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23B—PRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
    • A23B9/00—Preservation of edible seeds, e.g. cereals
    • A23B9/16—Preserving with chemicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23B—PRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
    • A23B9/00—Preservation of edible seeds, e.g. cereals
    • A23B9/16—Preserving with chemicals
    • A23B9/24—Preserving with chemicals in the form of liquids or solids
    • A23B9/26—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C3/00—Preservation of milk or milk preparations
    • A23C3/08—Preservation of milk or milk preparations by addition of preservatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L3/00—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs
    • A23L3/34—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L3/00—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs
    • A23L3/34—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals
    • A23L3/3454—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals in the form of liquids or solids
    • A23L3/3463—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L3/00—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs
    • A23L3/34—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals
    • A23L3/3454—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals in the form of liquids or solids
    • A23L3/3463—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A23L3/34635—Antibiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L3/00—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs
    • A23L3/34—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals
    • A23L3/3454—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals in the form of liquids or solids
    • A23L3/3463—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A23L3/3472—Compounds of undetermined constitution obtained from animals or plants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L3/00—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs
    • A23L3/34—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals
    • A23L3/3454—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals in the form of liquids or solids
    • A23L3/3463—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A23L3/3526—Organic compounds containing nitrogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Preservation Except Freezing, Refrigeration, And Drying (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

Предложено применение композиции, содержащей антимикробный полипептид, включающий Blad или его активный вариант, для предотвращения или подавления порчи пищевого продукта, вызываемой микроорганизмом. Также предложен способ предотвращения или подавления вызываемой микроорганизмом порчи пищевого продукта, включающий введение в предназначенный для этого пищевой продукт эффективного количества композиции, содержащей антимикробный полипептид, включающий Blad или его активный вариант.

Description

Настоящее изобретение относится к области антимикробных агентов, которые воздействуют на микроорганизмы, вызывающие порчу пищевых продуктов.
Введение
Консервация пищевых продуктов представляет собой процесс обработки пищевых продуктов с целью предотвращения или подавления их порчи, вызываемой эндогенным химическим/ферментативным разложением и/или вызываемой или ускоряемой микроорганизмом. Существует много способов консервации пищевых продуктов, некоторые из которых подавляют эндогенные процессы (например, антиоксиданты), некоторые из которых подавляют микробные процессы (например, антимикробные препараты) и некоторые из которых подавляют оба типа процессов (например, замораживание). Химическое соединение, которое используется для подавления порчи пищевых продуктов, обычно называют консервантом, который может быть, например, антиоксидантом или антимикробным препаратом.
Конкретные способы консервирования пищевых продуктов включают сушку, нагревание, охлаждение или замораживание, осмотическое ингибирование (например, использование сиропов и соли), вакуумную упаковку, консервирование в металлической и стеклянной таре, желирование, заливку, тушение, ионизирующее излучение, обработку пульсирующим электрическим полем и консервацию пищевых продуктов сверхвысоким гидравлическим давлением, применение антиоксидантов и/или применение антимикробных консервантов (например, диоксида серы, диоксида углерода, этанола, уксусной кислоты, лимонной кислоты, молочной кислоты, сорбиновой кислоты, бензоатов, нитратов и нитритов, сульфитов, пропионата кальция и метилхлоризотиазолина).
Несмотря на наличие относительно большого числа способов консервации пищевых продуктов, которые используются в настоящее время, существует необходимость в разработке новых антимикробных консервантов. Причиной этого является недостаточно эффективное воздействие многих уже существующих способов на микроорганизмы и, в частности, проблемы с эффективностью и/или безопасностью многих уже существующих антимикробных консервантов.
Многие способы консервации пищевых продуктов, которые пытаются создать неблагоприятные условия для роста микроорганизмов, являются неэффективными против организмов, которые выживают в экстремальных условиях (например, виды Ркеийошопак могут расти при очень низких температурах; ВаеШи8 еоади1ап8 является термоустойчивой и кислотовыносливой; многие виды АкретдШик обладают способностью к олиготрофии; виды 2у§о8ассЬагошусе8 имеют высокую ксеротолерантность).
Многие уже существующие антимикробные консерванты имеют умеренную активность, особенно против микроорганизмов с врожденной или приобретенной устойчивостью, и/или узкий спектр действия. Например, виды 2у§о8ассйагошусе8 обладают высокой устойчивостью к этанолу, уксусной кислоте, сорбиновой кислоте, бензойной кислоте и диоксиду серы. Кроме того, многие уже существующие антимикробные консерванты связаны с различными побочными эффектами, такими как респираторные проблемы или ДСД. В частности, например, диоксид серы вызывает раздражение бронхов у астматиков, нитриты являются потенциально канцерогенными, бензоаты связаны с различными видами аллергии, астмой, кожной сыпью и повреждением мозга.
Кроме того, эффективные способы подавления роста микроорганизмов в пищевых продуктах, такие как низкое значение рН или низкая активность воды, часто являются неприемлемыми для потребителя (например, дают кислый вкус) или имеют отрицательные последствия для здоровья (например, высокое содержание соли или сахара).
Одна из целей настоящего изобретения состоит в попытке решения этих проблем и, в частности, например, в создании нового антимикробного агента с мощным действием широкого спектра против микроорганизмов, и при этом обладающего низкой токсичностью.
Сущность изобретения
Авторами настоящего изобретения неожиданно было обнаружено, что полипептид В1а4 из Ьиршик обладает мощным антимикробным действием в отношении большого числа разнообразных бактериальных и грибковых организмов, которые вызывают порчу пищевых продуктов. Авторы настоящего изобретения также обнаружили, что полипептид В1а4 является нетоксичным, что делает В1а4 превосходным химическим соединением для применения в качестве антимикробного консерванта пищевых продуктов.
Таким образом, авторами настоящего изобретения предложено применение композиции, содержащей антимикробный полипептид, включающий В1а4 или его активный вариант, для предотвращения или подавления порчи пищевого продукта, вызываемой микроорганизмом. Предпочтительно указанный микроорганизм является бактерией (предпочтительно видом, вызывающим порчу пищевых продуктов, родов Ркеийошопак или ВасШик) или грибком (предпочтительно видом, вызывающим порчу пищевых продуктов, одного из следующих родов: АИетпапа, АкретдШик, Рикагшш, ВойуШ, Со11е1ойтсЬиш, ЗассЬатошусек, К1иууетошусе8 и 2удо8ассйагошусе8).
В предпочтительных вариантах осуществления изобретения пищевой продукт получен из, произведен или является фруктом, орехом, овощем, зерном, сахаром, молочным продуктом, жидким или пастообразным продуктом, мясом, рыбой или хлебом.
В предпочтительных вариантах осуществления изобретения пищевой продукт является клубникой,
- 1 026573 а микроорганизм предпочтительно является Войубк сшегеа или Со11е1о1пс1шт асШаШш предпочтительно ВоНуОз сшегеа.
В предпочтительных вариантах осуществления изобретения указанная композиция дополнительно включает хелатирующий агент.
Авторами настоящего изобретения также предложен способ предотвращения или подавления вызываемой микроорганизмом порчи пищевого продукта. включающий введение в предназначенный для этого пищевой продукт эффективного количества композиции, содержащей антимикробный полипептид, включающий В1аб или его активный вариант.
Описание чертежей
Настоящее изобретение будет описано со ссылкой на прилагаемые чертежи, где на фиг. 1 показана кодирующая последовательность предшественника β-конглютина Ьиртик а1Ьик (НЕС) ГО N0: 1); и на фиг. 2 показан внутренний фрагмент кодирующей последовательности предшественника βконглютина, соответствующий В1аб (8ЕС ГО N0: 3).
Подробное описание изобретения
В1аб
В1аб (Ьапба бе Ьиршик а1Ьик босе - полоса из сладкого Ь. а1Ьик) - это название, данное стабильному промежуточному продукту распада β-конглютина, основного запасного белка, содержащегося в семенах растений рода Ьиршик. Он представляет собой полипептид с массой 20 кДа, состоящий из 173 аминокислотных остатков, который кодируется внутренним фрагментом (519 нуклеотидов, зарегистрирован в СеиВаик под номером доступа АВВ13526) гена, кодирующего предшественник β-конглютина из Ьиршик (1791 нуклеотидов, зарегистрирован в СеиВаик под номером доступа АА897865). Когда праймеры, кодирующие концевые последовательности В1аб, были использованы для амплификации последовательности из геномной ДНК Ьиртик, был получен продукт размером ~620 п.н., что указывает на наличие интрона в фрагменте, кодирующем В1аб. Существующий в природе В1аб является основным компонентом гликоолигомера массой 210 кДа, который накапливается (после интенсивного ограниченного протеолиза β-конглютина) исключительно в семядолях видов растений из рода Ьиршик между 4 и 12 днями после начала прорастания. В то время как указанный олигомер является гликозилированным, существующий в природе В1аб является негликозилированным. Содержащий В1аб гликоолигомер состоит из нескольких полипептидов, основные из которых имеют молекулярную массу 14, 17, 20, 32, 36, 48 и 50 кДа. Полипептид массой 20 кДа В1аб несомненно является наиболее распространенным полипептидом этого олигомера, и по всей видимости только он один обладает лектиновой активностью.
Существующий в природе В1аб составляет приблизительно 80% от всех семядольных белков у 8дневных проростков.
Кодирующая последовательность предшественника β-конглютина Ь. а1Ьик (8ЕС ГО N0: 1) приведена на фиг. 1. Кодирующая последовательность исходной субъединицы β-конглютина соответствует остаткам с 70 по 1668. Кодируемые ею 533 аминокислотных остатка исходной субъединицы β-конглютина (8ЕС ГО N0: 2) представляют собой
МСКМКУНГРТЬ\'ЪУЬС1УГ1МА731С1АУСЕКЕ)\ГЪКЗНЕПРЕЕКЕОЕЕИОРВЕОК Ρβ3ΚΡ.ΕΕΚΕβΕ0Ε0Ο5Ρ3ΥΡΚΚ<33ΟΥΕΚΕς)ΥΕΕΒ.3Ε0ΚΕΕΚΕς)Ε0ς·0(33Ρ5Υ3ΚΕ 0ΚΝΡΥΗΕ5εΩΚΡ0ΤΕΥΚΝΚΝ5ΚΙΚνΕΕΚΕΟ0ΕΤΝΚΡΕΝΕ0ΝΥΚΐνΕΕ0ΞΚΡΥτΤΥΙ ЬРКНЗОАРУ\’ЬУУЬЫЗЕАТ1Т1УЫРЭКЕОАУЕЬЕУСОАЬК1РАОЗТЗУ1ЬМРОВЦ ΩΚΡΕ4Ε;ΚΕΑ1ΡΙΝΝΡ3ΥΕΥΡΕΥΡ3ΞΤΚ0003ΥΡ33Ε3ΕΧΤΕΕΑΤΡΝΤΚΥΕΕΙΟΕ: ΙΕ0ΝΕΡΕΩΕΥΕΕΩΚΚ3ΩΕΩ3ΕΩϋΕ6νΐνΐν3ΚΚΩΙΩΚΕΤΚΗΑβ333ΘΚ0ΚΡ3ϋ30 ΡΕΝΡΕΞΝΕΡΙΥ5ΝΚ Υ3Ν ΕΥΕI ΤΡΟΡΝΡζ)νζ)ΟΙ,ΝΙ 8РТУI КГМЕСАЬЕЪРН ΥΝ3ΚΔ ΙΥννννΕΕΟΕ3ΝΥΕΕν3ΙΕΡι2ΩΕ2ΩΟΕς>ΕΕΚΕΕΕ\ίΙΡΥ5ΑΕΕ5Ε3ΡΙΓνΐ РАСУР 13ГЕАЗЗЫЪКЬЕСРе1ЫАРЕЕ0КЫЕ’РАСЗКПХУ1К0Р0!<АУЦЕЬТРРЗЗАЕР1ЕК 1ЛКМЙ<Э03УЕА№3<2Р<2С1220<Э05ЕКЕСЕЕСКЕ353ЪРЕ
Внутренний фрагмент кодирующей последовательности предшественника β-конглютина, соответствующий В1аб (8ЕС ГО N0: 3), приведен на фиг. 2. Полипептид В1аб (8ЕС ГО N0: 4) представляют собой
ΚΚΩΚΝΡΥΗΕΞ30ΕΕΩΤΕΥΚΝΚΝ0ΚΙΚνΡΕΕΕΟΩΚΤΚΡΕΕΝΕζ)ΝΥΡ.ΐνΕΓΩ5Κ?ΝΤ Е1ЬРК1!ЗОАРУЕтЬУУЬЫЗКАТ1Т1УЫРОЕК0АУКЬЕУЗРАЬЕ1РА68ТЗУ1ЪЫГР ΡΝΩΚΕΡννΚΕΑΙΡIΝΝΡΕ ΥΕΥϋΓΥ РЗ 3ΤΚ03Ω3 ΥΕ33 ГЗЕЫтЕЕ.АТ ΕΝΡΡΥΕΕ1С киьемЕО
Настоящее изобретение относится к композиции, содержащей антимикробный полипептид, включающий В1аб или его активный вариант. Таким образом, оно относится к композиции, содержащей антимикробный полипептид, включающий полипептидную последовательность (8ЕС ГО N0: 4) или ее активный вариант. В альтернативных вариантах осуществления изобретения композиция в основном состоит из антимикробного полипептида, включающего В1аб или его активный вариант, и/или антимикробный полипептид в основном состоит из В1аб или его активного варианта. В дополнительных вариантах осуществления изобретения антимикробный полипептид, включающий (или в основном состоящий из) В1аб или его активный вариант, может быть использован в изолированном виде.
- 2 026573
Активным вариантом В1аб является вариант В1аб, который сохраняет способность действовать в качестве антимикробного агента (т.е. обладает антимикробной активностью - описание уровня такой активности и способа ее измерения см. ниже). Термин активный вариант В1аб включает объем фрагмент последовательности 8ЕЭ ГО N0: 4. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения фрагмент последовательности 8ЕЭ ГО N0: 4 выбран таким образом, что он составляет по меньшей мере 10% длины 8ЕЭ ГО N0: 4, предпочтительно по меньшей мере 20%, предпочтительно по меньшей мере 30%, предпочтительно по меньшей мере 40%, предпочтительно по меньшей мере 50%, предпочтительно по меньшей мере 60%, предпочтительно по меньшей мере 70%, предпочтительно по меньшей мере 80%, предпочтительно по меньшей мере 90% и наиболее предпочтительно по меньшей мере 95% длины 8ЕЭ ГО N0: 4. Таким образом, В1аб или его вариант, как правило, имеет длину по меньшей мере 10 аминокислотных остатков, например по меньшей мере 20, 25, 30, 40, 50, 60, 80, 100, 120, 140, 160 или 173 аминокислотных остатка.
Термин активный вариант В1аб также включает в свой объем полипептидную последовательность, которая обладает гомологией с 8ЕЭ ГО N0: 4, например, по меньшей мере 40% идентичности, предпочтительно по меньшей мере 60%, предпочтительно по меньшей мере 70%, предпочтительно по меньшей мере 80%, предпочтительно по меньшей мере 85%, предпочтительно по меньшей мере 90%, предпочтительно по меньшей мере 95%, предпочтительно по меньшей мере 97% и наиболее предпочтительно по меньшей мере 99% идентичности, например, по всей последовательности или на участке по меньшей мере из 20, предпочтительно по меньшей мере 30, предпочтительно по меньшей мере 40, предпочтительно по меньшей мере 50, предпочтительно по меньшей мере 60, предпочтительно по меньшей мере 80, предпочтительно по меньшей мере 100, предпочтительно по меньшей мере 120, предпочтительно по меньшей мере 140 и наиболее предпочтительно по меньшей мере 160 или более соседних аминокислотных остатков. Способы измерения гомологии белков хорошо известны из уровня техники, и специалистам в данной области техники будет понятно, что в данном контексте гомология рассчитывается на основе идентичности аминокислот (иногда обозначается как строгая гомология).
Гомологичный активный вариант В1аб, как правило, отличается от полипептидной последовательности 8ЕЭ ГО N0: 4 заменами, инсерциями или делениями, например, имеет от 1, 2, 3, 4, 5 до 8 или более замен, инсерций или делеций. Замены являются предпочтительно консервативными, то есть другими словами, аминокислота может быть заменена аналогичной аминокислотой, где аналогичные аминокислоты имеют одинаковой с заменяемой аминокислотой одну из следующих групп: ароматические остатки (Р/Н/^/Υ), неполярные алифатические остатки (О/А/РЛ/Ь/У), полярные незаряженные алифатические остатки (С/8/Т/М/Л/р) и полярные заряженные алифатические остатки (Ό/Е/К/Р). Предпочтительные подгруппы включают: О/А/Р; Ι/Ь/У; С/8/Т/М; N/0: Ό/Е и К/Р.
Антимикробный полипептид, включающий В1аб или его активный вариант (как описано выше), может состоять из В1аб или его активного варианта с любым количеством аминокислотных остатков, добавленных к Оконцу и/или С-концу, при условии, что полипептид сохраняет антимикробную активностью (описание уровня такой активности и способа ее измерения опять смотри ниже). Предпочтительно, чтобы к одному или обоим концам В1аб или его активного варианта было добавлено не более 300 аминокислотных остатков, более предпочтительно не более 200 аминокислотных остатков, предпочтительно не более 150 аминокислотных остатков, предпочтительно не более 100 аминокислотных остатков, предпочтительно не более 80, 60 или 40 аминокислотных остатков, наиболее предпочтительно не более 20 аминокислотных остатков.
Антимикробный полипептид, включающий (или в основном состоящий из) В1аб или его активный вариант (как описано выше), может быть использован в настоящем изобретении в очищенном виде (например, выделен из растительного, животного или микробного источника) и/или в виде рекомбинантного белка. Получение рекомбинантной формы позволяет получать активные варианты В1аб.
Способы очистки существующего в природе В1аб уже описаны в литературе (например, Каток с1 а1. (1997) Р1аи1а 203(1): 26-34 и Мойейо е1 а1. (2010) РЬо8 0№ 5(1): е8542). Подходящим источником существующего в природе В1аб является растение рода Ьиршик, такое как Ьиршик а1Ьик, предпочтительно семядоли указанного растения, предпочтительно собранные между примерно 4 и примерно 14 днем после начала прорастания, более предпочтительно собранные с 6 по 12 день после начала прорастания (например, на 8 день после начала прорастания). В уровне техники раскрыты способы экстрагирования общего белка, приводящие к получению неочищенного экстракта, содержащего В1аб, и способы выделения белков из такого экстракта, приводящие к получению частично очищенного экстракта, например, включающего В1аб-содержащий гликоолигомер, который включает В1аб.
Для того чтобы выделить собственно В1аб, можно затем использовать ДСН-ПААГ и/или предпочтительно обращенно-фазную ВЭЖХ на колонке С-18.
Альтернативным способом получения частично очищенного экстракта, содержащего гликоолигомер, который включает В1аб, является использование хитинсвязывающей активности В1аб. Этот гликоолигомер очень эффективно связывается с хитиновой колонкой, в способе очистки при помощи хитиновой аффинной хроматографии, и элюируется 0,05 Н раствором НС1. Подробное описание примера этого способа очистки приводится ниже.
- 3 026573
Семядоли восьмидневных растений люпина собирают и гомогенизируют в воде, очищенной при помощи системы МПП-0 р1и8 (значение рН доведено до 8,0), содержащей 10 мМ СаС12 и 10 мМ МдС12. Гомогенат фильтруют через марлю и центрифугируют при 30000 д в течение 1 ч при температуре 4°С. Затем осадок ресуспендируют в 100 мМ Тп8-НС1 буфере с рН 7,5, содержащем 10% (мас./об.) ЫаС1, 10 тМ ЭДТА и 10 мМ ЭГТА, перемешивают в течение 1 ч при температуре 4°С и центрифугируют при 30000 д в течение 1 ч при температуре 4°С. Общую глобулиновую фракцию, содержащуюся в надосадочной жидкости, осаждают сульфатом аммония (561 г/л), перемешивают на холоде в течение 1 ч и центрифугируют при 3000 0 д в течение 30 мин при температуре 4°С. Полученный осадок растворяют в 50 мМ ТТ18-НС1 буфере с рН 7,5, обессоливают на колонке ΡΌ-10, уравновешенной тем же буфером, и пропускают через колонку для хитиновой аффинной хроматографии, предварительно уравновешенную тем же буфером. Эту колонку промывают 50 мМ Тп8-НС1 буфером с рН 7,5 и связавшиеся белки элюируют 0,05 Н раствором НС1. Элюированные фракции сразу нейтрализуют 2 М раствором Тп8. и пиковые фракции объединяют, лиофилизируют и анализируют при помощи ДСН-ПААГ.
Для изготовления хитиновой колонки хитиновое сырье было получено от компании Шдша и обработано следующим образом: образец хитина обильно промывали водой, очищенной при помощи системы МПП-О р1и8, а затем 0,05 Н раствором НС1. Затем его промывали 1% (мас./об.) раствором карбоната натрия и затем этанолом до тех пор, пока поглощение промывочной жидкости не становилось меньше 0,05. После этого хитин помещали в наконечник для пипетки и уравновешивали 50 мМ Тп8-НС1 буфером с рН 7,5.
Способы получения рекомбинантных белков хорошо известны из уровня техники. Такие способы, какие применяются здесь, будут включать вставку полинуклеотида, кодирующего полипептид, включающий В1аб или его активный вариант, в подходящий экспрессионный вектор, позволяющий совмещать указанный полинуклеотид с одним или несколькими промоторами (например, с индуцибельным промотором, таким как Т71ас промотор) и с другими целевыми полинуклеотидами или генами, введение данного экспрессионного вектора в подходящую клетку или организм (например, Е8сНспс1иа сой), экспрессию полипептида в трансформированной клетке или организме и удаление экспрессированного рекомбинантного полипептида из этой клетки или организма. Для облегчения такой очистки экспрессионный вектор может быть сконструирован так, чтобы полинуклеотид дополнительно кодировал, например, концевую метку, которая может способствовать очистке: например, метку из гистидиновых остатков для аффинной очистки. После того как рекомбинантный полипептид был очищен, метка очистки может быть удалена из полипептида, например, путем протеолитического расщепления.
В композиции, содержащей антимикробный полипептид, включающий (или в основном состоящий из) В1аб или его активный вариант, указанный полипептид предпочтительно находится в частично очищенном виде, более предпочтительно в очищенном виде. Указанный полипептид является частично очищенным, если он находится в среде, в которой отсутствуют один или несколько других полипептидов, с которыми он связан в естественных условиях, и/или составляет по меньшей мере 10% от всех присутствующих белков. Указанный полипептид является очищенным, если он находится в среде, в которой отсутствуют все или большинство других полипептидов, с которыми он связан в естественных условиях. Например, термин очищенный В1аб означает, что В1аб составляет по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% от всех белков в композиции.
В композиции, содержащей антимикробный полипептид, включающий (или, в основном, состоящий из) В1аб или его активный вариант, набор белков Ьирти8 может состоять, в основном, из В1абсодержащего гликоолигомера, который включает полипептид, который включает (или, в основном, состоит из) В1аб или его активный вариант.
Композиция, содержащая антимикробный полипептид, включающий (или, в основном, состоящий из) В1аб, также может представлять собой препарат, содержащий другое химическое соединение(я), добавленное в эту композицию специалистом в данной области техники.
Порча пищевых продуктов и пищевые продукты
Порча пищевого продукта микроорганизмом означает любое изменение пищевого продукта, вызываемое микроорганизмом, которое приводит к изменению, например, вкуса, запаха или внешнего вида (например, формы, цвета, консистенции, упругости), которое снижает его питательную и/или коммерческую ценность. Предполагается, что термин пищевой продукт означает любое жидкое или твердое вещество, предназначенное для употребления человеком или животным с целью питания или получения удовольствия. Пищевой продукт может употребляться непосредственно или опосредованно (например, после приготовления или обработки, такой как очистка зерновых продуктов). В соответствующих случаях предполагается, что пищевой продукт предпочтительно является продуктом, выделенным из природной окружающей среды, таким как пищевые продукты растительного происхождения (например, фрукты, овощи, семена), и продуктом животного происхождения (например, мясо, рыба, молоко).
Пищевой продукт может быть получен из, произведен или может являться фруктом, орехом, ово- 4 026573 щем, зерном, сахаром, молочным продуктом, жидким или пастообразным продуктом, мясом, рыбой или хлебом. Пищевые продукты, полученные из фруктов, включают вино и фруктовый сок. Растения, дающие зерно, включают злаки (например, кукурузу, пшеницу, ячмень, сорго, просо, рис, овес и рожь). Сахара, предпочтительно сахароза, могут быть получены из сахарной свеклы или сахарного тростника. Молочные продукты включают молоко, сливки, сыр и йогурт. Жидкий или пастообразный продукт включает суп, соусы, маринады, майонез, сливочные салатные заправки и другие заправки для салатов, варенья, сироп и детское питание. Предполагаемые мясные и/или рыбные пищевые продукты могут быть как обработанными, так и необработанными и могут быть приготовленными или неприготовленными. Другие конкретные пищевые продукты, предусмотренные настоящим изобретением, могут быть найдены в следующем разделе, который относится к примеру пищевых продуктов, подверженных порче теми микроорганизмами, на которые могут быть направлены применение и способы настоящего изобретения.
Пищевые продукты также включают заранее приготовленные составные пищевые продукты, такие как бутерброды, пироги, пироги с заварным кремом и начинкой и т.д., особенно те, которые предназначены для хранения в охлажденном состоянии.
Целевые микроорганизмы
Авторами настоящего изобретения также предложено применение композиции, содержащей антимикробный полипептид, включающий В1аб или его активный вариант, для предотвращения или подавления порчи пищевого продукта, вызываемой микроорганизмом. Микроорганизмы, которые могут вызывать порчу пищевого продукта - портящие продукты микроорганизмы включают, в частности, бактерии и грибки. В таком применении антимикробный полипептид может рассматриваться в качестве антимикробного консерванта пищевых продуктов.
Антимикробный полипептид может быть использован для предотвращения или подавления порчи пищевого продукта, вызываемой как грамположительными, так и грамотрицательными бактериями. Особенно предпочтительные целевые бактерии (с приведенными в скобках примерами пищевых продуктов, порчу которых они могут вызывать) включают вызывающие порчу пищевых продуктов виды Ркеиботопак, такие как Ркеиботопак аетидшока (арабидопсис и латук), Ркеиботопак кутшдае (различные пищевые продукты растительного происхождения, такие как свекла, пшеница и ячмень), Ркеиботопак Ю1аакп (грибы), Ркеиботопак адайе1 (грибы), Ркеиботопак Ггад1 (молочные продукты) и Ркеиботопак 1ипбеп818 (молоко, сыр, мясо и рыба), наиболее предпочтительно Р. аетидшока; и вызывающие порчу пищевых продуктов виды ВаеШик, такие как ВаеШик киЫйПк (томаты, картофель, хлеб) и ВаеШик еоади1ап8 (молоко, томатный сок).
Антимикробный полипептид может быть использован для предотвращения или подавления порчи пищевого продукта, вызываемой как одноклеточными (дрожжевые грибки), так и многоклеточными (мицелиальными, плесневыми) грибками. Особенно предпочтительные целевые дрожжевые грибки (с приведенными в скобках примерами пищевых продуктов, порчу которых они могут вызывать) включают вызывающие порчу пищевых продуктов виды Засейатошуеек, такие как Засейатошуеек еетеу181ае (сахар, сахарные сиропы, вино и безалкогольные напитки, такие как фруктовые соки); вызывающие порчу пищевых продуктов виды К1иууегошуеек, такие как К1иууегошуеек шатаиик (сыр); и вызывающие порчу пищевых продуктов виды 2удокаеейагошуеек, такие как 2удокаеейагошуеек ЫаЛп (вино, фруктовый сок, заправки для салатов и томатный соус) и 2у§окаеейатошуеек тоихи (сахарные сиропы, фруктовые соки, варенья и заправки для салатов). Особенно предпочтительные целевые плесневые грибки (с приведенными в скобках примерами пищевых продуктов, порчу которых они могут вызывать) включают вызывающие порчу пищевых продуктов виды ЛЙегпапа. такие как ЛЙегпапа айегпа1а (картофель), ЛЙегпапа агЫогекеепк (томаты), ЛЙегпапа атЫикй (азиатская груша), ЛЙегпапа Ытакыеае (овощи), ЛЙегпапа Ыгакк1е1ео1а (капустные культуры), ЛЙегпапа еагоШпеиЙае (морковь), ЛЙегпапа еои^ииеΐа (пастернак), АЙетапа баие1 (морковь), ЛЙегпапа еирйотЫпео1а (капустные культуры), ЛЙегпапа дайеп (груша), ЛЙегпапа шГееЮпа (пшеница), ЛЙегпапа )арошеа (капустные культуры), ЛЙегпапа рейокейт (петрушка), ЛЙегпапа кейш (петрушка), ЛЙегпапа ко1аш (картофель, томаты) и ЛЙегпапа ктути (смирна, петрушка); вызывающие порчу пищевых продуктов виды ЛкрегдШпк, такие как ЛкрегдШпк ГинидаШк (орехи, картофель, рис и хлеб), ЛкрегдШик шдег (фрукты и овощи, например, виноград и лук) и ЛкрегдШпк йауик (зерновые культуры, арахис); вызывающие порчу пищевых продуктов виды Рикатшш, такие как Рикатшш охукротиш (фрукты) и Рикатшш дгатшеатит (ячмень, пшеница и кукуруза); вызывающие порчу пищевых продуктов виды Войуйк, такие как Во1г\йк епгегеа (клубника, виноград и томаты); и вызывающие порчу пищевых продуктов виды Со11еЮ1пе1шпг, такие как Со11е1о1пе1шт аеШаШт (клубника, сельдерей, яблоки, авокадо, баклажан, кофе и гуава), Со11еЮ1пе1шт еоееойек (томаты, картофель), Со11еЮ1пе1шпг еарк1е1 (базилик, нут, перец), Со11еЮ1пе1шт етакырек (маракуйя), Со11е1о1пе1шт д1оеокропоШек (овощи и фрукты, например, айва и яблоки), Со11еЮ1пе1шт дгатпйеойг (злаковые культуры), Со11еΐоί^^ейит ка1га\уае (кофе), Со11еΐоΐ^^ейит НпйепиШиапипг (фасоль), Со11еΐоί^^ейит тикае (бананы), Со11еЮ1пе1шт шдгит (томаты), Со11еΐоΐ^^ейит отЫ1еи1ате (дыни, огурцы), Со11еΐоί^^ейит рШ (горох) и Со11еΐоί^^ейит киЫйпеойпп (рис).
В предпочтительных вариантах осуществления изобретения антимикробный полипептид используется для предотвращения или подавления вызываемой микроорганизмом порчи фруктов, предпочтительно клубники, и этот микроорганизм предпочтительно является Войуйк епгегеа или Со11еΐоί^^ейит аеи- 5 026573
Шит. предпочтительно Βοίτγίίδ сшегеа.
Специалист в данной области техники при помощи стандартных методов сможет определить подходящую концентрацию (т.е. эффективную концентрацию), с которой антимикробный полипептид будет применяться для предотвращения или подавления порчи в любых конкретных условиях. Предпочтительно, например, В1ай применяется в концентрации по меньшей мере 1 мкг/мл, по меньшей мере 5 мкг/мл, по меньшей мере 10 мкг/мл, по меньшей мере 50 мкг/мл, по меньшей мере 100 мкг/мл или по меньшей мере 150 мкг/мл и до 350 мкг/мл, до 500 мкг/мл, до 600 мкг/мл, до 1 мг/мл, до 2,5 мг/мл, до 5 мг/мл или до 10 мг/мл. Предпочтительно выбранная концентрация В1ай составляет от 10 мкг/мл до 5 мг/мл, более предпочтительно от 50 мкг/мл до 2,5 мг/мл, более предпочтительно от 100 мкг/мл до 1 мг/мл и еще более предпочтительно от 150 до 600 мкг/мл (например, около 250 мкг/мл). Авторами настоящего изобретения были получены доказательства (см. примеры 4 и 5) того, что В1ай является нетоксичным для животных в концентрации по меньшей мере до 400 мкг/мл.
Авторами настоящего изобретения неожиданно было обнаружено, что сочетание В1ай с хелатирующим агентом (например, ЭДТА) дает синергический антимикробный эффект. Таким образом, предпочтительно использовать хелатирующий агент для улучшения антимикробного действия антимикробного полипептида, и использование такого хелатирующего агента может снижать концентрацию данного антимикробного полипептида, необходимую для достижения определенного уровня предотвращения или подавления порчи. Хелатирующий агент (также известный как хелант, хелатор или комплексообразующий агент) представляет собой любое химическое соединение, которое связывает ион металла с образованием нековалентного комплекса и уменьшает активность иона. Подходящие хелатирующие агенты включают полиаминокарбоксилаты, такие как ЭДТА (этилендиаминтетрауксусная кислота) и ЭГТА (этиленгликоль-бисф-аминоэтиловый эфир)-Х,Х,№,№-тетрауксусная кислота). Предпочтительно в качестве хелатирующего агента используется ЭДТА, предпочтительно в концентрации по меньшей мере 10 мкг/мл, по меньшей мере 50 мкг/мл или по меньшей мере 100 мкг/мл и до 500 мкг/мл, до 1 мг/мл, до 5 мг/мл, до 10 мг/мл или до 20 мг/мл. Предпочтительно ЭДТА используется в концентрации от 0,1 до 1 мг/мл.
Результаты
Антимикробный полипептид может применяться для подавления роста вызывающего порчу пищевых продуктов микроорганизма (означает, что он обладает микробоостатическим действием) или уничтожения указанного микроорганизма (означает, что он обладает микробицидным действием) на пищевом продукте так, что порча указанного пищевого продукта, вызываемая указанным микроорганизмом, предотвращается или подавляется. Специалист в данной области техники будет способен определить подходящую дозу и/или концентрацию для достижения желаемого подавления роста или уничтожения микроорганизма в каждом конкретном случае.
Предпочтительно при использовании в качестве микробоостатического агента антимикробный полипептид уменьшает скорость роста на 10%, более предпочтительно на 50%, более предпочтительно на 75%, более предпочтительно на 90%, более предпочтительно на 95%, более предпочтительно на 98%, более предпочтительно на 99% и еще более предпочтительно на 99, 9% по сравнению с эквивалентными условиями без использования антимикробного полипептида. Наиболее предпочтительно антимикробный полипептид предотвращает любой рост микроорганизма.
Предпочтительно при использовании в качестве микробицидного агента антимикробный полипептид уничтожает 10% популяции микроорганизмов, более предпочтительно 50% указанной популяции, более предпочтительно 75% указанной популяции, более предпочтительно 90% указанной популяции, более предпочтительно 95% указанной популяции, более предпочтительно 98% указанной популяции, более предпочтительно 99% указанной популяции и еще более предпочтительно 99,9% указанной популяции по сравнению с эквивалентными условиями без использования антимикробного полипептида. Наиболее предпочтительно антимикробный полипептид уничтожает всю популяцию микроорганизма.
При применении для предотвращения или подавления порчи пищевого продукта антимикробный полипептид предпочтительно используется в эффективном количестве, то есть, другими словами, количестве, которое обеспечивает такой уровень подавления роста и/или уничтожения микроорганизма, при котором достигается определяемый уровень предотвращения или подавления порчи (например, снижение скорости порчи), предпочтительно по сравнению с эквивалентными условиями без использования антимикробного полипептида. Предпочтительно эффективное количество антимикробного полипептида является нетоксичным для человека или животного.
Применение и способы
Авторами настоящего изобретения предложено применение композиции, содержащей антимикробный полипептид, включающий В1ай или его активный вариант, для предотвращения или подавления порчи пищевого продукта, вызываемой микроорганизмом. В связи с этим, авторами также предложен способ предотвращения или подавления порчи пищевого продукта, вызываемой микроорганизмом, включающий введение в предназначенный для этого пищевой продукт эффективного количества композиции, содержащей антимикробный полипептид, включающий В1ай или его активный вариант. Предпочтительно эффективное количество антимикробного полипептида является нетоксичным для людей или
- 6 026573 животных. Предотвращение или подавление порчи может осуществляться во время хранения, транспортировки, погрузки/разгрузки, обработки или демонстрации пищевого продукта.
Композиция, содержащая антимикробный полипептид, может, например, быть смешана с пищевым продуктом или может, например, быть нанесена на поверхность пищевого продукта (например, в виде жидкой пленки или мелких капель). Пищевой продукт также может быть погружен в указанную композицию (и при необходимости выдержан в ней). Для любого конкретного пищевого продукта применение указанной композиции в качестве консерванта может сочетаться с любым другим хорошо известным способом консервации пищевых продуктов, антимикробным препаратом или иным способом, включая сушку, нагревание, охлаждение или замораживание, осмотическое ингибирование (например, использование сиропов и соли), вакуумную упаковку, консервирование в металлической и стеклянной таре, желирование, заливку, тушение, ионизирующее излучение, обработку пульсирующим электрическим полем, консервацию пищевых продуктов сверхвысоким гидравлическим давлением, применение антиоксидантов и/или применение антимикробных консервантов (например, диоксида серы, диоксида углерода, этанола, уксусной кислоты, лимонной кислоты, молочной кислоты, сорбиновой кислоты, бензоатов, нитратов и нитритов, сульфитов, пропионата кальция и метилхлоризотиазолина).
Примеры
В следующих примерах ВЬЛИ обозначает существующий в природе В1аб-содержащий гликоолигомер, включающий полипептид В1аб массой 20 кДа, очищенный по методике, описанной в Каток с1 а1. (1997) Р1аи1а 203(1): 26-34: см. разделы Растительный материал и условия выращивания и Очистка белков в параграфе Материалы и методы этого документа.
Определения:
МИК - минимальная ингибирующая концентрация: наименьшая концентрация антимикробного препарата, которая подавляет видимый рост микроорганизма.
МФК/МБК - минимальная фунгицидная/бактерицидная концентрация (или минимальная летальная концентрация): наименьшая концентрация антимикробного препарата, необходимая для уничтожения 99,9% первичного инокулума после 24 ч при стандартизированном наборе условий.
Пример 1. Бактерицидное действие ВЕЛИ
МИК и МБК ВЬЛИ в отношении различных видов бактерий (с использованием среды МюллераХинтона)
Виды бактерий МИК (мкг/мл) МБК (мкг/мл)
Рзеис1отопаз аегидапова 32-256 128-256
1Лз(:ег1а топосу^одепез 8 >512
ВасП1и5 зиЬЫНз 4 >512
51арРу1ососсиз аигеиз 8 >512
5а1топе11а ^АурАатигаит 64 128
В частности, Р. аегидшока и В. киМШк могут вызывать порчу пищевых продуктов. Было установлено, что для Р. аегидшока бактериостатическая концентрация ВЬЛИ составляет 100 мкг/мл, а бактерицидная - 250 мкг/мл. ВЬЛИ в концентрации 50 мкг/мл или ЭДТА в концентрации 1 мг/мл подавляют рост Р. аегидшока (т.е. обе концентрации являются бактериостатическими), но комбинация этих двух веществ в данных концентрациях является бактерицидной.
Пример 2. Фунгицидное действие ВЕЛИ
МИК и МФК ВЕЛИ в отношении различных мицелиальных грибков (с использованием среды КРМ1)
Виды грибков МИК (мкг/мл) МФК (мкг/мл)
Виды ШСегпагда 64 >512
АзрегдШиз Ришида^из 32 >512
АзрегдШиз п!дег 32-64 >512
ВоЁгуСаз сапегеа 128 512
СоИеЬоЬгРсЪит асиЬаЬит 64 >512
СоИе^сРгаскит д1оезрог1о1с1ез 64 >512
Ризагаит охузрогит 64 >512
МИК ВЕЛИ в отношении различных мицелиальных грибков (с использованием различных сред)
Штамм МИК (мкг/мл)
ΡϋΒ ΡϋΒ рН7 5 АМЗ ΚΡΜΙ
ВоСгуСдз с1пегеа ВМ 128(1) 4-8 (3) 8-32(3) 128 (2)
В. ВТ 32-128 (3) 8 (3) 16-32(3) 64-128(3)
Со1 какаыае (из Кении) 32 4 1-4 64
С. какаыае (из Зимбабве) 16 4-8 4-16 64
- 7 026573
Зона подавления ВБАИ (диаметр) в отношении Войуйк сшетеа ВМ на 0,6% или 0,9% (мас./об.) картофельно-декстрозном агаре (ΡΌΑ) (3 суток инкубации при 25°С)
ВЬАО на диск (мкг) Средний диаметр зоны Средний диаметр зоны на 0/ 9% агаре (мм)
на 0,6% агаре (мм)
2 0 мкг 0 0
50 мкг 13 0
100 мкг 25, 5 11
200 мкг 36 22
На 0,6% агаре рост В. сшета в возрастающей степени подавлялся с увеличением количества ВЬАО с 20 до 200 мкг.
Менее выраженное подавление наблюдалось при 5 и 10 мг/мл на 0,9% агаре.
Зона подавления ВЬАО с концентрацией 200 мкг на диск (диаметр) в отношении различных дрожжевых грибков на 0,9% (мас./об.) ΡΌΑ (3 суток инкубации при 25°С)
Дрожжевой грибок Средний диаметр зоны (мм)
Засскаготусез сеге^азаае 30
К1иууеготусез тагхаапиз 28
ЗудозассЬаготусез ЬаИИ >40
гудозасс^аготусез ιοιιχίί 40
Концентрация ВБАИ 200 мкг на диск вызывала значительное подавление роста всех этих дрожжевых грибков, каждый из которых может вызывать порчу пищевых продуктов.
Пример 3. Анализ консервации/обеззараживаня клубники
Была исследована подверженность клубники заражению В. сшетеа после обработки ВБАИ. Было обнаружено, что до 38% необработанной клубники, предоставленной коммерческим поставщиком, является зараженной (размер партии: десять коробок по 500 г), что подчеркивает проблему заражения клубники.
Протокол анализа
1. Г отовили однородный и репрезентативный образец.
2. Мыли водой и обеззараживали 70% (об./об.) раствором этанола.
3. Дважды промывали водой.
4. Обрабатывали различными концентрациями ВЬАО (кроме контроля): на 1 мин погружали в раствор для обработки, перед тем как оставить сохнуть в инкубационных чашках Петри (содержащих влажную хозяйственную губку, стерильную воду, фильтровальную бумагу и пластиковую сетку).
5. Каждую ягоду клубники инокулировали 10 мкл раствора спор В. сшетеа с концентрацией 1-5 х106 спор/мл.
6. Инкубировали в течение 5 дней при следующих условиях: температура: 25°С (+/-3°С);
относительная влажность: 80-90%; освещение: защита от прямого солнечного света.
7. Через определенные промежутки времени отбирали 1 г образца и гомогенизировали с помощью вортекса.
8. Готовили серию десятичных разведений.
9. Рассевали на твердых средах и проводили подсчет колоний.
Все экспериментальные процедуры выполняли в стерильных условиях с использованием автоклавированного материала.
Следующие данные представляют собой процент клубники, инфицированной В. сшетеа после инокуляции раствором спор В. сшетеа:
Дни после инокуляции Концентрация ВЪАЭ (мкг/мл)
0 (контроль) 50 150 250 350
0 0 0 0 0 0
1 44 33 4 0 0
2 63 63 15 6 5
3 93 77 46 50 40
4 100 100 56 70 60
5 100 100 73 70 64
Концентрации ВЬАО от 150 до 350 мкг/мл значительно задерживали начало заражения В. сшетеа и
- 8 026573 снижали общую долю зараженной клубники по сравнению с контролем.
Пример 4. Изучение кожной токсичности ВЬАИ у морских свинок
Конфиденциальное исследование было выполнено на факультете ветеринарной медицины Технического университета Лиссабона для Агрономического института в период с 18 июля 2006 по 1 августа 2006 г. с использованием руководства ОЭСР по тестированию химических веществ № 402, Острая кожная токсичность. Исследование было проведено в соответствии с нормами надлежащей лабораторной практики и благополучия животных.
Острую кожную токсичность ВЬАИ оценивали после воздействия разовой дозы на морских свинок, которые получили широкое признание в качестве подходящих животных для изучения кожной токсичности. ВЬАИ наносили на безволосый участок кожи животных, разделенных на две групп по 10 животных каждая, в дозе 200 мкг/мл и 400 мкг/мл соответственно. После экспозиции животные находились под наблюдением в течение 15 дней, во время которых фиксировали массу тела, заболеваемость и смертность.
Материалы и методы
1. Материалы
Исследуемый препарат: ВТАИ был получен с концентрацией 5 мг/мл (желтоватая непрозрачная жидкость, 0-4°С) и хранился при температуре -80°С.
Животные: морские свинки альбиносы; линия Ииикш НаШеу (НкбРос: ИН) от Наг1ап Шепса, Вагсе1опа.
Количество используемых животных: 30.
Масса тела: 400-449 г.
Возраст: 6 недель.
Условия содержания: животные были помещены по отдельности в полиэтиленовые коробки со стерилизованными древесными опилками (Ь1дпосе1).
Условия окружающей среды:
a) Фотопериод: циклы свет/темнота в течение 12 ч через 12 ч.
b) Контролируемые условия среды: средняя температура 19/22°С и средняя влажность 60%.
Адаптация: животные находились в экспериментальных условиях окружающей среды в течение семи дней до начала эксперимента.
Корм: поддерживающий рацион для грызунов С1оЬа1 И1е1 2014, поставляемый Наг1ап 1Ьепса, Вагсе1опа; вода неограниченно.
2. Методы
Нанесение: животных брили за 48 ч до начала испытания, и только тех животных, у которых отсутствовали повреждения на коже, отбирали для дальнейшего исследования. Аликвоту, равную 1 мл (с концентрацией или 200 мкг/мл, или 400 мкг/мл), наносили на побритую кожу каждого животного.
Дизайн исследования: 30 животных, принимающих участие в исследовании, были разделены на четыре группы: две группы по десять животных каждая и две группы по пять животных каждая. Группу из десяти животных подвергали воздействию ВЬАИ с концентрацией 200 мкг/мл (опытная группа 1) и другую группу из десяти животных подвергали воздействию ВЬАИ с концентрацией 400 мкг/мл (опытная группа 2). Две группы из пяти животных служили в качестве контроля: на кожу животных одной группы наносили воду (аликвота объемом 1 мл) , в то время как другая группа не подвергалась никакому воздействию, но с ней обращались как со всеми другими группами.
Оценка результатов: после экспозиции животных ежедневно осматривали в течение 15 дней, чтобы зафиксировать какие-либо признаки нездоровья или даже смерть. При оценке заболеваемости особое внимание уделяли возможному появлению повреждений на коже в месте нанесения и возможным признакам общей токсичности, таким как изменения нормальной модели поведения. Массу тела определяли индивидуально перед началом эксперимента и в конце периода испытаний.
Результаты
Ни при каких концентрациях ВЬАИ не были отмечены признаки каких-либо физических изменений на участке кожи, на который осуществлялось нанесение, а также изменения в питьевом/пищевом или общем поведении. Любые неблагоприятные побочные реакции или смерть отсутствовали после нанесения ВЬАИ. Увеличение массы тела было одинаковым во всех группах (и соответствовало ожидаемому увеличению у развивающихся животных такого молодого возраста).
Заключение
ВЬАИ в концентрациях до 400 мкг/мл (и возможно выше) не обладает кожной токсичностью.
Пример 5. Изучение пероральной токсичности ВТАИ у белых крыс
Конфиденциальное исследование было выполнено на факультете ветеринарной медицины Технического университета Лиссабона для Агрономического института с использованием руководства ОЭСР по тестированию химических веществ № 401, Острая пероральная токсичность. Исследование было проведено в соответствии с нормами надлежащей лабораторной практики и благополучия животных.
Острую пероральную токсичность ВЬАИ оценивали после воздействия разовой дозы на крыс, кото- 9 026573 рые получили широкое признание в качестве подходящих животных для изучения пероральной токсичности. ВЬЛБ вводили путем принудительного кормления животным, разделенным на две группы по 10 животных каждая, в дозе 200 и 400 мкг/мл соответственно. После экспозиции животные находились под наблюдением в течение 15 дней, во время которых фиксировали массу тела, заболеваемость и смертность. После периода наблюдения животных умерщвляли и подвергли некропсии.
Материалы и методы
1. Материалы
Исследуемый препарат: ВЕЛИ был получен с концентрацией 5 мг/мл (желтоватая непрозрачная жидкость, 0-4°С) и хранился при температуре -80°С.
Животные: Ка11и8 потуед1си8, линия \УМаг Наппоует, приобретенные виварием факультета ветеринарной медицины Лиссабона у Наг1ап 1Ъетюа, Вагсе1опа.
Количество используемых животных: 30.
Масса тела: 250-300 г.
Возраст: 10 недель.
Условия содержания: животные были помещены по отдельности в полиэтиленовые коробки со стерилизованными древесными опилками (Ыдпосе1).
Условия окружающей среды:
a) Фотопериод: циклы свет/темнота в течение 12 ч через 12 ч.
b) Контролируемые условия среды: средняя температура 19/22°С и средняя влажность 60%.
Адаптация: животные находились в экспериментальных условиях окружающей среды в течение семи дней до начала эксперимента.
Корм: поддерживающий рацион для грызунов С1оЪа1 И1е1 2014, поставляемый Наг1ап 1Ъепса, Вагсе1опа; вода неограниченно.
2. Методы
Введение: аликвоту, равную 1 мл (с концентрацией или 200 мкг/мл, или 400 мкг/мл), вводили путем пероральной (ротопищеводной) интубации, широко известной как принудительное кормление. Введение проводили при помощи металлического зонда, подходящего для используемого вида животных. Перед введением препарата животных подвергали голодной выдержке в течение 18 часов и кормили через 3 часа после введения.
Дизайн исследования: 30 животных, принимающих участие в исследовании, были разделены на четыре группы: две группы по десять животных каждая и две группы по пять животных каждая. Группу из десяти животных подвергали воздействию ВЬАЭ с концентрацией 200 мкг/мл (опытная группа 1) и другую группу из десяти животных подвергали воздействию ВЬАЭ с концентрацией 400 мкг/мл (опытная группа 2). Две группы из пяти животных служили в качестве контроля: животные одной группы получали воду (аликвоту объемом 1 мл) , в то время как другая группа не подвергалась никакому воздействию, но с ней обращались как со всеми другими группами.
Оценка результатов: после введения животных ежедневно осматривали в течение 15 дней, чтобы зафиксировать какие-либо признаки нездоровья или даже смерть. Массу тела определяли индивидуально перед началом эксперимента и в конце периода испытаний. После периода наблюдения животных умерщвляли (путем удушения в атмосфере, насыщенной углекислым газом) для последующего вскрытия.
Результаты
Ни при каких концентрациях ВЬАО не были отмечены признаки каких-либо физических изменений или изменений в питьевом/пищевом или общем поведении. Любые неблагоприятные побочные реакции или смерть отсутствовали после введения ВЬАБ. Увеличение массы тела было одинаковым во всех группах (и соответствовало ожидаемому увеличению у развивающихся животных такого молодого возраста). Посмертный макроскопический осмотр органов грудной и брюшной полости не выявил в них никаких изменений.
Заключение
ВЬАБ в концентрациях до 400 мкг/мл (и возможно выше) не обладает пероральной токсичностью.

Claims (9)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Применение антимикробного полипептида В1аб, включающего аминокислотную последовательность 8ЕО ГО N0: 4, или его функционально активного варианта для предотвращения или подавления порчи пищевого продукта, вызываемой микроорганизмом, где указанный вариант содержит последовательность, которая по меньшей мере на 70% идентична 5>ЕО ГО N0: 4 или фрагменту 8ЕО ГО N0: 4, который имеет по меньшей мере 100 аминокислот в длину.
  2. 2. Применение по п.1, где микроорганизм является бактерией или грибком.
  3. 3. Применение по п.2, где бактерия принадлежит роду Ркеиботопак или ВасШик.
  4. 4. Применение по п.2, где грибок принадлежит одному из следующих родов: АЙегпапа. АкретдШик, Рикатшт, Войуйк, Со11е1о1г1сйит, Зассйаготусек, К1иууеготусек и 2удокассйаготусе5.
  5. 5. Применение по любому из предшествующих пунктов, где пищевой продукт является фруктом,
    - 10 026573 орехом, овощем, зерном, сахаром, молочным продуктом, мясом, рыбой или хлебом или получен на их основе.
  6. 6. Применение по п.5, где пищевой продукт является клубникой.
  7. 7. Применение по п.4, где грибок представляет собой Войуйз стегеа или СоПеШпсНит асШаШт, предпочтительно Войуйз стегеа.
  8. 8. Применение по любому из предшествующих пунктов, где указанный полипептид входит в состав композиции, которая дополнительно включает хелатирующий агент.
  9. 9. Способ предотвращения или подавления вызываемой микроорганизмом порчи пищевого продукта, включающий введение в пищевой продукт эффективного количества антимикробного полипептида В1аф включающего аминокислотную последовательность 8Ер Ιϋ ΝΟ: 4, или его функционально активного варианта, где указанный вариант содержит последовательность, которая по меньшей мере на 70% идентична 8Ер ГО ΝΟ: 4 или фрагменту 8Ер ГО ΝΟ: 4, который имеет по меньшей мере 100 аминокислот в длину.
EA201390486A 2010-10-12 2011-10-12 Применение композиции, содержащей антимикробный пептид, в качестве пищевого консерванта EA026573B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PT105331A PT105331A (pt) 2010-10-12 2010-10-12 Conservante alimentar
GB1017283.1A GB2484508A (en) 2010-10-12 2010-10-13 Use of antimicrobial polypeptide from Lupinus alba to preserve food
PCT/EP2011/067821 WO2012049213A1 (en) 2010-10-12 2011-10-12 Use of a composition comprising an antimicrobial peptide as a food preservative

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201390486A1 EA201390486A1 (ru) 2013-08-30
EA026573B1 true EA026573B1 (ru) 2017-04-28

Family

ID=44785878

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201390486A EA026573B1 (ru) 2010-10-12 2011-10-12 Применение композиции, содержащей антимикробный пептид, в качестве пищевого консерванта

Country Status (25)

Country Link
US (2) US9095166B2 (ru)
EP (1) EP2627202B1 (ru)
JP (1) JP6239383B2 (ru)
CN (1) CN103228161B (ru)
AU (1) AU2011315523B2 (ru)
BR (1) BR112013008768B1 (ru)
CA (1) CA2814383C (ru)
CL (1) CL2013000992A1 (ru)
CO (1) CO6791561A2 (ru)
CY (1) CY1123156T1 (ru)
DK (1) DK2627202T3 (ru)
EA (1) EA026573B1 (ru)
FR (1) FR23C1033I1 (ru)
GB (1) GB2484508A (ru)
HU (2) HUE049709T2 (ru)
IL (1) IL225496A (ru)
MX (1) MX347600B (ru)
MY (1) MY160965A (ru)
NZ (1) NZ610389A (ru)
PE (1) PE20140591A1 (ru)
PL (1) PL2627202T3 (ru)
PT (2) PT105331A (ru)
SG (1) SG189380A1 (ru)
WO (1) WO2012049213A1 (ru)
ZA (1) ZA201302932B (ru)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ587490A (en) * 2010-08-20 2013-03-28 Greentide Ltd Anti-Microbial Compounds containing compounds with a sugar substituent
PT105332A (pt) * 2010-10-12 2012-04-12 Cev Biotecnologia Das Plantas S A Agentes para utilização com antimicrobianos
PL2627201T3 (pl) * 2010-10-12 2018-05-30 Consumo Em Verde - Biotecnologia Das Plantas, S.A. Kompozycja zawierająca polipeptyd przeciwdrobnoustrojowy
US10357470B2 (en) * 2013-03-07 2019-07-23 Kane Biotech Inc. Antimicrobial-antibiofilm compositions and methods of use thereof
WO2014134731A1 (en) * 2013-03-07 2014-09-12 Kane Biotech Inc. Antimicrobial-antibiofilm compositions and methods of use thereof
CN104381419A (zh) * 2014-11-20 2015-03-04 洞头县水产科学技术研究所 一种生物保鲜剂及其保鲜方法
US20160186273A1 (en) * 2014-12-29 2016-06-30 Fmc Corporation Bacillus amyloliquefaciens rti301 compositions and methods of use for benefiting plant growth and treating plant disease
CN106715568B (zh) 2015-01-09 2021-03-12 纳米及先进材料研发院有限公司 内置抗菌塑料树脂及其制备方法
JP2018002647A (ja) * 2016-06-30 2018-01-11 アヲハタ株式会社 耐熱性微生物の不活性化用組成物、耐熱性カビの不活性化前処理用組成物、及び耐熱性微生物の不活性化方法
US20180228189A1 (en) 2017-02-14 2018-08-16 Kraft Foods Group Brands Llc Process for maintaining freshness of vegetable pieces
CN108378069A (zh) * 2018-05-09 2018-08-10 惠州市梦芭迪工业产品设计中心(普通合伙) 一种杀菌组合物
BR102021002393A2 (pt) * 2021-02-08 2022-08-23 Sterman Heimann Andrea Aditivo de preservação de células e/ou alimentos, uso
CN117562931B (zh) * 2024-01-15 2024-04-30 上海昌进生物科技有限公司 含有马克斯克鲁维酵母菌体的组合物、制备方法及应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007010459A2 (en) * 2005-07-21 2007-01-25 Instituto Superior De Agronomia Protein extracted from plants of the genus lupinus or produced in recombinant form, nucleotide sequence encoding it and its use in animal nutrition, as a plant growth promoter and in the fight against pathogenic fungi

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3459314B2 (ja) * 1994-08-31 2003-10-20 社団法人農林水産技術情報協会 新規ペプチド、抗菌剤、新規ペプチド遺伝子、新規な組み換え体ｄｎａ及び新規ペプチドの製造法
AUPN780296A0 (en) * 1996-01-31 1996-02-22 Cooperative Research Centre For Tropical Plant Pathology Anti-microbial protein
DE19930959A1 (de) * 1999-07-05 2001-01-25 Aventis Res & Tech Gmbh & Co Neue Antimycotika und Fungizide, Verfahren zu deren Herstellung und Verwendung
AU1325601A (en) * 1999-07-14 2001-02-05 Rhodia Inc. An antibacterial composition for control of gram positive bacteria in food applications
JP2002095475A (ja) * 2000-09-19 2002-04-02 Iwate Prefecture わさびの新規な抗菌性タンパク質遺伝子
WO2003101197A1 (en) * 2002-05-31 2003-12-11 Cjb Industries, Inc. Adjuvant for pesticides
WO2007090438A1 (en) * 2005-09-06 2007-08-16 Agrarforum Ag Seed suspensions from 'lupinus albus', isolated compounds thereof and use as biological plant strengthening agent
DE102008002972A1 (de) * 2008-07-25 2010-01-28 Profos Ag Neues Endolysin PlyP40

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007010459A2 (en) * 2005-07-21 2007-01-25 Instituto Superior De Agronomia Protein extracted from plants of the genus lupinus or produced in recombinant form, nucleotide sequence encoding it and its use in animal nutrition, as a plant growth promoter and in the fight against pathogenic fungi

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HAQUE H, RUSSELL A D: "CELL ENVELOPES OF GRAM NEGATIVE BACTERIA: COMPOSITION, RESPONSE TO CHELATING AGENTS AND SUSCEPTIBILITY OF WHOLE CELLS TO ANTIBACTERIAL AGENTS", JOURNAL OF APPLIED BACTERIOLOGY, BLACKWELL PUBLISHING LTD., OXFORD, GB, vol. 40, no. 01, 1 January 1976 (1976-01-01), GB, pages 89 - 99, XP009048176, ISSN: 0021-8847 *
JOHN M WELLS, C H LIAO, A T HOTCHKISS: "In vitro Inhibition of Soft-Rotting Bacteria by EDTA and Nisin and in vivo Response on Inoculated Fresh Cut Carrots", PLANT DISEASE, 1 January 1998 (1998-01-01), pages 491 - 495, XP055014413, Retrieved from the Internet <URL:http://apsjournals.apsnet.org/doi/pdf/10.1094/PDIS.1998.82.5.491> [retrieved on 20111209], DOI: 10.1094/PDIS.1998.82.5.491 *
M.D.L. OLIVEIRA, ANDRADE C.A.S., SANTOS-MAGALHÃES N.S., COELHO L.C.B.B., TEIXEIRA J.A., CARNEIRO-DA-CUNHA M.G., CORREIA M.T.S.: "Purification of a lectin from Eugenia uniflora L. seeds and its potential antibacterial activity", LETTERS IN APPLIED MICROBIOLOGY, PUBLISHED FOR THE SOCIETY FOR APPLIED BACTERIOLOGY BY BLACKWELL SCIENTIFIC PUBLICATIONS, vol. 46, no. 3, 1 March 2008 (2008-03-01), pages 371 - 376, XP055014526, ISSN: 02668254, DOI: 10.1111/j.1472-765X.2007.02319.x *
R.J.W. LAMBERT, HANLON G.W., DENYER S.P.: "The synergistic effect of EDTA/antimicrobial combinations on Pseudomonas aeruginosa", JOURNAL OF APPLIED MICROBIOLOGY, ACADEMIC PRESS, vol. 96, no. 2, 1 February 2004 (2004-02-01), pages 244 - 253, XP055014452, ISSN: 13645072, DOI: 10.1046/j.1365-2672.2004.02135.x *
Ribeiro, Ana Cristina Ferreira da Conceição: "Análise molecular de lectinas em sementes de leguminosas", Repositório da Universidade de Lisboa, 2009, XP002666464, Lisbon. Retrieved from the Internet: URL:http://repositorio.ul.pt/handle/10451/ 257, [retrieved on 2011-12-29], abstract *
ROBIN WAIT, ELISABETTA GIANAZZA, DANIELA BRAMBILLA, IVANO EBERINI, SHEILA MORANDI, ANNA ARNOLDI, CESARE R. SIRTORI: "Analysis of Lupinus albus Storage Proteins by Two-Dimensional Electrophoresis and Mass Spectrometry", JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY, ¬AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, BOOKS AND JOURNALS DIVISION|, vol. 53, no. 11, 1 June 2005 (2005-06-01), pages 4599 - 4606, XP055015516, ISSN: 00218561, DOI: 10.1021/jf050021i *
WAESCHE A, MUELLER K, KNAUF U: "NEW PROCESSING OF LUPIN PROTEIN ISOLATES AND FUNCTIONAL PROPERTIES", NAHRUNG - FOOD, VCH VERLAGSGESELLSCHAFT, WEINHEIM., XX, vol. 45, no. 06, 1 October 2001 (2001-10-01), XX, pages 393 - 395, XP009033277, ISSN: 0027-769X, DOI: 10.1002/1521-3803(20011001)45:6<393::AID-FOOD393>3.0.CO;2-O *

Also Published As

Publication number Publication date
US9095166B2 (en) 2015-08-04
EA201390486A1 (ru) 2013-08-30
PT105331A (pt) 2012-04-12
US20130288953A1 (en) 2013-10-31
JP6239383B2 (ja) 2017-11-29
PL2627202T3 (pl) 2020-11-02
MX2013004104A (es) 2013-07-17
GB201017283D0 (en) 2010-11-24
CN103228161A (zh) 2013-07-31
EP2627202B1 (en) 2020-04-29
BR112013008768B1 (pt) 2020-05-12
CA2814383C (en) 2018-04-10
WO2012049213A1 (en) 2012-04-19
MX347600B (es) 2017-05-03
IL225496A (en) 2016-07-31
US20150289529A1 (en) 2015-10-15
NZ610389A (en) 2014-11-28
CA2814383A1 (en) 2012-04-19
HUE049709T2 (hu) 2020-10-28
CO6791561A2 (es) 2013-11-14
SG189380A1 (en) 2013-05-31
CN103228161B (zh) 2015-09-09
BR112013008768A2 (pt) 2016-06-28
DK2627202T3 (da) 2020-07-27
MY160965A (en) 2017-03-31
GB2484508A (en) 2012-04-18
FR23C1033I1 (fr) 2023-11-03
HUS2100044I1 (hu) 2021-10-28
JP2013540442A (ja) 2013-11-07
US9402404B2 (en) 2016-08-02
ZA201302932B (en) 2013-11-27
AU2011315523B2 (en) 2015-09-10
CL2013000992A1 (es) 2014-02-14
EP2627202A1 (en) 2013-08-21
AU2011315523A1 (en) 2013-05-30
PE20140591A1 (es) 2014-05-31
IL225496A0 (en) 2013-06-27
CY1123156T1 (el) 2021-10-29
PT2627202T (pt) 2020-07-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA026573B1 (ru) Применение композиции, содержащей антимикробный пептид, в качестве пищевого консерванта
Quinto et al. Food safety through natural antimicrobials
Davidson et al. Chemical preservatives and natural antimicrobial compounds
Hamad Factors affecting the growth of microorganisms in food
Schmidt et al. Novel approaches for chemical and microbiological shelf life extension of cereal crops
Saladino et al. Antimicrobial activity of the glucosinolates
EP3370522B1 (en) Anti-microbial agent comprising xanthohumol and the use thereof in food products
Søltoft-Jensen et al. New chemical and biochemical hurdles
Shwaiki et al. Plant compounds for the potential reduction of food waste–a focus on antimicrobial peptides
Kamal et al. Prospects of antimicrobial peptides as an alternative to chemical preservatives for food safety
RU2725687C2 (ru) Композиция и способы борьбы с разрастанием патогенов и микроорганизмов, вызывающих порчу, в системах с высокой влажностью и низким содержанием солей натрия
SK7372002A3 (en) Use of nonanoic acid, a dairy product, a fruit juice, a cheese, and a cheese coating and an agent for the treatment of cheese surface
Patel et al. Lactic Acid Bacteria (Lab) Bacteriocins: An Ecologicaland Sustainable Biopreservativeapproach to Improve The Safety and Shelf Life of Foods
Jay et al. Food protection with chemicals, and by biocontrol
Jebelli Javan et al. Effect of chitosan and Trachyspermum ammi essential oil on microbial growth, proteolytic spoilage, lipid oxidation and sensory attributes of chicken fillet during refrigerated storage
Ramos-Villarroel et al. Natural antimicrobials for food processing
ES2807327T3 (es) Uso de una composición que comprende un péptido antimicrobiano como un conservador de alimentos
Quinto Fernández et al. Food safety through natural antimicrobials
JP2005341844A (ja) 水産物用制菌剤及び水産物の保存方法
Pinarli et al. Microorganisms responsible for deterioration of food products
Pınarlı et al. MICROORGANISMS RESPONSIBLE FOR DETERIORATION OF FOOD PRODUCTS
Chauhan et al. 4 Antimicrobials
Gálvez et al. Biopreservation of vegetable foods
JP2021151972A (ja) 静菌用組成物、静菌方法及び加工食品
Losso et al. Lysozyme-Antimicrobial Agent and Applications

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM