BR102013018882A2 - Desativação viral com caprilato - Google Patents

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Abstract

DESATIVAÇÃO VIRAL COM CAPRILATO A presente invenção refere-se a métodos para inativar vírus usando caprilato em soluções contendo albumina.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "DESATIVAÇÃO VIRAL COM CAPRILATO".
Campo Técnico Descritos aqui são métodos para a inativação de vírus utilizando caprilato durante a purificação da albumina a partir do plasma.
Antecedentes Albumina do soro humano (daqui em diante a albumina) é a proteína mais abundante no plasma de sangue humano. Albumina de circulação é uma proteína de 585 aminoácidos com um peso molecular de 67 kDa. A proteína tem uma vida útil sérica de cerca de 20 dias e está envolvida no transporte de várias hormônios, metabolitos e fármacos, bem como a manutenção da pressão oncótica e tamponamento do pH do sangue. A albumina é terapeuticamente administrada para substituir o líquido perdido e restaurar o volume de sangue em trauma, queimadura, e pacientes cirúrgicos.
Cohn descreveu pela primeira vez a purificação de albumina a partir de plasma humano através do fracionamento diferencial. Vide Cohn et al., J. Am. Chem. Soc. 68: 459-475 (1946); Cohn et al., J. Am. Chem. Soc. 69: 1753-1761 (1947); Patente norte-americana No 2.390.074 e 2.469.193. Esses métodos foram melhorados por Gerlough. Ver Patente norte-americana No 2.710.293 e 2.710.294. Tais métodos utilizam etanol frio e a manipulação do pH, força iônica, concentração de proteína e temperatura, para precipitar as proteínas do plasma, tais como albuminas. O procedimento para a purificação de albumina a partir do plasma humano para os produtos farmacêuticos geralmente inclui uma etapa de inativação viral para reduzir o risco de transmissão de vírus transmitidos pelo sangue. Estas etapas de inativação viral podem incluir pasteurização calor, solventes orgânicos, ou combinações de solventes orgânicos e detergentes (por exemplo, fosfato de tri-n-butila e polissorbato 80). Além disso, o caprilato de ácido graxo, ou um sal do mesmo (por exemplo, caprilato de sódio), foi utilizado como um agente de inativação viral. Ver Patente norte-americana NQ 4.939.176; Publicação do Pedido de Patente Internacional WO Ns 1998/024485 e WO 2000/056768; Lundblad and Seng, Vox Sang. 60:75-81 (1991); Johnston, Jonstone, & Wu, Biologicals 31: 213-221 (2003). Além disso, caprilato também tem sido utilizado como um estabilizante e como um agente de particionamento na purificação de albumina humana terapêutica. Ver Patente norte-americana NQ 5.250.663 e 5.561.115. A albumina humana é purificada a partir de Efluente de Fração IV-1 de Cohn ou Fração V e inclui uma etapa de secagem com acetona para concentrar a albumina e inativar vírus. O processo com acetona é oneroso, e utiliza grandes quantidades de acetona, o que cria um perigo de fogo ou explosão. Por conseguinte, a inativação viral alternativa e processos de concentração são desejáveis. Um método para purificação de albumina a partir do plasma humano utilizando inativação viral de caprilato sob condições de pH baixo e de temperatura elevadas seguido por ultrafiltração/diafiltração é aqui descrito.
Sumário São aqui descritos métodos para a inativação de vírus utilizando caprilato durante a purificação da albumina a partir do plasma.
Uma modalidade aqui descrita é um método de preparação de albumina a partir de uma solução que compreende albumina, compreendendo: o ajuste da concentração da proteína da solução para menos do que cerca de 5%, para ajustar o pH da solução para um pH de cerca de 5 ou menos, a adição de ácido caprílico (ácido octanoico) ou caprilato de sódio, aumento da temperatura de solução para maior do que cerca de 20 °C, e a incubação da solução.
Em alguns aspectos aqui descritos, a temperatura de incubação é de 27-30 °C.
Em alguns aspectos aqui descritos, o período de incubação é de cerca de 30 min a cerca de 120 min.
Em alguns aspectos aqui descritos, o período de incubação é de pelo menos cerca de 90 min.
Em alguns aspectos aqui descritos, a concentração de caprilato é de cerca de 10 mM a cerca de 40 mM.
Em alguns aspectos aqui descritos, a concentração de caprilato é de cerca de 15 mM a cerca de 30 mM.
Em alguns aspectos aqui descritos, a concentração de caprilato é cerca de 20 mM.
Em alguns aspectos aqui descritos, o pH é de cerca de 3,8 a cerca de 5.
Em alguns aspectos aqui descritos, o pH é cerca de 5.
Em alguns aspectos aqui descritos, o método adicionalmente compreende: a filtragem da solução; realização de ultrafiltração e diafiltra-ção; formulação e aumento em massa da solução, e esterilização, enchimento e pasteurização da albumina.
Outra modalidade aqui descrita é um método de preparação de albumina a partir de uma solução de albumina compreendendo: o ajuste da concentração de proteína da solução para menos do que cerca de 5%, ajuste do pH da solução a cerca de pH 5 ou menos; adição de ácido caprílico (ácido octanoico), ou caprilato de sódio a uma concentração de cerca de 20 mM; elevação da temperatura da solução até cerca de 27-30°C e incubação da solução durante pelo menos cerca de 30 minutos a cerca de 120 minutos.
Em alguns aspectos aqui descritos, o período de incubação é de pelo menos cerca de 90 min.
Em alguns aspectos aqui descritos, o pH é cerca de 5.
Em alguns aspectos aqui descritos, o método adicionalmente compreende: a filtragem da solução; realização de ultrafiltração e diafiltra-ção; formulação e aumento em massa da solução, e esterilização, enchimento e pasteurização da albumina.
Outra modalidade aqui descrita é um método de inativação de vírus de uma solução que compreende albumina, o método compreendendo: o ajuste da concentração de proteína da solução de proteína para cerca de 5%, ajuste do pH da solução para menos do que cerca de 5, adição de ácido caprílico (ácido octanoico) ou caprilato de sódio, aumento da temperatura de solução para maior do que cerca de 20°C, e incubação da solução.
Em alguns aspectos aqui descritos, os vírus são vírus envelopa-do de lipídio.
Em alguns aspectos aqui descritos, a concentração de caprilato é de cerca de 15 mM a cerca de 30 mM.
Em alguns aspectos aqui descritos, a temperatura é de cerca de 27-30 °C.
Em alguns aspectos aqui descritos, a incubação é durante pelo menos 90 min.
Em alguns aspectos aqui descritos, a concentração de caprilato é de 20 mM.
Em alguns aspectos aqui descritos, a incubação é de 90 minutos.
Em alguns aspectos aqui descritos, a temperatura é de 30°C.
Em alguns aspectos aqui descritos, os vírus são vírus envelopa-dos de lipídio que infectam seres humanos.
Outra modalidade aqui descrita é um método de inativação de vírus de uma solução que compreende albumina, o método compreendendo: o ajuste da concentração de proteína da solução de proteína a cerca de 5%, ajuste do pH da solução para menos do que cerca de 5, adição de ácido ca-prílico (ácido octanoico) ou caprilato de sódio a uma concentração de cerca de 20 mM; elevação da temperatura da solução até cerca de 27-30°C e incubação da solução durante pelo menos 90 minutos.
Em alguns aspectos aqui descritos, os vírus são vírus envelopa-do de lipídio que infectam seres humanos.
Em alguns aspectos aqui descritos, o método adicionalmente compreende: a filtragem da solução; realização de ultrafiltração e diafiltra-ção; formulação e aumento da solução, e esterilização, enchimento e pasteurização da albumina.
Breve Descrição dos Desenhos A Figura 1 ilustra os resultados de inativação de vírus induzida por caprilato em suspensões de pasta de albumina 25 AU a 27°C, pH 5,1, durante uma hora. Concentrações de Caprilato de 0, 10, 15 e 20 mM foram avaliadas em intervalos de 0, 0,5, e de uma hora. Os resultados mostram que 15 mM de caprilato inativam eficazmente o vírus da diarréia viral bovina e vírus da estomatite vesicular ao limite de detecção em uma hora a 27°C. A Figura 2 ilustra os resultados de 20 mM de inativação de vírus induzaida por caprilato em concentrações de albumina de em 25 ou 65 AU, no pH 4,5 ou 5,1 em três, temperaturas baixas, 5, 12 e 20°C durante um período de 6 horas. Os resultados mostram que a baixas concentrações de albumina, 20 mM de caprilato foram eficazes como um inativador viral a 20°C após duas horas. Contudo, a inativação viral não foi robusta sob temperaturas mais baixas, e foi dependente do pH, tempo de incubação e concentração de albumina. A Figura 3 ilustra o projeto de resposta de experimento (DOE) e valores de redução de log (LRV) preditos para concentração de proteína, como uma função da concentração de caprilato (Painel A) a uma temperatura constante (27,5°C) e pH (4,5). O painel B mostra as respostas e LRV predito para pH como uma função da concentração de caprilato a uma temperatura constante (27,5 °C) e concentração de proteína (11,5%) A Figura 4 ilustra as respostas de DOE e LRV predito para pH como uma função da concentração de proteína a uma temperatura constante (27,5°C) e concentração de caprilato (20 mM). A Figura 5 mostra um gráfico de contorno que representa a superfície de resposta para LRV no intervalo 95 e intervalos de confiança maiores para o pH como uma função da concentração de proteína a 30 mM de caprilato e 40°C (Painel A). O painel B mostra uma representação tridimensional da superfície de resposta. LRV foi maximizado (isto é, 100%) com o intervalo de predição menor de 95%, com as condições de pH 4,4 e a concentração de proteína de 5%, a 30 mM de caprilato e 40°C. A Figura 6 mostra os gráficos de contorno que representam superfície de resposta para LRV no intervalo 95 e intervalos de confiança maiores para a concentração de proteína, como uma função da concentração de caprilato a pH 3,96 e 40°C (Painel A) ou pH, como uma função da concentração de caprilato a 6,6% de proteínas e 36,9°C (Painel B). A Figura 7 mostra um fluxograma do processo de purificação da albumina modificada, incluindo uma fase de inativação viral de caprilato. Descrição Detalhada Um processo de purificação de albumina atual inclui uma etapa de secagem com acetona. A etapa de secagem com acetona foi validada como uma etapa de inativação de vírus. No entanto, a etapa com acetona é difícil, requer equipamento operacional oneroso, e as grandes quantidades de acetona utilizadas apresentam uma inflamabilidade e/ou emissão de explosão, o que exige medidas de segurança extensas. Substituir as etapas de secagem com acetona é desejável. A incubação de caprilato aqui descrita pode ser usada como uma etapa de inativação do vírus e, em seguida, a albumina pode ser concentrada utilizando uma etapa de ultrafiltra-ção/diafiltração. Ácido caprílico (caprilato; octanoico) pode ser um agente de inativação viral eficaz. Além disso, caprilato é atualmente utilizado na formulação de albumina e, assim, inativação viral de caprilato pode ser facilmente integrada no processo de albumina sem a introdução de reagentes adicionais, tais como detergentes e solventes ou com alterações mínimas no processo. Ácido caprílico ou caprilato de sódio é adicionado à formulação da albumina como um estabilizador durante a etapa de texturização. No entanto, o pH da solução de albumina no enchimento é muito elevada (~ 7) para criar o ácido caprílico livre suficiente para a inativação de vírus. Caprilato pode ser adicionado durante a suspensão da pasta de Fração V (pasta de albumina), que já é uma solução de pH baixo. Devido ao fato de caprilato ser essencialmente um estabilizador para a albumina, o seu efeito sobre a albumina é mínimo. Filtração adequada antes de UF/DF remove muito do caprilato, na forma de ácido caprílico não dissolvido. À medida que o processamento de albumina continua nas etapas de UF/DF, o pH será aumentado e o caprilato de sódio irá ser realizado por diafiltração para permitir texturização normal da albumina.
Em geral, o processo consiste em albumina modificada usando Fração IV-1 de efluente (ou filtrado) ou pasta Cohn V como material de entrada. A pasta Cohn V foi ressuspenso em água fria por injeção ou a Fração IV-1 de efluente foi diluído para uma concentração de proteína de cerca de 25 AU (A280). Caprilato de sódio foi adicionada a uma concentração de 20 mM, caprilato e o pH foi ajustado para um pH inferior a 5, se necessário. A solução foi, em seguida, incubou-se a 27-30°C durante 90 min. Vide Figura 7.
Para testar a eficácia virulicida, os experimentos de inativação viral foram realizados com um painel de vírus envelopado (isto é, o vírus da diarréia viral bovina (BVDV), vírus da pseudo-raiva (PRV), o vírus da imunodeficiência humana (HIV)) em suspensão de Fração V de Cohn e suspensão de albumina utilizando um modelo reduzido do processo de fabricação proposto. Pasta de Fração V ou pasta de albumina foi suspenso em água, misturada com cerca de 5% do vírus, e o pH ajustado para o destino apropriado, se necessário. Caprilato de sódio foi adicionado para atingir a concentração alvo de caprilato, o pH da solução foi verificado, e a solução foi incubada a uma temperatura adequada. As amostras foram removidas em vários pontos no tempo durante a incubação e tituladas utilizando ensaios baseados em células para quantificar o vírus infeccioso. Inativação rápida e eficaz de VDVB, PVS e HIV foi observada sob as condições apropriadas de pH, concentração de caprilato, concentração de proteína e temperatura. A capacidade de processo foi avaliada separadamente para suspensões de pasta de Fração V e albumina utilizando uma escala para baixo (500 g de suspensão de pasta) do processo de fabricação proposto. Caprilato de sódio foi adicionado e o pH foi ajustado, se necessário, para atingir a concentração alvo de caprilato e pH. Após a incubação, o material foi filtrado, processado através de UF/DF, formulado, texturizado, esterilizado por filtração, e pasteurizado. Dados de caracterização de produtos final e intermediários obtidos a partir de um estudo do processo modificado por escala reduzida foram comparáveis com aqueles derivados de uma execução de controle de escala reduzida e com aqueles derivados do processo de fabricação em grande escala atual.
Execuções de escala reduzida de processo modificado foram realizadas com Fração V de Cohn ou pasta de albumina. Aproximadamente 500 g de pasta foi inicialmente dissolvido em água fria para injeção. A pasta dissolvida foi em seguida aquecida a uma temperatura de ~ 27 °C e caprilato de sódio foi adicionado a uma concentração de ~ 20 mM. Esta solução textu-rizada dissolvida foi deixada incubar durante 90 minutos, para permitir a o-corrência de inativação viral. A clarificação da solução de albumina foi realizada por filtração através de uma série de filtros. A solução de albumina clarificada foi então concentrada para ~ 12% p/v por ultrafiltração, o volume da proteína foi diafiltrado com uma solução salina e água fria para injeção. A concentração de ~ 28% de proteína foi conseguida por uma segunda etapa de ultrafiltração. A solução do volume da proteína de UF/DF foi então formulada com adições de hidróxido de sódio, triptofano, e caprilato de sódio. A solução do volume formulada foi esterilizada por filtração, colocada em frascos tapados, e vedada. Estes frascos foram, em seguida, pasteurizados a 60°C durante 10-11 horas para chegar ao recipiente final.
Foi surpreendente descoberto que caprilato pode funcionar tanto como um inativador viral quanto como um estabilizador, simultaneamente, durante o processo para as concentrações de proteína e caprilato usadas, e a extensão e a temperatura da incubação. Isto também foi surpreendente, porque a albumina liga-se ao caprilato e as concentrações de caprilato eram eficazes para a inativação viral, em concentrações moderadas de proteína com incubações curtas à temperatura ambiente. O processo de purificação de albumina atual, que inclui a etapa de secagem com acetona, é descrito no Exemplo 1, e começa com Efluente IV-1 de Cohn ou Fração V. Vide Cohn Cohn et al., J. Am. Chem. Soc. 68: 459-475 (1946); Cohn et al., J. Am. Chem. Soc. 69: 1753-1761 (1947); U.S. Patent Nos. 2,390,074 and 2,469,193.
Exemplo 1 Preparação de Albumina Humana Fração V de Cohn foi suspensa em água fria para injeção. Alternativamente, Efluente IV-1 pode ser usado em vez de Fração V. Etanol frio desnaturado (SDA-3A) foi adicionado para se obter uma solução de álcool de cerca de 10%, enquanto se arrefece a solução a uma temperatura de cerca de 0°C. A solução foi misturada durante cerca de 1 hora a cerca de 0°C, e depois clarificada por filtração de profundidade. A fração de albumina foi então precipitada a partir do Efluente IV-1 ou Fração V, ajustando o pH, adicionado o etanol frio desnaturado (SDA-3A), e incubando a solução a uma temperatura baixa. Após a incubação à temperatura baixa, a fração de albumina foi separada por centrifuga-ção.
Inativacão Viral com Acetona A fração de albumina foi então suspensa em acetona fria e mantida durante cerca de minutos a cerca de 0°C. A proteína foi separada da suspensão e lavada com acetona fria. O pó de albumina úmido foi seco passando em nitrogênio seco e/ou através do ar, o pó.
Concentração e Filtração O pó de albumina seco foi dissolvido em água fria para injeção a uma concentração de proteína de cerca de 7%. A solução de albumina foi clarificada por filtração através de uma série de filtros graduados em porosi-dade para um final de 0,2 pm de filtro absoluto (diatomita foi utilizada conforme necessária para auxiliar na filtração). O pH da solução de albumina foi ajustado para cerca de pH 7, ultrafiltrado para concentrar a solução aproximadamente duas vezes, e em seguida diafiltrado com NaCI a 3%, seguido por água para injeção. A solução de albumina foi então concentrada, se necessário, por ultrafiltração para a concentração de proteína adequada (ca. 25%).
Volume. Esterilização. Enchimento e Pasteurização Volume aquoso de albumina foi preparado ajustando a solução de albumina ultrafiltrada/diafiltrada com caprilato de sódio, excipientes, hidróxido de sódio, cloreto de sódio e água para injeção para conseguir caprilato de sódio a 20 mM, 25% de proteína, e um pH de 7. O pH foi ajustado com 1,0 M de carbonato de sódio e/ou HCI 1,0 M, se necessário. A solução de albumina foi esterilizada por filtração através de uma série de filtros graduados em porosidade para um final de 0,2 pm de filtro absoluto. A solução de albumina estéril foi colocada assepticamente em frascos estéreis e pasteurizada durante cerca de 10 horas a cerca de 60°C. Os recipientes finais foram incubados a 25^0 durante cerca de duas semanas e, em seguida, armazenados à temperatura ambiente.
Exemplo 2 Experimentos de Inativacão de Vírus Tratamento com acetona da pasta de albumina é uma etapa de inativação de vírus envelopado muito eficaz, mas é um gargalo no processo e está associado com numerosas questões de limpeza e de segurança (risco de incêndio). Por conseguinte, o tratamento com caprilato é uma alternativa possível à suspensão de acetona e secagem. Os experimentos foram realizados para avaliar a inativação do vírus envelopado por tratamento com caprilato de suspensão da pasta de albumina. Para os estudos, suspensão da pasta de albumina com uma concentração de proteína de 25 AU foi enriquecida com o vírus da diarréia viral bovina (VDVB) e o vírus da estomatite vesi-cular (VSV) e incubada durante uma hora a 27°C, pH 5,1, contendo 0, 10, 15, ou 20 mM de caprilato. Os dados mostram a inativação de vírus ao limite de detecção, depois do tratamento com 15 mM de caprilato. Vide Tabela 1 e Figura 1.
Exemplo 3 Foram realizados experimentos para avaliar a capacidade viruci-da de caprilato a baixas temperaturas. Albumina e suspensões de pasta de Fração V foram diluídas em 25 e 65 unidades de absorvância (AU), e caprilato de sódio foi adicionado até uma concentração final de 20 mM. As soluções foram ajustadas para um pH de 4,5 ou 5,1 e com adição de BVDV de pH ajustado antes de incubação a 5, 12, ou 20 °C. As amostras para a titulação, pH e/ou concentração de proteína (isto é, A2eo) foram removidas após aquecimento (0 horas) e 0,5, 2, e 6 horas.
Para ambas albumina e suspensões de pasta de Fração V, o vírus da inativação por caprilato foi maior em temperaturas mais altas e em baixas concentrações de proteína. Vide Figura 2. Para 25 AU e 65 AU de suspensões de fração V, a inativação do vírus foi maior em pH 4,5 do que em pH 5.1. Inativação do vírus também foi maior em pH 4,5 para suspensões de albumina a 25 AU. Para suspensões de albumina a 65 AU, no entanto, a inativação do vírus foi maior a pH 5,1 do que a pH 4,5. Devido ao fato de o mecanismo de inativação do vírus por caprilato ser atribuído à forma não ionizada do caprilato, e as concentrações de forma não ionizada devendo ser maiores a pH 4,5 do que a pH 5,1, os resultados com 65 AU de albumina foram inesperados.
Inativação do vírus é dependente do pH, tempo de exposição, a concentração de proteína, e composição do produto. Ao contrário do tratamento a 27°C, que inativou VDVB abaixo da detecção dentro de 30 minutos (dados não apresentados), o tratamento a 5°C, sob condições ideais (25 AU, pH 4,5), requereu duas horas para a inativação completa de BVDV. Uma etapa de incubação de caprilato de albumina/Fração V a 5°C não foi eficaz para a inativação do vírus envelopado.
Exemplo 4 Proieto de Estudo Experimental de Variáveis de Processo de Inativação Viral Com base nos resultados iniciais com a inativação do vírus de caprilato em amostras de albumina ou fração V, foi realizado um projeto de estudo experimental para avaliar as condições que maximizam a atividade viricida. As variáveis que foram otimizadas foram Concentração de Albumina (5% a 20%), concentração de caprilato (10 mM a 30 mM), pH em solução (3,8 a 5,5), temperatura de incubação (20°C a 40°C) e tempo de incubação (10 min e 120 min.) As variáveis de resposta foram o log do valor de redução de vírus (LRV), concentração de albumina, agregação (% de monômero) e concentração de haptoglobulina. Um projeto experimental linear foi concebido para testar três níveis de cada variável (ou seja, baixo, médio e alto, vide Tabela 2).
Um total de 28 experimentos individuais foram realizados. Vide Tabela 3.
Os experimentos foram conduzidos como se segue: Pasta de Fração V foi suspensa em água para injeção e mantida a 2 a 8°C durante a noite. A temperatura foi então aumentada para 27 a 30°C e a concentração (com base na absorvância a 280 nm) foi ajustada a um dos três valores experimentais, por exemplo, 5, 11.5, ou 18% (isto é, g de albumina/100 mL; 26,5, 60,95, ou 95,4 AU respectivamente; ~ 0,75 M, 1,7 M ou 2,7 M, respectivamente). Em seguida, o pH da solução foi ajustado (pH de 3,8, 4,5, ou 5,2). As amostras foram então incubadas à temperatura experimental (por exemplo, 15, 27,5, ou 40°C. O vírus foi então adicionado a uma concentração de 1%. Caprilato foi então adicionado a uma de três concentrações:. 10, 20, ou 30 mM. As amostras foram então incubadas à temperatura experimental por 120 min. Amostras de titulação (antes da adição de caprilato e aos 5, 10, 15, 30, 60, 90 e 120 minutos) foram também obtidas para determinar a cinética da atividade viricida de caprilato. Finalmente, o LRV foi determinado para cada experimento. Resultados experimentais são apresentados na Tabela 4 e nas Figuras 3-6.
Havia uma matriz de concentrações de caprilato, concentrações de proteína, temperaturas e pHs que eram eficazes em atividade viricida. Com base nas condições testadas no estudo DOE, as seguintes generalidades foram aparentes: • Aumento da temperatura melhorou a atividade viricida; • Aumento do tempo de incubação melhorou atividade viricida; • Aumento da concentração de caprilato melhorou atividade viricida; • Diminuição da concentração de proteínas (albumina) melhorou atividade viricida, e • Diminuição do pH melhorou atividade viricida.
Além disso, o LRV previsto na escala de 0 a 100 é maximizado, ou seja, igual a 100% (o que equivale a um LRV de 2,16), com o menor intervalo de predição de confiança de 95% nas seguintes definições de variáveis mistas (vide Figuras 6-7): • Concentração de Caprilato: 30 mM; • Concentração de Albumina: 5% (cerca de 26,5 AU, 750 mM); • pH: 4,4; • Temperatura: 40°C; e • Tempo de incubação: 120 min.
Com base nestes dados, as seguintes condições foram determinadas como práticas por uma etapa de inativação de vírus no processo de purificação da albumina: • Concentração de proteína: < 25 AU (A2so) (ou seja, < 5% e < 750mm) • Concentração de caprilato: > 20 mm; • pH: < 5,0; • Temperatura: 27-30 °C; e • Tempo de incubação: > 90 min.
Estas condições maximizam atividade viricida enquanto reduzem o custo de fabricação e o tempo no processo de purificação da albumina. O escopo das condições, métodos e processos aqui descritos incluem todas as combinações de modalidades, aspectos, exemplos, etapas e preferências aqui descritos.

Claims (26)

1. Método para preparação de albumina a partir de uma solução que compreende albumina, compreendendo: ajustar a concentração de proteína da solução para menos do que cerca de 5%; ajustar o pH da solução a cerca de pH 5 ou menos; adicionar ácido caprílico (ácido octanoico), ou caprilato de sódio; aumentar a temperatura de solução para maior do que cerca de 20 °C, e incubar a solução.
2. Método, de acordo com a reivindicação 1, em que a temperatura de incubação é de 27-30 °C.
3. Método, de acordo com a reivindicação 1, em que o período de incubação é de cerca de 30 min a cerca de 120 min.
4. Método, de acordo com a reivindicação 1, em que o período de incubação é de pelo menos cerca de 90 min.
5. Método, de acordo com a reivindicação 1, em que a concentração de caprilato é cerca de 10 mM a cerca de 40 mM.
6. Método, de acordo com a reivindicação 1, em que a concentração de caprilato é de cerca de 15 mM a cerca de 30 mM.
7. Método, de acordo com a reivindicação 1, em que a concentração de caprilato é de cerca de 20 mM.
8. Método, de acordo com a reivindicação 1, em que o pH é de cerca de 3,8 a cerca de 5.
9. Método, de acordo com a reivindicação 1, em que o pH é de cerca de 5.
10. Método, de acordo com a reivindicação 1, adicionalmente compreendendo: filtração da solução; realização de ultrafiltração e diafiltração; formulação e texturização da solução, e esterilização, enchimento e pasteurização da albumina.
11. Método para preparação de albumina a partir de uma solução de albumina compreendendo: ajustar a concentração de proteína da solução para menos do que cerca de 5%; ajustar o pH da solução a cerca de pH 5 ou menos; adicionar ácido caprílico (ácido octanoico), ou caprilato de sódio a uma concentração de cerca de 20 mM; aumentar a temperatura da solução até cerca de 27-30°C, e incubar a solução durante pelo menos cerca de 30 min a cerca de 120 min.
12. Método, de acordo com a reivindicação 11, em que a incubação é de pelo menos cerca de 90 min.
13. Método, de acordo com a reivindicação 11, em que o pH é cerca de 5.
14. Método, de acordo com a reivindicação 11, adicionalmente compreendendo: filtração da solução; realização de ultrafiltração e diafiltração; formulação e texturização da solução, e esterilização, enchimento e pasteurização da albumina.
15. Método para inativar vírus em uma solução compreendendo albumina, o método compreendendo: ajuste da concentração de proteína da solução para cerca de 5% de proteína; ajuste do pH da solução para menos do que cerca de 5; adição de ácido caprílico (ácido octanoico), ou caprilato de sódio; aumento da temperatura de solução para maior do que cerca de 20 °C, e incubação da solução.
16. Método, de acordo com a reivindicação 15, em que os vírus são vírus envelopado de lipídio.
17. Método, de acordo com a reivindicação 15, em que a concentração de caprilato é de cerca de 15 mM a cerca de 30 mM.
18. Método, de acordo com a reivindicação 15, em que a temperatura é de cerca de 27-30°C.
19. Método, de acordo com a reivindicação 15, em que a incubação é durante pelo menos 90 min.
20. Método, de acordo com a reivindicação 15, em que a concentração de caprilato é de 20 mM.
21. Método, de acordo com a reivindicação 15, em que a incubação é de 90 minutos.
22. Método, de acordo com a reivindicação 15, em que a temperatura é de 30 °C.
23. Método, de acordo com a reivindicação 16, em que os vírus são vírus envelopado de lipídio que infectam humanos.
24. Método para inativar vírus em uma solução compreendendo albumina, o método compreendendo: ajuste da concentração de proteína da solução para cerca de 5% de proteína; ajuste do pH da solução para menos do que cerca de 5; adição de ácido caprílico (ácido octanoico), ou caprilato de sódio a uma concentração de cerca de 20 mM; aumento da temperatura da solução até cerca de 27-30 °C, e incubação da solução durante pelo menos 90 min.
25. Método, de acordo com a reivindicação 24, em que os vírus são vírus envelopado de lipídio que infectam humanos.
26. Método, de acordo com a reivindicação 24, adicionalmente compreendendo: filtração da solução; realização de ultrafiltração e diafiltração; formulação e texturização da solução, e esterilização, enchimento e pasteurização da albumina.
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111632167B (zh) * 2014-04-15 2021-12-28 勃林格殷格翰国际公司 在制造生物制品期间连续灭活病毒的方法、装置和系统
ES2857582T3 (es) * 2014-04-30 2021-09-29 Novo Nordisk As Métodos para la purificación de proteínas mediante el uso de ácido caprílico
GB201611365D0 (en) 2016-06-30 2016-08-17 Devenish Nutrition Ltd A composition for use in treating rotavirus infection
CN111973582A (zh) * 2020-06-29 2020-11-24 浙江大学 一种正辛酸或正辛酸钠在杀灭冠状病毒中的应用

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2469193A (en) 1942-02-09 1949-05-03 Research Corp Protein fractionation
US2390074A (en) 1942-02-09 1945-12-04 Research Corp Protein product and process
US2710293A (en) 1953-10-30 1955-06-07 Olin Mathieson Blood fractionation
US2710294A (en) 1953-11-02 1955-06-07 Olin Mathieson Blood fractionation
US4939176A (en) 1988-12-20 1990-07-03 Miles Inc. Viral inactivation process
US5250663A (en) 1990-04-19 1993-10-05 Miles Inc. Preparing essentially monomeric normal human serum albumin
US5521287A (en) * 1992-05-20 1996-05-28 The Green Cross Corporation Recombinant human serum albumin, process for producing the same and pharmaceutical preparation containing the same
US5440018A (en) 1992-05-20 1995-08-08 The Green Cross Corporation Recombinant human serum albumin, process for producing the same and pharmaceutical preparation containing the same
US5561115A (en) 1994-08-10 1996-10-01 Bayer Corporation Low temperature albumin fractionation using sodium caprylate as a partitioning agent
AUPO410696A0 (en) 1996-12-06 1997-01-09 Csl Limited Inactivation of viruses by incubation with caprylate
US5886154A (en) * 1997-06-20 1999-03-23 Lebing; Wytold R. Chromatographic method for high yield purification and viral inactivation of antibodies
WO2000056768A2 (en) 1999-03-19 2000-09-28 Bayer Corporation Chromatographic albumin process
JP4259324B2 (ja) * 2002-02-28 2009-04-30 ニプロ株式会社 安定化されたアルブミン製剤
UA86775C2 (ru) * 2003-08-12 2009-05-25 Октафарма Аг Способ очистки раствора альфа-1-антитрипсина
DK1718675T3 (da) * 2004-02-27 2013-07-15 Octapharma Ag Fremgangsmåde til at tilvejebringe en oprenset virussikker antistoftilberedning
ES2294976B1 (es) * 2007-11-12 2008-12-16 Grifols, S.A. "procedimiento de obtencion de albumina humana de alta eficacia para su uso en terapia de detoxificacion".

Also Published As

Publication number Publication date
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