<Desc/Clms Page number 1>
EMI1.1
':'4-;,1i,e.t1on de stéroïdes' et 8téro!e8 obtenus".,..
EMI1.2
ente invention est 'relative à un. procd4 ,%% ilRiaR|[j3.i isitdroldes et plus .particulièrement h un Fo*> :,}", 1-6Bd.rOBéna',rn enzymatique de ct 01 de., HHfera'i M att 1vent1c?!,}I' il ta1 t oonnu 'lue de en 'piO"1,.ifpova1ent' 8tre joumis à une tsByPsr 0 ZY mai'uel agit on 1ntrOdL1Ú)nt le ! .,culture d'Ùn micro-organi.4me @a croir, iunc1e J"L,.,g.6nante, ou en soumettant le E3t.-groïde a l'ticticn:
<Desc/Clms Page number 2>
EMI2.1
de cellules d'un micro-organisme 1-ddehydrosonant ïp ,m-y lieu de erdissance, ou d'un l-dâshydrogénuo en1'.5 des cellulee de cols micro-organismes.
De tels proçd F ,' , désignés d'une manière générale par l'expression "*iÊ8 nation en:rmatique", On a maintenant trouvé qU8.. l ,41 1dhdro d'un 8trorde de la série 1,17-dihYdr* 44-prégnène est le produit désiré, la conversion p *JS lieo plus avantageusement ci un ester 16,17-cyelobore.iub! dann ieru oRt utilia ccaune subntrat stéroida, ..,....( . >,..- dans l'eau est utilisé come ateroïde, ,. daM l'al1u est utilise comme 8ubRtr.t Btero '1:,:"",:{"'<*1 Un but de la présence invention eot pal:' :cOI1.é.', quaft de procurer un procédé amélioré pour la 1-déshydrogépatiot .:
r ennc tique d'un stproïde de IA série du 16o',l-dihydro)ty"3- '.. céto-04 - prcynéne.. y Ce but est atteint crice au proeadé ,j' ' . . 3;1 ..... nI tion qui consiste à soumettre, nous des conditions zip ester 16,17 cycloboratc, soluble dans l'eau, d'un 9,,t @-il la série du 16M,17ot-dihydroxy-3-eeto- -prgnènc a uni ddh1 drogénation en:rym8tique. f; ,'JI La I-drjshydrogénatlon enzymatique pe Ut lisée en incluant le stérolde dans une culture en crolës611Cd ott une culture mûre d'un micro-orcanisme connu pour ri-& 1-deshydrosonation des stéroides, ou en traitant 10;. .. ' avec les cellules ou le myedim d'une telle culture' du 1 ieu de croissance, ou dc 1-deshydronaec etl"11Î\é.':épa...'ti!
EMI2.2
EMI2.3
rct ces celluler de tEl.^. :1ilcro-orE.;anismes.. 1iw " .
J.lt.1:''; .("'..y, Des mlcro-orJan1smcs convenables sont c'tïtu6 .'::..' V. par les mcsnbrcs des r,Cnren : Coryncb4c:trlum (par exeniple, . ,i'1ll('x), Nocardia (par exemple, 1i. aurantia et lie oint4ro de RIF Bacterium (par exemple, cyvl2-oyMdAns), KyeobaeterM.çar exempLe rhodofhroutï Sacillua (par exemple, antua execnpe - ;' rho("hlAA' , Nac 111ulI (par ext.'mp 1 e, Seporr.yxt1 (par exemple, S.effin!s), Didymella (pa't)!' :'R,: lycopPt-RJei) . Calonectrin (par exemple, e. decora)'' un 5
<Desc/Clms Page number 3>
EMI3.1
(par exemple, L. o1 t'ni). Cylindrocarpon (par exemple, Q. radi- picola). pseudomonas (par exemple, L. testoAteron)1 Strepto- myces (par exemple, InvpndulAe), et également des espèces choisies des genres : Protnminobacter, Alcfiligenes, Alterneria, Oph10holus et P)'c1nod1thts.
Si le micro-organisme cet utilisé en soi. il est mis à croître de manière aérobie dans un milieu nutritif conve- nable comme il est connu en pratique, le stéroïde à soumettre
EMI3.2
à \-dshydrOE"at10n étant ajoute soit au début du procédé de culture, soit parfois durant ce procédé.
D'une manière générale, les conditions de culture des micro-organismes prévues pour les hesoins de la présente invention sont les mêmes que celles de la culture des micro-
EMI3.3
orsanismer pour la production d'antibiotiques ou de vitarince.
C'est ainsi que le micro-organisme est mis à croître en contact avec (dans ou sur) un milieu nutritif convenable en présence d'une alimentation convenable d'oxygène (air). Un milieu nutri- tif convenable comprend essentiellement une source de facteurs azotés et une source assimilable de carbone et d'énergie. Cette dernièru source peut être constituée parun hydrate de carbone, par exemple du sucrope, des mutasses, du glucose, du mnltone, de l'amidon ou de la dextrine.
La source de facteurs azotée peut être organique (par exemple farine de soya, liqueur de macéra- tion de maïs, extrait de viande, produits solubles de distille-
EMI3.4
rie, peptoner et/ou extrait de levure) ou synthétique (pf.r ç:$TIJ ple constituée de composa simple, organique et inoraninue,, pou- vant être synthétisée, tels que les sels d'ammonium, les mitta- tes alcalins, les amino-acides ou l'urne).
Une forme spécialement avantageuse de mise en oeuvre de l'invention consiste à recueillir et à utiliser des
EMI3.5
cellules préformées de l'un des micro-ornn1Amcs 1-dé9hydrogér nants énumérés précédemment. Dnns ce cas, la 1-déehyc'roénntion
<Desc/Clms Page number 4>
EMI4.1
est de préférence men:e en prér.8nc: d'un composé 1odoac(t.t..
EMI4.2
tel que de l'acide iodoacétique, un sel de celui-ci, par exemple
EMI4.3
un sel de mut,-! alcalin (par cv:cmnl de 1' iodoacc'tate de sodium et de l'iodooctte de ootcssium), un sel de métal alcaline* terreux, le rel d'ammonium, et un sel d'acnine;
ou un enter, tel qu'un ester c1';>11<:'1(> Inférieur, par exemple 1 'iodoacétate de méthyle et l'iodopcctatc r"thylc, et un ester d'aralkyle mono- cyclique, le conporf.' iOODC(:tatc ôtant de préférence présent en une concrntrntion d'environ 0,001 molaire Jusqu'à environ 0,1 molaire, de prpft'rsnce d'environ 0,005 nolnire il environ 0,02 molaire. Ure elimcntdion convenable d'oxygène est également prévue durent le "'rocef;r,U8 de 1-dsh5droénation, de préférence par aération ou fitetiop c'u mélange, ou le*' deux.
C"'1mr m;b5trrt do- 1" t<:rofdc, n'importe quel enter 16,17-cycloboratc soluble n6 l'eau d'un rtcroltie de la série du lt'>o,l7a-di.lytiroy-3-ceto-p4rc'nène peut être employé. De tels C'OO1nO(!'! (>n"lo('nt 1er sel*! rie métaux alcalins (par exemple Ion aels de fiodiur et de potl1.!' d,um) et le sel d'ammonium des esters 16,17-cycloborntPS. On préfère tout particulièrement le b Zt'Toide0. do LI formule l'i'm'rnlci
EMI4.4
EMI4.5
dnns laquelle- *< est de l'hydrogène, R' est de l'hydrogène ou le radical (3-hy('roYy, ou bien R et R' forment encembte le radical
<Desc/Clms Page number 5>
EMI5.1
-.- '- ',1,"-,:,.
Il 'aétô X.'ïaat da l'hydrocènehaloeène, la radical, hydroxy, un :.', r"dj;..1I(0)()' inférieur ou un radical alkyle inférieur, au moine' un X étant do l'hydrosene, Y est do l'hydrogène, du méthyle du chlore ou du fluor, Z est de l'hydrogône, un h41oCèn. le
EMI5.2
EMI5.3
radical hydroxy ou lo radical acyloxy, et R" cet un cation, de #prdférnee un métal alcalin ou de l'ammonium.
<.
. Loa substrats de atéroldes convenables sont les 881. . mètaux alcalins et d'ammonium den entera 16,17-cyclo- #- boratia de ,15a,17ee-dihydraxyproEestcrone, lboc,l7l,21..trihy-
EMI5.4
EMI5.5
droxyprogeatérone, 6a-m<<thyi-16a,17bdihydroxyproestrone, 6*chloro-16ri,17rx-dihydrox>,progentérone, 6afluoro-l6oc,17a(iihy droK7PrOcoBtÁrono, 16n,17a.dihydroxy2lfluoroproy,estixone, 16e,17a-dlhydroxy.21-chloronroestirone, 16v-hydroxyhydrîcorti- sono, l6of-hydrqortisone, 9o(-halo-16.hydror.yhydracort npa '.:'<' (par:.Ctxemp1e y-f.luoro-16x-hydrocyhydrocortisone), t 9>-halo-16te :: hydroxyeortison08, 12n-helolb-hydroxyhydrocortieones (par exemple, l2acfluoro-16c.hydror.yhydrocortisone), 12.hala-l6nc- , hydroxycortisones, bx-méthyl-15^c.hydror.yhydrocortisone, 5c- mithyl..16-,c-hydroy.yeortisone, 6fluoro-16'-h)'droyyhydrocorthonc. ;
6c.chlaro-lbx-hydroxyhydrocortisone, 9x-hnlo- 6et mrithyl-l6oc- hydroxyhydrocortinoncoo 12!-hnla-6hG-méthyl-16x-hydror.yhydrocor- tisonoso 9x-hnlo-6aE-fluoro-l6nc-hydroxyhydrocor.tisonea (par exem- ple, 6c,9ordifluoro-Lbc-hydroxyhydrocortisone), 9x-halo-6o(- chloro-16rt-hydroxyhydrocortisones (pAr exemple, 5a,9ardichloro- 16-hydroxyhydrocortinone), llB,lbsc,l7a-trihydroxy;rogc:térone, 11-céto-I6a,17x-dihydroxyprogestérone, <-halo-ll,16oL,17ot- trihydroxyprozestérones (par exemple, 9oc-fluoro-11,16x,17x.:, trihydroxyprocentérone)t 9oc.halo-11-céto-15 l7oc-dih drox 'r i cest<?ron 8, l2oc.hnloll, 16a,17o4.trihydroxyproçeatéroncs, l2rX- halo-11-céto-16a,17oc-dihydroxyproeatérore, 21-halo-ll ,1 6,17- " . trihydroxyproE;
el> tronc8. 9oc,21-dihalo-11,-15,17oC-trihydroxy- progestérones, 6a,9x,21-trifluoro-l1a,16nt,17oc-trihydroxyproes-
<Desc/Clms Page number 6>
EMI6.1
turone et ba,9,?1-trichloro-1l,lfiot,l7x-trihdroxyprogeetcsonet et len optera (!t- ces B t',:rotc\N., ayant un croup* 21.hydrox)'. On
EMI6.2
profère particulièrement les esters formée avec des acides car- boxyliques hydrocarbures de moins de 12 atomes de cabone. tels
EMI6.3
ctu'ox,cnpllficR pnr les nc1t1t'tJ aïkanoïquec de mo1n. de 12 atome. de carbone, les acides Alk(norrue8 de moins de 12 atomes de car- bone, les acides cl1rbo:-:yl iCUl:b aryliques monocycliques, les aci" des alkanoïques inférieurs acryliques monocycliques, Ion acides cycloftlkanccnrhoxy11qucs et Iris acides c:ycloalknc:.rbox,11que..
Com;ne les substrats de stéroïdes delà présente invention, 1 '('ncontre des 8ubt-ttanct"8 stéroïdes courantes, sont
EMI6.4
très soluMcs dnns l'eau, ils peuvent Être ajoutas au milieu de
EMI6.5
1.d(nhydrot:/nl\ t ion sous forme de solutions aqueuree. Cette dif- férenec rpnorte l'un des avantagea du présent proedd par rap- port aux proc,et*,5 connu? en pratique, car elle permet une plus grande concentration de substrat août! forme soluble que Ce nui était possible enterictirement. Avant la présente invention, le etérolde t'tflit ajouta de préférence en solution dans un solvant arertnic,vc, par exemple une solution dans du diméthyl formant ide.
De tell solvants orbl1riucfi Font inhibiteurs pour la 1-déshydro- , rénn,,ion c.>n:-Y'M t1qut' et limitent par conséquent la concentration de stérolee pouvant être ajoutée a un système de 1-dcehydrogena- i tion. Ou bien, le stérolde est ajoute IIOUR une forme solide, au- quel car In vifrsse et le de-r de la réaction étaient limités pnr l'allure de dipnoiution et la solubilité finale du atérolde.
Par l'utilisation dcg substrats de stéroïde de la présente inven- tion, on peut utiliser, par contre, des concentrations aussi Jle- vées que 0,0025 molaire de substrat de t6rordc, dans des procé- d(:(1 ou le substrat est ajouté à une culture diluée du micro-
EMI6.6
organisme; et une teneur allant Jusqu'à 0,1 molaire de substrat
EMI6.7
de st4,-o!de peut être utilisé* dans des processus on le substrat est ajouté à un système contenant des cellules concentrées &4.
<Desc/Clms Page number 7>
EMI7.1
Are.ou un,.! 1déahydrogénase enryme. La concentration du sub- Ctâàna 10 premier aystctnc est de préférence environ 0,0002 ;,jttaqu'1,! environ O.OC2 molaire; et dans le dernier cas, elle est de préférence d'environ 0,0002 a environ 0,02 molaire.
Le substrat de stéroïde en solution aqueuse,
EMI7.2
i b,ùth avant ou durant la culture du micro-organisme, ci el mai est utiliré en soit ou à un milieu aqueux contenant :oa;,çoltul.es séparées ou le 1-déshydrosénase enzyme exempt de celluloiet le composé iodoacétate, ai ce processus est employé, ,Aprèo* environ 1 a environ 48 heures, suivant la concentration de ce etfiroide et de Ilen?yme, pratiquement tout le substrat , s été converti en non dérivé l.d6hydro. L'ester 16,17-cyclobo- rate résultant du dérivé 1-déhydro peut alors être récupéré.
EMI7.3
#ù De préférence cependant, le milieu est acidifié (après cniève.
,1>'ment des cellules ou du mycélium si on utilise un micio-organis- Mmo).Ljûaquâ un pH d'au moins 4,5, de préférence d'environ 2 à ..,.environ 4, par exemple par traitement avec un acide minéral,
EMI7.4
tel-que de l'acide sulfurique, pour hydrolyser le groupe d'eelcr y 1b,17cycloboxate, ce qui donne ainsi le dérivé l6ot,1'76-dihvdrn libre, Lo stéroïde désiré peut alors être récupéré de la
EMI7.5
.manière habituelle, par exemple par filtration ou centrifuta.
#j; t ion (s'il s'agit d'un solide) ou par une extraction à contre- courant:.
Les exemples suivants illustrent les procède de la présente invention (toutes les températures sont données .en degrés centigrades) : Exemple
EMI7.6
Du Nocardia rentrictue (Collection Waksman N*545, 1} Université de Rutgers, New Bruneu-jek New Jersey) est mis croître pendant quatre semaines à 25 sur une culture couchée
EMI7.7
D,d!agax-aar de la composition suivante!
<Desc/Clms Page number 8>
EMI8.1
<tb> Extrait <SEP> de <SEP> boeuf <SEP> 1,5 <SEP> grnmmes
<tb>
<tb> Extrait <SEP> de <SEP> levure <SEP> 3,0 <SEP> grammes
<tb>
<tb> Peptone <SEP> 6,0 <SEP> grammes
<tb>
<tb> Glucose <SEP> 1,0 <SEP> gramme
<tb>
Eau distillée jusqu'à 1 litre,
Traitement à l'autoclave pendant 30 minutât à
EMI8.2
1?T 121 " r ilv Dem portiono d'un ml.
d'une suspension obtenue >tV par lavage de la aurfecc d'une culture couchée avec 5 tel, d'eau stérile sont ut.lises pourentemencer des portions de 50 MI. du milieu euivant contenuem dane des flacons d'Erlenmeyer de 250 ml., bouches par du coton :
EMI8.3
<tb> Peptone <SEP> 5 <SEP> , <SEP> 0 <SEP> gramme*
<tb>
EMI8.4
Tr;ptone 3,0 grommen
EMI8.5
<tb> Extrait <SEP> de <SEP> levure <SEP> 5,0 <SEP> grammes
<tb>
EMI8.6
Glucose 20,0 pranmee 1 *-IA:"" caco3 2,3 grammen Eau distillée jusqu'. 1 litre.
EMI8.7
Traitement pendnnt 30 minutes à 1 eutoelave â 121' ,
Les flncons ensemencée sont soumis à incubation à 25 avec un secouement mécanique rotatif d'un rayon de 2 pou- ces, avec 280 cycles par minute. Après 23 heures, 6% (volume par
EMI8.8
volume) sont transfr,s à un autre jeu de flacons prépares conçue les premiers , Le second jeu de flacons est soumis à incubation dels même manière rue le premier jeu, pendant 17 heures, puis on ajoute à chaque flacon 0,25 ml. d'une solution de 16,17-
EMI8.9
cycloborate de lbc,c.hydroxy-9d-fluotohydroeortieone dans du N,N d1mthylfo.amirle. Lr rolution dans le dthylformam1dc con- tient 20 mg. de etérolde par ml. et, par conséquent, 100 micro- 3rammeR de rtérolde/mI. de culture sont prévus.
Dos échantillons sont nrclevc'n 4,5 heures et 29 heures après l'addition du 8térÓt-: de à la culture, ret6" ou pH de 3 + 0,05, et les otdrordas lim
<Desc/Clms Page number 9>
EMI9.1
%\ bret ont extraits avec da la mcthyliaobutyï estent et ournl une chromntoet'ftf'h10 sur papier dans un système bonpéne-éthanolque eau sur Whatman K'1. De ce fait:, on observera 1.d&.hydroCtna- tion est complète à 70% en 4 à 5 heures et qu'elle est prati-
EMI9.2
,,.cusment quantitative on 29 hautcs ou moins.
. .j-' P:>:1'1t' Une culture en fiole lyophile de Coryncbactrjr1um "\. 11mp1ex ATCC 6945 est utilisée pour ensemencer un flocon de 230 ml, contenant 50 ml. du même milieu que celui utilisé *0 \ l'exemple 1. Le flacon ensemencé est soumis à incubation à 25' pendant 24 heures avec un oecouement rotatif par voie mécanique (280 cycles par minute, rayon de 2 pouces), Des portions d'en-
EMI9.3
viron 0,05 ml. du milieu sont ensuite ut4.linéet pour ensemencer plusieurs portions de 50 ml. d'un milieu ayant la composition suivante
EMI9.4
;.t' . Ycas famine gramme KH2P04 1 jjranOTe 1(211PO't 1 gramme Glucose monohydraté 1 gramme
EMI9.5
Euu de ville junqu'à 1 litre.
Traitement à l'autoclave pendant 20 minutée à 1 21# La seconde série de flacons ert soumise z tncu. bation (de la même manière que la première série) pendant 48
EMI9.6
heures, et ensuite den transferts de 67. (volume per volume) sont faite à plusieurs flacons prépares écrase ceux de la secon- de série. 'Les flacons de cette troisième série sont coulis à incubation pendant 24 heures (de la même manière que pour leE prie précédentes), moment auquel chaque flacon est complété
EMI9.7
par 1 ml, d'une solution contenant du t:traboratc de sodium.
::':+ ("OUI forme de borax, 3 m./ml,) et de la 1 6dL-hydro>:y -$><*- fluorohydrocortieone (60 a,/ml.), le etirolde étant en solu. tion sous forme du sel sodique d'ester cycloborate. De ce fait,
<Desc/Clms Page number 10>
EMI10.1
on procure 600 't11cro:'rr,fluI1C'R de !1t,:rotr1c/mt. À la fermentation.
A intervalle.*, on prélevé de petites quantités, on règle au pu de 3 + 0,5 avec de l'c1rlr phoanhoriqup concentre, le stéroide libre cr;t c'':."^t ,"\'C'C c'e In mi'thyllsobutyl côtone et il eut RO\,l:ni l' à une r.nnly rar chro:ator^llde sur papier, Dix.sept heu!'l'!': rj-rcr rj!'itO!1 '!u etroicie, environ R3'!.. du sturoide inti- tial sont "rprntp Four forme de triamcinolone (16ci-hydroxy-9 - fluorop rednicolone) et eprèt 41 heures, la 1-déshydroCénation est prntlquesncnt quantitative, rvoif .3 Une culture de Corynrbactcrium simplex ATCC 6946 est mise R croître "ifnt Fort jourtr à 25 sur une culture cou- chée è 'l1±:nr-c.'lIr pynnt la composition suivante 1
EMI10.2
<tb> Extrait <SEP> de <SEP> boeuf <SEP> 1,5 <SEP> gramme
<tb>
<tb> Extraite <SEP> de <SEP> levure <SEP> 3,0 <SEP> grammes
<tb>
EMI10.3
Pc:
,tO'1C' 6,0 ürl1mmC'8
EMI10.4
<tb> Glucose <SEP> 1,0 <SEP> gramme
<tb>
<tb> Agar-agar <SEP> 15,0 <SEP> çrammes
<tb> Eau <SEP> distillée <SEP> 1 <SEP> litre
<tb>
EMI10.5
Trd:c:'1C'nt us l'autoclave pendant 30 minutes à 1210 Des quantité? de 3 ml. d'une suspension obtenue
EMI10.6
par lavage de le croissance murerflcielle d'une culture couchée avec 10 ml. du milieu suivant (Fl) :
EMI10.7
KH 21' 4 1,C CTtt'1'!T1t'
EMI10.8
<tb> Prptonc <SEP> 10,0 <SEP> grammes
<tb>
<tb> Extrait <SEP> de <SEP> levure <SEP> 2,5 <SEP> grammes
<tb>
EMI10.9
ilucore 30,0 rrnmmc8
EMI10.10
<tb> Enu <SEP> 1 <SEP> litre
<tb>
EMI10.11
nH rie 7,2 cvant traitement à !'autoclave pendant 30 minutes à 1210 sont utilisées pour ensemencer du f'o:-t:1on! de 50 ml. du m6m. milieu FI contenue? dans dr!n flacon d'rletneyer de 250 ml.,
<Desc/Clms Page number 11>
EMI11.1
ü pervdt¯ coton. Lea flacons sont soumis à incubation pen- itta jours' à 25* sur un appareil à secouer rotatif mar- httï "280creloa par minute avec un rayon de 2 pouces.
Le cont 3totâl,dra flacons est ensuite transféré de manière asep- ",tiqe' '"dea flacons d'Erlemneyer de 4 litres contenant 1 litre u F1:'',Cea flacons (les flacons F2) sont soumis à incuba- . 5 i.o - dantrdéûx jours â 25 sur un appareil à secouer du type t,xl.tax'f if fonctionnant a 120 cycles par minute avec une course .de 1poucë,'Six flacons F2 sont utilisés pour ensemencer 50 Ç8d11 de milieu FI dans un récipient de fermentation soumis atitat on et aère.
Après 48 heures de croissance des cellules, 15 grammes de testostérone dans 300 ml. de méthanol sont ntérili. ses aux filtre et ajoutas à la fermentation. 24 heures plus terd, les cellules sont récoltées par enntrifusation, recueilles soue 0.1 Une pâte et emmagasinées dans un réfricérateti- h .170, W"- '#:'"$ÊêÈ> y ta 1déAhydroCéttation de l'ester 16,17-cyclobora- yka -flvoo-l6uchydroxyhydrocortisone est rèalinée dans un ;¯mil:èontenant ce qui suit
EMI11.2
CtUul.e$ tcfrigercee 3% (poids/volume) . rHPO4 0,05 JH -H0P,07 0,05 M oacétate de sodium 0,003 M
EMI11.3
myh 1; ,2,5, on ajouta 2 supplémentaires de cellules et de le iodoqate de sodium 0,002 M).
La réaction est menée dans un Volume .otal de 50 ml. de milieu dans un flacon dIE.-lenmf ycr de 25 0 reLe stéroïde est préparé en mélangeant 200 mg. d'un mp- ? langea 82% de 9ot-fluorol6or.hydroxyhydrocortiaone et de 12tZi. de 9o(-fluoro-l6c4.hydrotyprodnisolone, 2,4 ml. de méthanol et S 25 mn,,"de Nn2i40.1OH10 dissoue dans 0,4 ml, d'cr.u dans un |flacons et en chauffant 950 au bain-marie bouillant. En envi- on',-qâminutea,"Ia matière est dissoute et l'enter cycloborate -e mt ngc avec 50 ml, du milieu décrit ci-demsuno le pil ert
<Desc/Clms Page number 12>
EMI12.1
réglé à 7,2 et le flacon est placé sur un appar.1t à 250.
Des échantillons sont prélevée pour une a,na graphique et ln progression de la dé8hYàrOcért4t10 t|l.l*B vante : '!!'
EMI12.2
Durse 9oT-fluoro-16or-hydroxy- Triaotonf hydrocortisone JIBIWHÉé' 3,5 heures 1,5 mg./ml. 2SE|l 12,5 heures 0,3 m./ml. 3>PSP heures 3 iiwl
EMI12.3
Une analyse du stérolde consiste a a û31 un échantillon acidifié avec de la mrkhylieobutyl ut oxtraire les et,',rolden, à etiromatotrapliier dans un î sé m bcn7.one-(?&h!'nol-enu our du papier pour séparer les composante. a eluer les eonipoMantc et à déterminer la coneant:ati0r ï31- coraparûieon de l'absorption dans l'ultraviolet avoa d1 Dnnn une seconde oxpurienec réalisé', exemple 3, on convertit 4 mg, do l'ester cyclobordt M# .B f luoro.16 .hydroxylivr! rocar timons en 3,4t! mt;
. de tritrie. par ml, en 21 heures, ''fffisl D'une manière semblable, en suivant tel eus nus des exempleg 1, 2 ou 3, los entero cyclnborates dytdtsD zig autre stéroïde 1,17d-dihydroxy de la série du 3-cdto"rA; précnène peuvent être convertie en leur)) dérivé 1cl; . t 36 11 doit être entendu que 1 ' in ven t i- p |j limitée aux détails donnée mais que bien des vartan ti n
EMI12.4
être prevuen ennr. sortir pour autant du cadre du présent brevet
**ATTENTION** fin du champ DESC peut contenir debut de CLMS **.