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Procède de préparation de nouveaux aldéhydes aliphatiques
La présente invention a pour objet la préparation de nouveaux aldéhydes ss-acyl-aliphatiques substitués en Ó,ss, notamment de composas de la formule générale
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où r1' R2 et R4 représentent des restes hydrocarbonés et R3 et R5 représentent de l'hydrogène ou des restes
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hydï'<9CM"bones, ainsi que de leurs dérivés fonctionnels. les restes bydi-octrbonés pet1f'8nt aussi $tre substitués, pu- extiple par des b1d1"02718. Ilbresq estèrifiés ou 4tl1w1f148, ftriout par' des atome dîiaiogène, et ce oenb uota.-nt das restes a.1coy11ques Intérieurs tels q- les l'est...'tb71., éthyley propylet 15Opl'opyle, batJ18, 180bttt1'1.t tortlo-butyle ou pectyle.
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Les substitués on
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0<, P1"'sentent un effet antibiotique Înt4rossant vis. à-vit de diW0Ws 81crooran1sae. tels que les bactéries, les f'Oto&08.!:r.., les cb.up1gnona et les vîrust par 8X08p1e .1H--vls du St'pwptocccoua pyogenest du saccharomyces "81'8.18la., do l'Entaeoebl. h18tolyt1ca. du virus de l'in... fluenus du Trichomonas tottud et du hypùoroaa equiterdu*. ni peuvent 8%e utilisés com désinfectants ou come aéd1caHnts.
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Dans le tableau ci- prés, on peut par exemple
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se rend coapte de l'effet antibiotique qu'exerce l'ald'bide 0( e 1aétbyl-lthR11qu8 (I) par rapport à 1 lard4. hyd lé7Uliqu8 (Il) et à la 304é'tbyl-huane-2, ;-dlone (III) tes empamisonis ont été effectuées dans le test de difrnslqrià plat avec des petits disque. de papier-filtre d'un diantre de 6 . On a utilisé des solutions à 1 % dans un adajage d'acétone et d'eau (ltlf.).
Le. nombres indiquas représentent le dlamètres des zones inhibantes.
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'1',bl¯av ,
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<tb>
<tb> 1 <SEP> II <SEP> III
<tb>
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aacmu 8Ubt111s 11-13 10 néant a.Pb7Ioooocwt" aVfma 11-13 néant néant b8!>1cb1a 0011 10-12 10 nant Candida trop1Cal1s 18-23 néant néant aMah<rexQro c81'ftY1sae 28-33 néant néant
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Si l'on utilise come méthode-test in vitro de$ sîrles de dilution (par puissances de 10) dans du bouil Ion xlitcoae que l'on a Imub6ba pemant zult heures à 370) OJI1Db1be alors par 8X88Ple pour une cODCentrat1on de 100 d'aldéhyde 0(. -41aftbyl-1évul1qua (1) par e.3, lu cro1.aanoe des a1crooran1"'. suivants t le Jl1ctrococeus pyogaY8 Ver.
AU1"QU8, le Streptoe-oceus hae- 801J1;lcus, le Copysebeoteriate tUphtb.8riae, l'Encharichla coli, la >1moella typoosa, le Babonel.1.a achottauellarl, I lCAb.1ella type A, le Pa8terïr.lla pest;13, le 7ilbro cholorau el Tor, le Bacillus ..thatberi#. Une concentratlon de 10 l'd 'aldéhyde t (3 -dillétby1-1én].1que (I) par CM3 ichibe entre autres la croissance des 4en:&tohyO8 et cbaap1Dona suivants (dans le .n1eu de atbM rand)t l'Bp14eraopb1ton floccosoB, le Trichophyton interd1g1ta1e, le Trichophyton Kanham Volt, le Jf1croaporua Audou!n1, 'Achorlon Schoenleinip llasportînne ft1o. tintus.
Les nouveau eomposée sont obtenus en oxydant
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en aldéhydes (3..acyl..al1PhatiQuel correspondants des alcools (3 -acyl-al1phatiques pr1u.1r8s qui sont substitues en de ou des -diola aliphatiques pr1l1a1res-secondaires qui sont substitués en 0(j /3 . Comme agents d lo2y. dation, sont par exemple appropriés l'oxyde de chrome -(VI) dans l'acide acétique on la pyridine, le bichromate de
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sodium dans une solution aqueuse diacide sultbrique; le cas échéant, les groupes hydroxy des composés indiqués peuvent aussi Atre transformés en groupes carbonyles par action de l'air à température élevée sur un catalyseur au cuivre.
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Les alcools j -acyl-aliphatlques substitués en , r3 ou 10,9 -f-diole aliphatiques substitués en ( '(3 qui sont utilisés comme matières de départ sont connus ou peuvent être préparés suivant des méthodes connues
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en elles-mémes. On peut, par exemple, a l'aide d'un hydrure métallique complexe, notamuent à l'aide d'hydrure de lithium et dealuainium, dans un solvant approprié comme lpéther absolu, le tétoeahydrofurane ou l'éther di- éthylique de l'éthylène-glycol, transformer en -diols correspondants des acides /3 -acyl-propioniques substitués
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en OCS li -y notamment des acides lévuliquos substitués en 0(s ' de préférence leurs esters.
On peut de la .êl1e manière à partir d'acétals d'acides -aayl-propion3ques substitués en ± , z et de leurs esters, notamment à partir
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de l'acétal du lévulate de méthyle, obtenir les alcools
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(3 acylwpropyliques substitués en 0(, .
Ces séries de réactions peuvent être illustrées par exemple, par les formules ci-après :
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Les nouveaux composés peuvent aussi être obtenus en oxydant des 1,5-diènes de la formule générale
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ou des cétones non-saturées en Ù, # et répondant à la formule générale
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R1 à R5 ayant dans ces formules la signification donnée ci-dessus et R6 à R9 représentant des restes hydrocarbonés,
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de préférence des restes alcoyliques ou aryliques, en les traitant par exemple par de l'ozone et en scindant les ozonides.
Le traitement à l'ozone est effectué, de pré- férence, dans des solvants comme l'eau, l'acide acétique aqueux, l'acide acétique, le chloroforme, le tétrachlorure de carbone, le formamide ou l'acétate d'éthyle. Les ozo- nides qui se forment sont, le cas échéant après avoir été isolés, transformés en composés carbonylés par une scission hydrolytique. Le cas échéant, cette scission peut aussi être effectuée par réduction, ainsi par exemple avec du zinc et de l'acide acétique glacial ou d palla.. dium et de l'hydrogène.
Les 1,5-diènes et les cétones non-saturées en Ù, 3 qui sont utilisés comme maliens de départ sont connus ou peuvent être préparés suivant des méthodes connues'en elles-mêmes. On peut, par exemple, le cas échéant après les avoir condensés avec des esters réactifs d'al-
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cools, saponifier des 1,1-dialcoyl- ou des 1,1-diaryl-.t'r 1 .- %-carbalxoxy-5-oxo-hexanes en 1.1-dialcoyl- ou en 1,1diarylr.. -5-oXo-heXanes, et les décarboxyler.
Cette série de réactions peut, par exemple, être illustrée par les formules suivantes :
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Des esters réactifs d'alcools sont, de préférence, ceux d'alcanols, notamment d'alcools alcoyliques inférieurs, avec des acides inorganiques forts, notamment avec les hydracides halogènes, ou toutefois avec des acides sultoniques organiques, par exemple avec des acides alcoyl(inférieur)-sulfoniques aliphatiques ou avec des acides aryl-sulfoniques. On utilise, par exemple, l'iodure de méthyle.
La réaction a lieu en présence d'un agent de condensation tel que des métaux alcalins finement divisés, des sels de métaux alcalins avec des alcanols, des hydroxydes de métaux alcalins, des amidures de métaux alcalins, ou des sels phénylés de métaux alcalins, de préférence toutefois lëthylate de sodium, en présence ou en absence d'un solvant. Comme solvants, sont appropries tous les solvants anhydres comme par exemple les alcanols, le benzène, le toluène, le xylène, l'éther ou les éthers dialcoyliques de l'éthylène-glycol, notamment toutefois l'éther, l'alcool absolu ou l'éther diméthylique de l'éthyléne-glycol. Pour la saponification, on peut aussi
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utiliser des agents d'hydrolyse quelconques, de préférence toutefois des bases, notamment l'hydroxyde de baryum.
Pour la préparation des 1,5'-diènes, on part par exemple d'esters de l'acide adipique et prépare à partir de ceux-ci, avec des composes de Grignard, de préférence avec le bromure de phényl-magnésium, suivant la méthode de Barbier-Wieland/Miescher, les 1,5-diènes correspondants..1
Une autre possibilité pour préparer les nouveaux composés consiste, par ébullition avec 2 mois d'une hydroxylamine, à scinder des pyrroles substituas en position 2 par R1 et en position 3 et 4 par R2 et R5 ou R4 et R5, R1 à R5 ayant la signification donnée ci-dessus, pour obtenir des dioxines d'aldéhydes ss-acyl-liphatiques qui peuvent alors être transformés, suivant des méthodes connues en elles-mêmes, en les aldéhydes ss -acyl-aliphatiques libres.
La série de réactions peut être illustrée, par exemple, par le schéma ci..après :
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Caame matière de départ, on utilise de préfé- rence des pyrroles qui sont substitués avec des restes hydrocarbonée, notamment par des restes alcoyliques in-
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Prieurs* La réaction a lien avec de 1'hydroxylamine éven- tuellement substituée à l'oxygène, de préférence par des restes hydrocarbonés, notamment par des restes alcoyliques inférieurs;
dans ce cas. on peut aussi faire réagir des sels d'hydroxylamines avec des acides inorganiques au organiques sur la quantité calculée d'une base constituée par exemple par des hydroxydes, des carbonates ou des bicarbonates d'ammonium, de .étaux alcalins et de totaux alcaline-terreux, ou sur un excès d'une résine basique échangeuse d'ions, dans un solvant approprié comme l'eau, des alcools aqueux ou des alcools anhydres, et utiliser directement cette solution pour la réaction.
Les matières de départ sont connues ou peuvent être préparées suivant des méthodes connues on elies-mêmes.
Une dernière force d'exécution du procédé décrit est caractérisée par le fait qu'on scinde en / -acyl'-' proplonaldéhydes,, par une hydrolyse douce effectuée en milieu alcalin, des 3-acy1-5-acyloky-2-oxo-2,3,4,5-tétrahydrofuranes de la formule générale
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R1 et R2 représentant des restes hydrocarbonés, de préfé- rence toutefois un alcoyle inférieur, R3 et R4 des restes hydrocarbonés, notamment un alcoyle intérieur.
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Pour l'hydrolyse alcaline douce, on utilise la solution squeuse ou alcoolique aqueuse d'un sel d'une base inorganique ou organique forte avec un acide inor- ganique ou organique faible, par exemple l'acétate de sodium, ou.la suspension aqueuse ou alcoolique-aqueuse d'une résine échangeuse d'aniona.
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C'est ainsi notatl1unt que l'aeétoayeine, l'antibiotique de la forirale ci-dessus, dans laquelle Bi à Rît. représentent un eethyle l'ri. Kelier chier3aint M. Lj.
Miba11ov1c et V. il'80$y i''$a.y'yte Acta", , 220 (1958) peut, sous l'influence d'une solution aqueuse d'acétate de sodium, être transformée en aldéhyde Ó, ss-
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d1métl-lévu1ique. coeue substances de départ pour le procédé de préparation, on utilise do prétrencec11escondu1sant aux substances qu'on a fait notamment ressortir au début.
L'invention concerne aussi les formes d'exé-
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cution du procédé suivant lesquelles on part de c7:,osss, obtenus comme produits intermédiaires à un stade quel- conque du procédé et effectue les phases encore Manquantes dudit procédé, on interrompt ce dernier à l'un quelconque de ses stades.
Suivant la forme d'exécution choisie pour le procédé, on obtient les nouveaux composés avec des groupes carbonyles libres ou sous la forme de leurs dérivés fonc-
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tionnels. A partir des composés comportant des groupes carbonyles libres, on peut, d'une mainère usuelle, préparer des dérives fonctionnels coeme par exemple les oximes et les acétals. Les dérivés fonctionnels peuvent, suivant des méthodes connues en elles-mêmes, être transformés en composés comportant des groupes carbonyles libres.
Les réactions sont effectuées d'une manière connue en elle-même, en présence ou en l'absence d'agents de dilution et/ou d'agents de condensation et/ou de catalyseurs, à la température normale ou à chaud, à l'air libre ou en vase clos sous pression.
Les aldéhydes ss-acyl-aliphatiques décrits., substitués en Ó, ss, peuvent être utilisés comme médicament!. par exemple sous la forme de préparations pharmaceutiques renfermant les composés indiqués en mélage avec une satière de support pharmaceutique, organique ou inorganique, appropriée pour une application entérale, parentérale on locale. Pour la formation de cette matière de support on envisage les substances ne réagissant pas sur les nouveaux composés comme par exemple la gélatine, le lactose, l'amidon, le stéarate de mégnésium, le talc, des huiles végétales, des alcools benzyliques, des gomes, des polyalcoylène-glycols, la vaseline, la cholestérine ou d'autres excipients connus.
Les préparations pharma-
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ceutiques peuvent se présenter, par exemple, à l'état de comprimés, de dragées, de poudres, d'onguents,de crèmes, de suppositoires, ou sous forme liquide à l'état de solutions, de suspensions ou d'épuisions. Le cas échéant, elles sont stérilisées et/ou renfermant des substances auxiliaires, telles que des agents de conservation, de stabilisation, des agents mouillants ou émulsifiants.
Elles peuvent aussi renfermer encore d'autres substances thérapeutiquement précieuses.
L'invention concerne également. à titre de produits industriels nouveaux, les composés obtenus par la mise en oeuvre du procédé défini ci-dessus.
L'invention est décrite plus en détail dans les exemples non limitatifs qui suivent, dans lesquels les températures sont indiquées en degrés centigrades.
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EXEMPLE 1
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A 8,0 g de 2,3**diwéthyl-Y-céto-pentanol-(1), on ajoute une solution de 14 g d'oxyda de chrome-(VI) dans 150 cm3 de pyridine et laisse reposer pendant une nuit à la température ambiante. On verse le mélange dans de l'eau glacée et extrait alors à plusieurs reprises avec du chloroforme.
Les solutions chloroformiques sont lavées avec de l'acide chlorhydrique dilué froid et avec de l'eau, séchées, puis le solvant est éliminé par distillation à travers une colonne de Vigreux. Lors d'une distillation sous vide, le résidu fournit 5,8 g d'une huile incolore qui bout à 73-77 sous une pression de 12 mm de mercure.
Le spectre infra-rouge du composa rectifié concorde complètement avec celui de l'aldéhyde
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0(, -ditnéthyl-lévulique obtenu à partir de l'acétomycinc
La matière de départ peut être préparée comme suit :
Dans 150 cm3 de benzène absolu, on chauffe pen-
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dant 30 heures à reflux 31,6 g d' ce, 6 diméthyl-1évulate de méthyle et 20 g d'éthylène-glycol anhydre avec un gramme d'acide p-toluène-sulfonique, le benzène qui reflue étant renvoyé dans le récipient réactionnel en passant par un séparateur d'eau. Lorsque 3,5 cm3 d'eau environ se sont séparés, on refroidit et lave la solution benzénique à l'eau. On élimine le benzène par distillation sur
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une bonne colonne. Le résidu est distillé sous vide.
Le cétal passe sous une pression de 12 mm de mercure, à 130 environ, sous la forme d'un liquide incolore.
A -la , on ajoute lentement goutte-à-goutte 30 g de cet éthylène-cétal, en solution dans 100 cm3 d'éther absolu, à une solution de 7 g d'hydrure de lithium et d'aluminium dans 100 cm3 d'éther. Au bout de 4 heures on supprime le refroidissement et laisse encore le mélange reposer pendant 20 heures. Après avoir décomposé avec de l'eau glacée et de l'acide sulfurique dilué, on extrait encore la phase aqueuse à quatre reprises avec de l'éther, lave les solutions éthérées à trois reprises avec peu d'une solution de chlorure de sodium et sèche. Le résidu qui reste après avoir chassé l'éther constitue un mélange d'un cétal et d'une cétone.
Pour colleter l'hydrolyse, on chauffe le produit pendant 1+ heures à 50 avec 200 cm3 d'acide sulfurique binormal. On extrait ensuite à cinq remises avec de l'éther et lave les solutions éthérées à trois reprises avec un peu d'une solution de chlorure de sodium. Le résidu d'évaporation est distillé sous vide, ce qui fait que le 2,3-diméthyl-4-céto-pentanol-(1) passe à 97-103 .
Il constitue un liquide incolore qui, dans le spectre d'absorption infra-rouge, présente entre -1 autres de forts maxima à 1715 et 3450 cm
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EXEMPLE 2 Dans 90 cm3 d'acétate d'éthyle absolu, on dis-
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sout 10 g de 2t5-triéthyl-heptne-t2)-onr-tb) et fait passer pendant l40 minutes, à une température de -30 à -20 , un courant d'oxygène ozonisé (27 mg d'ozone par minute; quantité totale d'ozone : 3,78 g 1,2 mol par mol de cétone). Ensuite, on transfère immédiatement la solution froide dans un appareillage en verre rodé comportant un agitateur et un tube adducteur de gaz, puis ajoute 0,5 g de palladium sur du sulfate de baryum (10 % de palladium).
Tout en refroidissant avec de l'eau glacée, on hydrogène alors jusqu'à cessation de l'absorption d'hydrogène (environ 6 heures). On sépare ensuite le cata. lyseur par filtration et évapore la solution sous vide à 30 . On distille le résidu jaunàtre à travers une petite colonne de Vigreux. A 70-80 , sous une pression de 11 Torr, on obtient, sous la forme d'une huile incolore,
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$63 g d'aldéhyde û(,/3 -d1mêthyl-lévu1ique. Une seconde fraction de 1,57 g qui bout à 140-145 sous une pression
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de 11 Torr, est constituée par l'acide t 3 ...dimétbylu lévulîque. A llé*at pur, l'aldéhyde diméthyl...lévu1.1qne bout à 74-76 sous une pression de 11 Torr.
Dans 25 cm3 de méthanol,, on dissout 150 mg de
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l'aldéhyde et ajoute 420 mg de 2-.dinitrophezrlh",d¯r3ire
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Après avoir fait bouillir pendant une demi-heure à reflux. on refroidit et ajoute quelques gouttes d'acide chlorhy- drique concentré pour dissoudre les restes du réactif n'ayant pas réagi. Âpres avoir laissé reposer pendant plusieurs heures à 0 , on sépare par filtration le pré- cipité jaune et le recristallise à quatre reprises dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éthanol. On obtient
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de petites aiguilles jaunes de b1s2J4-d1nitroph6nYl- hydrazone fondant à 213,5-214 .
On fait réagir 200mg de l'aldéhyde diméthyl-
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lévulique sur l'acétate du semi-carbezida. Les aiguilles incolores de la /2,3,Wtriméthyl-pyrryl-(1)5-urôe fondent b ?1 ¯::>, o La 2q.tr3méthyl-.heptne--(2)-ose.6) utilisée comme matière de départ peut être préparée comme suit :
Dans 200 cm3 d'alcool absolu, on dissout 5,9 g
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de sodium et ajoute 5+ g de 2ditaéthyhcarbétiazyv heptène-(2)-one-(6) préparée suivant Rouvé et Stoll, "Hely Chia!. Acta" 30, 226 (1947). Tout en agitant, on ajoute alors 100 g d'iodure de méthyle et fait bouillir la solution pendant 2 heures à reflux.
On élimine largement par distillation l'alcool de la solution qui présente maintenant une réaction neutre, puis, après refroidissement, répartit le résidu entre de l'eau et de l'éther.
Arès avoir lavé la solution éthérée à plusieurs reprises
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avec de l'eau, on sèche avec du sulfate de sodium et élimine l'éther par distillation. On distille le résidu
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sous vide. Il 'bb 1 ¯ 330-1 sous une pression de ils Torr. La méthylation est encore répétée à deux reprises dans les ternes conditions. On obtient finalement, sous la force d'une huile jaune-pale, 43,6 g de 2,4,5-tri-
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méttzyl--aarôdttorlr-heptns-12a one-f 6) bouillant à 110-1140 sous une pression de 12 Torr. Le rendement est de 76 % de la théorie.
Dans 600 cm3 d'eau, on dissout 72 g d'hydroxyde de baryum et clarifie la solution par filtration. Cn fait bouillir cette solution pendant 16 heures à reflux, con-
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aita.:t av5C 40 g da 2a+?..tr5.mrtnyi---carbdthoy . heptaQat?one-.6). Après refroidissement, on acidifie avec de l'acide chlorhydrique et extrait la solution à trois reprises avec de l'éther. On lave la solution éthérée, la sèche et l'évapore, puis purifie le résidu par distillation sous vide. Il bout à 61-66 sous une pression de 10 Torr. On obtient, sous la forme d'une huile incolore, 18s3 g (67,% de la théorie) de 2,4,5-
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trimétiyl-heptne-t2j.one-tô). Apres une nouvelle distil- lation, le produit bout à 64 sous une pression de 13 Torr.
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EXEMPLE 3
Dans 10 ca3 d'alcool, on dissout 1,3 g de 2,3, triméthyl-pyrrole, ajoute 1,1 g de carbonate de sodius et 1,8 g de chlorhydrate d'hydroxylamine, puis fait bouillir pendant 6 heures à reflux. Ensuite, on évapore à sec et, en vue de débarrasser le résidu de la matière de départ qui n'a pas réagi, on le fai t bouillir à plu- sieurs reprises avec de l'éther. On recristallise dans du benzène le résidu qui est insoluble dans l'éther et ob- client la dixose de l'aldéhyde Ó, ss -diméthyl-lévulique, compos@ d'un point de fusion de 145 , à partir duquel on peut, suivant des méthodes connues en elles-mêmes obtenir l'aldéhyde fil,
/3 -diméthyl-lévulique décrit dans l'exemple 1.
EXEMPLE 4
On chauffe pendant 19 heures, à 90-95 , 20,53 g d'acétomycine avec une solution de 28 g d'acétate anhydre de sodium dans 135 cm3 d'eau. Apres refroidissement, on neutralise avec précaution le mélange réactionnel à l'aide de carbonate de potassium solide, sature ensuite de carbonate de potassium solide et extrait à l'éther.
On lave les extraits éthérés avec peu d'une solution de chlorure de sodium, sèche et distille. On obtient ainsi 8,97 g d'une huile incolore qui bout à 74-76 sous une
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pression de 11 mm de mercure; à partir du résidu de distillation, on peut récupérer 700 ag d'acétomycine inchan- gée. Pour l'analyse, on distille à nouveau l'huile sous vide. Elle ne montre pas de pouvoir rotatoire spécifique et possède la constitution de l'aldéhyde Ó,ss -diméthyllévulique.
Le spectre d'absorption ultra-violet ne présente qu'une faible absorption à 282 mu (log 6 =: 1,31)' Le spectre d'absorption infra-rouge du liquide présente des bandes aldébydiques à 2730 et 1730 cm-1.
L'antibiotique acétomycine qui est utilisé cama$ matière de départ répond à la formule
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est formé en cultivant de manière usuelle une souche de Streptomyces ramulosus nov. sp. qui a été isolée à partir d'une prise d'essai faite dans le sol près de Bandama blanc (Côte d'Ivoire) et a été conservée dans les Laboratoires de la Demanderesse et dans ceux de l'Ecole Polytechnique Fédérale de Zurich (Suisse), Lnstitut de Botanique Spéciale, sous la désignation A 17653.
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Le Streptomyces ramulosus nov. sp. forme un mycélium aérien gris-cendre. Il porte des chaînes de oonidies, ce qui constitue une caractéristique typique de la famille des streptomycètes. Ces chaînes se forment sur des hyphes aériennes stériles et ont de courtes branches latérales ramifiées la plupart du temps presque verticalement; les formations de spirales ou d'hélices font défaut. lors de la culture sur des milieux nutritifs peptonés, on observe pas de décoloration mélanoïdique en brun-noir. Les diverses spores sont lisses. La croissance dépend relativement peu de la température et le champignon se développe aussi bien à 18 qu'à 40 ; toutefois, la croissance optimum se situe entre 25 et 32 .
Pour donner d'autres caractéristiques, on décrira dans ce qui va suivre la culture du Streptomyces ramulosus nov. sp. sur différents milieux nutritifs. Les Bilieux nutritifs 1 à 7. ainsi que 10, ont été préparés suivant W. Lindenbein, "Arch. Mikroboil." 17,361 (1952).
1) Gélose synthétique : croissance voilée au début et rouge carmin, plus tard rugueuse et brun-verdâtre. Mycélium aérien velouté gris-verdâtre. Substratum carmin-pâle.
2) Milieu synthétique liquide Sédiment, flocons d'un blanc laiteux, pellicule et crois-
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sance annulaire jaune-foncé, sub- stratum jaune-clair.
3) Gélose-glucose : Croissance voilée, rouge jaune pâ- le à noir corbeau verdâtre par en- droits. Mycélium aérien farinaoé, gris-cendre. Substratum vert-poi- reau à noir de brai brunâtre.
4) Gélose-glucose à l'asparagine : Croissance voilée, l'ou- ge-jaune clair. Mycélium aérien gris-verdâtre. Substratum carmin pâle.
5) Gélose au malate de calcium : Croissance voilée, jaune clair, mycélium aérien laineux, blanc crayeux à gri-s-verdâtre.
6) Milieu gélose (gélatine) à 18 :Croissance superfi- cielle, pustuleuse, jaune-clair.
Substratum brun-clair. Pas de li- quéfaction.
Gélose à l'amidon Croissance voilée, jaune-clair, substratum carmin pâle. Hydrolyse sur 3 mm au bout de 3 semaines.
8) Pomme de terre : Croissance rugueuse à lichéneuse, rouge-jaunâtre. Mycélium aérien blanc crayeux à gris cendre. Sub- stratum carmin pâle.
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9) Carottes : Croissance peu abondant*, puncti.. forme, jaune-clair. -Substratum carmin pâle.
10) Lait de tournesol : Pellicule rugueuse, jaune-clair.
Le Mycélium aérien fait défaut.
Substratum violet-bleu, coagula- tion peu abondante, bonne hydrolys
Le Streptomyces ramulosus nov. sp. croit de la façon suivante, d'après la méthode de T. G. Pridham et D.
Gottlieb, "J. Bacteriology" 56, 107 (1948), lorsqu'on utilise diverses sources de car bone :
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<tb>
<tb> L-xylose <SEP> + <SEP> raffinose
<tb> L-arabinose <SEP> (-) <SEP> inuline <SEP> +
<tb> L-rhamnose <SEP> (+) <SEP> D-mannite
<tb> D-fructose <SEP> + <SEP> D-sorbite <SEP> +
<tb> D-glucose <SEP> + <SEP> mésoinosite
<tb> Saccharose <SEP> + <SEP> salicine <SEP> (+)
<tb>
Les signes ont la signification suivante : + : bonne croissance , utilisation certaine de la source de carbone mentionnée (+) : croissance faible, utilisation douteuse de la source de carbone mentionnée (-) : croissance très faible, utilisation improbable de la source de carbone mentionnée -- :
pas de croissance, pas d'utilisation de la source de carbone mentionnée.
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Pour préparer l'antibiotique, on prépare une solution nutritive formée de 20 g de tarins de soja, de 20 g de mannite et d'un litre d'eau du robinet, puis l'ajuste à un pH de 7,8. On verse cette solution ou un multiple de celle-ci dans des fioles coniques de 500 cm3 (renfermant chacune 100 cm3 de la solution nutritive) ou dans des fermenteurs de 500 litres (renfermant chacun 300 litres de la solution nutritive) et stérilise pendant 20 à 30 minutes sous une pression d'une atmosphère. On ensemence alors avec jusque 10 % d'une culture végétative, partiellement sporulente, de Streptomyces ramulosus et, tout en agitant bien ou en secouant, incube à 27 en faisant passer de l'air dans les fermenteurs (environ un volume d'air stérile par volume de solution nutritive et par minute).
Après 70 à 120 heures de croissance) on filtre les cultures à travers un entonnoir filtrant en ajoutant un auxiliaire de filtration en fonction du volume, ou 4 travers un filtre.-presse ou à travers un filtre rotatif, et débarrasse ainsi la solution aqueuse, active du point de vue antibiotique, du mycélium et des autres composantes solides.
On agite avec 10 litres d'acétone le résidu de filtration d'une charge de 60 litres obtenue de façon correspondante et filtre à nouveau. On répète à deux reprises cette opération, après quoi on réunit les solution?
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acétoniques renfermant l'antibiotique, les concentre sono vide à deux litres et les réunit avec le filtrat de cul- tore. On extrait cette solution dans un extracteur West falia avec 30 litres d'acétate d'éthyle, la totalité de l'activité antib&.ctérie118 passant dans la phase organique. On lave l'extrait à l'eau, l'évapore BOUS vide jusqu'à un volume de deux litres et l'extrait ensuite à plusieurs reprises avec de l'acide acétique demi-normal et avec une solution binormale d'hydroxyde de sodium.
Finalement, on sèche la solution d'acétate d'éthyle sur du sulfate de sodium et l'évapore jusqu'à avoir 50 cm3. On ajoute à ce concentrât 400 ce 3 d'éther de pétrole, après quoi l'antibiotique brut dénoomé acétomycins précipite sous la forme de flocons amorphes jaunâtres. Aprés fil*- tration, on dissout la poudre obtenue dans 250 cm3 de méthanol chaud. Par refroidissement, l'antibiotique dénom- mé acétomycine cristallise en fines aiguilles. Le rendement est de 16 g d'un point de fusion de 115-116 et d'un pouvoir rotatoire spécifique [Ó]22 x -167 (c = 1,47 dans l'éthanol).
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Process for the preparation of new aliphatic aldehydes
The present invention relates to the preparation of novel ss-acyl-aliphatic aldehydes substituted in Ó, ss, in particular of compounds of the general formula
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where r1 'R2 and R4 represent hydrocarbon residues and R3 and R5 represent hydrogen or residues
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hydï '<9CM "bones, as well as their functional derivatives. the bydi-octrbonated residues can also be substituted, pu-extiple by b1d1" 02718. Ilbresq esterrified or 4tl1w1f148, ftriout by 'dîiaiogen atoms, and this oenb uota.-nt das Interior a.1coy11ic remains such as is ...' tb71., Ethyly propylet 15Opl'opyle, batJ18, 180bttt1'1 .t tortlo-butyl or pectyl.
EMI2.2
Substitutes are
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0 <, P1 "'feel an important antibiotic effect against diW0Ws 81crooran1sae. Such as bacteria, f'Oto & 08.!: R .., cb.up1gnona and vîrust par 8X08p1e .1H - vls of St'pwptocccoua pyogenest from saccharomyces "81'8.18la., from Enttaeoebl. h18tolyt1ca. of the influenza virus of Trichomonas tottud and hypùoroaa equiterdu *. nor can 8% e used as disinfectants or as aids.
EMI2.4
In the table below, we can for example
EMI2.5
adapts to the antibiotic effect exerted by ald'bide 0 (e 1aétbyl-lthR11qu8 (I) relative to 1 lard4. hyd le7Uliqu8 (II) and to 304é'tbyl-huane-2,; -dlone (III) Empamisonis were carried out in the flat difrnslqri test with small discs of filter paper of a diantre of 6. We used 1% solutions in a mixture of acetone and water (ltlf .).
The. Numbers indicated represent the diameters of the inhibiting zones.
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'1', bl¯av,
EMI3.2
<tb>
<tb> 1 <SEP> II <SEP> III
<tb>
EMI3.3
aacmu 8Ubt111s 11-13 10 none a.Pb7Ioooocwt "aVfma 11-13 none none b8!> 1cb1a 0011 10-12 10 none Candida trop1Cal1s 18-23 none none aMah <rexQro c81'ftY1sae 28-33 none none
EMI3.4
If one uses as an in vitro test method of $ sires of dilution (in powers of 10) in boil Ion xlitcoae which one has imub6ba pemant zult hours at 370) OJI1Db1be then by 8X88Ple for a cODCentrat1on of 100 d ' aldehyde 0 (. -41aftbyl-1evul1qua (1) by e.3, read the cro1.aanoe of the following a1crooran1 "'. the Jl1ctrococeus pyogaY8 Ver.
AU1 "QU8, Streptoe-oceus hae- 801J1; lcus, Copysebeoteriate tUphtb.8riae, Encharichla coli,> 1moella typoosa, Babonel.1.a achottauellarl, I lCAb.1ella type A, Pa8terïr.lla pest ; 13, 7ilbro cholorau el Tor, Bacillus ..thatberi #. A concentration of 10 the aldehyde t (3 -dillétby1-1én] .1que (I) by CM3 ichibe among others the growth of 4en: & tohyO8 and following cbaap1Dona (in the .n1eu of atbM rand) t the Bp14eraopb1ton floccosoB, the Trichophyton interd1g1ta1e, the Trichophyton Kanham Volt, the Jf1croaporua Audou! n1, 'Achorlon Schoenleinip llasportînne ft1o. tintus.
The new compounds are obtained by oxidizing
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EMI4.1
aldehydes (3..acyl..al1PhatiQuel corresponding alcohols (3 -acyl-al1phatics pr1u.1r8s which are substituted for or -diola primary-secondary aliphatic which are substituted for 0 (j / 3. As lo2y agents. suitable for example chromium oxide - (VI) in acetic acid or pyridine, dichromate of
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sodium in an aqueous solution of sultbric acid; where appropriate, the hydroxy groups of the compounds indicated can also be converted into carbonyl groups by the action of air at high temperature on a copper catalyst.
EMI4.3
The α, β-substituted or 10,9 -f-diole aliphatic β-substituted aliphatic alcohols ('(3) which are used as starting materials are known or can be prepared according to known methods.
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in themselves. It is possible, for example, using a complex metal hydride, in particular using lithium aluminum hydride, in a suitable solvent such as absolute ether, tetoeahydrofuran or diethyl ether. ethylene glycol, transforming substituted / 3-acyl-propionic acids into -diols
EMI4.5
in OCS li -y in particular levuliquos acids substituted in 0 (s' preferably their esters.
One can in the .êl1e manner from acetals of -aayl-propion3ques substituted in ±, z and their esters, in particular from
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methyl levulate acetal, obtain alcohols
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(3 acylwpropyl substituted in 0 (,.
These series of reactions can be illustrated, for example, by the formulas below:
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The new compounds can also be obtained by oxidizing 1,5-dienes of the general formula
EMI5.3
or ketones unsaturated in Ù, # and corresponding to the general formula
EMI5.4
R1 to R5 having in these formulas the meaning given above and R6 to R9 representing hydrocarbon residues,
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preferably alkyl or aryl residues, for example by treating them with ozone and by splitting the ozonides.
The ozone treatment is preferably carried out in solvents such as water, aqueous acetic acid, acetic acid, chloroform, carbon tetrachloride, formamide or ethyl acetate. . The ozonides which form are, if necessary after being isolated, transformed into carbonyl compounds by hydrolytic cleavage. If necessary, this cleavage can also be carried out by reduction, for example with zinc and glacial acetic acid or palladium and hydrogen.
The 1,5-dienes and the unsaturated Ù, 3 ketones which are used as starting Malians are known or can be prepared according to methods known in themselves. It is possible, for example, if necessary after having condensed them with reactive esters of al-
EMI6.1
cools, saponify 1,1-dialkoyl- or 1,1-diaryl-.t'r 1 .-% -carbalxoxy-5-oxo-hexanes in 1.1-dialkoyl- or in 1,1diarylr .. -5-oXo -heXanes, and decarboxylate them.
This series of reactions can, for example, be illustrated by the following formulas:
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Reactive esters of alcohols are preferably those of alkanols, in particular of lower alkyl alcohols, with strong inorganic acids, in particular with halogenated hydracids, or however with organic sultonic acids, for example with alkyl acids ( lower) -sulfonic aliphatic or with aryl-sulfonic acids. Methyl iodide is used, for example.
The reaction takes place in the presence of a condensing agent such as finely divided alkali metals, salts of alkali metals with alkanols, hydroxides of alkali metals, amides of alkali metals, or phenyl salts of alkali metals, of however preferably sodium ethylate, in the presence or absence of a solvent. Suitable solvents are all anhydrous solvents such as, for example, alkanols, benzene, toluene, xylene, ether or dialkyl ethers of ethylene glycol, in particular however ether, absolute alcohol or alcohol. ethylene glycol dimethyl ether. For saponification, we can also
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use any hydrolysis agents, however preferably bases, in particular barium hydroxide.
For the preparation of 1,5'-dienes, one starts for example from esters of adipic acid and is prepared from these, with Grignard compounds, preferably with phenyl-magnesium bromide, according to Barbier-Wieland / Miescher method, the corresponding 1,5-dienes..1
Another possibility for preparing the new compounds consists, by boiling with 2 months of a hydroxylamine, in cleaving pyrroles substituted in position 2 by R1 and in position 3 and 4 by R2 and R5 or R4 and R5, R1 to R5 having the meaning given above, to obtain dioxins of ss-acyl-liphatic aldehydes which can then be converted, according to methods known per se, into the free ss -acyl-aliphatic aldehydes.
The series of reactions can be illustrated, for example, by the diagram below:
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As a starting material, pyrroles are preferably used which are substituted with hydrocarbon residues, in particular with internal alkyl residues.
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Prior * The reaction is linked to hydroxylamine which is optionally substituted for oxygen, preferably by hydrocarbon residues, in particular by lower alkyl residues;
in that case. it is also possible to react salts of hydroxylamines with inorganic or organic acids on the calculated quantity of a base consisting, for example, of hydroxides, carbonates or bicarbonates of ammonium, of alkali metals and of alkaline-earth totals , or on an excess of a basic ion exchange resin, in a suitable solvent such as water, aqueous alcohols or anhydrous alcohols, and use this solution directly for the reaction.
The starting materials are known or can be prepared according to known methods themselves.
A final strength of execution of the method described is characterized by the fact that the / -acyl'- 'proplonaldehydes, are split by a gentle hydrolysis carried out in an alkaline medium, of 3-acy1-5-acyloky-2-oxo- 2,3,4,5-tetrahydrofurans of the general formula
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R1 and R2 representing hydrocarbon residues, preferably however lower alkyl, R3 and R4 hydrocarbon residues, in particular an interior alkyl.
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For mild alkaline hydrolysis, use is made of a squous or aqueous alcoholic solution of a salt of a strong inorganic or organic base with a weak inorganic or organic acid, for example sodium acetate, or the aqueous suspension. or alcoholic-aqueous anion exchange resin.
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It is thus notatl1unt that aeétoayeine, the antibiotic of the forirale above, in which Bi à Rît. represent an eethyle l'ri. Kelier chier3aint M. Lj.
Miba11ov1c and V. il'80 $ y i '' $ a.y'yte Acta ",, 220 (1958) can, under the influence of an aqueous solution of sodium acetate, be transformed into aldehyde Ó, ss -
EMI10.2
d1metl-levu1ique. Coeue starting materials for the preparation process, pre-starting is used which is conducive to the substances which in particular were brought out at the beginning.
The invention also relates to the forms of execution.
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cution of the process according to which one starts from c7:, osss, obtained as intermediate products at any stage of the process and carries out the phases which are still missing from said process, the latter is interrupted at any one of its stages.
Depending on the embodiment chosen for the process, the new compounds are obtained with free carbonyl groups or in the form of their functional derivatives.
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tional. From the compounds comprising free carbonyl groups, it is possible, in the usual way, to prepare functional derivatives such as, for example, oximes and acetals. The functional derivatives can, according to methods known per se, be converted into compounds comprising free carbonyl groups.
The reactions are carried out in a manner known per se, in the presence or absence of diluting agents and / or condensing agents and / or catalysts, at normal temperature or hot, at l open air or in a closed vessel under pressure.
The ss-acyl-aliphatic aldehydes described, substituted in Ó, ss, can be used as medicament !. for example in the form of pharmaceutical preparations containing the compounds indicated in admixture with a pharmaceutical carrier material, organic or inorganic, suitable for enteral, parenteral or local application. For the formation of this support material are considered substances which do not react with the new compounds, such as for example gelatin, lactose, starch, megnesium stearate, talc, vegetable oils, benzyl alcohols, gomes. , polyalkylene glycols, petroleum jelly, cholesterin or other known excipients.
Pharmaceutical preparations
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Ceuticals can be presented, for example, in the form of tablets, dragees, powders, ointments, creams, suppositories, or in liquid form in the form of solutions, suspensions or exhaustions. Where appropriate, they are sterilized and / or containing auxiliary substances, such as preservatives, stabilizers, wetting agents or emulsifiers.
They may also contain still other therapeutically valuable substances.
The invention also relates to. as new industrial products, the compounds obtained by carrying out the process defined above.
The invention is described in more detail in the non-limiting examples which follow, in which the temperatures are indicated in degrees centigrade.
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EXAMPLE 1
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To 8.0 g of 2,3 ** diwethyl-Y-keto-pentanol- (1), a solution of 14 g of chromium- (VI) oxide in 150 cm3 of pyridine is added and left to stand overnight at room temperature. The mixture is poured into ice water and then extracted several times with chloroform.
The chloroform solutions are washed with cold dilute hydrochloric acid and with water, dried, then the solvent is removed by distillation through a Vigreux column. On vacuum distillation the residue gives 5.8 g of a colorless oil which boils at 73-77 under 12 mm Hg pressure.
The infra-red spectrum of rectified composa completely matches that of aldehyde
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0 (, -ditnethyl-levulic obtained from acetomycinc
The starting material can be prepared as follows:
In 150 cm3 of absolute benzene, heat for
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For 30 hours at reflux 31.6 g of this, 6 methyl dimethyl 1evulate and 20 g of anhydrous ethylene glycol with one gram of p-toluenesulphonic acid, the refluxed benzene being returned to the reaction vessel in passing through a water separator. When approximately 3.5 cm3 of water have separated, the benzene solution is cooled and washed with water. Benzene is removed by distillation over
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a good column. The residue is distilled off under vacuum.
The ketal passes under a pressure of 12 mm Hg, at about 130, as a colorless liquid.
At -la, 30 g of this ethylene ketal, dissolved in 100 cm3 of absolute ether, are slowly added dropwise to a solution of 7 g of lithium aluminum hydride in 100 cm3 of ether. After 4 hours the cooling is removed and the mixture is still left to stand for 20 hours. After decomposing with ice water and dilute sulfuric acid, the aqueous phase is further extracted four times with ether, the ethereal solutions washed three times with little sodium chloride solution and dried. The residue which remains after expelling the ether is a mixture of a ketal and a ketone.
To stop hydrolysis, the product is heated for 1+ hours at 50 with 200 cc of binormal sulfuric acid. Then extracted five times with ether and the ethereal solutions washed three times with a little sodium chloride solution. The evaporation residue is distilled off in vacuo, so that 2,3-dimethyl-4-keto-pentanol- (1) becomes 97-103.
It constitutes a colorless liquid which, in the infra-red absorption spectrum, presents among others -1 strong maxima at 1715 and 3450 cm
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EXAMPLE 2 In 90 cm3 of absolute ethyl acetate, it is dissolved
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sout 10 g of 2t5-triethyl-heptne-t2) -onr-tb) and pass for 140 minutes, at a temperature of -30 to -20, a stream of ozonated oxygen (27 mg of ozone per minute; quantity total ozone: 3.78 g 1.2 mol per mol of ketone). Then, the cold solution is immediately transferred to ground glass apparatus comprising a stirrer and a gas adductor tube, then 0.5 g of palladium on barium sulfate (10% palladium) is added.
While cooling with ice water, hydrogen is then hydrogenated until the absorption of hydrogen ceases (about 6 hours). We then separate the catamaran. lyser by filtration and evaporate the solution in vacuo to 30. The yellowish residue is distilled through a small Vigreux column. At 70-80, under a pressure of 11 Torr, one obtains, in the form of a colorless oil,
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$ 63 g of aldehyde û (, / 3 -d1mêthyl-levu1ique. A second fraction of 1.57 g which boils at 140-145 under pressure
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of 11 Torr, consists of t 3 ... dimétbylu levulic acid. When pure, dimethyl aldehyde ... lévu1.1qne boils at 74-76 under a pressure of 11 Torr.
In 25 cm3 of methanol, 150 mg of
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aldehyde and add 420 mg of 2-.dinitrophezrlh ", d¯r3ire
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After boiling for half an hour at reflux. it is cooled and a few drops of concentrated hydrochloric acid added to dissolve the remains of the unreacted reagent. After leaving to stand for several hours at 0, the yellow precipitate is filtered off and recrystallized four times from a mixture of ethyl acetate and ethanol. We obtain
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small yellow needles of b1s2J4-d1nitroph6nYl-hydrazone melting at 213.5-214.
200 mg of dimethyl aldehyde is reacted
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levulic on semi-carbezida acetate. The colorless needles of / 2,3, Wtrimethyl-pyrryl- (1) 5-uroe melt b? 1 ¯ ::>, o La 2q.tr3methyl-.heptne - (2) -ose.6) used as material start can be prepared as follows:
In 200 cm3 of absolute alcohol, 5.9 g are dissolved
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of sodium and add 5+ g of 2ditaethyhcarbétiazyv heptene- (2) -one- (6) prepared according to Rouvé and Stoll, "Hely Chia !. Acta" 30, 226 (1947). While stirring, then 100 g of methyl iodide are added and the solution boiled for 2 hours at reflux.
The alcohol is largely distilled off from the solution which now exhibits a neutral reaction, and then, after cooling, the residue is distributed between water and ether.
After washing the ethereal solution several times
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with water, it is dried with sodium sulfate and the ether is removed by distillation. The residue is distilled
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under vacuum. It 'bb 1 ¯ 330-1 under pressure from them Torr. Methylation is repeated two more times under the dull conditions. Finally, under the force of a pale yellow oil, 43.6 g of 2,4,5-tri-
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mettzyl - aarôdttorlr-heptns-12a one-f 6) boiling at 110-1140 under a pressure of 12 Torr. The yield is 76% of theory.
72 g of barium hydroxide are dissolved in 600 cm3 of water and the solution clarified by filtration. This solution is boiled for 16 hours at reflux, conc.
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aita.:t av5C 40 g da 2a +? .. tr5.mrtnyi --- carbdthoy. heptaQat? one-.6). After cooling, it is acidified with hydrochloric acid and the solution extracted three times with ether. The ethereal solution is washed, dried and evaporated, then the residue is purified by vacuum distillation. It boils at 61-66 under 10 Torr pressure. 18s3 g (67.% of theory) of 2,4,5- are obtained as a colorless oil.
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trimetyyl-heptne-t2j.one-tô). After further distillation, the product boils at 64 under a pressure of 13 Torr.
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EXAMPLE 3
In 10 ca3 of alcohol, 1.3 g of 2,3, trimethyl-pyrrole are dissolved, 1.1 g of sodius carbonate and 1.8 g of hydroxylamine hydrochloride are added, then boiled for 6 hours at reflux . The mixture is then evaporated to dryness and, in order to free the residue from the unreacted starting material, it is boiled several times with ether. The residue which is insoluble in ether is recrystallized from benzene and obtains the dixose of Ó, ss -dimethyl-levulic aldehyde, composed of a melting point of 145, from which one can, according to methods known in themselves to obtain the aldehyde wire,
/ 3 -dimethyl-levulic described in Example 1.
EXAMPLE 4
20.53 g of acetomycin are heated for 19 hours at 90-95 with a solution of 28 g of anhydrous sodium acetate in 135 cm3 of water. After cooling, the reaction mixture is carefully neutralized with solid potassium carbonate, then saturated with solid potassium carbonate and extracted with ether.
The ethereal extracts are washed with little sodium chloride solution, dried and distilled. This gives 8.97 g of a colorless oil which boils at 74-76 under a
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pressure of 11 mm of mercury; 700 g of unchanged acetomycin can be recovered from the distillation residue. For analysis, the oil is distilled again under vacuum. It does not show specific rotatory power and has the constitution of Ó, ss -dimethyllevulic aldehyde.
The ultraviolet absorption spectrum shows only weak absorption at 282 mu (log 6 =: 1.31). The infrared absorption spectrum of the liquid shows aldebidic bands at 2730 and 1730 cm-1.
The antibiotic acetomycin which is used as the starting material corresponds to the formula
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is formed by cultivating in the usual manner a strain of Streptomyces ramulosus nov. sp. which was isolated from a test sample made in the soil near Bandama blanc (Côte d'Ivoire) and was kept in the Applicant's laboratories and in those of the Federal Polytechnic School of Zurich (Switzerland ), Lnstitut de Botanique Spéciale, under the designation A 17653.
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Streptomyces ramulosus nov. Sp. forms an ash-gray aerial mycelium. It carries chains of oonidia, which is a typical feature of the streptomycete family. These chains form on sterile aerial hyphae and have short side branches branching mostly almost vertically; there are no spiral or helix formations. during cultivation on peptone nutrient media, no melanoid discoloration in brown-black is observed. The various spores are smooth. Growth is relatively little temperature dependent, and the fungus thrives at 18 as well as at 40; however, optimum growth is between 25 and 32.
To give other characteristics, we will describe in what follows the culture of Streptomyces ramulosus nov. Sp. on different nutrient media. Nutrient Bilious 1 to 7. as well as 10, were prepared according to W. Lindenbein, "Arch. Mikroboil." 17,361 (1952).
1) Synthetic agar: growth hazy at first and carmine red, later rough and greenish-brown. Velvety greenish-gray aerial mycelium. Pale carmine substrate.
2) Liquid synthetic medium Sediment, milky white flakes, film and growth
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annular sance dark yellow, substratum light yellow.
3) Glucose agar: Veiled growth, pale yellow-red to raven-black greenish in places. Farinaoe aerial mycelium, ash-gray. Substratum skin-green to brownish pitch black.
4) Asparagine Glucose Agar: Veiled growth, light yellow-yellow. Greenish-gray aerial mycelium. Pale carmine substrate.
5) Calcium Malate Agar: Veiled growth, light yellow, woolly aerial mycelium, chalky white to gray-greenish.
6) Agar medium (gelatin) at 18: Superficial growth, pustular, light yellow.
Substratum light brown. No liquefaction.
Starch Agar Veiled, light yellow growth, pale carmine bedrock. Hydrolysis over 3 mm after 3 weeks.
8) Potato: Rough to lichenous, yellowish-red growth. Chalky white to ash gray aerial mycelium. Substratum pale carmine.
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9) Carrots: Growth sparse *, punctate .. shape, light yellow. --Pale carmine substratum.
10) Sunflower milk: Rough, light yellow film.
The aerial mycelium is lacking.
Purple-blue substrate, scant coagulation, good hydrolys
Streptomyces ramulosus nov. Sp. believes as follows, according to the method of T. G. Pridham and D.
Gottlieb, "J. Bacteriology" 56, 107 (1948), when various carbon sources are used:
EMI22.1
<tb>
<tb> L-xylose <SEP> + <SEP> raffinose
<tb> L-arabinose <SEP> (-) <SEP> inulin <SEP> +
<tb> L-rhamnose <SEP> (+) <SEP> D-mannite
<tb> D-fructose <SEP> + <SEP> D-sorbite <SEP> +
<tb> D-glucose <SEP> + <SEP> mesoinositis
<tb> Sucrose <SEP> + <SEP> salicin <SEP> (+)
<tb>
The signs have the following meaning: +: good growth, certain use of the mentioned carbon source (+): weak growth, questionable use of the mentioned carbon source (-): very weak growth, improbable use of the carbon source mentioned -:
no growth, no use of the carbon source mentioned.
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To prepare the antibiotic, a nutrient solution formed from 20 g of soybean siskins, 20 g of mannite and one liter of tap water is prepared, then adjusted to a pH of 7.8. This solution or a multiple thereof is poured into 500 cm3 conical flasks (each containing 100 cm3 of the nutrient solution) or into 500 liter fermenters (each containing 300 liters of the nutrient solution) and sterilized for 20 to 30 minutes under a pressure of one atmosphere. We then inoculate with up to 10% of a vegetative, partially sporulent culture of Streptomyces ramulosus and, while shaking well or shaking, incubate at 27 by passing air through the fermenters (approximately one volume of sterile air per volume of nutrient solution per minute).
After 70 to 120 hours of growth) the cultures are filtered through a filter funnel adding a filter aid depending on the volume, or 4 through a filter press or through a rotary filter, and thus frees the aqueous solution, active from the point of view of antibiotics, mycelium and other solid components.
The filter residue from a correspondingly obtained 60 liter charge was stirred with 10 liters of acetone and filtered again. We repeat this operation twice, after which we combine the solutions?
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acetone containing the antibiotic, concentrate them, empty, to two liters and combine them with the culture filtrate. This solution is extracted in a West Falia extractor with 30 liters of ethyl acetate, all of the antibacterial activity passing into the organic phase. The extract is washed with water, the BOUS evaporated empty to a volume of two liters and then extracted several times with semi-normal acetic acid and with a binormal solution of sodium hydroxide. .
Finally, the ethyl acetate solution is dried over sodium sulfate and evaporated until it is 50 cm3. 400 cc of petroleum ether is added to this concentrate, after which the crude antibiotic denominated acetomycins precipitates in the form of yellowish amorphous flakes. After filtration, the powder obtained is dissolved in 250 cm3 of hot methanol. On cooling, the antibiotic called acetomycin crystallizes in fine needles. The yield is 16 g with a melting point of 115-116 and a specific optical rotation [Ó] 22 x -167 (c = 1.47 in ethanol).