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LES LABORATOIRES FRANCAIS DE CHIMIOTHERAPIE, résidant à PARIS.
NOUVELLES HYDRAZONES DES CETOSTEROIDES ET PROCEDE POUR L'ISOLEMENT ET LA PURIFICATION DE CETOSTEROIDES EN COMPORTANT APPLICAT ION.
La présente invention est relative à de nouvelles hydrazones des cétostéroïdes permettant de séparer sélectivement, à partir de mélan- ges complexes, des cétostéroides d'un grand intérêt industriel tels que, par exemple, l'hormone femelle ou estrone ou une hormone corticosurrénale comme la cortisone. Elle vise également un procédé pour l'isolement et la purification de cétostéroldes à l'aide des nouvelles hydrazones suivant l'invention.
On sait que les hormones stéroïdes sont fabriquées actuellement soit par extraction de produits naturels comptes comme c'est le cas de l' estrone isolée à partir d'urines de jument gravide, soit par des synthèses très laborieuses (en plus de vingt étapes, par exemple, pour la cortisone) Or, s'il s'agit d'un cétostéroïde d'origine naturelle, le milieu que l'on soumet à extraction renferme toujours plusieurs substances assez proches du produit recherché. Dans le cas précité d'urine de jument gravide, on trouve à côté du principe essentiel, l'estrone, des satellites, des pré- curseurs biologiques ou des produits dégradés.
S'il s'agit d'un produit ob- tenu par synthèse, il est peu pratique de purifier chaque terme intermédiai- re jusqu'à un degré de pureté voisin de 100%; on table généralement sur la grande tendance de cristallisation sélective d'un ou deux termes intermé- diaires pour purifier en cours de route, en veillant de plus près à la puri- fication du produit final.
Ainsi, le plus souvent, un cétostéroïde recherché pour ses usa- ges en médecine ou en art vétérinaire peut être souillé de substances pré- sentant des caractères de solubilité presque identiques à ceux du produi t principal. Il est fréquent que les cristallisations fractionnées n'appor- tent pas de résultats satisfaisants. De plus, ces cristallisations nom-
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breuses entraînent régulièrement des pertes coûteuses auxquelles il est dif- ficile de consentir.
On sait qu'un premier progrès a été obtenu en séparant les cé- tostéroêdes des substances non cétoniques qui les accompagnent. Deux des exemples les plus connus industriellement sont l'isolement, sous la forme de sa semicarbazone,de la trans-déhydroandrostérone (terme intermédiaire dans la synthèse de la testostérone) parmi les produits neutres d'oxydation du cholestérol, et celui de l'estrone des usines de jument, à l'aide des ré- actifs T et P de GIRARD et SANDULESCO, qui permettent d'engager les cétones en combinaisons hydrosolubles, sous forme d'hydrazones à fonction ammonium quaternaire.
Cependant, les semicarbazones, pratiquement toutes insolubles, ne permettent, d'une façon générale, aucun fractionnement net des cétosté- roides entre eux. Quant aux réactifs de GIRARD et SANDULESCO, s'ils ont dé- terminé de brillantes réussites en mettant à profit soit les vitesses dif- férentes avec lesquelles diverses hormones s'engagent en combinaison avec ces réactifs, soit les vitesses inégales d'hydrolyse, soit encore les pH auxquels les hydrazones T ou P se laissent scinder avec régénération des cé- tones, ces conditions fines de travail demeurent d'application restreinte, ne serait-ce qu'en fonction des volumes importants de liqueurs à mettre en oeuvre.
Comme il a été indiqué ci-dessus, les semicarbazones sont géné- ralement toutes insolubles. Il en est de même des dinitro-phényl-hydrazo- nes, intermédiaires souvent préconisés à des fins analytiques, qui, par ail- leurs, s'hydrolysent difficilement. Les oximes, autres dérivés classiques, sont au contraire généralement trop solubles.
D'une manière générale,d'ailleurs, les réactifs cétoniques uti- lisés jusqu'à présent présentent l'inconvénient de nepas posséder une actim sélective suffisante sur les divers cétostéroïdes en rendant ainsi leur sép a- ration délicate et coûteuse, ou bien encore ils donnent avec les cétostéroi- des des dérivés à partir desquels il est difficile de régénérer les cétosté- roides.
L'invention se propose de remédier à ces inconvénients.
La demanderesse a en effet découvert que l'hydrazide correspon- dant à l'acide diphénylglycolique ou acide benzilique donne, avec certains cétostéroïdes, des hydrazones peu solubles qu'on peut séparer sélectivement de mélanges complexes contenant ces cétostéroides et à partir desquelles il est aisé de régénérer ces cétostéroldes.
L'hydrazide benzilique, qu'on désignera également dans la suite sous le nom de "réactif B", réagit avec les cétostéroïdes selon l'équation suivante :
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R \ G = f Ô %1 N-NH-OC-C X C6H5 C,HC ---------------.. 0 HZ N-NH-OC-C 1"'" R' OH C6H5 (hormone cétostérolde) (hydrazide benzilique) R \ / C6H5 #H-0 c=N-Nt!-OC-0 x )\ R7 OH 'G6H5 (hydrazone B)
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L'invention a pour objets, à titre de produits industriels nou- veaux, les nouvelles hydrazones benziliques des cétostéroïdes.
L'invention a également pour objets les applications de ces hydrazones et notamment un procédé de purification et d'isolement des cé- tostéroïdes à partir de mélanges les contenant.
Ce procédé est remarquable notamment en ce qu'il consiste à faire réagir l'hydrazide benzilique sur une solution dudit mélange dans un solvant approprié, en précipitant ainsi sélectivement l'hydrazone ben- zilique d'un cétostéroïde, à séparer cette hydrazone benzilique des hydra- zones benziliques restées dissoutes et des autres composants du mélange et
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à régénérer à partir de cette hydrazone le cé-ostéroide:
L'hydrazide benzilique est un produit bien connu et est obte- nu selon la méthode de CURTIUS Journ. prakt. Chem., 1917,/2/95, p. 196).
Les hydrazones des cétostérodes sont produites, par exemple, en faisant réagir le cétostéroide ou un mélange de cétostéroides, dans un solvant approprié à réaction neutre, avec ledit hydrazide benzilique.
Dans certains cas, il est à conseiller d'ajouter au mélange une petite quantité d'un acide organique à faible poids moléculaire tel que l'acide acétique qui a un effet catalytique sur la réaction qu'il accélère. On
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peut aussi faire réagir l'hydrazide et le cétostéroYde dans l'acide acéti- que pur. La réaction se produit à froid, après un contact plus ou moins prolongé des produits de réaction, ou en faisant chauffer le mélange réac- tionnel au reflux.
On a trouvé que ledit réactif B ne réagissait pas du tout avec un certain nombre de stéroïdes usuels. Avec certains autres, il produit des hydrazones de faible solubilité dans le solvant choisi. En employant des mélanges de cétostéroïdes, il arrive très souvent qu'un seul cétosté- roide soit précipité sous la forme d'une hydrazone B, tandis que les autres ne réagissent pas, ou bien leurs produits de réaction sont solubles dans le solvant.
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Après filtrage ou essorage, puis recristallisation, l'hydrazine B peut être clivée de telle sorte que le cétostéroide qui a réagi avec le- dit réactif B est régénéré et récupéré. Selon l'hydrazone B spécifique
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employée, cette régénération du cétostér ide est obtenue par l'hydrolyse avec des acides minéraux ou des acides organiques forts ou par double dé- composition et échange avec un aldéhyde ou une cétone possédant une plus
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grande affinité pour le réactif B que le cétostêroide combiné.
C'est pour- quoi ledit aldéhyde ou la cétone est de préférence employé en excès, par rapport à la quantité nécessaire, afin de provoquer une rupture d'équilibre
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Le bensaldéhyde ou l'acide pyruvique, par exemple, conviennent particuliè- rement bien pour de telles réactions d'échange, le dernier composé étant employé avantageusement en solution dans l'acide acétique dilué.
Le réactif B fournit, par exemple, des hydrazones cristallisées
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et peu solubles, avec les cétostéroides suivants : l'estrone, c'est-à-dire 3-hydroxy 17-céto A 1,3,5 -estratriène ; la cis-testo-stérone, c'est-àdire 17Ó -hydroxy 3-céto A 4-androstène; la norcholesténolone, c'est-à- dire 3 ss -hydroxy 25-céto A 5-27-nor-cholestène; les esters de désoxycor-
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ticostérone, spécialement le 21-acétoxy 3,20-dicéto A 4 prégnène, c'est- à-dire l'acétate de 21-hydroxy 3,20-dicéto A 4 prégnène;
les esters de 3a cortisone, spécialement le 17 Ó -hydroxy 21-acétoxy 3,11,20-tricéto A -prégnène, c'est-à-dire le 21-acétate de 17 Ó ,21-dihydroxy 3,11,20-tricé- to A 4-prégnène. Dans ces conditions de réaction tout à fait analogues, on n'observe, par exemple, aucune précipitation avec les composés suivants la trans-déhydroandrostérone, c'est-à-dire le 3 ss -hydroxy 17-céto A 5-
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androstène, la à -androstènedione-3,1i; la testostérone (trans), c'est- à-dire 17 -hydroxy 3-céto A -androstène; la prégnénolone, c'est-à-dire 3 -hydroxy 20-céto A 5-prégnéne; la progestérone, c'est-à-dire 3,20-
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docéto# 4-prégnène;
l'équiline, c'est-à-dire le 3-hydroxy 17-céto A 1,3,5,(10),7-estratétraëne, pour ne citer ici que les représentants sté- roides les mieux connus.
Il est très surprenant de constater qu'il existe d'aussi gran- des différences de solubilité entre les hydrazones benziliques des cétosté- roides, d'autant plus que les hydrazides d'acides très voisins, comme l'a- cide mandélique et l'acide diphénylacétique, ne présentent pas de telles différences de solubilité. Les hydrazones mandéliques sont presque toutes solubles dans les conditions de réaction habituelles lorsqu'on emploie le méthanol ou lthanol comme solvants.
Les hydrazones diphénylacétiques, d'autre part, ne présentent pas de différences de solubilité : presque toutes ces hydrazones sont in- solubles de sorte qu'on ne peut faire aucune précipitation sélective, com- me on le voit sur le tableau suivant : TABLEAU
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<tb> Précipitation <SEP> des <SEP> hydrazones
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<tb> Hydrazones <SEP> Hydrazones
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<tb> diphénylacétiques <SEP> benziliques
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<tb> (réactif <SEP> B)
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<tb> à <SEP> chaud <SEP> à <SEP> froid <SEP> à <SEP> chaud <SEP> à <SEP> froid.
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Acétate <SEP> de <SEP> norcholesténolone <SEP> + <SEP> +- <SEP> -
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<tb> Norcholestène-dione <SEP> + <SEP> + <SEP> - <SEP> -
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<tb> Estrone <SEP> + <SEP> + <SEP> +
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<tb>
<tb> Equiline- <SEP> +-
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<tb> Trans-déhydroandrostérone <SEP> + <SEP> +- <SEP> -
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<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Acétate <SEP> de <SEP> trans-déhydroandrostérone <SEP> + <SEP> +- <SEP> -
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<tb>
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<tb> Androstène-dione <SEP> + <SEP> + <SEP> - <SEP> -
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<tb> Androstanolone <SEP> + <SEP> +- <SEP> -
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<tb> Benzoate <SEP> d'androstanolone <SEP> + <SEP> +- <SEP> +
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<tb> Testostérone <SEP> (cis) <SEP> + <SEP> + <SEP> + <SEP> +
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<tb>
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<tb> Testostérone <SEP> (trans)
<SEP> + <SEP> + <SEP> - <SEP> -
<tb>
<tb>
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<tb> Acétate <SEP> de <SEP> testostérone <SEP> (trans) <SEP> + <SEP> +- <SEP> -
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<tb>
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<tb> Propionate <SEP> de <SEP> testostérone <SEP> (trans) <SEP> + <SEP> +- <SEP> -
<tb>
<tb>
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<tb>
<tb> Méthyl-testostérone <SEP> + <SEP> +- <SEP> -
<tb>
En conséquence l'hydrazide benzilique permet d'effectuer la sé- paration de cétoséroïdes intéressants, dilués dans une grande quantité d' autres représentants sans valeur, ou encore de purifier ces stéroïdes lors- qu'ils sont souillés de composés voisins avec lesquels ils ont tendance à syncristalliser.
Tel est, en premier lieu,.le cas de l'isolement de l'estrone dans des résidus de fabrication à hautes teneurs en équilénine et équiline La solubilité de l'hydrazone B de l'estrone, dont la formule est repré- sentée par la figure 1 du dessin annexé, est respectivement 5 fois et 50 fois plus faible dans le méthanol que la solubilité des dérivés correspon- dants de 1'équilénine (Figure 2), et de l'équiline (Figure 3).
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Ainsi, lorsqu'on isole l'estrone de l'urine de jument gravide par la mé- thode connue qui consiste à extraire l'urine hydrolysée par un solvant des lipides, à saponifier cet extrait et à séparer de l'insaponifiable brut, par traitement aux réactifsT ou P de GIRARD, la fraction cétonique, celle-ci donne après fractionnement par la soude pour séparer les céto- phénols, dont fait partie l'estrone, un mélange de cristaux constitués d' estrone, d'équiline et d'équilénine, Après une ou deux recristallisations le mélange cède la majeure partie de l'estrone sous forme pure, mais une partie de l'hormone demeure dans les eaux-mères sous forme de mélange quasi inextricable avec les deux satellites, équiline et équilénine. On peut séparer de ce mélange la majeure partie de l'équilénine à l'état de picrate (G. SANDULESCO, WANG, A.
GIRARD, C.R. Acad. Sciences, 1933,
136, 137), mais ce traitement néglige la récupération de l'estrone qui est cependant le constituant le plus précieux. Or, même dans ce cas, on obtient encore une précipitation sélective de l'hormone femelle sous la forme de son hydrazone B. Les satellites de l'estrone, c'est-à-dire prin- cipalement l'équiline, forment des hydrazones qui, dans les mêmes condi- tions, ne précipitent que peu ou même ne précipitent absolument pas. On régénère ensuite l'estrone par hydrolyse avec un rendement pratiquement quantitatif. (Exemple II).
Le procédé d'isolement suivant l'invention trouve encore une autre application industrielle dans la préparation de la cortisone. Au cours de la synthèse de cette hormone, on peut être conduit à oxyder le 11, 20-dicéto 3 oL , 17Ó -dihydroxy 21-acétoxy pregnane en 3,11,20-tricéto 17Ó -hydroxy 21-acétoxy pregnane et il se trouve alors que de faibles quantités de produit non oxydé gênent considérablement les réactions suivantes. Là encore, la purification par recristallisation est peu satisfaisante pour éliminer l'impureté. Le passage par l'hydrazone B permet de résoudre fa- cilement le problème. Le 11-20-dicéto 3Ó ,17Ó -dihydroxy 21-acétoxy prégnane ne forme pas d'hydrazone B insoluble en méthanol, alors que le dérivé du produit oxydé est remarquablement peu soluble (Exemple VIII).
D'autre part, dans la série de la cortisone comme dans la série estrogène, une seule liaison éthylénique dans la structure stéroïde appa- rait suffisante pour modifier considérablement le caractère de solubilité des benzilhydrazones. On a vu plus haut que l'hydrazone B de l'équiline était 50 fois plus soluble en méthanol que celle de l'estrone. De même l'hydrazone B de l'acétate de cortisone (Figure 4), est soluble dans le dichloréthane, tandis que l'hydrazone B du dérivé saturé en 4-5(Figure 5), ne l'est plus. (Exemple IX).
D'un point de vue pratique, on peut également, sans s'écarter pour cela du cadre de l'invention, choisir un solvant dans lequel les hy- drazones B formées seront toutes solubles, puis en précipiter l'une par addition d'un autre solvant, ou encore distiller le solvant à sec, puis reprendre les hydrazones B restantes par un solvant dans lequel telle ou telle hydrazone B sera soluble ou insoluble. Inversement, on peut aussi, lorsque leproduit recherché ne renferme qu'une seule impureté, engager celle-ci en combinaison avec le réactif B pour l'éliminer. C'est ainsi que l'on peut séparer l'hydrazone B de la cis-testostérone, insoluble en mé- thanol, alors que l'hydrazone B de l'hormone mâle (ou trans-testostérone) reste dissoute (Exemple IV).
Les exemples suivants illustrent l'invention sans pour cela la limiter. C'est ainsi, en particulier, que l'invention peut être ap- pliquée à d'autres cétostéroïdes que ceux spécifiquement mentionnés.
De même, les solvants neutres cités peuvent être remplacés par d'autres solvants équivalents tels que l'isopropanol, le dioxane, le benzène, et 1' acide acétique utilisé comme catalyseur par d'autres acides organiques, tels que les acides formique ou tartrique, employés seuls ou en mélange.
Les points de fusion figurant dans les exemples sont des points
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de fusion instantanés déterminés au bloc de Mâquenne.
Exemple I - HYDRAZONE B DE L'ESTRONE ET REGENERATION DE L'ESTRONE.
On chauffe au reflux 50 g d'estrone et 50 g de réactif B dans 5 litres de méthanol et 200 cm3 d'acide acétique glacial. Après re- froidissement, les cristaux sont filtrés.et lavés à l'alcool. On obtient ainsi 86 g (95%) de produit, F = 170 ,[Ó] D = + 75 (c = 1%, dioxane).
On procède à l'hydrolyse de la façon suivante :
100 g de l'hydrazone précédente sont mis en suspension dans 800 cm3 d'alcool à 96 et 800 cm3 d'acétone. On porte à l'ébullition, puis on introduit rapidement 160 cm3 d'acide chlorhydrique pur et refroidit dans un bain d'eau. glacée. On ajoute ensuite 16 litres d'acide chlorhydrique normal. Après repos, on essore, lave à l'acide chlorhydrique normal et à l'eau distillée, puis on sèche. On obtient un rendement quantitatif (53 g) d'estrone, F. 262 ,[Ó]D= + 1630 (c = 1%, dioxane).
Exemple II - SEPARATION ESTRONE -EQUILINE.
100 g d'un mélange de cétones contenant de l'estrone sont dis- sous, à chaud, dans 2 litres de méthanol et 80 cm3 d'acide acétique cris- tallisable. On ajoute 125 g de réactif B et fait bouillir à reflux pendait deux heures. S'il s'agit d'un produit riche en estrone, l'hydrazone com- mence à se séparer pendant la durée de l'ébullition. S'il s'agit d'un pro- duit pauvre, on amorce la cristallisation. On essore et lave au méthanol
L'hydrazone obtenue est reprise par 2 litres de méthanol bouil- lant. Il s'agit ici d'une digestion alcoolique et non d'une recristalli- sation. Après repos jusqu'au lendemain, on essore et on lave à plusieurs reprises avec du méthanol. Le produit séché et contrôlé présente les con- stantes suivantes : F. 169-170 ,[Ó]D = + 75 (c = 1%, dioxane).
L'hydrolyse de l'hydrazone effectuée dans les conditions décri- tes pour l'exemple I fournit l'estrone, F : 262 , [Ó]D = + 163 (c =1%, dioxane), avec un rendement quantitatif.
Exemple III - HYDRAZONE B DE LA CIS-TESTOSTERONE.
On porte au reflux, pendant une heure, 29 g de cis-testostérone dans 600 cm3 de méthanol acétique renfermant 6 cm3 d'acide acétique et 27 g de réactif B dissous au préalable à chaud dans 250 cm3 du même solvant.
On abandonne ensuite une nuit à la température ordinaire. Le lendemain, on filtre, essore, lave au méthanol et sèche. Le rendement est de 46 g, de combinaison B de la cis-testostérone fondant à 1850. On hydrolyse à l'acide pyruvique selon le mode opératoire décrit dans l'exemple V et ob- tient 26 g de cis-testostérone.
Exemple IV - SEPARATION CIS-TESTOSTERONE ET TRANS-TESTOSTERONE.
On traite comme plus haut un mélange de trans-et cis-testosté- rone provenant des recristallisations de testostérone technique pesant 58 g. On obtient 20 g de combinaison B de cis-testostérone. Les eaux-mères sont évaporées à sec et le résidu hydrolysé comme précédemment fournit 44 g de produit brut qui, par recristallisation, donnent 30,8 de trans- testostérone.
Exemple V - HYDRAZONE B DE L'ACETATE DE CORTISONE ET REGENARATION DE L'ACE- TATE DE CORTISONE.
On porte au reflux 50 g d'acétate de cortisone (3,11,20-tricé- to 17Ó -hydroxy 21-acétoxy A 4-pregnène) et 33 g de réactif B dans un litre d'alcool méthylique contenant 10 cm3 d'acide acétique. Après re- froidissement, les cristaux sont filtrés, lavés et séchés. Le rendement s'élève à 96%. La benzilhydrazone de l'acétate de cortisone est cristal- lisée en paillettes insolubles dans l'éther, un peu solubles dans le chlo- roforme et l'acide acétique, F = 196 ,[Ó] D = + 235 à + 2400 (c = 1%, chlo-
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reforme).
On procède à l'hydrolyse de la façon suivante :
On traite 50 g de benzilhydrazone d'acétate de cortisone par un mélange de 200 cm3 d'acide acétique glacial, 20 cm3 d'acide pyruvilique et 10 cm3 d'eau. Les cristaux formés sont filtrés et la masse lavée avec une solution de bicarbonate de sodium puis à l'eau. Après séchage, on obtient 30 g d'acétate de cortisone (95%), F = 247 ,[Ó] D = + 1770 (c = 1%, acétone).
Exemple VI - PURIFICATION DE L'ACETATE DE CORTISONE.
On traite 40 g d'acétate de cortisone impur, F = 230 , par 30 g de réactif B dans 1000 cm3 d'alcool méthylique à 1% d'acide acétique.
Par refroidissement, on obtient l'hydrazone de l'acétate de cortisone,
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F = 196 , Ga D = bzz 235 à 240 (c = 1%, chloroforme).
L'hydrolyse de l'hydrazone effectuée selon l'exemple V fournit
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l'acétate de cortisone, F = 2L7 ,Cd D = + 177 (c = 1%, acétone).
Exemple VII - HYDRAZONE B DU 3,11,20-tricéto 17Ó -hydroxy 21-acétoxy pregnane.
On chauffe au reflux 120 g de réactif B et 100 g de 3,11,20- tricéto 17Ó -hydroxy 21-acétoxy pregnane dans 200 cm3 de dichloréthane.
Après refroidissement, on sépare, lave et sèche les cristaux formés.
On obtient ainsi 150 g (95%) de benzilhydrazone de 3,11,20-tricéto 17Ó-
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hydroxy 21-acétoxy pregnane en aiguilles, F = 210 ,rd D = + 101 (c = 1%, pyridine), peu solubles dans les solvants, usuels, solubles dans la pyridine.
La décomposition de l'hydrazone est effectuée de la façon sui- vante. On traite 50 g de benzilhydrazone de 3,11,20 tricéto 17 oC -hydroxy 21-acétoxy pregnane par un mélange de 200 cm3 d'acide acétique glacial, 20 cm3 d'acide pyruvique et 10 cm3 d'eau. Les cristaux formés sont lavés par une solution de bicarbonate de sodium, puis une solution chlorhydrique N et, enfin, à l'eau. Après séchage, on obtient 30 g (95%) de 3,11,20-
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tricéto 17 0l -hydroxy 21-acétoxy pregnane, F = 2310e rald = + S2 (c = 1 acétone).
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Exemple VIII - PURIFICATION DU 3,11,20-TRICETO 17 -HYDROXY 21-ACETOXY PREGNANE.
On traite par le réactif B, au reflux, du méthanol contenant
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1% d'acide acétique, 16 g de 3,11,20-tricéto 17 -hydroxy 21-acétoxy preg- nane contenant, comme impureté, 20% de 11,20-dicéto 3 0 , 17 cl -dihydroxy 21-acétoxy pregnane. Par refroidissement, on recueille 23 g de cristaux F = 210 , représentant en hydrazone 95%, du dérivé 3-carbonylé mis en jeu La décomposition de la benzilhydrazone effectuée selon l'exemple V fournit
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le 3,11,20-tricéto 17 oC -hydroxy 21-acétoxy pregnane, F : 2310ploj D = + 820 (c = 1%, acétone).
Exemple IX - SEPARATION DU 311,20-TRICETO 17 OC ,21-DIHYDROXY PREGNANE ET DE L'ACETATE DE CORTISONE.
43 g de résidu provenant de l'évaporation d'eaux-mères de cor-
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tisone qui renferment du 3,11-20-tricéto 17 p1,21-dihydroxy pregnane sont acétylés par traitement à l'anhydride acétique et à la pyridine. Le pro- duit réactionnel sous forme de gomme jaune est dissous à l'ébullition dans 300 cm3 de méthanol contenant 1% d'acide acétique. On ajoute ensuite une solution bouillante de 26 g de réactif B (excès de 10%) dans 200 cm3 de méthanol à 1% d'acide acétique et porte au reflux au bain-marie. La combinaison B cristallise rapidement. On abandonne au repos une nuit. On essore la masse cristallisée, lave au méthanol puis à l'acide chlorhydri- que normal pour éliminer l'excès de réactif B, puis à l'eau et sèche à 120 .
On obtient 45,8 g (68,5%) de combinaison B fondant vers 200-210 .
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On reprend ce mélange de combinaisons B (45,8 g) par 200 cm3 de dichloréthane. On tiédit au bain-marie pendant quelques minutes puis refroidit à température ambiante et essore- l'insoluble. On répète deux fois l'opération avec 200 cm3 puis 50 cm3 de dichloréthane. Après sécha- ge, on obtient 26 g de combinaison B du 3,11,20-tricéto 17Ó -hydroxy 21- acétoxy pregnane, soit 56,5% du mélange, F. 210 .
Les dichloréthanes d'extraction sont réunis et distillés à sec sous vide. On obtient 18,5 (40%) de combinaison B de l'acétate de cortisone cristallisant par addition d'acide acétique aqueux.
Par clivage des deux combinaisons B suivant les exemples pré- cédents,on récupère, d'une part, l'acétate de cortisone et, d'autre part le 3,11,20-tricéto 17Ó-hydroxy 21-acétoxy pregnane.
On prépare de la même manière les hydrazones benziliques de l'acétate de désoxycorticostérone : F = 143 ; de la norcholes- ténolone : paillettes F : 255 ; du benzoate d'androstanolone : microcris- taux F = 155 ;de l'équiline F = 182 (soluble dans le méthanol) ; de l'équilénine F = 170 (soluble dans le méthanol).
Bien entendu, l'invention n'est pas limitée aux modes de mise en oeuvre décrits, qui n'ont été cités qu'à titre d'exemple.
REVENDICATIONS
1. Les hydrazones benziliques des cétostéroides de formule :
EMI8.1
\ G6H5 G=N-NH-OC-C R' OH C.H- R.9 5 dans laquelle /C = est un radical cetostérolde, et notamment : - l'hydrazone benzilique de l'estrone : - les hydrazones benziliques des esters de la cortisone ; - les hydrazones benziliques des esters de la désoxycorticostérone; - l'hydrazone benzilique de la cis-testostérone; - les hydrazones benziliques des 21-esters du 3,11.20-tricéto-17Ó, 21-dihydroxy pregnane; - l'hydrazone benzilique de la nor-cholesténolone.
2. Procédé de purification et d'isolement de cétostéroêdes à partir de mélanges en contenant, à l'aide des hydrazones ci-avant, carac- térisé en ce qu'il consiste à faire réagir l'hydrazide benzilique sur une solution dudit mélange dans un solvant approprié, en précipitant ainsi sélectivement l'hydrazone benzilique d'un cétostéroêde, à séparer cette hydrazone benzilique des hydrazones benziliques restées dissoutes et des autres composants du mélange, et à régénérer à partir de cette hydrazone le cétostérolde.
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LES LABORATOIRES FRANCAIS DE CHIMIOTHERAPIE, residing in PARIS.
NEW HYDRAZONES OF CETOSTEROIDS AND PROCESS FOR THE ISOLATION AND PURIFICATION OF CETOSTEROIDS INCLUDING APPLICAT ION.
The present invention relates to novel hydrazones of ketosteroids making it possible to selectively separate, from complex mixtures, ketosteroids of great industrial interest such as, for example, the female hormone or estrone or an adrenal cortex hormone such as adrenal cortex. cortisone. It also relates to a process for the isolation and purification of cetosteroids using the novel hydrazones according to the invention.
We know that steroid hormones are currently manufactured either by extraction of natural products, as is the case with estrone isolated from the urine of pregnant mares, or by very laborious syntheses (in more than twenty steps, for example). example, for cortisone) Now, if it is a ketosteroid of natural origin, the medium that is subjected to extraction always contains several substances quite similar to the desired product. In the above-mentioned case of pregnant mare urine, alongside the essential principle, estrone, satellites, biological precursors or degraded products are found.
If it is a product obtained by synthesis, it is impractical to purify each intermediate term to a degree of purity close to 100%; one generally relies on the great tendency of selective crystallization of one or two intermediate terms to purify along the way, with more attention paid to the purification of the final product.
Thus, more often than not, a ketosteroid sought for its uses in medicine or in the veterinary art can be contaminated with substances exhibiting solubility characteristics almost identical to those of the main product. Fractional crystallizations often do not provide satisfactory results. In addition, these crystallizations nom-
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many regularly lead to costly losses that are difficult to accept.
We know that a first step forward has been obtained by separating the ketosteroids from the non-ketone substances which accompany them. Two of the most well-known industrial examples are the isolation, in the form of its semicarbazone, of trans-dehydroandrosterone (an intermediate term in the synthesis of testosterone) among the neutral oxidation products of cholesterol, and that of estrone mare factories, using T and P reagents from GIRARD and SANDULESCO, which enable ketones to be used in water-soluble combinations, in the form of hydrazones with a quaternary ammonium function.
However, semicarbazones, almost all insoluble, generally do not allow any net fractionation of the ketosteroids between them. As for the reagents of GIRARD and SANDULESCO, if they have determined brilliant successes by taking advantage either of the different rates with which various hormones engage in combination with these reagents, or the unequal rates of hydrolysis, or still the pH at which the T or P hydrazones can be split with regeneration of the ketones, these fine working conditions remain of limited application, if only as a function of the large volumes of liquors to be used.
As indicated above, the semicarbazones are generally all insoluble. The same is true of dinitro-phenyl-hydrazones, intermediates often recommended for analytical purposes, which, moreover, are difficult to hydrolyze. The oximes, other conventional derivatives, are on the contrary generally too soluble.
In general, moreover, the ketone reagents used hitherto have the drawback of not possessing sufficient selective activity on the various ketosteroids, thus making their separation delicate and expensive, or even together with the ketosteroids they give derivatives from which it is difficult to regenerate the ketosteroids.
The invention proposes to remedy these drawbacks.
The Applicant has in fact discovered that the hydrazide corresponding to diphenylglycolic acid or benzilic acid gives, with certain ketosteroids, poorly soluble hydrazones which can be selectively separated from complex mixtures containing these ketosteroids and from which it is easy. to regenerate these ketosteroids.
Benzilic hydrazide, which will also be referred to below under the name of "reagent B", reacts with ketosteroids according to the following equation:
EMI2.1
R \ G = f Ô% 1 N-NH-OC-C X C6H5 C, HC --------------- .. 0 HZ N-NH-OC-C 1 "'" R 'OH C6H5 (ketosteroid hormone) (benzilic hydrazide) R \ / C6H5 # H-0 c = N-Nt! -OC-0 x) \ R7 OH' G6H5 (hydrazone B)
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The object of the invention is, as new industrial products, the novel benzilic hydrazones of ketosteroids.
A subject of the invention is also the applications of these hydrazones and in particular a process for the purification and isolation of cetosteroids from mixtures containing them.
This process is remarkable in particular in that it consists in causing the benzilic hydrazide to react with a solution of said mixture in an appropriate solvent, thus selectively precipitating the benzyl hydrazone from a ketosteroid, in separating this benzilic hydrazone from the hydra - benzilic zones remained dissolved and of the other components of the mixture and
EMI3.1
to regenerate ce-osteroid from this hydrazone:
Benzilic hydrazide is a well known product and is obtained by the method of CURTIUS Journ. prakt. Chem., 1917, / 2/95, p. 196).
Ketosterode hydrazones are produced, for example, by reacting the ketosteroid or a mixture of ketosteroids, in a suitable neutral reacting solvent, with said benzilic hydrazide.
In some cases, it is advisable to add to the mixture a small amount of an organic acid of low molecular weight such as acetic acid which has a catalytic effect on the reaction which it accelerates. We
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can also react hydrazide and ketosteroid in pure acetic acid. The reaction takes place in the cold, after more or less prolonged contact with the reaction products, or by heating the reaction mixture to reflux.
It has been found that said Reagent B does not react at all with a number of common steroids. Along with some others, it produces hydrazones of low solubility in the chosen solvent. When employing mixtures of ketosteroids, it very often happens that only one ketosteroid is precipitated as hydrazone B while the others do not react, or their reaction products are soluble in the solvent.
EMI3.3
After filtering or draining, then recrystallization, the hydrazine B can be cleaved such that the ketosteroid which has reacted with said reagent B is regenerated and recovered. According to specific hydrazone B
EMI3.4
used, this regeneration of ketosteride is obtained by hydrolysis with mineral acids or strong organic acids or by double decomposition and exchange with an aldehyde or a ketone having a higher
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high affinity for Reagent B than combined ketosteroid.
This is why said aldehyde or ketone is preferably used in excess, relative to the amount necessary, in order to cause a disruption of equilibrium.
EMI3.6
Bensaldehyde or pyruvic acid, for example, are particularly suitable for such exchange reactions, the latter compound being advantageously employed in solution in dilute acetic acid.
Reagent B provides, for example, crystallized hydrazones
EMI3.7
and sparingly soluble, with the following ketosteroids: estrone, i.e. 3-hydroxy 17-keto A 1,3,5 -estratriene; cis-testo-sterone, i.e. 17O -hydroxy 3-keto A 4-androstene; norcholestenolone, i.e. 3 ss -hydroxy 25-keto A 5-27-nor-cholestene; deoxycor esters
EMI3.8
ticosterone, especially 21-acetoxy 3,20-diketo A 4 pregnene, i.e. 21-hydroxy 3,20-diketo A 4 acetate pregnene;
esters of 3a cortisone, especially 17 Ó -hydroxy 21-acetoxy 3,11,20-triketo A -pregnene, i.e. 17 Ó, 21-dihydroxy 3,11,20- 21-acetate triceto A 4-pregnene. Under these completely analogous reaction conditions, for example, no precipitation is observed with the following compounds trans-dehydroandrosterone, that is to say 3 ss -hydroxy 17-keto A 5-
EMI3.9
androstene, α -androstenedione-3,1i; testosterone (trans), i.e. 17-hydroxy 3-keto A -androstene; pregnenolone, i.e. 3-hydroxy 20-keto A 5-pregnen; progesterone, i.e. 3,20-
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doceto # 4-pregnene;
equilin, i.e. 3-hydroxy 17-keto A 1,3,5, (10), 7-estratetraene, to name here only the best known steroid representatives.
It is very surprising to find that there are such large differences in solubility between the benzilic hydrazones of the ketosteroids, especially since the hydrazides of closely related acids, such as mandelic acid and l diphenylacetic acid do not exhibit such differences in solubility. Almost all of the mandelic hydrazones are soluble under the usual reaction conditions when methanol or ethanol are used as solvents.
Diphenylacetic hydrazones, on the other hand, do not show any differences in solubility: almost all of these hydrazones are insoluble so that no selective precipitation can be made, as seen in the following table: TABLE
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<tb> Precipitation <SEP> of <SEP> hydrazones
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Hydrazones <SEP> Hydrazones
<tb>
<tb>
<tb> diphenylacetics <SEP> benzilics
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> (reactive <SEP> B)
<tb>
<tb>
<tb> to <SEP> hot <SEP> to <SEP> cold <SEP> to <SEP> hot <SEP> to <SEP> cold.
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
Norcholestenolone <SEP> <SEP> <SEP> + <SEP> + - <SEP> -
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Norcholestene-dione <SEP> + <SEP> + <SEP> - <SEP> -
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Estrone <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Equiline- <SEP> + -
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Trans-dehydroandrosterone <SEP> + <SEP> + - <SEP> -
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Trans-dehydroandrosterone <SEP> acetate <SEP> <SEP> + <SEP> + - <SEP> -
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Androstène-dione <SEP> + <SEP> + <SEP> - <SEP> -
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Androstanolone <SEP> + <SEP> + - <SEP> -
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Androstanolone Benzoate <SEP> <SEP> + <SEP> + - <SEP> +
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Testosterone <SEP> (cis) <SEP> + <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Testosterone <SEP> (trans)
<SEP> + <SEP> + <SEP> - <SEP> -
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Testosterone <SEP> acetate <SEP> <SEP> (trans) <SEP> + <SEP> + - <SEP> -
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> <SEP> testosterone <SEP> propionate <SEP> (trans) <SEP> + <SEP> + - <SEP> -
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Methyl-testosterone <SEP> + <SEP> + - <SEP> -
<tb>
Consequently, benzilic hydrazide makes it possible to carry out the separation of interesting ketosteroids, diluted in a large quantity of other worthless representatives, or to purify these steroids when they are contaminated with related compounds with which they have. tendency to syncrystallize.
Such is, in the first place, the case of the isolation of estrone in manufacturing residues with high contents of equilenin and equiline The solubility of hydrazone B of estrone, the formula of which is represented by Figure 1 of the accompanying drawing is respectively 5 times and 50 times lower in methanol than the solubility of the corresponding derivatives of equilenin (Figure 2), and equilin (Figure 3).
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Thus, when estrone is isolated from the urine of pregnant mares by the known method which consists in extracting the urine hydrolyzed by a lipid solvent, in saponifying this extract and in separating from the crude unsaponifiable matter, by treatment with GIRARD T or P reagents, the ketone fraction, this yields, after fractionation with sodium hydroxide to separate the ketophenols, of which estrone is part, a mixture of crystals made up of estrone, equiline and of equilenine, After one or two recrystallizations, the mixture gives up most of the estrone in pure form, but part of the hormone remains in the mother liquors in the form of an almost inextricable mixture with the two satellites, equiline and equilenine. Most of the equilenin in the picrate state can be separated from this mixture (G. SANDULESCO, WANG, A.
GIRARD, C.R. Acad. Sciences, 1933,
136, 137), but this treatment neglects the recovery of estrone which is however the most valuable constituent. However, even in this case, one still obtains a selective precipitation of the female hormone in the form of its hydrazone B. The satellites of estrone, that is to say mainly equilin, form hydrazones. which, under the same conditions, precipitate little or even absolutely no precipitation. The estrone is then regenerated by hydrolysis in practically quantitative yield. (Example II).
The isolation process according to the invention finds yet another industrial application in the preparation of cortisone. During the synthesis of this hormone, one can be led to oxidize 11,20-diketo 3oL, 17Ó -dihydroxy 21-acetoxy pregnane to 3,11,20-triketo 17Ó -hydroxy 21-acetoxy pregnane and it is found whereas small amounts of unoxidized product considerably interfere with the following reactions. Again, purification by recrystallization is unsatisfactory for removing the impurity. Passing through hydrazone B easily solves the problem. 11-20-diketo 3O, 17Ó -dihydroxy 21-acetoxy pregnane does not form hydrazone B insoluble in methanol, while the derivative of the oxidized product is remarkably poorly soluble (Example VIII).
On the other hand, in the cortisone series as well as in the estrogen series, a single ethylenic bond in the steroid structure appears sufficient to considerably modify the solubility character of benzilhydrazones. We have seen above that the hydrazone B of equiline was 50 times more soluble in methanol than that of estrone. Similarly, hydrazone B of cortisone acetate (Figure 4) is soluble in dichloroethane, while hydrazone B of the derivative saturated at 4-5 (Figure 5) is no longer so. (Example IX).
From a practical point of view, it is also possible, without thereby departing from the scope of the invention, to choose a solvent in which the hydrazones B formed will all be soluble, then to precipitate one of them by adding another solvent, or alternatively distill the solvent to dryness, then take up the remaining hydrazones B in a solvent in which such or such hydrazone B will be soluble or insoluble. Conversely, it is also possible, when the desired product contains only one impurity, to engage the latter in combination with the reagent B in order to eliminate it. Thus, hydrazone B can be separated from cis-testosterone, which is insoluble in methanol, while hydrazone B of the male hormone (or trans-testosterone) remains dissolved (Example IV).
The following examples illustrate the invention without thereby limiting it. Thus, in particular, the invention can be applied to other ketosteroids than those specifically mentioned.
Likewise, the mentioned neutral solvents can be replaced by other equivalent solvents such as isopropanol, dioxane, benzene, and acetic acid used as a catalyst by other organic acids, such as formic or tartaric acids. , used alone or in combination.
The melting points shown in the examples are points
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of instantaneous fusion determined at the Mâquenne block.
Example I - ESTRONE HYDRAZONE B AND ESTRONE REGENERATION.
50 g of estrone and 50 g of reagent B are heated to reflux in 5 liters of methanol and 200 cm3 of glacial acetic acid. After cooling, the crystals are filtered off and washed with alcohol. 86 g (95%) of product are thus obtained, Mp = 170, [Ó] D = + 75 (c = 1%, dioxane).
The hydrolysis is carried out as follows:
100 g of the above hydrazone are suspended in 800 cm3 of 96 alcohol and 800 cm3 of acetone. It is brought to the boil, then 160 cm3 of pure hydrochloric acid are rapidly introduced and cooled in a water bath. frozen. Then 16 liters of normal hydrochloric acid are added. After standing, filtered, washed with normal hydrochloric acid and with distilled water, then dried. A quantitative yield (53 g) of estrone, F. 262, [Ó] D = + 1630 (c = 1%, dioxane) is obtained.
Example II - ESTRONE -EQUILINE SEPARATION.
100 g of a mixture of ketones containing estrone are dissolved, while hot, in 2 liters of methanol and 80 cm3 of crystallizable acetic acid. 125 g of reagent B are added and the mixture is boiled at reflux for two hours. If it is a product rich in estrone, the hydrazone begins to separate during the time of the boil. If it is a poor product, crystallization is initiated. It is filtered off and washed with methanol
The hydrazone obtained is taken up in 2 liters of boiling methanol. This is an alcoholic digestion and not a recrystallization. After standing overnight, filtered and washed several times with methanol. The dried and controlled product exhibits the following constants: F. 169-170, [Ó] D = + 75 (c = 1%, dioxane).
The hydrolysis of the hydrazone carried out under the conditions described for Example I affords the estrone, F: 262, [Ó] D = + 163 (c = 1%, dioxane), in quantitative yield.
Example III - HYDRAZONE B OF CIS-TESTOSTERONE.
29 g of cis-testosterone in 600 cm3 of acetic methanol containing 6 cm3 of acetic acid and 27 g of reagent B dissolved beforehand hot in 250 cm3 of the same solvent are brought to reflux for one hour.
It is then left overnight at room temperature. The next day, filtered, drained, washed with methanol and dried. The yield is 46 g of combination B of cis-testosterone, melting at 1850. It is hydrolyzed with pyruvic acid according to the procedure described in Example V and 26 g of cis-testosterone are obtained.
Example IV - CIS-TESTOSTERONE AND TRANS-TESTOSTERONE SEPARATION.
As above, a mixture of trans- and cis-testosterone obtained from recrystallizations of technical testosterone weighing 58 g is treated. 20 g of cis-testosterone combination B are obtained. The mother liquors are evaporated to dryness and the residue hydrolyzed as above gives 44 g of crude product which, on recrystallization, gives 30.8 of trans-testosterone.
Example V - HYDRAZONE B OF CORTISONE ACETATE AND REGENARATION OF CORTISONE ACETATE.
50 g of cortisone acetate (3,11,20-tricto 17Ó -hydroxy 21-acetoxy A 4-pregnene) and 33 g of reagent B are brought to reflux in one liter of methyl alcohol containing 10 cm3 of acetic acid. After cooling, the crystals are filtered, washed and dried. The yield is 96%. The benzilhydrazone of cortisone acetate is crystallized in flakes insoluble in ether, somewhat soluble in chloroform and acetic acid, F = 196, [Ó] D = + 235 to + 2400 (c = 1%, chlo-
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reform).
The hydrolysis is carried out as follows:
50 g of benzilhydrazone of cortisone acetate are treated with a mixture of 200 cm3 of glacial acetic acid, 20 cm3 of pyruvilic acid and 10 cm3 of water. The crystals formed are filtered off and the mass washed with sodium bicarbonate solution and then with water. After drying, 30 g of cortisone acetate (95%), F = 247, [Ó] D = + 1770 (c = 1%, acetone) are obtained.
Example VI - PURIFICATION OF CORTISONE ACETATE.
40 g of impure cortisone acetate, F = 230, are treated with 30 g of reagent B in 1000 cm3 of methyl alcohol at 1% acetic acid.
By cooling, the hydrazone of cortisone acetate is obtained,
EMI7.1
F = 196, Ga D = bzz 235 to 240 (c = 1%, chloroform).
The hydrolysis of the hydrazone carried out according to Example V provides
EMI7.2
cortisone acetate, F = 2L7, Cd D = + 177 (c = 1%, acetone).
Example VII - HYDRAZONE B OF 3,11,20-triketo 17O -hydroxy 21-acetoxy pregnane.
120 g of reagent B and 100 g of 3,11,20-triketo 17O -hydroxy 21-acetoxy pregnane are heated to reflux in 200 cm3 of dichloroethane.
After cooling, the crystals formed are separated, washed and dried.
150 g (95%) of benzilhydrazone of 3,11,20-triketo 17Ó- are thus obtained.
EMI7.3
hydroxy 21-acetoxy pregnane in needles, F = 210, rd D = + 101 (c = 1%, pyridine), sparingly soluble in the usual solvents, soluble in pyridine.
The decomposition of the hydrazone is carried out as follows. 50 g of benzilhydrazone of 3,11,20 triketo 17 ° C -hydroxy 21-acetoxy pregnane are treated with a mixture of 200 cm3 of glacial acetic acid, 20 cm3 of pyruvic acid and 10 cm3 of water. The crystals formed are washed with a sodium bicarbonate solution, then an N hydrochloric solution and, finally, with water. After drying, 30 g (95%) of 3,11,20-
EMI7.4
triketo 1701 -hydroxy 21-acetoxy pregnane, F = 2310e rald = + S2 (c = 1 acetone).
EMI7.5
Example VIII - PURIFICATION OF 3,11,20-TRICETO 17 -HYDROXY 21-ACETOXY PREGNANE.
Is treated with reagent B, at reflux, methanol containing
EMI7.6
1% acetic acid, 16 g of 3,11,20-triketo 17 -hydroxy 21-acetoxy preg- nane containing, as an impurity, 20% of 11,20-diketo 3 0,17 cl -dihydroxy 21-acetoxy pregnane . By cooling, 23 g of crystals F = 210, representing 95% hydrazone, of the 3-carbonyl derivative involved are collected. The decomposition of the benzilhydrazone carried out according to Example V provides
EMI7.7
3,11,20-triketo 17 ° C -hydroxy 21-acetoxy pregnane, F: 2310ploj D = + 820 (c = 1%, acetone).
Example IX - SEPARATION OF 311,20-TRICETO 17 OC, 21-DIHYDROXY PREGNANE AND CORTISONE ACETATE.
43 g of residue resulting from the evaporation of natural liquor
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tisones which contain 3,11-20-triketo 17 p1,21-dihydroxy pregnane are acetylated by treatment with acetic anhydride and pyridine. The reaction product in the form of a yellow gum is dissolved at the boiling point in 300 cm3 of methanol containing 1% acetic acid. Then added a boiling solution of 26 g of reagent B (excess of 10%) in 200 cm3 of methanol at 1% acetic acid and brought to reflux in a water bath. Combination B crystallizes quickly. We give up at rest one night. The crystallized mass is filtered off, washed with methanol and then with normal hydrochloric acid to remove the excess of reagent B, then with water and dried at 120.
45.8 g (68.5%) of combination B are obtained, melting around 200-210.
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This mixture of combinations B (45.8 g) is taken up in 200 cm3 of dichloroethane. It is warmed in a water bath for a few minutes then cooled to room temperature and the insoluble material is filtered off. The operation is repeated twice with 200 cm3 and then 50 cm3 of dichloroethane. After drying, 26 g of combination B of 3,11,20-triketo 17O -hydroxy 21-acetoxy pregnane are obtained, ie 56.5% of the mixture, F. 210.
The extraction dichloroethanes are combined and vacuum distilled to dryness. 18.5 (40%) of combination B of the crystallizing cortisone acetate is obtained by addition of aqueous acetic acid.
By cleavage of the two combinations B according to the preceding examples, one recovers, on the one hand, the acetate of cortisone and, on the other hand the 3,11,20-triketo 17O-hydroxy 21-acetoxy pregnane.
The benzilic hydrazones of deoxycorticosterone acetate are prepared in the same way: F = 143; norcholestenolone: flakes F: 255; androstanolone benzoate: microcrystalline F = 155, equilin F = 182 (soluble in methanol); equilenin F = 170 (soluble in methanol).
Of course, the invention is not limited to the embodiments described, which have been cited only by way of example.
CLAIMS
1. Benzilic hydrazones of ketosteroids of the formula:
EMI8.1
\ G6H5 G = N-NH-OC-C R 'OH CH- R.9 5 in which / C = is a cetosteroid radical, and in particular: - benzilic hydrazone of estrone: - benzilic hydrazones of esters of cortisone; - benzilic hydrazones of deoxycorticosterone esters; - benzilic hydrazone of cis-testosterone; - benzilic hydrazones of the 21-esters of 3,11.20-triketo-17Ó, 21-dihydroxy pregnane; - nor-cholestenolone benzilic hydrazone.
2. Process for the purification and isolation of ketosteroids from mixtures containing them, using the above hydrazones, characterized in that it consists in reacting benzilic hydrazide with a solution of said mixture in a suitable solvent, thereby selectively precipitating benzilic hydrazone from a ketosteroid, to separate this benzilic hydrazone from the benzilic hydrazones which have remained dissolved and from the other components of the mixture, and to regenerate the ketosteroid from this hydrazone.