BE1021938B1 - Composition immunogene pour une utilisation en therapie - Google Patents

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BE1021938B1
BE1021938B1 BE2014/0416A BE201400416A BE1021938B1 BE 1021938 B1 BE1021938 B1 BE 1021938B1 BE 2014/0416 A BE2014/0416 A BE 2014/0416A BE 201400416 A BE201400416 A BE 201400416A BE 1021938 B1 BE1021938 B1 BE 1021938B1
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aureus
clfa
protein
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Ralph Leon Biemans
Dominique Boutriau
Philippe Denoel
Pierre Duvivier
Carine Goraj
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Glaxosmithkline Biologicals S.A.
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Abstract

La demande décrit un procédé d'immunisation contre une infection par Staphylococcus aureus comprenant une étape d'administration à un patient humain d'une seule dose d'une composition immunogène comprenant un saccharide capsulaire de Staphylococcus aureus Type 5 conjugué à une protéine de transport pour former un conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 5, où le conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 est administré à une dose de saccharide de 3 à 50 µg.

Description

COMPOSITION IMMUNOGENE POUR UNE UTILISATION EN THERAPIE Domaine technique
La présente invention concerne le domaine des compositions immunogènes et des vaccins contre les staphylocoques, la fabrication et l'utilisation de telles compositions en médecine. Plus particulièrement, elle concerne l'utilisation de conjugués constitués d'un saccharide capsulaire issu de S. aureus, conjugué à une protéine de transport. De telles conjugués peuvent être combinés avec des antigènes protéiques staphylococciques choisis pour former des compositions multivalentes.
Contexte
Staphylococcus aureus (S. aureus) est une bactérie à Gram positif commensale qui colonise les narines, les cavités axillaires, le pharynx, et d'autres surfaces mucosales et cutanées d'environ 30 % des sujets humains. Il est estimé que S. aureus est responsable de 20 à 25 % de toutes les infections nosocomiales (Wisplinghoff et al. Clin Infect. Dis. 2004; 39; 309-317), entraînant un séjour à l'hôpital trois fois plus long et un risque 5 fois supérieur de décès à l'hôpital pour les patients infectés comparativement aux patients ne présentant pas de telles infections (Noskin et al. Arch. Intern. Med. 2005; 165; 1756-1761). Les infections par S. aureus peuvent être associées à des taux de mortalité à l'hôpital s'élevant jusqu'à 25 %. Du point de vue historique, S. aureus a été associé principalement à des infections nosocomiales. La gravité de telles infections a augmenté avec l'augmentation récente très importante de l'infection par S. aureus associée à une résistance aux antibiotiques.
Staphylococcus aureus est la cause la plus courante des infections nosocomiales avec une morbidité et une mortalité significatives (Romero-Vivas et al 1995, Infect. Dis. 21; 1417). Il est la cause de certains cas d'ostéomyélite, d'endocardite, d'arthrite septique, de pneumonie, d'abcès et de syndrome de choc toxique. L'immunothérapie passive impliquant l'administration d'antisérums polyclonaux contre des antigènes staphylococciques a été étudiée (WO 00/15238, WO 00/12132) ainsi que l'immunothérapie utilisant un anticorps monoclonal contre l'acide lipotéichoïque (WO 98/57994). Toutefois jusqu'à présent, il n'a été attribué aucune licence pour une utilisation. Plusieurs candidats d'immunothérapie ne sont pas parvenus à afficher une efficacité chez les êtres humains. Ceux-ci comprennent : Altastaph (Nabi Biopharmaceuticals)1' contenant les anticorps CP5 et CP8 purifiés à partir de sujets vaccinés avec StaphVAX™ (vaccin d'étude développé et commercialisé par Nabi Biopharmaceuticals, Rockville, MD, Etats-Unis) ; Veronate (Inhibitex), des anticorps polyclonaux ciblant le facteur d'agglutination A de S. aureus (ClfA) et la protéine d'adhérence de S. epidermidis SdrG ; Aurexis (Tefibazumab, Inhibitex), anticorps monoclonaux ciblant le ClfA ; Aurograb (NeuTec Pharma), anticorps à chaîne unique contre un transporteur à cassette de liaison de l'ATP ; et Pagibaximab (Biosynexus), un anticorps monoclonal anti-acide lipotéichoïque (Dejonge et al. J. Paediatrics 2007; 151; 260-265, Rupp et al. Antimicrob. Agents Chemother. 2007; 51; 4249-4254) .
Une variante d'approche serait l'utilisation d'une vaccination active pour générer une réponse immunitaire polyclonale contre les staphylocoques. Une approche rapportée dans le document WO 03/61558 utilise des conjugués de polysaccharides capsulaires de S. aureus Type 5 et Type 8 conjugués à 1'exoprotéine A de Pseudomonas (StaphVAX - Nabi Biopharmaceuticals) . Une autre approche a utilisé la protéine
IsdB de S. aureus (V710 - Merck & Co) mais n'est pas parvenue à démontrer une efficacité (Fowler et al. 2013; JAMA 309; 1368-1378) .
Il existe de nombreux problèmes associés au développement d'un vaccin contre une infection par S. aureùs. L'échec des vaccins reposant sur un seul composant (polysaccharide capsulaire ou protéine IsdB) suggère qu'un vaccin plus complexe contenant des composants multiples peut être requis pour induire une immunité protectrice. Toutefois, la combinaison de différents antigènes dans une composition immunogène peut mener à des interférences survenant dans la composition (Skurnik et al. (2010) J. Clin. Invest. 120; 3220-3233). L'identification de composants à combiner dans une composition multivalente n'est donc pas simple. Il demeure un besoin de développer un vaccin efficace contre une infection staphylococcique, spécialement au vu de l'augmentation de la fréquence des souches polypharmacorésistantes.
Dans le cas d'une immunisation contre une infection staphylococcique nosocomiale, l'immunisation peut souvent prendre place seulement brièvement avant l'hospitalisation ou une intervention chirurgicale ou l'installation d'un cathéter à demeure. Par conséquent, il serait avantageux d'obtenir des taux élevés d'immunité avec une seule immunisation. L'utilisation de doses inférieures de conjugué présente également des avantages d'efficacité relative de production de vaccin et de bénéfices économiques associés.
Par conséquent, il est proposé un procédé d'immunisation contre une infection par Staphylococcus aureus comprenant une étape d'administration à un patient humain d'une seule dose d'une composition immunogène comprenant un saccharide capsulaire de Staphylococcus aureus Type 5 conjugué à une protéine de transport pour former un conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 5, où le conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 est administré à une dose de saccharide de 3 à 50 pg, 5 à 25 pg, 3 à 20 pg, 3 à 12 pg, 5 à 10 pg, 7 à 20 pg, 7 à 15 pg ou 8 à 12 pg.
Dans un deuxième aspect de l'invention, il est proposé une composition immunogène comprenant un saccharide capsulaire de Staphylococcus aureus Type 5 conjugué à une protéine de transport pour former un conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 5, où le conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 est administré à une dose de saccharide de 3 à 50 pg, 5 à 25 pg, 3 à 20 pg, 3 à 12 pg, 5 à 10 pg, 7 à 20 pg, 7 à 15 pg ou 8 à 12 pg, pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par Staphylococcus aureus où il est administré à un patient humain une seule dose de la composition immunogène.
Dans un troisième aspect de l'invention, il est proposé une composition immunogène comprenant un saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 conjugué à une protéine de transport, un saccharide capsulaire de 5. aureus Type 8 conjugué à une protéine de transport, une protéine ClfA ou l'un de ses fragments et une anatoxine alpha.
Dans un quatrième aspect de l'invention, il est proposé un vaccin contre un saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 conjugué à une protéine de transport, un saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 conjugué à une protéine de transport, une protéine ClfA ou l'un de ses fragments et une anatoxine alpha et un excipient pharmaceutiquement acceptable.
Dans un cinquième aspect de l'invention, il est proposé un procédé de fabrication de la composition immunogène ou du vaccin de l'invention comprenant les étapes de a) conjugaison d'un saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 à une protéine de transport pour former un conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 5, b) conjugaison d'un saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 à une protéine de transport pour former un conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 8, et c) combinaison du conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 5, du conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 8, d'une protéine ClfA ou de l'un de ses fragments et d'une anatoxine alpha pour former la composition immunogène.
Description des figures
Figure 1. Pourcentage des sujets expérimentant une douleur après 1 ou 2 doses du vaccin AC. Dans chaque groupe de formulation, les trois premières colonnes fournissent le % de sujets expérimentant une douleur après une seule dose avec la première colonne représentant tous les rapports de douleur, la deuxième colonne représentant une douleur supérieure ou égale au grade 2 et la troisième colonne représentant une douleur de grade 3. Les 4ème, 5ème et 6ème colonnes présentent les mêmes informations après la seconde dose.
Figure 2. Pourcentage des sujets expérimentant une rougeur après 1 ou 2 doses du vaccin 4C. Dans chaque groupe de formulation, les trois premières colonnes fournissent le % de sujets expérimentant une rougeur après une seule dose avec la première colonne représentant tous les rapports de rougeur, la deuxième colonne représentant plus de 50 mm de rougeur et la troisième colonne représentant plus de 100 mm de rougeur. Les 4 ème t 5ème et 6ème colonnes présentent les mêmes informations après la seconde dose.
Figure 3. Pourcentage des sujets expérimentant un gonflement après 1 ou 2 doses du vaccin AC. Dans chaque groupe de formulation, les trois premières colonnes fournissent le % de sujets expérimentant un gonflement après une seule dose avec la première colonne représentant tous les rapports de gonflement, la deuxième colonne représentant plus de 50 mm de gonflement et la troisième colonne représentant plus de 100 mm de gonflement. Les 4ème, 5ème et 6ème colonnes présentent les mêmes informations après la seconde dose.
Figure 4. Résultats d'immunogénicité pour des anticorps dirigés contre le polysaccharide capsulaire de S. aureus Type 5. Les résultats de GMC d'un test Luminex détectant des anticorps dirigés contre le polysaccharide capsulaire de Type 5 à divers points du temps après les première et seconde immunisations sont présentés. Les points du temps choisis sont le jour 0 avant l'immunisation, le jour 7 après une immunisation, le jour 14 après une immunisation, le jour 30 après une immunisation, le jour 7 après deux immunisations (correspondant au jour 37 sur le diagramme), le jour 14 après deux immunisations (correspondant au jour 44 sur le diagramme), et le jour 30 après deux immunisations (correspondant au jour 60 sur le diagramme). Pour chaque point du temps, les résultats sont présentés dans l'ordre (de gauche à droite) pour 5/10, 5/10AS, 10/30, 10/30AS et du sérum physiologique.
Figure 5. Résultats d'immunogénicité pour des anticorps dirigés contre le polysaccharide capsulaire de S. aureus Type 8. Les résultats de GMC d'un test Luminex détectant des anticorps dirigés contre le polysaccharide capsulaire de Type 8 à divers points du temps après les première et seconde immunisations sont présentés. Les points du temps choisis sont le jour 0 avant l'immunisation, le jour 7 après une immunisation, le jour 14 après une immunisation, le jour 30 après une immunisation, le jour 7 après deux immunisations (correspondant au jour 37 sur le diagramme), le jour 14 après deux immunisations (correspondant au jour 44 sur le diagramme), et le jour 30 après deux immunisations (correspondant au jour 60 sur le diagramme). Pour chaque point du temps, les résultats sont présentés dans l'ordre (de gauche à droite) pour 5/10, 5/10AS, 10/30, 10/30AS et du sérum physiologique.
Figure 6. Résultats d'immunogénicité pour des anticorps dirigés contre l'anatoxine alpha de S. aureus. Les résultats de GMC d'un test Luminex détectant des anticorps dirigés contre l'anatoxine alpha à divers points du temps après les première et seconde immunisations sont présentés. Les points du temps choisis sont le jour 0 avant l'immunisation, le jour 7 après une immunisation, le jour 14 après une immunisation, le jour 30 après une immunisation, le jour 7 après deux immunisations (correspondant au jour 37 sur le diagramme), le jour 14 après deux immunisations (correspondant au jour 44 sur le diagramme) , et le jour 30 après deux immunisations (correspondant au jour 60 sur le diagramme). Pour chaque point du temps, les résultats sont présentés dans l'ordre (de gauche à droite) pour 5/10, 5/10AS, 10/30, 10/30AS et du sérum physiologique.
Figure 7. Résultats d'immunogénicité pour des anticorps dirigés contre le ClfA de S. aureus. Les résultats de GMC d'un test ELISA détectant des anticorps dirigés contre le ClfA à divers points du temps après les première et seconde immunisations sont présentés. Les points du temps choisis sont le jour 0 avant l'immunisation, le jour 7 après une immunisation, le jour 14 après une immunisation, le jour 30 après une immunisation, le jour 7 après deux immunisations (correspondant au jour 37 sur le diagramme), le jour 14 après deux immunisations (correspondant au jour 44 sur le diagramme), et le jour 30 après deux immunisations (correspondant au jour 60 sur le diagramme). Pour chaque point du temps, les résultats sont présentés dans l'ordre (de gauche à droite) pour 5/10, 5/10AS, 10/30, 10/30AS et du sérum physiologique.
Figure 8. Résultats d'immunogénicité pour le polysaccharide capsulaire de S. aureus Type 5 (panel A), le polysaccharide capsulaire de S. aureus Type 8 (panel B), l'anatoxine alpha (panel C) et le ClfA (panel D) sur une période de temps plus longue du jour 0 au jour 540, après 1, 2 ou 3 immunisations.
Description détaillée
La présente invention décrit un procédé d'immunisation contre une infection par Staphylococcus aureus comprenant une étape d'administration à un patient humain d'une seule dose d'une composition immunogène comprenant un saccharide capsulaire de Staphylococcus aureus Type 5 conjugué à une protéine de transport pour former un conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 5, où le conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 est administré à une dose de saccharide de 3 à 50 pg, 3 à 25 pg, 3 à 20 pg, 3 à 12 pg, 5 à 50 pg, 5 à 25 pg, 5 à 20 pg, 5 à 12 pg, 5 à 10 pg, 7 à 20 pg, 7 à 15 pg ou 8 à 12 pg.
Dans un mode de réalisation, la composition immunogène comprend en outre un saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 conjugué à une protéine de transport pour former un conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 8, où le conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 est administré à une dose de saccharide de 3 à 50 pg, 3 à 25 pg, 3 à 20 pg, 3 à 12 pg, 5 à 50 pg, 5 à 25 pg, 5 à 20 pg, 5 à 12 pg, 5 à 10 pg, 7 à 20 pg, 7 à 15 pg ou 8 à 12 pg.
Dans un mode de réalisation, la même dose de saccharide de conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 et de conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 est présente dans la composition immunogène ; par exemple une dose de 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 pg de saccharide des deux conjugués de Type 5 et de Type 8.
La plupart des souches de S. aureus contiennent des polysaccharides soit de Type 5 soit de Type 8. Approximativement 60 % des souches humaines sont de Type 8 et approximativement 30 % sont de Type 5. Jones Carbohydrate Research 340, 1097-1106 (2005) a utilisé une spectroscopie par RMN pour identifier les structures des polysaccharides capsulaires comme étant :
Type 5 —4 ) -ß-D-ManNAcA- ( 1-4 ) -α-L-FucNAc ( 30Ac ) - ( 1-3 ) -ß-D-FucNAc- ( 1-Type 8 -3)-ß-D-ManNAcA(40Ac)-(1-3)-a-L-FucNAc(1-3)-a-D-FucNAc(1-
Les polysaccharides peuvent être extraits à partir de la souche appropriée de S. aureus en utilisant des procédés bien connus de l'homme du métier, par exemple tels que décrits dans les documents US 6 294 177, WO 11/41003, WO 11/51917 ou Infection and Immunity (1990) 58(7); 2367. Par exemple, ATCC 12 902 est une souche de S. aureus Type 5 et ATCC 12605 est une souche de S. aureus Type 8.
Les polysaccharides sont de taille native ou en variante ils peuvent être réduits en taille, par exemple par microfluidisation, irradiation ultrasonique ou par traitement chimique comme une exposition à un pH de 5,0 à 3,0. L'invention couvre également des oligosaccharides dérivés des polysaccharides de Type 5 et 8 issus de S. aureus. Dans un mode de réalisation, le saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 a une masse moléculaire supérieure à 25 kDa, 30 kDa, 40 kDa, 50 kDa, 60 kDa, 70 kDa, 80 kDa ou 90 kDa ou entre 25 et 125 kDa, 90 et 125 kDa, 30 et 100 kDa, 35 et 75 kDa ou 40 et 70 kDa. Dans un mode de réalisation, le saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 a une masse moléculaire supérieure à 25 kDa, 30 kDa, 40 kDa, 50 kDa, 60 kDa, 70 kDa, 80 kDa ou 90 kDa ou entre 25 et 125 kDa, 90 et 125 kDa, 30 et 100 kDa, 35 et 75 kDa ou 40 et 70 kDa.
Dans un mode de réalisation, la protéine de transport à laquelle le saccharide capsulaire de Type 5 et/ou de Type 8 est conjugué est choisie dans le groupe constitué de l'anatoxine tétanique, l'anatoxine diphtérique, CRM197, l'anatoxine alpha, le ClfA et 1'exoprotéine A de Pseudomonas aeruginosa.
Le polysaccharide capsulaire de Type 5 et/ou 8 ou les oligosaccharides inclus dans la composition immunogène de l'invention sont O-acétylés. Dans un mode de réalisation, le degré d'O-acétylation du polysaccharide capsulaire de Type 5 ou de l'oligosaccharide est de 50 à 100 %, 60 à 100 %, 70 à 100 %, 80 à 100 %, 90 à 100 %, 50 à 90 %, 60 à 90 %, 70 à 90 %, 70 à 80 % ou 80 a 90 %. Dans un mode de réalisation, le degré d'O-acétylation du polysaccharide capsulaire de Type 8 ou de l'oligosaccharide est de 10 à 100 %, 20 à 100 %, 30 à 100 %, 40 à 100 %, 50 à 100 %, 60 à 100 %, 70 à 100 %, 80 à 100 %, 90 à 100 %, 50 à 90 %, 60 à 90 %, 70 à 90 %, 70 à 80 % ou 80 à 90 %. Dans un mode de réalisation, le degré d'O- acétylation des polysaccharides capsulaires de Type 5 et de type 8 ou des oligosaccharides est de 10 à 100 %, 20 à 100 %, 30 à 100 %, 40 à 100 %, 50 à 100 %, 60 à 100 %, 70 à 100 %, 80 à 100 %, 90 à 100 %, 50 à 90 %, 60 à 90 %, 70 à 90 %, 70 à 80 % ou 80 à 90 %. Dans un mode de réalisation, les polysaccharides capsulaires de Type 5 et/ou de Type 8 sont 0-acétylés à 80 à 100 % ou 100 %.
Le degré d'O-acétylation du polysaccharide ou de l'oligosaccharide peut être déterminé par tout procédé connu dans l'art, par exemple, par RMN du proton (Lemercinier and Jones 1996, Carbohydrate Research 296; 83-96, Jones and Lemercinier 2002, J Pharmaceutical and Biomédical analysis 30; 1233-1247, WO 05/033148 ou WO 00/56357). Un autre procédé couramment utilisé est celui décrit par Hestrin (1949) J. Biol. Chem. 180; 249-261.
Les groupes O-acétyle peuvent être éliminés par hydrolyse, par exemple par traitement avec une base comme une hydrazine anhydre (Konadu et al. 1994; Infect. Immun. 62; 5048-5054) ou le traitement avec du NaOH 0,1 N pendant 1 à 8 heures. Afin de maintenir des taux élevés d'O-acétylation sur le polysaccharide de Type 5 et/ou 8 ou l'oligosaccharide, les traitements qui mèneront à une hydrolyse des groupes 0-acétyle sont minimisés. Par exemple, les traitements a des extrêmes de pH sont minimisés.
Parmi les problèmes associés à l'utilisation de polysaccharides dans une vaccination, il y a le fait que les polysaccharides en soi sont des immunogènes médiocres. Les stratégies, qui ont été conçues pour surmonter ce manque d'immunogénicité, comprennent la liaison du polysaccharide à de gros supports protéiques, qui fournissent une aide des cellules T de proximité. Dans un mode de réalisation, les polysaccharides utilisés dans l'invention sont liés à un support protéique, qui fournit une aide des cellules T de proximité. Les exemples de ces supports qui peuvent être utilisés pour le couplage à des immunogènes polysaccharidiques ou oligosaccharidiques comprennent les anatoxines diphtériques et tétaniques (DT, DT Crml97 et TT), 1'hémocyanine de patelle (KLH), 1'exoprotéine A de Pseudomonas aeruginosa (rEPA) et le dérivé protéique purifié de la tuberculine (PPD), la protéine D de Haemophilus influenzae, la pneumolysine ou des fragments de l'un quelconque des supports ci-dessus. Les fragments appropriés pour une utilisation comprennent des fragments englobant des épitopes T auxiliaires. En particulier, un fragment de la protéine D contiendra éventuellement le 1/3 N-terminal de la protéine. La protéine D est une protéine de liaison des IgD de Haemophilus influenzae (EP 0 594 610 Bl).
Une nouvelle protéine de transport qui serait particulièrement avantageuse pour une utilisation dans le contexte d'un vaccin antistaphylococcique est l'anatoxine alpha staphylococcique. La forme native peut être conjuguée à un polysaccharide puisque le procédé de conjugaison réduit la toxicité. Eventuellement, une toxine alpha génétiquement détoxifiée comme les variants His35Leu ou His35Arg est utilisée en tant que support puisque la toxicité résiduelle est inférieure. En variante, la toxine alpha est chimiquement détoxifiée par traitement avec un agent de réticulation, le formaldéhyde ou le glutaraldéhyde. Le procédé de conjugaison est une variante de traitement chimique qui détoxifie la toxine alpha. Une toxine alpha génétiquement détoxifiée est éventuellement chimiquement détoxifiée, éventuellement par traitement avec un agent de réticulation, le formaldéhyde ou le glutaraldéhyde pour encore réduire la toxicité.
Les polysaccharides peuvent être liés à une ou plusieurs protéines de transport par tout procédé connu (par exemple, par Likhite, brevet US 4 372 945 par Armor et al., brevet US 4 474 757, Anderson et al. WO 10/151544, Berti et al. WO 11/138636, et Jennings et al., brevet US 4 356 170). Eventuellement, il est réalisé une chimie de conjugaison à du CDAP (voir le document WO 95/08348, WO 07/113222).
Dans la conjugaison à du CDAP, le réactif de cyanylation tétrafluoroborate de 1-cyano-diméthylaminopyridinium (CDAP) est éventuellement utilisé pour la synthèse de conjugués polysaccharide-protéine. La réaction de cyanylation peut être réalisée dans des conditions relativement douces, ce qui évite l'hydrolyse des polysaccharides sensibles aux alcalins. Cette synthèse permet un couplage direct à une protéine de transport.
Le polysaccharide peut être solubilisé dans de l'eau ou une solution saline. Le CDAP peut être dissous dans de 1'acétonitrile et ajouté immédiatement à la solution du polysaccharide. Le CDAP réagit avec les groupes hydroxyle du polysaccharide pour former un ester cyanate. Après l'étape d'activation, la protéine de transport est ajoutée. Les groupes amino de la lysine réagissent avec le polysaccharide activé pour former une liaison covalente iso-urée. Après la réaction de couplage, un gros excès de glycine est ensuite ajouté pour désactiver les groupes fonctionnels activés résiduels. Le produit est ensuite passé à travers une colonne de perméation de gel pour éliminer la protéine de transport qui n'a pas réagi et les réactifs résiduels.
Dans un mode de réalisation, le saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 et/ou le saccharide capsulaire de S. aureus
Type 8 est directement conjugué à la protéine de transport. Toutefois, l'invention englobe également des conjugués où les saccharides capsulaires de Type 5 et/ou 8 sont conjugués par l'intermédiaire d'un lieur, par exemple un lieur ADH.
Dans un mode de réalisation, le saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 et/ou le saccharide capsulaire de S. aureus
Type 8 est conjugué en utilisant un réactif de cyanylation, par exemple le CDAP. En variante, d'autres procédés de conjugaison comme une amination réductrice ou la chimie des carbodiimides (par exemple, l'EDAC) peuvent être utilisés.
Dans un mode de réalisation, le rapport du polysaccharide sur la protéine dans le conjugué du saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 se situe entre 1/5 et 5/1 (p/p) , 1/1 et 1/5 (p/p) , 1/2 et 1/5 (p/p), 1/3 et 1/5 (p/p) 1/2 et 2/1 (p/p) ou 1/1 et 1/2 (p/p) . Dans un mode de réalisation, le rapport du polysaccharide sur la protéine dans le conjugué du saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 se situe entre 1/5 et 5/1 (ρ/ρ) , 1/1 et 1/5 (p/p) , 1/2 et 1/5 (p/p) , 1/3 et 1/5 (p/p) 1/2 et 2/1 (p/p) ou 1/1 et 1/2 (p/p).
Le facteur d'agglutination A (ClfA) a été identifié comme une protéine de liaison au fibrinogène de S. aureus (US 6 008 341) et il a été identifié comme une protéine de transport potentielle pour les polysaccharides qui pourraient être utilisés pour immuniser contre une infection staphylococcique (WO 04/80490). Le ClfA est une protéine localisée à la surface et est un facteur de virulence important en raison de sa propriété de liaison au fibrinogène et de contribution à l'adhérence de S. aureus. Le ClfA contient une région de liaison au fibrinogène. Cette région, connue comme le domaine A est localisée vers l'extrémité N-terminale du ClfA et comprend trois sous-domaines repliés séparément, connus sous le nom de NI, N2 et N3. Le domaine A est suivi d'une région de répétition de sérine-aspartate et d'une région couvrant la paroi et la membrane cellulaire qui contient le motif LPXTG pour l'ancrage favorisé par la sortase à la paroi cellulaire. Le ClfA se lie à l'extrémité C-terminale de la chaîne γ du fibrinogène, et de cette manière est capable d'induire l'agglutination des bactéries dans une solution de fibrinogène (McDevitt et al. (1997) Eur. J. Biochem. 247; 416-424). Les résidus d'acides aminés 221 à 559 du ClfA correspondent à la région N2-N3 qui est le produit tronqué le plus petit présenté comme conservant la liaison au fibrinogène. Les fragments contenant les acides aminés 221 à 559 du ClfA sont les fragments préférés. Les résidus d'acides aminés 532 à 538 correspondent à la région peptidique de verrouillage du ClfA. Chaque sous-domaine comprend neuf brins β qui forment un nouveau repliement de type IgG. Le site de liaison peptidique de la chaîne γ du fibrinogène dans le ClfA est localisé dans un sillon hydrophobe à la jonction entre N2 et N3. Récemment, les acides aminés P336 et Y338 du ClfA ont été reconnus comme des sites de liaison au fibrinogène, dont la mutation a mené à la perte de liaison au fibrinogène (Josefsson et al. 2008, PLOS One volume 3, Issue 5, page 1-7). Les SEQ ID NO : 8 à 12 contiennent des mutations ponctuelles au niveau des positions 336 et 338. La perte de la liaison au fibrinogène dans ces variants a mené à une augmentation de la capacité à protéger contre une mort septique chez des souris immunisées, menant à la conclusion que le potentiel vaccinal du ClfA recombinant est amélioré par élimination de sa capacité à lier le fibrinogène (WO 09/95453) . Dans un mode de réalisation, la composition immunogène comprend en outre une protéine ClfA ou l'un de ses fragments, éventuellement recombinante, isolée ou purifiée.
Dans un mode de réalisation, la protéine ClfA est au moins identique à 80 %, 85 %, 90 %, 93 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % avec la séquence polypeptidique de SEQ ID NO : 3, 4, 5, 6 ou 7 ou 8 à 12 sur leur longueur entière. « L'identité », comme il est connu dans l'art, est une relation entre deux séquences polypeptidiques ou plus ou deux séquences polynucléotidiques ou plus, comme cela peut être le cas, mesurée par comparaison des séquences. Dans l'art, « identité » signifie également le degré de parenté de séquence entre des séquences polypeptidiques ou polynucléotidiques, comme cela peut être le cas, déterminé par la correspondance entre les chaînes de telles séquences. « L'identité » peut être facilement calculée par des procédés connus, y compris, mais sans y être limités, ceux décrits dans (Computational Molecular Biology, Lesk, A.M., ed., Oxford University Press, New York, 1988 ; Biocomputing: Informaties and Genome Projects, Smith, D.W., ed. , Academie Press, New York, 1993 ; Computer Analysis of Sequence Data, Part I,
Griffin, A.M., and Griffin, H.G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994 ; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heine, G., Academie Press, 1987 ; et Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991 ; et Carillo, H., and Lipman, D., SIAM J. Applied Math., 48: 1073 (1988). Les procédés pour déterminer l'identité sont conçus pour donner la plus grande
correspondance entre les séquences testées. En outre, les procédés pour déterminer l'identité sont codifiés dans des programmes informatiques disponibles au public. Les procédés des programmes informatiques pour déterminer 1'identité entre deux séquences comprennent, mais sans y être limités, le programme GAP dans le progiciel GCG (Devereux, J., et al., Nucleic Acids Research 12(1): 387 (1984)), BLASTP, BLASTN (Altschul, S.F. et al., J. Molec. Biol. 215: 403-410 (1990), et FASTA( Pearson and Lipman Proc. Natl. Acad. Sei. USA 85/ 2444-2448 (1988). La famille des programmes BLAST est
disponible au public auprès du NCBI et d'autres sources (BLAST Manual, Altschul, S., et al., NCBI NLM NIH Bethesda, MD 20894 ; Altschul, S., et al., J. Mol. Biol. 215: 403-410 (1990). L'algorithme bien connu de Smith Waterman peut être également utilisé pour déterminer l'identité.
Les paramètres pour la comparaison de séquences polypeptidiques comprennent les suivants :
Algorithme : Needleman and Wunsch, J. Mol Biol. 48: 443- 453 (1970)
Matrice de comparaison : BLOSSUM62 de Henikoff et
Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 89: 10915-10919 (1992) Pénalité de brèche : 8 Pénalité de longueur de brèche : 2
Un programme utile avec ces paramètres est disponible au public sous le nom de programme « gap » auprès de Genetics Computer Group, Madison WI. Les paramètres susmentionnés sont les paramètres par défaut pour des comparaisons de peptides (sans aucune pénalité pour les brèches des extrémités).
Les paramètres pour la comparaison de polynucléotides comprennent les suivants :
Algorithme : Needleman and Wunsch, J. Mol Biol. 48: 443-453 (1970)
Matrice de comparaison : correspondances = +10, mésappariement = 0 Pénalité de brèche : 50 Pénalité de longueur de brèche : 3
Disponible en tant que : programme « gap » auprès de
Genetics Computer Group, Madison WI. Ce sont les paramètres par défaut pour des comparaisons d'acides nucléiques.
Lorsqu'une protéine est mentionnée spécifiquement ici, il s'agit éventuellement d'une référence à une protéine pleine longueur native ou recombinante ou éventuellement à une protéine mature dans laquelle toute séquence signal a été éliminée. La protéine peut être isolée directement à partir de la souche staphylococcique ou produite par des techniques d'ADN recombinant. Des fragments immunogènes de la protéine peuvent être incorporés dans la composition immunogène de l'invention. Ce sont des fragments comprenant au moins 10 acides aminés, au moins 20 acides aminés, au moins 30 acides aminés, au moins 40 acides aminés, au moins 50 acides aminés ou au moins 100 acides aminés pris de manière contiguë à partir de la séquence d'acides aminés de la protéine. En outre, de tels fragments immunogènes sont généralement immunologiquement réactifs avec des anticorps générés contre les protéines staphylococciques ou avec des anticorps générés par infection d'un hôte mammifère avec des staphylocoques ou ils contiennent des épitopes de cellules T. Dans un mode de réalisation, les fragments immunogènes comprennent également des fragments qui, lorsqu'ils sont administrés à une dose efficace, (soit seuls soit sous la forme d'un haptène lié à un support), déclenchent une réponse immunitaire protectrice contre une infection staphylococcique, éventuellement ils sont protecteurs contre une infection par S. aureus et/ou S. epidermidis. Un tel fragment immunogène comprend, par exemple, la protéine à laquelle il manque une séquence leader N-terminale, et/ou un domaine transmembranaire et/ou un domaine d'ancrage C-terminal. Pour le ClfA, il manque aux fragments préférés le domaine de répétition SD vers l'extrémité C-terminale du ClfA (par exemple en utilisant un fragment dans lequel les acides aminés 555 à 927, 556 à 927, 557 à 927, 558 à 927, 559 à 927 ou 560 à 927 sont délétés). Pour le ClfA et l'anatoxine alpha, les fragments préférés ont le peptide signal éliminé pour former la protéine mature, éventuellement avec un résidu initial de méthionine à l'extrémité N-terminale pour permettre l'expression recombinante.
Dans un mode de réalisation, les compositions immunogènes de 1'invention peuvent contenir des protéines de fusion ou des fragments du ClfA. La protéine de fusion contient éventuellement des séquences hétérologues comme un fournisseur d'épitopes de cellules T ou des marqueurs de purification, par exemple : la ß-galactosidase, la glutathion-S-transférase, les protéines fluorescentes vertes (GFP), les marqueurs épitopiques tels que FLAG, le marqueur myc, une poly-histidine, ou des protéines de la surface virale telles que 1 ' hémagglutinine du virus de la grippe, ou des protéines bactériennes telles que l'anatoxine tétanique, l'anatoxine diphtérique, CRM197. La protéine de fusion est présente dans la composition immunogène de l'invention sous la forme d'une protéine libre ou elle peut être une protéine de transport liée à un saccharide.
Dans un mode de réalisation, l'invention propose également un fragment immunogène de la protéine ClfA, c'est-à-dire une partie contiguë du polypeptide du ClfA qui possède la même ou pratiquement la même activité immunogène que le polypeptide comprenant la séquence polypeptidique de SEQ ID NO : 3. C'est-à-dire que le fragment (si nécessaire lorsqu'il est couplé à un support) est capable d'induire une réponse immunitaire qui reconnaît le polypeptide du ClfA. Un tel fragment immunogène comprend, par exemple, le polypeptide du ClfA auquel il manque une séquence leader N-terminale, et/ou le domaine de répétition SD vers l'extrémité C-terminale du ClfA. Dans un aspect préféré, le fragment immunogène du ClfA comprend pratiquement la totalité du domaine de liaison au fibrinogène et présente au moins 85 % d'identité, de préférence au moins 90 % d'identité, de manière davantage préférée au moins 95 % d'identité, de manière préférée entre toutes 97 à 99 % d'identité ou 100 % d'identité, avec la séquence d'acides aminés de l'une quelconque de SEQ ID NO : 4 à 12 sur la longueur entière de ladite séquence.
Les fragments peuvent être « indépendants » ou compris au sein d'un polypeptide plus grand dont ils forment une partie ou une région, de manière préférée entre toutes sous la forme d'une région continue simple dans un polypeptide plus grand simple. D'autres fragments du ClfA comprennent un polypeptide isolé comprenant une séquence d'acides aminés comportant au moins 15, 20, 30, 40, 50 ou 100 acides aminés contigus issus de la séquence d'acides aminés de SEQ ID NO : 3.
Dans un mode de réalisation, la protéine ClfA est un fragment de ClfA comprenant le domaine NI, le domaine N2, le domaine N3, les domaines NI et N2, les domaines N2 et N3 ou les domaines Ni et N2 et N3. Eventuellement, le fragment du ClfA comprend les domaines N2 et N3 et a une séquence d'acides aminés au moins identique à 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % identique à la séquence de SEQ ID NO : 6, 7, 11 ou 12.
Dans un mode de réalisation, la protéine ClfA ou l'un de ses fragments contient une substitution, une délétion ou une insertion d'acide aminé qui réduit ou abolit la capacité du ClfA à se lier au fibrinogène. Dans un mode de réalisation, la capacité du ClfA à se lier au fibrinogène est réduite d'au moins 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95 ou 99 %. Une telle mutation se situe généralement dans la région de liaison au fibrinogène à l'extrémité N-terminale du ClfA. La mutation est éventuellement une substitution d'acide aminé au niveau d'au moins un, deux, trois ou quatre des acides aminés Ala254, Tyr256, Pro336, Tyr338, Ile387, Lys389, Tyr474, Glu526 ou Val527. Dans un mode de réalisation, l'acide aminé Pro336 du ClfA est muté. Dans un mode de réalisation, l'acide aminé Tyr338 du ClfA est muté. Dans un mode de réalisation, à la fois Pro336 et Tyr338 sont mutés, éventuellement en Alanine ou Sérine. Dans un mode de réalisation, le ClfA contient deux mutations avec Pro336 muté en Ser et Tyr338 muté en Ala.
Dans un mode de réalisation, la protéine ClfA ou un fragment est présent dans la composition immunogène sous la forme d'une protéine non conjuguée. En variante, elle est présente conjuguée au saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 ou au saccharide capsulaire de S. aureus Type 8. Dans de tels cas, le ClfA peut agir comme une protéine de transport et un antigène.
Dans un mode de réalisation, la protéine ClfA ou l'un de ses fragments est présente dans la composition immunogène à une dose de 5 à 50, 10 à 30, 5 à 15 ou 20 à 40 pg.
La toxine alpha est un déterminant de virulence important produit par la plupart des souches de S. aureus. Il s'agit d'une toxine formant des pores avec une activité hémolytique.
Il a été montré que les anticorps dirigés contre la toxine alpha neutralisent les effets délétères et létaux de la toxine alpha dans des modèles animaux (Adlam et al. 1977 Infect. Immun. 17; 250) . Les plaquettes humaines, les cellules endothéliales et les cellules mononucléées sont sensibles aux effets de la toxine alpha. Afin de pouvoir utiliser la toxine alpha dans une composition immunogène, elle est généralement détoxifiée par traitement chimique ou mutation pour produire l'anatoxine alpha.
Dans un mode de réalisation, la composition immunogène comprend une anatoxine alpha. Eventuellement, l'anatoxine alpha a une séquence d'acides aminés au moins identique à 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % avec SEQ ID NO : 1 ou 2.
La toxicité élevée de la toxine alpha nécessite qu'elle soit détoxifiée avant d'être utilisée en tant qu'immunogène. Ceci peut être obtenu par traitement chimique, par exemple par traitement avec du formaldéhyde, du glutaraldéhyde ou d'autres agents de réticulation ou par sa conjugaison chimique à des polysaccharides bactériens tels que décrits ci-dessus.
Un autre moyen d'éliminer la toxicité est d'introduire des mutations ponctuelles qui éliminent la toxicité tout en conservant l'immunogénicité de la toxine. L'introduction d'une mutation ponctuelle au niveau de l'acide aminé 35 de la toxine alpha où un résidu d'histidine est remplacé par un résidu de leucine entraîne l'élimination de la toxicité tout en conservant l'immunogénicité (Menzies and Kernodle 1996; Infect. Immun. 64; 1839). L'histidine 35 semble être très importante pour 1'oligomérisation correcte requise pour la formation des pores et la mutation de ce résidu mène à la perte de la toxicité. La modification de l'histidine 35 peut être une substitution par Lys, Arg, Ala, Leu ou Glu. Une mutation ponctuelle de la toxine alpha au niveau de Asp24, Lys37, His48, Lys58, AsplOO, Ilel07, Glulll, Metll3, Aspl27,
Aspl28, Glyl30, Glyl34, Hisl44, Lysl47, Glnl50, Aspl52, Phel53, Lysl54, Vall69, Asnl73, Arg200, Asn214, Leu219 ou His259 peut être éventuellement utilisée pour réduire la toxicité.
Lorsqu'elle est incorporée dans des compositions immunogènes de l'invention, l'anatoxine alpha est éventuellement détoxifiée par mutation de His 35, par exemple en remplaçant His 35 par Leu ou Arg. Dans une variante de mode de réalisation, l'anatoxine alpha est détoxifiée par conjugaison à d'autres composants de la composition immunogène, par exemple au polysaccharide de S. aureus Type 5 et/ou au polysaccharide de S. aureus Type 8. Dans un mode de réalisation, l'anatoxine alpha est détoxifiée par à la fois l'introduction d'une mutation ponctuelle et par conjugaison au polysaccharide de S. aureus Type 5 et/ou au polysaccharide de S. aureus Type 8.
Dans un mode de réalisation, la composition immunogène comprend l'anatoxine alpha qui contient une mutation ponctuelle qui diminue la toxicité de la toxine alpha, par exemple au niveau de l'acide aminé 35. L'anatoxine alpha contient éventuellement une mutation ponctuelle au niveau de l'acide aminé 35 où l'histidine est remplacée par un acide aminé arginine.
Dans un mode de réalisation, l'anatoxine alpha est présente dans la composition immunogène sous la forme d'une protéine non conjuguée. En variante, l'anatoxine alpha est conjuguée au saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 et/ou au saccharide capsulaire de S. aureus Type 8.
Dans un mode de réalisation, l'anatoxine alpha est présente dans la composition immunogène à une dose de 5 à 50, 10 à 30, 5 à 15 ou 20 à 40 pg. Dans un mode de réalisation, le ClfA et l'anatoxine alpha sont présents à la même dose dans la composition immunogène. Dans un mode de réalisation, la dose de saccharide des conjugués des saccharides capsulaires de Type 5 et 8 est supérieure à la dose de protéine du ClfA et de l'anatoxine alpha.
Dans un mode de réalisation, la composition immunogène de l'invention est mélangée avec un excipient pharmaceutiquement acceptable, et éventuellement avec un adjuvant pour former un vaccin.
Les vaccins de la présente invention peuvent être associés à des adjuvants, particulièrement lorsqu'ils sont prévus pour une utilisation dans des populations de personnes âgées, d'individus immunocompromis ou souffrant d'une maladie chronique (comme le diabète, la maladie rénale en stade terminal ou d'autres populations à risque élevé d'infection staphylococcique) mais également pour une utilisation dans des populations de nourrissons. Les adjuvants appropriés comprennent un sel d'aluminium comme le gel d'hydroxyde d'aluminium ou le phosphate d'aluminium ou l'alun, mais ils peuvent être également d'autres sels de métaux comme ceux de calcium, magnésium, fer ou zinc. Les émulsions huile dans l'eau, par exemple comprenant une huile métabolisable (par exemple, le squalène), un agent émulsifiant (par exemple, le monooléate de sorbitane polyoxyéthyléné) et éventuellement un tocol (par exemple, 1'alpha-tocophérol) sont également appropriées (WO 09/95453).
Il est préféré que l'adjuvant soit choisi pour être un inducteur préférentiel d'un type TH1 de réponse. De tels taux élevés de cytokines de type Thl tendent à favoriser l'induction des réponses immunitaires à médiation cellulaire envers un antigène donné, alors que des taux élevés de cytokines de type Th2 tendent à favoriser l'induction des réponses immunitaires humorales envers l'antigène.
La distinction de la réponse immunitaire de type Thl et Th2 n'est pas absolue. En réalité, un individu supportera une réponse immunitaire qui est décrite comme étant principalement Thl ou principalement Th2. Toutefois, il est souvent pratique de considérer les familles de cytokines en termes de celles décrites dans des clones de cellules T CD4-positifs murins par Mosmann et Coffman (Mosmann, T.R. and Coffman, R.L. (1989) TH1 and TH2 cells: different patterns of lymphokine sécrétion lead to different functional properties. (Annual Review of
Immunology, 7, pl45-173). Traditionnellement, les réponses de type Thl sont associées à la production des cytokines INF-γ et IL-2 par les lymphocytes T. D'autres cytokines souvent associées directement à l'induction des réponses immunitaires de type Thl ne sont pas produites par les lymphocytes T, comme l'IL-12. Au contraire, les réponses de type Th2 sont associées à la sécrétion d'Il-4, d'IL-5, d'IL-6, d'IL-10. Les systèmes d'adjuvants appropriés qui favorisent une réponse principalement Thl comprennent : le monophosphoryl-lipide A ou l'un de ses dérivés (ou le lipide A détoxifié en général -voir par exemple le document WO 2005107798), particulièrement le monophosphoryl-lipide A 3-dés-O-acylé (3D-MPL) (pour la préparation, voir le document GB 2220211 A) ; et une combinaison de monophosphoryl-lipide A, de préférence le monophosphoryl-lipide A 3-dés-O-acylé, conjointement avec soit un sel d'aluminium (par exemple, le phosphate d'aluminium ou 1'hydroxyde d'aluminium) soit une émulsion huile dans l'eau. Dans de telles combinaisons, l'antigène et le 3D-MPL sont contenus dans les mêmes structures particulaires, permettant une délivrance plus efficace des signaux antigéniques et immunostimulants. Des études ont montré que le 3D-MPL est capable d'amplifier encore l'immunogénicité d'un antigène adsorbé sur de l'alun [Thoelen et al. Vaccine (1998) 16: 708- 14 ; EP 689454-Bl].
Un système amplifié implique la combinaison d'un monophosphoryl-lipide A et d'un dérivé de saponine, particulièrement la combinaison de QS21 et de 3D-MPL comme il est décrit dans le document WO 94/00153, ou une composition moins réactogène où le QS21 est désactivé avec du cholestérol comme il est décrit dans le document WO 96/33739. Une formulation d'adjuvant particulièrement puissante impliquant du QS21, du 3D-MPL et du tocophérol dans une émulsion huile dans l'eau est décrite dans le document WO 95/17210. Dans un mode de réalisation, la composition immunogène comprend en outre une saponine, qui peut être le QS21. La formulation peut également comprendre une émulsion huile dans l'eau et du tocophérol (WO 95/17210). Des oligonucléotides contenant des CpG non méthylés (WO 96/02555) et d'autres oligonucléotides immunomodulateurs (WO 0226757 et WO 03507822) sont également des inducteurs préférentiels d'une réponse THl et ils sont appropriés pour une utilisation dans la présente invention.
Toutefois, les inventeurs ont découvert que dans un essai clinique, l'addition d'un adjuvant sous forme d'émulsion huile dans l'eau n'a pas produit d'augmentation de l'immunogénicité. Au vu de l'augmentation de la réactogénicité qui peut être associée à l'utilisation d'un adjuvant, un mode de réalisation de l'invention utilise une composition immunogène non additionnée d'adjuvants, par exemple une composition immunogène dans laquelle aucun des composants staphylococciques présents n'est adsorbé sur un adjuvant ou une composition immunogène dans laquelle les composants staphylococciques ne sont pas mélangés avec un adjuvant sous forme d'émulsion huile dans l'eau. Les composants staphylococciques comprennent 1, 2, 3 ou 4 d'un conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 5, d'un conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 8, d'un fragment du ClfA ou de l'un de leurs fragments et d'une anatoxine alpha.
Un autre aspect de l'invention est un vaccin comprenant la composition immunogène décrite ci-dessus et un excipient pharmaceutiquement acceptable. Des préparations vaccinales de la présente invention peuvent être utilisées pour protéger ou traiter un être humain sensible à une infection par S. aureus, au moyen de l'administration dudit vaccin par voie systémique ou mucosale. Ces administrations peuvent comprendre une injection par les voies intramusculaire, intrapéritonéale, intradermique ou sous-cutanée ; ou par une administration mucosale aux systèmes oral/alimentaire, respiratoire, génito-urinaire .
La préparation de vaccins est décrite de manière générale dans Vaccine Design ("The subunit and adjuvant approach" (eds Powell M.F. & Newman M.J.) (1995) Plenum Press New York). L'encapsulation au sein de liposomes est décrite par Fullerton, brevet US 4 235 877.
Les vaccins de la présente invention peuvent être stockés en solution ou lyophilisés. Eventuellement, la solution est lyophilisée en présence d'un sucre comme le saccharose, le tréhalose ou le lactose. Il est typique qu'il soit lyophilisé et reconstitué de manière extemporanée avant utilisation. La lyophilisation peut entraîner une composition plus stable (vaccin). L'invention englobe également un procédé de fabrication des compositions immunogènes et des vaccins de l'invention. Dans un mode de réalisation, le procédé de l'invention est un procédé pour fabriquer un vaccin comprenant les étapes de a) conjugaison d'un saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 à une protéine de transport pour former un conjugué de , saccharide capsulaire de S. aureus Type 5, b) conjugaison d'un saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 à une protéine de transport pour former un conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 8, et c) combinaison du conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 5, du conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 8, d'une protéine ClfA ou de l'un de ses fragments et d'une anatoxine alpha pour former la composition immunogène. Dans un mode de réalisation, le procédé comprend une autre étape d'addition d'un excipient pharmac'eutiquement acceptable. L'invention englobe également un procédé de traitement d'une infection staphylococcique, particulièrement des infections nosocomiales acquises à l'hôpital.
La composition immunogène ou le vaccin de l'invention est particulièrement avantageux pour une utilisation dans des cas de chirurgie non urgente, particulièrement lorsque les sujets sont immunisés avec une seule dose. De tels patients connaîtront la date de l'intervention chirurgicale à l'avance et pourront être inoculés de manière avantageuse à l'avance. Dans un mode de réalisation, le sujet est immunisé avec une seule dose de la composition immunogène de l'invention 5 à 60, 6 à 40, 7 à 30 ou 7 à 15 jours avant l'admission à l'hôpital. Dans un mode de réalisation, le sujet est immunisé avec une seule dose de la composition immunogène de l'invention 5 à 60, 6 à 40, 7 à 30 ou 7 à 15 jours avant une procédure planifiée à l'hôpital, par exemple une procédure chirurgicale comme une procédure chirurgicale cardio-thoracique. Généralement, des adultes âgés de plus de 16 ans en attente d'une chirurgie non urgente sont traités avec les compositions immunogènes et les vaccins de l'invention. En variante, des enfants âgés de 3 a 16 ans en attente d'une chirurgie non urgente sont traités avec les compositions immunogènes et les vaccins de 1'invention.
Il est également possible d'inoculer des professionnels de la santé avec le vaccin de l'invention.
Les préparations vaccinales de la présente invention peuvent être utilisées pour protéger ou traiter un être humain sensible à une infection par S. aureus, au moyen de l'administration dudit vaccin par voie systémique ou mucosale.
Ces administrations peuvent comprendre une injection par les voies intramusculaire, intrapéritonéale, intradermique ou sous-cutanée ; ou par une administration mucosale aux systèmes oral/alimentaire, respiratoire, génito-urinaire.
Un mode de réalisation de l'invention est un procédé de prévention ou de traitement d'une infection ou d'une maladie staphylococcique comprenant l'administration de la composition immunogène ou du vaccin de l'invention à un patient en ayant besoin.
Un autre mode de réalisation de l'invention est une utilisation de la composition immunogène de l'invention dans la fabrication d'un vaccin destiné au traitement ou à la prévention d'une infection ou d'une maladie staphylococcique, éventuellement d'une infection staphylococcique postopératoire.
Les termes « comprenant », « comprennent » et « comprend » ici sont prévus par les inventeurs comme étant éventuellement substituables par les termes « étant constitué de », « sont constitués de » et « est constitué de », respectivement, dans tous les cas. Toutefois, les termes « comprenant », « comprennent » et « comprend » conservent leur signification « ouverte » habituelle lorsqu'ils n'ont pas été substitués.
Toutes les références ou demandes de brevet citées dans ce mémoire de brevet sont incorporées ici en référence.
Pour que cette invention puisse être mieux comprise, les exemples suivants sont présentés. Ces exemples sont uniquement pour des objectifs d'illustration, et ils ne doivent pas être interprétés comme limitant l'étendue de l'invention d'une manière quelconque.
Exemples
Exemple 1 - Séquences des protéines SEQ ID NO : 1
MKTRIVSSVTTTLLLGSILMNPVANAADSDINIKTGTTDIGSNTTVKTGDLVTYDKENGMHKKVFYSF
IDDKNHNKKLLVIRTKGTIAGQYRVYSEEGANKSGLAWPSAFKVQLQLPDNEVAQISDYYPRNSIDTK
EYMSTLTYGFNGNVTGDDTGKIGGLIGANVSIGHTLKYVQPDFKTILESPTDKKVGWKVIFNNMVNQN
WGPYDRDSWNPVYGNQLFMKTRNGSMKAADNFLDPNKASSLLSSGFSPDFATVITMDRKASKQQTNID
VIYERVRDDYQLHWTSTNWKGTNTKDKWIDRSSERYKIDWEKEEMTN SEQ ID NO : 2 - Toxine alpha
MADSDINIKTGTTDIGSNTTVKTGDLVTYDKENGMHKKVFYSFIDDKNHNKKLLVIRTKGTIAGQYRV
YSEEGANKSGLAWPSAFKVQLQLPDNEVAQISDYYPRNSIDTKEYMSTLTYGFNGNVTGDDTGKIGGL
IGANVSIGHTLKYVQPDFKTILESPTDKKVGWKVIFNNMVNQNWGPYDRDSWNPVYGNQLFMKTRNGS
MKAADNFLDPNKASSLLSSGFSPDFATVITMDRKASKQQTNIDVIYERVRDDYQLHWTSTNWKGTNTK
DKWIDRSSERYKIDWEKEEMTN SEQ ID NO:3 - ClfA de la souche de S. aureus NCTC8325
MNMKKKEKHAIRKKSIGVASVLVGTLIGFGLLSSKEADASENSVTQSDSASNESKSNDSSSVSAAPKT DDTNVSDTKTSSNTNNGETSVAQNPAQQETTQSSSTNATTEETPVTGEATTTTTNQANTPATTQSSNT NAEELVNQTSNETTSNDTNTVSSVNSPQNSTNAENVSTTQDTSTEATPSNNESAPQSTDASNKDWNQ AVNTSAPRMRAFSLAAVAADAPVAGTDITNQLTNVTVGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKG DTFKITVPKELNLNGVTSTAKVPPIMAGDQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMPAYID PENVKKTGNVTLATGIGSTTANKTVLVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVI APVLTGNLKPNTDSNALIDQQNTSIKVYKVDNAADLSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEF NTPDDQITTPYIVVVNGHIDPNSKGDLALRSTLYGYNSNIIWRSMSWDNEVAFNNGSGSGDGIDKPVV PEQPDEPGEIEPIPEDSDSDPGSDSGSDSNSDSGSDSGSDSTSDSGSDSASDSDSASDSDSASDSDSA S DS DSAS DS DS DNDS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS D S DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS D S DS DS DS DS DS DS DS DS DSAS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DS DSES DS DS DS D SDSDSDSDSDSDSDSASDSDSGSDSDSSSDSDSESDSNSDSESVSNNNVVPPNSPKNGTNASNKNEAK DSKEPLPDTGSEDEANTSLIWGLLASIGSLLLFRRKKENKDKK
SEQ ID NO : 4 - N1N2N3 du ClfA
MSENSVTQSDSASNESKSNDSSSVSAAPKTDDTNVSDTKTSSNTNNGETSVAQNPAQQETTQSSSTNA TTEETPVTGEATTTTTNQANTPATTQSSNTNAEELVNQTSNETTSNDTNTVSSVNSPQNSTNAENVST TQDTSTEATPSNNESAPQSTDASNKDVVNQAVNTSAPRMRAFSLAAVAADAPVAGTDITNQLTNVTVG IDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELNLNGVTSTAKVPPIMAGDQVLANGVID SDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMPAYIDPENVKKTGNVTLATGIGSTTANKTVLVDYEKYGKFYNL SIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNTDSNALIDQQNTSIKVYKVDNAADLSE SYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPDDQITTPYIVVVNGHIDPNSKGDLALRSTLYGYNS NIIWRSMSWDNEVAFNNGSGSGDGIDKPVVPEQPDEPGEIEPIPE
SEQ ID .NO : 5 - Nl-3 du ClfA
MNMKKKEKHAIRKKSIGVASVLVGTLIGFGLLSSKEADASENSVTQSDSASNESKSNDSSSVSAAPKT DDTNVSDTKTSSNTNNGETSVAQNPAQQETTQSSSTNATTEETPVTGEATTTTTNQANTPATTQSSNT NAEELVNQTSNETTSNDTNTVSSVNSPQNSTNAENVSTTQDTSTEATPSNNESAPQSTDASNKDVVNQ AVNTSAPRMRAFSLAAVAADAPVAGTDITNQLTNVTVGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKG DTFKITVPKELNLNGVTSTAKVPPIMAGDQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMPAYID PENVKKTGNVTLATGIGSTTANKTVLVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVI APVLTGNLKPNTDSNALIDQQNTSIKVYKVDNAADLSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEF NTPDDQITTPYIVVVNGHIDPNSKGDLALRSTLYGYNSNIIWRSMSWDNEVAFNNGSGSGDGIDKPVV PEQPDEPGEIEPIPE
SEQ ID NO : 6 - N23 du ClfA
SLAAVAADAPVAGTDITNQLTNVTVGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELN LNGVTSTAKVPPIMAGDQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMPAYIDPENVKKTGNVTL ATGIGSTTANKTVLVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNT DSNALIDQQNTSIKVYKVDNAADLSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPDDQITTPYI VVVNGHIDPNSKGDLALRSTLYGYNSNIIWRSMSWDNEVAFNNGSGSGDGIDKPVVPEQPDEPGEIEP IPE
SEQ ID NO : 7 - N23 plus court du ClfA
GTDITNQLTNVTVGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELNLNGVTSTAKVPP IMAGDQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMPAYIDPENVKKTGNVTLATGIGSTTANKT VLVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNTDSNALIDQQNTS IKVYKVDNAADLSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPDDQITTPYIVVVNGHIDPNSK GDLALRSTLYGYNSNIIWRSMSWDNEVAFNNGSGSGDGIDKPVVPEQPDEPGEIEPIPE SEQ ID NO : 8 - ClfA de la souche de S. aureus NCTC8325
MNMKKKEKHAIRKKSIGVASVLVGTLIGFGLLSSKEADASENSVTQSDSASNESKSNDSSSVSAAPKT DDTNVSDTKTSSNTNNGETSVAQNPAQQETTQSSSTNATTEETPVTGEATTTTTNQANTPATTQSSNT NAEELVNQTSNETTSNDTNTVSSVNSPQNSTNAENVSTTQDTSTEATPSNNESAPQSTDASNKDWNQ AVNTSAPRMRAFSLAAVAADAPVAGTDITNQLTNVTVGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKG DTFKITVPKELNLNGVTSTAKVPPIMAGDQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMSAAID PENVKKTGNVTLATGIGSTTANKTVLVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVI APVLTGNLKPNTDSNALIDQQNTSIKVYKVDNAADLSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEF NTPDDQITTPYIVVVNGHIDPNSKGDLALRSTLYGYNSNIIWRSMSWDNEVAFNNGSGSGDGIDKPVV PEQPDEPGEIEPIPEDSDSDPGSDSGSDSNSDSGSDSGSDSTSDSGSDSASDSDSASDSDSASDSDSA SDSDSASDSDSDNDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSD SDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSD SDSDSDSDSDSDSDSDSDSASDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSESDSDSDSD SDSDSDSDSDSDSDSASDSDSGSDSDSSSDSDSESDSNSDSESVSNNNVVPPNSPKNGTNASNKNEAK DSKEPLPDTGSEDEANTSLIWGLLASIGSLLLFRRKKENKDKK
SEQ ID NO : 9 - N1N2N3 du ClfA
MSENSVTQSDSASNESKSNDSSSVSAAPKTDDTNVSDTKTSSNTNNGETSVAQNPAQQETTQSSSTNA TTEETPVTGEATTTTTNQANTPATTQSSNTNAEELVNQTSNETTSNDTNTVSSVNSPQNSTNAENVST TQDTSTEATPSNNESAPQSTDASNKDVVNQAVNTSAPRMRAFSLAAVAADAPVAGTDITNQLTNVTVG IDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELNLNGVTSTAKVPPIMAGDQVLANGVID SDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMSAAIDPENVKKTGNVTLATGIGSTTANKTVLVDYEKYGKFYNL
SIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNTDSNALIDQQNTSIKVYKVDNAADLSE SYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPDDQITTPYIVVVNGHIDPNSKGDLALRSTLYGYNS NIIWRSMSWDNEVAFNNGSGSGDGIDKPVVPEQPDEPGEIEPIPE
SEQ ID NO : 10 - Nl-3 du ClfA
MNMKKKEKHAIRKKSIGVASVLVGTLIGFGLLSSKEADASENSVTQSDSASNESKSNDSSSVSAAPKT DDTNVSDTKTSSNTNNGETSVAQNPAQQETTQSSSTNATTEETPVTGEATTTTTNQANTPATTQSSNT NAEELVNQTSNETTSNDTNTVSSVNSPQNSTNAENVSTTQDTSTEATPSNNESAPQSTDASNKDVVNQ AVNTSAPRMRAFSLAAVAADAPVAGTDITNQLTNVTVGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKG DTFKITVPKELNLNGVTSTAKVPPIMAGDQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMSAAID PENVKKTGNVTLATGIGSTTANKTVLVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVI APVLTGNLKPNTDSNALIDQQNTSIKVYKVDNAADLSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEF NTPDDQITTPYIVWNGHIDPNSKGDLALRSTLYGYNSNIIWRSMSWDNEVAFNNGSGSGDGIDKPVV PEQPDEPGEIEPIPE
SEQ ID NO : 11 - N23 du ClfA
SLAAVAADAPVAGTDITNQLTNVTVGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELN LNGVTSTAKVPPIMAGDQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMSAAIDPENVKKTGNVTL ATGIGSTTANKTVLVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNT DSNALIDQQNTSIKVYKVDNAADLSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPDDQITTPYI VVVNGHIDPNSKGDLALRSTLYGYNSNIIWRSMSWDNEVAFNNGSGSGDGIDKPVVPEQPDEPGEIEP IPE
SEQ ID NO : 12 - N23 plus court du ClfA
GTDITNQLTNVTVGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELNLNGVTSTAKVPP
IMAGDQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMSAAIDPENVKKTGNVTLATGIGSTTANKT
VLVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNTDSNALIDQQNTS
IKVYKVDNAADLSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPDDQITTPYIVVVNGHIDPNSK
GDLALRSTLYGYNSNIIWRSMSWDNEVAFNNGSGSGDGIDKPVVPEQPDEPGEIEPIPE SEQ ID NO: 13
MKTRIVSSVTTTLLLGSILMNPVANAADSDINIKTGTTDIGSNTTVKTGDLVTYDKENGMRK KVFYSFIDDKNHNKKLLVIRTKGTIAGQYRVYSEEGANKSGLAWPSAFKVQLQLPDNEVAQI SDYYPRNSIDTKEYMSTLTYGFNGNVTGDDTGKIGGLIGANVSIGHTLKYVQPDFKTILESP TDKKVGWKVIFNNMVNQNWGPYDRDSWNPVYGNQLFMKTRNGSMKAADNFLDPNKASSLLSS GFSPDFATVITMDRKASKQQTNIDVIYERVRDDYQLHWTSTNWKGTNTKDKWIDRSSERYKI DWEKEEMTN SEQ ID NO: 14
MADSDINIKTGTTDIGSNTTVKTGDLVTYDKENGMRKKVFYSFIDDKNHNKKLLVIRTKGTI AGQYRVYSEEGANKSGLAWPSAFKVQLQLPDNEVAQISDYYPRNSIDTKEYMSTLTYGFNGN VTGDDTGKIGGLIGANVSIGHTLKYVQPDFKTILESPTDKKVGWKVIFNNMVNQNWGPYDRD SWNPVYGNQLFMKTRNGSMKAADNFLDPNKASSLLSSGFSPDFATVITMDRKASKQQTNIDV IYERVRDDYQLHWTSTNWKGTNTKDKWIDRSSERYKIDWEKEEMTN SEQ ID NO: 15
MASLAAVAADAPVAGTDITNQLTNVTVGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELNLNGVT STAKVPPIMAGDQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMPAYIDPENVKKTGNVTLATGIGSTTANKT VLVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNTDSNALIDQQNTSIKVYKVD NAADLSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPDDQITTPYIVVVNGHIDPNSKGDLALRSTLYGYNS NIIWRSMSWDNEVAFNNGSGSGDGIDKPVVPEQPDEPGEIEPIPE SEQ ID NO: 16
MAGTDITNQLTNVTVGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELNLNGVTSTAKVPPIMA
GDQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMPAYIDPENVKKTGNVTLATGIGSTTANKTVLVDYEKYGK
FYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNTDSNALIDQQNTSIKVYKVDNAADLSESYF
VNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPDDQITTPYIVVVNGHIDPNSKGDLALRSTLYGYNSNIIWRSMSWD
NEVAFNNGSGSGDGIDKPVVPEQPDEPGEIEPIPE SEQ ID NO: 17
MASLAAVAADAPVAGTDITNQLTNVTVGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELNLNGVT STAKVPPIMAGDQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMSAAIDPENVKKTGNVTLATGIGSTTANKT VLVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNTDSNALIDQQNTSIKVYKVD NAADLSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPDDQITTPYIVVVNGHIDPNSKGDLALRSTLYGYNS NIIWRSMSWDNEVAFNNGSGSGDGIDKPVVPEQPDEPGEIEPIPE SEQ ID NO: 18
MAGTDITNQLTNVTVGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELNLNGVTSTAKVPPIMAGD
QVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMSAAIDPENVKKTGNVTLATGIGSTTANKTVLVDYEKYGKFY
NLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNTDSNALIDQQNTSIKVYKVDNAADLSESYFVN
PENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPDDQITTPYIVVVNGHIDPNSKGDLALRSTLYGYNSNIIWRSMSWDNE
VAFNNGSGSGDGIDKPVVPEQPDEPGEIEPIPE
Exemple 2 - Préparation des composants vaccinaux
Il a été préparé un vaccin antistaphylococcique à quatre composants qui contenait un polysaccharide capsulaire de S. aureus Type 5 conjugué à une protéine de transport, l'anatoxine tétanique, un polysaccharide capsulaire de S. aureus Type 8 conjugué à une protéine de transport, l'anatoxine tétanique, un fragment du ClfA contenant les domaines N2 et N3 et des mutations ponctuelles au niveau des résidus 336 et 338 où P336 est changé en sérine et Y338 est changé en alanine, et l'anatoxine alpha qui est détoxifiée par une mutation ponctuelle au niveau du résidu 35 avec H35 changé en arginine. Les polysaccharides capsulaires ont été conjugués à l'anatoxine tétanique en utilisant du CDAP en tant qu'agent de couplage. Ce procédé est décrit dans le document WO 07/113222. Les protéines de l'anatoxine alpha et du ClfA peuvent fabriquées en utilisant des systèmes classiques de biologie moléculaire et d'expression.
Quatre formulations du vaccin antistaphylococcique ont été fabriquées : 5/10 contenait : 5 pg de dose de saccharide de conjugué
Type 5 - anatoxine tétanique, 5 pg de dose de saccharide de conjugué Type 8 - anatoxine tétanique, 10 pg d'anatoxine alpha et 10 pg du produit tronqué du ClfA décrit ci-dessus. 10/30 contenait : 10 pg de dose de saccharide de conjugué Type 5 - anatoxine tétanique, 10 pg de dose de saccharide de conjugué Type 8 - anatoxine tétanique, 30 pg d'anatoxine alpha et 30 pg du produit tronqué du ClfA décrit ci-dessus. 5/10AS contenait : 5 pg de dose de saccharide de conjugué Type 5 - anatoxine tétanique, 5 pg de dose de saccharide de conjugué Type 8 - anatoxine tétanique, 10 pg d'anatoxine alpha et 10 pg du produit tronqué du ClfA décrit ci-dessus, et comme adjuvant une émulsion huile dans l'eau contenant du squalène, de 1'alpha-tocophérol et du monooléate de sorbitane polyoxyéthyléné. 10/30AS contenait : 10 pg de dose de saccharide de conjugué Type 5 - anatoxine tétanique, 10 pg de dose de saccharide de conjugué Type 8 - anatoxine tétanique, 30 pg d'anatoxine alpha et 30 pg du produit tronqué du ClfA décrit ci-dessus, et comme adjuvant une émulsion huile dans l'eau contenant du squalène, de 1'alpha-tocophérol et du monooléate de sorbitane polyoxyéthyléné.
Exemple 3 - Résultats d'un essai clinique utilisant le vaccin antistaphylococcique à 4 composants
Un essai clinique en phase I a été réalisé en utilisant un total de 88 adultes en bonne santé âgés de 18 à 40 ans. Le groupe témoin contenait 30 sujets qui ont été inoculés avec du sérum physiologique. Les sujets restants ont été divisés en quatre bras avec 15/14 sujets immunisés avec chacune des formulations décrites dans l'exemple 2 (5/10, 5/10AS, 10/30 et 10/30AS) . Les doses de vaccin ont été données au départ de l'essai et après un mois et à six mois. Des échantillons de sang pour l'analyse humorale ont été prélevés aux jours 0, 7, 14 et 30 après chaque dose et aux jours 360 et 540.
Les détails des sujets sont fournis ci-dessous.
Groupe N Age moyen % de femmes 5/10 15 31,1 73,3 5/10AS 15 31,9 33,3 10/30 14 30,9 42,9 10/30AS 14 30,6 50 Sérum 30 30,1 50 physiologique Réactogénicité et sécurité
Le vaccin antistaphylococcique à 4 composants a été de manière générale sécuritaire et bien toléré. Après les première et seconde doses, il n'a été observé aucun événement indésirable sérieux et aucun trouble à médiation immunitaire potentiel. Le pourcentage de sujets rapportant une douleur, une rougeur et un gonflement après la dose 1 et la dose 2 est représenté sur les figures 1 à 3. La douleur a été expérimentée au niveau du site injection chez 78,6 à 100 % des sujets dans le groupe du vaccin comparativement à 3 à 4 % dans le groupe témoin (voir la figure 1). Toutefois, un seul cas a été gradé 3. Les résultats pour l'incidence d'une rougeur et d'un gonflement sont représentés sur les figures 2 et 3. Pour les deux paramètres, il y a eu une tendance d'incidence supérieure de rougeur/gonflement après l'administration de la seconde dose comparativement à après une seule dose pour le bras 10/30 de l'étude.
Immunogénicité
Des échantillons de sang prélevés au jour 0 et 7, 14 et 30 jours après les deuxième et troisième immunisations ont été testés par une technique Luminex ou ELISA pour établir le taux d'IgG produit contre chaque antigène du vaccin antistaphylococcique à quatre composants.
Les résultats pour l'immunogénicité sont présentés sur les figures 4 à 8 et dans les tableaux 1 à 5 ci-dessous.
Prévaccination, il y a eu 83,3 à 100 % de séropositivité pour tous les tests. En dépit de taux considérables d'immunité de fond, le vaccin à 4 composants a été capable de déclencher une réponse immunitaire solide contre les 4 composants.
Les figures 4 à 7 montrent que pour le CPS5, le CPS8, l'anatoxine alpha et le ClfA, la première immunisation a produit l'augmentation la plus importante de l'immunogénicité avec de fortes augmentations des GMC évidentes aux jours 14 et 30. La deuxième immunisation au jour 30 n'a pas produit d'autre augmentation de l'immunogénicité et les taux de GMC demeurent à un niveau similaire entre les jours 30 et 60. La figure 8 montre que la troisième immunisation après 6 mois n'a pas provoqué d'autre augmentation des GMC avec des taux de GMC demeurant approximativement identiques pour les quatre composants entre le jour 30 et le jour 540. Par conséquent, une seule immunisation est un moyen efficace de production d'une réponse immunitaire maximale.
Les résultats d'immunogénicité pour le dosage 10/30 semblent être plus forts que pour le dosage 5/10 avec une augmentation approximativement de 1,5 à 2 fois des GMC pour le CPS5, le CPS8 et l'anatoxine alpha. Dans le cas du ClfA, l'augmentation de GMC a été d'environ 3,8 fois à la dose supérieure. L'addition d'un adjuvant à base d'émulsion huile dans l'eau n'a pas augmenté l'immunogénicité du vaccin à 4 composants, comme il est démontré par une comparaison de la réponse en anticorps déclenchée par les bras 5/10 et 5/10AS et les bras 10/30 et 10/30AS.
Tableau 1
Taux de séropositivité et GMC pour les anticorps Ac IgG dirigés contre le CPS 5 de Staphylococcus aureus (cohorte conforme au protocole pour l'immunogénicité)
5/10 = 5 pg de CPS5-TT, 5 gg de CPS8-TT, 10 gg de ClfA, 10 μg d'anatoxine a
5/10AS = 5 pg de CPS5-TT, 5 μg de CPS8-TT, 10 gg de ClfA, 10 gg d'anatoxine a, adjuvantée par AS03B 10/30 = 10 gg de CPS5-TT, 10 gg de CPS8-TT, 30 gg de ClfA, 30 gg d'anatoxine a 10/30AS = 10 gg de CPS5-TT, 10 gg de CPS8-TT, 30 gg de ClfA, 30 gg d'anatoxine a, adjuvantée
par AS03B Sérum physiologique = regroupement de sérum physiologique 1 et sérum physiologique 2 GMC = moyenne géométrique de la concentration d'anticorps calculée sur tous les sujets N = nombre de sujets avec des résultats disponibles n/% = nombre/pourcentage de sujets avec une concentration au sein de la plage spécifiée IC à 95 % = intervalle de confiance à 95 % ; LL = limite inférieure, UL = limite supérieure PRE = pré-dose 1 PI(J7) = 7 jours post-dose 1 PI(J14) = 14 jours post-dose 1 PI(J30) = 30 jours post-dose 1 (échantillon de sang prélevé aux visites 5 ou 6) PII(J37) = 7 jours post-dose 2 PII(J44) = 14 jours post-dose 2 PII(J60) = 30 jours post-dose 2
Tableau 2
Taux de séropositivité et GMC pour les anticorps Ac IgG dirigés contre le CPS 8 de Staphylococcus aureus (cohorte conforme au protocole pour l'immunogénicité)
5/10 = 5 μς de CPS5-TT, 5 pg de CPS8-TT, 10 pg de ClfA, 10 pg d'anatoxine a
5/10AS = 5 μg de CPS5-TT, 5 pg de CPS8-TT, 10 pg de ClfA, 10 pg d'anatoxine a, adjuvantée par ÄS03B 10/30 = 10 pg de CPS5-TT, 10 pg de CPS8-TT, 30 pg de ClfA, 30 pg d'anatoxine a 10/30AS = 10 pg de CPS5-TT, 10 pg de CPS8-TT, 30 pg de ClfA, 30 pg d'anatoxine a, adjuvantée
par AS03B Sérum physiologique = regroupement de sérum physiologique 1 et sérum physiologique 2 GMC = moyenne géométrique de la concentration d'anticorps calculée sur tous les sujets N = nombre de sujets avec des résultats disponibles n/% = nombre/pourcentage de sujets avec une concentration au sein de la plage spécifiée IC à 95 % = intervalle de confiance à 95 % ; LL = limite inférieure, UL = limite supérieure PRE = pré-dose 1 PI(J7) = 7 jours post-dose 1 PI(J14) = 14 jours post-dose 1 PI(J30) = 30 jours post-dose 1 (échantillon de sang prélevé aux visites 5 ou 6) PII(J37) = 7 jours post-dose 2 PII(J44) = 14 jours post-dose 2 PII(J60) = 30 jours post-dose 2
Tableau 3
Taux de séropositivité et GMC pour les anticorps Ac IgG dirigés contre la toxine alpha de Staphylococcus aureus (cohorte conforme au protocole pour l'immunogénicité)
5/10 = 5 pg de CPS5-TT, 5 pg de CPS8-TT, 10 pg de ClfA, 10 pg d'anatoxine a
5/10AS = 5 pg de CPS5-TT, 5 pg de CPS8-TT, 10 pg de ClfA, 10 pg d'anatoxine a, adjuvantée par AS03B 10/30 = 10 pg de CPS5-TT, 10 pg de CPS8-TT, 30 pg de ClfA, 30 pg d'anatoxine a 10/30AS = 10 pg de CPS5-TT, 10 pg de CPS8-TT, 30 pg de ClfA, 30 pg d'anatoxine a, adjuvantée
par AS03B Sérum physiologique = regroupement de sérum physiologique 1 et sérum physiologique 2 GMC = moyenne géométrique de la concentration d'anticorps calculée sur tous les sujets N = nombre de sujets avec des résultats disponibles n/% = nombre/pourcentage de sujets avec une concentration au sein de la plage spécifiée IC à 95 % = intervalle de confiance à 95 % ; LL = limite inférieure, UL = limite supérieure PRE = pré-dose 1 PI(J7) = 7 jours post-dose 1 PI(J14) = 14 jours post-dose 1 PI(J30) = 30 jours post-dose 1 (échantillon de sang prélevé aux visites 5 ou 6) PII(J37) = 7 jours post-dose 2 PII(J44) = 14 jours post-dose 2 PII(J60) = 30 jours post-dose 2
Tableau 4
Taux de séropositivité et GMC pour les anticorps Ac IgG dirigés contre le ClfA de Staphylococcus aureus (cohorte conforme au protocole pour l'immunogénicité)
5/10 = 5 μς de CPS5-TT, 5 pg de CPS8-TT, 10 pg de ClfA, 10 pg d'anatoxine a 5/10AS = 5 pg de CPS5-TT, 5 pg de CPS8-TT, 10 pg de ClfA, 10 pg d'anatoxine a, adjuvantée par
ÄS03B 10/30 = 10 pg de CPS5-TT, 10 pg de CPS8-TT, 30 pg de ClfA, 30 pg d'anatoxine a 10/30AS = 10 pg de CPS5-TT, 10 pg de CPS8-TT, 30 pg de ClfA, 30 pg d'anatoxine a, adjuvantée
par AS03B Sérum physiologique = regroupement de sérum physiologique 1 et sérum physiologique 2 GMC = moyenne géométrique de la concentration d'anticorps calculée sur tous les sujets N = nombre de sujets avec des résultats disponibles n/% = nombre/pourcentage de sujets avec une concentration au sein de la plage spécifiée IC à 95 % = intervalle de confiance à 95 % ; LL = limite inférieure, UL = limite supérieure PRE = pré-dose 1 PI(J7) = 7 jours post-dose 1 PI( J14) = 14 jours post-dose 1 PI(J30) = 30 jours post-dose 1 (échantillon de sang prélevé aux visites 5 ou 6) PII(J37) = 7 jours post-dose 2 PII(J44i = 14 jours post-dose 2 PII(J60) = 30 jours post-dose 2
Tableau 5
Taux de séropositivité et GMC pour les anticorps Ac IgG dirigés contre la toxine de C. tetani (cohorte conforme au protocole pour l'immunogénicité)
5/10 = 5 pg de CPS5-TT, 5 μg de CPS8-TT, 10 pg de ClfA, 10 pg d'anatoxine a
5/10AS = 5 pg de CPS5-TT, 5 pg de CPS8-TT, 10 pg de ClfA, 10 pg d'anatoxine a, adjuvantée par AS03B 10/30 = 10 pg de CPS5-TT, 10 pg de CPS8-TT, 30 pg de ClfA, 30 pg d'anatoxine a 10/30AS = 10 pg de CPS5-TT, 10 pg de CPS8-TT, 30 pg de ClfA, 30 pg d'anatoxine a, adjuvantée
par AS03B Sérum physiologique = regroupement de sérum physiologique 1 et sérum physiologique 2 GMC = moyenne géométrique de la concentration d'anticorps calculée sur tous les sujets N = nombre de sujets avec des résultats disponibles n/% = nombre/pourcentage de sujets avec une concentration au sein de la plage spécifiée IC à 95 % = intervalle de confiance à 95 % ; LL = limite inférieure, UL = limite supérieure PRE = pré-dose 1 PI(J7) = 7 jours post-dose 1 PI(J14) = 14 jours post-dose 1 PI(J30) = 30 jours post-dose 1 (échantillon de sang prélevé aux visites 5 ou 6) PII(J37) = 7 jours post-dose 2 PII(J44) = 14 jours post-dose 2 PII(J60) = 30 jours post-dose 2

Claims (131)

  1. REVENDICATIONS
    1. Procédé d'immunisation contre une infection par Staphylococcus aureus comprenant une étape d'administration à un patient humain d'une seule dose d'une composition immunogène comprenant un saccharide capsulaire de Staphylococcus aureus Type 5 conjugué à une protéine de transport pour former un conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 5, où le conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 est administré à une dose de saccharide de 3 à 50 pg, 5 à 25 pg, 3 à 20 pg, 3 à 12 pg, 5 à 10 pg, 7 à 20 pg, 7 à 15 pg ou 8 à 12 pg.
  2. 2. Procédé selon la revendication 1, dans lequel la composition immunogène comprend un saccharide capsulaire de Staphylococcus aureus Type 8 conjugué à une protéine de transport pour former un conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 8, où le conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 est administré à une dose de saccharide de 3 à 50 pg, 5 à 25 pg, 3 à 20 pg, 3 à 12 pg, 5 à 10 pg, 7 à 20 pg, 7 à 15 pg ou 8 à 12 pg.
  3. 3. Procédé selon la revendication 1 ou 2, dans lequel le saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 a une masse moléculaire supérieure à 25 kDa, 40 kDa ou 50 kDa, ou entre 25 et 125 kDa, 90 et 125 kDa, 30 et 100 kDa, 35 et 75 kDa ou 40 et 70 kDa.
  4. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel le saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 a une masse moléculaire supérieure à 25 kDa, 40 kDa ou 50 kDa, ou entre 25 et 125 kDa, 90 et 125 kDa, 30 et 100 kDa, 35 et 75 kDa ou 40 et 70 kDa.
  5. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans lequel la protéine de transport à laquelle le saccharide capsulaire de Type 5 est conjugué est choisie dans le groupe constitué de l'anatoxine tétanique, l'anatoxine diphtérique, CRM197, l'anatoxine alpha, le ClfA, 1'exoprotéine A de Pseudomonas aeruginosa.
  6. 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans lequel la protéine de transport à laquelle le saccharide capsulaire de Type 8 est conjugué est choisie dans le groupe constitué de l'anatoxine tétanique, l'anatoxine diphtérique, CRM197, l'anatoxine alpha, le ClfA, 1'exoprotéine A de Pseudomonas aeruginosa.
    1. Procédé selon la revendication 5 ou 6, dans lequel la protéine de transport est l'anatoxine tétanique.
  7. 8. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, dans lequel le saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 et/ou le saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 est 0-acétylé à 50 à 100 % ou 75 à 100 %.
  8. 9. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, dans lequel le saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 et/ou le saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 est conjugué directement à la protéine de transport.
  9. 10. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, dans lequel le saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 est conjugué en utilisant un réactif de cyanylation.
  10. 11. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, dans lequel le saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 est conjugué en utilisant un réactif de cyanylation.
  11. 12. Procédé selon la revendication 10 ou 11, dans lequel le réactif de cyanylation est le CDAP.
  12. 13. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, dans lequel le rapport du polysaccharide sur la protéine dans le conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 se situe entre 1/5 et 5/1 (p/p) ou entre 1/2 et 2/1 (p/p), 1/2 à 1/5 (p/p) ou 1/1 et 1/2 (p/p).
  13. 14. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 13, dans lequel le rapport du polysaccharide sur la protéine dans le conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 se situe entre 1/5 et 5/1 (p/p) ou entre 1/2 et 2/1 (p/p), 1/2 à 1/5 (p/p) ou 1/1 et 1/2 (p/p).
  14. 15. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, dans lequel la même dose de saccharide du saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 et du saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 est présente dans la composition immunogène.
  15. 16. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, dans lequel la composition immunogène comprend en outre une protéine ClfA ou l'un de ses fragments.
  16. 17. Procédé selon la revendication 16, dans lequel la protéine ClfA ou l'un de ses fragments est au moins identique à 90 % avec la séquence polypeptidique de l'une quelconque de SEQ ID NO : 3 à 12 sur leur longueur entière.
  17. 18. Procédé selon la revendication 16 ou 17, dans lequel la protéine ClfA ou l'un de ses fragments est un fragment du ClfA comprenant le domaine N2.
  18. 19. Procédé selon les revendications 16 à 18, dans lequel la protéine ClfA ou l'un de ses fragments est un fragment du ClfA comprenant le domaine N3.
  19. 20. Procédé selon l'une quelconque des revendications 16 à 19, dans lequel la protéine ClfA ou l'un de ses fragments est un fragment du ClfA comprenant le domaine NI.
  20. 21. Procédé selon l'une quelconque des revendications 16 ou 17, dans lequel la protéine ClfA ou l'un de ses fragments comprend les domaines N2-N3 et a une séquence polypeptidique au moins identique à 90 % avec la séquence de SEQ ID NO : 6, 7, 11, 12, 15, 16, 17 ou 18.
  21. 22. Procédé selon l'une quelconque des revendications 16 à 21, dans lequel la protéine ClfA ou l'un de ses fragments contient une substitution d'acide aminé qui réduit la capacité du ClfA à se lier au fibrinogène.
  22. 23. Procédé selon la revendication 22, dans lequel la protéine ClfA ou l'un de ses fragments contient une substitution d'acide aminé au niveau d'au moins l'un des acides aminés Ala254, Tyr256, Pro336, Tyr338, Ile387, Lys389, Tyr474, Glu526 ou Val527.
  23. 24. Procédé selon la revendication 22, dans lequel l'acide aminé Pro336 est muté en Ser et/ou Y338 est muté en Ala.
  24. 25. Procédé selon l'une quelconque des revendications 16 à 24, dans lequel la protéine ClfA ou l'un de ses fragments est présente dans la composition immunogène sous la forme d'une protéine non conjuguée.
  25. 26. Procédé selon l'une quelconque des revendications 16 à 24, dans lequel la protéine ClfA ou l'un de ses fragments est conjuguée au saccharide capsulaire de S. aureus Type 5.
  26. 27. Procédé selon l'une quelconque des revendications 16 à 24, dans lequel la protéine ClfA ou l'un de ses fragments est conjuguée au saccharide capsulaire de S. aureus Type 8.
  27. 28. Procédé selon l'une quelconque des revendications 16 à 18, dans lequel la protéine ClfA ou l'un de ses fragments est présente dans la composition immunogène à une dose de 5 à 50, 10 à 30, 5 à 15 ou 20 à 40 pg.
  28. 29. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 28, dans lequel la dose unique de la composition immunogène est administrée 5 à 60, 6 à 40, 7 à 30 ou 7 à 15 jours avant une procédure planifiée à l'hôpital.
  29. 30. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel la composition immunogène comprend une anatoxine alpha.
  30. 31. Procédé selon la revendication 30, dans lequel l'anatoxine alpha a une séquence d'acides aminés au moins identique à 90 % avec SEQ ID NO : 1, 2, 13 ou 14.
  31. 32. Procédé selon la revendication 30 ou 31, dans lequel l'anatoxine alpha contient une mutation ponctuelle qui diminue la toxicité de l'anatoxine alpha.
  32. 33. Procédé selon la revendication 32, dans lequel l'anatoxine alpha contient une mutation ponctuelle au niveau de l'acide aminé 35.
  33. 34. Procédé selon la revendication 33, dans lequel la mutation ponctuelle au niveau de l'acide aminé 35 remplace une histidine par un acide aminé arginine.
  34. 35. Procédé selon l'une quelconque des revendications 30 à 34, dans lequel l'anatoxine alpha est présente dans la composition immunogène sous la forme d'une protéine non conj uguée.
  35. 36. Procédé selon l'une quelconque des revendications 30 à 35, dans lequel l'anatoxine alpha est conjuguée au saccharide capsulaire de S. aureus Type 5.
  36. 37. Procédé selon l'une quelconque des revendications 30 à 36, dans lequel l'anatoxine alpha est conjuguée au saccharide capsulaire de S. aureus Type 8.
  37. 38. Procédé selon l'une quelconque des revendications 30 à 37, dans lequel l'anatoxine alpha est présente dans la composition immunogène à une dose de 5 à 50, 10 à 30, 5 à 15 ou 20 à 40 pg.
  38. 39. Procédé selon l'une quelconque des revendications 30 a 38, dans lequel le ClfA et l'anatoxine alpha sont présents à la même dose dans la composition immunogène.
  39. 40. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel la composition immunogène ne contient pas d'émulsion huile dans l'eau.
  40. 41. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel la composition immunogène est non adjuvantée.
  41. 42. Composition immunogène comprenant un saccharide capsulaire de Staphylococcus aureus Type 5 conjugué à une protéine de transport pour former un conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 5, où le conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 est administré à une dose de saccharide de 3 à 50 pg, 5 à 25 pg, 3 à 20 pg, 3 à 12 pg, 5 à 10 pg, 7 à 20 pg, 7 à 15 pg ou 8 à 12 pg, pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par Staphylococcus aureus, où il est administré à un patient humain une seule dose de la composition immunogène.
  42. 43. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon la revendications 42, la composition immunogène comprenant un saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 conjugué à une protéine de transport pour former un conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 8, où le conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 est administré à une dose de saccharide de 3 à 50 pg, 5 à 25 pg, 3 à 20 pg, 3 à 12 pg, 5 à 10 pg, 7 à 20 pg, 7 à 15 pg ou 8 à 12 pg.
  43. 44. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon la revendication 42 ou 43, dans laquelle le saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 a une masse moléculaire supérieure à 25 kDa, 40 kDa ou 50 kDa, ou entre 25 et 125 kDa, 90 et 125 kDa, 30 et 100 kDa, 35 et 75 kDa ou 40 et 70 kDa.
  44. 45. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon l'une quelconque des revendications 42 à 44, dans laquelle le saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 a une masse moléculaire supérieure à 25 kDa, 40 kDa ou 50 kDa, ou entre 25 et 125 kDa, 90 et 125 kDa, 30 et 100 kDa, 35 et 75 kDa ou 40 et 70 kDa.
  45. 46. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon l'une quelconque des revendications 42 à 45, dans laquelle la protéine de transport à laquelle le saccharide capsulaire de Type 5 est conjugué est choisie dans le groupe constitué de l'anatoxine tétanique, l'anatoxine diphtérique, CRM197, l'anatoxine alpha, le ClfA, 1'exoprotéine A de Pseudomonas aeruginosa.
  46. 47. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon l'une quelconque des revendications 42 à 46, dans laquelle la protéine de transport à laquelle le saccharide capsulaire de Type 8 est conjugué est choisie dans le groupe constitué de l'anatoxine tétanique, l'anatoxine diphtérique, CRM197, l'anatoxine alpha, le ClfA, 1 ' exoprotéine A de Pseudomonas aeruginosa.
  47. 48. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon la revendication 46 ou 47, dans laquelle la protéine de transport est l'anatoxine tétanique.
  48. 49. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon l'une quelconque des revendications 42 à 48, dans laquelle le saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 et/ou le saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 est O-acétylé à 50 à 100 % ou 75 à 100 %.
  49. 50. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon l'une quelconque des revendications 42 à 49, dans laquelle le saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 et/ou le saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 est conjugué directement à la protéine de transport.
  50. 51. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon l'une quelconque des revendications 42 à 50, dans laquelle le saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 est conjugué en utilisant un réactif de cyanylation.
  51. 52. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon l'une quelconque des revendications 42 à 51, dans laquelle le saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 est conjugué en utilisant un réactif de cyanylation.
  52. 53. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon la revendication 51 ou 52, dans laquelle le réactif de cyanylation est le CDAP.
  53. 54. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon l'une quelconque des revendications 42 à 53, dans laquelle le rapport du polysaccharide sur la protéine dans le conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 se situe entre 1/5 et 5/1 (p/p) ou entre 1/2 et 2/1 (p/p) , 1/2 à 1/5 (p/p) ou 1/1 et 1/2 (p/p).
  54. 55. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon l'une quelconque des revendications 42 à 54, dans laquelle le rapport du polysaccharide sur la protéine dans le conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 se situe entre 1/5 et 5/1 (p/p) ou entre 1/2 et 2/1 (p/p) , 1/2 à 1/5 (p/p) ou 1/1 et 1/2 (p/p).
  55. 56. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon l'une quelconque des revendications 42 à 55, dans laquelle la même dose de saccharide du saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 et du saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 est présente dans la composition immunogène.
  56. 57. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon l'une quelconque des revendications 42 à 56, la composition immunogène comprenant en outre une protéine ClfA ou l'un de ses fragments.
  57. 58. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon la revendication 57, dans laquelle la protéine ClfA ou l'un de ses fragments est au moins identique à 90 % avec la séquence polypeptidique de l'une quelconque de SEQ ID NO : 3 à 12 ou 15 à 18 sur leur longueur entière.
  58. 59. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon la revendication 57 ou 58, dans laquelle la protéine ClfA ou l'un de ses fragments est un fragment du ClfA comprenant le domaine N2.
  59. 60. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon l'une quelconque des revendications 57 à 59, dans laquelle la protéine ClfA ou l'un de ses fragments est un fragment du ClfA comprenant le domaine N3.
  60. 61. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon l'une quelconque des revendications 57 à 60, dans laquelle la protéine ClfA ou l'un de ses fragments est un fragment du ClfA comprenant le domaine Ni.
  61. 62. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon l'une quelconque des revendications 57 et 58, dans laquelle la protéine ClfA ou l'un de ses fragments comprend le domaine N2-N3 et a une séquence polypeptidique au moins identique à 90 % avec la séquence de SEQ ID NO : 6, 7, 11, 12, 15, 16, 17 ou 18.
  62. 63. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon l'une quelconque des revendications 57 à 62, dans laquelle la protéine ClfA ou l'un de ses fragments contient une substitution d'acide aminé qui réduit la capacité du ClfA à se lier au fibrinogène.
  63. 64. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon la revendication 63, dans laquelle la protéine ClfA ou l'un de ses fragments contient une substitution d'acide aminé au niveau d'au moins l'un des acides aminés Ala254, Tyr256, Pro336, Tyr338, Ile387, Lys389, Tyr474, Glu526 ou Val527.
  64. 65. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon la revendication 63, dans laquelle l'acide aminé Pro336 est muté en Ser et/ou Y338 est muté en Ala.
  65. 66. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon l'une quelconque des revendications 57 à 65, dans laquelle la protéine ClfA ou l'un de ses fragments est présente dans la composition immunogène sous la forme d'une protéine non conjuguée.
  66. 67. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon l'une quelconque des revendications 57 à 65, dans laquelle la protéine ClfA ou l'un de ses fragments est conjuguée au saccharide capsulaire de S. aureus Type 5.
  67. 68. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon l'une quelconque des revendications 57 à 65, dans laquelle la protéine ClfA ou l'un de ses fragments est conjuguée au saccharide capsulaire de S. aureus Type 8.
  68. 69. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon l'une quelconque des revendications 57 à 68, dans laquelle la protéine ClfA ou l'un de ses fragments est présente dans la composition immunogène à une dose de 5 à 50, 10 à 30, 5 à 15 ou 20 à 40 pg.
  69. 70. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon l'une quelconque des revendications 42 à 69, dans laquelle la dose unique de la composition immunogène est administrée 5 à 60, 6 à 40, 7 à 30 ou 7 à 15 jours avant une procédure planifiée à l'hôpital.
  70. 71. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle la composition immunogène comprend une anatoxine alpha.
  71. 72. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon la revendication 71, dans laquelle l'anatoxine alpha a une séquence d'acides aminés au moins identique à 90 % avec SEQ ID NO : 1, 2, 13 ou 14.
  72. 73. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon la revendication 71 ou 72, dans laquelle l'anatoxine alpha contient une mutation ponctuelle qui diminue la toxicité de l'anatoxine alpha.
  73. 74. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon la revendication 73, dans laquelle l'anatoxine alpha contient une mutation ponctuelle au niveau de l'acide aminé 35.
  74. 75. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon la revendication 74, dans laquelle la mutation ponctuelle au niveau de l'acide aminé 35 remplace une histidine par un acide aminé arginine.
  75. 76. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon l'une quelconque des revendications 71 à 75, dans laquelle l'anatoxine alpha est présente dans la composition immunogène sous la forme d'une protéine non conjuguée.
  76. 77. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon l'une quelconque des revendications 71 à 76, dans laquelle l'anatoxine alpha est conjuguée au saccharide capsulaire de S. aureus Type 5.
  77. 78. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon l'une quelconque des revendications 71 à 77, dans laquelle l'anatoxine alpha est conjuguée au saccharide capsulaire de S. aureus Type 8.
  78. 79. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon l'une quelconque des revendications 71 à 78, dans laquelle l'anatoxine alpha est présente dans la composition immunogène à une dose de 5 à 50, 10 à 30, 5 à 15 ou 20 à 4 0 pg.
  79. 80. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon l'une quelconque des revendications 71 à 79, dans laquelle le ClfA et l'anatoxine alpha sont présents à la même dose dans la composition immunogène.
  80. 81. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon l'une quelconque des revendications 42 à 80, dans laquelle la composition immunogène ne contient pas d'émulsion huile dans l'eau.
  81. 82. Composition immunogène pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus selon l'une quelconque des revendications 42 à 81, dans laquelle la composition immunogène est non additionnée d'adjuvants.
  82. 83. Composition immunogène comprenant un saccharide capsulaire de Type 5 conjugué à une protéine de transport, un saccharide capsulaire de Type 8 conjugué à une protéine de transport, une protéine ClfA ou l'un de ses fragments et une anatoxine alpha.
  83. 84. Composition immunogène selon la revendication 83, dans laquelle le conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 est présent à une dose de saccharide de 3 à 50 pg, 5 à 25 pg, 3 à 20 pg, 3 à 12 pg, 5 à 10 pg, 7 à 20 pg, 7 à 15 pg ou 8 à 12 pg.
  84. 85. Composition immunogène selon la revendication 83 ou 84, dans laquelle le conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 est présent à une dose de saccharide de 3 à 50 pg, 5 à 25 pg, 3 à 20 pg, 3 à 12 pg, 5 à 10 pg, 7 à 20 pg, 7 à 15 pg ou 8 à 12 pg.
  85. 86. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 83 à 85, dans laquelle le saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 a une masse moléculaire supérieure à 25 kDa, 40 kDa ou 50 kDa, ou entre 25 et 125 kDa, 90 et 125 kDa, 30 et 100 kDa, 35 et 75 kDa ou 40 et 70 kDa.
  86. 87. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 83 à 86, dans laquelle le saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 a une masse moléculaire supérieure à 25 kDa, 40 kDa ou 50 kDa, ou entre 25 et 125 kDa, 90 et 125 kDa, 30 et 100 kDa, 35 et 75 kDa ou 40 et 70 kDa.
  87. 88. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 83 à 87, dans laquelle la protéine de transport à laquelle le saccharide capsulaire de Type 5 est conjugué est choisie dans le groupe constitué de l'anatoxine tétanique, l'anatoxine diphtérique, CRM197, l'anatoxine alpha, le ClfA, 1'exoprotéine A de Pseudomonas aeruginosa.
  88. 89. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 83 à 88, dans laquelle la protéine de transport à laquelle le saccharide capsulaire de Type 8 est conjugué est choisie dans le groupe constitué de l'anatoxine tétanique, l'anatoxine diphtérique, CRM197, l'anatoxine alpha, le ClfA, 1'exoprotéine A de Pseudomonas aeruginosa.
  89. 90. Composition immunogène selon la revendication 88 ou 89, dans laquelle la protéine de transport est l'anatoxine tétanique.
  90. 91. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 83 à 90, dans laquelle le saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 et/ou le saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 est O-acétylé à 50 à 100 % ou 75 à 100 %.
  91. 92. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 83 à 91, dans laquelle le saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 et/ou le saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 est conjugué directement à la protéine de transport.
  92. 93. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 83 à 92, dans laquelle le saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 est conjugué en utilisant un réactif de cyanylation.
  93. 94. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 83 à 93, dans laquelle le saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 est conjugué en utilisant un réactif de cyanylation.
  94. 95. Composition immunogène selon la revendication 93 ou 94, dans laquelle le réactif de cyanylation est le CDAP.
  95. 96. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 83 à 95, dans laquelle le rapport du polysaccharide sur la protéine dans le conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 se situe entre 1/5 et 5/1 (p/p) ou entre 1/2 et 2/1 (p/p) , 1/2 à 1/5 (p/p) ou 1/1 et 1/2 (p/p)·
  96. 97. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 83 à 96, dans laquelle le rapport du polysaccharide sur la protéine dans le conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 se situe entre 1/5 et 5/1 (p/p) ou entre 1/2 et 2/1 (p/p) , 1/2 à 1/5 (p/p) ou 1/1 et 1/2 (p/p)-
  97. 98. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 83 à 97, dans laquelle la même dose de saccharide du saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 et du saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 est présente dans la composition immunogène.
  98. 99. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 83 à 98, la composition immunogène comprenant en outre une protéine ClfA ou l'un de ses fragments.
  99. 100. Composition immunogène selon la revendication 99, dans laquelle la protéine ClfA ou l'un de ses fragments est au moins identique à 90 % avec la séquence polypeptidique de l'une quelconque de SEQ ID NO : 3 à 12 ou 15 à 18 sur leur longueur entière.
  100. 101. Composition immunogène selon la revendication 99 ou 100, dans laquelle la protéine ClfA ou l'un de ses fragments est un fragment du ClfA comprenant le domaine N2.
  101. 102. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 99 à 101, dans laquelle la protéine ClfA ou l'un de ses fragments est un fragment du ClfA comprenant le domaine N3.
  102. 103. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 99 à 102, dans laquelle la protéine ClfA ou l'un de ses fragments est un fragment du ClfA comprenant le domaine NI.
  103. 104. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 99 à 103, dans laquelle la protéine ClfA ou l'un de ses fragments comprend le domaine N2-N3 et a une séquence polypeptidique au moins identique à 90 % avec la séquence de SEQ ID NO : 6, 7, 11, 12, 15, 16, 17 ou 18.
  104. 105. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 99 à 104, dans laquelle la protéine ClfA ou l'un de ses fragments contient une substitution d'acide aminé qui réduit la capacité du ClfA à se lier au fibrinogène.
  105. 106. Composition immunogène selon la revendication 105, dans laquelle la protéine ClfA ou l'un de ses fragments contient une substitution d'acide aminé au niveau d'au moins l'un des acides aminés Ala254, Tyr256, Pro336, Tyr338, Ile387, Lys389, Tyr474, Glu526 ou Val527.
  106. 107. Composition immunogène selon la revendication 105, dans laquelle l'acide aminé Pro336 est muté en Ser et/ou Tyr338 est muté en Ala.
  107. 108. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 99 à 107, dans laquelle la protéine ClfA ou l'un de ses fragments est présente dans la composition immunogène sous la forme d'une protéine non conjuguée.
  108. 109. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 99 à 107, dans laquelle la protéine ClfA ou l'un de ses fragments est conjuguée au saccharide capsulaire de S. aureus Type 5.
  109. 110. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 99 à 107, dans laquelle la protéine ClfA ou l'un de ses fragments est conjuguée au saccharide capsulaire de S. aureus Type 8.
  110. 111. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 99 à 110, dans laquelle la protéine ClfA ou l'un de ses fragments est présente dans la composition immunogène à une dose de 5 à 50, 10 à 30, 5 à 15 ou 20 à 4 0 pg.
  111. 112. Composition immunogène selon la revendication 111, la composition immunogène ayant un volume de 0,5 ml.
  112. 113. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 83 à 112, la composition immunogène comprenant une anatoxine alpha.
  113. 114. Composition immunogène selon la revendication 113, dans laquelle l'anatoxine alpha a une séquence d'acides aminés au moins identique à 90 % avec SEQ ID NO : 1, 2, 13 ou 14.
  114. 115. Composition immunogène selon la revendication 113 ou 114, dans laquelle l'anatoxine alpha contient une mutation ponctuelle qui diminue la toxicité de l'anatoxine alpha.
  115. 116. Composition immunogène selon la revendication 115, dans laquelle l'anatoxine alpha contient une mutation ponctuelle au niveau de l'acide aminé 35.
  116. 117. Composition immunogène selon la revendication 116, dans laquelle la mutation ponctuelle au niveau de l'acide aminé 35 remplace une histidine par un acide aminé arginine ou leucine.
  117. 118. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 113 à 117, dans laquelle l'anatoxine alpha est présente dans la composition immunogène sous la forme d'une protéine non conjuguée.
  118. 119. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 113 à 118, dans laquelle l'anatoxine alpha est conjuguée au saccharide capsulaire de S. aureus Type 5.
  119. 120. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 113 à 119, dans laquelle l'anatoxine alpha est conjuguée au saccharide capsulaire de S. aureus Type 8.
  120. 121. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 113 à 120, dans laquelle l'anatoxine alpha est présente dans la composition immunogène à une dose de 5 à 50, 10 à 30, 5 à 15 ou 20 à 40 yg.
  121. 122. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 113 à 121, dans laquelle le ClfA et l'anatoxine alpha sont présents à la même dose dans la composition immunogène.
  122. 123. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 83 à 122, dans laquelle la composition immunogène ne contient pas d'émulsion huile dans l'eau.
  123. 124. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 83 à 123, dans laquelle la composition immunogène est non additionnée d'adjuvants.
  124. 125. Vaccin comprenant la composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 83 à 124, et un excipient pharmaceutiquement acceptable.
  125. 126. Procédé de fabrication de la composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 83 à 124 ou du vaccin selon la revendication 125, comprenant les étapes de a) conjugaison d'un saccharide capsulaire de S. aureus Type 5 à une protéine de transport pour former un conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 5, b) conjugaison d'un saccharide capsulaire de S. aureus Type 8 à une protéine de transport pour former un conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 8, et c) combinaison du conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 5, du conjugué de saccharide capsulaire de S. aureus Type 8, d'une protéine ClfA ou de l'un de ses fragments et d'une anatoxine alpha pour former la composition immunogène.
  126. 127. Composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 83 à 124 ou vaccin selon la revendication 125, pour une utilisation dans le traitement ou la prévention d'une infection par S. aureus chez un sujet humain.
  127. 128. Composition immunogène pour une utilisation selon la revendication 127, où le sujet humain subit une procédure chirurgicale, éventuellement une chirurgie cardio-thoracique.
  128. 129. Composition immunogène pour une utilisation selon la revendication 128, où le sujet humain est immunisé avec une seule dose de la composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 83 à 124 ou du vaccin selon la revendication 125 à un point du temps 5 à 60, 6 à 40, 7 à 30 ou 7 à 15 jours avant de subir la procédure chirurgicale.
  129. 130. Procédé de traitement comprenant l'étape d'administration à un sujet humain à risque de développer une infection par S. aureus d'une quantité immunologiquement efficace de la composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 83 à 124 ou du vaccin selon la revendication 125.
  130. 131. Procédé selon la revendication 130, dans lequel le sujet humain subit une procédure chirurgicale, éventuellement une chirurgie cardio-thoracique.
  131. 132. Procédé selon la revendication 131, dans lequel le sujet humain est immunisé avec une seule dose de la composition immunogène selon l'une quelconque des revendications 83 à 124 ou du vaccin selon la revendication 125 à un point du temps 5 à 60, 6 à 40, 7 à 30 ou 7 à 15 jours avant de subir la procédure chirurgicale.
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