KR20160018604A - 치료에 사용하기 위한 면역원성 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 출원은 스타필로코쿠스 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 컨쥬게이트를 형성하기 위해 담체 단백질에 컨쥬게이션된 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류를 포함하는 단일 용량의 면역원성 조성물을 인간 환자에 투여하는 단계를 포함하는, 스타필로코쿠스 아우레우스 감염에 대해 면역화시키는 방법으로서, S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 컨쥬게이트가 3-50㎍의 당류 용량으로 투여되는 방법을 기재한다.
Description
본 발명은 포도구균 면역원성 조성물 및 백신의 분야, 이들의 제조 및 의학에서의 상기 조성물의 용도에 관한 것이다. 보다 특히, 본 발명은 담체 단백질에 컨쥬게이션된 S. 아우레우스(S. aureus)로부터의 캡슐 당류로 제조된 컨쥬게이트의 용도에 관한 것이다. 그러한 컨쥬게이트는 선택된 포도구균 단백질 항원과 조합되어 다가 조성물을 형성할 수 있다.
스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus)(S. 아우레우스)는 인간 피검체의 약 30%의 비공, 겨드랑이, 인두 및 다른 점막과 피부 표면에 집락을 이룬 공생하는 그램-양성 박테리아이다. S. 아우레우스는 모든 의료 관련 감염의 20-25%의 원인이 되는 것으로 추정되며 (Wisplinghoff et al Clin Infect. Dis. 2004; 39; 309-317), 그러한 감염이 없는 환자에 비해 감염된 환자에서 3번의 입원 기간 및 5배 더 높은 병원내 사망 위험을 발생시킨다 (Noskin et al Arch. Intern. Med. 2005; 165; 1756-1761). S. 아우레우스 감염은 최대 25%의 병원내 사망률과 관련될 수 있다. 역사적으로, S. 아우레우스는 병원내 감염과 주로 관련되었다. 그러한 감염의 심각성은 항생제 내성과 관련된 최근의 극적인 S. 아우레우스 감염 증가와 함께 증가되었다. 스타필로코쿠스 아우레우스는 상당한 이환율과 사망률을 지닌 병원내 감염의 가장 흔한 원인이다 (Romero-Vivas et al 1995, Infect. Dis. 21; 1417). 이는 골수염, 심내막염, 화농성 관절염, 폐렴, 종기 및 독성 쇼크 증후군 중 일부 병증의 원인이다.
포도구균 항원에 대한 폴리클로날 항혈청의 투여를 포함하는 수동 면역요법 (WO 00/15238, WO 00/12132) 뿐만 아니라 리포테이코산에 대한 모노클로날 항체를 이용한 면역요법 (WO 98/57994)이 조사되었다. 그러나 아직까지, 어떤 것도 사용이 승인되지 않았다. 여러 면역요법 후보가 인간에서 효능을 나타내지 못했다. 이는 StaphVAX™으로 백신접종된 피검체로부터 정제된 CP5 및 CP8 항체를 함유하는 Altastaph (Nabi Biopharmaceuticals)(Nabi Biopharmaceuticals, Rockville, MD, USA에 의해 개발되고 상표화된 시험용 백신; Veronate (Inhibitex), S. 아우레우스 응괴 인자 A (ClfA)를 표적화하는 폴리클로날 항체 및 S. 에피더미디스 부착 SdrG; Aurexis (Tefibazumab, Inhibitex), ClfA를 표적화하는 모노클로날 항체; Aurograb (NeuTec Pharma), ATP-결합 카세트 수송체에 대한 단일쇄 항체; 및 Pagibaximab (Biosynexus), 모노클로날 항-리포테이코산 항체 (Dejonge et al J. Paediatrics 2007; 151; 260-265, Rupp et al Antimicrob. Agents Chemother. 2007; 51; 4249-4254)를 포함한다.
대안적인 접근법은 포도구균에 대한 폴리클로날 면역 반응을 생성하기 위해 능동 백신접종을 이용하는 것이다. WO 03/61558에 보고된 한 접근법은 슈도모나스 엑소단백질 A에 컨쥬게이션된 S. 아우레우스 타입 5 및 타입 8 캡슐 다당류의 컨쥬게이트를 이용한다 (StaphVAX - Nabi Biopharmaceuticals). 추가 접근법은 S. 아우레우스 IsdB 단백질 (V710 - Merck & Co)을 이용하였으나 효능을 입증하지 못했다 (Fowler et al 2013; JAMA 309; 1368-1378).
S. 아우레우스 감염에 대한 백신 개발과 관련된 수많은 문제가 존재한다. 단일 구성요소 (캡슐 다당류 또는 IsdB 단백질)에 의존하는 백신의 실패는 다수의 구성요소를 함유하는 더 복잡한 백신이 보호 면역성을 유도하는데 필요할 수 있음을 제안한다. 그러나, 면역원성 조성물에 상이한 항원을 조합시키는 것은 조성물에서 간섭 발생으로 이어질 수 있다 (Skurnik et al (2010) J. Clin. Invest. 120; 3220-3233). 따라서, 다가 조성물로 조합되는 구성요소의 확인은 쉽지 않다. 특히 다중약물 내성 균주의 빈도가 증가함을 고려할 때, 포도구균 감염에 효과적인 백신을 개발할 필요성이 여전히 남아 있다.
병원내 포도구균 감염에 대해 면역화시키는 경우, 면역화는 종종 입원 또는 수술 전이나 유치 카테터의 배치 전의 단시간에만 일어날 수 있다. 따라서 단일 면역화에 의해 높은 수준의 면역성을 달성하는 것이 이로울 것이다. 낮은 용량의 컨쥬게이트의 이용은 또한 백신 생산의 상대적 효율성 및 관련된 경제적 이익의 장점을 지닌다.
따라서, 스타필로코쿠스 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 컨쥬게이트를 형성하기 위해 담체 단백질에 컨쥬게이션된 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류를 포함하는 단일 용량의 면역원성 조성물을 인간 환자에 투여하는 것을 포함하는, 스타필로코쿠스 아우레우스 감염에 대해 면역화시키는 방법이 제공되고, 이 때 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 컨쥬게이트는 3-50㎍, 5-25㎍, 3-20㎍, 3-12㎍, 5-10㎍, 7-20㎍, 7-15㎍ 또는 8-12㎍의 당류 용량으로 투여된다.
본 발명의 두 번째 양태에서, 인간 환자에 단일 용량의 면역원성 조성물이 투여되는 스타필로코쿠스 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한, 스타필로코쿠스 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 컨쥬게이트를 형성하기 위해 담체 단백질에 컨쥬게이션된 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류를 포함하는 면역원성 조성물이 제공되며, 이 때 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 컨쥬게이트는 3-50㎍, 5-25㎍, 3-20㎍, 3-12㎍, 5-10㎍, 7-20㎍, 7-15㎍ 또는 8-12㎍의 당류 용량으로 투여된다.
본 발명의 세 번째 양태에서, 담체 단백질에 컨쥬게이션된 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류, 담체 단백질에 컨쥬게이션된 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류, ClfA 단백질 또는 이의 단편 및 알파 톡소이드를 포함하는 면역원성 조성물이 제공된다.
본 발명의 네 번째 양태에서, 담체 단백질에 컨쥬게이션된 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류, 담체 단백질에 컨쥬게이션된 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류, ClfA 단백질 또는 이의 단편 및 알파 톡소이드 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 백신이 제공된다.
본 발명의 다섯 번째 양태에서, a) S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류를 담체 단백질에 컨쥬게이션시켜 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 컨쥬게이트를 형성하는 단계, b) S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류를 담체 단백질에 컨쥬게이션시켜 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류 컨쥬게이트를 형성하는 단계, 및 c) S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 컨쥬게이트, S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류 컨쥬게이트, ClfA 단백질 또는 이의 단편 및 알파 톡소이드를 조합시켜 면역원성 조성물을 형성하는 단계를 포함하는, 본 발명의 면역원성 조성물 또는 백신을 제조하는 방법이 제공된다.
도 1 - 1 또는 2 용량의 4C 백신 후에 동통을 경험한 피검체의 백분율. 각각의 제형 그룹에서, 처음 3개의 컬럼은 단일 용량 후에 동통을 경험한 피검체의 %를 제공하며, 첫 번째 컬럼은 모든 동통 보고를 나타내고, 두 번째 컬럼은 2등급보다 높거나 같은 등급의 동통을 나타내며, 세 번째 컬럼은 3등급 동통을 나타낸다. 네 번째, 다섯 번째 및 여섯 번째 컬럼은 두 번째 용량 이후의 동일한 정보를 나타낸다.
도 2 - 1 또는 2 용량의 4C 백신 후에 발적을 경험한 피검체의 백분율. 각각의 제형 그룹에서, 처음 3개의 컬럼은 단일 용량 후에 발적을 경험한 피검체의 %를 제공하며, 첫 번째 컬럼은 모든 발적 보고를 나타내고, 두 번째 컬럼은 50mm 이상의 발적을 나타내며, 세 번째 컬럼은 100mm 이상의 발적을 나타낸다. 네 번째, 다섯 번째 및 여섯 번째 컬럼은 두 번째 용량 이후의 동일한 정보를 나타낸다.
도 3 - 1 또는 2 용량의 4C 백신 후에 종창을 경험한 피검체의 백분율. 각각의 제형 그룹에서, 처음 3개의 컬럼은 단일 용량 후에 종창을 경험한 피검체의 %를 제공하며, 첫 번째 컬럼은 모든 종창 보고를 나타내고, 두 번째 컬럼은 50mm 이상의 종창을 나타내며, 세 번째 컬럼은 100mm 이상의 종창을 나타낸다. 네 번째, 다섯 번째 및 여섯 번째 컬럼은 두 번째 용량 이후의 동일한 정보를 나타낸다.
도 4 - S. 아우레우스 타입 5 캡슐 다당류에 대해 생긴 항체에 대한 면역원성 결과. 제 1 및 제 2 면역화 후의 다양한 시점에 타입 5 캡슐 다당류에 대한 항체를 검출하는 Luminex 검정의 GMC 결과가 도시된다. 선택된 시점은 면역화 전 0일, 한 번 면역화 후 7일, 한 번 면역화 후 14일, 한 번 면역화 후 30일, 두 번 면역화 후 7일 (그래프에서 37일에 해당함), 두 번 면역화 후 14일 (그래프에서 44일에 해당함) 및 두 번 면역화 후 30일 (그래프에서 60일에 해당함)이다. 각 시점에 대해, 결과는 5/10, 5/10AS, 10/30, 10/30AS 및 염수의 순서 (왼쪽에서 오른쪽)로 제공된다.
도 5 - S. 아우레우스 타입 8 캡슐 다당류에 대해 생긴 항체에 대한 면역원성 결과. 제 1 및 제 2 면역화 후의 다양한 시점에 타입 8 캡슐 다당류에 대한 항체를 검출하는 Luminex 검정의 GMC 결과가 도시된다. 선택된 시점은 면역화 전 0일, 한 번 면역화 후 7일, 한 번 면역화 후 14일, 한 번 면역화 후 30일, 두 번 면역화 후 7일 (그래프에서 37일에 해당함), 두 번 면역화 후 14일 (그래프에서 44일에 해당함) 및 두 번 면역화 후 30일 (그래프에서 60일에 해당함)이다. 각 시점에 대해, 결과는 5/10, 5/10AS, 10/30, 10/30AS 및 염수의 순서 (왼쪽에서 오른쪽)로 제공된다.
도 6 - S. 아우레우스 알파 톡소이드에 대해 생긴 항체에 대한 면역원성 결과. 제 1 및 제 2 면역화 후의 다양한 시점에 알파 톡소이드에 대한 항체를 검출하는 Luminex 검정의 GMC 결과가 도시된다. 선택된 시점은 면역화 전 0일, 한 번 면역화 후 7일, 한 번 면역화 후 14일, 한 번 면역화 후 30일, 두 번 면역화 후 7일 (그래프에서 37일에 해당함), 두 번 면역화 후 14일 (그래프에서 44일에 해당함) 및 두 번 면역화 후 30일 (그래프에서 60일에 해당함)이다. 각 시점에 대해, 결과는 5/10, 5/10AS, 10/30, 10/30AS 및 염수의 순서 (왼쪽에서 오른쪽)로 제공된다.
도 7 - S. 아우레우스 ClfA에 대해 생긴 항체에 대한 면역원성 결과. 제 1 및 제 2 면역화 후의 다양한 시점에 ClfA에 대한 항체를 검출하는 Luminex 검정의 GMC 결과가 도시된다. 선택된 시점은 면역화 전 0일, 한 번 면역화 후 7일, 한 번 면역화 후 14일, 한 번 면역화 후 30일, 두 번 면역화 후 7일 (그래프에서 37일에 해당함), 두 번 면역화 후 14일 (그래프에서 44일에 해당함) 및 두 번 면역화 후 30일 (그래프에서 60일에 해당함)이다. 각 시점에 대해, 결과는 5/10, 5/10AS, 10/30, 10/30AS 및 염수의 순서 (왼쪽에서 오른쪽)로 제공된다.
도 8 - 1, 2 또는 3회 면역화 후에 0일 내지 540일의 장기간에 걸쳐 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 다당류 (패널 A), S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류 (패널 B), 알파 톡소이드 (패널 C) 및 ClfA (패널 D)에 대한 면역원성 결과.
도 2 - 1 또는 2 용량의 4C 백신 후에 발적을 경험한 피검체의 백분율. 각각의 제형 그룹에서, 처음 3개의 컬럼은 단일 용량 후에 발적을 경험한 피검체의 %를 제공하며, 첫 번째 컬럼은 모든 발적 보고를 나타내고, 두 번째 컬럼은 50mm 이상의 발적을 나타내며, 세 번째 컬럼은 100mm 이상의 발적을 나타낸다. 네 번째, 다섯 번째 및 여섯 번째 컬럼은 두 번째 용량 이후의 동일한 정보를 나타낸다.
도 3 - 1 또는 2 용량의 4C 백신 후에 종창을 경험한 피검체의 백분율. 각각의 제형 그룹에서, 처음 3개의 컬럼은 단일 용량 후에 종창을 경험한 피검체의 %를 제공하며, 첫 번째 컬럼은 모든 종창 보고를 나타내고, 두 번째 컬럼은 50mm 이상의 종창을 나타내며, 세 번째 컬럼은 100mm 이상의 종창을 나타낸다. 네 번째, 다섯 번째 및 여섯 번째 컬럼은 두 번째 용량 이후의 동일한 정보를 나타낸다.
도 4 - S. 아우레우스 타입 5 캡슐 다당류에 대해 생긴 항체에 대한 면역원성 결과. 제 1 및 제 2 면역화 후의 다양한 시점에 타입 5 캡슐 다당류에 대한 항체를 검출하는 Luminex 검정의 GMC 결과가 도시된다. 선택된 시점은 면역화 전 0일, 한 번 면역화 후 7일, 한 번 면역화 후 14일, 한 번 면역화 후 30일, 두 번 면역화 후 7일 (그래프에서 37일에 해당함), 두 번 면역화 후 14일 (그래프에서 44일에 해당함) 및 두 번 면역화 후 30일 (그래프에서 60일에 해당함)이다. 각 시점에 대해, 결과는 5/10, 5/10AS, 10/30, 10/30AS 및 염수의 순서 (왼쪽에서 오른쪽)로 제공된다.
도 5 - S. 아우레우스 타입 8 캡슐 다당류에 대해 생긴 항체에 대한 면역원성 결과. 제 1 및 제 2 면역화 후의 다양한 시점에 타입 8 캡슐 다당류에 대한 항체를 검출하는 Luminex 검정의 GMC 결과가 도시된다. 선택된 시점은 면역화 전 0일, 한 번 면역화 후 7일, 한 번 면역화 후 14일, 한 번 면역화 후 30일, 두 번 면역화 후 7일 (그래프에서 37일에 해당함), 두 번 면역화 후 14일 (그래프에서 44일에 해당함) 및 두 번 면역화 후 30일 (그래프에서 60일에 해당함)이다. 각 시점에 대해, 결과는 5/10, 5/10AS, 10/30, 10/30AS 및 염수의 순서 (왼쪽에서 오른쪽)로 제공된다.
도 6 - S. 아우레우스 알파 톡소이드에 대해 생긴 항체에 대한 면역원성 결과. 제 1 및 제 2 면역화 후의 다양한 시점에 알파 톡소이드에 대한 항체를 검출하는 Luminex 검정의 GMC 결과가 도시된다. 선택된 시점은 면역화 전 0일, 한 번 면역화 후 7일, 한 번 면역화 후 14일, 한 번 면역화 후 30일, 두 번 면역화 후 7일 (그래프에서 37일에 해당함), 두 번 면역화 후 14일 (그래프에서 44일에 해당함) 및 두 번 면역화 후 30일 (그래프에서 60일에 해당함)이다. 각 시점에 대해, 결과는 5/10, 5/10AS, 10/30, 10/30AS 및 염수의 순서 (왼쪽에서 오른쪽)로 제공된다.
도 7 - S. 아우레우스 ClfA에 대해 생긴 항체에 대한 면역원성 결과. 제 1 및 제 2 면역화 후의 다양한 시점에 ClfA에 대한 항체를 검출하는 Luminex 검정의 GMC 결과가 도시된다. 선택된 시점은 면역화 전 0일, 한 번 면역화 후 7일, 한 번 면역화 후 14일, 한 번 면역화 후 30일, 두 번 면역화 후 7일 (그래프에서 37일에 해당함), 두 번 면역화 후 14일 (그래프에서 44일에 해당함) 및 두 번 면역화 후 30일 (그래프에서 60일에 해당함)이다. 각 시점에 대해, 결과는 5/10, 5/10AS, 10/30, 10/30AS 및 염수의 순서 (왼쪽에서 오른쪽)로 제공된다.
도 8 - 1, 2 또는 3회 면역화 후에 0일 내지 540일의 장기간에 걸쳐 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 다당류 (패널 A), S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류 (패널 B), 알파 톡소이드 (패널 C) 및 ClfA (패널 D)에 대한 면역원성 결과.
상세한 설명
본 발명은 스타필로코쿠스 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 컨쥬게이트를 형성하기 위해 담체 단백질에 컨쥬게이션된 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류를 포함하는 단일 용량의 면역원성 조성물을 인간 환자에 투여하는 단계를 포함하는, 스타필로코쿠스 아우레우스 감염에 대해 면역화시키는 방법을 기재하며, 이 때 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 컨쥬게이트는 3-50㎍, 3-25㎍, 3-20㎍, 3-12㎍, 5-50㎍, 5-25㎍, 5-20㎍, 5-12㎍, 5-10㎍, 7-20㎍, 7-15㎍ 또는 8-12㎍의 당류 용량으로 투여된다.
구체예에서, 면역원성 조성물은 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류 컨쥬게이트를 형성하기 위해 담체 단백질에 컨쥬게이션된 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류를 추가로 포함하며, S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류 컨쥬게이트는 3-50㎍, 3-25㎍, 3-20㎍, 3-12㎍, 5-50㎍, 5-25㎍, 5-20㎍, 5-12㎍, 5-10㎍, 7-20㎍, 7-15㎍ 또는 8-12㎍의 당류 용량으로 투여된다.
구체예에서, 동일한 당류 용량의 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 컨쥬게이트 및 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류 컨쥬게이트가 면역원성 조성물에 존재하며; 예를 들어, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10㎍ 당류 용량의 타입 5 및 타입 8 컨쥬게이트 둘 모두가 면역원성 조성물에 존재한다.
인간에서 염증을 야기하는 S. 아우레우스의 대부분의 균주는 타입 5 또는 타입 8 다당류를 함유한다. 인간 균주의 약 60%는 타입 8이고 약 30%는 타입 5이다. 문헌[Jones Carbohydrate Research 340, 1097-1106 (2005)]에서는 다음과 같은 캡슐 다당류의 구조를 확인하기 위해 NMR 분광학을 이용하였다:
타입 5
→4)-β-D-ManNAcA-(1 →4)-α-L-FucNAc(3OAc)-(1 →3)-β-D-FucNAc-(1 →
타입 8
→3)-β-D-ManNAcA(4OAc)-(1 →3)-α-L-FucNAc(1 →3)-α-D-FucNAc(1 →
다당류는 예를 들어 US6294177, WO 11/41003, WO 11/51917 또는 문헌[Infection and Immunity (1990) 58(7); 2367]에 기재된 대로, 당업자에게 잘 알려진 방법을 이용하여 S. 아우레우스의 적절한 균주로부터 추출될 수 있다. 예를 들어, ATCC 12902는 타입 5 S. 아우레우스 균주이고 ATCC 12605는 타입 8 S. 아우레우스 균주이다.
다당류는 천연 크기를 지니거나 대안적으로, 예를 들어 미세유동화, 초음파 조사 또는 pH 5.0-3.0에 노출과 같은 화학 처리에 의해, 크기가 감소될 수 있다. 본 발명은 또한 S. 아우레우스로부터의 타입 5 및 8 다당류에서 유래된 올리고당류를 포함한다. 구체예에서, S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류는 25kDa, 30kDa, 40kDa, 50kDa, 60kDa, 70kDa, 80kDa 또는 90kDa 초과 또는 25-125kDa, 90-125kDa, 30-100kDa, 35-75KDa 또는 40-70kDa의 분자량을 지닌다. 구체예에서, S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류는 25kDa, 30kDa, 40kDa, 50kDa, 60kDa, 70kDa, 80kDa 또는 90kDa 초과 또는 25-125kDa, 90-125kDa, 30-100kDa, 35-75KDa 또는 40-70kDa의 분자량을 지닌다.
구체예에서, 타입 5 및/또는 타입 8 캡슐 당류가 컨쥬게이션되는 담체 단백질은 파상풍 톡소이드, 디프테리아 톡소이드, CRM197, 알파 톡소이드, ClfA, 및 슈도모나스 에어루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 엑소단백질 A로 구성된 군으로부터 선택된다.
본 발명의 면역원성 조성물에 포함된 타입 5 및/또는 8 캡슐 다당류 또는 올리고당류는 O-아세틸화된다. 구체예에서, 타입 5 캡슐 다당류 또는 올리고당류의 O-아세틸화 정도는 50-100%. 60-100%, 70-100%, 80-100%, 90-100%, 50-90%, 60-90%, 70-90%, 70-80% 또는 80-90%이다. 구체예에서, 타입 8 캡슐 다당류 또는 올리고당류의 O-아세틸화 정도는 10-100%, 20-100%, 30-100%, 40-100%, 50-100%. 60-100%, 70-100%, 80-100%, 90-100%, 50-90%, 60-90%, 70-90%, 70-80% 또는 80-90%이다. 구체예에서, 타입 5 및 타입 8 캡슐 다당류 또는 올리고당류의 O-아세틸화 정도는 10-100%, 20-100%, 30-100%, 40-100%, 50-100%. 60-100%, 70-100%, 80-100%, 90-100%, 50-90%, 60-90%, 70-90%, 70-80% 또는 80-90%이다. 구체예에서, 타입 5 및/또는 타입 8 캡슐 당류는 80-100% 또는 100% O-아세틸화된다.
다당류 또는 올리고당류의 O-아세틸화 정도는 당 분야에 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들어, 양성자 NMR (Lemercinier and Jones 1996, Carbohydrate Research 296; 83-96, Jones and Lemercinier 2002, J Pharmaceutical and Biomedical analysis 30; 1233-1247, WO 05/033148 or WO 00/56357)에 의해 결정될 수 있다. 보통 사용되는 추가 방법은 문헌[Hestrin (1949) J. Biol. Chem. 180; 249-261]에 기재된 것이다.
O-아세틸기는 가수분해에 의해, 예를 들어 무수 하이드라진과 같은 염기로의 처리 (Konadu et al 1994; Infect. Immun. 62; 5048-5054) 또는 1-8시간 동안 0.1N NaOH로의 처리에 의해 제거될 수 있다. 타입 5 및/또는 8 다당류 또는 올리고당류에 대한 높은 수준의 O-아세틸화를 유지하기 위해, O-아세틸기의 가수분해를 발생시키는 처리는 최소화된다. 예를 들어, 극단적인 pH에서의 처리는 최소화된다.
백신접종에서 다당류의 이용과 관련된 문제는 특히 다당류 자체가 불충분한 면역원이라는 사실에 있다. 이러한 면역원성의 부족을 극복하도록 설계된 전략은 다당류를 방관자 T-세포 도움을 제공하는 큰 단백질 담체에 연결시키는 것을 포함한다. 구체예에서, 본 발명에 이용된 다당류는 방관자 T-세포 도움을 제공하는 단백질 담체에 연결된다. 다당류 또는 올리고당류 면역원에 커플링되기 위해 사용될 수 있는 이러한 담체의 예는 디프테리아 및 파상풍 톡소이드 (DT, DT Crm197 및 TT), 키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH), 슈도모나스 에어루기노사 엑소단백질 A (rEPA) 및 투베르쿨린의 정제된 단백질 유도체 (PPD), 헤모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae)로부터의 단백질 D, 뉴몰리신 또는 상기 중 임의의 단편을 포함한다. 사용하기 적합한 단편은 T-헬퍼 에피토프를 포함하는 단편을 포함한다. 특히 단백질 D 단편은 임의로 단백질의 N-말단 1/3을 함유할 것이다. 단백질 D는 헤모필루스 인플루엔자로부터의 IgD-결합 단백질이다 (EP 0 594 610 B1).
포도구균 백신과 관련해서 사용이 특히 유리한 신규한 담체 단백질은 포도구균 알파 톡소이드이다. 컨쥬게이션 공정이 독성을 감소시키므로 천연 형태는 다당류에 컨쥬게이션될 수 있다. 임의로 유전적으로 탈독화된 알파 독소, 예컨대 His35Leu 또는 His 35 Arg 변이체는 잔류 독성이 더 낮으므로 담체로서 이용된다. 대안적으로, 알파 독소는 가교제, 포름알데히드 또는 글루타르알데히드로의 처리에 의해 화학적으로 탈독화된다. 컨쥬게이션 공정은 알파 독소를 탈독화시키는 대안적인 화학 처리이다. 유전적으로 탈독화된 알파 독소는 독성을 더 감소시키기 위해 임의로 가교제, 포름알데히드 또는 글루타르알데히드로의 처리에 의해, 임의로 화학적으로 탈독화된다.
다당류는 임의의 공지된 방법에 의해 담체 단백질(들)에 연결될 수 있다 (예를 들어, Likhite에 의한 U.S. Patent 4,372,945, Armor 등에 의한 U.S. Patent 4,474,757, Anderson 등에 의한 WO 10/151544, Berti 등에 의한 WO 11/138636, 및 Jennings 등에 의한 U.S. Patent 4,356,170). 임의로, CDAP 컨쥬게이션 화학이 수행된다 (WO 95/08348, WO 07/113222 참조).
CDAP에서, 시아닐화 시약 1-시아노-디메틸아미노피리디늄 테트라플루오로보레이트 (CDAP)가 다당류-단백질 컨쥬게이트의 합성에 임의로 이용된다. 시아닐화 반응은 알칼리 민감성 다당류의 가수분해를 회피하는 비교적 순한 조건 하에 수행될 수 있다. 이러한 합성은 담체 단백질로의 직접 커플링을 허용한다.
다당류는 물 또는 염수 용액에 용해될 수 있다. CDAP는 아세토니트릴에 용해되거나 다당류 용액에 직접 첨가될 수 있다. CDAP는 다당류의 하이드록실기와 반응하여 시아네이트 에스테르를 형성한다. 활성화 단계 후에, 담체 단백질이 첨가된다. 리신의 아미노기는 활성화된 다당류와 반응하여 이소우레아 공유 연결을 형성한다. 커플링 반응 후에, 매우 과량의 글리신을 이어서 첨가하여 남아 있는 활성화된 작용기를 켄칭시킨다. 그 후 생성물을 겔 투과 컬럼을 통해 통과시켜 반응하지 않은 담체 단백질 및 잔류 시약을 제거한다.
구체예에서, S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 및/또는 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류를 담체 단백질에 직접 컨쥬게이션한다. 그러나, 본 발명은 또한 타입 5 및/또는 8 캡슐 당류가 링커, 예를 들어 ADH 링커를 통해 컨쥬게이션된 컨쥬게이트를 포함한다.
구체예에서, S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 및/또는 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류는 시아닐화제, 예를 들어 CDAP를 이용하여 컨쥬게이션된다. 대안적으로, 환원성 아민화 또는 카르보디이미드 (예를 들어 EDAC) 화학과 같은 다른 컨쥬게이션 공정이 이용된다.
구체예에서, S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 컨쥬게이트에서 다당류 대 단백질의 비는 1:5 내지 5:1 (w:w), 1:1 내지 1:5 (w/w), 1:2 내지 1:5 (w/w), 1:3 내지 1:5 (w/w), 1:2 내지 2:1 (w/w) 또는 1:1 내지 1:2 (w/w)이다. 구체예에서, S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류 컨쥬게이트에서 다당류 대 단백질의 비는 1:5 내지 5:1 (w:w), 1:1 내지 1:5 (w/w), 1:2 내지 1:5 (w/w), 1:3 내지 1:5 (w/w) 1:2 내지 2:1 (w/w) 또는 1:1 내지 1:2 (w/w)이다.
응괴 인자 A (ClfA)는 S. 아우레우스 섬유소원 결합 단백질로서 확인되었고 (US6008341) 포도구균 감염에 대한 면역화에 이용될 수 있는 다당류에 대한 잠재적인 담체 단백질로서 확인되었다 (WO 04/80490). ClfA는 표면 위치 단백질이고 섬유소원에 결합하여 S. 아우레우스의 부착에 기여하는 이의 성질로 인해 중요한 독성 인자이다. ClfA는 섬유소원 결합 영역을 함유한다. A 도메인으로서 공지된 이러한 영역은 ClfA의 N-말단쪽에 위치하고 N1, N2 및 N3으로서 공지된 3개의 별도로 폴딩된 서브도메인을 포함한다. A 도메인 다음에 세린-아스파르테이트 반복 영역 및 세포벽 및 세포벽에 소르타젠-촉진된 고정을 위한 LPXTG 모티프를 함유하는 막 스패닝 영역이 온다. ClfA는 섬유소원의 γ-사슬의 C-말단에 결합하여, 섬유소원 용액에서 박테리아의 응괴를 유도할 수 있다 (McDevitt et al (1997) Eur. J. Biochem. 247; 416-424). ClfA의 아미노산 잔기 221-559는 섬유소원 결합을 유지하는 N2-N3 영역에 해당한다. ClfA의 아미노산 221-559을 함유하는 단편이 바람직한 단편이다. 아미노산 잔기 532 내지 538은 ClfA의 래칭 펩티드 영역에 해당한다. 각각의 서브도메인은 신규한 IgG-타입 폴드를 형성하는 9개의 β-가닥을 포함한다. ClfA의 섬유소원 γ-사슬 펩티드 결합 부위는 N2 및 N3 사이의 접합부에 있는 소수성 그루브에 위치한다.
최근에, ClfA의 아미노산 P336 및 Y338은 섬유소원 결합 부위이며, 이의 돌연변이는 섬유소원 결합의 손실을 발생시키는 것이 인지되었다 (Josefsson et al 2008, PLOS One volume 3, Issue 5, page 1-7). SEQ ID NO: 8-12, 17 및 18은 위치 336 및 338에 점 돌연변이를 함유한다. 이러한 변이체에서 섬유소원 결합의 손실은 면역된 마우스에서 패혈증 사망에 대한 보호를 위한 증가된 능력을 발생시켰는데, 이는 재조합 ClfA의 백신 잠재력이 섬유소원에 결합하는 그 능력을 제거함에 의해 개선된다는 결론을 이끌어 내었다 (WO 09/95453). 그러나, Y256, P336, Y338 또는 K389 중 단 하나에 점 돌연변이를 지닌 변이체가 또한 섬유소원에 결합하는 그 능력을 상실하였다 (Deivanayagam et al EMBO J, 21; 6660-6672 (2002)). 이러한 단일 점 돌연변이가 유사하게 개선된 면역원성을 나타낼 것으로 에상되므로, 단일 돌연변이를 또한 본 발명에 이용할 수 있다. 구체예에서, 면역원성 조성물은 ClfA 단백질 또는 이의 단편, 임의로 재조합, 분리되거나 정제된 ClfA 단백질 또는 이의 단편을 추가로 포함한다.
구체예에서, ClfA 단백질은 이의 전체 길이를 따라 SEQ ID NO:3, 4, 5, 6 또는 7 또는 8-12의 폴리펩티드 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 93%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하다.
당 분야에 공지된 "동일성"은 서열을 비교함에 의해 결정되는 대로, 경우에 따라 2개 이상의 폴리펩티드 서열 또는 2개 이상의 폴리뉴클레오티드 서열 간의 관계이다. 당 분야에서, "동일성"은 또한 그러한 서열의 스트링 간의 일치에 의해 결정되는 대로, 경우에 따라 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드 서열 간의 서열 관련성 정도를 의미한다. "동일성"은 문헌(Computational Molecular Biology, Lesk, A.M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D.W., ed., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M., and Griffin, H.G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heine, G., Academic Press, 1987; and Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991; and Carillo, H., and Lipman, D., SIAM J. Applied Math., 48: 1073 (1988)]에 기재된 방법을 비제한적으로 포함하는 공지된 방법에 의해 용이하게 계산될 수 있다. 동일성을 결정하는 방법은 시험 서열들 간의 최대 일치를 제공하도록 설계된다. 더욱이, 동일성을 결정하는 방법은 공개적으로 이용가능한 컴퓨터 프로그램으로 코드화된다. 2개의 서열 간의 동일성을 결정하는 컴퓨터 프로그램 방법은 GCG 프로그램 패키지의 GAP 프로그램 (Devereux, J., et al., Nucleic Acids Research 12(1): 387 (1984)), BLASTP, BLASTN (Altschul, S.F. et al., J. Molec. Biol. 215: 403-410 (1990), 및 FASTA (Pearson and Lipman Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85; 2444-2448 (1988))을 포함하지만 이로 한정되는 것은 아니다. 프로그램의 BLAST 패밀리는 NCBI 및 다른 공급처에서 공개적으로 이용가능하다 (BLAST Manual, Altschul, S., et al., NCBI NLM NIH Bethesda, MD 20894; Altschul, S., et al., J. Mol. Biol. 215: 403-410 (1990). 널리 공지된 Smith Waterman 알고리듬도 동일성을 결정하는데 이용될 수 있다.
폴리펩티드 서열 비교를 위한 파라메터는 다음을 포함한다:
알고리듬: Needleman and Wunsch, J. Mol Biol. 48: 443-453 (1970)
비교 매트릭스: Henikoff and Henikoff로부터의 BLOSSUM62,
Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 89:10915-10919 (1992)
갭 페널티: 8
갭 길이 페널티: 2
이러한 파라메터를 갖는 유용한 프로그램은 Genetics Computer Group (Madison WI)으로부터의 "갭" 프로그램으로서 공개적으로 이용가능하다. 상기 언급된 파라메터는 펩티드 비교를 위한 기본 파라메터이다 (말단 갭에 대한 페널티 없음에 덧붙여).
폴리뉴클레오티드 비교를 위한 파라메터는 다음을 포함한다:
알고리듬: Needleman and Wunsch, J. Mol Biol. 48: 443-453 (1970)
비교 매트릭스: 매치 = +10, 미스매치 = 0
갭 페널티: 50
갭 길이 페널티: 3
다음으로 이용가능: Genetics Computer Group (Madison WI)로부터의 "갭" 프로그램. 이들은 핵산 비교를 위한 기본 파라메터이다.
단백질이 본원에서 구체적으로 언급되는 경우, 이는 임의로 천연 또는 재조합, 전장 단백질 또는 임의로 어떤 신호 서열이 제거된 성숙 단백질에 대한 언급이다. 단백질은 포도구균 균주로부터 직접 분리되거나 재조합 DNA 기법에 의해 생산될 수 있다. 단백질의 면역원성 단편은 본 발명의 면역원성 조성물에 혼입될 수 있다. 이들은 단백질의 아미노산 서열로부터 연속하여 취해진 적어도 10개 아미노산, 적어도 20개 아미노산, 적어도 30개 아미노산, 적어도 40개 아미노산, 적어도 50개 아미노산 또는 적어도 100개 아미노산을 포함하는 단편이다. 또한, 그러한 면역원성 단편은 전형적으로 포도구균 단백질에 대해 생성된 항체 또는 포도구균에 의한 포유동물 숙주의 감염에 의해 생성된 항체와 면역학적으로 반응성이거나 T 세포 에피토프를 함유한다. 구체예에서, 면역원성 단편은 또한 유효 용량으로 투여될 때 (단독으로 또는 담체에 결합된 합텐으로서), 포도구균 감염에 대해 보호성 면역 반응을 유도하는 단편을 포함하며, 임의로 이것은 S. 아우레우스 및/또는 S. 에피더미디스(S. epidermidis) 감염에 대해 보호성이다. 그러한 면역원성 단편은, 예를 들어, N-말단 리더 서열, 및/또는 막통과 도메인 및/또는 C-말단 앵커 도메인이 결여된 단백질을 포함할 수 있다. ClfA의 경우, 바람직한 단편은 ClfA의 C-말단쪽의 SD 반복 도메인이 결여되어 있다 (예를 들어, 아미노산 555-927, 556-927, 557-927, 558-927, 559-927 또는 560-927이 결실된 단편을 이용함에 의해). ClfA 및 알파 톡소이드의 경우, 바람직한 단편은 제거된 신호 펩티드를 지녀서, 임의로 재조합 발현을 가능하게 하는 N-말단에 초기 메티오닌 잔기를 지니는 성숙 단백질을 형성한다.
구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 융합 단백질 또는 ClfA의 단편을 함유할 수 있다. 융합 단백질은 임의로 T-세포 에피토프의 프로바이더 또는 정제 태그와 같은 이종성 서열, 예를 들어: β-갈락토시다제, 글루타치온-S-트랜스퍼라제, 그린 형광 단백질 (GFP), 에피토프 태그, 예컨대 FLAG, myc tag, 폴리 히스티딘, 또는 바이러스 표면 단백질, 예컨대 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌, 또는 박테리아 단백질, 예컨대 파상풍 톡소이드, 디프테리아 톡소이드, CRM197을 함유한다. 융합 단백질은 본 발명의 면역원성 조성물에 유리 단백질로서 존재할 수 있거나 당류에 연결된 담체 단백질일 수 있다.
구체예에서, 본 발명은 또한 ClfA 단백질의 면역원성 단편, 즉 SEQ ID NO:3의 폴리펩티드 서열을 포함하는 폴리펩티드와 동일하거나 실질적으로 동일한 면역원성 활성을 갖는 ClfA 폴리펩티드의 연속 부분을 제공한다. 즉, 단편 (필요에 따라 담체에 결합될 때)은 ClfA 폴리펩티드를 인지하는 면역 반응을 일으킬 수 있다. 그러한 면역원성 단편은, 예를 들어, N-말단 리더 서열, 및/또는 ClfA의 C-말단쪽의 SD 반복 도메인이 결여된 ClfA 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 바람직한 양태에서, ClfA의 면역원성 단편은 실질적으로 모든 섬유소원 결합 도메인을 포함하고 SEQ ID NO:4-12 중 어느 하나의 아미노산 서열과 상기 서열의 전체 길이에 걸쳐 적어도 85% 동일성, 바람직하게는 적어도 90% 동일성, 더욱 바람직하게는 적어도 95% 동일성, 가장 바람직하게는 적어도 97-99% 동일성 또는 100% 동일성을 갖는다.
단편은 "프리-스탠딩(free-standing)"이거나, 이들이 부분 또는 영역을 형성하는 더 큰 폴리펩티드 내에 포함될 수 있으며, 가장 바람직하게는 단일한 더 큰 폴리펩티드 내에 단일한 연속 영역으로서 포함될 수 있다.
ClfA의 추가 단편은 SEQ ID NO:3의 아미노산 서열로부터의 적어도 15, 20, 30, 40, 50 또는 100개 연속 아미노산을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 분리된 폴리펩티드를 포함한다.
구체예에서, ClfA 단백질은 N1 도메인, N2 도메인, N3 도메인, N1 및 N2 도메인, N2 및 N3 도메인 또는 N1 및 N2 및 N3 도메인을 포함하는 ClfA의 단편이다. 임의로, ClfA 단편은 N2 및 N3 도메인을 포함하고 SEQ ID NO: 6, 7, 11 또는 12의 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는다.
구체예에서, ClfA 단백질 또는 이의 단편은 섬유소원에 결합하는 ClfA의 능력을 감소시키거나 폐지하는 아미노산 치환, 결실 또는 삽입을 함유한다. 구체예에서, 섬유소원에 결합하는 ClfA의 능력은 적어도 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95 또는 99%만큼 감소한다. 그러한 돌연변이는 전형적으로 ClfA의 N-말단에 있는 섬유소원 결합 영역에 존재한다. 돌연변이는 임의로 아미노산 Ala254, Tyr256, Pro336, Tyr338, Ile387, Lys389, Tyr474, Glu526 또는 Val527 중 적어도 하나, 2개, 3개 또는 4개에서의 아미노산 치환이다. 구체예에서, ClfA 아미노산 Pro336은 돌연변이된다. 구체예에서 ClfA 아미노산 Tyr338은 돌연변이된다. 구체예에서, Pro336 및 Tyr338 둘 모두는 임의로 알라닌 또는 세린으로 돌연변이된다. 구체예에서, ClfA는 Pro336이 Ser으로 돌연변이되고 Tyr338이 Ala으로 돌연변이된 2개의 돌연변이를 함유한다.
구체예에서, ClfA 단백질 또는 단편은 컨쥬게이션되지 않은 단백질로서 면역원성 조성물에 존재한다. 대안적으로, 이것은 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 또는 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류에 컨쥬게이션된 채로 존재한다. 그러한 경우에, ClfA는 담체 단백질 및 항원으로서 기능할 수 있다.
구체예에서, ClfA 단백질 또는 이의 단편은 5-50, 10-30, 5-15 또는 20-40 ㎍의 용량으로 면역원성 조성물에 존재한다.
알파 독소는 S. 아우레우스의 대부분의 균주에 의해 생산되는 중요한 독성 결정인자이다. 이것은 용혈 활성을 갖는 포어 형성 독소이다. 알파 독소에 대한 항체는 동물 모델에서 알파 독소의 유해하고 치명적인 효과를 중화시키는 것으로 나타났다 (Adlam et al 1977 Infect. Immun. 17; 250). 인간 혈소판, 내피 세포 및 단핵 세포는 알파 독소의 효과에 영향을 받기 쉽다. 알파 독소가 면역원성 조성물에 이용되기 위해, 이는 전형적으로 화학 처리 또는 돌연변이에 의해 탈독화되어 알파 톡소이드를 생산한다.
구체예에서, 면역원성 조성물은 알파 톡소이드를 포함한다. 임의로 알파 톡소이드는 SEQ ID NO:1 또는 2와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 갖는다.
알파 독소의 높은 독성은 면역원으로서 사용되기 전에 탈독화되어야 할 필요가 있다. 이는 화학 처리에 의해, 예를 들어 다른 가교제의 포름알데히드, 글루타르알데히드로의 처리 또는 이것을 상기 기재된 박테리아 다당류에 화학적으로 컨쥬게이션시킴에 의해 달성될 수 있다.
독성을 감소시키는 추가 방법은 독소의 면역원성을 유지하면서 독성을 제거하는 점 돌연변이를 도입시키는 것이다. 히스티딘 잔기를 류신 잔기로 대체하는 알파 독소의 아미노산 35에서 점 돌연변이의 도입은 면역원성을 유지하면서 독성의 제거를 초래한다 (Menzies and Kernodle 1996; Infect. Immun. 64; 1839). 히스티딘 35는 포어 형성에 필요한 적절한 올리고머화에 중요한 것으로 보이며 이러한 잔기의 돌연변이는 독성의 손실을 초래한다. 히스티딘 35의 변형은 Lys, Arg, Ala, Leu 또는 Glu으로의 치환일 수 있다. Asp24, Lys37, His48, Lys58, Asp100, Ile107, Glu111, Met113, Asp127, Asp128, Gly130, Gly134, His144, Lys147, Gln150, Asp152, Phe153, Lys154, Val169, Asn173, Arg200, Asn214, Leu219 또는 His259에서 알파 독소의 점 돌연변이는 독성을 감소시키기 위해 임의로 이용될 수 있다.
본 발명의 면역원성 조성물에 혼입될 때, 알파 톡소이드는 His 35의 돌연변이에 의해, 예를 들어 His 35를 Leu 또는 Arg로 대체함에 의해 임의로 탈독화된다. 대안적인 구체예에서, 알파 톡소이드는 면역원성 조성물의 다른 구성요소, 예를 들어 S. 아우레우스 타입 5 다당류 및/또는 S. 아우레우스 타입 8 다당류로의 컨쥬게이션에 의해 탈독화된다. 구체예에서, 알파 톡소이드는 점 돌연변이의 도입 및 S. 아우레우스 타입 5 다당류 및/또는 S. 아우레우스 타입 8 다당류로의 컨쥬게이션 둘 모두에 의해 탈독화된다.
구체예에서, 면역원성 조성물은, 예를 들어 아미노산 35에 알파 독소의 독성을 감소시키는 점 돌연변이를 함유하는 알파 톡소이드를 포함한다. 알파 톡소이드는 히스티딘이 아르기닌 아미노산으로 대체되는 아미노산 35에서의 점 돌연변이를 임의로 함유한다.
구체예에서, 알파 톡소이드는 면역원성 조성물에 컨쥬게이션되지 않은 단백질로서 존재한다. 대안적으로, 알파 톡소이드는 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 및/또는 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류에 컨쥬게이션된다.
구체예에서, 알파 톡소이드는 면역원성 조성물에 5-50, 10-30, 5-15 또는 20-40 ㎍의 용량으로 존재한다. 구체예에서, ClfA 및 알파 톡소이드는 면역원성 조성물에 동일한 용량으로 존재한다. 구체예에서 타입 5 및 8 캡슐 당류 컨쥬게이트의 당류 용량은 ClfA 및 알파 톡소이드의 단백질 용량보다 높다.
구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 약학적으로 허용되는 부형제, 및 임의로 애쥬번트와 혼합되어 백신을 형성한다.
본 발명의 백신은, 특히 노인, 면역손상되거나 만성질환 집단 (예컨대 당뇨병, 말기 신질환 또는 포도구균 감염의 위험이 높은 다른 집단)에 사용하기 위해 그리고 또한 유아 집단에 사용하기 위해 애쥬번트화될 수 있다. 적합한 애쥬번트는 알루미늄 염, 예컨대 알루미늄 하이드록사이드 겔 또는 알루미늄 포스페이트 또는 알룸을 포함하고, 또한 칼슘, 마그네슘, 철 또는 아연의 염과 같은 다른 금속염일 수 있다. 예를 들어, 대사성 오일 (예를 들어 스쿠알렌), 에멀젼화제 (예를 들어 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트) 및 임의로 토콜 (예를 들어 알파 토코페롤)을 포함하는 수중유 에멀젼도 적합하다 (WO 09/95453).
선택되는 애쥬번트는 TH1 타입의 반응의 우선적인 유도인자인 것이 바람직하다. 그러한 높은 수준의 Th1-타입 사이토카인은 주어진 항원에 대한 세포 매개된 면역 반응의 유도를 선호하는 경향이 있는 한편, 높은 수준의 Th2-타입 사이토카인은 항원에 대한 체액 면역 반응의 유도를 선호하는 경향이 있다.
Th1 및 Th2-타입 면역 반응의 구별은 절대적이지 않다. 실제로 개인은 우세하게 Th1이거나 우세하게 Th2인 것으로 기재되는 면역 반응을 지지할 것이다. 그러나, Mosmann 및 Coffman에 의해 뮤린 CD4 +ve T 세포 클론에서 기재된 바에 관해 사이토카인의 패밀리를 고려하는 것이 종종 편리하다 (Mosmann, T.R. and Coffman, R.L. (1989) TH1 and TH2 cells: different patterns of lymphokine secretion lead to different functional properties. (Annual Review of Immunology, 7, p145-173)). 전통적으로, Th1-타입 반응은 T-림프구에 의한 INF-γ 및 IL-2 사이토카인의 생산과 관련된다. Th1-타입 면역 반응의 유도와 종종 직접 관련되는 다른 사이토카인은 IL-12와 같은 T-세포에 의해 생산되지 않는다. 대조적으로, Th2-타입 반응은 Il-4, IL-5, IL-6, IL-10의 분비와 관련된다. 우세하게 Th1 반응을 촉진하는 적합한 애쥬번트 시스템은 모노포스포릴 지질 A 또는 이의 유도체 (또는 일반적으로 탈독화된 지질 A - 예를 들어 WO2005107798을 참조하라), 특히 3-데-O-아실화된 모노포스포릴 지질 A (3D-MPL) (이의 제조를 위해 GB 2220211 A를 참조하라); 및 알루미늄 염 (예를 들어 알루미늄 포스페이트 또는 알루미늄 하이드록사이드) 또는 수중유 에멀젼과 함께 모노포스포릴 지질 A, 바람직하게는 3-데-O-아실화된 모노포스포릴 지질 A의 조합물을 포함한다. 그러한 조합물에서, 항원 및 3D-MPL은 동일한 미립자 구조물에 함유되어, 항원성 및 면역자극성 신호의 더욱 효율적인 전달을 가능하게 한다. 연구는 3D-MPL이 알룸-흡착된 항원의 면역원성을 더 향상시킬 수 있다고 밝혔다 [Thoelen et al. Vaccine (1998) 16:708-14; EP 689454-B1].
추가 시스템은 모노포스포릴 지질 A 및 사포닌 유도체의 조합물, 특히 WO 94/00153에 기재된 대로 QS21 및 3D-MPL의 조합물, 또는 WO 96/33739에 기재된 대로 QS21이 콜레스테롤에 의해 켄칭된 덜 반응원성인 조성물을 포함한다. 수중유 에멀젼에 QS21, 3D-MPL 및 토코페롤을 포함하는 추가의 애쥬번트 제형이 WO 95/17210에 기재되어 있다. 한 구체예에서, 면역원성 조성물은 QS21일 수 있는 사포닌을 추가로 포한하다. 제형은 또한 수중유 에멀젼 및 토코페롤을 포함할 수 있다 (WO 95/17210). 메틸화되지 않은 CpG 함유 올리고뉴클레오티드 (WO 96/02555) 및 다른 면역조절성 올리고뉴클레오티드 (WO0226757 및 WO03507822)도 TH1 반응의 우선적인 유도인자이며 본 발명에 사용하기 적합하다.
그러나, 본 발명자들은 임상 시험에서, 수중유 에멀젼 애쥬번트의 첨가가 면역원성의 증가를 일으키지 않았음을 발견하였다. 애쥬번트의 사용과 관련될 수 있는 증가된 반응원성을 고려하여, 본 발명의 구체예는 애쥬번트화되지 않은 면역원성 조성물, 예를 들어 존재하는 어떤 포도구균 성분도 애쥬번트에 흡착되지 않은 면역원성 조성물 또는 포도구균 성분이 수중유 에멀젼 애쥬번트와 혼합되지 않은 면역원성 조성물을 이용한다. 포도구균 성분은 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 컨쥬게이트, S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류 컨쥬게이트, ClfA 단편 또는 이의 단편 및 알파 톡소이드 중 1, 2, 3 또는 4개를 포함한다.
본 발명의 추가의 양태는 상기 기재된 면역원성 조성물 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 백신이다. 본 발명의 백신 제조물은 상기 백신을 전신 또는 점막 경로를 통해 투여함에 의해 S. 아우레우스 감염에 취약한 인간을 보호하거나 치료하는데 이용될 수 있다. 이러한 투여는 근내, 복강내, 피내 또는 피하 경로를 통하거나; 구강/소화, 호흡, 비뇨생식관으로의 점막 투여를 통한 주입을 포함할 수 있다.
백신 제조물은 일반적으로 문헌[Vaccine Design ("The subunit and adjuvant approach" (eds Powell M.F. & Newman M.J.) (1995) Plenum Press New York)]에 기재되어 있다. 리포솜 내의 캡슐화는 문헌[Fullerton, US Patent 4,235,877]에 기재되어 있다.
본 발명의 백신은 용액으로 저장될 수 있거나 동결건조될 수 있다. 임의로 용액은 수크로스, 트레할로스 또는 락토스와 같은 당의 존재 하에 동결건조된다. 이들을 동결건조시키고 사용 전에 즉석에서 재구성하는 것은 전형적인 것이다. 동결건조는 더욱 안정한 조성물 (백신)을 발생시킬 수 있다.
본 발명은 또한 본 발명의 면역원성 조성물 및 백신을 제조하는 방법을 포함한다. 구체예에서, 본 발명의 방법은 a) S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류를 담체 단백질에 컨쥬게이션시켜 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 컨쥬게이트를 형성하는 단계, b) S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류를 담체 단백질에 컨쥬게이션시켜 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류 컨쥬게이트를 형성하는 단계, 및 c) S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 컨쥬게이트, S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류 컨쥬게이트, ClfA 단백질 또는 이의 단편 및 알파 톡소이드를 조합시켜 면역원성 조성물을 형성하는 단계를 포함하는 백신을 제조하는 방법이다. 구체예에서, 상기 방법은 약학적으로 허용되는 부형제를 첨가하는 추가 단계를 포함한다.
본 발명은 또한 포도구균 감염, 특히 병원 획득 병원내 감염을 치료하는 방법을 포함한다.
본 발명의 면역원성 조성물 또는 백신은 대기 수술의 경우에, 특히 피검체가 단일 용량으로 면역될 때 사용하기에 특히 유리하다. 그러한 환자는 수술 날짜를 미리 알고 있을 것이고 유리하게 사전에 접종될 수 있다. 구체예에서, 피검체는 병원에 입원하기 5-60, 6-40, 7-30 또는 7-15일 전에 단일 용량의 본 발명의 면역원성 조성물로 면역된다. 구체예에서, 피검체는 계획된 병원 절차, 예를 들어 심장-흉부 수술 절차와 같은 수술 절차보다 5-60, 6-40, 7-30 또는 7-15일 전에 단일 용량의 본 발명의 면역원성 조성물로 면역된다. 전형적으로 대기 수술을 기다리고 있는 16세가 넘은 성인은 본 발명의 면역원성 조성물 및 백신으로 처리된다. 대안적으로 대기 수술을 기다리고 있는 3-16세의 소아는 본 발명의 면역원성 조성물 및 백신으로 처리된다.
의료 종사자들을 본 발명의 백신으로 접종하는 것이 또한 가능하다.
본 발명의 백신 제조물은 상기 백신을 전신 또는 점막 경로를 통해 투여함에 의해 S. 아우레우스 감염에 취약한 인간을 보호하거나 치료하는데 이용될 수 있다. 이러한 투여는 근내, 복강내, 피내 또는 피하 경로를 통하거나; 구강/소화, 호흡, 비뇨생식관으로의 점막 투여를 통한 주입을 포함할 수 있다.
본 발명의 구체예는 본 발명의 면역원성 조성물 또는 백신을 이를 필요로 하는 환자에 투여하는 단계를 포함하는, 포도구균 감염 또는 질환을 예방하거나 치료하는 방법이다.
본 발명의 추가의 구체예는, 포도구균 감염 또는 질환, 임의로 수술-후 포도구균 감염의 치료 또는 예방을 위한 백신의 제조에서의 본 발명의 면역원성 조성물의 용도이다.
본원에서 용어 "포함하는", "~들을 포함하다" 및 "~을 포함하다"는 모든 경우에 각각 용어 "구성된", "~들로 구성되다" 및 "~로 구성되다"와 선택적으로 대체될 수 있는 것으로 본 발명자들에 의해 의도된다. 그러나, 용어 "포함하는", "~들을 포함하다" 및 "~을 포함하다"는 이들이 대체될 수 없는 경우 그 일반적인 "개방된" 의미를 유지한다.
본 특허 명세서에 인용된 모든 참고문헌 또는 특허 출원은 본원에 참조로서 포함된다.
본 발명이 더 잘 이해될 수 있도록, 하기 실시예가 개시된다. 이러한 실시예는 단지 예시를 목적으로 하며, 어떠한 방식으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되지 않는다.
실시예
실시예 1 단백질의 서열
실시예 2 백신 구성요소의 제조
파상풍 톡소이드 담체 단백질에 컨쥬게이션된 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 다당류, 파상풍 톡소이드 담체 단백질에 컨쥬게이션된 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 다당류, N2 및 N3 도메인 및 P336이 세린으로 변화되고 Y338이 알라닌으로 변화된 잔기 336 및 338에서의 점 돌연변이를 함유하는 ClfA의 단편, 및 H35가 아르기닌으로 변화된 잔기 35에서의 점 돌연변이에 의해 탈독화된 알파 톡소이드를 함유한 4 구성요소 포도구균 백신을 제조하였다. 캡슐 다당류는 커플링제로서 CDAP를 이용하여 파상풍 톡소이드에 컨쥬게이션되었다. 이러한 컨쥬게이션 공정은 WO 07/113222에 기재되어 있다.
포도구균 백신의 4개 제형이 제조되었다:
5/10 함유됨: 5㎍ 당류 용량의 타입 5 - 파상풍 톡소이드 컨쥬게이트, 5㎍ 당류 용량의 타입 8 - 파상풍 톡소이드 컨쥬게이트, 10㎍의 알파 톡소이드 및 10㎍의 상기 기재된 ClfA 트렁케이트(truncate).
10/30 함유됨: 10㎍ 당류 용량의 타입 5 - 파상풍 톡소이드 컨쥬게이트, 10㎍ 당류 용량의 타입 8 - 파상풍 톡소이드 컨쥬게이트, 30㎍의 알파 톡소이드 및 30㎍의 상기 기재된 ClfA 트렁케이트.
5/10AS 함유됨: 스쿠알렌, 알파-토코페롤 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트를 함유하는 수중유 에멀젼으로 애쥬번트화된, 5㎍ 당류 용량의 타입 5 - 파상풍 톡소이드 컨쥬게이트, 5㎍ 당류 용량의 타입 8 - 파상풍 톡소이드 컨쥬게이트, 10㎍의 알파 톡소이드 및 10㎍의 상기 기재된 ClfA 트렁케이트.
10/30AS 함유됨: 스쿠알렌, 알파-토코페롤 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트를 함유하는 수중유 에멀젼으로 애쥬번트화된, 10㎍ 당류 용량의 타입 5 - 파상풍 톡소이드 컨쥬게이트, 10㎍ 당류 용량의 타입 8 - 파상풍 톡소이드 컨쥬게이트, 30㎍의 알파 톡소이드 및 30㎍의 상기 기재된 ClfA 트렁케이트.
실시예 3 4 구성요소 포도구균 백신을 이용한 임상 시험 결과
18 내지 40세의 총 88명의 건강한 성인을 이용하여 I상 임상 시험을 수행하였다. 대조군은 염수로 접종된 30명의 피검체를 포함하였다. 남은 피검체를 4개의 아암으로 분류하였고 15/14명 피검체를 실시예 2에 기재된 각각의 제형으로 면역시켰다 (5/10, 5/10AS, 10/30 및 10/30AS). 백신 용량은 시험 시작 및 1개월 후 및 6개월에 제공되었다. 체액 분석을 위한 혈액 샘플을 각 용량 후 0, 7, 14 및 30일과 360일 및 540일에 취하였다.
피검체의 자세한 설명이 하기에 제공된다.
그룹
N
평균 연령
% 여성
5/10
15
31.1
73.3
5/10AS
15
31.9
33.3
10/30
14
30.9
42.9
10/30AS
14
30.6
50
염수
30
30.1
50
반응원성 및 안전성
4 구성요소 포도구균 백신은 일반적으로 안전하고 잘 관용되었다. 제 1 및 제 2 용량 후에 심각한 부작용 및 잠재적인 면역 매개 장애는 관찰되지 않았다. 용량 1 및 용량 2 후에 동통, 발적 및 종창을 보고한 피검체의 백분율이 도 1-3에 도시된다. 동통은 대조군에서의 3-4%에 비해 백신 그룹의 피검체 중 78.6-100%의 피검체가 주입 부위에서 경험하였다 (도 1을 참조하라). 그러나, 단지 한 경우만이 3등급이었다. 발적 및 종창의 발생에 대한 결과는 도 2 및 3에 도시된다. 두 파라메터 모두의 경우에, 연구의 10/30 아암에 대해 단일 용량 후 보다 제 2 용량의 투여 후에 더 높은 발적/종창이 발생하는 경향이 있었다.
면역원성
0일 및 제 1, 제 2 및 제 3 면역화 후 7, 14 및 30일에 피검체로부터 취해진 혈액 샘플을 Luminex 또는 ELISA에 의해 시험하여 4 구성요소 포도구균 백신의 각각의 항원에 대해 생산된 IgG의 수준을 확인하였다.
면역원성에 대한 결과를 도 4-8 및 하기 표 1-5에 도시한다.
백신접종 전, 모든 검정에 대해 83.3-100% 혈청 양성이었다. 상당 수준의 배경 면역성에도 불구하고, 4 구성요소 백신은 모든 4 구성요소에 대해 강력한 면역 반응을 유도할 수 있었다.
도 4-7은 CPS5, CPS8, 알파 톡소이드 및 ClfA의 경우, 첫 번째 면역화가 면역원성의 가장 큰 증가를 제공하고 GMC의 강한 증가는 14일 및 30일에 명백함을 보여준다. 30일에 두 번째 면역화는 면역원성에서의 추가 증가를 제공하지 않았고 GMC 수준은 30일과 60일 사이에 유사한 수준으로 유지된다. 도 8은 6개월 후의 세 번째 면역화가 GMC에서의 추가 증가를 일으키지 않았고 GMC 수준은 30일과 540일 사이에 4 구성요소에 대해 대략 동일하게 유지됨을 나타낸다. 따라서 단일 면역화는 최대 면역 반응을 생성하는 효율적인 방식이다.
10/30 투여량에 대한 면역원성 결과는 CPS5, CPS8 및 알파 톡소이드의 경우에 GMC의 약 1-5-2배 증가를 지니며 5/10 투여량보다 더 강한 것으로 보인다. ClfA의 경우, GMC에서의 증가는 보다 높은 용량에서 약 3.8배였다. 수중유 에멀젼 애쥬번트의 첨가는 5/10 및 5/10AS 아암 및 10/30 및 10/30AS 아암에 의해 유도된 항체 반응의 비교에 의해 입증된 대로 4 구성요소 백신의 면역원성을 증가시키지 않았다.
표 1 Staph aureus.CPS 5 Ab.IgG 항체에 대한 혈청양성율 및 GMC (면역원성에 대한 ATP 코호트)
표 2 Staph aureus.CPS 8 Ab.IgG 항체에 대한 혈청양성율 및 GMC (면역원성에 대한 ATP 코호트)
표 3 Staph aureus 알파-독소 Ab.IgG 항체에 대한 혈청양성율 및 GMC (면역원성에 대한 ATP 코호트)
표 4
Staph aureus ClfA Ab.IgG 항체에 대한 혈청양성율 및 GMC (면역원성에 대한 ATP 코호트)
표 5
C tetani.Tox Ab.IgG 항체에 대한 혈청양성율 및 GMC (면역원성에 대한 ATP 코호트)
SEQUENCE LISTING
<110> GlaxoSmithKline Biologicals
<120> Immunogenic composition for use in therapy
<130> VB65459
<160> 18
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 319
<212> PRT
<213> Staphylococcus aureus
<400> 1
Met Lys Thr Arg Ile Val Ser Ser Val Thr Thr Thr Leu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Ser Ile Leu Met Asn Pro Val Ala Asn Ala Ala Asp Ser Asp Ile Asn
20 25 30
Ile Lys Thr Gly Thr Thr Asp Ile Gly Ser Asn Thr Thr Val Lys Thr
35 40 45
Gly Asp Leu Val Thr Tyr Asp Lys Glu Asn Gly Met His Lys Lys Val
50 55 60
Phe Tyr Ser Phe Ile Asp Asp Lys Asn His Asn Lys Lys Leu Leu Val
65 70 75 80
Ile Arg Thr Lys Gly Thr Ile Ala Gly Gln Tyr Arg Val Tyr Ser Glu
85 90 95
Glu Gly Ala Asn Lys Ser Gly Leu Ala Trp Pro Ser Ala Phe Lys Val
100 105 110
Gln Leu Gln Leu Pro Asp Asn Glu Val Ala Gln Ile Ser Asp Tyr Tyr
115 120 125
Pro Arg Asn Ser Ile Asp Thr Lys Glu Tyr Met Ser Thr Leu Thr Tyr
130 135 140
Gly Phe Asn Gly Asn Val Thr Gly Asp Asp Thr Gly Lys Ile Gly Gly
145 150 155 160
Leu Ile Gly Ala Asn Val Ser Ile Gly His Thr Leu Lys Tyr Val Gln
165 170 175
Pro Asp Phe Lys Thr Ile Leu Glu Ser Pro Thr Asp Lys Lys Val Gly
180 185 190
Trp Lys Val Ile Phe Asn Asn Met Val Asn Gln Asn Trp Gly Pro Tyr
195 200 205
Asp Arg Asp Ser Trp Asn Pro Val Tyr Gly Asn Gln Leu Phe Met Lys
210 215 220
Thr Arg Asn Gly Ser Met Lys Ala Ala Asp Asn Phe Leu Asp Pro Asn
225 230 235 240
Lys Ala Ser Ser Leu Leu Ser Ser Gly Phe Ser Pro Asp Phe Ala Thr
245 250 255
Val Ile Thr Met Asp Arg Lys Ala Ser Lys Gln Gln Thr Asn Ile Asp
260 265 270
Val Ile Tyr Glu Arg Val Arg Asp Asp Tyr Gln Leu His Trp Thr Ser
275 280 285
Thr Asn Trp Lys Gly Thr Asn Thr Lys Asp Lys Trp Ile Asp Arg Ser
290 295 300
Ser Glu Arg Tyr Lys Ile Asp Trp Glu Lys Glu Glu Met Thr Asn
305 310 315
<210> 2
<211> 294
<212> PRT
<213> Staphylococcus aureus
<400> 2
Met Ala Asp Ser Asp Ile Asn Ile Lys Thr Gly Thr Thr Asp Ile Gly
1 5 10 15
Ser Asn Thr Thr Val Lys Thr Gly Asp Leu Val Thr Tyr Asp Lys Glu
20 25 30
Asn Gly Met His Lys Lys Val Phe Tyr Ser Phe Ile Asp Asp Lys Asn
35 40 45
His Asn Lys Lys Leu Leu Val Ile Arg Thr Lys Gly Thr Ile Ala Gly
50 55 60
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290
<210> 3
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<212> PRT
<213> Staphylococcus aureus
<400> 3
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1 5 10 15
Gly Val Ala Ser Val Leu Val Gly Thr Leu Ile Gly Phe Gly Leu Leu
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Ser Ser Lys Glu Ala Asp Ala Ser Glu Asn Ser Val Thr Gln Ser Asp
35 40 45
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50 55 60
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195 200 205
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225 230 235 240
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Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp
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Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp
660 665 670
Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp
675 680 685
Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp
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Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp
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Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp
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Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp
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Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Ala
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Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp
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Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp
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Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Glu Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp
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Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Asp Ser Ala
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<212> PRT
<213> Staphylococcus aureus
<400> 4
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<212> PRT
<213> Staphylococcus aureus
<400> 5
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<212> PRT
<213> Staphylococcus aureus
<400> 6
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1 5 10 15
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<213> Staphylococcus aureus
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<211> 521
<212> PRT
<213> Staphylococcus aureus
<400> 9
Met Ser Glu Asn Ser Val Thr Gln Ser Asp Ser Ala Ser Asn Glu Ser
1 5 10 15
Lys Ser Asn Asp Ser Ser Ser Val Ser Ala Ala Pro Lys Thr Asp Asp
20 25 30
Thr Asn Val Ser Asp Thr Lys Thr Ser Ser Asn Thr Asn Asn Gly Glu
35 40 45
Thr Ser Val Ala Gln Asn Pro Ala Gln Gln Glu Thr Thr Gln Ser Ser
50 55 60
Ser Thr Asn Ala Thr Thr Glu Glu Thr Pro Val Thr Gly Glu Ala Thr
65 70 75 80
Thr Thr Thr Thr Asn Gln Ala Asn Thr Pro Ala Thr Thr Gln Ser Ser
85 90 95
Asn Thr Asn Ala Glu Glu Leu Val Asn Gln Thr Ser Asn Glu Thr Thr
100 105 110
Ser Asn Asp Thr Asn Thr Val Ser Ser Val Asn Ser Pro Gln Asn Ser
115 120 125
Thr Asn Ala Glu Asn Val Ser Thr Thr Gln Asp Thr Ser Thr Glu Ala
130 135 140
Thr Pro Ser Asn Asn Glu Ser Ala Pro Gln Ser Thr Asp Ala Ser Asn
145 150 155 160
Lys Asp Val Val Asn Gln Ala Val Asn Thr Ser Ala Pro Arg Met Arg
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Ala Phe Ser Leu Ala Ala Val Ala Ala Asp Ala Pro Val Ala Gly Thr
180 185 190
Asp Ile Thr Asn Gln Leu Thr Asn Val Thr Val Gly Ile Asp Ser Gly
195 200 205
Thr Thr Val Tyr Pro His Gln Ala Gly Tyr Val Lys Leu Asn Tyr Gly
210 215 220
Phe Ser Val Pro Asn Ser Ala Val Lys Gly Asp Thr Phe Lys Ile Thr
225 230 235 240
Val Pro Lys Glu Leu Asn Leu Asn Gly Val Thr Ser Thr Ala Lys Val
245 250 255
Pro Pro Ile Met Ala Gly Asp Gln Val Leu Ala Asn Gly Val Ile Asp
260 265 270
Ser Asp Gly Asn Val Ile Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Val Asn Thr Lys
275 280 285
Asp Asp Val Lys Ala Thr Leu Thr Met Ser Ala Ala Ile Asp Pro Glu
290 295 300
Asn Val Lys Lys Thr Gly Asn Val Thr Leu Ala Thr Gly Ile Gly Ser
305 310 315 320
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Phe Tyr Asn Leu Ser Ile Lys Gly Thr Ile Asp Gln Ile Asp Lys Thr
340 345 350
Asn Asn Thr Tyr Arg Gln Thr Ile Tyr Val Asn Pro Ser Gly Asp Asn
355 360 365
Val Ile Ala Pro Val Leu Thr Gly Asn Leu Lys Pro Asn Thr Asp Ser
370 375 380
Asn Ala Leu Ile Asp Gln Gln Asn Thr Ser Ile Lys Val Tyr Lys Val
385 390 395 400
Asp Asn Ala Ala Asp Leu Ser Glu Ser Tyr Phe Val Asn Pro Glu Asn
405 410 415
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435 440 445
Tyr Ile Val Val Val Asn Gly His Ile Asp Pro Asn Ser Lys Gly Asp
450 455 460
Leu Ala Leu Arg Ser Thr Leu Tyr Gly Tyr Asn Ser Asn Ile Ile Trp
465 470 475 480
Arg Ser Met Ser Trp Asp Asn Glu Val Ala Phe Asn Asn Gly Ser Gly
485 490 495
Ser Gly Asp Gly Ile Asp Lys Pro Val Val Pro Glu Gln Pro Asp Glu
500 505 510
Pro Gly Glu Ile Glu Pro Ile Pro Glu
515 520
<210> 10
<211> 559
<212> PRT
<213> Staphylococcus aureus
<400> 10
Met Asn Met Lys Lys Lys Glu Lys His Ala Ile Arg Lys Lys Ser Ile
1 5 10 15
Gly Val Ala Ser Val Leu Val Gly Thr Leu Ile Gly Phe Gly Leu Leu
20 25 30
Ser Ser Lys Glu Ala Asp Ala Ser Glu Asn Ser Val Thr Gln Ser Asp
35 40 45
Ser Ala Ser Asn Glu Ser Lys Ser Asn Asp Ser Ser Ser Val Ser Ala
50 55 60
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65 70 75 80
Asn Thr Asn Asn Gly Glu Thr Ser Val Ala Gln Asn Pro Ala Gln Gln
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260 265 270
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275 280 285
Thr Ser Thr Ala Lys Val Pro Pro Ile Met Ala Gly Asp Gln Val Leu
290 295 300
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305 310 315 320
Asp Tyr Val Asn Thr Lys Asp Asp Val Lys Ala Thr Leu Thr Met Ser
325 330 335
Ala Ala Ile Asp Pro Glu Asn Val Lys Lys Thr Gly Asn Val Thr Leu
340 345 350
Ala Thr Gly Ile Gly Ser Thr Thr Ala Asn Lys Thr Val Leu Val Asp
355 360 365
Tyr Glu Lys Tyr Gly Lys Phe Tyr Asn Leu Ser Ile Lys Gly Thr Ile
370 375 380
Asp Gln Ile Asp Lys Thr Asn Asn Thr Tyr Arg Gln Thr Ile Tyr Val
385 390 395 400
Asn Pro Ser Gly Asp Asn Val Ile Ala Pro Val Leu Thr Gly Asn Leu
405 410 415
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420 425 430
Ile Lys Val Tyr Lys Val Asp Asn Ala Ala Asp Leu Ser Glu Ser Tyr
435 440 445
Phe Val Asn Pro Glu Asn Phe Glu Asp Val Thr Asn Ser Val Asn Ile
450 455 460
Thr Phe Pro Asn Pro Asn Gln Tyr Lys Val Glu Phe Asn Thr Pro Asp
465 470 475 480
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Phe Asn Asn Gly Ser Gly Ser Gly Asp Gly Ile Asp Lys Pro Val Val
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Pro Glu Gln Pro Asp Glu Pro Gly Glu Ile Glu Pro Ile Pro Glu
545 550 555
<210> 11
<211> 343
<212> PRT
<213> Staphylococcus aureus
<400> 11
Ser Leu Ala Ala Val Ala Ala Asp Ala Pro Val Ala Gly Thr Asp Ile
1 5 10 15
Thr Asn Gln Leu Thr Asn Val Thr Val Gly Ile Asp Ser Gly Thr Thr
20 25 30
Val Tyr Pro His Gln Ala Gly Tyr Val Lys Leu Asn Tyr Gly Phe Ser
35 40 45
Val Pro Asn Ser Ala Val Lys Gly Asp Thr Phe Lys Ile Thr Val Pro
50 55 60
Lys Glu Leu Asn Leu Asn Gly Val Thr Ser Thr Ala Lys Val Pro Pro
65 70 75 80
Ile Met Ala Gly Asp Gln Val Leu Ala Asn Gly Val Ile Asp Ser Asp
85 90 95
Gly Asn Val Ile Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Val Asn Thr Lys Asp Asp
100 105 110
Val Lys Ala Thr Leu Thr Met Ser Ala Ala Ile Asp Pro Glu Asn Val
115 120 125
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Ala Asn Lys Thr Val Leu Val Asp Tyr Glu Lys Tyr Gly Lys Phe Tyr
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195 200 205
Leu Ile Asp Gln Gln Asn Thr Ser Ile Lys Val Tyr Lys Val Asp Asn
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Ala Ala Asp Leu Ser Glu Ser Tyr Phe Val Asn Pro Glu Asn Phe Glu
225 230 235 240
Asp Val Thr Asn Ser Val Asn Ile Thr Phe Pro Asn Pro Asn Gln Tyr
245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
Leu Arg Ser Thr Leu Tyr Gly Tyr Asn Ser Asn Ile Ile Trp Arg Ser
290 295 300
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305 310 315 320
Asp Gly Ile Asp Lys Pro Val Val Pro Glu Gln Pro Asp Glu Pro Gly
325 330 335
Glu Ile Glu Pro Ile Pro Glu
340
<210> 12
<211> 331
<212> PRT
<213> Staphylococcus aureus
<400> 12
Gly Thr Asp Ile Thr Asn Gln Leu Thr Asn Val Thr Val Gly Ile Asp
1 5 10 15
Ser Gly Thr Thr Val Tyr Pro His Gln Ala Gly Tyr Val Lys Leu Asn
20 25 30
Tyr Gly Phe Ser Val Pro Asn Ser Ala Val Lys Gly Asp Thr Phe Lys
35 40 45
Ile Thr Val Pro Lys Glu Leu Asn Leu Asn Gly Val Thr Ser Thr Ala
50 55 60
Lys Val Pro Pro Ile Met Ala Gly Asp Gln Val Leu Ala Asn Gly Val
65 70 75 80
Ile Asp Ser Asp Gly Asn Val Ile Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Val Asn
85 90 95
Thr Lys Asp Asp Val Lys Ala Thr Leu Thr Met Ser Ala Ala Ile Asp
100 105 110
Pro Glu Asn Val Lys Lys Thr Gly Asn Val Thr Leu Ala Thr Gly Ile
115 120 125
Gly Ser Thr Thr Ala Asn Lys Thr Val Leu Val Asp Tyr Glu Lys Tyr
130 135 140
Gly Lys Phe Tyr Asn Leu Ser Ile Lys Gly Thr Ile Asp Gln Ile Asp
145 150 155 160
Lys Thr Asn Asn Thr Tyr Arg Gln Thr Ile Tyr Val Asn Pro Ser Gly
165 170 175
Asp Asn Val Ile Ala Pro Val Leu Thr Gly Asn Leu Lys Pro Asn Thr
180 185 190
Asp Ser Asn Ala Leu Ile Asp Gln Gln Asn Thr Ser Ile Lys Val Tyr
195 200 205
Lys Val Asp Asn Ala Ala Asp Leu Ser Glu Ser Tyr Phe Val Asn Pro
210 215 220
Glu Asn Phe Glu Asp Val Thr Asn Ser Val Asn Ile Thr Phe Pro Asn
225 230 235 240
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245 250 255
Thr Pro Tyr Ile Val Val Val Asn Gly His Ile Asp Pro Asn Ser Lys
260 265 270
Gly Asp Leu Ala Leu Arg Ser Thr Leu Tyr Gly Tyr Asn Ser Asn Ile
275 280 285
Ile Trp Arg Ser Met Ser Trp Asp Asn Glu Val Ala Phe Asn Asn Gly
290 295 300
Ser Gly Ser Gly Asp Gly Ile Asp Lys Pro Val Val Pro Glu Gln Pro
305 310 315 320
Asp Glu Pro Gly Glu Ile Glu Pro Ile Pro Glu
325 330
<210> 13
<211> 319
<212> PRT
<213> Staphylococcus aureus
<400> 13
Met Lys Thr Arg Ile Val Ser Ser Val Thr Thr Thr Leu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Ser Ile Leu Met Asn Pro Val Ala Asn Ala Ala Asp Ser Asp Ile Asn
20 25 30
Ile Lys Thr Gly Thr Thr Asp Ile Gly Ser Asn Thr Thr Val Lys Thr
35 40 45
Gly Asp Leu Val Thr Tyr Asp Lys Glu Asn Gly Met Arg Lys Lys Val
50 55 60
Phe Tyr Ser Phe Ile Asp Asp Lys Asn His Asn Lys Lys Leu Leu Val
65 70 75 80
Ile Arg Thr Lys Gly Thr Ile Ala Gly Gln Tyr Arg Val Tyr Ser Glu
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100 105 110
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Gly Phe Asn Gly Asn Val Thr Gly Asp Asp Thr Gly Lys Ile Gly Gly
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Leu Ile Gly Ala Asn Val Ser Ile Gly His Thr Leu Lys Tyr Val Gln
165 170 175
Pro Asp Phe Lys Thr Ile Leu Glu Ser Pro Thr Asp Lys Lys Val Gly
180 185 190
Trp Lys Val Ile Phe Asn Asn Met Val Asn Gln Asn Trp Gly Pro Tyr
195 200 205
Asp Arg Asp Ser Trp Asn Pro Val Tyr Gly Asn Gln Leu Phe Met Lys
210 215 220
Thr Arg Asn Gly Ser Met Lys Ala Ala Asp Asn Phe Leu Asp Pro Asn
225 230 235 240
Lys Ala Ser Ser Leu Leu Ser Ser Gly Phe Ser Pro Asp Phe Ala Thr
245 250 255
Val Ile Thr Met Asp Arg Lys Ala Ser Lys Gln Gln Thr Asn Ile Asp
260 265 270
Val Ile Tyr Glu Arg Val Arg Asp Asp Tyr Gln Leu His Trp Thr Ser
275 280 285
Thr Asn Trp Lys Gly Thr Asn Thr Lys Asp Lys Trp Ile Asp Arg Ser
290 295 300
Ser Glu Arg Tyr Lys Ile Asp Trp Glu Lys Glu Glu Met Thr Asn
305 310 315
<210> 14
<211> 294
<212> PRT
<213> Staphylococcus aureus
<400> 14
Met Ala Asp Ser Asp Ile Asn Ile Lys Thr Gly Thr Thr Asp Ile Gly
1 5 10 15
Ser Asn Thr Thr Val Lys Thr Gly Asp Leu Val Thr Tyr Asp Lys Glu
20 25 30
Asn Gly Met Arg Lys Lys Val Phe Tyr Ser Phe Ile Asp Asp Lys Asn
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His Asn Lys Lys Leu Leu Val Ile Arg Thr Lys Gly Thr Ile Ala Gly
50 55 60
Gln Tyr Arg Val Tyr Ser Glu Glu Gly Ala Asn Lys Ser Gly Leu Ala
65 70 75 80
Trp Pro Ser Ala Phe Lys Val Gln Leu Gln Leu Pro Asp Asn Glu Val
85 90 95
Ala Gln Ile Ser Asp Tyr Tyr Pro Arg Asn Ser Ile Asp Thr Lys Glu
100 105 110
Tyr Met Ser Thr Leu Thr Tyr Gly Phe Asn Gly Asn Val Thr Gly Asp
115 120 125
Asp Thr Gly Lys Ile Gly Gly Leu Ile Gly Ala Asn Val Ser Ile Gly
130 135 140
His Thr Leu Lys Tyr Val Gln Pro Asp Phe Lys Thr Ile Leu Glu Ser
145 150 155 160
Pro Thr Asp Lys Lys Val Gly Trp Lys Val Ile Phe Asn Asn Met Val
165 170 175
Asn Gln Asn Trp Gly Pro Tyr Asp Arg Asp Ser Trp Asn Pro Val Tyr
180 185 190
Gly Asn Gln Leu Phe Met Lys Thr Arg Asn Gly Ser Met Lys Ala Ala
195 200 205
Asp Asn Phe Leu Asp Pro Asn Lys Ala Ser Ser Leu Leu Ser Ser Gly
210 215 220
Phe Ser Pro Asp Phe Ala Thr Val Ile Thr Met Asp Arg Lys Ala Ser
225 230 235 240
Lys Gln Gln Thr Asn Ile Asp Val Ile Tyr Glu Arg Val Arg Asp Asp
245 250 255
Tyr Gln Leu His Trp Thr Ser Thr Asn Trp Lys Gly Thr Asn Thr Lys
260 265 270
Asp Lys Trp Ile Asp Arg Ser Ser Glu Arg Tyr Lys Ile Asp Trp Glu
275 280 285
Lys Glu Glu Met Thr Asn
290
<210> 15
<211> 345
<212> PRT
<213> Staphylococcus aureus
<400> 15
Met Ala Ser Leu Ala Ala Val Ala Ala Asp Ala Pro Val Ala Gly Thr
1 5 10 15
Asp Ile Thr Asn Gln Leu Thr Asn Val Thr Val Gly Ile Asp Ser Gly
20 25 30
Thr Thr Val Tyr Pro His Gln Ala Gly Tyr Val Lys Leu Asn Tyr Gly
35 40 45
Phe Ser Val Pro Asn Ser Ala Val Lys Gly Asp Thr Phe Lys Ile Thr
50 55 60
Val Pro Lys Glu Leu Asn Leu Asn Gly Val Thr Ser Thr Ala Lys Val
65 70 75 80
Pro Pro Ile Met Ala Gly Asp Gln Val Leu Ala Asn Gly Val Ile Asp
85 90 95
Ser Asp Gly Asn Val Ile Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Val Asn Thr Lys
100 105 110
Asp Asp Val Lys Ala Thr Leu Thr Met Pro Ala Tyr Ile Asp Pro Glu
115 120 125
Asn Val Lys Lys Thr Gly Asn Val Thr Leu Ala Thr Gly Ile Gly Ser
130 135 140
Thr Thr Ala Asn Lys Thr Val Leu Val Asp Tyr Glu Lys Tyr Gly Lys
145 150 155 160
Phe Tyr Asn Leu Ser Ile Lys Gly Thr Ile Asp Gln Ile Asp Lys Thr
165 170 175
Asn Asn Thr Tyr Arg Gln Thr Ile Tyr Val Asn Pro Ser Gly Asp Asn
180 185 190
Val Ile Ala Pro Val Leu Thr Gly Asn Leu Lys Pro Asn Thr Asp Ser
195 200 205
Asn Ala Leu Ile Asp Gln Gln Asn Thr Ser Ile Lys Val Tyr Lys Val
210 215 220
Asp Asn Ala Ala Asp Leu Ser Glu Ser Tyr Phe Val Asn Pro Glu Asn
225 230 235 240
Phe Glu Asp Val Thr Asn Ser Val Asn Ile Thr Phe Pro Asn Pro Asn
245 250 255
Gln Tyr Lys Val Glu Phe Asn Thr Pro Asp Asp Gln Ile Thr Thr Pro
260 265 270
Tyr Ile Val Val Val Asn Gly His Ile Asp Pro Asn Ser Lys Gly Asp
275 280 285
Leu Ala Leu Arg Ser Thr Leu Tyr Gly Tyr Asn Ser Asn Ile Ile Trp
290 295 300
Arg Ser Met Ser Trp Asp Asn Glu Val Ala Phe Asn Asn Gly Ser Gly
305 310 315 320
Ser Gly Asp Gly Ile Asp Lys Pro Val Val Pro Glu Gln Pro Asp Glu
325 330 335
Pro Gly Glu Ile Glu Pro Ile Pro Glu
340 345
<210> 16
<211> 333
<212> PRT
<213> Staphylococcus aureus
<400> 16
Met Ala Gly Thr Asp Ile Thr Asn Gln Leu Thr Asn Val Thr Val Gly
1 5 10 15
Ile Asp Ser Gly Thr Thr Val Tyr Pro His Gln Ala Gly Tyr Val Lys
20 25 30
Leu Asn Tyr Gly Phe Ser Val Pro Asn Ser Ala Val Lys Gly Asp Thr
35 40 45
Phe Lys Ile Thr Val Pro Lys Glu Leu Asn Leu Asn Gly Val Thr Ser
50 55 60
Thr Ala Lys Val Pro Pro Ile Met Ala Gly Asp Gln Val Leu Ala Asn
65 70 75 80
Gly Val Ile Asp Ser Asp Gly Asn Val Ile Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
85 90 95
Val Asn Thr Lys Asp Asp Val Lys Ala Thr Leu Thr Met Pro Ala Tyr
100 105 110
Ile Asp Pro Glu Asn Val Lys Lys Thr Gly Asn Val Thr Leu Ala Thr
115 120 125
Gly Ile Gly Ser Thr Thr Ala Asn Lys Thr Val Leu Val Asp Tyr Glu
130 135 140
Lys Tyr Gly Lys Phe Tyr Asn Leu Ser Ile Lys Gly Thr Ile Asp Gln
145 150 155 160
Ile Asp Lys Thr Asn Asn Thr Tyr Arg Gln Thr Ile Tyr Val Asn Pro
165 170 175
Ser Gly Asp Asn Val Ile Ala Pro Val Leu Thr Gly Asn Leu Lys Pro
180 185 190
Asn Thr Asp Ser Asn Ala Leu Ile Asp Gln Gln Asn Thr Ser Ile Lys
195 200 205
Val Tyr Lys Val Asp Asn Ala Ala Asp Leu Ser Glu Ser Tyr Phe Val
210 215 220
Asn Pro Glu Asn Phe Glu Asp Val Thr Asn Ser Val Asn Ile Thr Phe
225 230 235 240
Pro Asn Pro Asn Gln Tyr Lys Val Glu Phe Asn Thr Pro Asp Asp Gln
245 250 255
Ile Thr Thr Pro Tyr Ile Val Val Val Asn Gly His Ile Asp Pro Asn
260 265 270
Ser Lys Gly Asp Leu Ala Leu Arg Ser Thr Leu Tyr Gly Tyr Asn Ser
275 280 285
Asn Ile Ile Trp Arg Ser Met Ser Trp Asp Asn Glu Val Ala Phe Asn
290 295 300
Asn Gly Ser Gly Ser Gly Asp Gly Ile Asp Lys Pro Val Val Pro Glu
305 310 315 320
Gln Pro Asp Glu Pro Gly Glu Ile Glu Pro Ile Pro Glu
325 330
<210> 17
<211> 345
<212> PRT
<213> Staphylococcus aureus
<400> 17
Met Ala Ser Leu Ala Ala Val Ala Ala Asp Ala Pro Val Ala Gly Thr
1 5 10 15
Asp Ile Thr Asn Gln Leu Thr Asn Val Thr Val Gly Ile Asp Ser Gly
20 25 30
Thr Thr Val Tyr Pro His Gln Ala Gly Tyr Val Lys Leu Asn Tyr Gly
35 40 45
Phe Ser Val Pro Asn Ser Ala Val Lys Gly Asp Thr Phe Lys Ile Thr
50 55 60
Val Pro Lys Glu Leu Asn Leu Asn Gly Val Thr Ser Thr Ala Lys Val
65 70 75 80
Pro Pro Ile Met Ala Gly Asp Gln Val Leu Ala Asn Gly Val Ile Asp
85 90 95
Ser Asp Gly Asn Val Ile Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Val Asn Thr Lys
100 105 110
Asp Asp Val Lys Ala Thr Leu Thr Met Ser Ala Ala Ile Asp Pro Glu
115 120 125
Asn Val Lys Lys Thr Gly Asn Val Thr Leu Ala Thr Gly Ile Gly Ser
130 135 140
Thr Thr Ala Asn Lys Thr Val Leu Val Asp Tyr Glu Lys Tyr Gly Lys
145 150 155 160
Phe Tyr Asn Leu Ser Ile Lys Gly Thr Ile Asp Gln Ile Asp Lys Thr
165 170 175
Asn Asn Thr Tyr Arg Gln Thr Ile Tyr Val Asn Pro Ser Gly Asp Asn
180 185 190
Val Ile Ala Pro Val Leu Thr Gly Asn Leu Lys Pro Asn Thr Asp Ser
195 200 205
Asn Ala Leu Ile Asp Gln Gln Asn Thr Ser Ile Lys Val Tyr Lys Val
210 215 220
Asp Asn Ala Ala Asp Leu Ser Glu Ser Tyr Phe Val Asn Pro Glu Asn
225 230 235 240
Phe Glu Asp Val Thr Asn Ser Val Asn Ile Thr Phe Pro Asn Pro Asn
245 250 255
Gln Tyr Lys Val Glu Phe Asn Thr Pro Asp Asp Gln Ile Thr Thr Pro
260 265 270
Tyr Ile Val Val Val Asn Gly His Ile Asp Pro Asn Ser Lys Gly Asp
275 280 285
Leu Ala Leu Arg Ser Thr Leu Tyr Gly Tyr Asn Ser Asn Ile Ile Trp
290 295 300
Arg Ser Met Ser Trp Asp Asn Glu Val Ala Phe Asn Asn Gly Ser Gly
305 310 315 320
Ser Gly Asp Gly Ile Asp Lys Pro Val Val Pro Glu Gln Pro Asp Glu
325 330 335
Pro Gly Glu Ile Glu Pro Ile Pro Glu
340 345
<210> 18
<211> 333
<212> PRT
<213> Staphylococcus aureus
<400> 18
Met Ala Gly Thr Asp Ile Thr Asn Gln Leu Thr Asn Val Thr Val Gly
1 5 10 15
Ile Asp Ser Gly Thr Thr Val Tyr Pro His Gln Ala Gly Tyr Val Lys
20 25 30
Leu Asn Tyr Gly Phe Ser Val Pro Asn Ser Ala Val Lys Gly Asp Thr
35 40 45
Phe Lys Ile Thr Val Pro Lys Glu Leu Asn Leu Asn Gly Val Thr Ser
50 55 60
Thr Ala Lys Val Pro Pro Ile Met Ala Gly Asp Gln Val Leu Ala Asn
65 70 75 80
Gly Val Ile Asp Ser Asp Gly Asn Val Ile Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
Lys Tyr Gly Lys Phe Tyr Asn Leu Ser Ile Lys Gly Thr Ile Asp Gln
145 150 155 160
Ile Asp Lys Thr Asn Asn Thr Tyr Arg Gln Thr Ile Tyr Val Asn Pro
165 170 175
Ser Gly Asp Asn Val Ile Ala Pro Val Leu Thr Gly Asn Leu Lys Pro
180 185 190
Asn Thr Asp Ser Asn Ala Leu Ile Asp Gln Gln Asn Thr Ser Ile Lys
195 200 205
Val Tyr Lys Val Asp Asn Ala Ala Asp Leu Ser Glu Ser Tyr Phe Val
210 215 220
Asn Pro Glu Asn Phe Glu Asp Val Thr Asn Ser Val Asn Ile Thr Phe
225 230 235 240
Pro Asn Pro Asn Gln Tyr Lys Val Glu Phe Asn Thr Pro Asp Asp Gln
245 250 255
Ile Thr Thr Pro Tyr Ile Val Val Val Asn Gly His Ile Asp Pro Asn
260 265 270
Ser Lys Gly Asp Leu Ala Leu Arg Ser Thr Leu Tyr Gly Tyr Asn Ser
275 280 285
Asn Ile Ile Trp Arg Ser Met Ser Trp Asp Asn Glu Val Ala Phe Asn
290 295 300
Asn Gly Ser Gly Ser Gly Asp Gly Ile Asp Lys Pro Val Val Pro Glu
305 310 315 320
Gln Pro Asp Glu Pro Gly Glu Ile Glu Pro Ile Pro Glu
325 330
Claims (132)
- 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus) 타입 5 캡슐 당류 컨쥬게이트를 형성하기 위해 담체 단백질에 컨쥬게이션된 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류를 포함하는 단일 용량의 면역원성 조성물을 인간 환자에 투여하는 단계를 포함하는, 스타필로코쿠스 아우레우스 감염에 대해 면역화시키는 방법으로서, S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 컨쥬게이트가 3-50㎍, 5-25㎍, 3-20㎍, 3-12㎍, 5-10㎍, 7-20㎍, 7-15㎍ 또는 8-12㎍의 당류 용량으로 투여되는. 방법.
- 제 1항에 있어서, 면역원성 조성물이 스타필로코쿠스 아우레우스 타입 8 캡슐 당류 컨쥬게이트를 형성하기 위해 담체 단백질에 컨쥬게이션된 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류를 포함하고, S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류 컨쥬게이트가 3-50㎍, 5-25㎍, 3-20㎍, 3-12㎍, 5-10㎍, 7-20㎍, 7-15㎍ 또는 8-12㎍의 당류 용량으로 투여되는 방법.
- 제 1항 또는 제 2항에 있어서, S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류가 25kDa, 40kDa 또는 50kDa 초과 또는 25-300kDa, 50-250kDa, 70-150kDa, 25-125kDa, 90-125kDa, 30-100kDa, 35-75KDa 또는 40-70kDa의 분자량을 갖는 방법.
- 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류가 25kDa, 40kDa 또는 50kDa 초과 또는 25-300kDa, 50-250kDa, 70-150kDa, 25-125kDa, 90-125kDa, 30-100kDa, 35-75KDa 또는 40-70kDa의 분자량을 갖는 방법.
- 제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 있어서, 타입 5 캡슐 당류가 컨쥬게이션되는 담체 단백질이 파상풍 톡소이드, 디프테리아 톡소이드, CRM197, 알파 톡소이드, ClfA, 및 슈도모나스 에어루기노사 엑소단백질 A로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
- 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 있어서, 타입 8 캡슐 당류가 컨쥬게이션되는 담체 단백질이 파상풍 톡소이드, 디프테리아 톡소이드, CRM197, 알파 톡소이드, ClfA 및 슈도모나스 에어루기노사 엑소단백질 A로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
- 제 5항 또는 제 6항에 있어서, 담체 단백질이 파상풍 톡소이드인 방법.
- 제 1항 내지 제 7항 중 어느 한 항에 있어서, S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 및/또는 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류가 50-100% 또는 75-100% O-아세틸화되는 방법.
- 제 1항 내지 제 8항 중 어느 한 항에 있어서, S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 S. 아우레우스 및/또는 타입 8 캡슐 당류가 담체 단백질에 직접 컨쥬게이션되는 방법.
- 제 1항 내지 제 9항 중 어느 한 항에 있어서, S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류가 시아닐화제를 이용하여 컨쥬게이션되는 방법.
- 제 1항 내지 제 10항 중 어느 한 항에 있어서, S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류가 시아닐화제를 이용하여 컨쥬게이션되는 방법.
- 제 10항 또는 제 11항에 있어서, 시아닐화제가 CDAP인 방법.
- 제 1항 내지 제 12항 중 어느 한 항에 있어서, S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 컨쥬게이트에서 다당류 대 단백질의 비가 1:5 내지 5:1 (w:w) 또는 1:2 내지 2:1 (w/w), 1:2 내지 1:5 (w/w) 또는 1:1 내지 1:2 (w/w)인 방법.
- 제 1항 내지 제 13항 중 어느 한 항에 있어서, S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류 컨쥬게이트에서 다당류 대 단백질의 비가 1:5 내지 5:1 (w:w) 또는 1:2 내지 2:1 (w/w), 1:2 내지 1:5 (w/w) 또는 1:1 내지 1:2 (w/w)인 방법.
- 제 1항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 있어서, 동일한 당류 용량의 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 및 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류가 면역원성 조성물에 존재하는 방법.
- 제 1항 내지 제 15항 중 어느 한 항에 있어서, 면역원성 조성물이 ClfA 단백질 또는 이의 단편을 추가로 포함하는 방법.
- 제 16항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 SEQ ID NO:3-12 중 어느 하나의 폴리펩티드 서열과 이의 전장을 따라 적어도 90% 동일한 방법.
- 제 16항 또는 제 17항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 N2 도메인을 포함하는 ClfA의 단편인 방법.
- 제 16항 내지 제 18항 중 어느 한 항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 N3 도메인을 포함하는 ClfA의 단편인 방법.
- 제 16항 내지 제 19항 중 어느 한 항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 N1 도메인을 포함하는 ClfA의 단편인 방법.
- 제 16항 내지 제 20항 중 어느 한 항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 N2-N3 도메인을 포함하고 SEQ ID NO: 6, 7, 11, 12, 15, 16, 17 또는 18의 서열과 적어도 90% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 방법.
- 제 16항 내지 제 21항 중 어느 한 항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 섬유소원에 결합하는 ClfA의 능력을 감소시키는 아미노산 치환을 함유하는 방법.
- 제 22항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 아미노산 Ala254, Tyr256, Pro336, Tyr338, Ile387, Lys389, Tyr474, Glu526 또는 Val527 중 적어도 하나에 아미노산 치환을 함유하는 방법.
- 제 22항에 있어서, 아미노산 Pro336이 Ser로 돌연변이되고/거나 Y338이 Ala로 돌연변이되는 방법.
- 제 16항 내지 제 24항 중 어느 한 항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 면역원성 조성물에 컨쥬게이션되지 않은 단백질로서 존재하는 방법.
- 제 16항 내지 제 24항 중 어느 한 항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류에 컨쥬게이션되는 방법.
- 제 16항 내지 제 24항 중 어느 한 항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류에 컨쥬게이션되는 방법.
- 제 16항 내지 제 18항 중 어느 한 항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 면역원성 조성물에 5-50, 10-30, 5-15 또는 20-40 ㎍의 용량으로 존재하는 방법.
- 제 1항 내지 제 28항 중 어느 한 항에 있어서, 단일 용량의 면역원성 조성물이 계획된 병원 절차보다 5-60, 6-40, 7-30 또는 7-15일 전에 투여되는 방법.
- 제 1항 내지 제 29항 중 어느 한 항에 있어서, 면역원성 조성물이 알파 톡소이드를 포함하는 방법.
- 제 30항에 있어서, 알파 톡소이드가 SEQ ID NO:1, 2, 13 또는 14와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 방법.
- 제 30항 또는 제 31항에 있어서, 알파 톡소이드가 알파 톡소이드의 독성을 감소시키는 점 돌연변이를 함유하는 방법.
- 제 32항에 있어서, 알파 톡소이드가 아미노산 35에 점 돌연변이를 함유하는 방법.
- 제 33항에 있어서, 아미노산 35에서의 점 돌연변이가 히스티딘을 아르기닌 아미노산으로 대체하는 것인 방법.
- 제 30항 내지 제 34항 중 어느 한 항에 있어서, 알파 톡소이드가 면역원성 조성물에 컨쥬게이션되지 않은 단백질로서 존재하는 방법.
- 제 30항 내지 제 35항 중 어느 한 항에 있어서, 알파 톡소이드가 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류에 컨쥬게이션된 방법.
- 제 30항 내지 제 36항 중 어느 한 항에 있어서, 알파 톡소이드가 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류에 컨쥬게이션된 방법.
- 제 30항 내지 제 37항 중 어느 한 항에 있어서, 알파 톡소이드가 면역원성 조성물에 5-50, 10-30, 5-15 또는 20-40 ㎍의 용량으로 존재하는 방법.
- 제 30항 내지 제 38항 중 어느 한 항에 있어서, ClfA 및 알파 톡소이드가 면역원성 조성물에 동일한 용량으로 존재하는 방법.
- 제 1항 내지 제 39항 중 어느 한 항에 있어서, 면역원성 조성물이 수중유 에멀젼을 함유하지 않는 방법.
- 제 1항 내지 제 40항 중 어느 한 항에 있어서, 면역원성 조성물이 애쥬번트화되지 않는 방법.
- 인간 환자를 단일 용량의 면역원성 조성물로 면역시키는 스타필로코쿠스 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한, 스타필로코쿠스 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 컨쥬게이트를 형성하기 위해 담체 단백질에 컨쥬게이션된 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류를 포함하는 면역원성 조성물로서, S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 컨쥬게이트가 3-50㎍, 5-25㎍, 3-20㎍, 3-12㎍, 5-10㎍, 7-20㎍, 7-15㎍ 또는 8-12㎍의 당류 용량으로 투여되는, 면역원성 조성물.
- 제 42항에 있어서, 면역원성 조성물이 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류 컨쥬게이트를 형성하기 위해 담체 단백질에 컨쥬게이션된 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류를 포함하고, S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류 컨쥬게이트가 3-50㎍, 5-25㎍, 3-20㎍, 3-12㎍, 5-10㎍, 7-20㎍, 7-15㎍ 또는 8-12㎍의 당류 용량으로 투여되는 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 42항 또는 제 43항에 있어서, S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류가 25kDa, 40kDa 또는 50kDa 초과 또는 25-300kDa, 50-250kDa, 70-150kDa, 25-125kDa, 90-125kDa, 30-100kDa, 35-75KDa 또는 40-70kDa의 분자량을 갖는 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 42항 내지 제 44항 중 어느 한 항에 있어서, S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류가 25kDa, 40kDa 또는 50kDa 초과 또는 25-300kDa, 50-250kDa, 70-150kDa, 25-125kDa, 90-125kDa, 30-100kDa, 35-75KDa 또는 40-70kDa의 분자량을 갖는 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 42항 내지 제 45항 중 어느 한 항에 있어서, 타입 5 캡슐 당류가 컨쥬게이션된 담체 단백질이 파상풍 톡소이드, 디프테리아 톡소이드, CRM197, 알파 톡소이드, ClfA, 및 슈도모나스 에어루기노사 엑소단백질 A로 구성된 군으로부터 선택되는 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 42항 내지 제 46항 중 어느 한 항에 있어서, 타입 8 캡슐 당류가 컨쥬게이션된 담체 단백질이 파상풍 톡소이드, 디프테리아 톡소이드, CRM197, 알파 톡소이드, ClfA, 및 슈도모나스 에어루기노사 엑소단백질 A로 구성된 군으로부터 선택되는 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 46항 또는 제 47항에 있어서, 담체 단백질이 파상풍 톡소이드인 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 42항 내지 제 48항 중 어느 한 항에 있어서, S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 및/또는 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류가 50-100% 또는 75-100% O-아세틸화되는 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 42항 내지 제 49항 중 어느 한 항에 있어서, S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 및/또는 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류가 담체 단백질에 직접 컨쥬게이션되는 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 42항 내지 제 50항 중 어느 한 항에 있어서, S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류가 시아닐화제를 이용하여 컨쥬게이션되는 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 42항 내지 제 51항 중 어느 한 항에 있어서, S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류가 시아닐화제를 이용하여 컨쥬게이션되는 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 51항 또는 제 52항에 있어서, 시아닐화제가 CDAP인 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 42항 내지 제 53항 중 어느 한 항에 있어서, S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 컨쥬게이트에서 다당류 대 단백질의 비가 1:5 내지 5:1 (w:w) 또는 1:2 내지 2:1 (w/w), 1:2 내지 1:5 (w/w) 또는 1:1 내지 1:2 (w/w)인 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 42항 내지 제 54항 중 어느 한 항에 있어서, S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류 컨쥬게이트에서 다당류 대 단백질의 비가 1:5 내지 5:1 (w:w) 또는 1:2 내지 2:1 (w/w), 1:2 내지 1:5 (w/w) 또는 1:1 내지 1:2 (w/w)인 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 42항 내지 제 55항 중 어느 한 항에 있어서, 동일한 당류 용량의 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 및 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류가 면역원성 조성물에 존재하는 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 42항 내지 제 56항 중 어느 한 항에 있어서, 면역원성 조성물이 ClfA 단백질 또는 이의 단편을 추가로 포함하는 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 57항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 SEQ ID NO:3-12 또는 15-18 중 어느 하나의 폴리펩티드 서열과 이의 전장을 따라 적어도 90% 동일한 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 57항 또는 제 58항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 N2 도메인을 포함하는 ClfA의 단편인 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 57항 내지 제 59항 중 어느 한 항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 N3 도메인을 포함하는 ClfA의 단편인 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 57항 내지 제 60항 중 어느 한 항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 N1 도메인을 포함하는 ClfA의 단편인 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 57항 또는 제 58항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 N2-N3 도메인을 포함하고 SEQ ID NO: 6, 7, 11, 12, 15, 16, 17 또는 18의 서열과 적어도 90% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 57항 내지 제 62항 중 어느 한 항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 섬유소원에 결합하는 ClfA의 능력을 감소시키는 아미노산 치환을 함유하는 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 63항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 아미노산 Ala254, Tyr256, Pro336, Tyr338, Ile387, Lys389, Tyr474, Glu526 또는 Val527 중 적어도 하나에 아미노산 치환을 함유하는 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 63항에 있어서, 아미노산 Pro336이 Ser로 돌연변이되고/거나 Y338이 Ala로 돌연변이되는 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 57항 내지 제 65항 중 어느 한 항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 면역원성 조성물에 컨쥬게이션되지 않은 단백질로서 존재하는 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 57항 내지 제 65항 중 어느 한 항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류에 컨쥬게이션되는 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 57항 내지 제 65항 중 어느 한 항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류에 컨쥬게이션되는 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 57항 내지 제 68항 중 어느 한 항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 면역원성 조성물에 5-50, 10-30, 5-15 또는 20-40 ㎍의 용량으로 존재하는 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 42항 내지 제 69항 중 어느 한 항에 있어서, 단일 용량의 면역원성 조성물이 계획된 병원 절차보다 5-60, 6-40, 7-30 또는 7-15일 전에 투여되는 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 42항 내지 제 70항 중 어느 한 항에 있어서, 면역원성 조성물이 알파 톡소이드를 포함하는 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 71항에 있어서, 알파 톡소이드가 SEQ ID NO:1, 2, 13 또는 14와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 71항 또는 제 72항에 있어서, 알파 톡소이드가 알파 톡소이드의 독성을 감소시키는 점 돌연변이를 함유하는 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 73항에 있어서, 알파 톡소이드가 아미노산 35에 점 돌연변이를 함유하는 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 74항에 있어서, 아미노산 35에서의 점 돌연변이가 히스티딘35를 아르기닌으로 대체하는 것인 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 71항 내지 제 75항 중 어느 한 항에 있어서, 알파 톡소이드가 면역원성 조성물에 컨쥬게이션되지 않은 단백질로서 존재하는 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 71항 내지 제 76항 중 어느 한 항에 있어서, 알파 톡소이드가 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류에 컨쥬게이션된 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 71항 내지 제 77항 중 어느 한 항에 있어서, 알파 톡소이드가 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류에 컨쥬게이션된 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 71항 내지 제 78항 중 어느 한 항에 있어서, 알파 톡소이드가 면역원성 조성물에 5-50, 10-30, 5-15 또는 20-40 ㎍의 용량으로 존재하는 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 71항 내지 제 79항 중 어느 한 항에 있어서, ClfA 및 알파 톡소이드가 면역원성 조성물에 동일한 용량으로 존재하는 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 42항 내지 제 80항 중 어느 한 항에 있어서, 면역원성 조성물이 수중유 에멀젼을 함유하지 않는 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 제 42항 내지 제 81항 중 어느 한 항에 있어서, 면역원성 조성물이 애쥬번트화되지 않는 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 면역원성 조성물.
- 담체 단백질에 컨쥬게이션된 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류, 담체 단백질에 컨쥬게이션된 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류, ClfA 단백질 또는 이의 단편 및 알파 톡소이드를 포함하는 면역원성 조성물.
- 제 83항에 있어서, S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 컨쥬게이트가 3-50㎍, 5-25㎍, 3-20㎍, 3-12㎍, 5-10㎍, 7-20㎍, 7-15㎍ 또는 8-12㎍의 당류 용량으로 존재하는 면역원성 조성물.
- 제 83항 또는 제 84항에 있어서, S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류 컨쥬게이트가 3-50㎍, 5-25㎍, 3-20㎍, 3-12㎍, 5-10㎍, 7-20㎍, 7-15㎍ 또는 8-12㎍의 당류 용량으로 존재하는 면역원성 조성물.
- 제 83항 내지 제 85항 중 어느 한 항에 있어서, S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류가 25kDa, 40kDa 또는 50kDa 초과 또는 25-300kDa, 50-250kDa, 70-150kDa, 25-125kDa, 90-125kDa, 30-100kDa, 35-75KDa 또는 40-70kDa의 분자량을 갖는 면역원성 조성물.
- 제 83항 내지 제 86항 중 어느 한 항에 있어서, S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류가 25kDa, 40kDa 또는 50kDa 초과 또는 25-300kDa, 50-250kDa, 70-150kDa, 25-125kDa, 90-125kDa, 30-100kDa, 35-75KDa 또는 40-70kDa의 분자량을 갖는 면역원성 조성물.
- 제 83항 내지 제 87항 중 어느 한 항에 있어서, 타입 5 캡슐 당류가 컨쥬게이션되는 담체 단백질이 파상풍 톡소이드, 디프테리아 톡소이드, CRM197, 알파 톡소이드, ClfA, 및 슈도모나스 에어루기노사 엑소단백질 A로 구성된 군으로부터 선택되는 면역원성 조성물.
- 제 83항 내지 제 88항 중 어느 한 항에 있어서, 타입 8 캡슐 당류가 컨쥬게이션되는 담체 단백질이 파상풍 톡소이드, 디프테리아 톡소이드, CRM197, 알파 톡소이드, ClfA 및 슈도모나스 에어루기노사 엑소단백질 A로 구성된 군으로부터 선택되는 면역원성 조성물.
- 제 88항 또는 제 89항에 있어서, 담체 단백질이 파상풍 톡소이드인 면역원성 조성물.
- 제 83항 내지 제 90항 중 어느 한 항에 있어서, S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 및/또는 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류가 50-100% 또는 75-100% O-아세틸화되는 면역원성 조성물.
- 제 83항 내지 제 91항 중 어느 한 항에 있어서, S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 및/또는 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류가 담체 단백질에 직접 컨쥬게이션되는 면역원성 조성물.
- 제 83항 내지 제 92항 중 어느 한 항에 있어서, S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류가 시아닐화제를 이용하여 컨쥬게이션되는 면역원성 조성물.
- 제 83항 내지 제 93항 중 어느 한 항에 있어서, S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류가 시아닐화제를 이용하여 컨쥬게이션되는 면역원성 조성물.
- 제 93항 또는 제 94항에 있어서, 시아닐화제가 CDAP인 면역원성 조성물.
- 제 83항 내지 제 95항 중 어느 한 항에 있어서, S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 컨쥬게이트에서 다당류 대 단백질의 비가 1:5 내지 5:1 (w:w) 또는 1:2 내지 2:1 (w/w), 1:2 내지 1:5 (w/w) 또는 1:1 내지 1:2 (w/w)인 면역원성 조성물.
- 제 83항 내지 제 96항 중 어느 한 항에 있어서, S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류 컨쥬게이트에서 다당류 대 단백질의 비가 1:5 내지 5:1 (w:w) 또는 1:2 내지 2:1 (w/w), 1:2 내지 1:5 (w/w) 또는 1:1 내지 1:2 (w/w)인 면역원성 조성물.
- 제 83항 내지 제 97항 중 어느 한 항에 있어서, 동일한 당류 용량의 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 및 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류가 면역원성 조성물에 존재하는 면역원성 조성물.
- 제 83항 내지 제 98항 중 어느 한 항에 있어서, 면역원성 조성물이 ClfA 단백질 또는 이의 단편을 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
- 제 99항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 SEQ ID NO:3-12 또는 15-18 중 어느 하나의 아미노산 서열과 이의 전장을 따라 적어도 90% 동일한 면역원성 조성물.
- 제 99항 또는 제 100항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 N2 도메인을 포함하는 ClfA의 단편인 면역원성 조성물.
- 제 99항 내지 제 101항 중 어느 한 항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 N3 도메인을 포함하는 ClfA의 단편인 면역원성 조성물.
- 제 99항 내지 제 102항 중 어느 한 항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 N1 도메인을 포함하는 ClfA의 단편인 면역원성 조성물.
- 제 99항 내지 제 103항 중 어느 한 항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 N2-N3 도메인을 포함하고 SEQ ID NO: 6, 7, 11, 12, 15, 16, 17 또는 18의 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 조성물.
- 제 99항 내지 제 104항 중 어느 한 항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 섬유소원에 결합하는 ClfA의 능력을 감소시키는 아미노산 치환을 함유하는 면역원성 조성물.
- 제 105항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 아미노산 Ala254, Tyr256, Pro336, Tyr338, Ile387, Lys389, Tyr474, Glu526 또는 Val527 중 적어도 하나에 아미노산 치환을 함유하는 면역원성 조성물.
- 제 105항에 있어서, 아미노산 Pro336이 Ser로 돌연변이되고/거나 Y338이 Ala로 돌연변이되는 면역원성 조성물.
- 제 99항 내지 제 107항 중 어느 한 항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 면역원성 조성물에 컨쥬게이션되지 않은 단백질로서 존재하는 면역원성 조성물.
- 제 99항 내지 제 107항 중 어느 한 항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류에 컨쥬게이션되는 면역원성 조성물.
- 제 99항 내지 제 107항 중 어느 한 항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류에 컨쥬게이션되는 면역원성 조성물.
- 제 99항 내지 제 110항 중 어느 한 항에 있어서, ClfA 단백질 또는 이의 단편이 면역원성 조성물에 5-50, 10-30, 5-15 또는 20-40 ㎍의 용량으로 존재하는 면역원성 조성물.
- 제 111항에 있어서, 면역원성 조성물이 0.5ml의 부피를 갖는 면역원성 조성물.
- 제 83항 내지 제 112항 중 어느 한 항에 있어서, 면역원성 조성물이 알파 톡소이드를 포함하는 면역원성 조성물.
- 제 113항에 있어서, 알파 톡소이드가 SEQ ID NO:1, 2, 3 또는 4와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 조성물.
- 제 113항 또는 제 114항에 있어서, 알파 톡소이드가 알파 톡소이드의 독성을 감소시키는 점 돌연변이를 함유하는 면역원성 조성물.
- 제 115항에 있어서, 알파 톡소이드가 아미노산 35에 점 돌연변이를 함유하는 면역원성 조성물.
- 제 116항에 있어서, 아미노산 35에서의 점 돌연변이가 히스티딘을 아르기닌 또는 류신 아미노산으로 대체하는 것인 면역원성 조성물.
- 제 113항 내지 제 117항 중 어느 한 항에 있어서, 알파 톡소이드가 면역원성 조성물에 컨쥬게이션되지 않은 단백질로서 존재하는 면역원성 조성물.
- 제 113항 내지 제 118항 중 어느 한 항에 있어서, 알파 톡소이드가 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류에 컨쥬게이션된 면역원성 조성물.
- 제 113항 내지 제 119항 중 어느 한 항에 있어서, 알파 톡소이드가 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류에 컨쥬게이션된 면역원성 조성물.
- 제 113항 내지 제 120항 중 어느 한 항에 있어서, 알파 톡소이드가 면역원성 조성물에 5-50, 10-30, 5-15 또는 20-40 ㎍의 용량으로 존재하는 면역원성 조성물.
- 제 113항 내지 제 121항 중 어느 한 항에 있어서, ClfA 및 알파 톡소이드가 면역원성 조성물에 동일한 용량으로 존재하는 면역원성 조성물.
- 제 83항 내지 제 122항 중 어느 한 항에 있어서, 면역원성 조성물이 수중유 에멀젼을 함유하지 않는 면역원성 조성물.
- 제 83항 내지 제 123항 중 어느 한 항에 있어서, 면역원성 조성물이 애쥬번트화되지 않는 면역원성 조성물.
- 제 83항 내지 제 124항 중 어느 한 항의 면역원성 조성물 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 백신.
- a) S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류를 담체 단백질에 컨쥬게이션시켜 S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 컨쥬게이트를 형성하는 단계, b) S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류를 담체 단백질에 컨쥬게이션시켜 S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류 컨쥬게이트를 형성하는 단계, 및 c) S. 아우레우스 타입 5 캡슐 당류 컨쥬게이트, S. 아우레우스 타입 8 캡슐 당류 컨쥬게이트, ClfA 단백질 또는 이의 단편 및 알파 톡소이드를 조합시켜 면역원성 조성물을 형성하는 단계를 포함하는, 제 83항 내지 제 124항 중 어느 한 항의 면역원성 조성물 또는 제 125항의 백신을 제조하는 방법.
- 인간 피검체에서 S. 아우레우스 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 제 83항 내지 제 124항 중 어느 한 항의 면역원성 조성물 또는 제 125항의 백신.
- 제 127항에 있어서, 인간 피검체가 수술 절차, 임의로 심장-흉부 수술을 받는 피검체인 면역원성 조성물.
- 제 128항에 있어서, 인간 피검체가 수술 절차를 받기 5-60, 6-40, 7-30 또는 7-15일 전 시점에 단일 용량의 제 83항 내지 제 124항 중 어느 한 항의 면역원성 조성물 또는 제 125항의 백신으로 면역되는 면역원성 조성물.
- S. 아우레우스 감염의 발생 위험이 있는 인간 피검체에 면역학적 유효량의 제 83항 내지 제 124항 중 어느 한 항의 면역원성 조성물 또는 제 125항의 백신을 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법.
- 제 130항에 있어서, 인간 피검체가 수술 절차, 임의로 심장-흉부 수술을 받는 피검체인 방법.
- 제 131항에 있어서, 인간 피검체가 수술 절차를 받기 5-60, 6-40, 7-30 또는 7-15일 전 시점에 단일 용량의 제 83항 내지 제 124항 중 어느 한 항의 면역원성 조성물 또는 제 125항의 백신으로 면역되는 방법.
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