CN105517567A - 用于治疗的免疫原性组合物 - Google Patents

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P.德诺埃尔
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Abstract

本申请公开了一种针对金黄色葡萄球菌感染进行免疫的方法，所述方法包括以下步骤：给人患者施用单次剂量的包含金黄色葡萄球菌5型荚膜糖的免疫原性组合物，所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖与载体蛋白缀合以形成金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物以3-50？μg的糖剂量施用。

Description

用于治疗的免疫原性组合物
技术领域
本发明涉及葡萄球菌免疫原性组合物和疫苗、它们的制备和这样的组合物在药物中的用途的领域。更具体地，它涉及与载体蛋白缀合的、得自金黄色葡萄球菌(S. aureus)的荚膜糖制备的缀合物的用途。这样的缀合物可以与选定的葡萄球菌蛋白抗原组合以形成多价组合物。
背景技术
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus, S. aureus）是寄居在约30%的人受试者的鼻孔、腋、咽以及其它粘膜表面和皮肤表面的共生性革兰氏阳性细菌。据估计，金黄色葡萄球菌引起所有健康护理相关感染的20-25%(Wisplinghoff等人Clin Infect. Dis.2004; 39; 309-317)，导致受感染的患者与不具有这样的感染的患者相比3倍的住院期持续时间和高5倍的住院死亡风险(Noskin等人Arch. Intern. Med. 2005; 165; 1756-1761)。金黄色葡萄球菌感染可以与高达25%的住院死亡率相关。在历史上，金黄色葡萄球菌已经主要与医院感染相关。这样的感染的严重性已经随着与抗生素抗性有关的金黄色葡萄球菌感染的最近急剧增加而增加。金黄色葡萄球菌是具有显著发病率和死亡率的医院感染的最常见原因(Romero-Vivas等人1995, Infect. Dis. 21; 1417)。它是骨髓炎、心内膜炎、脓毒性关节炎、肺炎、脓肿和中毒性休克综合征的一些病例的原因。
已经研究了包括施用针对葡萄球菌抗原的多克隆抗血清的被动免疫疗法(WO 00/15238, WO 00/12132)以及使用针对脂磷壁酸的单克隆抗体的免疫疗法(WO 98/57994)。但是，迄今都没有被许可使用。几种免疫疗法候选物在人类中没有表现出效力。这些包括：Altastaph (Nabi Biopharmaceuticals)，其含有从接种了StaphVAX™(由NabiBiopharmaceuticals, Rockville, MD, USA开发和注册商标的研究疫苗)的受试者纯化出的CP5和CP8抗体；Veronate (Inhibitex)，靶向金黄色葡萄球菌聚集因子A (ClfA)和表皮葡萄球菌（S. epidermidis）粘附SdrG的多克隆抗体；Aurexis (替非珠单抗, Inhibitex)，靶向ClfA的单克隆抗体；Aurograb (NeuTec Pharma)，针对ATP-结合盒转运蛋白的单链抗体；和帕昔单抗(Biosynexus)，单克隆抗-脂磷壁酸抗体(Dejonge等人J. Paediatrics2007; 151; 260-265, Rupp等人Antimicrob. Agents Chemother . 2007; 51; 4249-4254)。
一种替代方案是使用主动疫苗接种来产生针对葡萄球菌的多克隆免疫应答。在WO03/61558中报道的一个方案使用与假单胞菌属（Pseudomonas）胞外蛋白A缀合的金黄色葡萄球菌5型和8型荚膜多糖的缀合物(StaphVAX - Nabi Biopharmaceuticals)。另一个方案使用金黄色葡萄球菌IsdB蛋白(V710 - Merck & Co)，但是没有表现出效力(Fowler等人2013; JAMA 309; 1368-1378)。
存在许多与针对金黄色葡萄球菌感染的疫苗的开发有关的问题。依赖于单一组分(荚膜多糖或IsdB蛋白)的疫苗的失败提示，可能需要含有多种组分的更复杂的疫苗来诱导保护性免疫。但是，在免疫原性组合物中组合不同抗原可以导致在所述组合物中发生的干扰(Skurnik等人(2010) J. Clin. Invest. 120; 3220-3233)。因此，要在多价组合物中组合的组分的鉴别不是直接的。仍然存在开发针对葡萄球菌感染的有效疫苗的需要，特别是考虑到多药抗性菌株的逐渐增加的频率。
在针对医院葡萄球菌感染进行免疫的情况下，免疫经常可以仅在住院治疗或外科手术或留置导管安置之前短时间进行。因此，将其有利的用单次免疫达到高免疫水平。较低剂量的缀合物的应用还具有疫苗生产的相对效率和有关经济效益的优点。
因此，提供了一种针对金黄色葡萄球菌感染进行免疫的方法，所述方法包括以下步骤：给人患者施用单次剂量的包含金黄色葡萄球菌5型荚膜糖的免疫原性组合物，所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖与载体蛋白缀合以形成金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物以3-50 μg、5-25 μg、3-20 μg、3-12 μg、5-10 μg、7-20μg、7-15 μg或8-12 μg的糖剂量施用。
在本发明的第二方面，提供了一种包含金黄色葡萄球菌5型荚膜糖的免疫原性组合物，所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖与载体蛋白缀合以形成金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物以3-50 μg、5-25 μg、3-20 μg、3-12 μg、5-10 μg、7-20 μg、7-15 μg或8-12 μg的糖剂量施用，其用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染，其中给人患者施用单次剂量的免疫原性组合物。
在本发明的第三方面，提供了一种免疫原性组合物，其包含与载体蛋白缀合的金黄色葡萄球菌5型荚膜糖、与载体蛋白缀合的金黄色葡萄球菌8型荚膜糖、ClfA蛋白或其片段和α类毒素。
在本发明的第四方面，提供了一种疫苗，其包含与载体蛋白缀合的金黄色葡萄球菌5型荚膜糖、与载体蛋白缀合的金黄色葡萄球菌8型荚膜糖、ClfA蛋白或其片段和α类毒素和药学上可接受的赋形剂。
在本发明的第五方面，提供了一种用于制备本发明的免疫原性组合物或疫苗的方法，所述方法包括下述步骤：a)将金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合至载体蛋白以形成金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物，b)将金黄色葡萄球菌8型荚膜糖缀合至载体蛋白以形成金黄色葡萄球菌8型荚膜糖缀合物，和c)将金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物、金黄色葡萄球菌8型荚膜糖缀合物、ClfA蛋白或其片段和α类毒素组合以形成免疫原性组合物。
附图说明
图1 -在1或2剂量的4C疫苗以后经历疼痛的受试者的百分比。在每个制剂分组中，前3列提供了在单次剂量以后经历疼痛的受试者的百分比，其中第一列代表所有疼痛报告，第二列代表超过或等于2级的疼痛，和第三列代表3级疼痛。第4列、第5列和第6列显示了第二剂量以后的相同信息。
图2 -在1或2剂量的4C疫苗以后经历发红的受试者的百分比。在每个制剂分组中，前3列提供了单次剂量以后经历发红的受试者的百分比，其中第一列代表所有发红报告，第二列代表超过50mm的发红，且第三列代表超过100mm的发红。第4列、第5列和第6列显示了第二剂量以后的相同信息。
图3–在1或2剂量的4C疫苗以后经历肿胀的受试者的百分比。在每个制剂分组中，前3列提供了单次剂量以后经历肿胀的受试者的百分比，其中第一列代表所有肿胀报告，第二列代表超过50mm的肿胀，且第三列代表超过100mm的肿胀。第4列、第5列和第6列显示了第二剂量以后的相同信息。
图4–针对金黄色葡萄球菌5型荚膜多糖产生的抗体的免疫原性结果。显示了Luminex测定的GMC结果，所述Luminex测定在第一次和第二次免疫以后的不同时间点检测针对5型荚膜多糖的抗体。选择的时间点是免疫之前第0天、一次免疫之后第7天、一次免疫之后第14天、一次免疫之后第30天、两次免疫之后第7天(对应于图上的第37天)、第14天两次免疫之后(对应于图上的第44天)和两次免疫之后第30天(对应于图上的第60天)。对于每个时间点，以5/10、5/10AS、10/30、10/30AS和盐水的次序(左到右)呈现结果。
图5 - 针对金黄色葡萄球菌8型荚膜多糖产生的抗体的免疫原性结果。显示了Luminex测定的GMC结果，所述Luminex测定在第一次和第二次免疫以后的不同时间点检测针对8型荚膜多糖的抗体。选择的时间点是免疫之前第0天、一次免疫之后第7天、一次免疫之后第14天、一次免疫之后第30天、两次免疫之后第7天(对应于图上的第37天)、第14天两次免疫之后(对应于图上的第44天)和两次免疫之后第30天(对应于图上的第60天)。对于每个时间点，以5/10、5/10AS、10/30、10/30AS和盐水的次序(左到右)呈现结果。
图6 - 针对金黄色葡萄球菌α类毒素产生的抗体的免疫原性结果。显示了Luminex测定的GMC结果，所述Luminex测定在第一次和第二次免疫以后的不同时间点检测针对α类毒素的抗体。选择的时间点是免疫之前第0天、一次免疫之后第7天、一次免疫之后第14天、一次免疫之后第30天、两次免疫之后第7天(对应于图上的第37天)、第14天两次免疫之后(对应于图上的第44天)和两次免疫之后第30天(对应于图上的第60天)。对于每个时间点，以5/10、5/10AS、10/30、10/30AS和盐水的次序(左到右)呈现结果。
图7 - 针对金黄色葡萄球菌ClfA产生的抗体的免疫原性结果。显示了ELISA的GMC结果，所述ELISA在第一次和第二次免疫以后的不同时间点检测针对ClfA的抗体。选择的时间点是免疫之前第0天、一次免疫之后第7天、一次免疫之后第14天、一次免疫之后第30天、两次免疫之后第7天(对应于图上的第37天)、第14天两次免疫之后(对应于图上的第44天)和两次免疫之后第30天(对应于图上的第60天)。对于每个时间点，以5/10、5/10AS、10/30、10/30AS和盐水的次序(左到右)呈现结果。
图8–金黄色葡萄球菌5型荚膜多糖(小图A)、金黄色葡萄球菌8型荚膜糖(小图B)、α类毒素(小图C)和ClfA (小图D)在1、2或3次免疫后第0天至第540天的较长时间段的免疫原性结果。
详细描述
本发明公开了一种针对金黄色葡萄球菌感染进行免疫的方法，所述方法包括：给人患者施用单次剂量的包含金黄色葡萄球菌5型荚膜糖的免疫原性组合物的步骤，所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖与载体蛋白缀合以形成金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物以3-50 μg、3-25 μg、3-20 μg、3-12 μg、5-50 μg、5-25 μg、5-20 μg、5-12 μg、5-10 μg、7-20 μg、7-15 μg或8-12 μg的糖剂量施用。
在一个实施方案中，所述免疫原性组合物进一步包含与载体蛋白缀合以形成金黄色葡萄球菌8型荚膜糖缀合物的金黄色葡萄球菌8型荚膜糖，其中所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖缀合物以3-50 μg、3-25 μg、3-20 μg、3-12 μg、5-50 μg、5-25 μg、5-20 μg、5-12 μg、5-10 μg、7-20 μg、7-15 μg或8-12 μg的糖剂量施用。
在一个实施方案中，相同糖剂量的金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物和金黄色葡萄球菌8型荚膜糖缀合物存在于免疫原性组合物中；例如，4、5、6、7、8、9或10 μg糖剂量的5型和8型缀合物。
大多数在人类中造成感染的金黄色葡萄球菌菌株含有5型或8型多糖。大约60%的人菌株是8型，且大约30%是5型。Jones Carbohydrate Research 340, 1097-1106 (2005)使用NMR光谱法鉴别荚膜多糖的结构为：
5型
→4)-β-D-ManNAcA-(1→4)-α-L-FucNAc(3OAc)-(1→3)-β-D-FucNAc-(1→
8型
→3)-β-D-ManNAcA(4OAc)-(1→3)-α-L-FucNAc(1→3)-α-D-FucNAc(1→。
使用技术人员众所周知的方法，例如如在US6294177、WO 11/41003、WO 11/51917或Infection and Immunity (1990) 58(7); 2367中所述，可以从适当的金黄色葡萄球菌菌株提取多糖。例如，ATCC 12902是5型金黄色葡萄球菌菌株，且ATCC 12605是8型金黄色葡萄球菌菌株。
多糖具有天然大小，或可选地可以减小尺寸，例如通过微流态化、超声辐照或通过化学处理诸如暴露于pH 5.0-3.0。本发明也涵盖从得自金黄色葡萄球菌的5型和8型多糖衍生出的寡糖。在一个实施方案中，所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖具有超过25kDa、30kDa、40kDa、50kDa、60kDa、70kDa、80kDa或90kDa或在25-125kDa、90-125kDa、30-100kDa、35-75KDa或40-70kDa之间的分子量。在一个实施方案中，所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖具有超过25kDa、30kDa、40kDa、50kDa、60kDa、70kDa、80kDa或90kDa或在25-125kDa、90-125kDa、30-100kDa、35-75KDa或40-70kDa之间的分子量。
在一个实施方案中，5型和/或8型荚膜糖与其缀合的载体蛋白选自破伤风类毒素、白喉类毒素、CRM197、α类毒素、ClfA和铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）胞外蛋白A。
在本发明的免疫原性组合物中包括的5型和/或8型荚膜多糖或寡糖被O-乙酰化。在一个实施方案中，5型荚膜多糖或寡糖的O-乙酰化程度是50-100%。60-100%、70-100%、80-100%、90-100%、50-90%、60-90%、70-90%、70-80%或80-90%。在一个实施方案中，8型荚膜多糖或寡糖的O-乙酰化程度是10-100%、20-100%、30-100%、40-100%、50-100%。60-100%、70-100%、80-100%、90-100%、50-90%、60-90%、70-90%、70-80%或80-90%。在一个实施方案中，5型和8型荚膜多糖或寡糖的O-乙酰化程度是10-100%、20-100%、30-100%、40-100%、50-100%。60-100%、70-100%、80-100%、90-100%、50-90%、60-90%、70-90%、70-80%或80-90%。在一个实施方案中，5型和/或8型荚膜糖被80-100%或100%O-乙酰化。
通过本领域已知的任意方法，例如，通过质子NMR (Lemercinier和Jones 1996,Carbohydrate Research 296; 83-96, Jones和Lemercinier 2002, J Pharmaceuticaland Biomedical analysis 30; 1233-1247, WO 05/033148或WO 00/56357)，可以确定多糖或寡糖的O-乙酰化程度。另一种常用方法是Hestrin (1949) J. Biol. Chem. 180;249-261所述的方法。
通过水解，例如通过用碱诸如无水肼处理(Konadu等人1994; Infect. Immun.62; 5048-5054)或用0.1N NaOH处理1-8小时，可以除去O-乙酰基。为了维持5型和/或8型多糖或寡糖上的高O-乙酰化水平，将导致O-乙酰基水解的处理最小化。例如将在极端pH的处理最小化。
与在疫苗接种中使用多糖有关的问题包括多糖本身是免疫原不足的事实。已经设计以克服该免疫原性缺乏的策略包括所述多糖与大蛋白载体的连接，所述大蛋白载体会提供旁观者T-细胞辅助。在一个实施方案中，将在本发明中利用的多糖连接至会提供旁观者T-细胞辅助的蛋白载体。可以用于偶联至多糖或寡糖免疫原的这些载体的例子包括白喉和破伤风类毒素(DT、DT Crm197和TT)、钥孔戚血蓝蛋白(KLH)、铜绿假单胞菌胞外蛋白A(rEPA)和结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)、得自流感嗜血菌（Haemophilus influenzae）的蛋白D、肺炎链球菌溶血素或以上任一种的片段。适合使用的片段包括包含T辅助细胞表位的片段。具体地，蛋白D片段将任选地含有所述蛋白的N-端1/3。蛋白D是得自流感嗜血菌的IgD-结合蛋白(EP 0 594 610 B1)。
特别有利地用在葡萄球菌疫苗的背景下的新载体蛋白是葡萄球菌α类毒素。可以将天然形式缀合至多糖，因为缀合的过程会降低毒性。任选地，将遗传上脱毒的α毒素诸如His35Leu或His 35 Arg变体用作载体，因为残余毒性较低。可选地，通过用交联剂、甲醛或戊二醛处理，将α毒素化学脱毒。缀合的过程是将α毒素脱毒的替代化学处理。任选地将遗传上脱毒的α毒素化学脱毒，任选地通过用交联剂、甲醛或戊二醛处理以进一步降低毒性。
通过任意已知方法(例如，Likhite, 美国专利4,372,945；Armor等人, 美国专利4,474,757；Anderson等人WO 10/151544；Berti等人WO 11/138636；和Jennings等人, 美国专利4,356,170)，可以将多糖连接至载体蛋白。任选地，进行CDAP缀合化学法(参见WO 95/08348, WO 07/113222)。
在CDAP中，任选地将氰基化试剂（cyanylating reagent）1-氰基-二甲基氨基吡啶四氟硼酸盐(CDAP)用于合成多糖-蛋白缀合物。氰基化反应可以在相对温和的条件下进行，这会避免碱敏感多糖的水解。该合成允许直接偶联至载体蛋白。
可以将所述多糖溶解在水或盐水溶液中。可以将CDAP溶解在乙腈中并立即加入所述多糖溶液中。所述CDAP与所述多糖的羟基反应以形成氰酸酯。活化步骤以后，加入载体蛋白。赖氨酸的氨基与活化的多糖反应以形成异脲共价键。偶联反应以后，随后加入大量过量的甘氨酸以淬灭残余的活化的官能团。然后使产物穿过凝胶渗透柱以除去未反应的载体蛋白和残余的试剂。
在一个实施方案中，将金黄色葡萄球菌5型荚膜糖和/或金黄色葡萄球菌8型荚膜糖直接地缀合至载体蛋白。但是，本发明还包括这样的缀合物：其中5型和/或8型荚膜糖通过接头（例如ADH接头）缀合。
在一个实施方案中，使用氰基化试剂（例如CDAP）缀合金黄色葡萄球菌5型荚膜糖和/或金黄色葡萄球菌8型荚膜糖。可选地，使用其它缀合方法诸如还原胺化或碳二亚胺(例如EDAC)化学法。
在一个实施方案中，金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物中多糖与蛋白的比率是在1:5和5:1 (w:w)、1:1和1:5 (w/w)、1:2和1:5 (w/w)、1:3和1:5 (w/w)、1:2和2:1 (w/w)或1:1和1:2 (w/w)之间。在一个实施方案中，金黄色葡萄球菌8型荚膜糖缀合物中多糖与蛋白的比率是在1:5和5:1 (w:w)、1:1和1:5 (w/w)、1:2和1:5 (w/w)、1:3和1:5 (w/w)、1:2和2:1 (w/w)或1:1和1:2 (w/w)之间。
聚集因子A (ClfA)已经被鉴别为金黄色葡萄球菌纤维蛋白原结合蛋白(US6008341)，且已经被鉴别为可用于针对葡萄球菌感染进行免疫的多糖的潜在载体蛋白(WO 04/80490)。由于它的结合纤维蛋白原和促成金黄色葡萄球菌的粘附的性质，ClfA是一种表面定位蛋白且是一种重要的毒力因子。ClfA含有纤维蛋白原结合区域。该区域（被称作A结构域）位于ClfA的N-端，且包含3个单独地折叠的子结构域（被称作N1、N2和N3）。A结构域后面是丝氨酸-天冬氨酸重复区域以及跨细胞壁和膜的区域，所述跨细胞壁和膜的区域含有LPXTG基序用于分选酶促进的向细胞壁的锚定。ClfA会结合至纤维蛋白原的γ-链的C-端，且由此能够诱导纤维蛋白原溶液中的细菌的聚集(McDevitt等人(1997) Eur. J.Biochem. 247; 416-424)。ClfA的氨基酸残基221-559对应于维持纤维蛋白原结合的N2-N3区域。含有ClfA的氨基酸221-559的片段是优选片段。氨基酸残基532-538对应于ClfA的锁闭肽区域（latching peptide region）。每个子结构域包含9个β-链，所述β-链形成新颖的IgG-型折叠。ClfA中的纤维蛋白原γ-链肽结合位点位于在N2和N3之间的连接部处的疏水槽中。
近年来，ClfA的氨基酸P336和Y338已经被识别为纤维蛋白原结合位点，其突变导致纤维蛋白原结合的丧失(Josefsson等人2008, PLOS One第3卷, 第5期, 第1-7页)。SEQID NO: 8-12、17和18含有在位置336和338处的点突变。这些变体中纤维蛋白原结合的丧失在免疫的小鼠中导致增加的保护免于脓毒性死亡的能力，从而得出结论：通过除去它的结合纤维蛋白原的能力，改善了重组ClfA的疫苗潜力(WO 09/95453)。但是，具有仅在Y256、P336、Y338或K389之一处的点突变的变体也丧失它们的结合纤维蛋白原的能力(Deivanayagam等人EMBO J, 21; 6660-6672 (2002))。预期这些单点突变会显示出类似地改善的免疫原性，因而单突变也可以用在本发明中。在一个实施方案中，所述免疫原性组合物进一步包含ClfA蛋白或其片段，任选地是重组的、经分离的或纯化的。
在一个实施方案中，所述ClfA蛋白与SEQ ID NO:3、4、5、6或7或8-12的多肽序列沿着其整个长度具有至少80%、85%、90%、93%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性。
如本领域已知的，“同一性”是两个或更多个多肽序列之间或者两个或更多个多核苷酸序列之间（视情况而定）的关系，如通过对比所述序列而确定的。在本领域中，“同一性”也表示多肽或多核苷酸序列（视情况而定）之间的序列相关性的程度，如通过这样的序列的字符串之间的匹配而确定的。通过已知方法，包括、但不限于在以下文献中描述的那些，可以容易地计算“同一性”：Computational Molecular Biology, Lesk, A.M., 编, OxfordUniversity Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and GenomeProjects, Smith, D.W., 编, Academic Press, New York, 1993; Computer Analysisof Sequence Data, 第I部分, Griffin, A.M., 和Griffin, H.G., 编, Humana Press,New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heine, G.,Academic Press, 1987；和Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. 和Devereux, J.,编, M Stockton Press, New York, 1991；和Carillo, H., 和Lipman, D., SIAM J.Applied Math., 48: 1073 (1988)。将确定同一性的方法设计成给出测试序列之间的最大匹配。此外，将确定同一性的方法编程在公众可得到的计算机程序中。用于确定两个序列之间的同一性的计算机程序方法包括、但不限于：GCG程序包中的GAP程序(Devereux, J., 等人, Nucleic Acids Research 12(1): 387 (1984))、BLASTP、BLASTN (Altschul, S.F.等人, J. Molec. Biol. 215: 403-410 (1990))和FASTA(Pearson and Lipman Proc.Natl. Acad. Sci. USA 85; 2444-2448 (1988))。公众可从NCBI和其它来源得到BLAST家族的程序(BLAST Manual, Altschul, S., 等人, NCBI NLM NIH Bethesda, MD 20894;Altschul, S., 等人, J. Mol. Biol. 215: 403-410 (1990)。众所周知的SmithWaterman算法也可以用于确定同一性。
用于多肽序列对比的参数包括以下：
算法: Needleman和Wunsch, J. Mol Biol. 48: 443-453 (1970)
对比矩阵: 得自Henikoff和Henikoff，Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 89:10915-10919 (1992)的BLOSSUM62
缺口罚分: 8
缺口长度罚分: 2。
可与这些参数一起使用的程序可作为得自Genetics Computer Group, MadisonWI的“gap”程序公开得到。前述参数是用于肽对比的默认参数(一起对末端缺口没有罚分)。
用于多核苷酸对比的参数包括以下:
算法: Needleman和Wunsch, J. Mol Biol. 48: 443-453 (1970)
对比矩阵：匹配= +10，错配= 0
缺口罚分：50
缺口长度罚分：3
可得到：得自Genetics Computer Group, Madison WI的“gap”程序。这些是用于核酸对比的默认参数。
在本文特别提及蛋白的情况下，它任选地表示天然的或重组的全长蛋白，或任选地表示其中已经除去任何信号序列的成熟蛋白。所述蛋白可以直接分离自葡萄球菌菌株，或通过重组DNA技术生产。可以将所述蛋白的免疫原性片段掺入本发明的免疫原性组合物中。这些是包含至少10个氨基酸、至少20个氨基酸、至少30个氨基酸、至少40个氨基酸、至少50个氨基酸或至少100个氨基酸的片段，所述氨基酸连续地取自所述蛋白的氨基酸序列。另外，这样的免疫原性片段通常在免疫学上可与针对葡萄球菌蛋白产生的抗体反应或与用葡萄球菌感染哺乳动物宿主而产生的抗体反应，或含有T细胞表位。在一个实施方案中，免疫原性片段还包括这样的片段：其当以有效剂量(单独地或作为与载体结合的半抗原)施用时，引起针对葡萄球菌感染的保护性免疫应答，任选地，它可保护免于金黄色葡萄球菌和/或表皮葡萄球菌感染。这样的免疫原性片段可以包括，例如，缺少N-端前导序列和/或跨膜结构域和/或C-端锚结构域的蛋白。对于ClfA，优选的片段缺少朝向ClfA的C-端的SD重复结构域(例如通过使用其中缺失了氨基酸555-927、556-927、557-927、558-927、559-927或560-927的片段)。对于ClfA和α类毒素，优选的片段被除去了信号肽以形成成熟的蛋白，任选地具有在N-端处的初始甲硫氨酸残基以允许重组表达。
在一个实施方案中，本发明的免疫原性组合物可以含有ClfA的融合蛋白或片段。所述融合蛋白任选地含有异源序列，诸如T-细胞表位或纯化标签（例如: β-半乳糖苷酶、谷胱甘肽-S-转移酶、绿色荧光蛋白(GFP)）、表位标签（诸如FLAG、myc标签、聚组氨酸）或病毒表面蛋白（诸如流感病毒血细胞凝集素）或细菌蛋白（诸如破伤风类毒素、白喉类毒素、CRM197）的提供者。所述融合蛋白可以作为游离蛋白存在于本发明的免疫原性组合物中，或它可以是与糖连接的载体蛋白。
在一个实施方案中，本发明还提供了ClfA蛋白的免疫原性片段，也就是说，ClfA多肽的连续部分，该部分具有与包含SEQ ID NO:3的多肽序列的多肽相同或基本上相同的免疫原性活性。也就是说，所述片段(如果必要的话，当与载体偶联时)能够引起识别ClfA多肽的免疫应答。这样的免疫原性片段可以包括，例如，缺少N-端前导序列和/或朝向ClfA的C-端的SD重复结构域的ClfA多肽。在一个优选的方面，ClfA的免疫原性片段包含基本上所有的纤维蛋白原结合结构域，且与SEQ ID NO:4-12中的任一个的氨基酸序列在所述序列的整个长度上具有至少85%同一性，优选至少90%同一性，更优选至少95%同一性，最优选至少97-99%同一性或100%同一性。
片段可以是“自立的（free-standing）”，或被包含在它们形成其一个部分或区域的较大多肽内，最优选地作为单个较大多肽中的单个连续区域。
ClfA的其它片段包括分离的多肽，其氨基酸序列具有至少15个、20个、30个、40个、50个或100个得自SEQ ID NO:3的氨基酸序列的连续氨基酸。
在一个实施方案中，所述ClfA蛋白是包含N1结构域、N2结构域、N3结构域、N1和N2结构域、N2和N3结构域、或N1和N2和N3结构域的ClfA片段。任选地，所述ClfA片段包含N2和N3结构域，且其氨基酸序列与SEQ ID NO: 6、7、11或12的序列具有至少80%、85%、90%、95%、97%、98%、99%或100%同一性。
在一个实施方案中，所述ClfA蛋白或其片段含有会减小或消除ClfA的结合纤维蛋白原的能力的氨基酸置换、缺失或插入。在一个实施方案中，ClfA的结合纤维蛋白原的能力减小了至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或99%。这样的突变通常是在ClfA的N-端处的纤维蛋白原结合区域中。所述突变任选地是在氨基酸Ala254、Tyr256、Pro336、Tyr338、Ile387、Lys389、Tyr474、Glu526或Val527中的至少1、2、3或4个处的氨基酸置换。在一个实施方案中，ClfA氨基酸Pro336被突变。在一个实施方案中，ClfA氨基酸Tyr338被突变。在一个实施方案中，Pro336和Tyr338二者被突变，任选地突变为丙氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，ClfA含有2个Pro336突变为Ser和Tyr 338突变为Ala的突变。
在一个实施方案中，ClfA蛋白或片段作为未缀合的蛋白存在于免疫原性组合物中。可选地，它呈现为缀合至金黄色葡萄球菌5型荚膜糖或金黄色葡萄球菌8型荚膜糖。在这样的情况下，ClfA可以充当载体蛋白和抗原。
在一个实施方案中，ClfA蛋白或其片段以5-50、10-30、5-15或20-40 μg的剂量存在于免疫原性组合物中。
α毒素是由大多数金黄色葡萄球菌菌株产生的重要毒力决定簇。它是一种具有溶血活性的孔形成毒素。已经证实针对α毒素的抗体会在动物模型中中和α毒素的有害和致死效应(Adlam等人1977 Infect. Immun. 17; 250)。人血小板、内皮细胞和单核细胞对α毒素的作用是敏感的。为了将α毒素用在免疫原性组合物中，通常通过化学处理或突变将它脱毒以产生α类毒素。
在一个实施方案中，所述免疫原性组合物包含α类毒素。任选地，所述α类毒素的氨基酸序列与SEQ ID NO:1或2具有至少90%、95%、96%、97%、98%或99%同一性。
α毒素的高毒性要求它在用作免疫原之前应当脱毒。这可以通过化学处理来实现，例如通过用甲醛、戊二醛或其它交联剂处理，或通过将它化学缀合至如上所述的细菌多糖。
除去毒性的另一种方式是引入点突变，其在保留所述毒素的免疫原性的同时除去毒性。点突变在α毒素的氨基酸35（在该处用亮氨酸残基替代组氨酸残基）处的引入，会导致毒性的除去，同时保留免疫原性(Menzies和Kernodle 1996; Infect. Immun. 64; 1839)。组氨酸35似乎对于孔形成所需的适当寡聚化而言是至关重要的，且该残基的突变会导致毒性的丢失。组氨酸35的修饰可以是用Lys、Arg、Ala、Leu或Glu置换。α毒素在Asp24、Lys37、His48、Lys58、Asp100、Ile107、Glu111、Met113、Asp127、Asp128、Gly130、Gly134、His144、Lys147、Gln150、Asp152、Phe153、Lys154、Val169、Asn173、Arg200、Asn214、Leu219或His259处的点突变可以任选地用于减小毒性。
当掺入本发明的免疫原性组合物中时，任选地通过His 35的突变，例如通过用Leu或Arg替代His 35，将α类毒素脱毒。在一个可选实施方案中，通过缀合至免疫原性组合物的其它组分，例如缀合至金黄色葡萄球菌5型多糖和/或金黄色葡萄球菌8型多糖，将α类毒素脱毒。在一个实施方案中，通过点突变的引入和通过缀合至金黄色葡萄球菌5型多糖和/或金黄色葡萄球菌8型多糖，将α类毒素脱毒。
在一个实施方案中，所述免疫原性组合物包含α类毒素，其含有降低α毒素的毒性的点突变，例如在氨基酸35处。所述α类毒素任选地含有在氨基酸35处的点突变，在该处用精氨酸氨基酸替代组氨酸。
在一个实施方案中，所述α类毒素作为未缀合的蛋白存在于免疫原性组合物中。可选地，所述α类毒素缀合至金黄色葡萄球菌5型荚膜糖和/或缀合至金黄色葡萄球菌8型荚膜糖。
在一个实施方案中，所述α类毒素以5-50、10-30、5-15或20-40 μg的剂量存在于免疫原性组合物中。在一个实施方案中，ClfA和α类毒素以相同剂量存在于免疫原性组合物中。在一个实施方案中，5型和8型荚膜糖缀合物的糖剂量高于ClfA和α类毒素的蛋白剂量。
在一个实施方案中，将本发明的免疫原性组合物与药学上可接受的赋形剂、且任选地与佐剂混合以形成疫苗。
本发明的疫苗可以含有佐剂，特别当意图用在老年的、免疫受损的或慢性病的群体(诸如糖尿病、末期肾病或其它葡萄球菌感染高危群体)中时，但是也用在婴儿群体中。合适的佐剂包括铝盐诸如氢氧化铝凝胶或磷酸铝或明矾，但是也可以是其它金属盐，诸如钙、镁、铁或锌的盐。水包油乳剂，例如包含可代谢的油(例如角鲨烯)、乳化剂(例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯)和任选的母生育酚(例如α生育酚)也是合适的(WO 09/95453)。
优选的是，将佐剂选择为TH1型应答的优选诱导物。如此高水平的Th1-型细胞因子倾向于有利于针对给定抗原的、细胞介导的免疫应答的诱导，而高水平的Th2-型细胞因子倾向于有利于针对所述抗原的体液免疫应答的诱导。
Th1和Th2-型免疫应答的区分不是绝对的。实际上，个体将支持被描述为主要是Th1或主要是Th2的免疫应答。但是，经常方便的是，考虑Mosmann和Coffman在鼠CD4 +ve T细胞克隆中描述的细胞因子家族(Mosmann, T.R. 和Coffman, R.L. (1989) TH1 and TH2cells: different patterns of lymphokine secretion lead to differentfunctional properties. (Annual Review of Immunology, 7, 第145-173页))。传统上，Th1-型应答与T-淋巴细胞对INF-γ和IL-2细胞因子的产生有关。经常与Th1-型免疫应答的诱导直接相关的其它细胞因子不是由T-细胞产生，诸如IL-12。相反，Th2-型应答与Il-4、IL-5、IL-6、IL-10的分泌有关。促进主要是Th1应答的合适佐剂系统包括：单磷酰脂质A或其衍生物(或脱毒的脂质A，一般- 参见例如WO2005107798)，特别是3-脱-O-酰化的单磷酰脂质A (3D-MPL) (关于它的制备，参见GB 2220211 A)；和单磷酰脂质A（优选3-脱-O-酰化的单磷酰脂质A）与铝盐(例如磷酸铝或氢氧化铝)或水包油乳剂一起的组合。在这样的组合中，将抗原和3D-MPL包含在相同的微粒结构中，从而允许抗原信号和免疫刺激信号的更有效递送。研究已经证实，3D-MPL能够进一步增强明矾吸附的抗原的免疫原性[Thoelen等人.Vaccine (1998)16:708-14;EP 689454-B1]。
另一个系统涉及单磷酰脂质A和皂苷衍生物的组合，特别是如在WO 94/00153中公开的QS21和3D-MPL的组合，或更低反应原性组合物，其中如在WO 96/33739中公开的用胆固醇淬灭QS21。在WO 95/17210中描述了另一种佐剂制剂，其涉及在水包油乳剂中的QS21、3D-MPL和生育酚。在一个实施方案中，所述免疫原性组合物另外包含皂苷，其可以是QS21。所述制剂还可以包含水包油乳剂和生育酚(WO 95/17210)。含有未甲基化的CpG的寡核苷酸(WO96/02555)和其它免疫调节性寡核苷酸(WO0226757和WO03507822)也是TH1应答的优选诱导物，且适合用在本发明中。
但是，发明人已经发现，在临床试验中，水包油乳剂佐剂的添加不会产生免疫原性的增加。考虑到可能与佐剂的应用有关的增加的反应原性，本发明的一个实施方案使用未加佐剂的免疫原性组合物，例如其中存在的葡萄球菌组分都没有吸附至佐剂的免疫原性组合物，或其中未将葡萄球菌组分与水包油乳剂佐剂混合的免疫原性组合物。所述葡萄球菌组分包含金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物、金黄色葡萄球菌8型荚膜糖缀合物、ClfA片段或其片段和α类毒素中的1种、2种、3种或4种。
本发明的另一个方面是包含上述免疫原性组合物和药学上可接受的赋形剂的疫苗。本发明的疫苗制品可以用于保护或治疗易于金黄色葡萄球菌感染的人，这通过经由全身或粘膜途径施用所述疫苗来进行。这些施用可以包括经由肌肉内、腹膜内、真皮内或皮下途径注射；或经由粘膜施用给口腔/消化道、呼吸道、泌尿生殖道。
在Vaccine Design (“The subunit and adjuvant approach”(Powell M.F. 和Newman M.J. 编) (1995) Plenum Press New York)中一般地描述了疫苗制品。Fullerton, 美国专利4,235,877描述了在脂质体内的包囊。
本发明的疫苗可以储存在溶液中或冻干。任选地，在有糖诸如蔗糖、海藻糖或乳糖存在下，将溶液低压冻干。通常将它们冻干并在使用前即时重构。冻干可以产生更稳定的组合物(疫苗)。
本发明还包括制备本发明的免疫原性组合物和疫苗的方法。在一个实施方案中，本发明的方法是制备疫苗的方法，所述方法包括下述步骤：a)将金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合至载体蛋白以形成金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物，b)将金黄色葡萄球菌8型荚膜糖缀合至载体蛋白以形成金黄色葡萄球菌8型荚膜糖缀合物，和c)将金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物、金黄色葡萄球菌8型荚膜糖缀合物、ClfA蛋白或其片段和α类毒素组合以形成免疫原性组合物。在一个实施方案中，所述方法包括加入药学上可接受的赋形剂的另一个步骤。
本发明还包括治疗葡萄球菌感染、特别是医院获得的医院感染的方法。
本发明的该免疫原性组合物或疫苗特别有利地用在选择性外科手术的情况下，特别是当用单次剂量免疫受试者时。这样的患者将预先知道外科手术的日期，且可以有利地预先接种。在一个实施方案中，在住院之前5-60天、6-40天、7-30天或7-15天，用单次剂量的本发明的免疫原性组合物免疫受试者。在一个实施方案中，在计划的医院手术（例如外科手术，诸如心胸外科手术）之前5-60天、6-40天、7-30天或7-15天，用单次剂量的本发明的免疫原性组合物免疫受试者。通常，用本发明的免疫原性组合物和疫苗治疗等待选择性外科手术的超过16岁的成年人。可选地，用本发明的免疫原性组合物和疫苗治疗等待选择性外科手术的3-16岁的儿童。
也可能给健康护理工作者接种本发明的疫苗。
本发明的疫苗制品可以用于保护或治疗易于金黄色葡萄球菌感染的人，这通过经由全身或粘膜途径施用所述疫苗来实现。这些施用可以包括经由肌肉内途径、腹膜内途径、真皮内途径或皮下途径注射；或经由粘膜施用给口腔/消化道、呼吸道、泌尿生殖道。
本发明的一个实施方案是预防或治疗葡萄球菌感染或疾病的方法，所述方法包括下述步骤：给有此需要的患者施用本发明的免疫原性组合物或疫苗。
本发明的另一个实施方案是本发明的免疫原性组合物在制备疫苗中的用途，所述疫苗用于治疗或预防葡萄球菌感染或疾病，任选外科手术后葡萄球菌感染。
在每种情况下，发明人在本文中意图使术语“包含”、“包括”和“含有”分别任选地被术语”由……组成”替代。但是，术语“包含”、“包括”和“含有”在它们没有被替代的情况下保留它们的通常“开放”含义。
在该专利说明书内引用的所有参考文献或专利申请通过引用并入本文。
为了更好地理解本发明，给出以下实施例。这些实施例仅仅用于例证目的，并不应解释为以任何方式限制本发明的范围。
实施例
实施例1 蛋白的序列
实施例2 疫苗组分的制备
制备了4组分葡萄球菌疫苗，其含有与破伤风类毒素载体蛋白缀合的金黄色葡萄球菌5型荚膜多糖、与破伤风类毒素载体蛋白缀合的金黄色葡萄球菌8型荚膜多糖、含有N2和N3结构域以及在残基336和338处的点突变（其中P336变成丝氨酸且Y338变成丙氨酸）的ClfA片段、和通过在残基35处的点突变（其中H35变成精氨酸）而脱毒的α类毒素。使用CDAP作为偶联剂，将荚膜多糖缀合至破伤风类毒素。该缀合方法描述在WO 07/113222中。
制备了4种葡萄球菌疫苗制剂：
5/10含有：5 μg糖剂量的5型- 破伤风类毒素缀合物、5 μg糖剂量的8型- 破伤风类毒素缀合物、10 μgα类毒素和10 μg上述的ClfA截短物。
10/30含有：10 μg糖剂量的5型- 破伤风类毒素缀合物、10 μg糖剂量的8型- 破伤风类毒素缀合物、30 μgα类毒素和30 μg上述的ClfA截短物。
5/10AS含有：5 μg糖剂量的5型- 破伤风类毒素缀合物、5 μg糖剂量的8型- 破伤风类毒素缀合物、10 μgα类毒素和10 μg上述的ClfA截短物，用含有角鲨烯、α-生育酚和聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯的水包油溶剂作为佐剂。
10/30AS含有：10 μg糖剂量的5型- 破伤风类毒素缀合物、10 μg糖剂量的8型- 破伤风类毒素缀合物、30 μgα类毒素和30 μg上述的ClfA截短物，用含有角鲨烯、α-生育酚和聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯的水包油溶剂作为佐剂。
实施例3 使用4组分葡萄球菌疫苗的临床试验结果
使用共计88位18-40岁的健康成年人进行I期临床试验。对照组含有30位接种盐水的受试者。将剩余的受试者分成4组，用在实施例2中描述的每种制剂（5/10、5/10AS、10/30和10/30AS）免疫15/14受试者。在试验开始时以及在1个月以后和在6个月时，施用疫苗剂量。在每个剂量以后第0、7、14和30天和在第360和540天，获取用于体液分析的血液样品。
下面提供了受试者的细节。
反应原性和安全性
所述4组分葡萄球菌疫苗通常是安全的和良好耐受的。在第一剂和第二剂以后，没有观察到严重的不利事件，且没有观察到潜在的免疫介导的障碍。在图1-3中显示了第1剂和第2剂以后报告疼痛、发红和肿胀的受试者的百分比。与对照组中的3-4%相比，疫苗组中78.6-100%的受试者在注射部位处经历疼痛(参见图1)。但是，仅一例被评级为3。在图2和3中显示了发红和肿胀的发生率的结果。对于两个参数，就研究的10/30组而言，与单次剂量以后相比，在施用第二剂以后存在更高的发红/肿胀发生率的趋势。
免疫原性
通过Luminex或ELISA测试在第0天和第一次、第二次和第三次免疫以后7、14和30天取自受试者的血液样品，以建立针对4组分葡萄球菌疫苗的每种抗原产生的IgG的水平。
免疫原性的结果显示在图4-8和下面的表1-5中。
疫苗接种前，对于所有测定而言存在83.3-100%血清阳性。尽管存在显著的背景免疫水平，4组分疫苗能够引起针对所有4种组分的稳健免疫应答。
图4-7表明，对于CPS5、CPS8、α类毒素和ClfA，第一次免疫产生了免疫原性的最大增加，GMC的强增加在第14和30天是明显的。在第30天的第二次免疫没有产生免疫原性的进一步增加，且GMC水平在第30至60天之间保持在类似水平。图8表明，6个月以后的第三次免疫没有引起GMC的进一步增加，GMC水平在第30天至第540天之间保持对于4种组分大约相同。因此，单次免疫是产生最大免疫应答的有效方式。
10/30剂量的免疫原性结果似乎强于5/10剂量，对于CPS5、CPS8和α类毒素而言，GMC有大约1-5-2倍增加。在ClfA的情况下，在较高剂量时，GMC的增加是约3.8倍。水包油乳剂佐剂的添加没有增加4组分疫苗的免疫原性，如通过对比由5/10和5/10AS组以及10/30和10/30AS组引起的抗体应答所证实的。
表1 金黄色葡萄球菌. CPS 5 Ab.IgG抗体的血清阳性率和GMC (ATP组群的免疫原性)
5/10 = 5µg CPS5-TT、5µg CPS8-TT、10µg ClfA、10µgα-类毒素
5/10AS = 5µg CPS5-TT、5µg CPS8-TT、10µg ClfA、10µgα-类毒素，加入AS03B佐剂
10/30 = 10µg CPS5-TT、10µg CPS8-TT、30µg ClfA、30µgα-类毒素
10/30AS = 10µg CPS5-TT、10µg CPS8-TT、30µg ClfA、30µgα-类毒素，加入AS03B佐剂
盐水= 盐水1和盐水2的合并物
GMC = 在所有受试者上计算的几何平均抗体浓度
N = 具有可利用结果的受试者的数目
n/%= 具有在指定范围内的浓度的受试者的数目/百分比
95%CI = 95%置信区间; LL = 下限, UL = 上限
PRE = 第1剂之前
PI(D7) = 第1剂之后7天
PI(D14) = 第1剂之后14天
PI(D30) = 第1剂之后30天(在第5或6次就诊时取的血液样品)
PII(D37) = 第2剂之后7天
PII(D44) = 第2剂之后14天 PII(D60) = 第2剂之后30天。
表2 金黄色葡萄球菌CPS 8 Ab.IgG抗体的血清阳性率和GMC (ATP组群的免疫原性)
5/10 = 5µg CPS5-TT、5µg CPS8-TT、10µg ClfA、10µgα-类毒素
5/10AS = 5µg CPS5-TT、5µg CPS8-TT、10µg ClfA、10µgα-类毒素，加入AS03B佐剂
10/30 = 10µg CPS5-TT、10µg CPS8-TT、30µg ClfA、30µgα-类毒素
10/30AS = 10µg CPS5-TT、10µg CPS8-TT、30µg ClfA、30µgα-类毒素，加入AS03B佐剂
盐水= 盐水1和盐水2的合并物
GMC = 在所有受试者上计算的几何平均抗体浓度
N = 具有可利用结果的受试者的数目
n/%= 具有在指定范围内的浓度的受试者的数目/百分比
95%CI = 95%置信区间; LL = 下限, UL = 上限
PRE = 第1剂之前
PI(D7) = 第1剂之后7天
PI(D14) = 第1剂之后14天
PI(D30) = 第1剂之后30天(在第5或6次就诊时取的血液样品)
PII(D37) = 第2剂之后7天
PII(D44) = 第2剂之后14天 PII(D60) = 第2剂之后30天。
表3 金黄色葡萄球菌α-毒素Ab.IgG抗体的血清阳性率和GMC (ATP组群的免疫原性)
5/10 = 5µg CPS5-TT、5µg CPS8-TT、10µg ClfA、10µgα-类毒素
5/10AS = 5µg CPS5-TT、5µg CPS8-TT、10µg ClfA、10µgα-类毒素，加入AS03B佐剂
10/30 = 10µg CPS5-TT、10µg CPS8-TT、30µg ClfA、30µgα-类毒素
10/30AS = 10µg CPS5-TT、10µg CPS8-TT、30µg ClfA、30µgα-类毒素，加入AS03B佐剂
盐水= 盐水1和盐水2的合并物
GMC = 在所有受试者上计算的几何平均抗体浓度
N = 具有可利用结果的受试者的数目
n/%= 具有在指定范围内的浓度的受试者的数目/百分比
95%CI = 95%置信区间; LL = 下限, UL = 上限
PRE = 第1剂之前 PI(D7) = 第1剂之后7天
PI(D14) = 第1剂之后14天 PI(D30) = 第1剂之后30天(在第5或6次就诊时取的血液样品)
PII(D37) = 第2剂之后7天 PII(D44) = 第2剂之后14天
PII(D60) = 第2剂之后30天。
表4 金黄色葡萄球菌ClfA Ab.IgG抗体的血清阳性率和GMC (ATP组群的免疫原性)
5/10 = 5µg CPS5-TT、5µg CPS8-TT、10µg ClfA、10µgα-类毒素
5/10AS = 5µg CPS5-TT、5µg CPS8-TT、10µg ClfA、10µgα-类毒素，加入AS03B佐剂
10/30 = 10µg CPS5-TT、10µg CPS8-TT、30µg ClfA、30µgα-类毒素
10/30AS = 10µg CPS5-TT、10µg CPS8-TT、30µg ClfA、30µgα-类毒素，加入AS03B佐剂
盐水= 盐水1和盐水2的合并物
GMC = 在所有受试者上计算的几何平均抗体浓度
N = 具有可利用结果的受试者的数目
n/%= 具有在指定范围内的浓度的受试者的数目/百分比
95%CI = 95%置信区间; LL = 下限, UL = 上限
PRE = 第1剂之前
PI(D7) = 第1剂之后7天
PI(D14) = 第1剂之后14天
PI(D30) = 第1剂之后30天(在第5或6次就诊时取的血液样品)
PII(D37) = 第2剂之后7天
PII(D44) = 第2剂之后14天 PII(D60) = 第2剂之后30天。
表5 破伤风梭菌.Tox Ab.IgG抗体的血清阳性率和GMC (ATP组群的免疫原性)
5/10 = 5µg CPS5-TT、5µg CPS8-TT、10µg ClfA、10µgα-类毒素
5/10AS = 5µg CPS5-TT、5µg CPS8-TT、10µg ClfA、10µgα-类毒素，加入AS03B佐剂
10/30 = 10µg CPS5-TT、10µg CPS8-TT、30µg ClfA、30µgα-类毒素
10/30AS = 10µg CPS5-TT、10µg CPS8-TT、30µg ClfA、30µgα-类毒素，加入AS03B佐剂
盐水= 盐水1和盐水2的合并物
GMC = 在所有受试者上计算的几何平均抗体浓度
N = 具有可利用结果的受试者的数目
n/%= 具有在指定范围内的浓度的受试者的数目/百分比
95%CI = 95%置信区间; LL = 下限, UL = 上限
PRE = 第1剂之前
PI(D7) = 第1剂之后7天
PI(D14) = 第1剂之后14天
PI(D30) = 第1剂之后30天(在第5或6次就诊时取的血液样品)
PII(D37) = 第2剂之后7天
PII(D44) = 第2剂之后14天 PII(D60) = 第2剂之后30天。

Claims (132)

1.一种针对金黄色葡萄球菌感染进行免疫的方法，所述方法包括以下步骤：给人患者施用单次剂量的包含金黄色葡萄球菌5型荚膜糖的免疫原性组合物，所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖与载体蛋白缀合以形成金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物以3-50 μg、5-25 μg、3-20 μg、3-12 μg、5-10 μg、7-20 μg、7-15 μg或8-12 μg的糖剂量施用。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述免疫原性组合物包含金黄色葡萄球菌8型荚膜糖，所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖与载体蛋白缀合以形成金黄色葡萄球菌8型荚膜糖缀合物，其中所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖缀合物以3-50 μg、5-25 μg、3-20 μg、3-12 μg、5-10 μg、7-20 μg、7-15 μg或8-12 μg的糖剂量施用。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖具有超过25kDa、40kDa或50kDa、或者在25-300kDa、50-250kDa、70-150kDa、25-125kDa、90-125kDa、30-100kDa、35-75KDa或40-70kDa之间的分子量。
4.根据权利要求1-3中的任一项所述的方法，其中所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖具有超过25kDa、40kDa或50kDa、或者在25-300kDa、50-250kDa、70-150kDa、25-125kDa、90-125kDa、30-100kDa、35-75KDa或40-70kDa之间的分子量。
5.根据权利要求1-4中的任一项所述的方法，其中所述5型荚膜糖所缀合的载体蛋白选自破伤风类毒素、白喉类毒素、CRM197、α类毒素、ClfA、铜绿假单胞菌胞外蛋白A。
6.根据权利要求1-5中的任一项所述的方法，其中所述8型荚膜糖所缀合的载体蛋白选自破伤风类毒素、白喉类毒素、CRM197、α类毒素、ClfA和铜绿假单胞菌胞外蛋白A。
7.根据权利要求5或6所述的方法，其中所述载体蛋白是破伤风类毒素。
8.根据权利要求1-7中的任一项所述的方法，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖和/或所述8型荚膜糖被50-100%或75-100%O-乙酰化。
9.根据权利要求1-8中的任一项所述的方法，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖和/或所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖直接缀合至所述载体蛋白。
10.根据权利要求1-9中的任一项所述的方法，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖使用氰基化试剂进行缀合。
11.根据权利要求1-10中的任一项所述的方法，其中所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖使用氰基化试剂进行缀合。
12.根据权利要求10或11所述的方法，其中所述氰基化试剂是CDAP。
13.根据权利要求1-12中的任一项所述的方法，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物中的多糖与蛋白的比率是在1:5和5:1 (w:w)之间或在1:2和2:1 (w/w)、1:2至1:5 (w/w)或1:1和1:2 (w/w)之间。
14.根据权利要求1-13中的任一项所述的方法，其中所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖缀合物中的多糖与蛋白的比率是在1:5和5:1 (w:w)之间或在1:2和2:1 (w/w)、1:2至1:5 (w/w)或1:1和1:2 (w/w)之间。
15.根据权利要求1-14中的任一项所述的方法，其中相同糖剂量的金黄色葡萄球菌5型荚膜糖和金黄色葡萄球菌8型荚膜糖存在于所述免疫原性组合物中。
16.根据权利要求1-15中的任一项所述的方法，其中所述免疫原性组合物进一步包含ClfA蛋白或其片段。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述ClfA蛋白或其片段与SEQ ID NO:3-12中的任一个的多肽序列沿着其全长具有至少90%同一性。
18.根据权利要求16或17所述的方法，其中所述ClfA蛋白或其片段是包含N2结构域的ClfA片段。
19.根据权利要求16-18所述的方法，其中所述ClfA蛋白或其片段是包含N3结构域的ClfA片段。
20.根据权利要求16-19中的任一项所述的方法，其中所述ClfA蛋白或其片段是包含N1结构域的ClfA片段。
21.根据权利要求16-20中的任一项所述的方法，其中所述ClfA蛋白或其片段包含N2-N3结构域，且具有与SEQ ID NO: 6、7、11、12、15、16、17或18的序列具有至少90%同一性的多肽序列。
22.根据权利要求16-21中的任一项所述的方法，其中所述ClfA蛋白或其片段含有减小ClfA的结合纤维蛋白原的能力的氨基酸置换。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述ClfA蛋白或其片段含有在氨基酸Ala254、Tyr256、Pro336、Tyr338、Ile387、Lys389、Tyr474、Glu526或Val527中的至少一个处的氨基酸置换。
24.根据权利要求22所述的方法，其中氨基酸Pro336被突变成Ser和/或Y338被突变成Ala。
25.根据权利要求16-24中的任一项所述的方法，其中所述ClfA蛋白或其片段作为未缀合的蛋白存在于所述免疫原性组合物中。
26.根据权利要求16-24中的任一项所述的方法，其中所述ClfA蛋白或其片段缀合至所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖。
27.根据权利要求16-24中的任一项所述的方法，其中所述ClfA蛋白或其片段缀合至所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖。
28.根据权利要求16-18中的任一项所述的方法，其中所述ClfA蛋白或其片段以5-50、10-30、5-15或20-40 μg的剂量存在于所述免疫原性组合物中。
29.根据权利要求1-28中的任一项所述的方法，其中在计划的医院手术之前5-60、6-40、7-30或7-15天施用所述单次剂量的免疫原性组合物。
30.根据任意前述权利要求所述的方法，其中所述免疫原性组合物包含α类毒素。
31.根据权利要求30所述的方法，其中所述α类毒素具有与SEQ ID NO:1、2、13或14具有至少90%同一性的氨基酸序列。
32.根据权利要求30或31所述的方法，其中所述α类毒素含有降低α类毒素的毒性的点突变。
33.根据权利要求32所述的方法，其中所述α类毒素含有在氨基酸35处的点突变。
34.根据权利要求33所述的方法，其中所述在氨基酸35处的点突变用精氨酸氨基酸替代组氨酸。
35.根据权利要求30-34中的任一项所述的方法，其中所述α类毒素作为未缀合的蛋白存在于免疫原性组合物中。
36.根据权利要求30-35中的任一项所述的方法，其中所述α类毒素缀合至所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖。
37.根据权利要求30-36中的任一项所述的方法，其中所述α类毒素缀合至所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖。
38.根据权利要求30-37中的任一项所述的方法，其中所述α类毒素以5-50、10-30、5-15或20-40 μg的剂量存在于免疫原性组合物中。
39.根据权利要求30-38中的任一项所述的方法，其中所述ClfA和α类毒素以相同剂量存在于所述免疫原性组合物中。
40.根据任意前述权利要求所述的方法，其中所述免疫原性组合物不含有水包油乳剂。
41.根据任意前述权利要求所述的方法，其中所述免疫原性组合物未加佐剂。
42.一种免疫原性组合物，其包含金黄色葡萄球菌5型荚膜糖，所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖与载体蛋白缀合以形成金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物以3-50 μg、5-25 μg、3-20 μg、3-12 μg、5-10 μg、7-20 μg、7-15 μg或8-12 μg的糖剂量施用，其用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染，其中用单次剂量的所述免疫原性组合物免疫人患者。
43.根据权利要求42所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物包含金黄色葡萄球菌8型荚膜糖，所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖与载体蛋白缀合以形成金黄色葡萄球菌8型荚膜糖缀合物，其中所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖缀合物以3-50 μg、5-25 μg、3-20 μg、3-12 μg、5-10 μg、7-20 μg、7-15 μg或8-12 μg的糖剂量施用。
44.根据权利要求42或43所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖具有超过25kDa、40kDa或50kDa、或者在25-300kDa、50-250kDa、70-150kDa、25-125kDa、90-125kDa、30-100kDa、35-75KDa或40-70kDa之间的分子量。
45.根据权利要求42-44中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖具有超过25kDa、40kDa或50kDa、或者在25-300kDa、50-250kDa、70-150kDa、25-125kDa、90-125kDa、30-100kDa、35-75KDa或40-70kDa之间的分子量。
46.根据权利要求42-45中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述5型荚膜糖所缀合的载体蛋白选自破伤风类毒素、白喉类毒素、CRM197、α类毒素、ClfA、铜绿假单胞菌胞外蛋白A。
47.根据权利要求42-46中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述8型荚膜糖所缀合的载体蛋白选自破伤风类毒素、白喉类毒素、CRM197、α类毒素、ClfA和铜绿假单胞菌胞外蛋白A。
48.根据权利要求46或47所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述载体蛋白是破伤风类毒素。
49.根据权利要求42-48中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖和/或所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖被50-100%或75-100%O-乙酰化。
50.根据权利要求42-49中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖和/或所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖直接缀合至所述载体蛋白。
51.根据权利要求42-50中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖使用氰基化试剂进行缀合。
52.根据权利要求42-51中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖使用氰基化试剂进行缀合。
53.根据权利要求51或52所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述氰基化试剂是CDAP。
54.根据权利要求42-53中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物中的多糖与蛋白的比率是在1:5和5:1 (w:w)之间或在1:2和2:1 (w/w)、1:2至1:5 (w/w)或1:1和1:2 (w/w)之间。
55.根据权利要求42-54中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖缀合物中的多糖与蛋白的比率是在1:5和5:1 (w:w)之间或在1:2和2:1 (w/w)、1:2至1:5 (w/w)或1:1和1:2 (w/w)之间。
56.根据权利要求42-55中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中相同糖剂量的金黄色葡萄球菌5型荚膜糖和金黄色葡萄球菌8型荚膜糖存在于所述免疫原性组合物中。
57.根据权利要求42-56中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物进一步包含ClfA蛋白或其片段。
58.根据权利要求57所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述ClfA蛋白或其片段与SEQ ID NO:3-12或15-18中任一的多肽序列沿着其全长具有至少90%同一性。
59.根据权利要求57或58所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述ClfA蛋白或其片段是包含N2结构域的ClfA片段。
60.根据权利要求57-59所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述ClfA蛋白或其片段是包含N3结构域的ClfA片段。
61.根据权利要求57-60中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述ClfA蛋白或其片段是包含N1结构域的ClfA片段。
62.根据权利要求57-58中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述ClfA蛋白或其片段包含N2-N3结构域，且具有与SEQ ID NO:6、7、11、12、15、16、17或18的序列具有至少90%同一性的多肽序列。
63.根据权利要求57-62中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述ClfA蛋白或其片段含有减小ClfA的结合纤维蛋白原的能力的氨基酸置换。
64.根据权利要求63所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述ClfA蛋白或其片段含有在氨基酸Ala254、Tyr256、Pro336、Tyr338、Ile387、Lys389、Tyr474、Glu526或Val527中的至少一个处的氨基酸置换。
65.根据权利要求63所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中氨基酸Pro336被突变成Ser和/或Y338被突变成Ala。
66.根据权利要求57-65中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述ClfA蛋白或其片段作为未缀合的蛋白存在于所述免疫原性组合物中。
67.根据权利要求57-65中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述ClfA蛋白或其片段缀合至所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖。
68.根据权利要求57-65中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述ClfA蛋白或其片段缀合至所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖。
69.根据权利要求57-68中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述ClfA蛋白或其片段以5-50、10-30、5-15或20-40 μg的剂量存在于所述免疫原性组合物中。
70.根据权利要求42-69中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中在计划的医院手术之前5-60、6-40、7-30或7-15天施用所述单次剂量的免疫原性组合物。
71.任意前述权利要求所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物包含α类毒素。
72.根据权利要求71所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述α类毒素具有与SEQ ID NO: 1、2、13或14具有至少90%同一性的氨基酸序列。
73.根据权利要求71或72所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述α类毒素含有降低α类毒素的毒性的点突变。
74.根据权利要求73所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述α类毒素含有在氨基酸35处的点突变。
75.根据权利要求74所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述在氨基酸35处的点突变用精氨酸替代组氨酸35。
76.根据权利要求71-75中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述α类毒素作为未缀合的蛋白存在于免疫原性组合物中。
77.根据权利要求71-76中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述α类毒素缀合至所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖。
78.根据权利要求71-77中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述α类毒素缀合至所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖。
79.根据权利要求71-78中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述α类毒素以5-50、10-30、5-15或20-40 μg的剂量存在于免疫原性组合物中。
80.根据权利要求71-79中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述ClfA和α类毒素以相同剂量存在于所述免疫原性组合物中。
81.根据权利要求42-80中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物不含有水包油乳剂。
82.根据权利要求42-81中的任一项所述的用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物未加佐剂。
83.一种免疫原性组合物，其包含与载体蛋白缀合的金黄色葡萄球菌5型荚膜糖、与载体蛋白缀合的金黄色葡萄球菌8型荚膜糖、ClfA蛋白或其片段和α类毒素。
84.根据权利要求83所述的免疫原性组合物，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物以3-50 μg、5-25 μg、3-20 μg、3-12 μg、5-10 μg、7-20 μg、7-15 μg或8-12 μg的糖剂量存在。
85.根据权利要求83或84所述的免疫原性组合物，其中所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖缀合物以3-50 μg、5-25 μg、3-20 μg、3-12 μg、5-10 μg、7-20 μg、7-15 μg或8-12 μg的糖剂量存在。
86.根据权利要求83-85中的任一项所述的免疫原性组合物，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖具有超过25kDa、40kDa或50kDa、或者在25-300kDa、50-250kDa、70-150kDa、25-125kDa、90-125kDa、30-100kDa、35-75KDa或40-70kDa之间的分子量。
87.根据权利要求83-86中的任一项所述的免疫原性组合物，其中所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖具有超过25kDa、40kDa或50kDa、或者在25-300kDa、50-250kDa、70-150kDa、25-125kDa、90-125kDa、30-100kDa、35-75KDa或40-70kDa之间的分子量。
88.根据权利要求83-87中的任一项所述的免疫原性组合物，其中所述5型荚膜糖所缀合的载体蛋白选自破伤风类毒素、白喉类毒素、CRM197、α类毒素、ClfA、铜绿假单胞菌胞外蛋白A。
89.根据权利要求83-88中的任一项所述的免疫原性组合物，其中所述8型荚膜糖所缀合的载体蛋白选自破伤风类毒素、白喉类毒素、CRM197、α类毒素、ClfA和铜绿假单胞菌胞外蛋白A。
90.根据权利要求88或89所述的免疫原性组合物，其中所述载体蛋白是破伤风类毒素。
91.根据权利要求83-90中的任一项所述的免疫原性组合物，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖和/或所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖被50-100%或75-100%O-乙酰化。
92.根据权利要求83-91中的任一项所述的免疫原性组合物，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖和/或所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖直接缀合至所述载体蛋白。
93.根据权利要求83-92中的任一项所述的免疫原性组合物，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖使用氰基化试剂进行缀合。
94.根据权利要求83-93中的任一项所述的免疫原性组合物，其中所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖使用氰基化试剂进行缀合。
95.根据权利要求93或94所述的免疫原性组合物，其中所述氰基化试剂是CDAP。
96.根据权利要求83-95中的任一项所述的免疫原性组合物，其中所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物中的多糖与蛋白的比率是在1:5和5:1 (w:w)之间或在1:2和2:1 (w/w)、1:2至1:5 (w/w)或1:1和1:2 (w/w)之间。
97.根据权利要求83-96中的任一项所述的免疫原性组合物，其中所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖缀合物中的多糖与蛋白的比率是在1:5和5:1 (w:w)之间或在1:2和2:1 (w/w)、1:2至1:5 (w/w)或1:1和1:2 (w/w)之间。
98.根据权利要求83-97中的任一项所述的免疫原性组合物，其中相同糖剂量的金黄色葡萄球菌5型荚膜糖和金黄色葡萄球菌8型荚膜糖存在于所述免疫原性组合物中。
99.根据权利要求83-98中的任一项所述的免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物进一步包含ClfA蛋白或其片段。
100.根据权利要求99所述的免疫原性组合物，其中所述ClfA蛋白或其片段与SEQ IDNO:3-12或15-18中的任一个的氨基酸序列沿着其全长具有至少90%同一性。
101.根据权利要求99或100所述的免疫原性组合物，其中所述ClfA蛋白或其片段是包含N2结构域的ClfA片段。
102.根据权利要求99-101所述的免疫原性组合物，其中所述ClfA蛋白或其片段是包含N3结构域的ClfA片段。
103.根据权利要求99-102中的任一项所述的免疫原性组合物，其中所述ClfA蛋白或其片段是包含N1结构域的ClfA片段。
104.根据权利要求99-103中的任一项所述的免疫原性组合物，其中所述ClfA蛋白或其片段包含N2-N3结构域，且具有与SEQ ID NO: 6、7、11、12、15、16、17或18的序列具有至少90%同一性的氨基酸序列。
105.根据权利要求99-104中的任一项所述的免疫原性组合物，其中所述ClfA蛋白或其片段含有减小ClfA的结合纤维蛋白原的能力的氨基酸置换。
106.根据权利要求105所述的免疫原性组合物，其中所述ClfA蛋白或其片段含有在氨基酸Ala254、Tyr256、Pro336、Tyr338、Ile387、Lys389、Tyr474、Glu526或Val527中的至少一个处的氨基酸置换。
107.根据权利要求105所述的免疫原性组合物，其中氨基酸Pro336被突变成Ser和/或Tyr338被突变成Ala。
108.根据权利要求99-107中的任一项所述的免疫原性组合物，其中所述ClfA蛋白或片段作为未缀合的蛋白存在于所述免疫原性组合物中。
109.根据权利要求99-107中的任一项所述的免疫原性组合物，其中所述ClfA蛋白或其片段缀合至所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖。
110.根据权利要求99-107中的任一项所述的免疫原性组合物，其中所述ClfA蛋白或其片段缀合至所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖。
111.根据权利要求99-110中的任一项所述的免疫原性组合物，其中所述ClfA蛋白或其片段以5-50、10-30、5-15或20-40 μg的剂量存在于所述免疫原性组合物中。
112.根据权利要求111所述的免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物具有0.5ml的体积。
113.根据权利要求83-112中的任一项所述的免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物包含α类毒素。
114.根据权利要求113所述的免疫原性组合物，其中所述α类毒素具有与SEQ ID NO:1、2、3或4具有至少90%同一性的氨基酸序列。
115.根据权利要求113或114所述的免疫原性组合物，其中所述α类毒素含有降低α类毒素的毒性的点突变。
116.根据权利要求115所述的免疫原性组合物，其中所述α类毒素含有在氨基酸35处的点突变。
117.根据权利要求116所述的免疫原性组合物，其中所述在氨基酸35处的点突变用精氨酸或亮氨酸氨基酸替代组氨酸。
118.根据权利要求113-117中的任一项所述的免疫原性组合物，其中所述α类毒素作为未缀合的蛋白存在于免疫原性组合物中。
119.根据权利要求113-118中的任一项所述的免疫原性组合物，其中所述α类毒素缀合至所述金黄色葡萄球菌5型荚膜糖。
120.根据权利要求113-119中的任一项所述的免疫原性组合物，其中所述α类毒素缀合至所述金黄色葡萄球菌8型荚膜糖。
121.根据权利要求113-120中的任一项所述的免疫原性组合物，其中所述α类毒素以5-50、10-30、5-15或20-40 μg的剂量存在于免疫原性组合物中。
122.根据权利要求113-121中的任一项所述的免疫原性组合物，其中所述ClfA和α类毒素以相同剂量存在于所述免疫原性组合物中。
123.根据权利要求83-122中的任一项所述的免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物不含有水包油乳剂。
124.根据权利要求83-123中的任一项所述的免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物未加佐剂。
125.一种疫苗，其包含根据权利要求83-124中的任一项所述的免疫原性组合物和药学上可接受的赋形剂。
126.一种用于制备根据权利要求83-124中的任一项所述的免疫原性组合物或根据权利要求125所述的疫苗的方法，所述方法包括下述步骤：a)将金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合至载体蛋白以形成金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物，b)将金黄色葡萄球菌8型荚膜糖缀合至载体蛋白以形成金黄色葡萄球菌8型荚膜糖缀合物，和c)将金黄色葡萄球菌5型荚膜糖缀合物、金黄色葡萄球菌8型荚膜糖缀合物、ClfA蛋白或其片段和α类毒素组合以形成免疫原性组合物。
127.根据权利要求83-124中的任一项所述的免疫原性组合物或根据权利要求125所述的疫苗，其用于治疗或预防人受试者中的金黄色葡萄球菌感染。
128.用于根据权利要求127所述的用途的免疫原性组合物，其中所述人受试者正在经历外科手术，任选心胸外科手术。
129.用于根据权利要求128所述的用途的免疫原性组合物，其中在经历外科手术之前5-60天、6-40天、7-30天或7-15天的时间点，用单次剂量的根据权利要求83-124中的任一项所述的免疫原性组合物或根据权利要求125所述的疫苗免疫所述人受试者。
130.一种治疗方法，所述方法包括下述步骤：给处于发展金黄色葡萄球菌感染的风险中的人受试者施用免疫学上有效量的根据权利要求83-124中的任一项所述的免疫原性组合物或根据权利要求125所述的疫苗。
131.根据权利要求130所述的方法，其中所述人受试者正在经历外科手术，任选心胸外科手术。
132.根据权利要求131所述的方法，其中在经历外科手术之前5-60天、6-40天、7-30天或7-15天的时间点，用单次剂量的根据权利要求83-124中的任一项所述的免疫原性组合物或根据权利要求125所述的疫苗免疫所述人受试者。
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