KR20220016964A - 에스. 뉴모니아에 혈청형 29에 대해 보호하는 면역원성 조성물을 사용하여 환자를 치료하는 방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 에스. 뉴모니아에 혈청형 35B 폴리사카라이드-단백질 접합체를 포함하고, 에스. 뉴모니아에 혈청형 29 폴리사카라이드-단백질 접합체는 포함하지 않으며, 에스. 뉴모니아에 혈청형 29에 대한 보호를 제공하는 면역원성 다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 백신을 투여함으로써 환자를 치료하는 방법을 제공한다.

Description

에스. 뉴모니아에 혈청형 29에 대해 보호하는 면역원성 조성물을 사용하여 환자를 치료하는 방법
본 발명은 혈청형 35B 폴리사카라이드-단백질 접합체를 포함하고, 혈청형 29 폴리사카라이드-단백질 접합체는 포함하지 않으며, 에스. 뉴모니아에(S. pneumoniae) 혈청형 29에 대한 보호를 제공하는 면역원성 다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 백신 조성물을 투여함으로써 환자를 치료하는 방법을 제공한다.
스트렙토코쿠스 뉴모니아에(Streptococcus pneumoniae) (에스. 뉴모니아에)는 그람-양성 박테리아이고, 영유아에서 침습성 박테리아 질환 (예컨대 폐렴, 박테리아혈증, 수막염 및 중이염)의 가장 흔한 원인이다. 뉴모코쿠스(Pneumococcus)는 혈청형 특이성을 부여하는 화학적으로 연결된 폴리사카라이드에 의해 캡슐화된다. 뉴모코쿠스의 90종이 넘는 공지된 혈청형이 존재하며, 캡슐은 보체로부터 박테리아의 내부 표면을 보호할 뿐만 아니라 그 자체가 면역원성이 불량하기 때문에 뉴모코쿠스에 대한 주요 병독성 결정인자이다. 폴리사카라이드는 T-세포 비의존성 항원이고, 대부분의 경우에, 프로세싱되거나 MHC 분자 상에 제시되지 않아 T-세포와 상호작용할 수 없다. 그러나, 이들은 B 세포 상의 표면 수용체의 가교를 수반하는 대안적 메카니즘을 통해 면역계를 자극할 수 있다.
수년 동안 허가되어 온 다가 폐렴구균 폴리사카라이드 백신은 성인, 특히 고령자 및 고위험자에서 폐렴구균성 질환을 예방하는데 가치있는 것으로 입증되었다. 그러나, 영유아는 미접합 폐렴구균 폴리사카라이드에 불량하게 반응한다. 당시 영유아에서 침습성 폐렴구균성 질환을 유발하는 7종의 가장 빈번하게 단리된 혈청형 (4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F)을 함유하는 폐렴구균 접합체 백신인 프레브나르(Prevnar)®가 2000년 2월에 미국에서 최초로 허가되었다. 미국에서 프레브나르®의 보편적 사용 후, 프레브나르®에 존재하는 혈청형으로 인해 소아에서 침습성 폐렴구균성 질환의 유의한 감소가 있었다. 문헌 [Centers for Disease Control and Prevention, MMWR Morb Mortal Wkly Rep 2005, 54(36):893-7]을 참조한다. 그러나, 세계의 특정 지역에는 프레브나르®에 의한 혈청형 적용범위에 있어서 제한이 존재하며, 미국에는 특정 신생 혈청형 (예를 들어, 19A 등)의 일부 증거가 존재한다. 문헌 [O'Brien et al., 2004, Am J Epidemiol 159:634-44; Whitney et al., 2003, N Engl J Med 348:1737-46; Kyaw et al., 2006, N Engl J Med 354:1455-63; Hicks et al., 2007, J Infect Dis 196:1346-54; Traore et al., 2009, Clin Infect Dis 48:S181-S189]을 참조한다. 다른 다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 백신이 공지되어 있다 (특히 US 2006/0228380, CN 101590224, 및 US 2011/0195086).
다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 백신에서 면역 간섭이 관찰되었고 (예를 들어 GSK의 PCV-11에서 혈청형 3에 대한 보다 낮은 보호), 화이자(Pfizer)의 PCV-13 (프레브나르® 13)에서 혈청형 6B에 대한 보다 낮은 반응률이 관찰되었다. 문헌 [Prymula et al., 2006, Lancet 367:740-48 및 Kieninger et al., Safety and Immunologic Non-inferiority of 13-valent Pneumococcal Conjugate Vaccine Compared to 7-valent Pneumococcal Conjugate Vaccine Given as a 4-Dose Series in Healthy Infants and Toddlers, presented at the 48th Annual ICAAC/ISDA 46th Annual Meeting, Washington DC, October 25-28, 2008]을 참조한다.
다가 폴리사카라이드-단백질 접합체 백신은 백신의 결합가가 증가되는 경우에 감소된 면역원성을 가질 수 있는 것으로 가설화되며, 이는 높은 결합가를 갖는 백신을 개발하는 것을 도전과제로 만든다. 이는 다중 메카니즘으로 인한 것일 수 있다. 담체 유도된 에피토프 억제는 동일한 담체 단백질에 커플링된 항원 (예컨대 피막 폴리사카라이드)에 대한 항체 반응의 간섭을 지칭한다. 간섭은 또한 제한된 수의 담체 특이적 프라이밍된 T 헬퍼 세포에 대한 경쟁으로부터 발생할 수 있다. 그 결과, 접합체 백신의 결합가가 증가함에 따라 공유된 피막 폴리사카라이드에 대한 반응이 감소할 수 있다. 이러한 관찰은 백신 결합가가 7-가 백신에서 13-가 백신으로 증가함에 따라 나타났다 (PCV13 연구논문의 표 9, 페이지 29, 프레브나르 7 대 프레브나르 13의 IgG 항체 GMC의 비교 참조). 따라서, 많은 상이한 뉴모코쿠스 발현 혈청형에 대해 효과적이지만 다가 백신에서 가장 낮은 결합가의 폴리사카라이드-단백질 접합체를 이용하는 백신을 사용하는 폐렴구균성 질환의 치료 방법을 확인할 필요가 있다.
본 발명은 대상체에서 에스. 뉴모니아에(S. pneumoniae) 혈청형 29에 의해 유발된 감염, 질환 또는 상태를 예방, 치료 또는 호전시키는 방법에 사용하기 위한 에스. 뉴모니아에 혈청형 35B 폴리사카라이드-단백질 접합체를 포함하는 면역원성 다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 백신 조성물을 제공하며, 여기서 상기 조성물은 에스. 뉴모니아에 혈청형 29 폴리사카라이드-단백질 접합체는 포함하지 않는다.
본 발명은 또한 혈청형 35B 폴리사카라이드-단백질 접합체를 포함하는 면역원성 다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 백신 조성물을 투여함으로써 대상체에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 29에 의해 유발된 감염, 질환 또는 상태를 예방, 치료 또는 호전시키는 방법을 제공하며, 여기서 상기 백신 조성물은 혈청형 29 폴리사카라이드-단백질 접합체는 포함하지 않는다.
도 1. 35B-CRM197/APA로 면역화된 토끼 (a) 및 마우스 (CD1 마우스 (b) 및 SW 마우스 (c))로부터의 혈청의 OPA 역가. 면역전 혈청 및 PD3 마우스 혈청을 풀로서 시험하였다. PD2 토끼 혈청을 개별적으로 시험하였다. 오차 막대는 GMT의 95% 신뢰 구간을 나타낸다.
도 2. PCV21로 면역화된 토끼로부터의 혈청의 OPA 역가. 면역전 혈청을 풀로서 시험하였다. PD2 토끼 혈청을 항-35B OPA에서 개별적으로 시험하고, 항-29 OPA 검정에서 각각의 군에 대한 풀로서 시험하였다. 오차 막대는 GMT의 95% 신뢰 구간을 나타낸다.
도 3. PD3에서 35B-CRM197 백신으로 면역화된 마우스로부터의 혈청의 ELISA IgG 역가. 오차 막대는 GMT의 95% 신뢰 구간을 나타낸다.
도 4. PD3에서 35B-CRM197 백신으로 면역화된 마우스로부터의 혈청의 OPA 역가. 오차 막대는 GMT의 95% 신뢰 구간을 나타낸다.
도 5. 혈청형 29 IT 챌린지의 생존.
본 발명은 대상체에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 29에 의해 유발된 감염, 질환 또는 상태를 예방, 치료 또는 호전시키는 방법에 사용하기 위한 에스. 뉴모니아에 혈청형 35B 폴리사카라이드-단백질 접합체를 포함하는 면역원성 다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 조성물을 제공하며, 여기서 상기 조성물은 에스. 뉴모니아에 혈청형 29 폴리사카라이드-단백질 접합체는 포함하지 않는다. (실시양태 1)
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 에스. 뉴모니아에 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F로부터의 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는, 실시양태 1의 면역원성 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는, 실시양태 1의 면역원성 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 및 33F로부터의 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는, 실시양태 1의 면역원성 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 에스. 뉴모니아에 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B/C, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 및 33F로부터의 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는, 실시양태 1의 면역원성 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 에스. 뉴모니아에 혈청형 8, 10A, 11A, 12F, 15B/C, 22F 및 33F로부터의 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는, 실시양태 1의 면역원성 조성물을 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 대상체에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 29에 의해 유발된 감염, 질환 또는 상태를 예방, 치료 또는 호전시키는 방법에 사용하기 위한 혈청형 3, 6A, 7F, 8, 9N, 10A, 11A, 12F, 15A, 15C, 16F, 17F, 19A, 20A, 22F, 23A, 23B, 24F, 31, 33F 및 35B로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 포함하는 면역원성 다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 조성물을 제공하며, 여기서 상기 조성물은 에스. 뉴모니아에 혈청형 29 폴리사카라이드-단백질 접합체는 포함하지 않는다.
한 실시양태에서, 본 발명은 대상체에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 29에 의해 유발된 감염, 질환 또는 상태를 예방, 치료 또는 호전시키는 방법에 사용하기 위한 혈청형 3, 6A, 7F, 8, 9N, 10A, 11A, 12F, 15A, 15C, 16F, 17F, 19A, 20A, 22F, 23A, 23B, 24F, 31, 33F 및 35B로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체로 이루어진 면역원성 다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 조성물을 제공한다.
본 발명은 추가로 혈청형 35B 폴리사카라이드-단백질 접합체를 포함하는 면역원성 다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 백신 조성물을 투여함으로써 대상체에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 29에 의해 유발된 감염, 질환 또는 상태를 예방, 치료 또는 호전시키는 방법을 제공하며, 여기서 상기 백신 조성물은 혈청형 29 폴리사카라이드-단백질 접합체는 포함하지 않는다. (실시양태 2)
한 실시양태에서, 본 발명은 또한 백신 조성물이 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 것인 상기 실시양태 2 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 또한 백신 조성물이 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 것인 상기 실시양태 2 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 또한 백신 조성물이 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 및 33F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 것인 상기 실시양태 2 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 또한 백신 조성물이 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B/C, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 및 33F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 것인 상기 실시양태 2 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 실시양태 중 임의의 것에 정의된 바와 같은 백신 조성물이 10종 이하의 추가의 에스. 뉴모니아에 혈청형 폴리사카라이드-단백질 접합체를 갖거나, 또는 6종의 추가의 에스. 뉴모니아에 혈청형 폴리사카라이드-단백질 접합체를 갖거나, 또는 5종의 추가의 에스. 뉴모니아에 혈청형 폴리사카라이드-단백질 접합체를 갖거나, 또는 4종의 추가의 에스. 뉴모니아에 혈청형 폴리사카라이드-단백질 접합체를 갖거나, 또는 3종의 추가의 에스. 뉴모니아에 혈청형 폴리사카라이드-단백질 접합체를 갖거나, 또는 2종의 추가의 에스. 뉴모니아에 혈청형 폴리사카라이드-단백질 접합체를 갖거나, 또는 1종의 추가의 에스. 뉴모니아에 혈청형 폴리사카라이드-단백질 접합체를 갖는 것인 실시양태 2 방법을 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 6종의 추가의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체가 혈청형 16F, 23A, 31, 23B, 24F 및 15A로부터의 것인 상기 방법을 추가로 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 4종의 추가의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체가 혈청형 2, 9N, 17F 및 20으로부터의 것인 상기 방법을 추가로 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 3종의 추가의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체가 혈청형 23B, 24F 및 15A로부터의 것인 상기 방법을 추가로 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 2종의 추가의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체가 혈청형 23B 및 15A로부터의 것인 상기 방법을 추가로 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 1종의 추가의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체가 혈청형 9N으로부터의 것인 상기 방법을 추가로 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 1종의 추가의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체가 혈청형 17F로부터의 것인 상기 방법을 추가로 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 1종의 추가의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체가 혈청형 20으로부터의 것인 상기 방법을 추가로 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 1종의 추가의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체가 혈청형 23B로부터의 것인 상기 방법을 추가로 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 1종의 추가의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체가 혈청형 15A로부터의 것인 상기 방법을 추가로 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 추가로 혈청형 35B 폴리사카라이드-단백질 접합체를 포함하는 면역원성 다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 백신 조성물을 투여함으로써 대상체에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 29에 의해 유발된 감염, 질환 또는 상태를 예방, 치료 또는 호전시키는 방법을 제공하며, 여기서 상기 백신은 혈청형 29 폴리사카라이드-단백질 접합체는 포함하지 않는다 (실시양태 3).
또 다른 측면에서, 본 발명은 또한 백신 조성물이 혈청형 3, 6A, 7F, 8, 9N, 10A, 11A, 12F, 15A, 15C, 16F, 17F, 19A, 20A, 22F, 23A, 23B, 24F, 31, 33F 및 35B로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 포함하는 것인 상기 실시양태 3 방법을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 또한 백신 조성물이 혈청형 3, 6A, 7F, 8, 9N, 10A, 11A, 12F, 15A, 15C, 16F, 17F, 19A, 20A, 22F, 23A, 23B, 24F, 31, 33F 및 35B로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체로 이루어진 것인 상기 실시양태 3 방법을 제공한다.
본 발명은 대상체에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 35B에 의해 유발된 감염, 질환 또는 상태를 예방, 치료 또는 호전시키는 방법에 사용하기 위한 에스. 뉴모니아에 혈청형 29 폴리사카라이드-단백질 접합체를 포함하는 면역원성 다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 조성물을 제공하며, 여기서 상기 조성물은 에스. 뉴모니아에 혈청형 35B 폴리사카라이드-단백질 접합체는 포함하지 않는다 (실시양태 4)
한 실시양태에서, 본 발명은 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 실시양태 4의 면역원성 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 실시양태 4의 면역원성 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 및 33F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 실시양태 4의 면역원성 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B/C, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 및 33F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 실시양태 4의 면역원성 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 혈청형 8, 10A, 11A, 12F, 15B/C, 22F 및 33F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 실시양태 4의 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명은 추가로 혈청형 29 폴리사카라이드-단백질 접합체를 포함하는 면역원성 다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 백신 조성물을 투여함으로써 대상체에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 35B에 의해 유발된 감염, 질환 또는 상태를 예방, 치료 또는 호전시키는 방법을 제공하며, 여기서 상기 백신 조성물은 혈청형 35B 폴리사카라이드-단백질 접합체는 포함하지 않는다. (실시양태 5)
한 실시양태에서, 본 발명은 또한 백신 조성물이 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 것인 상기 실시양태 5의 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 또한 백신 조성물이 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 것인 상기 실시양태 5의 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 또한 백신 조성물이 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 및 33F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 것인 상기 실시양태 5의 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 또한 백신 조성물이 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B/C, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 및 33F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 것인 상기 실시양태 5의 방법을 제공한다.
정의 및 약어
명세서 및 첨부된 청구범위 전반에 걸쳐 사용된 바와 같이, 하기 약어가 적용된다:
Figure pct00001
Figure pct00002
본 발명이 보다 용이하게 이해될 수 있도록, 특정 기술 과학 용어가 하기에 구체적으로 정의된다. 본 문헌의 다른 곳에서 구체적으로 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 다른 기술 과학 용어는 본 발명이 속하는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 의미를 갖는다.
명세서 및 첨부된 청구범위 전반에 걸쳐 사용된 단수 형태는 문맥이 달리 명백하게 지시하지 않는 한 복수 지시대상을 포함한다.
"또는"에 대한 언급은 문맥이 나타낸 가능성 중 하나를 명백하게 지시하지 않는 한 어느 하나 또는 둘 다의 가능성을 나타낸다. 일부 경우에, "및/또는"은 어느 하나 또는 둘 다의 가능성을 강조하기 위해 사용되었다.
본원에 사용된 용어 "포함하다"는 본 발명의 면역원성 조성물과 함께 사용되는 경우에 (항원 혼합물에 대한 "로 이루어진"의 언어의 제한에 적용되는) 임의의 다른 성분, 예컨대 아주반트 및 부형제의 포함을 지칭한다. 용어 "로 이루어진"은 다가 폴리사카라이드-단백질 접합체 혼합물과 함께 사용되는 경우에 특정한 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드 단백질 접합체를 갖고 상이한 혈청형으로부터의 다른 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드 단백질 접합체는 갖지 않는 혼합물을 지칭한다.
본 발명의 조성물 및/또는 백신의 "유효량"은 후속 챌린지 동안 미생물, 예를 들어 에스. 뉴모니아에의 감염성의 가능성 또는 중증도를 유의하게 감소시키는 항체를 도출하는데 요구되는 용량을 지칭한다.
본원에 사용된 어구 "폐렴구균성 질환의 예방을 위해 지시된"은 백신 또는 면역원성 조성물이, 일반적으로 폐렴구균성 질환, 폐렴구균성 폐렴, 폐렴구균성 수막염, 폐렴구균성 박테리아혈증, 에스. 뉴모니아에에 의해 유발된 침습성 질환, 및 에스. 뉴모니아에에 의해 유발된 중이염을 포함하나 이에 제한되지는 않는 에스. 뉴모니아에의 임의의 혈청형에 의해 유발된 1종 이상의 질환의 예방을 위해 하나 이상의 규제 기관, 예컨대 미국 식품 의약품국에 의해 승인된 것을 의미한다.
"면역원성 다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 백신 조성물"은 에스. 뉴모니아에의 1종 초과의 혈청형에 의해 유발된 질환 또는 병리학적 상태에 대한 능동 면역을 제공하는 1종 초과의 활성제 (예를 들어, 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체)를 포함하는 제약 제제이다.
본원에 정의된 "아주반트"는 본 발명의 면역원성 조성물 및/또는 백신의 면역원성을 증진시키는 역할을 하는 물질이다. 면역 아주반트는 단독으로 투여되는 경우에 약하게 면역원성인, 예를 들어 항체 역가 또는 세포-매개된 면역 반응을 유도하지 않거나 약하게 유도하는 항원에 대한 면역 반응을 증진시킬 수 있고/거나, 항원에 대한 항체 역가를 증가시킬 수 있고/거나, 개체에서 면역 반응을 달성하는데 효과적인 항원의 용량을 낮출 수 있다. 따라서, 아주반트는 종종 면역 반응을 부스팅하기 위해 제공되고, 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다.
"환자" (대안적으로 본원에서 "대상체"로 지칭됨)는 에스. 뉴모니아에에 감염될 수 있는 포유동물을 지칭한다. 바람직한 실시양태에서, 환자는 인간이다. 환자는 예방적으로 또는 치유적으로 치료될 수 있다. 예방적 치료는 폐렴구균 감염 또는 그의 영향, 예를 들어 폐렴구균성 폐렴의 가능성 또는 중증도를 감소시키기에 충분한 보호 면역을 제공한다. 치유적 치료는 에스. 뉴모니아에 감염 또는 그의 임상 영향의 중증도를 감소시키거나 재발을 방지하기 위해 수행될 수 있다. 예방적 치료는 본원에 기재된 바와 같은 본 발명의 다가 면역원성 조성물을 사용하여 수행될 수 있다. 본 발명의 조성물은 일반 인구 또는 폐렴구균 감염의 증가된 위험이 있는 사람, 예를 들어 영아, 소아 및 노인, 또는 노인과 함께 살거나 또는 노인을 돌보는 사람에게 투여될 수 있다. 본원에 개시된 바와 같이, 본원에 기재된 면역원성 조성물은 대상체에서 박테리아 감염, 질환 또는 상태를 예방, 치료 또는 호전시키기 위한 다양한 치유적 또는 예방적 방법에서 사용될 수 있다.
다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 백신을 제조하기 위한 일반적 방법
피막 폴리사카라이드
박테리아 피막 폴리사카라이드, 특히 항원으로서 사용되어 온 것은 본 발명에서 사용하기에 적합하고, 면역원성 및/또는 항원성 폴리사카라이드를 확인하는 방법에 의해 용이하게 확인될 수 있다. 에스. 뉴모니아에로부터의 박테리아 피막 폴리사카라이드의 예는 혈청형: 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 6C, 7C, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15A, 15B, 15C, 16F, 17F, 18C, 19A, 19F, 20 (20A 및 20B), 22F, 23A, 23B, 23F, 24F, 33F, 35B, 35F, 또는 38이다.
폴리사카라이드는 공지된 기술에 의해 정제될 수 있다. 그러나, 본 발명은 천연 공급원으로부터 정제된 폴리사카라이드로 제한되지 않고, 폴리사카라이드는 다른 방법, 예컨대 전체 또는 부분 합성에 의해 수득될 수 있다. 에스. 뉴모니아에로부터의 피막 폴리사카라이드는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 표준 기술에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 폴리사카라이드는 박테리아로부터 단리될 수 있고, 공지된 방법 (예를 들어, 유럽 특허 번호 EP497524 및 EP497525 참조)에 의해; 바람직하게는 균질화기를 사용하여 달성되는 미세유동화에 의해 또는 화학적 가수분해에 의해 어느 정도 사이징될 수 있다. 각각의 폴리사카라이드 혈청형에 상응하는 에스. 뉴모니아에 균주는 대두-기반 배지에서 성장시킬 수 있다. 이어서, 개별 폴리사카라이드를 원심분리, 침전, 및 한외여과를 포함한 표준 단계를 통해 정제할 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 출원 공개 번호 2008/0286838 및 미국 특허 번호 5,847,112를 참조한다. 후속 접합 생성물의 점도를 감소시키고/거나 여과성 및 로트-대-로트 일관성을 개선시키기 위해 폴리사카라이드를 사이징할 수 있다.
정제된 폴리사카라이드를 화학적으로 활성화시켜 표준 기술을 사용하여 담체 단백질과 반응할 수 있는 관능기를 도입할 수 있다. 폴리사카라이드의 화학적 활성화 및 담체 단백질(들)에의 후속 접합은 미국 특허 번호 4,365,170, 4,673,574 및 4,902,506에 기재된 수단에 의해 달성된다. 간략하게, 폐렴구균 폴리사카라이드를 퍼아이오데이트-기반 산화제, 예컨대 소듐 퍼아이오데이트, 포타슘 퍼아이오데이트, 또는 과아이오딘산과 반응시켜 이웃자리 히드록실 기의 산화성 절단을 발생시켜 반응성 알데히드 기를 생성한다. 퍼아이오데이트 (예를 들어, 소듐 퍼아이오데이트, 소듐 메타퍼아이오데이트 등)의 적합한 몰 당량은 0.05 내지 0.5 몰 당량 (퍼아이오데이트 대 폴리사카라이드 반복 단위의 몰비) 또는 0.1 내지 0.5 몰 당량을 포함한다. 퍼아이오데이트 반응은 소듐 퍼아이오데이트에 대한 반응성 히드록실 기의 접근성을 제어하는 디올 입체형태 (예를 들어, 비-시클릭 디올, 시스 디올, 트랜스 디올)에 따라 30분 내지 24시간으로 달라질 수 있다.
용어 "퍼아이오데이트"는 퍼아이오데이트 및 과아이오딘산 둘 다를 포함하고; 용어는 또한 메타퍼아이오데이트 (IO4-) 및 오르토퍼아이오데이트 (IO6-) 둘 다를 포함하고, 퍼아이오데이트의 다양한 염 (예를 들어, 소듐 퍼아이오데이트 및 포타슘 퍼아이오데이트)을 포함한다. 피막 폴리사카라이드는 메타퍼아이오데이트의 존재 하에, 또는 소듐 퍼아이오데이트 (NaIO4)의 존재 하에 산화될 수 있다. 추가로, 피막 폴리사카라이드는 오르토퍼아이오데이트의 존재 하에, 또는 과아이오딘산의 존재 하에 산화될 수 있다.
정제된 폴리사카라이드는 또한 링커에 연결될 수 있다. 일단 활성화되거나 링커에 연결되면, 각각의 피막 폴리사카라이드는 담체 단백질에 개별적으로 접합되어 당접합체를 형성한다. 폴리사카라이드 접합체는 공지된 커플링 기술에 의해 제조될 수 있다.
폴리사카라이드는 링커에 커플링되어 폴리사카라이드-링커 중간체를 형성할 수 있으며, 여기서 링커의 유리 말단은 에스테르 기이다. 따라서, 링커는 적어도 1개의 말단이 에스테르 기인 것이다. 다른 말단은 폴리사카라이드와 반응하여 폴리사카라이드-링커 중간체를 형성할 수 있도록 선택된다.
폴리사카라이드는 폴리사카라이드 내의 1급 아민기를 사용하여 링커에 커플링될 수 있다. 이 경우에, 링커는 전형적으로 양쪽 말단에 에스테르 기를 갖는다. 이는 에스테르 기 중 1개를 폴리사카라이드 내의 1급 아민기와 친핵성 아실 치환에 의해 반응시킴으로써 커플링이 일어나게 한다. 반응은 폴리사카라이드가 아미드 연결을 통해 링커에 커플링된 폴리사카라이드-링커 중간체를 생성한다. 따라서, 링커는 폴리사카라이드 내의 1급 아민기와 반응하기 위한 제1 에스테르 기 및 담체 분자 내의 1급 아민기와 반응하기 위한 제2 에스테르 기를 제공하는 이관능성 링커이다. 전형적인 링커는 아디프산 N-히드록시숙신이미드 디에스테르 (SIDEA)이다.
커플링은 또한 간접적으로, 즉 링커에의 커플링 전에 폴리사카라이드를 유도체화하는데 사용되는 추가의 링커에 의해 일어날 수 있다.
폴리사카라이드는 폴리사카라이드의 환원 말단에서 카르보닐 기를 사용하여 추가의 링커에 커플링될 수 있다. 이러한 커플링은 2개의 단계: (a1) 카르보닐 기를 추가의 링커와 반응시키는 단계; 및 (a2) 추가의 링커의 유리 말단을 링커와 반응시키는 단계를 포함한다. 이들 실시양태에서, 추가의 링커는 전형적으로 양쪽 말단에 1급 아민기를 가지며, 이에 의해 1급 아민기 중 1개를 폴리사카라이드 내의 카르보닐 기와 환원성 아미노화에 의해 반응시킴으로써 단계 (a1)가 일어나게 한다. 폴리사카라이드 내의 카르보닐 기와 반응성인 1급 아민기가 사용된다. 히드라지드 또는 히드록실아미노 기가 적합하다. 동일한 1급 아민기가 전형적으로 추가의 링커의 양쪽 말단에 존재하며, 이는 폴리사카라이드 (Ps)-Ps 커플링의 가능성을 허용한다. 반응은 폴리사카라이드-추가의 링커 중간체를 생성하며, 여기서 폴리사카라이드는 C-N 연결을 통해 추가의 링커에 커플링된다.
폴리사카라이드는 폴리사카라이드 내의 상이한 기, 특히 카르복실 기를 사용하여 추가의 링커에 커플링될 수 있다. 이러한 커플링은 2개의 단계: (a1) 기를 추가의 링커와 반응시키는 단계; 및 (a2) 추가의 링커의 유리 말단을 링커와 반응시키는 단계를 포함한다. 이러한 경우에, 추가의 링커는 전형적으로 양쪽 말단에 1급 아민기를 가지며, 이에 의해 1급 아민기 중 1개를 폴리사카라이드 내의 카르복실 기와 EDAC 활성화에 의해 반응시킴으로써 단계 (a1)가 일어나게 한다. 폴리사카라이드 내의 EDAC-활성화된 카르복실 기와 반응성인 1급 아민기가 사용된다. 히드라지드 기가 적합하다. 동일한 1급 아민기가 전형적으로 추가의 링커의 양쪽 말단에 존재한다. 반응은 폴리사카라이드-추가의 링커 중간체를 생성하며, 여기서 폴리사카라이드는 아미드 연결을 통해 추가의 링커에 커플링된다.
담체 단백질
CRM197은 바람직하게는 담체 단백질로서 사용된다. CRM197은 디프테리아 독소의 비-독성 변이체 (즉, 톡소이드)이다. CRM197은 카사미노산 및 효모 추출물-기반 배지에서 성장시킨 코리네박테리움 디프테리아(Corynebacterium diphtheria) 균주 C7 (β197)의 배양물로부터 단리될 수 있다. CRM197은 미국 특허 번호 5,614,382에 기재된 방법에 따라 재조합적으로 제조될 수 있다. 전형적으로, CRM197은 한외여과, 황산암모늄 침전, 및 이온-교환 크로마토그래피의 조합을 통해 정제된다. 추가로 CRM197은 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens)에서 페넥스 익스프레션 테크놀로지(Pfenex Expression Technology)™ (페넥스 인크.(Pfenex Inc.), 캘리포니아주 샌디에고)를 사용하여 제조될 수 있다.
다른 적합한 담체 단백질은 추가의 불활성화된 박테리아 독소, 예컨대 DT (디프테리아 톡소이드), TT (파상풍 톡소이드) 또는 TT의 단편 C, 백일해 톡소이드, 콜레라 톡소이드 (예를 들어, 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2004/083251에 기재된 바와 같음), 이.콜라이(E. coli) LT, 이. 콜라이 ST, 및 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa)로부터의 외독소 A를 포함한다. 박테리아 외막 단백질, 예컨대 외막 복합체 c (OMPC), 포린, 트랜스페린 결합 단백질, 폐렴구균 표면 단백질 A (PspA; 국제 출원 특허 공개 번호 WO 02/091998 참조), 폐렴구균 표면 어드헤신 단백질 (PsaA), 군 A 또는 군 B 스트렙토코쿠스(streptococcus)로부터의 C5a 펩티다제, 또는 헤모필루스 인플루엔자에(Haemophilus influenzae) 단백질 D, 폐렴구균 뉴모리신 (Kuo et al., 1995, Infect Immun 63; 2706-13), 예컨대 일부 방식으로 해독된 ply, 예를 들어 dPLY-GMBS (국제 특허 출원 공개 번호 WO 04/081515 참조) 또는 dPLY-포르몰, PhtX, 예컨대 PhtA, PhtB, PhtD, PhtE 및 Pht 단백질의 융합체, 예를 들어 PhtDE 융합체, PhtBE 융합체 (국제 특허 출원 공개 번호 WO 01/98334 및 WO 03/54007 참조)가 또한 사용될 수 있다. 다른 단백질, 예컨대 오브알부민, 키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH), 소 혈청 알부민 (BSA) 또는 투베르쿨린의 정제된 단백질 유도체 (PPD), PorB (엔. 메닌기티디스(N. meningitidis)로부터의 것), PD (헤모필루스 인플루엔자에 단백질 D; 예를 들어, 유럽 특허 번호 EP 0 594 610 B 참조), 또는 그의 면역학적 기능적 등가물, 합성 펩티드 (유럽 특허 번호 EP0378881 및 EP0427347 참조), 열 쇼크 단백질 (국제 특허 출원 공개 번호 WO 93/17712 및 WO 94/03208 참조), 백일해 단백질 (국제 특허 출원 공개 번호 WO 98/58668 및 유럽 특허 번호 EP0471177 참조), 시토카인, 림포카인, 성장 인자 또는 호르몬 (국제 특허 출원 공개 번호 WO 91/01146 참조), 다양한 병원체 유래 항원으로부터의 다중 인간 CD4+ T 세포 에피토프를 포함하는 인공 단백질 (문헌 [Falugi et al., 2001, Eur J Immunol 31:3816-3824] 참조), 예컨대 N19 단백질 (문헌 [Baraldoi et al., 2004, Infect Immun 72:4884-7] 참조), 철 흡수 단백질 (국제 특허 출원 공개 번호 WO 01/72337 참조), 씨. 디피실레(C. difficile)의 독소 A 또는 B (국제 특허 공개 번호 WO 00/61761 참조), 및 플라젤린 (문헌 [Ben-Yedidia et al., 1998, Immunol Lett 64:9] 참조)이 또한 담체 단백질로서 사용될 수 있다.
다가 백신이 사용되는 경우에, 다가 백신 내의 항원 중 1종 이상에 대해 제2 담체가 사용될 수 있다. 제2 담체 단백질은 바람직하게는 비-독성 및 비-반응원성이고 충분한 양 및 순도로 수득가능한 단백질이다. 제2 담체 단백질은 또한 항원, 예를 들어 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드와 접합 또는 연결되어 항원의 면역원성을 증진시킨다. 담체 단백질은 표준 접합 절차에 적용가능해야 한다. 제1 담체 단백질에 접합되지 않은 각각의 피막 폴리사카라이드는 동일한 제2 담체 단백질에 접합될 수 있다 (예를 들어, 각각의 피막 폴리사카라이드 분자는 단일 담체 단백질에 접합됨). 제1 담체 단백질에 접합되지 않은 피막 폴리사카라이드는 2개 이상의 담체 단백질에 접합될 수 있다 (각각의 피막 폴리사카라이드 분자는 단일 담체 단백질에 접합됨). 이러한 실시양태에서, 동일한 혈청형의 각각의 피막 폴리사카라이드는 전형적으로 동일한 담체 단백질에 접합된다. 다른 DT 돌연변이체, 예컨대 CRM176, CRM228, CRM45 (Uchida et al., 1973, J Biol Chem 218:3838-3844); CRM9, CRM45 CRM102, CRM103 및 CRM107 및 문헌 [Nicholls and Youle in Genetically Engineered Toxins, Ed: Frankel, Maecel Dekker Inc, 1992]에 기재된 다른 돌연변이; Glu-148의 Asp, Gln 또는 Ser로의 및/또는 Ala 158의 Gly로의 결실 또는 돌연변이 및 미국 특허 번호 4,709,017 또는 미국 특허 번호 4,950,740에 개시된 다른 돌연변이; 적어도 1개 이상의 잔기 Lys 516, Lys 526, Phe 530 및/또는 Lys 534의 돌연변이 및 미국 특허 번호 5,917,017 또는 미국 특허 번호 6,455,673에 개시된 다른 돌연변이; 또는 미국 특허 번호 5,843,711에 개시된 단편이 제2 담체 단백질로서 사용될 수 있다.
환원성 아미노화에 의한 접합
폴리사카라이드의 담체 단백질에의 공유 커플링은 환원성 아미노화를 통해 수행될 수 있고, 여기서 폴리사카라이드 상의 아민-반응성 모이어티는 단백질의 1급 아민기 (주로 리신 잔기)에 직접 커플링된다. 널리 공지된 바와 같이, 환원성 아미노화 반응은 2 단계 메카니즘을 통해 진행된다. 먼저, 분자 1 상의 알데히드 기 (R-CHO)와 분자 2 상의 1급 아민 기 (R'-NH2)의 반응에 의해 화학식 R-CH=N-R'의 쉬프 염기 중간체를 형성한다. 제2 단계에서, 쉬프 염기를 환원시켜 화학식 R-CH2-NH-R'의 아미노 화합물을 형성한다. 많은 환원제가 사용될 수 있지만, 가장 흔하게는 고도로 선택적인 환원제, 예컨대 소듐 시아노보로히드라이드 (NaCNBH3)가 사용되는데, 이는 이러한 시약이 쉬프 염기의 이민 관능기만을 특이적으로 환원시킬 것이기 때문이다.
모든 폴리사카라이드가 쇄의 단부에 알데히드 관능기 (말단 알데히드 관능기)를 갖기 때문에, 폴리사카라이드의 환원성 아미노화를 포함하는 접합 방법은 매우 일반적으로 적용될 수 있고, 반복 단위 내에 다른 알데히드 관능기 (쇄내 알데히드 관능기)가 없는 경우에, 이러한 방법은 폴리사카라이드 분자가 담체 단백질의 단일 분자에 커플링된 접합체를 수득하는 것을 가능하게 한다.
전형적인 환원제는 시아노보로히드라이드 염, 예컨대 소듐 시아노보로히드라이드이다. 전형적으로 사용되는 이민-선택적 환원제는 소듐 시아노보로히드라이드이지만, 포타슘 시아노보로히드라이드를 비롯한 다른 시아노보로히드라이드 염이 사용될 수 있다. 소듐 시아노보로히드라이드 시약 로트에서의 출발 시아나이드 수준 및 접합 반응에서의 잔류 시아나이드의 차이는 일관되지 않은 접합 성능으로 이어져, 가변적 생성물 속성, 예컨대 접합체 크기 및 접합체 Ps-대-CRM197 비를 발생시킬 수 있다. 최종 반응 생성물 중 유리 시아나이드 수준을 제어하고/거나 감소시킴으로써, 접합 가변성을 감소시킬 수 있다.
폴리사카라이드 상의 잔류 미반응 알데히드는 강한 환원제, 예컨대 소듐 보로히드라이드의 첨가에 의해 임의로 환원된다. 일반적으로, 강한 환원제의 사용이 바람직하다. 그러나, 일부 폴리사카라이드의 경우, 이 단계를 피하는 것이 바람직하다. 예를 들어, 에스. 뉴모니아에 혈청형 5는 강한 환원제와 용이하게 반응할 수 있는 케톤 기를 함유한다. 이 경우에, 폴리사카라이드의 항원 구조를 보호하기 위해 환원 단계를 우회하는 것이 바람직하다.
접합 후, 폴리사카라이드-단백질 접합체는 과량의 접합 시약 뿐만 아니라 잔류 유리 단백질 및 유리 폴리사카라이드를 제거하기 위해 농축/투석여과 작업, 한외여과, 침전/용리, 칼럼 크로마토그래피 및 심층 여과를 포함한 통상의 기술자에게 널리 공지된 임의의 기술 중 1종 이상에 의해 정제될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 6,146,902를 참조한다. 정제 단계는 한외여과에 의해 다루어질 수 있다.
다가 폴리사카라이드-단백질 접합체 백신
면역원성 조성물은 1개 이상의 담체 단백질에 접합된 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 6C, 7C, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15A, 15B, 15C, 16F, 17F, 18C, 19A, 19F, 20 (20A 또는 20B), 22F, 23A, 23B, 23F, 24F, 33F, 35B, 35F, 또는 38 중 적어도 1종으로부터 선택된 에스. 뉴모니아에 혈청형으로부터의 피막 폴리사카라이드를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 특정한 혈청형으로부터의 사카라이드는 1개 초과의 담체 단백질에 접합되지 않는다.
개별 당접합체를 정제한 후, 이들을 배합하여 본 발명의 면역원성 조성물을 제제화할 수 있다. 이들 폐렴구균 접합체는 개별 방법에 의해 제조되고, 단일 투여 제제로 벌크 제제화된다.
제약/백신 조성물
본 발명은 상기 기재된 폴리사카라이드 혈청형 조합 중 임의의 것을 제약상 허용되는 담체 및 아주반트와 함께 포함하거나, 그로 본질적으로 이루어지거나, 또는 대안적으로 그로 이루어진 제약, 면역원성 및 백신 조성물을 포함한 조성물을 추가로 제공한다. 한 실시양태에서, 조성물은 2 내지 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 또는 35종의 별개의 폴리사카라이드-단백질 접합체를 포함하거나, 그로 본질적으로 이루어지거나, 또는 그로 이루어질 수 있으며, 여기서 각각의 접합체는 제1 담체 단백질 또는 제2 담체 단백질에 접합된 상이한 피막 폴리사카라이드를 함유하고, 여기서 스트렙토코쿠스 뉴모니아에의 혈청형 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 6C, 7C, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15A, 15B, 15C, 16F, 17F, 18C, 19A, 19F, 20 (20A or 20B), 22F, 23A, 23B, 23F, 24F, 33F, 35B, 35F, 또는 38 중 적어도 1종으로부터의 피막 폴리사카라이드는 CRM197에 접합된다.
본 발명은 대상체에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 29에 의해 유발된 감염, 질환 또는 상태를 예방, 치료 또는 호전시키는 방법에 사용하기 위한 에스. 뉴모니아에 혈청형 35B 폴리사카라이드-단백질 접합체를 포함하는 면역원성 다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 조성물을 제공하며, 여기서 상기 조성물은 에스. 뉴모니아에 혈청형 29 폴리사카라이드-단백질 접합체는 포함하지 않는다. (실시양태 1)
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 실시양태 1의 면역원성 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 실시양태 1의 면역원성 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 및 33F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 실시양태 1의 면역원성 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B/C, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 및 33F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 실시양태 1의 면역원성 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 혈청형 8, 10A, 11A, 12F, 15B/C, 22F 및 33F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 실시양태 1의 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명은 대상체에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 29에 의해 유발된 감염, 질환 또는 상태를 예방, 치료 또는 개선시키는 방법에 사용하기 위한, 상기 조성물 중 임의의 것에 정의된 바와 같은 면역원성 조성물을 제공하며, 여기서 조성물은 에스. 뉴모니아에 혈청형 35B 폴리사카라이드-단백질 접합체를 포함하지만, 에스. 뉴모니아에 혈청형 29 폴리사카라이드-단백질 접합체는 포함하지 않고, 여기서 조성물은 10종 이하의 추가의 에스. 뉴모니아에 혈청형 폴리사카라이드-단백질 접합체를 갖는다. 본원에 사용된 "추가의 에스. 뉴모니아에 혈청형 폴리사카라이드-단백질 접합체"는 혈청형 35B 이외의 것으로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 지칭한다.
추가 실시양태에서, 조성물은 6종의 추가의 에스. 뉴모니아에 혈청형 폴리사카라이드-단백질 접합체를 가지며, 바람직하게는 여기서 6종의 추가의 에스. 뉴모니아에 혈청형 폴리사카라이드-단백질 접합체는 혈청형 16F, 23A, 31, 23B, 24F 및 15A로부터의 것이다.
또 다른 실시양태에서, 조성물은 5종의 추가의 에스. 뉴모니아에 혈청형 폴리사카라이드-단백질 접합체를 갖는다.
또 다른 실시양태에서, 조성물은 4종 이하의 추가의 에스. 뉴모니아에 혈청형 폴리사카라이드-단백질 접합체를 가지며, 바람직하게는 여기서 4종 이하의 추가의 에스. 뉴모니아에 혈청형 폴리사카라이드-단백질 접합체는 혈청형 2, 9N, 17F 및 20으로부터 선택된다.
또 다른 실시양태에서, 조성물은 3종의 추가의 에스. 뉴모니아에 혈청형 폴리사카라이드-단백질 접합체를 가지며, 바람직하게는 여기서 3종의 추가의 에스. 뉴모니아에 혈청형 폴리사카라이드-단백질 접합체는 혈청형 23B, 24F 및 15A로부터의 것이다.
또 다른 실시양태에서, 조성물은 2종의 추가의 에스. 뉴모니아에 혈청형 폴리사카라이드-단백질 접합체를 가지며, 바람직하게는 여기서 2종의 추가의 에스. 뉴모니아에 혈청형 폴리사카라이드-단백질 접합체는 혈청형 23B 및 15A로부터의 것이다.
또 다른 실시양태에서, 조성물은 1종의 추가의 에스. 뉴모니아에 혈청형 폴리사카라이드-단백질 접합체를 가지며, 바람직하게는 여기서 1종의 추가의 에스. 뉴모니아에 혈청형 폴리사카라이드-단백질 접합체는 혈청형 9N, 또는 혈청형 17F, 또는 혈청형 20, 또는 혈청형 20A, 또는 혈청형 20B, 또는 혈청형 23B, 또는 혈청형 15A로부터의 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 대상체에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 29에 의해 유발된 감염, 질환 또는 상태를 예방, 치료 또는 호전시키는 방법에 사용하기 위한 혈청형 3, 6A, 7F, 8, 9N, 10A, 11A, 12F, 15A, 15C, 16F, 17F, 19A, 20A, 22F, 23A, 23B, 24F, 31, 33F 및 35B로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 포함하는 면역원성 다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 조성물을 제공하며, 여기서 상기 조성물은 에스. 뉴모니아에 혈청형 29 폴리사카라이드-단백질 접합체는 포함하지 않는다.
한 실시양태에서, 본 발명은 대상체에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 29에 의해 유발된 감염, 질환 또는 상태를 예방, 치료 또는 호전시키는 방법에 사용하기 위한 혈청형 3, 6A, 7F, 8, 9N, 10A, 11A, 12F, 15A, 15C, 16F, 17F, 19A, 20A, 22F, 23A, 23B, 24F, 31, 33F 및 35B로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체로 이루어진 면역원성 다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 조성물을 제공한다.
본 발명의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체의 제제화는 관련 기술분야에 인식된 방법을 사용하여 달성될 수 있다. 예를 들어, 개별 폐렴구균 접합체는 조성물을 제조하기 위해 생리학상 허용되는 비히클과 함께 제제화될 수 있다. 이러한 비히클의 예는 물, 완충 염수, 폴리올 (예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 액체 폴리에틸렌 글리콜) 및 덱스트로스 용액을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
바람직한 실시양태에서, 백신 조성물은 L-히스티딘 완충제 중에서 염화나트륨의 존재 하에 제제화된다.
본원에 정의된 바와 같이, "아주반트"는 본 발명의 면역원성 조성물의 면역원성을 증진시키는 역할을 하는 물질이다. 면역 아주반트는 단독으로 투여되는 경우에 약하게 면역원성인, 예를 들어 항체 역가 또는 세포-매개된 면역 반응을 유도하지 않거나 약하게 유도하는 항원에 대한 면역 반응을 증진시킬 수 있고/거나, 항원에 대한 항체 역가를 증가시킬 수 있고/거나, 개체에서 면역 반응을 달성하는데 효과적인 항원의 용량을 낮출 수 있다. 따라서, 아주반트는 종종 면역 반응을 부스팅하기 위해 제공되고, 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다. 조성물의 유효성을 증진시키기 위한 적합한 아주반트는 하기를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다:
(1) 알루미늄 염 (명반), 예컨대 알루미늄 히드록시드, 알루미늄 포스페이트, 알루미늄 술페이트 등;
(2) 수중유 에멀젼 제제 (다른 특정 면역자극제, 예컨대 뮤라밀 펩티드 (하기 정의됨) 또는 박테리아 세포벽 성분을 함유하거나 함유하지 않음), 예컨대, 예를 들어, (a) 미세유동화기, 예컨대 모델 110Y 미세유동화기 (마이크로플루이딕스(Microfluidics), 매사추세츠주 뉴턴)를 사용하여 서브마이크론 입자로 제제화된, 5% 스쿠알렌, 0.5% 트윈 80, 및 0.5% 스팬 85를 함유하는 (임의로 다양한 양의 MTP-PE를 함유하는) MF59 (국제 특허 출원 공개 번호 WO 90/14837), (b) 서브마이크론 에멀젼으로 미세유동화되거나 또는 볼텍싱되어 보다 큰 입자 크기 에멀젼을 생성하는, 10% 스쿠알렌, 0.4% 트윈 80, 5% 플루로닉-차단된 중합체 L121, 및 thr-MDP를 함유하는 SAF, (c) 2% 스쿠알렌, 0.2% 트윈 80, 및 미국 특허 번호 4,912,094에 기재된 3-O-탈아실화된 모노포스포릴지질 A (MPL™), 트레할로스 디미콜레이트 (TDM), 및 세포벽 골격 (CWS)으로 이루어진 군으로부터의 1종 이상의 박테리아 세포벽 성분, 바람직하게는 MPL+CWS (데톡스(Detox)™)를 함유하는 리비(Ribi)™ 아주반트 시스템 (RAS) (코릭사(Corixa), 몬타나주 해밀턴); 및 (d) 몬타니드 ISA;
(3) 사포닌 아주반트, 예컨대 퀼 A(Quil A) 또는 스티물론(STIMULON)™ QS-21 (안티제닉스(Antigenics), 매사추세츠주 프레이밍햄) (예를 들어, 미국 특허 번호 5,057,540 참조), 또는 그로부터 생성된 입자, 예컨대 ISCOM (콜레스테롤, 사포닌, 인지질, 및 양친매성 단백질의 조합에 의해 형성된 면역자극 복합체) 및 이스코매트릭스(Iscomatrix)® (ISCOM과 본질적으로 동일한 구조를 갖지만 단백질이 없음)가 사용될 수 있음;
(4) 박테리아 리포폴리사카라이드, 합성 지질 A 유사체, 예컨대 아미노알킬 글루코사민 포스페이트 화합물 (AGP), 또는 그의 유도체 또는 유사체, 이는 코릭사로부터 입수가능하고, 미국 특허 번호 6,113,918에 기재되어 있음; 하나의 이러한 AGP는 2-[(R)-3-테트라데카노일옥시테트라데카노일아미노]에틸 2-데옥시-4-O-포스포노-3-O-[(R)-3-테트라데카노일옥시테트라데카노일]-2-[(R)-3-테트라데카노일옥시테트라데카노일아미노]-b-D-글루코피라노시드이고, 이는 또한 529로 공지되어 있고 (이전에 RC529로 공지됨), 이는 수성 형태 또는 안정한 에멀젼으로서 제제화됨;
(5) 합성 폴리뉴클레오티드, 예컨대 CpG 모티프(들)를 함유하는 올리고뉴클레오티드 (미국 특허 번호 6,207,646);
(6) 시토카인, 예컨대 인터류킨 (예를 들어, IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18 등), 인터페론 (예를 들어, 감마 인터페론), 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자 (GM-CSF), 대식세포 콜로니 자극 인자 (M-CSF), 종양 괴사 인자 (TNF), 공동자극 분자 B7-1 및 B7-2 등; 및
(7) 보체, 예컨대 보체 성분 C3d의 삼량체.
또 다른 실시양태에서, 아주반트는 상기 아주반트 중 2, 3종, 또는 그 초과의 혼합물, 예를 들어 SBAS2 (3-탈아실화된 모노포스포릴 지질 A 및 QS21을 또한 함유하는 수중유 에멀젼)이다.
뮤라밀 펩티드는 N-아세틸-뮤라밀-L-트레오닐-D-이소글루타민 (thr-MDP), N-아세틸-노르뮤라밀-L-알라닌-2-(1'-2' 디팔미토일-sn-글리세로-3-히드록시포스포릴옥시)-에틸아민 (MTP-PE) 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
특정 실시양태에서, 아주반트는 알루미늄 염이다. 알루미늄 염 아주반트는 명반-침전 백신 또는 명반-흡착 백신일 수 있다. 알루미늄-염 아주반트는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 예를 들어 문헌 [Harlow, E. and D. Lane (1988; Antibodies: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory) 및 Nicklas, W. (1992; Aluminum salts. Research in Immunology 143:489-493)]에 기재되어 있다. 알루미늄 염은 수화 알루미나, 알루미나 수화물, 알루미나 3수화물 (ATH), 알루미늄 수화물, 알루미늄 3수화물, 알히드로겔, 슈퍼포스, 암포겔, 알루미늄 (III) 히드록시드, 알루미늄 히드록시포스페이트 술페이트 (알루미늄 포스페이트 아주반트 (APA)), 무정형 알루미나, 3수화 알루미나, 또는 트리히드록시알루미늄을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
APA는 알루미늄 히드록시포스페이트의 수성 현탁액이다. APA는 염화알루미늄 및 인산나트륨을 1:1 부피비로 블렌딩하여 알루미늄 히드록시포스페이트를 침전시킴으로써 제조된다. 블렌딩 과정 후, 물질을 고전단 혼합기로 크기-감소시켜 단분산 입자 크기 분포를 달성한다. 이어서, 생성물을 생리 염수에 대해 투석여과하고, 멸균한다 (스팀 멸균 또는 오토클레이빙).
특정 실시양태에서, 상업적으로 입수가능한 Al(OH)3 (예를 들어, 뉴욕주 웨스트베리 소재의 덴마크/아큐레이트 케미칼 앤드 사이언티픽 캄파니(Denmark/Accurate Chemical and Scientific Co.)의 알히드로겔 또는 슈퍼포스)을 사용하여 단백질을 흡착시킨다. 또 다른 실시양태에서, 단백질의 흡착은 단백질의 pI (등전 pH) 및 배지의 pH에 의존한다. 보다 낮은 pI를 갖는 단백질은 보다 높은 pI를 갖는 단백질보다 더 강하게 양으로 하전된 알루미늄 이온에 흡착한다. 알루미늄 염은 2-3주의 기간에 걸쳐 천천히 방출되는 항원의 데포를 확립할 수 있고/거나, 대식세포의 비특이적 활성화 및 보체 활성화에 수반될 수 있고/거나, 선천성 면역 메카니즘을 자극할 수 있다 (가능하게는 요산의 자극을 통함). 예를 들어, 문헌 [Lambrecht et al., 2009, Curr Opin Immunol 21:23]을 참조한다.
1가 벌크 수성 접합체는 전형적으로 함께 블렌딩되고, 목표 16 μg/mL로 희석될 6B를 제외한 모든 혈청형에 대해 목표 8 μg/mL로 희석된다. 희석되면, 배치를 여과 멸균하고, 동일 부피의 알루미늄 포스페이트 아주반트를 250 μg/mL의 최종 알루미늄 농도를 목표로 무균 첨가할 것이다. 아주반트화된, 제제화된 배치는 단일-사용, 0.5 mL/용량 바이알에 충전될 것이다.
특정 실시양태에서, 아주반트는 CpG-함유 뉴클레오티드 서열, 예를 들어 CpG-함유 올리고뉴클레오티드, 특히 CpG-함유 올리고데옥시뉴클레오티드 (CpG ODN)이다. 또 다른 실시양태에서, 아주반트는 콜리 파마슈티칼 그룹(Coley Pharmaceutical Group)으로부터 입수할 수 있는 ODN 1826이다.
"CpG-함유 뉴클레오티드", "CpG-함유 올리고뉴클레오티드", "CpG 올리고뉴클레오티드" 및 유사한 용어는 비메틸화된 CpG 모이어티를 함유하는 6-50개 뉴클레오티드 길이의 뉴클레오티드 분자를 지칭한다. 예를 들어, 문헌 [Wang et al., 2003, Vaccine 21:4297]을 참조한다. 또 다른 실시양태에서, 상기 용어의 임의의 다른 관련 기술분야에서 허용되는 정의가 의도된다. CpG-함유 올리고뉴클레오티드는 임의의 합성 뉴클레오시드간 연결, 변형된 염기 및/또는 변형된 당을 사용하는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다.
CpG 올리고뉴클레오티드의 사용 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 예를 들어 문헌 [Sur et al., 1999, J Immunol. 162:6284-93; Verthelyi, 2006, Methods Mol Med. 127:139-58; 및 Yasuda et al., 2006, Crit Rev Ther Drug Carrier Syst. 23:89-110]에 기재되어 있다.
투여/투여량
본 발명의 조성물 및 제제는 전신 또는 점막 경로를 통해 백신을 투여함으로써 감염, 예를 들어 폐렴구균 감염에 감수성인 인간을 보호 또는 치료하는데 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 본 발명은 인간에게 면역학적 유효량의 본 발명의 면역원성 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 에스. 뉴모니아에 피막 폴리사카라이드 접합체에 대한 면역 반응을 유도하는 방법을 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 인간에게 면역학적 유효량의 본 발명의 면역원성 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 폐렴구균 감염에 대비하여 인간에게 백신접종하는 방법을 제공한다.
특정한 백신에 대한 성분의 최적량은 대상체에서 적절한 면역 반응의 관찰을 수반하는 표준 연구에 의해 확인될 수 있다. 예를 들어, 또 다른 실시양태에서, 인간 백신접종을 위한 투여량은 동물 연구로부터 인간 데이터로의 외삽에 의해 결정된다. 또 다른 실시양태에서, 투여량은 실험적으로 결정된다.
본 발명의 조성물의 "유효량"은 후속 챌린지 동안 미생물, 예를 들어 에스. 뉴모니아에의 감염성의 가능성 또는 중증도를 유의하게 감소시키는 항체를 도출하는데 요구되는 용량을 지칭한다.
본 발명의 방법은 침습성 감염 (수막염, 폐렴, 및 박테리아혈증) 및 비침습성 감염 (급성 중이염 및 부비동염) 둘 다를 포함한, 미생물, 예를 들어 에스. 뉴모니아에 의해 유발되는 1차 임상 증후군의 예방 및/또는 감소를 위해 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물의 투여는 근육내, 복강내, 피내 또는 피하 경로를 통한 주사; 또는 경구/소화관, 호흡기도 또는 비뇨생식관으로의 점막 투여를 통하는 것 중 1종 이상을 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 비강내 투여는 폐렴 또는 중이염의 치료를 위해 사용된다 (폐렴구균의 비인두 보유가 보다 효과적으로 예방될 수 있고, 따라서 그의 초기 단계에서 감염을 약화시킬 수 있음).
각각의 백신 용량 내의 접합체의 양은 유의한 유해 효과 없이 면역보호 반응을 유도하는 양으로서 선택된다. 이러한 양은 폐렴구균 혈청형에 따라 달라질 수 있다. 일반적으로, 폴리사카라이드-기반 접합체의 경우에, 각각의 용량은 각각의 폴리사카라이드를 0.1 내지 100 μg, 특히 0.1 내지 10 μg, 보다 특히 1 내지 5 μg 포함할 것이다. 예를 들어, 각각의 용량은 100, 150, 200, 250, 300, 400, 500, 또는 750 ng 또는 1, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 7.5, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 18, 20, 22, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 또는 100 μg을 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 알루미늄 염의 용량은 10, 15, 20, 25, 30, 50, 70, 100, 125, 150, 200, 300, 500, 또는 700 μg, 또는 1, 1.2, 1.5, 2, 3, 5 mg 또는 그 초과이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 기재된 명반 염의 용량은 재조합 단백질의 μg당이다.
본 발명의 방법 중 임의의 것에 따르면, 한 실시양태에서, 대상체는 인간이다. 특정 실시양태에서, 인간 환자는 영아 (1세 미만), 유아 (대략 12 내지 24개월), 또는 소아 (대략 2 내지 5세)이다. 다른 실시양태에서, 인간 환자는 고령 환자 (> 65세)이다. 본 발명의 조성물은 또한 아동, 청소년 및 성인 (예를 들어, 18 내지 45세 또는 18 내지 65세)에서 사용하기에 적합하다.
본 발명은 추가로 에스. 뉴모니아에 혈청형 35B 폴리사카라이드-단백질 접합체를 포함하는 면역원성 다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 백신 조성물을 투여함으로써 대상체에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 29에 의해 유발된 감염, 질환 또는 상태를 예방, 치료 또는 호전시키는 방법을 제공하며, 여기서 상기 백신 조성물은 에스. 뉴모니아에 혈청형 29 폴리사카라이드-단백질 접합체는 포함하지 않는다. (실시양태 2)
한 실시양태에서, 본 발명은 또한 백신 조성물이 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 것인 상기 실시양태 2 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 또한 백신 조성물이 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 것인 상기 실시양태 2 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 또한 백신 조성물이 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 및 33F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 것인 상기 실시양태 2 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 또한 백신 조성물이 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B/C, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 및 33F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 것인 상기 실시양태 2 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 실시양태 중 임의의 것에 정의된 바와 같은 백신 조성물이 10종 이하의 추가의 혈청형 폴리사카라이드-단백질 접합체를 갖거나, 또는 6종의 추가의 혈청형 폴리사카라이드-단백질 접합체를 갖거나, 또는 5종의 추가의 혈청형 폴리사카라이드-단백질 접합체를 갖거나, 또는 4종의 추가의 혈청형 폴리사카라이드-단백질 접합체를 갖거나, 또는 3종의 추가의 혈청형 폴리사카라이드-단백질 접합체를 갖거나, 또는 2종의 추가의 혈청형 폴리사카라이드-단백질 접합체를 갖거나, 또는 1종의 추가의 혈청형 폴리사카라이드-단백질 접합체를 갖는 것인 실시양태 2 방법을 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 6종의 추가의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체가 혈청형 16F, 23A, 31, 23B, 24F, 15A로부터의 것인 상기 방법을 추가로 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 4종의 추가의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체가 혈청형 2, 9N, 17F 및 20으로부터의 것인 상기 방법을 추가로 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 3종의 추가의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체가 혈청형 23B, 24F 및 15A로부터의 것인 상기 방법을 추가로 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 2종의 추가의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체가 혈청형 23B 및 15A로부터의 것인 상기 방법을 추가로 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 1종의 추가의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체가 혈청형 9N으로부터의 것인 상기 방법을 추가로 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 1종의 추가의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체가 혈청형 17F로부터의 것인 상기 방법을 추가로 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 1종의 추가의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체가 혈청형 20으로부터의 것인 상기 방법을 추가로 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 1종의 추가의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체가 혈청형 23B로부터의 것인 상기 방법을 추가로 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 1종의 추가의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체가 혈청형 15A로부터의 것인 상기 방법을 추가로 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 추가로 에스. 뉴모니아에 혈청형 35B 폴리사카라이드-단백질 접합체를 포함하는 면역원성 다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 백신 조성물을 투여함으로써 대상체에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 29에 의해 유발된 감염, 질환 또는 상태를 예방, 치료 또는 호전시키는 방법을 제공하며, 여기서 상기 백신 조성물은 에스. 뉴모니아에 혈청형 29 폴리사카라이드-단백질 접합체는 포함하지 않는다 (실시양태 3).
또 다른 측면에서, 본 발명은 또한 백신 조성물이 혈청형 3, 6A, 7F, 8, 9N, 10A, 11A, 12F, 15A, 15C, 16F, 17F, 19A, 20A, 22F, 23A, 23B, 24F, 31, 33F 및 35B로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 포함하는 것인 상기 실시양태 3 방법을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 또한 백신 조성물이 혈청형 3, 6A, 7F, 8, 9N, 10A, 11A, 12F, 15A, 15C, 16F, 17F, 19A, 20A, 22F, 23A, 23B, 24F, 31, 33F 및 35B로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체로 이루어진 것인 상기 실시양태 3 방법을 제공한다.
본 발명은 대상체에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 35B에 의해 유발된 감염, 질환 또는 상태를 예방, 치료 또는 호전시키는 방법에 사용하기 위한 에스. 뉴모니아에 혈청형 29 폴리사카라이드-단백질 접합체를 포함하는 면역원성 다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 조성물을 제공하며, 여기서 상기 조성물은 에스. 뉴모니아에 혈청형 35B 폴리사카라이드-단백질 접합체는 포함하지 않는다 (실시양태 4).
한 실시양태에서, 본 발명은 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 실시양태 4의 면역원성 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 실시양태 4의 면역원성 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 및 33F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 실시양태 4의 면역원성 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B/C, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 및 33F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 실시양태 4의 면역원성 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 혈청형 8, 10A, 11A, 12F, 15B/C, 22F 및 33F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 실시양태 4의 면역원성 조성물을 제공한다.
본 발명은 추가로 에스. 뉴모니아에 혈청형 29 폴리사카라이드-단백질 접합체를 포함하는 면역원성 다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 백신을 투여함으로써 대상체에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 35B에 의해 유발된 감염, 질환 또는 상태를 예방, 치료 또는 호전시키는 방법을 제공하며, 여기서 상기 백신은 에스. 뉴모니아에 혈청형 35B 폴리사카라이드-단백질 접합체는 포함하지 않는다. (실시양태 5)
한 실시양태에서, 본 발명은 또한 백신 조성물이 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 것인 상기 실시양태 5의 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 또한 백신 조성물이 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 것인 상기 실시양태 5의 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 또한 백신 조성물이 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 및 33F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 것인 상기 실시양태 5의 방법을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 또한 백신 조성물이 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B/C, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 및 33F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 것인 상기 실시양태 5의 방법을 제공한다.
본 발명의 방법의 한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 단일 접종으로서 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 백신 조성물은 2회, 3회 또는 4회 또는 그 초과로 적절하게 이격되어 투여된다. 예를 들어, 조성물은 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개월 간격 또는 그의 임의의 조합으로 투여될 수 있다. 면역화 스케줄은 폐렴구균 백신에 대해 지정된 것을 따를 수 있다. 예를 들어, 에스. 뉴모니아에에 의해 유발되는 침습성 질환에 대한 영유아의 상용 스케줄은 2, 4, 6 및 12-15개월령이다. 따라서, 바람직한 실시양태에서, 조성물은 2, 4, 6, 및 12-15개월령에 4-용량 시리즈로서 투여된다.
본 발명의 조성물은 또한 에스. 뉴모니아에로부터의 1종 이상의 단백질을 포함할 수 있다. 포함되는데 적합한 에스. 뉴모니아에 단백질의 예는 국제 특허 출원 공개 번호 WO 02/083855 및 WO 02/053761에서 확인되는 것을 포함한다.
제제
본 발명의 조성물은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 1종 이상의 방법에 의해, 예컨대 비경구로, 경점막으로, 경피로, 근육내로, 정맥내로, 피내로, 비강내로, 피하로, 복강내로 대상체에게 투여될 수 있고, 이에 따라 제제화될 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 액체 제제의 표피 주사, 근육내 주사, 정맥내, 동맥내, 피하 주사, 또는 호흡기내 점막 주사를 통해 투여된다. 주사용 액체 제제는 용액 등을 포함한다.
본 발명의 조성물은 단일 용량 바이알, 다중-용량 바이알 또는 사전-충전된 시린지로서 제제화될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 경구로 투여되고, 따라서 경구 투여에 적합한 형태로, 즉 고체 또는 액체 제제로서 제제화된다. 고체 경구 제제는 정제, 캡슐, 환제, 과립, 펠릿 등을 포함한다. 액체 경구 제제는 용액, 현탁액, 분산액, 에멀젼, 오일 등을 포함한다.
액체 제제를 위한 제약상 허용되는 담체는 수성 또는 비-수성 용액, 현탁액, 에멀젼 또는 오일이다. 비수성 용매의 예는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 및 주사가능한 유기 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트이다. 수성 담체는 염수 및 완충 매질을 포함하여, 물, 알콜성/수성 용액, 에멀젼 또는 현탁액을 포함한다. 오일의 예는 동물, 식물, 또는 합성 기원의 것, 예를 들어 땅콩 오일, 대두 오일, 올리브 오일, 해바라기 오일, 어류-간 오일, 또 다른 해양 오일, 또는 우유 또는 난으로부터의 지질이다.
제약 조성물은 등장성, 저장성 또는 고장성일 수 있다. 그러나, 주입 또는 주사용 제약 조성물이 투여될 때 본질적으로 등장성인 것이 종종 바람직하다. 따라서, 저장을 위해 제약 조성물은 바람직하게는 등장성 또는 고장성일 수 있다. 제약 조성물이 저장을 위해 고장성인 경우에, 이는 투여 전에 등장성 용액이 되도록 희석될 수 있다.
등장화제는 이온성 등장화제, 예컨대 염 또는 비-이온성 등장화제, 예컨대 탄수화물일 수 있다. 이온성 등장화제의 예는 염화나트륨 (NaCl), 염화칼슘 (CaCl2), 염화칼륨 (KCl) 및 염화마그네슘 (MgCl2)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 비-이온성 등장화제의 예는 만니톨, 소르비톨 및 글리세롤을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
적어도 1종의 제약상 허용되는 첨가제는 완충제인 것이 또한 바람직하다. 일부 목적을 위해, 예를 들어 제약 조성물이 주입 또는 주사를 위해 의도되는 경우에, 조성물은 용액을 4 내지 10, 예컨대 5 내지 9, 예를 들어 6 내지 8 범위의 pH로 완충시킬 수 있는 완충제를 포함하는 것이 종종 바람직하다.
완충제는 예를 들어 트리스, 아세테이트, 글루타메이트, 락테이트, 말레에이트, 타르트레이트, 포스페이트, 시트레이트, 카르보네이트, 글리시네이트, 히스티딘, 글리신, 숙시네이트 및 트리에탄올아민 완충제로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
게다가, 완충제는 예를 들어, 특히 제약 제제가 비경구 용도를 위한 것인 경우에 비경구 용도를 위한 USP 상용 완충제로부터 선택될 수 있다. 예를 들어, 완충제는 일염기성 산, 예컨대 아세트산, 벤조산, 글루콘산, 글리세르산 및 락트산; 이염기성 산, 예컨대 아코니트산, 아디프산, 아스코르브산, 탄산, 글루탐산, 말산, 숙신산 및 타르타르산, 다염기성 산, 예컨대 시트르산 및 인산; 및 염기, 예컨대 암모니아, 디에탄올아민, 글리신, 트리에탄올아민 및 트리스로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
비경구 비히클 (피하, 정맥내, 동맥내, 또는 근육내 주사용)은 염화나트륨 용액, 링거 덱스트로스, 덱스트로스 및 염화나트륨, 락테이트화 링거 및 고정 오일을 포함한다. 정맥내 비히클은 유체 및 영양 보충제, 전해질 보충제, 예컨대 링거 덱스트로스를 기초로 하는 것 등을 포함한다. 예는 계면활성제 및 다른 제약상 허용되는 아주반트를 첨가하거나 또는 첨가하지 않은 멸균 액체, 예컨대 물 및 오일이다. 일반적으로, 물, 염수, 수성 덱스트로스 및 관련 당 용액, 글리콜, 예컨대 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜이, 특히 주사가능한 용액을 위한 바람직한 액체 담체이다. 오일의 예는 동물, 식물, 또는 합성 기원의 것, 예를 들어 땅콩 오일, 대두 오일, 올리브 오일, 해바라기 오일, 어류-간 오일, 또 다른 해양 오일, 또는 우유 또는 난으로부터의 지질이다.
본 발명의 제제는 또한 계면활성제를 함유할 수 있다. 바람직한 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르 계면활성제 (통상적으로 트윈으로 지칭됨); 상표명 다우팍스(DOWFAX)™ 하에 판매되는 에틸렌 옥시드 (EO), 프로필렌 옥시드 (PO), 및/또는 부틸렌 옥시드 (BO)의 공중합체, 예컨대 선형 EO/PO 블록 공중합체; 반복 에톡시 (옥시-1,2-에탄디일) 기의 수가 다양할 수 있는 옥톡시놀, 특히 관심대상인 옥톡시놀-9 (트리톤(Triton) X-100, 또는 t-옥틸페녹시폴리에톡시에탄올); (옥틸페녹시)폴리에톡시에탄올 (이게팔(IGEPAL) CA-630/NP-40); 인지질, 예컨대 포스파티딜콜린 (레시틴); 노닐페놀 에톡실레이트, 예컨대 테르기톨(Tergitol)™ NP 시리즈; 라우릴, 세틸, 스테아릴 및 올레일 알콜로부터 유래된 폴리옥시에틸렌 지방 에테르 (브리즈(Brij) 계면활성제로 공지됨), 예컨대 트리에틸렌글리콜 모노라우릴 에테르 (브리즈 30); 및 소르비탄 에스테르 (통상적으로 스팬으로 공지됨), 예컨대 소르비탄 트리올레에이트 (스팬 85) 및 소르비탄 모노라우레이트를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
계면활성제의 바람직한 양 (중량%)은 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르 (예컨대 PS80) 0.01 내지 1%, 특히 약 0.1%; 옥틸- 또는 노닐페녹시 폴리옥시에탄올 (예컨대 트리톤 X-100, 또는 트리톤 시리즈의 다른 세제) 0.001 내지 0.1%, 특히 0.005 내지 0.02%; 폴리옥시에틸렌 에테르 (예컨대 라우레트 9) 0.1 내지 20%, 바람직하게는 0.1 내지 10%, 특히 0.1 내지 1% 또는 약 0.5%이다.
제제는 또한 pH-완충 염수 용액을 함유한다. 완충제는, 예를 들어 트리스, 아세테이트, 글루타메이트, 락테이트, 말레에이트, 타르트레이트, 포스페이트, 시트레이트, 카르보네이트, 글리시네이트, 히스티딘, 글리신, 숙시네이트, HEPES (4-(2-히드록시에틸)-1-피페라진에탄술폰산), MOPS (3-(N-모르폴리노)프로판술폰산), MES (2-(N-모르폴리노)에탄술폰산) 및 트리에탄올아민 완충제로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 완충제는 용액을 4 내지 10, 5.2 내지 7.5, 또는 5.8 내지 7.0 범위의 pH로 완충시킬 수 있다. 본 발명의 특정 측면에서, 완충제는 포스페이트, 숙시네이트, 히스티딘, MES, MOPS, HEPES, 아세테이트 또는 시트레이트로 이루어진 군으로부터 선택된다. 게다가, 완충제는 예를 들어, 특히 제약 제제가 비경구 용도를 위한 것인 경우에 비경구 용도를 위한 USP 상용 완충제로부터 선택될 수 있다. 완충제의 농도는 1 mM 내지 50 mM 또는 5 mM 내지 50 mM의 범위일 것이다. 특정 측면에서, 완충제는 5 mM 내지 50 mM의 최종 농도의 히스티딘, 또는 1 mM 내지 10 mM의 최종 농도의 숙시네이트이다. 특정 측면에서, 히스티딘은 20 mM ± 2 mM의 최종 농도로 존재한다.
염수 용액 (즉, NaCl을 함유하는 용액)이 바람직하며, 제제에 적합한 다른 염은 CaCl2, KCl 및 MgCl2 및 그의 조합을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 수크로스, 트레할로스, 만니톨, 소르비톨 및 글리세롤을 포함하나 이에 제한되지는 않는 비-이온성 등장화제가 염 대신 사용될 수 있다. 적합한 염 범위는 25 mM 내지 500 mM 또는 40mM 내지 170mM을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 한 측면에서, 염수는 20 mM 내지 170 mM의 농도로 임의로 존재하는 NaCl이다.
바람직한 실시양태에서, 제제는 염화나트륨과 함께 L-히스티딘 완충제를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 제약 조성물은 제어 방출 시스템으로 전달된다. 예를 들어, 작용제는 정맥내 주입, 경피 패치, 리포솜, 또는 다른 투여 방식을 사용하여 투여될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 중합체 물질이; 예를 들어 마이크로구체 또는 이식물에 사용된다.
본 발명의 조성물은 또한 에스. 뉴모니아에로부터의 1종 이상의 단백질을 포함할 수 있다. 포함되는데 적합한 에스. 뉴모니아에 단백질의 예는 국제 특허 출원 공개 번호 WO 02/083855 및 WO 02/053761에서 확인되는 것을 포함한다.
분석 방법
HPSEC/UV/MALS/RI 검정을 사용한 접합체의 분자량 및 농도 분석
접합체 샘플을 주입하고, 고성능 크기-배제 크로마토그래피 (HPSEC)에 의해 분리한다. 자외선 (UV), 다중-각도 광 산란 (MALS) 및 굴절률 (RI) 검출기를 연속으로 사용하여 검출을 달성한다. UV280으로부터 흡광 계수를 사용하여 단백질 농도를 계산한다. 폴리사카라이드 농도는 mL/g으로 보고되는 용질 농도의 변화에 따른 용액의 굴절률의 변화인 dn/dc 인자를 사용하여 RI 신호 (단백질 및 폴리사카라이드 둘 다에 의해 기여됨)로부터 디컨볼루션한다. 샘플의 평균 분자량은 측정된 농도 및 전체 샘플 피크에 걸친 광 산란 정보를 사용하여 아스트라(Astra) 소프트웨어 (와이어트 테크놀로지 코포레이션(Wyatt Technology Corporation), 캘리포니아주 산타 바바라)에 의해 계산한다. 다분산된 분자에 대해 다중 형태의 평균 분자량 값이 존재한다. 예를 들어, 수-평균 분자량 Mn, 중량-평균 분자량 Mw, 및 z-평균 분자량 Mz (Molecules, 2015, 20:10313-10341). 명시되지 않는 한, 명세서 전반에 걸쳐 사용된 용어 "분자량"은 중량-평균 분자량이다.
폴리사카라이드와 담체 단백질 사이의 공유 부착의 수의 척도로서 접합된 단백질에서의 리신 소모의 결정
워터스 AccQ-태그 아미노산 분석 (AAA)을 사용하여 접합체 샘플에서 접합의 정도를 측정한다. 엘덱스 워크스테이션에서 증기 상 산 가수분해를 사용하여 샘플을 가수분해하여, 담체 단백질을 그의 성분 아미노산으로 분해한다. 유리 아미노산을 6-아미노퀴놀릴-N-히드록시숙신이미딜 카르바메이트 (AQC)를 사용하여 유도체화한다. 이어서, 유도체화된 샘플은 C18 칼럼 상에서 UV 검출과 함께 UPLC를 사용하여 분석한다. 리신 외의 대표적인 아미노산을 사용하여 평균 단백질 농도를 수득한다. 접합 동안의 리신 소모 (즉, 리신 손실)를 접합체에서의 리신의 평균 측정량과 출발 단백질에서의 리신의 예상량 사이의 차이에 의해 결정한다.
유리 폴리사카라이드 시험
먼저 유리 단백질 및 접합체를 데옥시콜레이트 (DOC) 및 염산으로 침전시킴으로써 접합체 샘플 내의 유리 폴리사카라이드 (즉, CRM197과 접합되지 않은 폴리사카라이드)를 측정한다. 이어서, 침전물을 여과하고, 여과물을 HPSEC/UV/MALS/RI에 의해 유리 폴리사카라이드 농도에 대해 분석한다. 유리 폴리사카라이드를 HPSEC/UV/MALS/RI에 의해 측정된 총 폴리사카라이드의 백분율로서 계산한다.
유리 단백질 시험
접합체 샘플 중의 유리 폴리사카라이드, 폴리사카라이드-CRM197 접합체, 및 유리 CRM197을 미셀 전기동역학적 크로마토그래피 (MEKC) 모드에서 모세관 전기영동에 의해 분리한다. 간략하게, 샘플을 25 mM 보레이트, 100 mM SDS, pH 9.3을 함유하는 MEKC 구동 완충제와 혼합하고, 사전조건화된 무가공-용융 실리카 모세관에서 분리한다. 분리를 200 nm에서 모니터링하고, 유리 CRM197을 CRM197 표준 곡선으로 정량화한다. 유리 단백질 결과를 HPSEC/UV/MALS/RI 절차에 의해 결정된 총 단백질 함량의 백분율로서 보고한다.
폴리사카라이드 활성화 정도 검정
접합은 활성화된 알데히드와 담체 단백질 상의 주로 리신 잔기 사이의 환원성 아미노화를 통해 일어난다. 폴리사카라이드 반복 단위의 몰당 알데히드의 몰로서 활성화 수준은 접합 반응을 제어하는데 중요하다.
본 검정에서, 폴리사카라이드를 2.5mg/mL 티오세미카르바지드 (TSC)로 pH4.0에서 유도체화하여 발색단을 도입한다 (혈청형 1, 5, 9V의 경우 활성화된 폴리사카라이드의 유도체화는 1.25mg/mL TSC를 사용함). 유도체화 반응을 진행시켜 플래토에 도달하도록 하였다. 실제 시간은 각각의 혈청형의 반응 속도에 따라 달라진다. 이어서, TSC-Ps를 고성능 크기 배제 크로마토그래피에 의해 TSC 및 다른 저분자량 성분으로부터 분리한다. 신호를 UV 흡광도에 의해 266 nm에서 검출한다. 활성화된 알데히드의 수준을 모노-TSC의 표준 곡선 주입에 대해 또는 미리 결정된 흡광 계수를 직접 사용하여 계산한다. 모노-TSC는 합성된 모노사카라이드의 티오세미카르바존 유도체이다. 이어서, HPSEC/UV/MALS/RI 검정에 의해 측정된 Ps 농도를 사용하여 알데히드 수준을 반복 단위의 몰당 알데히드의 몰 (Ald/RU)로서 전환시킨다.
첨부된 설명을 참조하여 본 발명의 다양한 실시양태를 기재하였지만, 본 발명은 그러한 정확한 실시양태로 제한되지 않으며, 첨부된 청구범위에 정의된 바와 같은 본 발명의 범주 또는 취지로부터 벗어나지 않으면서 다양한 변화 및 변형이 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 그 안에서 이루어질 수 있는 것으로 이해되어야 한다.
본원에 언급된 모든 공개물은 본 발명과 관련되어 사용될 수 있는 방법론 및 물질을 기재하고 개시하기 위한 목적으로 참조로 포함된다.
하기 실시예는 본 발명을 예시하지만, 제한하지는 않는다.
실시예 1
혈청형 35B 접합체의 제조
폴리사카라이드를 용해시키고, 화학적으로 활성화시키고, 한외여과에 의해 완충제-교환하였다. 활성화된 폴리사카라이드 및 정제된 CRM197을 개별적으로 동결건조시키고, DMSO 중에 재-용해시켰다. 이어서, 재-용해된 폴리사카라이드 및 CRM197 용액을 하기 기재된 바와 같이 합하고, 접합시켰다. 생성된 접합체를 최종 0.2-마이크로미터 여과 전에 한외여과에 의해 정제하였다. 각각의 단계 내의 여러 공정 파라미터, 예컨대 pH, 온도, 농도 및 시간을 제어하여 목적하는 속성을 갖는 접합체를 수득하였다.
폴리사카라이드 산화
정제된 폐렴구균 피막 Ps 분말을 물 중에 용해시키고, 0.45-마이크로미터 여과하였다. 용해된 폴리사카라이드를 농축시키고, 10 kDa NMWCO 접선 흐름 한외여과 막을 사용하여 물에 대해 투석여과하였다.
이어서, 폴리사카라이드 용액을 아세트산나트륨 완충제를 사용하여 pH 5 및 22℃로 조정하여 활성화로 인한 폴리사카라이드 크기 감소를 최소화하였다. 100 mM 소듐 메타퍼아이오데이트 용액을 첨가하여 폴리사카라이드 활성화를 개시하였다. 산화 반응을 22℃에서 2시간 동안 진행시켰다.
활성화된 생성물을 10 mM 인산칼륨, pH 6.4에 대해 투석여과한 후, 5 kDa NMWCO 접선 흐름 한외여과 막을 사용하여 물에 대해 투석여과하였다. 2-8℃에서 한외여과를 수행하였다.
CRM197에 대한 폴리사카라이드 접합
이전에 기재된 바와 같이 (WO 2012/173876 A1) 슈도모나스 플루오레센스에서의 발현을 통해 수득된 정제된 CRM197을 5 kDa NMWCO 접선 흐름 한외여과 막을 사용하여 2 mM 포스페이트, pH 7.2 완충제에 대해 투석여과하고, 0.2-마이크로미터 여과하였다.
활성화된 폴리사카라이드를 동결건조를 위해 5% w/v의 수크로스 농도를 갖는 6 mg Ps/mL로 제제화하였다. CRM197을 동결건조를 위해 1% w/v의 수크로스 농도를 갖는 6 mg Pr/mL로 제제화하였다.
제제화된 Ps 및 CRM197 용액을 개별적으로 동결건조시켰다. 동결건조된 Ps 및 CRM197 물질을 동일한 부피의 DMSO 중에 개별적으로 재-용해시켰다. 폴리사카라이드 용액을 염화나트륨과 함께 최종 농도 20 mM로 섞었다. 폴리사카라이드 및 CRM197 용액을 블렌딩하여 6.0 g Ps/L의 폴리사카라이드 농도 및 3.0의 폴리사카라이드 대 CRM197 질량비를 달성하였다. 질량비를 선택하여 생성된 접합체에서의 폴리사카라이드 대 CRM197 비를 제어하였다. 접합을 34℃에서 진행시켰다.
소듐 보로히드라이드를 사용한 환원
소듐 보로히드라이드 (폴리사카라이드 반복 단위의 몰당 2 몰)를 접합 반응 후에 첨가하고, 34℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 배치를 대략 4℃에서 대략 0.025% (w/v) 폴리소르베이트 20을 갖는 150 mM 염화나트륨으로 희석하였다. 이어서, 인산칼륨 완충제를 첨가하여 pH를 중화시켰다. 배치를 농축시키고, 30 kD NMWCO 접선 흐름 한외여과 막을 사용하여 150 mM 염화나트륨, 25 mM 인산칼륨 pH 7에 대해 대략 4℃에서 투석여과하였다.
최종 여과 및 생성물 저장
이어서, 배치를 농축시키고, 300 kDa NMWCO 접선 흐름 한외여과 막을 사용하여 4℃에서 0.015% (w/v) 폴리소르베이트 20을 함유하는 150 mM 염화나트륨 중 10 mM 히스티딘, pH 7.0에 대해 투석여과하였다.
보유물 배치를 0.2 마이크로미터 여과한 다음 (0.5 마이크로미터 예비필터를 가짐), 추가의 0.015% (w/v) 폴리소르베이트 20을 갖는 150 mM 염화나트륨 중 10 mM 히스티딘, pH 7.0으로 희석하고, 분취물로 분배하고, ≤ -60℃에서 동결시켰다.
실시예 2
폐렴구균 접합체 백신의 제제화
상기 실시예(들)에 기재된 바와 같은 상이한 방법을 이용하여 제조된 개별 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체를 1가 및 다가 폐렴구균 접합체 백신의 제제화에 사용하였다.
비양성자성 환경 (DMSO)에서 환원성 아미노화를 사용하여 CRM197 단백질을 폐렴구균 폴리사카라이드 (PnPs) 유형 (3, 6C, 7F, 8, 9N, 10A, 11A, 12F, 15A, 15C (deOAc15B의 형태), 16F, 17F, 19A, 20, 22F, 23A, 23B, 24F, 31, -3F, 및 35B)에 개별적으로 접합시킴으로써 마우스 및 토끼를 면역화시키는데 사용되는 PCV21 백신 약물 생성물을 제조하고, 이를 20 mM L-히스티딘 pH 5.8 및 150 mM NaCl 및 0.2% w/v 폴리소르베이트-20 (PS-20) 중에 84.0 μg/mL의 총 폴리사카라이드 농도에 대해 4.0 μg/mL의 각각의 혈청형으로 제제화하였다. 총 폐렴구균 폴리사카라이드 항원의 목표 농도를 수득하는데 필요한 벌크 접합체의 요구되는 부피를 배치 부피 및 개별 벌크 폴리사카라이드 농축물의 농도에 기초하여 계산하였다. 개별 접합체를 히스티딘, 염화나트륨 및 PS-20의 용액에 첨가하여 4-배 접합체 블렌드를 제조하였다. 4-배 접합체 블렌드를 함유하는 제제 용기를 자기 교반 막대를 사용하여 혼합한 다음, 또 다른 용기 내로 멸균 여과한다. 이어서, 멸균 여과된 4-배 접합체 블렌드를 염수로 희석하여 목적하는 목표 폴리사카라이드 및 부형제 농도를 달성한다. 이어서, 제제를 유리 바이알 또는 시린지에 충전하고, 2-8℃에서 저장하였다.
폐렴구균 폴리사카라이드 35B-CRM197 접합체를 사용하여 1가 약물 생성물을 제조하고, 20 mM 히스티딘 pH 5.8 및 150 mM 염화나트륨 및 0.1% w/v 또는 0.2% w/v 폴리소르베이트-20 (PS-20) 중에 목표로 하는 4.0 μg/mL 폐렴구균 폴리사카라이드 항원으로 제제화하였다. 아주반트로서 알루미늄 포스페이트의 형태의 250 μg [Al]/mL를 사용하여 제제를 제조하였다. 개별 폐렴구균 폴리사카라이드 항원의 목표 농도를 수득하는데 필요한 벌크 접합체의 요구되는 부피를 배치 부피 및 개별 벌크 폴리사카라이드 농축물의 농도에 기초하여 계산하였다. 개별 접합체를 히스티딘, 염화나트륨 및 PS-20의 용액에 첨가하여 2-배 또는 4-배 접합체 블렌드를 제조하였다. 2-배 또는 4-배 접합체 블렌드를 함유하는 제제 용기를 자기 교반 막대를 사용하여 혼합한 다음, 또 다른 용기 내로 멸균 여과하였다. 이어서, 멸균 여과된 2-배 또는 4-배 접합체 블렌드를 알루미늄 포스페이트 아주반트 (APA)를 함유하는 또 다른 용기에 첨가하여 목적하는 목표 폴리사카라이드, 부형제 및 APA 농도를 달성하였다. 이어서, 제제를 유리 바이알 또는 시린지에 충전하고, 2-8℃에서 저장하였다.
실시예 3
35B-CRM197 백신으로 면역화된 뉴질랜드 백색 토끼 (NZWR) 및 마우스에서 생성된 항-35B 혈청은 에스. 뉴모니아에 혈청형 29 박테리아와 교차 반응한다
성체 뉴질랜드 백색 토끼 (n=3마리/군)를 제0일 및 제14일에 0.25 ml의 35B-CRM197 백신으로 근육내로 (IM) 면역화시켰다 (교대 측면). 35B-CRM197 백신을 CRM197에 접합된 35B 폴리사카라이드 1 μg으로 투여하였고, 이는 면역화당 62.5 μg APA와 함께 제제화되었다. 연구 시작 전 (면역전) 및 제14일 (제1 투여후, PD1) 및 제28일 (제2 투여후, PD2)에 혈청을 수집하였다. 훈련된 동물 관리 스태프가 질병 또는 고통의 임의의 징후에 대해 NZWR을 적어도 매일 관찰하였다. 백신-관련 유해 사건이 나타나지 않았기 때문에, NZWR에서 백신 제제는 안전하고 잘 허용되는 것으로 간주되었다. 모든 동물 실험은 미국 국립 보건원의 실험 동물의 관리 및 사용에 대한 지침에서의 권고에 따라 엄격하게 수행하였다. NZWR 실험 프로토콜은 머크 앤 캄파니, 인크.(Merck & Co., Inc.) 및 코반스(Covance) (펜실베니아주 덴버) 둘 다의 동물 실험 윤리 위원회에 의해 승인되었다.
어린 암컷 CD1 및 스위스 웹스터 (SW) 마우스 (6-8주령, n=10마리/군)를 35B-CRM197 백신 0.1 ml로 제0일, 제14일, 및 제28일에 근육내로 면역화시켰다. 35B-CRM197 백신을 면역화당 25 μg APA와 함께 CRM197에 접합된 35B 폴리사카라이드 0.4 μg으로 투여하였다. 연구 시작 전 (면역전) 및 제35일 (제3 투여후, PD3)에 혈청을 수집하였다. 훈련된 동물 관리 스태프가 질병 또는 고통의 임의의 징후에 대해 마우스를 적어도 매일 관찰하였다. 백신-관련 유해 사건이 나타나지 않았기 때문에, 마우스에서 백신 제제는 안전하고 잘 허용되는 것으로 간주되었다. 모든 동물 실험은 미국 국립 보건원의 실험 동물의 관리 및 사용에 대한 지침에서의 권고에 따라 엄격하게 수행하였다. 마우스 실험 프로토콜은 머크 앤 캄파니, 인크.의 동물 실험 윤리 위원회에 의해 승인되었다.
토끼 및 마우스 혈청을 알라바마 대학 (UAB) 연구 재단이 소유하고 그로부터 허가된 www.vaccine.uab.edu 및 옵소타이터(Opsotiter)® 3 소프트웨어에 이전에 기재되어 있던 프로토콜에 기초한 옵소닌식세포작용 검정 (OPA)을 통해 항-35B 및 항-29 기능적 항체에 대해 평가하였다 (Burton, RL, Nahm MH, Clin Vaccine Immunol 2006, 13:1004-9; Burton, RL, Nahm MH, Clin Vaccine Immunol 2012, 19:835-41). 토끼 PD2 혈청을 개별적으로 검정하고, 면역전 혈청을 풀로서 검정하였다. 면역전 및 PD3 마우스 혈청을 풀로서 검정하였다.
35B-CRM197 백신은 면역전 혈청과 비교하여 토끼 및 2종의 마우스 계통에서 높은 항-35B OPA 역가를 유도하였다. 항-35B 혈청은 또한 혈청형 29 균주에 대해 옵소닌식세포 사멸 활성을 가졌다 (도 1a-1c).
실시예 4
PCV21 백신으로 면역화된 뉴질랜드 백색 토끼에서 생성된 항-35B 혈청은 에스. 뉴모니아에 혈청형 29 박테리아와 교차 반응한다
성체 뉴질랜드 백색 토끼 (NZWR, n=5마리/군)를 제0일 및 제14일에 0.1 또는 0.25 ml의 21-가 폐렴구균 접합체 백신 (PCV21/비아주반트화)으로 근육내로 (IM) 면역화시켰다 (교대 측면). PCV21을 0.4 (군 1) 또는 1 μg (군 2)의 각각의 폐렴구균 폴리사카라이드 (3, 6C, 7F, 8, 9N, 10A, 11A, 12F, 15A, 15C, 16F, 17F, 19A, 20A, 22F, 23A, 23B, 24F, 31, 33F, 35B)로 투여하였고, 이는 모두 CRM197에 접합되었고 비아주반트화되었다. 연구 시작 전 (면역전) 및 제14일 (PD1) 및 제28일 (PD2)에 혈청을 수집하였다. 훈련된 동물 관리 스태프가 질병 또는 고통의 임의의 징후에 대해 NZWR을 적어도 매일 관찰하였다. 백신-관련 유해 사건이 나타나지 않았기 때문에, NZWR에서 백신 제제는 안전하고 잘 허용되는 것으로 간주되었다. 모든 동물 실험은 미국 국립 보건원의 실험 동물의 관리 및 사용에 대한 지침에서의 권고에 따라 엄격하게 수행하였다. NZWR 실험 프로토콜은 머크 앤 캄파니, 인크. 및 코반스 (펜실베니아주 덴버) 둘 다의 동물 실험 윤리 위원회에 의해 승인되었다.
토끼 혈청을 옵소닌식세포작용 검정 (OPA)을 통해 항-35B 및 항-29 기능적 항체에 대해 평가하였다. PCV21 백신은 토끼에서 PD2에 높은 항-35B OPA 역가를 생성하였다. 항-PCV21 혈청은 또한 혈청형 29 균주에 대해 옵소닌식세포 사멸 활성을 가졌다 (도 2).
실시예 5
혈청형 29 폴리사카라이드는 혈청형 35B 균주에 대한 항-35B 혈청 옵소닌식세포 사멸 활성을 부분적으로 억제한다
35B-CRM197 또는 PCV21 백신에 의해 생성된 과다면역 혈청을 PnPs15A, 또는 PnPS29, 또는 PnPs35B, 또는 완충제 100 μg과 함께 실온에서 30분 동안 인큐베이션한 후, OPA 검정을 실행하였다. PnPs 사전-흡수 후에, 혈청을 OPA 검정을 통해 항-35B 기능적 항체에 대해 평가하였다.
PnPs35B에 의한 사전-흡수는 모든 혈청에서 항-35B OPA 활성을 완전히 억제하였다. PnPs15A에 의한 사전-흡수는 항-35B-CRM197 토끼 혈청 및 35B-CRM197 CD1 마우스 혈청에 대해 항-35B OPA 활성의 억제를 나타내지 않았고, 항-35B-CRM197 SW 혈청 및 항-PCV21 토끼 혈청에 대해 낮은 억제를 가졌다 (25%-34%). PnPs29에 의한 사전-흡수는 모든 혈청에서 항-35B OPA 활성을 유의하게 감소시켰다 (71%-89%) (표 1). 이 데이터는 PnPs29가 혈청형 35B 균주에 대한 기능적 항체의 일부에 결합할 수 있다는 것을 입증한다. 이들 항체는 PnPs35B 및 PnPs29에 의해 공유되는 공통 에피토프에 의해 유도될 수 있다 (Geno KA, Nahm MH et al., Clin Microbiol Rev 2015, 28(3):871-899). 데이터에 기초하여, 본 발명자들은 PnPs35B가 29-CRM197 백신에 의해 유도되는 과다면역 혈청의 항-29 OPA 활성을 부분적으로 억제할 수 있다고 가설화하였다.
표 1: PnPs15A, PnPs29, 및 PnPs35B에 의한 사전-흡수 후 완충제 대조군에 대한 상대적 OPA 활성.
Figure pct00003
실시예 6
폴리사카라이드-단백질 접합체 혈청형 35B-CRM197 백신으로 면역화된 마우스는 에스. 뉴모니아에 혈청형 29 챌린지로부터 보호되었다
어린 암컷 CD1 마우스 (6-8주령, n=10마리/군)를 35B-CRM197 백신 0.1 ml로 제0일, 제14일, 및 제28일에 면역화시켰다. 35B-CRM197 백신을 면역화당 25 μg APA와 함께 CRM197에 접합된 35B 폴리사카라이드 0.4 μg으로 투여하였다. 훈련된 동물 관리 스태프가 질병 또는 고통의 임의의 징후에 대해 마우스를 적어도 매일 관찰하였다. 백신-관련 유해 사건이 나타나지 않았기 때문에, 마우스에서 백신 제제는 안전하고 잘 허용되는 것으로 간주되었다. 모든 동물 실험은 미국 국립 보건원의 실험 동물의 관리 및 사용에 대한 지침에서의 권고에 따라 엄격하게 수행하였다. 마우스 실험 프로토콜은 머크 앤 캄파니, 인크.의 동물 실험 윤리 위원회에 의해 승인되었다.
제52일에, 마우스를 에스. 뉴모니아에 혈청형 29로 기관내로 (IT) 챌린지하였다. 에스. 뉴모니아에의 지수기 배양물을 원심분리하고, 세척하고, 멸균 PBS 중에 현탁시켰다. 챌린지 전에 마우스를 이소플루란으로 마취시켰다. 0.1ml의 PBS 중 5x104 cfu의 에스. 뉴모니아에 혈청형 29를 앞니에 의해 똑바로 세워진 마우스의 인후에 넣었다. 혀를 바깥쪽으로 부드럽게 잡아당기고 비공을 덮어 박테리아의 흡인을 유도하였다. 마우스를 매일 칭량하고, 체중 감소가 출발 체중의 20%를 초과하면 안락사시켰다. 혈액을 24, 48 및 72시간에 수집하여 박테리아혈증을 평가하였다. 훈련된 동물 관리 스태프가 질병 또는 고통의 임의의 징후에 대해 마우스를 적어도 1일 2회 관찰하였다.
마우스 혈청을 이전에 기재된 바와 같이 ELISA를 사용하여 항-PnPs35B 및 항-PnPs29 IgG 역가에 대해 평가하였다 (Chen Z.F. et al., BMC Infectious Disease, 2018, 18: 613). 마우스 혈청을 또한 OPA 검정을 통해 항-35B 및 항-29 기능적 항체에 대해 평가하였다.
35B-CRM197 백신으로 면역화된 마우스는 PnPs35B 및 PnPs29에 대한 결합 항체 (도 3) 및 에스. 뉴모니아에 혈청형 35B 균주 및 혈청형 29 박테리아에 대한 기능적 항체 (도 4) 둘 다를 생성하였다. 35B-CRM197 백신으로 면역화된 마우스는 또한 혈청형 29 기관내 챌린지로부터 보호되었다 (도 5). 35B-CRM197 백신으로 면역화된 마우스는 챌린지 8일 후에 나이브 마우스의 30% 생존율과 비교하여 100% 생존율을 가졌다. 이들 데이터는 35B-CRM197 백신이 혈청형 29 IT 챌린지로부터 마우스를 교차-보호할 수 있다는 것을 입증한다. 이러한 교차-보호는 혈청형 29 균주에 대한 교차-반응성 기능적 항체를 통해 매개될 수 있다.

Claims (16)

  1. 대상체에서 에스. 뉴모니아에(S. pneumoniae) 혈청형 29에 의해 유발된 감염, 질환 또는 상태를 예방, 치료 또는 호전시키는 방법에 사용하기 위한 에스. 뉴모니아에 혈청형 35B 폴리사카라이드-단백질 접합체를 포함하는 면역원성 다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 조성물이며, 에스. 뉴모니아에 혈청형 29 폴리사카라이드-단백질 접합체는 포함하지 않는 면역원성 다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 및 33F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B/C, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 및 33F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 혈청형 8, 10A, 11A, 12F, 15B/C, 22F 및 33F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
  7. 대상체에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 29에 의해 유발된 감염, 질환 또는 상태를 예방, 치료 또는 호전시키는 방법에 사용하기 위한 혈청형 3, 6A, 7F, 8, 9N, 10A, 11A, 12F, 15A, 15C, 16F, 17F, 19A, 20A, 22F, 23A, 23B, 24F, 31, 33F 및 35B로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 포함하는 면역원성 다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 조성물이며, 에스. 뉴모니아에 혈청형 29 폴리사카라이드-단백질 접합체는 포함하지 않는 면역원성 다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 조성물.
  8. 대상체에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 29에 의해 유발된 감염, 질환 또는 상태를 예방, 치료 또는 호전시키는 방법에 사용하기 위한 혈청형 3, 6A, 7F, 8, 9N, 10A, 11A, 12F, 15A, 15C, 16F, 17F, 19A, 20A, 22F, 23A, 23B, 24F, 31, 33F 및 35B로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체로 이루어진 면역원성 다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 조성물이며, 에스. 뉴모니아에 혈청형 29 폴리사카라이드-단백질 접합체는 포함하지 않는 면역원성 다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 조성물.
  9. 혈청형 35B 폴리사카라이드-단백질 접합체를 포함하는 면역원성 다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 백신 조성물을 투여함으로써 대상체에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 29에 의해 유발된 감염, 질환 또는 상태를 예방, 치료 또는 호전시키는 방법이며, 여기서 상기 백신 조성물은 혈청형 29 폴리사카라이드-단백질 접합체는 포함하지 않는 것인 방법.
  10. 제9항에 있어서, 백신 조성물이 혈청형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 것인 방법.
  11. 제9항에 있어서, 백신 조성물이 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 것인 방법.
  12. 제9항에 있어서, 백신 조성물이 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 및 33F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 것인 방법.
  13. 제9항에 있어서, 백신 조성물이 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B/C, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F 및 33F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 것인 방법.
  14. 제9항에 있어서, 백신 조성물이 혈청형 8, 10A, 11A, 12F, 15B/C, 22F 및 33F로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 추가로 포함하는 것인 방법.
  15. 혈청형 3, 6A, 7F, 8, 9N, 10A, 11A, 12F, 15A, 15C, 16F, 17F, 19A, 20A, 22F, 23A, 23B, 24F, 31, 33F 및 35B로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체를 포함하는 면역원성 다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 백신 조성물을 투여함으로써 대상체에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 29에 의해 유발된 감염, 질환 또는 상태를 예방, 치료 또는 호전시키는 방법.
  16. 혈청형 3, 6A, 7F, 8, 9N, 10A, 11A, 12F, 15A, 15C, 16F, 17F, 19A, 20A, 22F, 23A, 23B, 24F, 31, 33F 및 35B로부터의 에스. 뉴모니아에 폴리사카라이드-단백질 접합체로 이루어진 면역원성 다가 폐렴구균 폴리사카라이드-단백질 접합체 백신 조성물을 투여함으로써 대상체에서 에스. 뉴모니아에 혈청형 29에 의해 유발된 감염, 질환 또는 상태를 예방, 치료 또는 호전시키는 방법.
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