ES2830785T3 - Composición inmunogénica para su uso en terapia - Google Patents

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Abstract

Una composición inmunogénica que comprende i. un sacárido capsular Tipo 5 de Staphylococcus aureus conjugado con una proteína transportadora para formar un conjugado de sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus, en el que el conjugado de sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus se administra a una dosis de sacárido de 3-50 μg, 5-25 μg , 3-20 μg, 3-12 μg, 5-10 μg, 7-20 μg, 7-15 μg o 8-12 μg, y ii. un sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus conjugado con una proteína transportadora para formar un conjugado de sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus, en el que el conjugado de sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus se administra a una dosis de sacárido de 3-50 μg, 5-25 μg, 3-20 μg, 3-12 μg, 5-10 μg, 7-20 μg, 7-15 μg o 8-12 μg, y iii. una proteína ClfA o un fragmento de la misma en la que la proteína ClfA o un fragmento de la misma es al menos un 90 % idéntica a la secuencia polipeptídica de cualquiera de las SEQ ID NO: 3-12 o 15-18 en toda su longitud, y iv. un toxoide alfa para su uso en el tratamiento o prevención de la infección por Staphylococcus aureus en el que se inmuniza a un paciente humano con una dosis única de la composición inmunogénica.

Description

DESCRIPCIÓN
Composición inmunogénica para su uso en terapia
Campo técnico
La presente invención se refiere al campo de las composiciones inmunogénicas estafilocócicas y vacunas, su fabricación y el uso de dichas composiciones en medicina. Más en particular, se refiere al uso de conjugados elaborados a partir de un sacárido capsular de S. aureus, conjugado con una proteína transportadora. Dichos conjugados pueden combinarse con antígenos de proteínas estafilocócicas seleccionados para formar composiciones multivalentes.
Antecedentes
Staphylococcus aureus (S. aureus) son bacterias Gram positivas comensales que colonizan las fosas nasales, axila, faringe y otras superficies mucosas y cutáneas de aproximadamente el 30 % de los sujetos humanos. Se estima que S. aureus es responsable del 20-25 % de todas las infecciones asociadas a la atención médica (Wisplinghoff et al., Clin Infect. Dis. 2004; 39; 309-317), lo que resulta en tres veces la duración de la estadía en el hospital y cinco veces mayor riesgo de muerte intrahospitalaria para pacientes infectados en comparación con pacientes sin tales infecciones (Noskin et al., Arch. Intern. Med. 2005; 165; 1756-1761). Las infecciones por S. aureus pueden estar asociadas con tasas de mortalidad intrahospitalaria de hasta el 25 %. Históricamente, S. aureus se ha asociado principalmente con infecciones nosocomiales. La gravedad de tales infecciones ha aumentado con el reciente aumento dramático de la infección por S. aureus asociada con la resistencia a los antibióticos. Staphylococcus aureus es la causa más común de infecciones nosocomiales con una morbilidad y mortalidad significativas (Romero-Vivas et al., 1995, Infect. Dis. 21; 1417). Es la causa de algunos casos de osteomielitis, endocarditis, artritis séptica, neumonía, abscesos y síndrome de choque tóxico.
Se ha investigado la inmunoterapia pasiva que implica la administración de antisueros policlonales contra antígenos estafilocócicos (documentos WO 00/15238, WO 00/12132) así como la inmunoterapia usando un anticuerpo monoclonal contra el ácido lipoteicoico (documento WO 98/57994). Sin embargo, hasta el momento, ninguno tiene licencia de uso. Varios candidatos a inmunoterapia no demostraron eficacia en humanos. Éstos incluyen; Altastaph (Nabi Biopharmaceuticals) que contiene anticuerpos CP5 y CP8 purificados de sujetos vacunados con StaphVAXMR (vacuna en investigación desarrollada y registrada por Nabi Biopharmaceuticals, Rockville, MD, EE. UU.); Veronate (Inhibitex), anticuerpos policlonales dirigidos al factor A de agrupamiento de S. aureus (ClfA) y SdrG de adhesión de S. epidermidis; Aurexis (Tefibazumab, Inhibitex), anticuerpos monoclonales dirigidos a ClfA; Aurograb (NeuTec Pharma), anticuerpos de cadena sencilla contra un transportador de casete de unión a ATP; y Pagibaximab (Biosynexus), un anticuerpo monoclonal anti-ácido lipoteicoico (Dejonge et al., J. Paediatrics 2007; 151; 260-265, Rupp et al., Antimicrob. Agents Chemother. 2007; 51; 4249-4254).
Un enfoque alternativo sería el uso de vacunación activa para generar una respuesta inmunitaria policlonal contra estafilococos. Un enfoque reportado en el documento WO 03/61558 utiliza conjugados de polisacáridos capsulares de S. aureus Tipo 5 y Tipo 8 conjugados con la exoproteína A de Pseudomonas (StaphVAX-Nabi Biopharmaceuticals). Un enfoque adicional utilizó una proteína IsdB de S. aureus (V710 - Merck & Co) pero no logró demostrar su eficacia (Fowler et al., 2013; JAMA 309; 1368-1378).
Existen muchos problemas asociados con el desarrollo de una vacuna contra la infección por S. aureus. El fracaso de las vacunas que se basan en un solo componente (polisacárido capsular o la proteína IsdB) sugiere que puede ser necesaria una vacuna más compleja que contenga múltiples componentes para inducir la inmunidad protectora. Sin embargo, la combinación de diferentes antígenos en una composición inmunogénica puede provocar interferencias en la composición (Skurnik et al., (2010) J. Clin. Invest. 120; 3220-3233). Por lo tanto, la identificación de componentes para combinar en una composición multivalente no es sencilla. Sigue existiendo la necesidad de desarrollar una vacuna eficaz contra la infección estafilocócica, especialmente en vista de la frecuencia creciente de cepas resistentes a múltiples fármacos.
En el caso de la inmunización contra la infección estafilocócica nosocomial, la inmunización a menudo puede tener lugar poco tiempo antes de la hospitalización o la cirugía o la colocación de un catéter permanente. Por lo tanto, sería ventajoso conseguir altos niveles de inmunidad con una sola inmunización. El uso de dosis más bajas de conjugado también tiene ventajas de eficiencia relativa de producción de vacuna y beneficios económicos asociados.
Por consiguiente, se proporciona una divulgación de un procedimiento de inmunización contra la infección por Staphylococcus aureus que comprende la etapa de administrar a un paciente humano una dosis única de una composición inmunogénica que comprende un sacárido capsular de Staphylococcus aureus Tipo 5 conjugado con una proteína transportadora para formar un conjugado de sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus, en el que el conjugado de sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus se administra a una dosis de sacárido de 3-50 |jg, 5-25 |jg, 3-20 |jg, 3-12 |jg, 5-10 jg , 7-20 jg , 7-15 jg u 8-12 jg .
En un aspecto de la invención, se proporciona una composición inmunogénica que comprende un sacárido capsular de Staphylococcus aureus Tipo 5 conjugado con una proteína transportadora para formar un conjugado de sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus, en el que el conjugado de sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus se administra a una dosis de sacárido de 3-50 |jg, 5-25 |jg, 3-20 |jg, 3-12 |jg, 5-10 |jg, 7-20 |jg, 7-15 |jg u 8-12 |jg, y un sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus conjugado con una proteína transportadora para formar un conjugado de sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus, en el que el conjugado de sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus se administra en una dosis de sacárido de 3-50 jig, 5-25 jig , 3-20 jig, 3-12 jig, 5-10 jig, 7-20 jig, 7-15 jig u 8-12 jig, y una proteína ClfA o un fragmento de la misma en la que la proteína ClfA o un fragmento de la misma es al menos 90 % idéntica a la secuencia polipeptídica de cualquiera de las SEQ ID NOs: 3-12 o 15-18 a lo largo de toda su longitud, y un toxoide alfa para su uso en el tratamiento o prevención de infección por Staphylococcus aureus en el que se inmuniza a un paciente humano con una dosis única de la composición inmunogénica.
En un aspecto adicional de la divulgación, se proporciona una composición inmunogénica que comprende un sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus conjugado con una proteína transportadora, un sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus conjugado con una proteína transportadora, una proteína ClfA o un fragmento de la misma y un toxoide alfa.
En un aspecto adicional de la divulgación, se proporciona una vacuna que comprende un sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus conjugado con una proteína transportadora, un sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus conjugado con una proteína transportadora, una proteína ClfA o un fragmento de la misma y un toxoide alfa y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
En un aspecto adicional de la invención, se proporciona un procedimiento de fabricación de la composición inmunogénica de la invención que comprende las etapas de a) conjugar un sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus con una proteína transportadora para formar un conjugado de sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus, b) conjugar un sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus conjugado con una proteína transportadora para formar un conjugado de sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus, y c) combinar el conjugado de sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus, el conjugado de sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus, una proteína ClfA o un fragmento de la misma en la que la proteína ClfA o un fragmento de la misma es al menos un 90 % idéntica a la secuencia polipeptídica de cualquiera de las SEQ ID NOs: 3-12 o 15-18 a lo largo de toda su longitud y un toxoide alfa para formar la composición inmunogénica.
Descripción de Figuras
Figura 1 - Porcentaje de sujetos que experimentaron dolor después de 1 o 2 dosis de la vacuna 4C. En cada grupo de formulación, las primeras tres columnas proporcionan el porcentaje de sujetos que experimentaron dolor después de una dosis única; la primera columna representa todos los reportes de dolor, la segunda columna representa el dolor superior o igual al grado 2 y la tercera columna representa el dolor de grado 3. Las columnas 4, 5 y 6 muestran la misma información después de la segunda dosis.
Figura 2 - Porcentaje de sujetos que experimentaron enrojecimiento después de 1 o 2 dosis de la vacuna 4C. En cada grupo de formulación, las primeras tres columnas proporcionan el % de sujetos que experimentaron enrojecimiento después de una dosis única; la primera columna representa todos los reportes de enrojecimiento, la segunda columna representa más de 50 mm de enrojecimiento y la tercera columna representa más de 100 mm de enrojecimiento. Las columnas 4, 5 y 6 muestran la misma información después de la segunda dosis.
Figura 3 - Porcentaje de sujetos que experimentaron hinchazón después de 1 o 2 dosis de la vacuna 4C. En cada grupo de formulación, las primeras tres columnas proporcionan el % de sujetos que experimentaron hinchazón después de una sola dosis; la primera columna representa todos los reportes de hinchazón, la segunda columna representa más de 50 mm de hinchazón y la tercera columna representa más de 100 mm de hinchazón. Las columnas 4, 5 y 6 muestran la misma información después de la segunda dosis.
Figura 4 - Resultados de inmunogenicidad para anticuerpos producidos contra el polisacárido capsular Tipo 5 de 5. aureus. Se muestran los resultados de GMC de un ensayo Luminex que detecta anticuerpos contra el polisacárido capsular Tipo 5 en varios puntos de tiempo después de la primera y segunda inmunizaciones. Los puntos de tiempo elegidos son el día 0 antes de la inmunización, el día 7 después de una inmunización, el día 14 después de una inmunización, el día 30 después de una inmunización, el día 7 después de dos inmunizaciones (correspondientes al día 37 en el gráfico), el día 14 después de dos inmunizaciones (correspondientes al día 44 en el gráfico) y el día 30 después de dos inmunizaciones (correspondientes al día 60 en el gráfico). Para cada punto de tiempo, los resultados se presentan en el orden (de izquierda a derecha) de, 5/10, 5/10AS, 10/30, 10/ 30AS y solución salina.
Figura 5 - Resultados de inmunogenicidad para anticuerpos producidos contra el polisacárido capsular Tipo 8 de S. aureus. Se muestran los resultados de GMC de un ensayo Luminex que detecta anticuerpos contra el polisacárido capsular Tipo 8 en varios puntos de tiempo después de la primera y segunda inmunizaciones. Los puntos de tiempo elegidos son el día 0 antes de la inmunización, el día 7 después de una inmunización, el día 14 después de una inmunización, el día 30 después de una inmunización, el día 7 después de dos inmunizaciones (correspondientes al día 37 en el gráfico), el día 14 después de dos inmunizaciones (correspondientes al día 44 en el gráfico) y al día 30 después de dos inmunizaciones (correspondientes al día 60 en el gráfico). Para cada punto de tiempo, los resultados se presentan en el orden (de izquierda a derecha) de, 5/10, 5/10AS, 10/30, 10/ 30AS y solución salina.
Figura 6 - Resultados de inmunogenicidad para anticuerpos producidos contra el toxoide alfa de S. aureus. Se muestran los resultados de GMC de un ensayo Luminex que detecta anticuerpos contra el toxoide alfa en varios puntos de tiempo después de la primera y segunda inmunizaciones. Los puntos de tiempo elegidos son el día 0 antes de la inmunización, el día 7 después de una inmunización, el día 14 después de una inmunización, el día 30 después de una inmunización, el día 7 después de dos inmunizaciones (correspondientes al día 37 en el gráfico), el día 14 después de dos inmunizaciones (correspondientes al día 44 en el gráfico) y al día 30 después de dos inmunizaciones (correspondientes al día 60 en el gráfico). Para cada punto de tiempo, los resultados se presentan en el orden (de izquierda a derecha), de 5/10, 5/10AS, 10/30, 10/30AS y solución salina.
Figura 7 - Resultados de inmunogenicidad para anticuerpos producidos contra ClfA de S. aureus. Se muestran los resultados de GMC de un ELISA que detecta anticuerpos contra ClfA en varios puntos de tiempo después de la primera y segunda inmunizaciones. Los puntos de tiempo elegidos son el día 0 antes de la inmunización, el día 7 después de una inmunización, el día 14 después de una inmunización, el día 30 después de una inmunización, el día 7 después de dos inmunizaciones (correspondientes al día 37 en el gráfico), el día 14 después de dos inmunizaciones (correspondientes al día 44 en el gráfico) y al día 30 después de dos inmunizaciones (correspondientes al día 60 en el gráfico). Para cada punto de tiempo, los resultados se presentan en el orden (de izquierda a derecha), de 5/10, 5/10AS, 10/30, 10/30AS y solución salina.
Figura 8 - Resultados de inmunogenicidad para el polisacárido capsular Tipo 5 de S. aureus (panel A), sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus (panel B), toxoide alfa (panel C) y ClfA (panel D) durante un período más largo del día 0 al día 540, después de 1, 2 o 3 inmunizaciones.
Descripción detallada
La presente divulgación proporciona un procedimiento de inmunización contra la infección por Staphylococcus aureus que comprende una etapa de administrar a un paciente humano una dosis única de una composición inmunogénica que comprende un sacárido capsular Tipo 5 de Staphylococcus aureus conjugado con una proteína transportadora para formar un conjugado de sacárido capsular de Tipo 5 de S. aureus, en el que el conjugado de sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus se administra en una dosis de sacárido de 3-50 |jg, 3-25 |jg, 3-20 |jg, 3-12 |jg, 5-50 |jg, 5-25 |jg, 5-20 jig, 5-12 jig, 5-10 jig, 7-20 jig, 7-15 jig u 8-12 jig.
En una realización, la composición inmunogénica comprende además un sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus conjugado con una proteína transportadora para formar un conjugado de sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus, en el que el conjugado de sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus se administra a una dosis de sacárido de 3-50 jig, 3-25 jig, 3-20 jg , 3-12 jg , 5-50 jg , 5-25 jg , 5-20 jg , 5-12 jg , 5-10 jg , 7-20 jg , 7-15 jg u 8-12 jg .
En una realización, la misma dosis de sacárido de conjugado de sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus y conjugado de sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus está presente en la composición inmunogénica; por ejemplo, una dosis de sacárido de 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 jg de ambos conjugados Tipo 5 y Tipo 8.
La mayoría de las cepas de S. aureus que causan infección en el hombre contienen polisacáridos de Tipo 5 o de Tipo 8. Aproximadamente el 60 % de las cepas humanas son de Tipo 8 y aproximadamente el 30 % son de Tipo 5. Jones Carbohydrate Research 340, 1097-1106 (2005) utilizó espectroscopía de RMN para identificar las estructuras de los polisacáridos capsulares como:
Tipo 5
•4)-p-D-ManNAcA-(1 ^ 4)-a-L-FucNAc(3OAc)-(1 ^3)-p-D-FucNAc-(1
Tipo 8
-3)-p-D-ManNAcA(4OAc)-(1 ^ 3)-a-L-FucNAc(1 ^3)-a-D-FucNAc(1
Los polisacáridos se pueden extraer de la cepa apropiada de S. aureus usando procedimientos bien conocidos por el experto, por ejemplo, como se describe en los documentos US6294177, WO 11/41003, WO 11/51917 o Infection and Immunity (1990) 58 (7); 2367. Por ejemplo, ATCC 12902 es una cepa de S. aureus de Tipo 5 y ATCC 12605 es una cepa de S. aureus de Tipo 8.
Los polisacáridos son de tamaño natural o, alternativamente, se pueden reducir de tamaño, por ejemplo, mediante microfluidización, irradiación ultrasónica o mediante tratamiento químico tal como exposición a pH 5,0-3,0. La invención también cubre los oligosacáridos derivados de los polisacáridos de Tipo 5 y 8 de S. aureus. En una realización, el sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus tiene un peso molecular de más de 25 kDa, 30 kDa, 40 kDa, 50 kDa, 60 kDa, 70 kDa, 80 kDa o 90 kDa o entre 25-125 kDa, 90-125 kDa, 30-100 kDa, 35-75 kDa o 40-70 kDa. En una realización, el sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus tiene un peso molecular de más de 25 kDa, 30 kDa, 40 kDa, 50 kDa, 60 kDa, 70 kDa, 80 kDa o 90 kDa o entre 25-125 kDa, 90-125 kDa, 30-100 kDa, 35-75 kDa o 40-70 kDa.
En una realización, la proteína transportadora con la que se conjuga el sacárido capsular de Tipo 5 y/o de Tipo 8 se selecciona del grupo que consta de toxoide tetánico, toxoide diftérico, CRM197, toxoide alfa, ClfA y exoproteína A de Pseudomonas aeruginosa.
Los oligosacáridos o polisacáridos capsulares de Tipo 5 y/u 8 incluidos en la composición inmunogénica de la invención están O-acetilados. En una realización, el grado de O-acetilación del polisacárido u oligosacárido capsular de Tipo 5 es 50-100 %, 60-100 %, 70-100 %, 80-100 %, 90-100 %, 50-90 %, 60-90 %, 70-90 %, 70-80 % u 80-90 %. En una realización, el grado de O-acetilación del polisacárido u oligosacárido capsular de Tipo 8 es 10-100 %, 20-100 %, 30­ 100 %, 40-100 %, 50-100 %, 60-100 %, 70-100 %, 80-100 %, 90-100 %, 50-90 %, 60-90 %, 70-90 %, 70-80 % u 80­ 90 %. En una realización, el grado de O-acetilación de polisacáridos u oligosacáridos capsulares de Tipo 5 y Tipo 8 es 10-100 %, 20-100 %, 30-100 %, 40-100 %, 50-100 %, 60-100 %, 70-100 %, 80-100 %, 90-100 %, 50-90 %, 60-90 %, 70-90 %, 70-80 % u 80-90 %. En una realización, los sacáridos capsulares de Tipo 5 y/o Tipo 8 están 80-100 % o 100 % O-acetilados.
El grado de O-acetilación del polisacárido u oligosacárido se puede determinar mediante cualquier procedimiento conocido en la técnica, por ejemplo, mediante RMN de protón (Lemercinier y Jones 1996, Carbohydrate Research 296; 83-96, Jones y Lemercinier 2002, J Pharmaceutical and Biomedical Analysis 30; 1233-1247, documentos WO 05/033148 o WO 00/56357). Otro procedimiento comúnmente utilizado es el descrito por Hestrin (1949) J. Biol. Chem.
180; 249-261.
Los grupos O-acetilo pueden eliminarse mediante hidrólisis, por ejemplo, mediante tratamiento con una base tal como hidracina anhidra (Konadu et al., 1994; Infect. Immun. 62; 5048-5054) o tratamiento con NaOH 0,1 N durante 1-8 horas. Para mantener altos niveles de O-acetilación en el polisacárido y el oligosacárido de Tipo 5 y/o 8, se minimizan los tratamientos que conducirían a la hidrólisis de los grupos O-acetilo. Por ejemplo, se minimizan los tratamientos a pH extremos.
Entre los problemas asociados con el uso de polisacáridos en la vacunación, está el hecho de que los polisacáridos por sí mismos son inmunógenos deficientes. Las estrategias, que se han diseñado para superar esta falta de inmunogenicidad, incluyen la unión del polisacárido a grandes transportadores de proteínas, que brindan ayuda a las células T espectadoras. En una realización, los polisacáridos utilizados en la invención están unidos a un transportador de proteína que proporciona ayuda a las células T espectadoras. Ejemplos de estos transportadores que pueden usarse para acoplarse a inmunógenos polisacáridos u oligosacáridos incluyen los toxoides diftérico y tetánico (DT, DT Crm197 y TT), hemocianina de lapa californiana (KLH), exoproteína A de Pseudomonas aeruginosa (rEPA) y el derivado proteico purificado de Tuberculina (PPD), proteína D de Haemophilus influenzae, neumolisina o fragmentos de cualquiera de los anteriores. Los fragmentos adecuados para su uso incluyen fragmentos que abarcan epítopos T auxiliares. En particular, el fragmento de proteína D contendrá opcionalmente un 1/3 del terminal N de la proteína. La proteína D es una proteína de unión a IgD de Haemophilus influenzae (documento EP 0594610 B1).
Una nueva proteína transportadora que sería particularmente ventajosa de usar en el contexto de una vacuna estafilocócica es el toxoide alfa estafilocócico. La forma nativa se puede conjugar con un polisacárido ya que el procedimiento de conjugación reduce la toxicidad. Opcionalmente, se utilizan como transportadores una toxina alfa genéticamente sin toxicidad, tal como las variantes His35Leu o His35Arg, ya que la toxicidad residual es menor. Alternativamente, la toxina alfa pierde su toxicidad químicamente mediante tratamiento con un reactivo de entrecruzamiento, formaldehído o glutaraldehído. El procedimiento de conjugación es un tratamiento químico alternativo que le quita toxicidad a la toxina alfa. Una toxina alfa genéticamente sin toxicidad pierde su toxicidad opcionalmente químicamente, opcionalmente mediante tratamiento con un reactivo de entrecruzamiento, formaldehído o glutaraldehído para reducir aún más la toxicidad.
Los polisacáridos pueden unirse a la o las proteínas portadora mediante cualquier procedimiento conocido (por ejemplo, por Likhite, patente de los Estados Unidos No. 4.372.945 de Armor et al., patente de Estados Unidos No.
4.474.757, Anderson et al., documento WO 10/151544, Berti et al., documento w O 11/138636 y Jennings et al., patente de los Estados Unidos No. 4.356.170). Opcionalmente, se lleva a cabo la química de conjugación de CDAP (véanse los documentos WO 95/08348, WO 07/113222).
En CDAP, el reactivo de cianilación tetrafluoroborato de 1-ciano-dimetilaminopiridinio (CDAP) se usa opcionalmente para la síntesis de conjugados de polisacárido-proteína. La reacción de cianilación se puede realizar en condiciones relativamente suaves, lo que evita la hidrólisis de los polisacáridos sensibles a los álcalis. Esta síntesis permite el acoplamiento directo a una proteína transportadora.
El polisacárido se puede solubilizar en agua o una solución salina. El CDAP puede disolverse en acetonitrilo y agregarse inmediatamente a la solución de polisacárido. El CDAP reacciona con los grupos hidroxilo del polisacárido para formar un éster de cianato. Después de la etapa de activación, se agrega la proteína transportadora. Los grupos amino de lisina reaccionan con el polisacárido activado para formar un enlace covalente de isourea. Después de la reacción de acoplamiento, se agrega un gran exceso de glicina para inactivar los grupos funcionales residuales activados. A continuación, el producto se pasa a través de una columna de permeación de gel para eliminar la proteína transportadora sin reaccionar y los reactivos residuales.
En una realización, el sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus y/o el sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus se conjugan directamente con la proteína transportadora. Sin embargo, la divulgación también abarca conjugados en los que los sacáridos capsulares Tipo 5 y/u 8 se conjugan a través de un enlazador, por ejemplo, un enlazador ADH.
En una realización, el sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus y/o el sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus se conjugan usando un reactivo de cianilación, por ejemplo CDAP. Alternativamente, otros procedimientos de conjugación tales como la aminación reductora o la química de carbodiimida (por ejemplo, EDAC).
En una realización, la proporción de polisacárido a proteína en el conjugado de sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus está entre 1:5 y 5:1 (p/p), 1:1 y 1:5 (p/p), 1:2 y 1:5 (p/p), 1:3 y 1:5 (p/p) 1:2 y 2:1 (p/p) o 1:1 y 1:2 (p/p ). En una realización, la proporción de polisacárido a proteína en el conjugado de sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus está entre 1:5 y 5:1 (p: p), 1:1 y 1:5 (p/p), 1:2 y 1:5 (p/p), 1:3 y 1:5 (p/p) 1:2 y 2:1 (p/p) o 1:1 y 1:2 (p/p).
El factor A de agrupamiento (ClfA) se ha identificado como una proteína de unión a fibrinógeno de S. aureus (documento US6008341) y se ha identificado como una proteína transportadora potencial para polisacáridos que podría usarse para inmunizar contra la infección estafilocócica (documento WO 04/80490). ClfA es una proteína localizada en la superficie y es un factor de virulencia importante debido a su propiedad de unirse al fibrinógeno y contribuir a la adhesión de S. aureus. ClfA contiene una región de unión de fibrinógeno. Esta región, conocida como dominio A, está ubicada hacia el terminal N de ClfA y comprende tres subdominios plegados por separado conocidos como N1, N2 y N3. El dominio A va seguido de una región de repetición de serina-aspartato y una región que abarca la pared celular y la membrana que contiene el motivo LPXTG para el anclaje a la pared celular promovido por sortasa. ClfA se une al terminal C de la cadena y del fibrinógeno y, por lo tanto, es capaz de inducir el agrupamiento de bacterias en la solución de fibrinógeno (McDevitt et al., (1997) Eur. J. Biochem. 247; 416-424). Los residuos de aminoácidos 221-559 de ClfA corresponden a la región N2-N3 que retiene la unión del fibrinógeno. Los fragmentos que contienen los aminoácidos 221-559 de ClfA son fragmentos preferidos. Los residuos de aminoácidos 532 a 538 corresponden a la región del péptido de retención de ClfA. Cada subdominio comprende nueve cadenas p que forman un nuevo pliegue de Tipo IgG. El sitio de unión del péptido de la cadena y del fibrinógeno en ClfA está ubicado en un surco hidrófobo en la unión entre N2 y N3.
Recientemente, los aminoácidos P336 e Y338 de ClfA han sido reconocidos como sitios de unión de fibrinógeno, cuya mutación condujo a la pérdida de unión de fibrinógeno (Josefsson et al., 2008, PLOS One volumen 3, Número 5, página 1-7). Las SEQ iD NOs: 8-12, 17 y 18 contienen mutaciones puntuales en las posiciones 336 y 338. La pérdida de la unión del fibrinógeno en estas variantes condujo a una mayor capacidad de protección contra la muerte séptica en ratones inmunizados, lo que lleva a la conclusión de que el potencial de la vacuna de ClfA recombinante se mejora eliminando su capacidad para unirse al fibrinógeno (documento WO 09/95453). Sin embargo, las variantes con mutaciones puntuales en solo uno de Y256, P336, Y338 o K389 también pierden su capacidad para unirse al fibrinógeno (Deivanayagam et al., EMBO J, 21; 6660-6672 (2002)). Se espera que estas mutaciones de un solo punto muestren una inmunogenicidad mejorada de manera similar, por lo que también se pueden usar mutaciones únicas en la divulgación. En una realización, la composición inmunogénica comprende además una proteína ClfA o un fragmento de la misma, opcionalmente recombinante, aislada o purificada.
En una realización, la proteína ClfA es al menos 80 %, 85 %, 90 %, 93 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % idéntica a la secuencia polipeptídica de las SEQ ID NOs: 3, 4, 5, 6 o 7 o 8-12 a lo largo de toda la longitud de las mismas.
"Identidad", como se conoce en la técnica, es una relación entre dos o más secuencias de polipéptidos o dos o más secuencias de polinucleótidos, según sea el caso, según se determina comparando las secuencias. En la técnica, "identidad" también significa el grado de relación de secuencia entre secuencias de polipéptidos o polinucleótidos, según sea el caso, de acuerdo con lo determinado por la coincidencia entre cadenas de tales secuencias. "Identidad" se puede calcular fácilmente mediante procedimientos conocidos, incluidos, entre otros, los descritos en (Computational Molecular Biology, Lesk, A.M., ed., Oxford University Press, Nueva York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D.W., ed., Academic Press, Nueva York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part l, Griffin, A.M., y Griffin, H.G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heine, G., Academic Press, 1987; y Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. y Devereux, J., eds., M Stockton Press, Nueva York, 1991; y Carillo, H., y Lipman, D., SIAM J. Applied Math., 48: 1073 (1988). Los procedimientos para determinar la identidad están diseñados para proporcionar la mayor coincidencia entre las secuencias probadas. Además, los procedimientos para determinar la identidad están codificados en programas de computadora disponibles públicamente. Procedimientos de programas de computadora para determinar la identidad entre dos secuencias incluyen, entre otros, el programa GAP en el paquete del programa GCG (Devereux, J., et al., Nucleic Acids Research 12 (1): 387 (1984)), BLASTP, BLASTN (Altschul, S.F. et al., J. Molec. Biol. 215: 403-410 (1990)) y FASTA (Pearson y Lipman Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85; 2444-2448 (1988)). La familia de programas BLAST está disponible públicamente en el NCBI y otras fuentes (BLAST Manual, Altschul, S., et al., NCBI NLM NIH Bethesda, MD 20894; Altschul, S., et al., J. Mol. Biol. 215 : 403-410 (1990)). También se puede utilizar el conocido algoritmo de Smith Waterman para determinar la identidad.
Los parámetros para la comparación de secuencias de polipéptidos incluyen los siguientes:
Algoritmo: Needleman y Wunsch, J. Mol Biol. 48: 443-453 (1970)
Matriz de comparación: BLOSSUM62 de Henikoff y Henikoff,
Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 89: 10915-10919 (1992)
Penalización por hueco: 8
Penalización de longitud de hueco: 2
Un programa útil con estos parámetros está disponible públicamente como el programa "gap" de Genetics Computer Group, Madison Wl. Los parámetros mencionados anteriormente son los parámetros predeterminados para las comparaciones de péptidos (junto con ninguna penalización por los huecos finales).
Los parámetros para la comparación de polinucleótidos incluyen los siguientes:
Algoritmo: Needleman y Wunsch, J. Mol Biol. 48: 443-453 (1970)
Matriz de comparación: coincidencias = 10, falta de coincidencias = 0
Penalización por hueco: 50
Penalización por longitud de hueco: 3
Disponible como: El programa "gap" de Genetics Computer Group, Madison Wl. Estos son los parámetros predeterminados para las comparaciones de ácidos nucleicos.
Cuando se menciona específicamente una proteína en el presente documento, es opcionalmente una referencia a una proteína de longitud completa nativa o recombinante u opcionalmente una proteína madura en la que se ha eliminado cualquier secuencia señal. La proteína puede aislarse directamente de la cepa estafilocócica o producirse mediante técnicas de ADN recombinante. Pueden incorporarse fragmentos inmunogénicos de la proteína en la composición inmunogénica de la divulgación. Estos son fragmentos que comprenden al menos 10 aminoácidos, al menos 20 aminoácidos, al menos 30 aminoácidos, al menos 40 aminoácidos, al menos 50 aminoácidos o al menos 100 aminoácidos, tomados contiguamente de la secuencia de aminoácidos de la proteína. Además, tales fragmentos inmunogénicos son típicamente inmunológicamente reactivos con anticuerpos generados contra las proteínas estafilocócicas o con anticuerpos generados por la infección de un huésped mamífero con estafilococos o contienen epítopos de células T. En una realización, los fragmentos inmunogénicos también incluyen fragmentos que cuando se administran en una dosis eficaz (ya sea solos o como un hapteno unido a un transportador), provocan una respuesta inmune protectora contra la infección por estafilococos, opcionalmente es protector contra Infección por S. aureus y/o S. epidermidis. Tal fragmento inmunogénico puede incluir, por ejemplo, la proteína que carece de una secuencia líder en el terminal N y/o un dominio transmembrana y/o un dominio de anclaje en el terminal C. Para ClfA, los fragmentos preferidos carecen del dominio de repetición SD hacia el terminal C de ClfA (por ejemplo, utilizando un fragmento en el que los aminoácidos 555-927, 556-927, 557-927, 558-927, 559-927 o 560-927 se eliminan). Para ClfA y toxoide alfa, los fragmentos preferidos tienen el péptido señal eliminado para formar la proteína madura, opcionalmente con un residuo de metionina inicial en el terminal N para permitir la expresión recombinante.
En una realización, las composiciones inmunogénicas de la divulgación pueden contener proteínas de fusión o fragmentos de ClfA. La proteína de fusión contiene opcionalmente secuencias heterólogas tales como un proveedor de epítopos de células T o etiquetas de purificación, por ejemplo: p-galactosidasa, glutatión-S-transferasa, proteínas fluorescentes verdes (GFP), etiquetas de epítopo tales como FLAG, etiqueta myc, polihistidina, o proteínas de superficie viral tales como hemaglutinina del virus de la influenza, o proteínas bacterianas tales como toxoide tetánico, toxoide diftérico, CRM197. La proteína de fusión puede estar presente en la composición inmunogénica de la divulgación como una proteína libre o puede ser una proteína transportadora unida a un sacárido.
En una realización, la divulgación también proporciona un fragmento inmunogénico de la proteína ClfA, es decir, una porción contigua del polipéptido ClfA que tiene la misma o sustancialmente la misma actividad inmunogénica que el polipéptido que comprende la secuencia polipeptídica de la SEQ ID NO: 3. Es decir, el fragmento (si es necesario cuando se acopla a un transportador) es capaz de generar una respuesta inmune que reconoce el polipéptido ClfA. Tal fragmento inmunogénico puede incluir, por ejemplo, el polipéptido ClfA que carece de una secuencia líder del terminal N, y/o el dominio de repetición SD hacia el terminal C de ClfA. En una realización preferida, el fragmento inmunogénico de ClfA comprende sustancialmente todo el dominio de unión de fibrinógeno y tiene al menos 85 % de identidad, preferiblemente al menos 90 % de identidad, más preferiblemente al menos 95 % de identidad, lo más preferiblemente al menos 97-99 % de identidad o 100 % de identidad, con la secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NOs: 4-12 en toda la longitud de dicha secuencia.
Los fragmentos pueden ser "independientes" o estar comprendidos dentro de un polipéptido más grande del que forman parte o región, lo más preferiblemente como una única región continua en un único polipéptido más grande.
Otros fragmentos de ClfA incluyen un polipéptido aislado que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 15, 20, 30, 40, 50 o 100 aminoácidos contiguos de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3.
En una realización, la proteína ClfA es un fragmento de ClfA que comprende el dominio N1, el dominio N2, el dominio N3, los dominios N1 y N2, los dominios N2 y N3 o los dominios N1 y N2 y N3. Opcionalmente, el fragmento de ClfA comprende los dominios N2 y N3 y tiene una secuencia de aminoácidos al menos 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % idéntica a la secuencia de las SEQ ID NOs.: 6, 7, 11 o 12.
En una realización, la proteína ClfA o un fragmento de la misma contiene una sustitución, eliminación o inserción de aminoácidos que reduce o anula la capacidad de ClfA para unirse al fibrinógeno. En una realización, la capacidad de ClfA para unirse al fibrinógeno se reduce en al menos un 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95 o 99 %. Esta mutación se encuentra típicamente en la región de unión del fibrinógeno en el terminal N de ClfA. La mutación es opcionalmente una sustitución de aminoácidos por al menos uno, dos, tres o cuatro de los aminoácidos Ala254, Tyr256, Pro336, Tyr338, Ile387, Lys389, Tyr474, Glu526 o Val527. En una realización, el aminoácido Pro336 de ClfA está mutado. En una realización, el aminoácido Tyr338 de ClfA está mutado. En una realización, tanto Pro336 como Tyr338 están mutados, opcionalmente con alanina o serina. En una realización, ClfA contiene dos mutaciones con Pro336 mutado con Ser y Tyr 338 mutado con Ala.
En una realización, la proteína ClfA o el fragmento está presente en la composición inmunogénica como una proteína no conjugada. Alternativamente, está presente conjugada con el sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus o con el sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus. En tales casos, ClfA puede actuar como una proteína transportadora y un antígeno.
En una realización, la proteína ClfA o un fragmento de la misma está presente en la composición inmunogénica a una dosis de 5-50, 10-30, 5-15 o 20-40 |jg.
La toxina alfa es un determinante de virulencia importante producido por la mayoría de las cepas de S. aureus. Es una toxina formadora de poros con actividad hemolítica. Se ha demostrado que los anticuerpos contra la toxina alfa neutralizan los efectos perjudiciales y letales de la toxina alfa en modelos animales (Adlam et al. 1977 Infect. Immun.
17; 250). Las plaquetas, las células endoteliales y las células mononucleares humanas son susceptibles a los efectos de la toxina alfa. Para que la toxina alfa se use en una composición inmunogénica, normalmente pierde su toxicidad mediante tratamiento químico o mutación para producir toxoide alfa.
En una realización, la composición inmunogénica comprende un toxoide alfa. Opcionalmente, el toxoide alfa tiene una secuencia de aminoácidos al menos 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % o 99 % idéntica a la SEQ ID NO: 1 o 2.
La alta toxicidad de la toxina alfa requiere que pierda toxicidad antes de usarse como un inmunógeno. Esto se puede lograr mediante tratamiento químico, por ejemplo, mediante tratamiento con formaldehído, glutaraldehído de otros reactivos de entrecruzamiento o conjugándolo químicamente con polisacáridos bacterianos como se describió anteriormente.
Una forma adicional de eliminar la toxicidad es introducir mutaciones puntuales que eliminan la toxicidad al tiempo que retienen la inmunogenicidad de la toxina. La introducción de una mutación puntual en el aminoácido 35 de la toxina alfa en el que un residuo de histidina se reemplaza por un residuo de leucina da como resultado la eliminación de la toxicidad mientras se retiene la inmunogenicidad (Menzies y Kernodle 1996; Infect. Immun. 64; 183). La histidina 35 parece ser crítica para la oligomerización adecuada requerida para la formación de poros y la mutación de este residuo conduce a la pérdida de toxicidad. La modificación de la histidina 35 puede ser una sustitución por Lys, Arg, Ala, Leu o Glu. La mutación puntual de la toxina alfa en Asp24, Lys37, His48, Lys58, Asp100, Ile107, Glu111, Met113, Asp127, Asp128, Gly130, Gly134, His144, Lys147, Gln150, Asp152, Phe153, Lys154, Val169, Asn173, Arg200, Asn214, Leu219 o His259 para reducir la toxicidad.
Cuando se incorpora a las composiciones inmunogénicas de la divulgación, el toxoide alfa pierde su toxicidad opcionalmente mediante la mutación de His 35, por ejemplo reemplazando His 35 con Leu o Arg. En una realización alternativa, el toxoide alfa pierde su toxicidad por conjugación con otros componentes de la composición inmunogénica, por ejemplo con el polisacárido Tipo 5de S. aureus y/o el polisacárido Tipo 8 de S. aureus. En una realización, el toxoide alfa pierde su toxicidad tanto mediante la introducción de una mutación puntual como mediante la conjugación con el polisacárido Tipo 5 de S. aureus y/o el polisacárido Tipo 8 de S. aureus.
En una realización, la composición inmunogénica comprende el toxoide alfa que contiene una mutación puntual que disminuye la toxicidad de la toxina alfa, por ejemplo en el aminoácido 35. El toxoide alfa contiene opcionalmente una mutación puntual en el aminoácido 35 en el que la histidina se reemplaza con un aminoácido arginina.
En una realización, el toxoide alfa está presente en la composición inmunogénica como una proteína no conjugada. Alternativamente, el toxoide alfa se conjuga con el sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus y/o con el sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus.
En una realización, el toxoide alfa está presente en la composición inmunogénica a una dosis de 5-50, 10-30, 5-15 o 20-40 |jg. En una realización, el toxoide alfa y ClfA están presentes en la misma dosis en la composición inmunogénica. En una realización, la dosis de sacárido de los conjugados de sacárido capsular de Tipo 5 y 8 es mayor que la dosis de proteína de ClfA y toxoide alfa.
En una realización, la composición inmunogénica de la divulgación se mezcla con un excipiente farmacéuticamente aceptable y, opcionalmente, con un adyuvante para formar una vacuna.
Las vacunas de la presente divulgación pueden ser complementadas, particularmente cuando están destinadas a su uso en poblaciones de edad avanzada, inmunodeprimidas o con enfermedades crónicas (tal como diabetes, enfermedad renal en etapa terminal u otras poblaciones con alto riesgo de infección estafilocócica) pero también para su uso en poblaciones infantiles. Los adyuvantes adecuados incluyen una sal de aluminio tal como gel de hidróxido de aluminio o fosfato de aluminio o alumbre, pero también pueden ser otras sales metálicas tales como las de calcio, magnesio, hierro o zinc. También son adecuadas emulsiones de aceite en agua, que comprenden, por ejemplo, aceite metabolizable (por ejemplo, escualeno), agente emulsionante (por ejemplo, monooleato de polioxietilensorbitán) y opcionalmente un tocol (por ejemplo, alfa tocoferol) (documento WO 09/95453).
Se prefiere que el adyuvante se seleccione para que sea un inductor preferencial de un tipo TH1 de respuesta. Niveles tan altos de citocinas de tipo Th1 tienden a favorecer la inducción de respuestas inmunes mediadas por células para un antígeno dado, mientras que niveles altos de citocinas de Tipo Th2 tienden a favorecer la inducción de respuestas inmunes humorales al antígeno.
La distinción entre respuesta inmune de Tipo Th1 y Th2 no es absoluta. En realidad, un individuo apoyará una respuesta inmune que se describe como predominantemente Th1 o predominantemente Th2. Sin embargo, a menudo es conveniente considerar las familias de citocinas en términos de lo descrito en clones de células T CD4+ ve murinas por Mosmann y Coffman (Mosmann, TR y Coffman, RL (1989) TH1 and TH2 cells: different patterns of lymphokine secretion lead to different functional properties (Annual Review of Immunology, 7, páginas 145-173). Tradicionalmente, las respuestas de Tipo Th1 están asociadas con la producción de las citocinas iNF-y e IL-2 por los linfocitos T. Otras citocinas a menudo asociadas directamente con la inducción de respuestas inmunes de Tipo Th1 no son producidas por células T, como IL-12. Por el contrario, las respuestas de Tipo Th2 están asociadas con la secreción de IL-4, IL-5, IL-6, IL-10. Sistemas adyuvantes adecuados que promueven una respuesta predominantemente Th1 incluyen: lípido A monofosforilado o un derivado del mismo (o lípido A en general sin toxicidad - vease por ejemplo el documento WO2005107798), particularmente lípido A monofosforil 3-des-O-acilado (3D-MPL) ( para su preparación, vease el documento GB 2220211 A); y una combinación de lípido A monofosforilado, preferiblemente lípido A monofosforilado 3-des-O-acilado, junto con una sal de aluminio (por ejemplo, fosfato de aluminio o hidróxido de aluminio) o una emulsión de aceite en agua. En tales combinaciones, el antígeno y 3D-MPL están contenidos en las mismas estructuras de partículas, lo que permite un suministro más eficiente de señales antigénicas e inmunoestimuladoras. Los estudios han demostrado que 3D-MPL es capaz de mejorar aún más la inmunogenicidad de un antígeno adsorbido en alumbre [Thoelen et al., Vaccine (1998) 16: 708-14; EP 689454-B1].
Un sistema adicional implica la combinación de un lípido A monofosforilado y un derivado de saponina, particularmente la combinación de QS21 y 3D-MPL como se divulga en el documento Wo 94/00153, o una composición menos reactogénica en la que el QS21 se inactiva con colesterol como se divulga en el documento WO 96/33739. En el documento WO 95/17210 se describe una formulación de adyuvante adicional que incluye QS21, 3D-MPL y tocoferol en una emulsión de aceite en agua. En una realización, la composición inmunogénica comprende adicionalmente una saponina, que puede ser QS21. La formulación también puede comprender una emulsión de aceite en agua y tocoferol (documento WO 95/17210). Los oligonucleótidos que contienen CpG no metilado (documento WO 96/02555) y otros oligonucleótidos inmunomoduladores (documentos WO0226757 y WO03507822) también son inductores preferenciales de una respuesta TH1 y son adecuados para su uso en la presente divulgación.
Sin embargo, los inventores han descubierto que en un ensayo clínico, la adición de un adyuvante de emulsión de aceite en agua no produjo un aumento de la inmunogenicidad. En vista del aumento de la reactogenicidad que se puede asociar con el uso de adyuvante, una realización de la divulgación usa una composición inmunogénica sin adyuvante, por ejemplo, una composición inmunogénica en la que ninguno de los componentes estafilocócicos presentes se adsorbe a un adyuvante o una composición inmunogénica en cuyos componentes estafilocócicos no se mezclan con un adyuvante de emulsión de aceite en agua. Los componentes estafilocócicos comprenden 1, 2, 3 o 4 de un conjugado de sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus, un conjugado de sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus, un fragmento de ClfA o fragmento del mismo y un toxoide alfa.
Otro aspecto de la divulgación es una vacuna que comprende la composición inmunogénica descrita anteriormente y un excipiente farmacéuticamente aceptable. Las preparaciones de vacuna de la presente divulgación pueden usarse para proteger o tratar a un ser humano susceptible a la infección por S. aureus, mediante la administración de dicha vacuna por vía sistémica o mucosa. Estas administraciones pueden incluir inyección por vía intramuscular, intraperitoneal, intradérmica o subcutánea; o vía administración mucosa a los tractos oral/alimentario, respiratorio, genitourinario.
La preparación de vacunas se describe generalmente en Vaccine Design ("The subunit and adjuvant approach" (eds Powell M.F. & Newman M.J.) (1995) Plenum Press Nueva York). La encapsulación dentro de los liposomas es descrita por Fullerton, patente de los Estados Unidos No. 4.235.877.
Las vacunas de la presente divulgación pueden almacenarse en solución o liofilizarse. Opcionalmente, la solución se liofiliza en presencia de un azúcar tal como sacarosa, trehalosa o lactosa. Es típico que se liofilicen y se reconstituyan extemporáneamente antes de su uso. La liofilización puede resultar en una composición más estable (vacuna).
La divulgación también abarca el procedimiento de fabricación de las composiciones inmunogénicas y las vacunas de la divulgación. En una realización, el procedimiento de la divulgación es un procedimiento de fabricación de una vacuna que comprende las etapas de a) conjugar un sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus con una proteína transportadora para formar un conjugado de sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus, b) conjugar un sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus conjugado con una proteína transportadora para formar un conjugado de sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus, y c) combinar el conjugado de sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus, el conjugado de sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus, una proteína ClfA o un fragmento de la misma y un toxoide alfa para formar la composición inmunogénica. En una realización, el procedimiento comprende una etapa adicional de añadir un excipiente farmacéuticamente aceptable.
La divulgación también abarca un procedimiento de tratamiento o una infección estafilocócica, particularmente infecciones nosocomiales adquiridas en el hospital.
Esta composición inmunogénica o vacuna de la divulgación es particularmente ventajosa para usar en casos de cirugía electiva, particularmente cuando los sujetos están inmunizados con una sola dosis. Dichos pacientes conocerán la fecha de la cirugía de antemano y, ventajosamente, pueden inocularse con antelación. En una realización, el sujeto se inmuniza con una dosis única de la composición inmunogénica de la divulgación 5-60, 6-40, 7-30 o 7-15 días antes de la admisión al hospital. En una realización, el sujeto se inmuniza con una dosis única de la composición inmunogénica de la divulgación 5-60, 6-40, 7-30 o 7-15 días antes de un procedimiento hospitalario planificado, por ejemplo, un procedimiento quirúrgico tal como un procedimiento quirúrgico cardio torácico. Normalmente, los adultos mayores de 16 años que esperan cirugía electiva son tratados con las composiciones inmunogénicas y vacunas de la divulgación. Alternativamente, los niños de 3 a 16 años que esperan cirugía electiva se tratan con las composiciones inmunogénicas y las vacunas de la divulgación.
También es posible inocular a los trabajadores sanitarios con la vacuna de la invención.
Las preparaciones de vacuna de la presente divulgación pueden usarse para proteger o tratar a un ser humano susceptible a la infección por S. aureus, mediante la administración de dicha vacuna por vía sistémica o mucosa. Estas administraciones pueden incluir inyección por vía intramuscular, intraperitoneal, intradérmica o subcutánea; o vía administración mucosa a los tractos oral/alimentario, respiratorio, genitourinario.
Una realización de la divulgación es un procedimiento para prevenir o tratar una infección o enfermedad estafilocócica que comprende la etapa de administrar la composición inmunogénica o la vacuna de la divulgación a un paciente que lo necesite.
Una realización adicional de la divulgación es un uso de la composición inmunogénica de la invención en la fabricación de una vacuna para el tratamiento o prevención de una infección o enfermedad estafilocócica, opcionalmente una infección estafilocócica posquirúrgica.
Los inventores pretenden que los términos "que comprende" y "comprende" en el presente documento sean opcionalmente sustituibles con los términos "que consiste en" y "consiste en", respectivamente, en todos los casos. Sin embargo, los términos "que comprende" y "comprende" conservan su significado "abierto" habitual cuando no se han sustituido.
Para que esta descripción pueda entenderse mejor, se exponen los siguientes ejemplos. Estos ejemplos tienen únicamente fines ilustrativos y no deben interpretarse como limitantes del alcance de la invención de ninguna manera.
Ejemplos
Ejemplo 1. Secuencias de proteínas
SEQ ID NO: 1
MKTRIVSSVTTTLLLGSILMNPVANAADSDINIKTGTTDIGSNTTVKTGDLVTYDKENGMHKKVFY SFIDDKNHNKKLLVIRTKGTIAGQYRVYSEEGANKSGLAWPSAFKVQLQLPDNEVAQISDYYPRNS IDTKEYMSTLTYGFNGNVTGDDTGKIGGLIGANVSIGHTLKYVQPDFKTILESPTDKKVGWKVIFN NMVNQNWGPYDRDSWNPVYGNQLFMKTRNGSMKAADNFLDPNKASSLLSSGFSPDFATVITMDRKA SKQQTNIDVIYERVRDDYQLHWTSTNWKGTNTKDKWIDRSSERYKIDWEKEEMTN SEQ ID NO: 2
MADSDINIKTGTTDIGSNTTVKTGDLVTYDKENGMHKKVFYSFIDDKNHNKKLLVIRTKGTIAGQY RVYSEEGANKSGLAWPSAFKVQLQLPDNEVAQISDYYPRNSIDTKEYMSTLTYGFNGNVTGDDTGK IGGLIGANVSIGHTLKYVQPDFKTILESPTDKKVGWKVIFNNMVNQNWGPYDRDSWNPVYGNQLFM KTRNGSMKAADNFLDPNKASSLLSSGFSPDFATVITMDRKASKQQTNIDVIYERVRDDYQLHWTST NWKGTNTKDKWIDRSSERYKIDWEKEEMTN SEQ ID NO: 3
MNMKKKEKHAIRKKSIGVASVLVGTLIGFGLLSSKEADASENSVTQSDSASNESKSNDSSSVSAAPKTDDTNV SDTKTSSNTNNGETSVAQNPAQQETTQSSSTNATTEETPVTGEATTTTTNQANTPATTQSSNTNAEELVNQTS NETTSNDTNTVSSVNSPQNSTNAENVSTTQDTSTEATPSNNESAPQSTDASNKDWNQAVNTSAPRMRAFSLA AVAADAPVAGTDITNQLTNVTVGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELNLNGVTSTA KVPPIMAGDQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMPAYIDPENVKKTGNVTLATGIGSTTANKTV LVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNTDSNALIDQQNTSIKVYKV DNAADLSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPDDQITTPYIVWNGHIDPNSKGDLALRSTLYG YNSNIIWRSMSWDNEVAFNNGSGSGDGIDKPWPEQPDEPGEIEPIPEDSDSDPGSDSGSDSNSDSGSDSGSD STSDSGSDSASDSDSASDSDSASDSDSASDSDSASDSDSDNDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDS DSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSD SDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSASDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDS DSDSESDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSASDSDSGSDSDSSSDSDSESDSNSDSESVSNNNWPPNSPKNGTN ASNKNEAKDSKEPLPDTGSEDEANTSLIWGLLASIGSLLLFRRKKENKDKK SEQ ID NO: 4
MSENSVTQSDSASNESKSNDSSSVSAAPKTDDTNVSDTKTSSNTNNGETSVAQNPAQQETTQSSSTNATTEETPVTGEATT TTTNQANTPATTQSSNTNAEELVNQTSNETTSNDTNTVSSVNSPQNSTNAENVSTTQDTSTEATPSNNESAPQSTDASNKD VVNQAVNTSAPRMRAFSLAAVAADAPVAGTDITNQLTNVTVGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPK ELNLNGVTSTAKVPPIMAGDQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMPAYIDPENVKKTGNVTLATGIGSTTAN KTVLVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNTDSNALIDQQNTSIKVYKVDNAAD LSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPDDQITTPYIVWNGHIDPNSKGDLALRSTLYGYNSNIIWRSMSWD NEVAFNNGSGSGDGIDKPVVPEQPDEPGEIEPIPE SEQ ID NO: 5
MNMKKKEKHAIRKKSIGVASVLVGTLIGFGLLSSKEADASENSVTQSDSASNESKSNDSSSVSAAPKTDDTNV SDTKTSSNTNNGETSVAQNPAQQETTQSSSTNATTEETPVTGEATTTTTNQANTPATTQSSNTNAEELVNQTS NETTSNDTNTVSSVNSPQNSTNAENVSTTQDTSTEATPSNNESAPQSTDASNKDWNQAVNTSAPRMRAFSLA AVAADAPVAGTDITNQLTNVTVGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELNLNGVTSTA KVPPIMAGDQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMPAYIDPENVKKTGNVTLATGIGSTTANKTV LVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNTDSNALIDQQNTSIKVYKV DNAADLSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPDDQITTPYIVWNGHIDPNSKGDLALRSTLYG YNSNI IWRSMSWDNEVAFNNGSGSGDGIDKPWPEQPDEPGEIEPI PE SEQ ID NO: 6
SLAAVAADAPVAGTDITNQLTNVTVGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELNLNGVT STAKVPPIMAGDQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMPAYIDPENVKKTGNVTLATGIGSTTAN KTVLVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNTDSNALIDQQNTSIKV YKVDNAADLSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPDDQITTPYIVWNGHIDPNSKGDLALRST LYGYNSNIIWRSMSWDNEVAFNNGSGSGDGIDKPWPEQPDEPGEIEPIPE
SEQ ID NO: 7
GTDITNQLTNVTVGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELNLNGVTSTAKVPPIMAG DQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMPAYIDPENVKKTGNVTLATGIGSTTANKTVLVDYEKYG KFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNTDSNALIDQQNTSIKVYKVDNAADLSE SYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPDDQITTPYIVWNGHIDPNSKGDLALRSTLYGYNSNIIWR SMSWDNEVAFNNGSGSGDGIDKPWPEQPDEPGEIEPIPE
SEQ ID NO: 8
MNMKKKEKHAIRKKSIGVASVLVGTLIGFGLLSSKEADASENSVTQSDSASNESKSNDSSSVSAAPKTDDTNV SDTKTSSNTNNGETSVAQNPAQQETTQSSSTNATTEETPVTGEATTTTTNQANTPATTQSSNTNAEELVNQTS NETTSNDTNTVSSVNSPQNSTNAENVSTTQDTSTEATPSNNESAPQSTDASNKDWNQAVNTSAPRMRAFSLA AVAADAPVAGTDITNQLTNVTVGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELNLNGVTSTA KVPPIMAGDQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMSAAIDPENVKKTGNVTLATGIGSTTANKTV LVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNTDSNALIDQQNTSIKVYKV DNAADLSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPDDQITTPYIVWNGHIDPNSKGDLALRSTLYG YNSNIIWRSMSWDNEVAFNNGSGSGDGIDKPWPEQPDEPGEIEPIPEDSDSDPGSDSGSDSNSDSGSDSGSD STSDSGSDSASDSDSASDSDSASDSDSASDSDSASDSDSDNDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDS DSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSD SDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSASDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDS DSDSESDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSDSASDSDSGSDSDSSSDSDSESDSNSDSESVSNNNWPPNSPKNGTN ASNKNEAKDSKEPLPDTGSEDEANTSLIWGLLASIGSLLLFRRKKENKDKK
SEQ ID NO: 9
MSENSVTQSDSASNESKSNDSSSVSAAPKTDDTNVSDTKTSSNTNNGETSVAQNPAQQETTQSSSTNATTEETPVTGEATT TTTNQANTPATTQSSNTNAEELVNQTSNETTSNDTNTVSSVNSPQNSTNAENVSTTQDTSTEATPSNNESAPQSTDASNKD VVNQAVNTSAPRMRAFSLAAVAADAPVAGTDITNQLTNVTVGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPK ELNLNGVTSTAKVPPIMAGDQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMSAAIDPENVKKTGNVTLATGIGSTTAN KTVLVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNTDSNALIDQQNT SIKVYKVDNAAD
LSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPDDQITTPYIVWNGHIDPNSKGDLALRSTLYGYNSNIIWRSMSWD NEVAFNNGSGSGDGIDKPVVPEQPDEPGEIEPIPE
SEQ ID NO: 10
MNMKKKEKHAIRKKSIGVASVLVGTLIGFGLLSSKEADASENSVTQSDSASNESKSNDSSSVSAAPKTDDTNV SDTKTSSNTNNGETSVAQNPAQQETTQSSSTNATTEETPVTGEATTTTTNQANTPATTQSSNTNAEELVNQTS NETTSNDTNTVSSVNSPQNSTNAENVSTTQDTSTEATPSNNESAPQSTDASNKDWNQAVNTSAPRMRAFSLA AVAADAPVAGTDITNQLTNVTVGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELNLNGVTSTA KVPPIMAGDQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMSAAIDPENVKKTGNVTLATGIGSTTANKTV LVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNTDSNALIDQQNTSIKVYKV DNAADLSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPDDQITTPYIVWNGHIDPNSKGDLALRSTLYG YNSNI IWRSMSWDNEVAFNNGSGSGDGIDKPWPEQPDEPGEIEPI PE
SEQ ID NO: 11
SLAAVAADAPVAGTDITNQLTNVTVGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELNLNGVT STAKVPPIMAGDQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMSAAIDPENVKKTGNVTLATGIGSTTAN KTVLVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNTDSNALIDQQNTSIKV YKVDNAADLSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPDDQITTPYIVWNGHIDPNSKGDLALRST LYGYNSNI IWRSMSWDNEVAFNNGSGSGDGIDKPWPEQPDEPGEIEPI PE
SEQ ID NO: 12
GTDITNQLTNVTVGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELNLNGVTSTAKVPPIMAG DQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMSAAIDPENVKKTGNVTLATGIGSTTANKTVLVDYEKYG KFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNTDSNALIDQQNTSIKVYKVDNAADLSE SYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPDDQITTPYIVWNGHIDPNSKGDLALRSTLYGYNSNIIWR SMSWDNEVAFNNGSGSGDGIDKPWPEQPDEPGEIEPIPE SEQ ID NO: 13
MKTRIVSSVTTTLLLGSILMNPVANAADSDINIKTGTTDIGSNTTVKTGDLVTYDKENGMRKKVFY SFIDDKNHNKKLLVIRTKGTIAGQYRVYSEEGANKSGLAWPSAFKVQLQLPDNEVAQISDYYPRNS IDTKEYMSTLTYGFNGNVTGDDTGKIGGLIGANVSIGHTLKYVQPDFKTILESPTDKKVGWKVIFN NMVNQNWGPYDRDSWNPVYGNQLFMKTRNGSMKAADNFLDPNKASSLLSSGFSPDFATVITMDRKA SKQQTNIDVIYERVRDDYQLHWTSTNWKGTNTKDKWIDRSSERYKIDWEKEEMTN SEQ ID NO: 14
MADSDINIKTGTTDIGSNTTVKTGDLVTYDKENGMRKKVFYSFIDDKNHNKKLLVIRTKGTIAGQY RVYSEEGANKSGLAWPSAFKVQLQLPDNEVAQISDYYPRNSIDTKEYMSTLTYGFNGNVTGDDTGK IGGLIGANVSIGHTLKYVQ PDFKTILES PTDKKVGWKVIFNNMVNQNWGPYDRDSWNPVYGNQLFM KTRNGSMKAADNFLDPNKASSLLSSGFSPDFATVITMDRKASKQQTNIDVIYERVRDDYQLHWTST NWKGTNTKDKWI DRSSERYKIDWEKEEMTN SEQ ID NO: 15
MASLAAVAADAPVAGTDITNQLTNVTVGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELNLNG VTSTAKVPPIMAGDQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMPAYIDPENVKKTGNVTLATGIGSTT ANKTVLVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNTDSNALIDQQNTSI KVYKVDNAADLSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPDDQITTPYIVWNGHIDPNSKGDLALR STLYGYNSNIIWRSMSWDNEVAFNNGSGSGDGIDKPWPEQPDEPGEIEPIPE SEQ ID NO: 16
MAGTDITNQLTNVTVGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELNLNGVTSTAKVPPIMA GDQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMPAYIDPENVKKTGNVTLATGIGSTTANKTVLVDYEKY GKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNTDSNALIDQQNTSIKVYKVDNAADLS ESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPDDQITTPYIVWNGHIDPNSKGDLALRSTLYGYNSNIIW RSMSWDNEVAFNNGSGSGDGIDKPWPEQPDEPGEIEPIPE SEQ ID NO: 17
MASLAAVAADAPVAGTDITNQLTNVTVGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELNLNG VTSTAKVPPIMAGDQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMSAAIDPENVKKTGNVTLATGIGSTT ANKTVLVDYEKYGKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNTDSNALIDQQNTSI KVYKVDNAADLSESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPDDQITTPYIVWNGHIDPNSKGDLALR STLYGYNSNI IWRSMSWDNEVAFNNGSGSGDGIDKPWPEQPDEPGEIEPI PE SEQ ID NO: 18
MAGTDITNQLTNVTVGIDSGTTVYPHQAGYVKLNYGFSVPNSAVKGDTFKITVPKELNLNGVTSTAKVPPIMA GDQVLANGVIDSDGNVIYTFTDYVNTKDDVKATLTMSAAIDPENVKKTGNVTLATGIGSTTANKTVLVDYEKY GKFYNLSIKGTIDQIDKTNNTYRQTIYVNPSGDNVIAPVLTGNLKPNTDSNALIDQQNTSIKVYKVDNAADLS ESYFVNPENFEDVTNSVNITFPNPNQYKVEFNTPDDQITTPYIVWNGHIDPNSKGDLALRSTLYGYNSNIIW RSMSWDNEVAFNNGSGSGDGIDKPWPEQPDEPGEIEPIPE
Ejemplo 2. Preparación de componentes de la vacuna
Se preparó una vacuna estafilocócica de cuatro componentes que contenía polisacárido capsular Tipo 5 de S. aureus conjugado con una proteína transportadora de toxoide tetánico, polisacárido capsular Tipo 8 de S. aureus conjugado con una proteína transportadora de toxoide tetánico, un fragmento de ClfA que contiene los dominios N2 y N3 y mutaciones puntuales en los residuos 336 y 338 en los que P336 se cambia por serina e Y338 se cambia por alanina, y toxoide alfa que pierde su toxicidad por una mutación puntual en el residuo 35 con H35 que se cambia por arginina. Los polisacáridos capsulares se conjugaron con toxoide tetánico utilizando CDAP como agente de acoplamiento. Este procedimiento de conjugación se describe en el documento WO 07/113222.
Se elaboraron cuatro formulaciones de la vacuna estafilocócica:
5/10 contenían: 5 |jg de dosis de sacárido de conjugado de toxoide tetánico Tipo 5, 5 |jg de dosis de sacárido de conjugado de toxoide tetánico de Tipo 8, 10 jg de toxoide alfa y 10 jg del truncado de ClfA descrito anteriormente.
10/30 contenía: 10 jg de dosis de sacárido de conjugado de toxoide tetánico de Tipo 5, 10 jg de dosis de sacárido de conjugado de toxoide tetánico de Tipo 8, 30 jg de toxoide alfa y 30 jg del truncado de ClfA descrito anteriormente.
5/10AS contenía: 5 jg de dosis de sacárido de conjugado de toxoide tetánico de Tipo 5, 5 jg de dosis de sacárido de conjugado de toxoide tetánico de Tipo 8, 10 jg de toxoide alfa y 10 jg del truncado de ClfA descrito anteriormente, complementado con una elusión de aceite en agua que contiene escualeno, monooleato de alfatocoferol y polioxietilén sorbitán.
10/30AS contenía: 10 jg de dosis de sacárido de conjugado de toxoide tetánico de Tipo 5, 10 jg de dosis de sacárido de conjugado de toxoide tetánico de Tipo 8, 30 jg de toxoide alfa y 30 jg del truncado de ClfA descrito anteriormente, complementado con una elusión de aceite en agua que contiene escualeno, monooleato de alfatocoferol y polioxietilén sorbitán.
Ejemplo 3. Resultados de un ensayo clínico usando la vacuna estafilocócica de 4 componentes
Se llevó a cabo un ensayo clínico de fase I con un total de 88 adultos sanos de 18 a 40 años. El grupo de control contenía 30 sujetos que fueron inoculados con solución salina. Los sujetos restantes se dividieron en cuatro grupos con 15/14 sujetos inmunizados con cada una de las formulaciones descritas en el ejemplo 2 (5/10, 5/10AS, 10/30 y 10/30AS). Las dosis de la vacuna se administraron al comienzo del ensayo y después de un mes y a los seis meses. Se tomaron muestras de sangre para análisis humoral los días 0, 7, 14 y 30 después de cada dosis y los días 360 y 540.
Los detalles de los sujetos se proporcionan a continuación.
Grupo N Edad media % de
mujeres
5/10 15 31,1 73,3
5/10AS 15 31,9 33,3
10/30 14 30,9 42,9
10/30AS 14 30,6 50
Solución salina 30 30,1 50
Reactogenicidad y seguridad
La vacuna estafilocócica de 4 componentes fue generalmente segura y bien tolerada. Después de la primera y segunda dosis, no se observaron eventos adversos graves ni posibles trastornos inmunomediados. El porcentaje de sujetos que informaron dolor, enrojecimiento e hinchazón después de la dosis 1 y la dosis 2 se muestra en las Figuras 1-3. Se experimentó dolor en el lugar de la inyección en el 78,6-100 % de los sujetos en los grupos de vacuna en comparación con el 3-4 % en el grupo de control (vease la Figura 1). Sin embargo, solo se calificó un caso como grado 3. Los resultados de la incidencia de enrojecimiento e hinchazón se muestran en las Figuras 2 y 3. Para ambos parámetros, hubo una tendencia a una mayor incidencia de enrojecimiento/hinchazón después de la administración de la segunda dosis en comparación con después de una dosis única para el grupo 10/30 del estudio.
Inmunogenicidad
Las muestras de sangre tomadas de los sujetos los días 0 y 7, 14 y 30 días después de la primera, segunda y tercera inmunizaciones fueron analizadas por Luminex o ELISA para establecer el nivel de IgG producido contra cada antígeno de la vacuna estafilocócica de cuatro componentes.
Los resultados de la inmunogenicidad se muestran en las Figuras 4-8 y en las Tablas 1-5 a continuación.
Antes de la vacunación, hubo 83,3-100 % de seropositividad para todos los ensayos. A pesar de los niveles considerables de inmunidad de fondo, la vacuna de 4 componentes fue capaz de provocar una sólida respuesta inmunitaria contra los 4 componentes.
Las Figuras 4-7 muestran que para CPS5, CPS8, toxoide alfa y ClfA, la primera inmunización produjo el mayor aumento en la inmunogenicidad con fuertes aumentos de GMC evidentes en los días 14 y 30. La segunda inmunización el día 30 no produjo un aumento adicional de la inmunogenicidad y los niveles de GMC permanecen en un nivel similar entre los días 30 y 60. La Figura 8 muestra que la tercera inmunización después de 6 meses no provocó un aumento adicional de GMC y los niveles de GMC permanecieron aproximadamente iguales para los cuatro componentes entre el día 30 y el día 540. Por lo tanto, una sola inmunización es una forma eficaz de producir una respuesta inmune máxima.
Los resultados de inmunogenicidad para la dosis 10/30 parecen ser más fuertes que para la dosis 5/10 con un aumento de aproximadamente 1-5-2 veces de GMC para CPS5, CPS8 y toxoide alfa. En el caso de ClfA, el aumento de GMC fue de aproximadamente 3,8 veces con la dosis más alta. La adición de adyuvante de emulsión de aceite en agua no aumentó la inmunogenicidad de la vacuna de 4 componentes, como se demuestra mediante una comparación de la respuesta de anticuerpos provocada por los grupos 5/10 y 5/10AS y los grupos 10/30 y 10/30AS.
Tabla 1. Tasas de seropositividad y GMC para anticuerpos Ab.IgG CPS 5 de Staph aureus (cohorte de ATP ara inmun enicidad
Figure imgf000015_0001
_____________________ (continuación)_______________________________________ T, 5 |jg de CPS8-TT, 10 |jg de ClfA, 10 |jg de a-toxoide
-TT, 5 jig de CPS8-TT, 10 jig de ClfA, 10 jig de a-toxoide complementado con AS03B -TT, 10 jig de CPS8-TT, 30 jig de ClfA, 30 jig de a-toxoide
S5-TT, 10 jig de CPS8-TT, 30 jig de ClfA, 30 jig de a-toxoide complementado con AS03B combinación de SOLUCIÓN SALINA 1 y SOLUCIÓN SALINA 2
ca de la concentración de anticuerpos calculada en todos los sujetos con resultados disponibles
je de sujetos con concentración dentro del intervalo especificado ntervalo de confianza; LL = límite inferior, UL = límite superior
s de la dosis 1
ués de la dosis 1
ués de la dosis 1 (muestra de sangre tomada en las visitas 5 o 6) ués de la dosis 2
pués de la dosis 2
Figure imgf000016_0002
pués de la dosis 2_____________________________________________________________
Tabla 2. Tasas de seropositividad y GMC para anticuerpos Ab.IgG CPS 8 de Staph aureus (cohorte de ATP r inm n ni i
Figure imgf000016_0001
______________________ (continuación)______________________________________ T, 5 |jg de CPS8-TT, 10 |jg de ClfA, 10 |jg de a-toxoide
-TT, 5 jig de CPS8-TT, 10 jig de ClfA, 10 jig de a-toxoide complementado con AS03B -TT, 10 jig de CPS8-TT, 30 jig de ClfA, 30 jig de a-toxoide
S5-TT, 10 jig de CPS8-TT, 30 jig de ClfA, 30 jig de a-toxoide complementado con AS03B combinación de SOLUCIÓN SALINA 1 y SOLUCIÓN SALINA 2
ca de la concentración de anticuerpos calculada en todos los sujetos con resultados disponibles
je de sujetos con concentración dentro del intervalo especificado
ntervalo de confianza; LL = límite inferior, UL = límite superior
s de la dosis 1
ués de la dosis 1
ués de la dosis 1 (muestra de sangre tomada en las visitas 5 o 6)
ués de la dosis 2
pués de la dosis 2
Figure imgf000017_0002
pués de la dosis 2_____________________________________________________________
Tabla 3. Tasas de seropositividad y GMC para anticuerpos Ab.IgG de toxina alfa de Staph aureus (cohorte de ATP r inm n ni i
Figure imgf000017_0001
_____________________ (continuación)_______________________________________ T, 5 |jg de CPS8-TT, 10 |jg de ClfA, 10 |jg de a-toxoide
-TT, 5 jig de CPS8-TT, 10 jig de ClfA, 10 jig de a-toxoide complementado con AS03B -TT, 10 jig de CPS8-TT, 30 jig de ClfA, 30 jig de a-toxoide
S5-TT, 10 jig de CPS8-TT, 30 jig de ClfA, 30 jig de a-toxoide complementado con AS03B combinación de SOLUCIÓN SALINA 1 y SOLUCIÓN SALINA 2
ca de la concentración de anticuerpos calculada en todos los sujetos con resultados disponibles
je de sujetos con concentración dentro del intervalo especificado ntervalo de confianza; LL = límite inferior, UL = límite superior
s de la dosis 1
ués de la dosis 1
ués de la dosis 1 (muestra de sangre tomada en las visitas 5 o 6) ués de la dosis 2
pués de la dosis 2
Figure imgf000018_0002
pués de la dosis 2_____________________________________________________________
Tabla 4. Tasas de seropositividad y GMC para anticuerpos Ab.IgG de ClfA de Staph aureus (cohorte de ATP r mm n ' ni i
Figure imgf000018_0001
_____________________ (continuación)_______________________________________ T, 5 |jg de CPS8-TT, 10 |jg de ClfA, 10 |jg de a-toxoide
-TT, 5 jig de CPS8-TT, 10 jig de ClfA, 10 jig de a-toxoide complementado con AS03B -TT, 10 jig de CPS8-TT, 30 jig de ClfA, 30 jig de a-toxoide
S5-TT, 10 jig de CPS8-TT, 30 jig de ClfA, 30 jig de a-toxoide complementado con AS03B combinación de SOLUCIÓN SALINA 1 y SOLUCIÓN SALINA 2
ca de la concentración de anticuerpos calculada en todos los sujetos con resultados disponibles
je de sujetos con concentración dentro del intervalo especificado ntervalo de confianza; LL = límite inferior, UL = límite superior
s de la dosis 1
ués de la dosis 1
ués de la dosis 1 (muestra de sangre tomada en las visitas 5 o 6) ués de la dosis 2
pués de la dosis 2
Figure imgf000019_0002
pués de la dosis 2_____________________________________________________________
Tabla 5. Tasas de seropositividad y GMC para anticuerpos Ab.IgG de toxina de C tetani (cohorte de ATP para inmuno enicidad
Figure imgf000019_0001
continuación
Figure imgf000020_0001

Claims (13)

REIVINDICACIONES
1. Una composición inmunogénica que comprende
i. un sacárido capsular Tipo 5 de Staphylococcus aureus conjugado con una proteína transportadora para formar un conjugado de sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus, en el que el conjugado de sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus se administra a una dosis de sacárido de 3-50 |jg, 5-25 |jg , 3-20 |jg, 3-12 |jg, 5-10 |jg, 7-20 |jg, 7-15 |jg o 8-12 jig, y
ii. un sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus conjugado con una proteína transportadora para formar un conjugado de sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus, en el que el conjugado de sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus se administra a una dosis de sacárido de 3-50 jig, 5-25 jig, 3-20 jig, 3-12 jig, 5-10 jig, 7-20 jig, 7-15 jig o 8-12 jig, y iii. una proteína ClfA o un fragmento de la misma en la que la proteína ClfA o un fragmento de la misma es al menos un 90 % idéntica a la secuencia polipeptídica de cualquiera de las SEQ ID NO: 3-12 o 15-18 en toda su longitud, y
iv. un toxoide alfa
para su uso en el tratamiento o prevención de la infección por Staphylococcus aureus en el que se inmuniza a un paciente humano con una dosis única de la composición inmunogénica.
2. La composición inmunogénica para su uso en el tratamiento o prevención de la infección por S. aureus de la reivindicación 1, en la que el sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus tiene un peso molecular de más de 25 kDa, 40 kDa o 50 kDa o entre 25-300 kDa, 50-250 kDa, 70-150kDa, 25-125kDa, 90-125kDa, 30-100kDa, 35-75KDa o 40-70kDa.
3. La composición inmunogénica para su uso en el tratamiento o prevención de la infección por S. aureus de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en la que el sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus tiene un peso molecular de más de 25 kDa, 40 kDa o 50 kDa o entre 25-300 kDa, 50-250kDa, 70-150kDa, 25-125kDa, 90-125kDa, 30-100kDa, 35-75KDa o 40-70kDa.
4. La composición inmunogénica para su uso en el tratamiento o la prevención de la infección por S. aureus de cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en la que el sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus y/o el sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus está 50-100 % o 75-100 % O-acetilado.
5. La composición inmunogénica para su uso en el tratamiento o prevención de la infección por S. aureus de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en la que la proporción de polisacárido a proteína en el conjugado de sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus está entre 1:5 y 5:1 (p/p) o entre 1:2 y 2:1 (p/p), 1:2 a 1:5 (p/p) o 1:1 y 1:2 (p/p).
6. La composición inmunogénica para su uso en el tratamiento o la prevención de la infección por S. aureus de cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en la que la proporción de polisacárido a proteína en el conjugado de sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus está entre 1:5 y 5: 1 (p/p) o entre 1:2 y 2:1 (p/p), 1:2 a 1:5 (p/p) o 1:1 y 1:2 (p/p).
7. La composición inmunogénica para su uso en el tratamiento o prevención de la infección por S. aureus de cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en la que la misma dosis de sacárido del sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus y sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus está presente en la composición inmunogénica.
8. La composición inmunogénica para su uso en el tratamiento o prevención de la infección por S. aureus de cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en la que la proteína ClfA o un fragmento de la misma contiene una sustitución de aminoácidos que reduce la capacidad de ClfA para unirse al fibrinógeno.
9. La composición inmunogénica para su uso en el tratamiento o prevención de la infección por S. aureus de la reivindicación 8, en la que la proteína ClfA o un fragmento de la misma contiene una sustitución de aminoácidos en al menos uno de los aminoácidos Ala254, Tyr256, Pro336, Tyr338, Ile387, Lys389, Tyr474, Glu526 o Val527.
10. La composición inmunogénica para su uso en el tratamiento o prevención de la infección por S. aureus de una cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en la que el toxoide alfa tiene una secuencia de aminoácidos idéntica al menos en un 90 % a la SEQ ID NO: 1-2.
11. La composición inmunogénica para su uso en el tratamiento o la prevención de la infección por S. aureus de cualquiera de las reivindicaciones 1-10, en la que la dosis única de la composición inmunogénica se administra 5-60, 6-40, 7-30 o 7-15 días antes de un procedimiento hospitalario planificado.
12. Una composición inmunogénica que comprende un sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus conjugado con una proteína transportadora, un sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus conjugado con una proteína transportadora, una proteína ClfA o un fragmento de la misma en la que la proteína ClfA o un fragmento de la misma es al menos 90 % idéntica a la secuencia polipeptídica de cualquiera de las SEQ ID NO: 3-12 o 15-18 a lo largo de toda su longitud y un toxoide alfa en el que el toxoide alfa está presente en la composición inmunogénica a una dosis de 5-50, 10-30, 5-15 o 20-40 |jg.
13. Un procedimiento de fabricación de la composición inmunogénica de las reivindicaciones 1-12 que comprende las etapas de a) conjugar un sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus con una proteína transportadora para formar un conjugado de sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus, b) conjugar un sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus, conjugado con una proteína transportadora para formar un conjugado de sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus, y c) combinar el conjugado de sacárido capsular Tipo 5 de S. aureus, el conjugado de sacárido capsular Tipo 8 de S. aureus, una proteína ClfA o un fragmento de la misma en el que la proteína ClfA o un fragmento de la misma es al menos 90 % idéntica a la secuencia polipeptídica de cualquiera de las SEQ ID NOs: 3-12 o 15-18 a lo largo de su longitud completa y un toxoide alfa para formar la composición inmunogénica.
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Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2007016403A (es) * 2005-06-27 2008-03-07 Glaxosmithkline Biolog Sa Composicion inmunogenica.
DK2493498T3 (en) * 2009-10-30 2017-05-08 Glaxosmithkline Biologicals Sa Purification of Staphylococcus aureus type 5 and type 8 capsule saccharides
AU2015359503B2 (en) * 2014-12-10 2019-05-09 Glaxosmithkline Biologicals Sa Method of treatment
WO2017079681A1 (en) * 2015-11-05 2017-05-11 The Texas A&M University System Targeting of ligand binding sites in clfa
RU2689161C1 (ru) * 2018-10-04 2019-05-24 Федеральное бюджетное учреждение науки "Казанский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Способ получения бактериальных антигенов

Family Cites Families (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4235877A (en) 1979-06-27 1980-11-25 Merck & Co., Inc. Liposome particle containing viral or bacterial antigenic subunit
US4372945A (en) 1979-11-13 1983-02-08 Likhite Vilas V Antigen compounds
IL61904A (en) 1981-01-13 1985-07-31 Yeda Res & Dev Synthetic vaccine against influenza virus infections comprising a synthetic peptide and process for producing same
US4356170A (en) 1981-05-27 1982-10-26 Canadian Patents & Development Ltd. Immunogenic polysaccharide-protein conjugates
US4912094B1 (en) 1988-06-29 1994-02-15 Ribi Immunochem Research Inc. Modified lipopolysaccharides and process of preparation
SE466259B (sv) 1990-05-31 1992-01-20 Arne Forsgren Protein d - ett igd-bindande protein fraan haemophilus influenzae, samt anvaendning av detta foer analys, vacciner och uppreningsaendamaal
DK0671948T3 (da) 1992-06-25 1997-09-01 Smithkline Beecham Biolog Vaccinepræparat indeholdende adjuvanser
ATE157882T1 (de) 1993-03-23 1997-09-15 Smithkline Beecham Biolog 3-0-deazylierte monophosphoryl lipid a enthaltende impfstoff-zusammensetzungen
KR100376361B1 (ko) 1993-09-22 2003-07-18 헨리 엠. 잭슨 파운데이션 포 더 어드벤스먼트 오브 밀리터리 메디신 면역원성구조체의제조를위하여신규한시아닐레이팅시약을사용하여용해성탄수화물을활성화하는방법
GB9326253D0 (en) 1993-12-23 1994-02-23 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
WO1996002555A1 (en) 1994-07-15 1996-02-01 The University Of Iowa Research Foundation Immunomodulatory oligonucleotides
US6008341A (en) 1994-08-22 1999-12-28 The Provost, Fellows And Scholars Of The College Of The Holy And Undivided Trinity Of Queen Elizabeth Near Dublin S. aureus fibrinogen binding protein gene
UA56132C2 (uk) 1995-04-25 2003-05-15 Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини
US6294177B1 (en) 1996-09-11 2001-09-25 Nabi Staphylococcus aureus antigen-containing whole cell vaccine
US6610293B1 (en) 1997-06-16 2003-08-26 The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Opsonic and protective monoclonal and chimeric antibodies specific for lipoteichoic acid of gram positive bacteria
EP1121149A4 (en) 1998-08-31 2002-03-20 Inhibitex Inc IMMUNOTHERAPY METHOD FOR STAPHYLOCOCCAL INFECTIONS INCLUDING DONOR SELECTION AND DONOR STIMULATION
ES2321892T3 (es) 1998-09-14 2009-06-12 Nabi Biopharmaceuticals Composiciones de beta-glucanos e inmunoglobulinas especificas.
US6936258B1 (en) 1999-03-19 2005-08-30 Nabi Biopharmaceuticals Staphylococcus antigen and vaccine
JP2004509970A (ja) 2000-09-26 2004-04-02 ハイブリドン・インコーポレイテッド 位置的化学変化による免疫刺激オリゴヌクレオチドアナログの免疫刺激活性の調節
US20030113350A1 (en) 2001-09-19 2003-06-19 Fattom Ali I. Glycoconjugate vaccines for use in immune-compromised populations
BRPI0408167B1 (pt) 2003-03-07 2014-10-21 Wyeth Corp Conjugados de polissacarídeo-proteína veículo adesina da superfície estafilocócica para imunização contra infecções nosocomiais
CA2531698A1 (en) 2003-07-09 2005-01-27 Sentigen Biosciences, Inc. Method for assaying protein-protein interaction
GB0323103D0 (en) 2003-10-02 2003-11-05 Chiron Srl De-acetylated saccharides
SI1748791T1 (sl) 2004-05-11 2010-07-30 Staat Der Nederlanden - Minister Van Vws Neisseria meningitidis IgtB LOS kot adjuvans
GB0606416D0 (en) * 2006-03-30 2006-05-10 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic composition
AR060188A1 (es) * 2006-03-30 2008-05-28 Glaxosmithkline Biolog Sa Procedimiento de conjugacion
NZ570805A (en) 2006-03-30 2011-10-28 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine comprising Type 5 and Type 8 capsular polysaccharides from Staphyloccocus aureus
TW200744632A (en) * 2006-06-12 2007-12-16 Nabi Biopharmaceuticals Use of alpha-toxin for treating and preventing staphylococcus infections
WO2009095453A1 (en) 2008-01-31 2009-08-06 The Provost, Fellows And Scholars Of The College Of The Holy And Undivided Trinity Of Queen Elizabeth, Near Dublin Treatment of microbial infections
PE20110023A1 (es) * 2009-06-22 2011-01-31 Wyeth Llc Composiciones inmunogenicas de antigenos de staphylococcus aureus
EP3461496B1 (en) 2009-06-22 2023-08-23 Wyeth LLC Compositions and methods for preparing staphylococcus aureus serotype 5 and 8 capsular polysaccharide conjugate immunogenic compositions
GB0913680D0 (en) * 2009-08-05 2009-09-16 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic composition
US8974799B2 (en) 2009-09-30 2015-03-10 Novartis Ag Conjugation of Staphylococcus aureus type 5 and type 8 capsular polysaccharides
DK2493498T3 (en) 2009-10-30 2017-05-08 Glaxosmithkline Biologicals Sa Purification of Staphylococcus aureus type 5 and type 8 capsule saccharides
KR20130093084A (ko) * 2010-07-02 2013-08-21 더 유니버시티 오브 시카고 단백질 Ａ(ＳｐＡ) 변이체와 관련된 조성물 및 방법
KR20130114210A (ko) * 2010-12-22 2013-10-16 와이어쓰 엘엘씨 스타필로코커스 아우레우스 항원의 안정한 면역원성 조성물

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