AT503521A1 - Verwendung eines extraktes von kiwi-frucht - Google Patents

Description

B 9034 1 A 778/2006

Verwendung eines Extrakts der Kiwi-Frucht

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf die Verwendung eines Extrakts der Kiwi-Frucht.

Polyphenole sind in Pflanzen weit verbreitet und sind eine wichtige Klasse von sekundären Pflanzenprodukten. Mehr als 5000 verschiedene Polyphenole wurden identifiziert, und die geschätzte Zahl der Polyphenole in der Natur ist aufgrund der Komplexität dieser Klasse von Verbindungen erwartungsgemäß noch viel höher. Im Allgemeinen sind Polyphenole in Pflanzen als freie Polyphenol-Monomere (z.B. Flavanole, Flavanone, Flavone, Antho-cyanidine) oder als konjugierte Tannine, wie hydrolysierbare Tannine, abgeleitete Tannine oder kondensierte Tannine und Proanthocyanidine, zu finden [Beecher GR. J. Nutr. (2003) 133: 3248S-3254S].

Zahlreiche Gesundheitsvorteile von Tee, Obst und Gemüse werden Polyphenolen zugeschrieben. Heutzutage werden insbesondere die Polyphenole im grünen Tee aufgrund ihrer bewiesenen antioxidativen, antimutagenen, antikarzinogenen und hypocholesteri-nämischen Wirkungen sowie ihres Potentials zur Verhinderung von Herz-Kreislauf-Erkrankungen geschätzt [Benzie IFF. Szeto YT. J. Agric. Food Chem. (1999) 47: 633-636;

Miura S, Watanabe J, Tomita T, Sano M, Tomital. Biol. Pharm. Bull. (1994) 17:1567-1572;

Yen GC, Chen HY. J. Agric. Food Chem. (1995) 43: 27-32; Fujiki H, Suganuma M, Okabe S,

Sueoka N, Komori A, Sueoka E, Kozu T, Tada Y, Suga K, Imai K, Nakachi K. Mutat. Res. (1998) 402: 307-310; Suzuki K, Yahara S, Hashimoto F, UyedaM Biol. Pharm. Bull. (2001) 24: 1088-1090; Murase T, Nagasawa A, Suzuki J, Hase T, Tokimitsu I. Int. J. Obesity (2002) 26: 1459-1464; Ikeda I, Imasato Y, Sasaki E, Nakayama M, Nagao H, Takeo T, Yayabe F,

Sugano M. Biochim. Biophys. Acta (1992) 1127:141-146; Ikeda I, Kobayashi M, HamadaT,

Tsuda K, Goto H, Imaizumi K, Nozawa A, Sugimoto A, Kakuda T. J. Agric. Food Chem. (2003) 51: 7303-7307].

Unlängst wurde nachgewiesen, dass Polyphenol-Oligo- und -Polymere des Oolong-Tees die menschliche Pankreaslipase (LPS) in vitro hemmen [Nakai M, Fukui Y, Asami S, Tovoda-Ono Y, Iwashita T, Shibata H, Mitsunaga T, Hashimoto F, Kiso Y. J. Agric. Food Chem. (2005) 53: 4593-4598]. Diese Studie, aber auch zuvor durchgeführte Untersuchungen zeigten, dass freie Polyphenol-Monomere nur sehr schwache Inhibitoren von LPS sind [Karamac M, Amarowicz R. Z. Naturforsch. (1996) 51c: 903-905].

Tee-Polyphenole sind in der Literatur gut charakterisiert. Berichten zufolge enthalten 200 ml grüner Tee bis zu 140 mg (-)-Epigallocatechingallat (EGCG), 65 mg (-)-Epigallocatechin (EGC), 28 mg (-)-Epicatechingallat (ECG) und 17 mg (-)-Epicatechin [Yang CS, Wang ZY. J. Natl. Cancer Inst. (1993) 85:1038-1049]. Es zeigte sich, dass der hohe Gehalt an Galloyl-

NACHGEREICHT • · · ιι » ···· ·········· · · · • · · ·· · · · · · · · *··* ****** 2* *

Einheiten mit einer in Prostata- und Brustkrebszellen induzierten Apoptose und der Hemmung der Fettsäuresynthase in einer Wechselbeziehung steht [Brusselmans K, Vrolix R, Verhoeven G, Swinnen JV JBC (2005) 280(7): 5636-5645; Zhang YM, Rock CO. JBC (2004) 279(30): 30994-31001].

Das Enzym Fettsäuresynthase (FAS) ist ein wichtiges, am in-vivo-Energiestoffwechsel teilnehmendes Enzym, und es wurde nachgewiesen, dass es mit verschiedenen Erkrankungen des Menschen in Verbindung steht. Die ersten Berichte über die Eigenschaften dieses Enzymsystems wurden in den frühen 60er-Jahren veröffentlicht [Alberts AW, Goldman P, Vagelos PR. JBiol Chem (1963) 238: 557-65; Bressler R, Wakil SI. JBiol Chem (1961) 236: 1643-51; Brooks IL, Stumpf, PK. Arch Biochem Biophys (1966) 116: 108-16; Burton, D., Haarik, A.G., Porter, I.W., Arch Biochem Biophys (1968) 126, 141-154; Butterworth PHW, Yang PC, Bock RM, Porter IW. JBiol Chem (1967) 242: 3508-16].

Basierend auf verschiedenen Untersuchungen wurden zwei, als Typ 1 und 2 bezeichnete Enzymsysteme identifiziert. FAS vom Typ 1 (EC 2.3.1.85) ist in höheren Tieren und Hefen zu finden, während Typ 2 vorwiegend in Pflanzen und Bakterien vorkommt.

Tierische FAS ist aus zwei identischen multifunktionellen Polypeptidketten zusammengesetzt, wobei jede sechs getrennte funktionelle Bereiche mit enzymatischer Aktivität enthält. FAS synthetisiert de novo hauptsächlich Palmitinsäure aus den Substraten Acetyl-Coenzym A (Ac-CoA), Malonyl-Coenzym A (Mal-CoA) und NADPH, und zwar gemäß dem folgenden Reaktionsschema [Wakil S. Biochemistry (1989) 28: 4523-30; Smith S. FASEB (1994) 8: 1248-59]:

Ac-CoA + 7 Mal-CoA + 14 NADPH + 14 H+ ^ Palmitinsäure + 14 NADP+ + 6H20 + 8 CoA-SH + 7 C02 FAS befindet sich in den meisten tierischen Geweben in großen Mengen in der Leber. Unter normalen Bedingungen wird die FAS-Aktivität im Gewebe aufgrund genügend verfügbarem Nahrungsfett herunterreguliert. Es zeigte sich, dass die FAS-Aktivität bei verschiedenen pathophysiologischen Zuständen, d.h. Malignitäten im Dickdarm, in der Prostata, in der Brust, in der Gebärmutterschleimhaut oder bei einem Eierstockkarzinom, auf überraschend hohe Levels hochreguliert war [Rashid A, Pizer ES, Moga M, Milgraum LZ, Zahurak M, Pastemack GR, Kuhajda FP, Hamilton SR. Am JPathol (1997) 150(1): 201-8; Shurbaji MS, Kalbfleisch JH, Thurmond TS. Hum Pathol (1996) 27(9): 917-21; Epstein JI, Carmichael M, Partin AW. Urology (1995) 45(1): 81-6; Gansler TS, Hardman W 3rd, Hunt DA, Schaffel S, Hennigar RA. Hum Pathol (1997) 28(6): 686-92; Pizer ES, Lax SF, Kuhajda FP, Pastemack GR, Kurman RJ. Cancer. (1998) 83(3): 528-37; Alo PL, Visca P, Trombetta G, Mangoni A,

NACHGEREICHT ····· · ···· • · · ······· ·· · • · · ·· · · · · ···

Lenti L, Monaco S, Botti C, Serpieri DE, Di Tondo U. Tumori (1999) 85(1): 35-40-, Milgraum LZ, Witters LA, Pastemack GR, KuhajdaFP Clin Cancer Res (1997) 3(11): 2115-20]

Folglich könnte die Hemmung von FAS, über die sich herausstellte, dass sie mit einer Verringerung des Tumorwachstums und der Apoptose bösartiger Zellen in Verbindung steht, als ein wertvolles Ziel bei der Krebsbehandlung dienen [Pizer ES, Jackisch C, Wood FD, Pastemack GR, Davidson NE, Kuhajda FP. Cancer Res (1996) 56(12): 2745-7]. Jüngste Studien zeigten auch, dass eine FAS-Hemmung die Nahrungsaufnahme und das Körpergewicht bei Mäusen reduzieren kann [Loftus TM, Jaworsky DE, Frehywot GL, Townsend CA, Ronnett GV, Lane MD, Kuhajda FP. Science (2000) 288(5475): 2379-81]. Weiters wurde nachgewiesen, dass eine de-novo-Lipogenese beim Menschen über die FAS zu den Spiegeln zirkulierender Triglyceride beiträgt. Zusammen mit der Umesterung von freien Fettsäuren im Plasma trägt sie zu etwa 50% des Triglyceridspiegels bei, während die restlichen 50% von der Aufspaltung und Absorption von Nahrungslipoproteinen und von Fettspeichem im Körper stammen [Diraison F, Beylot M. Am JPhysiol (1998) 274: E321-7],

Es bleibt anzumerken, dass Studien über die Lipogenese bei gesunden, nicht fettleibigen Menschen nahe legen, dass die Lipogenese über das FAS-System kein wichtiger Weg hinsichtlich der Umwandlung in und Sekretion von Triglyceriden ist [Hellerstein MK, Christiansen M, Kaempfer S, Kletke C, Wu K, Reid JS, Mulligan K, Hellerstein NS, Shackleton CH. J Clin Invest (1991) 87(5): 1841-52.]. Daher wird die Hemmung der FAS bei gesunden, nicht fettleibigen Menschen nicht als wirksamer Weg zur Verringerung des Fettanteils im Körper angesehen. Aus Studien mit Mäusen wurde jedoch der Schluss gezogen, dass Inhibitoren der FAS auch für eine verringerte Nahrungsaufnahme und einen Körpergewichtsverlust verantwortlich sind, was maßgeblich einem Fettverlust zugeschrieben werden könnte [Loftus TM, Jaworsky DE, Frehywot GL, Townsend CA, Ronnett GV, Lane MD, Kuhajda FP. Science (2000) 288(5475): 2379-81]. Überdies zeigen Studien mit fettleibigen Menschen und Patienten, die an Diabetes leiden, dass eine Hypertriglyceridämie eng mit der Kohlenhydrataufriahme zusammenhängt, was mit größter Wahrscheinlichkeit auf die Umwandlung von Stoffwechselprodukten der Glykolyse in Lipide über eine de-novo-Lipogenese zurückzuführen ist [Danforth E Jr. Am J Clin Nutr (1985) 41(5 Suppl): 1132-45; Coulston AM, Hollenbeck CB, Swislocki AL, Reaven GM. Diabetes Care (1989) 12(2): 94-101; Hollenbeck CB, Coulston AM, Diabetes Care (1991) 14(9): 774-85].

Bisher wurden eine Reihe von FAS-Inhibitoren mit klinischem Potential, wie zum Beispiel die natürlich vorkommenden Moleküle Cerulenin, Thiolactomycin, Polyphenole (Catechine

NACHGEREICHT • · • · • · • · · · ······· ·· · • · · ·· ·· · · ··· • ·· ·· · · ^ βϊ*# φ * im grünen Tee und andere Flavonoide) und synthetische Moleküle (z.B. Isoniazid, Triclosan, C75), untersucht [Kuhajda FP, Pizer ES, Li JN, Mani NS, Frehywot GL und Townsend CA. Proc Natl Acad Sei (2000) 97: 3450-54; Vance D, Goldberg I, Mitsuhashi 0, Bloch K. Biochem Biophys Res Commun (1972) 48: 649-56·, Wang X, Tian W. Biochem Biophys Res Commun (2001) 288:1200-06; Li BH, Tian WX. J Biochem (2004) 135: 85-91; Hayashi T, Yamamoto O, Sasaki H, Okazaki H. J Antibiot (Tokyo). (1984) 37(11):1456-61; Laakso JA, Raulli R, McElhaney-Feser GE, Actor P, Underiner TL, Hotovec BJ, Mocek U, Cihlar RL, Broedel SE. CT2108A und B: JNat Prod. (2003) 66(8): 1041-6 ; Baneijee A, Dubnau E, Quemard A, Balasubramanian V, Um KS, Wilson T, Collins D, de Lisle G, Jacobs WR Jr. Science. (1994) 263 (5144): 227-30; McMurry LM, Oethinger M, Levy SB. Nature. (1998) 394(6693): 531-2; Heath RJ, Yu YT, Shapiro MA, Olson E, Rock CO. JBiol Chem. (1998) 273(46): 30316-20].

Fettleibigkeit wird durch die Resultate eines Ungleichgewichts zwischen Energieaufnahme und -aufwand verursacht. Überschüssige Energie wird in Fettzellen gespeichert, die sich vergrößern oder zahlenmäßig zunehmen. Überdies ist Fettleibigkeit ein großer Risikofaktor für verschiedene Erkrankungen, wie zum Beispiel Bluthochdruck, Hyperlipidämie, Arteriosklerose und Diabetes. Ein wirksamer Weg zur Verhinderung von Fettleibigkeit besteht daher in der Hemmung der Fettabsorption aus dem Darm.

Pankreaslipase ist ein Schlüsselenzym für die Lipidabsorption. Es ist wohlbekannt, dass Nahrungsfett nicht direkt aus dem Darm absorbiert wird, es sei denn, es wurde der Wirkung von Pankreaslipase ausgesetzt. Dabei wäre es effektiv, zur Unterdrückung einer Gewichtszunahme die Fettabsorption durch Lipasehemmung zu verringern.

Kiwis (Actinidia chinensis L.) sind in Europa beliebte Früchte. Abgesehen von den allgemeinen Emährungsvorteilen, die für Obst geltend gemacht werden, wurden in der Kiwi bioaktive Polysaccharide und Glycoproteine festgestellt [Deters AM, Schroeder KR, Hensel A. J. cell. Physiol (2005) 202: 717-722; Balestrieri C, Castaldo D, Giovane A, Quagliuolo L, Servillo L. Eur. J. Biochem. (1990) 193:183-187]. Kiwi-Früchte enthalten sowohl Polyphenol-Monomere als auch 01igo-/Polymere. Mehr als 50% der in Kiwi-Früchten vorkommenden Polyphenole liegen Berichten zufolge als Oligo-/Polymere vor [Imeh U, Khokhar S. J. Agric. Food Chem. (2002) 50: 6301-6306]. Eine detaillierte Untersuchung der Phenolzusammensetzung zeigte ein breites Spektrum von in Kiwi-Früchten natürlich vorkommenden Polyphenolen [Dawes HM, Keene JB. J. Agric. Food Chem. (1999) 47: 2398-2403].

Die WO 2005/096849, die WO 2005/110404, die US 5053232 A, die WO 91/003172, die WO 01/70259, die WO 03/03415, die WO 2004/017982, die WO 2006/016728, die EP 0 359

NACHGEREICHT 822 Al, die CN 1560243 (Zusammenfassung), die JP 61140510 A (Zusammenfassung), die JP 2072850 A2 (Zusammenfassung), die JP 2202808 A (Zusammenfassung), die JP 6256207 A (Zusammenfassung), die JP 2002/293780 A (Zusammenfassung), die JP 2003/171294 A (Zusammenfassung) und die KR 2001/96881 (Zusammenfassung) offenbaren Anwendungen von Kiwi-Früchten und Kiwi-Fruchtextrakten.

Eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung besteht in der Bereitstellung eines weiteren Medikaments zur Behandlung von Erkrankungen oder Zuständen, die mit der Aktivität von menschlicher Pankreaslipase (LPS) und/oder menschlicher Fettsäuresynthase (FAS) Zusammenhängen oder durch diese verursacht werden.

Diese Aufgabe wird gelöst durch die Verwendung eines Extrakts der Kiwi-Frucht zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung einer Erkrankung oder eines Zustands, die bzw. der mit der Aktivität von menschlicher Pankreaslipase und/oder menschlicher Fettsäuresynthase zusammenhängt, durch diese verursacht oder vermittelt wird.

Unerwarteterweise wurde festgestellt, dass Extrakte der Kiwi-Frucht im Vergleich zur frischen Frucht unerwartet hohe Mengen an Polyphenolen, insbesondere in konjugierter Form, enthalten.

Ein bevorzugter, erfindungsgemäß verwendeter Kiwi-Fruchtextrakt weist einen Polyphenolgehalt von 10 Gew.% oder mehr auf.

Bei einem weiteren bevorzugten, erfindungsgemäß verwendeten Kiwi-Fruchtextrakt liegen 75% oder mehr, vorzugsweise 90% oder mehr, am meisten bevorzugt 95% oder mehr, der in diesem Extrakt vorhandenen Polyphenole als konjugierte Tannine vor.

Am meisten bevorzugt enthält der erfindungsgemäß verwendete Kiwi-Fruchtextrakt Catechin (C) und Gallussäure (GA), und das Catechin und die Gallussäure, die in diesem Extrakt vorhanden sind, liegen in einer Menge von 75% oder mehr, vorzugsweise 90% oder mehr bzw. am meisten bevorzugt 95% oder mehr, in konjugierter Form vor.

Weiters wurde festgestellt, dass offensichtlich konjugierte Tannine eine höhere Inhibierungswirkung gegenüber LPS und FAS aufweisen als freie Polyphenole. Folglich wurde festgestellt, dass Kiwi-Extrakte, die hohe Mengen an konjugierten Tanninen enthalten, eine äußerst gute inhibierende Aktivität bezüglich LPS und FAS aufweisen.

Der Kiwi-Fruchtextrakt wird vorzugsweise mit einem Lösungsmittel, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus aliphatischen Alkoholen, insbesondere Ethanol; Aceton, Hexan,

NACHGEREICHT ····· · · · · · • · · t ··· ··· · · · • · · · · · t « · ·· ·

Chloroform, Ethylacetat, Petrolether, Mischungen davon und/oder Mischungen davon mit Wasser, erhalten. Am meisten bevorzugt ist ein ethanolischer Extrakt der Kiwi-Frucht oder ein mit einem Gemisch aus Ethanol und Wasser hergestellter Extrakt.

Die Kiwi-Frucht ist vorzugsweise eine Actinidia Chinensis- oder Actinidia Deliciosa-Yrwchi.

Der erfindungsgemäß verwendete Kiwi-Fruchtextrakt kann aus dem Fruchtfleisch, den Schalen, den Samen, dem Saft, den Blättern und/oder den Wurzeln der Kiwi-Frucht hergestellt werden. Das Fruchtfleisch und der Saft der Kiwi-Frucht sind am meisten bevorzugt.

Der Kiwi-Fruchtextrakt kann vorzugsweise für die Herstellung eines Medikaments zur Behandlung einer Erkrankung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Stoffwechselstörungen wie z.B. Fettleibigkeit, Hyperlipidämie, Bluthochdruck, Arteriosklerose, Diabetes, Laxation, Verstopfung, Fettlebererkrankung; und Krebs wie z.B. Dickdarm-, Prostata-, Brust-, Gebärmutterschleimhaut- oder Eierstockkarzinom, verwendet werden. Es wurde nachgewiesen, dass diese Erkrankungen mit der Aktivität von LPS und/oder FAS in Verbindung stehen, siehe oben.

Der erfindungsgemäß verwendete Kiwi-Fruchtextrakt kann durch ein Verfahren hergestellt werden, das die folgenden Schritte umfasst: 1. Herstellung des Rohmaterials: Der Saft wird aus der frischen Kiwi-Frucht gepresst.

Der Rückstand nach der Filtration wird als Rohmaterial verwendet; oder die getrocknete Frucht wird als Rohmaterial verwendet; 2. Extraktion: Das gemäß Schritt 1 erhaltene Rohmaterial wird extrahiert, wobei fünfmal 80 Gew.%iges Ethanol bei Raumtemperatur verwendet wird, etwa 1 Stunde lang gerührt wird, das Rohmaterial zweimal extrahiert wird und die extrahierten Lösungen danach vereinigt werden; 3. Konzentration: Die extrahierte Lösung wird bei reduziertem Druck unter 45°C konzentriert; 4. Beschichtung: Dextrin oder ein anderes Stärkederivat wird zur konzentrierten Lösung hinzugefügt. Die Lösung wird gerührt, bis die Zusatzstoffe vollständig gelöst sind; 5. Sprühtrocknung: Durch Sprühtrocknung kann ein Pulver aus beschichtetem Kiwi-Extrakt erhalten werden.

Bevorzugte Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung werden nun anhand von Beispielen und der Figuren beschrieben.

NACHGEREICHT • · • · • · t II » · • · · · ··· ··· ·· · • · · ·· ·· · ·

Kurze Beschreibung der Figuren:

Die Figuren 1 und 2 zeigen die Menge an Catechin (C), Epicatechin (EC) und Gallussäure (GA) in Proben von frischer Kiwi-Frucht und Kiwi-Fruchtextrakt, die mit bzw. ohne Hydrolyse der Polyphenole erhalten wurde.

Figur 3 zeigt die Ergebnisse von LPS-Hemmungstests mit Kiwi-Frucht und Kiwi-Extrakt.

Figur 4 zeigt die Wechselbeziehung der LPS-Hemmung zu GA, welche die Polyphenol-Oligo-/Polymere darstellt.

Figur 5 zeigt eine Schätzung der IC50 für GA-E in einem Kiwi-Extrakt.

Figur 6 zeigt die Proteinlinearität der FAS-Enzymtestanalyse.

Figur 7 zeigt die Substratlinearität der FAS-Enzymtestanalyse.

Figur 8 zeigt das pH-Optimum der FAS-Enzymtestanalyse.

Figur 9 zeigt die Hemmung von FAS durch einen Kiwi-Extrakt.

Beispiele:

Beispiel 1 - Herstellung von Kiwi-Fruchtextrakt 1.000 kg frische Kiwi werden zermahlen und gepresst. 600 kg Rückstand werden als Rohmaterial erhalten. 3.000 Liter 80%iges Ethanol werden als Lösungsmittel für die Extraktion bei Raumtemperatur (20°C) unter einstündigem Rühren hinzugefügt. Die extrahierte Lösung wird filtriert. Der Rückstand wird durch 3.000 Liter 80%iges Ethanol bei Raumtemperatur (21°C) eine weitere Stunde lang extrahiert. Die extrahierte Lösung wird filtriert. Die beiden Chargen extrahierter Lösung werden mit dem gepressten Saft vereinigt und danach bei 42°C unter reduziertem Druck auf 600 Liter konzentriert. 12 kg Beta-Cyclodextrin werden unter Rühren bis zur vollständigen Auflösung hinzugefügt. 62,5 kg Pulver eines beschichteten Kiwi-Extrakts werden erhalten.

Der Extrakt enthält 5,0% Actinidine mit einer biologischen Aktivität von 113.000 IU/g. Gemäß der Folin-Ciocalteau-Analyse beträgt nach einer 2-stündigen Hydrolyse mit Methanol/ HCL 1,2 M (v/v) bei 90°C die Menge an Gesamt-Polyphenolen >10% (m/m), die Menge an

NACHGEREICHT

Catechin (m/m) >4% und die Menge an Gallussäure >1%. Weiters enthält der Extrakt 1,52% Vitamin C und 66,1 % Polysaccharide.

Beispiel 2 500 kg frische Kiwi werden zermahlen und gepresst, 289 kg Rückstand werden als Rohmaterial erhalten. 1.450 Liter 80%iges Ethanol werden als Lösungsmittel für die Extraktion bei Raumtemperatur (20°C) unter einstündigem Rühren hinzugefügt. Die extrahierte Lösung wird filtriert. Der Rückstand wird durch 1.450 Liter 80%iges Ethanol bei Raumtemperatur (19°C) unter einstündigem Rühren weiter extrahiert. Die extrahierte Lösung wird filtriert. Die beiden Chargen extrahierter Lösung werden mit dem gepressten Saft vereinigt und danach bei 41°C unter reduziertem Druck auf 295 Liter konzentriert. 5,8 kg Beta-Cyclodextrin werden unter der Bedingung des Rührens bis zur vollständigen Auflösung hinzugefügt. 30,1 kg Pulver eines beschichteten Kiwi-Extrakts werden erhalten.

Der Extrakt enthält 4,8% Actinidine mit einer biologischen Aktivität von 113.000 IU/g. Gemäß der Folin-Ciocalteau-Analyse beträgt nach einer 2-stündigen Hydrolyse mit Methanol/ HCL 1,2 M (v/v) bei 90°C die Menge an Gesamt-Polyphenolen >10% (m/m), die Menge an Catechin (m/m) >4% und die Menge an Gallussäure >1%. Weiters enthält der Extrakt 1.48% Vitamin C und 65.3% Polysaccharide.

Beispiel 3 - Bestimmung von freien und Gesamt-Polvphenolen Herstellung von Kiwi-Proben:

Frische Kiwis (einschließlich der Haut) wurden gesäubert, gründlich vermischt und gefriergetrocknet. Das Lyophylisat wurde zerpulvert und als Probe verwendet.

Zur Herstellung eines Extrakts wurden frische Kiwi-Früchte gepresst. Der Pressrückstand wurde zweimal mit 80%igem Ethanol extrahiert (Verhältnis Rückstand/Ethanol 80% = 1/5). Die ethanolischen Extrakte wurden mit dem Saft vereinigt und unter reduziertem Druck bei 42°C bis zur Trockenheit eingedampft. Ausgehend von 10 kg Kiwi-Früchten wurde 0,50 kg getrockneter Pulverextrakt erhalten.

Extraktion von freien und Gesamt-Polvphenolen:

Eine abgewogene Menge (1,0 g) an Kiwi-Frucht oder -Extrakt (hergestellt wie oben) wurde mit 25 ml Methanol/Water (1/1 v/v) vermischt und in einem Plastikrohr mit Schraubkappe unter 2-stündigem periodischem Schütteln auf 90°C erhitzt, um die im entsprechenden

NACHGEREICHT

t · · · » • »«f ··· · • · · · ♦ ·

• · • · # · • ·

Extrakt vorhandenen freien Polyphenole zu bestimmen. Eine weitere abgewogene Probe wurde mit 25 ml Methanol/1,2 M HCl (1/1 v/v) 2 h lang bei 90°C erhitzt, um die im entsprechenden Extrakt vorhandenen Gesamt-Polyphenole zu messen [Vinson, JA, Yong H., Xuehui, S, Ligia Z, et al. J. Agric. Food Chem. (2001) 49: 5315-5321]. Für jede Probe wurde ein Minimum von 3 Extraktionen durchgeführt.

Bestimmung von Catechin (C), Epicatechin (EC), Epigallocatechingallat (EGCG), Epigallo-catechin (EGC) und Gallussäure (GA):

Die Trennung der Polyphenole wurde an einem Merck-HPLC-Gradientensystem mittels UV-Nachweis (280 nm) durchgefuhrt. Eine C-18-Spherisorb-Umkehrphasensäule (250 x 4,6 mm, 5 pm, Waters) wurde für die Trennung mit einem linearen Gradienten von Acetonitril und Wasser (mit konzentrierter HCl auf pH 2,5 eingestellt) bei 40°C verwendet. Der Gradient der mobilen Phase wurde von 3% Acetonitril in Wasser zum Zeitpunkt 0 Min. auf 40% Acetonitril bei 44 Min. mit einer Durchflussgeschwindigkeit von 1 ml/min eingestellt. Das Einspritzvolumen betrag für alle Proben 10 μΐ. Nach der Filtration wurden Extrakte für eine Bestimmung der freien und Gesamt-Polyphenole eingespritzt (0,3 pm, Spritzenfilter) [Däwes HM, Keene JB., J. Agric. Food Chem. (1999) 47: 2398-2403]. C, EC, EGCG, EGC und GA wurden als externe Standards verwendet. Kalibrierlösungen wurden durch Auflösung von 25 mg Standard in 0,5 ml Methanol und Verdünnung mit Wasser auf 10 ml hergestellt. Durch Zugabe von Wasser wurden weitere Verdünnungen hergestellt. Die Linearität des Verfahrens wurde für alle 3 Referenzverbindungen auf 0,6 mg/10 ml bis 25,0 mg/10 ml festgesetzt. Die Stabilität der unter den Extraktionsbedingungen getesteten Polyphenol-Monomere (C, EC und GA) wurde bewiesen. Die Rückgewinnungen aller 3 Standards nach einer methanolischen/wässrigen Extraktion und einer methanolischen/ sauren Extraktion waren höher als 95% (3 Konzentrationen, wiederholte Extraktionen). Die analytischen Ergebnisse sind als Mittelwerte angegeben (± Standardabweichung). Die Ergebnisse wurden in mmol/kg Trockensubstanz umgewandelt.

Bestimmung von freien und Gesamt-Polyphenolen:

Die Summe der Polyphenol-Monomere und 01igo-/Polymere wurde in den Proben durch die Folin-Ciocalteau-Analyse bei 720 nm spektralphotometrisch bestimmt [Singleton VL, Orthofer R, Lamuela-Raventos, RM. Methods Enzymol. (1999) 299:152-178]. GA wurde als externer Standard verwendet. Die Ergebnisse sind als GA-Äquivalente (GA-E) ausgedrückt. Kontrollversuche zeigten, dass die Rückgewinnungen von C und EC, wie sich herausstellte, 75% betrugen, wenn sie als GA-E ausgedrückt waren, was daraufhinweist, dass bei der

NACHGEREICHT I · · » · I ► · · ► · · ·· ·· t · • ♦·· • · •Λ·* ··· ·♦·· ·· externen Kalibrierung mit GA in den vorgelegten Proben C und EC möglicherweise als zu gering eingeschätzt werden.

Ergebnisse:

Menge an C, EC, EGCG, EGC und GA: EGCG und EGC wurden nach einer Extraktion mit Methanol/Wasser weder in frischen gefriergetrockneten Kiwi-Früchten, noch in Kiwi-Extrakt nachgewiesen (<5 μg/g Probe). Die Figuren 1 und 2 zeigen die Menge an C, ECT und GA in beiden Proben, die mit oder ohne Hydrolyse der Polyphenole erhalten wurde.

Von der Menge an C, EC und GA, die mit bzw. ohne Hydrolyse festgelegt wurde, konnten die folgenden Schätzungen von deren relativem Beitrag aus Polyphenol-Monomeren und konjugierten Tanninen abgeleitet werden (siehe Tabelle 1).

Tabelle 1, relativer Beitrag von C, EC und GA aus Polyphenol-Monomeren und Oligo-/ Polymeren

Verbindung Monomere (%) konjugierter [annine (%) Kiwi- Kiwi- Kiwi- Kiwi- Extrakt Frucht Extrakt Frucht C 0,8 9,5 99,2 90,5 EC 30,1 32,5 69,9 67,5 GA 2,1 14,4 97,9 85,6

Bestimmung von freien und Gesamt-Polyphenolen:

Die Summe der durch die Folin-Ciocalteau-Analyse erhaltenen Polyphenol-Monomere und konjugierten Tannine wird in Tabelle 2 gezeigt.

Tabelle 2, Summe der Polyphenole (mmol GA/kg Trockensubstanz) gemäß einer Folin-Ciocalteau-Analyse freie Polyphenole (GA-E*) Gesamt-Polyphenole (GA-E) Kiwi- Extrakt Kiwi-Frucht Kiwi- Extrakt Kiwi-Frucht 56,5 16,0 710 210 *... Gallussäure-Äquivalente

NACHGEREICHT

• · · · · · • « · · 99« 99 • 9 9 · 9 9 9 • · · 9 9 9 9 99 99 99 9

Die Ergebnisse der methanolischen/wässrigen Extraktion weisen daraufhin, dass der hergestellte Kiwi-Extrakt wesentlich weniger freie Polyphenole als die frische gefriergetrocknete Kiwi-Frucht enthält. Im Gegensatz dazu zeigt der Vergleich mit dem methanolischen/sauren Extrakt, dass Kiwi-Extrakt mehr konjugierte Gesamt-Tannine als die frische gefriergetrocknete Kiwi-Frucht enthält.

Erwartungsgemäß wurde beim Kiwi-Extrakt nach einer sauren Extraktion im Vergleich zu einer wässrigen Extraktion ein erheblicher Unterschied im GA- und C-Gehalt beobachtet. Die beobachteten proportionalen Anstiege werden bei GA, C und EC durch die Faktoren 47, 120 bzw. 2,3 beschrieben. Die proportionalen Anstiege, die bei frischen gefriergetrockneten Kiwi-Früchten beobachtet wurden, werden durch die Faktoren 6,10 bzw. 2,0 beschrieben. Äußerst interessant ist, dass der Anstieg von GA und C beim Kiwi-Extrakt viel höher ist als bei frischen gefriergetrockneten Kiwis, wohingegen der EC-Anstieg vergleichbar ist. Diese Resultate weisen erstens daraufhin, dass der Kiwi-Extrakt mit konjugierten Tanninen angereichert ist, und zweitens, dass EC zum Gehalt an kondensiertem Tannin nicht in großer Menge beiträgt.

Es wurde ebenfalls nachgewiesen, dass mehr als 97% der Polyphenole im Kiwi-Extrakt konjugierte Tannine sind. Bei frischen gefriergetrockneten Kiwis gehört ein wesentlich geringerer Anteil von etwa 73% der Polyphenole zu den konjugierten Tanninen.

Beim Kiwi-Extrakt und bei der frischen gefriergetrockneten Kiwi-Frucht werden etwa 30% bzw. 23% der freien Polyphenole, die durch die Folin-Ciocalteau-Analyse bestimmt werden, durch GA, C und EC repräsentiert. Beim Kiwi-Extrakt und bei der frischen gefriergetrockneten Kiwi-Frucht werden etwa 45% bzw. 30% der Gesamt-Polyphenole durch GA, C und EC repräsentiert.

Beispiel 3 - Überprüfung der Lipasehemmung Lipasehemmungstest

Die Lipaseaktivität wurde unter Verwendung einer handelsüblichen Testausrüstung (Trinity Biotech, Jamestown, NY, USA, Kat-Nr.: 805) bestimmt. Kurz gesagt, Aliquote von LPS-Standard, Lösungsmittel oder Proben wurden zu 500 μΐ einer rekonstituierten Substratlösung hinzugefügt, schonend vermischt und bei 37°C 5 Minuten lang inkubiert. Nach Zugabe eines Aktivatorreagenzstoffs wird die Veränderung der Extinktionsrate bei 550 nm beobachtet. Die LPS-Hemmung wird als Veränderung der Extinktionsrate ausgedrückt.

NACHGEREIC

• · · · • · t ♦·* • · · · • · · ♦ • « ·· ·· ·· ·· ··· •••Λ • · ·«·· t·· ··

Inhibierungsversuche wurden unter Einbringung der methanolischen/wässrigen oder sauren Extrakte durchgeführt, die nach einer Evaporation von Methanol (Rotovapor) und der Einstellung des pH-Werts auf 6,5-7,5 (NaOH) und der Wiederherstellung des ursprünglichen Volumens mit Ethanol (Endkonzentration in den Proben: etwa 50% v/v) hergestellt wurden. Vor der Inkubation wurden die Proben filtriert. Kontrollversuche wurden unter Verwendung von 50%igem Ethanol (Assay Blank) durchgeführt.

Die Hemmungsrate wird als %-Abnahme der Aktivität von Lipase PS (327 IU/L) angegeben, welche in Gegenwart von Proben im Vergleich zu Kontrollproben erhalten wird. Die Konzentration der Kiwi-Proben lag bei dem Test zwischen 5 und 40 mg Extrakt/ml.

Die IC50-Werte wurden von der log/linearen Korrelation zwischen Enzymgeschwindigkeit (ausgedrückt als Substratverbrauch/Minute) und Konzentration der Probe abgeleitet.

Ergebnisse:

Die LPS-hemmenden Eigenschaften des Kiwi-Extrakts (5-40 mg/ml) wurden mit jenen von gefriergetrockneten Kiwi-Früchten (5-40 mg/ml) nach einer methanolischen Extraktion ohne Hydrolyse verglichen (siehe Fig. 3).

Die Menge der beim LPS-Hemmungstest verwendeten Probe wurde in GA-E umgewandelt, was die Polyphenol-01igo-/Polymere darstellte (710 mmol/g Extrakt und 210 mmol/g gefriergetrocknete Frucht). In Figure 4 wird die Wechselbeziehung zwischen der LPS-Hemmung und der die Polyphenol-Oligo-/Polymere darstellenden GA gezeigt.

Aus den Ergebnissen der LPS-Hemmungsanalyse mit Kiwi-Extrakt wurde eine IC50 von 4,16 μΜ GA-E berechnet, wenn die Reaktionsgeschwindigkeit und das die Polyphenol-01igo-/Polymere im Extrakt darstellende GA-E in eine Wechselbeziehung gesetzt wurden (siehe Fig. 5). Aus Gründen der Löslichkeit konnte keine Vergleichszahl für die Kiwi-Frucht erhalten werden.

Bei einer Extraktion mit saurem Methanol ergaben alle Proben bei allen getesteten Konzentrationen ohne große Unterschiede zwischen Kiwi-Früchten und Kiwi-Extrakt LPS-Hemmungswerte zwischen 0 und 7%.

Dies bedeutet, dass die Lipase-hemmenden Eigenschaften beinahe verloren gehen, wenn die konjugierten Tannine durch eine Säurebehandlung hydrolysiert werden.

Beispiel 4 - Hemmung von Hühnerleber-Fettsäuresvnthase durch Kiwi-Extrakt

NACHGEREICHT

• · · · * · · ·· ·· M

Materialien und Methoden:

Extraktion von FAS aus Hiihnerleber:

Die Leber eines Kükens (0,5 kg BW) wurde unmittelbar, nachdem die Tiere getötet und bis zur weiteren Verarbeitung auf Eis gelagert wurden, herausgeschnitten. 10 g gehackte Leber wurden unter Verwendung eines mechanischen Homogenisators in 100 ml eiskaltem Puffer (0,1 M NaH2PC>4-Puffer mit 20% Glycerin, pH-Wert wurde mit NaOH auf 7,5 eingestellt) homogenisiert. Das Homogenat wurde bei 4°C 15 Minuten lang mit 30.000 g zentrifugiert.

Der resultierende Überstand (befreit von der gelegentlich vorkommenden Fettschicht) wurde sofort mittels Gelfiltration über Sephadex G-50 weiterverarbeitet. Die Gelfiltration wurde unter Verwendung von 100 ml-Kartuschen von Pharmacia durchgeführt, die mit in Wasser suspendiertem Sephadex G-50 gefüllt waren. Die Durchflussgeschwindigkeit wurde auf ungefähr 4 ml/min eingestellt. Die Elution wurde durch einen auf 214 nm eingestellten UV-Nachweis verfolgt. Die mobile Phase bestand aus 0,1 M NaH2P04-Puffer, 45 mM Glycerin, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, der pH-Wert wurde mit NaOH auf 7,5 eingestellt. Der erste mit der Proteinfraktion übereinstimmende Peak wurde gesammelt und gepoolt (40 ml-Volumen).

Die Proteinfraktion wurde zu 5% (m/v) Polyethylenglycol zusammengesetzt und bei 4°C 30 Minuten lang gerührt. Das Präzipitat wurde durch Zentrifugation (9.000 g, 30 Minuten, 4°C) abgetrennt, und der Überstand wurde auf 12% Polyethylenglycol gebracht. Das resultierende Präzipitat wurde durch Zentrifugation (9.000 g, 30 Minuten, 4°C) gesammelt und für die weitere Verarbeitung verwendet.

Das Pellet wurde sorgfältig gewaschen und danach in 5 ml 0,1 M NaH2P04-Puffer, 45 mM Glycerin, 1 mM EDTA, 1 mM DTT aufgelöst, der pH-Wert wurde mit NaOH auf 7,5 eingestellt. Diese Lösung wurde nötigenfalls filtriert und ohne Aktivitätsverlust 4 Wochen lang bei -20°C gelagert.

Als letzter, unmittelbar vor der Analyse durchgeführter Reinigungsschritt wurde die resultierende Lösung durch Ionenaustauschchromatographie mit DEAE-Cellulose gereinigt. In diesem Fall wurden Glaspipetten mit einem 1 ml-Volumen von DEAE-Cellulose gefüllt und mit 0,1 M NaH2P04-Puffer, 45 mM Glycerin, 1 mM EDTA, 1 mM DTT äquilibriert, der pH-Wert wurde mit NaOH auf 7,5 eingestellt. 0,5 ml der Proteinlösung wurde auf die Säule geladen und durch schrittweises Hinzufügen von 0,5 ml-Mengen desselben Puffers eluiert. Die Fraktionen, die zwischen 1,5 und 2,5 ml eluierten, wurden gesammelt und für die FAS-Analyse verwendet.

NACHGEREICHT • · • · « · · · · ·« ·· ·· ·'

··# ·· • · • · • · · · · t • · · · ·*· ··· • · · · · · · FAS-Testanalvse: 150 μΐ des gereinigten Extrakts wurden mit 100 μΐ NADPH2/AC-C0A (2,5/0,8 mg/2 ml Wasser, entsprechend einer endgültigen Konzentration von 150 bzw. 50 μΜ) vermischt. Eine wie untenstehend angegeben hergestellte Kiwi-Extraktlösung wurde in Volumen von bis zu 250 μΐ hinzugefügt.

Die Testanalyse wurde danach mit 0,1 M NaEfePCVPufFer, 45 mM Glycerin, 1 mM EDTA, 1 mM DTT auf 1 ml aufgefüllt, der pH-Wert wurde mit NaOH auf 7,5 eingestellt. Nach einer 30-minütigen Vorinkubationsperiode bei 25°C wurden 100 μΐ Malonyl-CoA (1 mg/2 ml Wasser, entsprechend 55 μΜ) als Reaktionsstarter hinzugefugt. Die Reaktion wurde in einem auf 340 nm eingestellten UV/VIS-Spektrometer (Jasco V-530) gegenüber Luft bei 30°C überwacht. Die Aktivität des Enzyms wurde aus der Abnahme der Absorption, die auf den Verbrauch von NADPH2 zurückzuführen ist, berechnet. Die Messzeit wurde auf 15 Minuten eingestellt.

Im Ergebnisabschnitt werden Variationen der allgemeinen Verfahrensweise genauer erläutert. Herstellung und Bewertung von Kiwi-Extraktproben:

Frische Kiwi-Früchte wurden gepresst. Der Pressrückstand wurde zweimal mit 80%igem Ethanol extrahiert (Verhältnis Rückstand/80%iges Ethanol = 1/5). Die ethanolischen Extrakte wurden mit dem Saft vereinigt und bei 42°C unter reduziertem Druck bis zur Trockenheit eingedampft. Ausgehend von 1.000 kg Kiwi-Früchten wurden 50 kg getrockneter Pulverextrakt erhalten.

Der Kiwi-Extrakt wurde in Ethanol gelöst und mit einem Testanalyse-Puffer zu einer endgültigen Konzentration von 2 mg/ml verdünnt.

Die Extraktion von freien und Gesamt-Polyphenolen wurde gemäß dem obenstehend in Beispiel 3 beschriebenen Verfahren durchgeführt.

Proteinbestimmung:

Das Protein wurde entsprechend einem modifizierten Micro-Lowry-Verfahren (Total Protein Kit, Micro Lowry, Onishi & Barr Modification) gemäß dem Handbuch bestimmt. Als Kalibrierbereich wurde 0,15-1,0 mg Protein/ml verwendet. Das Verfahren wurde mit Rinderalbumin kalibriert.

NACHGEREICHT ····· · ···· • · · · ··· ··· · · · • · · ·· · * · · ··♦ • ·« *· ··«·.· · ·· ·· ·· ·4>#·· ··

Berechnungen:

Die Aktivität der FAS wurde aus dem Verbrauch von NADPH, der als μΜ x L'1 x min'1 ausgedrückt wurde, berechnet, wobei die erhaltenen Absorptionsdaten und ein molarer Extinktionskoeffizient von 6,3 verwendet wurden.

Ergebisse:

Enzvmcharakteristika:

Die Proteinlinearität wurde durch Zugabe von verschiedenen Volumen des gereinigten Enzymextrakts zum Testanalysesystem, welches 1,8 g Protein/1 Extrakt enthielt, abgeschätzt. Die resultierende Kurve ist in Fig. 6 dargestellt, wobei jeder Punkt den Durchschnittswert von 3 Versuchen darstellt. Wie zu sehen ist, reichte der lineare Teil der Testanalyse von 175 mg bis 450 mg Protein/1 Testanalyse, und zwar mit einem Korrelationskoeffizienten von 0,9961. Bei höheren Konzentrationen wurde ein Ceiling-EfFekt hinsichtlich der Aktivität beobachtet. Aus diesen Untersuchungen wurde ein Proteingehalt von 270 mg Protein/1, der 150 μΐ gereinigtem Extrakt entsprach, ausgewählt.

Zur Bestimmung der Substratlinearität wurde NADPH in unterschiedlichen Mengen im Bereich von 5-350 μΜ NADPH/1 Testanalyse hinzugefügt. Malonyl-CoA wurde im Überschuss hinzugefügt und daher nicht weiter untersucht. Die Ergebnisse sind in Fig. 7 dargestellt, wobei jeder Punkt den Durchschnittswert von 3 Versuchen darstellt. Wie dort zu sehen ist, wurde die maximale Aktivität bei 150 μΜ NADPH/1 Testanalyse erzielt, und folglich wurde diese Konzentration für die Testanalyse gewählt.

Die Inkubationszeit wurde durch Messung der Veränderung der Absorption bei 340 nm über einen Zeitraum von 60 Minuten hinweg ermittelt. Es konnte gezeigt werden, dass die Aktivität des Enzyms nach einer 15-minütigen Messung verschwand, was keinem weiteren Anstieg der Absorption entsprach. Folglich wurde die Inkubationszeit auf 15 Minuten eingestellt.

Die Inkubationstemperatur wurde auf 30°C eingestellt, da Vergleichs versuche bei 20, 25 und 35°C nur geringfügige Veränderungen der FAS-Aktivität erbrachten. Es wurde der Schluss gezogen, dass die Temperatur keinen wesentlichen Einfluss auf das Testsystem hat. NACHGEREICHT \ • · · · · · + · · · »♦· ··«

•4Τ3···· ·· • · · · · · · • · · · » · · ·· ·· ·· ·

Weiters wurde gezeigt, dass mögliche Lösungsmittel, die für die Auflösung der Extrakte (DMSO, 10% Ethanol) verwendet wurden, im Vergleich zu Kontrollversuchen (Daten nicht gezeigt) keinen Einfluss auf die Enzymaktivität hatten.

Zur Bestimmung des pH-Optimums wurde der hinzugefügte Testpuffer auf pH-Werte zwischen 3 und 11 eingestellt. Die Ergebnisse sind in Fig. 8 dargestellt, wobei jeder Punkt den Durchschnittswert von 3 Versuchen darstellt. Wie zu sehen ist, lag das pH-Optimum, wie sich herausstellte, etwa bei 7,5. Daher wurde für weitere Untersuchungen ein pH-Wert von 7,5 gewählt.

Die optimierte Testanalyse für die FAS wurde zur Durchführung von Hemmversuchen mit Kiwi-Extrakt verwendet. H emm versuche:

Kiwi-Extrakt wurde in Ethanol gelöst und mit einem Testanalysepuffer auf eine endgültige Konzentration verdünnt. Nach der Filtration wurden unterschiedliche Mengen der Kiwi-Extraktlösung (2 mg Kiwi-Extrakt/ml) zur FAS-Testanalyse hinzugefügt. Die erhaltenen Ergebnisse werden in Fig. 9 gezeigt, wobei jeder Punkt den Durchschnittswert von 3 Versuchen darstellt. Wie zu sehen ist, hemmte der Extrakt die FAS in einer stark dosisabhängigen Weise. Bei der höchsten Konzentration, die getestet wurde, war eine Hemmung von etwa 60% zu sehen.

NACHGEREICHT

Claims (8)

1. • · · • · · • · · • · · • · • ♦♦♦ • · • · ··· • · • · ·· ·♦« ·· Patentansprüche: 1. Verwendung eines Extrakts der Kiwi-Frucht zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung einer Erkrankung oder eines Zustands, die bzw. der mit der Aktivität von menschlicher Pankreaslipase und/oder menschlicher Fettsäuresynthase zusammenhängt, durch diese verursacht oder vermittelt wird.
2. 2. Verwendung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass der Extrakt einen Polyphenolgehalt von 10 Gew.% oder mehr aufweist.
3. 3. Verwendung gemäß Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass 75% oder mehr, vorzugsweise 90% oder mehr, am meisten bevorzugt 95% oder mehr, der in diesem Extrakt vorhandenen Polyphenole als konjugierte Tannine vorliegen.
4. 4. Verwendung gemäß einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass der Extrakt Catechin (C) und Gallussäure (GA) enthält, wobei das Catechin und die Gallussäure, die in diesem Extrakt vorhanden sind, in einer Menge von 75% oder mehr, vorzugsweise 90% oder mehr bzw. am meisten bevorzugt 95% oder mehr, in konjugierter Form vorliegen.
5. 5. Verwendung gemäß einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass der Extrakt ein Extrakt ist, der mit einem Lösungsmittel, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus aliphatischen Alkoholen, insbesondere Ethanol; Aceton, Hexan, Chloroform, Ethylacetat, Petrolether, Mischungen davon und/oder Mischungen davon mit Wasser, erhalten wurde.
6. 6. Verwendung gemäß einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Kiwi-Frucht eine Actinidia Chinensis- oder Actinidia Deliciosa-Fmcht ist.
7. 7. Verwendung gemäß einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass der Extrakt aus dem Fruchtfleisch, den Schalen, den Samen, dem Saft, den Blättern und/oder den Wurzeln der Kiwi-Frucht hergestellt wird.
8. 8. Verwendung gemäß einem der vorhergehenden Ansprüche für die Behandlung einer Erkrankung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Stoffwechselstörungen wie z.B. Fettleibigkeit, Hyperlipidämie, Bluthochdruck, Arteriosklerose, Diabetes, Laxation, Verstopfung, Fettlebererkrankung; und Krebs wie z.B. Dickdarm-, Prostata-, Brust-, Gebärmutterschleimhaut- oder Eierstockkarzinom. NACHGEREICHT