AT401269B - Enzymatisches oxidationsverfahren zur umsetzung von cephalosporin c in glutaryl-7- aminocephalosporansäure - Google Patents
Enzymatisches oxidationsverfahren zur umsetzung von cephalosporin c in glutaryl-7- aminocephalosporansäure Download PDFInfo
- Publication number
- AT401269B AT401269B AT0047694A AT47694A AT401269B AT 401269 B AT401269 B AT 401269B AT 0047694 A AT0047694 A AT 0047694A AT 47694 A AT47694 A AT 47694A AT 401269 B AT401269 B AT 401269B
- Authority
- AT
- Austria
- Prior art keywords
- mixture
- amino acid
- cephalosporin
- acid oxidase
- glutaryl
- Prior art date
Links
- HOKIDJSKDBPKTQ-GLXFQSAKSA-N cephalosporin C Chemical compound S1CC(COC(=O)C)=C(C(O)=O)N2C(=O)[C@@H](NC(=O)CCC[C@@H](N)C(O)=O)[C@@H]12 HOKIDJSKDBPKTQ-GLXFQSAKSA-N 0.000 title claims description 78
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 46
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 title claims description 16
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 title claims description 14
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 title claims description 14
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 title claims description 12
- 239000002253 acid Substances 0.000 title claims 2
- 102100026908 D-amino-acid oxidase Human genes 0.000 claims description 56
- 108010003989 D-amino-acid oxidase Proteins 0.000 claims description 56
- 241001480015 Trigonopsis variabilis Species 0.000 claims description 39
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 38
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 37
- IXUSDMGLUJZNFO-BXUZGUMPSA-N (7R)-7-(4-carboxybutanamido)cephalosporanic acid Chemical compound S1CC(COC(=O)C)=C(C(O)=O)N2C(=O)[C@@H](NC(=O)CCCC(O)=O)[C@@H]12 IXUSDMGLUJZNFO-BXUZGUMPSA-N 0.000 claims description 34
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 claims description 31
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 25
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 25
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 19
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 14
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 13
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 11
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 238000007664 blowing Methods 0.000 claims description 10
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 8
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 4
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims description 4
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 claims description 4
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims description 4
- 241000228431 Acremonium chrysogenum Species 0.000 claims description 3
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 claims description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 2
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 claims 1
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 24
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 11
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 11
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 5
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- GRQXHIBWEUNUHL-BXKDBHETSA-N (6r,7r)-7-(4-carboxybutanoylamino)-3-(hydroxymethyl)-8-oxo-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylic acid Chemical compound S1CC(CO)=C(C(O)=O)N2C(=O)[C@@H](NC(=O)CCCC(O)=O)[C@@H]12 GRQXHIBWEUNUHL-BXKDBHETSA-N 0.000 description 3
- XWCFYHBHOFBVIV-UHFFFAOYSA-N Deacetylcephalosporin C Natural products S1CC(CO)=C(C(O)=O)N2C(=O)C(NC(=O)CCCC(N)C(O)=O)C21 XWCFYHBHOFBVIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XWCFYHBHOFBVIV-JWKOBGCHSA-N deacetylcephalosporin C Chemical compound S1CC(CO)=C(C(O)=O)N2C(=O)[C@@H](NC(=O)CCC[C@@H](N)C(O)=O)[C@H]21 XWCFYHBHOFBVIV-JWKOBGCHSA-N 0.000 description 3
- HSHGZXNAXBPPDL-HZGVNTEJSA-N 7beta-aminocephalosporanic acid Chemical compound S1CC(COC(=O)C)=C(C([O-])=O)N2C(=O)[C@@H]([NH3+])[C@@H]12 HSHGZXNAXBPPDL-HZGVNTEJSA-N 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000004470 DL Methionine Substances 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L calcium sulfate Chemical compound [Ca+2].[O-]S([O-])(=O)=O OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N methionine Chemical compound CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 235000006109 methionine Nutrition 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 description 1
- 229940123748 Catalase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- 239000003637 basic solution Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- QYDYPVFESGNLHU-UHFFFAOYSA-N elaidic acid methyl ester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OC QYDYPVFESGNLHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- QYDYPVFESGNLHU-KHPPLWFESA-N methyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC QYDYPVFESGNLHU-KHPPLWFESA-N 0.000 description 1
- 229940073769 methyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0012—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7)
- C12N9/0014—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on the CH-NH2 group of donors (1.4)
- C12N9/0022—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on the CH-NH2 group of donors (1.4) with oxygen as acceptor (1.4.3)
- C12N9/0024—D-Amino acid oxidase (1.4.3.3)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungal isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P35/00—Preparation of compounds having a 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring system, e.g. cephalosporin
- C12P35/06—Cephalosporin C; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Botany (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Cephalosporin Compounds (AREA)
Description
ΑΤ 401 269 Β
Die Erfindung betrifft ein verbessertes enzymatisches Oxidationsverfahren zur Umsetzung von Cephalosporin C in Glutaryl-7-aminocephalosporansäure (nachfolgend Glutaryl-7-ACA genannt) unter Verwendung einer D-Aminosäureoxidase-haltigen Mischung (nachfolgend DAO-haltige Mischung genannt). Insbesondere ist eine Esteraseaktivität in der DAO-haltigen im vorliegenden Verfahren eingesetzten Mischung selektiv reduziert.
Glutaryl-7-ACA ist ein Zwischenprodukt für die Herstellung von 7-Aminocephalosporansäure (nachfolgend 7-ACA genannt) aus Cephalosporin C. Cephalosporin C reagiert mit D-Aminosäureoxidase (nachfolgend DAO genannt), um a-Ketoadipoyl-7-aminocephalosporansäure (nachfolgend a-Ketoadipoyl-7-ACA genannt), das ein thermisch instabiles Zwischenprodukt ist, und Wasserstoffperoxid zu erhalten, worauf das hergestellte e-Ketoadipoyl-7-ACA durch das Wasserstoffperoxid oxidiert wird, um Glutaryl-7-ACA zu erhalten. Zwecks Erzielung einer höheren Ausbeute von Glutaryl-7-ACA wurden verschiedene enzymatische Verfahren zur Konvertierung von Cephalosporin C in Glutaryl-7-ACA unter Verwendung von DAO, das von Trigonopsis variabilis (nachfolgend T. variabilis genannt) abgeleitet ist, entwickelt. So offenbaren z.B. die US-A 3 821 209, die JP-A 35119/1980 und die JP-A 15635/1984 enzymatische Oxidationsverfahren, die in Gegenwart von Katalaseinhibitoren, beispielsweise anorganische Azide und Perborat bzw. im Überschuß von Wasserstoffoxid ausgeführt werden, um die Zersetzung von Wasserstoffperoxid durch Katalase zu vermeiden. Die US-A 3 801 458 offenbart eine enzymatische Oxidation von Cephalosporin C unter Verwendung aktivierter Zellen von T. variabilis mit einem Katalaseinhibitor von Natriumazid, um eine gute Ausbeute von Glutaryl-7-ACA zu erhalten. Die EP-A 409 521 offenbart ein Verfahren zur Inaktivierung von Katalase in Gegenwart DAO durch Behandlung der Enzyme mit einer wässerigen basischen Lösung mit einem pH von ungefähr 11 bis 12 vor der enzymatischen Oxidation von Cephalosporin C zu Glutaryl-7-ACA. Die DE-C 40 28 119 offenbart ein Verfahren zur Herstellung von Glutaryl-7-ACA zu Cephalosporin C unter Anwendung einer kontinuierlichen Umsetzung in Gegenwart eines DAO-haltigen Katalysators.
Diese Verfahren weisen jedoch Nachteile im Hinblick auf eine Verminderung der Ausbeute zufolge der T. variabilis enthaltenden Esterase und eine Qualitätsverschlechterung zufolge Verunreinigungen, wie Katalaseinhibitoren, wenn diese Verfahren in der wirtschaftlichen Praxis in indstriellem Maßstab angewendet werden. Die Esterase ist ein Enzym, das Cephalosporin C, Glutaryl-7-ACA und a-Ketoadipoyl-7-ACA Zwischenprodukt in ihre 3-Desacetylformen konvertiert. Diese Desacetylderivate reduzieren nicht nur die Ausbeute an Glutaryl-7-ACA, sondern verschlechtern auch die Qualität des Glutaryl-7-ACA als Verunreinigungen. Um daher die Ausbeute und Qualität von Glutaryl-7-ACA zu steigern, ist es sehr bedeutsam, die Esteraseaktivität zu inaktivieren oder zu inhibieren.
Die EP-A 409 521 offenbart auch ein Verfahren zur Inaktivierung von Esteraseaktivität durch Behandlung der T. variabilis-Zellen mit Aceton/Wasser, um die Bildung von Desacetyl-Cephalosporin C und Desacetylglutaryl-7-ACA zu verhindern. Das beschriebene Verfahren erfordert jedoch eine komplizierte und schwierige Verfahrensstufe zur Beseitigung des Acetons. Auf diese Weise besteht ein großes Bedürfnis nach einem einfachen und sehr effizienten Verfahren zur Inaktivierung von Esterase, das in industriellem Maßstab anwendbar ist.
Die vorliegende Erfindung betrifft ein verbessertes enzymatisches Oxidationsverfahren zur Umsetzung von Cephalosporin C in Glutaryl-7-ACA, das dadurch gekennzeichnet, daß eine wässerige Lösung von Cephalosporin C mit einer D-Aminosäureoxidase-haltigen Mischung in Kontakt gebracht wird, um Glutaryl-7-aminocephalosporansäure zu produzieren, wobei die D-Aminosäureoxidase-haltige Mischung ein Estera-se/D-Aminosäureoxidaseaktivitätsverhältnis von 5 % oder weniger hat und von einer Trigonopsis variabilis Hefe erhalten wird. Im Verfahren gemäß der vorliegenden Erfindung wird die DAO-haltige Mischung, deren Esteraseaktivität abgesenkt oder inhibiert ist, durch Inkontaktbringen teilweise zerstörter Zellen, permeabili-sierter Zellen oder zellfreier Extrakte von Trigonopsis variabilis mit einer Cu-Verbindung erhalten. Mit dem erfindungsgemäßen Verfahren wird die oben erwähnte DAO-haltige Mischung auch von einem Mutanten erhalten, der 5 % oder weniger Esteraseaktivität, bezogen auf seine DAO-Aktivität aufweist und der durch Behandlung von Trigonopsis variabilis Zellen, die DAO produzieren können, mit ultravioletter Strahlung, Röntgenstrahlung und einem Mutagenreagenz, erhalten wird. Nach dem Verfahren gemäß vorliegender Erfindung können ausgezeichnete Ausbeuten an Glutaryl-7-ACA in hoher Qualität erzielt werden. Das Verfahren gemäß vorliegender Erfindung umfaßt überdies einfache Stufen, so daß es in industriellem Maßstab anwendbar ist.
Die vorliegende Erfindung betrifft ein enzymatisches Oxidationsverfahren zur Umsetzung von Cephalosporin C in Glutaryl-7-ACA unter Verwendung einer DAO-haltigen Mischung, deren Esteraseaktivität höchstens 5 % der DAO-Aktivität ist.
Das gemäß vorliegender Erfindung eingesetzte Cephalosporin C ist eine wässerige Lösung von Cephalosporin C Pulver oder Cephalosporin C Fermentationsbrühen, worin Zellen und Feststoff beseitigt werden. Cephalosporin C wird durch Kultivieren von Achremonium chrysogenum in einem Kulturmedium, 2
AT 401 269 B das 2 % Sucrose, 3 % Maisstärke, 5 % Rübenmolassen, 6 % entfettete Sojabohnen, 3 % Methyloleat, 0,5 % Kalziumkarbonat, 1,25 % Kalziumsulfat und 0,8 % Ammoniumacetat enthält, oder in einem Nährfermentationsmedium für Achremonium chrysogenum erhalten.
Die erfindungsgemäß eingesetzte DAO-haltige Mischung umfaßt teilweise gereinigtes OAO und rohes DAO und weist eine Esteraseaktivität von 5 % oder weniger, bezogen auf die DAO-Aktivität auf. Die DAO-haltige Mischung kann in diversen Formen verwendet werden, wie beispielsweise in Form von teilweise zerstörten Zellen, permeabilisierten Zellen, zellfreien Extrakten und als immobilisiertes Enzym. Von diesen werden permeabilisierte Zellen und zellfreie Extrakte bevorzugt. Sie werden mittels bekannter Methoden erhalten.
Es wird bevorzugt, daß DAO in vorliegender Erfindung von T. variabilis abgeleitet ist. Besonders bevorzugt wird ein Katalase-negativer Mutant, wie der T. variabilis KC-103 Stamm (hinterlegt bei National Institute of Bioscience und Human-Technology, Agency of Industrial Science and Technology unter der Nr. FERM BP-4359), verwendet, um zu vermeiden, daß a-Ketoadipoyl-7-ACA verbleibt.
Gemäß vorliegender Erfindung wird die DAO-haltige Mischung, deren Esteraseaktivität 5 % oder weniger der DAO-Aktivität beträgt, durch Inkontaktbringen teilweise zerstörter Zeilen, permeabilisierter Zellen oder zellfreier Extrakte von Trigonopsis variabilis mit einer Cu-Verbindung erhalten. Die Esteraseaktivität in der DAO-haltigen Mischung wird selektiv reduziert, indem die oben genannten Zellen oder zellfreien Extrakte mit der Cu-Verbindung bei einer Cu- Konzentration von 10 bis 2000 ppm, bezogen auf die Gesamtmenge an wässeriger Lösung oder Suspension der DAO-haltigen Mischung bei 5* bis 25* C für 2 bis 24 h in Kontakt gebracht werden. Um die Esterase zu inaktivieren, ohne jedoch die DAO-Aktivität zu beeinflussen, wird bevorzugt, daß die Konzentration der Cu-Verbindung 10 bis 400 ppm ist. Die Esteraseaktivität kann zur Hälfte oder mehr durch diese Cu- Behandlung reduziert werden. Wenn daher die DAO-haltige Mischung aus dem T.variabilis KC-103 Stamm, der 9,1 % des Aktivitätsverhältnisses von Estera-se/DAO aufweist, erhalten wird, kann das Aktivitätsverhältnis auf 4,5 % oder weniger reduziert werden.
Gemäß vorliegender Erfindung wird die Cu-Verbindung mit einer DAO-haltigen Mischung vor dem enzymatischen Oxidationsverfahren, d.h. bevor Cepahlosporin C zugesetzt wird, in Kontakt gebracht. Die Cu-Verbindung kann aber auch mit der DAO-haltigen Mischung während des enzymatischen Oxidationsverfahrens in Kontakt gebracht werden, d.h. sie wird der Reaktionsmischung zugesetzt, die Cephalosporin C und die DAO-haltige Mischung enthält. Im letztgenannten Fall ist die Konzentration der Cu-Verbindung 10 bis 2000 ppm, bezogen auf die Reaktionsmischung. Ein repräsentatives Beispiel für die in vorliegender Erfindung eingesetzte Cu-Verbindung ist CuSO*.
Gemäß vorliegender Erfindung wird die DAO-haltige Mischung, deren Esteraseaktivität 5 % oder weniger der DAO-Aktivität ist, auch von einem Mutanten erhalten, der 5 % oder weniger Esteraseaktivität, bezogen auf seine DAO-Aktivität aufweist, der durch Behandlung von Trigonopsis variabilis Zellen erhalten wird, die DAO zu produzieren im Stande sind, mit ultravioletter Strahlung, Röntgenstrahlung oder einem Mutagenreagenz.
Ein solcher Mutant wird folgendermaßen erhalten: Ein Mutterstamm, der DAO zu produzieren im Stande ist, wird mit ultravioletter Strahlung, Röntgenstrahlung oder einem Mutagenreagenz, wie N-Methyl-N’-nitro-N-nitrosoganisin (nachfolgend NTG genannt) behandelt, und dann in einem Fermentationsmedium kultiviert. Der eine reduzierte Esteraseaktivität aufweisende Stamm wird durch Messung der Esteraseaktivität selektiert.
Gemäß vorliegender Erfindung wird bevorzugt, daß als Mutterstamm ein Katalase-negativer Mutant verwendet wird, um die Bildung von Nebenprodukten zu vermeiden. Ein repräsentatives Beispiel für einen Mutanten ist der T. variabilis EL-17 Stamm (hinterlegt bei National Institute of Bioscience and Human-Technology, Agency of Industrial Science and Technology unter Nr. FERM BP-4467). Dieser wird erhalten durch Behandlung des T. variabilis KC-103 Stammes (supra) mit NTG. Der Mutant hat 3,0 % der Esteraseaktivität, bezogen auf die DAO-Aktivität.
Die Esteraseaktivität wird auf folgende Weise gemessen: Eine Enzymprobe wird 0,2 M Phosphatpuffer (pH 7,5) zugesetzt, der 2 g/l Glutaryl-7-ACA enthält, und diese Lösung wird bei 25 *C 30 min reagieren gelassen. Methylalkohol wird in gleicher Menge wie die so erhaltene Lösung zugesetzt, um die Reaktion zu stoppen. Die so erhaltene Lösung wird einer HPLC unterworfen, um die Menge an produzierter Desacetyl-Glutaryl-7-ACA und a-Ketoadipoyl-7-ACA zu bestimmen.
Die DAO-Aktivität wird auf folgende Weise gemessen: Eine Enzymprobe wird 0,1 M Phosphatpuffer (pH 7,5) zugesetzt, der 10 g/l Cephalosporin C enthält, und diese Lösung wird bei 25 *C 15 min reagieren gelassen. Methylalkohol wird in gleicher Menge wie die so erhaltene Lösung zugesetzt, um die Reaktion zu stoppen. Die so erhaltene Lösung wird einer HPLC unterworfen, um die Menge an produzierter Glutaryl-7-ACA und a-Ketoadipoyl-7-ACA zu bestimmen. 3
AT 401 269 B
Wenn eine DAO-haltige Mischung mit einer Cu-Verbindung während des Enzymoxidationsverfahrens in Kontakt gebracht wird, wird die Gesamtmenge an Desacetyl-Cephalosporin C und Desacetylglutaryl-7-ACA vor und nach dem Enzymoxidationsverfahren gemessen. Die erhöhte Menge der Desacetyl-Derivate, bezogen auf die Anfangsmenge von Cephalosporin C, wird als Aktivitätsverhältnis von Esterase/DAO bezeichnet.
Die enzymatische Oxidation wird üblicherweise durch Einblasen von Sauerstoff in die Reaktionslösung bei 20 bis 30 *C durchgeführt. Die Reaktionsdauer hängt von der Konzentration von Cephalosporin C, der Menge und Aktivität einer DAO-haltigen Mischung und der Reaktionstemperatur ab. Wenn die Menge an produzierter Glutaryl-7-ACA ein Maximum erreicht hat, das mittels HPLC, TLC od.dgl. nachgewiesen werden kann, kann die Reaktion gestoppt werden. Die Reaktion ist im allgemeinen in 30 min bis 4 h vollständig. Um eine Menge von verbleibendem a-Ketoadipoyl-7-ACAzu reduzieren, kann Wasserstoffperoxid der Reaktionsmischung zugesetzt werden.
Glutaryl-7-ACA wird aus der erhaltenen Reaktionsmischung mittels bekannter Methoden isoliert.
Die vorliegende Erfindung wird detaillierter an Hand der folgenden nicht einschränkenden Beispiele näher erläutert.
Beispiel 1
Der T. variabilis KC-103 Stamm (FERM BP-4359) wird in einem Medium, das 2 % Glucose, 2 % Maisquellflüssigkeit und 0,2 % DL-Methionin enthält, bei 25’C 60 h gezüchtet. 0,3 ml Toluol werden zu 60 ml Fermentationsbrühe, die 6 g Naß-Zellen enthält, zugesetzt, worauf bei 25’C 2 h zur Permeabilisierung der Zellen gemischt wird. 23,6 mg CuS04.5H20 werden zur erhaltenen Fermentationsbrühe der permeabilisierten Zellen zugesetzt und bei Zimmertemperatur 2 h stehen gelassen. Eine entsprechende Menge einer Enzymprobe von der Cu-haltigen Fermentationsbrühe wird zu 0,2 M Kaliumphosphatpuffer (pH 7,5), der 2 g/l Glutaryl-7-ACA enthält, zugesetzt. Die Reaktion wird bei 25‘C 30 min lang ausgeführt und durch Zusetzen von Methylalkohol in der gleichen Menge wie die Reaktionsmischung gestoppt und dann der HPLC unterworfen. In der Reaktion produziertes Desacetylglutaryl-7-ACA wird nicht gefunden, was aussagt, daß die Esterase in der Enzymprobe ausreichend inaktiviert ist. 10 g Cephalosporin C-Pulver wird in 1000 ml Wasser gelöst und der pH-Wert wird auf pH 7,5 eingestellt. Die erhaltene Cephalosporin-C-Lösung wird mit der oben erhaltenen Cu-haltigen Brühe vermischt und bei 20 *C 180 min lang unter Einblasen von Sauerstoff in die Reaktionsmischung reagieren gelassen. Die Ausbeute an Glutaryl-7-ACA ist 93,2 %.
Beispiel 2
Eine Fermentationsbrühe der permeabilisierten Zellen des T. variabilis KC-103 Stammes, dessen Esteraseaktivität inaktiviert wird, wird mittels des gleichen Verfahrens, wie in Beispiel 1 beschrieben, erhalten.
Eine A. chrysogenum Fermentationsbrühe, die 8,5 g/l Cephalosporin C enthält, wird auf pH 2,5 eingestellt, worauf die Zellen hieraus entfernt werden. Der pH-Wert der Brühe wird auf 7,5 eingestellt. 1200 ml der erhaltenen Brühe werden mit 60 ml der oben erhaltenen T. variabilis Fermentationsbrühe vermischt. Die Reaktion wird bei 20 * C ungefähr 240 min unter Einblasen von Sauerstoff in die Reaktionsmischung und kontinuierlichem Zuführen von 23,9 ml 3,5 %-igen Wasserstoffperoxid zur Reaktionsmischung durchgeführt. Die Ausbeute an Glutaryl-7-ACA ist 92,8 %.
Beispiel 3
Eine Fermentationsbrühe der permeabilisierten Zellen des T. variabilis KC-103 Stammes wird auf gleiche Weise, wie in Beispiel 1 beschrieben, erhalten. 10 g Cephalosporin C-Pulver wird in 1000 ml Wasser gelöst, und der pH-Wert wird auf pH 7,5 eingestellt. Die erhaltene Cephalosporin C-Lösung wird mit 60 ml der oben erhaltenen T. variabilis Fermentationsbrühe vermischt. Dann werden der erhaltenen Mischung 0,5 g CuS0t.5H20 zugesetzt. Die Reaktion wird bei 20 *C etwa 180 min lang durchgeführt, während Sauerstoff in die Reaktionsmischung eingeblasen wird. Die Ausbeute an Glutaryl-7-ACA ist 92,2 %. Die erhöhte Gesamtmenge an Desacetyl Cephalosporin C und Desacetylglutaryl-7-ACA beträgt 1 % oder weniger, bezogen auf die Menge von Cephalosporin C. 4
AT 401 269 B
Beispiel 4
Eine Fermentationsbrühe der permeabilisierten Zellen des T. variabilis KC-103 Stammes wird mittels des gleichen Verfahrens, wie in Beispiel 1 beschrieben, erhalten. 60 ml der T. variabilis Fermentationsbrühe und 1200 ml der Cephalosporin C enthaltenden A. chrysogenum Fermentationsbrühe, die mittels des gleichen Verfahrens, wie in Beispiel 2 beschrieben, erhalten wurde, werden vermischt. 0,5 g CuSO« .5H2 O werden der erhaltenen Mischung zugesetzt, und es wird bei 20 * C ungefähr 240 min reagieren gelassen, während Sauerstoff eingeblasen wird und 23,9 ml 3,5 %-iges Wasserstoffperoxid kontinuierlich der Reaktionsmischung zugesetzt werden. Oie Ausbeute an Glutaryl-7-ACA ist 92,0 %. Oie erhöhte Gesamtmenge an Desacetyl-Cephalosporin C und Desacetylglutaryl-7-ACA ist 1 % oder weniger, bezogen auf die Cephalosporin C-Menge.
Beispiel 5 400 ml einer T. variabilis Fermentationsbrühe, die 40 g Naß-Zellen enthält, wird mittels des gleichen Verfahrens, wie in Beispiel 1 beschrieben, erhalten und mit 2,0 ml Toluol auf die gleiche Weise, wie in Beispiel 1 beschrieben, behandelt. 157,3 mg CuS0*.5H20 werden der oben erhaltenen Brühe zugesetzt, und die erhaltene Mischung wird 2 h bei Zimmertemperatur stehen gelassen. Die Esteraseaktivität einer Enzymprobe von der erhaltenen Cu-haltigen Brühe wird mittels des gleichen Verfahrens, wie in Beispiel 1 beschrieben, gemessen. Die Esterase in der Enzymprobe war ausreichend inaktiviert. 10 g Cephalosporin C-Pulver wird in 1000 ml Wasser gelöst und der pH-Wert wird auf pH 7,5 eingestellt. Die erhaltene Lösung wird mit 400 ml der oben erhaltenen T. variabilis Fermentationsbrühe gemischt. Die Reaktion wird bei 20 · C ungefähr 30 min unter Einblasen von Sauerstoff in die Reaktionsmischung durchgeführt. Die Ausbeute an Glutaryl-7-ACA ist 99,0 %.
Beispiel 6 400 ml einer Fermentationsbrühe der permeabilisierten Zellen des T. variabilis KC-103 Stammes, erhalten mittels des gleichen Verfahrens, wie in Beispiel 1 beschrieben, und 1000 ml wässerige Cephalosporin C-Lösung, erhalten mittels des gleichen Verfahrens, wie in Beispiel 1 beschrieben, werden vermischt. 0,66 g CuS04.5H20 werden der oben erhaltenen Reaktionsmischung zugesetzt und die Reaktion wird bei 20 *C ungefähr 30 min lang durchgeführt, während Sauerstoff in die Reaktionsmischung eingeblasen wird.
Die Ausbeute an Glutaryl-7-ACA ist 98,1 %. Die erhöhte Gesamtmenge an Desacetyl-Cephalosporin C und Desacetylglutaryl-7-ACA ist 1 % oder weniger, bezogen auf die Menge Cephalosporin C.
Beispiel 7
Der T. variabilis EL-17 Stamm (FERM BP-4467) wird in einem Medium, das 2 % Glucose, 2 % Maisquellflüssigkeit und 0,2 % DL-Methionin enthält, bei 25* C in 60 h gezüchtet. 0,2 ml Toluol werden zu 25 ml Fermentationsbrühe, die 2,5 g Naßzellen hat. zugesetzt, und es wird bei 25 *C 2 h zur Permeabilisie-rung der Zellen gemischt.
Eine geeignete Menge an Enzymprobe von der Fermentationsbrühe wird zu 0,2 M Kaliumphosphatpuffer (pH 7,5), enthaltend 2 g/l Glutaryl-7-ACA, zugesetzt und bei 25 *C 30 min reagieren gelassen. Die Reaktion wird durch Zugabe von Methylalkohol in der gleichen Menge wie die Reaktionsmischung gestoppt und dann der HPLC unterworfen. Das Verhältnis der Esteraseaktivität zur DAO-Aktivität wird auf ein Drittel von derjenigen des Mutterstammes, d.h. 3,0% vermindert. 10 g Cephalosporin C-Pulver wird in 1000 ml Wasser gelöst, und der pH-Wert wird auf pH 7,5 eingestellt. Die erhaltene Cephalosporin C-Lösung wird mit der oben erhaltenen Fermentationsbrühe permeabilisierter Zellen vermischt, und die Mischung wird bei 20 *C ungefähr 180 min unter Einblasen von Sauerstoff in die Reaktionsmischung reagieren gelassen. Die Ausbeute an Glutaryl-7-ACA ist 92,6 %.
Beispiel 8
Eine Fermentationsbrühe der permeabilisierten Zellen des T. variabilis EL-17 Stammes werden mittels des gleichen Verfahrens, wie im Beispiel 7 beschrieben, erhalten. 5
Claims (11)
- AT 401 269 B Eine 9 g/l Cephalosporin C enthaltende A. chrysogenum Fermentationsbrühe wird auf pH 2,5 eingestellt, und dann werden die Zellen hieraus beseitigt. Der pH-Wert wird mit 6N NaOH auf pH 7,5 eingestellt. 6 m3 der erhaltenen Brühe werden mit 60 I der oben erhaltenen T. variabilis Fermentationsbrühe vermischt. Während Sauerstoff in die Reaktionsmischung eingeblasen wird und 13 I 35 %-iges Wasserstoffperoxid kontinuierlich der Reaktionsmischung zugesetzt werden, wird die Reaktion bei 20 * C ungefähr 220 min lang durchgeführt. Die Ausbeute an Glutaryl-7-ACA ist 92,2 %. Beispiel 9 125 ml einer Fermentationsbrühe der permeabilisierten Zellen des T. variabilis EL-17 Stammes, erhalten mittels des gleichen Verfahrens, wie in Beispiel 7 beschrieben, und 1000 ml wässerige Cephalosporin C-Lösung, erhalten mittels des gleichen Verfahrens, wie in Beispiel 1 beschrieben, werden vermischt. Die Mischung wird dann bei 20 *C ungefähr 30 min unter Einblasen von Sauerstoff in die Reaktionsmischung reagieren gelassen. Die Ausbeute an Glutaryl-7-ACA ist 96,2 %. Vergleichsbeispiel 60 ml einer Fermentationsbrühe permeabilisierter Zellen des T. variabilis KC-103 Stammes, erhalten auf die gleiche Weise, wie in Beispiel 1 beschrieben, und 1000 ml einer wässerigen Cephalosporin C-Lösung, erhalten mittels des gleichen Verfahrens, wie in Beispiel 1 beschrieben, werden vermischt. Die Mischung wird dann bei 20 *C ungefähr 180 min unter Einblasen von Sauerstoff in die Reaktionsmischung reagieren gelassen. Die Ausbeute an Glutaryl-7-ACA ist 83,0 %. Patentansprüche 1. Enzymatisches Oxidationsverfahren zur Umsetzung von Cephalosporin C in Glutaryl-7-aminocephalospor-ansäure, dadurch gekennzeichnet, daß eine wässerige Lösung von Cephalosporin C mit einer D-Aminosäureoxidase-haltigen Mischung in Kontakt gebracht wird, um Glutaryl-7-aminocephalosporansäure zu produzieren, wobei die D-Aminosäureoxidase-haltige Mischung ein Esterase/D-Aminosäureoxidaseaktivitäts-verhältnis von 5 % oder weniger hat und von einer Trigonopsis variabilis Hefe erhalten wird.
- 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die D-Aminosäureoxidase-haltige Mischung durch Inkontaktbringen teilweise zerstörter Zellen, permeabilisierter Zellen oder zellfreier Extrakte von Trigonopsis variabilis mit Cu-Verbindungen erhalten wird.
- 3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die D-Aminosäureoxidase-haltige Mischung durch Inkontaktbringen teilweise zerstörter Zellen, permeabilisierter Zellen oder zellfreier Extrakte von Trigonopsis variabilis mit einer Cu-Verbindung bei einer Cu-Konzentration im Bereich von 10 bis 2000 ppm erhalten wird.
- 4. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß die D-Aminosäureoxidase-haltige Mischung mit den Cu-Verbindungen vor oder während des enzymatischen Oxidationsverfahrens in Kontakt gebracht wird.
- 5. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die D-Aminoäureoxidase-haltige Mischung von einem Mutanten von Trigonopsis variabilis, der 5 % oder weniger Esteraseaktivität, bezogen auf seine DAO-Aktivität aufweist, erhalten wird, der durch Behandlung von Trigonopsis variabilis Zellen mit UV-Strahlung, Röntgenstrahlung oder einem Mutagenreagenz erhalten wird.
- 6. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß die D-Aminosäureoxidase-haltige Mischung teilweise aus zerstörten Zellen, permeabilisierten Zellen, hieraus erhaltenen zellfreien Extrakten oder immobilisiertem Enzym gebildet ist.
- 8. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß der Mutant der Trigonopsis variabilis EL-17 Stamm, FERM BP-4467, ist.
- 9. Trigonopsis variabilis EL-17 Stamm, FERM BP-4467.
- 10. Verfahren zur Inaktivierung von Esterase in einer D-Aminosäureoxidase-Mischung, dadurch gekennzeichnet, daß die D-Aminosäureoxidase-Mischung mit einer Cu-Verbindung in Kontakt gebracht wird.
- 11. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß die D-Aminosäureoxidase-Mischung von einem Katalase-negativen Mutanten von Trigonopsis variabilis erhalten wird.
- 12. Verfahren nach Anspruch 2. dadurch gekennzeichnet, daß die D-Aminosäureoxidase-Mischung von dem Trigonopsis variabilis Stamm KC-103, FERM BP-4359, erhalten wird. 6
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7072793 | 1993-03-08 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ATA47694A ATA47694A (de) | 1995-12-15 |
| AT401269B true AT401269B (de) | 1996-07-25 |
Family
ID=13439867
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| AT0047694A AT401269B (de) | 1993-03-08 | 1994-03-07 | Enzymatisches oxidationsverfahren zur umsetzung von cephalosporin c in glutaryl-7- aminocephalosporansäure |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06315396A (de) |
| AT (1) | AT401269B (de) |
| DE (1) | DE4407699C2 (de) |
| ES (1) | ES2097080B1 (de) |
| FR (1) | FR2702493B1 (de) |
| GB (1) | GB2275925B (de) |
| IT (1) | IT1269301B (de) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20030076721A (ko) | 1997-09-09 | 2003-09-26 | 바이오케미 게젤샤프트 엠베하 | 무 에스테라제 효소 |
| CN111698981A (zh) | 2019-01-15 | 2020-09-22 | 宝洁公司 | 柔性且可溶解的固体片材制品 |
| KR20230110833A (ko) | 2019-01-15 | 2023-07-25 | 더 프록터 앤드 갬블 캄파니 | 개구 또는 구멍을 갖는 다층 용해성 고체 물품 |
| WO2020147010A1 (en) | 2019-01-15 | 2020-07-23 | The Procter & Gamble Company | Multilayer dissolvable solid article with specific aspect ratio |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4028119C1 (de) * | 1990-09-05 | 1991-12-05 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt, De |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1272769A (en) * | 1968-08-02 | 1972-05-03 | Glaxo Lab Ltd | Improvements in or relating to cephalosporin derivatives |
| GB1385685A (en) * | 1971-04-21 | 1975-02-26 | Glaxo Lab Ltd | Cephalosporin derivatives |
| WO1990012110A1 (en) * | 1989-04-04 | 1990-10-18 | Biopure Corporation | Enzymatic production of 7-amino cephalosporanic acid |
| ES2079442T3 (es) * | 1989-07-19 | 1996-01-16 | Lilly Co Eli | Oxidacion enzimatica mejorada de cef c a acido glutaril-7-amino-cefalosporanico. |
| IT1252308B (it) * | 1990-12-21 | 1995-06-08 | Antibioticos Spa | Procedimento enzimatico per la produzione di acido 7- amminocefalosporanico e derivati |
| CA2100987C (en) * | 1992-07-27 | 1999-06-15 | Kaoru Furuya | A transformant capable of producing d-amino acid oxidase |
-
1994
- 1994-03-03 GB GB9404103A patent/GB2275925B/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-03-03 ES ES09400434A patent/ES2097080B1/es not_active Expired - Fee Related
- 1994-03-04 JP JP6058297A patent/JPH06315396A/ja not_active Withdrawn
- 1994-03-07 AT AT0047694A patent/AT401269B/de not_active IP Right Cessation
- 1994-03-07 FR FR9402599A patent/FR2702493B1/fr not_active Expired - Fee Related
- 1994-03-08 IT ITMI940418A patent/IT1269301B/it active IP Right Grant
- 1994-03-08 DE DE4407699A patent/DE4407699C2/de not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4028119C1 (de) * | 1990-09-05 | 1991-12-05 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt, De |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IT1269301B (it) | 1997-03-26 |
| ATA47694A (de) | 1995-12-15 |
| FR2702493B1 (fr) | 1996-02-02 |
| JPH06315396A (ja) | 1994-11-15 |
| ES2097080B1 (es) | 1997-11-16 |
| GB2275925B (en) | 1996-08-14 |
| ITMI940418A1 (it) | 1995-09-08 |
| ITMI940418A0 (it) | 1994-03-08 |
| FR2702493A1 (fr) | 1994-09-16 |
| DE4407699A1 (de) | 1994-09-15 |
| GB2275925A (en) | 1994-09-14 |
| ES2097080A1 (es) | 1997-03-16 |
| GB9404103D0 (en) | 1994-04-20 |
| DE4407699C2 (de) | 2003-12-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE3123975C2 (de) | ||
| DE3424440C2 (de) | ||
| DE69019967T2 (de) | Enzymatisches verfahren zur herstellung von 7-aminocephalosporansäure. | |
| DE2343587A1 (de) | Verfahren zur herstellung von 2-ketol-gulonsaeure | |
| DE2631048C3 (de) | Verfahren zur Herstellung von D-Phenylglycin | |
| DE69022963T2 (de) | Verfahren zur herstellung von d-pantolacton. | |
| AT401269B (de) | Enzymatisches oxidationsverfahren zur umsetzung von cephalosporin c in glutaryl-7- aminocephalosporansäure | |
| DE2163791A1 (de) | Verfahren zur Herstellung von 7-Amino-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure und ihrer Ester | |
| DE69022909T2 (de) | Enzymatische Oxidation von Ceph C zu Glutaryl-7-Aminocephalosporansäure. | |
| DE3027380C2 (de) | ||
| DE3882255T2 (de) | Ein-Schritt-enzymatische Konversion von Cephalosporin C und seiner Derivate in 7-Aminocephalosporinsäure und Derivate. | |
| DE2923794A1 (de) | Verfahren zum abbau von cyanursaeure | |
| DE2527068A1 (de) | Verfahren zur herstellung von cholesterinesterase | |
| DE69131286T2 (de) | L-Gulono-Gamma-Lacton Dehydrogenase | |
| DE2619311A1 (de) | Verfahren zur herstellung von l(+)weinsaeure | |
| EP0040430B1 (de) | Verfahren zur Gewinnung von Glucosedehydrogenase und hierfür geeignete Mikroorganismen | |
| CH658670A5 (de) | Verfahren zur erzeugung von l-phenylalanin unter wiederverwendung von phenylalanin-ammoniumhydroxid-lyase. | |
| DE3724722A1 (de) | Verbessertes verfahren zur enzymatischen herstellung von l-2-amino-4-methylphosphinobuttersaeure | |
| EP0661382B1 (de) | Mikrobielles Verfahren zur Herstellung von Dihydroxyaceton | |
| DE3025424C2 (de) | Verfahren zur Herstellung von Galactoseoxidase | |
| DE3036413C2 (de) | Aerobes mikrobiologisches Verfahren zur Herstellung von 2,5-Diketogluconsäure | |
| AT408448B (de) | Enzymatisches oxydationsverfahren zur umsetzung von cephalosporin c in glutaryl-7-aminocephalosporansäure | |
| DE2600589A1 (de) | Verfahren zur herstellung von weinsaeure | |
| DE2933646A1 (de) | Verfahren zur gewinnung von cholesterinesterase | |
| DE3510963C2 (de) | Verfahren zur Herstellung eines Coenzyms in reduzierter Form |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EIH | Change in the person of patent owner | ||
| MM01 | Lapse because of not paying annual fees |
Effective date: 20121215 |