AT221225B - Verfahren zur Herstellung von hoch gereinigten Kallikrein-Präparaten - Google Patents

Description

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  Verfahren zur Herstellung von hoch gereinigten Kallikrein-Präparaten 
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 haben eine spezifische Aktivität von 89 y Protein/KE. 25 g   DEAE-Zellulose   Trockenmasse werden in der Hydrochloridform mit m/100 Phosphatpuffer PH 7, 0 vorbehandelt und in die Kallikreinlösung eingerührt. 



  Nach einigem Stehen wird die Zellulose abzentrifugiert und viermal mit je 200   m1   Puffer gewaschen. Die Elution mit   5%iger NaCI-Lösung   in m/20 Phosphatpuffer pH 7,0 erfolgt in drei Fraktionen. 
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  Fraktion <SEP> ml <SEP> KE/ml <SEP> mg <SEP> Prot/ml <SEP> Prot/KE <SEP> Gesamt-KE <SEP> x-fache <SEP> Reinig.
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  1 <SEP> 95 <SEP> 150 <SEP> 3, <SEP> 53 <SEP> 23,6 <SEP> 14250 <SEP> 3, <SEP> 8 <SEP> 
<tb> 2 <SEP> 100 <SEP> 53 <SEP> 0, <SEP> 85 <SEP> 16 <SEP> 5300 <SEP> 5, <SEP> 6 <SEP> 
<tb> 3 <SEP> 100 <SEP> 30 <SEP> 0, <SEP> 30 <SEP> 10 <SEP> 3000 <SEP> 8, <SEP> 9 <SEP> 
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 Ausbeute : 99% 
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 auf einer Glasfritte mit geringem Unterdruck abgesaugt. Die Zellulose wird zuerst mit   200 ml Puffer ge-   waschen und dann mit 0,4%iger NaCl-Lösung in m/100 Phosphatpuffer PH 7,0 solange eluiert. bisder Proteingehalt im Durchlauf mindestens unter   10'yProtein/ml ab sinkt.   Dabei werden ungefähr   75tao   des aufgezogenen Proteins ohne Kallikreinverlust ausgewaschen. Zur Elution wird mit   5% iger NaCl-Lösung   in m/20 Phosphatpuffer PH   7, 0 gewaschen.   
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  Extrakt <SEP> ml <SEP> KE/ml <SEP> mg <SEP> Prot/ml <SEP> Prot/KE <SEP> Gesamt-KE <SEP> x-fache <SEP> Reinig.
<tb> 



  1 <SEP> 80 <SEP> 207. <SEP> 2, <SEP> 475 <SEP> 12 <SEP> 16560 <SEP> 4, <SEP> 8 <SEP> 
<tb> 2 <SEP> 45 <SEP> 69 <SEP> 0, <SEP> 511 <SEP> 7, <SEP> 4 <SEP> 3100 <SEP> 7,8
<tb> 
   Ausbeute : 92, 60/0    
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 sung wird mit zirka 2 ml/min aufgezogen, anfangs mit Puffer gewaschen und dann mit 0, 510iger NaClLösung in m/100 Phosphatpuffer PH 7, 0 solange eluiert, bis der Durchlauf unter   10y Protein/mlliegt.   



  Dabei werden zirka   80%   des aufgezogenenProteins ohne Kallikreinverlust ausgewaschen. Zur Elution wird mit   5%iger NaCl-Lösung   in m/20 Phosphatpuffer pH 7,0 gewaschen. 
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<tb> 
<tb> 



  Fraktion <SEP> ml <SEP> KE/ml <SEP> mg <SEP> Prot/ml <SEP> Prot/KE <SEP> Gesamt-KE <SEP> x-fache <SEP> Reinig.
<tb> 



  1 <SEP> 13 <SEP> 800 <SEP> 8, <SEP> 25 <SEP> 10, <SEP> 3 <SEP> 10400 <SEP> 5, <SEP> 5 <SEP> 
<tb> 2 <SEP> 14 <SEP> 350 <SEP> 1, <SEP> 51 <SEP> 4, <SEP> 3' <SEP> 4900 <SEP> 13, <SEP> 2 <SEP> 
<tb> 3 <SEP> 50'50 <SEP> 0. <SEP> 31 <SEP> 6, <SEP> 2 <SEP> 2500 <SEP> 9, <SEP> 2
<tb> 
 
Ausbeute : 85% 
Eine Gradientenelution mit einer NaCI-Lösung steigender Konzentration ergibt Kallikrein-Präparate mit 2-3 yProtein/KE. 

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Claims (1)

1. PATENTANSPRÜCHE : 1. Verfahren zur Herstellung von hoch gereinigten Kallikrein-Präparaten, dadurch gekennzeichnet, dass man Kallikrein aus seinen Lösungen an basisch substituierte Zellulosen adsorbiert, das Adsorbatmit <Desc/Clms Page number 3> einer stark verdünnten, gepufferten Elektrolytlösung vom pH-Wert etwa 7, solange wäscht, bis ein nahezu eiweissfreies Filtrat erhalten wird, und den Wirkstoff aus dem Adsorbat mit einer mindestens 1% i n Elektrolytlösung eluiert.

   2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass Diäthylaminoäthyl-Zellulose (DEAEZellulose) als Adsorptionsmittel verwendet wird.

   3. Verfahren nach Anspruch l, dadurch gekennzeichnet, dass Triäthylaminoäthyl-Zellulose (TEAEZellulose) als Adsorptionsmittel verwendet wird.