WO2022092472A1 - 코팅 프로바이오틱스 및 이를 포함하는 식품 조성물, 이의 제조방법 - Google Patents

코팅 프로바이오틱스 및 이를 포함하는 식품 조성물, 이의 제조방법 Download PDF

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WO2022092472A1
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probiotics
coating
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aloe vera
phospholipids
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정승희
허건
심재중
이정열
심재헌
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주식회사 에치와이
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Definitions

  • the present invention relates to coated probiotics with improved acid resistance, bile resistance, gastrointestinal viability, refrigeration and room temperature storage stability, and a food composition comprising the same, and a method for preparing the same by using milk-derived phospholipids and aloe vera gel as coating materials.
  • Lactic acid bacteria also called lactic acid bacteria
  • Lactobacillus are Gram-positive bacteria that produce lactic acid by decomposing sugars such as glucose, and are found in the digestive tract, oral cavity, and vagina of humans or mammals. Lactobacillus is one of the most widely used microorganisms for the longest time by centuries. It does not produce substances harmful to the intestines of humans or animals and prevents abnormal fermentation by harmful bacteria in the intestines, so it is also usefully used as a bowel preparation.
  • probiotics are live bacteria that enter the body and give good health effects, and most probiotics known to date include lactic acid bacteria.
  • human intestinal microbes, including probiotics have an important impact on human health, consumers' awareness of probiotics has expanded further, and the demand for probiotic products is increasing accordingly.
  • 11 Lactobacillus species currently registered by the Ministry of Food and Drug Safety L. acidophilus , L. casei , L. gasseri , L. delbruekii subsp. bulgaricus , L. helveticus , L. fermentum , L. paracasei , L. plantarum , L. reuteri , L rhamnosus , L.
  • probiotics in addition to the function of suppressing harmful bacteria, proliferating lactic acid bacteria, and helping bowel movements smoothly, probiotics have various effects such as intestinal function, irritable bowel syndrome, atopy, constipation, and female diseases.
  • these probiotics also do not exhibit the original functionality of probiotics as the cell membrane is damaged by gastric and bile acids when injected into the body because the bacteria themselves are composed of proteins.
  • An object of the present invention is to provide a coated probiotic with improved acid resistance, bile resistance, gastrointestinal viability, and stability at refrigeration and room temperature storage.
  • Another object of the present invention is to provide a food composition comprising the coated probiotics.
  • Another object of the present invention is to provide a method for producing the coated probiotics.
  • the present inventors studied a new probiotic stability improvement technology that is economical and does not require high-level technology and expensive equipment to solve conventional problems such as the use of expensive coating agents and complex processes, and the use of high-concentration probiotics.
  • the present invention was completed by developing novel coated probiotics containing phospholipids and Aloe vera gel.
  • One aspect of the present invention is probiotics; and a coating material comprising a milk-derived phospholipid and Aloe vera gel.
  • probiotics means live bacteria that enter the body and give good health effects, and in a broader sense, include dead bacteria.
  • the probiotics are Lactobacillus strains, Lactococcus strains, Enterococcus strains and Streptococcus strains and Bifidobacterium strains ( Bifidobacterium ) It may be one or more selected from the group consisting of strains.
  • the probiotics are Lactobacillus acidophilus ( Lactobacillus acidophilus ), Lactobacillus casei ( Lactobacillus casei ), Lactobacillus gasseri ( Lactobacillus gasseri ), Lactobacillus del Burki Bulgaricus ( Lactobacillus brueckii brueckii brueckii ).
  • Lactobacillus helveticus Lactobacillus helveticus
  • Lactobacillus fermentum Lactobacillus fermentum
  • Lactobacillus paracasei Lactobacillus paracasei
  • Lactobacillus plantarum Lactobacillus plantarum
  • Lactobacillus reuteri Lactobacillus plantarum
  • Lactobacillus reuteri Rhamnosus Lactobacillus rhamnosus
  • Lactobacillus salivarius Lactococcus lactis ( Lactococcus lactis ), Enterococcus faecium ( Enterococcus faecium ), Enterococcus faecalis, Enterococcus faecalis ( Enterocococcus ) thermophilus ), Bifidobacterium bifidum , Bifidobacterium breve , Bifidobacterium longum
  • Coating as used in the present invention means protecting the surface of probiotics or probiotics from the external environment by covering the surface of probiotics with a coating material.
  • the coating method can be largely divided into a physical vapor deposition method and a chemical vapor deposition method, and coating methods and conditions known in the art according to probiotics, coating materials, etc. may be applied without limitation.
  • the coating material may be used without limitation as long as it is a material capable of imparting acid resistance, bile resistance, gastrointestinal tract viability, refrigeration and room temperature storage stability, etc. to probiotics, for example, phospholipids, polysaccharides, proteins, etc. it is not
  • the coating material may be made of milk-derived phospholipids and aloe vera gel.
  • the milk-derived phospholipids are phospholipids extracted from milk fat, such as phosphatidylcholine (PC), phosphatidylethanolamine (PE), phosphatidylinositol (PI), phosphatidic acid (PA), phosphatidylserine (Phosphatidylserine, PA), PS), sphingomyelin (SPM), and the like, and in particular, it is characterized in that it contains a large amount of phosphatidylserine and sphingomyelin, which are contained in trace amounts in soybean-derived phospholipids, egg yolk-derived phospholipids, and fish-derived phospholipids (Table 3). reference). Since the phosphatidylserine can withstand up to pH 2, it has excellent acid resistance, and the sphingomyelin improves the stability of the phospholipid bilayer. there is.
  • PC phosphatidylcholine
  • PE phosphatidylethanolamine
  • the milk-derived phospholipids are phosphatidylserine 5% or more, preferably 5-20% and sphingomyelin 20% or more, preferably 20-30% based on the total weight.
  • the probiotics coated with milk-derived phospholipids are soybean-derived phospholipids or egg yolk. It was confirmed that the survival rate was maintained high under the harsh conditions of 45 °C and the digestive tract conditions compared to the probiotics coated with the derived phospholipids.
  • the aloe vera gel is a gel separated from Aloe vera and contains various vitamins, minerals, enzymes, fatty acids, polysaccharides, etc., and is known to have different components from aloe whole leaf.
  • Types of edible aloe include aloe vera, aloe arborescens , and aloe saponaria Haw., but aloe gel is known to be obtained only from aloe vera with large leaves. This aloe vera gel is known to be particularly effective in preserving and improving the storage period of food, so it is mainly used as a food additive.
  • the aloe vera gel contains 30 mg/g or more, preferably 30 to 300 mg/g of polysaccharide in solid content, and 0.005% or less of anthraquinone-based compound (as barbaroin anhydrous) , preferably containing 0.005 to 0.0005%.
  • probiotics maintained a higher survival rate under severe conditions at 45°C compared to probiotics coated with whole aloe vera leaves, xanthan gum, locust bean gum, or gum arabic.
  • the coating material may be a mixture of aloe vera gel and milk-derived phospholipids in a weight ratio of 1:0.1 to 2.
  • the mixing ratio of aloe vera gel and milk-derived phospholipids is 1: 0.1 to 2, 1: 0.1 to 1.5, 1: 0.1 to 1, 1: 0.1 to 0.5, 1: 0.5 to 2, 1: 0.5 to 1.5. , 1: 0.5 to 1, 1:1 to 2, 1:1 to 1.5, 1: 1.5 to 2, or 1:1 by weight, and to improve the stability of probiotics, aloe vera gel and milk-derived phospholipids are mixed with 1 : It is preferable to mix and use in a weight ratio of 1.
  • the coating probiotics may include 30 to 99 parts by weight of probiotics and 0.005 to 5 parts by weight of the coating material.
  • the coating material is less than 0.005 parts by weight, the surface of probiotics or probiotics cannot be sufficiently coated, and thus the stability of probiotics cannot be expected to be improved. , diarrhea, inflammation, and other side effects may occur.
  • the probiotics complexly coated with milk-derived phospholipids and aloe vera gel are either milk-derived phospholipids or It was confirmed that the survival rate was maintained high in the digestive tract conditions, refrigeration, room temperature, and accelerated conditions compared to probiotics coated with Aloe vera gel alone.
  • the survival rate of probiotics complex coated with milk-derived phospholipids and aloe vera gel as a coating material is increased compared to probiotics before coating, for example, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, or 50% or more.
  • coated probiotics can be dried at a temperature of -10°C or lower through a freeze-drying process and then powdered to extend the storage period.
  • the coated probiotics may further include a cryoprotectant.
  • the cryoprotectant may use any component of the cryoprotectant known in the art without limitation, for example, powdered skim milk, fructooligosaccharide, trihalose, maltodextrin, glycerin, etc. , but is not limited thereto.
  • the coating probiotics including the probiotics, the coating material and the cryoprotectant may include 0.1 to 10 parts by weight of the coating material based on 100 parts by weight of the cryoprotectant.
  • the coating material is 0.1 to 10 parts by weight, 0.1 to 5 parts by weight, 0.1 to 1 parts by weight, 0.1 to 0.5 parts by weight, 0.5 to 10 parts by weight, 0.5 to 5 parts by weight, based on 100 parts by weight of the cryoprotectant; It may be 0.5 to 1 parts by weight, 1 to 10 parts by weight, 1 to 5 parts by weight, or 5 to 10 parts by weight.
  • the probiotics, the coating probiotics including the coating material and the cryoprotectant may include 30 to 99 parts by weight of the probiotics, and 1 to 70 parts by weight of the mixture containing the cryoprotectant and the coating material. .
  • the mixture containing the cryoprotectant and the coating material is less than 1 part by weight, stability against the freezing and storage conditions of the probiotic cannot be expected, and if it exceeds 70 parts by weight, the intestinal settlement and proliferation of the probiotic is inhibited or digested Side effects such as gastrointestinal spasm and pain, indigestion, diarrhea, and inflammation may occur by putting a burden on the organs.
  • another aspect of the present invention provides a food composition comprising the coating probiotics.
  • the food composition may be used as food, food additive, beverage, beverage additive, fermented milk, health functional food, and the like.
  • various foods fermented milk, meat, beverage, chocolate, snack, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gum, ice cream, alcoholic beverage, vitamin It may be provided as a combination drug, alcoholic beverage or other health functional food formulation, but is not limited thereto.
  • the food composition is preferably at least one selected from the group consisting of fermented milk, functional beverage and health functional food.
  • the food composition according to the present invention may include, as an active ingredient, ingredients commonly added during food production, in addition to coating biotics, for example, proteins, carbohydrates, fats, nutrients, seasonings and flavoring agents.
  • carbohydrates include monosaccharides (eg, glucose, fructose, etc.), disaccharides (eg, maltose, sucrose, oligosaccharides, etc.) and polysaccharides (eg, dextrin, cyclodextrin, etc.) It may be a conventional sugar such as, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, erythritol.
  • flavoring agents natural flavoring agents [taumatine, stevia extract (eg, rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.)] and synthetic flavoring agents (eg, saccharin, aspartame, etc.) can be used.
  • natural flavoring agents eg, stevia extract (eg, rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.)
  • synthetic flavoring agents eg, saccharin, aspartame, etc.
  • the food composition of the present invention includes various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), flavoring agents such as synthetic and natural flavoring agents, coloring agents and thickeners (cheese, chocolate, etc.), pectic acid and its salts, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonation agents used in carbonated beverages, and the like.
  • these components may be used independently or in combination, and the ratio of these additives may be selected from 0 to about 20 parts by weight per 100 parts by weight of the food composition of the present invention, but is not limited thereto.
  • the method for preparing the coated probiotics includes the steps of: a) preparing a mixture by mixing the probiotics with a coating material composed of milk-derived phospholipids and aloe vera gel; and b) freeze-drying the mixture.
  • Step a) is a process of mixing the probiotic strain and the coating material.
  • the probiotics in step a) are Lactobacillus strains, Lactococcus strains, Enterococcus strains, and Streptococcus strains and Bifidobacterium. It may be one or more selected from the group consisting of Bifidobacterium strains.
  • the coating material in step a) may be a mixture of aloe vera gel and milk-derived phospholipids in a weight ratio of 1:0.1 to 2.
  • the mixture of step a) may include 30 to 99 parts by weight of probiotics and 0.005 to 5 parts by weight of the coating material.
  • the mixture containing the probiotics and the coating material may further include a cryoprotectant to protect the probiotic strain or the activity of the strain under low-temperature conditions when lyophilized in a later step.
  • the mixture of step a) may further include a cryoprotectant.
  • cryoprotectant Since the description of the cryoprotectant is the same as that described above, it is omitted to avoid overlapping description.
  • probiotics and coating materials may be uniformly mixed using a mixing device known in the art without limitation, for example, a homogenizer, an ultrasonicator, etc. may be used.
  • Step b) is a process of freeze-drying to dry and powder the mixture in which the probiotics and the coating material are mixed.
  • the freeze-drying may use without limitation a freeze-drying method known in the art, wherein the temperature and time conditions of the freeze-drying may be adjusted according to the concentration, amount, etc. of the mixture.
  • step b) may be to remove moisture while thawing in a freeze dryer after maintaining the mixture in rapid freezing conditions (-40 ° C. or less) for 4 to 24 hours.
  • the temperature conditions for freeze-drying are -40 to -70 °C, -40 to -75 °C, -40 to -80 °C, -45 to -70 °C, -45 to -75 °C, -45 to -80 °C, -50 to -70°C, -50 to -75°C, -50 to -75°C, or -50 to -80°C.
  • the time conditions for freeze-drying are 12 to 24 hours, 10 to 22 hours, and 8 to 20 hours. 6 to 18 hours, 4 to 16 hours, 4 to 14 hours, or 4 to 12 hours.
  • the coating probiotic according to the present invention contains aloe vera gel and milk-derived phospholipid as a coating material, thereby increasing stability against external environmental stress such as freeze-drying stability and storage stability of the probiotic itself, as well as an indicator of intestinal environment stability when probiotics are ingested. Acid resistance and bile resistance can be significantly improved.
  • probiotics used in this Example are shown in Table 1 below, and the composition of the cryoprotectant is shown in Table 2 below.
  • Probiotics were prepared by culturing in an edible medium suitable for each strain according to the strain culture manual in the art. After centrifuging the cultured medium at 8,000 rpm for 15 minutes, obtaining only the strain, mixing the strain, cryoprotectant and coating agent, and maintaining the culture medium for 4 to 24 hours under rapid freezing conditions (-40°C or less), then freeze-drying to obtain probiotic powder prepared.
  • a coating agent 1% of milk-derived phospholipid, 1% of soybean-derived phospholipid, or 1% of egg yolk-derived phospholipid was mixed with the cryoprotectant, and 90 parts by weight of each strain was mixed with 10 parts by weight of the cryoprotectant and coating agent mixture.
  • a probiotic powder was prepared by mixing a strain and a cryoprotectant without a coating agent.
  • composition of the milk-derived phospholipid, soybean-derived phospholipid and egg yolk-derived phospholipid is shown in Table 3 below.
  • Phospholipids from milk Soybean-derived phospholipids Phospholipids derived from egg yolk Phosphatidylcholine (PC) 26 to 28 23 73 to 75 Phosphatidylethanolamine (PE) 23 to 25 22 18 Phosphatidylinositol (PI) 7 to 8 8 to 14 2-3 Phosphatidic acid (PA) ⁇ 2 6 ⁇ 1 Phosphatidylserine (PS) 8 to 12 ⁇ 1 - Sphingomyelin (SPM) 25 to 26 - 3
  • PC egg yolk Phosphatidylcholine
  • PE Phosphatidylethanolamine
  • PI Phosphatidylinositol
  • PA Phosphatidic acid
  • PS Phosphatidylserine
  • SPM Sphingomyelin
  • the prepared probiotic powder was individually packaged and the viability was measured through an accelerated experiment at 45° C., and the strain viability of the probiotic powder was shown in Table 4 compared to the number of bacteria that were not freeze-dried.
  • the prepared probiotic powder was dissolved in PBS (phosphate buffer saline) to have a final concentration of 1x10 9 cfu/ml to prepare a sample.
  • PBS phosphate buffer saline
  • the survival rate was similar to that of freeze-drying without a coating agent (untreated), but when milk-derived phospholipids were used, no coating agent was used or It was confirmed that the survival rate was increased compared to the case where soybean-derived phospholipids or egg yolk-derived phospholipids were used.
  • Coating probiotics were prepared in the same manner as in Example 1, except that 1% of aloe vera whole leaf, xanthan gum, locust bean gum, gum arabic or aloe vera gel was used instead of milk-derived phospholipid, soybean-derived phospholipid, or egg yolk-derived phospholipid as a coating agent. did
  • the whole leaf of Aloe vera is manufactured by removing non-edible parts (thorns, etc.) from Aloe vera, drying it and powdering it. Contains 2.0 to 50.0 mg/g.
  • the aloe vera gel is manufactured by removing the non-edible part and outer skin from Aloe vera, separating the gel, and drying and powdering it.
  • the polysaccharide in the solid content is 30 mg/ g or more, and contains 0.005% or less of anthraquinone-based compounds (as barbaroin anhydrous).
  • Test strain name Survival rate before/after coating (%) unprocessed aloe vera whole leaf xanthan gum locust bean gum gum arabic aloe vera gel
  • a probiotic powder was prepared in the same manner as in Example 1, except that 1% of the complex (0.5% of milk-derived phospholipid and 0.5% of Aloe vera gel) was used as a coating agent instead of milk-derived phospholipid, soybean-derived phospholipid, or egg yolk-derived phospholipid.
  • the number of viable probiotics was analyzed according to the measurement method and expressed as a survival rate (%) compared to the number of viable cells immediately after freeze-drying.
  • Test strain name Room temperature viability after freeze-drying (%) unprocessed milk origin Phospholipids aloe vera gel Complex processing L. acidophilus HY7036 63 77 76 79 L. casei HY2782 64 78 77 80 L. gasseri HY7023 63 78 79 81 L. delbrueckii ssp. bulgaricus HY7901 63 80 78 81 L. helveticus HY7801 64 79 81 82 L. fermentum HY7301 66 81 83 84 L. paracasei HP7 62 77 75 78 L. plantarum HY7715 61 76 74 77 L.
  • thermophilus HY9012 51 66 68 69 S. thermophilus HY9012 53 61 63 64 B. bifidum HY8308 51 66 68 69 B. breve HY8201 55 70 72 73 B. longum HY8001 55 66 68 69 B. animalis ssp. lactis HY8002 61 76 78 79

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Abstract

본 발명은 코팅 물질로서 우유 유래 인지질 및 알로에 베라 겔을 이용하여 내산성, 내담즙성, 위장관 생존성, 냉장 및 상온저장 안정성이 향상된 코팅 프로바이오틱스 및 이를 포함하는 식품 조성물, 이의 제조방법에 관한 것으로, 상기 코팅 프로바이오틱스는 코팅 물질로서 알로에 베라 겔 및 우유 유래 인지질을 포함함으로써 프로바이오틱스 자체의 동결건조 안정성, 저장안정성 등 외부 환경 스트레스에 대한 안정성이 증가될 뿐만 아니라 프로바이오틱스 섭취 시 장관환경 안정성의 지표인 내산성, 내담즙성이 현저히 향상될 수 있다.

Description

코팅 프로바이오틱스 및 이를 포함하는 식품 조성물, 이의 제조방법
본 발명은 코팅 물질로서 우유 유래 인지질 및 알로에 베라 겔을 이용하여 내산성, 내담즙성, 위장관 생존성, 냉장 및 상온저장 안정성이 향상된 코팅 프로바이오틱스 및 이를 포함하는 식품 조성물, 이의 제조방법에 관한 것이다.
유산균(lactic acid bacteria)은 젖산균이라고도 하며, 글루코오스 등의 당류를 분해하여 젖산을 생성하는 그람 양성세균으로, 사람이나 포유동물의 소화관, 구강, 질 등에서 발견된다. 유산균은 인류가 가장 오랫동안 광범위하게 활용하고 있는 미생물 중 하나로서 사람이나 동물의 장에 해로운 물질을 생성하지 않으며 장내에서 유해균에 의한 이상발효를 방지하여 정장제로도 유용하게 이용되고 있다.
한편, 프로바이오틱스(probiotics)는 체내에 들어가서 건강에 좋은 효과를 주는 살아있는 균으로, 현재까지 알려진 대부분의 프로바이오틱스는 유산균을 포함한다. 프로바이오틱스를 포함한 인간의 장내 미생물이 인간의 건강에 중요한 영향을 미친다는 연구결과 및 과학성 자료가 증가함에 따라 프로바이오틱스에 대한 소비자들의 인식이 더욱 확대되었으며 그에 따라 프로바이오틱스 제품의 수요가 점차 증가하고 있다. 현재 식약처에서 등재한 Lactobacillus 11종 (L. acidophilus, L. casei, L. gasseri, L. delbruekii subsp. bulgaricus, L. helveticus, L. fermentum, L. paracasei, L. plantarum, L. reuteri, L. rhamnosus, L. salivarius)과 Lactococcus 1종 (Lc. lactis), Enterococcus 2종 (E. faecium, E. faecalis), Streptococcus 1종 (S. thermophilus), Bifidobacterium 4종 (B. bifidum, B. breve, B. longum, B. animalis subsp. lactis)을 포함한 19종의 균에 대해 프로바이오틱스로 고시하였고 많은 기업체들이 프로바이오틱스를 연구하고 관련 제품을 생산, 판매하고 있다. 대표적인 프로바이오틱스의 기능성으로는 유해균 억제, 유산균 증식, 배변활동에 원활하게 도움을 주는 기능성 이외에 수많은 연구와 임상결과에 따르면 정장작용, 과민성장증후군, 아토피, 변비, 여성 질환 등 다양한 효능을 가지고 있다. 하지만 이러한 프로바이오틱스도 균 자체가 단백질로 구성이 되어있기 때문에 체내로 투입 시 위산 및 담즙산에 의해 세포막이 손상이 되면서 프로바이오틱스의 본래의 기능성을 나타내지 못하고 있다.
이러한 문제점을 극복하고자 현재 프로바이오틱스를 생산하는 업계에서는 고농도의 균주를 포함하거나 3 ~ 4종류 이상의 추가적인 공정을 통해 코팅된 균주를 이용한 제품을 생산하고 있다 (한국등록특허 제10-2048690호 및 제10-1918089호). 그러나, 고농도의 균주를 포함하는 제품은 제품의 가격이 상승하면서 소비자에게 큰 부담을 줄 수 있을 뿐만 아니라 일일 섭취량의 이상의 생균을 섭취하게 되면 부작용이 일어날 수 있는 문제점이 있다. 또한, 복합 공정에 의한 균주 코팅 기술은 고가의 설비와 코팅제로 인하여 제품의 단가 상승이 일어나고, 추가적인 공정이 추가됨에 따라 프로바이오틱스의 안정성을 확보하기 힘든 단점도 있다. 따라서, 프로바이오틱스의 안정성 향상을 위해서는 여전히 많은 연구가 필요한 실정이다.
[선행기술문헌]
[특허문헌]
한국등록특허 제10-2048690호
한국등록특허 제10-1918089호
본 발명은 내산성, 내담즙성, 위장관 생존성, 냉장 및 상온저장 안정성이 향상된 코팅 프로바이오틱스를 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 상기 코팅 프로바이오틱스를 포함하는 식품 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 상기 코팅 프로바이오틱스의 제조방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명자들은 고가의 코팅제 및 복합 공정 사용, 고농도의 프로바이오틱스 사용 등 종래 문제점을 해결하기 위해 경제적이면서 고난이도 기술 및 고가의 장비를 요구하지 않는 새로운 프로바이오틱스 안정성 향상 기술을 연구한 결과, 프로바이오틱스의 코팅제로서 우유 유래 인지질 및 알로에 베라 겔을 포함하는 신규한 코팅 프로바이오틱스를 개발하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 일 양상은 프로바이오틱스; 및 우유 유래 인지질 및 알로에 베라 겔로 이루어진 코팅 물질을 포함하는 코팅 프로바이오틱스를 제공한다.
본 발명에서 사용된 "프로바이오틱스"는 체내에 들어가서 건강에 좋은 효과를 주는 살아있는 균을 의미하며, 더 넓은 의미로는 사균(死菌)까지 포함한다.
본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 프로바이오틱스는 락토바실러스속(Lactobacillus) 균주, 락토코커스속(Lactococcus) 균주, 엔테로코커스속(Enterococcus) 균주 및 스트렙토코커스속(Streptococcus) 균주 및 비피도박테리움속(Bifidobacterium) 균주로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것일 수 있다.
보다 구체적으로, 상기 프로바이오틱스는 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri), 락토바실러스 델부르키 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus), 락토바실러스 헬베티쿠스(Lactobacillus helveticus), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri), 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius), 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis), 엔테로코커스 패시움(Enterococcus faecium), 엔테로코커스 페칼리스 (Enterococcus faecalis), 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus), 비피도박테리움 비피덤(Bifidobacterium bifidum), 비피도박테리움 브레베(Bifidobacterium breve), 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum) 및 비피도박테리움 애니멀리스 락티스(Bifidobacterium animalis ssp. lactis)로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에서 사용된 "코팅"은 프로바이오틱스의 표면에 코팅물질로 막을 덮어 씌워 프로바이오틱스 또는 프로바이오틱스의 표면을 외부 환경으로부터 보호하는 것을 의미한다. 코팅 방법은 크게 물리 증착 방법과 화학 증착 방법으로 나뉠 수 있으며, 프로바이오틱스, 코팅물질 등에 따라 당업계에 공지된 코팅 방법 및 조건이 제한 없이 적용될 수 있다.
상기 코팅 물질은 프로바이오틱스에 내산성, 내담즙성, 위장관 생존성, 냉장 및 상온저장 안정성 등을 부여할 수 있는 물질이라면 제한 없이 사용할 수 있으며, 일례로는 인지질, 다당체, 단백질 등일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 코팅 물질은 우유 유래 인지질 및 알로에 베라 겔로 이루어진 것일 수 있다.
상기 우유 유래 인지질은 유지방에서 추출된 인지질로서 포스파티딜콜린(Phosphatidylcholine, PC), 포스파티딜에탄올아민(Phosphatidylethanolamine, PE), 포스파티딜이노시톨(Phosphatidylinositol, PI), 포스파티딘산(Phosphatidic acid, PA), 포스파티딜세린(Phosphatidylserine, PS), 스핑고미엘린(Sphingomyelin, SPM) 등을 포함하며, 특히 대두 유래 인지질이나 난황 유래 인지질, 어류 유래 인지질에 미량 함유되어 있는 포스파티딜세린과 스핑고미엘린을 다량 함유하는 것을 특징으로 한다 (표 3 참조). 상기 포스파티딜세린은 pH 2까지 견딜 수 있어 내산성이 우수하며, 상기 스핑고미엘린은 인지질 이중층의 안정성을 향상시키므로, 이러한 포스파티딜세린 및 스핑고미엘린을 다량 함유하는 우유 유래 인지질은 프로바이오틱스의 안정성 향상에 기여할 수 있다.
본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 우유 유래 인지질은 전체 중량에 대하여 포스파티딜세린 5% 이상, 바람직하게는 5 ~ 20% 및 스핑고미엘린 20% 이상, 바람직하게는 20 ~ 30%를 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 프로바이오틱스의 안정성 향상을 위해 인지질로서 우유 유래 인지질, 대두 유래 인지질 및 난황 유래 인지질을 사용하여 프로바이오틱스를 코팅한 결과, 우유 유래 인지질로 코팅된 프로바이오틱스가 대두 유래 인지질 또는 난황 유래 인지질로 코팅된 프로바이오틱스에 비해 45℃의 가혹 조건과 소화관 조건에서 생존율이 높게 유지되는 것을 확인하였다.
상기 알로에 베라 겔은 알로에 베라(Aloe vera)에서 분리된 겔(gel)로서 다양한 비타민, 무기질, 효소, 지방산, 다당체 등을 포함하며, 알로에 전잎(whole leaf)과는 성분이 상이한 것으로 알려져 있다. 식용 알로에의 종류로는 알로에 베라, 알로에 아보레센스(Aloe arborescens), 알로에 사포나리아(Aloe saponaria Haw.)가 있으나, 알로에 겔은 잎이 큰 알로에 베라에서만 얻어지는 것으로 알려져 있다. 이러한 알로에 베라 겔은 특히 식품의 저장기간 보존 및 향상에 효과가 있는 것으로 알려져 있어 주로 식품 첨가물로 사용되고 있으나, 유산균의 성장 및 저장성, 생존율과의 연관성에 대해서는 많은 연구가 이루어지지 않았다.
본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 알로에 베라 겔은 고형분 중 다당체 30 mg/g 이상, 바람직하게는 30 ~ 300 mg/g을 포함하며, 안트라퀴논계 화합물(무수바바로인으로서) 0.005% 이하, 바람직하게는 0.005 ~ 0.0005%을 함유하는 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 알로에 베라 겔과 알로에 베라 전잎, 종래 유산균 또는 프로바이오틱스 코팅용 다당체 (잔탄검, 로커스트빈검 및 아라비아검)를 사용하여 프로바이오틱스의 안정성을 비교한 결과, 알로에 베라 겔로 코팅된 프로바이오틱스가 알로에 베라 전잎, 잔탄검, 로커스트빈검 또는 아라비아검으로 코팅된 프로바이오틱스에 비해 45℃의 가혹 조건에서 생존율이 높게 유지되는 것을 확인하였다.
본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 코팅 물질은 알로에 베라 겔과 우유 유래 인지질을 1 : 0.1 ~ 2의 중량비로 혼합된 것일 수 있다.
예를 들면, 알로에 베라 겔과 우유 유래 인지질의 혼합 비율은 1 : 0.1 ~ 2, 1 : 0.1 ~ 1.5, 1 : 0.1 ~ 1, 1 : 0.1 ~ 0.5, 1: 0.5 ~ 2, 1 : 0.5 ~ 1.5, 1 : 0.5 ~ 1, 1 : 1 ~ 2, 1 : 1 ~ 1.5, 1 : 1.5 ~ 2, 또는 1 : 1의 중량비일 수 있으며, 프로바이오틱스의 안정성 향상을 위해 알로에 베라 겔과 우유 유래 인지질을 1 : 1의 중량비로 혼합 사용하는 것이 바람직하다.
본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 코팅 프로바이오틱스는 프로바이오틱스 30 ~ 99 중량부 및 코팅 물질 0.005 ~ 5 중량부를 포함하는 것일 수 있다.
이때, 코팅 물질이 0.005 중량부 미만일 경우에는 프로바이오틱스 또는 프로바이오틱스의 표면을 충분히 코팅하지 못하여 프로바이오틱스의 안정성 향상을 기대할 수 없고, 5 중량부를 초과할 경우에는 소화기관에 부담을 주어 위장관 경련 및 통증, 소화불량, 설사, 염증 등의 부작용이 발생할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 코팅 물질로서 우유 유래 인지질과 알로에 베라 겔을 1 : 1의 중량비로 혼합하여 프로바이오틱스를 코팅한 결과, 우유 유래 인지질 및 알로에 베라 겔로 복합 코팅된 프로바이오틱스가 우유 유래 인지질 또는 알로에 베라 겔로 단독 코팅된 프로바이오틱스에 비해 소화관 조건과 냉장, 상온 및 가속 조건에서 생존율이 높게 유지되는 것을 확인하였다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 코팅 물질로서 우유 유래 인지질 및 알로에 베라 겔로 복합 코팅된 프로바이오틱스의 생존율은 코팅 전 프로바이오틱스에 비해 증가한 것으로, 예를 들면, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 또는 50% 이상 증가한 것일 수 있다.
이러한 코팅 프로바이오틱스는 동결건조 과정을 통해 -10℃ 이하의 온도에서 건조시켜 분말화하여 보존 기간을 늘릴 수 있다.
본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 코팅 프로바이오틱스는 동결보호제를 더 포함하는 것일 수 있다.
상기 동결보호제는 당업계에 공지된 동결보호제의 성분을 제한 없이 사용할 수 있으며, 일례로는 탈지분유, 프락토올리고당, 트리할로오스(trehalose), 말토덱스트린(maltodextrin), 글리세린(glycerin) 등일 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 프로바이오틱스, 코팅 물질 및 동결보호제를 포함하는 코팅 프로바이오틱스는 동결보호제 100 중량부에 대하여 코팅 물질 0.1 ~ 10 중량부를 포함하는 것일 수 있다.
예를 들면, 코팅 물질은 동결보호제 100 중량부에 대하여 0.1 ~ 10 중량부, 0.1 ~ 5 중량부, 0.1 ~ 1 중량부, 0.1 ~ 0.5 중량부, 0.5 ~ 10 중량부, 0.5 ~ 5 중량부, 0.5 ~ 1 중량부, 1 ~ 10 중량부, 1 ~ 5 중량부, 또는 5 ~ 10 중량부일 수 있다.
본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 프로바이오틱스, 코팅 물질 및 동결보호제를 포함하는 코팅 프로바이오틱스는 프로바이오틱스 30 ~ 99 중량부, 및 동결보호제 및 코팅 물질을 포함하는 혼합물 1 ~ 70 중량부를 포함하는 것일 수 있다.
이때, 동결보호제 및 코팅 물질을 포함하는 혼합물이 1 중량부 미만일 경우에는 프로바이오틱스의 동결 조건 및 저장 조건에 대한 안정성을 기대할 수 없고, 70 중량부를 초과할 경우에는 프로바이오틱스의 장내 정착 및 증식을 저해하거나 소화기관에 부담을 주어 위장관 경련 및 통증, 소화불량, 설사, 염증 등의 부작용이 발생할 수 있다.
또한, 본 발명의 다른 일 양상은 상기 코팅 프로바이오틱스를 포함하는 식품 조성물을 제공한다.
상기 식품 조성물은 식품, 식품첨가제, 음료, 음료첨가제, 발효유, 건강기능식품 등으로 사용될 수 있다. 식품, 식품첨가제, 음료, 음료첨가제, 또는 건강기능식품으로 사용되는 경우, 각종 식품류, 발효유, 육류, 음료수, 초콜렛, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류, 알코올 음료, 비타민 복합제, 주류 또는 그 밖의 건강기능식품 제형으로 제공될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 식품 조성물은 발효유, 기능성 음료 및 건강기능식품으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상인 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 식품 조성물은 유효성분으로서 코팅 바이오틱스 외에, 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함할 수 있으며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 포함할 수 있다. 탄수화물의 예는 모노사카라이드 (예를 들어, 포도당, 과당 등), 디사카라이드 (예를 들어, 말토스, 슈크로스, 올리고당 등) 및 폴리사카라이드 (예를 들어, 덱스트린, 사이클로덱스트린 등) 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜일 수 있다. 향미제로서 천연 향미제 [타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어, 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등)] 및 합성 향미제 (예를 들어, 사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다.
또한, 본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있으며, 이러한 첨가제의 비율은 본 발명의 식품 조성물 100 중량부 당 0 ~ 약 20 중량부의 범위에서 선택될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
또한, 본 발명의 다른 일 양상은 상기 코팅 바이오틱스의 제조방법을 제공한다. 보다 구체적으로, 상기 코팅 프로바이오틱스의 제조방법은 a) 프로바이오틱스를 우유 유래 인지질 및 알로에 베라 겔로 이루어진 코팅 물질과 혼합하여 혼합물을 준비하는 단계; 및 b) 상기 혼합물을 동결건조하는 단계를 포함하는 것일 수 있다.
상기 a) 단계는 프로바이오틱스 균주와 코팅 물질을 혼합하는 과정이다.
상기 프로바이오틱스 및 코팅 물질에 관한 설명은 전술한 바와 동일하므로, 중복 설명을 피하기 위해 생략한다.
본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 a) 단계의 프로바이오틱스는 락토바실러스속(Lactobacillus) 균주, 락토코커스속(Lactococcus) 균주, 엔테로코커스속(Enterococcus) 균주 및 스트렙토코커스속(Streptococcus) 균주 및 비피도박테리움속(Bifidobacterium) 균주로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것일 수 있다.
본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 a) 단계의 코팅 물질은 알로에 베라 겔과 우유 유래 인지질을 1 : 0.1 ~ 2의 중량비로 혼합된 것일 수 있다.
본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 a) 단계의 혼합물은 프로바이오틱스 30 ~ 99 중량부 및 코팅 물질 0.005 ~ 5 중량부를 포함하는 것일 수 있다.
이러한 프로바이오틱스와 코팅 물질을 포함하는 혼합물은 이후 단계에서 동결건조될 때 저온의 조건에서 프로바이오틱스 균주 또는 균주의 활성을 보호하기 위해 동결보호제를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 a) 단계의 혼합물은 동결보호제를 더 포함하는 것일 수 있다.
상기 동결보호제에 관한 설명은 전술한 바와 동일하므로, 중복 설명을 피하기 위해 생략한다.
이러한 프로바이오틱스 및 코팅 물질, 또는 프로바이오틱스, 코팅 물질 및 동결보호제의 혼합은 당업계에 공지된 혼합 장치를 제한 없이 사용하여 균일하게 혼합될 수 있으며, 일례로는 균질기, 초음파기 등을 사용할 수 있다.
상기 b) 단계는 프로바이오틱스와 코팅 물질이 혼합된 혼합물을 건조, 분말화하기 위해 동결건조하는 과정이다.
상기 동결건조는 당업계에 공지된 동결건조 방법을 제한 없이 이용할 수 있으며, 이때 동결건조의 온도 및 시간 조건은 혼합물의 농도, 양 등에 따라 조절될 수 있다.
본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 b) 단계는 혼합물을 급속 동결 조건 (-40 ℃ 이하)에서 4 ~ 24시간 전후로 유지한 후, 동결 건조기에서 해동하면서 수분을 제거하는 것일 수 있다.
예를 들면, 동결건조의 온도 조건은 -40 ~ -70℃, -40 ~ -75℃, -40 ~ -80℃, -45 ~ -70℃, -45 ~ -75℃, -45 ~ -80℃, -50 ~ -70℃, -50 ~ -75℃, -50 ~ -75℃, 또는 -50 ~ -80℃일 수 있으며. 동결건조의 시간 조건은 12 ~ 24시간, 10 ~ 22시간, 8 ~ 20시간. 6 ~ 18시간, 4 ~ 16시간, 4 ~ 14시간, 또는 4 ~ 12시간일 수 있다.
본 발명에 따른 코팅 프로바이오틱스는 코팅 물질로서 알로에 베라 겔 및 우유 유래 인지질을 포함함으로써 프로바이오틱스 자체의 동결건조 안정성, 저장안정성 등 외부 환경 스트레스에 대한 안정성이 증가될 뿐만 아니라 프로바이오틱스 섭취 시 장관환경 안정성의 지표인 내산성, 내담즙성이 현저히 향상될 수 있다.
이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이러한 설명은 본 발명의 이해를 돕기 위하여 예시적으로 제시된 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이러한 예시적인 설명에 의하여 제한되는 것은 아니다.
실시예 1. 코팅 프로바이오틱스의 제조 - 인지질 종류의 차이
본 실시예에서 사용된 프로바이오틱스의 종류는 하기 표 1과 같고, 동결보호제의 조성은 하기 표 2와 같다.
번호 프로바이오틱스
1 L. acidophilus HY7036
2 L. casei HY2782
3 L. gasseri HY7023
4 L. delbrueckii ssp. bulgaricus HY7901
5 L. helveticus HY7801
6 L. fermentum HY7301
7 L. paracasei HP7
8 L. plantarum HY7715
9 L. reuteri HY7501
10 L. rhamnosus HY1213
11 S. thermophilus HY9012
12 B. bifidum HY8308
13 B. breve HY8201
14 B. longum HY8001
15 B. animalis ssp. lactis HY8002
원재료명 함량 (%)
말토덱스트린 분말 7
탈지분유 5
정제수 88
합계 100
프로바이오틱스는 당업계의 균주 배양 매뉴얼에 따라 각 균주에 맞는 식용배지에서 배양하여 준비하였다. 배양된 배지를 8,000 rpm, 15분간 원심분리 후 균주만 획득하여 균주, 동결보호제 및 코팅제를 혼합하고 급속 동결 조건 (-40℃ 이하)에서 4 ~ 24시간 전후로 유지한 후, 동결건조하여 프로바이오틱스 분말을 제조하였다. 코팅제로는 동결보호제에 우유 유래 인지질 1%, 대두 유래 인지질 1% 또는 난황 유래 인지질 1%을 혼합하여 사용하였고, 각 균주 90 중량부와 동결보호제 및 코팅제 혼합물 10 중량부를 혼합하였다. 대조군으로는 코팅제 없이 균주 및 동결보호제를 혼합하여 프로바이오틱스 분말을 제조하였다.
상기 우유 유래 인지질, 대두 유래 인지질 및 난황 유래 인지질의 조성은 하기 표 3과 같다.
우유 유래 인지질 대두 유래 인지질 난황 유래 인지질
포스파티딜콜린(PC) 26 ~ 28 23 73 ~ 75
포스파티딜에탄올아민(PE) 23 ~ 25 22 18
포스파티딜이노시톨(PI) 7 ~ 8 8 ~ 14 2 ~ 3
포스파티딘산(PA) ≤2 6 ≤1
포스파티딜세린(PS) 8 ~ 12 ≤1 -
스핑고미엘린(SPM) 25 ~ 26 - 3
1-1. 코팅 프로바이오틱스의 생존율 측정 - 가속 실험
제조된 프로바이오틱스 분말은 개별 포장하여 45℃에서의 가속 실험을 통해 생존율을 측정하였고, 프로바이오틱스 분말의 균주 생존율은 동결건조하지 않은 균수와 비교하여 표 4에 나타내었다.
시험 균주명 코팅 전/후 생존율(%)
무처리 우유 유래
인지질		 대두 유래
인지질		 난황 유래
인지질
L. acidophilus HY7036 71 90 85 71
L. casei HY2782 65 89 82 66
L. gasseri HY7023 75 94 83 73
L. delbrueckii ssp. bulgaricus HY7901 67 91 84 66
L. helveticus HY7801 88 93 81 83
L. fermentum HY7301 71 92 78 84
L. paracasei HP7 81 91 83 85
L. plantarum HY7715 85 97 79 86
L. reuteri HY7501 83 87 71 85
L. rhamnosus HY1213 71 86 73 72
S. thermophilus HY9012 73 86 74 75
B. bifidum HY8308 69 84 71 76
B. breve HY8201 82 92 75 83
B. longum HY8001 86 90 85 85
B. animalis ssp. lactis HY8002 65 83 69 66
상기 표 4에 나타낸 바와 같이, 식품에 적용 가능한 인지질을 사용하여 인지질의 종류에 따른 균주의 생존율 차이를 비교한 결과, 코팅제로 대두 유래 인지질 또는 난황 유래 인지질을 사용한 경우에는 코팅제를 사용하지 않고 동결건조한 경우 (무처리)와 생존율이 유사한 수준이었으나, 우유 유래 인지질을 사용한 경우에는 코팅제를 사용하지 않거나 대두 유래 인지질 또는 난황 유래 인지질을 사용한 경우에 비해 생존율이 증가한 것으로 확인되었다.
1-2. 코팅 프로바이오틱스의 소환관 생존율 측정
제조된 프로바이오틱스 분말은 최종 농도가 1x109 cfu/ml이 되도록 PBS(phosphate buffer saline)에 용해하여 시료를 준비하였다.
M. Minekus et al. (Food Funct. 2014 (5) : 1113-1124) 등의 논문을 참고하여 소화모델에 사용되는 전해질 용액을 제조하였고, 전해질 용액의 조성은 하기 표 5와 같다.
구분 Simulated Salivary Fluid
(SSF, mmol/L)		 Simulated Gastric Fluid
(SGF, mmol/L)		 Simulated Intestinal Fluid
(SIF, mmol/L)
KCl 15.1 6.9 6.8
KH2PO4 3.7 0.9 0.8
NaHCO3 13.6 25 85
NaCl ― 47.2 38.4
MgCl2(H2O)6 0.15 0.1 0.33
(NH4)2CO3 0.06 0.5 ―
CaCl2(H2O)2 1.5 (0.75) 0.15 (0.075) 0.6 (0.3)
구강 단계에서는 준비된 시료에 SSF 전해질 용액, 인체 유래 타액의 α-amylase를 첨가하여 37℃에서 2분간 반응 후 SGF 전해질 용액과 돼지 유래 펩신을 첨가하고 pH 3.0으로 조절하여 37℃에서 2시간 동안 반응하였다. 소장단계에서는 앞서 소화된 시료에 돼지 유래 판크레아틴, 담즙산을 첨가하여 pH 7.0으로 조절한 뒤 37℃에서 2시간 동안 반응하였다. 마지막 흡수 단계에서는 앞서 소화된 시료에 자연막소포(Brush Border Membrane Vesicles)를 첨가하고 pH 7.0으로 조절한 뒤 37℃에서 4시간 동안 반응하였다. 모든 소화흡수과정을 거친 후에 잔존하는 프로바이오틱스 균수는 통상적인 유산균 생균수 측정 방법에 따라 생균수를 분석하였으며, 균주의 소화관 생존율은 소화흡수 전의 초기 균수와 비교하여 생존율(%)로 표현하였고, 그 결과는 하기 표 6에 나타내었다.
시험 균주명 코팅 전/후 생존율(%)
무처리 우유 유래
인지질		 대두 유래
인지질		 난황 유래
인지질
L. acidophilus HY7036 56 58 56 55
L. casei HY2782 51 55 52 51
L. gasseri HY7023 46 49 47 46
L. delbrueckii ssp. bulgaricus HY7901 45 50 46 44
L. helveticus HY7801 35 35 31 33
L. fermentum HY7301 42 44 43 39
L. paracasei HP7 39 42 40 38
L. plantarum HY7715 52 60 53 43
L. reuteri HY7501 43 46 44 42
L. rhamnosus HY1213 42 43 41 40
S. thermophilus HY9012 23 25 22 21
B. bifidum HY8308 36 39 35 18
B. breve HY8201 32 37 31 20
B. longum HY8001 21 32 22 18
B. animalis ssp. lactis HY8002 45 50 46 39
상기 표 6에 나타낸 바와 같이, 대두 유래 인지질 또는 난황 유래 인지질을 사용한 경우에는 코팅제를 사용하지 않고 동결건조한 경우 (무처리)와 생존율이 유사한 수준이었으나, 우유 유래 인지질을 사용한 경우에는 코팅제를 사용하지 않거나 대두 유래 인지질 또는 난황 유래 인지질을 사용한 경우에 비해 생존율이 증가한 것으로 확인되었다.
2. 코팅 프로바이오틱스의 제조 - 다당체 종류의 차이
코팅제로 우유 유래 인지질, 대두 유래 인지질 또는 난황 유래 인지질 대신 알로에 베라 전잎, 잔탄검, 로커스트빈검, 아라비아검 또는 알로에 베라 겔 1%을 사용한 것을 제외하고는, 실시예 1과 동일한 방법으로 코팅 프로바이오틱스를 제조하였다.
상기 알로에 베라 전잎은 알로에 베라(Aloe vera)에서 비가식 부위 (가시 등)를 제거한 후 건조, 분말화하여 제조된 것으로, 건강기능식품 기준 규격에 따라 안트라퀴논계 화합물(무수바바로인으로서)을 2.0 ~ 50.0 mg/g 함유한다.
상기 알로에 베라 겔은 알로에 베라(Aloe vera)에서 비가식 부위, 외피를 제거한 후 겔(gel)만을 분리하여 건조, 분말화하여 제조된 것으로, 건강기능식품 기준 규격에 따라 고형분 중 다당체를 30 mg/g 이상 함유하며, 안트라퀴논계 화합물(무수바바로인으로서)을 0.005% 이하 함유한다.
2-1. 코팅 프로바이오틱스의 생존율 측정 - 가속 실험
실시예 1-1의 가속 실험과 동일한 방법으로 프로바이오틱스 분말의 균주 생존율을 측정하였고, 그 결과를 표 7에 나타내었다.
시험 균주명 코팅 전/후 생존율(%)
무처리 알로에 베라 전잎 잔탄검 로커스트빈검 아라비아검 알로에 베라 겔
L. acidophilus HY7036 71 71 74 72 75 91
L. casei HY2782 65 66 68 65 66 90
L. gasseri HY7023 75 72 76 77 73 95
L. delbrueckii ssp. bulgaricus HY7901 67 65 71 68 70 92
L. helveticus HY7801 88 86 86 84 85 94
L. fermentum HY7301 71 72 74 73 74 93
L. paracasei HP7 81 77 75 76 80 92
L. plantarum HY7715 85 84 86 83 89 98
L. reuteri HY7501 83 82 81 80 84 88
L. rhamnosus HY1213 71 71 73 72 73 87
S. thermophilus HY9012 73 74 76 74 70 88
B. bifidum HY8308 69 70 70 72 72 85
B. breve HY8201 82 80 83 81 80 93
B. longum HY8001 86 85 84 84 81 91
B. animalis ssp. lactis HY8002 91 90 92 89 86 98
상기 표 7에 나타낸 바와 같이, 식품에 적용 가능한 다당체를 사용하여 다당체의 종류에 따른 균주의 생존율 차이를 비교한 결과, 코팅제로 알로에 베라 전잎, 잔탄검, 로커스트빈검 또는 아라비아검을 사용한 경우에는 코팅제를 사용하지 않고 동결건조한 경우 (무처리)와 생존율이 유사한 수준이었으나, 알로에 베라 겔을 사용한 경우에는 코팅제를 사용하지 않거나 알로에 베라 전잎, 잔탄검, 로커스트빈검 또는 아라비아검을 사용한 경우에 비해 생존율이 월등히 증가한 것으로 확인되었다.
실시예 3. 코팅 프로바이오틱스의 제조
실시예 1 및 2에서 프로바이오틱스의 높은 생존율을 나타낸 우유 유래 인지질과 알로에 베라 겔을 혼합 사용하여 단독 사용과 균주 생존율을 비교하였다.
코팅제로 우유 유래 인지질, 대두 유래 인지질 또는 난황 유래 인지질 대신 복합물 1% (우유 유래 인지질 0.5% 및 알로에 베라 겔 0.5%)을 사용한 것을 제외하고는, 실시예 1과 동일한 방법으로 프로바이오틱스 분말을 제조하였다.
3-1. 코팅 프로바이오틱스의 생존율 측정 - 가속 실험
실시예 1-1의 가속 실험과 동일한 방법으로 프로바이오틱스 분말의 균주 생존율을 측정하였고, 그 결과를 표 8에 나타내었다.
시험 균주명 코팅 전/후 생존율(%)
무처리 우유 유래
인지질		 알로에 베라 겔 복합처리
L. acidophilus HY7036 71 90 91 90
L. casei HY2782 65 89 90 89
L. gasseri HY7023 75 94 95 94
L. delbrueckii ssp. bulgaricus HY7901 67 91 92 91
L. helveticus HY7801 88 93 94 93
L. fermentum HY7301 71 92 93 92
L. paracasei HP7 81 91 92 91
L. plantarum HY7715 85 97 98 97
L. reuteri HY7501 83 87 88 87
L. rhamnosus HY1213 71 86 87 86
S. thermophilus HY9012 73 86 88 91
B. bifidum HY8308 69 84 85 84
B. breve HY8201 82 92 93 92
B. longum HY8001 86 90 91 90
B. animalis ssp. lactis HY8002 65 83 84 83
상기 표 8에 나타낸 바와 같이, 코팅제로 우유 유래 인지질과 알로에 베라 겔을 복합 사용한 경우 (복합처리)에는 우유 유래 인지질 또는 알로에 베라 겔을 단독 사용한 경우와 생존율이 유사한 수준인 것으로 확인되었다.
3-2. 코팅 프로바이오틱스의 소환관 생존율 측정
실시예 1-2의 소화관 생존율 측정과 동일한 방법으로 프로바이오틱스 분말의 균주 생존율을 측정하였고, 그 결과를 표 9에 나타내었다.
시험 균주명 코팅 전/후 생존율(%)
무처리 우유 유래
인지질		 알로에 베라 겔 복합처리
L. acidophilus HY7036 56 58 59 61
L. casei HY2782 51 55 58 59
L. gasseri HY7023 46 49 47 50
L. delbrueckii ssp. bulgaricus HY7901 45 50 48 51
L. helveticus HY7801 35 35 36 38
L. fermentum HY7301 42 44 46 47
L. paracasei HP7 39 42 44 45
L. plantarum HY7715 52 60 59 62
L. reuteri HY7501 43 46 45 48
L. rhamnosus HY1213 42 43 46 47
S. thermophilus HY9012 23 25 26 28
B. bifidum HY8308 36 39 40 42
B. breve HY8201 32 37 36 39
B. longum HY8001 21 32 35 36
B. animalis ssp. lactis HY8002 45 50 52 53
상기 표 9에 나타낸 바와 같이, 코팅제로 우유 유래 인지질과 알로에 베라 겔을 복합 사용한 경우 (복합처리)에는 우유 유래 인지질 또는 알로에 베라 겔을 단독 사용한 경우에 비해 생존율이 약간 증가한 것으로 확인되었다.
3-3. 코팅 프로바이오틱스의 생존율 측정 - 온도조건별
제조된 프로바이오틱스 분말을 냉장 (10℃ 이하, 습도 40% 이하), 상온 (25℃, 습도 40 ~ 60%) 및 가속 (40℃, 습도 70%)의 조건에서 1개월 보관 후 통상적인 프로바이오틱스 생균수 측정 방법에 따라 생균수를 분석하였으며 동결건조 직후의 생균수와 대비하여 생존율(%)로 표현하였다.
시험 균주명 동결 건조 후 냉장 생존율 (%)
무처리 우유 유래
인지질		 알로에 베라 겔 복합처리
L. acidophilus HY7036 90 97 96 99
L. casei HY2782 93 95 94 97
L. gasseri HY7023 92 97 96 99
L. delbrueckii ssp. bulgaricus HY7901 89 94 95 97
L. helveticus HY7801 91 92 97 97
L. fermentum HY7301 90 92 96 96
L. paracasei HP7 89 96 95 98
L. plantarum HY7715 93 95 99 99
L. reuteri HY7501 91 92 97 97
L. rhamnosus HY1213 84 91 90 93
S. thermophilus HY9012 82 89 88 91
B. bifidum HY8308 93 95 99 99
B. breve HY8201 88 95 94 97
B. longum HY8001 81 88 87 90
B. animalis ssp. lactis HY8002 83 90 89 92
시험 균주명 동결 건조 후 상온 생존율 (%)
무처리 우유 유래
인지질		 알로에 베라 겔 복합처리
L. acidophilus HY7036 63 77 76 79
L. casei HY2782 64 78 77 80
L. gasseri HY7023 63 78 79 81
L. delbrueckii ssp. bulgaricus HY7901 63 80 78 81
L. helveticus HY7801 64 79 81 82
L. fermentum HY7301 66 81 83 84
L. paracasei HP7 62 77 75 78
L. plantarum HY7715 61 76 74 77
L. reuteri HY7501 59 74 76 77
L. rhamnosus HY1213 62 76 74 77
S. thermophilus HY9012 56 71 73 74
B. bifidum HY8308 61 76 74 77
B. breve HY8201 66 80 83 84
B. longum HY8001 61 76 74 77
B. animalis ssp. lactis HY8002 70 86 88 89
시험 균주명 동결 건조 후 가속 생존율 (%)
무처리 우유 유래
인지질		 알로에 베라 겔 복합처리
L. acidophilus HY7036 61 68 70 71
L. casei HY2782 54 69 71 72
L. gasseri HY7023 53 71 70 73
L. delbrueckii ssp. bulgaricus HY7901 55 70 72 73
L. helveticus HY7801 54 69 71 72
L. fermentum HY7301 56 74 73 76
L. paracasei HP7 52 70 69 72
L. plantarum HY7715 51 70 68 71
L. reuteri HY7501 52 64 66 67
L. rhamnosus HY1213 51 66 68 69
S. thermophilus HY9012 53 61 63 64
B. bifidum HY8308 51 66 68 69
B. breve HY8201 55 70 72 73
B. longum HY8001 55 66 68 69
B. animalis ssp. lactis HY8002 61 76 78 79
상기 표 10 ~ 12에 나타낸 바와 같이, 프로바이오틱스 분말을 냉장 보관 시 코팅제로 우유 유래 인지질 및 알로에 베라 겔을 복합 사용한 경우 (복합처리)에는 코팅제를 사용하지 않고 동결건조한 경우 (무처리)에 비해 생존율이 약간 증가한 것으로 확인되었다. 또한, 프로바이오틱스 분말을 상온 또는 가속 조건에서 보관한 경우에는 균주의 생존율이 전체적으로 감소하였으나, 코팅제로 우유 유래 인지질 및 알로에 베라 겔을 복합 사용한 경우에는 우유 유래 인지질 또는 알로에 베라 겔을 단독 사용한 경우에 비해 균주의 생쥰율이 높은 수준으로 유지되는 것을 확인하였다.
이러한 결과는 코팅제로서 우유 유래 인지질 및 알로에 베라 겔의 복합 사용이 냉장, 상온 또는 가속 조건에서 균주 생존율을 높이는데 도움이 된다는 것을 시사한다.
이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (7)

  1. 프로바이오틱스; 및
    우유 유래 인지질 및 알로에 베라 겔로 이루어진 코팅 물질
    을 포함하는 코팅 프로바이오틱스.
  2. 청구항 1에 있어서,
    상기 프로바이오틱스는 락토바실러스속(Lactobacillus) 균주, 락토코커스속(Lactococcus) 균주, 엔테로코커스속(Enterococcus) 균주 및 스트렙토코커스속(Streptococcus) 균주 및 비피도박테리움속(Bifidobacterium) 균주로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것인 코팅 프로바이오틱스.
  3. 청구항 1에 있어서,
    상기 코팅 물질은 알로에 베라 겔과 우유 유래 인지질을 1 : 0.1 ~ 2의 중량비로 혼합된 것인 코팅 프로바이오틱스.
  4. 청구항 1에 있어서,
    상기 코팅 프로바이오틱스는 프로바이오틱스 30 ~ 99 중량부 및 코팅 물질 0.005 ~ 5 중량부를 포함하는 것인 코팅 프로바이오틱스.
  5. 청구항 1에 있어서,
    상기 코팅 프로바이오틱스는 동결보호제를 더 포함하는 것인 코팅 프로바이오틱스.
  6. 청구항 1의 코팅 프로바이오틱스를 포함하는 식품 조성물.
  7. a) 프로바이오틱스를 우유 유래 인지질 및 알로에 베라 겔로 이루어진 코팅 물질과 혼합하여 혼합물을 준비하는 단계; 및
    b) 상기 혼합물을 동결건조하는 단계
    를 포함하는 코팅 프로바이오틱스의 제조방법.
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