WO2020248372A1 - 一种去氨加压素的合成方法 - Google Patents

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WO2020248372A1
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resin
fmoc
desmopressin
phase
synthesizing
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陈学明
袁慧星
宓鹏程
陶安进
袁建成
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翰宇药业（武汉）有限公司
甘肃成纪生物药业有限公司
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Definitions

  • the invention belongs to the technical field of polypeptide drug production and relates to a method for synthesizing desmopressin.
  • Desmopressin is a structural analogue of natural arginine vasopressin. It is obtained by making two changes to the chemical structure of natural hormones, namely, 1-cysteine de-amino and 8-D-arginine Replace 8-L-arginine.
  • the peptide sequence of desmopressin is shown in formula I, in which Mpa and Cys form a ring through a disulfide bond.
  • Desmopressin is mainly used for the treatment of central diabetes insipidus, nocturnal enuresis and hemophilia, etc. It is also used for the test of renal urine concentration, and can also be used for postoperative hemostasis.
  • solid-phase oxidants include iodine and hydrogen peroxide; liquid-phase oxidation methods include air oxidation, iodine/acetic acid system oxidation, and hydrogen peroxide oxidation. These methods cannot guarantee the specific selectivity of the reaction and inevitably produce mismatched impurities. , The product purity is low, which increases the difficulty of purification.
  • Patent CN101372505A introduces a pseudo-dilution reaction to avoid the mismatch of disulfide bonds between polypeptide chains in the liquid phase reaction.
  • the solid-phase oxidation synthesizes disulfide bonds, but the solid-phase disulfide bond reaction is a heterogeneous reaction. The low rate results in a low yield of desmopressin.
  • the use of iodine during oxidation causes pollution to the environment, which is not conducive to environmental protection and the sustainable development of the industry.
  • the present invention uses the Fmoc/tBu strategy to connect the main chain amino acid residues in solid phase.
  • the crude peptide is liquid-phase coupled to the side chains of cysteine and mercaptopropionic acid by electrochemical methods to form disulfide bonds. Purification to obtain desmopressin.
  • the problem of specific selectivity of the reaction can be avoided, the utilization of main chain fragments and the utilization of atoms can be improved, thereby reducing production costs, avoiding the use of oxidants such as iodine and hydrogen peroxide, making it more environmentally friendly and in line with the concept of green chemistry.
  • the purpose of the present invention is to provide a desmopressin synthesis method, which can avoid the specific selectivity of the reaction, increase the utilization of main chain fragments, and increase the utilization of atoms Rate, reduce production costs, and be environmentally friendly.
  • the technical solution adopted by the present invention is: a desmopressin synthesis method, including the following steps:
  • the solid-phase carrier resin is selected from Rink Amide AM Resin, Rink Amide MBHA Resin or Rink Amide Resin, and the degree of substitution of the solid-phase carrier resin is 0.1-1.0 mmol/g, preferably 0.2-0.8 mmol/g, more Preferably 0.3-0.5 mmol/g.
  • step 2) coupling Fmoc-AA-OH in the order of C-terminal to N-terminal is Fmoc-Gly-OH, Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Cys ( P)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH and Mpa(Trt)-OH.
  • P in Fmoc-Cys(P)-OH is Trt, Mmt or Dpm.
  • the solid-phase peptide synthesis method includes: 1) Removal of Fmoc, and then washing the resin with a solvent until the complete removal of Fmoc is detected by the detection method; 2) Dissolving an appropriate amount of the amino acid to be coupled and the coupling agent in the solvent and After activation, they are added to the solid phase reaction column together until the termination of the reaction is detected by the detection method; 3) Repeat 1) and 2).
  • the reagent for removing Fmoc is a 20% piperidine/DMF solution (DBLK), that is, a piperidine:DMF (volume ratio) 1:4 mixed solution.
  • DBLK 20% piperidine/DMF solution
  • the detection method used in the reaction is any method known in the art that can achieve this purpose, such as chromatography or chemical calibration.
  • a reagent that can determine the end of the reaction preferably ninhydrin.
  • ninhydrin a reagent that can determine the end of the reaction, preferably ninhydrin.
  • the reaction of step 2) is carried out in a solid phase reaction column.
  • the solid-phase reaction column used in the present invention is not particularly limited, and is any solid-phase reaction column that can achieve this purpose.
  • the coupling reaction time for each amino acid is usually 1.5-4 hours, preferably 2-3 hours; the pressure is preferably normal pressure, and can also be carried out under appropriately increased or reduced pressure; the temperature is preferably room temperature (ie 20 ⁇ 5°C), it can also be carried out at an appropriately increased or decreased temperature.
  • the synthesis of the backbone peptide resin specifically includes the following steps:
  • the coupling agent is a combination of DIPCDI and compound A or a combination of DIPEA and compound A and compound B, wherein compound A is selected from HOBt or HOAt, and compound B is selected from PyBOP, PyAOP, HATU, HBTU or TBTU, and
  • DIPEA: compound A: compound B 2.0:1.1:1.0 in molar ratio.
  • it is a combination of DIPCDI and compound A.
  • reaction of step 2) preferably swells the resin before coupling, and the washing and swelling steps can be carried out in the art using any reagent for achieving this purpose, including DMF, NMP, dichloromethane, etc., preferably DMF.
  • the liquid phase electrochemical oxidative coupling disulfide bond is oxidative coupling of cysteine and mercaptopropionic acid
  • the anode and cathode electrodes used are platinum electrodes
  • the current used is 5mA-20mA, preferably 10-15mA
  • the reaction temperature is 10 °C to 100 °C, preferably 35 °C
  • the electrolyte is tetrabutylammonium perchlorate, tetrabutylammonium tetrafluoroborate or tetrabutylammonium hexafluorophosphonium, preferably tetrabutylammonium tetrafluoroborate.
  • the reversed-phase high pressure liquid chromatography includes using reversed-phase octadecylsilane as a stationary phase and using 0.1% trifluoro Aqueous acetic acid/acetonitrile was used as the mobile phase, and the target peak fraction was collected, concentrated and lyophilized.
  • the beneficial effect of the present invention is that the present invention provides a method for synthesizing desmopressin by solid-phase connection of main chain amino acid residues through Fmoc/tBu strategy, cleavage and precipitation to obtain crude peptides, and then electrochemical methods Liquid-phase oxidative coupling of cysteine to obtain desmopressin after purification.
  • This method can avoid the problem of specific selectivity of the reaction, can increase the utilization rate of fragmented peptide resin, increase the utilization rate of main chain fragments, and increase the utilization rate of atoms, thereby reducing production costs, avoiding the use of chemical oxidants iodine and hydrogen peroxide, and more Environmental protection is more in line with the concept of green chemistry.
  • Figure 1 is a reaction flow chart of the desmopressin synthesis method of the present invention.
  • Example 3 Liquid oxidative coupling of disulfide bonds
  • the oxidizing solution obtained in Example 3 was purified by high performance liquid phase, using reverse-phase octadecylsilane as the stationary phase and 0.1% trifluoroacetic acid aqueous solution/acetonitrile as the mobile phase, collecting the target peak fractions, and concentrating and lyophilizing. 20.8 g of refined peptide was obtained, the purity was 99.98%, and the yield was 74.8%.

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Abstract

提供了一种去氨加压素的合成方法，包括以下步骤：1)固相载体树脂的选择；2)主链肽树脂的合成；3)裂解，脱除树脂及保护基；4)液相电化学氧化偶联二硫键得到去氨加压素。此种方法可以避免反应的专一选择性问题，能够提高片段肽树脂的利用率，提高主链片段利用率，提高原子利用率，从而降低生产成本，避免了化学氧化剂碘和双氧水的使用，更加环保，更加符合绿色化学的理念。

Description

一种去氨加压素的合成方法 技术领域
本发明属于多肽类药物生产技术领域，涉及一种去氨加压素的合成方法。
背景技术
去氨加压素是天然精氨加压素的结构类似物，系对天然激素的化学结构进行两处改动而得，即1-半胱氨酸脱去氨基和以8-D-精氨酸取代8-L-精氨酸。去氨加压素的肽序如式Ⅰ所示，其中Mpa与Cys通过二硫键成环。
Figure PCTCN2019102692-appb-000001
去氨加压素主要用于治疗中枢性尿崩症、夜间遗尿及血友病等，也用于肾尿液浓缩功能的测试，还可用作术后止血。
随着Fmoc固相肽合成方法的日益发展和制备工艺的日渐成熟，目前，多肽合成中，固相合成逐渐取代液相合成。对于去氨加压素的合成，主要采用的合成方法是Fmoc固相多肽合成策略。常规方法偶联合成去氨加压素的关键在于二硫键的构建，常规的肽合成中使用的构建二硫键的方法包括固相氧化法和液相氧化法。其中固相氧化剂包括碘和双氧水；液相氧化法包括空气氧化法、碘/醋酸体系氧化法和双氧水氧化法，这类方法无法保证反应的专一选择性，无可避免的会产生错配杂质，产品纯度较低，增加了纯化的难度。专利CN101372505A介绍了一种假稀释反应避免液相反应中存在的多肽链间二硫键错配问题，固相氧化合成二硫键，但固相成二硫键反应为非均相反应，反应转化率较低，导致产品去氨加压素收率偏低。同时氧化时使用碘，给环境造成污染，不利于环保，不利于产业的可持续性发展。
开发原子经济性反应和环保已成为绿色化学研究的核心内容，从原子经济性的角度来讲，常规的依序偶联方法由于无法避免这种线性肽的二硫键的构建的专一选择性问题，导致L-型半胱氨酸和巯基丙酸二硫键的构建时，主链片段有效利用率较低，即原子利用率较低。在一般的固相合成操作过程中，氨基酸用量一般为3～5eqv，当主链片段有效利用率较低时将造成相应氨基酸的大量浪费。
鉴于上述情况，本发明通过Fmoc/tBu策略固相连接主链氨基酸残基，裂解后粗肽通过电化学方法液相偶联半胱氨酸和巯基丙酸的侧链，形成二硫键，最后纯化得到去氨加压素。如此，可以避免反应的专一选择性问题，提高主链片段利用率，提高原子利用率，从而降低生 产成本，避免了碘、双氧水等氧化剂的使用，更加环保，符合绿色化学的理念。
发明内容
为了解决上述背景技术中所提出的问题，本发明的目的在于提供一种去氨加压素的合成方法，该方法可以避免反应的专一选择性问题，提高主链片段利用率，提高原子利用率，降低生产成本，绿色环保。
为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案为：一种去氨加压素的合成方法，包括以下步骤：
1)固相载体树脂的选择；
2)主链肽树脂的合成；
3)裂解，脱除树脂及保护基；
4)液相电化学氧化偶联二硫键得到去氨加压素。
进一步地，1)中固相载体树脂选自Rink Amide AM Resin、Rink Amide MBHA Resin或Rink Amide Resin，固相载体树脂的替代度为0.1-1.0mmol/g，优选0.2-0.8mmol/g，更优选0.3-0.5mmol/g。
进一步地，步骤2)中按照C端到N端的顺序偶联Fmoc-AA-OH依次为Fmoc-Gly-OH、Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Cys(P)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH和Mpa(Trt)-OH。其中Fmoc-Cys(P)-OH中P为Trt、Mmt或Dpm。固相多肽合成方法包括：1)脱除Fmoc，接着用溶剂洗涤树脂，直至用检测方法检测到完全脱除Fmoc为止；2)将合适量的待偶联氨基酸和偶联剂在溶剂中溶解并活化后，一起加入到固相反应柱中，直至用检测方法检测到反应终止为止；3)重复1)和2)。其中脱除Fmoc的试剂为20％的哌啶/DMF溶液(DBLK)，即哌啶：DMF(体积比)为1:4的混合溶液。反应中应用的检测方法是本领域已知的可实现此目的的任意方法，例如色谱法或化学标定法，优选使用可判定反应终点的试剂，优选茚三酮，当使用茚三酮时，若树脂显色则说明多肽中有游离的胺，即胺上无保护基。
进一步地，步骤2)的反应在固相反应柱中进行。本发明所使用的固相反应柱无特别限制，为可实现此目的的任意固相反应柱。此外，每种氨基酸进行偶联反应的时间通常为1.5-4小时，优选2-3小时；压力优选为常压，也可在适当提高或降低的压力下进行；温度优选为室温(即20±5℃)，也可在适当提高或降低的温度下进行。
进一步地，2)中主链肽树脂的合成具体包括以下步骤：
a、将固相载体树脂加入到固相反应柱中，用20％的哌啶/N,N-二甲基甲酰胺溶液脱除Fmoc 保护基后洗涤；
b、将Fmoc-Gly-OH和偶联剂加入到N,N-二甲基甲酰胺中，在0～5℃活化后加入到固相反应柱中，在常压室温下反应1.5-4h后洗涤；然后用20％哌啶/N,N-二甲基甲酰胺溶液脱Fmoc保护基后洗涤；重复上述过程，依次偶联Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Cys(P)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH和Mpa(Trt)-OH，其中Fmoc-Cys(P)-OH中P为Trt、Mmt或Dpm。
进一步地，偶联剂为DIPCDI和化合物A的组合物或DIPEA和化合物A和化合物B的组合物，其中化合物A选自HOBt或HOAt，化合物B选自PyBOP、PyAOP、HATU、HBTU或TBTU，偶联剂中各成分的比例以摩尔比计为DIPCDI：化合物A＝1.2：1.1，DIPEA：化合物A：化合物B＝2.0：1.1：1.0。优选为DIPCDI和化合物A的组合物。
进一步地，步骤2)的反应优选将树脂在偶联之前进行溶胀，洗涤和溶胀的步骤本领域可采用实现该目的的任何试剂进行，包括DMF、NMP、二氯甲烷等，优选DMF。
进一步地，裂解用裂解液为TFA、H 2O、PhOMe、苯甲硫醚的组合物，优选比例为TFA：H 2O：PhOMe：苯甲硫醚＝90：5：4：1(V:V)。
进一步地，液相电化学氧化偶联二硫键为氧化偶联半胱氨酸和巯基丙酸，所用阴阳电极均为铂电极，所用电流为5mA-20mA，优选10-15mA，反应温度为10℃-100℃，优选35℃，电解质为四丁基高氯酸铵、四丁基四氟硼化铵或四丁基六氟膦化铵，优选四丁基四氟硼化铵。
进一步地，4)后还包括纯化步骤，采用反相高压液相色谱法进行纯化制备精肽，反相高压液相色谱法包括以反相十八烷基硅烷为固定相，以0.1％三氟乙酸水溶液/乙腈为流动相，收集目的峰馏分，浓缩冻干。
本发明的有益效果是，本发明提供了一种合成去氨加压素的方法，该方法通过Fmoc/tBu策略固相连接主链氨基酸残基，裂解、沉淀得到粗肽，然后通过电化学方法液相氧化偶联半胱氨酸，纯化后得到去氨加压素。此种方法可以避免反应的专一选择性问题，能够提高片段肽树脂的利用率，提高主链片段利用率，提高原子利用率，从而降低生产成本，避免了化学氧化剂碘和双氧水的使用，更加环保，更加符合绿色化学的理念。
附图说明
图1为本发明中去氨加压素合成方法的反应流程图。
具体实施方式
为了更好地理解本发明的内容，下面结合具体实施方法对本发明内容作进一步说明，但 本发明的保护内容不局限以下实施例。
说明书和权利要求书中所使用的缩写的含义列于下表中：
Figure PCTCN2019102692-appb-000002
实施例1：肽树脂合成
称取Rink Amide树脂(52g，替代度为0.48mmol/g)加入到固相反应柱中，用DMF洗涤 2次，再用DMF溶胀树脂30分钟，加入DBLK脱保护(5min+7min)，树脂用DMF洗涤6次。
称取Fmoc-Gly-OH(22.3g，75mmol)和HOBT(12.159g，90mmol)加入至DMF(250mL)中溶解，冰水浴冷却至0～5℃，加入DIPCDI(12.75mL，75mmol)活化5min，将此活化液加入到反应柱中，室温鼓氮气鼓泡2小时，以茚三酮检测反应终点(如树脂无色透明则终止反应；如树脂显色则延长反应1小时)。反应结束，用DMF洗涤树脂3次，加入DBLK脱保护5min+7min，DMF洗涤树脂6次，茚三酮检测树脂有颜色。
称取Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH(48.660g，75mmol)和HOBT(12.159g，90mmol)加入至DMF(250mL)中溶解，冰水浴冷却至0～5℃，加入DIPCDI(12.75mL，75mmol)活化5min，将此活化液加入到反应柱中，室温鼓氮气鼓泡2小时，以茚三酮检测反应终点。反应结束，用DMF洗涤树脂3次，加入DBLK脱保护5min+7min，DMF洗涤树脂6次，茚三酮检测树脂有颜色。
称取Fmoc-Pro-OH(25.3g，75mmol)和HOBT(12.159g，90mmol)加入至DMF(250mL)中溶解，冰水浴冷却至0～5℃，加入DIPCDI(12.75mL，75mmol)活化5min，将此活化液加入到反应柱中，室温鼓氮气鼓泡2小时，以茚三酮检测反应终点。反应结束，用DMF洗涤树脂3次，加入DBLK脱保护5min+7min，DMF洗涤树脂6次，茚三酮检测树脂有颜色。
称取Fmoc-Cys(Trt)-OH(43.9g，75mmol)和HOBT(12.159g，90mmol)加入至DMF(250mL)中溶解，冰水浴冷却至0～5℃，加入DIPCDI(12.75mL，75mmol)活化5min，将此活化液加入到反应柱中，室温鼓氮气鼓泡2小时，以茚三酮检测反应终点。反应结束，用DMF洗涤树脂3次，加入DBLK脱保护5min+7min，DMF洗涤树脂6次，茚三酮检测树脂有颜色。
称取Fmoc-Asn(Trt)-OH(44.8g，75mmol)和HOBT(12.159g，90mmol)加入至DMF(250mL)中溶解，冰水浴冷却至0～5℃，加入DIPCDI(12.75mL，75mmol)活化5min，将此活化液加入到反应柱中，室温鼓氮气鼓泡2小时，以茚三酮检测反应终点。反应结束后用DMF洗涤树脂3次，加入DBLK脱保护5min+7min，DMF洗涤树脂6次，茚三酮检测树脂有颜色。
称取Fmoc-Gln(Trt)-OH(45.8g，75mmol)和HOBT(12.159g，90mmol)加入至DMF(250mL)中溶解，冰水浴冷却至0～5℃，加入DIPCDI(12.75mL，75mmol)活化5min，将此活化液加入到反应柱中，室温鼓氮气鼓泡2小时，以茚三酮检测反应终点。反应结束后用DMF洗涤树脂3次，加入DBLK脱保护5min+7min，DMF洗涤树脂6次，茚三酮检测树脂 有颜色。
称取Fmoc-Phe-OH(29.1g，75mmol)和HOBT(12.159g，90mmol)加入至DMF(250mL)中溶解，冰水浴冷却至0～5℃，加入DIPCDI(12.75mL，75mmol)活化5min，将此活化液加入到反应柱中，室温鼓氮气鼓泡2小时，以茚三酮检测反应终点。反应结束后用DMF洗涤树脂3次，加入DBLK脱保护5min+7min，DMF洗涤树脂6次，茚三酮检测树脂有颜色。
称取Fmoc-Tyr(tBu)-OH(34.5g，75mmol)和HOBT(12.159g，90mmol)加入至DMF(250mL)中溶解，冰水浴冷却至0～5℃，加入DIPCDI(12.75mL，75mmol)活化5min，将此活化液加入到反应柱中，室温鼓氮气鼓泡2小时，以茚三酮检测反应终点。反应结束后用DMF洗涤树脂3次，加入DBLK脱保护5min+7min，DMF洗涤树脂6次，茚三酮检测树脂有颜色。
称取Mpa(Trt)-OH(26.1g，75mmol)和HOBT(12.159g，90mmol)加入至DMF(250mL)中溶解，冰水浴冷却至0～5℃，加入DIPCDI(12.75mL，75mmol)活化5min，将此活化液加入到反应柱中，室温鼓氮气鼓泡2小时，以茚三酮检测反应终点。反应结束后用DMF洗涤树脂3次，加入DBLK脱保护5min+7min，DMF洗涤树脂6次，茚三酮检测树脂有颜色。DCM洗涤3次，甲醇收缩，真空干燥得肽树脂57.65g，树脂增重率为85.0％。
实施例2：裂解肽树脂
将实施例1得到的肽树脂57.65g加入到2L单口瓶中，加入预冻至-15℃的裂解液(TFA：H 2O：PhOMe：苯甲硫醚＝90：5：4：1(V:V)，600ml)，室温搅拌4小时，过滤树脂，收集滤液。用少量TFA洗涤树脂，合并滤液。将滤液缓慢加入6L冰乙醚中沉淀。离心，冰乙醚洗涤5次，氮气吹干得到粗肽27.80克，粗肽纯度88.9％，收率99.9％。
实施例3：液氧化偶联二硫键
将实施例2中得到的粗肽27.80克加入到1000ml三口瓶中，依次加入乙腈500ml、四丁基四氟硼化铵8.2g(25mmol)，然后插入铂电极(阳极：15mm×15mm×0.3mm，阴极：15mm×15mm×0.3mm))，控制电流12mA，35℃搅拌反应48小时。反应结束后，停止通电。
实施例4：反相色谱制备精肽
将实施例3得到的氧化液用高效液相纯化，以反相十八烷基硅烷为固定相，以0.1％三氟乙酸水溶液/乙腈为流动相，收集目的峰馏分，浓缩冻干。得精肽20.8g，纯度99.98％，收率74.8％。
以上所述仅为本发明的具体实施方式，不是全部的实施方式，本领域普通技术人员通过阅读本发明说明书而对本发明技术方案采取的任何等效的变换，均为本发明的权利要求所涵盖。

Claims (10)

  1. 一种去氨加压素的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：
    1)固相载体树脂的选择；
    2)主链肽树脂的合成；
    3)裂解，脱除树脂及保护基；
    4)液相电化学氧化偶联二硫键得到去氨加压素。
  2. 根据权利要求1所述的去氨加压素的合成方法，其特征在于，1)中所述固相载体树脂选自Rink Amide AM Resin、Rink Amide MBHA Resin或Rink Amide Resin，所述固相载体树脂的替代度为0.1-1.0mmol/g。
  3. 根据权利要求2所述的去氨加压素的合成方法，其特征在于，所述固相载体树脂的替代度为0.3-0.5mmol/g。
  4. 根据权利要求1所述的去氨加压素的合成方法，其特征在于，2)中所述主链肽树脂的合成具体包括以下步骤：
    a、将固相载体树脂加入到固相反应柱中，用20％的哌啶/N,N-二甲基甲酰胺溶液脱除Fmoc保护基后洗涤；
    b、将Fmoc-Gly-OH和偶联剂加入到N,N-二甲基甲酰胺中，在0～5℃活化后加入到固相反应柱中，在常压室温下反应1.5-4h后洗涤；然后用20％哌啶/N,N-二甲基甲酰胺溶液脱Fmoc保护基后洗涤；重复上述过程，依次偶联Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Cys(P)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH和Mpa(Trt)-OH，其中Fmoc-Cys(P)-OH中P为Trt、Mmt或Dpm。
  5. 根据权利要求4所述的去氨加压素的合成方法，其特征在于，所述偶联剂为DIPCDI和化合物A的组合物或DIPEA和化合物A和化合物B的组合物，其中化合物A选自HOBt或HOAt，化合物B选自PyBOP、PyAOP、HATU、HBTU或TBTU，偶联剂中各成分的比例以摩尔比计为DIPCDI：化合物A＝1.2：1.1，DIPEA：化合物A：化合物B＝2.0：1.1：1.0。
  6. 根据权利要求4所述的去氨加压素的合成方法，其特征在于，步骤a为将固相载体树脂加入到固相反应柱中用溶剂充分溶胀，然后用20％的哌啶/N,N-二甲基甲酰胺溶液脱除Fmoc保护基后洗涤；
  7. 根据权利要求1所述的去氨加压素的合成方法，其特征在于，所述裂解用裂解液为TFA、H2O、PhOMe、苯甲硫醚的组合物，所述TFA、H 2O、PhOMe、苯甲硫醚的体积比为90：5：4：1。
  8. 根据权利要求1所述的去氨加压素的合成方法，其特征在于，所述液相电化学氧化偶 联二硫键为氧化偶联半胱氨酸和巯基丙酸，所用阴阳电极均为铂电极，所用电流为5mA-20mA，反应温度为10℃-100℃，电解质为四丁基高氯酸铵、四丁基四氟硼化铵或四丁基六氟膦化铵。
  9. 根据权利要求8所述的去氨加压素的合成方法，其特征在于，所述液相电化学氧化偶联二硫键所用电流为10-15mA，反应温度为35℃，所用电解质为四丁基四氟硼化铵。
  10. 根据权利要求1所述的去氨加压素的合成方法，其特征在于，4)后还包括纯化步骤，采用反相高压液相色谱法进行纯化，所述反相高压液相色谱法包括以反相十八烷基硅烷为固定相，以0.1％三氟乙酸水溶液/乙腈为流动相，收集目的峰馏分，浓缩冻干。
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