WO2020218868A1 - 스트렙토코커스 파이오제네스 세균 유래 단백질 및 이의 용도 - Google Patents

스트렙토코커스 파이오제네스 세균 유래 단백질 및 이의 용도 Download PDF

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WO2020218868A1
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streptococcus pyogenes
diseases
culture medium
inflammatory
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김윤근
김재규
신태섭
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Definitions

  • the present invention relates to a protein derived from Streptococcus pyogenes bacteria and uses thereof, and more specifically, a composition for preventing, improving or treating inflammatory diseases, metabolic diseases, and cancer using a protein isolated from a culture medium or a culture medium of Streptococcus pyogenes bacteria It is about.
  • Interleukin-8 is a cytokine that is secreted by inflammatory cells, epithelial cells, and vascular endothelial cells and causes neutrophilic inflammation.
  • the secretion of IL-8 is increased by oxidative stress. And, it induces another oxidative stress and amplifies the inflammatory response. It has been reported that IL-8 is closely related to the etiology of not only diseases characterized by neutrophilic inflammation, but also metabolic diseases such as obesity, diabetes, and nonalcoholic hepatitis, and mental diseases such as cancer, depression, and schizophrenia. .
  • Streptococcus pyogenes is an alpha-hemolytic Streptococcus bacterium that resides in the oral cavity and is sometimes known as a bacterium that causes infectious endocarditis.
  • the present inventors isolated a protein from the culture medium obtained by culturing the Streptococcus pyogenes strain, and experimentally confirmed that the protein effectively inhibits the expression of inflammatory cytokines, and based on this, the present invention was completed.
  • an object of the present invention is one or more pharmaceutical compositions for prevention or treatment selected from the group consisting of inflammatory diseases, metabolic diseases and cancer, comprising as an active ingredient a protein isolated from a culture medium or a culture medium of Streptococcus pyogenes Is to provide.
  • Another object of the present invention is to provide a food composition for preventing or improving at least one selected from the group consisting of inflammatory diseases, metabolic diseases and cancer, comprising as an active ingredient a protein isolated from a culture medium or a culture medium of Streptococcus pyogenes Is to do.
  • Another object of the present invention is to provide an inhalant composition for preventing or improving respiratory inflammatory diseases, comprising as an active ingredient a protein isolated from a culture medium or a culture medium of Streptococcus pyogenes .
  • Another object of the present invention is to provide a cosmetic composition for preventing or improving inflammatory skin diseases, comprising as an active ingredient a protein isolated from a culture medium or a culture medium of Streptococcus pyogenes .
  • the present invention is one selected from the group consisting of inflammatory diseases, metabolic diseases and cancer, comprising as an active ingredient a protein isolated from a culture medium or a culture medium of Streptococcus pyogenes It provides a composition for preventing, treating or improving the above.
  • the composition includes a pharmaceutical composition, a food composition, an inhalant composition, or a cosmetic composition, and the food composition may be a health functional food composition.
  • the present invention provides an inhalant composition for preventing or improving respiratory inflammatory disease, comprising as an active ingredient a protein isolated from a culture medium or a culture medium of Streptococcus pyogenes .
  • the present invention provides a cosmetic composition for preventing or improving inflammatory skin diseases, comprising as an active ingredient a protein isolated from a culture medium or a culture medium of Streptococcus pyogenes .
  • the protein may be isolated from a Streptococcus pyogenes culture medium.
  • the protein may be 100 kDa or more.
  • composition according to the present invention can inhibit inflammatory cytokines.
  • the composition may inhibit inflammatory cytokines caused by Helicobacter pylori or E. coli-derived extracellular vesicles.
  • the inflammatory cytokine may be interleukin-8.
  • the cancer is lung cancer, laryngeal cancer, oral cancer, stomach cancer, colon-rectal cancer, liver cancer, bile duct cancer, pancreatic cancer, breast cancer, ovarian cancer, cervical cancer, kidney cancer, bladder cancer, prostate cancer, brain tumor, leukemia, And it may be one or more selected from the group consisting of lymphoma, but is not limited thereto.
  • the inflammatory diseases include respiratory diseases including rhinitis, asthma and chronic obstructive pulmonary disease; Inflammatory diseases of the oral cavity including periodontitis; Digestive diseases including gastritis and inflammatory colitis; Skin diseases including atopic dermatitis, psoriasis, and acne; Atherosclerosis and its complications; Chronic hepatitis and cirrhosis; Joint diseases including rheumatoid arthritis and osteoarthritis; And cancer caused by inflammation; may be one or more selected from the group consisting of, but is not limited thereto.
  • the metabolic disease is obesity, fatty liver, cirrhosis, liver ischemia, liver abscess, hyperlipidemia, hypercholesterolosis, diabetes, dyslipidemia, arteriosclerosis, coronary artery disease, alcoholic steatohepatitis, non-alcoholic It may be one or more selected from the group consisting of sexual steatohepatitis and stroke, but is not limited thereto.
  • the respiratory inflammatory disease is a cold, pneumonia, emphysema, pulmonary fibrosis, acute rhinitis, chronic rhinitis, sinusitis, allergic rhinitis, acute bronchitis, chronic bronchitis, asthma and chronic obstructive pulmonary disease (COPD). It may be one or more selected from the group consisting of, but is not limited thereto.
  • the inflammatory skin disease is skin inflammation, psoriasis, lupus erythematosus, dandruff, acute/chronic eczema, contact dermatitis, atopic dermatitis, seborrheic dermatitis, chronic lichen planus, interstitial dermatitis, deprived dermatitis , Papular urticaria, sun dermatitis, and may be one or more selected from the group consisting of acne, but is not limited thereto.
  • the present invention provides a method for preventing or treating at least one disease selected from the group consisting of inflammatory diseases, metabolic diseases and cancer by administering to an individual a protein isolated from the Streptococcus pyogenes culture medium or culture medium. .
  • the present invention provides a use for the treatment of one or more diseases selected from the group consisting of inflammatory diseases, metabolic diseases, and cancers of the protein isolated from the Streptococcus pyogenes culture medium or culture medium.
  • the present invention provides the use of the Streptococcus pyogenes culture medium or protein isolated from the culture medium for the manufacture of one or more therapeutic agents selected from the group consisting of inflammatory diseases, metabolic diseases and cancer.
  • the present inventors confirmed the anti-inflammatory effect when the protein isolated from the Streptococcus pyogenes culture medium or the culture medium was treated in an inflammatory disease model, and the Streptococcus pyogenes culture medium or protein according to the present invention is an inflammatory disease, metabolism It can be usefully used in the development of medicines or health functional foods, inhalants, cosmetics, etc. for preventing diseases and cancer, improving or treating symptoms.
  • FIG. 1 is a result of evaluating the efficacy of Streptococcus pyogenes culture medium to inhibit the expression of IL-1 ⁇ (10 ng/ml)-induced inflammatory cytokine IL-8 in gastric epithelial cell line (AGS, ATCC CRL-1739). .
  • FIG. 2 shows IL- of a water-soluble component of a Streptococcus pyogenes culture medium (SP CM>100 kDa) in which a low molecular compound and a protein smaller than 100 kDa were removed through filtration of 100 kDa size, and the water-insoluble portion was removed by ultracentrifugation. 8 This is the result of evaluating the expression inhibitory function.
  • SP CM>100 kDa Streptococcus pyogenes culture medium
  • Figure 4 is a result of evaluating the efficacy of the Streptococcus pyogenes culture medium (SP CM>100 kDa) to inhibit the expression of IL-8 induced by Helicobacter pylori (HP99) in gastric epithelial cell line (AGS).
  • SP CM Streptococcus pyogenes culture medium
  • HP99 Helicobacter pylori
  • 6A is a result of analyzing the composition of a protein in a Streptococcus pyogenes culture medium (SP CM>100 kDa) by 1D native-PAGE (polyacrylamide gel electrophoresis), and separating and purifying a protein having a high concentration (F1).
  • SP CM Streptococcus pyogenes culture medium
  • F1 1D native-PAGE
  • 6B is a result of evaluating the IL-8 expression inhibitory function of F1 isolated and purified from Streptococcus pyogenes culture medium (SP CM>100 kDa).
  • FIG. 7 is a diagram showing a protocol for evaluating the efficacy of a Streptococcus pyogenes culture medium (SP CM>100 kDa) in a mouse model of Dextran Sulfate Sodium (DSS)-induced colitis (DSS-colitis).
  • SP CM Streptococcus pyogenes culture medium
  • DSS-colitis Dextran Sulfate Sodium
  • Figure 8a is a result of evaluating the efficacy of the Streptococcus pyogenes culture medium (SP CM>100 kDa) by measuring the length of the mouse colon in the Dextran Sulfate Sodium (DSS) induced colitis (DSS-colitis) mouse model.
  • SP CM Streptococcus pyogenes culture medium
  • DSS-colitis Dextran Sulfate Sodium
  • Figure 8b is a graph showing the results of Figure 8a.
  • Figure 9a is a result of evaluating the efficacy of the Streptococcus pyogenes culture medium (SP CM>100 kDa) by measuring the change in the weight of the mouse in a mouse model of colitis induced with Dextran Sulfate Sodium (DSS) (DSS-colitis).
  • SP CM Streptococcus pyogenes culture medium
  • DSS-colitis Dextran Sulfate Sodium
  • Figure 9b is a result of evaluating the efficacy of the Streptococcus pyogenes culture medium (SP CM>100 kDa) by measuring the food intake of the mouse in a mouse model of Dextran Sulfate Sodium (DSS)-induced colitis (DSS-colitis).
  • SP CM Streptococcus pyogenes culture medium
  • DSS-colitis Dextran Sulfate Sodium
  • FIG. 10A is a reference for evaluating the weight change, stool properties, and bloody stool degree of a mouse in a mouse model of DSS-colitis induced by Dextran Sulfate Sodium (DSS) as a disease activity index (DAI) score. .
  • DSS Dextran Sulfate Sodium
  • FIG. 10b is a result of evaluating the efficacy of a Streptococcus pyogenes culture medium (SP CM>100 kDa) in a mouse model of Dextran Sulfate Sodium (DSS)-induced colitis according to the criteria of FIG. 10A as disease activity.
  • SP CM Streptococcus pyogenes culture medium
  • DSS Dextran Sulfate Sodium
  • Figure 10c is a graph showing the results of Figure 10b.
  • FIG. 11 is a diagram illustrating a protocol for evaluating the efficacy of a Streptococcus pyogenes culture medium (SP CM>100 kDa) in an ethanol-induced acute gastritis mouse model.
  • SP CM Streptococcus pyogenes culture medium
  • 12A is a result of evaluating the anti-inflammatory efficacy of Streptococcus pyogenes culture medium (SP CM>100 kDa) by observing the change in appearance and size of the mouse in an ethanol-induced acute gastritis mouse model.
  • SP CM Streptococcus pyogenes culture medium
  • FIG. 12B is a graph showing the result of the change in the size of FIG. 12A.
  • 12C is a result of evaluating the anti-inflammatory efficacy of the Streptococcus pyogenes culture medium (SP CM>100 kDa) by observing the degree of inflammation in the mouse model of ethanol-induced acute gastritis.
  • 12D is a result of evaluating the anti-inflammatory efficacy of Streptococcus pyogenes culture medium (SP CM 200 ⁇ g) by observing the degree of salt crystals in the 80% ethanol-induced acute gastritis mouse model.
  • FIG. 13 shows an experimental protocol for evaluating the efficacy of Streptococcus pyogenes culture medium (SP CM> 100 kDa) in a cancer cell transplantation mouse cancer model.
  • 14A is a result of evaluating the growth rate of cancer tissue in a cancer cell transplanted mouse cancer model.
  • 14B is a result of evaluating the volume of cancer tissue in a cancer cell transplanted mouse cancer model.
  • FIG. 15 is a diagram illustrating a protocol for evaluating the efficacy of a Streptococcus pyogenes culture medium (SP CM>100 kDa) in a high fat diet-induced obesity mouse model.
  • SP CM Streptococcus pyogenes culture medium
  • 16 is a result of evaluating the anti-obesity efficacy of a Streptococcus pyogenes culture medium (SP CM>100 kDa) by observing a change in body weight in a high fat diet-induced obesity mouse model.
  • SP CM Streptococcus pyogenes culture medium
  • FIG. 17 is a high fat diet-induced obesity mouse model by analyzing blood ALT (alanine aminotransferase) and AST (arspartate aminotransferase) to evaluate the treatment efficacy of Streptococcus pyrosenes culture medium (SP CM>100 kDa) for treatment of fatty liver. It is the result.
  • the present inventors confirmed that the protein isolated from the culture medium and the culture medium derived from Streptococcus pyogenes inhibits the expression of inflammatory cytokines and has a therapeutic effect in inflammatory diseases, metabolic diseases, and cancer models, based on this The present invention has been completed.
  • the water-soluble supernatant in the Streptococcus pyogenes culture medium has an effect of inhibiting the expression of the inflammatory cytokine IL-8 (see Example 1), specifically, the molecular weight of 100 kDa It was confirmed that the above water-soluble component inhibited the expression of the inflammatory cytokine IL-8 (see Example 2).
  • the active ingredient that inhibits the expression of IL-8 is a protein component that is weak to heat (see Example 3), and the protein derived from Streptococcus pyogenes is induced by Helicobacter pylori or E. coli-derived extracellular vesicles. It was confirmed that there is an effect of inhibiting the expression of IL-8, an inflammatory cytokine that becomes (see Examples 4 and 5).
  • the protein derived from Streptococcus pyogenes has anti-obesity and hepatitis inhibitory effects in a metabolic disease model (see Example 10).
  • the protein derived from Streptococcus pyogenes according to the present invention exhibits anti-inflammatory, anti-obesity, liver function protection, and anti-cancer effects.
  • the protein is used in inflammatory diseases, metabolic diseases, and cancer. It can be used for prevention, improvement, or treatment.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of one or more selected from the group consisting of inflammatory diseases, metabolic diseases and cancer, comprising as an active ingredient a protein isolated from a culture medium or a culture medium of Streptococcus pyogenes do.
  • the term "culture medium” refers to the culture medium obtained by culturing the Streptococcus pyogenes bacteria according to the present invention in a suitable liquid medium, and the filtrate from which the strain was removed by filtration or centrifugation (filtrate or centrifugal supernatant ), a cell lysate obtained by sonicating the culture solution or treating the culture solution with a lysozyme, and the like, and preferably refers to a supernatant after centrifugation, but is not limited thereto.
  • the culture solution may include both a concentrate of the culture solution and a dried product of the culture solution.
  • the culture medium may be one from which extracellular vesicles have been removed.
  • the protein of the present invention may be isolated and purified in the following order.
  • the term "inflammatory disease” refers to a disease caused by a chain of biological reactions caused by a direct reaction of a humoral mediator constituting the immune system or stimulating a local or systemic effector system.
  • respiratory diseases including rhinitis, asthma and chronic obstructive pulmonary disease
  • Inflammatory diseases of the oral cavity including periodontitis
  • Digestive diseases including gastritis and inflammatory colitis
  • Skin diseases including atopic dermatitis, psoriasis, and acne
  • Atherosclerosis and its complications Chronic hepatitis and cirrhosis
  • Joint diseases including rheumatoid arthritis and osteoarthritis
  • cancer caused by inflammation includes one or more selected from the group consisting of, but is not limited thereto.
  • Inflammatory diseases of the present invention are, for example, infectious inflammatory diseases, cancer, inflammatory skin diseases, inflammatory bowel diseases such as Crohn's desease and ulcerative colitis, peritonitis, osteomyelitis, cellulitis, meningitis, encephalitis, pancreatitis, trauma Induced shock, bronchial asthma, allergic rhinitis, cystic fibrosis, stroke, acute bronchitis, chronic bronchitis, acute bronchiolitis, chronic bronchiolitis, osteoarthritis, gout, spondyloarthropathy, ankylosing spondylitis, Reiter syndrome, psoriatic arthrosis, intestinal spondylitis , Juvenile arthritis, juvenile ankylosing spondylitis, reactive arthritis, infectious arthritis, post-infectious arthritis, gonococcal arthritis, tuberculous arthritis, viral arthritis, fungal arthritis, syphilitic arthritis, Lyme disease, and'angiitis syndrome' Arthriti
  • infectious inflammatory disease used in the present invention is, for example, salmonellosis, food poisoning, typhoid, paratyphoid, sepsis, septic shock, systemic inflammatory response syndrome, SIRS), multiple organ dysfunction syndrome (MODS), pneumonia, pulmonary tuberculosis, tuberculosis, cold, influenza, respiratory infections, rhinitis, nasopharyngitis, otitis media, bronchitis, lymphadenitis, mumps, lymphadenitis, stomatitis, stomatitis, Arthritis, myositis, dermatitis, vasculitis, gingivitis, periodontitis, keratitis, conjunctivitis, wound infection, peritonitis, hepatitis, osteomyelitis, cellulitis, meningitis, encephalitis, brain abscess, encephalomyelitis, meningitis, nep
  • digestive diseases used in the present invention may include, for example, gastritis, colitis, Crohn's disease, enteric Behcet's disease, intestinal lesions, ulcerative colitis, hemorrhagic rectal ulcers, and ileal cystitis ( ⁇ ), but , But is not limited thereto.
  • metabolic disease is a disease caused by abnormalities in carbohydrate or lipid metabolism
  • metabolic diseases in the present invention are obesity, fatty liver, cirrhosis, hepatic ischemia, liver abscess, hyperlipidemia, hypercholesterolosis, diabetes , Dyslipidemia, arteriosclerosis, coronary artery disease, alcoholic steatohepatitis, non-alcoholic steatohepatitis, and stroke, including, but not limited to, one or more diseases selected from the group consisting of.
  • cancer used in the present invention is a disease caused by the proliferation of cancer cells by changing normal cells to cancer cells.
  • cancer is lung cancer, laryngeal cancer, oral cancer, esophageal cancer, gastric cancer, colon-rectal cancer, liver cancer, Bile duct cancer, pancreatic cancer, breast cancer, ovarian cancer, kidney cancer, bladder cancer, prostate cancer, cervical cancer, brain tumor, leukemia, lymphoma, and the like, but are not limited thereto.
  • inflammatory skin disease used in the present invention is not limited thereto, but skin inflammation, psoriasis, lupus erythematosus, dandruff, acute/chronic eczema, contact dermatitis, atopic dermatitis, seborrheic dermatitis, chronic lichen planus, examination These include pain, deprived dermatitis, papular urticaria, sun dermatitis, and acne.
  • inflammatory cytokine refers to a cytokine that is deeply involved in inflammatory reactions caused by bacterial or viral infection, tumor, tissue damage, etc., among trace amounts of physiologically active substances produced by lymphocytes or macrophages. .
  • the inflammatory cytokines are IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11 , IL-12, IL-13, TNF- ⁇ , TNF- ⁇ , transforming growth factor- ⁇ (TGF- ⁇ ), MIG (CXCL9), or interferons (IFNs), but are not limited thereto.
  • interleukin-8 (IL-8) is a heparin-affinity basic protein with a molecular weight of about 8,000 composed of a three-stranded ⁇ -plate structure and an ⁇ -helical structure, and belongs to the subfamily of chemokines. It is produced by several cells, including macrophages.
  • the interleukin-8 chromosome gene consists of 4 active sites and 3 inactive sites, and the gene is activated by synergistic action of NFkB, C/EBP, and AP-1 binding elements in the upstream region. Interleukin-8 is an essential factor involved in the migration of neutrophils during acute inflammatory reactions.
  • the protein of the present invention can be isolated from the culture medium of Streptococcus pyogenes.
  • the content of the protein isolated from the Streptococcus pyogenes culture medium or the culture medium in the composition of the present invention can be appropriately adjusted according to the symptoms of the disease, the degree of progression of the symptoms, and the condition of the patient, for example, based on the weight of the total composition. It may be 0.0001 to 99.9% by weight, or 0.001 to 50% by weight, but is not limited thereto.
  • the content ratio is a value based on the amount of dry solvent removed.
  • the pharmaceutical composition according to the present invention may further include suitable carriers, excipients, and diluents commonly used in the preparation of pharmaceutical compositions.
  • the excipient may be, for example, one or more selected from the group consisting of a diluent, a binder, a disintegrant, a lubricant, an adsorbent, a moisturizing agent, a film-coating material, and a controlled release additive.
  • the pharmaceutical composition according to the present invention is a powder, granule, sustained-release granule, enteric granule, liquid, eye drop, el-silic, emulsion, suspension, alcohol, troche, fragrance, limonadese according to a conventional method, respectively.
  • Carriers, excipients and diluents that may be included in the pharmaceutical composition according to the present invention include lactose, dextrose, sucrose, oligosaccharides, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, gum acacia, alginate, gelatin, calcium. Phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, and mineral oils.
  • diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants that are usually used.
  • the additives of the liquid formulation according to the present invention include water, diluted hydrochloric acid, diluted sulfuric acid, sodium citrate, monostearic acid sucrose, polyoxyethylensorbitol fatty acid esters (twin esters), polyoxyethylene monoalkyl ethers, lanolin ethers, Lanolin esters, acetic acid, hydrochloric acid, aqueous ammonia, ammonium carbonate, potassium hydroxide, sodium hydroxide, prolamine, polyvinylpyrrolidone, ethylcellulose, sodium carboxymethylcellulose, and the like can be used.
  • the syrup according to the present invention may include a solution of white sugar, other sugars or sweeteners, and if necessary, a fragrance, a colorant, a preservative, a stabilizer, a suspending agent, an emulsifier, a viscous agent, and the like may be used.
  • Purified water may be used for the emulsion according to the present invention, and emulsifiers, preservatives, stabilizers, fragrances, etc. may be used as needed.
  • Suspension agents such as acacia, tragacantha, methylcellulose, carboxymethylcellulose, carboxymethylcellulose sodium, microcrystalline cellulose, sodium alginate, hydroxypropyl methylcellulose, 1828, 2906, 2910, etc. may be used as the suspending agent according to the present invention, Surfactants, preservatives, stabilizers, colorants, and fragrances may be used as needed.
  • Injectables according to the present invention include distilled water for injection, 0.9% sodium chloride injection, ring gel injection, dextrose injection, dextrose + sodium chloride injection, PEG, lactated ring gel injection, ethanol, propylene glycol, non-volatile oil-sesame oil Solvents such as cottonseed oil, peanut oil, soybean oil, corn oil, ethyl oleic acid, isopropyl myristic acid, and benzene benzoate; Solubilizing aids such as sodium benzoate, sodium salicylate, sodium acetate, urea, urethane, monoethylacetamide, butazolidine, propylene glycol, tweens, nijeongtinamide, hexamine, and dimethylacetamide; Buffering agents such as weak acids and their salts (acetic acid and sodium acetate), weak bases and their salts (ammonia and ammonium acetate), organic compounds, proteins, albumin, peptone,
  • Suppositories according to the present invention include cacao butter, lanolin, witepsol, polyethylene glycol, glycerogelatin, methylcellulose, carboxymethylcellulose, a mixture of stearic acid and oleic acid, Subanal, cottonseed oil, peanut oil, palm oil, cacao butter+ Cholesterol, lecithin, ranetwax, glycerol monostearate, tween or span, Imhausen, monolen (propylene glycol monostearate), glycerin, Adeps solidus, Butyrum Taego-G (Buytyrum Tego) -G), Cebes Pharma 16, Hexalide Base 95, Cotomar, Hydroxote SP, S-70-XXA, S-70-XX75 (S-70-XX95), Hydro Hydrokote 25, Hydrokote 711, Idropostal, Massa estrarium (A, AS, B, C, D, E, I, T), Massa-MF
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, and these solid preparations include at least one excipient in the extract, such as starch, calcium carbonate, and sucrose. ) Or lactose (lactose), gelatin, etc. are mixed to prepare. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc are also used.
  • Liquid preparations for oral administration include suspensions, liquid solutions, emulsions, syrups, etc.In addition to water and liquid paraffin, which are commonly used simple diluents, various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives may be included. have.
  • Preparations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, and suppositories.
  • the non-aqueous solvent and suspending agent propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, and injectable ester such as ethyl oleate may be used.
  • a pharmaceutically effective amount means an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit/risk ratio applicable to medical treatment, and the effective dose level is the type of patient disease, severity, drug activity, Sensitivity to drugs, time of administration, route of administration and rate of excretion, duration of treatment, factors including drugs used concurrently, and other factors well known in the medical field can be determined.
  • the pharmaceutical composition according to the present invention may be administered as an individual therapeutic agent or administered in combination with other therapeutic agents, may be administered sequentially or simultaneously with a conventional therapeutic agent, and may be administered single or multiple. It is important to administer an amount capable of obtaining the maximum effect in a minimum amount without side effects in consideration of all the above factors, and this can be easily determined by a person skilled in the art to which the present invention pertains.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be administered to a subject by various routes. All modes of administration can be expected, e.g. oral administration, subcutaneous injection, intraperitoneal administration, intravenous injection, intramuscular injection, peri-spinal space (intrathecal) injection, sublingual administration, buccal mucosa administration, rectal injection, vaginal injection. It may be administered according to intramuscular insertion, ocular administration, ear administration, nasal administration, inhalation, spray through the mouth or nose, skin administration, transdermal administration, and the like.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is determined according to the type of drug as an active ingredient, along with various related factors such as the disease to be treated, the route of administration, the age, sex, weight, and severity of the disease.
  • “individual” refers to a subject in need of treatment of a disease, and more specifically, human or non-human primates, mice, rats, dogs, cats, horses, cattle, etc. It may be a mammal of, but is not limited thereto.
  • “administration” means providing a given composition of the present invention to a subject by any suitable method.
  • prevention refers to any action that suppresses or delays the onset of the target disease
  • treatment refers to the target disease and the resulting metabolic abnormalities are improved by administration of the pharmaceutical composition according to the present invention. It means all actions that are advantageously altered, and “improvement” means any action that reduces the degree of a parameter related to a desired disease, for example, symptoms by administration of the composition according to the present invention.
  • the present invention is for the prevention or improvement of at least one selected from the group consisting of inflammatory diseases, metabolic diseases and cancer, comprising as an active ingredient a protein isolated from a Streptococcus pyogenes culture medium or culture medium.
  • a food composition comprising as an active ingredient a protein isolated from a Streptococcus pyogenes culture medium or culture medium.
  • the food composition includes a health functional food composition.
  • the active ingredient may be added to food as it is or may be used with other foods or food ingredients, and may be appropriately used according to a conventional method.
  • the mixing amount of the active ingredient may be appropriately determined depending on the purpose of use (for prevention or improvement).
  • the composition of the present invention is added in an amount of 15% by weight or less, preferably 10% by weight or less based on the raw material.
  • the amount may be less than the above range.
  • the health functional food composition of the present invention is not particularly limited to other ingredients other than containing the active ingredient as an essential ingredient in the indicated ratio, and may contain various flavoring agents or natural carbohydrates as additional ingredients, such as a normal beverage.
  • natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose, fructose, and the like; Disaccharides such as maltose, sucrose, and the like; And polysaccharides, for example, common sugars such as dextrin and cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol.
  • natural flavoring agents tacmatin, stevia extract (for example, rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.)
  • synthetic flavoring agents sacharin, aspartame, etc.
  • the proportion of the natural carbohydrate can be appropriately determined by the choice of a person skilled in the art.
  • the health functional food composition of the present invention includes various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), flavoring agents such as synthetic flavoring agents and natural flavoring agents, coloring agents and heavy weight agents (cheese, chocolate, etc.), pectic acid and salts thereof, Alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonates used in carbonated beverages, and the like may be contained. These components may be used independently or in combination. The proportion of these additives can also be appropriately selected by a person skilled in the art.
  • the present invention provides a cosmetic composition for preventing or improving inflammatory skin diseases, comprising as an active ingredient a protein derived from Streptococcus pyogenes.
  • Products to which the cosmetic composition of the present invention can be added include, for example, astringent lotion, softening lotion, nutrient lotion, various creams, essences, packs, and cosmetics such as foundation, and cleansing, face wash, soap, treatment, beauty liquid Etc.
  • Specific formulations of the cosmetic composition of the present invention include skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, lotion, milk lotion, moisture lotion, nutrition lotion, massage cream, nutrition cream, moisture cream, hand cream, essence, nutrition essence, pack, It includes formulations such as soap, shampoo, cleansing foam, cleansing lotion, cleansing cream, body lotion, body cleanser, emulsion, lipstick, makeup base, foundation, press powder, loose powder, and eye shadow.
  • the cosmetic composition of the present invention may further include a composition selected from the group consisting of water-soluble vitamins, oil-soluble vitamins, polymer peptides, polymer polysaccharides, and sphingo lipids.
  • Water-soluble vitamins can be anything that can be blended in cosmetics, but examples include vitamin B1, vitamin B2, vitamin B6, pyridoxine, pyridoxine hydrochloride, vitamin B12, pantothenic acid, nicotinic acid, nicotinic acid amide, folic acid, vitamin C, and vitamin H. And their salts (thiamine hydrochloride, sodium ascorbate, etc.) and derivatives (ascorbic acid-2-phosphate sodium salt, ascorbic acid-2-magnesium salt, etc.) are also included in the water-soluble vitamins that can be used in the present invention. Included. Water-soluble vitamins can be obtained by conventional methods such as a microbial transformation method, a purification method from a culture of microorganisms, an enzyme method or a chemical synthesis method.
  • oil-soluble vitamin any one that can be blended into cosmetics may be used, but examples include vitamin A, carotene, vitamin D2, vitamin D3, vitamin E (d1-alpha tocopherol, d-alpha tocopherol, d-alpha tocopherol), and the like.
  • Their derivatives (ascorbine palmitate, ascorbine stearate, ascorbine dipalmitate, dl-alpha tocopherol acetate, nicotinic acid dl-alpha tocopherol vitamin E, DL-pantotenyl alcohol, D-pantotenyl alcohol, pantotenyl ethyl Ether, etc.) are also included in the oil-soluble vitamins used in the present invention.
  • Oil-soluble vitamins can be obtained by conventional methods such as a microbial transformation method, a purification method from a microorganism culture, an enzyme or a chemical synthesis method.
  • the polymer peptide may be any one that can be blended in cosmetics, and examples thereof include collagen, hydrolyzed collagen, gelatin, elastin, hydrolyzed elastin, keratin, and the like.
  • the polymeric peptide can be purified and obtained by a conventional method such as a purification method from a culture medium of a microorganism, an enzyme method, or a chemical synthesis method, or it can be used after being purified from natural products such as dermis of pigs and cattle, silk fibers of silkworms.
  • the polymer polysaccharide may be any one as long as it can be blended in cosmetics, and examples thereof include hydroxyethyl cellulose, xanthan gum, sodium hyaluronate, chondroitin sulfuric acid or a salt thereof (sodium salt, etc.).
  • chondroitin sulfate or a salt thereof can be used after being purified from mammals or fish.
  • sphingo lipids any one can be used as long as it can be blended in cosmetics, and examples thereof include ceramide, phytosphingosine, sphingoglycolipid, and the like.
  • Sphingo lipids are usually purified from mammals, fish, shellfish, yeast, plants, etc. by a conventional method, or can be obtained by chemical synthesis.
  • composition of the present invention in addition to the above essential ingredients, other ingredients that are usually blended in cosmetics may be blended if necessary.
  • ingredients that may be added include fats and oils, moisturizers, emollients, surfactants, organic and inorganic pigments, organic powders, ultraviolet absorbers, preservatives, fungicides, antioxidants, plant extracts, pH adjusters, alcohols, pigments, fragrances, Blood circulation accelerators, cold sensation agents, restrictors, and purified water.
  • oil and fat components examples include ester oils and fats, hydrocarbon oils, silicone oils, fluorine oils, animal oils and vegetable oils.
  • ester oils include glyceryl tri2-ethylhexanoate, cetyl 2-ethylhexanoate, isopropyl myristate, butyl myristate, isopropyl palmitate, ethyl stearate, octyl palmitate, isocetyl isostearate, stearic acid.
  • hydrocarbon-based fats and oils examples include hydrocarbon-based fats such as squalene, liquid paraffin, alpha-olefin oligomer, isoparaffin, ceresin, paraffin, liquid isoparaffin, polybuden, microcrystalline wax, and petrolatum.
  • Silicone-based fats and oils include polymethylsilicone, methylphenylsilicone, methylcyclopolysiloxane, octamethylpolysiloxane, decamethylpolysiloxane, dodecamethylcyclosiloxane, dimethylsiloxane/methylcetyloxysiloxane copolymer, dimethylsiloxane/methylsteaoxysiloxane copolymer, alkyl And modified silicone oil and amino-modified silicone oil.
  • Animal or vegetable oils include avocado oil, almond oil, olive oil, sesame oil, rice bran oil, new flower oil, soybean oil, corn oil, rapeseed oil, almond oil, palm kernel oil, palm oil, castor oil, sunflower oil, grape seed oil.
  • Cottonseed Oil, Palm Oil Cucuine Nut Oil, Wheat Germ Oil, Rice Germ Oil, Shea Butter, Walnut Colostrum Oil, Marker Demi Anut Oil, Meadow Home Oil, Egg Yolk Oil, Tallow Oil, Horse Oil, Mink Oil, Orange Rape Oil, Jojoba Oil
  • Animal or plant fats such as canderry wax, carnauba wax, liquid lanolin, and hydrogenated castor oil.
  • the moisturizing agent examples include a water-soluble low-molecular moisturizer, a fat-soluble molecular moisturizer, a water-soluble polymer, and a fat-soluble polymer.
  • water-soluble polymer examples include carboxyvinyl polymer, polyaspartic acid salt, tragacanth, xanthan gum, methylcellulose, hydroxymethylcellulose, hydroxyethylcellulose, hydroxypropylcellulose, carboxymethylcellulose, water-soluble chitin, chitosan, dextrin, and the like. I can.
  • oil-soluble polymer examples include polyvinylpyrrolidone/eicosene copolymer, polyvinylpyrrolidone/hexadecene copolymer, nitrocellulose, dextrin fatty acid ester, and polymer silicone.
  • emollient agent examples include long-chain acyl glutamate cholesteryl ester, hydroxystearate cholesteryl, 12-hydroxystearic acid, stearic acid, rosin acid, and lanolin fatty acid cholesteryl ester.
  • surfactant examples include nonionic surfactants, anionic surfactants, cationic surfactants, and amphoteric surfactants.
  • Nonionic surfactants include self-emulsifying glycerin monostearate, propylene glycol fatty acid ester, glycerin fatty acid ester, polyglycerin fatty acid ester, sorbitan fatty acid ester, POE (polyoxyethylene) sorbitan fatty acid ester, POE sorbit fatty acid ester, POE Glycerin fatty acid ester, POE alkyl ether, POE fatty acid ester, POE hydrogenated castor oil, POE castor oil, POE ⁇ POP (polyoxyethylene ⁇ polyoxypropylene) copolymer, POE ⁇ POP alkyl ether, polyether-modified silicone, lauric acid Alkanolamides, alkylamine oxides, hydrogenated soybean phospholipids, and the like.
  • anionic surfactants fatty acid soap, alpha-acyl sulfonate, alkyl sulfonate, alkyl allyl sulfonate, alkyl naphthalene sulfonate, alkyl sulfate, POE alkyl ether sulfate, alkylamide sulfate, alkyl phosphate, POE alkyl phosphate, alkylamide phosphate , Alkyloylalkyltaurine salt, N-acylamino acid salt, POE alkylether carboxylate, alkylsulfosuccinate, sodium alkylsulfoacetate, acylated hydrolyzed collagen peptide salt, perfluoroalkylphosphoric acid ester, and the like. .
  • Cationic surfactants include alkyl trimethyl ammonium chloride, stearyl trimethyl ammonium chloride, stearyl trimethyl ammonium bromide, cetostearyl trimethyl ammonium chloride, distearyl dimethyl ammonium chloride, stearyldimethylbenzyl ammonium chloride, behenyl trimethyl ammonium bromide, and chloride.
  • Benzalkonium diethylaminoethyl amide stearate, dimethylaminopropyl amide stearate, lanolin derivative quaternary ammonium salt, and the like.
  • amphoteric surfactants include carboxybetaine type, amidebetaine type, sulfobetaine type, hydroxysulfobetaine type, amide sulfobetaine type, phosphobetaine type, aminocarboxylate type, imidazoline derivative type, amideamine type, etc. Amphoteric surfactants, and the like.
  • organic and inorganic pigments include silicic acid, silicic anhydride, magnesium silicate, talc, sericite, mica, kaolin, bengala, clay, bentonite, titanium coated mica, bismuth oxychloride, zirconium oxide, magnesium oxide, zinc oxide, titanium oxide, aluminum oxide.
  • Inorganic pigments such as calcium sulfate, barium sulfate, magnesium sulfate, calcium carbonate, magnesium carbonate, iron oxide, ultramarine, chromium oxide, chromium hydroxide, calamine, and complexes thereof; Polyamide, polyester, polypropylene, polystyrene, polyurethane, vinyl resin, urea resin, phenol resin, fluorine resin, silicon resin, acrylic resin, melamine resin, epoxy resin, polycarbonate resin, divinylbenzene-styrene copolymer, Organic pigments, such as silk powder, cellulose, CI pigment yellow, and CI pigment orange, and complex pigments of these inorganic pigments and organic pigments, etc. are mentioned.
  • organic powder examples include metal soaps such as calcium stearate; Alkyl phosphate metal salts, such as sodium zinc cetylate, a zinc laurylate, and calcium laurylate; Acylamino acid polyvalent metal salts such as N-lauroyl-beta-alanine calcium, N-lauroyl-beta-alanine zinc, and N-lauroyl glycine calcium; Amide sulfonic acid polyvalent metal salts such as N-lauroyl-taurine calcium and N-palmitoyl-taurine calcium; N, such as N-epsilon-lauroyl-L-lysine, N-epsilon-palmitoyl lizine, N-alpha-paritoylolnitine, N-alpha-lauroylarginine, N-alpha-hardened tallow fatty acid acylarginine, etc.
  • metal soaps such as calcium stearate
  • N-acyl polypeptides such as N-lauroylglycylglycine
  • Alpha-amino fatty acids such as alpha-aminocaprylic acid and alpha-aminolauric acid
  • Polyethylene polypropylene, nylon, polymethyl methacrylate, polystyrene, divinylbenzene/styrene copolymer, ethylene tetrafluoride, and the like.
  • UV absorbers include paraaminobenzoic acid, ethyl paraaminobenzoate, amyl paraaminobenzoate, octyl paraaminobenzoate, ethylene glycol salicylate, phenyl salicylate, octyl salicylate, benzyl salicate, butyl phenyl salicylate, homomentyl salicylate, benzyl cinnamate , Paramethoxycinnamic acid-2-ethoxyethyl, paramethoxycinnamic acid octyl, diparamethoxycinnamic acid mono-2-ethylhexane glyceryl, paramethoxycinnamic acid isopropyl, diisopropyl ⁇ diisopropyl cinnamic acid ester mixture, right Cannic acid, ethyl urocanate, hydroxymethoxybenzophenone, hydroxymethoxybenz
  • antioxidants examples include butylhydroxyanisole, propyl gallic acid, and lysorbic acid.
  • pH adjuster examples include citric acid, sodium citrate, malic acid, sodium malate, pmalic acid, sodium pmarate, succinic acid, sodium succinate, sodium hydroxide, sodium monohydrogen phosphate, and the like.
  • alcohol examples include higher alcohols such as cetyl alcohol.
  • blending ingredients that may be added are not limited thereto, and any of the above ingredients may be blended within a range not impairing the object and effect of the present invention, but 0.01-5% by weight or 0.01-3 based on the total weight. % By weight.
  • the formulation of the present invention is a lotion, paste, cream or gel, animal fibers, plant fibers, wax, paraffin, starch, tracant, cellulose derivatives, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc, or zinc oxide, etc. are used as carrier components. Can be used.
  • lactose When the formulation of the present invention is a powder or spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate, or polyamide powder may be used as a carrier component.
  • lactose talc
  • silica aluminum hydroxide
  • calcium silicate or polyamide powder
  • propellants such as butane or dimethyl ether.
  • a solvent, a solvating agent or an emulsifying agent is used as a carrier component, such as water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1 ,3-butylglycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or fatty acid ester of sorbitan.
  • a liquid diluent such as water, ethanol or propylene glycol as a carrier component, an ethoxylated isostearyl alcohol, a suspending agent such as polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, microcrystalline Cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tracant, and the like may be used.
  • the formulation of the present invention is a surfactant containing cleansing, as a carrier component, aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, isethionate, imidazolinium derivative, methyltaurate, sarcosinate, fatty acid amide Ether sulfates, alkylamidobetaines, fatty alcohols, fatty acid glycerides, fatty acid diethanolamides, vegetable oils, linoline derivatives, or ethoxylated glycerol fatty acid esters may be used.
  • the present invention provides an inhalant composition for preventing or improving respiratory inflammatory diseases, comprising as an active ingredient a protein isolated from a culture medium or a culture medium of Streptococcus pyogenes .
  • the inhalant composition of the present invention may include components commonly used in inhalation compositions, as well as proteins isolated from Streptococcus pyogenes culture medium or culture medium, such as antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins , Pigments, and conventional auxiliaries such as fragrances, and carriers.
  • the content of the protein isolated from the culture medium or culture medium of Streptococcus pyogenes of the present invention is 0.00001 to 99% by weight, preferably 0.0001-50% by weight, based on the total weight of the composition. , Preferably 0.5-20%, more preferably 1.0-10% by weight, but is not limited thereto.
  • Example 1 Inhibitory Effect of Inflammatory Cytokine IL-8 Expression of Cell Culture Fluid Derived from Streptococcus pyogenes in Gastric Epithelial Cell Line (AGS)
  • SP CM supernatant
  • EV Extracellular vesicles
  • AGS gastric epithelial cells
  • the cell culture solution is replaced with a new cell culture solution, and the negative control group (NT) is PBS, the positive control group (PT) is IL-1 ⁇ (10 ng/ml), experimental group (Exp1, Exp2) with IL-1 ⁇ and SP CM ( 10 ⁇ l) and SP CM EV(-) (10 ⁇ l) were treated and cultured in a 37°C, 5% CO 2 incubator for 24 hours, and then each cell culture was obtained to determine the level of expression of the inflammatory cytokine IL-8. It was quantified by the interest (using standard protocol) method.
  • FIG. 1 As shown in, it was confirmed that both SP CM and SP CM EV(-) inhibited the expression of IL-8, an inflammatory cytokine induced by IL-1 ⁇ , which indicates that the active ingredient that inhibits the expression of IL-8 is a water-soluble component. it means. (See Fig. 1)
  • Example 2 Inhibitory Effect of Inflammatory Cytokine IL-8 Expression of Streptococcus pyogenes-derived Cell Culture Solution Concentrated with 100 kDa Ultrafiltration Filter in Gastric Epithelial Cell Line (AGS)
  • the culture solution of Streptococcus was isolated by the following method.
  • the prepared SP CM 1L was subjected to ultrafiltration (using standard protocol) using a Quixstand benchtop system (GE Healthcare) and a 100kDa ultrafiltration filter (GE Healthcare), and the buffer was exchanged with 2 L of Phosphate Buffered saline (PBS). 100ml of SP CM that did not pass through the kDa ultrafiltration filter was prepared. Thereafter, the SP CM prepared according to the method of Example 1 was ultracentrifuged to remove the water-insoluble component, and SP CM >100 kDa was finally prepared, taking only the water-soluble portion.
  • PBS Phosphate Buffered saline
  • AVS gastric epithelial cells
  • nucleated cell culture solution RPMI, 10% FBS, antibiotics
  • nucleated cell culture solution was removed, treated with trypsin-EDTA (0.05%) ml, and left at 37° C. for 5 minutes.
  • trypsin-EDTA 0.05%) ml
  • collect the suspended cells with 5 ml of cell culture solution, dispense into a 15 ml tube, centrifuge at 1500 rpm for 5 minutes, remove the existing cell culture, and make a new cell culture solution so that the gastric epithelial cells (AGS) become 1x10 5 cells/ml. It was diluted in and dispensed into a 12-well plate each 1ml, and incubated for 24 hours in a 37°C, 5% CO 2 incubator.
  • the expression level of IL-8 was analyzed by ELISA method, as shown in FIG. Likewise, it was confirmed that the water-soluble component in SP CM>100 kDa inhibited the expression of IL-8, an inflammatory cytokine induced by IL-1 ⁇ (see FIG. 2).
  • BHI Infusion
  • SP CM supernatant
  • the prepared pyogenes CM 1 L was subjected to ultrafiltration (using standard protocol) using a Quixstand benchtop system (GE Healthcare) and a 100 kDa ultrafiltration filter (GE Healthcare), and buffer exchange was performed with 2 L of Phosphate Buffered saline (PBS). Thus, 100 ml of SP CM that did not pass through the 100 kDa ultrafiltration filter was finally prepared.
  • GE Healthcare Quixstand benchtop system
  • PBS Phosphate Buffered saline
  • the SP CM prepared in the same manner as in Example 1 was ultracentrifuged to remove the water-insoluble component, and SP CM>100 kDa, which took only the water-soluble part, was finally prepared, and the chemical properties of the prepared SP CM>100 kDa were obtained. For analysis, it was left at 100°C for 15 minutes and then at 4°C for 10 minutes.
  • AVS gastric epithelial cells
  • nucleated cell culture solution RPMI, 10% FBS, antibiotics
  • nucleated cell culture solution was removed, treated with trypsin-EDTA (0.05%) 1 ml, and left at 37° C. for 5 minutes.
  • trypsin-EDTA 0.05%) 1 ml, and left at 37° C. for 5 minutes.
  • collect the suspended cells with 5 ml of cell culture solution, dispense into a 15 ml tube, centrifuge at 1500 rpm for 5 minutes, remove the existing cell culture, and make a new gastric epithelial cell (AGS) of 1 ⁇ 10 5 cells/ml. Diluted in the cell culture solution, 1 ml was dispensed into a 12-well plate, and cultured in a 37°C, 5% CO 2 incubator for 24 hours.
  • SP obtained with PBS for the negative control group (NT), IL-1 ⁇ (10 ng/ml) for the positive control group (PT), and IL-1 ⁇ for the experimental groups (Exp1, Exp2) CM>100 kDa (10 ⁇ l) and heat treated (HI) SP CM> 100 kDa (10 ⁇ l) were treated and incubated for 24 hours in a 37°C, 5% CO 2 incubator, and each cell culture solution was obtained to obtain inflammatory cytokines.
  • the level of expression of IL-8 was quantified by ELISA (using standard protocol).
  • Example 4 Inhibitory effect of the inflammatory cytokine IL-8 expression by Helicobacter pylori (HP99) of SP CM>100 kDa in gastric epithelial cell line (AGS)
  • the water-soluble component SP CM>100 kDa was separated and purified from the cell culture solution derived from Streptococcus by the method of Example 2, and the expression of IL-8 expressed by Helicobacter pylori (HP99) in the gastric epithelial cell line (AGS) was SP CM.
  • HAS gastric epithelial cell line
  • the gastric epithelial cell line (AGS) was cultured by the method of Example 1.
  • the cell culture solution was replaced with a new cell culture solution, and SP CM >100 kDa obtained with PBS for the negative control group (NT), Helicobacter pylori (HP99, 10 ⁇ l) for the positive control group (PT), and Helicobacter pylori for the experimental group (Exp) (10 ⁇ l) was treated and incubated for 24 hours in a 37°C, 5% CO 2 incubator, and then each cell culture solution was obtained and the expression level of the inflammatory cytokine IL-8 was quantified by ELISA (using a standard protocol) method. .
  • the expression level of IL-8 was analyzed by ELISA method, as shown in FIG. As described above, it was confirmed that the water-soluble component of SP CM>100 kDa inhibited the expression of IL-8 by Helicobacter pylori in the AGS cell line. (See Fig. 4)
  • Example 5 Inhibitory effect of IL-8, an inflammatory cytokine, of SP CM>100 kDa in colon epithelial cell line
  • HT29 1x10 8 colonic epithelial cells
  • nucleated cell culture solution RPMI, 10% FBS, antibiotics
  • the culture solution was removed, treated with 1 ml of trypsin-EDTA (0.05%), and left at 37°C for 5 minutes.
  • trypsin-EDTA 0.05%)
  • collect the suspended cells with 5 ml of cell culture solution, dispense into a 15 ml tube, centrifuge at 1500 rpm for 5 minutes, remove the existing cell culture, and dilute the HT29 cells to 1x10 5 cells/ml in a new cell culture solution.
  • 1 ml was dispensed into a 12-well plate and incubated for 24 hours in a 37°C, 5% CO 2 incubator.
  • the cell culture solution was replaced with a new cell culture solution, obtained with PBS for the negative control group (NT), E. coli C4 EV (1 ⁇ g/ml) for the positive control group (PT), and E. coli C4 EV for the experimental group (Exp).
  • NT negative control group
  • PT positive control group
  • Exp E. coli C4 EV for the experimental group
  • One SP CM>100 kDa (10 ⁇ l) was treated and incubated for 24 hours in a 37°C, 5% CO 2 incubator, and then each cell culture was obtained and the expression level of the inflammatory cytokine IL-8 was determined by ELISA (standard protocol Use) method.
  • E. coli-derived extracellular vesicles E. coli C4 EV
  • E. coli-derived extracellular vesicles E. coli C4 EV
  • SP CM>100 kDa in the colon epithelial cell line (HT29) according to the above method.
  • FIG. 5 the expression of IL-8 by the extracellular vesicles derived from E. coli (E. coli C4 EV) in the HT29 cell line with a water-soluble component of SP CM>100 kDa as shown in FIG. It was confirmed that it suppressed. (See Fig. 5)
  • a protein of 100 kDa with the highest expression was purified.
  • native PAGE was performed by loading an excess (500 ⁇ g) of SP CM>100 kDa onto a 6% native polyacryl amide gel.
  • Native PAGE was performed to confirm whether a 100 kDa-sized protein (F1) was well separated (FIG. 6A).
  • Example 1 In order to evaluate the effectiveness of the 100 kDa protein (F1) isolated from SP CM>100 kDa, the expression of the inflammatory cytokine IL-8 in gastric epithelial cells (AGS) was evaluated and confirmed as in Example 1.
  • F1 100 kDa protein isolated from SP CM>100 kDa
  • IL-1 ⁇ or the isolated 100 kDa protein (F1) was added to the gastric epithelial cell line (AGS) in an increasing amount (5, 10. 20. 50 ⁇ l) and treated with IL-1 ⁇ for 24 hours.
  • AGS gastric epithelial cell line
  • FIG. 6B the isolated 100 kDa protein (F1) inhibited the expression of IL-8 by IL-1 ⁇ in AGS cell lines in a concentration-dependent manner. I confirmed that. (See Fig. 6B)
  • SP CM>100 kDa was orally administered to a DSS-induced colitis mouse model for 7 days, and the length of the large intestine (see FIGS. 8A and 8B), change in body weight (see FIG. 9A), and feed intake (see FIG. 9B)
  • the length of the large intestine was longer than that of the DSS-induced colitis mouse model, and the amount of change in body weight was also small.
  • the intake was high and the disease score was low.
  • SP CM>100 kDa 200 ⁇ l prepared by the method of Example 2 was orally administered using a sonde (sonde, rod for oral administration) three times at 2 hour intervals.
  • a sonde sonde, rod for oral administration
  • 100 ⁇ l of 80% ethanol was orally administered.
  • the mouse was dissected to measure the shape, size, and degree of inflammation of the stomach.
  • mice 6 weeks old, female, BALB/c mice were placed in cages of 6 without discrimination, and an acclimation time was given for 2 days, and after 1 day, mouse cancer cells (CT26) were injected subcutaneously to the right side of the mouse (1 ⁇ 10 5 cells/mouse).
  • CT26 mouse cancer cells
  • 200 ug of SP CM100 kDa prepared by the method of Example 2 was administered intraperitoneally every 8 hours.
  • the size of the cancer tissue was measured every 3 days after injection of cancer cells, and the mouse was dissected the next day after the final administration of SP CM>100 kDa (after 28 days). was collected and observed.
  • Example 10 Antiobesity and fatty liver improvement effect of SP CM>100kDa in a high fat diet-induced metabolic disease mouse model
  • the present inventors confirmed the anti-inflammatory effect when the protein isolated from the Streptococcus pyogenes culture medium or the culture medium was treated in an inflammatory disease model, and the Streptococcus pyogenes culture medium or protein according to the present invention is an inflammatory disease, metabolism It can be usefully used in the development of medicines or health functional foods, inhalants, cosmetics, etc. for preventing diseases and cancer, improving or treating symptoms, and thus has industrial applicability.

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Abstract

본 발명은 스트렙토코커스 파이오제네스( Streptococcus pyogenes) 배양액 또는 배양액으로부터 분리된 단백질을 유효성분으로 포함하는 염증질환, 대사질환, 암의 예방, 개선, 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명자들은 염증질환, 대사질환, 및 암 모델에서 스트렙토코커스 파이오제네스( Streptococcus pyogenes) 배양액 또는 배양액으로부터 분리된 단백질을 투여하여 항염증, 항비만, 간기능 개선, 항암 효과를 확인하였는 바, 본 발명에 따른 스트렙토코커스 파이오제네스 배양액 또는 배양액으로부터 분리된 단백질은 염증질환, 대사질환, 및 암을 예방, 증상을 개선 또는 치료하기 위한 의약품 또는 건강기능식품, 흡입제, 화장료 등의 개발에 유용하게 이용될 수 있다.

Description

스트렙토코커스 파이오제네스 세균 유래 단백질 및 이의 용도
본 발명은 스트렙토코커스 파이오제네스 세균 유래 단백질 및 이의 용도에 관한 것으로, 보다 구체적으로 스트렙토코커스 파이오제네스 세균의 배양액 또는 배양액에서 분리된 단백질을 이용한 염증 질환, 대사질환, 및 암 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
본 출원은 2019년 04월 26일에 출원된 한국특허출원 제10-2019-0049284호 및 2020년 04월 17일에 출원된 한국특허출원 제10-2020-0046639호에 기초한 우선권을 주장하며, 해당 출원의 명세서 및 도면에 개시된 모든 내용은 본 출원에 원용된다.
호중구(neutrophil)는 포유류에서 가장 많은 비율을 차지하는 백혈구로서, 세균 감염과 같은 선천 면역반응에서 중요한 역할을 담당한다. 인터류킨-8 (interleukin-8, 이하 IL-8)은 염증세포, 상피세포, 혈관내피세포 등에서 분비되어 호중구성 염증을 일으키는 사이토카인으로, 산화성 스트레스(oxidative stress)에 의해 IL-8의 분비가 증가하고, 이는 또 다른 산화성 스트레스를 유발하여 염증반응을 증폭시킨다. IL-8은 호중구성 염증을 특징으로 하는 질환뿐만 아니라, 비만, 당뇨, 비알콜성간염 등의 대사질환, 암, 우울증, 조현병 등의 정신질환의 병인과도 밀접한 관련이 있음이 보고되고 있다.
스트렙토코커스 속 세균은 구강, 질 등과 같이 인체에 공생하는 통기성 그람양성세균으로서, 발효과정에서 유산을 분비하고, 50개 이상의 종을 포함하고 있다. 이 중에서 스트렙토코커스 파이오제네스( Streptococcus pyogenes)는 구강에 상재하는 알파-용혈성 스트렙토코커스균으로서 간혹, 감염성심내막염을 일으키는 균으로 알려져 있다.
한편, 사이토카인 분비를 억제하여 염증 질환을 치료하는 발명은 다수 있으나(KR 10-1478089, KR 10-1670317 등), 스트렙토코커스 파이오제네스 배양액 또는 배양액으로부터 분리된 단백질이 염증 질환의 예방 또는 치료를 위해 이용된 경우는 없는 실정이다.
본 발명자들은 스트렙토코커스 파이오제네스 균주를 배양하여 얻은 배양액으로부터 단백질을 분리하였고, 상기 단백질이 염증성 사이토카인 발현을 효과적으로 억제함을 실험적으로 확인하였는바, 이에 기초하여 본 발명을 완성하였다.
이에, 본 발명의 목적은 스트렙토코커스 파이오제네스( Streptococcus pyogenes) 배양액 또는 배양액으로부터 분리된 단백질을 유효성분으로 포함하는, 염증성 질환, 대사성 질환 및 암으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 스트렙토코커스 파이오제네스( Streptococcus pyogenes) 배양액 또는 배양액으로부터 분리된 단백질을 유효성분으로 포함하는, 염증성 질환, 대사성 질환 및 암으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 스트렙토코커스 파이오제네스( Streptococcus pyogenes) 배양액 또는 배양액으로부터 분리된 단백질을 유효성분으로 포함하는, 호흡기 염증질환의 예방 또는 개선용 흡입제 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 스트렙토코커스 파이오제네스( Streptococcus pyogenes) 배양액 또는 배양액으로부터 분리된 단백질을 유효성분으로 포함하는, 염증성 피부 질환의 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 스트렙토코커스 파이오제네스( Streptococcus pyogenes) 배양액 또는 배양액으로부터 분리된 단백질을 유효성분으로 포함하는, 염증성 질환, 대사성 질환 및 암으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 예방, 치료 또는 개선용 조성물을 제공한다.
상기 조성물은 약학적 조성물, 식품 조성물, 흡입제 조성물, 또는 화장료 조성물을 포함하고 또한, 상기 식품 조성물은 건강기능식품 조성물일 수 있다.
또한, 본 발명은 스트렙토코커스 파이오제네스( Streptococcus pyogenes) 배양액 또는 배양액으로부터 분리된 단백질을 유효성분으로 포함하는, 호흡기 염증질환의 예방 또는 개선용 흡입제 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 스트렙토코커스 파이오제네스( Streptococcus pyogenes) 배양액 또는 배양액으로부터 분리된 단백질을 유효성분으로 포함하는, 염증성 피부 질환의 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 구현예로, 상기 단백질은 스트렙토코커스 파이오제네스 배양액에서 분리되는 것일 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로, 상기 단백질은 100 kDa 이상일 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예로, 본 발명에 따른 조성물은 염증성 사이토카인을 억제할 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예로 상기 조성물은 헬리코박터 파일로리 또는 대장균 유래 세포밖 소포에 의해 유발되는 염증성 사이토카인을 억제할 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예로 상기 염증성 사이토카인은 인터류킨-8(interleukin-8)일 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 암은 폐암, 후두암, 구강암, 위암, 대장-직장암, 간암, 담관암, 췌장암, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 신장암, 방광암, 전립선암, 뇌종양, 백혈병, 및 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 염증성 질환은 비염, 천식 및 만성폐쇄성폐질환을 포함하는 호흡기 질환; 치주염을 포함하는 구강 내 염증 질환; 위염 및 염증성 대장염을 포함하는 소화기 질환; 아토피피부염, 건선, 여드름을 포함하는 피부질환; 동맥경화증 및 이의 합병증; 만성간염 및 간경변; 류마치스관절염, 골관절염을 포함하는 관절질환; 및 염증에 의해 발생하는 암;으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 대사성 질환은 비만, 지방간, 간경변, 간허혈, 간농양, 고지혈증, 고콜레스테롤증, 당뇨병, 이상지질혈증, 동맥경화증, 관상동맥질환, 알콜성 지방간염, 비알콜성 지방간염 및 뇌졸중으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 호흡기 염증질환은 감기, 폐렴, 폐기종, 폐섬유화, 급성비염, 만성비염, 부비동염, 알레르기비염, 급성기관지염, 만성기관지염, 천식 및 만성폐쇄성폐질환 (COPD)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 염증성 피부 질환은 피부 염증, 건선, 홍반성 루푸스, 비듬, 급ㆍ만성 습진, 접촉성 피부염, 아토피성 피부염, 지루성 피부염, 만성단순태선, 간찰진, 박탈 피부염, 구진상 두드러기, 일광 피부염 및 여드름으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 상기 스트렙토코커스 파이오제네스( Streptococcus pyogenes) 배양액 또는 배양액으로부터 분리된 단백질을 개체에 투여함으로써 염증성 질환, 대사성 질환 및 암으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 질환을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 스트렙토코커스 파이오제네스( Streptococcus pyogenes) 배양액 또는 배양액으로부터 분리된 단백질의 염증성 질환, 대사성 질환 및 암으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 질환의 치료 용도를 제공한다.
또한, 본 발명은 염증성 질환, 대사성 질환 및 암으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 치료용 약제 제조를 위한 상기 스트렙토코커스 파이오제네스( Streptococcus pyogenes) 배양액 또는 배양액으로부터 분리된 단백질의 용도를 제공한다.
본 발명자들은 스트렙토코커스 파이오제네스( Streptococcus pyogenes) 배양액 또는 배양액으로부터 분리된 단백질을 염증 질환 모델에 처리하였을 때 항염증 효과를 확인하였는바, 본 발명에 따른 스트렙토코커스 파이오제네스 배양액 또는 단백질은 염증질환, 대사질환, 암을 예방, 증상을 개선 또는 치료하기 위한 의약품 또는 건강기능식품, 흡입제, 화장료 등의 개발에 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 위 상피 세포주(AGS, ATCC CRL-1739)에서 IL-1α(10 ng/ml)가 유도하는 염증성 사이토카인 IL-8의 발현을 억제하는 스트렙토코커스 파이오제네스 배양액의 효능을 평가한 결과이다.
도 2는 100 kDa 크기의 여과를 통해 저분자화합물과 100 kDa 보다 작은 단백질을 제거하고, 이를 초원심분리하여 비수용성 부분을 제거한 스트렙토코커스 파이오제네스 배양액(SP CM>100 kDa)의 수용성 성분의 IL-8 발현 억제기능을 평가한 결과이다.
도 3은 열처리를 한 스트렙토코커스 파이오제네스 배양액(SP CM>100 kDa)의 IL-8 발현 억제기능을 평가한 결과이다.
도 4는 위 상피 세포주(AGS)에서 헬리코박터 파일로리(HP99)가 유도하는 IL-8의 발현을 억제하는 스트렙토코커스 파이오제네스 배양액(SP CM>100 kDa)의 효능을 평가한 결과이다.
도 5는 대장 상피 세포주(ATCC HTB-38)에서 대장균 유래 세포밖 소포가 유도하는 IL-8의 발현을 억제하는 스트렙토코커스 파이오제네스 배양액(SP CM>100 kDa)의 효능을 평가한 결과이다.
도 6a는 스트렙토코커스 파이오제네스 배양액(SP CM>100 kDa) 단백질의 구성을 1D native-PAGE(polyacrylamide gel electrophoresis)로 분석하고 그 중 농도가 높은 단백질(F1)을 분리 및 정제한 결과이다.
도 6b는 스트렙토코커스 파이오제네스 배양액(SP CM>100 kDa)에서 분리 및 정제한 F1의 IL-8 발현 억제기능을 평가한 결과이다.
도 7은 Dextran Sulfate Sodium(DSS)으로 유도된 대장염 (DSS-colitis) 마우스 모델에서 스트렙토코커스 파이오제네스 배양액(SP CM>100 kDa)의 효능을 평가하기 위한 프로토콜을 그림으로 도시한 것이다.
도 8a는 Dextran Sulfate Sodium(DSS)으로 유도된 대장염 (DSS-colitis) 마우스 모델에서 마우스 대장의 길이를 측정하여 스트렙토코커스 파이오제네스 배양액(SP CM>100 kDa)의 효능을 평가한 결과이다.
도 8b는 도 8a의 결과를 그래프로 나타낸 것이다.
도 9a는 Dextran Sulfate Sodium(DSS)으로 유도된 대장염 (DSS-colitis) 마우스 모델에서 마우스 체중의 변화를 측정하여 스트렙토코커스 파이오제네스 배양액(SP CM>100 kDa)의 효능을 평가한 결과이다.
도 9b는 Dextran Sulfate Sodium(DSS)으로 유도된 대장염 (DSS-colitis) 마우스 모델에서 마우스의 먹이 섭취량을 측정하여 스트렙토코커스 파이오제네스 배양액(SP CM>100 kDa)의 효능을 평가한 결과이다.
도 10a는 Dextran Sulfate Sodium(DSS)으로 유도된 대장염 (DSS-colitis) 마우스 모델에서 마우스의 체중변화, 대변의 성상 그리고 혈변의 정도를 질병활성도(disease activity index, DAI) 점수로 평가하기 위한 기준이다.
도 10b는 도 10a의 기준에 따라 Dextran Sulfate Sodium(DSS)으로 유도된 대장염(DSS-colitis) 마우스 모델에서 스트렙토코커스 파이오제네스 배양액(SP CM>100 kDa)의 효능을 질병활성도로 평가한 결과이다.
도 10c는 도 10b의 결과를 그래프로 나타낸 것이다.
도 11은 에탄올-유도 급성위염 마우스 모델에서 스트렙토코커스 파이오제네스 배양액(SP CM>100 kDa)의 효능을 평가하기 위한 프로토콜을 그림으로 도시한 것이다.
도 12a는 에탄올-유도 급성위염 마우스 모델에서 마우스 위의 외형의 변화 및 크기변화를 관찰하여 스트렙토코커스 파이오제네스 배양액(SP CM>100 kDa)의 항염증 효능을 평가한 결과이다.
도 12b는 도 12a의 위의 크기 변화 결과를 그래프로 나타낸 것이다.
도 12c는 에탄올-유도 급성위염 마우스 모델에서 위의 염증 정도를 관찰하여 스트렙토코커스 파이오제네스 배양액(SP CM>100 kDa)의 항염증 효능을 평가한 결과이다.
도 12d는 80% 에탄올-유도 급성위염 마우스 모델에서 위의 염정 정도를 관찰하여 스트렙토코커스 파이오제네스 배양액(SP CM 200μg)의 항염증 효능을 평가한 결과이다.
도 13은 암세포 이식 마우스 암 모델에서 스트렙토코커스 파이오제네스 배양액(SP CM> 100kDa)의 효능을 평가하기 위한 실험 프로토콜을 나타낸 것이다.
도 14a는 암세포 이식 마우스 암 모델에서 암 조직의 성장 속도를 평가한 결과이다.
도 14b는 암세포 이식 마우스 암 모델에서 암 조직의 부피를 평가한 결과이다.
도 15은 고지방 식이-유도 비만 마우스 모델에서 스트렙토코커스 파이오제네스 배양액(SP CM>100 kDa)의 효능을 평가하기 위한 프로토콜을 그림으로 도시한 것이다.
도 16은 고지방 식이-유도 비만 마우스 모델에서 체중 변화를 관찰하여 스트렙토코커스 파이오제네스 배양액(SP CM>100 kDa)의 항비만 효능을 평가한 결과이다.
도 17은 고지방 식이-유도 비만 마우스 모델에서 혈액의 ALT (alanine aminotransferase), AST (arspartate aminotransferase)을 분석하여 스트렙토코커스 파이로제네스 배양액 (SP CM>100 kDa)의 지방간 (steatosis) 치료 효능을 평가한 결과이다.
본 발명자들은 스트렙토코커스 파이오제네스( Streptococcus pyogenes) 유래 배양액 및 배양액에서 분리된 단백질이 염증성 사이토카인 발현을 억제하고, 염증 질환, 대사질환, 및 암 모델에서 치료효과가 있음을 확인하였는 바, 이에 기초하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 일실시예에서는, 스트렙토코커스 파이오제네스 배양액 중 수용성인 상층액이 염증성 사이토카인 IL-8의 발현을 억제하는 효과가 있음을 확인하였으며(실시예1 참조), 구체적으로, 분자량이 100 kDa 이상인 수용성 성분이 염증성 사이토카인 IL-8의 발현을 억제함을 확인하였다(실시예2 참조).
본 발명의 다른 실시예에서는, IL-8의 발현을 억제하는 유효성분이 열에 약한 단백질 성분임을 확인하였으며(실시예3 참조), 스트렙토코커스 파이오제네스 유래 단백질이 헬리코박터 파일로리 또는 대장균 유래 세포밖 소포에 의해 유발되는 염증성 사이토카인 IL-8 발현을 억제하는 효과가 있음을 확인하였다(실시예 4 및 5 참조).
본 발명의 또 다른 실시예에서는, 스트렙토코커스 파이오제네스 유래 100 kDa의 단백질이 농도 의존적으로 IL-8의 발현을 억제하는 것을 확인하였으며(실시예6 참조), 스트렙토코커스 파이오제네스 유래 단백질이 위염 또는 대장염 마우스 모델에서 항염증 효과가 있음을 확인하였다(실시예 7 및 8 참조).
본 발명의 또 다른 실시예에서는, 스트렙토코커스 파이오제네스 유래 단백질이 암 모델에서 항암 효과가 있음을 확인하였다(실시예 9 참조).
본 발명의 또 다른 실시예에서는, 스트렙토코커스 파이오제네스 유래 단백질이 대사질환 모델에서 항비만 및 간염 억제 효과가 있음을 확인하였다(실시예 10 참조).
본 발명의 실시예 결과를 통해 본 발명에 따른 스트렙토코커스 파이오제네스 유래 단백질이 항염증, 항비만, 간 기능 보호, 및 항암 효과를 나타냄을 확인하였는바, 상기 단백질은 염증성 질환, 대사성 질환, 암의 예방, 개선, 또는 치료용도로 이용될 수 있다.
이에, 본 발명은 스트렙토코커스 파이오제네스( Streptococcus pyogenes) 배양액 또는 배양액으로부터 분리된 단백질을 유효성분으로 포함하는, 염증성 질환, 대사성 질환 및 암으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "배양액"은 본 발명에 따른 스트렙토코커스 파이오제네스 균을 적합한 액체 배지에서 배양한 배양액 자체, 상기 배양액을 여과 또는 원심분리하여 균주를 제거한 여액(여과액 또는 원심분리한 상등액), 상기 배양액을 초음파 처리하거나 상기 배양액에 용해효소(lysozyme)를 처리하여 수득한 세포 파쇄액 등을 포함하며, 바람직하게는 원심분리 후 상층액을 의미하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한, 상기 배양액은 배양액의 농축액 및 상기 배양액의 건조물을 모두 포함할 수 있다. 본 발명에서, 상기 배양액은 세포외소포가 제거된 것일 수 있다.
본 발명의 단백질은 다음과 같은 순서로, 분리 정제된 것일 수 있다.
a) 스트렙토코커스 파이오제네스를 포함하는 액체 배지를 원심분리하여 상층액을 수득하는 단계;
b) 상층액을 여과하는 단계; 및
c) 여과된 상층액에서 단백질을 분리하는 단계.
본 발명에서 사용되는 용어, "염증성 질환"이란, 면역계를 이루는 체액성 매개체(humoral mediator)가 직접 반응하거나, 국부적 또는 전신적 작동 시스템(effector system)을 자극함으로써 일어나는 연쇄적인 생체반응에 의해 유발되는 질환으로, 예를 들어 비염, 천식 및 만성폐쇄성폐질환을 포함하는 호흡기 질환; 치주염을 포함하는 구강 내 염증 질환; 위염 및 염증성 대장염을 포함하는 소화기 질환; 아토피피부염, 건선, 여드름을 포함하는 피부질환; 동맥경화증 및 이의 합병증; 만성간염 및 간경변; 류마치스관절염, 골관절염을 포함하는 관절질환; 및 염증에 의해 발생하는 암;으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 염증 질환은, 예를 들어, 감염성 염증 질환, 암, 염증성 피부질환, 크론씨 질환(Crohn's desease) 및 궤양성 대장염과 같은 염증성 장 질환, 복막염, 골수염, 봉소염, 뇌막염, 뇌염, 췌장염, 외상 유발 쇼크, 기관지 천식, 알레르기성 비염, 낭포성 섬유증, 뇌졸중, 급성 기관지염, 만성 기관지염, 급성 세기관지염, 만성 세기관지염, 골관절염, 통풍, 척추관절병증, 강직성 척추염, 라이터 증후군, 건선성 관절병증, 장질환 척추염, 연소자성 관절병증, 연소자성 강직성 척추염, 반응성 관절병증, 감염성 관절염, 후-감염성 관절염, 임균성 관절염, 결핵성 관절염, 바이러스성 관절염, 진균성 관절염, 매독성 관절염, 라임 병,'혈관염 증후군'과 관련된 관절염, 결절성 다발동맥염, 과민성 혈관염, 루게릭 육아종증, 류마티스성 다발성근육통, 관절 세포 동맥염, 칼슘 결정 침착 관절병증, 가성 통풍, 비-관절 류마티즘, 점액낭염, 건초염, 상과염(테니스 엘보), 신경병증성 관절 질환(charco and joint), 출혈성 관절증(hemarthrosic), 헤노흐-쉔라인 자반병, 비후성 골관절병증, 다중심성 세망조직구종, 수르코일로시스(surcoilosis), 혈색소증, 겸상 적혈구증 및 기타 혈색소병증, 고지단백혈증, 저감마글로불린혈증, 가족성 지중해열, 베하트 병, 전신성 홍반성 루푸스, 재귀열, 건선, 다발성 경화증, 패혈증, 패혈성 쇼크, 다장기 기능장애 증후군, 급성 호흡곤란 증후군, 만성 폐쇄성 폐질환(chronic obstructive pulmonary disease), 류마치스성 관절염(rheumatoid arthritis), 급성 폐손상(acute lung injury) 및 기관지 폐 형성장애(broncho-pulmonary dysplasia)로 이루어진 군에서 선택된 것일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명에서 사용되는 용어 “감염성 염증 질환”은 예를 들어, 살모넬라증(salmonellosis), 식중독, 장티푸스, 파라티푸스, 패혈증(sepsis), 패혈성 쇼크(septic shock), 전신성 염증반응 증후군(systemic inflammatory response syndrome, SIRS), 다장기 기능장애 증후군(multiple organ dysfunction syndrome, MODS), 폐렴, 폐결핵, 결핵, 감기, 인플루엔자, 기도 감염, 비염, 비인두염, 중이염, 기관지염, 임파선염, 이하선염, 림프절염, 구순염, 구내염, 관절염, 근육염, 피부염, 혈관염, 치은염, 치근막염, 각막염, 결막염, 창상 감염, 복막염, 간염, 골수염, 봉소염, 수막염, 뇌염, 뇌농양, 뇌척수염, 뇌막염, 신장염, 심장염, 심내막염, 장염, 위염, 식도염, 십이지장염, 대장염, 요로염, 방광염, 질염, 자궁경부염, 난관염, 감염성 홍반, 세균성 이질, 농양 및 궤양, 균혈증, 설사, 이질, 위장염, 위장관염, 비뇨생식기 농양, 개방성 창상 또는 상처의 감염, 화농성 염증, 농양, 종기, 농피증, 농가진, 모낭염, 봉소염, 수술 후 상처 감염, 피부열상증후군, 피부화상증후군, 혈전성 혈소판 감소증, 용혈성 요독 증후군, 신부전증, 신우신염, 사구체신염, 신경계 농양, 중이염, 부비동염, 인두염, 편도선염, 유양돌기염, 연조직염, 치성 감염, 누낭염, 늑막염, 복부 농양, 간농양, 담낭염, 비장 농양, 심낭염, 심근염, 태반염, 양수염, 유방염, 유선염, 산욕열, 독소성 쇼크증후군(toxic shock syndrome), 라임(lyme)병, 가스회저, 아테롬성 동맥경화증, 마이코박테리움 아비움 증후군(MAC), 장출혈성 대장균(EHEC) 감염증, 장병원성 대장균(EPEC) 감염증, 장침습성 대장균 감염증(EIEC), 메치실린 내성 황색포도상구균(MRSA) 감염증, 반코마이신 내성 황색포도상구균(VRSA) 감염증 및 리즈테리아증(listerosis)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상 일 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, “소화기 질환”이란, 예를 들어, 위염, 대장염, 크론병, 장관형 베체트병, 장 병변, 궤양성 대장염, 출혈성 직장 궤양 및 회장 낭염 (囊炎)을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 사용되는 용어, "대사성 질환"이란, 탄수화물 또는 지질 대사의 이상에 의해 발생하는 질환으로, 본 발명에서 대사질환은 비만, 지방간, 간경변, 간허혈, 간농양, 고지혈증, 고콜레스테롤증, 당뇨병, 이상지질혈증, 동맥경화증, 관상동맥질환, 알콜성 지방간염, 비알콜성 지방간염 및 뇌졸중으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 질환을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 사용되는 용어, "암"이란, 정상세포가 암세포로 변화하여 암세포의 증식에 의해 발생하는 질환으로, 본 발명에서 암은 폐암, 후두암, 구강암, 식도암, 위암, 대장-직장암, 간암, 담관암, 췌장암, 유방암, 난소암, 신장암, 방광암, 전립선암, 자궁경부암, 뇌종양, 백혈병, 림프종 등으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 질환을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 사용되는 용어 "염증성 피부 질환"은 이에 한정되지는 않으나, 피부 염증, 건선, 홍반성 루푸스, 비듬, 급ㆍ만성 습진, 접촉성 피부염, 아토피성 피부염, 지루성 피부염, 만성단순태선, 간찰진, 박탈 피부염, 구진상 두드러기, 일광 피부염 및 여드름 등이 포함된다.
본 발명에서 사용되는 용어 "염증성 사이토카인"이란, 림프구나 대식세포 등에서 생산되는 미량의 생리활성물질 중 특히, 세균이나 바이러스 감염, 종상, 조직손상 등에 따른 염증반응에 깊이 관여하는 사이토카인을 의미한다.
본 발명에서 염증성 사이토카인은 IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, TNF-α, TNF-β, TGF-β(transforming growth factor-β), MIG(CXCL9) 또는 인터페론(interferons, IFNs)일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 사용되는 용어 "인터류킨-8(interleukin-8, IL-8)"이란, 세 가닥 β판상구조와 α나선구조로 구성된 분자량 약 8,000인 헤파린친화성 염기성 단백질로 케모카인아족에 속하고 염증시 대식세포를 비롯한 여러 세포에서 생성된다. 인터류킨-8 염색체 유전자는 4개의 활성부위와 3개의 비활성부위로 구성되며 상류역에 있는 NFkB, C/EBP, AP-1결합요소의 상승작용으로 유전자가 활성화된다. 인터류킨-8은 급성 염증 반응시 호중구의 유주 활성화에 관여하는 본질적인 인자이다.
본 발명의 상기 단백질은 스트렙토코커스 파이오제네스의 배양액에서 분리될 수 있다.
본 발명의 조성물 내의 상기 스트렙토코커스 파이오제네스( Streptococcus pyogenes) 배양액 또는 배양액으로부터 분리된 단백질의 함량은 질환의 증상, 증상의 진행 정도, 환자의 상태 등에 따라서 적절히 조절 가능하며, 예컨대, 전체 조성물 중량을 기준으로 0.0001 내지 99.9중량%, 또는 0.001 내지 50중량%일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 함량비는 용매를 제거한 건조량을 기준으로 한 값이다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 상기 부형제는 예를 들어, 희석제, 결합제, 붕해제, 활택제, 흡착제, 보습제, 필름-코팅 물질, 및 제어방출첨가제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 서방형 과립제, 장용과립제, 액제, 점안제, 엘실릭제, 유제, 현탁액제, 주정제, 트로키제, 방향수제, 리모나아데제, 정제, 서방형정제, 장용정제, 설하정, 경질캅셀제, 연질캅셀제, 서방캅셀제, 장용캅셀제, 환제, 틴크제, 연조엑스제, 건조엑스제, 유동엑스제, 주사제, 캡슐제, 관류액, 경고제, 로션제, 파스타제, 분무제, 흡입제, 패취제, 멸균주사용액, 또는에어로졸 등의 외용제 등의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 상기 외용제는 크림, 젤, 패치, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제 등의 제형을 가질 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.
본 발명에 따른 정제, 산제, 과립제, 캡슐제, 환제, 트로키제의 첨가제로 옥수수전분, 감자전분, 밀전분, 유당, 백당, 포도당, 과당, 디-만니톨, 침강탄산칼슘, 합성규산알루미늄, 인산일수소칼슘, 황산칼슘, 염화나트륨, 탄산수소나트륨, 정제 라놀린, 미결정셀룰로오스, 덱스트린, 알긴산나트륨, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 카올린, 요소, 콜로이드성실리카겔, 히드록시프로필스타치, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 1928, 2208, 2906, 2910, 프로필렌글리콜, 카제인, 젖산칼슘, 프리모젤 등 부형제; 젤라틴, 아라비아고무, 에탄올, 한천가루, 초산프탈산셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스칼슘, 포도당, 정제수, 카제인나트륨, 글리세린, 스테아린산, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 메칠셀룰로오스나트륨, 메칠셀룰로오스, 미결정셀룰로오스, 덱스트린, 히드록시셀룰로오스, 히드록시프로필스타치, 히드록시메칠셀룰로오스, 정제쉘락, 전분호, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 폴리비닐알코올, 폴리비닐피롤리돈 등의 결합제가 사용될 수 있으며, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 옥수수전분, 한천가루, 메칠셀룰로오스, 벤토나이트, 히드록시프로필스타치, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 알긴산나트륨, 카르복시메칠셀룰로오스칼슘, 구연산칼슘, 라우릴황산나트륨, 무수규산, 1-히드록시프로필셀룰로오스, 덱스트란, 이온교환수지, 초산폴리비닐, 포름알데히드처리 카제인 및 젤라틴, 알긴산, 아밀로오스, 구아르고무(Guar gum), 중조, 폴리비닐피롤리돈, 인산칼슘, 겔화전분, 아라비아고무, 아밀로펙틴, 펙틴, 폴리인산나트륨, 에칠셀룰로오스, 백당, 규산마그네슘알루미늄, 디-소르비톨액, 경질무수규산 등 붕해제; 스테아린산칼슘, 스테아린산마그네슘, 스테아린산, 수소화식물유(Hydrogenated vegetable oil), 탈크, 석송자, 카올린, 바셀린, 스테아린산나트륨, 카카오지, 살리실산나트륨, 살리실산마그네슘, 폴리에칠렌글리콜 4000,6000, 유동파라핀, 수소첨가대두유(Lubri wax), 스테아린산알루미늄, 스테아린산아연, 라우릴황산나트륨, 산화마그네슘, 마크로골(Macrogol), 합성규산알루미늄, 무수규산, 고급지방산, 고급알코올, 실리콘유, 파라핀유, 폴리에칠렌글리콜지방산에테르, 전분, 염화나트륨, 초산나트륨, 올레인산나트륨, dl-로이신, 경질무수규산 등의 활택제;가 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 액제의 첨가제로는 물, 묽은 염산, 묽은 황산, 구연산나트륨, 모노스테아린산슈크로스류, 폴리옥시에칠렌소르비톨지방산에스텔류(트윈에스텔), 폴리옥시에칠렌모노알킬에텔류, 라놀린에텔류, 라놀린에스텔류, 초산, 염산, 암모니아수, 탄산암모늄, 수산화칼륨, 수산화나트륨, 프롤아민, 폴리비닐피롤리돈, 에칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 시럽제에는 백당의 용액, 다른 당류 혹은 감미제 등이 사용될 수 있으며, 필요에 따라 방향제, 착색제, 보존제, 안정제, 현탁화제, 유화제, 점조제 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 유제에는 정제수가 사용될 수 있으며, 필요에 따라 유화제, 보존제, 안정제, 방향제 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 현탁제에는 아카시아, 트라가칸타, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 미결정셀룰로오스, 알긴산나트륨, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 1828, 2906, 2910 등 현탁화제가 사용될 수 있으며, 필요에 따라 계면활성제, 보존제, 안정제, 착색제, 방향제가 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 주사제에는 주사용 증류수, 0.9%염화나트륨주사액, 링겔주사액, 덱스트로스주사액, 덱스트로스+염화나트륨주사액, 피이지(PEG), 락테이티드 링겔주사액, 에탄올, 프로필렌글리콜, 비휘발성유-참기름, 면실유, 낙화생유, 콩기름, 옥수수기름, 올레인산에칠, 미리스트산 이소프로필, 안식향산벤젠과 같은 용제; 안식향산나트륨, 살리실산나트륨, 초산나트륨, 요소, 우레탄, 모노에칠아세트아마이드, 부타졸리딘, 프로필렌글리콜, 트윈류, 니정틴산아미드, 헥사민, 디메칠아세트아마이드와 같은 용해보조제; 약산 및 그 염(초산과 초산나트륨), 약염기 및 그 염(암모니아 및 초산암모니움), 유기화합물, 단백질, 알부민, 펩 톤, 검류와 같은 완충제; 염화나트륨과 같은 등장화제; 중아황산나트륨(NaHSO 3)이산화탄소가스, 메타중아황산나트륨(Na 2S 2O 3),아황산나트륨(Na 2SO 3),질소가스(N 2),에칠렌디아민테트라초산과 같은 안정제; 소디움비설파이드 0.1%, 소디움포름알데히드 설폭실레이트, 치오우레아, 에칠렌디아민테트라초산디나트륨, 아세톤소디움비설파이트와 같은 황산화제; 벤질알코올, 클로로부탄올, 염산프로카인, 포도당, 글루콘산칼슘과 같은 무통화제; 시엠시나트륨, 알긴산나트륨, 트윈 80, 모노스테아린산알루미늄과 같은 현탁화제를 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 좌제에는 카카오지, 라놀린, 위텝솔, 폴리에틸렌글리콜, 글리세로젤라틴, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 스테아린산과 올레인산의 혼합물, 수바날(Subanal), 면실유, 낙화생유, 야자유, 카카오버터+콜레스테롤, 레시틴, 라네트왁스, 모노스테아린산글리세롤, 트윈 또는 스판, 임하우젠(Imhausen), 모놀렌(모노스테아린산프로필렌글리콜), 글리세린, 아뎁스솔리두스(Adeps solidus), 부티룸 태고-G(Buytyrum Tego-G), 세베스파마 16 (Cebes Pharma 16), 헥사라이드베이스 95, 코토마(Cotomar), 히드록코테 SP, S-70-XXA, S-70-XX75(S-70-XX95), 히드록코테(Hydrokote) 25, 히드록코테 711, 이드로포스탈 (Idropostal), 마사에스트라리움(Massa estrarium, A, AS, B, C, D, E, I, T), 마사-MF, 마수폴, 마수폴-15, 네오수포스탈-엔, 파라마운드-B, 수포시로(OSI, OSIX, A, B, C, D, H, L), 좌제기제 IV 타입 (AB, B, A, BC, BBG, E, BGF, C, D, 299), 수포스탈 (N, Es), 웨코비 (W, R, S, M ,Fs), 테제스터 트리글리세라이드 기제 (TG-95, MA, 57)와 같은 기제가 사용될 수 있다.
경구 투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다.
경구 투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 본 발명이 속하는 기술분야에 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 개체에게 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구 복용, 피하 주사, 복강 투여, 정맥 주사, 근육 주사, 척수 주위 공간(경막내) 주사, 설하 투여, 볼점막 투여, 직장 내 삽입, 질 내 삽입, 안구 투여, 귀 투여, 비강 투여, 흡입, 입 또는 코를 통한 분무, 피부 투여, 경피 투여 등에 따라 투여될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 치료할 질환, 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 질환의 중등도 등의 여러 관련 인자와 함께 활성성분인 약물의 종류에 따라 결정된다.
본 발명에서 “개체”란 질병의 치료를 필요로 하는 대상을 의미하고, 보다 구체적으로는 인간 또는 비-인간인 영장류, 생쥐 (mouse), 쥐 (rat), 개, 고양이, 말, 및 소 등의 포유류일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 “투여”란 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.
본 발명에서 “예방”이란 목적하는 질환의 발병을 억제하거나 지연시키는 모든 행위를 의미하고, “치료”란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 목적하는 질환과 그에 따른 대사 이상 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미하며, “개선”이란 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 목적하는 질환과 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 감소시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 다른 양태로서, 본 발명은 스트렙토코커스 파이오제네스( Streptococcus pyogenes) 배양액 또는 배양액으로부터 분리된 단백질을 유효성분으로 포함하는, 염증성 질환, 대사성 질환 및 암으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
상기 식품 조성물은 건강기능성 식품 조성물을 포함한다.
본 발명의 건강기능성식품 조성물에서 유효성분을 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합량은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 발명의 조성물은 원료에 대하여 15 중량% 이하, 바람직하게는 10 중량% 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있다.
본 발명의 건강기능성식품 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 유효성분을 함유하는 것 외에 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 당업자의 선택에 의해 적절하게 결정될 수 있다.
상기 외에 본 발명의 건강기능성식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율 또한 당업자에 의해 적절히 선택될 수 있다.
본 발명의 또 다른 양태로서, 본 발명은 스트렙토코커스 파이오제네스(Streptococcus pyogenes) 유래 단백질을 유효성분으로 포함하는, 염증성 피부 질환의 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 화장료 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 수렴화장수, 유연화장수, 영양화장수, 각종 크림, 에센스, 팩, 파운데이션 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 미용액 등이 있다. 본 발명의 화장료 조성물의 구체적인 제형으로서는 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 마사지크림, 영양크림, 모이스쳐 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 립스틱, 메이크업 베이스, 파운데이션, 프레스파우더, 루스파우더, 아이섀도 등의 제형을 포함한다.
본 발명의 화장료 조성물은 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 및 스핑고 지질로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 더 포함할 수 있다.
수용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 예를 들어 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 그들의 염 (티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체 (아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)도 본 발명에서 사용할 수 있는 수용성 비타민에 포함된다. 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득할 수 있다.
유용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 예를 들어 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E (d1-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤) 등을 들 수 있으며, 그들의 유도체 (팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산dl-알파 토코페롤, 니코틴산dl-알파 토코페롤비타민 E, DL-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르 등) 등도 본 발명에서 사용되는 유용성 비타민에 포함된다. 유용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 취득할 수 있다.
고분자 펩티드로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 예를 들어 콜라겐, 가수 분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴, 케라틴 등을 들 수 있다. 고분자 펩티드는 미생물의 배양액으로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 정제 취득할 수 있으며, 또는 통상 돼지나 소 등의 진피, 누에의 견섬유 등의 천연물로부터 정제하여 사용할 수 있다.
고분자 다당으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 예를 들어 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 (나트륨염 등) 등을 들 수 있다. 예를 들어, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 등은 통상 포유 동물이나 어류로부터 정제하여 사용할 수 있다.
스핑고 지질로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 예를 들어 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질 등을 들 수 있다. 스핑고 지질은 통상 포유류, 어류, 패류, 효모 또는 식물 등으로부터 통상의 방법에 의해 정제하거나 화학 합성법에 의해 취득할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장품에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다.
이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.
유지 성분으로서는 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지, 식물 유지 등을 들 수 있다.
에스테르계 유지로서는 트리2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴,카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등의 에스테르계 등을 들 수 있다.
탄화 수소계 유지로서는 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스, 와셀린 등의 탄화 수소계 유지 등을 들 수 있다.
실리콘계 유지로서는 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산ㆍ메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산ㆍ메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유, 아미노 변성 실리콘유 등을 들 수 있다.
불소계 유지로서는 퍼플루오로폴리에테르 등을 들 수 있다.
동물 또는 식물 유지로서는 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인(杏仁)유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지(牛脂), 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린, 경화피마자유 등의 동물 또는 식물 유지를 들 수 있다.
보습제로서는 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자, 지용성 고분자 등을 들 수 있다.
수용성 저분자 보습제로서는 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜B(중합도 n = 2 이상), 폴리프로필렌글리콜(중합도 n = 2 이상), 폴리글리세린B(중합도 n = 2 이상), 락트산, 락트산염 등을 들 수 있다.
지용성 저분자 보습제로서는 콜레스테롤, 콜레스테롤에스테르 등을 들 수 있다.
수용성 고분자로서는 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성 키틴, 키토산, 덱스트린 등을 들 수 있다.
지용성 고분자로서는 폴리비닐피롤리돈ㆍ에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈ㆍ헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르, 고분자 실리콘 등을 들 수 있다.
에몰리엔트제로서는 장쇄아실글루타민산콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산, 라놀린지방산콜레스테릴에스테르 등을 들 수 있다.
계면 활성제로서는 비이온성 계면 활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제, 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.
비이온성 계면 활성제로서는 자기 유화형 모노스테아르산글리세린, 프로필렌글리콜지방산에스테르, 글리세린지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, POE (폴리옥시에틸렌)솔비탄지방산에스테르, POE 솔비트지방산에스테르, POE 글리세린지방산에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산에스테르, POE 경화피마자유, POE 피마자유, POEㆍPOP (폴리옥시에틸렌ㆍ폴리옥시프로필렌) 공중합체, POEㆍPOP 알킬에테르, 폴리에테르변성실리콘, 라우린산알카놀아미드, 알킬아민옥시드, 수소첨가대두인지질 등을 들 수 있다.
음이온성 계면 활성제로서는 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인산염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염, 퍼플루오로알킬인산에스테르 등을 들 수 있다.
양이온성 계면 활성제로서는 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드, 라놀린 유도체 제 4급 암모늄염 등을 들 수 있다.
양성 계면 활성제로서는 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형, 아미드아민형 등의 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.
유기 및 무기 안료로서는 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체등의 무기 안료; 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트수지, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트오렌지 등의 유기 안료 및 이들의 무기 안료와 유기 안료의 복합 안료 등을 들 수 있다.
유기 분체로서는 스테아르산칼슘 등의 금속비누; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염 ; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염 ; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염 ; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파-파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산 ; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드 ; 알파-아미노카프릴산, 알파-아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산 ; 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 사불화에틸렌 등을 들 수 있다.
자외선 흡수제로서는 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리신산페닐, 살리신산옥틸, 살리신산벤질, 살리신산부틸페닐, 살리신산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산-2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모노-2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시계피산이소프로필, 디이소프로필ㆍ디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p-(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸 등을 들 수 있다.
살균제로서는 히노키티올, 트리클로산, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 크로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살리칠산, 진크필리티온, 염화벤잘코늄, 감광소 301 호, 모노니트로과이어콜나트륨, 운데시렌산 등을 들 수 있다.
산화 방지제로서는 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필, 엘리소르빈산 등을 들 수 있다.
pH 조정제로서는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨, 인산일수소나트륨 등을 들 수 있다.
알코올로서는 세틸알코올 등의 고급 알코올을 들 수 있다.
또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지만, 총중량에 대하여 0.01-5% 중량 백분율 또는 0.01-3% 중량 백분율로 배합될 수 있다.
본 발명의 제형이 로션, 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 또 다른 양태로서, 본 발명은 스트렙토코커스 파이오제네스( Streptococcus pyogenes) 배양액 또는 배양액으로부터 분리된 단백질을 유효성분으로 포함하는, 호흡기 염증질환의 예방 또는 개선용 흡입제 조성물을 제공한다.
본 발명의 상기 흡입제 조성물은 스트렙토코커스 파이오제네스( Streptococcus pyogenes) 배양액 또는 배양액으로부터 분리된 단백질뿐만 아니라, 흡입 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료, 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 스트렙토코커스 파이오제네스( Streptococcus pyogenes) 배양액 또는 배양액으로부터 분리된 단백질의 함량은 조성물 총 중량에 대하여 0.00001~99중량%, 바람직하게는 0.0001-50중량% 이며, 바람직하게는 0.5-20%이며, 보다 바람직하게는 1.0-10중량%일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
실시예 1. 위 상피 세포주(AGS)에서 스트렙토코커스 파이오제네스 유래 세포배양액의 염증성 사이토카인 IL-8 발현 억제 효과
스트렙토코커스 파이오제네스 균주를 37℃ 중탕으로 최대한 빨리 녹여 MRS agar 배지에 100μl를 도말하여 37℃, 10% CO 2 배양기에서 24시간 배양 후 스트렙토코커스 파이오제네스의 싱글 콜로니를 취하여 1L의 Brain Heart Infusion(BHI) broth에 풀어내고 37℃, 10% CO 2 배양기에서 200 rpm으로 24시간 진탕 배양하였다.
진탕 배양 후 500 ml의 고속원심분리 튜브에 옮겨 10,000 x g, 30분간 고속원심분리하여 스트렙토코커스 파이오제네스 세포를 제외하고 상층액(SP CM)을 취하였으며 세포밖 소포(Extracellular vesicles, EV)가 없는 SP CM을 제조하기 위해서 상기 방법으로 제조한 SP CM을 100,000 x g, 2시간 초원심분리하여 침전물을 제외한 상층액(SP CM EV(-))을 취하였다.
1x10 8 개의 위 상피 세포(AGS)를 유핵세포 세포배양액(RPMI, 10% FBS, antibiotics)에 풀어 100 mm 세포 배양 디쉬에 분주하고 37℃, 5% CO 2 배양기에서 24시간 배양한 후 유핵세포 세포배양액을 제거하고 트립신-EDTA(0.05%) 1 ml을 처리하고 37℃에서 5분간 방치하였다. 5분 후 5 ml의 세포배양액으로 부유세포를 모아 15 ml 튜브에 분주하고 1500 rpm으로 5분 원심분리한 뒤 기존의 세포배양을 제거하고 위 상피 세포(AGS)가 1x10 5 개/ml가 되도록 새로운 세포배양액에 희석하여 12웰 플레이트에 1 ml 씩 분주하고 37℃, 5% CO 2 배양기에 24시간 배양하였다.
배양 후 세포배양액을 새로운 세포배양액으로 교체해주고 음성대조군(NT)에는 PBS, 양성대조군(PT)에는 IL-1α(10 ng/ml), 실험군(Exp1, Exp2)에는 IL-1α와 함께 SP CM(10 μl) 및 SP CM EV(-)(10 μl)를 처리하고 37℃, 5% CO 2 배양기에 24시간 동안 배양한 후에 각각의 세포 배양액을 얻어내어 염증성 사이토카인 IL-8의 발현 정도를 엘라이자(표준 프로토콜 사용)법으로 정량하였다.
상기 방법에 따라 위 상피 세포주(AGS)에 IL-1α 또는 IL-1α와 함께 SP CM 및 SP CM EV(-)를 처리한 뒤 엘라이자법으로 IL-8의 발현 정도를 분석한 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, SP CM 및 SP CM EV(-) 모두 IL-1α에 의해 유도되는 염증성 사이토카인 IL-8의 발현을 억제함을 확인하였으며 이는 IL-8의 발현을 억제하는 유효성분이 수용성 성분임을 의미한다. (도 1 참조)
실시예 2. 위 상피 세포주(AGS)에서 100 kDa 한외여과 필터로 농축된 스트렙토코커스 파이오제네스 유래 세포배양액의 염증성 사이토카인 IL-8 발현 억제 효과
스트렙토코커스 파이오제네스 유래 세포배양액의 IL-8 발현 억제 유효 성분을 특정하기 위하여 다음과 같은 방법으로 스트렙토코커스 배양액을 분리하였다.
스트렙토코커스 파이오제네스 균주를 37℃ 중탕으로 최대한 빨리 녹여 MRS agar 배지에 100μl를 도말하여 37℃, 10% CO 2 배양기에서 24시간 배양하고 스트렙토코커스 파이오제네스의 싱글 콜로니를 취하여 1L의 Brain Heart Infusion(BHI) broth에 풀어내어 37℃, 10% CO 2 배양기에서 200 rpm으로 24시간 진탕 배양 후 500 ml의 고속원심분리 튜브에 옮겨 10,000 x g, 30분간 고속원심분리하여 스트렙토코커스 파이오제네스 세포를 제외하고 상층액(SP CM)을 취하였다.
제조한 SP CM 1L를 Quixstand benchtop system(GE Healthcare)과 100kDa 한외여과필터(GE Healthcare)를 이용해서 울트라필트레이션(표준 프로토콜 사용)을 실시하고 Phosphate Buffered saline(PBS) 2 L로 버퍼교환을 하여 100 kDa 한외여과필터를 통과하지 못한 SP CM을 100ml 제조하였다. 그 후 상기 실시예 1의 방법과 같이 제조된 SP CM을 초원심분리하여 비수용성 성분을 제거하고 수용성 부분만을 취한 SP CM>100 kDa를 최종적으로 제조하였다.
1x10 8개의 위 상피 세포(AGS)를 유핵세포 세포배양액(RPMI, 10% FBS, antibiotics)에 풀어 100mm 세포 배양 디쉬에 분주하고 37℃, 5% CO 2 배양기에서 24시간 배양한 후 유핵세포 세포배양액을 제거하고 트립신-EDTA(0.05%) ml을 처리하고 37℃에서 5분간 방치하였다. 5분 후 5ml의 세포배양액으로 부유세포를 모아 15 ml 튜브에 분주하고 1500rpm으로 5분 원심분리한 뒤 기존의 세포배양을 제거하고 위 상피 세포(AGS)가 1x10 5 개/ml가 되도록 새로운 세포배양액에 희석하여 12웰 플레이트에 1ml 씩 분주하고 37℃, 5% CO 2 배양기에 24시간 배양하였다.
배양 후 세포배양액을 새로운 세포배양액으로 교체해주고 음성대조군(NT)에는 PBS, 양성대조군(PT)에는 IL-1α(10 ng/ml), 실험군(Exp)에는 IL-1α와 함께 획득한 pyogenes CM>100 kDa(10μl)를 처리하고 37℃, 5% CO 2 배양기에 24시간 동안 배양한 후에 각각의 세포 배양액을 얻어내어 염증성 사이토카인 IL-8의 발현 정도를 엘라이자(표준 프로토콜 사용)법으로 정량하였다.
상기 방법에 따라 위 상피 세포주(AGS)에 IL-1α, 또는 IL-1α와 함께 SP CM>100 kDa를 처리한 뒤 엘라이자법으로 IL-8의 발현 정도를 분석한 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, SP CM>100 kDa에 있는 수용성 성분이 IL-1α에 의해 유도되는 염증성 사이토카인 IL-8의 발현을 억제함을 확인하였다 (도 2 참조).
실시예 3. 열처리된 스트렙토코커스 파이오제네스 유래 세포배양액의 IL-8 발현 억제 효과
스트렙토코커스 파이오제네스 유래 세포배양액의 IL-8 발현 억제 유효 성분을 특정하기 위하여 다음과 같은 방법으로 열처리를 한 스트렙토코커스 배양액을 분리하였다.
스트렙토코커스 파이오제네스 균주를 37℃ 중탕으로 최대한 빨리 녹여 MRS agar 배지에 100 μl를 도말하여 37℃, 10% CO 2 배양기에서 24시간 배양한 후 스트렙토코커스 파이오제네스의 싱글 콜로니를 취하여 1 L의 Brain Heart Infusion(BHI) broth에 풀어내고 37℃, 10% CO 2 배양기에서 200 rpm으로 24시간 진탕배양 후 500 ml의 고속원심분리 튜브에 옮겨 10,000 x g, 30분간 고속원심분리하여 스트렙토코커스 파이오제네스 세포를 제외하고 상층액 (SP CM)을 취하였다.
제조한 pyogenes CM 1 L를 Quixstand benchtop system(GE Healthcare)과 100 kDa 한외여과필터(GE Healthcare)를 이용해서 울트라필트레이션(표준 프로토콜 사용)을 실시하고 Phosphate Buffered saline(PBS) 2 L로 버퍼교환을 하여 최종적으로 100 kDa 한외여과필터를 통과하지 못한 SP CM을 100 ml 제조하였다.
그 후 상기 실시예 1의 방법과 같이 제조된 SP CM을 초원심분리하여 비수용성 성분을 제거하고 수용성 부분만을 취한 SP CM>100 kDa를 최종적으로 제조하였으며 제조된 SP CM>100 kDa의 화학적 성상을 분석하기 위해서 100℃에서 15분간 방치한 뒤 4℃에서 10분간 다시 방치 하였다.
1x10 8개의 위 상피 세포(AGS)를 유핵세포 세포배양액(RPMI, 10% FBS, antibiotics)에 풀어 100 mm 세포 배양 디쉬에 분주하고 37℃, 5% CO 2 배양기에서 24시간 배양 후 유핵세포 세포배양액을 제거하고 트립신-EDTA(0.05%) 1 ml을 처리하고 37℃에서 5분간 방치하였다. 5분 후 5 ml의 세포배양액으로 부유세포를 모아 15 ml 튜브에 분주하고 1500 rpm으로 5분간 원심분리한 뒤 기존의 세포배양을 제거하고 위 상피 세포(AGS)가 1x10 5 개/ml가 되도록 새로운 세포배양액에 희석하여 12웰 플레이트에 1 ml 씩 분주하고 37℃, 5% CO 2 배양기에 24시간 배양하였다.
배양 후 세포배양액을 새로운 세포배양액으로 교체해주고 음성대조군(NT)에는 PBS, 양성대조군(PT)에는 IL-1α(10 ng/ml), 실험군(Exp1, Exp2)에는 IL-1α와 함께 획득한 SP CM>100 kDa(10 μl) 및 열처리된(H.I.) SP CM>100 kDa(10 μl)를 처리하고 37℃, 5% CO 2 배양기에 24시간 동안 배양하였으며 각각의 세포 배양액을 얻어내어 염증성 사이토카인 IL-8의 발현 정도를 엘라이자(표준 프로토콜 사용)법으로 정량하였다.
상기 방법에 따라 위 상피 세포주(AGS)에 IL-1α, IL-1α와 함께 SP CM>100 kDa 또는 SP CM>100 kDa H.I.를 처리한 뒤 엘라이자법으로 IL-8의 발현 정도를 분석한 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이 SP CM>100 kDa가 IL-8을 억제하는 반면에 SP CM>100 kDa H.I.는 IL-8의 발현을 억제하지 못하였음을 확인하였다. 이는 SP CM>100 kDa의 IL-8의 발현을 억제하는 유효성분이 열에 약한 단백질 성분임을 의미한다 (도 3 참조).
실시예 4. 위 상피 세포주(AGS)에서 SP CM>100 kDa 의 헬리코박터 파일로리(HP99)에 의한 염증성 사이토카인 IL-8 발현 억제 효과
상기 실시예 2의 방법으로 스트렙토코커스 유래 세포배양액에서 수용성 성분인 SP CM>100 kDa를 분리 정제 하였으며, 위 상피 세포주(AGS)에서 헬리코박터 파일로리(HP99)에 의해 발현되는 IL-8의 발현을 SP CM>100 kDa가 억제할 수 있는지 평가하기 위해서 하기의 방법으로 헬리코박터 파일로리(HP99)를 배양하였다.
헬리코박터 파일로리 HP99 스톡을 37℃의 물에 중탕하여 빠르게 녹인후 sheep blood agar 플레이트에 100 μl를 분주하고 37℃, 10% CO 2 배양기에서 72시간 배양하였다. 배양 후 멸균 면봉으로 플레이트의 헬리코박터 파일로리를 긁어내어 Brain Heart Infusion broth에 풀어내 흡광도(O.D) 값이 2.32가 되도록 희석하였다.
위 상피 세포주(AGS)에서 SP CM>100 kDa가 헬리코박터 파일로리 (HP99)에 의한 IL-8의 발현을 억제하는지 평가하기 위해서 상기 실시예 1의 방법으로 위 상피 세포주(AGS)를 배양하였다.
배양 후 세포배양액을 새로운 세포배양액으로 교체해주고 음성대조군(NT)에는 PBS, 양성대조군(PT)에는 헬리코박터 파일로리(HP99, 10 μl), 실험군(Exp)에는 헬리코박터 파일로리와 함께 획득한 SP CM>100 kDa(10 μl)를 처리하고 37℃, 5% CO 2 배양기에 24시간 동안 배양한 후에 각각의 세포 배양액을 얻어내어 염증성 사이토카인 IL-8의 발현 정도를 엘라이자(표준 프로토콜 사용)법으로 정량하였다.
상기 방법에 따라 위 상피 세포주(AGS)에 헬리코박터 파일로리 (HP99), 또는 헬리코박터 파일로리와 함께 pyogenes CM>100 kDa을 처리한 뒤 엘라이자법으로 IL-8의 발현 정도를 분석한 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이 SP CM>100 kDa의 수용성 성분이 AGS 세포주에서 헬리코박터 파일로리에 의한 IL-8의 발현을 억제하는 것을 확인하였다. (도 4 참조)
실시예 5. 대장 상피 세포주에서 SP CM>100 kDa의 염증성 사이토카인 IL-8 발현 억제 효과
대장 상피 세포주(HT29)에서 SP CM>100 kDa가 대장균 유래 세포밖 소포(E. coli C4 EV)에 의한 IL-8 발현의 억제 기능을 이하와 같이 평가하였다.
1x10 8 개의 대장 상피 세포(HT29)를 유핵세포 세포배양액(RPMI, 10% FBS, antibiotics)에 풀어 100 mm 세포 배양 디쉬에 분주하고 37℃, 5% CO 2 배양기에서 24시간 배양한 후 유핵세포 세포배양액을 제거하고 트립신-EDTA(0.05%) 1 ml을 처리하고 37℃에서 5분간 방치하였다. 5분 후 5 ml의 세포배양액으로 부유세포를 모아 15 ml 튜브에 분주하고 1500 rpm으로 5분 원심분리한 후 기존의 세포배양을 제거하고 HT29 세포가 1x10 5 개/ml가 되도록 새로운 세포배양액에 희석하여 12웰 플레이트에 1 ml 씩 분주하고 37℃, 5% CO 2 배양기에 24시간 배양하였다.
배양 후 세포배양액을 새로운 세포배양액으로 교체해주고 음성대조군(NT)에는 PBS, 양성대조군(PT)에는 E. coli C4 EV(1 μg/ml), 실험군(Exp)에는 E. coli C4 EV와 함께 획득한 SP CM>100 kDa(10 μl)를 처리하고 37℃, 5% CO 2 배양기에 24시간 동안 배양한 후에 각각의 세포 배양액을 얻어내어 염증성 사이토카인 IL-8의 발현 정도를 엘라이자(표준 프로토콜 사용)법으로 정량하였다.
상기 방법에 따라 대장 상피 세포주(HT29)에 대장균 유래 세포밖 소포 (E. coli C4 EV), 또는 대장균 유래 세포밖 소포 (E. coli C4 EV)와 함께 SP CM>100 kDa을 처리한 뒤 엘라이자법으로 IL-8의 발현 정도를 분석한 결과, 도 5에 나타낸 바와 같이 SP CM>100 kDa의 수용성 성분이 HT29 세포주에서 대장균 유래 세포밖 소포 (E. coli C4 EV)에 의한 IL-8의 발현을 억제하는 것을 확인하였다. (도 5 참조)
실시예 6. SP CM>100 kDa의 성분 분리 및 분리된 성분의 유효성 평가
SP CM>100 kDa의 수용성 성분 구성을 분석하기 위해서 SP CM>100 kDa 50 ul를 6x native loading day와 혼합하여 6% native polyacryl amide gel을 이용해서 native PAGE를 한 결과(표준 프로토콜 사용) 약 5개의 단백질 밴드를 확인할 수 있었다.
성분의 분리를 위해서 가장 발현이 높은 100 kDa 사이즈의 단백질을 정제하였으며 정제를 위하여 6% native polyacryl amide gel에 과량(500 μg)의 SP CM>100 kDa를 로딩하여 native PAGE를 수행하였고 해당 사이즈의 gel을 칼로 절제하여 gel elusion buffer(표준 프로토콜 사용)에 넣고 균질막대로 gel을 으깨고 25℃에서 200 rpm으로 쉐이킹하며 24시간 방치 후 100 μm의 mesh에 gel 부산물을 걸러 액체만을 얻어냈으며 그 중 50 ul를 native PAGE를 하여 100 kDa 사이즈의 단백질(F1)이 잘 분리 되었는지 확인하였다(도 6a).
SP CM>100 kDa에서 분리된 100 kDa의 단백질(F1)의 유효성을 평가하기 위해서 상기 실시예 1과 같이 위 상피 세포(AGS)에서 염증성 사이토카인 IL-8의 발현을 평가하여 확인하였다.
상기 방법에 따라 위 상피 세포주(AGS)에 IL-1α, 또는 분리된 100 kDa의 단백질 (F1)을 양을 늘려가며(5, 10. 20. 50 μl) IL-1α와 함께 처리한 뒤 24 시간 후 엘라이자법으로 IL-8의 발현 정도를 분석한 결과, 도 6b에 나타낸 바와 같이 분리된 100 kDa의 단백질 (F1)이 농도 의존적으로 AGS 세포주에서 IL-1α에 의한 IL-8의 발현을 억제하는 것을 확인하였다. (도 6b 참조)
실시예 7. Dextran Sulfate Sodium (DSS)-유도 대장염 마우스 모델에서 SP CM>100 kDa의 항염증 효과
Dextran Sulfate Sodium (DSS)-유도 대장염 마우스 모델에서 SP CM>100 kDa의 효능을 평가하기 위해서 도 7에 명시된 방법으로 다음과 같이 실험을 진행하였다.
15마리의 6주령, female, C57BL/6 마우스를 분별없이 5마리씩 케이지에 담아 2일간 적응시간을 준 뒤, 2일 후부터 오전 9시부터 오후 6시까지 2% DSS를 희석한 음수(멸균수)를 주고 오후 6시부터 다음날 오전 9시 까지는 일반 음수를 7일간 섭취하였다. SP CM>100 kDa의 효능을 평가하기 위한 그룹에서는 오전 9시에 손데(sonde, 경구투여용 로드)를 이용하여 실시예 2의 방법으로 제조된 SP CM>100 kDa 200 μl를 7일 동안 경구 투여하였다. 실험 기간 마우스의 체중, 사료 섭취량, 변의 묽기 그리고 혈변의 정도 등을 측정하였으며 7일 후 마우스를 해부하여 대장의 길이를 평가하였다.
상기 방법에 따라 DSS-유도 대장염 마우스 모델에 SP CM>100 kDa를 7일 동안 경구투여하며 대장의 길이 (도 8a, 8b 참고), 체중의 변화 (도 9a 참고), 사료섭취량 (도 9b 참고) 및 질병스코어 (도 10c 참고)등을 관찰한 결과 DSS-유도 대장염 마우스 모델에 SP CM>100 kDa 투여한 경우는 DSS-유도 대장염 마우스 모델보다 대장의 길이가 길었으며, 체중의 변화량도 작았고, 사료섭취량은 많았으며 질병스코어도 낮게 나타났다.
상기 결과는 SP CM>100 kDa이 DSS에 의해서 유도되는 대장염 마우스 모델에서 항염증의 효과가 있음을 의미한다.
실시예 8. 에탄올(Ethanol, EtOH)-유도 급성위염 마우스 모델에서 SP CM>100 kDa의 항염증 효과
에탄올-유도 위염 마우스 모델에서 SP CM>100 kDa의 효능을 평가하기 위해서 도 11에 명시된 방법으로 다음과 같이 실험을 진행하였다.
6주령, female, C57BL/6 마우스를 분별없이 5마리씩 케이지에 담아 2일간 적응시간을 준 후 2일 후부터 24시간동안 금식을 하고 SP CM>100 kDa의 효능을 평가하기 위한 그룹에서는 오전 9시부터 2시간 간격으로 3회 손데 (sonde, 경구투여용 로드)를 이용하여 실시예 2의 방법으로 제조된 SP CM>100 kDa 200 μl를 경구투여 하였다. SP CM>100 kDa의 최종투여 후 한 시간 뒤에 80% 에탄올 100 μl를 경구투여 하였으며 투여 후 한 시간 뒤에 마우스를 해부하여 위의 형태, 크기 및 위의 염증 정도를 측정하였다.
상기 방법에 따라 SP CM>100 kDa를 3회 투여 후에 에탄올을 이용한 위염 마우스 모델에서 위의 형태 (도 12a), 위의 크기 (도 12b) 및 위의 염증정도 (도 12c, 12d)등을 관찰한 결과, 에탄올-유도 위염 마우스 모델에 SP CM>100 kDa를 투여한 경우는 에탄올-유도 위염 마우스 모델에 비해 위의 크기가 감소되었으며 또한 위의 염증 정도도 더 감소된 것으로 나타났다.
상기 결과는 SP CM>100 kDa이 에탄올에 의해서 유도되는 위염 마우스 모델에서 항염증의 효과가 있음을 의미한다.
실시예 9. 마우스 암 모델에서 SP CM>100 kDa의 항암 효과
암세포를 이식한 마우스 암 모델에서 SP CM>100 kDa의 효능을 평가하기 위해서 도 13에 명시된 방법으로 다음과 같이 실험을 진행하였다.
6주령, female, BALB/c 마우스를 분별없이 6마리씩 케이지에 담아 2일간 적응시간을 준 후 1일 후 마우스 암세포 (CT26)을 마우스 등의 오른쪽에 피하주사 하였다 (1x10 5 cell/마우스). SP CM>100 kDa의 효능을 평가하기 위한 그룹에서는 매일 8시간 간격으로 실시예 2의 방법으로 제조된 SP CM100 kDa 200ug을 복강으로 투여 하였다. 항암효능을 평가하기 위해서 암세포 주사 후 3일 간격으로 암조직의 크기 (가로x세로 2/2)를 측정하였으며, SP CM>100 kDa의 최종투여 후 (28일 후) 다음날 마우스를 해부하여 암 조직을 채취하여 관찰하였다.
상기 방법에 따라 SP CM>100 kDa를 투여한 그룹에서 암 조직의 성장정도와 최종 크기를 관찰한 결과, 암세포 이식 마우스 암 모델에서 SP CM>100 kDa를 투여한 경우는 양성 대조군 (P.C, PBS 200 μl)에 비교하여 암 조직의 성장 속도가 현저히 감소하였음을 (도 14a) 확인하였으며 최종적으로 암 조직의 크기가 작은 것으로 평가되었다 (도 14b).
상기 결과는 SP CM>100 kDa이 대장암세포 이식 마우스 암 모델에서 항암 효과가 있음을 의미한다.
실시예 10. 고지방 식이-유도 대사질환 마우스 모델에서 SP CM>100kDa의 항비만 및 지방간 개선 효과
고지방 식이로 유도한 대사질환 마우스 모델에서 SP CM>100 kDa의 효능을 평가하기 위해 도 15에 명시된 방법으로 다음과 같이 실험을 진행하였다.
8주령, male, C57BL/6 마우스를 분별없이 10마리씩 케이지에 담아 7일간 적응시간을 준 후 8주간 고지방 식이를 먹여 비만을 유도하였다. SP CM>100 kDa의 효능을 평가하기 위한 그룹에서는 8주 후부터 10주간 고지방 식이를 유지하면서 1일 1회 24시간 간격으로 손데 (sonde, 경구투여용 로드)를 이용하여 실시예 2의 방법으로 제도된 SP CM>100 kDa 200 μl를 경구투여 하였으며 10주뒤 마우스의 체중을 측정하여 몸무게를 측정하고, 채혈하여 간기능 지표인 ALT, AST 등을 측정하여다. 음성대조군 (con (-))은 PBS 200 μl를 경구로 투여하였으며, 양성대조군 (con(+))은 메트포민-HCl 300 mpk를 경구로 투여 하였다.
상기 방법에 따라 SP CM>100 kDa를 10주간 투여한 고지방 식이-유도 대사질환 모델 (case 5) 에서 마우스의 체중 (도 16), 혈중 ALT, AST (도 17)를 분석한 결과, 고지방 식이-유도 대사질환 마우스 모델에 SP CM>100 kDa를 투여한 경우는 대조군에 비해 체중이 현저히 감소하였으며 또한 혈중 AST, ALT 수치도 유의하게 감소하였다.
상시 결과는 고지방 식이에 의해서 유도된 대사질환 마우스 모델에서 SP CM>100 kDa이 비만을 억제하고, 간 기능을 개선하는 효과가 있음을 의미한다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가지는 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.
본 발명자들은 스트렙토코커스 파이오제네스( Streptococcus pyogenes) 배양액 또는 배양액으로부터 분리된 단백질을 염증 질환 모델에 처리하였을 때 항염증 효과를 확인하였는바, 본 발명에 따른 스트렙토코커스 파이오제네스 배양액 또는 단백질은 염증질환, 대사질환, 암을 예방, 증상을 개선 또는 치료하기 위한 의약품 또는 건강기능식품, 흡입제, 화장료 등의 개발에 유용하게 이용될 수 있어, 산업상 이용가능성이 있다.

Claims (20)

  1. 스트렙토코커스 파이오제네스( Streptococcus pyogenes) 배양액 또는 배양액으로부터 분리된 단백질을 유효성분으로 포함하는, 염증성 질환, 대사성 질환 및 암으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 단백질은 100kDa 이상인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 약학적 조성물은 염증성 사이토카인을 억제하는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  4. 제3항에 있어서,
    상기 염증성 사이토카인은 인터류킨-8(interleukin-8)인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 암은 폐암, 후두암, 구강암, 위암, 대장-직장암, 간암, 담관암, 췌장암, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 신장암, 방광암, 전립선암, 뇌종양, 백혈병, 및 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 염증성 질환은 비염, 천식 및 만성폐쇄성폐질환을 포함하는 호흡기 질환; 치주염을 포함하는 구강 내 염증 질환; 위염 및 염증성 대장염을 포함하는 소화기 질환; 아토피피부염, 건선, 여드름을 포함하는 피부질환; 동맥경화증 및 이의 합병증; 만성간염 및 간경변; 류마치스관절염, 골관절염을 포함하는 관절질환; 및 염증에 의해 발생하는 암;으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 대사성 질환은 비만, 지방간, 간경변, 간허혈, 간농양, 고지혈증, 고콜레스테롤증, 당뇨병, 이상지질혈증, 동맥경화증, 관상동맥질환, 알콜성 지방간염, 비알콜성 지방간염 및 뇌졸중으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  8. 스트렙토코커스 파이오제네스( Streptococcus pyogenes) 배양액 또는 배양액으로부터 분리된 단백질을 유효성분으로 포함하는, 염증성 질환, 대사성 질환 및 암으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 단백질은 100kDa 이상인 것을 특징으로 하는, 식품 조성물.
  10. 제8항에 있어서,
    상기 식품 조성물은 염증성 사이토카인을 억제하는 것을 특징으로 하는, 식품 조성물.
  11. 제8항에 있어서,
    상기 암은 폐암, 후두암, 구강암, 위암, 대장-직장암, 간암, 담관암, 췌장암, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 신장암, 방광암, 전립선암, 뇌종양, 백혈병, 및 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 식품 조성물.
  12. 제8항에 있어서,
    상기 염증성 질환은 비염, 천식 및 만성폐쇄성폐질환을 포함하는 호흡기 질환; 치주염을 포함하는 구강 내 염증 질환; 위염 및 염증성 대장염을 포함하는 소화기 질환; 아토피피부염, 건선, 여드름을 포함하는 피부질환; 동맥경화증 및 이의 합병증; 만성간염 및 간경변; 류마치스관절염, 골관절염을 포함하는 관절질환; 및 염증에 의해 발생하는 암;으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 식품 조성물.
  13. 제8항에 있어서,
    상기 대사성 질환은 비만, 지방간, 간경변, 간허혈, 간농양, 고지혈증, 고콜레스테롤증, 당뇨병, 이상지질혈증, 동맥경화증, 관상동맥질환, 알콜성 지방간염, 비알콜성 지방간염 및 뇌졸중으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 식품 조성물.
  14. 스트렙토코커스 파이오제네스( Streptococcus pyogenes) 배양액 또는 배양액으로부터 분리된 단백질을 유효성분으로 포함하는, 호흡기 염증질환의 예방 또는 개선용 흡입제 조성물.
  15. 제14항에 있어서,
    상기 호흡기 염증질환은 감기, 폐렴, 폐기종, 폐섬유화, 급성비염, 만성비염, 부비동염, 알레르기비염, 급성기관지염, 만성기관지염, 천식 및 만성폐쇄성폐질환 (COPD)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 흡입제 조성물.
  16. 스트렙토코커스 파이오제네스( Streptococcus pyogenes) 배양액 또는 배양액으로부터 분리된 단백질을 유효성분으로 포함하는, 염증성 피부 질환의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
  17. 제16항에 있어서,
    상기 염증성 피부 질환은 피부 염증, 건선, 홍반성 루푸스, 비듬, 급ㆍ만성 습진, 접촉성 피부염, 아토피성 피부염, 지루성 피부염, 만성단순태선, 간찰진, 박탈 피부염, 구진상 두드러기, 일광 피부염 및 여드름으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
  18. 스트렙토코커스 파이오제네스( Streptococcus pyogenes) 배양액 또는 배양액으로부터 분리된 단백질을 개체에 투여함으로써 염증성 질환, 대사성 질환 및 암으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 질환을 예방 또는 치료하는 방법.
  19. 스트렙토코커스 파이오제네스( Streptococcus pyogenes) 배양액 또는 배양액으로부터 분리된 단백질의 염증성 질환, 대사성 질환 및 암으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 질환의 치료 용도.
  20. 염증성 질환, 대사성 질환 및 암으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 치료용 약제 제조를 위한 상기 스트렙토코커스 파이오제네스( Streptococcus pyogenes) 배양액 또는 배양액으로부터 분리된 단백질의 용도.
PCT/KR2020/005420 2019-04-26 2020-04-24 스트렙토코커스 파이오제네스 세균 유래 단백질 및 이의 용도 WO2020218868A1 (ko)

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