WO2022164183A1 - 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체를 유효성분으로 포함하는 양모 촉진용 조성물 - Google Patents

락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체를 유효성분으로 포함하는 양모 촉진용 조성물 Download PDF

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WO2022164183A1
WO2022164183A1 PCT/KR2022/001338 KR2022001338W WO2022164183A1 WO 2022164183 A1 WO2022164183 A1 WO 2022164183A1 KR 2022001338 W KR2022001338 W KR 2022001338W WO 2022164183 A1 WO2022164183 A1 WO 2022164183A1
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extracellular vesicles
hair
hair growth
composition
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진화섭
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주식회사 리스큐어바이오사이언시스
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    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
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    • A61Q17/00—Barrier preparations; Preparations brought into direct contact with the skin for affording protection against external influences, e.g. sunlight, X-rays or other harmful rays, corrosive materials, bacteria or insect stings

Definitions

  • the present invention relates to a composition for promoting wool or hair growth, or preventing hair loss, comprising Lactobacillus kerbetus-derived extracellular vesicles as an active ingredient.
  • Hair not only plays the role of protecting the head and maintaining the temperature of the head, but it is also a body organ that determines the appearance due to the recent increase in aesthetic interest. Accordingly, interest in hair loss and hair loss treatment methods has increased, and research and development of hair loss treatment agents are being actively conducted. Hair repeats growth and exfoliation through four cyclic hair cycles: anagen, growing phase, canagen, transitional phase, telogen, resting phase, and exogen. When hair loss occurs more frequently than hair growth due to various causes, it is called hair loss.
  • causes of hair loss include genetic factors, blood flow disorders, and endocrine abnormalities caused by the male hormone testosterone, and external causes such as stress are known.
  • Representative hair stimulants include minoxidil (6-Amino-1,2-dihydro-1-hydroxy-2-imino-4-phenoxypyrimidine, transdermal application) and finasteride (oral preparation).
  • minoxidil it is known that it induces hair growth by promoting nutrient supply through vasodilation
  • finasteride it has a mechanism of action of inhibiting dermal papilla apoptosis by inhibiting the activity of 5 ⁇ -reductase, an enzyme metabolizing testosterone.
  • both treatments are effective only when used and the effect disappears when the use is stopped, there is a inconvenience that it must be used continuously. Sexual dysfunction has been reported, which limits its continued use.
  • An object of the present invention is to provide a composition for promoting hair growth or hair growth, or preventing, improving or treating hair loss, comprising Lactobacillus curvatus-derived extracellular vesicles as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide a composition for promoting division or proliferation of hair cells, comprising the Lactobacillus kerbetus-derived extracellular vesicles as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide a method for preventing, improving or treating hair growth or hair growth, or hair loss, comprising administering a therapeutically effective amount of Lactobacillus kerbetus-derived extracellular vesicles to a subject in need thereof. .
  • Another object of the present invention is to provide a method for promoting division or proliferation of hair cells, comprising administering a therapeutically effective amount of Lactobacillus kerbetus-derived extracellular vesicles to a subject in need thereof.
  • Another object of the present invention is to provide a use of Lactobacillus kerbetus-derived extracellular vesicles for promoting hair growth or hair growth, or preventing, improving or treating hair loss.
  • Another object of the present invention is to provide a method for preparing a composition for promoting hair growth or hair growth, or preventing, improving or treating hair loss, comprising the step of culturing Lactobacillus kerbetus.
  • Lactobacillus curvatus (Lactobacillus curvatus) derived extracellular vesicles (extracellular vesicles) as an active ingredient for promoting hair growth or hair growth, or hair loss prevention, improvement or treatment composition is provided.
  • a method of preventing, improving or treating hair growth or hair growth, or hair loss comprising administering a therapeutically effective amount of Lactobacillus curvatus-derived extracellular vesicles to a subject in need thereof.
  • Lactobacillus curvatus (Lactobacillus curvatus) derived extracellular vesicles (extracellular vesicles) promoting hair growth or hair growth, or prevention, improvement or treatment of hair loss is provided.
  • the present invention relates to a composition for promoting hair growth or hair growth, or preventing, improving or treating hair loss, comprising Lactobacillus curvatus-derived extracellular vesicles as an active ingredient.
  • the composition of the present invention can be utilized as a composition for promoting hair growth or hair growth, or a composition for preventing, improving or treating hair loss by promoting the division or proliferation of hair cells, which are stem cells that are the source of hair.
  • FIG. 1 is a result of performing nanoparticle tracking analysis to confirm the size of Lactobacillus kerbetus-derived extracellular vesicles isolated according to Example 1.
  • FIG. 1 is a result of performing nanoparticle tracking analysis to confirm the size of Lactobacillus kerbetus-derived extracellular vesicles isolated according to Example 1.
  • composition for promoting hair growth or hair growth, or for preventing, improving, or treating hair loss of the present invention comprises Lactobacillus curvatus-derived extracellular vesicles as an active ingredient.
  • the Lactobacillus kerbetus is not limited, but preferably Lactobacillus kerbetus derived from kimchi, and more preferably Lactobacillus Lactobacillus kerbetus deposited under the accession number KCCM12011P.
  • Lactobacillus kerbetus of the accession number KCCM12011P was deposited on April 07, 2017 at the Korea Microorganism Conservation Center.
  • hair loss is not limited, but preferably includes male pattern hair loss and female pattern hair loss, telogen alopecia, alopecia areata, and M-type alopecia.
  • Androgenetic alopecia is a condition in which the hair becomes thinner and falls out due to the influence of male hormone (DHT). It is a symptom that the hair falls out gradually rather than all at once, and it is divided into O-type or M-shaped alopecia according to the shape of the hair falling out, and hair falls out from the crown of the head to the bangs.
  • DHT male hormone
  • female pattern baldness When male pattern baldness due to heredity occurs in women, it is called female pattern baldness. It is characterized by thinning and decreasing hair on the top of the head while maintaining the forehead line of the bangs, and baldness, where the hair completely falls out like men, is rare. Resting hair loss is caused by childbirth, excessive stress, or rapid weight loss. The areas where the hair falls out are not clearly defined, and when you comb or wash your hair, it shows a tendency to fall out a lot overall.
  • Alopecia areata is a symptom in which hair falls out in a circular shape, and it is a kind of skin disease-like disease that appears locally unlike other alopecia symptoms.
  • This alopecia is a disease in which one's own immune cells cause an immunological inflammatory reaction in the hair root, causing hair to fall out.
  • promoting hair growth or “promoting hair growth” is not limited, but preferably includes promoting the generation or growth of hair to ultimately increase the proportion of hair growth phase in the total hair. Accordingly, the term may include the meaning of suppressing hair loss caused by a decrease in the specific gravity of hair in the growth phase.
  • hair cell refers to a cell that produces hair while being in the dermal papilla ( ⁇ ) tissue. Hair follicles ( ⁇ ) are formed by absorbing nutrients from the capillaries flowing in the dermal papilla under the hair follicles, dividing and proliferating.
  • composition of the present invention promotes the division or proliferation of the hair cells to promote hair growth or hair growth, or to prevent, improve or treat hair loss.
  • the promotion of division or proliferation of the mother cells can be confirmed using various analysis methods existing in the art, for example, it can be confirmed by increasing the expression of the marker Ki67.
  • extracellular vesicle refers to a vesicle having a lipid bi-membrane structure with a diameter in the range of 10-1,000 nm that is secreted into the extracellular environment through the fusion of polycystic bodies and plasma membranes in various cells. Exosomes, microvesicles, ectosomes, microparticles, membrane vesicles, nanovesicles (exosomes), microvesicles, ectosomes, nanovesicles), outer membrane vesicles, and the like.
  • the extracellular vesicles prepared by the method of the present invention have an average diameter of 10 - 1,000 nm, more specifically 50 - 700 nm, even more specifically, an average of 100 - 500 nm have a diameter
  • Extracellular vesicles having a microdiameter in this range are also called exosomes.
  • Lactobacillus kerbetus is cultured (step a).
  • Lactobacillus kerbetus can be obtained from the stock solution of the kimchi extract.
  • step b the culture medium in which the Lactobacillus kerbetus is cultured is centrifuged.
  • step c the centrifuged culture solution is mixed with an organic solvent and reacted, followed by centrifugation to obtain an extracellular vesicle pellet.
  • the organic solvent may include sodium chloride.
  • the culture supernatant and the organic solvent may be mixed in a volume ratio of 1:0.5 to 1:1.5, preferably in a volume ratio of 1:0.8 to 1:1.2, and more preferably in the same amount. .
  • the organic solvent may be polyethylene glycol.
  • the organic solvent containing sodium chloride preferably has a sodium chloride concentration of 0.5 to 1.5 M.
  • the mixing and centrifugation may be repeatedly performed after centrifugation.
  • extracellular vesicle pellet is resuspended in extracellular vesicle extraction buffer to prepare a suspension, and the extracellular vesicles are isolated from the suspension (step d).
  • the term 'comprising as an active ingredient' means including an amount sufficient to achieve the efficacy or activity of the Lactobacillus kerbetus-derived extracellular vesicles.
  • the Lactobacillus kervetus-derived extracellular vesicles in the composition of the present invention are, for example, 1 x 10 7 or more, preferably 1 x 10 8 or more, more preferably 2 x 10 8 or more, more preferably 3 x 10 8 or more, still more preferably 4 x 10 8 or more, and most preferably 5 x 10 8 or more.
  • the upper quantitative limit of the Lactobacillus kervetus-derived extracellular vesicles contained in the composition of the present invention can be selected and implemented by those skilled in the art within an appropriate range. have.
  • the composition of the present invention is a pharmaceutical composition.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be prepared by using a pharmaceutically suitable and physiologically acceptable adjuvant in addition to the active ingredient, and the adjuvant includes an excipient, a disintegrant, a sweetener, a binder, a coating agent, a swelling agent, a lubricant, and a lubricant. agent or flavoring agent, etc. may be used.
  • the pharmaceutical composition may be preferably formulated as a pharmaceutical composition by including one or more pharmaceutically acceptable carriers in addition to the active ingredients described above for administration.
  • Formulations of the pharmaceutical composition may be granules, powders, tablets, coated tablets, capsules, suppositories, solutions, syrups, juices, suspensions, emulsions, drops or injectable solutions.
  • the active ingredient may be combined with an orally, non-toxic, pharmaceutically acceptable inert carrier such as ethanol, glycerol, water, and the like.
  • suitable binders, lubricants, disintegrants and color-developers may also be included in the mixture.
  • Suitable binders include, but are not limited to, starch, gelatin, natural sugars such as glucose or beta-lactose, corn sweeteners, natural and synthetic gums such as acacia, tracacanth or sodium oleate, sodium stearate, magnesium stearate, sodium benzoate, sodium acetate, sodium chloride, and the like.
  • Disintegrants include, but are not limited to, starch, methyl cellulose, agar, bentonite, xanthan gum, and the like.
  • acceptable pharmaceutical carriers are sterile and biocompatible, and include saline, sterile water, Ringer's solution, buffered saline, albumin injection, dextrose solution, maltodextrin solution, glycerol, ethanol and One or more of these components may be mixed and used, and other conventional additives such as antioxidants, buffers, and bacteriostats may be added as needed.
  • diluents, dispersants, surfactants, binders and lubricants may be additionally added to form an injectable formulation such as an aqueous solution, suspension, emulsion, etc., pills, capsules, granules or tablets.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be administered orally or parenterally, and in the case of parenteral administration, it may be administered by intravenous injection, subcutaneous injection, intramuscular injection, intraperitoneal injection, transdermal administration, etc., preferably oral administration.
  • a suitable dosage of the pharmaceutical composition of the present invention varies depending on factors such as formulation method, administration mode, age, weight, pathological condition, food, administration time, route of administration, excretion rate, and response sensitivity of the patient, usually skilled A trained physician can readily determine and prescribe an effective dosage for the desired treatment or prevention.
  • the daily dose of the pharmaceutical composition of the present invention is 0.001-10 g/kg.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is prepared in unit dosage form by formulating using a pharmaceutically acceptable carrier and/or excipient according to a method that can be easily carried out by a person of ordinary skill in the art to which the present invention pertains. Alternatively, it may be prepared by being introduced into a multi-dose container.
  • the formulation may be in the form of a solution, suspension, or emulsion in oil or aqueous medium, or may be in the form of an extract, powder, granule, tablet or capsule, and may additionally include a dispersant or stabilizer.
  • the present invention provides a cosmetic composition for promoting hair growth or hair growth, or preventing or improving hair loss, comprising Lactobacillus kerbetus-derived extracellular vesicles as an active ingredient.
  • the Lactobacillus kerbetus is not limited, but preferably Lactobacillus kerbetus derived from kimchi, more preferably Lactobacillus kerbetus deposited under the accession number KCCM12011P.
  • the contents of the Lactobacillus kerbetus-derived extracellular vesicles are the same as those described in the pharmaceutical composition for promoting hair growth or hair growth, or for preventing or treating hair loss, including the Lactobacillus kerbetus-derived extracellular vesicles as an active ingredient. For details, refer to that part.
  • composition of the present invention when used as a cosmetic composition, it includes ingredients commonly used in cosmetic compositions in addition to the Lactobacillus kerbetus-derived extracellular vesicle as an active ingredient, for example, water-soluble vitamins, oil-soluble vitamins, polymer peptides, polymer polysaccharides, sphingo lipids and seaweed extracts; and the like.
  • the water-soluble vitamin may be any as long as it can be formulated in cosmetics, but preferably vitamin B1, vitamin B2, vitamin B6, pyridoxine, pyridoxine hydrochloride, vitamin B12, pantothenic acid, nicotinic acid, nicotinic acid amide, folic acid, vitamin C, vitamin H, etc. and their salts (thiamine hydrochloride, sodium ascorbate salt, etc.) and derivatives (ascorbic acid-2-phosphate sodium salt, ascorbic acid-2-phosphate magnesium salt, etc.) are also included in the water-soluble vitamins that can be used in the present invention. Included. Water-soluble vitamins can be obtained by conventional methods such as a microbial transformation method, a purification method from a microbial culture, an enzymatic method or a chemical synthesis method.
  • the oil-soluble vitamins may be any as long as they can be formulated in cosmetics, but are preferably vitamin A, carotene, vitamin D2, vitamin D3, vitamin E ( ⁇ -, ⁇ -, ⁇ - and ⁇ -tocopherol and ⁇ -, ⁇ -, ⁇ - and ⁇ - tocotrienol), and their derivatives (ascorbine palmitate, ascorbine stearate, ascorbine dipalmitate, acetic acid-alpha tocopherol, nicotinic acid-alpha tocopherol, DL-pantothenyl alcohol, D- Pantothenyl alcohol, pantothenyl ethyl ether, etc.) are also included in the oil-soluble vitamins used in the present invention.
  • Oil-soluble vitamins can be obtained by conventional methods such as a microbial transformation method, a purification method from a microbial culture, an enzyme or a chemical synthesis method, and the like.
  • the macromolecular peptide may be any as long as it can be blended into cosmetics, and preferred examples include collagen, hydrolyzed collagen, gelatin, elastin, hydrolyzed elastin, and keratin.
  • Polymeric peptides can be purified and obtained by conventional methods such as purification from microbial culture, enzymatic methods or chemical synthesis, or can be purified and used from natural products such as dermis of pigs or cattle, silk fibers of silkworms, and the like.
  • the high molecular weight polysaccharide may be any one as long as it can be formulated in cosmetics, but preferably hydroxyethyl cellulose, xanthan gum, sodium hyaluronate, chondroitin sulfate, or a salt thereof (such as sodium salt).
  • chondroitin sulfate or a salt thereof can be purified and used from mammals or fish.
  • the sphingolipid may be any as long as it can be blended in cosmetics, and ceramide, phytosphingosine, sphingoglycolipid, and the like are preferred. Sphingo lipids can be purified by conventional methods from mammals, fish, shellfish, yeast or plants, or can be obtained by chemical synthesis.
  • the seaweed extract may be any type as long as it can be formulated in cosmetics, but preferably brown algae extract, red algae extract, green algae extract, etc. Potassium alginate and the like are also included in the seaweed extract used in the present invention.
  • the seaweed extract can be obtained by purification from seaweed by a conventional method.
  • the cosmetic composition may contain other ingredients that are usually formulated in cosmetics, if necessary, in addition to the above ingredients.
  • oils and fats include oils and fats, moisturizers, emollients, surfactants, organic and inorganic pigments, organic powders, UV absorbers, preservatives, disinfectants, antioxidants, plant extracts, pH adjusters, alcohols, colorants, fragrances, A blood circulation promoter, a cooling agent, an anti-inflammatory agent, purified water, etc. are mentioned.
  • fat and oil component examples include ester fats and oils, hydrocarbon oils and fats, silicone oils and fats, fluorine oils and fats, animal oils and fats, and vegetable oils and fats.
  • ester-based oils and fats examples include glyceryl tri-ethylhexanoate, cetyl 2-ethylhexanoate, isopropyl myristate, butyl myristate, isopropyl palmitate, ethyl stearate, octyl palmitate, isocetyl isostearate, stearic acid.
  • hydrocarbon-based fats and oils examples include hydrocarbon-based fats and oils such as squalene, liquid paraffin, alpha-olefin oligomer, isoparaffin, ceresin, paraffin, liquid isoparaffin, polybudene, microcrystalline wax, petrolatum.
  • silicone oils and fats examples include polymethylsilicone, methylphenylsilicone, methylcyclopolysiloxane, octamethylpolysiloxane, decamethylpolysiloxane, dodecamethylcyclosiloxane, dimethylsiloxane/methylcetyloxysiloxane copolymer, dimethylsiloxane/methylstealloxysiloxane copolymer, and alkyl Modified silicone oil, amino modified silicone oil, etc. are mentioned.
  • Perfluoropolyether etc. are mentioned as fluorine-type fats and oils.
  • humectant examples include a water-soluble low-molecular humectant, a fat-soluble molecular humectant, a water-soluble polymer, and a fat-soluble polymer.
  • Cholesterol, cholesterol ester, etc. are mentioned as a fat-soluble low molecular weight humectant.
  • water-soluble polymer examples include carboxyvinyl polymer, polyaspartate, tragacanth, xanthan gum, methyl cellulose, hydroxymethyl cellulose, hydroxyethyl cellulose, hydroxypropyl cellulose, carboxymethyl cellulose, water-soluble chitin, chitosan, and dextrin.
  • the fat-soluble polymer examples include polyvinylpyrrolidone/eicosene copolymer, polyvinylpyrrolidone/hexadecene copolymer, nitrocellulose, dextrin fatty acid ester, and high molecular weight silicone.
  • emollient examples include long-chain acylglutamic acid cholesteryl ester, hydroxystearic acid cholesteryl, 12-hydroxystearic acid, stearic acid, rosin acid, and lanolin fatty acid cholesteryl ester.
  • Nonionic surfactants anionic surfactants, cationic surfactants, amphoteric surfactants, etc. are mentioned as surfactant.
  • Nonionic surfactants include self-emulsifying glycerin monostearate, propylene glycol fatty acid ester, glycerin fatty acid ester, polyglycerol fatty acid ester, sorbitan fatty acid ester, POE (polyoxyethylene) sorbitan fatty acid ester, POE sorbitan fatty acid ester, POE Glycerin fatty acid ester, POE alkyl ether, POE fatty acid ester, POE hydrogenated castor oil, POE castor oil, POE/POP (polyoxyethylene/polyoxypropylene) copolymer, POE/POP alkyl ether, polyether-modified silicone, lauric acid alkanolamides, alkylamine oxides, hydrogenated soybean phospholipids, and the like.
  • anionic surfactant examples include fatty acid soap, alpha-acyl sulfonate, alkyl sulfonate, alkyl allyl sulfonate, alkyl naphthalene sulfonate, alkyl sulfate, POE alkyl ether sulfate, alkyl amide sulfate, alkyl phosphate, POE alkyl phosphate, and alkyl amide phosphate.
  • alkyloyl alkyl taurine salt N-acyl amino acid salt
  • POE alkyl ether carboxylate alkyl sulfosuccinate salt, alkyl sulfoacetate sodium
  • acylated hydrolyzed collagen peptide salt perfluoroalkyl phosphate ester, etc.
  • cationic surfactant examples include alkyltrimethylammonium chloride, stearyltrimethylammonium chloride, stearyltrimethylammonium bromide, cetostearyltrimethylammonium chloride, distearyldimethylammonium chloride, stearyldimethylbenzylammonium chloride, behenyltrimethylammonium bromide, chloride Benzalkonium, diethylaminoethylamide stearate, dimethylaminopropylamide stearate, quaternary ammonium salt of lanolin derivative, etc. are mentioned.
  • amphoteric surfactant examples include carboxybetaine type, amidebetaine type, sulfobetaine type, hydroxysulfobetaine type, amidesulfobetaine type, phosphobetaine type, aminocarboxylate type, imidazoline derivative type, amidamine type, etc. Amphoteric surfactant etc. are mentioned.
  • organic and inorganic pigments include silicic acid, silicic anhydride, magnesium silicate, talc, sericite, mica, kaolin, bengala, clay, bentonite, titanium-coated mica, bismuth oxychloride, zirconium oxide, magnesium oxide, zinc oxide, titanium oxide, aluminum oxide.
  • inorganic pigments such as calcium sulfate, barium sulfate, magnesium sulfate, calcium carbonate, magnesium carbonate, iron oxide, ultramarine, chromium oxide, chromium hydroxide, calamine, and complexes thereof; Polyamide, polyester, polypropylene, polystyrene, polyurethane, vinyl resin, urea resin, phenol resin, fluororesin, silicon resin, acrylic resin, melamine resin, epoxy resin, polycarbonate resin, divinylbenzene/styrene copolymer, and organic pigments such as silk powder, cellulose, CI pigment yellow and CI pigment orange, and composite pigments of these inorganic pigments and organic pigments.
  • inorganic pigments such as calcium sulfate, barium sulfate, magnesium sulfate, calcium carbonate, magnesium carbonate, iron oxide, ultramarine, chromium oxide, chromium hydroxide, calamine, and complexes thereof; Polyamide,
  • organic powder examples include metal soaps such as calcium stearate; alkyl phosphate metal salts such as sodium cetylate, zinc laurylate, and calcium laurylate; acylamino acid polyvalent metal salts such as calcium N-lauroyl-beta-alanine, zinc N-lauroyl-beta-alanine, and calcium N-lauroyl glycine; amidesulfonic acid polyvalent metal salts such as calcium N-lauroyl-taurine and calcium N-palmitoyl-taurine; N such as N-epsilon-lauroyl-L-lysine, N-epsilon-palmitoylizine, N-alpha-paritoylolnithine, N-alpha-lauroylarginine, N-alpha-hydrogenated beef fatty acid acylarginine, etc.
  • metal soaps such as calcium stearate
  • alkyl phosphate metal salts such as
  • N-acyl basic amino acids such as N-lauroylglycylglycine
  • alpha-amino fatty acids such as alpha-aminocaprylic acid and alpha-aminolauric acid
  • Polyethylene, polypropylene, nylon, polymethyl methacrylate, polystyrene, a divinylbenzene-styrene copolymer, ethylene tetrafluoride, etc. are mentioned.
  • UV absorbers para-aminobenzoic acid, ethyl para-aminobenzoate, amyl para-aminobenzoate, octyl para-aminobenzoate, ethylene glycol salicylate, phenyl salicylate, octyl salicylate, benzyl salicylate, butylphenyl salicylate, homomentyl salicylate, benzyl cinnamate , para-methoxycinnamic acid-2-ethoxyethyl, para-methoxycinnamic acid octyl, dipara-methoxycinnamic acid mono-2-ethylhexaneglyceryl, para-methoxycinnamic acid isopropyl, diisopropyl diisopropyl cinnamic acid ester mixture, uro Cannic acid, ethyl urokanate, hydroxymethoxybenzophenone,
  • disinfectants include hinokitiol, triclosan, trichlorohydroxydiphenyl ether, chlorhexidine gluconate, phenoxyethanol, resorcin, isopropylmethylphenol, azulene, salicylic acid, zinc phyllithione, benzalkonium chloride, photosensitizer. So, No. 301, mononitroguaial sodium, undecyrenic acid, etc. are mentioned.
  • antioxidant examples include butylhydroxyanisole, propyl gallic acid, and ellisorbic acid.
  • pH adjuster examples include citric acid, sodium citrate, malic acid, sodium malate, fmalic acid, sodium fumarate, succinic acid, sodium succinate, sodium hydroxide, sodium monohydrogen phosphate, and the like.
  • Examples of the alcohol include higher alcohols such as cetyl alcohol.
  • blending components that may be added are not limited thereto, and any of the above components can be blended within a range that does not impair the purpose and effect of the present invention, but preferably 0.001 to 50% by weight based on the total weight of the composition. , more preferably 0.001 - 3% by weight.
  • the cosmetic composition of the present invention may take the form of a solution, an emulsion, a viscous mixture, or the like.
  • Components included in the cosmetic composition of the present invention may include components commonly used in cosmetic compositions in addition to the Lactobacillus kervetus-derived extracellular vesicles as active ingredients, for example, stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments and conventional adjuvants and carriers such as perfumes.
  • the cosmetic composition of the present invention may be prepared in any formulation conventionally prepared in the art, for example, paste, cream, gel, powder, spray solution, emulsion, suspension, lotion, soap, treatment, It may be formulated as a surfactant-containing cleansing, oil, powder foundation, emulsion foundation, wax foundation, and the like, but is not limited thereto.
  • the formulation of the present invention is a paste, cream or gel, animal fiber, vegetable fiber, wax, paraffin, starch, tracanth, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc or zinc oxide may be used as a carrier component.
  • lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component, and in particular, in the case of a spray, additional chlorofluorohydrocarbon, propane /may contain propellants such as butane or dimethyl ether.
  • a solvent, solvating agent or emulsifying agent is used as a carrier component, such as water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1 ,3-butylglycol oil, glycerol fatty esters, fatty acid esters of polyethylene glycol or sorbitan.
  • the formulation of the present invention is a suspension
  • a carrier component water, a liquid diluent such as ethanol or propylene glycol, a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol esters and polyoxyethylene sorbitan esters, microcrystalline Cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tracanth may be used.
  • a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol esters and polyoxyethylene sorbitan esters, microcrystalline Cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tracanth may be used.
  • the formulation of the present invention is a surfactant-containing cleansing agent
  • Ether sulfate, alkylamidobetaine, aliphatic alcohol, fatty acid glyceride, fatty acid diethanolamide, vegetable oil, linolin derivative or ethoxylated glycerol fatty acid ester and the like can be used.
  • the present invention provides a food composition for promoting hair growth or hair growth, or preventing or improving hair loss, comprising Lactobacillus kerbetus-derived extracellular vesicles as an active ingredient.
  • the Lactobacillus kerbetus is not limited, but preferably Lactobacillus kerbetus derived from kimchi, more preferably Lactobacillus kerbetus deposited under the accession number KCCM12011P.
  • the contents of the Lactobacillus kerbetus-derived extracellular vesicles are the same as those described in the pharmaceutical composition for promoting hair growth or hair growth, or for preventing or treating hair loss, including the Lactobacillus kerbetus-derived extracellular vesicles as an active ingredient. For details, refer to that part.
  • the food composition according to the present invention may be formulated in the same manner as the pharmaceutical composition and used as a functional food or added to various foods.
  • Foods to which the composition of the present invention can be added include, for example, beverages, alcoholic beverages, sweets, diet bars, dairy products, meat, chocolate, pizza, ramen, other noodles, gums, ice cream, vitamin complexes, health supplements etc.
  • the food composition of the present invention may include not only the active ingredients, but also ingredients commonly added during food production, for example, proteins, carbohydrates, fats, nutrients, seasonings and flavoring agents.
  • examples of the above-mentioned carbohydrates include monosaccharides such as glucose, fructose, and the like; disaccharides such as maltose, sucrose, oligosaccharides and the like; and polysaccharides, for example, conventional sugars such as dextrin, cyclodextrin, and the like, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol.
  • flavoring agents natural flavoring agents [taumatine, stevia extract (eg, rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.)) and synthetic flavoring agents (saccharin, aspartame, etc.) can be used.
  • stevia extract eg, rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.
  • synthetic flavoring agents sacharin, aspartame, etc.
  • the present invention provides a health functional food comprising a food composition for promoting hair growth or hair growth, or preventing or improving hair loss, comprising the Lactobacillus kerbetus-derived extracellular vesicles as an active ingredient.
  • Health functional food is a food prepared by adding Lactobacillus kerbetus-derived extracellular vesicles to food materials such as beverages, teas, spices, gum, and confectionery, or by encapsulating, powdering, or suspension, etc. It means to bring a specific effect, but unlike general drugs, it has the advantage of not having side effects that may occur when taking the drug for a long time using food as a raw material.
  • the health functional food of the present invention obtained in this way is very useful because it can be ingested on a daily basis.
  • the amount of Lactobacillus kerbetus-derived extracellular vesicles added in such a health functional food varies depending on the type of target health functional food and cannot be defined uniformly, but it can be added within a range that does not impair the original taste of the food, It is usually in the range of 0.01 to 50% by weight, preferably 0.1 to 20% by weight relative to the target food.
  • a health functional food in the form of pills, granules, tablets or capsules it is usually added in an amount of 0.1 to 100% by weight, preferably 0.5 to 80% by weight.
  • the health functional food of the present invention may be in the form of a pill, tablet, capsule or beverage.
  • Lactobacillus kerbetus-derived extracellular vesicles according to the present invention or a composition comprising the same as an active ingredient may be used as a feed additive or feed.
  • the composition When used as a feed additive, the composition may be a high concentration of 20 to 90% or may be prepared in powder or granular form.
  • the feed additives include organic acids such as citric acid, humic acid, adipic acid, lactic acid, and malic acid, phosphates such as sodium phosphate, potassium phosphate, acid pyrophosphate, polyphosphate (polyphosphate), polyphenol, catechin, alpha-tocopherol, rosemary Extract, vitamin C, green tea extract, licorice extract, chitosan, tannic acid, any one or more of natural antioxidants such as phytic acid may be further included.
  • the composition When used as a feed, the composition may be formulated in the form of a conventional feed, and may include common feed ingredients together.
  • the feed additive and feed include grains such as milled or crushed wheat, oats, barley, corn and rice; plant protein feeds, such as feeds based on rape, soybean, and sunflower; animal protein feeds such as blood meal, meat meal, bone meal and fish meal; Sugars and dairy products, for example, may further include dry ingredients made of various powdered milk and whey powder, and in addition, may further include nutritional supplements, digestion and absorption enhancers, growth promoters, and the like.
  • the feed additive may be administered alone or in combination with other feed additives in an edible carrier.
  • the feed additive can be easily administered to the animal as a top dressing, directly mixing them with animal feed, or in an oral formulation separate from the feed.
  • a pharmaceutically acceptable edible carrier as well known in the art to prepare an immediate release or sustained release formulation.
  • Such edible carriers may be solid or liquid, for example cornstarch, lactose, sucrose, soybean flakes, peanut oil, olive oil, sesame oil and propylene glycol.
  • the feed additive may be a tablet, a capsule, a powder, a troche or a sugar-containing tablet, or a top dressing in a microdispersed form.
  • a liquid carrier is used, the feed additive may be in the form of a gelatin soft capsule, or a syrup or suspension, emulsion, or solution.
  • the feed additives and feed may contain auxiliary agents, for example, preservatives, stabilizers, wetting or emulsifying agents, solution accelerators, and the like.
  • the feed additive may be used by adding to animal feed by immersion, spraying, or mixing.
  • the feed or feed additive of the present invention can be applied to a number of animal diets including mammals, poultry and fish.
  • the mammal it can be used not only for pigs, cattle, sheep, goats, laboratory rodents, and laboratory rodents, but also for pets (eg, dogs and cats), and as the poultry, chickens, turkeys, ducks, geese, pheasants, and quail, and the like, and may be used as the fish such as trout, but is not limited thereto.
  • the present invention provides the use of Lactobacillus kerbetus-derived extracellular vesicles for promoting hair growth or hair growth, or preventing, improving or treating hair loss.
  • the present invention provides the use of the Lactobacillus kerbetus-derived extracellular vesicles for promoting hair growth or hair growth, or for the production of a medicament, cosmetic or food for preventing, improving or treating hair loss.
  • the Lactobacillus kerbetus-derived extracellular vesicles can be used for promoting hair growth or hair growth, or for preventing, improving or treating hair loss.
  • the present invention provides a method for preventing, improving or treating hair growth or hair growth, or hair loss, comprising administering a therapeutically effective amount of Lactobacillus kerbetus-derived extracellular vesicles to a subject in need thereof.
  • the term "subject” refers to a mammal that is the subject of treatment, observation or experimentation, preferably a human.
  • the term "effective amount” or “therapeutically effective amount” refers to an active ingredient that induces a biological or medical response in a tissue system, animal or human, or pharmaceutical, cosmetic, food, or pharmaceutical, cosmetic, food By means of an amount of the composition, it includes an amount that induces alleviation of the symptoms of the disease or disorder in question.
  • the effective amount and frequency of administration for the active ingredient of the present invention may vary depending on the desired effect.
  • the optimal dosage to be administered can be easily determined by those skilled in the art, and the type of disease, the severity of the disease, the content of active ingredients and other ingredients contained in the composition, the type of formulation, and the age, weight, and general health of the patient It can be adjusted according to various factors including condition, sex and diet, administration time, administration route and secretion rate of the composition, treatment period, and concurrently used drugs.
  • the extracellular vesicles or composition is preferably administered at a dose of 0.001 g/kg to 10 g/kg when administered once to several times a day.
  • the composition comprising the Lactobacillus kerbetus-derived extracellular vesicle as an active ingredient is administered via oral, rectal, intravenous, intraarterial, intraperitoneal, intramuscular, intrasternal, transdermal, topical, or intradermal routes. It can be administered in a conventional manner.
  • Example 1 Lactobacillus kervetus-derived extracellular vesicle (P9E) isolation
  • the microorganism of the present invention was named Lactobacillus curvatus WIKIM55 (Lactobacillus curvatus WIKIM55), and was deposited at the Korea Microorganism Conservation Center on April 07, 2017 (accession number KCCM12011P) (hereinafter referred to as P9).
  • Lactobacillus kerbetus P9 strain 0.1% was inoculated into 30 ml of MRS broth and cultured at 30° C. for 18 hours. After incubation, centrifuged at 3500 rpm for 10 minutes, the culture medium was stored separately for nano-ER separation and medium treatment, and the cells were washed three times with a PBS (phosphate buffered saline) solution to remove the remaining medium components.
  • PBS phosphate buffered saline
  • the culture solution obtained after culturing the strain and 1M NaCl solution containing 16% PEG 6000 were mixed in the same amount and reacted at 4° C. for 15 hours. Thereafter, the reacted solution was centrifuged at 10,000 g at 4° C. for 20 minutes to obtain an extracellular vesicle pellet.
  • the extracellular vesicle pellet was resuspensioned in 0.5 M NaCl solution containing 5% PEG 6000, washed, and centrifuged at 11,000 rpm at 4°C for 20 minutes. After that, the supernatant was discarded and the pellet was resuspensioned in 1X PBS to finally separate Lactobacillus kerbetus P9-derived extracellular vesicles (P9E).
  • Nanoparticle tracking analysis was performed to confirm the size of the separated extracellular vesicles.
  • the extracellular vesicle sample was placed in the chamber of the instrument and focused using a camera so that the particles were clearly visible, followed by measurement.
  • the extracellular vesicles exhibited about 100-500 nm.
  • Example 1 As a medium in (1) of Example 1, a medium in which Lactobacillus kerbetus P9 was not cultured was prepared.
  • Example 1 As a medium in (1) of Example 1, after culturing Lactobacillus kerbetus P9, a residual medium filtered through a 0.22 um filter was prepared.
  • Example 1 As a medium in (1) of Example 1, a medium in which Lactobacillus kerbetus P9 was not cultured was again filtered through a 0.22 um filter as in Comparative Example 2 to prepare a medium.
  • Lactobacillus curvetus P9 strain was treated with an MOI of 0.5.
  • the extracellular vesicles of the Lactobacillus kerbetus P9 strain were treated with 1 x 10 8 pieces.
  • the extracellular vesicles of the Lactobacillus kerbetus P9 strain were treated with 5 x 10 8 pieces.
  • Human germinal matrix cells are involved in hair growth through interaction with human dermal papilla cells, fibroblasts, and skin cells (Keratinocytes).
  • hair cells are stem cells that are the source of hair, and since they secrete factors important for growth of dermal papilla cells and skin cells to promote hair growth, the division and increase of hair cells are very important for cell activity.
  • the mother cells were seeded with 1 x 10 5 cells in a 6 well plate coated with poly-L-lysine and cultured for 24 hours. The next day, the culture medium was removed and replaced with an antibiotic-free medium.
  • the Lactobacillus kerbetus strain and the culture medium prepared above, the EV isolated from the strain-free medium, and the EV isolated from the Lactobacillus kerbetus culture medium were treated, respectively, and cultured for 24 hours.
  • Ki67 FITC
  • Ki67 is a marker expressed when cells divide. It is commonly expressed in all cells, and as division increases, expression also increases. In the case of parental cells, the expression of Ki67 was increased only when the Lactobacillus kerbetus-derived EV was treated with a high concentration.
  • the above result means that the Lactobacillus kerbetus-derived EV can induce hair growth by promoting the growth of hair cells, and it means that the Lactobacillus kerbetus-derived EV is importantly involved in hair growth (FIG. 2).
  • the above ingredients are mixed and filled in an airtight bag to prepare a powder.
  • tablets are prepared by tableting according to a conventional manufacturing method of tablets.
  • the above ingredients are mixed and filled in a gelatin capsule to prepare a capsule.
  • the content of the above ingredients per 1 ampoule is prepared.
  • each component is added and dissolved in purified water, an appropriate amount of lemon flavor is added, the above components are mixed, purified water is added, the whole is adjusted to 100 g by adding purified water, and then filled in a brown bottle and sterilized to prepare a liquid.
  • composition ratio of the vitamin and mineral mixture is relatively suitable for granules in a preferred embodiment, but the mixing ratio may be arbitrarily modified. It can be prepared and used in the preparation of a health functional food composition according to a conventional method.
  • the resulting solution is filtered and obtained in a sterilized 2 L container, sealed and sterilized, then refrigerated. It is used to prepare the functional beverage composition of the present invention.
  • composition ratio is prepared by mixing ingredients suitable for relatively favorite beverages in a preferred embodiment, the mixing ratio may be arbitrarily modified according to regional and ethnic preferences such as demand class, demanding country, and use.

Abstract

본 발명은 락토바실러스 커베투스 (Lactobacillus curvatus) 유래 세포밖 소포체(extracellular vesicles)를 유효성분으로 포함하는 발모 또는 양모 촉진용, 또는 탈모의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 모발의 근원이 되는 줄기세포로인 모모세포의 분열 또는 증식을 촉진함으로써 발모 또는 양모 촉진용 조성물이나, 탈모의 예방, 개선 또는 치료용 조성물로서 활용될 수 있다.

Description

락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체를 유효성분으로 포함하는 양모 촉진용 조성물
본 발명은 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체를 유효성분으로 포함하는 양모 또는 발모 촉진, 또는 탈모 방지 조성물에 관한 것이다.
모발은 머리 보호 및 머리 온도 유지 등의 역할을 할 뿐만 아니라 최근 미적 관심 증대로 외모를 결정짓는 신체 기관이기도 하다. 이에 따라 탈모 및 탈모 치료 방법에 대해 관심이 증대되었으며, 탈모 치료제에 대한 연구, 개발이 활발하게 이루어지고 있다. 모발은 성장기(anagen, growing phase), 퇴행기(canagen, transitional phase), 휴지기(telogen, resting phase), 탈락기(exogen)의 4단계 순환적 모주기(hair cycle)를 통해 성장과 탈락을 반복하는데, 다양한 원인으로 인하여 모발 성장보다 탈락이 더 많이 일어나게 될 때 탈모라고 한다. 현재 알려진 탈모의 원인으로는 유전적 요인, 혈류 장애 및 남성 호르몬인 테스토스테론에 의한 내분비 이상 등이 있으며, 스트레스와 같은 외부 원인들이 알려져 있다.
대표적인 모발 촉진제로는 미녹시딜(minoxidil; 6-Amino-1,2-dihydro-1-hydroxy-2-imino-4-phenoxypyrimidine, 경피 도포제)과 피나스테라이드(finasteride, 경구 복용제) 등이 사용되고 있다. 미녹시딜의 경우 혈관 확장을 통한 영양 공급 촉진을 통해 모발 성장을 유도한다고 알려져 있으며, 피나스테리드의 경우 테스토스테론의 대사 효소인 5α-reductase의 활성 억제로 인한 모유두 세포 사멸 억제의 작용 기전을 가지고 있다. 그러나, 두 치료제 모두 사용시에만 효과가 있고 사용을 중단하면 효과가 사라지기 때문에 지속적으로 사용해야만 한다는 불편함이 있으며, 미녹시딜의 경우 끈적이는 사용감과 피부 자극이라는 부작용이, 피나스테라이드의 경우 정력 감퇴, 발기 부전 등의 성기능 장애가 보고되고 있어 지속적인 사용에 많은 제한이 따른다.
한편, 최근들어 유산균으로부터 분리된 세포밖 소포체(extracellular vesicles, EVs)를 활용한 연구들이 활발히 진행되고 있다. 박테로이데스 프라질리스(Bacteroides fragilis)로부터 유래된 EV의 경우 DSS 유발 대장염에서 DC 자극을 통한 면역 조절 Treg 반응을 유도한다고 보고 되었고, 락토바실러스 케피르(Lactobacillus kefir)로부터 유래된 EV의 경우 TNBS 유도 IBD 마우스 모델에서 전염증성 사이토카인 생성을 억제한다고 보고되었으며, 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei)로부터 유래된 EV의 경우 장(gut)에서 강화된 IgA 생산하고 상피 장 장벽 강화 및 미생물총 구성을 조절한다고 보고되었고, 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus)로부터 유래된 EV의 경우 장 DC 함량 증가 및 IL-10 분비를 강화한다고 보고되었으며, 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum)으로부터 유래된 EV의 경우 식품 알레르기 마우스 모델에서 비만 세포의 세포자멸사를 통한 알레르기성 설사를 억제한다고 보고되었다(JA Molina-Tijeras et al., The Immunomodulatory Properties of Extracellular Vesicles Derived from Probiotics: A Novel Approach for the Management of Gastrointestinal Diseases, Nutrients 2019, 11, 1038).
이러한 배경 하에서, 최근 엑소좀 등의 세포밖 소포체를 이용한 피부 및 모발 건강에 대한 연구가 진행되고 있지만, 직접적으로 탈모 및/또는 양모에 영향을 주는 기전에 직접적으로 관여하는 유산균 유래 세포밖 소포체에 대해 밝혀지지 않은바, 모발 건강 및 양모를 유발시킬 수 있는 우수한 세포밖 소포체를 포함하는 조성물의 개발이 요구되고 있다.
상기한 배경기술로서 설명된 사항들은 본 발명의 배경에 대한 이해 증진을 위한 것일 뿐, 이 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 이미 알려진 종래기술에 해당함을 인정하는 것으로 받아들여져서는 안 될 것이다.
[선행기술문헌]
[특허문헌]
한국등록특허 제10-1615314호
본 발명의 목적은 락토바실러스 커베투스 (Lactobacillus curvatus) 유래 세포밖 소포체(extracellular vesicles)를 유효성분으로 포함하는 발모 또는 양모 촉진용, 또는 탈모의 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체를 유효성분으로 포함하는 모모세포의 분열 또는 증식 촉진용 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 치료상 유효량의 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 발모 또는 양모 촉진, 또는 탈모의 예방, 개선 또는 치료방법을 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 치료상 유효량의 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 모모세포의 분열 또는 증식 촉진방법을 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체의 발모 또는 양모 촉진, 또는 탈모의 예방, 개선 또는 치료 용도를 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 락토바실러스 커베투스를 배양하는 단계를 포함하는 발모 또는 양모 촉진용, 또는 탈모의 예방, 개선 또는 치료용 조성물의 제조방법을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.
본 발명의 일 측면에 따르면,
락토바실러스 커베투스 (Lactobacillus curvatus) 유래 세포밖 소포체(extracellular vesicles)를 유효성분으로 포함하는 발모 또는 양모 촉진용, 또는 탈모의 예방, 개선 또는 치료용 조성물이 제공된다.
본 발명의 다른 하나의 측면에 따르면,
치료상 유효량의 락토바실러스 커베투스 (Lactobacillus curvatus) 유래 세포밖 소포체(extracellular vesicles)를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 발모 또는 양모 촉진, 또는 탈모의 예방, 개선 또는 치료방법이 제공된다.
본 발명의 또 다른 하나의 측면에 따르면,
락토바실러스 커베투스 (Lactobacillus curvatus) 유래 세포밖 소포체(extracellular vesicles)의 발모 또는 양모 촉진, 또는 탈모의 예방, 개선 또는 치료 용도가 제공된다.
본 발명의 다른 또 하나의 측면에 따르면,
(a) 락토바실러스 커베투스 (Lactobacillus curvatus)를 배양하는 단계;
(b) 상기 락토바실러스 커베투스가 배양된 배양액을 원심분리하는 단계; 및
(c) 상기 원심분리한 배양액을 유기용매와 혼합하여 반응시킨 후 원심분리하여 세포밖 소포체 펠릿을 수득하는 단계; 및
(d) 상기 세포밖 소포체 펠릿을 세포밖 소포체 추출 버퍼에 재현탁시켜 현탁액을 제조하고, 상기 현탁액으로부터 세포밖 소포체를 분리하는 단계;를 포함하는 발모 또는 양모 촉진, 또는 탈모의 예방, 개선 또는 치료용 조성물의 제조방법이 제공된다.
본 발명은 락토바실러스 커베투스 (Lactobacillus curvatus) 유래 세포밖 소포체(extracellular vesicles)를 유효성분으로 포함하는 발모 또는 양모 촉진용, 또는 탈모의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 모발의 근원이 되는 줄기세포로인 모모세포의 분열 또는 증식을 촉진함으로써 발모 또는 양모 촉진용 조성물이나, 탈모의 예방, 개선 또는 치료용 조성물로서 활용될 수 있다.
도 1은 실시예 1에 따라 분리된 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체의 크기를 확인하기 위하여 나노사이트(Nanoparticle tracking analysis)를 수행한 결과이다.
도 2는 모모세포의 분열을 확인할 수 있는 마커인 Ki67의 발현량을 비교한 결과이다.
이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실시예를 상세히 설명하도록 한다. 그러나, 이하의 설명은 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다. 본원에서 사용한 용어는 단지 특정한 실시예를 설명하기 위해 사용된 것으로, 본 발명을 한정하려는 의도가 아니다. 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다. 본 출원에서, "포함하다" 또는 "가지다" 등의 용어는 명세서상에 기재된 특징, 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 또는 이들을 조합한 것이 존재함을 지정하려는 것이지, 하나 또는 그 이상의 다른 특징들이나 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 또는 이들을 조합한 것들의 존재 또는 부가 가능성을 미리 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다.
본 발명의 발모 또는 양모 촉진용, 또는 탈모의 예방, 개선 또는 치료용 조성물은 락토바실러스 커베투스 (Lactobacillus curvatus) 유래 세포밖 소포체(extracellular vesicles)를 유효성분으로 포함한다.
본 명세서에서, 락토바실러스 커베투스는 제한되지 않으나, 바람직하게는 김치 유래의 락토바실러스 커베투스, 보다 바람직하게는 수탁번호 KCCM12011P로 기탁된 락토바실러스 락토바실러스 커베투스이다.
상기 수탁번호 KCCM12011P의 락토바실러스 커베투스는 한국미생물보존센터에 2017년 04월 07일자로 기탁되었다.
본 명세서에서, 용어, "탈모"는 제한되지 않으나, 바람직하게는 남성형 탈모와 여성형 탈모, 휴지기 탈모증, 원형 탈모증, M자형 탈모증을 포함한다.
남성형 탈모증은 DHT(남성호르몬)의 영향으로 모발이 점점 얇아지면서 빠지는 증상을 말한다. 모발이 일시에 탈락하는 것이 아니라 서서히 빠지는 증상으로 모발이 빠지는 모양에 따라 O형 또는 M자형 탈모증으로 나눠지고, 정수리 부위에서 앞머리까지 모발이 빠지게 된다.
유전에 의한 남성형 탈모가 여성에게 발생하면 이를 여성형 탈모라고 한다. 대개 앞머리의 이마선은 유지되면서 정수리 부위의 모발이 가늘어지고 적어지는 것이 특징이며, 남자들처럼 완전히 머리가 빠지는 대머리는 거의 발생하지 않는다. 휴지기 탈모는 출산이나 과도한 스트레스, 급격한 체중 감소 등에 의해 발생한다. 머리카락이 빠지는 곳이 뚜렷이 구분되지 않고 머리를 빗거나 감을 때 전체적으로 많이 빠지는 양상을 보인다.
원형탈모증은 원모양으로 모발이 빠지는 증상으로, 다른 탈모증상과 다르게 국소적으로 나타나는 일종의 피부병 같은 질환이다. 이 탈모증은 자신의 면역세포가 모근에 면역학적 염증반응을 일으켜서 모발이 빠지게 되는 질환이다.
본 명세서에서, 용어, "발모 촉진" 또는 "양모 촉진"은 제한되지 않으나, 바람직하게는 모발의 발생 또는 성장을 촉진하여 궁극적으로 전체 모발에서 성장기 모발의 비중을 증가시키는 것을 포함한다. 따라서, 상기 용어는 성장기 모발의 비중이 감소함으로써 유발되는 탈모를 억제하는 의미를 포함할 수 있다.
본 명세서에서, 용어, "모모세포(keratinocyte cell)"는 모유두(毛乳頭) 조직 내에 있으면서 모발을 만들어 내는 세포를 의미한다. 모낭(毛囊) 밑에 있는 모유두에 흐르는 모세 혈관으로부터 영양분을 흡수 및 분열 증식하여 모발을 형성한다.
본 발명의 조성물은 상기 모모세포의 분열 또는 증식을 촉진하여 발모 또는 양모의 촉진이나, 탈모의 예방, 개선 또는 치료를 달성할 수 있다.
상기 상기 모모세포의 분열 또는 증식 촉진은 당업계에 존재하는 다양한 분석방법을 이용하여 확인 할 수 있으며, 예를 들어, 마커 Ki67의 발현 증가를 통해 확인할 수 있다.
본 명세서에서 용어 "세포밖 소포체(extracellular vesicle)"는 다양한 세포에서 다낭체와 원형질막의 융합을 통해 세포 밖 환경으로 분비되는 10-1,000 nm 범위 직경의 지질 이중막 구조의 소낭을 의미한다. 세포밖 소포체는 기원과 분비 기작, 크기 등을 기준으로 엑소좀(exosomes), 마이크로베시클(microvesicles), 엑토좀(ectosomes), 마이크로파티클(microparticles), 막 소포체(membrane vesicles), 나노베시클(nanovesicles), 외막 소포체(outer membrane vesicles) 등을 포함한다.
본 발명의 구체적인 구현예에 따르면, 본 발명의 방법으로 제조되는 세포밖 소포체는 10 - 1,000 nm의 평균 직경을 가지며, 보다 구체적으로는 50 - 700 nm, 보다 더 구체적으로는 100 - 500 nm의 평균 직경을 가진다. 이러한 범위의 미세 직경을 가지는 세포밖 소포체를 엑소좀(exosome)이라고도 한다.
이하, 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체를 유효성분으로 포함하는 발모 또는 양모 촉진용, 또는 탈모의 예방, 개선 또는 치료용 조성물의 제조방법에 대해 설명하도록 한다.
먼저, 락토바실러스 커베투스를 배양한다(단계 a).
락토바실러스 커베투스는 김치 추출물의 원액으로부터 수득될 수 있다.
다음으로, 상기 락토바실러스 커베투스가 배양된 배양액을 원심분리한다(단계 b).
이후, 상기 원심분리한 배양액을 유기용매와 혼합하여 반응시킨 후 원심분리하여 세포밖 소포체 펠릿을 수득한다(단계 c).
상기 유기용매는 염화나트륨을 포함할 수 있다.
상기 배양 상층액과 유기용매는 1:0.5 내지 1:1.5 부피비로 혼합할 수 있고, 바람직하게는 1:0.8 내지 1:1.2의 부피비로 혼합할 수 있고, 더욱 바람직하게는 동량으로 혼합할 수 있다.
상기 유기용매는 폴리에틸렌글리콜일 수 있다.
상기 염화나트륨을 포함하는 유기용매는 염화나트륨 농도가 0.5 내지 1.5 M 인 것이 바람직하다.
상기 염화나트륨을 포함하는 유기용매와 혼합하여 반응시킨 후 원심분리한 후 상기 혼합 및 원심분리를 반복 수행할 수 있다.
마지막으로, 상기 세포밖 소포체 펠릿을 세포밖 소포체 추출 버퍼에 재현탁시켜 현탁액을 제조하고, 상기 현탁액으로부터 세포밖 소포체를 분리한다(단계 d).
상기 세포밖 소포체 추출 버퍼는 PBS(Phosphate-buffered saline)를 사용하는 것이 바람직하다.
한편, 본 명세서에서 용어 ‘유효성분으로 포함하는’이란 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체의 효능 또는 활성을 달성하는 데 충분한 양을 포함하는 것을 의미한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 조성물 내에서 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체는 예를 들어, 1 x 107개 이상, 바람직하게는 1 x 108개 이상, 보다 바람직하게는 2 x 108개 이상, 보다 더 바람직하게는 3 x 108개 이상, 보다 더욱 더 바람직하게는 4 x 108개 이상, 가장 바람직하게는 5 x 108개 이상 포함할 수 있다. 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체는 천연물로서 과량 투여하여도 인체에 부작용이 없으므로 본 발명의 조성물 내에 포함되는 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체의 양적 상한은 당업자가 적절한 범위 내에서 선택하여 실시할 수 있다.
본 발명의 구체적인 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물은 약학 조성물인 것이다.
본 발명의 약학 조성물은 상기 유효 성분 이외에 약제학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 사용하여 제조될 수 있으며, 상기 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제 또는 향미제 등을 사용할 수 있다.
상기 약학 조성물은 투여를 위해서 상기 기재한 유효 성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 약학 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다.
상기 약학 조성물의 제제 형태는 과립제, 산제, 정제, 피복정, 캡슐제, 좌제, 액제, 시럽, 즙, 현탁제, 유제, 점적제 또는 주사 가능한 액제 등이 될 수 있다. 예를 들어, 정제 또는 캡슐제의 형태로의 제제화를 위해, 유효 성분은 에탄올, 글리세롤, 물 등과 같은 경구, 무독성의 약제학적으로 허용 가능한 불활성 담체와 결합될 수 있다. 또한, 원하거나 필요한 경우, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 발색제 또한 혼합물로 포함될 수 있다. 적합한 결합제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 젤라틴, 글루코스 또는 베타-락토오스와 같은 천연 당, 옥수수 감미제, 아카시아, 트래커캔스 또는 소듐올레이트와 같은 천연 및 합성 검, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트, 소듐 클로라이드 등을 포함한다. 붕해제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 메틸 셀룰로스, 아가, 벤토니트, 잔탄 검 등을 포함한다.
액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용 가능한 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있고, 비경구 투여인 경우에는 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여 등으로 투여할 수 있으며, 바람직하게는 경구 투여이다.
본 발명의 약학 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사는 소망하는 치료 또는 예방에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 약학 조성물의 1일 투여량은 0.001-10 g/㎏이다.
본 발명의 약학 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화 함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명은 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체를 유효성분으로 포함하는 발모 또는 양모 촉진용, 또는 탈모의 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
상기 락토바실러스 커베투스는 제한되지 않으나, 바람직하게는 김치 유래의 락토바실러스 커베투스, 보다 바람직하게는 수탁번호 KCCM12011P로 기탁된 락토바실러스 커베투스이다.
상기 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체에 관한 내용은 상술한 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체를 유효성분으로 포함하는 발모 또는 양모 촉진용, 또는 탈모의 예방 또는 치료용 약학 조성물에서의 설명과 동일하므로 상세한 내용은 그 부분을 참조하기로 한다.
본 발명의 조성물이 화장료 조성물로 이용되는 경우에는, 유효 성분으로서의 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스 등을 포함할 수 있다.
수용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 그들의 염 (티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체 (아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)도 본 발명에서 사용할 수 있는 수용성 비타민에 포함된다. 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득할 수 있다.
유용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E (α-, β-, γ- 및 δ- 토코페롤과 α-, β-, γ- 및 δ- 토코트리에놀) 등을 들 수 있으며, 그들의 유도체 (팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산-알파 토코페롤, 니코틴산-알파 토코페롤, DL-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르 등) 등도 본 발명에서 사용되는 유용성 비타민에 포함된다. 유용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 취득할 수 있다.
고분자 펩티드로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 콜라겐, 가수 분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴, 케라틴 등을 들 수 있다. 고분자 펩티드는 미생물의 배양액으로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 정제 취득할 수 있으며, 또는 통상 돼지나 소 등의 진피, 누에의 견섬유 등의 천연물로부터 정제하여 사용할 수 있다.
고분자 다당으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 (나트륨염 등) 등을 들 수 있다. 예를 들어, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 등은 통상 포유 동물이나 어류로부터 정제하여 사용할 수 있다.
스핑고 지질로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질 등을 들 수 있다. 스핑고 지질은 통상 포유류, 어류, 패류, 효모 또는 식물 등으로부터 통상의 방법에 의해 정제하거나 화학 합성법에 의해 취득할 수 있다.
해초 엑기스로는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 갈조 엑기스, 홍조 엑기스, 녹조 엑기스 등을 들 수 있으며, 또, 이들의 해초 엑기스로부터 정제된 칼라기난, 아르긴산, 아르긴산나트륨, 아르긴산칼륨 등도 본 발명에서 사용되는 해초 엑기스에 포함된다. 해초 엑기스는 해초로부터 통상의 방법에 의해 정제하여 취득할 수 있다.
상기 화장료 조성물은 상기 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합할 수 있다.
이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.
유지 성분으로서는 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지, 식물 유지 등을 들 수 있다.
에스테르계 유지로서는 트리2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴,카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등의 에스테르계 등을 들 수 있다.
탄화 수소계 유지로서는 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스, 와셀린 등의 탄화 수소계 유지 등을 들 수 있다.
실리콘계 유지로서는 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산ㆍ메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산ㆍ메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유, 아미노 변성 실리콘유 등을 들 수 있다.
불소계 유지로서는 퍼플루오로폴리에테르 등을 들 수 있다.
동물 또는 식물 유지로서는 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인(杏仁)유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지(牛脂), 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린, 경화피마자유 등의 동물 또는 식물 유지를 들 수 있다.
보습제로서는 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자, 지용성 고분자 등을 들 수 있다.
수용성 저분자 보습제로서는 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜B(중합도 n = 2 이상), 폴리프로필렌글리콜(중합도 n = 2 이상), 폴리글리세린B(중합도 n = 2 이상), 락트산, 락트산염 등을 들 수 있다.
지용성 저분자 보습제로서는 콜레스테롤, 콜레스테롤에스테르 등을 들 수 있다.
수용성 고분자로서는 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성 키틴, 키토산, 덱스트린 등을 들 수 있다.
지용성 고분자로서는 폴리비닐피롤리돈ㆍ에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈ㆍ헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르, 고분자 실리콘 등을 들 수 있다.
에몰리엔트제로서는 장쇄아실글루타민산콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산, 라놀린지방산콜레스테릴에스테르 등을 들 수 있다.
계면 활성제로서는 비이온성 계면 활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제, 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.
비이온성 계면 활성제로서는 자기 유화형 모노스테아르산글리세린, 프로필렌글리콜지방산에스테르, 글리세린지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, POE (폴리옥시에틸렌)솔비탄지방산에스테르, POE 솔비트지방산에스테르, POE 글리세린지방산에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산에스테르, POE 경화피마자유, POE 피마자유, POEㆍPOP (폴리옥시에틸렌ㆍ폴리옥시프로필렌) 공중합체, POEㆍPOP 알킬에테르, 폴리에테르변성실리콘, 라우린산알카놀아미드, 알킬아민옥시드, 수소첨가대두인지질 등을 들 수 있다.
음이온성 계면 활성제로서는 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인산염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염, 퍼플루오로알킬인산에스테르 등을 들 수 있다.
양이온성 계면 활성제로서는 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드, 라놀린 유도체 제 4급 암모늄염 등을 들 수 있다.
양성 계면 활성제로서는 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형, 아미드아민형 등의 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.
유기 및 무기 안료로서는 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체등의 무기 안료; 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트수지, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트오렌지 등의 유기 안료 및 이들의 무기 안료와 유기 안료의 복합 안료 등을 들 수 있다.
유기 분체로서는 스테아르산칼슘 등의 금속비누; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파-파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드; 알파-아미노카프릴산, 알파-아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산; 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 사불화에틸렌 등을 들 수 있다.
자외선 흡수제로서는 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리신산페닐, 살리신산옥틸, 살리신산벤질, 살리신산부틸페닐, 살리신산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산-2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모노-2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시계피산이소프로필, 디이소프로필ㆍ디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p-(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸 등을 들 수 있다.
살균제로서는 히노키티올, 트리클로산, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 크로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살리칠산, 진크필리티온, 염화벤잘코늄, 감광소 301 호, 모노니트로과이어콜나트륨, 운데시렌산 등을 들 수 있다.
산화 방지제로서는 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필, 엘리소르빈산 등을 들 수 있다.
pH 조정제로서는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨, 인산일수소나트륨 등을 들 수 있다.
알코올로서는 세틸알코올 등의 고급 알코올을 들 수 있다.
또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지만, 조성물 총 중량에 대하여 바람직하게는 0.001 - 50 중량%, 보다 바람직하게는 0.001 - 3 중량%로 배합될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함한다.
본 발명의 화장료 조성물은, 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 페이스트, 크림, 겔, 파우더, 스프레이 용액, 유탁액, 현탁액, 로션, 비누, 트리트먼트, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
보다 상세하게는, 헤어크림, 헤어로션, 헤어스프레이 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 또는 바디클린저의 제형으로도 제조될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명은 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체를 유효성분으로 포함하는 발모 또는 양모 촉진용, 또는 탈모의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
상기 락토바실러스 커베투스는 제한되지 않으나, 바람직하게는 김치 유래의 락토바실러스 커베투스, 보다 바람직하게는 수탁번호 KCCM12011P로 기탁된 락토바실러스 커베투스이다.
상기 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체에 관한 내용은 상술한 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체를 유효성분으로 포함하는 발모 또는 양모 촉진용, 또는 탈모의 예방 또는 치료용 약학 조성물에서의 설명과 동일하므로 상세한 내용은 그 부분을 참조하기로 한다.
본 발명에 따른 식품 조성물은 상기 약학 조성물과 동일한 방식으로 제제화되어 기능성 식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가할 수 있다. 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 음료류, 알코올 음료류, 과자류, 다이어트바, 유제품, 육류, 초코렛, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류, 비타민 복합제, 건강보조식품류 등이 있다.
본 발명의 식품 조성물은 상기 유효성분뿐 아니라, 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함할 수 있으며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 포함한다. 상술한 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 향미제로서 천연 향미제 [타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등]) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다. 예컨대, 본 발명의 식품 조성물이 드링크제와 음료류로 제조되는 경우에는 본 발명의 유효성분 이외에 구연산, 액상과당, 설탕, 포도당, 초산, 사과산, 과즙, 및 각종 식물 추출액 등을 추가로 포함시킬 수 있다.
본 발명은 상기 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체를 유효성분으로 포함하는 발모 또는 양모 촉진용, 또는 탈모의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 포함하는 건강기능식품을 제공한다. 건강기능식품이란, 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체를 음료, 차류, 향신료, 껌, 과자류 등의 식품소재에 첨가하거나, 캡슐화, 분말화, 현탁액 등으로 제조한 식품으로, 이를 섭취할 경우 건강상 특정한 효과를 가져오는 것을 의미하나, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있다. 이와 같이 하여 얻어지는 본 발명의 건강기능식품은, 일상적으로 섭취하는 것이 가능하기 때문에 매우 유용하다. 이와 같은 건강기능식품에 있어서의 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체의 첨가량은, 대상인 건강기능식품의 종류에 따라 달라 일률적으로 규정할 수 없지만, 식품 본래의 맛을 손상시키지 않는 범위에서 첨가하면 되며, 대상 식품에 대하여 통상 0.01 내지 50 중량%, 바람직하기로는 0.1 내지 20 중량%의 범위이다. 또한, 환제, 과립제, 정제 또는 캡슐제 형태의 건강기능식품의 경우에는 통상 0.1 내지 100 중량% 바람직하기로는 0.5 내지 80 중량%의 범위에서 첨가하면 된다. 한 구체예에서, 본 발명의 건강기능식품은 환제, 정제, 캡슐제 또는 음료의 형태일 수 있다.
상기 본 발명에 따른 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체 또는 이를 유효성분으로 포함하는 조성물은 사료첨가제 또는 사료로서 이용될 수 있다.
사료 첨가제로서 이용될 경우, 상기 조성물은 20 내지 90% 고농축액이거나 분말 또는 과립 형태로 제조될 수 있다. 상기 사료첨가제는 구연산, 후말산, 아디픽산, 젖산, 사과산등의 유기산이나 인산 나트륨, 인산 칼륨, 산성 피로인산염, 폴리인산염(중합인산염) 등의 인산염이나, 폴리페놀, 카테킨, 알파-토코페롤, 로즈마리 추출물, 비타민 C, 녹차 추출물, 감초 추출물, 키토산, 탄닌산, 피틴산 등의 천연 항산화제 중 어느 하나 또는 하나 이상을 추가로 포함할 수 있다. 사료로서 이용될 경우, 상기 조성물은 통상의 사료 형태로 제제화 될 수 있으며, 통상의 사료성분을 함께 포함할 수 있다.
상기 사료첨가제 및 사료는 곡물, 예를 들면 분쇄 또는 파쇄된 밀, 귀리, 보리, 옥수수 및 쌀; 식물성 단백질 사료, 예를 들면 평지, 콩, 및 해바라기를 주성분으로 하는 사료; 동물성 단백질 사료, 예를 들면 혈분, 육분, 골분 및 생선분; 당분 및 유제품, 예를 들면 각종 분유 및 유장 분말로 이루어지는 건조성분 등을 더 포함할 수 있으며, 이외에도 영양보충제, 소화 및 흡수향상제, 성장촉진제 등을 더 포함할 수 있다.
상기 사료첨가제는 동물에게 단독으로 투여하거나 식용 담체 중에서 다른 사료첨가제와 조합하여 투여할 수도 있다. 또한, 상기 사료첨가제는 탑드레싱으로서 또는 이들을 동물사료에 직접 혼합하거나 또는 사료와 별도의 경구제형으로 용이하게 동물에게 투여할 수 있다. 상기 사료첨가제를 동물사료와 별도로 투여할 경우, 당해 기술분야에 잘 알려진 바와 같이 약제학적으로 허용가능한 식용 담체와 조합하여, 즉시 방출 또는 서방성 제형으로 제조할 수 있다. 이러한 식용 담체는 고체 또는 액체, 예를 들어 옥수수전분, 락토오스, 수크로오스, 콩플레이크, 땅콩유, 올리브유, 참깨유 및 프로필렌글리콜일 수 있다. 고체 담체가 사용될 경우, 사료첨가제는 정제, 캡슐제, 산제, 트로키제 또는 함당정제 또는 미분산성 형태의 탑 드레싱일 수 있다. 액체 담체가 사용될 경우, 사료첨가제는 젤라틴 연질 캡슐제, 또는 시럽제나 현탁액, 에멀젼제, 또는 용액제의 제형일 수 있다.
또한, 상기 사료첨가제 및 사료는 보조제, 예를 들어 보존제, 안정화제, 습윤제 또는 유화제, 용액촉진제 등을 함유할 수 있다. 상기 사료첨가제는 침주, 분무 또는 혼합하여 동물의 사료에 첨가하여 이용될 수 있다.
본 발명의 사료 또는 사료첨가제는 포유류, 가금 및 어류를 포함하는 다수의 동물식이에 적용할 수 있다.
상기 포유류로서 돼지, 소, 양, 염소, 실험용 설치동물, 및 실험용 설치동물뿐만 아니라, 애완동물(예: 개, 고양이) 등에게 사용할 수 있으며, 상기 가금류로서 닭, 칠면조, 오리, 거위, 꿩, 및 메추라기 등에도 사용할 수 있고, 상기 어류로서 송어 등에 이용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 발모 또는 양모 촉진, 또는 탈모의 예방, 개선 또는 치료용 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체의 용도를 제공한다.
또한, 본 발명은 발모 또는 양모 촉진, 또는 탈모의 예방, 개선 또는 치료용 의약, 화장료 또는 식품의 제조를 위한 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체의 용도를 제공한다.
상기한 바와 같이 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체는 발모 또는 양모 촉진, 또는 탈모의 예방, 개선 또는 치료를 위한 용도로 이용될 수 있다.
또한, 본 발명은 치료상 유효량의 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 발모 또는 양모 촉진, 또는 탈모의 예방, 개선 또는 치료방법을 제공한다.
여기에서 사용된 용어 "대상체"는 치료, 관찰 또는 실험의 대상(subject)인 포유동물을 말하며, 바람직하게는 인간을 말한다.
여기에서 사용된 용어 "유효량" 또는 "치료상 유효량"은 연구자, 수의사, 의사 또는 기타 임상의에 의해 생각되는 조직계, 동물 또는 인간에서 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하는 유효 성분, 또는 약학, 화장료, 식품 조성물의 양을 의미하는 것으로, 이는 해당 질환 또는 장애의 증상의 완화를 유도하는 양을 포함한다. 본 발명의 유효 성분에 대한 유효량 및 투여횟수는 원하는 효과에 따라 변화될 수 있다. 그러므로, 투여될 최적의 투여량은 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있으며, 질환의 종류, 질환의 중증도, 조성물에 함유된 유효성분 및 다른 성분의 함량, 제형의 종류, 및 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있다. 본 발명의 예방, 치료 또는 개선 방법에 있어서, 성인의 경우, 세포밖 소포체 또는 조성물을 1일 1회 내지 수회 투여시, 0.001 g/kg 내지 10 g/kg의 용량으로 투여하는 것이 바람직하다.
본 발명의 치료방법에서 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체를 유효 성분으로 포함하는 조성물은 경구, 직장, 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 흉골내, 경피, 국소, 또는 피내 경로를 통해 통상적인 방식으로 투여할 수 있다.
이하에서 실시예 등을 통해 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 하며, 다만 이하의 실시예 등에 의해 본 발명의 범위와 내용이 축소되거나 제한되어 해석될 수 없다. 또한, 이하의 실시예를 포함한 본 발명의 개시 내용에 기초한다면, 구체적으로 실험 결과가 제시되지 않은 본 발명을 통상의 기술자가 용이하게 실시할 수 있음은 명백한 것이며, 이러한 변형 및 수정이 첨부된 특허청구범위에 속하는 것도 당연하다.
또한 이하에서 제시되는 실험 결과는 상기 실시예 및 비교예의 대표적인 실 험 결과만을 기재한 것이며, 아래에서 명시적으로 제시하지 않은 본 발명의 여러 구현예의 각각의 효과는 해당 부분에서 구체적으로 기재하도록 한다.
[실시예]
실시예 1: 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체(P9E) 분리
(1) 균주의 분리 및 동정
김치 추출물의 원액을 MRS 배지에 도말하여 얻은 균단일집락을 루프로 수거하여 MRS broth에 배양하였다. DNA 추출은 QIAamp DNA Mini Kit(QIAgen, Germany)를 사용하여 추출하였다. 추출된 DNA는 1% 아가로스 겔을 이용하여 확인하였으며, 16S rRNA gene을 증폭하기 위하여 추출된 genomic DNA를 주형으로 하여 PCR을 진행하였고, PCR 조건은 denaturation 95℃ 1분, annealing 45℃ 1분, extension 72℃ 1분 30초로 30 사이클을 수행하였다. 얻어진 PCR 산물은 마크로젠(Seoul, Korea)에 의뢰하여 서열을 분석하였다. 세균의 동정은 16SrRNA 서열을 National Center for Biotechnology Information(NCBI, www.ncbi.nlm.nih.gov)의 Basic Local Alignment Search Tool (BLAST) 검색엔진의 유사도 분석을 통해 수행하였다.
이에, 본 발명의 미생물을 락토바실러스 커베투스 WIKIM55 (Lactobacillus curvatus WIKIM55)로 명명하였으며, 한국미생물보존센터에 2017년 04월 07일자로 기탁하였다(수탁번호 KCCM12011P)(이하, P9이라 칭함).
(2) 세포밖 소포체 분리
락토바실러스 커베투스 P9 균주를 MRS 액체배지 30ml에 0.1% 접종하여 30℃에서 18시간동안 정치배양 하였다. 배양 후, 3500 rpm에서 10분 동안 원심분리하여 배양액은 나노소포체 분리와 배지처리를 위해 따로 보관하였고, 균체는 PBS(phosphate buffered saline) 용액으로 3회 세척하여 남아 있는 배지 성분을 제거하였다.
상기 균주 배양 후 얻어진 배양액과 16% PEG 6000이 포함되어 있는 1M NaCl 용액을 동량으로 섞어 4℃에서 15시간 반응시켰다. 이 후 반응시킨 용액을 10,000 g, 4℃에서 20분간 원심분리하여 세포밖 소포체 pellet을 얻었다. 세포밖 소포체 pellet은 5% PEG 6000이 포함되어 있는 0.5 M NaCl 용액에 resuspension하여 wash한 후 11,000 rpm으로 4℃에서 20분간 원심분리하였다. 이 후 상층액은 버리고 pellet을 1X PBS에 resuspension하여 최종적으로 락토바실러스 커베투스 P9 유래 세포밖 소포체를 분리하였다(P9E).
분리된 세포밖 소포체의 사이즈를 확인하기 위해 나노사이트(Nanoparticle tracking analysis)를 수행하였다. 세포밖 소포체 샘플을 기기의 챔버에 넣어 카메라를 이용하여 초점을 맞추어서 입자(particle)가 선명하게 보이도록 한 후, 측정하였다. 그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, 세포밖 소포체는 약 100-500 nm를 나타내었다.
비교예 1: Non-stimulated 락토바실러스 커베투스 배양배지(Non)
실시예 1의 (1)에서 배지로서, 락토바실러스 커베투스 P9을 배양하지 않은 배지를 준비하였다.
비교예 2: 락토바실러스 커베투스 균주를 여과한 배양배지(P9 media)
실시예 1의 (1)에서 배지로서, 락토바실러스 커베투스 P9을 배양한 후 0.22 um 필터로 균주를 여과한 잔여 배지를 준비하였다.
비교예 3: 균주 없는 배지를 여과한 배양배지(media-particle)
실시예 1의 (1)에서 배지로서, 락토바실러스 커베투스 P9을 배양하지 않은 배지를 다시 비교예 2와 같이 0.22 um 필터로 여과한 배지를 준비하였다.
비교예 4: 락토바실러스 커베투스 균주 P9 (P9)
락토바실러스 커베투스 P9 균주를 MOI 0.5로 처리하였다.
실험예 1: 락토바실러스 커베투스 세포밖 소포체 P9E (EV 1)
락토바실러스 커베투스 P9 균주의 세포밖 소포체를 1 x 108개로 처리하였다.
실험예 2: 락토바실러스 커베투스 세포밖 소포체 P9E (EV 1.5)
락토바실러스 커베투스 P9 균주의 세포밖 소포체를 5 x 108개로 처리하였다.
실시예 2: 모모세포의 분열 측정
인간 모모세포 (Human germinal matrix cell)는 인간 모유두세포 (Human dermal papilla cell), 섬유아세포 (Fibroblast), 피부세포 (Keratinocyte) 등과 함께 서로 상호작용으로 모발 성장에 관여하고 있다. 특히 모모세포는 모발의 근원이 되는 줄기세포로서 모유두세포, 피부세포가 성장하는데 중요한 인자들을 분비하여 모발의 성장을 촉진하기 때문에 모모세포의 분열, 증가는 세포의 활성에도 아주 중요하다.
모모세포는 poly-L-lysine이 코팅된 6 well plate에 1 x 105 cell을 seeding 한 후 24시간 배양하였다. 다음날 배양 배지는 제거하고 항생제가 없는 배지로 교체하였다. 위에서 준비된 락토바실러스 커베투스 균주와 균주를 배양한 배지, 균주가 없는 배지에서 분리한 EV, 락토바실러스 커베투스 배양배지에서 분리한 EV를 각각 처리한 후, 24시간 배양하였다.
그 후, 세포는 수거하여 분열 마커인 Ki67 (FITC)를 각 샘플에 넣어 4℃ 에서 30분간 염색되었다. DPBS를 이용하여 한번 wash하고 flow cytometry에 의해 분석되었다.
Ki67은 세포가 분열할 때 발현되는 마커이다. 모든 세포에서 공통적으로 발현하며 분열이 증가할수록 발현도 증가한다. 모모세포의 경우 Ki67의 발현이 락토바실러스 커베투스 유래 EV를 고농도로 처리했을 때에만 발현이 증가하였다.
상기의 결과는 락토바실러스 커베투스 유래 EV가 모모세포의 성장을 촉진함으로써 발모를 유도할 수 있다는 것을 의미하며, 락토바실러스 커베투스 유래 EV가 모발 성장에 중요하게 관여한다는 것을 의미한다(도 2).
하기에 본 발명의 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
제제예 1. 산제의 제조
실시예 1의 세포밖 소포체 500 mg
유당 100 mg
탈크 10 mg
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
제제예 2. 정제의 제조
실시예 1의 세포밖 소포체 300 mg
옥수수전분 100 mg
유당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.
제제예 3. 캅셀제의 제조
실시예 1의 세포밖 소포체 200 mg
결정성 셀룰로오스 3 mg
락토오스 14.8 mg
마그네슘 스테아레이트 0.2 mg
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.
제제예 4. 주사제의 제조
실시예 1의 세포밖 소포체 600 mg
만니톨 180 mg
주사용 멸균 증류수 2974 mg
Na2HPO4,12H2O 26 mg
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플 당 상기의 성분 함량으로 제조한다.
제제예 5. 액제의 제조
실시예 1의 세포밖 소포체 4 g
이성화당 10 g
만니톨 5 g
정제수 적량
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100g으로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.
제제예 6. 과립제의 제조
실시예 1의 세포밖 소포체 1,000 mg
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이트 70 ㎍
비타민 E 1.0 mg
비타민 B1 0.13 mg
비타민 B2 0.15 mg
비타민 B6 0.5 mg
비타민 B12 0.2 ㎍
비타민 C 10 mg
비오틴 10 ㎍
니코틴산아미드 1.7 mg
엽산 50 ㎍
판토텐산 칼슘 0.5 mg
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75 mg
산화아연 0.82 mg
탄산마그네슘 25.3 mg
제1인산칼륨 15 mg
제2인산칼슘 55 mg
구연산칼륨 90 mg
탄산칼슘 100 mg
염화마그네슘 24.8 mg
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 과립제에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 과립제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강기능식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
제제예 7. 기능성 음료의 제조
실시예 1의 세포밖 소포체 1,000 mg
구연산 1,000 mg
올리고당 100 g
매실농축액 2 g
타우린 1 g
정제수를 가하여 전체 900 mL
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1 시간 동안 85 ℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 L 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 기능성 음료 조성물 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
제제예 8. 화장료 조성물의 제조
실시예 1의 세포밖 소포체 5.0 중량%
글리세린 6.0 중량%
1,3-부틸렌글라이콜 3.0 중량%
피이지1500 1.0 중량%
알란토인 0.1 중량%
DL-판테놀 0.3 중량%
EDTA-2Na 0.02 중량%
벤조페논-9 0.04 중량%
소듐하이알루로네이트 5.0 중량%
에탄올 10.0 중량%
폴리소르베이트20 0.2 중량%
방부제, 향, 색소 미량
증류수 잔량
합계 100 중량%
제제예 9. 두피 에센스의 제조
실시예 1의 세포밖 소포체 5.0 중량%
글리세린 10.0 중량%
베타인 5.0 중량%
PEG 1500 2.0 중량%
알란토인 0.1 중량%
DL-판테놀 0.3 중량%
EDTA-2Na 0.02 중량%
벤조페논-9 0.04 중량%
하이드록시에칠셀룰로오스 0.1 중량%
소듐하이알루로네이트 8.0 중량%
카르복시비닐폴리머 0.2 중량%
트리에탄올아민 0.18 중량%
옥틸도데칸올 0.3 중량%
옥틸도데세스-16 0.4 중량%
에탄올 6.0 중량%
방부제, 향, 색소 미량
증류수 잔량
합계 100
기탁기관명 : 한국미생물보존센터(국외)
수탁번호 : KCCM12011P
수탁일자 : 20170407
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Claims (11)

  1. 락토바실러스 커베투스 (Lactobacillus curvatus) 유래 세포밖 소포체(extracellular vesicles)를 유효성분으로 포함하는 발모 또는 양모 촉진용, 또는 탈모의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 발모 또는 양모 촉진, 또는 탈모의 예방 또는 치료는 모모세포의 분열 또는 증식 촉진에 의한 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 모모세포의 분열 또는 증식 촉진은 마커 Ki67의 발현 증가를 통해 확인되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 락토바실러스 커베투스 유래 세포밖 소포체를 1 x 108개 이상 함유하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 락토바실러스 커베투스는 기탁번호 KCCM12011P로 기탁된 락토바실러스 커베투스인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  6. 락토바실러스 커베투스 (Lactobacillus curvatus) 유래 세포밖 소포체(extracellular vesicles)를 유효성분으로 포함하는 발모 또는 양모 촉진용, 또는 탈모의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
  7. 락토바실러스 커베투스 (Lactobacillus curvatus) 유래 세포밖 소포체(extracellular vesicles)를 유효성분으로 포함하는 발모 또는 양모 촉진용, 또는 탈모의 예방 또는 개선용 사료 또는 사료첨가제.
  8. 락토바실러스 커베투스 (Lactobacillus curvatus) 유래 세포밖 소포체(extracellular vesicles)를 유효성분으로 포함하는 발모 또는 양모 촉진용, 또는 탈모의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
  9. 치료상 유효량의 락토바실러스 커베투스 (Lactobacillus curvatus) 유래 세포밖 소포체(extracellular vesicles)를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 발모 또는 양모 촉진, 또는 탈모의 예방, 개선 또는 치료방법.
  10. 락토바실러스 커베투스 (Lactobacillus curvatus) 유래 세포밖 소포체(extracellular vesicles)의 발모 또는 양모 촉진, 또는 탈모의 예방, 개선 또는 치료 용도.
  11. (a) 락토바실러스 커베투스 (Lactobacillus curvatus)를 배양하는 단계;
    (b) 상기 락토바실러스 커베투스가 배양된 배양액을 원심분리하는 단계; 및
    (c) 상기 원심분리한 배양액을 유기용매와 혼합하여 반응시킨 후 원심분리하여 세포밖 소포체 펠릿을 수득하는 단계; 및
    (d) 상기 세포밖 소포체 펠릿을 세포밖 소포체 추출 버퍼에 재현탁시켜 현탁액을 제조하고, 상기 현탁액으로부터 세포밖 소포체를 분리하는 단계;를 포함하는 발모 또는 양모 촉진용, 또는 탈모의 예방, 개선 또는 치료용 조성물의 제조방법.
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