KR20170037381A - 탈모의 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 식물 유래 세포 외 소포체와 카페인을 포함하는 탈모의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
본 발명에서 제공하는 조성물은 발모 및 육모 촉진 효과가 매우 우수하여 탈모의 예방 및 치료 효과가 뛰어나며, 이를 섭취하거나 피부에 도포하여도 부작용이 없이 안전하다.
본 발명에서 제공하는 조성물은 발모 및 육모 촉진 효과가 매우 우수하여 탈모의 예방 및 치료 효과가 뛰어나며, 이를 섭취하거나 피부에 도포하여도 부작용이 없이 안전하다.
Description
본 발명은 식물 착즙물 유래 세포 외 소포체와 카페인을 포함하며, 발모 및 육모 촉진 효과가 뛰어난 탈모의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
탈모는 유전적 요인이 가장 주요한 원인으로 작용하나, 최근 사회적 스트레스의 증가와 더불어 환경오염 및 인스턴트식품 등 서구화된 식습관, 잦은 파마와 염색, 잘못된 두피관리들로 인하여 탈모 인구가 점차 증가하고 있다.
모발은 성장기(Anagen), 퇴화기(Catagen), 휴지기(Telogen)의 주기를 돌며 발모와 탈모를 반복하며 유지되고 있다. 상세하게는, 모발을 성장시키는 성장기(anagen), 성장을 종료하고 모구부가 축소하는 시기인 퇴화기(catagen), 모유두가 활동을 멈추고 모발을 두피에 머무르게 하는 시기인 휴지기(talogen), 모유두가 활동을 시작하거나 또는 새로운 모발을 발생시켜 오래된 모발을 탈모시키는 시기인 발생기로 나눌 수 있다.
모발의 성장기는 남성 3~5년, 여성이 4~6년 정도로 그 후 퇴화기 30~45일 정도, 휴지기가 3~4개월 정도 지나 자연적으로 탈모가 된다. 그리고 휴지기의 마지막이 되면 새로운 모발이 생성되는 발생기가 시작된다.
탈모는 정상적인 현상이나 정상인 사람이 성장기 상태의 모발이 많은 데 비해 보통 탈모증(Alopecia)인 사람은 휴지기 상태의 모발이 많아 눈으로 보이는 탈모현상이 나타내게 된다.
탈모증을 나타내는 사람들의 특징은 모발의 소형화에 있다. 탈모가 진행될수록 성장기의 기간이 짧아지고 이로 인하여 모발은 점점 소형화된다. 따라서 탈모의 치료를 위해서는 휴지기 상태의 모낭을 성장기로 빨리갈 수 있도록 하고, 짧아진 성장기를 늘려주는 것이 중요하다.
남성형 탈모증은 남성의 성징을 나타나게 하며 사춘기에 근육의 발달, 남성 기관의 발달 등에 작용하는 호르몬인 테스토스테론(Testosterone)이라는 남성호르몬에 의해 나타나는 현상으로 이 테스토스테론이 5 알파-리덕타아제(α-reductase)라는 효소에 의해 더 강력한 호르몬인 디히드로테스토스테로(Dihydrotestosterone:DHT)으로 바뀌게 되면, 이 호르몬이 모낭에 작용하여 모낭을 성장기 단계에서 퇴화기 단계로 유도하여 탈모가 일어나게한다. 따라서 이러한 원인에 의한 탈모증을 치료하기 위하여 5 알파-리덕타아제에 의한 DHT의 생성을 억제하는 방법이 주로 사용된다.
여성형 탈모증은 주로 폐경기 이후 에스트로겐 양의 감소에 의해 발생한다. 여성의 탈모증은 남성형 탈모증의 모양과는 좀 다르게 머리 앞부분은 빠지지 않고 중간 부분의 머리만이 주로 탈모된다. 여성의 탈모증은 5 알파-리덕타아제와의 연관관계가 남성보다 적게 작용한다. 따라서 5 알파-리덕타아제를 억제시키는 약물은 폐경기 이후의 탈모증 여성에게는 별로 효과가 없다. 따라서, 이러한 탈모증을 위한 치료제로는 주로 미녹시딜이나 에스트로겐을 사용한다.
원형 탈모증은 자가면역질환이나 정신적 스트레스, 유전적 소인에 의해 발생한다. 원형 또는 난원형의 탈모가 일어나며, 두부 백선이나 발모벽이 생기는 특징을 갖고 있다. 이러한 원형 탈모증은 안드로겐성 탈모증과는 근본적으로 원인이 다르며, 치료법 또한 달라서 부신피질 호르몬제를 처리하는 방법을 사용하거나, 미녹시딜을 환부에 바르거나 인위적으로 환부에 자극을 유발하는 방법을 사용한다.
이처럼 다양하고 복잡한 탈모 원인에 대하여, 현재까지 알려진 탈모 방지 제품에는 유효성분으로 혈액 순환 촉진, 남성 호르몬 작용 억제, 모근 기능 강화 등을 목적으로 하는 성분 등이 시중에 제품으로 판매되고 있으나, 효과 면에서 뚜렷한 효과를 지닌 것은 아직까지 없는 상태이고, 대부분 부작용의 문제가 제기되기도 한다.
이러한 발모제로, 처음에는 혈액 순환 촉진을 위한 용도로 개발되어 사용되다가 이를 사용하는 환자들 사이에서 부작용으로 발모 효과를 나타내는 것으로 알려져, 이후, 발모용 원료로 미국식품의약품안전청(FDA)에서 승인받아 발모 치료제로 사용되어진 미국특허 제3,382,247호의 미녹시딜(6-Amino-1,2-dihydro-1-hydroxy-2-imino-4-phenoxypyrimidine)은 현재에도 발모용 치료제로 사용되고 있으며, 미국특허 제5,215,894호에서 언급된 머크사의 피나스테라이드(finasteride)는 처음에는 남성의 전립선 치료제로 사용되던 성분이었으나, 역시 인체 내 투여량을 조절하여 남성형 탈모증 치료제로 탄생하게 되었다.
그러나, 미녹시딜의 경우 끈적이는 사용감과 피부에 자극을 유발하는 부작용이 보고된 바 있으며, 피나스테라이드의 경우 현재 경구투여용 제제로 사용되고 있으나, 이의 섭취에 따라 성기능 장애 등의 부작용이 보고된 일도 있을 뿐 아니라, 탈모에 대해서도 꾸준한 복용이 이루어져야만 효과가 있으며, 이들의 5 알파-리덕타아제 활성 억제제는 도포에 의한 효과를 기대하기 어렵고, 경구복용에 의해서만 효과를 기대할 수 있어서 사용상에 많은 불편함이 있다.
본 발명은 안전하면서도 발모 및 육모 촉진 효과가 뛰어나 탈모를 예방 또는 치료할 수 있는 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명의 발명자들은 식물 착즙물 유래 세포 외 소포체(extracellular vesicles)와 카페인을 함께 사용하는 경우 발모 및 육모 효과가 매우 뛰어남을 발견하여 본 발명에 이르게 되었다.
본 발명의 일 구현 예에 따르면, 식물 유래 세포 외 소포체(extracellular vesicles) 및 카페인을 유효성분으로 포함하는 탈모의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에서 상기 세포 외 소포체의 직경은 30 ~ 1,000nm일 수 있다.
본 발명에서 상기 세포 외 소포체와 카페인의 혼합비는 특별히 제한하지는 않으나, 바람직하게는 1: 1 ~ 10, 또는 1: 2 ~ 8, 또는 1: 3 ~ 7, 또는 1: 4 ~ 6, 또는 1: 4 ~ 5의 중량비로 포함될 수 있다.
또한, 본 발명에서 상기 세포 외 소포체의 함량은 특별히 제한하지는 않으나, 바람직하게는 5 ~ 10㎍/ml의 양으로 포함될 수 있다.
또한, 본 발명에서 상기 카페인의 함량은 특별히 제한하지는 않으나, 바람직하게는 25 ~ 50μM 의 양으로 포함될 수 있다.
본 발명의 다른 구현 예에 따르면, 식물 유래 세포 외 소포체(extracellular vesicles) 및 카페인을 유효성분으로 포함하는 탈모 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에서 상기 세포 외 소포체의 직경은 30 ~ 1,000nm일 수 있다.
본 발명에서 상기 세포 외 소포체와 카페인의 혼합비는 특별히 제한하지는 않으나, 바람직하게는 1: 1 ~ 10, 또는 1: 2 ~ 8, 또는 1: 3 ~ 7, 또는 1: 4 ~ 6, 또는 1: 4 ~ 5의 중량비로 포함될 수 있다.
또한, 본 발명에서 상기 세포 외 소포체의 함량은 특별히 제한하지는 않으나, 바람직하게는 5 ~ 10㎍/ml의 양으로 포함될 수 있다.
또한, 본 발명에서 상기 카페인의 함량은 특별히 제한하지는 않으나, 바람직하게는 25 ~ 50μM 의 양으로 포함될 수 있다.
본 발명의 다른 구현 예에 따르면, 식물 착즙물 유래 세포 외 소포체(extracellular vesicles) 및 카페인을 유효성분으로 포함하는 탈모 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에서 상기 세포 외 소포체의 직경은 30 ~ 1,000nm일 수 있다.
본 발명에서 상기 세포 외 소포체와 카페인의 혼합비는 특별히 제한하지는 않으나, 바람직하게는 1: 1 ~ 10, 또는 1: 2 ~ 8, 또는 1: 3 ~ 7, 또는 1: 4 ~ 6, 또는 1: 4 ~ 5의 중량비로 포함될 수 있다.
또한, 본 발명에서 상기 세포 외 소포체의 함량은 특별히 제한하지는 않으나, 바람직하게는 5 ~ 10㎍/ml의 양으로 포함될 수 있다.
또한, 본 발명에서 상기 카페인의 함량은 특별히 제한하지는 않으나, 바람직하게는 25 ~ 50μM 의 양으로 포함될 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현 예에 따르면, 스크류를 이용하여 식물을 착즙해 식물 착즙물을 획득하는 단계;
상기 식물 착즙물을 정치 배양하는 단계;
배양된 식물 착즙물을 원심 분리하여 상층액을 회수하는 단계;
상기 상층액을 평균 기공 사이즈가 0.1 ~ 1.0 ㎛인 기공을 포함하는 여과막으로 여과하여 여액을 회수하는 단계; 및
상기 여액에 카페인을 혼합하는 단계를 포함하는, 탈모의 예방 또는 치료용 약학적 조성물의 제조방법을 제공한다.
본 발명에서 상기 여액과 카페인의 혼합비는 특별히 제한하지는 않으나, 바람직하게는 1: 1 ~ 10, 또는 1: 2 ~ 8, 또는 1: 3 ~ 7, 또는 1: 4 ~ 6, 또는 1: 4 ~ 5의 중량비로 포함될 수 있다.
본 발명은 상기 식물을 착즙하기에 앞서, 필요에 따라서는 식물을 세척하여 불순물을 제거하는 단계를 추가로 수행할 수 있다.
또한, 본 발명에서 상기 스크류는 교반 속도가 20 ~ 100rpm인 저속 스크류를 사용하는 것이 발모 및 육모 효과가 뛰어난 세포 외 소포체를 다량 포함하는 식물 착즙물을 획득할 수 있어 바람직하다.
또한, 본 발명에서 상기 정치 배양은 20 ~ 30℃에서 12 ~ 48시간 동안 수행될 수 있다.
또한, 본 발명에서 상기 원심 분리는 100 ~ 20,000g에서 10 ~ 120분 동안 1회 이상 수행될 수 있다.
또한, 본 발명에서 상기 원심 분리는 100 ~ 500g에서 10 ~ 30분 동안 1차로 수행하고, 1,000 ~ 2,000g에서 10 ~ 30분 동안 2차로 수행한 뒤 5,000 ~ 20,000g에서 30분 ~ 1시간 동안 3차로 수행될 수 있다.
또한, 본 발명에서 상기 여액과 카페인의 혼합비는 특별히 제한하지는 않으나, 바람직하게는 1: 1 ~ 10, 또는 1: 2 ~ 8, 또는 1: 3 ~ 7, 또는 1: 4 ~ 6, 또는 1: 4 ~ 5의 중량비로 포함될 수 있다.
또한, 본 발명에서 상기 여과는 평균 기공 사이즈가 0.2 ~ 0.5 ㎛인 기공을 포함하는 여과막을 이용하여 1회 이상 수행될 수 있다. 바람직하게는 평균 기공 사이즈가 0.4 ~ 0.5㎛인 기공을 포함하는 여과막을 이용하여 1차로 여과를 수행한 뒤, 평균 기공 사이즈가 0.2 ~ 0.3㎛인 기공을 포함하는 여과막을 이용하여 2차로 여과를 수행하는 것이 발모 및 육모 효과가 뛰어난 세포 외 세포체를 다량 포함하는 여액을 획득할 수 있다.
또한, 본 발명의 또 다른 구현 예에 따르면, 스크류를 이용하여 식물을 착즙해 식물 착즙물을 획득하는 단계;
상기 식물 착즙물을 정치 배양하는 단계;
배양된 식물 착즙물을 원심 분리하여 상층액을 회수하는 단계;
상기 상층액을 평균 기공 사이즈가 0.1 ~ 1.0 ㎛인 기공을 포함하는 여과막으로 여과하여 여액을 회수하는 단계; 및
상기 여액에 카페인을 혼합하는 단계를 포함하는, 탈모 개선용 화장료 조성물의 제조방법을 제공한다.
본 발명은 상기 식물을 착즙하기에 앞서, 필요에 따라서는 식물을 세척하여 불순물을 제거하는 단계를 추가로 수행할 수 있다.
또한, 본 발명에서 상기 스크류는 교반 속도가 20 ~ 100rpm인 저속 스크류를 사용하는 것이 발모 및 육모 효과가 뛰어난 세포 외 세포체를 다량 포함하는 식물 착즙물을 획득할 수 있어 바람직하다.
또한, 본 발명에서 상기 정치 배양은 20 ~ 30℃에서 12 ~ 48시간 동안 수행될 수 있다.
또한, 본 발명에서 상기 원심 분리는 100 ~ 20,000g에서 10 ~ 120분 동안 1회 이상 수행될 수 있다.
또한, 본 발명에서 상기 원심 분리는 100 ~ 500g에서 10 ~ 30분 동안 1차로 수행하고, 1,000 ~ 2,000g에서 10 ~ 30분 동안 2차로 수행한 뒤 5,000 ~ 20,000g에서 30분 ~ 1시간 동안 3차로 수행될 수 있다.
또한, 본 발명에서 상기 여액과 카페인의 혼합비는 특별히 제한하지는 않으나, 바람직하게는 1: 1 ~ 10, 또는 1: 2 ~ 8, 또는 1: 3 ~ 7, 또는 1: 4 ~ 6, 또는 1: 4 ~ 5의 중량비로 포함될 수 있다.
또한, 본 발명에서 상기 여과는 평균 기공 사이즈가 0.2 ~ 0.5 ㎛인 기공을 포함하는 여과막을 이용하여 1회 이상 수행될 수 있다. 바람직하게는 평균 기공 사이즈가 0.4 ~ 0.5㎛인 기공을 포함하는 여과막을 이용하여 1차로 여과를 수행한 뒤, 평균 기공 사이즈가 0.2 ~ 0.3㎛인 기공을 포함하는 여과막을 이용하여 2차로 여과를 수행하는 것이 발모 및 육모 효과가 뛰어난 세포 외 세포체를 다량 포함하는 여액을 획득할 수 있다.
또한, 본 발명의 또 다른 구현 예에 따르면, 스크류를 이용하여 식물을 착즙해 식물 착즙물을 획득하는 단계;
상기 식물 착즙물을 정치 배양하는 단계;
배양된 식물 착즙물을 원심 분리하여 상층액을 회수하는 단계;
상기 상층액을 평균 기공 사이즈가 0.1 ~ 1.0 ㎛인 기공을 포함하는 여과막으로 여과하여 여액을 회수하는 단계; 및
상기 여액에 카페인을 혼합하는 단계를 포함하는, 탈모 개선용 식품 조성물의 제조방법을 제공한다.
본 발명은 상기 식물을 착즙하기에 앞서, 필요에 따라서는 식물을 세척하여 불순물을 제거하는 단계를 추가로 수행할 수 있다.
또한, 본 발명에서 상기 스크류는 교반 속도가 20 ~ 100rpm인 저속 스크류를 사용하는 것이 발모 및 육모 효과가 뛰어난 세포 외 세포체를 다량 포함하는 식물 착즙물을 획득할 수 있어 바람직하다.
또한, 본 발명에서 상기 정치 배양은 20 ~ 30℃에서 12 ~ 48시간 동안 수행될 수 있다.
또한, 본 발명에서 상기 원심 분리는 100 ~ 20,000g에서 10 ~ 120분 동안 1회 이상 수행될 수 있다.
또한, 본 발명에서 상기 원심 분리는 100 ~ 500g에서 10 ~ 30분 동안 1차로 수행하고, 1,000 ~ 2,000g에서 10 ~ 30분 동안 2차로 수행한 뒤 5,000 ~ 20,000g에서 30분 ~ 1시간 동안 3차로 수행될 수 있다.
또한, 본 발명에서 상기 여액과 카페인의 혼합비는 특별히 제한하지는 않으나, 바람직하게는 1: 1 ~ 10, 또는 1: 2 ~ 8, 또는 1: 3 ~ 7, 또는 1: 4 ~ 6, 또는 1: 4 ~ 5의 중량비로 포함될 수 있다.
또한, 본 발명에서 상기 여과는 평균 기공 사이즈가 0.2 ~ 0.5 ㎛인 기공을 포함하는 여과막을 이용하여 1회 이상 수행될 수 있다. 바람직하게는 평균 기공 사이즈가 0.4 ~ 0.5㎛인 기공을 포함하는 여과막을 이용하여 1차로 여과를 수행한 뒤, 평균 기공 사이즈가 0.2 ~ 0.3㎛인 기공을 포함하는 여과막을 이용하여 2차로 여과를 수행하는 것이 발모 및 육모 효과가 뛰어난 세포 외 세포체를 다량 포함하는 여액을 획득할 수 있다.
본 명세서에서, 용어 "세포 외 소포체"는 다양한 세포들로부터 분비되는 막 구조의 작은 소낭을 의미하며, 나노베지클(nanovesicle)로도 정의된다. 세포 외 소포체의 직경은 대략 30 ~ 1,000 nm이고, 바람직하게는 평균 직경이 100 ~ 300nm이며, 다낭체와 원형질막의 융합이 일어나 세포 밖 환경으로 방출되는 소낭을 의미한다.
본 명세서에서, 용어 "식물"은 성숙한 식물뿐만 아니라 성숙한 식물로 발육할 있는 식물 세포, 식물 조직 및 식물의 종자 등을 모두 포함하는 의미로서 이해된다.
본 발명에서 사용될 수 있는 식물의 종류는 특별하게 제한되지 않으나, 예를 들면, 벼, 밀, 보리, 옥수수, 콩, 감자, 밀, 팥, 귀리 및 수수를 포함하는 식량 작물류; 아라비돕시스, 배추, 무, 고추, 마늘, 생강, 딸기, 토마토, 수박, 오이, 양배추, 참외, 호박, 파, 양파, 아스파라거스 및 당근을 포함하는 채소 작물류; 인삼, 담배, 목화, 참깨, 사탕수수, 사탕무우, 들깨, 땅콩 및 유채를 포함하는 특용작물류; 사과나무, 배나무, 대추나무, 복숭아, 양다래, 포도, 감귤, 감, 오렌지, 자몽, 자두, 살구, 용과, 망고, 블루베리, 아보카도 및 바나나를 포함하는 과수류; 장미, 글라디올러스, 거베라, 카네이션, 국화, 백합 및 튤립을 포함하는 화훼류; 및 라이그라스, 레드클로버, 오차드그라스, 알파알파, 톨페스큐 및 페레니얼라이그라스를 포함하는 사료작물류로 구성된 군으로부터 선택되는 식물을 사용할 수 있으나, 바람직하게는 아스파라거스를 사용할 수 있다.
본 명세서에서, 용어 "식물 착즙물"은 기계적인 힘 또는 회전력으로 식물의 내부에 포함되어 있는 수분 등을 외부로 유출시켜 얻어진 액상의 유체를 의미하는 것으로, 예를 들어, 과즙, 야채즙, 식물즙 등이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
또한, 본 발명에서 상기 약학적 조성물은 통상의 방법에 따른 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 메틸히드록시 벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명에 따른 약학적 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 상세하게는, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구 투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 본 발명의 약학적 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로스 (sucrose), 락토오스 (lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는 데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔 (witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여 경로는 이들로 한정되는 것은 아니지만 구강, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 경막내, 심장내, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 장관, 국소, 설하 또는 직장이 포함된다. 경구 또는 비경구 투하가 바람직하다. 본 발명에서 사용된 용어 "비경구"는 피하, 피내, 정맥내, 근육내, 관절내, 활액낭내, 흉골내, 경막내, 병소내 및 두개골내 주사 또는 주입기술을 포함한다. 본 발명의 약학적 조성물은 또한 직장 투여를 위한 좌제의 형태로 투여될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 사용된 특정 화합물의 활성, 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별, 정식, 투여시간, 투여경로, 배출율, 약물 배합 및 예방 또는 치료될 특정 질환의 중증을 포함한 여러 요인에 따라 다양하게 변할 수 있고, 상기 약학적 조성물의 투여량은 환자의 상태, 체중, 질병의 정도, 약물 형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있고, 1일 0.0001 내지 50mg/kg 또는 0.001 내지 50mg/kg으로 투여할 수 있다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 본 발명에 따른 약학적 조성물은 환제, 당의정, 캡슐, 액제, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁제로 제형될 수 있다.
본 발명에서 식품 조성물은 각종 식품류, 예를 들어, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 분말, 과립, 정제, 캡슐, 과자, 떡, 빵 등의 형태로 제조될 수 있다. 본 발명의 식품 조성물은 독성 및 부작용이 거의 없는 식물추출물로 구성된 것이므로 예방 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있다.
본 발명에서 유효 성분으로 포함되는 식물 유래 세포 외 소포체, 혹은 이를 포함하는 여액이 식품 조성물에 포함될 때 그 양은 전체 중량의 0.1 내지 50%의 비율로 첨가할 수 있다.
여기서, 상기 식품 조성물이 음료 형태로 제조되는 경우 지시된 비율로 상기 식품 조성물을 함유하는 것 외에 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 즉, 천연 탄수화물로서 포도당 등의 모노사카라이드, 과당 등의 디사카라이드, 슈크로스 등의 및 폴리사카라이드, 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜 등을 포함할 수 있다. 상기 향미제로서는 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등) 등을 들 수 있다.
그 외 본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다.
이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 식품 조성물 100 중량부 당 0.1 내지 약 50 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
또한, 본 발명에서 화장료 조성물은 화장수, 영양로션, 영양에센스, 마사지 크림, 미용목욕물첨가제, 바디로션, 바디밀크, 배스오일, 베이비오일, 베이비파우더, 샤워겔, 샤워크림, 선스크린로션, 선스크린크림, 선탠크림, 스킨로션, 스킨크림, 자외선차단용 화장품, 크렌징밀크, 탈모제{화장용}, 페이스 및 바디로션, 페이스 및 바디크림, 피부미백크림, 핸드로션, 헤어로션, 화장용크림, 쟈스민오일, 목욕비누, 물비누, 미용비누, 샴푸, 손세정제(핸드클리너), 약용비누{비의료용}, 크림비누, 페이셜 워시, 전신 세정제, 두피 세정제, 헤어린스, 화장비누, 치아미백용 겔, 치약 등의 형태로 제조될 수 있다. 이를 위해 본 발명의 조성물은 화장료 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 용매나, 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물 내에 더 추가될 수 있는 용매의 종류는 특별히 한정하지 않으나, 예를 들어, 물, 식염수, DMSO 또는 이들의 조합을 사용할 수 있고, 담체, 부형제 또는 희석제로는 정제수, 오일, 왁스, 지방산, 지방산 알콜, 지방산 에스테르, 계면활성제, 흡습제(humectant), 증점제, 항산화제, 점도 안정화제, 킬레이팅제, 완충제, 저급 알콜 등이 포함되지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한, 필요에 따라 미백제, 보습제, 비타민, 자외선 차단제, 향수, 염료, 항생제, 항박테리아제, 항진균제를 포함할 수 있다.
상기 오일로서는 수소화 식물성유, 피마자유, 면실유, 올리브유, 야자인유, 호호바유, 아보카도유가 이용될 수 있으며, 왁스로는 밀랍, 경랍, 카르나우바, 칸델릴라, 몬탄, 세레신, 액체 파라핀, 라놀린이 이용될 수 있다.
지방산으로는 스테아르산, 리놀레산, 리놀렌산, 올레산이 이용될 수 있고, 지방산 알콜로는 세틸 알콜, 옥틸 도데칸올, 올레일 알콜, 판텐올, 라놀린 알콜, 스테아릴 알콜, 헥사데칸올이 이용될 수 있으며 지방산 에스테르로는 이소프로필 미리스테이트, 이소프로필 팔미테이트, 부틸 스테아레이트가 이용될 수 있다. 계면 활성제로는 당업계에 알려진 양이온 계면활성제, 음이온 계면활성제 및 비이온성 계면활성제가 사용가능하며 가능한 한 천연물 유래의 계면활성제가 바람직하다.
그 외에도 화장품 분야에서 널리 알려진 흡습제, 증점제, 항산화제 등을 포함할 수 있으며, 이들의 종류와 양은 당업계에 공지된 바에 따른다.
본 발명에서 제공하는 조성물은 발모 및 육모 촉진 효과가 매우 우수하여 탈모의 예방 및 치료 효과가 뛰어나며, 이를 섭취하거나 피부에 도포하여도 부작용이 없이 안전하다.
도 1은 실험예 1에서 모유두 세포에 아스파라거스 여액, 카페인 및 이들의 혼합물을 처리함에 따른 세포 생존율의 변화를 그래프로 나타낸 것이다.
도 2는 실험예 2에서 모유두 세포에 아스파라거스 여액, 카페인 및 이들의 혼합물을 처리함에 따라 PTC-1, VEGF 및 CD34 유전자의 발현 정도의 변화를 그래프로 나타낸 것이다.
도 3은 실험예 3에서 모유두 세포에 아스파라거스 여액, 카페인 및 이들의 혼합물을 처리 후의 변화를 형광 면역 염색으로 분석하여 나타낸 것이다.
도 2는 실험예 2에서 모유두 세포에 아스파라거스 여액, 카페인 및 이들의 혼합물을 처리함에 따라 PTC-1, VEGF 및 CD34 유전자의 발현 정도의 변화를 그래프로 나타낸 것이다.
도 3은 실험예 3에서 모유두 세포에 아스파라거스 여액, 카페인 및 이들의 혼합물을 처리 후의 변화를 형광 면역 염색으로 분석하여 나타낸 것이다.
이하, 본 발명의 바람직한 실시형태들을 설명한다. 그러나 본 발명의 실시형태는 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 이하 설명하는 실시 형태로 한정되는 것은 아니다. 또한, 본 발명의 실시형태는 당해 기술분야에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 더욱 완전하게 설명하기 위해서 제공되는 것이다.
실시예
이하의 실험에서는 세포는 인간 모유두 세포(Dermal palilla cell, DPC)를 사용하였고, 모든 실험에서 세포는 계대배양 passage 20 이하에서 수행되었으며, 배양 시 배지는 DMEM(welgene, Korea) 배지에 10% FBS(lonza), 1% 페니실린-스트렙토마이신(welgene, Korea)를 첨가하여 사용하였으며, 세포를 상기 배지에 접종 후 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 배양하였다.
[제조예 1]
아스파라거스를 증류수로 세척한 뒤, 교반 속도가 40 rpm인 저속 스크류로 착즙하여 얻어진 액상의 식물즙을 체에 걸러 부유물을 제거하였다. 이후, 25℃에서 10분간 정치 배양하고, 2,000g에서 30분 동안 원심분리하여 상층액을 분리한 뒤, 폴리비닐리덴디플루오라이드 재질의 0.45㎛ 기공을 포함하는 여과막으로 여과하고, 이후 동일 재질의 0.22㎛ 기공을 포함하는 여과막으로 여과하여 여액을 얻었다.
[실험예 1] MTS 어쎄이
모유두 세포 2.5 x 104 세포를 24-웰 플레이트(SPL, Korea) 각각에 동일하게 분주하였다. 24시간의 안정화 시간 후 상기 제조예 1에서 얻어진 여액, 카페인 및 이들의 혼합물을 48시간 동안 처리하였다. MTS 시약(Promega, USA)과 세포의 기본 배지(FBS free, 1% p/s)를 1:5의 비율로 희석하여 각 웰당 500㎕씩 분주하여 1시간 30분 반응 후 490nm의 파장에서 흡광도를 측정하여 세포 생존율의 변화를 평가해 그 결과를 도 1에 그래프로 나타내었다. 단, 양성 대조군으로는 10% 소 태아 혈청(FBS)을 처리하였고, 음성 대조군으로는 아무런 처리를 하지 않았다.
도 1에서 보는 바와 같이, 세포 외 소포체를 포함하는 아스파라거스 유래 여액 10㎍/ml과 카페인 50μM을 단독으로 처리한 경우, 음성 대조군 대비 세포 증식율이 각각 24%, 32% 증가한 것을 볼 수 있으나, 아스파라거스 유래 세포 외 소포체를 포함하는 여액 10㎍/ml과 카페인 50μM을 단독으로 처리한 경우 음성 대조군 대비 세포 증식율이 47% 증가한 것을 확인할 수 있었다.
이를 통하여 식물 유래 세포 외 소포체 또는 카페인을 단독으로 처리한 경우보다 본 발명과 같이 이들을 혼합하여 처리하는 경우 모유두 세포 증식율 향상에 시너지 효과를 얻을 수 있음을 알 수 있다.
[실험예 2] qPCR (Quantitative Polymerase Chain Reaction) 분석
모유두 세포 5 x 105 세포/ml를 60mm 디쉬(SPL, Korea)에 동일하게 분주하고, 상기 제조예 1에서 얻어진 여액, 카페인 및 이들의 혼합물을 처리하였다. 이후 RNA 분리 키트(Quiagen, USA)를 사용하여 세포로부터 RNA를 분리한 뒤, cDNA 합성 키트(Intronbio, Korea)를 이용하여 분리된 RNA 1㎍에 대한 프라이머를 합성하였다. 프라이머는 10pmol/㎕의 농도로 사용하였고, 2X 사이버 그린 마스터 믹스(Takara, Japan)를 첨가하여 PTC-1(the patched protein-1), VEGF(Vascular endothelial growth factor) 및 CD34 유전자 발현 정도를 검출하여 그 결과를 도 2에 그래프로 나타내었다. 단, 대조군으로는 아무런 처리를 하지 않았다.
도 2에서 보는 바와 같이, 세포 외 소포체를 포함하는 아스파라거스 유래 여액과 카페인을 혼합하여 처리한 경우, 이들을 단독으로 처리한 경우보다 PTC-1, VEGF 및 CD34 유전자의 발현율이 현저히 증가한 것을 확인할 수 있었고, 음성 대조군과 비교하면 PTC-1, VEGF 및 CD34 유전자의 발현율이 각각 2.8, 2.3, 2.2배 증가한 것을 확인할 수 있었다.
여기서, 상기 PTC-1은 Sonic Hedgehog(Shh) 리셉터로, 모낭의 형태 형성과 성장을 조절하는 유전자이고, VEGF는 혈관 성장인자에 관련된 유전자이며, CD34는 신생혈관형성 마커에 해당한다.
따라서, 상기한 결과를 통하여 본 발명에 따른 식물 유래 세포 외 소포체와 카페인의 혼합 조성물은 발모 및 육모 촉진 효과가 우수함을 알 수 있다.
[실험예 3] 형광 면역 염색(Immuno-fluorescence staining) 분석
모유두 세포 5 x 104 세포/ml를 60mm 디쉬(SPL, Korea)에 동일하게 분주하였다. 1주일 후, 상기 제조예 1에서 얻어진 여액, 카페인 및 이들의 혼합물을 처리한 뒤 48시간 동안 배양하였다. 2% 파라폼 알데히드(paraform aldehyde)를 10분 동안 반응시킨 뒤, 세포의 투과성을 높이기 위하여 0.1% 트리톤X-100을 반응시켰다. 이후 비특이성 발현을 줄이기 위한 블러킹 단계로 5%의 BSA 용액으로 1시간 반응시켰고, 1차 항체는 1:200(Cytokeratin15, Ki67, abcam)의 비율로 4℃에서 밤새 반응시켰다. 형광이 결합된 2차 항체는 1:200의 비율로 1시간 동안 반응시켰다. 그 후 핵 염색을 위해 DAPI 용액이 혼합된 마운팅 용액(mounting solution)으로 마무리하였다. 그 결과로 얻어진 사진을 도 3에 나타내었다.
도 3에서 보는 바와 같이, 세포 외 소포체를 포함하는 아스파라거스 유래 여액과 카페인을 혼합하여 처리한 경우, 이들을 단독으로 처리한 경우보다 Ki67(증식 마커) 및 사이토케라틴15(모낭에서 발현)의 발현이 증가하는 것을 확인할 수 있었다.
이를 통하여 본 발명에 따른 식물 유래 세포 외 소포체와 카페인의 혼합 조성물은 이들 각각을 단독으로 처리한 경우보다 모유두 세포의 증식과 발달에 상당한 영향을 미치는 것을 알 수 있다.
이상, 본 발명을 상기 실시예를 중심으로 하여 설명하였으나 이는 예시에 지나지 아니하며, 본 발명은 본 발명의 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 자명한 다양한 변형 및 균등한 기타의 실시 예를 이하에 첨부한 청구범위 내에서 수행할 수 있다는 사실을 이해하여야 한다.
Claims (30)
- 식물 착즙물 유래 세포 외 소포체(extracellular vesicles) 및 카페인을 유효성분으로 포함하는 탈모의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 세포 외 소포체의 직경은 30 ~ 1,000nm인 탈모의 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 세포 외 소포체와 카페인은 1: 1 ~ 10의 중량비로 포함되는 탈모의 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 세포 외 소포체는 5 ~ 10㎍/ml의 양으로 포함되는 탈모의 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 카페인은 25 ~ 50μM 의 양으로 포함되는 탈모의 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 식물 착즙물은 식물을 교반 속도가 20 ~ 100rpm인 스크류로 착즙하여 얻어진 것인, 탈모의 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 식물은 벼, 밀, 보리, 옥수수, 콩, 감자, 밀, 팥, 귀리 및 수수를 포함하는 식량 작물류; 아라비돕시스, 배추, 무, 고추, 마늘, 생강, 딸기, 토마토, 수박, 오이, 양배추, 참외, 호박, 파, 양파, 아스파라거스 및 당근을 포함하는 채소 작물류; 인삼, 담배, 목화, 참깨, 사탕수수, 사탕무우, 들깨, 땅콩 및 유채를 포함하는 특용작물류; 사과나무, 배나무, 대추나무, 복숭아, 양다래, 포도, 감귤, 감, 오렌지, 자몽, 자두, 살구, 용과, 망고, 블루베리, 아보카도 및 바나나를 포함하는 과수류; 장미, 글라디올러스, 거베라, 카네이션, 국화, 백합 및 튤립을 포함하는 화훼류; 및 라이그라스, 레드클로버, 오차드그라스, 알파알파, 톨페스큐 및 페레니얼라이그라스를 포함하는 사료작물류로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상인, 탈모의 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 식물 착즙물 유래 세포 외 소포체(extracellular vesicles) 및 카페인을 유효성분으로 포함하는 탈모 개선용 화장료 조성물.
- 제8항에 있어서,
상기 세포 외 소포체의 직경은 30 ~ 1,000nm인 탈모 개선용 화장료 조성물. - 제8항에 있어서,
상기 세포 외 소포체와 카페인은 1: 1 ~ 10의 중량비로 포함되는 탈모 개선용 화장료 조성물. - 제8항에 있어서,
상기 세포 외 소포체는 5 ~ 10㎍/ml의 양으로 포함되는 탈모 개선용 화장료 조성물. - 제8항에 있어서,
상기 카페인은 25 ~ 50μM 의 양으로 포함되는 탈모 개선용 화장료 조성물. - 제8항에 있어서,
상기 식물 착즙물은 식물을 교반 속도가 20 ~ 100rpm인 스크류로 착즙하여 얻어진 것인, 탈모 개선용 화장료 조성물. - 제8항에 있어서,
상기 식물은 벼, 밀, 보리, 옥수수, 콩, 감자, 밀, 팥, 귀리 및 수수를 포함하는 식량 작물류; 아라비돕시스, 배추, 무, 고추, 마늘, 생강, 딸기, 토마토, 수박, 오이, 양배추, 참외, 호박, 파, 양파, 아스파라거스 및 당근을 포함하는 채소 작물류; 인삼, 담배, 목화, 참깨, 사탕수수, 사탕무우, 들깨, 땅콩 및 유채를 포함하는 특용작물류; 사과나무, 배나무, 대추나무, 복숭아, 양다래, 포도, 감귤, 감, 오렌지, 자몽, 자두, 살구, 용과, 망고, 블루베리, 아보카도 및 바나나를 포함하는 과수류; 장미, 글라디올러스, 거베라, 카네이션, 국화, 백합 및 튤립을 포함하는 화훼류; 및 라이그라스, 레드클로버, 오차드그라스, 알파알파, 톨페스큐 및 페레니얼라이그라스를 포함하는 사료작물류로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상인, 탈모 개선용 화장료 조성물. - 식물 착즙물 유래 세포 외 소포체(extracellular vesicles) 및 카페인을 유효성분으로 포함하는 탈모 개선용 식품 조성물.
- 제15항에 있어서,
상기 세포 외 소포체의 직경은 30 ~ 1,000nm인 탈모 개선용 식품 조성물. - 제15항에 있어서,
상기 세포 외 소포체와 카페인은 1: 1 ~ 10의 중량비로 포함되는 탈모 개선용 식품 조성물. - 제15항에 있어서,
상기 세포 외 소포체는 5 ~ 10㎍/ml의 양으로 포함되는 탈모 개선용 식품 조성물. - 제15항에 있어서,
상기 카페인은 25 ~ 50μM 의 양으로 포함되는 탈모 개선용 식품 조성물. - 제15항에 있어서,
상기 식물 착즙물은 식물을 교반 속도가 20 ~ 100rpm인 스크류로 착즙하여 얻어진 것인, 탈모 개선용 식품 조성물. - 제15항에 있어서,
상기 식물은 벼, 밀, 보리, 옥수수, 콩, 감자, 밀, 팥, 귀리 및 수수를 포함하는 식량 작물류; 아라비돕시스, 배추, 무, 고추, 마늘, 생강, 딸기, 토마토, 수박, 오이, 양배추, 참외, 호박, 파, 양파, 아스파라거스 및 당근을 포함하는 채소 작물류; 인삼, 담배, 목화, 참깨, 사탕수수, 사탕무우, 들깨, 땅콩 및 유채를 포함하는 특용작물류; 사과나무, 배나무, 대추나무, 복숭아, 양다래, 포도, 감귤, 감, 오렌지, 자몽, 자두, 살구, 용과, 망고, 블루베리, 아보카도 및 바나나를 포함하는 과수류; 장미, 글라디올러스, 거베라, 카네이션, 국화, 백합 및 튤립을 포함하는 화훼류; 및 라이그라스, 레드클로버, 오차드그라스, 알파알파, 톨페스큐 및 페레니얼라이그라스를 포함하는 사료작물류로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상인, 탈모 개선용 식품 조성물. - 스크류를 이용하여 식물을 착즙해 식물 착즙물을 획득하는 단계;
상기 식물 착즙물을 정치 배양하는 단계;
배양된 식물 착즙물을 원심 분리하여 상층액을 회수하는 단계;
상기 상층액을 평균 기공 사이즈가 0.1 ~ 1.0 ㎛인 기공을 포함하는 여과막으로 여과하여 여액을 회수하는 단계; 및
상기 여액에 카페인을 혼합하는 단계를 포함하는, 탈모의 예방 또는 치료용 약학적 조성물의 제조방법. - 제22항에 있어서,
상기 여액과 카페인은 1: 1 ~ 10의 중량비로 혼합되는 탈모의 예방 또는 치료용 약학적 조성물의 제조방법. - 제22항에 있어서,
상기 식물을 착즙하기에 앞서, 식물을 세척하여 불순물을 제거하는 단계를 더 포함하는 탈모의 예방 또는 치료용 약학적 조성물의 제조방법. - 제22항에 있어서,
상기 스크류는 교반 속도가 20 ~ 100rpm인 탈모의 예방 또는 치료용 약학적 조성물의 제조방법. - 제22항에 있어서,
상기 정치 배양은 20 ~ 30℃에서 12 ~ 48 시간 동안 수행되는 탈모의 예방 또는 치료용 약학적 조성물의 제조방법. - 제22항에 있어서,
상기 원심 분리는 100 ~ 20,000g에서 10 ~ 120분 동안 1회 이상 수행되는 탈모의 예방 또는 치료용 약학적 조성물의 제조방법. - 제27항에 있어서,
상기 원심 분리는 100 ~ 500g에서 10 ~ 30분 동안 1차로 수행하고, 1,000 ~ 2,000g에서 10 ~ 30분 동안 2차로 수행한 뒤 5,000 ~ 20,000g에서 30분 ~ 1시간 동안 3차로 수행되는 탈모의 예방 또는 치료용 약학적 조성물의 제조방법. - 제22항에 있어서,
상기 여과는 평균 기공 사이즈가 0.2 ~ 0.5 ㎛인 기공을 포함하는 여과막을 이용하여 1회 이상 수행되는, 탈모의 예방 또는 치료용 약학적 조성물의 제조방법. - 제29항에 있어서,
상기 여과는 평균 기공 사이즈가 0.4 ~ 0.5㎛인 기공을 포함하는 여과막을 이용하여 1차로 여과한 뒤, 평균 기공 사이즈가 0.2 ~ 0.3㎛인 기공을 포함하는 여과막을 이용하여 2차로 여과하며 수행되는, 탈모의 예방 또는 치료용 약학적 조성물의 제조방법.
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