WO2020057088A1 - 一种戈舍瑞林的合成方法 - Google Patents

一种戈舍瑞林的合成方法 Download PDF

Info

Publication number
WO2020057088A1
WO2020057088A1 PCT/CN2019/080349 CN2019080349W WO2020057088A1 WO 2020057088 A1 WO2020057088 A1 WO 2020057088A1 CN 2019080349 W CN2019080349 W CN 2019080349W WO 2020057088 A1 WO2020057088 A1 WO 2020057088A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
dcm
resin
ser
azagly
tfa
Prior art date
Application number
PCT/CN2019/080349
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
袁慧星
陈蕾
宓鹏程
陶志强
陶安进
袁建成
Original Assignee
深圳翰宇药业股份有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 深圳翰宇药业股份有限公司 filed Critical 深圳翰宇药业股份有限公司
Publication of WO2020057088A1 publication Critical patent/WO2020057088A1/zh

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/10—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using coupling agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/23—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Definitions

  • the invention relates to the technical field of peptide synthesis, and in particular to a method for synthesizing goserelin.
  • Goserelin acetate is a luteinizing hormone-releasing hormone analog (LHRHa) with an amino acid sequence of Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser (tBu) -Leu-Arg-Pro-Azagly-NH 2 . It can inhibit the secretion of sex hormones (testosterone and estradiol), thereby shrinking hormone-sensitive tumors; it is a subcutaneous implant, which is a long-acting hormone preparation that can last for 1 month.
  • the original research manufacturer was AstraZeneca plc with the trade name Zoladex "Norad". It was first developed in the United Kingdom in March 1987; it was launched in the United States in May 1990; and it was launched in China in 1996 for the treatment of breast cancer. The drug currently ranks second in the world in LHRHa formulations.
  • liquid phase synthesis There are two main types of synthesis methods for this product, one is liquid phase synthesis; the other is solid phase synthesis.
  • the strategy of liquid phase synthesis is mainly using the fragment condensation method, that is, different fragments are synthesized first, and then the fragments are condensed; for example, "4 + 6", “5 + 5", "3 + 7" and other strategies.
  • the methods of liquid phase synthesis mainly include the following patents and literatures:
  • J.Med.Chem 121 (10), 1018-1024,1978 adopted the "4 + 6" fragment condensation method.
  • the protected hexapeptide Z-Tyr (Bzl) -D-Ser-Arg (NO 2 ) -Pro-AzaGly-NH 2 to synthesize the tetrapeptide pGlu-His-Trp-Ser-OMe; the synthesized tetrapeptide fragment and hexapeptide fragment were again synthesized by the azide method to obtain goserelin.
  • US4024248 PL194997 and others use "3 + 7" fragment or "5 + 5" contraction.
  • the protective tripeptide pGlu-His-Trp-OMe was synthesized by liquid phase, and then the heptapeptide Z-Ser-Tyr-D-Ser (tBu) -Leu-Arg-Pro-Azagly-NH 2 was synthesized.
  • Goserelin was obtained by hydrazinolysis, deprotection, and azide condensation.
  • the condensation of liquid-phase fragments involves long synthesis cycles, complicated synthesis operations, and complicated post-treatment purification.
  • the crude peptide has low purity and requires hydrazinolysis, azide, and palladium-carbon removal of protective groups. Not easy to scale up.
  • the solid-phase synthesis strategy is mainly aimed at protecting base strategies and deprotection methods.
  • a commonly used strategy is to first synthesize a fully protected peptide, then condense with NH 2 -Azagly-NH 2 , and finally remove the protecting group in different ways.
  • Adopting solid-liquid phase binding, this type of synthesis methods generally synthesize a fully protected peptide, then perform C-terminal modification, and then deprotect the group. Only the choice of the protecting group is different, and the removal method is different.
  • the main protective base sites are the side chains of His, Ser, Tyr, and Arg.
  • Patent 201010256054.6 is protected by His (Trt), Ser (Trt), Arg (HCl), 5% TFA-DCM is removed;
  • Patent 201210155366.7 is protected by His (Trt), Tyr (Bzl), Arg (NO 2 ), Palladium Removal by hydrocarbon transfer method;
  • Patent 201310557778.8 uses His (Trt), Ser (Bzl), Tyr (Bzl), Arg (NO 2 ) and catalyzed hydrogenolysis removal using palladium carbon in methanol or ethanol solution;
  • Patent 201510005951.2 uses His (Trt ), Tyr (Bzl), Arg (NO 2 ) protection, remove in two steps, first remove Trt with 20% TFA-DCM, and then use hydrogen transfer reaction to remove Bzl and NO 2 .
  • the present invention provides a method for synthesizing goserelin.
  • the goserelin obtained by the synthesis method has high yield, simple operation, and is favorable for purification, while avoiding reduction with palladium on carbon.
  • the invention provides a method for synthesizing goserelin, including the following steps:
  • Step A Coupling Azagly with resin to obtain Azagly-resin
  • Step B Pro, Arg (Alloc) 2 , Leu, D-Ser (tBu), Tyr (Trt), Ser (Trt), Trp, His (Mmt), and Pyr are sequentially coupled to the amino terminal of the Azagly-resin to obtain Pyr -His (Mmt) -Trp-Ser (Trt) -Tyr (Trt) -D-Ser (tBu) -Leu-Arg (Alloc) 2 -Pro-Azagly-resin;
  • Step C The Arg guanidine protecting group Alloc in the peptide resin obtained in Step B is removed by using a remover containing tetratriphenylphosphine palladium and morpholine to obtain Pyr-His (Mmt) -Trp-Ser (Trt ) -Tyr (Trt) -D-Ser (tBu) -Leu-Arg-Pro-Azagly-resin;
  • Step D The peptide resin obtained in Step C is cleaved with a lysate to obtain Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser (tBu) -Leu-Arg-Pro-Azagly-NH 2.
  • the amino acid sequence is as shown in SEQ. ID NO: 1, shown as Goserelin.
  • step A and step B of the present invention the amino acid required for coupling is Fmoc-amino acid.
  • Azagly, Pro, Arg (Alloc) 2 , Leu, D-Ser (tBu), Tyr (Trt), Ser (Trt), Trp, His (Mmt) are Fmoc-Azagly-OH or Fmoc-Azagly- OMe, Fmoc-Pro, Fmoc-Arg (Alloc) 2 , Fmoc-Leu, Fmoc-D-Ser (tBu), Fmoc-Tyr (Trt), Fmoc-Ser (Trt), Fmoc-Trp, Fmoc-His (Mmt ).
  • the resin is a Sieber Resin resin.
  • the degree of substitution of the Sieber Resin resin is 0.5 to 1.0 mmol / g.
  • the degree of substitution of the Sieber Resin resin is 0.9 to 1.0 mmol / g.
  • the degree of substitution of the Sieber Resin resin is 1.0 mmol / g.
  • the coupling agent used in step A is HOAt / DIC or pyridine.
  • the coupling agent used for coupling in step A is HOAt / DIC.
  • the equivalent ratio of HOAt to DIC in the coupling agent HOAt / DIC is (1 to 2): (1 to 2).
  • the equivalent ratio of HOAt to DIC in the coupling agent HOAt / DIC is 1: 1.
  • the coupling agent used for coupling in step B is HOBt / DIC.
  • the coupling time is 2 to 4 hours.
  • the equivalent ratio of tetratriphenylphosphine palladium to morpholine is (0.2 to 0.8): (15 to 25).
  • the equivalent ratio of tetratriphenylphosphine palladium to morpholine is 0.5: 20.
  • the removing agent containing tetratriphenylphosphine palladium and morpholine further includes a solvent DCM.
  • the lysing solution used for the lysis is a mixed solution of DCM, TFA, and organic capture agent, or a mixed solution of DCM, TFA, organic capture agent, and water.
  • the organic capture agent is a combination of one or more of TIS, ethylene dithiol (EDT), anisole sulfide, or anisole.
  • the removal is carried out under a condition of nitrogen agitation.
  • the removal time is 2 to 3 hours.
  • the volume ratio of DCM, TFA, capture agent and water in the mixed solution of DCM, TFA, organic capture agent, and water is (70 to 90): (5 to 30): (2 to 10): (2 to 10) ).
  • the volume ratio of DCM, TFA, organic capture agent and water is (80 to 90): (8 to 12): (2 to 3): (2 to 3).
  • the volume ratio of DCM, TFA, and organic capture agent in the mixed solution of DCM, TFA, and organic capture agent is (70 to 90): (5 to 30): (2 to 10).
  • the volume ratio of DCM, TFA and organic capture agent is (80-90): (8-12): (2-3).
  • the volume ratio of DCM: TFA: anisole sulfide: anisole sulfide: TIS is 85: 10: 2: 1: 2; or the volume ratio of DCM: TFA: TIS: H 2 O is 85 : 10: 2.5: 2.5; or DCM: TFA: anisole sulfide: anisole: water in a volume ratio of 85: 10: 2: 1: 1: 2; or DCM: TFA: anisole sulfide: anisole sulfide: The volume ratio of EDT is 85: 10: 2: 1: 2.
  • the lysis time is 1 to 3 hours.
  • the steps of precipitating and centrifuging the ether are also included after the lysis.
  • the ether precipitation is carried out at a freezing temperature.
  • a step of purifying the goserelin crude peptide is further included.
  • the invention provides a method for synthesizing goserelin.
  • the synthesis method includes the following steps: coupling Azagly with resin to obtain Azagly-resin; coupling amino acids in sequence at the amino end of Azagly-resin to obtain Pyr-His (Mmt) -Trp-Ser (Trt) -Tyr (Trt) -D-Ser (tBu) -Leu-Arg (Alloc) 2 -Pro-Azagly-resin; protecting the Arg guanidine group in the peptide resin obtained in step B with a remover containing tetratriphenylphosphine palladium and morpholine Alloc was removed to obtain Pyr-His (Mmt) -Trp-Ser (Trt) -Tyr (Trt) -D-Ser (tBu) -Leu-Arg-Pro-Azagly-resin.
  • the weakly acidic protecting groups of the side chains of His (Mmt), Ser (Trt), and Tyr (Trt) are consistent with the cleavage conditions of Sieber Resin resin, which can achieve resin cleavage and removal of the protective group in one step. Easy to operate.
  • FIG. 7 shows an HPLC chart of a crude peptide in Comparative Example 3.
  • the present invention discloses a method for synthesizing goserelin. Those skilled in the art can learn from the content of this article and appropriately improve the process parameters. In particular, it should be noted that all similar replacements and modifications will be apparent to those skilled in the art, and they are all considered to be included in the present invention.
  • the method and application of the present invention have been described through the preferred embodiments. It is obvious that relevant persons can modify or appropriately modify and combine the methods and applications described herein without departing from the content, spirit and scope of the present invention, to achieve and Apply the technology of the present invention.
  • the peptide synthesis flowchart of the present invention is as follows:
  • the reagents or instruments used in the synthetic method of goserelin provided by the present invention can be purchased from the market.
  • sperm peptides were obtained after two preparations with a purity of about 99.41%. See Figure 2 for HPLC.
  • the peptide resin is about 16.02 g.
  • the peptide resin was added to a 1% TFA-DCM (V / V) solution, stirred for 2 hours, and concentrated to dryness to obtain a white solid.
  • M 1533.40 Pyr-His (Trt) -Trp-Ser (Trt) -Tyr (Bzl) -D-Ser (tBu) -Leu-Arg (NO 2 ) -Pro-COOH.
  • Boc-Pro-OH and DCM were dissolved by stirring, 1.2 times equivalent of NH 2 -Azagly-CONH 2 in DMF was added, and then 1.2 times equivalent of DCC was added. The reaction was performed overnight at room temperature, and the plate was monitored. The raw material Boc-Pro-OH disappeared. Add a 5% citric acid aqueous solution and wash it twice, take the DCM layer, and then wash it twice with a 10% Na 2 CO aqueous solution, and wash it twice with a saturated sodium chloride aqueous solution. Take the DCM layer, dry it with anhydrous sodium sulfide, and concentrate to obtain a white solid. . Boc-Pro-NH-Azagly-CONH 2 .
  • Boc-Arg (NO 2 ) -OH and DCM were dissolved by stirring, and 1.2 times equivalent of NH 2 -Pro-NH-Azagly-CONH 2 in DMF was added, and then 1.2 times equivalent of DCC was added. The reaction was performed at room temperature overnight, and the plate was monitored.
  • the raw material Boc-Arg (NO2) -OH was washed twice by adding a 5% citric acid aqueous solution, and the DCM layer was taken. Then, the DCM layer was washed twice with a 10% Na 2 CO aqueous solution, and washed twice with a saturated sodium chloride aqueous solution. Dry with sodium sulfide and concentrate to give a white solid.
  • Boc-Arg (NO 2 ) -Pro-NH-Azagly-CONH 2 a white solid.
  • Boc-Pro-OH and DCM were dissolved by stirring, 1.2 times equivalent of NH 2 -Azagly-CONH 2 in DMF was added, and then 1.2 times equivalent of DCC was added. The reaction was performed overnight at room temperature, and the plate was monitored. The raw material Boc-Pro-OH disappeared. Add a 5% citric acid aqueous solution and wash it twice, take the DCM layer, and then wash it twice with a 10% Na 2 CO aqueous solution, and wash it twice with a saturated sodium chloride aqueous solution. Take the DCM layer, dry it with anhydrous sodium sulfide, and concentrate to obtain a white solid. . Boc-Pro-NH-Azagly-CONH 2 .
  • Boc-Arg (NO 2 ) -OH and DCM were dissolved by stirring, and 1.2 times equivalent of NH 2 -Pro-NH-Azagly-CONH 2 in DMF was added, and then 1.2 times equivalent of DCC was added. The reaction was performed at room temperature overnight, and the plate was monitored.
  • the raw material Boc-Arg (NO2) -OH was washed twice by adding a 5% citric acid aqueous solution, and the DCM layer was taken. Then, the DCM layer was washed twice with a 10% Na 2 CO aqueous solution, and washed twice with a saturated sodium chloride aqueous solution. Dry with sodium sulfide and concentrate to give a white solid.
  • Boc-Arg (NO 2 ) -Pro-NH-Azagly-CONH 2 a white solid.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明属于多肽合成技术领域，本发明公开了一种戈舍瑞林的合成方法，该合成方法包括：将Azagly与树脂进行偶联；在Azagly-树脂氨基端依次偶联氨基酸；采用含有四三苯基膦钯和吗啡啉的脱除剂对步骤B得到的肽树脂中的Arg胍基保护基进行脱除；采用裂解液对步骤C得到的肽树脂进行裂解，得到戈舍瑞林。

Description

一种戈舍瑞林的合成方法
本申请要求于2018年09月20日提交中国专利局、申请号为201811101461.2、发明名称为“一种戈舍瑞林的合成方法”的中国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。
技术领域
本发明涉及多肽合成技术领域，特别涉及一种戈舍瑞林的合成方法。
背景技术
醋酸戈舍瑞林是一种促黄体生成素释放激素类似物(LHRHa)，其氨基酸序列为Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH 2。它可以抑制性激素的分泌(睾丸酮和雌二醇)，从而使激素敏感性肿瘤萎缩；是一种皮下植入剂，属于长效的激素制剂，作用时间可维持1个月。原研厂家为阿斯利康(AstraZeneca plc)，商品名Zoladex“诺雷得”，1987年3月在英国首次完成研发；1990年5月在美国上市；1996年应用于药物治疗乳腺癌在中国上市。该药物目前的销量在LHRHa制剂中世界排名第二。
该产品合成方法主要有两大类，一类是液相合成；另一类是固相合成。液相合成的策略主要是采用片段缩合法，即先合成不同片段，再片段缩合；比如“4+6”、“5+5”、“3+7”等策略。液相合成的方法主要有以下专利和文献：
J.Med.Chem 121(10),1018-1024,1978采用“4+6”片段缩合法，首先采用液相合成法合成保护六肽Z-Tyr(Bzl)-D-Ser-Arg(NO 2)-Pro-AzaGly-NH 2，合成除四肽pGlu-His-Trp-Ser-OMe；将合成出来的四肽片段和六肽片段再次采用叠氮物法合成出戈舍瑞林。US4024248 PL194997等采用“3+7”片段或“5+5”缩合法。首先，液相合成保护三肽pGlu-His-Trp-OMe，再合成七肽Z-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH 2。再通过肼解，脱保护，叠氮法缩合得戈舍瑞林。但液相片段缩合存在合成周期长，合成操作繁琐，后处理纯化等比较复杂，粗肽纯度低且需肼解，叠氮化，钯碳脱除保护基等步骤。不易放大生产。
而固相合成的策略主要是针对保护基策略和脱保护方法。常用的策略有先合成全保护肽，再与NH 2-Azagly-NH 2缩合，最后采用不同的方式脱除保护基。采用固液相结合，这一类合成方法，大致都是先合成全保护肽，再进行C端 修饰，再脱保护基。只是保护基的选择不同，采用的脱除方式也不相同。主要的保护基位点是His、Ser、Tyr、Arg的侧链。例如：专利201010256054.6采用His(Trt)、Ser(Trt)、Arg(HCl)保护，5％TFA-DCM脱除；专利201210155366.7采用His(Trt)、Tyr(Bzl)、Arg(NO 2)保护，钯碳氢转移方式脱除；专利201310557778.8采用His(Trt)、Ser(Bzl)、Tyr(Bzl)、Arg(NO 2)，采用甲醇或乙醇溶液中钯碳催化氢解脱除；专利201510005951.2采用His(Trt)、Tyr(Bzl)、Arg(NO 2)保护，分两步脱除，先采用20％TFA-DCM脱除Trt，再采用氢转移反应脱除Bzl和NO 2。但固液相缩合的方式，大多均采用了Bn、NO 2这类保护基，需要液体脱除，而常用的脱除方式均为钯碳氢化还原，或者钯碳/醋酸/60℃加热脱除，高温会导致消旋化和多肽立体结构的破坏，高压反应釜钯碳氢化还原，对设备要求较高。且在液相进行C端修饰，存在全保护肽自身缩合等副反应，导致收率降低，上述四篇专利公开的技术方案下戈舍瑞林的粗肽收率仅达到30％～40％。
因此，急需开发一种新的合成工艺，来解决液相操作繁琐，不利于纯化的缺点，同时避免使用钯碳还原等一系列问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种戈舍瑞林的合成方法。该合成方法得到的戈舍瑞林收率高，操作简单，利于纯化，同时避免了使用钯碳还原。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种戈舍瑞林的合成方法，包括如下步骤：
步骤A：将Azagly与树脂进行偶联，得到Azagly-树脂；
步骤B：在Azagly-树脂氨基端依次偶联Pro、Arg(Alloc) 2、Leu、D-Ser(tBu)、Tyr(Trt)、Ser(Trt)、Trp、His(Mmt)、Pyr，得到Pyr-His(Mmt)-Trp-Ser(Trt)-Tyr(Trt)-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(Alloc) 2-Pro-Azagly-树脂；
步骤C：采用含有四三苯基膦钯和吗啡啉的脱除剂对步骤B得到的肽树脂中的Arg胍基保护基Alloc进行脱除，得到Pyr-His(Mmt)-Trp-Ser(Trt)-Tyr(Trt)-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-Azagly-树脂；
步骤D：采用裂解液对步骤C得到的肽树脂进行裂解，得到 Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH 2，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，即戈舍瑞林。
在本发明步骤A和步骤B中，偶联所需氨基酸为Fmoc-氨基酸。
作为优选，Azagly、Pro、Arg(Alloc) 2、Leu、D-Ser(tBu)、Tyr(Trt)、Ser(Trt)、Trp、His(Mmt)分别为Fmoc-Azagly-OH或Fmoc-Azagly-OMe、Fmoc-Pro、Fmoc-Arg(Alloc) 2、Fmoc-Leu、Fmoc-D-Ser(tBu)、Fmoc-Tyr(Trt)、Fmoc-Ser(Trt)、Fmoc-Trp、Fmoc-His(Mmt)。
作为优选，树脂为Sieber Resin树脂。
作为优选，Sieber Resin树脂的替代度为0.5～1.0mmol/g。
优选地，Sieber Resin树脂的替代度为0.9～1.0mmol/g。
更优选地，Sieber Resin树脂的替代度为1.0mmol/g。
作为优选，步骤A中偶联采用的偶联剂为HOAt/DIC或吡啶。
优选地，步骤A中偶联采用的偶联剂为HOAt/DIC。
作为优选，偶联剂HOAt/DIC中HOAt与DIC的当量比为(1～2)：(1～2)。
优选地，偶联剂HOAt/DIC中HOAt与DIC的当量比为1：1。
作为优选，步骤B中偶联采用的偶联剂为HOBt/DIC。
作为优选，偶联的时间为2～4h。
作为优选，四三苯基膦钯与吗啡啉的当量比为(0.2～0.8)：(15～25)。
优选地，四三苯基膦钯与吗啡啉的当量比为0.5：20。
作为优选，含有四三苯基膦钯和吗啡啉的脱除剂还包括溶剂DCM。
作为优选，裂解采用的裂解液为DCM、TFA、有机捕获剂的混合液，或者为DCM、TFA、有机捕获剂、水的混合液。
作为优选，有机捕获剂为TIS、乙二硫醇(EDT)、茴香硫醚或苯甲硫醚中的一种或几种的组合物。
作为优选，脱除为在氮气鼓动的条件下脱除。
作为优选，脱除的时间为2～3h。
作为优选，DCM、TFA、有机捕获剂、水的混合液中DCM、TFA、捕获剂与水的体积比为(70～90)：(5～30)：(2～10)：(2～10)。
优选的，裂解液中，DCM、TFA、有机捕获剂与水的体积比为(80～90)： (8～12)：(2～3)：(2～3)。
作为优选，DCM、TFA、有机捕获剂的混合液中DCM、TFA、有机捕获剂的体积比为(70～90)：(5～30)：(2～10)。
优选的，裂解液中，DCM、TFA与有机捕获剂的体积比为(80～90)：(8～12)：(2～3)。
作为优选，裂解液中，DCM：TFA：茴香硫醚：苯甲硫醚：TIS的体积比为85：10：2：1：2；或者DCM：TFA：TIS：H 2O的体积比为85：10：2.5：2.5；或者DCM：TFA：茴香硫醚：苯甲硫醚：水的体积比为85：10：2：1：2；或者DCM：TFA：茴香硫醚：苯甲硫醚：EDT的体积比为85：10：2：1：2。
作为优选，裂解的时间为1～3h。
作为优选，裂解后还包括乙醚沉淀、离心的步骤。
作为优选，乙醚沉淀为在冷冻温度下进行乙醚沉淀。
作为优选，离心后还包括将戈舍瑞林粗肽进行精制的步骤。
本发明提供了一种戈舍瑞林的合成方法。该合成方法包括如下步骤：将Azagly与树脂进行偶联，得到Azagly-树脂；在Azagly-树脂氨基端依次偶联氨基酸，得到Pyr-His(Mmt)-Trp-Ser(Trt)-Tyr(Trt)-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(Alloc) 2-Pro-Azagly-树脂；采用含有四三苯基膦钯和吗啡啉的脱除剂对步骤B得到的肽树脂中的Arg胍基保护基Alloc进行脱除，得到Pyr-His(Mmt)-Trp-Ser(Trt)-Tyr(Trt)-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-Azagly-树脂；采用裂解液对步骤C得到的肽树脂进行裂解，得到戈舍瑞林。本发明具有的技术效果为：
1、采用Sieber Resin树脂和本发明的保护氨基酸组合，可以实现在树脂上偶联、脱保护、修饰，不需要再进行C端修饰，该工艺操作简单，后处理方便，重现性好。
2、引入了胍基保护基Alloc，脱除采用四三苯基膦钯/吗啡啉脱除，从而避免了精氨酸的胍基保护基团(NO 2)等，避开液相钯碳氢化还原步骤，氢化步骤对设备要求高，且不便于放大生产。
3、His(Mmt)、Ser(Trt)、Tyr(Trt)这些侧链的弱酸性保护基，和Sieber Resin树脂的裂解条件一致，可以实现树脂裂解和保护基脱除一步完成。操作简便。
4、反应毕直接乙醚沉淀，而不是文献提及的浓缩TFA全保护肽，再进行C端修饰。在TFA浓缩的过程中，酸浓度增加，势必造成Ser(tBu)侧链保护基tBu的脱除。该杂质与目标产物结构类似，难以除去。
附图说明
图1示实施例5中粗肽的HPLC图谱；
图2示实施例5中精肽的HPLC图谱；
图3示实施例6中粗肽的HPLC图谱；
图4示实施例7中粗肽的HPLC图谱；
图5示对比例1中粗肽的HPLC图谱；
图6示对比例2中粗肽的HPLC图谱；
图7示对比例3中粗肽的HPLC图谱。
具体实施方式
本发明公开了一种戈舍瑞林的合成方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明多肽合成流程图如下：
Figure PCTCN2019080349-appb-000001
缩写及英文含义如下：
Figure PCTCN2019080349-appb-000002
Figure PCTCN2019080349-appb-000003
本发明提供的戈舍瑞林的合成方法中所用试剂或仪器等均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1 Fmoc-Azagly-NH-Sieb Resin的合成
称取替代度sub＝0.76mmol/g的Sieber Resin，DCM溶胀10min，抽干，DMF洗涤3次，抽干后，加入20％哌啶-DMF(脱Fmoc)，一次5分钟，一次7分钟，DMF洗涤5次，加入3倍量的Fmoc-Azagly-OH，1.2eqHOAt/1.2eqDIC，偶联2小时，茚三酮检测透明即可。然后采用酸酐/吡啶封闭树脂，DMF、DCM洗涤，甲醇收缩送替代度，替代度sub＝0.50mmol/g。
实施例2 Fmoc-Azagly-NH-Sieb Resin的合成
称取替代度sub＝0.5mmol/g的Sieber Resin，DCM溶胀10min，抽干，DMF洗涤3次，抽干后，加入20％哌啶-DMF(脱Fmoc)，一次5分钟，一次7分钟，DMF洗涤5次，加入3倍量的Fmoc-Azagly-OH，1.2eqHOAt/1.2eqDIC，偶联2小时，茚三酮检测透明即可。然后采用酸酐/吡啶封闭树脂，DMF、DCM洗涤，甲醇收缩送替代度，替代度sub＝0.32mmol/g。
实施例3 Fmoc-Azagly-NH-Sieb Resin的合成
称取替代度sub＝1.0mmol/g的Sieber Resin，DCM溶胀10min，抽干，DMF洗涤3次，抽干后，加入20％哌啶-DMF(脱Fmoc)，一次5分钟，一次7分钟，DMF洗涤5次，加入3倍量的Fmoc-Azagly-OH，1.2eqHOAt/1.2eqDIC， 偶联2小时，茚三酮检测透明即可。然后采用酸酐/吡啶封闭树脂，DMF、DCM洗涤，甲醇收缩送替代度，替代度sub＝0.58mmol/g。
实施例4 Fmoc-Azagly-NH-Sieb Resin的合成
称取替代度sub＝1.0mmol/g的Sieber Resin，DCM溶胀10min，抽干，DMF洗涤3次，抽干后，加入20％哌啶-DMF(脱Fmoc)，一次5分钟，一次7分钟，DMF洗涤5次，加入3倍量的Fmoc-Azagly-OMe，3.5eq吡啶，偶联4小时，茚三酮检测透明即可。然后采用酸酐/吡啶封闭树脂，DMF、DCM洗涤，甲醇收缩送替代度，替代度sub＝0.34mmol/g。
实施例5 戈舍瑞林粗肽及精肽的制备
称取实施例3获得的替代度sub＝0.58mmol/g的Fmoc-Azagly-NH-Sieber Resin 10g(5.8mmol)，DCM溶胀10min，抽干，DMF洗涤3次，抽干后，加入20％哌啶-DMF(脱Fmoc)，一次5分钟，一次7分钟，DMF洗涤5次，加入3倍量的Fmoc-Pro-OH，1.2eqHOBt/1.2eqDIC，偶联2小时，茚三酮检测透明；抽干，DMF洗涤3次，抽干后，加入20％哌啶-DMF(脱Fmoc)，一次5分钟，一次7分钟，DMF洗涤5次，再参照以上固相合成的方法，依次偶联Fmoc-Arg(Alloc) 2-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Tyr(Trt)-OH、Fmoc-Ser(Trt)-OH、Fmoc-Trp-OH、Fmoc-His(Mmt)-OH、Pyr-OH，偶联完毕，用DMF洗涤3次，DCM洗涤3次，抽干。
加入0.5eq四三苯基膦钯，20eq吗啡啉，DCM溶解，N2鼓动，反应2小时，抽干，1％哌啶-DMF洗涤3次，DMF洗涤5次，DCM洗涤5次，甲醇收缩得到肽树脂约21.02g。
取DCM 340mL，TFA 40mL，有机捕获剂TIS 10mL，H 2O 10mL，配成85：10：2.5：2.5的裂解液400L。取肽树脂21.0g，加入上述裂解液210mL，裂解2小时。过滤，滤液至于乙醚中冷冻沉淀，离心，得到粗肽，再氮气吹干，得到粗肽5.66g(4.46mmol)，色谱纯度约81.9％，收率76.9％。粗肽HPLC纯度见图1。
采用0.3％醋酸铵溶液(pH7.0)-0.1％醋酸溶液-乙腈体系，Kromasil C18 填料的制备柱，经两次制备后得到精肽，纯度约99.41％，HPLC见图2。
实施例6 戈舍瑞林粗肽的制备
称取替代度sub＝0.32mmol/g的Fmoc-Azagly-NH-Sieber Resin 10g(0.58mmol)，DCM溶胀10min，抽干，DMF洗涤3次，抽干后，加入20％哌啶-DMF(脱Fmoc)，一次5分钟，一次7分钟，DMF洗涤5次，加入3倍量的Fmoc-Pro-OH，1.2eqHOBt/1.2eqDIC，偶联2小时，茚三酮检测透明；抽干，DMF洗涤3次，抽干后，加入20％哌啶-DMF(脱Fmoc)，一次5分钟，一次7分钟，DMF洗涤5次，再参照以上固相合成的方法，依次偶联Fmoc-Arg(Alloc) 2-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Tyr(Trt)-OH、Fmoc-Ser(Trt)-OH、Fmoc-Trp-OH、Fmoc-His(Mmt)-OH、Pyr-OH，偶联完毕，用DMF洗涤3次，DCM洗涤3次，抽干。
加入0.5eq四三苯基膦钯，20eq吗啡啉，DCM溶解，N2鼓动，反应1.5小时，抽干，1％哌啶-DMF洗涤3次，DMF洗涤5次，DCM洗涤5次，甲醇收缩得到肽树脂约16.02g。
取DCM 170mL，TFA 20mL，有机捕获剂包括TIS 4mL、茴香硫醚4mL、苯甲硫醚2mL，配成85：10：2：2：1的裂解液200L。取肽树脂16.0g，加入上述裂解液160mL(10倍)，裂解2小时。过滤，滤液至于乙醚中冷冻沉淀，离心，得到粗肽，再氮气吹干，得到粗肽3.19g，色谱纯度约72.4％，收率80.44％，粗肽HPLC见图3。
实施例7 戈舍瑞林粗肽的制备
称取替代度sub＝0.32mmol/g的Fmoc-Azagly—NH-Sieber Resin 10g(0.58mmol)，DCM溶胀10min，抽干，DMF洗涤3次，抽干后，加入20％哌啶-DMF(脱Fmoc)，一次5分钟，一次7分钟，DMF洗涤5次，加入3倍量的Fmoc-Pro-OH，1.2eqHOBt/1.2eqDIC，偶联2小时，茚三酮检测透明；抽干，DMF洗涤3次，抽干后，加入20％哌啶-DMF(脱Fmoc)，一次5分钟，一次7分钟，DMF洗涤5次，再参照以上固相合成的方法，依次偶联Fmoc-Arg(Alloc) 2-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Ser(tBu)-OH、 Fmoc-Tyr(Trt)-OH、Fmoc-Ser(Trt)-OH、Fmoc-Trp-OH、Fmoc-His(Mmt)-OH、Pyr-OH，偶联完毕，用DMF洗涤3次，DCM洗涤3次，抽干。
加入0.5eq四三苯基膦钯，20eq吗啡啉，DCM溶解，N2鼓动，反应2小时，抽干，1％哌啶-DMF洗涤3次，DMF洗涤5次，DCM洗涤5次，甲醇收缩得到肽树脂约15.87g。
取DCM 170mL，TFA 20mL，有机捕获剂包括茴香硫醚4mL、苯甲硫醚2mL，水4mL，配成85：10：2：1：2的裂解液200L。取肽树脂15.5g，加入上述裂解液124mL(8倍)，裂解2小时。过滤，滤液至于乙醚中冷冻沉淀，离心，得到粗肽，再氮气吹干，得到粗肽3.29g，色谱纯度约84.12％，收率81.0％。粗肽HPLC见图4。
对比例1 戈舍瑞林粗肽的制备(常规方案)
称取替代度sub＝1.0mmol/g的2-CTC Resin，DCM溶胀10min，抽干，DMF洗涤3次，抽干后，加入3倍当量的Fmoc-Pro-OH并加入约200mlDMF溶解，偶联2小时，同时冰水浴降温，加入8.7mlDIPEA活化10min后，将氨基酸活化液体加入至反应柱中反应，5min后再向反应器中加入17.5mlDIPEA继续反应2小时，反应结束后，加入DMF、DCM洗涤，采用封闭液DCM/MEOH/DIPEA(17：2:1体积比)封闭2次，每次10分钟，封闭结束后DMF洗涤MeOH收缩，取样测得替代度0.52mmol/g
取19.2g(10mmol)上述Fmoc-Pro-CTC Resin，DCM溶胀10min，抽干，DMF洗涤3次，抽干后，加入20％哌啶-DMF(脱Fmoc)，一次5分钟，一次7分钟，DMF洗涤5次，加入3倍量的Fmoc-Arg(NO 2)-OH，1.2eqHOBt/1.2eqDIC，偶联2小时，茚三酮检测透明；抽干，DMF洗涤3次，抽干后，加入20％哌啶-DMF(脱Fmoc)，一次5分钟，一次7分钟，DMF洗涤5次，再参照以上固相合成的方法，依次偶联Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Tyr(Bzl)-OH、Fmoc-Ser(Trt)-OH、Fmoc-Trp-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Pyr-OH，偶联完毕，用DMF洗涤3次，DCM洗涤3次，抽干。甲醇收缩。
上述肽树脂加入到1％TFA-DCM(V/V)溶液中搅拌2小时，浓缩至干，得到白色固体。(M＝1533.40)Pyr-His(Trt)-Trp-Ser(Trt)-Tyr(Bzl) -D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO 2)-Pro-COOH。
加入DCM溶解上述固体，再加入HOBt\DIC，搅拌溶解，最后加入NH 2-Azagly-CONH 2的DMF溶液，搅拌反应2小时。加入5％柠檬酸水溶液洗涤2次，取DCM层，再采用10％Na 2CO水溶液洗涤2次，饱和氯化钠水溶液洗涤2次，取DCM层，无水硫化钠干燥，浓缩得到白色固体物。Pyr-His(Trt)-Trp-Ser(Trt)-Tyr(Bzl)-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO 2)-Pro-Azagly-NH 2
将上述化合物溶解在甲醇中，加入1.1倍当量的10％Pd/C，加压到10个大气压，室温反应5小时，过滤掉钯碳，反应液加入到冰冻的乙醚中，析出沉淀。总收率约32％，HPLC 69.07％(图5)。
对比例2 戈舍瑞林粗肽的制备(7+2)
称取替代度sub＝1.0mmol/g的2-CTC Resin，DCM溶胀10min，抽干，DMF洗涤3次，抽干后，加入3倍当量的Fmoc-Leu-OH并加入约200mlDMF溶解，偶联2小时，同时冰水浴降温，加入8.7mlDIPEA活化10min后，将氨基酸活化液体加入至反应柱中反应，5min后再向反应器中加入17.5mlDIPEA继续反应2小时，反应结束后，加入DMF、DCM洗涤，采用封闭液DCM/MEOH/DIPEA(17：2:1体积比)封闭2次，每次10分钟，封闭结束后DMF洗涤MeOH收缩，取样测得替代度0.52mmol/g
取19.2g(10mmol)上述Fmoc-Leu-CTC Resin，DCM溶胀10min，抽干，DMF洗涤3次，抽干后，加入20％哌啶-DMF(脱Fmoc)，一次5分钟，一次7分钟，DMF洗涤5次，加入3倍量的Fmoc-D-Ser(tBu)-OH，1.2eqHOBt/1.2eqDIC，偶联2小时，茚三酮检测透明；抽干，DMF洗涤3次，抽干后，加入20％哌啶-DMF(脱Fmoc)，一次5分钟，一次7分钟，DMF洗涤5次，再参照以上固相合成的方法，依次偶联Fmoc-Tyr(Bzl)-OH、Fmoc-Ser(Trt)-OH、Fmoc-Trp-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Pyr-OH，偶联完毕，用DMF洗涤3次，DCM洗涤3次，抽干。甲醇收缩。
上述肽树脂加入到1％TFA-DCM(V/V)溶液中搅拌2小时，浓缩至干，得到白色固体。(M＝1533.40)Pyr-His(Trt)-Trp-Ser(Trt)-Tyr(Bzl)-D-Ser(tBu)-Leu-COOH。
Boc-Pro-OH和DCM搅拌溶解，加入1.2倍当量的NH 2-Azagly-CONH 2的DMF溶液，然后加入1.2倍当量的DCC，室温反应过夜，点板监控，原料Boc-Pro-OH消失，加入5％柠檬酸水溶液洗涤2次，取DCM层，再采用10％Na 2CO水溶液洗涤2次，饱和氯化钠水溶液洗涤2次，取DCM层，无水硫化钠干燥，浓缩得到白色固体物。Boc-Pro-NH-Azagly-CONH 2。
将上述固体，溶解在氯化氢的乙酸乙酯溶液中，搅拌2小时，脱除Boc，反应结束后，浓缩至干，加入DCM溶解，再采用10％Na 2CO水溶液洗涤2次，饱和氯化钠水溶液洗涤2次，取DCM层，无水硫化钠干燥，浓缩得到白色固体物。NH 2-Pro-NH-Azagly-CONH 2。
Boc-Arg(NO 2)-OH和DCM搅拌溶解，加入1.2倍当量的NH 2-Pro-NH-Azagly-CONH 2的DMF溶液，然后加入1.2倍当量的DCC，室温反应过夜，点板监控，原料Boc-Arg(NO2)-OH，加入5％柠檬酸水溶液洗涤2次，取DCM层，再采用10％Na 2CO水溶液洗涤2次，饱和氯化钠水溶液洗涤2次，取DCM层，无水硫化钠干燥，浓缩得到白色固体物。Boc-Arg(NO 2)-Pro-NH-Azagly-CONH 2。
将上述固体，溶解在氯化氢的乙酸乙酯溶液中，搅拌2小时，脱除Boc，反应结束后，浓缩至干，加入DCM溶解，再采用10％Na 2CO水溶液洗涤2次，饱和氯化钠水溶液洗涤2次，取DCM层，无水硫化钠干燥，浓缩得到白色固体物。NH 2-Arg(NO 2)-Pro-NH-Azagly-CONH 2。
取Pyr-His(Trt)-Trp-Ser(Trt)-Tyr(Bzl)-D-Ser(tBu)-Leu–COOH加入DCM搅拌溶解，加入1.1倍当量的NH 2-Arg(NO 2)-Pro-NH-Azagly-CONH 2的DMF溶液，然后加入1.1倍当量的DCC，室温反应，HPLC监控，原料Pyr-His(Trt)-Trp-Ser(Trt)-Tyr(Bzl)-D-Ser(tBu)-Leu–COOH消失，加入5％柠檬酸水溶液洗涤2次，取DCM层，再采用10％Na 2CO水溶液洗涤2次，饱和氯化钠水溶液洗涤2次，取DCM层，无水硫化钠干燥，浓缩得到白色固体物。Pyr-His(Trt)-Trp-Ser(Trt)-Tyr(Bzl)-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO 2)-Pro-NH-Azagly-CONH 2。
将上述化合物溶解在甲醇中，加入1.1倍当量的10％Pd/C，加压到10个大气压，室温反应5小时，过滤掉钯碳，反应液加入到冰冻的乙醚中，析出沉 淀。总收率约34％，HPLC 74.7％(图6)。
对比例3 戈舍瑞林粗肽的制备(液相合成)
Boc-Pro-OH和DCM搅拌溶解，加入1.2倍当量的NH 2-Azagly-CONH 2的DMF溶液，然后加入1.2倍当量的DCC，室温反应过夜，点板监控，原料Boc-Pro-OH消失，加入5％柠檬酸水溶液洗涤2次，取DCM层，再采用10％Na 2CO水溶液洗涤2次，饱和氯化钠水溶液洗涤2次，取DCM层，无水硫化钠干燥，浓缩得到白色固体物。Boc-Pro-NH-Azagly-CONH 2。
将上述固体，溶解在氯化氢的乙酸乙酯溶液中，搅拌2小时，脱除Boc，反应结束后，浓缩至干，加入DCM溶解，再采用10％Na 2CO水溶液洗涤2次，饱和氯化钠水溶液洗涤2次，取DCM层，无水硫化钠干燥，浓缩得到白色固体物。NH 2-Pro-NH-Azagly-CONH 2。
Boc-Arg(NO 2)-OH和DCM搅拌溶解，加入1.2倍当量的NH 2-Pro-NH-Azagly-CONH 2的DMF溶液，然后加入1.2倍当量的DCC，室温反应过夜，点板监控，原料Boc-Arg(NO2)-OH，加入5％柠檬酸水溶液洗涤2次，取DCM层，再采用10％Na 2CO水溶液洗涤2次，饱和氯化钠水溶液洗涤2次，取DCM层，无水硫化钠干燥，浓缩得到白色固体物。Boc-Arg(NO 2)-Pro-NH-Azagly-CONH 2。
将上述固体，溶解在氯化氢的乙酸乙酯溶液中，搅拌2小时，脱除Boc，反应结束后，浓缩至干，加入DCM溶解，再采用10％Na 2CO水溶液洗涤2次，饱和氯化钠水溶液洗涤2次，取DCM层，无水硫化钠干燥，浓缩得到白色固体物。NH 2-Arg(NO 2)-Pro-NH-Azagly-CONH 2。
按照上述偶联和脱除方法，依次液相缩合Leu、D-Ser(tBu)、Tyr(Bzl)、Ser(Trt)、Trp、His(Trt)、Pyr。得到Pyr-His(Trt)-Trp-Ser(Trt)-Tyr(Bzl)-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO 2)-Pro-NH-Azagly-CONH 2。
将上述化合物溶解在甲醇中，加入1.1倍当量的10％Pd/C，加压到10个大气压，室温反应5小时，过滤掉钯碳，反应液加入到冰冻的乙醚中，析出沉淀。总收率约19％，HPLC 62.94％(图7)。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

  1. 一种戈舍瑞林的合成方法，其特征在于，包括如下步骤：
    步骤A：将Azagly与树脂进行偶联，得到Azagly-树脂；
    步骤B：在Azagly-树脂氨基端依次偶联Pro、Arg(Alloc) 2、Leu、D-Ser(tBu)、Tyr(Trt)、Ser(Trt)、Trp、His(Mmt)、Pyr，得到Pyr-His(Mmt)-Trp-Ser(Trt)-Tyr(Trt)-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(Alloc) 2-Pro-Azagly-树脂；
    步骤C：采用含有四三苯基膦钯和吗啡啉的脱除剂对步骤B得到的肽树脂中的Arg胍基保护基Alloc进行脱除，得到Pyr-His(Mmt)-Trp-Ser(Trt)-Tyr(Trt)-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-Azagly-树脂；
    步骤D：采用裂解液对步骤C得到的肽树脂进行裂解，得到Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH 2，即戈舍瑞林。
  2. 根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述树脂为Sieber Resin树脂。
  3. 根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于，所述Sieber Resin树脂的替代度为0.5～1.0mmol/g。
  4. 根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，步骤A中所述偶联采用的偶联剂为HOAt/DIC或吡啶，步骤B中所述偶联采用的偶联剂为HOBt/DIC。
  5. 根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述四三苯基膦钯与所述吗啡啉的当量比为(0.2～0.8)：(15～25)，所述含有四三苯基膦钯和吗啡啉的脱除剂还包括溶剂DCM。
  6. 根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述裂解采用的裂解液为DCM、TFA、有机捕获剂的混合液，或者为DCM、TFA、有机捕获剂、水的混合液；所述有机捕获剂为TIS、茴香硫醚、乙二硫醇或苯甲硫醚中的一种或几种的组合物。
  7. 根据权利要求6所述的合成方法，其特征在于，DCM、TFA、有机捕获剂、水的混合液中DCM、TFA、有机捕获剂与水的体积比为(70～90)：(5～30)：(2～10)：(2～10)，DCM、TFA、有机捕获剂的混合液中DCM、TFA、有机捕 获剂的体积比为(70～90)：(5～30)：(2～10)。
  8. 根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述裂解液中，DCM：TFA：茴香硫醚：苯甲硫醚：TIS的体积比为85：10：2：1：2；或者DCM：TFA：TIS：H 2O的体积比为85：10：2.5：2.5；或者DCM：TFA：茴香硫醚：苯甲硫醚：水的体积比为85：10：2：1：2；或者DCM：TFA：茴香硫醚：苯甲硫醚：EDT的体积比为85：10：2：1：2。
  9. 根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述裂解后还包括乙醚沉淀、离心的步骤。
  10. 根据权利要求9所述的合成方法，其特征在于，所述离心后还包括将戈舍瑞林粗肽进行精制的步骤。
PCT/CN2019/080349 2018-09-20 2019-03-29 一种戈舍瑞林的合成方法 WO2020057088A1 (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811101461.2A CN110922453B (zh) 2018-09-20 2018-09-20 一种戈舍瑞林的合成方法
CN201811101461.2 2018-09-20

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2020057088A1 true WO2020057088A1 (zh) 2020-03-26

Family

ID=69855455

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/CN2019/080349 WO2020057088A1 (zh) 2018-09-20 2019-03-29 一种戈舍瑞林的合成方法

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN110922453B (zh)
WO (1) WO2020057088A1 (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114685616A (zh) * 2020-12-31 2022-07-01 哈尔滨三联药业股份有限公司 醋酸曲普瑞林的合成方法
WO2023030277A1 (zh) * 2021-08-30 2023-03-09 湖南微肽生物医药有限公司 一种全液相合成GRnH九肽酰胺类似物的方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102653555A (zh) * 2012-05-18 2012-09-05 深圳翰宇药业股份有限公司 一种固相制备戈舍瑞林的方法
CN107474108A (zh) * 2017-07-18 2017-12-15 上海太阳生物技术有限公司 Suc‑Ile‑Glu(γ‑Pip)‑Gly‑Arg‑pNA·HCl的制备方法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2154590B1 (es) * 1999-05-20 2001-11-01 Lipotec Sa Procedimiento de sintesis de peptidos en fase solida
CN104910257B (zh) * 2015-01-07 2018-04-03 苏州天马医药集团天吉生物制药有限公司 戈舍瑞林的固相合成方法
CN108034004A (zh) * 2017-12-29 2018-05-15 江苏诺泰澳赛诺生物制药股份有限公司 一种索玛鲁肽的合成方法
CN107903317A (zh) * 2017-12-29 2018-04-13 江苏诺泰澳赛诺生物制药股份有限公司 一种利拉鲁肽的合成方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102653555A (zh) * 2012-05-18 2012-09-05 深圳翰宇药业股份有限公司 一种固相制备戈舍瑞林的方法
CN107474108A (zh) * 2017-07-18 2017-12-15 上海太阳生物技术有限公司 Suc‑Ile‑Glu(γ‑Pip)‑Gly‑Arg‑pNA·HCl的制备方法

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114685616A (zh) * 2020-12-31 2022-07-01 哈尔滨三联药业股份有限公司 醋酸曲普瑞林的合成方法
CN114685616B (zh) * 2020-12-31 2024-03-29 哈尔滨三联药业股份有限公司 醋酸曲普瑞林的合成方法
WO2023030277A1 (zh) * 2021-08-30 2023-03-09 湖南微肽生物医药有限公司 一种全液相合成GRnH九肽酰胺类似物的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN110922453B (zh) 2023-12-26
CN110922453A (zh) 2020-03-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109456401B (zh) 一种索马鲁肽的合成方法
AU723268B2 (en) Improved solid-phase peptide synthesis and agent for use in such synthesis
DK2421887T3 (en) A process for the preparation of degarelix
US20080287650A1 (en) High purity peptides
CN113330024A (zh) 制备gip/glp1双重激动剂的方法
WO2011066386A1 (en) Process for production of degarelix
US20130060004A1 (en) Novel Process For The Preparation Of Leuprolide And Its Pharmaceutically Acceptable Salts Thereof
CN104371008B (zh) 片段缩合制备特利加压素的方法
WO2020057088A1 (zh) 一种戈舍瑞林的合成方法
US9150615B2 (en) Process for the preparation of leuprolide and its pharmaceutically acceptable salts
CN108383896B (zh) 一种片段法合成戈舍瑞林的方法
CN110054679B (zh) 一种合成Abaloparatide的方法
US7176282B1 (en) Solid-phase peptide synthesis and agent for use in such synthesis
CN107778355B (zh) 一种合成西曲瑞克的方法
CN113801199B (zh) 一种卡贝缩宫素的全固相合成方法
CN112876541B (zh) 一种地加瑞克的固相合成方法
CN113698458A (zh) 一种全液相合成曲普瑞林的方法
WO2020057089A1 (zh) 一种戈舍瑞林的合成方法
CN112500455A (zh) 一种多肽固液组合合成戈那瑞林的方法
CN111233980A (zh) 一种戈舍瑞林的片段法合成方法
CN112159461B (zh) 一种西曲瑞克的合成方法
CN110386964A (zh) 一种亮丙瑞林的固液合成方法
WO2017114192A1 (zh) 一种利西拉来的制备方法
Cavallaro et al. Solid‐phase synthesis of a dendritic peptide related to a retinoblastoma protein fragment utilizing a combined boc‐and fmoc‐chemistry approach
WO2009150657A1 (en) Improved process for preparation of eptifibatide by fmoc solid phase synthesis

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 19862333

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 19862333

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1