CN114685616A - 醋酸曲普瑞林的合成方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了醋酸曲普瑞林的合成方法，包括，(1)在树脂上按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护十肽树脂；(2)在裂解液作用下将曲普瑞林从树脂上切割得到曲普瑞林的粗品料液；(3)析出粗品进行料液分离后干燥得到醋酸曲普瑞林粗品。本发明在裂解液中加入了二价金属盐作为电子捕捉辅助剂，大幅提高了裂解过程中的电子捕捉效率，进而提高整个裂解后多肽粗品的收率与纯度；在加入电子捕捉剂辅助剂的情况下，对比不加入的情况，很好的缩短多肽裂解的时间，减少多肽在裂解过程中杂质的生产，裂解后粗品的纯度达到95％以上。电子捕捉剂助剂用量很少，催化剂量即可达到很好的裂解效果，回收后可以反复套用，成本低廉。
Description
技术领域
本发明涉及多肽的合成方法，尤其涉及醋酸曲普瑞林的合成方法，属于醋酸曲普瑞林的合成领域。
背景技术
曲普瑞林是一种促性腺素释放素激动剂，是由10个氨基酸组成的多肽，其序列为：pGlu-His-L-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2。
多肽合成方法一般分为液相合成与固相合成两大类，这其中液相合成由于周期长、后处理繁琐、总收率偏低等原因目前已经很少应用在多肽合成领域。而固相合成由于操作简单，在简单反应器皿中即可完成，避免了液相合成中冗长的结晶与分离过程，因此得到了更为广泛的应用。
在现有技术中，在多肽在固相合成完成后的裂解是一个多肽合成的关键步骤，简单可以概况如下：
将固相合成后的多肽从树脂上分离并去掉多肽侧链和主链多余的临时保护基团。大致流程如下：
1)准备树脂:这里只需要树脂里面的溶剂成分被洗涤掉并充分干燥树脂，理想状态是：像干燥的沙子一样，不容易占到其它物体的表面，例如瓶子或者纸。
2).切割液的选择和配置:这里常用的组合很多，针对不同的多肽序列，选择不同的切割液种类。
这里主要列几种常见的切割液比例。
①TFA：H2O＝95％：5％、TFA：H2O＝97.5％：2.5％；
②TFA：H2O：TIS＝95％：2.5％：2.5％；
③三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水＝87.5：5：2.5：2.5：2.5等。
3).裂解过程:常规的时间在2.5小时左右，要不停地震荡，温度为室温。
一些非常容易氧化或者变质的多肽，还需要排除容器里面的空气(用氮气代替)，有时还需要适当降低环境的温度，例如控制环境的温度0-10℃。
4).抽料：收集滤液，此时的滤液里面含有被切割下来的多肽和一部分侧链保护基团。一些不溶于TFA的保护基团，例如Pbf，是一种白色漂浮物，同树脂一起被过滤掉了。
5).沉淀、离心、洗涤:沉淀用的是冰乙醚，这里的冰字是要求乙醚的温度要很低，例如放置在-20℃的冰箱里面。当然使用常温的乙醚，也是可以的。离心使用的是能达到3000转每分钟的离心机，离心后将上清液弃去，剩余物反复洗涤后，出料真空干燥后即可得到多肽粗品。
从上述整个实验过程中可以看出，整个操作的核心过程在于裂解过程，因此裂解液的配置与反应是成败的关键。
常用的裂解液包括如下组分：1).强酸：三氟乙酸等。2).含硫化合物。3).电子捕捉剂。不同组分之间作用各不相同。强酸是多肽裂解的必要条件，否则无法达到多肽从树脂上切割的目的。采用含硫化合物是为了缩短吸电子保护基的脱去时间。而在裂解过程中电子捕捉剂的作用是中和多肽裂解过程中产生的正负离子，是一个电子与多肽正离子静电场相互作用的过程，这其中前二者是配比相对固定，而电子捕捉剂的选择与应用则是灵活多变，选择合适的电子捕捉剂及其配比能够大幅的提高整个裂解的时间与效果，裂解后的多肽粗品的收率也能够大幅提高。
目前常用的电子捕捉剂三异丙基硅烷(TIS)、苯酚等，这些电子捕捉剂在用于醋酸曲普瑞林的裂解时，存在裂解时间长以及经过裂解后的多肽粗品的收率低等缺陷，有待改进。
发明内容
本发明的主要目的是提供一种醋酸曲普瑞林的合成方法，该合成方法具有裂解时间短，裂解后的醋酸曲普瑞林粗品收率高等优点；
本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：
一种醋酸曲普瑞林的合成方法，包括，(1)在树脂上按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护十肽树脂H-L-Pyr-His(Tyt)-Trp-L-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂，其间依次脱去Fmoc-保护基，同步进行脱侧链保护基团；(2)在裂解液作用下将曲普瑞林从树脂上切割得到曲普瑞林的粗品料液；(3)析出粗品曲普瑞林，进行料液分离后，干燥得到醋酸曲普瑞林粗品。
其中，所述的树脂优选为Rink Admin-MBHA树脂或Rink Amide AM树脂。
其中，步骤(1)中在进行固相合成时采用的肽偶联剂选自DCC、DIC或EDCI中的任何一种或一种以上按照任意比例组成的混合物。
步骤(1)中在进行固相合成时采用的酰胺键形成促进剂选自HOAT、HOBT、6-Cl-HOBT中的任何一种或一种以上按照任意比例组成的混合物。
步骤(2)中所述的裂解液由强酸、含硫化合物、电子捕捉剂、电子捕捉剂助剂和水组成；其中，所述的强酸优选为三氟乙酸，所述的含硫化合物选自1,2-乙二硫醇、苯甲硫醚、苯酚、1,2-乙二硫醇或苯甲硫醚中的任何一种。
所述的电子捕捉剂优选为三异丙基硅烷。
所述的电子捕捉剂助剂为二价过渡金属离子，优选为金属二价氯化物盐或金属二价硫酸盐，最优选为ZnCl2、FeCl2、MgCl2、CuCl2·2H2O或MnCl2中的任何一种或一种以上按照任意比例组成的混合物。
其中，裂解液中的强酸与多肽连接完毕的肽树脂质量比优选为(0.010～0.015):1。
裂解液中的电子捕捉剂与多肽连接完毕的肽树脂质量比优选为(0.10～0.2):1。
为了实现更好的裂解效果，在裂解液中强酸、含硫化合物、电子捕捉剂、电子捕捉剂助剂和水的质量比优选为0.9：(28-30)：10：(0.4-0.6)：26。
步骤(3)中在离心机的作用下进行料液分离；所述的干燥优选为真空干燥。
本发明在裂解液中加入了二价金属盐作为电子捕捉辅助剂大幅度提高了裂解过程中的电子捕捉效率，进而提高整个裂解后多肽粗品的收率与纯度；与不加入该辅助剂做对比，多肽粗品的纯度有收率都有了显著的提升。在加入电子捕捉剂辅助剂的情况下，对比不加入的情况，可以很好的缩短多肽裂解的时间，减少多肽在裂解过程中杂质的生产，使得裂解后粗品的纯度可以达到95％以上，远高于现在文献报道的平均水平。该电子捕捉剂的辅助剂用量很少，催化剂量即可达到很好的裂解效果，并且回收后可以反复套用，成本低廉。
本发明涉及的缩略术语
DMF：N,N-二甲基甲酰胺。
DCC：二环己基碳二亚胺。
DIC：N,N'-二异丙基碳二亚胺。
EDCI：1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐。
HOAT：1-羟基-7-氮杂苯并三氮唑。
HOBT：1-羟基苯并三氮唑。
6-Cl-HOBT：6-氯-1-羟基苯并三氮唑。
附图说明
图1醋酸曲普瑞林质谱检测图。
图2实施例1合成的醋酸曲普瑞林的高效液相检测图。
图3实施例2合成的醋酸曲普瑞林的高效液相检测图。
图4实施例3合成的醋酸曲普瑞林的高效液相检测图。
图5实施例4合成的醋酸曲普瑞林的高效液相检测图。
图6实施例5合成的醋酸曲普瑞林的高效液相检测图。
图7实施例6合成的醋酸曲普瑞林的高效液相检测图。
图8对比实施例合成的醋酸曲普瑞林的高效液相检测图。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但是应理解所述实施例仅是范例性的，不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改或替换均落入本发明的保护范围。
多肽茚检液的配置：
苯酚的无水乙醇溶液配制：向棕色胶头滴瓶中加入20.00g苯酚；再加入19.73g无水乙醇，摇匀，备用。
吡啶的无水乙醇溶液配制：向棕色胶头滴瓶中加入48.12g吡啶；再加入0.79g无水乙醇，摇匀，备用。
苯骈戊三酮(茚三酮)的无水乙醇溶液配制：向棕色胶头滴瓶中加入1.00g苯骈戊三酮(茚三酮)；再加入15.01g无水乙醇，摇匀，备用。
茚检液比例：苯酚的无水乙醇溶液：吡啶的无水乙醇溶液：茚三酮的无水乙醇溶液＝100ul(2滴)：200ul(4滴)：100ul(2滴)。
茚检方法及茚检合格标准：
茚检方法：从固相合成仪中取少量树脂(约100-200粒)移入试管，向试管中按比例加入茚检液，放到油浴锅中加热至90～110℃，持续2～3min。
茚检合格标准：脱保护后颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色；连接氨基酸后颜色应为淡黄色或无色。
实施例1醋酸曲普瑞林粗品的合成
操作1：树脂溶胀：将30g的Rink Admin-MBHA树脂加入固相合成仪中，在吹入氮气的情况下，再向固相合成仪中加入300ml的N,N-二甲基甲酰胺，搅拌溶胀1h，内温控制在20～30℃。
操作2：树脂溶胀结束后，过滤除去有机溶剂，随后在固相合成仪中加入配置好的脱保护溶液，搅拌反应30分钟，随后将脱保护液抽干，用200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
2.1 Fmoc-Gly-树脂的制备
向反应瓶中加入17.84g的Fmoc-GLY-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入7.52g的N,N,-二异丙基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在25～30℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.2 Fmoc-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向烧瓶中加入21.32g的Fmoc-L-Pro-OH·H2O、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的N,N-二甲基甲酰胺，搅拌溶解，向其中加入7.52g的N,N,-二异丙基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在25～30℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.3 Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入38.93g的Fmoc-Arg(pbf)-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入7.52g的N,N,-二异丙基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.4 Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入21.20g的Fmoc-Leu-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入7.52g的N,N,-二异丙基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.5 Fmoc-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入25.59g的Fmoc-Leu-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入7.52g的N,N,-二异丙基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.6 Fmoc-Tyr(uBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入27.57g的Fmoc-Tyr(tBu)-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入7.52g的N,N,-二异丙基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.7 Fmoc-L-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入23.00g的Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入7.52g的N,N,-二异丙基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.8 Fmoc-Trp-L-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入25.59g的Fmoc-Trp-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入7.52g的N,N,-二异丙基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.9 Fmoc-His(Tyt)-Trp-L-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入37.18g的Fmoc-His(Trt)-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入7.52g的N,N,-二异丙基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.10 H-L-Pyr-His(Tyt)-Trp-L-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入7.75g的H-L-Pyr-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入7.52g的N,N,-二异丙基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
所有氨基酸连接完成后，向固相合成仪中加入500ml的无水乙醇分两次对树脂进行洗涤，每次洗涤过程2分钟，再用500ml的二氯甲烷分两次对树脂进行洗涤，每次洗涤过程2分钟，抽干。
将抽干后的树脂放入真空干燥箱中，控制真空度0.09～0.1MPa，28～32℃真空干燥至恒重后，收料，称重，得肽树脂65g。
操作3：裂解液配制：称取0.90g的三氟乙酸、30g的1,2-乙二硫醇、26g的纯化水、10g的三异丙基硅烷、0.5g的ZnCl2加入反应瓶，搅拌均匀备用。
3.1将操作2得到的肽树脂缓慢倒入至反应瓶中，控制温度为20～30℃，搅拌2小时。
3.2裂解结束后过滤除去树脂，用100ml的三氟乙酸淋洗树脂，合并滤液。
3.3将滤液加入至旋蒸蒸发仪中，控制水浴的温度在30～35℃，将滤液的体积浓缩至总体积的1/2到1/3。
3.4将浓缩后的裂解液重新导入反应瓶中，向其中加入400ml的冰乙醚，开启搅拌，在0～5℃下搅拌10分钟，停止搅拌，备用。
3.5将裂解液装入离心瓶中，以3000转/分进行离心分离5分钟，离心后将上清液倾倒，随后重复上述操作两次。
3.6将装有产品的离心瓶放入真空干燥箱中，控制真空度0.09～0.1MPa；控制温度28～32℃真空干燥1h，将产品从离心瓶取出、碾碎，控制温度28～32℃继续干燥至恒重，收料，称重，得醋酸曲普瑞林粗品23.47g，收率97.12％，纯度96.01％。图2是本实施例制备的醋酸曲普瑞林粗品的高效液相检测图，表1是液相检测积分结果。
表1实施例1制备的醋酸曲普瑞林粗品的液相检测积分结果
实施例2醋酸曲普瑞林粗品的合成
操作1：树脂溶胀：将30g的Rink Amide AM树脂加入固相合成仪中，在吹入氮气的情况下，再向固相合成仪中加入300ml的N,N-二甲基甲酰胺，搅拌溶胀1h，内温控制在20～30℃。
操作2：树脂溶胀结束后，过滤除去有机溶剂，随后在固相合成仪中加入配置好的脱保护溶液，搅拌反应30分钟，随后将脱保护液抽干，用200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
2.1Fmoc-Gly-树脂的制备
向反应瓶中加入17.84g的Fmoc-GLY-OH、10.81g的1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入12.30g的二环己基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在25～30℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.2 Fmoc-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向烧瓶中加入21.32g的Fmoc-L-Pro-OH·H2O、10.81g的1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入12.30g的二环己基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在25～30℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.3 Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入38.93g的Fmoc-Arg(pbf)-OH、10.81g的1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入12.30g的二环己基碳二亚胺，，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.4 Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入21.20g的Fmoc-Leu-OH、10.81g的1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入12.30g的二环己基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.5 Fmoc-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入25.59g的Fmoc-Leu-OH、10.81g的1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入12.30g的二环己基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.6 Fmoc-Tyr(uBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入27.57g的Fmoc-Tyr(tBu)-OH、10.81g的1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入12.30g的二环己基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.7 Fmoc-L-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入23.00g的Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、10.81g的1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入12.30g的二环己基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.8 Fmoc-Trp-L-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入25.59g的Fmoc-Trp-OH、10.81g的1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入12.30g的二环己基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.9 Fmoc-His(Tyt)-Trp-L-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入37.18g的Fmoc-His(Trt)-OH、10.81g的1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入12.30g的二环己基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.10 H-L-Pyr-His(Tyt)-Trp-L-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入7.75g的H-L-Pyr-OH、10.81g的1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入12.30g的二环己基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
所有氨基酸连接完成后，向固相合成仪中加入500ml的无水乙醇分两次对树脂进行洗涤，每次洗涤过程2分钟，再用500ml的二氯甲烷分两次对树脂进行洗涤，每次洗涤过程2分钟，抽干。
将抽干后的树脂放入真空干燥箱中，控制真空度0.09～0.1MPa，28～32℃真空干燥至恒重后，收料，称重，得肽树脂65g。
操作3：裂解液配制：称取0.90g的三氟乙酸、28g的苯甲硫醚、26g的纯化水、10g的三异丙基硅烷、0.6g的FeCl2加入反应瓶，搅拌均匀备用。
3.1将操作2得到的肽树脂缓慢倒入至反应瓶中，控制温度为20～30℃，搅拌2小时。
3.2裂解结束后过滤除去树脂，用100ml的三氟乙酸淋洗树脂，合并滤液。
3.3将滤液加入至旋蒸蒸发仪中，控制水浴的温度在30～35℃，将滤液的体积浓缩至总体积的1/2到1/3。
3.4将浓缩后的裂解液重新导入反应瓶中，向其中加入400ml的冰乙醚，开启搅拌，在0～5℃下搅拌10分钟，停止搅拌，备用。
3.5将裂解液装入离心瓶中，以3000转/分进行离心分离5分钟，离心后将上清液倾倒，随后重复上述操作两次。
3.6将装有产品的离心瓶放入真空干燥箱中，控制真空度0.09～0.1MPa；控制温度28～32℃真空干燥1h，将产品从离心瓶取出、碾碎，控制温度28～32℃继续干燥至恒重，收料，称重，得醋酸曲普瑞林粗品23.39g，收率96.88％，纯度95.97％。图3是本实施例制备的醋酸曲普瑞林粗品的高效液相检测图，表2是液相检测积分结果
表2实施例2制备的醋酸曲普瑞林粗品的液相检测积分结果
实施例3醋酸曲普瑞林粗品的合成
操作1：树脂溶胀：将30g的Rink Admin-MBHA树脂加入固相合成仪中，在吹入氮气的情况下，再向固相合成仪中加入300ml的N,N-二甲基甲酰胺，搅拌溶胀1h，内温控制在20～30℃。
操作2：树脂溶胀结束后，过滤除去有机溶剂，随后在固相合成仪中加入配置好的脱保护溶液，搅拌反应30分钟，随后将脱保护液抽干，用200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
2.1 Fmoc-Gly-树脂的制备
向反应瓶中加入17.84g的Fmoc-GLY-OH、10.96g的N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑，300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入11.42g的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在25～30℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.2 Fmoc-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向烧瓶中加入21.32g的Fmoc-L-Pro-OH·H2O、10.96g的N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑，300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入11.42g的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在25～30℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.3 Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入38.93g的Fmoc-Arg(pbf)-OH、10.96g的N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑，300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入11.42g的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.4 Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入21.20g的Fmoc-Leu-OH、10.96g的N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑，300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入11.42g的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.5 Fmoc-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入25.59g的Fmoc-Leu-OH、10.96g的N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑，300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入11.42g的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.6 Fmoc-Tyr(uBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入27.57g的Fmoc-Tyr(tBu)-OH、10.96g的N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑，300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入11.42g的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.7 Fmoc-L-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入23.00g的Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、10.96g的N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑，300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入11.42g的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.8 Fmoc-Trp-L-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入25.59g的Fmoc-Trp-OH、10.96g的N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑，300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入11.42g的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.9 Fmoc-His(Tyt)-Trp-L-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入37.18g的Fmoc-His(Trt)-OH、10.96g的N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑，300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入11.42g的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.10 H-L-Pyr-His(Tyt)-Trp-L-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入7.75g的H-L-Pyr-OH、10.96g的N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑，300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入11.42g的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
所有氨基酸连接完成后，向固相合成仪中加入500ml的无水乙醇分两次对树脂进行洗涤，每次洗涤过程2分钟，再用500ml的二氯甲烷分两次对树脂进行洗涤，每次洗涤过程2分钟，抽干。
将抽干后的树脂放入真空干燥箱中，控制真空度0.09～0.1MPa，28～32℃真空干燥至恒重后，收料，称重，得肽树脂65g。
操作3：裂解液配制：称取0.90g的三氟乙酸、30g的苯酚、26g的纯化水、10g的三异丙基硅烷、0.4g的MgCl2加入反应瓶，搅拌均匀备用。
3.1将操作2得到的肽树脂缓慢倒入至反应瓶中，控制温度为20～30℃，搅拌2小时。
3.2裂解结束后过滤除去树脂，用100ml的三氟乙酸淋洗树脂，合并滤液。
3.3将滤液加入至旋蒸蒸发仪中，控制水浴的温度在30～35℃，将滤液的体积浓缩至总体积的1/2到1/3。
3.4将浓缩后的裂解液重新导入反应瓶中，向其中加入400ml的冰乙醚，开启搅拌，在0～5℃下搅拌10分钟，停止搅拌，备用。
3.5将裂解液装入离心瓶中，以3000转/分进行离心分离5分钟，离心后将上清液倾倒，随后重复上述操作两次。
3.6将装有产品的离心瓶放入真空干燥箱中，控制真空度0.09～0.1MPa；控制温度28～32℃真空干燥1h，将产品从离心瓶取出、碾碎，控制温度28～32℃继续干燥至恒重，收料，称重，得醋酸曲普瑞林粗品23.05g，收率95.45％，纯度95.69％。图4是本实施例制备的醋酸曲普瑞林粗品的高效液相检测图，表3是液相检测积分结果。
表3实施例3制备的醋酸曲普瑞林粗品的液相检测积分结果
实施例4醋酸曲普瑞林粗品的合成
操作1：
树脂溶胀：将30g的Rink Amide AM树脂加入固相合成仪中，在吹入氮气的情况下，再向固相合成仪中加入300ml的N,N-二甲基甲酰胺，搅拌溶胀1h，内温控制在20～30℃。
操作2：
树脂溶胀结束后，过滤除去有机溶剂，随后在固相合成仪中加入配置好的脱保护溶液，搅拌反应30分钟，随后将脱保护液抽干，用200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
2.1 Fmoc-Gly-树脂的制备
向反应瓶中加入17.84g的Fmoc-GLY-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入12.30g的二环己基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在25～30℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.2 Fmoc-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向烧瓶中加入21.32g的Fmoc-L-Pro-OH·H2O、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的N,N-二甲基甲酰胺，搅拌溶解，向其中加入12.30g的二环己基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在25～30℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.3 Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入38.93g的Fmoc-Arg(pbf)-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入12.30g的二环己基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.4 Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入21.20g的Fmoc-Leu-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入7.52g的12.30g的二环己基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.5 Fmoc-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入25.59g的Fmoc-Leu-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入12.30g的二环己基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.6 Fmoc-Tyr(uBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入27.57g的Fmoc-Tyr(tBu)-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入12.30g的二环己基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.7 Fmoc-L-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入23.00g的Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入12.30g的二环己基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.8 Fmoc-Trp-L-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入25.59g的Fmoc-Trp-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入12.30g的二环己基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.9 Fmoc-His(Tyt)-Trp-L-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入37.18g的Fmoc-His(Trt)-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入12.30g的二环己基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.10 H-L-Pyr-His(Tyt)-Trp-L-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入7.75g的H-L-Pyr-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入12.30g的二环己基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
所有氨基酸连接完成后，向固相合成仪中加入500ml的无水乙醇分两次对树脂进行洗涤，每次洗涤过程2分钟，再用500ml的二氯甲烷分两次对树脂进行洗涤，每次洗涤过程2分钟，抽干。
将抽干后的树脂放入真空干燥箱中，控制真空度0.09～0.1MPa，28～32℃真空干燥至恒重后，收料，称重，得肽树脂65g。
操作3：裂解液配制：称取0.90g的三氟乙酸、30g的1,2-乙二硫醇、26g的纯化水、10g的三异丙基硅烷、0.5g的CuCl2·2H2O加入反应瓶，搅拌均匀备用。
3.1将操作2得到的肽树脂缓慢倒入至反应瓶中，控制温度为20～30℃，搅拌2小时。
3.2裂解结束后过滤除去树脂，用100ml的三氟乙酸淋洗树脂，合并滤液。
3.3将滤液加入至旋蒸蒸发仪中，控制水浴的温度在30～35℃，将滤液的体积浓缩至总体积的1/2到1/3。
3.4将浓缩后的裂解液重新导入反应瓶中，向其中加入400ml的冰乙醚，开启搅拌，在0～5℃下搅拌10分钟，停止搅拌，备用。
3.5将裂解液装入离心瓶中，以3000转/分进行离心分离5分钟，离心后将上清液倾倒，随后重复上述操作两次。
3.6将装有产品的离心瓶放入真空干燥箱中，控制真空度0.09～0.1MPa；控制温度28～32℃真空干燥1h，将产品从离心瓶取出、碾碎，控制温度28～32℃继续干燥至恒重，收料，称重，得醋酸曲普瑞林粗品23.24g，收率96.24％，纯度95.85％。图5是本实施例制备的醋酸曲普瑞林粗品的高效液相检测图，表4是液相检测积分结果。
表4实施例4制备的醋酸曲普瑞林粗品的液相检测积分结果
实施例5醋酸曲普瑞林粗品的合成
操作1：树脂溶胀：将30g的Rink Admin-MBHA树脂加入固相合成仪中，在吹入氮气的情况下，再向固相合成仪中加入300ml的N,N-二甲基甲酰胺，搅拌溶胀1h，内温控制在20～30℃。
操作2：树脂溶胀结束后，过滤除去有机溶剂，随后在固相合成仪中加入配置好的脱保护溶液，搅拌反应30分钟，随后将脱保护液抽干，用200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
2.1 Fmoc-Gly-树脂的制备
向反应瓶中加入17.84g的Fmoc-GLY-OH、10.81g的1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入11.42g的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在25～30℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.2 Fmoc-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向烧瓶中加入21.32g的Fmoc-L-Pro-OH·H2O、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的N,N-二甲基甲酰胺，搅拌溶解，向其中加入11.42g的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在25～30℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.3 Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入38.93g的Fmoc-Arg(pbf)-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入11.42g的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.4 Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入21.20g的Fmoc-Leu-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入7.52g的N,N,-二异丙基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.5 Fmoc-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入25.59g的Fmoc-Leu-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入11.42g的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.6 Fmoc-Tyr(uBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入27.57g的Fmoc-Tyr(tBu)-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入11.42g的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.7 Fmoc-L-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入23.00g的Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入11.42g的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.8 Fmoc-Trp-L-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入25.59g的Fmoc-Trp-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入11.42g的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.9 Fmoc-His(Tyt)-Trp-L-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入37.18g的Fmoc-His(Trt)-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入11.42g的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.10 H-L-Pyr-His(Tyt)-Trp-L-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入7.75g的H-L-Pyr-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入11.42g的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
所有氨基酸连接完成后，向固相合成仪中加入500ml的无水乙醇分两次对树脂进行洗涤，每次洗涤过程2分钟，再用500ml的二氯甲烷分两次对树脂进行洗涤，每次洗涤过程2分钟，抽干。
将抽干后的树脂放入真空干燥箱中，控制真空度0.09～0.1MPa，28～32℃真空干燥至恒重后，收料，称重，得肽树脂65g。
操作3：裂解液配制：称取0.90g的三氟乙酸、30g的苯酚、26g的纯化水、10g的三异丙基硅烷、0.5g的MnCl2加入反应瓶，搅拌均匀备用。
3.1将操作2得到的肽树脂缓慢倒入至反应瓶中，控制温度为20～30℃，搅拌2小时。
3.2裂解结束后过滤除去树脂，用100ml的三氟乙酸淋洗树脂，合并滤液。
3.3将滤液加入至旋蒸蒸发仪中，控制水浴的温度在30～35℃，将滤液的体积浓缩至总体积的1/2到1/3。
3.4将浓缩后的裂解液重新导入反应瓶中，向其中加入400ml的冰乙醚，开启搅拌，在0～5℃下搅拌10分钟，停止搅拌，备用。
3.5将裂解液装入离心瓶中，以3000转/分进行离心分离5分钟，离心后将上清液倾倒，随后重复上述操作两次。
3.6将装有产品的离心瓶放入真空干燥箱中，控制真空度0.09～0.1MPa；控制温度28～32℃真空干燥1h，将产品从离心瓶取出、碾碎，控制温度28～32℃继续干燥至恒重，收料，称重，得醋酸曲普瑞林粗品23.26g，收率96.33％，纯度96.15％。图6是本实施例制备的醋酸曲普瑞林粗品的高效液相检测图，表5是液相检测积分结果。
表5实施例5制备的醋酸曲普瑞林粗品的液相检测积分结果
实施例6醋酸曲普瑞林粗品的合成
操作1：树脂溶胀：将30g的Rink Admin-MBHA树脂加入固相合成仪中，在吹入氮气的情况下，再向固相合成仪中加入300ml的N,N-二甲基甲酰胺，搅拌溶胀1h，内温控制在20～30℃。
操作2：树脂溶胀结束后，过滤除去有机溶剂，随后在固相合成仪中加入配置好的脱保护溶液，搅拌反应30分钟，随后将脱保护液抽干，用200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
2.1 Fmoc-Gly-树脂的制备
向反应瓶中加入17.84g的Fmoc-GLY-OH、10.96g的N-羟基-7-氨杂苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入7.52g的N,N-二异丙基二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在25～30℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.2 Fmoc-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向烧瓶中加入21.32g的Fmoc-L-Pro-OH·H2O、10.96g的N-羟基-7-氨杂苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入7.52g的N,N-二异丙基二亚胺，搅拌溶解，向其中加入12.30g的二环己基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在25～30℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.3 Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入38.93g的Fmoc-Arg(pbf)-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入12.30g的二环己基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.4 Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入21.20g的Fmoc-Leu-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入12.30g的二环己基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.5 Fmoc-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入25.59g的Fmoc-Leu-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入12.30g的二环己基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.6 Fmoc-Tyr(uBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入27.57g的Fmoc-Tyr(tBu)-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入12.30g的二环己基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.7 Fmoc-L-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入23.00g的Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入12.30g的二环己基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.8 Fmoc-Trp-L-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入25.59g的Fmoc-Trp-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入12.30g的二环己基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.9 Fmoc-His(Tyt)-Trp-L-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入37.18g的Fmoc-His(Trt)-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入12.30g的二环己基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.10 H-L-Pyr-His(Tyt)-Trp-L-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入7.75g的H-L-Pyr-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入12.30g的二环己基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
所有氨基酸连接完成后，向固相合成仪中加入500ml的无水乙醇分两次对树脂进行洗涤，每次洗涤过程2分钟，再用500ml的二氯甲烷分两次对树脂进行洗涤，每次洗涤过程2分钟，抽干。
将抽干后的树脂放入真空干燥箱中，控制真空度0.09～0.1MPa，28～32℃真空干燥至恒重后，收料，称重，得肽树脂65g。
操作3：裂解液配制：称取0.90g的三氟乙酸、30g的苯甲硫醚、26g的纯化水、10g的三异丙基硅烷、0.5g的ZnCl2加入反应瓶，搅拌均匀备用。
3.1将操作2得到的肽树脂缓慢倒入至反应瓶中，控制温度为20～30℃，搅拌2小时。
3.2裂解结束后过滤除去树脂，用100ml的三氟乙酸淋洗树脂，合并滤液。
3.3将滤液加入至旋蒸蒸发仪中，控制水浴的温度在30～35℃，将滤液的体积浓缩至总体积的1/2到1/3。
3.4将浓缩后的裂解液重新导入反应瓶中，向其中加入400ml的冰乙醚，开启搅拌，在0～5℃下搅拌10分钟，停止搅拌，备用。
3.5将裂解液装入离心瓶中，以3000转/分进行离心分离5分钟，离心后将上清液倾倒，随后重复上述操作两次。
3.6将装有产品的离心瓶放入真空干燥箱中，控制真空度0.09～0.1MPa；控制温度28～32℃真空干燥1h，将产品从离心瓶取出、碾碎，控制温度28～32℃继续干燥至恒重，收料，称重，得醋酸曲普瑞林粗品23.13g，收率95.78％，纯度95.82％。图7是本实施例制备的醋酸曲普瑞林粗品的高效液相检测图，表6是液相检测积分结果。
表6实施例6制备的醋酸曲普瑞林粗品的液相检测积分结果
对比实施例1醋酸曲普瑞林粗品的合成(不加入电子捕捉剂辅助剂)
操作1：树脂溶胀：将30g的Rink Admin-MBHA树脂加入固相合成仪中，在吹入氮气的情况下，再向固相合成仪中加入300ml的N,N-二甲基甲酰胺，搅拌溶胀1h，内温控制在20～30℃。
操作2：树脂溶胀结束后，过滤除去有机溶剂，随后在固相合成仪中加入配置好的脱保护溶液，搅拌反应30分钟，随后将脱保护液抽干，用200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
2.1 Fmoc-Gly-树脂的制备
向反应瓶中加入17.84g的Fmoc-GLY-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入7.52g的N,N,-二异丙基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在25～30℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.2 Fmoc-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向烧瓶中加入21.32g的Fmoc-L-Pro-OH·H2O、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的N,N-二甲基甲酰胺，搅拌溶解，向其中加入7.52g的N,N,-二异丙基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在25～30℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.3 Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入38.93g的Fmoc-Arg(pbf)-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入7.52g的N,N,-二异丙基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.4 Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入21.20g的Fmoc-Leu-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入7.52g的N,N,-二异丙基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.5 Fmoc-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入25.59g的Fmoc-Leu-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入7.52g的N,N,-二异丙基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.6 Fmoc-Tyr(uBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入27.57g的Fmoc-Tyr(tBu)-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入7.52g的N,N,-二异丙基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.7 Fmoc-L-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入23.00g的Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入7.52g的N,N,-二异丙基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.8 Fmoc-Trp-L-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入25.59g的Fmoc-Trp-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入7.52g的N,N,-二异丙基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.9 Fmoc-His(Tyt)-Trp-L-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入37.18g的Fmoc-His(Trt)-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入7.52g的N,N,-二异丙基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
2.10 H-L-Pyr-His(Tyt)-Trp-L-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂的制备
在固相合成仪中吹氮气的情况下加入按操作1配置的脱保护液，温度控制在25～30℃，搅拌反应30分钟。随后将脱保护液抽干，向固相合成仪中共加入200ml的二氯甲烷分三次对树脂进行洗涤，每次洗涤2分钟，抽干后再加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分三次对树脂进行洗涤，抽干后取树脂茚检，颜色应为棕色、红棕色、墨绿色、蓝绿色等深颜色，若不合格则重复上述操作。
向反应瓶中加入7.75g的H-L-Pyr-OH、13.57g的6-氯-1-羟基苯并三氮唑、300ml的DMF，搅拌溶解，向其中加入7.52g的N,N,-二异丙基碳二亚胺，控制温度5～15℃，搅拌30min以上，料液转移至固相合成仪中在吹入氮气的情形下与树脂进行搅拌混合反应，控制温度在23～32℃，搅拌反应1h，随后将固相合成仪中的溶液抽干，加入200ml的N,N-二甲基甲酰胺分四次对树脂进行洗涤，每次搅拌2分钟，最终抽干，除少量树脂茚检，颜色应为无色或淡黄色，若不合格则重复操作上述操作。
所有氨基酸连接完成后，向固相合成仪中加入500ml的无水乙醇分两次对树脂进行洗涤，每次洗涤过程2分钟，再用500ml的二氯甲烷分两次对树脂进行洗涤，每次洗涤过程2分钟，抽干。
将抽干后的树脂放入真空干燥箱中，控制真空度0.09～0.1MPa，28～32℃真空干燥至恒重后，收料，称重，得肽树脂65g。
操作3：裂解液配制：称取0.90g的三氟乙酸、30g的1,2-乙二硫醇、26g的纯化水、10g的三异丙基硅烷加入反应瓶，搅拌均匀备用。
3.1将操作2得到的肽树脂缓慢倒入至反应瓶中，控制温度为20～30℃，搅拌2小时。
3.2裂解结束后过滤除去树脂，用100ml的三氟乙酸淋洗树脂，合并滤液。
3.3将滤液加入至旋蒸蒸发仪中，控制水浴的温度在30～35℃，将滤液的体积浓缩至总体积的1/2到1/3。
3.4将浓缩后的裂解液重新导入反应瓶中，向其中加入400ml的冰乙醚，开启搅拌，在0～5℃下搅拌10分钟，停止搅拌，备用。
3.5将裂解液装入离心瓶中，以3000转/分进行离心分离5分钟，离心后将上清液倾倒，随后重复上述操作两次。
3.6将装有产品的离心瓶放入真空干燥箱中，控制真空度0.09～0.1MPa；控制温度28～32℃真空干燥1h，将产品从离心瓶取出、碾碎，控制温度28～32℃继续干燥至恒重，收料，称重，得醋酸曲普瑞林粗品21.69g，收率89.83％，纯度90.32％。图8是本对比实施例制备的醋酸曲普瑞林粗品的高效液相检测图，表7是液相检测积分结果。
表7对比实施例制备的醋酸曲普瑞林粗品的液相检测积分结果
Claims (10)
1.一种醋酸曲普瑞林的合成方法，其特征在于，包括，(1)在树脂上按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护十肽树脂H-L-Pyr Fmoc-His(Tyt)-Trp-L-Ser(tBu)–Tyr(tBu)-D-Trp-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-树脂，其间依次脱去Fmoc-保护基，同步进行脱侧链保护基团；(2)在裂解液作用下将曲普瑞林从树脂上切割得到曲普瑞林的粗品料液；(3)析出粗品曲普瑞林，进行料液分离后干燥得到醋酸曲普瑞林粗品。
2.按照权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述的树脂为Rink Admin-MBHA树脂或Rink Amide AM树脂。
3.按照权利要求1所述的合成方法，其特征在于，步骤(1)中在进行固相合成时采用的肽偶联剂选自DCC、DIC或EDCI中的任何一种或一种以上按照任意比例组成的混合物。
4.按照权利要求1所述的合成方法，其特征在于，步骤(1)中在进行固相合成时采用的酰胺键形成促进剂选自HOAT、HOBT、6-Cl-HOBT中的任何一种或一种以上按照任意比例组成的混合物。
5.按照权利要求1所述的合成方法，其特征在于，步骤(2)中所述的裂解液由强酸、含硫化合物、电子捕捉剂、电子捕捉剂助剂和水组成；其中，所述的电子捕捉剂助剂为二价过渡金属离子。
6.按照权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述二价过渡金属离子为金属二价氯化物盐或金属二价硫酸盐；优选为ZnCl2、FeCl2、MgCl2、CuCl2·2H2O或MnCl2中的任何一种或一种以上按照任意比例组成的混合物。
7.按照权利要求5所述的合成方法，其特征在于，所述的强酸为三氟乙酸；，所述的含硫化合物选自1,2-乙二硫醇、苯甲硫醚、苯酚、1,2-乙二硫醇或苯甲硫醚中的任何一种；所述的电子捕捉剂优选为三异丙基硅烷。
8.按照权利要求5所述的合成方法，其特征在于，其中，裂解液中的强酸与多肽连接完毕的肽树脂质量比优选为(0.010～0.015):1；裂解液中的电子捕捉剂与多肽连接完毕的肽树脂质量比优选为(0.10～0.2):1。
9.按照权利要求5所述的合成方法，其特征在于，在裂解液中强酸、含硫化合物、电子捕捉剂、电子捕捉剂助剂和水的质量比为0.9：(28-30)：10：(0.4-0.6)：26。
10.按照权利要求1所述的合成方法，其特征在于，步骤(3)中在离心机的作用下进行料液分离；所述的干燥为真空干燥。
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