WO2020040136A1 - 対象の皮膚情報を検査するための検査キット - Google Patents

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WO2020040136A1
WO2020040136A1 PCT/JP2019/032439 JP2019032439W WO2020040136A1 WO 2020040136 A1 WO2020040136 A1 WO 2020040136A1 JP 2019032439 W JP2019032439 W JP 2019032439W WO 2020040136 A1 WO2020040136 A1 WO 2020040136A1
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WO
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sheet
pad
test kit
staining
kit
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Application number
PCT/JP2019/032439
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English (en)
French (fr)
Inventor
健夫 峰松
弘美 真田
友則 米田
優 西尾
瑞之 竜
Original Assignee
国立大学法人 東京大学
サラヤ株式会社
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Publication date
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    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
    • G01N1/31—Apparatus therefor
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing

Definitions

  • the present invention relates to a test kit for testing skin information of a subject.
  • Skin is an organ located on the outermost layer of the body, and has a function of preventing irritation and invasion of foreign substances from the outside of the body, and a function of preventing leakage of biological material from the body to the outside.
  • the barrier function of the skin is impaired, it becomes susceptible to external stimuli and foreign substances, causing immune diseases such as allergies and skin diseases such as dermatitis. Therefore, it is important to accurately understand the condition of the skin in preventing these diseases.
  • Patent Literature 1 discloses that a skin barrier is obtained by transdermally collecting albumin in an interstitial fluid present below a skin surface (for example, a stratum corneum) which is responsible for a skin barrier function and measuring the amount thereof. A method for evaluating function is disclosed.
  • Non-Patent Document 1 a biological substance (for example, a disease marker serving as an indicator of a disease) in the interstitial fluid can be collected percutaneously.
  • a non-invasive transdermal measurement is performed because the albumin in the interstitial fluid below the skin surface is collected by attaching a protein-adsorbing sheet to the skin surface of the subject. Is the way.
  • the present method can also non-invasively and transcutaneously measure a biological substance in the interstitial fluid other than albumin (eg, a disease marker serving as an indicator of a disease). Is also considered useful.
  • albumin is collected quickly after the protein-adsorbing sheet is attached to the skin surface of the subject in about 1 to 20 minutes.
  • Patent Literature 1 the measurement of albumin collected on a sheet is performed by an immunological measurement method such as a Western blot method that requires several hours, and therefore cannot be said to be a rapid method as a whole. there were. Further, in a general immunological measurement method, it is necessary to use various solutions (for example, a blocking solution, an antibody solution, and a staining solution), and it is troublesome to discard the used solution.
  • an immunological measurement method such as a Western blot method that requires several hours, and therefore cannot be said to be a rapid method as a whole.
  • various solutions for example, a blocking solution, an antibody solution, and a staining solution
  • an object of the present invention is to provide an inspection kit that can easily and easily inspect skin information of a subject in a short time.
  • One aspect of the present invention is a test kit for testing skin information of a subject, An arrangement unit on which a sheet from which skin information is collected is arranged, A staining liquid supply unit for supplying a staining liquid to the sheet arranged in the arrangement unit, Absorption that has a capacity to absorb the entire amount of the staining solution stored in the staining solution supply unit, and absorbs the staining solution at a speed that can secure the time necessary for the sheet arranged in the placement unit to be stained. And a pad.
  • the dye solution is supplied to the sheet from the dye solution supply unit, and the absorbing pad absorbs the dye solution at a speed capable of securing a time necessary for the sheet to be dyed. Test results can be obtained early. Further, since the entire amount of the staining solution is absorbed by the absorption pad, there is no need to treat the staining solution with a waste solution. As a result, it is possible to provide an inspection kit that can easily inspect target skin information in a short time.
  • the above aspect further includes the following configuration.
  • the absorbent pad includes a pad main body, and a connecting portion that connects the pad main body and the sheet disposed on the placement section.
  • the connection part is formed smaller than the pad body part.
  • connection portion is configured to cover a part of the entire periphery of the attachment portion to which the skin information of the sheet attached to the placement portion is attached.
  • the pad main body of the absorbent pad is made of a cellulose film
  • the connection of the absorbent pad is made of filter paper.
  • the test kit includes a kit body and a lid that covers an upper portion of the kit body.
  • the staining solution supply unit is configured to include an opening formed in the lid,
  • the test kit includes a sealing member that seals between the staining solution supply unit and the kit main body when the kit main body is closed by the lid.
  • the connecting portion is formed smaller than the pad body, the absorbing speed at which the staining solution is absorbed in the connecting portion can be adjusted.
  • connection portion covers a part of the entire periphery of the attachment portion of the sheet, so that the time for absorbing the staining liquid with the absorbent pad is longer than in the case where the connection portion covers the entire periphery of the attachment portion. can do.
  • the connection portion covers the entire periphery of the attachment portion.
  • the pad body and the connecting portion are made of different members, it is easy to achieve both the absorption speed and the absorbability of the dyeing solution of the absorbent pad.
  • the leakage of the staining liquid from the staining liquid supply unit can be suppressed by the seal member.
  • an examination kit that can easily examine the skin information of a subject in a short time.
  • FIG. 1 is a schematic perspective view of a test kit for testing target skin information according to an embodiment of the present invention.
  • FIG. 3 is a schematic perspective view of the inspection kit with a lid removed. It is the schematic perspective view seen from the back surface of the lid part. It is the schematic perspective view seen from the back of the kit main part. It is a partial side view of the inspection kit before attaching a sheet.
  • FIG. 4 is a partial side view of the inspection kit with a sheet attached.
  • test kit for testing skin information of a target according to an embodiment of the present invention will be described in detail.
  • the “subject” is not particularly limited as long as it is an animal containing a disease marker described below in interstitial fluid such as the spinous layer and basal layer of the epidermis.
  • the target animal include humans and other mammals (for example, mice, rats, dogs, cats, cows, horses, pigs, and the like), birds such as chickens and parakeets, and the like.
  • Skin is not particularly limited as long as interstitial fluid such as the spinous layer and basal layer of the epidermis is present.
  • Examples of the skin include skin of feet, legs, head, hands, arms, face, and other body parts.
  • FIG. 1 is a schematic perspective view of a test kit for testing skin information of a subject according to an embodiment of the present invention.
  • the test kit 1 has a rectangular shape in a top view, and includes a kit body 11 and a lid 12 that covers an upper part of the kit body 11 as a structure. I have.
  • the lid part 12 is attached to the kit body part 11 so that the upper part of the kit body part 11 can be opened and closed.
  • the test kit 1 has a rectangular shape when viewed from above, but the shape of the test kit 1 is not particularly limited.
  • FIG. 2 is a schematic perspective view of the inspection kit 1 with the lid 12 removed
  • FIG. 3 is a schematic perspective view seen from the back of the lid 12,
  • FIG. It is the schematic perspective view seen from.
  • the test kit 1 includes a placement unit 2 on which a sheet S from which skin information has been collected is placed, and a staining solution that supplies a staining solution to the sheet S placed on the placement unit 2.
  • the dyeing unit has a supply unit 3 and a capacity capable of absorbing the entire amount of the dyeing liquid stored in the dyeing liquid supply unit 3 and dyeing at a speed capable of securing a time necessary for dyeing the sheet S arranged in the disposing unit 2.
  • An absorbent pad 4 for absorbing a liquid.
  • the arrangement unit 2 includes an opening 11a formed in the kit body 11 and penetrating in the up-down direction.
  • the sheet S has an attachment portion S1 to which skin information is collected and attached, and a tape portion S2 to which the attachment portion S1 is attached at the center.
  • FIG. 5 is a partial side view of the inspection kit 1 before the sheet S is attached
  • FIG. 6 is a partial side view of the inspection kit 1 with the sheet S attached.
  • the sheet S is attached to the edge of the opening 11a from the back surface of the kit body 11.
  • the opening 11a is closed by the sheet S, and the attachment portion S1 of the sheet S is located in the opening 11a.
  • the sheet S Before placing the sheet S on the placement unit 2, the sheet S is attached to the surface of the target skin, and skin information is collected.
  • a disease marker in the interstitial fluid present in a layer located below the skin surface for example, a spine layer or a basal layer of the epidermis
  • a reference marker for correcting the disease marker may be included in addition to the disease marker.
  • the sheet S is not particularly limited as long as it can generate an attractive force based on electrostatic interaction with the disease marker.
  • Examples of the sheet S include a sheet having a polar functional group on the surface.
  • the polar functional group is a functional group having polarity, and may be a nonionic functional group or an ionic functional group.
  • the shape and size of the sheet S are not particularly limited.
  • a nitrocellulose membrane as the sheet having polar functional groups on the surface. According to the nitrocellulose membrane, the attractive force based on the electrostatic interaction between the positive charge of the nitro group and the negative charge of the disease marker, and the force between the negative charge of the nitro group and the positive charge of the disease marker Attraction based on the electrostatic interaction of
  • the staining solution supply unit 3 is configured to be supplied with a staining solution from outside the test kit 1, and includes an opening 12 a formed in the lid 12.
  • the opening 12a has a truncated quadrangular pyramid shape, with the lid 12 being attached to the kit body 11 and recessed downward and having a horizontal cross-sectional area that decreases downward. Therefore, when the staining liquid is supplied to the staining liquid supply unit 3, the staining liquid fills the openings 12a, and the surface of the sheet S is immersed in the staining liquid.
  • the dyeing liquid supply unit 3 has a volume enough to store the dyeing liquid for the time required for dyeing the sheet S at the time of inspection (usually about 1 to 2 minutes, and at most about 5 minutes). Have.
  • the opening 12a also serves as an observation window that allows the user to observe the state in which the sheet S is stained with the staining solution.
  • a disease marker that is skin information stained by the staining solution is, for example, a protein selected from the group consisting of cytokines, enzymes, extracellular matrix proteins, plasma proteins, heat shock proteins, and receptor proteins, or osmolyte.
  • the disease marker is a protein selected from the group consisting of TNF ⁇ , IL1 ⁇ , NGF ⁇ , VEGF-C, TGF ⁇ 1, BMP1, PAI1, MMP2, creatine kinase, creatine phosphokinase, COL4, fibronectin, albumin, HSP90 ⁇ and NOTCH1; Or, it is taurine.
  • Disease is not particularly limited as long as it is a symptom or abnormality that can be determined using a disease marker as an index. Symptoms or abnormalities include, for example, inflammation, pruritus, skin laceration, decreased skin barrier function, ischemic disease, hypoxia, cell deformation, pressure ulcer, muscle damage, abnormal hair cycle, dehydration, and the like. In addition, the symptom or abnormality may be local or systemic, or the site where the symptom or abnormality is present is not particularly limited. Examples of the site having symptoms or abnormalities include skin, subcutaneous tissue, and the like.
  • inflammation, pruritus, ischemic disease, hypoxia and the like can be determined using, for example, cytokines as indicators.
  • skin laceration can be determined using, for example, cytokines, enzymes, extracellular matrix proteins and the like as indices.
  • the decrease in the skin barrier function can be determined using, for example, plasma protein or the like as an index.
  • cell deformation can be determined using, for example, a heat shock protein or the like as an index.
  • a pressure ulcer can be determined using, for example, cytokines, heat shock proteins, enzymes, and the like as indices.
  • Muscle damage can be determined using, for example, an enzyme or the like as an index.
  • the abnormal hair cycle can be evaluated using, for example, a receptor protein, a cytokine, or the like as an index. Dehydration can be evaluated using, for example, osmolyte as an index.
  • the absorption pad 4 includes a pad body 41 and a connection section 42 for connecting the pad body 41 and the sheet S arranged on the arrangement section 2.
  • the pad body 41 of the absorbent pad 4 is provided as a pair on both sides of the sheet S arranged on the arrangement section 2, and is arranged in a recess 11 b formed inside the kit body 11.
  • the pad body 41 absorbs the staining liquid stored in the staining liquid supply unit 3 via the sheet S by utilizing the capillary phenomenon.
  • the pad body 41 is formed on the side surface of the recess 11b of the kit body 11, and is positioned by a positioning member 11c protruding inwardly of the recess 11b.
  • the pad body 41 has a rectangular shape in a top view, and is made of, for example, a cellulose film. As shown in FIG. 2 and the like, the pad main body 41 may be configured by stacking a plurality of thin pads, or may be configured by one thick pad.
  • the pad main body 41 has a capacity capable of absorbing the entire amount of the staining liquid stored in the staining liquid supply unit 3. For example, the pad main body 41 has at least a volume larger than the volume of the staining liquid supply unit 3.
  • the pad bodies 41 are provided as a pair on both sides of the attachment portion S1 of the sheet S, and have a rectangular shape in a top view, but the number and shape of the pad bodies 41 are not particularly limited. As described above, the pad body 41 only needs to have a capacity capable of absorbing the entire amount of the staining solution stored in the staining solution supply unit 3.
  • the length of the pad body 41 in the short side direction (Y direction) of the rectangular inspection kit 1 when viewed from above is substantially the same as the length in the Y direction of the attachment portion S1 of the sheet S. I have.
  • Each of the pad main bodies 41 has a length in the long side direction (X direction) of the rectangular inspection kit 1 when viewed from above, which is about twice as long as the X direction length of the attachment portion S1 of the sheet S. .
  • the connecting portion 42 of the absorbing pad 4 is formed smaller than the pad main body portion 41 and covers a part of the outer periphery of the attachment portion S1 of the sheet S.
  • the connection portions 42 are provided as a pair on both sides of the sheet S, corresponding to the pad body portions 41 provided as a pair on both sides of the attachment portion S1 of the sheet S, each having a T-shape in a top view. I have.
  • the connecting portion 42 has such a shape that the pad main body 41 can absorb the staining liquid stored in the staining liquid supply unit 3 via the sheet S at a speed that can secure a time necessary for dyeing the sheet S with the staining liquid. , Dimensions.
  • the connection portion 42 has a first portion 42a extending in the Y direction and a second portion 42b extending in the X direction.
  • the connecting portion 42 covers two opposing sides of the attachment portion S1 of the sheet S with the first portion 42a, and the other two portions. It does not cover the sides.
  • the first portion 42a has an elongated shape extending in the Y direction, and the length of the first portion 42a in the Y direction is equal to that of the adhering portion S1 so that the connecting portion 42 reliably covers two opposing sides of the sheet S.
  • the length is slightly longer than the length in the Y direction of each of the two opposing sides.
  • the connection portion 42 covers a part of the entire circumference of the attachment portion S1.
  • the second portion 42b of the connection portion 42 has an elongated shape extending in the X direction, and the length of the second portion 42b in the Y direction is shorter than the length of the first portion 42a in the X direction.
  • the second portion 42b is provided so as to partially overlap with the pad body 41 in a top view.
  • the tip of the second portion 42b on the pad body 41 side is located on the sheet S side of the center of the pad body 41 in the X direction.
  • the speed at which 42 absorbs the staining liquid from the staining liquid supply unit 3 can be adjusted. Specifically, when the contact area between the first part 42a and the attachment part S1 is increased, the absorption rate of the staining liquid increases. When the contact area between the second portion 42b and the pad body 41 is increased, the absorption speed of the staining liquid increases, and when the length of the second portion 42b in the Y direction is shortened, the absorption speed of the staining liquid decreases.
  • connection portion 42 is made of a member different from the pad body portion 41, and is made of, for example, filter paper (cotton fiber, cellulose).
  • a seal member 5 is disposed on the inner surface of the edge of the opening 12a formed in the lid 12.
  • the sealing member 5 seals the space between the staining solution supply unit 3 and the kit main body 11 when the kit main body 11 is closed by the lid 12.
  • the seal member 5 is preferably made of a packing having a waterproof function.
  • test kit 1 is used as follows.
  • the sheet S When the sheet S is affixed to the surface of the skin of the subject, there is a static between the sheet S and a disease marker in the interstitial fluid existing in a layer located below the skin surface (for example, a spinous layer or a basal layer of the epidermis). Attraction based on the electric interaction occurs, and the disease marker in the interstitial fluid of the subject passes through the epidermis of the subject, is attracted to the sheet S, and adheres to the surface of the attaching portion S1 of the sheet S. That is, the disease marker in the interstitial fluid of the subject is collected non-invasively.
  • the interaction between the sheet S and the disease marker attached to the surface of the sheet S may involve a hydrophobic interaction or the like in addition to the electrostatic interaction.
  • the disease marker attached to the sheet S surface is peeled off from the skin surface together with the sheet S.
  • the time for bringing the sheet S into contact with the skin surface is not particularly limited as long as the disease marker in the interstitial fluid of the subject can adhere to the sheet S surface.
  • the contact time can be appropriately adjusted according to the magnitude of the attractive force based on the electrostatic interaction generated between the sheet S and the disease marker in the interstitial fluid of the subject, but is usually 1 minute or more, preferably Is at least 5 minutes, more preferably at least 10 minutes.
  • the upper limit of the contact time is not particularly limited, but is usually 20 minutes, preferably 15 minutes.
  • the sheet S peeled off from the skin surface is attached to the edge of the opening 11a from the back surface of the kit body 11, with the surface on which the disease marker is attached as the upper surface.
  • the opening 11a is closed by the sheet S, and the attachment surface of the attachment portion S1 of the sheet S is located in the opening 11a.
  • the staining liquid is supplied to the staining liquid supply unit 3.
  • two or more types of dyeing liquid are supplied so as to fill the opening 12a, and the attachment surface of the attachment portion S1 of the sheet S is immersed in the dyeing liquid.
  • the dyeing liquid that dyes the sheet S is absorbed by the absorbent pad 4 via the sheet S.
  • the absorption pad 4 adjusts the absorption speed of the staining liquid absorbed from the sheet S into the pad main body 41 by the connection portion 42.
  • the connection part 42 absorbs the dyeing liquid from the sheet S to the pad main body 41 at an absorption rate at which the dyeing liquid is present in the dyeing liquid supply unit 3 for a time sufficient to dye the sheet S. .
  • the time sufficient for the dye solution to dye the sheet S is usually about 1 to 2 minutes, and at most about 5 to 10 minutes.
  • the information on the disease is information on whether or not the subject has the disease, information on whether or not there is a suspicion of the disease, and the like.
  • the dyeing liquid present in the dyeing liquid supply unit 3 is all absorbed by the pad body 41 of the absorption pad 4. For this reason, no staining liquid remains in the staining liquid supply unit 3, and there is no need to perform a waste liquid treatment of the remaining staining liquid.
  • test kit 1 After the staining of the sheet S with the staining solution is completed and the information on the target disease is confirmed, the test kit 1 is discarded.
  • the test kit 1 is usually used disposably.
  • test kit 1 having the above configuration, the following effects can be exerted.
  • test kit 1 supplies the staining solution to the sheet S from the staining solution supply unit 3 and the absorbing pad 4 absorbs the staining solution at a speed capable of securing a time necessary for the sheet S to be stained,
  • the sheet S can be inspected on the spot, and the inspection result can be obtained early.
  • the absorption pad 4 Since the absorption pad 4 has a capacity capable of absorbing the entire amount of the staining solution stored in the staining solution supply unit 3, the entire amount of the staining solution is absorbed by the absorption pad 4, and there is no need to treat the staining solution with a waste solution.
  • the examination kit 1 can inspect the skin S at an early stage after collecting the skin information on the sheet S. For this reason, the possibility that impurities may be added to the sheet S can be reduced, and the possibility that the sheet S from which the target skin information has been collected can be mistaken for a sheet from which another target skin information has been collected can be reduced.
  • the absorbent pad 4 includes a pad body 41, and a connecting section 42 for connecting the pad body 41 and the sheet S arranged on the arrangement section 2, and the connecting section 42 is a pad body. Since it is formed smaller than 41, it is possible to adjust the absorption speed of absorbing the staining liquid at the connection part 42. That is, since the absorption pad 4 has the connection portion 42, it is possible to easily achieve the absorption of the dyeing solution at a speed that can secure the time necessary for the sheet S to be dyed.
  • the connecting portion 42 covers the part of the entire periphery of the attachment portion S1 of the sheet S, so that the time for absorbing the staining liquid with the absorbent pad 4 is longer than in the case of covering the entire periphery of the attachment portion S1. can do. By lengthening the absorption time, a sufficient time for the sheet S to react with the dye solution can be secured.
  • the pad body 41 of the absorbent pad 4 is made of a cellulose film, and the connecting part 42 is made of filter paper.
  • the seal member 5 for sealing between the staining solution supply unit 3 and the kit body 11 is provided. Leakage of the staining solution from the solution supply unit 3 can be suppressed.
  • the staining solution supply unit 3 is configured to have a truncated square pyramid shape in which the opening 12a is recessed downward and the horizontal cross-sectional area decreases toward the bottom. When the dyeing liquid is supplied, the dyeing liquid does not easily overflow from the dyeing liquid supply unit 3.
  • the pad body 41 of the absorbent pad 4 is formed on the side surface of the recess 11b of the kit body 11, and is positioned by the positioning member 11c protruding inward of the side of the recess 11b. The displacement can be prevented.
  • connection portion 42 of the absorbent pad 4 partially overlaps the pad body 41 in a top view, the staining liquid can flow smoothly from the connection portion 42 to the pad body 41.
  • the pad body 41 of the absorbent pad 4 is disposed in the recess 11b of the kit body 11, but if the stain liquid stored in the stain liquid supply unit 3 can be absorbed, the lid body may be used. 12 may be arranged in a recess formed inside.
  • connection section 42 adjusts the absorption speed of absorbing the staining liquid from the staining liquid supply section 3.
  • the connection section 42 is not provided, and the structure, dimensions, shape, etc.
  • the absorption rate may be adjusted. For example, by changing the density of the pad body 41 according to the distance from the attachment portion S1 of the sheet S, the absorption speed of the staining solution of the pad body 41 can be adjusted.
  • the inspection kit 1 has a rectangular shape in a top view, but is not limited thereto, and may have, for example, an elliptical shape or a circular shape.
  • the pad body 41 of the absorbent pad 4 may be arranged on the outer periphery of the attachment portion S1 of the sheet S so as to surround the attachment portion S1.
  • a test kit capable of easily and easily examining target skin information in a short time can be provided, and thus has a great industrial value.

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Abstract

対象の皮膚情報を検査するための検査キット（１）であって、皮膚情報が採取されたシート（Ｓ）が配置される配置部（２）と、配置部（２）に配置されたシート（Ｓ）に染色液を供給する染色液供給部（３）と、染色液供給部（３）に貯留されている染色液全量を吸収できる容量を有し、配置部（２）に配置されたシート（Ｓ）が染色されるのに必要な時間を確保できる速度で染色液を吸収する吸収パッド（４）と、を備えている。

Description

対象の皮膚情報を検査するための検査キット
　本発明は、対象の皮膚情報を検査するための検査キットに関する。
　皮膚は、体の最外層に位置する器官であり、体外から体内への刺激や異物の侵入を阻む機能と、体内からの体外への生体物質の漏出を防止する機能とがある。
　このような皮膚のバリア機能が損なわれると、外部からの刺激や異物の侵入を受けやすくなり、アレルギーなどの免疫疾患、及び皮膚炎などの皮膚疾患の原因となる。したがって、皮膚の状態を的確に把握することは、これらの疾患を予防するうえで重要である。
　ここで、特許文献１には、皮膚バリア機能を担う皮膚表面（例えば角層）の下方に存在する間質液中のアルブミンを経皮的に採取し、その量を測定することによって、皮膚バリア機能を評価する方法が開示されている。
　また、前記間質液中の生体物質（例えば、疾患の指標となる疾患マーカー）が経皮的に採取され得ることが知られている（非特許文献１）。
特開２０１８－０４８９８４号公報
Minematsu et al., ADVANCES IN SKIN & WOUND CARE 2014; 27: 272-9
　ここで、特許文献１に開示された方法では、タンパク質吸着性のシートを対象の皮膚表面に貼付けることで皮膚表面下方の間質液中のアルブミンを採取するため、非侵襲的な経皮測定方法である。そして、本方法は、アルブミン以外の前記間質液中の生体物質（例えば、疾患の指標となる疾患マーカー）も非侵襲的に且つ経皮的に測定可能であるため、疾患の診断補助方法としても有用と考えられる。
　また、特許文献１に開示された方法では、アルブミンの採取は、タンパク質吸着性のシートを対象の皮膚表面に貼付けてから約１～２０分で終わるため、迅速に行われる。
　しかし、特許文献１によれば、シートに採取されたアルブミンの測定は、数時間を要するウェスタンブロット法などの免疫学的測定法により行われるため、全体として迅速な方法とは言いがたいものであった。また、一般的な免疫学的測定法では、種々の溶液（例えば、ブロッキング液、抗体溶液、染色液）を用いる必要があり、使用後の溶液を廃棄する手間もかかった。
　そこで本発明では、対象の皮膚情報を短時間で容易に検査できる検査キットを提供することを目的とする。
　本発明の一態様は、対象の皮膚情報を検査するための検査キットであって、
　皮膚情報が採取されたシートが配置される配置部と、
　前記配置部に配置された前記シートに染色液を供給する染色液供給部と、
　前記染色液供給部に貯留されている染色液全量を吸収できる容量を有し、前記配置部に配置された前記シートが染色されるのに必要な時間を確保できる速度で染色液を吸収する吸収パッドと、を備えている。
　前記構成によれば、染色液供給部からシートに染色液を供給し、吸収パッドはシートが染色されるのに必要な時間を確保できる速度で染色液を吸収するので、その場でシートを検査することができ、検査結果を早期に得ることができる。また、染色液全量が吸収パッドに吸収されるので、染色液を廃液処理する必要がない。その結果、対象の皮膚情報を短時間で容易に検査できる検査キットを提供できる。
　前記態様は、さらに、次のような構成を備えるのが好ましい。
（１）前記吸収パッドは、パッド本体部と、前記パッド本体部と前記配置部に配置された前記シートとを接続する接続部を備えており、
　前記接続部は、前記パッド本体部より小さく形成されている。
（２）前記構成（１）において、前記接続部は、前記配置部に配置された前記シートの皮膚情報が付着した付着部の全周の一部を覆うよう構成されている。
（３）前記構成（１）又は（２）において、前記吸収パッドの前記パッド本体部は、セルロース膜でできており、
　前記吸収パッドの前記接続部は、ろ紙でできている。
（４）前記検査キットは、キット本体部と前記キット本体部の上部を覆う蓋部と、を備えており、
　前記染色液供給部は、前記蓋部に形成された開口部を含んで構成されており、
　前記検査キットは、前記キット本体部が前記蓋部によって閉止されている状態において、前記染色液供給部と前記キット本体部との間をシールするシール部材を備えている。
　前記構成（１）によれば、接続部がパッド本体部より小さく形成されているので、接続部において、染色液を吸収する吸収速度を調整することができる。
　前記構成（２）によれば、接続部がシートの付着部の全周の一部を覆うことによって、付着部の全周を覆う場合と比べて、染色液を吸収パッドで吸収する時間を長くすることができる。吸収時間を長くすることによって、シートが染色液で反応する時間を十分確保できる。
　前記構成（３）によれば、パッド本体部と接続部とを異なる部材とすることによって、吸収パッドの染色液の吸収速度と吸収性とを両立することが容易となる。
　前記構成（４）によれば、シール部材によって、染色液供給部からの染色液の漏れを抑制できる。
　本発明によると、対象の皮膚情報を短時間で容易に検査できる検査キットを提供できる。
本発明の実施形態に係る対象の皮膚情報を検査するための検査キットの概略斜視図である。 蓋部を取り外した状態の検査キットの概略斜視図である。 蓋部の裏面から見た概略斜視図である。 キット本体部の裏面から見た概略斜視図である。 シートを取り付ける前の検査キットの一部側面図である。 シートを取り付けた状態の検査キットの一部側面図である。
　以下、図面に基づいて、本発明の実施形態に係る対象の皮膚情報を検査するための検査キットにつき、詳細に説明する。
　ここで、「対象」は、表皮の有棘層、基底層等の間質液中に、後述する疾患マーカーを含む動物である限り特に限定されない。対象動物としては、例えば、ヒト又はその他の哺乳類（例えば、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ等）、ニワトリ、インコ等の鳥類等が挙げられる。
　「皮膚」は、表皮の有棘層、基底層等の間質液が存在する限り特に限定されない。皮膚としては、例えば、足、脚、頭、手、腕、顔、その他の体部等の皮膚が挙げられる。
［検査キット］
　図１は、本発明の実施形態に係る対象の皮膚情報を検査するための検査キットの概略斜視図である。図１に示されるように、検査キット１は、上面視で矩形状を有しており、構造体として、キット本体部１１と、キット本体部１１の上部を覆う蓋部１２と、を備えている。蓋部１２は、キット本体部１１に取り付けられ、キット本体部１１の上部を開放、閉止可能としている。なお、本実施形態では、検査キット１は、上面視で矩形状を有しているが、検査キット１の形状は特に限定されない。
　図２は、蓋部１２を取り外した状態の検査キット１の概略斜視図であり、図３は、蓋部１２の裏面から見た概略斜視図であり、図４は、キット本体部１１の裏面から見た概略斜視図である。図１～図４に示されるように、検査キット１は、皮膚情報が採取されたシートＳが配置される配置部２と、配置部２に配置されたシートＳに染色液を供給する染色液供給部３と、染色液供給部３に貯留されている染色液全量を吸収できる容量を有し、配置部２に配置されたシートＳが染色されるのに必要な時間を確保できる速度で染色液を吸収する吸収パッド４と、を備えている。
　配置部２は、キット本体部１１に形成された上下方向に貫通する開口部１１ａを含んで構成される。シートＳは、皮膚情報が採取され付着する付着部Ｓ１と、付着部Ｓ１がその中心に取り付けられるテープ部Ｓ２と、を有している。
　図５は、シートＳを取り付ける前の検査キット１の一部側面図であり、図６は、シートＳを取り付けた状態の検査キット１の一部側面図である。図５及び図６に示されるように、シートＳは、キット本体部１１の裏面から開口部１１ａの縁に貼り付けられる。その結果、シートＳによって、開口部１１ａが閉止され、シートＳの付着部Ｓ１は、開口部１１ａ内に位置する。
　シートＳは、配置部２に配置される前に、対象の皮膚表面に貼付され、皮膚情報が採取される。シートＳには、皮膚情報として、皮膚表面の下方に位置する層（例えば、表皮の有棘層、基底層等）に存在する間質液中の疾患マーカーが付着しており、検査キット１は、その疾患マーカーを検査するものである。なお、疾患マーカーに加え、疾患マーカーを補正する参照マーカーを含んでもよい。
　シートＳは、疾患マーカーとの間で静電相互作用に基づく引力を生じ得る限り特に限定されない。シートＳとしては、例えば、極性官能基を表面に有するシート等が挙げられる。極性官能基は、極性を有する官能基であり、非イオン性官能基であってもよく、イオン性官能基であってもよい。シートＳの形状、サイズ等も特に限定されない。
　極性官能基を表面に有するシートとしては、ニトロセルロース膜を使用することが好ましい。ニトロセルロース膜によれば、ニトロ基が有する正電荷と疾患マーカーが有する負電荷との間の静電相互作用に基づく引力、及び、ニトロ基が有する負電荷と疾患マーカーが有する正電荷との間の静電相互作用に基づく引力が生じ得る。
　染色液供給部３は、検査キット１の外部より染色液が供給されるようになっており、蓋部１２に形成された開口部１２ａを含んで構成される。開口部１２ａは、蓋部１２をキット本体部１１に取り付けた状態において、下方に凹み、下方に向かって水平断面積が小さくなる、四角錐台形状を有している。したがって、染色液供給部３に染色液が供給されると、染色液は開口部１２ａを満たし、シートＳの表面が染色液に浸されることになる。
　染色液供給部３は、検査時に、シートＳを染色させるのに必要な時間（通常１～２分程度であり、最長でも５分程度）、染色液を溜めておくことのできる程度の容積を有している。なお、開口部１２ａは、シートＳが染色液によって染色された状態を観察可能とする観察窓の役割も果たす。
　染色液供給部３には、通常、２種類以上の染色液が供給される。染色液によって染色される皮膚情報である疾患マーカーは、例えば、サイトカイン、酵素、細胞外基質タンパク質、血漿タンパク質、熱ショックタンパク質及び受容体タンパク質からなる群より選択されるタンパク質、又は、オスモライトである。また、当該疾患マーカーは、ＴＮＦα、ＩＬ１α、ＮＧＦβ、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＴＧＦβ１、ＢＭＰ１、ＰＡＩ１、ＭＭＰ２、クレアチンキナーゼ、クレアチンホスホキナーゼ、ＣＯＬ４、フィブロネクチン、アルブミン、ＨＳＰ９０α及びＮＯＴＣＨ１からなる群より選択されるタンパク質、又は、タウリンである。
　「疾患」は、疾患マーカーを指標として判断され得る症状又は異常である限り特に限定されない。症状又は異常としては、例えば、炎症、掻痒症、皮膚裂傷、皮膚バリア機能の低下、虚血性疾患、低酸素状態、細胞変形、褥瘡、筋損傷、毛周期異常、脱水症等が挙げられる。また、症状又は異常は局所性のものであっても全身性のものであってもよく、又は、症状又は異常がある部位も特に限定されない。症状又は異常がある部位としては、例えば、皮膚、皮下組織等が挙げられる。
　上記疾患のうち、炎症、掻痒症、虚血性疾患、低酸素状態等は、例えばサイトカイン等を指標として判断され得る。また、皮膚裂傷は、例えばサイトカイン、酵素、細胞外基質タンパク質等を指標として判断され得る。また、皮膚バリア機能の低下は、例えば血漿タンパク質等を指標として判断され得る。また、細胞変形は、例えば熱ショックタンパク質等を指標として判断され得る。また、褥瘡は、例えばサイトカイン、熱ショックタンパク質、酵素等を指標として判断され得る。また、筋損傷は、例えば酵素等を指標として判断され得る。また、毛周期異常は、例えば受容体タンパク質、サイトカイン等を指標として評価され得る。また、脱水症は、例えばオスモライト等を指標として評価され得る。
　吸収パッド４は、パッド本体部４１と、パッド本体部４１と配置部２に配置されたシートＳとを接続する接続部４２を備えている。
　吸収パッド４のパッド本体部４１は、配置部２に配置されたシートＳの両側に一対として設けられ、キット本体部１１の内部に形成された凹部１１ｂに配置されている。パッド本体部４１は、シートＳを介して、染色液供給部３に貯留されている染色液を、毛細管現象を利用して吸収するようになっている。
　パッド本体部４１は、キット本体部１１の凹部１１ｂ側面に形成され、凹部１１ｂの側方内方に突出する位置決め部材１１ｃによって、位置決めされる。パッド本体部４１は、上面視で矩形状を有しており、例えば、セルロース膜でできている。パッド本体部４１は、図２等に示されるように、複数の薄いパッドが積層されて構成されてもよく、また、１つの厚いパッドによって構成されてもよい。パッド本体部４１は、染色液供給部３に貯留されている染色液全量を吸収できる容量を有している。例えば、パッド本体部４１は、少なくとも、染色液供給部３の容積より大きい容積を有している。
　本実施形態では、パッド本体部４１は、シートＳの付着部Ｓ１の両側に一対として設けられ、上面視で矩形状を有しているが、パッド本体部４１の数、形状は特に限定されない。上述したように、パッド本体部４１は、染色液供給部３に貯留されている染色液全量を吸収できる容量を有していればよい。なお、本実施形態では、パッド本体部４１は、上面視で矩形状の検査キット１の短辺方向（Ｙ方向）長さが、シートＳの付着部Ｓ１のＹ方向長さと略同じとなっている。また、それぞれのパッド本体部４１は、上面視で矩形状の検査キット１の長辺方向（Ｘ方向）長さが、シートＳの付着部Ｓ１のＸ方向長さの２倍程度となっている。
　吸収パッド４の接続部４２は、パッド本体部４１より小さく形成されており、シートＳの付着部Ｓ１の外周の一部を覆っている。接続部４２は、シートＳの付着部Ｓ１の両側に一対として設けられたパッド本体部４１に対応して、シートＳの両側に一対として設けられ、それぞれ、上面視でＴ字形状を有している。
　接続部４２は、シートＳを染色液で染色させるのに必要な時間を確保できる速度で、シートＳを介して染色液供給部３に貯留された染色液をパッド本体部４１吸収できるような形状、寸法となっている。
　接続部４２は、Ｙ方向に延びる第１部４２ａと、Ｘ方向に延びる第２部４２ｂと、を有している。本実施形態のように、シートＳの付着部Ｓ１が上面視で矩形状を有する場合、接続部４２は、シートＳの付着部Ｓ１の対向する二辺を第１部４２ａで覆い、他の二辺を覆わないようになっている。第１部４２ａは、Ｙ方向に延びる細長い形状を有しており、接続部４２がシートＳの対向する二辺を確実に覆うよう、第１部４２ａのＹ方向長さは、付着部Ｓ１の対向する二辺それぞれのＹ方向長さより若干長くなっている。なお、例えば、付着部Ｓ１が上面視で円形状や楕円形状を有する場合、接続部４２は、付着部Ｓ１の全周の一部を覆うようになっている。
　接続部４２の第２部４２ｂは、Ｘ方向に延びる細長い形状を有しており、第２部４２ｂのＹ方向長さは、第１部４２ａのＸ方向長さより短くなっている。第２部４２ｂは、上面視で、パッド本体部４１と一部が重なるように設けられている。第２部４２ｂのパッド本体部４１側の先端部は、パッド本体部４１のＸ方向中心よりシートＳ側に位置している。
　接続部４２とシートＳの付着部Ｓ１との接触面積（第１部４２ａの形状、寸法）及び接続部４２の容積（特に、第２部４２ｂの形状、寸法）を調整することによって、接続部４２が染色液供給部３から染色液を吸収する速度を調整できる。具体的には、第１部４２ａと付着部Ｓ１との接触面積を大きくすると、染色液の吸収速度は増加する。また、第２部４２ｂとパッド本体部４１との接触面積を大きくすると、染色液の吸収速度は増加し、第２部４２ｂのＹ方向長さを短くすると、染色液の吸収速度は減少する。
　接続部４２は、パッド本体部４１とは異なる部材でできており、例えば、ろ紙（綿繊維、セルロース）でできている。
　蓋部１２に形成された開口部１２ａの縁内面には、シール部材５が配置されている。シール部材５は、キット本体部１１が蓋部１２によって閉止されている状態において、染色液供給部３とキット本体部１１との間をシールするようになっている。シール部材５は、防水機能を有するパッキンでできていることが好ましい。
　検査キット１は、次のように使用される。
［検査キットの使用方法］
　シートＳを対象の皮膚表面に貼付すると、シートＳと皮膚表面の下方に位置する層（例えば、表皮の有棘層、基底層等）に存在する間質液中の疾患マーカーとの間に静電相互作用に基づく引力が生じ、対象の間質液中の疾患マーカーが対象の表皮を通過してシートＳに引きつけられ、シートＳの付着部Ｓ１表面に付着する。すなわち、対象の間質液中の疾患マーカーが非侵襲的に採取される。なお、シートＳと、シートＳ表面に付着した疾患マーカーとの結合には、静電相互作用以外に、疎水性相互作用等が関与してもよい。
　シートＳを皮膚表面から剥離すると、シートＳ表面に付着した疾患マーカーは、シートＳとともに皮膚表面から剥離される。シートＳを皮膚表面に接触させる時間は、対象の間質液中の疾患マーカーがシートＳ表面に付着し得る限り特に限定されない。接触時間は、シートＳと対象の間質液中の疾患マーカーとの間で生じる静電相互作用に基づく引力の大きさ等に応じて適宜調整されることができるが、通常１分以上、好ましくは５分以上、さらに好ましくは１０分以上である。なお、接触時間の上限は特に限定されないが、通常２０分、好ましくは１５分である。
　次に、皮膚表面から剥離したシートＳを、疾患マーカーが付着した面を上面として、キット本体部１１の裏面から開口部１１ａの縁に貼り付ける。その結果、シートＳによって、開口部１１ａが閉止され、シートＳの付着部Ｓ１の付着面は、開口部１１ａ内に位置する。
　そして、染色液供給部３に染色液を供給する。染色液は、通常、２種類以上が開口部１２ａを満たすよう供給され、シートＳの付着部Ｓ１の付着面は染色液に浸される。
　シートＳを染色した染色液は、シートＳを介して、吸収パッド４に吸収される。吸収パッド４は、接続部４２によって、シートＳからパッド本体部４１に吸収する染色液の吸収速度を調整する。具体的には、接続部４２は、シートＳを染色するのに十分な時間染色液が染色液供給部３に存在する程度の吸収速度で、染色液をシートＳからパッド本体部４１へ吸収させる。染色液がシートＳを染色するのに十分な時間とは、通常１～２分程度であり、最大でも５～１０分程度である。
　染色液によるシートＳの染色が完了すると、シートＳの染色状態を開口部１２ａから観察することによって、対象の疾患に関する情報を確認できる。疾患に関する情報とは、対象が疾患に罹患しているか否かの情報、罹患の疑いがあるか否かの情報等である。
　染色液によるシートＳの染色が完了した後、染色液供給部３に存在した染色液は、すべて吸収パッド４のパッド本体部４１によって吸収される。このため、染色液供給部３に染色液は残留せず、残留した染色液の廃液処理を行う必要はない。
　染色液によるシートＳの染色が完了し、対象の疾患に関する情報を確認した後、当該検査キット１は廃棄処分される。検査キット１は、通常、使い捨てで使用される。
　前記構成の検査キット１によれば、次のような効果を発揮できる。
（１）検査キット１は、染色液供給部３からシートＳに染色液を供給し、吸収パッド４はシートＳが染色されるのに必要な時間を確保できる速度で染色液を吸収するので、その場でシートＳを検査することができ、検査結果を早期に得ることができる。
（２）吸収パッド４は、染色液供給部３に貯留されている染色液全量を吸収できる容量を有するので、染色液全量が吸収パッド４に吸収され、染色液を廃液処理する必要がない。
（３）検査キット１は、シートＳをその場で検査することができるので、皮膚情報をシートＳに採取した後、早期に検査することができる。このため、シートＳに不純物が加入するおそれを低減することができ、また、対象の皮膚情報が採取されたシートＳを別の対象の皮膚情報が採取されたシートと取り違えるおそれを低減できる。
（４）吸収パッド４は、パッド本体部４１と、パッド本体部４１と配置部２に配置されたシートＳとを接続する接続部４２と、を備えており、接続部４２は、パッド本体部４１より小さく形成されているので、接続部４２において、染色液を吸収する吸収速度を調整することができる。すなわち、吸収パッド４が接続部４２を有することで、シートＳが染色されるのに必要な時間を確保できる速度で染色液を吸収することを容易に達成できる。
（５）接続部４２は、シートＳの付着部Ｓ１の全周の一部を覆うことによって、付着部Ｓ１の全周を覆う場合と比べて、染色液を吸収パッド４で吸収する時間を長くすることができる。吸収時間を長くすることによって、シートＳが染色液で反応する時間を十分確保できる。
（６）吸収パッド４のパッド本体部４１は、セルロース膜でできており、接続部４２は、ろ紙でできている。パッド本体部４１と接続部４２とを異なる部材とすることによって、吸収パッド４の染色液の吸収速度と吸収性とを両立することが容易となる。
（７）キット本体部１１が蓋部１２によって閉止されている状態において、染色液供給部３とキット本体部１１との間をシールするシール部材５を備えているので、シール部材５によって、染色液供給部３からの染色液の漏れを抑制できる。
（８）染色液供給部３は、開口部１２ａが下方に凹み、下方に向かって水平断面積が小さくなる、四角錐台形状を有して構成されるので、染色液を染色液供給部３に供給する際、染色液が染色液供給部３から溢れにくい。
（９）吸収パッド４のパッド本体部４１は、キット本体部１１の凹部１１ｂ側面に形成され、凹部１１ｂの側方内方に突出する位置決め部材１１ｃによって、位置決めされるので、パッド本体部４１の位置がずれることを防止できる。
（１０）吸収パッド４の接続部４２は、上面視で、パッド本体部４１と一部が重なっているので、染色液が接続部４２からパッド本体部４１へ円滑に流れることができる。
［変形例］
　上記実施形態では、吸収パッド４のパッド本体部４１は、キット本体部１１の凹部１１ｂに配置されているが、染色液供給部３に貯留されている染色液を吸収できるのであれば、蓋部１２の内部に形成された凹部に配置されてもよい。
　上記実施形態では、接続部４２が染色液供給部３からの染色液を吸収する吸収速度を調整しているが、接続部４２を設けず、パッド本体部４１の構造、寸法、形状等によって上記吸収速度を調整してもよい。例えば、パッド本体部４１の密度をシートＳの付着部Ｓ１からの距離に応じて変化させることによって、パッド本体部４１の染色液の吸収速度を調整することができる。
　上記実施形態では、検査キット１は上面視で長方形の形状を有しているが、それに限定されるものではなく、例えば、楕円形状や円形状を有してもよい。その場合、吸収パッド４のパッド本体部４１は、シートＳの付着部Ｓ１の外周に、付着部Ｓ１を囲むように配置されることが考えられる。
　特許請求の範囲に記載された本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、各種変形及び変更を行うことも可能である。
　本発明では、対象の皮膚情報を短時間で容易に検査できる検査キットを提供できるので、産業上の利用価値が大である。
　　１　検査キット　
　　２　配置部　
　　３　染色液供給部　
　　４　吸収パッド　
　　５　シール部材　
　　１１　キット本体部　
　　１２　蓋部　
　　４１　パッド本体部　
　　４２　接続部　
　　Ｓ　シート　

Claims (5)

  1. 　対象の皮膚情報を検査するための検査キットであって、
    　皮膚情報が採取されたシートが配置される配置部と、
    　前記配置部に配置された前記シートに染色液を供給する染色液供給部と、
    　前記染色液供給部に貯留されている染色液全量を吸収できる容量を有し、前記配置部に配置された前記シートが染色されるのに必要な時間を確保できる速度で染色液を吸収する吸収パッドと、を備えている、検査キット。
  2. 　前記吸収パッドは、パッド本体部と、前記パッド本体部と前記配置部に配置された前記シートとを接続する接続部を備えており、
    　前記接続部は、前記パッド本体部より小さく形成されている、請求項１記載の検査キット。
  3. 　前記接続部は、前記配置部に配置された前記シートの皮膚情報が付着した付着部の全周の一部を覆うよう構成されている、請求項２記載の検査キット。
  4. 　前記吸収パッドの前記パッド本体部は、セルロース膜でできており、
    　前記吸収パッドの前記接続部は、ろ紙でできている、請求項２又は３に記載の検査キット。
  5. 　前記検査キットは、キット本体部と前記キット本体部の上部を覆う蓋部と、を備えており、
    　前記染色液供給部は、前記蓋部に形成された開口部を含んで構成されており、
    　前記検査キットは、前記キット本体部が前記蓋部によって閉止されている状態において、前記染色液供給部と前記キット本体部との間をシールするシール部材を備えている、請求項１～４のいずれか１つに記載の検査キット。
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