WO2017057540A1 - 免疫賦活活性を有する核酸誘導体 - Google Patents
免疫賦活活性を有する核酸誘導体 Download PDFInfo
- Publication number
- WO2017057540A1 WO2017057540A1 PCT/JP2016/078765 JP2016078765W WO2017057540A1 WO 2017057540 A1 WO2017057540 A1 WO 2017057540A1 JP 2016078765 W JP2016078765 W JP 2016078765W WO 2017057540 A1 WO2017057540 A1 WO 2017057540A1
- Authority
- WO
- WIPO (PCT)
- Prior art keywords
- compound
- mmol
- seq
- added
- adjuvant
- Prior art date
Links
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title abstract description 27
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title abstract description 27
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title abstract description 27
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 title abstract description 19
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 219
- 125000003473 lipid group Chemical group 0.000 claims abstract 2
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 114
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 90
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 85
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 80
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 80
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 57
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 46
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 claims description 46
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 claims description 41
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 37
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 33
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 21
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims description 20
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 17
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 16
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 4
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 claims description 4
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 abstract description 182
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 25
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 abstract description 8
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 abstract description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 340
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 243
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 239
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 238
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 150
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 121
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 116
- -1 thiothioformate Chemical compound 0.000 description 115
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 111
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 105
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 102
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 93
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 87
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 75
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 75
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 70
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 69
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 69
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 68
- 230000008569 process Effects 0.000 description 67
- 229940046168 CpG oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 63
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 61
- 229940046166 oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 61
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 61
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 59
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 59
- CTMZLDSMFCVUNX-VMIOUTBZSA-N cytidylyl-(3'->5')-guanosine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=C(C(N=C(N)N3)=O)N=C2)O)[C@@H](CO)O1 CTMZLDSMFCVUNX-VMIOUTBZSA-N 0.000 description 58
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 55
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 52
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 51
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 50
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 48
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 48
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 47
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- KDWFDOFTPHDNJL-TUBOTVQJSA-N odn-2006 Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)O[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=S)O[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)O[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)O[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=S)O[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(S)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)O)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)O)N2C(N=C(N)C=C2)=O)O)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)O)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)O)N2C(N=C(N)C=C2)=O)O)[C@@H](O)C1 KDWFDOFTPHDNJL-TUBOTVQJSA-N 0.000 description 43
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 42
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 42
- VQWNELVFHZRFIB-UHFFFAOYSA-N odn 1826 Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1C(O1)CC(O)C1COP(O)(=O)OC1CC(N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C(N=C(N)C=C2)=O)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C(N=C(N)C=C2)=O)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C(N=C(N)C=C2)=O)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OC1COP(O)(=O)OC(C(O1)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(O)=O)CC1N1C=C(C)C(=O)NC1=O VQWNELVFHZRFIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 41
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 40
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 39
- 125000006615 aromatic heterocyclic group Chemical group 0.000 description 39
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 38
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 38
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 37
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 37
- 230000004576 lipid-binding Effects 0.000 description 37
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 37
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 36
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 35
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 35
- 125000002837 carbocyclic group Chemical group 0.000 description 33
- 108010042234 peptide SVYDFFVWL Proteins 0.000 description 32
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 31
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 30
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 26
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 26
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 25
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 23
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 23
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 22
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 21
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 21
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 21
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 20
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 20
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 19
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- XHFLOLLMZOTPSM-UHFFFAOYSA-M sodium;hydrogen carbonate;hydrate Chemical class [OH-].[Na+].OC(O)=O XHFLOLLMZOTPSM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 19
- 125000001731 2-cyanoethyl group Chemical group [H]C([H])(*)C([H])([H])C#N 0.000 description 18
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 18
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 17
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 17
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 17
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 17
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 16
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 15
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 15
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 15
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 15
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 description 14
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 14
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 description 14
- 230000009422 growth inhibiting effect Effects 0.000 description 13
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 13
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 13
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 13
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N Heavy water Chemical class [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 12
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 12
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 12
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 12
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 12
- AOSZTAHDEDLTLQ-AZKQZHLXSA-N (1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-6-[(3-chlorophenyl)methyl]-12,19-difluoro-11-hydroxy-8-(2-hydroxyacetyl)-9,13-dimethyl-6-azapentacyclo[10.8.0.02,9.04,8.013,18]icosa-14,17-dien-16-one Chemical compound C([C@@H]1C[C@H]2[C@H]3[C@]([C@]4(C=CC(=O)C=C4[C@@H](F)C3)C)(F)[C@@H](O)C[C@@]2([C@@]1(C1)C(=O)CO)C)N1CC1=CC=CC(Cl)=C1 AOSZTAHDEDLTLQ-AZKQZHLXSA-N 0.000 description 11
- 229940126657 Compound 17 Drugs 0.000 description 11
- 229910004298 SiO 2 Inorganic materials 0.000 description 11
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 11
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 11
- FPGGTKZVZWFYPV-UHFFFAOYSA-M tetrabutylammonium fluoride Chemical compound [F-].CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC FPGGTKZVZWFYPV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 10
- ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N Phosphorous acid Chemical compound OP(O)=O ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 10
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 10
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 10
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 10
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 10
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 10
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 9
- ZQPBSCRNHWIVJX-UHFFFAOYSA-N CC(C)NC(C)C.OP(O)O.Cl Chemical compound CC(C)NC(C)C.OP(O)O.Cl ZQPBSCRNHWIVJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 9
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 9
- 125000002950 monocyclic group Chemical group 0.000 description 9
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 9
- GHYOCDFICYLMRF-UTIIJYGPSA-N (2S,3R)-N-[(2S)-3-(cyclopenten-1-yl)-1-[(2R)-2-methyloxiran-2-yl]-1-oxopropan-2-yl]-3-hydroxy-3-(4-methoxyphenyl)-2-[[(2S)-2-[(2-morpholin-4-ylacetyl)amino]propanoyl]amino]propanamide Chemical compound C1(=CCCC1)C[C@@H](C(=O)[C@@]1(OC1)C)NC([C@H]([C@@H](C1=CC=C(C=C1)OC)O)NC([C@H](C)NC(CN1CCOCC1)=O)=O)=O GHYOCDFICYLMRF-UTIIJYGPSA-N 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 8
- 229940125797 compound 12 Drugs 0.000 description 8
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 8
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical group NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 8
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 8
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical group O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 8
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 8
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 8
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 8
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 7
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 7
- 239000012230 colorless oil Substances 0.000 description 7
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 7
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 7
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 7
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 7
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 7
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 7
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 7
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 7
- BMTZEAOGFDXDAD-UHFFFAOYSA-M 4-(4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-methylmorpholin-4-ium;chloride Chemical compound [Cl-].COC1=NC(OC)=NC([N+]2(C)CCOCC2)=N1 BMTZEAOGFDXDAD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 5-methylcytosine Chemical compound CC1=CNC(=O)N=C1N LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101710093778 L-dopachrome tautomerase Proteins 0.000 description 6
- 102100031413 L-dopachrome tautomerase Human genes 0.000 description 6
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 102000008235 Toll-Like Receptor 9 Human genes 0.000 description 6
- 108010060818 Toll-Like Receptor 9 Proteins 0.000 description 6
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical group O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 6
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 6
- ZPUCINDJVBIVPJ-LJISPDSOSA-N cocaine Chemical compound O([C@H]1C[C@@H]2CC[C@@H](N2C)[C@H]1C(=O)OC)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZPUCINDJVBIVPJ-LJISPDSOSA-N 0.000 description 6
- 238000013461 design Methods 0.000 description 6
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 6
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 6
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 6
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 6
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 6
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 6
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 6
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 6
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 6
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 6
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical group CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940044655 toll-like receptor 9 agonist Drugs 0.000 description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 6
- SNICXCGAKADSCV-JTQLQIEISA-N (-)-Nicotine Chemical compound CN1CCC[C@H]1C1=CC=CN=C1 SNICXCGAKADSCV-JTQLQIEISA-N 0.000 description 5
- LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 3-Amino-1-methyl-5H-pyrido[4,3-b]indole Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C=C(N)N=C2C LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- WYFCZWSWFGJODV-MIANJLSGSA-N 4-[[(1s)-2-[(e)-3-[3-chloro-2-fluoro-6-(tetrazol-1-yl)phenyl]prop-2-enoyl]-5-(4-methyl-2-oxopiperazin-1-yl)-3,4-dihydro-1h-isoquinoline-1-carbonyl]amino]benzoic acid Chemical compound O=C1CN(C)CCN1C1=CC=CC2=C1CCN(C(=O)\C=C\C=1C(=CC=C(Cl)C=1F)N1N=NN=C1)[C@@H]2C(=O)NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 WYFCZWSWFGJODV-MIANJLSGSA-N 0.000 description 5
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 5
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 5
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 5
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 5
- ACBQROXDOHKANW-UHFFFAOYSA-N bis(4-nitrophenyl) carbonate Chemical compound C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1OC(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 ACBQROXDOHKANW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 5
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 5
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 5
- 150000002009 diols Chemical class 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 5
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 5
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 5
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 5
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 5
- 229960002715 nicotine Drugs 0.000 description 5
- SNICXCGAKADSCV-UHFFFAOYSA-N nicotine Natural products CN1CCCC1C1=CC=CN=C1 SNICXCGAKADSCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 5
- NXLNNXIXOYSCMB-UHFFFAOYSA-N (4-nitrophenyl) carbonochloridate Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(OC(Cl)=O)C=C1 NXLNNXIXOYSCMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ITQTTZVARXURQS-UHFFFAOYSA-N 3-methylpyridine Chemical compound CC1=CC=CN=C1 ITQTTZVARXURQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 4
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 4
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 4
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N [3-[hydroxy(2-hydroxyethoxy)phosphoryl]oxy-2-[(e)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (e)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C\CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\CCCCCCCC HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 4
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N adenyl group Chemical group N1=CN=C2N=CNC2=C1N GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000005090 alkenylcarbonyl group Chemical group 0.000 description 4
- 125000003806 alkyl carbonyl amino group Chemical group 0.000 description 4
- 125000004448 alkyl carbonyl group Chemical group 0.000 description 4
- 125000004414 alkyl thio group Chemical group 0.000 description 4
- 125000005087 alkynylcarbonyl group Chemical group 0.000 description 4
- 125000002619 bicyclic group Chemical group 0.000 description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 4
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 4
- 125000004663 dialkyl amino group Chemical group 0.000 description 4
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol Natural products OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 125000001188 haloalkyl group Chemical group 0.000 description 4
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 4
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 229940023041 peptide vaccine Drugs 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 4
- 230000005760 tumorsuppression Effects 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- ASGMFNBUXDJWJJ-JLCFBVMHSA-N (1R,3R)-3-[[3-bromo-1-[4-(5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-yl)phenyl]pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-6-yl]amino]-N,1-dimethylcyclopentane-1-carboxamide Chemical compound BrC1=NN(C2=NC(=NC=C21)N[C@H]1C[C@@](CC1)(C(=O)NC)C)C1=CC=C(C=C1)C=1SC(=NN=1)C ASGMFNBUXDJWJJ-JLCFBVMHSA-N 0.000 description 3
- UAOUIVVJBYDFKD-XKCDOFEDSA-N (1R,9R,10S,11R,12R,15S,18S,21R)-10,11,21-trihydroxy-8,8-dimethyl-14-methylidene-4-(prop-2-enylamino)-20-oxa-5-thia-3-azahexacyclo[9.7.2.112,15.01,9.02,6.012,18]henicosa-2(6),3-dien-13-one Chemical compound C([C@@H]1[C@@H](O)[C@@]23C(C1=C)=O)C[C@H]2[C@]12C(N=C(NCC=C)S4)=C4CC(C)(C)[C@H]1[C@H](O)[C@]3(O)OC2 UAOUIVVJBYDFKD-XKCDOFEDSA-N 0.000 description 3
- JVJGCCBAOOWGEO-RUTPOYCXSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-4-amino-2-[[(2s,3s)-2-[[(2s,3s)-2-[[(2s)-2-azaniumyl-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-carboxylatobutanoyl]amino]-6-azaniumy Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JVJGCCBAOOWGEO-RUTPOYCXSA-N 0.000 description 3
- HUWSZNZAROKDRZ-RRLWZMAJSA-N (3r,4r)-3-azaniumyl-5-[[(2s,3r)-1-[(2s)-2,3-dicarboxypyrrolidin-1-yl]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-oxo-4-sulfanylpentane-1-sulfonate Chemical compound OS(=O)(=O)CC[C@@H](N)[C@@H](S)C(=O)N[C@@H]([C@H](C)CC)C(=O)N1CCC(C(O)=O)[C@H]1C(O)=O HUWSZNZAROKDRZ-RRLWZMAJSA-N 0.000 description 3
- WZZBNLYBHUDSHF-DHLKQENFSA-N 1-[(3s,4s)-4-[8-(2-chloro-4-pyrimidin-2-yloxyphenyl)-7-fluoro-2-methylimidazo[4,5-c]quinolin-1-yl]-3-fluoropiperidin-1-yl]-2-hydroxyethanone Chemical compound CC1=NC2=CN=C3C=C(F)C(C=4C(=CC(OC=5N=CC=CN=5)=CC=4)Cl)=CC3=C2N1[C@H]1CCN(C(=O)CO)C[C@@H]1F WZZBNLYBHUDSHF-DHLKQENFSA-N 0.000 description 3
- YSUIQYOGTINQIN-UZFYAQMZSA-N 2-amino-9-[(1S,6R,8R,9S,10R,15R,17R,18R)-8-(6-aminopurin-9-yl)-9,18-difluoro-3,12-dihydroxy-3,12-bis(sulfanylidene)-2,4,7,11,13,16-hexaoxa-3lambda5,12lambda5-diphosphatricyclo[13.2.1.06,10]octadecan-17-yl]-1H-purin-6-one Chemical compound NC1=NC2=C(N=CN2[C@@H]2O[C@@H]3COP(S)(=O)O[C@@H]4[C@@H](COP(S)(=O)O[C@@H]2[C@@H]3F)O[C@H]([C@H]4F)N2C=NC3=C2N=CN=C3N)C(=O)N1 YSUIQYOGTINQIN-UZFYAQMZSA-N 0.000 description 3
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 0 COCC1OC(*)CC1OP(O)(OCC(CCCCNC(*)=O)COP=C)=* Chemical compound COCC1OC(*)CC1OP(O)(OCC(CCCCNC(*)=O)COP=C)=* 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940127007 Compound 39 Drugs 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 206010040880 Skin irritation Diseases 0.000 description 3
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 3
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 3
- 125000005091 alkenylcarbonylamino group Chemical group 0.000 description 3
- 125000005115 alkyl carbamoyl group Chemical group 0.000 description 3
- 125000005088 alkynylcarbonylamino group Chemical group 0.000 description 3
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 3
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 3
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960003920 cocaine Drugs 0.000 description 3
- 229940126545 compound 53 Drugs 0.000 description 3
- 125000003493 decenyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 3
- 208000010758 granulomatous inflammation Diseases 0.000 description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000011344 liquid material Substances 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 3
- YCJZWBZJSYLMPB-UHFFFAOYSA-N n-(2-chloropyrimidin-4-yl)-2,5-dimethyl-1-phenylimidazole-4-carboxamide Chemical compound CC=1N(C=2C=CC=CC=2)C(C)=NC=1C(=O)NC1=CC=NC(Cl)=N1 YCJZWBZJSYLMPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 3
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 3
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 125000003396 thiol group Chemical class [H]S* 0.000 description 3
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 3
- AVBGNFCMKJOFIN-UHFFFAOYSA-N triethylammonium acetate Chemical compound CC(O)=O.CCN(CC)CC AVBGNFCMKJOFIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 3
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- CRDAMVZIKSXKFV-FBXUGWQNSA-N (2-cis,6-cis)-farnesol Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C/CC\C(C)=C/CO CRDAMVZIKSXKFV-FBXUGWQNSA-N 0.000 description 2
- 239000000260 (2E,6E)-3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trien-1-ol Substances 0.000 description 2
- GCTFTMWXZFLTRR-GFCCVEGCSA-N (2r)-2-amino-n-[3-(difluoromethoxy)-4-(1,3-oxazol-5-yl)phenyl]-4-methylpentanamide Chemical compound FC(F)OC1=CC(NC(=O)[C@H](N)CC(C)C)=CC=C1C1=CN=CO1 GCTFTMWXZFLTRR-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 2
- IUSARDYWEPUTPN-OZBXUNDUSA-N (2r)-n-[(2s,3r)-4-[[(4s)-6-(2,2-dimethylpropyl)spiro[3,4-dihydropyrano[2,3-b]pyridine-2,1'-cyclobutane]-4-yl]amino]-3-hydroxy-1-[3-(1,3-thiazol-2-yl)phenyl]butan-2-yl]-2-methoxypropanamide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](C)OC)[C@H](O)CN[C@@H]1C2=CC(CC(C)(C)C)=CN=C2OC2(CCC2)C1)C(C=1)=CC=CC=1C1=NC=CS1 IUSARDYWEPUTPN-OZBXUNDUSA-N 0.000 description 2
- QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N (3S)-3-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[5-[(3aS,6aR)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-4-[1-bis(4-chlorophenoxy)phosphorylbutylamino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound CCCC(NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](Cc1ccc(O)cc1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCC1SC[C@@H]2NC(=O)N[C@H]12)C(C)C)P(=O)(Oc1ccc(Cl)cc1)Oc1ccc(Cl)cc1 QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N 0.000 description 2
- UDQTXCHQKHIQMH-KYGLGHNPSA-N (3ar,5s,6s,7r,7ar)-5-(difluoromethyl)-2-(ethylamino)-5,6,7,7a-tetrahydro-3ah-pyrano[3,2-d][1,3]thiazole-6,7-diol Chemical compound S1C(NCC)=N[C@H]2[C@@H]1O[C@H](C(F)F)[C@@H](O)[C@@H]2O UDQTXCHQKHIQMH-KYGLGHNPSA-N 0.000 description 2
- OMBVEVHRIQULKW-DNQXCXABSA-M (3r,5r)-7-[3-(4-fluorophenyl)-8-oxo-7-phenyl-1-propan-2-yl-5,6-dihydro-4h-pyrrolo[2,3-c]azepin-2-yl]-3,5-dihydroxyheptanoate Chemical compound O=C1C=2N(C(C)C)C(CC[C@@H](O)C[C@@H](O)CC([O-])=O)=C(C=3C=CC(F)=CC=3)C=2CCCN1C1=CC=CC=C1 OMBVEVHRIQULKW-DNQXCXABSA-M 0.000 description 2
- BYEAHWXPCBROCE-UHFFFAOYSA-N 1,1,1,3,3,3-hexafluoropropan-2-ol Chemical compound FC(F)(F)C(O)C(F)(F)F BYEAHWXPCBROCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KQZLRWGGWXJPOS-NLFPWZOASA-N 1-[(1R)-1-(2,4-dichlorophenyl)ethyl]-6-[(4S,5R)-4-[(2S)-2-(hydroxymethyl)pyrrolidin-1-yl]-5-methylcyclohexen-1-yl]pyrazolo[3,4-b]pyrazine-3-carbonitrile Chemical compound ClC1=C(C=CC(=C1)Cl)[C@@H](C)N1N=C(C=2C1=NC(=CN=2)C1=CC[C@@H]([C@@H](C1)C)N1[C@@H](CCC1)CO)C#N KQZLRWGGWXJPOS-NLFPWZOASA-N 0.000 description 2
- ONBQEOIKXPHGMB-VBSBHUPXSA-N 1-[2-[(2s,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-4,6-dihydroxyphenyl]-3-(4-hydroxyphenyl)propan-1-one Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC(O)=CC(O)=C1C(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 ONBQEOIKXPHGMB-VBSBHUPXSA-N 0.000 description 2
- KJUGUADJHNHALS-UHFFFAOYSA-N 1H-tetrazole Chemical compound C=1N=NNN=1 KJUGUADJHNHALS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GVZJRBAUSGYWJI-UHFFFAOYSA-N 2,5-bis(3-dodecylthiophen-2-yl)thiophene Chemical compound C1=CSC(C=2SC(=CC=2)C2=C(C=CS2)CCCCCCCCCCCC)=C1CCCCCCCCCCCC GVZJRBAUSGYWJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NPRYCHLHHVWLQZ-TURQNECASA-N 2-amino-9-[(2R,3S,4S,5R)-4-fluoro-3-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-7-prop-2-ynylpurin-8-one Chemical compound NC1=NC=C2N(C(N(C2=N1)[C@@H]1O[C@@H]([C@H]([C@H]1O)F)CO)=O)CC#C NPRYCHLHHVWLQZ-TURQNECASA-N 0.000 description 2
- VKIGAWAEXPTIOL-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyhexanenitrile Chemical compound CCCCC(O)C#N VKIGAWAEXPTIOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFOIDLOIBZFWDO-UHFFFAOYSA-N 2-methoxy-6-[6-methoxy-4-[(3-phenylmethoxyphenyl)methoxy]-1-benzofuran-2-yl]imidazo[2,1-b][1,3,4]thiadiazole Chemical compound N1=C2SC(OC)=NN2C=C1C(OC1=CC(OC)=C2)=CC1=C2OCC(C=1)=CC=CC=1OCC1=CC=CC=C1 LFOIDLOIBZFWDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000094 2-phenylethyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 2
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RYVNIFSIEDRLSJ-UHFFFAOYSA-N 5-(hydroxymethyl)cytosine Chemical compound NC=1NC(=O)N=CC=1CO RYVNIFSIEDRLSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XFJBGINZIMNZBW-CRAIPNDOSA-N 5-chloro-2-[4-[(1r,2s)-2-[2-(5-methylsulfonylpyridin-2-yl)oxyethyl]cyclopropyl]piperidin-1-yl]pyrimidine Chemical compound N1=CC(S(=O)(=O)C)=CC=C1OCC[C@H]1[C@@H](C2CCN(CC2)C=2N=CC(Cl)=CN=2)C1 XFJBGINZIMNZBW-CRAIPNDOSA-N 0.000 description 2
- GONFBOIJNUKKST-UHFFFAOYSA-N 5-ethylsulfanyl-2h-tetrazole Chemical compound CCSC=1N=NNN=1 GONFBOIJNUKKST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical group [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 2
- 206010018612 Gonorrhoea Diseases 0.000 description 2
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 2
- 241000713887 Human endogenous retrovirus Species 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 206010024769 Local reaction Diseases 0.000 description 2
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- LJOOWESTVASNOG-UFJKPHDISA-N [(1s,3r,4ar,7s,8s,8as)-3-hydroxy-8-[2-[(4r)-4-hydroxy-6-oxooxan-2-yl]ethyl]-7-methyl-1,2,3,4,4a,7,8,8a-octahydronaphthalen-1-yl] (2s)-2-methylbutanoate Chemical compound C([C@H]1[C@@H](C)C=C[C@H]2C[C@@H](O)C[C@@H]([C@H]12)OC(=O)[C@@H](C)CC)CC1C[C@@H](O)CC(=O)O1 LJOOWESTVASNOG-UFJKPHDISA-N 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 238000012382 advanced drug delivery Methods 0.000 description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 2
- 125000005193 alkenylcarbonyloxy group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003302 alkenyloxy group Chemical group 0.000 description 2
- 125000005092 alkenyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000005136 alkenylsulfinyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000005137 alkenylsulfonyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003282 alkyl amino group Chemical group 0.000 description 2
- 125000005196 alkyl carbonyloxy group Chemical group 0.000 description 2
- 125000005277 alkyl imino group Chemical group 0.000 description 2
- 125000004644 alkyl sulfinyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000004390 alkyl sulfonyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000005133 alkynyloxy group Chemical group 0.000 description 2
- 125000005225 alkynyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000005134 alkynylsulfinyl group Chemical group 0.000 description 2
- HSFWRNGVRCDJHI-UHFFFAOYSA-N alpha-acetylene Natural products C#C HSFWRNGVRCDJHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004397 aminosulfonyl group Chemical group NS(=O)(=O)* 0.000 description 2
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 2
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 2
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- 125000004603 benzisoxazolyl group Chemical group O1N=C(C2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 2
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- DQPSUGZZTADITQ-UHFFFAOYSA-N bis(2-nitrophenyl) carbonate Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=CC=C1OC(=O)OC1=CC=CC=C1[N+]([O-])=O DQPSUGZZTADITQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 125000004369 butenyl group Chemical group C(=CCC)* 0.000 description 2
- 125000000480 butynyl group Chemical group [*]C#CC([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 2
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 229940126142 compound 16 Drugs 0.000 description 2
- 229940127204 compound 29 Drugs 0.000 description 2
- 229940125877 compound 31 Drugs 0.000 description 2
- 229940125807 compound 37 Drugs 0.000 description 2
- 229940127573 compound 38 Drugs 0.000 description 2
- 229940126540 compound 41 Drugs 0.000 description 2
- 229940125936 compound 42 Drugs 0.000 description 2
- 229940125900 compound 59 Drugs 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 2
- 125000005117 dialkylcarbamoyl group Chemical group 0.000 description 2
- HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N diethylamine Chemical compound CCNCC HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- ZZVUWRFHKOJYTH-UHFFFAOYSA-N diphenhydramine Chemical group C=1C=CC=CC=1C(OCCN(C)C)C1=CC=CC=C1 ZZVUWRFHKOJYTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000001848 dysentery Diseases 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- 125000002534 ethynyl group Chemical group [H]C#C* 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 229940043259 farnesol Drugs 0.000 description 2
- 229930002886 farnesol Natural products 0.000 description 2
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 2
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 208000001786 gonorrhea Diseases 0.000 description 2
- 125000004438 haloalkoxy group Chemical group 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 2
- VKYKSIONXSXAKP-UHFFFAOYSA-N hexamethylenetetramine Chemical compound C1N(C2)CN3CN1CN2C3 VKYKSIONXSXAKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- 238000007914 intraventricular administration Methods 0.000 description 2
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 125000000555 isopropenyl group Chemical group [H]\C([H])=C(\*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 2
- 229960003511 macrogol Drugs 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 2
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 125000000740 n-pentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 2
- LHKVDVFVJMYULK-UHFFFAOYSA-N nitrosylazide Chemical compound [N-]=[N+]=NN=O LHKVDVFVJMYULK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 2
- OGIAAULPRXAQEV-UHFFFAOYSA-N odn 2216 Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(O)=O)C(OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)O)C1 OGIAAULPRXAQEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIRLPEMNFBJPIT-UHFFFAOYSA-N odn 2395 Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(COP(O)(O)=O)C(OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)O)C1 UIRLPEMNFBJPIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PIDFDZJZLOTZTM-KHVQSSSXSA-N ombitasvir Chemical compound COC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NC1=CC=C([C@H]2N([C@@H](CC2)C=2C=CC(NC(=O)[C@H]3N(CCC3)C(=O)[C@@H](NC(=O)OC)C(C)C)=CC=2)C=2C=CC(=CC=2)C(C)(C)C)C=C1 PIDFDZJZLOTZTM-KHVQSSSXSA-N 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 125000002971 oxazolyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 2
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 2
- 125000005981 pentynyl group Chemical group 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 2
- 150000003014 phosphoric acid esters Chemical class 0.000 description 2
- 125000004437 phosphorous atom Chemical group 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 125000004368 propenyl group Chemical group C(=CC)* 0.000 description 2
- 125000002568 propynyl group Chemical group [*]C#CC([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 150000004671 saturated fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000003441 saturated fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 125000002914 sec-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 208000037968 sinus cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000036556 skin irritation Effects 0.000 description 2
- 231100000475 skin irritation Toxicity 0.000 description 2
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 125000003003 spiro group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 231100000057 systemic toxicity Toxicity 0.000 description 2
- BCNZYOJHNLTNEZ-UHFFFAOYSA-N tert-butyldimethylsilyl chloride Chemical compound CC(C)(C)[Si](C)(C)Cl BCNZYOJHNLTNEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000005300 thiocarboxy group Chemical group C(=S)(O)* 0.000 description 2
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- CRDAMVZIKSXKFV-UHFFFAOYSA-N trans-Farnesol Natural products CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCO CRDAMVZIKSXKFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004665 trialkylsilyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000004306 triazinyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003866 trichloromethyl group Chemical group ClC(Cl)(Cl)* 0.000 description 2
- 125000005040 tridecenyl group Chemical group C(=CCCCCCCCCCCC)* 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002023 trifluoromethyl group Chemical group FC(F)(F)* 0.000 description 2
- RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphine Chemical compound C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 2
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 description 2
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 2
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- HZDNNJABYXNPPV-UHFFFAOYSA-N (2-chloro-2-oxoethyl) acetate Chemical compound CC(=O)OCC(Cl)=O HZDNNJABYXNPPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YIMATHOGWXZHFX-WCTZXXKLSA-N (2r,3r,4r,5r)-5-(hydroxymethyl)-3-(2-methoxyethoxy)oxolane-2,4-diol Chemical compound COCCO[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H]1O YIMATHOGWXZHFX-WCTZXXKLSA-N 0.000 description 1
- VXNZUUAINFGPBY-UHFFFAOYSA-N 1-Butene Chemical compound CCC=C VXNZUUAINFGPBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OBOHMJWDFPBPKD-UHFFFAOYSA-N 1-[chloro(diphenyl)methyl]-4-methoxybenzene Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C(Cl)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 OBOHMJWDFPBPKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YBYIRNPNPLQARY-UHFFFAOYSA-N 1H-indene Natural products C1=CC=C2CC=CC2=C1 YBYIRNPNPLQARY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004206 2,2,2-trifluoroethyl group Chemical group [H]C([H])(*)C(F)(F)F 0.000 description 1
- FMKGJQHNYMWDFJ-CVEARBPZSA-N 2-[[4-(2,2-difluoropropoxy)pyrimidin-5-yl]methylamino]-4-[[(1R,4S)-4-hydroxy-3,3-dimethylcyclohexyl]amino]pyrimidine-5-carbonitrile Chemical compound FC(COC1=NC=NC=C1CNC1=NC=C(C(=N1)N[C@H]1CC([C@H](CC1)O)(C)C)C#N)(C)F FMKGJQHNYMWDFJ-CVEARBPZSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVTJUIAKQFIXCE-HUKYDQBMSA-N 2-amino-9-[(2R,3S,4S,5R)-4-fluoro-3-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-7-prop-2-ynyl-1H-purine-6,8-dione Chemical compound NC=1NC(C=2N(C(N(C=2N=1)[C@@H]1O[C@@H]([C@H]([C@H]1O)F)CO)=O)CC#C)=O TVTJUIAKQFIXCE-HUKYDQBMSA-N 0.000 description 1
- ARVQIYGIIOWVCP-UHFFFAOYSA-N 2-cyanoethyl dihydrogen phosphite Chemical compound OP(O)OCCC#N ARVQIYGIIOWVCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003229 2-methylhexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QBWKPGNFQQJGFY-QLFBSQMISA-N 3-[(1r)-1-[(2r,6s)-2,6-dimethylmorpholin-4-yl]ethyl]-n-[6-methyl-3-(1h-pyrazol-4-yl)imidazo[1,2-a]pyrazin-8-yl]-1,2-thiazol-5-amine Chemical compound N1([C@H](C)C2=NSC(NC=3C4=NC=C(N4C=C(C)N=3)C3=CNN=C3)=C2)C[C@H](C)O[C@H](C)C1 QBWKPGNFQQJGFY-QLFBSQMISA-N 0.000 description 1
- HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 3-[3-[3,5-dihydroxy-6-methyl-4-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]oxydecanoyloxy]decanoic acid;hydrate Chemical compound O.OC1C(OC(CC(=O)OC(CCCCCCC)CC(O)=O)CCCCCCC)OC(C)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(C)O1 HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNNARSZPGNJZIX-UHFFFAOYSA-N 6-amino-5-prop-1-ynyl-1h-pyrimidin-2-one Chemical compound CC#CC1=CNC(=O)N=C1N QNNARSZPGNJZIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589291 Acinetobacter Species 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 241000120516 African horse sickness virus Species 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000224489 Amoeba Species 0.000 description 1
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 206010061424 Anal cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000007860 Anus Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 206010004593 Bile duct cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 description 1
- 241001115070 Bornavirus Species 0.000 description 1
- 241000589968 Borrelia Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical group [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YWUQOBIFWBQXLB-AFHMWFOHSA-N CC(C)CCC[C@@H](C)[C@@H](CC1)[C@@](C)(CC2)C1[C@H]1[C@H]2[C@@](C)(CC[C@@H](C2)OC(NCCCCCC(N(C3)C(CO[O]=C)CC3O)=O)=O)C2=CC1 Chemical compound CC(C)CCC[C@@H](C)[C@@H](CC1)[C@@](C)(CC2)C1[C@H]1[C@H]2[C@@](C)(CC[C@@H](C2)OC(NCCCCCC(N(C3)C(CO[O]=C)CC3O)=O)=O)C2=CC1 YWUQOBIFWBQXLB-AFHMWFOHSA-N 0.000 description 1
- LPJMVIUEIRQAKF-UHFFFAOYSA-N COC(C1)C(CO)OC1Br Chemical compound COC(C1)C(CO)OC1Br LPJMVIUEIRQAKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000244203 Caenorhabditis elegans Species 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000700664 Capripoxvirus Species 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241001502567 Chikungunya virus Species 0.000 description 1
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 1
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 1
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 1
- 208000005243 Chondrosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 241000725101 Clea Species 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000709687 Coxsackievirus Species 0.000 description 1
- 241000223935 Cryptosporidium Species 0.000 description 1
- 206010011732 Cyst Diseases 0.000 description 1
- 241000725619 Dengue virus Species 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 241001115402 Ebolavirus Species 0.000 description 1
- 241000244160 Echinococcus Species 0.000 description 1
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000009273 Endometriosis Diseases 0.000 description 1
- 241000588914 Enterobacter Species 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241001198387 Escherichia coli BL21(DE3) Species 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010015548 Euthanasia Diseases 0.000 description 1
- 206010015719 Exsanguination Diseases 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000239183 Filaria Species 0.000 description 1
- 108010040721 Flagellin Proteins 0.000 description 1
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 description 1
- 241000589601 Francisella Species 0.000 description 1
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 description 1
- 208000022072 Gallbladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 206010051066 Gastrointestinal stromal tumour Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 206010067807 Gingival cancer Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 101100260757 Homo sapiens TLR9 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000831496 Homo sapiens Toll-like receptor 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000669447 Homo sapiens Toll-like receptor 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000669460 Homo sapiens Toll-like receptor 5 Proteins 0.000 description 1
- 101000669402 Homo sapiens Toll-like receptor 7 Proteins 0.000 description 1
- 101000800483 Homo sapiens Toll-like receptor 8 Proteins 0.000 description 1
- 241000701085 Human alphaherpesvirus 3 Species 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 1
- 241000713340 Human immunodeficiency virus 2 Species 0.000 description 1
- 241000430519 Human rhinovirus sp. Species 0.000 description 1
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 206010060708 Induration Diseases 0.000 description 1
- 241001500351 Influenzavirus A Species 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701460 JC polyomavirus Species 0.000 description 1
- 241000710842 Japanese encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 206010023825 Laryngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000712902 Lassa mammarenavirus Species 0.000 description 1
- 241000589248 Legionella Species 0.000 description 1
- 208000007764 Legionnaires' Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000222722 Leishmania <genus> Species 0.000 description 1
- 206010024229 Leprosy Diseases 0.000 description 1
- 241000589902 Leptospira Species 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 1
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 208000016604 Lyme disease Diseases 0.000 description 1
- 241000712899 Lymphocytic choriomeningitis mammarenavirus Species 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001115401 Marburgvirus Species 0.000 description 1
- 208000005450 Maxillary Sinus Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 1
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 description 1
- UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-N Metaphosphoric acid Chemical compound OP(=O)=O UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000127282 Middle East respiratory syndrome-related coronavirus Species 0.000 description 1
- 241001024304 Mino Species 0.000 description 1
- 208000003445 Mouth Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 1
- 241000711386 Mumps virus Species 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 101100170604 Mus musculus Dmap1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282339 Mustela Species 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- GUVMFDICMFQHSZ-UHFFFAOYSA-N N-(1-aminoethenyl)-1-[4-[[5-(4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-1-yl)-3-[[5-(4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-1-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-1-yl)-3-[[5-(4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-1-yl)-3-[[5-(4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-1-yl)-3-[[5-(4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-1-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[hydroxy-[[3-[hydroxy-[[3-hydroxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy]phosphinothioyl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy]phosphinothioyl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-[[[2-[[[2-[[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-2-[[[5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)-2-[[hydroxy-[2-(hydroxymethyl)-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxyphosphinothioyl]oxymethyl]oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphinothioyl]oxymethyl]oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphinothioyl]oxymethyl]-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphinothioyl]oxymethyl]-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphinothioyl]oxymethyl]oxolan-2-yl]-5-methylimidazole-4-carboxamide Chemical compound CC1=C(C(=O)NC(N)=C)N=CN1C1OC(COP(O)(=S)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=S)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=S)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=S)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=S)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)CO)C(OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)O)C1 GUVMFDICMFQHSZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182474 N-glycoside Natural products 0.000 description 1
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 1
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 1
- 241000588652 Neisseria gonorrhoeae Species 0.000 description 1
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241001263478 Norovirus Species 0.000 description 1
- 241000714209 Norwalk virus Species 0.000 description 1
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000150452 Orthohantavirus Species 0.000 description 1
- 208000001715 Osteoblastoma Diseases 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 241000233870 Pneumocystis Species 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 108091036414 Polyinosinic:polycytidylic acid Proteins 0.000 description 1
- 241001505332 Polyomavirus sp. Species 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 1
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 1
- 241001240958 Pseudomonas aeruginosa PAO1 Species 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 241000282806 Rhinoceros Species 0.000 description 1
- 241000606701 Rickettsia Species 0.000 description 1
- 241000713124 Rift Valley fever virus Species 0.000 description 1
- 241000711897 Rinderpest morbillivirus Species 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 241000710799 Rubella virus Species 0.000 description 1
- 241000315672 SARS coronavirus Species 0.000 description 1
- 208000004337 Salivary Gland Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010061934 Salivary gland cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 241000369757 Sapovirus Species 0.000 description 1
- 241000369753 Sapporo virus Species 0.000 description 1
- 206010039509 Scab Diseases 0.000 description 1
- 241000242677 Schistosoma japonicum Species 0.000 description 1
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 241000607720 Serratia Species 0.000 description 1
- 241000700665 Sheeppox virus Species 0.000 description 1
- 101710173694 Short transient receptor potential channel 2 Proteins 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010068771 Soft tissue neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 241000191963 Staphylococcus epidermidis Species 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 241000272534 Struthio camelus Species 0.000 description 1
- 208000037065 Subacute sclerosing leukoencephalitis Diseases 0.000 description 1
- 206010042297 Subacute sclerosing panencephalitis Diseases 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 1
- 241000709710 Swine vesicular disease virus Species 0.000 description 1
- 208000024313 Testicular Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 1
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000002474 Tinea Diseases 0.000 description 1
- 102100024324 Toll-like receptor 3 Human genes 0.000 description 1
- 102100039360 Toll-like receptor 4 Human genes 0.000 description 1
- 102100039357 Toll-like receptor 5 Human genes 0.000 description 1
- 102100039390 Toll-like receptor 7 Human genes 0.000 description 1
- 102100033110 Toll-like receptor 8 Human genes 0.000 description 1
- 206010062129 Tongue neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000223996 Toxoplasma Species 0.000 description 1
- 108010018242 Transcription Factor AP-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100023118 Transcription factor JunD Human genes 0.000 description 1
- 241000893966 Trichophyton verrucosum Species 0.000 description 1
- 241000223104 Trypanosoma Species 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000711975 Vesicular stomatitis virus Species 0.000 description 1
- 241000711825 Viral hemorrhagic septicemia virus Species 0.000 description 1
- 241000710886 West Nile virus Species 0.000 description 1
- 241000710772 Yellow fever virus Species 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 125000000641 acridinyl group Chemical group C1(=CC=CC2=NC3=CC=CC=C3C=C12)* 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 201000005188 adrenal gland cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000024447 adrenal gland neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 125000004183 alkoxy alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004453 alkoxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005198 alkynylcarbonyloxy group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005139 alkynylsulfonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 125000005428 anthryl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2C([H])=C3C(*)=C([H])C([H])=C([H])C3=C([H])C2=C1[H] 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940053200 antiepileptics fatty acid derivative Drugs 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 201000011165 anus cancer Diseases 0.000 description 1
- 125000002029 aromatic hydrocarbon group Chemical group 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 125000002393 azetidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004069 aziridinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 125000003785 benzimidazolyl group Chemical group N1=C(NC2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 125000004604 benzisothiazolyl group Chemical group S1N=C(C2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 125000004618 benzofuryl group Chemical group O1C(=CC2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 125000005874 benzothiadiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001164 benzothiazolyl group Chemical group S1C(=NC2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 125000004196 benzothienyl group Chemical group S1C(=CC2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 125000003354 benzotriazolyl group Chemical group N1N=NC2=C1C=CC=C2* 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 1
- 208000026900 bile duct neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- IAQRGUVFOMOMEM-UHFFFAOYSA-N butene Natural products CC=CC IAQRGUVFOMOMEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 1
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 1
- 125000000609 carbazolyl group Chemical group C1(=CC=CC=2C3=CC=CC=C3NC12)* 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000004948 cheek mucosa cancer Diseases 0.000 description 1
- OKYYOKGIPDRZJA-CPSXWDTOSA-N chembl2103792 Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)CO)[C@@H](O)C1 OKYYOKGIPDRZJA-CPSXWDTOSA-N 0.000 description 1
- 239000007810 chemical reaction solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 208000006990 cholangiocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 150000001841 cholesterols Chemical class 0.000 description 1
- 125000003016 chromanyl group Chemical group O1C(CCC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 125000000259 cinnolinyl group Chemical group N1=NC(=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003245 coal Substances 0.000 description 1
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 1
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229940125846 compound 25 Drugs 0.000 description 1
- 229940125851 compound 27 Drugs 0.000 description 1
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 description 1
- 229940127113 compound 57 Drugs 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 125000001047 cyclobutenyl group Chemical group C1(=CCC1)* 0.000 description 1
- 125000001995 cyclobutyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004850 cyclobutylmethyl group Chemical group C1(CCC1)C* 0.000 description 1
- 125000001162 cycloheptenyl group Chemical group C1(=CCCCCC1)* 0.000 description 1
- 125000000582 cycloheptyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000003678 cyclohexadienyl group Chemical group C1(=CC=CCC1)* 0.000 description 1
- 125000000596 cyclohexenyl group Chemical group C1(=CCCCC1)* 0.000 description 1
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004210 cyclohexylmethyl group Chemical group [H]C([H])(*)C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000006547 cyclononyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000640 cyclooctyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000002433 cyclopentenyl group Chemical group C1(=CCCC1)* 0.000 description 1
- 125000001511 cyclopentyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004851 cyclopentylmethyl group Chemical group C1(CCCC1)C* 0.000 description 1
- 125000000298 cyclopropenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C1([H])* 0.000 description 1
- 125000001559 cyclopropyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C1([H])* 0.000 description 1
- 125000004186 cyclopropylmethyl group Chemical group [H]C([H])(*)C1([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 description 1
- 206010052015 cytokine release syndrome Diseases 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000006837 decompression Effects 0.000 description 1
- 125000005070 decynyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C#C* 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 238000006642 detritylation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000004987 dibenzofuryl group Chemical group C1(=CC=CC=2OC3=C(C21)C=CC=C3)* 0.000 description 1
- WBKFWQBXFREOFH-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;ethyl acetate Chemical compound ClCCl.CCOC(C)=O WBKFWQBXFREOFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001664 diethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])N(*)C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 208000024334 diffuse gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 125000005056 dihydrothiazolyl group Chemical group S1C(NC=C1)* 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 125000002147 dimethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])N(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000532 dioxanyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005879 dioxolanyl group Chemical group 0.000 description 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- 125000005066 dodecenyl group Chemical group C(=CCCCCCCCCCC)* 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000004454 ethmoid sinus cancer Diseases 0.000 description 1
- RSIHJDGMBDPTIM-UHFFFAOYSA-N ethoxy(trimethyl)silane Chemical compound CCO[Si](C)(C)C RSIHJDGMBDPTIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000031 ethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])N([H])[*] 0.000 description 1
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 1
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 125000003983 fluorenyl group Chemical group C1(=CC=CC=2C3=CC=CC=C3CC12)* 0.000 description 1
- IRXSLJNXXZKURP-UHFFFAOYSA-N fluorenylmethyloxycarbonyl chloride Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)Cl)C3=CC=CC=C3C2=C1 IRXSLJNXXZKURP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 201000004457 frontal sinus cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000024386 fungal infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 125000002541 furyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 201000010175 gallbladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000011243 gastrointestinal stromal tumor Diseases 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 125000004634 hexahydroazepinyl group Chemical group N1(CCCCCC1)* 0.000 description 1
- JYVHOGDBFNJNMR-UHFFFAOYSA-N hexane;hydrate Chemical compound O.CCCCCC JYVHOGDBFNJNMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006038 hexenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005980 hexynyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 125000002632 imidazolidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002636 imidazolinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005945 imidazopyridyl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 125000003392 indanyl group Chemical group C1(CCC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 125000003453 indazolyl group Chemical group N1N=C(C2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 125000003454 indenyl group Chemical group C1(C=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 125000003387 indolinyl group Chemical group N1(CCC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 125000003406 indolizinyl group Chemical group C=1(C=CN2C=CC=CC12)* 0.000 description 1
- 125000001041 indolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000006301 indolyl methyl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 125000003384 isochromanyl group Chemical group C1(OCCC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 1
- 125000004491 isohexyl group Chemical group C(CCC(C)C)* 0.000 description 1
- 125000004594 isoindolinyl group Chemical group C1(NCC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 125000000904 isoindolyl group Chemical group C=1(NC=C2C=CC=CC12)* 0.000 description 1
- 125000001972 isopentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 125000002183 isoquinolinyl group Chemical group C1(=NC=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 125000001786 isothiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 125000000842 isoxazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009191 jumping Effects 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 206010023841 laryngeal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 208000012987 lip and oral cavity carcinoma Diseases 0.000 description 1
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 230000009773 lymphatic migration Effects 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 208000008417 malignant catarrh Diseases 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000004488 maxillary sinus cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000019303 maxillary sinus carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 229940127554 medical product Drugs 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- QRGPDTRRBAEMNK-UHFFFAOYSA-N methanethioyl acetate Chemical compound CC(=O)OC=S QRGPDTRRBAEMNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SKTCDJAMAYNROS-UHFFFAOYSA-N methoxycyclopentane Chemical compound COC1CCCC1 SKTCDJAMAYNROS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CQSQICAWKWNGMP-UHFFFAOYSA-N methyl dihydrogen phosphite N-propan-2-ylpropan-2-amine hydrochloride Chemical compound Cl.COP(O)O.CC(C)NC(C)C CQSQICAWKWNGMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000250 methylamino group Chemical group [H]N(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229960002900 methylcellulose Drugs 0.000 description 1
- YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N methylphosphonic acid Chemical compound CP(O)(O)=O YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000002715 modification method Methods 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 125000002757 morpholinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- CZFNISFYDPIDNM-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylformamide;oxolane Chemical compound CN(C)C=O.C1CCOC1 CZFNISFYDPIDNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003136 n-heptyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001280 n-hexyl group Chemical group C(CCCCC)* 0.000 description 1
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004923 naphthylmethyl group Chemical group C1(=CC=CC2=CC=CC=C12)C* 0.000 description 1
- 125000004593 naphthyridinyl group Chemical group N1=C(C=CC2=CC=CN=C12)* 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 125000001971 neopentyl group Chemical group [H]C([*])([H])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 208000025189 neoplasm of testis Diseases 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 125000005187 nonenyl group Chemical group C(=CCCCCCCC)* 0.000 description 1
- 125000005071 nonynyl group Chemical group C(#CCCCCCCC)* 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 238000001668 nucleic acid synthesis Methods 0.000 description 1
- WTBAHSZERDXKKZ-UHFFFAOYSA-N octadecanoyl chloride Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(Cl)=O WTBAHSZERDXKKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004365 octenyl group Chemical group C(=CCCCCCC)* 0.000 description 1
- 125000005069 octynyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C#C* 0.000 description 1
- VRHMPUJYJVJKNI-UHFFFAOYSA-N odn 10104 Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(O)=O)C(O)C1 VRHMPUJYJVJKNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DHYWDEXXBWTTEH-UHFFFAOYSA-N odn 2007 Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(O)=O)C(O)C1 DHYWDEXXBWTTEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 229940049964 oleate Drugs 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 125000001715 oxadiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- CWGKROHVCQJSPJ-UHFFFAOYSA-N oxathiasilirane Chemical compound O1[SiH2]S1 CWGKROHVCQJSPJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005880 oxathiolanyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003551 oxepanyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003566 oxetanyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 125000000466 oxiranyl group Chemical group 0.000 description 1
- LVSJDHGRKAEGLX-UHFFFAOYSA-N oxolane;2,2,2-trifluoroacetic acid Chemical compound C1CCOC1.OC(=O)C(F)(F)F LVSJDHGRKAEGLX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BSCHIACBONPEOB-UHFFFAOYSA-N oxolane;hydrate Chemical compound O.C1CCOC1 BSCHIACBONPEOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YWWARDMVSMPOLR-UHFFFAOYSA-M oxolane;tetrabutylazanium;fluoride Chemical compound [F-].C1CCOC1.CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC YWWARDMVSMPOLR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000005740 oxycarbonyl group Chemical group [*:1]OC([*:2])=O 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000003154 papilloma Diseases 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 125000002255 pentenyl group Chemical group C(=CCCC)* 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 125000005561 phenanthryl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001484 phenothiazinyl group Chemical group C1(=CC=CC=2SC3=CC=CC=C3NC12)* 0.000 description 1
- 125000004932 phenoxathinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001644 phenoxazinyl group Chemical group C1(=CC=CC=2OC3=CC=CC=C3NC12)* 0.000 description 1
- 125000004344 phenylpropyl group Chemical group 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 description 1
- 125000004592 phthalazinyl group Chemical group C1(=NN=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 125000004193 piperazinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005936 piperidyl group Chemical group 0.000 description 1
- 201000000317 pneumocystosis Diseases 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920005990 polystyrene resin Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 230000007015 preclinical effect Effects 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 125000001844 prenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001042 pteridinyl group Chemical group N1=C(N=CC2=NC=CN=C12)* 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- 125000000561 purinyl group Chemical group N1=C(N=C2N=CNC2=C1)* 0.000 description 1
- 125000003373 pyrazinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003072 pyrazolidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002755 pyrazolinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003226 pyrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002098 pyridazinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004076 pyridyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005344 pyridylmethyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C(=N1)C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000000714 pyrimidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000719 pyrrolidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001422 pyrrolinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000168 pyrrolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002294 quinazolinyl group Chemical group N1=C(N=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 125000002943 quinolinyl group Chemical group N1=C(C=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 125000001567 quinoxalinyl group Chemical group N1=C(C=NC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 201000009410 rhabdomyosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 238000010079 rubber tapping Methods 0.000 description 1
- 229930195734 saturated hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- SUBJHSREKVAVAR-UHFFFAOYSA-N sodium;methanol;methanolate Chemical compound [Na+].OC.[O-]C SUBJHSREKVAVAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 210000003718 sphenoid sinus Anatomy 0.000 description 1
- 150000003408 sphingolipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 150000003429 steroid acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 210000000701 subdural space Anatomy 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- IIACRCGMVDHOTQ-UHFFFAOYSA-M sulfamate Chemical compound NS([O-])(=O)=O IIACRCGMVDHOTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 description 1
- 150000003456 sulfonamides Chemical class 0.000 description 1
- 150000003457 sulfones Chemical class 0.000 description 1
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 150000003462 sulfoxides Chemical class 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000002511 suppository base Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 206010042863 synovial sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000003120 testicular cancer Diseases 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001712 tetrahydronaphthyl group Chemical group C1(CCCC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 125000001412 tetrahydropyranyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000006173 tetrahydropyranylmethyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 125000001113 thiadiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005458 thianyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001984 thiazolidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000335 thiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005302 thiazolylmethyl group Chemical group [H]C1=C([H])N=C(S1)C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001544 thienyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001166 thiolanyl group Chemical group 0.000 description 1
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 229930003799 tocopherol Natural products 0.000 description 1
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 description 1
- 125000002640 tocopherol group Chemical class 0.000 description 1
- 235000019149 tocopherols Nutrition 0.000 description 1
- 201000006134 tongue cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 125000001425 triazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000001946 ultra-performance liquid chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 125000005065 undecenyl group Chemical group C(=CCCCCCCCCC)* 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 229930195735 unsaturated hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 229940124856 vaccine component Drugs 0.000 description 1
- 230000005924 vaccine-induced immune response Effects 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 210000004885 white matter Anatomy 0.000 description 1
- 125000001834 xanthenyl group Chemical group C1=CC=CC=2OC3=CC=CC=C3C(C12)* 0.000 description 1
- 229940051021 yellow-fever virus Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/117—Nucleic acids having immunomodulatory properties, e.g. containing CpG-motifs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6018—Lipids, e.g. in lipopeptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6025—Nucleotides
Definitions
- the present invention relates to a nucleic acid derivative having immunostimulatory activity. More specifically, the present invention relates to a double-stranded oligonucleotide in which the first strand is a CpG oligonucleotide and the lipid is bound to the second strand.
- Vaccines which are pharmaceuticals used in the field of infectious diseases and cancer, use specific immune responses against antigens.
- Adjuvants are compounds with immunostimulatory activity that are used to increase the effectiveness and sustainability of vaccine immune responses.
- Various types of adjuvants such as aluminum salts, emulsifiers, and liposomes have been researched and developed so far. (Non-Patent Document 1, etc.).
- ssCpG ODN single-stranded oligodeoxynucleotide
- 5'-CpG-3 ' unmethylated cytosine-guanine dinucleotide
- ssCpG ODN is a ligand of TLR9 (Toll-like receptor 9), and induces Th1 immunity and cytotoxic T cell (CTL) reaction very efficiently through TLR9 and activates immunity (non-patented) Reference 1).
- TLR9 Toll-like receptor 9
- CTL cytotoxic T cell
- Non-patent document 2 a method of encapsulating ssCpG ODN in nanoparticles formed of a lipid bilayer membrane (Non-patent document 2), a method of binding lipid to the 5 ′ end of ssCpG ODN (non-patent document) 3, Patent Document 1) and the like are known.
- Non-patent Document 4 describes that dsCpG ODN alone does not show an immunostimulatory effect, but if dsCpG ODN is encapsulated in lipofectin particles, it exhibits immunostimulatory activity regardless of the CpG motif or GpC motif.
- An object of the present invention is to provide a nucleic acid derivative having a novel immunostimulatory activity that can be used as an adjuvant of a vaccine and / or a vaccine itself.
- Non-Patent Documents 4 and 5 describe that immunostimulatory activity is not exhibited even when dsCpG ODN is administered. Furthermore, Non-Patent Document 5 discloses that when dsCpG ODN is encapsulated in lipofectin particles, IL-8 and HLR-DRA expression is performed regardless of the CpG motif (ODN4531) or GpC motif (ODN4531GC), that is, in a method independent of the CG sequence. It is described that was induced.
- dsCpG ODN degrades faster in the cell than ssCpG ODN
- the reason why dsCpG ODN encapsulated in lipofectin particles showed immunostimulatory activity is that dsCpG ODN is encapsulated in lipofectin particles. It is stated that it may be protected from premature degradation (page 165, right column, lines 14-16).
- the present inventors have found that the first strand is a CpG oligonucleotide, the second strand is an oligonucleotide containing a sequence capable of hybridizing to the first strand, and the second strand A double-stranded oligonucleotide having a lipid bound thereto (lipid-bound double-stranded oligonucleotide of the present invention) was synthesized.
- lipid-binding double-stranded oligonucleotide of the present invention together with a cancer antigen peptide as an adjuvant improves the induction rate of antigen-specific CTL by the vaccine and exhibits an antitumor effect (of the present invention).
- a lipid-binding double-stranded oligonucleotide is used as an adjuvant, it is also referred to as “the adjuvant of the present invention”).
- the lipid-binding double-stranded oligonucleotides of the present invention there are those that exhibit a strong antitumor effect by themselves, that is, those that can be used as cancer vaccines (the lipid-binding double-stranded oligonucleotide of the present invention).
- the single-stranded oligonucleotide is used as a vaccine, it is also referred to as “the vaccine of the present invention”). That is, the lipid-binding double-stranded oligonucleotide of the present invention has immunostimulatory activity.
- the lipid-binding double-stranded oligonucleotide of the present invention has good metabolic stability and water solubility, low toxicity, and is sufficiently safe for use as a medicine.
- the adjuvant of the present invention in which the second strand is a DNA nucleotide the adjuvant of the present invention in which the nucleoside derivative having OMe at the 2′-position of the sugar is bound, or F at the 2′-position of the sugar
- the adjuvant of the present invention which is an oligonucleotide to which a nucleoside derivative was bound, was administered together with a cancer antigen peptide, it showed an increase in CTL induction rate and a strong antitumor effect compared to ssCpG ODN (Example 3, result 1-A , B, result 7-A, B, result 9-A, B, etc.).
- the lipid-bound double-stranded oligonucleotide (SEQ-40) whose second strand is an RNA oligonucleotide did not show an antitumor effect (Result 7-B).
- the adjuvant of the present invention in which a lipid containing two acyl chains containing 14 to 24 carbon atoms is bound to the 3 ′ end or 5 ′ end of the second chain is administered together with a cancer antigen peptide, it is compared with ssCpG ODN. And showed strong antitumor effect (Example 3, results 2-A, B, etc.).
- a double-stranded oligonucleotide (SEQ-12) in which a lipid containing two acyl chains containing 10 carbon atoms is bound to the 5 ′ end of the second chain is administered together with a cancer antigen peptide, ssCpG ODN Compared with, no improvement in antitumor effect was observed. Further, a lipid comprising two acyl chains containing 12 to 20 carbon atoms is bound to the 3 ′ end or 5 ′ end of the second chain, and the lipid is bound to the other end.
- the adjuvant of the present invention in which lipid is bound to the second strand through an oligonucleotide linker (for example, dGdG, dTdT, dAdA, etc.) together with the cancer antigen peptide, it is compared with the adjuvant of the present invention without a linker. Furthermore, the CTL induction rate was increased and a strong antitumor effect was exhibited (Example 3, results 8-A, B, etc.).
- an oligonucleotide linker for example, dGdG, dTdT, dAdA, etc.
- the lipid-binding double-stranded oligonucleotide of the present invention has no systemic toxicity and high safety (Example 5).
- the adjuvant of the present invention also showed immunostimulatory activity as an adjuvant for infectious disease vaccines (Example 6).
- the adjuvant (SEQ-121) of the present invention in which a lipid is bound to the second strand via an oligonucleotide linker (dGdGdGdGdGdG) is administered alone, it exhibits a strong antitumor effect compared to ssCpG ODN. (Example 4).
- the present invention relates to the following.
- the first strand is a CpG oligonucleotide of 8 to 50 bases
- the second strand is an oligonucleotide of 8 to 60 bases (excluding an RNA oligonucleotide) containing a sequence capable of hybridizing to the first strand
- the length of the second chain is 50% or more of the length of the first chain
- A2 The double-stranded oligonucleotide according to (A1), wherein the second strand oligonucleotide is an oligonucleotide to which a DNA nucleoside and / or nucleoside derivative is bound.
- A3 The two nucleoside derivatives according to (A2), wherein the nucleoside derivative is a nucleoside having a substituent at the 2′-position of the sugar and / or a nucleoside having a cross-linking structure between the 4′-position and the 2′-position of the sugar.
- Strand oligonucleotides Strand oligonucleotides.
- (A4) The structure according to (A3), wherein the cross-linked structure between the 4′-position and the 2′-position of the sugar is 4 ′-(CH 2 ) m—O-2 ′ (m is an integer of 1 to 4).
- Double stranded oligonucleotide (A5) The double-stranded oligonucleotide according to any one of (A1) to (A4), wherein the lipid is a diacyl lipid.
- (A6) The double-stranded oligonucleotide according to (A1) to (A5), wherein the lipid is bound to the 3 ′ end and / or the 5 ′ end of the second strand.
- (A7) The double-stranded oligonucleotide according to any one of (A1) to (A6), wherein the lipid is bound via a linker.
- (A8) The double-stranded oligonucleotide according to (A7), wherein the linker is an oligonucleotide linker.
- the linker is-(dX 1 ) u- (wherein X 1 is each independently A, G, C or T, and u is an integer of 1 to 8).
- A8) The double-stranded oligonucleotide.
- (A10) The double-stranded oligonucleotide according to (A1), selected from the group consisting of SEQ-61, SEQ-119, SEQ-121, SEQ-170, and SEQ-192.
- (A11) The group consisting of SEQ-59, SEQ-166, SEQ-168, SEQ-216, SEQ-272, SEQ-280, SEQ-290, SEQ-294, SEQ-310, SEQ-373, and SEQ-384
- the double-stranded oligonucleotide according to (A1) selected from: (A12) A pharmaceutical composition comprising the double-stranded oligonucleotide according to any one of (A1) to (A11).
- A13 The pharmaceutical composition according to (A12), further comprising an antigen.
- A14 A method for treating or preventing cancer or an infectious disease, comprising administering the double-stranded oligonucleotide according to any one of (A1) to (A11).
- A15 Use of the double-stranded oligonucleotide according to any of (A1) to (A11) for producing a therapeutic or prophylactic agent for cancer or infectious diseases.
- A16 The double-stranded oligonucleotide according to any one of (A1) to (A11) for treating or preventing cancer or an infectious disease.
- the self-antigen is a cancer antigen, an antigen associated with Alzheimer's disease, an antigen against a human antibody, or an antigen expressed from a human endogenous retrovirus element.
- the addictive substance is nicotine or cocaine.
- a method for increasing an immune response in a subject comprising administering to the subject an effective amount of the pharmaceutical composition according to any of (A13), (A17) to (A20) Administering to increase the immune response in the subject.
- A22 The method according to (A21), wherein the immune response is an increase in the induction rate of induced specific cytotoxic T cells compared to the control.
- A23 The method according to (A21) or (A22), wherein the subject has cancer or an infectious disease.
- the present invention also includes the following.
- the first strand is a CpG oligonucleotide of 8 to 50 bases;
- the second strand is an 8 to 60 base oligonucleotide comprising a sequence capable of hybridizing to the first strand;
- An adjuvant comprising a double-stranded oligonucleotide in which a lipid is bound to the second strand via a linker or not.
- B2 The adjuvant according to (B1), wherein the second strand oligonucleotide is an oligonucleotide to which a DNA nucleoside and / or nucleoside derivative is bound.
- (B3) The adjuvant according to (B2), wherein the nucleoside derivative is a nucleoside having a substituent at the 2 ′ position of the sugar and / or a nucleoside having a cross-linking structure between the 4 ′ position and the 2 ′ position of the sugar.
- (B4) The adjuvant according to (B3), wherein the substituent is OCH 3 .
- (B5) The adjuvant according to any one of (B1) to (B4), wherein the lipid is a diacyl lipid.
- (B6) The adjuvant according to (B5), wherein the acyl chain of the diacyl lipid contains 14 to 30 carbon atoms.
- (B7) The adjuvant according to (B5) or (B6), wherein the lipid is bound to the 5 ′ end of the second strand.
- (B8) The adjuvant according to any one of (B1) to (B7), wherein the length of the second chain is 50% or more of the length of the first chain.
- (B9) The adjuvant according to any one of (B1) to (B8), wherein the lipid is bound via a linker.
- (B10) The adjuvant according to (B9), wherein the linker is an oligonucleotide linker.
- (B11) The adjuvant according to (B10), wherein the linker is dX 1 dX 2 (wherein X 1 or X 2 is A, G, C, or T).
- (B12) A vaccine composition comprising an antigen and the adjuvant according to any one of (B1) to (B11).
- the self-antigen is a cancer antigen, an antigen associated with Alzheimer's disease, an antigen against a human antibody, or an antigen expressed from a human endogenous retrovirus element.
- the addictive substance is nicotine or cocaine.
- (B17) A method for increasing an immune response in a subject comprising administering an effective amount of the vaccine composition according to any of (B12) to (B16) to the subject, Increasing the immune response in said subject.
- (B18) The method according to (B17), wherein the immune response is an increase in the induction rate of induced specific cytotoxic T cells compared to the control.
- (B19) The method according to (B17) or (B18), wherein the subject has cancer or an infectious disease.
- (B20) A method for treating cancer or an infectious disease, the method comprising administering an effective amount of the vaccine composition according to any of (B12) to (B15) to a subject, and controlling the subject A method comprising reducing one or more symptoms of the cancer or infectious disease as compared to.
- the lipid-binding double-stranded oligonucleotide of the present invention exhibits a superior immunostimulatory activity against the target antigen. Since no systemic toxicity was observed, application to pharmaceuticals is expected as an adjuvant of vaccine and / or vaccine itself.
- Antitumor effect when ssCpG ODN (ODN1826, SEQ-1) or adjuvant of the present invention (SEQ-46 and SEQ-48) having lipids at both ends is administered together with a cancer antigen peptide (TRP2 peptide) ssCpG ODN (ODN1826, SEQ-1), ssCpG ODN (SEQ-2) into which a lipid ligand is introduced, or the adjuvants (SEQ-8 and SEQ-10) of the present invention having different chain lengths are used as cancer antigen peptides (TRP2 peptides) )
- adjuvant means a compound having an immunostimulatory activity that is used to enhance the effectiveness and persistence of the immune response of a vaccine antigen.
- Nucleoside means a compound in which a nucleobase and a sugar form an N-glycoside bond.
- Olionucleotide means a nucleotide in which a plurality of identical or different nucleosides are linked.
- the linkage between sugars (internucleoside linkage) in an oligonucleotide may be a linkage that a natural nucleic acid has, a phosphodiester (D-oligo), an artificially modified linkage, or a phosphorus atom.
- D-oligo phosphodiester
- bonding as described in international publication 2013/022966, international publication 2011/005761, international publication 2014/012081, international publication 2015/125845, etc. can also be utilized.
- Examples of the bond having no phosphorus atom include divalent substituents derived from alkyl, non-aromatic carbocyclic groups, haloalkyl, halogen-substituted non-aromatic carbocyclic groups, and the like.
- divalent substituents derived from alkyl, non-aromatic carbocyclic groups, haloalkyl, halogen-substituted non-aromatic carbocyclic groups, and the like.
- all may
- DNA nucleoside or “RNA nucleoside” means a natural DNA nucleoside or a natural RNA nucleoside and means a part of a nucleotide which is one unit constituting an oligonucleotide.
- Natural DNA nucleoside means: (Wherein B X1 is adenine, guanine, cytosine or thymine)
- Natural RNA nucleoside means: (In the formula, B X2 is adenine, guanine, cytosine or uracil.)
- DNA oligonucleotide is an oligonucleotide in which a plurality of DNA nucleosides are bound
- RNA oligonucleotide is an oligonucleotide in which a plurality of RNA nucleosides are bound.
- nucleoside derivative means a nucleoside in which a DNA nucleoside or an RNA nucleoside is artificially modified at the nucleobase and / or sugar site. Any modification of nucleosides known in the art can be used.
- nucleobase modifications include 5-methylcytosine, 5-hydroxymethylcytosine, 5-propynylcytosine and the like.
- Examples of the modification of the sugar moiety include substitution at the 2 ′ position of the sugar. Specifically, 2′-F, 2′-OCH 3 (2′-OMe), 2′-OCH 2 CH 2 OCH 3 (2′-MOE) and the like. Moreover, for example, a cross-linked structure between the 4′-position and the 2′-position of the following sugars can be mentioned.
- R 1 and R 2 are preferably a hydrogen atom.
- R 3 is preferably a hydrogen atom, alkyl, alkenyl, alkynyl, aromatic carbocyclic group, non-aromatic carbocyclic group, aromatic heterocyclic group, non-aromatic heterocyclic group, aromatic carbocycle It is alkyl, non-aromatic carbocyclic alkyl, aromatic heterocyclic alkyl or non-aromatic heterocyclic alkyl, and may have one or more arbitrary substituents selected from ⁇ group.
- the ⁇ group is a hydroxyl group, alkyl, alkyloxy, mercapto, alkylthio, amino, alkylamino or halogen.
- the cross-linked structure is preferably 4 ′-(CR 1 R 2 ) m—O-2 ′ or 4 ′-(CR 1 R 2 ) m 1 —C ( ⁇ O) —NR 3 -2 ′ (AmNA, Bridged nucleic acid) here,
- Each R 1 is independently a hydrogen atom, halogen, cyano, substituted or unsubstituted alkyl, substituted or unsubstituted alkenyl, or substituted or unsubstituted alkynyl;
- Each R 2 is independently a hydrogen atom, halogen, cyano, substituted or unsubstituted alkyl, substituted or unsubstituted alkenyl, or substituted or unsubstituted alkynyl;
- R 3 is a hydrogen atom, substituted or unsubstituted alkyl, substituted or unsubstituted alkenyl or substituted or unsubstituted alkynyl,
- m
- the cross-linked structure is particularly preferably 4 ′-(CH 2 ) m—O-2 ′ (m is an integer of 1 to 4) or 4′-C ( ⁇ O) —NR 3 -2 ′ (R 3 Is a hydrogen atom or alkyl).
- 4 ′-(CH 2 ) m—O-2 ′ (m is an integer of 1 to 4)
- 4′—CH 2 —O-2 ′ (LNA, Locked Nucleic Acid) is particularly preferable.
- Specific examples and preparation methods thereof are described in International Publication No. 98/39352, International Publication No. 2003/066875, International Publication No. 2005/021570, and the like.
- 4′-C ( ⁇ O) —NR 3 ⁇ 2 ′ (R 3 is a hydrogen atom or alkyl)
- 4′—C ( ⁇ O) —NCH 3 ⁇ 2 ′ is particularly preferable. Specific examples and preparation methods thereof are described in International Publication No. 2011/052436.
- Nucleotide modification and modification methods known in the art are also disclosed in, for example, the following patent documents.
- Halogen includes fluorine atom, chlorine atom, bromine atom and iodine atom. In particular, a fluorine atom and a chlorine atom are preferable.
- Alkyl includes straight or branched hydrocarbon groups having 1 to 15 carbon atoms, preferably 1 to 10 carbon atoms, more preferably 1 to 6 carbon atoms, and still more preferably 1 to 4 carbon atoms. To do. For example, methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, n-pentyl, isopentyl, neopentyl, n-hexyl, isohexyl, n-heptyl, isoheptyl, n-octyl , Isooctyl, n-nonyl, n-decyl and the like.
- alkyl examples include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl and n-pentyl. Further preferred examples include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl and tert-butyl.
- Alkenyl has 2 to 15 carbon atoms, preferably 2 to 10 carbon atoms, more preferably 2 to 6 carbon atoms, and further preferably 2 to 4 carbon atoms, having one or more double bonds at any position. These linear or branched hydrocarbon groups are included.
- alkenyl include vinyl, allyl, propenyl, isopropenyl, butenyl, isobutenyl, prenyl, butadienyl, pentenyl, isopentenyl, pentadienyl, hexenyl, isohexenyl, hexadienyl, heptenyl, octenyl, nonenyl, decenyl, undecenyl, dodecenyl, tridecenyl, decenyl, tridecenyl, decenyl Etc.
- alkenyl include vinyl, allyl, propenyl, isopropenyl and butenyl.
- Alkynyl has 2 to 10 carbon atoms, preferably 2 to 8 carbon atoms, more preferably 2 to 6 carbon atoms, more preferably 2 to 4 carbon atoms, having one or more triple bonds at any position. Includes straight chain or branched hydrocarbon groups. Examples include ethynyl, propynyl, butynyl, pentynyl, hexynyl, heptynyl, octynyl, nonynyl, decynyl and the like. These may further have a double bond at an arbitrary position. Preferred embodiments of “alkynyl” include ethynyl, propynyl, butynyl and pentynyl.
- “Aromatic carbocyclic group” means a monocyclic or bicyclic or more cyclic aromatic hydrocarbon group. For example, phenyl, naphthyl, anthryl, phenanthryl and the like can be mentioned. A preferred embodiment of the “aromatic carbocyclic group” includes phenyl.
- non-aromatic carbocyclic group means a cyclic saturated hydrocarbon group or a cyclic non-aromatic unsaturated hydrocarbon group having one or more rings.
- the non-aromatic carbocyclic group having 2 or more rings includes a monocyclic ring or a non-aromatic carbocyclic group having 2 or more rings condensed with a ring in the “aromatic carbocyclic group”.
- the “non-aromatic carbocyclic group” includes a group which forms a bridge or a spiro ring as described below.
- the monocyclic non-aromatic carbocyclic group preferably has 3 to 16 carbon atoms, more preferably 3 to 12 carbon atoms, and still more preferably 4 to 8 carbon atoms.
- Examples include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclooctyl, cyclononyl, cyclodecyl, cyclopropenyl, cyclobutenyl, cyclopentenyl, cyclohexenyl, cycloheptenyl, cyclohexadienyl, and the like.
- Examples of the two or more non-aromatic carbocyclic groups include indanyl, indenyl, acenaphthyl, tetrahydronaphthyl, fluorenyl and the like.
- “Aromatic heterocyclic group” means a monocyclic or bicyclic or more aromatic cyclic group having one or more heteroatoms arbitrarily selected from O, S and N in the ring. To do.
- the aromatic heterocyclic group having 2 or more rings is a monocyclic ring or an aromatic heterocyclic group having 2 or more rings, and the ring in the “aromatic carbocyclic group” and / or “non-aromatic carbocyclic group” is Condensed products are also included.
- the monocyclic aromatic heterocyclic group is preferably 5 to 8 members, more preferably 5 or 6 members.
- Examples include pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridyl, pyridazinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, triazolyl, triazinyl, tetrazolyl, furyl, thienyl, isoxazolyl, oxazolyl, oxadiazolyl, isothiazolyl, thiazolyl, thiadiazolyl and the like.
- bicyclic aromatic heterocyclic group examples include indolyl, isoindolyl, indazolyl, indolizinyl, quinolinyl, isoquinolinyl, cinnolinyl, phthalazinyl, quinazolinyl, naphthyridinyl, quinoxalinyl, purinyl, pteridinyl, benzimidazolyl, benzisoxazolyl, benzisoxazolyl, Oxazolyl, benzoxiadiazolyl, benzisothiazolyl, benzothiazolyl, benzothiadiazolyl, benzofuryl, isobenzofuryl, benzothienyl, benzotriazolyl, imidazopyridyl, triazolopyridyl, imidazothiazolyl, pyrazinopyr Dazinyl, oxazolopyridyl, thiazolopyridyl and the like can be mentioned
- aromatic heterocyclic group having 3 or more rings examples include carbazolyl, acridinyl, xanthenyl, phenothiazinyl, phenoxathinyl, phenoxazinyl, dibenzofuryl and the like.
- non-aromatic heterocyclic group is a monocyclic or bicyclic or more cyclic non-aromatic cyclic group having one or more of the same or different heteroatoms arbitrarily selected from O, S and N in the ring Means group.
- a non-aromatic heterocyclic group having two or more rings is a monocyclic or two or more non-aromatic heterocyclic group, an “aromatic carbocyclic group”, “non-aromatic carbocyclic group” and / or Also included are those in which each ring in the “aromatic heterocyclic group” is condensed.
- the “non-aromatic heterocyclic group” includes a group which forms a bridge or a spiro ring as described below.
- the monocyclic non-aromatic heterocyclic group is preferably 3 to 8 members, more preferably 5 or 6 members.
- Alkyloxy means a group in which “alkyl” is bonded to an oxygen atom. Examples thereof include methoxy, ethoxy, n-propyloxy, isopropyloxy, n-butyloxy, tert-butyloxy, isobutyloxy, sec-butyloxy, pentyloxy, isopentyloxy, hexyloxy and the like. Preferable embodiments of “alkyloxy” include methoxy, ethoxy, n-propyloxy, isopropyloxy, tert-butyloxy.
- Haloalkyl means a group in which one or more “halogen” is bonded to “alkyl”. For example, monofluoromethyl, monofluoroethyl, monofluoropropyl, 2,2,3,3,3-pentafluoropropyl, monochloromethyl, trifluoromethyl, trichloromethyl, 2,2,2-trifluoroethyl, 2, Examples include 2,2-trichloroethyl, 1,2-dibromoethyl, 1,1,1-trifluoropropan-2-yl and the like. Preferable embodiments of “haloalkyl” include trifluoromethyl and trichloromethyl.
- Alkylthio means a group in which “alkyl” is bonded to a sulfur atom.
- Alkylamino includes monoalkylamino and dialkylamino.
- “Monoalkylamino” means a group in which “alkyl” is replaced with one hydrogen atom bonded to the nitrogen atom of the amino group.
- methylamino, ethylamino, isopropylamino and the like can be mentioned.
- methylamino and ethylamino are used.
- “Dialkylamino” means a group in which “alkyl” is replaced with two hydrogen atoms bonded to the nitrogen atom of the amino group. The two alkyls may be the same or different.
- Examples include dimethylamino, diethylamino, N, N-diisopropylamino, N-methyl-N-ethylamino, N-isopropyl-N-ethylamino and the like. Preferable examples include dimethylamino and diethylamino.
- Alkylcarbonylamino means a group in which alkylcarbonyl is replaced with one or two hydrogen atoms bonded to the nitrogen atom of the amino group. In the case of two, each alkylcarbonyl group may be the same or different. For example, methylcarbonylamino, ethylcarbonylamino, propylcarbonylamino, isopropylcarbonylamino, tert-butylcarbonylamino, isobutylcarbonylamino, sec-butylcarbonylamino, dimethylcarbonylamino, diethylcarbonylamino, N, N-diisopropylcarbonylamino, etc. Is mentioned. Preferable embodiments of “alkylcarbonylamino” include methylcarbonylamino and ethylcarbonylamino.
- Alkenylcarbonylamino means a group in which alkenylcarbonyl is replaced with one or two hydrogen atoms bonded to the nitrogen atom of the amino group. In the case of two, each alkenylcarbonyl group may be the same or different. For example, vinylcarbonylamino, propenylcarbonylamino and the like can be mentioned.
- Alkynylcarbonylamino means a group in which alkynylcarbonyl is replaced with one or two hydrogen atoms bonded to the nitrogen atom of the amino group. In the case of two, each alkynylcarbonyl group may be the same or different. For example, ethynylcarbonylamino, propynylcarbonylamino and the like can be mentioned.
- Alkylcarbamoyl means a group in which “alkyl” is replaced with one or two hydrogen atoms bonded to the nitrogen atom of the carbamoyl group. In the case of two, each alkyl group may be the same or different. For example, methylcarbamoyl, ethylcarbamoyl, dimethylcarbamoyl, diethylcarbamoyl and the like can be mentioned.
- Alkenylcarbamoyl means a group in which “alkenyl” is replaced with one or two hydrogen atoms bonded to the nitrogen atom of the carbamoyl group. In the case of two, each alkenyl group may be the same or different. Examples thereof include vinyl carbamoyl, propenyl carbamoyl and the like.
- Alkynylcarbamoyl means a group in which “alkynyl” is replaced with one or two hydrogen atoms bonded to the nitrogen atom of the carbamoyl group. In the case of two, each alkynyl group may be the same or different. For example, ethynylcarbamoyl, propynylcarbamoyl and the like can be mentioned.
- alkyl part of “aromatic carbocyclic alkyl”, “non-aromatic carbocyclic alkyl”, “aromatic heterocyclic alkyl”, and “non-aromatic heterocyclic alkyl” is the same as “alkyl”.
- “Aromatic carbocyclic alkyl” means an alkyl substituted with one or more “aromatic carbocyclic groups”. For example, benzyl, phenethyl, phenylpropyl, benzhydryl, trityl, naphthylmethyl, groups shown below Etc.
- aromatic carbocyclic alkyl Preferable embodiments of “aromatic carbocyclic alkyl” include benzyl, phenethyl and benzhydryl.
- Non-aromatic carbocyclic alkyl means an alkyl substituted with one or more “non-aromatic carbocyclic groups”. “Non-aromatic carbocyclic alkyl” also includes “non-aromatic carbocyclic alkyl” in which the alkyl moiety is substituted with “aromatic carbocyclic group”. For example, cyclopropylmethyl, cyclobutylmethyl, cyclopentylmethyl, cyclohexylmethyl, groups shown below Etc.
- “Aromatic heterocyclic alkyl” means alkyl substituted with one or more “aromatic heterocyclic groups”. “Aromatic heterocyclic alkyl” also includes “aromatic heterocyclic alkyl” in which the alkyl moiety is substituted with “aromatic carbocyclic group” and / or “non-aromatic carbocyclic group”.
- pyridylmethyl furanylmethyl, imidazolylmethyl, indolylmethyl, benzothiophenylmethyl, oxazolylmethyl, isoxazolylmethyl, thiazolylmethyl, isothiazolylmethyl, pyrazolylmethyl, isopyrazolylmethyl, pyrrolidinylmethyl, benz Oxazolylmethyl, group shown below Etc.
- Non-aromatic heterocyclic alkyl means alkyl substituted with one or more “non-aromatic heterocyclic groups”. In the “non-aromatic heterocyclic alkyl”, the alkyl moiety is replaced with “aromatic carbocyclic group”, “non-aromatic carbocyclic group” and / or “aromatic heterocyclic group”. Non-aromatic heterocyclic alkyl ”is also included. For example, tetrahydropyranylmethyl, morpholinylethyl, piperidinylmethyl, piperazinylmethyl, groups shown below Etc.
- Substituted or unsubstituted alkyl “substituted or unsubstituted alkenyl”, “substituted or unsubstituted alkynyl”, “substituted or unsubstituted alkyloxy”, “substituted or unsubstituted alkylcarbonylamino”, “substituted” Or “unsubstituted alkenylcarbonylamino”, “substituted or unsubstituted alkynylcarbonylamino”, “substituted or unsubstituted alkylcarbamoyl”, “substituted or unsubstituted alkenylcarbamoyl” or “substituted or unsubstituted alkynylcarbamoyl”.
- substituents include the following substituents.
- the carbon atom at any position may be bonded to one or more groups selected from the following substituents.
- Substituents halogen, hydroxy, carboxy, amino, imino, hydroxyamino, hydroxyimino, formyl, formyloxy, carbamoyl, sulfamoyl, sulfanyl, sulfino, sulfo, thioformyl, thiocarboxy, dithiocarboxy, thiocarbamoyl, cyano, nitro, nitroso , Azide, hydrazino, ureido, amidino, guanidino, trialkylsilyl, alkyloxy, alkenyloxy, alkynyloxy, haloalkyloxy, alkylcarbonyl, alkenylcarbonyl, alkynylcarbonyl, monoalkylamino, dialkylamino
- Substituted or unsubstituted aromatic carbocyclic group “Substituted or unsubstituted nonaromatic carbocyclic group”, “Substituted or unsubstituted aromatic heterocyclic group”, and “Substituted or unsubstituted aromatic carbocyclic group”
- Substituents on the rings of “aromatic carbocycle”, “non-aromatic carbocycle”, “aromatic heterocycle” and “non-aromatic heterocycle” of “non-aromatic heterocyclic group” include the following substitutions: Groups. An atom at any position on the ring may be bonded to one or more groups selected from the following substituents.
- Substituents halogen, hydroxy, carboxy, amino, imino, hydroxyamino, hydroxyimino, formyl, formyloxy, carbamoyl, sulfamoyl, sulfanyl, sulfino, sulfo, thioformyl, thiocarboxy, dithiocarboxy, thiocarbamoyl, cyano, nitro, nitroso , Azide, hydrazino, ureido, amidino, guanidino, trialkylsilyl, alkyl, alkenyl, alkynyl, haloalkyl, alkyloxy, alkenyloxy, alkynyloxy, haloalkyloxy, alkyloxyalkyl, alkylcarbonyl, alkenylcarbonyl, Alkynylcarbonyl, monoalkylamino, dialkylamin
- substituted or unsubstituted non-aromatic carbocyclic group and “substituted or unsubstituted non-aromatic heterocyclic group” may be substituted with “oxo”. In this case, it means a group in which two hydrogen atoms on a carbon atom are substituted as follows.
- the first strand is a CpG oligonucleotide having 8 to 50 bases
- the second strand is an 8 to 60 base oligonucleotide comprising a sequence capable of hybridizing to the first strand; It consists of a double-stranded oligonucleotide in which lipid is bound to the second strand via a linker or not.
- the first strand is a CpG oligonucleotide of 8-50 bases;
- the second strand is an oligonucleotide of 8 to 60 bases (excluding an RNA oligonucleotide) containing a sequence capable of hybridizing to the first strand;
- the length of the second chain is 50% or more of the length of the first chain; It is a double-stranded oligonucleotide in which a lipid containing a hydrocarbon chain having 12 to 30 carbon atoms is bound to the second chain via a linker or not.
- the first strand of the lipid-binding double-stranded oligonucleotide of the present invention is a CpG oligonucleotide having 8 to 50 bases.
- CpG oligonucleotide (CpG ODN) is a single-stranded oligonucleotide containing an unmethylated cytosine-guanine dinucleotide (5′-CpG-3 ′) motif (CpG motif), and is mediated by TLR9. It is known that it can be used as a vaccine adjuvant (Nat Rev Drug Discov, 2006, 5, 471-484, Expert Rev Vaccines., 2011, 10 (4), 499). -511).
- the CpG oligonucleotide used in the present invention contains at least one CpG motif and may contain a plurality of CpG motifs.
- the length of the CpG oligonucleotide used in the present invention is 8 to 50 bases.
- CpG oligonucleotide is not particularly limited as long as it is a known CpG oligonucleotide whose immunostimulatory activity is known in the art.
- International Publication No. 2006/065751, International Publication No. 2007/092315, International Publication No. 2008/068638, International Publication No. 2010/0667262, International Publication No. 2010/125480, International Publication No. 2014/047588, International Publication No. Synthetic methods and CpG oligonucleotides can be mentioned in Japanese Patent Publication No. 2014/134698, International Publication No. 2015/041318, US Patent Application Publication No. 2011/0300163, and the like.
- CpG oligonucleotides can be synthesized with reference to the methods described in the above documents.
- CpG oligonucleotides are classified into class A, class B, class C, class P, class S based on sequence, secondary structure and effects on human peripheral blood mononuclear cells (PBMC) (Advanced drug delivery reviews, 2009, 61 (3), 195-204).
- Class A ODN1585, ODN2216, ODN2336, etc .
- Class B ODNWW006, ODN D-SL01, ODN1668 (International Publication No. 2005/063264), OND1826 (International Publication No. 2007/030580), OND2006 (CpG7909, PF-3512676) (International Publication No.
- CpG ODN 10104 CpG-10104
- Drug Data Rep 2006, 28 (3), 258
- CpG ODN-1585 International Publication No. 2001/022990
- ODN-5890 International Publication No. 2006/080946
- 1018-ISS International Publication No. 2008/073661
- EMD-1201081 HYB-2055, IMO-2055
- CpG oligonucleotides can be used in the present invention, but preferably a class A CpG oligonucleotide (eg, ODN2216, ODN2336, D35-CpG, etc.) or a class B CpG oligonucleotide ( For example, ODN1826, ODN2006, CpG-28, 1018-ISS, IMO2055, K3-CpG, ODN684, D-LS01, etc.) or class C CpG oligonucleotides (eg, D-LS03, ODN2395, ODN M362). Particularly preferred are ODN1826 and ODN2006.
- a class A CpG oligonucleotide eg, ODN2216, ODN2336, D35-CpG, etc.
- a class B CpG oligonucleotide eg., ODN1826, ODN2006, CpG-28, 1018-ISS, IMO20
- the second strand of the lipid-binding double-stranded oligonucleotide of the present invention is an 8- to 60-base oligonucleotide containing a sequence capable of hybridizing to the first strand CpG oligonucleotide (excluding an RNA oligonucleotide). It is.
- the second strand is an 8 to 60 base oligonucleotide comprising a sequence capable of hybridizing to the first strand CpG oligonucleotide under stringent conditions.
- Second-strand oligonucleotides include those in which one or several mismatches exist at the site of hybridization as long as they can hybridize with CpG oligonucleotides under stringent conditions.
- the homology is indicated in the score by using a search program BLAST using an algorithm developed by Altschul et al. (The Journal of Molecular Biology, 215, 403-410 (1990)), for example. .
- “Stringent conditions” means that a certain base sequence forms a hybrid with a specific sequence (so-called specific hybrid), and a base sequence that does not have an equivalent function forms a hybrid with a specific sequence (so-called non-specific hybrid) It means a condition that does not.
- Those skilled in the art can easily select such conditions by changing the temperature during the hybridization reaction and washing, the salt concentration of the hybridization reaction solution and the washing solution, and the like. Specifically, it is 42 ° C. in 6 ⁇ SSC (0.9 M NaCl, 0.09 M trisodium citrate) or 6 ⁇ SSPE (3 M NaCl, 0.2 M NaH 2 PO 4 , 20 mM EDTA ⁇ 2Na, pH 7.4).
- Examples of the stringent conditions of the present invention include, but are not limited to, the conditions in which the cells are hybridized with and washed with 0.5 ⁇ SSC at 42 ° C.
- a hybridization method a well-known and commonly used method in this field, for example, a Southern blot hybridization method or the like can be used. Specifically, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition (1989) (Cold Spring Harbor Laboratory Press), Current Protocol in Amplification in Coal (1994) (Ten-Proc. It can be carried out according to the method described in Second Edition (1995) (Oxford University Press) and the like.
- One or several mismatches means 1 to 5, preferably 1 to 3, more preferably 1 or 2 mismatches.
- the second strand of the lipid-binding double-stranded oligonucleotide of the present invention has a length of 8 to 60 bases.
- the length of the second strand may be the same as the CpG oligonucleotide that is the first strand, or as long as it hybridizes with the CpG oligonucleotide, one or several more than the length of the CpG oligonucleotide. It may be as short as the base.
- the length of the second strand may be longer than the length of the CpG oligonucleotide by adding one or several bases to one side or both sides of the site that hybridizes with the CpG oligonucleotide.
- “One or several bases” means 1 to 10, 1 to 5, 1 to 3, or 1 or 2 bases.
- the preferred length of the second strand depends on the length of the CpG oligonucleotide of the first strand.
- the length of the first chain is 50% or more, 60% or more, 70% or more, 50 to 100%, 60 to 100%, 70% It is ⁇ 100% long. Particularly preferred is a length of 50 to 100% with respect to the length of the first chain.
- the second-strand oligonucleotide of the lipid-binding double-stranded oligonucleotide of the present invention is an oligonucleotide to which a nucleoside selected from the group consisting of a DNA nucleoside, an RNA nucleoside, and a nucleoside derivative is bound. All nucleosides may be of the same type or may contain two or more nucleosides. However, RNA oligonucleotides in which all nucleosides are RNA nucleosides are excluded.
- the nucleoside contained in the second strand is preferably an oligonucleotide to which a DNA nucleoside and / or a nucleoside derivative is bound.
- nucleosides may be DNA nucleosides, all nucleosides may be nucleoside derivatives, or both may be included.
- a DNA nucleoside and a nucleoside derivative for example, an oligonucleotide including a central region and terminal regions on both sides of the central region, and including at least one nucleoside derivative in both terminal regions.
- the nucleoside derivative is contained in the 5 ′ terminal region and / or the 3 ′ terminal region in an amount of 1 or more, preferably 1 to 5, and more preferably 2 to 3.
- the type, number and position of modification in one terminal region may be the same as or different from the type, number and position of modification in the other terminal region.
- Other embodiments also include oligonucleotides that randomly include nucleoside derivatives.
- nucleoside derivative in the second strand of the lipid-binding double-stranded oligonucleotide of the present invention any nucleoside modification known in the art can be used as exemplified above.
- it is a nucleoside having a substituent at the 2′-position of the sugar and / or a nucleoside having a cross-linking structure between the 4′-position and the 2′-position of the sugar.
- the substituent at the 2 ′ position of the sugar is preferably F, OCH 3 or OCH 2 CH 2 OCH 3 . OCH 3 is particularly preferable.
- the cross-linked structure between the 4′-position and the 2′-position of the sugar is preferably 4 ′-(CH 2 ) m—O-2 ′ (m is an integer of 1 to 4), 4′-C ( ⁇ O) —NR 3 -2 ′ (R 3 represents a hydrogen atom or alkyl).
- any internucleoside linkage known in the art can be used as exemplified above. All the internucleoside bonds may be of the same type or may contain two or more types of bonds. Preferred are D-oligo and / or S-oligo. When two or more internucleoside linkages are included, such as D-oligo and S-oligo, for example, it includes a central region and terminal regions on both sides of the central region, and at least one non-natural nucleoside in both terminal regions.
- Examples include oligonucleotides that contain interlinkages (eg, S-oligos) and natural internucleoside linkages (ie, D-oligos) in the central region.
- interlinkages eg, S-oligos
- natural internucleoside linkages ie, D-oligos
- the 5′-terminal region and / or the 3′-terminal region contain one or more non-natural internucleoside linkages, preferably 1-5, more preferably 2-3.
- the type, number and position of modification in one terminal region may be the same as or different from the type, number and position of modification in the other terminal region.
- Other embodiments also include oligonucleotides that randomly include non-natural internucleoside linkages.
- the first-strand CpG oligonucleotide and the second-strand oligonucleotide in the lipid-binding double-stranded oligonucleotide of the present invention can be synthesized by a conventional method in the art.
- a commercially available nucleic acid automatic synthesizer (For example, Applied Biosystems, Dainippon Seiki Co., Ltd., etc.) can be easily synthesized.
- Examples of the synthesis method include a solid phase synthesis method using phosphoramidite and a solid phase synthesis method using hydrogen phosphonate. For example, it is disclosed in Example 1 below, Tetrahedron Letters 22, 1859-1862 (1981), and the like.
- the synthesized first strand and second strand are hybridized by a known method to form a double-stranded oligonucleotide. For example, it is disclosed in Example 1 below and Example 1 of International Publication No. 2013/0889283.
- lipid is bound to the second strand with or without a linker.
- the “lipid” is a hydrophobic compound and is not particularly limited as long as it is a known lipid, and may be linear, branched or cyclic.
- fatty acids having an aliphatic chain of 8 to 30 carbons eg farnesol
- diacyl lipids eg farnesol
- cholesterol e.g., cholesterol
- cholesterol derivatives e.g., cholesterol
- steroid acids eg bile acids
- lipid A lipid A
- tocopherols or combinations thereof examples include linear unsaturated fatty acids and saturated fatty acids, branched saturated fatty acids and unsaturated fatty acids, and fatty acid derivatives (for example, fatty acid esters, fatty acid amides, fatty acid thioesters, etc.). However, it is not limited to these.
- the lipid used in the present invention is preferably a lipid containing a hydrocarbon chain.
- Preferable examples include lipids containing one or two hydrocarbon chains.
- the lipid-binding double-stranded oligonucleotide of the present invention particularly preferably has a diacyl lipid.
- the lipid is bound at two or more positions, if one lipid is a diacyl lipid, the other lipid may be a lipid other than the diacyl lipid.
- the “diacyl lipid” is a phospholipid, a glycolipid, a sphingolipid, or a combination thereof, and includes two hydrocarbon chains.
- it is a group represented by the following (a) or (f).
- Each hydrocarbon chain in the lipid contains about 8 to 30 carbon atoms, is saturated, unsaturated, or a combination thereof, and may be branched.
- the preferred chain length is 8 to 30 carbon atoms, more preferably 8 to 20 carbon atoms.
- the preferred chain length is 10 to 30 carbon atoms, more preferably 12 to 30 carbon atoms, and still more preferably 14 to 24 carbon atoms.
- the two chains may be the same or different in length.
- the chain in the lipid binds to a site containing phosphoric acid, sugar or the like (site that binds to the oligonucleotide) via an ester bond, an amide bond, a thioester bond, or a combination thereof.
- the lipid-bonded double-stranded oligonucleotide of the present invention has a lipid containing a hydrocarbon chain having 12 to 30 carbon atoms in the second chain. When lipids are bound at two or more positions, if one lipid is a lipid containing a hydrocarbon chain having 12 to 30 carbon atoms, the carbon number of the hydrocarbon chain contained in the other lipid is less than 12. Also good.
- lipid examples include the following. (Wherein p and q are each independently an integer of 6 to 28, preferably each independently 8 to 28, more preferably each independently 10 to 28, and still more preferably each independently. 12-22.)
- the lipid may be bound to any of the second strands. It may be bound in the 3 ′ end, 5 ′ end or in the second strand. When the lipid is bound in the second chain, it can be bound, for example, as follows.
- B 1 and B 2 are adenine (A), guanine (G), cytosine (C), 5-methylcytosine (5-Me-C), thymine (T) or uracil (U), Y a and Y b are O or S, and p and q are each independently an integer of 6 to 28, preferably 10 to 18.)
- the lipid is preferably bound to one or two positions of the second chain. Preferably, a lipid is bound to the 3 ′ end and / or the 5 ′ end. More preferably, a lipid is bound to the 5 ′ end.
- lipids and preparation methods can be synthesized with reference to techniques known in the art. For example, it is disclosed also in the following Example 1, Patent Document 1, and the like.
- the lipid may be directly bonded to the second chain, or may be bonded to the second chain via a linker.
- linker any linker used in the art can be used.
- polar linkers, alkylene linkers, ethylene glycol linkers, ethylenediamine linkers and the like can be mentioned.
- the lipid is a phospholipid, it is a linker having 4 to 26 atoms between the second chain oxygen atom and the lipid phosphorus atom.
- Specific examples include oligonucleotide linkers or the linkers described below.
- the linker can be synthesized with reference to a technique known in the art.
- the oligonucleotide linker can be synthesized by the same method as the oligonucleotide synthesis method exemplified above.
- the linker is preferably an oligonucleotide linker.
- the length of the oligonucleotide linker is 2 to 10 bases, 2 to 5 bases, 2 bases, 3 bases, 4 bases, and 5 bases.
- the following linkers can be mentioned.
- B 1 and B 2 are adenine (A), guanine (G), cytosine (C), 5-methylcytosine (5-Me-C), thymine (T) or uracil (U).
- Y ′ is O or S.
- Z 1 and Z 2 are H or OH, preferably H.
- a DNA linker that is,-(dX 1 ) u- (where X 1 is each independently A, G, C or T, and u is an integer of 1 to 8) ).
- a phosphorothioate linkage is preferred.
- the 3 ′ end or 5 ′ end to which the lipid of the lipid-binding double-stranded oligonucleotide of the present invention is not bound may be further modified.
- Examples thereof include a hydroxyl protecting group, a reporter molecule, cholesterol, phospholipid, a dye, and a fluorescent molecule.
- the 3 ′ end or 5 ′ end to which the lipid of the lipid-binding double-stranded oligonucleotide of the present invention is not bound may contain a phosphate ester moiety.
- Phosphate ester moiety means a terminal phosphate group, including phosphate esters as well as modified phosphate esters.
- the phosphate ester moiety may be located at either end, but is preferably a 5′-terminal nucleoside. Specifically, it is a group represented by the formula: —OP ( ⁇ O) (OH) OH or a modifying group thereof.
- O and OH is replaced by H, O, OR ′, S, N (R ′) (where R ′ is H, an amino protecting group or substituted or unsubstituted alkyl) or alkyl May be.
- R ′ is H, an amino protecting group or substituted or unsubstituted alkyl
- alkyl May be.
- the 5 ′ or 3 ′ end may each independently contain 1 to 3 phosphate ester moieties that are substituted or unsubstituted.
- the present invention provides a pharmaceutical composition (the pharmaceutical composition of the present invention) or a vaccine composition (the vaccine composition of the present invention) comprising the lipid-binding double-stranded oligonucleotide of the present invention (the vaccine of the present invention or the adjuvant of the present invention). ).
- the present invention also encompasses a pharmaceutical composition or a vaccine composition comprising an antigen and the lipid-binding double-stranded oligonucleotide of the present invention (the adjuvant of the present invention).
- an “antigen” is a molecule that can elicit an immune response.
- molecules include, for example, cells, cell extracts, proteins, recombinant proteins, purified proteins, polypeptides, peptides, polysaccharides, polysaccharide conjugates, peptides, non-peptide polysaccharide mimetics, and others encoded by plasmid DNA.
- the antigens can be provided as a single antigen or can be provided in combination.
- the antigen can be provided as a complex mixture of polypeptides or oligonucleotides.
- Antigens include, but are not limited to, microbial antigens, self antigens and addictive substances.
- Microorganisms include, but are not limited to, bacteria, viruses, parasites, fungi and the like.
- the “bacteria” is not particularly limited as long as it is a bacterium that causes disease to rabbits, pets, livestock, and the like. Specifically, streptococci (streptococcus, pneumococci, etc.), Staphylococcus aureus (MSSA, MRS sputum, etc.), Staphylococcus epidermidis, enterococci, Listeria spp., Meningococcus, bacilli, pathogenic E.
- coli coli, pneumonia Neisseria gonorrhoeae, Proteus, Bordetella pertussis, Pseudomonas aeruginosa, Serratia, Shirobacter, Acinetobacter, Enterobacter, Mycoplasma, Mycoplasma, tuberculosis, cholera, plague, diphtheria, dysentery Examples include fungi, anthrax, reptilema, tetanus, leprosy, legionella, leptospira, borrelia, francisella, coccella, rickettsia, chlamydia, rhinomycosis, and pylori.
- the “virus” is not particularly limited as long as it is a virus that causes disease in rabbits, pets, livestock, and the like.
- influenza virus respiratory multinuclear virus (RSV) papilloma virus, hepatitis virus (type IV, type IV, type C, type D, type IV, F type, G type, type IV), rhinovirus, natural Vaginal virus, measles virus, rubella virus, poliovirus, varicella-zoster virus, norovirus, norwalk virus, sapovirus, sapporovirus, mumps virus, adenovirus, enterovirus, rotavirus, HIV-1, HIV-2, etc.
- RSV respiratory multinuclear virus
- hepatitis virus type IV, type IV, type C, type D, type IV, F type, G type, type IV
- rhinovirus natural Vaginal virus
- measles virus rubella virus
- poliovirus varicella-zoster virus
- norovirus norwalk virus
- Human immunodeficiency virus rabies virus, vaginal lymphophilic virus, yellow fever virus, rhinoceros megalovirus, coronaviruses such as SARS-CoV, MERS-CoV, Ebola virus, polyoma virus, JC virus, pox virus, herpes simplex Virus 1 (HSV1), herpes simplex Herpes virus such as virus 2 (HSV2), lymphoklippox virus, roseovirus, Japanese encephalitis virus, coxsackie virus, dengue virus, West Nile virus, coronavirus, parvovirus, Epstein-Barr virus, Marburg virus, Hantavirus, Lassa virus , Chikungunya virus, huntan virus, jumping disease virus, lymphocytic choriomeningitis virus, borna virus, rift valley fever virus, gonorrhea virus, dori virus, foot-and-mouth disease virus, newcastle virus, bovine papulitis virus , Rinderpest virus, swine ves
- the “parasite” is not particularly limited as long as it is a parasite that causes disease to rabbits, pets, livestock, and the like. Examples include amoeba dysentery, malaria, toxoplasma, leishmania, cryptosporidium, trypanosoma, echinococcus, schistosoma japonicum, filaria, roundworm, and broad-headed crested worm.
- the “fungus” is not particularly limited as long as it is a fungus that causes disease to rabbits, pets, livestock, and the like. Specific examples include Aspergillus bacteria, Candida bacteria, Kribucoccus bacteria, Ringworm mycosis, Hiscoplasma bacteria, Pneumocystis bacteria, and the like.
- “Self-antigen” means a cancer antigen, an antigen associated with Alzheimer's disease, an antigen against a human antibody, an antigen expressed from a human endogenous retroviral element, and the like.
- the “cancer antigen” is an antigen that is specifically expressed in cancer cells, and includes proteins, peptides and the like, and includes fusion peptides containing them.
- the addictive substance means nicotine, cocaine and the like.
- Examples of the nicotine antigen include a nicotine hapten conjugated to a carrier (for example, diphtheria toxin).
- the pharmaceutical composition or vaccine composition of the present invention may further contain a known adjuvant as long as the effect of the lipid-binding double-stranded oligonucleotide of the present invention is not impaired.
- a known adjuvant for example, cholera toxin, salmonella toxin, alum, an agonist for Toll-like receptor (TLR) that is not TLR9.
- TLR Toll-like receptor
- agonists for TLR include agonists for TLR3 such as stabilized poly I: C; agonists for TLR4 such as lipopolysaccharide (LPS) derivatives (eg, MPL or GLA); agonists for TLR5 such as flagellin; agonists for TLR7 An agonist for TLR8 and the like.
- Specific examples include aluminum salts such as aluminum hydroxide, immunostimulatory complexes (ISCOMs), oil-in-water or water-in-oil emulsions, delivery systems such as liposomes, nanoparticle
- the pharmaceutical composition or vaccine composition of the present invention containing a cancer antigen has any or all of the following excellent features.
- a) CTL induction rate of 1% or more is shown.
- f) Cytokine release syndrome does not occur.
- the risk of acute toxicity is low.
- Any administration method and preparation of the pharmaceutical composition or vaccine composition of the present invention can be used as long as they are administration methods and preparations known in the art.
- the pharmaceutical composition or vaccine composition of the present invention can be administered by various methods depending on whether local or systemic treatment is desired or on the region to be treated.
- the administration method may be, for example, topical (including eye drops, intravaginal, rectal, intranasal, transdermal), oral, or parenteral.
- Parenteral administration includes intravenous injection or infusion, subcutaneous, intraperitoneal or intramuscular injection, pulmonary administration by inhalation or inhalation, intradural administration, intraventricular administration, and the like. Intravenous injection or subcutaneous administration is preferred.
- compositions for oral administration include powders, granules, suspensions or solutions dissolved in water or non-aqueous media, capsules, powders, tablets and the like.
- compositions for parenteral, subdural space, or intraventricular administration include sterile aqueous solutions containing buffers, diluents and other suitable additives.
- the pharmaceutical composition or vaccine composition of the present invention requires various pharmaceutical additives such as excipients, binders, wetting agents, disintegrating agents, lubricants, diluents and the like suitable for the dosage form in an effective amount. It can be obtained by mixing. In the case of an injection, it may be sterilized with an appropriate carrier to form a preparation.
- pharmaceutical additives such as excipients, binders, wetting agents, disintegrating agents, lubricants, diluents and the like suitable for the dosage form in an effective amount. It can be obtained by mixing. In the case of an injection, it may be sterilized with an appropriate carrier to form a preparation.
- excipient examples include lactose, sucrose, glucose, starch, calcium carbonate, crystalline cellulose and the like.
- binder include methyl cellulose, carboxymethyl cellulose, hydroxypropyl cellulose, gelatin, and polyvinyl pyrrolidone.
- disintegrant examples include carboxymethyl cellulose, sodium carboxymethyl cellulose, starch, sodium alginate, agar powder, or sodium lauryl sulfate.
- lubricant examples include talc, magnesium stearate or macrogol. As a suppository base, cocoa butter, macrogol, methylcellulose, or the like can be used.
- solubilizers when preparing as liquid or emulsion or suspension injections, commonly used solubilizers, suspending agents, emulsifiers, stabilizers, preservatives, isotonic agents, etc. are added as appropriate. You may do it. In the case of oral administration, flavoring agents, fragrances and the like may be added.
- Optimal dosing schedules can be calculated from measurements of pharmaceutical or vaccine composition accumulation in the body. Persons of ordinary skill in the art can determine optimum dosages, dosing methodologies and repetition rates.
- the content ratio of the lipid-binding double-stranded oligonucleotide of the present invention in the pharmaceutical composition or vaccine composition of the present invention is not particularly limited, but is usually 0.001% relative to 100% by weight of the pharmaceutical composition or vaccine composition. It is about 01% to 99.99% by weight.
- the ratio of the antigen and the adjuvant of the present invention is usually about 10 to 1000 parts by weight with respect to 1 part by weight of the antigen.
- the dose of the pharmaceutical composition or vaccine composition varies depending on the desired degree of immunostimulation, age, sex, etc. of the administration target, and may be set as appropriate. A daily dose of 0.001 to 10 mg / kg body weight is mentioned.
- the pharmaceutical composition or vaccine composition of the present invention is administered multiple times to the same subject according to the degree of effect exerted by the desired pharmaceutical composition or vaccine composition, the age, sex, etc. of the administration subject.
- the upper limit may be about 2 to 4 times.
- the interval may be set as appropriate, for example, about 14 to 30 days.
- the pharmaceutical composition or vaccine composition of the present invention may be administered in combination with one or more additional drugs.
- a therapeutic agent known in the art can be used as a therapeutic agent for the disease to be treated.
- the pharmaceutical composition or vaccine composition of the present invention can be administered together with a chemotherapeutic agent.
- the pharmaceutical composition or vaccine composition of the present invention can be co-administered with an antibiotic. You may administer simultaneously with the pharmaceutical composition or vaccine composition of this invention, and may administer separately.
- the pharmaceutical composition or vaccine composition of the present invention and the therapeutic agent may be administered as different formulations, respectively, or administered as a single formulation containing the pharmaceutical composition or vaccine composition and the therapeutic agent. May be.
- administration of the pharmaceutical composition or vaccine composition of the present invention may be combined with surgical treatments known in the art.
- the present invention also relates to a method for increasing an immune response in a subject comprising administering an effective amount of the pharmaceutical composition or vaccine composition of the present invention to the subject.
- Immunune response includes an increase in the induction rate of induced specific cytotoxic T cells (CTLs) as compared to controls.
- CTLs induced specific cytotoxic T cells
- a specific method for measuring the CTL induction rate is disclosed in, for example, the following Example 3, International Publication No. 2013/024582.
- the present invention is a method for treating cancer or an infectious disease comprising administering to a subject an effective amount of a pharmaceutical or vaccine composition of the present invention and comparing to a control. And reducing the one or more symptoms of the cancer or infectious disease.
- Subject refers to any individual that is the target of treatment using the pharmaceutical composition or vaccine composition of the present invention.
- humans laboratory animals (eg, mice, rats, etc.), pets (eg, dogs, cats, ferrets, birds, etc.), livestock (cow, peta, chicken, goat, ostrich, sheep, horses, etc.), etc. Mammals.
- Effective amount refers to a disorder, disease, or condition that is being treated to induce or enhance an immune response, or otherwise to provide the desired pharmacological and / or physiological effect. Meaning a dosage sufficient to provide treatment. The exact dosage will vary according to various factors such as subject dependent variables (eg, age, immune system health, etc.), disease, stage of disease, and treatment being performed.
- “Cancer” is not particularly limited as long as it is cancer that affects rabbits, pets, livestock, and the like.
- chronic myelogenous leukemia CML
- acute myeloid leukemia AML
- lymphoma Hodgkin's disease
- non-Hodgkin's lymphoma multiple myeloma
- brain tumor breast cancer
- endometrial cancer cervical cancer
- ovarian cancer esophageal cancer
- Gastric cancer such as diffuse gastric cancer, appendic cancer, colon cancer, liver cancer, hepatocellular carcinoma, gallbladder cancer, bile duct cancer, pancreatic cancer, adrenal cancer, gastrointestinal stromal tumor, mesothelioma, head and neck cancer, laryngeal cancer, oral cancer , Gingival cancer, tongue cancer, buccal mucosa cancer, salivary gland cancer, sinus cancer, maxillary sinus cancer, frontal sinus cancer, ethmoid sinus cancer, sphenoid sinus cancer, thyroid cancer, kidney
- infectious disease is an acute or chronic infectious disease, particularly a viral infectious disease.
- viral infection such as local or systemic viral infection (immune deficiency due to HIV, papilloma due to HPV, herpes due to HSV, encephalitis, influenza due to human influenza virus A, cold due to human rhinovirus, etc.
- local or systemic viral infection immunodeficiency due to HIV, papilloma due to HPV, herpes due to HSV, encephalitis, influenza due to human influenza virus A, cold due to human rhinovirus, etc.
- n is an integer of 6 to 28.
- a mixed solution (1: 1, 42 mL) of CapA (PROLIGO, L840045-06) and CapB (PROLIGO, L850045-06) was added to the dried CPG, and the mixture was shaken and stirred for 1 hour and a half. After filtering the reaction solution, CPG was washed twice with pyridine, twice with isopropanol and twice with diethyl ether, and then dried under reduced pressure.
- the supported amount of Compound 14-6 was calculated by colorimetric determination of DMTr cation to obtain Compound 15-6 having a supported amount of 53 ⁇ mol / g.
- a mixed solution (1: 1, 38 mL) of CapA (PROLIGO, L840045-06) and CapB (PROLIGO, L850045-06) was added to the dried CPG, and the mixture was shaken and stirred for 1 hour and a half. After filtering the reaction solution, CPG was washed twice with pyridine, twice with isopropanol and twice with diethyl ether, and then dried under reduced pressure. The supported amount of Compound 14-10 was calculated by colorimetric determination of DMTr cation to obtain Compound 15-10 having a supported amount of 40 ⁇ mol / g.
- CapA PROLIGO, L840045-06
- CapB PROLIGO, L850045-06
- a mixed solution (1: 1, 35 mL) of CapA (PROLIGO, L840045-06) and CapB (PROLIGO, L850045-06) was added to the dried CPG, and the mixture was shaken and stirred for 1 hour and a half. After filtering the reaction solution, CPG was washed twice with pyridine, twice with isopropanol and twice with diethyl ether, and then dried under reduced pressure. The supported amount of Compound 14-18 was calculated by colorimetric determination of DMTr cation, and Compound 15-18 having a supported amount of 56 ⁇ mol / g was obtained.
- HybridCPG a THF / acetic anhydride / pyridine mixture (8: 1: 1, 30 mL) was added, and the mixture was shaken and stirred for 3 hours. After filtering the reaction solution, HybridCPG was washed twice with pyridine, twice with isopropanol and twice with diethyl ether, and then dried under reduced pressure. The supported amount of Compound 21-6 was calculated by colorimetric determination of DMTr cation to obtain Compound 22-6 having a supported amount of 114 ⁇ mol / g.
- HybridCPG a THF / acetic anhydride / pyridine mixture (8: 1: 1, 30 mL) was added, and the mixture was shaken and stirred for 3 hours. After filtering the reaction solution, HybridCPG was washed twice with pyridine, twice with isopropanol and twice with diethyl ether, and then dried under reduced pressure. The supported amount of Compound 21-8 was calculated by colorimetric determination of DMTr cation to obtain Compound 22-8 having a supported amount of 107 ⁇ mol / g.
- CapA PROLIGO, L840045-06
- CapB PROLIGO, L850045-06
- a mixed liquid (1: 1, 5 mL) of CapA (PROLIGO, L840045-06) and CapB (PROLIGO, L850045-06) was added to the dried CPG, and the mixture was shaken and stirred for 1 hour and a half. After filtering the reaction solution, CPG was washed twice with pyridine, twice with isopropanol and twice with diethyl ether, and then dried under reduced pressure. The supported amount of Compound 21-12 was calculated by colorimetric determination of DMTr cation to obtain Compound 22-12 having a supported amount of 31 ⁇ mol / g.
- a mixed solution (1: 1, 40 mL) of CapA (PROLIGO, L840045-06) and CapB (PROLIGO, L850045-06) was added to the dried CPG, and the mixture was shaken and stirred for 1 hour and a half. After filtering the reaction solution, CPG was washed with pyridine (40 mL), isopropanol (60 mL), diethyl ether (60 mL) and then dried under reduced pressure. The supported amount of Compound 21-14 was calculated by colorimetric determination of DMTr cation to obtain Compound 22-14 having a supported amount of 40 ⁇ mol / g.
- Triethylamine (0.1 mL, 0.79 mmol) and TBAF (1M THF solution, 0.32 mL, 0.32 mmol) were added to a THF solution (4 mL) of compound 19-18 (100 mg, 0.079 mmol), and the mixture was stirred at room temperature for 24 hours. Stir. The reaction solution was diluted with chloroform (10 mL) and then washed with saturated multilayer water (10 mL).
- a mixed liquid (1: 1, 5 mL) of CapA (PROLIGO, L840045-06) and CapB (PROLIGO, L850045-06) was added to the dried CPG, and the mixture was shaken and stirred for 1 hour and a half. After filtering the reaction solution, CPG was washed twice with pyridine, twice with isopropanol and twice with diethyl ether, and then dried under reduced pressure. The supported amount of Compound 21-18 was calculated by colorimetric determination of DMTr cation to obtain Compound 22-18 having a supported amount of 15 ⁇ mol / g.
- a mixed solution (1: 1, 20 mL) of CapA (PROLIGO, L840045-06) and CapB (PROLIGO, L850045-06) was added to the dried CPG, and the mixture was shaken and stirred for 1 hour and a half. After filtering the reaction solution, CPG was washed 3 times with chloroform and 3 times with acetonitrile, and then dried under reduced pressure.
- the supported amount of Compound 21-20 was calculated by colorimetric determination of DMTr cation to obtain Compound 22-20 having a supported amount of 48 ⁇ mol / g.
- CapA PROLIGO, L840045-06
- CapB PROLIGO, L850045-06
- Step 6 1-1-6) DIEA (3.36 mL, 19.3 mmol, 4.0 eq.) was added to a suspension of compound 3-16 (2.00 g, 3.21 mmol) synthesized in the same manner as in 1-1-6) in dichloromethane (60 ml). The solution was added to a solution of methyl N, N-diisopropylamidochloride phosphite (2.54 g, 12.8 mmol, 2.0 eq.) In dichloromethane (10 ml) and stirred at 45 ° C. for 10 minutes.
- the reaction mixture was diluted with ethyl acetate, washed successively with 10% aqueous citric acid solution, saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution and saturated brine, then dried over magnesium sulfate, and the solvent was evaporated under reduced pressure.
- Step 9 Triethylamine (0.073 ml, 0.528 mmol, 3.0 eq.), Succinic anhydride (35 mg, 0.352 mmol, 2.0 eq.) was added to a solution of compound 35-16 (210 mg, 0.176 mmol) in dichloromethane (3 ml) at room temperature. ) And DMAP (4 mg, 0.033 mmol) were sequentially added and stirred at room temperature for 12 hours, and then the reaction solution was concentrated under reduced pressure.
- Step 6 TFA (30 ml) was added to compound 41 (3.00 g, 7.15 mmol), stirred at room temperature for 1 hour, and then concentrated under reduced pressure to obtain a crude product of compound 42.
- ESI-MS m / z: 312 (M + H).
- HPLC Peak RT 1.00 min.
- Step 7 Triethylamine (1.17 ml, 8.44 mmol, 6.0 eq.) And stearoyl chloride (938 mg, 3.10 mmol, 2.2 eq.) Were added to a dichloromethane solution (10 ml) of compound 42 at room temperature, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour. .
- Step 10 Triethylamine (0.237 ml, 1.71 mmol, 5.6 eq.), Succinic anhydride (85 mg, 0.844 mmol, 2.8 eq.) was added to a solution of compound 45-16 (340 mg, 0.303 mmol) in dichloromethane (3 ml) at room temperature. ) And DMAP (4 mg) were sequentially added and stirred at 45 ° C. for 2 hours, and then the reaction solution was concentrated under reduced pressure.
- Compound 49-16 is a mixture of two isomers, some of which were separated by silica gel column chromatography and various instrument data were measured.
- ESI-MS (m / z): 1277 (M +).
- HPLC Peak RT 3.72 min.
- Compound 50-16 was obtained by subjecting Compound 36-16 obtained in 9-1) to the same conditions as those in 4).
- the supported amount of Compound 36-16 was calculated by colorimetric determination of DMTr cation, and Compound 50-16 having a supported amount of 32 umol / g was obtained.
- the compound 49-n can be supported on the solid phase resin by the same method.
- Process 3 Compound 3-18 (140 mg, 0.205 mmol) and DMAP (63 mg, 0.514 mmol) were finely crushed in a flask, and then made into a THF solution (1.8 mL). Bis (4-nitrophenyl) carbonate (156 mg, 0.514 mmol) was added and stirred at 55 ° C. for 30 minutes. After cooling to room temperature, THF was distilled off under reduced pressure and suspended again in acetonitrile (10 mL). After heating to make a solution, a solid precipitated when cooled to room temperature, and ultrasonic crushing was added to promote precipitation.
- Step 6 Compound 62-18 (153 mg, 0.098 mmol) was made into acetonitrile / dichloromethane mixed solution (1: 1, 10 mL), DIEA (0.067 mL, 0.392 mmol) and HBTU (41 mg, 0.108 mmol) were added, and at room temperature. Shake and stir for 20 minutes. Native Amino lcaa CPG 1000 ⁇ (Chem Genes) (1.0 g) was added to the reaction solution, and the mixture was stirred and shaken for 24 hours. After filtering the reaction solution, CPG was washed twice with acetonitrile, twice with dichloromethane and twice with diethyl ether, and then dried under reduced pressure.
- CapA PROLIGO, L840045-06
- CapB PROLIGO, L850045-06
- oligonucleotides used in the examples of the present specification were AKTA Oligopilot 10 (GE Healthcare), NS-8-I (Dainippon Seiki), NS-8-II (Dainippon Seiki), Synthesized by phosphoramidite method.
- the monomer was prepared in a 0.1 M acetonitrile solution using the amidite obtained by the above amidite synthesis.
- the coupling time was 32 seconds to 10 minutes, and 8 to 10 equivalents of amidite were used for the condensation of one monomer.
- the activator used was ETT activator (5-ethylthio) -1H-tetrazole) (Sigma-Aldrich), and the capping reagent used was CapA, CapB (Sigma-Aldrich).
- the detritylation reagent Deb (3 w / v% TCA CH 2 Cl 2 solution) (Wako Pure Chemical Industries), Deb (3 w / v% Dichloroacetin acid, Toluene Solution) were used.
- SEQ-321, SEQ-323, SEQ-340, SEQ-343, SEQ-346, SEQ-349, SEQ-352, SEQ-355, and SEQ-358 donate compound 22-18 to Gene Design Co., Ltd. Obtained by consigning nucleic acid synthesis and oligonucleotide purification.
- DMT-butanediol phosphoramidite used for the synthesis of SEQ-316 was purchased from ChemGene.
- an oligonucleotide-bound solid phase (CPG resin, polystyrene resin), 0.25 M ETT activator (5-ethylthio) -1H-tetrazole) dichloromethane solution (the same amount as chloroform) was added and sealed, and the mixture was sealed at 40 ° C. For 10 minutes to 1 hour. After cooling to room temperature, the reaction solution was diluted twice with chloroform, and the resin was collected by filtration. The obtained resin was subjected to PS oxidation on NS-8-I (Dainippon Seiki) and NS-8-II (Dainippon Seiki).
- the dried resin was then subjected to the following deprotection conditions I and II to synthesize the desired lipid-binding oligonucleotide.
- 2) Synthesis from a lipid-supported resin The lipid-supported resin synthesized in A) above (for example, Compound 15-n, Compound 22-n, Compound 50-n, Compound 51-n, Compound 55, Compound 63- n) was used to synthesize the desired lipid-binding oligonucleotide in the same manner as in B) above.
- the resin was washed with 50% aqueous ethanol, and the filtrate was concentrated to about 1 to 5 mL under reduced pressure. In the case of a sequence containing RNA, the obtained solution was freeze-dried to obtain a white powder, and then the following 2′-TBS group deprotection reaction was separately performed.
- lipid-binding double-stranded oligonucleotide of the present invention was prepared as follows. A 100 ⁇ M aqueous solution of each oligonucleotide was mixed in an equimolar amount, then heated at 75 ° C. for 5 minutes, and then naturally cooled to room temperature to obtain a double-stranded nucleic acid. Confirmation of duplex formation was performed by size exclusion chromatography. Column: YMC-PAC Diol-120 (4.6x300mm) (manufactured by YMC) Mobile phase: 1% PBS solution containing 40% acetonitrile Flow rate 0.5 mL / min Temperature: room temperature
- the synthesized oligonucleotides are shown in Tables 4 to 27.
- n (lower case) is DNA
- n OMe is 2'-OMe-RNA
- N (upper case) is RNA
- N F upper case
- 5mC is 5-methylcytosine is shown.
- ⁇ Means a phosphorothioate bond, and when there is no symbol, it means a phosphodiester bond.
- L xn means a compound introduced at the 5 ′ end, and indicates that each compound is covalently bonded to each hydroxyl group by the indicated bond.
- M xn means a compound introduced at the 3 ′ end, and indicates that each compound is covalently bonded to each hydroxyl group by the indicated bond.
- x is a number according to the structure of Compound 4-n or Compound 10-n showing a double chain, or Compound 8-n showing a single chain, and n corresponds to the carbon chain It is an integer from 6 to 28.
- M xn x is a number corresponding to the structure of Compound 22-n, Compound 49-n, Compound 51-n, Compound 51-n showing a double chain, or Compound 15-n showing a single chain, and n is a carbon chain It is an integer from 6 to 28 according to.
- L xn is a group shown below. (In the formula, n is an integer of 6 to 28.)
- L 4-n is a group derived from the compound 4-n synthesized in 1-1) of A) above.
- L 8-n is a group derived from the compound 8-n synthesized in 2) of A) above.
- L 10-n is a group derived from the compound 10-n synthesized in 3) of A) above.
- L chol or L TOC in the table is a group shown below.
- L chol is a group derived from the compound 26 synthesized in 8-1) of A) above.
- L Toc is a group derived from the compound 5′-Tocopherol-CE-Phosphoramidite purchased from Link Technologies.
- L far in the table is a group shown below.
- L farl is a group derived from the compound 53 synthesized in 8-2) of A) above.
- M xn is a group shown below. (In the formula, n is an integer of 6 to 28.) M 15-n is a group derived from compound 15-n synthesized in 4) of A) above, M 22-n is a group derived from compound 22-n synthesized in 6) of A) above, M 49-n is a group derived from compound 49-n synthesized in 11) of A) above, and M 51-n is a group derived from compound 51-n synthesized in 13) of A) above.
- M chol in the table is a group shown below.
- M chol is a group derived from the compound 55 synthesized in 14) of A) above.
- M TEG-n in the table is a group shown below.
- M TEG-n is a group derived from the compound 63-n synthesized in 15) of A) above.
- K 22-n is a group shown below.
- K 22-n is a group derived from compound 22-n synthesized in 6) of A) above.
- Example 2 Evaluation of activity of lipid-binding double-stranded oligonucleotide of the present invention by reporter assay (Materials and Methods)
- HEK-Blue TM hTLR9 cells in vivogen used in the reporter assay were introduced into HEK293 cells with a human TLR9 gene and a reporter gene in which a secreted alkaline phosphatase gene was bound to an NF-kB / AP-1 binding region sequence.
- lipid-binding double-stranded oligonucleotide of the present invention A known CpG oligonucleotide (ODN2006, SEQ-49), an adjuvant based on the design of Patent Document 1, that is, ssCpG ODN (SEQ-142, 143 or 144) into which a lipid ligand was introduced were added. After culturing at 37 ° C.
- Non-patent Document 4 It is known that when ssCpG ODN is annealed as a first strand and a second strand, the properties as an adjuvant are lost when administered as double-stranded DNA (dsCpG ODN) (Non-patent Document 4). As already mentioned. In order to examine whether the double-stranded nucleic acid adjuvant design shows activity as a TLR9 agonist, the activity of the double-stranded oligonucleotide was evaluated by a reporter assay.
- the ssCpG ODN ODN2006 shows activity as a TLR9 agonist, and its EC 50 value is about 467 nM (Test 1, Table 28), about 245 nM (Test 2, Table 28). 29).
- the activity of the lipid-bound double-stranded oligonucleotide of the present invention containing ODN2006 as a CpG oligonucleotide was evaluated, it showed TLR9 agonist activity in the range of tens to thousands of nM.
- Many of the adjuvants of the present invention described in Table 28 and Table 29 tended to have improved activity compared to ODN2006.
- Patent Document 1 ssCpG ODN into which a lipid ligand is introduced
- ODN1826 mouse type
- ODN2006 human type
- vaccine human type
- the lipid-binding double-stranded oligonucleotide of the present invention shows activity not only in ODN1826 but also in ODN2006, it can be used as a vaccine adjuvant and / or vaccine itself regardless of the sequence of the CpG oligonucleotide. It has been suggested.
- Example 3 In vivo evaluation of adjuvant of the present invention A) Evaluation of CTL inducing activity (animal) C57BL / 6JJcl mice (6-8 weeks old) were introduced from CLEA Japan.
- OVA 257-264 peptide (SIINFEKL, SEQ ID NO: 22): A product synthesized by SIGMA and purified by reverse phase HPLC was purchased.
- -Adjuvant of the present invention or known CpG ODN Component of vaccine 2
- TRP2 180-188 peptide CSVYDFFVWL, SEQ ID NO: 23
- a product synthesized by SIGMA and purified by reverse phase HPLC was purchased.
- -Adjuvant of the present invention or known CpG ODN (Component of vaccine 3) ⁇ OVA 257-264 peptide or TRP2 180-188 peptide ⁇ Monitamide ISA51 (SEPPIC)
- Alexa647 A labeled anti-CD8 antibody (Medical and Biological Laboratories) was added, and staining was performed by allowing to stand at room temperature for 45 minutes.
- DAPI Invitrogen
- FACS buffer washed twice with FACS buffer. The sample was resuspended in FACS buffer and analyzed using a FACS version flow cytometer (BD bioscience) and FACSuit software (BD bioscience).
- CTL Induction Rate Indicator Calculation Method After calculating the average CTL induction rate of each group for each experiment, the CTL induction rate of the control compounds ssCpG ODN, ODN1826 (SEQ-1) and ODN2006 (SEQ-49) was compared with the average value. The ratio was calculated.
- B16F10 cells (1 ⁇ 10 5 cells / mouse) were transferred to the right shoulder on the day following observation of the tetramer positive rate in peripheral blood of mice immunized by administration of vaccine twice every 7 days by the same method as in Example 3A).
- the tumor volume was calculated by the following formula. Calculation method of index of anti-tumor effect In the case of adjuvant containing ODN1826 100- (average tumor size of adjuvant group) / (average tumor size of ODN1826 group) In the case of an adjuvant containing ODN2006 100- (average tumor size in adjuvant group) / (average tumor size in ODN2006 group) A compound with a larger numerical value indicates stronger antitumor activity.
- Results 1-A Comparison of CTL induction rate between adjuvant of the present invention and known adjuvants When ODN1826 (SEQ-1) and TRP2 peptide were used to immunize mice, TRP2-specific CTLs were induced. When dsCpG ODN (SEQ-4) was used, the TRP2-specific CTL induction rate was reduced 0.46 times compared to ODN1826. That is, by using double strands, the CTL induction rate was reduced compared to single strand adjuvants.
- Non-Patent Document 4 it was found that the immunostimulatory activity is reduced simply by making the CpG oligonucleotide double-stranded.
- the adjuvant of the present invention that is, the double-stranded oligonucleotide adjuvant (SEQ-16) conjugated with lipid
- SEQ-16 double-stranded oligonucleotide adjuvant
- the CTL induction rate was improved 1.46 times compared with ODN1826. Therefore, it was found that the adjuvant of the present invention has an unexpected improvement in activity.
- Table 31 The results are shown in Table 31.
- Results 2-A and B CTL induction rate and antitumor effect of the adjuvant of the present invention in which the number of carbon atoms of the lipid ligand is different
- the lipid of the present invention having two acyl chains containing 10 to 20 carbon atoms as a ligand.
- Adjuvant activity was examined using OVA peptide. It was found that SEQ-12 (10 carbon atoms) decreased the induction rate of CTL and the inhibition rate of tumors compared to ODN1826 (SEQ-1). On the other hand, CTL induction rate tends to improve as the chain length increases with SEQ-14 (14 carbon atoms), SEQ-6 (18 carbon atoms), and SEQ-16 (20 carbon atoms). It was.
- Result 3-B Anticancer effect of the adjuvant of the present invention in which lipids are introduced at both ends.
- the mice were immunized with the adjuvant of the present invention, SEQ-46 or SEQ-48, and the TRP2 peptide.
- the B16F10 cell engraftment inhibitory effect and growth inhibitory effect were 52% and 43%, respectively. The results are shown in FIG.
- Result 4-A CTL induction rate of the adjuvant of the present invention with different complementary strand lengths
- the rate of separation of the double strand is proportional to the thermal stability of the double strand, and the more complementary sites of the double strand structure, the more stably it exists as a double strand. Therefore, the activity of the adjuvant of the present invention having different complementary strand lengths was examined using the TRP2 peptide.
- the complementary strand is 10 mer, that is, an adjuvant (SEQ-8) whose complementary strand is 50% in length to the CpG oligonucleotide, and the complementary strand is 15 mer, ie, 75% in length.
- An adjuvant (SEQ-10) was used. SEQ-8 was approximately 1.2 times, and SEQ-10 was 2.5 times, both of which significantly improved CTL induction compared to ODN1826 (SEQ-1). The results are shown in Table 34.
- Result 5-A CTL induction rate of the adjuvant of the present invention with different strand lengths of complementary strands ODN1826 (20 mer), the complementary strand has a length of 10 mer to 20 mer, that is, a complementary strand of 50 to
- Adjuvants with complementary strands of 14 mer (SEQ-28), 15 mer (SEQ-26), 17 mer (SEQ-22), 19 mer (SEQ-18) and 20 mer (SEQ-16) are compared to ODN 1826 (SEQ-1).
- the CTL induction rate was improved.
- the results are shown in Table 35.
- Results 6-A Comparison of CTL induction rate with Montanide ODN1826 (SEQ-1), ssCpG ODN introduced with lipid ligand (SEQ-2), adjuvant of the present invention (SEQ-26), clinical trial as an adjuvant for peptide vaccine
- SEQ-2 ssCpG ODN introduced with lipid ligand
- SEQ-26 adjuvant of the present invention
- SEQ-2 and SEQ-26 showed a high CTL induction rate compared to ODN1826.
- the CTL induction rate of Montanide decreased to 1/7 compared with ODN1826.
- Table 36 The results are shown in Table 36.
- Result 6-B Comparison of anti-tumor effect with ssCpG ODN into which lipid ligand was introduced
- SEQ-26 and TRP2 peptide, ODN1826 SEQ- Compared with 1
- 76.8% of B16F10 cells had a very potent engraftment inhibitory effect and growth inhibitory effect.
- the tumor suppression rate of ssCpG ODN (SEQ-2) into which a lipid ligand was introduced was 64.3% compared to ODN1826 on the 12th day after transplantation. That is, the adjuvant of the present invention showed stronger B16F10 cell engraftment inhibitory effect and growth inhibitory effect than the SEQ-2 adjuvant.
- montanide was used as an adjuvant, it did not show any antitumor activity. The results are shown in FIG.
- Result 7-A CTL induction rate of the adjuvant of the present invention in which the type of the nucleic acid monomer of the complementary strand is different
- the adjuvant of the present invention in which the nucleic acid monomer of the complementary strand is RNA, 2′-OMe-RNA or 2′-F-RNA Activity was examined using TRP2 peptide.
- the adjuvant (SEQ-40) in which the nucleic acid monomers are all RNA and the adjuvant (SEQ-42) in which all the 2'-F-RNA is RNA have a large improvement in CTL induction rate compared to ODN1826 (SEQ-1). There wasn't.
- Result 7-B Antitumor effect of the adjuvant of the present invention in which the type of the nucleic acid monomer of the complementary strand is different
- the mouse is treated with the adjuvant (SEQ-38) of the present invention having 2′-OMe-RNA as a nucleic acid monomer and the TRP2 peptide.
- SEQ-1 ODN1826
- the tumor suppression rate of ssCpG ODN (SEQ-2) into which a lipid ligand was introduced was about 72.6% compared to ODN1826 on the 14th day after transplantation. That is, the adjuvant of the present invention showed stronger B16F10 cell engraftment inhibitory effect and growth inhibitory effect than the SEQ-2 adjuvant.
- an adjuvant that shortens SEQ-38 (SEQ-44) and an adjuvant that includes 2′-F-RNA as a nucleic acid monomer (SEQ-42) also showed an engraftment inhibitory effect and a growth inhibitory effect on B16F10 cells.
- the adjuvant (SEQ-40) having RNA as a nucleic acid monomer did not show any B16F10 cell engraftment inhibitory effect or growth inhibitory effect.
- Result 8-A CTL induction rate of the adjuvant of the present invention having the adjuvant or linker of the present invention having different chain lengths of complementary strands ODN2006 (SEQ-49, 24mer) and the activity of the adjuvant of the present invention using the TRP2 peptide Compared.
- the complementary strand has a length of 24 mer, that is, an adjuvant (SEQ-51) having a complementary strand length of 100% with respect to the CpG oligonucleotide, and the complementary strand has a length of 15 mer, that is, with respect to the CpG oligonucleotide.
- An adjuvant (SEQ-61) with a complementary strand length of 62.5% was used. Both SEQ-51 and SEQ-61 showed more than 5-fold higher CTL induction compared to ODN2006. Furthermore, an adjuvant (SEQ-63) having dTdT as a linker and an adjuvant (SEQ-65) having dGdG were used. Both SEQ-63 and SEQ-65 showed a very high CTL induction of about 10 times compared to ODN2006. The results are shown in Table 38.
- Result 8-B Antitumor effect of the adjuvant of the present invention or the adjuvant of the present invention having a different chain length of complementary strands OMN2006 (SEQ-49) and TRP2 peptide were used to immunize mice, and the survival of B16F10 cells Almost no inhibitory effect on growth and no inhibitory effect on growth were observed.
- the adjuvant of the present invention when used, the adjuvant (SEQ-51) whose complementary strand is 100% in length to the CpG oligonucleotide is 20% compared to ODN2006 on the 10th day after transplantation. Of B16F10 cells were observed to have an inhibitory effect on growth and an inhibitory effect on proliferation.
- an adjuvant (SEQ-61) whose complementary strand is 62.5% in length with respect to the CpG oligonucleotide, an adjuvant (SEQ-63) having dTdT as a linker, and an adjuvant (SEQ-65) having dGdG as a linker
- Result 9-A CTL induction rate of the adjuvant of the present invention in which the nucleic acid monomer of the complementary strand is 2′-OMe-RNA
- the activity of the adjuvant of the present invention in which the nucleic acid monomer of the complementary strand is 2′-OMe-RNA We investigated using.
- the complementary strand has a length of 24 mer, that is, an adjuvant (SEQ-67) having a complementary strand length of 100% with respect to the CpG oligonucleotide, and the complementary strand has a length of 15 mer, ie, with respect to the CpG oligonucleotide.
- Adjuvant (SEQ-69) with a complementary strand length of 62.5% was used.
- SEQ-67 and SEQ-69 showed 1.4-fold and 1.2-fold CTL induction, respectively, compared with ODN2006 (SEQ-49). The results are shown in Table 39.
- Result 9-B Antitumor effect of the adjuvant of the present invention in which the nucleic acid monomer of the complementary strand is 2′-OMe-RNA
- the mouse was treated with the adjuvant of the present invention having 2′-OMe-RNA as a nucleic acid monomer and the TRP2 peptide.
- the adjuvant (SEQ-67) having a complementary strand of 100% in length to the CpG oligonucleotide was found to be about 75% compared to ODN2006 (SEQ-49) on the 10th day after transplantation. It showed a potent B16F10 cell engraftment inhibitory effect and growth inhibitory effect.
- the CTL induction rate or the antitumor effect of the adjuvant of the present invention was measured.
- the results are shown in Tables 40 to 68 and FIGS. 8 to 13 for each test. In these tests, TRP2 peptide is used, and the dosage of the adjuvant of the present invention is 4.71 nmol. In the table, NT means that no experiment was performed.
- Example 4 ODN2006 (SEQ-49) and SEQ-121 were evaluated for antigen-specific CTL induction and antitumor effects in the absence of cancer antigen peptide.
- the effect of administering a vaccine without addition of a cancer antigen peptide was verified.
- the value of the antigen-specific CTL was below the detection limit.
- the antitumor effect compared to ODN2006, 85-3% of B16F10 cell engraftment inhibitory effect and proliferation inhibitory effect were seen in SEQ-121 compared with ODN2006. From this result, SEQ-121 is expected to be applied as a therapeutic vaccine that exhibits an antitumor effect even with a single agent (Table 69, FIG. 14).
- Example 5 Single-stimulation test of the adjuvant of the present invention
- A) Single-skin irritation test Single-subcutaneous administration The skin at the time of anatomy 1 day and 1, 4 weeks later was subjected to macroscopic examination and histopathological examination. The subcutaneous irritation of the compounds of the present invention was evaluated. The compound of the present invention was administered subcutaneously in the center of the back of the interscapular region of rats. The skin at the administration site was collected at the time of anatomy (isoflurane anesthesia, exsanguination euthanasia) 1 day and 1 and 4 weeks after administration, followed by visual observation, and then fixed with 10% neutral buffered formalin solution.
- the fixed skin was cut out, embedded and sliced according to a conventional method to prepare a hematoxylin-eosin (HE) -stained section.
- the prepared HE-stained section was observed by a pathologist under an optical microscope, and the histological findings were recorded.
- the intensity of changes in pathological findings was evaluated in four stages: Minimal; ⁇ , Mild; +, Moderate; 2+, Marked; 3+. In the case of finding that it was not appropriate to grade, it was recorded as Positive.
- Montanide is an adjuvant composed of mineral oil and a surfactant, and is used in clinical trials as an adjuvant for peptide vaccines by preparing an emulsion with an aqueous preparation.
- SEQ-2 known adjuvants Aph1826
- ODN2006 SEQ-49
- Montanide is an adjuvant composed of mineral oil and a surfactant, and is used in clinical trials as an adjuvant for peptide vaccines by preparing an emulsion with an aqueous preparation.
- the systemic safety concern is an adjuvant having a very high safety profile, the occurrence of sclerosis due to emulsion retention at the administration site is cited as a problem.
- SEQ-2, SEQ-49 or the adjuvant of the present invention was dissolved in phosphate buffered saline and administered at 4.71, 15.7, and 47.1 nmol / 1 mL / site, respectively.
- montanide was confirmed as a white matter accumulation or white nodule subcutaneously and histologically as a cyst-like structure at 1 day, 1 week and 4 weeks after administration, and was absorbed / decomposed. / It became clear that it was not excreted. Montanide that remained subcutaneously continued to cause inflammation from 1 day after administration to 4 weeks after administration, and as neutrophil infiltration and edema after 1 day of administration, neutrophil infiltration and edema continued after 1 week of administration.
- a thick fibrous capsule encapsulating montanide was formed, and inflammation was slightly reduced compared to 1 week after administration, but neutrophil infiltration and edema were still observed after 4 weeks of administration.
- SEQ-2 shows infiltration of inflammatory cells, edema or scab after 1 day and 1 week after administration, and skin inflammation does not recover even after 4 weeks after administration, and the continuous activity of the monocyte / macrophage system Granulomatous inflammation was observed.
- SEQ-49 and the adjuvants of the present invention are acutely composed mainly of neutrophil infiltration subcutaneously one day after administration. Inflammation was observed, but 1 week after administration, inflammation mainly from lymphocytes / macrophages was observed in the subcutaneous to dermis, and inflammation was almost converged 4 weeks after administration.
- SEQ. 119, SEQ-121, and SEQ-170 were not evaluated for subcutaneous irritation 4 weeks after administration, but one day after administration of SEQ-119, SEQ-121, SEQ-170, and SEQ-61.
- Tables 70 to 72 show the results one day after administration
- Tables 73 to 75 show the results one week after administration
- Tables 76 and 77 show the results four weeks after administration.
- the annotations in the table are as follows. 1) The number after the findings is the number of cases. 2) The numbers after the findings are scores. The score is calculated with the grade of each individual being Minimal; 1, Mild; 2, Moderate; 3.
- the adjuvant of the present invention has no subcutaneous compound retention (low risk of induration), and necrosis and neutrophil infiltration are observed even one week after administration. None, and the inflammation almost completely converged 4 weeks after administration, and therefore, the subcutaneous irritation was judged to be milder than that of Montanide.
- the inflammation of the adjuvant of the present invention almost completely converged after 4 weeks of administration, whereas SEQ-2 did not deteriorate the skin even after 4 weeks of administration.
- the adjuvant of the present invention was judged to be milder in terms of subcutaneous irritation than SEQ-2. No significant difference was observed in the subcutaneous irritation between the adjuvant of the present invention and ODN2006 (SEQ-49).
- Example 5 Single skin irritation test Single day subcutaneous administration 1 day, 1 and 4 weeks later, the skin at the time of dissection was subjected to macroscopic examination and histopathological examination, and the adjuvant of the present invention was evaluated for skin irritation. evaluate.
- the adjuvant of the present invention is administered subcutaneously to the back skin of rats. Thereafter, the same process as in A) of Example 5 is performed.
- Example 6 Evaluation of Antibody Production Inducibility by Adjuvant of the Invention During Immunization with Pseudomonas aeruginosa PCRV Antigen Vaccine
- the infection vaccine when antigen and adjuvant are administered and antibody production from B lymphocytes is promoted in the immunized animal, infection The prevention and treatment effect from the disease can be expected. Therefore, in anticipation of the application of this adjuvant to an infectious disease vaccine, antibody production from B lymphocytes was evaluated.
- PCRV antigen which is Pseudomonas aeruginosa was used for examination.
- Freund's adjuvant is an adjuvant in which Mycobacterium tuberculosis killed by heat is mixed with oil composed of paraffin oil and mannide oleate, and is known as an adjuvant that induces strong antibody production in non-clinical practice.
- the pcrv nucleotide sequence (SEQ ID NO: 48) derived from Pseudomonas aeruginosa PAO1 was cloned into the NdeI-XhoI site of the pET21a vector, and the prepared plasmid was used to transform Escherichia coli BL21 (DE3).
- the pcrV-BL21 (DE3) strain was cultured at 37 ° C. in 500 mL of LB / Ampicillin liquid medium. When OD600 reached 0.5, 200 ⁇ L of 0.1M IPTG was added to induce expression of recombinant PCRV protein. After culturing at 16 ° C.
- the cells are centrifuged, and 15 ml of buffer A (50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 0.2 M NaCl) containing 0.5% lysozyme (manufactured by Sigma) is obtained.
- buffer A 50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 0.2 M NaCl
- lysozyme manufactured by Sigma
- sonication was performed.
- a soluble fraction was obtained by centrifugation at 12,000 rpm for 10 minutes.
- 1 mL of Ni-NTA agarose gel (manufactured by QIAGEN) was added to Polyprep column (manufactured by BIO-RAD), equilibrated with 10 mL of buffer A, and the soluble fraction was added to the column and allowed to pass through.
- the column was washed with 20 mL buffer A + 20 mM imidazole and eluted with 1 mL buffer A + 250 mM imidazole.
- a Superdex 200 16/60 GL column was connected to AKTA Explorer (manufactured by GE Healthcare), equilibrated with 1.5 CV buffer A, and the imidazole elution fraction was purified by gel filtration and recombinant PCRV protein C-terminal HIS (sequence) No. 49) was purified.
- the concentration of the obtained recombinant PCRV protein was measured with a BCA assay kit (manufactured by PIERCE) and stored at ⁇ 80 ° C.
- recombinant PCRV protein 100 ⁇ g was adjusted to 0.5 mL with physiological saline, and an emulsion was prepared with an equal amount of CompleteCo Freund's adjuvant (manufactured by Difco). Internal injection was used for the first immunization. On the 27th day of the test, immunization was carried out in the same manner together with Incomplete Freund's adjuvant (Difco). On day 33 of the test, heparin was collected from the tail vein from the mouse, centrifuged at 6,000 rpm for 15 minutes, and the supernatant was collected and stored at ⁇ 40 ° C. as antiserum.
- the antibody titer was measured as follows. Recombinant PCRV protein was adjusted to 1 ⁇ g / mL with PBS (pH 7.4) (manufactured by Invitrogen), 20 ⁇ L / well was added to Nunc Maxisorp 384 well plate (manufactured by Thermo), a plate seal was affixed and incubated overnight at 4 ° C.
- Washing Buffer (9 g / L NaCl, 0.5 g / L Proclin 150, 0.1 g / L Tween-20) Washed twice with 90 ⁇ L / well, 1 ⁇ Assay Buffer (manufactured by Invitrogen) 60 ⁇ L / well and plate seal Affixed and blocked for 2 hours at room temperature. The solution was removed by tapping, and antiserum was diluted 10 3 to 10 7 times with 1 ⁇ Assay Buffer, 20 ⁇ L / well was added, a plate seal was affixed, and the plate was incubated at 4 ° C. overnight.
- Antibody titer 3.0 ⁇ 10 6 when using SEQ-121 is highest, followed by antibody titer 2.5 ⁇ 10 6 when using Freund's Juvant, antibody titer 7.1 ⁇ 10 5 when using SEQ-61
- the antibody titer when using ODN2006 was in the order of 5.3 ⁇ 10 5 .
- the antibody titer of PCRV protein alone was 1.3 ⁇ 10 5 . From these results, it was shown that the adjuvant of the present invention has a strong immunostimulatory effect on B cells.
- the antibody titer when using SEQ-121 showed higher antibody production inducing ability than ODN2006 and was almost equivalent to the antibody titer when using Freund's adjuvant.
- the adjuvant was shown to be excellent. From these results, application of the adjuvant of the present invention to an infectious disease vaccine is expected.
- the lipid-binding double-stranded oligonucleotide of the present invention exhibits a very excellent immunostimulatory activity. Therefore, it is very useful as an adjuvant for enhancing the effect of the vaccine.
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
Description
14個~24個の炭素原子を含むアシル鎖を2本含む脂質を第2の鎖の3’末端又は5’末端に結合した本発明のアジュバントを癌抗原ペプチドと共に投与すると、ssCpG ODNと比較して強い抗腫瘍効果を示した(実施例3、結果2-A,B等)。一方、10個の炭素原子を含むアシル鎖を2本含む脂質が第2の鎖の5’末端に結合した二本鎖オリゴヌクレオチド(SEQ-12)を癌抗原ペプチドと共に投与しても、ssCpG ODNと比較して抗腫瘍効果の向上は見られなかった。また、12個~20個の炭素原子を含むアシル鎖を2本含む脂質を第2の鎖の3’末端又は5’末端に結合し、さらに、もう一方の末端に脂質が結合した本発明のアジュバントを癌抗原ペプチドと共に投与すると、ssCpG ODNと比較してCTL誘導率の上昇や強い抗腫瘍効果を示した(実施例3、結果3-A,B等)。
第2の鎖の長さが第1の鎖(CpGオリゴヌクレオチド)に対して50%~100%である本発明のアジュバントを癌抗原ペプチドと共に投与すると、ssCpG ODNと比較してCTL誘導率の上昇や強い抗腫瘍効果を示した(実施例3、結果4-A,B、結果5-A、結果8-A,B、結果9-A,B等)。
第2の鎖にオリゴヌクレオチドリンカー(例えば、dGdG、dTdT、dAdA等)を介して脂質が結合している本発明のアジュバントを癌抗原ペプチドと共に投与すると、リンカーを介さない本発明のアジュバントと比較して、さらにCTL誘導率の上昇や強い抗腫瘍効果を示した(実施例3、結果8-A,B等)。
(A1)第1の鎖が、8~50塩基のCpGオリゴヌクレオチドであり、
第2の鎖が、該第1の鎖にハイブリダイズ可能な配列を含む8~60塩基のオリゴヌクレオチド(但し、RNAオリゴヌクレオチドを除く)であり、
第2の鎖の長さが、第1の鎖の長さに対して50%以上の長さであり、
第2の鎖に炭素数12~30の炭化水素鎖を含む脂質がリンカーを介して又は介さずに結合している二本鎖オリゴヌクレオチド。
(A2)第2の鎖のオリゴヌクレオチドが、DNAヌクレオシド及び/又はヌクレオシド誘導体が結合したオリゴヌクレオチドである、(A1)に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
(A3)ヌクレオシド誘導体が、糖の2’位に置換基を有するヌクレオシド及び/又は糖の4’位と2’位との間に架橋構造を有するヌクレオシドである、(A2)に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
(A4)糖の4’位と2’位との間に架橋構造が、4’-(CH2)m-O-2’(mは1~4の整数)である、(A3)記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
(A5)脂質が、ジアシル脂質である、(A1)~(A4)いずれかに記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
(A6)脂質が、第2の鎖の3’末端及び/又は5’末端に結合している、(A1)~(A5)に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
(A7)脂質が、リンカーを介して結合している、(A1)~(A6)いずれかに記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
(A8)該リンカーが、オリゴヌクレオチドリンカーである、(A7)記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
(A9)該リンカーが、-(dX1)u-(ここで、X1はそれぞれ独立して、A、G、C又はTであり、uは1~8の整数である)である、(A8)記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
(A10)SEQ-61、SEQ-119、SEQ-121、SEQ-170及びSEQ-192からなる群から選択される、(A1)記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
(A11)SEQ-59、SEQ-166、SEQ-168、SEQ-216、SEQ-272、SEQ-280、SEQ-290、SEQ-294、SEQ-310、SEQ-373、及びSEQ-384 からなる群から選択される、(A1)記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
(A12)(A1)~(A11)いずれかに記載の二本鎖オリゴヌクレオチドを含む、医薬組成物。
(A13)抗原をさらに含む、(A12)記載の医薬組成物。
(A14)(A1)~(A11)いずれかに記載の二本鎖オリゴヌクレオチドを投与することを特徴とする、癌又は感染性疾患の治療又は予防方法。
(A15)癌又は感染性疾患の治療又は予防剤を製造するための、(A1)~(A11)いずれかに記載の二本鎖オリゴヌクレオチドの利用。
(A16)癌又は感染性疾患を治療又は予防するための、(A1)~(A11)いずれかに記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
(A19)微生物抗原が、細菌抗原、ウイルス抗原又は寄生生物抗原である、(A17)記載の医薬組成物。
(A19)自己抗原が、癌抗原、アルツハイマー病と関連がある抗原、ヒト抗体に対する抗原又はヒト内因性レトロウイルスエレメントから発現される抗原である、(A17)記載の医薬組成物。
(A20)習慣性物質が、ニコチン又はコカインである、(A17)記載の医薬組成物。
(A21)被験体における免疫応答を増大させるための方法であって、該方法は、該被験体に、有効量の(A13)、(A17)~(A20)いずれかに記載の医薬組成物を投与して、該被験体における免疫応答を増大させる工程を含む、方法。
(A22)該免疫応答が、コントロールと比較して、誘導される特異的細胞傷害性T細胞の誘導率の上昇である、(A21)に記載の方法。
(A23)該被験体が、癌又は感染性疾患を有する、(A21)又は(A22)に記載の方法。
(B1)第1の鎖が、8~50塩基のCpGオリゴヌクレオチドであり、
第2の鎖が、該第1の鎖にハイブリダイズ可能な配列を含む8~60塩基のオリゴヌクレオチドであり、
第2の鎖に脂質がリンカーを介して又は介さずに結合している二本鎖オリゴヌクレオチドからなるアジュバント。
(B2)第2の鎖のオリゴヌクレオチドが、DNAヌクレオシド及び/又はヌクレオシド誘導体が結合したオリゴヌクレオチドである、(B1)に記載のアジュバント。
(B3)ヌクレオシド誘導体が、糖の2’位に置換基を有するヌクレオシド及び/又は糖の4’位と2’位との間に架橋構造を有するヌクレオシドである、(B2)に記載のアジュバント。
(B4)該置換基が、OCH3である、(B3)記載のアジュバント。
(B5)脂質が、ジアシル脂質である、(B1)~(B4)いずれかに記載のアジュバント。
(B6)該ジアシル脂質のアシル鎖が、14~30個の炭素原子を含む、(B5)記載のアジュバント。
(B7)脂質が、第2の鎖の5’末端に結合している、(B5)又は(B6)記載のアジュバント。
(B8)第2の鎖の長さが、第1の鎖の長さに対して50%以上の長さである、(B1)~(B7)いずれかに記載のアジュバント。
(B9)脂質が、リンカーを介して結合している、(B1)~(B8)いずれかに記載のアジュバント。
(B10)該リンカーが、オリゴヌクレオチドリンカーである、(B9)記載のアジュバント。
(B11)該リンカーが、dX1dX2(ここで、X1又はX2は、A、G、C又はTである)である、(B10)記載のアジュバント。
(B12)抗原及び(B1)~(B11)いずれかに記載のアジュバントを含む、ワクチン組成物。
(B14)微生物抗原が、細菌抗原、ウイルス抗原又は寄生生物抗原である、(B13)記載のワクチン組成物。
(B15)自己抗原が、癌抗原、アルツハイマー病と関連がある抗原、ヒト抗体に対する抗原又はヒト内因性レトロウイルスエレメントから発現される抗原である、(B13)記載のワクチン組成物。
(B16)習慣性物質が、ニコチン又はコカインである、(B13)記載のワクチン組成物。
(B17)被験体における免疫応答を増大させるための方法であって、該方法は、該被験体に、有効量の(B12)~(B16)いずれかに記載のワクチン組成物を投与して、該被験体における免疫応答を増大させる工程を含む、方法。
(B18)該免疫応答が、コントロールと比較して、誘導される特異的細胞傷害性T細胞の誘導率の上昇である、(B17)に記載の方法。
(B19)該被験体が、癌又は感染性疾患を有する、(B17)又は(B18)に記載の方法。
(B20)癌又は感染性疾患を処置するための方法であって、該方法は、被験体に、有効量の(B12)~(B15)いずれかに記載のワクチン組成物を投与して、コントロールと比較して、該癌又は感染性疾患の1以上の症状を低減する工程を含む、方法。
本発明においては、当該分野で公知の遺伝子操作方法の使用が可能である。例えば、Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Forth Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press (2012)、Current Protocols Essential Laboratory Techniques, Current Protocols (2012)に記載された方法等が挙げられる。
「オリゴヌクレオチド」とは、同一又は異なるヌクレオシドが複数個結合したヌクレオチドを意味する。
(式中、BX1は、アデニン、グアニン、シトシン又はチミンである。)
「天然のRNAヌクレオシド」とは、以下を意味する。
(式中、BX2は、アデニン、グアニン、シトシン又はウラシルである。)
また、例えば、以下の糖の4’位と2’位との間の架橋構造が挙げられる。
4’-(CR1R2)m-O-2’、4’-(CR1R2)m-S-2’、4’-(CR1R2)m-O-C(=O)-2’、4’-(CR1R2)m-NR3-O-(CR1R2)m1-2’、4’-(CR1R2)m1-C(=O)-NR3-2’又は4’-(CR1R2)m2-C(=O)-NR3-Y4-2’、4’-(CR1R2)m1-SO2-NR3-2’、又は
であり、
ここで、
Y4は、O、S、NH又はCH2であり、
R1は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン、シアノ、置換若しくは非置換のアルキル、置換若しくは非置換のアルケニル又は置換若しくは非置換のアルキニルであり、
R2は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン、シアノ、置換若しくは非置換のアルキル、置換若しくは非置換のアルケニル又は置換若しくは非置換のアルキニルであり、
R3は、水素原子、置換若しくは非置換のアルキル、置換若しくは非置換のアルケニル、置換若しくは非置換のアルキニル、置換若しくは非置換の芳香族炭素環式基、置換若しくは非置換の非芳香族炭素環式基、置換若しくは非置換の芳香族複素環式基、置換若しくは非置換の非芳香族複素環式基、置換若しくは非置換の芳香族炭素環アルキル、置換若しくは非置換の非芳香族炭素環アルキル、置換若しくは非置換の芳香族複素環アルキル又は置換若しくは非置換の非芳香族複素環アルキルであり、
Y1はCR4又はNであり、
Y2はCR5又はNであり、
Y3はCR6又はNであり、
R4、R5及びR6はそれぞれ独立して、水素原子、ハロゲン、シアノ、置換若しくは非置換のアルキル、置換若しくは非置換のアルケニル、置換若しくは非置換のアルキニル、置換若しくは非置換のアミノ、置換若しくは非置換のアルキルオキシ、置換若しくは非置換のアルキルカルボニルアミノ、置換若しくは非置換のアルケニルカルボニルアミノ、置換若しくは非置換のアルキニルカルボニルアミノ、置換若しくは非置換のアルキルカルバモイル、置換若しくは非置換のアルケニルカルバモイル又は置換若しくは非置換のアルキニルカルバモイルであり、
mは、1~4の整数であり、
m1は、0~3の整数であり、
m2は、0又は1である。
α群は、水酸基、アルキル、アルキルオキシ、メルカプト、アルキルチオ、アミノ、アルキルアミノ又はハロゲンである。
ここで、
R1は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン、シアノ、置換若しくは非置換のアルキル、置換若しくは非置換のアルケニル又は置換若しくは非置換のアルキニルであり、
R2は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン、シアノ、置換若しくは非置換のアルキル、置換若しくは非置換のアルケニル又は置換若しくは非置換のアルキニルであり、
R3は、水素原子、置換若しくは非置換のアルキル、置換若しくは非置換のアルケニル又は置換若しくは非置換のアルキニルであり、
mは、1~4の整数であり、
m1は、0~2の整数である。
4’-(CH2)m-O-2’(mは1~4の整数)の中で、特に好ましくは4’-CH2-O-2’(LNA、Locked nucleic acid)である。具体例及びその調製方法は、国際公開第98/39352号、国際公開第2003/068795号、国際公開第2005/021570号等に記載されている。
4’-C(=O)-NR3-2’(R3は、水素原子又はアルキルである)の中で、特に好ましくは4’-C(=O)-NCH3-2’である。具体例及びその調製方法は、国際公開第2011/052436号に記載されている。
国際公開第98/39352号、国際公開第99/014226号、国際公開2000/056748、国際公開第2005/021570号、国際公開第2003/068795号、国際公開第2011/052436号、国際公開第2004/016749号、国際公開第2005/083124号、国際公開2007/143315号、国際公開第2009/071680号、国際公開2014/112463号、国際公開2014/126229号等。
「アルキル」の好ましい態様として、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、n-ペンチルが挙げられる。さらに好ましい態様として、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、tert-ブチルが挙げられる。
「アルケニル」の好ましい態様として、ビニル、アリル、プロペニル、イソプロペニル、ブテニルが挙げられる。
「アルキニル」の好ましい態様として、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニルが挙げられる。
「芳香族炭素環式基」の好ましい態様として、フェニルが挙げられる。
さらに、「非芳香族炭素環式基」は、以下のように架橋している基、又はスピロ環を形成する基も包含する。
単環の非芳香族炭素環式基としては、炭素数3~16が好ましく、より好ましくは炭素数3~12、さらに好ましくは炭素数4~8である。例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、シクロデシル、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニル、シクロヘキサジエニル等が挙げられる。
2環以上の非芳香族炭素環式基としては、例えば、インダニル、インデニル、アセナフチル、テトラヒドロナフチル、フルオレニル等が挙げられる。
2環以上の芳香族複素環式基は、単環又は2環以上の芳香族複素環式基に、「芳香族炭素環式基」及び/又は「非芳香族炭素環式基」における環が縮合したものも包含する。
単環の芳香族複素環式基としては、5~8員が好ましく、より好ましくは5員又は6員である。例えば、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアゾリル、トリアジニル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソオキサゾリル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、イソチアゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル等が挙げられる。
2環の芳香族複素環式基としては、例えば、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、インドリジニル、キノリニル、イソキノリニル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、プリニル、プテリジニル、ベンズイミダゾリル、ベンズイソオキサゾリル、ベンズオキサゾリル、ベンズオキサジアゾリル、ベンズイソチアゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾフリル、イソベンゾフリル、ベンゾチエニル、ベンゾトリアゾリル、イミダゾピリジル、トリアゾロピリジル、イミダゾチアゾリル、ピラジノピリダジニル、オキサゾロピリジル、チアゾロピリジル等が挙げられる。
3環以上の芳香族複素環式基としては、例えば、カルバゾリル、アクリジニル、キサンテニル、フェノチアジニル、フェノキサチイニル、フェノキサジニル、ジベンゾフリル等が挙げられる。
2環以上の非芳香族複素環式基は、単環又は2環以上の非芳香族複素環式基に、「芳香族炭素環式基」、「非芳香族炭素環式基」及び/又は「芳香族複素環式基」におけるそれぞれの環が縮合したものも包含する。
さらに、「非芳香族複素環式基」は、以下のように架橋している基、又はスピロ環を形成する基も包含する。
単環の非芳香族複素環式基としては、3~8員が好ましく、より好ましくは5員又は6員である。例えば、ジオキサニル、チイラニル、オキシラニル、オキセタニル、オキサチオラニル、アゼチジニル、チアニル、チアゾリジニル、ピロリジニル、ピロリニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピペリジル、ピペラジニル、モルホリニル、モルホリノ、チオモルホリニル、チオモルホリノ、ジヒドロピリジル、テトラヒドロピリジル、テトラヒドロフリル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロチアゾリル、テトラヒドロチアゾリル、テトラヒドロイソチアゾリル、ジヒドロオキサジニル、ヘキサヒドロアゼピニル、テトラヒドロジアゼピニル、テトラヒドロピリダジニル、ヘキサヒドロピリミジニル、ジオキソラニル、ジオキサジニル、アジリジニル、ジオキソリニル、オキセパニル、チオラニル、チイニル、チアジニル等が挙げられる。
2環以上の非芳香族複素環式基としては、例えば、インドリニル、イソインドリニル、クロマニル、イソクロマニル等が挙げられる。
「アルキルオキシ」の好ましい態様として、メトキシ、エトキシ、n-プロピルオキシ、イソプロピルオキシ、tert-ブチルオキシが挙げられる。
「ハロアルキル」の好ましい態様として、トリフルオロメチル、トリクロロメチルが挙げられる。
「モノアルキルアミノ」とは、「アルキル」がアミノ基の窒素原子と結合している水素原子1個と置き換わった基を意味する。例えば、メチルアミノ、エチルアミノ、イソプロピルアミノ等が挙げられる。好ましくは、メチルアミノ、エチルアミノが挙げられる。
「ジアルキルアミノ」とは、「アルキル」がアミノ基の窒素原子と結合している水素原子2個と置き換わった基を意味する。2個のアルキルは、同一でも異なっていてもよい。例えば、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、N,N-ジイソプロピルアミノ、N-メチル-N-エチルアミノ、N-イソプロピル-N-エチルアミノ等が挙げられる。好ましくは、ジメチルアミノ、ジエチルアミノが挙げられる。
「アルキルカルボニルアミノ」の好ましい態様としては、メチルカルボニルアミノ、エチルカルボニルアミノが挙げられる。
等が挙げられる。
「芳香族炭素環アルキル」の好ましい態様としては、ベンジル、フェネチル、ベンズヒドリルが挙げられる。
等が挙げられる。
等が挙げられる。
等が挙げられる。
置換基:ハロゲン、ヒドロキシ、カルボキシ、アミノ、イミノ、ヒドロキシアミノ、ヒドロキシイミノ、ホルミル、ホルミルオキシ、カルバモイル、スルファモイル、スルファニル、スルフィノ、スルホ、チオホルミル、チオカルボキシ、ジチオカルボキシ、チオカルバモイル、シアノ、ニトロ、ニトロソ、アジド、ヒドラジノ、ウレイド、アミジノ、グアニジノ、トリアルキルシリル、アルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、ハロアルキルオキシ、アルキルカルボニル、アルケニルカルボニル、アルキニルカルボニル、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルスルホニル、アルケニルスルホニル、アルキニルスルホニル、モノアルキルカルボニルアミノ、ジアルキルカルボニルアミノ、モノアルキルスルホニルアミノ、ジアルキルスルホニルアミノ、アルキルイミノ、アルケニルイミノ、アルキニルイミノ、アルキルカルボニルイミノ、アルケニルカルボニルイミノ、アルキニルカルボニルイミノ、アルキルオキシイミノ、アルケニルオキシイミノ、アルキニルオキシイミノ、アルキルカルボニルオキシ、アルケニルカルボニルオキシ、アルキニルカルボニルオキシ、アルキルオキシカルボニル、アルケニルオキシカルボニル、アルキニルオキシカルボニル、アルキルスルファニル、アルケニルスルファニル、アルキニルスルファニル、アルキルスルフィニル、アルケニルスルフィニル、アルキニルスルフィニル、モノアルキルカルバモイル、ジアルキルカルバモイル、モノアルキルスルファモイル、ジアルキルスルファモイル、芳香族炭素環式基、非芳香族炭素環式基、芳香族複素環式基、非芳香族複素環式基、芳香族炭素環オキシ、非芳香族炭素環オキシ、芳香族複素環オキシ、非芳香族複素環オキシ、芳香族炭素環カルボニル、非芳香族炭素環カルボニル、芳香族複素環カルボニル、非芳香族複素環カルボニル、芳香族炭素環オキシカルボニル、非芳香族炭素環オキシカルボニル、芳香族複素環オキシカルボニル、非芳香族複素環オキシカルボニル、芳香族炭素環アルキルオキシ、非芳香族炭素環アルキルオキシ、芳香族複素環アルキルオキシ、非芳香族複素環アルキルオキシ、芳香族炭素環アルキルオキシカルボニル、非芳香族炭素環アルキルオキシカルボニル、芳香族複素環アルキルオキシカルボニル、非芳香族複素環アルキルオキシカルボニル、芳香族炭素環アルキルアミノ、非芳香族炭素環アルキルアミノ、芳香族複素環アルキルアミノ、非芳香族複素環アルキルアミノ、芳香族炭素環スルファニル、非芳香族炭素環スルファニル、芳香族複素環スルファニル、非芳香族複素環スルファニル、非芳香族炭素環スルホニル、芳香族炭素環スルホニル、芳香族複素環スルホニル、及び非芳香族複素環スルホニル。
「非芳香族複素環」の環上の置換基としては、次の置換基が挙げられる。環上の任意の位置の原子が次の置換基から選択される1以上の基と結合していてもよい。
置換基:ハロゲン、ヒドロキシ、カルボキシ、アミノ、イミノ、ヒドロキシアミノ、ヒドロキシイミノ、ホルミル、ホルミルオキシ、カルバモイル、スルファモイル、スルファニル、スルフィノ、スルホ、チオホルミル、チオカルボキシ、ジチオカルボキシ、チオカルバモイル、シアノ、ニトロ、ニトロソ、アジド、ヒドラジノ、ウレイド、アミジノ、グアニジノ、トリアルキルシリル、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、アルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、ハロアルキルオキシ、アルキルオキシアルキル、アルキルオキシアルキルオキシ、アルキルカルボニル、アルケニルカルボニル、アルキニルカルボニル、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルスルホニル、アルケニルスルホニル、アルキニルスルホニル、モノアルキルカルボニルアミノ、ジアルキルカルボニルアミノ、モノアルキルスルホニルアミノ、ジアルキルスルホニルアミノ、アルキルイミノ、アルケニルイミノ、アルキニルイミノ、アルキルカルボニルイミノ、アルケニルカルボニルイミノ、アルキニルカルボニルイミノ、アルキルオキシイミノ、アルケニルオキシイミノ、アルキニルオキシイミノ、アルキルカルボニルオキシ、アルケニルカルボニルオキシ、アルキニルカルボニルオキシ、アルキルオキシカルボニル、アルケニルオキシカルボニル、アルキニルオキシカルボニル、アルキルスルファニル、アルケニルスルファニル、アルキニルスルファニル、アルキルスルフィニル、アルケニルスルフィニル、アルキニルスルフィニル、モノアルキルカルバモイル、ジアルキルカルバモイル、モノアルキルスルファモイル、ジアルキルスルファモイル、芳香族炭素環式基、非芳香族炭素環式基、芳香族複素環式基、非芳香族複素環式基、芳香族炭素環オキシ、非芳香族炭素環オキシ、芳香族複素環オキシ、非芳香族複素環オキシ、芳香族炭素環カルボニル、非芳香族炭素環カルボニル、芳香族複素環カルボニル、非芳香族複素環カルボニル、芳香族炭素環オキシカルボニル、非芳香族炭素環オキシカルボニル、芳香族複素環オキシカルボニル、非芳香族複素環オキシカルボニル、芳香族炭素環アルキル、非芳香族炭素環アルキル、芳香族複素環アルキル、非芳香族複素環アルキル、芳香族炭素環アルキルオキシ、非芳香族炭素環アルキルオキシ、芳香族複素環アルキルオキシ、非芳香族複素環アルキルオキシ、芳香族炭素環アルキルオキシカルボニル、非芳香族炭素環アルキルオキシカルボニル、芳香族複素環アルキルオキシカルボニル、非芳香族複素環アルキルオキシカルボニル、芳香族炭素環アルキルオキシアルキル、非芳香族炭素環アルキルオキシアルキル、芳香族複素環アルキルオキシアルキル、非芳香族複素環アルキルオキシアルキル、芳香族炭素環アルキルアミノ、非芳香族炭素環アルキルアミノ、芳香族複素環アルキルアミノ、非芳香族複素環アルキルアミノ、芳香族炭素環スルファニル、非芳香族炭素環スルファニル、芳香族複素環スルファニル、非芳香族複素環スルファニル、非芳香族炭素環スルホニル、芳香族炭素環スルホニル、芳香族複素環スルホニル、及び非芳香族複素環スルホニル。
本発明の脂質結合二本鎖オリゴヌクレオチドは
第1の鎖が、8~50塩基のCpGオリゴヌクレオチドであり、
第2の鎖が、該第1の鎖にハイブリダイズ可能な配列を含む8~60塩基のオリゴヌクレオチドであり、
第2の鎖に脂質がリンカーを介して又は介さずに結合している二本鎖オリゴヌクレオチド
からなる。
より、好ましくは、
第1の鎖が、8~50塩基のCpGオリゴヌクレオチドであり、
第2の鎖が、該第1の鎖にハイブリダイズ可能な配列を含む8~60塩基のオリゴヌクレオチド(但し、RNAオリゴヌクレオチドを除く)であり、
第2の鎖の長さが、第1の鎖の長さに対して50%以上の長さであり、
第2の鎖に炭素数12~30の炭化水素鎖を含む脂質がリンカーを介して又は介さずに結合している二本鎖オリゴヌクレオチド
である。
CpGオリゴヌクレオチドは、配列、二次構造及びヒト末梢血単核細胞(PBMC)に対する影響に基づいて、クラスA、クラスB、クラスC、クラスP、クラスSに分類される(Advanced drug delivery reviews, 2009, 61(3),195-204)。
クラスA:ODN1585、ODN2216、ODN2336等;
クラスB:ODNBW006、ODN D-SL01、ODN1668(国際公開第2005/063264号)、OND1826(国際公開第2007/030580号)、OND2006(CpG7909、PF-3512676)(国際公開第98/18810号)、ODN2007、ODN684等;
クラスC:ODN D-SL03、ODN 2395、ODN M362等が挙げられる。これらは、研究用試薬としてInvivoGen社から購入することもできる。また、その他、
CpG-28(国際公開第2000/056342号)、
CpG-685(GNKG-168)(Blood, 2010, 115(24), 5041)
CpG-ODN C274(PLoS ONE, 2013, 8(4), e62373)
KSK-13(KSK-CpG)(米国特許第7408050号明細書)
CpG ODN 10104(CpG-10104)(Drug Data Rep, 2006, 28(3), 258)
CpG ODN-1585(国際公開第2001/022990号)
ODN-5890(国際公開第2006/080946号)
1018-ISS(国際公開第2008/073661号)
EMD-1201081(HYB-2055、IMO-2055)(国際公開第2005/009355号)
D35-CpG、K3-CpG(ジーンデザイン社)
等が挙げられる。本発明にはいずれのクラスのCpGオリゴヌクレオチドであっても利用可能であるが、好ましくは、クラスAのCpGオリゴヌクレオチド(例えば、ODN2216、ODN2336、D35-CpG等)又はクラスBのCpGオリゴヌクレオチド(例えば、ODN1826、ODN2006、CpG-28、1018-ISS、IMO2055、K3-CpG、ODN684、D-LS01等)又はクラスCのCpGオリゴヌクレオチド(例えば、D-LS03、ODN2395、ODN M362)である。特に好ましくは、ODN1826、ODN2006である。
第2の鎖のオリゴヌクレオチドは、CpGオリゴヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズできる限り、ハイブリダイズする部位において、1又は数個のミスマッチが存在するものも含まれる。
例えば、ハイブリダイズする部位が、第1の鎖のCpGオリゴヌクレオチドの相補配列と少なくとも70%以上、好ましくは80%以上、より好ましくは90%以上、もっとも好ましくは95%以上の相同性を有するオリゴヌクレオチドが挙げられる。ここで、相同性は、例えば、Altschulら(The Journal of Molecular Biology,215,403-410(1990).)の開発したアルゴリズムを使用した検索プログラムBLASTを用いることにより、スコアで類似度が示される。
「1又は数個の塩基」とは、1~10個、1~5個、1~3個又は1若しくは2個の塩基を意味している。
第2の鎖の好ましい長さは第1の鎖のCpGオリゴヌクレオチドの長さに依存する。例えば、第1の鎖の長さに対して50%以上の長さ、60%以上の長さ、70%以上の長さ、50~100%の長さ、60~100%の長さ、70~100%の長さである。特に好ましくは第1の鎖の長さに対して50~100%の長さである。
DNAヌクレオシド及びヌクレオシド誘導体を含む場合、例えば、中心領域と該中心領域の両側の末端領域を含み、両側の末端領域に少なくとも1つのヌクレオシド誘導体を含むオリゴヌクレオチドが挙げられる。具体的には、5’末端領域及び/又は3’末端領域に、ヌクレオシド誘導体を1以上、好ましくは、1~5、さらに好ましくは、2~3含有する。一方の末端領域内の修飾の種類、数、位置は他方の末端領域における修飾の種類、数、位置と同じであっても異なっていてもよい。他の態様として、ランダムにヌクレオシド誘導体を含むオリゴヌクレオチドも挙げられる。
好ましくは、糖の2’位に置換基を有するヌクレオシド及び/又は糖の4’位と2’位との間に架橋構造を有するヌクレオシドである。
糖の2’位の置換基として好ましくは、F、OCH3又はOCH2CH2OCH3である。特に、OCH3が好ましい。
糖の4’位と2’位との間の架橋構造として好ましくは、4’-(CH2)m-O-2’(mは1~4の整数)、4’-C(=O)-NR3-2’(R3は、水素原子又はアルキルである)である。
D-オリゴ及びS-オリゴのように、2種以上のヌクレオシド間結合を含む場合、例えば、中心領域と該中心領域の両側の末端領域を含み、両側の末端領域に少なくとも1つの非天然のヌクレオシド間結合(例えば、S-オリゴ)を含み、中心領域に天然のヌクレオシド間結合(つまり、D-オリゴ)を含むオリゴヌクレオチドが挙げられる。例えば、5’末端領域及び/又は3’末端領域に、非天然のヌクレオシド間結合を1以上、好ましくは、1~5、さらに好ましくは、2~3含有する。一方の末端領域内の修飾の種類、数、位置は他方の末端領域における修飾の種類、数、位置と同じであっても異なっていてもよい。他の態様として、ランダムに非天然のヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチドも挙げられる。
「ジアシル脂質」は、リン酸脂質、糖脂質、スフィンゴ脂質又はこれらの組み合わせであり、炭化水素鎖を2本含む。好ましくは、下記(a)又は(f)で表される基である。
脂質中の炭化水素鎖は、それぞれ、約8~30個の炭素原子を含み、飽和、不飽和、又はこれらの組み合わせであり、分岐していてもよい。1本鎖の脂質の場合、好ましい鎖長は、炭素原子数が8~30個、より好ましくは8~20個である。2本鎖の脂質の場合、好ましい鎖長は炭素原子数が10~30個、より好ましくは12~30個、さらに好ましくは14~24個である。2本鎖の脂質の場合、2本の鎖は長さが同じであっても異なっていてもよい。脂質中の鎖は、エステル結合、アミド結合、チオエステル結合又はこれらの組み合わせ等を介して、リン酸、糖等を含む部位(オリゴヌクレオチドと結合する部位)に結合する。
なお、本発明の脂質結合二本鎖オリゴヌクレオチドは第2の鎖に炭素数12~30の炭化水素鎖を含む脂質を有する。脂質が2カ所以上に結合している場合、1つの脂質が炭素数12~30の炭化水素鎖を含む脂質であれば、他方の脂質に含まれる炭化水素鎖の炭素数は、12より少なくてもよい。
(式中、p及びqはそれぞれ独立して6~28の整数であり、好ましくはそれぞれ独立して8~28であり、より好ましくはそれぞれ独立して10~28であり、さらに好ましくはそれぞれ独立して12~22である。)
あるいは、
(式中、B1及びB2はアデニン(A)、グアニン(G)、シトシン(C)、5-メチルシトシン(5-Me-C)、チミン(T)又はウラシル(U)であり、Ya及びYbはO又はSであり、p及びqはそれぞれ独立して6~28の整数であり、好ましくは10~18である。)
また、脂質は第2の鎖の1又は2か所に結合していることが好ましい。好ましくは、3’末端及び/又は5’末端に脂質が結合する。より好ましくは、5’末端に脂質が結合する。
(式中、Y’はO又はSであり、r及びsは1~10の整数であり、好ましくは1~5であり、より好ましくは1~3である。tは1~4の整数であり、好ましくは1~3、より好ましくは2又は3である。)
リンカーは、当該分野において公知の手法を参考にしながら合成することができる。オリゴヌクレオチドリンカーに関しては、上記に例示したオリゴヌクレオチドの合成方法と同様の方法で合成することができる。
(式中、B1及びB2は、アデニン(A)、グアニン(G)、シトシン(C)、5-メチルシトシン(5-Me-C)、チミン(T)又はウラシル(U)である。Y’はO又はSである。Z1及びZ2は、H又はOHであり、好ましくはHである。)
オリゴヌクレオチドリンカーとして、例えば、DNAリンカー、つまり、-(dX1)u-(ここで、X1はそれぞれ独立して、A、G、C又はTであり、uは1~8の整数である)が挙げられる。具体的には、dG、dGdG、dGdGdGdG、dGdGdGdGdG、dT、dTdT、dTdTdTdT、dTdTdTdTdT等が挙げられる。特に好ましくは、dGdG、dGdGdGdGdG又はdTdTである。DNAリンカー中のヌクレオシド間結合としては、ホスホロチオエート結合が好ましい。
また、本発明の脂質結合二本鎖オリゴヌクレオチドの脂質が結合していない3’末端又は5’末端はリン酸エステル部分を含んでいてもよい。「リン酸エステル部分」とは、リン酸エステル並びに修飾リン酸エステルが含まれる、末端リン酸基を意味する。リン酸エステル部分は、いずれの末端に位置してもよいが、5’-末端ヌクレオシドであることが好ましい。具体的には、式:-O-P(=O)(OH)OHで示される基又はその修飾基である。つまり、O及びOHの1以上が、H、O、OR’、S、N(R’)(ここでR’は、H、アミノ保護基又は置換若しくは非置換のアルキルである)又はアルキルで置換されていてもよい。5’又は3’末端は、それぞれ独立して置換又は非置換の1~3のリン酸エステル部分を含んでいてもよい。
また、本発明は、抗原及び本発明の脂質結合二本鎖オリゴヌクレオチド(本発明のアジュバント)を含む、医薬組成物又はワクチン組成物も包含する。
抗原は、単一の抗原として提供され得るか、又は組み合わせて提供され得る。抗原は、ポリペプチド又はオリゴヌクレオチドの複雑な混合物として提供され得る。
抗原には、微生物抗原、自己抗原及び習慣性物質が包含されるが、これらに限定されない。
「細菌」は、ヒ卜、愛玩動物、家畜等に対して疾患を引き起こす原因となる細菌であれば特に限定されない。具体的には、レンサ球菌(溶連菌、肺炎球菌等)、黄色ブドウ球菌(MSSA、MRSΑ等)、表皮ブドウ球菌、腸球菌、リステリア属に属する菌、髄膜炎球菌、淋菌、病原性大腸菌、肺炎桿菌、プロテウス菌、百日咳菌、緑膿菌、セラチア菌、シ卜ロバクター菌、アシネ卜バクター菌、エンテロバクター菌、マイコプラズマ菌、クロス卜リジウム菌、結核菌、コレラ菌、ペスト菌、ジフテリア菌、赤痢菌、炭疽菌、卜レポネーマ菌、破傷風菌、らい菌、レジオネラ菌、レプ卜スピラ菌、ボレリア菌、フランシセラ菌、コクシエラ菌、リケッチア菌、クラミジア菌、鼻疽菌、ピロリ菌等が挙げられる。
「ウイルス」は、ヒ卜、愛玩動物、家畜等に対して疾患を引き起こす原因となるウイルスであれば特に限定されない。例えば、インフルエンザウイルス、呼吸器多核体ウイルス(RSV)パピロマウイルス、肝炎ウイルス(Α型、Β型、C型、D型、Ε型、F型、G型、ΤΤ型等)、ライノウイルス、天然痘ウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、ポリオウイルス、水痘・帯状疱疹ウイルス、ノロウイルス、ノーウォークウイルス、サポウイルス、サッポロウイルス、ムンプスウイルス、アデノウイルス、エンテロウイルス、ロタウイルス、HIV-1、HIV-2等のヒト免疫不全ウイルス、狂犬病ウイルス、Τリンパ好性ウイルス、黄熱病ウイルス、サイ卜メガロウイルス、SARS-CoV、MERS-CoV等のコロナウイルス、エボラウイルス、ポリオーマウイルス、JCウイルス、ΒΚウイルス、単純ヘルペスウイルス1(HSV1)、単純ヘルペスウイルス2(HSV2)等のヘルペスウイルス、リンホクリプ卜ウイルス、ロゼオロウイルス、日本脳炎ウイルス、コクサッキーウイルス、デングウイルス、ウエストナイルウイルス、コロナウイルス、パルボウイルス、エプスタイン・バール・ウイルス、マールブルグウイルス、ハンタウイルス、ラッサウイルス、チクングニアウイルス、ハンターンウイルス、跳躍病ウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、ボルナウイルス、リフトバレー熱ウイルス、卜ゴ卜ウイルス、ドーリウイルス、口蹄疫ウイルス、ニューキャッスルウイルス、牛丘疹性口炎ウイルス、牛疫ウイルス、豚水胞病ウイルス、カリシウイルス、卜ロウイルス、アフリカ馬疫ウイルス、アルテリウイルス、羊痘ウイルス、カプリポックスウイルス、羊随伴型悪性カタル熱ウイルス、ウイルス性出血性敗血症ウイルス、水胞性口炎ウイルス等が挙げられる。
「寄生生物」は、ヒ卜、愛玩動物、家畜等に対して疾患を引き起こす原因となる寄生生物であれば特に限定されない。例えば、アメーバ赤痢、マラリア、トキソプラズマ、リーシュマニア、クリプトスポリジウム、トリパノソーマ、エキノコックス、日本住血吸虫、フィラリア、回虫、広節裂頭条虫等が挙げられる。
「真菌」は、ヒ卜、愛玩動物、家畜等に対して疾患を引き起こす原因となる真菌であれば特に限定されない。具体的には、アスペルギルス菌、カンジダ菌、クリブ卜コッカス菌、白癬菌症、ヒス卜プラズマ菌、ニューモシスチス菌等が挙げられる。
「癌抗原」としては、癌細胞において特異的に発現する抗原であり、タンパク質、ペプチド等が挙げられ、それらを含む融合ペプチドも包含する。例えば、国際公開第2006/090810号、国際公開第2007/145318号、国際公開第2008/047473号、国際公開第2008/102557号、国際公開第2009/025117号、国際公開第2009/025196号、国際公開第2009/1539992号、国際公開第2010/013485号、国際公開第2010/021112号、国際公開第2010/073551号、国際公開第2010/095428号、国際公開第2010/131452号、国際公開第2010/137295号、国際公開第2011/067920号、国際公開第2011/074236号、国際公開第2011/089921号、国際公開第2011/111392号、国際公開第2012/053200号、国際公開第2012/053206号、国際公開第2012/169200号、国際公開第2013/024582号、国際公開第2013/061594号、国際公開第2014/041784号、国際公開第2014/087626号等に記載のペプチド等が挙げられる。
「アルツハイマー病と関連がある抗原」としては、タウ、β-アミロイド等が挙げられる。
「ヒト抗体に対する抗原」としては、IgEが挙げられる。
a)1%以上のCTL誘導率を示す。
b)腫瘍生着阻害を示す。
c)腫瘍退縮効果を示す。
d)高いバイオアベイラビリティー、適度なクリアランス等良好な薬物動態を示す。特に、高いリンパ移行性を示す。
e)代謝安定性が高い。
f)サイトカイン放出症候群が起きない。
g)局所刺激性が軽い。
h)変異原性を有さない。
i)心血管系のリスクが低い。
j)急性毒性のリスクが低い。
経口投与用組成物としては、散剤、顆粒剤、水若しくは非水性媒体に溶解させた懸濁液又は溶液、カプセル、粉末剤、錠剤等が挙げられる。
非経口、硬膜下腔、又は、脳室内投与用組成物としては、バッファー、希釈剤及びその他の適当な添加剤を含む無菌水溶液等が挙げられる。
結合剤としてはメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチン又はポリビニルピロリドン等が挙げられる。
崩壊剤としてはカルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末又はラウリル硫酸ナトリウム等が挙げられる。
滑沢剤としてはタルク、ステアリン酸マグネシウム又はマクロゴール等が挙げられる。坐剤の基剤としてはカカオ脂、マクロゴール又はメチルセルロース等を用いることができる。
また、液剤又は乳濁性、懸濁性の注射剤として調製する場合には通常使用されている溶解補助剤、懸濁化剤、乳化剤、安定化剤、保存剤、等張剤等を適宜添加しても良い。経口投与の場合には嬌味剤、芳香剤等を加えても良い。
また、抗原を含む場合、該抗原と本発明のアジュバン卜の割合は、抗原1重量部に対して、アジュバン卜は、通常10重量部~1000重量部程度である。
医薬組成物又はワクチン組成物の投与量は、所望する免疫賦活化の程度や、投与対象の年齢、性別等によって区々であるため、適宜設定すればよく、特に限定はされないが、例えば、1日に0.001~10mg/kg体重が挙げられる。
また、所望する医薬組成物又はワクチン組成物が発揮する効果の程度、投与対象の年齢、性別等に従って、同一の被験体に対して本発明の医薬組成物又はワクチン組成物を複数回投与してもよく、例えば、2回~4回程度を上限とすればよい。なお、同一の被験体に対して本発明の医薬組成物又はワクチン組成物を複数回投与する際には、その間隔を適宜設けてもよく、例えば、14日~30日程度とすればよい。
Ac:アセチル
CPG:コントロールドポーラーガラス
DIEA:N,N-ジイソプロピルエチルアミン
DMAP:4-ジメチルアミノピリジン
DMTr:ジメトキシトリチル
DMT-MM:4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド
DMF:N,N’-ジメチルホルムアミド
Et:エチル
Fmoc:9-フルオレニルメチルオキシカルボニル
HBTU:O-ベンゾトリアゾール-N,N,N’,N’-テトラメチル-ウロニウム-ヘキサフルオロ-ホスフェート
Me:メチル
MMTr:4-メトキシフェニルジフェニルメチル
MMTrCl:4-メトキシトリチルクロリド
PBS:リン酸緩衝生理食塩水
TBS:tert-ブチルジメチルシリル
TBAF:テトラブチルアンモニウムフルオリド
TFA:トリフルオロ酢酸
THF:テトラヒドロフラン
実施例で得られた化合物のNMR分析は300MHz、400MHzで行い、CD3OD、CDCl3、DMSO-d6を用いて測定した。
移動相:[A]は0.1%ギ酸含有水溶液[B]は0.1%ギ酸含有アセトニトリル溶液
グラジエント:3.5分間で5%-100%溶媒[B]のリニアグラジエントを行った後、0.5分間、100%溶媒[B]を維持した。
カラム:ACQUITY UPLC(登録商標)BEH C18(1.7μm、i.d.2.1x50mm)(Waters)
流速:0.8 mL/分
PDA検出波長:254nm(検出範囲210-500nm)
A) 脂質の合成
工程1
化合物2-6(3.20g、22.2mmol、東京化成工業株式会社)をTHF-DMF(5:1、60mL)に溶解し、DIEA(4.84mL、27.7mmol)、HBTU(8.84g、23.3mmol)を加え、室温で30分間撹拌した。化合物1(2.2g、24.41mmol)のDMF溶液(5mL)を10分間かけて滴下し、3時間撹拌した。反応液量を減圧により半分程度に濃縮し、水(100mL)中へ滴下してから、10分間撹拌した。生じた固体を、ろ取した。固体を水(50mL)及びアセトニトリル(150mL)で洗浄して、白色固体として化合物3-6(3.2g、9.34mmol)を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 6.45 (2H, t, J = 6.0 Hz), 4.39 (1H, s), 3.78-3.73 (1H, m), 3.33 (4H, t, J = 5.6 Hz), 2.22 (4H, t, J = 7.7 Hz), 1.67 (4H, dt, J = 31.0, 14.1 Hz), 1.30-1.27 (16H, m), 0.88 (6H, t, J = 6.8 Hz).
工程1
化合物2-8(7.65g、44.40mmol、和光純薬工業株式会社)をDMF(50.0mL)、ジクロロメタン溶液(100.0mL)に溶解し、DIEA(8.72mL、66.6mmol)、HBTU(18.52g、48.8mmol)を加え、室温で激しく30分間撹拌した。得られた白濁溶液に対して、室温で化合物1(2.0g、22.2mmol)を加えて、3時間激しく撹拌した。反応液に飽和重そう水(20mL)を加え反応を停止した後に、白色固体をろ取した。得られた固体を水(100mL)、アセトニトリル(100mL)で洗浄後、乾燥し、白色固体として化合物3-8(6.6g、16.6mmol)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:6.29 (brs, 2H), 4.12 (s, 1H), 3.76 (dd, 1H, J = 4.5, 4.5 Hz), 3.42-3.35 (m, 2H), 3.31-3.25 (m, 2H), 2.22 (t, 4H, J = 7.5 Hz), 1.65-1.60 (m, 4H), 1.29-1.26 (m, 24H), 0.88 (t, 6H, J = 6.5 Hz).
ESI-MS(m/z) : 340 (M+1).
工程2
化合物3-8(2.88g、7.22mmol)をジクロロメタン(60mL)に懸濁し、DIEA(5.30mL、30.3mmol)を加えた。その後室温にて、N,N‐ジイソプロピルアミドクロリド亜りん酸2‐シアノエチル(3.23mL、14.5mmol)を加え、2時間加熱還流した。室温へ放冷後、反応溶液を分液漏斗へ移し、ジクロロメタン(80mL)で希釈した有機層を飽和重そう水(20mL)で二回、水(20mL)で二回、食塩水(20mL)で一回洗浄した。得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥した後、溶媒を減圧留去した。得られた褐色オイルである化合物4-8(2.88g、4.81mmol)を粗生成物として得た。化合物の生成は31P-NMRにより3価のリンが導入されたことをもって判断した。
31P-NMR(CDCl3)δ:148.2 (s)
工程1
化合物2-10(9.78g、48.8mmol、東京化成工業株式会社)をDMF(150mL)、ジクロロメタン溶液(75mL)に溶解し、DIEA(12.79mL、73.2mmol)、HBTU(20.37g、53.7mmol)を加え、室温で激しく45分間撹拌した。得られた白濁溶液に対して、室温で化合物1(2.2g、24.41mmol)を加えて激しく撹拌した。その後、80℃に昇温しさらに4時間撹拌した。反応液に飽和重そう水(200mL)と水(50mL)を加え反応を停止した後に、白色固体をろ取した。得られた固体を水(200mL)、アセトニトリル(400mL)で洗浄後、白色固体として化合物3-10(9.95g、21.88mmol)を得た。
1H-NMR (CDCl3)δ: 6.25 (2H, t, J = 5.8 Hz), 4.07 (1H, s), 3.75 (1H, s), 3.44-3.38 (2H, m), 3.29-3.23 (2H, m), 2.22 (4H, t, J = 7.6 Hz), 1.67-1.59 (4H, m), 1.30-1.25 (64H, m), 0.88 (6H, t, J = 6.8 Hz).
工程2
化合物3-10(230mg、0.506mmol)をジクロロメタン(11mL)に懸濁し、DIEA(0.353mL、2.023mmol)を加えた。その後室温にて、N,N‐ジイソプロピルアミドクロリド亜りん酸2‐シアノエチル(0.226mL、1.012mmol)を加え、2時間加熱還流した。室温へ放冷後、反応溶液を分液漏斗へ移し、有機層を飽和重そう水(10mL)で2回、水(10mL)で5回、食塩水(10mL)で1回洗浄した。得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥した後、溶媒を減圧留去した。褐色オイルである化合物4-10(365mg)を粗生成物として得た。化合物の生成は31P-NMRにより3価のリンが導入されたことをもって判断した。
31P-NMR(CDCl3)δ:148.2 (s)
工程1
化合物2-12(5.07g、22.19mmol、東京化成工業株式会社)をDMF(51.8mL)、ジクロロメタン溶液(28.6mL)に溶解し、DIEA(5.81mL、33.3mmol)、HBTU(9.26g、24.4mmol)を加え、室温で激しく30分間撹拌した。得られた白濁溶液に対して、室温で化合物1(1.0g、11.1mmol)を加えて激しく撹拌した。その後、40℃に昇温しさらに2時間撹拌した。反応液に飽和重そう水(10mL)を加え反応を停止した後に、白色固体をろ取した。得られた固体を水(50mL)、アセトニトリル(50mL)、ジクロロメタン(50mL)で洗浄後、白色固体として化合物3-12(4.8g、9.4mmol)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:6.20 (brs, 2H), 3.96 (d, 1H, J = 4.0 Hz, 1H), 3.75 (m, 1H), 3.40 (dd, 2H, J=4.0, 12.0 Hz), 3.25 (dd, 2H, J = 4.0, 12.0 Hz), 2.22 (t, 4H, J = 12.0 Hz, 2H), 1.62 (d, 4H, J = 8.0 Hz), 1.29-1.25 (m, 40H), 0.90-0.86 (m, 6H)
ESI-MS(m/z) : 512 (M+1).
工程2
化合物3-12(5.10g、9.98mmol)をジクロロメタン(257mL)に懸濁し、DIEA(6.97mL、39.9mmol)を加えた。その後室温にて、N,N‐ジイソプロピルアミドクロリド亜りん酸2‐シアノエチル(4.46mL、20.0mmol)を加え、2時間加熱還流した。室温へ放冷後、反応溶液を分液漏斗へ移し、有機層を飽和重そう水(100mL)で二回、水(100mL)で二回、食塩水(100mL)で一回洗浄した。得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥した後、溶媒を減圧留去した。褐色オイルである化合物4-12(4.80g、6.75mmol)を粗生成物として得た。化合物の生成は31P-NMRにより3価のリンが導入されたことをもって判断した。
31P-NMR(CDCl3)δ:148.2 (s)
化合物2-14(12.52g、48.8mmol、東京化成工業株式会社)をDMF(150mL)、ジクロロメタン溶液(75mL)に溶解し、DIEA(12.79mL、73.2mmol)、HBTU(20.37g、53.7mmol)を加え、室温で激しく2時間半撹拌した。得られた白濁溶液に対して、室温で化合物1(2.2g、24.41mmol)を加えて激しく撹拌した。その後、80℃に昇温しさらに5時間撹拌した。反応液に飽和重そう水(800mL)と水(50mL)を加え反応を停止した後に、白色固体をろ取した。得られた固体を水(500mL)、アセトニトリル(300mL)、ジクロロメタン(100mL)で洗浄後、白色固体として化合物3-14(10.9g、19.23mmol)を得た。
1H-NMR (CDCl3)δ: 6.21 (2H, s), 3.97 (1H, d, J = 4.0 Hz), 3.77-3.74 (1H, m), 3.45-3.38 (2H, m), 3.28-3.22 (2H, m), 2.22 (4H, t, J = 7.6 Hz), 1.65-1.61 (4H, m), 1.29-1.25 (48H, m), 0.88 (6H, t, J = 6.8 Hz).
工程2
化合物3-14(1.00g、1.76mmol)をジクロロメタン(50mL)に懸濁し、DIEA(0.924mL、5.29mmol)を加えた。その後室温にて、N,N‐ジイソプロピルアミドクロリド亜りん酸2‐シアノエチル(0.870mL、3.53mmol)を加え、2時間加熱還流した。室温へ放冷後、反応溶液をジクロロメタン(50mL)で希釈後、分液漏斗へ移し、有機層を飽和重そう水(100mL)で二回、水(100mL)で二回、食塩水(100mL)で一回洗浄した。得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥した後、溶媒を減圧留去した。得られた白色アモルファスである化合物4-14(1.00g、1.30mmol)を粗生成物として得た。化合物の生成は31P-NMRにより3価のリンが導入されたことをもって判断した。
31P-NMR(CDCl3)δ:148.2 (s)
非特許文献3に記載の方法に従って、化合物2-16より化合物3-16を合成し、続けて化合物4-16の合成を行った。
化合物3-16:1H-NMR(CDCl3)δ:6.20 (brs, 2H), 3.95 (m, 1H), 3.76 (m, 1H), 3.40 (m, 2H), 3.25 (m, 2H), 2.24 (m, 4H), 1.68-1.20 (m, 60H), 0.88 (t, 6H, J=8.0 Hz)
化合物4-16:31P-NMR(CDCl3)δ:148.2 (s)
工程1
化合物2-18(13.9g、44.4mmol、東京化成工業株式会社)をDMF(207mL)、ジクロロメタン溶液(214mL)に溶解し、DIEA(16.3mL、93mmol)、HBTU(18.5g、48.8mmol)を加え、室温で激しく30分間撹拌した。得られた白濁溶液に対して、室温で化合物1(2.0g、22.2mmol)を加えて激しく撹拌した。その後、40℃に昇温しさらに2時間撹拌した。反応液に飽和重そう水(10mL)を加え反応を停止した後に、白色固体をろ取した。得られた固体を水(100mL)、アセトニトリル(100mL)、ジクロロメタン(100mL)で洗浄後、白色固体として化合物3-18(10.0g、14.7mmol)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:6.20 (brs, 2H), 3.96 (m, 1H), 3.75 (m, 1H), 3.42 (m, 2H), 3.23 (m, 2H), 2.22 (m, 4H), 1.68-1.20 (m, 68H), 0.88 (m, 6H)
工程2
化合物3-18(3.8g、5.60mmol)をジクロロメタン(230mL)に懸濁し、DIEA(5.86mL、33.6mmol)を加えた。その後室温にて、N,N‐ジイソプロピルアミドクロリド亜りん酸2‐シアノエチル(3.74mL、16.79mmol)を加え、2時間加熱還流した。室温へ放冷後、反応溶液を分液漏斗へ移し、有機層を飽和重そう水(100mL)で2回、水(50mL)で1回、食塩水(50mL)で1回洗浄した。得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥した後、溶媒を減圧留去した。残渣にアセトニトリルを加えた後に、白色固体をろ取した。得られた固体を飽和重そう水、水、アセトニトリルで洗浄後、白色固体として化合物4-18(4.13g、4.70mmol)を得た。化合物の生成は31P-NMRにより3価のリンが導入されたことをもって判断した。
31P-NMR(CDCl3)δ:148.2 (s)
工程1
化合物2-20(10.2g、30.0mmol、東京化成工業株式会社)をDMF(250mL)、ジクロロメタン溶液(250mL)に溶解し、DIEA(7.86mL、45mmol)、HBTU(12.52g、33.0mmol)を加え、室温で激しく30分間撹拌した。得られた白濁溶液に対して、室温で化合物1(1.35g、15.0mmol)を加えて激しく撹拌した。その後、40℃に昇温しさらに2時間撹拌した。反応液に飽和重そう水(50mL)を加え反応を停止した後に、白色固体をろ取した。得られた固体を水(50mL)、アセトニトリル(50mL)、ジクロロメタン(50mL)で洗浄後、白色固体として化合物3-20(7.20g、9.79mmol)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:6.18 (brs, 2H), 3.75 (m, 1H), 3.41 (m, 2H), 3.27 (m, 2H), 2.22 (m, 4H), 1.58-1.25 (m, 76H), 0.89-0.86 (m, 6H)
工程2
化合物3-20(1.0g、1.36mmol)をクロロホルム(50mL)に懸濁し、DIEA(0.713mL、4.08mmol)を加えた。その後室温にて、N,N‐ジイソプロピルアミドクロリド亜りん酸2‐シアノエチル(0.607mL、2.72mmol)を加え、2時間加熱還流した。室温へ放冷後、激しく撹拌下のアセトニトリル(300mL)に対して、反応溶液を滴下した。析出した固体をろ取し、固体を飽和重そう水(20mL)で二回、水(20mL)で二回、アセトニトリル(20mL)で二回洗浄した。得られた固体を減圧下で乾燥し、白色固体である化合物4-20(843mg、0.901mmol)を得た。化合物の生成は31P-NMRにより3価のリンが導入されたことをもって判断した。
31P-NMR(CDCl3)δ:148.2 (s)
工程1
化合物2-22(8.79g、23.8mmol、和光純薬工業株式会社)をDMF(250mL)、ジクロロメタン溶液(250mL)に溶解し、DIEA(6.25mL、35.8mmol)、HBTU(9.95g、26.2mmol)を加え、室温で激しく30分間撹拌した。得られた白濁溶液に対して、室温で化合物1(1.07g、11.9mmol)を加えて激しく撹拌した。その後、40℃に昇温しさらに2時間撹拌した。反応液に飽和重そう水(50mL)を加え反応を停止した後に、白色固体をろ取した。得られた固体を水(50mL)、アセトニトリル(50mL)、ジクロロメタン(50mL)で洗浄後、白色固体として化合物3-22(8.10g、8.17mmol)を得た。1H-NMR(CDCl3)δ:6.06 (brs, 2H), 3.73 (m, 1H), 3.36 (dd, 2H, J = 6.0, 14.4 Hz), 3.22 (dd, 2H, J = 5.2, 14.4 Hz), 2.17 (m, 4H), 1.61 (m, 4H), 1.59-1.24 (m, 80H), 0.87-0.84 (m, 6H)
工程2
化合物3-22(1.0g、1.36mmol)をクロロホルム(50mL)に懸濁し、DIEA(0.713mL、4.08mmol)を加えた。その後室温にて、N,N‐ジイソプロピルアミドクロリド亜りん酸2‐シアノエチル(0.607mL、2.72mmol)を加え、2時間加熱還流した。室温へ放冷後、激しく撹拌下のアセトニトリル(300mL)に対して、反応溶液を滴下した。析出した固体をろ取し、固体を飽和重そう水(20mL)で二回、水(20mL)で二回、アセトニトリル(20mL)で二回洗浄した。得られた固体を減圧下で乾燥し、白色固体である化合物4-22(814mg、0.821mmol)を得た。化合物の生成は31P-NMRにより3価のリンが導入されたことをもって判断した。
31P-NMR(CDCl3)δ:148.2 (s)
工程1
化合物2-8をDMF、ジクロロメタン溶液に溶解し、DIEA、HBTUを加え、室温で撹拌する。得られる白濁溶液に対して、室温で化合物1を加えて、撹拌する。反応容器に対して別途調製した化合物2-18の活性化溶液[化合物2-18をDMF、ジクロロメタン溶液に溶解し、DIEA、HBTUを加え、室温で撹拌する]を加えて室温で撹拌後、40℃に昇温しさらに撹拌する。反応液に飽和重そう水を加え反応を停止させ、固体をろ取する。得られる固体を水、アセトニトリル、ジクロロメタンで洗浄後、化合物6-8,18を得る。
工程2
化合物6-8,18をクロロホルムに懸濁し、DIEAを加える。その後室温にて、N,N‐ジイソプロピルアミドクロリド亜りん酸2‐シアノエチルを加え、加熱還流する。室温へ放冷後、撹拌下のアセトニトリルに対して、反応溶液を滴下する。析出した固体をろ取し、固体を飽和重そう水で二回、水で二回、アセトニトリルで二回洗浄する。得られた固体を減圧下で乾燥し、化合物4-8,18を得る。化合物の生成は31P-NMRにより3価のリンが導入されたことをもって判断する。
化合物7-6(1.00g、7.68mmol、東京化成工業株式会社)をジクロロメタン(15mL)に溶解し、トリエチルアミン(2.13mL、15.4mmol)を加えた。その後室温にて、N,N‐ジイソプロピルアミドクロリド亜りん酸2‐シアノエチル(1.71mL、7.68mmol)を加え、室温で3時間撹拌した。反応溶液を飽和重そう水により停止し、酢酸エチル(50mL)で二回抽出した。有機層を飽和重そう水(10mL)、水(10mL)で三回、飽和食塩水(10mL)で洗浄し、その後硫酸マグネシウムを用いて乾燥した。有機層を減圧下で濃縮後、粗生成物として褐色オイルである化合物8-6(2.60g)を得た。化合物の生成は31P-NMRにより3価のリンが導入されたことをもって判断した。
31P-NMR(CDCl3)δ:147.2 (s)
化合物7-10(1.00g、5.37mmol、東京化成工業株式会社)をジクロロメタン(15mL)に溶解し、トリエチルアミン(1.49mL、10.7mmol)を加えた。その後室温にて、N,N‐ジイソプロピルアミドクロリド亜りん酸2‐シアノエチル(1.20mL、5.37mmol)を加え、室温で3時間撹拌した。反応溶液を飽和重そう水により停止し、酢酸エチル(50mL)で二回抽出した。有機層を飽和重そう水(10mL)、水(10mL)で三回、飽和食塩水(10mL)で洗浄し、その後硫酸マグネシウムを用いて乾燥した。有機層を減圧下で濃縮後、粗生成物として褐色オイルである化合物8-10(2.09g)を得た。化合物の生成は31P-NMRにより3価のリンが導入されたことをもって判断した。
31P-NMR(CDCl3)δ:147.2 (s)
化合物7-12(4.29g、20.0mmol、東京化成工業株式会社)をジクロロメタン(52mL)に溶解し、DIEA(10.5mL、60.0mmol)を加えた。その後室温にて、N,N‐ジイソプロピルアミドクロリド亜りん酸2‐シアノエチル(5.36mL、24.00mmol)を加え、室温で12時間撹拌した。反応溶液を飽和重そう水(20mL)により停止し、その後混合液を分液漏斗へ移し、有機層を水(100mL)で洗浄した。その後、有機層を飽和重そう水(100mL)、水(100mL)で二回洗浄し、その後硫酸マグネシウムを用いて乾燥した。有機層を減圧下で濃縮後、粗生成物として褐色オイルである化合物8-12(4.80g、11.6mmol)を得た。化合物の生成は31P-NMRにより3価のリンが導入されたことをもって判断した。
31P-NMR(CDCl3)δ:147.3 (s)
化合物7-14(1.00g、4.12mmol、ナカライテスク株式会社)をジクロロメタン(15mL)に溶解し、トリエチルアミン(1.14mL、8.25mmol)を加えた。その後室温にて、N,N‐ジイソプロピルアミドクロリド亜りん酸2‐シアノエチル(0.92mL、4.12mmol)を加え、室温で3時間撹拌した。反応溶液を飽和重そう水により停止し、酢酸エチル(50mL)で二回抽出した。有機層を飽和重そう水(10mL)、水(10mL)で三回、飽和食塩水(10mL)で洗浄し、その後硫酸マグネシウムを用いて乾燥した。有機層を減圧下で濃縮後、粗生成物として褐色オイルである化合物8-14(1.87g)を得た。化合物の生成は31P-NMRにより3価のリンが導入されたことをもって判断した。
31P-NMR(CDCl3)δ:147.2 (s)
化合物7-16(5.41g、20.0mmol、東京化成工業株式会社)をジクロロメタン(52mL)に溶解し、DIEA(10.5mL、60.0mmol)を加えた。その後室温にて、N,N‐ジイソプロピルアミドクロリド亜りん酸2‐シアノエチル(4.91mL、22.00mmol)を加え、室温で12時間撹拌した。反応溶液を飽和重そう水(20mL)により停止し、その後混合液を分液漏斗へ移し、有機層を水(100mL)で洗浄した。その後、有機層を飽和重そう水(100mL)、水(100mL)で二回洗浄し、その後硫酸マグネシウムを用いて乾燥した。有機層を減圧下で濃縮後、粗生成物として褐色オイルである化合物8-16(4.60g、9.77mmol)を得た。化合物の生成は31P-NMRにより3価のリンが導入されたことをもって判断した。
31P-NMR(CDCl3)δ:147.3 (s)
化合物7-18(2.99g、10.0mmol、東京化成工業株式会社)をクロロホルム(81mL)に溶解し、DIEA(3.67mL、21.0mmol)を加えた。その後室温にて、N,N‐ジイソプロピルアミドクロリド亜りん酸2‐シアノエチル(2.34mL、10.5mmol)を加え、室温で12時間撹拌した。反応溶液を濃縮し、残渣をアセトニトリル(50mL)で洗浄した。析出した固体をろ取し、アセトニトリル(50mL)で洗浄した。その後、黄色固体を減圧下で乾燥して化合物8-18(1.22g、2.45mmol)を得た。化合物の生成は31P-NMRにより3価のリンが導入されたことをもって判断した。
31P-NMR(CDCl3)δ:147.2 (s)
化合物7-20(3.27g、10.0mmol、東京化成工業株式会社)をクロロホルム(81mL)に溶解し、DIEA(3.67mL、21.0mmol)を加えた。その後室温にて、N,N‐ジイソプロピルアミドクロリド亜りん酸2‐シアノエチル(2.34mL、10.5mmol)を加え、室温で12時間撹拌した。反応溶液を濃縮し、残渣をアセトニトリル(50mL)で洗浄した。析出した固体をろ取し、アセトニトリル(50mL)で洗浄した。その後、黄色固体を減圧下で乾燥して化合物8-20(3.19g、6.06mmol)を得た。化合物の生成は31P-NMRにより3価のリンが導入されたことをもって判断した。
31P-NMR(CDCl3)δ:147.2 (s)
化合物7-22(3.55g、10.0mmol、東京化成工業株式会社)をクロロホルム(81mL)に溶解し、DIEA(3.67mL、21.0mmol)を加えた。その後室温にて、N,N‐ジイソプロピルアミドクロリド亜りん酸2‐シアノエチル(2.34mL、10.5mmol)を加え、室温で12時間撹拌した。反応溶液を濃縮し、残渣をアセトニトリル(50mL)で洗浄した。析出した固体をろ取し、アセトニトリル(50mL)で洗浄した。その後、黄色固体を減圧下で乾燥して化合物8-22(4.97g、8.96mmol)を得た。化合物の生成は31P-NMRにより3価のリンが導入されたことをもって判断した。
31P-NMR(CDCl3)δ:147.2 (s)
工程1
窒素気流下、化合物7-16(12.1g、44.4mmol)のDMF(104mL)―ジクロロメタン(57.1mL)溶液に、ビス-(p-ニトロフェニル)カーボネート(13.5g、44.4mmol)及びDIEA(11.6mL、66.6mmol)を加えた後、室温下8時間撹拌した。次に、化合物1(2.0g、22.2mmol)を加えて、60℃で2時間、加熱還流した。生じた固体をろ取した後、固体を、ジクロロメタン(100mL)、水(100mL)、アセトニトリル(100mL)で洗浄した後、減圧下で乾燥し、白色固体である化合物9-16(15.44g、22.6mmol)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:5.20 (brs, 2H), 4.05 (m, 4H), 3.79 (m, 1H), 3.24 (m, 4H), 1.55-1.21 (m, 68H), 0.88 (m, 6H)
工程2
窒素気流下、化合物9-16のジクロロメタン(582mL)懸濁液に、DIEA(15.8mL、90.0mmol)及びN,N‐ジイソプロピルアミドクロリド亜りん酸2‐シアノエチル(10.1mL、45.2mmol)を加えた後、50℃で2時間加熱還流した。反応液を室温まで冷ました後、有機層を飽和重層水(300mL)で二回、水(300mL)、飽和食塩水(300mL)で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をジクロロメタン(50mL)に溶解し、アセトニトリル(150mL)の中へ滴下することで粉末化させた。生じた固体を減圧下乾燥して、化合物10-16(14.2g、16.1mmol)を得た。
31P-NMR(CDCl3)δ:149.1 (s)
工程1
窒素気流下、化合物7-18(4g、13.4mmol)のDMF(60mL)―ジクロロメタン(40mL)溶液に、ビス-(p-ニトロフェニル)カーボネート(4.1g、13.4mmol)及びDIEA(3.5mL、20.1mmol)を加えた後、室温下5時間撹拌した。次に、化合物1(0.6g、6.7mmol)のDMF溶液(5mL)を加えて、終夜撹拌した。生じた固体をろ取した後、固体を、ジクロロメタン、水、アセトニトリルで洗浄した後、減圧下で乾燥し、白色固体として化合物9-18(4.1g、5.55mmol)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:5.20 (brs, 2H), 4.05 (t, 4H, J = 8Hz), 3.79 (s, 1H), 3.32 (m, 2H), 3.23 (m, 2H), 1.25 (s, 72H), 0.88 (t, 6H, J = 8Hz)
工程2
窒素気流下、化合物9-18(1.0g、1.35mmol)のジクロロメタン(60mL)懸濁液に、DIEA(1.2mL、6.8mmol)及びN,N‐ジイソプロピルアミドクロリド亜りん酸2‐シアノエチル(0.75mL、3.4mmol)を加えた後、50℃下で1.5時間撹拌した。反応液を室温まで冷ました後、ジクロロメタン(40mL)で希釈して、飽和重層水(40mLx2)、水(40mL)、飽和食塩水(40mL)で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をジクロロメタン(15mL)に溶解し、アセトニトリル(150mL)の中へ滴下することで粉末化させた。生じた固体を減圧下乾燥して、白色固体として化合物10-18(0.98g、1.04mmol)を得た。
31P-NMR(CDCl3)δ:149.1 (s)
工程1及び工程2
化合物11(米国特許出願公開第2014/0142253号明細書参照)(722mg、1.075mmol)のジクロロメタン溶液(5.6mL)にジエチルアミン(1.4mL、13.40mmol)加え、室温で17時間撹拌した。反応液にエタノールを加えて撹拌した後、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をエタノールで2回共沸し、化合物12の粗製物を得た。
化合物2-6(239mg、1.505mmol)のエタノール溶液(5.0mL)にDMT-MM(476mg、1.720mmol)を加え、室温で15分間撹拌した。得られた反応液を、化合物12の粗製物のエタノール溶液(2.5mL)に加え、室温で4時間半撹拌した。溶媒を減圧留去した後、得られた残渣に飽和重そう水及び水を加えて酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去して、得られた粗製物をシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(n-へキサン:酢酸エチル=70:30→20:80)で精製し、化合物13-6(320mg、収率52%)を無色油状物質として得た。
1H-NMR (CDCl3)δ: 7.42-7.40 (2H, m), 7.32-7.26 (6H, m), 7.21 (1H, t, J = 7.2 Hz), 6.83 (4H, d, J = 8.8 Hz), 5.37 (1H, s), 3.79 (6H, s), 3.71-3.65 (1H, m), 3.63-3.57 (1H, m), 3.27 (1H, dd, J = 9.2, 4.0 Hz), 3.25-3.15 (2H, m), 3.07 (1H, dd, J = 9.2, 7.2 Hz), 2.45 (1H, t, J = 5.6 Hz), 2.12 (2H, t, J = 7.6 Hz), 1.78 (1H, s), 1.62-1.58 (2H, m), 1.47-1.40 (2H, m), 1.36-1.20 (12H, m), 0.87 (3H, t, J = 6.8 Hz).
工程3
化合物13-6(310mg、0.538mmol)のジクロロメタン溶液(3.0mL)にDMAP(6.6mg、0.054mmol)、DIEA(0.282mL、1.614mmol)と無水コハク酸(81mg、0.807mmol)を加え、室温で2日間撹拌した。溶媒を減圧留去した後、得られた粗製物をシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(クロロホルム:メタノール=100:0→90:10)で精製し、化合物14-6(360mg、収率99%)を無色油状物質として得た。
1H-NMR (CDCl3)δ: 7.42-7.40 (2H, m), 7.31-7.25 (6H, m), 7.19 (1H, t, J = 7.2 Hz), 6.82 (4H, d, J = 8.8 Hz), 5.74 (1H, t, J = 5.6 Hz), 4.24 (1H, dd, J = 10.8, 5.2 Hz), 4.12 (1H, dd, J = 10.8, 6.0 Hz), 3.79 (6H, s), 3.52-3.45 (1H, m), 3.24-2.98 (4H, m), 2.90 (1H, q, J = 7.2 Hz), 2.59-2.50 (3H, m), 2.14 (2H, t, J = 7.6 Hz), 1.90-1.85 (1H, m), 1.61-1.58 (2H, m), 1.48-1.18 (14H, m), 0.87 (3H, t, J = 6.8 Hz).
工程4
化合物14-6(216mg、0.320mmol)のアセトニトリル溶液(42mL)にDIEA(0.186mL、1.065mmol)とHBTU(89mg、0.234mmol)を加え、室温で15分間振とう撹拌した。反応液へNative Amino lcaa CPG 1000Å(ChemGenes社)(4.2g)を加え、24時間振とう撹拌した。反応液をろ過後、CPGをアセトニトリルで3回、ジエチルエーテルで3回洗浄した後、減圧下で乾燥した。乾燥したCPGにCapA(PROLIGO社、L840045-06)とCapB(PROLIGO社、L850045-06)の混合液(1:1、42mL)を加えて1時間半振とう撹拌した。反応液をろ過後、CPGをピリジンで2回、イソプロパノールで2回、ジエチルエーテルで2回洗浄した後、減圧乾燥した。化合物14-6の担持量はDMTrカチオンの比色定量により算出し、担持量が53μmol/gの化合物15-6を得た。
工程1及び工程2
4-1)の工程1と同様の方法にて化合物12の粗生成物(392mg)を得た。
化合物2-10(155mg、0.772mmol)のエタノール溶液(2.6mL)にDMT-MM(214mg、0.772mmol)を加え、室温で30分間撹拌した。得られた反応液を、化合物12の粗製物(392mg)のエタノール溶液(1.3mL)に加え、室温で4時間撹拌した。化合物2-10(71mg、0.356mmol)のエタノール溶液(1.3mL)にDMT-MM(99mg、0.356mmol)を加えて室温で15分間撹拌した後、再び反応液へ加え、室温で1時間半撹拌した。溶媒を減圧留去した後、得られた残渣に飽和重そう水及び水を加えて酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去して、得られた粗製物をシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(n-へキサン:酢酸エチル=80:20→30:70)で精製し、化合物13-10(165mg、44%)を無色油状物質として得た。
1H-NMR (CDCl3)δ: 7.41 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.31-7.26 (6H, m), 7.21 (1H, t, J = 6.6 Hz), 6.83 (4H, d, J = 8.4 Hz), 5.35 (1H, s), 3.79 (6H, s), 3.70-3.57 (2H, m), 3.28-3.16 (3H, m), 3.07 (1H, t, J = 8.0 Hz), 2.43 (1H, s), 2.12 (2H, t, J = 7.2 Hz), 1.78 (1H, s), 1.61-1.58 (2H, m), 1.46-1.39 (2H, m), 1.25 (20H, s), 0.87 (3H, t, J = 6.0 Hz).
工程3
化合物13-10(222mg、0.352mmol)のジクロロメタン溶液(2.2mL)にDMAP(4.3mg、0.035mmol)、DIEA(0.184mL、1.055mmol)と無水コハク酸(53mg、0.528mmol)を加え、室温で2日間撹拌した。溶媒を減圧留去した後、得られた粗製物をシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(クロロホルム:メタノール=100:0→90:10)で精製し、化合物14-10(243mg、94%)を無色油状物質として得た。
1H-NMR (CDCl3)δ: 7.41 (2H, d, J = 6.0 Hz), 7.31-7.26 (6H, m), 7.20 (1H, d, J = 7.2 Hz), 6.82 (4H, d, J = 7.6 Hz), 5.59 (1H, s), 4.29 (1H, d, J = 10.4 Hz), 4.17-4.13 (1H, m), 3.79 (6H, s), 3.23-2.98 (4H, m), 2.58 (4H, s), 2.16 (2H, t, J = 8.0 Hz), 1.90 (1H, s), 1.60 (2H, s), 1.42-1.19 (22H, m), 0.88 (3H, t, J = 6.8 Hz).
工程4
化合物14-10(209mg、0.285mmol)のアセトニトリル溶液(38mL)にDIEA(0.166mL、0.950mmol)とHBTU(79mg、0.209mmol)を加え、室温で15分間振とう撹拌した。反応液へNative Amino lcaa CPG 1000Å(ChemGenes社)(3.8g)を加え、23時間振とう撹拌した。反応液をろ過後、CPGをアセトニトリルで3回、ジエチルエーテルで3回洗浄した後、減圧下で乾燥した。乾燥したCPGにCapA(PROLIGO社、L840045-06)とCapB(PROLIGO社、L850045-06)の混合液(1:1、38mL)を加えて1時間半振とう撹拌した。反応液をろ過後、CPGをピリジンで2回、イソプロパノールで2回、ジエチルエーテルで2回洗浄した後、減圧乾燥した。化合物14-10の担持量はDMTrカチオンの比色定量により算出し、担持量が40μmol/gの化合物15-10を得た。
工程1及び工程2
4-1)の工程1と同様の方法にて化合物12の粗生成物(392mg)を得た。
化合物2-14(345mg、1.346mmol)のエタノール溶液(4.0mL)にDMT-MM(372mg、1.346mmol)を加え、室温で15分間撹拌した。得られた反応液を、化合物12の粗製物のエタノール溶液(2.0mL)に加え、室温で28時間撹拌した。溶媒を減圧留去した後、得られた残渣に飽和重そう水及び水を加えて酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去して、得られた粗製物をシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(n-へキサン:酢酸エチル=70:30→20:80)で精製し、化合物13-14(228mg、収率37%)を無色油状物質として得た。
1H-NMR (CDCl3)δ: 7.40 (2H, d, J = 6.8 Hz), 7.31-7.21 (7H, m), 6.83 (4H, d, J = 6.4 Hz), 5.35 (1H, s), 3.79 (6H, s), 3.67 (1H, s), 3.61 (1H, s), 3.28-3.19 (3H, m), 3.07 (1H, t, J = 7.2 Hz), 2.43 (1H, s), 2.12 (2H, t, J = 6.0 Hz), 1.77 (1H, s), 1.59 (2H, s), 1.43 (2H, s), 1.25 (28H, s), 0.88 (3H, s).
工程3
化合物13-14(224mg、0.326mmol)のジクロロメタン溶液(2.2mL)にDMAP(4.0mg、0.033mmol)、DIEA(0.171mL、0.977mmol)と無水コハク酸(49mg、0.488mmol)を加え、室温で2日間撹拌した。溶媒を減圧留去した後、得られた粗製物をシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(クロロホルム:メタノール=100:0→90:10)で精製し、化合物14-14(163mg、収率64%)を無色油状物質として得た。
1H-NMR (CDCl3)δ: 7.40 (2H, d, J = 6.4 Hz), 7.30-7.26 (6H, m), 7.19 (1H, t, J = 7.2 Hz), 6.81 (4H, d, J = 7.2 Hz), 5.57 (1H, s), 4.29 (1H, d, J = 10.8 Hz), 4.17-4.13 (1H, m), 3.79 (6H, s), 3.23-2.98 (4H, m), 2.58 (4H, s), 2.15 (2H, t, J = 7.2 Hz), 1.90 (1H, s), 1.59 (4H, s), 1.46-1.25 (28H, m), 0.87 (3H, t, J = 5.6 Hz).
工程4
化合物14-14(162mg、0.206mmol)のアセトニトリル溶液(28mL)にDIEA(0.122mL、0.700mmol)とHBTU(58mg、0.154mmol)を加え、室温で15分間振とう撹拌した。反応液へNative Amino lcaa CPG 1000Å(ChemGenes社)(2.8g)を加え、24時間振とう撹拌した。反応液をろ過後、CPGをアセトニトリルで3回、ジエチルエーテルで3回洗浄した後、減圧下で乾燥した。乾燥したCPGにCapA(PROLIGO社、L840045-06)とCapB(PROLIGO社、L850045-06)の混合液(1:1、28mL)を加えて1時間半振とう撹拌した。反応液をろ過後、CPGをピリジンで2回、イソプロパノールで2回、ジエチルエーテルで2回洗浄した後、減圧乾燥した。化合物14-14の担持量はDMTrカチオンの比色定量により算出し、担持量が42μmol/gの化合物15-14を得た。
工程1及び工程2
4-1)の工程1と同様の方法にて化合物12の粗生成物(392mg)を得た。
化合物2-18(466mg、1.490mmol)のエタノール溶液(5.0mL)にDMT-MM(471mg、1.702mmol)を加え、室温で15分間撹拌した。得られた反応液を、化合物12の粗製物のエタノール溶液(2.5mL)に加え、室温で4時間半撹拌した。溶媒を減圧留去した後、得られた残渣に飽和重そう水と水を加えて酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去して、得られた粗製物をシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(n-へキサン:酢酸エチル=70:30→20:80)で精製し、化合物13-18(494mg、収率62%)を無色油状物質として得た。
1H-NMR (CDCl3)δ: 7.41 (2H, d, J = 7.2 Hz), 7.32-7.26 (6H, m), 7.21 (1H, t, J = 7.2 Hz), 6.83 (4H, d, J = 8.8 Hz), 5.36 (1H, s), 3.79 (6H, s), 3.70-3.65 (1H, m), 3.63-3.57 (1H, m), 3.27 (1H, dd, J = 9.2, 4.0 Hz), 3.24-3.13 (2H, m), 3.07 (1H, dd, J = 9.2, 7.2 Hz), 2.45 (1H, t, J = 5.6 Hz), 2.12 (2H, t, J = 7.6 Hz), 1.78 (1H, s), 1.63-1.25 (40H, m), 0.88 (3H, t, J = 6.8 Hz).
工程3
化合物13-18(352mg、0.473mmol)のジクロロメタン溶液(3.5mL)にDMAP(5.8mg、0.047mmol)、DIEA(0.248mL、1.419mmol)と無水コハク酸(71mg、0.709mmol)を加え、室温で2日間撹拌した。溶媒を減圧留去した後、得られた粗製物をシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(クロロホルム:メタノール=100:0→90:10)で精製し、化合物14-18(225mg、56%)を無色油状物質として得た。
1H-NMR (CDCl3)δ: 7.41 (2H, d, J = 7.2 Hz), 7.31-7.26 (6H, m), 7.20 (1H, t, J = 6.4 Hz), 6.82 (4H, d, J = 7.6 Hz), 5.57 (1H, s), 4.30 (1H, dd, J = 10.4, 2.4 Hz), 4.15 (1H, dd, J = 10.4, 6.4 Hz), 3.79 (6H, s), 3.24-2.98 (4H, m), 2.59 (4H, s), 2.16 (2H, t, J = 7.6 Hz), 1.90 (1H, s), 1.59 (4H, s), 1.44-1.21 (36H, m), 0.88 (3H, t, J = 5.6 Hz).
工程4
化合物14-18(223mg、0.264mmol)のアセトニトリル溶液(35mL)にDIEA(0.154mL、0.880mmol)とHBTU(73mg、0.194mmol)を加え、室温で15分間振とう撹拌した。反応液へNative Amino lcaa CPG 1000Å(ChemGenes社)(3.5g)を加え、24時間振とう撹拌した。反応液をろ過後、CPGをアセトニトリルで3回、ジエチルエーテルで3回洗浄した後、減圧下で乾燥した。乾燥したCPGにCapA(PROLIGO社、L840045-06)とCapB(PROLIGO社、L850045-06)の混合液(1:1、35mL)を加えて1時間半振とう撹拌した。反応液をろ過後、CPGをピリジンで2回、イソプロパノールで2回、ジエチルエーテルで2回洗浄した後、減圧乾燥した。化合物14-18の担持量はDMTrカチオンの比色定量により算出し、担持量が56μmol/gの化合物15-18を得た。
工程1及び工程2
化合物11(米国特許出願公開第2014/0142253号明細書参照、292mg、0.435mmol)のDMF溶液(2.0mL)にイミダゾール(71mg、1.044mmol)とt-ブチルジメチルクロロシラン(79mg、0.522mmol)加え、室温で16時間撹拌した。反応液へ水を加えてシクロペンチルメチルエーテルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、化合物16の粗製物(352mg)を得た。
化合物16の粗製物(352mg)のジクロロメタン溶液(2.4mL)にジエチルアミン(0.6mL、5.74mmol)を加え、室温で16時間撹拌した。反応液にエタノールを加えて撹拌した後、溶媒を減圧留去した。残渣をエタノールで2回共沸し、得られた粗製物をアミノシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(クロロホルム)で精製し、無色油状物質として化合物17(190mg、78%)を得た。
1H-NMR (CDCl3)δ: 7.45-7.43 (2H, m), 7.32 (4H, d, J = 8.8 Hz), 7.29-7.25 (2H, m), 7.22-7.18 (1H, m), 6.81 (4H, d, J = 8.8 Hz), 3.79 (6H, s), 3.68-3.61 (2H, m), 3.08-3.02 (2H, m), 2.63 (2H, t, J = 7.2 Hz), 1.75-1.69 (1H, m), 1.41-1.30 (6H, m), 1.27-1.15 (2H, m), 0.84 (9H, s), 0.01 (6H, s).
工程1
化合物3-6(1.0g、2.92mmol)のTHF(20mL)―クロロホルム(20mL)溶液にDIEA(1.53mL、8.76mmol)、ビス(ニトロフェニル)カーボネート(1.33g、4.38mmol)、DMAP(178mg、1.46mmol)を加え、60℃で1時間撹拌した。反応液を濾過し母液を減圧留去した後、得られた粗製物をシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(ヘキサン:酢酸エチル=60:40→20:80)で精製し、化合物18-6(982mg、66%)を白色固体として得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 8.32-8.26 (2H, m), 7.42 (2H, dt, J = 9.9, 2.5 Hz), 6.36 (2H, t, J = 6.4 Hz), 4.80 (1H, ddd, J = 10.7, 5.6, 3.3 Hz), 3.65-3.50 (4H, m), 2.26 (4H, t, J = 7.6 Hz), 1.69-1.62 (4H, m), 1.28 (16H, dt, J = 19.1, 4.7 Hz), 0.87 (6H, t, J = 6.8 Hz).
工程2
化合物17(500mg、0.89mmol)のジクロロメタン溶液(10.0mL)に化合物18-6(450mg、0.89mmol)を加え、室温で2時間撹拌した。反応液を減圧濃縮後、アミノシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(ヘキサン:酢酸エチル=65:35→10:90)で精製し、化合物19-6(625mg、76%)を無色油状物質として得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 7.42 (2H, d, J = 7.4 Hz), 7.31 (4H, t, J = 6.2 Hz), 7.26 (3H, t, J = 3.9 Hz), 7.19 (1H, t, J = 7.2 Hz), 6.82 (4H, t, J = 6.0 Hz), 6.25 (2H, t, J = 5.8 Hz), 4.70 (2H, dd, J = 10.3, 5.3 Hz), 3.79 (6H, d, J = 4.4 Hz), 3.62 (2H, dd, J = 10.1, 5.1 Hz), 3.51 (2H, dd, J = 13.3, 6.4 Hz), 3.32-3.26 (2H, m), 3.08 (4H, dt, J = 20.2, 6.6 Hz), 2.19 (4H, t, J = 7.7 Hz), 1.70 (1H, t, J = 5.7 Hz), 1.61 (8H, t, J = 9.3 Hz), 1.42 (2H, t, J = 7.3 Hz), 1.26 (20H, tt, J = 26.0, 10.5 Hz), 0.88 (6H, dd, J = 12.0, 5.3 Hz), 0.83 (9H, s).
工程3
化合物19-6(625mg、0.67mmol)のTHF溶液(10mL)にTBAF(1M THF溶液、1.34mL、1.34mmol)を加え、室温で24時間撹拌した。反応液を減圧濃縮後、得られた粗製物をジオールシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(ヘキサン:酢酸エチル=50:50→10:90)で精製し、化合物20-6(541mg、99%)を無色液体物質として得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 7.41 (2H, t, J = 4.3 Hz), 7.26 (9H, ddt, J = 31.6, 12.0, 4.9 Hz), 6.83 (4H, d, J = 8.8 Hz), 6.38 (2H, q, J = 6.1 Hz), 4.88 (1H, t, J = 5.6 Hz), 4.67 (1H, t, J = 5.0 Hz), 3.79 (6H, t, J = 7.5 Hz), 3.69-3.61 (2H, m), 3.50-3.44 (2H, m), 3.30 (3H, tt, J = 20.6, 6.5 Hz), 3.15-3.06 (3H, m), 2.63 (1H, s), 2.21-2.17 (4H, m), 1.78 (1H, s), 1.62 (4H, t, J = 6.9 Hz), 1.43 (2H, t, J = 5.4 Hz), 1.30 (20H, dt, J = 29.2, 11.0 Hz), 0.87 (6H, t, J = 6.9 Hz).
化合物20-6(541mg、0.66mmol)の塩化メチレン溶液(2mL)にDIEA(0.35mL、1.98mmol)、DMAP(8.0mg、0.066mmol)、無水コハク酸(132mg、1.32mmol)を加え、室温で4時間撹拌した。反応液を減圧濃縮した後、得られた粗精製物をシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(クロロホルム:メタノール=40:1→10:1)で精製し、化合物21-6(591mg、97%)を無色液体物質として得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 7.41 (2H, d, J = 7.5 Hz), 7.31-7.25 (8H, m), 7.20 (1H, t, J = 7.2 Hz), 6.82 (4H, d, J = 8.5 Hz), 6.62 (1H, t, J = 6.3 Hz), 6.48 (1H, t, J = 6.5 Hz), 5.91 (1H, t, J = 5.5 Hz), 4.71 (1H, t, J = 5.3 Hz), 4.42 (1H, dd, J = 11.0, 3.2 Hz), 4.14 (1H, dd, J = 10.9, 5.9 Hz), 3.79 (6H, s), 3.40 (4H, tt, J = 20.4, 7.0 Hz), 3.08 (4H, dq, J = 33.3, 8.0 Hz), 2.69-2.49 (4H, m), 2.20 (4H, dd, J = 15.6, 8.2 Hz), 1.95 (1H, s), 1.61 (4H, d, J = 7.0 Hz), 1.27 (22H, d, J = 5.0 Hz), 0.87 (6H, dd, J = 6.8, 5.1 Hz).
工程5
化合物21-6(312mg、0.34mmol)のアセトニトリル/塩化メチレン混合溶液(4:1、25mL)にDIEA(0.30mL、1.70mmol)とHBTU(142mg、0.37mmol)を加え、室温で15分間振とう撹拌した。反応液へHybridCPG amino form 2000Å(Prime Synthesis社)(2.8g)を加え、24時間振とう撹拌した。反応液をろ過後、HybridCPGをアセトニトリルで3回、ジエチルエーテルで3回洗浄した後、減圧下で乾燥した。乾燥したHybridCPGにTHF/無水酢酸/ピリジン混液(8:1:1、30mL)を加えて3時間振とう撹拌した。反応液をろ過後、HybridCPGをピリジンで2回、イソプロパノールで2回、ジエチルエーテルで2回洗浄した後、減圧乾燥した。化合物21-6の担持量はDMTrカチオンの比色定量により算出し、担持量が114μmol/gの化合物22-6を得た。
工程1
化合物3-8(1g、2.5mmol)のTHF溶液(20mL)及びクロロホルム(20mL)にビス(ニトロフェニル)カーボネート(1.14g、3.76mmol)、DIEA(1.3mL、7.5mmol)、DMAP(0.15g、1.25mmol)を加え、60℃で1時間撹拌した。反応液を濾過し母液を減圧留去した後、得られた粗製物をシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(ヘキサン:酢酸エチル=60:40→20:80)で精製し、化合物18-8(1.17g、83%)を白色固体として得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 8.27 (2H, dt, J = 9.9, 2.5 Hz), 7.41 (2H, dt, J = 9.9, 2.5 Hz), 6.42 (2H, t, J = 6.5 Hz), 4.81-4.78 (1H, m), 3.65-3.50 (4H, m), 2.26 (4H, t, J = 7.6 Hz), 1.68-1.62 (4H, m), 1.28 (24H, t, J = 9.5 Hz), 0.87 (6H, t, J = 6.8 Hz).
工程2
化合物17(500mg、0.89mmol)のジクロロメタン溶液(10.0mL)に化合物18-8(500mg、0.89mmol)及びDIEA(0.23mL、1.33mmol)を加え、室温で2時間撹拌した。反応液を減圧濃縮後、アミノシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(ヘキサン:酢酸エチル=50:50→10:90)で精製し、化合物19-8(661mg、75%)を淡黄色固体として得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 7.42 (2H, d, J = 7.4 Hz), 7.31 (4H, t, J = 6.3 Hz), 7.26 (3H, t, J = 3.9 Hz), 7.19 (1H, t, J = 7.2 Hz), 6.81 (4H, d, J = 8.8 Hz), 6.25 (2H, t, J = 6.0 Hz), 4.70 (2H, q, J = 5.4 Hz), 3.79 (6H, s), 3.63 (2H, t, J = 5.3 Hz), 3.51 (2H, dd, J = 13.1, 6.5 Hz), 3.29 (2H, dd, J = 12.9, 7.0 Hz), 3.08 (4H, dt, J = 20.0, 6.5 Hz), 2.18 (4H, t, J = 7.7 Hz), 1.70 (1H, t, J = 5.8 Hz), 1.62 (6H, d, J = 11.2 Hz), 1.42 (2H, t, J = 7.2 Hz), 1.27 (28H, dt, J = 37.9, 14.6 Hz), 0.87 (6H, t, J = 6.8 Hz), 0.83 (9H, s).
工程3
化合物19-8(661mg、0.669mmol)のTHF溶液(10mL)にTBAF(1M THF溶液、1.34mL、1.34mmol)を加え、室温で25時間撹拌した。反応液を減圧濃縮後、ジオールシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(ヘキサン:酢酸エチル=50:50→10:90)で精製し、化合物20-8(549mg、94%)を無色油状物質として得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 7.41 (2H, t, J = 4.4 Hz), 7.32-7.19 (9H, m), 6.84 (4H, d, J = 8.8 Hz), 6.35 (2H, q, J = 6.1 Hz), 4.85 (1H, t, J = 5.8 Hz), 4.67 (1H, t, J = 5.1 Hz), 3.79 (6H, s), 3.64 (2H, dd, J = 14.3, 7.4 Hz), 3.47 (2H, dt, J = 14.1, 5.8 Hz), 3.30 (3H, tt, J = 19.5, 6.2 Hz), 3.15-3.06 (3H, m), 2.60 (1H, s), 2.21-2.17 (4H, m), 1.78 (1H, s), 1.62 (4H, s), 1.44 (2H, d, J = 5.1 Hz), 1.27 (28H, dd, J = 11.0, 3.7 Hz), 0.87 (6H, t, J = 6.8 Hz).
化合物20-8(549mg、0.63mmol)の塩化メチレン溶液(10mL)にDMAP(7.7mg、0.063mmol)、無水コハク酸(126mg、1.25mmol)、DIEA(0.32mL、1.88mmol)を加え、室温で4時間撹拌した。反応液を減圧濃縮した後、得られた粗製物をシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(クロロホルム:メタノール=20:1→10:1)で精製し、化合物21-8(582mg、95%)を無色液体物質として得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 7.41 (2H, d, J = 7.5 Hz), 7.31-7.25 (8H, m), 7.20 (1H, t, J = 7.2 Hz), 6.82 (4H, d, J = 8.7 Hz), 6.61 (1H, t, J = 6.2 Hz), 6.47 (1H, t, J = 6.4 Hz), 5.91 (1H, t, J = 5.6 Hz), 4.71 (1H, t, J = 5.1 Hz), 4.42 (1H, dd, J = 11.0, 3.2 Hz), 4.14 (1H, dd, J = 10.9, 5.8 Hz), 3.80 (6H, d, J = 6.1 Hz), 3.47-3.33 (4H, m), 3.08 (4H, ddd, J = 33.6, 15.6, 8.5 Hz), 2.69-2.49 (4H, m), 2.20 (4H, dd, J = 15.6, 8.2 Hz), 1.95 (1H, s), 1.55 (4H, dt, J = 34.3, 6.5 Hz), 1.27 (30H, t, J = 7.2 Hz), 0.87 (6H, t, J = 6.8 Hz).
工程5
化合物21-8(300mg、0.31mmol)のアセトニトリル/塩化メチレン混合溶液(4:1、25mL)にDIEA(0.27mL、1.54mmol)とHBTU(128mg、0.34mmol)を加え、室温で15分間振とう撹拌した。反応液へHybridCPG amino form 2000Å(Prime Synthesis社)(2.5g)を加え、24時間振とう撹拌した。反応液をろ過後、HybridCPGをアセトニトリルで3回、ジエチルエーテルで3回洗浄した後、減圧下で乾燥した。乾燥したHybridCPGにTHF/無水酢酸/ピリジン混液(8:1:1、30mL)を加えて3時間振とう撹拌した。反応液をろ過後、HybridCPGをピリジンで2回、イソプロパノールで2回、ジエチルエーテルで2回洗浄した後、減圧乾燥した。化合物21-8の担持量はDMTrカチオンの比色定量により算出し、担持量が107μmol/gの化合物22-8を得た。
工程1
化合物3-10(2.0g、3.92mmol)のTHF溶液(50mL)にピリジン(0.379mL、4.70mmol)、クロロぎ酸4-ニトロフェニル(947mg、4.70mmol)を加え、60℃で1時間撹拌した。反応液を濾過し母液を減圧留去した後、得られた粗製物をシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(クロロホルム:メタノール=100:0→90:10)で精製し、化合物18-10(1.1g、42%)を白色固体として得た。
1H-NMR (CDCl3)δ: 8.28 (2H, d, J = 8.8 Hz) , 7.42 (2H, d, J = 8.8 Hz),6.91 (2H, d, J = 9.1 Hz),4.80 (1H, s),3.57 (4H, m),2.26 (4H, t, J = 7.6 Hz),1.66 (4H, t, J = 6.9 Hz),1.27 (40H, d, J = 20.2 Hz),0.88 (6H, t, J = 6.7 Hz).
工程2
化合物17(41mg、0.074mmol)のジクロロメタン溶液(5.0mL)に化合物18-10(50mg、0.074mmol)を加え、室温で1時間撹拌した。反応液をシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(クロロホルム:メタノール=100:0→90:10)で精製し、化合物19-10(80mg、98%)を黄色液体物質として得た。
1H-NMR (CDCl3)δ: 7.42 (2H, d, J = 7.5 Hz),7.31 (7H, t, J = 6.4 Hz),6.81 (4H, d, J = 8.8 Hz),6.23 (2H, d, J = 5.5 Hz),4.68 (1H, s),3.79 (6H, s),3.63 (2H, t, J = 5.4 Hz),3.52 (2H, t, J = 6.8 Hz),3.28 (2H, t, J = 7.3 Hz),3.11-3.04 (4H, m),2.18 (4H, t, J = 7.5 Hz),1.62 (6H, t, J = 7.2 Hz),1.25 (40H, s),0.88 (6H, t, J = 6.8 Hz),0.84 (9H, s), 0.01 (6H, s)
工程3
化合物19-10(559.2mg、0.535mmol)のTHF溶液(5mL)にトリエチルアミン(4.4mL、7.21mmol)、TBAF(1M THF溶液、0.4mL、0.40mmol)を加え、室温で12時間撹拌した。反応液をクロロホルム(10mL)で希釈した後に飽和重層水(10mL)で洗浄した。得られた有機層を減圧濃縮した後、得られた粗製物をシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(クロロホルム:メタノール=100:0→90:10)で精製し、化合物20-10(384mg、77%)を無色液体物質として得た。
1H-NMR (CDCl3)δ: 7.41 (2H, t, J = 4.3 Hz),7.31 (7H, d, J = 8.5 Hz),6.84 (4H, d, J = 8.8 Hz),6.32 (2H, t, J = 6.3 Hz),4.83 (1H, t, J = 6.0 Hz),4.67 (1H, s, J = 5.2 Hz),3.79 (6H, s),3.68-3.63 (2H, m),3.47 (2H, dd, J = 12.9, 6.1 Hz),3.34-3.24 (3H, m),3.10 (3H, dt, J = 17.5, 5.6 Hz),2.59 (1H, s),2.21-2.17 (4H, m),1.71 (1H, m),1.62 (4H, t, J = 7.2 Hz),1.25 (36H, s),0.88 (6H, t, J = 6.8 Hz).
化合物20-10(384mg、0.431mmol)のジクロロメタン溶液(10.1mL)にDMAP(5.04mg、0.041mmol)、無水コハク酸(62.0mg、0.619mmol)を加え、室温で1日間撹拌した。反応液を減圧濃縮した後、得られた粗製物をジオールシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(クロロホルム:メタノール=100:0→90:10)で精製し、化合物21-10(308mg、71%)を無色液体物質として得た。
1H-NMR (CDCl3)δ: 7.41 (2H, t, J = 4.3 Hz),7.31 (6H, d, J = 8.5 Hz),6.84 (4H, d, J = 8.8 Hz), 6.81 (1H, br s),6.61 (1H, br s),5.83 (1H, br s),4.70 (1H, s),4.38 (1H, m),4.13 (1H, d, J = 10.4 Hz),3.79 (6H, s),3.78-3.41 (6H, m),3.05 (6H, m),2.89 (6H, m),2.62-2.55 (6H, m),2.20 (4H, d, J = 7.2 Hz),1.94 (1H, s),1.62 (4H, t, J = 7.2 Hz),1.25 (36H, s),0.88 (6H, t, J = 7.2 Hz).
工程5
化合物21-10(247mg、0.240mmol)のアセトニトリル/ジクロロメタン混合溶液(1:1、20mL)にDIEA(0.168mL、0.982mmol)とHBTU(100mg、0.264mmol)を加え、室温で20分間振とう撹拌した。反応液へNative Amino lcaa CPG 1000Å(ChemGenes社)(2.0g)を加え、12時間振とう撹拌した。反応液をろ過後、CPGをジクロロメタンで3回、ジエチルエーテルで3回洗浄した後、減圧下で乾燥した。乾燥したCPGにCapA(PROLIGO社、L840045-06)とCapB(PROLIGO社、L850045-06)の混合液(1:1、20mL)を加えて30分間振とう撹拌した。反応液をろ過後、CPGをジクロロメタンで2回、ジエチルエーテルで2回洗浄した後、減圧乾燥した。化合物21-10の担持量はDMTrカチオンの比色定量により算出し、担持量が69μmol/gの化合物22-10を得た。
工程1
化合物3-12(2.0g、3.92mmol)のTHF溶液(50mL)にピリジン(0.379mL、4.70mmol)、クロロぎ酸4-ニトロフェニル(947mg、4.70mmol)を加え、60℃で1時間撹拌した。反応液を濾過し母液を減圧留去した後、得られた粗製物をシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(クロロホルム:メタノール=100:0→90:10)で精製し、化合物18-12(1.1g、42%)を白色固体として得た。
1H-NMR (CDCl3)δ: 8.28 (2H, d, J = 8.8 Hz) , 7.42 (2H, d, J = 8.8 Hz),6.91 (2H, d, J = 9.1 Hz),4.80 (1H, s),3.57 (4H, m),2.26 (4H, t, J = 7.6 Hz),1.66 (4H, t, J = 6.9 Hz),1.27 (40H, d, J = 20.2 Hz),0.88 (6H, t, J = 6.7 Hz).
工程2
化合物17(41mg、0.074mmol)のジクロロメタン溶液(5.0mL)に化合物18-12(50mg、0.074mmol)を加え、室温で1時間撹拌した。反応液をシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(クロロホルム:メタノール=100:0→90:10)で精製し、化合物19-12(80mg、98%)を黄色液体物質として得た。
1H-NMR (CDCl3)δ: 7.42 (2H, d, J = 7.5 Hz),7.31 (6H, t, J = 6.4 Hz),6.81 (4H, d, J = 8.8 Hz),6.23 (2H, d, J = 5.5 Hz),4.68 (1H, s),3.79 (6H, s),3.63 (2H, t, J = 5.4 Hz),3.52 (2H, t, J = 6.8 Hz),3.28 (2H, t, J = 7.3 Hz),3.11-3.04 (4H, m),2.18 (4H, t, J = 7.5 Hz),1.62 (6H, t, J = 7.2 Hz),1.25 (40H, s),0.88 (6H, t, J = 6.8 Hz),0.84 (6H, s), 0.01 (6H, s)
工程3
化合物19-12(90mg、0.082mmol)のTHF溶液(5mL)にトリエチルアミン(1.0mL、7.21mmol)、TBAF(1M THF溶液、0.4mL、0.40mmol)を加え、室温で12時間撹拌した。反応液をクロロホルム(10mL)で希釈した後に飽和重層水(10mL)で洗浄した。得られた有機層を減圧濃縮した後、得られた粗製物をシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(クロロホルム:メタノール=100:0→95:5)で精製し、化合物20-12(84mg、100%)を無色液体物質として得た。
1H-NMR (CDCl3)δ: 7.41 (2H, t, J = 4.3 Hz),7.31 (6H, d, J = 8.5 Hz),6.84 (4H, d, J = 8.8 Hz),6.34 (2H, t, J = 6.3 Hz),4.83 (1H, s),4.67 (1H, s),3.79 (6H, s),3.68-3.63 (2H, m),3.47 (2H, dd, J = 12.9, 6.1 Hz),3.34-3.24 (3H, m),3.10 (3H, dt, J = 17.5, 5.6 Hz),2.60 (1H, s),2.21-2.17 (4H, m),1.62 (4H, t, J = 6.9 Hz),1.25 (40H, s),0.88 (6H, t, J = 6.8 Hz).
化合物20-12(60mg、0.061mmol)のピリジン溶液(2mL)にDMAP(0.7mg、0.006mmol)、無水コハク酸(7.3mg、0.073mmol)を加え、室温で4日間撹拌した。反応液を減圧濃縮した後、得られた粗製物をシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(クロロホルム:メタノール=100:0→95:5)で精製し、化合物21-12(56mg、85%)を無色液体物質として得た。
ESI-MS (m/z) : 1085 (M-H).
工程5
化合物21-12(52mg、0.048mmol)のアセトニトリル/クロロホルム混合溶液(1:1、10mL)にDIEA(0.043mL、0.248mmol)とHBTU(31mg、0.083mmol)を加え、室温で15分間振とう撹拌した。反応液へNative Amino lcaa CPG 1000Å(ChemGenes社)(0.5g)を加え、23時間振とう撹拌した。反応液をろ過後、CPGをアセトニトリルで3回、ジエチルエーテルで3回洗浄した後、減圧下で乾燥した。乾燥したCPGにCapA(PROLIGO社、L840045-06)とCapB(PROLIGO社、L850045-06)の混合液(1:1、5mL)を加えて1時間半振とう撹拌した。反応液をろ過後、CPGをピリジンで2回、イソプロパノールで2回、ジエチルエーテルで2回洗浄した後、減圧乾燥した。化合物21-12の担持量はDMTrカチオンの比色定量により算出し、担持量が31μmol/gの化合物22-12を得た。
工程1
化合物3-14(1.5g、3.92mmol)のTHF溶液(60mL)にピリジン(0.320mL、3.97mmol)、クロロぎ酸4-ニトロフェニル(800mg、3.97mmol)を加え、3時間加熱還流した。反応液を濾過し母液を減圧留去した後、得られた粗製物をシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(ヘキサン:酢酸エチル=66:34→45:55)で精製し、化合物18-14(1.56g、81%)を白色固体として得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 8.29 (2H, d, J = 10.0 Hz), 7.43 (2H, d, J = 10.0 Hz), 6.31 (2H, t, J = 6.4 Hz), 4.81-4.76 (1H, m), 3.65-3.58 (2H, m), 3.55-3.48 (2H, m), 2.25 (4H, t, J = 7.6 Hz), 1.67-1.61 (4H, m), 1.25 (48H, s), 0.88 (6H, t, J = 6.8 Hz).
工程2
化合物17(1.06g、1.88mmol)のジクロロメタン溶液(30mL)に化合物18-14(1.38g、1.88mmol)を加え、室温で1時間撹拌した。溶媒を減圧留去後、得られた粗製物をシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(ヘキサン:酢酸エチル=66:34→45:55)で精製し、化合物19-14(1.47g、68%)を白色固体として得た。
ESI-MS (m/z) : 1155 (M-H).
工程3
化合物19-14(1.47g、1.27mmol)のTHF溶液(30mL)にTBAF(1M THF溶液、3.81mL、3.81mmol)を加え、室温で18時間撹拌した。反応液を酢酸エチルで希釈した後、溶媒を減圧濃縮した。得られた粗製物をシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(ヘキサン:酢酸エチル=50:50→5:95)で精製し、化合物20-14(1.04g、79%)を白色固体として得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 7.41 (2H, d, J = 7.6 Hz), 7.32-7.27 (6H, m), 7.21 (1H, t, J = 7.2 Hz), 6.83 (4H, d, J = 8.8 Hz), 6.37-6.35 (2H, m), 4.86 (1H, t, J = 5.6 Hz), 4.69-4.64 (1H, m), 3.79 (6H, s), 3.69-3.61 (2H, m), 3.50-3.24 (6H, m), 3.15-3.06 (3H, m), 2.61 (1H, s), 2.21-2.17 (4H, m), 1.25 (58H, s), 0.88 (6H, t, J = 6.8 Hz).
化合物20-14(1.04g、0.998mmol)のジクロロメタン溶液(20mL)にDMAP(12mg、0.10mmol)、DIEA(0.523mL、2.99mmol)、無水コハク酸(170mg、1.70mmol)を加え、室温で16時間撹拌した。反応液を減圧濃縮した後、得られた粗製物をジオールシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(クロロホルム)で精製し、化合物21-14(1.17g)を白色固体として得た。
ESI-MS (m/z) : 1141 (M-H).
工程5
化合物21-14(585mg、0.512mmol)のアセトニトリル/ジクロロメタン混合溶液(1:1、40mL)にDIEA(0.447mL、2.56mmol)とHBTU(214mg、0.563mmol)を加え、室温で15分間振とう撹拌した。反応液へNative Amino lcaa CPG 1000Å(ChemGenes社)(4.0g)を加え、21時間振とう撹拌した。反応液をろ過後、CPGをアセトニトリル/ジクロロメタン混合溶液(1:1、120mL)、ジエチルエーテル(60mL)で洗浄した後、減圧下で乾燥した。乾燥したCPGにCapA(PROLIGO社、L840045-06)とCapB(PROLIGO社、L850045-06)の混合液(1:1、40mL)を加えて1時間半振とう撹拌した。反応液をろ過後、CPGをピリジン(40mL)、イソプロパノール(60mL)、ジエチルエーテル(60mL)で洗浄した後、減圧乾燥した。化合物21-14の担持量はDMTrカチオンの比色定量により算出し、担持量が40μmol/gの化合物22-14を得た。
工程1
化合物3-18(1.0g、1.47mmol)のTHF溶液(40mL)にピリジン(0.143mL、1.76mmol)、クロロぎ酸4-ニトロフェニル(356mg、1.77mmol)を加え、60℃で1時間撹拌した。反応液を濾過し母液を減圧留去した後、得られた固体の粗製物を酢酸エチルで洗浄し、化合物18-18(508mg、41%)を白色固体として得た。
1H-NMR (CDCl3)δ: 8.29 (2H, d, J = 8.8 Hz),7.43 (2H, d, J = 9.1 Hz),6.29 (2H, s),3.60-3.50 (4H, m),2.25 (4H, t, J = 7.6 Hz),1.64 (4H, d, J = 6.6 Hz),1.25 (64H, s),0.88 (6H, t, J = 6.4 Hz).
工程2
化合物17(62mg、0.110mmol)のジクロロメタン溶液(4.0mL)に化合物18-18(93mg、0.110mmol)を加え、室温で1時間撹拌した。反応液をシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(クロロホルム:メタノール=100:0→90:10)で精製し、化合物19-18(113mg、81%)を黄色液体物質として得た。
1H-NMR (CDCl3)δ: 7.42 (2H, d, J = 13.4 Hz),7.31 (7H, d, J = 9.3 Hz),6.81 (4H, d, J = 8.8 Hz),6.22 (2H, s),4.69 (1H, s),3.78 (6H, s),3.62 (2H, t, J = 5.6 Hz),3.51 (2H, dd, J = 10.9, 6.1 Hz),3.32-3.27 (2H, m),3.11-3.04 (4H, m),
2.17 (4H, t, J = 3.7 Hz),1.62 (6H, dd, J = 10.5, 4.7 Hz),1.25 (64H, s),0.88 (6H, t, J = 6.8 Hz),0.83 (9H, s), 0.01 (6H, s).
工程3
化合物19-18(100mg、0.079mmol)のTHF溶液(4mL)にトリエチルアミン(0.1mL、0.79mmol)、TBAF(1M THF溶液、0.32mL、0.32mmol)を加え、室温で24時間撹拌した。反応液をクロロホルム(10mL)で希釈した後に飽和重層水(10mL)で洗浄した。得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した後、得られた粗製物をシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(クロロホルム:メタノール=100:0→95:5)で精製し、化合物20-18(90mg、99%)を無色液体物質として得た。
1H-NMR (CDCl3)δ: 7.41 (2H, d, J = 8.6 Hz),7.31 (7H, d, J = 8.8 Hz),6.84 (4H, d, J = 8.6 Hz),6.31 (2H, s),4.81 (1H, s),4.67 (1H, s),3.79 (6H, s),3.71-3.63 (2H, m),3.49 (2H, dd, J = 14.7, 11.1 Hz),3.30 (3H, tt, J = 18.8, 7.4 Hz),3.13-3.07 (3H, m),2.58 (1H, s),2.18 (4H, d, J = 7.6 Hz),1.60 (6H, dd, J = 9.2, 4.4 Hz)1.25 (64H, s),0.88 (6H, t, J = 6.3 Hz).
化合物20-18(87mg、0.075mmol)のピリジン溶液(2mL)にDMAP(0.9mg、0.007mmol)、無水コハク酸(15.8mg、0.151mmol)を加え、室温で7日間撹拌した。反応液を減圧濃縮した後、得られた粗製物をシリカゲルカラムクロマ卜グラフィー(クロロホルム:メタノール=100:0→95:5)で精製し、化合物21-18(85mg、90%)を無色液体物質として得た。
ESI-MS (m/z) : 1253 (M-H).
工程5
化合物21-18(85mg、0.068mmol)のアセトニトリル/クロロホルム混合溶液(1:1、10mL)にDIEA(0.043mL、0.248mmol)とHBTU(38mg、0.10mmol)を加え、室温で15分間振とう撹拌した。反応液へNative Amino lcaa CPG 1000Å(ChemGenes社)(0.5g)を加え、室温で23時間振とう撹拌した。反応液をろ過後、CPGをアセトニトリルで3回、ジエチルエーテルで3回洗浄した後、減圧下で乾燥した。乾燥したCPGにCapA(PROLIGO社、L840045-06)とCapB(PROLIGO社、L850045-06)の混合液(1:1、5mL)を加えて1時間半振とう撹拌した。反応液をろ過後、CPGをピリジンで2回、イソプロパノールで2回、ジエチルエーテルで2回洗浄した後、減圧乾燥した。化合物21-18の担持量はDMTrカチオンの比色定量により算出し、担持量が15μmol/gの化合物22-18を得た。
工程1
化合物3-20(1.0g、1.36mmol)のTHF溶液(35mL)に炭酸ビス(4-ニトロフェニル)(1.241mL、4.08mmol)、DMAP(498mg、4.08mmol)を加え、55℃で1時間撹拌した。反応液を減圧下で濃縮し、残渣に対してアセトニトリル(50mL)を加えて沈殿が生じるまで撹拌した。反応溶液に水(20mL)を加えて激しく撹拌した。生じた固体をでろ取した。得られた固体を水(50mL)、アセトニトリル(50mL)で順に洗浄し、化合物18-20(1.1g、92%)を白色固体として得た。
1H-NMR (CDCl3)δ: 8.28 (2H, dd, J = 2.0, 6.8 Hz) , 7.42 (2H, dd, J = 2.4, 7.2 Hz),6.30 (2H, s),4.79 (1H, s),3.61 (2H, m),3.52 (2H, m),2.20 (4H, m),1.66 (4H, m),1.25 (72H, m),0.88 (6H, t, J = 6.8 Hz).
工程2
化合物17(219mg、0.388mmol)のTHF溶液(6.5mL)に化合物18-20(350mg、0.388mmol)、DMAP(47.5mg、0.388mmol)を加え、65℃で2時間撹拌した。反応液に10%含水アセトニトリル溶液(70ml)を加えしばらく撹拌した後に、析出した固体をろ取した。化合物19-20(420mg、82%)を白色固体として得た。
1H-NMR (CDCl3)δ: 7.43 (2H, d, J = 7.6 Hz),7.31 (7H, m),6.81 (4H, d, J = 8.4 Hz),6.26 (2H, br s),4.73 (1H, br s),4.69 (1H, br s),3.79 (6H, s),3.79 (6H, s),3.63 (2H, m),3.49 (2H, m),3.29 (2H, d, J = 14.0 Hz),3.10-3.06 (4H, m),2.18 (4H, t, J = 7.6 Hz),1.68 (4H, m),1.42-1.25 (m, 72H),0.88 (6H, t, J = 6.4 Hz),0.83 (s, 9H),0.00 (s, 6H).
工程3
化合物19-20(559mg、0.422mmol)のTHF溶液(5mL)にTBAF(1M THF溶液、0.506mL、0.506mmol)を加え、50℃で5時間撹拌した。反応液を10%含水アセトニトリル溶液(100mL)に滴下し、析出した固体をろ取した。化合物20-20(344mg、67%)を白色固体として得た。
1H-NMR (CDCl3)δ: 7.41 (2H, t, J = 4.3 Hz),7.31 (7H, d, J = 8.5 Hz),6.84 (4H, d, J = 8.8 Hz),6.35 (2H, br s),4.85 (1H, s),4.67 (1H, s),3.79 (6H, s),3.68 (2H, m),3.47 (2H, dd, J = 12.9, 6.1 Hz),3.34-3.24 (3H, m),3.10 (3H, dt, J = 17.5, 5.6 Hz),2.60 (1H, s),2.21-2.17 (4H, m),1.62 (4H, m), 1.60-1.45 (m, 4H),1.25-1.01 (72H, m),0.88 (6H, t, J = 6.8 Hz).
化合物20-20(344mg、0.284mmol)のジクロロメタン溶液(10mL)にDMAP(3.5mg、0.0284mmol)、無水コハク酸(42.6mg、0.426mmol)を加え、室温で一晩撹拌した。反応液を10%含水アセトニトリル溶液(100mL)に滴下し、析出した固体をろ取した。化合物21-20(361mg、97%)を白色固体として得た。
1H-NMR (CDCl3)δ: 7.42 (2H, d, J = 7.6 Hz),7.31-7.26 (7H, m),6.83 (4H, t, J = 8.4 Hz),6.56 (1H, br s),6.40 (1H, br s),5.89 (1H, br s),4.71 (1H, m),4.41 (1H, d, J = 8.0 Hz),4.14 (1H, dd, J = 6.0,11.2 Hz),3.79 (6H, s),3.65 (1H, m), 3.43-3.37 (4H, m),3.05-3.02 (4H, m),2.19-2.17 (4H, m),1.61-1.25 (76H, m),0.88 (6H, t, J = 6.8 Hz).
工程5
化合物21-20(190mg、0.145mmol)のアセトニトリル/クロロホルム混合溶液(1:3、10mL)にDIEA(0.127mL、0.725mmol)とHBTU(60.5mg、0.159mmol)を加え、40℃で15分間振とう撹拌した。反応液へNative Amino lcaa CPG 1000Å(ChemGenes社)(3.0g)を加え、2時間振とう撹拌した。反応液をろ過後、CPGをクロロホルムで3回、エタノール、アセトニトリルで3回洗浄した後、減圧下で乾燥した。乾燥したCPGにCapA(PROLIGO社、L840045-06)とCapB(PROLIGO社、L850045-06)の混合液(1:1、20mL)を加えて1時間半振とう撹拌した。反応液をろ過後、CPGをクロロホルムで3回、アセトニトリルで3回洗浄した後、減圧乾燥した。化合物21-20の担持量はDMTrカチオンの比色定量により算出し、担持量が48μmol/gの化合物22-20を得た。
工程1
化合物3-22(2.0g、2.53mmol)のTHF溶液(35mL)に炭酸ビス(4-ニトロフェニル)(1.54g、5.05mmol)、DMAP(618mg、5.05mmol)を加え、65℃で2時間撹拌した。反応液を減圧下で濃縮し、残渣に対してアセトニトリル(100mL)を加えて沈殿が生じるまで撹拌した。反応溶液に水(20mL)を加えて激しく撹拌した。生じた固体をろ取した。得られた固体を水(100mL)、アセトニトリル(100mL)で順に洗浄し、化合物18-22(2.27g、89%)を白色固体として得た。
1H-NMR (CDCl3)δ: 8.28 (2H, d, J = 8.8 Hz) , 7.43 (2H, d, J = 8.82 Hz),6.29 (2H, br t, J = 6.4 Hz),4.79 (1H, br s),3.61 (2H, m),3.52 (2H, m),2.25 (4H, t, J = 7.6 Hz),1.64 (4H, m),1.26 (84H, m),0.88 (6H, t, J = 6.0 Hz)
工程2
化合物17(666mg、1.81mmol)のTHF溶液(10.0mL)にDMAP(144mg、1.81mmol)、化合物18-22(1.13g、1.18mmol)を加え、65℃で2時間撹拌した。反応液をにアセトニトリル(150mL)をゆっくりと加え、生じた沈殿をろ取した。得られた固体をアセトニトリルで3回洗浄し、化合物19-22(1.5g、92%)を白色固体として得た。
1H-NMR (CDCl3)δ: 7.42 (2H, d, J = 6.8 Hz),7.32-7.20 (7H, m),6.81 (4H, d, J = 6.8 Hz),6.26 (2H, br m),4.70 (2H, s),3.63 (2H, m),3.49 (2H, m),3.31 (2H, m),3.09-3.04 (4H, m),2.18 (4H, m),1.60 4H, m),1.25 (84H, m),0.86 (6H, t, J = 6.8 Hz),0.84 (9H, s), 0.01 (6H, s)
工程3
化合物19-22(1.5g、1.07mmol)のTHF溶液(8.9mL)に、TBAF(1M THF溶液、1.64mL、1.69mmol)を加え、65℃で2時間撹拌した。反応液をにアセトニトリル(150mL)をゆっくりと加え、生じた沈殿をろ取した。得られた固体をアセトニトリルで3回洗浄し、化合物20-22(1.2g、87%)を白色固体として得た。
1H-NMR (CDCl3)δ: 7.41 (2H, t, J = 7.2 Hz),7.31-7.21 (7H, m),6.84 (4H, d, J = 8.0 Hz),6.34 (2H, m),4.83 (1H, s),4.67 (1H, s),3.79 (6H, s),3.67 (2H, m),3.46 (2H, m),3.33-3.24 (3H, m),3.10 (3H, m),2.17 (4H, t, J = 7.6 Hz),1.78 (4H, m),1.44-1.25 (84H, m),0.88 (6H, t, J = 6.0 Hz).
化合物20-22(100mg、0.079mmol)のジクロロメタン溶液(3mL)にDMAP(1mg、0.008mmol)、無水コハク酸(11.9mg、0.118mmol)を加え、45℃で4時間した。反応液にアセトニトリル(10mL)に滴下し、析出した固体をろ取した。得られた固体をアセトニトリルで3回洗浄し、化合物21-22(361mg、97%)を白色固体として得た。
1H-NMR (CDCl3)δ: 7.42 (2H, d, J = 7.6 Hz),7.31-7.26 (7H, m),6.81 (4H, t, J = 8.8 Hz),6.58 (1H, br m),6.43 (1H, br m),5.88 (1H, br m),4.71 (1H, m),4.40 (1H, d, J = 8.0 Hz),4.14 (1H, dd, J = 6.0,10.8 Hz),3.79 (6H, s),3.65 (1H, m), 3.43-3.37 (4H, m),3.13-3.02 (4H, m),2.63-2.53 (4H, m),2.23-2.18 (4H, dd, J = 7.2, 14.8 Hz),2.00-1.25 (4H, m) 1.25-1.11(84H, m),0.88 (6H, t, J = 6.8 Hz).
工程5
化合物21-22(92mg、0.067mmol)のアセトニトリル/ジクロロメタン/クロロホルム混合溶液(1:2:2、10mL)にDIEA(0.059mL、0.336mmol)とHBTU(28mg、0.074mmol)を加え、40℃で15分間振とう撹拌した。反応液へNative Amino lcaa CPG 1000Å(ChemGenes社)(0.9g)を加え、40℃で3時間振とう撹拌した。反応液をろ過後、CPGをクロロホルム、アセトニトリル、エタノールで各3回洗浄した後、減圧下で乾燥した。乾燥したCPGにCapA(PROLIGO社、L840045-06)とCapB(PROLIGO社、L850045-06)の混合液(1:1、60mL)を加えて1時間半振とう撹拌した。反応液をろ過後、CPGをアセトニトリルで3回洗浄した後、減圧乾燥した。化合物21-22の担持量はDMTrカチオンの比色定量により算出し、担持量が47μmol/gの化合物22-22を得た。
窒素気流下、コレステロール(化合物25、1.00g、2.59mmol、和光純薬)のジクロロメタン(10mL)溶液に、DIEA(0.9mL、5.17mmol)を加え、氷冷水で冷却した。N,N‐ジイソプロピルアミドクロリド亜りん酸メチル(0.86mL、3.85mmol)を加えて氷冷下40分撹拌した。反応液をジクロロメタン酢酸エチル(100mL)で希釈した後に飽和重層水(100mL)、飽和食塩水(100mL)で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥してろ過後,減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(SiO2:20g、n-ヘキサン:酢酸エチル=50:50→0:100)により精製し、化合物26(1.45g、収率95%)を無色泡状物質として得た。化合物の生成は31P-NMRにより3価のリンが導入されたことをもって判断した。
31P-NMR(CDCl3)δ:145.46 (d)
ファルネソール(化合物52、1.0mL、3.99mmol、純正化学株式会社)をジクロロメタン(8.9mL)に溶解し、DIEA(1.53mL、8.78mmol)を加えた。その後室温にて、N,N‐ジイソプロピルアミドクロリド亜りん酸2‐シアノエチル(0.98mL、4.39mmol)を加え、室温で40分間撹拌した。ジクロロメタン(90mL)と飽和重そう水(100mL)を反応溶媒に加えて反応を停止し、その後混合液を分液漏斗へ移し、有機層を飽和食塩水(100mL)で洗浄した。その後、硫酸マグネシウムを用いて乾燥した。有機層を減圧下で濃縮後、粗生成物として淡黄色オイルである化合物53(1.20g、2.84mmol)を得た。化合物の生成は31P-NMRにより3価のリンが導入されたことをもって判断した。
1H-NMR (CDCl3) δ: 5.37 (1H, t, J = 6.6 Hz), 5.10-5.08 (2H, m), 4.19-4.13 (2H, m), 3.90-3.77 (2H, m), 3.66-3.54 (2H, m), 2.64 (2H, t, J = 6.6 Hz), 2.08-1.99 (8H, m), 1.68-1.67 (6H, m), 1.61-1.60 (6H, m), 1.20-1.17 (12H, m).
31P-NMR (CDCl3) δ: 147.92 (1H, s).
工程1
Nucleic Acids Reserch,42,8796―8807(2014)に記載の方法に従って、化合物27より2工程で化合物28を合成した。
工程2
化合物28(5.0g、7.79mmol)のDMF溶液(20mL)に室温でイミダゾール(690mg、10.1mmol、1.3eq.)、tert-ブチルジメチルシリルクロリド(1.29g、8.57mmol、1.1eq.)を順次加え、室温で2時間撹拌した。反応液を酢酸エチルで希釈し、飽和食塩水にて洗浄、次いで硫酸マグネシウム乾燥後、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(SiO2:120g、n-ヘキサン:酢酸エチル:トリエチルアミン=90:10:1→65:35:1)により精製し、化合物29(5.50g、収率93%)を無色泡状物質として得た。1H-NMRでは1:1のロータマー混合物として観測された。
ESI-MS (m/z) : 778 (M+H).
1H-NMR(CDCl3)δ: 7.68 (d, J=7.5Hz, 1H), 7.62 (d, J=7.5Hz, 1H), 7.58-7.51 (m, 1H), 7.40-7.05 (m, 14H), 6.74-6.63 (m, 5H), 4.61-4.49 (m, 1H), 4.33-4.15 (2m, 1H), 4.12-4.03 (m, 1H), 3.93-3.85 (m, 1H), 3.62 (s, 6H), 3.56 (dd, J=10.7, 5.4Hz, 0.5H), 3.41-3.31 (m, 1H), 3.16 (dd, J=9.0, 4.3Hz, 0.5H), 3.00 (m, 0.5H), 2.90 (m, 0.5H), 2.13-2.02 (m, 1H), 1.97-1.82 (m, 1H), 0.82 (s, 1.5H), 0.81 (s, 3H), 0.779 (s, 3H), 0.787 (s, 1.5H), 0.007 (s, 1.5H), 0.000 (s, 1.5H), -0.015 (s, 1.5H), -0.026 (s, 1.5H).
工程3
化合物29(2.63g、3.48mmol)のDMF溶液(10ml)にピペリジン(0.379ml、3.83mmol、1.1eq.)を加え、室温で2時間撹拌した後、減圧下濃縮した。残渣を酢酸エチルで希釈し、飽和食塩水にて洗浄、次いで硫酸マグネシウム乾燥後、溶媒を減圧留去した。メタノール(10ml)を加え、生じた析出物をろ別した後、ろ液を濃縮することにより、化合物30(2.20g)の粗生成物を得た。
ESI-MS (m/z) : 524 (M+H). HPLC Peak RT = 3.29 min.
工程4
化合物30(2.20g、粗製)のジクロロメタン溶液(15ml)に室温でトリエチルアミン(3.65ml、36.9mmol)、アセトキシアセチルクロリド(3.65ml、36.9mmol)を順次加え、室温で2時間撹拌した。反応液を酢酸エチルで希釈し、飽和食塩水にて洗浄、次いで硫酸マグネシウム乾燥後、溶媒を減圧留去することにより、化合物31の粗生成物を得た。
ESI-MS (m/z) : 634 (M+H). HPLC Peak RT = 3.40 min.
工程5
工程4で得られた化合物31をメタノール(10ml)に溶解した後、28%ナトリウムメトキシド‐メタノール溶液(0.60ml)を加え、室温で1時間撹拌した。反応液を酢酸エチルで希釈し、飽和食塩水にて洗浄、次いで硫酸マグネシウム乾燥後、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(SiO2:80g、n-ヘキサン:酢酸エチル:トリエチルアミン=80:20:1→65:35:1)により精製し、化合物32(1.45g、化合物30からの収率71%)を無色泡状物質として得た。1H-NMRでは78:22のロータマー混合物として観測された。
ESI-MS (m/z) : 592 (M+H). HPLC Peak RT = 3.36 min.
1H-NMR(CDCl3)δ: (Major) 7.39-7.32 (m, 2H), 7.32-7.18 (m, 7H), 6.86-6.79 (m, 4H), 4.73 (m, 1H), 4.35 (m, 1H), 4.06 (dd, J=15.1, 4.4Hz, 1H), 3.98 (dd, J=15.1, 4.4Hz, 1H), 3.79 (s, 6H), 3.57 (dd, J=10.0, 4.0Hz, 1H), 3.52 (dd, J=10.0, 6.0Hz, 1H), 3.47 (dd, J=4.4, 4.4Hz, 1H), 3.13 (dd, J=10.0, 2.5Hz, 1H), 3.08 (dd, J=10.0, 5.0Hz, 1H), 2.19 (m, 1H), 1.93 (ddd, J=13.0, 8.8, 6.0Hz, 1H), 0.87 (s, 9H), 0.08 (s, 3H), 0.07 (s, 3H). (Minor) 7.39-7.32 (m, 2H), 7.32-7.18 (m, 7H), 6.86-6.79 (m, 4H), 4.54 (m, 1H), 4.06-3.98 (m, 1H), 3.92 (dd, J=14.6, 4.3Hz, 1H), 3.79 (s, 6H), 3.68 (dd, J=12.0, 4.0Hz, 1H), 3.62-3.42 (m, 2H), 3.16-3.02 (m, 2H), 2.11 (ddd, J=13.0, 5.8, 4.0Hz, 1H), 2.02 (m, 1H), 0.86 (s, 9H), 0.051 (s, 3H), 0.049 (s, 3H).
1-1-6)と同様に合成した化合物3-16(2.00g、3.21mmol)のジクロロメタン(60ml)懸濁溶液にDIEA(3.36mL、19.3mmol、4.0eq.)を加えた溶液を、N,N‐ジイソプロピルアミドクロリド亜りん酸メチル(2.54g、12.8mmol、2.0eq.)のジクロロメタン(10ml)溶液に加え、45℃で10分間撹拌した。
室温へ放冷後、飽和炭酸水素ナトリウム溶液に空けて、クロロホルムにて抽出した後、飽和食塩水にて洗浄、次いで硫酸マグネシウム乾燥後、溶媒を減圧留去した。撹拌しながら、得られた残渣にアセトニトリル(20ml)を加えて、白色の目的物を析出させた後、ろ取することにより、化合物33-16(2.36g、収率94%)を白色固体として得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:6.39 (t, J = 5.5 Hz, 1H, -NH), 6.18 (t, J = 5.5 Hz, 1H, -NH),3.95 (m, 0.5H), 3.67-3.51 (m, 4.5H), 3.42 (s, 1.5H), 3.39 (s, 1.5H), 3.19-3.11 (m, 1H), 3.05-2.97 (m, 1H), 2.30-2.15 (m, 4H), 1.70-1.57 (m, 4H), 1.36-1.23 (m, 56H), 1.23-1.14 (m, 12H), 0.88 (t, J=6.5Hz, 6H). 31P-NMR(CDCl3)δ: 149.06
工程7
化合物32(700mg、1.18mmol)と化合物33-16(1.87g、2.37mmol、2.0eq.)が溶解したジクロロメタン(14ml)溶液に1H-テトラゾール(124mg、1.77mmol、1.5eq.)を加え、室温で2時間撹拌した後、0.5M DDTT溶液([(ジメチルアミノ-メチリデン)アミノ]-3H-1,2,4-ジチアザオリン-3-チオン、4.73ml、3-ピコリン:アセトニトリル=1:1に溶解)を加え、同温度で1時間撹拌した。反応液を酢酸エチルで希釈し、10%クエン酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水にて順次洗浄、次いで硫酸マグネシウム乾燥後、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(SiO2:45g、n-ヘキサン:酢酸エチル:トリエチルアミン=75:25:1→50:50:1)により精製し、化合物34-16(1.19g、収率79%)を無色泡状物質として得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:7.40-7.11 (m, 9H), 6.87-6.78 (m, 4H), 4.94-4.84 (m, 1H), 4.82-4.72 (m, 1H), 4.58-4.43 (m, 2H), 4.38-4.31 (m, 1H), 3.86-3.53 (m, 4H), 3.80 (s, 3H), 3.79 (s, 6H), 3.33-2.99 (m, 4H), 2.30-1.88 (m, 6H), 1.65-1.55 (m, 4H), 1.35-1.20 (m, 56H), 0.91-0.84 (m, 15H), 0.08 (s, 3H), 0.01 (s, 3H).
工程8
化合物34-16(1.02g、0.780mmol)のTHF溶液(10ml)に室温で1mol/l テトラブチルアンモニウムフロリド-THF溶液(0.937ml、1.2eq.)を加え、室温で1時間撹拌した後、反応液を減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(SiO2:30g、クロロホルム:メタノール:トリエチルアミン=97.5:2.5:1→90:10:1)により精製し、化合物35-16(608mg、収率65%)を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:7.40-7.17 (m, 9H), 6.91 (m, 1H, -NH), 6.88-6.78 (m, 5H),5.00-4.35 (m, 5H), 3.85-3.44 (m, 4H), 3.79 (s, 3H), 3.78 (s, 6H), 3.35-3.06 (m, 4H), 2.31-2.09 (m, 5H), 2.06-1.94 (m, 1H), 1.68-1.52 (m, 4H), 1.36-1.18 (m, 56H), 0.88 (t, J=7.0Hz, 6H).
工程9
化合物35-16(210mg、0.176mmol)のジクロロメタン溶液(3ml)に室温でトリエチルアミン(0.073ml、0.528mmol、3.0eq.)、無水コハク酸(35mg、0.352mmol、2.0eq.)、DMAP(4mg、0.033 mmol)を順次加え、室温で12時間撹拌した後、反応液を減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(SiO2:24g、クロロホルム:メタノール:トリエチルアミン=100:0:1→95:5:1)により精製し、化合物36-16(172mg、収率76%)を無色固体として得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:7.38-7.32 (m, 2H), 7.38-7.32 (m, 7H), 6.90-6.76 (m, 4H), 5.42 (br.s, 1H), 5.04-4.39 (m, 4H), 3.87-3.55 (m, 4H), 3.79 (s, 3H), 3.78 (s, 6H), 3.31-3.07 (m, 4H), 2.65-2.43 (m, 4H), 2.38-2.28 (m, 1H), 2.28-2.08 (m, 5H), 1.67-1.53 (m, 4H), 1.35-1.19 (m, 56H), 0.88 (t, J=6.5Hz, 6H).
工程1
Nucleic Acids Reserch,42,8796―8807(2014)に記載の方法に従って、化合物28より化合物37を合成した。
工程2
化合物37(3.00g、7.15mmol)のジクロロメタン溶液(15ml)に室温でトリエチルアミン(1.98ml、14.3mmol、2.0eq.)、無水コハク酸(751mg、7.51mmol、1.05eq.)を加え、室温で1時間撹拌した後、反応液を減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(SiO2:120g、クロロホルム:メタノール:トリエチルアミン=95:5:1→75:25:1)により精製し、化合物38(3.37g、収率91%)を無色粉末として得た。1H-NMRでは63:37のロータマー混合物として観測された。
ESI-MS (m/z) : 530 (M+H). HPLC Peak RT = 1.86 min.
1H-NMR(CDCl3)δ:(Major) 7.39-7.33 (m, 2H), 7.30-7.22 (m, 6H), 7.22-7.16 (m, 1H), 6.85-6.77 (m, 4H), 4.50 (br.s, 1H), 4.41 (m, 1H), 3.88 (d, J=11.0Hz, 1H), 3.775 (s, 6H), 3.65 (dd, J=11.0, 4.0Hz, 1H), 3.43 (dd, J=9.2, 4.5Hz, 1H),3.14 (dd, J=9.2, 2.7Hz, 1H), 2.85-1.97 (m, 6H). (Minor) 7.39-7.33 (m, 2H), 7.30-7.22 (m, 6H), 7.22-7.16 (m, 1H), 6.85-6.77 (m, 4H), 4.41 (m, 1H), 4.31 (br.s, 1H), 4.11 (d, J=12.3Hz, 1H), 3.783 (s, 6H), 3.25 (dd, J=12.3, 3.5Hz, 1H), 3.18 (dd, J=9.5, 4.8Hz, 1H),3.10 (dd, J=9.5, 4.8Hz, 1H), 2.85-1.97 (m, 6H).
工程3
Journal of Medicinal Chemistry,48,7781(2005)に記載の方法に従って、化合物1より化合物39を合成した。
工程4
化合物39(3.00g、7.15mmol)のTHF-水(9:1)の混合溶液(30ml)に室温でトリフェニルホスフィン(1.98ml、14.3mmol、2.0eq.)を加え、室温で1時間撹拌した後、70℃に昇温し、4時間撹拌した。室温へ放冷後、反応液を減圧下濃縮することにより、化合物40の粗生成物をを無色油状物として得た。
工程5
化合物40(7.15mmol)のジクロロメタン溶液(30ml)に室温でトリエチルアミン(2.10ml、15.1mmol、1.2eq.)、Fmoc-Cl(3.59g、13.9mmol、1.1eq.)を加え、室温で1時間撹拌した後、反応液をクロロホルムで希釈し、飽和食塩水にて洗浄、次いで硫酸マグネシウム乾燥後、溶媒を減圧留去した。得られた固体をn-ヘキサン及び少量のクロロホルムにて洗浄した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(SiO2:120g、n-ヘキサン:酢酸エチル=75:25→0:100)により精製し、化合物41(4.18g、化合物39からの収率65%)を無色泡状物質として得た。
ESI-MS (m/z) : 512 (M+H). HPLC Peak RT = 2.71 min.
1H-NMR(CDCl3)δ:7.80 (d, J=7.5Hz, 2H), 7.60 (d, J=7.5Hz, 2H), 7.40 (dd, J=7.5, 7.5Hz, 2H), 7.30 (dd, J=7.5, 7.5Hz, 2H), 6.02 (br.s, 1H), 5.21 (br.s, 2H), 4.46-4.27 (m, 2H), 4.21 (m, 1H), 3.59 (m, 1H), 3.45-3.29 (m, 2H), 3.27-3.13 (m, 2H), 1.46 (s, 18H).
化合物41(3.00g、7.15mmol)にTFA(30ml)を加え、室温で1時間撹拌した後、減圧下濃縮することにより、化合物42の粗生成物を得た。
ESI-MS (m/z) : 312 (M+H). HPLC Peak RT = 1.00 min.
工程7
化合物42のジクロロメタン溶液(10ml)に室温でトリエチルアミン(1.17ml、8.44mmol、6.0eq.)、ステアロイルクロリド(938mg、3.10mmol、2.2eq.)を加え、室温で1時間撹拌した。生じた白色の析出物をろ取した後、少量のクロロホルム、水、n-ヘキサンにて洗浄、減圧下乾燥することにより、化合物43-16(888mg、化合物40からの収率75%)を無色固体として得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:7.76 (d, J=7.5Hz, 2H), 7.60 (d, J=7.5Hz, 2H), 7.34 (d, J=7.5, 7.5Hz, 2H), 7.31 (d, J=7.5, 7.5Hz, 2H), 6.51 (br.s, 2H), 6.39 (br.s, 1H), 4.39-4.26 (m, 2H), 4.21 (m, 1H), 3.68-3.54 (m, 2H), 3.26-3.07 (m, 2H), 2.29-2.18 (m, 4H), 1.70-1.58 (m, 4H), 1.37-1.17 (m, 56H), 0.88 (t, J=7.0Hz, 6H).
工程8
化合物43-16(860mg、1.02mmol)のDMF溶液(5ml)にピペリジン(0.111ml、1.12mmol、1.1eq.)を加え、80℃で1.5時間撹拌した。室温にて2時間静置した後、生じた析出物をろ取し、n-ヘキサンにて洗浄、減圧下乾燥した。得られた固体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(SiO2:24g、クロロホルム:メタノール=98:2→75:25)により精製し、化合物44-16(198mg、収率31%)を無色固体として得た。
1H-NMR(CDCl3)δ:6.34 (br.s, 2H), 3.48-3.36 (m, 2H), 3.06-2.98 (m, 2H), 2.99 (s, 1H), 2.25-2.18 (m, 4H), 1.70-1.58 (m, 4H), 1.37-1.18 (m, 56H), 0.88 (t, J=7.0Hz, 6H).
工程9
工程2で得られた化合物38(134mg、0.257mmol)のDMF溶液(2mL)に室温でDIEA(225μl、1.29mmol)、HBTU(127mg、0.334mmol)を加え、室温で10分間撹拌した後、45℃で化合物44-16(218mg、17.1mmol)のジクロロメタン溶液(3mL)に加え、45℃で30分間撹拌した。反応液を飽和食塩水にて洗浄、次いで硫酸マグネシウム乾燥後、溶媒を減圧留去した。得られた残渣を酢酸エチルに溶解し、80℃でn-ヘキサンを加えて、目的物を析出させ、ろ取することで化合物45-16(244mg、収率85%)を無色固体として得た。1H-NMRでは63:37のロータマー混合物として観測された。
1H-NMR(CDCl3)δ:(Major) 7.35-7.32 (m, 2H), 7.31-7.16 (m, 7H), 6.85-6.77 (m, 4H), 6.46 (br.s, 1H, -NH), 4.38 (br.s, 1H), 3.781 (s, 6H), 3.72-3.58 (m, 2H), 3.51-3.36 (m, 2H), 3.28-3.08 (m, 3H), 2.78-2.60 (m, 2H), 2.48-1.98 (m, 7H), 1.64-1.56 (m, 4H), 1.35-1.19 (m, 56H), 0.88 (t, J=7.0Hz, 6H). (Minor) 7.35-7.32 (m, 2H), 7.31-7.16 (m, 7H), 6.85-6.77 (m, 4H), 6.46 (br.s, 1H, -NH), 4.53 (br.s, 1H), 3.783 (s, 6H), 3.72-3.58 (m, 2H), 3.51-3.36 (m, 2H), 3.28-3.08 (m, 3H), 2.48-1.98 (m, 7H), 1.64-1.56 (m, 4H), 1.35-1.19 (m, 56H), 0.88 (t, J=7.0Hz, 6H).
工程10
化合物45-16(340mg、0.303mmol)のジクロロメタン溶液(3ml)に室温でトリエチルアミン(0.237ml、1.71mmol、5.6eq.)、無水コハク酸(85mg、0.844mmol、2.8eq.)、DMAP(4mg)を順次加え、45℃で2時間撹拌した後、反応液を減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(SiO2:12g、クロロホルム:メタノール:トリエチルアミン=100:0:1→80:20:1)により精製した後、n-ヘキサンで洗浄することで化合物46-16(246mg、収率66%)を無色固体として得た。1H-NMRでは77:23のロータマー混合物として観測された。
1H-NMR(CDCl3)δ:(Major) 7.38-7.31 (m, 2H), 7.31-7.12 (m, 6H), 7.17-7.11 (m, 1H), 7.00 (br.s, 1H), 6.85-6.77 (m, 4H), 6.74 (br.s, 1H, -NH), 5.33 (br.s, 1H), 4.34 (br.s, 1H), 3.90-3.74 (m, 2H), 3.788 (s, 6H), 3.64-3.37 (m, 2H), 3.35-3.11 (m, 2H), 3.11-2.92 (m, 2H), 2.68-2.07 (m, 11H), 1.68-1.51 (m, 4H), 1.37-1.16 (m, 56H), 0.88 (t, J=6.6Hz, 6H). (Minor) 7.38-7.31 (m, 2H), 7.31-7.12 (m, 6H), 7.17-7.11 (m, 1H), 7.00 (br.s, 1H), 6.85-6.77 (m, 4H), 6.74 (br.s, 1H, -NH), 5.20 (br.s, 1H), 4.17 (br.s, 1H), 3.90-3.74 (m, 2H), 3.678 (s, 6H), 3.64-3.37 (m, 2H), 3.35-3.11 (m, 2H), 3.11-2.92 (m, 2H), 2.68-2.07 (m, 11H), 1.68-1.51 (m, 4H), 1.37-1.16 (m, 56H), 0.88 (t, J=6.6Hz, 6H).
工程1
9-1)に記載の化合物34-16の合成と同様の手法により、化合物47-16を、無色泡状物質として得た(収率78%)。
1H-NMR(CDCl3)δ:7.34 (d, J=8.0Hz, 2H), 7.31-7.21 (m, 6H), 7.18 (m, 1H), 6.87-6.79 (m, 4H), 3.78 (s, 6H), 2.25-2.02 (m, 5H), 1.94-1.84 (m, 1H), 1.64-1.49 (m, 4H), 1.33-1.16 (m, 56H), 0.88 (t, J=7.0Hz, 6H), 0.87 (s, 9H), 0.06 (s, 6H).
工程2
9-1)に記載の化合物35-16の合成と同様の手法により、化合物48-16を無色泡状物質として得た(収率61%)。
ESI-MS (m/z) : 1177 (M+). HPLC Peak RT = 3.64 min.
1H-NMR(CDCl3)δ:7.35 (d, J=7.8Hz, 2H), 7.31-7.16 (m, 7H), 6.87-6.78 (m, 4H), 4.98-4.49 (m, 3H), 4.48-4.31 (m, 2H), 3.91-3.44 (m, 5H), 3.78 (s, 6H), 3.37-3.08 (m, 4H), 2.27-2.11 (m, 5H), 2.08-1.94 (m, 1H), 1.66-1.52 (m, 4H), 1.34-1.21 (m, 56H), 0.88 (t, J=6.7Hz, 6H).
工程3
化合物48-16(624mg、0.529mmol)のジクロロメタン溶液(5ml)に室温でトリエチルアミン(0.330ml、2.39mmol、4.5eq.)、無水コハク酸(106mg、0.159mmol、3.0eq.)、DMAP(13mg、10.6μmol、0.2eq.)を順次加え、室温で12時間撹拌した後、反応液を減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(SiO2:24g、クロロホルム:メタノール:トリエチルアミン=97.5:2.5:1→80:20:1)により精製し、化合物49-16(482mg、収率71%)を無色固体として得た。
化合物49-16の異性体1 (クロロホルム:メタノール=5:1の溶媒で展開したTLCでRf値が大きい異性体) : 1H-NMRでは65:35のロータマー混合物として観測された。
ESI-MS (m/z) : 1277 (M+). HPLC Peak RT = 3.72 min.
1H-NMR(CDCl3)δ:(Major) 7.34 (d, J=7.5Hz, 2H), 7.31-7.14 (m, 7H), 6.83 (d, J=8.3Hz, 4H), 5.45 (br.s, 1H), 4.75 (dd, J=14.1, 8.3Hz, 1H), 4.55-4.38 (m, 2H), 4.33 (m, 1H), 3.79 (s, 6H), 3.72-3.48 (m, 4H), 3.44-3.08 (m, 4H), 2.70-2.44 (m, 4H), 2.38-2.14 (m, 6H), 1.68-1.51 (m, 4H), 1.34-1.21 (m, 56H), 0.88 (t, J=6.7Hz, 6H). (Minor) 7.34 (d, J=7.5Hz, 2H), 7.31-7.14 (m, 7H), 6.83 (d, J=8.3Hz, 4H), 5.20 (br.s, 1H), 4.84 (m, 1H), 4.55-4.38 (m, 2H), 4.33 (m, 1H), 3.79 (s, 6H), 3.72-3.48 (m, 4H), 3.44-3.08 (m, 4H), 2.70-2.44 (m, 4H), 2.38-2.14 (m, 6H), 1.68-1.51 (m, 4H), 1.34-1.21 (m, 56H), 0.88 (t, J=6.7Hz, 6H). 31P-NMR(CDCl3)δ: 58.1
化合物49-16の異性体2 (クロロホルム:メタノール=5:1の溶媒で展開したTLCでRf値が小さい異性体)
ESI-MS (m/z) : 1277 (M+). HPLC Peak RT = 3.72 min.
1H-NMR(CDCl3)δ:7.83 (br.s, 1H), 7.37-7.10 (m, 9H), 6.74 (d, J=8.6Hz, 4H), 5.30 (br.s, 1H), 4.62 (dd, J=14.0, 9.2Hz, 1H), 4.42-4.33 (m, 2H), 4.30 (dd, J=14.0, 9.2Hz, 1H), 3.71 (s, 6H), 2.63-2.34 (m, 4H),2.31-2.21 (m, 1H), 2.16-2.03 (m, 5H), 1.59-1.42 (m, 4H), 1.24-1.09 (m, 56H), 0.81 (t, J=6.7Hz, 6H). 31P-NMR(CDCl3)δ: 57.3
4)の固相樹脂への担持反応と同様の条件に、9-1)で得られた化合物36-16を付すことで化合物50-16を得た。化合物36-16の担持量はDMTrカチオンの比色定量により算出し、担持量が32umol/gの化合物50-16を得た。
なお、同様の方法により、化合物49-nを固相樹脂へ担持させることができる。
4)の固相樹脂への担持反応と同様の条件に、10-1)で得られた化合物46-16を付すことで化合物51-16を得た。化合物46-16の担持量はDMTrカチオンの比色定量により算出し、担持量が33umol/gの化合物51-16を得た。
4)の固相樹脂への担持反応と同様の条件に、米国特許出願公開第2008/0085869号明細書に記載されている化合物54を付すことで化合物55を得た。化合物54の担持量はDMTrカチオンの比色定量により算出し、担持量が90umol/gの化合物55を得た。
工程1
化合物57(Sigma-Aldrich、0.517g、0.952mmol)のDMF溶液(4.9mL)にDIEA(0.447mL、3.46mmol)とHBTU(349mg、1.04mmol)を加えて、室温で30分間撹拌した。その後、化合物17(0.488g、0.865mmol)のDMF溶液を加えて一晩撹拌した。ヘキサン/酢酸エチル=1:1(2x50mL)と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(50mL)で分液抽出操作をした後に有機層を合わせて飽和食塩水(50mL)で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥、ろ過後にロータリーエバポレータ―で減圧濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム:メタノール=100:0→70:30)で精製し、化合物58(0.837g、85%)を無色固体として得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 7.75 (2H, d, J = 7.5 Hz), 7.60 (2H, d, J = 7.4 Hz), 7.42-7.38 (4H, m), 7.32-7.28 (7H, m), 7.24 (1H, s), 7.18 (1H, t, J = 7.3 Hz), 6.81 (4H, d, J = 8.9 Hz), 6.49 (1H, s), 6.08 (1H, s), 5.56 (1H, s), 4.39 (2H, d, J = 6.9 Hz), 4.21 (1H, t, J = 6.7 Hz), 3.79 (6H, s), 3.63-3.52 (15H, m), 3.34-3.28 (4H, m), 3.14 (2H, dd, J = 13.9, 6.4 Hz), 3.03 (2H, d, J = 5.6 Hz), 1.80-1.65 (5H, m), 1.63 (4H, s), 1.43-1.36 (2H, m), 1.31-1.26 (2H, m), 1.18-1.12 (2H, m), 0.84 (9H, s), 0.01 (6H, s).
工程2
化合物58(800mg、0.735mmol)のDMF溶液(8mL)にピペリジン(80uL)を加えて室温で2時間撹拌した。ヘキサン/酢酸エチル=1:4と水で分液抽出を行い、無水硫酸ナトリウムで一晩乾燥した。ろ過の後にロータリーエバポレータ―で減圧濃縮した。アミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム:メタノール=100:0→97:3)で精製し、化合物59(0.178g、0.205mmol)を無色オイル状物質として得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 7.37 (8H, dt, J = 50.4, 5.2 Hz), 7.26-7.18 (2H, m), 6.89 (1H, s), 6.82 (4H, t, J = 5.9 Hz), 6.25 (1H, t, J = 5.1 Hz), 3.81 (6H, s), 3.66-3.53 (15H, m), 3.35 (2H, q, J = 6.0 Hz), 3.16 (2H, dd, J = 13.9, 6.5 Hz), 3.04 (2H, d, J = 5.5 Hz), 2.80 (2H, t, J = 6.7 Hz), 1.80-1.17 (17H, m), 0.85 (9H, s), 0.03-0.01 (6H, m).
工程3
化合物3-18(140mg、0.205mmol)とDMAP(63mg、0.514mmol)をフラスコ内で細かく砕いた後にTHF溶液(1.8mL)とした。ビス(4-ニトロフェニル)カーボネート(156mg、0.514mmol)を加えて55℃で30分間撹拌した。室温まで冷却したのちに、THFを減圧留去し、再度アセトニトリル(10mL)に懸濁した。加熱してほぼ溶液化したのちに、室温まで冷却したところで固体が析出したので、超音波破砕を加えて析出を促進した。析出した固体をろ取し、アセトニトリル(10mL)、水(10mL)、アセトニトリル(10mL)の順に洗浄を行い、最後に真空下で乾燥することで化合物18-18(196mg、0.232mmol)を淡黄色固体として得た。化合物18-18(196mg)をTHF(1.8mL)に溶解し、化合物59(178mg、0.205mmol)とDMAP(25mg、0.205mmol)を加えて55℃で2時間撹拌した。室温まで冷却すると固体が析出したので、アセトニトリル(18mL)を加えて加熱及び超音波破砕を行い、最後に水(1.8mL)を加えて桐山ろ過によって目的化合物60-18(251mg、0.160mmol)を淡黄色固体として得た。
化合物60-18(246mg、0.157mmol)のTHF溶液(4.9mL)を氷冷し、TBAF溶液(1M THF溶液、495uL、0.495mmol)を加え、室温まで昇温しながら30分間撹拌した。溶媒を減圧留去したのちに、得られた粗製物をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルムのみ)で精製し、化合物61-18(192mg、0.132mmol)を無色固体として得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 7.41 (2H, d, J = 7.3 Hz), 7.30 (5H, dd, J = 8.9, 2.1 Hz), 7.21 (1H, t, J = 7.2 Hz), 6.83 (5H, d, J = 8.7 Hz), 6.76 (1H, t, J = 6.2 Hz), 6.44 (1H, t, J = 6.6 Hz), 5.63 (1H, t, J = 5.7 Hz), 4.72-4.66 (1H, m), 3.79 (6H, s), 3.76-3.74 (1H, m), 3.64-3.48 (17H, m), 3.39-3.14 (6H, m), 3.06 (2H, dd, J = 9.0, 7.6 Hz), 2.76 (1H, t, J = 5.8 Hz), 2.50-2.46 (6H, m), 2.19 (6H, t, J = 7.6 Hz), 1.79-1.73 (7H, m), 1.49-1.42 (6H, m), 1.24 (68H, d, J = 11.8 Hz), 0.89-0.87 (6H, t, J = 6.3 Hz).
工程5
化合物61-18(191mg、0.131mmol)のジクロロメタン溶液(1.9mL)にDIEA(0.069mL、0.393mmol)、DMAP(1.6mg、0.013mmol)と無水コハク酸(20mg、0.197mmol)を加えて3時間還流しながら撹拌した。溶媒を減圧留去し、ジオールシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルムのみ)で精製して化合物62-18(201mg、0.129mmol)を無色固体として得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 7.42 (2H, d, J = 7.4 Hz), 7.30 (5H, d, J = 8.7 Hz), 7.19 (1H, t, J = 7.2 Hz), 6.81 (5H, d, J = 8.7 Hz), 6.74 (1H, t, J = 5.8 Hz), 6.26 (1H, t, J = 5.9 Hz), 5.55 (1H, t, J = 5.9 Hz), 4.72-4.67 (1H, m), 3.79 (6H, s), 3.58-3.49 (17H, m), 3.32-3.27 (6H, m), 3.14 (2H, q, J = 6.5 Hz), 3.04 (2H, d, J = 5.4 Hz), 2.49-2.46 (4H, m), 2.20 (5H, t, J = 7.5 Hz), 1.76-1.72 (4H, m), 1.65-1.62 (10H, m), 1.42-1.41 (3H, m), 1.25 (68H, s), 0.88 (6H, t, J = 6.6 Hz).
工程6
化合物62-18(153mg、0.098mmol)をアセトニトリル/ジクロロメタン混合溶液(1:1、10mL)とし、DIEA(0.067mL、0.392mmol)とHBTU(41mg、0.108mmol)を加え、室温で20分間振とう撹拌した。反応液へNative Amino lcaa CPG 1000Å(ChemGenes社)(1.0g)を加え、24時間振とう撹拌した。反応液をろ過後、CPGをアセトニトリルで2回、ジクロロメタンで2回、ジエチルエーテルで2回洗浄した後、減圧下で乾燥した。乾燥したCPGにCapA(PROLIGO社、L840045-06)とCapB(PROLIGO社、L850045-06)の混合液(1:1、20mL)を加えて30分間振とう撹拌した。反応液をろ過後、CPGをアセトニトリルで2回、ジクロロメタンで2回、ジエチルエーテルで2回洗浄した後、減圧乾燥した。化合物62-18の担持量はDMTrカチオンの比色により算出し、担持量が56umol/gの化合物63-18を得た。
本明細書の実施例に利用したオリゴヌクレオチドはAKTA Oligopilot10(GE Healthcare)、NS-8-I(大日本精機)、NS-8-II(大日本精機)を用いて、ホスホロアミダイト法により合成した。モノマーは上記アミダイト合成で得られたアミダイトを用いて、0.1Mアセトニトリル溶液に調製した。カップリング時間は32秒~10分間とし、1つのモノマーの縮合に8~10当量のアミダイト体を用いた。PO酸化には0.02M Oxidizer(Sigma―Aldrich)、ヨウ素/ピリジン/水/=12.7/9/1(w/v/v)を使用し、PS酸化には50mM DDTT((ジメチルアミノ-メチリデン)アミノ-3H-1,2,4-ジチアゾリン-3-チオン)のアセトニトリル/3-ピコリン1/1(v/v)、1/4(v/v)、アセトニトリル/ピリジン1/4(v/v)溶液を用いた。活性化剤はETT activator(5-エチルチオ)-1H-テトラゾール)(Sigma―Aldrich)、キャッピング試薬はCapA、CapB(Sigma―Aldrich)を使用した。脱トリチル化試薬はDeb(3w/v%TCA CH2Cl2 solution)(和光純薬)、Deb(3w/v% Dichloroacetin acid、Toluene Solution)を使用した。
なお、SEQ-321、SEQ-323、SEQ-340、SEQ-343、SEQ-346、SEQ-349、SEQ-352、SEQ-355、SEQ-358は、ジーンデザイン社に化合物22-18を供与し、核酸合成及びオリゴヌクレオチドの精製を委託することで得た。SEQ-316の合成に用いるDMT-ブタンジオール ホスホロアミダイトに関してはChemGene社より購入した。
1)合成アミダイト体からの合成
Biotage社製マイクロウェーブチューブ(2-5ml、10-20ml)に撹拌子、Molecular Sieves 4A 1/16、上記A)で合成した合成アミダイト(例えば、化合物4-n、化合物4-n,o、化合物8-n、化合物10-n等。オリゴヌクレオチドの10~100等量)を入れ、クロロホルム(安定化剤として2-メチル-2-ブテン添加)で0.2Mに調製した。5時間乾燥後、オリゴヌクレオチドが結合した固相(CPG樹脂、ポリスチレン樹脂)、0.25M ETT activator(5-エチルチオ)-1H-テトラゾール)ジクロロメタン溶液(クロロホルムと同量)を加え密閉し、40℃で10分~1時間加熱した。室温へ放冷後、反応溶液をクロロホルムで2倍希釈し、樹脂をろ取した。得られた樹脂をNS-8-I(大日本精機)、NS-8-II(大日本精機)上でPS酸化した。その後乾燥した樹脂を下記の脱保護条件I、IIに付し、望みの脂質結合オリゴヌクレオチドを合成した。
2)脂質を担持した樹脂からの合成
上記A)で合成した脂質を担持した樹脂(例えば、化合物15-n、化合物22-n、化合物50-n、化合物51-n、化合物55、化合物63-n等)を用いて、上記B)と同様の方法で望みの脂質結合オリゴヌクレオチドを合成した。
1) 樹脂からの切り出し、塩基及びリン酸の脱保護
DNAオリゴヌクレオチドの切り出しは28%アンモニア水(SEQ-1、3又は49)又は28%アンモニア水/EtOH4/1(v/v)(SEQ-1、3及び49以外の実施例記載の一本鎖オリゴヌクレオチド)を用いて、室温下で1時間、55℃で5時間振とうした。1μmol合成の際は、アンモニア溶液を1ml用い、5μmol又は10μmol合成の際は、5ml、10mlそれぞれ用いて切り出し反応を行った。樹脂を50%エタノール水で洗浄後、ろ過液を減圧下で1~5mL程度まで濃縮した。
なおRNAを含む配列の場合は、得られた溶液を凍結乾燥し、白色粉末を得た後に、別途下記の2’-TBS基の脱保護反応を行った。
得られた白色粉末に、N-メチルピロリドン/トリエチルアミン/3-フッ化水素トリエチルアミン=6/1/2(v/v)を加えて65℃下で1.5時間撹拌した。反応液に同量のエトキシトリメチルシランを加えて室温下で10分間激しく撹拌すると沈殿物が得られた。2500xg(2分間)にて遠心分離後、有機溶媒層を注意深く除去した。得られた沈殿物にジエチルエーテルを加えて激しく撹拌後、同様に遠心分離を行い有機溶媒を除去して、粗RNA体(白色固体)を得た。
SEQ-1、3又は49等脂質リガンドを導入していないオリゴヌクレオチドは条件1の逆相HPLCで精製を行った。
逆相HPLCの条件
条件1
移動相 A液:100mM TEAA(triethylammoniumacetate pH7.0)水溶液あるいは100mM AcONa水溶液(pH5.4)
B液:アセトニトリル
B濃度グラジエント:10-30%
(条件1-1)
Column:Hydrosphere C18(YMC社製)100x20mml.D、S-5 μm、12 nm
流速:10mL/min
カラム温度:室温
検出UV:260nm
(条件1-2)
Column:Hydrosphere C18(YMC社製)150x10mml.D、S-5 μm、12 nm
流速:4mL/min
カラム温度:室温
検出UV:260nm
脂質リガンドを導入した一本鎖オリゴヌクレオチド(SEQ-1、3及び49以外の実施例記載の一本鎖オリゴヌクレオチド)は条件2の逆相HPLCで精製を行った。
条件2
逆相HPLCの条件
化合物の脂溶性に応じ、開始時のB濃度を20%~50%まで調節した
移動相 A液:100mM TEAA(triethylammoniumacetate pH7.0)水溶液あるいは100mM AcONa水溶液(pH5.4)
B液:アセトニトリル
B濃度グラジエント:20-80%(L4-8、L4-10を有する化合物)、30-60(LToc、Lcholを有する化合物)、30-80%(L4-12、L4-14、L4-16、L4-18、M22-12、M51-16を有する化合物)、40-80%(L4-20、L4-22を有する化合物)、50-80%(M22-18を有する化合物)
(条件2-1)
Column:YMC-Pack C4(YMC社製)100x20mml.D、S-5 μm、12 nm
流速:10mL/min
カラム温度:室温
検出UV:260nm
(条件2-2)
Column:YMC-Pack C4(YMC社製)150x10mml.D、S-5 μm、12 nm
流速:4mL/min
カラム温度:室温
検出UV:260nm
得られたオリゴヌクレオチドはVivaSpin20(MWCO 3000)(Sartorius社製)、アミコンウルトラ(Amicon Ultra)-4 遠心式フィルターユニット-3Kを用いて、限外濾過を繰り返すことでフラクションに含まれる塩成分を除去した。その後、凍結乾燥にて目的とするオリゴヌクレオチドを粉末として得た。なお、TEAA溶媒を用いて精製したオリゴヌクレオチドに対しては100mM酢酸ナトリウム水溶液(20mL)で塩フォームの変換を行った後に脱塩操作を行った。
得られたオリゴヌクレオチドは、UPLC/MS測定による実測分子量が理論分子量と一致することで、目的の配列が合成できていることを確認した。
条件1(SEQ-1、3又は49)
Xevo G2 Tof System(Waters社製)
Column:Aquity OST C18(2.1x50mm)(Waters社製)
移動相 A液:200mM 1,1,1,3,3,3-ヘキサフルオロ-2-プロパノール/8mMトリエチルアミン
B液:メタノール
B濃度グラジエント:10-30%(10min)
温度:50℃
流速:0.2mL/min
条件2(SEQ-1、3及び49以外の実施例記載の一本鎖オリゴヌクレオチド)
Xevo G2 Tof System(Waters社製)
Column:ACQUITY UPLC Protain BEH C4 Column、300Å、1.7μm、2.1mm×100mm、1/pkg(Waters社製)
移動相 A液:200mM 1,1,1,3,3,3-ヘキサフルオロ-2-プロパノール/8mMトリエチルアミン
B液:メタノール
B濃度グラジエント:10-95%(10min)
温度:50℃
流速:0.2mL/min
本発明の脂質結合二本鎖オリゴヌクレオチドは以下のようにして調製した。各オリゴヌクレオチドの100μM水溶液を等モル量混合した後、その後75℃下で5分間加温後、室温まで自然冷却させることで二本鎖核酸を得た。二本鎖形成の確認は、サイズ排除クロマトグラフィーにより実施した。
Column:YMC-PAC Diol-120(4.6x300mm)(YMC社製)
移動相:40%アセトニトリル含有1xPBS溶液
流速0.5mL/min
温度:室温
Lx-nは5’末端に導入した化合物を意味し、それぞれの水酸基に対して各化合物が表記の結合で共有結合していることを示す。Mx-nは3’末端に導入した化合物を意味し、それぞれの水酸基に対して各化合物が表記の結合で共有結合していることを示す。なお、Lx-nにおいて、xは二本鎖を示す化合物4-n若しくは化合物10-n、又は一本鎖を示す化合物8-nの構造に準ずる数字であり、nは炭素鎖に応じた6~28の整数である。Mx-nにおいて、xは二本鎖を示す化合物22-n、化合物49-n、若しくは化合物51-nあるいは一本鎖を示す化合物15-nの構造に準ずる数字であり、nは炭素鎖に応じた6~28の整数である。
(式中、nは6~28の整数である。)
なお、L4-nは上記A)の1-1)で合成した化合物4-nから誘導される基である。L8-nは上記A)の2)で合成した化合物8-nから誘導される基である。L10-nは上記A)の3)で合成した化合物10-nから誘導される基である。
なお、Lcholは上記A)の8-1)で合成した化合物26から誘導される基である。LTocはリンクテクノロジーズ社から購入した化合物5’-Tocopherol-CE-Phosphoramiditeから誘導される基である。
(式中、nは6~28の整数である。)
なお、M15-nは上記A)の4)で合成した化合物15-nから誘導される基、M22-nは上記A)の6)で合成した化合物22-nから誘導される基、M49-nは上記A)の11)で合成した化合物49-nから誘導される基、M51-nは上記A)の13)で合成した化合物51-nから誘導される基である。
(材料及び方法)
レポーターアッセイに用いたHEK-BlueTM hTLR9 cells(invivogen)はHEK293細胞にヒトTLR9遺伝子とNF-kB・AP-1結合領域配列に分泌型アルカリフォスファターゼ遺伝子を結合したレポーター遺伝子が導入され、それぞれが安定して発現する細胞である。アルカリフォスファターゼに対する基質を含むHEK-BlueTM Detection (Invitrogen)に懸濁した本細胞3.6×104細胞を96ウェルプレートに播種し、3nM~30μMの本発明の脂質結合二本鎖オリゴヌクレオチド、既知のCpGオリゴヌクレオチド(ODN2006、SEQ-49)、特許文献1の設計に基づくアジュバント、つまり、脂質リガンドを導入したssCpG ODN(SEQ―142、143又は144)を添加した。37℃、5%CO2 インキュベーター内で16時間培養後、発色した培養上清を用いて620nmの吸光度を測定した。得られた値はTIBCO Spotfireソフトウェアにより解析し、それぞれのオリゴヌクレオチドの50%活性化濃度(EC50)を算出した。
ssCpG ODNを第1の鎖と第2の鎖としてアニーリングすることにより、二本鎖DNA(dsCpG ODN)として投与するとアジュバントとしての特性が失われることが知られている(非特許文献4)ことはすでに述べたとおりである。当該二重鎖核酸アジュバント設計がTLR9アゴニストとして活性を示すかを検討するために、レポーターアッセイによる二本鎖オリゴヌクレオチドの活性評価を行った。
表28及び表29に示されるようにssCpG ODNであるODN2006(SEQ-49)はTLR9アゴニストとして活性を示し、そのEC50値は約467nM(試験1、表28)、約245nM(試験2、表29)であった。これに対してCpGオリゴヌクレオチドとしてODN2006を含む本発明の脂質結合二本鎖オリゴヌクレオチドの活性評価を行ったところ、数十~千数百nM範囲でTLR9アゴニスト活性を示した。表28及び表29に記載の本発明のアジュバントの多くはODN2006と比較して活性向上の傾向にあった。また、SEQ-57、SEQ-59、SEQ-61、SEQ-63、SEQ-65、SEQ-111、SEQ-117、SEQ-135、SEQ-146、SEQ-226、SEQ-282、SEQ-284、SEQ-294、SEQ-324、SEQ-361、SEQ-363の16配列に関してもODN2006と比較して、若干活性低下の傾向ではあるがその差は3倍程度のとどまったため、いずれの本発明の脂質結合二本鎖オリゴヌクレオチドもTLR9アゴニストとして活性を示すことが明らかとなった。
また特許文献1記載のSEQ-2の修飾様式をヒト型のCpGオリゴヌクレオチド配列であるODN2006に適用した場合、TLR9アゴニストとして活性を示すか検討するため、同様に活性評価を行った(SEQ-141、142又は143)。SEQ-142、143又は144は、測定した濃度域においてTLR9の活性化を誘導することができず、EC50値の算出が不可能であった(表28中のn.d.)。このことから特許文献1記載の設計(脂質リガンドを導入したssCpG ODN)は該実施例に示されるようにODN1826(マウス型)において活性を示すが、ODN2006(ヒト型)では活性を示さず、ワクチンのアジュバント及び/又はワクチンそのものとして利用できない設計であることが示唆された。
それに対し、本発明の脂質結合二本鎖オリゴヌクレオチドは、ODN1826だけでなく、ODN2006においても活性を示すことから、CpGオリゴヌクレオチドの配列に関わらずワクチンのアジュバント及び/又はワクチンそのものとして利用可能であることが示唆された。
A)CTL誘導活性の評価
(動物)
C57BL/6JJclマウス(6~8週齢)を日本クレアから導入した。
(ワクチン1の成分)
・OVA257-264ペプチド(SIINFEKL、配列番号:22):SIGMAが合成し、逆相HPLCにより精製したものを購入した。
・本発明のアジュバント又は既知のCpG ODN
(ワクチン2の成分)
・TRP2180-188ペプチド(CSVYDFFVWL、配列番号:23):SIGMAが合成し、逆相HPLCにより精製したものを購入した。
・本発明のアジュバント又は既知のCpG ODN
(ワクチン3の成分)
・OVA257-264ペプチド又はTRP2180-188ペプチド
・Monitanide ISA51(SEPPIC社)
マウスに7日ごとの2回のワクチン接種により特異免疫の成立を行った。それぞれのワクチンは100μgのOVAペプチドと1.57又は4.71nmolの本発明のアジュバント又は既知のCpG ODNを1×PBS中に溶解したものである。作成したワクチン100μLをマウス側腹部に皮下投与した。
(ワクチン2調製)
マウスに7日ごとの2回のワクチン接種により特異免疫の成立を行った。それぞれのワクチンは100μgのTRP2ペプチドと1.57又は4.71nmolの本発明のアジュバント又は既知のCpG ODNを1×PBS中に溶解したものである。作成したワクチン100μLをマウス側腹部に皮下投与した。
(ワクチン3調製)
2mg/mlにPBSで調整したTRP2ペプチドと1:1の割合でMontanide(上記ワクチン成分3)を注射筒とポンピングコネクターを用いて混和してエマルションを作成した。作成されたワクチンエマルション100μLをマウス側腹部に7日ごとに2回皮下投与した。
2回目のワクチン接種から7日後に採血を行い、赤血球をBD Pharm Lyse (BD pharmingen社)により除去し、次にFACS緩衝液(1%ウシ胎仔血清、2mM EDTA含有PBS)に懸濁し、抗マウスCD16/32モノクローナル抗体(BioXcell社)を添加し、30分、4℃におくことによりFcレセプターのブロッキングを行った。次にワクチン抗原に対応したPE標識H-2Kbテトラマー(T-Select H-2Kb OVA Tetramer-SIINFEKL 又は T-Select H-2Kb TRP-2 Tetramer-SVYDFFVWL;いずれも医学生物学研究所より購入)とAlexa647標識抗CD8抗体(医学生物学研究所)を添加し、45分室温におくことにより染色を行った。次にDAPI(Invitrogen)を用いて染色し、FACS緩衝液により2回洗浄した。FACS緩衝液に再懸濁し、FACS verseフローサイトメーター(BD bioscience社)とFACSuiteソフトウェア(BD bioscience社)を用いて解析した。解析はDAPIの陰性画分をゲーティングしたのち、前方散乱と側方散乱を指標により白血球画分を規定した。白血球画分の内、Alexa647-CD8・PE-H-2Kb Tetramerの両陽性細胞をCTLと規定して、白血球中におけるCTLの割合で評価した。
CTL誘導率の指標の算出法
実験ごとに各群の平均CTL誘導率を算出後、対照化合物であるssCpG ODN、ODN1826(SEQ-1)及びODN2006(SEQ-49)のCTL誘導率の平均値に対する比を算出した。
ODN1826を含むアジュバントの場合
(アジュバント群のCTL誘導率の平均)/(ODN1826群のCTL誘導率の平均)=平均値に対する比
ODN2006を含むアジュバントの場合
(アジュバント群のCTL誘導率の平均)/(ODN2006群のCTL誘導率の平均)=平均値に対する比
ssCpG ODNのCTL誘導率を1とした場合の各アジュバントのCTL誘導率を示すため、数値が大きくなるほどCTL誘導率が高いことを示す。
TRP2ペプチドワクチンによる免疫成立後、TRP2蛋白を発現するマウスメラノーマであるB16F10細胞(ATTC社)を皮下移植することにより抗腫瘍効果の評価を行った。実施例3A)と同様の手法により7日ごと2回のワクチン投与により免疫が成立したマウスの末梢血中テトラマー陽性率を観察した翌日にB16F10細胞(1×105細胞/マウス)を右側肩部に皮下移植した。生着した腫瘍の長径と短径を2~3日おきに測定し、
(長径×短径2)/2
の計算式により腫瘍の体積を算出した。
抗腫瘍効果の指標の算出法
ODN1826を含むアジュバントの場合
100-(アジュバント群の平均腫瘍サイズ)/(ODN1826群の平均腫瘍サイズ)
ODN2006を含むアジュバントの場合
100-(アジュバント群の平均腫瘍サイズ)/(ODN2006群の平均腫瘍サイズ)
数値の大きな化合物ほど強い抗腫瘍活性を有することを示す。
結果1-A:本発明のアジュバントと既知アジュバントのCTL誘導率の比較
ODN1826(SEQ―1)及びTRP2ペプチドを用いてマウスを免疫したところ、TRP2特異的なCTLが誘導された。dsCpG ODN(SEQ―4)を用いた場合、TRP2特異的なCTL誘導率はODN1826と比較して、0.46倍に低下した。つまり、二本鎖にすることによって、一本鎖アジュバントと比較してCTL誘導率が低下する結果となった。このことから非特許文献4等に記載の通り、CpGオリゴヌクレオチドを単純に二本鎖にするだけでは免疫賦活活性は低下することが分かった。一方で、本発明のアジュバント、つまり、脂質を結合した二本鎖オリゴヌクレオチドアジュバント(SEQ―16)を用いて免疫したところ、ODN1826と比較して、CTL誘導率が1.46倍に向上した。よって、本発明のアジュバントに、予想もしない活性向上が見られることが分かった。結果を表31に示す。
ODN1826(SEQ―1)及びTRP2ペプチドを用いてマウスを免疫したところ、B16F10細胞の生着阻害効果と増殖抑制効果はほとんど見られなかった。また、dsCpG ODN(SEQ―4)を用いた場合にも、B16F10細胞の生着阻害効果と増殖抑制効果はほとんど見られなかった。一方で、本発明のアジュバント(SEQ―16)を用いた場合、移植後14日目において、ODN1826と比較して43%という強力なB16F10細胞の生着阻害効果及び増殖抑制効果を示した。結果を図1に示す。
10個~20個の炭素原子を含むアシル鎖を2本含む脂質をリガンドとして有する本発明のアジュバントの活性を、OVAペプチドを用いて調べた。SEQ-12(10個の炭素原子)ではCTLの誘導率及び腫瘍の抑制率がODN1826(SEQ-1)と比較して低下することが分かった。一方でSEQ-14(14個の炭素原子)、SEQ-6(18個の炭素原子)、SEQ-16(20個の炭素原子)と鎖長を伸長するにつれてCTL誘導率が向上する傾向が見られた。さらに腫瘍の抑制率においてもSEQ-14においてその腫瘍の増殖を移植後14日目において、ODN1826と比較して94%程度抑制し、SEQ-6及びSEQ-16に至っては移植後14日目においても、腫瘍の増殖を完全に抑制した。結果を表32に示す。
20個の炭素原子を含むアシル鎖を2本含む脂質をリガンドとして有するCpGオリゴヌクレオチド3’末端に8個又は12個の炭素原子を含む一本鎖脂質をさらに導入した本発明のアジュバント(SEQ―46及びSEQ―48)の活性を、TRP2ペプチドを用いて調べた。ODN1826(SEQ-1)と比較して、CTLの誘導率が、ともに約2.8倍向上した。結果を表33に示す。
本発明のアジュバント、SEQ―46又はSEQ―48と、TRP2ペプチドを用いてマウスを免疫したところ、移植後13日目において、ODN1826(SEQ―1)と比較して、それぞれ52%、43%という強いB16F10細胞の生着阻害効果及び増殖抑制効果を示した。結果を図2に示す。
二本鎖オリゴヌクレオチドアジュバント設計において、活性本体であるCpGオリゴヌクレオチドをリンパ節で放出する必要がある。二本鎖のかい離の速度はその二本鎖の熱的な安定性に比例しており、二本鎖構造の相補部位が多いほど二本鎖として安定に存在する。そこで、相補鎖の鎖長が異なる本発明のアジュバントの活性を、TRP2ペプチドを用いて調べた。ODN1826(20mer)に対し、相補鎖が10mer、つまり、CpGオリゴヌクレオチドに対して相補鎖が50%の長さであるアジュバント(SEQ-8)及び相補鎖が15mer、つまり、75%の長さであるアジュバント(SEQ-10)を用いた。SEQ-8では約1.2倍、SEQ-10では2.5倍と、ともにODN1826(SEQ-1)と比較して優位にCTL誘導を向上させた。結果を表34に示す。
特許文献1記載の脂質リガンドを導入したssCpG ODN(SEQ―2)とTRP2ペプチドを用いてマウスを免疫したところ、腫瘍抑制率は、移植後12日目において、ODN1826(SEQ―1)と比較して、約3.5%であった。一方で、本発明のアジュバントである、10merの相補鎖を有するSEQ-8は、移植後12日目において、ODN1826と比較して、約50%の腫瘍抑制率を示した。さらに15merの相補鎖を有するSEQ-10は、移植後12日目において、ODN1826と比較して約76%という強力なB16F10細胞の生着阻害効果及び増殖抑制効果を示した。結果を図3に示す。
ODN1826(20mer)に対し、相補鎖の鎖長が10merから20mer、つまり、CpGオリゴヌクレオチドに対して相補鎖が50~100%である本発明のアジュバントの活性を、TRP2ペプチドを用いて調べた。相補鎖が14mer(SEQ-28)、15mer(SEQ-26)、17mer(SEQ-22)、19mer(SEQ-18)及び20mer(SEQ-16)のアジュバントは、ODN1826(SEQ-1)と比較してCTL誘導率の向上が見られた。特に、19mer(SEQ-18)、17mer(SEQ-22)及び15mer(SEQ-26)のアジュバントではODN1826(SEQ-1)に対して3倍程度のCTLの誘導が見られた。結果を表35に示す。
ODN1826(SEQ-1)、脂質リガンドを導入したssCpG ODN(SEQ―2)、本発明のアジュバント(SEQ-26)、ペプチドワクチンのアジュバントとして臨床治験において多く用いられているアジュバントであるモンタナイドの活性を、TRP2ペプチドを用いて比較した。SEQ-2及びSEQ-26は、ODN1826と比較して高いCTL誘導率を示した。一方でモンタナイドのCTL誘導率はODN1826と比較して7分の1に低下した。結果を表36に示す。
本発明のアジュバント、SEQ―26とTRP2ペプチドを用いてマウスを免疫したところ、移植後12日目において、ODN1826(SEQ―1)と比較して、76.8%非常に強力なB16F10細胞の生着阻害効果と増殖抑制効果を示した。脂質リガンドを導入したssCpG ODN(SEQ―2)の腫瘍抑制率は移植後12日目において、ODN1826と比較して、64.3%であった。つまり、本発明のアジュバントは、SEQ-2のアジュバントより強いB16F10細胞の生着阻害効果と増殖抑制効果を示した。一方でモンタナイドをアジュバントとして用いた場合、まったく抗腫瘍活性を示さなかった。結果を図4に示す。
相補鎖の核酸モノマーが、RNA、2’-OMe―RNA又は2’-F―RNAである本発明のアジュバントの活性を、TRP2ペプチドを用いて調べた。核酸モノマーが全てRNAであるアジュバント(SEQ-40)や全て2’-F―RNAであるアジュバント(SEQ-42)ではODN1826(SEQ―1)と比較して、大きなCTL誘導率の向上が見られなかった。一方で、2’-OMe―RNAを核酸モノマーとして有するアジュバント(SEQ―38及びSEQ―44)では、それぞれ、ODN1826と比較して、2.9倍、2.4倍のCTL誘導率の向上が見られた。これら結果から、2’-OMe―RNAは本発明のアジュバントの核酸モノマーとしてDNAと同様に有用であることが示された。結果を表37に示す。
2’-OMe―RNAを核酸モノマーとして有する本発明のアジュバント(SEQ―38)とTRP2ペプチドを用いてマウスを免疫したところ、移植後14日目において、ODN1826(SEQ―1)と比較して、約86.2%という非常に強力なB16F10細胞の生着阻害効果と増殖抑制効果を示した。脂質リガンドを導入したssCpG ODN(SEQ―2)の腫瘍抑制率は、移植後14日目において、ODN1826と比較して、約72.6%であった。つまり、本発明のアジュバントは、SEQ-2のアジュバントより強いB16F10細胞の生着阻害効果と増殖抑制効果を示した。また、SEQ-38を短鎖化したアジュバント(SEQ-44)や、2’-F―RNAを核酸モノマーとして有するアジュバント(SEQ-42)もB16F10細胞の生着阻害効果と増殖抑制効果を示した。一方で、RNAを核酸モノマーとして有するアジュバント(SEQ―40)は、B16F10細胞の生着阻害効果と増殖抑制効果を全く示さなかった。結果を表37及び図5に示す。
結果8-A:相補鎖の鎖長が異なる本発明のアジュバント又はリンカーを有する本発明のアジュバントのCTL誘導率
ODN2006(SEQ-49、24mer)及び本発明のアジュバントの活性を、TRP2ペプチドを用いて比較した。相補鎖の鎖長が24mer、つまり、CpGオリゴヌクレオチドに対して相補鎖が100%の長さであるアジュバント(SEQ-51)及び、相補鎖の鎖長が15mer、つまり、CpGオリゴヌクレオチドに対して相補鎖が62.5%の長さであるアジュバント(SEQ-61)を用いた。SEQ-51及びSEQ-61は、ともに、ODN2006と比較して5倍以上の高いCTL誘導を示した。さらに、リンカーとしてdTdTを有するアジュバント(SEQ-63)及びdGdGを有するアジュバント(SEQ-65)を用いた。SEQ-63及びSEQ-65は、ともに、ODN2006と比較して10倍程度の非常に高いCTL誘導を示した。結果を表38に示す。
ODN2006(SEQ―49)及びTRP2ペプチドを用いてマウスを免疫したところ、B16F10細胞の生着阻害効果と増殖抑制効果はほとんど見られなかった。一方で、本発明のアジュバントを用いた場合、CpGオリゴヌクレオチドに対して相補鎖が100%の長さであるアジュバント(SEQ-51)では移植後10日目において、ODN2006と比較して、20%のB16F10細胞の生着阻害効果と増殖抑制効果が見られた。また、CpGオリゴヌクレオチドに対して相補鎖が62.5%の長さであるアジュバント(SEQ-61)、リンカーとしてdTdTを有するアジュバント(SEQ-63)及びdGdGを有するアジュバント(SEQ-65)ではいずれも移植後10日目において、ODN2006と比較して、50%程度のB16F10細胞の生着阻害効果と増殖抑制効果が見られた。結果を図6に示す。
相補鎖の核酸モノマーが2’-OMe―RNAである本発明のアジュバントの活性をTRP2を用いて調べた。相補鎖の鎖長が24mer、つまり、CpGオリゴヌクレオチドに対して相補鎖が100%の長さであるアジュバント(SEQ-67)及び、相補鎖の鎖長が15mer、つまり、CpGオリゴヌクレオチドに対して相補鎖が62.5%の長さであるアジュバント(SEQ-69)を用いた。SEQ-67及びSEQ-69はそれぞれ、ODN2006(SEQ-49)と比較して1.4倍、1.2倍のCTL誘導を示した。結果を表39に示す。
2’-OMe―RNAを核酸モノマーとして有する本発明のアジュバントとTRP2ペプチドを用いてマウスを免疫したところ、CpGオリゴヌクレオチドに対して相補鎖が100%の長さであるアジュバント(SEQ-67)では移植後10日目においてODN2006(SEQ-49)と比較して、約75%という非常に強力なB16F10細胞の生着阻害効果と増殖抑制効果を示した。CpGオリゴヌクレオチドに対して相補鎖が62.5%の長さであるアジュバント(SEQ-69)においても、移植後10日目においてODN2006と比較して、約20%程度のB16F10細胞の生着阻害効果と増殖抑制効果が見られた。結果を図7に示す。
これらから、ODN2006に対しても、2’-OMe―RNAは本発明のアジュバントの核酸モノマーとしてDNAと同様に有用であることが示された。
ODN2006(SEQ―49)及びSEQ―121の癌抗原ペプチド非存在下における抗原特異的CTL誘導および抗腫瘍効果を評価した。実施例3のA)及びB)と同様に癌抗原ペプチド非添加のワクチンを投与した場合の効果を検証した。SEQ―49及びSEQ―121においていずれも抗原特異的CTLの値は検出限界以下であった。一方で抗腫瘍効果については、移植後12日目において、ODN2006と比較して、SEQ―121では85.3%のB16F10細胞の生着阻害効果と増殖抑制効果が見られた。この結果からSEQ―121は単剤でも抗腫瘍効果を発揮する治療ワクチンとしての応用が期待される(表69、図14)。
A)単回皮下刺激性試験
単回皮下投与1日及び1、4週後の解剖時の皮膚について、肉眼検査、病理組織学的検査を実施し、本発明化合物の皮下刺激性を評価した。
本発明化合物をラットの肩甲骨間背部中央に皮下投与した。投与1日及び1、4週後の解剖時(イソフルラン麻酔、放血安楽死)に投与部位の皮膚を採取し、肉眼的に観察した後、10%中性緩衝ホルマリン液で固定した。固定された皮膚は常法に従って、切り出し、包埋、薄切を行い、Hematoxylin-eosin(HE)染色切片を作成した。作成されたHE染色切片を病理観察者が光学顕微鏡下で観察し、組織学的所見を記録した。病理所見の変化の強さはMinimal;±、Mild;+、Moderate;2+、Marked;3+の4段階で評価した。なお、グレードをつけることが適切でない所見の場合にはPositiveと記録した。
本発明のアジュバントの医薬品としての安全性を検証するために、臨床でアジュバントとして用いられているモンタナイドや公知のアジュバントであるAmph1826(SEQ-2)、ODN2006(SEQ-49)との皮下刺激性を比較した。
モンタナイドはミネラルオイルと界面活性剤からなるアジュバントで水系製剤とのエマルション作製によりペプチドワクチンのアジュバントとして臨床治験などに使用されている。全身性の安全性懸念については非常に高い安全性プロファイルを持つアジュバントであるものの、投与局所におけるエマルション滞留に伴う皮膚硬結の発生が問題点として挙げられている。本試験においては二重鎖オリゴヌクレオチドの投与局所反応に関してモンタナイドとの比較を行い、局所反応が低いアジュバントとなりうるかどうかについて検討した。
モンタナイド、SEQ-2、SEQ-49又は本発明のアジュバント(SEQ-61、SEQ-119、SEQ-121、SEQ-170、SEQ-192、SEQ-216)のラット単回皮下刺激性試験を行った。モンタナイドは、生理食塩液と1:1で乳化したエマルションを1mL/site投与した。SEQ-2、SEQ-49又は本発明のアジュバントはリン酸緩衝生理食塩水に溶解させ、それぞれ4.71、15.7、47.1nmol/1mL/site投与した。
その結果、モンタナイドは、投与1日後、1週間後及び4週間後のいずれにおいても皮下に肉眼的には白色物貯留あるいは白色結節として、組織学的には嚢胞様構造として確認され、吸収/分解/排泄されていないことが明らかとなった。皮下に留まったモンタナイドは投与1日後から投与4週間後まで炎症を惹起し続けており、投与1日後では好中球浸潤及び水腫として、投与1週間後では好中球浸潤、水腫が継続するものの、炎症がやや慢性化し、肉芽腫性炎として認められた。投与4週間後ではモンタナイドを被包化する分厚い線維性被膜が形成され、炎症は投与1週間後と比較してやや軽減していたが、投与4週間後においてもなお、好中球浸潤や水腫が継続する個体も認められた。
SEQ-2は投与1日後及び1週間後において、炎症細胞の浸潤、水腫又は痂皮が見られ、投与4週間後においても、皮膚の炎症が回復せず、単球/マクロファージ系の持続的活性化による肉芽腫性炎が見られた。
SEQ-49及び本発明のアジュバントであるSEQ-61、SEQ-119、SEQ-121、SEQ-170、SEQ-192、SEQ-216は、投与1日後では皮下に好中球浸潤を主体とする急性炎症が認められたが、投与1週間後では皮下から真皮において、リンパ球・マクロファージを主体とする炎症が認められ、投与4週間後では炎症はほぼ収束していた。なおSEQ-119、SEQ-121、SEQ-170については、投与4週間後の皮下刺激性評価を実施していないが、SEQ-119、SEQ-121、SEQ-170及びSEQ-61の投与1日後及び1週間後における皮下刺激性を比較すると、SEQ-61と同等もしくはより軽度であった。このことからSEQ-119、SEQ-121、SEQ-170についても、投与4週間後には炎症がほぼ完全に収束していると考えられた。
表70~72に投与1日後の結果、表73~75に投与1週後の結果、表76及び77に投与4週後の結果を示す。なお、表中の注釈は以下の通りである。
1)所見の後の数値は発現例数。
2)所見の後の数値はスコア。スコアは各個体のグレードをMinimal;1、Mild;2、Moderate;3とし、その合計を算出。
単回皮下投与1日及び1、4週後の解剖時の皮膚について、肉眼検査、病理組織学的検査を実施し、本発明のアジュバントの皮内刺激性を評価する。
本発明のアジュバントをラットの背部皮膚に皮下投与する。以降は実施例5のA)と同様に行う。
感染症ワクチンでは、抗原とアジュバントを投与しその免疫動物においてBリンパ球からの抗体産生を促した場合、感染症からの予防及び治療効果が期待できる。そこで、本アジュバントの感染症ワクチンへの応用を期待して、Bリンパ球からの抗体産生を評価した。抗原としては緑膿菌であるPCRV抗原を用いて検討を行った。なお、緑膿菌PCRV抗原にはワクチン効果があることが既に報告されている(Moriyama et al.、Infect. Immun.、 Sep.2001、vol. 69、no. 9、 5908-5910)ことから、アジュバントによる抗体産生誘導の効果はPCRV抗原投与群との比較によって評価した。対照群として、Freund’sアジュバントを用いた。Freund’sアジュバントは、熱殺傷した結核菌をパラフィンオイルとオレイン酸マンニドから成るオイルに混合したアジュバントであり、非臨床において強力な抗体産生を誘導するアジュバントとして知られている。Freund’sアジュバントは、非臨床における効果は強力であるが、副作用の懸念から臨床での使用は禁止されている(The European Agancy for the Evaluation of Medical Products Evaluation of Medicines for Human Use, 25 March 2004、インターネット(URL:http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Scientific_guideline/2009/11/WC500015469.pdf))。
Claims (16)
- 第1の鎖が、8~50塩基のCpGオリゴヌクレオチドであり、
第2の鎖が、該第1の鎖にハイブリダイズ可能な配列を含む8~60塩基のオリゴヌクレオチド(但し、RNAオリゴヌクレオチドを除く)であり、
第2の鎖の長さが、第1の鎖の長さに対して50%以上の長さであり、
第2の鎖に炭素数12~30の炭化水素鎖を含む脂質がリンカーを介して又は介さずに結合している二本鎖オリゴヌクレオチド。 - 第2の鎖のオリゴヌクレオチドが、DNAヌクレオシド及び/又はヌクレオシド誘導体が結合したオリゴヌクレオチドである、請求項1に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
- ヌクレオシド誘導体が、糖の2’位に置換基を有するヌクレオシド及び/又は糖の4’位と2’位との間に架橋構造を有するヌクレオシドである、請求項2に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
- 糖の4’位と2’位との間に架橋構造が、4’-(CH2)m-O-2’(mは1~4の整数)である、請求項3記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
- 脂質が、ジアシル脂質である、請求項1~4いずれかに記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
- 脂質が、第2の鎖の3’末端及び/又は5’末端に結合している、請求項1~5いずれかに記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
- 脂質が、リンカーを介して結合している、請求項1~6いずれかに記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
- 該リンカーが、オリゴヌクレオチドリンカーである、請求項7記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
- 該リンカーが、-(dX1)u-(ここで、X1はそれぞれ独立して、A、G、C又はTであり、uは1~8の整数である)である、請求項8記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
- SEQ-61、SEQ-119、SEQ-121、SEQ-170及びSEQ-192からなる群から選択される、請求項1~9記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
- SEQ-59、SEQ-166、SEQ-168、SEQ-216、SEQ-272、SEQ-280、SEQ-290、SEQ-294、SEQ-310、SEQ-373、及びSEQ-384 からなる群から選択される、請求項1記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
- 請求項1~11いずれかに記載の二本鎖オリゴヌクレオチドを含む、医薬組成物。
- 抗原をさらに含む、請求項12記載の医薬組成物。
- 請求項1~11いずれかに記載の二本鎖オリゴヌクレオチドを投与することを特徴とする、癌又は感染性疾患の治療又は予防方法。
- 癌又は感染性疾患の治療又は予防剤を製造するための、請求項1~11いずれかに記載の二本鎖オリゴヌクレオチドの利用。
- 癌又は感染性疾患を治療又は予防するための、請求項1~11いずれかに記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。
Priority Applications (9)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201680069814.8A CN108472358B (zh) | 2015-09-30 | 2016-09-29 | 具有免疫赋活活性的核酸衍生物 |
MX2018002998A MX2018002998A (es) | 2015-09-30 | 2016-09-29 | Derivado de acido nucleico que tiene actividad inmunoestimuladora. |
KR1020187012107A KR102230325B1 (ko) | 2015-09-30 | 2016-09-29 | 면역 부활 활성을 갖는 핵산 유도체 |
JP2017543538A JP6583864B2 (ja) | 2015-09-30 | 2016-09-29 | 免疫賦活活性を有する核酸誘導体 |
RU2018115800A RU2730871C1 (ru) | 2015-09-30 | 2016-09-29 | Производное нуклеиновой кислоты, обладающее иммуностимулирующей активностью |
EP16851711.8A EP3357507A4 (en) | 2015-09-30 | 2016-09-29 | NUCLEIC ACID DERIVATIVE WITH IMMUNOSTIMULATING EFFECT |
AU2016332266A AU2016332266B2 (en) | 2015-09-30 | 2016-09-29 | Nucleic acid derivative having immunostimulatory activity |
CA3000617A CA3000617C (en) | 2015-09-30 | 2016-09-29 | Nucleic acid derivative having immunostimulatory activity |
US15/907,920 US10940201B2 (en) | 2015-09-30 | 2018-02-28 | Nucleic acid derivative having immunostimulatory activity |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2015192565 | 2015-09-30 | ||
JP2015-192565 | 2015-09-30 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PCT/JP2017/013025 Continuation WO2018179172A1 (ja) | 2015-09-30 | 2017-03-29 | 免疫賦活活性を有する核酸誘導体 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
US15/907,920 Continuation US10940201B2 (en) | 2015-09-30 | 2018-02-28 | Nucleic acid derivative having immunostimulatory activity |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
WO2017057540A1 true WO2017057540A1 (ja) | 2017-04-06 |
Family
ID=58423651
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PCT/JP2016/078765 WO2017057540A1 (ja) | 2015-09-30 | 2016-09-29 | 免疫賦活活性を有する核酸誘導体 |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP3357507A4 (ja) |
JP (1) | JP6583864B2 (ja) |
KR (1) | KR102230325B1 (ja) |
CN (1) | CN108472358B (ja) |
AU (1) | AU2016332266B2 (ja) |
CA (1) | CA3000617C (ja) |
MX (1) | MX2018002998A (ja) |
RU (1) | RU2730871C1 (ja) |
WO (1) | WO2017057540A1 (ja) |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2018181428A1 (ja) | 2017-03-29 | 2018-10-04 | 塩野義製薬株式会社 | 核酸医薬及び多分岐脂質の複合体 |
WO2019131719A1 (ja) * | 2017-12-27 | 2019-07-04 | 神戸天然物化学株式会社 | 高脂溶性ホスホラミダイトの製造 |
JP2020516305A (ja) * | 2017-04-18 | 2020-06-11 | チャンチュン ファープ バイオテクノロジー カンパニー リミテッド | 免疫調節ポリヌクレオチド及びその使用 |
CN112041297A (zh) * | 2018-04-23 | 2020-12-04 | 株式会社Enzychem生命科学 | 甘油衍生物、其制备方法以及包含其作为有效成分的免疫调节剂 |
WO2020246443A1 (ja) | 2019-06-03 | 2020-12-10 | 塩野義製薬株式会社 | 二分岐脂質結合オリゴヌクレオチドの製造方法及び中間体 |
WO2021193900A1 (ja) | 2020-03-27 | 2021-09-30 | 公立大学法人北九州市立大学 | ポリヌクレオチド-ペプチドコンジュゲートを含む免疫誘導剤およびそれを含む医薬組成物 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001012804A2 (en) * | 1999-08-13 | 2001-02-22 | Hybridon, Inc. | MODULATION OF OLIGONUCLEOTIDE CpG-MEDIATED IMMUNE STIMULATION BY POSITIONAL MODIFICATION OF NUCLEOSIDES |
JP2005526497A (ja) * | 2002-02-04 | 2005-09-08 | ビオミラ,インコーポレーテッド | 免疫刺激性、共有結合性脂質化オリゴヌクレオチド |
JP2012500827A (ja) * | 2008-08-28 | 2012-01-12 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | ワクチン |
JP2015514108A (ja) * | 2012-04-05 | 2015-05-18 | マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー | 免疫刺激組成物およびその使用方法 |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2338750C2 (ru) * | 2002-08-19 | 2008-11-20 | Коли Фармасьютикал Груп, Инк. | ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩИЕ ФОСФОРТИОАТНЫЕ CpG-ОЛИГОНУКЛЕОТИДЫ, СОДЕРЖАЩИЕ ФОСФОДИЭФИРНЫЕ СВЯЗИ, СПОСОБ ИММУНОМОДУЛЯЦИИ, СПОСОБ СТИМУЛИРОВАНИЯ ИММУННОГО ОТВЕТА |
CA2589406A1 (en) * | 2004-12-09 | 2006-06-15 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inducing an immune response in a mammal and methods of avoiding an immune response to oligonucleotide agents such as short interfering rnas |
GB0605247D0 (en) * | 2006-03-15 | 2006-04-26 | Chiron Srl | Compositions and methods for immunisation |
MX359674B (es) * | 2008-11-10 | 2018-10-05 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Lipidos y composiciones novedosas para el suministro de terapeuticos. |
US20110305770A1 (en) * | 2008-11-17 | 2011-12-15 | Enzon Pharmaceuticals, Inc. | Releasable polymeric lipids for nucleic acids delivery system |
RU2477753C2 (ru) * | 2008-12-09 | 2013-03-20 | Коули Фармасьютикал Груп, Инк. | Иммуностимулирующие олигонуклеотиды |
MX337723B (es) * | 2008-12-09 | 2016-03-15 | Pfizer Vaccines Llc | Vacuna de peptido ch3 de ige. |
WO2014134698A1 (en) * | 2013-03-06 | 2014-09-12 | Gomis Susantha Muhandiramge | Cpg oligonucleotide formulations and methods and uses thereof |
WO2015105083A1 (ja) * | 2014-01-07 | 2015-07-16 | 塩野義製薬株式会社 | アンチセンスオリゴヌクレオチド及び糖誘導体を含む二本鎖オリゴヌクレオチド |
-
2016
- 2016-09-29 RU RU2018115800A patent/RU2730871C1/ru active
- 2016-09-29 CA CA3000617A patent/CA3000617C/en active Active
- 2016-09-29 WO PCT/JP2016/078765 patent/WO2017057540A1/ja active Application Filing
- 2016-09-29 EP EP16851711.8A patent/EP3357507A4/en active Pending
- 2016-09-29 CN CN201680069814.8A patent/CN108472358B/zh active Active
- 2016-09-29 MX MX2018002998A patent/MX2018002998A/es active IP Right Grant
- 2016-09-29 AU AU2016332266A patent/AU2016332266B2/en active Active
- 2016-09-29 KR KR1020187012107A patent/KR102230325B1/ko active IP Right Grant
- 2016-09-29 JP JP2017543538A patent/JP6583864B2/ja active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001012804A2 (en) * | 1999-08-13 | 2001-02-22 | Hybridon, Inc. | MODULATION OF OLIGONUCLEOTIDE CpG-MEDIATED IMMUNE STIMULATION BY POSITIONAL MODIFICATION OF NUCLEOSIDES |
JP2005526497A (ja) * | 2002-02-04 | 2005-09-08 | ビオミラ,インコーポレーテッド | 免疫刺激性、共有結合性脂質化オリゴヌクレオチド |
JP2012500827A (ja) * | 2008-08-28 | 2012-01-12 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | ワクチン |
JP2015514108A (ja) * | 2012-04-05 | 2015-05-18 | マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー | 免疫刺激組成物およびその使用方法 |
Non-Patent Citations (7)
Title |
---|
ANDREWS, C.D. ET AL.: "Conjugation of lipid and CpG-containing oligonucleotide yields an efficient method for liposome incorporation", BIOCONJUG. CHEM., vol. 22, no. 7, 2011, pages 1279 - 1286, XP055372250 * |
LIU, H. ET AL.: "Structure-based programming of lymph-node targeting in molecular vaccines", NATURE, vol. 507, no. 7493, 2014, pages 519 - 522, XP055229918 * |
PARK, B.K. ET AL.: "The production and immunostimulatory activity of double-stranded CpG-DNA", BMB REPORTS, vol. 43, no. 3, 2010, pages 164 - 169, XP055372242 * |
RATTANAKIAT, S. ET AL.: "Self-assembling CpG DNA nanoparticles for efficient antigen delivery and immunostimulation", EUR. J. PHARMACEUTICAL SCIENCES, vol. 47, no. 2, 2012, pages 352 - 358, XP055141331 * |
See also references of EP3357507A4 * |
SHIVAHARE, R. ET AL.: "Combination of liposomal CpG oligodeoxynucleotide 2006 and miltefosine induces strong cell -mediated immunity during experimental visceral leishmaniasis", PLOS ONE, vol. 9, no. 4, 2014, pages e94596-1 - 12, XP055372246 * |
ZELENAY, S. ET AL.: "Immunostimulatory effects of plasmid DNA and synthetic oligodeoxynucleotides", EUR. J. IMMUNOL., vol. 33, 2003, pages 1382 - 1392, XP009103892 * |
Cited By (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2018181428A1 (ja) | 2017-03-29 | 2018-10-04 | 塩野義製薬株式会社 | 核酸医薬及び多分岐脂質の複合体 |
US11638717B2 (en) * | 2017-03-29 | 2023-05-02 | Shionogi & Co., Ltd. | Complex of nucleic acid medicine and multibranched lipid |
JP2020516305A (ja) * | 2017-04-18 | 2020-06-11 | チャンチュン ファープ バイオテクノロジー カンパニー リミテッド | 免疫調節ポリヌクレオチド及びその使用 |
EP3612633A4 (en) * | 2017-04-18 | 2021-04-28 | Changchun Huapu Biotechnology Co., Ltd. | IMMUNOMODULATORY POLYNUCLEOTIDES AND USES THEREOF |
JP7251017B2 (ja) | 2017-04-18 | 2023-04-04 | チャンチュン ファープ バイオテクノロジー カンパニー リミテッド | 免疫調節ポリヌクレオチド及びその使用 |
JP7229539B2 (ja) | 2017-12-27 | 2023-02-28 | 神戸天然物化学株式会社 | 高脂溶性ホスホラミダイトの製造 |
WO2019131719A1 (ja) * | 2017-12-27 | 2019-07-04 | 神戸天然物化学株式会社 | 高脂溶性ホスホラミダイトの製造 |
US11891412B2 (en) | 2017-12-27 | 2024-02-06 | Knc Laboratories Co., Ltd. | Production of highly fat-soluble phosphoramidite |
JPWO2019131719A1 (ja) * | 2017-12-27 | 2021-03-04 | 神戸天然物化学株式会社 | 高脂溶性ホスホラミダイトの製造 |
CN112041297A (zh) * | 2018-04-23 | 2020-12-04 | 株式会社Enzychem生命科学 | 甘油衍生物、其制备方法以及包含其作为有效成分的免疫调节剂 |
JP7105916B2 (ja) | 2018-04-23 | 2022-07-25 | エンジーケム ライフサイエンシーズ コーポレイション | グリセロール誘導体、これの製造方法及びこれを有効成分として含有する免疫調節剤 |
JP2021519807A (ja) * | 2018-04-23 | 2021-08-12 | エンジーケム ライフサイエンシーズ コーポレイション | グリセロール誘導体、これの製造方法及びこれを有効成分として含有する免疫調節剤 |
CN112041297B (zh) * | 2018-04-23 | 2023-10-20 | 株式会社Enzychem生命科学 | 甘油衍生物、其制备方法以及包含其作为有效成分的免疫调节剂 |
WO2020246443A1 (ja) | 2019-06-03 | 2020-12-10 | 塩野義製薬株式会社 | 二分岐脂質結合オリゴヌクレオチドの製造方法及び中間体 |
WO2021193900A1 (ja) | 2020-03-27 | 2021-09-30 | 公立大学法人北九州市立大学 | ポリヌクレオチド-ペプチドコンジュゲートを含む免疫誘導剤およびそれを含む医薬組成物 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU2016332266A1 (en) | 2018-03-22 |
CN108472358A (zh) | 2018-08-31 |
KR20180054854A (ko) | 2018-05-24 |
EP3357507A1 (en) | 2018-08-08 |
JPWO2017057540A1 (ja) | 2018-06-21 |
MX2018002998A (es) | 2018-04-11 |
AU2016332266B2 (en) | 2020-05-07 |
RU2730871C1 (ru) | 2020-08-26 |
CN108472358B (zh) | 2022-06-24 |
KR102230325B1 (ko) | 2021-03-19 |
CA3000617C (en) | 2021-03-09 |
EP3357507A4 (en) | 2019-05-29 |
JP6583864B2 (ja) | 2019-10-09 |
CA3000617A1 (en) | 2017-04-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6583864B2 (ja) | 免疫賦活活性を有する核酸誘導体 | |
US10940201B2 (en) | Nucleic acid derivative having immunostimulatory activity | |
JP6482475B2 (ja) | アンチセンスオリゴヌクレオチド及び糖誘導体を含む二本鎖オリゴヌクレオチド | |
CN105008381B (zh) | 包含具有确定立体化学的环嘌呤二核苷酸的组合物及其制备和使用方法 | |
ES2822584T3 (es) | Inducción de dinucleótidos cíclicos del interferón tipo I | |
TWI706958B (zh) | 活化「干擾素基因刺激因子」依賴性訊息傳導之組合物及方法 | |
JP7190794B2 (ja) | 核酸医薬及び多分岐脂質の複合体 | |
CN105188373B (zh) | 抑制“干扰素基因刺激蛋白”依赖性信号传导的组合物和方法 | |
EP2844663B1 (en) | Tetragalnac containing conjugates and methods for delivery of oligonucleotides | |
CN104136419B (zh) | 能够形成药物封装微球的在n末端上官能化的氨基酸衍生物 | |
CN107848988A (zh) | 烯基取代的2,5‑哌嗪二酮和其在组合物中用于向个体或细胞递送药剂的用途 | |
JP2012526130A (ja) | 化学的にプログラム可能な免疫 | |
JP2021503940A (ja) | 核酸、当該核酸を含む組成物及び複合体ならびに調製方法と使用 | |
JP5401323B2 (ja) | オリゴヌクレオチド、タンパク、および/またはペプチド・ポリマー接合体 | |
BR112020008546A2 (pt) | construtos de oligonucleotídeo e usos dos mesmos | |
JP6383740B2 (ja) | ペプチド/β−1,3−グルカン複合体及びそれを含む医薬組成物 | |
JP6611298B2 (ja) | 免疫賦活活性を有する核酸誘導体 | |
TW200836762A (en) | Polymeric short interfering RNA conjugates | |
KR20220150356A (ko) | 치료제 및 이의 접합체 | |
EP4370132A2 (en) | Multiplexing targeting ligands through click chemistry at the anomeric site of sugars | |
CN116615246A (zh) | 包含单取代的同-二价连接基的多缀合物 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
121 | Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application |
Ref document number: 16851711 Country of ref document: EP Kind code of ref document: A1 |
|
DPE1 | Request for preliminary examination filed after expiration of 19th month from priority date (pct application filed from 20040101) | ||
ENP | Entry into the national phase |
Ref document number: 2017543538 Country of ref document: JP Kind code of ref document: A |
|
WWE | Wipo information: entry into national phase |
Ref document number: MX/A/2018/002998 Country of ref document: MX |
|
ENP | Entry into the national phase |
Ref document number: 2016332266 Country of ref document: AU Date of ref document: 20160929 Kind code of ref document: A |
|
ENP | Entry into the national phase |
Ref document number: 3000617 Country of ref document: CA |
|
NENP | Non-entry into the national phase |
Ref country code: DE |
|
ENP | Entry into the national phase |
Ref document number: 20187012107 Country of ref document: KR Kind code of ref document: A |
|
WWE | Wipo information: entry into national phase |
Ref document number: 2018115800 Country of ref document: RU |