WO2017022768A1 - β－ニコチンアミドモノヌクレオチド含有酵母エキス及びその製造方法 - Google Patents

β－ニコチンアミドモノヌクレオチド含有酵母エキス及びその製造方法 Download PDF

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祐一郎 深水
一成 田崎
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興人ライフサイエンス株式会社
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    • A23L31/10—Yeasts or derivatives thereof
    • A23L31/15—Extracts
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
    • C12P19/28—N-glycosides
    • C12P19/30—Nucleotides

Definitions

  • the present invention provides a food-standard ⁇ -Nicotinamide Mononucleotide ( ⁇ -NMN) -containing yeast extract obtained by culturing and extracting using Candida utilis, and a method for producing the same.
  • ⁇ -NMN ⁇ -Nicotinamide Mononucleotide
  • ⁇ -nicotinamide mononucleotide is an intermediate metabolite of Nicotinamide Adenine Dinucleotide (NAD), which is a core substance in the salvage pathway in vivo.
  • FIG. 2 shows anti-aging wrinkles (anti-aging) due to activation of “sirtuin gene wrinkles (longevity gene wrinkles)” typified by Sirt 1, accompanying NAD increase by ⁇ -NMN administration.
  • Non-patent document 1 functions involved in ⁇ -NMN include “participation in circadian clock (Non-patent document 1)”, “improvement of lipid and sugar metabolism abnormality (Non-patent document 2)”, “improvement of mitochondrial function by aging (non-patent document) Reference 3) ”,“ Protection of the heart from ischemia / reperfusion (Non-patent Document 4) ”,“ Decrease suppression of neural stem cells due to aging (Non-patent Document 5) ”,“ Epigenetic suppression of diabetic albuminuria Inhibition flaws (Non-Patent Document 6) "have been reported. In this way, various biological phenomena related to aging such as glucose metabolism, diabetes, neurodegenerative diseases, and heart diseases can be suppressed by ⁇ -NMN triggering sirtuin activity. It is said that it will lead to life extension.
  • Torula yeast (Candida utilis) is an edible yeast that is evaluated for higher nutritional functionality and safety from eating experience than the US Food and Drug Administration (FAD). . For this reason, it has been used effectively for many years for medicines, supplements and seasonings.
  • Nicotinamide mononucleotide an intermediate of NAD + synthesis, protects the heart from ischemia and reperfusion.
  • Liana, R Stein. Et al. Specific ablation of Nampt in adult neural stem cells recapitulates their functional defects during aging.
  • ⁇ -NMN is not a food standard, and only synthetic products are sold for research use. Therefore, it is an object to obtain a yeast extract containing ⁇ -NMN from yeast with experience of eating and to obtain a ⁇ -NMN composition derived from yeast.
  • a yeast extract containing ⁇ -NMN can be obtained by extracting a yeast extract from yeast by a specific method, and have completed the present invention.
  • ⁇ -nicotinamide mononucleotide can be easily obtained from an experienced yeast extract.
  • Torula yeast is a yeast that has been eating for a long time, and the yeast extract obtained from this is highly safe.
  • Such yeast extract containing ⁇ -nicotinamide mononucleotide can be ingested as pharmaceuticals, supplements, functional foods and the like.
  • Example 1 is a graph showing the relationship between extracted pH and ⁇ -NMN content in yeast extract.
  • Results of Example 2. It is a graph which shows the relationship between extraction temperature and the content of ⁇ -NMN in yeast extract.
  • Results of Example 3. 3 is a graph showing the relationship between extraction time and ⁇ -NMN content in yeast extract.
  • Results of Example 5. 3 is a graph showing ⁇ -NMN content in a yeast extract obtained from Candida utilis IAM 4264.
  • edible yeast can be used as the yeast.
  • yeasts belonging to the genus Saccharomyces include yeasts belonging to the genus Krivellomyces, yeasts belonging to the genus Candida, yeasts belonging to the genus Pichia, etc.
  • yeasts belonging to the genus Candida and Candida utilis are preferred. More specifically, Candidaandutilis ATCC 9950, Candida utilis ATCC 9550, Candida utilis IAM 4233, Candida utilis IAM 4264, Candida utilis AHU 3259 and the like. More preferably, the use of yeast containing glutathione increases the content of ⁇ -nicotinamide mononucleotide.
  • Glucose, acetic acid, ethanol, glycerol, molasses, sulfite pulp waste liquid, etc. are used as the carbon source in the culture medium for culturing yeast, and urea, ammonia, ammonium sulfate, ammonium chloride, nitrate, etc. are used as the nitrogen source.
  • Phosphoric acid, potassium, and magnesium sources may be ordinary industrial raw materials such as lime perphosphate, ammonium phosphate, potassium chloride, potassium hydroxide, magnesium sulfate, magnesium chloride, and other zinc, copper, manganese, iron ions, etc.
  • Add inorganic salt Others can be cultured without using vitamins, amino acids, nucleic acid-related substances, etc., but these may be added.
  • Organic substances such as corn steep liquor, casein, yeast extract, meat extract and peptone may be added.
  • Culture conditions such as koji culture temperature and pH can be applied without particular limitation, and may be set according to the yeast strain to be used.
  • the culture temperature is 21 to 37 ° C., preferably 25 to 34 ° C.
  • the pH is 3.0 to 8.0, particularly 3.5 to 7.0.
  • the culture format of the present invention may be either batch culture or continuous culture, but the latter is desirable industrially. Conditions such as agitation and aeration during culture are not particularly limited and may be a general method.
  • the extract of the present invention is extracted after culturing the cells.
  • the wet yeast cells after culturing the cells are suspended in distilled water and washed by repeated centrifugation, and then the yeast extract is extracted.
  • the extraction method may be appropriately adjusted according to the type of yeast cells to be used, but in order to increase the content of ⁇ -NMN, it is performed by an autolysis method, an alkali extraction method, a hot water extraction method, or a combination thereof. In the case of using Candida utilis, it is resuspended in distilled water so that the cell concentration is 7 to 10%, preferably 8 to 9%, in terms of dry weight.
  • the pH is adjusted when extracting the extract from the cell suspension. In order to obtain a yeast extract containing ⁇ -NMN, the pH during extraction is adjusted to 7.5 to 11.0, preferably 8.0 to 10.0, more preferably 9.0 to 10.0. To do.
  • the pH adjustment method may be a known method.
  • the extraction temperature is 50 to 70 ° C, preferably 55 to 65 ° C.
  • a known method can be used without particular limitation as long as the extract reaches the above temperature.
  • Extraction time may be 5 minutes or more. It is desirable to stir during extraction. The stirring speed and the like may be adjusted as appropriate and are not particularly limited. Further, when the extraction time is 40 to 50 minutes, the content of ⁇ -NMN increases, which is more preferable.
  • the yeast extract After extracting the yeast extract, the yeast extract can be obtained by separating the yeast residue by centrifugation. The yeast extract can be concentrated and then freeze-dried or hot-air dried to obtain a ⁇ -NMN-containing yeast extract.
  • 0.01 wt% or more, 0.1 wt% or more, or 0.5 wt% or more of ⁇ -NMN is added to the solid content of the yeast extract.
  • the contained yeast extract can be obtained.
  • the ⁇ -NMN content is quantified according to the HPLC measurement conditions described in the examples.
  • a ⁇ -NMN-containing composition can be obtained by purifying ⁇ -NMN from a ⁇ -NMN-containing yeast extract.
  • a composition containing ⁇ -NMN derived from yeast can also be obtained by purifying ⁇ -NMN from the previous yeast extract.
  • a purification method a generally employable purification method using an ion exchange resin or the like can be used.
  • the method of ingesting the yeast extract or yeast-derived ⁇ -NMN-containing composition of the present invention is not particularly limited, and examples thereof include oral administration, parenteral administration such as intravenous, intraperitoneal or subcutaneous administration.
  • parenteral administration such as intravenous, intraperitoneal or subcutaneous administration.
  • oral preparations such as tablets, powders, granules, pills, suspensions, emulsions, soaking and decoction, capsules, syrups, solutions, elixirs, extracts, tinctures, fluid extracts, Or any of parenteral agents, such as an injection, a drip, a cream, and a suppository, may be sufficient.
  • the yeast yeast extract can be ingested not only as a medicine but also as a food, and can also be ingested as a functional food, a nutritional supplement, a supplement and the like.
  • the present invention can also be used in combination with other compositions that do not reduce the sirtuin activity of ⁇ -NMN or increase the sirtuin activity of ⁇ -NMN.
  • examples include excipients, diluents such as maltitol, sorbitol, and starch.
  • the amount of intake of the present invention may be an amount that can express the activity of ⁇ -NMN.
  • the dose required for ⁇ -NMN activity is determined by the condition of the consumer, the choice of composition administered, the age, weight and response of the consumer, the condition of the consumer, etc. Is done.
  • Wakosil-II 5C18 RS ( ⁇ 4.6 mm XW 30 mm) ⁇ Wakosil-II 5C18 RS ( ⁇ 4.6 mm XW 150 mm) ⁇ Wakosil-II 5C18 RS ( ⁇ 4.6 mm XW 250 mm) 3 were connected in tandem.
  • Example 1 (Yeast culture) Candida utilis Cs7529 strain (FERM BP-1656 strain) was pre-cultured in an Erlenmeyer flask containing YPD medium (yeast extract 1%, polypeptone 2%, glucose 2%) in advance, and this was cultured in a 30L fermentor. Inoculated 1-2%. Medium composition is 4% glucose, 0.3% monoammonium phosphate, 0.161% ammonium sulfate, 0.137% potassium chloride, 0.08% magnesium sulfate, 1.6 ppm copper sulfate, 14 ppm iron sulfate, 16 ppm manganese sulfate, 14 ppm of zinc sulfate was used.
  • the culture conditions were pH 4.0, culture temperature 30 ° C., aeration rate 1 vvm, stirring 600 rpm, and ammonia was added to control the pH. After culturing the cells for 16 hours, the culture solution was collected and collected by centrifugation to obtain 180 g of wet yeast cells. The obtained yeast cells were washed by suspending them in distilled water and repeating the centrifugation. It was resuspended in distilled water to a dry solid content concentration of 82.88 g / L. At this time, the pH was 5.8.
  • Example 2 (Extraction temperature study) A yeast extract is produced in the same manner as in Example 1 except that the yeast is cultured in the same manner as in Example 1, except that the yeast extract extraction pH is 8.0 and the hot water extraction temperature is 60 ° C, 70 ° C, 80 ° C, and 90 ° C. did.
  • the concentration of ⁇ -NMN in the yeast extract during extraction at each temperature is shown in FIG. When the extraction temperature was 60 to 90 ° C., yeast extract with high ⁇ -NMN content was obtained at 60 ° C. and 70 ° C.
  • Example 3 (Examination of extraction pH and extraction time)
  • the pH was adjusted to pH 8.0 / pH 9.0 / pH 10.0 with 10 N NaOH
  • the temperature of hot water extraction was 60 ° C.
  • the extraction time was 10 minutes / 20 minutes / 30 minutes / 40 minutes.
  • a yeast extract was produced in the same manner as in Example 1 except that / 50 minutes / 60 minutes.
  • FIG. 4 shows the concentration of ⁇ -NMN in the yeast extract at each pH and each extraction time. At an extraction temperature of 60 ° C., a yeast extract with the highest ⁇ -NMN content was obtained at an extraction pH of 9.0 and an extraction time of 30 or more.
  • Example 4 Cultivation was carried out in the same manner as in Example 1 except that Candida utilis 36D61 (accession number FERM P-21546) was used as the yeast strain, and the ⁇ -NMN-containing yeast extract was obtained at pH 9.0, extraction temperature 60 ° C., and extraction time 40 minutes. Got. The ⁇ -NMN concentration measured by HPLC was 0.65% based on the solid content.
  • Example 5 Candida utilis IAM 4264 was divided into 4 lots (samples 1 to 4) and cultured in the same manner as in Example 1, pH 9.0, extraction temperature 60 ° C., extraction time 40 minutes, and others as in Example 1. A ⁇ -NMN-containing yeast extract was obtained. The content of ⁇ -NMN was as shown in FIG. The ⁇ -NMN concentration was 0.50% to 0.78% per solid content.
  • ⁇ Comparative example> The content of ⁇ -NMN in the commercially available yeast extract was measured.
  • the yeast extract used was alomiled (manufactured by Kojin Life Science Co., Ltd.), Hyper Mist GT (manufactured by Asahi Food and Healthcare Company), Vertex IG20 (manufactured by Fuji Food Industry Co., Ltd.), yeast extract B2 (manufactured by Oriental Yeast Co., Ltd.)
  • a normal yeast extract extraction method cannot obtain a yeast extract containing ⁇ -NMN.
  • ⁇ -nicotinamide mononucleotide can be obtained from edible safe yeast and can be ingested not only as a pharmaceutical product but also as a functional food and a dietary supplement. By ingesting the product of the present invention, ⁇ -nicotinamide mononucleotide can be obtained. The functionality possessed by can be obtained.

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Abstract

【課題】 食経験のある安全な酵母からβ‐ニコチンアミドモノヌクレオチド（β-ＮＭＮ）を含有した酵母エキスを得ること、酵母由来のβ-ＮＭＮ組成物を得ることを課題とする。 【解決手段】 酵母から特定温度、ｐＨ、で酵母エキスを抽出することで、β-ＮＭＮを含有した酵母エキスを得られることを見出した。また、β-ＮＭＮ含有酵母エキス又は酵母抽出液からβ-ＮＭＮを精製することで、酵母由来のβ-ＮＭＮ含有組成物を得ることができる。

Description

β－ニコチンアミドモノヌクレオチド含有酵母エキス及びその製造方法
　本発明は、キャンディダ・ウチリスを用いて、培養、抽出工程より得られた食品規格のβ－Nicotinamide Mononucleotide （β-ＮＭＮ）含有酵母エキス、及びその製造方法を提供する。
β‐ニコチンアミドモノヌクレオチド（β-ＮＭＮ）は生体内のサルベージ経路の中核物質であるNicotinamide Adenine Dinucleotide （ＮＡＤ）の中間代謝物である。β-ＮＭＮ投与によるＮＡＤ増加に伴う、Ｓｉｒｔ １に代表される「サーチュイン遺伝子 (長寿遺伝子) 」の活性化による抗老化 (アンチエイジング)を示す。近年、β-ＮＭＮが関わる機能として、「サーカディアンクロックへの関与 (非特許文献１）」、「脂質や糖代謝異常の改善　（非特許文献２）」、「老化によるミトコンドリア機能の改善　（非特許文献３）」、「虚血再灌流からの心臓の保護　（非特許文献４）」、「老化による神経幹細胞の減少抑制 (非特許文献５)」、「エピジェネティク抑制による糖尿病性アルブミン尿の抑制 (非特許文献６)」などが報告されている。このように、糖代謝、糖尿病や神経変性疾患、心疾患など老化現象に関わるさまざまな生体現象は、β-ＮＭＮがサーチュイン活性のトリガーになることで抑制することができ、最終的には生命の延命に繋がるとされている。
また、酵母は、各種食品等に使用されており、トルラ酵母（Candida utilis）は、アメリカ食品医薬品局 （ＦＡＤ）より高い栄養機能性と食経験からの安全性が評価されている食用酵母である。このことより、長年にわたって医薬品やサプリメント、調味料をなどに有効活用されている。
国際公開ＷＯ２０１４／１４６０４４ 中国特許公報第１０１６０１６７９ Ｂ 米国特許公開第２０１１‐０１２３５１０ Ａ１ 米国特許第７７３７１５８号
Ramsey, KM . et al. Circadian clock feedback cycle through NAMPT-mediated NAD+ biosynthesis . Science. 2009, 324(5927), P. 651-654. J, Yoshino . et al. Nicotinamide Mononucleotide, a Key NAD+ Intermediate, Treats the Pathophysiology of Diet- and Age-Induced Diabetes in Mice . Cell Metab. 2011, 14(4), P. 528-536. Ana, P. Gomes . et al. Declining NAD+ Induces a Pseudohypoxic State Disrupting Nuclear-Mitochondrial Communication during Aging . Cell. 2013, 155(7), P. 1624-1638. T, Yamamoto . et al. Nicotinamide mononucleotide, an intermediate of NAD+ synthesis, protects the heart from ischemia and reperfusion . PLoS One. 2014, 9(6), e98972. Liana, R Stein . et al. Specific ablation of Nampt in adult neural stem cells recapitulates their functional defects during aging . EMBO J. 2014, 33(12), P. 1321-1340 K, Hasegawa . et al. Renal tubular Sirt1 attenuates diabetic albuminuria by epigenetically suppressing Claudin-1 overexpression in podocytes . Nat Med. 2013, 19(11), P. 1496-1504
　現在、β-ＮＭＮは食品規格ではなく、研究用途で合成品しか販売されていない。よって、食経験のある酵母からβ-ＮＭＮを含有した酵母エキスを得ること、酵母由来のβ-ＮＭＮ組成物を得ることを課題とする。
  本発明者らは、酵母から特定の方法で酵母エキスを抽出することで、β-ＮＭＮを含有した酵母エキスを得られることを見出し、本発明を完成させた。
具体的には、
（１）β‐ニコチンアミドモノヌクレオチド含有酵母エキス、
（２）β‐ニコチンアミドモノヌクレオチドを０．１重量％以上含有する酵母エキス、
（３）酵母由来のβ‐ニコチンアミドモノヌクレオチドを含有する組成物、
（４）培養した酵母菌体からｐＨ７．５～１１．０、抽出温度５０～７０℃で抽出するβ‐ニコチンアミドモノヌクレオチド含有酵母エキスの製造方法、
である。
本発明によると、β‐ニコチンアミドモノヌクレオチドを食経験のある酵母エキスから簡便に取得できる。特にトルラ酵母は古くから食経験のある酵母であり、これから取得した酵母エキスは安全性が高い。このような、β‐ニコチンアミドモノヌクレオチドを含有する酵母エキスは、医薬品、サプリメント、機能性食品等として摂取できる。
ＨＰＬＣにおける、β‐ＮＭＮの検量線である。 実施例１の結果。抽出ｐHと酵母エキス中のβ－ＮＭＮ含量との関係を示すグラフである。 実施例２の結果。抽出温度と酵母エキス中のβ－ＮＭＮ含量との関係を示すグラフである。 実施例３の結果。抽出時間と酵母エキス中のβ－ＮＭＮ含量との関係を示すグラフである。 実施例５の結果。Candida utilis IAM 4264 から得られた酵母エキス中のβ－ＮＭＮ含量を示すグラフである。
本発明では、酵母として食用酵母が使用できる。例えばサッカロマイセス属に属する酵母、クリベロマイセス属酵母、キャンディダ属酵母、ピヒヤ属酵母などが挙げられ，中でもキャンディダ属酵母、キャンディダ・ウチリスが好ましい。より具体的には、Candida utilis ATCC 9950、Candida utilis ATCC 9550、Candida utilis IAM 4233、Candida utilis IAM 4264、Candida utilis AHU 3259などである。さらに好ましくは、グルタチオンを含有する酵母を使用すると、β‐ニコチンアミドモノヌクレオチドの含量が高まる。
  酵母を培養する際の培地には、炭素源として、ブドウ糖、酢酸、エタノール、グリセロール、糖蜜、亜硫酸パルプ廃液等が用いられ、窒素源としては、尿素、アンモニア、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸塩などが使用される。リン酸、カリウム、マグネシウム源も過リン酸石灰、リン酸アンモニウム、塩化カリウム、水酸化カリウム、硫酸マグネシウム、塩化マグネシウム等の通常の工業用原料でよく、その他亜鉛、銅、マンガン、鉄イオン等の無機塩を添加する。その他は、ビタミン、アミノ酸、核酸関連物質等を使用しないでも培養可能であるが、これらを添加しても良い。コーンスチーブリカー、カゼイン、酵母エキス、肉エキス、ペプトン等の有機物を添加しても良い。
  培養温度やｐH等の培養条件は、特に制限なく適用でき、使用する酵母菌株に合わせて設定すれば良い。一般的には、培養温度は２１～３７℃、好ましくは２５～３４℃が良く、ｐＨは３．０～８．０、特に３．５～７．０が好ましい。
　  本発明の培養形式としては、バッチ培養、あるいは連続培養のいずれでも良いが、工業的には後者が望ましい。培養時の撹拌、通気等の条件は特に制限なく、一般的な方法でよい。
　菌体培養後に本発明のエキス抽出を行う。菌体培養後の湿潤酵母菌体を蒸留水に懸濁して遠心分離を繰り返すことで洗浄した後に、酵母エキスの抽出を行う。
　抽出法は、使用する酵母菌体の種類に応じて適宜調整すればよいが、β‐ＮＭＮの含量を高めるには、自己消化法、アルカリ抽出法、温水抽出法、又はこれらの組み合わせにより行う。
　キャンディダ・ウチリスを用いた場合の方法は、菌体濃度が乾燥重量換算で、７～１０％、好ましくは８～９％になるように蒸留水に再懸濁する。この菌体懸濁液においてエキス抽出を行うのに際し、ｐＨ調整を行う。β－ＮＭＮを含有する酵母エキスを取得するには、抽出時のｐＨを７．５～１１．０、好ましくは、８．０～１０．０、さらに好ましくは９．０～１０．０に調整する。ｐＨ調整法は、公知の方法でよい。
　抽出温度は、５０～７０℃、好ましくは、５５～６５℃とする。温度の調整法は、抽出液が前記の温度になれば特に制限なく公知の方法が利用できる。
　抽出時間は、５分以上行えばよい。抽出中は、撹拌することが望ましい。撹拌速度等は、適宜調整すればよく、特に制限はない。また、抽出時間を４０～５０分とすると、β‐ＮＭＮの含量が高まるので、さらに好ましい。
 酵母エキス抽出後、遠心分離で酵母残渣を分離することで、酵母抽出液を得ることが出来る。この酵母抽出液を濃縮後、凍結乾燥又は熱風乾燥することで、β‐ＮＭＮ含有酵母エキスを得ることができる。培養した酵母から前述の方法で酵母エキスを抽出することで、酵母エキスの固形分に対して０．０１重量％以上、０．１重量％以上、又は０．５重量％以上のβ‐ＮＭＮを含有する酵母エキスを得ることができる。なお、本願でβ‐ＮＭＮの含量の定量は、実施例中に記載したＨＰＬＣの測定条件による。
　さらに、β‐ＮＭＮ含有酵母エキスから、β‐ＮＭＮを精製することで、酵母由来のβ‐ＮＭＮを含有する組成物を得ることができる。また、前段の酵母抽出液からβ‐ＮＭＮを精製することでも、酵母由来のβ‐ＮＭＮを含有する組成物を得ることができる。
 精製法は、イオン交換樹脂等を用いた、一般的に採用できる精製法が利用できる。
  本発明の酵母エキス又は酵母由来のβ‐ＮＭＮ含有組成物の摂取方法は、特に限定されず、経口投与、静脈内、腹膜内もしくは皮下投与等の非経口投与をあげることができる。具体的には、錠剤、散剤、顆粒剤、丸剤、懸濁剤、乳剤、浸剤・煎剤、カプセル剤、シロップ剤、液剤、エリキシル剤、エキス剤、チンキ剤、流エキス剤等の経口剤、又は注射剤、点滴剤、クリーム剤、坐剤等の非経口剤のいずれでもよい。
 酵母エキスは、医薬品だけでなく、食品として摂取可能であり、機能性食品、栄養補助食品、サプリメント等としても摂取できる。
 また、本発明は、β‐ＮＭＮのサーチュイン活性を低下させない又はβ‐ＮＭＮのサーチュイン活性を増加させる他の組成物と併用することも可能である。例えば、賦形剤、希釈剤となるマルチトール、ソルビトール、澱粉などである。
  本発明の摂取量は、β‐ＮＭＮの活性が発現される量を投与すればよい。一般的に、β‐ＮＭＮの活性に必要な投与量を決定するには、摂取者の状態、投与される組成物の選択、摂取者の年齢、体重、および応答、摂取者の状態などによって決定される。
以下に、本願発明を具体的に示すが、本願発明は、これに限定されるものではない。

（β‐ニコチンアミドモノヌクレオチドの測定法）
ＨＰＬＣにより測定
ポンプ： Chromaster 5110 (HITACHI)      
デガッサー：  なし      
オートサンプラー： Chromaster 5210 (HITACHI)    
UV-VIS 検出器： Chromaster 5420 (HITACHI)     
カラムオーブン： Chromaster 5310 (HITACHI)     
移動相： 75 mM リン酸二水素アンモニウム NH4H2PO4 (pH 2.3) (wako)。アスピレーターで60 分間の脱気処理を行った。     
カラム： Wakosil-II 5C18 RS (φ4.6 mm X W 30 mm) ⇒ Wakosil-II 5C18 RS (φ4.6 mm X W 150 mm) ⇒ Wakosil-II 5C18 RS (φ4.6 mm X W 250 mm)の順でカラムをタンデムに３連結した。     
カラムオーブン温度： 26℃      
流速： 1.0 mL/min (0.0 分) ⇒ 1.0 mL/min (7.0 分) ⇒ 0.2 mL/min (8.0 分) ⇒ 0.2 mL/min (20.0 分) ⇒ 1.5 mL/min (21.0 分) ⇒ 1.5 mL/min (55.0 分) ⇒ 1.0 mL/min (56.0 分) ⇒ 1.0 mL/min (60.0 分)
溶出法： アイソクラテック      
検出波長： abs 260 nm       
分析時間： 60 min      
サンプル注入量： 5 uL      
オートサンプラー温度： 2℃      
分析検体の調製法： 検体溶液を移動相
75 mM NH4H2PO4 (pH 2.3)で10倍希釈を行った。その後、希釈溶液は、シリンジに装着したDISMIC 13CP020AS 0.45 umフィルター (ADVANTEC)によって不溶性物質をろ過し、HPLCに供した。
標準β‐ニコチンアミドモノヌクレオチド（Sigma-Aldrich社から入手）
図１に示す検量線から、各実施例のβ‐ニコチンアミドモノヌクレオチドの濃度を測定した。定量値は以下の式で求めた。
定量値 (ppm)=(LC intensity-504.87)/15684.59
＜実施例１＞
（酵母の培養）
　キャンディダ・ウチリスＣｓ７５２９株（ＦＥＲＭ　ＢＰ－１６５６株）を予めＹＰＤ培地（酵母エキス１％、ポリペプトン２％、グルコース２％）を含む三角フラスコで種母培養し、これを３０Ｌ容発酵槽に１８Ｌ培地に１～２％植菌した。培地組成は、グルコース４％、燐酸一アンモニウム０．３％、硫酸アンモニウム０．１６１％、塩化カリウム０．１３７％、硫酸マグネシウム０．０８％、硫酸銅１．６ｐｐｍ、硫酸鉄１４ｐｐｍ、硫酸マンガン１６ｐｐｍ、硫酸亜鉛１４ｐｐｍを用いた。培養条件は、ｐＨ４．０、培養温度３０℃、通気量１ｖｖｍ、撹拌６００ｒｐｍで行い、アンモニアを添加しｐＨのコントロールを行った。１６時間菌体培養した後、培養液を回収し、遠心分離により集菌し、１８０ｇの湿潤酵母菌体を得た。
得られた酵母菌体を蒸留水に懸濁して遠心分離を繰り返すことで洗浄した。乾燥固形分濃度８２．８８ｇ／Ｌとなるよう蒸留水に再懸濁した。この時ｐＨ ５．８であった。
（酵母エキスの抽出）
（抽出ｐＨの検討）
上記菌体懸濁液に酢酸を終濃度０．５ ％ （ｖ／ｖ）になるように添加し、１０Ｎ  ＨＣｌまたは１０ Ｎ ＮａＯＨでｐＨ１．０／ｐＨ２．０／ｐＨ３．０／ｐＨ４．０／ｐＨ５．０／ｐＨ６．０／ｐＨ７．０／ｐＨ８．０に調整を行った。 
ｐＨ調整した各菌体懸濁液２５ ｍＬを９５℃のウォーターバス下で90℃まで達温し、撹拌しながら、５分間熱水抽出した。 抽出処理後、サンプリングした菌体懸濁液２５ ｍＬを氷中下で冷却し、１００００ ｒｐｍで１０分、４℃下で遠心分離し、上清を取得した。沈殿物に２５ ｍＬの超純水を添加、懸濁、再び度遠心分離し、上清を取得した。最初の遠心分離で取得した上清と２回目に遠心分離して取得した上清をプールし、超純水で５０ ｍＬにメスアップしたものを抽出液とした。この抽出液について、前記の方法によりβ－ＮＭＮの濃度を測定した。また、乾燥固形分中のβ－ＮＭＮ含量を算出するため、１８０℃で６０分乾熱乾燥を行った。各ｐＨでの抽出における、酵母エキス中のβ‐ＮＭＮの濃度を、図２に示す。抽出のｐＨが１～８では、アルカリ側になるほど、β‐ＮＭＮ含量の高い酵母エキスとなった。
＜実施例２＞
（抽出温度検討）
実施例１と同様に酵母を培養し、酵母エキス抽出ｐＨ８．０、熱水抽出の温度を６０℃、７０℃、８０℃、９０℃とした他は、実施例１と同様に酵母エキスを製造した。各温度での抽出における、酵母エキス中のβ‐ＮＭＮの濃度を、図３に示す。抽出温度が６０～９０℃では、６０℃、７０℃でβ‐ＮＭＮ含量の高い酵母エキスとなった。
＜実施例３＞
（抽出ｐＨ、抽出時間の検討）
実施例１において、ｐＨ調整を１０ Ｎ ＮａＯＨでｐＨ８．０／ｐＨ９．０／ｐＨ１０．０とし、熱水抽出の温度を６０℃とし、抽出時間を、１０分／２０分／３０分／４０分／５０分／６０分とした他は、実施例１と同様にして、酵母エキスを製造した。各ｐＨ、各抽出時間における酵母エキス中のβ‐ＮＭＮの濃度を図４に示す。抽出温度６０℃においては、抽出ｐＨ９．０、抽出時間３０以上において、最もβ－ＮＭＮ含量の高い酵母エキスが得られた。
＜実施例４＞
酵母菌株にキャンディダ・ウチリス３６Ｄ６１（受託番号  ＦＥＲＭ  Ｐ－２１５４６）を用いた以外は、実施例１同様に培養し、ｐＨ９．０、抽出温度６０℃、抽出時間４０分でβ‐ＮＭＮ含有酵母エキスを得た。
ＨＰＬＣでβ‐ＮＭＮ濃度を測定すると、対固形分あたり、０．６５％含有していた。
＜実施例５＞
Candida utilis IAM 4264を用いて、４ロットに分けて（サンプル１～４）、実施例１と同様に培養し、ｐＨ９．０、抽出温度６０℃、抽出時間４０分、その他は実施例１同様にβ‐ＮＭＮ含有酵母エキスを得た。β‐ＮＭＮの含量は、図５のようになった。β-ＮＭＮ濃度は固形分あたり、０．５０％～０．７８％であった。
＜比較例＞
　市販されている酵母エキス中のβ‐ＮＭＮの含量を測定した。
使用した酵母エキスは、アロマイルド（興人ライフサイエンス社製）、ハイパーミーストＧＴ（アサヒフードアンドヘルスケア社製）、バーテックスＩＧ２０（富士食品工業社製）、酵母エキスＢ２（オリエンタル酵母社製）であり、測定の結果、いずれの酵母エキスも、ＨＰＬＣでは、β‐ＮＭＮを検出できなかった。
このように、通常の酵母エキス抽出法では、β‐ＮＭＮを含有する酵母エキスを得ることはできない。
食用として安全な酵母からβ‐ニコチンアミドモノヌクレオチドを得ることができ、医薬品だけでなく、機能性食品、栄養補助食品としても摂取可能であり、本発明品の摂取により、β‐ニコチンアミドモノヌクレオチドの有する機能性を得ることができる。

Claims (4)

  1. β‐ニコチンアミドモノヌクレオチド含有酵母エキス。
  2. β‐ニコチンアミドモノヌクレオチドを０．１％重量以上含有する酵母エキス。
  3. 酵母由来のβ‐ニコチンアミドモノヌクレオチドを含む組成物。
  4. 培養した酵母菌体からｐＨ７．５～１１．０、抽出温度５０～７０℃で抽出するβ‐ニコチンアミドモノヌクレオチド含有酵母エキスの製造方法。
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Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2018203691A (ja) * 2017-06-08 2018-12-27 興人ライフサイエンス株式会社 糖尿病改善剤又は予防剤
US10392416B2 (en) 2015-10-02 2019-08-27 Metro International Biotech, Llc Crystal forms of beta-nicotinamide mononucleotide
US10548913B2 (en) 2015-08-05 2020-02-04 Metro International Biotech, Llc Nicotinamide mononucleotide derivatives and their uses
US10618927B1 (en) 2019-03-22 2020-04-14 Metro International Biotech, Llc Compositions and methods for modulation of nicotinamide adenine dinucleotide
US11180521B2 (en) 2018-01-30 2021-11-23 Metro International Biotech, Llc Nicotinamide riboside analogs, pharmaceutical compositions, and uses thereof
CN114099556A (zh) * 2020-08-25 2022-03-01 大江生医股份有限公司 富含烟酰胺单核苷酸的酵母粉、其制备方法及用途
WO2022138656A1 (ja) * 2020-12-25 2022-06-30 株式会社大阪ソーダ ニコチンアミドモノヌクレオチドの製造方法
US11787830B2 (en) 2021-05-27 2023-10-17 Metro International Biotech, Llc Crystalline solids of nicotinic acid mononucleotide and esters thereof and methods of making and use
US11939348B2 (en) 2019-03-22 2024-03-26 Metro International Biotech, Llc Compositions comprising a phosphorus derivative of nicotinamide riboside and methods for modulation of nicotinamide adenine dinucleotide

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7416684B2 (ja) * 2018-03-20 2024-01-17 三菱商事ライフサイエンス株式会社 β―ＮＭＮの製造方法およびその含有組成物
CN112438918A (zh) * 2019-08-30 2021-03-05 广东丸美生物技术股份有限公司 一种牛油果提取物及其制备方法和在抗衰老化妆品中的应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015069860A1 (en) * 2013-11-06 2015-05-14 President And Fellows Of Harvard College Biological production of nad precursors and analogs

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PE20131116A1 (es) 2010-08-10 2013-10-24 Takeda Pharmaceutical Compuestos heterociclicos potenciadores de ampa

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015069860A1 (en) * 2013-11-06 2015-05-14 President And Fellows Of Harvard College Biological production of nad precursors and analogs

Cited By (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11464796B2 (en) 2015-08-05 2022-10-11 Metro International Biotech, Llc Nicotinamide mononucleotide derivatives and their uses
US10548913B2 (en) 2015-08-05 2020-02-04 Metro International Biotech, Llc Nicotinamide mononucleotide derivatives and their uses
US11878027B2 (en) 2015-08-05 2024-01-23 Metro International Biotech, Llc Nicotinamide mononucleotide derivatives and their uses
US10392416B2 (en) 2015-10-02 2019-08-27 Metro International Biotech, Llc Crystal forms of beta-nicotinamide mononucleotide
US11059847B2 (en) 2015-10-02 2021-07-13 Metro International Biotech, Llc Crystal forms of β-nicotinamide mononucleotide
JP7093161B2 (ja) 2017-06-08 2022-06-29 三菱商事ライフサイエンス株式会社 糖尿病改善剤又は予防剤
JP2018203691A (ja) * 2017-06-08 2018-12-27 興人ライフサイエンス株式会社 糖尿病改善剤又は予防剤
US11180521B2 (en) 2018-01-30 2021-11-23 Metro International Biotech, Llc Nicotinamide riboside analogs, pharmaceutical compositions, and uses thereof
US10618927B1 (en) 2019-03-22 2020-04-14 Metro International Biotech, Llc Compositions and methods for modulation of nicotinamide adenine dinucleotide
US11939348B2 (en) 2019-03-22 2024-03-26 Metro International Biotech, Llc Compositions comprising a phosphorus derivative of nicotinamide riboside and methods for modulation of nicotinamide adenine dinucleotide
CN114099556A (zh) * 2020-08-25 2022-03-01 大江生医股份有限公司 富含烟酰胺单核苷酸的酵母粉、其制备方法及用途
WO2022042615A1 (zh) * 2020-08-25 2022-03-03 大江生医股份有限公司 富含烟酰胺单核苷酸的酵母粉、其制备方法及用途
US11833116B2 (en) 2020-08-25 2023-12-05 Tci Co., Ltd. Preparation method of yeast powder rich in nicotinamide mononucleotide, yeast powder, and methods for improving skin condition, hair health, antiinflammation, cardiovascular health, antioxidation, antiaging and/or relieving body fatigue
WO2022138656A1 (ja) * 2020-12-25 2022-06-30 株式会社大阪ソーダ ニコチンアミドモノヌクレオチドの製造方法
US11787830B2 (en) 2021-05-27 2023-10-17 Metro International Biotech, Llc Crystalline solids of nicotinic acid mononucleotide and esters thereof and methods of making and use
US11952396B1 (en) 2021-05-27 2024-04-09 Metro International Biotech, Llc Crystalline solids of nicotinic acid mononucleotide and esters thereof and methods of making and use

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