WO2017003204A1 - 후발효차 추출물을 포함하는 신경 세포 보호용 조성물 - Google Patents

후발효차 추출물을 포함하는 신경 세포 보호용 조성물 Download PDF

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WO2017003204A1
WO2017003204A1 PCT/KR2016/007011 KR2016007011W WO2017003204A1 WO 2017003204 A1 WO2017003204 A1 WO 2017003204A1 KR 2016007011 W KR2016007011 W KR 2016007011W WO 2017003204 A1 WO2017003204 A1 WO 2017003204A1
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composition
fermented
less
post
fermented tea
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PCT/KR2016/007011
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홍용덕
이범진
최민식
김정기
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(주)아모레퍼시픽
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/82—Theaceae (Tea family), e.g. camellia

Definitions

  • the present disclosure discloses a composition for protecting neurons, including the post-fermented tea extract.
  • Green tea is in the form of leaf tea, or fermented tea for a deeper flavor.
  • Fermented green tea means that the green tea leaves are subjected to oxidation treatment, including fermented tea oxidized by the oxidase present in the tea leaves, and post-fermented tea fermented by a separate microorganism other than the enzyme present in the tea leaves. .
  • it can be classified into weakly fermented tea, semi-fermented tea, and fully fermented tea.
  • fermented green tea is called by various names, such as green tea, oolong tea, black tea, black tea, etc., depending on the type and extent of fermentation.
  • the fermented tea not only exhibits a difference in flavor compared to the green tea, but can also show a large difference in the type and content of the active ingredient depending on the specific fermentation process.
  • Oxidative stress may be caused by aging, disease, and the like.
  • degenerative brain diseases such as Alzheimer's and Parkinson's disease cause neuronal damage as a symptom.
  • Neuronal cell damage caused by oxidative stress is associated with memory loss, cognitive decline, forgetfulness, and depression.
  • the problem to be solved by the present invention is to provide a composition exhibiting neuronal protective activity.
  • the problem to be solved by the present invention is to provide a composition for preventing damage or death of nerve cells due to oxidative stress.
  • the problem to be solved by the present invention is to provide a composition for preventing or alleviating the symptoms of degenerative brain diseases caused by oxidative stress.
  • Another problem to be solved by the present invention is to provide a composition for preventing or ameliorating memory impairment, cognitive decline, forgetfulness or depression.
  • composition according to one aspect of the present invention relates to a composition having nerve cell protective activity, including the post-fermented tea extract as an active ingredient.
  • a composition according to another aspect of the present invention is a composition having a neuronal cell protective activity comprising a fermented polyphenol obtained by separating high-fermentation tea extract by high performance liquid chromatography (HPLC) as an active ingredient,
  • HPLC high performance liquid chromatography
  • the fermented polyphenol is a post-fermented tea extract AA using a C18 column (Thermo syncronis-C18 4.6 x 250mm, Thermo fisher scientific, USA), using 0.1% acetic acid (AA) and acetonitrile (ACN) solvent as a mobile phase 90/10 volume gradient from 0-29 min / ACN; 85/15 volume gradient at 30-41 minutes; 80/20 volume gradient at 42-43 minutes; 5/95 volume gradient at 44-48 min; In the spectrum measured in the range of 90/10 volume gradient, flow rate 1 ml / min, UV wavelength 280 nm at 49-50 minutes, retention time was 45.85 minutes to 45.95 minutes. It is related to the composition which has.
  • the present invention can provide a composition exhibiting neuronal protective activity.
  • the present invention may provide a composition that prevents damage or death of nerve cells due to oxidative stress.
  • the present invention may provide a composition for preventing or alleviating the manifestation of symptoms of degenerative brain disease due to oxidative stress.
  • the present invention may provide a composition for preventing or ameliorating memory impairment, cognitive decline, forgetfulness or depression.
  • 1 is a spectrum result of HPLC analysis of the post-fermented tea extract.
  • Figure 3 is a graph comparing the content of each component of the general green tea, semi-fermented tea and full fermented tea.
  • Figure 4 is an enlarged fermented polyphenol peak in the HPLC analysis of the post-fermented tea extract.
  • 5 is a graph showing the content of catechin and caffeine according to the ethanol aqueous solution concentration of post-fermented tea extract.
  • after-fermentation tea means fermented by a separate microorganism, not the enzyme present in the tea leaves.
  • fully fermented tea refers to tea made by fermenting 90% or more by adding microorganisms to tea leaves
  • semi-fermented tea means tea made by fermenting 30% to 50% by adding microorganisms to tea leaves.
  • Neuronal cell protection composition may include a post-fermented tea extract as an active ingredient.
  • the fermentation degree of the post-fermented tea may be a semi-fermented tea or a fully fermented tea, for example, may be a full fermented tea.
  • the semi-fermented tea may be prepared by, for example, adding microorganisms and fermenting for 3 to 4 days, and the complete fermented tea may be prepared by adding microorganisms and fermenting for 7 days to 10 days, but is not limited thereto.
  • Post-fermented tea can be prepared by fermenting green tea leaves using strains selected from Saccharomyces sp., Lactobacillus sp. And Leukonostoc mesenteroides sp.
  • Such strains include, for example, Saccharomyces cerevisiae, Lactobacillus casei, Bacillus subtlis, Lactobacillus bulgarius and Luconostoke mesenteroyi. It may be selected from the Death (Leuconostoc mesenteroides).
  • the strain may be a strain distributed by the Korea Food Research Institute 'Food Microbial Gene Bank', or may be a strain possessing other research institutes or commercially available strains, and specifically, Saccharomyces cerevisiae (ATCC9763), Lactobacillus casei (Lactobacillus casei, KFRI000127), Bacillus subtlis (F4041, F4163), Lactobacillus bulgarius (KFRI000344) and Luconostoc mesenteroides (KFRI 818). .
  • Fermentation of the green tea leaves may include fermenting the strain by inoculating the green tea leaves.
  • the green tea leaves may be used by adding water to the dried leaves, when using dried green tea leaves, for example, dried leaves of less than 5% by weight of moisture.
  • the water has a water content of 20% by weight, 25% by weight or 30% by weight, 70% by weight, 65% by weight or 60% by weight, such as 30% by weight or less, based on the total weight of the green tea leaves to which water is added. It may be added to 60% by weight. It is possible to enhance the activity of the strain within the above range, to promote uniform fermentation and ease of processing of green tea leaves.
  • the moisture content is less than the above range, it may be difficult to uniformly ferment the green tea leaves, and if it exceeds the above ranges, the green tea leaves may adhere to each other and may cause problems in the processing process, resulting in deterioration of the shape and quality of the final post-fermented tea. Can be.
  • the strain may use an activated strain, but is not limited thereto. Activation of the strain may be carried out by inoculating and culturing the strain in the active medium, for example, inoculating the strain in the active medium, may be incubated for 2 hours at 20 ⁇ 30 °C in a shaking incubator (shaking incubator), but It is not limited.
  • the strain may be inoculated at 0.05% by weight or more, 0.1% by weight, 10% by weight or 5% by weight or less, such as 0.1-5% by weight, based on the total weight of the green tea leaves. If the strain exceeds the weight range, the fermentation time is short, the search of the final post-fermentation tea becomes cloudy, and if it is less than the weight range, the fermentation time is long.
  • the inoculation is, for example, using a sterilized reaction tank, the green tea main substrate prepared for each small packaging unit, and the nutrients required for cultivation, so that the water content ratio of the green tea weight is 30% to 60% by weight. It can be added and inoculated active bacteria, but is not limited thereto.
  • the fermentation process is, for example, at least 5 ° C, at least 6 ° C, or at least 7 ° C, at least 8 ° C, at least 9 ° C, or at least 10 ° C, at most 55 ° C, at most 54 ° C, at most 53 ° C, at most 52 ° C, 51.
  • 50 degrees C or less 50 degrees C or less, 50 degrees C or less, 49 degrees C or less, 48 degrees C or less, 47 degrees C or less, 46 degrees C or less, 45 degrees C or less, 44 degrees C or less, 43 degrees C or less, 42 degrees C or less, 41 degrees C or less, 40 degrees C or less, 39 degrees C or less , 38 ° C or below, 37 ° C or below, 36 ° C or below, or 35 ° C or below, for example, 5 ° C, 6 ° C, 7 ° C, 8 ° C, 9 ° C, 10 ° C, 11 ° C, 12 ° C, 13 ° C, 14 ° C, 15 ° C.
  • the fermentation process is 25 °C or more, 26 °C or more, 27 °C or more, 28 °C or more, 29 °C or more, in order to inhibit the growth of bacteria other than Bacillus subtilis in the fermentation process, or It is 30 degrees C or more, 55 degrees C or less, 54 degrees C or less, 53 degrees C or less, 52 degrees C or less, 51 degrees C or less, 50 degrees C or less, 49 degrees C or less, 48 degrees C or less, 47 degrees C or less, 46 degrees C or less, 45 degrees C or less, 44 It can be carried out at a temperature of not more than °C, 43 °C or less, 42 °C or less, 41 °C or less, or 40 °C or less, such as 30 °C 55 °C, 35 °C 50 °C. If the temperature is higher than the above range, the quality of the post-fermentation tea may be lowered. If the temperature is lower than the above range, the reaction time may be long or fermentation may
  • the quality of the post-fermentation tea may be lowered. If the temperature is lower than the above range, the reaction time may be long or fermentation may not occur.
  • the fermentation process may be at pH 3.5 or higher or at pH 4.0 or higher, at pH 8.5 or lower or at pH 8.0 or lower, such as at pH 4.0 to 8.0, to prevent bacterial contamination during the ripening period. If the pH is out of the above range, the growth of the strain is difficult, the bacteria are inactivated may not be sufficiently cultured.
  • the fermentation process is, for example, 20 hours or more, 21 hours or more, 22 hours or more, 23 hours or more, 24 hours or more, 1000 hours or less, 990 hours or less, 980 hours or less, 970 hours or less, 960 hours or less, 950 hours or less, 940 Up to 930 hours, up to 920 hours, up to 910 hours or up to 900 hours, such as 24 hours to 15 days.
  • a sterilization process may be further performed to remove or exclude various germs or pathogenic bacteria other than the target microorganism.
  • the sterilization step is, for example, 65 ° C or higher, 66 ° C or higher, 67 ° C or higher, 68 ° C or higher, 69 ° C or higher, 70 ° C or higher, 71 ° C or higher, 72 ° C or higher, 73 ° C or higher, 74 ° C or higher, or 75 ° C or higher.
  • the fermentation process or the fermentation process and sterilization process may further perform a aging process.
  • the aging process may be performed at a temperature of 3 ° C., 4 ° C. or more, 5 ° C. or more, 25 ° C. or less, 24 ° C. or less, 23 ° C. or less, 22 ° C. or less, 21 ° C. or less, or 20 ° C. or less, such as 5 to 20 ° C. have.
  • a temperature 3 ° C., 4 ° C. or more, 5 ° C. or more, 25 ° C. or less, 24 ° C. or less, 23 ° C. or less, 22 ° C. or less, 21 ° C. or less, or 20 ° C. or less, such as 5 to 20 ° C. have.
  • Jejudo basalt can be used in the aging process, it can further reduce the odor or fungal odor through the strong deodorizing power and purification / purification of the basalt Jejudo.
  • the maturation is 2 days or more, 3 days or more, 4 days or more, 5 days or more, 6 days or more, or 7 days or more, 8 days or more, 9 days or more, 10 days or more, 150 days or less, 140 days or less, 130 days or less , 120 days or less, 110 days or less, 100 days or less, 90 days or less, 80 days or less, 70 days or less, 60 days or less, 50 days or less, 40 days or less, 30 days or less, 20 days or less, 19 days or less, 18 It can be carried out for days or less, 17 days or less, 16 days or less, or 15 days or less, for example, 7 days to 120 days.
  • the post fermented tea extract contains at least 30 vol%, at least 31 vol%, at least 32 vol%, at least 33 vol%, at least 34 vol%, at least 35 vol%, at least 36 vol%, at least 37 vol%, More than 38%, More than 39%, More than 40%, More than 41%, More than 42%, More than 43%, More than 44%, More than 45%, More than 46%, More than 47%, 48 volume% or more, 49 volume% or more, 50 volume% or less, 80 volume% or less, 79 volume% or less, 78 volume% or less, 77 volume% or less, 76 volume% or less, 75 volume% or less, 74 volume% 73 volume% or less, 72 volume% or less, 71 volume% or less, 70 volume% or less, 69 volume% or less, 68 volume% or less, 67 volume% or less, 66 volume% or less, 65 volume% or less, 64 volume% Up to 63%, up to 62%, up to 61%, or up to 60%, such as from 30%
  • the post-fermented tea extract contains catechin in a reduced content as compared to the green tea extract that has not been fermented (hereinafter, “non-fermented green tea extract”). For example, 30% by weight, 29% by weight, 28% by weight, 27% by weight, 26% by weight, 25% by weight, 24% by weight, 23% by weight of the catechin content of the non-fermented green tea extract.
  • the post-fermented tea extract may include gallocatechin gallate in an amount of 0.1 wt% to 10 wt% based on the total weight of the extract. For example, at least 0.1%, at least 0.2%, at least 0.3%, at least 0.4%, at least 0.5%, at least 0.6%, at least 0.7%, at least 0.8%, at least 0.9%, or 1.0 It may be at least 10% by weight, at most 9% by weight, at most 8%, at most 7%, at most 6%, at most 5%, at most 4%, or at most 3%. Within this range, nerve cell protective effects can be enhanced.
  • the post-fermented tea extract may include catechin gallate in an amount of 0.1% to 3% by weight based on the total weight of the extract, for example, 0.1% by weight, 0.2% by weight, 0.3 At least 0.4 wt%, at least 0.5 wt%, at least 0.6 wt%, at least 0.7 wt%, at least 0.8 wt%, at least 0.9 wt% or at least 1.0 wt%, at most 3.0 wt%, at most 2.5 wt%, It may be 2.0% by weight or less, 1.5% by weight or less or 1.0% by weight or less. Within the above range, the nerve cell protective effect may be enhanced.
  • the post-fermented tea extract is also reduced in the content of caffeine compared to the non-fermented green tea extract.
  • the post-fermented tea extract is 0.1% to 5% by weight, such as 0.1% by weight, 0.2% by weight, 0.3% by weight, 0.4% by weight, 0.5% by weight, based on the total weight of the extract At least 0.6 wt%, at least 0.7 wt%, at least 0.8 wt%, at least 0.9 wt% or at least 1.0 wt%, at most 5.0 wt%, at most 4.5 wt%, at most 4.0 wt%, at most 3.5 wt%, at least 3.0 wt%. It may be up to 2.5% by weight, up to 2.0% by weight, up to 1.5% by weight or up to 1.0% by weight. Within this range, neuronal cell protective effects may be enhanced without side effects due to excessive caffeine.
  • the post-fermented tea extract is reduced in content of catechins compared to the non-fermented green tea extract, but contains caffeine at a level capable of maintaining the safety of the body, it may be excellent neuronal protective activity.
  • the post-fermented tea extract contains fermented polyphenols with excellent neuronal protective activity.
  • Fermented polyphenols may be produced by modifying the polyphenol component of the non-fermented green tea through the fermentation process for producing a non-fermented green tea as a post-fermented tea according to the embodiments of the present invention.
  • the fermented polyphenols may include 5 to 300 times, for example, 10 to 200 times the content of the total weight of the post-fermented tea.
  • Figure 1 is a spectrum of the HPLC analysis of the post-fermented tea extract, the peak represented by a red square shows the fermented polyphenol.
  • the fermented polyphenol is a post-fermented tea extract using a C18 column (Thermo syncronis-C18 4.6 x 250mm, Thermo fisher scientific, USA), using 0.1% acetic acid (AA) and acetonitrile (ACN) solvent as the mobile phase.
  • AA acetic acid
  • ACN acetonitrile
  • AA / ACN with 90/10 volume gradient from 0 to 29 minutes; 85/15 volume gradient at 30-41 minutes; 80/20 volume gradient at 42-43 minutes; 5/95 volume gradient at 44-48 min; Corresponds to the fraction component having a peak at a retention time of 45.85 minutes to 45.95 minutes in the spectrum measured in the region of 90/10 volume gradient at 49-50 minutes, flow rate 1 ml / min, UV wavelength 280 nm.
  • the content of the fermented polyphenol in the post-fermented tea extract may be included in an amount of 10 times to 2000 times, for example, 20 times to 1000 times by weight, compared to the non-fermented green tea extract.
  • the composition may include the post-fermented tea extract in an amount of 0.0001% to 100% by weight, for example, 0.001% to 90% by weight, or 0.05% to 50% by weight relative to the total weight of the composition.
  • the composition having nerve cell protective activity according to another embodiment of the present invention includes a fermented polyphenol as an active ingredient.
  • the fermented polyphenol is the same as described with respect to the composition according to an embodiment of the present invention.
  • composition according to the present embodiment may contain the fermented polyphenol as the post-fermented tea extract.
  • the composition is 0.01% by weight, 0.02% by weight, 0.03% by weight, 0.04% by weight, 0.05% by weight, 0.06% by weight, 0.07% by weight, 0.08% by weight of the fermented polyphenol % Or more, 0.09% or more, 0.1% or more, 0.2% or more, 0.3% or more, 0.4% or more, or 0.5% or more, 40% or less, 39% or less, 38% or less, 37 Up to 36 wt%, up to 35 wt%, up to 34 wt%, up to 33 wt%, up to 32 wt%, up to 31 wt%, up to 30 wt%, up to 29 wt%, up to 28 wt%, 27 Up to 26 wt%, up to 25 wt%, up to 24 wt%, up to 23 wt%, up to 22 wt%, up to 21 wt%, or up to 20 wt%, such as from 0.01 wt% to 40 wt%
  • composition of the present embodiment may exhibit more excellent neuronal activity through synergy through the combination of ingredients included in the post-fermented tea extract.
  • compositions according to embodiments of the present invention may have neuronal cell protective activity to prevent damage or death of nerve cells due to oxidative stress.
  • Damage or death of nerve cells due to the oxidative stress causes symptoms such as memory impairment, cognitive decline, depression or forgetfulness, and the composition may prevent or ameliorate the symptoms.
  • the composition may prevent or alleviate the symptoms of degenerative brain diseases such as Alzheimer's or Parkinson's disease, for example, the symptoms may be due to oxidative stress.
  • compositions according to embodiments of the present invention may be provided in various forms of food additives or functional foods containing the active ingredient. It can be processed into fermented milk, cheese, yogurt, juice, probiotic and health food, including the active ingredient, and can be used in the form of various other food additives.
  • the composition according to the embodiments of the present invention may be a composition for health food.
  • the composition for health foods may have neuroprotective activity to prevent damage or death of nerve cells due to oxidative stress, and may prevent or improve symptoms caused by damage or death of nerve cells.
  • the symptoms may include memory impairment, cognitive decline, depression or forgetfulness.
  • the health food composition may prevent or alleviate the symptoms of the degenerative brain disease.
  • the health food composition may be formulated as pills, capsules, tablets, granules, caramels or drinks. In other embodiments, it may be processed in the form of a liquid, powder, granules, tablets or tea bags and the like.
  • composition may be administered by various methods, such as simple drinking, injection, spray or squeeze.
  • the composition may contain other ingredients and the like that can give a synergistic effect to the main effect within a range that does not impair the main effect of the present invention.
  • it may further include additives such as perfumes, pigments, fungicides, antioxidants, preservatives, moisturizers, thickeners, inorganic salts, emulsifiers and synthetic polymer materials to improve physical properties.
  • additives such as perfumes, pigments, fungicides, antioxidants, preservatives, moisturizers, thickeners, inorganic salts, emulsifiers and synthetic polymer materials to improve physical properties.
  • supplementary ingredients such as water soluble vitamins, oil soluble vitamins, polymer peptides, polymer polysaccharides and seaweed extract may be further included.
  • ingredients may be suitably selected and formulated by those skilled in the art according to the dosage form or purpose of use, and the amount thereof may be selected within a range that does not impair the object and effect of the present invention.
  • the addition amount of the components may be 0.01% to 5% by weight, for example 0.01% to 3% by weight based on the total weight of the composition.
  • composition according to the embodiments of the present invention may be a pharmaceutical composition.
  • the pharmaceutical composition may prevent, treat or alleviate the symptoms of degenerative brain diseases such as Alzheimer's or Parkinson's disease.
  • the pharmaceutical composition may be formulated in oral or parenteral dosage forms in various forms, such as solid, semi-solid or liquid, further comprising a commercially available inorganic or inorganic carrier in accordance with conventional methods.
  • the oral dosage form can be, for example, tablets, pills, granules, soft / light capsules, powders, granules, powders, emulsions, syrups, pellets, and the like.
  • Parenteral dosage forms are, for example, injections, drops, and the like.
  • the pharmaceutical composition may further contain preservatives, stabilizers, hydrating or emulsifying accelerators, pharmaceutical auxiliaries such as salts or buffers for controlling osmotic pressure and other therapeutically useful substances.
  • the pharmaceutical composition may be administered orally, parenteral, topical, transdermal, subcutaneous, rectal, intravenous, intramuscular, intraperitoneal, and the like.
  • the actual dosage of the active ingredient should be determined in light of several relevant factors such as the severity of the symptom, the route of administration chosen, the age, sex, weight and health of the subject. Generally, the dosage of the active ingredient is 0.001 mg / kg / day to 2000 mg / kg / day, for example 0.5 mg / kg / day to 1500 mg / kg / day.
  • the water content was adjusted to 40 wt% by adding water to green tea made from fresh green tea (C. sinensis var. Yabukita) leaves.
  • Bacillus subtillis Bacillus subtillis 5 ⁇ 10 6 cfu / g was inoculated, fermented for 3 days at 50 °C and then fermented at 80 °C 4 days.
  • the fermented tea was dried to 4 to 6% by weight of water with hot air at 70 ° C. to 80 ° C., and then matured at 10 ° C. for 100 days to prepare a fully fermented tea.
  • the post-fermented tea was ground for 15 seconds and filtered through a stainless steel sieve of mesh size 1 mm. 50 mg of the crushed tea was added to a 1.5ml Eppendorf tube, and 1 ml of deionized water was added thereto, stirred at a constant speed for 30 minutes in a 60 ° C constant temperature water bath, and centrifuged at 25 ° C. 13,000rpm for 15 minutes. The supernatant was lyophilized to prepare a complete fermented tea sample.
  • the water content was adjusted to 40 wt% by adding water to green tea made from fresh green tea (C. sinensis var. Yabukita) leaves.
  • Bacillus subtillis 5 ⁇ 10 6 cfu / g was inoculated and fermented at 50 ° C. for 7 days.
  • the fermented tea was dried to hot water of 4 to 6% by weight with hot air of 70 ° C. to 80 ° C., and then aged at 100 ° C. for 100 days to prepare semi-fermented tea.
  • the semi-fermented tea was ground for 15 seconds and sieved through a stainless steel sieve of mesh size 1 mm. 50 mg of the crushed tea was added to a 1.5ml Eppendorf tube, and 1 ml of deionized water was added thereto, stirred at a constant speed for 30 minutes in a 60 ° C constant temperature water bath, and centrifuged at 25 ° C. 13,000rpm for 15 minutes. Semi-fermented tea samples were prepared by lyophilization of the supernatant.
  • the non-fermented green tea leaves were ground for 15 seconds and sieved through a stainless steel sieve of mesh size 1 mm. 50 mg of the crushed tea was added to a 1.5ml Eppendorf tube, and 1 ml of deionized water was added thereto, stirred at a constant speed for 30 minutes in a 60 ° C constant temperature water bath, and centrifuged at 25 ° C. 13,000rpm for 15 minutes. The supernatant was lyophilized to prepare a normal green tea sample.
  • General green tea sample prepared in Preparation Example 3 0% by volume, 10% by volume, 20% by volume, 30% by volume, 40% by volume, 50% by volume, 60% by volume, 70% by volume, respectively, based on the sample weight. %, 80% by volume and 90% by volume in 70 °C ethanol aqueous solution was extracted for 2 hours, concentrated and lyophilized to prepare a general green tea extract.
  • HPLC high performance liquid chromatography
  • the complete fermented tea extract prepared in Preparation Example 4 was filtered through a 0.45 ⁇ m PVDF filter and injected into the apparatus after pretreatment.
  • the instrument was analyzed in the UV 210 ⁇ 400 nm region using HPLC (Waters Alliance 2695 system, Waters, USA), 0.1% Acetic acid using C18 column (Thermo syncronis-C18 4.6 x 250mm, Thermo fisher scientific, USA) It was analyzed by the gradient method using a solvent and Acetonitrile (ACN) solvent.
  • HPLC Waters Alliance 2695 system, Waters, USA
  • Acetic acid using C18 column Thermo syncronis-C18 4.6 x 250mm, Thermo fisher scientific, USA
  • ACN Acetonitrile
  • AA / ACN is 90/10 volume gradient at 0-29 min using 0.1% acetic acid (AA) and acetonitrile (ACN) solvent as the mobile phase; 85/15 volume gradient at 30-41 minutes; 80/20 volume gradient at 42-43 minutes; 5/95 volume gradient at 44-48 min;
  • the spectrum measured in the 90/10 volume gradient, flow rate 1 ml / min, and UV wavelength of 280 nm in 49-50 minutes is shown in FIG.
  • the solvent used in the analysis was HPLC grade reagents, and data processing was performed for component analysis using the Waters Empower II program.
  • the fraction component having a peak in the retention time of about 45.85 minutes to 45.95 minutes, indicated by a red square, is a fermented polyphenol which is a newly produced component by fermentation.
  • the catechin and caffeine contents according to ethanol aqueous solution concentration are shown in FIG. 5.
  • the catechin content increase in the ethanol aqueous solution concentration of 40% by volume is saturated, even if the ethanol aqueous solution concentration increases, the catechin content is almost unchanged, the content difference is not large in the case of caffeine regardless of the solvent concentration.
  • the cell line used in this experiment was Rat pheochromocytoma cell line 12, PC12, and was used by the Korea Cell Line Bank (KCLB).
  • KCLB Korea Cell Line Bank
  • l-glutamine 300mg / L
  • 25mM HEPES 25mM NaHCO3
  • 10% heat inactivated fetal bovine serum FBS
  • FBS heat inactivated fetal bovine serum
  • PC12 cell lines were aliquoted in a 96-well plate 5 ⁇ 10 4 per well and incubated in 37 °C, 5% CO 2 environment. After 24 hours, the cells were replaced with serum free medium, and the whole fermented tea extracts of Preparation Examples 4 and 5 and the general green tea extracts were treated and cultured again for 24 hours. After incubation, 400 ⁇ M of hydrogen peroxide (H 2 O 2 ), which is known to reduce cell viability by causing oxidative stress, was left to stand for 3 hours. After the incubation, 10 ⁇ l of CCK-8 (Dojindo, Japan) solution was added to each well and left at 37 ° C.
  • H 2 O 2 hydrogen peroxide
  • the concentration of the ethanol aqueous solution of the extraction solvent in the range of 30% by volume to 80% by volume it can be confirmed that the neuronal cell damage protection effect of the post-fermented tea extract is excellent.
  • the catechin and caffeine content according to the ethanol aqueous solution concentration is different from the tendency of the neuronal cell damage protection effect, it can be confirmed that the effect is not the effect by catechin.
  • the tendency of the neuronal cell damage protection effect according to the ethanol concentration corresponds to the tendency of the fermented polyphenol content, it can be seen that the effect by the fermented polyphenols analyzed in Test Example 1.
  • the capsules were prepared by filling into gelatin capsules according to a conventional capsule preparation method.
  • Vitamin A Acetate 70 ⁇ g Vitamin E 1.0 mg Vitamin B1 0.13 mg Vitamin B2 0.15 mg Vitamin B6 0.5 mg Vitamin B12 0.2 ⁇ g Vitamin c 10 mg Biotin 10 ⁇ g Nicotinic acid amide 1.7 mg Folic acid 50 ⁇ g Calcium Pantothenate 0.5 mg Mineral mixture Ferrous sulfate 1.75 mg Zinc oxide 0.82 mg Magnesium carbonate 25.3 mg Potassium phosphate monobasic 15 mg Dicalcium Phosphate 55 mg Potassium citrate 90 mg Calcium carbonate 100 mg Magnesium chloride 24.8 mg
  • composition ratio of the vitamin and inorganic mixture is a composition that is relatively suitable for health foods, for example, the composition ratio may be arbitrarily modified, and the above ingredients are mixed according to a conventional health food manufacturing method, and then granules are prepared. And it can be used for manufacturing a health food composition according to a conventional method.
  • Post Fermented Tea Extract 1000 mg Citric acid 1000 mg oligosaccharide 100 g Plum concentrate 2 g Taurine 1 g Purified water Remaining amount Total volume 900 ml
  • the remaining amount of purified water was added to a total volume of 900 ml, and the above ingredients were mixed according to a conventional healthy beverage manufacturing method, and then stirred and heated at 85 ° C. for about 1 hour. Acquired in a sterilized 2 L container, sealed and sterilized, and then refrigerated and used to prepare a healthy beverage composition.

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Abstract

본 명세서에는 후발효차 추출물을 유효성분으로 포함하는 신경 세포 보호용 갖는 조성물이 개시된다. 본 발명 실시예들에 따른 조성물은 신경 세포 보호 활성을 나타내어 산화 스트레스에 기인한 신경 세포의 손상 또는 사멸을 방지하고, 퇴행성 뇌질환의 증상, 기억력 손상, 인지감퇴, 건망증 또는 우울증 등을 예방 또는 개선할 수 있다.

Description

후발효차 추출물을 포함하는 신경 세포 보호용 조성물
본 명세서는 후발효차 추출물을 포함하는 신경 세포 보호용 조성물을 개시한다.
녹차는 잎 상태의 엽차 형태, 또는 보다 깊은 향취를 느끼기 위해 발효 상태의 차로 음용 한다. 발효 녹차는 녹차 잎에 산화 처리를 수행한 것을 의미하며, 차 잎에 존재하는 산화 효소에 의하여 산화시킨 발효차, 차 잎에 존재하는 효소가 아닌 별도의 미생물에 의하여 발효시킨 후발효차를 포함한다. 발효 정도에 따라 약발효차, 반발효차, 완전발효차 등으로 구분할 수 있다. 예를 들어, 발효 녹차는 발효 형태 및 정도에 따라, 녹차, 우롱차, 홍차, 보이차 등과 같은 다양한 명칭으로 불리워진다. 발효 상태의 차는 엽차와 비교하여 향취에 있어 차이를 나타낼 뿐만 아니라, 구체적 발효 공정에 따라 유효 성분의 종류 및 함량에 있어서 큰 차이를 나타낼 수 있다.
산화적 스트레스는 노화, 질병 등에 의하여 유발될 수 있으며, 특히 알츠하이머, 파킨슨병 등의 퇴행성 뇌질환은 그 증상으로서 신경 세포의 손상을 일으킨다. 산화적 스트레스에 의한 신경 세포의 손상은 기억력 손상, 인지 감퇴, 건망증, 우울증 등의 증상으로 나타난다.
노인 인구가 증가함에 따라 노화, 퇴행성 뇌질환에 대한 치료 및 방지에 대한 요구가 증가하고 있으나, 질환이나 노화 자체의 정확한 원인이나 매커니즘이 밝혀지지 않아 노화나 질환 자체의 해소는 어려운 실정이다. 이에, 노화 또는 질환의 증상, 진행에 대한 예방, 완화 또는 개선을 위한 연구가 계속되고 있다.
본 발명의 선행기술은 한국 등록특허공보 제10-0975199호에 기재되어 있다.
일 측면에서, 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 신경 세포 보호 활성을 나타내는 조성물을 제공하는 것이다.
다른 측면에서, 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 산화 스트레스에 기인한 신경 세포의 손상 또는 사멸을 방지하는 조성물을 제공하는 것이다.
다른 측면에서, 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 산화 스트레스에 기인한 퇴행성 뇌질환의 증상을 예방 또는 완화하기 위한 조성물을 제공하는 것이다.
다른 측면에서, 본 발명이 해결하고자 하는 또 다른 과제는 기억력 손상, 인지감퇴, 건망증 또는 우울증을 예방 또는 개선하기 위한 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 일 관점에 따른 조성물은 후발효차 추출물을 유효성분으로 포함하는 신경 세포 보호 활성을 갖는 조성물에 관한다.
본 발명의 다른 관점에 따른 조성물은 후발효차 추출물을 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography, HPLC)로 분리한 발효 폴리페놀을 유효성분으로 포함하는 신경 세포 보호 활성을 갖는 조성물로서,
상기 발효 폴리페놀은 후발효차 추출물을 C18컬럼(Thermo syncronis-C18 4.6 x 250mm, Thermo fisher scientific, USA)을 사용하고, 이동상으로 0.1% 아세트산(AA) 및 아세토니트릴(ACN) 용매를 사용하여 AA/ACN이 0~29분에서 90/10 부피 구배; 30~41분에서 85/15 부피 구배; 42~43분에서 80/20 부피 구배; 44~48분에서 5/95 부피 구배; 49~50분에서 90/10 부피 구배, 유속 1 ㎖/min, UV 파장　280 nm 영역에서 측정한 스펙트럼에서 머무름 시간(retention time) 45.85분 내지 45.95분에서 피크를 가지는 분획 성분인 신경 세포 보호 활성을 갖는 조성물에 관한다.
일 측면에서, 본 발명은 신경 세포 보호 활성을 나타내는 조성물을 제공할 수 있다.
다른 측면에서, 본 발명은 산화 스트레스에 기인한 신경 세포의 손상 또는 사멸을 방지하는 조성물을 제공할 수 있다.
다른 측면에서, 본 발명은 산화 스트레스에 기인한 퇴행성 뇌질환의 증상의 발현을 예방 또는 증상을 완화하기 위한 조성물을 제공할 수 있다.
다른 측면에서, 본 발명은 기억력 손상, 인지감퇴, 건망증 또는 우울증을 예방 또는 개선하기 위한 조성물을 제공할 수 있다.
도 1은 후발효차 추출물을 HPLC 분석한 스펙트럼 결과이다.
도 2는 일반 녹차, 반발효차 및 완전발효차의 성분을 분석한 NMR 결과이다.
도 3은 일반 녹차, 반발효차 및 완전발효차의 각 성분 함량을 비교한 그래프이다.
도 4는 후발효차 추출물의 HPLC 분석 결과에서 발효 폴리페놀 피크를 확대한 것이다.
도 5는 후발효차 추출물의 에탄올 수용액 농도별 카테킨과 카페인의 함량을 나타낸 그래프이다.
도 6은 시험예 3의 산화 스트레스에 의한 세포 생존률을 나타낸 결과 그래프이다.
이하, 첨부한 도면들을 참조하여, 본 출원의 실시예들을 보다 상세하게 설명하고자 한다. 그러나 본 출원에 개시된 기술은 여기서 설명되는 실시예들에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 단지, 여기서 소개되는 실시예들은 개시된 내용이 철저하고 완전해질 수 있도록 그리고 당업자에게 본 출원의 사상이 충분히 전달될 수 있도록 하기 위해 제공되는 것이다. 도면에서 각 구성요소를 명확하게 표현하기 위하여 구성요소의 폭이나 두께 등의 크기를 다소 확대하여 나타내었다. 또한, 설명의 편의를 위하여 구성요소의 일부만을 도시하기도 하였으나, 당업자라면 구성요소의 나머지 부분에 대하여도 용이하게 파악할 수 있을 것이다. 또한, 해당 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 출원의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 본 출원의 사상을 다양한 다른 형태로 구현할 수 있을 것이다.
본 명세서에서, 후발효차는 차 잎에 존재하는 효소가 아닌 별도의 미생물에 의하여 발효시킨 것을 의미한다.
본 명세서에서, 완전발효차는 차잎에 미생물을 첨가하여 90% 이상 발효시켜 만든 차를 의미하고, 상기 반발효차는 차잎에 미생물을 첨가하여 30% 내지 50%로 발효시켜 만든 차를 의미한다.
본 발명 일 실시예에 따른 신경 세포 보호용 조성물은 후발효차 추출물을 유효성분으로 포함할 수 있다.
상기 후발효차의 발효 정도는 반발효차 또는 완전발효차일 수 있으며, 예를 들어 완전발효차일 수 있다. 상기 반발효차는 예를 들어 미생물을 첨가하고 3일 내지 4일 동안 발효시켜 제조할 수 있으며, 상기 완전 발효차는 미생물을 첨가하고 7일 내지 10일 동안 발효시켜 제조할 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
후발효차는 사카로마이세스속(Saccharomyces sp.), 락토바실러스속(Lactobacillus sp.) 및 루코노스톡속(Leuconostoc mesenteroides sp.)으로부터 선택되는 균주를 사용하여 녹차 잎을 발효시켜 제조할 수 있다.
상기 균주는 예를 들어, 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae), 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtlis), 락토바실러스 불가리우스(Lactobacillus bulgarius) 및 루코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides)로부터 선택될 수 있다.
상기 균주는 한국식품연구원 '식품 미생물 유전자은행'으로부터 분양받은 균주이거나, 기타 연구기관 보유군주 또는 상용화된 균주일 수 있으며, 구체적으로 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae, ATCC9763), 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei, KFRI000127), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtlis, F4041, F4163), 락토바실러스 불가리우스(Lactobacillus bulgarius, KFRI000344) 및 루코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides, KFRI 818)로부터 선택된 균주일 수 있다.
녹차 잎의 발효는 상기 균주를 녹차 잎에 접종하여 발효시키는 것을 포함할 수 있다.
상기 녹차 잎은 건조된 녹차 잎, 예를 들어 수분 함량 5중량% 미만의 건엽을 사용하는 경우, 상기 건엽에 물을 첨가하여 사용할 수 있다. 상기 물은 물이 첨가된 녹차 잎 총 중량에 대하여 수분 함량이 20중량% 이상, 25중량% 이상 또는 30중량% 이상, 70중량% 이하, 65중량% 또는 60중량%, 예컨대 이하 30중량% 내지 60중량%가 되도록 첨가할 수 있다. 상기 범위 내에서 균주의 활성을 증진시킬 수 있으며, 녹차 잎의 균일한 발효 및 가공 용이성을 증진시킬 수 있다. 수분 함량이 상기 범위 미만인 경우 녹차 잎의 균일한 발효가 어려울 수 있으며, 상기 범위를 초과하는 경우 녹차 잎끼리 부착되어 가공 공정에 문제가 발생할 수 있고, 최종 후발효차의 형태 및 품질 저하의 원인이 될 수 있다.
상기 균주는 활성화 된 균주를 사용할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 상기 균주의 활성화는 활성 배지에 균주를 접종하고 배양하여 수행할 수 있으며, 예를 들어 활성 배지에 균주를 접종하고, 진동 배양기(shaking incubator)에서 20~30℃에서 2시간 배양할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
상기 녹차 잎 총 중량에 대하여 상기 균주 0.05중량% 이상 또는 0.1중량% 이상, 10중량% 이하 또는 5중량% 이하, 예컨대 0.1~5중량%로 접종할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 균주가 상기 중량 범위를 초과하면 발효 시간은 짧아지며, 최종 후발효차의 수색이 탁해지고, 상기 중량 범위 미만이면 발효 시간이 길어진다. 상기 접종은 예를 들어, 멸균된 반응탱크, 소포장 단위별로 준비된 상기 녹차 주 기질, 배양에 필요한 영양 요구 배지물들을 사용하여, 녹차중량대비 수분함량 비율이 30중량% 내지 60중량%가 되게 물을 첨가하고 활성균을 접종할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
발효 공정은 예를 들어 온도 5℃ 이상, 6℃ 이상 또는 7℃ 이상, 8℃ 이상, 9℃ 이상, 또는 10℃ 이상이고, 55℃ 이하, 54℃ 이하, 53℃ 이하, 52℃ 이하, 51℃ 이하, 50℃ 이하, 49℃ 이하, 48℃ 이하, 47℃ 이하, 46℃ 이하, 45℃ 이하, 44℃ 이하, 43℃ 이하, 42℃ 이하, 41℃ 이하, 40℃ 이하, 39℃ 이하, 38℃ 이하, 37℃ 이하, 36℃이하 또는 35℃이하, 예컨대, 5℃, 6℃, 7℃, 8℃, 9℃, 10℃, 11℃, 12℃, 13℃, 14℃, 15℃, 16℃, 17℃, 18℃, 19℃, 20℃, 21℃, 22℃, 23℃, 24℃, 25℃, 26℃, 27℃, 28℃, 29℃, 30℃, 31℃, 32℃, 33℃, 34℃, 35℃, 36℃, 37℃, 38℃, 39℃, 40℃, 41℃, 42℃, 43℃, 44℃, 45℃, 46℃, 47℃, 48℃, 49℃, 50℃, 51℃, 52℃, 53℃, 54℃, 또는 55℃, 예컨대 7℃~55℃에서 수행될 수 있다. 상기 균주가 바실러스 서브틸리스인 경우, 발효 과정에서의 바실러스 서브틸리스 이외의 잡균 증식을 억제하기 위하여 발효 공정을 25℃ 이상, 26℃ 이상, 27℃ 이상, 28℃ 이상, 29℃ 이상, 또는 30℃ 이상이고, 55℃ 이하, 54℃ 이하, 53℃ 이하, 52℃ 이하, 51℃ 이하, 50℃ 이하, 49℃ 이하, 48℃ 이하, 47℃ 이하, 46℃ 이하, 45℃ 이하, 44℃ 이하, 43℃ 이하, 42℃ 이하, 41℃ 이하, 또는 40℃ 이하, 예컨대 30℃ 이상 55℃ 이하, 35℃ 이상 50℃ 이하의 온도에서 수행될 수 있다. 온도가 상기 범위를 초과하여 고온이면 후발효차의 품질이 저하될 수 있으며, 온도가 상기 범위 미만의 저온이면 반응 시간이 길어지거나 발효가 일어나지 않을 수 있다.
상기 발효 공정은 상술한 온도 범위에서 1차 발효를 수행한 후, 보다 높은 온도, 예를 들어 30℃ 이상, 31℃ 이상, 32℃ 이상, 33℃ 이상, 34℃ 이상, 또는 35℃ 이상이고, 90℃ 이하, 89℃ 이하, 88℃ 이하, 87℃ 이하, 86℃ 이하, 85℃ 이하, 84℃ 이하, 83℃ 이하, 82℃ 이하, 81℃ 이하, 또는 80℃ 이하, 예컨대 35℃ 이상 83℃ 이하의 온도에서 2차 발효를 수행할 수 있다. 고온에서의 2차 발효를 수행하여 반응 시간을 단축시킬 수 있다.
온도가 상기 범위를 초과하여 고온이면 후발효차의 품질이 저하될 수 있으며, 온도가 상기 범위 미만의 저온이면 반응 시간이 길어지거나 발효가 일어나지 않을 수 있다.
발효 공정은 pH 3.5 이상 또는 pH 4.0 이상, pH 8.5 이하 또는 pH 8.0 이하, 예컨대 pH 4.0~8.0에서 이루어질 수 있으며, 상기 범위 내에서 숙성 기간 동안의 잡균 오염을 방지할 수 있다. pH가 상기 범위를 벗어나면 균주의 생육이 어려우며, 균이 실활되어 배양이 충분히 이루어지지 않을 수 있다.
발효 공정은 예를 들어 20시간 이상, 21시간 이상, 22시간 이상, 23시간 이상 또는 24시간 이상, 1000시간 이하, 990시간 이하 980시간 이하, 970시간 이하, 960시간 이하, 950시간 이하, 940시간 이하, 930시간 이하, 920시간 이하, 910시간 이하 또는 900시간 이하, 예컨대 24시간 내지 15일 동안 수행할 수 있다.
상기 발효 공정 후에 살균 공정을 더 수행할 수 있으며, 목적 미생물 이외의 잡균 또는 병원성 균을 제거 또는 배제하기 위한 것이다. 상기 살균 공정은 예를 들어 65℃ 이상, 66℃ 이상, 67℃ 이상, 68℃ 이상, 69℃ 이상, 70℃ 이상, 71℃ 이상, 72℃ 이상, 73℃ 이상, 74℃ 이상, 75℃ 이상, 76℃ 이상, 77℃ 이상, 78℃ 이상, 79℃ 이상 또는 80℃ 이상, 130℃ 이하, 129℃ 이하, 128℃ 이하, 127℃ 이하, 126℃ 이하, 125℃ 이하, 124℃ 이하, 123℃ 이하, 122℃ 이하, 121℃ 이하 또는 120℃ 이하, 예컨대 70~120℃, 예컨대 70~80℃에서 열풍건조하여 수행할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 열풍건조는 3시간 내지 7시간, 예를 들어 4~6시간 동안 수행할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 발효 공정, 또는 발효 공정 및 살균 공정 후에 숙성 공정을 더 수행할 수 있다.
상기 숙성 공정은 온도 3℃이상, 4℃이상 또는 5℃ 이상, 25℃이하, 24℃이하, 23℃이하, 22℃이하, 21℃이하 또는 20℃이하, 예컨대 5~20℃에서 수행될 수 있다. 상기 범위 내에서 장시간 동안 잡균의 오염 없이 유익한 균의 숙성을 유도하고, 잡균에 의한 곰팡이 냄새를 감소시킬 수 있으며, 유익한 균의 향미를 강화할 수 있다. 상기 온도가 20℃를 초과하면 상기 효과가 현저하게 감소한다. 상기 숙성 공정에 제주도 현무암을 이용할 수 있으며, 제주도 현무암의 강한 탈취력과 정수/정화 작용을 통하여 곰팡이 냄새 또는 잡균 냄새를 보다 경감시킬 수 있다.
상기 숙성은 2일 이상, 3일 이상, 4일 이상, 5일 이상, 6일 이상 또는 7일 이상, 8일 이상, 9일 이상, 10일 이상, 150일 이하, 140일 이하, 130일 이하, 120일 이하, 110일 이하, 100일 이하, 90일 이하, 80일 이하, 70일 이하, 60일 이하, 50일 이하, 40일 이하, 30일 이하, 20일 이하, 19일 이하, 18일 이하, 17일 이하, 16일 이하 또는 15일 이하 동안 수행할 수 있으며, 예컨대 7일 내지 120일간 수행할 수 있다.
후발효차 추출물은 상기 후발효차를 30부피% 이상, 31부피% 이상, 32부피% 이상, 33부피% 이상, 34부피% 이상, 35부피% 이상, 36부피% 이상, 37부피% 이상, 38부피% 이상, 39부피% 이상, 40부피% 이상, 41부피% 이상, 42부피% 이상, 43부피% 이상, 44부피% 이상, 45부피% 이상, 46부피% 이상, 47부피% 이상, 48부피% 이상, 49부피% 이상, 또는 50부피% 이상이고, 80부피% 이하, 79부피% 이하, 78부피% 이하, 77부피% 이하, 76부피% 이하, 75부피% 이하, 74부피% 이하, 73부피% 이하, 72부피% 이하, 71부피% 이하, 70부피% 이하, 69부피% 이하, 68부피% 이하, 67부피% 이하, 66부피% 이하, 65부피% 이하, 64부피% 이하, 63부피% 이하, 62부피% 이하, 61부피% 이하, 또는 60부피% 이하, 예컨대 30부피% 내지 80부피%, 40부피% 내지 70부피%, 예를 들어 50부피% 내지 60부피%의 에탄올 수용액으로 추출한 것일 수 있다. 상기 범위 내에서 신경 세포 보호 효과에 기여하는 발효 폴리페놀의 함량이 높아 신경 세포 보호 활성이 우수할 수 있다.
상기 후발효차 추출물은 발효시키지 않은 녹차 추출물(이하, “비발효 녹차 추출물”)에 비하여 카테킨을 저감된 함량으로 포함한다. 예를 들어 비발효 녹차 추출물의 카테킨 함량에 대하여 30중량% 이하, 29%중량% 이하, 28중량% 이하, 27중량% 이하, 26중량% 이하, 25중량% 이하, 24중량% 이하, 23중량% 이하, 22중량% 이하, 21중량% 이하, 20중량% 이하, 19중량% 이하, 18중량% 이하, 17중량% 이하, 16중량% 이하, 15중량% 이하, 14중량% 이하, 13중량% 이하, 12중량% 이하, 11중량% 이하 또는 10중량% 이하이고, 0.1중량% 이상, 0.2중량% 이상, 0.3중량% 이상, 0.4중량% 이상, 0.5중량% 이상, 0.6중량% 이상, 0.7중량% 이상, 0.8중량% 이상, 0.9중량% 이상 또는 1중량% 이상, 예컨대 0.1중량% 내지 30중량%, 0.2중량% 내지 20중량%, 1중량% 내지 20중량%, 또는 0.2중량% 내지 15중량%로 포함할 수 있다. 이는 발효, 숙성 과정에서 카테킨이 산화되기 때문이다.일 구체예에서, 상기 후발효차 추출물은 갈로카테킨갈레이트(gallocatechin gallate)를 추출물 총 중량에 대하여 0.1중량% 내지 10중량%로 포함할 수 있으며, 예를 들어 0.1중량% 이상, 0.2중량% 이상, 0.3중량% 이상, 0.4중량% 이상, 0.5중량% 이상, 0.6중량% 이상, 0.7중량% 이상, 0.8중량% 이상, 0.9중량% 이상 또는 1.0중량% 이상이고, 10중량% 이하, 9중량% 이하, 8중량% 이하, 7중량% 이하, 6중량% 이하, 5중량% 이하, 4중량% 이하 또는 3중량% 이하일 수 있다. 상기 범위 내에서 신경 세포 보호 효과를 증진시킬 수 있다.
일 구체예에서 상기 후발효차 추출물은 카테킨갈레이트(catechin gallate)를 추출물 총 중량에 대하여 0.1중량% 내지 3중량%로 포함할 수 있으며, 예를 들어 0.1중량% 이상, 0.2중량% 이상, 0.3중량% 이상, 0.4중량% 이상, 0.5중량% 이상, 0.6중량% 이상, 0.7중량% 이상, 0.8중량% 이상, 0.9중량% 이상 또는 1.0중량% 이상이고, 3.0중량% 이하, 2.5중량% 이하, 2.0중량% 이하, 1.5중량% 이하 또는 1.0중량% 이하일 수 있다.상기 범위 내에서 신경 세포 보호 효과를 증진시킬 수 있다.
상기 후발효차 추출물은 카페인의 함량 또한 비발효 녹차 추출물에 비하여 저감된다. 일 구체예에서, 상기 후발효차 추출물은 추출물 총 중량에 대하여 카페인을 0.1중량% 내지 5중량%, 예컨대 0.1중량% 이상, 0.2중량% 이상, 0.3중량% 이상, 0.4중량% 이상, 0.5중량% 이상, 0.6중량% 이상, 0.7중량% 이상, 0.8중량% 이상, 0.9중량% 이상 또는 1.0중량% 이상이고, 5.0중량% 이하, 4.5중량% 이하, 4.0중량% 이하, 3.5중량% 이하, 3.0중량% 이하, 2.5중량% 이하, 2.0중량% 이하, 1.5중량% 이하 또는 1.0중량% 이하일 수 있다. 상기 범위 내에서 과도한 카페인으로 인한 부작용 없이 신경 세포 보호 효과가 증진될 수 있다.
상기 후발효차 추출물은 카테킨의 함량이 비발효 녹차 추출물에 비하여는 저감되나, 카페인을 체내 안전성이 유지될 수 있는 수준으로 함유하며, 신경 세포 보호 활성이 우수할 수 있다.
상기 후발효차 추출물은 신경 세포 보호 활성이 우수한 발효 폴리페놀을 포함한다. 발효 폴리페놀은 비발효 녹차를 본 발명 실시예들에 따른 후발효차로 제조하는 발효 과정을 통해 비발효 녹차의 폴리페놀 성분이 변형되어 생성될 수 있다. 상기 발효 폴리페놀은 후발효차 총 중량에 대한 함량이 비발효 녹차에서의 5배 내지 300배, 예를 들어 10배 내지 200배를 포함할 수 있다.
도 1은 후발효차 추출물을 HPLC 분석한 스펙트럼으로, 붉은색 사각형으로 표시한 피크가 상기 발효 폴리페놀을 나타낸다. 구체적으로 상기 발효 폴리페놀은 후발효차 추출물을 C18컬럼(Thermo syncronis-C18 4.6 x 250mm, Thermo fisher scientific, USA)을 사용하고, 이동상으로 0.1% 아세트산(AA) 및 아세토니트릴(ACN) 용매를 사용하여 AA/ACN이 0~29분에서 90/10 부피 구배; 30~41분에서 85/15 부피 구배; 42~43분에서 80/20 부피 구배; 44~48분에서 5/95 부피 구배; 49~50분에서 90/10 부피 구배, 유속 1 ㎖/min, UV 파장　280 nm 영역에서 측정한 스펙트럼에서 머무름 시간(retention time) 45.85분 내지 45.95분에서 피크를 가지는 분획 성분에 해당한다.
상기 후발효차 추출물 중 발효 폴리페놀의 함량은 비발효 녹차 추출물에 비하여 중량비로 10배 내지 2000배, 예를 들어 20배 내지 1000배의 함량으로 포함할 수 있다.
상기 조성물은 후발효차 추출물을 조성물 총 중량에 대하여 0.0001중량% 내지 100중량%, 예를 들어 0.001중량% 내지 90중량%, 또는 0.05중량% 내지 50중량%로 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 실시예에 따른 신경 세포 보호 활성을 갖는 조성물은 발효 폴리페놀을 유효성분으로 포함한다. 상기 발효 폴리페놀은 본 발명 일 실시예에 따른 조성물에 관하여 설명한 바와 동일하다.
본 실시예에 따른 조성물은 상기 발효 폴리페놀을 상기 후발효차 추출물로서 함유할 수 있다.
상기 조성물은 상기 발효 폴리페놀을 조성물 총 중량에 대하여 0.01중량% 이상, 0.02중량% 이상, 0.03중량% 이상, 0.04중량% 이상, 0.05중량% 이상, 0.06중량% 이상, 0.07중량% 이상, 0.08중량% 이상, 0.09중량% 이상, 0.1중량% 이상, 0.2중량% 이상, 0.3중량% 이상, 0.4중량% 이상, 또는 0.5중량% 이상, 40중량% 이하, 39중량% 이하, 38중량% 이하, 37중량% 이하, 36중량% 이하, 35중량% 이하, 34중량% 이하, 33중량% 이하, 32중량% 이하, 31중량% 이하, 30중량% 이하, 29중량% 이하, 28중량% 이하, 27중량% 이하, 26중량% 이하, 25중량% 이하, 24중량% 이하, 23중량% 이하, 22중량% 이하, 21중량% 이하, 또는 20중량% 이하, 예컨대 0.01중량% 내지 40중량%, 예를 들어 0.1중량% 내지 30중량%, 0.5중량% 내지 20중량%로 포함할 수 있다.
본 실시예의 조성물은 후발효차 추출물에 포함되는 성분들의 조합을 통한 상승 작용을 통하여 보다 우수한 신경 세포 활성을 나타낼 수 있다.
본 발명의 실시예들에 따른 조성물은 신경 세포 보호 활성을 가져 산화 스트레스에 기인한 신경 세포의 손상 또는 사멸을 방해할 수 있다.
상기 산화 스트레스에 기인한 신경 세포의 손상 또는 사멸은 기억력 손상, 인지 감퇴, 우울증 또는 건망증과 같은 증상을 유발시키며, 상기 조성물은 상기 증상을 예방 또는 개선할 수 있다.
상기 조성물은 알츠하이머 또는 파킨슨병과 같은 퇴행성 뇌질환의 증상을 예방 또는 완화시킬 수 있으며, 예를 들어 상기 증상은 산화 스트레스에 기인한 것일 수 있다.
본 발명 실시예들에 따른 조성물은 상기 유효성분을 포함하는 다양한 형태의 식품 첨가제 또는 기능성 식품으로 제공될 수 있다. 상기 유효성분을 포함하는 발효유, 치즈, 요구르트, 주스, 생균제제 및 건강식품 등으로 가공될 수 있으며, 그 외 다양한 식품 첨가제의 형태로 사용될 수 있다.
본 발명의 실시예들에 따른 조성물은 건강 식품용 조성물일 수 있다. 상기 건강 식품용 조성물은 신경 세포 보호 활성을 가져 산화 스트레스에 기인한 신경 세포의 손상 또는 사멸을 방해할 수 있으며, 신경 세포의 손상 또는 사멸에 의해 유발되는 증상을 예방 또는 개선할 수 있다. 상기 증상은 기억력 손상, 인지 감퇴, 우울증 또는 건망증 등을 포함할 수 있다. 상기 건강 식품용 조성물은 상기 퇴행성 뇌질환의 증상을 예방 또는 완화시킬 수 있다.
구체예에서, 상기 건강 식품용 조성물은 환제, 캅셀제, 정제, 과립제, 캬라멜제 또는 드링크제 등으로 제형화할 수 있다. 다른 구체예에서, 액제, 분말, 과립, 정제 또는 티백 등의 형태로 가공될 수도 있다.
상기 조성물은 단순 음용, 주사 투여, 스프레이 방식 또는 스퀴즈 방식 등의 다양한 방법으로 투여될 수 있다.
상기 조성물은 본 발명의 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 함유할 수 있다. 예를 들어, 물성 개선을 위하여 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제, 보습제, 점증제, 무기염류, 유화제 및 합성 고분자 물질 등의 첨가제를 더 포함할 수 있다. 그 외에도, 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당 및 해초 엑기스 등의 보조 성분을 더 포함할 수도 있다. 상기 성분들은 제형 또는 사용 목적에 따라서 당업자가 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 그 첨가량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 선택될 수 있다. 예를 들어, 상기 성분들의 첨가량은, 조성물 전체 중량을 기준으로, 0.01중량% 내지 5 중량%, 예를 들어 0.01중량% 내지 3중량% 일 수 있다.
본 발명의 실시예들에 따른 조성물은 약학 조성물일 수 있다. 상기 약학 조성물은 알츠하이머 또는 파킨슨병과 같은 퇴행성 뇌질환의 증상을 예방, 치료 또는 완화시킬 수 있다.
구체예에서, 상기 약학 조성물은, 통상적인 방법에 따라 상용되는 무기 또는 무기의 담체를 더 포함하여 고체, 반고체 또는 액상 등 다양한 형태로 경구 또는 비경구 투여 형태로 제형화할 수 있다.
상기 경구 투여형 제재는 예를 들어 정제, 환제, 과립제, 연/경 캡슐제, 산제, 세립제, 분제, 유탁제, 시럽제, 펠렛제 등일 수 있으며, 비경구 투여형 제재는 예를 들어 주사제, 점적제, 연고, 로션, 스프레이, 현탁제, 유제, 좌제 등일 수 있다. 상기 약학 조성물은 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 또는 완충제 등의 약학적 보조제 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 추가로 함유할 수 있다.
상기 약학 조성물은 경구, 비경구, 국소, 경피, 피하, 직장, 정맥 내, 근육 내, 복강 내 등으로 투여될 수 있다.
유효성분의 실제 투여량은 증상의 중증도, 선택된 투여 경로, 대상의 연령, 성별, 체중 및 건강상태 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되어야 하는 것으로 이해되어야 한다. 일반적으로 유효성분의 투여량은 0.001mg/kg/일 내지 2000mg/kg/일, 예를 들어 0.5mg/kg/일 내지 1500mg/kg/일이다.
이하, 실시예, 비교예 및 시험예를 참조하여 본 발명을 상세히 설명한다. 이들은 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위해 예시적으로 제시한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이 실시예, 비교예 및 시험예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가지는 자에 있어서 자명할 것이다.
[제조예 1] 후발효차(완전발효차)의 제조
신선한 녹차(C. sinensis var. Yabukita) 잎으로 만든 녹차에 물을 첨가하여 수분 함량을 40중량%으로 조정하였다. 여기에 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtillis) 5×106cfu/g을 접종하고, 50℃에서 3일간 발효시킨 후 80℃에서 4일간 발효시켰다. 발효된 차를 70℃ 내지 80℃의 열풍으로 수분 함량 4중량% 내지 6중량%까지 건조한 후, 10℃에서 100일간 숙성하여 완전발효차를 제조하였다.
상기 후발효차를 15초 동안 분쇄하고, 메쉬 사이즈 1mm의 스테인리스 체로 걸렀다. 분쇄된 차 50mg을 1.5ml Eppendorf tube 넣고 1ml의 탈이온수를 첨가하여 60℃ 항온 수조에서 30분간 일정 속도로 교반한 후, 25℃ 13,000rpm에서 15분간 원심분리하였다. 상등액을 동결 건조하여 완전발효차 시료를 제조하였다.
[제조예 2] 후발효차(반발효차)의 제조
신선한 녹차(C. sinensis var. Yabukita) 잎으로 만든 녹차에 물을 첨가하여 수분 함량을 40중량%으로 조정하였다. 여기에 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtillis) 5×106cfu/g을 접종하고, 50℃에서 7일간 발효시켰다. 발효된 차를 70℃ 내지 80℃의 열풍으로 수분 함량 4중량% 내지 6중량%까지 건조한 후, 10℃에서 100일간 숙성하여 반발효차를 제조하였다.
상기 반발효차를 15초 동안 분쇄하고, 메쉬 사이즈 1mm의 스테인리스 체로 걸렀다. 분쇄된 차 50mg을 1.5ml Eppendorf tube 넣고 1ml의 탈이온수를 첨가하여 60℃ 항온 수조에서 30분간 일정 속도로 교반한 후, 25℃ 13,000rpm에서 15분간 원심분리하였다. 상등액을 동결 건조하여 반발효차 시료를 제조하였다.
[제조예 3] 일반 녹차 시료의 준비
발효하지 않은 일반 녹차 건엽을 15초 동안 분쇄하고, 메쉬 사이즈 1mm의 스테인리스 체로 걸렀다. 분쇄된 차 50mg을 1.5ml Eppendorf tube 넣고 1ml의 탈이온수를 첨가하여 60℃ 항온 수조에서 30분간 일정 속도로 교반한 후, 25℃ 13,000rpm에서 15분간 원심분리하였다. 상등액을 동결 건조하여 일반 녹차 시료를 제조하였다.
[제조예 4] 후발효차 추출물의 제조
제조예 1에서 제조된 후발효차 시료를 시료 중량에 대하여 5배수 중량의 각각 0부피%, 10부피%, 20부피%, 30부피%, 40부피%, 50부피%, 60부피%, 70부피%, 80부피% 및 90부피%의 70℃ 에탄올 수용액에 2시간 동안 추출하고, 농축 및 동결건조하여 완전발효차 추출물을 제조하였다.
[제조예 5] 일반 녹차 추출물의 제조
상기 제조예 3에서 제조한 일반 녹차 시료를 시료 중량에 대하여 5배수 중량의 각각 0부피%, 10부피%, 20부피%, 30부피%, 40부피%, 50부피%, 60부피%, 70부피%, 80부피% 및 90부피%의 70℃ 에탄올 수용액에 2시간 동안 추출하고, 농축 및 동결건조하여 일반 녹차 추출물을 제조하였다.
[시험예 1] 일반 녹차 및 후발효차의 성분 분석
상기 제조예 1 내지 3에서 제조한 일반 녹차, 후발효차(반발효차, 완전발효차) 시료를 NMR 분석하였다. 구체적인 분석 조건 및 방법은 1H NMR-based metabolomic characterization during green tea (Camellia sinensis) fermentation (Jang-Eun Lee et al., Food Research International 44 (2011) pp. 597-604)에 기재된 바에 의하였으며, NMR 분석 결과는 도 2 및 도 3에 나타내었다.
도 2 및 도 3의 결과로부터 후발효차는 발효에 의하여 카테킨류 성분이 현저하게 감소하는 것을 확인할 수 있다.
[시험예 2] 후발효차 추출물의 성분 분석
후발효차의 성분검출을 위하여 High performance liquid chromatography (HPLC)를 이용해 분석을 수행하였다.
제조예 4에서 제조한 완전발효차 추출물을 0.45㎛ PVDF filter에 여과, 전처리 후 기기에 주입하였다. 기기는 HPLC(Waters Alliance 2695 system, Waters, USA)를 사용하여 UV 210 ～ 400 nm영역에서 분석하였으며, C18컬럼(Thermo syncronis-C18 4.6 x 250mm, Thermo fisher scientific, USA)을 사용하여 0.1% Acetic acid용매와 Acetonitrile(ACN)용매를 사용한 기울기 용법으로 분석하였다. 구체적으로, 이동상으로 0.1% 아세트산(AA) 및 아세토니트릴(ACN) 용매를 사용하여 AA/ACN이 0~29분에서 90/10 부피 구배; 30~41분에서 85/15 부피 구배; 42~43분에서 80/20 부피 구배; 44~48분에서 5/95 부피 구배; 49~50분에서 90/10 부피 구배, 유속 1 ㎖/min, UV 파장　280 nm 영역에서 측정한 스펙트럼을 도 1에 나타내었다. 분석에 사용된 용매는 HPLC급 시약을 사용하였으며, 데이터 처리는 워터스사의 Empower II 프로그램을 사용하여 성분 분석을 수행하였다.
도 1의 결과에서 붉은색 사각형으로 표시한 머무름 시간(retention time) 약 45.85분 내지 45.95분 영역에 피크가 나타나는 분획 성분이 발효에 의하여 새롭게 생성된 성분인 발효 폴리페놀이다.
상기 피크를 확대하여 도 4에 나타내었으며, 에탄올 수용액의 농도에 따라 함량이 증가하는 것을 확인할 수 있다.
에탄올 수용액 농도별 카테킨과 카페인의 함량을 도 5에 나타내었다. 도 5의 결과에서, 에탄올 수용액 농도 40부피%에서 카테킨 함량 증가는 포화되어 에탄올 수용액 농도가 높아져도 카테킨 함량은 변화가 거의 없으며, 카페인의 경우 용매 농도와 관계 없이 함량 차이가 크지 않다.
[시험예 3] 산화 스트레스에 의한 세포 손상 보호 효과 측정
본 실험에 사용된 세포주는 쥐 크롬친화성 세포종(Rat pheochromocytoma cell line 12, PC12) 이며, 한국세포주은행 (KCLB) 에서 분양 받아 사용하였다. 세포배양을 위해 RPMI1640 배양액 에 L-glutamine (300mg/L), 25mM HEPES, 25mM NaHCO3, heat inactivated fetal bovine serum (FBS) 10% 가 포함되도록 제조한 후, 100 unit/ml의 penicillin, 100 mg/ml의 streptomycin 을 첨가하여 사용하였다. 세포는 37℃, 5% CO2 조건에서 배양하였다.
산화 스트레스에 의한 세포 손상 보호 효과는 MTT법을 변형하여 측정하였다. PC12 세포주를 96-well plate에 well 당 5X104개씩 분주하여 37℃, 5% CO2 환경에서 배양하였다. 24시간 후, serum free 배지로 교체하고 상기 제조예 4 및 5의 완전발효차 추출물 및 일반 녹차 추출물을 처치하여 다시 24 시간 배양하였다. 배양이 끝난 후, 산화적 스트레스를 유발하여 세포 생존율을 감소시키는 것으로 알려져 있는 400μM의 과산화수소 (hydrogen peroxide, H2O2)를 처리하고 3시간 동안 방치하였다. 배양이 끝난 후, 각 well당 10μl의 CCK-8 (Dojindo, Japan) 용액을 첨가하고 37℃, 5% CO2 에서 방치하였다. 2시간 후, Micro-plate reader를 이용하여 450nm 파장에서 흡광도를 측정하였다. 정상 대조군으로는 약물을 첨가하지 않은 well을 사용하여 정상 대조군의 세포 생존률을 1.0으로 하여 정상 대조군 대비 시료 처리군의 세포 생존률을 계산하여 결과를 도 6에 나타내었다.
도 6의 결과에서, 추출 용매인 에탄올 수용액의 농도가 30부피%~80부피%인 범위에서 후발효차 추출물의 신경 세포 손상 보호 효과가 우수한 것을 확인할 수 있다. 앞선 시험예 2의 결과로부터 에탄올 수용액 농도에 따른 카테킨 및 카페인 함량은 상기 신경 세포 손상 보호 효과의 경향성과 다르게 나타나므로, 상기 효과는 카테킨에 의한 효과가 아님을 확인할 수 있다. 반면, 에탄올 농도에 따른 신경 세포 손상 보호 효과의 경향성은 발효 폴리페놀 함량의 경향성에 대응되므로 시험예 1에서 분석된 발효 폴리페놀에 의하여 상기 효과를 나타내는 것을 알 수 있다.
[제형예 1] 정제
본 발명 실시예에 따른 후발효차 추출물 100mg, 락토오스 400mg, 옥수수 전분 400mg 및 스테아린산 마그네슘 2mg을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
[제형예 2] 캡슐제
본 발명 실시예에 따른 후발효차 추출물 100mg, 락토오스 400mg, 옥수수 전분 400mg 및 스테아린산 마그네슘 2mg을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조 방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
[제형예 3] 과립제
본 발명 실시예에 따른 후발효차 추출물 50mg, 무수결정 포도당 250mg 및 전분 550mg을 혼합하고, 유동층 과립기를 사용하여 과립으로 성형한 후 포에 충진하였다.
[제형예 4] 드링크제
본 발명 실시예에 따른 후발효차 추출물 50mg, 포도당 10g, 구연산 0.6g, 및 액상 올리고당 25g을 혼합한 후 정제수 300ml를 가하여 각 병에 200ml씩 충진한다. 병에 충진한 후 130℃ 에서 4~5 초간 살균하여 드링크제를 제조하였다.
[제형예 5] 캬라멜 제형
본 발명 실시예에 따른 후발효차 추출물 50mg, 옥수수 시럽(corn syrup) 1.8g, 탈지우유 0.5g, 대두 레시틴 0.5g, 버터 0.6g, 식물성 경화유 0.4g, 설탕 1.4g, 마가린 0.58g, 및 식염 20mg을 혼합하여 캬라멜 성형 하였다.
[제형예 6] 건강 식품
성분 함량
후발효차 추출물 1000 ㎎
비타민 혼합물
비타민 A 아세테이트 70 ㎍
비타민 E 1.0 ㎎
비타민 B1 0.13 ㎎
비타민 B2 0.15 ㎎
비타민 B6 0.5 ㎎
비타민 B12 0.2 ㎍
비타민 C 10 ㎎
비오틴 10 ㎍
니코틴산아미드 1.7 ㎎
엽산 50 ㎍
판토텐산 칼슘 0.5 ㎎
무기질 혼합물
황산제1철 1.75 ㎎
산화아연 0.82 ㎎
탄산마그네슘 25.3 ㎎
제1인산칼륨 15 ㎎
제2인산칼슘 55 ㎎
구연산칼륨 90 ㎎
탄산칼슘 100 ㎎
염화마그네슘 24.8 ㎎
상기 비타민 및 무기질 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
[제형예 7] 건강 음료
성분 함량
후발효차 추출물 1000 ㎎
구연산 1000 ㎎
올리고당 100 g
매실농축액 2 g
타우린 1 g
정제수 잔량
총 부피 900 ㎖
상기 표 2와 같이 총 부피 900㎖가 되도록 잔량의 정제수를 첨가하여 통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관하여 건강음료 조성물 제조에 사용할 수 있다.

Claims (12)

  1. 후발효차 추출물을 유효성분으로 포함하는 신경 세포 보호용 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 후발효차 추출물은 후발효차를 30부피% 내지 80부피%의 에탄올 수용액으로 추출한 것인 조성물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 후발효차는 사카로마이세스속(Saccharomyces sp.), 락토바실러스속(Lactobacillus sp.) 및 루코노스톡속(Leuconostoc mesenteroides sp.)으로부터 선택되는 균주를 사용하여 녹차 잎을 발효시킨 것인 조성물.
  4. 제3항에 있어서,
    상기 균주는 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae, ATCC9763), 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei, KFRI000127), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtlis, F4041, F4163), 락토바실러스 불가리우스(Lactobacillus bulgarius, KFRI000344) 및 루코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides, KFRI 818)로부터 선택되는 것인 조성물.
  5. 제3항에 있어서,
    상기 후발효차는 녹차 잎에 상기 균주를 접종하여 발효시키고, 상기 발효 후 7일 내지 15일간 숙성시키는 것을 포함하여 제조된 것인 조성물.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 조성물은 발효 폴리페놀을 0.01중량% 내지 40중량%로 포함하고,
    상기 발효 폴리페놀은 상기 발효 폴리페놀은 후발효차 추출물을 C18컬럼(Thermo syncronis-C18 4.6 x 250mm, Thermo fisher scientific, USA)을 사용하고, 이동상으로 0.1% 아세트산(AA) 및 아세토니트릴(ACN) 용매를 사용하여 AA/ACN이 0~29분에서 90/10 부피 구배; 30~41분에서 85/15 부피 구배; 42~43분에서 80/20 부피 구배; 44~48분에서 5/95 부피 구배; 49~50분에서 90/10 부피 구배, 유속 1 ㎖/min, UV 파장　280 nm 영역에서 측정한 스펙트럼에서 머무름 시간(retention time) 45.85분 내지 45.95분에서 피크를 가지는 분획 성분인 조성물.
  7. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 조성물은 산화 스트레스에 기인한 신경 세포의 손상 또는 사멸을 방해하기 위한 건강 식품용인 조성물.
  8. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 조성물은 기억력 손상, 인지 감퇴, 우울증 또는 건망증을 예방 또는 개선하기 위한 건강 식품용인 조성물.
  9. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 조성물은 산화 스트레스에 기인한 퇴행성 뇌질환의 증상을 예방 또는 완화하기 위한 건강 식품용인 조성물.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 퇴행성 뇌질환은 알츠하이머 또는 파킨슨병인 조성물.
  11. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 조성물은 산화 스트레스에 기인한 퇴행성 뇌질환의 증상을 예방, 치료 또는 완화하기 위한 것인 약학 조성물.
  12. 제11항에 있어서,
    상기 퇴행성 뇌질환은 알츠하이머 또는 파킨슨병인 약학 조성물.
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