CN101856433A

CN101856433A - 普洱茶在制备抗衰老所致氧化应激或其相关疾病的药物中的用途

Info

Publication number: CN101856433A
Application number: CN201010205415A
Authority: CN
Inventors: 马治中; 邵宛芳; 屠鹏飞; 张可; 马旭; 袁力丰; 张梁
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2010-06-22
Filing date: 2010-06-22
Publication date: 2010-10-13

Abstract

本发明提供了普洱茶在制备抗衰老所致氧化应激或其相关疾病的药物中的用途。普洱茶或其提取物的抗衰老所致氧化应激用途具体包括以下几个方面：对衰老机体因氧化应激导致的血管内皮细胞损伤具有抑制作用，因而具有预防或延缓老年人群冠心病与脑中风发病的功效；通过抑制衰老氧化应激导致的血管内皮细胞损伤，抑制动脉粥样硬化形成，因而对老年人群的动脉粥样硬化具有预防或延缓的作用；对衰老氧化应激导致的神经元的损伤与死亡具有明显的抑制作用，因而能够预防或延缓老年人群神经退行性疾病。

Description

普洱茶在制备抗衰老所致氧化应激或其相关疾病的药物中的用途

技术领域

本发明涉及一种抗衰老所致氧化应激或其相关疾病的药物，具体涉及普洱茶在制备抗衰老所致氧化应激或其相关疾病的药物或保健品中的用途。

背景技术

众所周知，老年人的常见疾病，包括冠心病、心肌梗死、脑中风、神经退行性疾患、肿瘤、高血压与Ⅱ型糖尿病等是威胁人类生命与健康的最主要疾病。它们不仅致残、致死率极高，而且也造成了个人乃至国家难以承受的巨大经济负担。虽然新的治疗药物与治疗方法的研究和应用日新月异，但仍然不能有效控制这些老年病的发病率、致残率与致死率。因而，世界各国的专家和学者一致认为，预防或延迟老年病发作与进展的研究应该是优先考虑的策略。但老年病的预防研究绝非易事，其难点主要在于两个方面。其一，针对这么多种不同的老年病，要想找出预防它们的良策，首先应该明确这些老年病的共同的、内在的发病机制。其二，老年病是一个长期累积的过程，非一朝一夕所能解决。这就要求研究出来的具体措施应该是老年人群容易接受的且能够长期坚持采用的疗法。

尽管冠心病、脑中风、神经退行性疾病、癌症、高血压与II型糖尿病等疾患的发病原因各不相同。但根据分析可以发现，目前的研究忽视了这些疾患最大的、共同的危险因素就是衰老，即随着人与动物的衰老，上述疾患的发病率明显增高，例如人体在65岁以后，上述疾病的发病率呈现指数级增加。进一步研究发现，尽管上述多种老年常见病的病理机制多种多样，但其存在一个非常明显的共同特点，就是与衰老相关的氧化应激。目前，衰老的氧化应激学说(Oxidative theory ofaging)是得到多数证据支持的，因而也是被广泛认可的衰老学说。这一学说认为，随着机体的衰老，机体细胞线粒体代谢过程中产生的活性氧自由基(reactive oxygen species，ROS)或活性氮自由基(reactive nitrogen species，RNS)增加，同时机体的抗氧化系统，如SOD、POD、GSH以及CAT等随着年龄增长机能也逐渐下降。当产生的自由基超过了抗氧化酶系统的清除能力时，氧自由基等与体内的脂质反应，产生脂质过氧化物，并与蛋白质反应，可使体内的蛋白酶系统破环，其与核酸反应造成细胞内基因突变，基因突变则是产生细胞癌变的基础。上述研究证据证明，氧化应激是机体衰老的主要表现之一。近来的研究又证明，氧化应激还是加速机体衰老的机制，也是许多常见老年病的发病诱因，即机体在衰老过程中所产生的氧化应激损伤是不少老年病的共同发病基础。

众所周知，缺血性脑中风与急性心肌梗死都是由于形成动脉血栓，阻断了心脑组织的血液供应，引起心脑组织的变性与坏死。虽然引起血管内血栓的原因多种多样，如包括动脉粥样硬化斑块的形成，血小板聚集性增高，血液中凝血因子增高等等。但是触发血栓形成的最主要因素就是血管壁内皮细胞的损伤，即长期动脉粥样硬化斑块的存在与血管内皮细胞的急性破损是导致血栓形成，进而导致缺血性脑中风与急性心肌梗死的主要因素。新的研究显示，动脉粥样硬化斑块的形成并不仅仅是由于血液中的胆固醇在血管壁上的沉积，更重要的因素是携带胆固醇的低密度脂蛋白(Lowdensity lipoprotein，LDL)经过氧化应激反应，在血管壁形成了氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)。正是这一病理过程触发了血管壁的炎症反应，加速了斑块的扩大。导致动脉粥样硬化的危险因素包括高胆固醇血症、高血压、吸烟与糖尿病等不同因素，其共同点就是导致血管壁处于氧化应激的环境(pro-oxidant environment)。经研究，血管壁的氧化自由基的产生主要有两个来源，一是血管内皮细胞等血管细胞的NADPH氧化酶(质膜产生过氧化物的酶系统)，它是血管内皮自由基产生的主要酶，如果将此酶的基因敲除，则动脉粥样硬化的发病显著减少。第二个来源是血管内皮细胞线粒体所产生的活性氧自由基，其导致血管内皮细胞损伤，加剧斑块形成，触发血栓形成。

神经退行性疾病是一类老年人常见病，包括老年性痴呆(Alzheimer’sdisease，AD)、帕金森病(Parkinson’s disease，PD)以及肌萎缩性侧索硬化(Amyotrophic lateral sclerosis，ALS)等。目前的研究证据显示，这些疾病的发病机制各不相同，但这些病理机制都与衰老的氧化应激有关。例如，发现家族遗传性ALS患者的神经元细胞浆中抗氧化酶(antioxidant proteinsuperoxide dismutase，SOD1)基因突变；在家族遗传性帕金森病患者中发现有5个基因(即编码α-synuclein、parkin、ubiquitin C-terminal hydrolase-1、DJ1和PTEN-induced kinase-1的基因)与帕金森病的发病有关。研究发现这些不同的基因的突变可能影响不同的靶点，但都与神经元内线粒体异常以及线粒体产生内源性ROS有关。内源性ROS导致神经元的损伤与死亡。对于老年性痴呆(AD)，研究发现淀粉样蛋白(Aβ)的聚集、沉积形成老年性斑块，并诱导神经元死亡是目前已被广为认可的AD病理机制。近来研究证明，Aβ诱发神经元内部ROS的产生，而后者诱导了神经元的死亡。

上述研究说明氧化应激不仅是机体衰老的表现，也是在衰老的基础上导致多种老年病的病理机制。但是，通过对衰老的氧化应激的干预来达到对老年性疾病的预防和治疗的策略和手段目前还没有得到充分研究以及实际应用。

普洱茶是一种在我国具有上千年历史的饮品。根据文献记载，普洱茶具有减肥、降脂、清脑等多种功效。现代研究发现，普洱茶具有降低血脂，降低血中胆固醇水平的作用，因此深入研发普洱茶的作用和拓展其应用范围将具有良好的前景。

发明内容

本发明对中国传统普洱茶及其提取物进行了研发，发现普洱茶及其提取物通过对抗衰老血管内皮细胞与大脑神经细胞的衰老变化，即抑制内源性ROS的产生，抑制这些细胞因衰老而产生的退变与死亡，改善了由此导致的血管易于形成血栓，神经易于产生退行性病变的病理状态。这样通过抑制衰老引起的变化，达到削减老年病的发病基础，从而对老年人群发挥预防、治疗与保健的作用。基于这些作用，本发明公开了普洱茶及其提取物用于与血管衰老以及神经衰老相关的常见病的预防、治疗以及保健的用途。

具体而言，本发明的目的之一是提供普洱茶或其提取物在制备抗衰老所致氧化应激或其相关疾病的药物或保健品中的应用。抗衰老所致氧化应激的用途具体包括以下几个方面：其一，老年人群由于衰老产生的氧化应激导致血管内皮细胞损伤，易于发生血栓，导致老年人群冠心病或脑中风的发病率增高。本发明经研究证明，普洱茶或其提取物对衰老机体因氧化应激导致的血管内皮细胞损伤具有抑制作用，因而具有预防或延缓老年人群冠心病与脑中风发病的功效。其二，衰老产生的氧化应激可导致血管内皮细胞损伤与死亡，这一病理过程也是导致动脉血栓形成与动脉粥样硬化的主要机制之一。本发明经研究证明，普洱茶提取物通过抑制衰老氧化应激导致的血管内皮细胞的损伤，抑制动脉血栓与动脉粥样硬化的形成，因而对老年人群的动脉粥样硬化具有预防或延缓的作用。其三，衰老氧化应激可以导致衰老机体神经元的损伤与死亡，这一病理变化是导致老年人群易于罹患神经退行性疾病的主要机制之一。本发明经研究证明，普洱茶及其提取物对衰老氧化应激导致的神经元损伤与死亡具有明显的抑制作用，因而能够预防或延缓老年人群神经退行性疾病(包括老年性痴呆，帕金森病等)。

用于实现上述目的的技术方案如下：

普洱茶或其提取物在制备预防和/或治疗衰老所致氧化应激或其相关疾病的药物或保健品中的用途。优选地，衰老所致氧化应激或其相关疾病为老年人的衰老所致氧化应激或其相关疾病。

在上述用途中，衰老所致氧化应激或其相关疾病可以选自血管损伤或其相关疾病；以及神经损伤或其相关疾病中的一种或多种。具体来说，血管损伤或其相关疾病可以选自血栓性疾病，例如心绞痛、心肌梗塞和脑中风；动脉粥样硬化；血栓性静脉炎；高血压；以及糖尿病血管性并发症，例如糖尿病眼底血管并发症、糖尿病四肢末梢血管并发症、糖尿病肾脏并发症和糖尿病脑血管并发症中的一种或多种。神经损伤或其相关疾病可以选自老年性痴呆；帕金森病；血管性痴呆；以及肌萎缩性侧索硬化中的一种或多种。

在上述用途中，普洱茶可以为普洱茶生茶和/或普洱茶熟茶。优选地，普洱茶提取物为普洱茶水提取物。

普洱茶提取物的制备方法可以包括将普洱茶加水煮沸后过滤，取滤液。具体来说，普洱茶提取物的制备方法可以包括以下步骤：

(1)将普洱茶加水煮沸20分钟，普洱茶与水的质量比为1∶20；

(2)过滤，再将普洱茶加水煮沸20分钟，普洱茶与水的质量比为1∶20；

(3)过滤，再将普洱茶加水煮沸10分钟，普洱茶与水的质量比为1∶10；

(4)合并滤液，减压浓缩。

上述药物还可以包含药学上可接受的载体和/或赋形剂。

虽然氧化应激损伤在动脉粥样硬化与血栓形成中的作用已被研究证实，但在衰老机体中，氧化应激与动脉粥样硬化和血栓形成的关系则鲜有报道。我们经过实验研究，首次证明了衰老小鼠的血管内皮细胞浆的线粒体以及NADPH氧化酶所产生的ROS比青年小鼠显著增加，当连续灌喂普洱茶水提取物的老年小鼠离体培养24小时后，老年小鼠血管内皮细胞内产生的ROS水平下降，由于衰老而诱发的血管内皮细胞的死亡亦随之下降。同时，给予老年小鼠连续灌喂不同剂量的普洱茶水提取物后，老年小鼠活体的血栓形成时间也明显延长，这就说明普洱茶水提取物能够对抗衰老机体氧化应激诱发的血管内皮细胞损伤，可以在一定程度上预防和治疗老年人的血栓形成。我们的实验还证明，在衰老模型小鼠的离体原代培养的神经元中，由线粒体产生的内源性ROS比青年小鼠显著增高，由ROS诱导的神经元凋亡也明显增高。普洱茶提取物能够抑制衰老动物脑内神经元线粒体ROS的产生，并且抑制由于ROS的产生所导致的神经元死亡，因而对老年机体易患老年神经退行性疾病的根本原因具有抑制作用。

本发明基于衰老与老年常见病具有共同病理机制的证据，通过对衰老的氧化应激的干预来达到对老年性疾病的延缓或预防。有关普洱茶对衰老有关的氧化应激的作用，对老年常见病是否具有延缓的作用，对老年人群是否具有保健的功效，迄今还没有研究报道，特别是对于由于衰老氧化应激诱发老年病中的氧化应激损伤作用，迄今更没有系统的研究报道。因此，本发明的研究具有重大意义，这不仅是因为阐明普洱茶的保健功效的意义非同寻常，还因为氧化应激是一个每天都发生的过程，特别是对于衰老诱发的氧化应激，需要长期坚持不懈地抗氧化应激才能产生实质上的、显著的临床疗效。更重要的是，普洱茶是一种为老年人群能够广为接受的、日常服用简便的、能够持久应用的饮品，其对减轻国家和个人的经济负担的巨大意义也是不言而喻的。

为了观察普洱茶提取物的抗衰老氧化应激的作用，本发明采用国际上公认的衰老动物模型-快速老化亚系(Senescence accelerated mouse/prone，SAM-P8系，8月龄)为实验观察动物，同时采用抗快速老化亚系(Senescence accelerated mouse/resistance，SAM-R1系，8月龄)为青年对照鼠。月龄的选择依据国际上选择P系、R系的主要标准，即老化度评分，其中SAM-P8鼠在8月龄时衰老程度表现明显突出，而同月龄的SAM-R1鼠尚处于青壮年阶段。本发明通过给SAM-P8鼠(8月龄)灌喂不同剂量的普洱茶生茶提取物、普洱茶熟茶提取物。用药一个月后，通过用包括流式细胞技术在内的多种方法，分析动物心肌，脑与肝组织的抗氧化应激酶的活性单位以及氧化应激代谢产物的含量，动脉粥样斑块的形成以及动脉血栓的形成。

本发明的实验结果表明，普洱茶提取物能够延缓或对抗机体血管内皮细胞由于在衰老过程中线粒体内源性的ROS产生增加从而导致的死亡，以及导致的血管内皮细胞易于损伤、血栓易于形成的状态，即老年人群易于形成血栓的一个主要原因。也就是说，普洱茶提取物具有延缓或对抗老年人群多发心肌梗死(冠状动脉血栓形成)以及脑中风(脑动脉血栓形成)的病理状态的药理作用。另一个方面，普洱茶提取物还抑制衰老动物神经元内线粒体ROS的产生。许多最新的研究证据显示，伴随衰老的进程，人和动物脑神经元线粒体的内源性ROS的产生增加，是老年机体易患神经退行性疾病的主要机制。本发明的实验证明，普洱茶提取物能够抑制衰老动物脑内神经元线粒体ROS的产生，并且抑制由于ROS产生所导致的神经元的死亡，因而对老年机体易患老年神经退行性疾病的根本原因具有抑制作用，可用于老年人群以预防和治疗老年神经退行性疾病。综上所述，普洱茶及其提取物可适用于抗神经衰老与血管内皮衰老，以及由衰老所导致的老年性血栓形成以及神经退行性患者的预防、治疗和保健。

本发明的有益效果包括：(1)对普洱茶及其提取物的抗衰老氧化应激作用、抗衰老血管内皮氧化应激损伤的原因及其后果(易于形成血栓)、抗神经元氧化应激损伤的原因及其后果(神经元的退行性凋亡)等进行了在体与离体的研究分析，阐明了普洱茶及其提取物对于衰老与部分老年常见病的预防、保健和治疗功效；(2)证明了普洱茶及其提取物能够通过抑制衰老血管内皮细胞的衰老变化，保护血管内皮细胞，预防或减少老年人群动脉血栓的形成。(3)证明了普洱茶提取物能够对抗与衰老相关的神经元退化，能够预防或减少由于衰老而导致的神经退行性疾病。

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：

图1：普洱茶水提取物对衰老动物模型SAM-P8小鼠心肌组织抗氧化酶活性SOD的影响，数值均以均值±标准差表示。##，P＜0.01，老化比较鼠SAM-P8(图中为P8)与青年鼠SAM-R1(图中为R1)比较；***P＜0.001，不同浓度的普洱茶提取物给药组与SAM-P8比较。其中，Sheng-L：生茶低剂量组125mg/kg；Sheng-M：生茶中剂量组250mg/kg；Sheng-H：生茶高剂量组500mg/kg；Shou-L：熟茶低剂量组125mg/kg；Shou-M：熟茶中剂量组250mg/kg；Shou-H：熟茶高剂量组500mg/kg。

图2：普洱茶水提取物对衰老动物模型SAM-P8小鼠肝组织抗氧化酶活性SOD的影响，数值均以均值±标准差表示。###P＜0.001，老化比较鼠SAM-P8(图中为P8)与青年鼠SAM-R1(图中为R1)比较；*P＜0.05，***P＜0.001，不同浓度的普洱茶提取物给药组与SAM-P8比较。Sheng-L：生茶低剂量组125mg/kg；Sheng-M：生茶中剂量组250mg/kg；Sheng-H：生茶高剂量组500mg/kg；Shou-L：熟茶低剂量组125mg/kg；Shou-M：熟茶中剂量组250mg/kg；Shou-H：熟茶高剂量组500mg/kg。

图3：普洱茶水提取物对衰老动物模型SAM-P8小鼠脑组织抗氧化酶活性SOD的影响，数值均以均值±标准差表示。###P＜0.001，老化比较鼠SAM-P8(图中为P8)与青年鼠SAM-R1(图中为R1)比较；***P＜0.001，不同浓度的普洱茶提取物给药组与SAM-P8比较。Sheng-L：生茶低剂量组125mg/kg；Sheng-M：生茶中剂量组250mg/kg；Sheng-H：生茶高剂量组500mg/kg；Shou-L：熟茶低剂量组125mg/kg；Shou-M：熟茶中剂量组250mg/kg；Shou-H：熟茶高剂量组500mg/kg。

图4：普洱茶水提取物对衰老动物模型SAM-P8小鼠心肌组织氧化应激代谢产物MDA的影响，数值均以均值±标准差表示。###P＜0.001，老化比较鼠SAM-P8(图中为P8)与青年鼠SAM-R1(图中为R1)比较；*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，不同浓度的普洱茶提取物给药组与SAM-P8比较。Sheng-L：生茶低剂量组125mg/kg；Sheng-M：生茶中剂量组250mg/kg；Sheng-H：生茶高剂量组500mg/kg；Shou-L：熟茶低剂量组125mg/kg；Shou-M：熟茶中剂量组250mg/kg；Shou-H：熟茶高剂量组500mg/kg。

图5：普洱茶水提取物对衰老动物模型SAM-P8小鼠肝组织氧化应激代谢产物MDA的影响，数值均以均值±标准差表示。###P＜0.001，老化比较鼠SAM-P8(图中为P8)与青年鼠SAM-R1(图中为R1)比较；***P＜0.001，不同浓度的普洱茶提取物给药组与SAM-P8比较。Sheng-L：生茶低剂量组125mg/kg；Sheng-M：生茶中剂量组250mg/kg；Sheng-H：生茶高剂量组500mg/kg；Shou-L：熟茶低剂量组125mg/kg；Shou-M：熟茶中剂量组250mg/kg；Shou-H：熟茶高剂量组500mg/kg。

图6：普洱茶水提取物对衰老动物模型SAM-P8小鼠脑组织氧化应激代谢产物MDA的影响，数值均以均值±标准差表示。###P＜0.01，老化比较鼠SAM-P8(图中为P8)与青年鼠SAM-R1比较；***P＜0.001，不同浓度的普洱茶提取物给药组与SAM-P8比较。Sheng-L：生茶低剂量组125mg/kg；Sheng-M：生茶中剂量组250mg/kg；Sheng-H：生茶高剂量组500mg/kg；Shou-L：熟茶低剂量组125mg/kg；Shou-M：熟茶中剂量组250mg/kg；Shou-H：熟茶高剂量组500mg/kg。

图7：普洱茶水提取物对衰老动物模型SAM-P8小鼠血管内皮细胞内源性ROS产生的影响，该图为血管内皮细胞的流式细胞图。结果显示，(A)青年小鼠血管内皮细胞产生ROS的阳性细胞比例为20.46％；(B)而老年小鼠产生ROS的比例为75.23％；(C)当给老年小鼠灌喂普洱茶熟茶水提取物(125mg/kg)一个月后，血管内皮细胞产生ROS的比例又下降到了20.53％。实验重复三次，均出现同样的结果，并显现明显的统计学意义。

图8：普洱茶水提取物对衰老动物模型SAM-P8小鼠活体血栓形成时间的延缓作用，数值均以均值±标准差表示。###P＜0.001，老年小鼠SAM-P8(图中为P8)与青年鼠SAM-R1比较；*P＜0.05，***P＜0.001，不同浓度的普洱茶提取物给药组与SAM-P8比较。Sheng-L：生茶低剂量组125mg/kg；Sheng-M：生茶中剂量组250mg/kg；Sheng-H：生茶高剂量组500mg/kg；Shou-L：熟茶低剂量组125mg/kg；Shou-M：熟茶中剂量组250mg/kg；Shou-H：熟茶高剂量组500mg/kg。本项研究发现，衰老动物SAM-P8小鼠的血管内皮细胞抗损伤能力下降。当受到损伤后，血管内皮细胞迅速脱落，诱发血栓形成，堵塞血管，血栓形成时间比青年对照动物SAM-R1小鼠明显缩短。当给予SAM-P8鼠(8月龄)灌喂不同剂量的普洱茶生茶提取物、普洱茶熟茶提取物，用药一个月后，动脉血栓形成时间明显延长，说明普洱茶提取物对衰老的动脉内皮细胞具有保护作用，使衰老动物的动脉内皮细胞抗损伤能力增强，显示出预防和延缓血栓形成的作用。

图9：普洱茶水提取物对衰老动物模型SAM-P8小鼠脑神经元内源性ROS产生的影响，该图为成体神经细胞的流式细胞图。结果显示，(A)青年小鼠神经细胞产生ROS的阳性细胞比例为0.41％；(B)而老年小鼠产生ROS的比例为78.40％；(C)当给老年小鼠灌喂普洱茶熟茶水提取物(500mg/kg)一个月后，血管内皮细胞产生ROS的比例下降到了40.53％。实验重复三次，均出现同样的结果，并显示出明显的统计学意义。

图10：普洱茶水提取物对衰老动物模型SAM-P8小鼠脑神经元细胞凋亡的影响，该图为成体神经细胞的流式细胞图。结果显示，(A)青年小鼠神经细胞的凋亡比例为2.69％；(B)而老年小鼠的凋亡比例为5.36％；(C)当老年小鼠的神经细胞加入普洱茶生茶提取物后，细胞凋亡的比例下降到了0.49％；(D)当老年小鼠的神经细胞加入普洱茶熟茶提取物后，细胞凋亡的比例下降到了3.94％。实验重复三次，均出现同样的结果，并显示出明显的统计学意义。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。

实施例1普洱茶水提取物的制备

分别取普洱茶生茶或熟茶，粉碎成粗粉。沸水浸提三次，茶叶与水的质量比分别为1∶20；1∶20；1∶10；浸提时间分别为20分钟、20分钟、10分钟。合并滤液，60℃减压浓缩得茶汤浓缩液。将茶汤浓缩液装瓶灭菌(120℃，20分钟)，低温冷藏(4℃)备用，或将提取液经真空干燥得普洱茶提取物。

实施例2普洱茶提取物的药理活性研究

1.实验药物：

普洱茶提取物的制备工艺参见实施例1。

2.实验动物：

实验动物选用国际上公认的衰老动物模型-快速老化亚系(Senescenceaccelerated mouse/prone，SAM-P8，雄性，8月龄)。采用抗快速老化亚系(Senescence accelerated mouse/resistance，SAM-R 1，雄性，8月龄)为青年对照鼠。

3.实验方法：

(1)普洱茶水提取物对衰老动物模型SAM-P8小鼠心肌、肝或脑组织抗氧化酶活性SOD的影响。通过口服灌喂给予快速老化鼠SAM-P8不同剂量的普洱茶提取物，青年对照组抗快速老化亚系和老年对照组快速老化亚系每天灌胃等量蒸馏水，连续用药4周。分别取动物的心肌，肝与脑组织，-20℃保存备用。然后用丙二醛(MDA)测定试剂盒以及超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒测定心肌、肝与脑组织的氧化应激代谢产物MDA与机体内源性抗氧化酶的活性，实验结果参见图1至6。

(2)普洱茶水提取物对衰老动物模型SAM小鼠血管内皮细胞或脑神经元内源性ROS产生的影响。通过口服灌喂给予快速老化鼠SAM-P8不同剂量的普洱茶提取物，青年对照组抗快速老化亚系和老年对照组快速老化亚系每天灌胃等量蒸馏水，连续用药4周。然后动物在无菌条件下，分离脑组织微血管内皮细胞与大脑皮层神经元，按照微血管内皮细胞与成体神经元的标准培养方法，进行细胞培养。

细胞内源性ROS产生的分析：a)神经细胞的处理：将从老年小鼠(SAM-P8)与青年小鼠(SAM-R1)中获取的大脑神经细胞进行离体培养，在细胞培养体系中加入ROS探针DCFDA后，进行流式细胞检测。b)血管内皮细胞的处理：将从老年小鼠(SAM-P8)与青年小鼠(SAM-R1)中获取的血管内皮细胞进行离体培养，在细胞培养体系中加入ROS探针DCFDA后，进行流式细胞检测。

流式细胞检测与分析：将给药组和对照组悬浮细胞(1～5×10⁵)用无血清的培养基洗2次；然后加入400μl PBS混匀细胞；将细胞摇匀，分别置于BD流式专用试管中。每管100μl，离心1500转/分，5分钟，弃上清。将沉淀细胞用PBS洗三遍。再加入2μl的荧光探针(终浓度为2.5μM)的2，7-二氯荧光素双醋酸盐(dichlorofluorescin dictate，DCF-DA，MolecularProbes公司产品，Eugene，OR，USA)，37℃避光，用美国FACS Caliber流式细胞仪(FACS Calibur TM，BD Biosciences，San Diego，CA，USA)上机对淋巴细胞亚群进行流式检测和分析。实验结果参见图7和9。

(3)普洱茶水提取物对衰老动物模型SAM-P8小鼠活体血栓形成时间的延缓作用。通过口服灌喂给予快速老化鼠SAM-P8不同剂量的普洱茶提取物，青年对照组抗快速老化亚系和老年对照组快速老化亚系每天灌胃等量蒸馏水，连续用药4周。实验方法为麻醉分离小鼠的腹主动脉，动脉的远端接仪器的温度探头，动脉近端给予1.5毫伏的电刺激以损伤动脉内皮细胞，动脉内皮细胞的损伤将触发血栓形成。随着动脉管腔内血栓的形成，血流逐渐被阻断，动脉远端的温度逐渐下降。当血流被完全阻断时，仪器报警，并显示阻塞时间(obstrutive time，OT)。实验结果参见图8。

(4)普洱茶水提取物对衰老动物模型SAM-P8小鼠脑神经元细胞凋亡的影响。实验方法为分别从老年小鼠(SAM-P8)与青年小鼠(SAM-R1)中获取大脑神经细胞，进行离体培养，在细胞培养体系中首先加入10μg/ml的普洱茶生茶提取物或普洱茶熟茶提取物共孵育24小时后，在细胞培养体系中加入ROS探针DCFDA后，进行流式细胞检测。

流式细胞检测与分析：将正常培养和经孵育处理的悬浮细胞(1～5×10⁵)用无血清的培养基洗2次；然后加入400μl PBS混匀细胞；将细胞摇匀，分别置于BD流式专用试管中。每管100μl，离心1500转/分，5分钟，弃上清。将沉淀细胞用PBS洗三遍。再加入2μl的荧光探针(终浓度为2.5μM)的2，7-二氯荧光素双醋酸盐(dichlorofluorescin dictate，DCF-DA，Molecular Probes公司产品，Eugene，OR，USA)，37℃避光，用美国FACSCaliber流式细胞仪(FACS Calibur TM，BD Biosciences，San Diego，CA，USA)上机对淋巴细胞亚群进行流式检测和分析。实验结果参见图10。

Claims

1.普洱茶或其提取物在制备预防和/或治疗衰老所致氧化应激或其相关疾病的药物或保健品中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述衰老所致氧化应激或其相关疾病为老年人的衰老所致氧化应激或其相关疾病。

3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述衰老所致氧化应激或其相关疾病选自血管损伤或其相关疾病；以及神经损伤或其相关疾病中的一种或多种。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述血管损伤或其相关疾病选自血栓性疾病，例如心绞痛、心肌梗塞和脑中风；动脉粥样硬化；血栓性静脉炎；高血压；以及糖尿病血管性并发症，例如糖尿病眼底血管并发症、糖尿病四肢末梢血管并发症、糖尿病肾脏并发症和糖尿病脑血管并发症中的一种或多种。

5.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述神经损伤或其相关疾病选自老年性痴呆；帕金森病；血管性痴呆；以及肌萎缩性侧索硬化中的一种或多种。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的用途，其特征在于，所述普洱茶为普洱茶茶和/或普洱茶熟茶。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的用途，其特征在于，所述普洱茶提取物为普洱茶水提取物。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的用途，其特征在于，所述普洱茶提取物的制备方法包括将普洱茶加水煮沸后过滤，取滤液。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的用途，其特征在于，所述普洱茶提取物的制备方法包括以下步骤：

(1)将普洱茶加水煮沸20分钟，普洱茶与水的质量比为1∶20；

(4)合并滤液，减压浓缩。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的用途，其特征在于，所述药物包含药学上可接受的载体和/或赋形剂。