CN101411781A - 普洱茶在制备治疗或预防糖尿病的药中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了普洱茶及其制剂在制备治疗或预防糖尿病的药中的应用。所述的产品具有能抑制蛋白质酪氨酸磷酸酶1B的活性，可作为与蛋白质酪氨酸磷酸酶1B相关疾病的食品、药物或药物组合成分；并可作为治疗II型糖尿病、肥胖症等一系列和PTP1B相关疾病的食品、药物或药物组合。本发明提供了普洱茶及其制剂的新用途，揭示了良好的药用前景。

Description

普洱茶在制备治疗或预防糖尿病的药中的应用

技术领域

本发明涉及普洱茶的用途，更具体地说，涉及普洱茶及其制剂在制备治疗或预防糖尿病的药中的应用。

背景技术

众所周知，糖尿病是一种严重危害人类健康的常见病，糖尿病终身不愈，并发症广泛而严重。值得警惕的是，近年来糖尿病有逐年增加的趋势，而且发病年龄低龄化。如何寻找安全有效的治疗糖尿病的药物，是长期以来人们渴望解决但始终未能获得成功的技术难题。

糖尿病在临床上主要分为两种类型：I型糖尿病和II型糖尿病，其中II型糖尿病占发病总数的80％～90％，全世界超过1亿人患有II型糖尿病，II型糖尿病的病因主要是机体组织对胰岛素的阻抗和胰岛B细胞分泌胰岛素相对不足，胰岛素阻抗是指胰岛素作用的靶器官或靶组织如肝脏、肌肉、脂肪组织等对一定量的胰岛素的生物学反应低于预计的正常水平。

目前临床上虽有一些药物用于治疗II型糖尿病，但均具有一些毒副作用。例如，以前认为是最有希望的治疗II型糖尿病的一类药物，目前临床上仍然使用的thiazolidinedione(四氢噻唑二酮)类药物，它们是通过过氧化物酶增生物激活γ受体增加脂肪细胞分化增殖来提高胰岛素敏感性的一类药物，现已发现它们通常导致患者体重增加并具其它的副作用。因此。目前急需安全、有效的靶标药物。

普洱茶是我国传统的饮品，至今已有1700多年的悠久历史，人们在饮茶过程中也总结出普洱茶具有明目、助消化、抑菌消炎、降脂、防治动脉硬化、预防便秘、解酒等保健功效。当前，客以品饮普洱茶为时尚，广受海内外人士的喜爱。但是，对普洱茶的研究一直还比较粗放，不够深入；普洱茶的功效还有待进一步开发。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供普洱茶的新用途，即普洱茶及其制剂在制药中的新应用。

实际上，本发明涉及普洱茶及其制剂作为制备治疗或预防糖尿病的药中的应用。

尤其是涉及普洱茶及其制剂作为制备蛋白质酪氨酸磷酸酶1B(ProteinTyrosine Phosphatase1B，PTP1B)抑制剂的药中的应用。

涉及普洱茶及其制剂作为制备治疗或预防II型糖尿病的药中的应用。

还涉及普洱茶及其制剂作为制备治疗或预防肥胖症的药中的应用。

本发明的目的通过下述技术方案予以实现。

A.本发明技术方案的基本思路

1.人体和动物体内有许多蛋白质酪氨酸磷酸酶，它们和酪氨酸激酶一道控制着蛋白质酪氨酸的磷酸化作用，这些酶在细胞内信号传导过程中发挥着重要的作用，并且与许多病理现象都有密切的联系，其中蛋白质酪氨酸磷酸酶1B(Protein Tyros ine Phosphatase1B，PTP1B)是最热门的研究对象之一，因为近年来对PTP1B的体内和体外的研究都提供了令人振奋的证据：PTP1B是一个治疗II型糖尿病和肥胖症的重要靶标，因此对PTP1B的抑制是一种治疗II型糖尿病和肥胖症的极有前景的疗法。

2.PTP1B是一种胞内的蛋白质酪氨酸磷酸酶，位于内质网。它是由诺贝尔生理和医学奖得主Edmond.H.Fischer于1988年在人胎盘细胞中第一次分离得到的。PTP1B由435个氨基酸残基组成，分子量49666Da，它在各种细胞中都广泛表达，包括像肝脏、肌肉和脂肪这些作为胰岛素代谢的重要调节剂的组织。近年来的研究已经证明，PTP1B是胰岛素信号的一个特异性负调节剂，PTP1B基因敲除的小鼠对胰岛素有极强的敏感性，并且用高脂肪食料长期喂养仍然不增加体重；另外还发现，用PTP1B反义寡核苷酸可以恢复糖尿病小鼠对胰岛素的敏感性，这也阐明了PTP1B在糖尿病状态下的作用；另外在糖尿病病人体内PTP1B的活性要比正常人高30％。这些研究表明，PTP1B能调节胰岛素信号而且这种把PTP1B作为靶标来抑制的方式在治疗II型糖尿病和肥胖症上具有重要的临床应用前景。

B.为了更好地理解本发明的实质，下面将用普洱茶的药理试验及结果来说明其在制药领域中的新用途，同样的，普洱茶制剂均可达到同样的药理效果。

1.本发明所述的普洱茶是通过传统或现代的普洱茶生产工艺制备的普洱生茶(生饼)、熟茶(熟饼)、紧压茶或散茶。而所述的普洱茶制剂可以是通过以普洱茶为原料或原料之一所制备得到的一种制剂。制剂以普洱茶为主要原料或原料之一，包括普洱茶水煎剂、普洱茶粉剂、普洱茶浸膏、普洱茶丸剂、普洱茶口服液或普洱茶针剂。

2.药理试验原理

——体外靶标选用基因工程技术克隆的人PTP1B催化结构域(ΔPTP1B)。

ΔPTP1B活性的测定原理和反应体系：PTP1B是一种磷酸酶，它可以使磷酸化的蛋白质去磷酸化。采用分子生物学方法构建人的PTP1B催化结构域基因的表达载体，在大肠杆菌中表达PTP1B的催化结构域，经纯化后以对硝基苯磷酸二钠盐(pNPP)为底物，测定PTP1B的活性。pNPP可以被PTP1B去磷酸化，变成对硝基苯酚，颜色呈黄色，通过检测410nm处光吸收值的变化来间接检测酶活性的变化情况。测定体系如下：25mM吗啉代丙烷磺酸(MOPS)pH7.0，1mg/ml牛血清白蛋白(BSA)，1mM二硫苏糖醇(DTT)，0.1mM乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)，5nM PTP1B，在405nm处测定光吸收的变化值。

具体采用酶标仪测量：其中加样按MOPS缓冲液：BSA：DTT＝11：2：1的比例配置Working Buffer；依次在96孔板的反应体系中加入WorkingBuffer，茶叶样品，ΔPTP1B靶标，振荡混匀，与p-NPP一起放入37℃恒温箱放置5min，每孔加入p-NPP底物，振荡混匀，酶标仪测量OD405，记为A0；将整个反应体系放入37℃恒温箱反应30min，测量OD405，记为A，其中，

各种物质对PTP1B的抑制作用一般通过测定其半数抑制浓度(IC50)来衡量。

3.本发明普洱茶及其制剂对PTP1B抑制作用(即IC50)的测定方法及试验结果：

各种普洱茶及其制剂按照2.5％(W/W)加入沸水沏泡，37℃静置1h，用120目尼龙筛过滤，收集上清液样品，补充蒸馏水至原浓度。

将普洱茶及其制剂按1/2的梯度进行稀释，将稀释后的每个浓度梯度的样品加入PTP1B活性测定的反应体系中，其中厚朴制剂的体积为100μl，测定室温条件下反应10min的光吸收的变化值，将各个梯度的吸收值与未加抑制组分的吸收值相除，得出的数值为抑制百分数，当达到50％时，所对应稀释倍数的浓度即为IC50。测量每种茶叶的半数抑制浓度(IC50，mg/ml)，并将得到的每个浓度所对应的抑制率作图，可得到IC50曲线。最后从市场中筛选的普洱茶为本研究用样品，其中对PTP1B的抑制率≥95％，IC50≤0.04mg/ml。

试验结果清楚地表明，普洱茶及其制剂在体外能抑制蛋白质酪氨酸磷酸酶1B的活性，可作为与蛋白质酪氨酸磷酸酶1B相关疾病的食品、药物或药物组合成分；并可作为治疗II型糖尿病、肥胖症等一系列和PTP1B相关疾病的食品、药物或药物组合。

本发明与现有技术相比，具有以下有益效果：

1.本发明对普洱茶及其制剂发掘了新的医疗用途，开拓了一个新的应用领域。

2.本发明提出的普洱茶及其制剂安全无毒，药理作用强，揭示了很好的药用前景。

3.本发明的产品原料来源丰富、价廉、未见毒副作用，制备方法十分简单，并可进一步制成药剂学上的各种口服剂型、注射剂型。

4.本发明提出的普洱茶是经过发酵工艺制备的茶，即在大量有益微生物的参与下，使茶叶的多种成分进行了充分的微生物发酵和生物酶参与的发酵，产生了许多对人体有益的成分，如微生物多糖，不容易被人体吸收的茶叶大分子变成了容易吸收的小分子等。

5.植物细胞与动物细胞相比具有坚硬不易破碎的特点，而本发明所涉及的茶是发酵茶，微生物的破壁作用使植物细胞的多种成分容易破壁溶解出来，因此，增加了有益成分的浓度。

6.生物技术发酵产品具有增强人体免疫、调节生理代谢的优点，如真菌多糖(蘑菇菌类)、大分子的降解等。

具体实施方式

通过下面给出的具体实施例和典型应用实施例，可以进一步清楚地了解本发明。但它们并不是对本发明保护范围的限定。

实施例1

——普洱茶粉剂制备实例

干燥的普洱茶：水＝1：10～20(W/V)，在100℃下煮沸10～30分钟，用120目筛过滤去除残渣，收集水提液。重复此步骤2～4次，合并每次的提取液。将总提取液分别用200目筛和0.45μM滤器过滤，经高温喷雾干燥得到普洱茶粉剂。

实施例2

——以实施例1所制备的普洱茶粉剂来研究其对II型糖尿病模型小鼠的降糖作用：本实验所用实验动物：均为II型糖尿病模型小鼠——db/db(Leptin receptor敲除型)小鼠(购自南京大学国家遗传小鼠资源库)，雌雄各半，共分为3组，分别为II型糖尿病模型组(阳性)、II型糖尿病模型阳性药(二甲双胍)组，给普洱茶(粉剂)组。每组db/db小鼠只数n＝9，给药方法：阳性药(二甲双胍)组为灌胃，200mg/kg，每天给药1次；普洱茶组和模型组分别只给普洱茶(粉)水和自来水，不限量，小鼠自由摄取，其中普洱茶水采用实施例1所制备的普洱茶粉剂来配制，浓度为0.5％(W/V)。表1为连续给药35天后所测得的各组血糖值等的变化，血糖测定采用中生北控生物科技股份有限公司生产的葡萄糖试剂盒和方法。

表1  普洱茶对II型糖尿病模型小鼠的降糖作用

***：P<0.001

经统计学分析，连续给药35天后，只喝普洱茶水的II型糖尿病模型组的小鼠血糖值发生了明显的降低，与模型(对照)组相比较，有非常显著的差异(***P<0.001)，阳性药(二甲双胍)组则没有差异。模型组和普洱茶组的小鼠每天分别只给自来水和普洱茶水，不限量，虽然普洱茶组小鼠实际的的饮茶量略低于模型组的饮水量，但普洱茶中的降糖活性成分对该组的平均血糖值的下调起到了至关重要的作用。

应用实施例1

男，48岁，汉族，云南省普洱市人，患II型糖尿病3年，无吃口服糖尿病药和注射胰岛素历史。经服用实施例1的粉剂，每天3次，每次0.8克-1克。连续服用30天后，餐前血糖由服用前的10.5mmol/L(正常人餐前血糖值为3.9～6.1mmol/L)降至8mmol/L；服用3月后，降至6.2mmol/L，血糖恢复正常，身体无其它不适。

应用实施例2

女，65岁，汉族，辽宁本溪市人，患II型糖尿病4年，注射胰岛素2年。注射胰岛素后餐前血糖值12.8mmol/L，经服用实施例1的粉剂，每天3次，每次0.8-1克。连续服用30天后，餐前血糖由服用前的10.5mmol/L降至8mmol/L；服用3月后，降至6.8mmol/L，身体无其它不适。

应用实施例3

男，58岁，汉族，天津人，患II型糖尿病6年，注射胰岛素4年。注射胰岛素后餐前血糖值14.8mmol/L，经服用实施例1的粉剂，每天3次，每次0.8-1克。连续服用40天后，餐前血糖降至6.8mmol/L，身体无其它不适。

应用实施例4

男，47岁，汉族，哈尔滨人，患II型糖尿病4年，口服降糖药盐酸二甲酸胍。口服药物后餐前血糖值10mmol/L，服用实施例1的粉剂，每天3次，每次0.8-1克。连续服用50天后，餐前血糖降至7.8mmol/L，身体无其它不适。

应用实施例5

男，50岁，汉族，上海人，患II型糖尿病6年，注射胰岛素6年。注射胰岛素后餐前血糖值14mmol/L，服用实施例1的粉剂，每天3次，每次0.8-1克。连续服用45天后，餐前血糖降至8mmol/L，身体无其它不适。

应用实施例6

男，55岁，汉族，吉林长春人，患II型糖尿病7年，注射胰岛素7年。注射胰岛素后餐前血糖值14mmol/L，服用实施例1的粉剂，每天3次，每次0.8-1克。连续服用45天后，餐前血糖降至8mmol/L，身体无其它不适。

Claims (6)

1.普洱茶及其制剂作为制备治疗或预防糖尿病的药中的应用。

2.普洱茶及其制剂作为制备蛋白质酪氨酸磷酸酶1B抑制剂的药中的应用。

3.普洱茶及其制剂作为制备治疗或预防II型糖尿病的药中的应用。

4.普洱茶及其制剂作为制备治疗或预防肥胖症的药中的应用。

5.根据权利要求1～4所述的应用，其中所述普洱茶是通过传统或现代的普洱茶生产工艺制备的普洱生茶、熟茶、紧压茶或散茶。

6.根据权利要求1～4所述的应用，其中所述的普洱茶制剂是通过以普洱茶为原料或原料之一所制备得到的一种制剂，包括普洱茶水煎剂、普洱茶粉剂、普洱茶浸膏、普洱茶丸剂、普洱茶口服液或普洱茶针剂。