CN101181446B - 西藏绿萝花及其提取物在制备糖尿病药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种西藏绿萝花及其提取物在制备糖尿病药物中的应用，西藏植物绿萝花(Scindapsus aureus(Linden ex Andre)Engl)及其提取部分具有对α-葡萄糖苷酶的抑制作用及治疗糖尿病的功效，特别是西藏绿萝花的石油醚提取物、乙酸乙酯提取物具有很强的α-葡萄糖苷酶的抑制作用，可作为α-葡萄糖苷酶抑制剂及制备治疗糖尿病药物。
Description
技术领域
本发明涉及西藏绿萝花(又名黄金葛、藤芋、石柑子、马蹄金)及其提取物在抑制α-葡萄糖苷酶及制备糖尿病药物中的应用。
背景技术
α-葡萄糖苷酶(EC 3.2.1.20)是一种存在于小肠黏膜细胞刷状缘的糖苷代谢酶，该酶针对双糖发挥水解作用，使进入小肠的碳水化合物最终形成单糖，被机体吸收。研究表明，该酶抑制剂有很好的防治糖尿病的功效。糖尿病是目前严重危害人类健康的主要疾病之一，可分为胰岛素依赖型(1型，即IDDM)和非胰岛素依赖型(2型，即NIDDM)，2型糖尿病占糖尿病患者的95％以上，其治疗是以降低血糖水平及减轻症状为主要目标。糖尿病以高血糖为主要特征，高血糖有两种情况：一为餐后高血糖，指食物消化吸收过程中的血糖高峰超越正常范围；另一为空腹血糖，指食物消化吸收完毕后的基础血糖高于正常。一直以来，对糖尿病的诊断标准及糖尿病治疗需达到的目标，多以空腹血糖为主。近年来，餐后高血糖在糖尿病的诊断、治疗目标及慢性并发症发病机制上的重要性受到愈来愈多的关注。一是由于餐后血糖过高，会通过“葡萄糖毒性作用”，加重胰岛素的分泌缺陷，机体处理餐后高血糖的能力进一步下降，基础状态下的血糖亦升高，即形成或加重2型糖尿病。二是餐后高血糖也会导致蛋白质的非酶糖化，从而引起进行性的大血管及微血管的病变，导致糖尿病并发症心脑血管甚至非糖尿病患者的心脑血管疾病，因此降低餐后高血糖的药物在治疗2型糖尿病及早期的糖耐量减低(IGT)状态非常重要。现在临床上使用的治疗糖尿病药物主要有4类，即作用于胰岛β-细胞、刺激胰岛素分泌的磺酰脲类；促进糖代谢的胍类；增强胰岛素作用、促进外周组织中葡萄糖利用的胰岛素增敏剂及α-葡萄糖苷酶抑制剂，前3类都只能降低空腹血糖，仅有α-葡萄糖苷酶抑制剂能降低餐后血糖。同时降低餐后高胰岛素血症，以达到减低葡萄糖毒性，减少并发症的发生。阿卡波糖作为广泛应用于临床的α-葡萄糖苷酶抑制剂，在治疗糖耐量减低、减少心脑血管并发症方面有明显疗效。
研究发现西藏绿萝花提取物的石油醚、乙酸乙酯萃取部分有很强抑制α-葡萄糖苷酶的作用。
发明内容
绿萝花又名黄金葛、藤芋、石柑子、马蹄金(Scindapsus aureus(Linden exAndre)Engl)为天南星科(Araceae)植物，属西藏特有珍贵植物。产于西藏寒冷地带，喜马拉雅山脉，每年七至八月开花，花期三十天左右，性微寒。本发明提供一种西藏绿萝花及从西藏绿萝花提取的各种提取物或有效成分作为α-葡萄糖苷酶的抑制剂，及制备治疗糖尿病药物。
西藏绿萝花提取的各种提取物的制备方法是先称取西藏绿萝花全草，用乙醇浸泡8～56h，经旋转蒸发浓缩后得到水溶液，然后分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取水溶液，萃取液经减压蒸馏并真空干燥后得到西藏绿萝花提取物膏体。
一种用于抑制α-葡萄糖苷酶的药物，其中含有西藏绿萝花及从西藏绿萝花提取的各种提取物或有效成分，以及药学上可接受的辅助剂。
一种用于治疗糖尿病的药物，其中含有西藏绿萝花及从西藏绿萝花提取的各种提取物或有效成分，以及药学上可接受的辅助剂。
所述药物是制成片剂、丸剂、胶囊剂、悬浮剂或乳剂。
西藏绿萝花的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇以及水等溶剂的提取部分，其中石油醚及乙酸乙酯提取部分具有很强抑制α-葡萄糖苷酶的作用。
本发明的有益效果是西藏绿萝花及其提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用明显，西藏绿萝花及其提取物可以降低血糖促进胰岛素的分泌，用来制备治疗糖尿病药物。
具体实施方式
本发明是通过以下方案实现：
实施例1
提取：
准确称取50g干燥的全草，用40～90％的乙醇(体积比)浸泡8～56h，经旋转蒸发浓缩后得到水溶液，分别用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇依次萃取水溶液(等体积分三次萃取)。萃取液经减压蒸馏并真空干燥后得到膏体。
实施例2
α-葡萄糖苷酶活性测试
1.α-葡萄糖苷酶活性测试原理：
α-葡萄糖苷酶活力的测定是基于PNPG的酶催化氧化产物——硝基苯(PNP)在400nm处有最大吸收，通过测定酶催化反应体系在一定时间后的A400的数值，可求得酶活力。以PNPG为底物，在2mL 0.05mol/L的磷酸盐缓冲液(pH为6.8)中，加待测样品溶液50μL与PNPG(终浓度为0.1328mmol/L)，然后加α-葡萄糖苷酶(终浓度为30μg/mL)，水浴37℃反应10min后，加入0.1mol/L Na2CO3溶液4mL终止反应，在波长400nm处测定释放出的对硝基苯(PNP)的吸光度值，计算抑制率。酶抑制实验平行做三次。
酶活性抑制率＝[(ΔAE-ΔA)/ΔAE]×100％
式中：ΔAE为酶与底物反应后的吸光度值(扣除相应空白)，ΔA为加入抑制剂后酶反应的吸光度值(扣除相应空白)。
2.实施例1中各部分对α-葡萄糖苷酶的抑制：
取不同质量的各部分加到α-葡萄糖苷酶活力的测定体系中，测定其吸光度，从而求得样品对α-葡萄糖苷酶的抑制率。
3.结果判断：
各部分对α-葡萄糖苷酶的抑制与阳性物阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶的抑制对比及IC50(见表1)可知：0.25mg/mL的石油醚部分、乙酸乙酯部分对α-葡萄糖苷酶的抑制作用与40mg/mL的阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用相差不多。
表1 绿萝花各提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用
| 提取物 | 浓度mg/mL | 酶活性抑制率(％) | IC50(μg/mL) |
| 全提取物 | 0.25 | 47.47 | 300 |
| 石油醚部分(PF) | 0.25 | 76.32 | 89.79 |
| 乙酸乙酯部分(EAF) | 0.25 | 83.65 | 43.63 |
| 正丁醇部分(nBF) | 0.25 | 11.53 | - |
| 水溶部分(WF) | 0.25 | 13.81 | - |
| 阿卡波糖 | 40 | 85.32 | - |
实施例3
动物实验
绿萝花对正常小鼠血糖、血清胰岛素、胰高血糖素、肝糖原、肌糖原的影响：正常小鼠50只，随机均分为对照组，绿萝花0.75，1.50，3.00g/kg 3个剂量组，每天1次，连续14 d，末次给药后2h，眼眶静脉取血用葡萄糖氧化酶法测血糖、用放射免疫法按试剂盒说明书测定血清胰岛素、胰高血糖素，并取肝脏、膈肌用改良的蒽酮法测定糖原含量。结果：百草降糖片1.5，3.00g/kg两个剂量组能显著降低正常小鼠血糖，增加肝糖原和减少胰高血糖素的含量，促进胰岛素的分泌(表2)。
表2 绿萝花对正常小鼠血糖、血清胰岛素、胰高血糖素、肝糖原、肌糖原的影响
| 组别 | 剂量(g/Kg) | 血糖(mmol/L) | 胰岛素(mU/L) | 胰高血糖素(Pg/L) | 肝糖原(mg/L) | 肌糖原(mg/L) |
| 对照 | 7.52±1.31 | 23.72±4.62 | 350.72±53.28 | 7.32±0.72 | 1.46±1.04 | |
| 绿萝花 | 0.75 | 7.08±1.09 | 23.92±3.14 | 301.54±62.72 | 7.94±0.59 | 1.45±1.27 |
| 绿萝花 | 1.5 | 6.34±1.17 | 24.89±2.37 | 289.52±71.31 | 8.52±0.89 | 1.62±0.89 |
| 绿萝花 | 3.0 | 6.03±0.87 | 28.01±4.25 | 215.01±57.24 | 8.78±0.73 | 1.98±1.17 |
Claims (2)
1.西藏绿萝花全草经体积比为40-90％的乙醇浸泡8-56小时，浓缩并干燥后所得浸膏在制备α-葡萄糖苷酶的抑制剂和治疗糖尿病药物中的用途。
2.西藏绿萝花全草经体积比为40-90％的乙醇浸泡8-56小时，经浓缩得到的水溶液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，所得石油醚、乙酸乙酯萃取液经浓缩干燥所得西藏绿萝花石油醚、乙酸乙酯萃取部分在制备α-葡萄糖苷酶的抑制剂药物中的用途。
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| 纯野生喜马拉雅山脉产绿萝花-适合糖尿病，高血压，冠心病.http://blog.19lou.com/10450850/viewspace-466990.2007, * |
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