WO2016084957A1 - マトリックスメタロプロテアーゼ産生阻害剤 - Google Patents

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WO2016084957A1
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matrix metalloprotease
mass
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万里江 齊藤
江里子 三澤
美順 田中
瑞卿 姚
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森永乳業株式会社
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    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Definitions

  • the present invention relates to a matrix metalloprotease production inhibitor.
  • Extracellular matrix is a structure formed around animal cells, and not only fills the extracellular space but also serves as a scaffold for fixing and adhering each cell.
  • the extracellular matrix is also known to be involved in maintaining the homeostasis of the living body, and is also known to regulate cell proliferation, differentiation, migration, cell death, and the like.
  • As the main extracellular matrix collagen, fibronectin, proteoglycan, laminin, and the like are known.
  • MMP matrix metalloproteinases
  • MMP matrix metalloproteinases
  • enzymes that degrade these extracellular matrices.
  • MMP is a metal-neutral neutral protease with a common structure and function, and functions extracellularly and on the cell membrane.
  • MMP consists of several domain structures that are well conserved in structure, and has a basic structure consisting of a signal sequence, an active center region, and a propeptide region that is a control region thereof.
  • MMP-1, MMP-8, MMP-13 and MMP-18 belong to the collagenase group, and degrade I, II and III collagens in the extracellular matrix.
  • MMP-2 and MMP-9 belong to the gelatinase group.
  • MMP-2 and MMP-9 are the main components of the basement membrane, further degrading collagen (denatured collagen) degraded by collagenase etc. It is known to be involved in the degradation of type IV collagen and elastin.
  • MMP-3, 10, and 11 belong to the stromlysin group and degrade matrix proteins such as laminin, fibronectin, and proteoglycan.
  • MMP-12 which is a metalloelastase having an elastin degrading activity having a structure similar to these
  • MMP-7 and MMP-26 belonging to the matrilysin group.
  • MMP-14, 15, 16 and MMP-17, 24, 25, which are membrane-type MMP (MMT-MP) groups, have a transmembrane region, and all are known to be involved in extracellular matrix degradation. ing.
  • Non-Patent Document 1 MMP destroys the extracellular matrix and works in embryogenesis, tissue differentiation, angiogenesis, etc. In addition to cancer invasion and metastasis, arthritis and periodontal disease, tissue ulceration (corneal ulcer, gastric ulcer) Or non-patent document 2, non-patent document 2).
  • Non-Patent Document 3 As drugs having an inhibitory effect on MMP, CGS27023a (Non-Patent Document 3), collagen tripeptide (Non-Patent Document 4), flavonoid compound (Patent Document 1), catechin compound (Patent Document 2) and the like are known. Further, winged bean extract (Patent Document 3), menatetrenone (Patent Document 4) and the like are known as those having an MMP production inhibitory effect.
  • an object of the present invention is to provide a functional material that can be safely ingested on a daily basis and can inhibit MMP production, and a drug using the functional material.
  • a first invention for solving the above-mentioned problems is a matrix metalloprotease production inhibitor containing a compound selected from the group consisting of a rophenol compound and a cyclolanostane compound as an active ingredient (hereinafter referred to as “inhibition of the present invention”).
  • Agent a compound selected from the group consisting of a rophenol compound and a cyclolanostane compound as an active ingredient
  • the inhibitor contains 0.00001% by mass or more of the compound in a total amount.
  • the compound comprises 4-methylcholest-7-en-3-ol, 4-methylergost-7-en-3-ol, 4-methylstigmast-7-en-3- Selected from the group consisting of ol, 9,19-cyclolanostan-3-ol, and 24-methylene-9,19-cyclolanostan-3-ol.
  • the inhibitor of the present invention is particularly effective for inhibiting the production of a matrix metalloprotease selected from the group consisting of matrix metalloprotease-2, matrix metalloprotease-9, matrix metalloprotease-12, and matrix metalloprotease-13. .
  • the second invention for solving the above-mentioned problems is the use of a compound selected from the group consisting of a rophenol compound and a cyclolanostane compound in the production of a matrix metalloprotease production inhibitor, and the preferred form of the compound is the aforementioned That's right.
  • the second invention includes the following forms. Use of a composition containing 0.00001% by mass or more in total of a compound selected from the group consisting of a rophenol compound and a cyclolanostane compound in the production of a matrix metalloprotease production inhibitor.
  • the matrix metalloprotease production inhibitor is a matrix metalloprotease selected from the group consisting of matrix metalloprotease-2, matrix metalloprotease-9, matrix metalloprotease-12, and matrix metalloprotease-13. It is a production inhibitor.
  • the second invention includes a form of use of a compound selected from the group consisting of a rophenol compound and a cyclolanostane compound in the manufacture of a medicament for preventing or ameliorating a symptom caused by degradation of an extracellular matrix.
  • composition comprising 0.00001% by mass or more in total of compounds selected from the group consisting of rophenol compounds and cyclolanostane compounds in the manufacture of a medicament for preventing or ameliorating symptoms caused by degradation of extracellular matrix Use of.
  • a third invention for solving the above-mentioned problem is a compound selected from the group consisting of a rophenol compound and a cyclolanostane compound used for matrix metalloprotease production inhibition, and preferred forms of the compound are described above. Street.
  • the compound is for inhibiting the production of a matrix metalloprotease selected from the group consisting of matrix metalloprotease-2, matrix metalloprotease-9, matrix metalloprotease-12, and matrix metalloprotease-13. Used for.
  • the compound is preferably used for preventing or ameliorating symptoms caused by degradation of the extracellular matrix.
  • a fourth invention for solving the above-mentioned problem contains a total of 0.00001% by mass or more of a compound selected from the group consisting of a rophenol compound and a cyclolanostane compound used for matrix metalloprotease production inhibition. It is a composition, The preferable form of the said compound is as having mentioned above.
  • the composition is preferably a food or drink.
  • the composition is for inhibiting the production of matrix metalloprotease selected from the group consisting of matrix metalloprotease-2, matrix metalloprotease-9, matrix metalloprotease-12, and matrix metalloprotease-13. Used for.
  • composition is preferably used for preventing or ameliorating symptoms caused by degradation of the extracellular matrix.
  • a fifth invention for solving the above-mentioned problems includes administering a compound selected from the group consisting of a rophenol compound and a cyclolanostane compound to a subject in need of inhibition of the production of matrix metalloprotease.
  • a method for inhibiting the production of a metalloprotease, and the preferred form of the compound is as described above.
  • the matrix metalloprotease is selected from the group consisting of matrix metalloprotease-2, matrix metalloprotease-9, matrix metalloprotease-12, and matrix metalloprotease-13.
  • the form includes the following.
  • a disease or condition resulting from degradation of an extracellular matrix comprising administering a compound selected from the group consisting of a rophenol compound and a cyclolanostane compound to a subject having a disease or condition resulting from degradation of the extracellular matrix Improvement or prevention method.
  • the fifth invention has the following preferred embodiments. Administering a composition containing 0.00001% by mass or more in total of a compound selected from the group consisting of a rophenol compound and a cyclolanostane compound.
  • ⁇ Diseases or symptoms resulting from the degradation of the extracellular matrix include inflammatory diseases.
  • diseases or symptom include gingivitis or periodontitis, tissue ulcer, skin disease, arthritis, cancer invasion or metastasis, and endometriosis. It is particularly effective in preventing or ameliorating the symptoms.
  • the inhibitor of the present invention can be safely taken and effectively inhibits the production of matrix metalloprotease.
  • the inhibitor of the present invention is used to prevent or ameliorate arthritis, inflammatory diseases, periodontal diseases, bone diseases, cancer invasion and metastasis, aneurysm diseases, keratosis abnormalities, skin inflammatory diseases caused by ultraviolet rays, skin aging, etc. Useful for treatment.
  • FIG. 2 is an optical micrograph of an extracellular matrix tissue section of each group of mice in Example 1.
  • the inhibitor of the present invention contains a compound selected from the group consisting of a rophenol compound (Compound 1) and a cyclolanostane compound (Compound 2) as an active ingredient.
  • Compound 1 and Compound 2 are represented by the following general formula (1) and general formula (2), respectively.
  • R1 is a linear or branched alkyl group having 5 to 16 carbon atoms, or an alkenyl group containing one or two double bonds.
  • the alkyl group or alkenyl group may be a substituted alkyl group or a substituted alkenyl group in which one or two hydrogen atoms are substituted with a hydroxyl group and / or a carbonyl group.
  • R2 and R3 are each independently a hydrogen atom or an alkyl group having 1 to 3 carbon atoms.
  • the alkyl group having 1 to 3 carbon atoms is preferably a methyl group, an ethyl group or the like, and particularly preferably a methyl group.
  • the alkyl group may be a substituted alkyl group in which at least one hydrogen atom is substituted with a hydroxyl group and / or a carbonyl group.
  • R4 together with the carbon atoms constituting the ring forms C ⁇ O, or is —OH or —OCOCH 3 .
  • R1 is preferably any one of the groups represented by the following formula.
  • one of R2 and R3 is preferably a hydrogen atom, the other is preferably a methyl group, and R4 is preferably a hydroxyl group.
  • Compound 1 preferably includes 4-methylcholest-7-en-3-ol, 4-methylergost-7-en-3-ol and 4-methylstigmast-7-en-3-ol. .
  • Each compound has a structure represented by the following formula.
  • Compound 1 can be chemically produced according to a known production method. For example, it can be synthesized according to supplement data described in Vitali Matyash et al., PLOS BIOLOGY, Volume 2, Issue 10, e280, 2004.
  • Compound 1 is contained in plants, and can be produced according to the known production method of rophenol (Biochemical Experimental Method 24, Fat Lipid Metabolism Experimental Method, Akihiro Yamada, Society Publishing Center, page 174, 1989).
  • rophenol Biochemical Experimental Method 24, Fat Lipid Metabolism Experimental Method, Akihiro Yamada, Society Publishing Center, page 174, 1989.
  • a method such as a hot water extraction method, an organic solvent extraction method, a supercritical extraction method or a subcritical extraction method (for example, And Japanese Patent No. 3905913).
  • Compound 1 can be extracted from plants of, for example, liliaceae, legumes, gramineae, solanaceae and gallaceae.
  • the molecular weight, structure, etc. of the compound produced as described above can be determined or confirmed by, for example, a mass spectrum (MS) method and a nuclear magnetic resonance spectrum (NMR) method.
  • MS mass spectrum
  • NMR nuclear magnetic resonance spectrum
  • Compound 1 may be a pharmaceutically acceptable salt.
  • Pharmaceutically acceptable salts include both metal salts (inorganic salts) and organic salts, the list of which is “Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th Edition, 1985, What is published in "page 1418" is illustrated.
  • inorganic acid salts such as hydrochloride, sulfate, phosphate, diphosphate, and hydrobromide, malate, maleate, fumarate, tartrate, succinate , Citrates, acetates, lactates, methanesulfonates, p-toluenesulfonates, pamoates, salicylates, and stearates.
  • solvates such as a hydrate of the said compound or its pharmaceutically acceptable salt, can also be used.
  • R5 is a linear or branched alkyl group having 6 to 8 carbon atoms and an alkenyl group having one or two double bonds.
  • the alkyl group or alkenyl group may be a substituted alkyl group or a substituted alkenyl group in which one or two hydrogen atoms are substituted with a hydroxyl group and / or a carbonyl group.
  • R6 and R7 are each independently a hydrogen atom or a methyl group.
  • R5 is preferably any one of the groups represented by the following formula.
  • one of R6 and R7 is preferably a hydrogen atom, the other is preferably a methyl group, and R8 is preferably a hydroxyl group.
  • Compound 2 is preferably 9,19-cyclolanostan-3-ol and 24-methylene-9,19-cyclolanostan-3-ol. Each compound has a structure represented by the following formula.
  • Compound 2 can be chemically produced according to a known production method.
  • 24-methylene-9,19-cyclolanostan-3-ol (common name: 24-methylenecycloartanol) is disclosed in JP-A-57-018617 and International Publication No. 2012/023599 ( ⁇ -oryzanol).
  • Compound 2 can be produced using a hydrolyzate of cycloartol ferrate as a starting material by the method disclosed in JP-A-2003-277269.
  • Compound 2 is also known to be contained in plants such as liliaceae, legumes, gramineae, solanaceae, and pepperaceae ([Phytochemistry, USA, 1977, Vol. 16). 140-141], [Handbook of phytochemical constituents of GRAS herbs and other economic plants, 1992. , United States, CRC Press], or [Hager's Handbuch der Pharmazeutica für für für für für für für aspirin, Vol. 16] ). Therefore, Compound 2 can be extracted from these plants using a known method such as an organic solvent extraction method or a hot water extraction method (for example, see Japanese Patent No. 3924310).
  • the molecular weight, structure, etc. of the compound produced as described above can be determined or confirmed by, for example, a mass spectrum (MS) method and a nuclear magnetic resonance spectrum (NMR) method.
  • MS mass spectrum
  • NMR nuclear magnetic resonance spectrum
  • Compound 2 may also be a pharmaceutically acceptable salt. Such salts are as exemplified for Compound 1.
  • the inhibitor of the present invention contains a compound selected from the group consisting of Compound 1 and Compound 2 as an active ingredient.
  • the compound may be one kind or plural kinds.
  • compound 1 mainly 4-methylcholest-7-en-3-ol, 4-methylergost-7-en-3-ol, or 4-methyls Either tigmast-7-en-3-ol
  • compound 2 mainly 9,19-cyclolanostan-3-ol or 24-methylene-9,19-cyclolanostan-3-ol
  • 4-methylcholest-7-en-3-ol is particularly preferable as Compound 1 in terms of physical properties such as solubility that are considered when used as an active ingredient of a drug, and 9,19 as Compound 2.
  • -Cyclolanostan-3-ol is particularly preferred.
  • Compound 1 mainly 4-methylcholest-7-en-3-ol, 4-methylergost-7-en-3-ol or 4-methyls More preferred is tigmast-7-en-3-ol.
  • one type of compound may be used, or a plurality of compounds may be mixed and used.
  • the inhibitors of the present invention are preferably 4-methylcholest-7-en-3-ol, 4-methylergost-7-en-3-ol, 4-methylstigmast-7-en-3-ol , 9,19-cyclolanostan-3-ol, and a compound selected from the group consisting of 24-methylene-9,19-cyclolanostan-3-ol as an active ingredient.
  • the content of the compound in the inhibitor of the present invention can be appropriately selected according to symptoms and the like, but the total amount is preferably at least 0.00001% by mass, more preferably at least 0.0001% by mass, and further preferably Is at least 0.0005% by weight, particularly preferably at least 0.001% by weight.
  • the upper limit of the amount in the inhibitor of the present invention is not particularly limited, but the total amount is 90% by mass or less, preferably 70% by mass or less, more preferably 50% by mass or less.
  • the inhibitor of this invention contains the composition containing the compound selected from the group which consists of the compound 1 and the compound 2 as an active ingredient.
  • the compound may be one kind or plural kinds. Examples of such a composition include an extract obtained from a plant containing Compound 1 described above, an extract obtained from a plant containing Compound 2, and a plant containing both Compound 1 and Compound 2. Extracts, as well as mixtures thereof.
  • the inhibitor of the present invention preferably contains a combination of both Compound 1 and Compound 2.
  • Each of Compound 1 and Compound 2 may be one kind or plural kinds.
  • a composition containing both Compound 1 and Compound 2 can be used as an active ingredient.
  • Preferred examples of the composition include an extract obtained from a plant containing both Compound 1 and Compound 2.
  • the range of the mass ratio of Compound 1 and Compound 2 includes, for example, the following.
  • Compound 1: Compound 2 is preferably 5: 1 to 1: 5, more preferably 3: 1 to 1: 3, particularly preferably 2: 1 to 1: 2.
  • the inhibitor of the present invention can be used in a pharmaceutical aspect.
  • the inhibitor of the present invention can be administered to mammals including humans orally or parenterally.
  • the inhibitor of the present invention is effective for preventing or ameliorating symptoms caused by degradation of extracellular matrix caused by the activity of MMP.
  • symptoms and diseases caused by extracellular matrix degradation include arthritis, osteoarthritis, rheumatoid arthritis, autoimmune arthritis, periodontal disease, ectopic angiogenesis, cancer invasion and metastasis, Endometriosis, ulceration, bone disease, vascular re-occlusion, vascular restenosis, HIV infection, diabetic complications, arteriosclerosis, aneurysm disease, acute aortic aneurysm dissection, atherosclerotic plaque dissection, myocardium Infarct, heart failure, tissue ulcer, wound, skin disease, blister formation in blistering, keratosis, skin disorders such as dermatitis due to ultraviolet rays, skin aging such as thickening / wrinkle formation / dullness of skin epidermis, skin elasticity Reduction, skin basement membrane destruction, tumor angiogenesis, age-related macular degeneration, fibros
  • the inhibitor of the present invention is any one selected from the group consisting of MMP-2 and MMP-9 which are MMPs belonging to the gelatinase group, MMP-12 which is a metalloelastase, and MMP-13 which belongs to the collagenase group. It is effective in preventing or ameliorating symptoms caused by the activity of MMP.
  • symptoms caused by the activity of MMP-2 include cancer invasion and metastasis, endometriosis, inflammatory bowel disease, epidermal basement membrane destruction, pressure ulcers, and the like.
  • Symptoms caused by the activity of MMP-9 include, among others, thickening of the skin epidermis and formation of wrinkles, rheumatoid arthritis, acute aortic dissection, blistering and the like.
  • Symptoms caused by the activity of MMP-12 include arthritis, emphysema, aneurysm, arteriosclerosis, chronic obstructive pulmonary disease and the like.
  • Symptoms caused by the activity of MMP-13 include osteoarthritis, osteoporosis, periodontitis, multiple sclerosis, gingivitis, corneal epidermal ulcer, pressure ulcer, gastric ulcer, atherosclerosis, Examples thereof include vascular restenosis or ischemic heart failure after arteriosclerotic occlusion treatment.
  • the inhibitor of the present invention is particularly useful for improving or preventing inflammatory diseases.
  • the inflammatory disease include gingivitis or periodontitis, tissue ulcer, dermatitis, arthritis, inflammatory bowel disease and the like.
  • tissue ulcers include corneal ulcers, epidermal ulcers, gastric ulcers, ulcerative colitis and the like.
  • skin diseases include dermatitis, thickening of the skin epidermis, wounds, keratosis, blistering, pressure sores, delayed postoperative wound healing period, chronic wounds, obesity skin inflammation, dermis structural changes, and the like.
  • the inhibitor of the present invention is particularly effective for preventing or ameliorating symptoms caused by the activity of MMP-2.
  • the form of the inhibitor of the present invention is not particularly limited, and can be appropriately selected according to usage. Specific examples include tablets, pills, powders, solutions, suspensions, emulsions, granules, capsules, syrups, suppositories, injections, ointments, patches, eye drops, nasal drops, etc. it can.
  • the administration timing of the inhibitor of the present invention is not particularly limited, and can be appropriately selected according to the target disease.
  • the dosage is preferably determined according to the preparation form, usage, patient age, sex, other conditions, the degree of symptoms, and the like.
  • the dosage of the inhibitor of the present invention is appropriately selected depending on the usage, patient age, sex, disease severity, other conditions, and the like. Usually, it is preferably 0.0001 to 100 mg / day, more preferably 0.001 to 50 mg / day, and particularly preferably 0.01 to 10 mg / day in terms of the amount of the active ingredient.
  • the inhibitor of the present invention may contain additives commonly used in medicine.
  • additives include excipients, binders, disintegrants, lubricants, stabilizers, flavoring agents, diluents, surfactants, solvents for injections, and the like.
  • the inhibitor of this invention can be manufactured by mix
  • the inhibitor of this invention can be manufactured by formulating the said compound with the additive mentioned above, for example.
  • the inhibitor of the present invention is an extract obtained by performing extraction using hot water or various solvents, supercritical extraction, subcritical extraction using a known plant containing the compound as a raw material, as described above. It can also be produced by formulating with an agent.
  • the inhibitor of the present invention containing Compound 1 and Compound 2 in the range of the specific mass ratio can be produced by mixing each compound in the range of the mass ratio.
  • Such a medicament can also be produced by a method such as extraction using various solvents, supercritical extraction, subcritical extraction, etc., using a known plant containing compound 1 and compound 2 as a raw material. It is.
  • the inhibitor of the present invention can be obtained, for example, from plants such as liliaceae, legumes, gramineae, eggplants, and pepperaceae.
  • the compound functions as an active ingredient, and has an effect of preventing or ameliorating symptoms caused by degradation of the extracellular matrix due to the activity of MMP.
  • it is effective in preventing or improving symptoms caused by degradation of the extracellular matrix due to the activity of any MMP selected from the group consisting of MMP-2, MMP-9, MMP-12, and MMP-13.
  • the inhibitor of the present invention is particularly effective in preventing or ameliorating symptoms caused by degradation of the extracellular matrix due to the activity of MMP-2.
  • the inhibitor of the present invention can be processed into a food or drink by mixing it with a raw material that can be used in the food or drink.
  • “food and beverage” includes food and beverages consumed by humans and feeds consumed by animals other than humans.
  • the total amount of the compounds in these is preferably at least 0.00001% by mass, more preferably at least 0.0001% by mass, even more preferably at least 0.0005% by mass, especially Preferably it is at least 0.001% by mass.
  • the upper limit of the said quantity in the food / beverage products of this invention is not restrict
  • the amount of the compound in the food or drink is preferably a total amount of the compound of 0.0001 to 100 mg / day, more preferably 0.001 to 50 mg / day, and particularly preferably 0.001 depending on the form. It may be an amount suitable for ingestion in the range of 01 to 10 mg / day. Accordingly, one of the preferred forms of the food and drink of the present invention is that the total amount of the compound is preferably 0.0001 to 100 mg / day, more preferably 0.001 to 50 mg / day, particularly preferably 0.01 to It is a food and drink used to be ingested at 10 mg / day.
  • the food or drink is preferably a health functional food.
  • Health-function foods are foods that are directly or indirectly labeled with a disease prevention effect or a disease risk reduction effect, and function on product packages based on scientific evidence at the responsibility of the operator. It means food that has been reported to the Consumer Affairs Agency as an indication of sex. For example, foods sold in the form of food for specified health use, functional indication food, health supplement food, etc. in Japan at present.
  • Beverages including the concentrated undiluted solution and powder for preparation of these drinks, such as a soft drink, a carbonated drink, a nutritive drink, a fruit juice drink, and a lactic acid bacteria drink, contain the said compound efficiently Particularly preferred from the viewpoint of ingestion.
  • the functional food or drink it is also preferable that it is a granular, tablet or liquid supplement from the viewpoint that it is easy for the intaker to grasp the intake amount of the active ingredient.
  • the food / beverage product of the present invention contains, for example, a matrix metalloprotease activity containing, as an active ingredient, a compound selected from the group consisting of Compound 1 and Compound 2, which is used for “for protecting extracellular matrix”. It is preferable to sell as a food or drink for the prevention or improvement of symptoms caused by.
  • the “display” includes all displays having a function of informing the consumer of the use.
  • any display capable of recalling / analyzing the application corresponds to the “display” regardless of the purpose of display, the content of display, the object / medium to be displayed, and the like.
  • the “display is attached” means that there is a display act that tries to recognize the display in association with the food or drink (product). It is preferable that the display act is one in which the consumer can directly recognize the application.
  • the use of the use of the above-mentioned use on the product or the product packaging related to the food or drink of the present invention, the advertisement related to the product, the price list or transaction documents (including those provided by electromagnetic methods) Can be exemplified.
  • the displayed content is a display approved by the government or the like (for example, a display that is approved based on various systems determined by the government and is performed in a mode based on such approval).
  • the display approved by the Consumer Affairs Agency for example, the display approved by the food system for specific health use and a similar system can be exemplified.
  • Examples of the latter can include a display as a food for specified health use, a display as a condition specific food for specified health use, a display that affects the structure and function of the body, a display for reducing disease risk, etc.
  • a display as a food for specified health use a display as a condition specific food for specified health use
  • a display that affects the structure and function of the body a display for reducing disease risk, etc.
  • the display can be listed as a typical example.
  • the wording indicating the use is not limited to the words “for inhibition of matrix metalloprotease production” and “for protection of extracellular matrix”, but other words occur due to degradation of the extracellular matrix. Needless to say, any word expressing an action or effect for preventing or improving symptoms is included in the scope of the present invention.
  • the food / beverage products of this invention include the display of the said active ingredient in addition to the display of the said use, Furthermore, the display which shows the relevance of the said use and the said active ingredient.
  • the said food-drinks can be manufactured by mix
  • the food / beverage products of this invention can be manufactured by mixing the said compound with food-drinks raw material, and processing, for example.
  • the food or drink is processed with a food or drink raw material by using a known plant containing the compound as a raw material, extraction using hot water or various solvents, supercritical extraction, or subcritical extraction. It can also be manufactured.
  • the compound as an active ingredient is, for example, saccharides such as lactulose, maltitol, and lactitol, and other saccharides.
  • saccharides such as lactulose, maltitol, and lactitol
  • other saccharides for example, dextrin, starch, etc .; proteins such as gelatin, soy protein, corn protein; amino acids such as alanine, glutamine, isoleucine; polysaccharides such as cellulose, gum arabic; It is also preferable to formulate.
  • a column in which 400 g of silica gel 60 (manufactured by Merck) was packed was passed through a solution prepared by dissolving 13 g of the extract in a 1 ml chloroform / methanol (1: 1) mixed solution and adsorbed on the column.
  • the eluate was fractionated for each mixing ratio of the mixed solution.
  • 9,19-cyclolanostan-3-ol (Compound 2) was synthesized using the obtained cycloartol.
  • 302 mg of cycloartol, 150 ml of isopropanol, and 1.0 g of a powdery 5% palladium-supported carbon catalyst were charged, sealed in an autoclave and replaced with nitrogen gas, and then a pressure of hydrogen gas of 3 kg / cm 2 was used. It was introduced while applying.
  • the mixture was heated with stirring, and when the temperature reached 50 ° C., the hydrogen pressure was 5 kg / cm 2, and the reaction was performed for 6 hours while maintaining the pressure by supplementing the absorbed hydrogen.
  • the reaction solution was filtered to remove the catalyst, concentrated, and then purified by silica gel column chromatography (developing solvent: chloroform 100%) to obtain 275 mg of 9,19-cyclolanostan-3-ol.
  • CMC carboxymethylcellulose
  • a mixture of a rophenol compound and a cyclolanostane compound was dispersed to prepare a powder diluted 10,000 times. These powders were added to AIN 93G feed at 2% to prepare test samples. That is, a test sample containing 0.00002 mass% in total of Compound 1 (Rophenol compound) and Compound 2 (Cyclolanostane compound) was produced.
  • Example 1 In this example, the influence of the composition containing Compound 1 and Compound 2 on the change in MMP expression with respect to the increase in MMP expression due to ultraviolet irradiation was analyzed.
  • test sample prepared in Production Example 3 was used.
  • animal feed AIN93G was used as a control sample (control).
  • Test method A group of 6 8 week-old hairless mice (HR-1 mice) was bred for a total of 8 weeks while administering a control sample or a test sample to a total of 2 groups. Two weeks after the start of breeding, hairless mice were placed in an ultraviolet irradiation device and irradiated with UVB at a frequency of 3 times / week. Irradiation dose per one time, starting from 48 mJ / cm 2, is increased stepwise until 200 mJ / cm 2, the final total dose was the sum 2.3 J / cm 2. Six weeks after the start of UVB irradiation, each group of hairless mice was dissected and the back skin tissue was collected to prepare extracellular matrix tissue sections.
  • tissue section was observed using an optical microscope (Olympus), and fragmentation and orientation of the extracellular matrix (elastic fiber) of the dermis layer were confirmed.
  • tissue sections were similarly observed for UVB non-irradiated mice reared with a control sample without UVB irradiation.
  • Example 2 In this test, the production inhibitory effect of MMP-2 and MMP-9 by the composition containing Compound 1 and Compound 2 was confirmed.
  • Test method Six 8-week-old female hairless mice purchased from Japan SLC Co., Ltd. are divided into a total of three groups, negative control samples (AIN93G Oriental Yeast Co.), and positive control samples for animals. A total of 8 weeks were fed while a collagen sample obtained by adding 0.6% by mass of collagen to feed AIN93G and a test sample were administered to each group. Separately, a negative control sample was administered, and one UVB non-control group that was not irradiated with ultraviolet rays was provided for comparison. Two weeks after the start of breeding, hairless mice were placed in an ultraviolet irradiation device and irradiated at a frequency of 3 times / week.
  • Irradiation dose per one time is increased stepwise until 200 mJ / cm 2, the final dose was the sum 2.3 J / cm 2.
  • the dorsal skin tissue was collected, frozen in liquid nitrogen, crushed with a multi-bead shocker (Yasui Kikai), and protein was obtained using CelLytic MT (Sigma-aldrich). Extracted. MMP-2 and MMP-9 protein expression levels in the extracted protein were detected using an MMP-2 detection kit (RayBio) and an MMP-9 detection kit (R & D Systems).
  • Example 3 In this test, the production inhibitory effect of MMP-12 and MMP-13 by the composition containing Compound 1 and Compound 2 was confirmed.
  • Test method Six 8-week-old female hairless mice purchased from Japan SLC Co., Ltd. are divided into a total of 2 groups, and negative control samples (AIN93G Oriental Yeast Co., Ltd.) and test samples are assigned to each group. The animals were reared for a total of 8 weeks. Separately, a negative control sample was administered, and one UVB non-control group that was not irradiated with ultraviolet rays was provided for comparison. Two weeks after the start of breeding, hairless mice were placed in an ultraviolet irradiation device and irradiated at a frequency of 3 times / week.
  • Irradiation dose per one time is increased stepwise until 200 mJ / cm 2, the final dose was the sum 3.1 J / cm 2.
  • the dorsal skin tissue was collected, frozen in liquid nitrogen, crushed with a multi-bead shocker (Yasui Kikai), and protein was obtained using CelLytic MT (Sigma-aldrich). Extracted.
  • the expression level of MMP-12 and MMP-13 protein in the extracted protein was detected using an MMP-12 detection kit (Cloud-Clone) and an MMP-13 detection kit (Cloud-Clone).
  • Test method Six 8-week-old female hairless mice purchased from Japan SLC Co., Ltd. are divided into a total of 2 groups, and negative control samples (AIN93G Oriental Yeast Co., Ltd.) and test samples are assigned to each group. The animals were reared for a total of 8 weeks. Separately, a negative control sample was administered, and one UVB non-control group that was not irradiated with ultraviolet rays was provided for comparison. Two weeks after the start of breeding, hairless mice were placed in an ultraviolet irradiation device and irradiated at a frequency of 3 times / week.
  • Irradiation dose per one time is increased stepwise until 200 mJ / cm 2, the final dose was the sum 3.1 J / cm 2.
  • the dorsal skin tissue was collected, frozen in liquid nitrogen, crushed with a multi-bead shocker (Yasui Kikai), and protein was obtained using CelLytic MT (Sigma-aldrich). Extracted. The expression level of MMP-3 protein in the extracted protein was detected using an MMP-3 detection kit (BioSource).
  • Example 4 A medicament having the following composition and having an inhibitory effect on matrix metalloprotease production was produced by the following method.
  • Carboxymethylcellulose (CMC: CMC :) in a mixture containing the rophenol compound produced in Production Example 1 and the cyclolanostane compound produced in Production Example 2 in a ratio of rophenol compound: cyclolanostan compound 2: 3.
  • the present invention can be used for the prevention, amelioration, and treatment of symptoms caused by the production of matrix metalloprotease and the degradation of the extracellular matrix.

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Abstract

日常的に安全に摂取できる、マトリックスメタロプロテアーゼ産生阻害剤を提供する。ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される化合物をマトリックスメタロプロテアーゼ産生阻害剤の有効成分として使用する。

Description

マトリックスメタロプロテアーゼ産生阻害剤
　本発明は、マトリックスメタロプロテアーゼ産生阻害剤に関する。
　細胞外マトリックス（ＥＣＭ：Ｅｘｔｒａ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｍａｔｒｉｘ）は、動物細胞の周囲に形成される構造体で、細胞外間隙を充填するだけでなく、各細胞を固定、接着する足場の役割を持つ。また、細胞外マトリックスは、生体の恒常性維持にも関わることが知られており、細胞の増殖や分化、移動、細胞死などを調節していることも知られている。細胞外マトリックスの主なものとしては、コラーゲン、フィブロネクチン、プロテオグリカン、ラミニンなどが知られている。
　これらの細胞外マトリックスを分解する酵素として、マトリックスメタロプロテアーゼ（Ｍａｔｒｉｘ　ｍｅｔａｌｌｏ　ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ　以下ＭＭＰという）がある。ＭＭＰは、構造と機能に共通性をもつ金属要求性の中性プロテアーゼで、細胞外および細胞膜上で機能する。ＭＭＰは、構造上よく保存されたいくつかのドメイン構造からなり、シグナル配列、活性中心領域、およびその制御領域であるプロペプチド領域を基本的構造とする。（非特許文献１、非特許文献２）
　ＭＭＰのうち、ＭＭＰ－１、ＭＭＰ－８、ＭＭＰ－１３およびＭＭＰ－１８は、コラゲナーゼ群に属し、細胞外マトリックスのうちＩ、ＩＩ及びＩＩＩ型コラーゲンを分解する。ＭＭＰ－２およびＭＭＰ－９は、ゼラチナーゼ群に属し、Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩ型コラーゲンを分解するほか、コラゲナーゼ等により分解されたコラーゲン（変性コラーゲン）をさらに分解すること、基底膜の主要成分であるＩＶ型コラーゲンの分解やエラスチンの分解にも関与していることが知られている。また、ＭＭＰ－３、１０、および１１はストロムライシン群に属し、ラミニン、フィブロネクチン、プロテオグリカンなどのマトリックス蛋白質を分解する。また、これらと類似の構造を有するエラスチン分解活性を持つメタロエラスターゼであるＭＭＰ－１２や、マトリライシン群に属するＭＭＰ－７、ＭＭＰ－２６などが存在する。また、膜型ＭＭＰ（ＭＭＴ－ＭＰ）群であるＭＭＰ－１４、１５、１６およびＭＭＰ－１７、２４、２５は膜貫領域を有し、いずれも細胞外マトリックス分解に関わっていることが知られている。（非特許文献１、非特許文献２）
　細胞外マトリックス成分を分解するＭＭＰの機能は、生体内では非常に厳密にコントロールされており、１）遺伝子発現、２）前駆体の活性型への変換、３）活性型ＭＭＰへの阻害因子の結合などの多段階で制御されている（非特許文献１）。ＭＭＰは細胞外マトリックスを破壊することで、胚の発生および組織の分化、血管新生などで働くが、その他にも癌の浸潤や転移、関節炎や歯周病、組織の潰瘍形成（角膜潰瘍、胃潰瘍、あるいは表皮性潰瘍）にもかかわることが知られている（非特許文献１、非特許文献２）。
　ＭＭＰの阻害効果をもつ薬物として、ＣＧＳ２７０２３ａ（非特許文献３）、コラーゲントリペプチド（非特許文献４）、フラボノイド化合物（特許文献１）、カテキン化合物（特許文献２）などが知られている。また、ＭＭＰの産生阻害効果をもつものとして、シカクマメ抽出物（特許文献３）、メナテトレノン（特許文献４）などが知られている。
　ところで、植物ステロールのうち、シクロラノスタン骨格を有する化合物やロフェノール骨格を有する化合物には、動脈硬化モデル動物において、血中過酸化脂質量を低減させる作用があること、胸部大動脈のプラーク形成数を抑制する作用があることが見出され、抗酸化剤としての用途が提案されている（特許文献５）。しかしながら、これらの化合物について、ＭＭＰとの関係はこれまで知られていなかった。
化学と生物，Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．１２，ｐ．８１６－８１８，１９９７ 生物物理化学，Ｖｏｌ．４７，ｐ．１１１－１１６，２００３ Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．４０，ｐ．２５２５－２５３２，１９９７ Ｐｒｅｖ　Ｎｕｔｒ　Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉ，Ｖｏｌ．１７，ｐ．２４５－２５３，２０１２
特開平８－１０４６２８号公報 特開２０００－２２６３２９号公報 特開２０１２－２０６９８４号公報 国際公開第２００４／０９３８５８号 国際公開第２０１０／０５８７９５号
　特許文献１～４に記載のように、ＭＭＰ阻害作用を示す素材が提案されている中、安全に摂取できる素材の開発が更に求められていた。
　そこで、本発明は、日常的に安全に摂取でき、ＭＭＰ産生を阻害し得る機能性素材、これを利用した薬剤を提供することを課題とする。
　前記課題を解決する第一の発明は、ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される化合物を有効成分として含有する、マトリックスメタロプロテアーゼ産生阻害剤である（以下、「本発明の阻害剤」という）。
　本発明の好ましい形態では、前記阻害剤は、前記化合物を総量で０．００００１質量％以上含む。
　本発明の好ましい形態では、前記化合物は、４－メチルコレスト－７－エン－３－オール、４－メチルエルゴスト－７－エン－３－オール、４－メチルスチグマスト－７－エン－３－オール、９，１９－シクロラノスタン－３－オール、及び２４－メチレン－９，１９－シクロラノスタン－３－オールからなる群から選択される。
　本発明の阻害剤は、特に、マトリックスメタロプロテアーゼ－２、マトリックスメタロプロテアーゼ－９、マトリックスメタロプロテアーゼ－１２、及びマトリックスメタロプロテアーゼ－１３からなる群から選択されるマトリックスメタロプロテアーゼの産生阻害に有効である。
　また、前記課題を解決する第二の発明は、マトリックスメタロプロテアーゼ産生阻害剤の製造におけるロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される化合物の使用であり、前記化合物の好ましい形態は前述した通りである。
　また、第二の発明には、以下の形態が含まれる。
　マトリックスメタロプロテアーゼ産生阻害剤の製造における、ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される化合物を総量で０．００００１質量％以上含有する組成物の使用。
　本発明の好ましい形態では、マトリックスメタロプロテアーゼ産生阻害剤は、マトリックスメタロプロテアーゼ－２、マトリックスメタロプロテアーゼ－９、マトリックスメタロプロテアーゼ－１２、及びマトリックスメタロプロテアーゼ－１３からなる群から選択されるマトリックスメタロプロテアーゼの産生阻害剤である。
　第二の発明は、細胞外マトリックスの分解に起因する症状を予防又は改善するための医薬の製造におけるロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される化合物の使用の形態を含む。
　また、該形態には、以下のものも含まれる。
　細胞外マトリックスの分解に起因する症状を予防又は改善するための医薬の製造における、ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される化合物を総量で０．００００１質量％以上含有する組成物の使用。
　また、前記課題を解決する第三の発明は、マトリックスメタロプロテアーゼ産生阻害のために用いられるロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される化合物であり、前記化合物の好ましい形態は前述した通りである。
　本発明の好ましい形態では、前記化合物は、マトリックスメタロプロテアーゼ－２、マトリックスメタロプロテアーゼ－９、マトリックスメタロプロテアーゼ－１２、及びマトリックスメタロプロテアーゼ－１３からなる群から選択されるマトリックスメタロプロテアーゼの産生阻害のために用いられる。
　また、前記化合物は細胞外マトリックスの分解に起因する症状を予防又は改善するために用いられることが好ましい。
　また、前記課題を解決する第四の発明は、マトリックスメタロプロテアーゼ産生阻害のために用いられるロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される化合物を総量で０．００００１質量％以上含有する組成物であり、前記化合物の好ましい形態は前述した通りである。
　第四の発明において、前記組成物は好ましくは飲食品である。
　本発明の好ましい形態では、前記組成物は、マトリックスメタロプロテアーゼ－２、マトリックスメタロプロテアーゼ－９、マトリックスメタロプロテアーゼ－１２、及びマトリックスメタロプロテアーゼ－１３からなる群から選択されるマトリックスメタロプロテアーゼの産生阻害のために用いられる。
　また、前記組成物は細胞外マトリックスの分解に起因する症状を予防又は改善するために用いられることが好ましい。
　また、前記課題を解決する第五の発明は、ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される化合物を、マトリックスメタロプロテアーゼの産生の阻害が必要な対象に投与することを含む、マトリックスメタロプロテアーゼの産生を阻害する方法であり、前記化合物の好ましい形態は前述した通りである。
　本発明の好ましい形態では、マトリックスメタロプロテアーゼは、マトリックスメタロプロテアーゼ－２、マトリックスメタロプロテアーゼ－９、マトリックスメタロプロテアーゼ－１２、及びマトリックスメタロプロテアーゼ－１３からなる群から選択される。
　また、該形態には、以下が含まれる。
　ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される化合物を、細胞外マトリックスの分解に起因する疾患又は症状を有する対象に投与することを含む、細胞外マトリックスの分解に起因する疾患又は症状の改善又は予防方法。
　また、第五の発明は、以下を好ましい形態としている。
　ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される化合物を、総量で０．００００１質量％以上含有する組成物を投与すること。
　細胞外マトリックスの分解に起因する疾患又は症状としては、炎症性疾患が挙げられる。また、該疾患又は症状としては、歯肉炎又は歯周炎、組織潰瘍、皮膚疾患、関節炎、癌の浸潤又は転移、子宮内膜症が挙げられ、前記化合物又はこれを含む前記組成物は、これらの症状の予防又は改善に特に有効である。
　本発明の阻害剤は、安全に服用でき、マトリックスメタロプロテアーゼの産生を効果的に阻害する。本発明の阻害剤は、関節炎、炎症性疾患、歯周病、骨疾患、癌の浸潤及び転移、動脈瘤疾患、角化異常症、紫外線等による皮膚炎症疾患、皮膚老化等の予防又は改善、治療に有用である。
実施例１における各群のマウスの細胞外マトリックス組織切片の光学顕微鏡写真である。図中、矢印は、線維の断裂がみられる箇所を示す。
　次に、本発明の好ましい形態について詳細に説明する。ただし、本発明は以下の好ましい形態に限定されず、本発明の範囲内で自由に変更することができるものである。尚、本明細書において百分率は特に断りのない限り質量による表示である。
　本発明の阻害剤は、ロフェノール化合物（化合物１）及びシクロラノスタン化合物（化合物２）からなる群から選択される化合物を有効成分として含有する。化合物１及び化合物２は、それぞれ以下の一般式（１）及び一般式（２）で表される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
　一般式（１）中、Ｒ１は、炭素数５～１６の直鎖状若しくは分枝鎖状のアルキル基、又は２重結合を１つ若しくは２つ含むアルケニル基である。また、前記アルキル基又はアルケニル基は、１又は２の水素原子がヒドロキシル基及び／又はカルボニル基に置換された置換アルキル基又は置換アルケニル基であってもよい。
　また、Ｒ２、Ｒ３は各々独立に水素原子又は炭素数１～３のアルキル基である。ここで、前記炭素原子数１～３のアルキル基としては、メチル基、エチル基等が好ましく、メチル基が特に好ましい。また、前記アルキル基は、少なくとも１の水素原子がヒドロキシル基及び／又はカルボニル基に置換された置換アルキル基であってもよい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
　また、Ｒ４は環を構成する炭素原子とともにＣ＝Ｏを形成するか、又は－ＯＨ、－ＯＣＯＣＨ３の何れかである。
　前記一般式（１）中、Ｒ１は、下記式で表される基の何れかであることが好ましい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
　また、前記一般式（１）中、Ｒ２及びＲ３の一方が水素原子であり、他方がメチル基であることが好ましく、Ｒ４が水酸基であることが好ましい。
　化合物１として、好ましくは、４－メチルコレスト－７－エン－３－オール、４－メチルエルゴスト－７－エン－３－オール及び４－メチルスチグマスト－７－エン－３－オールが挙げられる。各化合物は、それぞれ、以下の式で表される構造を有する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
　化合物１は、公知の製造方法に準じて化学的に製造することができる。
　例えば、Vitali Matyash et al., PLOS BIOLOGY, Volume 2, Issue 10, e280, 2004 に記載されたサプリメントデータに準じて、合成することが可能である。
　また、化合物１が植物に含まれていることは公知であり、公知のロフェノールの製造方法に準じて製造することができる（生物化学実験法２４、脂肪脂質代謝実験法、山田晃弘著、学会出版センター、第１７４ページ、１９８９年）。
　例えば、化合物１が含まれていることが公知の植物より、熱水抽出法、有機溶媒抽出法、超臨界抽出法又は亜臨界抽出法などの方法を用いて抽出することが可能である（例えば、特許第３９０５９１３号公報参照）。化合物１は、例えばユリ科、マメ科、イネ科、ナス科及びバショウ科の植物から抽出することができる。
　前記のようにして製造した化合物は、例えば、マススペクトル（ＭＳ）法、及び核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）法等によって、その分子量や構造等を決定又は確認することができる。
　また、化合物１は、医薬に許容される塩であってもよい。医薬に許容される塩として、金属塩（無機塩）と有機塩との両方が含まれ、それらのリストは「レミントン・ファーマシューティカル・サイエンシーズ（Remington's Pharmaceutical Sciences）、第１７版、１９８５年、第１４１８頁」に掲載されているものが例示される。
　具体的には塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、二リン酸塩、及び臭化水素酸塩などの無機酸塩や、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、パモ酸塩、サリチル酸塩、及びステアリン酸塩などの有機酸塩が非限定的に含まれる。
　また、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム等の金属の塩、リジン等のアミノ酸との塩とすることもできる。また、前記化合物若しくはその医薬に許容される塩の水和物等の溶媒和物も使用できる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
　一般式（２）中、Ｒ５は、炭素数６～８の直鎖状又は分枝鎖状のアルキル基、２重結合を１つ又は２つ含むアルケニル基である。また、前記アルキル基又はアルケニル基は、１又は２の水素原子がヒドロキシル基及び／又はカルボニル基に置換された置換アルキル基又は置換アルケニル基であってもよい。
　また、Ｒ６、Ｒ７は各々独立に水素原子又はメチル基である。また、Ｒ８は環を構成する炭素原子とともにＣ＝Ｏを形成するか、又は下記式の何れかである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
　前記一般式（２）中、Ｒ５は、下記式で表される基の何れかであることが好ましい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
　また、前記一般式（２）中、Ｒ６及びＲ７の一方が水素原子であり、他方がメチル基であることが好ましく、Ｒ８が水酸基であることが好ましい。
　化合物２としては、好ましくは、９，１９－シクロラノスタン－３－オール及び２４－メチレン－９，１９－シクロラノスタン－３－オールが挙げられる。各化合物は、それぞれ、以下の式で表される構造を有する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
　化合物２は、公知の製造方法に準じて化学的に製造することができる。例えば、２４－メチレン－９，１９－シクロラノスタン－３－オール（慣用名：２４－メチレンシクロアルタノール）は、特開昭５７－０１８６１７号公報や国際公開第２０１２／０２３５９９号（γ－オリザノールから合成する方法）に開示される方法にて製造することが可能である）。また、化合物２は、特開２００３－２７７２６９号公報に開示される方法にて、シクロアルテノールフェルレートの加水分解物を出発物質として製造することが可能である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
　また、化合物２も、ユリ科、マメ科、イネ科、ナス科及びバショウ科などの植物に含まれていることが知られている（〔フィトケミストリー（Phytochemistry）、米国、１９７７年、第１６巻、第１４０～１４１ページ〕、〔ハンドブック・オブ・フィトケミカル・コンスティチュエンツ・オブ・ＧＲＡＳ・ハーブ・アンド・アザー・エコノミック・プランツ（Handbook of phytochemical constituents of GRAS herbs and other economic plants）、１９９２年、米国、シーアールシープレス〕、又は〔ハーゲルズ・ハントブーフ・デア・ファルマツォイティシェン・プラクシス（Hager's Handbuch der Pharmazeutischen Praxis）、第２～６巻、１９６９～１９７９年、ドイツ、シュプリンガー・フェアラークベルリン〕参照）。よって、化合物２は、これらの植物より、有機溶媒抽出法又は熱水抽出法などの公知の方法を用いて抽出することが可能である（例えば、特許第３９２４３１０号公報参照）。
　前記のようにして製造した化合物は、例えば、マススペクトル（ＭＳ）法、及び核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）法等によって、その分子量や構造等を決定又は確認することができる。
　また、化合物２は、医薬に許容される塩であってもよい。このような塩は化合物１について例示した通りである。
　本発明の阻害剤は、化合物１及び化合物２からなる群から選択される化合物を、有効成分として含有する。該化合物は、１種でも、複数種でもよい。
　化合物１又は化合物２を単独で用いる場合としては、化合物１（主に、４－メチルコレスト－７－エン－３－オール、４－メチルエルゴスト－７－エン－３－オール、若しくは４－メチルスチグマスト－７－エン－３－オール）、又は化合物２（主に、９，１９－シクロラノスタン－３－オール若しくは２４－メチレン－９，１９－シクロラノスタン－３－オール）の何れかであることが好ましい。
　中でも薬剤の有効成分として使用する場合において考慮される溶解性等の物性の点で、化合物１としては、４－メチルコレスト－７－エン－３－オールが特に好ましく、化合物２としては、９，１９－シクロラノスタン－３－オールが特に好ましい。
　また、化合物１と化合物２とを対比した場合では、化合物１（主に、４－メチルコレスト－７－エン－３－オール、４－メチルエルゴスト－７－エン－３－オール又は４－メチルスチグマスト－７－エン－３－オール）であることがより好ましい。
　また、化合物１又は化合物２各々においても、１種の化合物を用いてもよいし、複数の化合物を混合して用いてもよい。
　本発明の阻害剤は、好ましくは、４－メチルコレスト－７－エン－３－オール、４－メチルエルゴスト－７－エン－３－オール、４－メチルスチグマスト－７－エン－３－オール、９，１９－シクロラノスタン－３－オール、及び２４－メチレン－９，１９－シクロラノスタン－３－オールからなる群から選択される化合物を有効成分として含有する。
　本発明の阻害剤における前記化合物の含有量は、症状等に応じて適宜選択することができるが、総量で、好ましくは少なくとも０．００００１質量％、より好ましくは少なくとも０．０００１質量％、さらに好ましくは少なくとも０．０００５質量％、特に好ましくは少なくとも０．００１質量％である。また本発明の阻害剤における当該量の上限は特に制限されないが、総量で、９０質量％以下、好ましくは７０質量％以下、より好ましくは５０質量％以下が例示される。
　また、本発明の阻害剤は、化合物１及び化合物２からなる群から選択される化合物を含む組成物を、有効成分として含有する。該化合物は、１種でも、複数種でもよい。
　このような組成物としては、例えば、前述した化合物１を含む植物から得られた抽出物、化合物２を含む植物から得られた抽出物、及び化合物１及び化合物２の両者を含む植物から得られた抽出物、並びにこれらの混合物が挙げられる。
　本発明の阻害剤は、好ましくは化合物１及び化合物２の両者を組み合わせて含有する。化合物１及び化合物２は、それぞれ１種でも、複数種でもよい。このような態様では、化合物１及び化合物２の両者を含む組成物を有効成分として用いることができる。該組成物として、化合物１及び化合物２の両者を含む植物から得られた抽出物が好ましく挙げられる。
　化合物１及び化合物２の両者を組み合わせる場合において、化合物１及び化合物２の質量比の範囲は、例えば以下が挙げられる。
　化合物１：化合物２は、好ましくは５：１～１：５、さらに好ましくは３：１～１：３、特に好ましくは２：１～１：２である。
　本発明の阻害剤は、医薬の態様で用いることができる。
　本発明の阻害剤は、経口的、又は非経口的にヒトを含む哺乳動物に投与することができる。
　本発明の阻害剤は、ＭＭＰの活性により起こる、細胞外マトリックスの分解により引き起こされる症状を予防又は改善するのに有効である。
　本発明において、細胞外マトリックスの分解により引き起こされる症状や疾患としては、関節炎、変形性関節症、関節リウマチ、自己免疫性関節炎、歯周病、異所性脈管形成、癌の浸潤及び転移、子宮内膜症、潰瘍形成、骨疾患、血管再閉塞、血管再狭窄、ＨＩＶ感染症、糖尿病合併症、動脈硬化、動脈瘤疾患、急性大動脈瘤解離、アテローム性動脈硬化症性斑離断、心筋梗塞、心不全、組織潰瘍、創傷、皮膚病、水疱症における水疱形成、角化異常症、紫外線等による皮膚炎などの皮膚障害、皮膚表皮の肥厚・シワ形成・くすみ等の皮膚老化、皮膚弾力性の低下、皮膚基底膜の破壊、腫瘍脈管形成、年齢による黄斑変性、線維症、移動性炎症細胞に依る炎症性疾患、炎症性腸疾患、角膜潰瘍、蛋白尿、水疱症、栄養障害型表皮水疱症、炎症性応答に導く症状、ＭＭＰ活性による骨減少症、骨粗しょう症、顎関節症、神経系の脱髄疾患、腫瘍転移又は外傷性関節傷害に続く退行性軟骨損失、粥状硬化性斑破断に由来する冠状動脈血栓症、受胎制御、肺気腫、又は慢性閉塞性肺疾患、褥瘡、術後創治癒期間の遅延、慢性創傷、肥満者の皮膚炎症・真皮の構造変化が挙げられる。
　本発明の阻害剤は、前記症状のうち一又は複数の症状を予防又は改善するのに有効である。
　本発明の阻害剤は、特に、ゼラチナーゼ群に属するＭＭＰであるＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９、メタロエラスターゼであるＭＭＰ－１２、及びコラゲナーゼ群に属するＭＭＰ－１３からなる群から選択されるいずれかのＭＭＰの活性により引き起こされる症状を予防又は改善するのに有効である。
　例えば、ＭＭＰ－２の活性により引き起こされる症状としては、特に、癌の浸潤及び転移、子宮内膜症、炎症性腸疾患、表皮基底膜の破壊、褥瘡等が挙げられる。
　ＭＭＰ－９の活性により引き起こされる症状としては、特に、皮膚表皮の肥厚及びしわの形成、関節リウマチ、急性大動脈解離、水疱症等が挙げられる。
　ＭＭＰ－１２の活性により引き起こされる症状としては、特に、関節炎、肺気腫、動脈瘤、動脈硬化、慢性閉塞性肺疾患等が挙げられる。
　また、ＭＭＰ－１３の活性により引き起こされる症状としては、特に、変形性関節症、骨粗鬆症、歯周炎、多発性硬化症、歯肉炎、角膜表皮性潰瘍、褥瘡、胃潰瘍、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化性閉塞処理後の血管再狭窄又は虚血性心不全等が挙げられる。
　本発明の阻害剤は、特に、炎症性疾患の改善又は予防に有用である。炎症性疾患としては、例えば、歯肉炎又は歯周炎、組織潰瘍、皮膚炎、関節炎、炎症性腸疾患等が挙げられる。
　組織潰瘍としては、角膜潰瘍、表皮性潰瘍、胃潰瘍、潰瘍性大腸炎等が挙げられる。
　また、皮膚疾患の改善又は予防にも有用である。皮膚疾患として、皮膚炎、皮膚表皮の肥厚、創傷、角化異常症、水疱症、褥瘡、術後創治癒期間の遅延、慢性創傷、肥満者の皮膚炎症・真皮の構造変化等が挙げられる。
　本発明の阻害剤は、特に、ＭＭＰ－２の活性により引き起こされる症状を予防又は改善するのに有効である。
　本発明の阻害剤の形態は特に限定されず、用法に応じて適宜選択できる。具体的には、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤、坐剤、注射剤、軟膏剤、貼付剤、点眼剤、点鼻剤等を例示できる。
　本発明の阻害剤の投与時期は特に限定されず、対象となる疾患に応じて、適宜選択することが可能である。また、投与量は製剤形態、用法、患者の年齢、性別、その他の条件、症状の程度等に応じて決定されることが好ましい。
　本発明の阻害剤の投与量は、用法、患者の年齢、性別、疾患の程度、その他の条件等により適宜選択される。通常、有効成分の量に換算して、好ましくは０．０００１～１００ｍｇ／日、より好ましくは、０．００１～５０ｍｇ／日、特に好ましくは０．０１～１０ｍｇ／日の範囲を目安とする。
　本発明の阻害剤は、医薬に汎用される添加剤を含有していてもよい。添加剤としては、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤、希釈剤、界面活性剤、注射剤用溶剤等が挙げられる。
　本発明の阻害剤は、前記化合物を有効成分として医薬用担体に配合することで製造することができる。本発明の阻害剤は、例えば、前記化合物を、前述した添加剤と共に製剤化することで製造することができる。
　また、本発明の阻害剤は、前記化合物を含む公知の植物等を原料として、熱水や各種溶媒を用いた抽出、超臨界抽出、亜臨界抽出することにより得た抽出物を、前述した添加剤と共に製剤化することで製造することもできる。
　特に、化合物１及び化合物２を前記特定の質量比の範囲で含む本発明の阻害剤は、各化合物を前記質量比の範囲で混合することで製造することができる。また、このような医薬は、化合物１及び化合物２が含まれている公知の植物等を原料として、各種溶媒を用いた抽出、超臨界抽出、亜臨界抽出等の方法にて製造することも可能である。
　本発明の阻害剤は、例えば、ユリ科、マメ科、イネ科、ナス科及びバショウ科などの植物から得ることができる。
　本発明の阻害剤は、前記化合物が有効成分として機能し、ＭＭＰの活性による細胞外マトリックスの分解に起因する症状の予防又は改善作用を有する。特に、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９、ＭＭＰ－１２、及びＭＭＰ－１３からなる群から選択されるいずれかのＭＭＰの活性による細胞外マトリックスの分解に起因する症状の予防又は改善に有効である。
　本発明の阻害剤は、特に、ＭＭＰ－２の活性による細胞外マトリックスの分解に起因する症状の予防又は改善に有効である。
　本発明の阻害剤は、飲食品に使用され得る原料と混合することで、飲食品に加工することも可能である。本発明において、「飲食品」には、人間が摂取する飲食品の他、人間以外の動物が摂取する飼料も含まれる。
　飲食品を製造する場合には、これらにおける前記化合物の量は、総量で、好ましくは少なくとも０．００００１質量％、より好ましくは少なくとも０．０００１質量％、さらに好ましくは少なくとも０．０００５質量％、特に好ましくは少なくとも０．００１質量％である。また本発明の飲食品における当該量の上限は特に制限されないが、総量で、９０質量％以下、好ましくは７０質量％以下、より好ましくは５０質量％以下が例示される。
　また、飲食品における前記化合物の量は、その形態に応じて、前記化合物を、総量で、好ましくは０．０００１～１００ｍｇ／日、より好ましくは０．００１～５０ｍｇ／日、特に好ましくは０．０１～１０ｍｇ／日の範囲で摂取するのに適した量とすることもできる。従って、本発明の飲食品の好ましい形態の一つは、前記化合物を、総量で、好ましくは０．０００１～１００ｍｇ／日、より好ましくは０．００１～５０ｍｇ／日、特に好ましくは０．０１～１０ｍｇ／日摂取するように用いられる飲食品である。
　前記飲食品は、好ましくは保健機能食品である。「保健機能食品」とは、疾患の予防効果、又は疾患の発生リスクの低減効果が、直接的又は間接的に表示された食品、及び事業者の責任で科学的根拠を基に商品パッケージに機能性を表示するものとして、消費者庁に届け出られた食品を意味する。例えば、現在、日本において、特定保健用食品、機能性表示食品、健康補助食品等の態様で販売される食品が挙げられる。
　前記飲食品の形態としては特に制限されないが、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果汁飲料、乳酸菌飲料等の飲料（これらの飲料の濃縮原液及び調製用粉末を含む）が、前記化合物を効率よく摂取する観点から特に好ましい。
　また、機能性飲食品の形態としては、顆粒状、タブレット状又は液状のサプリメントであることも、摂取者が有効成分の摂取量を把握し易いという点で好ましい。
　また、このような機能性飲食品には、「マトリックスメタロプロテアーゼ産生阻害のため」、「細胞外マトリックス保護のため」の用途の表示が付された形態とすることも好ましい。すなわち、本発明の飲食品は、例えば、「細胞外マトリックス保護のため」の用途が付された、化合物１及び化合物２からなる群から選択される化合物を有効成分として含有する、マトリックスメタロプロテアーゼ活性により引き起こされる症状の予防又は改善のための飲食品として販売することが好ましい。
　前記「表示」は、需要者に対して前記用途を知らしめる機能を有する全ての表示を含む。すなわち、前記用途を想起・類推させうるような表示であれば、表示の目的、表示の内容、表示する対象物・媒体等の如何に拘わらず、すべて前記「表示」に該当する。
　また、前記「表示が付された」とは、前記表示と、飲食品（製品）を関連付けて認識させようとする表示行為が存在していることをいう。
　表示行為は、需要者が前記用途を直接的に認識できるものであることが好ましい。具体的には、本発明の飲食品に係る商品又は商品の包装への前記用途の記載行為、商品に関する広告、価格表若しくは取引書類（電磁的方法により提供されるものを含む）への前記用途の記載行為が例示できる。
　一方、表示される内容（表示内容）としては、行政等によって認可された表示（例えば、行政が定める各種制度に基づいて認可を受け、そのような認可に基づいた態様で行う表示）であることが好ましい。
　例えば、健康食品、機能性飲食品、経腸栄養食品、特別用途食品、保健機能食品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、医薬用部外品等の表示を例示することができる。特に、消費者庁によって認可される表示、例えば、特定保健用食品制度、これに類似する制度にて認可される表示を例示できる。後者の例としては、特定保健用食品としての表示、条件付き特定保健用食品としての表示、身体の構造や機能に影響を与える旨の表示、疾病リスク低減表示等を例示することができ、詳細にいえば、健康増進法施行規則（平成１５年４月３０日日本国厚生労働省令第８６号）に定められた特定保健用食品としての表示（特に保健の用途の表示）、及びこれに類する表示が、典型的な例として列挙することが可能である。
　前記用途を表す文言は、「マトリックスメタロプロテアーゼ産生阻害のため」、「細胞外マトリックス保護のため」という文言に限られるものでなく、それ以外の文言であっても、細胞外マトリックスの分解により起こる症状を予防、改善する作用又は効果を表現する文言であれば、本発明の範囲に包含されることは言うまでもない。
　また、本発明の飲食品は、前記用途の表示に加え、前記有効成分の表示、さらには、前記用途と前記有効成分の関連性を示す表示を含むことも好ましい。
　前記飲食品は、化合物１及び化合物２から選ばれる化合物を、有効成分として配合することで製造することができる。本発明の飲食品は、例えば、前記化合物を、飲食品原料に混合して、加工することで製造することができる。
　また、前記飲食品は、前記化合物を含む公知の植物等を原料として、熱水や各種溶媒を用いた抽出、超臨界抽出、亜臨界抽出することにより得た抽出物を、飲食品原料と共に加工することで製造することもできる。
　また、前記飲食品の形態を、顆粒状、タブレット状又は液状のサプリメントとする場合には、有効成分である前記化合物を、例えば、ラクチュロース、マルチトール、及びラクチトール等の糖類、及びそれ以外の糖類、例えばデキストリン、デンプン等；ゼラチン、大豆タンパク、トウモロコシタンパク等のタンパク質；アラニン、グルタミン、イソロイシン等のアミノ酸類；セルロース、アラビアゴム等の多糖類；大豆油、中鎖脂肪酸トリグリセリド等の油脂類等と共に、製剤化することも好ましい。
　次に実施例を示して本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
［製造例１］
（ロフェノール化合物（化合物１）の製造）
　アロエベラの葉肉（透明ゲル部分）１００ｋｇを、ホモジナイザーを用いて液状化し、ここに１００Ｌの酢酸エチル／ブタノール（３：１）混合液を添加して攪拌した。一晩放置した後、酢酸エチル／ブタノール混合液と水層を分液して、酢酸エチル／ブタノール混合液を回収した。この酢酸エチル／ブタノール混合液を減圧下で濃縮した。回収された酢酸エチル／ブタノール混合液抽出物の質量は、１３．５ｇであった。
　シリカゲル６０（メルク社製）を４００ｇ充填したカラムに、当該抽出物１３ｇを１ｍｌのクロロホルム／メタノール（１：１）混合液に溶解させた溶液を通液し、カラムに吸着させた後、クロロホルム／メタノール混合液（クロロホルム：メタノール＝１００：１、２５：１、１０：１、５：１及び１：１の各混合比）を使用して、メタノール濃度を段階的に上昇させるステップワイズグラジエント法により溶出し、前記混合液の混合比毎に溶出液を分画した。これらのフラクションのうち、クロロホルム：メタノール＝２５：１で溶出してきたフラクションに本発明のロフェノール化合物が存在することを、順相及び逆相薄層クロマトグラフィー（メルク社製、シリカゲル６０Ｆ２５４及びＲＰ－１８Ｆ２５４３）にて確認した。
　このフラクションの溶媒を除去した後、１ｍｌのクロロホルム／メタノール（１：１）混合液に溶解し、シリカゲル６０を１００ｇ充填したカラムに通液し、カラムに吸着させた後、ヘキサン／酢酸エチル（４：１）混合液１１００ｍｌで溶出した。溶出フラクションを、順に３００ｍｌ（フラクションＡ）、 ３００ｍｌ（フラクションＢ）、５００ｍｌ（フラクションＣ）ずつ分取した。
　本発明の化合物１であるロフェノール化合物が、フラクションＡに濃縮されたことを、順相及び逆相薄層クロマトグラフィーにて確認し、さらに、コスモシールＣ１８（ナカライテスク社製）を装着したＨＰＬＣを用いて、クロロホルム／ヘキサン（８５：１５）混合液にて分離し、４－メチルコレスト－７－エン－３－オール、４－メチルエルゴスト－７－エン－３－オール、及び４－メチルスチグマスト－７－エン－３－オールを、それぞれ１．３ｍｇ、１．２ｍｇ、１ｍｇ得た。各々の化合物の構造は質量（ＭＳ）分析及びＮＭＲにて確認した。
［製造例２］
（シクロラノスタン化合物（化合物２）の製造）
　γ－オリザノール（オリザ油化社製）８．０ｇに蒸留水２５０ｍｌ、水酸化ナトリウム５０ｇ、イソプロパノール１５０ｍｌ、エタノール１５０ｍｌ、メタノール１５０ｍｌを加え、マントルヒーターを用いて２時間加熱還流を行った。反応後に、反応液を１３００ｍｌの水に添加し、生じた白色の析出物を吸引ろ過し、固形物を得た。残存するアルカリを洗浄するために、得られた残渣を１０００ｍｌの水の中に懸濁させた後、再び吸引ろ過を行った。この操作を２回繰り返し、最終的な残渣を凍結減圧乾燥させることによりオリザノール加水分解物５．９１ｇを得た。当該加水分解物はＨＰＬＣにて精製を行い、２４３５ｍｇのシクロアルテノール、及び１５４３ｍｇの２４－メチレン－９，１９－シクロラノスタン－３－オール（化合物２）を得た。
　次に、得られたシクロアルテノールを用いて、９，１９－シクロラノスタン－３－オール（化合物２）の合成を行った。
　シクロアルテノールを３０２ｍｇ、イソプロパノールを１５０ｍｌ、及び粉末状の５％パラジウム担持炭素触媒１．０ｇを仕込み、これをオートクレーブ内で密閉して、窒素ガスで置換した後、水素ガス３ｋｇ／ｃｍ2の圧力をかけながら導入した。攪拌しながら加熱していき、５０℃になったところで、水素の圧力を５ｋｇ／ｃｍ2とし、吸収された水素を補うことで圧力を保ちながら６時間反応させた。反応液について、ろ過により触媒を除去し、濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：クロロホルム１００％）により精製を行い、９，１９－シクロラノスタン－３－オール２７５ｍｇを得た。
［製造例３］
（ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物の混合物を添加した試料の調製）
　上記製造例１によって得られた、４－メチルコレスト－７－エン－３－オール、４－メチルエルゴスト－７－エン－３－オール、及び４－メチルスチグマスト－７－エン－３－オールと、製造例２によって得られた、９，１９－シクロラノスタン－３－オール及び２４－メチレン－９，１９－シクロラノスタン－３－オールとを用いて、ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物の質量比が、ロフェノール化合物（化合物１）：シクロラノスタン化合物（化合物２）＝１：１となるような混合物を得た。
　カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ：第一工業製薬株式会社製）を用いて、ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物の混合物を分散させ、１００００倍希釈させた粉末を作製した。これらの粉末を、ＡＩＮ９３Ｇ飼料に２％添加し、試験試料を調製した。
　すなわち、化合物１（ロフェノール化合物）及び化合物２（シクロラノスタン化合物）を総量で０．００００２質量％含有した試験試料を製造した。
[実施例１]
　本実施例では、紫外線照射によるＭＭＰ発現量の増加に対する、化合物１及び化合物２を含有する組成物のＭＭＰ発現の変化に与える影響を解析した。
（１）試料の調製
　本実施例では、前記製造例３で調製した試験試料を用いた。なお、対照試料（コントロール）として、動物用飼料ＡＩＮ９３Ｇを用いた。
（２）試験方法
　８週齢ヘアレスマウス（ＨＲ－１マウス）を６匹１群とし、計２群にそれぞれ対照試料または試験試料を投与しながら、計８週間飼育した。
　飼育開始２週間後から、紫外線照射装置にヘアレスマウスを入れて、３回／週の頻度でＵＶＢを照射した。１回あたりの照射量は、４８ｍＪ／ｃｍ2から開始し、段階的に２００ｍＪ／ｃｍ2まで増加させ、最終的な総照射量は、合計２．３Ｊ／ｃｍ2とした。ＵＶＢの照射開始６週目に、各群のヘアレスマウスを解剖して背部皮膚組織を採取し、細胞外マトリックス組織切片を作製した。当該組織切片を、光学顕微鏡（オリンパス社）を用いて観察し、真皮層の細胞外マトリックス（弾性繊維）の断片化、配向を確認した。また、ＵＶＢの照射を行わずに、対照試料で飼育したＵＶＢ非照射マウスについても、同様に組織切片を観察した。
（３）試験結果
　光学顕微鏡写真を図１に示す。図１から明かなとおり、対照試料群では、真皮層の弾性線維の顕著な断片化が観察されたが、試験試料群では、真皮層の弾性線維断片化が抑制されていた。これより、紫外線照射により真皮層の弾性線維が断片化されている状態において、化合物１及び化合物２を含む組成物を摂取することで、真皮層の弾性線維断片化を抑制（皮膚組織の細胞外マトリックス断片化抑制）できることが判明した。
［実施例２］
　本試験においては、化合物１及び化合物２を含む組成物によるＭＭＰ－２、及びＭＭＰ－９の産生阻害効果について確認した。
（１）試験方法
　日本エスエルシー社より購入した８週齢雌ヘアレスマウスを６匹１群とし、計３群に分けて、陰性の対照試料（ＡＩＮ９３Ｇ　オリエンタル酵母社）、陽性の対照試料として動物用飼料ＡＩＮ９３Ｇにコラーゲンを０．６質量％添加したコラーゲン試料、及び試験試料をそれぞれの群に投与しながら、計８週間飼育した。また、これらとは別に陰性の対照試料を投与し、紫外線照射しないＵＶＢ非対照群を１群設け、比較対象とした。
　飼育開始２週間後から、紫外線照射装置にヘアレスマウスを入れて、３回／週の頻度で照射した。１回あたりの照射量は、４８ｍＪ／ｃｍ2から開始し、段階的に２００ｍＪ／ｃｍ2まで増加させ、最終的な照射量は、合計２．３Ｊ／ｃｍ2とした。
　ＵＶＢの照射開始６週目に解剖して、背部皮膚組織を採取し、液体窒素で凍結した後、マルチビーズショッカー（安井器械）にて破砕し、CelLytic MT (Sigma-aldrich社)を用いてタンパク質を抽出した。抽出したタンパク質中のＭＭＰ－２、及びＭＭＰ－９タンパク発現量をＭＭＰ－２検出キット（ＲａｙＢｉｏ社）、およびＭＭＰ－９検出キット（Ｒ＆Ｄ　Ｓｙｓｔｅｍｓ社）を用いて検出した。
（２）試験結果
　結果を表１及び表２に示す。表中のＭＭＰタンパク質発現に関する数値は、検出キットに基づくＥＬＩＳＡ法により測定された実測値である。また、表中のp値は、Dunnett 法による有意確率を示す。表から明らかなように、ＵＶＢを照射した対照試料群では、ＭＭＰ－２（表１）、及びＭＭＰ－９（表２）の発現量は、いずれもＵＶＢ非照射群に対して大きかった。一方、試験試料群では、対照試料群に比して、その発現量が顕著に抑制されていた。一方、陽性対照であるコラーゲン試料群においては、ＭＭＰ－２、及びＭＭＰ－９発現増加の有意な抑制効果は認められなかった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000013
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000014
　また、上述した化合物１を単独で０．００００２質量％含有した試験試料、及び化合物２を単独で０．００００２質量％含有した試験試料についても同様に効果を確認した結果、何れの試験試料も、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９の各々に対して、上記試験試料と同様の阻害効果を示した。
　これにより、化合物１又は化合物２は、各々単独でもＭＭＰ－２及びＭＭＰ－９に対して阻害作用を示すことが明らかとなった。
　また、製造例３において、化合物１及び化合物２を総量で０．００００１質量％含有した試験試料、化合物１を単独で０．００００１質量％含有した試験試料、及び化合物２を単独で０．００００１質量％含有した試験試料についても同様に効果を確認した結果、何れの試験試料も、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９の各々に対して、上記試験試料と同様の阻害効果を示した。
［実施例３］
　本試験においては、化合物１及び化合物２を含む組成物によるＭＭＰ－１２、及びＭＭＰ－１３の産生阻害効果について確認した。
（１）試験方法
　日本エスエルシー社より購入した８週齢雌ヘアレスマウスを６匹１群とし、計２群に分けて、陰性の対照試料（ＡＩＮ９３Ｇ　オリエンタル酵母社）、及び試験試料をそれぞれの群に投与しながら、計８週間飼育した。また、これらとは別に陰性の対照試料を投与し、紫外線照射しないＵＶＢ非対照群を１群設け、比較対象とした。
　飼育開始２週間後から、紫外線照射装置にヘアレスマウスを入れて、３回／週の頻度で照射した。１回あたりの照射量は、５０ｍＪ／ｃｍ2から開始し、段階的に２００ｍＪ／ｃｍ2まで増加させ、最終的な照射量は、合計３．１Ｊ／ｃｍ2とした。
　ＵＶＢの照射開始６週目に解剖して、背部皮膚組織を採取し、液体窒素で凍結した後、マルチビーズショッカー（安井器械）にて破砕し、CelLytic MT (Sigma-aldrich社)を用いてタンパク質を抽出した。抽出したタンパク質中のＭＭＰ－１２、及びＭＭＰ－１３タンパク発現量をＭＭＰ－１２検出キット（Ｃｌｏｕｄ－Ｃｌｏｎｅ社）、およびＭＭＰ－１３検出キット（Ｃｌｏｕｄ－Ｃｌｏｎｅ社）を用いて検出した。
（２）試験結果
　結果を表３及び表４に示す。表中のＭＭＰタンパク質発現に関する数値は、検出キットに基づくＥＬＩＳＡ法により測定された実測値である。また、表中のp値は、Dunnett 法による有意確率を示す。その結果、表から明らかなように、ＵＶＢを照射した陰性対照試料群では、ＭＭＰ－１２（表３）、ＭＭＰ－１３（表４）の発現量はいずれもＵＶＢ非照射群に対して顕著に増加していた。一方、試験試料群では、対照試料に比して、特にＭＭＰ－１２において、発現量が顕著に抑制されていた。
　また、上述した化合物１を単独で０．００００２質量％含有した試験試料、及び化合物２を単独で０．００００２質量％含有した試験試料についても同様に効果を確認した結果、何れの試験試料も、ＭＭＰ－１２、ＭＭＰ－１３の各々に対して、上記試験試料と同様の阻害効果を示した。
　これにより、化合物１又は化合物２は、各々単独でもＭＭＰ－１２及びＭＭＰ－１３に対して阻害作用を示すことが明らかとなった。
　また、製造例３において、化合物１及び化合物２を総量で０．００００１質量％含有した試験試料、化合物１を単独で０．００００１質量％含有した試験試料、及び化合物２を単独で０．００００１質量％含有した試験試料についても同様に効果を確認した結果、何れの試験試料も、ＭＭＰ－１２、ＭＭＰ－１３の各々に対して、上記試験試料と同様の阻害効果を示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000015
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000016
　前記実施例２、３のとおり、化合物１及び化合物２は、単独で、又は組み合わせることにより、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９、ＭＭＰ－１２、及びＭＭＰ－１３に対する阻害作用を顕著に示すことが判った。特に、化合物１及び化合物２が、ゼラチナーゼ群に属するＭＭＰ－２及びＭＭＰ－９、メタロエラスターゼであるＭＭＰ－１２、並びにコラゲナーゼであるＭＭＰ－１３の全てに対して阻害作用を示すことは驚くべきことであった。特に、ＭＭＰ－２に対する阻害作用は、従来、ＭＭＰ阻害作用を有するとして知られていた比較的安全性の高い成分の中でも顕著といえるものであった。前記化合物１及び化合物２は生体への安全性が確認されていることから、前記ＭＭＰの産生に起因する症状の改善に極めて有用である。
［比較例］
　本試験においては、前記実施例２、３で確認したＭＭＰとは異なるＭＭＰ－３に対して、化合物１及び化合物２を含む組成物によるＭＭＰ－３の産生阻害効果について確認した。
（１）試験方法
　日本エスエルシー社より購入した８週齢雌ヘアレスマウスを６匹１群とし、計２群に分けて、陰性の対照試料（ＡＩＮ９３Ｇ　オリエンタル酵母社）、及び試験試料をそれぞれの群に投与しながら、計８週間飼育した。また、これらとは別に陰性の対照試料を投与し、紫外線照射しないＵＶＢ非対照群を１群設け、比較対象とした。
　飼育開始２週間後から、紫外線照射装置にヘアレスマウスを入れて、３回／週の頻度で照射した。１回あたりの照射量は、５０ｍＪ／ｃｍ2から開始し、段階的に２００ｍＪ／ｃｍ2まで増加させ、最終的な照射量は、合計３．１Ｊ／ｃｍ2とした。
　ＵＶＢの照射開始６週目に解剖して、背部皮膚組織を採取し、液体窒素で凍結した後、マルチビーズショッカー（安井器械）にて破砕し、CelLytic MT (Sigma-aldrich社)を用いてタンパク質を抽出した。抽出したタンパク質中のＭＭＰ－３タンパク発現量をＭＭＰ－３検出キット（ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ社）を用いて検出した。
（２）試験結果
　結果を表５に示す。表中のＭＭＰタンパク質発現に関する数値は、検出キットに基づくＥＬＩＳＡ法により測定された実測値である。また、表中のp値は、Dunnett 法による有意確率を示す。その結果、表から明らかなように、ＭＭＰ－３（表５）において、試験試料によるＭＭＰ－３発現抑制効果は認められなかった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000017
［実施例４］
　次の組成からなるマトリックスメタロプロテアーゼ産生阻害効果を有する医薬を、以下の方法により製造した。
　製造例１で製造したロフェノール化合物と、及び製造例２で製造したシクロラノスタン化合物とを、ロフェノール化合物：シクロラノスタン化合物＝２：３の割合で含有した混合物に、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ：第一工業製薬株式会社製）を添加し分散させて調製した前記混合物を０．００１質量％含有する組成物を２質量％、中鎖脂肪酸（ＭＣＴ：理研ビタミン株式会社製）を２質量％、グリセリン脂肪酸エステル（理研ビタミン株式会社製）を４質量％、サポニン（丸善製薬株式会社製）を０．５質量％、エタノール（日本アルコール産業株式会社製）を０．２％、マルチトール（株式会社林原製）を１．３質量％、グリセリン（日油株式会社製）を７８％、さらに水を添加して全量が１００質量％、となるように混合して、ロフェノール化合物（化合物１）及びシクロラノスタン化合物（化合物２）の混合物が最終濃度で０．００００２質量％含有するシロップ状の製剤を製造した。
　本実施例の阻害剤は、細胞外マトリックスの分解により引き起こされる症状の改善・治療に有効である。
　本発明は、マトリックスメタロプロテアーゼ産生、及びこれによる細胞外マトリックスの分解に起因する症状の予防又は改善、治療に利用できる。

 

Claims (8)

  1. 　ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される化合物を有効成分として含有する、マトリックスメタロプロテアーゼ産生阻害剤。
  2. 　前記化合物を総量で０．００００１質量％以上含む、請求項１に記載のマトリックスメタロプロテアーゼ産生阻害剤。
  3. 　マトリックスメタロプロテアーゼがマトリックスメタロプロテアーゼ－２、マトリックスメタロプロテアーゼ－９、マトリックスメタロプロテアーゼ－１２、及びマトリックスメタロプロテアーゼ－１３からなる群から選択されるいずれかである、請求項１又は２に記載のマトリックスメタロプロテアーゼ産生阻害剤。
  4. 　マトリックスメタロプロテアーゼ産生阻害剤の製造における、ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される化合物の使用。
  5. 　マトリックスメタロプロテアーゼ産生阻害のために用いられる、ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される化合物。
  6. 　マトリックスメタロプロテアーゼ産生阻害のために用いられる、ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される化合物を総量で０．００００１質量％以上含む組成物。
  7. 　前記組成物が飲食品である、請求項６に記載の組成物。
  8. 　ロフェノール化合物及びシクロラノスタン化合物からなる群から選択される化合物を、マトリックスメタロプロテアーゼ産生の阻害が必要な対象に投与することを含む、マトリックスメタロプロテアーゼの産生を阻害する方法。

     
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