WO2014094230A1 - Sp肽或其衍生物在制备预防或治疗哮喘的药物中的应用 - Google Patents

Sp肽或其衍生物在制备预防或治疗哮喘的药物中的应用 Download PDF

Info

Publication number
WO2014094230A1
WO2014094230A1 PCT/CN2012/086830 CN2012086830W WO2014094230A1 WO 2014094230 A1 WO2014094230 A1 WO 2014094230A1 CN 2012086830 W CN2012086830 W CN 2012086830W WO 2014094230 A1 WO2014094230 A1 WO 2014094230A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
peptide
asthma
gly
derivative
thr
Prior art date
Application number
PCT/CN2012/086830
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
程云
虞瑞鹤
李红
赵万洲
Original Assignee
Cheng Yun
Yu Ruihe
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Cheng Yun, Yu Ruihe filed Critical Cheng Yun
Priority to CN201280077242.XA priority Critical patent/CN104955469B/zh
Priority to PCT/CN2012/086830 priority patent/WO2014094230A1/zh
Publication of WO2014094230A1 publication Critical patent/WO2014094230A1/zh
Priority to US14/742,656 priority patent/US9605023B2/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Definitions

  • the present invention relates to the field of medical technology, and in particular, the present invention relates to the use of SP peptide or a derivative thereof for preparing a medicament for preventing or treating asthma, in particular to the preparation of a SP peptide or a derivative thereof for preventing or treating allergic asthma.
  • Asthma is a common respiratory disease characterized by: allergies, chronic airway inflammation, airway hyperresponsiveness, airway neuromodulation disorders, genetic mechanisms, respiratory viral infections, neuronal signaling mechanisms, and airway remodeling And their interactions, mainly manifested as paroxysmal wheezing, shortness of breath, chest tightness or coughing, or the symptoms are sharply aggravated, often have difficulty breathing, characterized by decreased expiratory flow, often due to exposure to allergens, Irritant or respiratory infection induced. The degree varies, the condition worsens, can occur in hours or days, and occasionally can be life-threatening in a matter of minutes. In recent years, allergic asthma induced by various allergens (eg, pollen, dust, dust mites, etc.) has attracted more and more attention. Therefore, research on effective drugs for asthma has become one of the major research topics in this field. .
  • allergens eg, pollen, dust, dust mites, etc.
  • Cytokines one of the major cytokines of the human immune system against viral infection, are of great significance for the clearance of HCV (hepatitis C virus), so the 7P peptide or its derivatives have the prevention and/or treatment of hepatitis C.
  • HCV hepatitis C virus
  • the inventors disclosed in the patent application CN101822816A the use of the 7P peptide or a derivative thereof for preventing and treating pneumonia, and specifically describing the treatment of pneumonia by reducing the TNF- ⁇ level of the 7P peptide and its derivative. . Therefore, it has been reported that 7P peptide has the effect of lowering the level of TNF-a in patients with pneumonia and increasing the level of cytokine IL-4 in patients with hepatitis C.
  • Asthma occurs and can significantly improve the symptoms of asthmatic lesions.
  • the present invention provides the use of an SP peptide or a derivative thereof as shown in Formula I for the preparation of a medicament for preventing or treating asthma:
  • Xaal is missing, Ala, Gly, Val, Leu or lie,
  • Xaa2 is Thr or Ser
  • Xaa3 is Tyr, Phe or Trp
  • Xaa4 is missing, Ala, Gly, Val, Leu, lie or Pro;
  • the derivative includes a pharmaceutically acceptable salt or ester of the peptide.
  • the inventors' studies have shown that administration of an effective amount of the SP peptide or a derivative thereof can effectively prevent or treat asthma, and in particular, prevent or treat allergic asthma.
  • the basic structure and composition of the SP peptide represented by the above formula I or its derivative are the 7P peptides or derivatives thereof obtained by the inventors in the previous studies, and are referred to as SP peptides or derivatives thereof in the present invention.
  • the SP peptide or its contaminating organism can be synthesized by solid phase synthesis or liquid phase synthesis, which is well known to those skilled in the art, and can also be obtained by genetic engineering fusion expression and purification.
  • ester refers to an ester that is suitable for contact with the tissues of a human or animal without excessive toxicity, irritation or allergic reaction, and the like.
  • esterification can reduce the hydrolysis of peptides by proteases in the body. Repairing the terminal amino, carboxyl or side chain groups of the peptides of the invention
  • the lacquer can form a pharmaceutically acceptable ester.
  • Modifications to amino acid side chain groups include, but are not limited to, threonine, esterification of a serine side chain hydroxyl group with a carboxylic acid.
  • the amino acid terminal group is protected with a protecting group known to those skilled in the art of protein chemistry, such as acetyl, trifluoroacetyl, Fmoc (9-fluorenyl-fluorenyloxycarbonyl), Boc (tert-butoxycarbonyl) , Alloc (allyloxycarbonyl), d_ 3 alkyl, C 6 -12 aralkyl, and the like.
  • a protecting group known to those skilled in the art of protein chemistry, such as acetyl, trifluoroacetyl, Fmoc (9-fluorenyl-fluorenyloxycarbonyl), Boc (tert-butoxycarbonyl) , Alloc (allyloxycarbonyl), d_ 3 alkyl, C 6 -12 aralkyl, and the like.
  • a protecting group known to those skilled in the art of protein chemistry such as acetyl, trifluoroacetyl, Fmoc (9-fluoreny
  • the inventors have found that the peptide of the present invention is not modified enough to treat or prevent asthma under physiological conditions, and therefore it is preferred not to have an amino group at the N-terminus of the polypeptide of Formula I and a carboxyl group at the C-terminus and an amino acid.
  • the side chain group is modified such that the chemical group at the N-terminus is still the ⁇ -amino group (-NHB 2B ) on the first amino acid, and the chemical group at the C-terminus is the carboxyl group (-COOH) of the C-terminal amino acid.
  • the "pharmaceutically acceptable salt” refers to a salt suitable for contact with the tissues of a human or animal without excessive toxicity, irritation or allergic reaction, and the like.
  • Pharmaceutically acceptable salts are well known in the art. Such salts may be prepared during the final isolation and purification of the polypeptides of the invention, or may be prepared separately by reacting the peptides with a suitable organic or inorganic acid or base.
  • Representative acid addition salts include, but are not limited to, acetate, dihexanoate, alginate, citrate, aspartate, benzoate, besylate, hydrogen sulfate, butyrate , camphorate, camphor sulfonate, glycerol phosphate, hemisulfate, heptanoate, hexanoate, fumarate, hydrochloride, hydrobromide, hydroiodide, 2-hydroxyethanesulfonate Acid salt, lactate, maleate, sulfonate, nicotinate, 2-naphthalenesulfonate, oxalate, 3-phenylpropionate, propionate, succinate, tartrate , phosphate, glutamate, bicarbonate, p-toluenesulfonate and undecanoate.
  • Preferred acids which can be used to form pharmaceutically acceptable salts are hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, oxalic acid, maleic acid, succinic acid and citric acid.
  • the cations in the pharmaceutically acceptable base addition salt include, but are not limited to, alkali metal or alkaline earth metal ions such as lithium, sodium, potassium, calcium and magnesium, and quaternary ammonium cations such as tetradecylammonium, tetraethylammonium, etc.
  • Preferred base addition salts include phosphates, trishydroxyalkylaminos (tris) and acetates. These salts are generally capable of increasing the solubility of the polypeptide, and the salt formed does not substantially alter the activity of the polypeptide.
  • the drug for preventing and/or treating asthma may be directly
  • the peptide (SP peptide) may also be used as a pharmaceutical preparation in the form of a pharmaceutically acceptable salt or a pharmaceutically acceptable ester of the SP peptide.
  • SP peptide or a derivative thereof is a peptide represented by the formula II or a pharmaceutically acceptable salt or ester thereof:
  • Gly-Gln-Thr-Tyr-Thr-Ser-Gly (Formula II)
  • the SP peptide of Formula II can also be abbreviated as GQTYTSG according to amino acid representations well known in the art.
  • the peptide or a derivative thereof may be administered in an appropriate preparation form according to the purpose of prevention and/or treatment, and the administration route, for example: injection, (injection) lyophilized powder, spray, oral solution Oral suspension, tablets, capsules, enteric-coated tablets, pills, powders, granules, sustained-release preparations (a dosage form that can control the slow release of the active ingredient of the active ingredient) or a controlled release agent (a dosage form that can control the release of the active ingredient of the pharmaceutical agent)
  • a formulation which may comprise a conventional pharmaceutically acceptable carrier, said "pharmaceutically acceptable carrier" means a non-toxic solid, semi-solid or liquid filler, diluent, adjuvant, encapsulating material or Other formulation excipients, such as: physiological saline, isotonic glucose solution, buffered saline, glycerin, ethanol, and combinations of the foregoing.
  • a drug made of the peptide or a derivative thereof in an injection manner that is, it is preferred to use an injection or a lyophilized powder, and to dissolve it with physiological saline as a carrier.
  • the injection preparation contains a therapeutically effective amount of 200 to 3000 ⁇ s of the peptide or a derivative thereof. Further, the injection preparation contains a therapeutically effective amount of 250-2500 ⁇ of the peptide or a derivative thereof.
  • the present invention provides a method for treating or preventing asthma, comprising administering to a patient a medicament comprising a therapeutically effective amount of the peptide of the above formula I or a derivative thereof, the derivative comprising the peptide being pharmaceutically acceptable Salt or ester.
  • the peptide or the derivative thereof as an active ingredient in the therapeutic drug may be the SP peptide represented by the above formula II or a pharmaceutically acceptable salt or ester thereof.
  • the above-mentioned drug containing a therapeutically effective amount of SP peptide or a derivative thereof can effectively prevent or treat asthma, and in particular, prevent or treat allergic asthma.
  • the drug is administered to the patient for the treatment of asthma after the onset of asthma; or the drug is administered to the patient for the first time within 1-48 hours of exposure to the asthma allergen source, preferably 1-24 hours. Defense.
  • the patient is a person with a history of allergies to asthma or who have asthma.
  • the medicament is administered to a patient comprising a therapeutically effective amount of said SP peptide or a derivative thereof of from 200 to 3000 ⁇ . Further preferably, the medicament is administered to the patient containing the SP peptide or a derivative thereof in a therapeutically effective amount of 250 to 2500 ⁇ .
  • the therapeutically effective amount is an effective amount for a single adult weight, a single administration.
  • a medicament containing a therapeutically effective amount of the peptide or derivative thereof is preferably administered by injection.
  • a unit preparation which is a preparation which satisfies the active ingredient required for one administration
  • a common unit preparation such as a unit (tablet) tablet, a unit (needle) injection or powder.
  • An injection or the like, wherein the content of the active ingredient is the amount required for one administration.
  • the amount of drug required for a single administration of a patient can be conveniently obtained by calculating the product of the patient's body weight and the unit weight dose required for the patient to take the drug once.
  • the unit body weight dose of experimental animals and humans can be calculated by the equivalent dose conversion relationship.
  • equivalent dose conversion relationship between experimental animals and humans known to those skilled in the art (see the guidance of FDA, SFDA, etc., see also (Huang Jihan et al., Animals and Animals in Pharmacological Tests). Equivalent dose conversion with human body, Chinese Journal of Clinical Pharmacology and Therapeutics, 2004 Sep; 9(9): 1069 - 1072)
  • the effective dose of human can be derived from the dose of experimental animals.
  • the human and mouse doses can be converted according to the human and d, mouse body surface area conversion factor of 0.1.
  • the peptide or derivative thereof in the unit preparation is 50-30 ( ⁇ g/kg)
  • the therapeutic effect is better when the mouse dose is administered to mice, and the therapeutic effect is even more when administered to a mouse at a dose of 60-25 ( ⁇ g/kg mouse, for example, 25 ( ⁇ g/kg or 125 g/kg mouse).
  • the pharmaceutical manufacturer can obtain the active ingredient content in the unit preparation for human use according to the above conversion method for use in the pharmaceutical process thereof.
  • the unit preparation contains the peptide or a derivative thereof in an amount of from 200 to 3000 ⁇ , more preferably the peptide or a derivative thereof in a dose of from 250 to 2500 ⁇ .
  • the 7-peptide or its derivative i.e., the SP peptide of the present invention or a derivative thereof
  • IL-13 and IL-4 inflammatory factors such as TNF- ⁇ aggravate asthma, and the role of IL-13 and IL-4 in the pathogenesis of asthma has been well studied.
  • the high expression of IL-13 in lung tissue can induce inflammation, high mucus secretion, and epithelial fibers. , eosinophil activation/chemokine production and airway hyperresponsiveness.
  • the expression of IL-4 can increase the expression of vascular cell adhesion molecules on epithelial cells, induce endotoxin production in airway epithelial cells, and finally increase the damage of eosinophils on the airway and promote airway inflammation.
  • the use of the SP peptide or a derivative thereof for preventing or treating asthma can effectively improve the symptoms of asthma lesions, particularly the symptoms of allergic asthma.
  • the field is used.
  • Conventional means to induce a mouse model of allergic asthma that is, a mouse model of allergic asthma induced by ovalbumin combined with adjuvant to illustrate the effect of the above SP peptide or its derivative on allergic asthma, which can be seen from the data of the following examples.
  • the group using the SP peptide or its derivative (including the SP peptide prophylactic high, medium and low dose groups and SP peptide treatment for high, medium and low dose groups), compared with the model group Significantly reduced IL-13 levels and IL-4 levels, as well as significantly improved lung tissue lesions. It is indicated that the SP peptide or its derivative has a remarkable effect of preventing or treating asthma.
  • the present invention further provides the use of an SP peptide or a derivative thereof as shown in Formula I for the preparation of a medicament for lowering IL-13 levels and IL-4 levels in asthmatic patients:
  • Xaal is missing, Ala, Gly, Val, Leu or lie,
  • Xaa2 is Thr or Ser
  • Xaa3 is Tyr, Phe or Trp
  • Xaa4 is missing, Ala, Gly, Val, Leu, lie or Pro;
  • the derivative includes a pharmaceutically acceptable salt or ester of the peptide.
  • peptide or a derivative thereof is a peptide of the formula II or a pharmaceutically acceptable salt or ester thereof:
  • the drug is a unit preparation or an injection preparation.
  • the unit preparation or the injection preparation contains a therapeutically effective amount of 200-3000 ⁇ of the peptide or a derivative thereof. Further, wherein the unit preparation or the injection preparation contains the treatment A therapeutically effective amount is 250-2500 ⁇ the peptide or a derivative thereof.
  • Figure 1 Effect of SP peptide on serum IL-13 levels and IL-4 levels in mice of each group.
  • Figure 2 Effect of SP peptide on IL-13 levels and IL-4 levels in lung tissue homogenates of mice in each group.
  • Figure 3 shows the comprehensive score of lung tissue lesions in each group of mice.
  • Figure 4 is a graph showing the pathological changes of lung tissue in a blank control group in Example 1.
  • Fig. 5 shows the pathological changes of lung tissue of the model group mice in Example 1.
  • Figure 6 shows the pathological changes of lung tissue in the positive drug group of Example 1.
  • Figure 7 is a graph showing the pathological changes of lung tissue in the low-dose group of SP peptides in Example 1 in the first dose.
  • Fig. 8 is a graph showing the pathological changes of lung tissue in a dose group of the SP peptide in the first embodiment of the present invention.
  • Fig. 9 is a view showing the pathological changes of lung tissue in the high-dose group of the SP peptide in the first embodiment of the present invention.
  • Figure 10 shows the pathological changes of lung tissue in the low dose group of SP peptide therapeutically administered in Example 1.
  • Figure 11 is a graph showing the pathological changes of lung tissue in the dose group of the SP peptide therapeutically administered in Example 1.
  • Figure 12 is a graph showing the pathological changes of lung tissue in a high dose group of SP peptide therapeutically administered in Example 1.
  • Positive control drug Dexamethasone injection, purchased from Guizhou Huasheng Pharmaceutical Co., Ltd., Specification: 5mg/ml/piece, daily dosage 10mg/70kg.dminister
  • Mouse IL-13 ELISA Kit purchased from Shanghai Shanghai Lanji Biotechnology Co., Ltd.
  • mice male and female, were randomly divided into 9 groups, 10 mice in each group, respectively:
  • model group administering ovalbumin and aluminum hydroxide solution prepared using physiological saline
  • SP peptide prophylactic high-dose group 5) SP peptide prophylactic administration medium dose group, 6) SP peptide prophylactic administration low-dose group (administered ovalbumin and aluminum hydroxide, and the dose is 25 ( ⁇ g/)
  • the SP peptide of kg-d, 125 g/kg.d, 62.5 g/kg.d was configured with physiological saline to a desired concentration of SP peptide solution).
  • SP peptide therapeutic high-dose group 8) SP peptide treatment medium dose group, 9) SP peptide treatment low-dose group (administered ovalbumin and aluminum hydroxide, and the dose was 25 ( ⁇ g/)
  • the SP peptide of kg-d, 125 g/kg d, 62.5 g/kg d was configured with physiological saline to a desired concentration of SP peptide solution).
  • mice were administered 0.1 ml of SP peptide solution per 10 g of body weight, and the blank control group was treated with the same amount of normal saline (0.1 ml of normal saline per 10 g of body weight of mice).
  • Positive drug group For intraperitoneal administration, mice were administered 0.1 ml of positive drug per 10 g of body weight.
  • sensitizing solution It is prepared by dissolving 10 ug of ovalbumin and 2 mg of aluminum hydroxide in 0.5 mL of normal saline.
  • mice Each group of mice was administered as follows, and during the administration, each group of mice was normally fed daily. On the 1st, 7th, and 14th days, the other groups except the blank control group (model group, preventive administration group, therapeutic administration group, positive drug group) were intraperitoneally injected with 0.5 ml of freshly prepared Sensitive solution. The blank control group was intraperitoneally injected with an equal volume of physiological saline.
  • mice in the other groups except the blank control group were placed in a 16L closed container every 3 days, and the mice were inhaled by the ultrasonic atomization to the lwt% ovalbumin physiology.
  • the blank control mice were aerosolized with an equal volume of normal saline.
  • the prophylactic administration group (SP peptide prophylactic administration high dose group, SP peptide prophylaxis medium dose group, SP peptide prophylaxis low dose group) was administered for 1 hour after the first intraperitoneal injection of sensitizing solution (ie, 1st) From day to day, the corresponding dose of SP peptide was subcutaneously injected into the right hind limb of the mouse, and administered once every other day for 15 times.
  • sensitizing solution ie, 1st
  • mice in each of the model group, the preventive drug-administered group, the therapeutic drug-administered group, and the positive drug group were randomly selected, and pathologically examined, except for the preventive drug-administered group, the other group of asthma mouse models were selected. success.
  • the right hind limb was subcutaneously injected with the corresponding dose of SP peptide, the next day. The drug was administered once and administered a total of 15 times.
  • mice in the positive drug group were intraperitoneally injected with dexamethasone injection corresponding to 0.1 ml/10 g of mouse body weight, and administered once every other day for 15 times.
  • mice were sacrificed by eyeballs 6 h after the last aerosol inhalation (week 19), and serum was collected and stored at -70 °C until use.
  • Double-antibody sandwich ELISA, serum IL-13 levels were measured using 'J, murine IL-13 ELISA kit, and the IL-13 standard was diluted with the dilution in the kit, and then according to the kit instructions. Take action. Calculate the standard curve, read the value of the sample taken from the standard curve, and multiply by the dilution factor to obtain the level of IL-13 in the sample serum. Similar to the IL-13 method, the level of IL-4 in the serum of the sample was obtained by the standard curve of the IL-4 standard.
  • the lungs of the mice were firstly soaked in ice physiological saline, and the left upper lobe of the mice was fixed with 10% neutral formalin, embedded in paraffin, sectioned, HE stained, and then gradient ethanol. Dehydration, diterpene benzene transparent, sealed with neutral gum, histopathological examination including: Whether the lung tissue is pulmonary bronchus, perivascular interstitial edema, and inflammatory cell infiltration, whether the alveolar cavity is clear, whether there is infiltration Appearance, whether the alveolar wall congestion is thickened, and the main types of inflammatory cells.
  • Preparation of lung tissue homogenate After the left upper lobe of the mouse was taken, approximately 0.04 g of the remaining fresh lung tissue was placed in a grinder, and 400 ul of ice PBS (10 c / concentration) was added, respectively. The above was ground one by one, then the abrasive was aspirated, and the supernatant was centrifuged for detection. Add 40 ul of the sample diluent to the wells of the sample to be tested on the plate, and then add 10 ⁇ l of the lung tissue homogenate sample to be tested (1:5 dilution). Then, serum samples were used to detect IL-4 and IL-13 in mouse lung tissue homogenate according to the ELISA kit instructions.
  • the degree of light to heavy is marked as 1 point, 2 points, 3 points, 4 points, no obvious lesions are 0 points,
  • the extremely mild lesions were 0.5 points, all scores were accumulated, and the average score (sSD) of each animal in each group was calculated. The higher the score, the more severe the lesion.
  • the rank sum test for the two-sample comparison of the lesion score results was compared with the model group.
  • Figure 1 and Figure 2 show the effect of SP peptide on IL-13 and IL-4 levels in serum and lung tissue homogenate of each group of mice, respectively, wherein the dose is as described in 1.3 above, Figure 1 and Figure The results in 2 are the average values of the mice in each group.
  • IL-13 levels and IL-4 levels in serum and lung homogenates of the allergic asthma mouse model group induced by ovalbumin combined with adjuvant aluminum hydroxide were significantly increased.
  • Fig. 5 the model group mice have severe edema around the small blood vessels in the lungs and have a large number of Inflammatory cell infiltration (as shown by the arrow in Figure 5), the inflammatory cells are mainly eosinophils and mononuclear cells, the alveolar cavity is clear, no exudate.
  • the pulmonary interstitial was mildly edematous and a small amount of inflammatory cells infiltrated (as shown by the arrow in Fig. 6), and the inflammatory cells were mainly eosinophils and mononuclear cells.
  • the SP peptide prevents the administration of low-dose mice with moderate or severe edema in the lung interstitial and more inflammatory cell infiltration (as shown by the arrow in Figure 7).
  • the inflammatory cells are eosinophils and The single core is mainly fine.
  • the SP peptide prevents the moderate or mild edema of the lung interstitial in the dose group of mice and has a small amount of inflammatory cell infiltration (as shown by the arrow in Fig. 8), the inflammatory cells are eosinophils and a single cell.
  • the core fine monthly package is the main one.
  • the SP peptide prevented the administration of mild interstitial edema in the high dose group and a small amount of inflammatory cell infiltration around the bronchus (as shown by the arrow in Fig. 9).
  • SP peptide treatment was administered to patients in the high-dose group with mild interstitial edema and a small amount of inflammatory cell infiltration (as indicated by the arrow in Figure 12).
  • the inflammatory cells were eosinophils and mononuclear cells. the Lord. ( ⁇ 200 )
  • the scores of the lung tissue lesions of each group of mice were obtained by the rank sum test method, as shown in Fig. 3. As can be seen from Fig. 3, histopathological examination was performed. It is indicated that the SP peptide can significantly reduce the bronchial and perivascular interstitial edema, the infiltration of inflammatory cells in the edema, the alveolar wall congestion or emphysema, and the SP peptide treatment in the low dose group.

Abstract

本发明提供了一种SP肽或其衍生物在制备预防或治疗哮喘的药物中的应用，所述肽或其衍生物为如式（I）所示的SP肽或其药学上可接受的盐或酯；本发明还提供了一种治疗哮喘的方法，该方法包括，向患者施用含有治疗有效量的所述肽或其衍生物的药物。本发明的研究证实，所述肽或其衍生物可有效改善哮喘的病变症状，特别是改善过敏性哮喘的病变症状。其中，Xaa1为缺失、Ala、Gly、Val、Leu或Ile，Xaa2为Thr或Ser，Xaa3为Tyr、Phe或Trp，而且Xaa4为缺失、Ala、Gly、Val、Leu，Ile或Pro。

Description

SP肽或其衍生物在制备预防或治疗哮喘的药物中的应用 技术领域
本发明属于医药技术领域， 具体而言， 本发明涉及 SP肽或其衍生物在 制备预防或治疗哮喘的药物中的应用，尤其涉及该 SP肽或其衍生物在制备 预防或治疗过敏性哮喘的药物中的应用。 背景技术
哮喘是一种常见呼吸系统疾病， 其发病机制包括： 变态反应、 气道慢 性炎症、 气道高反应性、 气道神经调节失常、 遗传机制、 呼吸道病毒感染、 神经信号转导机制和气道重构及其相互作用等， 主要表现为发作性的喘息、 气急、 胸闷或咳嗽等症状， 或原有症状急剧加重， 常有呼吸困难， 以呼气 流量降低为其特征， 常因接触变应原、 刺激物或呼吸道感染诱发。 其程度 轻重不一， 病情加重， 可在数小时或数天内出现， 偶尔可在数分钟内即危 及生命。 近年来， 由各种过敏原 (例如： 花粉、 粉尘、 尘螨等)诱发的过敏性 哮喘越来越引起人们的关注， 所以针对哮喘的有效药物的研究也成为本领 域的主要研究课题之一。
本发明人在中国专利 CN1194986C和 CN1216075C中披露了一种 7P肽 或其衍生物 （简称 7P肽或其衍生物， 本发明中名称为 SP肽或其衍生物 ), 是一种最初根据丙型肝炎病毒而设计的免疫原性肽， 并证明所述 7P肽或其 衍生物具有诱导细胞因子 r-IFN, IL-4, IL-10水平升高和抗体产生的功能， r-IFN是 Thl分泌的细胞因子，是人体免疫系统抵抗病毒感染的主要细胞因 子之一， 针对 HCV (丙型肝炎病毒)的清除具有相当重要的意义， 因此该 7P 肽或其衍生物具有预防和 /或治疗丙型肝炎的作用。 进一步的， 本发明人在 专利申请 CN101822816A中公开了所述 7P肽或其衍生物在预防和治疗肺炎 中的用途，并且具体记载该 7P肽及其衍生物通过降低 TNF-α水平对肺炎的 治疗。所以， 已经有的研究报道可以知道， 7P肽具有降低肺炎患者的 TNF-a 水平， 以及具有提高丙型肝炎患者细胞因子 IL-4水平的作用。
而所述肽或其衍生物是否具有预防哮喘发病以及改善哮喘疾病症状尚 没有报道。 发明内容
Figure imgf000003_0001
应用， 为哮喘类疾病的治疗和预防提供了新的临床方法， 也拓宽了该 SP肽 的潜
Figure imgf000003_0002
过向患者施用含有治疗有效量的所述肽或其衍生物的药物,
喘发生， 并能显著改善哮喘的病变症状的目的。
Figure imgf000003_0003
IL-13水平和
IL-4水平的药物中的应用。
本发明提供了如式 I所示的 SP肽或其衍生物在制备预防或治疗哮喘的 药物中的应用：
Xaal-Gln-Xaa2-Xaa3 -Thr-Ser-Gly-Xaa4 (式 I )
其中，
Xaal为缺失、 Ala、 Gly、 Val、 Leu或 lie,
Xaa2为 Thr或 Ser,
Xaa3为 Tyr、 Phe或 Trp, 而且
Xaa4为缺失、 Ala、 Gly、 Val、 Leu, lie或 Pro;
所述衍生物包括所述肽在药学上可接受的盐或酯。
发明人的研究证明， 施用有效剂量的所述 SP肽或其衍生物能够有效预 防或治疗哮喘， 尤其能预防或治疗过敏性哮喘。 上述式 I所示的 SP肽或其衍 生物的基本结构和组成即为发明人在之前的研究中所得到的 7P肽或其衍生 物， 在本发明中称为 SP肽或其衍生物。 根据在先专利的记载， 所述 SP肽或 其 ^汙生物可通过本领域技术人员熟知的固相合成法或液相合成法合成， 也 可通过基因工程融合表达并提純获得。
在本文中，所述"药学上可接受的酯"指适于与人或动物的组织接触而且 无过多的毒性、 刺激或变态反应等的酯。 通常， 酯化修饰后能降低机体中 的蛋白酶对肽的水解。 对本发明的肽的末端氨基、 羧基或侧链基团进行修 饰可以形成药学上可接受的酯。 对氨基酸侧链基团的修饰包括但不限于苏 氨酸、 丝氨酸侧链羟基与羧酸发生的酯化反应。 优选氨基酸末端基团用蛋 白质化学领域的技术人员已知的保护性基团保护起来， 如乙酰基、 三氟乙 酰基、 Fmoc ( 9-芴基 -曱氧羰基） 、 Boc (叔丁氧羰基） 、 Alloc (烯丙氧羰 基） 、 d_3烷基、 C6_12芳烷基等。 有关该 SP肽 (即在先专利中的 7P肽)的药用 酯在 PCT/CN2006/001176中有详细说明，因此将该在先公开申请文件中的相 关内容并入本案作为参考。 在本发明的具体实施方式中， 发明人发现， 本 发明的肽不经修饰也足以在生理条件下用于治疗或预防哮喘， 因此优选不 对式 I 多肽 N末端的氨基和 C末端的羧基以及氨基酸侧链基团进行修饰， 即 N末端的化学基团仍旧为第一个氨基酸上的 α-氨基（-NHB2B ) , C末端的化 学基团是 C末端氨基酸的羧基 ( -COOH ) 。
在本文中，所述"药学上可接受的盐"指适于与人或动物的组织接触而且 无过多的毒性、 刺激或变态反应等的盐。 药学上可接受的盐是本领域熟知 的。 这种盐可以在本发明多肽的最终分离和純化的过程中制备， 也可以将 所述的肽与适当的有机或无机酸或碱反应单独制备。 代表性酸加成盐包括 但不限于乙酸盐、 二己酸盐、 藻酸盐、 柠檬酸盐、 天冬氨酸盐、 苯曱酸盐、 苯磺酸盐、 硫酸氢盐、 丁酸盐、 樟脑酸盐、 樟脑磺酸盐、 甘油磷酸盐、 半 硫酸盐、 庚酸盐、 己酸盐、 富马酸盐、 盐酸盐、 氢溴酸盐、 氢碘酸盐、 2- 羟基乙磺酸盐、 乳酸盐、 马来酸盐、 曱磺酸盐、 烟酸盐、 2-萘磺酸盐、 草酸 盐、 3-苯基丙酸盐、 丙酸盐、 琥珀酸盐、 酒石酸盐、 磷酸盐、 谷氨酸盐、 碳 酸氢盐、 对曱苯磺酸盐和十一烷酸盐。 能用于形成药学上可接受盐的优选 的酸是盐酸、 氢溴酸、 硫酸、 磷酸、 草酸、 马来酸、 琥珀酸和柠檬酸。 药 学上可接受的碱加成盐中的阳离子包括但不限于碱金属或碱土金属离子如 锂、 钠、 钾、 钙和镁等， 季铵阳离子 （如四曱基铵、 四乙基铵等） 、 以及 铵、 曱基胺、 二曱基胺、 三曱基胺、 三乙基胺、 二乙基胺、 乙基胺、 二乙 胺、 乙醇胺、 二乙醇胺、 哌啶、 哌嗪等的阳离子。 优选的碱加成盐包括磷 酸盐、 三羟曱基氨基曱烷（tris )和乙酸盐。 这些盐一般能够增加多肽的溶 解性， 而且所形成的盐基本上不改变多肽的活性。
总之， 根据本发明的方案， 所述预防和 /或治疗哮喘的药物可以是直接 釆用所述肽（SP肽） ， 也可以是釆用所述 SP肽的药用盐或药用酯形式的药 物制剂。
进一步的， 所述 SP肽或其衍生物为式 II所示的肽或其药学上可接受的 盐或酯：
Gly-Gln-Thr-Tyr-Thr-Ser-Gly (式 II ) 根据本领域公知的氨基酸表示方式， 式 II所示的 SP肽还可以缩写为 GQTYTSG。
在本发明的方案中， 所述肽或其衍生物可根据预防和 /或治疗目的， 以 及施用途径釆用适当的制剂形式， 例如： 注射剂、 （注射用） 冻干粉、 喷 雾剂、 口服溶液、 口服混悬液、 片剂、 胶嚢、 肠溶片、 丸剂、 粉剂、 颗粒 剂、 緩释剂 （可控制药剂有效成分緩慢释放的剂型）或控释剂 （可控制药 剂有效成分释放的剂型）等制剂， 所述制剂中可包含常规的药学上可接受 的载体， 所述"药学上可接受的载体"指无毒固态、半固态或液态填充剂、稀 释剂、 佐剂、 包裹材料或其他制剂辅料， 例如： 生理盐水、 等渗葡萄糖溶 液、 緩冲盐水、 甘油、 乙醇及上述溶液的组合。 本发明的方案中优选以注 射方式施用由所述肽或其衍生物制成的药物， 即， 使用注射针剂或冻干粉 针剂是优选的， 以生理盐水作为载体溶解即可。
进一步的， 所述注射制剂中含有治疗有效量为 200-3000μ§ 所述肽或其 衍生物。 更进一步的， 所述注射制剂中含有治疗有效量为 250-2500μ§ 所述 肽或其衍生物。
本发明提供的一种治疗或预防哮喘的方法， 包括， 向患者施用含有治 疗有效量的上述式 I所示的肽或其衍生物的药物， 所述衍生物包括所述肽在 药学上可接受的盐或酯。
根据本发明的优选方案， 所述治疗用药中作为有效成分的肽或其衍生 物可以为上述式 II所示的 SP肽或其药学上可接受的盐或酯。
上述含有治疗有效量的 SP肽或其衍生物的药物 （所述肽或其衍生物作 为有效成分） 能够有效预防或治疗哮喘， 尤其能预防或治疗过敏性哮喘。 进一步的， 在哮喘发病后向患者施用所述药物进行哮喘的治疗； 或在接触 哮喘致敏源 1-48小时内，优选的 1-24小时向患者施用所述药物进行哮喘的预 防。 所述患者为有哮喘过敏史或有哮喘疾病的人。
在本发明的一个实施方式中，向患者施用含有治疗有效量为 200-3000μ§ 的所述 SP肽或其衍生物的药物。 进一步优选的， 向患者施用含有治疗有效 量为 250-2500μ§的所述 SP肽或其衍生物的药物。 所述治疗有效量是针对一 般成人体重、 单次施用的有效量。
在本发明的一个实施方式中， 优选以注射方式施用含有治疗有效量的 所述肽或其衍生物的药物。 进一步的， 优选对患者以单位制剂的剂量给药， 所述单位制剂为满足一次给药所需有效成分的制剂， 常见的单位制剂如一 单位（片） 片剂、 一单位（针）针剂或粉针剂等， 其中有效成分的含量为 一次给药所需的量。 患者一次施用所需的药物的量可以方便地通过计算患 者的体重和该患者一次用药所需单位体重剂量的乘积得到。 例如， 在制备 药物的过程中， 一般认为成人体重为 50-90kg, 可以用该体重值来计算。 实 验动物与人的单位体重剂量可以通过等效剂量换算关系来计算。 例如， 根 据的本领域普通技术人员所公知的实验动物与人的等效剂量换算关系 （可 参见 FDA、 SFDA等药品管理机构的指导意见， 也可参见（黄继汉等， 药理 试验中动物间和动物与人体间的等效剂量换算， 中国临床药理学与治疗学, 2004 Sep ;9(9) : 1069 - 1072 )可从实验动物的剂量推导出人的有效剂量。 在 本发明的实施方式中， 可以使用按照人和 d、鼠的体表面积折算系数 0.1来换 算人和小鼠的剂量。 根据本发明实施方式， 所述单位制剂中所述肽或其衍 生物以 50-30(^g/kg小鼠剂量施用至小鼠时治疗效果较好， 当以 60-25(^g/kg 小鼠剂量， 例如 25(^g/kg或 125 g/kg小鼠剂量施用至小鼠时治疗效果更佳。 制药商可以根据上述换算方法得到用于人的单位制剂中的有效成分含量， 用以应用于其制药过程中。 在本发明的技术方案中， 根据等效剂量换算关 系以及人的常规体重， 并且综合用药安全、 成本和药效， 优选的， 所述单 位制剂中含有 200-3000μ§剂量的所述肽或其衍生物，更优选含有 250-2500μ§ 剂量的所述肽或其衍生物。 所述 7Ρ肽或其衍生物（即本发明的 SP肽或其衍生物）能降低肺炎患者 TNF-a 的水平， 但在过敏性哮喘中通常是 IL-4 和 IL-13等细胞因子诱发哮喘而 TNF-α等炎症因子加重哮喘， IL-13和 IL-4在诱导哮喘发病中的作用已得到 了充分研究证实， IL-13在肺组织的高表达可诱导炎症、 粘液高分泌、 上下 皮纤维化、 嗜酸粒细胞活化 /趋化因子的产生和气道高反应。 IL-4的表达可 增加上皮细胞上血管细胞黏附分子的表达， 诱导气道上皮细胞产生内毒素， 最终使嗜酸粒细胞对气道的损害加重， 促进气道炎症。
经本申请人研究发现， 将所述 SP肽或其衍生物用于预防或治疗哮喘， 可有效改善哮喘病变症状， 特别是过敏性哮喘的病变症状， 在本发明的实 施例中， 使用本领域常规手段诱导出过敏性哮喘小鼠模型， 即用卵白蛋白 联合佐剂诱导出过敏性哮喘小鼠模型来说明上述 SP肽或其衍生物对于过敏 性哮喘的作用， 从以下实施例的数据可以看出， 应用所述 SP肽或其衍生物 的组（包括 SP肽预防给药高、 中、 低剂量组和 SP肽治疗给药高、 中、 低剂 量组） ， 相比于模型组， 均表现出显著减轻的 IL-13水平和 IL-4水平， 以及 显著改善的肺组织病变程度。 表明 SP肽或其衍生物具有显著的预防或治疗 哮喘的作用。
因此， 本发明进一步提供了， 如式 I所示的 SP肽或其衍生物在制备降低 哮喘患者 IL-13水平和 IL-4水平的药物中的应用：
Xaal-Gln-Xaa2-Xaa3-Thr-Ser-Gly-Xaa4 (式 I )
其中，
Xaal为缺失、 Ala、 Gly、 Val、 Leu或 lie,
Xaa2为 Thr或 Ser,
Xaa3为 Tyr、 Phe或 Trp, 而且
Xaa4为缺失、 Ala、 Gly、 Val、 Leu, lie或 Pro;
所述衍生物包括所述肽在药学上可接受的盐或酯。
进一步的， 所述肽或其衍生物为式 II所示的肽或其药学上可接受的盐 或酯：
Gly-Gln-Thr-Tyr-Thr-Ser-Gly (式 II ) 。
进一步的， 所述药物为单位制剂或注射制剂。
进一步的， 所述单位制剂或注射制剂中含有治疗有效量为 200-3000μ§ 所述肽或其衍生物。 更进一步的， 其中所述单位制剂或注射制剂中含有治 疗有效量为 250-2500μ§ 所述肽或其衍生物。
为了便于理解， 以下将通过具体的实施例对本发明进行详细地描述。 需要特别指出的是， 具体实例仅是为了说明， 并不构成对本发明范围的限 制。 显然本领域的普通技术人员可以根据本文说明， 在本发明的范围内对 本发明做出各种各样的修正和改变， 这些修正和改变也纳入本发明的范围 内。 另外， 本发明引用了公开文献， 这些文献也是为了更清楚地描述本发 明， 它们的全文内容均纳入本发明而作为本发明说明书的一部分。 附图说明
图 1 SP肽对各组小鼠的血清中 IL-13水平和 IL-4水平的影响。
图 2 SP肽对各组小鼠的肺组织匀浆中 IL-13水平和 IL-4水平的影响。 图 3各组小鼠的肺组织病变程度综合评分。
图 4显示实施例 1中空白对照组小鼠肺组织病理变化。
图 5显示实施例 1中模型组小鼠肺组织病理变化。
图 6显示实施例 1中阳性药物组小鼠肺组织病理变化。
图 7显示实施例 1中 SP肽预防给药低剂量组小鼠肺组织病理变化。 图 8显示实施例 1中 SP肽预防给药中剂量组小鼠肺组织病理变化。 图 9显示实施例 1中 SP肽预防给药高剂量组小鼠肺组织病理变化。 图 10显示实施例 1中 SP肽治疗给药低剂量组小鼠肺组织病理变化。 图 11显示实施例 1中 SP肽治疗给药中剂量组小鼠肺组织病理变化。 图 12显示实施例 1中 SP肽治疗给药高剂量组小鼠肺组织病理变化。 具体实施方式
实施例 1 SP肽对小鼠哮喘的保护作用
1. 实验材料
1.1 动物：
清洁级 ICR小鼠， 体重 18g ~ 22g , 雌雄各半， 购自南通大学实验动物 中心。
1.2药物、 试剂及仪器： 使用通过固相肽合成方法，由 413A型自动肽合成仪（购自 Perkin Elmer 公司）合成的以下序列的肽： GQTYTSG (以下称为 SP肽）， 具体的合成步 骤请参见 PCT/CN2006/001176中实施例 1的记载，使用时用生理盐水溶解。
阳性对照药： 地塞米松注射液， 购自贵州华圣制药有限公司， 规格： 5mg/ml/支， 人日用量 10mg/70kg.d„
卵白蛋白 （ Albumin Egg ), 购自 Sigma公司。
小鼠 IL-13 ELISA Kit, 购自上海上海蓝基生物科技有限公司。
BIO-RAD 680伯乐酶标仪。
1.3分组及药物剂量
ICR小鼠 , 雌雄各半 , 随机分为 9组 , 小鼠每组 10只， 分别为：
1 ) 空白对照组（施用与模型组等体积的生理盐水）；
2 )模型组（施用使用生理盐水配制的卵白蛋白和氢氧化铝溶液）；
3 ) 阳性药物组 （施用与模型组等体积的地塞米松注射液， 剂量为 0.9 g/kg-d );
4 ) SP肽预防给药高剂量组、 5 ) SP肽预防给药中剂量组、 6 ) SP肽预 防给药低剂量组（施用卵白蛋白和氢氧化铝， 以及剂量分别为 25(^g/kg-d, 125 g/kg.d, 62.5 g/kg.d的 SP肽，用生理盐水配置成需要浓度的 SP肽溶液）。
7 ) SP肽治疗给药高剂量组、 8 ) SP肽治疗给药中剂量组、 9 ) SP肽治 疗给药低剂量组（施用卵白蛋白和氢氧化铝， 以及剂量分别为 25(^g/kg-d, 125 g/kg d, 62.5 g/kg d的 SP肽，用生理盐水配置成需要浓度的 SP肽溶液）。
SP肽各剂量组均皮下注射给药， 小鼠每 10g体重给药 0.1 ml的 SP肽 溶液， 空白对照组使用等量的生理盐水（小鼠每 10g体重给予 0.1 ml生理 盐水），阳性药物组腹腔注射给药，小鼠每 10g体重给药 0.1 ml的阳性药物。
2.试验方法
2.1 实验方案：
致敏液的配制： 以 10 ug卵白蛋白和 2mg氢氧化铝溶于 0.5mL生理盐水的 比例配制， 现配现用。
按照以下方式对各组小鼠进行给药， 给药期间， 每天向各组小鼠正常 喂食。 在第 1、 7、 14天， 对除空白对照组外的其余各组小鼠 (模型组、 预防给 药组、 治疗给药组、 阳性药物组）， 腹腔注射 0.5ml新鲜配制的所述致敏液。 空白对照组腹腔注射等体积的生理盐水。
从第 21天起 (即第 4周起)， 对除空白对照组外的其余各组小鼠， 每隔 3 天置于 16L密闭容器中， 通过超声雾化使小鼠吸入 lwt%卵白蛋白生理盐水， 吸入时间为 25min/d,雾化流量为 3ml/min,每周 2次， 以激发哮喘， 直到第 19 周结束。 空白对照组小鼠用等体积的生理盐水腹腔进行雾化。
其中， 预防给药组 (SP肽预防给药高剂量组、 SP肽预防给药中剂量组、 SP肽预防给药低剂量组)在第一次腹腔注射致敏液 1小时后 (即第 1天起）， 在小鼠的右后肢皮下注射相应剂量的 SP肽， 隔天给药一次， 共给药 15次。
第 15周第 1天， 随机抽取模型组、 预防给药组、 治疗给药组、 阳性药物 组中各 5只小鼠， 经病理学检查， 除预防给药组外， 其余小组哮喘小鼠模型 成功。 同一天起， 对治疗给药组 (治疗给药 SP高剂量组、 治疗给药 SP中剂量 组、 治疗给药 SP低剂量组） 的小鼠， 右后肢皮下注射相应剂量的 SP肽,隔天 给药一次， 共给药 15次。 同一天起， 对阳性药物组的小鼠， 腹腔注射相应 0.1ml/10g小鼠体重的地塞米松注射液， 隔天给药一次， 共给药 15次。
关于实验结果的测定， 所有小鼠在最后一次雾化吸入 (第 19周)后 6 h摘 眼球取血处死， 收集血清， -70 °C 保存备用。 釆用双抗体夹心 ELISA法， 使 用 'J、鼠 IL- 13 ELISA检测试剂盒检测血清 IL- 13水平， 将 IL- 13标准品用试剂 盒中的稀释液进行倍比稀释， 然后按照试剂盒说明书进行操作。 计算出标 准曲线， 从标准曲线上读出所测样本的数值， 再乘以稀释倍数， 即得出样 本血清中 IL-13的水平值。类似于 IL-13的方式，通过 IL-4标准品的标准曲线， 获得样本血清中 IL-4的水平值。
并收集完血清后， 将小鼠肺先用冰生理盐水浸泡冲洗后， 取小鼠左肺 上叶用 10 %中性福尔马林固定， 石蜡包埋， 切片， HE染色， 再经梯度乙醇 脱水， 二曱苯透明， 以中性树胶封片， 进行病理组织学检查包括： 肺组织 是否表现为肺内小支气管、 血管周围间质水肿， 以及炎细胞浸润， 肺泡腔 是否清晰、 是否有渗出物， 肺泡壁充血是否增厚， 以及炎细胞的主要类型 等。 肺组织匀浆的制备： 取完小鼠左肺上叶后， 从剩余的新鲜肺组织取大 约 0.04g放入研磨器中， 加入 400ul冰 PBS ( 10 c/。浓度）， 按组别分别在冰上逐 个研磨， 然后吸取研磨物， 离心取上清进行检测。 在酶标包被板上的待测 样品孔中先加样品稀释液 40ul, 然后再加待测小鼠肺组织匀浆样品 lOul (待 测 1 : 5倍稀释）。 然后同血清样本按照 ELISA试剂盒说明检测小鼠肺组织匀 浆中 IL-4、 IL-13。
根据肺组织病变 (包括小支气管、 血管周围间质水肿， 肺泡壁充血或气 肿)由轻到重的程度分别标记为 1分， 2分， 3分， 4分， 无明显病变为 0分， 极 轻度病变为 0.5分， 累加所有分数， 并计算出每组每只动物的均分（士 SD ), 分值越高提示病变程度越重。 对病变评分结果进行两个样本比较的秩和检 验， 与模型组进行比较。
2.2数据处理： 对所有数据进行数据处理， 对病理学评分釆用秩和检验， 其 他数据釆用 t检验， 并统计分析结果。
3.结果
3.1 小鼠血清以及肺组织勾浆中 IL-13水平和 IL-4水平
图 1和图 2分别表示了 SP肽对各组小鼠的血清以及肺组织匀浆中 IL-13 水平和 IL-4水平的影响， 其中给药量如上述 1.3中所述， 图 1和图 2中的 结果为各组小鼠的平均值。
从图 1和图 2可以看出， 卵白蛋白联合佐剂氢氧化铝致敏引起的过敏 性哮喘小鼠模型组的血清及肺组织匀浆中 IL-13水平和 IL-4水平显著升高
(尸 <0.01 ), 根据下面病理组织学检查可知， IL-13水平和 IL-4水平升高诱 发了小鼠支气管哮喘， 表明卵白蛋白联合佐剂氢氧化铝致敏引起的小鼠支 气管哮喘可通过释放 IL-13和 IL-14引发。 而 SP肽治疗给药高、 中、 低剂 量组及 SP 肽预防给药高、 中剂量组小鼠的血清及肺组织匀浆中 IL-13 和
IL-14水平相比模型组均有显著降低 ( * < 0.05, ** < 0.01 )„
3.2肺组织切片结果分析
由图 4可以看出， 空白对照组小鼠肺内小血管周围组织间隙增宽， 无 炎细胞浸润 (如图 4箭头所示）。
由图 5 可以看出， 模型组小鼠肺内小血管周围间质重度水肿并有大量 炎细胞浸润（如图 5箭头所示），炎细胞以嗜酸性粒细胞和单个核细胞为主， 肺泡腔清晰、 无渗出物。
由图 6 可以看出， 阳性药物组小鼠肺间质轻度水肿并且少量炎细胞浸 润 (如图 6箭头所示）， 炎细胞以嗜酸性粒细胞和单个核细胞为主。
由图 7可以看出， SP肽预防给药低剂量组小鼠肺间质中度或重度水肿 并有较多的炎细胞浸润（如图 7箭头所示）， 炎细胞以嗜酸性粒细胞和单个 核细 为主。
由图 8可以看出， SP肽预防给药中剂量组小鼠肺间质中度或轻度水肿 并有少量炎细胞浸润（如图 8箭头所示）， 炎细胞以嗜酸性粒细胞和单个核 细月包为主。
由图 9可以看出， SP肽预防给药高剂量组小鼠肺间质轻度水肿并且支 气管周围有较少量炎细胞浸润 (如图 9箭头所示 )。
由图 10可以看出， SP肽治疗给药低剂量组小鼠肺内小血管和支气管周 围肺间质中度水肿并有较多量炎细胞浸润 （如图 10箭头所示）， 炎细胞以 嗜酸性粒细胞和单个核细胞为主。
由图 11可以看出， SP肽治疗给药中剂量组小鼠肺内小血管和支气管周 围肺间质轻度水肿并有较多量炎细胞浸润 （如图 11 箭头所示）， 炎细胞以 嗜酸性粒细胞和单个核细胞为主， 周围肺泡壁充血， 肺泡呈气肿状。
由图 12可以看出， SP肽治疗给药高剂量组小鼠肺间质轻度水肿并有少 量炎细胞浸润 （如图 12箭头所示）， 炎细胞以嗜酸性粒细胞和单个核细胞 为主。 ( χ 200 )
3.2将各组小鼠的肺组织病变轻重程度按照上述评分规则，使用秩和检 验方法获得各病理学检查指标的综合评分结果， 如图 3所示， 由图 3可以 看出， 病理组织学检查表明 SP肽预防给药或治疗给药后均能显著性减轻小 鼠支气管、 血管周围间质水肿、 水肿处炎细胞的浸润以及肺泡壁充血或气 肿， 并且 SP肽治疗给药低剂量组及 SP肽预防给药中、 低剂量组小鼠， 相 比于模型组均有统计学显著性差异 (* < 0.05), 其中 SP肽治疗给药高、 中 剂量组， SP肽预防给药高剂量组与模型组相比有高度显著性差异 (**尸< 0.01)。

Claims

权 利 要求
Xaal-Gln-Xaa2-Xaa3-Thr-Ser-Gly-Xaa4 (式 I ) 其中，
Xaal为缺失、 Ala、 Gly、 Val、 Leu或 lie,
Xaa2为 Thr或 Ser,
Xaa3为 Tyr、 Phe或 Trp, 而且
Xaa4为缺失、 Ala、 Gly、 Val、 Leu, lie或 Pro;
所述衍生物包括所述肽在药学上可接受的盐或酯。
2、 根据权利要求 1所述的应用， 其中所述肽或其衍生物为式 II所示的肽或 其药学上可接受的盐或酯：
Gly-Gln-Thr-Tyr-Thr-Ser-Gly (式 II ) 。
3、 根据权利要求 1或 2所述的应用， 其中所述药物为单位制剂。
4、 根据权利要求 1或 3所述的应用， 其中所述药物为注射制剂。
5、 根据权利要求 1或 2所述的应用， 所述哮喘为过敏性哮喘。
6、 根据权利要求 3或 4所述的应用， 其中所述单位制剂或注射制剂中含有治 疗有效量为 200-3000μ§ 的所述肽或其^^生物。
7、 根据权利要求 6所述的应用， 其中所述单位制剂或注射制剂中含有治疗 有效量为 250-2500μ§ 的所述肽或其衍生物。
8、 一种治疗或预防哮喘的方法， 包括， 向患者施用含有治疗有效量的式 I 所示的 SP肽或其衍生物的药物：
Xaal-Gln-Xaa2-Xaa3-Thr-Ser-Gly-Xaa4 (式 I ) 其中，
Xaal为缺失、 Ala、 Gly、 Val、 Leu或 lie,
Xaa2为 Thr或 Ser,
Xaa3为 Tyr、 Phe或 Trp, 而且
Xaa4为缺失、 Ala、 Gly、 Val、 Leu, lie或 Pro;
所述衍生物包括所述肽在药学上可接受的盐或酯。
9、 根据权利要求 8所述的方法， 所述肽或其衍生物为下式 II所示的 SP肽或 其药学上可接受的盐或酯：
Gly-Gln-Thr-Tyr-Thr-Ser-Gly (式 II ) 。
10、 根据权利要求 8或 9所述的方法， 包括， 在哮喘发病后向患者施用所述 药物进行哮喘的治疗；或在接触哮喘致敏源 1-24小时内向患者施用所述药物 进行哮喘的预防；所述药物含有治疗有效量为 200-3000μ§的所述肽或其衍生 物。
11、 根据权利要求 10所述的方法， 其中， 所述药物含有治疗有效量为 250-2500μ§的所述肽或其衍生物。
12、根据权利要求 8-11任一项所述的方法， 其中， 对患者以单位制剂的剂量 给药。
13、根据权利要求 12所述的方法，其中，所述单位制剂中含有 200-3000μ§ 的 所述肽或其衍生物。
14、根据权利要求 13所述的方法，其中，所述单位制剂中含有 250-2500μ§ 的 所述肽或其衍生物。
15、 根据权利要求 8-14任一项所述的方法， 包括以注射方式给药。
16、 根据权利要求 8或 15所述的方法， 其中所述哮喘为过敏性哮喘。
17、 如式 I所示的 SP肽或其衍生物在制备降低哮喘患者 IL-13水平和 IL-4水平 的药物中的应用：
Xaal-Gln-Xaa2-Xaa3-Thr-Ser-Gly-Xaa4 (式 I ) 其中，
Xaal为缺失、 Ala、 Gly、 Val、 Leu或 lie,
Xaa2为 Thr或 Ser,
Xaa3为 Tyr、 Phe或 Trp, 而且
Xaa4为缺失、 Ala、 Gly、 Val、 Leu, lie或 Pro;
所述衍生物包括所述肽在药学上可接受的盐或酯。
18、 根据权利要求 17所述的应用， 其中所述肽或其衍生物为式 II所示的肽 或其药学上可接受的盐或酯：
Gly-Gln-Thr-Tyr-Thr-Ser-Gly (式 II ) 。
19、 根据权利要求 17或 18所述的应用， 其中所述药物为单位制剂。
20、 根据权利要求 17或 19所述的应用， 所述药物为注射制剂。
21、 根据权利要求 17或 18所述的应用， 其中所述哮喘为过敏性哮喘。
22、 根据权利要求 19或 20所述的应用， 其中所述单位制剂或注射制剂中含 有治疗有效量为 200-3000μ§ 的所述肽或其衍生物。
23、 根据权利要求 22所述的应用， 其中所述单位制剂或注射制剂中含有治 疗有效量为 250-2500μ§ 的所述肽或其衍生物。
PCT/CN2012/086830 2012-12-18 2012-12-18 Sp肽或其衍生物在制备预防或治疗哮喘的药物中的应用 WO2014094230A1 (zh)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201280077242.XA CN104955469B (zh) 2012-12-18 2012-12-18 Sp肽或其衍生物在制备预防或治疗哮喘的药物中的应用
PCT/CN2012/086830 WO2014094230A1 (zh) 2012-12-18 2012-12-18 Sp肽或其衍生物在制备预防或治疗哮喘的药物中的应用
US14/742,656 US9605023B2 (en) 2012-12-18 2015-06-17 Application of SP peptide or derivative thereof in preparing medicines for preventing or treating asthma

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/CN2012/086830 WO2014094230A1 (zh) 2012-12-18 2012-12-18 Sp肽或其衍生物在制备预防或治疗哮喘的药物中的应用

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
US14/742,656 Continuation US9605023B2 (en) 2012-12-18 2015-06-17 Application of SP peptide or derivative thereof in preparing medicines for preventing or treating asthma

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2014094230A1 true WO2014094230A1 (zh) 2014-06-26

Family

ID=50977526

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/CN2012/086830 WO2014094230A1 (zh) 2012-12-18 2012-12-18 Sp肽或其衍生物在制备预防或治疗哮喘的药物中的应用

Country Status (3)

Country Link
US (1) US9605023B2 (zh)
CN (1) CN104955469B (zh)
WO (1) WO2014094230A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021098854A1 (zh) * 2019-11-21 2021-05-27 上海医药工业研究院 一种治疗肺部疾病的生物肽及其应用

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014121492A1 (zh) * 2013-02-07 2014-08-14 Cheng Yun Sp肽或其衍生物在制备降低il-13水平的药物中的应用
CN112920256B (zh) * 2019-11-21 2022-08-19 上海医药工业研究院 一种治疗哮喘的生物肽及其应用
CN112824428B (zh) * 2019-11-21 2022-08-16 上海医药工业研究院 一种治疗肺疾病的生物肽及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1438238A (zh) * 2003-01-24 2003-08-27 程云 丙型肝炎病毒高变区1合成肽及其应用
CN102178926A (zh) * 2006-06-01 2011-09-14 程云 预防或治疗肝损伤的肽

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1216075C (zh) 2003-01-24 2005-08-24 程云 丙型肝炎病毒高变区1合成肽及其应用
CN101336110B (zh) * 2006-06-01 2011-06-01 程云 预防或治疗肝损伤的肽及其衍生物及其应用
CN101559217A (zh) * 2008-04-18 2009-10-21 程云 7p肽的口服给药途径及其在预防或治疗肾炎中的应用
CN101822816A (zh) * 2010-05-27 2010-09-08 程云 7p肽在预防或治疗肺炎中的应用
CN102229645B (zh) * 2011-06-03 2013-08-14 程云 免疫七肽的制备方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1438238A (zh) * 2003-01-24 2003-08-27 程云 丙型肝炎病毒高变区1合成肽及其应用
CN102178926A (zh) * 2006-06-01 2011-09-14 程云 预防或治疗肝损伤的肽

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021098854A1 (zh) * 2019-11-21 2021-05-27 上海医药工业研究院 一种治疗肺部疾病的生物肽及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN104955469A (zh) 2015-09-30
US20150284430A1 (en) 2015-10-08
CN104955469B (zh) 2016-12-21
US9605023B2 (en) 2017-03-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11851481B2 (en) Treatment of central nervous system disorders by intranasal administration of immunoglobulin g
JP2002511385A5 (zh)
KR101872218B1 (ko) 펩티드 및 바이러스성 뉴라미니다아제의 저해제를 포함하는 조성물
US9605023B2 (en) Application of SP peptide or derivative thereof in preparing medicines for preventing or treating asthma
ES2887358T3 (es) Inhibidor de Alfa1-Proteinasa para demorar el comienzo o progresión de exacerbaciones pulmonares
CA2727973C (en) Peptidyl diacylglycerides
CN115768468A (zh) 用于治疗covid-19的肽
WO1982003011A1 (en) Agent for treating deseases of respiratory organs
CA2755116C (en) Ameliorating agent for chronic obstructive pulmonary disease
RU2737799C1 (ru) Ингаляционный гексапептид для лечения респираторных заболеваний, связанных с интерлейкином-6
WO2014121492A1 (zh) Sp肽或其衍生物在制备降低il-13水平的药物中的应用
CN116916889A (zh) 用于肺高压领域的吸入式伊马替尼
EP3402505B1 (en) Pharmaceutical formulations for the treatment of diabetes
WO2015073958A1 (en) Ephedra alata extracts and methods of use thereof
CN114129705B (zh) 一种多肽在预防和治疗肺炎的药物中的应用
RU2810732C1 (ru) Композиция для профилактики или лечения заболеваний легких, содержащая гиалуронан/протеогликан-связывающий белок 1
US20220233683A1 (en) Methods and compositions for treating infections
US20210346459A1 (en) Application of Dalargin for the prevention of VRIs and prevention of the development of complications during VRIs
US20230172901A1 (en) Compositions and methods for the prophylaxis and treatment of fibrotic and inflammatory conditions
KR102494794B1 (ko) 여성 성기능장애의 치료를 위한 약학 조성물 및 방법
Mason American Thoracic Society 2019 International Conference. Dallas, Texas, USA-May 17-22, 2019
US20160296574A1 (en) Ephedra alata extracts and methods of use thereof
CN115461356A (zh) 用于预防或治疗covid-19的肽
WO2021211006A1 (en) Inhaled hexapeptide for treating interleukin-6 related respiratory diseases
TW202241490A (zh) 用於治療氣喘之脂質運載蛋白突變蛋白乾粉配製物

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 12890165

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 12890165

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1