CN101822816A - 7p肽在预防或治疗肺炎中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了丙型肝炎病毒免疫原性肽7P及其衍生物的在制备预防或治疗肺炎的药物中的应用,尤其涉及该肽或其衍生物制备预防或治疗肺炎的250μg/kg小鼠剂量的药物中的应用。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域,具体而言,本发明涉及涉及丙型肝炎病毒免疫原性肽7P及其衍生物的在制备预防或治疗肺炎的药物中的应用,尤其涉及该肽或其衍生物制备预防或治疗肺炎的250μg/kg小鼠剂量的药物中的应用。
背景技术
序列为GQTYTSG的肽(本文中简称为7P)是一种最初根据丙型肝炎病毒而设计的免疫原性肽,本发明人在中国专利CN1194986C和CN1216075C中披露了用作丙型肝炎病毒免疫原性肽的7P及其衍生物。另外,在PCT申请WO/2007/137456中,本发明人也发现了7P及其衍生物还能用于预防和治疗肝损伤的应用,尤其能预防或治疗免疫性肝损伤和肝毒性化学物质引起的肝损伤。此后,本发明人又发现7P对于肾炎也有一定的治疗作用,并披露于中国专利申请CN101559217A中。
然而,与肾炎和肝损伤不同,肺炎,尤其是因TNFα增加而引起的肺炎,是通过TNFα增加的途径来引起肺部炎性病变的,现有技术中并没有发现7P及其衍生物能抑制肺部TNFα增加,也没有观察到7P及其衍生物能改善肺炎病变症状。
但是,本发明人令人意外地发现,7P及其衍生物还能够改善肺炎病变症状,特别是改善该肺炎病变症状是通过抑制肺部TNFα增加的途径来完成的,因此可以预防或治疗需要抑制肺部TNFα增加的并发症。而且,本发明人经过长期摸索,综合用药成本、安全性和疗效,发现250μg/kg小鼠剂量的7P及其衍生物最佳。
发明内容
本发明的目的在于提供7P或其衍生物在制备预防或治疗肺炎的药物中的应用,并提供7P或其衍生物在制备抑制肺部TNFα增加的药物中的应用。另外,本发明的目的还在于提供相应药剂盒。
具体而言,在第一方面,本发明提供了7P或其衍生物在制备预防或治疗肺炎的药物中的应用,其中7P或其衍生物指如下式I所示的肽或其药学上可接受的盐或酯:
Xaa1-Gln-Xaa2-Xaa3-Thr-Ser-Gly-Xaa4 (式I)
其中,
Xaa1为缺失、Ala、Gly、Val、Leu或Ile,
Xaa2为Thr或Ser,
Xaa3为Tyr、Phe或Trp,而且
Xaa4为缺失、Ala、Gly、Val、Leu、Ile或Pro。
本文所称的“7P或其衍生物”指如下式I所示的肽或其药学上可接受的盐或酯:
Xaa1-Gln-Xaa2-Xaa3-Thr-Ser-Gly-Xaa4 (式I)
其中,
Xaa1为缺失、Ala、Gly、Val、Leu或Ile,
Xaa2为Thr或Ser,
Xaa3为Tyr、Phe或Trp,而且
Xaa4为缺失、Ala、Gly、Val、Leu、Ile或Pro。优选其中,7P或其衍生物是唯一有效成分。
在本发明的第一方面中,7P或其衍生物优选为GQTYTSG的肽或其药学上可接受的盐或酯,尤其优选为7P。在本发明的具体实施方式中,我们发现,7P能够在作为唯一有效成分的情况下,能够有效预防或治疗肺炎,尤其是能抑制TNFα的增加从而预防或治疗肺炎。因此,在本发明的第一方面中,肺炎优选是TNFα增加而引起的肺炎。
在本文中,“药学上可接受的酯”指适于与人或动物的组织接触而且无过多的毒性、刺激或变态反应等的酯。通常,酯化修饰后能降低机体中的蛋白酶对肽的水解。对本发明的肽的末端氨基、羧基或侧链基团进行修饰可以形成药学上可接受的酯。对氨基酸侧链基团的修饰包括但不限于苏氨酸、丝氨酸侧链羟基与羧酸发生的酯化反应。优选末端基团用蛋白质化学领域的技术人员已知的保护性基团保护起来,如乙酰基、三氟乙酰基、Fmoc(9-芴基-甲氧羰基)、Boc(叔丁氧羰基)、Alloc(烯丙氧羰基)、C1-3烷基、C6-12芳烷基等。在本发明的具体实施方式中,我们发现,7P不经修饰也足以在生理条件下进行治疗,因此优选不对式I多肽N末端的氨基和C末端的羧基以及氨基酸侧链基团进行修饰,即N末端的化学基团仍旧为第一个氨基酸上的α-氨基(-NH2),C末端的化学基团是C末端氨基酸的羧基(-COOH)。
在本文中,“药学上可接受的盐”指适于与人或动物的组织接触而且无过多的毒性、刺激或变态反应等的盐。药学上可接受的盐是本领域熟知的。这种盐可以在本发明多肽的最终分离和纯化的过程中制备,也可以将肽与适当的有机或无机酸或碱反应单独制备。代表性酸加成盐包括但不限于乙酸盐、二己酸盐、藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、3-苯基丙酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。能用于形成药学上可接受盐的优选的酸是盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、草酸、马来酸、琥珀酸和柠檬酸。药学上可接受的碱加成盐中的阳离子包括但不限于碱金属或碱土金属离子如锂、钠、钾、钙、镁和铝等,以及非毒性季铵阳离子如铵、四甲基铵、四乙基铵、甲基胺、二甲基胺、三甲基胺、三乙基胺、二乙基胺、乙基胺、二乙胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶、哌嗪等。优选的碱加成盐包括磷酸盐、tris和乙酸盐。这些盐一般能够增加多肽的溶解性,而且所形成的盐基本上不改变多肽的活性。本发明的多肽可以单独使用,也可以以药学上可接受的盐形式使用。
在本文中,“药物”、“药物制剂”、“药用制剂”以及简称的“制剂”入未特别说明,可以互换使用,指的是包含药物有效成分的制品,并任选其中还包含药学上可接受的载体。其中,“药学上可接受的载体”指无毒固态、半固态或液态填充剂、稀释剂、佐剂、包裹材料或其他制剂辅料。所用载体可与相应的给药形式相适应,可使用本领域技术人员所知晓的载体配成注射剂、(注射用)冻干粉、喷雾剂、口服溶液、口服混悬液、片剂、胶囊、肠溶片、丸剂、粉剂、颗粒剂、持续释放或延迟释释放等制剂。在本发明的具体实施方式中,7P通过注射方式给药,使用生理盐水作为载体溶解即可,因此,本发明的药物优选为注射剂或注射用冻干粉。
在本发明的第一方面中,为了方便给药,药物优选是单位制剂,即满足一次给药所需活性成分的制剂。常见的单位制剂如一单位(片)片剂、一单位(针)针剂或粉针剂等,其中活性成分的为一次给药所需的量。一次给药所需的量可以方便地计算受试者的体重和该受试者一次用药所需单位体重剂量(在本文中简称为“剂量”)的乘积得到。例如,在制备药物的过程中,通常将成人的体重被定为60kg,可以用该体重值来计算。不同受试者的单位体重剂量可以通过等效剂量换算关系来计算。例如,根据的本领域普通技术人员所公知的实验动物与人的等效剂量换算关系(通常可参见FDA、SFDA等药品管理机构的指导意见,也可参见“黄继汉等.药理试验中动物间和动物与人体间的等效剂量换算.中国临床药理学与治疗学,2004Sep;9(9):1069-1072”)可从实验动物的剂量推导出人的有效剂量。如未特别指出,本文中的“剂量”指小鼠的剂量。通常可以使用12这个系数来换算人和小鼠的剂量。经过本发明人长期研究,发现综合用药安全、成本和药效,在本发明的第一方面中,单位制剂中7P或其衍生物的剂量优选为30-400μg/kg小鼠剂量,更优选为100-350μg/kg小鼠剂量,更优选为180-320μg/kg小鼠剂量,更优选为200-300μg/kg小鼠剂量,最优选为250μg/kg小鼠剂量,其取得了最佳的用药安全、成本和药效的平衡。根据剂量,制药商可以换算得到单位制剂中的活性成分含量,用以应用于其制药过程中。
在第二方面,本发明提供了7P或其衍生物在制备抑制肺部TNFα增加的药物中的应用,其中7P或其衍生物指如下式I所示的肽或其药学上可接受的盐或酯:
Xaa1-Gln-Xaa2-Xaa3-Thr-Ser-Gly-Xaa4 (式I)
其中,
Xaa1为缺失、Ala、Gly、Val、Leu或Ile,
Xaa2为Thr或Ser,
Xaa3为Tyr、Phe或Trp,而且
Xaa4为缺失、Ala、Gly、Val、Leu、Ile或Pro。优选其中,7P或其衍生物是唯一有效成分。
在本发明的第二方面中,7P或其衍生物优选为GQTYTSG的肽或其药学上可接受的盐或酯,尤其优选为7P。在本发明的具体实施方式中,我们发现,7P能够在作为唯一有效成分的情况下,能够有效抑制肺部TNFα增加。
在本发明的第二方面中,为了方便给药,药物优选是单位制剂,即满足一次给药所需活性成分的制剂。常见的单位制剂如一单位(片)片剂、一单位(针)针剂或粉针剂等,其中活性成分的为一次给药所需的量。一次给药所需的量可以方便地计算受试者的体重和该受试者一次用药所需单位体重剂量(在本文中简称为“剂量”)的乘积得到。例如,在制备药物的过程中,通常将成人的体重被定为60kg,可以用该体重值来计算。不同受试者的单位体重剂量可以通过等效剂量换算关系来计算。例如,根据的本领域普通技术人员所公知的实验动物与人的等效剂量换算关系(通常可参见FDA、SFDA等药品管理机构的指导意见,也可参见“黄继汉等.药理试验中动物间和动物与人体间的等效剂量换算.中国临床药理学与治疗学,2004Sep;9(9):1069-1072”)可从实验动物的剂量推导出人的有效剂量。如未特别指出,本文中的“剂量”指小鼠的剂量。通常可以使用12这个系数来换算人和小鼠的剂量。经过本发明人长期研究,发现综合用药安全、成本和药效,在本发明的第二方面中,单位制剂中7P或其衍生物的剂量优选为30-400μg/kg小鼠剂量,更优选为100-350μg/kg小鼠剂量,更优选为180-320μg/kg小鼠剂量,更优选为200-300μg/kg小鼠剂量,最优选为250μg/kg小鼠剂量,其取得了最佳的用药安全、成本和药效的平衡。根据剂量,制药商可以换算得到单位制剂中的活性成分含量,用以应用于其制药过程中。
在第三方面,本发明提供了药剂盒,其包括,
(1)包含7P或其衍生物的容器;和
(2)指示7P或其衍生物给药预防或治疗肺炎或抑制肺部TNFα增加的说明书,任选说明书指示给药剂量为30-400μg/kg小鼠剂量,优选为100-350μg/kg小鼠剂量,更优选为180-320μg/kg小鼠剂量,更优选为200-300μg/kg小鼠剂量,最优选为250μg/kg小鼠剂量。
药剂盒是大众所熟知的代包装的药品形式,其中包括装有药剂的容器,如瓶、管等,并包括有说明书,所述说明书可以以单独形式装于药剂盒内,也可以印刷在药剂盒或容器外壁上。
在本发明的第三方面中,优选说明书记载有指示给药剂量为30-400μg/kg小鼠剂量,优选为100-350μg/kg小鼠剂量,更优选为180-320μg/kg小鼠剂量,更优选为200-300μg/kg小鼠剂量,最优选为250μg/kg小鼠剂量的内容。
为了便于理解,以下将通过具体的实施例对本发明进行详细地描述。需要特别指出的是,具体实例仅是为了说明,并不构成对本发明范围的限制。显然本领域的普通技术人员可以根据本文说明,在本发明的范围内对本发明做出各种各样的修正和改变,这些修正和改变也纳入本发明的范围内。另外,本发明引用了公开文献,这些文献也是为了更清楚地描述本发明,它们的全文内容均纳入本发明进行参考,就好像它们的全文已经在本发明说明书中重复叙述过一样。
具体实施方式
实施例1.免疫7肽药物对小鼠肺炎的保护作用
1.实验材料
1.1动物:
清洁级ICR小鼠,体重18g~22g,雌雄各半,由南通大学实验动物中心提供(实验动物生产许可证:SCXK(苏)2008-0010;实验动物使用许可证:SYXK(苏)2007--0030)。
1.2药物:
序列为GQTYTSG的肽(以下称“免疫7肽”),使用时用生理盐水溶解。
阳性对照药:地塞米松注射液,由贵州华圣制药有限公司提供,批号:071017,规格:5mg/ml/支。
1.3药物配制、剂量及分组
地塞米松注射液组(给药剂量为0.9mg/kg),免疫7肽药物高、中、低剂量组分别为250μg/kg,125μg/kg,62.5μg/kg,空白对照组,模型组给予等容积生理盐水。上述各组药物使用时均用生理盐水配置成所需浓度。免疫7肽各剂量组均皮下注射给药,给药体积为0.1ml/10g体重,地塞米松注射液组腹腔注射给药,给药体积为0.1ml/10g体重。
1.4试剂
脂多糖(LPS),SIGMA公司产品,批号:L2880。
小鼠TNF αELISA Kit,上海源叶生物科技有限公司,YY02868B1.5仪器:
Electronic particle counter(Diana 5,Hycel Diagnostics,Reims France)
BIO-RAD 680伯乐酶标仪
2.试验方法
2.1实验方案:
实验动物随机分为6组,即空白组、模型组、阳性药(地塞米松注射液)组,免疫7肽高剂量组、免疫7肽中剂量组、免疫7肽低剂量组。小鼠每组10只。除空白组小鼠外,其余各组小鼠腹腔注射脂多糖(LPS)1mg/kg,腹腔注射LPS后2小时,免疫7肽高剂量组、免疫7肽中剂量组、免疫7肽低剂量组右后肢皮下给药0.1ml/10g体重,阳性药地塞米松组腹腔注射0.1ml/10g体重。腹腔注射LPS后24小时后,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),使用Electronic particle counter检测支气管肺泡灌洗液(BALF)白细胞计数。根据厂商说明,应用小鼠TNFαELISA检测试剂盒检测支气管肺泡灌洗液TNFα水平,将标准品用稀释液作倍比稀释,然后按照试剂盒说明书进行操作。计算出标准曲线,从标准曲线上读出所测样本的数值,再乘以稀释倍数,即得出原液浓度。另取右页肺脏以10%甲醛固定,石蜡包埋,切片,HE染色,再经梯度乙醇脱水,二甲苯透明,以中性树胶封片,进行病理组织学检查各组肺炎损伤程度。
2.2数据处理:对所有数据进行数据处理,对病理学评分采用秩和检验,其他数据采用t检验,并统计分析结果。
3.结果
3.1.免疫7肽药物对小鼠肺炎肺泡灌洗液白细胞计数及TNFα的影响:
从表1可以看出,模型组小鼠肺炎肺泡灌洗液白细胞计数及TNFα水平显著升高(P<0.01),表明LPS可造成小鼠释放TNFα,引起肺部炎性病变。免疫7肽药物高、中、低剂量组能显著性降低LPS实验性肺炎小鼠白细胞计数及肺泡灌洗液TNFα(P<0.05或P<0.01)。
表1:药物免疫7肽对小鼠肺炎肺泡灌洗液白细胞计数及TNFα的影响(X±SD,n=5)
注:与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01
3.2.免疫7肽药物对小鼠肺炎病理组织学检查的影响
免疫7肽药物对小鼠肺炎影响的组织病理学检查评分结果见表2。病理组织学研究表明,本实验用脂多糖造模的小鼠肺部炎性病变,主要表现为肺泡壁增厚、伴有轻度到重度充血及炎细胞浸润,其它病变有支气管周围炎间质水肿。药物免疫7肽应用后能减轻肺部炎症的病变,各剂量组比较,以免疫7肽高剂量组减轻肺部炎症的效果最好,其次为免疫7肽中剂量组,免疫7肽低剂量组,与模型组相比均有非常显著性差异(P<0.01)。
表2.药物免疫7肽对小鼠肺炎模型影响的病理评分(X±SD)
Claims (10)
1.7P或其衍生物在制备预防或治疗肺炎的药物中的应用,其中7P或其衍生物指如下式I所示的肽或其药学上可接受的盐或酯:
Xaal-Gln-Xaa2-Xaa3-Thr-Ser-Gly-Xaa4 (式I)
其中,
Xaa1为缺失、Ala、Gly、Val、Leu或Ile,
Xaa2为Thr或Ser,
Xaa3为Tyr、Phe或Trp,而且
Xaa4为缺失、Ala、Gly、Val、Leu、Ile或Pro。
2.权利要求1所述的应用,其中药物是单位制剂,优选所述制剂是注射制剂。
3.权利要求2所述的应用,其中单位制剂中7P或其衍生物的剂量为30-400μg/kg小鼠剂量,优选为100-350μg/kg小鼠剂量,更优选为180-320μg/kg小鼠剂量,更优选为200-300μg/kg小鼠剂量,最优选为250μg/kg小鼠剂量。
4.权利要求1-3之任一所述的应用,其中7P或其衍生物为GQTYTSG的肽或其药学上可接受的盐或酯。
5.权利要求1所述的应用,其中所述肺炎是TNFα增加而引起的肺炎。
6.7P或其衍生物在制备抑制肺部TNFα增加的药物中的应用,其中7P或其衍生物指如下式I所示的肽或其药学上可接受的盐或酯:
Xaal-Gln-Xaa2-Xaa3-Thr-Ser-Gly-Xaa4 (式I)
其中,
Xaa1为缺失、Ala、Gly、Val、Leu或Ile,
Xaa2为Thr或Ser,
Xaa3为Tyr、Phe或Trp,而且
Xaa4为缺失、Ala、Gly、Val、Leu、Ile或Pro。
7.权利要求6所述的应用,其中药物是单位制剂,优选所述制剂是注射制剂。
8.权利要求7所述的应用,其中单位制剂中7P或其衍生物的剂量为30-400μg/kg小鼠剂量,优选为100-350μg/kg小鼠剂量,更优选为180-320μg/kg小鼠剂量,更优选为200-300μg/kg小鼠剂量,最优选为250μg/kg小鼠剂量。
9.权利要求6-8之任一所述的应用,其中7P或其衍生物为GQTYTSG的肽或其药学上可接受的盐或酯。
10.药剂盒,其包括,
(1)包含7P或其衍生物的容器;和
(2)指示7P或其衍生物给药预防或治疗肺炎或抑制肺部TNFα增加的说明书,任选说明书指示给药剂量为30-400μg/kg小鼠剂量,优选为100-350μg/kg小鼠剂量,更优选为180-320μg/kg小鼠剂量,更优选为200-300μg/kg小鼠剂量,最优选为250μg/kg小鼠剂量。
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PB01 | Publication | ||
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C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
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